EA036498B1 - Дозировка и введение нефукозилированных анти-cd40 антител - Google Patents
Дозировка и введение нефукозилированных анти-cd40 антител Download PDFInfo
- Publication number
- EA036498B1 EA036498B1 EA201790932A EA201790932A EA036498B1 EA 036498 B1 EA036498 B1 EA 036498B1 EA 201790932 A EA201790932 A EA 201790932A EA 201790932 A EA201790932 A EA 201790932A EA 036498 B1 EA036498 B1 EA 036498B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- antibody
- cancer
- sea
- administered
- patient
- Prior art date
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 93
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 57
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 46
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 33
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 claims description 66
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 claims description 66
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 50
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical group C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 claims description 27
- 229930182474 N-glycoside Natural products 0.000 claims description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 15
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 13
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 11
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 11
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 10
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 8
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 8
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 229950009791 durvalumab Drugs 0.000 claims description 5
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 claims description 5
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 claims description 5
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 claims description 5
- 229950010773 pidilizumab Drugs 0.000 claims description 5
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 4
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 4
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims description 4
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 claims description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 229950007217 tremelimumab Drugs 0.000 claims description 4
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 4
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010055113 Breast cancer metastatic Diseases 0.000 claims description 3
- 208000031671 Large B-Cell Diffuse Lymphoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 claims description 3
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 claims description 3
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims description 3
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims description 3
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 claims description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 229960003852 atezolizumab Drugs 0.000 claims 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 77
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 53
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 53
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 51
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 51
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 46
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 38
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 38
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 35
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 31
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 30
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 28
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 27
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 24
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 24
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 23
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 23
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 21
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 21
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 20
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 20
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 19
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 18
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 18
- 229950007409 dacetuzumab Drugs 0.000 description 18
- 150000008267 fucoses Chemical class 0.000 description 18
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 18
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 17
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 17
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 17
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 16
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 16
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 16
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 16
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 16
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 14
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 14
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 12
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 12
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 12
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 12
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 11
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 11
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 11
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 11
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 11
- 230000033581 fucosylation Effects 0.000 description 11
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 11
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 11
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 11
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 11
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 10
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 10
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 10
- 230000006870 function Effects 0.000 description 10
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 description 10
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 230000004044 response Effects 0.000 description 10
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 9
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 9
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 9
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 9
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 8
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 8
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 8
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 8
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 7
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 7
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 7
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 7
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 7
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 7
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 description 6
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 6
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 6
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 6
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 5
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 102000006639 indoleamine 2,3-dioxygenase Human genes 0.000 description 5
- 108020004201 indoleamine 2,3-dioxygenase Proteins 0.000 description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 5
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 5
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 5
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- SQTFKIKSQNCWGJ-KCDKBNATSA-N (2s,3r,4r,5s)-2-fluoro-3,4,5-trihydroxyhexanal Chemical compound C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](F)C=O SQTFKIKSQNCWGJ-KCDKBNATSA-N 0.000 description 4
- 102100021266 Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Human genes 0.000 description 4
- 241000392139 Astarte Species 0.000 description 4
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 4
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 4
- 101000819490 Homo sapiens Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Proteins 0.000 description 4
- 101001005728 Homo sapiens Melanoma-associated antigen 1 Proteins 0.000 description 4
- 101001005719 Homo sapiens Melanoma-associated antigen 3 Proteins 0.000 description 4
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 4
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 4
- 102100025050 Melanoma-associated antigen 1 Human genes 0.000 description 4
- 102100025082 Melanoma-associated antigen 3 Human genes 0.000 description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 4
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 4
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 4
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 4
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 4
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 4
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 4
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 4
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 4
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 3
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 3
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 3
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 3
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 3
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 3
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 3
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000037449 immunogenic cell death Effects 0.000 description 3
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000003990 inverse gas chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 229940125750 lymphocyte modulator Drugs 0.000 description 3
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- DOUMFZQKYFQNTF-WUTVXBCWSA-N (R)-rosmarinic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)O)OC(=O)\C=C\C=1C=C(O)C(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C(O)=C1 DOUMFZQKYFQNTF-WUTVXBCWSA-N 0.000 description 2
- TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 6-oxabicyclo[3.2.1]oct-3-en-7-one Chemical compound C1C2C(=O)OC1C=CC2 TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 2
- 201000007155 CD40 ligand deficiency Diseases 0.000 description 2
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 2
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 241001379910 Ephemera danica Species 0.000 description 2
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 2
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 2
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 2
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 description 2
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101100099884 Homo sapiens CD40 gene Proteins 0.000 description 2
- 101001068133 Homo sapiens Hepatitis A virus cellular receptor 2 Proteins 0.000 description 2
- 101001137987 Homo sapiens Lymphocyte activation gene 3 protein Proteins 0.000 description 2
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 2
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 2
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 2
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 2
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 description 2
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 2
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 2
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 2
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 2
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 2
- 208000006391 Type 1 Hyper-IgM Immunodeficiency Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 201000001696 X-linked hyper IgM syndrome Diseases 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 2
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000009640 blood culture Methods 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 2
- 190000008236 carboplatin Chemical compound 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 2
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 2
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 208000026095 hyper-IgM syndrome type 1 Diseases 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000007837 multiplex assay Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 2
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 210000004623 platelet-rich plasma Anatomy 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 2
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 2
- ZTTWHZHBPDYSQB-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-amino-3-(1h-indol-3-yl)-2-methylpropanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@](N)(C)C(O)=O)=CNC2=C1 ZTTWHZHBPDYSQB-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- SNTGWXAZMZPJPH-UHFFFAOYSA-N 1-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxypyrrolidine-2,5-dione Chemical compound O=C1CCC(=O)N1ON1C(=O)CCC1=O SNTGWXAZMZPJPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091007505 ADAM17 Proteins 0.000 description 1
- 102100021761 Alpha-mannosidase 2 Human genes 0.000 description 1
- 102000010565 Apoptosis Regulatory Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010063104 Apoptosis Regulatory Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940125431 BRAF inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010063916 CD40 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 102000006471 Fucosyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 108010019236 Fucosyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 101710203794 GDP-fucose transporter Proteins 0.000 description 1
- 229940032072 GVAX vaccine Drugs 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102100036242 HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 2 chain Human genes 0.000 description 1
- 102000011786 HLA-A Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 101000930801 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 2 chain Proteins 0.000 description 1
- 101000599852 Homo sapiens Intercellular adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 1
- 102000014158 Interleukin-12 Subunit p40 Human genes 0.000 description 1
- 108010011429 Interleukin-12 Subunit p40 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 1
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 208000031951 Primary immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 1
- ZZAFFYPNLYCDEP-HNNXBMFYSA-N Rosmarinsaeure Natural products OC(=O)[C@H](Cc1cccc(O)c1O)OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2 ZZAFFYPNLYCDEP-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 201000001531 bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N bortezomib Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)B(O)O)NC(=O)C=1N=CC=NC=1)C1=CC=CC=C1 GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N 0.000 description 1
- 229960001467 bortezomib Drugs 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000009096 combination chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940111134 coxibs Drugs 0.000 description 1
- 239000003255 cyclooxygenase 2 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 229960002465 dabrafenib Drugs 0.000 description 1
- BFSMGDJOXZAERB-UHFFFAOYSA-N dabrafenib Chemical compound S1C(C(C)(C)C)=NC(C=2C(=C(NS(=O)(=O)C=3C(=CC=CC=3F)F)C=CC=2)F)=C1C1=CC=NC(N)=N1 BFSMGDJOXZAERB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000006274 endogenous ligand Substances 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 210000000285 follicular dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- -1 for example Proteins 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 125000002446 fucosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O1)C)* 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 101150023212 fut8 gene Proteins 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000012178 germinal center formation Effects 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 229960001101 ifosfamide Drugs 0.000 description 1
- HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N ifosfamide Chemical compound ClCCNP1(=O)OCCCN1CCCl HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002751 imiquimod Drugs 0.000 description 1
- DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N imiquimod Chemical compound C1=CC=CC2=C3N(CC(C)C)C=NC3=C(N)N=C21 DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940126546 immune checkpoint molecule Drugs 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000003259 immunoinhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 108010061181 influenza matrix peptide (58-66) Proteins 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 108010083819 mannosyl-oligosaccharide 1,3 - 1,6-alpha-mannosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000001806 memory b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000008995 multiplex Luminex assay kit Methods 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000004031 partial agonist Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- DOUMFZQKYFQNTF-MRXNPFEDSA-N rosemarinic acid Natural products C([C@H](C(=O)O)OC(=O)C=CC=1C=C(O)C(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C(O)=C1 DOUMFZQKYFQNTF-MRXNPFEDSA-N 0.000 description 1
- TVHVQJFBWRLYOD-UHFFFAOYSA-N rosmarinic acid Natural products OC(=O)C(Cc1ccc(O)c(O)c1)OC(=Cc2ccc(O)c(O)c2)C=O TVHVQJFBWRLYOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 210000001258 synovial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 229940044655 toll-like receptor 9 agonist Drugs 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 230000037455 tumor specific immune response Effects 0.000 description 1
- 208000010570 urinary bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960003862 vemurafenib Drugs 0.000 description 1
- GPXBXXGIAQBQNI-UHFFFAOYSA-N vemurafenib Chemical compound CCCS(=O)(=O)NC1=CC=C(F)C(C(=O)C=2C3=CC(=CN=C3NC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1F GPXBXXGIAQBQNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M25/00—Catheters; Hollow probes
- A61M25/0009—Making of catheters or other medical or surgical tubes
- A61M25/0012—Making of catheters or other medical or surgical tubes with embedded structures, e.g. coils, braids, meshes, strands or radiopaque coils
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M25/00—Catheters; Hollow probes
- A61M25/0017—Catheters; Hollow probes specially adapted for long-term hygiene care, e.g. urethral or indwelling catheters to prevent infections
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M25/00—Catheters; Hollow probes
- A61M25/002—Packages specially adapted therefor ; catheter kit packages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M25/00—Catheters; Hollow probes
- A61M25/0067—Catheters; Hollow probes characterised by the distal end, e.g. tips
- A61M25/0068—Static characteristics of the catheter tip, e.g. shape, atraumatic tip, curved tip or tip structure
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
- C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Anesthesiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к способам применения нефукозилированного анти-CD40 антитела для лечения рака и хронических инфекционных заболеваний.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к способам применения нефукозилированного анти-CD40 антитела для лечения рака и хронических инфекционных заболеваний.
Уровень техники изобретения
CD40 является членом суперсемейства рецепторов факторов некроза опухоли (ФНО). Он представляет собой одноцепочечный трансмембранный белок типа I со средней молекулярной массой 50 кДа. CD40 экспрессируется некоторыми раковыми клетками, например клетками лимфомы и несколькими типами клеток солидных опухолей. CD40 также функционирует, чтобы активировать иммунную систему путем облегчения контактзависимых взаимодействий между антигенпрезентирующими клетками и Тлимфоцитами. Хотя ряд анти-CD40 антител был протестирован в клинических испытаниях, к настоящему времени ни одно из них не проявило достаточной активности. Настоящее изобретение решает эту и другие проблемы.
Краткая сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к способу лечения рака путем введения анти-CD40 антитела пациенту, нуждающемуся в таком лечении. Ahtu-CD40 антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 1 и вариабельную область легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 2 и константную область человека. Эта константная область имеет N-гликозидсвязанную сахарную цепь в остатке N297 в соответствии с индексом EU, как указано в Kabat, и менее чем 5% Nгликозидсвязанных сахарных цепей включают остаток фукозы, т.е. фукозу, связанную с восстанавливающим концом сахарной цепи через α1,6 связь с N-ацетилглюкозамином (GlcNAc). Введение антиCD40 антитела осуществляется в дозе от 0,1 до 300 мк/кг (мкг антитела на килограмм массы тела пациента). В одном варианте осуществления изобретения уровень дозы анти-CD40 антитела составляет от 0,6 до 150 мкг/кг. В другом варианте осуществления изобретения уровень дозы анти-CD40 антитела составляет от 1,0 до 100 мкг/кг. В еще одном варианте осуществления изобретения уровень дозы анти-CD40 антитела составляет от 5 до 25 мкг/кг. В другом варианте осуществления изобретения уровень дозы антиCD40 антитела составляет от 8 до 12 мкг/кг. В другом варианте осуществления изобретения уровень дозы анти-CD40 антитела составляет примерно 10 мкг/кг. В другом варианте осуществления изобретения уровень дозы анти-CD40 антитела составляет 10 мкг/кг.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения рака путем введения антиCD40 антитела пациенту, нуждающемуся в таком лечении. Ahtu-CD40 антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 1 и вариабельную область легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 2 и константную область человека. Эта константная область имеет Nгликозидсвязанную сахарную цепь в остатке N297 в соответствии с индексом EU, как указано в Kabat, и менее чем 5% N-гликозидсвязанных сахарных цепей включают остаток фукозы, т.е. фукозу, связанную с восстанавливающим концом сахарной цепи через α1,6 связь с N-ацетилглюкозамином (GlcNAc). Введение анти-CD40 антитела осуществляется в дозе от 0,1 до 2000 мк/кг (мкг антитела на килограмм массы тела пациента). В одном варианте осуществления изобретения уровень дозы составляет от 10 до 1000 мкг/кг. В другом варианте осуществления изобретения уровень дозы составляет от 50 до 800 мкг/кг. В другом варианте осуществления изобретения уровень дозы составляет от 75 до 600 мкг/кг. В другом варианте осуществления изобретения уровень дозы составляет от 100 до 500 мкг/кг. В других вариантах осуществления изобретения уровень дозы представляет собой диапазон, выбранный из следующих значений: 100-300, 300-500, 500-700, 700-900 и 900-1100 мкг/кг. В других вариантах осуществления изобретения уровень дозы представляет собой диапазон, выбранный из следующих значений: 100-150, 150-200, 200-250, 250-300, 300-350, 350-400, 400-450, 450-500, 500-550, 550-600, 600-650, 650-700, 700-750, 750800, 800-850, 850-900, 900-950, 950-1000, 1000-1050 и 1050-1100 мкг/кг. В других вариантах осуществления изобретения уровень дозы выбран из следующих значений: примерно 60, примерно 100, примерно 150, примерно 200, примерно 250, примерно 300, примерно 350, примерно 400, примерно 450, примерно 500, примерно 550, примерно 600, примерно 650, примерно 700, примерно 750, примерно 800, примерно 850, примерно 900, примерно 950, примерно 1000-1050, примерно 1050 и 1110 мкг/кг.
В одном варианте осуществления изобретения анти-CD40 антитело вводят каждые три недели. В другом варианте осуществления изобретения анти-CD40 антитело вводят каждые шесть недель. В другом варианте осуществления изобретения анти-CD40 антитело вводят каждые 10 недель. В другом варианте осуществления изобретения анти-CD40 антитело вводят каждые 12 недель. В другом варианте осуществления изобретения анти-CD40 антитело вводят каждые 15 недель. В другом варианте осуществления изобретения анти-CD40 антитело вводят каждые 18 недель.
В другом варианте осуществления изобретения пациент имеет CD40-положительный рак. В другом варианте осуществления изобретения пациент имеет CD40-отрицательный рак. В другом варианте осу- 1 036498 ществления изобретения пациент имеет рак, который представляет собой солидную опухоль. В еще одном варианте осуществления изобретения пациент имеет рак, который представляет собой рак крови. В другом варианте осуществления изобретения рак представляет собой меланому, рак молочной железы, включая метастатический рак молочной железы, рак легкого, включая немелкоклеточный рак легкого, или рак поджелудочной железы.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения рака путем введения пациенту комбинации анти-CD40 антитела и антитела, которое блокирует иммунную контрольную точку. Одним из примеров антитела, которое блокирует иммунную контрольную точку, является антитело против ассоциированного с цитотоксическими Т-лимфоцитами белка 4 (CTLA4). Примеры анти-CTLA4 антител включают, например, ипилимумаб или тремелимумаб. Другим примером антитела, которое блокирует иммунную контрольную точку, является антитело против белка программируемой клеточной смерти 1 (PD1). Примеры анти-PD1 антител включают, например, ниволумаб, пидилизумаб или пембролизумаб. Еще одним примером антитела, которое блокирует иммунную контрольную точку, является антитело против лиганда белка программируемой клеточной смерти 1 (PD-L1). Примеры αнтu-PD-L1 антител включают, например, MEDI4736 и MPDL3280A.
В другом варианте осуществления изобретения пациент имеет CD40-положительный рак и получает лечение комбинацией анти-CD40 антитела и антитела, которое блокирует иммунную контрольную точку, например анти-CTLA4 антитела, анти-PD1 антитела или αнтu-PD-L1 антитела. В другом варианте осуществления изобретения пациент имеет CD40-оmрицательный рак и получает лечение комбинацией анти-CD40 антитела и антитела, которое блокирует иммунную контрольную точку, например антиCTLA4 антитела, анти-PD1 антитела или αнтu-PD-L1 антитела. В другом варианте осуществления изобретения пациент имеет солидную опухоль и получает лечение комбинацией анти-CD40 антитела и антитела, которое блокирует иммунную контрольную точку, например анти-CTLA4 антитела, анти-PD1 антитела или αнтu-PD-L1 антитела. В еще одном варианте осуществления изобретения пациент имеет рак, который представляет собой рак крови, и получает лечение комбинацией анти-CD40 антитела и антитела, которое блокирует иммунную контрольную точку, например анти-CTLA4 антитела, αнтu-PD1 антитела или aнтu-PD-L1 антитела. В еще одном варианте осуществления изобретения рак представляет собой меланому, рак молочной железы, включая метастатический рак молочной железы, рак легкого, включая немелкоклеточный рак легкого, или рак поджелудочной железы, и его лечение осуществляется комбинацией анти-CD40 антитела и антитела, которое блокирует иммунную контрольную точку, например aнтu-CTLA4 антитела, aнтu-PD1 антитела или aнmu-PD-L1 антитела.
Определения.
Полипептид или полипептидная цепь представляет собой полимер аминокислотных остатков, соединенных пептидными связями, полученный естественным или синтетическим путем. Полипептиды размером менее примерно 10 аминокислотных, как правило, называются пептиды.
Белок представляет собой макромолекулу, содержащую одну или несколько полипептидных цепей. Белок также может содержать непептидные компоненты, такие как углеводные группы. Углеводы и другие непептидные заместители могут быть добавлены к белку клеткой, в которой продуцируется белок, и они будут различаться в зависимости от типа клетки. Белки в настоящем изобретении описываются по их структуре основной аминокислотной цепи; заместители, такие как углеводные группы, как правило, не указываются, но, тем не менее, они могут присутствовать.
Термины аминоконцевая и карбоксиконцевая используются в настоящем изобретении для обозначения положений в полипептидах. В зависимости от контекста эти термины используются со ссылкой на конкретную последовательность или часть полипептида для обозначения близости или относительного положения. На пример, определенная последовательность, имеющая карбоксиконцевое расположение в полипептиде относительно стандартной последовательности, расположена вблизи карбоксильного конца стандартной последовательности, но необязательно находится на карбоксильном конце полного полипептида.
Термин антитело используется в настоящем изобретении для обозначения белков иммуноглобулинов, продуцируемых организмом в ответ на присутствие антигена, и которые связываются с антигеном, а также их антигенсвязывающих фрагментов и сконструированных вариантов. Таким образом, термин антитело включает, например, интактные моноклональные антитела, содержащие полноразмерные тяжелую и легкую цепи иммуноглобулина (например, антитела, полученные с использованием гибридомной технологии) и антигенсвязывающие фрагменты антител, такие как фрагменты F(ab')2 и Fab. Генно-инженерные интактные антитела и фрагменты, такие как химерные антитела, гуманизированные антитела, одноцепочечные Fv-фрагменты, одноцепочечные антитела, диатела, мини-антитела, линейные антитела, поливалентные или мультиспецифичные (например, биспецифичные) гибридные антитела и тому подобное, также охватываются этим термином. Таким образом, термин антитело используется расширительно и включает любой белок, который содержит антигенсвязывающий сайт антитела и который способен специфично связываться с его антигеном.
Антигенсвязывающий сайт антитела представляет собой часть антитела, которая является достаточной для связывания с его антигеном. Минимально такая область, как правило, представляет собой
- 2 036498 вариабельный домен или его генно-инженерный вариант. Однодоменные сайты связывания могут быть получены из верблюжьих антител (см. Muyldermans and Lauwereys, J. Mol. Recog. 12:131-140, 1999; Nguyen et al., EMBO J. 19:921-930, 2000) или из VH доменов других видов для получения однодоменных антител (dAbs; см. Ward et al., Nature 341:544-546, 1989; патент США № 6248516 авторов Winter et al.). В некоторых вариантах антигенсвязывающий сайт представляет собой область полипептида, имеющую только две определяющие комплементарность области (CDRs) природного или неприродного (например, мутагенизированного) вариабельного домена тяжелой цепи или вариабельного домена легкой цепи или их комбинацию (см., например, Pessi et al., Nature 362:367-369, 1993; Qiu et al., Nature Biotechnol. 25:921929, 2007). В большинстве случаев антигенсвязывающий сайт антитела содержит как вариабельный домен тяжелой цепи (VH), так и вариабельный домен легкой цепи (VL), которые связываются с общим эпитопом. В контексте настоящего изобретения антитело может включать один или несколько компонентов в дополнение к антигенсвязывающему сайту, таких как, например, второй антигенсвязывающий сайт антитела (который может связываться с тем же самым или другим эпитопом или с тем же или другим антигеном), пептидный линкер, константная область иммуноглобулина, шарнирная область иммуноглобулина, амфипатическая спираль (см. Pack and Pluckthun, Biochem. 31 1579-1584, 1992), непептидный линкер, олигонуклеотид (см. Chaudri et al., FEBS Letters 450:23-26, 1999), цитостатический или цитотоксический лекарственный препарат и тому подобное, и может представлять собой мономерный или мультимерный белок. Примеры молекул, содержащих антигенсвязывающий сайт антитела, известны в данной области техники и включают, например, Fv, одноцепочечный Fv (scFv), Fab, Fab', F(ab')2, F(ab)c, диатела, dAbs, мини-антитела, наноантитела, слитые Fab-scFv, биспецифичный (scFv)4-IgG и биспецифичный (scFv)2-Fab (см., например, Hu et al., Cancer Res. 56:3055-3061, 1996; Atwell et al., Molecular Immunology 33:1301-1312, 1996; Carter and Merchant, Curr. Opin. Biotechnol., 8:449- 454, 1997; Zuo et al., Protein Engineering 13:361-367, 2000 и Lu et al., J. Immunol. Methods 267:213-226, 2002).
Используемый здесь термин иммуноглобулин относится к белку, состоящему из одного или нескольких полипептидов, в основном кодируемому геном(ами) иммуноглобулина. Одна форма иммуноглобулина составляет основную структурную единицу нативных (т.е. природных) антител у позвоночных животных. Эта форма представляет собой тетрамер и состоит из двух идентичных пар цепей иммуноглобулина, каждая из этих пар имеет одну легкую цепь и одну тяжелую цепь. В каждой паре вариабельные области легкой и тяжелой цепей (VL и VH) вместе в основном отвечают за связывание с антигеном, а константные области в основном отвечают за эффекторные функции антитела. У высших позвоночных животных было идентифицировано пять классов белков иммуноглобулинов (IgG, IgA, IgM, IgD и IgE). IgG представляет собой основной класс; в норме он существует как второй наиболее распространенный белок, обнаруженный в плазме крови. У людей IgG состоит из четырех подклассов, обозначенных IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. Константные области тяжелой цепи класса IgG обозначаются греческой буквой γ. Например, иммуноглобулины подкласса IgG1 содержат константную область тяжелой цепи γ1. Каждая тяжелая цепь иммуноглобулина обладает константной областью, которая состоит из константных областей белковых доменов (CH1, шарнирная область, CH2 и CH3; IgG3 также содержит домен CH4), которые являются, по существу, инвариантными для данного подкласса у вида. Последовательности ДНК, кодирующие цепи человеческих и нечеловеческих иммуноглобулинов, известны из уровня техники (см., например, Ellison et al., DNA 1:11-18, 1981; Ellison et al., Nucleic Acids Res. 10:4071-4079, 1982; Kenten et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79:6661-6665, 1982; Seno et al., Nuc. Acids Res. 11:719-726, 1983; Riechmann et al., Nature 332:323-327, 1988; Amster et al., Nuc. Acids Res. 8:2055-2065, 1980; Rusconi and Kohler, Nature 314:330-334, 1985; Boss et al., Nuc. Acids Res. 12:3791-3806, 1984; Bothwell et al., Nature 298:380-382, 1982; van der Loo et al., Immunogenetics 42:333-341, 1995; Karlin et al., J. Mol. Evol. 22:195-208, 1985; Kindsvogel et al., DNA 1:335-343, 1982; Breiner et al., Gene 18:165-174, 1982; Kondo et al., Eur. J. Immunol. 23:245-249, 1993 и GenBank Accession No. J00228). Структура и функция иммуноглобулинов рассматриваются в Putnam, The Plasma Proteins, Vol V, Academic Press, Inc., 49-140, 1987 and Padlan, Mol. Immunol. 31:169-217, 1994. Термин иммуноглобулин используется здесь в своем общепринятом значении для обозначения интактного антитела, входящих в его состав цепей или фрагментов цепей в зависимости от контекста.
Полноразмерные легкие цепи иммуноглобулина (примерно 25 кДа или 214 аминокислот) кодируются геном вариабельной области на аминоконце (кодирует примерно 110 аминокислот) и геном константной области каппа или лямбда на карбоксиконце. Полноразмерные тяжелые цепи иммуноглобулина (примерно 50 кДа или 446 аминокислот) кодируются геном вариабельной области (кодирует примерно 116 аминокислот) и геном константной области гамма, мю, альфа, дельта или эпсилон (кодирует примерно 330 аминокислот), причем последние определяют изотип антитела как IgG, IgM, IgA, IgD или IgE соответственно. В легких и тяжелых цепях переменная и константная области соединяются Jобластью, состоящей из примерно 12 или более аминокислот, причем тяжелая цепь также включает Dобласть, состоящую из примерно 10 аминокислот (общую информацию см. в Fundamental Immunology (Paul, ed., Raven Press, N.Y., 2nd ed. 1989), Ch. 7).
Вариабельная область легкой или тяжелой цепи иммуноглобулина (также обозначаемая здесь как
- 3 036498 вариабельный домен легкой цепи (VL домен) или вариабельный домен тяжелой цепи (VH домен) соответственно) состоит из каркасной области, прерываемой тремя гипервариабельными областями, также именуемыми определяющие комплементарность области или CDRs. Каркасные области служат для выравнивания CDR для специфичного связывания с эпитопом антигена. Таким образом, термин гипервариабельная область или CDR относится к аминокислотным остаткам антитела, которые преимущественно отвечают за связывание антигена. От аминоконца до карбоксиконца оба домена VL и VH содержат следующие каркасные области (FR) и CDR: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Обозначение аминокислот в каждом домене соответствует определениям, приведенным в Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987 and 1991) или в Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901-917, 1987; Chothia et al., Nature 342:878-883, 1989. В Kabat также предлагается широко используемая система нумерации (нумерация по Kabat), в соответствии с которой соответствующим остаткам между различными тяжелыми цепями или между различными легкими цепями присваивается одинаковый номер. CDRs 1, 2 и 3 домена VL также обозначаются здесь соответственно как CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3; CDRs 1, 2 и 3 домена VH также обозначаются здесь соответственно как CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3.
Если контекст не требует иного, то используемый здесь термин моноклональное антитело не ограничивается антителами, полученными с помощью гибридомной технологии. Термин моноклональное антитело относится к антителу, которое получено из одного клона, включая любой эукариотический, прокариотический или фаговый клон, а не способ, которым оно получено.
Термин химерное антитело относится к антителу, имеющему вариабельные домены, полученные от первого вида, и константные области, полученные от второго вида. Химерные иммуноглобулины или антитела могут быть сконструированы, например, при помощи генной инженерии из сегментов гена иммуноглобулина, принадлежащих к различным видам. Термин гуманизированное антитело, как определено ниже, не предназначен для обозначения химерных антител. Хотя гуманизированные антитела являются химерными по своей конструкции (т.е. содержат области из более чем одного вида белка), они включают дополнительные признаки (то есть вариабельные области, содержащие остатки донорной CDR и остатки акцепторной каркасной области), не обнаруженные в химерных иммуноглобулинах или антителах, как определено здесь.
Термин гуманизированный VH-домен или гуманизированный VL-домен относится к домену VH или VL иммуноглобулина, содержащему некоторые или все CDRs полностью или в значительной степени из нечеловеческого донорного иммуноглобулина (например, мыши или крысы) и последовательности каркасных областей вариабельной области полностью или практически из последовательностей иммуноглобулина человека. Нечеловеческий иммуноглобулин, служащий источником CDRs, называется донором, а человеческий иммуноглобулин, служащий источником каркасных областей, называется акцептором. В некоторых случаях гуманизированные антитела могут сохранять нечеловеческие остатки в каркасных областях вариабельного домена человека для усиления характеристик правильного связывания (например, мутации в каркасных областях могут оказаться необходимыми для сохранения аффинности связывания при гуманизации антитела).
Гуманизированное антитело представляет собой антитело, содержащее один или оба из следующих доменов: гуманизированный домен VH и гуманизированный домен VL. Константная область(и) иммуноглобулина необязательно должна присутствовать, но если они есть, то они полностью или в значительной степени представляют собой константные области иммуноглобулина человека.
Специфичное связывание антитела со своим целевым антигеном означает аффинность по меньшей мере 106, 107, 108, 109или 1010 М-1. Специфичное связывание значительно выше по величине и отличается от неспецифичного связывания, происходящего по меньшей мере с одной неспецифичной мишенью. Специфичное связывание может быть результатом образования связей между конкретными функциональными группами или конкретного пространственного совмещения (например, по типу ключ-замок), в то время как неспецифичное связывание обычно является результатом ван-дер-ваальсовых сил. Специфичное связывание, однако, не обязательно означает, что моноклональное антитело связывается с одной и только одной мишенью.
Что касается описанных здесь белков, то ссылка на аминокислотные остатки, соответствующие указанным в SEQ ID NO, включает посттрансляционные модификации таких остатков.
Используемый здесь термин разбавитель относится к раствору, подходящему для изменения или достижения приводимой в качестве примера или подходящей концентрации или концентраций, как описано здесь.
Термин контейнер относится к какому-либо предмету, в который может быть помещен или содержаться объект или жидкость, например, для хранения (например, держатель, емкость, сосуд или тому подобное).
Термин способ введения включает известные в данной области техники пути введения для доставки терапевтического белка, такие как, например, парентеральный, внутривенный, внутримышечный или подкожный. Для введения антитела для лечения рака может быть желательным введение в системный кровоток путем внутривенного или подкожного введения. Для лечения рака, характеризующегося
- 4 036498 солидной опухолью, введение также может быть локализовано непосредственно в опухоль, если это является необходимым.
Термин лечение относится к введению терапевтического агента пациенту, у которого имеется заболевание, с целью излечения, заживления, частичного снятия симптомов, задержки, облегчения, изменения, лечения, улучшения, способствования улучшению или воздействия на заболевание.
Термин пациент включает человека и других млекопитающих, которые получают или профилактическое, или терапевтическое лечение.
Термин эффективное количество, эффективная доза или эффективная дозировка относится к количеству, которое является достаточным для достижения или, по меньшей мере, частичного достижения желаемого эффекта, например достаточным для ингибирования возникновения или улучшения одного или нескольких симптомов заболевания или расстройства. Эффективное количество фармацевтической композиции вводят в эффективном режиме. Термин эффективный режим относится к комбинации количества вводимой композиции и частоты дозирования, достаточной для осуществления профилактического или терапевтического лечения заболевания или расстройства.
Используемый здесь термин примерно обозначает приблизительный диапазон плюс или минус 10% от указанного значения. Например, формулировка примерно 20 мкг/кг охватывает диапазон от 18 до 22 мкг/кг. В том значении, в каком он употребляется здесь, термин примерно также включает точное количество. Таким образом, примерно 20 мкг/кг означает примерно 20 мкг/кг, а также 20 мкг/кг.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 показано связывание SEA-CD40 (сплошная линия) и дацетузумаба (пунктирная линия) для белка CD40 человека, присутствующего на поверхности МКПК.
На фиг. 2А и 2В показана аффинность связывания SEA-CD40 (пустые и закрашенные квадраты) и дацетузумаба (пустые и закрашенные круги) для вариантов рецептора FcYIIIa человека. На фиг. 2А показано графическое представление, а на фиг. 2В показаны значения KD. Значения SEA-CD40 показаны в левой колонке; значения дацетузумаба показаны в правой колонке.
На фиг. 3 показана связь с дозой и временная динамика истощения В-клеток в мононуклеарных клетках периферической крови человека (МКПК) в результате обработки SEA-CD40.
На фиг. 4А и 4В показан репрезентативный синтез цитокинов в цельной крови человека после обработки в течение 24 ч SEA-CD40 или изотипическим контролем (SEA-h00). Антитела вводили в единицах мкг/мл. На фиг. 4А показан синтез фактора некроза опухолей-α, а на фиг. 4В показан синтез MIP-1e.
На фиг. 5А и 5В показан репрезентативный синтез цитокинов МКПК человека после обработки в течение 24 ч SEA-CD40 или изотипическим контролем (SEA-h00). Антитела вводили в единицах мкг/мл. На фиг. 5А показан синтез фактора некроза опухолей-α (ФНО-α), а на фиг. 5В показан синтез MIP-1e.
На фиг. 6 показана временная динамика истощения В-клеток в МКПК человека в результате обработки SEA-CD40 (закрашенные квадраты); дацетузумабом (серые круги) или SEA-CD40 F(ab')2 (серые квадраты).
На фиг. 7 показан синтез интерферона-γ (ИФН-γ) МКПК в результате обработки SEA-CD40 (закрашенные квадраты); дацетузумабом (серые круги) или SEA-CD40 F(ab')2 (серые квадраты).
На фиг. 8 показана индукция HLA-DR/DQ/DP в качестве маркера созревания антигенпрезентирующих клеток МКПК в результате обработки SEA-CD40 (закрашенные квадраты); дацетузумабом (серые круги) или SEA-CD40 F(ab')2 (серые квадраты).
На фиг. 9 показаны кривые зависимости нормализованного ответа от концентрации для маркеров иммунной активации в МКПК, обработанных различными концентрациями SEA-CD40.
На фиг. 10А и 10В показано сравнение иммунного ответа на пептид вируса гриппа M1 МКПК, инкубированными с SEA-CD40 или дацетузумабом. На фиг. 10А показаны уровни антигенспецифичных Тлимфоцитов (в процентах); на фиг. 10В показаны уровни синтеза ИФН-γ.
На фиг. 11 показано усиление иммунного ответа на пептид вируса гриппа Ml МКПК, инкубированными с комбинацией SEA-CD40 и/или анти-CTLA-4 антитела или анти-PD-1 антитела. Уровни ИФН-γ показаны на фиг. 11.
На фиг. 12 показано усиление иммунного ответа на пептид вируса гриппа Ml МКПК, инкубированными с комбинацией SEA-CD40 и/или анти-CTLA-4 антитела или анти-PD-1 антитела. Уровни антигенспецифичных Т-лимфоцитов показаны на фиг. 12.
На фиг. 13 показан иммунный ответ (синтез ИФН-γ) МКПК от доноров с раком на общие пептиды опухолевых антигенов (MAGEA1/MAGE3/NY-ESO). МКПК инкубировали в присутствии или в отсутствие возрастающих концентраций SEA-CD40 или SGN-40 в течение 5 суток.
На фиг. 14 показан иммунный ответ (синтез ИФН-γ) МКПК от доноров с раком на общие пептиды опухолевых антигенов (MAGEA1/MAGE3/NY-ESO). МКПК инкубировали в присутствии или в отсутствие возрастающих концентраций SEA-CD40 и/или постоянной концентрации анти-CTLA-4 или анти-PD1 блокирующего антитела.
На фиг. 15А и 15В показано связывание фукозилированных и нефукозилированных антимышиных
- 5 036498
CD40 антител с мышиными рецепторами Fcy. Рецептор Fcy представлял собой или FcyRI (фиг. 15А) или
FcYRIV (фиг. 15В).
На фиг. 16 показана активность in vivo фукозилированных и нефукозилированных суррогатов антиCD40 антител в мышиной модели меланомы В16.
На фиг. 17 показана активность по активации В-клеток SEA-CD40, антитела 21.4.1 и гексамерного лиганда CD40. Эксперименты проводили с использованием очищенных культур В-клеток.
На фиг. 18 показана активность по активации В-клеток SEA-CD40, антитела 21.4.1 и гексамерного лиганда CD40. Эксперименты проводили с использованием культур МКПК.
На фиг. 19 показана активность по активации моноцитов/макрофагов SEA-CD40, антитела 21.4.1, дацетузумаба и изотипического контроля SEA.
На фиг. 20 показан уровень индукции интерферона-γ (ИФН-γ) SEA-CD40, антителом 21.4.1, дацетузумабом и изотипическим контролем SEA.
На фиг. 21 показан уровень индукции интерлейкина 10 (IL-10) SEA-CD40, антителом 21.4.1, дацетузумабом и изотипическим контролем SEA.
На фиг. 22 показан уровень индукции интерферона-γ (ИФН-γ) SEA-CD40, антителом 21.4.1 или дацетузумабом. Инкубацию проводили в присутствии пептида вируса гриппа.
На фиг. 23 показана индукция ответа специфичных по отношению к антигену гриппа Т-лимфоцитов SEA-CD40, антителом 21.4.1 или дацетузумабом.
На фиг. 24 показаны изменения уровня IL-10 после инкубации МКПК с пептидом вируса гриппа и SEA-CD40, антителом 21.4.1 или дацетузумабом.
Подробное описание изобретения
В настоящем изобретении приводится описание активности нефукозилированного анти-CD40антитела, SEA-CD40. SEA-CD40 представляет собой агонистическое антитело и обладает повышенным связыванием с рецепторами Fcy III и, неожиданно, проявляет усиленную активацию сигнального пути CD40. Благодаря своей усиленной активации пути CD40 SEA-CD40 является мощным активатором иммунной системы и может применяться для лечения рака или для лечения инфекционных заболеваний, в частности хронических вирусных заболеваний, таких как гепатит С, вирус иммунодефицита человека, вирус Эпштейна-Барр, цитомегаловирус, вирус Джона Каннингема и вирус папилломы человека. Другие инфекционные заболевания включают, например, туберкулез. Усиленная активация иммунной системы позволяет вводить SEA-CD40 в низких дозах по сравнению с фукозилированным исходным антителом.
Описание и функция CD40.
CD40 является членом суперсемейства рецепторов факторов некроза опухоли (ФНО). Он представляет собой одноцепочечный трансмембранный белок типа I со средней молекулярной массой 50 кДа. Его зрелая полипептидная основная часть состоит из 237 аминокислот, из которых 173 аминокислоты образуют внеклеточный домен (ВД), организованный в 4 богатых цистеином повтора, которые характерны для членов семейства рецепторов ФНО. Два потенциальных N-связанных сайта гликозилирования присутствуют в области ВД, находящейся близко к мембране, в то время как потенциальные О-связанные сайты гликозилирования отсутствуют. Трансмембранный домен, состоящий 22 аминокислот, соединяет ВД с состоящей из 42 аминокислот цитоплазматической частью CD40. Мотивы последовательности, вовлеченные в CD40-опосредованную передачу сигнала, были идентифицированы в цитоплазматической части CD40. Эти мотивы взаимодействуют с цитоплазматическими факторами, называемыми факторами, ассоциированными с рецептором фактора некроза опухоли (TRAF), запуская каскад различных последующих событий, включая активацию МАР-киназ и NFkB, которые, в свою очередь, модулируют транскрипционную активность различных генов, связанных с воспалением, выживанием и ростом (см. например, van Kooten and Banchereau, J. Leukoc. Biol. 67: 2-17 (2000); Elgueta et al., Immunol. Rev. 229: 152-172 (2009)).
В системе кроветворения CD40 может быть обнаружен на В-клетках на разных стадиях дифференцировки, моноцитах, макрофагах, тромбоцитах, фолликулярных дендритных клетках, дендритных клетках (ДК), эозинофилах и активированных Т-лимфоцитах. В нормальных некроветворных тканях CD40 был обнаружен на почечных эпителиальных клетках, кератиноцитах, фибробластах синовиальной оболочки и кожного происхождения и активированном эндотелии. Растворимый вариант CD40 высвобождается из CD40-экспрессирующих клеток, возможно путем дифференциального сплайсинга первичного транскрипта или ограниченного протеолиза с помощью металлопротеиназного ФНОа-конвертирующего фермента. Высвобожденный CD40 потенциально может модифицировать иммунный ответ, препятствуя взаимодействию CD40/CD40L (см., например, van Kooten and Banchereau, J. Leukoc. Biol. 67:2-17 (2000); Elgueta et al., Immunol. Rev. 229:152-172 (2009)).
Эндогенный лиганд для CD40 (CD40L) представляет собой мембранный гликопротеин типа II с массой 39 кДа, также известный как CD154. CD40L является членом суперсемейства ФНО и экспрессируется как тример на поверхности клеток. CD40L транзиентно экспрессируется на активированных CD4+, CD8+ и γδ Т-лимфоцитах. CD40L также обнаруживается на разных уровнях на очищенных моноцитах, активированных В-клетках, эпителиальных и сосудистых эндотелиальных клетках, гладкомышеч- 6 036498 ных клетках и ДК, но функциональная значимость экспрессии CD40L на этих типах клеток не была четко определена (van Kooten 2000; Elgueta 2009). Однако экспрессия CD40L на активированных тромбоцитах связана с патогенезом тромботических заболеваний (см., например, Ferroni et al., Curr. Med. Chem.
14:2170-2180 (2007)).
Наиболее описанной функцией взаимодействия CD40/CD40L является ее роль в контактзависимом взаимодействии между антигенпрезентирующими клетками и Т-лимфоцитами (см., например, van Kooten and Banchereau, J. Leukoc. Biol. 67:2-17 (2000); Elgueta et al., Immunol. Rev. 229:152-172 (2009)). Связывание CD40L на активированных Т-лимфоцитах с CD40 на антигенактивированных В-клетках не только стимулирует быстрое размножение В-клеток, но также обеспечивает необходимый для В-клеток сигнал для дифференцировки или в В-клетки памяти, или плазматические клетки. Передача сигнала с участием CD40 необходима для образования зародышевых центров, в которых В-клетки подвергаются созреванию аффинности и переключению изотипов, чтобы приобрести способность продуцировать высокоаффинные антитела изотипов IgG, IgA и IgE (см., например, Kehry, J. Immunol. 156:2345-2348 (1996)). Таким образом, индивиды с мутациями в локусе CD40L, которые делают невозможным функциональное взаимодействие CD40/CD40L, страдают первичным иммунодефицитным при Х-связанном гипер-IgM синдроме, который характеризуется избыточным содержанием IgM в кровотоке и невозможностью продуцировать IgG, IgA и IgE. У этих пациентов наблюдаются подавленные вторичные гуморальные иммунные ответы, повышенная чувствительность к рецидивирующим пирогенным инфекциям и более высокая частота карцином и лимфом. Эксперименты с нокаутом гена у мышей с целью инактивации или локуса CD40, или локуса CD40L воспроизводят основные дефекты, наблюдаемые у пациентов с Х-связанным гипер-IgM синдромом. У этих KO мышей также наблюдается нарушение антигенспецифичного прайминга Т-лимфоцитов, что указывает на то, что взаимодействие CD40L/CD40 также является критическим фактором для формирования клеточных иммунных ответов (см., например, Elgueta et al., Immunol. Rev. 229:152-172 (2009)).
Иммуно-стимулирующие эффекты связывания CD40 с CD40L или анти-CD40 in vivo коррелируют с иммунными ответами против сингенных опухолей (см., например, French et al., Nat. Med. 5:54 8-553 (1999)). Недостаточный иммунный ответ против опухолевых клеток может быть результатом комбинации факторов, таких как экспрессия иммунных молекул контрольной точки, таких как PD-1 или CTLA-4, снижение экспрессии антигенов МНС, низкая экспрессия опухолеассоциированных антигенов, соответствующих молекул адгезии или костимулирующих молекул и продуцирование опухолевыми клетками иммуносупрессивных белков, таких как ФНОв. Связывание CD40 на антигенпрезентирующих и трансформированных клетках приводит к активации белков адгезии (например, CD54), ко-стимулирующих молекул (например, CD86) и антигенов МНС, а также к секреции воспалительных цитокинов, тем самым потенциально вызывая и/или усиливая противоопухолевый иммунный ответ, а также иммуногенность опухолевых клеток (см., например, Gajewski et al., Nat. Immunol. 14:1014-1022 (2013)).
Первичным следствием связывания CD40 является активация ДК (часто называемая лицензированием) и потенцирование способности миелоидных и В-клеток процессировать и презентировать ассоциированные с опухолью антигены Т-лимфоцитам. Помимо непосредственной способности активировать врожденный иммунный ответ, уникальным следствием передачи сигналов через CD40 является презентирование АПК опухолевых антигенов предшественникам CD8+ цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) в процессе, известном как праймирование перекрестно-реагирующим антигеном. Эта CD40зависимая активация и дифференцировка предшественников ЦТЛ зрелыми ДК в опухолеспецифичные эффекторы ЦТЛ может усиливать клеточно-опосредованный иммунный ответ на опухолевые клетки (см., например, Kurts et al., Nat. Rev. Immunol. 10:403-414 (2010)).
Агонистические CD40-mAb, включая дацетузумаб, исходную молекулу SEA-CD40, показали обнадеживающую клиническую активность при одноагентной и комбинированной химиотерапии. Дацетузумаб продемонстрировал определенную клиническую активность в фазе 1 клинических испытаний при НХЛ и в фазе 2 клинических испытаний при диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфоме (ДКВЛ) (см., например, Advani et al., J. Clin. Oncol. 27: 4371-4377 (2009) и De Vos et al., J. Hematol. Oncol. 7: 1-9 (2014)). Кроме того, СР-870,893, гуманизированное IgG2-агонистическое антитело к CD40, показало обнадеживающую активность при лечении солидной опухоли в комбинации с паклитакселом, или карбоплатином, или гемцитабином. В этих исследованиях были обнаружены активация антигенпрезентирующих клеток, продуцирование цитокинов и образование антигенспецифичных Т-лимфоцитов (см., например, Beatty et al., Clin. Cancer Res. 19: 6286-6295 (2013) и Vonderheide et al., Oncoimmunology 2: e23033 (2013)).
Ahtu-CD40 антитела.
Принимая во внимание его роль в иммунной функции, против антигена CD40 были получены антитела. Такие антитела можно разделить на три группы: антагонистические антитела, которые ингибируют активность CD40; частично агонистические антитела, которые частично индуцируют активность CD40; и полностью агонистические антитела, которые полностью стимулируют активность CD40. Члены каждой из этих групп были протестированы в клинических испытаниях и в настоящее время ни один из них не был рекомендован к применению.
- 7 036498
SEA-CD40.
Настоящее изобретение относится к нефукозилированному антителу hS2C6, SEA-CD40. S2C6 первоначально было получено в виде мышиного моноклонального антитела, полученного против карциномы мочевого пузыря человека, обозначаемого здесь как mS2C6 (см., например, Paulie et al., Cancer Immunol. Immunother. 17:165-179 (1984)). Антитело S2C6 является частичным агонистом сигнального пути CD40 и, следовательно, обладает следующими активностями: связывание с белком CD40 человека, связывание с белком CD40 макака-крабоеда, активация сигнального пути CD40, потенцирование взаимодействия CD40 с его лигандом, CD40L (см., например, патент США № 6946129).
На следующем этапе разработки S2C6 было гуманизировано, и это гуманизированное антитело здесь обозначается как гуманизированное антитело S2C6, и альтернативно как дацетизумаб, или фукозилированное гуманизированное антитело S2C6 (fhS2C6), или SGN-40 (см., например, Международную патентную заявку WO 2006/128103). SGN-40 было протестировано в клинических испытаниях на людях и показало свою недостаточную активность, что сделало дальнейшую работу с ним нецелесообразным.
SEA-CD40 представляет собой нефукозилированное гуманизированное антитело S2C6. Аминокислотные последовательности тяжелой и легкой цепей для SEA-CD40 раскрыты в SEQ ID NO: 1 и 2 соответственно. Вариабельная область тяжелой цепи представляет собой аминокислоты 1-113 в SEQ ID NO: 1; вариабельная область легкой цепи представляет собой аминокислоты 1-113 в SEQ ID NO: 2. Получение основы антитела SEA-CD40 раскрыто в Международной патентной заявке WO 2006/128103, которая включена в настоящее изобретение путем ссылки.
Настоящее изобретение относится к нефукозилированному гуманизированному антителу S2C6, обозначаемому здесь как nf hS2C6 или SEA-CD40. Кроме повышенного связывания с Fc-рецепторами, SEA-CD40 также повышает активность пути CD40 по сравнению с исходным антителом дацетизумаб. Таким образом, антитело SEA-CD40 вводят пациентам в более низких дозах и с использованием других схем введения.
Нефукозилированные антитела.
SEA-CD40 представляет собой нефукозилированное антитело и обладает повышенным связыванием с FcγШ-рецепторами и неожиданно повышает способность активировать сигнальный путь CD40 в иммунных клетках.
Способы получения нефукозилированных антител.
Настоящее изобретение относится к композициям и способам для получения гуманизированных антител S2C6 с уменьшенным фукозилированием основы. Используемый здесь термин фукозилирование основы относится к добавлению фукозы (фукозилирование) к N-ацетилглюкозамину (GlcNAc) на восстанавливающем конце N-связанного гликана.
Фукозилирование сложных связанных с N-гликозидом сахарных цепей, связанных с Fc-областью (или доменом) основной цепи антитела SEA-CD40, снижается. Используемый здесь термин сложная связанная с N-гликозидом сахарная цепь обычно связан с аспарагином 297 (в соответствии с индексом EU, как описано в Kabat, Sequences of Immunological Interest, 5th Ed., Pub. No. 91-3242, U.S. Dept. Healtth & Human Services, NIH, Bethesda, MD, 1991). Используемая здесь сложная цепь, связанная с Nгликозидом, имеет биантеннарную композитную сахарную цепь, в основном имеющую следующую структуру:
где ± указывает на то, что молекула сахара может присутствовать или отсутствовать, а числа указывают на положение связей между молекулами сахара. В вышеприведенной структуре конец сахарной цепи, который связывается с аспарагином, называется восстанавливающим концом (справа), а противоположная сторона называется невосстанавливающим концом. Фукоза, как правило, связана с Nацетилглюкозамином (GlcNAc) восстанавливающего конца, как правило, связью α1,6 (6-положение GlcNAc связано с 1-положением фукозы). Gal относится к галактозе, a Man относится к маннозе.
Сложная связанная с N-гликозидом сахарная цепь включает 1) сложный тип, в котором невосстанавливающая концевая сторона основной структуры имеет одну или несколько ветвей галактозо-Nацетилглюкозамина (также называемого Gal-GlcNAc), и невосстанавливающая концевая сторона GalGlcNAc необязательно содержит сиаловую кислоту, делящую пополам N-ацетилглюкозамин или тому подобное; или 2) гибридный тип, в котором невосстанавливающая концевая сторона основной структуры имеет обе ветви связанной с N-гликозидом сахарной цепи высоким содержанием маннозы и сложной связанной с N-гликозидом сахарной цепи.
В некоторых вариантах осуществления изобретения сложная связанная с N-гликозидом сахарная цепь включает сложный тип, в котором невосстанавливающая концевая сторона основной структуры
- 8 036498 имеет ноль, одну или несколько ветвей галактозо-Н-ацетилглюкозамина (также называемого galGlcNAc), и невосстанавливающая концевая сторона Gal-GlcNAc необязательно дополнительно имеет такую структуру, как сиаловая кислота, делящую пополам N-ацетилглюкозамин или тому подобное.
В соответствии с настоящими способам обычно только незначительное количество фукозы вводится в сложную связанную с N-гликозидом цепь (цепи) молекулы SEA-CD40. Например, в различных вариантах осуществления изобретения менее примерно 60%, менее примерно 50%, менее примерно 40%, менее примерно 30%, менее примерно 20%, менее примерно 15%, менее примерно 10%, менее примерно 5% или менее примерно 3% антитела имеет фукозилированную фукозой основу. В некоторых вариантах осуществления изобретения примерно 2% антитела имеет фукозилированную фукозой основу.
В некоторых вариантах осуществления изобретения только незначительное количество аналога фукозы (или метаболита, или продукта аналога фукозы) вводится в сложную связанную с N-гликозидом цепь (цепи). Например, в различных вариантах осуществления изобретения менее примерно 40%, менее примерно 30%, менее примерно 20%, менее примерно 15%, менее примерно 10%, менее примерно 5% или менее примерно 3% антитела SEA-CD40 имеет основу, фукозилированную аналогом фукозы, или метаболитом, или продуктом аналога фукозы. В некоторых вариантах осуществления изобретения примерно 2% антитела SEA-CD40 имеет основу, фукозилированную аналогом фукозы, или метаболитом, или продуктом аналога фукозы.
Способы получения нефукозилированных антител путем инкубации продуцирующих антитело клеток с аналогом фукозы описаны, например, в Международной патентной заявке WO 2009/135181. В кратком изложении клетки, которые были сконструированы для экспрессии гуманизированного антитела S2C6, инкубируют в присутствии аналога фукозы, или внутриклеточного метаболита, или продукта аналога фукозы. Используемый здесь внутриклеточный метаболит может представлять собой, например, ГДФ-модифицированный аналог или полностью или частично деэтерифицированный аналог. Продукт может представлять собой, например, полностью или частично деэтерифицированный аналог. В некоторых вариантах осуществления изобретения аналог фукозы может ингибировать фермент(ы) в пути утилизации фукозы. Например, аналог фукозы (или внутриклеточный метаболит, или продукт аналога фукозы) может ингибировать активность фукокиназы или ГДФ-фукозопирофосфорилазы. В некоторых вариантах осуществления изобретения аналог фукозы (или внутриклеточный метаболит, или продукт аналога фукозы) ингибирует фукозилтрансферазу (предпочтительно 1,6-фукозилтрансферазу, например белок FUT8). В некоторых вариантах осуществления изобретения аналог фукозы (или внутриклеточный метаболит, или продукт аналога фукозы) может ингибировать активность фермента в пути синтеза фукозы de novo. Например, аналог фукозы (или внутриклеточный метаболит, или продукт аналога фукозы) может ингибировать активность 4,6-дегидратазы ГДФ-маннозы и/или ГДФ-фукозосинтетазы. В некоторых вариантах осуществления изобретения аналог фукозы (или внутриклеточный метаболит, или продукт аналога фукозы) может ингибировать транспортер фукозы (например, транспортер ГДФ-фукозы).
В одном варианте осуществления изобретения аналог фукозы представляет собой 2-фторфукозу. Способы применения аналогов фукозы в питательной среде и другие аналоги фукозы раскрыты, например, в Международной патентной заявке WO2009/135181, которая включена в настоящее изобретение путем ссылки.
Другие способы конструирования клеточных линий для уменьшения фукозилирования основы включают нокаут генов, активацию генов и РНК интерференцию (РНКи). При нокауте генов ген, кодирующий FUT8 (фермент альфа 1,6-фукозилтрансфераза), подвергается инактивации. FUT8 катализирует перенос фукозильного остатка от ГДФ-фукозы в положение 6 Asn-связанного (N-связанного) GlcNac Nгликана. Сообщается, что FUT8 является единственным ферментом, ответственным за добавление фукозы к N-связанному биантеннарному углеводу при Asn297. При активации генов добавляют гены, кодирующие ферменты, такие как GNTIII или Гольджи альфа-маннозидаза II. Повышение уровней таких ферментов в клетках отвлекает моноклональные антитела от пути фукозилирования (приводя к уменьшению фукозилирования основы и увеличивая количество биссектирующих N-ацетилглюкозаминов). РНКи также обычно нацелена на экспрессию гена FUT8 и приводит к снижению уровню транскрипции мРНК или полному нокауту экспрессии гена. Любой из этих способов можно использовать для получения клеточной линии, которая могла бы продуцировать нефукозилированное антитело, например антитело SEA-CD40.
Специалистам в данной области техники известно, что существует множество способов определения степени фукозилирования антитела. Эти способы включают, например, ЖХ-МС при помощи PLRP-S хроматографии, и времяпролетную квадрупольную МС с ионизацией электрораспылением.
Нефукозилированное антитело SEA-CD40 при введении пациенту индуцирует активацию созревания моноцитов в макрофаги и индуцирует синтез цитокинов, включая, например, интерферон-γ (ИФН-γ), и хемокинов, которые вызывают устойчивый Т-клеточный ответ на стимуляцию иммунной системы антигеном. В отличие от полностью агонистических антител, таких как антитело 24.4.1., SEA-CD40 не индуцирует синтез иммунодемпфирующих цитокинов, таких как интерлейкин-10 (IL-10). IL-10, в свою очередь, индуцирует активность регуляторных Т-лимфоцитов, которые ослабляют иммунную реакцию. Таким образом, SEA-CD40 пригоден для индукции устойчивого иммунного ответа, опосредованного Т- 9 036498 лимфоцитами, без стимулирования активности регуляторных Т-лимфоцитов.
Дозы и введение SEA-CD40.
Фармацевтические композиции для парентерального введения предпочтительно являются стерильными и практически изотоническими и изготавливаются в условиях НПП. Фармацевтические композиции могут быть получены в стандартной лекарственной форме (то есть дозировке для однократного введения). Фармацевтические композиции могут быть составлены с использованием одного или нескольких физиологически приемлемых носителей, разбавителей, эксципиентов или вспомогательных веществ. Состав композиции зависит от выбранного пути введения. Для инъекции антитела могут находиться в составе водных растворов, предпочтительно в физиологически совместимых буферах для уменьшения дискомфорта в месте инъекции. Раствор может содержать вспомогательные вещества, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. Альтернативно, антитела могут находиться в лиофилизованной форме для восстановления перед использованием подходящим носителем, например стерильной апирогенной водой.
SEA-CD40 вводят внутривенно. В других вариантах осуществления изобретения SEA-CD40 вводят подкожно. В другом варианте осуществления изобретения SEA-CD40 вводят подкожно в область опухоли.
Нефукозилированное SEA-CD40-антитело неожиданно обладает повышенной иммуноактивационной способностью по сравнению со своим исходным антителом дацетизумабом. Таким образом, SEACD40 может вводиться пациентам в более низких дозах и по другим схемам введения по сравнению с дацетизумабом.
В качестве примера SEA-CD40 может вводиться пациентам в дозе от 0,1 до 2000 мкг/кг (мкг антитела на килограмм массы тела пациента). Другие возможные диапазоны доз составляют 10-1000, 50-800, 75-600, 100-500 мкг/кг. Другие возможные диапазоны доз составляют 100-300, 300-500, 500-700, 700-900 и 900-1100 мкг/кг. Дополнительные диапазоны доз составляют 100-150, 150-200, 200-250, 250-300, 300350, 350-400, 400-450, 450-500, 500-550, 550-600, 600-650, 650-700, 700-750, 750-800, 800-850, 850-900, 900-950, 950-1000, 1000-1050 и 1050-1100 мкг/кг. Другие возможные диапазоны доз составляют 0,3-200, 0,6-150, 1,0-100, 2-50, 5-25, 7,5-15 и 8-12 мкг/кг.
В других вариантах осуществления изобретения SEA-CD40 вводят пациентам в количестве 0,6, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5, 10, 30, 50, 75, 100 или 200 мкг/кг. В предпочтительном варианте осуществления изобретения SEA-CD40 вводят пациентам в количестве 10 мкг/кг.
В других вариантах осуществления изобретения SEA-CD40 вводят пациентам в количестве примерно 60, примерно 100, примерно 150, примерно 200, примерно 250, примерно 300, примерно 350, примерно 400, примерно 450, примерно 500, примерно 550, примерно 600, примерно 650, примерно 700, примерно 750, примерно 800, примерно 850, примерно 900, примерно 950, примерно 1000-1050, примерно 1050 и 1110 мкг/кг.
В некоторых вариантах осуществления изобретения SEA-CD40 вводят таким образом, чтобы уменьшить вероятность иммунного истощения. Например, SEA-CD40 может вводиться с 3-недельными, 6-недельными, 8-недельными, 10-недельными, 12-недельными и 14-недельными интервалами. Интервалы могут также составляться по месячному графику, например через один месяц, два месяца или три месяца.
Поскольку SEA-CD40 активирует иммунную систему для ответа на связанные с опухолью антигены, его применение не ограничено раковыми клетками, которые экспрессируют CD40. Таким образом, SEA-CD40 может применяться для лечения как CD40-положительного, так и CD40-отрицательного рака.
SEA-CD40 предпочтительно применяют для лечения опухолей, о которых известно, что они обладают иммунной реактивностью, особенно если рак экспрессирует низкие уровни CD40 или не обнаруживает экспрессию CD40. К иммунореактивным видам рака относятся, например, меланома; рак мочевого пузыря; рак легких, например мелкоклеточный рак легкого и немелкоклеточный рак легкого; рак яичника; рак почки; рак поджелудочной железы; рак молочной железы; рак шейки матки; рак головы и шеи, рак предстательной железы; глиобластома; неходжкинская лимфома; хронический лимфолейкоз; гепатоцеллюлярная карцинома или множественная миелома.
В другом варианте осуществления изобретения SEA-CD40 применяют для лечения солидных опухолей. В другом варианте осуществления изобретения SEA-CD40 применяют для лечения рака крови, например лимфомы, включая неходжкинскую лимфому и лимфому Ходжкина; хронического лимфолейкоза или множественной миеломы.
Комбинированная терапия SEA-CD40.
Благодаря своей иммуностимулирующей функции SEA-CD40 может применяться в комбинации с другими терапевтическими агентами, которые активируют иммунную систему. Препараты, обладающие иммуностимулирующей функцией, включают, например, модуляторы Т-лимфоцитов, в том числе ингибиторы иммунной контрольной точки; иммунные активаторы; и химиотерапевтические агенты, которые индуцируют иммуногенную гибель клеток. В качестве примера некоторые антитела функционируют путем блокирования активности молекул, которые служат в качестве иммунных контрольных точек на Тлимфоцитах. Таким образом, SEA-CD40 можно использовать в комбинации с антителами, действие ко
- 10 036498 торых направлено на белки иммунных контрольных точек.
Модуляторы Т-лимфоцитов.
Т-лимфоциты играют определенную роль в способности иммунной системы распознавать и устранять раковые образования из организма. Модуляторы Т-лимфоцитов включают антитела, которые блокируют функцию иммунных контрольных точек (см., например, Pardoll, Nature Rev. Cancer, 12:252-264 (2012)). Антитела, которые блокируют иммунные контрольные точки, включают, например, анти-PD-1 антитела, анти-РО-Ы антитела и анти-CTLA4 антитела. Другие ингибиторы/активаторы контрольных точек включают LAG3 и TIM3. Антитела против некоторых белков могут использоваться для модуляции активности Т-лимфоцитов или предпочтительно активировать активность Т-лимфоцитов, например антитела против 41ВВ, CD27, ICOS и ОХ40. Другие модуляторы Т-лимфоцитов включают ингибиторы фермента индоламин 2,3-диоксигеназа (ИДО).
Анти-CTLA4-αнтитела распознают ассоциированный с цитотоксическими Т-лимфоцитами белок 4 (CTLA-4), также известный как кластер дифференцировки 152 или CD152. Белок CTLA-4 экспрессируется на Т-лимфоцитах, которые распознают антигены, подходящие для атаки иммунной системой. Активация CTLA-4 подавляет иммунный ответ (см., например, Nirschi and Drake, Clin. Cancer Res., 19:4917-4924 (2013)). Антитела, специфичные по отношению к CTLA-4 и блокирующие его активность, применяются для лечения рака путем активации иммунного ответа на раковые заболевания. Примеры анти-CTLA-4 антител включают ипилимумаб или тремелимумаб. SEA-CD40 может вводиться в комбинации с ипилимумабом или тремелимумабом для лечения рака.
Анти-PDI антитела распознают белок программируемой клеточной смерти 1 (PD-1). Как и CTLA-4, PD-1 экспрессируется на Т-лимфоцитах и ослабляет иммунный ответ (см., например, Nirschi and Drake, Clin. Cancer Res., 19:4917-4924 (2013)). Антитела, специфичные по отношению к PD-1 и блокирующие его активность, применяются для лечения рака путем активации иммунного ответа на раковые заболевания. Примеры анmи-PD-1 антител включают MEDI0680, АМР-224, ниволумаб, пембролизумаб и пидилизумаб. Другие связывающие PD-1 белки, которые действуют как ингибиторы контрольной точки и могут использоваться в комбинации с SEA-CD40, включают, например, B7-DC-Fc. SEA-CD40 может вводиться в комбинации с MEDI0680, АМР-224, ниволумабом, пембролизумабом или пидилизумабом для лечения рака.
PD-L1 представляет собой лиганд белка PD-1. PD-L1 экспрессируется на раковых клетках, и его взаимодействие с PD-1 позволяет экспрессирующим PD-L1 раковым клеткам избегать распознавания иммунной системой. Анти-PD-N-антитела были получены и использованы для лечения рака. Примеры анти-РП-Ы антител включают, например, MEDI4736, BMS-936559/MDX-1105, MSB0010718C и MPDL3280A. SEA-CD40 может вводиться в комбинации с MEDI4736, BMS-936559/MDX-1105, MSB0010718C или MPDL3280A для лечения рака.
Другие антитела, которые блокируют функцию белков иммунных контрольных точек, включают антитела, направленные против, например, LAG3 и TIM3, и могут применяться в комбинации с SEACD40.
Антитела против 41ВВ, CD27, ICOS и ОХ40 применяются для активации активности Т-лимфоцитов и могут использоваться в комбинации с SEA-CD40. Анти-ОХ40 антитела включают, например, MEDI6469 и MEDI6383. Примером агонистического aнти-CD27-aнтителa является CDX-1127, которое может применяться в комбинации с SEA-CD40.
Фермент индоламин-2,3-диоксигеназа (ИДО) катализирует расщепление аминокислоты триптофана. Ингибиторами ИДО могут быть малые молекулы, такие как розмариновая кислота, ингибиторы СОХ2 и альфа-метилтриптофан.
Химиотерапевтические агенты, которые индуцируют иммуногенную гибель клеток.
У большинства людей миллионы клеток погибают посредством апоптоза и удаляются, не вызывая иммунного ответа. Тем не менее, после лечения некоторыми химиотерапевтическими агентами наблюдаются иммунные клетки, которые проникают в опухоли. Таким образом, некоторые опухолевые клетки, убитые химиотерапевтическими агентами, действуют как вакцины и вызывают специфический к опухоли иммунный ответ. Это явление получило название иммуногенной гибели клеток (ИГК) (см., например, Kroemer et al., Annu. Rev. Immunol., 31:51-72 (2013)). Возможность химиотерапевтического агента индуцировать ИГК может быть определена экспериментально. Должны соблюдаться два критерия. Вопервых, инъекция иммунокомпетентной мыши раковых клеток, которые были обработаны in vitro химиотерапевтическим агентом, должна вызывать защитный иммунный ответ, специфичный для опухолевых антигенов, в отсутствие адъюванта. Во-вторых, ИГК, происходящая in vivo, например сингенная мышиная модель, получавшая лечение с использованием потенциального индуцирующего ИГК химиотерапевтического агента, должна демонстрировать иммунный ответ в опухоли, который зависит от иммунной системы.
Химиотерапевтические агенты, которые индуцируют ИГК, включают, например, антрациклины, анти-EGFR антитела, бортезомиб, циклофосфамид, гемцитабин, облучение опухоли и оксалиплатин. SEA-CD40 может применяться в комбинации с любым из этих агентов для получения усиленного иммунного ответа и лечения рака у пациента.
- 11 036498
Иммунная активация.
Рак также лечат путем введением агентов, которые непосредственно стимулируют иммунную систему. Такие агенты включают, например, агонисты ГМКСФ, ИФН-гамма, интерлейкина-2, GVAX и TLR9. Другие иммунные активаторы включают, например, противораковые вакцины, бациллы Кальметта-Герена (БЦЖ), неспецифические иммуностимуляторы (например, имиквимод) и клеточные терапии, такие как CAR-T-лимфоциты. SEA-CD40 может применяться в комбинации с любым из этих агентов для получения усиленного иммунного ответа и лечения рака у пациента.
Другие комбинации.
Другие комбинации с SEA-CD40 могут применяться для лечения рака. Примеры включают, например, SEA-CD40 в комбинации с анти-PD1 антителом, например ниволумабом, пембролизумабом и пидилизумабом, MEDI0680 или АМР-224; SEA-CD40 в комбинации с гемцитабином, с или без паклитаксела, или цисплатина, или оксалиплатина; SEA-CD40 в комбинации с ингибитором BRAF, например вемурафенибом или дабрафенибом; или SEA-CD40 в комбинации с циклофосфамидом, адриамицином, винкристином и преднизоном (CHOP) или ритуксимабом, ифосфамидом, карбоплатином и этопизидом (RICE) или ритуксимабом, гемцитабином, дексаметазоном и цисплатином (RGDP).
Примеры
Следующие примеры приводятся в целях иллюстрации, но не для ограничения заявленного изобретения.
Пример 1. Синтез нефукозилированного антитела hS2C6.
Гуманизированное αнти-CD40-αнтитело S2C6 с тяжелыми и легкими цепями, представленными в SEQ ID NO: 1 и 2, экспрессировали в клетках CHO. Ингибитор фукозилирования, 2-фторфукоза, был включен в среду для культивирования клеток во время продуцирования антител, для получения нефукозилированного антитела SEA-CD40 (см., например, Okeley et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. 110:5404-55409 (2013)). Основная среда для роста клеток не содержала фукозу, и 2-фторфукозу добавляли в среду для ингибирования фукозилирования белка (см., там же). Включение фукозы в антитела измеряли с помощью ЖХ-МС при помощи PLRP-S хроматографии и времяпролетной квадрупольной МС с ионизацией электрораспылением (см., там же). Данные не показаны.
Пример 2. Характеристика нефукозилированного антитела hS2C6.
Определение аффинности связывания с CD40 SEA-CD40.
Для выделения мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК) цельную кровь человека получали от Astarte Biologies. В кратком изложении кровь собирали в пробирки с гепарином и доставляли в лабораторию Seattle Genetics в течение 4 ч после отбора. По прибытии кровь распределяли по 50 мл коническим пробиркам (Falcon) и центрифугировали при 200g на центрифуге Eppendorf 5810R (ротор А4-62) в течение 20 мин при температуре 25°С без перерыва для отделения обогащенной тромбоцитами фракции. После центрифугирования образовывались три различных слоя: нижний слой, эритроциты (составляющие 50-80% от общего объема); средний слой, очень тонкая полоска лейкоцитов; верхний слой, соломенного цвета тромбоцитарно обогащенная плазма (ТОП).
Верхний слой соломенного цвета, который обогащен тромбоцитами, отбирали при помощи 1-мл пипетки. После отбора тромбоцитарно обогащенной плазмы кровь разбавляли равными объемами стерильного ФСБ (Gibco, лот 1618435, ept 2016-07). 15 мл среды Histopaque-1077 (Sigma, номер партии RNBD2965, Expt 5/2017) нагревали до комнатной температуры и вносили под слой крови. Образцы Histopaque центрифугировали при 1500 об/мин в течение 25 мин при температуре 25°С без перерыва. После центрифугирования снова получали три слоя: нижний слой, эритроциты (50-80% от общего объема); средний слой, толстый слой лейкоцитов (также называемый лейкоцитарная пленка); верхний слой, ФСБ и оставшиеся тромбоциты.
Верхний слой ФСБ/тромбоцит отбирали 1-мл пипеткой и удаляли. Толстый слой лейкоцитов осторожно отбирали и помещали в чистую 50-мл стерильную коническую пробирку. Пробирки заполняли до 50 мл и клетки центрифугировали при 800 g в течение 10 мин. Промывочный раствор удаляли и осадок ресуспендировали в 10 мл буфера для лизиса эритроцитов АСК (Gibco, лот 1618488) в течение 10 мин. Затем в 50-мл конические пробирки вносили 35 мл стерильного ФСБ и клетки центрифугировали при 800 g в течение 10 мин. Промывочный раствор удаляли и осадок ресуспендировали в 50 мл ФСБ. Отбирали 500 мкл образца и подсчитывали количество МКПК при помощи Vi-cell-XR (Beckman Coulter). Клетки снова центрифугировали при 800 g в течение 10 мин. Промывочный раствор удаляли и осадок ресуспендировали при 1х106/мл в окрашивающем растворе FAC (BD). 100 мкл ресуспендированных МКПК наносили в 96-луночный планшет с U-образным дном (Corning) и помещали на лед. Чтобы блокировать неспецифическое связывание FcYRIIIa, МКПК предварительно обрабатывали 100 мкг/мл человеческих Fc-фрагментов (Calbiochem) в течение 13 мин. Десятикратные серийные разведения биотинилированного SEA-h00 (нефукозилированного контрольного антитела), SEA-CD40 или SGN-40 готовили для получения серии разведений (100, 10, 1, 0,1, 0,01, 0,001, 0,0001 мкг/мл).
Образцы дважды промывали ледяным буфером FAC и инкубировали с насыщающими концентрациями ПЭ-стрептавидина (BD) на льду в течение 30 мин. Образцы дважды промывали ледяным буфером
- 12 036498
FAC и ресуспендировали в 200 мкл буфера FAC. Связывание оценивали с использованием программного обеспечения BD LSRII и DIVA. Результаты клеточной сортировки с активацией флуоресценции анализировали в FlowJo и GeoMean, определяли флуоресценцию положительно окрашенных клеток и наносили на график в Pad Prism Graph Pad. Данные аппроксимировали при помощи нелинейной регрессии, предполагая наличие одного сайта связывания в программе Prism и значения KD связывания рассчитывали путем деления вычисленной концентрации мкг/мл на молекулярную массу SEA-CD40.
Результаты.
Аффинность связывания SEA-CD40 и исходного антитела дацетузумаб с CD40 на мононуклеарных клетках периферической крови человека (МКПК) определяли при помощи проточной цитометрии. Фоновое связывание соответствующего изотипического контроля вычитали и строили график зависимости средней интенсивности флуоресценции (СИФ) от концентрации антител. Результаты показаны на фиг. 1. SEA-CD40 и исходное антитело дацетузумаб дали практически перекрывающиеся кривые связывания и оба эти антитела насыщали МКПК в концентрациях приблизительно 1,17 нМ. Эти данные свидетельствуют о том, что изменения фукозилирования не влияют на сродство SEA-CD40 к CD40.
Определение аффинности связывания SEA-CD40 с FcyRIIIa.
Получали клетки CHO, которые экспрессируют высоко-(158V) или низкоаффинный (158F) вариант FcyRIIIa человека. 20х106 клеток центрифугировали, промывали один раз в 20 мл 1х ФСБ и ресуспендировали в 8 мл буфера для окрашивания BD. Клетки делили на аликвоты в следующей плотности: 2,0х106 клеток/мл в 100 мкл объема. По 0,12х106 клеток помещали в каждую лунку. Клетки центрифугировали при 1250 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре.
Антитела разбавляли или до 0,14 мкг/мл (SGN) или до 0,04 мкг/мл (SEA). Разведения приведены в табл. 1.
Таблица 1
| Био тинилиро в анны е антитела Разведения | Конц. мг/мл | Объем антитела (мкл) | Объем буфера для окрашивания | Самая высокая КОНЦ . Красителя мкг/мл |
| SGN-40-Биотин | 3,29 | 18,23 | 581,7 | 100 |
| SEA40-Биотин | 3,27 | 15, 11 | 584,7 | 100 |
| hOO-SGN-Биотин | 1,55 | 38,7 | 561, 0 | 100 |
| h00-SEA-Биотин | 3, 61 | 16, 6 | 583 | 100 |
Супернатанты отбирали от отцентрифугированных клеток и многоканальной пипеткой добавляли 60 мкл соответствующих разведений антител. Соответствующие концентрации были 100, 33,3, 11,1, 3,7, 1,23, 0,41, 0,14 мкг/мл. Образцы инкубировали при температуре 4°С в течение 1 ч. Образцы центрифугировали и дважды промывали 200 мкл окрашивающего буфера BD на лунку. Один миллилитр ПЭстрептавидина добавляли в 20 мл окрашивающего буфера BD (избыток 2°) для получения стрептавидинового буфера. К каждому образцу добавляли 100 мкл стрептавидинового буфера и инкубировали их в течение 30 мин в темноте при температуре 4°С. Образцы затем центрифугировали и дважды промывали 200 мкл окрашивающего буфера BD на лунку. Образцы анализировали при помощи проточной цитометрии в режиме HTS на LSRII и график СИФ для вычисления Kd строили в программе Prism.
Результаты.
Оценивали связывание SEA-CD40 и исходного антитела дацетизумаб с клетками яичника китайского хомячка (CHO), экспрессирующими низко- (158F) или высоко- (158В) аффинную форму FcyRIIIa. Результаты показаны на фиг. 2А и 2В. SEA-CD40 связывался как с низко- (158F), так и с высокоаффинной (158 В) формой FcyRIIIa с аналогичной аффинностью (KD 27,5 и 5,2 нМ соответственно). Связывание SEA-CD40 с низкоаффинной формой (158F) было значительно лучше, чем у фукозилированного исходного антитела дацетизумаб (KD 302,7 нМ), и SEA-CD40 даже с высокоаффинной формой 158V связывалось лучше, чем фукозилированное исходное антитело дацетузумаб (5,2 и 37,9 нМ соответственно).
Опосредованная SEA-CD40 АЗКЦ активность.
МКПК человека выделяли, как описано выше, и обрабатывали различными концентрациями SEACD40 или изотипическим контролем SEA (SEA-h00) в течение 6, 24 или 48 ч. Культуры окрашивали для CD19+ В-клеток и количество клеток определяли количественно при помощи проточной цитометрии.
Результаты.
Культуры РВМС человека обрабатывали 100, 10, 1, 0,1, 0,01, 0,001 или 0,0001 мкг/мл SEA-CD40 или не связывающимся изотипическим контролем SEA (SEA-h0 0) в течение 6, 24, и 48 ч и затем оценивали количество CD40-положительных клеток. Результаты показаны на фиг. 4. Обработка SEA-CD40 приводила к значительному снижению CD40+ CD19+ В-клеток в зависимости от дозы и времени даже до низких концентраций ниже мкг/мл. Не наблюдалось существенного влияния SEA-CD40 на количество моноцитов/ДК (данные для моноцитов/ДК не приводятся).
Оценка синтеза цитокинов в цельной крови человека или МКПК.
- 13 036498
Цельную кровь человека получали от Astarte Biologics. В кратком изложении 100 мл кровь собирали в пробирки с гепарином и доставляли в лабораторию Seattle Genetics в течение 4 ч после отбора. Половину крови отбирали для культур цельной крови, а другую половину использовали для выделения МКПК, как описано выше. Аликвоты по 100 мкл цельной крови наносили на 3-96 плоскодонные планшеты для культивирования тканей (Costar). Выделенные МКПК подсчитывали в Viacell и ресуспендировали в количестве 1x106 клеток/мл в среде DMEM, содержащей 10% ФБС (Atlanta Biologics), 1х пенициллин/стрептавидин и X глутамин (среда МКПК). Для МКПК 100 мкл ресуспендированных очищенных
МКПК разделяли на аликвоты в 3-96 плоскодонные планшеты для культивирования тканей. 10х серийные разведения SEA-h00 и SEA-CD40 проводили в среде МКПК, и цельную кровь и выделенные культуры МКПК обрабатывают убывающими концентрациями SEA-h00 или SEA-CD40 (100, 10, 1,0, 0,1, 0,01, 0,001, 0,0001 или 0 мкг/мл). Обработка SEA-CD40 была выполнена в двух повторностях как для цельной крови, так и для МКПК культур в каждый момент времени. В каждый из заранее определенных периодов времени (6, 24 и 48 ч) 96-луночный планшет, содержащий цельную кровь или очищенные МКПК, центрифугировали с адаптером для планшета в центрифуге Eppendorf 5810R при 800 об/мин в течение 5 мин. Супернатанты культуры сыворотки или ткани удаляли и переносили в 96-луночный штатив и образцы замораживали при -80°С до дальнейшей обработки.
Замороженные супернатанты культуры ткани и сыворотку оттаивали в течение ночи при температуре 4°С и обрабатывают для получения цитокинов с использованием мультиплексного набора реагентов Luminex от Millipore. Наборы реагентов были разработаны под заказ для анализа ИФ1 Ιγ, IL-12p40, IL-6, IL-8, МСР-1, MIP-1a, IL-1e, ΜΙΡ-1β, ФНО-α, SCD40L. Анализируемые цитокины отбирали из цитокинов, наблюдаемых с дацетуземабом в предыдущих исследованиях. Супернатанты культуры ткани и образцы сыворотки обрабатывали в соответствии с инструкциям производителя. В кратком изложении аналитические планшеты промывали 200 мкл промывочного буфера на лунку с последующим добавлением 25 мкл стандарта или буфера, 25 мкл матрицы или образца и 25 мкл мультиплексированных гранул аналита в каждую лунку. Образцы инкубировали в течение ночи при интенсивном встряхивании при температуре 4°С. Аналитические планшеты дважды промывали промывочным буфером. В каждую лунку добавляли 25 мкл детектирующих антител и инкубировали при комнатной температуре в течение одного часа. Добавляли 25 мкл стрептавидин-фикоэритрина (SA-PE) и образцы инкубировали при комнатной температуре в течение 13 мин. Планшет дважды промывали промывочным буфером и гранулы ресуспендировали в 150 мкл проточной жидкости. Образцы анализировали с использованием систем Luminex MagPix в сочетании с программной системой Xponent. Уровни цитокинов рассчитывали по стандартной кривой.
Результаты.
Культуры цельной крови человека обрабатывали изотипическим контролем SEA или SEA-CD40 (100, 10, 1, 0,1, 0,01, 0,001 или 0,0001 мкг/мл) в течение 6, 24 или 48 ч. Сыворотку или супернатанты культуры ткани собирали и воспалительные цитокины оценивали с помощью мультиплексного анализа Luminex. Данные представлены в виде кратного увеличения синтеза цитокинов по сравнению с изотипическим контролем SEA. SEA-CD40 стимулировало активный синтез ИФ1 Ιγ, ΜΙΡ1β и ФНОа в 6, 24 и 48 ч в цельной крови, как показано ниже в табл. 2. Уровни SEA-CD40 представлены в крайних левых столбцах. Активность наблюдалась при таких низких уровнях, как 0,010 мкг/мл SEA-CD40. Стимуляция ΜΙΡ1β и ФНОа в 24 ч показана на фиг. 4А и 4В.
Таблица 2
Цельная кровь ч ИФНу IL-8 МСР-1 ΜΙΡΙα ΜΙΡΙβ ФНОа
| 4,52 | 2,01 | 2,75 | 1,30 | 30,86 | 3,22 |
| 10, 81 | 1,05 | 2,33 | 1,04 | 26, 69 | 1,90 |
| 4,99 | 1,13 | 1, 62 | 0, 93 | 4,59 | 2,20 |
| 3,42 | 0, 84 | 0, 96 | 1,02 | 0, 88 | 1, 65 |
| 1,83 | 1,00 | 1,29 | 1,26 | 0, 96 | 0, 98 |
| 1,20 | 0, 94 | 1,25 | 1,24 | 0, 93 | 1, 04 |
| 1,16 | 1,05 | 1,29 | 1,15 | 0, 98 | 1,02 |
- 14 036498
| 24 ч | ИФНу | IL-8 | МСР-1 | ΜΙΡΙα | ΜΙΡΙβ | ФНОа |
| 100,00 | 3, 01 | 1,95 | 2,19 | 2,28 | 6, 77 | 3,51 |
| 10, 00 | 3,23 | 1,52 | 2,84 | 2,34 | 8,42 | 3,26 |
| 1,00 | 2,31 | 1,70 | 2,36 | 1,75 | 6, 77 | 3, 62 |
| 0, 10 | 1,32 | 1,36 | 1,19 | 0, 89 | 3, 95 | 2,12 |
| 0, 01 | 0, 95 | 1, 10 | 1,01 | 0, 74 | 0, 96 | 2,11 |
| 0, 00 | 0,55 | 0, 92 | 1,04 | 0, 95 | 1,15 | 1,03 |
| 0, 00 | 0,40 | 0, 82 | 0,79 | 1, 01 | 1, 66 | 1,44 |
| 48 ч | ИФНу | IL-8 | МСР-1 | ΜΙΡΙα | ΜΙΡΙβ | ΦΗΟα |
| 100,00 | 3,59 | 1,11 | 1, 19 | 1,26 | 2,03 | 3,47 |
| 10, 00 | 2,37 | 1,21 | 1,22 | 1,24 | 2,27 | 2,71 |
| 1,00 | 2,15 | 1,08 | 1,07 | 1,07 | 1,76 | 2, 63 |
| 0, 10 | 1,01 | 0,76 | 1,05 | 1,09 | 1,43 | 2,53 |
| 0, 01 | 0,86 | 0, 81 | 1,16 | 1,17 | 1,27 | 1,93 |
| 0, 00 | 0, 87 | 0, 97 | 1, 18 | 1,18 | 0, 97 | 1,18 |
| 0, 00 | 0, 96 | 0, 93 | 0, 87 | 1,05 | 0, 68 | 1,17 |
МКПК человека обрабатывали изотипическим контролем SEA или SEA-CD40 (100, 10, 1, 0,1, 0,01,
0,001 или 0,0001 мкг/мл) в течение 6, 24 или 48 ч. Сыворотку или супернатанты культуры ткани собирали и воспалительные цитокины оценивали с помощью мультиплексного анализа Luminex. Данные представлены в виде кратного увеличения синтеза цитокинов по сравнению с изотипическим контролем SEA.
SEA-CD40 стимулировало активный синтез ИФНу, MIP1e и ФНОа в 6, 24 и 48 ч в МКПК, как показано ниже в табл. 3. Уровни SEA-CD40 представлены в крайних левых столбцах. Активность наблюдалась при таких низких уровнях, как 0,010 мкг/мл SEA-CD40. Стимуляция MIP1e и ФНОа в 24 ч показана на фиг. 5А и 5В.
Таблица 3
МКПК ч ИФНу IL-8 МСР-1 ΜΙΡΙα ΜΙΡΙβ ФНОа
| 100 | 8,75 | 1,18 | 3, 00 | 2,51 | 6, 91 | 11, 66 |
| 10 | 13, 68 | 1,16 | 7,70 | 3, 11 | 11,59 | 17,72 |
| 1 | 6,21 | 0, 89 | 2,71 | 1,48 | 4,55 | 5, 58 |
| 0, 1 | 3, 89 | 0, 89 | 1, 61 | 1,26 | 3,40 | 3, 04 |
| 0, 01 | 1,49 | 0,75 | 1,07 | 1,26 | 2,11 | 2,26 |
| 0, 001 | 1, 60 | 0,71 | 0, 89 | 1,31 | 1,30 | 1,28 |
| 0,0001 | 1,58 | 0,71 | 0,77 | 0, 83 | 1,33 | 1, 10 |
| 24 ч | ИФНу | IL-8 | МСР-1 | ΜΙΡΙα | ΜΙΡΙβ | ΦΗΟα |
| 100 | 8,51 | 4,79 | 5, 69 | 2, 84 | 13, 43 | 19, 91 |
| 10 | 8,98 | 3, 96 | 7,87 | 1, 91 | 7,58 | 14, 97 |
| 1 | 3,32 | 1,35 | 3, 10 | 1,28 | 8,73 | 3,79 |
| 0, 1 | 1,80 | 1,04 | 1,38 | 1, 03 | 5, 85 | 5, 58 |
| 0, 01 | 1, 66 | 0, 85 | 1,28 | 1, 08 | 2,87 | 1,22 |
| 0, 001 | 1, 12 | 0,71 | 0, 90 | 0, 96 | 1, 18 | 2,75 |
| 0,0001 | 0,40 | 0,71 | 0, 80 | 0, 74 | 1, 11 | 1,02 |
| 48 ч | ИФНу | IL-8 | МСР-1 | ΜΙΡΙα | ΜΙΡΙβ | ΦΗΟα |
| 100 | 17,92 | 2,58 | 11,47 | 1,51 | 2,81 | 14, 02 |
| 10 | 8, 81 | 3, 61 | 3,39 | 1,46 | 2,33 | 5, 58 |
| 1 | 4,09 | 2,07 | 2,36 | 1,32 | 1,91 | 6, 47 |
| ο, 1 | 1, 82 | 1, 19 | 0, 84 | 0, 96 | 1, 00 | 2,30 |
| 0, 01 | 1, 03 | 1,02 | 1,41 | 0, 95 | 1,13 | 2,09 |
| 0, 001 | 0, 83 | 0, 86 | 1,13 | 0, 93 | 0, 96 | 1,93 |
| 0,0001 | 0, 82 | 0, 97 | 0, 97 | 0, 91 | 1, 05 | 1,73 |
- 15 036498
Оценка маркеров активации на МКПК.
Поверхностную экспрессию костимулирующей молекулы оценивали на клеточных осадках, оставшихся после описанного выше анализа цитокинов. Клеточные осадки ресуспендировали в 50 мл FAC буфера BD и переносили в 96-луночные круглодонные микротитровальные планшеты и Fc-рецепторы блокировали 100 мкг/мл Fc-фрагментов человека (Millipore) в течение 30 мин на льду. Основную смесь, состоящую из PE-CD86 (BD) и MHCII (Пан анти-DR, DP, DQ-антитело BD), разведенную в соотношении 1:100, получали в FAC буфере BD, содержащем 100 мг/мл человеческих Fc-фрагментов. 5 мкл основной смеси добавляли в каждую лунку, содержащую 90 мкл, и образцы инкубировали в течение одного часа на льду. Затем клетки центрифугировали при 400g в предварительно охлажденной центрифуге Eppendorf 5810R в течение 5 мин. Супернатанты удаляли и клетки промывали 200 мл FAC буфера BD. Клетки промывали дважды, а затем ресуспендировали в 200 мл FAC буфера. Затем образцы анализировали на LSRII (BD biosciences) с программным обеспечением DIVA (BD biosciences). Среднюю флуоресценцию CD86 и MHCII определяли с использованием программного обеспечения для анализа FlowJo. Рассчитывали соотношение между SEA-h00 и SEA-CD40 и использовали кратность изменения для вычисления диапазона активности SEA-CD40.
Результаты.
Активация CD40, кроме инициации синтеза цитокинов, способствует созреванию антигенпрезентирующих клеток. За созреванием ДК может следовать активация маркеров активации, включая CD86 и MHCII. Культуры МКПК человека стимулировали SEA-CD40 и изотипическим контролем SEA в течение 6, 24 или 48 ч и оценивали поверхностную экспрессию антигенов МНС класса II (HLA DR, DP, DQ) и CD86. Стимуляция SEA-CD40, но не изотипическим контролем, приводила к значительному увеличению как MHCII (табл. 4), так и CD86 (данные не показаны) при таких низких концентрациях, как 0,01 мкг/мл.
Таблица 4
Роль фукозы в иммунной активации при помощи SEA-CD40.
МКПК человека выделяли, как описано выше. РВМС обрабатывали различными концентрациями SEA-CD40, исходного антитела SGN40 или F(ab)'2 варианта SEA-CD40 и инкубировали в течение 24 ч. Для оценки истощения В-клеток культуры МКПК окрашивали PE-CD19 и количество В-клеток определяли при помощи проточной цитометрии. Для оценки синтеза цитокинов супернатанты тканевой культуры МКПК собирали и оценивали синтез цитокинов путем мультиплексного анализа на платформе Luminex. Синтез ИФНу показан на фиг. 7 (нг/мл), и аналогичные тенденции наблюдались для других цитокинов. Для оценки созревания антигенпрезентирующих клеток МКПК собирали после 24-часовой инкубации и окрашивали анти-CD86 антителом или антителом к АПК-пан МНС класса II антигену (DR, DQ, DP) и процент положительных клеток оценивали при помощи проточной цитометрии. Данные показаны как средняя интенсивность флуоресценции для пан МНС маркеров.
Результаты.
Для оценки истощения В-клеток культуры МКПК человека обрабатывали различными концентрациями SEA-CD40, дацетизумаба или SEA-CD40 F(ab')2 в течение 24 ч. Результаты показаны на фиг. 6. АЗКЦ-опосредованное истощение В-клеток было значительно выше в культурах, обработанных SEACD40, по сравнению с культурами, обработанными дацетизумабом, и эта активность была утрачена в случае SEA-CD40 F(ab')2.
Дополнительно конечные точки иммунной активации (цитокины и маркеры активации/созревания АПК) оценивали на культурах МКПК, стимулированных SEA-CD40, дацетизумабом и SEA-CD40 F(ab')2 в течение 24 ч. Стимуляция SEA-CD40 как синтеза цитокинов (фиг. 7), так и созревания АПК (фиг. 8) была значительно выше, чем у дацетизумаба или SEA-CD40 F(ab')2. Эти данные показывают, что отсутствие фукозы в домене IgG не изменяет связывание с CD40, но увеличивает связывание с FcyRIIIa, приводящее к повышению активности CD40 и, в конечном счете, к повышению иммуномодулирующей активности CD40.
Пример 3. Иммуномодулирующая активность нефукозилированного антитела hS2C6.
Идентификация активных доз SEA-CD40.
Предполагается, что SEA-CD40 является активным в дозах, которые активируют антигенпрезенти
- 16 036498 рующие клетки, которые могут характеризоваться активацией маркеров активации, такими как МНС класса I или II или CD8 6. Маркеры активации на МКПК после обработки различными концентрациями SEA-CD40 от 6 до 48 ч оценивали, как описано выше (Оценка маркеров активации на МКПК). Различие между обработками с изотипическим контролем SEA-h00 и SEA-CD40 для каждого маркера активации рассчитывали и наносят на график зависимости от концентрации SEA-CD40 и времени обработки. Самые крутые кривые ответ-концентрация наблюдались в 24 ч для CD86 и MHCII и в 48 ч для MHCI. Данные ответа-концентрация (24 ч CD86, 24 ч MHCII и 48 ч MHCI) обрабатывали при помощи нелинейной регрессии с использованием следующего уравнения, где 0 и 100%-ный ответ определяли как наименьшие и наибольшие значения в наборе данных для каждого маркера активации, ЕС50 представляет собой концентрацию SEA-CD40, которая дает 50%-ный ответ.
о - 100 — 1 + 10(1о§1а£С50-1о§1ОКончентРачия)
Результаты.
Нормализованный ответ в зависимости от логарифма концентрации и нелинейные аппроксимированные кривые регрессии для маркеров активации показаны на фиг. 9. Оцененные значения ЕС50 для MHCI, CD86 и MHCII составили 0,011, 0,14 и 0,41 мкг/мл соответственно. Было определено, что SEACD40 индуцирует приблизительно 90, 60 и 30% максимальной активации MHCI, CD86 и MHCII соответственно при 0,2 мкг/мл, что соответствует теоретической Cmax в плазме, достигаемой в дозе 10 мкг/кг при внутривенном введении у людей. Эта доза предлагается в качестве теоретической первой ожидаемой активной дозы.
Пример 4. Иммуномодулирующая активность нефукозилированного антитела hS2C6.
Т-клеточный ответ, вызываемый SEA-CD40.
Линия анти-М1 Т-лимфоцитов была получена в Astarte Biologics от донора HLA-A2, который, как было показано, обладает высокой чувствительностью к пептиду вируса гриппа M1. Эти клетки метили карбоксифлуоресцеинсукцинимидиловым эфиром (CFSE) и объединяли с аутологичными МКПК. Культуры стимулировали 10 мкг/мл пептида вируса гриппа M1 в присутствии или в отсутствие уменьшающихся концентраций SEA-CD40 или дацетизумаба (1, 0,1, 0,01 мкг/мл) в течение 5 суток. Культуральные супернатанты собирали и анализировали на цитокины при помощи мультиплексного анализа на платформе Luminex и антигенспецифичные Т-лимфоциты идентифицировали с помощью специфичного связывания тетрамера M1.
Результаты.
МКПК от донора HLA-A2, который, как было показано, обладает высокой чувствительностью к пептиду вируса гриппа M1, стимулировали пептидом вируса гриппа M1 в присутствии или в отсутствие уменьшающихся концентраций SEA-CD40 или дацетизумаба в течение пяти суток. Результаты показаны на фиг. 10А и 10В. Стимулированные SEA-CD40 культуры демонстрировали повышенную чувствительность к антигену вируса гриппа M1, что следует из увеличения синтеза ИФНу и увеличения количества антигенспецифичных Т-лимфоцитов, что определяется увеличением связывания тетрамера. SEA-CD40 стимулировал антигенспецифичный Т-клеточный ответ до концентрации 0,1 мкг мл, и эта активность была более выраженной, чем ответ, связанный с дацетизумабом.
Т-клеточный ответ, вызываемый SEA-CD40 в комбинации с антителами против ингибиторов иммунных контрольных точек.
Линия анти-М1 Т-лимфоцитов была получена в Astarte Biologics от донора HLA-A2, который, как было показано, обладает высокой чувствительностью к пептиду вируса гриппа M1. Эти клетки метили CFSE и объединяли с аутологичными МКПК. Культуры стимулировали 10 мкг/мл пептида вируса гриппа M1 в присутствии или в отсутствие уменьшающихся концентраций SEA-CD40 (1, 0,1, 0,01 мкг/мл) и/или 1 мкг/мл анти-CTLA4 или анти-PD-1 антитела в течение пяти суток. Культуральные супернатанты собирали и анализировали на цитокины при помощи мультиплексного анализа на платформе Luminex и антигенспецифичные Т-лимфоциты идентифицировали с помощью специфичного связывания тетрамера M1.
Результаты.
МКПК от донора HLA-A2, который, как было показано, обладает высокой чувствительностью к пептиду вируса гриппа M1, стимулировали пептидом вируса гриппа M1 в присутствии или в отсутствие уменьшающихся концентраций SEA-CD40 и/или постоянной концентрации анти-CTLA4 блокирующего антитела или анти-PD-1-антитела. Результаты показаны на фиг. 11 и 12. Хотя SEA-CD40, анти-CTLA4 антитела и анти-PD-1 антитела сами по себе стимулировали антигенспецифичный Т-клеточный ответ, повышенный ответ на антиген вируса гриппа M1, о чем свидетельствует увеличение синтеза ИФН-у (фиг. 11) и увеличение количества антигенспецифичных Т-лимфоцитов, определяемое повышенным связыванием тетрамера (фиг. 12, с использованием тетрамер/АПК - HLA-A*02:01, пептидом вируса гриппа (GILGFVFTL) из MBL), наблюдался когда SEA-CD40 и анти-CTLA4 антитела или анти-PD-1 антитела объединяли. SEA-CD40 стимулировало антигенспецифичный Т-клеточный ответ до концентрации 0,1 мкг/мл, и эта активность усиливалась при комбинации с антителом к иммунным контрольным точкам.
Т-клеточный ответ, вызываемый SEA-CD40 в МКПК, полученных от больных раком.
- 17 036498
Для оценки только анти-С.П40-антител МКПК выделяли из 10 мл крови пациента с опухолью и 0,25 миллиона клеток высевали в 24-луночный планшет. Образцы обрабатывали только увеличивающимися концентрациями SEA-CD40 или 1 мкг/мл объединенного пептидного пула, содержащего MageA1/MageA3/NY-ESO, и увеличивающимися концентрациями или SEA-CD40, или SGN-40. Образцы культивировали в атмосфере с 10% СО2 при температуре 37°С в течение пяти суток, супернатанты культуры ткани собирали и оценивали уровни ИФН-γ.
Для оценки SEA-CD40 в комбинации с антителами, блокирующими иммунные контрольные точки, МКПК выделяли из 10 мл крови пациентов, которым был поставлен диагноз рак молочной железы, рак поджелудочной железы или меланома, и 0,25 миллиона клеток высевали в 24-луночный планшет. Образцы обрабатывали возрастающими концентрациями SEA-CD40, 1 мкг/мл объединенного пептидного пула, содержащего MageA1/MageA3/NY-ESO, и или 1 мкг/мл анτи-PD1 антитела, или анτи-CTLA4 антитела. Образцы культивировали в атмосфере с 10% СО2 при температуре 37°С в течение 5 суток, супернатанты культуры ткани собирали и оценивали уровни ИФН-γ.
Результаты.
МКПК от доноров выделяли из цельной крови, как описано выше. Донорами были три пациента с диагнозом меланома, три пациента с диагнозом рак молочной железы и три пациента с диагнозом рак поджелудочной железы. МКПК доноров стимулировали пулом пептидов общих белков опухолевых антигенов (MAGEA1/MAGE3/NY-ESO) в присутствии или отсутствие возрастающих концентраций SEACD40 или SGN-40 в течение 5 суток. Супернатанты культуры ткани собирали и оценивали уровень ИФНγ. Результаты показаны на фиг. 13. Шесть из девяти пациентов продемонстрировали антигензависимый ИФН-γ-ответ, который был значительно усилен обработкой SEA-CD40 по сравнению с обработкой SGN40. В обработанных SEA-CD40 МКПК стимуляция наблюдалась при концентрациях 10 мкг/мл.
МКПК от доноров выделяли из цельной крови, как описано выше. Как указано выше, донорами были три пациента с диагнозом меланома, три пациента с диагнозом рак молочной железы и три пациента с диагнозом рак поджелудочной железы. МКПК доноров стимулировали пулом пептидов общих белков опухолевых антигенов (MAGEA1/MAGE3/NY-ESO) в присутствии или в отсутствие возрастающих концентраций SEA-CD40 и/или постоянной концентрации анти-СТЬА4 или анτи-PD1 блокирующего антитела. Результаты показаны на фиг. 14. Хотя SEA-CD40 и антитела против блокаторов контрольных точек PD1 и CTLA4 сами по себе стимулировали антигенспецифичный Т-клеточный ответ, ярко выраженный сигнал на опухолевый антиген, измеренный по синтезу ИФН-γ, наблюдался, когда SEA- CD40 объединяли или с анти-СТЬА4 антителами, или с анти-PD 1 антителами.
Пример 5. Мышиные модели для оценки активности нефукозилированных анτи-CD40-анτиτел.
Было показано, что мышиные модели применимы для оценки эффективности и механизмов действия новых противораковых препаратов. Исследование SEA-CD40 на мышиных моделях рака было затруднительным, поскольку SEA-CD40 не распознает мышиный CD40. Поэтому для оценки активности нефукозилированных анτи-CD40-анτиτел была разработана сингенная мышиная опухолевая модель. Функциональные мышиные эквиваленты человеческого IgG1 и человеческого FcyRIII/CD16 представляют собой мышиные IgG2a и FcyRIV соответственно, и связывание мышиного IgG2a с мышиным FcyRIV опосредует АЗКЦ (см., например, Bruhns, Blood 119:5640-5649 (2012) и Nimmeriahn et al., Immunity 23: 41-51 (2005)). Крысиное антитело 1C10 использовали для получения суррогата SEA-CD40 (см., например, Heath et al., Eur. J. Immunol. 24: 1828-1834 (1994)). В кратком изложении фрагменты гена VL и VH моноклонального антитела крысы, которое распознает мышиный CD40, антитела 1C10, были клонированы в 5'-рамку считывания фрагментов мышиного скаппа и мышиного IgG2a CH1-CH2-CH3 соответственно. Экспрессией полученных генов в клетках CHO получали химерное антитело 1C10 с крысиными VL и VH доменами и мышиными доменами легкой и тяжелой цепей изотипа IgG2a (mIgG2a 1C10). mIgG2a 1C10 экспрессировали в присутствии 2-фторфукозы в среде для роста клеток CHO, используя способы, описанные в примере 1, для получения нефукозилированной формы mIgG2a 1C10 (mIgG2aSEA 1C10). Фукозилированные mIgG2a 1C10 и mIgG2a SEA 1C10 проверяли на наличие противоопухолевой активности с использованием мышиной модели меланомы В16.
Оценка связывания нефукозилированного мышиного антитела с Fcγ-рецепτорами мыши.
Клетки CHO, стабильно экспрессирующие мышиный FcyRI или FcyRIV, инкубировали с возрастающими концентрациями фукозилированного mIgG2a 1C10 или нефукозилированного mIgG2a 1C10 (mIgG2a SEA-1C10). Образцы промывали и добавляли насыщающее количество РЕ-антимышиного IgG и инкубировали с образцами на льду в течение 30 мин. Образцы снова промывали и меченые клетки анализировали при помощи проточной цитометрии.
Результаты.
Оценивали связывание суррогатных анτи-CD40 антител с клетками яичника китайского хомячка (CHO), экспрессирующими мышиный FcyRI или FcyRIV (мышиный эквивалент человеческого FcyRIII/CD16). Результаты показаны на фиг. 15А и 15В. Как ожидалось, mIgG2a 1C10 связывается с FcyRI с такой же аффинностью, как и mIgG2a SEA 1C10 (см., например, фиг. 15А). Однако нефукозилированный mIgG2a SEA 1C10 связывается с FcyRIV со значительно более высокой аффинностью, чем фу
- 18 036498 козилированное исходное антитело mIgG2a 1C10 (см., например, фиг. 15В).
Оценка нефукозилированных анти-CD40-антител в мышиной опухолевой модели.
250.0Е+3 клеток меланомы B16F10 подкожно вводили мышам линии C57BL/6. Мышей случайным образом распределяли по когортам с размером опухоли в среднем приблизительно 50 мм3. Затем мышам вводили внутрибрюшинные инъекции или изотипического контроля (mIgG2a), или фукозилированного mIgG2a 1C10, или нефукозилированного mIgG2a 1С10 (mIgG2a SEA 1C10) через сутки в общей сложности три дозы. Мышей наблюдали до тех пор, пока размер опухоли не достигал 1000 мм3, в этот момент мышей умерщвляли.
Результаты.
Сингенную модель меланомы B16F10 использовали для оценки in vivo эффективности полученных нефукозилированных суррогатов анти-CD40-антител. Мышам линии C57BL/6 имплантировали клетки меланомы B16F10, а затем вводили или изотипический контроль mIgG2a, или фукозилированный mIgG2a 1С10, или нефукозилированный mIgG2a 1C10 (mIgG2a SEA 1C10). Проводили мониторинг опухолевой нагрузки и мышей умерщвляли, когда размер опухоли достигал 1000 мм3. Результаты показаны на фиг. 16. Мыши, получавшие нефукозилированный SEA-1C10 mIgG2a, показали значительное преимущество в выживаемости и задержку развития опухоли по сравнению с мышами, получавшими фукозилированное исходное антитело IgG2a 1C10.
Пример 6. SEA-CD40 истощает В-клетки и стимулирует активацию Т-лимфоцитов.
Активность SEA-CD40 сравнивали с родственным фукозилированным антителом и с полностью агонистическим анти-CD40-антителом, клон 21.4.1. Антитело 21.4.1 представляет собой человеческое анти-CD40 IgG2k агонистическое антитело, которое является исходным клоном СР-870,893, антитело, которое в настоящее время проходит клинические испытания для лечения солидных опухолей в комбинации с PDL1. Информацию о аминокислотной последовательности для антитела 21.4.1 см., например, в патенте США № 7338660, который включен в настоящее изобретение для всех целей. Для антител были протестированы три функциональные области: способность управлять дифференцировкой, активацией и истощением В-клеток человека, способностью активировать первичные культуры МКПК человека и способность активировать антигенспецифичный ответ.
Оценка активации В-клеток анти-CD-40 антителами.
Эксперименты проводили с использованием очищенных В-клеток из свежей цельной крови человека или мононуклеарных клеток периферической крови человека (МКПК). В-клетки выделяли из свежей цельной крови человека с использованием набора реагентов для выделения RosetteSep. Выделенные очищенные В-клетки культивировали с возрастающими концентрациями SEA-CD40, антитела 21.4.1 или гексамерного лиганда CD40, Enzo Life Sciences (10, 1, 0,1, 0,01 или 0,001 мкг/мл) в течение 24 ч. Активацию В-клеток оценивали как активацию CD80 при помощи проточной цитометрии.
МКПК выделяли, как описано выше, и затем культивировали с возрастающими концентрациями SEA-CD40, антитела 21.4.1 или гексамерного CD40L (10, 1, 0,1, 0,01 или 0,001 мкг/мл) в течение 24 ч. Общее количество В-клеток оценивали путем окрашивания CD19 при помощи проточной цитометрии.
Результаты.
Иммуномодулирующая активность SEA-CD40 зависит от Fc-части антитела и ее взаимодействия с CD16, рецептором FcyRIII. Результаты показаны на фиг. 17. SEA-CD40 не индуцирует активацию Вклеток в очищенных культурах В-клеток, в которых отсутствуют клетки, которые экспрессируют рецепторы Fcy, необходимые для связывания с SEA-CD40. Это отличается от активирующего CD40 антитела 21.4.1, которое способно вызывать активацию В-клеток в чистых культурах В-клеток, аналогично лиганду CD40.
МКПК включают клетки, которые экспрессируют рецепторы Fcy. Результаты для данной популяции клеток показаны на фиг. 18. В случае культур МКПК SEA-CD40 стимулировало АЗКЦопосредованное истощение В-клеток, в то время как обработка антителом 21.4.1 не приводила к истощению В-клеток.
Оценка активации моноцитов/макрофагов анти-CD-40 антителами.
Культуры МКПК человека выделяли, как описано выше. Культуры МКПК стимулировали возрастающими концентрациями (0,0, 0,001, 0,01, 0,1, 1,0 или 10 мкг/мл) SEA-CD40, дацетизумаба, антитела 21.4.1 или изотипического контроля SEA в течение 24 ч. Активация CD80 являлась маркером созревания моноцитов. Поверхностную экспрессию CD80 оценивали при помощи проточной цитометрии.
Результаты.
Результаты показаны на фиг. 19. Обработка МКПК SEA-CD40 индуцирует ярко выраженную активацию моноцитов/макрофагов, измеренную по активации CD80, и эта активация находится на одном уровне с активацией, наблюдаемой с активирующим CD40 антителом 21.4.1.
Оценка индукции цитокинов hhtu-CD40 антителами.
Культуры МКПК человека выделяли, как описано выше. Культуры МКПК стимулировали возрастающими концентрациями (0,0, 0,001, 0,01, 0,1, 1,0 или 10 мкг/мл) SEA-CD40, дацетизумаба, антитела 21.4.1 или изотипического контроля SEA в течение 24 ч. После стимуляции собирали супернатанты тка- 19 036498 невой культуры и проводили оценку воспалительных цитокинов с помощью мультиплексного анализа
Luminex.
Результаты.
Результаты показаны на фиг. 20 и 21. На фиг. 20 показано, что SEA-CD40 и активирующее CD40 антитело 21.4.1 индуцируют цитокины ИФН-γ и хемокины, важные для индуцирования выраженных Тклеточных ответов. На фиг. 21 показана индукция интерлейкина 10 (IL10) с помощью антител. В отличие от антитела 21.4.1, которое стимулирует синтез IL10, SEA-CD40 снижает уровень иммунодемпфирующего цитокина IL-10.
Оценка индукции Т-лимфоцитов анти-CD40-антителами.
Культуры МКПК человека выделяли, как описано выше. 1х106 МКПК культивировали в среде DMEM+10% ФБС и инкубировали с 5 мкг пептида вируса гриппа M1 и с возрастающими концентрациями (0,0, 0,001, 0,01, 0,1, 1,0 или 10 мкг/мл) SEA-CD40, дацетизумаба или антитела 21,4.1 в течение пяти суток. Затем собирали клетки и супернатанты клеточной культуры. Уровни ИФН-γ оценивали в супернатантах. Т-лимфоциты, специфичные для антигена вируса гриппа, оценивали путем окрашивания тетрамера при помощи проточной цитометрии. Процент регуляторных Т-лимфоцитов, CD4+, CD25+, CD127 малочисленной популяции клеток определяли с использованием проточной цитометрии.
Результаты.
Результаты показаны на фиг. 22-24. После инкубации в течение пяти суток SEA-CD40 индуцирует более высокие уровни ИФН-γ по сравнению с дацетизумабом или антителом 21.4.1 (см., например, фиг. 22). На фиг. 23 показано, что SEA-CD40 индуцирует выраженный специфичный по отношению к антигену вируса гриппа Т-клеточный ответ, аналогичный тому, который наблюдается с антителом 21.4.1. Однако на фиг. 24 показано, что SEA-CD40 также уменьшает количество иммуноингибирующих регуляторных Т-лимфоцитов, присутствующих после стимуляции пептидом вируса гриппа. Эта активность, вероятно, связана с уменьшением синтеза IL10, наблюдаемым после обработки МКПК SEA-CD40. В отличие от этого после инкубации с антителом 21.4.1 МКПК показали увеличенное число регуляторных Тлимфоцитов, как показано на фиг. 24.
Следует понимать, что описанные здесь примеры и варианты осуществления изобретения предназначены только для иллюстративных целей и что различные модификации или изменения в свете этого могут быть предложены специалистам в данной области техники и должны быть включены в сущность и объем данной заявки, а также в объем прилагаемой формулы изобретения. Все публикации, патенты и патентные заявки, цитируемые в настоящем описании, полностью включены в настоящее изобретение путем ссылки для всех целей.
Неформальный список последовательностей
SEQ ID NO: 1; тяжелая цепь hS2C6
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSFTGYYIHWVRQAPGKGLEWVARVIPNAGGTSY
80 90 100 110120
I I I I I I I I I I II
NQKFKGRFTLSVDNSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGIYWWGQGTLVTVSSASTKGP
130 140 150 160 170180
I I I I I I I I I I II
SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS
190 200 210 220 230240
I I I I I I I I I I II
SVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLF
250 260 270 280 290300
I II I I t I I I I I *1
PPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVV
310 320 330 340 350360
I I I I I I I I I I II
SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV
370 380 390 400 410420
I I I I I I I I I I II
SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF
430440
Illi
SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 2; легкая цепь hS2C6
- 20 036498
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLVHSNGNTFLHWYQQKPGKAPKLLIYTVSNRF
80 90 100 110120
I I I I I I I I I II I
SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCSQTTHVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSV
130 140 150 160 170180
I I I I I I I I I I I I
FIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSL
190 200210
I I I I I II
SSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Claims (28)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Способ лечения рака, включающий введение эффективного количества композиции, содержащей aHTu-CD40 антитела пациенту, нуждающемуся в таком лечении, где анти-CD40 антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 1, вариабельную область легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 2 и константную область человека; где эта константная область имеет N-гликозидсвязанную сахарную цепь в остатке N297 в соответствии с индексом EU и где менее чем 5% N-гликозидсвязанных сахарных цепей в композиции включают остаток фукозы.
- 2. Способ по п.1, где анти-CD40 антитело вводят при уровне дозы от 10 до 1000 мкг/кг массы тела пациента.
- 3. Способ по п.1 или 2, где анти-CD40 антитело вводят при уровне дозы от 50 до 800 мкг/кг массы тела пациента.
- 4. Способ по любому из пп.1-3, где анти-CD40 антитело вводят при уровне дозы от 75 до 600 мкг/кг массы тела пациента.
- 5. Способ по любому из пп.1-4, где анти-CD40 антитело вводят при уровне дозы от 100 до 500 мкг/кг массы тела пациента.
- 6. Способ по п.1, где анти-CD40 антитело вводят при уровне дозы в диапазоне, выбранном из группы, состоящей из 100-300, 300-500, 500-700, 700-900 и 900-1100 мкг/кг массы тела пациента.
- 7. Способ по п.1, где анти-CD40 антитело вводят при уровне дозы в диапазоне, выбранном из группы, состоящей из 100-150, 150-200, 200-250, 250-300, 300-350, 350-400, 400-450, 450-500, 500-550, 550600, 600-650, 650-700, 700-750, 750-800, 800-850, 850-900, 900-950, 950-1000, 1000-1050 и 1050-1100 мкг/кг массы тела пациента.
- 8. Способ по п.1, где анти-CD40 антитело вводят при уровне дозы, выбранном из группы, состоящей из примерно 60, примерно 100, примерно 150, примерно 200, примерно 250, примерно 300, примерно 350, примерно 400, примерно 450, примерно 500, примерно 550, примерно 600, примерно 650, примерно 700, примерно 750, примерно 800, примерно 850, примерно 900, примерно 950, примерно 10001050, примерно 1050 и 1110 мкг/кг массы тела пациента.
- 9. Способ по любому из пп.1-8, где композицию вводят каждые три недели.
- 10. Способ по любому из пп.1-8, где композицию вводят каждые шесть недель.
- 11. Способ лечения рака, включающий введение анти-CTLA4 антитела и композиции, содержащей анти-CD40 антитело, пациенту, нуждающемуся в таком лечении, где анти-CD40 антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 1, вариабельную область легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 2 и константную область человека; где эта константная область имеет N-гликозидсвязанную сахарную цепь в остатке N297 в соответствии с индексом EU и где менее чем 5% N-гликозидсвязанный сахарных цепей содержат остаток фукозы.
- 12. Способ по п.11, где анти-CTLA4 антитело выбрано из группы, состоящей из ипилимумаба и тремелимумаба.
- 13. Способ лечения рака, включающий введение анти-PD-1 антитела и композиции, содержащей анти-CD40 антитела пациенту, нуждающемуся в таком лечении, где анти-CD40 антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 1, вариабельную область легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 2 и константную область человека; где эта константная область имеет N-гликозидсвязанную сахарную цепь в остатке N297 в соответствии с индексом EU и где менее чем 5% N-гликозидсвязанных сахарных цепей содержат остаток фукозы.
- 14. Способ по п.13, где анти-PD-1 антитело выбрано из группы, состоящей из ниволумаба, пидилизумаба и пемролизумаба.
- 15. Способ лечения рака, включающий введение анти-PD-L1 антитела и композиции, содержащей анти-CD40 антитело, пациенту, нуждающемуся в таком лечении, где анти-CD40 антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 1, вариабельную область легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 2 и константную область человека; где эта константная область имеет N-гликозидсвязанную сахарную цепь в остатке N297 в соответствии с индексом EU и где менее- 21 036498 чем 5% N-гликозидсвязанных сахарных цепей содержат остаток фукозы.
- 16. Способ по п.15, где анти-PD-L1 антитело выбрано из группы, состоящей из MEDI4736 (дурвалумаб) и MPDL3280A (атезолизумаб).
- 17. Способ по любому из пп.1-16, где рак представляет собой CD40-положительный рак.
- 18. Способ по любому из пп.1-16, где рак представляет собой CD40-отрицательный рак.
- 19. Способ по любому из пп.1-10, где рак представляет собой рак крови.
- 20. Способ по любому из пп.1-10, где рак представляет собой солидную опухоль.
- 21. Способ по любому из пп.1-16, где рак выбирают из группы, состоящей из меланомы, рака мочевого пузыря, рака легкого, немелкоклеточного рака легкого, мелкоклеточного рака легкого, рака яичника, рака почки, рака поджелудочной железы, рака молочной железы, метастатического рака молочной железы, рака шейки матки, рака головы и шеи, рака предстательной железы, глиобластомы, неходжкинской лимфомы, хронического лимфолейкоза, гепатоцеллюлярной карциномы, множественной миеломы, рака крови, лимфомы, лимфомы Ходжкина и диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы.
- 22. Способ по любому из пп.1-16, где рак представляет собой рак поджелудочной железы.
- 23. Способ по любому из пп.1-22, дополнительно включающий введение одного или более химиотерапевтических агентов пациенту.
- 24. Способ по п.23, где один или более химиотерапевтических агентов содержат гемцитабин, паклитаксел или оба этих агента.
- 25. Способ по любому из пп.1-16, отличающийся тем, что композицию вводят пациенту внутривенно или подкожно.
- 26. Способ по любому из пп.1-25, где анти-CD40 антитело вводят при уровне дозы от 2 до 50 мкг/кг массы тела пациента.
- 27. Способ по любому из пп.1-26, где анти-CD40 антитело вводят при уровне дозы 10 мкг/кг массы тела пациента.
- 28. Способ по пп.1-27, где анти-CD40 антитело вводят при уровне дозы 30 мкг/кг массы тела пациента.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201462072031P | 2014-10-29 | 2014-10-29 | |
| US201562134955P | 2015-03-18 | 2015-03-18 | |
| PCT/US2015/058108 WO2016069919A1 (en) | 2014-10-29 | 2015-10-29 | Dosage and administration of non-fucosylated anti-cd40 antibodies |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201790932A1 EA201790932A1 (ru) | 2017-08-31 |
| EA036498B1 true EA036498B1 (ru) | 2020-11-17 |
Family
ID=55858352
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201790932A EA036498B1 (ru) | 2014-10-29 | 2015-10-29 | Дозировка и введение нефукозилированных анти-cd40 антител |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (8) | US11213584B2 (ru) |
| EP (2) | EP3831847A1 (ru) |
| JP (5) | JP6691113B2 (ru) |
| KR (1) | KR20170072884A (ru) |
| CN (2) | CN107073118B (ru) |
| AU (2) | AU2015339128C1 (ru) |
| BR (1) | BR112017008959A2 (ru) |
| CA (1) | CA2963720C (ru) |
| CY (1) | CY1124033T1 (ru) |
| DK (1) | DK3212230T3 (ru) |
| EA (1) | EA036498B1 (ru) |
| ES (1) | ES2864756T3 (ru) |
| HK (1) | HK1243328A1 (ru) |
| HU (1) | HUE054075T2 (ru) |
| IL (2) | IL299075A (ru) |
| MX (1) | MX2017005152A (ru) |
| PL (1) | PL3212230T3 (ru) |
| PT (1) | PT3212230T (ru) |
| SG (2) | SG11201702598XA (ru) |
| SI (1) | SI3212230T1 (ru) |
| WO (1) | WO2016069919A1 (ru) |
| ZA (2) | ZA201702347B (ru) |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL3212230T3 (pl) * | 2014-10-29 | 2021-07-26 | Seagen Inc. | Dawkowanie i podawanie niefukozylowanych przeciwciał anty-CD40 |
| US20210001032A1 (en) * | 2015-03-27 | 2021-01-07 | Eliaz Therapeutics, Inc. | Galectin-3 plasmapheresis therapy |
| JP7152309B2 (ja) | 2016-02-17 | 2022-10-12 | シージェン インコーポレイテッド | 癌及び免疫学的障害を治療するためのｂｃｍａ抗生物質及びその使用 |
| PE20190562A1 (es) | 2016-05-27 | 2019-04-22 | Abbvie Biotherapeutics Inc | Proteinas de union biespecificas que se unen a una proteina inmunomoduladora y un antigeno tumoral |
| MX2018014630A (es) | 2016-05-27 | 2019-06-10 | Abbvie Biotherapeutics Inc | Anticuerpos anti-cd40 y sus usos. |
| KR102019033B1 (ko) | 2016-11-11 | 2019-09-06 | 다이노나(주) | Cd40에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도 |
| MX2020005463A (es) | 2017-12-01 | 2020-09-07 | Seattle Genetics Inc | Anticuerpos anti grupo de diferenciacion 47 (anti-cd47) y sus usos para tratar cancer. |
| CA3093820A1 (en) * | 2018-03-13 | 2019-09-19 | Hibercell, Inc. | Beta glucan and cd40 agonist combination immunotherapy |
| CA3103629A1 (en) | 2018-06-15 | 2019-12-19 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Increasing immune activity through modulation of postcellular signaling factors |
| MX2021002002A (es) | 2018-08-23 | 2021-05-31 | Seagen Inc | Anticuerpos anti inmunorreceptor de celulas t con dominios ig y motivo inhibidor inmunorreceptor basado en tirosina (tigit). |
| WO2020104690A1 (en) | 2018-11-23 | 2020-05-28 | Quine Medical Ab | Bi-specific conjugates |
| FR3089597B1 (fr) | 2018-12-06 | 2020-11-20 | Gaztransport Et Technigaz | Cuve étanche et thermiquement isolante |
| SG11202106481SA (en) * | 2018-12-19 | 2021-07-29 | Seagen Inc | Controlled fucosylation of antibodies |
| KR20220007849A (ko) * | 2019-03-18 | 2022-01-19 | 스코어 파마, 인코포레이티드 | 푸코실화를 억제하기 위한 화합물 및 그의 사용 방법 |
| EP3962493A2 (en) | 2019-05-03 | 2022-03-09 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Methods of modulating immune activity/level of irf or sting or of treating cancer, comprising the administration of a sting modulator and/or purinergic receptor modulator or postcellular signaling factor |
| JP2022536982A (ja) * | 2019-06-21 | 2022-08-22 | ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム | 癌およびその他の疾患の処置のためのα３β１インテグリンの標的化 |
| US20220370418A1 (en) | 2019-09-09 | 2022-11-24 | Basilea Pharmaceutica International AG | Pharmaceutical combinations comprising a furazanobenzimidazoles and a cd40 agonist for use in the treatment of neoplastic diseases |
| JP2023509359A (ja) | 2019-12-17 | 2023-03-08 | フラグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ，インコーポレーテッド | 鉄依存性細胞分解の誘導物質との併用抗癌療法 |
| TW202206100A (zh) | 2020-04-27 | 2022-02-16 | 美商西健公司 | 癌症之治療 |
| GB202008003D0 (en) | 2020-05-28 | 2020-07-15 | Quine Medical Ab | Anti-CD40 antibody |
| CA3184366A1 (en) | 2020-06-29 | 2022-01-06 | Darby Rye Schmidt | Viruses engineered to promote thanotransmission and their use in treating cancer |
| EP4221751A1 (en) | 2020-09-30 | 2023-08-09 | Seagen Inc. | Uveal melanoma treatment using sea-cd40 |
| KR20230104659A (ko) | 2020-11-08 | 2023-07-10 | 씨젠 인크. | 면역 세포 억제제를 이용한 조합-요법 항체 약물 접합체 |
| JP2024500847A (ja) | 2020-12-18 | 2024-01-10 | センチュリー セラピューティクス，インコーポレイテッド | 適合可能な受容体特異性を有するキメラ抗原受容体システム |
| EP4313109A1 (en) | 2021-03-31 | 2024-02-07 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Thanotransmission polypeptides and their use in treating cancer |
| WO2022251311A1 (en) | 2021-05-25 | 2022-12-01 | Seagen Inc. | Methods of quantifying anti-cd40 antibodies |
| AU2022303363A1 (en) | 2021-06-29 | 2024-01-18 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Immune cells engineered to promote thanotransmission and uses thereof |
| WO2023010080A1 (en) | 2021-07-30 | 2023-02-02 | Seagen Inc. | Treatment for cancer |
| WO2024077191A1 (en) | 2022-10-05 | 2024-04-11 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Nucleic acid molecules encoding trif and additionalpolypeptides and their use in treating cancer |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003040170A2 (en) * | 2001-11-09 | 2003-05-15 | Pfizer Products Inc. | Antibodies to cd40 |
| US20120258496A1 (en) * | 2010-09-27 | 2012-10-11 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Production of low fucose antibodies in h4-ii-e rat cells |
| US20130315900A1 (en) * | 2005-05-26 | 2013-11-28 | Seattle Genetics, Inc. | Humanized anti-cd40 antibodies conjugated to therapeutic agents |
| US20140099254A1 (en) * | 2012-08-14 | 2014-04-10 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy for inducing immune response to disease |
Family Cites Families (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1990005144A1 (en) | 1988-11-11 | 1990-05-17 | Medical Research Council | Single domain ligands, receptors comprising said ligands, methods for their production, and use of said ligands and receptors |
| US5874082A (en) | 1992-07-09 | 1999-02-23 | Chiron Corporation | Humanized anti-CD40 monoclonal antibodies and fragments capable of blocking B cell proliferation |
| US6051228A (en) | 1998-02-19 | 2000-04-18 | Bristol-Myers Squibb Co. | Antibodies against human CD40 |
| US6946129B1 (en) | 1999-06-08 | 2005-09-20 | Seattle Genetics, Inc. | Recombinant anti-CD40 antibody and uses thereof |
| US6482411B1 (en) | 1999-08-27 | 2002-11-19 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods of reducing bone loss with CD40 ligand |
| DE60035057T2 (de) | 1999-10-04 | 2008-01-31 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc., Emeryville | CD40 Antagonist zur Behandlung von Psoriasis |
| JP2004505927A (ja) | 2000-04-19 | 2004-02-26 | タノックス インコーポレイテッド | 乾癬及び他の炎症性皮膚状態の治療用ｃｄ４０アンタゴニスト |
| US7063845B2 (en) | 2000-04-28 | 2006-06-20 | Gemini Science, Inc. | Human anti-CD40 antibodies |
| WO2002028480A2 (en) | 2000-10-02 | 2002-04-11 | Chiron Corporation | Methods of therapy for b-cell malignancies |
| EP2009027B1 (en) | 2001-04-27 | 2014-05-21 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Anti-CD40 monoclonal antibody |
| US20080199471A1 (en) | 2002-03-01 | 2008-08-21 | Bernett Matthew J | Optimized cd40 antibodies and methods of using the same |
| US20050136055A1 (en) | 2003-12-22 | 2005-06-23 | Pfizer Inc | CD40 antibody formulation and methods |
| KR20080079301A (ko) * | 2005-12-09 | 2008-08-29 | 시애틀 지네틱스, 인크. | Ｃｄ４０ 결합제를 이용하는 방법 |
| EP2007423A2 (en) | 2006-04-05 | 2008-12-31 | Pfizer Products Incorporated | Ctla4 antibody combination therapy |
| CA2704499C (en) | 2007-11-07 | 2020-03-10 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for assessing responsiveness of b-cell lymphoma to treatment with anti-cd40 antibodies |
| AU2009206506B2 (en) * | 2008-01-23 | 2013-01-10 | Xencor, Inc. | Optimized CD40 antibodies and methods of using the same |
| PL2282773T3 (pl) | 2008-05-02 | 2014-08-29 | Seattle Genetics Inc | Sposoby i kompozycje do wytwarzania przeciwciał i pochodnych przeciwciał o obniżonej fukozylacji rdzeniowej |
| WO2013043569A1 (en) * | 2011-09-20 | 2013-03-28 | Vical Incorporated | Synergistic anti-tumor efficacy using alloantigen combination immunotherapy |
| PL3212230T3 (pl) * | 2014-10-29 | 2021-07-26 | Seagen Inc. | Dawkowanie i podawanie niefukozylowanych przeciwciał anty-CD40 |
-
2015
- 2015-10-29 PL PL15854895T patent/PL3212230T3/pl unknown
- 2015-10-29 SI SI201531569T patent/SI3212230T1/sl unknown
- 2015-10-29 AU AU2015339128A patent/AU2015339128C1/en active Active
- 2015-10-29 DK DK15854895.8T patent/DK3212230T3/da active
- 2015-10-29 MX MX2017005152A patent/MX2017005152A/es unknown
- 2015-10-29 PT PT158548958T patent/PT3212230T/pt unknown
- 2015-10-29 EA EA201790932A patent/EA036498B1/ru unknown
- 2015-10-29 KR KR1020177009766A patent/KR20170072884A/ko not_active IP Right Cessation
- 2015-10-29 ES ES15854895T patent/ES2864756T3/es active Active
- 2015-10-29 JP JP2017522840A patent/JP6691113B2/ja active Active
- 2015-10-29 WO PCT/US2015/058108 patent/WO2016069919A1/en active Application Filing
- 2015-10-29 CN CN201580059631.3A patent/CN107073118B/zh active Active
- 2015-10-29 SG SG11201702598XA patent/SG11201702598XA/en unknown
- 2015-10-29 IL IL299075A patent/IL299075A/en unknown
- 2015-10-29 EP EP20212733.8A patent/EP3831847A1/en active Pending
- 2015-10-29 CA CA2963720A patent/CA2963720C/en active Active
- 2015-10-29 EP EP15854895.8A patent/EP3212230B1/en active Active
- 2015-10-29 CN CN202210123399.7A patent/CN114522228A/zh active Pending
- 2015-10-29 BR BR112017008959-9A patent/BR112017008959A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2015-10-29 SG SG10201913099YA patent/SG10201913099YA/en unknown
- 2015-10-29 US US15/522,614 patent/US11213584B2/en active Active
- 2015-10-29 HU HUE15854895A patent/HUE054075T2/hu unknown
-
2017
- 2017-01-20 US US15/411,741 patent/US11202827B2/en active Active
- 2017-04-03 ZA ZA2017/02347A patent/ZA201702347B/en unknown
- 2017-04-04 IL IL251552A patent/IL251552B2/en unknown
-
2018
- 2018-02-27 HK HK18102794.4A patent/HK1243328A1/zh unknown
-
2020
- 2020-01-06 JP JP2020000194A patent/JP6833080B2/ja active Active
- 2020-09-08 JP JP2020150669A patent/JP7165166B2/ja active Active
-
2021
- 2021-03-11 JP JP2021039216A patent/JP2021088609A/ja not_active Withdrawn
- 2021-04-01 ZA ZA2021/02219A patent/ZA202102219B/en unknown
- 2021-04-16 CY CY20211100334T patent/CY1124033T1/el unknown
- 2021-04-20 AU AU2021202407A patent/AU2021202407A1/en active Pending
-
2022
- 2022-04-25 US US17/728,350 patent/US20220249662A1/en not_active Abandoned
- 2022-05-02 US US17/734,541 patent/US20220265822A1/en not_active Abandoned
- 2022-11-02 US US17/979,582 patent/US20230201343A1/en not_active Abandoned
- 2022-11-09 US US17/983,970 patent/US20230201344A1/en not_active Abandoned
-
2023
- 2023-07-12 JP JP2023114493A patent/JP2023126406A/ja active Pending
- 2023-09-20 US US18/471,051 patent/US20240075135A1/en active Pending
- 2023-09-20 US US18/471,036 patent/US20240075134A1/en active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003040170A2 (en) * | 2001-11-09 | 2003-05-15 | Pfizer Products Inc. | Antibodies to cd40 |
| US20130315900A1 (en) * | 2005-05-26 | 2013-11-28 | Seattle Genetics, Inc. | Humanized anti-cd40 antibodies conjugated to therapeutic agents |
| US20120258496A1 (en) * | 2010-09-27 | 2012-10-11 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Production of low fucose antibodies in h4-ii-e rat cells |
| US20140099254A1 (en) * | 2012-08-14 | 2014-04-10 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy for inducing immune response to disease |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20240075134A1 (en) | Dosage and administration of non-fucosylated anti-cd40 antibody | |
| US20230203175A1 (en) | Anti-CD40 Antibody Combination Treatment for Cancer | |
| US20230257474A1 (en) | Uveal melanoma treatment using sea-cd40 | |
| KR20240073140A (ko) | 비-푸코실화된 항-cd40 항체의 용량 및 투여 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TC4A | Change in name of a patent proprietor in a eurasian patent |