ES2084639T4

ES2084639T4 - Derivados de N-(pirrolo[2,3-d]pirimidin-3-ilacetil)-glutámico

Info

Publication number: ES2084639T4
Application number: ES90123671T
Authority: ES
Inventors: Edward C. Taylor; Dietmar G. Kuhnt; Chuan Shih; Gerald B. Grindey
Original assignee: Eli Lilly and Co; Princeton University
Current assignee: Eli Lilly and Co; Princeton University
Priority date: 1989-12-11
Filing date: 1990-12-10
Publication date: 2013-06-11
Anticipated expiration: 2010-12-10
Also published as: PT96140B; DE69025723T2; DE69025723D1; EP0432677A1; ATE135007T1; IL96531A; AU6779190A; DE122005000012I1; ES2084639T3; LU91147I2; HU218483B; CY2076B1; HUT58335A; NL300181I1; CA2031890C; HU908147D0; IE904445A1; RU2057131C9; SG48098A1; DK0432677T3

Abstract

LOS DERIVADOS DE ACIDO N-(ACIL)GLUTAMICO EN LOS QUE EL GRUPO ACIDO SE SUSTITUYE CON UN GRUPO 4-HIDROXIPIRROLO[2, 3-D]-PIRIMIDIN-3-IL SON AGENTES ANTINEOPLASTICOS. UNA TIPICA PERSONIFICACION ES ACIDO N-[ 4-(2-{ 4-HIDROXI-6-AMINOPIRROLO[ 2, 3-D]PIRIMIDIN-3-IL}-ETIL) BENZOILO]-L-GLUTAMICO.

Description

El presente invento se refiere a derivados de ácido glutámico que tienen la fórmula

en donde:

Rl cs-OH 0-NH2;

R2 es hidrógeno o un catión farrnacéuticamente aceptable;

R3 es 1,4 -fenHeno o 1) -fenileno insustituido o sustituido por cloro, fiuoro, metilo, metoxilo, o triftuorornetilo~ tienedilo insustituido o sustituido por cloro.. fiuow, metilo, metoxilo¡ o triftuorometilo; ciclohexandiilo; o un grupo alifático divalente lineal o ramificado con 2 a 4 átomos de carbono;

R4

es hidrógeno;

R5 es hidrógeno, alquilo con 1 a 6 átomos de carbono, o amiDa;

y la configuración sobre el átomo de carbono designado *es S.

Los compuestos de este invento se describen aquí como incorporando el sistema de anillo heterocíclico pirrolo[2,3 -d]pirimidina cuyo sistema de anillo es numerado como sigue:

-: 0C , 5 N/ C---C 3

I 11 U

C:--.. /C C 2

'N 'N/

6 7 1

Se apreciará que las pirrolo[2,3 -d]pirimidinas como se expone en la fórmula 1 son el equivalente tautomérico de las estructuras 5 -H -6 -oxo o 5 -H -6 -amino correspondientes. A menos que se indique de otro modo) con el fin de simplificar los compuestos se exponen aquí y nombran utilizando la convención 6 -hidroxi y 6 -amino, entendiéndose que las estructuras 5 -H -6 -oxo y 5 -H -6 -imino son totalmente equivalentes.

Los compuestos de fónnula 1 tienen un efecto inhibidor sobre una o mas enzimas que utilizan ácido fólico y en particular derivados metabólicos de á.cido fólico como un substrato. Los compuestos resultan particularmente activos como inhibidorcs de timidilato sintetasa, que cataliza la metilación del ácido deoxiuridílico a á.cido deoxitimidílico utilizando N5 )NlO -metiliden -tetrahidrofolato corno una coenzima. Los compuestos pueden utilizarse por tanto, solos o en combinación, para inhibir el crecimiento de aquellos neoplasmas que de otro modo dependen de la enzima inhibida.

Los compuestos de la fórmula 1 tienen un efecto inhibidor sobre una o mas enzimas que utilizan ácido f6lico, y en particular derivados metabólicos de ácido fólico, como un substrato. Los compuestos resultan parrticularrnente activos corno inhibidores de timidilato sintetasa, que cataliza la metilación de ácido deoxiuridílico a ácido deoxitimidílico utilizando NS,N10 -metiliden -tetrahidrofolato como una coeuzima. Los compuestos por tanto pueden utilizarse, solos o en combinación, para inhibir el desarrollo de aquellos neoplasmas que de otro modo dependen de la enzima inhibida.

El invento se refiere también a las sales farmacéut.icamente aceptables de los compuestos de fórmula 1, a procedimientos para la preparación de estos compuestos y sus sales, a intermedios químicos útiles en la preparación de estos compuestos, a un método para combat.ir desarrollo neoplástico en un mamífero, y a composiciones fannacéuticas que contienen estos compuestos o sus sales.

Un primer grupo de intermedios químicos útiles, que pueden convertirse directamente en los compuestos finales deseados de fórmula 1 mediante la separación de grupos protectores, son compuestos de la fórmula:

II

en donde

R3 tiene el significado antes indicado;

R2' es hidrógeno o un grupo protector carboxi;

R4 ' es hidrógeno;

R5' es hidrógeno, alquilo, amino, o amino que comporta un grupo protector, y

R6 es hidrógeno o alcanoiloxilo;

siendo por lo menos uno de R2' y RS, un grupo protector carboxilo, un grupo protector hidroxilo, o un grupo protector amino, respectivamente.

Los compuestos de la fónnula 1 pueden utilizarse en forma del ácido dicarboxílico libre, en cuyo ca.''>o ambos grupos R2 son hidrógeno. Alternativamente los compuestos pueden utilizarse con frecuencia vent.ajosamente en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, en cuyo caso uno o ambos grupos

R2

son un catión farmacéuticamente aceptable. Estas formas de sal, incluyendo sus hidratos, son con frecuencia cristalinas y ventajosas para formar soluciones o formular composiciones farmacéuticas. Sales fannacéuticamente aceptables con bases incluyen las formadas a partir de metales alcalinos, metales alcalinotérreosl metales atóxicos, aminas amónicas, y mono -, di -Y trisustituidas, tal como, por ejemplo, las sales sódica, potásica, lítica, caldca, de magnesio, aluminio, zinc, amonio, trimetilamonio, trietanolamonio, piridinio y piridinio sustituidas. Son ventajosas las sales mono y di sódicas, particularmente la sal disódica.

El grupo R3 es un grupo divalente que tiene por lo menos dos átomos de carbono entre los átomos de carbono que comportan enlaces de valencia libre. R3 puede ser, por ejemplo, un anillo 1,4 -fenHeno

o 1,3 -fenileno que está insustituido o sustituido opcionalment.e por cloro, fiuoro, metilo, metoxilo o trifiuoromet.ilo.

Alternativamente, R3 puede ser un grupo de tienediilo, que es, un anillo de tiofeno del que se han separado dos átomos de hidrógeno de dos átomos de carbono de anillo, como por ejemplo los sistemas de anillo de tieno -2,5 -diilo, tieno -3,5 -diilo, tieno -2,4 -diilo, Y tieno -3,4 -diilo, cuyos sistemas de anillo pueden estar in.'mstituidos o sustituidos por cloro, fiuoro, met.ilo, metoxilo o trifiuorometilo. Se apreciará que mientras en el extracto el sistema tieno -3,5 -diilo es el equivalente del sistema tieno -2,4 -dii1o, los dos términos se utilizan aquí para denotar las dos formas isoméricas resultantes de la orientación del anillo tiofénico dentro del resto de la molécula: o sea la estructura en donde el grupo carboxilo expuesto

R3

adyacente a se encuentra en la posición 2 del anillo tiofeno y en donde el grupo carboxi expuesto adyacente a R 3 está en la posición 3 del anillo de tiofeno.

Alternativamente, R3 puede ser un grupo de ciclohexandiilo, o sea lUl grupo de cicloalcano divalente de 6 átomos de carbono tal como ciclohexano -1,3 -diilo y ciclohexano -1,4 -diilo.

Alternativamente, R3 puede ser un a1candiilo, o sea un grupo alifático divalente lineal o ramificado de 2 a 4 átomos de carbono tal como etano, trimetileno, tetrametileno, propan -1,2 -diilo, propan -2,3 -diilo, butan -2,3 -dino, butan -1,3 -diilo, y butan -2,4 -djiJo. De nuevo se apreciará que mientras en el extracto propan -1,2 -diilo es el equivalente de propan -2,3 -diilo, y butan -1,3 -diilo el equivalente de butan -2,4 -diilo, los dos términos se utilizan aquí para denotar las dos formas isoméricas resultantes de la orientación de una cadena de alcandiilo simétrica con respecto al resto de la molécula.

Los grupos protectores designados por R2' y R5' Y aquí utilizados denotan grupos que generalmente no se encuentran en los compuestos terapéuticos finales pero que se introducen intencionalmente en una etapa de la sin tesis con el fin de proteger grupos que de otro modo podrían reaccionar en el curso de manipulaciones químicas, separándose luego en una etapa posterior de la sin tesis.

Debido a que los compuestos que comportan estos grupos protectores son or tanto de importancia principalmente como intermedios quimicos (si bien algunos derivados exhiben también actividad biológica), su estructura precisa no es crítica. Numerosas reacciones para la. formación y separación de estos grupos protectores se describen en lUla serie de trabajos corrientes incluyendo, por ejemplo, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London y New York, 1973; Greene, Th. W. "Protective Groups in Orgallic Synthesis", Wiley, New Yoerk, 1981; "The Peptides", Vol. J, Schrüder and Lubke, Academic Press, London y New York, 1965; "Methoden der organischen Chemie", Houben -Weyl, 4ª edición, Vol. 15/1, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, cuya descripción se incorpora aquí como referencia.

Con respecto a R2', puede protegerse un grupo carboxilo como un grupo éster que es separable de modo selectivo bajo condiciones suficientemente suayes para no interrumpir la estructura deseada de la molécula, especialmente, un ester de alquilo inferior con 1 a 12 atarnos de carbono tal como metilo o etilo y particularmente uno que está ramificado en la posición 1 tal como t -butilo; y este ester de alquilo inferior sustituido en la posición 1 o 2 por (i) alcoxilo inferior, tal como por ejemplo, metoximetilo, 1 metoxietilo, y etoximetilo, (ii) alquiltio inferior, tal corno, por ejemplo metiltiornetilo y 1 -etiltioetilo; (iii) halógeno, tal como 2,2,2 -tricloroetilo, 2 -bromoetilo, y 2 -yodoetoxicarbollilo; (iv) uno o dos grupos fenilo cada uno de los cuales puede estar insustituido o mono -, di -o tri -sustituido por, por ejemplo alquilo inferior tal como ter -butilo, alcoxilo inferior tal como metoxilo, hidroxilo, halo tal corno cloro, y nitro. tal como, por ejemplo) bencilo, 4 -nitrobencilo, difenilmetilo, di -(4 -metoxifenil)metilo; o (v) aroilo, tal como fenacilo. Un grupo carboxilo puede estar t.ambién protegido en forma de un grupo de sililo orgánico tal como trimetilsililetilo o tri -alquilsililo inferior, como, por ejemplo, trimetilsiloxicarbonilo.

Con respecto a R5', un grupo amino puede protegerse como una amida utilizando un grupo acilo que es separable de modo selectivo bajo condiciones suaves, especialmente formilo, un grupo alcanoilo inferior que está alfa ramificado frente al grupo carbonilo, part.icularment.e a1canoilo terciario tal como pivaloilo,

o un grupo alcanoilo inferior que est.á sustituido en la posición alfa frente al grupo carbonilo, como, por ejemplo, trifiuoroacetilo.

Los compuestos preferidos de la fórmula I son aquellos en donde R5 es amino o hidrógeno. Dentro de esta clase R1 es, de preferencia, hidroxilo y R3 es 114 -fenileno. Se prefieren asimismo dentro de esta clase los compuestos en donde R 1 es hidroxilo y R3 es tienediilo.

Los compuestos de este invento pueden prepararse de conformidad con un primer procedimiento mediante hidrogenación catalítica de un compuest.o de la fórmula:

III

en donde

ZI es hidrógeno, o ZI tomado junto con R4' es un enlace carbono -carbono;

R 2' es hidrógeno o un grupo protector carboxilo;

R3

y R6 tienen el significado antes indicado;

R4 ', cuando se toman independientemente de 21, es hidrógeno;

R5' es hidrógeno, alquilo con 1 a 6 átomos de carbono, amino, o un grupo protector amÍnico.

Los catalizadores de hidrogenación apropiados incluyen metales nobles y óxidos de metal noble tal como óxido de paladio o platino, óxido de rodio: y el precedente sobre un soporte tal como óxido de carbono o calcio.

Cuando en la fórmula III, ZI tomados junto con R4 ' es un enlace carbono -carbono, o sea, cuando

está presente un enlace triple entre los dos átomos de carbono al que ZI y R4' están enlazados, R4' en el producto de hidrogenación será hidrógeno. En ausencia de cualquier quiralidad en R3 (o cualquier grupo protector abarcado por R2, y/o R5' ), el producto de hidrogenación será un enantiómero simple que tiene la configuración S sobre el átomo de carbono designado. Esto es también cierto cuando ZI y R4' son cada unO hidrógeno, o sea, cuando está presente un doble enlace entre los dos átomos de carbono a los que están enlazados ZI y R4'.

Los grupos protectores abarcados por R2', R5' y/o R6 pueden separarse siguiendo hidrogenación mediante hidrólisis acídica o básica, como, por ejemplo, con hidróxido sódico para disociar grupos protectores R2' o R5"dando a.')f los compuestos de fórmula L En las referencias corrientes antes indicadas y que se incorporan aquí como referencia se describen métodos de separar los diversos grupos protectores.

Pueden prepararse compuestos de fórmula 111 utilizando procedimientos análogos a los descritos en la patente USA nO 4.818.819, utilizando no obstante la pirrolo[2,3 -d]pirimidina halogenada correspondiente. Asi pues una pirrolo[213 -d]pirimidina de la fórmula:

IV

en donde X es bromo o yodo y R5' y R6' tienen el significado antes indicado, se deja que reaccione con un compuesto insaturado de la fórmula

Z1

R3

HC=C _ _ R' v

R4' en donde ZI, R3, y R4 tienen el significado aquí expuesto y H? es

o
o: O

11 -C -OR2',: o 11 * 11, -CNHCHCH2 CH2C -OR2

1

C -OR"

11

O

en donde R2 ' tiene el significado aquí definido~ en presencia de un catalizador de paladio/fostina trisustituida del tipo descrito en la patente estadounidense nO 4.818.819, cuya descripción se incorpora aquí como referencia.

Cuando R' es -CONHCH(COOR")CH,CH,COOR2' el producto de esta reacción de copulación se hidrogena y se separa cualquier grupo protector como se ha descrito antes.

Alternativamente se deja que reaccione un compuesto de la fórmula IV con un compuesto de la fórmula:

Z1

R3

HC=C --COOR2' VI

R4'

en donde Z1, R2" R3, Y R4' tienen el significado aquí indicado en presencia de un catalizador de paladio/fastina trisustituida del tipo descrito en la patente estadounidense n~ 4.818.819, para dar un intermedio de la fórmula:

VII

El producto de la fórmula VII puede luego hidrogenarse, hidrolizarse para separar los grupos protctores R2' y R6 y, opcionalmente, con protección intermedia de cualquier grupo amino abarcado por R5', asociado con un derivado de ácido glutámico protegido en la forma descrita en la patente estadounidense nO 4.684.653 utilizando técnicas de condensación convencionales para formar enlaces peptídicos tal como DCC o difenilclorofosfonato, después de lo cual se scparan los grupos protectores.

En otra variante puedcn prepararse com puest.os de fórmula III utilizando los procedimientos descritos en la patente estadounidense nO 4.818.819. De est.e modo un compuesto de la fórmula:

VIII

en donde Zl, R4') R5' Y R6 tienen el significado aquí indicado, se deja que reaccione con un compUe'lto de la fórmula:

x _ R3 _ R' IX

en donde X, R3 , Y R7 tienen el significado aquí definido, en presencia de un catalizador de paladio/fostina trisustituida del tipo descrito en la patente estadounidense nO 4.818.819,

Los compuestos de la fórmula VIII pueden obtenerse también con los métodos de la patente estadounidense nO 4.818.819 tratando un compuesto de la fórmula IV con illl compuesto insaturado de la fórmula:

H -e '" e -R4" X

en donde R4" es un grupo sililo trisustituido en presencia de un catalizador de paladio/fastina trisustituida del tipo antes indicado.

Si bien no siempre es el caso los compuestos de la fórmula IV en donde R6 es hidrógeno pueden tender a volverse algo insolubles en disolventes apropiados para la reacción descrita en la patente estadounidense

Q

n4.818.819. En estos casos los compuestos de fórmula IV en donde R6 es hidrógeno pueden tratarse en primer lugar con hidruro sódico y un alcanoato de alquilo apropiado (tal como clorometil pivalato) para introducir un grupo de alcanoiloxilo en la posición 5 y aumentar la solubilidad.

Una subclase útil de compuestos utiles tanto como intermedios como por su efecto sobre enzimas son derivados de la fórmula XI y XII carent,es de la cadena lateral de ácido glutámico:

y

XII

en donde:

R' es-OHo-NH2 ;

R4 es hidrógeno;

R5 es hidrógeno, alquilo con 1 a 6 átomos de carbono, o ami no,

R8 es hidrógeno, cloro, fiuoro, metilo~ metoxilo, triftuoro -metilo o carboxilo;

Yes-S-u-O-;y

sus sales farmacéuticamente aceptables.

Los compuestos de fórmulas XI y XII se obtienen dejando que un compuesto de fórmula VII reaccione con un compuest.o de la fórmula:

X{]fR'

O

en donde X, Y Y R8 tienen el significado aquí expuesto con los métodos de la patente estadounidense

nO 4.818.819, o sea en presencia de un catalizador de paladio/fosfina trisubstituida, hidrogenándose el producto acoplado resultante e hidrolizándose para separar el grupo protector R2'. Compuestos típicos de las fórmula XI y XII son 3 -(2 -fenil -3 -hidroxipropil) -4 -hidroxi -6 -amino -pirrolo[2,3 d]pirimidina, 3 -[2 -(tien -2 -il)ctil]-4 -hidroxi -6 -aminopirrolo[2,3 -d]pirimidina, 3 -[2 -(tien -2 il)etil]-4 -hi -droxipirrolo[2,3 -d]pirimidina, 3 -[2 -(ticn -2 -il)etil]-4 -hidroxi -6 -mctilpirrOlol2,3 -d]pirimidina, 3 -[2 -(tien -3 -il)etil] -4 -hi -droxi -6 -amino -pirrolo[2,3 -d]pirimidina, 3 -2(tien -3 -il)etil]-4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina, y 3 -[2 -(ticn -3 -il) -ctil] -4 -hi -droxi -6 metilpirrolo[2,3 -d]pirimidina.

Como se ha expuesto antes los compuestos de este invento pueden prepararse utilizando la copulación catalizada de varios compuestos insaturados descritos en la patente estadounidense nO 4.818.819 y las reacciones de copulación de ácido glutámico descritas en la patente estadounidense nO 4.684.653, sustituyendo la pirrolo[2,3 -di]pirimidina apropiada por la piridol213 -d]pirimidina aquí descrita. Los intermedios de pirrolo[2,3 -d]pirimidina de la fórmula IV anteriores pueden obtenerse tratando un compuesto de la fórmula:

XIII

en donde R5' y R6 tienen el significado aquí definido con N -yodosuccinimida para dar la 2,3 -diyodopirrolo[2,3 -d]pirimidina correspondiente que se trata luego COIl zinc y ácido acético para separar de modo

selectivo el átomo de yodo en la posición 2, dando la 3 -yodopirrolo[2,3 -d]pirimidina correspondiente de la fórmula IV.

De conformidad con los procedimientos precedentes, se obtienen los compuestos de la fórmula JI en donde R1 es -OH. Cuando se desea un compuesto de la fórmula 1 en donde R1 es -NH2 , puede tratarse un compuesto en donde Rl es -OH con 1,2A -triazol y (4 -clorofenil)diclorofosfato y el producto de esta reacción se trata luego con amoniaco concentrado.

Como se ha indicado los compuestos de este invento tienen un efecto sobre una o mas enzimas que utilizan ácido fólico, y en particular derivados metabólicos de ácido fólico, como un sustrato. Por ejemplo el ácido N -{4 -[2 -(4 -hidroxi -6 -aminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)etil]benzoil) -L -glutámico demuestra potentes efectos inhibidores frente al desarrollo de células T humanas derivadas de células de leucemia lifoblásticas (CCRF -CEM), exhibiendo una CIso de 0,004 u/mI. La citotoxicidad no se invierte con la adición de purinas tal como hipoxantina y con la adición de aminoimidazolcarboxamida pero se invierte con la adición de timi di na, indicando inhibición específica en el ciclo de timidilato y no en la sintesis de novo purina. Los compuestos pueden ut.ilizarse, bajo la supervisión de profesionales cualificados, para inhibir el desarrollo de neoplasmas incluyendo cloriocarcinoma, leucemia, adenocarcinoma del pecho femenino: cánceres epidérmicos de la cabeza y cuello: cancer escamoso o de pulmón de pequenas celulas, y diversos linfosarcomas. Los compuestos pueden utilizarse también para tratar micosis fungoides y psoriasis.

Los compuestos pueden administrarse por vía oral, pero se administran, de preferencia, parenteralmente, solos o en combinación con otros agentes terapéuticos incluyendo otros agentes anti -neoplá...;;ticos, esteroides, etc., a un mamífero que sufra de neoplasma y precise tratamiento. Las vias parenterales de administración incluyen intramuscular, intratraqueal, intravenosa e intra -arterial. Los regimenes de dosificación deben titularse al neoplasma particular, la condición del paciente, y la respuesta, pero en general las dosis estarán comprendidas entre alrededor de 10 y alrededor de 100 mg/día durante 5 -10 días o administración diaria única de 250 -500 mg, repetidas periódicamente; por ejemplo cada 14 días. Si bien tienen una baja toxicidad en comparación con otros antimetabolitos ahora en uso, puede eliminarse una respuesta tóxica con frecuencia reduciendo la dosis diaria y/o administrando el compuesto en dias alternos o a intervalos mas prolongados tal como cada t.res días. Las formas de dosificación oral incluyen comprimidos y cápsulas conteniendo de 1 a 10 mg de farmaco por dosis unitaria. Para administración parenteral pueden utilizarse soluciones salinas isotónicas conteniendo 20 -100 mg/mL

Los ejemplos que siguen servirán para ampliar la ilustración del invento. En los datos de RM1\ "s" denota singlete, ¡;D" denota doblete, "T" denota triplete, "q" denota cuartete, "m" denota multiplete, y "br" denota un pico ancho.

Ejemplo I

3 -yodo -4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo(2,S -d}pirimidina.

Una mezcla de 3,0 g (0,02 mol) de 4 -hidroxi -6 -aminopirrolo[2,3 -d]pirimidina y 8,4 g (0,07 mol) de cloruro de pivaloilo en 40 mI de piridina se agita durante 30 minutos entre 80 y 90°C, luego se evapora la mezcla hasta sequedad y se disuelve el residuo en 30 mI de metano!. La a.dición de amoniaco acuoso al 10% proporciona 4,2 g (89%) de 4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidina que puede purirficarse adicionalmente mediante cromatografía a través de gel de sílice, eluyéndose con metanol al 8% en cloruro de metileno. Punto de fusión 295°C. 1RMN (d6 -DMSO) delta 1,20 (s, 9R), 6,37 (d, J ~ 3,4 R<, IR), 6,92 (d, J ~ 3,4Rz, lH), 10,78 (s, IR), 11,56 (s, lH), 11,82 (s, lH). Analisis, calculado para CllH14N4 0 2 : C, 56,40; h, 6,02; N, 23,92. Hallado: C, 56,16; H, 6,01; N, 23,67.

A una mezcla de 4,7 g (20 mmol) de 4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo -[2,3 -d]pirimidina en 200 mI de dimetil -formamida se adicionan 9,9 g (44 mmol) de N -yodosuccinamida. Se agita la mezcla a temperatura ambiente en la oscuridad durante 18 horas. La mayor parte de la dimetilformamida se separa mediante evaporación y la suspensión residual se vierte en 300 m l de agua. El sólido resultante se recoge por filtración y se seca bajo vacio sobre pentóxido de fósforo para dar 2,3 -diyodo -4 -hidroxi 6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidina que puede purificarse adicionalmente mediante cromatografía sobre sílice eluyéndose con metanol al 2,5% en cloruro de metilcno. Punto de fusión >290°C. 1 RMN (d6 -DMSO) delta 1,18 (s, 9R), 10,85 (s, IR), 11,85 (s, IR), 12,42 (s, IR). Analisis: Calculado para Cu H12N40 2h: C, 27,18; H 2,49; N, 11,53; 1, 52,22. Hallado: C, 27,51; H, 2,51; N, 11,27; 1, 52,02.

De modo similar pero a partir de 4 -hidroxi -6 -metilpirrolo[2,3 -d]pirimidina y 4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]piri -midina (7 -desazahipoxantina) se obtiene, respectivamente, 2,3 -diyodo -4 -hidroxi -6 -metilpirrolo[2,3 -d]pirimidina y 2,3 -diyodo -4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina, punto de fusión >205°C (el compuesto pierde yodo). 'RMN (d6 -DMSO) delta 7,79 (s, lH), 11,93 (s, IH), 12,74 (s, IH).

5 A una mezcla de 4,86 g de 2,3 -diyodo -4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo -[2,3 -d]pirimidina en 100 mi de ácido acético glacial y 25 mI de agua se adiciona 1,3 g (20 mmol) de polvo de zinc. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 18 horas, se diluyó con 500 mI de agua, y se enfrió. Se recogió el sólido mediante filtración y se secó bajo vaCÍo sobre pentóxido de fósforo para dar 3 -yodo -4 -hidroxi 6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidina que puede purificarse adicionalmente mediante cromatografía sobre sílice eluyéndose con metanol al 2,5% en cloruro de metileno. Punto de fusión >240°C. IR:rvIN (d6 -DMSO) delta 1,20 (s, 9H), 7,12 (d, J ~ 1,8 Hz, lH), 10,82 (s, lH), 11,79 (s, lH), 11,89 (s, lH). Análisis: Calculado para CllHI3N.021: C, 36,69; H, 3,64; N, 15,56; 1, 35,24. Hallado: C, 36,91; H, 3,58; N, 15,65; 1, 35,56.

15 De modo similar a partir de 2,3 -diyodo -4 -hidroxi -6 -metilpirrolo[2,3 -d] -pirimidin y 2,3 diyodo -4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina, se obtiene, respectivamente, 3 -yodo -4 -hidroxi -6 metilpirrolo[2,3 -d]pirimidina y 3 -yodo -4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]primidina, punto de fusión >245°C (compuesto pierde yodo). RMN' (d6 -DMSO) delta 7,20 (d, J ~ 2,2 Hz, lH), 7,82 (d, J ~ 2,8 Hz, lH), 11,85 (d, J ~ 1,1 Hz, lH), 12,17 (s, lH).

Ejemplo 2

N -[4 -(4 -hídroxí -6 -pívaloilamíno -pirrolo[2,3 -dijpírímidin -3 -iletinil)benzoilj -L -glutamato de dimetilo.

25 A una mezcla de 3,6 g (20 mmol) de 3 -yodo -4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo -[2,3 -d]pirimidina bien seca en 40 mI de dimetilformamida se adicionan 4,0 g (13,19 mmol) de N -(4 -etinilbenzoil) -L

glutamato de dimetilo, 0,38 g de yoduro de cobre (1), 3 mi de trietilamina, y 1,0 g de tetrakis -(trifenilfosfina)paladio. Esta mezcla se agita a temperatura ambiente durante dos horas y luego se viert.e en 500 mI de agua. Se recoge el sólido por filt.ración, se seca al aire, y luego se somete a reflujo en 200 mi de metano!. Se enfría la mezcla y se recoge el sólido por filtración, se disuelve en dos litros de metanol al 10% en cloruro de metileno, y se somrografía sobre sílice. Se recromatografían bandas negras iniciales y las bandas incoloras combinadas de la primera y segunda pruebas se evaporan, lo que dá 3,5 g de N -[4(4 -hidroxi -6 -piva -loilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -iletinil)benzoil]-L -glutamato de dimetilo

35 que puede purificrse adicionalmente mediante recristalización a partir de metanol al 50% en cloruro de metileno. Punto de fusión 280 -285°C. RMN' (d6 -DMSO) delta 1,21 (s, 9H), 1,96 -2,15 (m, 2H), 2,44 (t, J~7,5 Hz, 2H) 3,56 (s, 3H), 3,62 (s, 3H), 4,40 -4,45 (m, lH), 7,43 (s, lH), 7,53 (d, J~ 8,4 Hz, 2H), 7,87 (d, J=8,4 Hz, 2H), 8,82 (d, J ~ 7,4 Hz, lH, 1 H), 10,95 (s, lH), 11,95 (s, lH). AnaJálisis: Calculado para C27H29NS07: C, 60,56; H, 5,46; N, 13,08. Hallado: C, 60,55; H, 5,46; N, 12,89.

De modo similar, sustituyendo una cantidad equivalente de N -(pent -4 -inoil) -L -glutamato de dimetilo, N -(hep -6 -enoil) -L -glutamato de dimetilo y N -(hex -5 -inoil) -L -glutamato de dimetilo por N -(4 -etinilbenzoil)glutamato de dimetilo en el procedimiento precedente, se obtiene N . [5 -(4hidroxk -6 -pivaloilamillo -pirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)pent -4 -inoil]-L -glutamato de dime -tilo,

.5 N -[7 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d] -pirimidin -3 -il)hept -6 -enoil]-L -glutamato de dimetilo y N -[6 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)hex -5 -inoil] -L gluta -mato de dimetilo.

En la forma descrita de modo general en la patente estadounidense n:! 4.882.334 expedida el 21 de noviembre de 1989 puede obt.enerse N -(hex -5 -inoil) -L -glutamat.o de dimetilo, cuya descripción se incorpora aquí como referencia, dejando que el cloruro de ácido hex -5 -inoico (obtenido tratando ácido hex -5 -inoico con cloruro de tionilo) reaccione con L -glutamato de dimetilo en presencia de un aceptor de ácido tal como trietilamina. A su vez puede prepararse ácido hex -5 -inoico, por ejemplo, mediante hidrolisis alcalina de 5 -cianopent -1 -ina.

55 Ejemplo 3

N -[5 -(4 -hidroxí -6 -pívaloilamino -pirrolo[2,3 -djpirímidin -3 -iljetinil)tien -2 -ilcarbonilj -L glutamato de dimetilo.

Una mezcla de 2)0 g de 3 -yodo -4 -hidroxi -6 -piva -loilaminopirrolo[2,3 -d] -pirimidina, 1,2 g de triemetilsi -lilacetileno, 0,1 g de cloruro de paladio, 0,23 g de trifenilfosfina, 0,06 g de yoduro cuproso

la

GO

y 2,6 g de trietilamina en 100 ml de acetonitrilo se calienta en un tubo sellado durante 1 hora y media a 50°C y leugo en refiujo durante 3 horas. Se separa el disolvente bajo presión reducida y se tritura el residuo con acetato de etilo:hexano 1:1 y se filtra. El sólido así recogido se disuelve en cloruro de metileno y esta solución se pasa a través de una almohadilla de gel de sílice eluyéndose con metanol al 1% sobre cloruro de metileno. Se concentra el eluato, lo que dá 3 -trimetilsililetinil -4 -hidroxi -6 pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidina.

A una solución de 1,5 g de 3 -trimetilsililetinil-4 -hidroxi -6 -pivalilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidina en 100 mI de tetrahidrofurano anhidro enfríada hasta OJC se adiciona bajo nitrógeno 4,76 mI de fiuoruro de tetrabuitilamonio 1M en tetrahidrofurano anhidro. Después de 5 minutos se deja que la mezcla reaccional obtenga la temperatura ambiente y luego se agita durante 2 horas. Se separa el disolvente bajo presión reducida y se purifica el residuo mediante cromatografía sobre gellde sílice, lo que dá 3 -etinil4 -hidroxi -6 -pivaloi -laminopirrolo -[2,3 -d] pirimidina.

Una mezcla de 1,70 g de 3 -etinil-4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d] -pirimidina, 2,30 g de N -(5 -bromotien -2 -ilcarbonil) -L -glutamato de dimetilo (preparado como se ha descrito en la patente estadoundiense nO 4.882.334 expedida el 23 de noviembre de 1989, cuya descripción se incorpora aquí como referencia), 44 mg de cloruro de paladio, 130 mg de trifenilfosfina, 25 mg de yoduro cuproso y L13 mI de trietilamina en 30 mI de acetonitrilo se calienta en reflujo durante 3 horas y luego se enfría hasta la temperatura ambiente. Se separa el disolvente bajo presión reducida y el residuo se somete a cromatografía de columna (Waters 500) eluyéndose con metanol:cloruro de emtileno 1:19, lo que dá N -[5 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il]etinil)tien -2 -ilear -bonil] -Lglutamato de dimetilo.

Con la sustitución de cantidades equivalentes de N -(4 -bromotien -2 -ilcarbonil) -L -glutamato de dietilo y N -(5 -bromo -etien -3 -ilcarbonil) -L -glutamato de dietilo en el procedimiento precedente, se obtiene, respectivamente, N -[4 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -iletinil)tien -2 -ilcarbo -nil] -L -glutarnato de dietilo y N -[5 -(4 -hidroxi -6 -pivaloil -aminopirrolo[2,3 d]pirimidin -3 -iletinil)tien -3 -ilcarbonil] -L -glutamato de dietilo.

De modo análogo, a partir de N -(2 -fiuoro -4 -yodobenzoil) -L -glutamato de dimetilo y N -(3 fiuoro -4 -yodobenzoil) -L -glutamato de dimetilo (preparado como se ha descrito en la patente estadounidense nO 4.882.334 expedida el 32 de noviembre de 1989, cuya descripción se incorpora aquí como referencia), se obtiene, respectivamente, N -[2 -fiuoro -4 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilamino -pirrolo[2,3d]piirimidin -3 -il -etinil)benzoil]-L -glutamato de di -metilo y N -[3 -fiuoro -4 -(4 -hidroxi -6pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -iletinil)benzoil]-L -glutamato de dimetilo.

Ejemplo 4

N -(4 -(4 -hidroxipirrolo(2,3 -djpirimidin -3 -il -etinil)benzoilj -L -glutamato de dimetilo.

Dejando que reaccione 3 -yodo -4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina con N -(4 -etinilbenzoil) -L -glutamato de dimetilo en la forma descrita en el ejemplo 2. se obtiene, respectivamente, N -[4 -(4 hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -iletinil)benzoil]-L -glutamato de dimetilo que se purifica mediante cromatografía sobre sílice, punto de fusión 160°C (dese.). RMN¡ (do -DMSO) delta 1,98 -215 (m, 2H), 2,45 (6, J = 7,5 Hz, 2H) 3,57 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 4,40 -4,45 (m, 1H), 7,51 (d, J = 2,5 Hz, lH), 7,55 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,87 (s, 1H), 7,90 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 11,97 ((d, J = 3,7 Hz, lH), 12,31 (s, 1H).

De modo alternativo, sustituyendo cantidades equi -valentes de metil 4 -etinilbenzoato, 4 -etiniltolueno, 4 -etinilbenceno, 4 -etinilclorobenceno, 4 -etinilfiuorobenceno, 3 -etinilftuorobenceno, y 1 metoxi -4 -etinilbenceno en el proce -di miento del ejemplo 2 se obtiene metil 4 -(4 -hidroxi -6 pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -iletinil)benzoato, 3 -(4 -metilfenil)etinil -4 -hidroxi -6 pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]piri -midina, 3 -feniletinil -4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pi -rimidina, 3 -(4 -clorofenil)etinil -4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopi -rrolo[2,3 -d]pirimidina, 3 -(4 fiuorofenil)etinil-4 -hidroxi -6 -pi -valoilaminopirrolo[2,3 . d]pirimidina, 3 -(3 -fiuorofenil)etinil -4 -hidroxi -6 -pivaloil-aminopirrolo[2,3 -d]pirimidina, y 3 -(4 -metoxi -fenil)etinil-4 -hidroxi -6pivaloila -minopirrolo[2,3 -d]pirimidina.

El empleo de 3 -yodo -4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina en lugar de 3 -yodo -4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]piri -midina con metil 4 -etinilbenzoato, 4 -etiniltolueno, 4 -etinilclorobenceno, 4 -etinilfluorobenceno, 3 -etinilftuorobenceno y ilmetoxi -4 -etinilbenceno proporciona, respectivamente, metil4 -(4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -iletinil)benzoato, 3 -(4 -metilfenil)etinil-4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina, 3 -fenil -etinil -4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina, 3 -(4 -clorofenil) -etinil -4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina, 3 -(4 -fiuorofenil)eti -nil -4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina, 3 -(4 -rnctoxifenil)etinil-4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina.

Se deja que reaccionen diez gramos de 3 -yodo -4 -hidroxi -6 -metilpirrolo[2,3 -d]pirimidina con 2,19 g de dispersión oleosa de hidruro sódico al 80% y 75 mI de dimetilformamida con la exclusión de humedad. Después de 30 minutos se adicionan 6,02 g de clorometil pivalato. Se agita esta mezcla durante tres horas, se vierte en agua, y se neutraliza con ácido acético. Se cromatografía el sólido sobre gel de sílice con acetona -diclorometano, lo que dá 3 -yodo -4 -hidroxi -1,5 -bis (pivaloiloxi -6 -metilpirrolo[2,3 d]pirimidina, punto de fusión 155°C ini -cialmente) seguido de 3 -yodo -4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 -mctil -pirrolo[2,3 -d]pirimidina, punto de fusión 236°C.

El empleo de 3 -yodo -4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 -metilpi -rrolo[2,3 -d] -pirimidina en el procedimiento del ejemplo 2 dá luego N -[4 -(4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 -metilpirrolo[2,3 -d]piri midin -3 -iletinil)benzoil]-L -glutamato de dimetilo, punto de fusión 196°C. Análisis: Calculado para Cz9H32N,08: C, 61,70; H, 5,71; N, 9,92. Hallado: C, 61,90; H, 5,71; N, 9,95.

El empleo de 3 -yodo -4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 -metil -pirrolo[2,3 -d]pirimidina en lugar de 3 -yodo -4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidina con metil -4 -etinilben -zoato, 4 -etiniltolueno, 4 -etinilbenceno, 3 -etinilftuorobenceno y 1 -metoxi -4 -etinilbenceno dá metil 4 -(4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 -metilpirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -iletinil)benzoato, 3 -(4 -metil fenil)etinil-4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 -metil -pirrolo[2,3 -d]piri -midina, 3 -feniletinil -4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 -metilpirro -10[2,3 -d]pirimidina, 3 -(4 -clorofenil)etinil -4 -hidroxi -5 -piva loiloxi -6 -metilpirrolo -[2,3 -d]pirimidina, 3 -(4 -ftuorofenil) -etinil -4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 metilpirrolo[2,3 -d]pirimdina, y 3 -(4 -metoxifenil) -etinil-4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 -metilpirrolo -[2,3 -d]pirimidina.

Ejemplo 5

N -{4 . (2 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilamino -pirrolo(2,3 -djpirimidin -3 -il) -etiljbenzoilJ -L

glutamato.

Una mezcla de 1,0 g de dimetil N -[4 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo -[2,3 -d]pirimidin -3 -iletinil)benzoil] -L -glutamato en 250 ml de metanol al 50% en cloruro de mctileno y 0,8 g de paladio sobre carbón al 3% se hidrogena a 50 p.s.i. durante tres horas, se filtra, y se concentra bajo pr~ión reducida. Se recoge el sólido mediante filtración y se seca, lo que dá 0,72 g de dimetil N -{4 -[2 -(4

hidroxi -6 -pivalo -ilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)etil]benzoil} -L -glutamato. Punto de fusión

247°C. RMW (d6 -DMSO) delta 1,21 (s, 9H), 1,90 -2,12 (, 2H), 2,42 (t, J ~ 7,4 Hz, 2H), 2,92 (t, J~4 Hz, 2H), 2,97 (t, J = 4 Hz, 2H), 3,55 (s, 3H), 3.61 (5, 3H), 4,38 -4,45 (m, 1H(). 6,61 (s. lB), 7,27 (d, J=8,2 Hz, 2H), 7,75 (d, J ~ 8,2 Hz, 2 H), 8,64 (d, J ~ 7,4 Hz, 1H), 10,75 (s, 1H), 11,22 (s, 1H). Análisis:

Calculado para C27H33Ns07: C, 60,10: H 6,17; N, 12,98. Hallado: C, 59,94; H, 6,15; N, 12,72.

Ejemplo 6

N -{5 -(2 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo(2,3 -djpirimidin -3 -il)etiljtien -2 -ilcarbonilJ -L -gluiamaio de dimeiilo.

Sometiendo dimetil N -[5 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilamino -pirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il}etinil)tien -2 -ilcarbonil] -L -gluta -mato al proceso de hidrogenación del ejemplo 5 se obtiene dimetil N -{5 -[2 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo -[2,3 -d]pirimi -din -3 -il)etil]tien -2 -i!carbonil) -L

glutamato.

De modo análogo los com puestos que siguen se someten a la hidrogenación del ejemplo 5:

(a) N -[2 -fiuoro -4 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilamino -pirrolo[2,3 -d]-pirimidin -3 -iletinil)benzoil]

-L -glutamato de dimetilo;

(b): N -[3 -fiuoro -4 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilamino -pirrolo[2,3 -d]-pirimidin -3 -ilet.inil)benzoil] -L -glutamato de dimetilo;

(e): N -[4 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -iletinil)tien -2 -ilcarbonil]-L -glutamato de dietilo;

(d): N -[5 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -iletinil)tien -3 -ilcarbonil]-L -glutamato de dietilo;

(e): N -[5 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo{2,3 -d}pirimidin -3 -il)pent -4 -inoil]-L -glutamato;

(f): hept -6 -enoil] -L -glutamato de dimetilo;

(g): N -[6 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)hex -5 -inoil]-L -glutamato

de dimetilo;

(h): 4 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]-pirimidin -3 -iletinil)benzoato de metilo;

(i): 3 -(4 -metilfenil)etinil-4 -bidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo -[2,3 -d]pirimidina; U) 3 -feniletinil -4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d] -pirimidina;

(k): 3 -(4 -clorofenil)etinil-4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo -[2,3 -d]pirimidina;

(1): etinil -4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo -[2,3 -d]pirimidina; (ro) etinil -4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo -[2,3 -d]pirimidina;

(n): etinil -4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo -[2,3 -d]pirimidina;

(o): benzoato de metilo;

(p): 3 -(4 -metilfenil)etinil -4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 -metilpirrolo[2,3 -d]pirimidina;

(q): 3 -fcniletinil-4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 -metilpirrolo -[2,3 -d]pirimidina;

(r): ctinil -4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 -metilpirrolo[2,3 -d]pirimidina;

(8): etinil -4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 -metilpirrolo[2)3 -d]pirimidina;

(t): ctinil -4 -hdiroxi -5 -pivaloiloxi -6 -mctilpirrolo[2,3 -d]pirimidina;

(u): benzoato de metilo)

(v): 3 -(4 -metilfenil)etinil-4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina;

(w): 3 -feniletinil-4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina;

(x): 3 -(4 -clorofenil)etinil-4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina;

(y): 3 -(4 -fiuorofenil)etinil -4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina; y

(z): 3 -(4 -metoxifenil)etinil-4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina.

Se obtiene) respectivamente:

(a): N - [2 -fiuoro -4 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]-pirimidin -3 -iletil)benzoil]-L -glutamato de dimetilo;

(b): N -[3 -fiuoro -4 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]-pirimidin -3 -iletil)benzoil]-L

-: glutamato de dimetilo;

(e) N -[4 -(4 -hdiroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -iletil)tien-2 -ilcarbonil]-L

glutamato de dietilo;

(d) N -(5 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -iletil)tien -3 -ilcarbonil] -L

glutamato de dietilo;

(e) N -[5 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)pentil] -L -glutamato de

dimetilo;

(f) N -[7 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)heptil] -L -glutamato de

dimetilo;

(g): N -[6 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il -hexil] -L -glutamato de dimetilo,

(h): 4 -[2 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)etil]benzoato de metilo;

(i): 3 -[2 -(4 -mctilfenil)etil]-4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo -[2,3 -d]pirimidina; U) 3 -(2 -feniletil) -4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d] -pirimidina;

(k): 3 -[2 -(4 -dorofenil)etil]-4 -hidroxi -6 -pivalilaminopirrolo -[2,3 -d]pirimidina;

(1): 3 -[2 -(4 -!luorofenil)e!il]-4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo -[2,3 -d]pirimidina;

(m): 3 -[2 -(3 -!luorofenil)etil]-4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo -[2,3 -d]pirimidina;

(n): 3 -[2 -(4 -metoxifenil)etil]-4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidina;

(o): 4 -[2 -(4 -hidroxi -6 -metilpirrolo[2,3-d]pirimidin -3 -il)etil] benzoato de metilo;

(p): 3 -[2 -(4 -metilfenil)etil]-4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 -metilpirrolo[2,3 -d]pirimidina;

(q): 3 -[2 -(4 -clorofenil)etil]-4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi-6 -rnetilpirrolo[2,3 -d]pirimidina;

(r): 3 -[2 -(4 -!luorofenil)etil]-4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 -metilpirrolo[2,3 -d]pirimidina;

(s): 3 -[2 -(4 -metoxifenil)etil]-4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 -metilpirrolo[2,3 -d]pirimidina;

(t): 4 -[2 -(4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)etil]benzoato de metilo;

(u): 3 -[2 -(4 -metilfenil)etil] -4 -hdiroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina;

(v): 3 -(2 -feniletil) -4 -hdiroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina;

(w): 3 -[2 -(4 -dorofenil)etil]-4 -hdiroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina;

(x): 3 -[2 -(4 -fluorofenil)etil]-4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina; e

(y) 3 -[2 -(4 -metoxifenil)etil]-4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidina.

(z) 3 -[2 -(4 -metoxifenil)etil] -4 -hidroxipirrolü[2,3 -d]pirimidina. Ejemplo 7 N -{4 -(2 -(4 -hidroxípirrolo(2,3 -d}pirimidin -3 -il)etil)benzoil} -L -glutamato de dimetilo.

Una mezda de 1,1 g de dimetil N -[4 -(4 -hidroxipi -rrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -iletinil)benzoil]-L

-: glutamato en 100 ml de metanol al 50% en cloruro de metileno y 0:8 g de paladio sobre carbón al 3% se hidrogenó a 50 p.sj. durante 24 horas, se filtró: y se concentró bajo presión reducida. Se adicionó éter al residuo se recogió el sólido mediante filtración y se secó, lo que dió 0,67 g de dimetil N -{4 -[2 -(4 hidroxiaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)etil]benzoil} -L -glutamato. Punto de fusión 170 -172°C. RMN1 (d6 -DMSO) delta 1,94 -2,14 (m, 2GH); 2,44 (1, J = 7,4 Hz, 2H), 2,93 -3,02 (m, 2H), 3,57 (s, 3H), 3,63 (s, 3H), 4,40 -4,70 (m, lH), 6,71 (s, lH), 7,29 (d, J= 8,2 Hz, 2H), 7,77 (m, 3H), 8,66 (d, J =

7,4 Hz, lH), 11,52 (s, lH), 11,71 (8, lH).

De modo similar a partir de N -[4 -(4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 -metilpirrolo -[2,3 -d]pirimidin3 -iletinil)benzoil]-L -glutamato de dimetilo se obtiene, de conformidad con este procedimiento N -{4 -[2 -(4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 -metilpirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)etil]benzoil} -L -glutamato

de dimetilo.

Ejemplo 8

Acido N -{4 -(2 -(4 -hidroxí -6 -pivaloilaminopirrolo(2,3 -d) -pirimidin -3 -il)etil}benzoil} -L

gluiamico.

Una mezcla de 1,5 g de N -{4 -[2 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3

il)etil]benzoil} -L -gluta -mato de dimetilo en 10 mI de hidróxido sódico IN se agita a tempeatura am

biente durante tres días para formar la sal sódica de ácido N -{4 -[2 -(4 -hidroxi -6 -aminopirrolo[2,3 _ d]pirimidin -3 -il)etil]benzoil} -L -glutámico. Se neutraliza con ácido acético glacial. El sólido que se forma se recoge mediante filtraci6n y rccristaliza en metanol al 50% en cloruro de metileno, lo que dá

0,8 g (67%) de ácido N -{4 -[2 -(4 -hidroxi -6 -aminopirrolo[2,3 -d]pirimidill-3 -il)etil]benzoil} -L -glutámico. RMN1 (d6 -DMSO) del-ta 1,80 -2,00 (m, 2H), 2,10 -2,30 (m, 2H), 2,77 -2,820 (m, 2H), 2,89 -2,93 (m, 2H), 4,13 -4,19 (m, 2H), 6,25 (d, J = 1,3 Hz, lH), 7,23 (d, J=8,1 Hz, 2H), 7,69 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 8,13 (d, J = 6,7 Hz, lH), 10,55 (S, lH).

Ejemplo 9

Acido N -(4 -{1 -hidroxi -3 -(4 -hidroxi -6 -aminopirrolo(2,3 -d) -piei -midin -3 -il)peop -2 il} benzoil}glutámico.

Una solución de 0,3 g de dietil N -[4 -{1 -hidroxi -3 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 d]pirimidin -3 -iI)prop -2 -il} -benzoil]glutamato en 9 mI de hidróxido sódico aucoso IN se agita bajo

nitrógeno a temperatura ambiente durante 72 horas. La reacción se vuelve ligeramente acíclica (pH = 4)

con ácido clorhídrico IN y se filtra. El sólido así recogido se lava con agua (5 mI) y etanol frio (5 mi) y se seca, lo que dá N -[4 -{1 -hidroxi -3 -(4 -hidroxi -6 -aminopirrolo[2,3 -d]-pirimidin -3 -il)prop -2 -il} benzoil]glutámico.

De modo análogo, a partir de N -{2 -fluara -4 -[2 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 d]pirimidin -3 -il) -etil]ben -zoil} -L -glutamato y dimetil N -{3 -fluoro -4 -[2 -(4 -hidroxi -6pivaloilarninopirrolo[2,3 -d}pirimidin -3 -il)etil]benzoil} -L -glutamato se obtiene, respectivamente, de conformidad con el procedimiento precedente) ácido N -{2 -fluaro -ti -[2 -(4 -hidroxi -6 -aminopi

rrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)etil]benzoil} -L -glutámico, punt.o de fusión 230"C (espumación), >300'C (dese. ) y ácido N -{3 -fluoro -4 -[2 -(4 -hidroxi -6 -aminopirrolo[2,3 -d] -pirimidin -3 -il) etil]benzoil} -L -glutámico, punto de fusión >300°C. (dese.).

De modo análogo al procedimiento precedente se obtiene, respectivamente, a partir de dietil N -{4 -[2 -(4 -hidroxi -6 -piva -loilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)etil]tien -2 -i!carbonil} -L glutamato, dietil N -{5 -[2 -(4 -hdiroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)ctil]tien -3 i!carbonil} -L -glutamato y dimetil N -{5 -[2 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il) -etil]tien -2 -i!carbonil} -L -glutamato, los compuestos ácido N -{4 -[2 -(4 -hidroxi -6 aminopirrolo -[2,3 -d]pirimidin -3 -il)etil]tien -2 -ilcarbonil} -L -glutámico,

ácido N -{5 -[4 -hidroxi -6 -aminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -iI)etil] -tien -3 -i!carbonil} -L -glutámico y ácido N -{5 -[2 -(4 -hidroxi -6 -aminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)etil]tien -2 ilcarbonil} -L -glutámico, punto de fusión 241 -243°C.

De modo análogo se obtiene a partir de dimetil N -[5 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3d]pirimidin -3 -il)pentanoil] -L -glutamato, dimetil N -[7 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilamino -pirroJo [2,3 -d]pirimidin -3 -il)heptanoil]-L -glutamato y dimetil N -[6 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo -[2,3 -d]pirimidin -3 -il) -hexanoil]-L -glutamato, respectivamente, el ácido N -[5 -(4 -hidroxi 6 -aminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -i1)pentanoil] -L -glutámico, el ácido N -17 -(4 -hidroxi -6 aminoPirrolol2,3 -d!Pirimidin -3 -il)hepta -noil] -L -glutámico y el ácido N -6 -(4 -hidroxi -6

aminopirrolo 2,3 -d pirimidin -3 -il)hexanoilJ -L -glutámico.

Ejemplo 10

Acido N -{4 -(2 -(4 -hidroxipirrolo(2,3 -d}pirimidin -3 -il)etil) -ben -zoil} -L -glutámica.

Una mezcla de 0,5 g de dimetil N -{4 -[2 -(4 -hidroxi -pirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)etil]benzoil}

-L -glutamato en 3 mi de hidríoxido sódico IN se agita a temperatura ambiente durante tres días

para formar la sal sódica de ácido N -{4 -[2 -(4 -hidroxi -6 -aminopirrolo[2,3 -d] -pirimidin -3 -il)etil]benzoil} -L -glutámico. Se neutraliza con ácido clorhídrico. El sólido que se forma se recoge mediante filtración y se recristaliza en metanol con la adición de agua para dar 0,35 g (75%) de ácido N

-: {4 -[2 -(4 -hidroxipirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -iI)etil]benzoil} -L -glutamico. RMN1 (d6 -DMSO) delta 1,88 -2,12 (m, 2H), 2,33 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,97 (m, 4H), 4,33 -4,40 (m, lH), 6,70 (d, J = 1,2 Hz, lH), 7,28 (d, J=7,0 Hz, 2H), 7,76 (m, 3H), 8,50 (d, J = 7,6 Hz, lH), 11,48 (s, lH), 11,67 (s, lH), 12,40 (ancho, lH).

De modo similar a partir de dimetil N -{4 -[2 -(4 -hidroxi -5 -pivaloiloxi -6 -metilpirrolo[2,3 d]pirimidin -3 -il)etil]benzoil] -L -glutamato, se obtiene, de conformidad con el procedimiento precedente, primero la sal sódica de ácido N -{4 -[2 -(4 -hidroxi -6 -metilpirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 il)etil]benzoil} -L -glutámico que después de neutralización con ácido acético glacial proporciona ácido N -{4 -[2 -(4 -hidroxi -6 -metilpirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il) -etil]benzoil} -L -glutámico.

Sometiendo 4 -[2 -(4 -hidroxi -5 -pivaloilaxi -6 -metilami -nopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)etil] benzoato de metilo; 3 -[2 -(4 -metilfenil)etil]-4 -hidroxi -6 -pivaloilamino-pirrolo[2,3 -d]pi -rimidina; 3 -(2 -feniletil) -4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidina; 3 -[2 -(4 -clorofenil)etil] -4 hidroxi -6 -pivaloil-aminopirrolo[2,3 -d]pirimidina; 3 -[2 -(4 -ftuorofenil)etil]-4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3 -d]pirimidina; 3 -[2 -(3 -fiuoro -fenil)etil]-4 -hidroxi -6 -pivaloilaminopirrolo[2,3d]pirimidina; 3 -[2 -(4 -metoxifenil) -etil]-4 -hidroxi-6 -pivaloilaminopirrolo[2,3-d]pirimidina; y 4[2 -(4 -hidroxi -6 -pivaloilmetilpirrolo[2,3 -d]pi -rimidin -3 -il)etil]benzoato de metilo al procedimiento procedente se obtiene, respectivamente, ácido 4 -[2 -(4 -hidroxi -6 -mctilpirrolo[2,3 -d]pirimidin

3 -il)etil] -benzoico; 3 -[2 -(4 -metilfe -nil)etil] -4 -hidroxi -6 -aminopirrolo[2,3 -d]pirimidina; 3 -(2 -fenil -etil) -4 -clorofenil)etil] -4 -hidroxi -6 -aminopirrolo[2,3 -d] -pirimi -dina; 3 -\2 -(4 -fluorofenil)etil] -4 -hidroxi -6 -aminopirrolo[2,3 -d]pirirnidina; 3 -[2 -(3 -ftuorofenil) -etil -4 hidroxi -6 -aminopirrolo[2,3 -d]pirimidina, punto de fusión 295 -298"C; 3 -[2 -(4 -metoxifenil)etil] 4 -hdiroxi -6 -aminopirrolo[2,3 -d]pirimidina, punto de fusión 280 -294°C; Y ácido 4 -[2 -(4 -hidroxi

-6 -ami -nopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il) -etil]benzoico, punto de fusión >300°C.

Ejemplo 11

Estudio comparati-vo de actividad antimetabólica.

Se llevaron a cabo estudios antimetabólicos utilizando los compuestos siguientes:

Compuesto A

Compuesto B

Compuesto C

Cada uno de los compueustos se disolvió en sulfóxido de dimetilo al 100%. Se prepararon diluciones de cada compuesto para dar una gama de concentraciones de prueba como se ha indica a continuación.

La actividad inhibidora de los compuestos se probaron siguiendo los procedimientos siguientes:

Preparación de células de stock.

Se desarrollaron células de leucemia linfoblásticas humanas Cem en medio RPMI 1640 (MABio), suplementado con suero bovino fetal dializado al 10% (Gibco) a 37°C en condiciones atmosféricas humidificadas de aire al 95% y CO2 al 5%. Las células se desarrollaron en suspensión estatica (Matraz &, Corning) mantenido en fase lag a una concentración de 3 -7 X celulas·ml.

Procedimiento.

(i): se dispone 10 ¡JI de un compuesto de prueba en un pocillo (grupos de 24 pocillos Costar). Esta etapa se repite para cada concentración de prueba de los compue:sto:s.

(ii): se adiciona a cada pocillo 500 ¡JI de medio exento de suero.

(iii) Se dispone en un agitador magnético una botella esteril conteniendo medio RPMI 1640 suplemen

tado con suero bovino fetal dializado al 10%, hepes 16 mM y tampones mops 8 mM y 3 x 104 células / mI. Se utiliza una bomba peristáltica Wheaton para suministrar 1,5 mI de esta suspensión de células a cada pocillo. El volumen final resultante suministrado a cada pocillo es de 2,0 mI a una concentración celular de 4,8 x 104 células/pocillo.

(iv): Los pocillos agrupados se incuban a 37°C en un incubador humidificado (aire al 95%, CO2 al 5%) durante 72 horas.

(v): Después del período de incubación se toman mediciones de cada pocillo utilizando el contador de partículas ZBl Coulter Counter y se determina la CI50 (concentración que inhibe el 50% del crecimiento celular).

(vi): Los resultados de ¿sta prueba fueron como sigue:

TABLA 1

Concentración (ug/ml): Desarrollo celular (%) A B e

100,0 33,3 11,1 3,7: 13,1 15,5 16,2 15,3 10,8 9,6 10,4 14 12 12 13

TABLA 1 (Cont.)

Concentración: Desarrollo celular (%)

(ug/ml): A B C

1,23: 16,1 11,3 14

0,411: 21,5 13,0 13

0,137: 63,9 17,7 14

0,045: 100,0 33,5 14

0,015: 76,9 25

0,005: 96

Cada uno de los compuestos A, B Y e exhibió in vitro actividad inhibidora frente a células de leucemia linfobástica humanas. La concentración inhibidora in vitro global relativa (CIso) de estos compuestos es como sigue:

Compuesto A: 0,2 ug/ml Compuesto B: 0,03 ug/ml Compuesto C: 0,007 ug/ml

Todos los compuestos demostraron actividad inhibidora. El compeusto e, cuando se comparó in vitra, fue el mas activo de los tres.

Estndios inversos.

Se determinó el mecanismo de actividad de cada. compuesto a través de pruebas ulteriores utilizando los estudios llamados de "inversión". Estos estudios suministraron compuestos o precursores que, solos o juntos, identificaron el punto especifico de inhibición enzimática.

(a): Hipoxanhina -La hipoxantina invertirá los efectos inhibidores de un compuesto si el compuesto funciona corno un inhibidor de purina de novo sintesis. La disponibilidad de hipoxantina permite así que las células soslayen purina de novo sintesis.

(b): Timidina -La timidina sola invertirá los efectos inhibidores de un compuesto si el compuesto funciona corno un inhibidor específico de timidilato sintetasa.

(c): Hipoxantina y timidina -Si se determina un compuesto en (a) corno no inhibidor de purina de novo sintesis. y en (b) corno no inhibidor de timidilato sintetasa, un estudio de inversión utilizando hipoxantina y timidina, en combinación, determinará si el compuesto puede producir inhibición de ambas trayectorias. Asi pues, si esta combinación invierte los efectos inhibidores de un compuesto, el compuesto muy probablemente funcionará como un inhibidor de dihidrofolato reductasa (implicado en la biosintesis de purina y pirimidina).

Procedimiento.

En cada caso se siguió el procedimiento básico antes reseñado, modificado en que se adicionó a los pocillos de prueba 250 ¡.tI del compuesto de inversión [o de cada compuesto de inversión en (b)] y se disminuyó la cantidad de medio sin suero adicionado a cada pocillo [o se eliminó por completo en (b)] en la misma cantidad. Los compuestos de inversión se prepararon corno soluciones de stock 8X en solución salina tamponada de fosfato (esteril filtrada a través de un filtro acrodisco de 0,2 1" -Gelman) de modo que 250 ,ul de la solución de sotck diera una concentración final de 100,uM de hipoxantina y/o 5 ¡¡M de timidina.

Los resultados de las pruebas de inversión son los siguientes:

(a) Hipoxantina (lOO uM).

TABLA II

Concentración: Desarrollo celular (%)

(¡Lg/rnl): Compuesto + A * Hipoxantina Compuesto + B' Hipoxantina Compuesto + C* Hipoxantina

100.0: 13.1 15.3 -- 14 13

33.3: 15.5 16.7 10.8 16.2 12 14

11.1: 16.2 17.6 9.6 15.9 12 13

3.7: 15.3 16.4 10.4 14.4 13 13

1.23: 16.1 15.5 11.3 15.6 14 13

0.411: 21.5 19.0 13.0 20.4 13 12

0.137: 63.9 73.8 17.7 43.2 14 15

0.045: 100.0 100.0 33.5 83.9 14 12

0.015: -- 76.9 99.5 25 24

0.005: -- -- 96 100

*Datos reproducidos a partir de la Tabla 1

(b) Hipoxantina (100 uM) y timidina (5 uM).

El compuesto B se probó adicionalmente para determinar el sitio secundario de actividad inhibidora.

TABLA 1II

Concentración (¡Lg/ml): Control B Desarrollo celular (%) + hipoxantina y timidina

33,3 11,1 3,7 1,23 0,411 0,137 0,045: 10,8 9,6 10,4 11,3 13,0 17,7 33,5 69,9 74,7 79,4 89,4 92,7 92,7 92,8

'" Datos reproducidos a partir de la Tabla 1.

(e) timidina (5 uM).

TABLA IV

Concentración: Desarrollo celular (%)

(I'g/ml): Compuesto + Compuesto + Compuesto +

A': Timidina B' Timidina C' Timidina

100.0: 13.1 48.8 14 44

33.3: 15.5 49.4 10.8 11.6 12 57

11.1: 16.2 49.4 9.6 11.6 12 52

3.7: 15.3 52.6 10.4 12.1 13 56

1.23: 16.1 62.1 11.3 12.3 14 58

0.411: 21.5 73.9 13.0 14.9 13 55

0.137: 63.9 98.1 17.7 18.8 14 64

0.045: 100.0 100.0 33.5 32.5 14 81

0.015: 76.9 81.1 25 100

0.005: 96 100

* Datos reproducidos de la Tabla 1

A nálisis de actividad In Vivo.

Se probaron adicionalmente los compuestos A y e para comparar su actividad antitumoral in vivo.

30 Se inocularon con células tumorales ratones hembras, raza DBA/2. El tratamiento con los c.ompuestos de prueba empezaron al día siguiente de la inoculación. El trat.amiento consistió en ocho dosis diarias Lp. (intraperitoneales) de los compuestos A y e durante ocho dias consecutivos. Se midió el tamaño del tumor al día siguiente del último día del tratamiento para determinar el efecto inhibidor de los compuestos de prueba sobre el desarrollo de tumores.

Los resultados fueron los siguientes:

TABLA V

10: Compuesto A Dosis (rng/kg) Número de animales Peso del tumor (rng)l % de inhibición

45

50: O (Control)' O (Control)' 200 100 8 8 8 8 2050±774 2753±790 2525±694 3117±747 O O

55: 50 25 12.5 6.25 3.125 8 8 8 8 8 1935±498 2121±410 3360±703 2719±413 2825±822 19 12 O O O

* Peso tumoral medio (mg) para todos los grupos de control sobre los datos

de evaluación = 2402 839.

l. Desviación corriente media ±.

TABLA VI

Compuesto e

Dosis: Número de Peso del tumor %

(rngjkg): animales (rng)' de inhibición

Prueba 1

0.0 (Control)

200.00

100.00

50.00

25.00

12.50

Prueba 2 O (Control)' O (Control)'

40 20 lO 5

2.5

1.25 0.6256

6 6 7 7 6 7 7

9 lO

lO lO lO lO lO lO 10

3606±2099 5533±1234 O±O O±O O±O O±O 102±166

6776±1328 5533±2645

O±O 18±57 196±152 1034±657 2908±1948 6682±2300

73RI±23~7

O

O 100 lOO lOO 100

100 97 83 53 O O

Peso del tumor (mg) para todos los grupos de control en esta fecha =

6155 ± 2134.

1 -Desviación corriente media ±.

El compuesto A no tuvo esencialmente efecto inhibidor sobre el desarrollo del tumor in vivo. Si bien el peso del tumor observado fue ligeramente inferior a dosis de 25 a 50 mgJkg1 esto no se considera significante puesto que no existió reducción en el peso del tumor a dosis de 100 o 200 mgJkg.

El compuesto e exhibe un marcado efecto inhibidor in vivo sobre el crecimiento del tumor) con una inhibición del 100% a dosis tan bajas como 20 mg/kg~ y mas del 50% de inhibición con dosis de por lo menos 2,5 mgjkg.

El compuesto B actua mediante un mecanismo diferente que los compuestos A o e, o sea inhibe DHFR en lugar de TS. Mientras que in vitro, los compuestos A y C parecen inhibir TS; el compuesto e es mas activo in vitro que el compuesto A según un factor de por lo menos 25 veces. El compuesto A in vivo es inactivo como agente antineoplástico. El compuesto C es altamente activo in vivo en combatir neoplasmas.

A continuación se exponen valores de inhibición representativos frente a cultivos de células eCRF CEM para compuestos típicos:

Compuesto: GI50

(!'Iml)

Acido 4 -[2 -(4 -hidroxi -6 -amino pirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)etil]benzoico: ..... >20,00

Acido N -{4 -[2 -(4 -hidroxi -6 -amino -pirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il) -etil]benzoil}

-L -glutámico ...................................................................... ' .: 0,004

3 -[2 -(4 -metoxifenil)etil] -4 -hidroxi -6 -aminopirrolo -[2,3 -d]pirimidina ........ .: >20,00

Acido N -{2 -fluoro -4 -[2 -(4 -hidroxi -6 -aminopirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)

-etil]benzoil} -L -glutámico: ........................................................... 0,008

Acido N -{3 -fluoro -4 -[2 -(4 -hidroxi -6 -aminopirrolo[2,3 -d] pirimidin -3 -il) -0,019 etil]benzoil} -L -glutámico ........................................................ .. 3 -[2 -(3 -fiuorofenil)etil] -4 -hidroxi -6 -aminopirrolo -[2,3 -d]pirimidina ........... >20,00

Acido N -{5 -[2 -(4 -hidroxi -6 -amino -pirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il)etil]-tien2 -ilcarbonil) -L -glutamico ............................................................. 0,025 Acido N -{4 -[2 -(4 -hidroxi -6 -metil-pirrolo[2,3 -d]pirimidin -3 -il) -etil]benzoil) -L -glutámico . . . .. . . . .. . . . .. . . .. .. . .. . . . . . . . . ... . .. . . . . . ............. . 0,0084 Acido N-{4-[2-(4-hidroxipirrolo[2,3-d]pirimidin-3-il)-etil]benzoil}-L-glutárnico ....... . 1,20

La citotoxicidad de estos compuestos no se invierte con la adición de hipoxantina o AleA, sugiriendo que no inhiben la trayectoria de biosintesis purina de novo, pero que se invierte mediante timidina, indicando que la timidilato sintet.asa es el objetivo principal La cit.otoxicidad se invierte también con la adición de leucovorin, indicando que la citotoxicidad se debe al antagonismo de un mecanismo relacionado con folato.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de la fórmula

en donde

R' es -OH o NH,;

R' es 1,4-fenileno o 1,3-fenileno no sustituido o sustituido con doro, fluoro, metilo, metoxi o trifluorometilo; tienodiílo no sustituido o sustituido con cloro, f1uoro, metilo, metoxi o trifluorometilo; ciclohexanodiílo; o un grupo alifático divalente lineal o ramificado de 2 a 4 átomos de carbono;

R4

es hidrógeno; y RS

es hidrógeno, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, o amino;

la configuración del átomo de carbono designado' es S; y

las sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
2.

Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R1 es -OH; R3 es 1,4-fenileno; R4 es hidrógeno y RS es hidrógeno.
3.

Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R 1 es -OH; R3 es 1,4-fenileno; R4 es hidrógeno y RS es metilo.
4.

Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R1 es -OH; R3 es tienodiílo; R4 es hidrógeno y RS es hidrógeno.
5.

Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R1 es -OH; R3 es tienodiílo; R4 es hidrógeno y RS es metilo.
6.

El compuesto de la reivindicación 1 que es el ácido N-{4-[2-(4-hidroxipirrolo[2,3-d]pirimidín-3-il)etil]benzoíl}-Lglutámico, y el ácido N-{4-{2-(4-hidroxi-6-metilpirrolo[2,3-d]pirimidln-3-il)etil]benzoíl}-L-glutámico.
7.

El compuesto de la fómnula

en donde RS' es amino o alcanoílamino de 1 a 12 átomos de carbono, la configuración del átomo de carbono designado * es S, y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
8. El compuesto de la reivindicación 7 que es el ácido N-{4-[2-(4-hidroxi-B-aminopirrolo[2,3-d]pirimidin-3il)etil]benzoll}-L-glutámico y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

23 9. Un compuesto de la fórmula:

en donde

R' es -OH o NH,; R3

es tienodiílo no sustituido o sustituido con cloro, fluero, metilo, metoxi o trifluorometilo; ciclohexadiílo; o un

grupo alifático divalente lineal o ramificado de 2 a 4 átomos de carbono; R' es hidrógeno; y la configuración del átomo de carbono designado * es S; y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
10.

Un compuesto según la reivindicación 9 en el que R' es -OH; R3 es tienodiílo, y R4 es hidrógeno.
11.

El compuesto según la reivindicación 9, que es el ácido N-{5-[2-(4-hidroxi-6-aminopirrolo[2,3-d]pirimidln-3il)etil]tien-2-ilcarbonil}-L-glutámico, el ácido N-{4-[2-(4-hidroxi-6-aminopirrolo[2,3-d]pirimidln-3-il)etil]tien-2-ilcarbonil}L-glutámico, o el ácido N-{5-[2-(4-hidroxi-6-aminopirrolo[2,3-d]pirimidln-3-il)etil]tien-3-ilcarbonil}-L-glutámico.
12.

Un procedimiento para la preparación de compuestos de la fórmula

en donde

R'

es -OH o NH,;

R'

es hidrógeno o un catión farmacéuticamente aceptable;

R3

es 1,4-fenileno o 1,3-fenileno no sustituido o sustituido con cloro, fluoro, metilo, metoxi tienodiflo no sustituido o sustituido con cloro, f1uoro, metilo, metoxi o trifluorometilo; ciclohgrupo alifático divalente lineal o ramificado de 2 a 4 átomos de carbono; o trifluorometilo; exanodiílo; o un

R'

es hidrógeno;

R5

es hidrógeno, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, o amino; y

la configuración del átomo de carbono designado' es S;

que comprende hidrogenar catalíticamente un compuesto de la fórmula

en donde X es COOR"; o

•

CONHCHCH2CH2COOR2 ' ;

I

10 COOR 2' Z' es hidrógeno, o Z1 tomado conjuntamente con R4' es un enlace carbono-carbono; R" es hidrógeno o un grupo carboxi protector;

R3

es como se ha definido más arriba; R4', cuando se toma independientemente de Z1, es hidrógeno; RS'

15 es hidrógeno, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, amino o un grupo amino protector; y R6

es hidrógeno o alcanoiloxi;

para producir un compuesto de la fórmula

o

R6 !

20 --N/ 'c-e-CH2C-R3_x 1 11 D 14 •

CH
5 .....c~ /c'N.... R

R N

I

en la que X, R2', R3, R4', R5' Y R6 son como se ha definido m~s aniba;

y cuando X= COOR', acoplando con un ácido glutámico protegido para formar un compuesto en el que:

y eliminar cualquier grupo protector.
13. El procedimiento según la reivindicación 12 para la preparación de ácido N-{4-[2-(4-hidroxi-6-aminopirrolo[2,330 d]pirimidin-3-il)etil]benzoil}-L-glutámico y las sales farmacéutica mente aceptables del mismo,
14.

Una composición farmacéutica que comprende como principio activo un compuesto según las reivindicaciones 111 en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
15.

Una composición fanmacéutica según la reivindicación 14 en la que el principio activo es el ácido N-{4-(2-(4hidroxi-6-aminopirrolo(2,3-d]piridín-3-il)etil]benzoíl}-L-glutámico.
16.

El uso del compuesto de las reivindicaciones 1-11 para la preparación de un medicamento útil para combatir el crecimiento neoplásico en un mamífero a través de la inhibición de la timidilato sintetasa.

26