ES2207636T3 - Mersacidina recombinante y un metodo para su produccion. - Google Patents
Mersacidina recombinante y un metodo para su produccion.Info
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Abstract
LA PRESENTE INVENCION SE REFIERE EN PARTICULAR A LA SECUENCIA DE GENES ESTRUCTURAL DE LA MERSACIDINA ANTIBIOTICA DE PEPTIDOS. LA SECUENCIACION HA REVELADO QUE LA PREMERSACIDINA CONSISTE EN UNA SECUENCIA PRINCIPAL 48 AMINOACIDOS INUSUALMENTE LARGA Y UNA PARTE DE PROPEPTIDO DE 20 AMINOACIDOS QUE SE MODIFICA DURANTE LA BIOSINTESIS AL LANTIBIOTICO MADURO.
Description
Mersacidina recombinante y un método para su
producción.
La presente invención se refiere en particular a
la secuencia genética estructural del antibiótico peptídico
mersacidina. El secuenciado reveló que la premersacidina consiste
en una secuencia de iniciadores inusualmente larga de 48 aminoácidos
y una parte propeptídica de 20 aminoácidos que se modifica durante
la biosíntesis al lantibiótico maduro.
La mersacidina pertenece a un grupo de péptidos
bactericidas que se designó "lantibióticos" para significar que
estos péptidos contienen los raros aminoácidos lantionina y/o
3-metillantionina. Regularmente se encuentran
aminoácidos modificados adicionales tales como deshidroalanina y
deshidrobutirina, mientras que solo se encuentran en algunos
lantibióticos la S-aminovinilcisteína y la
lisinoalanina (G. Jung (1991), Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 30:
1051-1068). Los lantibióticos son producidos por
bacterias gram positivas y son derivados de prepéptidos sintetizados
por los ribosomas. Se han encontrado genes estructurales de
lantibióticos o en los cromosomas bacterianos (por ejemplo,
subtilina y cinamicina), o asociados con elementos móviles como
transposones (por ejemplo, nisina) o grandes plásmidos (por ejemplo,
epidermina y Pep5). Los prepéptidos consisten en una secuencia de
iniciadores de N terminal que se escinde después de la exportación
de la célula productora y el propéptido de C terminal, que se
modifica post-translacionalmente al lantibiótico
maduro (G. Jung (1991), supra). En una primera etapa de la
modificación, se deshidratan los residuos de serina y treonina para
dar respectivamente deshidroalanina (Dha) o deshidrobutirina (Dhb)
(H. P. Weil et al. (1990), Eur. J. Biochem. 194:
217-223). Posteriormente los grupos SH de los
residuos de cisteína reaccionan con los dobles enlaces de los
residuos de Dha o Dhb para formar respectivamente lantioninas o
metillantioninas.
La mersacidina se aisló del sobrenadante del
cultivo de Bacillus spec. HIL Y-85.54728 y
adquirió interés por su significativa eficacia in vivo frente al
Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) (S.
Chatterjee et al. (1992), J. Antibiotics 45:
839-845. Es el lantibiótico más pequeño aislado
hasta la fecha (1825 Da), sintetizado a partir de un propéptido de
20 aminoácidos y contiene 3 residuos de metillantionina, una
deshidroalanina y una
S-aminovinil-2-metilcisteína
(Fig. 1 A) (S. Chatterjee (1992), J. Antibiotics 45:
832-838). La mersacidina no lleva carga neta y tiene
propiedades hidrófobas globales. Resultados recientes indican que la
mersacidina interfiere con la biosíntesis de peptidoglicanos. Lo
más probable es que esto ocurra en el nivel de la
transglicosilación por medio de un mecanismo que difiere del de los
antibióticos en uso actualmente frente a MRSA.
Por consiguiente, la presente invención se
refiere a la premersacidina que tiene la secuencia de aminoácidos
como se muestra en la Fig. 2 desde el aminoácido nº 1 hasta el 68 y
la promersacidina que tiene la secuencia de aminoácidos como se
muestra en la Fig. 2 desde el aminoácido nº 49 hasta el 68.
Una realización adicional de la presente
invención son las codificaciones de ADNs de premersacidina, en
particular ADNs que tienen la secuencia de nucleótido como se
muestra en la Fig. 2 desde el nº 22 hasta el 225 que codifican la
premersacidina, un vector que contiene dicho ADN y una célula
anfitrión que contiene dicho vector.
Otra realización es un proceso para producir
premersacidina, promersacidina o mersacidina madura por métodos de
tecnología génica generalmente conocidos por una persona
experimentada en la técnica, i.e. se realiza un cultivo de una
célula anfitrión adecuada que contiene dicha codificación de ADNs
para premersacidina en condiciones adecuadas, seguido por
aislamiento de la premersacidina expresada por dicha célula
anfitrión, preferiblemente una bacteria gram positiva, tal como
Bacillus, Streptomyces o Streptococcus.
Finalmente, de acuerdo con la presente invención
el péptido de la premersacidina o sus genes pueden usarse para la
producción de mersacidina madura como se describe, por ejemplo, en
el documento de patente WO 90/00558.
Como ejemplo, la mersacidina madura es útil como
antibiótico peptídico para la conservación de alimentos,
particularmente frente a Staphylococcus aureus resistente a
meticilina o como un antibiótico para tratar infecciones de
Staphylococcus aureus en animales o seres humanos.
Adicionalmente puede utilizarse la invención para obtener derivados
de mersacidina modificados en la secuencia de aminoácidos con un
espectro de antibióticos extruidos o con una eficacia diferente. Más
aún, la invención abre vías para sobre expresar Mersacidina o sus
derivados por ingeniería genética.
Fig. 1: A) Estructura del lantibiótico
mersacidina. B) Secuencia supuesta del prepéptido y secuencia de las
51 bases guessmer que se utilizaron para la identificación del gen
estructural.
Fig. 2: Secuencia de nucleótidos del gen
estructural mrsA del lantibiótico mersacidina y secuencia deducida
de aminoácidos del prepéptido. El sitio de unión al ribosoma frente
al codón de inicio de ATG está dentro de un rectángulo y el sitio de
procesado está marcado con una flecha. El supuesto finalizador
independiente de rho está subrayado.
Fig. 3: Comparación de las secuencias de
iniciadores de varios lantibióticos. Se han marcado las secuencias
conservadas con letra negrilla.
Se dedujo la secuencia de propéptido mersacidina
supuesta (Fig. 1B) de la estructura de mersacidina y se basó en
información general acerca de la biosíntesis de lantibióticos. Se
sintetizó la sonda representada como un guessmer de 51 bases basado
en el uso de codón preferido de Bacillus en un
PCR-mate® (Applied Biosystems, Weiterstadt, RFA) y
se marcó con digoxigenina (Boehringer Mannhein, Mannhein, RDA)
(Fig. 1B). En el propéptido, los residuos de aminobutirilo
(Abu_{S} - mitad de metillantionina) derivan de treoninas,
mientras que los residuos de alanina (Ala_{S} - mitad de
metilantionina) se codifican como cisteína. Probablemente, la
S-aminovinil-2-metilcisteína,
que forma la estructura en anillo terminal, se forma de una
metillantionina que ha sido descarboxilada por oxidación como se
mostró para la epidermina que contiene una
S-aminovinilcisteína de C terminal (T. Kupke et al.
(1992), J. Bacteriol. 174: 5354-5361).
Como los plásmidos no podrían detectase en la
cepa productora, se preparó ADN cromosómico como se ha descrito por
Marmur (J. Marmur (1961), J. Mol. Biol. 3: 208-218)
excepto en que solo se realizó una extracción con cloroformo y una
precipitación y que se disolvió posteriormente el ADN en tampón de
equilibrado y se purificó en una columna
Oiagen-tip® 100 (Diagen, Hilden, RFA). A 51ºC, una
única banda de 2kb de una digestión de restricción cromosómica con
Hind III se hibridó con la sonda en un ensayo de trasferencia
Southern (E. M. Southern (1975), J. Mol. Biol. 98:
503-517). Se separaron del gel los fragmentos que
estaban en el intervalo de 1,9 a 2,3 kb de tamaño, se eluyeron con
un BIOTRAP® (Schleicher y Schüll, Dassel, RFA) y se subclonaron en
pUC18 (C. Yanisch-Perron et al. (1985), Gene 33:
103-109) en E. Coli. Se prepararon los plásmidos de
varias colonias recombinantes por el método de Birnboin y Doly (H.
C. Birnboin y J. Doly (1979), Nucl. Acids Res. 7:
1513-1523), se digirieron con Hind III y se
sondearon con el guessmer. Uno de los clones que dio una señal
positiva se analizó posteriormente por digestiones de restricción
con diferentes enzimas y subsiguientes ensayos de transferencia
Southern. Finalmente, se subclonó un fragmento de 1,3 kb EcoR
I-Hind III en pEMBL 18 y pEMBL 19 (L. Dente et al.
(1983), Nucleic Acids. Res. 11:1645-1655) en E.
Coli. Más aún, se clonó un fragmento de 0,6 kb EcoR V en el vector
pCU1 (J. Augustin et al. (1992), Eur. J. Biochem. 204:
1149-1154) después de mutagénesis dirigida al sitio
del sitio de EcoR I en un sitio de EcoR V utilizando el kit de
mutagénesis dirigida al sitio transformador (Clontech, Palo Alto,
EE.UU.).
Se secuenció el fragmento de 0,6 kb en un
secuenciador automático de ADN A.L.F. (Pharmacia, Brussels, Belgium)
utilizando el método de terminación de cadena didesoxi (F. Sanger
et al. (1977), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74:
5463-5467) a partir de ADN de cadena doble; para
cebar el cebador universal y de inversión del kit secuenciador
AutoRed® (Pharmacia, Brussels, Belgium) y se emplearon dos
oligonucleótidos sintéticos 5'-(TCTCTTCCATTTTTTTG)3' y
5'-(AAATCAAATTAACAAATAC)3'. En la Fig. 2 se muestra la
secuencia de nucleótidos del gen estructural de mersacidina, mrsA.
Se encontró un sitio de enlace de ribosoma potencial ocho pares de
bases más arriba del codón de inicio ATG del marco de lectura
abierto. La parte de C terminal de la secuencia está de acuerdo con
la estructura primaria de mersacidina publicada (S. Chatterjee et
al. (1992), J. Antibiotics 45:832-838) y su
secuencia de propéptido propuesta. La parte de N terminal consiste
en una secuencia de iniciadores de 48 aminoácidos (la flecha en la
Fig. 2). La promersacidina consiste en 20 aminoácidos. Por
consiguiente, la longitud completa del prepéptido es 68 aminoácidos
con una masa molecular calculada de 7228 Da. Ocho bases más abajo
del codón finalizador TAA (ocre) se encontró una estructura en forma
de U con un valor de energía libre de -86,7 kJ mol^{-1} y un
tamaño de tronco de 14 pares de bases, que podría servir como un
finalizador independiente de rho durante la transcripción cuando es
seguido por una secuencia TTTAATT (Fig. 2).
Los lantibióticos se han subdividido en dos
grupos (G. Jung (1991), supra). Los lantibióticos del tipo A
son péptidos anfifílicos alargados que forman poros transitorios en
las membranas de bacterias sensibles (H. -G. Sahl (1991), Pore
formation in bacterial membranes by cationic lantibiotics, p.
347-358. En G. Jung y H.-G. Sahl (ed.), Nisin and
novel lantibiotics, Escom, Leiden). Los lantibióticos de tipo B son
péptidos globulares producidos por Streptomyces, que tienen
masas moleculares menores de 2100 Da y son altamente homólogos a su
secuencia de aminoácidos y a su estructura en anillo que incluye
una condensación cabeza a cola (G. Jung (1991), supra). Hasta
ahora la mersacidina no podía ser clasificada en ningún grupo (G.
Bierbaum y H.-G. Sahl (1993), Zbl. Bakt. 278:
1-22). En este aspecto, es de especial interés la
comparación de la secuencia de prepéptido de mersacidina con los
lantibióticos de tipo A y B.
Se han conservado en la mersacidina dos
características especiales de las secuencias de iniciadores de
lantibiótico: i) No hay cisteína en la secuencia de iniciadores (G.
Jung (1991), supra), ii) Se predice una propensión
\alpha-espiral para la parte de C terminal de la
secuencia de iniciadores. También se han predicho y demostrado
tales elementos estructurales para los péptidos iniciadores de
lantibióticos de tipo A por medidas de dicroismo circular en
mezclas de trifluoroetanol/agua (A. G.
Beck-Sickinger y G. Jung. Synthesis and
conformational analysis of lantibiotic leader-, pro- and
prepeptides, p. 218-230. En G. Jung y H.-G. Sahl
(ed.), Nisin and novel lantibiotics, Escom, Leiden 1991). En
cualquier otro aspecto la secuencia de iniciadores de mersacidina
difiere de las secuencias de iniciadores de lantibiótico de tipo A
descritas hasta la fecha: Como se muestra en la Fig. 3 se parece más
bien en longitud y distribución de carga (48 aminoácidos / 12
cargas) al inusualmente largo iniciador de 59 aminoácidos (11
cargas) del lantibiótico de tipo B cinamicina (C. Kaletta et al.
(1989), Pep5 a new lantibiotic: structural gene isolation and
prepeptide sequence. Arch. Microbiol. 152: 16-19).
En contraste, una típica secuencia de iniciadores de lantibiótico
de tipo A altamente cargada, por ejemplo, el péptido iniciador Pep5,
contiene 10 residuos cargados en un total de solo 26 aminoácidos
(C. Kaletta et al. (1989), supra). No se encuentran
secuencias conservadas de lantibióticos de tipo A (por ejemplo, el
motivo F D/N L D/E) en el péptido iniciador de mersacidina. El sitio
de escisión de proteasa de la secuencia de iniciadores de
mersacidina (^{-4}M - ^{-3}E - ^{-2}A - ^{-1}A - ^{+1}C)
difiere del sitio conservado de los lantibióticos de tipo A (Fig.
3). Aquí encontramos o sitio de escisión de tipo nisina (-1,
aminoácido cargado positivamente; -2, prolina; -3, polar o cargado
negativamente y -4, hidrófobo) o la glicina hidrófoba que contiene
sitios de escisión de lacticina 481 (J.-C. Piard et al. (1993), J.
Biol. Chem., 268, 16361-16368) o estreptococina
A-FF22 (W. L. Hynes et al. (1993), Appl. Env.
Microbiol. 59: 1969-1971). El sitio de escisión
(^{-3}A - ^{-2}F - ^{-1}A) de cinamicina (C. Kaletta et al.
(1989), supra) está de acuerdo con la regla (^{-3}A -
^{-2}X - ^{-1}A) para proteínas secretadas vía la ruta Sec. En
conclusión, el prepéptido de mersacidina no muestra homologías con
las secuencias conservadas de secuencias de iniciadores de
lantibiótico de tipo A. Hay similitud con el prepéptido de
cinamicina en longitud y distribución de carga, pero no hay
homología evidente de secuencia al nivel de aminoácidos. La
mersacidina es más pequeña que los lantibióticos de tipo A, no está
cargada positivamente y no despolariza membranas, pero sin embargo
inhibe la biosíntesis de peptidoglicanos. Esto, además de las
propiedades del péptido iniciador, indica que la mersacidina está
más relacionada con lantibióticos de tipo B que con los de tipo A.
Recientemente, se ha dilucidado la secuencia y la estructura de
puentes de otro lantibiótico, actagardina, que también inhibe la
biosíntesis de la pared celular (S. Somma et al., Antimicrob.
Agents Chenother. 11: 396-401, 1977). La
comparación con mersacidina muestra que se conserva casi
completamente un anillo en ambos lantibióticos. En vista de la
fuerte homología de los lantibióticos de tipo B caracterizados
hasta hora duramicina A, B, C, ancovenina y cinamicina, estos
péptidos podían también ser catalogados como variantes
estructurales como se observa para epidermina y galidermina o nisina
A y nisina Z. Por consiguiente, proponemos que la mersacidina y la
actagardina deberían ser clasificadas con los lantibióticos de tipo
B y que la designación lantibiótico de tipo B no debería ser
reservada exclusivamente para variantes estructurales de duramicina
sino que comprenda lantibióticos pequeños, globulares que llevan
una carga baja e inhiben la actividad enzimática.
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: Hoechst Aktiengesellschaft
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CALLE: -
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Frankfurt am Main
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: -
\vskip0.333000\baselineskip
- (E)
- PAIS: Alemania
\vskip0.333000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL (ZIP): 65926
\vskip0.333000\baselineskip
- (G)
- TELÉFONO: 069-305-6031
\vskip0.333000\baselineskip
- (H)
- TELEFAX: 069-35 7175
\vskip0.333000\baselineskip
- (I)
- TELEX: 41234700 hod
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TÍTULO DE LA INVENCIÓN: Mersacidina recombinante y un método de producción
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE SECUENCIAS: 4
\vskip0.666000\baselineskip
- (iv)
- FORMATO INTERPRETABLE POR EL ORDENADOR:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- TIPO DE SOPORTE: Disco flexible
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- ORDENADOR: IBM PC compatible
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- PROGRAMA: PatentIn Release n° 1, versión n° 1.25 (EPO)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 1:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICASDE LA SECUENCIA
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: pares de base 17
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- - TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- ENCADENAMIENTO: Simple
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: Lineal
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICO: SI
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\dddseqskipTCTCTTCCAT TTTTTTG
\hfill17
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 2:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: pares de base 19
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- ENCADENAMIENTO: Simple
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICO: SI
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\dddseqskipAAATCAAATT AACAAATAC
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 3
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: PARES DE BASE 288
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- ENCADENAMIENTO: simple
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICO NO
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- ANTISENTIDO : SI
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- FUENTE ORIGINAL:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE CIENTÍFICO: Mersacidina
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CEPA: Bacillus
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- AISLADO INDIVIDUAL: HIL Y-85,54728
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: RBS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 22..225
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE:: Finalizador
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 208..288
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN `DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 4:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 62 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
Claims (8)
1. Premersacidina que tiene la secuencia de
aminoácidos como se muestra en SEQ ID NO: 4, desde el aminoácido nº
1 hasta el 68.
2. ADN que codifica premersacidina de acuerdo con
la reivindicación 1.
3. ADN que codifica premersacidina con la
secuencia de ácidos nucleicos como se muestra en SEQ ID NO: 3 desde
el ácido nucleico nº 22 hasta el 225.
4. ADN que codifica premersacidina que tiene la
secuencia de ácidos nucleicos como se muestra en SEQ ID NO: 3 desde
el ácido nucleico nº 166 hasta el 225.
5. Vector que contiene un ADN de acuerdo con una
cualquiera de las reivindicaciones 2, 3 ó 4.
6. Célula anfitrión que contiene un vector de
acuerdo con la reivindicación 5.
7. Proceso para producir premersacidina,
promersacidina o Mersacidina madura que contiene las etapas:
- a)
- cultivar una célula anfitrión adecuada que contiene una secuencia de ADN de acuerdo con las reivindicaciones 2-4 en condiciones adecuadas; y
- b)
- aislar la premersacidina, promersacidina o Mersacidina madura.
8. Uso de premersacidina de acuerdo con la SEQ ID
NO: 4 desde el aminoácido nº 1 hasta el 68 para la producción de
Mersacidina madura.
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