CN111235119B - 一种融合抗菌蛋白的制备及应用 - Google Patents

一种融合抗菌蛋白的制备及应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种葡萄球菌噬菌体裂解酶LysK与抗菌肽Mersacidin融合蛋白的制备与应用，表达该融合蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，该融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明对该融合蛋白进行异源表达及纯化，检测发现该融合蛋白比较稳定，作用温度和pH均比较广，其对包括金黄色葡萄球菌在内的多种葡萄球菌均有特异的杀菌效果。本发明提供的抗葡萄球菌融合蛋白为食品，尤其是奶制品中的葡萄球菌的防治提供了提供一种安全的蛋白制剂来源，具有广泛的应用前景。

Description

一种融合抗菌蛋白的制备及应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种葡萄球菌噬菌体裂解酶LysK与抗菌肽Mersacidin融合蛋白的制备方法与应用。
背景技术
葡萄球菌广泛分布于空气、地面、水体及畜禽饲料，为革兰氏阳性菌，呈圆形或卵圆形，直径约0.8μm，没有鞭毛，无荚膜，亦不能产生芽胞。少数葡萄球菌可导致人兽共患疾病，如金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)一直是医源性感染排名仅次于大肠杆菌的致病菌，可引起关节炎、骨髓炎、伤口感染、败血症和中毒性休克综合征等多种疾病。金黄色葡萄球菌可感染肉类、蛋类、奶类食品，引起人体食物中毒，也可感染畜禽甚至水产动物。
目前，感染金黄色葡萄球菌后最普遍的治疗方式是口服或注射抗生素。然而，人类对抗生素的强烈依赖也造成了它的过度使用。近些年来，不断有关于“超级细菌”——多重耐药性细菌的报道，如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐多药肺炎链球菌(MDRSP)、耐万古霉素肠球菌(VRE)等。因此，对新型非抗生素类抗菌剂的研发迫在眉睫。
自1915年噬菌体发现以来，噬菌体已经成功应用于治疗痢疾、伤口感染等疾病。细菌耐药问题日趋严峻的现在，噬菌体用于新型抗菌剂的研发重新受到研究者的重视。然而，不可否认的是，噬菌体作为活体病毒，在动物体内可能遭受免疫系统攻击、且噬菌体还有可能带来未知的抗性基因，此外，细菌也可能会对噬菌体产生抗性。因此，应用噬菌体开发抗菌剂仍然存在问题。
噬菌体裂解酶(bacteriophage lysins)是烈性噬菌体感染宿主细菌后晚期一类细胞壁蛋白水解酶，可水解宿主菌细胞壁的肽聚糖，引起细胞裂解。研究发现，噬菌体裂解酶可以从革兰氏阳性菌的外面破坏细胞壁，进而杀菌，且见效快、裂解谱广、安全性高。噬菌体裂解酶作用靶点肽聚糖为细菌非常保守的成分，所以细菌很难对噬菌体裂解酶产生抗性，此外，噬菌体裂解酶的应用还避免了噬菌体可能遭受动物体免疫系统攻击及带来抗性基因的风险。分子生物学的发展也为噬菌体裂解酶基因的重组表达奠定了坚实基础。作为抗菌药物的候选者，葡萄球菌噬菌体裂解酶如ClyS(Daniel A et al.,AntimicrobialAgents&Chemotherapy,2010,54,4,1603-1612)、LysK(Becker SC et al.,FEMS MicrobiolLett,2008,287,2,185-191)、SAL-2(Son Jee-Soo et al.,Applied Microbiology andBiotechnology,2010,86,1439-1449)等陆续被报道，它们显示出良好的抗金黄色葡萄球菌效果。
噬菌体裂解酶在医药、食品保鲜、水产养殖等领域的应用前景十分光明，提高噬菌体裂解酶的抗菌效果势在必行。改善噬菌体裂解酶效果的策略之一是将它们与其他抗菌剂联合使用，发挥对病原菌感染的协同治疗作用。抗菌肽通常是由20-60个氨基酸残基组成的碱性小分子多肽，其具有广谱抗菌活性，对细菌有很强的杀伤作用，其杀菌速度优于普通噬菌体裂解酶。1992年，Chatterjee S报道了Bacillus spp.产生的杆菌肽Mersacidin有效印制MRSA细胞壁合成酶的活性，通过腹腔给药可以清除MRSA感染小鼠血液、肺、肝、肾、脾等脏器中的细菌，并且对小鼠各器官没有造成明显的损害。然而，杆菌肽Mersacidin对在体内可能会对多种微生物进行无选择性的攻击，在杀灭致病菌的同时有可能会破坏正常菌群的平衡，因此会对动物体产生一定的风险。目前，将噬菌体裂解酶与抗菌肽相结合生产融合抗菌蛋白用于防治葡萄球菌感染的报道不多。中国专利CN201510844661.7公开了一种葡萄球菌的宽谱噬菌体嵌合裂解酶，该裂解酶用于防治多种葡萄球菌，对葡萄球菌引起的奶牛乳房炎感染具有显著的防治效果，但该裂解酶对不同宿主菌的裂解作用不稳定，尤其是金黄色葡萄球菌。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种抗葡萄球菌的噬菌体裂解酶LysK与抗菌肽Mersacidin融合蛋白及其制备方法。该融合蛋白结合噬菌体裂解酶及抗菌肽的优点，可同时作用于葡萄球菌的细胞壁和细胞膜。该融合抗菌蛋白对多种葡萄球菌，包括金黄色葡萄球菌均有很强的杀伤作用，该融合抗菌蛋白对葡萄球菌引起的感染具有显著的防治效果，在医药、食品保鲜、水产养殖等领域都具有良好的应用前景。
一方面，本发明提供了一种抗葡萄球菌融合蛋白。
具体地，所述的抗葡萄球菌融合蛋白由基因工程改造的噬菌体裂解酶LysK与抗菌肽Mersacidin基因共同表达获得。
具体地，所述的抗菌蛋白的编码核苷酸序列如SEQ ID NO:1，氨基酸序列如SEQ IDNO:2。
本发明还提供了包含SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列的重组表达载体和包含所述重组表达载体的重组菌。
另一方面，本发明提供了前述抗葡萄球菌融合蛋白的制备方法。
具体地，所述的制备方法包括以下步骤：
(1)人工合成SEQ ID NO:1所示核苷酸序列；
(2)将步骤(1)合成的序列连接到表达载体中，得到重组质粒；
(3)将步骤(2)得到的重组质粒转化宿主菌，得到重组大肠杆菌；
(4)诱导重组菌表达抗葡萄球菌融合蛋白；
(5)收集步骤(4)得到的菌体，破碎细胞并对上清液进行纯化；
(6)将(7)纯化得到的蛋白进行去毒处理，即获得所述抗葡萄球菌融合蛋白。
优选地，所述的步骤(2)中的表达载体为pET32a(+)表达载体。
优选地，所述的步骤(2)中合成序列通过BamH I、Xho I酶切位点连接到表达载体。
优选地，所述的步骤(3)的宿主菌为BL21(DE3)宿主菌。
优选地，所述的步骤(4)诱导重组菌表达条件为0～1mmol/L IPTG，4-37℃诱导；进一步优选为4℃、16℃、25℃和37℃。
优选地，所述的步骤(5)中破碎细胞采用超声破碎。
优选地，所述的步骤(5)中对上清液进行纯化采用His亲和层析镍柱纯化。
优选地，所述的步骤(6)中去毒处理采用去毒素试剂盒，如Thermo Fisher公司去毒素试剂盒。
再一方面，本发明提供了前述的抗葡萄球菌融合蛋白及其制备方法、重组表达载体、重组菌在防治葡萄球菌感染和污染中的应用。
具体地，所述的应用为在预防、抑制或治疗葡萄球细菌感染中的应用。
具体地，所述的应用包括但不限于在抑制食品中的金黄色葡萄球菌的应用。
进一步具体地，所述的食品包括但不限于奶制品，小麦制品，玉米制品，大米制品。
优选地，所述的抗葡萄球菌融合蛋白的应用温度为20-50℃，进一步优选为为35℃。
又一方面，本发明提供了一种葡萄球菌抑制剂或其添加剂。
具体地，所述的抑制剂或其添加剂包含前述的抗葡萄球菌融合蛋白。
又一方面，本发明提供了一种针对葡萄球细菌感染的药物，其特征在于，所述的药物中包含前述的融合蛋白。
具体地，所述的针对葡萄球细菌感染的药物包括预防、抑制和治疗葡萄球细菌感染的药物。
附图说明
图1为重组质粒pET32a-LysK-Mer构建的菌液PCR电泳图；其中，泳道1～10为菌液PCR，M为15Kb DNAMarker。
图2为重组质粒pET32a-LysK-Mer BamH I/Xho I双酶切鉴定电泳图；其中，泳道1为pET32a-LysK-Mer原始质粒对照，泳道2、3为pET32a-LysK-Mer的BamH I、Xho I双酶切鉴定，M为15Kb DNAMarker。
图3为诱导抗葡萄球菌融合蛋白表达的SDS-PAGE分析；其中泳道1为蛋白Marker，泳道2-9分别为0、0.1mM、0.2mM、0.4mM、0.6mM、0.8mM、1mM IPTG于4℃、16℃、25℃和37℃下分别诱导BL21(pET32a-LysK-Mer)后上清中外源蛋白表达，10泳道为1mM IPTG诱导BL21(pET32a-LysK-Mer)后全菌中外源蛋白表达。
图4为抗葡萄球菌融合蛋白LysK-Mer在不同pH下稳定性分析。
图5为抗葡萄球菌融合蛋白LysK-Mer在不同温度下稳定性分析。
图6为抗葡萄球菌融合蛋白LysK-Mer在牛奶的中杀菌效果分析；PBS表示缓冲液，LysK-Mer表示抗葡萄球菌融合蛋白。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明所用金黄色葡萄球菌(CICC 10001、CICC 10145、CICC 10201)、表皮葡萄球菌(CICC 10294)、假中间葡萄球菌(CICC 10499)、大肠埃希氏菌(CICC 10389)、枯草芽胞杆菌(CICC 10275)、粪肠球菌(CICC 23658)、肠炎沙门氏菌(CICC 21482)和产气荚膜梭菌(CICC 22949)均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。pET32a(+)质粒、大肠杆菌BL21(DE3)感受态及大肠杆菌DH5α感受态均购自北京索莱宝科技有限公司。
本发明重组菌的命名规则如下：BL21是一种适合于外源蛋白表达的菌株,其内源性的蛋白酶基因缺失；BL21(DE3)在BL21的基础上整合了T7噬菌体基因组，适合T7表达系统；BL21(pET32a-LysK-Mer)在BL21的基础上整合了含LysK基因和抗菌肽Mersacidin基因的pET32a(+)重组质粒。
实施例1抗葡萄球菌融合蛋白基因的合成及原核表达载体的构建
a.在GenBank上下载金黄色葡萄球菌噬菌体K基因组全长(AY176327)，截取27072-27762及28638-29435bp处核苷酸序列，获得LysK基因全长。在APD数据库(TheAntimicrobial Peptide Database,http://aps.unmc.edu/AP/)获取抗菌肽Mersacidin的氨基酸序列。将LysK基因与编码抗菌肽Mersacidin氨基酸序列的的核苷酸序列串联，并利用大肠杆菌密码子使用偏好性对核苷酸序列进行优化，将其命名为LysK-Mer，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
b.将优化后抗葡萄球菌融合蛋白基因两端分别加上BamH I、Xho I酶切位点序列并送至苏州金唯智生物科技有限公司进行合成。对pET32a(+)及合成的LysK-Mer进行BamHI、Xho I双酶切，利用T4连接酶对酶切后质粒和片段进行连接，转化大肠杆菌DH5α后涂布于含50μg/mL氨苄青霉素的平板上37℃过夜培养。阳性克隆经菌液PCR验证正确后扩摇，利用Omega质粒提取试剂盒(货号为D6943)按照说明书方法提取质粒，经BamH I、Xho I双酶切验证，将验证正确的质粒交由长春库美生物有限公司进行测序，将测序正确的重组质粒命名为pET32a-LysK-Mer。
结果如图1与图2所示，重组质粒pET32a-LysK-Mer转化DH5α后在1500bp左右处出现条带，且重组质粒pET32a-LysK-Mer经BamH I、Xho I双酶切后在5000bp以上和1500bp左右各出现一条带，条带大小与实验预期相符，说明原核表达载体构建正确。
实施例2抗葡萄球菌融合蛋白的诱导表达及纯化
a.将实施例1获得的重组质粒pET32a-LysK-Mer按常规分子生物学方法转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态，涂布于含50μg/mL氨苄青霉素的平板上37℃过夜培养，阳性克隆扩摇后得到重组菌，命名为BL21(pET32a-LysK-Mer)。
b.将BL21(pET32a-LysK-Mer)转接到100mL LB培养基中，37℃培养，待OD600达到0.5时，加入终浓度分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mmol/L的IPTG，并分别在4℃、16℃、25℃和37℃诱导蛋白表达。
c.诱导结束后，搜集菌体，超声波破碎细胞，离心(12000rpm)后收集上清，SDS-PAGE检测上清中蛋白表达情况。
d.BL21(pET32a-LysK-Mer)转接到250mL LB培养基中，加入终浓度为0.8mmol/L的IPTG、在4℃条件下大量诱导重组蛋白表达，经超声破碎、离心获得上清后，利用His亲和层析镍柱(GE Healthcare,Sweden)对上清进行纯化，纯化后产物利用Thermo Fisher公司去毒素试剂盒(货号为88277)处理，最终获得抗葡萄球菌融合蛋白。
结果如图3所示，重组菌BL21(pET32a-LysK-Mer)经0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mmol/L的IPTG在不同温度下诱导后，上清中均能产生诱导蛋白条带，大小在70kD之间，与预期大小相符。其中，添加1mmol/L的IPTG、4℃诱导条件下可溶性蛋白更多。
实施例3抗葡萄球菌融合蛋白的平板抑菌试验
将金黄色葡萄球菌(CICC 10001、CICC 10145、CICC 10201)、表皮葡萄球菌(CICC10294)、假中间葡萄球菌(CICC 10499)、大肠埃希氏菌(CICC 10389)、枯草芽胞杆菌(CICC10275)、粪肠球菌(CICC 23658)、肠炎沙门氏菌(CICC 21482)和产气荚膜梭菌(CICC22949)复苏，取100μL新鲜菌液(菌含量109CFU/mL)均匀涂布于LB固体培养基。取100μL实施例2获得的抗葡萄球菌融合蛋白(调整浓度到1mg/mL)，滴于LB固体培养基正中央并均匀地涂开，并滴加等量的溶解抗葡萄球菌融合蛋白的PBS缓冲液为对照组，37℃培养12h后，观察抗葡萄球菌融合蛋白对不同宿主菌的裂解作用，结果如表1所示。
表1抗葡萄球菌融合蛋白的抑菌谱对检测菌种的抑菌圈大小
Figure BDA0002400922890000061
Figure BDA0002400922890000071
注：表1中“+”代表微弱抑菌圈，“++”代表显著抑菌圈，“-”代表无抑菌圈。
由抑菌结果可知，抗葡萄球菌融合蛋白对三种金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及假中间葡萄球菌均有较好的裂解活性，对其他种属菌株无反应。
实施例4抗葡萄球菌融合蛋白的稳定性试验
复苏金黄色葡萄球菌(CICC 10001)，取100μL过夜培养的菌液(菌含量109CFU/mL)均匀涂布于LB固体培养基。将实施例2获得的抗葡萄球菌融合蛋白溶液(1mg/mL)pH调整为4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0，分别将100μL不同pH的抗葡萄球菌融合蛋白滴于LB固体培养基正中央并均匀地涂开，并滴加等量不同pH的PBS缓冲液为对照组，37℃培养12h后，观察不同pH抗葡萄球菌融合蛋白对金黄色葡萄球菌裂解后的抑菌圈大小，结果如图4所示，该抗葡萄球菌融合蛋白作用的pH范围较广，在pH 4.0-9.0之间均能裂解金黄色葡萄球菌CICC10001，最适pH为6.0。取100μL pH调整为6.0的抗葡萄球菌融合蛋白，滴到LB固体培养基正中央并均匀地涂开，分别置于20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃条件下培养12h，观察抗葡萄球菌融合蛋白在不同温度下对金黄色葡萄球菌裂解后的抑菌圈大小，结果如图5所示，该抗葡萄球菌融合蛋白作用的温度范围较广，在20-50℃之间均能裂解金黄色葡萄球菌CICC 10001，最适温度为35℃。
实施例5抗葡萄球菌融合蛋白在牛奶中的杀菌效果试验
复苏金黄色葡萄球菌(CICC 10001)，取50μL过夜培养的菌液(菌含量109CFU/mL)加入到50mL巴氏杀菌牛奶中，加入100μL抗葡萄球菌融合蛋白(调整浓度到1mg/mL)，对照组加入等量的PBS缓冲液。将上述样品置于35℃，分别于0.5h、1h、2h和4h后检测金黄色葡萄球菌数量。结果如图6所示，加入抗葡萄球菌融合蛋白0.5h后，牛奶中金黄色葡萄球菌数量比对照组显著下降，随着作用时间延长，牛奶中金黄色葡萄球菌数量剧烈减少，在加入抗葡萄球菌融合蛋白2h后，金黄色葡萄球菌数量比对照组减少了3.2个log10，本发明所述抗葡萄球菌融合蛋白对食品中的葡萄球菌有很好地杀菌效果。
序列表
<110> 苏州十一方生物科技有限公司
<120> 一种融合抗菌蛋白的制备及应用
<130> 20200301
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1548
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 1
atggcgaaaa cccaggcaga aattaataaa cgtctggatg cctatgctaa aggcactgtt 60
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Met Ala Lys Thr Gln Ala Glu Ile Asn Lys Arg Leu Asp Ala Tyr Ala
1 5 10 15
Lys Gly Thr Val Asp Ser Pro Tyr Arg Val Lys Lys Ala Thr Ser Tyr
20 25 30
Asp Pro Ser Phe Gly Val Met Glu Ala Gly Ala Ile Asp Ala Asp Gly
35 40 45
Tyr Tyr His Ala Gln Cys Gln Asp Leu Ile Thr Asp Tyr Val Leu Trp
50 55 60
Leu Thr Asp Asn Lys Val Arg Thr Trp Gly Asn Ala Lys Asp Gln Ile
65 70 75 80
Lys Gln Ser Tyr Gly Thr Gly Phe Lys Ile His Glu Asn Lys Pro Ser
85 90 95
Thr Val Pro Lys Lys Gly Trp Ile Ala Val Phe Thr Ser Gly Ser Tyr
100 105 110
Glu Gln Trp Gly His Ile Gly Ile Val Tyr Asp Gly Gly Asn Thr Ser
115 120 125
Thr Phe Thr Ile Leu Glu Gln Asn Trp Asn Gly Tyr Ala Asn Lys Lys
130 135 140
Pro Thr Lys Arg Val Asp Asn Tyr Tyr Gly Leu Thr His Phe Ile Glu
145 150 155 160
Ile Pro Val Lys Ala Gly Thr Thr Val Lys Lys Glu Thr Ala Lys Lys
165 170 175
Ser Ala Ser Lys Thr Pro Ala Pro Lys Lys Lys Ala Thr Leu Lys Val
180 185 190
Ser Lys Asn His Ile Asn Tyr Thr Met Asp Lys Arg Gly Lys Lys Pro
195 200 205
Glu Gly Met Val Ile His Asn Asp Ala Gly Arg Ser Ser Gly Gln Gln
210 215 220
Tyr Glu Asn Ser Leu Ala Asn Ala Gly Tyr Ala Arg Tyr Ala Asn Gly
225 230 235 240
Ile Ala His Tyr Tyr Gly Ser Glu Gly Tyr Val Trp Glu Ala Ile Asp
245 250 255
Ala Lys Asn Gln Ile Ala Trp His Thr Gly Asp Gly Thr Gly Ala Asn
260 265 270
Ser Gly Asn Phe Arg Phe Ala Gly Ile Glu Val Cys Gln Ser Met Ser
275 280 285
Ala Ser Asp Ala Gln Phe Leu Lys Asn Glu Gln Ala Val Phe Gln Phe
290 295 300
Thr Ala Glu Lys Phe Lys Glu Trp Gly Leu Thr Pro Asn Arg Lys Thr
305 310 315 320
Val Arg Leu His Met Glu Phe Val Pro Thr Ala Cys Pro His Arg Ser
325 330 335
Met Val Leu His Thr Gly Phe Asn Pro Val Thr Gln Gly Arg Pro Ser
340 345 350
Gln Ala Ile Met Asn Lys Leu Lys Asp Tyr Phe Ile Lys Gln Ile Lys
355 360 365
Asn Tyr Met Asp Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Val Val Lys Asp Gly
370 375 380
Lys Thr Ser Ser Ala Ser Thr Pro Ala Thr Arg Pro Val Thr Gly Ser
385 390 395 400
Trp Lys Lys Asn Gln Tyr Gly Thr Trp Tyr Lys Pro Glu Asn Ala Thr
405 410 415
Phe Val Asn Gly Asn Gln Pro Ile Val Thr Arg Ile Gly Ser Pro Phe
420 425 430
Leu Asn Ala Pro Val Gly Gly Asn Leu Pro Ala Gly Ala Thr Ile Val
435 440 445
Tyr Asp Glu Val Cys Ile Gln Ala Gly His Ile Trp Ile Gly Tyr Asn
450 455 460
Ala Tyr Asn Gly Asn Arg Val Tyr Cys Pro Val Arg Thr Cys Gln Gly
465 470 475 480
Val Pro Pro Asn Gln Ile Pro Gly Val Ala Trp Gly Val Phe Lys Cys
485 490 495
Thr Phe Thr Leu Pro Gly Gly Gly Gly Val Cys Thr Leu Thr Ser Glu
500 505 510
Cys Ile Cys
515

Claims (10)

1.一种抗葡萄球菌融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白自氨基端到羧基端依次含有葡萄球菌噬菌体裂解酶LysK和抗菌肽Mersacidin的序列；所述的融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.一种编码权利要求1所述的融合蛋白的基因，其特征在于，所述的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
3.一种重组表达载体，其特征在于，所述的重组表达载体包括SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。
4.一种重组菌，其特征在于，所述的重组菌包括权利要求3所述的重组表达载体。
5.一种融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤：
（1）人工合成SEQ ID NO:1所示核苷酸序列；
（2）将步骤（1）合成的序列连接到表达载体中，得到重组质粒；
（3）将步骤（2）得到的重组质粒转化宿主菌，得到重组大肠杆菌；
（4）诱导重组菌表达抗葡萄球菌融合蛋白；
（5）收集步骤（4）得到的菌体，破碎细胞并对上清液进行纯化；
（6）将步骤（5）纯化得到的蛋白进行去毒处理，即获得所述抗葡萄球菌融合蛋白。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（2）中所述的表达载体为pET32a(+)表达载体；所述的人工合成序列通过BamH I、Xho I酶切位点连接到表达载体。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（3）的宿主菌为BL21(DE3)宿主菌；所述的步骤（4）中诱导重组菌表达条件为0～1 mmol/L IPTG，4-37℃诱导。
8.权利要求1所述融合蛋白、权利要求2所述的重组表达载体、权利要求3所述的重组菌和权利要求4-7任一项所述的制备方法在防治葡萄球菌污染中的应用。
9.一种针对葡萄球细菌感染的药物，其特征在于，所述的药物中包含权利要求1所述的抗葡萄球融合蛋白。
10.一种葡萄球菌抑制剂或其添加剂，其特征在于，所述的抑制剂或其添加剂包含权利要求1所述的抗葡萄球菌融合蛋白。
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