KR20230104659A - 면역 세포 억제제를 이용한 조합-요법 항체 약물 접합체 - Google Patents

면역 세포 억제제를 이용한 조합-요법 항체 약물 접합체 Download PDF

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앨리슨 스미스
케리 클루스만
버나드 리우
헤더 반 엡스
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씨젠 인크.
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Abstract

항체-약물 접합체와 조합으로 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체로 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.

Description

면역 세포 억제제를 이용한 조합-요법 항체 약물 접합체
관련된 출원에 대한 교차-참조
본 출원은 2020년 11월 8일 출원된 미국 가출원 번호 63/111,045, 2021년 4월 8일 출원된 미국 가출원 번호 63/172,411, 및 2021년 6월 8일 출원된 미국 가출원 번호 63/208,179의 우선권을 주장하고, 이들 각각은 그 전체가 임의의 목적을 위하여 참조로 본원에 편입된다.
분야
항체-약물 접합체와 조합으로 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체로 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
배경
면역-종양 치료제 및 항체-약물 접합체 (ADC)는 환자들에서 암을 치료하는데 사용되어 왔다. 치료제들의 어느 한쪽 클래스도 표적화된 적응증에서 환자들의 전원을 치료할 수 없었다. 본 개시내용은 이 문제 및 다른 문제를 해결한다.
간단한 개요
구현예 1. 암을 가진 대상체에게 (1) 종양-연관된 항원와 튜불린 교란제인 세포독성제를 결합시키는 제1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체 (ADC); 및 (2) 면역 세포 인게이저에 결합하는 제2 항체로서, 제2 항체가 하나 이상의 활성화 FcγR에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하며, 활성화 FcγR이 FcγRIIIa, FcγRIIa, 및/또는 FcγRI 중 하나 이상을 포함하는, 제2 항체를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법.
구현예 2. 구현예 1에 있어서, 제2 항체가 적어도 FcγRIIIa에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하는, 방법.
구현예 3. 구현예 1에 있어서, 제2 항체가 적어도 FcγRIIIa 및 FcγRIIa에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하는, 방법.
구현예 4. 구현예 1에 있어서, 제2 항체가 적어도 FcγRIIIa 및 FcγRI에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하는, 방법.
구현예 5. 구현예 1에 있어서, 제2 항체가 FcγRIIIa, FcγRIIa, 및 FcγRI에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하는, 방법.
구현예 6. 구현예 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체의 Fc가 하나 이상의 억제성 FcγR에 감소된 결합을 갖는, 방법.
구현예 7. 구현예 6에 있어서, 제2 항체의 Fc가 FcγRIIb에 감소된 결합을 갖는, 방법.
구현예 8. 구현예 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체의 Fc가 감소된 푸코스 수준을 갖고/갖거나 Fc가 하나 이상의 활성화 FcγR에 향상된 결합을 갖도록 하나 이상의 돌연변이를 포함하도록 조작된, 방법.
구현예 9. 구현예 8에 있어서, 제2 항체가 비푸코실화되는, 방법.
구현예 10. 구현예 8에 있어서, 제2 항체가 중쇄 불변 영역에서 치환 S293D, A330L 및 I332E를 포함하는, 방법.
구현예 11. 암을 가진 대상체에게 항체-약물 접합체로서, 튜불린 교란제인 세포독성제에 접합된 제1 항체를 포함하는, 항체-약물 접합체; 및 면역 세포 인게이저를 결합시키는 제2 항체로서, 비푸코실화되는, 제2 항체를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법.
구현예 12. 구현예 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 종양-연관된 항원을 결합시키는, 방법.
구현예 13. 암을 가진 대상체에게 (1) 항체-약물 접합체 (ADC)로서, 종양-연관된 항원과 튜불린 교란제인 세포독성제를 결합시키는 제1 항체를 포함하는, ADC 및 (2) 면역 세포 인게이저를 결합시키는 제2 항체로서, 동일한 아이소타입의 상응하는 야생형 Fc에 비해 향상된 ADCC 활성을 가진 Fc를 포함하는, 제2 항체를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법.
구현예 14. 구현예 13에 있어서, 제2 항체가 동일한 아이소타입의 상응하는 야생형 Fc에 비해 향상된 ADCC 및 ADCP 활성을 가진 Fc를 포함하는, 방법.
구현예 15. 구현예 13 또는 14에 있어서, 제2 항체가 비푸코실화되는, 방법.
구현예 16. 구현예 13 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체가 하나 이상의 활성화 FcγR에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하고, 활성화 FcγR이 FcγRIIIa, FcγRIIa, 및/또는 FcγRI 중 하나 이상을 포함하는, 방법.
구현예 17. 구현예 16에 있어서, 제2 항체가 적어도 FcγRIIIa에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하는, 방법.
구현예 18. 구현예 16에 있어서, 제2 항체가 적어도 FcγRIIIa 및 FcγRIIa에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하는, 방법.
구현예 19. 구현예 16에 있어서, 제2 항체가 적어도 FcγRIIIa 및 FcγRI에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하는, 방법.
구현예 20. 구현예 16에 있어서, 제2 항체가 FcγRIIIa, FcγRIIa, 및 FcγRI에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하는, 방법.
구현예 21. 구현예 13 내지 20 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체의 Fc가 하나 이상의 억제성 FcγR에 감소된 결합을 갖는, 방법.
구현예 22. 구현예 21에 있어서, 제2 항체의 Fc가 FcγRIIb에 감소된 결합을 갖는, 방법.
구현예 23. 구현예 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 5T4 (TPBG), ADAM-9, AG-7, ALK, ALP, AMHRII, APLP2, ASCT2, AVB6, AXL (UFO), B7-H3 (CD276), B7-H4, BCMA, C3a, C3b, C4.4a (LYPD3), C5, C5a, CA6, CA9, CanAg, 탄산 무수화효소 IX (CAIX), 카텝신 D, CCR7, CD1, CD10, CD100, CD101, CD102, CD103, CD104, CD105, CD106, CD107a, CD107b, CD108, CD109, CD111, CD112, CD113, CD116, CD117, CD118, CD119, CD11A, CD11b, CD11c, CD120a, CD121a, CD121b, CD122, CD123, CD124, CD125, CD126, CD127, CD13, CD130, CD131, CD132, CD133, CD135, CD136, CD137, CD138, CD14, CD140a, CD140b, CD141, CD142, CD143, CD144, CD146, CD147, CD148, CD15, CD150, CD151, CD154, CD155, CD156a, CD156b, CD156c, CD157, CD158b2, CD158e, CD158f1, CD158h, CD158i, CD159a, CD16, CD160, CD161, CD162, CD163, CD164, CD166, CD167b, CD169, CD16a, CD16b, CD170, CD171, CD172a, CD172b, CD172g, CD18, CD180, CD181, CD183, CD184, CD185, CD19, CD194, CD197, CD1a, CD1b, CD1c, CD1d, CD2, CD20, CD200, CD201, CD202b, CD203c, CD204, CD205, CD206, CD208, CD21, CD213a1, CD213a2, CD217, CD218a, CD22, CD220, CD221, CD222, CD224, CD226, CD228, CD229, CD23, CD230, CD232, CD239, CD243, CD244, CD248, CD249, CD25, CD26, CD265, CD267, CD269, CD27, CD272, CD273, CD274, CD275, CD279, CD28, CD280, CD281, CD282, CD283, CD284, CD289, CD29, CD294, CD295, CD298, CD3, CD3 엡실론, CD30, CD300f, CD302, CD304, CD305, CD307, CD31, CD312, CD315, CD316, CD317, CD318, CD319, CD32, CD321, CD322, CD324, CD325, CD326, CD327, CD328, CD32b, CD33, CD331, CD332, CD333, CD334, CD337, CD339, CD34, CD340, CD344, CD35, CD352, CD36, CD37, CD38, CD39, CD3d, CD3g, CD4, CD41, CD42d, CD44, CD44v6, CD45, CD46, CD47, CD48, CD49a, CD49b, CD49c, CD49d, CD49e, CD49f, CD5, CD50, CD51, CD51 (인테그린 알파-V), CD52, CD53, CD54, CD55, CD56, CD58, CD59, CD6, CD61, CD62L, CD62P, CD63, CD64, CD66a-e, CD67, CD68, CD69, CD7, CD70, CD70L, CD71, CD71 (TfR), CD72, CD73, CD74, CD79a, CD79b, CD8, CD80, CD82, CD83, CD84, CD85f, CD85i, CD85j, CD86, CD87, CD89, CD90, CD91, CD92, CD95, CD96, CD97, CD98, CDH6, CDH6 (카드헤린 6), CDw210a, CDw210b, CEA, CEACAM5, CEACAM6, CFC1B, cKIT, CLDN18.2 (클라우딘 18.2), CLDN6, CLDN9, CLL-1, c-MET, 보체 인자 C3, 크립토, CSP-1, CXCR5, DCLK1, DLK-1, DLL3, DPEP3, DR5 (사멸 수용체 5), 디스에드헤린, EFNA4 , EGFR, EGFR 야생형, EGFRviii, EGP-1 (TROP-2), EGP-2, EMP2, ENPP3, EpCAM, EphA2, EphA3, 에프린-A4 (EFNA4), ETBR, FAP, FcRH5, FGFR2, FGFR3, FLT3, FOLR, FOLR1, FOLR-알파, FSH, GCC, GD2, GD3, 글로보 H, GPC1, GPC-1, GPC3, GPNMB, GPR20, HER2, HER-2, HER3, HER-3, HGFR (c-Met), HLA-DR, HM1.24, HSP90, Ia, IGF-1R, IL-13R, IL-15, IL1RAP, IL-2, IL-3, IL-4, IL7R, 인테그린 알파V베타3 (인테그린 αVβ3), 인테그린 베타-6, 인터류킨-4 수용체 (IL4R), KAAG-1, KLK2, LAMP-1, Le(y), 루이스 Y 항원, LGALS3BP, LGR5, LH/hCG, LHRH, 지질 래프트, LIV-1 (SLC39A6 또는 ZIP6), LRP-1, LRRC15, LY6E, 대식세포 만노스 수용체 1, MAGE, 메소텔린 (MSLN), MET, MHC 클래스 I 쇄-관련 단백질 A 및 B (MICA 및 MICB), MN/CA IX, MRC2, MT1-MMP, MTX3, MTX5, MUC1, MUC16, MUC2, MUC3, MUC4, MUC5, MUC5ac, NaPi2b, NCA-90, NCA-95, 넥틴-4, Notch3, 뉴클레올린, OAcGD2, OT-MUC1 (종양-속박-MUC1), OX001L, P1GF, PAM4 항원, p-카드헤린 (카드헤린 3), PD-L1, 포스파티딜 세린(PS), PRLR, 프로락틴 수용체 (PRLR), 슈도모나스, PSMA, PTK4, PTK7, 수용체 티로신 키나제 (RTK), RNF43, ROR1, ROR2, SAIL, SEZ6, SLAMF7, SLC44A4, SLITRK6, SLMAMF7 (CS1), SLTRK6, 소르틸린 (SORT1), SSEA-4, SSTR2, 황색포도상구균 (항생 제제), STEAP-1, STING, STn, T101, TAA, TAC, TDGF1, 테나신, TENB2, TGF-B, 톰슨-프라이덴리히 항원, Thy1.1, TIM-1, 조직 인자 (TF; CD142), TM4SF1, Tn 항원, TNF-알파 (TNFα), TRA-1-60, TRAIL 수용체 (R1 및 R2), TROP-2, 종양-연관된 당단백질 72 (TAG-72), uPAR, VEGFR, VEGFR-2, 및 xCT로부터 선택된 항원을 결합시키는, 방법.
구현예 24. 구현예 1 내지 23 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 넥틴-4를 결합시키지 않는, 방법.
구현예 25. 구현예 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 본 방법이 넥틴-4를 결합시키는 항체를 포함하는 항체-약물 접합체를 투여하는 것을 포함하지 않는, 방법.
구현예 26. 구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 CD71, Axl, AMHRII, 및 LGR5, Axl, CA9, CD142, CD20, CD22, CD228, CD248, CD30, CD33, CD37, CD48, CD7, CD71, CD79b, CLDN18.2, CLDN6, c-MET, EGFR, EphA2, ETBR, FCRH5, GCC, 글로보 H, gpNMB, HER-2, IL7R, 인테그린 베타-6, KAAG-1, LGR5, LIV-1, LRRC15, Ly6E, 메소텔린 (MSLN), MET, MRC2, MUC16, NaPi2b, 넥틴-4, OT-MUC1 (종양-속박-MUC1), PSMA, ROR1, SLAMF7, SLC44A4, SLITRK6, STEAP-1, STn, TIM-1, TRA-1-60, 및 종양-연관된 당단백질 72 (TAG-72)로부터 선택된 항원을 결합시키는, 방법.
구현예 27. 구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 BCMA, GPC1, CD30, cMET, SAIL, HER3, CD70, CD46, CD48, HER2, 5T4, ENPP3, CD19, EGFR, 및 EphA2로부터 선택된 항원을 결합시키는, 방법.
구현예 28. 구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 Her2, TROP2, BCMA, cMet, 인테그린 알프V베타6 (인테그린 αVβ6), CD22, CD79b, CD30, CD19, CD70, CD228, CD47, 및 CD48로부터 선택된 항원을 결합시키는, 방법.
구현예 29. 구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 CD142, 인테그린 베타-6, 인테그린 알파V베타6, ENPP3, CD19, Ly6E, cMET, C4.4a, CD37, MUC16, STEAP-1, LRRC15, SLITRK6, ETBR, FCRH5, Axl, EGFR, CD79b, BCMA, CD70, PSMA, CD79b, CD228, CD48, LIV-1, EphA2, SLC44A4, CD30, 및 sTn으로부터 선택된 항원을 결합시키는, 방법.
구현예 30. 구현예 1 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 튜불린 교란제가 아우리스타틴, 튜불리신, 콜히친, 빈카 알칼로이드, 탁산, 크립토피신, 메이탄시노이드, 또는 헤미아스털린인, 방법.
구현예 31. 구현예 30에 있어서, 튜불린 교란제가 아우리스타틴인, 방법.
구현예 32. 구현예 1 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 튜불린 교란제가 돌로스타틴-10, MMAE (N-메틸발린-발린-돌라이소류인-돌라프로인-노르에페드린), MMAF (N-메틸발린-발린-돌라이소류인-돌라프로인-페닐알라닌), 아우리스타틴 F, AEB, AEVB, 또는 AFP (아우리스타틴 페닐알라닌 페닐렌디아민)인, 방법.
구현예 33. 구현예 1 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 튜불린 교란제가 MMAE인, 방법.
구현예 33-1. 구현예 33에 있어서, 항체-약물 접합체가 MMAE를 포함하고 다음으로부터 선택되는, 방법: HER-2를 표적화하는 DP303c, SYSA1501로도 알려짐 (CSPC Pharmaceutical; Dophen Biomed), STn을 표적화하는 SIA01-ADC, ST1로도 알려짐 (Siamab Therapeutics), LIV-1을 표적화하는 라디라투주맙 베도틴, SGN-LIV1A로도 알려짐 (Merck & Co., Inc.; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), LRRC15를 표적화하는 ABBV-085, 삼로타맙 베도틴으로도 알려짐 (Abbvie; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), 메소텔린 (MSLN)을 표적화하는 DMOT4039A, RG7600; αMSLN-MMAE로도 알려짐 (Roche-Genentech), EGFR을 표적화하는 RC68, Remegen EGFR ADC로도 알려짐 (RemeGen (Rongchang Biopharmaceutical (Yantai) Co., Ltd.)), c-MET를 표적화하는 RC108, RC108-ADC로도 알려짐 (RemeGen (Rongchang Biopharmaceutical (Yantai) Co., Ltd.)), CLDN18.2를 표적화하는 CMG901, MRG005로도 알려짐 (Keymed Biosciences; Lepu biotech; Shanghai Miracogen Inc. (Shanghai Meiya Biotechnology Co., Ltd)), DLK-1을 표적화하는 YBL-001, LCB67로도 알려짐 (Lego Chem Biosciences; Pyxis Oncology; Y-Biologics), CD79b를 표적화하는 DCDS0780A, 일라다투주맙 베도틴; RG7986으로도 알려짐 (Roche-Genentech; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), CD142를 표적화하는 티소투맙 베도틴, Humax-TF-ADC; tf-011-mmae; TIVDAK™으로도 알려짐 (GenMab; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), MUC1-C를 표적화하는 GO-3D1-ADC, humAb-3D1-MMAE ADC로도 알려짐 (Genus Oncology LLC), HER-2를 표적화하는 ALT-P7, HM2-MMAE로도 알려짐 (Alteogen, Inc.; Levena Biopharma; 3SBio, Inc.), STEAP-1을 표적화하는 반도르투주맙 베도틴, DSTP3086S; RG7450으로도 알려짐 (Roche-Genentech; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), NaPi2b를 표적화하는 리파스투주맙 베도틴, DNIB0600A; NaPi2b ADC; RG7599로도 알려짐 (Roche-Genentech), MUC16을 표적화하는 소피투주맙 베도틴, DMUC5754A; RG7458로도 알려짐 (Seagen (Seattle Genetics) Inc.; Roche-Genentech), Ly6E를 표적화하는 RG7841, DLYE5953A로도 알려짐 (Roche-Genentech; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), FCRH5를 표적화하는 RG7598, DFRF4539A로도 알려짐 (Roche-Genentech; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), ETBR을 표적화하는 RG7636, DEDN6526A로도 알려짐 (Seagen (Seattle Genetics) Inc.; Roche-Genentech), CD22를 표적화하는 피나투주맙 베도틴, DCDT2980S; RG7593으로도 알려짐 (Roche-Genentech), CD79b를 표적화하는 폴라투주맙 베도틴, DCDS4501A; POLIVY™; RG7596; RO-5541077로도 알려짐 (Chugai Pharmaceutical; Roche-Genentech; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), MUC16을 표적화하는 DMUC4064A, D-4064a; RG7882로도 알려짐 (Roche-Genentech; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), CLDN18.2를 표적화하는 SYSA1801, CPO102로도 알려짐 (Conjupro Biotherapeutics Inc.; CSPC ZhongQi Pharmaceutical Technology Co.), CLDN18.2를 표적화하는 RC118, 클라우딘18.2- ADC; YH005로도 알려짐 (RemeGen (Rongchang Biopharmaceutical (Yantai) Co., Ltd.); Biocytogen), ROR1을 표적화하는 VLS-101, 시름투주맙 베도틴; MK-2140; UC-961ADC3; 질로베르타맙 베도틴으로도 알려짐 (VelosBio. Inc), gpNMB를 표적화하는 글렘바투무맙 베도틴, CDX-011; CR011-vcMMAE로도 알려짐 (Celldex Therapeutics), ROR2를 표적화하는 BA3021, CAB-ROR2-ADC; 오주리프타맙 베도틴으로도 알려짐 (Bioatla; Himalaya Therapeutics), Axl을 표적화하는 BA3011, CAB-AXL-ADC; 멕보타맙 베도틴으로도 알려짐 (Bioatla; Himalaya Therapeutics), TRA-1-60을 표적화하는 CM-09, 브스트롱시맙-ADC로도 알려짐 (CureMeta), SLAMF7을 표적화하는 ABBV-838, 아진툭시주맙 베도틴으로도 알려짐 (Abbvie), Axl을 표적화하는 에나포타맙 베도틴, AXL-107-MMAE; HuMax-AXL-ADC로도 알려짐 (GenMab; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), CD79b를 표적화하는 ARC-01, 항-CD79b ADC로도 알려짐 (Araris Biotech AG), HER-2를 표적화하는 디시타맙 베도틴, Aidexi®; RC48로도 알려짐 (RemeGen (Rongchang Biopharmaceutical (Yantai) Co., Ltd.); Seagen (Seattle Genetics) Inc.), SLC44A4를 표적화하는 ASG-5ME, AGS-5; AGS-5ME로도 알려짐 (Agensys, Inc.; Astellas Pharma Inc.; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), 넥틴-4를 표적화하는 엔포르투맙 베도틴, AGS-22M6E; ASG-22CE; ASG-22ME; PADCEV™으로도 알려짐 (Astellas Pharma Inc.; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), SLITRK6을 표적화하는 ASG-15ME, AGS-15E; 시르트라투맙 베도틴으로도 알려짐 (Seagen (Seattle Genetics) Inc.; Astellas Pharma Inc.), CD30을 표적화하는 브렌툭시맙 베도틴, 아드세트리스; cAC10-vcMMAE; SGN-35로도 알려짐 (Seagen (Seattle Genetics) Inc.; Takeda), c-MET를 표적화하는 텔리소투주맙 베도틴, ABBV-399로도 알려짐 (Abbvie), EGFR을 표적화하는 로사툭시주맙 베도틴, ABBV-221로도 알려짐 (Abbvie), CD71을 표적화하는 CX-2029, ABBV-2029로도 알려짐 (Abbvie; CytomX Therapeutics), KAAG-1을 표적화하는 AB-3A4-ADC, AB-3A4-vcMMAE로도 알려짐 (Alethia Biotherapeutics), GCC를 표적화하는 인두사투맙 베도틴, 5F9-vcMMAE; MLN0264; TAK-264로도 알려짐 (Takeda; Millennium Pharmaceuticals, Inc), CD46을 표적화하는 FOR46 (Fortis Therapeutics, Inc.), EGFR을 표적화하는 LR004-VC-MMAE (Chinese Academy of Medical Sciences Peking Union Medical College Hospital), CD30을 표적화하는 CD30-ADC (NBE Therapeutics; Boehringer Ingelheim), CD248을 표적화하는 항-엔도시알린-MC-VC-PABC-MMAE (Genzyme), SSEA-4를 표적화하는 OBI-998 (OBI Pharma), HER-2를 표적화하는 MRG002 (Lepu biotech; Shanghai Miracogen Inc. (Shanghai Meiya Biotechnology Co., Ltd)), CD20을 표적화하는 TRS005 (Teruisi Pharmaceuticals), DR5 (사멸 수용체 5)를 표적화하는 Oba01 (Obio Technology (Shanghai) Corp.,Ltd.; Yantai Obioadc Biomedical Technology Ltd.), PSMA를 표적화하는 PSMA ADC (Progenics Pharmaceuticals, Inc; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), CD48을 표적화하는 SGN-CD48A (Seagen (Seattle Genetics) Inc.), CLDN18.2를 표적화하는 IMAB362-vcMMAE (Astellas Pharma Inc.; Ganymed), HER-2를 표적화하는 GB251 (Genor Biopharma Co., Ltd.), CD30을 표적화하는 Innate Pharma BTG-ADC (Innate Pharma; Sanofi), MRC2를 표적화하는 ADCendo uPARAP ADC (ADCendo), actM을 표적화하는 XCN-010 (Xiconic Pharmaceuticals, LLC), HER-2를 표적화하는 ANT-043 (Antikor Biopharma), 글로보 H를 표적화하는 OBI-999 (Abzena; OBI Pharma), MET를 표적화하는 LY3343544 (Eli Lilly and Company), TAG-72를 표적화하는 Tagworks 항-TAG72 ADC (Tagworks Pharmaceuticals), CLDN6을 표적화하는 IMAB027-vcMMAE (Ganymed; Astellas Pharma Inc.), LGR5를 표적화하는 LGR5-ADC (Genentech, Inc.), IL-7R을 표적화하는 Philochem B12-MMAE ADC (Instituto de Medicina Molecular Joao Lobo Antunes; Philochem AG), CD19를 표적화하는 TE-1522 (Immunwork), STn을 표적화하는 SGN-STNV (Seagen (Seattle Genetics) Inc.), EGFR을 표적화하는 HTI-1511 (Abzena; Halozyme Therapeutics), OT-MUC1을 표적화하는 Peptron PAb001-ADC (종양-속박-MUC1) (Peptron; Qilu Pharmaceutical co. Ltd.), CLDN18.2를 표적화하는 LM-102 (LaNova Medicines Limited), 메소텔린 (MSLN)을 표적화하는 Anwita Biosciences MSLN-MMAE (Anwita biosciences), CD228을 표적화하는 SGN-CD228A (Seagen (Seattle Genetics) Inc.), HER-2를 표적화하는 NBT828 (NewBio Therapeutics; Genor Biopharma Co., Ltd.), AMHR2를 표적화하는 Gamamabs GM103 (GamaMabs Pharma; Exelixis), HER-2를 표적화하는 LCB14-0302 (Lego Chem Biosciences), 탄산 무수화효소 IX (CAIX)를 표적화하는 BAY79-4620 (Bayer; MorphoSys), CD79b를 표적화하는 NBT508 (NewBio Therapeutics), 미개시물을 표적화하는 PAT-DX3-MMAE (Patrys; Yale University), CD37을 표적화하는 AGS67E (Astellas Pharma Inc.; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), TIM-1을 표적화하는 CDX-014 (Celldex Therapeutics), CD33; CD7을 표적화하는 BVX001 (Bivictrix therapeutics), 인테그린 베타-6을 표적화하는 SGN-B6A (Seagen (Seattle Genetics) Inc.), EGFR을 표적화하는 MRG003 (Lepu biotech; Shanghai Miracogen Inc. (Shanghai Meiya Biotechnology Co., Ltd)), 및 DLK-1을 표적화하는 PYX-202 (Pyxis Oncology; Lego Chem Biosciences).
구현예 34. 구현예 33에 있어서, MMAE가 발린 및 시트룰린을 포함하는 링커를 통해서 제1 항체에 접합되는, 방법.
구현예 35. 구현예 34에 있어서, 링커-MMAE가 vcMMAE인, 방법.
구현예 36. 구현예 33에 있어서, MMAE가 류신, 알라닌, 및 글루탐산을 포함하는 링커를 통해서 제1 항체에 접합되는, 방법.
구현예 37. 구현예 36에 있어서, 링커-MMAE가 dLAE-MMAE인, 방법.
구현예 38. 구현예 1 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 튜불린 교란제가 MMAF인, 방법.
구현예 38-1. 구현예 38에 있어서, 항체-약물 접합체가 MMAF를 포함하고 다음으로부터 선택되는, 방법: CD70을 표적화하는 CD70-ADC (Kochi University; Osaka University), SAIL을 표적화하는 IGN786 (AstraZeneca; Igenica Biotherapeutics), 5T4를 표적화하는 PF-06263507 (Pfizer), GPC-1을 표적화하는 GPC1-ADC (Kochi University), CD30을 표적화하는 ADC-AVP10 (Avipep), CD103을 표적화하는 M290-MC-MMAF (The Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University), CD33; CD7를 표적화하는 BVX001 (Bivictrix therapeutics), c-MET를 표적화하는 Tanabe P3D12-vc-MMAF (Tanabe Research Laboratories), LILRB4를 표적화하는 LILRB4-표적화 ADC (The University of Texas Health Science Center, Houston), BCMA를 표적화하는 TSD101, ABL201로도 알려짐 (TSD Life Science; ABL Bio; Lego Chem Biosciences), EGFR을 표적화하는 데파툭시주맙 마포도틴, ABT-414로도 알려짐 (Abbvie; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), ENPP3을 표적화하는 AGS16F, AGS-16C3F; AGS-16M8F로도 알려짐 (Astellas Pharma Inc.; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), BCMA를 표적화하는 AVG-A11 BCMA ADC, AVG-A11-mcMMAF로도 알려짐 (Avantgen), BCMA를 표적화하는 벨란타맙 마포도틴, BLENREP; GSK2857916; J6M0-mcMMAF로도 알려짐 (GlaxoSmithKline; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), HER-3을 표적화하는 MP-HER3-ADC, HER3-ADC로도 알려짐 (MediaPharma), HER-2를 표적화하는 FS-1502, LCB14-0110으로도 알려짐 (Lego Chem Biosciences; Shanghai Fosun Pharmaceutical Development Co, Ltd.), EphA2를 표적화하는 MEDI-547, MI-CP177로도 알려짐 (AstraZeneca; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), CD70을 표적화하는 보르세투주맙 마포도틴, SGN-75로도 알려짐 (Seagen (Seattle Genetics) Inc.), CD19를 표적화하는 데닌투주맙 마포도틴, SGN-CD19A로도 알려짐 (Seagen (Seattle Genetics) Inc.), 및 c-MET를 표적화하는 HTI-1066, SHR-A1403으로도 알려짐 (Jiangsu HengRui Medicine Co., Ltd).
구현예 39. 구현예 1 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 튜불린 교란제가 튜불리신인, 방법.
구현예 40. 구현예 39에 있어서, 튜불리신이 튜불리신 D, 튜불리신 M, 튜부페닐알라닌, 및 튜부티로신으로부터 선택되는, 방법.
구현예 41. 구현예 1 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 항체-약물 접합체가 AbGn-107 (Ab1-18Hr1), AGS62P1 (ASP1235), ALT-P7 (HM2-MMAE), BA3011 (CAB-AXL-ADC), 벨란타맙 마포도틴, 브렌툭시맙 베도틴, 시름투주맙 베도틴 (VLS-101, UC-961ADC3), 코페투주맙 펠리도틴 (PF-06647020, PTK7-ADC, PF-7020, ABBV-647), CX-2029 (ABBV-2029), 디시타맙 베도틴 (RC48), 에나포타맙 베도틴 (HuMax-AXL-ADC, AXL-107-MMAE), 엔포르투맙 베도틴 (EV), FS-1502 (LCB14-0110), 젬투주맙 오조가미신, HTI-1066 (SHR-A1403), 이노투주맙 오조가미신, PF-06804103 (NG-HER2 ADC), 폴라투주맙 베도틴, 사시투주맙 고비테칸, SGN-B6A, SGN-CD228A, SGN-STNV, STI-6129 (CD38 ADC, LNDS1001, CD38-077 ADC), 텔리소투주맙 베도틴 (ABBV-399), 티소투맙 베도틴 (Humax-TF-ADC, tf-011-mmae, TV), 트라스투주맙 데룩스테칸, 트라스투주맙 엠탄신, 및 보르세투주맙 마포도틴으로부터 선택되는, 방법.
구현예 42. 구현예 1 내지 41, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 서열번호:61-66의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함하는 항-클라우딘-18.2 항체인, 방법.
구현예 43. 구현예 42에 있어서, 항-클라우딘-18.2 항체가 서열번호:59의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:60의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
구현예 44. 구현예 43에 있어서, 항-클라우딘-18.2 항체가 졸베툭시맙 (175D10)인, 방법.
구현예 45. 구현예 1 내지 41, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 서열번호: 69-74의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함하는 항-클라우딘-18.2 항체인, 방법.
구현예 46. 구현예 45에 있어서, 항-클라우딘-18.2 항체가 서열번호:67의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:68의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
구현예 47. 구현예 1 내지 41, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 서열번호:77-82의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함하는 항-PD-L1 항체인, 방법.
구현예 48. 구현예 47에 있어서, 항-PD-L1 항체가 서열번호:75의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:76의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
구현예 49. 구현예 1 내지 41, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 서열번호:85-90의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함하는 항-ALP 항체인, 방법.
구현예 50. 구현예 49에 있어서, 항-ALP 항체가 서열번호:83의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:84의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
구현예 51. 구현예 1 내지 41, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 서열번호:93-98의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함하는 항-B7H4 항체를 포함하는, 방법.
구현예 52. 구현예 51에 있어서, 항-B7H4 항체가 서열번호:91의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:92의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
구현예 53. 구현예 1 내지 41, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 서열번호:99의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호:100의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-HER2 항체인, 방법.
구현예 54. 구현예 53에 있어서, 항체-약물 접합체가 디시타맙 베도틴인, 방법.
구현예 55. 구현예 1 내지 41, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 서열번호:101의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호:102의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-NaPi2B 항체인, 방법.
구현예 56. 구현예 55에 있어서, 항체-약물 접합체가 리파스투주맙 베도틴인, 방법.
구현예 57. 구현예 1 내지 41, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 서열번호:105-110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함하는 항-넥틴-4 항체인, 방법.
구현예 58. 구현예 57에 있어서, 항-넥틴-4 항체가 서열번호:103의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:104의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는 항체인, 방법.
구현예 59. 구현예 58에 있어서, 항체-약물 접합체가 엔포르투맙 베도틴인, 방법.
구현예 60. 구현예 1 내지 41, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 서열번호:113-118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함하는 항-AVB6 항체인, 방법.
구현예 61. 구현예 60에 있어서, 항-AVB6 항체가 서열번호:111의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:112의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
구현예 62. 구현예 1 내지 41, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 서열번호:121-126의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함하는 항-AVB6 항체인, 방법.
구현예 63. 구현예 62에 있어서, 항-AVB6 항체가 서열번호:119의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:120의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
구현예 64. 구현예 1 내지 41, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 서열번호:129-134의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함하는 항-CD228 항체인, 방법.
구현예 65. 구현예 64에 있어서, 항-CD228 항체가 서열번호:127의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:128의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
구현예 66. 구현예 1 내지 41, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 서열번호:137-142의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함하는 항-LIV-1 항체인, 방법.
구현예 67. 구현예 66에 있어서, 항-LIV-1 항체가 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:136의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
구현예 68. 구현예 1 내지 41, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체가 서열번호:145-150의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함하는 항-조직 인자 항체인, 방법.
구현예 69. 구현예 68에 있어서, 항-조직 인자 항체가 서열번호:143의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:144의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
구현예 70. 구현예 69에 있어서, 항체-약물 접합체가 티소투맙 베도틴인, 방법.
구현예 71. 구현예 1 내지 70, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체가 항-뮬러관 호르몬 수용체 II (AMHR2), B7, B7H1, B7H2, B7H3, B7H4, BAFF-R, BCMA (B-세포 성숙 항원), Bst1/CD157, C5 보체, CC 케모카인 수용체 4 (CCR4), CD123, CD137, CD19, CD20, CD25 (IL2RA), CD276, CD278, CD3, CD32, CD33, CD37, CD38, CD4 및 HIV-1 gp120-결합 부위, CD40, CD70, CD70 (TNF 수용체 리간드 패밀리의 구성원), CD80, CD86, 클라우딘 18.2, c-MET, CSF1R, CTLA-4, EGFR, EGFR MET 원종양유전자, EPHA3, ERBB2, ERBB3, FGFR2b, FLT3, GITR, 글루코코르티코이드-유발 TNF 수용체 (GITR), HER2, HER3, HLA, ICOS, IDO1, IFNAR1, IFNAR2, IGF-1R, IL-3R알파 (CD123), IL-5R, IL-5R알파, LAG-3, MET 원종양유전자, OX40 (CD134), PD-1, PD-L1, PD-L2, PVRIG, EBOV 당단백질 (GP)의 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) 과하게 글리코실화된 뮤신-유사 도메인, 레수스 (Rh) D, 시알산 면역글로불린-유사 렉틴 8 (Siglec-8), 신호전달 림프구 활성화 분자 (SLAMF7/CS1), T-세포 수용체 세포독성 T-림프구-연관된 항원 4 (CTLA4), TIGIT, TIM3 (HAVCR2), Muc1의 종양 특이적 글리코에피토프 (TA-Muc1), VSIR (VISTA), 및 VTCN1로부터 선택된 면역 세포 인게이저를 결합시키는, 방법.
구현예 72. 구현예 1 내지 71, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체가 TIGIT를 결합시키는, 방법.
구현예 73. 구현예 72에 있어서, 제2 항체가 (a) 서열번호: 7-9로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1; (b) 서열번호: 10-13으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2; (c) 서열번호: 14-16으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3; (d) 서열번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1; (e) 서열번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 및 (f) 서열번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는, 방법.
구현예 74. 구현예 72에 있어서, 제2 항체가 다음의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 그리고 경쇄 CDR1, CDR, 및 CDR3을 포함하는, 방법: (a) 서열번호: 7, 10, 14, 17, 18, 및 19, 각각; 또는 (b) 서열번호: 8, 11, 14, 17, 18, 및 19, 각각; 또는 (c) 서열번호: 9, 12, 15, 17, 18, 및 19, 각각; 또는 (d) 서열번호: 8, 13, 16, 17, 18, 및 19, 각각; 또는 (e) 서열번호: 8, 12, 16, 17, 18, 및 19, 각각.
구현예 75. 구현예 72에 있어서, 제2 항체가 서열번호: 1-5로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
구현예 76. 구현예 72에 있어서, 제2 항체가 서열번호: 20-24로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 방법.
구현예 77. 구현예 1 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체가 CD40을 결합시키는, 방법.
구현예 78. 구현예 77에 있어서, 제2 항체가 다음의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 그리고 경쇄 CDR1, CDR, 및 CDR3을 포함하는, 방법: (a) 서열번호: 30, 31, 32, 33, 34, 및 35, 각각; 또는 (b) 서열번호: 30, 36, 32, 33, 34, 및 35, 각각.
구현예 79. 구현예 77에 있어서, 제2 항체가 서열번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
구현예 80. 구현예 77에 있어서, 제2 항체가 서열번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 방법.
구현예 81. 구현예 1 내지 71, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체가 CD70을 결합시키는, 방법.
구현예 82. 구현예 81에 있어서, 제2 항체가 각각 서열번호: 53-58의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 그리고 경쇄 CDR1, CDR, 및 CDR3을 포함하는, 방법.
구현예 83. 구현예 81에 있어서, 제2 항체가 서열번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
구현예 84. 구현예 1 내지 71, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체가 BCMA를 결합시키는, 방법.
구현예 85. 구현예 84에 있어서, 제2 항체가 각각 서열번호: 47-52의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 그리고 경쇄 CDR1, CDR, 및 CDR3을 포함하는, 방법.
구현예 86. 구현예 84에 있어서, 제2 항체가 서열번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
구현예 87. 구현예 1 내지 86, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체가 IgG1 또는 IgG3 항체인, 방법.
구현예 88. 구현예 1 내지 87, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체가 항체의 조성물에서 포함되고, 조성물에서 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비푸코실화되는, 방법.
구현예 89. 구현예 88에 있어서, 조성물에서 각 항체가 제2 항체와 동일한 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
구현예 90. 구현예 1 내지 89, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체의 Fc가 동일한 아이소타입의 상응하는 야생형 Fc와 비교해서 하나 이상의 활성화 FcγR에 향상된 결합을 갖고, 활성화 FcγR이 FcγRIIIa, FcγRIIa, 및/또는 FcγRI 중 하나 이상을 포함하는, 방법.
구현예 91. 구현예 90에 있어서, 제2 항체의 Fc가 FcγRIIIa에 향상된 결합을 갖는, 방법.
구현예 92. 구현예 1 내지 91, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체의 Fc가 동일한 아이소타입의 상응하는 야생형 Fc와 비교해서 하나 이상의 억제성 FcγR에 감소된 결합을 갖는, 방법.
구현예 93. 구현예 92에 있어서, 제2 항체의 Fc가 FcγRIIb에 감소된 결합을 갖는, 방법.
구현예 94. 구현예 1 내지 93, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체의 Fc가 FcγRIIIa에 향상된 결합 및 FcγRIIb에 감소된 결합을 갖는, 방법.
구현예 95. 구현예 1 내지 94, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체가 단클론성 항체인, 방법.
구현예 96. 구현예 1 내지 95, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체가 인간화된 항체 또는 인간 항체인, 방법.
구현예 97. 구현예 1 내지 96, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 암이 방광암, 유방암, 자궁암, 자궁경부암, 난소암, 전립선암, 고환암, 식도암, 위장암, 위암, 췌장암, 결장직장암, 결장암, 신장암, 투명 세포 신장 암종, 두경부암, 폐암, 폐 선암종, 위암, 생식세포암, 골암, 간암, 갑상선암, 피부암, 흑색종, 중추 신경계의 신생물, 중피종, 림프종, 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 호지킨 림프종, 골수종, 또는 육종인, 방법.
구현예 98. 구현예 1 내지 97, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 암이 림프종, 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 또는 호지킨 림프종인, 방법.
구현예 99. 구현예 1 내지 98, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 항체-약물 접합체 및 제2 항체가 동시에 투여되는, 방법.
구현예 100. 구현예 99, 33-1, 및 38-1에 있어서, 항체-약물 접합체 및 제2 항체가 단일 약학적 조성물로 투여되는, 방법.
구현예 101. 구현예 1 내지 98, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 항체-약물 접합체 및 제2 항체가 순차적으로 투여되는, 방법.
구현예 102. 구현예 101에 있어서, 항체-약물 접합체의 적어도 제1 용량이 제2 항체의 제1 용량에 앞서 투여되거나; 제2 항체의 적어도 제1 용량이 항체-약물 접합체의 제1 용량에 앞서 투여되는, 방법.
구현예 103. 구현예 1 내지 102, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체가 T 조절성 세포 (Treg)를 고갈시키는, 방법.
구현예 104. 구현예 1 내지 103, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 항체-약물 접합체가 항체-약물 접합체에 의해 결합된 항원을 발현시키는 세포에 대해 면역 기억을 유도하는, 방법.
구현예 105. 구현예 104에 있어서, 면역 기억의 유도가 기억 T 세포의 유도를 포함하는, 방법.
구현예 106. 구현예 1 내지 105, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체가 항원 제시 세포 (APC)를 활성화시키는, 방법.
구현예 107. 구현예 1 내지 106, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체가 CD8 T 세포 반응들을 향상시키는, 방법.
구현예 108. 구현예 1 내지 107, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체가 공-자극성 수용체를 상향조절하는, 방법.
구현예 109. 구현예 1 내지 108, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, ADC 및 제2 항체의 투여가 면역 활성화 사이토카인의 방출을 촉진시키는, 방법.
구현예 110. 구현예 109에 있어서, 면역 활성화 사이토카인이 CXCL10 또는 IFNγ인, 방법.
구현예 111. 구현예 1 내지 110, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, ADC 및 제2 항체가 상승적으로 작용하는, 방법.
구현예 112. 구현예 1 내지 111, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 조합으로 ADC 및 제2 항체의 투여가 어느 한쪽이 단일요법으로서 투여되는 때 ADC 또는 제2 항체의 것과 비교가능한 독성 프로파일을 갖는, 방법.
구현예 113. 구현예 1 내지 112, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 조합으로 투약된 때 ADC 및/또는 제2 항체의 유효 용량이 단일요법으로서 투여된 때보다 적은, 방법.
구현예 114. 구현예 1 내지 113, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 암이 높은 종양 돌연변이 부담을 갖는, 방법.
구현예 115. 구현예 1 내지 114, 33-1, 및 38-1 중 어느 하나에 있어서, 암이 미소부수체 불안정성을 갖는, 방법.
도면의 간단한 설명
도 1은 비-지시된 화학치료제가 T 세포 반응들을 손상시킴을 도시한다.
도 2는 CD30+ CD8 T 세포의 브렌툭시맙 베도틴 (BV) 치료를 도시한다. T 세포에 전달을 지시한 베도틴 ADC는 증식을 억제시키지 않는다.
도 3a 내지 e는 소포체 (ER) 스트레스 유도가 상이한 페이로드를 가진 ADC와 비교해서 아우리스타틴 항체-약물 접합체 (ADC), 예컨대 베도틴-기반 ADC에 대하여 우수함을 도시한다. 도 3a는 다양한 임상적으로 승인된 ADC 페이로드의 표를 도시한다. 도 3b는 ER 스트레스 신호전달 반응의 그래픽을 도시한다. 도 3c는 36 또는 48 시간 동안 IC50 농도에서의 파클리탁셀 또는 가변하는 페이로드를 가진 ADC로 치료된 MIA-PaCa-2 세포의 웨스턴 블랏 분석을 도시한다. 도 3d 내지 e는 용량 범위 (도 3d) 동안 또는 IC50 용량 (세포독성) (도 3e)에서 상이한 페이로드를 가진 ADC로 치료된 CHOP-구동 루시퍼라제 리포터 (Signosis, Inc.)를 발현시키는 MIA-PaCa-2 세포를 도시한다. CHOP 유도는 미치료된 세포와 비교하여 배수 유도에 의해 발현된다.
도 4a 내지 b는 임상적 ADC 페이로드의 면역원성 세포사 (ICD) 잠재력을 도시한다. 상청액은 72 시간 동안 상이한 페이로드를 가진 1 μg/mL ADC로 치료된 MIA-PaCa-2 췌장 종양 세포로부터 수집되었다. 도 4a는 Cell Titer Glo에 의해 결정된 경우에 방출된 TP를 도시한다. 도 4b는 ELISA에 의해 결정된 경우에 HMGB1 분비를 도시한다.
도 5a 내지 c는 ADC 페이로드의 면역 활성화 평가를 도시한다. 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 내에서 골수성 세포에 관한 MHC-클래스 II (HLA-DR)의 상향조절은 상이한 페이로드 (IC50 농도에서 24 시간)를 가진 ADC로 투약된 L540cy 세포와 PBMC의 48-시간 공-인큐베이션 이후 유세포 분석에 의해 평가되었다. 24-시간 상청액은 사이토카인 수준에 대하여 Luminex 멀티플렉스 검정에 의해 평가되었다. 도 5a는 ADC에 의한 면역 활성화를 도시한다. 도 5b는 ADC 노출에 응하여 단핵구에 관한 MHCII 발현을 도시한다. 도 5c는 면역 세포 활성의 척도로서 ADC 노출에 응하여 선천적 사이토카인 CXCL-10/IP10 발현을 도시한다.
도 6a 내지 e는 트라스투주맙 백본에 관한 페이로드 평가를 도시한다. 도 6a는 평가된 트라스투주맙 ADC의 표를 도시한다. 도 6b는 ER 스트레스 신호전달 반응의 그래픽을 도시한다. 도 6c는 72 시간 동안 ADC 또는 약물로 치료된 BT474 세포의 웨스턴 블랏을 도시한다. 도 6d 내지 e는 베도틴 ADC가 여러 ICD 특질의 강한 활성화를 입증함을 도시한다. 1 μg/mL로 투약된 트라스투주맙 ADC 또는 유리 MMAE (100 nM)는 SKBR3 HER2 발현 유방암 세포에서 상이한 ICD 반응들을 입증한다. 48 또는 72 시간의 치료 후, 배지는 수집되었고 ATP 방출 (도 6d) 및 HMGB1 수준 (도 6e)을 측정하는데 사용되었다.
도 7a는 면역원성 세포사 (ICD) 경로를 추가로 실례한다.
도 7b는 도 7b 내지 e에서 사용된 특정 ADC의 페이로드에 관하여 정보를 제공한다.
도 7c 내지 f는 메이탄신-ADC (도 7c), 캄프토테신-ADC (도 7d), 안트라사이클린-ADC (도 7e), 및 칼리케아미신-ADC (도 7f)와 비교하여 MMAE-ADC를 이용한 치료에 응하여 생성된 JNK 신호전달 활성화를 도시한다.
도 8a 내지 d는 메이탄신-ADC (도 8a), 캄프토테신-ADC (도 8b), 안트라사이클린-ADC (도 8c), 및 오조가마이신-ADC, 테세린-ADC, 및 AT-ADC를 포함한 다른 유형들의 ADC (도 8d)와 비교하여 MMAE-ADC를 이용한 치료에 응하여 생성된 CHOP 유도를 도시한다.
도 9a 내지 d는 메이탄신-ADC (도 9a), 캄프토테신-ADC (도 9b), 안트라사이클린-ADC (도 9c), 및 오조가마이신-ADC, 테세린-ADC, 및 AT-ADC를 포함한 다른 유형들의 ADC (도 9d)와 비교하여 MMAE-ADC를 이용한 치료에 응하여 생성된 ATP 및 HMGB1의 방출을 도시한다.
도 10a 내지 d는 메이탄신-ADC (도 10a), 캄프토테신-ADC (도 10b), 안트라사이클린-ADC (도 10c), 및 오조가마이신-ADC 및 테세린-ADC를 포함한 다른 유형들의 ADC (도 10d)와 비교하여 MMAE-ADC를 이용한 치료에 응하여 생성된 MHCII 발현 및 CXCL-10/IP10 방출을 도시한다.
도 10e는 도 7b 내지 e, 도 8a 내지 d, 도 9a 내지 d, 및 도 10a 내지 d에서 결과를 요약한다.
도 11a 내지 d는 중국 햄스터 난소 (CHO 세포)에서 FcγRIIa, FcγRIIb, 및 FcγRIIIa에 항체 결합을 도시한다. 도 11a는 평가된 항체를 도시한다. 도 11b는 FcγRIIa에 결합을 도시한다. 도 11c는 FcγRIIIa에 결합을 도시한다. 도 11d는 FcγRIIb에 결합을 도시한다.
도 12a 내지 d는 CD40 효능제 및 화학요법 제제로 치료된 MIA-PaCa 2 췌장암 세포에서 CXCL10 (도 12a), IFNγ (도 12b), IL10 (도 12c), 및 대식세포 유래된 사이토카인 (MDC; CCL22) (도 12d)의 수준을 도시한다.
도 13a 내지 d는 CD40 효능제 및 화학요법으로 치료된 흑색종 세포주에서 CXCL10 (도 13a 내지 b) 및 IL10 (도 13c 내지 d)의 수준을 도시한다.
도 14a 내지 c는 흑색종, 폐, 유방, 및 췌장으로부터 종양 세포에서 CXCL14 (도 14a), IL14 (도 14b), 및 IFNγ (도 14c)의 수준을 도시한다.
도 15는 종양 표적 항원이 Thy1.1인 인간 CD40 이식유전자 모델에 의해 평가된 경우에 ADC 화학요법 조합과 조합으로 SEA-CD40 베도틴에 대하여 생체내 데이터를 도시한다.
도 16은 다양한 효과기 기능 백본을 가진 TIGIT 표적화된 항체와 조합으로 종양-연관된 항원에 대한 ADC-MMAE로 치료된 종양 세포주에서 CXCL10 수준을 도시한다.
도 17은 다양한 효과기 기능 백본을 가진 TIGIT 표적화된 항체와 조합으로 종양-연관된 항원에 대한 ADC-MMAE로 치료된 종양 세포주에서 IFNγ 수준을 도시한다.
도 18a 내지 c는 비푸코실화된 TIGIT 항체 및 vc-MMAE ADC ("베도틴 ADC")의 향상된 활성을 입증하는 시험관내 및 생체내 데이터를 도시한다. 도 18a는 향상된 (비푸코실화된) IgG1 Fc 백본 (SEA-TGT)을 갖는 비푸코실화된 TIGIT 항체가 효과기 무효 백본 (LALA) 또는 표준 야생형 IgG1 Fc 백본을 가진 상응하는 TIGIT 항체 어느 한쪽과 비교해서 이들 항체가 표적화 vc-MMAE ADC에 의해 사멸된 종양 세포와 공-배양된 때 사이토카인 IP10 유도를 통해 면역 활성화를 구동하는 데 상당히 더욱 양호했음을 도시한다. SEA-TGT와 조합은 상승작용적 면역 세포 활성화를 나타냈다. 도 18b 및 도 18c는 어느 한쪽 CT26 동계 종양 세포 (도 18b) 또는 렌카 동계 종양 세포 (도 18c)로 이식된 마우스가 다음으로 치료된 때 항-종양 반응을 도시한다: 1) 차선 용량의 ADC (도 18b에서 Thy1.1 vc-MMAE ADC 및 도 18c에서 EphA2 vc-MMAE ADC); 2) 일련의 차선 용량의 mIgG2a SEA-TGT (비푸코실화된 인간 IgG1 백본에 상응하는 비푸코실화된 마우스 IgG2a로서 재형식화된 SEA-TGT 항체); 또는 3) 양쪽 제제의 조합. 이들 도로부터 볼 수 있듯이, 이들 2개 제제의 공-투여는 이들 별개 종양 모델에서 높은 백분율의 치유적 반응들을 생성하는 것을 포함하는, 치료 효능을 상당히 증가시켰다.
도 19는 비푸코실화된 TIGIT 항체 (SEA-TGT) 및 SGN-B7H4 베도틴 ADC (B7H4V)의 향상된 활성을 입증하는 생체내 데이터를 도시한다. 도 19는 렌카 동계 종양 세포로 이식된 마우스가 준치료적 용량의 SEA-TGT 및 준치료적 용량의 B7H4V, 또는 준치료적 용량의 SEA-TGT 및 치료적 용량의 옥살리플라틴으로 치료된 때 항-종양 반응을 도시한다. 도 19에서 도시된 대로, SEA-TGT 및 B7H4V의 공-투여는, 높은 백분율의 치유적 반응들을 생성하는 것을 포함하는, 각각의 준치료적 용량에서 조차, 치료 효능을 상당히 증가시켰다.
도 20a 내지 b는 MMAE를 함유하는 항-CD30 ADC인 SEA-CD70, 비푸코실화된 항-CD70 항체, 및 SGN-35의 조합형 효과를 도시한다. 도 20a는 비-호지킨 림프종 (NHL) 이종이식 모델의 생체내 종양 성장 평가를 도시한다. 도 20b는 500 mm3 종양 크기 종점에서 NHL 이종이식 모델의 카플란-마이어 생존 평가를 도시한다. Tx (치료) 및 화살표는 치료 시작 일 (이식후 19 일)을 표시한다.
도 21a 내지 b는 MMAE를 함유하는 항-CD48 ADC인 SEA-BCMA, 비푸코실화된 항-BCMA 항체, 및 SGN-CD48A의 상승작용적 효과를 도시한다. 도 21a는 이종이식 모델의 생체내 생존 평가를 도시하고, 도 21b는 이종이식 모델의 생체내 루시퍼라제 평가를 도시한다.
도 22a 내지 c는 베도틴 ADC가 생체내 면역 세포 모집 및 활성화를 유도함을 도시한다. 도 22a: 8 일 동안 vc-MMAE ADC 또는 비-결합 vc-MMAE 아이소타입 ADC로 치료된, 그리고 유세포 분석 또는 사이토카인 프로파일링이 적용된 동물들로부터 단리된 종양 이종이식편. 도 22b: CD45 양성 면역 세포는 CD11c에 대하여 염색되었고 활성화는 세포 표면 상에서 MHC-클래스 II의 발현에 대하여 염색함으로써 관찰되었다. 도 22c: 종양내 사이토카인은 Luminex에 의해 측정되었다.
도 23a 내지 b는 vc-MMAE ADC에 의한 T 세포 기억의 유도를 도시한다. 렌카 동계 모델에서, 마우스는 vc-MMAE ADC 치료로 치유되었다 (도 23a). 치료로 치유된 마우스는 렌카 종양 세포로 재공격되었고, 그들 마우스는 후속적으로 이식된 종양 세포를 거부하였다 (도 23b).
도 24는 MMAE 또는 vc-MMAE ADC-치료된 세포에 의해 부여된 보호적 항-종양 면역성을 도시한다. A20 암 세포는 브렌툭시맙 베도틴 (BV) 또는 MMAE로 치료되었고, 사멸하는 그리고 사멸된 세포는 마우스에 투여되었다. 도 24는 면역화된 마우스가 후속적으로 이식된 A20 세포를 거부하는 더 강한 면역 반응들을 표시하였음을 도시한다.
도 25는 비푸코실화된 항-CD40 항체, SEA-CD40에 의한 수용체 클러스터링 및 효능작용의 예시적 모델; 및 비푸코실화된 항-TIGIT 항체, SEA-TGT에 의한 수용체 효능제 및 시냅스 형성의 예시적 모델을 도시한다. 도시된 대로, SEA-CD40 항체는, 수용체 클러스터링을 촉진시키는, 자연 살해 (NK) 세포 상에서 또는 단핵구 상에서 발현된 FcγRIIIa에 결합하는 항체의 Fc 부문을 가진 항원 제시 세포 (APC) 상에서 발현된 CD-40을 결합시킬 수 있다. SEA-TGT 항체는, 대조적으로, T-세포 상에서 발현된 TIGIT에 결합하고 항체의 Fc 영역은 APC 상에서 발현된 FcγRIIIa에 결합한다.
상세한 설명
I. 도입
세포자멸사를 통한 세포사는 침묵의 관용원성 과정이다. 하지만, 특이적 항종양 제제 예컨대 안트라사이클린, 옥살리플라틴, 또는 방사선을 포함하는 특정 세포독성제는 면역원성 세포사 (ICD)라고 하는 특징적 형태의 세포사를 유도한다. ICD는 세포자멸적 암성 세포에 대해 PBMC 및 T-세포의 면역 반응들을 생성하는 한 모드의 조절된 세포사/이다. 본원에 입증된 대로, 특정 튜불린 교란제 예컨대 아우리스타틴 (예를 들면, MMAE 및 MMAF)을 사용한 치료는 ER 내에서 정상적으로 발견된 단백질을 세포 표면 상에서 노출시킨다. 증가된 식세포성 흡수 및 T 세포에 종양 항원의 제시는 후속적으로 적응적 면역계를 프라이밍한다. 본원에 추가로 나타난 대로, 아우리스타틴 예컨대 MMAE 및 MMAF는 ICD 유도를 뚜렷하게 구동할 수 있고, 이로써 면역계가 종양에 대해 세포독성 활성을 인식하고 탑재하게 할 수 있다. 본질적으로, ICD로부터 사멸하는 세포는 임의의 잔여 질환에 대해, 또는 재발/재현의 이벤트에서 종양-특이적 면역 반응들을 자극하는 백신의 역할을 한다.
본원에 기재된 실험적 결과에 의해 입증된 대로, 아우리스타틴 예컨대 MMAE 및 MMAF에 응하여 ICD를 겪는 종양 세포는 칼레티쿨린의 세포 표면으로의 전좌, 세포자멸사 동안 ATP의 분비, 및 핵 단백질 HMGB1의 방출을 포함하는, 그들의 면역원성 및 세포자멸사를 강화하는 특징들의 독특한 세트를 표시한다. ICD는 종양 항원의 T 세포 인식을 촉진시키는 전-염증성 환경을 확립시키는 독특한 능력을 갖는 특이적 MAMPS 및 위험-연관된 분자성 패턴 (DAMPS)의 방출을 유도한다. 본원에 나타난 대로, 다른 화학치료제가 세포자멸사를 유도할 수 있는 한편, 모두가 아우리스타틴 예컨대 MMAE 및 MMAF만큼 강력한 ICD 반응을 유도할 수 없다.
ICD의 핵심 단계들은 선천적 면역계를 활성화시켜 종양 세포를 인식하고 이들을 소거하는 일련의 신호를 생성한다. 첫째, 약물은 ER 스트레스를 유도하고. 이것은 차례로 칼레티쿨린, 열 충격 단백질 (HSP70 및 HSP90)을 포함하는 DAMP의 표면 노출, ATP의 분비, 및 고 이동성 그룹 단백질 B1 (HMGB1)의 방출을 초래한다. ICD의 과정 동안 이들 DAMP의 노출 및 면역 조절성 제제의 분비는 수지상 세포 및 다른 항원 제시 세포의 활성화를 포함하는 면역 반응들을 개시하기 위해 일제히 작용하여, ER-스트레스된 세포의 식세포작용 및 파괴로 이어질 수 있다.
상기 언급된 대로, ICD의 개시는 ER 스트레스에 연결된다. 언폴딩된 폴리펩티드에 대한 ER의 용량 오버로딩 또는 단백질-폴딩 환경의 교란은 ER 스트레스 반응들을 개시시킨다. ER은 동적 조립 및 수축을 통해서 구조 및 탄력성을 제공하는 미소관 네트워크에 밀접하게 연결된다. 미소관 네트워크의 교란은 ER 네트워크에 영향을 주고 심각한 ER 스트레스를 초래하고, 이는 ICD 유도에 요구된 특징들의 발현을 촉발시키고, 언폴딩된 단백질 반응 (UPR)으로서 지칭된 스트레스 반응을 초래한다. UPR 반응은 증가된 pIRE1, JNK의 다운스트림 인산화, 및 ATF4 절단을 포함하는 여러 아암을 갖는다.
본 발명은 특정 튜불린 교란제 예컨대 아우리스타틴 (예를 들면, MMAE 및 MMAF)이 다른 세포독성제와 비교하여 그리고, 특히, 항체-약물 접합체에서 사용되는 다른 페이로드와 비교해서 독특한 ICD 반응을 생성할 수 있다는 발견에 부분적으로 기초한다. 본 발명은 면역 반응을 향상시키는 제제와 ICD를 구동시키는 이러한 제제의 독특한 능력을 짝짓기하는 것이 항-종양 활성을 증폭시킬 수 있다는 발견에 추가로 기초한다. 이것은 이러한 면역 효능작용이 면역 신호전달에 연루된 특정 표적을 결합시키는 능력을 갖고 향상된 Fc 결합 특징 및 효과기 기능을 갖는 항체를 사용하여 달성된 경우인 것으로 특히 밝혀졌다. 원하는 Fc 결합 특징은 활성 예컨대 활성화 FcγR에 향상된 결합, 억제성 FcγR에 축소된 결합, 향상된 ADCC 활성, 및/또는 향상된 ADCP 활성을 포함하였다. 원하는 활성을 가진 이러한 특정 항체는 비푸코실화되었다.
이들 집합적 발견에 기초하여, 본 발명자들은 본원에 더욱 상세히 기재된 대로 향상된 Fc 활성을 또한 갖는 면역 세포 인게이저에 대해 항체와 조합으로 특정한 튜불린 교란제 예컨대 MMAE 및 MMAF를 사용하여 ICD를 유도하는 것이 상승적으로 개선된 항-종양 반응들을 초래함을 입증하였다. 표준 화학요법 제제보다 오히려 ADC의 사용은 전통적 화학요법으로 보여진 T 세포 반응들의 손상을 완화시키는 것으로 또한 나타났고, 그래서 이 특정한 조합 접근법에 추가 이점을 제공하였다.
따라서, 본원에 제공된 일부 구현예는 암을 가진 대상체에게 (1) 종양-연관된 항원을 결합시키는 제1 항체에 접합된 튜불린 교란제를 포함하는 항체-약물 접합체; 및 (2) 면역 세포 인게이저에 결합하는 항체를 투여하는 것을 포함하는 조합 요법이고, 여기서 제2 항체는 하나 이상의 활성화 FcγR에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 항체는 비푸코실화된다. 특정 구현예에서, 제2 항체는 향상된 ADCC 및/또는 ADCP 활성을 갖는다.
II. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 기술 및 과학 용어들은 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 예를 들면, Lackie, Dictionary of Cell and Molecular Biology, Elsevier (제4판. 2007); Sambrook 등, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Press (Cold Springs Harbor, NY 1989)를 참조한다. 본원에 기재된 것들과 유사하거나 동등한 임의의 방법, 장치 및 물질은 본 발명의 실시에서 사용될 수 있다.
본원에 사용된 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥이 달리 명확하게 지시하지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다. 그래서, 예를 들어, "항체"에 대한 언급은 2개 이상의 이러한 분자들의 조합 등을 임의로 포함한다.
본원에 사용된, 용어 "약"은 이 기술 분야에서 숙련가에게 쉽게 알려진 각각의 값에 대하여 일반적인 오차 범위를 지칭한다.
용어 "항체"는 온전한 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 여기서 항원-결합 단편은 항원-결합 영역 및, CH2에 자리잡은, 아스파라긴 (N) 297을 포함하는 중쇄 불변 영역의 적어도 한 부문을 포함한다. 전형적으로, "가변 영역"은 항체의 항원-결합 영역을 함유하고 결합의 특이성 및 친화성에 연루된다. Fundamental Immunology 제7판, Paul, ed., Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams & Wilkins (2013)를 참조한다. 경쇄는 어느 한쪽 카파 또는 람다로서 전형적으로 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론으로서 전형적으로 분류되고, 이는 차례로 면역글로불린 클래스, 각각 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE를 정의한다.
용어 "항체"는 또한 2가 또는 이중특이적 분자, 디아바디, 트리아바디, 및 테트라바디를 포함한다. 2가 및 이중특이적 분자는, 예를 들면, Kostelny 등 (1992) J. Immunol. 148:1547, Pack and Pluckthun (1992) Biochemistry 31:1579, Hollinger 등 (1993), PNAS. USA 90:6444, Gruber 등 (1994) J Immunol. 152:5368, Zhu 등 (1997) Protein Sci. 6:781, Hu 등 (1996) Cancer Res. 56:3055, Adams 등 (1993) Cancer Res. 53:4026, 및 McCartney, 등 (1995) Protein Eng. 8:301에 기재된다.
용어 "항체"는 항체 그 자체 (네이키드 항체) 또는 세포독성 또는 세포증식억제성 약물에 접합된 항체를 포함한다.
"단클론성 항체"는 실질적으로 동질 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭한다, 즉, 집단을 포함하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고 동일하다. 수식어 "단클론성"은 항체의 실질적으로 동질 집단으로부터 수득되는 경우 항체의 특징을 나타내고, 임의의 특정한 방법에 의해 항체의 생산을 요구하는 것으로서 해석되지 않아야 한다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되어야 하는 단클론성 항체는 Kohler 등 (1975) Nature 256:495에 의해 처음 기재된 하이브리도마 방법에 의해 만들어질 수 있거나, 재조합 DNA 방법 (예를 들어, 미국 특허 번호 4816567, 참조)에 의해 만들어질 수 있다. "단클론성 항체"는 Clackson 등 (1991) Nature, 352:624-628 및 Marks 등 (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597에 기재된 기법을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 또한 단리될 수 있거나, 예를 들어 다른 방법에 의해 만들어질 수 있다. 본원에 기재된 항체는 단클론성 항체이다.
단클론성 항체의 이의 표적 항원에의 특이적 결합은 적어도 106, 107, 108, 109, 또는 1010 M-1의 친화성을 의미한다. 특이적 결합은 크기가 검출가능하게 더 크고 적어도 하나의 관련없는 표적에 발생하는 비-특이적 결합과 구별할 수 있다. 특이적 결합은 특정한 작용기 또는 특정한 공간적 적합성 (예를 들면, 잠금 및 키 유형) 사이 결합의 형성의 결과일 수 있는 반면 비특이적 결합은 보통 반 데르 발스 힘의 결과이다.
기본적 항체 구조적 단위는 서브유닛의 사량체이다. 각 사량체는, 각 쌍이 1개의 "경"쇄 (약 25 kDa) 및 1개의 "중"쇄 (약 50-70 kDa)를 갖는, 폴리펩티드 쇄의 2개 동일 쌍을 포함한다. 각 쇄의 아미노-말단 부문은 항원 인식을 주로 담당하는 약 100 내지 110개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. 이 가변 영역은 절단가능한 신호 펩티드에 연결되어 초기에 발현된다. 신호 펩티드가 없는 가변 영역은 때때로 성숙한 가변 영역으로서 지칭된다. 그래서, 예를 들어, 경쇄 성숙한 가변 영역은 경쇄 신호 펩티드 없는 경쇄 가변 영역을 의미한다. 각 쇄의 카르복시-말단 부문은 효과기 기능을 주로 담당하는 불변 영역을 정의한다.
경쇄는 어느 한쪽 카파 또는 람다로서 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론으로서 분류되고, 항체의 아이소타입을 각각 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE로서 정의한다. 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 결합되고, 중쇄는 또한 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다. (일반적으로, Fundamental Immunology (Paul, W., ed., 제2판 Raven Press, N.Y., 1989, Ch. 7, 참조, 모든 목적을 위하여 이 전체가 참조로 편입됨).
각 경쇄/중쇄 쌍의 성숙한 가변 영역은 항체 결합 부위를 형성한다. 그래서, 온전한 항체는 2개의 결합 부위를 갖는다. 이작용적 또는 이중특이적 항체를 제외하고, 2개의 결합 부위는 동일하다. 쇄들은 모두, 상보성 결정 영역 또는 CDR이라고 하는, 3개의 초가변 영역에 의해 결합된 상대적으로 보존된 프레임워크 영역 (FR)의 동일한 일반 구조를 나타낸다. 각 쌍의 2개 쇄로부터 CDR은 프레임워크 영역에 의해 정렬되어, 특이적 에피토프에 결합을 가능하게 한다. N-말단부터 C-말단까지, 양쪽 경쇄 및 중쇄는 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 각 도메인에 아미노산의 할당은 Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987 및 1991), 또는 Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Chothia 등, Nature 342:878-883 (1989), 또는 카밧 및 초티아의 복합물, 또는 IMGT (ImMunoGeneTics 정보 시스템), AbM 또는 Contact의 정의나 CDR의 다른 종래 정의에 따른다. 카밧은 상이한 중쇄들 사이 또는 상이한 경쇄들 사이 상응하는 잔기들이 동일한 번호로 할당되는 널리 사용된 넘버링 규정 (카밧 넘버링)을 또한 제공한다. 문맥으로부터 달리 명백하지 않는 한, 카밧 넘버링은 가변 영역에서 아미노산의 위치를 지정하는데 사용된다. 문맥으로부터 달리 명백하지 않는 한 EU 넘버링은 불변 영역에서 지정된 위치에 사용된다.
"인간화된" 항체는 인간에서 덜 면역원성이면서 비-인간 항체의 반응성을 유지하는 항체이다. 이것은, 가령, 비-인간 CDR 영역을 유지하고 항체의 남은 부분들을 그들의 인간 대응부로 대체함으로서 달성될 수 있다. 예를 들면, Morrison 등, PNAS USA, 81:6851-6855 (1984); Morrison and Oi, Adv. Immunol., 44:65-92 (1988); Verhoeyen 등, Science, 239:1534-1536 (1988); Padlan, Molec. Immun., 28:489-498 (1991); Padlan, Molec. Immun., 31(3):169-217 (1994)를 참조한다.
본원에 사용된 용어 "키메라 항체"는 (a) 항원 결합 부위 (가변 영역, CDR, 또는 이의 부문)가 상이한 종의 불변 영역에 연결되도록 불변 영역, 또는 이의 한 부문이 대체되는 항체 분자를 지칭한다.
용어 "에피토프"는 항체가 결합하는 항원 상에서 한 부위를 지칭한다. 에피토프는 하나 이상의 단백질의 3차 폴딩에 의해 병치된 연속 아미노산 또는 비연속 아미노산으로부터 형성될 수 있다. 연속 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 변성 용매에 노출시 전형적으로 유지되는 반면 3차 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 변성 용매를 이용한 치료시 전형적으로 상실된다. 에피토프는 전형적으로 독특한 공간적 형태에서 적어도 3, 및 더욱 보통, 적어도 5 또는 8-10개의 아미노산을 포함한다. 에피토프의 공간적 형태를 결정하는 방법은, 예를 들어, x-선 결정학 및 2차원 핵 자기 공명을 포함한다. 예를 들면, Epitope Mapping Protocols, in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, Glenn E. Morris, Ed. (1996)를 참조한다.
동일한 또는 중첩 에피토프를 인식하는 항체는 표적 항원에 또 다른 항체의 결합과 경쟁하는 하나의 항체의 능력을 보여주는 단순 면역검정에서 식별될 수 있다. 항체의 에피토프는 접촉 잔기들을 식별하기 위해 이의 항원에 결합된 항체의 X-선 결정학에 의해 또한 정의될 수 있다. 대안적으로, 1개 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 항원에서 모든 아미노산 돌연변이가 다른 것의 결합을 감소시키거나 제거한다면 2개 항체는 동일한 에피토프를 갖는다. 1개 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 일부 아미노산 돌연변이가 다른 것의 결합을 감소시키거나 제거한다면 2개 항체는 중첩 에피토프를 갖는다.
항체들 사이 경쟁은 시험 중인 항체가 공통 항원에 참조 항체의 특이적 결합을 억제시키는 검정에 의해 결정된다 (예를 들면, Junghans 등, Cancer Res. 50:1495, 1990 참조). 과량의 시험 항체 (예를 들면, 적어도 2x, 5x, 10x, 20x 또는 100x)가 경쟁적 결합 검정에서 측정된 경우에 적어도 50% 그러나 바람직하게는 75%, 90% 또는 99%만큼 참조 항체의 결합을 억제시킨다면 시험 항체는 참조 항체와 경쟁한다. 경쟁 검정에 의해 식별된 항체 (경쟁 항체)는 참조 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체 그리고 입체 장애가 발생하도록 참조 항체에 의해 결합된 에피토프에 충분히 근접하는 인접한 에피토프에 결합하는 항체를 포함한다.
어구 "특이적으로 결합하다"는 비-표적 화합물에 결합하는 것보다 샘플에서 그 표적에 대한 더 큰 친화성, 결합력, 더욱 용이하게, 및/또는 더 긴 지속기간으로 표적에 결합하는 분자 (예를 들면, 항체 또는 항체 단편)를 지칭한다. 일부 구현예에서, 표적을 특이적으로 결합시키는 항체는 비-표적 화합물보다 적어도 2-배 더 큰 친화성, 예컨대, 예를 들어, 적어도 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배, 20-배, 25-배, 50-배, 또는 100-배 더 큰 친화성으로서 표적에 결합하는 항체이다. 예를 들어, TIGIT를 특이적으로 결합시키는 항체는 비-TIGIT 표적보다 적어도 2-배 더 큰 친화성으로서 TIGIT에 전형적으로 결합할 것이다. 예를 들어, 제1 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체 (또는 모이어티 또는 에피토프)가 제2 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합할 수 있거나 그렇지 않을 수 있음이 이 정의를 읽는 당업자에 의해 이해될 것이다. 이와 같이, "특이적 결합"은 배타적 결합을 (포함할 수 있어도) 반드시 필요로 하지 않는다.
용어 "결합 친화성"은 2개 분자, 예를 들면, 항체, 또는 이의 단편, 및 항원 사이 비-공유 상호작용의 강도의 척도로서 본원에 사용된다. 용어 "결합 친화성"은 1가 상호작용 (내재적 활성)을 설명하는데 사용된다.
2개 분자, 예를 들면, 항체, 또는 이의 단편, 및 항원 사이 결합 친화성은, 1가 상호작용을 통해서 해리 상수 (KD)의 결정에 의해 정량화될 수 있다. 차례로, KD는, 비제한 예로서, 표면 플라즈몬 공명 (SPR) 방법 (Biacore™)을 사용하여 복합체 형성 및 해리의 동역학의 측정에 의해 결정될 수 있다. 1가 복합체의 결합 및 해리에 상응하는 속도 상수는 각각 결합 속도 상수 k a (또는 k on ) 및 해리 속도 상수 k d (또는 k off )로서 지칭된다. KD는 방정식 KD = k d / k a 를 통해서 k a 및 k d 에 관련된다. 해리 상수의 값은 잘-알려진 방법에 의해 직접적으로 결정될 수 있고, 방법 예컨대, 예를 들어, Caceci 등 (1984, Byte 9: 340-362)에서 제시된 것들에 의해 복잡한 혼합물에 대하여 조차 컴퓨팅될 수 있다. 예를 들어, KD는 이중-필터 니트로셀룰로스 필터 결합 검정 예컨대 Wong & Lohman (1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5428-5432)에 의해 개시된 것을 사용하여 확립될 수 있다. 예를 들어, ELISA, 웨스턴 블랏, RIA, 및 유세포 분석 분석, 그리고 본원에 다른 곳에 예시된 다른 검정을 포함하는, 표적 항원에 대한 리간드 예컨대 항체의 결합 능력을 평가하기 위한 다른 표준 검정은 당업계에 알려진다. 항체의 결합 동역학 및 결합 친화성은 또한 당업계에서 알려진 또는 아래 실시예 섹션에서 기재된 대로 표준 검정, 예컨대 표면 플라즈몬 공명 (SPR)에 의해, 예를 들면 Biacore™ 시스템; 동역학 배제 검정 예컨대 KinExA®; 및 BioLayer 간섭법 사용 (예를 들면, ForteBio® Octet 플랫폼 사용)에 의해 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 결합 친화성은 BioLayer 간섭법 검정을 사용하여 결정된다. 예를 들면, Wilson 등, Biochemistry and Molecular Biology Education, 38:400-407 (2010); Dysinger 등, J. Immunol. Methods, 379:30-41 (2012); 및 Estep 등, Mabs, 2013, 5:270-278을 참조한다.
본원에 사용된 용어 "교차-반응하다"는 항체가 길러진 항원 이외의 항원에 결합하는 항체의 능력을 지칭한다. 일부 구현예에서, 교차-반응성은 항체가 길러진 항원 이외의 또 다른 종으로부터 항원에 결합하는 항체의 능력을 지칭한다. 비-제한 예로서, 인간 TIGIT 항원에 대해 길러지는 항-TIGIT 항체는 본원에 기재된 경우에 상이한 종 (예를 들면, 마우스 또는 원숭이)으로부터 TIGIT와 교차-반응성을 나타낼 수 있다.
"단리된" 항체는 이의 자연 환경의 구성요소들로부터 식별되고 분리되고/거나 회수된 항체 및/또는 재조합적으로 생산되는 항체를 지칭한다. "정제된 항체"는 이의 생산 또는 정제에서 발생하는 방해 단백질 및 기타 오염물질의 적어도 50% w/w 순수하지만 단클론성 항체가 과량의 약학적으로 허용가능한 담체(들) 또는 이의 사용을 용이하게 하기 위한 기타 비히클과 조합되는 가능성을 배제하지 않는 항체이다. 방해 단백질 및 기타 오염물질은, 예를 들어, 항체가 단리되거나 재조합적으로 생산되는 세포의 세포성 구성요소를 포함할 수 있다. 때대로 단클론성 항체는 생산 또는 정제로부터 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95 또는 99% w/w 순수한 방해 단백질 및 오염물질이다. 렛트, 키메라, 베니어 및 인간화된 항체를 포함하는, 본원에 기재된 항체는 단리된 및/또는 정제된 형태로 제공될 수 있다.
용어 "LAE"는 트리펩티드 링커 류신-알라닌-글루탐산을 지칭한다. 용어 "dLAE"는 트리펩티드 링커 D-류신-알라닌-글루탐산을 지칭하고, 여기서 트리펩티드 링커에서 류신은 D-상대배치이다.
"대상체", "환자", "개체" 및 유사 용어는 교환가능하게 사용되고, 표시된 경우를 제외하고, 포유동물 예컨대 인간 및 비-인간 영장류, 뿐만 아니라 토끼, 렛트, 마우스, 염소, 돼지 및 기타 포유류 종을 지칭한다. 본 용어는 대상체가 특정한 질환으로 진단된 것을 반드시 나타내지 않지만, 전형적으로 의료 감독 중인 개체를 지칭한다.
용어들 "요법", "치료", 및 "호전"은 증상들의 중증도에서 임의의 감소를 지칭한다. 암을 치료하는 경우에서, 치료는, 예를 들면, 종양 크기, 암 세포의 수, 성장 속도, 전이성 활성, 비-암 세포의 세포사, 등을 감소시키는 것을 지칭할 수 있다. 본원에 사용된 용어들 "치료하다" 및 "예방하다"는 절대 용어이도록 의도되지 않는다. 치료 및 예방은 발병에서의 임의의 지연, 증상의 호전, 환자 생존에서의 개선, 생존 시간 또는 속도에서의 증가, 등을 지칭할 수 있다. 치료 및 예방은, 증상이 본원에 기재된 치료 없이 환자에서 보다 덜 빈번하거나 중증이도록, 완전하거나 (감지할 수 있는 증상이 남지 않음) 부분적일 수 있다. 치료의 효과는 치료를 받지 않은 개체 또는 개체들의 풀과, 또는 치료에 앞서 또는 치료 동안 상이한 시간에 동일한 환자와 비교될 수 있다. 일부 양태에서, 질환의 중증도는, 예를 들면, 투여전 개체와 또는 치료를 받지 않은 대조군 개체와 비교해서 적어도 10%만큼 감소된다. 일부 양태에서, 질환의 중증도는 적어도 25%, 50%, 75%, 80%, 또는 90%만큼 감소되거나, 일부 경우에, 표준 진단적 기법을 사용하여 더 이상 검출할 수 없다.
본원에 사용된, 제제 (예를 들면, 본원에 기재된 경우에 항체)의 "치료적 양" 또는 "치료적으로 유효량"은 대상체에서 질환 (예를 들면, 암)의 증상의 중증도를 예방, 경감, 완화, 호전, 또는 감소시키는 제제의 양이다.
용어들 "투여하다", "투여된", 또는 "투여하기"는 제제, 화합물, 또는 조성물을 생물학적 작용의 원하는 부위에 전달하는 방법을 지칭한다. 이들 방법은, 비제한적으로, 국부 전달, 비경구 전달, 정맥내 전달, 진피내 전달, 근육내 전달, 결장 전달, 직장 전달, 또는 복강내 전달을 포함한다. 본원에 기재된 제제 및 방법과 임의로 이용되는 투여 기법은, 예를 들면, Goodman and Gilman에 논의된 대로, The Pharmacological Basis of Therapeutics, current ed.; Pergamon; 및 Remington's, Pharmaceutical Sciences (current edition), Mack Publishing Co., Easton, PA를 포함한다.
III. 면역 세포 인게이저를 결합시키는 예시적 항체
상기 언급된 대로, 본 발명자들은 면역 조절에 직접적으로 또는 간접적으로 관여된 단백질을 결합시키고 향상된 Fc 활성을 갖는 항체를 사용하여 면역 반응을 촉발시키는 것과 조합으로 특정 튜불린 교란제 (예를 들면, 가령 MMAE 및 MMAF를 포함하는 아우리스타틴)를 포함하는 항체-약물 접합체를 투여함으로써 ICD를 유도하는 것이 상승작용적 반응을 포함하는 개선된 항-종양 반응들을 초래할 수 있음을 알아내었다. 이와 같이, 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 암을 가진 대상체에게 면역 반응을 조절하는 것에 연루된 표적을 결합시키는 항체를 투여하는 것을 포함하고, 여기서 이러한 결합은 면역 반응을 유도, 촉진, 또는 향상시킨다. 이러한 항체의 표적은 "면역 세포 인게이저"로서 지칭될 수 있다. 본원에 사용된 "면역 세포 인게이저"는, 어느 한쪽 양성으로 또는 음성으로, 면역 세포 반응을 조절하는 것에 연루되는 분자 (예를 들면, 막관통 단백질)를 지칭한다. 일부 구현예에서, 항체는 면역 세포 또는 종양 상의 수용체에 결합하고 직접 면역 세포 관여를 초래하거나 음성 억제성 신호를 방출한다. 일부 구현예에서, 면역 세포 인게이저는 T-세포 신호전달에 연루된 분자이다. 일부 구현예에서, 면역 세포 인게이저는 항원-존재 세포 (APC)를 조절한다. 면역 세포 인게이저는 특정 구현예에서 면역 관문 단백질이다. 잠재적 면역 세포 인게이저의 다른 예는 아래 열거된다. 일부 구현예에서, 항체는 면역 세포 또는 종양 상의 수용체에 결합한다. 본원에 기재된 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체들의 임의의 것은 본원에 기재된 항체-약물 접합체들의 임의의 것과 조합될 수 있다.
면역 조절에 연루된 표적 (예를 들면, 면역 세포 인게이저)을 결합시키는 항체는 또한 하기 특성들의 하나 이상 또는 모두를 임의의 조합으로 갖는 Fc를 포함한다: 1) 하나 이상의 활성화 FcγR에 향상된 결합, 2) 억제성 FcγR에 감소된 결합, 3) 비푸코실화됨, 4) 향상된 ADCC 활성을 가짐, 5) 향상된 ADCP 활성을 가짐, 6) 항원 제시 세포 (APC)를 활성화시킴, 7) CD8 T 세포 반응들을 향상시킴, 8) 공-자극성 수용체를 상향조절함, 9) 선천적 세포 면역 반응을 활성화시킴, 및/또는 10) NK 세포를 관여시킴.
그래서, 일부 구현예에서, 항체는 원하는 향상된 FcγR 결합 프로파일을 수득하기 위해 하나 이상의 활성화 FcγR에 향상된 결합 및/또는 하나 이상의 억제성 FcγR에 감소된 결합을 가진 Fc를 포함한다. 활성화 FcγR은 FcγRIIIa, FcγRIIa, 및/또는 FcγRI 중 하나 이상을 포함한다. 억제성 FcγR은, 예를 들어, FcγRIIb를 포함한다.
특정 구현예에서, 항체는 적어도 FcγRIIIa에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함한다. 다른 구현예에서, 항체는 적어도 FcγRIIIa 및 FcγRIIa에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 적어도 FcγRIIIa 및 FcγRI에 향상된 결합 을 가진 Fc를 포함한다. 특정 구현예에서, 항체는 FcγRIIIa, FcγRIIa, 및 FcγRI에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는, 활성화 FcγR에 향상된 결합 이외에도 또는 이와 별도로, 하나 이상의 억제성 FcγR에 감소된 결합을 갖는다. 그래서, 일부 구현예에서, 항체는 FcγRIIa 및/또는 FcγRIIb에 감소된 결합을 갖는다.
일부 구현예에서, 항체는 비푸코실화된다. 일부 구현예에서, 항체는 추가로 상기 기재된 FcγR 결합 프로파일들 중 하나를 갖는다.
특정 구현예에서, 항체의 Fc는 야생형 Fc에 비해 아미노산 변화를 포함하여 활성화 FcγR에의 결합을 향상시키고/거나, 하나 이상의 억제성 FcγR에의 결합을 감소시켜 FcγR 결합 프로파일 예컨대 상기 기재된 것을 수득한다. 예를 들어, 일부 구현예에서 항체의 Fc는 중쇄 불변 영역에서 치환 S293D, A330L, 및 I332E를 포함한다.
원하는 FcγR 프로파일을 가진 항체를 수득하는 방법에 관한 추가의 상세는, 비푸코실화된 항체를 수득하는 방법과 마찬가지로, 아래 제공된다.
A. 예시적 면역 세포 인게이저
항체가 표적화될 수 있는 비제한 예시적 표적 또는 면역 세포 인게이저는 다음을 포함한다: 뮬러관 호르몬 수용체 II (AMHR2), B7, B7H1, B7H2, B7H3, B7H4, BAFF-R, BCMA (B-세포 성숙 항원), Bst1/CD157, C5 보체, CC 케모카인 수용체 4 (CCR4), CD123, CD137, CD19, CD20, CD25 (IL2RA), CD276, CD278, CD3, CD32, CD33, CD37, CD38, CD4 및 HIV-1 gp120-결합 부위, CD40, CD70, CD70 (TNF 수용체 리간드 패밀리의 구성원), CD80, CD86, 클라우딘 18.2, c-MET, CSF1R, CTLA-4, EGFR, EGFR MET 원종양유전자, EPHA3, ERBB2, ERBB3, FGFR2b, FLT3, GITR, 글루코코르티코이드-유발 TNF 수용체 (GITR), HER2, HER3, HLA, ICOS, IDO1, IFNAR1, IFNAR2, IGF-1R, IL-3R알파 (CD123), IL-5R, IL-5R알파, LAG-3, MET 원종양유전자, OX40 (CD134), PD-1, PD-L1, PD-L2, PVRIG, EBOV 당단백질 (GP)의 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) 과하게 글리코실화된 뮤신-유사 도메인, 레수스 (Rh) D, 시알산 면역글로불린-유사 렉틴 8 (Siglec-8), 신호전달 림프구 활성화 분자 (SLAMF7/CS1), T-세포 수용체 세포독성 T-림프구-연관된 항원 4 (CTLA4), TIGIT, TIM3 (HAVCR2), Muc1 (TA-Muc1)의 종양 특이적 글리코에피토프, VSIR (VISTA), 및 VTCN1.
일부 구현예에서, 항체는 면역 세포 인게이저의 효능제이다. 일부 이러한 구현예에서, 항체는 CD80, CD86, OX40 (CD134), GITR, CD137, CD40, VTCN1, CD276, IFNAR2, IFNAR1, CSF1R, VSIR (VISTA), 및 HLA로부터 선택된 면역 세포 인게이저의 효능제이다.
일부 구현예에서, 항체는 면역 세포 인게이저의 길항제이다. 일부 이러한 구현예에서, 항체는 CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, B7, TIM3 (HAVCR2), PVRIG, TIGIT, CD25 (IL2RA), 및 IDO1로부터 선택된 면역 세포 인게이저의 길항제이다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법을 위하여 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 관문 단백질에 대해 억제제일 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법을 위하여 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 PD-1 억제제, PD-L1 억제제, PD-L2 억제제, CTLA-4 억제제, LAG-3 억제제, B7 억제제, TIM3 (HAVCR2) 억제제, OX40 (CD134) 억제제, GITR 효능제, CD137 효능제, 또는 CD40 효능제, VTCN1 억제제, IDO1 억제제, CD276 억제제, PVRIG 억제제, TIGIT 억제제, CD25 (IL2RA) 억제제, IFNAR2 억제제, IFNAR1 억제제, CSF1R 억제제, VSIR (VISTA) 억제제, 또는 HLA를 표적화하는 치료제일 수 있다. 이러한 억제제, 활성제, 또는 치료제는 아래 추가로 제공된다. 본원에 구현예들 중 임의의 것에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 하나 이상의 활성화 FcγR에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하는 항체일 수 있다. 일부 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 비푸코실화된 항체이다.
일부 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 CTLA-4 억제제이다. 일 구현예에서, CTLA-4 억제제는 항-CTLA-4 항체이다. 항-CTLA-4 항체의 예는, 비제한적으로, 미국 특허 번호: 5,811,097; 5,811,097; 5,855,887; 6,051,227; 6,207,157; 6,682,736; 6,984,720; 및 7,605,238에 기재된 것들을 포함하고, 이들의 모두는 본원에 그들 전체가 편입된다. 일 구현예에서, 항-CTLA-4 항체는 트레멜리무맙 (티실리무맙 또는 CP-675,206으로도 알려짐) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙 (MDX-010 또는 MDX-101로도 알려짐) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 이필리무맙은 CTLA-4에 결합하는 완전히 인간 단클론성 IgG 항체이다. 이필리무맙은 상표명 Yervoy™ 하에 시판된다.
특정 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 PD-1/PD-L1 억제제이다. PD-l/PD-L1 억제제의 예는, 비제한적으로, 미국 특허 번호 7,488,802; 7,943,743; 8,008,449; 8,168,757; 8,217,149, 및 PCT 특허 출원 번호 WO2003042402, WO2008156712, WO2010089411, WO2010036959, WO2011066342, WO2011159877, WO2011082400, 및 WO2011161699에 기재된 것들을 포함하고, 이들의 모두는 본원에 그들 전체가 편입된다.
일부 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 PD-1 억제제이다. 일 구현예에서, PD-1 억제제는 항-PD-1 항체이다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체는 BGB-A317, 니볼루맙 (ONO-4538, BMS-936558, 또는 MDX1106으로도 알려짐), 펨브롤리주맙 (MK-3475, SCH 900475, 또는 람브롤리주맙으로도 알려짐), 또는 이들의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 니볼루맙은 인간 IgG4 항-PD-1 단클론성 항체이고, 상표명 Opdivo™ 하에 시판된다. 또 다른 구현예에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 펨브롤리주맙은 인간화된 단클론성 IgG4 항체이고 상표명 Keytruda™ 하에 시판된다. 더욱 또 다른 구현예에서, 항-PD-1 항체는 CT-011, 인간화된 항체, 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 단독 투여된 CT-011은 재발시 급성 골수성 백혈병 (AML)의 치료에서 반응을 보이지 않았다. 더욱 또 다른 구현예에서, 항-PD-1 항체는 AMP-224, 융합 단백질, 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, PD-1 항체는 BGB-A317, 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. BGB-A317은 Fc 감마 수용체 I을 결합시키는 능력이 특이적으로 조작되고, 높은 친화성 및 우수한 표적 특이성으로 PD-1에 대한 독특한 결합 시그니처를 갖는 단클론성 항체이다. 일 구현예에서, PD-1 항체는 세미플리맙 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, PD-1 항체는 캄렐리주맙 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 추가 구현예에서, PD-1 항체는 신틸리맙 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일부 구현예에서, PD-1 항체는 티스렐리주맙 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 특정 구현예에서, PD-1 항체는 TSR-042 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 더욱 또 다른 구현예에서, PD-1 항체는 PDR001 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 더욱 또 다른 구현예에서, PD-1 항체는 토리팔리맙 또는 이의 비푸코실화된 버전이다.
특정 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 PD-L1 억제제이다. 일 구현예에서, PD-L1 억제제는 항-PD-L1 항체이다. 일 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 MEDI4736 (두르발루맙) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 BMS-936559 (MDX-1105-01로도 알려짐) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 더욱 또 다른 구현예에서, PD-L1 억제제는 아테졸리주맙 (MPDL3280A, 및 Tecentriq®로도 알려짐) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 추가 구현예에서, PD-L1 억제제는 아벨루맙 또는 이의 비푸코실화된 버전이다.
일 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 PD-L2 억제제이다. 일 구현예에서, PD-L2 억제제는 항-PD-L2 항체이다. 일 구현예에서, 항-PD-L2 항체는 rHIgM12B7A 또는 이의 비푸코실화된 버전이다.
일 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 림프구 활성화 유전자-3 (LAG-3) 억제제이다. 일 구현예에서, LAG-3 억제제는 IMP321, 가용성 Ig 융합 단백질 (Brignone 등, J. Immunol., 2007, 179, 4202-4211), 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, LAG-3 억제제는 BMS-986016 또는 이의 비푸코실화된 버전이다.
일 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 B7 억제제이다. 일 구현예에서, B7 억제제는 B7-H3 억제제 또는 B7-H4 억제제이다. 일 구현예에서, B7-H3 억제제는 MGA271, 항-B7-H3 항체 (Loo 등, Clin. Cancer Res., 2012, 3834), 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일부 구현예에서, B7 억제제는 B7-H4 억제제이다. 비제한 예시적 B7-H4 억제제는 FPA150, B7-H4에 대해 비푸코실화된 항체이다. PCT/US2018/047805를 참조한다.
일 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 TIM3 (T-세포 면역글로불린 도메인 및 뮤신 도메인 3) 억제제 (Fourcade 등, J. Exp. Med., 2010, 207, 2175-86; Sakuishi 등, J. Exp. Med., 2010, 207, 2187-94)이다.
일 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 OX40 (CD134) 효능제 항체이다. 특정 구현예에서, 항-OX40 항체는 MEDI6469 또는 이의 비푸코실화된 버전이다.
일 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 GITR 효능제이다. 일 구현예에서, 면역 세포 인게이저는 항-GITR 항체 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, 항-GITR 항체는 TRX518 또는 이의 비푸코실화된 버전이다.
일 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 CD137 효능제이다. 일 구현예에서, 면역 세포 인게이저는 항-CD137 항체이다. 일 구현예에서, 항-CD137 항체는 우렐루맙 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, 항-CD137 항체는 PF-05082566 또는 이의 비푸코실화된 버전이다.
일 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 CD40 효능제이다. 일 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 항-CD40 항체이다. 일 구현예에서, 항-CD40 항체는 CF-870,893 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, 항-CD40 항체는 MP0317 (Molecular Partners) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, 항-CD40 항체는 YH003 (Eucure Biopharma) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, 항-CD40 항체는 CDX-1140 (Celldex Therapeutics) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, 항-CD40 항체는 YH003 (Eucure Biopharma) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, 항-CD40 항체는 미타잘리맙 (Alligator Bioscience) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, 항-CD40 항체는 ABBV-927 (AbbVie) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, 항-CD40 항체는 소티갈리맙 (Apexigen) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, 항-CD40 항체는 GEN1042 (Genmab) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, 항-CD40 항체는 2141 V-11 (Rockefeller University) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, 항-CD40 항체는 셀리크렐루맙 (Roche) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, 항-CD40 항체는 뮤린 S2C6의 비푸코실화된, 인간화된 버전이고 서열번호: 30-35의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함하는 SEA-CD40 (Seagen)이다. 상응하는 VH 및 VL은 서열번호: 28 및 29의 아미노산 서열을 각각 포함한다. SEA-CD40은 미국 특허 공개 번호 2017/0333556 및 2017/0137528에 기재되고, 이들의 양쪽은 참조로 본원에 편입된다.
일부 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 CD70을 결합시키는 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 SEA-CD70이다. 예를 들면, 미국 특허 번호 8,067,546; 본원에 서열의 표를 참조한다.
일부 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 BCMA를 결합시키는 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 SEA-BCMA이다.　예를 들면, 미국 공개 번호 2017/0233484 및 WO 2017/143069 (서열번호: 13 및 19의 VH 및 VL, 각각; 서열번호: 60, 61, 62, 90, 91, 92의 CDR, 미국 공개 번호 2017/0233484 참조); 본원에 서열의 표 (또한 서열번호: 45 및 46의 VH 및 VL, 각각; 서열번호: 47-52의 CDR)를 참조한다.
일 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 항-인터류킨-15 항체이다.
일 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 VTCN 억제제이다. 일 구현예에서, VTCN 억제제는 FPA150 또는 이의 비푸코실화된 버전이다.
일 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 항-IDO 길항제 항체이다. 일부 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 TIGIT 억제제이다. 특정 구현예에서, TIGIT 억제제는 항-TIGIT 항체이다. 일 구현예에서, TIGIT 억제제는 MTIG7192A 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 BMS-986207 (BMS) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 더욱 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 OMP-313M32 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, TIGIT 억제제는 MK-7684이다. 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 AB154 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 더욱 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 CGEN-15137 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, TIGIT 억제제는 SEA-TGT이다. 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 ASP8374 (Astellas) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 더욱 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 AJUD008 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, TIGIT 억제제는 AB308 (Arcus Biosciences) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 AGEN1327 (Agenus) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 더욱 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 AK127 (Akeso Biopharma) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 BAT6005 (Bio-Thera 용액) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 BAT6021 (Bio-Thera Solutions) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, TIGIT 억제제는 CASC-674 (Seagen) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 COM902 (Compugen) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 더욱 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 돔바날리맙 (Arcus Biosciences) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, TIGIT 억제제는 에티길리맙 (Mereo BioPharma) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 GSK4428859 (GSK) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 더욱 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 HL186 (HanAll Biopharma) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, TIGIT 억제제는 MIL-100 (Beijing Mabworks Biotech) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 YH-29143 (Yu Han) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, TIGIT 억제제는 HLX53 (Shanghai Henlius Biotech) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 IBI939 (Innovent Biologics) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 더욱 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 JS006 (Junshi Biosciences) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, TIGIT 억제제는 M6223 (Merck KGaA) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 MG1131 (Mogam Institute) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 더욱 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 오시펄리맙 (BeiGene) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, TIGIT 억제제는 티라골루맙 (Roche; 미국 특허 번호 10,047,158에 기재됨) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 TJT6 (I-Mab Biopharma) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 더욱 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 비보스톨리맙 (MSD; 미국 특허 번호 10,618,958에 기재됨) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, TIGIT 억제제는 YBL-012 (Y Biologics) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 IBI-939 (Innovent) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 더욱 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 AZD2936 (AstraZeneca) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, TIGIT 억제제는 EOS-448 (iTeos/GSK) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 BAT6005 (Bio Thera) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 더욱 또 다른 구현예에서, TIGIT 억제제는 AGEN1777 (BMS/Agenus) 또는 이의 비푸코실화된 버전이다.
일부 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 VSIR 억제제이다. 특정 구현예에서, VSIR 억제제는 항-VSIR 항체이다. 일 구현예에서, VSIR 억제제는 MTIG7192A 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, VSIR 억제제는 CA-170 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 더욱 또 다른 구현예에서, VSIR 억제제는 JNJ 61610588 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, VSIR 억제제는 HMBD-002 또는 이의 비푸코실화된 버전이다.
일부 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 TIM3 억제제이다. 특정 구현예에서, TIM3 억제제는 항-TIM3 항체이다. 일 구현예에서, TIM3 억제제는 AJUD009 또는 이의 비푸코실화된 버전이다.
일부 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 CD25 (IL2RA) 억제제이다. 특정 구현예에서, CD25 (IL2RA) 억제제는 항-CD25 (IL2RA) 항체이다. 일 구현예에서, CD25 (IL2RA) 억제제는 다클리주맙 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, CD25 (IL2RA) 억제제는 바실릭시맙 또는 이의 비푸코실화된 버전이다.
일부 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 IFNAR1 억제제이다. 특정 구현예에서, IFNAR1 억제제는 항-IFNAR1 항체이다. 일 구현예에서, IFNAR1 억제제는 아니프롤루맙 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, IFNAR1 억제제는 시팔리무맙 또는 이의 비푸코실화된 버전이다.
일부 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 CSF1R 억제제이다. 특정 구현예에서, CSF1R 억제제는 항-CSF1R 항체이다. 일 구현예에서, CSF1R 억제제는 펙시다르티닙 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, CSF1R 억제제는 에막투주맙 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 더욱 또 다른 구현예에서, CSF1R 억제제는 카비랄리주맙 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, CSF1R 억제제는 ARRY-382 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, CSF1R 억제제는 BLZ945 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 더욱 또 다른 구현예에서, CSF1R 억제제는 AJUD010 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, CSF1R 억제제는 AMG820 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, CSF1R 억제제는 IMC-CS4 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 더욱 또 다른 구현예에서, CSF1R 억제제는 JNJ-40346527 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 일 구현예에서, CSF1R 억제제는 PLX5622 또는 이의 비푸코실화된 버전이다. 또 다른 구현예에서, CSF1R 억제제는 FPA008 또는 이의 비푸코실화된 버전이다.
다양한 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 하기 활성들의 하나 이상 또는 모두를 임의의 조합으로 갖는다: 1) T 조절성 (Treg) 세포를 고갈시킴, 2) 항원 제시 세포 (APC)를 활성화시킴, 3) CD8 T 세포 반응들을 향상시킴, 4) 공-자극성 수용체를 상향조절시킴, 및/또는 5) 면역 활성화 사이토카인 (예컨대 CXCL10 및/또는 IFNγ)의 방출을 촉진시킴. 일부 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 면역 억압적 사이토카인 (예컨대 IL10 및/또는 MDC)보다 더 큰 정도로 면역-활성화 사이토카인 (예를 들면, CXCL10 및 IFNγ)의 방출을 촉진시킨다.
B. 예시적 항-TIGIT 항체
일 양태에서, 인간 TIGIT (Ig 및 ITIM 도메인을 가진 T-세포 면역수용체)에 결합하는 항체는 면역 세포 인게이저에 대한 항체로서 제공된다. 본원에 기재된 경우에, 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 TIGIT와 리간드 CD155 및 CD112의 한쪽 또는 양쪽 사이 상호작용을 억제시킨다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 기능적 생물검정에서 TIGIT와 CD155 사이 상호작용을 억제시켜, CD155-CD226 신호전달이 발생하도록 한다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 항-PD-1 제제 (예를 들면, 항-PD-1 항체) 또는 항-PD-L1 제제 (예를 들면, 항-PD-L1 항체)와 상승작용을 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 방법에서 사용을 위한 항-TIGIT 항체는 각각 서열번호: 7, 10, 14, 17, 18, 및 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 비푸코실화된 IgG1 항체인 SEA-TGT이다. 상응하는 VH 및 VL은 각각 서열번호: 1 및 6의 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명자들은, 놀랍게도, 향상된 효과기 기능을 가진 항-TIGIT 항체가 예컨대 비푸코실화된 IgG1 항체로 달성될 수 있고, Treg 세포를 고갈시킬 수 있고 생체내 개선된 효능을 보여줄 수 있음을 알아내었다. 따라서, 다양한 구현예에서, 비푸코실화된 항-TIGIT 항체가 제공된다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체, 예컨대 비푸코실화된 항-TIGIT 항체는 높은 친화성으로 인간 TIGIT 단백질 (서열번호:218) 또는 이의 한 부문에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 5 nM 미만, 1 nM 미만, 500 pM 미만, 250 pM 미만, 150 pM 미만, 100 pM 미만, 50 pM 미만, 40 pM 미만, 30 pM 미만, 20 pM 미만, 또는 약 10 pM 미만의 인간 TIGIT에 대한 결합 친화성 (KD)을 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 50 pM 미만의 인간 TIGIT에 대한 결합 친화성 (KD)을 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 약 1 pM 내지 약 5 nM, 예를 들면, 약 1 pM 내지 약 1 nM, 약 1 pM 내지 약 500 pM, 약 5 pM 내지 약 250 pM, 또는 약 10 pM 내지 약 100 pM의 범위에서 인간 TIGIT에 대한 KD를 갖는다.
일부 구현예에서, 높은 친화성으로 인간 TIGIT에 결합하는 것 이외에도, 비푸코실화된 항-TIGIT 항체는 사이노몰구스 원숭이 ("사이노") TIGIT 및/또는 마우스 TIGIT와 교차-반응성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 100 nM 이하의 결합 친화성 (KD)으로 마우스 TIGIT에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 5 nM 이하의 KD로 인간 TIGIT에 결합하고, 100 nM 이하의 KD로 마우스 TIGIT와 교차-반응한다. 일부 구현예에서, 인간 TIGIT에 결합하는 항-TIGIT 항체는 양쪽 사이노몰구스 원숭이 TIGIT 및 마우스 TIGIT와 교차-반응성을 또한 나타낸다.
일부 구현예에서, 항체 교차-반응성은 세포 (예를 들면, 인간 TIGIT, 사이노몰구스 원숭이 TIGIT, 또는 마우스 TIGIT를 발현시키는 세포주, 또는 TIGIT를 내인성으로 발현시키는 1차 세포, 예를 들면, 인간 TIGIT, 사이노 TIGIT, 또는 마우스 TIGIT를 내인성으로 발현시키는 1차 T 세포) 상에서 발현되는 TIGIT에 항-TIGIT 항체의 특이적 결합을 검출함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, 항체 결합 및 항체 교차-반응성은 정제된 또는 재조합 TIGIT (예를 들면, 정제된 또는 재조합 인간 TIGIT, 정제된 또는 재조합 사이노 TIGIT, 또는 정제된 또는 재조합 마우스 TIGIT) 또는 TIGIT를 포함하는 키메라 단백질 (예를 들면, 인간 TIGIT, 사이노몰구스 원숭이 TIGIT, 또는 마우스 TIGIT를 포함하는 Fc-융합 단백질, 또는 인간 TIGIT, 사이노 TIGIT, 또는 마우스 TIGIT를 포함하는 His-태깅된 단백질)에 항-TIGIT 항체의 특이적 결합을 검출함으로써 결정된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-TIGIT 항체는 TIGIT와 리간드 CD155 사이 상호작용을 억제시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-TIGIT 항체는 TIGIT와 리간드 CD112 사이 상호작용을 억제시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-TIGIT 항체는 TIGIT와 리간드 CD155 및 CD112의 양쪽 사이 상호작용을 억제시킨다.
일부 구현예에서, 인간 TIGIT에 결합하는 항-TIGIT 항체는 본원에 기재된 하기 항체들 중 임의의 것으로부터 유래된 경쇄 가변 영역 서열, 또는 이의 한 부문, 및/또는 중쇄 가변 영역 서열, 또는 이의 한 부문을 포함한다: 클론 13, 클론 13A, 클론 13B, 클론 13C, 또는 클론 13D. 항-TIGIT 항체 클론 13, 클론 13A, 클론 13B, 클론 13C, 및 클론 13D의 CDR, 경쇄 가변 도메인 (VL), 및 중쇄 가변 도메인 (VH)의 아미노산 서열은 아래 서열의 표에서 제시된다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 다음 중 하나 이상 (예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개)을 포함한다:
서열번호:7, 서열번호:8, 및 서열번호:9로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열;
서열번호:10, 서열번호:11, 서열번호:12, 및 서열번호:13으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열;
서열번호:14, 서열번호:15 및 16으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열;
서열번호:17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열;
서열번호:18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및/또는
서열번호:19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 7, 서열번호:8, 또는 서열번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열번호:10, 서열번호:11, 서열번호:12, 또는 서열번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 및 서열번호: 14, 서열번호:15, 또는 16의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호:17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열번호:18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 서열번호:19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 7, 서열번호:8, 또는 서열번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열번호:10, 서열번호:11, 서열번호:12, 또는 서열번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 서열번호:14, 서열번호:15, 또는 서열번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; 서열번호:17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열번호:18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 서열번호:19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 다음의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다:
(a) 서열번호: 7, 10, 14, 17, 18, 및 19, 각각; 또는
(b) 서열번호: 8, 11, 14, 17, 18, 및 19, 각각; 또는
(c) 서열번호: 9, 12, 15, 17, 18, 및 19, 각각; 또는
(d) 서열번호: 8, 13, 16, 17, 18, 및 19, 각각; 또는
(e) 서열번호: 8, 12, 16, 17, 18, 및 19, 각각.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호:1, 서열번호:2, 서열번호:3, 서열번호:4, 또는 서열번호:5에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호:1, 서열번호:2, 서열번호:3, 서열번호:4, 또는 서열번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, 참조 서열 (예를 들면, 서열번호:1, 서열번호:2, 서열번호:3, 서열번호:4, 또는 서열번호:5)에 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만 인간 TIGIT에 결합하는 능력을 유지하고 임의로, TIGIT에 CD155 및/또는 CD112의 결합을 차단하는 능력을 유지한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호:6에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, 참조 서열 (예를 들면, 서열번호:6)에 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만 인간 TIGIT에 결합하는 능력을 유지하고 임의로, TIGIT에 CD155 및/또는 CD112의 결합을 차단하는 능력을 유지한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호:1, 서열번호:2, 서열번호:3, 서열번호:4, 또는 서열번호:5에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 서열번호:6에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호:1, 서열번호:2, 서열번호:3, 서열번호:4, 또는 서열번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 서열번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:1의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(b) 서열번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(c) 서열번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(d) 서열번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(f) 서열번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 VL.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 20, 21, 22, 23, 및 24로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 방법에서 사용을 위한 항-TIGIT 항체는 US 2009/0258013, US 2016/0176963, US 2016/0376365, 또는 WO 2016/028656에 개시된 항-TIGIT 항체의 비푸코실화된 버전이다.
C. 예시적 항-CD40 항체
상기 언급된 대로, 일부 구현예에서, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 효능제 항-CD40 항체이다. 다세투주맙을 포함하는 효능적 CD40 단클론성 항체는 단일-제제 및 조합 화학요법 설정에서 고무적인 임상적 활동을 보여주었다. 다세투주맙은 NHL내 1 상 연구 그리고 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL)내 2 상 연구에서 일부 임상적 활성을 입증하였다. 예를 들면, Advani 등, J. Clin. Oncol. 27:4371-4377 (2009) 및 De Vos 등, J. Hematol. Oncol. 7:1-9 (2014)를 참조한다. 추가적으로, CD40에 대한 인간화된 IgG2 효능제 항체인, CP-870,893은 파클리탁셀 또는 카르보플라틴 또는 젬시타빈과 조합된 때 고형 종양 적응증에서 고무적인 활성을 보여주었다. 이들 연구들에서, 항원 제시 세포의 활성화, 사이토카인 생산, 및 항원-특이적 T 세포의 생성은 보여졌다. 예를 들면, Beatty 등, Clin. Cancer Res. 19:6286-6295 (2013) 및 Vonderheide 등, Oncoimmunology 2:e23033 (2013)을 참조한다.
일부 구현예에서, 비푸코실화된 항-CD40 항체는 본 방법에서 사용을 위하여 제공된다. 일부 구현예에서, 비푸코실화된 항-CD40 항체는 뮤린 S2C6의 비푸코실화된, 인간화된 버전이고 각각 서열번호: 30-35의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 SEA-CD40이다. 상응하는 VH 및 VL은 각각 서열번호: 28 및 29의 아미노산 서열을 포함한다. SEA-CD40은 미국 특허 공개 번호 2017/0333556 및 2017/0137528에 기재되고, 이들의 양쪽은 참조로 본원에 편입된다. S2C6은, 본원에 mS2C6으로서 지칭된, 인간 방광 암종에 대해 길러진 뮤린 단클론성 항체로서 본래 단리되었다. 예를 들면, Paulie 등, Cancer Immunol. Immunother. 17:165-179 (1984)를 참조한다. S2C6 항체는 CD40 신호전달 경로의 부분적 효능제이고, 일부 구현예에서, 하기 활성을 갖는다: 인간 CD40 단백질에 결합, 사이노몰구스 CD40 단백질에 결합, CD40 신호전달 경로의 활성화, 이의 리간드, CD40L과 CD40의 상호작용의 강화. 예를 들면, 미국 특허 번호 6,946,129를 참조한다.
S2C6은 인간화되었고 이 인간화된 항체는 본원에 인간화된 S2C6으로서, 그리고 대안적으로 푸코실화된 인간화된 S2C6 (fhS2C6, 또는 SGN-40)인 다세투주맙으로서 지칭된다. 임의의 목적을 위하여 참조로 본원에 편입되는, 예를 들면, WO 2006/128103을 참조한다. SEA-CD40은 비푸코실화된 인간화된 S2C6 항체이다. 인간화된 S2C6의 기타 버전은 WO2008/091954에 개시되고; 이들은 비푸코실화될 수 있고 본원에 개시된 방법에서 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 항-CD40 항체는 다음 중 하나 이상 (예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개)을 포함한다:
서열번호:30의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열;
서열번호:31 또는 서열번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열;
서열번호:32의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열;
서열번호:33인 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열;
서열번호:34인 아미노산을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및/또는
서열번호:35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열.
일부 구현예에서, 항-CD40 항체는 서열번호:30의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열번호:31 또는 서열번호:36 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 및 서열번호:32의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CD40 항체는 서열번호:33의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열번호:34의 아미노산을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 서열번호:35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CD40 항체는 서열번호:30의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열번호:31 또는 서열번호:36의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 서열번호:32의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; 서열번호:33의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열번호:34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 서열번호:35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CD40 항체는 다음의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다:
(a) 서열번호: 30, 31, 33, 34, 및 35, 각각; 또는
(b) 서열번호: 30, 36, 33, 34, 및 35, 각각.
일부 구현예에서, 항-CD40 항체는 서열번호:28에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD40 항체는 NO:28의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, 참조 서열 (예를 들면, 서열번호:28)에 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만 인간 CD40에 결합하는 능력을 유지한다.
일부 구현예에서, 항-CD40 항체는 서열번호:29에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD40 항체는 서열번호:29의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, 참조 서열 (예를 들면, 서열번호:29)에 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만 인간 CD40에 결합하는 능력을 유지한다.
일부 구현예에서, 항-CD40 항체는 서열번호:28에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 서열번호:29에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD40 항체는 서열번호:28의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 서열번호:29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CD40 항체는 각각 서열번호:28 및 29로서 개시된 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD40 항체는 각각 서열번호:26 및 27로서 개시된 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
D. 예시적 항-CD70 항체
일부 구현예에서, 비푸코실화된 항-CD70 항체는 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체로서 본 방법에서 사용을 위하여 제공된다. 일부 구현예에서, 비푸코실화된 항-CD70 항체는 미국 특허 번호 8,067,546에 기재된 대로 그리고 각각 서열번호: 53-58의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 SEA-CD70이다. 상응하는 VH 및 VL은 각각 서열번호: 41 및 42의 아미노산 서열을 포함한다. CD70 분자는 종양 괴사 인자 (TNF) 리간드 수퍼패밀리 (TNFSF)의 한 구성원이고 이는 관련된 수용체, CD27 (TNFRSF7)에 결합한다. 2개 분자들 사이 상호작용은 양쪽 수용체로부터 세포내 신호를 활성화시킨다. 정상 조건에서, CD70 발현은 순각적이고 활성화된 T 및 B 세포, 성숙한 수지상, 및 자연 살해 (NK) 세포로 제한된다. 유사하게, CD27은 양쪽 나이브 및 활성화된 효과기 T 세포, 뿐만 아니라 NK 및 활성화된 B 세포 상에서 발현된다. 하지만, CD70은 급성 골수성 백혈병 (AML), 골수이형성 증후군 (MDS), 및 비-호지킨 림프종 (NHL), 뿐만 아니라 암종을 포함하는 다양한 혈액암에서 또한 비정상적으로 발현되고, 양쪽 종양 세포 생존 및/또는 종양 면역 회피에 역할을 한다. SEA-CD70은 CD70/CD27 축 신호전달을 차단하고, 항체 의존적 세포성 식세포작용 (ADCP) 및 보체 의존적 세포독성 (CDC)을 유도하고, 항체 의존적 세포성 세포독성 (ADCC)을 향상시킴으로써 작용한다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 다음의 하나 이상 (예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개)을 포함한다:
서열번호:53의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열;
서열번호:54의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열;
서열번호:55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열;
서열번호:56인 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열;
서열번호:57인 아미노산을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및/또는
서열번호:58의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 서열번호:53의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열번호:54의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 및 서열번호:55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 서열번호:56의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열번호:57의 아미노산을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 서열번호:58의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 서열번호:53의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열번호:54의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 서열번호:55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; 서열번호:56의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열번호:57의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 서열번호:58의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 서열번호:41에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 NO:41의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, 참조 서열 (예를 들면, 서열번호:41)에 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만 인간 CD70에 결합하는 능력을 유지한다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 서열번호:42에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 서열번호:42의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, 참조 서열 (예를 들면, 서열번호:42)에 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만 인간 CD70에 결합하는 능력을 유지한다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 서열번호:41에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 서열번호:42에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 서열번호:41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 서열번호:42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CD70 항체는 각각 서열번호:41 및 42로서 개시된 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
E. 예시적 항-BCMA 항체
일부 구현예에서, 비푸코실화된 항-BCMA 항체는 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체로서 본 방법에서 사용을 위하여 제공된다. 일부 구현예에서, 비푸코실화된 항-BCMA 항체는 항체 표적화 B-세포 성숙 항원 (BCMA)이고 각각 서열번호: 47-52의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 SEA-BCMA이다. 상응하는 VH 및 VL은 각각 서열번호: 45 및 46의 아미노산 서열을 포함한다. BCMA는 다발성 골수종 (MM) 상에서 발현된다. 항체는 리간드 매개된 BCMA 세포 신호전달, 항체 의존적 세포성 식세포작용 (ADCP) 및 향상된 항체 의존적 세포성 세포독성 (ADCC) 차단을 통해서 작용한다.
일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 다음 중 하나 이상 (예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개)을 포함한다:
서열번호:47의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열;
서열번호:48의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열;
서열번호:49의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열;
서열번호:50인 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열;
서열번호:51인 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및/또는
서열번호:52의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열.
일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 서열번호:47의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열번호:48의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 및 서열번호:49의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 서열번호:50의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열번호:51의 아미노산을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 서열번호:52의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 서열번호:47의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열번호:48의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 서열번호:49의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; 서열번호:50의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열번호:51의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 서열번호:52의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 서열번호:45에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 NO:45의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, 참조 서열 (예를 들면, 서열번호:45)에 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만 인간 BCMA에 결합하는 능력을 유지한다.
일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 서열번호:46에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 서열번호:46의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, 참조 서열 (예를 들면, 서열번호:46)에 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만 인간 BCMA에 결합하는 능력을 유지한다.
일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 서열번호:45에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 서열번호:46에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 서열번호:45의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 서열번호:46의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 각각 서열번호:45 및 46으로서 개시된 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
F. 향상된 Fc 백본
상기 언급된 대로, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 다음 활성들 중 하나 이상을 갖는 Fc를 포함한다: 하나 이상의 활성화 FcγR에 향상된 결합; 억제성 FcγR에 감소된 결합; 향상된 ADCC 활성; 및/또는 향상된 ADCP 활성. 이러한 활성 및 원하는 활성 프로파일이 있는 Fc를 갖는 항체는, 비푸코실화된 단백질을 생산하는 것을 포함하는, 다양한 방식으로 생성되고/되거나 원하는 활성을 산출하는 특정 돌연변이를 함유하도록 Fc를 조작함으로써 생성될 수 있다. 이 섹션은 비푸코실화된 항체를 생성하는 방법 및 예시적 조작 접근법에 관해 추가의 상세를 제공한다. 불변 영역의 선택 및 항체의 제작에 관한 추가의 지침은 아래 다른 섹션에서 제공된다.
항체는 그들의 불변 영역에서 보존된 위치에 글리코실화될 수 있다 (Jefferis and Lund, (1997) Chem. Immunol. 65:111-128; Wright and Morrison, (1997) TibTECH 15:26-32). 면역글로불린의 올리고당 측쇄는 단백질의 기능 (Boyd 등, (1996) Mol. Immunol. 32:1311-1318; Wittwe and Howard, (1990) Biochem. 29:4175-4180), 그리고 당단백질의 형태 및 제시된 3차원 표면에 영향을 줄 수 있는 당단백질의 부문들 사이 분자내 상호작용 (Jefferis and Lund, 상기; Wyss and Wagner, (1996) Current Opin. Biotech. 7:409-416)에 영향을 준다. 올리고당은 특이적 인식 구조에 기반된 특정 분자에 주어진 당단백질을 표적하는 역할을 또한 할 수 있다. 예를 들어, 아갈락토실화된 IgG에서, 올리고당 모이어티가 CH2간 공간 밖으로 '플립'하고 말단 N-아세틸글루코사민 잔기들이 만노스 결합 단백질에 결합할 수 있게 되는 것으로 보고되었다 (Malhotra 등, (1995) Nature Med. 1:237-243). 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포에서 생산된 CAMPATH-1H (인간 림프구의 CDw52 항원을 인식하는 재조합 인간화된 뮤린 단클론성 IgG1 항체)로부터 올리고당의 글리코펩티다제에 의한 제거는 보체 매개된 용해 (CMCL)에서 완전한 감소를 초래하였고 (Boyd 등, (1996) Mol. Immunol. 32:1311-1318), 한편 뉴라미니다제를 사용하는 시알산 잔기들의 선택적 제거는 DMCL의 손실 없음을 초래하였다. 항체의 글리코실화는 항체-의존적 세포성 세포독성 (ADCC)에 영향을 주는 것으로 또한 보고되었다. 특히, 이등분 GlcNAc의 형성을 촉매작용하는 글리코실트랜스퍼라제인 β(1,4)-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III (GnTIII)의 테트라사이클린-조절 발현을 가진 CHO 세포는 개선된 ADCC 활성을 갖는 것으로 보고되었다 (Umana 등. (1999) Mature Biotech. 17:176-180).
항체의 글리코실화는 전형적으로 어느 한쪽 N-연결 또는 O-연결된다. N-연결은 아스파라긴 잔기의 측쇄에 탄수화물 모이어티의 부착을 지칭한다. X가 프롤린을 제외하고 임의의 아미노산인, 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌은 아스파라긴 측쇄에 탄수화물 모이어티의 효소적 부착을 위한 인식 서열이다. 그래서, 폴리펩티드에서 이들 트리펩티드 서열들 중 어느 한쪽의 존재는 잠재적 글리코실화 부위를 창출한다. O-연결 글리코실화는, 5-하이드록시프롤린 또는 5-하이드록시리신이 또한 사용될 수 있어도, 하이드록시아미노산, 가장 일반적으로 세린 또는 트레오닌에 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 자일로스 중 하나의 부착을 지칭한다.
항체의 글리코실화 변이체는 항체의 글리코실화 패턴이 변경되는 변이체이다. 변경은 항체에서 발견된 하나 이상의 탄수화물 모이어티 고갈시키는 것, 항체에 하나 이상의 탄수화물 모이어티 부가하는 것, 글리코실화의 조성 (글리코실화 패턴), 글리코실화의 정도를 변화시키는 것 등을 의미한다.
항체에 글리코실화 부위의 부가는 (N-연결 글리코실화 부위의 경우) 상기-기재된 트리펩티드 서열들 중 하나 이상을 함유하도록 아미노산 서열을 변경시킴으로써 성취될 수 있다. 변경은 (O-연결 글리코실화 부위의 경우) 원래 항체의 서열에 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기들의 부가, 또는 이들에 의한 치환으로 또한 이루어질 수 있다. 유사하게, 글리코실화 부위의 제거는 항체의 천연 글리코실화 부위 내에서 아미노산 변경에 의해 성취될 수 있다.
아미노산 서열은 기저 핵산 서열을 변경시킴으로써 보통 변경된다. 이들 방법은 (자연-발생 아미노산 서열 변이체의 경우에서) 자연 공급원으로부터 단리 또는 올리고뉴클레오티드-매개된 (또는 부위-지시된) 돌연변이유발, PCR 돌연변이유발, 및 이전에 준비된 변이체 또는 항체의 비-변이체 버전의 카세트 돌연변이유발에 의한 제조를 포함한다.
항체의 글리코실화 (글리코실화 패턴 포함)는 아미노산 서열 또는 기저 뉴클레오티드 서열 변경 없이도 변경될 수 있다. 예를 들면, Pereira 등, 2018, MAbs, 10(5): 693-711을 참조한다. 글리코실화는 항체를 발현시키는데 사용된 숙주 세포에 크게 의존한다. 잠재적 치료제로서 재조합 당단백질, 예를 들면, 항체의 발현에 사용된 세포 유형이 천연 세포가 거의 없기 때문에, 항체의 글리코실화 패턴에서의 상당한 변동이 예상될 수 있다. 예를 들면, Hse 등, (1997) J. Biol. Chem. 272:9062-9070을 참조한다. 숙주 세포의 선정 이외에도, 항체의 재조합 생산 동안 글리코실화에 영향을 주는 인자는 성장 모드, 배지 제형, 배양 밀도, 산소화, pH, 정제 체계 및 기타 등등을 포함한다. 올리고당 생산에 연루된 특정 효소를 도입하거나 과발현시키는 것을 포함하는 특정한 숙주 유기체에서 달성된 글리코실화 패턴을 변경하기 위한 다양한 방법이 제안되었다 (미국 특허 번호 5047335; 5510261; 5278299). 글리코실화, 또는 글리코실화의 특정 유형들은 당단백질로부터, 예를 들어 엔도글리코시다제 H (엔도 H)를 사용하여 효소적으로 제거될 수 있다. 이외에도, 재조합 숙주 세포는 유전적으로 조작될 수 있고, 예를 들면, 특정 유형들의 다당류를 처리하는데 결함이 있을 수 있다. 이들 및 유사한 기법은 당업계에 알려진다.
항체의 글리코실화 구조는, 전하에 기반하여 올리고당을 분리하기 위해 높은 pH 음이온 교환 크로마토그래피를 사용하는, 렉틴 크로마토그래피, NMR, 질량 분석법, HPLC, GPC, 단당류 조성적 분석, 순차적 효소적 분해, 및 HPAEC-PAD를 포함하는, 탄수화물 분석의 종래 기법에 의해 용이하게 분석될 수 있다. 분석적 목적을 위하여 올리고당을 방출하는 방법은 또한 알려지고, 제한 없이, (펩티드-N-글리코시다제 F/엔도-β-갈락토시다제를 사용하여 일반적으로 수행된) 효소적 치료, 주로 O-연결 구조를 방출하기 위해 가혹한 알칼리성 환경을 사용한 제거, 그리고 양쪽 N- 및 O-연결 올리고당을 방출하기 위해 무수 하이드라진을 사용한 화학적 방법을 포함한다
항체의 글리코실화의 변형을 위한 바람직한 형태는 환원된 코어 푸코실화이다. "코어 푸코실화"는 N-연결 글리칸의 환원 말단에서 N-아세틸글루코사민 ("GlcNAc")에 푸코스의 부가 ("푸코실화")를 지칭한다.
"복합 N-글리코시드-연결 당 쇄"는 (카밧의 번호에 따라) 아스파라긴 297에 전형적으로 결합된다. 본원에 사용된, 복합 N-글리코시드-연결 당 쇄는 다음 구조를 주로 갖는, 2분기 복합 당 쇄를 갖는다:
Figure pct00001
식 중 ±는 당 분자가 당 분자가 존재하거나 부재할 수 있음을 나타내고, 번호는 당 분자들 사이 연결기의 위치를 나타낸다. 상기 구조에서, 아스파라긴에 결합하는 당 쇄 말단은 (오른쪽에) 환원 말단이라고 하고, 반대 측은 비-환원 말단이라고 한다. 푸코스는 환원 말단의 N-아세틸글루코사민 ("GlcNAc")에, 전형적으로 α1,6 결합에 의해 보통 결합된다 (GlcNAc의 6-위치는 푸코스의 1-위치에 연결된다). "Gal"은 갈락토스를 지칭하고, "Man"은 만노스를 지칭한다.
"복합 N-글리코시드-연결 당 쇄"는 1) 코어 구조의 비-환원 말단 측이 갈락토스-N-아세틸글루코사민 ("gal-GlcNAc"로도 지칭됨)의 0, 1개 또는 그 이상 분지를 갖고 gal-GlcNAc의 비-환원 말단 측이 시알산, 이등분 N-아세틸글루코사민 또는 기타 등등을 임의로 갖는 복합 유형; 및 2) 코어 구조의 비-환원 말단 측이 높은 만노스 N-글리코시드-연결 당 쇄 및 복합 N-글리코시드-연결 당 쇄의 양쪽 분지를 갖는 하이브리드 유형을 포함한다.
본원에 제공된 일부 방법에서, 소량의 푸코스만이 항체의 복합 N-글리코시드-연결 당 쇄(들)에 편입된다. 예를 들어, 다양한 구현예에서, 조성물에서 항체의 약 60% 미만, 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 약 15% 미만, 약 10% 미만, 약 5% 미만, 또는 약 3% 미만은 푸코스에 의한 코어 푸코실화를 갖는다. 일부 구현예에서, 조성물에서 항체의 약 2%는 푸코스에 의한 코어 푸코실화를 갖는다. 다양한 구현예에서, 조성물에서 항체의 60% 미만이 푸코스에 의한 코어 푸코실화를 갖는 때, 조성물의 항체는 "비푸코실화된" 또는 "아푸코실화된"으로서 지칭될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물에서 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%는 비푸코실화된다.
특정 구현예에서, 소량의 푸코스 유사체 (또는 푸코스 유사체의 대사산물 또는 생산물)만이 복합 N-글리코시드-연결 당 쇄(들)에 편입된다. 예를 들어, 다양한 구현예에서, 항체의 약 60% 미만, 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 약 15% 미만, 약 10% 미만, 약 5% 미만, 또는 약 3% 미만은 푸코스 유사체 또는 푸코스 유사체의 대사산물 또는 생산물에 의한 코어 푸코실화를 갖는다. 일부 구현예에서, 항체의 약 2%는 푸코스 유사체 또는 푸코스 유사체의 대사산물 또는 생산물에 의한 코어 푸코실화를 갖는다.
일부 구현예에서, 조성물에서 항체의 약 60% 미만, 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 약 15% 미만, 약 10% 미만, 약 5% 미만, 또는 약 3% 미만은 G0, G1, 또는 G2 글리칸 구조 상에서 푸코스 잔기를 갖는다. (예를 들면, Raju 등, 2012, MAbs 4: 385-391, 도 3. 참조) 일부 구현예에서, 조성물에서 항체의 약 2%는 G0, G1, 또는 G2 글리칸 구조 상에서 푸코스 잔기를 갖는다. 다양한 구현예에서, 조성물에서 항체의 60% 미만이 G0, G1, 또는 G2 글리칸 구조 상에서 푸코스 잔기를 갖는 때, 조성물의 항체는 "비푸코실화된"으로서 지칭될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물에서 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%는 G0, G1, 또는 G2 글리칸 구조 상에서 푸코스가 결여된다. G0 글리칸이 G0-GN 글리칸을 포함하는 것이 유의되어야 한다. G0-GN 글리칸은 하나의 말단 GlcNAc 잔기를 가진 1분기 글리칸이다. G1 글리칸은 G1-GN 글리칸을 포함한다. G1-GN 글리칸은 하나의 말단 갈락토스 잔기를 가진 1분기 글리칸이다. G0-GN 및 G1-GN 글리칸은 푸코실화 또는 비푸코실화될 수 있다.
비푸코실화된 항체를 생성하는 다양한 방법은 활용될 수 있다. 예시적 전략은 푸코실화 경로에 연루된 특정 생합성 효소가 결여된 세포주의 사용 또는 푸코실화 경로에 연루된 특정 유전자의 억제 또는 녹아웃을 포함한다. 이러한 접근법의 검토는 이 전체가 참조로 본원에 편입되는 Pereira, 등 (2018) MABS 10:693-711에 의해 제공된다.
예를 들어, 항체-생산 세포를 푸코스 유사체와 인큐베이션함으로써 비푸코실화된 항체를 만드는 방법은, 예를 들면, WO2009/135181에 기재된다. 간략히, 항체를 발현시키도록 조작된 세포는 푸코스 유사체 또는 푸코스 유사체의 세포내 대사산물 또는 생산물의 존재 하에서 인큐베이션된다. 세포내 대사산물은, 예를 들어, GDP-변형 유사체 또는 완전히 또는 부분적으로 탈-에스테르화된 유사체일 수 있다. 생산물은, 예를 들어, 완전히 또는 부분적으로 탈-에스테르화된 유사체일 수 있다. 일부 구현예에서, 푸코스 유사체는 푸코스 회수 경로에서 효소(들)를 억제시킬 수 있다. 예를 들어, 푸코스 유사체 (또는 푸코스 유사체의 세포내 대사산물 또는 생산물)는 푸코키나아제, 또는 GDP-푸코스-피로포스포릴라아제의 활성을 억제시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 푸코스 유사체 (또는 푸코스 유사체의 세포내 대사산물 또는 생산물)는 푸코실트랜스퍼라제 (바람직하게는 1,6-푸코실트랜스퍼라제, 예를 들면, FUT8 단백질)를 억제시킨다. 일부 구현예에서, 푸코스 유사체 (또는 푸코스 유사체의 세포내 대사산물 또는 생산물)는 푸코스에 대하여 드 노보 합성 경로에서 효소의 활성을 억제시킬 수 있다. 예를 들어, 푸코스 유사체 (또는 푸코스 유사체의 세포내 대사산물 또는 생산물)는 GDP-만노스 4,6-탈수효소 또는/또는 GDP-푸코스 합성효소의 활성을 억제시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 푸코스 유사체 (또는 푸코스 유사체의 세포내 대사산물 또는 생산물)는 푸코스 수송체 (예를 들면, GDP-푸코스 수송체)를 억제시킬 수 있다.
일 구현예에서, 푸코스 유사체는 2-플루로푸코스이다. 성장 배지에서 푸코스 유사체 및 다른 푸코스 유사체를 사용하는 방법은, 예를 들면, 참조로 본원에 편입되는 WO 2009/135181에 개시된다.
코어 푸코실화를 감소시키기 위해 세포주를 조작하는 다른 방법은 유전자 녹-아웃, 유전자 녹-인 및 RNA 간섭 (RNAi)을 포함하였다.　예를 들면, Pereira 등, 2018, MAbs, 10(5): 693-711을 참조한다. 유전자 녹-아웃에서, 유전자 인코딩 FUT8 (알파 1,6-푸코실트랜스퍼라제 효소)은 비활성화된다. FUT8은 GDP-푸코스로부터 N-글리칸의 Asn-연결 (N-연결) GlcNac의 위치 6으로 푸코실 잔기의 전이를 촉매작용한다. FUT8은 Asn297에서 N-연결 2분기 탄수화물에 푸코스 부가하는 것을 담당하는 유일한 효소인 것으로 보고된다. 유전자 녹-인은 효소 예컨대 GNTIII 또는 골지 알파 만노시다제 II를 인코딩하는 유전자를 부가한다. 세포에서 이러한 효소의 수준에서의 증가는 푸코실화 경로로부터 단클론성 항체를 전환시키고 (축소된 코어 푸코실화로 이어짐), 이등분 N-아세틸글루코사민의 증가된 양을 갖는다. RNAi는 전형적으로 또한 FUT8 유전자 발현을 표적화하여, 축소된 mRNA 전사 수준을 초래하거나 유전자 발현을 완전히 녹아웃시킨다.
사용될 수 있는 다른 전략은 GlycoMAb® (미국 특허 번호 6,602,684) 및 Potelligent® (BioWa)를 포함한다.
이들 방법들 중 임의의 것은 비푸코실화된 항체를 생산할 수 있는 세포주를 생성하는데 사용될 수 있다.
다양한 조작 접근법은 원하는 FcγR 활성 및 효과기 기능을 가진 Fc 영역을 수득하는데 또한 활용될 수 있다. 일부 구현예에서, Fc는, FcγRIIIA에 대하여 Fc 도메인의 친화성을 증가시키고 후속적으로 ADCC를 증가시키는, 돌연변이들의 하기 조합: S239D, A330L 및 I332E을 갖도록 조작된다. FcγRIIIa에 대하여 친화성을 향상시키는 추가의 치환은, 예를 들어, T256A, K290A, S298A, E333A, 및 K334A를 포함한다. 활성화 FcγRIIIa에 결합을 향상시키고 억제성 FcγRIIIb에 결합을 감소시킨 치환은, 예를 들어, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L 및 F243L/R292P/Y300L/L235V/P396L을 포함한다. 일부 구현예에서, 치환은 IgG1 Fc 배경에 있다.
보존된 Asn297에 공유적으로 부착된 올리고당은 FcγR을 결합시키는 IgG의 Fc 영역의 능력에 연루된다 (Lund 등, 1996, J. Immunol. 157:4963-69; Wright and Morrison, 1997, Trends Biotechnol. 15:26-31). IgG에 관한 이 글리코폼의 조작은 IgG-매개된 ADCC를 상당히 개선할 수 있다. 이 글리코폼에 이등분 N-아세틸글루코사민 변형의 부가 (Umana 등, 1999, Nat. Biotechnol. 17:176-180; Davies 등, 2001, Biotech. Bioeng. 74:288-94) 또는 이 글리코폼으로부터 푸코스의 제거 (Shields 등, 2002, J. Biol. Chem. 277:26733-40; Shinkawa 등, 2003, J. Biol. Chem. 278:6591-604; Niwa 등, 2004, Cancer Res. 64:2127-33)는 IgG Fc와 FcγR 사이 결합을 개선하고, 이로써 Ig-매개된 ADCC 활성을 향상시키는 IgG Fc 조작의 2개 예이다.
인간 IgG1 Fc 영역의 용매-노출 아미노산의 체계적 치환은 변경된 FcγR 결합 친화성을 가진 IgG 변이체를 생성하였다 (Shields 등, 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604). 친계 IgG1과 비교된 때, Thr256/Ser298, Ser298/Glu333, Ser298/Lys334, 또는 Ser298/Glu333/Lys334에서 Ala로의 치환을 포함하는 이들 변이체의 서브세트는 FcγR에 대한 결합 친화성 및 ADCC 활성 양쪽에서 증가된 것으로 입증한다 (Shields 등, 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604; Okazaki 등, 2004, J. Mol. Biol. 336:1239-49).
많은 방법은 항체 상에서 푸코실화의 양을 결정하는데 이용가능하다. 방법은, 예를 들면, PLRP-S 크로마토그래피를 통한 LC-MS, 전자분무 이온화 사중극자 TOF MS, 레이저-유도 형광을 사용한 모세관 전기영동 (CE-LIF), 및 형광 검출을 사용한 친수성 상호작용 크로마토그래피 (HILIC)를 포함한다.
IV. 예시적 항체-약물 접합체 (ADC)
선행 섹션은 면역 조절에 연루되는 표적 (면역 세포 인게이저)에 결합하는 항체의 관련한 양태를 기재하였다. 상기 언급된 대로, 본원에 제공되는 방법들 중 일부는 또한 면역 세포 인게이저에 결합하는 항체와 조합으로 튜불린 교란제 (예를 들면, 아우리스타틴 가령 MMAE 및 MMAF 포함)를 포함하는 항체-약물 접합체 (ADC)를 투여하는 것을 포함한다. 다양한 구현예에서, 항체-약물 접합체는 세포독성제에 접합된 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포독성제는 튜불린 교란제이다. 일부 구현예에서, 항체는 종양 세포 상에서 발현된 항원을 결합시킨다. 본원에 제공된 방법에서 활용되는 ADC에 관한 추가 상세는 이 섹션에서 그리고 아래 실시예에서 제시된다. 본원에 기재된 ADC들 중 임의의 것은 본원에 기재된 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체들의 임의의 것과 조합될 수 있다.
A. 예시적 표적 항원
일부 구현예에서, ADC는 종양 세포 상에서 발현된 항원을 결합시킨다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법에서 사용된 ADC는 세포독성제에 접합된 항체를 포함하고, 여기서 항체는 5T4 (TPBG), ADAM-9, AG-7, ALK, ALP, AMHRII, APLP2, ASCT2, AVB6, AXL (UFO), B7-H3 (CD276), B7-H4, BCMA, C3a, C3b, C4.4a (LYPD3), C5, C5a, CA6, CA9, CanAg, 탄산 무수화효소 IX (CAIX), 카텝신 D, CCR7, CD1, CD10, CD100, CD101, CD102, CD103, CD104, CD105, CD106, CD107a, CD107b, CD108, CD109, CD111, CD112, CD113, CD116, CD117, CD118, CD119, CD11A, CD11b, CD11c, CD120a, CD121a, CD121b, CD122, CD123, CD124, CD125, CD126, CD127, CD13, CD130, CD131, CD132, CD133, CD135, CD136, CD137, CD138, CD14, CD140a, CD140b, CD141, CD142, CD143, CD144, CD146, CD147, CD148, CD15, CD150, CD151, CD154, CD155, CD156a, CD156b, CD156c, CD157, CD158b2, CD158e, CD158f1, CD158h, CD158i, CD159a, CD16, CD160, CD161, CD162, CD163, CD164, CD166, CD167b, CD169, CD16a, CD16b, CD170, CD171, CD172a, CD172b, CD172g, CD18, CD180, CD181, CD183, CD184, CD185, CD19, CD194, CD197, CD1a, CD1b, CD1c, CD1d, CD2, CD20, CD200, CD201, CD202b, CD203c, CD204, CD205, CD206, CD208, CD21, CD213a1, CD213a2, CD217, CD218a, CD22, CD220, CD221, CD222, CD224, CD226, CD228, CD229, CD23, CD230, CD232, CD239, CD243, CD244, CD248, CD249, CD25, CD26, CD265, CD267, CD269, CD27, CD272, CD273, CD274, CD275, CD279, CD28, CD280, CD281, CD282, CD283, CD284, CD289, CD29, CD294, CD295, CD298, CD3, CD3 엡실론, CD30, CD300f, CD302, CD304, CD305, CD307, CD31, CD312, CD315, CD316, CD317, CD318, CD319, CD32, CD321, CD322, CD324, CD325, CD326, CD327, CD328, CD32b, CD33, CD331, CD332, CD333, CD334, CD337, CD339, CD34, CD340, CD344, CD35, CD352, CD36, CD37, CD38, CD39, CD3d, CD3g, CD4, CD41, CD42d, CD44, CD44v6, CD45, CD46, CD47, CD48, CD49a, CD49b, CD49c, CD49d, CD49e, CD49f, CD5, CD50, CD51, CD51 (인테그린 알파-V), CD52, CD53, CD54, CD55, CD56, CD58, CD59, CD6, CD61, CD62L, CD62P, CD63, CD64, CD66a-e, CD67, CD68, CD69, CD7, CD70, CD70L, CD71, CD71 (TfR), CD72, CD73, CD74, CD79a, CD79b, CD8, CD80, CD82, CD83, CD84, CD85f, CD85i, CD85j, CD86, CD87, CD89, CD90, CD91, CD92, CD95, CD96, CD97, CD98, CDH6, CDH6 (카드헤린 6), CDw210a, CDw210b, CEA, CEACAM5, CEACAM6, CFC1B, cKIT, CLDN18.2 (클라우딘 18.2), CLDN6, CLDN9, CLL-1, c-MET, 보체 인자 C3, 크립토, CSP-1, CXCR5, DCLK1, DLK-1, DLL3, DPEP3, DR5 (사멸 수용체 5), 디스에드헤린, EFNA4, EGFR, EGFR 야생형, EGFRviii, EGP-1 (TROP-2), EGP-2, EMP2, ENPP3, EpCAM, EphA2, EphA3, 에프린-A4 (EFNA4), ETBR, FAP, FcRH5, FGFR2, FGFR3, FLT3, FOLR, FOLR1, FOLR-알파, FSH, GCC, GD2, GD3, 글로보 H, GPC1, GPC-1, GPC3, GPNMB, GPR20, HER2, HER-2, HER3, HER-3, HGFR (c-Met), HLA-DR, HM1.24, HSP90, Ia, IGF-1R, IL-13R, IL-15, IL1RAP, IL-2, IL-3, IL-4, IL7R, 인테그린 알파V베타3 (인테그린 αVβ3), 인테그린 베타-6, 인터류킨-4 수용체 (IL4R), KAAG-1, KLK2, LAMP-1, Le(y), 루이스 Y 항원, LGALS3BP, LGR5, LH/hCG, LHRH, 지질 래프트, LIV-1 (SLC39A6 또는 ZIP6), LRP-1, LRRC15, LY6E, 대식세포 만노스 수용체 1, MAGE, 메소텔린 (MSLN), MET, MHC 클래스 I 쇄-관련 단백질 A 및 B (MICA 및 MICB), MN/CA IX, MRC2, MT1-MMP, MTX3, MTX5, MUC1, MUC16, MUC2, MUC3, MUC4, MUC5, MUC5ac, NaPi2b, NCA-90, NCA-95, 넥틴-4, Notch3, 뉴클레올린, OAcGD2, OT-MUC1 (종양-속박-MUC1), OX001L, P1GF, PAM4 항원, p-카드헤린 (카드헤린 3), PD-L1, 포스파티딜 세린(PS), PRLR, 프로락틴 수용체 (PRLR), 슈도모나스, PSMA, PTK4, PTK7, 수용체 티로신 키나제 (RTK), RNF43, ROR1, ROR2, SAIL, SEZ6, SLAMF7, SLC44A4, SLITRK6, SLMAMF7 (CS1), SLTRK6, 소르틸린 (SORT1), SSEA-4, SSTR2, 황색포도상구균 (항생 제제), STEAP-1, STING, STn, T101, TAA, TAC, TDGF1, 테나신, TENB2, TGF-B, 톰슨-프라이덴리히 항원, Thy1.1, TIM-1, 조직 인자 (TF; CD142), TM4SF1, Tn 항원, TNF-알파 (TNFα), TRA-1-60, TRAIL 수용체 (R1 및 R2), TROP-2, 종양-연관된 당단백질 72 (TAG-72), uPAR, VEGFR, VEGFR-2, 및 xCT로부터 선택된 항원을 특이적으로 결합시킨다.
일부 구현예에서, ADC는 EGFR, KAAG1, MET, CD30, HER2, CD30, IL7R, CD248, 종양-연관된 당단백질 72 (TAG-72), MRC2, EGFR, CD71, TRA-1-60, STn, CLDN18.2, CLDN6, HER-2, CD33,CD7, OT-MUC1 (종양-속박-MUC1), TRA-1-60, TIM-1, GCC, 메소텔린 (MSLN), EGFR, gpNMB, CD20, AMHRII, NaPi2b, CD142, ROR1, 인테그린 베타-6, Ly6E, cMET, CD37, MUC16, STEAP-1, LRRC15, SLITRK6, MUC16, ETBR, FCRH5, Axl, CD79b, 글로보 H, SLAMF7, PSMA, CD22, CD228, CD48, LIV-1, EphA2, SLC44A4, CA9, Axl, 및 LGR5로부터 선택된 항원을 결합시킨다.
일부 구현예에서, ADC는 BCMA, GPC1, CD30, cMET, SAIL, HER3, CD70, c-MET, CD46, HER2, 5T4, ENPP3, CD19, EGFR, BCMA, CD70, BCMA, 및 EphA2로부터 선택된 항원을 결합시킨다.
일부 구현예에서, ADC는 Her2, TROP2, BCMA, cMet, 인테그린 알프V베타6 (인테그린 αVβ6), CD22, CD79b, CD30, CD19, CD70, CD228, 및 CD47로부터 선택된 항원을 결합시킨다.
일부 구현예에서, ADC는 CD142, 인테그린 베타-6, ENPP3, CD19, Ly6E, cMET, C4.4a, CD37, MUC16, STEAP-1, LRRC15, SLITRK6, MUC16, ETBR, FCRH5, Axl, EGFR, CD79b, BCMA, CD70, PSMA, CD79b, CD228, CD48, LIV-1, EphA2, SLC44A4, CD30, 및 sTn으로부터 선택된 항원을 결합시킨다.
일부 구현예에서, ADC는 5T4, ADAM-9, AG-7, ALK, AMHRII, APLP2, ASCT2, Axl, B7-H3, B7-H4, BCMA, C4.4a, CA6, CA9, CanAg, 탄산 무수화효소 IX (CAIX), 카텝신 D, CCR7, CD103, CD123, CD133, CD138, CD142, CD147, CD16, CD166, CD184, CD19, CD20, CD205, CD206, CD22, CD228, CD248, CD25, CD3, CD3 엡실론, CD30, CD300f, CD317, CD33, CD352, CD37, CD38, CD44v6, CD45, CD46, CD47, CD48, CD51, CD56, CD7, CD70, CD71, CD74, CD79b, CDH6, CEA, CEACAM5, CEACAM6, cKIT, CLDN18.2, CLDN6, CLDN9, CLL-1, c-MET, 크립토, CSP-1, CXCR5, DCLK1, DLK-1, DLL3, DPEP3, DR5 (사멸 수용체 5), 디스에드헤린, EFNA4　, EGFR, EGFR 야생형, EGFRviii, EMP2, ENPP3, EpCAM, EphA2, EphA3, ETBR, FAP, FCRH5, FGFR2, FGFR3, FLT3, FOLR, FOLR-알파, FSH, GCC, GD2, GD3, 글로보 H, GPC-1, GPC3, gpNMB, GPR20, HER-2, HER-3, HLA-DR, HSP90, IGF-1R, IL-13R, IL-15, IL1RAP, IL-2, IL-3, IL-4, IL7R, 인테그린 베타-6, 인터류킨-4 수용체 (IL4R), KAAG-1, KLK2, LAMP-1, 루이스 Y 항원, LGALS3BP, LGR5, LH/hCG, LHRH, 지질 래프트, LIV-1, LRP-1, LRRC15, Ly6E, 대식세포 만노스 수용체 1, MAGE, 메소텔린　 (MSLN), MET, MHC 클래스 I 쇄-관련 단백질 A 및 B (MICA 및 MICB), MRC2, MT1-MMP, MTX3, MTX5, MUC-1, MUC16, NaPi2b, 넥틴-4, NOTCH3, 뉴클레올린, OAcGD2, OT-MUC1 (종양-속박-MUC1), OX001L, P-카드헤린, PD-L1, 포스파티딜 세린, 포스파티딜세린 (PS), 프로락틴 수용체 (PRLR), 슈도모나스, PSMA, PTK7, 수용체 티로신 키나제 (RTK), RNF43, ROR1, ROR2, SAIL, SEZ6, SLAMF7, SLC44A4, SLITRK6, 소르틸린 (SORT1), SSEA-4, SSTR2, 황색포도상구균 (항생 제제), STEAP-1, STING, STING (페이로드 표적), STn, TAA, TGF-B, TIM-1, TM4SF1, TNF-알파, TRA-1-60, TROP-2, 종양-연관된 당단백질 72 (TAG-72), VEGFR-2, xCT로부터 선택된 항원을 결합시킨다.
일부 구현예에서, ADC는 AMHRII, Axl, CA9, CD142, CD20, CD22, CD228, CD248, CD30, CD33,CD7, CD48, CD71, CD79b, CLDN18.2, CLDN6, c-MET, EGFR, EphA2, ETBR, FCRH5, GCC, 글로보 H, gpNMB, HER-2, IL7R, 인테그린 베타-6, KAAG-1, LGR5, LIV-1, LRRC15, Ly6E, 메소텔린　(MSLN), MET, MRC2, MUC16, NaPi2b, 넥틴-4, OT-MUC1 (종양-속박-MUC1), PSMA, ROR1, SLAMF7, SLC44A4, SLITRK6, STEAP-1, STn, TIM-1, TRA-1-60, 종양-연관된 당단백질 72 (TAG-72)로부터 선택된 항원을 결합시킨다.
일부 구현예에서, ADC는 BCMA, GPC-1, CD30, c-MET, SAIL, HER-3, CD70, CD46, HER-2, 5T4, ENPP3, CD19, EGFR, EphA2로부터 선택된 항원을 결합시킨다.
일부 구현예에서, ADC의 항체는 넥틴-4를 결합시키지 않는다.
전형적으로, ADC의 항체 및 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 2개 별도 항체이다. 특정 구현예에서, 하지만, 항체는 이중특이적 항체를 형성할 수 있다.
B. 예시적 세포독성제
다양한 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 항체-약물 접합체를 투여하는 것을 포함하고, 여기서 항체-약물 접합체는 튜불린 교란제에 접합된 항체를 포함한다.
비제한적으로, 돌라스타틴, 아우리스타틴, 튜불리신, 콜히친, 빈카 알칼로이드, 탁산, T67 (Tularik), 크립토피신, 메이탄시노이드, 헤미아스털린, 및 기타 튜불린 교란제를 포함하는 다양한 범주의 튜불린 교란제는 업계에서 공지되어 있다.
아우리스타틴은 자연 산물 돌라스타틴의 유도체이다. 예시적 아우리스타틴은 돌로스타틴-10, 아우리스타틴 E, 아우리스타틴 T, MMAE (N-메틸발린-발린-돌라이소류인-돌라프로인-노르에페드린 또는 모노메틸 아우리스타틴 E) 및 MMAF (N-메틸발린-발린-돌라이소류인-돌라프로인-페닐알라닌 또는 도발린-발린-돌라이소류닌-돌라프로인-페닐알라닌), AEB (아우리스타틴 E를 파라아세틸 벤조산과 반응시킴으로써 생산된 에스테르), AEVB (아우리스타틴 E를 벤조일발레르산과 반응시킴으로써 생산된 에스테르), 및 AFP (디메틸발린-발린-돌라이소류인-돌라프로인-페닐알라닌-p-페닐렌디아민 또는 아우리스타틴 페닐알라닌 페닐렌디아민)를 포함한다. WO 2015/057699는 MMAE를 포함하는 PEG화된 아우리스타틴을 설명한다. 사용을 위하여 고려된 추가의 돌로스타틴 유도체는 임의의 목적을 위하여 참조로 본원에 편입된 미국 특허 번호 9,345,785에 개시된다. 예시적 아우리스타틴 구현예는, "Senter 등, Proceedings of the American Association for Cancer Research, 부피 45, Abstract Number 623에 개시된, 2004년 3월 28일 제시된, 그리고 이의 개시내용이 이 전체가 참조로 분명히 편입되는 미국 특허 공개 번호 2005/0238649에 기재된 N-말단 연결된 모노메틸아우리스타틴 약물 단위 DE 및 DF를 포함한다.
특정 구현예에서, ADC 세포독성제는 MMAE이다.
다른 구현예에서, ADC에 접합된 세포독성제는 MMAF이다.
튜불리신은, 비제한적으로, 튜불리신 D, 튜불리신 M, 튜부페닐알라닌 및 튜부티로신을 포함한다. WO 2017-096311 및 WO 2016-040684는 튜불리신 M을 포함하는 비제한 튜불리신 유사체를 설명한다.
콜히친은, 비제한적으로, 콜히친 및 CA-4를 포함한다.
빈카 알칼로이드는, 비제한적으로, 빈블라스틴 (VBL), 비노렐빈 (VRL), 빈크리스틴 (VCR) 및 빈드페신 (VDS)을 포함한다.
탁산은, 비제한적으로, Taxol® (파클리탁셀) 및 Taxotere® (도세탁셀)을 포함한다.
크립토피신은 비제한적으로 크립토피신-1 및 크립토피신-52를 포함한다.
메이탄시노이드는, 비제한적으로, 메이탄신, 메이탄시놀, 메이탄신 유사체, DM1, DM3 및 DM4, 및 안사마토신-2를 포함한다. 예시적 메이탄시노이드 약물 모이어티는 변형된 방향족 고리를 갖는 것들, 예컨대: C-19-데클로로 (미국 특허 번호 4,256,746) (안사마이토신 P2의 수소화알루미늄리튬 환원에 의해 제조됨); C-20-하이드록시 (또는 C-20-데메틸)+/-C-19-데클로로 (미국 특허 번호 4,361,650 및 4,307,016) (스트렙토마이신 또는　악티노마이신을 사용하는 탈메틸화 또는 LAH를 사용하는 탈염소화에 의해 제조됨); 및 C-20-데메톡시, C-20-아실옥시 (―OCOR), +/-데클로로 (미국 특허 번호 4,294,757) (아실 클로리드를 사용하는 아실화에 의해 제조됨), 및 다른 위치에서 변형을 갖는 것들을 포함한다.
메이탄시노이드 약물 모이어티는 변형을 갖는 것들 예컨대: C-9-SH (미국 특허 번호 4,424,219) (H.sub.25 또는 P.sub.2S.sub.5와 메이탄시놀의 반응에 의해 제조됨); C-14-알콕시메틸(데메톡시/CH.sub.20R) (미국 특허 번호 4,331,598); C-14-하이드록시메틸 또는 아실옥시메틸 (CH.sub.20H 또는 CH.sub.2OAc) (미국 특허 번호 4,450,254) (Nocardia로부터 제조됨); C-15-하이드록시/아실옥시 (미국 특허 번호 4,364,866) (스트렙토마이신에 의한 메이탄시놀의 전환에 의해 제조됨); C-15-메톡시 (미국 특허 번호 4,313,946 및 4,315,929) (Trewia nudlflora로부터 단리됨); C-18-N-데메틸 (미국 특허 번호 4,362,663 및 4,322,348) (스트렙토마이신에 의한 메이탄시놀의 탈메틸화에 의해 제조됨); 및 4,5-데옥시 (미국 특허 번호 4,371,533) (메이탄시놀의 삼염화티타늄/LAH 환원에 의해 제조됨)를 또한 포함한다. HER-2를 결합시키는 TA.1-메이탄소노이드 접합체의 세포독성 (Chari 등, Cancer Research 52:127-131 (1992)은 인간 유방암 세포주 SK-BR-3에 관해 시험관내 시험되었다. 약물 접합체는, 항체 분자당 메이탄시노이드 분자의 수를 증가시킴으로써 증가될 수 있는, 유리 메이탄시노이드 약물과 유사한 정도의 세포독성을 달성하였다.
헤미아스털린은 비제한적으로, 헤미아스털린 및 HTI-286을 포함한다.
다른 튜불린 교란제는 탁칼로놀리드 A, 탁칼로놀리드 B, 탁칼로놀리드 AF, 탁칼로놀리드 AJ, 탁칼로놀리드 AI-에폭시드, 디스코더몰리드, 바카틴 유도체, 탁산 유사체 (예를 들면, 에포틸론 A 및 에포틸론 B), 노코다졸, 콜히친, 콜시미드, 에스트라무스틴, 세마도틴, 콤브레타스타틴, 디스코더몰리드, 엘류테로빈, 에리불린, 프롤라볼린, 포몹신, 및 라우리말리드를 포함한다.
본원에 방법에서 사용을 위한 ADC는, 일부 구현예에서, 링커 단위를 포함할 수 있다. 예를 들어, ADC는 세포독성제와 항체 사이 링커 영역을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 프로테아제 절단가능한 링커, 산-절단가능한 링커, 디술피드 링커, 또는 자가-안정화 링커이다. 다양한 구현예에서, 링커는 링커의 절단이 세포내 환경에서 항체로부터 치료제를 방출하도록 세포내 조건 하에서 절단가능하다.
본원에 방법에서 사용을 위한 ADC는 항체로부터 (예를 들면, 가수분해에 의해, 항체 분해에 의해, 또는 절단 제제에 의해) 탈착되지 않는 한 이의 활성을 감소시키는 방식으로 치료제 (예를 들면, 튜불린 교란제)가 항체에 접합될 수 있는 링커를 포함할 수 있다. 이러한 치료제는 링커를 통해 항체에 부착될 수 있다. 링커에 접합된 치료제는 본원에 약물 링커로도 지칭된다. 링커의 성질은 널리 다양할 수 있다. 링커를 구성하는 구성요소는 접합체가 전달되는 부위에서 조건에 의해 부분적으로 구술될 수 있는 그들의 특징에 기초하여 선정된다.
치료제는 표적 세포의 세포내 환경에서 절단에 민감하지만 세포외 환경에 실질적으로 민감하지 않은 절단가능한 링커로 항체에 부착될 수 있어서, 접합체는 암 세포에 의해 (예를 들면, 엔도솜에서 또는, 예를 들어 pH 민감성 또는 프로테아제 민감성에 의해, 리소좀 환경에서 또는 카베올라 환경에서) 내재화되는 때 항체로부터 절단된다. 치료제는 비-절단가능한 링커로 항체에 또한 부착될 수 있다.
표시된 대로, 링커는 절단가능한 단위를 포함할 수 있다. 일부 이러한 구현예에서, 절단가능한 단위의 구조 및/또는 서열은 표적 부위 (예를 들면, 표적 세포)에 존재하는 효소의 작용에 의해 절단되도록 선택된다. 다른 구현예에서, pH (예를 들면 산 또는 염기 불안정), 온도 또는 조사시 (예를 들면 광불안정) 변화에 의해 절단하는 절단가능한 단위는 또한 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 절단가능한 단위는 하나의 아미노산 또는 아미노산의 연속 서열을 포함할 수 있다. 아미노산 서열은 효소에 대하여 표적 기질일 수 있다.
일부 양태에서, 절단가능한 단위는 펩티딜 단위이고 적어도 2개 아미노산 길이이다. 절단 제제는 카텝신 B 및 D 그리고 플라스민을 포함할 수 있다 (예를 들면, Dubowchik 및 Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123 참조). 가장 전형적인 것은 표적 세포에서 존재하는 효소에 의해 절단하는 절단가능한 단위, 즉, 효소 절단가능한 링커이다. 따라서, 링커는 리소좀 또는 엔도솜 프로테아제를 포함하는 세포내 펩티다제 또는 프로테아제 효소에 의해 절단될 수 있다. 예를 들어, 암성 조직에서 고도로 발현되는, 티올-의존적 프로테아제 카텝신-B에 의해 절단하는 링커 (예를 들면, Phe-Leu 또는 Val-Cit 펩티드 또는 Val-Ala 펩티드를 포함하는 링커)는 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 링커는 절단가능한 단위 (예를 들면, 펩티딜 단위)를 포함할 것이고 절단가능한 단위는 치료제에 직접적으로 접합될 것이다. 다른 구현예에서, 절단가능한 단위는 추가의 기능적 단위, 예를 들면, 자가-희생 스페이서 단위 또는 비-자가-희생 스페이서 단위를 통해 치료제에 접합될 것이다. 비-자가-희생 스페이서 단위는 스페이서 단위의 부분 또는 전부가 항체-약물 접합체로부터 절단가능한 단위 (예를 들면, 아미노산)의 절단후 약물 단위에 결합된 상태로 남아 있는 것이다. 약물을 유리시키기 위해, 독립적 가수분해 반응은 약물로부터 스페이서 단위를 절단하기 위해 표적 세포 내에서 발생한다.
자가-희생 스페이서 단위로, 약물은 별도 가수분해 단계를 위한 약물이 필요 없이 방출된다. 링커가 절단가능한 단위 및 자가 희생 그룹을 포함하는, 일 구현예에서, 절단가능한 단위는 효소의 작용에 의해 절단가능하고 절단가능한 단위의 절단 후, 자가-희생 그룹(들)은 치료제를 방출한다. 일부 구현예에서, 링커의 절단가능한 단위는 한쪽 단부에서 치료제에 직접적으로 또는 간접적으로 접합될 것이고 다른쪽 단부에서 항체에 직접적으로 또는 간접적으로 접합될 것이다. 일부 이러한 구현예에서, 절단가능한 단위는 한쪽 단부에서 치료제에 직접적으로 또는 간접적으로 (예를 들면, 자가-희생 또는 비-자가-희생 스페이서 단위를 통해) 접합될 것이고 다른쪽 단부에서 스트레처 단위를 통해 항체에 접합될 것이다. 스트레처 단위는 항체를 약물 및/또는 약물 링커의 나머지에 연결한다. 일 구현예에서, 항체와 약물 또는 약물 링커의 나머지 사이 연결은 말레이미드 기를 통해, 예를 들면, 말레이미도카프로일 링커를 통해 이루어진다. 일부 구현예에서, 항체는 디술피드, 예를 들어 디술피드 연결된 메이탄시노이드 접합체 SPDB-DM4 및 SPP-DM1을 통해 약물에 연결될 것이다.
항체와 링커 사이 연결은 다수의 상이한 루트를 통해, 예를 들면, 티오에테르 결합을 통해서, 디술피드 결합을 통해서, 아미드 결합을 통해서, 또는 에스테르 결합을 통해서 이루어질 수 있다. 일 구현예에서, 항체와 링커 사이 연결은 항체의 시스테인 잔기의 티올 기와 링커의 말레이미드 기 사이 형성된다. 일부 구현예에서, 항체의 쇄간 결합은 링커의 작용기와 반응에 앞서 유리 티올 기로 전환된다. 일부 구현예에서, 시스테인 잔기는 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입되고 링커와 반응된다. 항체 중쇄 또는 경쇄내 치환에 의한 시스테인 삽입을 위한 위치는 공개된 미국 출원 번호 2007-0092940 및 국제 특허 공개 WO2008070593에 기재된 것들을 포함하고, 이들의 각각은 이 전체가 본원에 참조로 그리고 모든 목적을 위하여 편입된다.
일부 구현예에서, 항체-약물 접합체는 다음 화학식 I을 갖는다:
L - (LU-D)p (I)
식 중 L은 항체이고, LU는 링커 단위이고 D는 약물 단위 (즉, 치료제)이다. 하첨자 p는 1 내지 20 범위이다. 이러한 접합체는 링커를 통해 적어도 하나의 약물에 공유적으로 연결된 항체를 포함한다. 링커 단위는 한쪽 단부에서 항체에 그리고 다른쪽 단부에서 약물에 연결된다.
약물 로딩은 항체당 약물 분자의 수인 p로 표시된다. 약물 로딩은 항체당 1 내지 20 약물 단위 (D) 범위일 수 있다. 일부 양태에서, 하첨자 p는 1 내지 20 (즉, 1 내지 20의 양쪽 정수 및 비-정수 값) 범위일 것이다. 일부 양태에서, 하첨자 p는 1 내지 20의 정수일 것이고, 단수 항체 상에서 약물-링커의 수를 나타낼 것이다. 다른 양태에서, p는 항체당 약물-링커 분자의 평균 수, 예를 들면, 반응 혼합물 또는 조성물 (예를 들면, 약학적 조성물)에서 항체당 약물-링커의 평균 수를 나타내고, 정수 또는 비-정수 값일 수 있다. 따라서, 일부 양태에서, 조성물 (예를 들면, 약학적 조성물)의 경우, p는 조성물에서 항체-약물 접합체의 평균 약물 로딩을 나타내고, p는 1 내지 20 범위이다.
일부 구현예에서, p는 항체당 약 1 내지 약 8개의 약물이다. 일부 구현예에서, p는 1이다. 일부 구현예에서, p는 2이다. 일부 구현예에서, p는 항체당 약 2 내지 약 8개의 약물이다. 일부 구현예에서, p는 항체당 약 2 내지 약 6, 2 내지 약 5, 또는 2 내지 약 4개의 약물이다. 일부 구현예에서, p는 항체당 약 2, 약 4, 약 6 또는 약 8개의 약물이다.
접합 반응으로부터 한 제조물에서 항체 단위당 약물의 평균 수는 종래 수단 예컨대 질량 분광법, ELISA 검정, HIC, 및 HPLC에 의해 특성규명될 할 수 있다. p의 측면에서 접합체의 정량적 분포는 또한 결정될 수 있다.
예시적 항체-약물 접합체는 아우리스타틴 기반된 항체-약물 접합체, 즉, 약물 구성요소가 아우리스타틴 약물인 접합체를 포함한다. 아우리스타틴은 튜불린을 결합시키고, 미소관 동역학 그리고 핵 및 세포성 분열을 방해하는 것으로 나타났고, 항암 활성을 갖는다. 전형적으로, 아우리스타틴 기반된 항체-약물 접합체는 아우리스타틴 약물과 항체 사이 링커를 포함한다. 아우리스타틴은 링커에 대한 접합에 적합한 임의의 위치에서 항체에 연결될 수 있다. 링커는, 예를 들어, 절단가능한 링커 (예를 들면, 펩티딜 링커) 또는 비-절단가능한 링커 (예를 들면, 항체의 분해에 의해 방출된 링커)일 수 있다. 아우리스타틴은 아우리스타틴 E 또는 이의 유도체일 수 있다. 아우리스타틴은, 예를 들어, 아우리스타틴 E와 케토 산 사이 형성된 에스테르일 수 있다. 예를 들어, 아우리스타틴 E는 파라아세틸 벤조산 또는 벤조일발레르산과 반응되어 각각 AEB 및 AEVB를 생산할 수 있다. 다른 전형적 아우리스타틴은 MMAF (모노메틸 아우리스타틴 F), 및 MMAE (모노메틸 아우리스타틴 E)를 포함한다. 예시적 아우리스타틴의 합성 및 구조는 이들의 각각이 이 전체가 참조로 본원에 그리고 전체 목적을 위하여 편입되는 미국 특허 또는 공개 번호 7,659,241, 7,498,298, 2009-0111756, 2009-0018086, 및 7,968, 687에 기재된다.
예시적 아우리스타틴 기반된 항체-약물 접합체는 Ab가 본원에 기재된 대로 항체이고 val-cit가 발린-시트룰린 디펩티드를 나타내는 아래 나타난 대로 vcMMAE, vcMMAF 및 mcMMAF 항체-약물 접합체:
Figure pct00002
Ab-vcMMAE
Figure pct00003
Ab-vcMMAF
Figure pct00004
Ab-mcMMAF
또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다. 약물 로딩은 항체당 약물-링커 분자의 수인 p로 표시된다. 맥락에 의존하여, p는 평균 약물 로딩으로도 지칭된, 항체당 약물-링커 분자의 평균 수를 나타낼 수 있다. 가변 p는 1 내지 20 범위이고 바람직하게는 1 내지 8이다. 일부 바람직한 구현예에서, p가 평균 약물 로딩을 나타내는 때, p는 약 2 내지 약 5의 범위이다. 일부 구현예에서, p는 약 2, 약 3, 약 4, 또는 약 5이다. 일부 양태에서, 항체는 시스테인 잔기의 황 원자를 통해 링커에 접합된다. 일부 양태에서, 시스테인 잔기는 항체로 조작되는 것이다. 다른 양태에서, 시스테인 잔기는 쇄간 디술피드 시스테인 잔기이다.
일부 다른 구현예에서, 항체-약물 접합체는 참조로 이 전체가 본원에 편입된 출원 US20160310612A1 (PCT/US2014/060477)에서 개시된 링커 단위를 갖는다. 일부 다른 구현예에서, 항체-약물 접합체는 다음 화학식 (II)를 갖는다:
Figure pct00005
식 중 D는 약물 단위이고, PEG는 약물-링커의 소수성을 가리는 폴리에틸렌 글리콜 단위이고, Lp는 PEG 단위가 X-D에 관하여 평행 배향이도록 하는 평행 커넥터 단위이고, A는 아단위로 임의로 구성된, m이 1 초과인 때 분지화 단위이거나, A는 m이 1인 때 부재이고, X는 LDC로부터 각 D의 방출을 제공하는 방출가능한 조립 단위이고 Z는, 항체인, Lp가 L에 결합되는 임의적 스페이서 단위이다.
일부 구현예에서, 항체-약물 접합체는 다음 화학식 III을 갖는다:
Figure pct00006
식 중 AD는 PEG 단위에 대한 평행 배향으로 t에 의해 표시된 X-D 모이어티의 추가의 부착을 허용하는 약물 부착 단위이고 L, Lp, Z, A, X, D, m, p 및 s는 화학식 II에 대하여 정의된 바와 같다
또 다른 원리 구현예에서 본 발명의 LDC는 아래 화학식 IV의 구조로 표시된다:
Figure pct00007
식 중 AD, L, Lp, PEG, Z, A, X, D, m, p, s 및 t는 화학식 III에 대하여 정의된 바와 같다.
일부 구현예에서, 항체-약물 접합체는 다음 화학식 1:
L-[LU-D']p (1)
또는 이의 염, 특히 약학적으로 허용가능한 염을 갖고, 식 중
L은 항체이고;
LU는 링커 단위이고;
D'는 화학식 -LU-D'의 각 약물 링커 모이어티에서 1 내지 약물 단위 (D)를 나타내고;
하첨자 p는 1 내지 12, 1 내지 10 또는 1 내지 8의 수이거나 약 4 또는 약 8이고,
여기서 항체는 유리 세포독성제로서 약물 단위의 후속 방출을 위한 종양 조직의 항원에 선택적으로 결합할 수 있고,
여기서 조성물의 항체-약물 접합체의 각각에서 화학식 -LU-D'의 약물 링커 모이어티는 화학식 1A의 구조:
Figure pct00008
또는 이의 염, 특히 약학적으로 허용가능한 염을 갖고,
식 중 파선은 L에 공유 부착을 나타내고;
D는 세포독성제의 약물 단위이고;
LB는 항체 공유 결합 모이어티이고;
A는 제1 임의적 스트레처 단위이고;
하첨자 a는 각각 A의 존재의 부재를 나타내는 0 또는 1이고;
B는 임의적 분지화 단위이고;
하첨자 b는, 각각 B의 존재의 부재를 나타내는 0 또는 1이고;
LO은 2차 링커 모이어티이고, 여기서 2차 링커는 다음의 화학식을 갖고;
Figure pct00009
,
식 중 Y에 인접한 파선은 약물 단위에 대한 LO의 공유 부착의 부위를 나타내고 A'에 인접한 파선은 약물 링커 모이어티의 나머지에 대한 공유 부착의 부위를 나타내고;
A'는, B의 부재 하에서 A의 아단위가 되는, 제2 임의적 스트레처 단위이고,
하첨자 a'는 각각 A'의 부재 또는 존재를 나타내는 0 또는 1이고,
W는 펩티드 절단가능한 단위이고, 여기서 펩티드 절단가능한 단위는 최대 12 (예를 들면, 3-12 또는 3-10)개 아미노산의 연속 서열이고, 여기서 서열은 이의 펩티드 절단가능한 단위의 펩티드 서열이 디펩티드-발린-시트룰린- 또는 -발린-알라닌-인 비교기 항체-약물 접합체 조성물의 항체-약물 접합체 조성물로부터 방출된 세포독성제와 비교에서 조성물의 항체-약물 접합체로부터 방출된 유리 세포독성제에 정상 조직보다 종양 조직의 노출을 위하여 개선된 선택성을 제공하는 선택성 부여 트리펩티드로 구성되고;
여기서 종양 및 정상 조직은 설치류 종이고 여기서 화학식 1 조성물은 다음에 의해 입증된 상기 개선된 노출 선택성을 제공하고:
비교기 항체-약물 접합체 조성물에 대하여 이전에 결정된 동일한 유효량 및 용량 일정으로 투여된 때 비교기 항체-약물 접합체 조성물의 종양 이종이식 모델에서 효능 유지하기, 및
조성물의 항체-약물 접합체로부터 방출된 유리 세포독성제의 혈장 농도에서의 감소, 및/또는 양쪽 접합체 조성물의 항체가 비-결합 항체에 의해 대체되는 비교기 항체-약물 접합체 조성물의 동등한 (예를 들면, 동일한) 투여와 비교에서 비-종양 보유 설치류에 종양 이종이식 모델에서와 같이 동일한 유효량 및 용량 일정으로 투여된 때 조직내 정상 세포의 보존을 보여주기,
여기서 비-종양 보유 설치류의 조직에서 정상 세포와 동일한 유형의 인간 조직내 세포에 대한 세포독성은 비교기 접합체 조성물의 치료적으로 유효량이 투여되는 인간 대상체에서 적어도 부분적으로 부작용을 담당하고;
Y는 자가-희생 스페이서 단위이고;
하첨자 y는 각각 Y의 1 또는 2의 부재 또는 존재를 나타내는 0, 1 또는 2이고;
하첨자 q는 1 내지 4 범위의 정수이고,
단, 하첨자 b가 0인 경우 하첨자 q는 1이고 하첨자 b가 1인 경우 하첨자 q는 2, 3 또는 4이고;
여기서 조성물의 항체-약물 접합체는 하첨자 p가 하첨자 p'로 대체되고, 여기서 하첨자 p'가 1 내지 12, 1 내지 10 또는 1 내지 8의 정수이거나 4 또는 8인 화학식 1의 구조를 갖는다.
관련된 구현예는 화학식 V의 약물 링커:
LU'-(D') (V)
또는 이의 염, 특히 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하고, 식 중 LU'는 화학식 1의 L과 LU 사이 공유 결합을 제공할 수 있고, 그러므로 때때로 링커 단위 전구체로서 지칭되고; D'는 1 내지 4개의 약물 단위를 나타내고, 여기서 약물 링커는 화학식 VI의 구조에 의해 추가로 정의되고:
Figure pct00010
식 중 LB'는 화학식 VI의 LB로 변환할 수 있고 이로써 화학식 1의 L에 공유 결합을 형성할 수 있고, 그러므로 때때로 항체 공유 결합 전구체 모이어티로 지칭되고, 화학식 VI의 나머지 가변 그룹은 화학식 VI에 대하여 정의된 바와 같다.
일부 구현예에서, ADC는 mc-vc-PABC-MMAE (본원에 vcMMAE 또는 1006으로도 지칭됨), mc-vc-PABC-MMAF, mc-MMAF, 또는 mp-dLAE-PABC-MMAE (본원에 dLAE-MMAE, mp-dLAE-MMAE, 또는 7092로도 지칭됨), 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염에 접합된 항체 (예를 들면, 본원에 기재된 경우에 임의의 항체)를 포함한다. mp-dLAE-PABC-MMAE는 PCT 공개 번호 WO　2021/055865　A1에 기재된다. 이러한 ADC는 아래 나타나고, 여기서 Ab는 항원-결합 단백질 (예를 들면, 본원에 기재된 경우에 임의의 항체)을 포함하고, mc는 말레이미도카프로일 기를 나타내고, mp는 말레이미도프로피오닐을 지칭하고:
Figure pct00011
, val-cit (vc)는 발린-시트룰린 디펩티드를 나타내고, PABC는 p-아미노벤질옥시카르보닐 기를 나타내고, dLAE는 D-류신-알라닌-글루탐산 트리펩티드:
Figure pct00012
mc-vc-PABC-MMAE
Figure pct00013
mc-vc-PABC-MMAF
Figure pct00014
mc-MMAF
Figure pct00015
mp-dLAE-PABC-MMAE를 나타낸다. 일부 구현예에서, 약물 로딩은 항체당 약물-링커 분자의 수인 p로 표시된다. 일부 구현예에서, p는, 평균 약물 로딩으로 또한 지칭된, 항체의 조성물에서 항체당 약물-링커 분자의 평균 수를 나타낼 수 있다. 일부 구현예에서, p는 1 내지 20 범위이다. 일부 구현예에서, p는 1 내지 8 범위이다. 일부 구현예에서, p가 평균 약물 로딩을 나타내는 때, p는 약 2 내지 약 5 범위이다. 일부 구현예에서, p는 약 2, 약 3, 약 4, 또는 약 5이다. 일부 구현예에서, 제조물에서 항체당 약물의 평균 수는 종래 수단 예컨대 질량 분광법, HIC, ELISA 검정, 및 HPLC에 의해 특성규명될 수 있다. 일부 구현예에서, 항원-결합 단백질 (예를 들면, 항체)은 항체의 시스테인 잔기를 통해서 약물-링커에 부착된다. 일부 구현예에서, 시스테인 잔기는 항체로 조작되는 것이다. 일부 구현예에서, 시스테인 잔기는 쇄간 디술피드 시스테인 잔기이다.
C. 예시적 ADC
본 방법에서 사용을 위하여 비제한 예시적 ADC는 본원에 기재된 튜불린 교란제들 중 임의의 것에 접합된 본원에 논의된 예시적 표적들 중 임의의 것을 결합시키는 항체를 포함하는 ADC를 포함한다.
일부 구현예에서, ADC는 시알릴 Tn 항원 (sTn) 및 MMAE에 결합하는 항체를 포함하는, 항-시알릴 Tn 항원 항체-ADC이다. 예를 들면, 미국 특허 공개 번호 2018/0327509A1; WO2017083582A1; 본원에 서열의 표를 참조한다.
일부 구현예에서, ADC는 B-세포 성숙 항원 (BCMA) 및 MMAF에 결합하는 항체를 포함하는, 벨란타맙 마포도틴이다. 예를 들면, 미국 특허 번호 9,273,141을 참조한다.
일부 구현예에서, ADC는 다음과 같이 아우리스타틴 및 항체를 포함하는, 항-클라우딘-18.2 ADC이다:
미국 특허 번호 8,168,427에 개시되고, 서열번호:59의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:60의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하거나 서열번호:61-66의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함하는 졸베툭시맙 (175D10);
미국 특허 번호 8,168,427에 개시되고, 서열번호:67의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:68의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하거나 서열번호:69-74의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함하는 163E12;
PCT 공개 번호 WO　2020/135674　A1에 개시된 임의의 항-클라우딘-18.2 항체; 또는
PCT 공개 번호 WO　2021/032157 A1에 개시된 임의의 항-클라우딘-18.2 항체.
일부 구현예에서, ADC는 항-PD-L1 항체 및 MMAE를 포함하는 SGN-PDL1V이고, 항체는 서열번호:75의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:76의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하거나 서열번호:77-82의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함한다.
일부 구현예에서, ADC는 항-ALP 항체 및 MMAE를 포함하는 SGN-ALPV이고, 항체는 서열번호:83의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:84의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하거나 서열번호:85-90의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함한다.
일부 구현예에서, ADC는 항-B7H4 항체 및 MMAE를 포함하는 SGN-B7H4V이고, 항체는 서열번호:91의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:92의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하거나 서열번호:93-98의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함한다.
일부 구현예에서, ADC는 항-HER2 항체 및 MMAE를 포함하는 디시타맙 베도틴이고, 항체는 서열번호:99의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호:100의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, ADC는 항-NaPi2B 항체 및 MMAE를 포함하는 리파스투주맙 베도틴이고, 항체는 서열번호:101의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호:102의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, ADC는 넥틴-4 및 MMAE를 결합시키는 항체를 포함하는 엔포르투맙 베도틴이다. 예를 들면, 미국 특허 번호 8,637,642; WO 2012/047724를 참조한다. 일부 구현예에서, 엔포르투맙 베도틴의 항체는 서열번호:103의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:104의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하거나 서열번호:105-110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함한다.
일부 구현예에서, ADC는 AVB6 및 MMAE에 결합하는 항체를 포함하는 SGN-B6A이다. 일부 구현예에서, SGN-B6A는 서열번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 서열번호:111의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:112의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하거나 서열번호:113-118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함하는 항-AVB6 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 서열번호:119의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:120의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하거나 서열번호:121-126의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함하는 항-AVB6 항체를 포함한다.
일부 구현예에서, ADC는 CD228 및 MMAE를 결합시키는 항체를 포함하는 항-CD228 항체-ADC이다. 예를 들면, 미국 특허 공개 번호 2020/0246479A1; WO2020/163225A1을 참조한다. 일부 구현예에서, ADC는 항-CD228 항체 및 MMAE를 포함하는 SGN-CD228A이고, 항체는 서열번호:127의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:128의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하거나 서열번호:129-134의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함한다.
일부 구현예에서, ADC는 항-LIV-1 항체 및 MMAE를 포함하는 SGN-LIV1A (라디라투주맙 베도틴; LV)이고, 항체는 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:136의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하거나 서열번호:137-142의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함하고;
여기서 SGN-LIV1A는 mc-vc-PABC-MMAE, mc-vc-PABC-MMAF, mc-MMAF, 또는 mp-dLAE-PABC-MMAE에 접합된 항-LIV-1 항체를 포함한다.
일부 구현예에서, ADC는 조직 인자 (TF) 및 MMAE를 결합시키는 항체를 포함하는 티소투맙 베도틴 (TV)이다. 예를 들면, 미국 특허 번호. 9,168,314 및 9,150,658; WO 2011/157741; WO　2010/066803을 참조한다. 일부 구현예에서, TV의 항체는 서열번호:143의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:144의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하거나 서열번호:145-150의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 각각 포함한다.
일부 구현예에서, ADC는 MMAE를 포함하고 AMHRII, Axl, CA9, CD142, CD20, CD22, CD228, CD248, CD30, CD33,CD7, CD48, CD71, CD79b, CLDN18.2, CLDN6, c-MET, EGFR, EphA2, ETBR, FCRH5, GCC, 글로보 H, gpNMB, HER-2, IL7R, 인테그린 베타-6, KAAG-1, LGR5, LIV-1, LRRC15, Ly6E, 메소텔린　(MSLN), MET, MRC2, MUC16, NaPi2b, 넥틴-4, OT-MUC1 (종양-속박-MUC1), PSMA, ROR1, SLAMF7, SLC44A4, SLITRK6, STEAP-1, STn, TIM-1, TRA-1-60, 종양-연관된 당단백질 72 (TAG-72)로부터 선택된 표적을 결합시킨다.
일부 구현예에서, ADC는 MMAE를 포함하고 다음 중 하나이다: HER-2를 표적화하는 DP303c, SYSA1501로도 알려짐 (CSPC Pharmaceutical; Dophen Biomed), STn을 표적화하는 SIA01-ADC, ST1로도 알려짐 (Siamab Therapeutics), LIV-1을 표적화하는 라디라투주맙 베도틴, SGN-LIV1A로도 알려짐 (Merck & Co., Inc.; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), LRRC15를 표적화하는 ABBV-085, 삼로타맙 베도틴으로도 알려짐 (Abbvie; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), 메소텔린 (MSLN)을 표적화하는 DMOT4039A, RG7600; αMSLN-MMAE로도 알려짐 (Roche-Genentech), EGFR을 표적화하는 RC68, Remegen EGFR ADC로도 알려짐 (RemeGen (Rongchang Biopharmaceutical (Yantai) Co., Ltd.)), c-MET를 표적화하는 RC108, RC108-ADC로도 알려짐 (RemeGen (Rongchang Biopharmaceutical (Yantai) Co., Ltd.)), CLDN18.2를 표적화하는 CMG901, MRG005로도 알려짐 (Keymed Biosciences; Lepu biotech; Shanghai Miracogen Inc. (Shanghai Meiya Biotechnology Co., Ltd)), DLK-1을 표적화하는 YBL-001, LCB67로도 알려짐 (Lego Chem Biosciences; Pyxis Oncology; Y-Biologics), CD79b를 표적화하는 DCDS0780A, 일라다투주맙 베도틴; RG7986으로도 알려짐 (Roche-Genentech; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), CD142를 표적화하는 티소투맙 베도틴, Humax-TF-ADC; tf-011-mmae; TIVDAK™로도 알려짐 (GenMab; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), MUC1-C를 표적화하는 GO-3D1-ADC, humAb-3D1-MMAE ADC로도 알려짐 (Genus Oncology LLC), HER-2를 표적화하는 ALT-P7, HM2-MMAE로도 알려짐 (Alteogen, Inc.; Levena Biopharma; 3SBio, Inc.), STEAP-1을 표적화하는 반도르투주맙 베도틴, DSTP3086S; RG7450으로도 알려짐 (Roche-Genentech; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), NaPi2b를 표적화하는 리파스투주맙 베도틴, DNIB0600A; NaPi2b ADC; RG7599로도 알려짐 (Roche-Genentech), MUC16을 표적화하는 소피투주맙 베도틴, DMUC5754A; RG7458로도 알려짐 (Seagen (Seattle Genetics) Inc.; Roche-Genentech), Ly6E를 표적화하는 RG7841, DLYE5953A로도 알려짐 (Roche-Genentech; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), FCRH5를 표적화하는 RG7598, DFRF4539A로도 알려짐 (Roche-Genentech; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), ETBR을 표적화하는 RG7636, DEDN6526A로도 알려짐 (Seagen (Seattle Genetics) Inc.; Roche-Genentech), CD22를 표적화하는 피나투주맙 베도틴, DCDT2980S; RG7593으로도 알려짐 (Roche-Genentech), CD79b를 표적화하는 폴라투주맙 베도틴, DCDS4501A; POLIVY™; RG7596; RO-5541077로도 알려짐 (Chugai Pharmaceutical; Roche-Genentech; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), MUC16을 표적화하는 DMUC4064A, D-4064a; RG7882로도 알려짐 (Roche-Genentech; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), CLDN18.2를 표적화하는 SYSA1801, CPO102로도 알려짐 (Conjupro Biotherapeutics Inc.; CSPC ZhongQi Pharmaceutical Technology Co.), CLDN18.2를 표적화하는 RC118, 클라우딘18.2-ADC; YH005로도 알려짐 (RemeGen (Rongchang Biopharmaceutical (Yantai) Co., Ltd.); Biocytogen), ROR1을 표적화하는 VLS-101, 시름투주맙 베도틴; MK-2140; UC-961ADC3; 질로베르타맙 베도틴으로도 알려짐 (VelosBio. Inc), gpNMB를 표적화하는 글렘바투무맙 베도틴, CDX-011; CR011-vcMMAE로도 알려짐 (Celldex Therapeutics), ROR2를 표적화하는 BA3021, CAB-ROR2-ADC; 오주리프타맙 베도틴으로도 알려짐 (Bioatla; Himalaya Therapeutics), Axl을 표적화하는 BA3011, CAB-AXL-ADC; 멕보타맙 베도틴으로도 알려짐 (Bioatla; Himalaya Therapeutics), TRA-1-60을 표적화하는 CM-09, 브스트롱시맙-ADC로도 알려짐 (CureMeta), SLAMF7을 표적화하는 ABBV-838, 아진툭시주맙 베도틴으로도 알려짐 (Abbvie), Axl을 표적화하는 에나포타맙 베도틴, AXL-107-MMAE; HuMax-AXL-ADC로도 알려짐 (GenMab; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), CD79b를 표적화하는 ARC-01, 항-CD79b ADC로도 알려짐 (Araris Biotech AG), HER-2를 표적화하는 디시타맙 베도틴, Aidexi®; RC48로도 알려짐 (RemeGen (Rongchang Biopharmaceutical (Yantai) Co., Ltd.); Seagen (Seattle Genetics) Inc.), SLC44A4를 표적화하는 ASG-5ME, AGS-5; AGS-5ME로도 알려짐 (Agensys, Inc.; Astellas Pharma Inc.; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), 넥틴-4를 표적화하는 엔포르투맙 베도틴, AGS-22M6E; ASG-22CE; ASG-22ME; PADCEV™로도 알려짐 (Astellas Pharma Inc.; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), SLITRK6을 표적화하는 ASG-15ME, AGS-15E; 시르트라투맙 베도틴으로도 알려짐 (Seagen (Seattle Genetics) Inc.; Astellas Pharma Inc.), CD30을 표적화하는 브렌툭시맙 베도틴, Adcetris; cAC10-vcMMAE; SGN-35로도 알려짐 (Seagen (Seattle Genetics) Inc.; Takeda), c-MET를 표적화하는 텔리소투주맙 베도틴, ABBV-399로도 알려짐 (Abbvie), EGFR을 표적화하는 로사툭시주맙 베도틴, ABBV-221로도 알려짐 (Abbvie), CD71을 표적화하는 CX-2029, ABBV-2029로도 알려짐 (Abbvie; CytomX Therapeutics), KAAG-1을 표적화하는 AB-3A4-ADC, AB-3A4-vcMMAE로도 알려짐 (Alethia Biotherapeutics), GCC를 표적화하는 인두사투맙 베도틴, 5F9-vcMMAE; MLN0264; TAK-264로도 알려짐 (Takeda; Millennium Pharmaceuticals, Inc), CD46을 표적화하는 FOR46 (Fortis Therapeutics, Inc.), EGFR을 표적화하는 LR004-VC-MMAE (Chinese Academy of Medical Sciences Peking Union Medical College Hospital), CD30을 표적화하는 CD30-ADC (NBE Therapeutics; Boehringer Ingelheim), CD248을 표적화하는 항-엔도시알린-MC-VC-PABC-MMAE (Genzyme), SSEA-4를 표적화하는 OBI-998 (OBI Pharma), HER-2를 표적화하는 MRG002 (Lepu biotech; Shanghai Miracogen Inc. (Shanghai Meiya Biotechnology Co., Ltd)), CD20을 표적화하는 TRS005 (Teruisi Pharmaceuticals), DR5 (사멸 수용체 5)를 표적화하는 Oba01 (Obio Technology (Shanghai) Corp.,Ltd.; Yantai Obioadc Biomedical Technology Ltd.), PSMA를 표적화하는 PSMA ADC (Progenics Pharmaceuticals, Inc; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), CD48을 표적화하는 SGN-CD48A (Seagen (Seattle Genetics) Inc.), CLDN18.2를 표적화하는 IMAB362-vcMMAE (Astellas Pharma Inc.; Ganymed), HER-2를 표적화하는 GB251 (Genor Biopharma Co., Ltd.), CD30을 표적화하는 Innate Pharma BTG-ADCs (Innate Pharma; Sanofi), MRC2를 표적화하는 ADCendo uPARAP ADC (ADCendo), actM을 표적화하는 XCN-010 (Xiconic Pharmaceuticals, LLC), HER-2를 표적화하는 ANT-043 (Antikor Biopharma), 글로보 H를 표적화하는 OBI-999 (Abzena; OBI Pharma), MET를 표적화하는 LY3343544 (Eli Lilly and Company), TAG-72를 표적화하는 Tagworks 항-TAG72 ADC (Tagworks Pharmaceuticals), CLDN6을 표적화하는 IMAB027-vcMMAE (Ganymed; Astellas Pharma Inc.), LGR5를 표적화하는 LGR5-ADC (Genentech, Inc.), IL-7R을 표적화하는 Philochem B12-MMAE ADC (Instituto de Medicina Molecular Joao Lobo Antunes; Philochem AG), CD19를 표적화하는 TE-1522 (Immunwork), STn을 표적화하는 SGN-STNV (Seagen (Seattle Genetics) Inc.), EGFR을 표적화하는 HTI-1511 (Abzena; Halozyme Therapeutics), OT-MUC1 (종양-속박-MUC1)을 표적화하는 Peptron PAb001-ADC (Peptron; Qilu Pharmaceutical co. Ltd.), CLDN18.2를 표적화하는 LM-102 (LaNova Medicines Limited), 메소텔린 (MSLN)을 표적화하는 Anwita Biosciences MSLN-MMAE (Anwita biosciences), CD228을 표적화하는 SGN-CD228A (Seagen (Seattle Genetics) Inc.), HER-2를 표적화하는 NBT828 (NewBio Therapeutics; Genor Biopharma Co., Ltd.), AMHR2를 표적화하는 Gamamabs GM103 (GamaMabs Pharma; Exelixis), HER-2를 표적화하는 LCB14-0302 (Lego Chem Biosciences), 탄산 무수화효소 IX (CAIX)를 표적화하는 BAY79-4620 (Bayer; MorphoSys), CD79b를 표적화하는 NBT508 (NewBio Therapeutics), 미개시물을 표적화하는 PAT-DX3-MMAE (Patrys; Yale University), CD37을 표적화하는 AGS67E (Astellas Pharma Inc.; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), TIM-1을 표적화하는 CDX-014 (Celldex Therapeutics), CD33; CD7을 표적화하는 BVX001 (Bivictrix therapeutics), 인테그린 베타-6을 표적화하는 SGN-B6A (Seagen (Seattle Genetics) Inc.), EGFR을 표적화하는 MRG003 (Lepu biotech; Shanghai Miracogen Inc. (Shanghai Meiya Biotechnology Co., Ltd)), 및 DLK-1을 표적화하는 PYX-202 (Pyxis Oncology; Lego Chem Biosciences).
일부 구현예에서 ADC는 MMAF를 포함하고 BCMA, GPC-1, CD30, c-MET, SAIL, HER-3, CD70, CD46, HER-2, 5T4, ENPP3, CD19, EGFR, EphA2로부터 선택된 표적을 결합시킨다.
일부 구현예에서, ADC는 MMAF를 포함하고 다음 중 하나이다: CD70을 표적화하는 CD70-ADC (Kochi University; Osaka University), SAIL을 표적화하는 IGN786 (AstraZeneca; Igenica Biotherapeutics), 5T4를 표적화하는 PF-06263507 (Pfizer), GPC-1을 표적화하는 GPC1-ADC (Kochi University), CD30을 표적화하는 ADC-AVP10 (Avipep), CD103을 표적화하는 M290-MC-MMAF (The Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University), CD33; CD7을 표적화하는 BVX001 (Bivictrix therapeutics), c-MET를 표적화하는 Tanabe P3D12-vc-MMAF (Tanabe Research Laboratories), LILRB4를 표적화하는 LILRB4-표적화 ADC (The University of Texas Health Science Center, Houston), BCMA를 표적화하는 TSD101, ABL201로도 알려짐 (TSD Life Science; ABL Bio; Lego Chem Biosciences), EGFR을 표적화하는 데파툭시주맙 마포도틴, ABT-414로도 알려짐 (Abbvie; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), ENPP3을 표적화하는 AGS16F, AGS-16C3F; AGS-16M8F로도 알려짐 (Astellas Pharma Inc.; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), BCMA를 표적화하는 AVG-A11 BCMA ADC, AVG-A11-mcMMAF로도 알려짐 (Avantgen), BCMA를 표적화하는 벨란타맙 마포도틴, BLENREP; GSK2857916; J6M0-mcMMAF로도 알려짐 (GlaxoSmithKline; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), HER-3을 표적화하는 MP-HER3-ADC, HER3-ADC로도 알려짐 (MediaPharma), HER-2를 표적화하는 FS-1502, LCB14-0110으로도 알려짐 (Lego Chem Biosciences; Shanghai Fosun Pharmaceutical Development Co, Ltd.), EphA2를 표적화하는 MEDI-547, MI-CP177로도 알려짐 (AstraZeneca; Seagen (Seattle Genetics) Inc.), CD70을 표적화하는 보르세투주맙 마포도틴, SGN-75로도 알려짐 (Seagen (Seattle Genetics) Inc.), CD19를 표적화하는 데닌투주맙 마포도틴, SGN-CD19A로도 알려짐 (Seagen (Seattle Genetics) Inc.), 및 c-MET를 표적화하는 HTI-1066, SHR-A1403으로도 알려짐 (Jiangsu HengRui Medicine Co., Ltd).
일부 구현예에서, ADC는 표 A, 표 B, 또는 표 C에서 ADC로부터 선택된다. 표 A, 표 B, 및 표 C에서, 서열의 표에서 제공된 서열을 가진 ADC는 별표 (*)로 표시된다. 일부 구현예에서 ADC는 엔포르투맙 베도틴이 아니다. 특정 구현예에서, ADC는 브렌툭시맙 베도틴이 아니다. 일부 구현예에서, ADC는 티소투맙 베도틴이 아니다. 일부 구현예에서, ADC는 라디라투주맙 베도틴이 아니다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-CD228A가 아니다.
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D. 항체의 제조
항체를 제조하기 위하여, 당업계에서 알려진 많은 기법들은 사용될 수 있다. 예를 들면, Kohler & Milstein, Nature 256:495-497 (1975); Kozbor 등, Immunology Today 4: 72 (1983); Cole 등, pp. 77-96 in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985); Coligan, Current Protocols in Immunology (1991); Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (1988); 및 Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (2nd ed. 1986))를 참조한다.
관심의 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자는 세포로부터 클로닝될 수 있다, 예를 들면, 단클론성 항체를 인코딩하는 유전자는 항체를 발현시키는 하이브리도마로부터 클로닝될 수 있고 재조합 단클론성 항체를 생산하는데 사용될 수 있다. 단클론성 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자 라이브러리는 하이브리도마 또는 형질 세포로부터 또한 만들어질 수 있다. 추가적으로, 파지 또는 효모 디스플레이 기술은 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 항체 및 헤테로머성 Fab 단편을 식별하는데 사용될 수 있다 (예를 들면, McCafferty 등, Nature 348:552-554 (1990); Marks 등, Biotechnology 10:779-783 (1992); Lou 등 (2010) PEDS 23:311; 및 Chao 등, Nature Protocols, 1:755-768 (2006) 참조). 대안적으로, 항체 및 항체 서열은 효모-기반 항체 제시 시스템, 예컨대, 예를 들면, Xu 등, Protein Eng Des Sel, 2013, 26:663-670; WO 2009/036379; WO 2010/105256; 및 WO 2012/009568에 개시된 것을 사용하여 단리 및/또는 식별될 수 있다. 중쇄 및 경쇄 유전자 산물의 무작위 조합은 상이한 항원성 특이성을 가진 항체들의 대형 풀을 생성한다 (예를 들면, Kuby, Immunology (제3판 1997) 참조). 단일 쇄 항체 또는 재조합 항체의 생산을 위한 기법 (미국 특허 4,946,778, 미국 특허 번호 4,816,567)은 항체를 생산하기 위해 또한 개조될 수 있다. 항체는 또한 이중특이적일 수, 즉, 2개의 상이한 항원을 인식할 수 있다 (예를 들면, WO 93/08829, Traunecker 등, EMBO J. 10:3655-3659 (1991); 및 Suresh 등, Methods in Enzymology 121:210 (1986) 참조). 항체는 또한 헤테로접합체, 예를 들면, 2개의 공유적으로 결합된 항체, 또는 면역독소에 공유적으로 결합된 항체일 수 있다 (예를 들면, 미국 특허 번호 4,676,980, WO 91/00360; 및 WO 92/200373 참조).
항체는 원핵 및 진핵 발현 시스템을 포함하는 임의의 수의 발현 시스템을 사용하여 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, 발현 시스템은 포유류 세포, 예컨대 하이브리도마, 또는 CHO 세포이다. 많은 이러한 시스템은 상업적 공급체로부터 널리 이용가능하다. 항체가 양쪽 중쇄 및 경쇄를 포함하는 구현예에서, 중쇄 및 중쇄 및 경쇄는, 예를 들면, 디-시스트론성 발현 단위에서 단일 벡터를 사용하여 발현될 수 있거나, 상이한 프로모터의 제어 하에 있을 수 있다. 다른 구현예에서, 중쇄 및 경쇄 영역은 별도 벡터를 사용하여 발현될 수 있다. 본원에 기재된 경우에 중쇄 및 경쇄는 N-말단에서 메티오닌을 임의로 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 단편 (예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, scFv, 또는 디아바디)는 생성된다. 다양한 기법은 항체 단편의 생산을 위하여 개발되었다. 전통적으로, 이들 단편은 온전한 항체의 단백질분해성 소화를 통해 유래되었다 (예를 들면, Morimoto 등, J. Biochem. Biophys. Meth., 24:107-117 (1992); 및 Brennan 등, Science, 229:81 (1985) 참조). 하지만, 이들 단편은 재조합 숙주 세포를 사용하여 이제 직접적으로 생산될 수 있다. 예를 들어, 항체 단편은 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편은 대장균 세포로부터 직접적으로 회수될 수 있고 화학적으로 커플링되어 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다 (예를 들면, Carter 등, BioTechnology, 10:163-167 (1992) 참조). 또 다른 접근법에 따라, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접적으로 단리될 수 있다. 항체 단편의 생산을 위한 다른 기법은 당업자에게 명백할 것이다. 다른 구현예에서, 선정된 항체는 단일 쇄 Fv 단편 (scFv)이다. 예를 들면, PCT 공개 번호 WO 93/16185; 및 미국 특허 번호 5,571,894 및 5,587,458을 참조한다. 항체 단편은, 예를 들면, 미국 특허 번호 5,641,870에 기재된 대로 또한 선형 항체일 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 또는 항체 단편은, 생체내 연장된 반감기를 제공하기 위해, 또 다른 분자, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG화) 또는 혈청 알부민에 접합될 수 있다. 항체 단편의 PEG화의 예는 Knight 등 Platelets 15:409, 2004 (압식시맙의 경우); Pedley 등, Br. J. Cancer 70:1126, 1994 (항-CEA 항체의 경우); Chapman 등, Nature Biotech. 17:780, 1999; 및 Humphreys, 등, Protein Eng. Des. 20: 227, 2007)에 제공된다.
일부 구현예에서, 다중특이적 항체, 예를 들면, 이중특이적 항체가 제공된다. 다중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 항원에 대하여 또는 동일한 항원의 적어도 2개의 상이한 에피토프에 대하여 결합 특이성을 갖는 항체이다. 다중특이적 항체를 만드는 방법은, 비제한적으로, 숙주 세포에서 중쇄 및 경쇄의 2개 쌍의 재조합 공-발현 (예를 들면, Zuo 등, Protein Eng Des Sel, 2000, 13:361-367 참조); "놉-인투-홀" 조작 (예를 들면, Ridgway 등, Protein Eng Des Sel, 1996, 9:617-721 참조); "디아바디" 기술 (예를 들면, Hollinger 등, PNAS (USA), 1993, 90:6444-6448 참조); 및 분자내 삼량체화 (예를 들면, Alvarez-Cienfuegos 등, Scientific Reports, 2016, doi:/10.1038/srep28643 참조)를 포함하고; 또한, Spiess 등, Molecular Immunology, 2015, 67(2), Part A:95-106을 참조한다.
불변 영역의 선택
본원에 기재된 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 인간 불변 영역의 적어도 한 부문에 연결될 수 있다. 불변 영역의 선정은, 부분적으로, 항체-의존적 세포-매개된 세포독성, 항체 의존적 세포성 식세포작용 및/또는 보체 의존적 세포독성이 요구되는지 여부에 의존한다. 예를 들어, 인간 동위원소 IgG1 및 IgG3은 강한 보체-의존적 세포독성을 갖고, 인간 아이소타입 IgG2는 약한 보체-의존적 세포독성을 갖고 인간 IgG4는 보체-의존적 세포독성이 결여된다. 인간 IgG1 및 IgG3은 인간 IgG2 및 IgG4보다 더 강한 세포 매개된 효과기 기능을 또한 유도한다. 경쇄 불변 영역은 람다 또는 카파일 수 있다. 항체는 별도 중쇄, 경쇄, Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv로서, 또는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인이 스페이서를 통해서 연결되는 단일 쇄 항체로서 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 함유하는 사량체로서 발현될 수 있다.
인간 불변 영역은 상이한 개체들 사이 알로타이프성 변이 및 아이소알로타이프성 변이를 보여준다, 즉, 불변 영역은 하나 이상의 다형성 위치에 상이한 개체에서 상이할 수 있다. 아이소알로타입은 아이소알로타입을 인식하는 혈청이 하나 이상의 다른 아이소타입의 비-다형성 영역에 결합한다는 점에서 알로타입과 상이하다.
경쇄 및/또는 중쇄의 아미노 또는 카르복시 말단, 예컨대 중쇄의 C-말단 리신에서 하나 또는 여러 아미노산은 일부 또는 모든 분자에서 누락 또는 유도체화될 수 있다. 치환은 효과기 기능 예컨대 보체-매개된 세포독성 또는 ADCC를 감소 또는 증가시키기 위해 (예를 들면, Winter 등, 미국 특허 번호 5,624,821; Tso 등, 미국 특허 번호 5,834,597; 및 Lazar 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005, 2006 참조), 또는 인간에서 반감기를 연장하기 위해 (예를 들면, Hinton 등, J. Biol. Chem. 279:6213, 2004 참조) 불변 영역에서 이루어질 수 있다.
원하는 항체-약물 접합체를 작제하기 위하여, 일부 구현예에서, 예시적 치환은 아미노산 위치 234, 235, 237, 239, 267, 298, 299, 326, 330, 또는 332에 도입된 시스테인 잔기로의 천연 아미노산의 아미노산 치환, 바람직하게는 인간 IgG1 아이소타입에서 S239C 돌연변이를 포함한다 (넘버링은 EU 지수에 따른다 (Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987 및 1991); 본원에 참조 편입되는 US 20100158909 참조). 추가의 시스테인 잔기의 존재는 쇄간 디술피드 결합 형성을 허용할 수 있다. 이러한 쇄간 디술피드 결합 형성은 입체 장애를 야기시켜, 이로써 Fc 영역-FcγR 결합 상호작용의 친화성을 감소시킬 수 있다. IgG 불변 영역의 Fc 영역에서 또는 가까이에서 도입된 시스테인 잔기(들)는 치료제 (즉, 티올 특이적 시약 예컨대 약물의 말레이미드 유도체를 사용하는 커플링 세포독성 약물에 접합을 위한 부위의 역할을 또한 할 수 있다. 치료제의 존재는 입체 장애를 야기시켜, 이로써 Fc 영역-FcγR 결합 상호작용의 친화성을 추가로 감소시킨다. 위치 234, 235, 236 및/또는 237 중 임의의 것에서 다른 치환은 Fcγ 수용체, 특히 FcγRI 수용체에 대한 친화성을 감소시킨다 (예를 들면, US 6,624,821, US 5,624,821. 참조)
항체의 생체내 반감기는 이의 효과기 기능에 또한 영향을 줄 수 있다. 항체의 반감기는 이의 치료적 활성을 변형시키기 위해 증가 또는 축소될 수 있다. FcRn은 β2-마이크로글로불린과 비-공유적으로 결합하는 MHC 클래스 I 항원과 구조적으로 유사한 수용체이다. FcRn은 IgG의 이화작용 및 조직에 걸쳐 그들의 통과세포외배출을 조절한다 (Ghetie and Ward, 2000, Annu. Rev. Immunol. 18:739-766; Ghetie and Ward, 2002, Immunol. Res. 25:97-113). IgG-FcRn 상호작용은 pH 6.0 (세포내 소포의 pH)에서 발생하지만 pH 7.4 (혈액의 pH)에서는 아니고; 이 상호작용은 IgG가 다시 순환으로 재순환되도록 한다 (Ghetie and Ward, 2000, Ann. Rev. Immunol. 18:739-766; Ghetie and Ward, 2002, Immunol. Res. 25:97-113). FcRn 결합에 연루된 인간 IgG1 상의 영역은 맵핑되었다 (Shields 등, 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604). 인간 IgG1의 위치 Pro238, Thr256, Thr307, Gln311, Asp312, Glu380, Glu382, 또는 Asn434에서 알라닌 치환은 FcRn 결합을 향상시킨다 (Shields 등, 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604). 이들 치환을 갖는 IgG1 분자는 더 긴 혈청 반감기를 갖는다. 결과적으로, 이들 변형된 IgG1 분자는 그들의 효과기 기능을 실시할 수 있고, 따라서 미변형된 IgG1과 비교하여 더 오랜 시기 동안 그들의 치료적 효능을 발휘할 수 있다. FcRn에 증가하는 결합을 위하여 다른 예시적 치환은 위치 250에서 Gln 및/또는 위치 428에서 Leu를 포함한다. EU 넘버링은 불변 영역에서 모든 위치에 사용된다.
항체의 보체 고정 활성 (양쪽 C1q 결합 및 CDC 활성)은 Lys326 및 Glu333에서 치환에 의해 개선될 수 있다 (Idusogie 등, 2001, J. Immunol. 166:2571-2575). 인간 IgG2 백본 상에서 동일한 치환은 C1q에 불량하게 결합하고 보체 활성화 활성이 심각하게 결핍되는 항체 아이소타입을 양쪽 C1q에 결합할 수 있고 CDC를 매개할 수 있는 것으로 전환시킬 수 있다 (Idusogie 등, 2001, J. Immunol. 166:2571-75). 몇몇 다른 방법은 항체의 보체 고정 활성을 개선하기 위해 또한 적용되었다. 예를 들어, IgM의 18-아미노산 카르복실-말단 꼬리 조각의 IgG의 카르복실-말단에의 그래프팅은 그들의 CDC 활성을 크게 향상시킨다. 이것은 검출가능한 CDC 활성을 정상적으로 갖지 않는 심지어 IgG4로 관찰된다 (Smith 등, 1995, J. Immunol. 154:2226-36). 또한, IgG1 중쇄의 카르복시-말단 가까이 자리잡은 Ser444를 Cys로 치환하는 것은 단량체성 IgG1보다 CDC 활성의 200-배 증가를 가진 IgG1의 꼬리-대-꼬리 이량체화를 유도하였다 (Shopes 등, 1992, J. Immunol. 148:2918-22). 이외에도, C1q에 대하여 특이성을 가진 이중특이적 디아바디 작제물은 또한 CDC 활성을 부여한다 (Kontermann 등, 1997, Nat. Biotech. 15:629-31).
보체 활성은 중쇄의 아미노산 잔기들 318, 320, 및 322 중 적어도 하나를 상이한 측쇄를 가진 잔기, 예컨대 Ala로 돌연변이시킴으로써 감소될 수 있다. 다른 알킬-치환된 비-이온성 잔기들, 예컨대 Gly, Ile, Leu, 또는 Val, 또는 3개의 잔기들 중 어느 하나 대신 Phe, Tyr, Trp 및 Pro와 같은 방향족 비-극성 잔기들은 또한 C1q 결합을 감소 또는 폐기시킨다. Ser, Thr, Cys, 및 Met는 C1q 결합 활성을 감소 또는 폐기하기 위해, 318이 아닌, 잔기들 320 및 322에서 사용될 수 있다. 극성 잔기에 의한 318 (Glu) 잔기의 대체는 C1q 결합 활성을 변형시킬 수 있지만 폐지하지는 않는다. 잔기 297 (Asn)을 Ala로 대체하는 것은 용해적 활성의 제거를 초래하지만 C1q에 대하여 (약 3 배 더 약한) 친화성을 단지 약간 감소시킨다. 이 변경은 보체 활성화에 요구되는 탄수화물의 존재 및 글리코실화 부위를 파괴한다. 이 부위에서 임의의 다른 치환은 글리코실화 부위를 또한 파괴한다. 다음 돌연변이 및 이의 임의의 조합은 또한 C1q 결합을 감소시킨다: D270A, K322A, P329A, 및 P311S (WO 06/036291 참조).
인간 불변 영역 지칭은 임의의 자연 알로타이프 또는 자연 알로타이프에서 다형성 위치를 차지하는 잔기들의 임의의 순열을 가진 불변 영역을 포함한다. 또한, 최대 1, 2, 5, 또는 10개의 돌연변이는 Fcγ 수용체 결합을 감소시키기 또는 FcRN에 결합을 증가시키기 위해 자연 인간 불변 영역, 예컨대 상기 표시된 것들에 비해 존재할 수 있다.
핵산, 벡터, 및 숙주 세포
일부 구현예에서, 본원에 기재된 항체는 재조합 방법을 사용하여 제조된다. 따라서, 일부 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체들 중 임의의 것 (예를 들면, 본원에 기재된 CDR 중 임의의 하나 이상)을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 핵산; 이러한 핵산을 포함하는 벡터; 그리고 항체-인코딩 핵산을 복제하는데 및/또는 항체를 발현시키는데 사용되는 핵산이 도입되는 숙주 세포를 제공한다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 진핵, 예를 들면, 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포; 또는 인간 세포이다.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드 (예를 들면, 단리된 폴리뉴클레오티드)는 본원에 기재된 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 본원에 개시된 하나 이상의 아미노산 서열 (예를 들면, CDR, 중쇄, 경쇄, 및/또는 프레임워크 영역)을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 본원에 개시된 서열 (예를 들면, CDR, 중쇄, 경쇄, 또는 프레임워크 영역 서열)에 적어도 85% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
추가 양태에서, 본원에 기재된 항체를 만드는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 본원에 기재된 경우에 숙주 세포 (예를 들면, 본원에 기재된 경우에 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 발현시키는 숙주 세포)를 항체의 발현에 적합한 조건 하에서 배양하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 후속적으로 회수된다.
본 개시내용의 항체, 또는 이의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 적합한 벡터는 클로닝 벡터 및 발현 벡터를 포함한다. 선택된 클로닝 벡터가 사용되기 위한 숙주 세포에 따라 다양할 수 있는 한편, 유용한 클로닝 벡터는 일반적으로 자가-복제하는 능력을 갖고/거나, 특정한 제한 엔도뉴클레아제에 대하여 단일 표적을 보유할 수 있고/거나, 벡터를 함유하는 클론 선택하기에서 사용될 수 있는 마커를 위한 유전자를 가질 수 있다. 예는 플라스미드 및 박테리아성 바이러스, 예를 들면, pUC18, pUC19, 블루스크립트 (예를 들면, pBS SK+) 및 이의 유도체, mpl8, mpl9, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, 파지 DNAs, 및 셔틀 벡터 예컨대 pSA3 및 pAT28을 포함한다. 클로닝 벡터는 상업적 공급업체 예컨대 BioRad, Stratagene, 및 Invitrogen으로부터 이용가능하다.
발현 벡터는 일반적으로 본 개시내용의 핵산을 함유하는 복제가능한 폴리뉴클레오티드 작제물이다. 발현 벡터는 숙주 세포에서 어느 한쪽 에피솜으로서 또는 염색체 DNA의 필수 부분으로서 복제할 수 있다. 적합한 발현 벡터는 비제한적으로 플라스미드, 아데노바이러스, 아데노-연관된 바이러스, 레트로바이러스를 포함하는 바이러스성 벡터, 및 임의의 다른 벡터를 포함한다.
재조합 항체의 발현
항체는 재조합 발현에 의해 전형적으로 생산된다. 재조합 폴리뉴클레오티드 작제물은 전형적으로, 자연적으로-연관된 또는 이종 프로모터 영역을 포함하는, 항체 쇄의 코딩 서열에 작동가능하게 연결된 발현 제어 서열을 포함한다. 바람직하게는, 발현 제어 서열은 진핵 숙주 세포를 형질전환 또는 형질감염시킬 수 있는 벡터내 진핵 프로모터 시스템이다. 일단 벡터가 적절한 숙주에 편입되었다면, 숙주는 뉴클레오티드 서열의 높은 수준 발현, 그리고 교차-반응하는 항체의 수집 및 정제에 적합한 조건 하에서 유지된다.
포유류 세포는 면역글로불린 또는 이의 단편을 인코딩하는 뉴클레오티드 세그먼트를 발현시키기 위한 바람직한 숙주이다. Winnacker, From Genes to Clones, (VCH Publishers, NY, 1987) 참고. 온전한 이종 단백질을 선택할 수 있는 다수의 적합한 숙주 세포주는 당업계에서 개발되었고, CHO 세포주 (예를 들면, DG44), 다양한 COS 세포주, HeLa 세포, HEK293 세포, L 세포, 및 Sp2/0 및 NS0를 포함하는 비-항체-생산 골수종을 포함한다. 바람직하게는, 세포는 비인간이다. 이들 세포에 대한 발현 벡터는 발현 제어 서열, 예컨대 복제의 기원, 프로모터, 인핸서 (Queen 등, Immunol. Rev. 89:49 (1986)), 및 필요한 처리 정보 부위, 예컨대 리보솜 결합 부위, RNA 스플라이스 부위, 폴리아데닐화 부위, 및 전사적 종결자 서열을 포함할 수 있다. 바람직한 발현 제어 서열은 내인성 유전자, 사이토메갈로바이러스, SV40, 아데노바이러스, 소 유두종바이러스, 및 기타 등등으로부터 유래된 프로모터이다. Co 등, J. Immunol. 148:1149 (1992)를 참조한다.
일단 발현되면, 항체는 HPLC 정제, 칼럼 크로마토그래피, 겔 전기영동 및 기타 등등을 포함하는 당업계의 표준 절차에 따라 정제될 수 있다 (일반적으로, Scopes, Protein Purification (Springer-Verlag, NY, 1982) 참조).
항체 특성규명
결합 친화성, 결합 동역학, 및 교차-반응성을 분석하는 방법은 당업계에 알려진다. 예를 들면, Ernst 등, Determination of Equilibrium Dissociation Constants, Therapeutic Monoclonal Antibodies (Wiley & Sons ed. 2009)를 참조한다. 이들 방법은, 비제한적으로, 고상 결합 검정 (예를 들면, ELISA 분석), 면역침전, 표면 플라즈몬 공명 (SPR, 예를 들면, Biacore™ (GE Healthcare, Piscataway, NJ)), 동역학 배제 검정 (예를 들면 KinExA®), 유세포 분석, 형광-활성화 세포 분류 (FACS), BioLayer 간섭법 (예를 들면, Octet™ (ForteBio, Inc., Menlo Park, CA)), 및 웨스턴 블롯 분석을 포함한다. SPR 기법은, 예를 들면, Hahnfeld 등 Determination of Kinetic Data Using SPR Biosensors, Molecular Diagnosis of Infectious Diseases (2004)에서 검토된다. 전형적 SPR 실험에서, 하나의 반응체 (표적 또는 표적화 제제)는 유동 셀에서 SPR-활성, 금-코팅된 유리 슬라이드 상에 고정화되고, 다른 반응체를 함유하는 샘플은 표면을 가로질러 유동하도록 도입된다. 주어진 파장의 광이 표면에 비추어지는 때, 금의 광학 반사율에 대한 변화는 결합, 및 결합의 동역학을 나타낸다. 일부 구현예에서, 동역학 배제 검정은 친화성을 결정하는데 사용된다. 이 기법은, 예를 들면, Darling 등, Assay and Drug Development Technologies Vol. 2, 번호 6 647-657 (2004)에 기재된다. 일부 구현예에서, BioLayer 간섭법 검정은 친화성을 결정하는데 사용된다. 이 기법은, 예를 들면, Wilson 등, Biochemistry and Molecular Biology Education, 38:400-407 (2010); Dysinger 등, J. Immunol. Methods, 379:30-41 (2012)에 기재된다.
IV. 치료적 방법
일부 구현예에서, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 대상체에게 (1) 종양-연관된 항원 및, 세포독성제가 튜불린 교란제인 세포독성제를 결합시키는 제1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체 (ADC); 및 (2) 제2 항체가 하나 이상의 활성화 FcγR에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하는, 면역 세포 인게이저에 결합하는 제2 항체를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 항체의 Fc는 FcγRIIIa, FcγRIIa, 및/또는 FcγRI 중 하나 이상에 향상된 결합을 갖는다. 일부 구현예에서, 제2 항체의 Fc는 하나 이상의 억제성 FcγR에 감소된 결합을 갖는다. 일부 구현예에서, 제2 항체의 Fc는 FcγRIIb에 감소된 결합을 갖는다.
일부 구현예에서, 암을 치료하는 방법은 암을 가진 대상체에게 (1) ADC가 종양-연관된 항원 및, 세포독성제가 튜불린 교란제인 세포독성제를 결합시키는 제1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체 (ADC), 및 (2) 제2 항체가 동일한 아이소타입의 상응하는 야생형 Fc에 비해 향상된 ADCC 활성을 가진 Fc를 포함하는, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 제2 항체를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 항체는 동일한 아이소타입의 상응하는 야생형 Fc에 비해 향상된 ADCC 및 ADCP 활성을 가진 Fc를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 항체의 Fc는 FcγRIIIa, FcγRIIa, 및/또는 FcγRI 중 하나 이상에 향상된 결합을 갖는다. 일부 구현예에서, 제2 항체의 Fc는 하나 이상의 억제성 FcγR에 감소된 결합을 갖는다. 일부 구현예에서, 제2 항체의 Fc는 FcγRIIb에 감소된 결합을 갖는다.
다양한 구현예에서, 제2 항체는 비푸코실화된 항체이다. 다양한 이러한 구현예에서, 제2 항체는 항체의 조성물에서 포함되고, 여기서 조성물에서 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%는 비푸코실화된다.
일부 구현예에서, 제2 항체는 TIGIT를 결합시킨다. 일부 구현예에서, 제2 항체는 CD40을 결합시킨다. 일부 구현예에서, 제2 항체는 본원에 제공된 면역 세포 인게이저를 결합시킨다.
다양한 구현예에서, ADC에서 제1 항체에 접합된 튜불린 교란제는 아우리스타틴, 튜불리신, 콜히친, 빈카 알칼로이드, 탁산, 크립토피신, 메이탄시노이드, 또는 헤미아스털린이다. 일부 구현예에서, ADC는 MMAE 또는 MMAF를 포함한다. 다양한 구현예에서, 제1 항체는 종양-연관된 항원, 예컨대 본원에 제공된 종양-연관된 항원을 결합시킨다.
본원에 기재된 ADC들 중 임의의 것은 본원에 기재된 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체들 중 임의의 것과 조합될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, ADC는 SGN-PDL1V이고, 제2 항체는 SEA-BCMA이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-ALPV이고, 제2 항체는 SEA-BCMA이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-B7H4V이고, 제2 항체는 SEA-BCMA이다. 일부 구현예에서, ADC는 리파스투주맙 베도틴이고, 제2 항체는 SEA-BCMA이다. 일부 구현예에서, ADC는 SEA-CD40이고, 제2 항체는 SEA-BCMA이다. 일부 구현예에서, ADC는 SEA-CD70이고, 제2 항체는 SEA-BCMA이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-B6A이고, 제2 항체는 SEA-BCMA이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-CD228A이고, 제2 항체는 SEA-BCMA이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-LIV1A이고, 제2 항체는 SEA-BCMA이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-STNV이고, 제2 항체는 SEA-BCMA이다. 일부 구현예에서, ADC는 브렌툭시맙 베도틴 (SGN-35)이고, 제2 항체는 SEA-BCMA이다. 일부 구현예에서, ADC는 엔포르투맙 베도틴이고, 제2 항체는 SEA-BCMA이다. 일부 구현예에서, ADC는 디시타맙 베도틴이고, 제2 항체는 SEA-BCMA이다. 일부 구현예에서, ADC는 티소투맙 베도틴이고, 제2 항체는 SEA-BCMA이다.
일부 구현예에서, ADC는 SGN-PDL1V이고, 제2 항체는 SEA-CD40이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-ALPV이고, 제2 항체는 SEA-CD40이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-B7H4V이고, 제2 항체는 SEA-CD40이다. 일부 구현예에서, ADC는 리파스투주맙 베도틴이고, 제2 항체는 SEA-CD40이다. 일부 구현예에서, ADC는 SEA-CD40이고, 제2 항체는 SEA-CD40이다. 일부 구현예에서, ADC는 SEA-CD70이고, 제2 항체는 SEA-CD40이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-B6A이고, 제2 항체는 SEA-CD40이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-CD228A이고, 제2 항체는 SEA-CD40이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-LIV1A이고, 제2 항체는 SEA-CD40이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-STNV이고, 제2 항체는 SEA-CD40이다. 일부 구현예에서, ADC는 브렌툭시맙 베도틴 (SGN-35)이고, 제2 항체는 SEA-CD40이다. 일부 구현예에서, ADC는 엔포르투맙 베도틴이고, 제2 항체는 SEA-CD40이다. 일부 구현예에서, ADC는 디시타맙 베도틴이고, 제2 항체는 SEA-CD40이다. 일부 구현예에서, ADC는 티소투맙 베도틴이고, 제2 항체는 SEA-CD40이다.
일부 구현예에서, ADC는 SGN-PDL1V이고, 제2 항체는 SEA-CD70이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-ALPV이고, 제2 항체는 SEA-CD70이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-B7H4V이고, 제2 항체는 SEA-CD70이다. 일부 구현예에서, ADC는 리파스투주맙 베도틴이고, 제2 항체는 SEA-CD70이다. 일부 구현예에서, ADC는 SEA-CD40이고, 제2 항체는 SEA-CD70이다. 일부 구현예에서, ADC는 SEA-CD70이고, 제2 항체는 SEA-CD70이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-B6A이고, 제2 항체는 SEA-CD70이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-CD228A이고, 제2 항체는 SEA-CD70이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-LIV1A이고, 제2 항체는 SEA-CD70이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-STNV이고, 제2 항체는 SEA-CD70이다. 일부 구현예에서, ADC는 브렌툭시맙 베도틴 (SGN-35)이고, 제2 항체는 SEA-CD70이다. 일부 구현예에서, ADC는 엔포르투맙 베도틴이고, 제2 항체는 SEA-CD70이다. 일부 구현예에서, ADC는 디시타맙 베도틴이고, 제2 항체는 SEA-CD70이다. 일부 구현예에서, ADC는 티소투맙 베도틴이고, 제2 항체는 SEA-CD70이다.
일부 구현예에서, ADC는 SGN-PDL1V이고, 제2 항체는 SEA-TGT이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-ALPV이고, 제2 항체는 SEA-TGT이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-B7H4V이고, 제2 항체는 SEA-TGT이다. 일부 구현예에서, ADC는 리파스투주맙 베도틴이고, 제2 항체는 SEA-TGT이다. 일부 구현예에서, ADC는 SEA-CD40이고, 제2 항체는 SEA-TGT이다. 일부 구현예에서, ADC는 SEA-CD70이고, 제2 항체는 SEA-TGT이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-B6A이고, 제2 항체는 SEA-TGT이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-CD228A이고, 제2 항체는 SEA-TGT이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-LIV1A이고, 제2 항체는 SEA-TGT이다. 일부 구현예에서, ADC는 SGN-STNV이고, 제2 항체는 SEA-TGT이다. 일부 구현예에서, ADC는 브렌툭시맙 베도틴 (SGN-35)이고, 제2 항체는 SEA-TGT이다. 일부 구현예에서, ADC는 엔포르투맙 베도틴이고, 제2 항체는 SEA-TGT이다. 일부 구현예에서, ADC는 디시타맙 베도틴이고, 제2 항체는 SEA-TGT이다. 일부 구현예에서, ADC는 티소투맙 베도틴이고, 제2 항체는 SEA-TGT이다.
일부 구현예에서, 대상체는 인간이다.
일부 구현예에서, 암은 방광암, 유방암, 자궁암, 자궁경부암, 난소암, 전립선암, 고환암, 식도암, 위장암, 위암, 췌장암, 결장직장암, 결장암, 신장암, 투명 세포 신장 암종, 두경부암, 폐암, 폐 선암종, 위암, 생식세포암, 골암, 간암, 갑상선암, 피부암, 흑색종, 중추 신경계의 신생물, 중피종, 림프종, 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 호지킨 림프종, 골수종, 또는 육종이다. 일부 구현예에서, 암은 위암, 고환암, 췌장암, 폐 선암종, 방광암, 두경부암, 전립선암, 유방암, 중피종, 및 투명 세포 신장 암종으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 암은 비제한적으로 급성 골수성, 만성 골수성, 급성 림프구성 또는 만성 림프구성 백혈병, 미만성 거대 B-세포 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 작은 림프구성 림프종, 원발성 종격동 거대 B-세포 림프종, 비장 변연부 B-세포 림프종, 또는 림프절외 변연부 B-세포 림프종을 포함하는 림프종 또는 백혈병이다. 일부 구현예에서, 암은 만성 림프구성 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 및 호지킨 림프종으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 암은 전이성 암이다.
일부 구현예에서, 암은 이러한 암이 T 세포 반응들을 구동하기 위해 더 많은 항원을 가지므로 높은 종양 돌연변이 부담을 가진 것이다. 그래서, 일부 구현예에서, 암은 높은 돌연변이적 부담 암 예컨대 폐, 흑색종, 방광, 또는 위 암이다. 일부 구현예에서, 암은 미소부수체 불안정성을 갖는다.
다양한 구현예에서, 제2 항체는 T 조절성 (Treg) 세포를 고갈시키고/거나, 항원 제시 세포 (APC)를 활성화시키고/거나, CD8 T 세포 반응을 향상시키고/거나, 공-자극성 수용체를 상향조절하고/거나, 면역 활성화 사이토카인 (예컨대 CXCL10 및/또는 IFNγ)의 방출을 촉진시킨다. 일부 구현예에서, 제2 항체는 면역 억압적 사이토카인 (예컨대 IL10 및/또는 MDC)보다 더 큰 정도로 면역 활성화 사이토카인의 방출을 촉진시킨다.
ADC 및 제2 항체는 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 순차적 투여의 경우, ADC의 제1 용량은 제2 항체의 제1 용량 전에 투여될 수 있거나, 제2 항체의 제1 용량은 ADC 전에 투여될 수 있다. 동시 투여의 경우, 일부 구현예에서, ADC 및 제2 항체는 별도 약학적 조성물로서 또는 동일한 약학적 조성물로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 치료제는 치료적으로 유효량 또는 용량으로 투여된다. 약 0.01 mg/kg 내지 약 500 mg/kg, 또는 약 0.1 mg/kg 내지 약 200 mg/kg, 또는 약 1 mg/kg 내지 약 100 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg 내지 약 50 mg/kg의 일일 용량 범위가 사용될 수 있다. 투약량은, 하지만, 선정된 투여의 루트, 조성물의 제형, 환자 반응, 병태의 중증도, 대상체의 중량, 및 처방 의사의 판단을 포함하는 몇몇 인자에 따라 가변될 수 있다. 투약량은, 개별 환자에 의해 필요에 따라, 시간이 지남에 따라 증가 또는 축소될 수 있다. 특정 경우에, 환자는 초기에 낮은 용량으로 주어지고, 그 다음 환자에게 허용가능한 효과가 있는 투약량으로 증가된다. 유효량의 결정은 당업자의 능력 범위 내에 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 특정한 조합 요법으로 관찰된 향상된 활성은 상응하는 단일요법 치료와 비교해서 특정 이점을 갖는다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 조합으로 ADC 및 제2 항체의 투여는 어느 한쪽이 단일요법으로서 투여되는 때 ADC 또는 제2 항체의 것과 비교가능한 독성 프로파일을 갖는다. 일부 구현예에서, 조합으로 투약된 때 ADC 및/또는 제2 항체의 유효 용량은 단일요법으로서 투여된 때보다 적다. 일부 구현예에서, 조합으로 ADC 및 제2 항체의 투여는 상응하는 단일요법 치료와 비교해서 반응의 더 오랜 지속기간을 제공한다. 일부 구현예에서, 조합으로 ADC 및 제2 항체의 투여는 상응하는 단일요법과 비교해서 더 오랜 무진행 생존을 초래한다. 일부 구현예에서, ADC 및 제2 항체의 투여는 개별적으로 어느 한쪽 제제를 이용한 단일요법 치료 이후 재발하는 재발성 암을 치료하는데 사용될 수 있다.
약학적 조성물의 투여의 루트는 경구, 복강내, 경피, 피하, 정맥내, 근육내, 흡입, 국부, 병변내, 직장, 기관지내, 비강, 경점막, 장, 안구 또는 귀 전달, 또는 당 업계에 알려진 임의의 다른 방법일 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 치료제는 경구로, 정맥내로, 또는 복강내로 투여된다.
공-투여된 치료제는 함께 또는 별도로, 동시에 또는 상이한 시간에 투여될 수 있다. 투여된 때, 치료제는 독립적으로 1일 1회, 2회, 3회, 4회 또는 필요에 따라 다소 자주 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 투여된 치료제는 1일 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 투여된 치료제는 동일한 시간 또는 시간들에, 가령 혼합물로서 투여된다. 일부 구현예에서, 치료제들 중 하나 이상은 지속된-방출 제형으로 투여된다.
일부 구현예에서, 치료제는 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 치료제는 순차적으로 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 제1 치료제는 제2 치료제를 투여하기 전에 예를 들어 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 일 또는 그 이상 동안 투여된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 치료는 대상체에게 연장된 시기 동안, 예를 들면, 적어도 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350 일 또는 더 오랜 동안 투여된다.
V. 조성물 및 키트
또 다른 양태에서, 대상체에서 암 치료하거나 예방하는 용도를 위한 조성물 및 키트가 제공된다.
약학적 조성물
일부 구현예에서, 본 방법에서 사용을 위하여 약학적 조성물이 제공된다. 일부 구현예에서, ADC는 제1 약학적 조성물로 투여되고 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 제2 약학적 조성물로 투여된다. 일부 구현예에서, ADC 및 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체는 단일 약학적 조성물로 투여된다.
본 발명에서 사용을 위하여 제형을 제조하기 위한 지침은, 예를 들어, 참조로 본원에 이로써 편입되는, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 제21판, 2006, 상기; Martindale: The Complete Drug Reference, Sweetman, 2005, London: Pharmaceutical Press; Niazi, Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formulations, 2004, CRC Press; 및 Gibson, Pharmaceutical Preformulation and Formulation: A Practical Guide from Candidate Drug Selection to Commercial Dosage Form, 2001, Interpharm Press에서 찾아진다. 본원에 기재된 약학적 조성물은 당업자에 알려지는 방식으로, 즉, 종래 혼합, 용해, 과립화, 당의정-제조, 유화, 캡슐화, 포획 또는 동결건조 공정에 의해 제조될 수 있다. 다음 방법 및 부형제는 단순히 예시적이고 결코 제한적이지 않다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 치료제는, 예를 들어, 치료제를 함유하는 고체 소수성 중합체의 절반-투과성 매트릭스에서 지속된-방출, 제어된 방출, 연장된-방출, 시간조정된-방출 또는 지연된-방출 제형으로 전달을 위하여 제조된다. 지속된-방출 물질들의 다양한 유형들은 확립되었고 당업자에 의해 잘 알려진다. 현행 연장된-방출 제형은 필름-코팅된 정제, 다중미립자 또는 펠렛 시스템, 친수성 또는 친유성 물질을 사용하는 매트릭스 기술 및 기공 형성 부형제가 있는 왁스-기반 정제를 포함한다 (예를 들어, Huang, 등 Drug Dev. Ind. Pharm. 29:79 (2003); Pearnchob, 등 Drug Dev. Ind. Pharm. 29:925 (2003); Maggi, 등 Eur. J. Pharm. Biopharm. 55:99 (2003); Khanvilkar, 등, Drug Dev. Ind. Pharm. 228:601 (2002); 및 Schmidt, 등, Int. J. Pharm. 216:9 (2001) 참조). 지속된-방출 전달 시스템은, 그들의 설계에 따라, 화합물을 수시간 또는 수일 동안, 가령, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20, 24 시간 또는 그 이상 동안 방출시킬 수 있다. 보통, 지속된 방출 제형은 자연-발생 또는 합성 중합체, 가령, 중합체성 비닐 피롤리돈, 예컨대 폴리비닐 피롤리돈 (PVP); 카르복시비닐 친수성 중합체; 소수성 및/또는 친수성 하이드로콜로이드, 예컨대 메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 하이드록시프로필셀룰로스, 및 하이드록시프로필메틸셀룰로스; 및 카르복시폴리메틸렌을 사용하여 제조될 수 있다.
경구 투여의 경우, 치료제는 당업계에서 잘 알려지는 약학적으로 허용가능한 담체와 조합함으로써 용이하게 제형화될 수 있다. 이러한 담체는, 치료되어야 하는 환자에 의한 경구 섭취를 위하여, 화합물이 정제, 알약, 당의정, 캡슐, 에멀젼, 친유성 및 친수성 현탁액, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 및 기타 등등으로서 제형화되도록 한다. 경구 사용을 위한 약학적 제조물은 화합물을 고체 부형제와 혼합하고, 생성된 혼합물을 임의로 분쇄하고, 원하는 경우, 적합한 보조제를 첨가한 후, 과립들의 혼합물을 처리하여, 정제 또는 당의정 코어를 수득함으로써 수득될 수 있다. 적합한 부형제는, 예를 들어, 충전제 예컨대 락토스, 수크로스, 만니톨, 또는 소르비톨을 포함하는 당; 셀룰로스 제조물 예컨대, 예를 들어, 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 트래거캔스검, 메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸-셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 및/또는 폴리비닐피롤리돈 (PVP)을 포함한다. 원하는 경우, 붕해 제제, 예컨대 가교 폴리비닐 피롤리돈, 한천, 또는 알긴산 또는 이의 염 예컨대 알긴산나트륨이 첨가될 수 있다.
치료제는 주사에 의해, 예를 들면, 볼루스 주사 또는 연속 주입에 의해 비경구 투여를 위하여 제형화될 수 있다. 주사의 경우, 화합물 또는 화합물들은 이들을 수성 또는 비수성 용매, 예컨대 식물성 또는 기타 유사한 오일, 합성 지방족 산 글리세리드, 고급 지방족 산의 에스테르 또는 프로필렌 글리콜에서; 그리고 필요한 경우, 종래 첨가제 예컨대 가용화제, 등장성 제제, 현탁화 제제, 유화 제제, 안정제 및 방부제로 용해, 현탁 또는 유화시킴으로써 제조물로 제형화될 수 있다. 일부 구현예에서, 화합물은 수용액에서, 바람직하게는 생리학적으로 적합한 완충액 예컨대 행크스 용액, 링거 용액, 또는 생리학적 식염수 완충액에서 제형화될 수 있다. 주사를 위한 제형은 방부제가 첨가된 단위 투약량 형태로, 예를 들면, 앰풀로 또는 다중-용량 용기에 제시될 수 있다. 조성물은 유성 또는 수성 비히클에서 현탁액, 용액 또는 에멀젼과 같은 형태를 취할 수 있고, 제형성 제제 예컨대 현탁화, 안정화 및/또는 분산화 제제를 함유할 수 있다.
치료제는 경점막 또는 경피 수단에 의해 전신적으로 투여될 수 있다. 경점막 또는 경피 투여의 경우, 침투되어야 하는 장벽에 적합한 침투제가 제형에서 사용된다. 국부 투여의 경우, 제제는 연고, 크림, 고약, 분말 및 젤로 제형화된다. 일 구현예에서, 경피 전달 제제는 DMSO일 수 있다. 경피 전달 시스템은, 예를 들면, 패치를 포함할 수 있다. 경점막 투여의 경우, 침투되어야 하는 장벽에 적절한 침투제가 제형에서 사용된다. 이러한 침투제는 당업계에서 일반적으로 알려진다. 예시적 경피 전달 제형은 미국 특허 번호 6,589,549; 6,544,548; 6,517,864; 6,512,010; 6,465,006; 6,379,696; 6,312,717 및 6,310,177에 기재된 것들을 포함하고, 이들의 각각은 참조로 본원에 이로써 편입된다.
일부 구현예에서, 약학적 조성물은 허용가능한 담체 및/또는 부형제를 포함한다. 약학적으로 허용가능한 담체는 생리학적으로 적합하고 바람직하게는 치료제의 활성을 방해하지 않거나 달리 억제시키지 않는 임의의 용매, 분산 매질, 또는 코팅물을 포함한다. 일부 구현예에서, 담체는 정맥내, 근육내, 경구, 복강내, 경피, 국부, 또는 피하 투여에 적합하다. 약학적으로 허용가능한 담체는, 예를 들어, 조성물을 안정화시키는 또는 활성 제제(들)의 흡수를 증가 또는 축소시키는 작용을 하는 하나 이상의 생리학적으로 허용가능한 화합물(들)을 함유할 수 있다. 생리학적으로 허용가능한 화합물은, 예를 들어, 탄수화물, 예컨대 글루코스, 수크로스, 또는 덱스트란, 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 글루타티온, 킬레이트화 제제, 저분자량 단백질, 활성 제제의 소거 또는 가수분해를 감소시키는 조성물, 또는 부형제나 기타 안정제 및/또는 완충액을 포함할 수 있다. 기타 약학적으로 허용가능한 담체 및 그들의 제형은 잘-알려지고 일반적으로, 예를 들어, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 제21판, Philadelphia, PA. Lippincott Williams & Wilkins, 2005에 기재된다. 다양한 약학적으로 허용가능한 부형제는 당업계에서 잘-알려지고, 예를 들어, Handbook of Pharmaceutical Excipients (제5판, Ed. Rowe 등, Pharmaceutical Press, Washington, D.C.)에서 찾아질 수 있다.
본 개시내용의 약학적 조성물의 투약량 및 원하는 약물 농도는 계획된 특정한 용도에 따라 다양할 수 있다. 적절한 투약량 또는 투여의 루트의 결정은 당업자의 기술 범위 내에 있다. 적합한 투약량은 또한 본원에 기재된다.
키트
일부 구현예에서, 암을 갖는 대상체 치료하는 용도를 위한 키트가 제공된다. 일부 구현예에서, 키트는 다음을 포함한다:
본원에 제공된, 튜불린 교란제에 접합된 제1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체; 및
본원에 제공된, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 제2 항체.
일부 구현예에서, 키트는 본 발명의 방법의 실시를 위한 지령 (즉, 프로토콜)이 들어있는 지시 자료 (예를 들면, 암을 치료하기 위한 키트 사용을 위한 지침)를 추가로 포함할 수 있다. 지시 자료가 서면 또는 인쇄 자료를 전형적으로 포함하여도, 이들은 이에 제한되지는 않는다. 이러한 지침을 보관할 수 있고 이들을 최종 사용자에게 통신할 수 있는 임의의 매체는 본 발명에 의해 고려된다. 이러한 매체는, 비제한적으로 전자적 저장 매체 (예를 들면, 자기 디스크, 테이프, 카트리지, 칩), 광학 매체 (예를 들면, CD ROM), 및 기타 등등을 포함한다. 이러한 매체는 이러한 지시 자료를 제공하는 인터넷 사이트에 대한 주소를 포함할 수 있다.
VI. 실시예
아래 논의된 실시예는 본 발명을 단순히 예시하도록 의도되고 어떤 식으로든 본 발명을 제한하는 것으로 간주되지 않아야 한다. 실시예는 아래 실험이 수행된 모든 또는 유일한 실험임을 나타내도록 의도되지 않는다. 사용된 숫자 (예를 들어, 양, 온도, 등)와 관련하여 정확성을 보장하기 위해 노력이 이루어졌지만 일부 실험적 오차 및 편차는 고려되어야 한다. 달리 표시되지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이고, 온도는 섭씨이고, 압력은 대기압 또는 대기압 근처이다.
실시예 1: 비-지시된 화학치료제는 T 세포 반응을 손상시킨다
1.1 물질 및 방법
인간 1차 T 세포는 CD3/CD28 코팅된 비드를 사용하여 증식을 겪도록 유도되었다. 20,000개의 카르복시플루오레세인 디아세테이트 숙신이미딜 에스테르 (CSFE) 표지된, 풍부화된 CD3+ T 세포는 4 일 동안 항-CD3 CD28 비드 (4개 T 세포당 1개 비드) + 10 ng/mL IL-2와 인큐베이션되었다. 세포는 LIVE/DEAD 고정가능한 사멸된 세포 염색 (ThermoFisher)으로 염색되었고 살아있는 세포는 유세포 분석을 통해 계수되었다.
1.2 결과
도 1에 도시된 대로, 1차 인간 T 세포의 증식은 시험된 모든 단일 자유 제제 화학요법제에 의해 상당히 감소되었다. 이들 데이터는 화학치료제에 전신 노출이 면역-종양학 제제 (예를 들면, 면역 세포 인게이저를 결합시키는 항체)로부터 반응을 포함하는 환자들에서 T 세포 매개된 활성을 제한시킬 수 있음을 시사한다.
실시예 2: 베도틴 ADC는, T 세포에 지시된 전달에도 불구하고, T 세포 증식을 억제시키지 않는다 (CD30+ CD8 T 세포의 BV (SGN-35) 치료)
2.1 물질 및 방법
인간 1차 CD8 T 세포는 CSFE로 표지되었고 4 일 동안 항-CD3-CD28 비드 (4개 T 세포당 1개 비드) + 10 ng/mL IL-2로 증식을 겪도록 유도되었다. 활성화 동안, CD30은 T 세포의 표면 상에서 상향조절되었다. CD30+ CD8 T 세포는 어느 한쪽 CD30 지시된 vc-MMAE (브렌툭시맙 베도틴; BV; SGN-35) 또는 아이소타입 대조군으로 치료되었다. 세포는 LIVE/DEAD 고정가능한 사멸된 세포 염색 (ThermoFisher)으로 염색되었고 살아있는 세포는 유세포 분석을 통해 계수되었다.
2.2 결과
도 2에 도시된 대로, 1차 인간 CD30+ CD8 T 세포의 세포 증식은 BV를 이용한 치료에 의해 상당히 변경되지 않았다. 이들 데이터는 베도틴 ADC의 전신 노출이, CD8 T 세포에 직접적으로 표적화되어도, CD8 매개된 항-종양 반응에 영향을 주지 않음을 시사한다.
실시예 3: 소포체 스트레스 유도는 베도틴 ADC에 대하여 우수하다
3.1 물질 및 방법
소포체 (ER) 스트레스의 유도는 면역원성 세포 반응들의 개시에 첫번째 그리고 필요한 단계들 중 하나이다 (도 3b). MIA-PaCa-2 췌장암 세포주는 이 시스템내 세포사를 유도하는 IC50 농도에서 베도틴 (MMAE), 엠탄신 (DM1), 엑사테칸 DS-8201 (Ex), 뿐만 아니라 유리 미소관 안정화 제제 파클리탁셀을 포함하는, 별개의 페이로드에 접합된 ADC로 치료되었다. 36 또는 48 시간의 치료후, 세포는 웨스턴 블랏 분석을 위하여 수확되었고 업스트림 ER 스트레스 마커 pJNK (도 3b)는 웨스턴 블랏에 의해 평가되었다.
3.1.1 웨스턴 블랏
치료된 세포는 14,000-16,000 rpm에서 10 분 동안 원심분리되었고 -20℃에 보관되었다. 세포 펠렛은 4X BOLT™ LDS 샘플 완충액 (Thermo Fisher Catalog # B0007)에서 재현탁되었고 95℃에서 5-10 분 동안 가열시킴으로써 용해되어 세포 용해물을 생산하였다. 샘플 용해물은 MOPS 완충액내 1 시간 40 분 동안 140V에서 비스-트리스 4-12% 구배 겔 상에서 운용되었다. 비스-트리스 겔은 그 다음 iBlot2를 사용하여 니트로셀룰로스 막 상에 옮겨졌다. 막들은 1X TBS에서 1회 세정되었고 리코르 차단 완충액내 4℃에서 밤새 인큐베이션되었다. 막들은 5-10 분 각각 동안 1X TBS-T내 4 회 세정되었다. 이미지는 84 μm 해상도 및 자동 강도를 사용하여 리코르 오딧세이 시스템에서 현상되었다.
3.1.2 CHOP 루시퍼라제 유도 검정
ER 스트레스 유도에 대한 다운스트림 경로의 평가는 CHOP 구동된 루시퍼라제 리포터 세포주로 형질도입된 MIA-PaCa-2 세포를 사용하여 수행되었다. CHOP는 ER 스트레스 반응 캐스케이드의 마지막 단계이고 이의 발현 수준은 ER 스트레스에 의해 증가된다. 임상적 개발에서 몇몇 ADC 페이로드 (도 3a)는 평가에서 사용되었다. CHOP의 유도는 제조사의 지침에 따라 CHOP 활성에 대하여 리포터 시스템을 사용하여 측정되었다 (Bright-Glo™ 루시퍼라제 검정 시스템, Promega). 간단히 말해서, 100,000 세포/웰은 96-웰, 편평-바닥 투명 플레이트 (웰당 분취량 150 μL)에서 플레이팅되었다. 200 μL의 배지는 플레이트의 외부 웰에 분취되어 세포의 웰 주위에 배지 "블랭킷"을 제공하였다. 24, 48, 및 72 시간에, 플레이트는 인큐베이터에서 꺼내졌고 실온이도록 허용되었다. 100 μL의 배지는 웰로부터 제거되었다. 100 μL의 BrightGlo 시약은 각 웰에 첨가되었다. 플레이트는 판독 전에 적어도 2 분 동안 진탕되었다. Envision CTG 96-웰 표준 프로토콜은 플레이트를 판독하는데 사용되었다.
3.2 결과
도 3c 내지 e에 도시된 대로, 아우리스타틴-기반 ADC (MMAE-ADC 또는 MMAF-ADC) 치료는 시험된 상이한 ADC 페이로드의 초기 ER 스트레스 반응 pJNK 신호를 유도하는 것으로 밝혀진 유일한 조건이었다. ER 스트레스 유도는 ER이 세포의 단백질 번역적 필요를 수용하도록 확장 및 수축하기 위해 온전한 미소관을 필요로 하기 때문에 미소관 교란과 관련이 있다. 이 ER 스트레스를 유도하는 미소관 교란제로서 MMAE의 능력은 나타난 데이터에서 예시된다.
도 3d 내지 e는 ER 스트레스 경로에서 다운스트림 신호인 CHOP가 MMAE ADC에 의해 상당히 유도되는 것 그리고 ER 스트레스에 대한 다운스트림 경로가 다른 페이로드와 비교해서 MMAE ADC에 의해 상이하게 또한 구동되는 것을 입증한다.
실시예 4: 상이한 임상적 ADC 페이로드의 ICD 잠재력
4.1 물질 및 방법
ICD의 고전적 마커는 ER 스트레스 반응의 유도와 동시에 발생하는 ATP 및 HMGB1의 방출 및 칼레티쿨린의 표면 노출을 포함한다. 이들 분자는 위험 신호로 간주되고 선천적 면역 세포를 활성화시키고 종양 항원 특이적 T 세포 반응들을 증가시킨다. MIA-PaCa-2 암 세포는 현재 임상적 시기에 있는 IC50 농도의 ADC-보유 페이로드, 즉 MMAE, DM1 및 엑사테칸 (Ex)로 치료되었다. 치료된 세포는 그 다음 ICD 마커 유도에 대하여 분석되었다. 시스플라틴은 세포사를 구동시킬 수 있지만 ICD를 유도하는 것으로 알려지지 않기 때문에 음성 대조군으로서 사용되었다.
100,000-150,000개의 세포는 96-웰 접시에서 웰당 플레이팅되었다. 세포는 50-60% 컨플루언스에 도달하도록 허용되었다. 배지는 제거되었고 신선한 배양 배지는 세포의 웰당 첨가되었다. 1μM의 약물 1μg/mL는 세포의 각 웰에 첨가되었다. 24 시간후, (ATP 방출 검정의 경우) 250 μL 또는 (HMGB1 검정의 경우) 200 μL의 배지는 수집되었고 표지된 1.5 mL 에펜도르프 튜브로 옮겨졌다. 샘플의 각 튜브는 10,000 rpm에서 1 분 동안 원심분리되었다. 50 μL의 배지는 96-웰 투명 바닥 플레이트에서 한 웰로 옮겨졌다. 50 μL의 CTG는 각 웰에 첨가되었다. 플레이트는 1-2 분 동안 진탕되었다. Envision 플레이트 판독기는 플레이트를 판독하는데 사용되었다.
HMGB1 방출 수준은 Envision 플레이트 판독기를 사용하여 웰당 발광 강도에 의해 모니터링되었다. HMGB1 및 ATP 방출 수준은 미치료된 샘플에 대하여 배경 값에 대한 배수 변화로서 보고되었다. 획득된 값은 텍스트 파일로 변환되었고 내보내졌고 엑셀 및 GraphPad Prism을 사용하여 분석되었다.
4.2 결과
도 4a에 도시된 대로, vc-MMAE는 시험된 다른 페이로드와 비교하여 ATP 방출을 구동하는데 강력하였다. HMGB1 방출이 ICD의 유도와 연관되는 한편 이의 방출은 세포가 괴사를 겪기 시작하는 때 또한 보여지고 강력한 면역 세포 관여와 직접적으로 연관되지 않는다. 마이크로튜빌린 교란제 vc-MMAE 및 DM1을 이용한 MIA-PaCa-2 세포의 치료는 토포이소머라제 억제제 엑사테칸 (Ex)과 대조적인 강력한 HMGB1 방출을 초래하였다 (도 4b).
실시예 5: ADC 페이로드의 면역 활성화 평가
5.1 물질 및 방법
5.1.1 세포
도 5a에 도시된 대로, MMAE에 접합된 ADC는 미소관을 교란시켜, ER 스트레스 반응을 초래하고, 면역원성 세포사 (ICD)를 유발시킨다. 사멸하는 세포는 차례로 면역-활성화 분자― 손상-연관된 분자성 패턴 (DAMP)―예컨대 HSP70, HSP90, ATP, HMGB1, 및 칼레티쿨린 (CRT)을 방출한다. 이들 DAMP는 수용체 예컨대 LPR1/CD91, P2RX7, P2RY2, AGER, TLR2, 및 TLR4를 결합시켜, 이로써 선천적 면역계를 활성화시킬 수 있다. 이 활성화는, 예를 들어, 단백질 예컨대 CD80, CD86, HLA-DR, 및 CD40의 상향조절, 단핵구 상에서 MHCII 발현의 증가, 및 사이토카인 예컨대 CXCL-10/IP10 및 IL-12의 방출을 초래하고, 이로써 항종양 T 세포 반응들을 개시한다. 이러한 T 세포 반응들은 PD-1/L1 억제제에 의해 추가로 증대될 수 있다. 여기에서, ICD의 면역학적 결과는 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 배양에서 평가되었다. 별개 페이로드에 접합된 ADC에 노출된 암 세포는 PBMC에 첨가되었다.
18 시간 동안 (37℃에서 5% CO2.에 EC50 농도의 ADC 또는 자유 약물에 노출된 L540cy 암 세포는 세정되었고 10x106 세포/mL로 현탁된 250 ul의 PBMC는 암 세포주 사멸된 세포에 48 시간 동안 첨가되었다. 조직 배양 배지는 취해졌고 사이토카인은 Luminex 평가에 의해 측정되었다.
치료는 2개의 독립적인 PBMC 공여자에 대해 3중으로 수행되었다.
5.1.2 공-자극성 분자 표면 발현
치료 후, 세포 펠렛은 50 mL의 BD FAC 완충액에서 재현탁되었고 96　웰 둥근-바닥 미세정량판으로 옮겨졌다. Fc 수용체는 빙상에서 30 분 동안 인간 100　μg/mL Fc-단편으로 차단되었다. 1:100으로 희석된 PE-HLA-DR (MHCII) 및 APC-CD14로 구성된 마스터 믹스는 100 mg/mL 인간 정제된 Fc-단편을 함유하는 BD FAC 완충액에서 제조되었다. 10 μl의 마스터 믹스는 90 μl의 재-현탁된 세포를 함유하는 각 웰에 첨가되었고 샘플은 1 시간 동안 빙상에서 인큐베이션되었다. 세포는 그 다음 5 분 동안 사전-냉각된 에펜도르프 5810R 원심분리기에서 400　xg로 원심분리되었다. 상청액은 제거되었고 세포는 200 mL의 BD FAC 완충액으로 세정되었다. 세정은 2회 수행되었고 세포는 200 mL의 FAC 완충액에서 재현탁되었고 샘플은 Attune 유세포 분석기에서 분석되었다. HLA-DR 평균 형광은 FlowJo 분석 소프트웨어를 사용하여 결정되었다.
5.1.3 사이토카인 생산
치료 후, PBMC/암 세포 공-배양물은 5 분 동안 800 rpm으로 에펜도르프 5810R에서 플레이트 어댑터로 회전되었다. 혈청 또는 조직 배양 상청액은 제거되었고 96-스트립 튜브 랙으로 옮겨졌고 샘플은 처리할 때까지 -80℃에서 냉동되었다. 냉동된 조직 배양 상청액 및 혈청은 4℃에서 밤새 해동되었고 Millipore로부터 Luminex 멀티플렉스 키트를 사용하여 사이토카인 생산을 위하여 처리되었다.
조직 배양 상청액 및 혈청 샘플은 제조사의 지침에 따라 처리되었다. 간략히, 검정 플레이트는 웰당 200 μL의 세정 완충액으로 세정되었고, 이어서 25 μL 표준 또는 완충액, 25 μL 매트릭스 또는 샘플, 및 25 μL의 다중화된 분석물 비드가 각 웰에 첨가되었다. 샘플은 4℃에서 격렬하게 진탕하면서 밤새 인큐베이션되었다. 플레이트는 세정 완충액으로서 2회 검정 플레이트 세정되었다.
검출 항체 (25 μL)는 각 웰에 첨가되었고 실온에서 1 시간 동안 인큐베이션되었다. 25 μL의 스트렙타비딘-파이코에리트린 (SA-PE)은 첨가되었고 샘플은 실온에서 30 분 동안 인큐베이션되었다. 플레이트는 세정 완충액으로 2회 세정되었고, 비드는 150 μL의 쉬스 유체로 재현탁되었다. 샘플은 Xponent 소프트웨어 시스템과 조합으로 Luminex MagPix 시스템을 사용하여 분석되었다. 사이토카인 수준은 표준 곡선으로부터 계산되었다.
5.2 결과
선천적 세포 활성화는, 증가된 표면 활성화 마커 (MHCII) 및 염증성 사이토카인 (CXCL-10/IP10)의 방출에 의해 증명된 대로, 관찰되었다 (도 5b 내지 c). 선천적 면역 세포는 vc-MMAE 치료된 종양 세포에 노출된 때 활성화된다. vc-MMAE에 의한 면역 세포 활성화는 다른 ADC 페이로드에 의한 활성화보다 더욱 강력하였다 (도 5b 내지 c).
Vc-MMAE-매개된 ICD는 사멸된 및 사멸하는 종양 세포로부터 항원에 대해 적응적 면역 반응들을 활성화시키고 강력한 선천적 면역 세포 활성화의 생성 그리고 특이적 종양 세포 항원에 대해 표적화된 후속 세포독성 T-세포 반응들을 허용하는 조절된 세포사이다. 여기에서, vc-MMAE 사멸된 암 세포가 사멸된 세포의 흡수후 단핵구/대식세포로부터 강한 화학주성 및 염증성 매개체인 선천적 사이토카인 CXCL10의 방출 및 표면 MHCII의 증가를 이끌어내었음이 입증되었다.
실시예 6: 트라스투주맙 백본에 관한 페이로드 평가
6.1 물질 및 방법
다양한 임상적 시기 페이로드를 보유하는 트라스투주맙 ADC 접합체의, ER 스트레스 및 다운스트림 ICD 마커 ATP 및 HMGB1을 유도하는 능력은 평가되었다. 사용된 페이로드는 DM1, MMAE, 및 엑사테칸 (Ex)이었다.
6.2 결과
2개가 관찰되었다: (1) vcMMAE에 접합된 트라스투주맙이 ATP 및 HMGB1의 유도와 연관된 가장 강력한 ER 스트레스 반응을 구동시켰음; 및 (2) 후기 세포사 마커 HMGB1이 2차 괴사가 명백한 ICD보다 오히려 이들 페이로드 클래스와 연관될 수 있음을 나타내는 다른 페이로드 클래스에 대하여 상승된 것으로 보였음 (도 6c 내지 e). 여기에서 발견은 Mia-PaCa-2 세포를 사용하였던, 실시예 4에서 상기 기재된 발견과 유사하다 (도 4a 내지 b).
실시예 7: 초기 ER 스트레스 마커의 유도 (JNK 신호전달 활성화)가 일반적으로 MMAE ADC에 대하여 우수하다
7.1 물질 및 방법
실시예 5에 기재되고 도 5a에 도시된 대로, ICD 경로는 다양한 양태를 포함한다. 이 경로는 도 7a에서 추가로 실례된다. 도 7a에서 도시되고 상기 언급된 대로, 초기에서 튜불린 교란제 이러한 MMAE는 미소관을 교란시키고, 이로써 ER 스트레스 및 ICD를 야기시킨다. ICD는 차례로 면역-활성화 분자 예컨대 DAMP, ATP, HMGB1, 및 CRT의 방출을 야기시킨다. 이들 분자는 항종양 T 세포 반응들을 개시할 수 있는 선천적 세포를 후속적으로 활성화시킬 수 있고 T 세포 기억을 유도할 수 있다. 이러한 T 세포 반응들은 다른 면역 조절제, 예컨대 본원에 기재된 면역 세포 인게이저와 조합에 의해 추가로 증대될 수 있다. 다음 실시예들의 몇몇은 ICD 경로의 전술한 상이한 양태를 유도하기 위해 다른 ADC 페이로드와 비교하여 MMAE의 유효성을 보여주는 연구들의 결과를 보고한다.
소포체 (ER) 스트레스의 유도는 면역원성 세포 반응들의 개시를 위한 제1 단계들 중 하나이고, JNK 신호전달 활성화는 ER 스트레스의 지표이다 (도 3b 참조). 이 지표를 평가하기 위해, MIA-PaCa-2 췌장암 세포는, 도 7b에 도시된 대로, 별개 페이로드에 접합된 1 μg/mL ADC로 치료되었다. 24 또는 48 시간의 치료후, 세포는 웨스턴 블랏 분석을 위하여 수확되었고, 업스트림 ER 스트레스 마커 pJNK는 Simple Western 면역검정 (Wes™, Protein Simple)에 의해 평가되었다.
치료된 세포는 세포 스크레이퍼를 사용하여 배양 플레이트로부터 해리되었다. 현탁된 세포는 10 분 동안 1000 rpm, 4 ℃에서 원심분리되었다. 상청액은 제거되었고 세포 펠렛은 (프로테아제 및 포스파타제 억제제를 함유하는) 용해 완충액에서 재현탁되었다. 빙상에서 최소 10 분후, 샘플은 13,500 g로 10 분 동안 원심분리되어 세포성 잔해를 펠렛 제거하였다. 용해 용액은 별도 튜브로 이전되었고 -80 ℃에서 보관되었다. 용해물 단백질 양은 Bio-Rad DC 단백질 검정 키트 (Cat. # 5000112)를 사용하여 정량화되어, 똑같은 레인 로딩을 허용하였다. 샘플 용해물 및 시약은 검정 플레이트에 로딩되었고 Wes™에서 배치되었다. 포스포-JNK는 1차 항체 (Cell Signaling Technologies Cat. # 9251S)를 사용하여 식별되었고 HRP-접합된 2차 항체 (Protein Simple Cat. # 042-206) 및 화학발광성 기질을 사용하여 면역탐침되었다. 생성된 화학발광성 신호는 통합된 Compass 소프트웨어에 의해 검출, 정량화, 및 표시되었다.
7.2 결과
도 7c 내지 f에 도시된 대로, 시험된 상이한 ADC 페이로드 중, MMAE-ADC (SGD-1006) 치료는 초기 ER 스트레스 반응인 JNK 인산화의 가장 강한 유도제들 중 하나이었다. 일반적으로, MMAE-ADC 치료는 메이탄신-ADC (도 7c), 캄프토테신-ADC (도 7d), 안트라사이클린-ADC (도 7e), 및 칼리케아미신-ADC (도 7f)를 이용한 치료와 비교하여 더 강한 pJNK 신호를 생성하였다. (도 7c 내지 f에서 hIgG는 상응하는 ADC와 동일한 페이로드를 가진 비-표적화된 접합체이다.) 유일한 예외는, MMAE-ADC를 이용한 치료로부터의 것에 비교가능한 pJNK 신호를 생성하였던, 안트라사이클린 mp-EDA-PNU (SGD-8335)를 함유하는 ADC를 이용한 치료이었다 (도 7e). ER 스트레스 유도는 ER이 세포의 단백질 번역적 필요를 수용하도록 확장 및 수축하기 위해 온전한 미소관을 필요로 하기 때문에 미소관 교란과 관련이 있다. 이 ER 스트레스를 유도하는 미소관 교란제로서 MMAE의 능력은 나타낸 데이터에서 예시된다.
실시예 8: 후기 ER 스트레스 마커의 유도 (CHOP 유도)는 일반적으로 MMAE ADC에 대하여 우수하다
8.1 물질 및 방법
CHOP는 ER 스트레스 반응 캐스케이드에서 마지막 단계이고 이의 발현 수준은 ER 스트레스에 의해 증가된다 (도 3b 참조). ER 스트레스에 대한 이 다운스트림 경로의 평가는 CHOP-구동 루시퍼라제 리포터 (Signosis, Inc.)로 형질도입된 MIA-PaCa-2 세포를 사용하여 수행되었다. 별개 페이로드를 포함하는 몇몇 ADC는 평가에서 사용되었다. 도 7a를 참조한다.
MIA-PaCa-2 세포에서 CHOP의 유도는 루시퍼라제 신호 (Bright-Glo™ 루시퍼라제 검정 시스템, Promega)의 검출에 의해 측정되었다. 간단히 말해서, 10,000 세포/웰은 웰당 75 μL내 96-웰, 흑색벽, 편평-바닥 투명 플레이트에 플레이팅되었다. ADC는 웰당 25 μL로 투약되어 최종 IC50 농도를 달성하였다. 36, 48, 및 72 시간에, 플레이트는 인큐베이터에서 꺼내졌고 실온이도록 허용되었다. 100 μL의 Bright-Glo 시약은 각 웰에 첨가되었다. 플레이트는 판독 전에 적어도 5 분 동안 진탕되었다. Envision CTG 96-웰 표준 프로토콜은 플레이트를 판독하는데 사용되었다.
8.2 결과
도 8a 내지 d에 도시된 대로, vc-MMAE (SGD-1006)를 함유하는 ADC를 이용한 치료는 메르탄신 (SPP-5351) 또는 라브탄신 (SPDB-5352) (도 8a)을 함유하는 ADC를 이용한 치료로부터 그리고 mp-EDA-PNU (SGD-8335) 또는 mp-Gluc-DXZ (SGD-8248) (도 8c)를 함유하는 ADC를 이용한 치료로부터 CHOP 유도와 비교가능한 CHOP 유도를 초래하였다. 또한, MMAE (SGD-1006)를 함유하는 ADC를 이용한 치료는 캄프토테신 (도 8b), AT (SGD-4830) (도 8d), 또는 테세린 (SGD-7455) (도 8d)을 함유하는 ADC를 이용한 치료로부터 CHOP 유도보다 더 강한 CHOP 유도를 초래하였다. 대조적으로, 오조가마이신 (SGD-8677)을 함유하는 ADC를 이용한 치료는 vc-MMAE (SGD-1006) 도 8d)를 함유하는 ADC를 이용한 치료로부터의 것보다 약간 더 강한 CHOP 유도를 초래하였다.
실시예 9: 면역자극성 DAMP의 유도는 일반적으로 MMAE ADC에 대하여 우수하다
9.1 물질 및 방법
ICD는 면역-활성화 분자―손상-연관된 분자성 패턴 (DAMP)―예컨대 ATP, HMGB1, 및 CRT의 방출을 야기시킨다. ICD를 측정하기 위해, ATP 및 HMGB1 방출은 다음과 같이 평가되었다. MIA-PaCa-2 암 세포는 시험관내 ICD 마커 유도를 평가하기 위해 다양한 페이로드를 가진 IC50 농도의 ADC로 치료되었다. 도 7a를 참조한다.
200,000개의 세포는 6-웰 TC 플레이트에서 웰당 플레이팅되었고 플레이트 ON에 부착하게 되었다. 세포는 50-60% 컨플루언스에 도달하였다. IC50 농도의 ADC는 각 치료 웰에 첨가되었다. 72 시간후, 배양 상청액의 (ATP 방출 검정의 경우) 500 μL 또는 (HMGB1 검정의 경우) 750 μL는 수집되었고 표지된 1.5 mL 에펜도르프 튜브로 옮겨졌다. 샘플의 각 튜브는 13,000 rpm으로 1 분 동안 원심분리되었다. 50 μL의 배지는 96-웰 투명 바닥 플레이트에서 삼중 웰로 옮겨졌다. 50 μL의 CellTiter-Glo® (Promega)는 각 웰에 첨가되었다. 플레이트는 1-2 분 동안 진탕되었다. Envision 플레이트 판독기 상에서 CTG 96-웰 표준 프로토콜은 플레이트를 판독하는데 사용되었다. 각 튜브 샘플 상청액은 그 다음, ELISA (IBL)에 의해 정량화된, HMGB1 방출 수준을 측정하는데 사용되었다. HMGB1 및 ATP 방출 수준은 미치료된 샘플에 대하여 배경 값에 대한 배수 변화로서 보고되었다. 획득된 값은 텍스트 파일로 변환되었고 내보내졌고 엑셀 및 GraphPad Prism을 사용하여 분석되었다.
9.2 결과
도 9a 내지 d에 도시된 대로, vc-MMAE (SGD-1006)를 함유하는 ADC를 이용한 치료는 메이탄신 (도 9a)을 함유하는 ADC를 이용한 치료로부터 그리고 캄프토테신 (도 9b)을 함유하는 ADC를 이용한 치료로부터의 것보다 더 강한 HMGB1 방출 및 ATP 방출을 초래하였다. 또한, vc-MMAE (SGD-1006)를 함유하는 ADC를 이용한 치료는 테세린 (SGD-7455) 또는 아우리스타틴 AT (SGD-4830) (도 9d)를 함유하는 ADC를 이용한 치료로부터의 것보다 더 강한 HMGB1 방출 및 ATP 방출을 초래하였다.
vc-MMAE (SGD-1006)를 함유하는 ADC를 이용한 치료는 안트라사이클린을 함유하는 ADC를 이용한 치료로부터 (HMGB1과 비교하여, ATP 방출은 덜 강력함) (도 9c) 그리고 오조가마이신 (SGD-8677) (도 9d)을 함유하는 ADC를 이용한 치료로부터의 것과 비교가능한 HMGB1 방출 및 ATP 방출을 초래하였다.
실시예 10: 선천적 세포의 활성화 (사이토카인 방출)는 일반적으로 MMAE ADC에 대하여 우수하다
10.1 물질 및 방법
DAMP는 항종양 T 세포 반응들을 개시할 수 있는 선천적 세포를 활성화시킨다. 예를 들어, 이들은 단핵구 상에서 MHCII의 발현 그리고 선천적 사이토카인 예컨대 CXCL-10/IP10의 방출을 증가시킬 수 있다. MHCII 발현 및 CXCL-10/IP10은 다음과 같이 평가되었다.
24 시간 동안 (37 ℃에서 5% CO2에) IC50 농도의 ADC 또는 파클리탁셀에 노출된 L540cy 암 세포는 세정되었고, 0.2 x 106 세포/웰 PBMC는 사멸된 암 세포에 1:10 L540cy:PBMC 비로 첨가되었다. 이 실험에서 사용된 ADC의 페이로드는 도 7a에 기재된다. 공-배양물은 48 시간 동안 인큐베이션되었다. 세포 배양 상청액은 24 시간에 수집되었고, 사이토카인은 선천적 사이토카인 CXCL-10/IP10을 포함하여, Luminex 평가에 의해 측정되었다.
48-시간 공-배양 인큐베이션 이후, 세포 펠렛은 50 μL의 BD FAC 완충액에서 재현탁되었고 96-웰 둥근-바닥 미세정량판으로 옮겨졌다. Fc 수용체는 빙상에서 30 분 동안 100 μg/mL에 인간 Fc-단편으로 차단되었다. 1:100으로 희석된, PE-Cy7 항-HLA-DR (MHCII), PE 항-CD14, PE-Dazzle 594 항-CD11b, BV605 항-CD3, 및 BV421 항-CD19를 포함하는 마스터 믹스는 100 μg/mL 인간 정제된 Fc-단편을 함유하는 BD FAC 완충액에서 제조되었다. 10 μL의 마스터 믹스는 90 μL의 재-현탁된 세포를 함유하는 각 웰에 첨가되었고 샘플은 빙상에서 1 시간 동안 인큐베이션되었다. 세포는 그 다음 5 분 동안 사전-냉각된 에펜도르프 5810R 원심분리기에서 400 x g로 원심분리되었다. 상청액은 제거되었고, 세포는 200 mL의 BD FAC 완충액으로 세정되었다. 세정은 2회 수행되었고, 세포는 200 mL의 FAC 완충액에서 재현탁되었다. 샘플은 Attune 유세포 분석기에서 분석되었다. 단핵구는 CD14+CD11b+CD3-CD19-로서 정의되었다. HLA-DR 평균 형광은 FlowJo 분석 소프트웨어를 사용하여 결정되었다.
10.2 결과
도 10a 내지 d에 도시된 대로, MMAE (SGD-1006)를 함유하는 ADC를 이용한 치료는 메이탄신 (도 10a), 캄프토테신 (도 10b), 안트라사이클린 (도 10c), 및 칼리케아미신 오조가마이신 (SGD-8677) 및 PBD 테세린 (SGD-7455) (도 10d)을 포함하여, 다른 페이로드를 함유하는 ADC를 이용한 치료로부터의 것과 비교가능하거나 이보다 높은 단핵구 MHC II 발현을 초래하였다. MMAE (SGD-1006)를 함유하는 ADC를 이용한 치료는 동일한 페이로드 (도 10a 내지 d)를 함유하는 ADC를 이용한 치료로부터의 것보다 일관되게 더 높은 선천적 사이토카인 CXCL-10/IP10의 방출을 또한 초래하였다.
10.3 MMAE ADC의 우수한 ICD 잠재력의 요약
이들 실험에서 나타난 대로, MMAE-ADC는 초기 ER 스트레스의 유도 (예를 들면, JNK 활성화), 후기 ER 스트레스의 유도 (예를 들면, CHOP 유도), 면역-활성화 분자의 유도 (예를 들면, ATP 및 HMGB1 방출), 및 선천적 면역 세포의 활성화 (예를 들면, 대식세포 활성화)를 포함하여, 다양한 ICD 특질 및 다양한 면역원성 세포 반응들을 유도할 수 있다. 시험된 다른 ADC 페이로드의 어느 것도 이들 ICD 특질을 일관되게 유도하지 않았다. 도 10e는 상이한 유형들의 페이로드를 가진 ADC의 (상기 특질에 의해 측정된 경우에) ICD 잠재력의 요약을 제공하고, 튜불린 교란제, 특히 MMAE의 전반적 우수성을 실례한다.
실시예 11: Fc 백본에 기반하여 FcγRIIa, FcγRIIb 또는 FcγRIIIa에 차별적 FcγR 결합.
11.1 물질 및 방법
항체 SEA-CD40, APX005M, ADC-1013, 및 셀리크렐루맙 (도 11a)은 인간 FcγRIIa, FcγRIIb 또는 FcγRIIIa로 형질감염된 CHO 세포에 대한 유세포 분석을 사용하여 FcγR 결합에 대하여 평가되었다. CHO 세포는 증가하는 농도의 항체 및 사용된 2차 항체로 인큐베이션되어 유세포 분석에 의해 모니터링된 경우에 결합을 평가하였다.
각 세포주의 경우, 5천만개의 세포는 50 mL의 PBS에서 1회 세정되었다. 세포는 재차 계수되었고 BD 염색 완충액내 220만 세포/mL로 재현탁되었다. 세포는 96-웰 둥근 바닥 플레이트에서 웰당 0.1 mL의 세포로 배치되었다.
항체 용액은 다음 최종 농도를 만들기 위해 희석되었다: 3 mg/mL, 1 mg/mL, 0.3 mg/mL, 0.1 mg/mL, 0.03 mg/mL, 0.01 mg/mL, 0.003 mg/mL, 0.001 mg/mL, 0.0003 mg/mL. 각 항체 용액은 다음 농도를 생산하기 위해 10x로 희석되었다 (즉, 11 μL 각 항체 용액은 89 μL의 배지에 첨가되었다): 300, 100, 30, 10, 3, 1, 0.03. 0.01, 0.003, 0.001, 및 0.0003　μg/ml. 배지는 세포로부터 제거되었고 세포는 배지로 세정되었다. 100 μL의 항체 용액은 각 웰에 첨가되었다. 항체 용액은 수직 방향에서 축소하는 농도로 첨가되었다. 4℃에서 1-시간 인큐베이션후, 플레이트는 원심분리되었고, 세포들의 각 웰은 200 μL BD 염색 완충액으로 2회 세정되었다. 펠렛화된 세포는 플레이트를 와동시킴으로써 재현탁되었다.
다음에, PE 접합된 항-인간 IgG Fc 항체는 BD 염색 완충액에서 (1 mg/ml 농도의 1/50 희석 = 33 μg/mL 포화 농도) 제조되었다. 용액은 어두운 냉장고에서 30 분에 인큐베이션되었다. 인큐베이션후, 플레이트는 원심분리되었고, 상청액은 제거되었고, 세포는 웰당 200 μL BD 염색 완충액으로 2회 세정되었다. 세포는 PBS + 1% 파라포름알데하이드에서 재현탁되었고 이들이 유세포 분석에 의해 분석된 때까지 4℃에서 유지되었다. 샘플은 Attune 유세포 분석기를 사용하여 분석되었다. 형광 강도의 기하 평균 (GEO 평균 형광)에 대한 데이터 지점은 Graphpad Prism을 사용하여 그래프화되었다.
11.2 결과
APX005 S267E는 FcγRIIa 및 FcγIIb에 대하여 최고 친화성을 나타냈다 (도 11b 내지 d). SEA-CD40은 FcγRIIb에 대하여 최저 친화성과 FcγRIIIa에 대하여 최고 친화성을 가졌다 (도 11b 내지 d). 데이터는 상이한 FcγR에의 결합에 영향을 주는 상이한 Fc 백본의 잠재력을 입증한다. SEA-CD40 비푸코실화된 백본은 억제성이 아닌 활성화 FcγR을 결합시켰다는 점에서 개발 중인 다른 CD40 항체와 비교해서 차별적 결합을 보여준다 (도 11b 내지 d).
실시예 12: MIA-PaCa-2 세포에서 유도된 세포사
12.1 물질 및 방법
MIA-PaCa-2 췌장 종양 세포는 (상기 실시예 3에서 파클리탁셀과 유사하게 작용하는) EC50 농도의 비-ICD 유도 제제 아브락산, 또는 2개의 ICD 유도 제제 옥살리플라틴 또는 vc-MMAE로 세포사를 겪도록 유도되었다. 세포는 각 제제와 18 시간 동안 인큐베이션되었다. 종양 세포는 그 다음 인간 PBMC 더하기 상이한 Fc 백본을 가진 다양한 CD40-지시된 효능제 (1 μg/ml)에 첨가되었고 (도 11a) 면역 활성화는 48 시간 후에 평가되었다.
12.2 결과
vcMMAE ADC와 조합된 SEA-CD40은, 적어도 부분적으로, 면역 활성화 사이토카인 (CXCL10 및 IFNγ; 도 12a 내지 b)의 우수한 방출을 유도함으로써 종양 세포를 사멸시켰고, 한편 상이한 Fc 백본을 가진 다른 CD40 효능제는 면역 완화 사이토카인 (IL-10 및 MDC; FIG 12c 내지 d)을 증폭시켰다. 이 실시예는 FcγRIIIa에 향상된 결합을 갖는 Fc 백본으로 관찰된 개선된 면역 반응을 실례한다.
실시예 13: Fc 백본의 기능으로서 세포자멸적 흑색종 세포에 대한 차별적 면역 활성화
13.1 물질 및 방법
2개의 흑색종 세포주, SK-MEL 12 및 SK-MEL 28은 아브락산, 옥살로플라틴, 또는 vc-MMAE로 EC50 농도에서 18 시간 동안 치료되었다. 인간 PBMC 더하기 상이한 Fc 백본을 가진 1 μg/ml의 다양한 CD40-지시된 효능제 (도 11a)는 치료된 흑색종/종양 세포에 첨가되었다. 면역 활성화는 48 시간 후에 평가되었다.
13.2 결과
vc-MMAE ADC와 조합된 SEA-CD40은 면역 활성화 사이토카인의 방출을 유도하였고 (CXCL10; 도 13a 내지 b) 한편 다른 CD40 효능제는 면역 완화 사이토카인을 증폭시켰다 (IL-10; 도 13c 내지 d).
실시예 14: Fc 백본의 기능으로서 다양한 세포자멸적 종양 세포 유형들에 대한 차별적 면역 활성화
14.1 물질 및 방법
14.1.1 세포
세포사는 EC50 농도 및 18 시간의 인큐베이션에서 ICD-유도 제제 옥살리플라틴 또는 vc-MMAE를 사용하여 흑색종, 폐, 유방 및 췌장으로부터 종양 세포에서 유도되었다. 치료된 종양 세포는 인간 PBMC 및 상이한 Fc 백본을 가진 다양한 CD40-지시된 효능제 (도 11a)에 첨가되었다. 면역 활성화는 48 시간 후에 평가되었다. PBMC 및 종양 세포주는 실시예 5에서 상기 기재된 대로 치료되었다. (실시예 5에서 사용된) MIA-PaCa-2 암 세포 대신, 다음 세포주가 사용되었다: 흑색종 세포주 SK-MEL 12 및 SK-MEL 28, 폐암 세포주 A549, 유방암 세포주 MDA-MB-468, 및 췌장암 세포주 MIA-PaCa-2. 세포는 삼중으로 치료되었다.
14.1.2 사이토카인 생산
사이토카인 생산은 실시예 5에서 상기 기재된 대로 평가되었다.
14.2 결과
vc-MMAE ADC와 조합된 SEA-CD40은 면역 활성화 사이토카인의 우수한 방출을 구동시켰고 (CXCL10 및 IFNγ; 도 14a 및 14c) 한편 다른 CD40 효능제는 면역 완화 사이토카인을 증폭시켰다 (IL-10; 도 14b). 실시예 12 및 13에서와 같이, 이 실시예는 다른 Fc 백본과 비교해서 FcγRIIIa에 향상된 결합을 갖는 Fc 백본으로 관찰된 개선된 면역 반응을 입증한다.
실시예 15: 비푸코실화된 SEA-CD40 항체 및 아우리스타틴 기반된 ADC의 조합을 이용한 상승작용적 효과
15.1 물질 및 방법
인간 CD40 이식유전자 마우스는 항원 Thy 1.1을 발현시키도록 조작된 A20 세포로 이식되었다. 종양 세포는 0 일차에 옆구리에서 피하로 이식되었다. (길이가 더 긴 치수인, 부피 (mm3) = 0.5 * 길이 * 폭2 공식을 사용함으로써 측정된) 평균 종양 크기 100 mm3가 도달된 경우, 마우스는 그룹당 5마리 마우스의 치료 그룹으로 무작위화되었다. 동물들은 그 다음 복강내로 지시된 치료로 치료되었고; 각 치료는 총 3회 치료 동안 매 3 일 1회 주어졌다. 항체의 스톡 농도는 적절한 농도로 희석되었고 동물들에게 100 μl 부피로 주사되었다. 최종 투약량은 SEA-CD40의 경우 1 mg/kg 및 Thy1.1에 대한 vc-MMAE ADC의 경우 1 mg/kg이었다. 종양 길이, 종양 폭, 및 마우스 중량은 연구 전반에 걸쳐 측정되었고 종양 부피는 상기 공식을 사용하여 계산되었다. 동물들이 그 다음 안락사된 때 이들이 ~1,000 mm3에 도달한 때까지 종양 부피가 측정된 때까지 동물들은 추적되었다.
15.2 결과
도 15에 도시된 대로, 준치료적 용량의 SEA-CD40을 이용한 A20 종양 모델의 치료는 감소된 종양 성장 및 종양 성장 지연을 초래하였다. 유사하게, vc-MMAE 함유 항체-약물 접합체는 경미한 종양 성장 지연을 보여주었다. 하지만, 2개의 제제가 탠덤으로 동물들에게 투여된 때, 치유적 항종양 반응들이 관찰되었다. 이 데이터는 향상된 SEA-CD40 항체를 ADC를 통해 전달되는 면역원성 세포사 유도 화학요법과 양쪽 조합하기에서, 치유적 반응 달성하기의 가능성을 포함하여 상승작용적 이익을 입증한다.
실시예 16: 상이한 Fc 백본을 가진 TIGIT 항체 및 종양-연관된 항원에 표적화된 아우리스타틴 기반된 ADC로 치료된 다양한 종양 세포주에서 차별적 활성
16.1 물질 및 방법
5개의 상이한 인간 암 세포주, SK-MEL 28 (흑색종) MDA-MB-468 (유방), CORL23 (폐), A549 (폐), 및 HT-26 (결장)은 이 실시예에서 사용되었다. 각 세포주는 18 시간 동안 1 μg/ml의 종양-표적화 항체-vcMMAE ADC로 약물-대-항체 비 (DAR) 4로 치료되었다. 37℃에서 인큐베이션후, 종양 세포는 세정되었고 인간 PBMC는 도 16에 지시된 대로 1 μg/ml의 항-TIGIT 항체 치료로 첨가되었다. 사용된 항-TIGIT 항체는 다양한 수준의 백본 효과기 기능을 가졌고, LALA TIGIT 항체는 FcγR 결합이 없었고, SEA-TIGIT 항체는 향상된 FcγR 결합 (활성화 FcγIIIaR에 증가된 결합, 및 억제성 FcγRIIbR에 축소된 결합을 가졌다. 아래 표 D는 상이한 TGT 항체의 상대 활성을 보여준다. 면역 세포, 항-TIGIT 항체 치료, 및 사멸된/사멸하는 종양 세포의 이들 배양물은 추가의 48 시간 동안 인큐베이션되었다. 각 조건에 대한 상청액은 수확되었고 사이토카인 유도에 대하여 제조사의 지침에 따라 ELISA를 사용하여 평가되었다.
Figure pct00021
16.2 결과
도 16에 도시된 대로, 임의의 추가 면역조절 치료를 포함하지 않았던 PBMC 인큐베이션으로 사멸된/사멸하는 종양 세포 (도 16에서 "미치료군")는 선천적 유형 I 인터페론 관련된 사이토카인 IP10의 생산에 의해 보여진 대로 면역 세포의 일부 자극을 가졌다. IP10 활성화의 수준은 SK-MEL 28, MDA-MB-468 및 CORL23이 A549 또는 HT-26 세포보다 PBMC의 훨씬 더 많은 활성화를 유도하였기 때문에 종양 세포 유형에 의존적이었다. 그러나 종양 세포와 상관없이, 공-배양물에 향상된 효과기 기능 항-TIGIT mAb SEA-TGT의 후속 첨가는 전반적으로 추가 향상된 면역 세포 활성화를 초래하였다. 사멸된 세포만으로의 공-인큐베이션이 실질적 활성화를 구동시키는데 충분하지 않았던 세포주의 경우, 비푸코실화된 TIGIT mAb SEA-TGT의 포함은 이의 강한 활성화 능력을 입증하는 가장 실질적 증가를 보여주었다. 이들 세포에서 IgG1 백본 TIGIT 항체는 향상된 mAb와 비교된 때 약화된 면역 세포 활성화를 구동시킬 수 있었다. FcγR 관여 능력이 없는, 항-TIGIT의 LALA 버전은 임의의 면역 활성화 구동하기에서 비활성이었다.
실시예 17: 상이한 Fc 백본을 가진 TIGIT 항체 및 종양-연관된 항원에 표적화된 아우리스타틴 기반된 ADC로 치료된 다양한 종양 세포주에서 차별적 활성
17.1 물질 및 방법
6개의 상이한 인간 암 세포주, HT-26 (결장), A549 (폐), CORL23 (폐), MDA-MB-468 (유방), SK-MEL 28 (흑색종), 및 Mia-PaCa-2 (췌장)는 이 실시예에서 사용되었다. 각 세포주는 18 시간 동안 1 μg/ml의 종양-표적화 항체-vcMMAE ADC로 약물-대-항체 비 (DAR) 4로 치료되었다. 37℃에서 인큐베이션후, 종양 세포는 세정되었고 인간 PBMC는 도 16에 지시된 대로 1 μg/ml의 항-TIGIT 항체 치료로 첨가되었다. 면역 세포, 항-TIGIT 항체 치료, 및 사멸된/사멸하는 종양 세포의 이들 배양물은 추가의 48 시간 동안 인큐베이션되었다. 각 조건에 대한 상청액은 수확되었고 사이토카인 유도에 대하여 제조사의 지침에 따라 ELISA를 사용하여 평가되었다.
17.2 결과
도 17에 도시된 대로, 임의의 추가 면역조절 치료를 포함하지 않았던 PBMC 인큐베이션으로 사멸된/사멸하는 종양 세포 (도 16에서 "미치료군")는 적응적 사이토카인 IFNγ의 생산에 의해 보여진 대로 면역 세포의 일부 자극을 가졌다. IFNγ 활성화의 수준은 SK-MEL 28, MDA-MB-468 및 CORL23이 A549 또는 HT-26 세포보다 PBMC의 더 많은 활성화를 유도하였기 때문에 종양 세포 유형에 의존적이었다. 그러나 종양 세포와 상관없이, 공-배양물에 향상된 효과기 기능을 갖는 비푸코실화된 SEA-TGT mAb의 후속 첨가는 전반적으로 추가 향상된 면역 세포 활성화를 초래하였다. 사멸된 세포만으로의 공-인큐베이션이 실질적 활성화를 구동시키는데 충분하지 않았던 세포주의 경우, 비푸코실화된 TIGIT mAb SEA-TGT의 포함은 이의 강한 활성화 능력을 입증하는 가장 실질적 증가를 보여주었다. 이들 세포에서 IgG1 백본 TIGIT 항체는 일부 면역 세포 활성화를 구동시킬 수 있었지만 향상된 mAb에 비해 크게 약화되었다. FcγR 관여 능력이 없는, 항-TIGIT의 LALA 버전은 임의의 면역 활성화 구동하기에서 비활성이었다.
실시예 18: 비푸코실화된 TIGIT 항체 및 아우리스타틴 기반된 ADC의 조합을 이용한 상승작용적 효과
18.1 물질 및 방법
18.1.1 TIGIT 항체 및 아우리스타틴 기반된 ADC의 시험관내 평가
A549 비-소 세포 폐암 암종 세포는 종양-세포-표적화 항체에 접합된 EC50 농도의 ICD-유도 제제 vc-MMAE로 세포사를 겪도록 유도되었다. 세포는 제제와 18 시간 동안 인큐베이션되었고 그 다음, IgG1 항체 (US 2018/0066055 A1)인, 항-TIGIT LALA, SEA-TGT, 및 항체 31C6 H4/L1을 포함하는, 상이한 Fc 백본을 가진 다양한 농도 (1, 0.1, 0.01 μg/ml)의 항-TIGIT 항체와 협력하여 인간 PBMC에 첨가되었다. 그 다음, 면역 활성화는 공-배양 48 시간후 사이토카인 (IP10) 수준을 측정함으로써 평가되었다.
18.1.2 TIGIT 항체 및 아우리스타틴 기반된 ADC의 생체내 평가
Balb/c 마우스는 0 일차에 옆구리에서 피하로 종양 항원 Thy1.1을 발현시키는 CT26 동계 종양 세포주로 이식되었다. (길이가 더 긴 치수인, 부피 (mm3) = 0.5 * 길이 * 폭2 공식을 사용함으로써 측정된) 평균 종양 크기 100 mm3가 도달된 경우, 마우스는 그룹당 5마리 마우스의 치료 그룹으로 무작위화되었다. 동물들은 그 다음 복강내로 지시된 치료로 치료되었고; 각 치료는 총 3회 치료 동안 매 3 일 1회 주어졌다. 항체의 스톡 농도는 적절한 농도로 희석되었고 동물들에게 100 μl 부피로 주사되었다. 최종 투약량은 SEA-TGT mIgG2a의 경우 0.1 mg/kg 및 종양-표적화 vc-MMAE Thy1.1 ADC의 경우 5 mg/kg이었다. 사용된 양쪽 항체는 mIgG2a 백본 상이었고, SEA-TGT mIgG2a는 비푸코실화된다. 종양 길이, 종양 폭, 및 마우스 중량은 연구 전반에 걸쳐 측정되었고, 종양 부피는 상기 공식을 사용하여 계산되었다. 동물들이 그 다음 안락사된 때 이들이 ~1,000 mm3에 도달한 때까지 종양 부피가 측정된 때까지 동물들은 추적되었다.
Balb/c 마우스는 0 일차에 옆구리에서 피하로 종양 항원 EphA2를 발현시키는 렌카 동계 종양 세포주로 이식되었다. (길이가 더 긴 치수인, 부피 (mm3) = 0.5 * 길이 * 폭2 공식을 사용함으로써 측정된) 평균 종양 크기 100 mm3가 도달된 경우, 마우스는 그룹당 5마리 마우스의 치료 그룹으로 무작위화되었다. 동물들은 그 다음 복강내로 지시된 치료로 치료되었고; 각 치료는 총 3회 치료 동안 매 3 일 1회 주어졌다. 항체의 스톡 농도는 적절한 농도로 희석되었고 동물들에게 100 μl 부피로 주사되었다. 최종 투약량은 SEA-TGT의 경우 0.1 mg/kg 및 종양-표적화 vc-MMAE EphA2 ADC의 경우 1 mg/kg이었다. 사용된 양쪽 항체는 mIgG2a 백본 상이었다. 종양 길이, 종양 폭, 및 마우스 중량은 연구 전반에 걸쳐 측정되었고, 종양 부피는 상기 공식을 사용하여 계산되었다. 동물들이 그 다음 안락사된 때 이들이 ~1,000 mm3에 도달한 때까지 종양 부피가 측정된 때까지 동물들은 추적되었다.
18.2 결과
도 18a에 도시된 대로, ADC의 인큐베이션은 세포들의 면역 집단과 종양 세포를 사멸시켜, 사이토카인 IP10의 유도에 의해 측정된 경우에 (X 축 상에서 "0"으로 표시된 막대 참조) MMAE를 통해 유도된 면역원성 세포사 때문에 면역 세포의 일부 활성화를 초래하였다. 추가로, 공-배양물에 증가하는 농도의 SEA-TGT의 첨가는 이 사이토카인의 유도에서 실질적 증가를 초래하였다. 이것은 효과기-무효 항-TIGIT 항체 (LALA) 또는 표준 항-TIGIT IgG1 항체 (31C6 H4/L1) 어느 한쪽으로 보여지지 않아서, SEA-TGT의 비푸코실화된 백본이 면역원성 세포-사멸-유도 MMAE와 상승작용을 구동시켜 우수한 면역 세포 활성화를 제공함을 보여주었다.
도 18b 및 도 18c에 도시된 대로, 준치료적 용량의 0.1 mg/kg의 SEA-TGT를 이용한, CT26 종양 모델 및 렌카 종양 모델, 각각의 치료는 감소된 종양 성장 및 종양 성장 지연을 초래하였다. vc-MMAE (베도틴) ADC는 경미한 종양 성장 지연을 자체적으로 보여주었다. 2개의 제제가 텐덤으로 동물들에게 투여된 때, 종양 성장에서 실질적 감소, 뿐만 아니라 동물들의 40%에서 치유적 반응이 관찰되었다. 이들 데이터는 면역원성 세포사를 유도하는 ADC와, 이의 향상된 효과기 기능을 가진 SEA-TGT mIgG2a 항체 (비푸코실화된 인간 IgG1 백본에 상응하는 비푸코실화된 마우스 IgG2a로서 재형식화된 SEA-TGT 항체) 조합하기에서 상승작용적 이익을 입증한다.
이러한 관찰이 2개의 상이한 종양 세포 항원을 표적화하는 ADC를 가진 2개의 상이한 종양 모델에서 이루어졌다는 사실은 이 조합의 항-종양 활성이 상이한 종양 유형들에 광범위하게 적용될 수 있음을 시사한다.
실시예 19: 비푸코실화된 TIGIT 항체 및 또 다른 아우리스타틴 기반된 ADC의 조합을 이용한 상승작용적 효과
19.1 물질 및 방법
뮤린 B7H4를 발현하도록 조작된 렌카 세포는 Balb/c 마우스에서 피하로 이식되었다. 종양은 성장하여 100 mm3에 도달하도록 되었고, 이 시점에 마우스는 준치료적 용량의 SEA-TGT 및 SGN-B7H4 MMAE ADC (B7H4V), 또는 준치료적 용량의 SEA-TGT 및 치료적 용량의 옥살리플라틴으로 치료되었다. 화합물은 같은 날에 주어졌고, 마우스는 7 일 떨어져 총 3회 용량 동안 치료되었다.
19.2 결과
도 19에 도시된 대로, SEA-TGT 조합형 활성은 준치료적 용량의 SEA-TGT가 준치료적 용량의 B7H4V와 조합된 때 증가된 항-종양 활성으로 확장하였다. SEA-TGT (준치료적 용량) 및 B7H4V (준치료적 용량)의 조합형 활성은 알려진 ICD 유도제인 SEA-TGT (준치료적 용량) 및 옥살리플라틴 (치료적 용량)의 조합형 활성과 유사하였다. 옥살리플라틴은, 하지만, 아나필락시스 및 신장 독성의 경고와 연관되고, 치료적 용량으로 주어진 때, 자체적으로 매우 활성이지 않고 다양한 다른 화학요법과 조합으로 종종 사용된다.
도 19에 또한 도시된 대로, SEA-TGT의 치유적 효과는 B7H4V와 조합된 때 상당히 증가되었다. 이론에 의해 구속되기 위한 것은 아니어도, 이 효과는 ICD의 유도 그리고 이러한 조합으로 유도되는 장수 기억 T 세포 반응 때문인 것으로 생각된다 (또한 아래 실시예 23 참조).
요약하면, 이 실험의 결과는 면역 세포 인게이저에 대한 비푸코실화된 항체 (이 실험에서, 비푸코실화된 항-TIGIT 항체 예컨대 SEA-TGT)가 면역 세포사를 유도하는, 이 특정한 실시예에서 MMAE ADC (즉, B7H4V) 및 옥살리플라틴 양쪽이었던 제제와 양호하게 조합함을 보여주는 본원에 기재된 다른 결과와 일치한다. MMAE ADC와 조합은, 하지만, 옥살리플라틴과 연관된 독성 때문에 그리고 비교가능한 치료적 효과가 치료적 용량의 옥살리플라틴과 비교해서 준치료적 용량의 ADC에서 관찰되었기 때문에 바람직하다.
실시예 20: 비푸코실화된 SEA-CD70 항체 및 아우리스타틴 기반된 ADC의 조합을 이용한 상승작용적 효과
SEA-CD70 (SEA-h1F6)은 CD70 항원을 표적화하는 비푸코실화된 항체이다. CD70 분자는 종양 괴사 인자 (TNF) 리간드 수퍼패밀리 (TNFSF)의 한 구성원이고 이는 관련된 수용체, CD27 (TNFRSF7)에 결합한다. 2개 분자들 사이 상호작용은 양쪽 수용체로부터 세포내 신호를 활성화시킨다. 정상 조건에서, CD70 발현은 일시적이고 활성화된 T 및 B 세포, 성숙한 수지상, 및 자연 살해 (NK) 세포로 제한된다. 유사하게, CD27은 나이브 및 활성화된 효과기 T 세포, 뿐만 아니라 NK 및 활성화된 B 세포 양쪽에서 발현된다. 하지만, CD70은 급성 골수성 백혈병 (AML), 골수이형성 증후군 (MDS), 및 비-호지킨 림프종 (NHL), 뿐만 아니라 암종을 포함하는 다양한 혈액 암에서 또한 비정상적으로 발현되고, 종양 세포 생존 및/또는 종양 면역 회피 양쪽에서 역할을 한다. (서열번호: 41 및 42, 각각의 VH 및 VL, 그리고 서열번호: 53-58의 CDR을 포함하는) SEA-CD70은 CD70/CD27 축 신호전달 차단하기, 항체 의존적 세포성 식세포작용 (ADCP) 및 보체 의존적 세포독성 (CDC) 이끌어내기, 그리고 항체 의존적 세포성 세포독성 (ADCC) 향상시키기를 통해서 작용한다. 아래 기재된 대로, SEA-CD70은 피하 NHL 모델에서 브렌툭시맙 베도틴 (BV, SGN-35, cAC10-MMAE)과 조합으로 시험되었다. SGN-35로도 지칭되는 브렌툭시맙 베도틴은 단클론성 항체 cAC10에 접합된 MMAE를 함유하는 CD30-표적화 ADC이다. CD30은 호지킨 림프종에서 뿐만 아니라 NHL 환자들의 서브세트에서 발현된다.
20.1 물질 및 방법
NHL 이종이식 모델에서 피하 종양 성장의 생체내 평가
Farage 세포 (2.5x106 세포/동물)는 0.1 mL의 25% 매트리겔에서 재현탁되었고, ADCP 및 ADCC를 매개하기 위해 활성 선천적 면역 효과기 세포를 함유하는 SCID 마우스에 피하로 주사되었다. 평균 종양 크기 100 mm3가 도달되었다면 (길이가 더 긴 치수인, 공식: 부피 (mm3) = 0.5*길이*폭2을 사용함으로써 측정됨), 마우스는 그룹당 6마리 마우스의 치료 그룹으로 무작위화되었다. 치료는 복강내로 주어졌다. 스톡 농도의 항체 및 화학요법은 적절한 농도로 희석되었고 동물들에게 10 μL/g 체중으로 주사되었다. 종양 길이 및 폭 및 동물 중량은 연구 전반에 걸쳐 매주 적어도 2 회 측정되었다. 이식 19 일후, 투약은 3 mg/kg SEA-CD70 및/또는 1 mg/kg SGN-35로 개시되었다. SEA-CD70은 5 회 동안 매 4 일 복강내로 (IP) 투약되었고 SGN-35는 19 일차에 IP 1회 투약되었다. 동물들은 종양 부피가 500 mm3 초과 측정된 때까지 추적되었고, 그 시간에 동물들은 안락사되었다. 500 mm3의 종양 크기 종점은 더 큰 크기에서 궤양화되는 종양의 경향 때문에 선정되었다.
20.2 결과
도 20a에 도시된 대로, SGN-35 및 SEA-CD70 조합하기는 단일 제제 SGN-35 또는 SEA-CD70 치료와 비교하여 종양 성장을 지연시켰다. 모든 미치료된 종양은 28.5 일차까지 (치료 9.5 일후) 그들의 본래 크기보다 5 배 더 크게 부피를 증가시켰고, 한편 단일 제제 SEA-CD70 또는 단일 제제 SGN-35로 치료된 종양은 각각 34.5 및 46 일차 (치료 15.5 및 27 일후)에서 평균 5 배 증가에 도달하였다. 특히, SEA-CD70 및 SGN-35의 조합으로 치료된 종양의 어느 것도 실험이 종결된 때까지 (50 일차) 확립된 크기 종점에 도달하지 않았다 (도 20b). 단일 SEA-CD70 또는 SGN-35 치료와 비교하여, 명백한 독성 또는 추가의 중량의 손실은 SEA-CD70 및 SGN-35를 조합하는 때 관찰되지 않았다. 이들 데이터는 MMAE 페이로드를 갖는 ADC (SGN-35) 및 비푸코실화된 항체 (SEA-CD70)의 조합이 효과가 있고 양호하게-내약성임을 나타냈다.
실시예 21: 비푸코실화된 SEA-BCMA 항체 및 아우리스타틴 ADC의 조합을 이용한 상승작용적 효과
SEA-BCMA는 다발성 골수종 (MM)에서 발현되는 비푸코실화된 항체 표적화 B-세포 성숙 항원 (BCMA)이다. (각각 서열번호: 45 및 46의 VH 및 VL, 그리고 서열번호: 47-52의 CDR을 갖는) SEA-BCMA는 리간드 매개된 BCMA 세포 신호전달, 항체 의존적 세포성 식세포작용 (ADCP), 및 향상된 항체 의존적 세포성 세포독성 (ADCC) 차단하기를 통해서 작용한다. 아래 기재된 대로, SEA-BCMA는 전파된 MM 종양 이종이식 모델에서 SGN-CD48A와 조합으로 시험되었다. SGN-CD48A는 글루쿠로니드 연결된 MMAE를 함유하는 CD48-표적화 ADC이다. CD48은 MM에서 광범위하게 발현된다.
21.1 물질 및 방법
21.1.1 이종이식 모델의 생체내 생존 평가
MM1S MM 세포는 ADCP 및 ADCC를 매개하기 위해 활성 선천적 면역 효과기 세포를 함유하는 SCID 동물들에 IV 주사되었다. 이식 7일후, 투약은 0.1 mg/kg SEA-BCMA 및/또는 0.01 mg/kg SGN-CD48A로 개시되었고, 동물들은 생존에 대하여 모니터링되었다. SEA-BCMA는 매주 5 주 동안 IP 투약되었고 SGN-CD48A는 1회 IP 투약되었다. 동물들은 160 일 동안 생존 (N=8/그룹)에 대하여 추적되었다. 51 일차까지, 모든 미치료된 동물들은 IACUC 프로토콜에 따라 인도적으로 안락사되었다.
21.1.2 이종이식 모델의 생체내 루시퍼라제 평가
L363 루시퍼라제 MM 세포는 SCID 동물들에게 IV 주사되었고, MM 세포는 골수로 귀가하게 되었다. 루시퍼라제 신호는 시간이 지남에 따라 모니터링되었다. 이식후 30 일에, 투약은 3 mg/kg SEA-BCMA 및/또는 0.3 mg/kg SGN-CD48A로 개시되었다. SEA-BCMA는 매주 5 주 동안 IP 투약되었고 SGN-CD48A는 1회 IP 투약되었다. 동물들은 175 일 동안 (N=5/그룹) 추적되었다. 58 일차까지, 모든 미치료된 동물들은 IACUC 프로토콜에 따라 인도적으로 안락사되었다.
21.2 결과
도 21a 내지 b에 도시된 대로, SEA-BCMA와 조합된 SGN-CD48A는 시험된 마우스 모델에서 완전 관해 및 연장된 생존을 유도하였다. 도 21a에서, 160 일차까지, 8마리 동물들 중 5마리는 SEA-BCMA 단독으로 치료된 0마리 동물 그리고 SGN-CD8A 단독으로 치료된 1마리 동물과 비교하여 조합 요법을 받은 그룹에서 생존하였다. 도 21b에서, 37 일차까지, 조합 요법으로 치료된 모든 동물들은 175 일차에, 연구의 종점까지 부재이었던, 검출가능한 루시퍼라제 신호를 표시하지 않았다. 이 현저한 상승작용은 선천적 면역 세포 관여 SEA-BCMA로 아우리스타틴 ADC를 유도하는 ICD의 독특한 조합 때문일 수 있다.
실시예 22: 베도틴 ADC는 생체내 면역 세포 모집 및 활성화를 유도한다
22.1 물질 및 방법
종양 이종이식편은 8 일 동안 vc-MMAE ADC 또는 비-결합 vc-MMAE 아이소타입 ADC로 치료된 동물들로부터 단리되었고, 유세포 분석 또는 사이토카인 프로파일링에 적용되었다. CD45 양성 면역 세포는 CD11c에 대하여 염색되었고 활성화는 세포 표면 상에서 MHC-클래스 II의 발현에 대하여 염색함으로써 관찰되었다. 종양내 사이토카인은 Luminex에 의해 측정되었다.
22.2 결과
도 22에 도시된 대로, 공통 종양 항원 (vc-MMAE ADC)을 표적화하는 MMAE-기반 ADC로 치료된 종양-보유 마우스는 종양에서 면역 세포 모집 및 활성화의 촉진을 초래하였다. 수지상 세포 침윤 및 수지상 세포 항원-제시하기는 비-결합 대조군 (비-결합 ADC)과 비교하여 종양을 표적화하는 MMAE-기반 ADC (vcMMAE ADC)로 치료된 때 둘 모두 상당히 향상되었다 (도 22b). 종양내 사이토카인 수준은 종양을 표적화하는 MMAE-기반 ADC (vc-MMAE ADC)로 치료된 때 또한 상당히 향상되었다 (도 22c). 이들 데이터는 튜불린 교란제를 포함하는 ADC가 종양에서 면역 세포 모집 및 활성화의 촉진을 초래하는 방식으로 ER 스트레스 및 종양 세포사를 유도함을 시사한다.
이들 결과는 면역 관문 차단 제제에 대한 바람직한 파트너로서 그 MMAE-기반 ADC를 시사한다.
실시예 23: 베도틴 ADC에 의한 T 세포 기억의 유도
23.1 물질 및 방법
Balb/c 마우스는 0 일차에 옆구리에서 종양 항원 Epha2를 발현시키는 렌카 동계 종양 세포로 피하로 이식되었다. (길이가 더 긴 치수인, 부피 (mm3) = 0.5 * 길이 * 폭2 공식을 사용함으로써 측정된) 평균 종양 크기 100 mm3가 도달된 경우, 마우스는 그룹당 5마리 마우스의 치료 그룹으로 무작위화되었다. 동물들은 그 다음 복강내로 지시된 치료로 치료되었다 (도 21a). 각 치료는 1회 주어졌다. 항체의 스톡 농도는 적절한 농도로 희석되었고 동물들에게 100 μl 부피로 주사되었다. 최종 투약량은 종양-표적화 ADC (ADC-vcMMAE) 및 비-결합 ADC (아이소타입-vcMMAE, h00-vcMMAE로도 알려짐)의 경우 5 mg/kg이었다. 종양 길이, 종양 폭, 및 마우스 중량은 연구 전반에 걸쳐 측정되었고, 종양 부피는 상기 공식을 사용하여 계산되었다. 동물들이 그 다음 안락사된 때, 종양 부피가 ~1,000 mm3에 도달한 때까지 동물들은 추적되었다.
치유적 항-종양 반응을 달성한 마우스는 모니터링되었다. 그 다음, 치유 달성 30 일후, 마우스는 렌카 종양 세포 (도 21b)로 재공격되었고, 새로운 종양의 증식 및 거부는 평가되었다.
23.2 결과
도 23a에 도시된 대로, 렌카 동계 모델에서, 단일 용량의 종양-표적화 MMAE ADC (ADC-vcMMAE)를 이용한 치료는 강한 항-종양 활성 및 치유적 반응들을 초래하였다. 도 23b에 도시된 대로, MMAE ADC 치료로 치유된 마우스가 면역 기억의 유도를 평가하기 위해 렌카 종양 세포로 재공격된 때, 이러한 마우스는 후속적으로 이식된 종양 세포를 거부할 수 있었다. 이러한 결과는 특이적 항-종양 T 세포 반응을 이끌어내는 MMAE ADC의 능력을 입증한다.
실시예 24: 브렌툭시맙 베도틴 (BV; SGN-35)-치료된 세포는 보호적 항-종양 면역성을 부여한다
24.1 물질 및 방법
인간 CD30을 발현시키는 A20 세포는 18 시간 동안 CD30-아우리스타틴 ADC (BV; SGN-35) 또는 MMAE로 치료되었다. 대안적으로, 1 분취량의 세포는 급속 냉동되었다. 치료된 샘플의 피콜 원심분리는 수행되어 살아있는 세포를 제거하였다. 모든 샘플은 아넥신 V/7AAD를 사용하여 유세포 분석에 의해 세포자멸사 및 생존력에 대하여 분석되었다. 사멸하는 및 사멸된 세포는 세정되었고, PBS에서 재현탁되었고, 마우스에 복강내로 주사되었다. 마우스는 7 일 떨어져 2 회 면역화되었다. 면역화된 마우스는 추가의 7 일 동안 휴식하였고, 그 다음 A20 림프종 세포로 공격되었고, 종양 성장 또는 거부는 시간이 지남에 따라 모니터링되었다.
24.2 결과
도 24에 도시된 대로, BV 또는 MMAE를 사용하여 사멸된 CD30-발현 A20 세포로 면역화된 마우스는 세포사의 비-ICD 방법인 급속 냉동으로 사멸된 CD30-발현 A20 세포로 면역화된 마우스와 비교하여 이식된 A20 세포를 거부하는 더 강한 면역 반응들을 표시하였다. 이들 결과는 기억 T 세포 반응의 유도를 나타낸다. 면역학적 기억의 유도는 분자의 ICD 활성을 평가하기 위한 황금 표준으로 간주된다.
총체적으로, 전술한 실시예에서 제시된 결과는 면역원성 세포사를 유도하는 아우리스타틴 기반된 ADC (예를 들면, MMAE 및 MMAF)의 독특한 능력을 뒷받침한다. 전술한 예에 의해 입증된 대로, 아우리스타틴의 작용의 기전 및 미소관 네트워크를 교란시키는 그들의 능력은 위험 신호 (DAMP)의 노출 및 분비로 이어지는 ER 스트레스 반응들의 유도와 연관된 것으로 보인다. 이들 DAMP의 노출은 항원 특이적 T 세포 반응으로 이어질 수 있는 선천적 면역 세포 반응을 개시한다. 종양 항원을 인식할 수 있는 새로운 항원 특이적 T 세포의 유도는 장기 면역 보호를 제공하는 장기 기억 T 세포 반응들과 연관되는 전임상적으로 치유적 항-종양 활성으로 이어질 수 있다.
MMAE ADC에 의해 유도되는 기억 T 세포의 이 집단은 비푸코실화된 항체에 의해 추가로 증가 및/또는 향상될 수 있다. MMAE ADC 유도된 ICD에서 비롯하는 (예를 들면, 상기 기억 T 세포 반응들을 통해서) 면역학적 기억을 확립한 후, 비푸코실화된 항체 예컨대 SEA-TIGIT는 PD-1/PD-L1의 관문 억제성 기전과 유사한 종양-차단/억제성 기전을 통해서 면역 반응들을 추가로 증대시킬 수 있다.
추가로, 면역원성 세포사를 구동시키는 아우리스타틴 기반된 ADC (예를 들면, MMAE 및 MMAF), 예컨대 MMAE ADC의 능력을 면역 세포 효능작용과 짝짓기하는 것은 항-종양 활성을 증폭시킬 수 있다. 면역 효능작용은 비푸코실화된 항체 또는 (예를 들면, 상기 실시예에서 나타난 대로 비푸코실화된 CD40 및 BCMA 항체로) 활성화 FcγR에 향상된 결합 및/또는 억제성 FcγR에 축소된 결합을 갖도록 조작된 항체의 사용에 의해 증폭될 수 있다. 비푸코실화된 항체는 활성화 FcγRIIIa 수용체에 증가된 결합 및 억제성 FcγRIIb 수용체에 축소된 또는 최소 결합을 가질 수 있다. 이 속성은 항체 표적의 성질에 따라 복합적이다. 클러스터링된 때 최적으로 활성인 CD40과 같은 수용체의 경우에, FcγRIIA+ 세포에 결합하는 비푸코실화된 항체는 수용체 클러스터링 및 면역 효능작용 및 활성화를 증가시킨다. 도 25를 참조한다. TIGIT의 경우에서와 같이, 비푸코실화된 항체는 항원 (+) T 세포와 항원 제시 세포 사이 면역 시냅스의 강도를 증가시킨다 (도 25). 선천적 세포 상에서 FcγRIIIa의 관여는 그들의 활성화 그리고 항원 특이적 T 세포 반응을 향상시킬 수 있는 인자들의 생산을 증가시킨다. 마지막으로, 비푸코실화된 백본은, 표적 항원과 독립적으로, 2차 항원 특이적 T 세포 반응을 유도하는데 도움이 될 수 있는 활성화 상태를 유도하기 위해 선천적 면역 세포 또는 다른 FcγRIIIa 세포 예컨대 감마 델타 T 세포에 결합할 수 있다. 비푸코실화된 항체가 작업하는 모든 이들 기전은 항-종양 활성 및 장수 면역 보호를 구동시키는 T 세포 반응으로 이어질 수 있다. FcγRIIb에 결합의 축소 또는 결여는 비푸코실화된 항체에 의해 구동된 면역 활성화를 감소시키는 카운터 또는 억제성 신호가 없음을 의미한다.
비푸코실화된 mAb에 의한 면역 조절과 커플링된, 아우리스타틴 ADC 예컨대 MMAE ADC의 작용의 기전은 본원에 입증된 대로 향상된 면역 활성화 및 치유적 항-종양 반응을 초래하는 것으로 나타난 상승작용적 및 상보적 활성을 초래한다.
본원에 인용된 모든 간행물, 특허, 특허 출원 또는 기타 문헌은 각 개별 간행물, 특허, 특허 출원, 또는 기타 문헌이 모든 목적을 위하여 참조로 편입되는 것으로 개별적으로 표시된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위하여 그들 전체가 참조로 편입된다.
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Claims (115)

  1. 암을 치료하는 방법으로서, 암을 가진 대상체에게
    (1) 종양-연관된 항원과 튜불린 교란제인 세포독성제를 결합시키는 제1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체 (ADC); 및
    (2) 면역 세포 인게이저에 결합하는 제2 항체로서, 제2 항체가 하나 이상의 활성화 FcγR에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하며, 활성화 FcγR이 FcγRIIIa, FcγRIIa, 및/또는 FcγRI 중 하나 이상을 포함하는, 제2 항체
    를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 제2 항체가 적어도 FcγRIIIa에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하는, 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 제2 항체가 적어도 FcγRIIIa 및 FcγRIIa에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하는, 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 제2 항체가 적어도 FcγRIIIa 및 FcγRI에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하는, 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 제2 항체가 FcγRIIIa, FcγRIIa, 및 FcγRI에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하는, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체의 Fc가 하나 이상의 억제성 FcγR에 감소된 결합을 갖는, 방법.
  7. 제6항에 있어서, 상기 제2 항체의 Fc가 FcγRIIb에 감소된 결합을 갖는, 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체의 Fc가 감소된 푸코스 수준을 갖고/갖거나 Fc가 하나 이상의 활성화 FcγR에 향상된 결합을 갖도록 하나 이상의 돌연변이를 포함하도록 조작된, 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 제2 항체가 비푸코실화되는, 방법.
  10. 제8항에 있어서, 상기 제2 항체가 중쇄 불변 영역에서 치환 S293D, A330L 및 I332E를 포함하는, 방법.
  11. 암을 치료하는 방법으로서, 암을 가진 대상체에게
    항체-약물 접합체로서, 튜불린 교란제인 세포독성제에 접합된 제1 항체를 포함하는, 항체-약물 접합체; 및 면역 세포 인게이저를 결합시키는 제2 항체로서, 비푸코실화되는, 제2 항체를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 종양-연관된 항원을 결합시키는, 방법.
  13. 암을 치료하는 방법으로서, 암을 가진 대상체에게
    (1) 항체-약물 접합체 (ADC)로서, 종양-연관된 항원과 튜불린 교란제인 세포독성제를 결합시키는 제1 항체를 포함하는, ADC 및 (2) 면역 세포 인게이저를 결합시키는 제2 항체로서, 동일한 아이소타입의 상응하는 야생형 Fc에 비해 향상된 ADCC 활성을 가진 Fc를 포함하는, 제2 항체를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 제2 항체가 동일한 아이소타입의 상응하는 야생형 Fc에 비해 향상된 ADCC 및 ADCP 활성을 가진 Fc를 포함하는, 방법.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 상기 제2 항체가 비푸코실화되는, 방법.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체가 하나 이상의 활성화 FcγR에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하며, 활성화 FcγR이 FcγRIIIa, FcγRIIa, 및/또는 FcγRI 중 하나 이상을 포함하는, 방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기 제2 항체가 적어도 FcγRIIIa에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하는, 방법.
  18. 제16항에 있어서, 상기 제2 항체가 적어도 FcγRIIIa 및 FcγRIIa에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하는, 방법.
  19. 제16항에 있어서, 상기 제2 항체가 적어도 FcγRIIIa 및 FcγRI에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하는, 방법.
  20. 제16항에 있어서, 상기 제2 항체가 FcγRIIIa, FcγRIIa 및 FcγRI에 향상된 결합을 가진 Fc를 포함하는, 방법.
  21. 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체의 Fc가 하나 이상의 억제성 FcγR에 감소된 결합을 갖는, 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 제2 항체의 Fc가 FcγRIIb에 감소된 결합을 갖는, 방법.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 5T4 (TPBG), ADAM-9 , AG-7, ALK, ALP, AMHRII, APLP2, ASCT2, AVB6, AXL (UFO), B7-H3 (CD276), B7-H4, BCMA, C3a, C3b, C4.4a (LYPD3), C5, C5a, CA6, CA9, CanAg, 탄산 무수화효소 IX (CAIX), 카텝신 D, CCR7, CD1, CD10, CD100, CD101, CD102, CD103, CD104, CD105, CD106, CD107a, CD107b, CD108, CD109, CD111, CD112, CD113, CD116, CD117, CD118, CD119, CD11A, CD11b, CD11c, CD120a, CD121a, CD121b, CD122, CD123, CD124, CD125, CD126, CD127, CD13, CD130, CD131, CD132, CD133, CD135, CD136, CD137, CD138, CD14, CD140a, CD140b, CD141, CD142, CD143, CD144, CD146, CD147, CD148, CD15, CD150, CD151, CD154, CD155, CD156a, CD156b, CD156c, CD157, CD158b2, CD158e, CD158f1, CD158h, CD158i, CD159a, CD16, CD160, CD161, CD162, CD163, CD164, CD166, CD167b, CD169, CD16a, CD16b, CD170, CD171, CD172a, CD172b, CD172g, CD18, CD180, CD181, CD183, CD184, CD185, CD19, CD194, CD197, CD1a, CD1b, CD1c, CD1d, CD2, CD20, CD200, CD201, CD202b, CD203c, CD204, CD205, CD206, CD208, CD21, CD213a1, CD213a2, CD217, CD218a, CD22, CD220, CD221, CD222, CD224, CD226, CD228, CD229, CD23, CD230, CD232, CD239, CD243, CD244, CD248, CD249, CD25, CD26, CD265, CD267, CD269, CD27, CD272, CD273, CD274, CD275, CD279, CD28, CD280, CD281, CD282, CD283, CD284, CD289, CD29, CD294, CD295, CD298, CD3, CD3 엡실론, CD30, CD300f, CD302, CD304, CD305, CD307, CD31, CD312, CD315, CD316, CD317, CD318, CD319, CD32, CD321, CD322, CD324, CD325, CD326, CD327, CD328, CD32b, CD33, CD331, CD332, CD333, CD334, CD337, CD339, CD34, CD340, CD344, CD35, CD352, CD36, CD37, CD38, CD39, CD3d, CD3g, CD4, CD41, CD42d, CD44, CD44v6, CD45, CD46, CD47, CD48, CD49a, CD49b, CD49c, CD49d, CD49e, CD49f, CD5, CD50, CD51, CD51 (인테그린 알파-V), CD52, CD53, CD54, CD55, CD56, CD58, CD59, CD6, CD61, CD62L, CD62P, CD63, CD64, CD66a-e, CD67, CD68, CD69, CD7, CD70, CD70L, CD71, CD71 (TfR), CD72, CD73, CD74, CD79a, CD79b, CD8, CD80, CD82, CD83, CD84, CD85f, CD85i, CD85j, CD86, CD87, CD89, CD90, CD91, CD92, CD95, CD96, CD97, CD98, CDH6, CDH6 (카드헤린 6), CDw210a, CDw210b, CEA, CEACAM5, CEACAM6, CFC1B, cKIT, CLDN18.2 (클라우딘 18.2), CLDN6, CLDN9, CLL-1, c-MET, 보체 인자 C3, 크립토, CSP-1, CXCR5, DCLK1, DLK-1, DLL3, DPEP3, DR5 (사멸 수용체 5), 디스에드헤린, EFNA4 , EGFR, EGFR 야생형, EGFRviii, EGP-1 (TROP-2), EGP-2, EMP2, ENPP3, EpCAM, EphA2, EphA3, 에프린-A4 (EFNA4), ETBR, FAP, FcRH5, FGFR2, FGFR3, FLT3, FOLR, FOLR1, FOLR-알파, FSH, GCC, GD2, GD3, 글로보 H, GPC1, GPC-1, GPC3, GPNMB, GPR20, HER2, HER-2, HER3, HER-3, HGFR (c-Met), HLA-DR, HM1.24, HSP90, Ia, IGF-1R, IL-13R, IL-15, IL1RAP, IL-2, IL-3, IL-4, IL7R, 인테그린 알파V베타3 (인테그린 αVβ3), 인테그린 베타-6, 인터류킨-4 수용체 (IL4R), KAAG-1, KLK2, LAMP-1, Le(y), 루이스 Y 항원, LGALS3BP, LGR5, LH/hCG, LHRH, 지질 래프트, LIV-1 (SLC39A6 또는 ZIP6), LRP-1, LRRC15, LY6E, 대식세포 만노스 수용체 1, MAGE, 메소텔린 (MSLN), MET, MHC 클래스 I 쇄-관련 단백질 A 및 B (MICA 및 MICB), MN/CA IX, MRC2, MT1-MMP, MTX3, MTX5, MUC1, MUC16, MUC2, MUC3, MUC4, MUC5, MUC5ac, NaPi2b, NCA-90, NCA-95, 넥틴-4, Notch3, 뉴클레올린, OAcGD2, OT-MUC1 (종양-속박-MUC1), OX001L, P1GF, PAM4 항원, p-카드헤린 (카드헤린 3), PD-L1, 포스파티딜 세린(PS), PRLR, 프로락틴 수용체 (PRLR), 슈도모나스, PSMA, PTK4, PTK7, 수용체 티로신 키나제 (RTK), RNF43, ROR1, ROR2, SAIL, SEZ6, SLAMF7, SLC44A4, SLITRK6, SLMAMF7 (CS1), SLTRK6, 소르틸린 (SORT1), SSEA-4, SSTR2, 황색포도상구균 (항생제), STEAP-1, STING, STn, T101, TAA, TAC, TDGF1, 테나신, TENB2, TGF-B, 톰슨-프라이덴리히 항원, Thy1.1, TIM-1, 조직 인자 (TF; CD142), TM4SF1, Tn 항원, TNF-알파 (TNFα), TRA-1-60, TRAIL 수용체 (R1 및 R2), TROP-2, 종양-연관된 당단백질 72 (TAG-72), uPAR, VEGFR, VEGFR-2, 및 xCT로부터 선택된 항원을 결합시키는, 방법.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 넥틴-4를 결합시키지 않는, 방법.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 넥틴-4를 결합시키는 항체를 포함하는 항체-약물 접합체를 투여하는 것을 포함하지 않는, 방법.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 CD71, Axl, AMHRII, 및 LGR5, Axl, CA9, CD142, CD20, CD22, CD228, CD248, CD30, CD33, CD37, CD48, CD7, CD71, CD79b, CLDN18.2, CLDN6, c-MET, EGFR, EphA2, ETBR, FCRH5, GCC, 글로보 H, gpNMB, HER-2, IL7R, 인테그린 베타-6, KAAG-1, LGR5, LIV-1, LRRC15, Ly6E, 메소텔린 (MSLN), MET, MRC2, MUC16, NaPi2b, 넥틴-4, OT-MUC1 (종양-속박-MUC1), PSMA, ROR1, SLAMF7, SLC44A4, SLITRK6, STEAP-1, STn, TIM-1, TRA-1-60, 및 종양-연관된 당단백질 72 (TAG-72)로부터 선택된 항원을 결합시키는, 방법.
  27. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 BCMA, GPC1, CD30, cMET, SAIL, HER3, CD70, CD46, CD48, HER2, 5T4, ENPP3, CD19, EGFR, 및 EphA2로부터 선택된 항원을 결합시키는, 방법.
  28. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 Her2, TROP2, BCMA, cMet, 인테그린 알프V베타6 (인테그린 αVβ6), CD22, CD79b, CD30, CD19, CD70, CD228, CD47, 및 CD48로부터 선택된 항원을 결합시키는, 방법.
  29. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 CD142, 인테그린 베타-6, 인테그린 알파V베타6, ENPP3, CD19, Ly6E, cMET, C4.4a, CD37, MUC16, STEAP-1, LRRC15, SLITRK6, ETBR, FCRH5, Axl, EGFR, CD79b, BCMA, CD70, PSMA, CD79b, CD228, CD48, LIV-1, EphA2, SLC44A4, CD30, 및 sTn으로부터 선택된 항원을 결합시키는, 방법.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 튜불린 교란제가 아우리스타틴, 튜불리신, 콜히친, 빈카 알칼로이드, 탁산, 크립토피신, 메이탄시노이드 또는 헤미아스털린인, 방법.
  31. 제30항에 있어서, 상기 튜불린 교란제가 아우리스타틴인, 방법.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 튜불린 교란제가 돌로스타틴-10, MMAE (N-메틸발린-발린-돌라이소류인-돌라프로인-노르에페드린), MMAF (N-메틸발린-발린-돌라이소류인-돌라프로인-페닐알라닌), 아우리스타틴 F, AEB, AEVB, 또는 AFP (아우리스타틴 페닐알라닌 페닐렌디아민)인, 방법.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 튜불린 교란제가 MMAE인, 방법.
  34. 제33항에 있어서, 상기 MMAE가 발린 및 시트룰린을 포함하는 링커를 통해서 제1 항체에 접합되는, 방법.
  35. 제34항에 있어서, 상기 링커-MMAE가 vcMMAE인, 방법.
  36. 제33항에 있어서, 상기 MMAE가 류신, 알라닌 및 글루탐산을 포함하는 링커를 통해서 제1 항체에 접합되는, 방법.
  37. 제36항에 있어서, 상기 링커-MMAE가 dLAE-MMAE인, 방법.
  38. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 튜불린 교란제가 MMAF인, 방법.
  39. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 튜불린 교란제가 튜불리신인, 방법.
  40. 제39항에 있어서, 상기 튜불리신이 튜불리신 D, 튜불리신 M, 튜부페닐알라닌 및 튜부티로신으로부터 선택되는, 방법.
  41. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체-약물 접합체가 AbGn-107 (Ab1-18Hr1), AGS62P1 (ASP1235), ALT-P7 (HM2-MMAE), BA3011 (CAB-AXL-ADC), 벨란타맙 마포도틴, 브렌툭시맙 베도틴, 시름투주맙 베도틴 (VLS-101, UC-961ADC3), 코페투주맙 펠리도틴 (PF-06647020, PTK7-ADC, PF-7020, ABBV-647), CX-2029 (ABBV-2029), 디시타맙 베도틴 (RC48), 에나포타맙 베도틴 (HuMax-AXL-ADC, AXL-107-MMAE), 엔포르투맙 베도틴 (EV), FS-1502 (LCB14-0110), 젬투주맙 오조가미신, HTI-1066 (SHR-A1403), 이노투주맙 오조가미신, PF-06804103 (NG-HER2 ADC), 폴라투주맙 베도틴, 사시투주맙 고비테칸, SGN-B6A, SGN-CD228A, SGN-STNV, STI-6129 (CD38 ADC, LNDS1001, CD38-077 ADC), 텔리소투주맙 베도틴 (ABBV-399), 티소투맙 베도틴 (Humax-TF-ADC, tf-011-mmae, TV), 트라스투주맙 데룩스테칸, 트라스투주맙 엠탄신 및 보르세투주맙 마포도틴으로부터 선택되는, 방법.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 서열번호:61-66의 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 항-클라우딘-18.2 항체인, 방법.
  43. 제42항에 있어서, 상기 항-클라우딘-18.2 항체가 서열번호:59의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:60의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
  44. 제43항에 있어서, 상기 항-클라우딘-18.2 항체가 졸베툭시맙 (175D10)인, 방법.
  45. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 서열번호:69-74의 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 항-클라우딘-18.2 항체인, 방법.
  46. 제45항에 있어서, 상기 항-클라우딘-18.2 항체가 서열번호:67의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:68의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
  47. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 서열번호:77-82의 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 항-PD-L1 항체인, 방법.
  48. 제47항에 있어서, 상기 항-PD-L1 항체가 서열번호:75의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:76의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
  49. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 서열번호:85-90의 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 항-ALP 항체인, 방법.
  50. 제49항에 있어서, 상기 항-ALP 항체가 서열번호:83의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:84의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
  51. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 서열번호:93-98의 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 항-B7H4 항체를 포함하는, 방법.
  52. 제51항에 있어서, 상기 항-B7H4 항체가 서열번호:91의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:92의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
  53. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 서열번호:99의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호:100의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-HER2 항체인, 방법.
  54. 제53항에 있어서, 상기 항체-약물 접합체가 디시타맙 베도틴인, 방법.
  55. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 서열번호:101의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호:102의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-NaPi2B 항체인, 방법.
  56. 제55항에 있어서, 상기 항체-약물 접합체가 리파스투주맙 베도틴인, 방법.
  57. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 서열번호:105-110의 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 항-넥틴-4 항체인, 방법.
  58. 제57항에 있어서, 상기 항-넥틴-4 항체가 서열번호:103의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:104의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는 항체인, 방법.
  59. 제58항에 있어서, 상기 항체-약물 접합체가 엔포르투맙 베도틴인, 방법.
  60. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 서열번호:113-118의 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 항-AVB6 항체인, 방법.
  61. 제60항에 있어서, 상기 항-AVB6 항체가 서열번호:37의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:38의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
  62. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 서열번호:121-126의 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 항-AVB6 항체인, 방법.
  63. 제62항에 있어서, 상기 항-AVB6 항체가 서열번호:119의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:120의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
  64. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 서열번호:129-134의 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 항-CD228 항체인, 방법.
  65. 제64항에 있어서, 상기 항-CD228 항체가 서열번호:127의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:128의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
  66. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 서열번호:137-142의 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 항-LIV-1 항체인, 방법.
  67. 제66항에 있어서, 상기 항-LIV-1 항체가 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:136의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
  68. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체가 서열번호:145-150의 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 항-조직 인자 항체인, 방법.
  69. 제68항에 있어서, 상기 항-조직 인자 항체가 서열번호:143의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호:144의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는, 방법.
  70. 제69항에 있어서, 상기 항체-약물 접합체가 티소투맙 베도틴인, 방법.
  71. 제1항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체가 항-뮬러관 호르몬 수용체 II (AMHR2), B7, B7H1, B7H2, B7H3, B7H4, BAFF-R, BCMA (B-세포 성숙 항원), Bst1/CD157, C5 보체, CC 케모카인 수용체 4 (CCR4), CD123, CD137, CD19, CD20, CD25 (IL2RA), CD276, CD278, CD3, CD32, CD33, CD37, CD38, CD4 및 HIV-1 gp120-결합 부위, CD40, CD70, CD70 (TNF 수용체 리간드 패밀리의 구성원), CD80, CD86, 클라우딘 18.2, c-MET, CSF1R, CTLA-4, EGFR, EGFR MET 원종양유전자, EPHA3, ERBB2, ERBB3, FGFR2b, FLT3, GITR, 글루코코르티코이드-유발 TNF 수용체 (GITR), HER2, HER3, HLA, ICOS, IDO1, IFNAR1, IFNAR2, IGF-1R, IL-3R알파 (CD123), IL-5R, IL-5R알파, LAG-3, MET 원종양유전자, OX40 (CD134), PD-1, PD-L1, PD-L2, PVRIG, 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) EBOV 당단백질 (GP)의 과하게 글리코실화된 뮤신-유사 도메인, 레수스 (Rh) D, 시알산 면역글로불린-유사 렉틴 8 (Siglec-8), 신호전달 림프구 활성화 분자 (SLAMF7/CS1), T-세포 수용체 세포독성 T-림프구-연관된 항원 4 (CTLA4), TIGIT, TIM3 (HAVCR2), Muc1의 종양 특이적 글리코에피토프 (TA-Muc1), VSIR (VISTA) 및 VTCN1로부터 선택된 면역 세포 인게이저를 결합시키는, 방법.
  72. 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체가 TIGIT를 결합시키는, 방법.
  73. 제72항에 있어서, 상기 제2 항체가 다음을 포함하는, 방법:
    (a) 서열번호: 7-9로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1;
    (b) 서열번호: 10-13으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2;
    (c) 서열번호: 14-16으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3;
    (d) 서열번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1;
    (e) 서열번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 및
    (f) 서열번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3.
  74. 제72항에 있어서, 상기 제2 항체가 다음의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR 및 CDR3을 포함하는, 방법:
    (a) 서열번호: 7, 10, 14, 17, 18 및 19 각각; 또는
    (b) 서열번호: 8, 11, 14, 17, 18 및 19 각각; 또는
    (c) 서열번호: 9, 12, 15, 17, 18 및 19 각각; 또는
    (d) 서열번호: 8, 13, 16, 17, 18 및 19 각각; 또는
    (e) 서열번호: 8, 12, 16, 17, 18 및 19 각각.
  75. 제72항에 있어서, 상기 제2 항체가 서열번호: 1-5로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  76. 제72항에 있어서, 상기 제2 항체가 서열번호: 20-24로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 방법.
  77. 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체가 CD40을 결합시키는, 방법.
  78. 제77항에 있어서, 상기 제2 항체가 (a) 각각 서열번호: 30, 31, 32, 33, 34, 및 35; 또는 (b) 각각 서열번호: 30, 36, 32, 33, 34, 및 35의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR 및 CDR3을 포함하는, 방법.
  79. 제77항에 있어서, 상기 제2 항체가 서열번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  80. 제77항에 있어서, 상기 제2 항체가 서열번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 방법.
  81. 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체가 CD70을 결합시키는, 방법.
  82. 제81항에 있어서, 상기 제2 항체가 각각 서열번호: 53-58의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR 및 CDR3을 포함하는, 방법.
  83. 제81항에 있어서, 상기 제2 항체가 서열번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  84. 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체가 BCMA를 결합시키는, 방법.
  85. 제84항에 있어서, 상기 제2 항체가 각각 서열번호: 47-52의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR 및 CDR3을 포함하는, 방법.
  86. 제84항에 있어서, 상기 제2 항체가 서열번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  87. 제1항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체가 IgG1 또는 IgG3 항체인, 방법.
  88. 제1항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체가 항체의 조성물에 포함되며, 조성물 중 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비푸코실화되는, 방법.
  89. 제88항에 있어서, 상기 조성물 중 각각의 항체가 제2 항체와 동일한 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  90. 제1항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체의 Fc가 동일한 아이소타입의 상응하는 야생형 Fc와 비교해서 하나 이상의 활성화 FcγR에 향상된 결합을 가지며, 활성화 FcγR이 FcγRIIIa, FcγRIIa 및/또는 FcγRI 중 하나 이상을 포함하는, 방법.
  91. 제90항에 있어서, 상기 제2 항체의 Fc가 FcγRIIIa에 향상된 결합을 갖는, 방법.
  92. 제1항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체의 Fc가 동일한 아이소타입의 상응하는 야생형 Fc와 비교해서 하나 이상의 억제성 FcγR에 감소된 결합을 갖는, 방법.
  93. 제92항에 있어서, 상기 제2 항체의 Fc가 FcγRIIb에 감소된 결합을 갖는, 방법.
  94. 제1항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체의 Fc가 FcγRIIIa에 향상된 결합 및 FcγRIIb에 감소된 결합을 갖는, 방법.
  95. 제1항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체가 단클론성 항체인, 방법.
  96. 제1항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체가 인간화된 항체 또는 인간 항체인, 방법.
  97. 제1항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 방광암, 유방암, 자궁암, 자궁경부암, 난소암, 전립선암, 고환암, 식도암, 위장암, 위암, 췌장암, 결장직장암, 결장암, 신장암, 투명 세포 신장 암종, 두경부암, 폐암, 폐 선암종, 위암, 생식세포암, 골암, 간암, 갑상선암, 피부암, 흑색종, 중추 신경계의 신생물, 중피종, 림프종, 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 호지킨 림프종, 골수종 또는 육종인, 방법.
  98. 제1항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 림프종, 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종 또는 호지킨 림프종인, 방법.
  99. 제1항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체-약물 접합체 및 제2 항체가 동시에 투여되는, 방법.
  100. 제99항에 있어서, 상기 항체-약물 접합체 및 제2 항체가 단일 약학적 조성물로 투여되는, 방법.
  101. 제1항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체-약물 접합체 및 제2 항체가 순차적으로 투여되는, 방법.
  102. 제101항에 있어서, 항체-약물 접합체의 적어도 제1 용량이 제2 항체의 제1 용량에 앞서 투여되거나; 제2 항체의 적어도 제1 용량이 항체-약물 접합체의 제1 용량에 앞서 투여되는, 방법.
  103. 제1항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체가 T 조절성 세포 (Treg)를 고갈시키는, 방법.
  104. 제1항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체-약물 접합체가 항체-약물 접합체에 의해 결합된 항원을 발현시키는 세포에 대해 면역 기억을 유도시키는, 방법.
  105. 제104항에 있어서, 면역 기억의 유도가 기억 T 세포의 유도를 포함하는, 방법.
  106. 제1항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체가 항원 제시 세포 (APC)를 활성화시키는, 방법.
  107. 제1항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체가 CD8 T 세포 반응들을 향상시키는, 방법.
  108. 제1항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 항체가 공-자극성 수용체를 상향조절하는, 방법.
  109. 제1항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC 및 제2 항체의 투여가 면역 활성화 사이토카인의 방출을 촉진시키는, 방법.
  110. 제109항에 있어서, 상기 면역 활성화 사이토카인이 CXCL10 또는 IFNγ인, 방법.
  111. 제1항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC 및 제2 항체가 상승적으로 작용하는, 방법.
  112. 제1항 내지 제111항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC 및 제2 항체의 조합 투여가, 어느 하나가 단일요법으로 투여될 때의 ADC 또는 제2 항체의 독성 프로파일에 필적하는 독성 프로파일을 갖는, 방법.
  113. 제1항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 조합 투약될 때 ADC 및/또는 제2 항체의 유효 용량이 단일요법으로 투여될 때보다 적은, 방법.
  114. 제1항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 높은 종양 돌연변이 부담을 갖는, 방법.
  115. 제1항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 미소부수체 불안정성을 갖는, 방법.
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