CN110237022A - 一种冻干粉、溶媒及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于化妆品技术领域，具体公开了一种含干细胞上清液和小分子多肽的冻干粉，一种包含透皮促渗剂的溶媒，以及包含上述冻干粉和溶媒的化妆品套装。本发明所制备的冻干粉通过干细胞上清液与小分子多肽的复配，使两者发挥协同增效作用，使得所制备的冻干粉具有显著的延缓衰老、淡化细纹、保湿嫩肤等功效；本发明用于溶解冻干粉的溶媒特异性地含有透皮促渗剂，通过透皮促渗剂来促进冻干粉中的细胞因子、小分子多肽等活性成分渗透到真皮层，从而更进一步地提高本发明产品的护肤效果。本发明通过将冻干粉和溶媒独立包装，延长了产品的保质期，并且冻干粉中无防腐剂，有效保证了冻干粉中的活性组分不受影响。
Description
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种含干细胞上清液和小分子多肽的冻干粉，以及一种包含透皮促渗剂的溶媒，以及所述冻干粉和溶媒的应用。
背景技术
近年来，生物基因技术获得了长足的发展，给美容化妆品行业带来全新的发展机遇，逐步从传统的合成化妆品、天然化妆品向生物基因美容产品发展。同时，随着生活水平和教育程度的提高，消费者对化妆品的关注度已逐渐从广告宣称的效果转向化妆品的成分和功效，以求美容产品真正能够有效的改善肌肤状况。现有的生物基因美容产品主要以多肽蛋白、生长因子等作为主要功效成分，通过将上述功效成分直接与化妆品常见成分或基质混合而得到面膜、精华、眼霜、面霜等产品，以达到抗皱、修复、淡斑等美容功效。
然而，现有的大部分生物基因化妆品只含有1～2个多肽分子，导致产品功能单一，不能全方位改善皮肤状况。另外，对于液态、乳状、浆体状化妆品，某些小分子多肽的长期活性得不到保证，小分子多肽在化妆品的制备、保存过程中可能极易失去活性而不能发挥相应的护肤作用。另外，将小分子多肽与化妆品的其他成分，例如保湿成分、防腐成分等复配后，其活性可能会受到这些成分的影响而降低，导致其功效大大降低，不能真正改善皮肤状态。此外，市面上很多化妆品的原料成分不能真的透过表皮到达真皮层，导致护肤效果也会大打折扣。
发明内容
针对以上问题，本发明通过将干细胞上清液与小分子多肽复配以获得一种更具修复、保护功效的化妆品，同时将所制备的产品进行冻干保存以保证干细胞上清液与小分子多肽的活性。此外，本发明利用促渗剂或纳米包裹剂等促渗技术，来提高活性成分在皮肤表面的渗透性，以全方位提升化妆品的护肤功效。
作为本发明的第一方面，本发明提供了一种包含干细胞上清液和小分子多肽的冻干粉。
作为优选的方式，所述冻干粉由包括以下质量百分比组分的原料经冷冻干燥制备而成：干细胞上清液0.1-90.0％，小分子多肽0.1-50.0％和冻干保护剂1.0-15.0％。
作为优选的方式，所述制备冻干粉的原料还包括以下质量百分比的组分：水解透明质酸钠0.1-8.0％和水0.5-30.0％。
作为优选的方式，所述干细胞上清液为骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和脐带间充质干细胞上清液中的任意一种或多种。
作为优选的方式，所述小分子多肽为乙酰基四肽-2、乙酰基六肽-8、乙酰基七肽、乙酰基六肽-1、棕榈酰三肽-1、棕榈酰四肽-7、棕榈酰五肽-4、棕榈酰寡肽、类蛇毒三肽-1、双效肉毒肽、海藻紧肤肽、EGF、寡肽-1、寡肽-3、寡肽-4、寡肽-5、十肽-4和抗坏血酸多肽中的任意一种或多种。
作为优选的方式，所述冻干保护剂为甘露糖醇、海藻糖、右旋糖酐、HSA和BSA中的任意一种或多种。
作为本发明的第二方面，本发明提供了一种包含透皮促渗剂的溶媒。
作为优选的方式，所述溶媒包括以下质量百分比的组分：水解透明质酸钠0.1-10.0％、糖原0.1-10.0％、水解胶原蛋白0.1-10.0％、维生素0.2-10.0％、透皮促渗剂0.2-20.0％和余量的水。
作为优选的方式，所述透皮促渗剂为多元醇、类脂、保湿剂和透皮增强肽中的一种或多种，其中，所述多元醇为甘油、丙二醇、1,3-丁二醇、1,2-己二醇和戊二醇中的任意一种或多种；所述类脂为神经酰胺、胆固醇、角鲨烷、蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂和氢化卵磷脂中的任意一种或多种；所述保湿剂为双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、辛酸/癸酸甘油三酯、147二甲基醚、水解葡糖氨基聚糖、乳木果油和PEG蓖麻油中的任意一种或多种；所述透皮增强肽为透皮肽TD-1、皮肤和细胞渗透肽SPACE、真皮定位肽DLP、前导肽-12和T2肽中的任意一种或多种。
作为优选的方式，所述维生素为维生素A、维生素E、维生素C中的任意一种或多种。
作为本发明的第三方面，本发明提供了一种化妆品套装。
作为优选，所述化妆品套装包括：
1)冻干粉，所述冻干粉由包括以下质量百分比组分的原料经冷冻干燥制备而成：干细胞上清液0.1-90.0％，小分子多肽0.1-50.0％和冻干保护剂1.0-15.0％。
2)溶媒，所述溶媒包括以下质量百分比的组分：水解透明质酸钠0.1-10.0％、糖原0.1-10.0％、水解胶原蛋白0.1-10.0％、维生素0.2-10.0％、透皮促渗剂0.2-20.0％和余量的水。
作为优选的方式，所述制备冻干粉的原料还包括以下质量百分比的组分：水解透明质酸钠0.1-8.0％和水0.5-30.0％。
作为优选的方式，所述冻干粉中的干细胞上清液为骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和脐带间充质干细胞上清液中的任意一种或多种。
作为优选的方式，所述冻干粉中的小分子多肽为乙酰基四肽-2、乙酰基六肽-8、乙酰基七肽、乙酰基六肽-1、棕榈酰三肽-1、棕榈酰四肽-7、棕榈酰五肽-4、棕榈酰寡肽、类蛇毒三肽-1、双效肉毒肽、海藻紧肤肽、EGF、寡肽-1、寡肽-3、寡肽-4、寡肽-5、十肽-4和抗坏血酸多肽中的任意一种或多种。
作为优选的方式，所述冻干粉中的冻干保护剂为甘露糖醇、海藻糖、右旋糖酐、胶原蛋白、HSA和BSA中的任意一种或多种。
作为优选的方式，所述溶媒中的透皮促渗剂为多元醇、类脂、保湿剂和透皮增强肽中的一种或多种，其中，所述多元醇为甘油、丙二醇、1,3-丁二醇、1,2-己二醇和戊二醇中的任意一种或多种；所述类脂为神经酰胺、胆固醇、角鲨烷、蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂和氢化卵磷脂中的任意一种或多种；所述保湿剂为双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、辛酸/癸酸甘油三酯、147二甲基醚、水解葡糖氨基聚糖、乳木果油和PEG蓖麻油中的任意一种或多种；所述透皮增强肽为透皮肽TD-1、皮肤和细胞渗透肽SPACE、真皮定位肽DLP、前导肽-12和T2肽中的任意一种或多种。
作为优选的方式，所述溶媒中的维生素为维生素A、维生素E、维生素C中的任意一种或多种。
作为优选的方式，所述化妆品套装还包括基础面膜，所述基础面膜包括面膜液和面膜基材。
作为优选的方式，所述基础面膜的面膜液包括以下质量百分比的组分：甘油2-15.0％、乙酰基6肽-8 0.1-10.0％、类蛇毒三肽-1 0.2-10.0％、双效肉毒肽0.2～8％、棕榈酰五肽-4 0.2-10.0％、海藻紧肤肽0.2-20.0％、全氟加奈0.2-8.0％、水解胶原蛋白0.2-10.0％、水解欧洲里0.1-1.0％、柑橘果皮提取物0.2-15.0％、维生素C 0.2-10.0％、富勒烯0.2-10.0％、透明质酸钠0.2-5.0％、生物糖胶-1 0.2-4.5％、糖原0.1-8.0％、1,3丁二醇0.2-5.0％，1，2己二醇0.2-5.0％、辛酰羟肟酸0.2-5.0％、麦芽糊精0.1-5.0％、角鲨烷0.2-10.0％，以及余量的水。
作为优选的方式，本发明所述的化妆品套装的使用方法为：将所述冻干粉与溶媒按质量比为1:1-5混合使用。
本发明的冻干粉和溶媒可以单独使用，也可以配合其他产品进行使用，例如配合精华液、面膜、面霜等使用。当单独使用时，将冻干粉与溶媒按质量比为1:1-5混合得到混合溶液，将该混合溶液涂抹于皮肤，适当按摩吸收即可。当需要配合其他产品进行使用时，先将冻干粉和溶媒按比例混合得到的混合溶液涂抹于皮肤，吸收后可根据护肤习惯依次使用面膜、精华液、乳液和/或面霜等。此外，冻干粉与溶媒按比例混合后得到的混合溶液也可以被制成面膜进行使用，例如将混合溶液负载于面膜基材上或注入固体或浆体面膜中进行使用。
本发明具有以下有益的技术效果：
(1)本发明公开了一种包含干细胞上清液与小分子多肽的冻干粉，一方面干细胞上清液与小分子多肽复配使得所制备的冻干粉功效更佳，另一方面，通过冻干技术使得该组合物可以在常温长期存放，不易失去生物活性，以确保在使用时，各组分起到对应的修复和保护功效。本发明所制备的冻干粉形态蓬松良好，不喷瓶，溶解快，并且稳定时间持久，常温可保存两年以上，另外冻干粉中无抗菌剂、防腐剂的添加，小分子多肽的活性保持较好。
(2)本发明公开了一种溶媒，溶媒一方面作为溶剂能够很好的溶解冻干粉，并保持冻干粉各活性因子的生物活性；另一方面，本发明的溶媒中含有的透皮促渗剂可促进冻干粉中的细胞因子、小分子多肽、抗氧化、保湿等活性成分渗透到真皮层，提高护肤效果。
(3)本发明公开了一种化妆品套装，该化妆品套装包括冻干粉和溶媒，该冻干粉和溶媒独立包装，且1次性使用，保证产品不会在使用中被二次污染，还延长了产品的保质期，而且保证了冻干粉中的活性物质不被破坏；其中，冻干粉包含干细胞上清液和小分子多肽，具有多重护肤功效，溶媒作为冻干粉的溶剂，其含有的透皮促渗制剂可促进冻干粉中的细胞因子、小分子多肽以及抗氧化、保湿等活性成分渗透到真皮层，提高护肤效果。
(4)本发明公开了一种面膜套装，该面膜套装包括冻干粉、溶媒和基础面膜，其中，在使用冻干粉和溶媒之后，进一步配合使用基础面膜，利用基础面膜将皮肤与外界隔开，从而能够更好的促进冻干粉中的有效成分渗入皮肤。本发明的产品以面膜套装的形式进行使用，不仅方便携带和施用，并且能够有利于肌肤对活性成分的吸收，可取得更佳的护肤效果。
(5)本发明公开了一种基础面膜配方，该面膜添加了系列优质保湿修复亮肤的成分，如透明质酸、胶原蛋白、维生素C、天然提取物等，有效提升4D保湿效果，具有修护受损角质层，使肌肤弹润幼滑，提亮肤色的作用。
附图说明
图1是本发明的冻干粉的制备工艺流程图。
图2是本发明的冻干粉、冻干粉+溶媒、冻干粉+溶媒+面膜液的细胞毒性实验结果。
图3是本发明的冻干粉的抗皱实验结果。
图4是本发明的冻干粉的抗光老化实验结果。
详细说明
下面对本发明涉及的结构或这些所使用的技术术语做进一步的说明。这些说明仅仅是采用举例的方式进行说明本发明的方式是如何实现的，并不能对本发明构成任何的限制。
干细胞及干细胞上清液
干细胞是来自胚胎、胎儿或成人，具有持久的自我更新的能力，能产生特异的细胞类型，形成人体组织器官的一类细胞。干细胞不仅具有分化的能力，还具有自分泌功能，能够分泌多种活性蛋白，这些活性蛋白具有调节免疫、调控细胞迁移、凋亡等多种功能。临床上常用的干细胞为间充质干细胞(MSCs)，MSCs是一类具有广泛组织分布，能自我更新和分化的细胞，可从骨髓、脂肪、脐带、胎盘等多种组织中分离、制备，其可以分泌多种细胞因子，用于激活机体整体上处于休眠状态下的各种干细胞群，以代替更新原有的因衰老或病理性等因素所造成的组织细胞的衰老和老化，达到组织器官功能的恢复，增强组织器官的活性和原有的抗耐受力，改善因衰老等因素所造成的细胞与细胞间、细胞与细胞外基质间的信息传递，增强和加快各组织细胞的新老更替等作用。
传统的干细胞美容需要将干细胞注射进入皮肤真皮层，对操作者的要求较高，而且此项操作对爱美人士容易产生心理负担，有安全性的担忧。而现代研究发现，干细胞培养过程中所分泌的细胞因子极易被水通道运输渗透至皮肤真皮层，可以达到刺激“唤醒”或营养表皮或真皮干细胞的作用，由此干细胞上清液逐渐受到广大研究者的青睐。干细胞上清液是干细胞培养的培养液，干细胞培养过程中分泌的众多生长因子主要游离在培养液中，通过收集上清液即可获得生长因子，诸多实验研究表明，干细胞上清液在动物模型实验中具有和干细胞相似的功效，有些甚至比干细胞更具功效，可以代替干细胞用于制备药物、保健品和化妆品等。
应用于本发明的干细胞可以为骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胎盘间充质干细胞，脐带间充质干细胞等，优选为脐带间充质干细胞。脐带间充质干细胞是存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，除了具有间充质干细胞的特性外，还具有免疫原性低、取材方便、易于工业化制备等特征。在本发明中，所采用的干细胞上清液由东方医院干细胞转化中心提供。
小分子多肽
小分子多肽可促进真表皮细胞增值和分化，加快透明质酸、胶原蛋白和糖蛋白的合成速率，修复老化断裂的胶原弹性纤维，并且能有效消除自由基，改善细胞生长微环境，从而发挥祛除细纹，预防皱纹产生，使肌肤光滑水嫩的作用。适用于化妆品行业的具有美容功效的小分子多肽需具备以下特点：(1)特定的氨基酸序列和分子量，目前常用的小分子多肽为2～10个氨基酸缩合物；(2)机理清晰，明确作用于皮肤某个微观受体；(3)添加量少；(4)来源大都为化学合成。
适用于本发明的小分子多肽的例子如下：
乙酰基寡肽类，例如乙酰基四肽-2、乙酰基六肽-8、乙酰基七肽、乙酰基六肽-1等，乙酰基四肽-2是本领域使用广泛的美容多肽之一，其可以有效增强皮肤抵抗力，帮助表皮再生，抚平皱纹；乙酰基六肽-8可以类似肉毒素发挥局部阻断神经传递肌肉收缩信息的作用，使脸部肌肉放松，达到平抚细纹，尤其是表情纹的目的；乙酰基六肽-1是一种模拟α-MSH的生物仿生肽，可通过与MC1-R结合促进黑色素生成，可作为一种自然的光保护因子和炎症调节剂，能够发挥诱导皮肤着色、增强皮肤对紫外线损伤的防御、减少皮肤红斑和炎症反应的作用。
棕榈酰三肽-1是应用最早和使用最广泛的美容胜肽之一，能促进胶原蛋白的合成，同时还能增加弹性蛋白、透明质酸、糖胺聚糖和纤维连接蛋白的生成；棕榈酰四肽-7能帮助促进胶原蛋白生成，缓解皱纹生成；棕榈酰五肽-4是Ⅰ型胶原蛋白前体序列片段，它能强烈刺激细胞外基质(ECM)中成纤维细胞的生长，从而刺激Ⅰ及Ⅲ型胶原蛋白的合成，并且作为信号肽能够显著促进胶原蛋白生成，消除静态纹，紧致肌肤；棕榈酰寡肽具有趋化作用，可以促进真皮成纤维细胞迁移、增殖和促进基质大分子合成(如弹力蛋白、胶原蛋白等)，为皮肤提供支撑，同时它还可以诱导成纤维细胞和单核细胞到特定的位置以达到伤口修复和组织更新。
类蛇毒三肽-1能够作用于突触后膜，是肌肉烟碱乙酰胆碱受体(nmachr)可逆转的抗结剂，类蛇毒三肽结合nmachr的ε亚单位从而阻滞乙酰胆碱与受体的结合，最终导致受体封闭，在封闭状态下钠离子不能摄入，无法去极化，神经兴奋传递阻断，肌肉因此松弛，其通过松弛面部肌肉而作为有效的平滑和去皱活性产品。
双效肉毒肽，是一种经电脑模拟结构，然后人工合成指定功效的肽，它通过同时有效抑制乙酰胆碱在神经传递过程中，突触前端的释放和后端对信号的接收，减少肌肉收缩频率从而达到抚平皱纹、延缓衰老的效果。
海藻紧肤活性肽是天然深海绿色藻类提取，含有大量藻寡糖类、低聚肽类、a-羟基酸类等活性成分，通过在皮肤上快速的形成一层透明的薄膜，从而在极短的时间内在皮肤上形成明显的提拉紧致抗皱效果，并使肌肤显得平滑、细嫩、柔软。
EGF，表皮生长因子EGF是由53个氨基组成的活性多肽，其可以刺激表皮细胞生长因子受体酪氨酸的磷酸化，达到修补增生肌肤表层细胞的作用，并且通过促进细胞的增殖分化，使新生细胞代替衰老和死亡的细胞，从而促进受损表皮的修复与再生，发挥显著的改善肌肤状况的功效。
寡肽-1能促进细胞生长和提高细胞活性，通过修复胶原纤维和弹性纤维达到修复受损肌肤的目的；寡肽-3可诱导干细胞分化，通过修复基底层成纤维细胞促进组织修复；寡肽-4能够促进新陈代谢，刺激细胞再生、增殖，从而发挥改善皮肤和调理作用；寡肽-5能够特异性地刺激上皮细胞的新陈代谢，修复角质层，增加角质层厚度，并能够增强胶原蛋白和弹性蛋白的活力；十肽-4可以穿透真皮增加胶原蛋白，通过从内至外的重建来逆转皮肤老化的过程，并通过刺激胶原蛋白、弹力纤维和透明质酸增生，来提高肌肤的含水量和锁水度，增加皮肤厚度以及减少细纹。
抗坏血酸多肽是一种天然维生素C，含聚合多肽稳定成分，其不仅能够使皮肤美白，同时可以提亮肤色、减少色素沉淀、延缓衰老和保湿防晒。
可以理解的是，适用于本发明的小分子多肽并不仅仅不限于上述几种，本领域常用的其他小分子多肽均可适用于本发明。
本发明的小分子多肽均为商业购买，购买自上海贤恩。
溶媒
在本发明中，溶媒是指能够溶解固体、液体或气体而成为均匀混合溶液的一种液体，其作为溶剂用于溶解溶质而得到一种溶液，习惯上把气体或固体叫做溶质，把液体叫做溶剂，而对于两种液体所组成的溶液，通常把含量较多的组分叫做溶剂，把含量较少的叫做溶质。本发明中所述的溶媒具体用于溶解包含干细胞上清液和小分子多肽的冻干粉，从而得到一种能够便于在人体皮肤上使用和便于人体皮肤吸收的化妆品溶液，该溶媒要求对包含干细胞上清液和小分子多肽的冻干粉有很好的溶解性，并且性质稳定，流动性好，对人体皮肤无毒副作用和刺激性。
适用于本发明的溶媒可以为水溶液、醇溶液或水溶液与醇溶液的混合溶液等。在一些优选的实施方式中，本发明的溶媒除了发挥溶解溶质的作用外，还具有一定的护肤功效，其可以包含化妆品中的某些常见基质，例如包含一种或多种保湿成分、防腐成分、抗菌成分等。在另一些优选的实施方式中，本发明的溶媒包含透皮促渗剂，其在作为溶剂溶解包含干细胞上清液和小分子多肽的冻干粉的同时，能够促进干细胞上清液中的分泌因子和小分子多肽的透皮吸收，从而增强本发明的冻干粉的护肤效果。
冻干保护剂
冻干保护剂又称稳定剂或分散剂，是指在冻干过程中或冻干过程后，加入的使生物制品活性物质免受破坏的一类物质，其不仅具有保护生物制品活性的效果，而且还具有冻干赋形的作用。根据其化学性质，冻干保护剂可分为多羟基化合物、糖类、氨基酸、聚合物和蛋白质等几大类。
糖是最常见、使用最广的一类冻干保护剂，是蛋白质的非特异性稳定剂，目前用作保护剂的糖类主要有葡萄糖，果糖，蔗糖，乳糖，海藻糖，纤维二糖，甘露糖，麦芽糖，肌糖，棉子糖，菊糖，麦芽糖糊精，右旋糖苷，麦芽多糖，八硫酸蔗糖和肝素等。用作保护剂的多羟基化合物包括甘油，甘露糖醇，肌醇，山梨醇，硫醇，聚乙二醇、侧金盏花醇等。蛋白质类保护剂包括人血清白蛋白(HSA)、牛血清白蛋白(BSA)、胶原蛋白、重组人白蛋白和明胶等。其他常用的保护剂包括氨基酸，例如甘氨酸、精氨酸、丙氨酸等，聚合物，吐温80，普朗尼克，布里杰，SDS和抗坏血酸等。
不同生物制剂中活性成分的分子结构各不相同，所要求的冻干保护剂的种类和浓度也各不相同，冻干保护剂的种类和浓度对冻干产品的有效性和稳定性有显著的影响。应用于本发明的冻干保护剂可以为甘露糖醇、海藻糖、右旋糖酐、胶原蛋白、HSA、BSA以及本领域常用的其他物质。在本发明中，可以采用单一的冻干保护剂，也可以采用不同浓度的几种保护剂进行协同作用。
透皮促渗剂
对于化妆品而言，其透皮传输效果至关重要。当化妆品的透皮效果较差时，一方面导致化妆品的活性成分不能到达真皮层，使得护肤效果大打折扣，另一方面，会造成皮肤表面营养成分过剩，可能会引起寄生细菌生长繁殖，导致皮肤感染。目前，促进化妆品活性成分透皮吸收的方法主要有三种：(1)化学促渗法，其是指借助一些具有促进渗透作用的化学原料，溶解角质层细胞间的脂质结构，来促进活性成分的渗透；(2)物理促渗法，主要包括离子导入、电穿孔、热能促进、超声导入、微针技术、激光技术和无针喷射给药等，其弊端是疼痛及费用昂贵，患者依从性较差；(3)药剂学促渗法，是指制备新型药物载体如微乳、脂质体、凝胶等，通过药物载体将活性成分靶向地递送至深层真皮层，其可通过改善活性成分在载体中的释放度和载体在皮肤脂质层的流动性来增加活性成分的透皮递送。
在本发明中，发明人设想通过在溶媒中添加透皮促渗剂来促进活性成分的透皮吸收。透皮促渗剂是指有助于促进化妆品中的活性成分透过皮肤表皮层到达真皮层的制剂。根据促进渗透的作用机理可分为化学促渗剂、生物促渗剂、前体药物等。常见的化学促渗剂为多元醇、氮酮、双氧环烷类等，其具有优良的促进渗透作用，但很多化学促渗剂具有生物相容性低和刺激性大的缺陷，使用不当可能会引起永久性皮肤损伤。常用的生物促渗剂有促渗肽、类脂类、保湿剂等，具有促渗范围广、生物相容性好、毒性低、无刺激性、起效迅速、选择性和特异性高的优点。前体药物是药物经过化学结构修饰后得到的在体外无活性或活性较小、在体内经酶或非酶的转化释放出活性药物而发挥药效的化合物，能增加药物的生物利用度，加强靶向性，降低药物的毒性和副作用。
适用于本发明的透皮促渗剂可以为多元醇、类脂、保湿剂和透皮增强肽中的一种或多种，其中，多元醇可以为甘油、丙二醇、1,3-丁二醇、1,2-己二醇和戊二醇中的任意一种或多种；类脂可以为神经酰胺、胆固醇、角鲨烷、蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂和氢化卵磷脂中的任意一种或多种；保湿剂可以为双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、辛酸/癸酸甘油三酯、147二甲基醚、水解葡糖氨基聚糖、乳木果油和PEG蓖麻油中的任意一种或多种；透皮增强肽可以为透皮肽TD-1(序列为ACSSSPSKHCG，分子量为1063.17)、皮肤和细胞渗透肽SPACE(序列为ACTGSTQHQCG，分子量为1092.17)、真皮定位肽DLP(ACKTGSHNQCG，分子量为1105.21)、前导肽-12(序列为HIITDPNMAEYL，分子量为16.61)和T2肽(序列为LVGVFH，分子量为670.81)中的任意一种或多种。
化妆品套装和基础面膜
化妆品套装是将具有不同作用和不同功效的单个产品组合成套装进行销售或使用的一类产品，例如，包含洁面乳、护肤水、乳液、面霜、眼霜、精华液、面膜等至少两种产品所组成的套装，这对本领域的技术人员是公知的。
在本发明中，化妆品套装可以仅包括冻干粉和溶媒，可以包括冻干粉、溶媒和基础面膜，也可以包括冻干粉、溶媒和精华液，还可以包括除了冻干粉、溶媒和/或基础面膜外的其他产品，例如可以为冻干粉+溶媒+基础面膜+精华液的组合，可以为冻干粉+溶媒+基础面膜+洁面乳的组合，可以为冻干粉+溶媒+基础面膜+面霜的组合，等等，只要该套装中包括本发明的冻干粉和溶媒，即属于本发明的保护范围。
对于基础面膜，应做广义的理解，可以为具有载体能够直接敷用的面膜，也可以为涂抹式的液体或浆体。当面膜为具有载体能够直接敷用的形式时，是通过将面膜液吸附在作为载体的面膜基材上所形成，面膜液吸附在面膜基材上的方法为本领域的通用技术。另外，面膜也具有促渗透的作用，其原理与医学上的湿敷封包相似，通过阻隔皮肤与空气的接触，局部形成一个湿度和温度都较高的环境，使皮肤水分增加，毛孔张开，渗透性增强，促进有效成分的吸收；在本发明中，面膜基材可以为无纺布、蚕丝布、生物纤维、纳米纤维等，在本发明中，面膜基材的尺寸为300～350cm2，单片面膜基材中面膜液的带液量为15～35g。面膜的敷用部位不仅仅限于面部，可以敷在人体其他部位，例如颈部、手臂等。在本发明中，市售的常见面膜均可作为基础面膜，配合本发明的冻干粉和溶媒进行使用，促进冻干粉、溶媒和面膜液中一些抗皱、保湿、美白、抗氧化等成分渗入肌肤，提升护肤效果。
具体实施方式
下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。
在本发明中，若无特别指明，实施例采用的方法为本领域通用技术，所有的设备和原料等均为本行业常用产品，可从市场中购得。
实施例1：一种包含冻干粉和溶媒的化妆品套装
(一)冻干粉
1、成分
脐带间充质干细胞上清液、乙酰基六肽-8、水解透明质酸钠、甘露糖醇和水。
2、工艺
将上述成分按照比例溶于水中，搅拌均匀，得到混合液，将混合液分装于冻干瓶、西林瓶或对接瓶中，之后放入真空冷冻干燥机中，设置冻干机的压力和冻干曲线，按照设置程序得到一种固体粉末，即为冻干粉。
冻干粉配方为：脐带间充质干细胞上清液40g、甘露糖醇1g、水解透明质酸钠0.1g、乙酰基六肽-8 35g、水23.9g。
冻干粉的制备参照本领域的通用技术进行，在本实施例中，冻干条件为：真空压力20pa，冻干曲线如下：
| 温度/℃ | -35 | -25 | -15 | 0 | 20 |
| 维持时间/h | 5 | 3 | 6 | 3 | 5 |
(二)溶媒
1、成分
水解透明质酸钠0.1％、糖原0.1％、水解胶原蛋白0.2％、维生素A 0.5％、维生素E1.0％、维生素C 0.5％、1,3丁二醇0.2％、水97.4％。
2、工艺
将上述成分按照一定配比溶于水中，搅拌均匀，分装于西林瓶中。
(三)基础面膜：
1、面膜液成分
甘油8％、乙酰基6肽-8 0.1％、类蛇毒三肽-1 0.5％、双效肉毒肽0.2％、棕榈酰五肽-4 0.2％、海藻紧肤肽0.5％、全氟加奈5％、水解胶原蛋白0.2％、水解欧洲里0.1％、柑橘果皮提取物2％、维生素C 3％、富勒烯2％、透明质酸钠3％、生物糖胶-1 2％、糖原5％、1,3丁二醇0.5％，1，2己二醇0.3％、辛酰羟肟酸1％、麦芽糊精0.1％、角鲨烷2％，去离子水64.5％。
2、工艺
将上述成分按比例在常温条件下溶于水中，搅拌均匀得到面膜液，将面膜液灌装于含有面膜基材的面膜袋中，即得基础面膜。其中，面膜基材为无纺布，面膜液的灌入量为20g。
实施例2：一种包含冻干粉和溶媒的化妆品套装
(一)冻干粉
1、成分
骨髓间充质干细胞上清液、棕榈酰三肽-1、水解透明质酸钠、海藻糖和水。
2、工艺
将上述成分按照比例溶于水中，搅拌均匀，得到混合液，将混合液分装于冻干瓶、西林瓶或对接瓶中，之后放入真空冷冻干燥机中，设置冻干机的压力和冻干曲线，按照设置程序得到一种固体粉末，即为冻干粉。
冻干粉配方为：骨髓间充质干细胞上清液0.1g、海藻糖15g、水解透明质酸钠8g、棕榈酰三肽-1 50g、水26.9g；冻干粉的制备过程如实施例1所述。
(二)溶媒
溶媒的制备方法同实施例1，溶媒的组分如下：
水解透明质酸钠5.0％、糖原5.0％、水解胶原蛋白5.0％、维生素A 0.1％、维生素E0.1％、1,2-己二醇20.0％、水64.8％。
(三)基础面膜：
基础面膜的组分和制备方法同实施例1。
实施例3：一种包含冻干粉和溶媒的化妆品套装
(一)冻干粉
1、成分
脂肪间充质干细胞上清液、棕榈酰五肽-4、水解透明质酸钠、右旋糖酐和水。
2、工艺
将上述成分按照比例溶于水中，搅拌均匀，得到混合液，将混合液分装于冻干瓶、西林瓶或对接瓶中，之后放入真空冷冻干燥机中，设置冻干机的压力和冻干曲线，按照设置程序得到一种固体粉末，即为冻干粉。
冻干粉配方为：脂肪间充质干细胞上清液20g、右旋糖酐5g、水解透明质酸钠5g、棕榈酰五肽-4 40g、水30g；冻干粉的制备过程如实施例1所述。
(二)溶媒
溶媒的制备方法同实施例1，溶媒的组分如下：
水解透明质酸钠8.0％、糖原8.0％、水解胶原蛋白8.0％、维生素A 1.5％、维生素E2.0％、维生素C 1.5％、水解葡糖氨基聚糖10.0％、去离子水61.0％。
(三)基础面膜：
基础面膜的组分和制备方法同实施例1。
实施例4：一种包含冻干粉和溶媒的化妆品套装
(一)冻干粉
1、成分
胎盘间充质干细胞上清液、类蛇毒三肽-1、水解透明质酸钠、HSA和水。
2、工艺
将上述成分按照比例溶于水中，搅拌均匀，得到混合液，将混合液分装于冻干瓶、西林瓶或对接瓶中，之后放入真空冷冻干燥机中，设置冻干机的压力和冻干曲线，按照设置程序得到一种固体粉末，即为冻干粉。
冻干粉配方为：胎盘间充质干细胞上清液20g、HSA 5g、水解透明质酸钠5g、类蛇毒三肽-1 40g、水30g；冻干粉的制备过程如实施例1所述。
(二)溶媒
溶媒的制备方法同实施例1，溶媒的组分如下：
水解透明质酸钠10.0％、糖原10.0％、水解胶原蛋白10.0％、维生素A 3.0％、维生素E4.0％、维生素C 3.0％、乳木果油5.0％、氢化卵磷脂1.0％、水54.0％。
(三)基础面膜：
基础面膜的组分和制备方法同实施例1。
实施例5：一种包含冻干粉和溶媒的化妆品套装
(一)冻干粉
1、成分
胎盘间充质干细胞上清液、寡肽-1、水解透明质酸钠、甘露糖醇和水。
2、工艺
将上述成分按照比例溶于水中，搅拌均匀，得到混合液，将混合液分装于冻干瓶、西林瓶或对接瓶中，之后放入真空冷冻干燥机中，设置冻干机的压力和冻干曲线，按照设置程序得到一种固体粉末，即为冻干粉。
冻干粉配方为：胎盘间充质干细胞上清液90g、甘露糖醇1g、水解透明质酸钠5g、寡肽-10.1g、水3.9g；冻干粉的制备过程如实施例1所述。
(二)溶媒
溶媒的制备方法同实施例1，溶媒的组分如下：
水解透明质酸钠10.0％、糖原5.0％、水解胶原蛋白5.0、维生素A 3.0％、维生素E4.0％、维生素C 3.0％、透皮肽TD-1 5.0％、水65.0％。
(三)基础面膜：
基础面膜的组分和制备方法同实施例1。
实施例6：一种包含冻干粉和溶媒的化妆品套装
(一)冻干粉
1、成分
脐带间充质干细胞上清液、乙酰基六肽-8、寡肽-1、类蛇毒三肽-1、水解透明质酸钠、甘露糖醇和去离子水。
2、工艺
将上述成分按照比例溶于水中，搅拌均匀，得到混合液，将混合液分装于冻干瓶、西林瓶或对接瓶中，之后放入真空冷冻干燥机中，设置冻干机的压力和冻干曲线，按照设置程序得到一种固体粉末，即为冻干粉。
冻干粉配方为：脐带间充质干细胞上清液10g、甘露糖醇5g、水解透明质酸钠8g、乙酰基六肽-8 20g、棕榈酰五肽-4 20g、类蛇毒三肽-1 10g、水27g；冻干粉的制备过程如实施例1所述。
(二)溶媒
溶媒的制备方法同实施例1，溶媒的组分如下：
水解透明质酸钠5.0％、糖原5.0％、水解胶原蛋白5.0％、维生素A 2.0％、维生素E3.0％、维生素C 1.0％、1,2-己二醇2.5％、氢化卵磷脂1.0％、乳木果油5.0％、透皮肽TD-15.0％、水65.5％。
(三)基础面膜：
基础面膜的组分和制备方法同实施例1。
对比例1
冻干粉中不加乙酰基六肽-8，其他与实施例1相同。
对比例2
冻干粉中不加脐带间充质干细胞上清液，其他与实施例1相同。
对比例3
溶媒中不加透皮促渗剂1,3丁二醇，其他与实施例1相同。
对比例4
以水作为溶媒，冻干粉的组分与实施例1相同。
效果实验
(一)冻干粉与溶媒的效果实验
1、志愿者的选择及分组
选取符合皮肤衰老标准的健康志愿者200名，其中，男性80名，女性120名，年龄在28-49岁之间，平均年龄为37.5岁，均无严重的系统疾病、免疫缺陷或自身免疫疾病，对化妆品无过敏，面部无急性炎症，未使用激素类药物或免疫抑制剂，未参加其他临床试验，未涂抹外用制剂。将此200人随机分为10组，每组20人。
皮肤衰老主要表现为：干燥、粗糙、脱屑、产生明显皱纹，面色萎黄，皮肤敏感性增加，弹性降低。
2、方法
实验组：在使用前，分别取上述实施例1-6和对比例1-4的1g冻干粉与10mL溶媒混合均匀，完全溶解后分别得到皮肤外用制剂。早晚洁面后，将所制备的皮肤外用制剂均匀涂抹于面部皮肤并进行适当时间按摩，疗程为2个月。
对照组：对照组1仅涂抹实施例1所述的溶媒，对照组2仅涂抹对比例3所述的溶媒，溶媒的使用方法同实验组所述。
连续使用2个月后，由专人对治疗前后的症状进行评分，评价使用效果。
3、评分标准
(1)皱纹：采用皮肤快速光学成像法(FOITS)对使用产品前后的皮肤纹理进行测量，眼角处有浅细鱼尾纹，额部浅显皱纹者计为1分；眼角处、额部、面颊部粗尾纹者计为2分；眼角处、额部、面颊部、口周处有明显皱纹者计为3分。
(2)皮肤弹性：按压后能迅速恢复但按压部周围产生较多皮纹计为1分；皮肤弹性欠佳，按压后1-2s能恢复计为2分，皮肤弹性差，按压后超过2s能恢复计为3分。
(3)粗糙、干燥：面部、额部、口周有一处部位皮肤触之不光滑计为1分；面颊、额部、口周有两处部位皮肤触之不光滑或一处部位触之碍手伴随脱屑计为2分；面颊、额部、口周皮肤触之均不光滑或大于一处部位皮肤触之碍手伴随脱屑计为3分。
4、疗效评定标准
症状积分分值改善率＝(治疗前症状积分分值-治疗后症状积分分值)/治疗前分值×100％。显效：症状积分值减少≥70％；有效：症状积分值减少≥50％；无效：症状未见明显改善或反见恶化，症状积分值减少＜50％。
根据使用前后皮肤变化情况进行统计，计算有效率，有效率＝起效病例数/总病例数，即(显效+有效)/总人数，使用结果如下表所示。
5、评价结果
表1不同组别在治疗前后的临床症状积分比较(分)
| 组别 | 人数 | 使用前积分平均值 | 使用后积分平均值 | 平均值差值 |
| 实施例1 | 20 | 13.90 | 5.21 | 8.69 |
| 实施例2 | 20 | 13.98 | 5.34 | 8.64 |
| 实施例3 | 20 | 14.36 | 6.96 | 7.40 |
| 实施例4 | 20 | 14.11 | 6.99 | 7.12 |
| 实施例5 | 20 | 14.23 | 5.01 | 9.22 |
| 实施例6 | 20 | 14.05 | 3.01 | 11.04 |
| 对比例1 | 20 | 14.28 | 8.39 | 5.89 |
| 对比例2 | 20 | 14.05 | 9.68 | 4.37 |
| 对比例3 | 20 | 14.14 | 9.36 | 4.78 |
| 对比例4 | 20 | 13.79 | 10.51 | 3.28 |
| 对照组1 | 20 | 13.84 | 12.01 | 1.83 |
| 对照组2 | 20 | 14.77 | 13.18 | 1.59 |
表2不同组别的疗效比较(分)
从实验结果可以看出，相较于对比例1和对比例2，本发明的产品显示出了更为显著的功效，能够明显改善面部皮肤状况，说明干细胞上清液和小分子多肽复配所制备的冻干粉相较于两者单独使用具有更好的效果，可能是由于干细胞上清液中多种生长因子与小分子多肽之间协同增效，使得所制备的产品效果更佳。
相较于对比例3，本发明的产品更能有效地缓解皮肤衰老，我们认为是溶媒中的透皮促渗制剂能够促进小分子多肽、干细胞上清液中的生长因子、保湿成分等活性成分从皮肤表面进入深层真皮层，从而使得护肤效果更佳。
相较于对比例4，我们发现以水解透明质酸钠、糖原等组分复配而成的溶媒相较于仅仅以水作为溶媒能够取得更好的护肤效果。
(二)透皮促渗剂的促渗效果
1、仪器与样品
Franz扩散池，体外鼠皮(由同济医院附属东方医院动物室提供)，乙酰基六肽-8，寡肽-1，供试透皮促渗剂为1,3-丁二醇、1,2-己二醇、神经酰胺、角鲨烷、氢化卵磷脂、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、乳木果油、水解葡糖氨基聚糖和透皮肽TD-1(上海贤恩)。
2、方法
供给液：以去离子水为溶剂，分别配制含有不同透皮促渗剂的乙酰基六肽-8溶液、含有不同透皮促渗剂的寡肽-1溶液备用，以不含透皮促渗剂的乙酰基六肽-8溶液和不含透皮促渗剂的寡肽-1溶液作为对照液，并以不含乙酰基六肽-8和寡肽-1，只含有相应透皮促渗剂的溶液作为空白组。
接收液：0.9％NaCl溶液。
实验方法：将鼠皮用铁架子固定在两室扩散池之间，向垂直扩散池的接受池内加入5mL接收液，向供给池内分别加入供给液，以保鲜膜密封住。将装置置于37.0±0.5℃恒温水浴中，于搅拌速度为400r/min进行搅拌。当样品渗透1,2,4,6,8,10,12,24h后，分别取样，每次取样同时向接收池中补充等量的接受液并排除池中的气泡。同时补加等量接受液。检测接收液中的乙酰基六肽-8和寡肽-1的质量浓度，并根据公式计算累积透过量Q(mg·cm-2)。
式中，Q为累积透过量，S为透皮扩散面积(扩散池R＝0.6cm，S＝1.1304cm2)，V1为Franz扩散池接受液体积(V1＝5mL)，ρn为第n次取样时接受液的质量浓度(g·L-1)，ρi为第i次取样时接受液的质量浓度(g·L-1)，V2为取样量。
多肽含量测定：准确称取牛血清白蛋白对照品20mg，置于50mL量瓶中用蒸馏水定容，得浓度为0.4g·L-1牛血清白蛋白对照品贮备溶液。准确吸取牛血清白蛋白对照品溶液0.1,0.3,0.5,0.7,0.9mL加水定容至1.0mL，分别加入5.0mL试剂甲，迅速混合后放入55℃水浴10min。逐管加入0.5mL试剂乙，立即混匀，55℃水浴反应30min，利用紫外分光光度计在700nm处测定吸光度Y，绘制标准曲线。
用福林酚法检测样品中的多肽含量，精密称取各样品100mg定溶于10mL量瓶，取1.0mL分别加入5.0mL试剂甲，迅速混合后放入55℃水浴10min。逐管加入0.5mL试剂乙，立即混匀，55℃水浴反应30min，在700nm处测定吸光度Y，根据标准曲线计算各样品的多肽含量。
其中，试剂甲：(A)10g Na2CO3+2g NaOH+0.25g酒石酸甲钠(KNaC4H4O4·4H2O)溶于500mL去离子水；(B)0.5g硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶解于100mL去离子水；将(A)与(B)按体积比50:1混合即为试剂甲。试剂乙：福林酚-去离子水(1:1)混合。实验结果如下表所示：
表3不同的透皮促渗剂对乙酰基六肽-8透皮的影响
表4不同的透皮促渗剂对寡肽-1透皮的影响
从实验结果可以看出，1,3-丁二醇、1,2-己二醇、神经酰胺、角鲨烷、氢化卵磷脂、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、乳木果油、水解葡糖氨基聚糖和透皮肽TD-1均能够明显促进小分子多肽的透皮渗透，其中，多种透皮促渗剂的复配显示出了更为优良的透皮促渗作用。
不同的透皮促渗剂的透皮促渗作用机理不同，其中，多元醇类透皮促渗剂具有吸水保湿性，其可以水化角质层，同时可以与细胞间脂质融合，打开通道，使得活性成分易于透过，并且其可增加小分子多肽的溶解性，使小分子多肽更易分配进入皮肤，选择性地促进小分子的透皮吸收；类脂类透皮促渗剂可以通过亲脂基团与皮肤脂质双分子层融合，促进活性成分穿透角质层进入真皮层；保湿剂类透皮促渗剂可水化角质层，增加角质层细胞间隙，从而有利于活性成分被动扩散进入真皮层；透皮增强肽可能是通过其与皮肤成分之间的某些特定相互作用而打开皮肤屏障，从而促进活性成分的渗透。
(三)面膜套装的使用效果
1、样品
实施例1-6、对比例1-4制备的面膜套装。
2、志愿者的选择及分组
选取健康志愿者160名，其中，男性60名，女性100名，年龄在34-55岁之间，平均年龄为41.2岁，均无严重的系统疾病、免疫缺陷或自身免疫疾病，对化妆品无过敏，面部无急性炎症，未使用激素类药物或免疫抑制剂，未参加其他临床试验，未涂抹外用制剂。将此160人随机分为8组，每组20人。
3、方法
洁面后使用受试面膜，每位受试者每天使用同一种面膜，每天一次，连续使用30天，在试验期间面部不使用其他任何护肤产品，并在试验期间避免过度的日光暴晒。本发明的面膜套装的使用方法为：1)将溶媒倒入冻干粉中溶解；2)将溶解后的冻干粉精华均匀涂抹面部；3)将面膜袋中未吸附到面膜基材上的面膜液轻轻涂抹到脸上；取出面膜基材敷帖15-20分钟后取下，轻拍精华至全部吸收。30天后评价其使用感受及皮肤纹理情况。
4、评价标准
志愿者自我评价使用后的皮肤纹理状况和皮肤保湿情况，其中，皮肤纹理情况通过肉眼直接观察。
皮肤纹理情况：A：有效，皮肤纹理明显变细腻、脸部细纹明显减少、深纹变浅；B：一般，皮肤纹理有变浅，减少不明显；C：皮肤纹理与实验前无变化。
皮肤保湿情况：A：皮肤保湿效果很好；B：皮肤保湿效果较好：C：皮肤保湿效果一般，皮肤有点干燥。
5、使用结果
根据使用前后皮肤变化情况进行统计，计算有效率，有效率(％)＝起效病例数/总病例数*100％，即(A+B)/20*100％，使用结果如下表所示：
表5面膜使用后的皮肤纹理情况(人数/个)
| 组别 | A | B | C | 有效率/％ |
| 实施例1 | 12 | 6 | 2 | 90 |
| 实施例2 | 13 | 6 | 1 | 95 |
| 实施例3 | 12 | 6 | 2 | 90 |
| 实施例4 | 14 | 5 | 1 | 95 |
| 实施例5 | 12 | 7 | 1 | 95 |
| 实施例6 | 13 | 6 | 1 | 95 |
| 对比例1 | 6 | 9 | 5 | 75 |
| 对比例2 | 7 | 4 | 9 | 55 |
| 对比例3 | 4 | 8 | 8 | 60 |
| 对比例4 | 2 | 6 | 12 | 40 |
表6面膜使用后的皮肤保湿情况
| 组别 | A | B | C | 有效率/％ |
| 实施例1 | 11 | 7 | 2 | 90 |
| 实施例2 | 12 | 7 | 1 | 95 |
| 实施例3 | 10 | 8 | 2 | 90 |
| 实施例4 | 12 | 6 | 2 | 90 |
| 实施例5 | 13 | 6 | 1 | 95 |
| 实施例6 | 15 | 4 | 1 | 95 |
| 对比例1 | 4 | 8 | 8 | 60 |
| 对比例2 | 6 | 5 | 9 | 55 |
| 对比例3 | 3 | 7 | 10 | 50 |
| 对比例4 | 3 | 4 | 13 | 35 |
从上述实验结果可以看出，实施例1-6的面膜套装相较于对比例1-4能够更显著的淡化皱纹，使得皮肤光滑紧致，并且具有较好的保湿效果。
采用其他小分子多肽与其他干细胞上清液复配而成的冻干粉进行实验获得了类似的实验结果，此处不再一一赘述。
细胞毒性实验
1、仪器
超净工作台(LCB-2F，上海龙跃)、荧光显微镜(LEICA DMI8，德国LEICA)、培养箱(ZQZY-75BN，上海知楚)、酶标仪(Synergy H1，BIO TEK)、天平(JA1003N，上海佑科)、摇床(TS-200，Kylin-Bell Lab)。
2、实验样品及试剂
样品为实施例1所使用的干细胞上清液(计为A样品)、实施例1所制备冻干粉+溶媒(混合比例w/w为1:1，计为B样品)，实施例1所制备的冻干粉+溶媒+面膜液(混合质量比例w/w为1:1:25，计为C样品)，所用到的试剂为L929细胞(购买于中国科学院细胞库)、PBS、MTT、DMSO、无血清培养液。MTT溶液的配制方法为：称取MTT 0.5g，溶于100mL的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存，或分装保存在-20℃的冰箱。PBS配方为：NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4 1.44g，KH2PO4 0.24g调pH7.4，定容1L。
3、实验方法
(1)细胞消化：将复苏培养的细胞，弃去培养液，加入胰酶3mL，孵育，待有细胞悬浮起来，再加入10mL培养液稀释解除消化。
(2)将细胞消化后，加入3.5mL新鲜有血清培养液，滴加到血球计数板上(16*25)，进行计数，调整细胞悬液浓度约为5*104个/mL，将96孔板边缘孔用200μL无菌PBS填充(防止水分蒸发)，中间列加入200μL细胞悬液，调节每孔约10000个细胞。
(3)将铺好的96孔板放入培养箱于37℃，5％CO2培养24h后，加入供试样品，加样方法为：弃掉原有培养液，加入200μL新鲜完全无血清培养液，再加入供试样品80μL。加样设置如下表所示，其中，空白组含有相同体积的无血清培养液，不含细胞；阴性对照组含有无血清培养液和细胞，不含供试样品；阳性对照：加入质量浓度为10ng/mL的EGF维持培养液80μL。
表7 96孔板加样设置
| PBS | PBS | PBS | PBS | PBS | PBS | PBS | PBS | PBS | PBS | PBS | PBS |
| 空白对照 | A1 | A2 | A3 | A4 | A5 | A6 | B1 | B2 | B3 | 阳性对照 | 阴性对照 |
| 空白对照 | A1 | A2 | A3 | A4 | A5 | A6 | B4 | B5 | B6 | 阳性对照 | 阴性对照 |
| 空白对照 | A1 | A2 | A3 | A4 | A5 | A6 | B1 | B2 | B3 | 阳性对照 | 阴性对照 |
| 空白对照 | C1 | C2 | C3 | C4 | C5 | C6 | B4 | B5 | B6 | 阳性对照 | 阴性对照 |
| 空白对照 | C1 | C2 | C3 | C4 | C5 | C6 | B1 | B2 | B3 | 阳性对照 | 阴性对照 |
| 空白对照 | C1 | C2 | C3 | C4 | C5 | C6 | B4 | B5 | B6 | 阳性对照 | 阴性对照 |
| PBS | PBS | PBS | PBS | PBS | PBS | PBS | PBS | PBS | PBS | PBS | PBS |
表中：A1-A6分别表示向96孔板中所加入的A样品的质量百分比浓度分别为2.5％、5％、15％、30％、60％和100％，B1-B6分别表示向96孔板中所加入的B样品的质量百分比浓度分别为2.5％、5％、15％、30％、60％和100％，C1-C6分别表示向96孔板中所加入的C样品的质量百分比浓度分别为2.5％、5％、15％、30％、60％和100％。
(3)放入培养箱培养24h后，每孔加入20μL MTT(质量浓度为5mg/mL)溶液，于37℃继续培养4h后，终止培养。测试前弃去培养液后每孔加入DMSO 150μL，摇床低速振荡10min，用酶标仪于490nm测每孔的吸光度A值。根据以下公式计算细胞增值率：细胞相对增殖率RGR(％)＝(实验组平均A值-空白对照平均A值)/(阴性对照组平均A值-空白对照平均A值)×100％。实验组的RGR结果如下表所示：
表8不同质量百分比浓度的样品对L929细胞相对增殖率的影响
| A样品 | RGR/％ | B样品 | RGR/％ | C样品 | RGR/％ |
| 2.5％ | 100.1 | 2.5％ | 101.1 | 2.5％ | 99.8 |
| 5％ | 112.1 | 5％ | 123.1 | 5％ | 103.1 |
| 15％ | 158.5 | 15％ | 134.4 | 15％ | 178.1 |
| 30％ | 225.8 | 30％ | 189.1 | 30％ | 267.1 |
| 60％ | 289.3 | 60％ | 221.1 | 60％ | 298.1 |
| 100％ | 278.1 | 100％ | 234.2 | 100％ | 304.2 |
根据美国药典中细胞相对增值率与细胞毒性分级的关系标准评定样品的毒性，细胞毒性分级标准：RGR≥100％为0级；75％-99％为1级；50％-74％为2级；25％-49％为3级；1％-24％为4级，0为5级。0级和1级被认为没有细胞毒性，2级为轻度细胞毒性，3级和4级为中度细胞毒性，5级为明显的细胞毒性。
通过显微镜观察发现加样前后细胞状态良好，基本呈现椭圆、梭形、不规则三角形，较少呈圆形。从细胞相对增值率结果可以看出，实施例1所使用的干细胞上清液(计为A样品)、所制备冻干粉+溶媒(计为B样品)，以及所制备的冻干粉+溶媒+面膜液(计为C样品)均无细胞毒性，即使加入样品质量百分比为100％时，仍无细胞毒性，说明本发明的产品具有较高的安全性，无毒副作用。
另外，测定阳性对照EGF组的RGR为108.9％，本发明的产品相较于阳性对照能够更加明显地促进成纤维细胞的增殖，具有优良的缓解衰老、促进皮肤修复的作用。
通过对实施例2-6的样品进行细胞毒性测试，发现了类似的实验结果，此处不再一一赘述。抗皱实验-促进细胞增殖
1、实验试剂及供试样品
供试细胞：成纤维细胞(NIH/3T3，购买自中国科学院细胞库)；
样品1：10g脐带间充质干细胞上清液+10g水，混匀；
样品2：10g乙酰基六肽-8+10g水，混匀；
样品3：10g脐带间充质干细胞上清+10g乙酰基六肽-8+10g水，混匀；
2、实验方法
(1)将复苏培养的细胞，弃去培养液，加入0.25％胰蛋白酶消化液消化细胞，待有细胞悬浮起来，将细胞悬液转移至离心管中，再加入2mL无血清培养液终止消化，1000r/min离心5min。离心完毕后弃上清，加入2mL有血清培养液充分吹打，控制细胞浓度为每1mL含1.0～5.0×105个细胞，于37℃，5％CO2培养。
(2)细胞传代24h后，弃去培养瓶中的培养液，消化和收集细胞，用有血清培养液配成每每1mL含5.0～8.0×105个细胞的细胞悬液，接种于96孔板中，每孔200μL，于37℃，5％CO2培养。
(3)24h后换成无血清培养液，加入供试样品1-3，每孔80μL，并设置空白对照组(只加入80μL的无血清培养液)，于37℃，5％CO2培养48h后每孔加入MTT溶液20μL，于37℃，5％CO2培养5h后，弃去96孔板中的液体，向每孔中加入二甲基亚砜150μL，测定490nm处的吸光度，计算细胞增殖情况。细胞存活率＝实验组吸光值A490/空白对照组吸光值A490×100％。
实验结果如图3所示，脐带间充质干细胞上清液和乙酰基六肽-8均能够促进成纤维细胞增殖，其中脐带间充质干细胞上清液的促进增殖作用高于乙酰基六肽-8，而脐带间充质干细胞上清液和乙酰基六肽-8复配后的样品的促进增殖作用显著优于脐带间充质干细胞上清液和乙酰基六肽-8，可能是干细胞上清液与小分子多肽之间协同作用，从而导致促进增殖作用更优，说明干细胞上清液与小分子多肽能够通过促进成纤维细胞增殖而发挥抗衰老作用。
采用其他小分子多肽与其他干细胞上清液进行实验获得了类似的实验结果，此处不再一一赘述。
抗光老化实验-抵抗UV辐射
1、实验试剂及供试样品
供试细胞：成纤维细胞(NIH/3T3，购买自中国科学院细胞库)；
样品1：10g脐带间充质干细胞上清液+10g水，混匀；
样品2：10g乙酰基六肽-8+10g水，混匀；
样品3：10g脐带间充质干细胞上清+10g乙酰基六肽-8+10g水，混匀；
2、实验方法
(1)将复苏培养的细胞，弃去培养液，加入0.25％胰蛋白酶消化液消化细胞，待有细胞悬浮起来，将细胞悬液转移至离心管中，再加入2mL无血清培养液终止消化，1000r/min离心5min。离心完毕后弃上清，加入2mL有血清培养液充分吹打，控制细胞浓度为每1mL含1.0～5.0×105个细胞，于37℃，5％CO2培养。
(2)细胞传代24h后，弃去培养瓶中的培养液，消化和收集细胞，用有血清培养液配成每每1mL含5.0～8.0×105个细胞的细胞悬液，接种于96孔板中，每孔200μL，于37℃，5％CO2培养。
(3)24h后换成无血清培养液，加入供试样品1-3，每孔80μL，并设置空白对照组(只加入80μL的无血清培养液，不接受辐照)，阳性对照组(加入80μL的无血清培养液，接受辐照)，将加入供试样品的实验组和阳性对照组置于紫外灯下进行辐照处理，空白对照组不进行辐照处理。辐照条件：辐射剂量20mJ/cm2，时间90s，细胞距离光源20cm。将辐照处理后的样品于37℃，5％CO2培养48h后每孔加入MTT溶液20μL，于37℃，5％CO2培养5h后，弃去96孔板中的液体，向每孔中加入二甲基亚砜150μL，测定490nm处的吸光度，计算细胞增殖情况。细胞存活率＝实验组吸光值A490/空白对照组吸光值A490×100％。
实验结果如图4所示，从图可以看出，成纤维细胞经UV辐射后，细胞存活率明显降低(存活率42.5％)，与空白对照组比较具有显著差异。与阳性对照组相比，脐带间充质干细胞上清液处理组的存活率60.2％，乙酰基六肽-8处理组的存活率为55.3％，说明两者都能够提高光老化成纤维细胞的增殖活性，其中脐带间充质干细胞上清液的促进增殖作用高于乙酰基六肽-8，而脐带间充质干细胞上清液和乙酰基六肽-8复配处理组的存活率达到89.5％，显著优于脐带间充质干细胞上清液和乙酰基六肽-8单独使用的效果，可能是干细胞上清液与小分子多肽之间协同作用。以上结果说明干细胞上清液与小分子多肽能够提高光老化成纤维细胞的增殖活性，对细胞损失具有一定的修复作用。
采用其他小分子多肽与其他干细胞上清液进行实验获得了类似的实验结果，此处不再一一赘述。
本发明的产品具有抗皱、保湿、抗氧化、抗光老化等作用，能够显著缓解皮肤衰老，修复受损肌肤。并且本发明的产品符合国家颁布的《化妆品卫生规范2007》中的各项指标，不含任何有毒物质，无副作用。本发明的面膜套装初次使用，每天敷1片面膜，连续使用4周，适应并加强使用效果。之后按照以上程序，每周敷2-3次面膜。
上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。
Claims (17)
1.一种冻干粉，其特征在于，所述冻干粉由包括以下质量百分比组分的原料经冷冻干燥制备而成：干细胞上清液0.1-90.0％，小分子多肽0.1-50.0％和冻干保护剂1.0-15.0％。
2.根据权利要求1所述的冻干粉，其特征在于，所述制备冻干粉的原料还包括以下质量百分比的组分：水解透明质酸钠0.1-8.0％和水0.5-30.0％。
3.根据权利要求1所述的冻干粉，其特征在于，所述干细胞上清液为骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和脐带间充质干细胞上清液中的任意一种或多种。
4.根据权利要求1所述的冻干粉，其特征在于，所述小分子多肽为乙酰基四肽-2、乙酰基六肽-8、乙酰基七肽、乙酰基六肽-1、棕榈酰三肽-1、棕榈酰四肽-7、棕榈酰五肽-4、棕榈酰寡肽、类蛇毒三肽-1、双效肉毒肽、海藻紧肤肽、EGF、寡肽-1、寡肽-3、寡肽-4、寡肽-5、十肽-4和抗坏血酸多肽中的任意一种或多种。
5.根据权利要求1所述的冻干粉，其特征在于，所述冻干保护剂为甘露糖醇、海藻糖、右旋糖酐、胶原蛋白、HSA和BSA中的任意一种或多种。
6.一种溶媒，其特征在于，所述溶媒包括以下质量百分比的组分：水解透明质酸钠0.1-10.0％、糖原0.1-10.0％、水解胶原蛋白0.1-10.0％、维生素0.2-10.0％、透皮促渗剂0.2-20.0％和余量的水。
7.根据权利要求6所述的溶媒，其特征在于，所述透皮促渗剂为多元醇、类脂、保湿剂和透皮增强肽中的一种或多种，其中，所述多元醇为甘油、丙二醇、1,3-丁二醇、1,2-己二醇和戊二醇中的任意一种或多种；所述类脂为神经酰胺、胆固醇、角鲨烷、蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂和氢化卵磷脂中的任意一种或多种；所述保湿剂为双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、辛酸/癸酸甘油三酯、147二甲基醚、水解葡糖氨基聚糖、乳木果油和PEG蓖麻油中的任意一种或多种；所述透皮增强肽为透皮肽TD-1、皮肤和细胞渗透肽SPACE、真皮定位肽DLP、前导肽-12和T2肽中的任意一种或多种。
8.根据权利要求6所述的溶媒，其特征在于，所述维生素为维生素A、维生素E、维生素C中的任意一种或多种。
9.一种化妆品套装，其特征在于，所述化妆品套装包括：
1)冻干粉，所述冻干粉由包括以下质量百分比组分的原料经冷冻干燥制备而成：干细胞上清液0.1-90.0％，小分子多肽0.1-50.0％和冻干保护剂1.0-15.0％。
2)溶媒，所述溶媒包括以下质量百分比的组分：水解透明质酸钠0.1-10.0％、糖原0.1-10.0％、水解胶原蛋白0.1-10.0％、维生素0.2-10.0％、透皮促渗剂0.2-20.0％和余量的水。
10.根据权利要求9所述的化妆品套装，其特征在于，所述制备冻干粉的原料还包括以下质量百分比的组分：水解透明质酸钠0.1-8.0％和水0.5-30.0％。
11.根据权利要求9所述的化妆品套装，其特征在于，所述冻干粉中的干细胞上清液为骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和脐带间充质干细胞上清液中的任意一种或多种。
12.根据权利要求9所述的化妆品套装，其特征在于，所述冻干粉中的小分子多肽为乙酰基四肽-2、乙酰基六肽-8、乙酰基七肽、乙酰基六肽-1、棕榈酰三肽-1、棕榈酰四肽-7、棕榈酰五肽-4、棕榈酰寡肽、类蛇毒三肽-1、双效肉毒肽、海藻紧肤肽、EGF、寡肽-1、寡肽-3、寡肽-4、寡肽-5、十肽-4和抗坏血酸多肽中的任意一种或多种。
13.根据权利要求9所述的化妆品套装，其特征在于，所述冻干粉中的冻干保护剂为甘露糖醇、海藻糖、右旋糖酐、胶原蛋白、HSA和BSA中的任意一种或多种。
14.根据权利要求9所述的化妆品套装，其特征在于，所述溶媒中透皮促渗剂为多元醇、类脂、保湿剂和透皮增强肽中的一种或多种，其中，所述多元醇为甘油、丙二醇、1,3-丁二醇、1,2-己二醇和戊二醇中的任意一种或多种；所述类脂为神经酰胺、胆固醇、角鲨烷、蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂和氢化卵磷脂中的任意一种或多种；所述保湿剂为双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、辛酸/癸酸甘油三酯、147二甲基醚、水解葡糖氨基聚糖、乳木果油和PEG蓖麻油中的任意一种或多种；所述透皮增强肽为透皮肽TD-1、皮肤和细胞渗透肽SPACE、真皮定位肽DLP、前导肽-12和T2肽中的任意一种或多种。
15.根据权利要求9所述的化妆品套装，其特征在于，所述溶媒中的维生素为维生素A、维生素E、维生素C中的任意一种或多种。
16.根据权利要求9所述的化妆品套装，其特征在于，所述化妆品套装还包括基础面膜，所述基础面膜包括面膜液和面膜基材。
17.如权利要求9-16之一所述的化妆品套装的使用方法，其特征在于，将所述冻干粉与溶媒按质量比为1:1-5混合使用。
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