HU216619B - Rekombináns mersacidin és eljárás előállítására - Google Patents

Rekombináns mersacidin és eljárás előállítására Download PDF

Info

Publication number
HU216619B
HU216619B HU9502643A HU9502643A HU216619B HU 216619 B HU216619 B HU 216619B HU 9502643 A HU9502643 A HU 9502643A HU 9502643 A HU9502643 A HU 9502643A HU 216619 B HU216619 B HU 216619B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
mersacidin
sequence
lantibiotics
amino acid
dna
Prior art date
Application number
HU9502643A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT73800A (en
HU9502643D0 (en
Inventor
Gabriele Bierbaum
Klaus-Peter Koller
Hans Georg Sahl
Original Assignee
Hoechst Ag.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoechst Ag. filed Critical Hoechst Ag.
Publication of HU9502643D0 publication Critical patent/HU9502643D0/hu
Publication of HUT73800A publication Critical patent/HUT73800A/hu
Publication of HU216619B publication Critical patent/HU216619B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
    • C07K7/54—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring
    • C07K7/56—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring the cyclisation not occurring through 2,4-diamino-butanoic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

A találmány tárgyát a mersacidin nevű peptidantibiőtikűmstrűktúrgénjének szekvenciája képezi. A szekvenciameghatárőzás sőrárakiderült, hőgy a premersacidin szőkatlanűl hősszú, 48 aminősavatartalmazó szignálszekvenciát és egy 20 aminősav hősszúságúprőpeptidrészt tartalmaz, amely az érett lantibiőtikűm biőszintézisesőrán módősűl. ŕ

Description

A találmány tárgyát a mersacidin elnevezésű peptidantibiotikum (lantibiotikum) struktúrgénjének szekvenciája képezi. Szekvenciameghatározás útján megállapítottuk, hogy a premersacidin egy szokatlanul hosszú, 48 aminosavból álló szignálszekvenciát tartalmaz, valamint egy 20 aminosav hosszúságú propeptidrészletet, amely az érett lantibiotikum bioszintézise során módosul.
A találmány szerinti megoldás előnyösen alkalmazható mersacidinantibiotikum előállítására.
A mersacidin a bakteriális peptidek egy olyan csoportjához tartozik, melyet lantibiotikumoknak neveztek el, mely elnevezés azt jelzi, hogy ezek a peptidek tartalmaznak ritkán előforduló lantionin és/vagy 3-metillantionin aminosavakat. A lantibiotikumokban gyakran előfordulnak egyéb módosított aminosavak is, mint például a dehidroalanin vagy a dehidrobutilin, míg az Samino-vinil-cisztein és a lizinoalanin csak bizonyos lantibiotikumokban található meg [G. Jung, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 30, 1051 (1991)]. A lantibiotikumokat Gram-pozitív baktériumok állítják elő, és a riboszómákon szintetizálódott prepeptidekből keletkeznek. A lantibiotikumok struktúrgénjei vagy a bakteriális kromoszómán találhatók (mint például a subtilin és a cinnamycin), vagy mozgékony genetikai elemekkel kapcsoltak (mint például a pisin), vagy pedig nagy plazmidokon találhatók (például epidermin és Pep5 a prepeptidek egy N-terminális szignálszekvenciát tartalmaznak, amely a termelősejtből történő exportálódás során lehasad, valamint egy C-terminális propeptidet, amelyből poszttranszlációs módosítások útján keletkezik az érett lantibiotikum [G. Jung (1991), fent]. A poszttranszlációs módosítás első lépéseként a szerin és treonin oldalláncok sorrendben dehidroalaninná (Dha) vagy dehidrobutirinné (Dhb) dehidratálódnak [H.-P. Weil és munkatársai: Eur. J. Biochem. 194, 217 (1990)]. Ezt követően a cisztein oldalláncok SH-csoportjai reakcióba lépnek a Dha- vagy Dhb-oldalláncok kettős kötéseivel, és ily módon sorrendben lantioninok vagy metil-lantioninok jönnek létre.
A mersacidint a HIL Y-85,54728 jelű Bacillus törzs tenyészetének felülúszójából izolálták, és azért figyeltek fel rá, mivel in vivő jelentős aktivitása van meticillinrezisztens Staphylococcus aureus (MRSA) törzsekkel szemben [S. Chatterjee és munkatársai: J. Antibiotics 45, 839 (1992)]. A mersacidin az eddig izolált legkisebb lantibiotikum (1825 D), amely egy 20 aminosavat tartalmazó propeptidből szintetizálódik, és 3 metillantionin-, 1 dehidroalanin-, valamint 1 S-aminovinil-2-metil-cisztein-oldalláncot tartalmaz [l.A ábra; S. Chatterjee: J. Antibiotics 45, 832 (1992)]. A mersacidinmolekulának nincs töltése, és a molekula hidrofób karakterű. A legújabb kutatási eredmények szerint a mersacidin a peptidoglikán-bioszintézist gátolja. Nagyon valószínű, hogy a molekula a transzglikoziláció szintjén fejti ki hatását, valamely olyan mechanizmuson keresztül, ami különbözik az MRSA-törzsek ellen jelenleg használt antibiotikumok hatásmechanizmusától.
A találmány tárgyát képezi tehát a premersacidin, melynek aminosavsorrendje megegyezik a 2. ábrán látható aminosavszekvencia 1-68. aminosavainak szekvenciájával, valamint a promersacidin, melynek aminosavsorrendje megegyezik a 2. ábrán látható aminosavszekvencia 49-68. aminosavainak szekvenciájával.
A találmány tárgyát képezik továbbá a premersacidint vagy promersacidint kódoló DNS-szekvenciák. A találmány előnyös megvalósítási módját képezik olyan DNS-molekulák, melyeknek nukleotidsorrendje megegyezik a 2. ábrán bemutatott szekvencia 22-225. nukleotidjainak sorrendjével, mely nukleotidok premersacidint kódolnak, valamint az említett szekvencia 166-225. nukleotidjainak sorrendjével, mely nukleotidok promersacidint kódolnak. A találmány tárgyát képezik továbbá az említett DNS-szekvenciákat tartalmazó vektorok és a vektorokat hordozó gazdasejtek is.
A találmány tárgyát képezi továbbá egy eljárás premersacidin, promersacidin vagy érett mersacidin előállítására, szakember számára ismert géntechnológiai eljárások alkalmazásával, mely eljárás szerint premersacidint vagy promersacidint kódoló DNS-molekulákat tartalmazó alkalmas gazdasejteket alkalmas körülmények között tenyésztünk, majd a gazdasejtek által expresszált premersacidin promersacidint vagy érett mersacidint izoláljuk, mely eljárásban az alkalmazott gazdasejt előnyösen Gram-pozitív baktérium, például valamely Bacillus, Streptomyces vagy Streptococcus törzs.
Végül, a találmány szerinti premersacidin vagy promersacidin peptid vagy azok génjei alkalmasak érett mersacidin előállítására, például a WO 90/00558 számú közzétételi iratban leírtak szerint. Az érett mersacidin alkalmas például peptidantibiotikumként történő felhasználásra, élelmiszerek tartósítása céljából, különösen meticillinrezisztens Staphilococcus aureus fajok ellen, és alkalmas Staphilococcus aureussai fertőzött állatok vagy emberek kezelésében antibiotikumként történő felhasználásra. A találmány szerinti megoldás alkalmas továbbá módosított aminosavsorrendű mersacidinszármazékok előállítására, mely származékok a mersacidinétől eltérő antibiotikumspektrumúak, vagy eltérő hatásosságúak. A találmány szerinti megoldás lehetővé teszi továbbá a mersacidin és származékai génsebészeti módszerekkel történő túltermeltetését.
Az alábbiakban röviden ismertetjük a leíráshoz csatolt ábrákat.
1. ábra: A. A mersacidin elnevezésű lantibiotikum szerkezete. B. A mersacidin feltételezett prepeptidszekvenciája, valamint a struktúrgén azonosításához felhasznált 51 bázis hosszúságú oligonukleotid szekvenciája, melynek szekvenciáját a feltételezett propeptidszekvencia alapján következtettük ki.
2. ábra: A. A mersacidin lantibiotikum mrsA-génjének nukleotidsorrendje, valamint a prepeptid kikövetkeztetett aminosavsorrendje. Az ATG-startkodon előtt található riboszómakötő helyet bekeretezéssel, a prepeptidben található hasítóhelyet pedig egy nyíllal jeleztük. A feltételezett rho-független terminátorszekvenciát aláhúzással jelöltük.
3. ábra: Néhány lantibiotikum szignálszekvenciájának összehasonlítása. A konzerválódott szekvenciarészleteket vastag betűkkel jelöltük.
HU 216 619 Β
]. példa
A mersacidin struktúrgénjértek klónozása
A mersacidinpropeptid feltételezett szekvenciáját (IB. ábra) egyrészt a mersacidin szerkezete alapján, másrészt pedig a lantibiotikumok bioszintéziséről rendelkezésünkre álló általános információk figyelembevételével határoztuk meg. A klónozáshoz használt 51 bázishosszúságú hibridizációs próbát egy PCR-Mate készülék alkalmazásával (Applied Biosystems, Weiterstadt, FRG) szintetizáltuk, az oligonukleotid szekvenciáját a feltételezett propeptidszekvencia alapján terveztük meg, a Bacillus fajok kodonhasználatának figyelembevételével, és az előállított oligonukleotidot digoxigeninnel jelöltük (Boehringer Mannheim, Mannheim, FRG, IB. ábra). A mersacidinben található aminobutiril oldalláncok (a metillantionin Abus-fele) a propeptid treonin oldalláncaiból származnak, az alanin oldalláncok pedig (a metillantionin Alas-fele) a propeptid cisztein oldalláncaiból alakultak ki. A molekula végén található gyűrűs szerkezetet képező S-amino-vinil-2-metil-cisztein valószínűleg egy metillantioninból alakult ki, amely oxidatív módon dekarboxileződött, amint azt az epidermin esetén kimutatták, amely egy C-terminális S-aminovinil-ciszteint tartalmaz [T. Kupke és munkatársai: J. Bacteriol. 174, 5354 (1992)].
Mivel az antibiotikumtermelő törzsben plazmid jelenlétét nem lehetett kimutatni, Marmur eljárása szerint [J. Marmur: J. Mól. Bioi. 3, 208 (1961)] kromoszomális DNS-t állítottunk elő, azzal az eltéréssel, hogy csak egy kloroformos extrakciót és kicsapást hajtottunk végre, majd a DNS-t ekvilibráló pufferben feloldottuk, és „Qiagen-tip-100” oszlopon tisztítottuk (Diagen, Hilden, FRG). A fent leírt hibridizációs próba Southem-blot kísérletben [Ε. M. Southern: J. Mól. Bioi. 98, 503 (1975)] 51 °C-on a HindlII-enzimmel emésztett kromoszomális DNS egyetlen 2 kb-os fragmenséhez hibridizálódott. A gélből kivágtuk az 1,9-2,3 kb méretű fragmenseket, majd azokat a gélből „BIOTRAP” (Schleicher és Schüll, Dassel, FRG) készülék alkalmazásával eluáltuk, majd az izolált fragmenseket pUC 18-vektorban [C. YanischPerron és munkatársai: Gene 33, 103 (1985)] E. coliban szubklónoztuk. Néhány rekombináns kiónból Bimbóm és Doly eljárása szerint [H. C. Bimbóm és J. Doly: Nucl. Acids. Rés. 7, 1513 (1979)] plazmidot izoláltunk, a plazmid DNS-eket HindlII-enzimmel megemésztettük és a fenti hibridizációs próbával hibridizáltattuk őket. A kiónok közül az egyiket, amelyik pozitív hibridizációs jelet adott, restrikciós emésztésekkel tovább analizáltuk, különböző enzimek alkalmazásával, majd Southem-blot analízisnek vetettük alá. Végül egy 1,3 kb-os EcoRI/HindlII fragmenst szubklónoztunk pEMBL18- és pEMBL19-vektorokba [L. Dente és munkatársai: Nucleic Acids. Rés. 11, 1645 (1983)], E. coliban. Megklónoztunk továbbá egy 0,6 kb-os EcoRVfragmenst, a pCUI-vektorban [J. Augustin és munkatársai: Eur. J. Biochem. 204, 1149 (1992)], miután az EcoRI-hasítóhelyet EcoRV-hasítóhellyé alakítottuk, helyspecifikus mutagenezis útján, a „traszformer” helyspecifikus mutációs reagenskészlet (Clontech, Palo Alto, USA) alkalmazásával.
2. példa
Az mrsA jelű mersacidin-struktúrgén nukleotidsorrendjének meghatározása
Az 1. példa szerinti 0,6 kb-os fragmenst egy „A.L.F.” típusú automata DNS-szekvenáló berendezésen (Pharmacia, Brussels, Belgium) megszekvenáltuk, a didezoxi-láncterminációs eljárás alkalmazásával [F. Sanger és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74, 5463 (1977)], kettős szálú DNS-templáton; láncindító oligonukleotidokként egyrészt az „AutoRead” szekvenáló reagenskészletben (Pharmacia, Brussels, Belgium) található univerzális reverz láncindító oligonukleotidot, valamint két szintetikus oligonukleotidot alkalmaztunk, melyek szekvenciája a következő volt: 5'-TCTCTTCCATTTTTTTG-3' és 5'-AAATCAAATTAACAAATAC-3'. Az mrsA jelű mersacidin-struktúrgén nukleotidszekvenciája a 2. ábrán látható. A nyílt leolvasási fázis ATG-startkodonjától 8 bázispámyira 5'-irányban találtunk egy feltételezett riboszómakötő helyet (AGGGGG). A szekvencia C-terminális részlete megfelel a mersacidin publikált primer szerkezetéből következő szekvenciának [S. Chatteijee és munkatársai: J. Antibiotics 45, 832 (1992)], valamint a feltételezett propeptidszekvenciának. A szekvencia egy 48 aminosav hosszúságú N-terminális szignálszekvenciát is kódol (a 2. ábrán nyíllal jeleztük). A promersacidin 20 aminosavból áll. Ennek megfelelően a teljes hosszúságú prepeptid 68 aminosavat tartalmaz, és számított molekulatömege 7228 D. A TAAstopkodontól (ochre) 8 bázisnyira 3'-irányban találtunk egy hajtűszerkezetet, melynek szabad energiaértéke -86 kJ/mol, a hajtű szára pedig 14 bázispár hosszúságú. Ez a struktúra feltételezhetően rho-independens terminátorként működik a transzkripció során, mivel egy TTTATT-szekvenciarészlet követi (2. ábra).
3. példa
A mersacidin prepeptid jellemzése
A lantibiotikumokat két csoportra osztották [G. Jung (1991), fent]. Az A típusú lantibiotikumok hosszú amfifil peptidek, melyek az érzékeny baktériumok membránjában pórusokat képeznek [Sahl. H.-G.: „Poré formation in bacterial membranes by cationic lantibiotics”, 347-358. oldal (1991), a „Nisin and növel lantibiotics” című könyvben, szerk.: Sahl H.-G. Escom. Leiden]. A B típusú lantibiotikumok globuláris peptidek, melyeket Streptomyces fajok termelnek, molekulatömegük kisebb, mint 2100 D, és egymással rendkívül homológok mind aminosavsorrendjük, mind gyűrűszerkezetük vonatkozásában, mely gyűrűszerkezet fej-farok kondenzációt is tartalmaz [G. Jung (1991) fent]. A mersacidint mindeddig nem lehetett besorolni egyik csoportba sem. Ebben a vonatkozásban a mersacidin-prepeptid szekvenciájának összehasonlítása az A és B típusú lantibiotikumokkal különös fontosságú.
A mersacidin szignálszekvenciájában a lantibiotikumokra jellemző szignálszekvenciák két közös sajátsága megőrződött: i) nem található cisztein a szignálszekvenciában [G. Jung (1991) fent], ii) a szignálszekvencia C-terminális végén α-helix-képző hajlam jósolható. Ha3 sonló szerkezeti elemeket feltételeztek és mutattak ki A típusú lantibiotikumok szignálpeptidjeiben is trifluoretanol/víz elegyben végrehajtott cirkulárisdikroizmusmérések alapján (A. G. Beck-Sickinger és G. Jung: „Synthesis and conformational analysis of lantibiotic leader-, pro- and prepeptides” 218-230. old. szerk.: G. Jung és H.-G. Sahl „Nisin and növel lantibiotics”, Escom, Leiden, 1991). A mersacidin szignálszekvenciája minden egyéb szempontból különbözik az eddig leírt A típusú lantibiotikumok szignálszekvenciáitól: amint az a 3. ábrán is látható, a mersacidin szignálszekvenciája hosszúságát és töltéseloszlását tekintve (48 aminosav/12 töltés) inkább hasonlít a szokatlanul hosszú, 59 aminosavból álló cinnamycin-szignálszekvenciához (11 töltés), mely lantibiotikum a B típusú lantibiotikumokhoz tartozik (C. Kaletta és munkatársai: „Pep5, a New Lantibiotic: Structural Gene Isolation and Prepeptide Sequence”, Arch. Microbiol. 152: 16-19, 1989). Ezzel szemben például a Pep5-szignálszekvencia, mely egy tipikus erősen töltött A típusú lantibiotikum szignálszekvencia, összesen 26 aminosavból áll, és 10 töltött aminosav-oldalláncot tartalmaz [C. Kaletta és munkatársai: (1989) fent]. A mersacidin szignálszekvenciájában nincsenek jelen az A típusú lantibiotikumokra jellemző konzerválódott szekvenciamotívumok (például F D/N L D/E). A mersacidin szignálszekvenciában található proteázhasító hely ( 4M- 3E- 2A- 'A-+IC) különbözik az A-típusú lantibiotikumokra jellemző konzerválódott hasítóhelytől (3. ábra). Az A típusú lantibiotikumok esetében vagy nisin típusú hasítóhelyet találunk (-1: pozitívan töltött aminosav; -2: prolin; -3: negatívan töltött vagy poláros aminosav; és -4: hidrofób aminosav), vagy pedig a lacticin-481 lantibiotikumra [J.-C. Piard és munkatársai: J. Bioi. Chem., 268, 16361 (1993)] vagy streptococcin-A-FF22-re [W. L. Hynes és munkatársai: Appl. Env. Microbiol. 59, 1968 (1993)] jellemző glicintartalmú hidrofób hasítóhely van jelen. A cinnamycin esetében talált hasítóhely ( 3A- 2X- 1 A) megfelel a Secreakcióúton keresztül kiválasztott proteinekben található hasítóhelyre vonatkozó szabálynak ( 3A- 2X- (A) [C. Kaletta és munkatársai: (1989), fent].
Összefoglalásként megállapíthatjuk, hogy a mersacidin szignálszekvenciája nem mutat homológiát az A típusú lantibiotikumok szignálszekvenciáival. A cinnamycin szignálszekvenciájával hosszúság és töltéseloszlás vonatkozásában kimutatható hasonlóság, de az aminosavszekvencia szintjén nem található homológia. A mersacidin kisebb, mint az A típusú lantibiotikumok, nem pozitívan töltött, és nem depolarizálja a membránokat, hanem a peptidoglikán-bioszintézist gátolja. Ez a tény, valamint a mersacidin szignálszekvenciájának sajátságai arra utalnak, hogy a mersacidin inkább a B típusú, mint az A típusú lantibiotikumok közé tartozik. Legújabban meghatározták egy másik lantibiotikum, az actagardine szekvenciáját és hídképződési mintázatát, mely lantibiotikum szintén a sejtfal bioszintézisét gátolja [S. Somma és munkatársai: Antimicrob. Agents Chermother. 11. 396 (1977)]. Ezt a lantibiotikumot a mersacidinnel összehasonlítva megállapíthatjuk, hogy ezekben a lantibiotikumokban egy gyűrű majdnem teljes mértékben konzerválódott. Az eddig jellemzett B típusú lantibiotikumokkal (duramycin-A, -B, -C, ancovenin és cinnamycin) mutatott erős homológiát figyelembe véve ezeket a peptideket strukturális variánsoknak is tekinthetjük, ahogy azt az epidermin és a gallidermin, vagy a nisin-A és a nisin-Z vonatkozásában megállapították. Éppen ezért a mersacidint és az actagardine-t a B típusú lantibiotikumok közé sorolhatjuk, és a B típusú lantibiotikum kifejezést nem szükséges fenntartani kizárólag a duramycin strukturális variánsai számára, hanem a B típusú lantibiotikumok közé tartoznak kis globuláris lantibiotikumok is, melyeknek kicsi a töltése és valamilyen enzimaktivitást gátolnak.

Claims (7)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Premersacidinmolekula, melynek aminosavsorrendje megegyezik a 2. ábrán látható szekvencia 1 -68. aminosavainak sorrendjével.
  2. 2. DNS, amely 1. igénypont szerinti premersacidinmolekulát vagy annak promersacidinfragmensét (49-68. aminosavak) kódolja.
  3. 3. A 2. igénypont szerinti DNS, melynek nukleotidsorrendje megegyezik a 2. ábrán bemutatott szekvencia 22-225. vagy 166-225. nukleotidjainak sorrendjével.
  4. 4. Vektor, amely 2. vagy 3. igénypont szerinti DNS-t tartalmaz.
  5. 5. Gazdasejt, amely 4. igénypont szerinti vektort tartalmaz.
  6. 6. Eljárás rekombináns premersacidin, promersacidin vagy érett mersacidin előállítására, azzal jellemezve, hogy
    i) 2. vagy 3. igénypont szerinti DNS-sel transzformáit gazdasejteket alkalmas körülmények között tenyésztünk; és ii) a termelődött premersacidint, promersacidint vagy érett mersacidint izoláljuk.
  7. 7. A 2. vagy 3. igénypont szerinti DNS alkalmazása érett mersacidin előállítására.
HU9502643A 1994-09-12 1995-09-11 Rekombináns mersacidin és eljárás előállítására HU216619B (hu)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP94114298A EP0700998B1 (en) 1994-09-12 1994-09-12 Recombinant mersacidin and a method for production

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9502643D0 HU9502643D0 (en) 1995-11-28
HUT73800A HUT73800A (en) 1996-09-30
HU216619B true HU216619B (hu) 1999-07-28

Family

ID=8216276

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9502643A HU216619B (hu) 1994-09-12 1995-09-11 Rekombináns mersacidin és eljárás előállítására

Country Status (19)

Country Link
US (1) US5667991A (hu)
EP (1) EP0700998B1 (hu)
JP (1) JPH0898695A (hu)
KR (1) KR100394289B1 (hu)
CN (1) CN1149287C (hu)
AT (1) ATE255165T1 (hu)
AU (1) AU696450B2 (hu)
CA (1) CA2157975C (hu)
CZ (1) CZ285741B6 (hu)
DE (1) DE69433357T2 (hu)
DK (1) DK0700998T3 (hu)
ES (1) ES2207636T3 (hu)
FI (1) FI120100B (hu)
HU (1) HU216619B (hu)
IL (1) IL115242A0 (hu)
NZ (1) NZ272960A (hu)
PT (1) PT700998E (hu)
RU (1) RU2198924C2 (hu)
SI (1) SI9500270B (hu)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1956785B1 (en) * 1999-03-12 2012-12-26 Daphimo Co. B.V., LLC Multicarrier modulation system and method
US6775320B1 (en) * 1999-03-12 2004-08-10 Aware, Inc. Method and a multi-carrier transceiver supporting dynamic switching between active application sets
US6861236B2 (en) 2002-05-24 2005-03-01 Applied Nanosystems B.V. Export and modification of (poly)peptides in the lantibiotic way
GB0406870D0 (en) * 2004-03-26 2004-04-28 Novacta Biosystems Ltd Improvements relating to the production of lantibiotics
US7592308B2 (en) 2004-03-26 2009-09-22 Novacta Biosystems Limited F3W variants of the lantibiotic mersacidin and its use
JP2009509519A (ja) * 2005-09-27 2009-03-12 ノヴァクタ バイオシステムズ リミティッド ランチビオティックメルサシジンの変種およびそれらの使用
GB0600928D0 (en) 2006-01-17 2006-02-22 Novacta Biosystems Ltd Improvements relating to lantibiotics
GB0714029D0 (en) 2007-07-18 2007-08-29 Novacta Biosystems Ltd Lantibiotic-based compounds having antimicrobial activity
GB0714030D0 (en) 2007-07-18 2007-08-29 Novacta Biosystems Ltd The use of type-B lantibiotic-based compounds having antimicrobial activity
EP2271665B1 (en) * 2008-04-02 2012-01-18 Sanofi Highly bridged peptides from actinomadura namibiensis
CA2742753A1 (en) * 2008-11-24 2010-05-27 Sentinella Pharmaceuticals, Inc. ("Sentinella") Lantibiotic carboxyamide derivatives with enhanced antibacterial activity
MX2011007313A (es) 2009-01-14 2011-08-04 Novacta Biosystems Ltd Derivados de desoxiactagardina.
SG173504A1 (en) 2009-02-04 2011-09-29 Novacta Biosystems Ltd Actagardine derivatives
GB201001688D0 (en) 2010-02-02 2010-03-17 Novacta Biosystems Ltd Compounds
GB201013513D0 (en) 2010-08-11 2010-09-22 Novacta Biosystems Ltd Formulations
CN106188253B (zh) * 2016-08-26 2020-08-18 上海交通大学 抗菌肽Lexapeptide及其制备方法和用途
CA3127806A1 (en) 2019-02-05 2020-08-13 Elanco Us Inc. Probiotic compositions comprising lactobacillus reuteri strains and methods of use
CN111235119B (zh) * 2020-03-05 2021-11-23 苏州十一方生物科技有限公司 一种融合抗菌蛋白的制备及应用
CN114457102B (zh) * 2022-02-24 2023-12-26 重庆市畜牧科学院 用于编码分泌型Mersacidin的基因表达盒及其制备方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5218101A (en) * 1988-07-05 1993-06-08 The University Of Maryland Leader sequence inducing a post-translational modification of polypeptides in bacteria, and gene therefor
IN167138B (hu) * 1988-08-17 1990-09-01 Hoechst India

Also Published As

Publication number Publication date
KR960010863A (ko) 1996-04-20
CZ231895A3 (en) 1996-03-13
CN1131192A (zh) 1996-09-18
NZ272960A (en) 1996-05-28
SI9500270B (sl) 2002-02-28
EP0700998B1 (en) 2003-11-26
DE69433357D1 (de) 2004-01-08
AU3055495A (en) 1996-03-28
ATE255165T1 (de) 2003-12-15
EP0700998A1 (en) 1996-03-13
DK0700998T3 (da) 2004-03-29
PT700998E (pt) 2004-03-31
HUT73800A (en) 1996-09-30
FI954220A (fi) 1996-03-13
CZ285741B6 (cs) 1999-10-13
HU9502643D0 (en) 1995-11-28
CA2157975C (en) 2008-11-18
IL115242A0 (en) 1995-12-31
KR100394289B1 (ko) 2003-10-22
JPH0898695A (ja) 1996-04-16
ES2207636T3 (es) 2004-06-01
SI9500270A (en) 1996-04-30
US5667991A (en) 1997-09-16
FI954220A0 (fi) 1995-09-08
CA2157975A1 (en) 1996-03-13
FI120100B (fi) 2009-06-30
CN1149287C (zh) 2004-05-12
DE69433357T2 (de) 2004-09-09
RU2198924C2 (ru) 2003-02-20
AU696450B2 (en) 1998-09-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU216619B (hu) Rekombináns mersacidin és eljárás előállítására
Bierbaum et al. Cloning, sequencing and production of the lantibiotic mersacidin
Engelke et al. Identification and sequence analysis of the Rhizobium meliloti dctA gene encoding the C4-dicarboxylate carrier
Schnell et al. Analysis of genes involved in the biosynthesis of lantibiotic epidermin
Kanatani et al. Isolation and characterization of acidocin A and cloning of the bacteriocin gene from Lactobacillus acidophilus
Stein et al. Two different lantibiotic-like peptides originate from the ericin gene cluster of Bacillus subtilis A1/3
Boot et al. S-layer protein of Lactobacillus acidophilus ATCC 4356: purification, expression in Escherichia coli, and nucleotide sequence of the corresponding gene
Talay et al. Domain structure and conserved epitopes of Sfb protein, the fibronectin‐binding adhesin of Streptococcus pyogenes
Townsend et al. Cloning of the mgtE Mg2+ transporter from Providencia stuartii and the distribution of mgtE in gram-negative and gram-positive bacteria
Galli et al. Transcriptional control of sex‐pheromone‐inducible genes on plasmid pAD1 of Enterococcus faecalis and sequence analysis of a third structural gene for (pPD1‐encoded) aggregation substance
KR101261870B1 (ko) 폴리믹신 ｂ 또는 ｅ 생합성 효소 및 이를 코딩하는 유전자 군
Schubert et al. P45, an extracellular 45 kDa protein of Listeria monocytogenes with similarity to protein p60 and exhibiting peptidoglycan lytic activity
Yoshida et al. Function of the Escherichia coli nucleoid protein, H-NS molecular analysis of a subset of proteins whose expression is enhanced in a hns deletion mutant
Roels et al. Adjacent and divergently oriented operons under the control of the sporulation regulatory protein GerE in Bacillus subtilis
WO1998019689A9 (en) Novel coding sequences
Bierbaum et al. Construction of an expression system for engineering of the lantibiotic Pep5
Pohlman et al. Genetic and biochemical analysis of an endonuclease encoded by the IncN plasmid pKM101
KR100750658B1 (ko) 폴리믹신 생합성 효소 및 이를 코딩하는 유전자 군
Chen et al. Molecular cloning, characterization, and sequencing of the hemolysin gene from Edwardsiella tarda
Ebisu et al. Conserved structures of cell wall protein genes among protein-producing Bacillus brevis strains
Egelseer et al. Characterization of an S-layer glycoprotein produced in the course of S-layer variation of Bacillus stearothermophilu s ATCC 12980 and sequencing and cloning of the sbsD gene encoding the protein moiety
Gerstel et al. The ActA polypeptides of Listeria ivanovii and Listeria monocytogenes harbor related binding sites for host microfilament proteins
De Rossi et al. Structural organization of pBC1, a cryptic plasmid from Bacillus coagulans
Kaul et al. Cloning and sequence analysis of the Chlamydia trachomatis spc ribosomal protein gene cluster
Kanatani et al. Cloning and nucleotide sequence of the gene for acidocin 8912, a bacteriocin from Lactobacillus acidophilus TK8912

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees