ES2697773T3 - Uso cosmético y/o dermatológico de un extracto de hojas de Hamamelis virginiana - Google Patents

Abstract

Uso cosmetico no terapeutico de un extracto de Hamamelis virginiana para aumentar la formacion de fibras de la matriz extracelular en la piel y/o membranas mucosas y/o el cuero cabelludo para aumentar la firmeza de la piel y/o membranas mucosas y/o el cuero cabelludo y/o para el cuidado y/o tratamiento de estrias, siendo obtenido el extracto de Hamamelis virginiana de las hojas.

Description

DESCRIPCIÓN

Uso cosmético y/o dermatológico de un extracto de hojas de Hamamelis virginiana

La presente invención se refiere a un nuevo agente cosmético y/o dermatológico y su uso cosmético o farmacéutico, en particular dermatológi

elasticidad de la piel y/o las membranas mucosas, en particular las membranas oculares, labiales y gingivales, y/o cuero cabelludo.

El envejecimiento de la piel, en particular el envejecimiento fotoinducido, es un fenómeno complejo que involucra varios mecanismos ampliamente estudiados, como la producción de compuestos reactivos ROS (especies reactivas de oxígeno), en particular los radicales libres responsables de los fenómenos de oxidación (peroxidación de lípidos y oxidación de proteínas) y la producción de enzimas tales como elastasas y metaloproteinasas causando la destrucción de tejidos y fibras tales como colágeno y elastina. Por lo tanto, estos mecanismos son generalmente responsables de la desorganización de los tejidos conectivos.

Por lo tanto, las fibras de colágeno nativas son específicamente degradadas por las metaloproteinasas (MMP), en particular la MMP-1, cuya producción se induce a partir de 0.001 DEM (Minimum Erythema Dose) es decir, el equivalente a sólo 3 minutos de exposición solar. Esta producción de MMP-1 evoluciona con la duración e intensidad de la exposición de manera dependiente de la dosis.

La pérdida de elasticidad es uno de los principales problemas de la exposición al sol, pero de manera más general del envejecimiento cutáneo. Las fibras de elastina, incluidos los elementos de tropoelastina y microfibrillas en la dermis, proporcionan las funciones de elasticidad. En el transcurso del envejecimiento y en particular bajo la acción del estrés UV, la formación de fibras elásticas y fibras de colágeno disminuyen y aumentan su degradación por los MMP y elastasas. Las MMP y las ROS son por otra parte factores proinflamatorios que contribuyen a los daños cutáneos.

Estos mecanismos han sido ampliamente investigados en los campos de la cosmética y la dermatología y muchos agentes antioxidantes, anti-MMP o anti-elastasa ya están disponibles comercialmente por sus efectos protectores de los tejidos conectivos. Sin embargo, la prevención e inhibición de la degradación de las fibras de la matriz extracelular, en particular de las fibras elásticas y del colágeno, no son acciones suficientes para prevenir el envejecimiento intrínseco de la piel y la aparición de sus efectos antiestéticos. Además, ningún ingrediente cosmético puede inhibir completamente la degradación inducida por el estrés oxidativo. Sin embargo, se ha observado que, bajo el efecto del estrés oxidativo, parte de la síntesis de elastina en la dermis profunda también aumenta y se acumula anárquicamente en forma de un agregado de elastina, contribuyendo así a la pérdida de elasticidad. Por otra parte, la elafina se sobreexpresa en el contexto del estrés oxidativo y es reticulada mediante la transglutaminasa en forma de fibras elásticas, lo que contribuye a la formación de agregados de elastina. Se habla de elastosis solar.

El solicitante ha observado así que la mejora de las propiedades de la piel, las membranas mucosas y el cuero cabelludo, en particular el restablecimiento de su elasticidad y su firmeza, pasa notablemente por el aumento de la calidad y/o la cantidad de fibras de la matriz extracelular.

El solicitante ya había descubierto que LOXL, una enzima isoforma de la familia de la lisil oxidasa (LOX), era un eslabón principal faltante en la elastogénesis en adultos y que era posible reactivar la síntesis de esta isoforma de lisil oxidasa con el fin obtener un efecto estimulante sobre la elastogénesis. De hecho, se ha demostrado en un modelo de piel reconstruido que produce fibras elásticas, que la activación de la síntesis de la LOXL hizo posible restaurar la elastogénesis funcional. El solicitante también ha destacado la falta de expresión de LOXL en áreas con cicatrices, así como en la dermis de la piel humana a diferentes edades, por lo tanto, durante el envejecimiento. La LOXL es la enzima responsable de la maduración de la elastina por reticulación y, permite, por lo tanto, la formación de fibras elásticas funcionales. El solicitante ya ha identificado agentes activos que pueden estimular la expresión de LOXL (solicitudes de patentes FR2855968 y FR2855969, US 2004-0253220 y US 2004-0258676).

El solicitante ha buscado así un ingrediente capaz de aumentar los asociados clave de la elastina en la formación de fibras elásticas, en particular la LOXL y fibulina 5 pero también capaz de inhibir la síntesis y o la actividad de la elafina.

La búsqueda de agentes activos alternativos a aquellos descritos en la técnica anterior sigue siendo de gran interés en el campo de la cosmética y la dermatología. Además, un agente activo tiene la propiedad de aumentar la expresión de LOXL pero también es capaz de actuar en las otras vías involucradas en la elastogénesis, como el aumento de la expresión de fibulina 5, disminuir la expresión de elafina, pero también es particularmente necesario aumentar la formación de fibras de colágeno y/o mejorar su organización.

El solicitante acaba de descubrir ahora de manera inesperada y sorprendente un nuevo agente que satisface esta necesidad en el sentido de que aumenta la formación de las fibras de la matriz extracelular, preferiblemente fibras elásticas y de colágeno, y que presenta varias propiedades adicionales de gran interés en el campo cosmético y en el campo farmacéuti

cabelludo, en particular cuando estas o este son alteradas por el envejecimiento cronoinducido y/o envejecimiento inducido por UV. El agente de acuerdo con la presente invención tiene la propiedad de aumentar la expresión de la LOXL y posee propiedades de inhibición de la expresión y/o actividad de la elafina, así como la estimulación de la síntesis de colágeno y de la fibulina 5

De este modo, este agente permite proporcionar por sí solo una solución completa, efectiva y, por lo tanto, completamente satisfactoria para restaurar y/o aumentar la elasticidad y/o la firmeza de los tejidos alterados por el envejecimiento, especialmente el envejecimiento cutáneo y en particular el crono o fotoinducido. También se puede utilizar en combinación con otros agentes de la técnica anterior para mejorar sus propiedades. De este modo, este agente hace posible resolver el problema de la técnica anterior de una manera particularmente eficaz.

El agente de acuerdo con la invención es un extracto vegetal y, por lo tanto, tiene la ventaja de ser producido fácilmente a escala industrial, de formularse fácilmente y de tener una alta estabilidad. También es fácilmente disponible y extraído de un recurso renovable, lo que permite fabricarlo de acuerdo con los principios del desarrollo sostenible.

El agente según la invención es un extracto de la planta Hamamelis virginiana.

La Hamamelis virginiana es un arbusto nativo del este de América del Norte donde se desarrolla en humedales. Por otra parte, denominado "witch hazel", es decir, " avellano de bruja" porque sus ramas se usaron en otro tiempo para identificar el agua y el oro, como una vara de bruja. La Hamamelis virginiana es una planta de uso común en el noroeste de los Estados Unidos por sus propiedades astringentes y está ampliamente disponible. Los taninos gálicos y catequísticos de la corteza pueden ser responsables de sus propiedades astringentes y hemostáticas. Se usa para contusiones, dolores musculares, venas varicosas, hemorroides, pezones adoloridos, inflamaciones. La corteza de la hamamelis es astringente, hemostática, sedante y tónica. Se usa internamente (por vía oral) para el tratamiento de diarrea, colitis, disentería, hemorroides, flujo vaginal, menstruación excesiva, sangrado interno y órganos prolapsados. Un remedio homeopático está hecho de corteza fresca. Se utiliza en el tratamiento de hemorragias nasales, hemorroides y venas varicosas. La hoja es astringente y se sabe que se utiliza como antibacteriano.

Los experimentos han demostrado que el extracto de la hoja aumenta la resistencia de las venas y disminuye la permeabilidad capilar.

Un extracto de Hamamelis virginiana ya se ha descrito para las actividades protectoras de los tejidos cutáneos, especialmente como un agente antiproteasa, especialmente por la inhibición de las metaloproteinasas 2, 3, 1, 9 (WO200653415). Por otra parte, los extractos se comercializan en forma de un destilado llamado "Hamamelis virginiana”, particularmente por sus acciones antiinflamatorias, desinfectantes y astringentes. No obstante, ninguna de estas propiedades conocidas del extracto de Hamamelis virginiana predijo sus propiedades de aumento de elasticidad y/o firmeza por la formación de fibras de la matriz extracelular, especialmente las fibras elásticas y de colágeno, ni sus propiedades de aumentar la expresión de la LOXL, síntesis de colágeno y fibulina 5, y/o inhibición de la expresión y/o actividad de la elafina como se descubrió en el contexto de la presente invención.

Algunas propiedades de un extracto vegetal de Hamamelis virginiana según la invención, se demostrará en particular con más detalle en los ejemplos proporcionados a continuación sobre su actividad en las fibras de la matriz extracelular, particularmente las fibras elásticas y las fibras de colágeno.

El objeto de la presente invención es, por lo tanto, el uso cosmético no terapéutico de un extracto de Hamamelis virginiana para aumentar la formación de fibras de matriz extracelular en la piel y/o membranas mucosas y/o el cuero cabelludo.

La presente invención tiene igualmente por objeto la utilización de un extracto de Hamamelis virginiana en una composición cosmética, particularmente como agente activo, para aumentar la formación de fibras de matriz extracelular en la piel y/o membranas mucosas y/o el cuero cabelludo.

El objeto de la presente invención es también el extracto de Hamamelis virginiana de acuerdo con la invención para su utilización por vía tópica para el cuidado y/o el tratamiento dermatológico de patologías que implican fibras elásticas y fibras de colágeno, que implican de manera ventajosa una pérdida de firmeza y/o elasticidad de la piel y/o membranas mucosas y/o cuero cabelludo como rosácea, telangiectasia, elastosis solar, enfermedad de cutix laxa y/o estrías.

La presente invención también se refiere a un método o método de cuidado y/o tratamiento cosmético que comprende la aplicación por vía tópica sobre al menos un área de la piel y/o membranas mucosas y/o cuero cabelludo del extracto de Hamamelis virginiana y/o una composición cosmética según la invención, para aumentar la formación de fibras de la matriz extracelular en la piel y/o las membranas mucosas y/o el cuero cabelludo.

Definiciones

Según la invención, se entiende que el término "aumentar la formación de fibras de la matriz extracelular" significa un aumento en la calidad y/o la cantidad de las fibras de la matriz extracelular. Este aumento puede medirse con respecto a la calidad y/o la cantidad de fibras de la matriz extracelular medida sin aplicar el extracto de acuerdo con la invención. De manera preferencial, este aumento se mide por la visualización y cuantificación de la organización de las fibras elásticas y el colágeno, como se describe en particular por inmunomarcación en el ejemplo 3. Preferiblemente, este aumento es al menos igual al 5 % con respecto a la medición realizada en ausencia de aplicación del extracto de acuerdo con la invención, más preferiblemente 10 %.

Según la invención, se entiende por el término "fibras de matriz extracelular" las proteínas que constituyen las fibras elásticas y/o las fibras de colágeno. Las proteínas que constituyen las fibras elásticas son preferiblemente elastina, fibulinas, en particular fibulina 5, y fibrilina, en particular fibrilina 1.

Según la invención, el término "colágeno" significa proteínas de colágeno de tipo I, III, IV, V, VI, VII, XII, XIII, XIV, XVI, XVII, XXIV, XXIX, preferiblemente las de la piel y/o membranas mucosas y/o cuero cabelludo seleccionado entre colágenos I, III, IV, V y VII y preferiblemente colágenos de tipo I, III y V y más preferiblemente colágeno de tipo I.

Según la invención, se entiende por "disminuir la formación de agregados de elastina", el aumento de la síntesis de fibulina y/o el aumento de la expresión de la LOXL y/o la disminución de la síntesis y/o la actividad de la elafina. Un tal modelo de medida de la inhibición de la expresión de la elafina se describe en el ejemplo 4.

Según la invención, se entiende por el término "LOXL", o "hLOXL", también conocido como LOXL-1, una isoforma de la familia de lisil oxidasas (LO), una familia que comprende 5 miembros: LOX, LOXL, LOXL2, LOXL3, LOXL4 y, en particular, descritos en la publicación Csiszar et al. Lysyl oxidases: "A novel multifunctional amine oxidase family", Nucleic Acid Research and Molecular Biology,2001, vol 70, p2-28.

Según la invención, se entiende por "aumentar la expresión de LOXL", el aumento de la expresión del gen que codifica LOXL o su promotor, y en particular la estimulación de la síntesis de ARN mensajero que codifica LOXL, pero también la estimulación de la síntesis de LOXL a partir de este ARN mensajero. Este aumento puede medirse en un modelo, que comprende al menos un tipo de célula que muestra una expresión de LOXL, de manera ventajosa los fibroblastos, preferiblemente cutáneos, en contacto con el extracto de acuerdo con la invención y da como resultado un aumento en la expresión génica y y/o proteína LOXL igual o superior al 10 %, de manera ventajosa igual o superior al 20 %, con respecto al nivel de expresión génica y/o proteínas en un modelo testigo o control, es decir, sin poner en contacto el extracto según la invención. El aumento de esta expresión es preferiblemente génico. Un tal modelo se describe en el ejemplo 2.

En el sentido de la presente invención, se entiende por "la expresión del colágeno" la expresión génica del colágeno, es decir, la expresión de ARNm (ARN mensajero) y/o la expresión de proteínas de colágeno. Preferiblemente, se trata de la expresión proteica del colágeno.

Según la invención, se entiende por "aumentar la firmeza y/o la elasticidad de la piel y/o las mucosas y/o el cuero cabelludo", un aumento con fines estéticos respectivamente de la firmeza y/o elasticidad de la piel y/o de las mucosas y/o cuero cabelludo que han perdido firmeza y/o elasticidad respectivamente, en particular bajo el efecto de factores intrínsecos como el envejecimiento del tejido de la piel y/o membranas mucosas y/o cuero cabelludo, es decir, envejecimiento cronoinducido, estrés celular, variaciones fisiológicas no patológicas, como un cambio en la dieta, variaciones hormonales, especialmente durante la pubertad, embarazo, menopausia, andropausia. Esta pérdida de firmeza y/o elasticidad también puede aparecer bajo el efecto de factores extrínsecos como los agentes agresivos del medio ambiente, como por ejemplo la radiación UV, contaminación, humos, tabaco, toxinas, agresiones climáticas y/o mecánicas. Puede tratarse particularmente del cuidado y/o tratamiento cosmético del aspecto no estético y/o no confortable de las estrías.

En el sentido de la presente invención, se entiende desde un punto de vista dermatológico el "aumentar la firmeza y/o la elasticidad de la piel y/o las membranas mucosas y/o el cuero cabelludo", un aumento con fines terapéuticos, respectivamente de la firmeza y/o elasticidad de la piel y/o las mucosas y/o el cuero cabelludo que se encuentran bajo el efecto de patologías de la piel y/o las membranas mucosas y/o el cuero cabelludo seleccionados entre telangiectasia , elastosis solar, enfermedad de cutis laxa. El aumento de firmeza se puede medir de acuerdo con los métodos convencionales, en particular mediante la medición in vivo por medio del método de proyecciones marginales, con la ayuda de un cutómetro, un densímetro, un torquímetro o aun un Dynaskin asociado con un Dermatop.

El aumento de la elasticidad se puede medir de acuerdo con métodos convencionales, en particular mediante la medición in vivo, utilizando un cutómetro o un densímetro.

Para los fines de la presente invención, el término "utilización y/o composición cosmética" significa una utilización y/o composición no farmacéutica, es decir, que no está destinado a un uso terapéutico y que tiene como objetivo mejorar la estética y/o comodidad y que se efectúa/aplica en una parte del cuerpo sano, en particular la mucosa sana, la piel sana y/o el cuero cabelludo sano.

En el sentido de la presente invención, el término "piel sana", "mucosa sana" o "cuero cabelludo sano" significa un área de la piel, mucosa o cuero cabelludo en la que se aplica el extracto según la invención y considerada "no patológica" por un dermatólogo, es decir, que no tiene ninguna infección, enfermedad o afección de la piel como candidiasis, impétigo, psoriasis, eczema, acné o dermatitis, o heridas o lesiones.

En el sentido de la presente invención, el término "cosmético y/o dermatológicamente aceptable por vía tópica", significa un ingrediente adecuado para la aplicación tópica, no tóxico, no irritante para la piel y/o las membranas mucosas y/o el cuero cabelludo, No induce respuesta alérgica, y no es químicamente inestable.

En el sentido de la presente invención, se entiende por "aplicación mediante vía tópica" de un ingrediente, la aplicación local directa y/o la vaporización del ingrediente en la superficie de la piel y/o las membranas mucosas y/o el cuero cabelludo.

Según la invención, se designa "mucosa(s)" la mucosa ocular, la mucosa vaginal, la mucosa urogenital y/o la mucosa bucal, particularmente bucal, labial y/o la mucosa gingival, preferiblemente las mucosas oculares y/o bucal, y más preferiblemente, y aun preferiblemente, la mucosa labial y/u ocular.

Extracto

El extracto vegetal según la invención es un extracto de las hojas.

[El extracto puede entonces ser obtenido por los métodos de extracción de vegetales conocidos en la técnica, por ejemplo, por maceración de las hojas entre 1 y 10 % (p/p) en un disolvente o una mezcla de disolventes, preferiblemente un disolvente polar prótico, y ventajosamente agua, un alcohol, un glicol, un poliol, una mezcla de agua/alcohol, agua/glicol o agua/poliol (tal como agua mezclada con etanol, glicerol, butilenglicol u otros glicoles, como el xilitol, etc.) de 100/0 a 0/100 (v/v). El extracto se obtiene preferiblemente por extracción acuosa.

En el sentido de la presente invención, se entiende por "extracto de Hamamelis virginiana obtenido por extracción acuosa" cualquier extracto obtenido por extracción con una solución acuosa que contiene más del 60 % en peso, de manera ventajosa al menos el 70 % en peso, en particular al menos el 80 % en peso, más particularmente al menos el 90 % en peso, de forma particular al menos el 95 % en peso, de agua en relación con el peso total de la solución acuosa, más de manera ventajosa que no contiene butilenglicol, en particular no contiene alcohol, más particularmente no contiene más que agua.

Según un modo de realización ventajoso, el extracto según la invención se obtiene por extracción a una temperatura de entre 0 °C y 30 °C, particularmente por maceración en frío, preferiblemente a 4 °C, o a temperatura ambiente es decir, entre 18 y 25 °C, preferiblemente 20 °C, opcionalmente después de una etapa de secado de la planta. Según un modo preferido, el extracto según la invención se obtiene mediante maceración a temperatura ambiente, preferiblemente a 20°C. De manera ventajosa, el extracto según la invención no se obtiene por destilación particularmente en caliente, y no es un aceite esencial. Aun ventajosamente, el extracto según la invención no se obtiene con la ayuda de agua caliente o en ebullición, es decir, llevada a ebullición, particularmente por decocción o por infusión.

Según un modo de realización preferido, el extracto de acuerdo con la invención se obtiene por maceración durante un período de entre 30 minutos y 24 horas, preferiblemente entre 1 hora y 5 horas, más preferiblemente 2 horas.

El extracto obtenido es a continuación preferiblemente centrifugado y/o filtrado para recuperar la fracción soluble activa, preferiblemente la fracción soluble en agua. Preferiblemente se filtra en un punto de corte de 0,45 |jm. Las etapas suplementarias de decoloración y/o desodorización pueden ser efectuadas sobre el extracto sin importar el estado de la extracción y según las técnicas conocidas por el experto en el arte.

El extracto de acuerdo con la invención también puede concentrarse posteriormente mediante liofilización o mediante atomización.

De una manera particularmente ventajosa, la cantidad de planta durante la extracción, es decir, las hojas, está entre 1 y 10 % en peso, preferiblemente 5 % en peso con respecto al peso total de la mezcla de planta/solvente de extracción, preferiblemente la solución acuosa. En particular, la planta se tritura antes de la extracción.

De manera ventajosa, la duración de la extracción es de 2 horas y se efectúa a temperatura ambiente, preferiblemente a 20 °C.

El extracto obtenido de acuerdo con la invención es preferiblemente soluble y se disuelve en un disolvente particularmente polar, tal como agua, un alcohol, un poliol, un glicol o una mezcla de los mismos, preferiblemente una mezcla hidroglicólica, más preferiblemente que contiene un glicol seleccionado entre caprililglicol, hexilenglicol, pentilenglicol y mezclas de los mismos.

Ventajosamente, el extracto según la invención se disuelve en una solución acuosa que contiene pentilenglicol y/o caprililglicol, en particular que contiene entre 0,01 y 10 % en peso de pentilenglicol y/o caprililglicol con respecto al peso total de la solución acuosa, más particularmente entre 0,1 y 5 % en peso de pentilenglicol y/o caprililglicol con respecto al peso total de la solución acuosa.

Utilización cosmética

La presente invención tiene así por objeto la utilización cosmética del extracto de Hamamelis virginiana para mejorar la formación de fibras de la matriz extracelular en la piel, las membranas mucosas y/o el cuero cabelludo y, preferiblemente, la formación de fibras elásticas y/o fibras de colágeno.

Por las propiedades sobre el aumento de la expresión de la LOXL, de la expresión de la fibulina 5 y de la inhibición de la síntesis y/o de la actividad de la elafina, el extracto de acuerdo con la invención aumenta globalmente la elastogénesis y por lo tanto se puede utilizar para aumentar la elasticidad de la piel y/o las membranas mucosas y/o el cuero cabelludo.

De manera particularmente ventajosa, el extracto de Hamamelis virginiana utilizado en la presente invención, en particular a través de sus propiedades sobre la inhibición de la síntesis y/o actividad de la elafina también hace posible reducir la formación de agregados de elastina. Además, el extracto de Hamamelis virginiana de acuerdo con la invención, por sus propiedades de aumento de la expresión y/o la actividad del colágeno, se puede usar para aumentar la firmeza de la piel y/o las membranas mucosas y/o el cuero cabelludo.

El extracto de Hamamelis virginiana de acuerdo con la invención, se puede usar, en particular bajo la forma de un ingrediente activo cosmético o dermatológico, como tal, o contenido en una composición cosmética o dermatológica que contiene un excipiente cosmético y/o dermatológico aceptable por vía tópica.

La dicha composición cosmética o dermatológica se usa de manera ventajosa en la aplicación tópica sobre la piel y/o las membranas mucosas y/o el cuero cabelludo.

De manera preferencial el extracto de Hamamelis virginiana según la invención, está contenido en la composición cosmética o dermatológica a una concentración comprendida entre 1.10-4 y 10 % en peso, y de manera ventajosa entre 1.10-4 y 5 % y más particularmente entre 1.10-3 y 3 % en peso con respecto al peso total de la composición.

Las composiciones cosméticas o dermatológicas según la invención, por lo tanto, contienen un excipiente cosmético o dermatológico aceptable por vía tópica además del extracto según la invención. Este excipiente es, por ejemplo, al menos un compuesto seleccionado del grupo que consiste en conservantes, emolientes, emulsionantes, tensioactivos, humectantes, espesantes, acondicionadores, agentes matificantes, estabilizantes, antioxidantes, agentes de textura, agentes de brillo, agentes formadores de película, solubilizantes, pigmentos, tintes, perfumes y protectores solares. Estos excipientes se eligen preferiblemente del grupo que consiste en aminoácidos y sus derivados, poligliceroles, ésteres, polímeros y derivados de celulosa, derivados de lanolina, fosfolípidos, lactoferrinas, lactoperoxidasas, estabilizantes basados en sacarosa, vitaminas E y sus derivados, ceras naturales y sintéticas, aceites vegetales, triglicéridos, insaponificables, fitosteroles, ésteres vegetales, siliconas y sus derivados, hidrolizados de proteínas, aceite de jojoba y sus derivados, ésteres lipo/hidrosolubles en agua, betaínas, aminoácidos, extractos de plantas, ésteres de sacarosa, dióxidos de titanio, glicinas y parabenos, y más preferiblemente del grupo que consiste en esteareth-2, esteareth-21, glicol-15 estearil éter, alcohol cetearílico, fenoxietanol, metilparabeno, etilparabeno, propilparabeno, butilparabeno, butilo etilenglicol, caprililglicol, tocoferoles naturales, glicerina, dihidroxicetil fosfato sódico, isopropil hidroxicetil éter, glicol estearato, triisononanoína, cocoato de octilo, poliacrilamida, isoparafina, laureth-7, carbómero, propilenglicol, hexilenglicol, glicerol, bisabolol, dimeticona, hidróxido de sodio, PEG-30-dipolihidroxiesterato, triglicéridos cáprico/caprílico, octanoato de cetearilo, adipato de dibutilo, semilla de uva, aceite de jojoba, sulfato de magnesio, EDTA, ciclometicona, goma xantana, ácido cítrico, lauril sulfato de sodio, ceras y aceites minerales, isoestearato de isoestearilo, dipelargonato de propilenglicol, isoestearato de propilenglicol, PEG 8, cera de abejas, glicéridos de aceite de palma hidrogenada, aceite de lanolina, aceite de sésamo, lactato de cetilo, alcohol de lanolina, aceite de ricino, dióxido de titanio, lactosa, sacarosa, polietileno de baja densidad, solución isotónica salada.

La composición cosmética según la invención puede elegirse entre una solución acuosa u oleosa, una crema o gel acuoso o un gel oleoso, en particular un gel de ducha, un champú; una leche; una emulsión, una microemulsión o una nanoemulsión, especialmente aceite en agua o agua en aceite o múltiple o siliconada; una máscara; un suero una loción un jabón líquido; una pastilla de jabón dermatológico; una pomada; una espuma; un parche; un producto anhidro, preferiblemente líquido, pastoso o sólido, por ejemplo, en forma de polvos de maquillaje, bastón o barra, especialmente en forma de lápiz para labios. De manera ventajosa, se trata de una crema o de un suero, en particular un contorno para ojos o labios.

La composición cosmética de acuerdo con la invención se puede elegir especialmente entre el cuidado solar, el tratamiento antienvejecimiento, especialmente para la llamada piel madura y/o las pieles que presentan los primeros signos de envejecimiento.

En el sentido de la presente invención, se entiende por "pieles maduras", las pieles de mujeres u hombres que tengan al menos 50 años, ventajosamente las pieles de mujeres menopáusicas.

En el sentido de la presente de la invención, se entiende por "pieles que muestran los primeros signos de envejecimiento", la piel de mujeres u hombres que tienen entre 30 y 40 años, ventajosamente las pieles que presentan las primeras arrugas de expresión.

Las composiciones según la invención se aplican más particularmente en el rostro, en particular en el contorno de los ojos o labios, preferiblemente a diario, preferiblemente una a dos veces al día, preferiblemente en la mañana y/o noche.

Ventajosamente, las composiciones cosméticas según la invención contienen otros ingredientes de interés, particularmente cosmético, preferiblemente agentes que tienen propiedades similares. Preferiblemente, estos son los ingredientes convencionales de las composiciones antienvejecimiento y/o mejoran la elasticidad y/o la firmeza de la piel y/o las membranas mucosas y/o el cuero cabelludo y/o mejoran la complexión de la piel y/o la homeóstasis cutánea, en particular aquellas seleccionadas entre rellenos, agentes hidratantes, agentes estimulantes y moléculas de matriz extracelular.

Las composiciones cosméticas según la invención también pueden contener ingredientes cosméticos activos que conducen a un efecto complementario o posiblemente sinérgico, como agentes activos hidratantes, agentes activos antienvejecimiento, agentes activos antirradicales y agentes protectores del factor de crecimiento de fibroblastos (FGF), agentes que estimulan la actividad y/o proliferación de fibroblastos y/o aguas termales. Por lo tanto, pueden ser, por ejemplo, agentes para la coloración de la piel o propigmentantes, inhibidores de la NO-sintasa, agentes antiseborreicos para el cuidado de la piel grasa, agentes que estimulan la síntesis dérmica o epidérmica de macromoléculas, especialmente de la matriz extracelular y/o impiden su degradación, por un efecto sinérgico o complementario, de agentes que estimulan la proliferación de fibroblastos o queratinocitos y/o la diferenciación de los queratinocitos, por un efecto sinérgico o complementario de agentes antimicrobianos, agentes tensores, agentes anticontaminantes o antirradicales, agentes tranquilizantes, calmantes o relajantes, agentes que actúan sobre la microcirculación para mejorar la luminosidad de la tez, en particular del rostro, para un efecto sinérgico o complementarios, agentes fotoprotectores, agentes cicatrizantes, agentes adelgazantes, agentes antienvejecimiento para un efecto sinérgico o complementario o eventualmente agentes hidratantes y/o que refuerzan la barrera epidérmica.

Los ingredientes activos hidratantes, emolientes o humectantes pueden mejorar la función de barrera y reducir las pérdidas insensibles al agua y/o aumentar el contenido de agua de la piel y/o las membranas mucosas y/o del cuero cabelludo o estimular la actividad secretora de las glándulas sebáceas y/o estimular la síntesis de acuaporina para mejorar la circulación del agua en las células. A modo de ejemplo no limitativo, se pueden mencionar los siguientes agentes activos: serina, urea y sus derivados, los productos comercializados con el nombre de Marine Filling Spheres ™, Advances Moisturizing Complex ™, Hyaluronic Filling Spheres ™, Vegetable Filling Spheres ™ Osmogelline ™, Micropatch ™, alquilcelulosas, lecitinas, compuestos a base de esfingoides, ceramidas, fosfolípidos, colesterol y sus derivados, glicoesfingolípidos, fitoesteroles (estigmasterol y beta-sitosterol, campesterol), ácidos grasos esenciales, 1-2 diacilglicerol, 4-cromanona, triterpenos pentacíclicos como el ácido ursólico, vaselina, lanolina, azúcares en particular trehalosa y sus derivados, ramnosa, fructosa, maltosa, lactosa, eritritol, manitol, D-xilosa y glucosa, adenosina y sus derivados, sorbitol, alcoholes polihídricos, de manera ventajosa C2-C6, y todavía de manera ventajosa C3-C6, tales como glicerina, propilenglicol, dipropilenglicol, diglicerina, poliglicerina y sus mezclas, glicerol y sus derivados, poliacrilato de glicerol, lactato de sodio, pentanodiol, serina, ácido láctico, AHA, BHA, pidolato de sodio, xilitol, lactato de sodio, ectoína y sus derivados, quitosán y sus derivados, colágeno, plancton, derivados de esteroides (incluida la DHEA, sus derivados 7-oxidados y/o 17-alquilados y sapogeninas), dihidrojasmonato de metilo, un extracto de malva silvestre o un extracto de Centella asiática, homopolímeros de ácido acrílico, beta-glucano y en particular carboximetil beta-glucano de sodio, un derivado C-glucósido como los descritos en la solicitud WO 02/051828, un aceite de rosa mosqueta, un extracto de microalgas Prophyridium cruentum enriquecido en zinc comercializado por Vincience bajo la denominación Algualane Zinc ™, arginina, acetil hexapéptido comercializado por Lipotech con el nombre Diffuporine ™, hidrolizado de Viola tricolor comercializado por Silab bajo el nombre de Aquaphyline ™.

El agente activo también puede elegirse entre agentes antienvejecimiento, es decir, que tienen un efecto de reestructuración sobre la barrera cutánea, agentes que previenen y/o reducen la glicación de las proteínas de la piel, en particular las proteínas de la dermis, tales como el colágeno, agentes activos que estimulan el metabolismo energético de las células y sus mezclas, un agente antienvejecimiento global, especialmente niacinamida o vitamina B3 y derivados. El agente que tiene un efecto reestructurante de la barrera cutánea se puede seleccionar de uno de los extractos de levadura como el Relipidium ™ de BASF Beauty Care Solutions France SAS, esfingosinas como saliciloilesfingosina, una mezcla de xilitol, xilitil poliglicósido y xilitan; extractos de solanáceas como el Lipidessence ™ de BASF Beauty Care Solutions France SAS y sus mezclas. Se puede aún citar, particularmente ceramidas, compuestos a base de esfingoides, glicosfingolípidos, fosfolípidos, colesterol y sus derivados, fitoesteroles, ácidos grasos esenciales, diacilglicerol, 4-cromanona y derivados de cromona y mezclas de los mismos, vitamina B5 o pantotenato y derivados.

El agente activo que estimula el metabolismo energético de las células puede elegirse, por ejemplo, entre biotina, una mezcla de sales de sodio, manganeso, zinc y de magnesio del ácido pirrolidonacarboxílico, una mezcla de gluconato de zinc, cobre y magnesio y sus mezclas.

Entre los agentes activos que estimulan la síntesis de macromoléculas de la dermis o evitan su degradación, se pueden mencionar aquellos que actúan como:

- un agente que estimula la síntesis de fibronectina, en particular un extracto de maíz, siendo dicho extracto comercializado particularmente por la Solicitante bajo el nombre Deliner ™ y el palmitoil pentapéptido comercializado por la sociedad SEDERMA con el nombre comercial Matrixil ™,

- un agente de protección del factor de crecimiento de fibroblastos (FGF2) de la matriz extracelular contra su degradación y/o desnaturalización, particularmente un extracto de Hibiscus abelmoscus como se describe en la solicitud de patente a nombre del solicitante publicada bajo el número FR2907014 y/o un agente estimulante del crecimiento de fibroblastos, por ejemplo, un extracto de soja fermentada que contiene péptidos, conocido bajo el nombre de Phytokine ™ comercializado por el solicitante y también descrito en la solicitud de patente. EP1119344 (Laboratoires Expanscience), y preferiblemente una combinación de estos dos extractos;

- un agente que estimula la síntesis de laminina, en particular un extracto de malta modificado biotecnológicamente, siendo comercializado dicho extracto en particular por el Solicitante con el nombre Basaline ™;

- un agente que estimula la expresión y/o la actividad de la hialuronona sintasa 2 (HAS2), como los extractos de plantas descritos en la solicitud de patente FR2 893 252 A1 y en particular un extracto acuoso de galanga (Alpinia galanga);

- un agente que estimula la síntesis de lisil oxidasa (LOXL), como un extracto de Geophila cordifolia y los descritos en la solicitud de patente FR2855968, y en particular un extracto de eneldo;

- un agente que estimula la síntesis de ATP intracelular, en particular un extracto de alga Laminaria digitata;

- un agente activo que estimula la síntesis de glicosaminoglicanos, como el producto de la fermentación de la leche;

- un agente activo estimulante del colágeno, como el retinol y/o la vitamina C;

- un inhibidor activo de metaloproteinasas (MMP), como más particularmente MMP 1, 2, 3, 9 y 12, como retinoides y derivados, oligopéptidos y lipopéptidos, lipoaminoácidos, extracto de malta comercializado por BASF Beauty Care Solutions Francia bajo el nombre comercial Collalift ™, el extracto hidrolizado de patata comercializado bajo el nombre Extracellium ™ por BASF Beauty Care Solutions France SAS; licopeno; isoflavonas, quercetina, kaempferol, apigenina.

Los agentes que estimulan la proliferación de queratinocitos, utilizables en la composición de acuerdo con la invención, incluyen retinoides tales como retinol y sus ésteres, incluyendo palmitato de retinilo y floroglucinol. Los agentes que estimulan la diferenciación de los queratinocitos incluyen, por ejemplo, minerales como el calcio y los lignanos como el secoisolaricirresinol así como el extracto de Achillea millefollium comercializados con el nombre de Neurobiox ™ por BASF Beauty Care Solutions France.

Entre los agentes tensores que pueden usarse en la composición de acuerdo con la presente invención, se pueden mencionar en particular polímeros sintéticos, tales como látex de poliuretano o látex acrílicos; polímeros de origen natural, especialmente polihololósidos en forma de almidón o en forma de carragenanos, alginatos, agares, gelanos, polímeros celulósicos y pectinas; proteína vegetal e hidrolizados de proteína de soja; silicatos mixtos; micropartículas de cera; partículas coloidales de carga inorgánica elegidas, por ejemplo, a partir de sílice, compuestos de sílicealúmina; así como sus mezclas.

La composición puede comprender agentes conocidos como agentes anticontaminantes, en particular eliminadores de ozono tales como, por ejemplo, vitamina C y sus derivados que incluyen glucósido de ascorbilo; fenoles y polifenoles, en particular taninos, ácido elágico y ácido tánico; epigalocatequina y extractos naturales que la contienen, en particular extractos de té verde; antocianinas; ácidos fenólicos, estilbenos; agentes activos atrapadores de compuestos aromáticos mono o policíclicos taninos tales como el ácido elágico y derivados de indoles y/o atrapadores de metales pesados como EDTA, agentes activos antirradicales como vitamina E y sus derivados tales como acetato de tocoferilo; bioflavonoides; Coenzima Q10 o ubiquinona.

Como agentes calmantes que se pueden usar en la composición de acuerdo con la invención, se pueden mencionar: triterpenos pentacíclicos, ácido ursólico y sus sales, ácido oleanólico y sus sales, ácido betulínico y sus sales, las sales del ácido salicílico y, en particular el salicilato de zinc, bisabolol, alantoína, aceites omega 3 insaturados, cortisona, hidrocortisona, indometacina y beta-metasona, agentes activos antiinflamatorios, y especialmente los descritos en la patente de EE.UU solicitud FR2847267, en particular el extracto de raíz de Pueraria lobata comercializado con el nombre Inhipase ™ por BASF Beauty Care Solutions France SAS, extractos de Theobroma cacao.

Los ingredientes activos fotoprotectores o los filtros UVA y/o UVB que se pueden usar de acuerdo con la presente invención son, en particular, agentes fotoprotectores activos UV-A y/o UV-B, tales como derivados de ácido paraaminobenzoico, especialmente UVINUL P25 ™ comercializado por BASF, derivados salicílicos en particular homosalato solo o en combinación con óxidos de titanio, derivados de dibenzoilmetano, derivados cinámicos, derivados de difenilacrilato, incluido el octocrileno vendido en particular con el nombre comercial UVINUL N539 ™ de BASF, derivados de benzofenona, en particular la benzofenona-1 vendida en particular con el nombre comercial UVINUL 400 ™ de BASF, derivados de bencilidenalcanfor, derivados de bencimidazol, derivados de triazina, de los cuales la etilhexil triazona se vende en particular con el nombre comercial UVINUL T150 ™ por BASF, derivados de benzotriazol, derivados antranílicos, derivados de imidazolina derivados de benzalmalonate, derivados de 4,4-diarilbutadieno, y mezclas de los mismos.

Agentes activos que proporcionan un efecto de bienestar como los que imitan los efectos de las beta-endorfinas para mejorar la función de barrera de la piel, como los que se citan en la solicitud de patente US 2006069032; agentes activos que estimulan la síntesis de beta-endorfinas, como un extracto de la planta Tephrosia purpúrea.

Los agentes activos adelgazantes se pueden elegir especialmente entre: agentes inhibidores de lipoproteínas lipasa, como los descritos en la patente. US2003086949 (Coletica) y en particular un extracto de vid de Perú (Uncaria tomentosa); agentes activos de drenaje, incluido el laurato de hesperitina (Flavagrum ™) o el caprilato de quercitina (Flavenger ™); inhibidores de la enzima fosfodiesterasa, agentes activadores de la adenilato ciclasa, AMPc y/o agentes activos capaces de atrapar espermina y/o espermidina. Ejemplos de estos agentes activos incluyen un extracto de raíz de Coleus Forskohlii, un extracto de Cecropia obtusa, Uva lactuca, cafeína, forskolina, teofilina, teobromina y/o sus derivados, un producto de kappa carragenano hidrolizado llamado Slimexcess ™ comercializado por BASF Beauty Care Solutions France SAS y/o sus mezclas.

Los expertos en la técnica conocen muchos ingredientes cosméticamente activos para mejorar la salud y/o el aspecto físico de la piel y/o las membranas mucosas y/o el cuero cabelludo. El experto en la materia sabe cómo formular las composiciones cosméticas para obtener los mejores efectos.

Por otro lado, los compuestos descritos en la presente invención pueden tener un efecto sinérgico cuando se combinan entre sí. Estas combinaciones también están cubiertas por la presente invención.

El CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, Second Edition (1992) describe diferentes ingredientes cosméticos y farmacéuticos comúnmente utilizados en la industria cosmética, que son particularmente adaptados para un uso tópico. Ejemplos de estas clases de ingredientes incluyen, sin estar limitados entre otros, los siguientes compuestos: abrasivos, absorbentes, compuestos con propósito estético como perfumes; pigmentos; colorantes; aceites esenciales, astringentes tales como aceite de clavo, mentol, alcanfor, aceite de eucalipto, eugenol, lactato de lactilo, destilado de Hamelis; agentes antiacné; antifloculantes; agentes antiespumantes; agentes antimicrobianos tales como butilcarbamato de yodopropilo; antioxidantes tales como ácido ascórbico; aglomerantes, aditivos biológicos; agentes amortiguadores; agentes de soplado; agentes quelantes; aditivos; agentes biocidas; desnaturalizantes espesantes; y vitaminas; materiales formadores de película; polímeros; agentes opacificantes; ajustadores de pH; agentes reductores; agentes acondicionadores tales como humectantes, y derivados o equivalentes de los mismos.

De manera preferencial, las composiciones según la invención contienen menos de dos compuestos elegidos entre ciclodextrina, pentetato de pentasodio, ácido fítico, citrato de potasio, citrato de sodio, gluconato de potasio y gluconato de sodio de manera ventajosa, no contienen un compuesto elegido entre ciclodextrina, pentetato de pentasodio, ácido fítico, citrato de potasio, citrato de sodio, gluconato de potasio y gluconato de sodio.

La presente invención tiene igualmente por objeto un procedimiento de cuidado y/o tratamiento cosmético caracterizado porque comprende la aplicación por vía tópica en al menos un área de la piel y/o membranas mucosas y/o el cuero cabelludo de un extracto de Hamamelis virginiana para aumentar la formación de fibras de la matriz extracelular en la piel y/o membranas mucosas y/o el cuero cabelludo, preferiblemente fibras elásticas y/o fibras de colágeno.

El método de cuidado y/o tratamiento cosmético de acuerdo con la invención hace posible aumentar la expresión de la LOXL, la expresión y/o la actividad del colágeno, la expresión y/o la actividad de la fibulina 5, y/o inhibir la expresión y/o la actividad de la elafina y, por lo tanto, es particularmente útil para reducir la formación de agregados de elastina y en general, para aumentar la firmeza y/o elasticidad de la piel y/o membranas mucosas y/o el cuero cabelludo.

Según un modo particularmente ventajoso, el procedimiento de cuidado y/o el tratamiento cosmético se aplican a un área de la piel y/o mucosa, seleccionada de al menos el cuero cabelludo, el cuello, el escote, el vientre, los brazos, los muslos, las caderas, las nalgas, la cintura y/o la cara, y preferiblemente el rostro, especialmente el contorno de los ojos y los labios. La invención también se refiere al extracto de Hamamelis virginiana de acuerdo con la invención para su uso tópico para el cuidado y/o el tratamiento dermatológico de patologías que impliquen pérdida de firmeza y/o elasticidad de la piel y/o membranas mucosas y/o cuero cabelludo seleccionado entre telangiectasia, elastosis solar, enfermedad cutix laxa. De manera ventajosa, el extracto de Hamamelis virginiana según la invención, está presente en una composición dermatológica que comprende un excipiente dermatológico tópicamente aceptable.

Preferiblemente, el extracto de acuerdo con la invención está contenido en una concentración de entre 1.10-4 y 10 % en peso, y de manera ventajosa entre 1.10-4 y 5 % y más particularmente entre 1.10-3 y 3 % en peso con respecto al peso total de la composición dermatológica.

Otros objetos, características y ventajas de la invención se harán evidentes para los expertos en la materia a partir de la lectura de la descripción explicativa que se refiere a las figuras y ejemplos que se dan solo a modo de ilustración y que de ninguna manera limitan el alcance de la invención.

La FIGURA 1 representa la visualización en inmunomarcación de fibulina 5 con o sin un extracto de acuerdo con la invención en cultivo de fibroblastos humanos (A: control sin tratar; B: células tratadas en presencia de un extracto de Hamamelis virginiana de acuerdo con la invención al 0,1% (v/v) con respecto al medio de cultivo).

La FIGURA 2 representa la visualización de inmunomarcación de elastina con o sin un extracto de acuerdo con la invención en cultivo de fibroblastos humanos (A: control sin tratar; células B: tratadas en presencia de un extracto de Hamamelis virginiana de acuerdo con la invención al 0,05 % (v/v) con respecto al medio de cultivo).

La figura 3 representa la visualización en inmunomarcación de colágeno tipo I en un cultivo de fibroblastos humanos. (A: control no tratado; B: células tratadas en presencia de un extracto de Hamamelis virginiana de acuerdo con la invención al 0,1% (v/v) con respecto al medio de cultivo).

La figura 4 representa la visualización de inmunomarcación de elafina en un modelo de piel reconstruido. (4a: Control negativo, 4b: Control irradiado, 4c: Piel tratada en presencia de un extracto de Hamamelis virginiana de acuerdo con la invención al 0,1% (v/v) con respecto al medio de cultivo).

Los ejemplos son parte integral de la presente invención y cualquier característica que parezca novedosa de cualquier técnica anterior de la descripción en su conjunto, incluidos los ejemplos, forma parte integral de la invención en su función y su generalidad.

Así, cada ejemplo tiene un alcance general.

Por otro lado, en los ejemplos, y a menos que se indique lo contrario, la temperatura se expresa en grados Celsius, y la presión es la presión atmosférica.

Ejemplo 1 Preparación de extracto de Hamamelis virginiana según la invención mediante extracción acuosa a) Las partes aéreas, aquí las hojas, se trituran y luego se maceran en agua durante 2 horas a temperatura ambiente, es decir, entre 18 y 25 °C, aquí a aproximadamente 20 ° C, siendo el contenido de hojas de Hamamelis virginiana triturado el 5 % en peso en relación con el peso total de la planta/agua.

Los insolubles se separan por centrifugación a 8000 rpm y una filtración de 0,45 |jm y se recupera el líquido que contiene el extracto acuoso de acuerdo con la invención. El pH se midió y se ajustó a un valor que oscila entre 5 y 7,5. Este extracto se probó a diferentes dosis en el medio de cultivo final en los siguientes ejemplos.

Este extracto también se puede formular en forma de un ingrediente cosmético como se muestra en el ejemplo 5. b) Las hojas de Hamamelis virginiana se trituran y luego se maceran en agua al 5 % (p/p), a una temperatura preferiblemente entre 0 y 20 °C, preferiblemente a 4 °C. La duración de la maceración es de manera ventajosa entre 30 minutos y 24 horas, con agitación, en este caso 16 horas. La solución se centrifuga, preferiblemente durante 10 minutos a 8000 rpm y se recupera el sobrenadante. El sobrenadante es ultrafiltrado en filtros en diferentes puntos de corte y especialmente a 0,45 jm . El extracto así obtenido se puede utilizar directamente en forma líquida.

c) Las hojas de Hamamelis virginiana se muelen y luego se maceran al 5 % (p/p) en una mezcla de agua/butilenglicol al 75 %/25 % (v/v) a una temperatura preferiblemente entre 0 y 20 °C, aquí a 4 °C. La duración de la maceración es de manera ventajosa entre 30 minutos y 24 horas, con agitación, en este caso 16 horas. La solución se centrifuga, preferiblemente durante 10 minutos a 8000 rpm y se recupera el sobrenadante. El sobrenadante es ultrafiltrado en filtros con diferentes umbrales de corte y, en particular, a 0.45 microM. El extracto así obtenido se seca luego en particular sobre un soporte de tipo maltodextrina y luego se resolubiliza en agua al 1% (p/p).

Ejemplo 2: Puesta en evidencia de la propiedad de aumentar la expresión del gen LOXL del extracto de Hamamelis virginiana según la invención.

Principio:

La expresión del gen LOXL se midió mediante el método de RT-PCR cuantitativa en condiciones de cultivo estándar. Su nivel de expresión se ha relacionado con el número de células gracias al gen doméstico ACTINE.

Protocolo experimental:

1) Protocolo de cultivo:

Se cultivaron fibroblastos humanos normales (NHF) de biopsia abdominal de un donante de 62 años de edad en una monocapa a 37 °C con 5 % de CO² en un medio específico para el cultivo de fibroblastos.

Se sembraron células P8 a 25000 células por cm2 en placas de 24 pocillos, para cada condición N = 4, en el medio FGM (medio de crecimiento de fibroblastos, Promocell) específico para el crecimiento de fibroblastos.

2) Aplicación del agente activo probado.

El extracto de Hamamelis virginiana obtenido en el ejemplo 1a) se aplicó durante 24 horas a la concentración final en el medio de cultivo analizado (0,01% (v/v)) en las células confluentes en el medio de cultivo FGM completo. El tratamiento de las células se detuvo mediante un enjuague con PBS y las placas se congelaron en seco a -80 ° C, en espera de la extracción de los ARN totales.

Se realizó un control sin tratar con el medio FGM solo.

3) Extracción de ARN total

Los ARN totales de los fibroblastos cultivados en monocapa se extrajeron (kit SV96 de sistema de aislamiento de ARN total (Promega)), se cuantificaron por espectrofotométría a 260/280 nm y se congelaron a -80 °C para Q RT PCR a continuación.

4) Reacción cuantitativa en cadena por polimerasa después de transcripción inversa (Q RT PCR)

La reacción de amplificación de la cadena se lleva a cabo con el kit Quantitect SYBR Kit Green Kit® (Qiagen, EE. UU.). Los cebadores utilizados se detallan en la Tabla 1. Una mezcla de PCR de 50 |jl que contiene 10 |jl de ARN de 5 ng/ml, 25 j l de mezcla SybrGreen, 0.5 j l de mezcla enzimática y 0.625 j l de cada cebador de 400 jM y agua qsp se preparó en las placas de PCR (después de descongelarlas). A continuación, la placa de PCR se centrifugó durante 1 min a 1500 rpm.

Los ARN mensajeros específicos para el gen de interés y el gen de la actina se amplificaron y cuantificaron mediante RT-PCR cuantitativa en presencia de los cebadores específicos para cada gen (Tabla 1).

Tabla 1: Secuencia de cebadores utilizada para RT-PCR

5) Análisis de los resultados:

Los resultados brutos obtenidos después de Q-RT-PCR se relacionaron con la expresión de la actina con el fin de normalizar los resultados. Luego, los resultados normalizados se reportaron al valor medio del control no tratado con el fin de medir las regulaciones de expresión.

Resultados:

Los resultados se expresan en inducción del gen LOXL con respecto al control no tratado por el extracto 1 a).

Tabla 2:

Agente activo probado Inducción de ARNm de LOXL Desviación estándar

Control no tratado 1,00 0,47

Extraído al 0.01% (v/v) en relación 2,09 0,26

Agente activo probado Inducción de ARNm de LOXL Desviación estándar

con el medio de cultivo

Conclusiones

Bajo el efecto del extracto según la invención, se observó un aumento de la expresión del gen de LOXL puesto que la síntesis de ARNm de LOXL se incrementa con respecto al control. Esto demuestra la efectividad del extracto según la invención para aumentar la expresión de LOXL y su capacidad para ser utilizada para aumentar la formación de fibras elásticas y la firmeza.

Ejemplo 3. Visualización del aumento en la formación de fibras elásticas y colágeno

Protocolo:

Los Fibroblastos de una biopsia abdominal de un donante de 62 años de edad se cultivaron en láminas de vidrio (Labteks) en el pase 8 en medio definido de MGF (Promocell) hasta la confluencia. El día de la confluencia, las células se trataron con el agente activo en medio FGM solo o suplementado con vitamina C (5 |jg/ml). El medio se renovó cada 2 días durante 3 días para el análisis de colágeno y 6 días para el análisis de las fibras elásticas (elastina y fibulina 5). El extracto de Hamamelis virginiana obtenido de acuerdo con el Ejemplo 1a) y diluido al 0,1% en relación con el medio de cultivo (v/v) se probó en el medio de cultivo y se volvió a aplicar en cada cambio de medio. El control no tratado corresponde al medio de cultivo solo suplementado con 5 jg/m l de vitamina C en el caso del colágeno o de 0.1ng /ml de TGFp 1 para elastina y fibulina 5. Al final del cultivo, el medio se retiró, las células se enjuagaron en solución salina regulada con fosfato (PBS) y luego se fijaron en metanol a -20 ° C para proceder a la inmunomarcación.

Las marcaciones se realizaron por técnica de inmunofluorescencia. Después del enjuague del metanol con PBS, los sitios antigénicos específicos se bloquean durante 1 hora con una solución de PBS-BSA al 1% (albúmina de suero bovino). El anticuerpo primario diluido en PBS/BSA al 1% se deposita en las láminas y se incuba durante 1 hora. En el control negativo se deposita un isotipo de control de IgG (en lugar del anticuerpo primario). El exceso de anticuerpos no fijados se elimina mediante dos enjuagues con PBS.

Las células se incuban protegidas de la luz con una solución de anticuerpo secundario capaz de reconocer el anticuerpo primario. Dado que este anticuerpo secundario está acoplado a un fluorocromo (Alexa Fluor 488), es posible visualizar la proteína en cuestión bajo un microscopio de fluorescencia. Las láminas se lavan luego con 3 baños de PBS y se montan con un medio de montaje que contiene un marcador nuclear, DAPI (4',6'-diamidino-2-fenilindol) (Invitrogen). Finalmente, las láminas se pueden observar con un microscopio confocal.

Tabla 3: Anticuerpos utilizados para inmunomarcación

Anticuerpo Anfitrión Dilución

Anti-Colágeno tipo I Conejo 1/200

Anti-fibulina 5 Conejo 1/500

Elastina Conejo 1/100

Anti-LGG de conejo acoplado AlexaFluor 488 Cabra 1/1000

Anti-I gG1 de ratón acoplado AlexaFluor 488 Cabra 1/1000

Resultados:

Los resultados se muestran en las figuras 1,2 y 3.

3a) Cuantificación de la longitud de fibra positiva de fibulina 5 (jm ):

Condición Promedio Desviación estándar

Control no tratado 431 105

Extracto según la invención al 0.1% (v/v) 1106 64

La observación en microscopía confocal se presenta en la figura 1.

Conclusión:

La fibulina 5 se localizó en las fibras elásticas cuando el cultivo se realizó en presencia del extracto de Hamamelis virginiana de acuerdo con la invención (Figura 1B), mientras que es difuso cuando el cultivo se realizó sin el extracto (control no tratado) (Figura 1A). Esto demuestra que el extracto según la invención aumenta la formación de fibras elásticas en particular mediante una mejor calidad de éstas, organizándolas en fibras elásticas maduras.

3b) Cuantificación de la longitud de las fibras positivas para elastina ( ^|Jm):

Condición Promedio Desviación estándar

Control no tratado 32,5 10,9

Extracto de acuerdo con la invención al 0.05 % (v/v) 772,2 201,9

La observación en microscopía confocal se presenta en la figura 2.

Conclusión:

La elastina aparece en forma fibrilar cuando el cultivo se llevó a cabo en presencia del extracto de Hamamelis virginiana de acuerdo con la invención (Figura 2B), aunque aparece en forma globular, no está organizada en ausencia del extracto (control no tratado) (Figura 2A). Esto demuestra que el extracto de acuerdo con la invención aumenta la formación de fibras elásticas en particular mediante una mejor calidad de éstas, organizándolas en fibras elásticas maduras.

3c) Cuantificación del aumento en la formación de fibras de colágeno de tipo I (como porcentaje del valor de control no tratado).

Condición Promedio Desviación estándar

Control no tratado 100 26

Extracto de acuerdo con la invención al 0.1% (v/v) 137 19

La observación en microscopía confocal se muestra en la Figura 3.

Conclusión:

El colágeno tipo I se sintetiza en grandes cantidades cuando el cultivo se realizó en presencia de Hamamelis virginiana al 0,1% (v/v) de acuerdo con la invención (Figura 3B) en ausencia del extracto (Figura 3A). Estos resultados demuestran que el extracto de Hamamelis virginiana De acuerdo con la invención, el 0,1% aumenta la cantidad y calidad de la red de fibras de colágeno.

Ejemplo 4 : Visualización de la inhibición de la expresión de elafina por un extracto de acuerdo con la invención: Protocolo

El efecto del extracto de Hamamelis virginiana obtenido en el Ejemplo 1a) se probó al 0,1% en volumen con respecto al volumen total del medio de cultivo en un modelo de piel reconstruido tipo Mimeskin ™, conocido por los expertos en la materia. En resumen, este modelo de piel se obtiene cultivando fibroblastos humanos normales y luego a partir del 28° día del cultivo (J28), se agregaron queratinocitos humanos normales y puestos a proliferar hasta el 35° día de cultivo (J35), luego se induce su diferenciación y el conjunto de células se cultivan hasta el 56° día (J56). Después de 56 días de cultivo, las células se enjuagaron con un regulador de solución salina de regulador de fosfato (PBS) que contienen calcio, magnesio y antibióticos y luego se fijaron en formaldehído durante 10 minutos. Se evaluaron tres condiciones:

- Piel no irradiada y no tratada llamada Control Negativo

- Piel irradiada de 14 a 28° días de cultivo (J14 a J28) y a partir del 42° día (J42 a J56) por UVA (longitud de onda A = 365nm) 1J/cm2 llamado Control irradiado.

- piel tratada a partir del 3° día de cultivo por el extracto de Hamamelis virginiana obtenido en el Ejemplo 1a) al 0,1% en el medio de cultivo (J3 a J56) e irradiado del 14 a 28° días de cultivo (J14 a J28) y a partir del 42° día (J42 a J56) por UVA (longitud de onda A = 365nm) 1J cm2, llamada Piel Tratada

El modelo se incluye en parafina y se realizaron cortes de 5 micras.

Los cortes así realizados se desparafinaron, se dispusieron en láminas y se hidrataron. Se efectuó una ejecución enzimática con la tripsina al 0,1% (v/v) durante 10 minutos a 37 °C y luego las láminas se saturan con una solución reguladora de PBS-BSA 3 % (albúmina de suero bovino) durante una hora. El anticuerpo primario policlonal de conejo anti-elafina (Abcan ™ ab-46774) se aplica a una concentración de 5 microgramos por mililitro en el medio de cultivo PBS-BSA al 1% durante 16 horas a 4 °C. Las láminas se lavan en un regulador PBS durante 5 minutos, repitiéndose este lavado dos veces. El bloqueo de las peroxidasas endógenas se realiza con una solución específica (DAKO ™ DAB Real Blocking Perodixase durante 30 minutos en una cámara húmeda a temperatura ambiente). Las láminas se lavan con regulador PBS durante 5 minutos, repitiéndose este lavado dos veces. El anticuerpo secundario (anti-conejo) acoplado a la peroxidasa se agrega de acuerdo con las recomendaciones del proveedor y las láminas se lavan con un regulador PBS durante 5 minutos, este lavado se repite dos veces. El revelado se lleva a cabo mediante una solución específica (solución DAKO ™ DAB cromogénica en una solución DAKO ™).

Finalmente, las láminas se pueden observar bajo un microscopio confocal y se realiza una cuantificación de la superficie de marcación. Los resultados se muestran en la Tabla 4 a continuación, así como en la Figura 4a) para el Control negativo, 4b) para el Control irradiado y 4c) para la Piel tratada.

Resultados:

Tabla 4: Valor promedio medido en píxeles en un área predefinida a nivel de la dermis con la ayuda de un software de generación de imágenes (ImaqeJ).

Condición Promedio en píxeles

Control negativo 205000

Control Irradiado 455000

Piel tratada 65000

Conclusión:

La expresión de la elafina se induce por irradiación con UVA (Figura 4b). Cuando la irradiación se realiza en presencia del extracto de Hamamelis virginiana de acuerdo con la invención, la expresión de la elafina está disminuida (figura 4c). Esto demuestra que el extracto de acuerdo con la invención inhibe la expresión de la elafina inducida por UVA. Ejemplo 5. Composición que comprende el extracto de acuerdo con la presente invención para incorporar en una composición cosmética (ingrediente cosmético)

El extracto de Hamamelis virginiana se obtiene de acuerdo con el Ejemplo 1a) y se mezcla con los otros ingredientes de la siguiente formulación:

Ingrediente % en peso con respecto al peso total de la composición

Agua qsq >50 %

Ingrediente % en peso con respecto al peso total de la composición

extracto acuoso de Hamamelis virginiana (Ex 1a) 5 %

Pentilenglicol 1-5 %

Caprilil glicol 0,1-1 %

Agente gelificante (goma xantano) 0,1-1 %

Ejemplo 6: Composiciones que contienen el extracto de Hamamelis virginiana según la invención.

El procedimiento se lleva a cabo de acuerdo con los métodos conocidos por los expertos en la técnica para mezclar entre sí las diversas partes A, B, C, D, E o F para preparar una composición de acuerdo con la presente invención. Los "productos de la invención" representan un extracto de Hamamelis virginiana y preferiblemente obtenido de acuerdo con el Ejemplo 1a).

Los productos de la invención también pueden estar en forma de liposomas que contienen un 5 % de lecitina de soja y que incorporan una solución de soja cuaternizada (600g final) obtenida de acuerdo con la siguiente realización: 30 g de lecitina de soja, 12 g de solución de soja cuaternizada, 1,5 g de Hamamelis virginiana preparados de acuerdo con el Ejemplo 1a) se introducen en un pastillero y se diluyen en 447 g de agua pura de laboratorio.

Después de la agitación magnética durante 10 minutos a temperatura ambiente, la mezcla se homogeneiza exhaustivamente durante 10 minutos, obteniendo así una solución liposómica en donde los liposomas tienen un tamaño promedio que puede variar entre 100 y 800 nanómetros de acuerdo con las condiciones exactas de la homogeneización.

La suspensión se agita suavemente durante 1 hora. Luego se agregan 90 g de butilenglicol, 6 g de fenoxietanol y 6 g de hidroxietil celulosa (agente gelificante).

Composición cosmética 6a:

A Agua qs 100

Butilenglicol 2

Glicerina 3

Fosfato de dihidroxicetil sodio, hidroxicetil isopropil éter 2

B Estearato de Glicol SE 14

Triisononaoína 5

Cocoato de octilo 6

C Butilenglicol, metilparabeno, etilparabeno, propilparabeno 2

pH ajustado a 5,5

D Productos de la invención. 0,01 - 10 %

Composición cosmética 6b:

A Agua qs 100 Butilenglicol 2 Glicerina 3 Poliacrilamida, Isoparafina, Laureth-7 2,8

B Butilenglicol, metilparabeno, etilparabeno, propilparabeno; 2 Fenoxietanol, metilparabeno , Propilparabeno, butilparabeno, etilparabeno 2 Butilenglicol 0,5

D Productos de la invención. 0,01 - 10 %

Composición cosmética 6c:

A Carbómero 0,50 Propilen Glicol 3 Glicerol 5 Agua qsq 100 B Cocoato de octilo 5 Bisabolol 0,30 Dimeticona 0,30 C Hidróxido de Sodio 1,60 D Fenoxietanol, metilparabeno, propilparabeno, butilparabeno, etilparabeno 0,50 E Perfume 0,30 F Productos de la invención. 0,01 - 10 %

Composición dermatológica 6d en forma de un ungüento

A Excipientes

Polietileno de baja densidad 5,5

Parafina líquida qsq 100

Claims (18)

REIVINDICACIONES

1. Uso cosmético no terapéutico de un extracto de Hamamelis virginiana para aumentar la formación de fibras de la matriz extracelular en la piel y/o membranas mucosas y/o el cuero cabelludo para aumentar la firmeza de la piel y/o membranas mucosas y/o el cuero cabelludo y/o para el cuidado y/o tratamiento de estrías, siendo obtenido el extracto de Hamamelis virginiana de las hojas.

2. Uso según la reivindicación 1, en donde las fibras de la matriz extracelular son fibras elásticas y/o fibras de colágeno.

3. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 para disminuir la formación de agregados de elastina.

4. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para aumentar la expresión de la LOXL, la expresión y/o la actividad del colágeno, la expresión y/o la actividad de la fibulina 5, y/o para inhibir la expresión y/o la actividad de la elafina.

5. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el extracto de Hamamelis virginiana se obtiene por extracción acuosa.

6. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el extracto de Hamamelis virginiana se obtiene por extracción a una temperatura entre 0 °C y 30 °C.

7. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el extracto de Hamamelis virginiana se disuelve en un disolvente polar elegido de agua, alcohol, poliol, glicol o una de sus mezclas.

8. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde el extracto de Hamamelis virginiana está contenido en una composición cosmética que contiene un excipiente cosmético tópicamente aceptable.

9. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde el extracto de Hamamelis virginiana se aplica por vía tópica sobre la piel y/o las membranas mucosas y/o el cuero cabelludo.

10. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 8 o 9, en donde el extracto de Hamamelis virginiana está presente en una concentración comprendida entre 1.10-4 y 10 % en peso, preferiblemente 1.10-4 y 5 %, y más preferiblemente entre 1.10-3 y 3 % en peso con respecto al peso total de la composición cosmética.

11. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, en donde la composición cosmética contiene menos de dos compuestos elegidos entre ciclodextrina, pentetato de pentasodio, ácido fítico, citrato de potasio, citrato de sodio, gluconato de potasio y gluconato de sodio, de manera ventajosa, dicha composición no contiene un compuesto elegido de ciclodextrina, pentetato de pentasodio, ácido fítico, citrato de potasio, citrato de sodio, gluconato de potasio y gluconato de sodio.

12. Procedimiento de cuidado cosmético, caracterizado porque comprende la aplicación por vía tópica en al menos un área de la piel y/o membranas mucosas y/o el cuero cabelludo de un extracto de Hamamelis virginiana para aumentar la formación de fibras de la matriz extracelular en la piel y/o las membranas mucosas y/o el cuero cabelludo, preferiblemente fibras elásticas y/o fibras de colágeno, para aumentar la firmeza de la piel y/o las membranas mucosas y/o el cuero cabelludo y/o o para el cuidado y/o tratamiento de las estrías, siendo obtenido el extracto de Hamamelis virginiana de las hojas.

13. Procedimiento de cuidado cosmético según la reivindicación 12, en donde el extracto de Hamamelis virginiana es tal como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 11.

14. Procedimiento de cuidado cosmético según una cualquiera de las reivindicaciones 12 o 13, en donde el área de la piel y/o la membrana mucosa y/o el cuero cabelludo se elige entre al menos el cuero cabelludo, el cuello, el escote, el vientre, los brazos, los muslos, las caderas, las nalgas, la cintura y/o la cara, y preferiblemente los ojos, y los labios.

15. Extracto de Hamamelis virginiana para su uso por vía tópica para el cuidado dermatológico y/o el tratamiento de patologías que impliquen una pérdida de firmeza y/o elasticidad de la piel y/o membranas mucosas y/o el cuero cabelludo elegido entre telangiectasias, elastosis solar y/o la enfermedad cutix laxa, siendo obtenido el extracto de Hamamelis virginiana de las hojas.

16. Extracto de Hamamelis virginiana para su utilización según la reivindicación 15 caracterizado porque dicho extracto es como se define en una de las reivindicaciones 5 a 7.

17. Extracto de Hamamelis virginiana para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 15 o 16, caracterizado porque dicho extracto está presente en una composición dermatológica que comprende un excipiente dermatológico tópicamente aceptable y en donde dicho extracto está contenido en una concentración final comprendida entre 1.10-4 y 10 % en peso, y de manera ventajosa entre 1.10-4 y 5 % en peso y más particularmente entre 1.10-3 y un 3 % en peso con respecto al peso total de la composición dermatológica.

18. Extracto de Hamamelis virginiana para su uso según la reivindicación 17, caracterizado porque la composición dermatológica contiene menos de dos compuestos elegidos entre ciclodextrina, pentetato de pentasodio, ácido fítico, citrato de potasio, citrato de sodio, gluconato de potasio y gluconato de sodio, de manera ventajosa, dicha composición no contiene un compuesto elegido entre ciclodextrina, pentetato de pentasodio, ácido fítico, citrato de potasio, citrato de sodio, gluconato de potasio y gluconato de sodio.