KR20020013485A - 항바이러스성 뉴클레오시드 유도체 - Google Patents

항바이러스성 뉴클레오시드 유도체 Download PDF

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Abstract

본 발명은 항바이러스제로서 유용한 구조식(Ⅰ) 또는 (Ⅰa)의 뉴클레오시드 유도체를 제공하는 것이다.

Description

항바이러스성 뉴클레오시드 유도체{Antiviral Nucleoside Analogues}
미국에서는 매년 1,200만 명 이상의 성접촉 질병(sexually transmitted diseases, STDs)환자가 새로이 발생하고 있다. 미국에서 상위 10개의 질병 중 5개가 성접촉 질병인 클라미디아(chlamydia), 임질, 매독, 후천성 면역결핍증(AIDS), B형 간염바이러스(hepatitis B virus, HBV) 감염이고, 이중 AIDS와 HBV 감염은 현재 치료법이 없다.
AIDS의 경우, 세계보건기구(WHO)는 2000년까지 전세계에서 4천만 명이 AIDS를 일으키는 바이러스인 인간 면역결핍 바이러스(human immunodeficiency virus, HIV)에 감염될 것이라고 예측하고 있다. 간염은 HIV 감염보다 5배나 더 많은 사람을 감염시킨다. 세계보건기구는 20억 명이 현재 HBV 바이러스에 감염되어 있고 이중 3억5천만 명이 만성감염 상태여서 간 질환으로 인하여 생명이 위독한 상태라고보고하고 있다.
새로운 치료법으로 인하여 AIDS에 의한 사망율이 떨어지고는 있지만 AIDS는 아직도 29세에서 40세 사이의 성인에서 두 번째의 사망원인이 되고 있다. 복합 항-HIV 치료법(combination anti-HIV therapy)이 현재 HIV 감염환자에 대한 표준 치료법이다. 현재 11개의 항-HIV 의약품이 처방에 의해 투여 가능하다. 이러한 항-HIV 의약품은 크게 3개의 카테고리로 분류되는데, 지도부딘(zidovudine), 디다노신(didanosine), 잘시타빈(zalcitabine), 스타부딘(stavudine) 또는 라미부딘 (lamivudine) 등과 같은 뉴클레오시드 유도체; 인디나비어(indinavir), 넬피나비어 (nelfinavir), 사퀴나비어(saquinavir), 리토나비어(ritonavir) 등과 같은 프로테아제 억제제(protease inhibitors); 네비라핀(nevirapine), 델라비르딘 (delavirdine), 에파비렌즈(efavirenz) 등과 같은 비-뉴클레오시드 역전사효소 억제제(non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors, NNRTIs) 등이다. HIV와 비교하여 만성 B형 간염바이러스 감염에 대한 공인된 치료법은 현재 거의 없는 상태로서 인터페론과 라미부딘 정도이다. 기타 현재 임상시험중에 있는 의약품으로 팜시클로비어(famciclovir), 로부카비어(lobucavir), 아데포비어(adefovir) 등이 있다. 그러나 많은 연구에서 대부분의 환자들이 치료 완료 후 다시 재발하고 약물에 대한 내성이 발현되는 문제점을 보고하고 있다.
내성 발현은 최근 HIV와 HBV 감염에 대한 치료에서 주 관심사가 되고 있다. 내성은 보통 치료에 사용되는 의약품이 바이러스 복제를 완전히 차단할 정도로 충분히 효과적인 경우가 아닐 때에 나타난다. 만일 바이러스가 약물이 존재하는 상태에서 결국 번식이 가능하다면 바이러스는 돌연변이로 불리는 구조 변경 기회를 갖게 되고 종래에는 약물이 있는 상태에서 바이러스가 번식이 가능하도록 만들어주는 한 조건을 찾게 된다. 일단 돌연변이가 일어나면, 이 바이러스는 숨어있는 상태에서 성장하고 곧 그 환자에서의 주된 바이러스 균주가 된다. 약물은 이 새로운 균주에 대해 점차 활성이 약해지게 된다. 또한 점증하는 관심사는 교차내성에 관한 것이다. 교차내성은 한 약물에 대한 내성을 유발하는 돌연변이가 또한 다른 약물에 대한 내성을 유발할 때 나타난다. 여러 연구에 따르면, 두 약물을 병용투여하면 단독투여에 비해 하나 또는 두 약물에 대한 내성발현이 지연된다고 입증되고 있다. 또다른 연구는 세 약물 병용투여의 경우 이러한 이점이 더 증가된다는 점을 시사하고 있다. 결론적으로 내성을 예방하거나 최소한 지연시키는 가장 바람직한 방법은 다약제 병용요법(multi-drug combination therapies)이라고 많은 사람들이 믿고 있다. 그러나 의약품의 수가 증가함에 따라 위험이나 약물상호작용 및 독성도 마찬가지로 같이 증가하고 있다.
약물의 효능을 증가시키는 한 가지 방법은 그 약물의 치료제로서의 활성에 기여하는 약동력학적 특성을 개선시키는 방법이다. 약동력학의 과학은 하나의 약제 또는 약물이 생체계에 투여된 후에 생물학적 효과가 나타나는 부위(site)에서 시간에 따라 화합물의 양을 결정하는 요인들에 관해 연구하는 학문이다. 약동력학은 약물의 흡수 분포["생체전위(biotranslocation)"]에 관한 연구, 약물의 체내에서의 화학적 변형["생체변환(biotransformation)"]에 관한 연구, 약물의 체내 저장 및 배출 방법에 관한 연구 등을 포함하고 있다. 장기간의 약물요법에서는 생체내이용율(bioavailability)이 더 중요한 요인인데 이는 그 약물이 흡수되어 혈류에 도달하거나 아니면 다른 경로로 체내의 치료위치에 이용되는 정도에 관한 것이기 때문이다. 생체내이용율은 그 약물이 체액에 용해되는 능력과 직접 관련되어 있다.
(-)-β-D-2,6-디아미노퓨린 디옥솔란[(-)-β-D-2,6-diaminopurine dioxolane (DAPD)]과 (-)-β-D-1,3-디옥솔란 구아닌[(-)-β-D-1,3-dioxolane guanine (DXG)]은 다양한 세포계에서 HIV-1에 대해 활성이 높고 라미부딘과의 교차내성이 작으며 독성이 낮다고 보고되어 있다. 그러나, 이러한 약물은 약동력학적 특성이 나쁘고 이 점은 개선이 필요한 점이다. 따라서 HIV 및 HBV 감염 환자의 치료에 약동력학적 특성이 개선된 약물이 있다면 유용할 것이다.
본 발명은 항바이러스성 제제로 유용한 신규한 퓨린 뉴클레오시드 유도체에 관한 것이다. 특히, 이 발명은 개선된 약동력학적 특성을 가진 퓨린 뉴클레오시드에 관한 것이다.
도 1 은 미토콘드리아 DNA 독성시험에 관한 그래프이다.
하나의 측면(aspect)에서, 본 발명은 하기 화학식(I)로 표기된 신규한 퓨린 시스-뉴클레오시드 화합물 및 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 제공하고 있다.
여기서:
n은 1 또는 2이고;
R 4 는 H, COOH, CONH2, OH, SH, NH2, NO2, C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, 할로겐,R a 가 C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐인 COR a 또는R b 가 C1-6알킬, C2-6알케닐 또는 C2-6알키닐인 COOR b 에서 선택되며;
R 3 는 H 또는 C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐이고;
X는 H, 모노포스페이트, 디포스페이트, 트리포스페이트, 카르보닐로서 C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C6-10아릴 치환된 카르보닐, 또는에서 선택되며, 여기서 각Rc는 따로따로 H, C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐 또는 하이드록시 보호그룹으로부터 선택되고; 상기 뉴클레오시드는 (-) 거울상이성질체, (+) 거울상이성질체 및 라세믹 혼합물을 포함한, 그들의 혼합물의 형태로 존재한다.
본 발명의 화합물들은 치료에 유용한데, 특히 항바이러스제로서 치료에 유용하다.
다른 측면에서, 본 발명의 한 화합물 또는 조성의 치료상 유효량을 투여하여 환자를 치료함에 있어서 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하고 있다.
다른 측면에서, 본 발명의 화합물이 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제로 구성된 약제학적 제제(formulation)를 제공하고 있다.
또한 다른 측면에서, 화학식 I에 따른 최소한 하나의 화합물과, 뉴클레오시드 유도체; 비-뉴클레오시드 역전사효소 억제제(non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors, NNRTIs) 또는 프로테아제 억제제 중에서 선택된 최소한 하나의 치료제로 구성된 복합제(combination)를 투여하여 환자를 치료함에 있어서 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하고 있다.
또한 다른 측면에서, 화학식 I에 따른 최소한 하나의 화합물과, 뉴클레오시드 유도체; 비-뉴클레오시드 역전사효소 억제제(non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors, NNRTIs) 또는 프로테아제 억제제 중에서 선택된 최소한 하나의 치료제; 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제로 구성된 약제학적 제제 (formulation)를 제공하고 있다.
발명의 또다른 측면은 화학식 I에 따른 하나의 화합물을 바이러스 감염의 치료를 위한 의약품의 제조에 사용하는 용도이다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물들이 하기 구체태양에서 단독으로 또는 병용으로 사용되는 예들을 구성하고 있다.
하나의 구체태양에서,X는 H이다.
또한,X는이고, 여기서 각Rc는 따로따로 H, C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐 또는 하이드록시 보호그룹으로부터 선택되는데 보호기는 S-아실치오에틸 에스테르, 아실옥시메틸 에스테르 또는 알킬 메틸 카보네이트로부터 선택된다. 추가적인 구체태양에서,X는이고, 여기서 각Rc는 따로따로 하이드록시 보호그룹인데 보호기는 아세틸-2-치오에틸 에스테르, 피발로일옥시메틸 에스테르 또는 이소프로필옥시카보닐옥시메틸 에스테르로부터 선택된다.
하나의 구체태양에서, n은 1이다.
추가적인 구체태양에서,R 3 는 H 또는 메틸이다.
추가적인 구체태양에서,R 3 는 H이다.
추가적인 구체태양에서,R 4 는 H, COOH, CONH2, C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐 또는R b 가 C1-6알킬, C2-6알케닐 또는 C2-6알키닐인 COOR b 에서 선택된다.
추가적인 구체태양에서,R 4 는 H, COOH 또는 C1-6알킬이다.
추가적인 구체태양에서,R 4 는 H, COOH, 메틸 또는 에틸이다.
추가적인 구체태양에서,R 4 는 메틸 또는 에틸이다.
또다른 구체태양에서,R 4 는 COOH이다.
추가적인 구체태양에서,R 4 는 H이다.
추가적인 구체태양에서,R 3 는 H 또는 메틸이고R 4 는 H이다.
추가적인 구체태양에서,R 4 및R 3 는 H이다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물들은 하기 화학식(Ia) 및 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 나타내고, 여기서 각X,R 3 ,R 4 는 상기 정의와 같다.
당업자는 화학식 (I) 및 (Ia)에는 일반식 (I) 및 (Ia)에 별표(*)로 표기되어있는 최소한 두 개의 키랄 중심이 있음을 알 수 있다. 따라서, 화학식 (I) 및 (Ia)의 화합물은 두 개의 서로 다른 광학 이성질체로 존재한다 (즉, (+) 또는 (-) 거울상이성질체 또는 β-L 및 β-D). 모든 그러한 거울상이성질체 및 라세믹 혼합물을 포함한 혼합물은 발명의 범위안에 포함된다. 하나의 광학 이성질체 또는 거울상이성질체는 키랄 HPLC, 효소 분할법 및 키랄 보조물(chiral auxiliary) 등과 같은 공지된 방법에 의해 얻어지거나 입체선택적으로 합성될 수 있다.
본 발명에 의해서, 개선된 약동력학적 특성을 가진 화합물이 제공된다.
본 발명의 하나의 구체태양에 의해서, 개선된 생체내이용율을 가진 화합물이 제공된다.
본 발명의 추가적인 구체태양에 의해서, 화학식(I) 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료상 유효량을 투여하여 환자를 치료함에 있어서 바이러스 감염을 치료하는 방법이 제공된다.
본 발명의 또다른 구체태양에 의해서, 화학식(I) 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료상 유효량을 투여하여 환자를 치료함에 있어서 레트로바이러스 감염(retroviral infection)을 치료하는 방법이 제공된다.
본 발명의 추가적인 구체태양에 의해서, 화학식(I) 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료상 유효량을 투여하여 HIV 바이러스 감염 환자를 치료하는 방법이 제공된다.
본 발명의 추가적인 구체태양에 의해서, 화학식(I) 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료상 유효량을 투여하여 HBV 바이러스 감염 환자를 치료하는 방법이 제공된다.
본 발명에 따른 화합물들은 하기 화합물들을 포함한다:
화합물 A시스-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로프로필아미노-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란
화합물 B시스-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로부틸아미노-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란
화합물 C시스-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-[1-카르복실산-시클로프로필아미노]-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란
추가적인 구체태양에서, 본 발명의 화합물들은 하기 화합물들을 포함한다:
화합물 A(-)(-)-(2R,4R)-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로프로필아미노-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란
화합물 B(-)(-)-(2R,4R)-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로부틸아미노-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란
화합물 C(-)(-)-(2R,4R)-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-[1-카르복실산-시클로프로필아미노]-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물은 (+) 거울상 이성질체의 형태로 존재하는데, 대응하는 (-) 거울상이성질체가 최소한 95% 존재하지 않는다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물은 (+) 거울상 이성질체의 형태로 존재하는데, 대응하는 (-) 거울상이성질체가 최소한 97% 존재하지 않는다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물은 (+) 거울상 이성질체의 형태로 존재하는데, 대응하는 (-) 거울상이성질체가 최소한 99% 존재하지 않는다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물은 (-) 거울상 이성질체의 형태로 존재하는데, 대응하는 (+) 거울상이성질체가 최소한 95% 존재하지 않는다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물은 (-) 거울상 이성질체의 형태로 존재하는데, 대응하는 (+) 거울상이성질체가 최소한 97% 존재하지 않는다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물은 (-) 거울상 이성질체의 형태로 존재하는데, 대응하는 (+) 거울상이성질체가 최소한 99% 존재하지 않는다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물은화합물 A이다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물은화합물 A (-)다.
또한 본 발명의 약제학적으로 허용가능한 염이 제공된다. 일반식 (I) 및 (Ia)화합물의 약제학적으로 허용가능한 염이라 함은 약제학적으로 허용가능한 무기 및 유기 산 및 염기로부터 유도된 것을 의미한다. 적당한 산의 예로서는 염산, 브롬산, 황산, 질산, 과염소산, 푸마르산(fumaric acid), 말레산(maleic acid), 인산, 글리콜산(glycollic acid), 젖산, 살리실산, 호박산(succinic acid), 톨루엔-p-술폰산, 주석산, 초산, 구연산, 메탄술폰산, 개미산, 벤조산, 말론산, 나프탈렌-2-술폰산 및 벤젠술폰산이다. 옥살산 등과 같은 기타 산은 약제학적으로 허용가능한 산은 아니지만 본 발명의 화합물 및 그 약제학적으로 허용가능한 산부가염을 얻는 과정의 중간체로서 유용하게 사용될 수 있다.
적당한 염기로부터 유도된 염은 알칼리금속(예를 들어 나트륨), 알칼리토금속 (예를 들어 마그네슘), 암모늄 및 NR4 +(여기서 R은 C1-4알킬이다)염이다.
이후 본 발명에 따른 화합물에 대한 참조는 일반식 (I) 및 (Ia)화합물 및 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
별도로 정의되지 않는 한, 여기서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속해있는 분야의 당업자에 의해 통상 이해되는 것과 같은 의미를 가진다. 여기서 언급되는 모든 발간물, 특허 출원서, 특허 및 기타 참고문헌은 원본 전부의 참고문헌에 포함된다. 해석상의 상충이 있을 경우, 본 명세서가 우선이고 정의도 여기에 포함된다. 또한 여러 물질재료, 방법 및 실시예는 단지 예를 들기 위할 뿐이고 그것에 한정하고자 함이 아니다.
본 출원서에서 사용되는 용어 "알킬"은 치환되어 있지 않거나 치환된 (할로겐, 니트로, CONH2, COOH, O-C1-6알킬, O-C2-6알케닐, O-C2-6알키닐, 하이드록실, 아미노 또는 COOQ로 치환되고, 여기서 Q는 C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐이다) 직쇄, 측쇄 또는 고리 탄화수소 부분을 나타낸다 (예를 들어 이소프로필, 에틸, 플루오로헥실 또는 시클로프로필). 용어 "알킬"은 또한 하나 또는 그 이상의 수소 원자가 하나의 할로겐, 더 바람직하게는 그 할로겐이 플루오로인 알킬을 포함하는 것을 의미한다 (예를 들어 CF3- 또는 CF3CH2-).
용어중 "알케닐" 및 "알키닐"은 최소한 하나의 불포화기(예를 들어, 알릴)를 함유하는 알킬을 나타낸다.
용어중 "하이드록시 보호그룹"은 유기화학 분야에서 공지된 용어이다. 그러한 보호그룹은 T. Greene저Protective Groups In Organic Synthesis(John Wiley & Sons, 1981)를 참조할 수 있다. 하이드록시 보호그룹의 예는 아세틸-2-치오에틸 에스테르, 피발로일옥시메틸 에스테르 및 이소프로필옥시카보닐옥시메틸 에스테르를 포함하는데 여기에 한정되는 것은 아니다.
황 원자가 존재할 경우, 황 원자는 S, SO 또는 SO2등의 다양한 산화상태에 있을 수 있다. 모든 그러한 산화상태는 본 발명의 범위 내에 있다.
여기서 할로겐은 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도, 예를 들어 플루오로를 의미한다.
본 발명의 화합물이 치료에 사용될 필요량은 선정된 화합물의 특성에 따라 달라질 뿐만 아니라 투여경로, 치료가 요구되는 조건의 특성 및 환자의 나이와 상태에 따라 달라질 것이라 인정되고 결국 의사나 수의사의 판단에 따르게 될 것이다. 그러나 일반적으로 적당한 용량은 체중 kg당 1일 약 0.1 내지 750 mg의 범위가 될 것이고, 바람직하게는 0.5 내지 60 mg/kg/일, 가장 바람직하게는 1 내지 20 mg/kg/일의 범위가 될 것이다.
바람직한 용량은 편의에 따라 단일 용량으로 표기될 수도 있고 또는 적당한 간격, 예를 들어 1일 2, 3, 4회 또는 그이상의 용량으로 투여되는 분할용량으로 표기될 수도 있다.
화합물은 편의에 따라 예를 들어 10 내지 1500 mg을 함유하는 단위용량 형태로 투여되고, 더 바람직하게는 단위용량 형태당 활성성분 20 내지 1000 mg, 가장바람직하게는 50 내지 700 mg으로 투여된다.
이상적으로는 활성성분은 그 최대 혈장농도가 약 1 내지 약 75 μM을 유지하도록 투여되어야 하고, 바람직하게는 약 2 내지 50 μM, 가장 바람직하게는 약 3 내지 약 30㎛의 농도가 되도록 투여되어야 한다. 이는 예를 들어, 활성성분의 0.1 내지 5% 용액, 선택적으로 식염수 용액을 정맥주사하거나 또는 활성성분의 약 1 내지 약 500 mg을 함유하는 정제 형태(bolus)로 경구투여하여 달성할 수 있다. 원하는 혈중농도는 활성성분의 약 0.01 내지 약 5.0 mg/kg/시간을 공급하는 연속주입 (continuous infusion)이나 약 0.4 내지 약 15 mg/kg을 함유하는 간헐주입 (intermittent infusion)에 의해서도 달성할 수 있다.
치료에 사용하기 위해서 본 발명의 화합물을 원료화합물로서 투여하는 것이 가능하기도 하지만 더 바람직하게는 활성성분을 약제학적 처방에 의해 투여한다. 따라서 본 발명은 이에 더하여 화학식 (I) 또는 (Ia)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 그 염으로 구성되어 있고 하나 또는 그 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체 및 선택적으로 기타 치료적 및/또는 예방적 성분과 같이 구성된 약제학적 제제를 제공하고 있다. 담체는 제제의 다른 성분에 유해하지 않고 양립할 수 있어야 하는 점에서 "허용가능"해야 한다.
약제학적 제제는 경구, 직장, 코, 국소(버칼 또는 설하 포함), 경피, 질 또는 비경구적(근육내, 피하 및 정맥내) 투여에 적당하거나 흡입 또는 기체주입에 의한 투여에 적당한 형태를 포함한다.
본 발명의 제제는 분리행 용량단위로 편리하게 적절히 제형화할 수 있으며,약학분야의 널리 알려진 기술로 제조될수 있다. 활성화합물을 액체담체와 연합하던가 담체를 분할하던가 또는 둘다의 모든 공정을 포함하며, 다음 필요하다면 제품을 바라는 제형의 형태로 할수 있다.
경구투여에 적당한 약제학적 제제는 유효성분의 예비결정량을 캅셀제, 카세트제(cachets)또는 정제와 같은 분리형 단위로서 편리하게 제형화할수 있으며; 분말 또는 과립제; 액제; 현탁제 또는 에멀젼으로 할수 있다. 활성성분은 또한 거환(bolus), 연약(electuary)또는 페이스트(paste)로서 존재할 수 있다.
경구투여용 정제와 캅셀제는 결합제, 충진제, 활제, 붕해제 또는 습윤제와 같은 통상의 부형제를 포함할 수 있다. 정제는 이분야에서 잘 알려진 방법에 따라 코팅될 수 있다. 경구액제로, 예를들면 수용액 또는 유성현탁액, 액제, 에물젼, 시럽 또는 에릭셔의 제형으로 제제화할 수 있으며, 사용전 물이나 다른 적당한 부형제(Vehicle)로 구성될 수 있는 건조제품으로 할수 있다. 이와 같은 액제는 현탁화제, 유화제, 비-수용성 부형제(Vehicle)(식용유를 포함한다), 또는 보전제와 같은 관용의 첨가제를 포함할 수 있다.
본 발명의 화합물은 비경구투여를 위한 제형으로 할수 있고(예를 들면, 주사제로, 거환주사 또는 연속주입), 앰플, 프리필드시린지, 소용량 주입제에 단일 용량형태로 존재하거나 보존제가 첨가된 대용량 콘테이너제로 존재할 수 있다. 조성물은 현탁제, 액제 또는 유상에물젼 또는 수용성 비히클과 같은 형태일수 있으며, 나아가 현탁화제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 제형형성제를 포함할수 있다. 변형된 형태로 주성분이 분말형태가 있을수 있으며, 적당한 비히클, 예를들면 멸균, 파이로젠이 없는 정제수와 사용전 구성될수 있는 무균고체의 무균적 분리 또는 용액을 동결 건조시켜 얻는다.
피부에 국소적인 투여를 위하여 본 발명의 화합물은 연고, 크림 또는 로숀또는 트랜스더말패취로 제제화 될수 있다. 이와같은 트랜스더말 패취는, 리나룰(linalool), 카바크롤(carvacrol), 치몰(thymol), 사이트랄(citral), 멘톨(menthol) 및 타네톨(tanethol)과 같은 침투강화제를 포함할 수 있다. 연고나 크림은, 예를들면, 적당한 농후제 및/또는 겔화제가 첨가된 수용성 또는 유성 베이스로 제형화 될수 있다. 로숀은 수용성 또는 유성베이스로 제형화 할수 있으며, 일반적으로 하나이상의 유화제, 안정화제, 분산제, 현탁화제, 농후제 또는 색소를 포함한다.
입에 국소 투여적용을 위한 제제로는, 향베이스로 통상 슈크로스와 아카시아 또는 트라가칸트중에 활성성분을 자는 로젠즈(lozenges); 젤라틴과 글리세린 또는 슈크로스 및 아카시아와 같은 불활성 베이중에 활성성분을 갖는 파스틸 (pastilles); 및 적당한 액체담체중에 활성성분을 갖는 구강세척제(mouthwashes)가 포함된다.
담체를 고체로한 직장투여용 약제학적 제제로는 단일용량의 좌제가 가장 바람직하다. 적당한 담체로는 코코아 버터 또는 이 분야에서 관용되는 다른 재료를 포함할수 있으며, 좌제는 활성화합물과 연화 또는 용융된 담체를 혼합하고 냉각시킨후 몰드에서 형태를 주어 편리하게 형성될수 있다.
질투여에 적당한 제형으로는 페사리 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 폼 또는 스프레이제제가 있으며 활성성분과 적당하다고 이 분야에서 알려진 담체를 부가적으로 함유시킨다.
비강투여를 위해서는 본 발명의 화합물을 액체스프레이 또는 분산형분말 또는 드롭형태로 사용할 수 있다. 드롭은 역시 하나이상의 분산제, 가용화제 또는 현탁화제로 구성된 숭용성 또는 비-수용성 베이스로 제형화 할수 있다. 액상스프레이는 가압된팩으로 편리하게 투여될 수 있다.
흡입투여를 위해서는 본 발명에 따른 화합물을 에어로졸 스프레이 할수 잇는 공기 흡입기(insufflater), 분무기(mublizer) 또는 가압팩(pressurized pack) 기타 편리한 장치로 투여될수 있다. 가압팩은 디클로로 디플루로오메탄, 트리클로로 플루오로메탄, 디클로테트라플루오로메탄, 이산화탄소 또는 적당한 가스를 적당한 분무제(propellant)로 함유할 수 있다. 가압된 에어로졸의 경우에는 투여용량유니트를 정하여진 량을 투여하기위하여 밸브를 갖게하여 정할 수 있다.
다르게는, 흡입(inhalation)또는 통기(insufflation) 투여를 위하여 본 발명의 화합물은 건조분말 조성물 형태를 갖을 수 있으며, 예를들면 활성화합물과 유당 또는 전분과 같은 적당한 분말 기제를 혼합한 혼합분말 형태로 할수 있다. 분말조성물은 예를들면 캅셀, 카트리지 또는, 예를 들면 흡입기(inhalator) 또는 공기 흡압기(insufflator)의 부가로 분말로 투여될수 있는 젤라틴 또는 브리스터팩중에 단일용량형태로 존재한다. 필요하다면, 상기 전술한 제형을 활성성분의 지속방출(sustatined release)을 위한 제형에도 적용될수 있다.
본 발명의 화합물은 또한 기타 항바이러스 제제와 병용(combination)으로 사용될 수 있다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 병용요법은 하기 구체태양이 독립적으로 또는 병용으로 사용되는 예들을 구성하고 있다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물들은 뉴클레오시드 유도체, NNRTI 또는 프로테아제 억제제에서 선택된 최소한 하나의 기타 항바이러스 제제와 같이 적용될 수 있다.
하나의 구체태양에서, 뉴클레오시드 유도체는 1,3-옥사티올란 유도체이다.
추가적인 구체태양에서, 1,3-옥사티올란 유도체는 라미부딘, 코비라실 (coviracil) 또는 2-하이드록시메틸-4-(시토신-1'-일)-1,3-옥사티올란이다.
추가적인 구체태양에서, 1,3-옥사티올란 유도체는 2-하이드록시메틸-4-(시토신-1'-일)-1,3-옥사티올란이다.
추가적인 구체태양에서, 1,3-옥사티올란 유도체는 2R-하이드록시메틸-4R-(시토신 -1'-일)-1,3-옥사티올란이다.
추가적인 구체태양에서, 1,3-옥사티올란 유도체는 2S-하이드록시메틸-4S-(시토신-1'-일)-1,3-옥사티올란이다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물들은 지도부딘, 디다노신, 잘시타빈, 스타부딘, 라미부딘, 네비라핀, 델라비르딘, 에파비렌즈, 인디나비어, 넬피나비어, 사퀴나비어 또는 리토나비어 중에서 선택된 최소한 하나의 기타 항바이러스 제제와 같이 적용될 수 있다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물들은 네비라핀, 에파비렌즈, 지도부딘, 스타부딘 또는 라미부딘 중에서 선택된 최소한 하나의 기타 항바이러스 제제와 같이 적용될 수 있다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물들은 에파비렌즈, 지도부딘, 스타부딘 또는 라미부딘 중에서 선택된 최소한 하나의 기타 항바이러스 제제와 같이 적용될 수 있다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물들은 에파비렌즈, 지도부딘 또는 라미부딘 중에서 선택된 최소한 하나의 기타 항바이러스 제제와 같이 적용될 수 있다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물들은 에파비렌즈, 지도부딘 또는 라미부딘과 같이 적용된다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물들은 네비라핀, 지도부딘, 스타부딘 또는 라미부딘 중에서 선택된 최소한 하나의 기타 항바이러스 제제와 같이 적용될 수 있다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물들은 네비라핀, 지도부딘, 스타부딘 또는 라미부딘과 같이 적용된다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물들은 지도부딘, 스타부딘 또는 라미부딘 중에서 선택된 최소한 하나의 기타 항바이러스 제제와 같이 적용될 수 있다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물들은 지도부딘, 스타부딘 또는 라미부딘과 같이 적용된다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물들은 지도부딘과 같이 적용될 수 있다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물들은 스타부딘과 같이 적용될 수 있다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물들은 라미부딘과 같이 적용될 수 있다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물들은 네비라핀과 같이 적용될 수 있다.
하나의 구체태양에서, 본 발명의 화합물들은 에파비렌즈와 같이 적용될 수 있다.
상기 언급된 병용투여(combinations)는 약제학적 제제의 형태로 사용되도록 제시될 수 있고 따라서 상기 정의된 바와 같이 약제학적으로 허용가능한 담체와 같이 병용투여를 위한 약제학적 제제는 본 발명의 추가적인 내용이다.
그러한 병용투여의 각각의 성분은 분리 또는 복합된 약제학적 제형으로하여, 순차적으로 투여되거나 또는 동시에 투여될 수 있다.
화합물 (I) 및 (Ia) 또는 그 약제학적으로 허용가능한 염이 동일한 바이러스에 대해 효과가 있는 두 번째 치료제(second therapeutic agent)와 병용으로 사용될 때는 각 화합물의 용량은 그 화합물이 단독으로 사용될 때와 비교하여 동일하거나 또는 다를 수 있다. 적당한 용량은 당업자에 의해 용이하게 적용될 수 있다.
본 발명의 화합물과 두 번째 치료제 사이의 비율은 당업자에 의해 용이하게 적용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물 : 두 번째 치료제 비율이 약 1:1 내지 약 1:50이 사용될 수 있다. 추가적인 구체태양에서, 본 발명의 화합물 : 두 번째 치료제 비율이 약 1:1 내지 약 1:30이 사용될 수 있다. 추가적인 구체태양에서, 본 발명의 화합물 : 두 번째 치료제 비율이 약 1:1 내지 약 1:20이 사용될 수 있다. 추가적인 구체태양에서, 본 발명의 화합물 : 두 번째 치료제 비율이 약 1:1 내지 약 1:15가 사용될 수 있다. 추가적인 구체태양에서, 본 발명의 화합물 : 두 번째 치료제 비율이 약 1:1 내지 약 1:10이 사용될 수 있다. 추가적인 구체태양에서, 본 발명의 화합물 : 두 번째 치료제 비율이 약 1:1 내지 약 1:5가 사용될 수 있다. 추가적인 구체태양에서, 본 발명의 화합물 : 두 번째 치료제 비율이 약 1:1 내지 약 1:3이 사용될 수 있다. 추가적인 치료제가 추가된다면 비율은 그에 따라 조정될 것이다.
본 발명의 화합물들은 다음과 같이 제조될 수 있다.
하기 실시예들은 본 발명의 다양한 구체실시예를 설명하기 위해서 제공되어 있고 범위를 한정하고자 하는 것이 아니다.
Scheme 1.
목표 화합물은 상기 Scheme에 따라 제조될 수 있다:
a 단계: 2-벤조일옥시-아세트알데히드1을 케탈교환반응(transketalisation) 조건에서 파라-톨루엔 술폰산(para-toluene sulfonic acid, pTSA) 존재하에 메틸(R)-(+)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-카르복실에이트2와 반응시켜 2-벤조일옥시메틸-1,3-디옥솔란-4-카르복실메틸 에스테르3을 시스 이성질체가 3:1의 비율로 더 많이 존재하는 시스 및 트란스 이성질체의 혼합물로 얻었다.
b 단계: 카르복실산 메틸 에스테르3을 수산화 리튬을 사용하여 선택적으로 가수분해시켜 상응하는 산 유도체4a및4b를 얻었다. 이 혼합물을 플래시 크로마토그라피에 의해 분리하였고, 각 이성질체는 따로따로 다음 반응에 사용되었다.
c 단계:4a의 카르복실 작용기는 사초산납(lead tetraacetate)으로 처리하여 아세톡시 이탈기로 변환되었다.
d 단계: (2R)-2-벤조일옥시메틸-1,3-디옥솔란-4-아세톡시4a는 활성화제로서 트리메틸실릴 트리플루오로메틸술포네이트(trimethylsilyl trifluoromethyl- sulfonate, TMSTf)를 사용하여 실릴화된 2-아미노-6-클로로퓨린과 결합시켜 시스 이성질체가 1.2:1의 비율로 더 많이 존재하는 뉴클레오시드 유도체6a및6b의 시스 및 트란스 이성질체의 혼합물을 얻었다. 이 혼합물을 플래시 크로마토그라피에 의해 분리하였고, 각 이성질체는 따로따로 다음 반응에 사용되었다.
e 단계:(-)-(2R,4R)-2-벤조일옥시메틸-4-(2'-아미노-6'-클로로-퓨린-9'-일)- 1,3-디옥솔란6a를 에탄올 용액에서 시클로프로필아민과 반응시켜 상응하는 (-)-(2R,4R)-2-벤조일옥시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로프로필아미노-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란7을 좋은 수율로 얻었다.
f 단계: 벤조일 보호기의 제거를 위해 (-)-(2R,4R)-2-벤조일옥시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로프로필아미노-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란7을 메탄올성 암모니아와 반응시켜 목적물인 (-)-(2R,4R)-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로프로필아미노-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란A를 좋은 수율로 얻었다.
실시예 1.
메틸2-(R,S)-벤조일옥시메틸-1,3-디옥솔란-4-(R)-카르복실 에이트.
메틸-2,3-O-이소프로필리덴-D-글리세레이트(Fluka: cat # 159449) (9.76 g, 60.9 mmol, 1 당량)와 벤조일옥시아세트알데히드(10 g, 60.9 mmol, 1 당량)의 톨루엔(20ml) 용액에 p-톨루엔술폰산(460 mg, 2.4 mmol, 4 mol %)을 80℃에서 가하였다. 반응 플라스크를 한 시간동안 진공으로 유지하고 이 때 증류물을 얻었다 (80-85℃). 잔사를 상온으로 냉각하고 실리카겔 컬럼 크로마토그라피에 의해 헥산/에틸아세테이트를 전개액으로 사용하여 정제하여 표제 화합물 13.2 g (81%)을 시스 이성질체가 3:1의 비율로 더 많이 존재하는 시스 및 트란스 이성질체의 혼합물로 얻었다.
시스 이성질체:
트란스 이성질체:
실시예 2.
(2R,4R)-2-벤조일옥시메틸-1,3-디옥솔란-4-카르복실산
(2S,4R)-2-벤조일옥시메틸-1,3-디옥솔란-4-카르복실산
메틸-2-(R,S)-벤조일옥시메틸-1,3-디옥솔란-4-(R)-카르복실에이트(411 g, 1.54 mmol, 1 당량, 시스 및 트란스 이성질체의 2:1 혼합물)의 THF와 물의 1:1 혼합물 용액에 반응플라스크 온도를 30℃ 이하로 유지하면서 수산화 리튬(64.8 g, 1.54 mols, 1 당량)을 30 분에 걸쳐 조금씩 가하였다. 90 분 후에 THF를 진공으로 제거하고 남은 수용액에 30%(w/w) 황산을 적가하여 pH 2.5-3.2로 산성화하였다. 이렇게 얻은 용액을 디클로로메탄(4X400 ml)으로 추출하였다. 유기층을 모두 합하여 포화식염수로 세척하고 황산나트륨에서 건조한 다음 농축하여 380 g의 검은색 오일을 얻었다. 이성질체들을 실리카겔 컬럼 크로마토그라피에 의해 2% 초산/디클로로메탄을 전개액으로 사용하여 분리하여 시스 이성질체 220 g(56.5%)과 트란스 이성질체 116 g(30%)을 얻었다. 각 이성질체는 따로따로 다음 반응에 사용되었다.
시스 이성질체:
(2R,4R)-2-벤조일옥시메틸-1,3-디옥솔란-4-카르복실산
트란스 이성질체:
(2S,4R)-2-벤조일옥시메틸-1,3-디옥솔란-4-카르복실산
실시예 3.
(2R)-2-벤조일옥시메틸-4-(R,S)-아세톡시-1,3-디옥솔란
(2R,4R)-2-벤조일옥시메틸-1,3-디옥솔란-4-카르복실산(130 g, 0.515 moles, 1 당량)과 피리딘(60 ml, 0.741 moles, 1.44 당량)의 아세토니트릴 용액에 사초산납(함량 95%, 300 g, 0.678 moles, 1.25 당량)을 4℃에서 20 분에 걸쳐 가하였다.반응 혼합물을 18 시간 상온에서 교반하였다. 무기물을 여과하여 제거하고, 여액을 포화 중탄산나트륨 용액(2 L)에 부은 다음 고체 중탄산나트륨을 가하였다 (pH = 7-8). 유기층을 분리하고 물층을 에틸아세테이트(3X400 ml)로 추출하였다. 유기층을 모아서 농축하고 실리카겔 컬럼 크로마토그라피에 의해 헥산/에틸아세테이트를 전개액으로 사용하여 정제하여 표제 화합물 93.5 g (68%)을 시스 및 트란스 이성질체의 2:1 혼합물로 얻었다. 이 혼합물을 다음 반응에 사용하였다.
시스/트란스 이성질체:
실시예 4.
(2R,4R) 및 (2R,4S)-2-벤조일옥시메틸-4-(2'-아미노-6'-클로로-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란
2-아미노-6-클로로-퓨린(4.15 g, 1.3 당량)과 황산암모늄 100 mg의 헥사메틸디실라잔(hexamethyldisilazane, HMDS) 용액 50 ml를 3 시간동안 환류시킨 후 투명한 용액을 진공 증류하여 건조하였다. 잔사를 무수 1,2-디클로로에탄 100 ml에 용해시켰다. (2R)-2-벤조일옥시메틸-4-아세톡시-1,3-디옥솔란(5 g)을 벤젠(2X30 ml)과 두 번 공증류하여 건조시킨 후 무수 1,2-디클로로에탄 100 ml에 용해시켰다. 이 용액을 실릴화된 2-아미노-6-클로로-퓨린 용액이 담긴 반응 플라스크에 옮겨 넣었다. 이 혼합액을 60℃로 미리 가열된 기름중탕에서 15 분간 가열하고 트리메틸실릴 트리플레이트(trimethylsilyl triflate, TMS-Tf, 3.8 ml, 1.1 당량)를 가하였다. 이 혼합물을 질소 하에서 3 시간동안 환류 가열했을 때 용액은 갈색이 되었다. TLC(당은 헥산:EtOAc 7:3, 생성물은 헥산:EtOAc 1:4) 결과 당은 사라지고 시스 및 트란스 생성물에 해당하는 두 개의 완전히 분리된 반점이 나타나 반응이 완결되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 상온으로 냉각하고 포화 중탄산나트륨 용액(100 ml)에 부은 다음 10 분간 교반하였다. 유기층을 분리하고 물층을 메틸렌 클로라이드(2X50 ml)로 두 번 추출하였다. 유기층을 모아서 물과 포화식염수로 씻은 다음 MgSO4에서 통상적인 방법으로 건조하고 용매를 증류 건조시켜 포말(7 g)을 얻었다. 미정제물의 H-NMR은 반응이 깨끗이 완결되었음을 보여주었고 시스 이성질체가 1.2:1의 비율로 더 많이 존재하는 시스 및 트란스 생성물을 나타내었다. 미정제 생성물을 실리카겔에서 헥산/에틸 아세테이트를 전개액으로 7:3, 1:1, 2:3의 조성변화를 사용하여 정제하여 포말 형태의 트란스 이성질체 2.5 g(낮은 극성, α-아노머, EtOH에서 결정화), 포말 형태의 시스 이성질체 3 g(높은 극성, β-아노머, EtOH에서 결정화) 및 시스 이성질체가 더 많이 존재하는 포말(foam) 형태의 시스 및 트란스 혼합물 0.3 g을 총 82%의 수율로 얻었다.
트란스 이성질체:
(+)-(2R,4S)-2-벤조일옥시메틸-4-(2'-아미노-6'-클로로-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란
시스 이성질체:
(-)-(2R,4R)-2-벤조일옥시메틸-4-(2'-아미노-6'-클로로-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란
실시예 5.
(-)-(2R,4R)-2-벤조일옥시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로프로필아미노-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란
(-)-(2R,4R)-2-벤조일옥시메틸-4-(2'-아미노-6'-클로로-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란(600 mg)의 에탄올 용액(30 ml)에 시클로프로필아민(2 ml, 18 당량)을 가하였다. 혼합물을 18 시간 동안 약하게 환류 가열(80-85℃)한 다음 상온으로 냉각하였다. 용매를 진공 증류하여 건조하였다. 잔사를 100 ml의 메틸렌 클로라이드에 용해시키고, 포화 중탄산나트륨 용액, 물, 포화식염수로 씻은 다음 MgSO4에서 건조하였다. 용매를 진공에서 제거하고 잔사를 실리카겔에서 EtOAc:MeOH를 전개액으로 사용하여 정제하여 포말(foam) 형태의 목적물을 80% 수율(506 mg)로 얻었다.
실시예 6.
(-)-(2R,4R)-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로프로필아미노-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란 (화합물 A)
(-)-(2R,4R)-2-벤조일옥시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로프로필아미노-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란(480 mg)을 30 ml의 포화 메탄올성 암모니아에 녹이고 상온에서 18 시간 교반하였다. 혼합물을 진공 증류하여 건조하였다. 잔사를 20 ml의 물에 용해시키고 10 ml의 메틸렌 클로라이드로 두 번 씻은 다음 동결건조하여 283 mg의 백색 고체를 80%의 수율로 얻었다.
실시예 7.
(-)-(2R,4R)-2-벤조일옥시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로부틸아미노-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란
(-)-(2R,4R)-2-벤조일옥시메틸-4-(2'-아미노-6'-클로로-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란(250 mg)의 에탄올 용액(25 ml)에 시클로부틸아민(0.17 ml, 3 당량)을 가하였다. 혼합물을 18 시간 동안 약하게 환류 가열(80-85℃)한 다음 상온으로 냉각하였다. 용매를 진공 증류하여 건조하였다. 잔사를 100 ml의 메틸렌 클로라이드에 용해시키고, 포화 중탄산나트륨 용액, 물, 포화식염수로 씻은 다음 MgSO4에서 건조하였다. 용매를 진공에서 제거하고 잔사를 실리카겔에서 95:5의 EtOAc:MeOH를 전개액으로 사용하여 정제하여 포말(foam) 형태의 목적물을 84% 수율(230 mg)로 얻었다.
실시예 8.
(-)-(2R,4R)-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로부틸아미노-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란 (화합물 B)
(-)-(2R,4R)-2-벤조일옥시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로부틸아미노-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란(214 mg)을 20 ml의 포화 메탄올성 암모니아에 녹이고 상온에서 18 시간 교반하였다. 혼합물을 진공 증류하여 건조하였다. 잔사를 20 ml의 물에 용해시키고 10 ml의 에테르로 두 번 씻은 다음 에탄올과의 공증류에 의해 건조시켜 154 mg의 포말(foam) 형태 순수생성물을 96%의 수율로 얻었다.
실시예 9.
(-)-(2R,4R)-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-{1-카르복실산-시클로프로필아미노}-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란(화합물 C)
(-)-(2R,4R)-2-벤조일옥시메틸-4-(2'-아미노-6'-클로로-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란(210 mg)의 에탄올 용액(30 ml)에 1-아미노-1-시클로프로판카르복실산(113 mg, 2 당량)과 트리에틸아민(0.2 ml, 2.5 당량)을 가하였다. 혼합물을 72 시간 동안 약하게 환류 가열(80-85℃)한 다음 상온으로 냉각하였다. 용매를 진공 증류하여 건조하였다. 잔사를 메탄올성 암모니아(20 ml)에 용해시키고 밤새 교반하였다. 용매를 진공에서 제거하고, 잔사를 실리카겔에서 CH2Cl2:MeOH를 전개액으로 95:5 내지 9:1의 조성변화를 사용하여 부산물을 제거한 다음 마지막으로 0.5%의 초산을 함유하는 CH2Cl2:MeOH 4:1로 목적물을 전개하였다. 그 결과 80 mg의 순수 생성물(42.5%수율)을 얻었다.
실시예 10.
항-HIV 활성
항바이러스 효과검정.화합물 A(-)의 항-HIV-1 활성은 이전에 기술된 바와 같이 다양한 세포 유형에서 HIV-1IIIB를 사용하여 측정되었다 (Gu 등, 1992, 1994, 1999; Rando 등, 1995; Salomon 등, 1994). 간단히 설명하면, T 세포 효과검정에서는 0.005의 감염다중도(multiplicity of infection, MOI)에서, 단핵세포 효과검정에서는 0.5의 MOI에서 세포가 바이러스와 함께 3 시간 동안 배양되었다. 결합되지 않은 바이러스는 세포를 세척하여 제거하고, 이어서 세포를 96-웰 플레이트(96-well plate)에 접종하였다. 감염된 세포를 시험 화합물의 여러 농도에서 5-7 일간 배양하였다. 항-HIV-1 효능은 세포배양 상등액(supernatant)에서 HIV-1 RT 활성 또는 p24 수준을 검정하여 결정되었다. 모든 효과검정시험은 2 회씩 수행되었다. 지도부딘 및/또는 라미부딘을 각 실험에서의 대조물질로 사용하였다.
화합물 A(-)의 허가받은 항-HIV 제제와의 비교.화합물 A(-)는 MT-2 세포에서 HIV-1IIIB에 대한 EC50이 0.083 μM이었는데, 이것은 라미부딘, 스타부딘, 잘시타빈 및 아바카비어(abacavir)와 같은 수준의 항-HIV-1 활성인 반면, 지도부딘보다는 활성이 낮았다 (표 1).
표 1. 화합물 A(-)와 허가받은 항-레트로바이러스 제제와의 항-HIV 활성비교(RT 활성도)
화합물 EC50(μM) ±S.D.in MT-2 cells
화합물 A(-) 0.082±0.022
DXG 0.065±0.039
지도부딘 0.0051±0.0025
라미부딘 0.061±0.028
스타부딘 0.38±0.26
잘시타빈 0.05
아바카비어 0.10
다양한 세포에서 화합물 A(-)의 HIV-1에 대한 활성.
화합물 A(-)의 항-HIV-1 활성은 인체 말초혈액 단핵세포(peripheral monocyte cells, PBMCs), T-세포 (MT-2 및 MT-4) 및 단핵세포 (U937) 세포주를 포함한 다양한 세포 유형에서 검정되었다. 화합물 A(-)는 측정된 다양한 세포 유형에서 HIV-1IIIB에 대해 1 μM이하의(submicromolar) EC50값을 보였다 (표 2).
표 2. 다양한 세포 유형에서의 화합물 A(-)의 항-HIV-1 효능 (RT 활성의 측정)
세포 EC50(μM)
화합물A(-) 지도부딘 라미부딘
PBMCs (3) * 0.22 0.0027 0.035
MT-2 (4) 0.082 0.0051 0.061
MT-4 (2) 0.14 0.015 0.17
U937 (1) 0.82 0.027 0.014
* 괄호안의 숫자는 측정횟수임
또한, 화합물 A(-)의 항-레트로바이러스 활성도 다양한 HIV-1균주를 사용하여 측정되었다. 표 3의 결과는 화합물 A(-)가 비-합포세포 유발 균주(non-symcytiu inducing strain, HIV-19881), 이중 주성 균주(dual tropic strain, HIV-1macBAL), 단핵구 주성 균주(monocytropic strain, HIV-1WRM8488)에 대해 활성이 있음을 보여주었다.
표 3. 다양한 HIV-1 균주 유형에 대한 화합물 A(-)의 항-HIV 활성 (p24 측정)
바이러스 세포 화합물 A (-) 지도부딘
HIV-19881 PBMCs 0.59 0.0017
HIV-1macBAL PBMCs 4.14 0.043
m/m 0.022 <0.0011
HIV-1WRM8488 m/m 0.028 <0.0011
실시예 11.
독성 평가
화합물의 세포내 독성은 다양한 세포에서의 [3H]-티미딘(thymidine) 흡수를 이용하여 측정되었다. Molt-4, HT1080, DU-145, HepG-2 및 HSF를 포함한 다양한 세포들이 웰 당 1-2 x 103세포의 농도로 접종되었다 (96-웰 플레이트). 24 시간 배양시킨 후, 10 배씩 희석된 화합물(10-4M 내지 10-10M)이 배지에 첨가되었고 세포는 72 시간 더 배양되었다. 배양 마지막 18 시간 동안 [3H]-티미딘이 첨가되었다. [3H] -티미딘과의 배양 후에, 세포를 PBS로 한 번 세척하고, 세포가 떨어지지 않는다면 트립신으로 처리한 다음, 물에 다시 현탁시켰다(세포의 저장성 용해). 세포 추출물을 바로 Tomtec Harvester96에 작동시켰다. 이 기구를 사용하여, 추출된 DNA를 여과지에 흡착시키고 세척한 다음 결합된 [3H]-티미딘을 측정하였다. 50% 세포독성 농도(CC50)가 대조물질 대비 화합물 존재하의 시료의 분당 방사성동위원소 측정치 (radioactive counts per minute)를 비교하여 결정되었다.
화합물의 세포내 독성은 또한 MT-2, H9, Jurkat, U937 및 CBMCs의 증식을 통한 WST-1 염색법에 의해서도 측정되었다. 이미 잘 확립된 세포주들은 RPMI 배지에서 96-웰 플레이트에 5 x 104세포/웰(CBMCs는 0.5 x 106/웰)의 밀도로 배양되었다. 10 배씩 희석된 화합물(10-4- 10-7M)이 제0일에 첨가되었다. 상응하는 농도의 화합물을 함유한 배지를 제4일에 절반을 교체하여 세포를 계대배양하였다. 제7일에 WST-1 시약(Boehringer Mannheim)을 사용하여 제조회사가 작성한 프로토콜에 따라 세포 활성이 측정되었다. 그 결과는 표 4에 제시되어있다.
표4. 독성.
WST-1 CC50(μM)마우스에서의 [3H-]TTP 결합
화합물 CBMC PBMC Molt-4 HT1080 U-145 HepG2 HSF (50mg/kg/일)
DXG >100 >500/250 >500/250 >500/250 >500/250 >500/250 ≥500 No
DAPD >100 >500 >500 >500 >500 ≥500 500/350 No
화합물 B(-) >100 80/90 >250 >250 200 >250 --- No
화합물 C(-) >100 --- --- --- --- --- --- No
지도부딘 74 --- 3 5 >10 3 >10 ---
라미부딘 ND 1 >100 >500/100 >500/100 350/100 400 ---
잘시타빈 29 50/15 2 2 5 7 --- ---
* 50mg/kg/일의 용량으로 5일 복강내 투여했을 때의
마우스(CDI,성체,숫컷)에서의 체중 증가 효과.
실시예 12
예비 약동력학 연구
화합물의 생체내이용률이 숫컷 성체 랫드에서 꼬리정맥을 통한 정맥주사(5 mg/kg) 및 경구투여(20 mg/kg) 후 평가되었다. 혈장 시료가 정맥주사의 경우 2, 5, 15, 30, 60, 90, 120, 240 분 후에, 경구투여의 경우 5, 15, 30, 60, 90, 120, 240, 360 분 후에 채취되었다.
실험 과정
혈장 시료 준비
혈액 시료(1 ml)가, iv 및 po 투여 모두, 랫드 꼬리로부터, EDTA(3 ml)를 함유한 바큐테이너(vacutainer)에 채집되었다. 혈장 시료가 4℃에서 15 분간 2000 x g로 원심분리하여 준비되었다.
HPLC 분석
분석 조건:
HPLC system: Waters 616 pump system 두 대 및 PDA 996을 갖춘 Alliance 2690 system 두 대.
컬럼: Phenomenex Luna C18 (2), 5μm, 250*4.6 mm.
전개액 조성변화(Gradient): 20 분간 0-35% 용매 A. 용매 A는 0.01% TFA를 함유한 아세토니트릴이고, 용매 B는 0.01% TFA를 함유한 Millipore water(0.25 μm여과)이다.
유출 속도: 1.0 ml/분, UV: 200 - 350 nm.
고체상태 추출:
혈장 시료(물 1ml로 희석)를 Abselut Nexus 흡착제(# 1210-3100)에 얹고 낮은 진공상태(약 5''Hg)에서 빨아들였다. 탈이온수 1 ml를 흡착제에 가하고 진공으로 빨아들였다. 추출 칼럼을 높은 진공상태(> 10''Hg)에서 1 분간 건조하였다. 메탄올 1 ml를 Abselut Nexus 칼럼에 가하고 전개액을 1-2 ml/분의 속도로 채집하였다. Speed Vac을 사용하여 전개액을 증류 건조시키고, 시료를 120 ㎕ H2O에 다시 현탁시킨 다음 100 ㎕를 HPLC주입에 사용하였다. 그 결과를 표 5에 제시하였다.
표 5. PK 및 경구 생체내이용률.
화합물 투여 동물 Oral BA (%) AUC(·g/ml.hr) T1/2(hr) Cmax(·g/ml)
DXG oral, 20 rat 4.43±1.65 0.91±0.34 2.45±0.59 0.27±0.03
iv, 5 rat --- 5.15 0.62 29.02
DAPD oral, 20 rat 7.42±1.58 1.89±0.40 0.77±0.31 1.04±0.24
화합물 A(-) oral, 20 rat 45.56±2.78 8.64±0.53 0.64±0.24 4.20±0.65
iv, 5 rat --- 4.74 0.37 14.26
화합물 B(-) oral, 20 rat 13.75 3.08 1.20 1.12
iv, 5 rat --- 5.60 0.31 13.26
화합물 C(-) oral, 20 rat 4.58 0.44 0.31 0.67
iv, 5 rat --- 2.40 0.32 14.53
실시예 14
화합물 A(-)의 약물 저항성 프로파일.
유전자재조합 HIV-1 변종이 이전에 기술된 바에 따라 위치-지정 변이유발(site-directed mutagenesis)에 의해 HXB2-D에 돌연변이를 유발함으로써 만들어졌다 (Gu 등, 1992, 1994). 바이러스 원종(virus stock)은 MT-4 세포에 감염성 바이러스 DNA 구조를 전이(transfect)시켜서 만들어졌다. 화합물 A(-)의 항바이러스 활성은 실시예 10에 기술된 방법에 따라 측정되었다. 화합물 A(-)는 역전사효소에서 K65R 및/또는 M184V 돌연변이를 전달하는 HIV-1 변종에 대해 약간 활성이 감소하였으나, 지도부딘, 비-뉴클레오시드 억제제 및 프로테아제 억제제에 저항성이 있는 기타 변종에 대해서는 민감하게 반응하는 상태가 계속되었다 (표 6).
표 6. 약물 저항성 HIV-1 변종에 대한 화합물 A(-)의 효능 (RT 활성 측정).
바이러스(측정횟수) 유전자형 EC50(μM)
Compound A(-) Zidovudine Lamivudine
HXB2-D (2) wt 0.53 0.023 0.35
K65R (2) 65R 1.03 0.021 4.31
L74V (2) 74V 0.62 0.010 0.51
M184V (2) 184V 0.53 0.02 >40
M184I (2) 184I 0.99 0.009 >40
K65R/M184V (3) 65R, 184V 1.1 0.031 >40
E89G/M184V (2) 89G, 184V 0.51 0.022 >40
JM1 (1) 41L,184V,215Y 1.83 0.027 >40
JM4 (2) 41L,70R,215Y,219Q 0.58 0.27 0.85
NNRTIR.T(1) 106A,181C 0.10 0.0061 0.15
PIR.2(2) 10R,46I,63P,82T,84V(프로테아제유전자형) 0.20 0.017 0.29
1. 네비라빈의 EC50은 >10μM이었음.
2. 사퀴나비어의 EC50은 0.028μM이었음.wt HXB2-D에대한 사퀴나비어의 EC50은 0.0015μM이었음
실시예 15.
화합물 A(-)의 임상 HIV-1 분리균주에 대한 효능.
임상균주는 HIV-1 감염환자의 PBMC로부터 정상인 PBMC와 함께 공동배양을 통하여 분리되었다. HIV-1 임상 분리균주의 RT 유전자형을 결정하기 위하여, 감염된 CD4+T-세포 또는 PBMC로부터 프로바이러스 DNA가 추출되었고, RT 코딩(coding) 부분 전체가 이전에 보고된 바와 같이 PCR에 의해 증폭되었다 (Gu 등, 1992). 이 PCR 생성물이 정제되었고, 곧바로 프라이머(primer) RTS를 이용하여 염기서열이 밝혀졌는데(5'-CCAAAAGTTAAA CAATGGC-3'), 이것은 RT coding 부분의 5' 부분에 위치해 있다(HXB2-D 좌표의 뉴클레오시드 2603-2621). 항바이러스 활성은 실시예 10에 기술된 방법에 따라 측정되었다.
표 7. 임상 HIV-1 분리균주에 대한 화합물 A(-) 활성 (RT 활성 측정)
바이러스(분리균주의 수) EC50(μM)
화합물 A (-) 지도부딘 라미부딘
지도부딘S(a)/라미부딘S(7) 0.15(b)(0.032-0.31)(b) 0.021(0.0034-0.051) 0.23(0.028-0.69)
지도부딘S/라미부딘R(3) 0.38(0.13-0.51) 0.012(0.0026-0.019) -(5.1->10)
지도부딘R/라미부딘S(3) 0.19(0.066-0.33) 0.83(0.25-1.74) 0.25(0.096-0.34)
지도부딘R/라미부딘R(2) 0.33(0.27/0.39) 1.15(0.49/1.81) 4.1(3.6/4.6)
a. S는 민감성(sensitive), R은 저항성(resistant)을 의미함.
b. 평균 EC50수치
c. 동일군 내의 분리균주의 EC50범위
표 8. PBMC의 약물-저항성 임상 분리균주에 대한 화합물 A(-) 활성 (p24 측정)
분리균주 IC50(μM)
화합물 A(-) 라미부딘 지도부딘 아바카비어 아데포비어 스타부딘
105/A(wt) 0.6 0.065 0.0043 <0.03 2.0 0.063
CCR15(라미부딘R*) 0.3 95 0.003 0.22 0.8 0.06
CCR18(라미부딘R) 1.3 300 0.0042 1.3 2.1 0.049
CCR19(라미부딘R) 1.6 95 0.003 0.58 2.3 0.05
105/F(지도부딘R) 0.84 0.17 0.23 0.07 7.0 0.12
R은 저항성(resistant)을 의미함.
실시예 16.
약물 병용 효과.(Drug Combination Effects)
화합물 A(-)의 항-HIV-1 제제와의 병용효과는 MT-2 또는 PBMC에서 HIV-1IIIB를 사용하여 측정하였다. 병용투여는 약물 농도의 격자형 교차패턴(checker board cross pattern)을 사용하여 수행되었다. 항바이러스 효과는 배양 상등액에서 RT 활성을 관찰함으로써 결정하였다. 데이터는 Chou 및 Talalay에 의해 기술된방법(Chou and Talalay, 1984)과 Prichard의 방법(Prichard 등, 1993)에 따라 분석되었다. 화합물 A(-)의 다른 항-HIV-1 제제와의 병용지수(combination indexes, CIs)는 CalcuSyn 소프트웨어(Biosoft, 영국 캠브리지)를 사용하여 계산되었다. 이론적으로, CI 수치가 1이면 단순 부가효과가 있음을 나타내고, 1이상의 CI 수치는 길항작용을, 1이하의 CI 수치는 상승작용을 나타낸다. MacSynergy II 소프트웨어가 약물 병용의 상승 또는 길항 용량(volume)을 계산하는데 사용되었다.
표 9. MT-2 세포에서의 화합물 A(-)와 지도부딘의 병용효과
몰비 CIs at: MacSynergy(μM2%)
EC50 ED75 EC95
(95% 신뢰도)
화합물 A(-): AZT
5 : 1 0.92 0.96 1.03
10 : 1 0.64 0.70 0.82
20 : 1 0.27 0.37 0.63
40 : 1 0.20 0.23 0.31
69.3
표 10. PBMCs에서의 화합물 A(-)와 AZT(지도부딘)의 병용효과
몰비 CIs at: MacSynergy(μM2%)
EC50 ED75 EC95
(95% 신뢰도)
화합물 A(-): AZT
1.1 : 1 0.84 0.74 0.61
3.33 : 1 0.49 0.53 0.63
10 : 1 0.40 0.37 0.37
30 : 1 0.40 0.27 0.16
17.03
표 11. MT-2 세포에서의 화합물 A(-)와 라미부딘의 병용효과
몰비 CIs at: MacSynergy(μM2%)
EC50 ED75 EC95
(95% 신뢰도)
화합물 A(-): 라미부딘
1 : 2 0.80 0.85 0.95
1 : 1 0.78 0.74 0.68
2 : 1 0.81 0.78 0.73
4 : 1 0.91 0.96 1.06
-7.89/-11.6
표 12. MT-2 세포에서의 화합물 A(-)와 스타부딘(d4T)의 병용효과
몰비 CIs at: MacSynergy(μM2%)
EC50 ED75 EC95
(95% 신뢰도)
화합물 A(-): d4T
1 : 4 0.61 0.55 0.68
1 : 2 0.75 0.79 1.07
2 : 1 0.68 0.64 0.65
2.81/-5.64
표 13. MT-2 세포에서의 화합물 A(-)와 네비라핀의 병용효과
몰비 CIs at: MacSynergy(μM2%)
EC50 ED75 EC95
(95% 신뢰도)
화합물 A(-): 네비라핀
5 : 1 0.81 0.78 0.77
10 : 1 0.68 1.0 1.14
20 : 1 0.86 0.99 1.04
-0.73
실시예 17.
세포독성 분석.
세포내 독성은 [3H]티미딘 흡수(de Muys 등, 1999) 및 WST-1 염색법에 의해 측정되었다. [3H]티미딘 흡수 실험에서는 Molt-4, HT1080, DU-145, HepG2 및 HSF가 웰 당 1-2 x 103세포의 농도로 접종되었다 (96-웰 플레이트). PHA-촉진 (stimulated) PBMCs는 웰 당 4 x 104세포의 농도로 배양되었다. 24 시간 사전-배양시킨 후, 시험 화합물(10-4M 내지 10-10M)이 첨가되었고 세포는 72 시간 더 배양되었다. 배양 마지막 18 시간 동안 [3H]-티미딘이 첨가되었다. 세포를 PBS로 한 번 세척하고, 세포가 떨어지지 않는다면 트립신으로 처리한 다음, 물에 다시 현탁시켰다 (세포의 저장성 용해). 세포 추출물을 바로 Tomtec Harvester96에 작동시켰다. 50% 세포독성 농도(CC50)는 약물-치료 시료의 분당 방사성동위원소 측정치(radioactive counts per minute)를 치료되지 않은 대조 세포의 측정치와 비교하여 결정되었다. WST-1 염색법 실험에서는 세포주들을 RPMI 배지에서 96-웰 플레이트에 5 x 104세포/웰의 밀도로 배양하였다. CBMCs는 0.5 ×106/웰의 농도로 접종하였다. 화합물(10-4- 10-7M)이 제0일에 첨가되었다. 세포 생활력(cell viability)는 제7일에 WST-1 시약(Boehringer Mannheim)을 사용하여 제조회사가 작성한 프로토콜에 따라 측정되었다.
화합물 A(-)는 다양한 세포 유형에서 [3H]티미딘 흡수 및 WST-1 염색법에 의해 측정된 결과 모두에서 지도부딘 및 잘시타빈 둘 모두에 비해 세포독성이 훨씬 낮았다 (표 14).
표 14. 화합물 A(-)의 세포독성
화합물 CC50(μM)WST-1 [3H]TTP결합:
CBMC PBMC Molt4 HT800 U145 HepG2 HSF
화합물 A(-) >100 286 >500 >500 >500 >500 414
지도부딘 74 9 3 5 >10 3 >10
라미부딘 ND >500 >100 >500 >500 >100 400
잘시타빈 29 35.5 1 2.5 3.5 6.5 2
실시예 18.
미토콘드리아 DNA 독성 시험
화합물 A(-)의 미토콘드리아 DNA(mtDNA) 독성이 HepG2 세포에서 측정되었다. 세포는 화합물 치료하에 28 일간 배양되었다. 세포는 1 주일에 한번씩 계대배양되었다. 하지만 상응하는 화합물 농도를 함유하는 세포배양 배지는 1 주일에 두 번씩 교체되었다. 잘시타빈이 대조물질로 사용되었다. 독성은 mtDNA와 핵DNA(28S rDNA)의 함량비를 써던 혼성화 검정(southern hybridization assay) (de Muys 등, 1999)에 의해서 측정하여 결정하였다. 화합물 A(-)는 시험에 사용한 최고 농도인 100 μM까지 유의성있는 mtDNA 독성을 보이지 않았다 (도 1).
각 랫드로부터 각 시간에서 채취된 약 1ml 혈액에서 준비되었다.
실시예 19.
본 발명 화합물의 약동력학 시험
화합물 A(-), DAPD 및 DXG를 경정맥(jugular vein)을 통하여 10 mg/kg의 용량으로 정맥주사하거나 또는 경구투여로 20, 125, 500, 1000 또는 2000 mg/kg의 용량으로 한번에 투여하였다. 모든 랫드를 경구투여 치료 전 12 시간동안 금식하였다. iv 및 po 투여 모두에서 사용된 투여매체(vehicle)는 증류수의 0.1% 카르복시메틸셀룰로오스 및 0.1% 트윈(Tween) 80 용액으로 1 N 염산을 사용하여 pH를 3.15로 산성화하였다. 모든 경구투여의 경우 혈액 시료는 하기 스케줄에 제시된 시간에 따라 랫드로부터 채취되었다. 각 투여의 경우 모두 10 마리의 랫드로부터, 경정맥을 통한 정맥투여(2, 5, 15, 30, 60, 120 및 240 분) 및 20 mg/kg의 경구투여(5-360 분)에서 7 번의 시간에 채취되었고, 반면에 125-2000 mg/kg 경구투여의 경우는 480 분과 1440 분에서 두번 더 채취되었다. 그 결과, 각 시간에서 4 번씩 채취되었고, 다만 1440 분의 경우는 예외이었는데 이 때는 모든 랫드로부터 경정맥을 통하여 혈액 시료를 채취한 다음 치사시켰다.
경구투여의 경우 랫드로부터의 혈액시료 채취 스케줄
시간(분) 5 15 30 60 120 240 360 480 1440
랫드 1 X X X X
랫드 2 X X X X
랫드 3 X X X X X
랫드 4 X X X X X
랫드 5 X X X X
랫드 6 X X X X
랫드 7 X X X X
랫드 8 X X X X
랫드 9 X X X X
랫드 10 X X X X
혈장이 각 랫드로부터 각 시간에서 채취된 약 1ml 혈액에서 준비되었다.
실험 과정
혈장 시료 준비
혈액 시료(1 ml)가 iv 및 po 투여 모두 랫드 꼬리로부터 EDTA(3 ml)를 함유한 바큐테이너(vacutainer)에 채집되었다. 혈장 시료가 4℃에서 15 분간 2000 x g로 원심분리하여 준비되었다.
HPLC 분석
분석 조건:
HPLC system: Waters 616 pump system 두 대 및 PDA 996을 갖춘 Alliance 2690 system 두 대.
컬럼: Phenomenex Luna C18 (2), 5μm, 250*4.6 mm.
전개액 조성변화(Gradient): 20 분간 0-35% 용매 A. 용매 A는 0.01% TFA를 함유한 아세토니트릴이고, 용매 B는 0.01% TFA를 함유한 Millipore water(0.25 μm여과)이다.
유출 속도: 1.0 ml/분, UV: 200 - 350 nm.
고체상태 추출:
혈장 시료(물 1ml로 희석)를 Abselut Nexus 흡착제(# 1210-3100)에 얹고 낮은 진공상태(약 5"Hg)에서 빨아들였다. 탈이온수 1 ml를 흡착제에 가하고 진공으로 빨아들였다. 추출 칼럼을 높은 진공상태(> 10"Hg)에서 1 분간 건조하였다. 메탄올 1 ml를 Abselut Nexus 칼럼에 가하고 전개액을 1-2 ml/분의 속도로 채집하였다. Speed Vac을 사용하여 전개액을 증류 건조시키고, 시료를 120 ㎕ H2O에 다시 현탁시킨 다음 100 ㎕를 HPLC주입에 사용하였다. 그 결과를 표 15와 표 16에 제시하였다.
표 15: 랫드에서의 iv(10 mg/kg) 또는 po(20 mg/kg) 투여 후의 화합물 A(-)에 대한 PK 지표
랫드 수컷 암컷
투여경로 iv po iv po
용량(mg/kg) 10 20 10 20
시료크기 4 4 4 4
Cmax(μg/ml) 19.2 4.6 22.9 5.5
Tmax(분) - 23.4 - 22.8
배출 반감기(분) 34.2 72.5 36.9 57.1
AUC(μg.min/ml) 304 600 328 602
생체내이용률(%) - 99 - 92
표 16: 암컷 및 숫컷 랫드에서의 DAPD의 iv 또는 po 투여 후의 DAPD 및 DXG에 대한 약동력학적 지표
지표 암컷 수컷
투여경로 iv(10 mg/kg) po(20 mg/kg) iv(10 mg/kg) po(20 mg/kg)
Cmax(μg/ml) 22.1 2.5 16.2 1.96
Tmax(분) - 45 - 35
T1/2 31.5 31.3 36.2 34
AUC(μg*.min/ml) 357.9 307.2 271.2 196.5
Cl(ml/min) 6.6 13.7 9.5 23.6
생체내이용률(%) 43 36
하기에 본 출원서에서 인용된 모든 참고문헌을 정리하였다:
1. De Muys, J.-M., H. Gourdeau, N. Nguyen-Ba, D. T. Taylor, P. S. Ahmed, T. Mansour, C. Locas, N. Richard, M. A. Wainberg, and R. F. Rando. 1999. Anti-human immunodeficiency virus type 1 activity, intracellular metabolism, and pharmacokinetic evaluation of 2'-deoxy-3'-oxa-4'-thiocytidine. Antimicrob. Agents Chemother. 43: 1835-1844.

Claims (35)

  1. 하기 일반식 (I)의 시스-뉴클레오시드 및 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
    여기서:
    n은 1 또는 2이고,
    R 4 는 H, COOH, CONH2, OH, SH, NH2, NO2, C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, 할로겐,R a 가 C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐인 COR a 또는R b 가 C1-6알킬, C2-6알케닐 또는 C2-6알키닐인 COOR b 에서 선택되며;
    R 3 는 H 또는 C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐이고;
    X는 H, 모노포스페이트, 디포스페이트, 트리포스페이트, 카르보닐로서 C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C6-10아릴 치환된 카르보닐, 또는에서 선택되는데, 여기서 각Rc는 따로따로 H, C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐 또는 하이드록시 보호기로부터 선택되고; 상기 뉴클레오시드는 (-) 거울상이성질체, (+) 거울상이성질체 및 라세믹 혼합물을 포함한 그 혼합물의 형태로 존재한다.
  2. 제1항에 있어서, 뉴클레오시드는 (-) 형태로 존재하고, (+) 형태가 최소한 95% 존재하지 않는 뉴클레오시드.
  3. 제1항에 있어서, 뉴클레오시드는 (-) 형태로 존재하고, (+) 형태가 최소한 97% 존재하지 않는 뉴클레오시드.
  4. 제1항에 있어서, 뉴클레오시드는(-) 형태로 존재하고, (+) 형태가 최소한 99% 존재하지 않는 뉴클레오시드.
  5. 제1항에 있어서, 하이드록시 보호그룹이 아세틸-2-치오에틸 에스텔, 피발로일옥시메틸에스테르 및 이소프로필옥시카보닐옥시메틸 에스테르에서 선택된 화합물.
  6. 제1항에 있어서, X는 H인 화합물.
  7. 제1항에 있어서, n이 1인 화합물.
  8. 제7항에 있어서, R3가 H 또는 메틸이고, 또는 R4가 H인 화합물.
  9. 제7항에 있어서, R4는 H; COOH; CONH2; C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐 또는 COORb 이고 Rb가 C1-6알킬, C2-6알케닐 또는 C2-6알키닐인 화합물.
  10. 제7항에 있어서, R4는 H, COOH 또는 C1-6알킬인 화합물.
  11. 제7항에 있어서, R4가 메틸 또는 에틸인 화합물.
  12. 제7항에 있어서, R4는 COOH인 화합물.
  13. 제7항에 있어서, R3와 R4가 H인 화합물.
  14. 시스-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로프로필아미노-퓨린-9'-일-1,3-디옥솔란 및 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
  15. 시스-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로부틸아미노-퓨린-9'-일-1,3-디옥솔란 및 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
  16. 시스-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-[1-카르복실산-시클로프로필아미노]-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란 및 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
  17. 대응하는 (+)거울상이성질체가 최소한 97% 존재하지 않는 (-)-(2R, 4R)-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로프로필아미노-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란.
  18. 대응하는 (-)거울상이성질체가 최소한 97% 존재하지 않는 (+)-(2S, 4S)-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로프로필아미노-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란.
  19. 대응하는 (+)거울상이성질체가 최소한 97% 존재하지 않는 (-)-(2R, 4R)-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로부틸아미노-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란.
  20. 대응하는 (-)거울상이성질체가 최소한 97% 존재하지 않는 (+)-(2S, 4S)-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-시클로부틸아미노-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란.
  21. 대응하는 (+)거울상이성질체가 최소한 97% 존재하지 않는 (-)-(2R, 4R)-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-[1-카복실산-시클로프로필아미노]-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란.
  22. 대응하는 (-)거울상이성질체가 최소한 97% 존재하지 않는 (+)-(2S, 4S)-2-하이드록시메틸-4-(2'-아미노-6'-[1-카복실산-시클로프로필아미노]-퓨린-9'-일)-1,3-디옥솔란
  23. 청구항 1내지 21항중 어느한항의 적어도 하나의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염과, 뉴클레오시드 유도체; NNRTIs; 또는 프로테아제 억제제중에서 선택된 적어도 하나이상의 치료제로서 구성된 바이러스 감염의 치료작용을 갖는 복합제제.
  24. 제23항에 있어서, 뉴클레오시드 유도체가 지도부딘(zidovudine), 디다노신(didanosine), 잘시타빈(zalcitabine), 스타부딘(stavudine) 또는 라미부딘(Lamivudine)인 복합제제.
  25. 제23항에 있어서, 비-뉴클레오시드 역전사효소억제제(NNRTIs)가 네비라핀 (nevirapine), 델라비르딘(delavirdine)또는 에파비렌조(efavirenz)인 복합제제.
  26. 제23항에 있어서, 프로테아제억제제가 인디나비어(indinavir), 넬피나비어 (nelfinavir), 사퀴나비어(saquinavir)또는 리토나비어(ritonavir)인 복합제제.
  27. 의약치료에 사용하는 청구항 1내지 22항중에 어느한항에 따른 화합물.
  28. 바이러스 감염치료에 사용하는 청구항 1 내지 22항중 어느한항에 따른 화합물.
  29. HIV감염치료에 사용하는 청구항 1내지 22항중 어느 한항에 따른 화합물.
  30. HBV감염치료에 사용하는 청구항 1내지 22항중 어느 한항에 따른 화합물.
  31. 바이러스감염치료약제의 제조를 위한 청구항 1내지 22항중 어느 한항에 따른 화합물의 용도.
  32. 실질적인 치료시까지 청구항 1내지 22항중 어느한항에 따른 화합물의 치료상 유효량을 투여하며 바이러스감염을 치료하는 방법.
  33. 청구항 32에 있어서, 바이러스감염이 HIV감염인 방법.
  34. 청구항 32에 있어서, 바이러스감염이 HBV감염인 방법.
  35. 청구항 1 내지 22항중 어느 한항에 따른 적어도 하나의 화합물과 약제학적으로 허용가능한 적어도 하나의 담체 또는 부형제로 구성된 약제학적 조성물.
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