CZ285741B6 - Rekombinantní mersacidin a způsob jeho přípravy - Google Patents
Rekombinantní mersacidin a způsob jeho přípravy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ285741B6 CZ285741B6 CZ952318A CZ231895A CZ285741B6 CZ 285741 B6 CZ285741 B6 CZ 285741B6 CZ 952318 A CZ952318 A CZ 952318A CZ 231895 A CZ231895 A CZ 231895A CZ 285741 B6 CZ285741 B6 CZ 285741B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- sequence
- amino acid
- mersacidin
- premersacidin
- promersacidin
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
- C07K7/54—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring
- C07K7/56—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring the cyclisation not occurring through 2,4-diamino-butanoic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Popisuje se sekvence strukturního genu pro peptidové antibiotikum mersacidin. Sekvenování tohoto genu odhalilo, že premersacidin se skládá z neobyčejně dlouhé vedoucí sekvence čítající 48 aminokyselin a 20 aminokyselin dlouhé peptidové části, která je v průběhu biosyntézy modifikována v maturované lantibiotikum.
ŕ
Description
Oblast techniky
Vynález popisuje sekvenci genu pro peptidové antibiotikum mersacidin. Sekvenování tohoto genu odhalilo, že premarsacidin se skládá z neobyčejně dlouhé vedoucí sekvence čítající 48 aminokyselin a 20 aminokyselin dlouhé propeptidové části, která je v průběhu biosyntézy modifikována v maturované lantibiotikum.
Dosavadní stav techniky
Mersacidin patří do skupiny baktericidních peptidů, které jsou díky tomu, že obsahují neobvyklé aminokyseliny lanthionin a/nebo 3-methyllanthionin, označovány jako lantibiotika. Další modifikované aminokyseliny jako například dehydroalanin nebo dehydrobutyrin se v lantibiotikách vyskytují pravidelně, zatímco S-aminovinylcystein a lysinoalanin byly prokázány pouze v některých lantibiotikách (G. Jung (1 991), Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 30: str. 1 051 až 1 068). Lantibiotika produkují grampozitivní bakterie, ve kterých jsou z ribosomálně syntetizovaných prepeptidů odvozovány postranslační modifikací. Strukturní geny kódující lantibiotika byly nalezeny jak v bakteriálním chromosomu (například subtilin nebo cinnamycin), nebojsou umístěny v pohyblivých elementech jakými jsou transpozony (například nisin) nebo ve velkých plasmidech (například epidermin a Pep5). Prepeptidy sestávají zNkoncové vedoucí sekvence, která je po transportu z mateřské buňky odštěpena a dále zCkoncového prepeptidů, který je posttranslačně modifikován na maturované lantibiotikum (G. Jung (1 991), viz výše). V prvním modifikačním kroku jsou serinové threoninové zbytky dehydrovány za vzniku dehydroalaninu (Dha) nebo dehydrobutyrinu (Dhb), (Η. - P. Weil a další (1990), Eur. J. Biochem. 194: str. 217 až 223). V dalším kroku reagují SH-skupiny cysteinových zbytků s dvojnými vazbami zbytků Dha nebo Dhb za vzniku lanthioninu respektive methyllanthioninu.
Mersacidin byl izolován z kultivačních supematantů kultur bakterií Bacillus spec. HIL Y-85, 54 728. Toto lantibiotikum si zaslouží pozornost zejména pro svoji výraznou účinnost proti methicillin-resistentním kmenům bakterií Staphyllococcus aureus (MRSA) in vivo (S. Chatterjee a další (1 992), J.Antibiotics 45: 839 až 845). Toto zatím nejmenší izolované lantibiotikum (1825) je syntetizováno z propeptidu o délce 20 aminokyselin a obsahuje tři methyllanthioninové zbytky, jeden dehydroalaninový a jeden S-aminovynil-2-methyl-cysteinový (obrázek l.A), (S.Chatterjee a další (1992), J.Antibiotics 45: str. 832 až 838). Mersacidin nenese žádný souhrnný náboj a jako celek vykazuje hydrofobní vlastnosti. Současné výsledky ukazují, že mersacidin zasahuje do biosyntézy peptidoglykanů. Děje se tak nejspíše na úrovni transglykosylace pomocí mechanismu, který je odlišný od v současnosti používaných antibiotik proti MRSA.
Podstata vynálezu
Vynález popisuje premersacidin s aminokyselinovou sekvencí podle obrázku 2 od aminkyseliny číslo 1 po aminokyselinu číslo 68 a dále pak promersacidin s aminokyselinovou sekvencí podle obrázku 2 od aminokyseliny číslo 49 po aminokyselinu číslo 68.
Dalším provedením vynálezu je DNA kódující premersacidin nebo promersacidin, především DNA s nukleotidovou sekvencí podle obrázku 2 od nukleotidu číslo 22 po nukleotid číslo 225 kódující premersacidin nebo od nukleotidu číslo 166 po nukleotid číslo 225 kódující
-1 CZ 285741 B6 promersacidin, dále pak vektor obsahující tuto DNA a hostitelská buňka, která obsahuje tento vektor.
Dalším provedením vynálezu je postup přípravy premersacidinu, promersacidinu nebo maturovaného mersacidinu pomocí metod rekombinantní DNA, které jsou odborníkům všeobecně známy, to jest kultivace vhodných hostitelských buněk, které obsahují uvedenou DNA za vhodných podmínek, následná izolace premersacidinu, promersacidinu nebo maturovaného mersacidinu produkovaného uvedenými hostitelskými buňkami, ve výhodném provedení vynálezu gram-pozitivními bakteriemi jako jsou bakterie rodu Bacillus, Streptomyces nebo Streptococcus.
Dále vynález popisuje použití premersacidinu, promersacidinu nebo genů kódujících tyto peptidy k přípravě maturovaného mersacidinu tak, jako je popsáno například v WO 90/00 558.
Maturovaný mersacidin je využitelný například jako peptidové antibiotikum při konzervaci potravin zejména proti methicillin-resistentním kmenům bakterií Staphylococcus aureus, nebo jako antibiotikum při léčbě infekcí způsobených bakteriemi Staphylococcus aureus u zvířat i člověka. Vynálezu může být rovněž využito k získání derivátů mersacidinu s modifikovanou aminokyselinovou sekvencí s omezeným spektrem antibiotických účinků nebo odlišnou účinností. Dále vynález otevírá možnosti exprese mersacidinu nebo jeho derivátů pomocí genového inženýrství.
Popis obrázků
Obrázek 1:
A) Struktura lantibiotika mersacidinu (zkratka „Abu“ označuje 2-aminomáselnou kyselinu)
B) Předpokládaná nukleotidová sekvence prepeptidu a sekvence 51 nukleotidů dlouhého předpokládaného oligonukleotidů, který byl použit k identifikaci strukturního genu.
Obrázek 2:
Sekvence nukleotidů strukturního genu mrsA lantibiotika mersacidinu a dedukovaná sekvence aminokyselin prepeptidu. Vazebné místo pro ribosom před startovním kodónem ATG je označeno obdélníkem a místo štěpení šipkou. Předpokládaný rho-nezávislý terminátor je označen podtržením.
Obrázek 3:
Srovnání vedoucích sekvencí některých lantibiotik. Tučně jsou vytištěny konzervované sekvence.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: Klonování strukturního genu pro mersacidin
Pravděpodobná sekvence propeptidu mersacidinu (obrázek 1B) byla vydedukována ze struktury mersacidinu a obecných znalostí o průběhu biosyntézy lantibiotik. Zobrazená sonda byla syntetizována jako 51 bází dlouhý oligonukleotid se sekvencí předpokládanou pro propedtid (guessmer). Tento odhad byl založený na využití kodónů preferovaných bakteriemi Bacillus
-2CZ 285741 B6 pomocí PCR-Mate(R) (Applied Biosystems, Weiterstadt, SRN) a označený digoxigeninem (Boehringer Mannheim, Mannheim,SRN), (obrázek 1B).
Zbytky kyseliny aminomáselné (Abus-část methyllanthioninu) vznikají zthreoninů, zatímco alaninové zbytky (Alas-část methyllanthioninu) jsou kódovány v propeptidu jako cysteiny. Saminovinylcystein, který vytváří terminální smyčku, vzniká pravděpodobně oxidační dekarboxylací methyllanthioninu podobně, jak bylo dokázáno u epiderminu, který obsahuje Ckoncový S-aminovinylcystein (T. Kupke a další, (1 992), J. Bacteriol. 174: str. 5354 až 5361.
Vzhledem k tomu, že v produkčním kmeni bakterií nabyla prokázána přítomnost plasmidů, byla izolována chromosomální DNA podle J. Marmura, (1961), J. Mol. Biol. 3: str 208 až 218. Byla přitom provedena pouze jedna extrace chloroformem a precitipace a poté byla DNA rozpuštěna ve vyrovnávacím pufru a přečištěna na koloně Qiagen-tip(R) 100 (Diagen, Hilden, SRN). Po štěpení enzymem Hind III hybridizoval se sondou v Southemově blotu (E.M. Southem, (1975), J. Mol. Biol. 3, str. 503 až 517) při teplotě 51 °C jeden restrikční fragment o velikosti 2 kb. Fragmenty o velikosti od 1,9 do 2,3 kb byly vyříznuty z gelu a poté byly eluovány pomocí kitu BIOTRAP<R) (Schleicher a Schiill, Dassel, SRN). Dalším krokem bylo nakloňování fragmentů pomocí plasmidů pUC18 (C. Yanish-Perron a další (1985), Gene 33: str. 103 až 109) do baktrií E. coli. Plasmidy několika těchto rekombinantních bakteriálních kolonií byly izolovány pomocí metody Bimboima a Dolyho (H.C. Bimboim a J. Doly (1979), Nucl. Acids. Res. 7: str. 1513 až 1523). Po jejich rozštěpení pomocí emzymu Hind III byla testována jejich schopnost hybridizace se sondou (guessmer). Jeden z klonů poskytujících pozitivní signál byl poté podroben restrikčnímu štěpení různými restrikčními enzymy a získané fragmenty byly testovány v Southemově blotu. Nakonec byl 1,3 kb dlouhý EcoR I - Hind III fragment vložen do plasmidů pEMBL 18 a pEMBL 19 (L.Dente a další (1 983), Nucl. Acids Res. 7: str. 1645 až 1655) a nakloňován v E. coli. Dále byl 0,6 kb dlouhý EcoR V fragment nakloňován ve vektoru pUCl (J. Augustin a další (1992), Eur. J. Biochem. 204: str. 1194 až 1154). Restrikční místo EcoR V bylo vytvořeno místně specifickou mutací místa EcoR I pomocí transformační, místně specifické mutační sady (Clontech, Palo Alto, USA).
Příklad 2: Nukleotidová sekvence strukturního genu pro mersacidin, mrsA
0,6 kb dlouhý fragment dvouvláknové DNA byl sekventován metodou terminace nukleotidového řetězce dideoxynukleotidy (F. Sanger a další (1977), Proč. Nati. Acad. Sci. USA 74: str. 5463 až 5467) pomocí automatického sekvenátoru A.L.F. (Pharmacia, Brusel, Belgie). Jako primerů bylo použito univerzálního a zpětného primem ze sekvenční sady AutoRead(R) (Pharmacia, Brusel, Belgie) a dvou syntetických oligonukleotid 5-TCTCTTCCATTTTTTTG-3' a 5'-AAATCAAATTAACAAATAC-3'. Nukleotidová sekvence strukturního genu pro mersacidin (mrsA) je ukázána na obrázku 2. Potenciální vazebné místo pro ribosom (AGG GGG) bylo nalezeno osm párů bází proti směru tanskripce od startovního kodómu ATG na počátku otevřeného čtecího rámce. C-terminální část proteinu podle této sekvence je ve shodě s publikovanou primární strukturou mersacidinu (S. Chatterjje a další (1992), J. Antibiotics 45: str. 832 až 838) a s předpokládanou strukturou jeho propeptidu. N-terminální část sestává z 48 aminokyselin dlouhé vedoucí sekvence (označena šipkou na obrázku 2). Promersacidin se skládá z 20 aminokyselin. Z toho vyplývá, že celková délka prepeptidu je 68 aminokyselin a vypočtená molekulová hmotnost 7228. Osm bází po směru transkripce od stop kodónu TAA se nachází vlásenková struktura s komplementárním úsekem dlouhým 14 párů bází a s hodnotou volné energie -86, 7 kJ/mol. Tato vlásenka může sloužit jako rho-nezávislý terminátor transkripce jelikož je následována sekvencí TTTATT (obrázek 2).
-3 CZ 285741 B6
Příklad 3: Charakterizace prepeptidu mersacidinu
Lantibiotika se dělí na dvě podskupiny (G. Jung (1991), viz výše). Lantibiotika typu A jsou protáhlé amfífílní peptidy, které vytvářejí v membráně sensitivní bakterie póry (H5 G. Sáhl (1991), Póre formation in bacterial membranes by cationic lantibiotics, str. 347 až 358, v knize G. Jung a H.-G. Sáhl, Nisin and novel lantibiotics, Escom, Leiden). Lantibiotika typu B jsou globulámí peptidy produkované streptomycetami, mají molekolovou hmotnost menší než 2100 a mají vysoce homologické aminokyselinové sekvence, jakož i kruhovou strukturu vznikající kondenzaci typu hlava-pata (G. Jung (1991), viz výše. Do současné doby nebylo io možno zařadit mersacidin ani do jedné z uvedených skupin (G. Bierbaum a H.-G. Sáhl (1993),
Zbl. Bakt. 278: str. 1 až 22). Vzhledem k tomu je srovnání sekvence prepeptidu mercacidinu se sekvencemi prepeptidů lantibiotik typu A a B velmi zajímavé.
Ve vedoucí sekvenci mersacidinu jsou zachovány dvě obecné vlastnosti vedoucích sekvencích 15 lantibiotik: a) ve vedoucí sekvenci se nenachází žádný cystein (G. Jung (1991), viz výše), b) v C-koncové oblasti vedoucí sekvence se předpokládá sklon k tvorbě α-helixu. Tyto strukturní prvky byly rovněž předpovězeny a později prokázány měřením cirkulámího dichroismu ve směsi trifluoroethanol/voda (A. G. Beck-Sickinger a G. Jung, Synthesis and conformational analysis of lantibiotik lesder-, pro- and prepeptides, str. 218 až 230, v knize G. Jung a H.-G. Sáhl, Nisin 20 and novel lantibiotics, Escom, Leiden) u vedoucích peptidů lantibiotik typu A. Ve všech ostatních rysech se vedoucí sekvence mersacidinu liší od dosud popsaných vedoucích sekvencí lantibiotik typu A. Z obrázku 3 je patrné, že vedoucí sekvence mersacidinu se svojí délkou a distribucí náboje (48 aminokyselin, 12 nábojů) podobá spíše neobyčejně dlouhé (59 aminokyselin, 11 nábojů) vedoucí sekvenci lantibiotika typu B cinamycinu (C. Kaletta 25 a další (1989), Pep5, a new lantibiotic: structural gene isolation and prepeptide seguence, Arch.
Microbiol. 152: str. 16 až 19). Naproti tomu je sekvence A typu lantibiotik vysoce nabitá, například vedoucí peptid lantibiotika Pep5 obsahuje 10 nabitých aminokyselinových zbytků z celkového počtu pouhých 20 aminokyselin ve vedoucí sekvenci (C. Kaletta a další (1989), viz výše). Ve vedoucí sekvenci mersacidinu se rovněž nenachází konzervované sekvence lantibiotik 30 typu A (například motiv F D/N L D/E). Místo štěpení proteázou ve vedoucí sekvenci mersacidinu Ú*M- 3E- ”2A- A- +1C) se rovněž liší od konzervovaného místa štěpení lantibiotik typu A (obr. 3). U těchto lantibiotik nacházíme místo štěpení nisinového typu (-1, kladně nabitá aminokyselina; -2. Prolin; -3, negativně nabitá nebo polární aminokyselina;
—4 hydrofobní) nebo místa štěpení obsahující hydrofobní glycin, jako je tomu u lacticinu 35 481 (J.C. Piard (1993), J.Biol. Chem., 268: str. 16 361 až 16 368) nebo u streptococcinu
A-FF22 (W. L. Hyneš a další (1993), Appl. Env. Biol. 59, str. 1969 až 1971). Místo proteázového štěpení cinnamycinu (~3A-_2F-A), (C. Kaletta a další (1989), viz výše) je ve shodě s pravidelným místem štěpení (’3A-'2X-_1A), které se vyskytuje u proteinů sekretovaných metabolickou cestou Sec. Navíc prepeptid mersacidinu nevykazuje žádnou 40 homologii s konzervovanými sekvencemi vedoucího peptidu lantibiotik typu A. Lze sice nalézt podobnost v délce a rozložení náboje s prepeptidem cinnamycinu avšak sekvenční homologie na úrovni aminokyselin není zřejmá.
Mersacidin je menší než lantibiotika typu A, nemá pozitivní náboj a nedepolarizuje membránu, 45 ale spíše inhibuje biosyntézu peptidoglykanů. To, spolu s vlastnostmi vedoucí sekvence, ukazuje, že mersacidin je bližší lantibiotikům typu B než typu A. V současnosti byla objasněna struktura a charakter kondenzačního prstence dalšího lantibiotika, actagardinu, kteiý rovněž inhibuje biosyntézu buněčné stěny (S. Somma a další (1977), Antimicrob. Agents Chemoter. 11: str 396 až 401). Srovnání s mersacidinem ukazuje, že jeden z prstenců je téměř zcela 50 konzervován v obou lantibiotikách. Vzhledem k vysoké homologii doposud charakterizovaných lantibiotik typu B duramycinu A, B, C, ancovaninu a strukturní varianty, jako je tomu u epiderminu a galliderminu nebo nisinu A a Z. Proto navrhujeme, aby byl mersacidin a actagardin řazen mezi lantibiotika typu B a aby tato skupina lantibiotik nebyla omezena
-4CZ 285741 B6 výlučně na strukturní varianty duramycinu, ale na malá, globulámí lantibiotika nesoucí malý náboj a inhibující enzymovou aktivitu.
INFORMACE O SEKVENCI ID. Č. 1 ( i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 17 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) POČET VLÁKEN: jedno (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (iii) : HYPOTETICKÁ: ano ( iii ) ANTI-SENSE: ano ( vi ) CHARAKTERISTICKÉ RYSY:
(A) JMÉNO/KLÍČ: exon (B) UMÍSTĚNÍ: 1 až 17
POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č.l:
TCTCTTCCAT TTTTTTG
INFORMACE O SEKVENCI ID. Č. 2:
( i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 19 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) POČET VLÁKEN: jedno (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (iii) HYPOTETICKÁ: ano (iii) ANTI-SENSE: ano ( vi ) CHARAKTERISTICKÉ RYSY:
(A) JMÉNO/KLÍČ: exon (B) UMÍSTĚNÍ: 1 až 19 (ix ) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID: Č. 2:
AAATC AAATT AACAAATAC
INFORMACE O SEKVENCI ID. Č. 3:
(i ) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 288 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) POČET VLÁKEN: jedno (D) TOPOLOGIE: lineární ( ii ) TYP MOLEKULY: DNA (genová) ( iii ) HYPOTETICKÁ: ne
-5CZ 285741 B6 ( iii ) ANTI-SENSE: ano ( vi ) PŮVODNÍ ZDROJ:
(A) VĚDECKÝ NÁZEV: Mersacidin (B) KMEN: Bacillus (C) INDIVIDUÁLNÍ ISOLÁT: HIL Y-85, 54 728 ( ix) CHARAKTERISTICKÉ RYSY:
(A) JMÉNO/KLÍČ: RBS (B) UMÍSTĚNÍ: 1 až 21 ( ix ) CHARAKTERISTICKÉ RYSY:
(A) JMÉNO/KLÍČ: CDS (B) UMÍSTĚNÍ: 22 až 225 (ix) CHARAKTERISTICKÉ RYSY:
(A) JMÉNO/KLÍČ: Terminátor (B) UMÍSTĚNÍ: 208 až 288 ( ix ) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID:Č 3.
CTTAATAAGG GGGTGAATAC A ATG AGT | CAA GAA | GCT Ala 5 | ATC Ile | ATT Ile | CGT Arg | TCA Ser | TGG Trp 10 | 51 | ||||||||
Met 1 | Ser | Gin | Glu | |||||||||||||
AAA | GAT | CCT | TTT | TCC | CGT | GAA | AAT | TCT | ACA | CAA | AAT | CCA | GCT | GGT | AAC | 99 |
Lys | Asp | Pro | Phe | Ser | Arg | Glu | Asn | Ser | Thr | Gin | Asn | Pro | Ala | Gly | Asn | |
15 | 20 | 25 | ||||||||||||||
CCA | TTC | .AGT | GAG | CTG | AAA | GAA | GCA | CAA | ATG | GAT | AAG | TTA | GTA | GGT | GCG | 147 |
Pro | Phe | Ser | Glu | Leu | Lye | Glu | Ala | Gin | Met | Asp | Lys | Leu | Val | Gly | Ala | |
30 | 35 | 40 | ||||||||||||||
GGA | GAC | ATG | GAA | GCA | GCA | TGT | ACT | TTT | ACA | TTG | CCT | GGT | GGC | GGC | GGT | 195 |
Gly | Asp | Met | Glu | Ala | Ala | Cys | Thr | Phe | Thr | Leu | Pro | Gly | Gly | Gly | Gly | |
45 | 50 | 55 | ||||||||||||||
GTT | TGT | ACT | CTA | ACT | TCT | GAA | TGT | ATT | TGT | TAATTTGATT TATATAGGCT | 245 | |||||
Val | Cya | Thr | Leu | Thr | Ser | Glu | Cye | Ile | Cys | |||||||
60 | 65 |
GTTTCCCTTC AGAAGGAACA GCCTATATTT TATTATATAA ACT 288
INFORMACE O SEKVENCI ID. Č. 4:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 68 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TOPOLOGIE: lineární ( ii ) TYP MOLEKULY: protein
POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 4:
-6CZ 285741 B6
Met 1 | Ser Gin | Glu | Ala 5 | Ile | Ile Arg | Ser Trp Lys Asp 10 | Pro | Phe | Ser 15 | Arg | |||||
Glu | Asn | Ser | Thr | Gin | Asn | Pro | Ala | Gly | Asn | Pro | Phe | Ser | Glu | Leu | Lys |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Glu | Ala | Gin | Met | Asp | Lys | Leu | Val | Gly | Ala | Gly | Asp | Met | Glu | Ala | Ala |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Cys | Thr | Phe | Thr | Leu | Pro | Gly | Gly | Gly | Gly | Val | Cys | Thr | Leu | Thr | Ser |
50 | 55 | 60 |
Glu Cys Ile Cys 65
Claims (10)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Premersacidin k přípravě maturovaného mersacidinu, jehož aminokyselinová sekvence odpovídá sekvenci na obr. 2 od aminokyseliny číslo 1 po aminokyselinu číslo 68.
- 2. Promersacidin k přípravě maturovaného mersacidinu, jehož aminokyselinová sekvence odpovídá sekvenci na obrázku 2 od aminokyseliny číslo 49 po aminokyselinu číslo 68.
- 3. DNA kódující premersacidin podle nároku 1.
- 4. DNA kódující premersacidin, jejíž sekvence nukleotidů odpovídá sekvenci na obrázku 2 od nukleotidu 22 po nukleotid 225.
- 5. DNA kódující promersacidin podle nároku 2.
- 6. DNA kódující promersacidin, jejíž sekvence nukleotidů odpovídá sekvenci na obrázku 2 od nukleotidu 166 po nukleotid 225.
- 7. Vektor obsahující DNA podle libovolného z nároků 3, 4, 5 nebo 6.
- 8. Hostitelská buňka obsahující vektor podle nároku 7.
- 9. Způsob přípravy premersacidinu, promersacidinu nebo maturovaného mersacidinu, vyznačující se tím, že obsahuje tyto kroky:a) kultivaci vhodných hostitelských buněk obsahujících sekvenci DNA podle nároků 3 až 6 za vhodných podmínek ab) izolaci premersacidinu, promersacidinu nebo maturovaného mersacidinu.
- 10. Použití premersacidinu nebo promersacidinu podle nároků 1 nebo 2 k přípravě maturovaného mersacidinu.3 výkresyTTT ACA CTG CCT GGA GGA GGA GGA GTT TGT ACA CTG ACA TCA GAA TGT ATC
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP94114298A EP0700998B1 (en) | 1994-09-12 | 1994-09-12 | Recombinant mersacidin and a method for production |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ231895A3 CZ231895A3 (en) | 1996-03-13 |
CZ285741B6 true CZ285741B6 (cs) | 1999-10-13 |
Family
ID=8216276
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ952318A CZ285741B6 (cs) | 1994-09-12 | 1995-09-08 | Rekombinantní mersacidin a způsob jeho přípravy |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5667991A (cs) |
EP (1) | EP0700998B1 (cs) |
JP (1) | JPH0898695A (cs) |
KR (1) | KR100394289B1 (cs) |
CN (1) | CN1149287C (cs) |
AT (1) | ATE255165T1 (cs) |
AU (1) | AU696450B2 (cs) |
CA (1) | CA2157975C (cs) |
CZ (1) | CZ285741B6 (cs) |
DE (1) | DE69433357T2 (cs) |
DK (1) | DK0700998T3 (cs) |
ES (1) | ES2207636T3 (cs) |
FI (1) | FI120100B (cs) |
HU (1) | HU216619B (cs) |
IL (1) | IL115242A0 (cs) |
NZ (1) | NZ272960A (cs) |
PT (1) | PT700998E (cs) |
RU (1) | RU2198924C2 (cs) |
SI (1) | SI9500270B (cs) |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6778596B1 (en) * | 1999-03-12 | 2004-08-17 | Aware, Inc. | Method and multi-carrier transceiver with stored application profiles for supporting multiple applications |
AU770037B2 (en) * | 1999-03-12 | 2004-02-12 | Daphimo Co. B.V., Llc | Seamless rate adaptive multicarrier modulation system and protocols |
US6861236B2 (en) | 2002-05-24 | 2005-03-01 | Applied Nanosystems B.V. | Export and modification of (poly)peptides in the lantibiotic way |
US7592308B2 (en) | 2004-03-26 | 2009-09-22 | Novacta Biosystems Limited | F3W variants of the lantibiotic mersacidin and its use |
GB0406870D0 (en) * | 2004-03-26 | 2004-04-28 | Novacta Biosystems Ltd | Improvements relating to the production of lantibiotics |
WO2007036706A1 (en) * | 2005-09-27 | 2007-04-05 | Novacta Biosystems Limited | Variants of the lantibiotic mersacidin and their use |
GB0600928D0 (en) | 2006-01-17 | 2006-02-22 | Novacta Biosystems Ltd | Improvements relating to lantibiotics |
GB0714030D0 (en) | 2007-07-18 | 2007-08-29 | Novacta Biosystems Ltd | The use of type-B lantibiotic-based compounds having antimicrobial activity |
GB0714029D0 (en) | 2007-07-18 | 2007-08-29 | Novacta Biosystems Ltd | Lantibiotic-based compounds having antimicrobial activity |
KR101612275B1 (ko) * | 2008-04-02 | 2016-04-14 | 사노피 | 악티노마두라 나미비엔시스로부터 유래된 고도로 브릿징된 펩타이드 |
WO2010058238A1 (en) * | 2008-11-24 | 2010-05-27 | Sentinella Pharmaceuticals, Inc. ("Sentinella") | Lantibiotic carboxyamide derivatives with enhanced antibacterial activity |
JP5719312B2 (ja) | 2009-01-14 | 2015-05-13 | ノヴァクタ バイオシステムズ リミティッド | デオキシアクタガルジン誘導体 |
AU2010212183B2 (en) | 2009-02-04 | 2014-07-10 | Novacta Biosystems Limited | Actagardine derivatives |
GB201001688D0 (en) | 2010-02-02 | 2010-03-17 | Novacta Biosystems Ltd | Compounds |
GB201013513D0 (en) | 2010-08-11 | 2010-09-22 | Novacta Biosystems Ltd | Formulations |
CN106188253B (zh) * | 2016-08-26 | 2020-08-18 | 上海交通大学 | 抗菌肽Lexapeptide及其制备方法和用途 |
US20220127628A1 (en) | 2019-02-05 | 2022-04-28 | Elanco Us Inc. | A genetically modified lactobacillus and uses thereof |
CN111235119B (zh) * | 2020-03-05 | 2021-11-23 | 苏州十一方生物科技有限公司 | 一种融合抗菌蛋白的制备及应用 |
CN114457102B (zh) * | 2022-02-24 | 2023-12-26 | 重庆市畜牧科学院 | 用于编码分泌型Mersacidin的基因表达盒及其制备方法 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5218101A (en) * | 1988-07-05 | 1993-06-08 | The University Of Maryland | Leader sequence inducing a post-translational modification of polypeptides in bacteria, and gene therefor |
IN167138B (cs) * | 1988-08-17 | 1990-09-01 | Hoechst India |
-
1994
- 1994-09-12 AT AT94114298T patent/ATE255165T1/de active
- 1994-09-12 EP EP94114298A patent/EP0700998B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-12 DK DK94114298T patent/DK0700998T3/da active
- 1994-09-12 PT PT94114298T patent/PT700998E/pt unknown
- 1994-09-12 ES ES94114298T patent/ES2207636T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-12 DE DE69433357T patent/DE69433357T2/de not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-09-01 SI SI9500270A patent/SI9500270B/sl not_active IP Right Cessation
- 1995-09-08 AU AU30554/95A patent/AU696450B2/en not_active Ceased
- 1995-09-08 CZ CZ952318A patent/CZ285741B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-09-08 US US08/524,677 patent/US5667991A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-08 CN CNB951162330A patent/CN1149287C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-09-08 NZ NZ272960A patent/NZ272960A/en not_active IP Right Cessation
- 1995-09-08 FI FI954220A patent/FI120100B/fi not_active IP Right Cessation
- 1995-09-11 RU RU95115686/13A patent/RU2198924C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-09-11 IL IL11524295A patent/IL115242A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1995-09-11 HU HU9502643A patent/HU216619B/hu not_active IP Right Cessation
- 1995-09-11 CA CA002157975A patent/CA2157975C/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-09-11 JP JP7232356A patent/JPH0898695A/ja active Pending
- 1995-09-12 KR KR1019950029599A patent/KR100394289B1/ko not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU696450B2 (en) | 1998-09-10 |
SI9500270B (sl) | 2002-02-28 |
DE69433357T2 (de) | 2004-09-09 |
FI954220A0 (fi) | 1995-09-08 |
HU9502643D0 (en) | 1995-11-28 |
HUT73800A (en) | 1996-09-30 |
NZ272960A (en) | 1996-05-28 |
IL115242A0 (en) | 1995-12-31 |
JPH0898695A (ja) | 1996-04-16 |
EP0700998A1 (en) | 1996-03-13 |
CA2157975C (en) | 2008-11-18 |
ES2207636T3 (es) | 2004-06-01 |
ATE255165T1 (de) | 2003-12-15 |
RU2198924C2 (ru) | 2003-02-20 |
DK0700998T3 (da) | 2004-03-29 |
KR100394289B1 (ko) | 2003-10-22 |
HU216619B (hu) | 1999-07-28 |
AU3055495A (en) | 1996-03-28 |
SI9500270A (en) | 1996-04-30 |
EP0700998B1 (en) | 2003-11-26 |
DE69433357D1 (de) | 2004-01-08 |
CN1149287C (zh) | 2004-05-12 |
PT700998E (pt) | 2004-03-31 |
FI954220A (fi) | 1996-03-13 |
CA2157975A1 (en) | 1996-03-13 |
US5667991A (en) | 1997-09-16 |
FI120100B (fi) | 2009-06-30 |
CN1131192A (zh) | 1996-09-18 |
KR960010863A (ko) | 1996-04-20 |
CZ231895A3 (en) | 1996-03-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CZ285741B6 (cs) | Rekombinantní mersacidin a způsob jeho přípravy | |
Bierbaum et al. | Cloning, sequencing and production of the lantibiotic mersacidin | |
Engelke et al. | Identification and sequence analysis of the Rhizobium meliloti dctA gene encoding the C4-dicarboxylate carrier | |
Bierbaum et al. | Engineering of a novel thioether bridge and role of modified residues in the lantibiotic Pep5 | |
Schnell et al. | Analysis of genes involved in the biosynthesis of lantibiotic epidermin | |
Gaillard et al. | Entry of L. monocytogenes into cells is mediated by internalin, a repeat protein reminiscent of surface antigens from gram-positive cocci | |
Stein et al. | Two different lantibiotic-like peptides originate from the ericin gene cluster of Bacillus subtilis A1/3 | |
Martínez-Bueno et al. | Determination of the gene sequence and the molecular structure of the enterococcal peptide antibiotic AS-48 | |
Hastings et al. | Characterization of leucocin A-UAL 187 and cloning of the bacteriocin gene from Leuconostoc gelidum | |
Bierbaum et al. | Construction of an expression system for engineering of the lantibiotic Pep5 | |
AU2006333246B2 (en) | Bacteriocin inducer peptides | |
EP1169340B1 (en) | Lantibiotic | |
Kreft et al. | The actin-polymerization protein from Listeria ivanovii is a large repeat protein which shows only limited amino acid sequence homology to ActA from Listeria monocytogenes | |
Bahrani et al. | Proteus mirabilis MR/P fimbriae: molecular cloning, expression, and nucleotide sequence of the major fimbrial subunit gene | |
US6218362B1 (en) | Lantibiotic from Streptococcus mutans and uses thereof | |
US6699970B2 (en) | Mutacin I biosynthesis genes and proteins | |
Kaul et al. | Cloning and sequence analysis of the Chlamydia trachomatis spc ribosomal protein gene cluster | |
Oswald et al. | A sporulation gene in Coxiella burnetii? | |
US7067125B2 (en) | Antimicrobial polypeptides and methods of use | |
JPH10505743A (ja) | 双翅目の昆虫に対する有毒活性をもつ新しいポリペプチド | |
Quadri | Biochemical and genetic characterization of antimicrobial peptides produced by carnobacterium piscicola LV17B | |
Jack et al. | Genetic Engineering of Lantibiotics | |
ZA200209666B (en) | Anti-listeria bacteriocin. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20130908 |