KR20220007849A - 푸코실화를 억제하기 위한 화합물 및 그의 사용 방법 - Google Patents

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KR20220007849A
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Abstract

개시내용은 일반적으로 푸코실화를 억제하기 위한 화합물 및 이를 사용하기 위한 방법 및 푸코실화가 감소된 항체를 생산하는 방법을 제공한다.

Description

푸코실화를 억제하기 위한 화합물 및 그의 사용 방법
본 개시내용은 일반적으로 항체와 같은 단백질의 푸코실화를 억제하기 위한 화합물 및 이의 용도를 제공한다.
6-데옥시-L-갈락토스 또는 단지 푸코스로도 지칭되는 L-푸코스는 동물에서 일부 N- 및 O-연결 글리칸 및 당지질의 성분인 단당류이다. 푸코스는 전형적으로 혈액형 항원, 셀렉틴 및 항체에 부착된 글리칸을 포함하여, 글리칸에 말단 변형으로 추가된다. 단백질의 푸코실화는 포유동물 발달에서 역할을 하는 것으로 믿어지고, 비정상적인 단백질 푸코실화는 암 및 류마티스 관절염에서 상향-조절을 비롯한 인간 질환과 관련이 있는 것으로 제안되었다. 푸코실화의 제거는 항체 결합 및 활성을 개선하는 것으로 나타났다. 따라서, 푸코실화를 억제하는데 사용될 수 있는 화합물에 대한 필요성이 있다. 본 실시형태는 이 요구뿐만 아니라 다른 요구도 충족시킨다.
일부 실시형태에서, 푸코실트랜스퍼라제를 억제하는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 방법은 푸코실트랜스퍼라제를 푸르푸로갈린, 헥사클로로펜, 아크리플라비늄, 바이칼레인, 에피카테킨 모노갈레이트, 에피카테킨-3-모노갈레이트, 에피카테킨-3,5-디갈레이트, 테아플라빈 모노갈레이트, 탄닌산, 메타사이클린, 안트랄린, 미톡산트론 염산염, 하이칸톤, 에트크리딘 락테이트, 아우린 트리카르복실산, 카르보플라틴, 시스플라틴, 프리뮬레틴, 크리신, 디오메틴, 수라민, 헤마틴, 고시폴, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 푸코실트랜스퍼라제는 항체를 생산하는 세포에 있다.
일부 실시형태에서, 세포에서 단백질의 푸코실화를 억제하는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 방법은 단백질의 푸코실화를 억제하기 위해 세포를 푸르푸로갈린, 헥사클로로펜, 아크리플라비늄, 바이칼레인, 에피카테킨 모노갈레이트, 에피카테킨-3-모노갈레이트, 에피카테킨-3,5-디갈레이트, 테아플라빈 모노갈레이트, 탄닌산, 메타사이클린, 안트랄린, 미톡산트론 염산염, 하이칸톤, 에트크리딘 락테이트, 아우린 트리카르복실산, 카르보플라틴, 시스플라틴, 프리뮬레틴, 크리신, 디오메틴, 수라민, 헤마틴, 고시폴, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실트랜스퍼라제를 억제함에 의해 푸코실화를 억제한다.
일부 실시형태에서, 푸코실화가 감소된 항체를 생산하는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 방법은 항체를 생산하는 세포를 푸르푸로갈린, 헥사클로로펜, 아크리플라비늄, 바이칼레인, 에피카테킨 모노갈레이트, 에피카테킨-3-모노갈레이트, 에피카테킨-3,5-디갈레이트, 테아플라빈 모노갈레이트, 탄닌산, 메타사이클린, 안트랄린, 미톡산트론 염산염, 하이칸톤, 에트크리딘 락테이트, 아우린 트리카르복실산, 카르보플라틴, 시스플라틴, 프리뮬레틴, 크리신, 디오메틴, 수라민, 헤마틴, 고시폴, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포는 시험관내 또는 생체내에서 조성물과 접촉된다. 일부 실시형태에서, 항체는 세포로부터 분비된다. 일부 실시형태에서, 화합물은 항체의 분비 이전에 푸코실트랜스퍼라제와 접촉한다.
일부 실시형태에서, 글리코실화 패턴이 변경된 항체를 생산하는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 방법은 항체를 생산하는 세포를 푸르푸로갈린, 헥사클로로펜, 아크리플라비늄, 바이칼레인, 에피카테킨 모노갈레이트, 에피카테킨-3-모노갈레이트, 에피카테킨-3,5-디갈레이트, 테아플라빈 모노갈레이트, 탄닌산, 메타사이클린, 안트랄린, 미톡산트론 염산염, 하이칸톤, 에트크리딘 락테이트, 아우린 트리카르복실산, 카르보플라틴, 시스플라틴, 프리뮬레틴, 크리신, 디오메틴, 수라민, 헤마틴, 고시폴, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포는 시험관내 또는 생체내에서 조성물과 접촉된다. 일부 실시형태에서, 항체는 세포로부터 분비된다. 일부 실시형태에서, 화합물은 항체의 분비 이전에 푸코실트랜스퍼라제와 접촉한다. 본 명세서에 기재된 임의의 방법에 따라 생성된 항체와 같은 단백질과 관련하여 "변경된 글리코실화 패턴"은 본 명세서에 기재된 조성물 또는 화합물과 접촉되지 않은 동일한 세포로부터 생성된 단백질과 비교하여 상이한 글리코실화 패턴을 갖는 단백질을 지칭한다.
일부 실시형태에서, 푸르푸로갈린, 헥사클로로펜, 아크리플라비늄, 바이칼레인, 에피카테킨 모노갈레이트, 에피카테킨-3-모노갈레이트, 에피카테킨-3,5-디갈레이트, 테아플라빈 모노갈레이트, 탄닌산, 메타사이클린, 안트랄린, 미톡산트론 염산염, 하이칸톤, 에트크리딘 락테이트, 아우린 트리카르복실산, 카르보플라틴, 시스플라틴, 프리뮬레틴, 크리신, 디오메틴, 수라민, 헤마틴, 고시폴, 또는 이의 임의의 조합, 및 세포를 포함하는 조성물이 제공된다.
일부 실시형태에서, 푸르푸로갈린, 헥사클로로펜, 아크리플라비늄, 바이칼레인, 에피카테킨 모노갈레이트, 에피카테킨-3-모노갈레이트, 에피카테킨-3,5-디갈레이트, 테아플라빈 모노갈레이트, 탄닌산, 메타사이클린, 안트랄린, 미톡산트론 염산염, 하이칸톤, 에트크리딘 락테이트, 아우린 트리카르복실산, 카르보플라틴, 시스플라틴, 프리뮬레틴, 크리신, 디오메틴, 수라민, 헤마틴, 고시폴, 또는 이의 임의의 조합, 및 항체를 포함하는 조성물이 제공된다.
일부 실시형태에서, 푸르푸로갈린, 헥사클로로펜, 아크리플라비늄, 바이칼레인, 에피카테킨 모노갈레이트, 에피카테킨-3-모노갈레이트, 에피카테킨-3,5-디갈레이트, 테아플라빈 모노갈레이트, 탄닌산, 메타사이클린, 안트랄린, 미톡산트론 염산염, 하이칸톤, 에트크리딘 락테이트, 아우린 트리카르복실산, 카르보플라틴, 시스플라틴, 프리뮬레틴, 크리신, 디오메틴, 수라민, 헤마틴, 고시폴, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 세포 유리 배지가 제공된다. 일부 실시형태에서, 배지는 항체를 추가로 포함한다.
도 1은 푸르푸로갈린을 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 2는 헥사클로로펜을 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 3은 아크리플라비늄을 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 4는 에피카테킨 모노갈레이트를 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 5는 에피카테킨-3-모노갈레이트를 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 6은 에피카테킨-3,5-디갈레이트를 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 7은 테아플라빈 모노갈레이트를 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 8은 탄닌산을 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 9는 메타사이클린을 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 9는 메타사이클린을 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 9는 메타사이클린을 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 10은 미톡산트론 염산염을 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 11은 하이칸톤을 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 12는 에타리딘 락테이트를 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 13은 아우린을 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 14는 카보플라틴을 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 15는 시스플라틴을 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 16은 디오메틴을 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 17은 수라민을 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 18은 헤마테인을 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 19는 고시폴을 사용한 푸코실화 억제 그래프를 도시한다.
도 20은 에피카테킨 모노갈레이트(ECG)에 의한 항체 푸코실화의 감소를 도시한다.
도 21은 에피카테킨-3-모노갈레이트(ECGC)에 의한 항체 푸코실화의 감소를 도시한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이 그리고 달리 표시되지 않는 한, 용어 "약"은 그것이 수정하는 값의 ±5%를 의미하도록 의도된다. 따라서 약 100은 95에서 105를 의미한다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용된 바와 같이, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥이 달리 명백하게 지시하지 않는 한 복수 참조를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "포함하는" (및 "포함하다", "포함한다" 및 "포함된"과 같은 포함하는의 임의의 형태), "갖는" (및 "갖는다" 및 "가진다"와 같은 갖는의 임의의 형태), "포괄하는" (및 "포괄하다" 및 "포괄한다"와 같은 포괄하는의 임의의 형태) 또는 "함유하는" (및 "함유하다" 및 "함유한다"와 같은 함유하는의 임의의 형태)은 포괄적이거나 개방형이고 추가, 인용되지 않은 요소 또는 방법 단계를 배제하지 않는다. 용어 "포함하는"을 인용하는 임의의 조성물 또는 방법은 또한 인용된 성분 또는 요소를 구성하거나, 이로 구성되거나, 또는 본질적으로 구성된 것으로서 이러한 조성물을 기술하는 것으로 이해되어야 한다.
용어 "항체"는 면역글로불린 또는 폴리클로날 항체, 뮤어라인, 인간, 인간화 및 키메라 모노클로날 항체를 포함하는 모노클로날 항체 및 항체 단편을 포함하는 항체 분자를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 재조합 항체이다. "재조합 항체"는 특정 항체를 생산하도록 유전적으로 변형된 세포로부터 발현되는 항체를 지칭한다. 재조합 항체를 생산하는 방법은 공지되어 있고 임의의 이러한 방법이 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 항체는 특정 항원 또는 표적 분자에 대한 결합 특이성을 나타내는 폴리펩티드를 지칭한다. 온전한 항체는 2개의 경쇄와 2개의 중쇄로 구성된 이종사량체 당단백질이다. 전형적으로, 각각의 경쇄는 하나의 공유 이황화 결합에 의해 중쇄에 연결되는 반면, 이황화 결합의 수는 상이한 면역글로불린 이소타입의 중쇄 사이에서 다양하다. 각각의 중쇄 및 경쇄는 또한 규칙적으로 간격을 둔 사슬내 이황화 가교를 갖는다. 각 중쇄는 일 말단에 가변 도메인(VH)을 갖고 그 뒤에 다수의 불변 도메인이 있다. 각 경쇄는 일 말단에 가변 도메인(VL) 및 다른 말단에 불변 도메인을 갖는다; 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인과 정렬되고 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬된다. 임의의 척추동물 종의 항체 경쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 두 가지 명확하게 구별되는 유형, 즉 카파 및 람다 중 하나로 지정될 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 유형 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 유형 항체이다.
일부 실시형태에서, 항체는 항체 단편이다. 용어 "항체 단편"은 무손상 항체의 일부, 일반적으로 무손상 항체의 항원 결합 또는 가변 영역을 의미한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편, 이중항체, 단일 사슬 항체 분자 및 다중 표적 또는 동일한 표적의 상이한 에피토프에 결합하는 다중특이적 항체를 포함하지만 이에 제한되지 않다.
일부 실시형태에서, 항체는 항체-약물 접합체이다. 용어 "항체-약물 접합체"는 약물에 부착된 항체 또는 항체 단편을 의미한다. 항체-약물 접합체의 예는 브렌툭시맙 베도틴, 칸투주맙 라우탄신, 젬투주맙 오조가미신, 이브리투모맙 티욱세탄, 폴투주맙 베도틴, 사시투주맙 고비테칸, 트라스투주맙 듀오카르마진, 트라스투주맙 엠탄신 및 이노투주맙 오조가미신을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
폴리클로날 항체는 항원으로 면역화된 동물의 혈청으로부터 유래된 항체 분자의 이종성 모집단이다. 예를 들어, Kohler 및 Milstein, Nature 256:495 497 (1975); 미국 특허 번호 4,376,110; Ausubel 등, eds., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y., (1987, 1992); 및 Harlow 및 Lane ANTIBODIES: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory (1988); Colligan 등, eds., Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y., (1992, 1993)을 참고하며, 그 참고문헌의 내용은 전체적으로 본 명세서에 참고로 통합된다. 이러한 항체는 IgG, IgM, IgE, IgA, IgD 및 이의 임의의 서브클래스를 포함하는 임의의 면역글로불린 클래스의 것일 수 있다. 본 발명의 mAb를 생산하는 하이브리도마는 시험관내, 제자리 또는 생체내에서 배양될 수 있다. 생체내 또는 제자리에서 고역가의 mAb의 생산은 이것을 현재로 바람직한 생산 방법이 되게 한다.
본 명세서에 사용된 용어 "모노클로날 항체"(mAb)는 실질적으로 동종성 항체의 모집단으로부터 수득된 항체(또는 항체 단편)를 의미한다. 모노클로날 항체는 전형적으로 단일 항원 결정기에 대해 지향된다. 수식어 "모노클로날"은 항체의 실질적으로 동종성 특성을 나타내고 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하지 않는다. 예를 들어, 뮤어라인 mAb는 Kohler 등, Nature 256:495-497 (1975)의 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있다. 수용체 항체(예컨대 인간을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다른 포유류 종)로부터 유래된 경쇄 및 중쇄 불변 영역과 연관하여 공여체 항체(예컨대, 비제한적으로 뮤어라인)로부터 유래된 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 함유하는 키메라 mAb는 미국 특허 번호 4,816,567에 개시된 방법 또는 기타 방법에 의해 제조될 수 있다. 비-인간 공여체 면역글로불린(예컨대, 비제한적으로 뮤어라인)으로부터 유래된 CDR 및 하나 이상의 인간 면역글로불린으로부터 유래된 분자의 나머지 면역글로불린-유래된 부분을 갖고, 선택적으로 결합 친화도를 보존하기 위해 변경된 프레임워크 지지 잔기를 갖는 인간화된 mAb는 Queen 등, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 86:10029-10032 (1989) 및 Hodgson 등, Bio/Technology, 9:421 (1991)에 기재된 기술에 의해 수득될 수 있다. 항체를 인간화하는 방법은 일상적이며 본 명세서에 기술된 방법에 중요하지 않다.
본 명세서에 사용된 용어 "와 조합하여"는 기재된 제제가 혼합물에서 함께, 단일 제제로서 동시에 또는 단일 제제로서 임의의 순서로 순차적으로 세포, 동물 또는 표적에 투여되거나 이들과 접촉될 수 있음을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "접촉하는"은 2개의 성분을 서로 근접하게 만드는 것을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 성분은 함께 혼합되거나 단순히 동일한 용기에 배치될 수 있다. 조성물은 또한 다른 성분에 투여되는 경우 다른 성분(예를 들어, 대상체, 세포 등)과 접촉하는 것으로 간주될 수 있다. 투여는 주사, 피펫팅 및 기타 일상적인 투여의 방법을 통해 이루어질 수 있다.
효소 활성과 관련하여 본 명세서에 사용된 용어 "억제하는"은 효소의 활성을 임의의 측정가능한 양만큼 감소시키는 것을 의미한다.
단백질 변형과 관련하여 본 명세서에 사용된 용어 "감소시키는"은 변형의 양을 임의의 측정가능한 양만큼 감소시키는 것을 의미한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 화합물은 화합물의 염이다. 일부 실시형태에서, 염은 그의 약학적으로 허용가능한 염이다. 본 명세서에 사용된 "약학적으로 허용가능한 염(들)"이라는 문구는 산성 또는 염기성 기의 염을 포함하지만 이에 제한되지 않다. 본질적으로 염기성인 화합물은 다양한 무기산 및 유기산과 함께 다양한 염을 형성할 수 있다. 이러한 염기성 화합물의 약학적으로 허용가능한 산 부가염을 제조하는 데 사용할 수 있는 산은 무-독성 산 부가염, 즉 황산, 티오황산, 시트르산, 말레산, 아세트산, 옥살산, 염산염, 브롬화수소산염, 요오드화수소산염, 질산염, 황산염, 중황산염, 중아황산염, 인산염, 산성 인산, 이소니코틴산염, 붕산염, 아세트산염, 젖산염, 살리실산염, 구연산염, 산 구연산염, 주석산염, 올레산염, 탄닌산염, 판토테네이트, 비타르트레이트, 아스코르베이트, 숙시네이트, 말레에이트, 젠티시네이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 글루카로네이트, 사카레이트, 포메이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 메탄술포네이트, 에탄술포네이트, 벤젠술포네이트, p-톨루엔술포네이트, 비카보네이트, 말로네이트, 메실레이트, 에실레이트, 냅시디실레이트, 토실레이트, 베실레이트, 오르토포스페이트, 트리플루오로아세테이트 및 파모에이트(즉, 1,1'-메틸렌-비스-(2-하이드록시-3-나프토에이트)) 염을 포함하나 이에 제한되지 않는 약학적으로 허용가능한 음이온을 함유하는 염을 형성하는 것이다. 아미노 모이어티를 포함하는 화합물은 상기 언급된 산에 부가하여 다양한 아미노산과 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있다. 본질적으로 산성인 화합물은 다양한 약학적으로 허용가능한 양이온과 염기 염을 형성할 수 있다. 이러한 염의 예는 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염, 특히 칼슘, 마그네슘, 암모늄, 나트륨, 리튬, 아연, 칼륨 및 철 염을 포함하지만 이에 제한되지 않다. 본 발명은 또한 본 명세서에 기재된 화합물의 4차 암모늄 염을 포함하며, 여기서 화합물은 하나 이상의 3차 아민 모이어티를 갖는다.
용어 "항원"은 항체가 결합하는 표적을 지칭한다.
단백질 또는 항체와 관련하여 용어 "정제된"은 그 자연 환경 또는 세포 환경에서 분자와 회합하는 다른 물질이 실질적으로 없는 단백질 또는 항체를 지칭한다. 예를 들어, 정제된 단백질은 그것이 유래된 세포 또는 조직으로부터의 세포 물질 또는 다른 단백질이 실질적으로 없다. 용어는 단리된 단백질이 분석하기에 충분히 순수하거나, 또는 적어도 70% 내지 80%(w/w) 순수, 적어도 80%-90%(w/w) 순수, 90-95% 순수하고; 그리고 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(w/w) 순수한 제제를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 임의의 실시형태에 따라 생산된 항체는 생산된 후에 추가로 정제된다.
본 명세서에 제공된 실시형태는, 예를 들어, 단백질 푸코실화를 감소시키기 위해 사용될 수 있는 조성물 및 방법을 제공한다. 단백질의 맥락에서 "감소된 푸코실화"는 일반적으로 α(1,2)-, α(1,3)-, α(1,4) 및 α(1,6)-결합을 통해 글리칸에 푸코스의 감소된 첨가를 지칭한다. 항체의 맥락에서 푸코실화는 항체의 N-연결된 글리칸의 감소하는 말단에서 N-아세틸글루코사민("GlcNAc")에 대한 푸코스의 부가("푸코실화")를 지칭한다. 항체의 맥락에서 "감소된 푸코실화"는 처리되지 않은 항체와 비교하여 항체의 N-연결된 글리칸의 감소하는 말단에서 N-아세틸글루코사민("GlcNAc")에 연결된 푸코스 분자의 감소를 지칭한다.
항체 의존성 세포 세포독성(ADCC)은 면역계의 이펙터 세포가 특정 항체에 의해 결합된 표적 세포를 능동적으로 용해시키는 세포-매개된 면역의 기전이다. ADCC는 면역 반응의 일부로서 항체가 감염과 질환을 제한하고 억제하는 작용을 할 수 있는 기전 중 하나이다. 그의 글리코실화 패턴에서 감소된 양의 푸코스를 갖는 모노클로날 항체는 정상적으로 푸코실화된 항체와 비교하여 훨씬 더 높은 ADCC 활성을 나타내는 것으로 나타났다. 임의의 특정 이론에 구속되지 않고, 푸코스가 낮거나 없는 항체의 증가된 ADCC 배후 기전은 표적 세포의 FcγR에 대한 항체 변형된 Fc 영역의 증가된 친화도에 의해 매개되는 것으로 보인다. 따라서, 본 명세서에 제공된 화합물, 조성물 및 방법은 더 높은 ADCC 활성을 갖는 항체를 제공할 수 있다.
특정 화합물 또는 이의 염이 본 명세서에서 참고된다. 표 1은 이들 화합물의 화학 구조를 제공한다. 또한 이들 화합물의 염, 예컨대 도시된 화합물의 약학적으로 허용가능한 염이 포함된다. 일부 실시형태에서, 염은 화합물의 HCl 염이다.
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Figure pct00004
일부 실시형태에서, 하나 이상의 화합물을 포함하는 조성물이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시형태에서, 조성물은 하나 이상의 화합물 및 세포를 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포는 진핵 또는 원핵 세포이다. 일부 실시형태에서, 세포는 단백질을 생산할 수 있다. 일부 실시형태에서, 세포는 재조합 유전적으로 변형된 세포이다. "재조합 유전적으로 변형된 세포"는 예컨대 형질감염, 형질도입 또는 감염에 의해 세포에 외인성인 핵산 물질로 변형된 세포이다. 일부 실시형태에서, 세포는 항체를 인코딩하는 핵산 분자로 안정적으로 형질도입되거나 형질감염되었다. 일부 실시형태에서, 세포는 항체를 생산한다.
다양한 세포 또는 세포 유형이 사용될 수 있다. 조성물에 존재할 수 있거나 본 명세서에 제공된 임의의 방법에서 사용될 수 있는 세포의 비-제한적인 예 CHO 세포, NS0 세포, Sp2/0 세포, HEK293 세포, PER.C6 세포, 등.
일부 실시형태에서, 조성물은 세포 배양 배지를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 선택 제제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 하나 이상의 항생제를 포함한다. 선택 제제는 특정 핵산 분자로 형질감염되거나 형질도입된 세포를 선택하는 데 사용되는 항생제와 같은 제제이다. 다양한 선택 제제가 사용될 수 있다. 예는 Geneticin™ (G418; (2R,3S,4R,5R,6S)-5-아미노-6-[(1R,2S,3S,4R,6S)-4,6-디아미노-3-[(2R,3R,4R,5R)-3,5-디하이드록시-5-메틸-4-메틸아미노옥산-2-일]옥시-2-하이드록시사이클로헥실]옥시-2-(1-하이드록시에틸)옥산-3,4-디올), 하이그로마이신 b(O-6-아미노-6-데옥시-L-글리세로-D-갈락토-헵토피라노실리덴-(1-2-3)-O-β-D-탈로피라노실(1-5)-2-데옥시-N3-메틸-D-스트렙타민), 네오마이신, 블라스티시딘(4-아미노-1-[4-({(3S)-3-아미노-5-[[아미노(이미노)메틸](메틸)아미노]펜타노일}아미노)-2,3,4-트리데옥시-β-D-에리트로-헥스-2-에노피라누로노실]피리미딘-2(1H)-온), 미코페놀산 ((E)-6-(4-하이드록시)-6-메톡시-7-메틸-3-옥소-1H-2-벤조푸란-5-일)-4-메틸헥스-4-에노산), Zeocin™ (2-({2-[2-{[(6-아미노-2-{3-아미노-1-[(2,3-디아미노-3-옥소프로필)아미노]-3-옥소프로필}-5-메틸-4-피리미디닐)카르보닐]아미노}-3-[(5-{[1-({2-[4-({4-[(디아미노메틸렌)아미노]부틸}카르바모일)-4',5'-디히드로-2,4'-비-1,3-티아졸-2'-일]에틸}아미노)-3-하이드록시-1-옥소-2-부탄일]아미노}-3-하이드록시-4-메틸-5-옥소-2-펜탄일)아미노]-1-(1H-이미다졸-5-일)-3-옥소프로폭시]-4,5-디하이드록시-6-(하이드록시메틸)테트라하이드로-2H-피란-3-일}옥시)-3,5-디하이드록시-6-(하이드록시메틸)테트라하이드로-2H-피란-4-일 카바메이트), 및 퓨로마이신 (3'-데옥시-N,N-디메틸-3'-[(O-메틸-L-티로실)아미노]아데노신), 또는 이의 임의의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 하나 이상의 화합물 및 항체를 포함하는 조성물. 일부 실시형태에서, 항체는 세포로부터 분비 및/또는 생산된 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 아달리무맙, 알렘투주맙, 알리로쿠맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 벨리무맙, 벤랄리주맙, 베바시주맙, 베즐로톡수맙, 블리나투모맙, 브렌툭시맙 베도틴, 부로수맙, 카나키누맙, 칸투주맙 메르탄신, 칸투주맙 라브탄신, 카로툭시맙, 세르톨리주맙 페골, 세툭시맙, 클라우딕시맙, 다클리주맙, 다라투무맙, 데노수맙, 데파툭시주맙 마포도틴, 디누툭시맙, 더발루맙, 엘로투주맙, 엔포르투맙 베도틴, 에노블리투주맙, 젬투주맙 오조가미신, 골리무맙, 구셀쿠맙, 이발리주맙, 이브리투모맙 티욱세탄, 이파보투주맙, 이네빌리주맙, 인플릭시맙, 이노투주맙 오조가미신, 이필리무맙, 이사툭시맙, 마르게툭시맙, 메폴리주맙, 네시투무맙, 니모투주맙, 니볼루맙, 오빌록악시맙, 오비누투주맙, 오크렐리주맙, 오파투무맙, 올라라투맙, 오말리주맙, 팔리비주맙, 펨브롤리주맙, 페르투주맙, 폴라투주맙 베도틴, 라코투모맙, 라무시루맙, 라니비주맙, 락시바쿠맙, 리툭시맙, 로발피투주맙 테시린, 사시투주맙, 사시투주맙 고비테칸, 사릴루맙, 세쿠키누맙, 실툭시맙, 시루쿠맙, 테프로투무맙, 틸드라키주맙, 토실리주맙, 토시투모맙, 트라스투주맙, 트라스투주맙 듀오카르마진, 트라스투주맙 엠탄신, 유블리툭수맙, 우스테키누맙, 베돌리주맙 또는 이의 바이오시밀러이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 조성물은 세포 유리 또는 실질적으로 세포 유리이다. 조성물에 50,000, 40,000, 30,000, 20,000, 10,000, 또는 5,000 미만의 세포가 있는 경우 조성물은 실질적으로 세포 유리이다. 일부 실시형태에서, 조성물은 본 명세서에 기재된 화합물 또는 그의 염 중 하나 이상을 포함하는 세포 유리 배지를 포함한다. 세포 유리 배지는 또한 본 명세서에 기재된 임의의 다른 성분을 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 항체는 ErbB 단백질, 예컨대 비제한적으로 HER1 또는 EGFR로도 명명된 ErbB1, HER2 또는 HER2/neu로도 명명된 ErbB2, HER3으로도 명명된 ErbB3, 및 HER4로도 명명된 ErbB4를 결합할 수 있는 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 TGFB1, TGFB2, TGFB3 및 TGFB4와 같은 형질전환 성장 인자 단백질에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 VEGFR1, Flt-1, VEGFR2, Flk-1/KDR, VEGFR3 및 Flt4와 같은 혈관 내피 성장 인자 단백질에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 TRANCE 수용체 또는 TNFRSFIIA로도 공지된 핵 인자 카파 베타의 수용체 활성제(RANK)에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 SLAMF1, SLAMF2, SLAMF3, SLAMF4, SLAMF5, SLAMF6, SLAMF7 및 SLAMF8과 같은 단백질의 시그널링 림프구 활성화 분자 패밀리(SLAMF)와 관련된 단백질에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 PDGFRα 및 PDGFRβ와 같은 혈소판 유래된 성장 인자 수용체 단백질에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 KIR3DL3, KIR3DP1, KIR3DL4, 및 KIR3DL2와 같은 단백질의 킬러 세포 면역글로불린 유사 수용체(KIR) 패밀리에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 MICA 및 MICB와 같은 주요 조직적합성 복합체 클래스 I 사슬 관련된 단백질(MIC)에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 LT알파, LT 베타, FASL, 4-IBBL, OX40L 및 TNF 관련된 세포자멸사 유도 리간드(TRAIL)와 같은 단백질의 종양 괴사 인자(TNF) 패밀리에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 DR1, DR2, DR3, Dr4, DR5, DR6, DR7, 및 DR8과 같은 단백질의 사멸 수용체(DR) 패밀리에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 CTLA4와 같은 단백질의 세포독성 T-림프구 항원 패밀리에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 PD1과 같은 프로그램된 사멸 수용체에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 CD66a, CD66b, CD66c, CD66d, CD66e 및 CD66f와 같은 단백질의 암배아 항원 패밀리에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 TIM1, TIM2, TIM3 및 TIM4와 같은 수용체의 T-세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 패밀리에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 LAG3과 같은 림프구 활성화 유전자(LAG)에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 CD2, CD3, CD19, CD20, CD22, CD25, CD27, CD30, CD33, CD38, CD39, CD52, CD70, CD73, CD94, CD134, CD137, CD252 및 CD340과 같은 분화의 클러스터에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 Tn으로도 공지된 뮤신 관련 GalNAc-O-ser/thr 및 시알릴 Tn으로도 공지된 Neu5Acα2-6GalNAcα-O-Ser/Thr과 같은 종양 관련 탄수화물 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 SSEA-1(루이스x로도 공지됨), SSEA-2, SSEA-3 및 SSEA-4와 같은 단계-특이적 배아 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 Gal-Gal-NAc로도 공지된 Thomsen-Freidenreich 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 루이스Y, 시알릴 루이스X, 시알릴 루이스A와 같은 루이스 관련 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 -글로보, -이소글로보, -강글리오, -이소강글리오, -락토, -네오락토, 락토강글리오, -뮤코, -네오갈라, -몰루, -아르트로, -쉬스토 및 -스피로메토와 같은 직렬로 분류된 글리코스핑고리피드의 탄수화물 구조에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 비제한적으로 GD1, GD2, GD3, GM1, GM2, 푸코실 Gm1, Neu5GcGm3 및 폴리시알산과 같은 강글리오시드에 결합한다.
일부 실시형태에서, 조성물은 또한 하나 이상의 완충제, 안정화제, 유화제, 또는 이의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 물을 포함한다.
일부 실시형태에서, 조성물은 하나 이상의 세포 침투 화합물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포 침투 화합물은 저장성 완충 용액; 비제한적으로 메탄올, 에탄올, 아세톤, 톨루엔, DMSO 및 알킬트리메틸암모늄 브로마이드와 같은 유기 화합물; 세제, 예컨대 비제한적으로 사포닌, TritonX-100, Tween-20, Tween-80, 디지토닌, 나트륨 도데실 설페이트(SDS); 및 비제한적으로 스트렙톨리신-O(SLO) 및 퍼피린골리신-O(PFO)와 같은 베타-용혈성 세포용해소와 같은 공극 형성 세포용해소; 또는 이의 임의의 조합을 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 저장성 완충 용액, 메탄올, 에탄올, 아세톤, 톨루엔, DMSO, 알킬트리메틸암모늄 브로마이드, 사포닌, TritonX-100, Tween-20, Tween-80, 디지토닌, 나트륨 도데실 설페이트(SDS), 베타-용혈성 세포용해소, 스트렙톨리신-O(SLO), 퍼피린골리신-O(PFO); 또는 이의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 세포 침투 제제를 포함한다.
따라서, 일부 실시형태에서, 푸코실트랜스퍼라제를 억제하는 방법이 제공된다. 본 명세서에 사용된 "푸코실트랜스퍼라제"는 단백질과 같은 표적에 푸코스의 첨가를 촉매하는 효소를 지칭한다. 푸코실트랜스퍼라제의 예는 FUT8로도 지칭될 수 있는 알파 1,6 푸코실트랜스퍼라제를 포함하지만 이에 제한되지 않다. 따라서, 일부 실시형태에서, 억제되는 푸코실트랜스퍼라제는 FUT8이다. 일부 실시형태에서, 방법은 푸코실트랜스퍼라제를 푸르푸로갈린, 헥사클로로펜, 아크리플라비늄, 바이칼레인, 에피카테킨 모노갈레이트, 에피카테킨-3-모노갈레이트, 에피카테킨-3,5-디갈레이트, 테아플라빈 모노갈레이트, 탄닌산, 메타사이클린, 안트랄린, 미톡산트론 염산염, 하이칸톤, 에트크리딘 락테이트, 아우린 트리카르복실산, 카르보플라틴, 시스플라틴, 프리뮬레틴, 크리신, 디오메틴, 수라민, 헤마틴, 고시폴, 또는 이의 임의의 조합, 또는 이의 임의의 염을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다. 푸코실트랜스퍼라제는 세포 또는 세포 유리 시스템에 있을 수 있다.
다양한 세포는 푸코실트랜스퍼라제를 포함할 수 있다. 세포의 예는 CHO 세포, NS0 세포, Sp2/0 세포, HEK293 세포, 또는 PER.C6 세포를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 이들 세포는 비-제한적인 예이고 다른 세포 유형 및 균주가 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 조성물 및 화합물과 접촉되는 세포는 항체를 생성한다. 일부 실시형태에서, 항체는 재조합 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 하기 표적 중 하나 이상에 결합한다: IL-8, ErbB, ErbB1, ErbB2, ErbB3, ErbB4, HER1, HER2, HER3, HER4, TGF, TGFB1, TGFB2, TGFB3, TGFB4, VEGF, VEGFR1,Flt-1, VEGFR2, Flk-1/KDR, VEGFR3, Flt4, RANK, TNFRSFIIA, SLAMF, SLAMF1, SLAMF2, SLAMF3, SLAMF4, SLAMF5, SLAMF6, SLAMF7, SLAMF8, PDGFRα, PDGFRβ, KIR3DL3, KIR3DP1, KIR3DL4, KIR3DL2, MIC, MICA, MICB, TNF, LT알파, LT 베타, FASL, 4-IBBL, OX40L, TNF 관련 세포자멸사 유도 리간드(TRAIL), DR1, DR2, DR3, Dr4, DR5, DR6, DR7, DR8, CTLA4, PD1, CD66a, CD66b, CD66c, CD66d, CD66e, CD66f, TIM1, TIM2, TIM3, LAG, LAG3, CD2, CD3, CD19, CD20, CD22, CD25, CD27, CD30, CD 33, CD38, CD39, CD52, CD70, CD73, CD94, CD134, CD137, CD252, CD340, GalNAc-O-ser/thr, Neu5Acα2-6GalNAcα-O-Ser/Thr, SSEA-, SSEA-2, SSEA-3, SSEA-4, Gal-Gal-NAc, 루이스Y, 시알릴 루이스X, 시알릴 루이스A, -글로보, -이소글로보, -강글리오, -이소강글리오, -락토, -네오락토, 락토강글리오, -뮤코, -네오갈라, -몰루, -아르트로, -쉬스토 및 -스피로메토, GD1, GD2, GD3, GM1, G M2, 푸코실 Gm1, Neu5GcGm3 및 폴리시알산.
일부 실시형태에서, 세포에 의해 생산되는 항체는 아달리무맙, 알렘투주맙, 알리로쿠맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 벨리무맙, 벤랄리주맙, 베바시주맙, 베즐로톡수맙, 블리나투모맙, 브렌툭시맙 베도틴, 부로수맙, 카나키누맙, 칸투주맙 메르탄신, 칸투주맙 라브탄신, 카로툭시맙, 세르톨리주맙 페골, 세툭시맙, 클라우딕시맙, 다클리주맙, 다라투무맙, 데노수맙, 데파툭시주맙 마포도틴, 디누툭시맙, 더발루맙, 엘로투주맙, 엔포르투맙 베도틴, 에노블리투주맙, 젬투주맙 오조가미신, 골리무맙, 구셀쿠맙, 이발리주맙, 이브리투모맙 티욱세탄, 이파보투주맙, 이네빌리주맙, 인플릭시맙, 이노투주맙 오조가미신, 이필리무맙, 이사툭시맙, 마르게툭시맙, 메폴리주맙, 네시투무맙, 니모투주맙, 니볼루맙, 오빌록악시맙, 오비누투주맙, 오크렐리주맙, 오파투무맙, 올라라투맙, 오말리주맙, 팔리비주맙, 펨브롤리주맙, 페르투주맙, 폴라투주맙 베도틴, 라코투모맙, 라무시루맙, 라니비주맙, 락시바쿠맙, 리툭시맙, 로발피투주맙 테시린, 사시투주맙, 사시투주맙 고비테칸, 사릴루맙, 세쿠키누맙, 실툭시맙, 시루쿠맙, 테프로투무맙, 틸드라키주맙, 토실리주맙, 토시투모맙, 트라스투주맙, 트라스투주맙 듀오카르마진, 트라스투주맙 엠탄신, 유블리툭수맙, 우스테키누맙, 베돌리주맙, 또는 이의 바이오시밀러이다.
바이오시밀러는 본 명세서에 기재된 명칭이 주어진 항체에 동일하거나 유사한 서열을 갖지만 이에 동일하지 않을 수 있는 항체이다. 바이오시밀러 항체는 또한 본 명세서에 기재된 것을 포함하여 기존 FDA-승인된 참조 제품과 매우 유사하고 임상적으로 의미 있는 차이가 없는 항체일 수 있다. 바이오시밀러는 참조 제품과 비교하여 안전성, 순도, 및 효능(안전성 및 유효성)의 관점에서 의미 있는(유의한) 차이가 없는 경우 임상적으로 의미 있는 차이가 없다.
임의의 특정 이론에 구속되지 않고, 조성물로 푸코실트랜스퍼라제를 억제함으로써, 조성물은 따라서 세포에서 단백질의 푸코실화의 수준을 감소시키는 데 사용될 수 있다. 푸코실화는 세포에 의해 생성되는 단백질에서 감소될 수 있다. 일부 실시형태에서, 감소된 푸코실화를 갖는 단백질은 항체이다. 항체의 비-제한적인 예는 본 명세서에 기술되어 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 95%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 90%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 85%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 80%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 75%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 70%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 65%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 60%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 55%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 50%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 45%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 40%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 35%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 30%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 25%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 20%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 15%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 10%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 1%에서 약 5%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 5%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 10%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 15%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 20%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 25%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 30%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 35%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 40%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 45%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 50%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 55%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 60%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 65%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 70%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 75%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 80%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 85%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 90%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화 수준을 약 95%에서 약 99%로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 단백질 또는 단백질 풀의 푸코실화 수준은 적어도 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 95% 감소된다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실화를 감소시키지만 제거하지는 않다. 단백질의 푸코실화 감소는 특정 세포 유형으로부터 생성된 단백질의 푸코실화 수준에 기초하며, 여기서 세포는 본 명세서에 기재된 조성물 및 화합물과 접촉된다. 예를 들어, 항체가 CHO 세포로부터 생산되어 지고 항체를 생산하는 동일하거나 유사한 CHO 세포가 본 명세서에 제공된 조성물 및 화합물과 접촉되는 경우, 항체 상의 푸코실화 수준이 감소된다. 감소 퍼센트는 본 명세서에 기재된 조성물 및 화합물과 접촉되지 않은 CHO 세포로부터 생성된 항체와 비교한 것이다.
일부 실시형태에서, 세포에서 단백질의 푸코실화를 억제 또는 감소시키는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 방법은 세포를 본 명세서에 제공된 임의의 조성물 또는 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포는 시험관내 또는 생체내에서 조성물과 접촉된다. 일부 실시형태에서, 조성물은 푸코실트랜스퍼라제를 억제함에 의해 푸코실화를 억제한다.
일부 실시형태에서, 세포는 본 명세서에 개시된 임의의 세포 유형이지만, 본 명세서에 제공된 세포 유형은 비-제한적인 예이다. 일부 실시형태에서, 세포는 항체를 생산한다. 일부 실시형태에서, 항체는 재조합 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 하기 표적 중 하나 이상에 결합한다: ErbB, ErbB1, ErbB2, ErbB3, ErbB4, HER1, HER2, HER3, HER4, TGF, TGFB1, TGFB2, TGFB3, TGFB4, VEGF, VEGFR1,Flt-1, VEGFR2, Flk-1/KDR, VEGFR3, Flt4, RANK, TNFRSFIIA, SLAMF, SLAMF1, SLAMF2, SLAMF3, SLAMF4, SLAMF5, SLAMF6, SLAMF7, SLAMF8, PDGFRα, PDGFRβ, KIR3DL3, KIR3DP1, KIR3DL4, KIR3DL2, MIC, MICA, MICB, TNF, LT알파, LT 베타, FASL, 4-IBBL, OX40L, TNF 관련 세포자멸사 유도 리간드(TRAIL), DR1, DR2, DR3, Dr4, DR5, DR6, DR7, DR8, CTLA4, PD1, CD66a, CD66b, CD66c, CD66d, CD66e, CD66f, TIM1, TIM2, TIM3, LAG, LAG3, CD2, CD3, CD19, CD20, CD22, CD25, CD27, CD30, CD 33, CD38, CD39, CD52, CD70, CD73, CD94, CD134, CD137, CD252, CD340, GalNAc-O-ser/thr, Neu5Acα2-6GalNAcα-O-Ser/Thr, SSEA-, SSEA-2, SSEA-3, SSEA-4, Gal-Gal-NAc, 루이스Y, 시알릴 루이스X, 시알릴 루이스A, -글로보, -이소글로보, -강글리오, -이소강글리오, -락토, -네오락토, 락토강글리오, -뮤코, -네오갈라, -몰루, -아르트로, -쉬스토 및 -스피로메토, GD1, GD2, GD3, GM1, G M2, 푸코실 Gm1, Neu5GcGm3 및 폴리시알산.
일부 실시형태에서, 항체는 아달리무맙, 알렘투주맙, 알리로쿠맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 벨리무맙, 벤랄리주맙, 베바시주맙, 베즐로톡수맙, 블리나투모맙, 브렌툭시맙 베도틴, 부로수맙, 카나키누맙, 칸투주맙 메르탄신, 칸투주맙 라브탄신, 카로툭시맙, 세르톨리주맙 페골, 세툭시맙, 클라우딕시맙, 다클리주맙, 다라투무맙, 데노수맙, 데파툭시주맙 마포도틴, 디누툭시맙, 더발루맙, 엘로투주맙, 엔포르투맙 베도틴, 에노블리투주맙, 젬투주맙 오조가미신, 골리무맙, 구셀쿠맙, 이발리주맙, 이브리투모맙 티욱세탄, 이파보투주맙, 이네빌리주맙, 인플릭시맙, 이노투주맙 오조가미신, 이필리무맙, 이사툭시맙, 마르게툭시맙, 메폴리주맙, 네시투무맙, 니모투주맙, 니볼루맙, 오빌록악시맙, 오비누투주맙, 오크렐리주맙, 오파투무맙, 올라라투맙, 오말리주맙, 팔리비주맙, 펨브롤리주맙, 페르투주맙, 폴라투주맙 베도틴, 라코투모맙, 라무시루맙, 라니비주맙, 락시바쿠맙, 리툭시맙, 로발피투주맙 테시린, 사시투주맙, 사시투주맙 고비테칸, 사릴루맙, 세쿠키누맙, 실툭시맙, 시루쿠맙, 테프로투무맙, 틸드라키주맙, 토실리주맙, 토시투모맙, 트라스투주맙, 트라스투주맙 듀오카르마진, 트라스투주맙 엠탄신, 유블리툭수맙, 우스테키누맙, 베돌리주맙 또는 이의 바이오시밀러이다. 푸코실화 억제 또는 감소의 수준은 본 명세서에 기재된 바와 같을 수 있다.
일부 실시형태에서, 푸코실트랜스퍼라제를 억제하는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 방법은 푸코실트랜스퍼라제를 본 명세서에 제공된 임의의 조성물 또는 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 푸코실트랜스퍼라제는 세포에 있다. 일부 실시형태에서, 세포는 본 명세서에 제공된 임의의 세포 유형이다. 일부 실시형태에서, 세포는 항체를 생산한다. 일부 실시형태에서, 항체는 재조합 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 본 명세서에 개시된 임의의 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 본 명세서에 제공된 임의의 표적 또는 항원에 결합한다.
일부 실시형태에서, 항체를 생산하는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 푸코실화가 감소된 항체를 생산하는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 방법은 항체를 생산하는 세포를 본 명세서에 제공된 임의의 조성물 및 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다. 세포는 시험관내 또는 생체내에서 조성물 및 화합물과 접촉될 수 있다. 항체를 생산하는 세포는 임의의 특정 세포 유형으로 제한되지 않으며, 예를 들어 본 명세서에 제공된 임의의 세포 유형일 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체는 재조합 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 본 명세서에 제공된 임의의 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 본 명세서에 개시된 것에 대해 제공된 임의의 것에 대해 지향된다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 임의의 방법은 감소된 푸코실화로 항체를 정제하는 것을 포함한다. 항체는 예를 들어 컬럼 크로마토그래피, 침전 등에 의해 정제될 수 있다. 정제의 다른 방법은 크기 배제 크로마토그래피, 황산암모늄 침전, 이온 교환 크로마토그래피, 고정화된 금속 킬레이트 크로마토그래피, 티오필릭 흡착, 멜론 겔 크로마토그래피, 단백질 A, G 및 L 항체-결합 리간드, 단백질 A, G 및 L로 항체 정체 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 이들 정제 방법은 비-제한적이고 다른 방법이 또한 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 변경된 글리코실화 패턴을 갖는 항체를 생산하는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 방법은 항체를 생산하는 세포를 본 명세서에 제공된 임의의 조성물 또는 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 시험관내 또는 생체내에서 세포와 접촉한다. 일부 실시형태에서, 세포는 본 명세서에 제공된 임의의 세포 유형이다. 일부 실시형태에서, 항체는 재조합 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 본 명세서에 개시된 임의의 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 본 명세서에 개시된 임의의 항원에 대해 지향된다.
본 명세서에서 생성된 항체는 또한 암, 자가-면역 질환 등과 같이 이들이 발달된 다양한 병태에 대해 대상체를 치료하는 방법에 사용될 수 있다. 따라서, 일부 실시형태에서, 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 방법은 치료 항체를 생산하는 세포를 본 명세서에 기재된 바와 같은 화합물 또는 조성물과 접촉시켜 푸코실화가 감소된 치료 항체를 생산하는 것을 포함한다. 치료 항체의 비-제한적인 예가 본 명세서에 기재되어 있다. 푸코실화가 감소된 항체는 단리될 수 있고 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하기에 적합한 약학적 조성물 또는 제형으로 제조될 수 있다. 일부 실시형태에서, 대상체는 암 또는 자가-면역 질환, 예컨대 류마티스 관절염, 크론병, 궤양성 대장염, 강직성 척추염, 베체트병, 누공성 질환, 화농성 한선염, 소아 특발성 관절염, 건선, 건선성 관절염, 및 재발성 다발연골염에 대해 치료된다.
실시형태는 이제 다음 실시예를 참조하여 기술한다. 이들 실시예는 단지 예시의 목적으로 제공되고 실시형태는 이들 실시예에 제한되는 것으로 결코 해석되어서는 안되며, 오히려 본 명세서에 제공된 교시의 결과로서 명백해지는 임의의 및 모든 변형을 포괄하는 것으로 해석되어야 한다. 당업자는 본질적으로 유사한 결과를 산출하도록 변경 또는 변형될 수 있는 다양한 중요하지 않은 매개변수를 쉽게 인식할 것이다.
실시예
다음 실시예는 본 명세서에 기재된 조성물 및 방법을 예시하지만 이에 제한되지 않는다. 당업자에게 공지된 다른 적절한 변형 및 개조는 다음 실시예의 범주 내에 있다.
실시예 1: 선택된 화합물에 의한 푸코실화의 억제
본 실시예에 예시된 화합물은 FUT8 활성을 억제하는 것으로 밝혀졌으며, 이는 화합물이 푸코실트랜스퍼라제를 억제할 수 있음을 입증하였다. 아래에 예시된 화합물은 FUT8 활성을 억제하는 데 효과적인 것으로 밝혀졌고 FUT8과 같은 푸코실트랜스퍼라제를 함유하는 세포로부터 생성되는 항체의 푸코실화를 감소시킬 것으로 예상된다. 간단히 말해서, 화합물을 푸코실트랜스퍼라제(FUT-8) 및 적절한 기질과 조합하고 1시간 동안 인큐베이션하였다. 반응을 종료하고 검출 시약 혼합물을 첨가하여 기질 단백질의 푸코실화의 양을 검출하였다. 각 화합물에 대한 억제 값은 표 2에 나타내었고 또한 도 1-19에 도시한다.
Figure pct00005
: 억제 값
실시예 2: 푸코실트랜스퍼라제 억제제는 항체 푸코실화를 감소시킨다.
본 실시예에 예시된 화합물은 FUT8과 같은 푸코실트랜스퍼라제를 함유하는 세포에 의해 생성되는 항체의 푸코실화 수준을 감소시키는 것으로 밝혀졌다. 간단히 말해서, 에피카테킨 모노갈레이트(ECG), 에피카테킨-3-모노갈레이트(ECGC) 및 아우린 트리카르복실산(ATA)을 세포 배양 배지에 포함시키고 ATCC로부터 수득한 항-IL8 IgG 모노클로날 항체(mAb)를 생산하는 CHO 세포(ATCC CRL-12445)에 부가하였으며, 이는 미국 특허 번호 6,025,158에도 기술되어 있으며, 이는 그 전체가 참고로 본 명세서에 포함된다. 특정 기간 후 세포를 수확하고 항-IL8 mAb를 표준 방법으로 정제했다. 그 다음 정제된 항-IL8 mAb를 디티오트레이톨을 첨가하여 환원시키고 LC-MS 분석을 시행하여 푸코실화 수준을 결정하였다. 항-IL8 푸코실화 수준에서의 감소는 도 20 및 도 21에 도시되어 있다. 이들 결과는 푸코실트랜스퍼라제를 억제하면 항체 푸코실화의 감소를 초래한다는 것을 입증한다. 더욱이, ECG는 코어 푸코실화된 종에서 용량 의존적 감소와 함께 어푸코실화된 종에서 수반되는 증가를 입증했다. ECG의 최대 농도(100μM)에서 푸코실화에서의 25% 감소가 관찰된 반면, 10-배 더 낮은 농도에서는 13% 감소가 달성되었다. 10μM에서 ECGC는 푸코실화에서 6% 감소를 달성했다. 이 항체의 경우 ATA는 테스트된 어느 하나의 농도에서도 푸코실화 수준을 변경하지 않았다(데이터는 표시되지 않음). 이들 결과는 상이한 유형의 푸코실트랜스퍼라제 억제제를 사용하면 항체 푸코실화에서 감소를 초래할 수 있음을 입증한다.
이 설명은 기재된 특정 공정, 조성 또는 방법론으로 제한되지 않으며, 이는 다양할 수 있다. 설명에서 사용된 용어는 단지 특정 버전 또는 실시형태를 설명하기 위한 목적이고, 본 명세서에 기재된 실시형태의 범주를 제한하려는 의도가 아니다. 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 당업자가 공통적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일부 경우에, 공통적으로 이해되는 의미를 갖는 용어는 명확성 및/또는 용이한 참고를 위해 본 명세서에 정의되고, 본 명세서에 그러한 정의를 포함하는 것이 반드시 당업계에서 일반적으로 이해되는 것과 실질적인 차이를 나타내는 것으로 해석되어서는 안된다. 그러나, 상충되는 경우 정의를 포함한 특허 명세서가 우선할 것이다.
전술한 내용으로부터, 본 개시내용의 다양한 실시형태가 예시의 목적으로 본 명세서에 기재되었으며, 본 개시내용의 범주 및 사상을 벗어나지 않고 다양한 변형이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 본 명세서에 개시된 다양한 실시형태는 제한하는 것으로 의도되지 않는다.

Claims (40)

  1. 푸코실트랜스퍼라제를 에피카테킨 모노갈레이트(ECG), 에피카테킨-3-모노갈레이트(ECGC), 푸르푸로갈린, 헥사클로로펜, 아크리플라비늄, 바이칼레인, 에피카테킨-3,5-디갈레이트, 테아플라빈 모노갈레이트, 탄닌산, 메타사이클린, 안트랄린, 미톡산트론 염산염, 하이칸톤, 에트크리딘 락테이트, 아우린 트리카르복실산, 카르보플라틴, 시스플라틴, 프리뮬레틴, 크리신, 디오메틴, 수라민, 헤마틴, 고시폴, 또는 이의 임의의 조합의 화합물 또는 이를 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는 푸코실트랜스퍼라제를 억제하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 푸코실트랜스퍼라제는 세포에 존재하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 세포는 항체를 생산하는 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 항체는 재조합 항체인 방법.
  5. 제3항에 있어서, 상기 항체는 하기 표적 중 하나 이상에 결합하는 방법: IL-8, ErbB, ErbB1, ErbB2, ErbB3, ErbB4, HER1, HER2, HER3, HER4, TGF, TGFB1, TGFB2, TGFB3, TGFB4, VEGF, VEGFR1,Flt-1, VEGFR2, Flk-1/KDR, VEGFR3, Flt4, RANK, TNFRSFIIA, SLAMF, SLAMF1, SLAMF2, SLAMF3, SLAMF4, SLAMF5, SLAMF6, SLAMF7, SLAMF8, PDGFRα, PDGFRβ, KIR3DL3, KIR3DP1, KIR3DL4, KIR3DL2, MIC, MICA, MICB, TNF, LT알파, LT 베타, FASL, 4-IBBL, OX40L, TNF 관련 세포자멸사 유도 리간드(TRAIL), DR1, DR2, DR3, Dr4, DR5, DR6, DR7, DR8, CTLA4, PD1, CD66a, CD66b, CD66c, CD66d, CD66e, CD66f, TIM1, TIM2, TIM3, LAG, LAG3, CD2, CD3, CD19, CD20, CD22, CD25, CD27, CD30, CD 33, CD38, CD39, CD52, CD70, CD73, CD94, CD134, CD137, CD252, CD340, GalNAc-O-ser/thr, Neu5Acα2-6GalNAcα-O-Ser/Thr, SSEA-, SSEA-2, SSEA-3, SSEA-4, Gal-Gal-NAc, 루이스Y, 시알릴 루이스X, 시알릴 루이스A, -글로보, -이소글로보, -강글리오, -이소강글리오, -락토, -네오락토, 락토강글리오, -뮤코, -네오갈라, -몰루, -아르트로, -쉬스토 및 -스피로메토, GD1, GD2, GD3, GM1, G M2, 푸코실 Gm1, Neu5GcGm3 및 폴리시알산.
  6. 제2항에 있어서, 상기 세포에 의해 생성되는 항체는 아달리무맙, 알렘투주맙, 알리로쿠맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 벨리무맙, 벤랄리주맙, 베바시주맙, 베즐로톡수맙, 블리나투모맙, 브렌툭시맙 베도틴, 부로수맙, 카나키누맙, 칸투주맙 메르탄신, 칸투주맙 라브탄신, 카로툭시맙, 세르톨리주맙 페골, 세툭시맙, 클라우딕시맙, 다클리주맙, 다라투무맙, 데노수맙, 데파툭시주맙 마포도틴, 디누툭시맙, 더발루맙, 엘로투주맙, 엔포르투맙 베도틴, 에노블리투주맙, 젬투주맙 오조가미신, 골리무맙, 구셀쿠맙, 이발리주맙, 이브리투모맙 티욱세탄, 이파보투주맙, 이네빌리주맙, 인플릭시맙, 이노투주맙 오조가미신, 이필리무맙, 이사툭시맙, 마르게툭시맙, 메폴리주맙, 네시투무맙, 니모투주맙, 니볼루맙, 오빌록악시맙, 오비누투주맙, 오크렐리주맙, 오파투무맙, 올라라투맙, 오말리주맙, 팔리비주맙, 펨브롤리주맙, 페르투주맙, 폴라투주맙 베도틴, 라코투모맙, 라무시루맙, 라니비주맙, 락시바쿠맙, 리툭시맙, 로발피투주맙 테시린, 사시투주맙, 사시투주맙 고비테칸, 사릴루맙, 세쿠키누맙, 실툭시맙, 시루쿠맙, 테프로투무맙, 틸드라키주맙, 토실리주맙, 토시투모맙, 트라스투주맙, 트라스투주맙 듀오카르마진, 트라스투주맙 엠탄신, 유블리툭수맙, 우스테키누맙, 베돌리주맙 또는 이의 바이오시밀러인 방법.
  7. 세포에서 단백질의 푸코실화를 억제하는 방법으로서, 상기 방법은 세포를 에피카테킨 모노갈레이트, 에피카테킨-3-모노갈레이트, 푸르푸로갈린, 헥사클로로펜, 아크리플라비늄, 바이칼레인, 에피카테킨-3,5-디갈레이트, 테아플라빈 모노갈레이트, 탄닌산, 메타사이클린, 안트랄린, 미톡산트론 염산염, 하이칸톤, 에트크리딘 락테이트, 아우린 트리카르복실산, 카르보플라틴, 시스플라틴, 프리뮬레틴, 크리신, 디오메틴, 수라민, 헤마틴, 고시폴, 또는 이의 임의의 조합의 화합물 또는 이를 포함하는 조성물과 접촉시켜 단백질의 푸코실화를 억제하는 것을 포함하는 방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기 화합물 또는 조성물은 푸코실트랜스퍼라제를 억제함에 의해 푸코실화를 억제하는 방법.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 상기 세포는 시험관내 또는 생체내에서 화합물 또는 조성물과 접촉되는 방법.
  10. 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백질은 항체인 방법.
  11. 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 저장성 완충 용액, 메탄올, 에탄올, 아세톤, 톨루엔, DMSO, 알킬트리메틸암모늄 브로마이드, 사포닌, TritonX-100, Tween-20, Tween-80, 디지토닌, 나트륨 도데실 설페이트(SDS), 베타-용혈성 세포용해소, 스트렙톨리신-O(SLO), 퍼피린골리신-O(PFO); 또는 이의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 세포 침투 제제를 포함하는 방법.
  12. 제7항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 HEK293 세포의, CHO 세포, NS0 세포, Sp2/0 세포, 또는 PER.C6 세포인 방법.
  13. 푸코실화가 감소된 항체를 생산하는 방법으로서, 상기 방법은 항체를 생산하는 세포를 에피카테킨 모노갈레이트, 에피카테킨-3-모노갈레이트, 푸르푸로갈린, 헥사클로로펜, 아크리플라비늄, 바이칼레인, 에피카테킨-3,5-디갈레이트, 테아플라빈 모노갈레이트, 탄닌산, 메타사이클린, 안트랄린, 미톡산트론 염산염, 하이칸톤, 에트크리딘 락테이트, 아우린 트리카르복실산, 카르보플라틴, 시스플라틴, 프리뮬레틴, 크리신, 디오메틴, 수라민, 헤마틴, 고시폴, 또는 이의 임의의 조합의 화합물 또는 이를 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 세포는 시험관내 또는 생체내에서 화합물 또는 조성물과 접촉되는 방법.
  15. 제13항에 있어서, 상기 화합물 또는 조성물은 푸코실트랜스퍼라제를 억제하는 방법.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 세포로부터 분비되는 방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기 화합물 또는 조성물은 항체의 분비 이전에 푸코실트랜스퍼라제와 접촉하는 방법.
  18. 제13항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생성된 항체는 화합물 또는 조성물과 접촉되지 않은 세포로부터 생성된 항체와 비교하여 감소된 수준의 푸코실화를 갖는 방법.
  19. 제13항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물 또는 조성물은 저장성 완충 용액, 메탄올, 에탄올, 아세톤, 톨루엔, DMSO, 알킬트리메틸암모늄 브로마이드, 사포닌, TritonX-100, Tween-20, Tween-80, 디지토닌, 나트륨 도데실 설페이트(SDS), 베타-용혈성 세포용해소, 스트렙톨리신-O(SLO), 퍼피린골리신-O(PFO); 또는 이의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 세포 침투 제제를 포함하는 방법.
  20. 제13항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 CHO 세포, NS0 세포, Sp2/0 세포, HEK293 세포, 또는 PER.C6 세포인 방법.
  21. 글리코실화 패턴이 변경된 항체를 생산하는 방법으로서, 상기 방법은 항체를 생산하는 세포를 에피카테킨 모노갈레이트, 에피카테킨-3-모노갈레이트, 푸르푸로갈린, 헥사클로로펜, 아크리플라비늄, 바이칼레인, 에피카테킨-3,5-디갈레이트, 테아플라빈 모노갈레이트, 탄닌산, 메타사이클린, 안트랄린, 미톡산트론 염산염, 하이칸톤, 에트크리딘 락테이트, 아우린 트리카르복실산, 카르보플라틴, 시스플라틴, 프리뮬레틴, 크리신, 디오메틴, 수라민, 헤마틴, 고시폴, 또는 이의 임의의 조합의 화합물 또는 이를 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 세포는 시험관내 또는 생체내에서 조성물과 접촉되는 방법.
  23. 제21항에 있어서, 상기 화합물 또는 조성물은 푸코실트랜스퍼라제를 억제하는 방법.
  24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 세포로부터 분비되는 방법.
  25. 제24항에 있어서, 상기 화합물 또는 조성물은 항체의 분비 이전에 세포와 접촉되는 방법.
  26. 제21항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생성된 항체는 조성물과 접촉되지 않은 세포로부터 생성된 항체와 비교하여 변경된 글리코실화 패턴을 갖는 방법.
  27. 제21항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물 또는 조성물은 저장성 완충 용액, 메탄올, 에탄올, 아세톤, 톨루엔, DMSO, 알킬트리메틸암모늄 브로마이드, 사포닌, TritonX-100, Tween-20, Tween-80, 디지토닌, 나트륨 도데실 설페이트(SDS), 베타-용혈성 세포용해소, 스트렙톨리신-O(SLO), 퍼피린골리신-O(PFO); 또는 이의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 세포 침투 제제를 포함하는 방법.
  28. 제21항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 CHO 세포, NS0 세포, Sp2/0 세포, HEK293 세포, 또는 PER.C6 세포인 방법.
  29. 에피카테킨 모노갈레이트, 에피카테킨-3-모노갈레이트, 푸르푸로갈린, 헥사클로로펜, 아크리플라비늄, 바이칼레인, 에피카테킨-3,5-디갈레이트, 테아플라빈 모노갈레이트, 탄닌산, 메타사이클린, 안트랄린, 미톡산트론 염산염, 하이칸톤, 에트크리딘 락테이트, 아우린 트리카르복실산, 카르보플라틴, 시스플라틴, 프리뮬레틴, 크리신, 디오메틴, 수라민, 헤마틴, 고시폴, 또는 이의 임의의 조합, 및 세포를 포함하는 조성물.
  30. 제29항에 있어서, 상기 세포는 재조합 항체를 생산하는 조성물.
  31. 제29항 또는 제30항에 있어서, 상기 세포는 CHO 세포, NS0 세포, Sp2/0 세포, HEK293 세포, 또는 PER.C6 세포인 조성물.
  32. 제29항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 세포 배양 배지를 추가로 포함하는 조성물.
  33. 제29항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 항생제를 추가로 포함하는 조성물.
  34. 제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 선택 제제를 추가로 포함하는 조성물.
  35. 제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포로부터 생산 및 분비된 재조합 항체를 추가로 포함하는 조성물.
  36. 에피카테킨-3-모노갈레이트, 에피카테킨-3,5-디갈레이트, 푸르푸로갈린, 헥사클로로펜, 아크리플라비늄, 바이칼레인, 에피카테킨 모노갈레이트, 테아플라빈 모노갈레이트, 탄닌산, 메타사이클린, 안트랄린, 미톡산트론 염산염, 하이칸톤, 에트크리딘 락테이트, 아우린 트리카르복실산, 카르보플라틴, 시스플라틴, 프리뮬레틴, 크리신, 디오메틴, 수라민, 헤마틴, 고시폴, 또는 이의 임의의 조합, 및 항체를 포함하는 조성물.
  37. 제36항에 있어서, 상기 항체는 아달리무맙, 알렘투주맙, 알리로쿠맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 벨리무맙, 벤랄리주맙, 베바시주맙, 베즐로톡수맙, 블리나투모맙, 브렌툭시맙 베도틴, 부로수맙, 카나키누맙, 칸투주맙 메르탄신, 칸투주맙 라브탄신, 카로툭시맙, 세르톨리주맙 페골, 세툭시맙, 클라우딕시맙, 다클리주맙, 다라투무맙, 데노수맙, 데파툭시주맙 마포도틴, 디누툭시맙, 더발루맙, 엘로투주맙, 엔포르투맙 베도틴, 에노블리투주맙, 젬투주맙 오조가미신, 골리무맙, 구셀쿠맙, 이발리주맙, 이브리투모맙 티욱세탄, 이파보투주맙, 이네빌리주맙, 인플릭시맙, 이노투주맙 오조가미신, 이필리무맙, 이사툭시맙, 마르게툭시맙, 메폴리주맙, 네시투무맙, 니모투주맙, 니볼루맙, 오빌록악시맙, 오비누투주맙, 오크렐리주맙, 오파투무맙, 올라라투맙, 오말리주맙, 팔리비주맙, 펨브롤리주맙, 페르투주맙, 폴라투주맙 베도틴, 라코투모맙, 라무시루맙, 라니비주맙, 락시바쿠맙, 리툭시맙, 로발피투주맙 테시린, 사시투주맙, 사시투주맙 고비테칸, 사릴루맙, 세쿠키누맙, 실툭시맙, 시루쿠맙, 테프로투무맙, 틸드라키주맙, 토실리주맙, 토시투모맙, 트라스투주맙, 트라스투주맙 듀오카르마진, 트라스투주맙 엠탄신, 유블리툭수맙, 우스테키누맙, 베돌리주맙 또는 이의 바이오시밀러인 조성물.
  38. 에피카테킨-3-모노갈레이트, 에피카테킨-3,5-디갈레이트, 푸르푸로갈린, 헥사클로로펜, 아크리플라비늄, 바이칼레인, 에피카테킨 모노갈레이트, 테아플라빈 모노갈레이트, 탄닌산, 메타사이클린, 안트랄린, 미톡산트론 염산염, 하이칸톤, 에트크리딘 락테이트, 아우린 트리카르복실산, 카르보플라틴, 시스플라틴, 프리뮬레틴, 크리신, 디오메틴, 수라민, 헤마틴, 고시폴, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 세포 유리 배지.
  39. 제38항에 있어서, 항체를 추가로 포함하는 배지.
  40. 제38항에 있어서, 항체는 아달리무맙, 알렘투주맙, 알리로쿠맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 벨리무맙, 벤랄리주맙, 베바시주맙, 베즐로톡수맙, 블리나투모맙, 브렌툭시맙 베도틴, 부로수맙, 카나키누맙, 칸투주맙 메르탄신, 칸투주맙 라브탄신, 카로툭시맙, 세르톨리주맙 페골, 세툭시맙, 클라우딕시맙, 다클리주맙, 다라투무맙, 데노수맙, 데파툭시주맙 마포도틴, 디누툭시맙, 더발루맙, 엘로투주맙, 엔포르투맙 베도틴, 에노블리투주맙, 젬투주맙 오조가미신, 골리무맙, 구셀쿠맙, 이발리주맙, 이브리투모맙 티욱세탄, 이파보투주맙, 이네빌리주맙, 인플릭시맙, 이노투주맙 오조가미신, 이필리무맙, 이사툭시맙, 마르게툭시맙, 메폴리주맙, 네시투무맙, 니모투주맙, 니볼루맙, 오빌록악시맙, 오비누투주맙, 오크렐리주맙, 오파투무맙, 올라라투맙, 오말리주맙, 팔리비주맙, 펨브롤리주맙, 페르투주맙, 폴라투주맙 베도틴, 라코투모맙, 라무시루맙, 라니비주맙, 락시바쿠맙, 리툭시맙, 로발피투주맙 테시린, 사시투주맙, 사시투주맙 고비테칸, 사릴루맙, 세쿠키누맙, 실툭시맙, 시루쿠맙, 테프로투무맙, 틸드라키주맙, 토실리주맙, 토시투모맙, 트라스투주맙, 트라스투주맙 듀오카르마진, 트라스투주맙 엠탄신, 유블리툭수맙, 우스테키누맙, 베돌리주맙 또는 이의 바이오시밀러인 세포 유리 배지.
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