ES2209532T3 - Analogos de nucleosidos antivirales. - Google Patents
Analogos de nucleosidos antivirales.Info
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Abstract
Un nucleósido cis de **fórmula** o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que: n es 1 ó 2 R4 se escoge de H, COOH, CONH2, OH, SH, NH2, NO2, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, halógeno, CORa en la que Ra es un alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, o COORb en la que Rb es un alquilo C1-6, alquenilo C2-6, o alquinilo C2-6; R3 es H o un alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6; X se escoge de H, monofosfato, difosfato, trifosfato, carbonilo sustituido con un alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, arilo C6-10, o O PORc ORc en la que cada Rc se escoge independientemente de H, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6 o un grupo protector de hidroxi; y en la que dicho nucleósido está en forma del enantiómero (- ), el enantiómero (+), y sus mezclas, incluyendo mezclas racémicas.
Description
Análogos de nucleósidos antivirales.
La presente invención se refiere a nuevos
análogos de nucleósidos de purina útiles como agentes antivirales.
Particularmente, la invención se refiere a nucleósidos de purina
con propiedades farmacocinéticas mejoradas.
En los Estados Unidos, aparecen cada año más de
12 millones de nuevos casos de enfermedades transmitidas sexualmente
(ETS). De la lista de las 10 principales enfermedades informadas en
los Estados Unidos, cinco son ETS, incluyendo clamidia, gonorrea,
sífilis, el Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA) e
infección por el virus de la hepatitis B (VHB), de las cuales el
SIDA y la infección por VHB no tienen cura.
En el caso de SIDA, la Organización Mundial de la
Salud predice que hacia el año 2000 habrá 40 millones de personas
infectadas mundialmente con el virus de inmunodeficiencia humana
(VIH), el virus que causa el SIDA. Las infecciones por hepatitis
afectan a 5 veces más personas que el VIH. Se ha informado por la
Organización Mundial de la Salud que 2000 millones de personas vivas
actualmente están infectadas con el virus VHB, de las cuales 350
millones están infectadas crónicamente y por lo tanto en riesgo de
morir de una enfermedad hepática.
Aunque las tasas de mortalidad por SIDA están
cayendo debido a nuevas terapias, el SIDA sigue siendo la segunda
causa principal de muerte en adultos entre las edades de 29 y 40
años. La terapia de combinación anti-VIH es ahora el
estándar de cuidados para las personas con VIH. Ahora hay 11
fármacos anti-VIH disponibles por prescripción.
Estos fármacos anti-VIH caen en tres categorías:
análogos de nucleósidos, que incluyen zidovudina, didanosina,
zalcitabina, estavudina o lamivudina; inhibidores de la proteasa,
que incluyen indinavir, nelfinavir, saquinavir y ritonavir; y los
inhibidores no nucleosídicos de la transcriptasa inversa (NNRTI),
que incluyen nevirapina, delavirdina y efavirenz. Comparada con el
VIH, actualmente sólo hay unas pocas terapias aceptadas para la
infección crónica por el virus de hepatitis B, que son interferón y
lamivudina. Otros fármacos están actualmente en ensayos clínicos,
incluyendo famciclovir, lobucavir y adefovir. Pero muchos estudios
han demostrado que la mayoría de los pacientes recaen tras la
terminación de la terapia, y desarrollan resistencia a los
fármacos.
El desarrollo de resistencia se ha convertido
recientemente en una preocupación importante en el tratamiento de
infecciones por VIH y VHB. La resistencia ocurre habitualmente
cuando los fármacos usados no son suficientemente potentes para
detener completamente la replicación del virus. Si el virus se puede
reproducir totalmente en presencia de fármacos, tiene la
oportunidad de realizar cambios en su estructura, denominados
mutaciones, hasta que encuentra una que permita que se reproduzca a
pesar de los fármacos. Una vez ocurre la mutación, entonces crece
indetectado y pronto es la cepa dominante del virus en el individuo.
El fármaco se hace progresivamente más débil frente a la nueva
cepa. También hay una preocupación creciente con respecto a la
resistencia cruzada. La resistencia cruzada ocurre cuando las
mutaciones que causan resistencia a un fármaco también causan
resistencia a otro. Varios estudios han demostrado que combinando
dos fármacos se retrasa el desarrollo de resistencia a uno o a
ambos fármacos, comparado con el uso de uno de los dos fármacos
solo. Otros estudios sugieren que las triples combinaciones de
fármacos extienden este beneficio incluso más allá. Como resultado,
muchas personas creen que la mejor forma para prevenir, o al menos
retrasar, la resistencia, es usar terapias de combinación de
múltiples fármacos. Pero a medida que el número de fármacos
aumenta, también lo hace el riesgo de interacciones entre fármacos
y de toxicidad.
Una forma para aumentar la eficacia de un fármaco
es mejorar sus propiedades farmacocinéticas que contribuyen a su
actividad terapéutica. La ciencia de la farmacocinética es el
estudio de los factores que determinan la cantidad de agentes
químicos en sus sitios de efecto biológico a diversos tiempos tras
la aplicación de un agente o fármaco a sistemas biológicos. La
farmacocinética incluye el estudio de absorción y distribución del
fármaco ("biotranslocación"), el estudio de las alteraciones
químicas que puede sufrir un fármaco en el cuerpo
("biotransformación"), y el estudio de los medios por los
cuales los fármacos se almacenan en el cuerpo y se eliminan de él.
En la terapia crónica con fármacos, la biodisponibilidad es el
factor más importante debido a que se relaciona con el grado en el
que se absorbe un fármaco y alcanza el torrente sanguíneo, o está
disponible de otro modo para el sitio de tratamiento en el cuerpo.
La biodisponibilidad está directamente enlazada con la capacidad
del fármaco para disolverse en fluidos biológicos.
Se ha informado que
(-)-\beta-D-2,6-diaminopurin-dioxolano
(DAPD) y
(-)-\beta-D-1,3-dioxolanguanina
(DXG) tienen una elevada eficacia frente a VIH-1 en
diversos sistemas celulares, mínima resistencia cruzada con
lamivudina y baja toxicidad. Sin embargo, estos compuestos tienen
malas propiedades farmacocinéticas que se podrían mejorar. Por lo
tanto, sería útil proveerse con compuestos que tengan
farmacocinética mejorada para uso en el tratamiento de pacientes
infectados con VIH y VHB.
En un aspecto, la presente invención proporciona
nuevos compuestos cis-nucleosídicos de purina
representados por la fórmula (I):
y sus sales farmacéuticamente
aceptables,
en la que:
n es 1 ó 2
R_{4} se escoge de H, COOH, CONH_{2}, OH, SH,
NH_{2}, NO_{2}, alquilo C_{1-6}, alquenilo
C_{2-6}, alquinilo C_{2-6},
halógeno, COR_{a} en la que R_{a} es un alquilo
C_{1-6}, alquenilo C_{2-6},
alquinilo C_{2-6}, o COOR_{b} en la que R_{b}
es un alquilo C_{1-6}, alquenilo
C_{2-6}, o alquinilo
C_{2-6};
R_{3} es H o un alquilo
C_{1-6}, alquenilo C_{2-6},
alquinilo C_{2-6};
X se escoge de H, monofosfato, difosfato,
trifosfato, carbonilo sustituido con un alquilo
C_{1-6}, alquenilo C_{2-6},
alquinilo C_{2-6}, arilo
C_{6-10}, o
---
\melm{\delm{\para}{ORc}}{P}{\uelm{\dpara}{O}}---ORc
en la que cada Rc se escoge independientemente de
H, alquilo C_{1-6}, alquenilo
C_{2-6}, alquinilo C_{2-6} o un
grupo protector de hidroxi;
y
en la que dicho nucleósido está presente en forma
del enantiómero (-), el enantiómero (+), y sus mezclas, incluyendo
mezclas racémicas.
Los compuestos de la presente invención son
útiles en terapia, en particular como antivirales.
En otro aspecto, se proporciona un método para
tratar infecciones víricas en un paciente que necesite de tal
tratamiento, que comprende administrar al paciente una cantidad
terapéuticamente efectiva de un compuesto o composición de la
invención.
En otro aspecto, se proporciona una formulación
farmacéutica que comprende el compuesto de la invención en
combinación con un vehículo o excipiente farmacéuticamente
aceptable.
Aún en otro aspecto, se proporciona un método
para tratar infecciones víricas en un paciente que necesite de tal
tratamiento, que comprende administrar al paciente una combinación
que comprende al menos un compuesto según la fórmula I y al menos
un agente terapéutico adicional escogido de análogos de nucleósidos;
inhibidores no nucleosídicos de la transcriptasa inversa (NNRTI); o
inhibidores de la proteasa.
En aún otro aspecto, se proporciona una
formulación farmacéutica que comprende al menos un compuesto según
la fórmula I, al menos un agente terapéutico adicional escogido de
análogos de nucleósidos; inhibidores no nucleosídicos de la
transcriptasa inversa (NNRTI); o inhibidores de la proteasa, y un
vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto de la invención es el uso de un
compuesto según la fórmula I, para la fabricación de un medicamento
para el tratamiento de infecciones víricas.
En una realización, los compuestos de la presente
invención comprenden aquellos en los que están presentes las
siguientes realizaciones, bien independientemente o en
combinación.
En una realización, X es H.
Como alternativa, X es
---
\melm{\delm{\para}{ORc}}{P}{\uelm{\para}{O}}---ORc en
la que cada Rc se escoge independientemente de H, alquilo
C_{1-6}, alquenilo C_{2-6},
alquinilo C_{2-6} o un grupo protector de hidroxi
escogido de éster S-aciltioetílico, éster
aciloximetílico o carbonato de alquilmetilo. En otra realización, X
es ---\melm{\delm{\para}{ORc}}{P}{\uelm{\para}{O}}---ORc
en la que cada Rc es independientemente un grupo protector de
hidroxi escogido de éster
acetil-2-tioetílico, éster
pivaloiloximetílico o éster
isopropiloxicarboniloxi-metílico.
En una realización, n es 1.
En una realización adicional, R_{3} es H o
metilo.
En una realización adicional, R_{3} es H.
En una realización adicional, R_{4} se escoge
de H, COOH, CONH_{2}, alquilo C_{1-6},
alquenilo C_{2-6}, alquinilo
C_{2-6} o COOR_{b} en la que R_{b} es un
alquilo C_{1-6}, alquenilo
C_{2-6}, o alquinilo
C_{2-6}.
En una realización adicional, R_{4} es H, COOH,
o alquilo C_{1-6}.
En una realización adicional, R_{4} es H, COOH,
metilo o etilo.
En una realización adicional, R_{4} es metilo o
etilo.
En una realización alternativa, R_{4} es
COOH.
En una realización adicional, R_{4} es H.
En una realización adicional, R_{3} es H o
metilo y R_{4} es H.
En una realización adicional, R_{4} y R_{3}
son H.
En una realización, los compuestos de la presente
invención se representan por la fórmula (Ia):
\newpage
y sus sales farmacéuticamente aceptables, en la
que cada n, X, R_{3} y R_{4} son como se definen
anteriormente.
Se apreciará por los expertos en la técnica que
los compuestos de fórmula (I) y (Ia) contienen al menos dos centros
quirales que están marcados por un asterisco (*) en la fórmula
general (I) y (Ia). Los compuestos de fórmula (I) y (Ia) existen de
este modo en forma de dos isómeros ópticos diferentes (es decir,
enantiómeros (+) o (-), o \beta-L y
\beta-D). Todos los tales enantiómeros y sus
mezclas, incluyendo mezclas racémicas, están incluidos en el alcance
de la invención. El isómero o enantiómero óptico simple se puede
obtener mediante un método bien conocido en la técnica, tal como
HPLC quiral, resolución enzimática y compuesto auxiliar quiral, o
se puede sintetizar estereoselectivamente.
Según la presente invención, se proporcionan
compuestos con propiedades farmacocinéticas mejoradas.
Según una realización de la presente invención,
se proporcionan compuestos con biodisponibilidad mejorada.
Según una realización adicional de la presente
invención, se proporciona un método para tratar una infección
vírica en un paciente que necesite de tal tratamiento, que
comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente
efectiva de un compuesto de fórmula I o una de sus sales
farmacéuticamente aceptables.
Según otra realización de la presente invención,
se proporciona un método para tratar una infección retroviral en un
paciente que necesite de tal tratamiento, que comprende administrar
al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto
de fórmula I o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
Según una realización adicional de la presente
invención, se proporciona un método para tratar a un paciente
infectado por el virus de VIH, que comprende administrar al
paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de
fórmula I o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
Según una realización adicional de la presente
invención, se proporciona un método para tratar a un paciente
infectado por el virus de VHB, que comprende administrar al
paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de
fórmula I o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
Los compuestos según la presente invención
incluyen:
Compuesto
A
Compuesto
B
Compuesto
C
En una realización adicional, los compuestos de
la invención incluyen:
Compuesto
A(-)
Compuesto
B(-)
Compuesto
C(-)
En una realización, el compuesto de la presente
invención está en forma del enantiómero (+) al menos 95% libre del
enantiómero (-) correspondiente.
En una realización, el compuesto de la presente
invención está en forma del enantiómero (+) al menos 97% libre del
enantiómero (-) correspondiente.
En una realización, el compuesto de la presente
invención está en forma del enantiómero (+) al menos 99% libre del
enantiómero (-) correspondiente.
En una realización, el compuesto de la presente
invención está en forma del enantiómero (-) al menos 95% libre del
enantiómero (+) correspondiente.
En una realización, el compuesto de la presente
invención está en forma del enantiómero (-) al menos 97% libre del
enantiómero (+) correspondiente.
En una realización, el compuesto de la presente
invención está en forma del enantiómero (-) al menos 99% libre del
enantiómero (+) correspondiente.
En una realización, el compuesto de la presente
invención es el Compuesto A.
En una realización, el compuesto de la presente
invención es el Compuesto A (-).
También se proporcionan sales farmacéuticamente
aceptables de la presente invención. Por la expresión sales
farmacéuticamente aceptables de compuestos de fórmula general (I) y
(Ia) se quiere decir las derivadas de ácidos y bases inorgánicos y
orgánicos farmacéuticamente aceptables. Ejemplos de ácidos
adecuados incluyen ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico,
nítrico, perclórico, fumárico, maleico, fosfórico, glicólico,
láctico, salicílico, succínico,
toluen-p-sulfónico, tartárico,
acético, cítrico, metanosulfónico, fórmico, benzoico, malónico,
naftalen-2-sulfónico y
bencenosulfónico. Otros ácidos, tales como oxálico, aunque ellos
mismos no son farmacéuticamente aceptables, pueden ser útiles como
intermedios para obtener los compuestos de la invención y sus sales
de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables.
Las sales derivadas de bases apropiadas incluyen
sales de metales alcalinos (por ejemplo, sodio), de metales
alcalino-térreos (por ejemplo, magnesio), de amonio
y NR_{4}^{+} (en la que R es alquilo
C_{1-4}).
Las referencias en lo sucesivo a un compuesto
según la invención incluyen compuestos de la fórmula general (I) y
(Ia), y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Excepto que se defina de otro modo, todos los
términos técnicos y científicos usados aquí tienen el mismo
significado como lo entiende habitualmente el experto normal en la
técnica a la que pertenece esta invención. Además, los materiales,
métodos, y ejemplos, son solamente ilustrativos y no pretenden ser
limitativos.
Como se usa en esta solicitud, el término
"alquilo" representa un resto hidrocarbonado de cadena lineal,
cadena ramificada o cíclica, sustituido (con un halógeno, nitro,
CONH_{2}, COOH, O-alquilo
C_{1-6}, O-alquenilo
C_{2-6}, O-alquinilo
C_{2-6}, hidroxilo, amino, o COOQ, en la que Q es
alquilo C_{1-6}; alquenilo
C_{2-6}; alquinilo C_{2-6}) o no
sustituido (por ejemplo, isopropilo, etilo, fluorohexilo o
ciclopropilo). El término alquilo también quiere incluir alquilos
en los que uno o más átomos de hidrógeno están sustituidos por un
halógeno, más preferiblemente, el halógeno es fluoro (por ejemplo
CF_{3}- o CF_{3}CH_{2}-).
Los términos "alquenilo" y "alquinilo"
representan un alquilo que contiene al menos un grupo insaturado
(por ejemplo, alilo).
La expresión "grupo protector de hidroxi" es
bien conocido en el campo de la química orgánica. Tales grupos
protectores se pueden encontrar en T. Greene, Protective Groups
In Organic Synthesis, (John Wiley & Sons, 1981). Ejemplos
de grupos protectores de hidroxi incluyen pero no se limitan a
éster acetil-2-tioetílico, éster
pivaloiloximetílico y éster isopropiloxicarboniloximetílico.
Cuando hay un átomo de azufre, el átomo de azufre
puede estar en un nivel de oxidación diferente, S, SO, o SO_{2}.
Todos los tales niveles de oxidación están dentro del alcance de la
presente invención.
Halógeno significa aquí fluoro, cloro, bromo, y
yodo, por ejemplo fluoro.
Se apreciará que la cantidad de un compuesto de
la invención requerida para uso en el tratamiento variará no sólo
con el compuesto particular seleccionado sino también con la vía de
administración, la naturaleza del estado para el que se requiere
tratamiento, y la edad y estado del paciente, y en último lugar
estará a la discreción del médico o veterinario que atiende. En
general, sin embargo, una dosis adecuada estará en el intervalo de
alrededor de 0,1 a alrededor de 750 mg/kg de peso corporal por día,
preferiblemente en el intervalo de 0,5 a 60 mg/kg/día, lo más
preferible en el intervalo de 1 a 20 mg/kg/día.
La dosis deseada se puede presentar
convenientemente en una dosis única o como una dosis dividida,
administrada a intervalos apropiados, por ejemplo como dos, tres,
cuatro o más dosis por día.
El compuesto se administra convenientemente en
forma de dosis unitaria; por ejemplo, conteniendo 10 a 1500 mg,
convenientemente 20 a 1000 mg, lo más conveniente 50 a 700 mg de
ingrediente activo por forma de dosis unitaria.
Idealmente, el ingrediente activo se debe
administrar para lograr concentraciones pico en el plasma del
compuesto activo de alrededor de 1 a alrededor de 75 \muM,
preferiblemente alrededor de 2 a 50 \muM, lo más preferible
alrededor de 3 a alrededor de 30 \muM. Esto se puede lograr, por
ejemplo, mediante inyección intravenosa de una disolución al 0,1 a
5% del ingrediente activo, opcionalmente en disolución salina, o se
puede administrar oralmente como un bolo que contiene alrededor de
1 a alrededor de 500 mg del ingrediente activo. Se pueden mantener
niveles deseables en sangre mediante una infusión continua para
proporcionar alrededor de 0,01 a alrededor de 5,0 mg/kg/hora o
mediante infusiones intermitentes que contienen alrededor de 0,4
hasta alrededor de 15 mg/kg del ingrediente activo.
Aunque es posible que, para uso en terapia, se
pueda administrar un compuesto de la invención como el producto
químico bruto, es preferible presentar el ingrediente activo como
una formulación farmacéutica. La invención proporciona así
adicionalmente una formulación farmacéutica que comprende un
compuesto de fórmula (I) o (Ia), o una de sus sales
farmacéuticamente aceptables, junto con uno o más vehículos
farmacéuticamente aceptables para el mismo y, opcionalmente, otros
ingredientes terapéuticos y/o profilácticos. El vehículo o
vehículos deben ser "aceptables" en el sentido de ser
compatibles con los otros ingredientes de la formulación, y no ser
perjudiciales para sus receptores.
Las formulaciones farmacéuticas incluyen aquellas
adecuadas para administración oral, rectal, nasal, tópica
(incluyendo bucal y sublingual), transdérmica, vaginal o parenteral
(incluyendo intramuscular, subcutánea e intravenosa), o en forma
adecuada para administración mediante inhalación o insuflamiento.
Las formulaciones se pueden presentar convenientemente, siempre que
sea apropiado, en unidades discretas de dosificación, y se pueden
preparar por cualesquiera de los métodos bien conocidos en la
técnica de farmacia. Todos los métodos incluyen la etapa de poner
en asociación el compuesto activo con vehículos líquidos o vehículos
sólidos finamente divididos, o ambos, y entonces, si es necesario,
conformar el producto en la formulación deseada.
La formulación farmacéutica adecuada para
administración oral se puede presentar convenientemente como
unidades discretas, tales como cápsulas, saquitos o comprimidos,
que contienen cada una cantidad predeterminada del ingrediente
activo; como un polvo o gránulos; como una disolución, una
suspensión o como una emulsión. El ingrediente activo también se
puede presentar como un bolo, electuario o pasta. Los comprimidos y
cápsulas para administración oral pueden contener excipientes
convencionales tales como agentes aglutinantes, cargas,
lubricantes, disgregantes, o agentes humectantes. Los comprimidos se
pueden revestir según métodos bien conocidos en la técnica. Las
preparaciones líquidas orales pueden estar en forma de, por
ejemplo, suspensiones acuosas u oleosas, disoluciones, emulsiones,
jarabes o elixires, o se pueden presentar como un producto seco
para constitución con agua u otro vehículo adecuado antes del uso.
Tales preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales
tales como agentes desuspensión, agentes emulsionantes, vehículos
no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles), o
conservantes.
Los compuestos según la invención también se
pueden formular para administración parenteral (por ejemplo,
mediante inyección, por ejemplo inyección de bolo o infusión
continua), y se pueden presentar en forma de dosis unitaria en
ampollas, jeringas pre-rellenas, infusión de pequeño
volumen o en recipientes de múltiples dosis con un conservante
añadido. Las composiciones pueden tomar formas tales como
suspensiones, disoluciones, o emulsiones, en vehículos oleosos o
acuosos, y pueden contener agentes formuladores tales como agentes
de suspensión, agentes estabilizantes y/o dispersantes. Como
alternativa, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo,
obtenido mediante aislamiento aséptico de sólido estéril, o
mediante liofilización a partir de disolución, para constitución
con un vehículo adecuado, por ejemplo agua estéril libre de
pirógenos, antes del uso.
Para la administración tópica a la epidermis, los
compuestos según la invención se pueden formular como ungüentos,
cremas o lociones, o como un parche transdérmico. Tales parches
transdérmicos pueden contener potenciadores de la penetración,
tales como linalool, carvacrol, timol, citral, mentol y
t-anetol. Los ungüentos y las cremas se pueden
formular, por ejemplo, con una base acuosa u oleosa con la adición
de agentes espesantes y/o gelificantes adecuados. Las lociones se
pueden formular con una base acuosa u oleosa, y en general también
contendrán uno o más agentes emulsionantes, agentes estabilizantes,
agentes dispersantes, agentes de suspensión, agentes espesantes, o
agentes colorantes.
Las formulaciones adecuadas para administración
tópica en la boca incluyen tabletas que comprenden ingrediente
activo en una base aromatizada, habitualmente sacarosa y goma
arábiga o tragacanto; pastillas que comprenden el ingrediente
activo en una base inerte tal como gelatina y glicerina o sacarosa y
goma arábiga; y colutorios que comprenden el ingrediente activo en
un vehículo líquido adecuado.
Las formulaciones farmacéuticas adecuadas para
administración rectal, en la que el vehículo es un sólido, se
presentan de forma más preferible como supositorios de dosis
unitaria. Los vehículos adecuados incluyen manteca de cacao y otros
materiales usados habitualmente en la técnica, y los supositorios
se pueden formar convenientemente por mezclamiento del compuesto
activo con el vehículo o vehículos reblandecidos o fundidos,
seguido de enfriamiento y configuración en moldes.
Las formulaciones adecuadas para administración
vaginal se pueden presentar como pesarios, tampones, cremas, geles,
pastas, espumas o pulverizaciones, que contienen, además del
ingrediente activo, vehículos tales como los conocidos en la
técnica, según sean apropiados.
Para administración intranasal, los compuestos de
la invención se pueden usar como una pulverización líquida o polvo
dispersable, o en forma de gotas. Las gotas se pueden formular con
una base acuosa o no acuosa, comprendiendo también uno o más
agentes dispersantes, agentes solubilizantes o agentes de
suspensión. Las pulverizaciones líquidas se suministran
convenientemente a partir de paquetes a presión.
Para la administración por inhalación, los
compuestos según la invención se suministran convenientemente a
partir de un insuflador, nebulizador o un paquete a presión, u otro
medio conveniente para suministrar una pulverización en forma de
aerosol. Los paquetes a presión pueden comprender un propelente
adecuado tal como diclorodifluorometano, triclorofluorometano,
diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En
el caso de un aerosol a presión, la unidad de dosificación se puede
determinar proporcionando una válvula para suministrar una cantidad
medida.
Como alternativa, para administración por
inhalación o insuflamiento, los compuestos según la invención pueden
tomar la forma de una composición en polvo seco, por ejemplo una
mezcla de polvo del compuesto y una base de polvo adecuada tal como
lactosa o almidón. La composición en polvo se puede presentar en
forma de dosis unitaria, por ejemplo, en cápsulas o cartuchos, o
por ejemplo paquetes de gelatina o blisters a partir de los cuales
se puede administrar el polvo con la ayuda de un inhalador o un
insuflador.
Cuando se desee, las formulaciones anteriormente
descritas se pueden emplear adaptadas para dar una liberación
sostenida del ingrediente activo.
Los compuestos de la invención también se pueden
usar en combinación con otros agentes antivirales.
En una realización, las combinaciones de la
presente invención comprenden aquellas en las que están presentes
las siguientes realizaciones, bien independientemente o en
combinación.
En una realización, los compuestos de la
invención se pueden emplear junto con al menos algún otro agente
antiviral, que se escoge de análogos de nucleósidos, NNRTI o
inhibidores de proteasa.
En una realización, los análogos de nucleósidos
es un análogo de 1,3-oxatiolano.
En una realización adicional, el análogo de
1,3-oxatiolano es lamivudina, coviracilo o
2-hidroximetil-4-(citosin-1'-il)-1,3-oxatiolano.
En una realización adicional, el análogo de
1,3-oxatiolano es
2-hidroximetil-4-(citosin-1'-il)-1,3-oxatiolano.
En una realización adicional, el análogo de
1,3-oxatiolano es
2R-hidroximetil-4R-(citosin-1'-il)-1,3-oxatiolano.
En una realización adicional, el análogo de
1,3-oxatiolano es
2S-hidroximetil-4S-(citosin-1'-il)-1,3-oxatiolano.
En una realización, los compuestos de la
invención se pueden emplear junto con al menos algún otro agente
antiviral que se escoge de zidovudina, didanosina, zalcitabina,
estavudina, lamivudina, nevirapina, delavirdina, efavirenz,
indinavir, nelfinavir, saquinavir o ritonavir.
En una realización, los compuestos de la
invención se pueden emplear junto con al menos algún otro agente
antiviral escogido de nevirapina, efavirenz, zidovudina,
estavudina, o lamivudina.
En una realización, los compuestos de la
invención se pueden emplear junto con al menos algún otro agente
antiviral escogido de efavirenz, zidovudina, estavudina, o
lamivudina.
En una realización, los compuestos de la
invención se pueden emplear junto con al menos algún otro agente
antiviral escogido de efavirenz, zidovudina o lamivudina.
En una realización, los compuestos de la
invención se emplean junto con efavirenz, zidovudina o
lamivudina.
En una realización, los compuestos de la
invención se pueden emplear junto con al menos algún otro agente
antiviral escogido de nevirapina, zidovudina, estavudina, o
lamivudina.
En una realización, los compuestos de la
invención se emplean junto con nevirapina, zidovudina, estavudina,
y lamivudina.
En una realización, los compuestos de la
invención se pueden emplear junto con al menos algún otro agente
antiviral que se escoge de zidovudina, estavudina, o
lamivudina.
En una realización, los compuestos de la
invención se emplean junto con zidovudina, estavudina, o
lamivudina.
En una realización, los compuestos de la
invención se pueden emplear junto con zidovudina.
En una realización, los compuestos de la
invención se pueden emplear junto con estavudina.
En una realización, los compuestos de la
invención se pueden emplear junto con lamivudina.
En una realización, los compuestos de la
invención se pueden emplear junto con nevirapina.
En una realización, los compuestos de la
invención se pueden emplear junto con efavirenz.
Las combinaciones citadas anteriormente se pueden
presentar convenientemente para uso en forma de una formulación
farmacéutica; y de este modo las formulaciones farmacéuticas que
comprenden una combinación como se define anteriormente, junto con
un vehículo farmacéuticamente aceptable para la misma, comprenden
un aspecto adicional de la invención.
Los componentes individuales de tales
combinaciones se pueden administrar secuencial o simultáneamente en
formulaciones farmacéuticas separadas o combinadas.
Cuando se usa el compuesto (I) y (Ia) o una de
sus sales farmacéuticamente aceptables, en combinación con un
segundo agente terapéutico activo frente al mismo virus, la dosis
de cada compuesto puede ser la misma o diferir de aquella cuando el
compuesto se usa en solitario. Las dosis apropiadas serán apreciadas
fácilmente por los expertos en la técnica.
La relación entre los compuestos de la presente
invención y el segundo agente terapéutico será rápidamente apreciada
por los expertos en la técnica. Por ejemplo, se puede usar de
alrededor de 1:1 a alrededor de 1:50 de compuestos de la
invención:segundo agente terapéutico. En una realización adicional,
se puede usar de alrededor de 1:1 a alrededor de 1:30 de compuestos
de la invención:segundo agente terapéutico. En una realización
adicional, se puede usar de alrededor de 1:1 a alrededor de 1:20 de
compuestos de la invención:segundo agente terapéutico. En una
realización adicional, se puede usar de alrededor de 1:1 a
alrededor de 1:15 de compuestos de la invención:segundo agente
terapéutico. En una realización adicional, se puede usar de
alrededor de 1:1 a alrededor de 1:10 de compuestos de la
invención:segundo agente terapéutico. En una realización adicional,
se puede usar de alrededor de 1:1 a alrededor de 1:5 de compuestos
de la invención:segundo agente terapéutico. En una realización
adicional, se puede usar de alrededor de 1:1 a alrededor de 1:3 de
compuestos de la invención:segundo agente terapéutico. Si se añade
un agente terapéutico adicional, las relaciones se ajustarán en
consecuencia.
Los compuestos de la presente invención se pueden
preparar según lo siguiente.
Los siguientes ejemplos se proporcionan para
ilustrar diversas realizaciones de la presente invención, y no se
deben considerar como limitantes del alcance.
Esquema
1
\newpage
a) PTSA, 100ºC, puro; b) LiOH,
MeOH-H_{2}O; c) Pb(OAc)_{4}, MeCN,
piridina; d) TMSTf, CH_{2} Cl_{2},
TMS-6-Cl-guanina,
80%; e) EtOH, ciclopropilamina, 80ºC; f) NH_{3}, MeOH
El compuesto objetivo se puede preparar según el
esquema anterior:
Etapa
a
Se hace reaccionar
2-benzoiloxi-acetaldehído 1 con
(R)-(+)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-carboxilato
de metilo 2 en presencia de ácido
para-toluensulfónico (pTSA) en condiciones de
transcetalización para dar el éster
2-benzoiloximetil-1,3-dioxolan-4-carboxilmetílico
3 como una mezcla de isómeros cis y trans en una relación de 3:1 a
favor del isómero cis.
Etapa
b
Se hidrolizó selectivamente el éster
carboximetílico 3 usando hidróxido de litio para dar los derivados
ácidos 4a y 4b correspondientes. La mezcla se separó por
cromatografía ultrarrápida, y cada isómero se usó posteriormente de
forma independiente.
Etapa
c
La función carboxílica de 4a se convirtió
entonces a un grupo saliente acetoxi por tratamiento con
tetraacetato de plomo.
Etapa
d
Se acopló el
(2R)-2-benzoiloximetil-1,3-dioxolan-4-acetoxi
4a con
2-amino-6-cloropurina
sililada usando trifluorometilsulfonato de trimetilsililo (TMSTf),
como activador, para dar una mezcla de isómeros cis y trans de
análogos nucleosídicos 6a y 6b en una relación de 1,2:1 a favor del
isómero cis. La mezcla se separó por cromatografía ultrarrápida, y
cada isómero se usó de forma independiente posteriormente.
Etapa
e
El
(-)-(2R,4R)-2-benzoiloximetil-4-(2'-amino-6'-cloro-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
6a se trató con ciclopropilamina en etanol para dar el
(-)-(2R,4R)-2-benzoiloximetil-4-(2'-amino-6'-ciclopropilamino-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
7 correspondiente con buen rendimiento.
Etapa
f
La eliminación del grupo protector benzoílico se
logró por tratamiento de
(-)-(2R,4R)-2-benzoiloximetil-4-(2'-amino-6'-ciclopropilamino-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
7 con amoníaco metanólico para dar el producto deseado
(-)-(2R,4R)-2-hidroximetil-4-(2'-amino-6'-ciclopropilamino-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
A con buen rendimiento.
A una disolución de
2,3-O-isopropiliden-D-glicerato
de metilo (Fluka: nº cat 59449), (9,76 g, 60,9 mmoles, 1 eq.) y
benzoiloxiacetaldehído (10 g, 60,9 mmoles, 1 eq.) en tolueno (20
ml) a 80ºC se añadió ácido p-toluensulfónico (460
mg, 2,4 mmoles, 4% en moles). El matraz de reacción se mantuvo a
vacío durante una hora, y se recogió un destilado
(80-85ºC) durante este período de tiempo. El
residuo se enfrió entonces hasta temperatura ambiente (RT), y se
purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice,
usando hexanos/acetato de etilo como eluyente para producir 13,2 g
(81%) del compuesto del título como una mezcla de isómeros cis y
trans en una relación 3:1.
Isómero cis:
^{1}H-NMR (CDCl_{3}):
\delta(ppm): 3,75 (s, 3H, CH3); 4,15 (dd, 1H,
C_{5}-CH), 4,30 (dd, 1H,
C_{5}-CH); 4,5 (m, 2H,
CH_{2}-O-CO-C_{6}H_{5});
4,7 (m, 1H, C_{4}-CH); 5,4 (t, 1H,
C_{2}-CH); 7,45-8,1 (m, 5H,
Ar-CH).
\newpage
Isómero trans:
^{1}H-NMR (CDCl_{3}):
\delta(ppm): 3,8 (s, 3H, CH_{3}); 4,1 (dd, 1H,
C_{5}-CH), 4,35 (dd, 1H,
C_{5}-CH); 4,45 (m, 2H,
CH_{2}-O-CO-C_{6}H_{5});
4,75 (m, 1H, C_{4}-CH); 5,5 (t, 1H,
C_{2}-CH); 7,45-8,1 (m,
5H, Ar-CH).
A una disolución de
2-(R,S)-benzoiloximetil-1,3-dioxolan-4-(R)-carboxilato
de metilo, (411 g, 1,54 mmoles, 1 eq., mezcla 2:1 de isómeros cis y
trans) en una mezcla 1:1 de THF y agua, se añadió en porciones
hidróxido de litio (64,8 g, 1,54 moles, 1 eq.) durante un período de
30 min., manteniendo la temperatura del matraz de reacción por
debajo de 30ºC. Después de 90 min., se eliminó el THF mediante
vacío, y la disolución acuosa se acidificó hasta pH
2,5-3,2, mediante adición gota a gota de ácido
sulfúrico al 30% (p/p).La disolución resultante se extrajo con
diclorometano (4 x 400 ml). La fase orgánica combinada se lavó con
salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró para
producir 380 g de un aceite oscuro. Los isómeros se separaron
mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice, usando ácido
acético al 2% en diclorometano para producir 220 g del isómero cis
(56,5%) y 116 g del isómero trans (30%). Cada uno de los isómeros
se usó independientemente para la siguiente etapa.
Isómero cis:
Ácido (2R,
4R)-2-benzoiloximetil-1,3-dioxolan-4-carboxílico
^{1}H-NMR (CDCl_{3}): \delta(ppm): 4,2
(t, 1H, C_{5}-H); 4,4 (m, 1H); 4,5 (m, 1H); 4,7 (m, 2H);
5,4 (t, 1H, C_{2}-CH);
7,45-8,1 (m, 5H, Ar-CH);
7,2-8,0 (bs, 1H, COOH).
Isómero trans:
Ácido (2S,
4R)-2-benzoiloximetil-1,3-dioxolan-4-carboxílico
^{1}H-NMR (CDCl_{3}): \delta(ppm): 4,15
(dd, 1H, C_{5}-H), 4,4 (t, 1H, C_{5}-H); 4,45 (m,
2H,
CH_{2}-O-COC_{6}H_{5});
4,8 (dd, 1H, C_{4}-CH); 5,6 (t, 1H,
C_{2}-CH); 7,45-8,1 (m, 5H,
Ar-CH); 8,3-8,8 (bs, 1H,
COOH).
A una disolución de ácido (2R,
4R)-2-benzoiloximetil-1,3-dioxolan-4-carboxílico
(130 g, 0,515 moles, 1 eq.) y piridina (60 ml, 0,741 moles, 1,44
eq.) en acetonitrilo a 4ºC, se añadió tetraacetato de plomo (95% de
ensayo, 300 g, 0,678 moles, 1,25 eq.) durante un período de 20 min.
La mezcla de reacción se mantuvo con agitación durante 18 horas a
RT. Los inorgánicos se eliminaron por filtración, el filtrado se
vertió sobre una disolución saturada de bicarbonato sódico (2 l)
seguido de adición de bicarbonato de sodio sólido (pH =
7-8). La fase orgánica se separó, y la fase acuosa
se extrajo con acetato de etilo (3 x 400 ml). La fase orgánica
combinada se concentró y se purificó mediante cromatografía en
columna, sobre gel de sílice, usando hexanos/acetato de etilo como
eluyente para producir 93,5 g (68%) del compuesto del título como
una mezcla de isómeros cis y trans en una relación de 2:1. La
mezcla se usó para la siguiente etapa.
Isómeros cis/trans:
^{1}H-NMR (CDCl_{3}):
\delta(ppm): 2,0, 2,15 (s, 3H, CH_{3});
4,05-4,45 (m, 4H, CH); 5,45, 5,55 (t, 1H,
C_{2}-CH); 6,4, 6,45 (dd, 1H,
C_{4}-CH); 7,45-8,1 (m, 5H,
Ar-CH).
Se calentó a reflujo durante 3 h
2-amino-6-cloro-purina
(4,15 g, 1,3 eq.) en 50 ml de hexametildisilazano (HMDS) que
contiene 100 mg de sulfato de amonio, después de lo cual la
disolución clara se evaporó hasta sequedad a vacío. El residuo se
disolvió en 100 ml de 1,2-dicloroetano anhidro. El
(2R)-2-benzoiloximetil-4-acetoxi-1,3-dioxolano
(5 g) se secó mediante coevaporación dos veces con benceno (2 x 30
ml), y se disolvió en 100 ml de 1,2-dicloroetano
anhidro. La disolución se transfirió entonces en el matraz de
reacción que contiene la disolución de
2-amino-6-cloro-purina
sililada. La mezcla se colocó en un baño de aceite precalentado a
60ºC durante 15 minutos, seguido de adición de triflato de
trimetilsililo (TMS-Tf, 3,8 ml, 1,1 eq.). La mezcla
se calentó a reflujo en nitrógeno durante 3 h, y la disolución se
puso marrón. La TLC (hex:EtOAc 7:3 para azúcar y hex:EtOAc 1:4 para
producto) indicó una reacción completa con la desaparición de
azúcar y la presencia de dos manchas bien separadas para los
productos cis y trans. La mezcla de reacción se enfrió hasta
temperatura ambiente, se vertió en una disolución de bicarbonato de
sodio saturada (100 ml), y se agitó durante 10 minutos. La capa
orgánica se recogió, y la capa acuosa se extrajo dos veces con
cloruro de metileno (2 x 50 ml). La disolución orgánica combinada se
lavó con agua, salmuera, y se secó sobre MgSO_{4} como es
habitual, y el disolvente se evaporó hasta sequedad para dar una
espuma (7 g). La RMN de H del producto bruto indicó una reacción
limpia con los productos cis y trans en una relación de 1,2:1 a
favor del isómero cis. El producto bruto se purificó sobre gel de
sílice usando un gradiente de hexano:acetato de etilo 7:3, 1:1 y 2:3
como eluyente, para dar 2,5 g de isómero trans (menos polar,
anómero \alpha) como una espuma, que se cristalizó en EtOH, y 3 g
de isómero cis (más polar, anómero \beta) como una espuma, que se
cristalizó en EtOH, y 0,3 g de mezcla cis y trans a favor de cis
como una espuma para un total de 82% de rendimiento.
Isómero trans:
(+)-(2R,4S)-2-benzoiloximetil-4-(2'-amino-6'-cloro-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
R_{f}: 0,40 (hexano-EtOAc
3:7)
[\alpha_{D}] + 21,16º (c 0,293 en
CH_{2}Cl_{2})
^{1}H-NMR (CDCl_{3}):
\delta(ppm): 4,45-4,55 (m, 4H;
C_{5}-H_{2},
C_{2}-CH_{2}-OBz), 5,16 (b, 2H,
NH_{2}), 5,83 (t, 1H, C_{2}-H, J=3,8Hz), 6,39
(dd, 1H, C_{4}-H), 7,45 (t, 2H, aromático), 7,62
(t, 1H, aromático), 7,92 (s, 1H, C_{8'}-8), 8,10
(d, 2H, aromático).
U.V.: (CH_{3}OH) \lambda_{max}: 312 nm
Isómero cis:
(-)-(2R,4R)-2-benzoiloximetil-4-(2'-amino-6'-cloro-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
R_{f}: 0,26 (hexano-EtOAc
3:7)
[\alpha_{D}] -87,7º (c 0,2565 en
CH_{2}Cl_{2})
^{1}H-NMR (CDCl_{3}):
\delta(ppm): 4,25-4,33 (dd, 1H,
C5-H), 4,60-4,64 (m, 3H;
C_{5}-H, y
C_{2}-CH_{2}-OBz), 5,17 (b, 2H,
NH_{2}), 5,42 (t, 1H, C_{2}-H, J=3,5Hz), 6,33
(dd, 1H, C_{4}-H), 7,45 (t, 2H, aromático), 7,62
(t, 1H, aromático), 7,95 (d, 2H, aromático), 8,05 (s, 1H,
C_{8'}-8).
U.V.: (CH_{3}OH) \lambda_{max}: 312 nm.
A una disolución de
(-)-(2R,4R)-2-benzoiloximetil-4-(2'-amino-6'-cloro-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
(600 mg) en etanol (30 ml) se añadió ciclopropilamina (2 ml, 18
eq.). La mezcla se calentó suavemente a reflujo
(80-85ºC) durante 18 h, y se enfrió hasta
temperatura ambiente. El disolvente se evaporó hasta sequedad a
vacío. El residuo se disolvió en 100 ml de cloruro de metileno, se
lavó con disolución saturada de NaHCO_{3}, agua, salmuera, y se
secó sobre MgSO_{4}. El disolvente se eliminó a vacío, y el
residuo se purificó sobre gel de sílice usando EtOAc:MeOH como
eluyente, para dar el producto deseado como una espuma con un
rendimiento de 80% (506 mg).
Rf: 0,26 (CH_{2}Cl_{2}:MeOH 95:5)
[\alpha_{D}] -67,7º (c 0,2565 en
CH_{2}Cl_{2})
^{1}H-NMR (CDCl_{3}):
\delta(ppm): 0,64-0,68 (m, 2H, CH_{2} de
ciclopropilo), 0,91-0,96 (m, 2H, CH_{2} de
ciclopropilo), 3,06 (b, 1H, CH de ciclopropilo),
4,27-4,30 (dd, 1H, C_{5}-H),
4,54-4,57 (dd, 1H; C_{5}-H), 4,60
(t, 2H, C_{2}-CH_{2}-OBz), 5,37
(b, 2H, NH_{2}), 5,42 (t, 1H, C_{2}-H,
J=3,5Hz), 6,28 (b, 1H, NH), 6,35 (dd, 1H,
C_{4}-H), 7,45 (t, 2H, aromático), 7,58 (t, 1H,
aromático), 7,77 (s, 1H, C_{8'}-8), 8,01 (d, 2H,
aromático).
U.V.: (CH_{3}OH) \lambda_{max}: 283 y 260
nm.
Una disolución de
(-)-(2R,4R)-2-benzoiloximetil-4-(2'-amino-6'-
ciclopropilamino-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
(480 mg) en 30 ml de amoníaco metanólico saturado se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla se evaporó hasta sequedad a vacío. El residuo se disolvió en 20 ml de agua, se lavó dos veces con 10 ml de cloruro de metileno, y se liofilizó para dar 283 mg de un sólido blanco con un 80% de rendimiento.
(480 mg) en 30 ml de amoníaco metanólico saturado se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla se evaporó hasta sequedad a vacío. El residuo se disolvió en 20 ml de agua, se lavó dos veces con 10 ml de cloruro de metileno, y se liofilizó para dar 283 mg de un sólido blanco con un 80% de rendimiento.
R_{f}: 0,26 (CH_{2}Cl_{2}:MeOH 9:1)
[\alpha_{D}] -35,9º (c 0,334 en MeOH)
^{1}H-NMR
(DMSO_{d-6}): \delta(ppm): 0,55 (m, 2H,
CH_{2} de ciclopropilo), 0,95 (m, 2H, CH_{2} de ciclopropilo),
3,15 (b, 1H, CH de ciclopropilo), 3,80 (m, 2H, CH_{2}OH), 4,30
(dd, 1H, C_{5}-H), 4,55 (dd, 1H;
C_{5}-H), 5,08 (t, 1H, C_{2}-H),
5,17 (b, H, OH), 6,15 (b, 2H, NH_{2}), 6,52 (dd, 1H,
C_{4}-H), 7,72 (b, 1H, NH), 8,12 (s, 1H,
C_{8'}-8).
U.V.: (CH_{3}OH) \lambda_{max}: 283 y 260
nm.
A una disolución de
(-)-(2R,4R)-2-benzoiloximetil-4-(2'-amino-6'-cloro-
purin-9'-il)-1,3-dioxolano
(250 mg) en etanol (25 ml) se añadió ciclobutilamina (0,17 ml, = 3
eq.). a mezcla se calentó suavemente a reflujo
(80-85ºC) durante 18 h, y se enfrió hasta
temperatura ambiente. El disolvente se evaporó hasta sequedad a
vacío. El residuo se disolvió en 100 ml de cloruro de metileno, se
lavó con disolución saturada de NaHCO_{3}, agua, salmuera, y se
secó sobre MgSO_{4}. El disolvente se eliminó a vacío, y el
residuo se purificó sobre gel de sílice usando EtOAc:MeOH 95:5 como
eluyente, para dar el producto deseado como una espuma con un
rendimiento de 84% (230 mg).
R_{f}: 0,31 (CH_{2}Cl_{2}:MeOH 95:5)
[\alpha_{D}] -62,5º (c 0,4925 en
CH_{2}Cl_{2})
^{1}H-NMR (CDCl_{3}):
\delta(ppm): 1,74-1,78 (m, 2H, CH_{2} de
ciclobutilo), 1,95-2,00 (m, 2H, CH_{2} de
ciclobutilo), 2,43-2,45 (m, 2H, CH_{2} de
ciclobutilo), 4,27-4,30 (dd, 1H,
C_{5}-H), 4,54-4,57 (dd, 1H;
C_{5}-H), 4,59 (t, 2H,
C_{2}-CH_{2}-OBz), 4,75 (b, 1H,
CH de ciclobutilo), 5,37 (b, 2H, NH_{2}), 5,41 (t, 1H,
C_{2}-H, J=3,6Hz), 6,00 (b, 1H, NH), 6,35 (dd,
1H, C_{4}-H), 7,45 (t, 2H, aromático), 7,58 (t,
1H, aromático), 7,75 (s, 1H, C_{8'}-8), 8,01 (d,
2H, aromático).
U.V.: (CH_{3}OH) \lambda_{max}: 283 y 263
nm.
Una disolución de
(-)-(2R,4R)-2-benzoiloximetil-4-(2'-amino-6'-
ciclobutilamino-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
(214 mg) en 20 ml de amoníaco metanólico saturado se agitó a
temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla se evaporó hasta
sequedad a vacío. El residuo se disolvió en 20 ml de agua, se lavó
dos veces con 10 ml de éter, y se evaporó hasta sequedad por
coevaporación con etanol, para dar 154 mg de producto puro como una
espuma con un 96% de rendimiento.
R_{f}: 0,52 (CH_{2}Cl_{2}:MeOH 9:1)
[\alpha_{D}] -29,04º (c 0,396 en MeOH)
^{1}H-NMR
(DMSO_{d-6}): \delta(ppm): 1,61 (m, 2H,
CH_{2} de ciclobutilo), 2.06 (m, 2H, CH_{2} de ciclobutilo),
2,18 (m, 2H, CH_{2} de ciclobutilo), 3,58 (m, 2H, CH_{2}OH),
4,17 (dd, 1H, C_{5}-H), 4,40 (dd, 1H;
C_{5}-H), 4,90 (b, 1H, CH de ciclobutilo), 5,01
(t, 1H, C_{2}-H), 5,42 (b, H, OH), 5,87 (b, 2H,
NH_{2}), 6,19 (dd, 1H, C_{4}-H), 7,62 (b, 1H,
NH), 7,85 (s, 1H, C_{8'}-8).
U.V.: (CH_{3}OH) \lambda_{max}: 283 y 260
nm.
A una disolución de
(-)-(2R,4R)-2-benzoiloximetil-4-(2'-amino-6'-cloro-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
(210 mg) en etanol (30 ml) se añadió ácido
1-amino-1-ciclopropancarboxílico
(113 mg = 2 eq.) y trietilamina (0,2 ml, 2,5 eq.). La mezcla se
calentó suavemente a reflujo (80-85ºC) durante 72 h,
y se enfrió hasta temperatura ambiente. El disolvente se evaporó
hasta sequedad a vacío. El residuo se disolvió en amoníaco
metanólico (20 ml), y se agitó toda la noche. El disolvente se
eliminó a vacío, y el residuo se purificó sobre gel de sílice
usando un gradiente de CH_{2}Cl_{2}:MeOH 95:5 hasta 9:1 para
eliminar el subproducto, y finalmente se eluyó el producto deseado
con CH_{2}Cl_{2}:MeOH 4:1 que contiene 0,5% de ácido acético.
Dio 80 mg de producto puro (42,5% de rendimiento).
R_{f}: 0,34 (CH_{2}Cl_{2}:MeOH 4:1 que
contiene AcOH al 0,5%)
^{1}H-NMR (DMSO_{d6}):
\delta(ppm): 1,05 (b, 2H, CH_{2} de ciclopropilo), 1,45
(b, 2H, CH_{2} de ciclopropilo), 3,58 (b, 2H,
CH_{2}-OH), 4,17 (dd, 1H,
C_{5}-H), 4,41 (dd, 1H;
C_{5}-H), 5,12 (t, 1H, C_{2}-H),
5,15 (b, 1H, OH), 5,82 (b, 1H, NH), 6,19 (dd, 1H,
C_{4}-H), 7,71 (b, H, NH), 7,86 (s, 1H,
C_{8'}-8).
U.V.: (CH_{3}OH) \lambda_{max}: 283 y 264
nm.
Se determinó la actividad
anti-VIH-1 del compuesto a (-)
empleando VIH-1_{IIIB} en una variedad de tipos
celulares como se ha descrito previamente (Gu et al., 1992, 1994,
1999; Rando et al., 1995; Salomon et al., 1994). De forma breve, as
células se incubaron con virus a una multiplicidad de infección
(MOI) de 0,005 para ensayos de células T, y una MOI de 0,5 para
ensayos de células monocíticas durante 3 horas. Entonces los virus
no unidos se eliminaron por lavado de las células, seguido del
sembrado de las células en una placa de 96 pocillos. Las células
infectadas se cultivaron en presencia de concentraciones en serie
del compuesto de ensayo durante 5-7 días. La
eficacia anti-VIH-1 se determinó
mediante ensayo en busca de la actividad de RT (transferasa
inversa) de VIH-1 o nivel de p24 en los
sobrenadantes del cultivo celular. Todos los ensayos se realizaron
por duplicado. La zidovudina y/o lamivudina se usaron como
controles en cada experimento.
El compuesto A (-) tuvo una EC_{50} de 0,083
\muM frente a VIH-1_{IIIB} en células
MT-2, que es el mismo nivel de actividad
anti-VIH-1 que la lamivudina,
estavudina, zalcitabina y abacavir, pero una actividad menor que
zidovudina (Tabla 1).
| Compuesto | EC_{50} (\muM) \pm S.D. en células MT-2 |
| Compuesto A (-) | 0,082 \pm 0,022 |
| DXG | 0,065 \pm 0,039 |
| Zidovudina | 0,0051 \pm 0,0025 |
TABLA 1
(Continuación)
| Compuesto | EC_{50} (\muM) \pm S.D. en células MT-2 |
| Lamivudina | 0,061 \pm 0,028 |
| Estavudina | 0,38 \pm 0,26 |
| Zalcitabina | 0,05 |
| Abacavir | 0,10 |
Se ensayó la actividad
anti-VIH-1 del compuesto A (-) en
diferentes tipos de células, incluyendo estirpes de células
monocíticas periféricas humanas (PBMC), de células T
(MT-2 y MT-4) y de células
monocíticas (U937). El compuesto A (-) tuvo unas EC_{50}
submicromolares frente a VIH-1_{IIIB} en
diferentes tipos de células ensayadas (Tabla 2).
| EC_{50} (\muM) | |||
| Células | Compuesto A (-) | Zidovudina | Lamivudina |
| PBMC (3)* | 0,22 | 0,0027 | 0,035 |
| MT-2 (4) | 0,082 | 0,0051 | 0,061 |
| MT-4 (2) | 0,14 | 0,015 | 0,17 |
| U937 (1) | 0,82 | 0,027 | 0,014 |
| * Los números en los paréntesis son números de determinaciones. |
Además, también se analizó la actividad
antirretroviral del compuesto A (-) usando diferentes tipos de
cepas de VIH-1. Los resultados en la Tabla 3
mostraron que el compuesto A (-) fue activo frente a cepas que no
inducen sincitios (VIH-1_{9881}), cepas trópicas
duales (VIH-1_{macBAL}) y cepas monocitrópicas
(VIH-1_{WRM8488}).
| EC_{50} (\muM) | |||
| Virus | Células | Compuesto A (-) | Zidovudina |
| VIH-1 _{9881} | PBMC | 0,59 | 0,0017 |
| VIH-1_{macBAL} | PBMC | 4,14 | 0,043 |
| m/m | 0,022 | <0,0011 | |
| VIH-1WRM_{8488} | m/m | 0,028 | <0,0011 |
Se analizó la toxicidad celular de los compuestos
sobre diversas células usando la captación de
[^{3}H]-timidina. Se colocaron en placas diversas
células, incluyendo Molt-4, HT1080,
DU-145, HepG-2 y HSF, a una
concentración de 1-2 x 10^{3} células por pocillo
(placas de 96 pocillos). Tras un período de incubación de 24 h, se
añadieron al medio de cultivo los compuestos diluidos en serie unas
10 veces (10^{-4} M a 10^{-10} M), y las células se cultivaron
adicionalmente durante 72 h. Se añadió
[^{3}H]-timidina durante el período final de
incubación de 18 horas. Tras la incubación con la
[^{3}H]-timidina, las células se lavaron una vez
con PBS, se trataron con tripsina si las células eran adherentes, y
entonces se resuspendieron en agua (lisis hipotónica de las
células). El extracto celular se aplicó directamente a un cosechador
Tomtec 96. Usando este instrumento se adsorbió sobre filtros el ADN
extraído, se lavó, y se contó entonces la
[^{3}H]-timidina incorporada. La concentración
citotóxica al 50% (CC_{50}) se determinó comparando los recuentos
radioactivos por minuto de las muestras en presencia de los
compuestos frente al control.
La toxicidad celular de los compuestos también se
ensayó mediante tinción con WST-1 analizando la
proliferación de MT-2, H9, Jurkat, U937, y CBMC. Las
estirpes celulares establecidas se cultivaron en medio RPMI en
placas de 96 pocillos a una densidad de 5 x 10^{4}
células/pocillo, mientras que las CBMC se colocaron en placas a una
concentración de 0,5 x 10^{6}/pocillo. Se añadió en el día cero
un compuesto diluido en serie unas 10 veces
(10^{-4}-10^{-7} M). En el cuarto día, las
células se pasaron cambiando la mitad del medio que contiene el
compuesto apropiadamente diluido. Las actividades celulares se
analizaron en el séptimo día usando el reactivo
WST-1 (Boehringer Mannheim) siguiendo el protocolo
proporcionado por el suministrador. Los resultados se dan en la
Tabla 4.
| WST-1 | CC50 (\muM) | |||||||
| [^{3}H-]TTP incorporación en Ratones | ||||||||
| Compuesto | CBMC | PBMC | Molt-4 | HT1080 | U-145 | HepG2 | HSF | (50mg/kg/d) |
| DXG | >100 | >500/250 | >500/250 | >500/250 | >500/250 | >500/250 | \geq500 | No |
| DAPD | >100 | >500 | >500 | >500 | >500 | \geq500 | 500/350 | No |
| Comp. B(-) | >100 | 80/90 | >250 | >250 | 200 | >250 | - - - | No |
| Comp. C (-) | >100 | - - - | - - - | - - - | - - - | - - - | - - - | No |
| Zidovudina | 74 | - - - | 3 | 5 | >10 | 3 | >10 | - - - |
| Lamivudina | ND | 1 | >100 | >500/100 | >500/100 | 350/100 | 400 | - - - |
| Zalcitabina | 29 | 50/15 | 2 | 2 | 5 | 7 | - - - | - - - |
| \bullet Efecto de ganancia de peso corporal administrado intraperitonealmente en ratones (CDI, adulto, macho) a una | ||||||||
| dosis de 50 mg/kg/día durante 5 días |
Se evaluó la biodisponibilidad de los compuestos
en ratas adultas macho, a las que se dosificó intravenosamente a
través de la vena de la cola (5 mg/kg), y oralmente (20 mg/kg). Las
muestras de plasma se recogieron a los 2, 5, 15, 30, 60, 90, 120 y
240 minutos tras la dosificación intravenosa, y a los 5, 15, 30,
60, 90, 120, 240 y 360 minutos tras la dosificación oral.
Las muestras de sangre (1 ml) se recogieron de
las colas de las ratas en un Vacutainer que contiene EDTA (3 ml)
para las administraciones tanto intravenosa (iv) como oral (po).
Las muestras de plasma se prepararon por centrifugación a 2000 x g
durante 15 minutos a 4ºC.
Condiciones analíticas:
Sistema de HPLC: Dos sistemas de bomba Waters 616
y dos sistemas Alliance 2690 con PDA 996,
Columna: Phenomenex Luna C18 (2), 5 \mum,
250*4,6 mm,
Gradiente: 0-35% de disolvente A
en 20 minutos. El disolvente A contiene acetonitrilo con TFA al
0,01%, y el disolvente B contiene agua Millipore (filtro de 0,25
\mum) con TFA al 0,01%,
Caudal: 1,0 ml/min, UV: 200-350
nm
Las muestras de plasma (diluidas hasta 1 ml con
agua) se cargaron en el sorbente Abselut Nexus (nº
1210-3100), y se extrajeron a su través a bajo vacío
(aproximadamente 16,93 kPa). Se añadió un mililitro de agua
desionizada al sorbente, y se extrajo a su través a vacío. La
columna de extracción se secó durante un minuto usando alto vacío
(>33,86 kPa). Se añadió un mililitro de metanol a la columna
Abselut Nexus, y el eluyente se recogió a 1-2
ml/min. El eluyente se evaporó a sequedad usando un vacío rápido, y
las muestras se reconstituyeron en 120 \mul de H_{2}O; y se
usaron 100 \mul para inyección. Los resultados se dan en la Tabla
5.
| Compuesto | Administración | Animal | Biodisp. | AUC | T1/2 | Cmax |
| (mg/kg) | Oral(%) | (\cdot g/ml/h) | (h) | (\cdot g/ml) | ||
| DXG | oral, 20 | rata | 4,43 \pm 1,65 | 0,91 \pm 0,34 | 2,45 \pm 0,59 | 0,27 \pm 0,03 |
| iv, 5 | rata | - - - | 5,15 | 0,62 | 29,02 | |
| DAPD | oral, 20 | Rata | 7,42 \pm 1,58 | 1,89 \pm 0,40 | 0,77 \pm 0,31 | 1,04 \pm 0,24 |
| Compuesto A | oral, 20 | rata | 45,56 \pm 2,78 | 8,64 \pm 0,53 | 0,64 \pm 0,24 | 4,20 \pm 0,65 |
| (-) | iv, 5 | rata | - - - | 4,74 | 0,37 | 14,26 |
| Compuesto B | oral, 20 | rata | 13,75 | 3,08 | 1,20 | 1,12 |
| (-) | iv, 5 | rata | - - - | 5,60 | 0,31 | 13,26 |
| Compuesto C | oral, 20 | rata | 4,58 | 0,44 | 0,31 | 0,67 |
| (-) | iv, 5 | rata | - - - | 2,40 | 0,32 | 14,53 |
Se prepararon variantes de VIH-1
recombinante introduciendo las mutaciones diseñadas en
HXB2-D por mutagénesis dirigida al sitio, según se
describe (Gu et al. 1992, 1994). Las materias primas víricas se
prepararon transfectando células MT-4 con
constructos de ADN vírico infecciosos. La actividad antiviral del
compuesto A (-) se evaluó como se describe en el Ejemplo 10. El
compuesto A (-) tuvo una actividad ligeramente disminuida frente a
variantes de VIH-1 que llevan la mutación K65R y/o
M184V en la transcriptasa inversa, pero siguió siendo sensible a
otras variantes que eran resistentes a zidovudina, inhibidores no
nucleosídicos e inhibidores de la proteasa (Tabla 6).
\hbox{actividad RT)}
| Virus (nº de determinaciones) | genotipo de RT | EC_{50} (\muM) | ||
| Compuesto A (-) | Zidovudina | Lamivudina | ||
| HXB2-D (2) | wt (tipo salvaje) | 0,53 | 0,023 | 0,35 |
| K65R (2) | 65R | 1,03 | 0,021 | 4,31 |
| L74V (2) | 74V | 0,62 | 0,010 | 0,51 |
| M184V (2) | 184V | 0,53 | 0,02 | >40 |
| M184I (2) | 184I | 0,99 | 0,009 | >40 |
| K65R/M184V (3) | 65R, 184V | 1,1 | 0,031 | >40 |
TABLA 6
(Continuación)
| Virus (nº de determinaciones) | genotipo de RT | EC_{50} (\muM) | ||
| Compuesto A (-) | Zidovudina | Lamivudina | ||
| E89G/M184V (2) | 89G, 184V | 0,51 | 0,022 | >40 |
| JM1 (1) | 41L, 184V, 215Y | 1,83 | 0,027 | >40 |
| JM4 (2) | 41L, 70R, 215Y, 219Q | 0,58 | 0,27 | 0,85 |
| NNRTI^{R,1} (1) | 106A, 181C | 0,10 | 0,0061 | 0,15 |
| PI^{R,2} (2) | 10R, 46I, 63P, 82T, 84V | 0,20 | 0,017 | 0,29 |
| (genotipo de proteasa) | ||||
| 1. La EC_{50} para nevirapina fue >10 \cdot M. | ||||
| 2. La EC_{50} para saquinavir fue 0,028 \cdot M. La EC_{50} de HXB2-D wt (tipo salvaje) para saquinavir fue 0,0015 \cdot M. |
Se aislaron cepas clínicas procedentes de PBMC de
individuos infectados por VIH-1 mediante
co-cultivo con PBMC procedentes de donantes
normales. Para determinar el genotipo de RT de los aislados
clínicos de VIH-1, se extrajo el ADN provírico de
células T CD4^{+} o PBMC infectadas, y las regiones codificantes
de RT completas se amplificaron mediante PCR, como se ha dado a
conocer previamente (Gu et al 1992). El producto de la PCR se
purificó, y entonces se secuenció directamente usando cebador RTS
(5'-CCAAAAGTTAAACAATGGC-3') que está
localizado en la porción 5' de la región codificante de RT
(nucleótido 2603-2621 de coordenadas de
HXB2-D). La actividad antiviral se evaluó como se
describe en el ejemplo 10.
| Virus (nº de aislados) | EC_{50} (\muM) | ||
| Compuesto A (-) | Zidovudina | Lamivudina | |
| Zidovudina ^{S} | 0,15^{(b)} | 0,021 | 0,23 |
| ^{(a)}/Lamivudina ^{S} (7) | (0,032-0,31) ^{(b)} | (0,0034-0,051) | (0,028-0,69) |
| Zidovudina ^{S} | 0,38 | 0,012 | - |
| /Lamivudina ^{R} (3) | (0,13-0,51) | (0,0026-0,019) | (5,1->10) |
| Zidovudina ^{R} | 0,19 | 0,83 | 0,25 |
| /Lamivudina ^{S} (3) | (0,066-0,33) | (0,25-1,74) | (0,096-0,34) |
| Zidovudina ^{R} | 0,33 | 1,15 | 4,1 |
| /Lamivudina ^{R} (2) | (0,27-0,39) | (0,49-1,81) | (3,6-4,6) |
| a. S representa sensible, R representa resistente. | |||
| b. Valores medios de EC_{50}. | |||
| c. Intervalos de las EC_{50} de los aislados en el mismo grupo. |
\hbox{mediante p24)}
| Aislados | CI_{50} (\muM) | |||||
| Compuesto A (-) | Lamivudina | Zidovudina | Abacavir | Adefovir | Estavudina | |
| 105/A (wt) | 0,6 | 0,065 | 0,0043 | <0,03 | 2,0 | 0,063 |
| CCR15 | 0,3 | 95 | 0,003 | 0,22 | 0,8 | 0,06 |
| (Lamivudina^{R*}) | ||||||
| CCR18 | 1,3 | 300 | 0,0042 | 1,3 | 2,1 | 0,049 |
| (Lamivudina^{R}) | ||||||
| CCR19 | 1,6 | 95 | 0,003 | 0,58 | 2,3 | 0,05 |
| (Lamivudina^{R}) | ||||||
| 105/F | 0,84 | 0,17 | 0,23 | 0,07 | 7,0 | 0,12 |
| (zidovudina^{R}) | ||||||
| *. R representa resistente |
Se analizaron los efectos de combinación del
compuesto A (-) con agentes
anti-VIH-1 en MT-2 o
PBMC usando VIH-1_{IIIB}. Las combinaciones se
realizaron usando un patrón cruzado de tablero de ajedrez de
concentraciones de fármacos. Los efectos antivirales se
determinaron monitorizando la actividad de RT en los sobrenadantes
de los cultivos. Los datos se analizaron según el método descrito
por Chou y Talalay (Chou y Talalay, 1984) y Prichard (Prichard et
al., 1993). Los índices de combinación (CI) del compuesto A (-) con
otros agentes anti-VIH-1 se
calcularon usando un software Calcusyn (Biosoft, Cambridge, UK).
Teóricamente, un valor de CI de 1 indica un efecto aditivo, un valor
de CI >1 indica antagonismo, y un valor de CI <1 indica
sinergia. Se usó el software MacSynergy II para calcular los
volúmenes de sinergia o antagonismo para la combinación de
fármacos.
Se determinó la toxicidad celular mediante
captación de [^{3}H]-timidina (de Muys et al.
1999) y tinción con WST-1. En los experimentos de
captación de [^{3}H]-timidina, se cultivaron en
placas Molt-4, HT1080, DU-145, HepG2
y HSF, a una concentración de 1-2 x 10^{3}
células por pocillo (placas de 96 pocillos). Se cultivaron PBMC,
estimuladas con PHA, a una concentración de 4 x 10^{4} células
por pocillo. Tras un período de preincubación de 24 horas, se
añadieron los compuestos de ensayo (10^{-4} M a 10^{-10} M), y
las células se incubaron durante 72 h adicionales. La
[^{3}H]-timidina se añadió durante el período de
incubación de las 18 horas finales. Las células se lavaron entonces
una vez con PBS, se trataron con tripsina si las células eran
adherentes, y se resuspendieron en agua (lisis hipotónica de las
células). El extracto celular se aplicó directamente a un
cosechador Tomtec 96. La concentración citotóxica al 50%
(CC_{50}) se determinó comparando los recuentos radioactivos por
minuto obtenidos a partir de las muestras ensayadas con fármaco
frente a los obtenidos a partir de las células del control (no
tratadas).
En los experimentos de tinción con
WST-1, las estirpes celulares se cultivaron en
medio RPMI en placas de 96 pocillos a una densidad de 5 x 10^{4}
células/pocillo. Se colocaron en las placas CBMC a una concentración
de 0,5 x 10^{6}/pocillo. Los compuestos
(10^{-4}-10^{-7} M) se añadieron en el día
cero.
La viabilidad celular se determinó en el séptimo
día, usando el reactivo de WST-1 (Boehringer
Mannheim) siguiendo el protocolo proporcionado por el
suministrador.
El compuesto A (-) tuvo una citotoxicidad mucho
menor que tanto la zidovudina como zalcitabina en los diferentes
tipos de células analizadas tanto mediante incorporación de
[^{3}H]-timidina como mediante tinción con
WST-1 (Tabla 14).
Se ensayó la toxicidad de ADN mitocondrial
(ADNmt) del compuesto A (-) en células HepG2. Las células se
cultivaron durante 28 días bajo el compuesto de tratamiento. Las
células se pasaron una vez a la semana. Sin embargo, el medio de
cultivo celular que contiene la concentración apropiada del
compuesto se cambió dos veces a la semana. Como control se usó
zalcitabina. La toxicidad se determinó midiendo la relación de
contenido de ADNmt y ADN nuclear (ADNr de 28) mediante un análisis
de hibridación Southern (de Muys et al., 1999). El compuesto A (-)
no mostró toxicidad significativa de ADNmt hasta 100 \muM, la
concentración más elevada ensayada (Figura 1).
El compuesto A (-), DAPD, y DXG se administraron
como una dosis única, bien intravenosamente a través de la vena
yugular a 10 mg/kg, u oralmente a 20, 125, 500, 1000 ó 2000 mg/kg.
Todas las ratas se dejaron en ayunas durante 12 horas antes del
tratamiento de dosificación oral (po). El vehículo usado tanto para
administración iv como po fue carboximetilcelulosa al 0,1% y
Tween^{TM} 80 al 0,1% en agua destilada, acidificada hasta pH
3,15 con HCl 1 N. Las muestras de sangre se tomaron de las ratas a
los tiempos mostrados en la Tabla a continuación para todas las
dosificaciones orales. De un total de 10 ratas para cada
administración, se tomaron siete puntos de tiempo para la
dosificación intravenosa a través de la vena yugular (2, 5, 15, 30,
60, 120 y 240 min) y para la dosificación oral
(5-360 min) a 20 mg/kg, mientras que se tomaron dos
puntos de tiempo adicionales a 480 y 1440 min para las dosis orales
de 125-2000 mg/kg. Como resultado, cada punto de
tiempo estaba por cuadruplicado, excepto para el punto de tiempo de
1440 minutos cuando las muestras de sangre se tomaron a través de
la vena yugular de todas las ratas antes de ser eutanasiadas.
Programa de toma de muestras de sangre para
ratas dosificadas
oralmente
El plasma se preparó a partir de aproximadamente
1 ml de sangre tomado en cada punto de tiempo de cada rata.
Las muestras de sangre (1 ml) se recogieron de
las colas de las ratas en un Vacutainer que contiene EDTA (3 ml)
para las administraciones tanto iv como po. Las muestras de plasma
se prepararon por centrifugación a 2000 x g durante 15 minutos a
4ºC.
Condiciones analíticas:
Sistema de HPLC: Dos sistemas de bomba Waters 616
y dos sistemas Alliance 2690 con PDA 996,
Columna: Phenomenex Luna C18 (2), 5 \mum,
250*4,6 mm,
Gradiente: 0-35% de disolvente A
en 20 minutos. El disolvente A contiene acetonitrilo con TFA al
0,01%, y el disolvente B contiene agua Millipore (filtro de 0,25
\mum) con TFA al 0,01%,
Caudal: 1,0 ml/min, UV: 200-350
nm
Las muestras de plasma (diluidas hasta 1 ml con
agua) se cargaron en el sorbente Abselut Nexus (nº
1210-3100), y se extrajeron a su través a bajo vacío
(aproximadamente 16,93 kPa). Se añadió un mililitro de agua
desionizada al sorbente, y se extrajo a su través a vacío. La
columna de extracción se secó durante un minuto usando alto vacío
(>33,86 kPa). Se añadió un mililitro de metanol a la columna
Abselut Nexus, y el eluyente se recogió a 1-2
ml/min. El eluyente se evaporó a sequedad usando un vacío rápido, y
las muestras se reconstituyeron en 120 \mul de H_{2}O; se
usaron 100 \mul para inyección. Los resultados se dan en la Tabla
15 y 16.
A continuación están las referencias completas
citadas en esta solicitud:
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Claims (19)
1. Un nucleósido cis de fórmula (I):
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables,
en la
que:
n es 1 ó 2
R_{4} se escoge de H, COOH, CONH_{2}, OH, SH,
NH_{2}, NO_{2}, alquilo C_{1-6}, alquenilo
C_{2-6}, alquinilo C_{2-6},
halógeno, COR_{a} en la que R_{a} es un alquilo
C_{1-6}, alquenilo C_{2-6},
alquinilo C_{2-6}, o COOR_{b} en la que R_{b}
es un alquilo C_{1-6}, alquenilo
C_{2-6}, o alquinilo
C_{2-6};
R_{3} es H o un alquilo
C_{1-6}, alquenilo C_{2-6},
alquinilo C_{2-6};
X se escoge de H, monofosfato, difosfato,
trifosfato, carbonilo sustituido con un alquilo
C_{1-6}, alquenilo C_{2-6},
alquinilo C_{2-6}, arilo
C_{6-10}, o
---
\melm{\delm{\para}{ORc}}{P}{\uelm{\para}{O}}---ORc en la que cada Rc se escoge independientemente
de H, alquilo C_{1-6}, alquenilo
C_{2-6}, alquinilo C_{2-6} o un
grupo protector de hidroxi;
y
en la que dicho nucleósido está en forma del
enantiómero (-), el enantiómero (+), y sus mezclas, incluyendo
mezclas racémicas.
2. Un nucleósido según la reivindicación 1, en el
que dicho nucleósido está presente en la forma (-) y está al menos
95%, preferiblemente al menos 97%, y más preferiblemente al menos
99% libre de la forma (+).
3. Un compuesto según la reivindicación 1, en el
que el grupo protector de hidroxi se escoge de éster
acetil-2-tioetílico, éster
pivaloiloximetílico o éster isopropiloxicarboniloximetílico.
4. Un compuesto según la reivindicación 1, en el
que X es H.
5. Un compuesto según la reivindicación 1, en el
que n es 1.
6. Un compuesto según la reivindicación 5, en el
que R_{3} es H o metilo, o R_{4} es H.
7. Un compuesto según la reivindicación 5, en el
que R_{4} es H; COOH; CONH_{2}; alquilo
C_{1-6}, alquenilo C_{2-6},
alquinilo C_{2-6} o COOR_{b} en la que R_{b}
es un alquilo C_{1-6}, alquenilo
C_{2-6}, alquinilo C_{2-6}.
8. Un compuesto según la reivindicación 5, en el
que R_{4} es metilo, etilo o COOH.
9. Un compuesto según la reivindicación 5, en el
que R_{3} y R_{4} son H.
10. Un compuesto según la reivindicación 1,
seleccionado de
cis-2-hidroximetil-4-(2'-amino-6'-ciclobutilamino-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
y sus sales farmacéuticamente aceptables,
cis-2-hidroximetil-4-(2'-amino-6'-[1-ácido
carboxílico-ciclopropilamino]-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
y sus sales farmacéuticamente aceptables,
(+)-(2S,4S)-2-hidroximetil-4-(2'-amino-6'-ciclopropilamino-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
al menos 97% libre del enantiómero (-) correspondiente,
(-)-(2R,4R)-2-hidroximetil-4-(2'-amino-6'-ciclobutilamino-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
al menos 97% libre del enantiómero (+) correspondiente,
(+)-(2S,4S)-2-hidroximetil-4-(2'-amino-6'-ciclobutilamino-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
al menos 97% libre del enantiómero (-) correspondiente,
(-)-(2R,4R)-2-hidroximetil-4-(2'-amino-6'-[1-ácido
carboxílico-ciclopropilamino]-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
al menos 97% libre del enantiómero (+) correspondiente, y
(+)-(2S,4S)-2-hidroximetil-4-(2'-amino-6'-[1-ácido
carboxílico-ciclopropilamino]-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
al menos 97% libre del enantiómero (-) correspondiente.
11. Un compuesto según la reivindicación 1, que
es
cis-2-hidroximetil-4-(2'-amino-6'-ciclopropilamino-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
o su sal farmacéuticamente aceptable.
12. Un compuesto según la reivindicación 1, que
es
(-)-(2R,4R)-2-hidroximetil-4-(2'-amino-6'-ciclopropilamino-purin-9'-il)-1,3-dioxolano
al menos 97% libre del enantiómero (+) correspondiente.
13. Una combinación útil para el tratamiento de
infecciones víricas que comprende al menos un compuesto según una
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o sus sales
farmacéuticamente aceptables, que comprende al menos un agente
terapéutico adicional escogido de análogos de nucleósidos;
inhibidores de la transcriptasa inversa no nucleosídicos (NNRTI); o
inhibidores de proteasa.
14. La combinación de la reivindicación 13, en la
que el análogo de nucleósido se escoge de zidovudina, didanosina,
zalcitabina, estavudina o lamivudina.
15. La combinación de la reivindicación 13, en la
que el inhibidor no nucleosídico de la transcriptasa inversa se
escoge de nevirapina, delavirdina o efavirenz.
16. La combinación de la reivindicación 13, en la
que el inhibidor de la proteasa se escoge de indiravir, nelfinavir,
saquinavir o ritonavir.
17. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 12, para uso en terapia médica,
particularmente en el tratamiento de infecciones víricas, tales
como infecciones por VIH o VHB.
18. Uso de un compuesto según una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 12, para la fabricación de un medicamento
para el tratamiento de infecciones víricas, particularmente
infecciones por VIH o VHB.
19. Una formulación farmacéutica que comprende al
menos un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 12, junto
con al menos un vehículo o excipiente farmacéuticamente
aceptable.
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