ES2218522T3 - Oligonucleotidos estabilizados y su uso. - Google Patents

Oligonucleotidos estabilizados y su uso.

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Abstract

LA INVENCION SE REFIERE A NUEVO OLIGONUCLEOTIDO ESTABILIZADO, EN DONDE SE MODIFICA AL MENOS UN NUCLEOXIDO PIRIMIDINA NO TERMINAL, ASI COMO A SU UTILIZACION COMO AGENTE DE DIAGNOSTICO O MEDICAMENTO PARA EL TRATAMIENTO DE INFECCIONES DE VIRUS, CANCER O ENFERMEDADES, EN DONDE ACTUAN LA INTEGRINA O CELULA-CELULARECEPTORES DE ADHESION.

Description

Oligonucleótidos estabilizados y su uso.
La invención se refiere a nuevos oligonucleótidos estabilizados en los que está modificado al menos un pirimidin-nucleósido no situado en el extremo así como a su uso como diagnóstico o medicamento para el tratamiento de infecciones víricas, enfermedad de Krebs o enfermedades en las que actúan receptores de adhesión integrales o célula - célula.
Los oligonucleótidos antisentido (AO) y los oligonucleótidos conformados en triple hélice (TFO) se manifiestan como inhibidores específicos de la expresión génica en una pluralidad de sistemas, tanto in vitro como también in vivo [Uhlman & Peyman, Chem. Rev. 1990, 90, 543; Milligan y col., J. Med. Chem. 1993, 36, 1923; Stein & Cheng, Science 1993, 261, 1004].
Uno de los problemas principales en el uso de oligonucleótidos de fosfodiéster (PO) de origen natural es su rápido catabolismo mediante distintas actividades nucleolíticas tanto en las células, como también en medio de cultivo celular. Para la estabilización de los oligonucleótidos se emplean distintas modificaciones químicas. Se ofrece una revisión del estado de la técnica por ejemplo en la referencia de Milligan y col., referencia mencionada anteriormente y Uhlmann & Peyman, mencionada anteriormente. La estabilización frente al catabolismo nucleolítico puede tener lugar mediante la modificación o sustitución del puente de fosfato, del componente de azúcar, de la nucleobase o por sustitución de la estructura de azúcar - fosfato del oligonucleótido. Debido a que el puente de fosfato es el centro del ataque nucleolítico, se describen especialmente múltiples modificaciones del puente internucleósido. Los puentes internucleósidos resistentes a la nucleasa más frecuentemente empleados son los puentes de fosforotioato (PS), metilfosfonato (MeP) y fosforoditioato (PA).
En esto se ha de tener en cuenta que con la introducción de modificaciones no se cambia solo la estabilidad frente a las nucleasas, sino que al mismo tiempo también una pluralidad de propiedades de los oligonucleótidos antisentido o de los oligonucleótidos formados en triple hélice, como por ejemplo su movilidad en célula, activación de RNasa H, la especificidad y la capacidad para la hibridación con ARN (para los AO) o con ADN (para los TFO) etc. Además de esto se da a entender que la estabilidad en suero, a la que frecuentemente se hace referencia como criterio para la estabilidad frente a la nucleasa, no siempre reproduce la actividad intracelular [P. D. Cook en "Antisense Research and Applications", ediciones Croque y Lebleu, CRC Press, Boca Ratón, 1993, capítulo 9 página 149 y siguientes]. Junto con la resistencia a la nucleasa la actividad biológica de los oligonucleótidos antisentido o de los oligonucleótidos en triple hélice aporta por tanto una explicación sobre la bondad de tales modificaciones.
En cuanto a las cuestiones de en qué posiciones en el oligonucleótido deben tener lugar de forma ideal tales modificaciones se han desarrollado las siguientes estrategias [P. D. Cook (mencionado anteriormente); Uhlmann & Peyman (mencionado anteriormente); Milligan y col., (referencia mencionada anteriormente)].
I) El intercambio de todos los puentes internucleosídicos, por ejemplo a oligonucleótidos totalmente PS
Este intercambio da lugar a oligonucleótidos extraordinariamente estables a la nucleasa. Por ejemplo se retarda el catabolismo mediante endonucleasas (nucleasa S1) y mediante la nucleasa P1 endo/exo en un oligonucleótido completamente PS en torno a un factor 2 - 45 respecto a un oligonucleótido PO [Stein y col., Nucl. Acids Res. 1988, 16, 1763]. Los oligonucleótidos totalmente PS son resistentes también en células intactas. En los oocitos de Xenopus o embriones se catabolizan los oligonucleótidos PO microinyectados con una vida media de treinta minutos, mientras que los oligonucleótidos totalmente PS muestran bajo las mismas condiciones presentan una vida media de más de tres horas [Wolf y col., Nucl. Acids. Res. 1990, 18, 1763]. También los oligonucleótidos completamente MeP son extraordinariamente resistentes a la nucleasa.
La desventaja de los oligonucleótidos completamente PS o MeP frente a los oligonucleótidos PO es su reducida capacidad para contraerse con el híbrido estable de ARN diana. Otra desventaja más de los oligonucleótidos completamente PS son los efectos inespecíficos ("no - antisentido"), que se observan frecuentemente con esta clase de compuestos [Milligan y col., referencia mencionada anteriormente; Stein & Cheng, mencionada anteriormente].
También otros derivados modificados de forma uniforme, por ejemplo los derivados 2'-O-metílico completos o los derivados de \alpha-2'-desoxirribo completos se caracterizan por lo general por la pérdida de la capacidad para la activación de la RNasa H.
II) Puentes fosforodiéster no modificados y modificados con copolímeros
Ghosh y col. [Anti-Cancer Drug Design 1993, 8, 15] describen un oligonucleótido de fosforotioato - fosforodiéster con distintas proporciones en porcentaje en puentes PS. Estos se construyen por ejemplo conforme al esquema [PS-PO-PO-PO]_{n}, [PO-PO-PS]_{n}, [PS-PO]_{n}, [(PO)_{2}-(PS)_{2}]_{n}, [PO-PS, PS]_{n}. Estos autores describen que es necesario para una inhibición selectiva de la translación un contenido de al menos un 50% de puentes PS y que por debajo se presenta una actividad residual. La presente invención muestra que estos resultados no son correctos y que con el posicionamiento correcto de las modificaciones es suficiente un contenido mucho menor de un 50% de las uniones PS para la inhibición selectiva (s.u.). Adicionalmente Ghosh y col. señalan que con la técnica de bloqueo de extremo/hueco descrita en III se obtienen buenos resultados.
El intercambio alternante cada segundo puente internucleosídico, por ejemplo frente a los puentes MeP (Furdan y col., Nucl. Acids Res. 1989, 17, 9193), no consigue ventaja alguna frente a los oligonucleótidos MeP modificados de forma uniforme. Así los oligonucleótidos modificados con MeP alternantes no provocan por ejemplo en ningún caso activación de la RNasa H.
Los oligonucleótidos con ésteres fosfat-O-etílicos o fosfat-O-isopropílicos alternantes y los oligonucleótidos MeP alternantes se manifiestan comparativamente también menos activos que los oligonucleótidos completamente PS o completamente MeP [Marcus-Secure y col., Nucl. Acids Res. 1987, 15, 5749].
III) El intercambio de uno, dos o tres puentes internucleosídicos en los extremos 5' ó 3' de los oligonucleótidos (bloqueo del extremo) así como el intercambio de uno, dos o tres puentes internucleosódicos en los extremos 5' y 3' de los oligonucleótidos (técnica del hueco)
Para la efectividad del bloque del extremo existen resultados parcialmente contradictorios. Se describe especialmente el bloque del extremo 3' mediante puentes de PS, PA o MeP como protección contra las nucleasas [P. D. Cook, mencionado anteriormente, Milligan y col., referencia mencionada anteriormente]. La protección mediante el bloque del extremo 3' se consigue también mediante otras modificaciones distintas. El bloqueo del extremo 3'-3' se describe por parte de distintos autores como protección frente al catabolismo nucleolítico [Shaw y col., Nucl. Acids Res. 1991, 19, 747; Seliger y col., Nucleoside & Nucleotides 1991, 10, 469]. Otra variante del bloqueo del extremo 3' es la introducción de moléculas conjugadas en el extremo 3', que aumenta igualmente la estabilidad frente a la nucleasa, como por ejemplo 3'-dodecanol o la 3'-acridina [P. D. Cook, mencionado anteriormente] o el 3-amino-2,3-propanodiol [documento WO 92/20697]. La técnica del hueco, así como el intercambio de uno, dos o tres puentes internucleosídicos en los extremos 5' y 3' de los oligonucleótidos se ha probado especialmente ya que prescindiendo de los oligonucleótidos PS, la mayoría de las modificaciones uniformes tienen lugar con una pérdida de capacidad para la activación de la RNasa H y con ello una fuerte pérdida de actividad. También aquí se emplean los distintos derivados, puentes fosfodiéster modificados, azúcares modificados, bases modificadas, como por ejemplo oligonucleótidos derivatizados por MeP, PS, PA, 2'-alquilo y 2'-F para la estabilización. Se encuentra un resumen de estos resultados en P. D. Cook mencionado anteriormente. En el "hueco" es entonces suficiente una secuencia de dos a cuatro enlaces de PO para activar la RNasa.
Giles y col. [Anti-Cancer Drug Design 1993, 8 33] describen oligonucleótidos quiméricos de metilfosfonato-fosfodiéster, en los que el hueco en puentes PO no modificados se acorta de forma continua de ocho a dos puentes. En esto se comprueba una tendencia a un mejor acogimiento de células con huecos acortados, sin embargo no se analiza la actividad antisentido de los oligonucleótidos.
Hoke y col. [Nucl. Acids Res. 1991, 19, 5743] aportan una comparación interesante de distintas estrategias. Estos autores compararon la actividad de distintos oligonucleótidos antisentido modificados frente a HSV-1 (virus simple del herpes) en cultivo celular. Sus resultados establecieron que los oligonucleótidos con bloqueo en los extremos 3' o 3' + 5' (se modifican respectivamente los tres primeros puentes internucleosídicos) en suero se protegían de forma comparable a los oligonucleótidos completamente PS suficientemente contra el catabolismo de la nucleasa. Por el contrario los oligonucleótidos modificados internamente (3 puentes PS) y solo los de bloqueo en el extremo 5' (los tres primeros puentes internucleosídicos se modifican igualmente) se catabolizan pronto. Por el contrario contrastaron que para la actividad en las células bien el bloqueo en los extremos 5' o 3' o ambos era suficiente y excluía de esto que sea necesaria una modificación uniforme (completamente PS) para conseguir una estabilidad suficiente frente a las nucleasas en las células.
Se ha encontrado ahora sorprendentemente que los pirimidin-nucleósidos en de los oligonucleótidos representan puntos débiles respecto a la resistencia a la nucleasa. Estos lugares se protegen ahora mediante modificaciones, las cuales aumentan la resistencia a la nucleasa, de modo que esto lleva de nuevo a una rigurosa mejora en la estabilidad y actividad.
El objeto de la invención son por tanto oligonucleótidos de fórmula:
1
en donde al menos está modificado un pirimidin-nucleósido no situado en un extremo y adicionalmente se modifican los extremos 5' y/o 3' del oligonucleótido.
Se prefieren en esto oligonucleótidos en los que estén modificados 2 -10, en especial 3 - 6 pirimidin-nucleósidos no situados en extremos, en donde sobre todo no deben estar modificados más de 8 nucleótidos sucesivos. En especial se prefieren oligonucleótidos en los que están modifican adicionalmente los extremos 5' y/o 3', especialmente aquellos en los que los primeros 1 - 5, especialmente 1 - 3, sobre todo 2 - 3 nucleótidos en los extremos 5' y/o 3', están unidos preferiblemente mediante puentes fosforotioato, puentes fosforoditioato y/o puentes de metilfosfonato. Se prefieren sobre todo aquellos oligonucleótidos modificados que contienen uno o varios grupos de al menos 1 - 4, especialmente 3 - 4, nucleótidos unidos entre ellos y no modificados.
La tabla 1 muestra por ejemplo que es efectivo el oligonucleótido antisentido 01 bloqueado con PS dos veces en los extremos 5' y 3' frente a HSV-1, en una concentración de 27 \muM. La introducción de tres puentes de PS en los extremos 5' y 3' llevan a un aumento de la actividad a 9 \muM lo que consigue el mismo efecto que con la introducción de un único puente de PS en 3' en un resto de citosina C (oligonucleótido antisentido número 03). La introducción de dos puentes de PS 5' o 3' en T y C (oligonucleótido antisentido número 05) o la introducción de cuatro puentes de PS 5' o 3' en T y C (oligonucleótido antisentido número 06) lleva a más aumentos de la actividad de valores MHK (concentración de inhibición mínima) de 3 ó 1 \muM. Con 1 \muM el valor MHK se corresponde también con el del respectivo derivado de PS completo. Mediante la protección del pirimidin-nucleósido se consigue también un aumento de la estabilidad y actividad comparable con las del oligonucleótido completamente modificado, pero sin tener que asimilar las desventajas anteriormente descritas de una semejante alteración drástica.
Las estabilizaciones en las posiciones de la pirimidina como también en los extremos 5' y/o 3' pueden tener lugar independientemente unas de otras de las formas siguientes:
a) sustitución del puente de diéster del ácido 3' y/o 5'-fosfórico, por ejemplo mediante un puente de fosforotioato, fosforoditioato, NR^{1}R^{2}-fosforamidato, boranofosfato, fosfat-O-alquil (C_{1}-C_{21})-éster, fosfat-[aril(C_{6}-C_{12})-O-alquil (C_{1}-C_{21})]-éster, 2,2,2-triclorodimetiletilfosfonato, alquil (C_{1}-C_{8})-fosfonato, aril (C_{6}-C_{12})-fosfonato. Se prefiere la sustitución por un puente de fosforotioato, fosforoditioato, NR^{1}R^{2}-fosforamidato, fosfat-O-metiléster, fosfat-O-etiléster, fosfat-O-isopropiléster, metilfosfonato, fenilfosfonato. Se prefiere especialmente la sustitución por un puente de fosforotioato, fosforoditioato, metilfosfonato.
Muy especialmente se prefiere la sustitución por un puente de fosforotioato.
R^{1} y R^{2} representan independientemente uno de otro hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{18}, arilo C_{6}-C_{20}, aril (C_{6}-C_{14})-alquilo (C_{1}-C_{8}), -(CH_{2})_{c}-[NH(CH_{2})_{c}]_{d}-NR^{3}R^{3}, en donde c es un número entero de 2 a 6 d un número entero de 0 a 6, y R^{3} es independientemente uno de oro hidrógeno, o alquilo C_{1}-C_{6} o alcoxi C_{1}-C_{4}-alquilo C_{1}-C_{6}; preferiblemente R^{1} y R^{2} representan hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{8} o metoxietilo, se prefiere especialmente hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4} o metoxietilo, se prefiere especialmente hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4} o metoxialquilo. R^{1} y R^{2} pueden formar también junto con el átomo de nitrógeno que los porta un anillo heterocíclico de 5 a 6 miembros, que puede contener adicionalmente otro heteroátomo del grupo de O, S, N.
b) Sustitución del puente diéster del ácido 3' ó 5'-fosfórico por puentes "defosfo" [véase, por ejemplo, Uhlmann y Peyman en "Methods in Molecular Biology", vol. 20: "Protocols for Oligonucleotides and Analogs", ediciones S. Agrawal, Humana Press, Totowa 1993, capítulo 16, página 355 y siguientes], por ejemplo por formacetal, 3'-tioformacetal, metilhidroxilamina, oxima, metilendimetilhidrazo, dimetilensulfona, grupos sililo.
Se prefiere la sustitución por formacetal y 3'-tioformacetal.
c) Sustitución de la estructura de azúcar - fosfato, por ejemplo por oligómeros "morfolinonucleosídicos" [E. P. Strichak y col., Nucleic Acids Res. 17 (1989) 6129].
d) Sustitución de la \beta-D-2'-desoxirribosa, por ejemplo por \alpha-D-2'-Desoxirribosa, L-2'-desoxirribosa, 2'-F-2'-desoxirribosa, 2'-O-alquil (C_{1}-C_{6})-ribosa, 2'-O-alquenil (C_{2}-C_{6})-ribosa, 2'-NH_{2}-2'-desoxirribosa, \beta-D-xilofuranosa, \alpha-arabinofuranosa, 2,4-didesoxi-\beta-D eritro-hexo-piranosa y análogos de azúcares carbocíclicos [por ejemplo Froehler, J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 8320] y de cadena abierta [por ejemplo Vanderdriessche y col., Tetrahedron 1993, 49, 7223], análogos de biciclo-azúcares [por ejemplo M. Tarkov y col., Helv. Chim. Acta 1993, 76, 481].
Preferiblemente la sustitución es por 2'-F2'-desoxirribosa, 2'-O-alquil (C_{1}-C_{6})-ribosa, 2'-O-alquenil (C_{2}-C_{6})-ribosa, 2'-NH_{2}-2'-desoxirribonsa.
Se prefiere especialmente la sustitución por 2'-F-2'-desoxirribosa, 2'-O-alquil (C_{1}-C_{4})-ribosa, 2'-alquenil (C_{2}-C_{4})-ribosa, 2'-NH_{2}-2'-desoxirribosa.
Se prefiere muy especialmente la sustitución por 2'-O-metil, 2'-O-alil-, 2'-O-butilrribosa.
e) Sustitución de las bases de nucleósido de origen natural, por ejemplo por 5-(hidroximetil)uracilo, 5-aminouracilo, pseudouracilo, dihidrouracilo, 5-alquil (C_{1}-C_{6})-uracilo, 5-alquenil (C_{2}-C_{6})-uracilo, 5-alquinil (C_{2}-C_{6})-uracilo, 5-alquil (C_{1}-C_{6})-citosina, 5-alquenil (C_{2}-C_{6})-citosina, 5-alquinil (C_{2}-C_{6})-citosina, 5-fluorouracilo, 5-fluorocitosina, 5-clorouracilo, 5-clorocitosina, 5-bromouracilo, 5-bromocitosina.
Se prefiere la sustitución por 5-alquil (C_{1}-C_{6})-uracilo, 5-alquenil (C_{2}-C_{6})-uracilo, 5-alquinil (C_{2}-C_{6})-uracilo, 5-alquil (C_{1}-C_{6})-citosina, 5-alquenil (C_{2}-C_{6})-citosina, 5-alquinil (C_{2}-C_{6})-citosina, 5-fluorouracilo, 5-fluorocitosina, 5-clorouracilo, 5-clorocitosina, 5-bromouracilo, 5-bromocitosina.
Se prefiere especialmente la sustitución por 5-alquil (C_{3}-C_{6})-uracilo, 5-alquenil (C_{2}-C_{6})-uracilo, 5-alquinil (C_{2}-C_{6})-uracilo, 5-alquil (C_{1}-C_{6})-citosina, 5-alquenil (C_{2}-C_{6})-citosina, 5-alquinil (C_{2}-C_{6})-citosina.
Se prefiere muy especialmente la sustitución por 5-pentinilcitosina, 5-hexiniluracilo, 5-hexinilcitosina.
De las modificaciones anteriormente mencionadas se prefieren sobre todo las modificaciones de los grupos a), b), c) y d), sobre todo de los grupos a) y d), en especial del grupo a).
Adicionalmente los oligonucleótidos de acuerdo con la invención pueden estar unidos (conjugados) por ejemplo por los extremos 3' y/o 5' con moléculas, las cuales influyen de forma propicia en las propiedades de los oligonucleótidos antisentido o de los oligonucleótidos formados en triple hélice (como por ejemplo la penetración celular, catabolismo por nucleasa, afinidad por el ARN/ADN diana, farmacocinética). Son ejemplos conjugados con poli-lisina, con intercaladores como el pireno, acridina, fenazina, fenantridina, con compuestos fluorescentes como la fluoresceína, con agentes reticulantes como psorales, azidoproflavina, con moléculas lipofílicas como alquilo (C_{12}-C_{20}), o sus derivados, como por ejemplo la hexametilentetraamina, con terpeneno, como el farnesol o el pitol, con lipideno como el 1,2-di-hexadecil-rac-glicerina, con esteroides como el ácido galénico, colesterina o testosterona, con vitaminas como la vitamina E, con poli- o oligoetilenglicol, con alquil (C_{12}-C_{18})-fosfatodiésteres, con -O-CH_{2}-CH(OH)-O-alquilo (C_{12}-C_{18}). Se prefieren conjugados con moléculas de lipofileno como alquilo (C_{12}-C_{20}), con esteroides como la colesterina o la testosterona, con poli- u oligoetilenglicol, con vitamina E, con intercaladores como el pireno, con alquil(C_{14}-C_{18})-fosfatodiésteres, con -O-CH_{2}-CH(OH)-O-alquilo(C_{12}-C_{16}).
La representación de tales conjugados de oligonucleótidos es conocida por el especialista en la técnica (véase por ejemplo Uhlmann & Peyman, Chem. Rev. 1990, 90, 543; "M. Manoharan in Antisense Research and Applications", ediciones Croque and Lebleu, CRC Press, Boca Ratón, 1993, capítulo 17, páginas 303 y siguientes, documento EP 0552766A2).
Además los oligonucleótidos de acuerdo con la invención pueden portar en los extremos 3' y/o 5' inversiones 3'-3' y 5'-5'[descritas por ejemplo en M- Koga y col., J. Org. Chem. 56 (1991) 3757].
Son objeto de la invención además procedimientos para la preparación de los compuestos de acuerdo con la invención según procedimientos conocidos por el especialista en la técnica, en especial de la síntesis química, el uso de compuestos de acuerdo con la invención para la preparación de un medicamento así como un procedimiento para la preparación de un medicamento, que se caracteriza porque los oligonucleótidos de acuerdo con la invención se mezclan con un vehículo fisiológicamente aceptable así como, dado el caso, con aditivos y/o adyuvantes adecuados.
Muy en general la presente invención se extiende también al uso de oligonucleótidos terapéuticamente efectivos de acuerdo con la invención para la preparación de un medicamento. Como oligonucleótidos terapéuticamente efectivos se entiende en general oligonucleótidos antisentido, oligonucleótidos formados en triple hélice, aptámeros (moléculas de ARN o ADN que se pueden unir a moléculas finales específicas, por ejemplo proteínas o receptores (por ejemplo L. C. Bock y col., Nature 1992, 355, 564) o ribozimas (ARN catalítico, véase por ejemplo Castanetto y col., Critical Rev. Eukar. Gene, Exp.. 1992, 2, 331), en especial oligonucleótidos antisentido.
Además de lo anterior un objeto más de la presente invención es el uso de los oligonucleótidos de acuerdo con la invención como diagnóstico, por ejemplo para la detección de la presencia o ausencia o de la cantidad de una molécula de ácido nucleico de cadena doble o simple en una muestra biológica.
Los oligonucleótidos presentan para el uso de acuerdo con la invención una longitud de aproximadamente 6 a 100, preferiblemente de aproximadamente 10 a 40, especialmente de aproximadamente 12 a 25 nucleótidos. Sino son válidos también en esto los grupos preferidos, modificaciones o conjugaciones anteriormente mencionados.
Los medicamentos de la presente invención se pueden usar por ejemplo para el tratamiento de enfermedades que surgen a partir de virus, por ejemplo por el virus de HIV (virus de inmunodeficiencia humano), HSV-1, HSV-2, gripe, VSV, hepatitis B o virus de papiloma.
Los oligonucleótidos antisentido que son efectivos frente a tales dianas son por ejemplo:
a) contra el HIV, por ejemplo
2
20
3
b) contra HSV-1, por ejemplo
4
Los medicamentos de la presente invención son adecuados por ejemplo también para el tratamiento de la enfermedad de Krebs. Por ejemplo, en esto las secuencias de oligonucleótido actúan contra las dianas a las que están dirigidas, que son responsables de la formación de Krebs o del crecimiento de Krebs. Tales dianas son por ejemplo:
1) Oncoproteínas nucleares como por ejemplo c-myc, N-myc, c-myc, c-fos, c-fos/jun, PCNA, p120.
2) Oncoproteínas citoplásmicas / asociadas a membranas como por ejemplo EJ-ras, c-Ha-ras, N-ras, rrg, bcl-2, cdc-2, c-raf-1, c-mos, c-src, c-abl.
3) Receptores celulares como por ejemplo el receptor EGF, c-erbA, receptores retinoides, subunidades regulatorias de la proteína quinasa, c-fms.
4) Citoquinas, factores de crecimiento, matriz extracelular como por ejemplo CSF-1, IL-6, IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-4, bFGF, mieloblastina, fibronectina.
Los oligonucleótidos antisentido de acuerdo con la invención que son efectivos contra tales dianas, son por ejemplo
a) contra c-ha-ras, por ejemplo
5
c) c-myc, por ejemplo
6 
\newpage
d) c-myb, por ejemplo
7
e) e-fos, por ejemplo
8
f) p120, por ejemplo
9 
\newpage
g) receptor EGF, por ejemplo,
10
h) supresor de tumor p53, por ejemplo
11
j) oligonucleótido antisentido contra la quinasa cdc-2:
5' - G*T*C*T T C*C A T*A G T*T A C*T*C*A -3' (XXI)
k) oligonucleótido antisentido contra PCNA (antígeno nuclear de célula proliferativa):
5' - G*A*T*C*C A G G*C G*T G C*C T C*A*A*A -3' (XXII)
(comparación)
l) oligonucleótido antisentido contra IGF-1:
5'- T*G*A*A G A*C G A C*A*T G A T*G*T*G -3' (XXIII)
m) oligonucleótido antisentido contra el lugar de comienzo de la translación bFGF:
12
n) oligonucleótido antisentido contra el codón bFGF 58 y siguientes
5'- C*T*G*T*A G T*T*T G A C*G*T G T*G*G* G -3' (XXV)
o) oligonucleótido antisentido contra el receptor FGF:
5'- G*G*C*C C C*G*C C A G C*C C*C A C A T*C*C*C -3' (XXVI)
Además los medicamentos de la presente invención son adecuados por ejemplo para el tratamiento de enfermedades que se ven influenciadas por receptores de adhesión integral o célula - célula, por ejemplo VLA-4, VLA-2, ICAM o ELAM.
Los oligonucleótidos antisentido de acuerdo con la invención que son efectivos contra tales dianas, son por ejemplo
a) VLA-4, por ejemplo
5'- G*C*A G*T A A G C* A T*C*C A T*A*T*C -3' \hskip0.5cm o
5'- G*C*A G*T A A G*C A T*C*C A T*A*T*C -3' \hskip0.6cm o
\hskip12cm (XXVII)
b) ICAM, por ejemplo
5'- C*C*C C C A C*C A C T*T*C*C C C T C*T*C-3' \hskip0.5cm o
5'- C*C*C*C C A C*C A C T*T*C*C C C T*C*T*C-3' \hskip0.5cm o
5'- C*C*C*C C A*CC*A C T*T*C*C C C*T*C*T*C-3'
\hskip10cm (XXVIII) (comparación)
5'- C*T*C*C C C C A C*C A C T*T C C C*C*T*C-3' \hskip0.5cm o
5'- C*T*C*C*C C C A C*C A C T*T C C*C*C*T*C-3' \hskip0.5cm o
\hskip12cm (XXIX)
5'- G*C*T G G G A G C*C A *T A G*C G A *G*G-3' \hskip0.5cm o
5'- G*C*T G G G A G C*C A T*A G*C*G A *G*G-3'
\hskip12cm (XXX)
c) ELAM-1, por ejemplo
5'- A*C*T G C*T G C*CT*C T*T G T*C T*C A*G*G-3' \hskip0.5cm o
5'- A*C*T G C T G C*CT*C T*T G T*C T C A*G*G-3'
\hskip12cm (XXXI)
5'- C*A*A T*C A A T*G A C*TT*C A A G A G T*T*C-3' \hskip0.5cm o
5'- C*A*A T C A A T*G A C*TT*C A A G A G T*T*C-3'
\hskip12cm (XXXII)
Los medicamentos se pueden emplear, por ejemplo, en forma de preparados farmacéuticos que se pueden administrar de forma oral, por ejemplo en forma de comprimidos, grageas, cápsulas de gelatina dura o blanda, disolventes, emulsiones o suspensiones. Se pueden administrar también por vía rectal, por ejemplo en forma de supositorios o por vía parenteral, por ejemplo en forma de soluciones para inyección. Para la preparación de preparados farmacéuticos pueden administrarse estos compuestos en vehículos orgánicos e inorgánicos terapéuticamente inertes. Ejemplos de tales vehículos para comprimidos, grageas y cápsulas de gelatina dura son la lactosa, almidón de maíz o derivados de los mismos, ácido sebácico y esteárico o sales de los mismos. Vehículos adecuados para la preparación de soluciones son agua, polioles, sacarosa, azúcar invertido y glucosa. Vehículos adecuados para soluciones para inyección son agua, alcoholes, polioles, glicerol y aceites vegetales. Vehículos adecuados para supositorios son aceites vegetales y endurecidos, cera, grasa y polioles semilíquidos. Los preparados farmacéuticos también pueden contener agentes conservantes, disolventes, estabilizantes, reticulantes, emulsionantes, edulcorantes, colorantes, aromatizantes, sales para modificación de la presión osmótica, tampones, recubrimientos, antioxidantes así como, dado el caso, otras sustancias terapéuticamente activas.
Una forma preferida de administración es la inyección. Para esto se formulan los oligonucleótidos antisentido en una solución líquida, preferiblemente en un tampón fisiológicamente aceptable, como por ejemplo solución de Hank o solución de Ringer. Sin embargo los oligonucleótidos antisentido también se pueden formular en forma sólida y disolverse o suspenderse antes de su toma. Las dosificaciones preferidas para la administración sistemática llegan a aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg por peso corporal y día.
Finalmente los siguientes ejemplos deben aclarar adicionalmente la invención:
Ejemplo 1 Síntesis de oligonucleótidos
Los oligonucleótidos no modificados se sintetizan en un sintetizador de ADN automático (Applied Biosystems Model 380B o 394) con el empleo de la química de la fosforamidita convencional y oxidación con yodo. Para la incorporación de los puentes de fosforotioato en los oligonucleótidos de fosforotioatos y fosfodiéster mixtos se oxida con TETD (disulfuro de tetraetiltiuram) (Applied Biosystems User Bulletin 65) en lugar de con yodo. Después de la escisión del vehículo sólido (CPG o Tentagel) y separación de los grupos protectores con NH_{3} concentrado a 55ºC durante 18 horas, se purifican los oligonucleótidos adicionalmente mediante precipitación con butanol (Sawadogo, Van Dyke, Nucl. Acids Res 19 (1991) 674). A continuación se obtiene la sal sódica mediante separación por precipitación a partir de una solución de NaCl 0,5 M con 2,5 veces el volumen de etanol.
La incorporación del [4-(1-pirenil)butanil]fosfodiéster en el extremo 5' tiene lugar como describe J. S. Mann y col. Bioconj. Chem. 3 (1992) 554.
El análisis de los oligonucleótidos tienen lugar mediante
a) electroforesis en gel analítica en acrilamida al 20%, urea 8 M y/o
b) análisis por HPLC: Waters GenPak FAX, gradiente CH_{3}CN (400 ml), H_{2}O (1,6 l), NaH_{2}PO_{4} (3,1 g), NaCl (11,7 g), pH 6,8 (NaCl 0,1 M) tras CH_{3}CN (400 ml), H_{2}O (1,6 l), NaH_{2}PO_{4} (3,1 g), NaCl (175,3 g), pH 6,8 (NaCl 1,5 M) y/o
c) electroforesis en gel capilar Beckmann Kapillare eCAP^{TM}, columna de gel U100P, longitud de 65 cm, I.D. 100 mm, ventana de 15 cm desde un extremo, tampón Tris 140 \muM, ácido borónico 360 mM, urea 7 M y/o
d) espectroscopia de masas por electropulverización.
La analítica de los oligonucleótidos dio como resultado que estos se encontraban en una pureza de más de un 90%.
Las estructuras de los oligonucleótidos sintetizados se representa en la tabla 1.
Ejemplo 2 Análisis de la actividad antiviral de sustancias de ensayo frente a virus del herpes in vitro
Se analiza la actividad antiviral de las sustancias de ensayo contra distintos virus del herpes humanopatógenos en sistemas de ensayo de cultivo celular.
Para el experimento se siembran células de riñón de mono (Vero, 2 x 10^{5}/ml) en un medio MEM de Dulbecco que contenga suero (suero bovino fetal, FCS, al 5%) en placas de microtítulos de 96 pocillos y se incuban durante 24 horas a 37ºC y en CO_{2} al 5%. Se succiona luego el medio que contiene suero y se aclaran las células dos veces con medio MEM de Dulbecco exento de suero.
Se diluyen previamente las sustancias de ensayo en H_{2}O hasta una concentración de 600 \muM y se conservan a -18ºC. Para el ensayo tienen lugar más etapas de dilución en medio esencial mínimo de Dulbecco (MEM). Se adiciona a las células aclaradas 100 \mul de las diluciones de sustancia de ensayo individuales junto con 100 \mul de medio MEM de Dulbecco exento de suero (-FCS).
Después de 3 horas de incubación a 37ºC y CO_{2} al 5% se infectan las células con virus simple del herpes del tipo 1 (ATCC VR733, HSV-1 cepa F) o con virus simple del herpes del tipo 2 (ATCC VR734, HSV-2 cepa G) a concentraciones a las que se destruyen las células generadas completamente en el plazo de 3 días. El grado de infección alcanza con el HSV-1 500 unidades por placa (PFU) por pocillo, con 350 PFU/pocillo para el HSV-2. La objeto del experimento comprende entonces sustancia de ensayo en concentraciones de 80 \muM a 0,04 \muM en medio MEM, completado con 100 U/ml de penicilina G y 100 mg/l de estreptomicina. Todos los experimentos se llevan a cabo como determinación doble con la excepción de los controles, que se llevan a cabo ocho veces por placa.
Se incuba el objeto de experimento durante 17 horas a 37ºC y CO_{2} al 5%. La citotoxicidad de las sustancias de ensayo se determina tras un tiempo de incubación total de 20 horas mediante observación microscópica de los cultivos celulares. Como máxima dosis tolerada (DTM) se designa la mayor concentración de preparado que bajo las condiciones del experimento mencionadas no provoca daño celular alguno reconocible microscópicamente.
Tiene lugar a continuación la adición de FCS en una concentración final de un 4% con incubación adicional durante 55 horas a 37ºC y CO_{2} al 5%. Los controles de infección no tratados muestran entonces un efecto citopático completo (CPE). Tras observación microscópica de los cultivos celulares estos se colorean con rojo neutro siguiendo el procedimiento de coloración vital de Finter (1966). La actividad antiviral de una sustancia de ensayo se define como la concentración de inhibición mínima (MHK) que es necesaria para proteger del 30 al 60% de las células del efecto citopatógeno condicionado por el virus.
Tabla 1
Actividad de distintos oligonucleótidos antisentido modificados frente al HSV-1 en cultivo celular. Los enlaces fosfodiéster sustituidos por un puente fosforotioato (P = S) se marcan en la secuencia con *.
13
Ejemplo 3 Análisis de la actividad antiproliferativa de sustancias de ensayo en células del músculo liso
Se comprueba la capacidad de los oligonucleótidos mencionados a continuación para inhibir la proliferación de las células del músculo liso. El ensayo se lleva a cabo como describen S. Biro y col. [Proc. Natl. Acad. Sci. EEUU 90 (1993) 654]. Todos los oligonucleótidos serían efectivos en el intervalo de 5 a 20 \muM. Los enlaces fosfodiéster sustituidos por un puente fosforotioato (P=S) se marcan en la secuencia con *.
1) Oligonucleótido antisentido contra la quinasa cdc2:
\hskip1.5cm
5'-G*T*C*T T C*C A T*A G T*T A C*T*C*A-3'
2) Oligonucleótido antisentido contra PCNA (antígeno nuclear de célula proliferativa):
\hskip1.5cm
5'-G*A*T*C A G G*C G*T G C*C T C*A*A*A-3' (comparativo)
3) Oligonucleótido antisentido contra IGF-1:
\hskip1.5cm
5'-T*G*A*A G A*C G A C*A*T G A T*G*T*G-3'
4) Oligonucleótido antisentido contra c myb de ratón:
\hskip1.5cm
5'-G*T*G*T C*G G G G T*C*T C*C G*G*G*C-3'(comparativo)
5) Oligonucleótido antisentido contra el sitio de comienzo de traslación bFGF
14
6) Oligonucleótido antisentido contra el codón bFGF 58 y siguientes
\hskip1.5cm
5'-C*T*G*T A G T*T*T G A C*G*T G T*G*G*G-3'
7) Oligonucleótido antisentido contra el receptor FGF:
\hskip1.5cm
5'-G*G*C*C C C*T*C C A G C*C C*C A C A T*C*C*C-3'
8) Oligonucleótido antisentido contra c-myc:
\hskip1.5cm
5'-C*A*C*GT*T*GAGGGG*C*A*T-3'
(1) INFORMACIÓN GENERAL
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
SOLICITANTE
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE: Hoechst Aktiengesellschaft
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
CALLE:
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
POBLACIÓN: Frankfurt am Main
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
ESTADO FEDERAL:
\vskip0.500000\baselineskip
(E)
PAÍS: Alemania
\vskip0.500000\baselineskip
(F)
CÓDIGO POSTAL: 65926
\vskip0.500000\baselineskip
(G)
TELÉFONO: 069 - 305 - 6031
\vskip0.500000\baselineskip
(H)
TELEFAX: 069 - 35 7175
\vskip0.500000\baselineskip
(I)
TELEX: 41234700 hod
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TÍTULO DE LA SOLICITUD: Oligonucleótidos estabilizados y su uso
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
NÚMERO DE SECUENCIAS: 33
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
EQUIPO INFORMÁTICO:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
SOPORTE DE DATOS: disco flexible
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
ORDENADOR: PC IBM Compatible
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS / MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
SOPORTE LÓGICO: Patentin Release # 1,0 Versión # 1,25 (EPA)
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 1:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: HIV
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..20
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
ACACCCAATT CTGAAAATGG 
\hfill
20 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 2:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: HIV
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..20
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
AGGTCCCTGT TCGGGCGCCA 
\hfill
20 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 3:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(E)
LONGITUD: 28 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(F)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(G)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(H)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: HIV
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..28
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GTCGACACCC AATTCTGAA ATGGATAA 
\hfill
28 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 4:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 25 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: HIV
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..25
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GCTATGTCGA CACCAATTC TGAAA 
\hfill
25 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 5:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 31 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: HIV
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..31
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 5:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
TCGTCGCTGT CTCCGCTTCT TCTTCCTGCC A 
\hfill
31 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 6:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 31 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: HIV
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..25
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 6:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CTGTCTCCGC TTCTTCTTCC TGCCATAGGA G 
\hfill
31 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 7:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: HIV-1
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..20
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 7:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GCGGGGCTCC ATGGGGGTCG 
\hfill
20 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 8:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 15 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..20
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "c-H-ras"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 8:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CAGCTGCAAC CCAGC 
\hfill
15 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 9:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..20
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
OTROS DATOS: /notación = "c-myc"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 9:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GGCTGCTGGA GCGGGGCACA C 
\hfill
21 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 10:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 15 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..15
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "c-myc"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 10:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
AACGTTGAGG GGCAT 
\hfill
15 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 11:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 15 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..15
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "c-myc"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 11:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CACGTTGAGG GGCAT 
\hfill
15 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 12:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..18
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "c-myb"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 12:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GTGCCGGGGT CTTCGGGC 
\hfill
18 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 13:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Ratón
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..18
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "c-myb"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 13:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GTGTCGGGGT CTCCGGGC 
\hfill
18 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 14:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..21
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "c-fos"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 14:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GGAGAACATC ATGGTCGAAA G 
\hfill
21 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 15:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 22 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..22
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "c-fos"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 15:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CCCGAGAACA TCATGGTCGA AG 
\hfill
22 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 16:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..20
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "c-fos"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 16:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GGGGAAAGCC CGGCAAGGGG 
\hfill
20 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 17:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..20
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "p-120"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 17:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CACCCGCCTT GGCCTCCCAC 
\hfill
20 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 18:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..20
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "receptor EGF"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 18:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GGGACCCGG CGCAGCGC 
\hfill
18 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 19:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..20
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "receptor EGF"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 19:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GGCAAACTTT CTTTTCCTCC 
\hfill
20 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 20:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..19
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "supresor de tumor p53"
\newpage
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 20:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GGGAAGGAGG AGGATGAGG 
\hfill
19 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 21:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..21
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "supresor del tumor p53"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 21:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GGCAGTCATC CAGCTTCGGA G 
\hfill
21 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 22:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..18
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "quinasa cdc2"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 22:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GTCTTCCATA GTTACTCA 
\hfill
18 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 23:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..18
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "PCNA (antígeno nuclear de célula proliferativa"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 23:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GATCAGGCGT GCCTCAAA 
\hfill
18 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 24:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..21
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "IGF-1"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 24:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
TGAAGACGAC ATGATGATGT G 
\hfill
21 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 25:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 15 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..15
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "sitio de inicio de la traslación bFGF"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 25:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GGCTGCCATG GTCCC 
\hfill
15 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 26:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..19
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "codón bFGF 58 y siguientes"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 26:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CTGTAGTTTG ACGTGTGGG 
\hfill
19 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 27:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 22 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..22
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "receptor FGF"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 27:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GGCCCCTCCA GCCCCACATC CC 
\hfill
22 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 28:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..18
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "VLA-4"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 28:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GCAGTAAGCA TCCATATC 
\hfill
18 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 29:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..20
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "ICAM"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 29:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CCCCCACCAC TTCCCCTCTC 
\hfill
20 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 30:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..20
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "ICAM"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 30:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CTCCCCCACC ACTTCCCCTC 
\hfill
20 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 31:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..19
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "ICAM"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 31:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GCTGGGAGCC ATAGCGAGG 
\hfill
19 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 32:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..21
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "ELAM-1"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 32:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
ACTGCTGCCT CTTGTCTCAG G 
\hfill
21 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN SOBRE LA SEC Nº ID: 33:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 22 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TIPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE LA MOLÉCULA: DNS (genómica)
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: Si
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
PROCEDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
ORGANISMO: Humana
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE / CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
SITUACIÓN: 1..22
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /notación = "ELAM-1"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC Nº ID: 33:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CAATCAATGA CTTCAAGAGT TC 
\hfill
22

Claims (10)

1. Oligonucleótidos de fórmula
15
caracterizados porque al menos está modificado un pirimidin-nucleósido no situado en el extremo y adicionalmente están modificados los extremos 5' y/o 3' del oligonucleótido.
2. Oligonucleótidos de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizados porque están modificados de 2 a 10 pirimidin-nucleósidos no situados en el extremo.
3. Oligonucleótidos de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, caracterizados porque están modificados de 3 a 6 pirimidin-nucleósidos no situados en el extremo.
4. Oligonucleótidos de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 - 3, caracterizados porque uno o más grupos de al menos 1 - 4 nucleótidos unidos unos a otros no están modificados.
5. Oligonucleótidos de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 - 4, caracterizados porque la modificación está definida como
a)
sustitución de al menos un nucleótido contiguo al enlace diéster del ácido 3' y/o 5'-fosfórico y/o
b)
nucleótido contiguo al enlace defosfo y/o
c)
sustitución de al menos un resto de azúcar y/o
d)
sustitución de al menos un nucleósido de origen natural.
6. Oligonucleótidos según la reivindicación 5, caracterizados porque la modificación está definida como
a)
un nucleótido contiguo al enlace fosforotioato, fosforoditioato, NR^{1}R^{2}-fosforamidato, boranofosfato, fosfat-O-alquil (C_{1}-C_{21})-éster, fosfat-[aril(C_{6}-C_{12})-O-alquil (C_{1}-C_{21})]-éster, 2,2,2-triclorodimetiletilfosfonato, alquil (C_{1}-C_{8})-fosfonato, aril(C_{6}-C_{12})-fosfonato, en donde
R^{1} y R^{2} independientemente uno de otro representan hidrógeno o alquilo (C_{1}-C_{18}), arilo (C_{1}-C_{20}), aril (C_{6}-C_{14})-alquilo (C_{1}-C_{8}), -(CH_{2})_{c}-[NH(CH_{2})_{c}]_{d}-NR^{3}R^{3}, en donde c es un número entero de 2 a 6 y d un número entero de 0 a 6, y R^{3} independientemente uno de otro es hidrógeno al alquilo C_{1}-C_{6} o alcoxi C_{1}-C_{4}-alquilo C_{1}-C_{6}, o
R^{1} y R^{2} pueden formar junto con el átomo de nitrógeno que los porta un anillo heterocíclico de 5 a 6 miembros, que puede contener adicionalmente dado el caso otro heteroátomo del grupo de O, S, N.
b)
un nucleótido contiguo al enlace formacetal, 3'-tioformacetal, metilhidroxilamina, oxima, metilengimetilhidrazo, dimetilensulfona, sililo,
c)
sustitución del esqueleto azúcar - fosfato por oligómeros "morfolinonucleosídicos" o
d)
sustitución de la \beta-D-2'-desoxirribosa por \alpha-D-2'-desoxirribosa, L-2'-desoxirribosa, 2'-F-2'-desoxirribosa, 2'-O-alquil (C_{1}-C_{6})-ribosa, 2'-O-alquenil (C_{2}-C_{6})-ribosa, 2'-NH_{2}-2'-desoxirribosa, \beta-D-xilofuranosa, \alpha-arabinofuranosa, 2,4-didesoxi-\beta-D-eritro-hexo-piranosa y análogos de azúcares carbocíclicos o de cadena abierta o análogos de azúcares biciclo.
e)
Sustitución de las bases de nucleósido de origen natural por 5-(hidroximetil)uridina, 5-aminouridina, pseudouridina, dihidrouridina, 5-alquil (C_{1}-C_{6})-uridina, 5-alquenil (C_{1}-C_{6})-uridina, 5-alquinil (C_{1}-C_{6})-uridina, 5-alquil (C_{1}-C_{6})-citidina, 5-alquenil (C_{1}-C_{6})-citidina, 5-alquinil (C_{1}-C_{6})-citidina, 5-fluorouridina, 5-fluorocitidina, 5-clorouridina, 5-clorocitidina, 5-bromouridina, 5-bromocitidina.
7. Oligonucleótidos según una de las reivindicaciones 1 - 6, caracterizados porque el oligonucleótido porta en los extremos 5' y/o 3' un resto lipófilo, preferiblemente un resto farnesilo, fitilo, hexadecilo, colesterilo, hexametilentetramino, vitamina E o ácido galénico.
8. Procedimiento para la preparación de los oligonucleótidos según una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque se sintetizan químicamente.
9. Procedimiento para la preparación de un medicamento, caracterizado porque al menos un oligonucleótido según una de las reivindicaciones 1 a 7 se mezcla con un vehículo fisiológicamente aceptable así como dado el caso aditivos y/o adyuvantes adecuados.
10. Uso de los oligonucleótidos según una de las reivindicaciones 1 - 7 para la preparación de un medicamento o diagnóstico.
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