TWI726730B - 一種處理細胞老化的方法 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種散血草( Ajuga taiwanensisNakai ex Murata)的酒精萃取物，其可顯著抑制人類真皮纖維母細胞的老化現象，此外，散血草的酒精萃取物還可抑制切絲蛋白-1 (cofilin-1)的表現，切絲蛋白-1是一種參與肌動蛋白動力學與細胞型態的蛋白質。本發明之中草藥萃取物在適當的濃度下，可更有效抑制細胞的老化，且不會過度抑制細胞的生存力與生長。

Description

一種處理細胞老化的方法
本發明係關於一種散血草( Ajuga taiwanensisNakai ex Murata)的萃取物及其用於治療細胞衰老的方法。較特別地，該方法包含給予受試者一有效劑量的抗衰老組合物，其中該抗衰老組合物包含散血草的酒精萃取物。
細胞衰老是一種不可逆的生理過程，因為染色體端粒會隨著細胞的不斷分裂而逐漸缺失，除此之外，細胞的形狀也會變得較大且扁平，並進入細胞週期的G0期以避免進行DNA複製。儘管無法直接控制老化細胞中端粒的缺失，但是有許多成果已強調可藉由幫老化細胞補充生長因子，或使用生長因子重塑老化細胞的細胞形狀，以暫時性逆轉其老化的表現型。
透過觀察皮膚結構的改變，可以容易的察覺老化的出現，因為此為一種不可逆的生理過程，染色體端粒的缺失伴隨著不間斷的細胞分裂，會造成細胞的擴大與扁平化。切絲蛋白-1(cofilin-1)， 為一種來自肌動蛋白解聚因子(actin de-polymerization factor, ADF)/切絲蛋白家族的分子，在維持細胞形態方面扮演著重要的角色，雖然目前仍不清楚其基本機制，但已有證據顯示切絲蛋白-1與細胞的衰老有關。
切絲蛋白-1(CFL-1)是一種小蛋白質(~19kD)，存在於真核生物中，屬於肌動蛋白解聚因子/切絲蛋白家族(Wang H , et al. Nucleic acids research,29(8):1653-1660, 2001)，肌動蛋白解聚因子/切絲蛋白家族包含ADF、CFL-1與CFL-2，其中CFL-1與ADF為非肌肉同種型(non-muscle isoforms)。然而，於哺乳細胞中，CFL-1的表現量較ADF更高，CFL-1基因的剔除會導致小鼠死亡，這也表示CFL-1與ADF的功能並非多餘的(Gurniak CB, Perlas E, & Witke W., Developmental biology278(1):231-241, 2005)；另一方面，抑制ADF/CFL家族的蛋白質亦會造成酵母菌、果蠅、非洲爪蟾的囊胚細胞(blastomere)出現非染色體分離的細胞分裂失敗(Bamburg JR., Annual review of cell and developmental biology15:185-230, 1999; Bamburg JR, McGough A, & Ono S., Trends in cell biology9(9):364-370, 1999)。ADF/CFL的基本功能是通過解聚或切斷肌動蛋白絲(actin filament)以加速肌動蛋白絲的更新，有趣的是，CFL-1可增強肌動蛋白的聚合，以利於細胞的移動與其他生理行為，而非破壞肌動蛋白絲(Elam WA, Kang H, & De la Cruz EM., FEBS letters587(8):1215-1219, 2013)，細胞的流動性、型態、細胞週期進程與細胞分裂均取決於CFL-1調控肌動蛋白細胞骨架的活性，因此，CFL-1的過度表現會促進細胞老化，而抑制老化細胞中的CFL-1表現則可減少老化的表現型。美國專利US 8,574,852揭示了一種方法，其中包含檢測細胞或組織樣品中的CFL-1表現程度，以判定培養的細胞或組織樣品的細胞老化情況。
中草藥被認為可用於維持與調節生理狀況，包含老化細胞的替換補充。散血草( Ajuga. taiwanensis)，屬於唇形科植物，是一種多年生的草本植物， 主要可見於中國大陸、台灣、馬來西亞和非洲，散血草整株可用於抗發炎、緩解腫脹與發紅，在台灣，散血草亦被用於治療山羊、抗利尿劑、瘧疾與發炎相關疾病，已知散血草中含有植物固醇(sitosterol)、酚醛化合物(Ardekani MS , et al., Journal of Essential Oil Bearing Plants13(1):45-51, 2010; Manguro LOA, et al., Journal of Asian natural products research9(7):617-629, 2007)和不同種類的新環戊烷二萜(neo-clerodane diterpenes)(Chiou et al., P hytochemistry80:64-69(2012; Castro et al., J Nat Prod74:1036-1041, 2011)與植物脫皮固醇(phytoecdysteroid)(Chan et al., Chem Pharm Bull.53:836-838)。然而，目前沒有任何證據或公開資訊揭露散血草具有抗老化、美白或保濕的作用。於本發明中，已由數據證實散血草可有效抑制CFL-1的表現，並且減少老化相關的半乳糖苷酶(senescence associated-galactosidase, SA-β-gal)的表現，表示散血草具有預防與/或治療細胞老化的功效。
一方面，本發明提供一散血草酒精萃取物(alcohol extract of A. taiwanensis,ATE)，可於人類真皮纖維母細胞(human dermal fibroblasts, HDF)的細胞模型中暫時逆轉老化的表現型並減少其CFL-1的表現，其中HDF的細胞模型係透過細胞群倍加數(population doubling level, PDL)公式來評估其老化現象。於一實施例中，本發明之散血草酒精萃取物係透過高效液相層析(high performance liquid chromatography, HPLC)分析其組成，顯示其中包含一活性化合物，為8- O-乙醯哈巴苷(8- O-acetylharpagide)。
於本發明的一實施例中，ATE於抑制HDF細胞的老化現象具有顯著的效果。於一較佳實施例中，細胞群倍加數為3.32 x log(Xe/Xb)+S，其中Xb為細胞培養起始時的細胞數量；Xe是細胞培養結束時的細胞數量；S是開始時間點的細胞群倍加數。於另一較佳實施例中，細胞群倍加數公式為n= 3.32 ( logUCY – logI) + X，其中n是繼代培養結束時的最終細胞群倍加數；UCY是於此時點的細胞產出量；I是繼代培養接種時的細胞數；X是用於進行繼代培養的接種細胞的加倍水平。
於一實施例中，本發明之散血草酒精萃取物ATE可抑制CFL-1的表現，CFL-1為一種參與肌動蛋白動力學與細胞形態學的蛋白質，且於老化細胞中表現較高，除此之外，本發明之散血草酒精萃取物ATE亦可恢復老化細胞中的長壽基因SIRT1的表現。
於其他實施例中，亦評估散血草酒精萃取物的次分層(sub-fraction)的抗老化效果，其中該散血草酒精萃取物的次分層包含乙酸乙酯可溶層、正丁醇可溶層與水可溶層。
另一方面，本發明提供一種抗老化組合物，其特徵係包含一散血草酒精萃取物(ATE)。於本發明的一實施例中，係將老化的HDF細胞經不同濃度的散血草酒精萃取物的次分層處理24小時，再進行SA-β-gal染色分析，顯示經ATE的次分層處理可改善老化現象。
於本發明的另一實施例中，經ATE處理後，可提升細胞的生長速率。
於本發明的一實施例中，ATE可抑制或限制細胞週期檢查點分子的表現，包含p53、p27與老化相關分子CFL-1。
除非另外定義，否則本文中所使用的技術和科學名詞與本發明所屬技術領域中具通常知識者所理解的具有相同含意。
如本文中所使用的，單數形式的“一個”、“一種”與“該”包括其複數形式，除非上下文中另有明確定義，因此，舉例來說，若提及“一樣品”，應包含本領域技術人員所知的複數個此樣品與其等同物。
本發明中所使用的醫藥組合物可透過使用一種或多種生理學上可接受的載體以常規方式進行配置，該載體包含賦形劑和助劑，有助於將活性化合物加工成藥用的製劑，而適當的製劑取決於所選的給藥途徑。
實施例
將於以下實施例中進一步說明和描述本發明的其他特徵與優點，本文中所描述的示例僅用於說明，而非用於限制本發明。
實施本發明將用到包含細胞生物學的常規技術和細胞培養的技術，此應屬於本領域的通常技術，此類技術應已於相關文獻中充分解說。
人類真皮纖維母細胞 (Human dermal fibroblast, HDF) 模型
HDF細胞(ATCC®PCS-201-010 ™)係以標準培養條件(37°C下，空氣濕度為95%與濃度5%的CO 2)培養於含2%胎牛血清的Fibroblast Growth Kit- Low serum (ATCC PCS-201-041)中，HDF細胞每48小時培養一次，每次繼代後細胞會變老。細胞群倍加數(PDL)公式係根據美國培養中心(American Type of Culture Center, ATCC)規範，PDL 為 3.32 x log(Xe/Xb)+S，其中Xb為細胞培養起始時的細胞數量；Xe是細胞培養結束時的細胞數量；S是開始時間點的細胞群倍加數，而該PDL公式為n= 3.32 ( logUCY – logI) + X，其中n是繼代培養結束時的最終細胞群倍加數；UCY是於此時點的細胞產出量；I是繼代培養接種時的細胞數；X是用於進行繼代培養的接種細胞的加倍水平。
散血草酒精萃取物及其次分層 (sub-fraction) 的製備
將乾燥的散血草地上部分研磨後，以乙醇水溶液(80%)進行萃取，並於減壓下進行濃縮，得到一粗萃取物(即為散血草酒精萃取物ATE)。將該粗萃取物懸浮於水中，並依次用乙酸乙酯(EA)與正丁醇(BuOH)進行分劃，分別獲得乙酸乙酯可溶、正丁醇可溶與水可溶的次分層，各層皆會用於接下來的實驗。
細胞生長曲線分析
首先，將HDF細胞(10 5個細胞)接種於60mm的培養皿中，並培養於37°C且空氣濕度為95%與濃度5%的CO 2環境下24小時，接著以濃度為50和100 μg/ml的散血草酒精萃取物處理HDF細胞共24小時，之後每天各組的細胞經胰蛋白酶消化後進行細胞數計數，持續7天。
細胞存活率試驗 (MTT assay)
於一實施例中，使用MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide)進行細胞存活率試驗，首先將HDF細胞接種於96孔盤中(每孔2000個細胞)，每一孔經不同濃度的ATE處理24小時候，再替換為0.5 mM的MTT無血清培養基，並培養於37°C培養箱中4小時，之後將培養基去除，並加入二甲基亞碸(Dimethyl sulfoxide, DMSO)形成紫色結晶，最後，使用ELISA分析儀(TECAN)測量其在570 nm波長下的OD值。
於另一實施例中，進行相同的程序以評估ATE的乙酸乙酯可溶層(ATE-EA)、正丁醇可溶層(ATE-BuOH)與水可溶層(ATE-H 2O)對HDF細胞的細胞毒性。
老化相關的半乳糖苷酶 (senescence associated-galactosidase, SA-β-gal) 染色
先於37°C下以0.2%戊二醛加2%甲醛固定細胞5分鐘，接著以磷酸鹽緩衝鹽水(phosphate buffered saline, PBS)沖洗，再將染色溶液(1 mg/ml的5-溴-4-氯-3-吲哚 β-D-吡喃半乳糖苷(5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactopyranoside)、5 mM的鐵氰化鉀(potassium ferricyanide)、5 mM的亞鐵氰化鉀(potassium ferrocyanide)、150 mM的氯化鈉(NaCl)、1 mM的氯化鎂(MgCl 2)、40 mM的檸檬酸(citric acid, pH 6.0)) 加入至培養皿中，並共同培養於37°C共24小時。染色的細胞可於光學顯微鏡下使用數位相機(Olympus, Center Valley, PA, USA)觀察，透過計算每100個隨機選擇的細胞中，呈陽性染色結果細胞所佔比例來進行定量。
西方墨點法
使用含有1%蛋白酶抑制劑的RIPA緩衝液(Thermo Scientific Inc., Waltham, MA, USA)製備蛋白質裂解物。將等量的總蛋白質進行SDS/PAGE電泳後，轉染至硝酸纖維素膜(PALL Co., Port Washington, NY, USA)，並將之與阻斷緩衝液(blocking buffer, 含4%脫脂牛奶的TBS-T)於室溫下處理1小時，再與初級抗體於4°C下雜合過夜，最後再與帶有辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase)的二級抗體反應。使用增強型化學發光試劑(Enhanced Chemiluminescence reagent, Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, USA)增強訊號強度，並以Image-Quant LAS-4000影像系統(GE Healthcare, Chicago, IL, USA)紀錄。
實施例一、散血草酒精萃取物 (ATE) 的高效液相色層分析
透過HPLC進行ATE的化學分析，於Hitachi 5160上操作Purospher® star RP-18的封端管住(5 µm) (150 x 4.6 mm)進行，其流動相由溶劑A(0.2% H 3PO 4)與溶劑B(MeOH)組成，採用以下的梯度順序：0-5分鐘，30%的溶劑B；5-20分鐘，30-60%的溶劑B；20-30分鐘，60-80%的溶劑B；30-35分鐘，80%的溶劑B，採1.0 ml/min的流速注入，進樣量和UV檢測器分別設置為10 µl與203 nm。結果顯示，ATE中含有一主要成分，稱為8- O-乙醯哈巴苷(8- O-acetylharpagide)(圖1)。
實施例二、建立人類真皮纖維母細胞 (HDF) 細胞模型
建立人類真皮纖維母細胞細胞模型，使用細胞群倍加數公式(PDL)評估老化現象(圖2A)。老化的HDF細胞會變得扁平、變大(圖2C)，且增殖速度緩慢，細胞骨架也隨著繼代代數增加而擴大(圖2B)，此外，除了細胞生長速度與細胞型態的改變以外，針對年輕細胞和老化細胞的細胞週期分布也進行了評估，年輕的HDF細胞其G1/G0階段比為72.8%，而老化的HDF細胞的G1/G0階段比則為89.1% (圖2D)，結果顯示，老化細胞中進入細胞停滯期的細胞比例有增加。另外，亦進行了老化相關的半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色，以證實代數Pn+12的HDF細胞已確實進入了老化階段，也進一步評估P6、P8、P10與P12代數的HDF細胞中p53與CFL-1等老化相關分子的表現量，其中p53於P12代HDF細胞中表現最強，而CFL-1的表現量隨著HDF細胞的衰老而增加(圖2E)。
實施例三、散血草酒精萃取物 ATE 的細胞毒性
採用MTT試驗分析ATE對HDF細胞的細胞毒性，結果如圖3所示，經低濃度ATE處理過的HDF細胞，其細胞的存活率甚至有略微提高，此外，ATE的半致死濃度(IC 50)約為1500 μg/ml，因此於本發明之後續實驗中，濃度選用為50 μg/ml與100 μg/ml。
實施例四、散血草酒精萃取物 ATE 的抗老化作用
在建立了年輕與老化的細胞模型與確定ATE沒有毒性後，進一步檢測ATE的抗老化功能。首先，將HDF細胞以50、100 μg/ml的ATE處理，並進行SA-β-gal染色分析。其結果顯示，相較於對照組，經處理的老化細胞其SA-β-gal表現量有顯著性的下降(圖4A)，從定量結果中可更明顯的觀察到兩種濃度的ATE均可降低其表現量(圖4B)，且以100 μg/ml組別的抑制效果更佳。
接著，檢測經ATE處理之老化細胞的細胞生長速率，結果顯示經ATE處理的老化細胞，其生長速率明顯高於對照組，且50與100 μg/ml的濃度都能達到相同的效果(圖4C)，雖然無法將老化細胞的生長速率恢復到正常細胞的水平，但也顯示ATE的處理可有效的減緩老化，並增加細胞的生長。
除了進行SA-β-gal染色分析與觀察生長速率的改變之外，本發明還進一步的評估細胞週期的復原。結果顯示，經ATE處理後，HDF細胞的G1/G0階段比率從85.2%減少至75.3%，接近年輕組的73.5%(圖4D)，此表示ATE可促進HDF細胞恢復分裂與生長。且透過SA-β-gal表現量分析結果顯示，ATE的處理可降低老化HDF細胞內的SA-β-gal表現量(圖4E)。
此外，亦使用其他的老化模型測試ATE的抗老化功效，例如由BeSO 4與D-半乳糖所誘導的老化細胞，如上述步驟所述，使用不同濃度的ATE處理此兩種老化細胞模型24小時，並檢測及定量其SA-β-gal的表現量。結果顯示，經ATE處理的細胞的表現量皆顯著性的降低(圖4F-4G)
實施例五、 HDF 細胞經 ATE 處理後的的分子表現
老化的HDF細胞經ATE處理後可恢復生長能力，並提高其生長速率，重新進入細胞分裂週期，因此，進一步評估包含p53、p27等表現於細胞週期檢查點的分子，以及老化相關分子CFL-1。結果顯示，給予50、100μg/ml ATE後，可顯著性的降低p53、p27、CFL-1的表現量(圖5A、5B)。
另一方面，亦檢測了長壽標記SIRT1的表現量。由西方墨點法之結果顯示，ATE (50、100 μg/ml)可提升HDF細胞的SIRT1表現量(圖5C)，且從其定量結果可見，於提升SIRT1表現量的抗老功效方面，係呈現繼量依賴性(圖5D)。
實施例六、 ATE 的次分層對 HDF 細胞的細胞毒性與經其處理後的 HDF 細胞的細胞增殖率
將ATE懸浮於水中，並依次與乙酸乙酯(EA)與正丁醇(BuOH)進行分層，而分別獲得乙酸乙酯可溶(ATE-EA)、正丁醇可溶(ATE-BuOH)與水可溶(ATE-H 2O)的ATE次分層。使用MTT試驗，進行ATE次分層對HDF細胞的細胞毒性檢測。如圖6A-6C之結果顯示，ATE-EA、ATE-BuOH、ATE-H 2O等三種ATE次分層對HDF細胞皆不具細胞毒性，即使已使用到最高劑量處理，其細胞存活率仍約為80%。
對於細胞增殖率，細胞增殖試驗係透過於24小時至72小時計數有經ATE次分層處理過或未經處理的細胞數目來進行判定。於各個時間點使用血球計數盤計算細胞數，並將每個時間點所得的細胞數目與初始接種(即0小時)的細胞數進行比較，以獲得比率，試驗結果顯示，不同濃度(最高至100 μg/ml)的ATE次分層皆不會引起明顯的細胞死亡和抑制細胞增殖速率(圖6D-6F)。
實施例七、散血草酒精萃取物 ATE 次分層的抗老化作用
於本實例也評估ATE次分層的抗老化作用，使用ATE-EA、ATE-BuOH、ATE-H 2O處理HDF細胞，並進行SA-β-gal的活性定量以檢測此三種次分層的抗老效果。如圖7A-7C之結果顯示，ATE次分層也同樣具備抗老化效果。除此之外，亦使用西方墨點法檢測，於經處理ATE次分層過的HDF細胞與未經處理的HDF細胞內，長壽標記SIRT1與老化標記p53、CFL-1之表現情形(圖7D)，其定量結果顯示，ATE次分層可顯著性的提升HDF細胞中SIRT1的表現量，並降低p53、CFL-1的表現量，且以ATE-H 2O為最有效的一ATE次分層(圖7E)。
實施例八、經散血草酒精萃取物 ATE 及其次分層處理過之小鼠的 p53 與 CFL-1 表現量的改變
11-12個月齡的Balb/C小鼠一般被視為中年的動物模型，因此使用此模型檢測散血草酒精萃取物、及其次分層ATE-H 2O與ATE-BuOH對於中年動物的抗老效果。將小鼠共分為4組：對照組、ATE、ATE-H 2O及ATE-BuOH實驗組，並分別進行每天兩次且每週五天共一個月的餵食，每一組皆含有2隻小鼠，每隻小鼠的施用劑量如下：35 mg/kg的ATE與7 mg/kg的ATE-BuOH、ATE-H 2O。完成處理後，將小鼠犧牲以進行p53與CFL-1的IHC染色。如圖8A-8C與圖9A-9C所示，肝臟與皮膚的IHC結果與對照組相比下，ATE及其次分層可顯著性的降低老化分子標記p53與CFL-1的表現量，然而，組內相較之下，ATE-BuOH對p53的抑制能力較弱。
圖1顯示散血草酒精萃取物(ATE)的HPLC分析結果。
圖2A-2G顯示建立一人類真皮纖維母細胞(HDF) 細胞模型用於評估老化現象。(A)使用細胞群倍加數公式模擬HDF細胞株的生長；(B)使用免疫螢光染色檢測HDF細胞的肌動蛋白細胞骨架的分布與細胞型態；(C)年輕HDF細胞與老化HDF細胞的細胞型態比較；(D) 年輕HDF細胞與老化HDF細胞間的細胞週期差異；(E) 年輕HDF細胞與老化HDF細胞中的老化相關分子p53與CFL-1的表現。
圖3顯示散血草酒精萃取物(ATE)的細胞毒性結果。係使用不同濃度的ATE處理HDF細胞，以檢測ATE是否具有細胞毒性與其半抑制濃度值(IC 50value)。
圖4A-4G顯示散血草酒精萃取物(ATE)的抗衰老作用。HDF細胞與不同濃度的ATE共培養，並進行老化相關的半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色，同時，由BeSO 4或D-半乳糖所誘導的老化細胞也經不同濃度的ATE處理，以觀察其SA-β-gal表現量的改變。(A)年輕HDF細胞與經不同濃度的ATE處理的老化HDF細胞間的 SA-β-gal染色結果比較；(B) SA-β-gal染色結果的定量；(C) 年輕HDF細胞與經不同濃度(50、100 μg/ml)的ATE處理的老化HDF細胞的細胞生長曲線；(D) 經ATE (100 μg/ml)處理的老化HDF細胞的細胞週期分布；(E) 老化HDF細胞經ATE處理後其SA-β-gal表現量；(F) 由BeSO 4所誘導的老化細胞經ATE處理後其SA-β-gal表現量；(G) 由D-半乳糖所誘導的老化細胞經ATE處理後其SA-β-gal表現量。
圖5A-5D顯示散血草酒精萃取物(ATE)對老化相關分子p53與p27的抑制效果，以及其對長壽標記SIRT1的提升效果。(A)進行西方墨點法分析以評估ATE (50、100 μg/ml)於降低HDF細胞中的CFL-1、p53、p27表現量的效果；(B)經不同濃度的ATE (50、100 μg/ml)處理的HDF細胞中，其西方墨點法結果的CFL-1、p53、p27表現量定量結果；(C) 進行西方墨點法分析以評估ATE (50、100 μg/ml)於提升HDF細胞中的SIRT1表現量的效果；(D)經不同濃度的ATE (50、100 μg/ml)處理的HDF細胞中，其西方墨點法結果的SIRT1表現量定量結果。
圖6A-6F顯示散血草酒精萃取物次分層(ATE sub-fraction)的細胞毒性評估結果，與經散血草酒精萃取物次分層處理後的細胞增值速率。HDF細胞經不同濃度的散血草酒精萃取物次分層處理，包含乙酸乙酯可溶層(ATE-EA)、正丁醇可溶層(ATE-BuOH)與水可溶層(ATE-H 2O)，以檢測這三種散血草酒精萃取物次分層是否對HDF細胞具有細胞毒性，以及對其細胞增殖的影響。
圖7A-7E顯示散血草酒精萃取物次分層ATE-BuOH、ATE-EA、ATE-H 2O的抗老化效果。(A) HDF細胞經不同濃度ATE-BuOH處理後其SA-β-gal表現量；(B) HDF細胞經不同濃度ATE-EA處理後其SA-β-gal表現量；HDF細胞經不同濃度ATE-H 2O處理後其SA-β-gal表現量；(D) 透過西方墨點法評估HDF細胞經不同濃度的ATE-BuOH、ATE-EA、ATE-H 2O處理後其CFL-1與p53的表現量；(E) 經ATE-BuOH、ATE-EA、ATE-H 2O處理過的HDF細胞與對照組HDF細胞之間的SIRT1、p53、CFL-1表現量的西方墨點結果的定量比較。
圖8A-8C顯示經ATE、ATE-BuOH、ATE-H 2O與水(作為對照組)處理後的小鼠的p53表現量的改變。(A) 肝臟與皮膚組織的p53免疫組織化學染色(immunohistochemistry, IHC)結果；(B)皮膚中p53的IHC染色強度定量結果；(C)肝臟中p53的IHC染色強度定量結果。
圖9A-9C顯示經ATE、ATE-BuOH、ATE-H 2O與水(作為對照組)處理後的小鼠的CFL-1表現量的改變。(A) 肝臟與皮膚的CFL-1免疫組織化學染色結果；(B) 肝臟中CFL-1的IHC染色強度定量結果；(C) 皮膚中CFL-1的IHC染色強度定量結果。

Claims (9)

  1. 一種抗老化組合物，係包含一散血草(Ajuga taiwanensis)酒精萃取物作為一抗老化劑，其中該萃取物包含8-O-acetylharpagide。
  2. 如請求項1所述的組合物，其中該酒精萃取物是透過將散血草地上部以乙醇水溶液進行萃取製備而得。
  3. 如請求項1所述的組合物，其中該酒精萃取物可進一步包含一種或多種的酒精萃取物的次分層。
  4. 如請求項3所述的組合物，其中該次分層包含該酒精萃取物的乙酸乙酯可溶層、正丁醇可溶層與水可溶層。
  5. 如請求項1所述的組合物，其中該組合物進一步包含藥學上可接受的賦形劑、載體或稀釋劑。
  6. 一種如請求項1所述的抗老化組合物用於製備預防與/或治療老化之醫藥組合物的用途，其中該組合物包含散血草(Ajuga taiwanensis)的酒精萃取物用於，且該萃取物包含8-O-acetylharpagide。
  7. 如請求項6所述的用途，其中該抗老化組合物係用於抑制切絲蛋白-1(cofilin-1)的表現。
  8. 如請求項6所述的用途，其中該抗老化組合物係用於抑制p53、p27、ROS或其組合的表現。
  9. 如請求項6所述的用途，其中該抗老化組合物係用於提升SIRT1的表現。
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Pharmacokinetics of 8-O-Acetylharpagide in Mouse Blood by UPLC-MS/MS,Acta Chromatographic 31(2019)3,p.183-188。【First publish online:14 March 2018】

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