JP2023548538A - 併用療法 - Google Patents

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Abstract

本明細書では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体を抗体－薬物複合体と組み合わせてがんを治療する方法を提供する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年１１月８日に出願された米国仮出願第６３／１１１，０４５号、２０２１年４月８日に出願された米国仮出願第６３／１７２，４１１号、及び２０２１年６月８日に出願された米国仮出願第６３／２０８，１７９号の優先権の利益を主張するものであり、それらの各々があらゆる目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体を抗体－薬物複合体と組み合わせてがんを治療する方法を提供する。
がん免疫療法薬及び抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）は、患者におけるがんの治療に使用されている。いずれのクラスの治療薬も、標的とした適応症において患者の完全な治療を完了することはできていない。本開示は、この問題及び他の問題を解決する。
実施形態１．がんを有する対象に、（１）抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）と、（２）免疫細胞エンゲージャーを結合する第２の抗体と、を投与することを含む、がんを治療する方法であって、ここで、前記抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）は、腫瘍関連抗原を結合する第１の抗体及び細胞傷害剤を含み、前記細胞傷害剤は、チューブリン破壊剤であり；前記第２の抗体は、１つ以上の活性化ＦｃγＲへの結合が増強されているＦｃを含み、前記活性化ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、及び／またはＦｃγＲＩのうちの１つ以上を含む、前記方法。
実施形態２．前記第２の抗体が、少なくともＦｃγＲＩＩＩａへの結合が増強されているＦｃを含む、実施形態１に記載の方法。
実施形態３．前記第２の抗体が、少なくともＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩａへの結合が増強されているＦｃを含む、実施形態１に記載の方法。
実施形態４．前記第２の抗体が、少なくともＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩへの結合が増強されているＦｃを含む、実施形態１に記載の方法。
実施形態５．前記第２の抗体が、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、及びＦｃγＲＩへの結合が増強されているＦｃを含む、実施形態１に記載の方法。
実施形態６．前記第２の抗体の前記Ｆｃは、１つ以上の阻害性ＦｃγＲへの結合が減少している、実施形態１～５のいずれか１項に記載の方法。
実施形態７．前記第２の抗体の前記Ｆｃは、ＦｃγＲＩＩｂへの結合が減少している、実施形態６に記載の方法。
実施形態８．前記第２の抗体の前記Ｆｃは、フコースレベルが低下しており、及び／または前記Ｆｃが、１つ以上の活性化ＦｃγＲへの結合が増強されるように、１つ以上の変異を含むように操作されている、実施形態１～７のいずれか１項に記載の方法。
実施形態９．前記第２の抗体が、非フコシル化されている、実施形態８に記載の方法。
実施形態１０．前記第２の抗体が、重鎖定常領域内に置換Ｓ２９３Ｄ、Ａ３３０Ｌ、及びＩ３３２Ｅを含む、実施形態８に記載の方法。
実施形態１１．がんを有する対象に抗体－薬物複合体を投与することを含む、がんを治療する方法であって、前記抗体－薬物複合体が、細胞傷害剤にコンジュゲートされた第１の抗体及び免疫細胞エンゲージャーを結合する第２の抗体を含み、前記細胞傷害剤がチューブリン破壊剤であり、前記第２の抗体は、非フコシル化されている、前記方法。
実施形態１２．前記第１の抗体が、腫瘍関連抗原を結合する、実施形態１～１１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態１３．がんを有する対象に（１）抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）及び（２）免疫細胞エンゲージャーを結合する第２の抗体を投与することを含む、がんを治療する方法であって、前記ＡＤＣは、腫瘍関連抗原を結合する第１の抗体及び細胞傷害剤を含み、前記細胞傷害剤は、チューブリン破壊剤であり、前記第２の抗体は、同じアイソタイプの対応する野生型Ｆｃと比較して、増強されたＡＤＣＣ活性を有するＦｃを含む、前記方法。
実施形態１４．前記第２の抗体が、同じアイソタイプの対応する野生型Ｆｃと比較して、増強されたＡＤＣＣ及びＡＤＣＰ活性を有するＦｃを含む、実施形態１３に記載の方法。
実施形態１５．前記第２の抗体が、非フコシル化されている、実施形態１３または１４に記載の方法。
実施形態１６．前記第２の抗体が、１つ以上の活性化ＦｃγＲへの結合が増強されているＦｃを含み、前記活性化ＦｃγＲが、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、及び／またはＦｃγＲＩのうちの１つ以上を含む、実施形態１３～１５のいずれか１項に記載の方法。
実施形態１７．前記第２の抗体が、少なくともＦｃγＲＩＩＩａへの結合が増強されているＦｃを含む、実施形態１６に記載の方法。
実施形態１８．前記第２の抗体が、少なくともＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩａへの結合が増強されているＦｃを含む、実施形態１６に記載の方法。
実施形態１９．前記第２の抗体が、少なくともＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩへの結合が増強されているＦｃを含む、実施形態１６に記載の方法。
実施形態２０．前記第２の抗体が、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩへの結合が増強されているＦｃを含む、実施形態１６に記載の方法。
実施形態２１．前記第２の抗体の前記Ｆｃは、１つ以上の阻害性ＦｃγＲへの結合が減少している、実施形態１３～２０のいずれか１項に記載の方法。
実施形態２２．前記第２の抗体の前記Ｆｃは、ＦｃγＲＩＩｂへの結合が減少している、実施形態２１に記載の方法。
実施形態２３．前記第１の抗体が、５Ｔ４（ＴＰＢＧ）、ＡＤＡＭ－９、ＡＧ－７、ＡＬＫ、ＡＬＰ、ＡＭＨＲＩＩ、ＡＰＬＰ２、ＡＳＣＴ２、ＡＶＢ６、ＡＸＬ（ＵＦＯ）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４、ＢＣＭＡ、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ４．４ａ（ＬＹＰＤ３）、Ｃ５、Ｃ５ａ、ＣＡ６、ＣＡ９、ＣａｎＡｇ、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、カテプシンＤ、ＣＣＲ７、ＣＤ１、ＣＤ１０、ＣＤ１００、ＣＤ１０１、ＣＤ１０２、ＣＤ１０３、ＣＤ１０４、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１０７ｂ、ＣＤ１０８、ＣＤ１０９、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３、ＣＤ１１６、ＣＤ１１７、ＣＤ１１８、ＣＤ１１９、ＣＤ１１Ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２０ａ、ＣＤ１２１ａ、ＣＤ１２１ｂ、ＣＤ１２２、ＣＤ１２３、ＣＤ１２４、ＣＤ１２５、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤ１３、ＣＤ１３０、ＣＤ１３１、ＣＤ１３２、ＣＤ１３３、ＣＤ１３５、ＣＤ１３６、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１４、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ１４０ｂ、ＣＤ１４１、ＣＤ１４２、ＣＤ１４３、ＣＤ１４４、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５、ＣＤ１５０、ＣＤ１５１、ＣＤ１５４、ＣＤ１５５、ＣＤ１５６ａ、ＣＤ１５６ｂ、ＣＤ１５６ｃ、ＣＤ１５７、ＣＤ１５８ｂ２、ＣＤ１５８ｅ、ＣＤ１５８ｆ１、ＣＤ１５８ｈ、ＣＤ１５８ｉ、ＣＤ１５９ａ、ＣＤ１６、ＣＤ１６０、ＣＤ１６１、ＣＤ１６２、ＣＤ１６３、ＣＤ１６４、ＣＤ１６６、ＣＤ１６７ｂ、ＣＤ１６９、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ１７０、ＣＤ１７１、ＣＤ１７２ａ、ＣＤ１７２ｂ、ＣＤ１７２ｇ、ＣＤ１８、ＣＤ１８０、ＣＤ１８１、ＣＤ１８３、ＣＤ１８４、ＣＤ１８５、ＣＤ１９、ＣＤ１９４、ＣＤ１９７、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２００、ＣＤ２０１、ＣＤ２０２ｂ、ＣＤ２０３ｃ、ＣＤ２０４、ＣＤ２０５、ＣＤ２０６、ＣＤ２０８、ＣＤ２１、ＣＤ２１３ａ１、ＣＤ２１３ａ２、ＣＤ２１７、ＣＤ２１８ａ、ＣＤ２２、ＣＤ２２０、ＣＤ２２１、ＣＤ２２２、ＣＤ２２４、ＣＤ２２６、ＣＤ２２８、ＣＤ２２９、ＣＤ２３、ＣＤ２３０、ＣＤ２３２、ＣＤ２３９、ＣＤ２４３、ＣＤ２４４、ＣＤ２４８、ＣＤ２４９、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２６５、ＣＤ２６７、ＣＤ２６９、ＣＤ２７、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７９、ＣＤ２８、ＣＤ２８０、ＣＤ２８１、ＣＤ２８２、ＣＤ２８３、ＣＤ２８４、ＣＤ２８９、ＣＤ２９、ＣＤ２９４、ＣＤ２９５、ＣＤ２９８、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３０、ＣＤ３００ｆ、ＣＤ３０２、ＣＤ３０４、ＣＤ３０５、ＣＤ３０７、ＣＤ３１、ＣＤ３１２、ＣＤ３１５、ＣＤ３１６、ＣＤ３１７、ＣＤ３１８、ＣＤ３１９、ＣＤ３２、ＣＤ３２１、ＣＤ３２２、ＣＤ３２４、ＣＤ３２５、ＣＤ３２６、ＣＤ３２７、ＣＤ３２８、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３３１、ＣＤ３３２、ＣＤ３３３、ＣＤ３３４、ＣＤ３３７、ＣＤ３３９、ＣＤ３４、ＣＤ３４０、ＣＤ３４４、ＣＤ３５、ＣＤ３５２、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ３ｄ、ＣＤ３ｇ、ＣＤ４、ＣＤ４１、ＣＤ４２ｄ、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５、ＣＤ５０、ＣＤ５１、ＣＤ５１（インテグリンアルファ－Ｖ）、ＣＤ５２、ＣＤ５３、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６、ＣＤ６１、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ６６ａ－ｅ、ＣＤ６７、ＣＤ６８、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ７０、ＣＤ７０Ｌ、ＣＤ７１、ＣＤ７１（ＴｆＲ）、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８、ＣＤ８０、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５ｆ、ＣＤ８５ｉ、ＣＤ８５ｊ、ＣＤ８６、ＣＤ８７、ＣＤ８９、ＣＤ９０、ＣＤ９１、ＣＤ９２、ＣＤ９５、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９８、ＣＤＨ６、ＣＤＨ６（カドヘリン６）、ＣＤｗ２１０ａ、ＣＤｗ２１０ｂ、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＦＣ１Ｂ、ｃＫＩＴ、ＣＬＤＮ１８．２（クローディン１８．２）、ＣＬＤＮ６、ＣＬＤＮ９、ＣＬＬ－１、ｃ－ＭＥＴ、補体因子Ｃ３、Ｃｒｉｐｔｏ、ＣＳＰ－１、ＣＸＣＲ５、ＤＣＬＫ１、ＤＬＫ－１、ＤＬＬ３、ＤＰＥＰ３、ＤＲ５（デスレセプター５）、Ｄｙｓａｄｈｅｒｉｎ、ＥＦＮＡ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ野生型、ＥＧＦＲｖｉｉｉ、ＥＧＰ－１（ＴＲＯＰ－２）、ＥＧＰ－２、ＥＭＰ２、ＥＮＰＰ３、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、エフリン－Ａ４（ＥＦＮＡ４）、ＥＴＢＲ、ＦＡＰ、ＦｃＲＨ５、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＬＴ３、ＦＯＬＲ、ＦＯＬＲ１、ＦＯＬＲ－アルファ、ＦＳＨ、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＤ３、ｇｌｏｂｏ Ｈ、ＧＰＣ１、ＧＰＣ－１、ＧＰＣ３、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ２０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ－２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ－３、ＨＧＦＲ（ｃ－Ｍｅｔ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＭ１．２４、ＨＳＰ９０、Ｉａ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１５、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ７Ｒ、インテグリンアルファＶベータ３（インテグリンαＶβ３）、インテグリンベータ－６、インターロイキン－４受容体（ＩＬ４Ｒ）、ＫＡＡＧ－１、ＫＬＫ２、ＬＡＭＰ－１、Ｌｅ（ｙ）、ルイスＹ抗原、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＬＧＲ５、ＬＨ／ｈＣＧ、ＬＨＲＨ、脂質ラフト、ＬＩＶ－１（ＳＬＣ３９Ａ６またはＺＩＰ６）、ＬＲＰ－１、ＬＲＲＣ１５、ＬＹ６Ｅ、マクロファージマンノース受容体１、ＭＡＧＥ、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＭＥＴ、ＭＨＣクラスＩ鎖関連タンパク質Ａ及びＢ（ＭＩＣＡ及びＭＩＣＢ）、ＭＮ／ＣＡＩＸ、ＭＲＣ２、ＭＴ１－ＭＭＰ、ＭＴＸ３、ＭＴＸ５、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５、ＭＵＣ５ａｃ、ＮａＰｉ２ｂ、ＮＣＡ－９０、ＮＣＡ－９５、ネクチン－４、Ｎｏｔｃｈ３、ヌクレオリン、ＯＡｃＧＤ２、ＯＴ－ＭＵＣ１（ｏｎｃｏ－ｔｅｔｈｅｒｅｄ－ＭＵＣ１）、ＯＸ００１Ｌ、Ｐ１ＧＦ、ＰＡＭ４抗原、ｐ－カドヘリン（カドヘリン３）、ＰＤ－Ｌ１、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＰＲＬＲ、プロラクチン受容体（ＰＲＬＲ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ４、ＰＴＫ７、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）、ＲＮＦ４３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＡＩＬ、ＳＥＺ６、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＬＩＴＲＫ６、ＳＬＭＡＭＦ７（ＣＳ１）、ＳＬＴＲＫ６、ソルチリン（ＳＯＲＴ１）、ＳＳＥＡ－４、ＳＳＴＲ２、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（抗生物質）、ＳＴＥＡＰ－１、ＳＴＩＮＧ、ＳＴｎ、Ｔ１０１、ＴＡＡ、ＴＡＣ、ＴＤＧＦ１、テネイシン、ＴＥＮＢ２、ＴＧＦ－Ｂ、Ｔｈｏｍｓｏｎ－Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原、Ｔｈｙ１．１、ＴＩＭ－１、組織因子（ＴＦ；ＣＤ１４２）、ＴＭ４ＳＦ１、Ｔｎ抗原、ＴＮＦ－アルファ（ＴＮＦα）、ＴＲＡ－１－６０、ＴＲＡＩＬ受容体（Ｒ１及びＲ２）、ＴＲＯＰ－２、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）、ｕＰＡＲ、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ－２、及びｘＣＴから選択される抗原を結合する、実施形態１～２２のいずれか１項に記載の方法。
実施形態２４．前記第１の抗体が、ネクチン－４を結合しない、実施形態１～２３のいずれか１項に記載の方法。
実施形態２５．ネクチン－４を結合する抗体を含む抗体－薬物複合体を投与することを含まない、実施形態１～２４のいずれか１項に記載の方法。
実施形態２６．前記第１の抗体が、ＣＤ７１、Ａｘｌ、ＡＭＨＲＩＩ、及びＬＧＲ５、Ａｘｌ、ＣＡ９、ＣＤ１４２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２２８、ＣＤ２４８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４８、ＣＤ７、ＣＤ７１、ＣＤ７９ｂ、ＣＬＤＮ１８．２、ＣＬＤＮ６、ｃ－ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＡ２、ＥＴＢＲ、ＦＣＲＨ５、ＧＣＣ、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、ｇｐＮＭＢ、ＨＥＲ－２、ＩＬ７Ｒ、インテグリンベータ－６、ＫＡＡＧ－１、ＬＧＲ５、ＬＩＶ－１、ＬＲＲＣ１５、Ｌｙ６Ｅ、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＭＥＴ、ＭＲＣ２、ＭＵＣ１６、ＮａＰｉ２ｂ、ネクチン－４、ＯＴ－ＭＵＣ１（ｏｎｃｏ－ｔｅｔｈｅｒｅｄ－ＭＵＣ１）、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＬＩＴＲＫ６、ＳＴＥＡＰ－１、ＳＴｎ、ＴＩＭ－１、ＴＲＡ－１－６０、及び腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）から選択される抗原を結合する、実施形態１～２５のいずれか１項に記載の方法。
実施形態２７．前記第１の抗体が、ＢＣＭＡ、ＧＰＣ１、ＣＤ３０、ｃＭＥＴ、ＳＡＩＬ、ＨＥＲ３、ＣＤ７０、ＣＤ４６、ＣＤ４８、ＨＥＲ２、５Ｔ４、ＥＮＰＰ３、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、及びＥｐｈＡ２から選択される抗原を結合する、実施形態１～２５のいずれか１項に記載の方法。
実施形態２８．前記第１の抗体が、Ｈｅｒ２、ＴＲＯＰ２、ＢＣＭＡ、ｃＭｅｔ、インテグリンアルファＶベータ６（インテグリンαＶβ６）、ＣＤ２２、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ３０、ＣＤ１９、ＣＤ７０、ＣＤ２２８、ＣＤ４７、及びＣＤ４８から選択される抗原を結合する、実施形態１～２５のいずれか１項に記載の方法。
実施形態２９．前記第１の抗体が、ＣＤ１４２、インテグリンベータ－６、インテグリンアルファＶベータ６、ＥＮＰＰ３、ＣＤ１９、Ｌｙ６Ｅ、ｃＭＥＴ、Ｃ４．４ａ、ＣＤ３７、ＭＵＣ１６、ＳＴＥＡＰ－１、ＬＲＲＣ１５、ＳＬＩＴＲＫ６、ＥＴＢＲ、ＦＣＲＨ５、Ａｘｌ、ＥＧＦＲ、ＣＤ７９ｂ、ＢＣＭＡ、ＣＤ７０、ＰＳＭＡ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２２８、ＣＤ４８、ＬＩＶ－１、ＥｐｈＡ２、ＳＬＣ４４Ａ４、ＣＤ３０、及びｓＴｎから選択される抗原を結合する、実施形態１～２５のいずれか１項に記載の方法。
実施形態３０．前記チューブリン破壊剤が、アウリスタチン、チューブリシン、コルヒチン、ビンカアルカロイド、タキサン、クリプトフィシン、メイタンシノイド、またはヘミアステリンである、実施形態１～２６のいずれか１項に記載の方法。
実施形態３１．前記チューブリン破壊剤が、アウリスタチンである、実施形態３０に記載の方法。
実施形態３２．前記チューブリン破壊剤が、ドロスタチン－１０、ＭＭＡＥ（Ｎ－メチルバリン－バリン－ドライソロイイン－ドラプロイン－ノルエフェドリン）、ＭＭＡＦ（Ｎ－メチルバリン－バリン－ドライソロイイン－ドラプロイン－フェニルアラニン）、アウリスタチンＦ、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ、またはＡＦＰ（アウリスタチンフェニルアラニンフェニレンジアミン）である、実施形態１～３１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態３３．前記チューブリン破壊剤がＭＭＡＥである、実施形態１～３２のいずれか１項に記載の方法。
実施形態３３－１．前記抗体－薬物複合体が、ＭＭＡＥを含み、以下のうちの１つから選択される、実施形態３３に記載の方法：ＤＰ３０３ｃ、別名ＳＹＳＡ１５０１、ＨＥＲ－２を標的とする（ＣＳＰＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ；Ｄｏｐｈｅｎ Ｂｉｏｍｅｄ）、ＳＩＡ０１－ＡＤＣ、別名ＳＴ１、ＳＴｎを標的とする（Ｓｉａｍａｂ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、Ｌａｄｉｒａｔｕｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ、別名ＳＧＮ－ＬＩＶ１Ａ、ＬＩＶ－１を標的とする（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ．；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＡＢＢＶ－０８５、別名Ｓａｍｒｏｔａｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ、ＬＲＲＣ１５を標的とする（Ａｂｂｖｉｅ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＤＭＯＴ４０３９Ａ、別名ＲＧ７６００；αＭＳＬＮ－ＭＭＡＥ、メソテリン（ＭＳＬＮ）を標的とする（Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＣ６８、別名Ｒｅｍｅｇｅｎ ＥＧＦＲ ＡＤＣ、ＥＧＦＲを標的とする（ＲｅｍｅＧｅｎ（Ｒｏｎｇｃｈａｎｇ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（Ｙａｎｔａｉ）Ｃｏ．，Ｌｔｄ．））、ＲＣ１０８、別名ＲＣ１０８－ＡＤＣ、ｃ－ＭＥＴを標的とする（ＲｅｍｅＧｅｎ（Ｒｏｎｇｃｈａｎｇ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（Ｙａｎｔａｉ）Ｃｏ．，Ｌｔｄ．））、ＣＭＧ９０１、別名ＭＲＧ００５、ＣＬＤＮ１８．２を標的とする（Ｋｅｙｍｅｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｌｅｐｕ ｂｉｏｔｅｃｈ；Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｍｉｒａｃｏｇｅｎ Ｉｎｃ．（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｍｅｉｙａ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．））、ＹＢＬ－００１、別名ＬＣＢ６７、ＤＬＫ－１を標的とする（Ｌｅｇｏ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｐｙｘｉｓ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ；Ｙ－Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）、ＤＣＤＳ０７８０Ａ、別名Ｉｌａｄａｔｕｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ；ＲＧ７９８６、ＣＤ７９ｂを標的とする（Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、チソツマブベドチン、別名Ｈｕｍａｘ－ＴＦ－ＡＤＣ；ｔｆ－０１１－ｍｍａｅ；ＴＩＶＤＡＫ（商標）、ＣＤ１４２を標的とする（ＧｅｎＭａｂ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＧＯ－３Ｄ１－ＡＤＣ、別名ｈｕｍＡｂ－３Ｄ１－ＭＭＡＥ ＡＤＣ、ＭＵＣ１－Ｃを標的とする（Ｇｅｎｕｓ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ＬＬＣ）、ＡＬＴ－Ｐ７、別名ＨＭ２－ＭＭＡＥ、ＨＥＲ－２を標的とする（Ａｌｔｅｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．；Ｌｅｖｅｎａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ；３ＳＢｉｏ，Ｉｎｃ．）、バンドルツズマブベドチン、別名ＤＳＴＰ３０８６Ｓ；ＲＧ７４５０、ＳＴＥＡＰ－１を標的とする（Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、リファスツズマブベドチン、別名ＤＮＩＢ０６００Ａ；ＮａＰｉ２ｂ ＡＤＣ；ＲＧ７５９９、ＮａＰｉ２ｂを標的とする（Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ソフィツズマブベドチン、別名ＤＭＵＣ５７５４Ａ；ＲＧ７４５８、ＭＵＣ１６を標的とする（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．；Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＧ７８４１、別名ＤＬＹＥ５９５３Ａ、Ｌｙ６Ｅを標的とする（Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＲＧ７５９８、別名ＤＦＲＦ４５３９Ａ、ＦＣＲＨ５を標的とする（Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＲＧ７６３６、別名ＤＥＤＮ６５２６Ａ、ＥＴＢＲを標的とする（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．；Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ピナツズマブベドチン、別名ＤＣＤＴ２９８０Ｓ；ＲＧ７５９３、ＣＤ２２を標的とする（Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ポラツズマブベドチン、別名ＤＣＤＳ４５０１Ａ；ＰＯＬＩＶＹ（商標）；ＲＧ７５９６；ＲＯ－５５４１０７７、ＣＤ７９ｂを標的とする（Ｃｈｕｇａｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ；Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＤＭＵＣ４０６４Ａ、別名Ｄ－４０６４ａ；ＲＧ７８８２、ＭＵＣ１６を標的とする（Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＳＹＳＡ１８０１、別名ＣＰＯ１０２、ＣＬＤＮ１８．２を標的とする（Ｃｏｎｊｕｐｒｏ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ．；ＣＳＰＣ ＺｈｏｎｇＱｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．）、ＲＣ１１８、別名クローディン１８．２－ＡＤＣ；ＹＨ００５、ＣＬＤＮ１８．２を標的とする（ＲｅｍｅＧｅｎ（Ｒｏｎｇｃｈａｎｇ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（Ｙａｎｔａｉ）Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）；Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ）、ＶＬＳ－１０１、別名Ｃｉｒｍｔｕｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ；ＭＫ－２１４０；ＵＣ－９６１ＡＤＣ３；Ｚｉｌｏｖｅｒｔａｍａｂ Ｖｅｄｏｔｉｎ、ＲＯＲ１を標的とする（ＶｅｌｏｓＢｉｏ．Ｉｎｃ）、グレンバツムマブベドチン、別名ＣＤＸ－０１１；ＣＲ０１１－ｖｃＭＭＡＥ、ｇｐＮＭＢを標的とする（Ｃｅｌｌｄｅｘ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＢＡ３０２１、別名ＣＡＢ－ＲＯＲ２－ＡＤＣ；オズリフタマブベドチン、ＲＯＲ２を標的とする（Ｂｉｏａｔｌａ；Ｈｉｍａｌａｙａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＢＡ３０１１、別名ＣＡＢ－ＡＸＬ－ＡＤＣ；メクボタマブベドチン、Ａｘｌを標的とする（Ｂｉｏａｔｌａ；Ｈｉｍａｌａｙａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＣＭ－０９、別名Ｂｓｔｒｏｎｇｘｉｍａｂ－ＡＤＣ；ＴＲＡ－１－６０を標的とする（ＣｕｒｅＭｅｔａ）、ＡＢＢＶ－８３８、別名Ａｚｉｎｔｕｘｉｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ；ＳＬＡＭＦ７を標的とする（Ａｂｂｖｉｅ）、エナポタマブベドチン、別名ＡＸＬ－１０７－ＭＭＡＥ；ＨｕＭａｘ－ＡＸＬ－ＡＤＣ、Ａｘｌを標的とする（ＧｅｎＭａｂ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＡＲＣ－０１、別名抗ＣＤ７９ｂ ＡＤＣ、ＣＤ７９ｂを標的とする（Ａｒａｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＡＧ）、Ｄｉｓｉｔａｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ、別名Ａｉｄｅｘｉ（登録商標）；ＲＣ４８、ＨＥＲ－２を標的とする（ＲｅｍｅＧｅｎ（Ｒｏｎｇｃｈａｎｇ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（Ｙａｎｔａｉ）Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＡＳＧ－５ＭＥ、別名ＡＧＳ－５；ＡＧＳ－５ＭＥ、ＳＬＣ４４Ａ４を標的とする（Ａｇｅｎｓｙｓ，Ｉｎｃ．；Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ．；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、エンホルツマブベドチン、別名ＡＧＳ－２２Ｍ６Ｅ；ＡＳＧ－２２ＣＥ；ＡＳＧ－２２ＭＥ；ＰＡＤＣＥＶ（商標）、ネクチン－４を標的とする（Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ．；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＡＳＧ－１５ＭＥ、別名ＡＧＳ－１５Ｅ；Ｓｉｒｔｒａｔｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ、ＳＬＩＴＲＫ６を標的とする（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．；Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ．）、ブレンツキシマブベドチン、別名Ａｄｃｅｔｒｉｓ；ｃＡＣ１０－ｖｃＭＭＡＥ；ＳＧＮ－３５、ＣＤ３０を標的とする（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．；Ｔａｋｅｄａ）、テリソツズマブベドチン、別名ＡＢＢＶ－３９９；ｃ－ＭＥＴを標的とする（Ａｂｂｖｉｅ）、Ｌｏｓａｔｕｘｉｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ、別名ＡＢＢＶ－２２１；ＥＧＦＲを標的とする（Ａｂｂｖｉｅ）、ＣＸ－２０２９、別名ＡＢＢＶ－２０２９；ＣＤ７１を標的とする（Ａｂｂｖｉｅ；ＣｙｔｏｍＸ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＡＢ－３Ａ４－ＡＤＣ、別名ＡＢ－３Ａ４－ｖｃＭＭＡＥ；ＫＡＡＧ－１を標的とする（Ａｌｅｔｈｉａ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、インダサツマブベドチン、別名５Ｆ９－ｖｃＭＭＡＥ；ＭＬＮ０２６４；ＴＡＫ－２６４、ＧＣＣを標的とする（Ｔａｋｅｄａ；Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ）、ＣＤ４６を標的とするＦＯＲ４６（Ｆｏｒｔｉｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、ＥＧＦＲを標的とするＬＲ００４－ＶＣ－ＭＭＡＥ（Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｐｅｋｉｎｇ Ｕｎｉｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ）、ＣＤ３０を標的とするＣＤ３０－ＡＤＣ（ＮＢＥ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ；Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＣＤ２４８を標的とするＡｎｔｉ－ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ－ＭＣ－ＶＣ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ（Ｇｅｎｚｙｍｅ）、ＳＳＥＡ－４を標的とするＯＢＩ－９９８（ＯＢＩ Ｐｈａｒｍａ）、ＨＥＲ－２を標的とするＭＲＧ００２（Ｌｅｐｕ ｂｉｏｔｅｃｈ；Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｍｉｒａｃｏｇｅｎ Ｉｎｃ．（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｍｅｉｙａ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ））、ＣＤ２０を標的とするＴＲＳ００５（Ｔｅｒｕｉｓｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＤＲ５（デスレセプター５）を標的とするＯｂａ０１（Ｏｂｉｏ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｃｏｒｐ．，Ｌｔｄ．；Ｙａｎｔａｉ Ｏｂｉｏａｄｃ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｔｄ．）、ＰＳＭＡを標的とするＰＳＭＡ ＡＤＣ（Ｐｒｏｇｅｎｉｃｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＣＤ４８を標的とするＳＧＮ－ＣＤ４８Ａ（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＣＬＤＮ１８．２を標的とするＩＭＡＢ３６２－ｖｃＭＭＡＥ（Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ．；Ｇａｎｙｍｅｄ）、ＨＥＲ－２を標的とするＧＢ２５１（Ｇｅｎｏｒ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）、ＣＤ３０を標的とするＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ ＢＴＧ－ＡＤＣ（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ；Ｓａｎｏｆｉ）、
ＭＲＣ２を標的とするＡＤＣｅｎｄｏ ｕＰＡＲＡＰ ＡＤＣ（ＡＤＣｅｎｄｏ）、ａｃｔＭを標的とするＸＣＮ－０１０（Ｘｉｃｏｎｉｃ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，ＬＬＣ）、ＨＥＲ－２を標的とするＡＮＴ－０４３（Ａｎｔｉｋｏｒ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、Ｇｌｏｂｏ Ｈを標的とするＯＢＩ－９９９（Ａｂｚｅｎａ；ＯＢＩ Ｐｈａｒｍａ）、ＭＥＴを標的とするＬＹ３３４３５４４（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ＴＡＧ－７２を標的とするＴａｇｗｏｒｋｓ ａｎｔｉ－ＴＡＧ７２ ＡＤＣ（Ｔａｇｗｏｒｋｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＣＬＤＮ６を標的とするＩＭＡＢ０２７－ｖｃＭＭＡＥ（Ｇａｎｙｍｅｄ；Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ．）、ＬＧＲ５を標的とするＬＧＲ５－ＡＤＣ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）、ＩＬ－７Ｒを標的とするＰｈｉｌｏｃｈｅｍ Ｂ１２－ＭＭＡＥ ＡＤＣ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｏ ｄｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｊｏａｏ Ｌｏｂｏ Ａｎｔｕｎｅｓ；Ｐｈｉｌｏｃｈｅｍ ＡＧ）、ＣＤ１９を標的とするＴＥ－１５２２（Ｉｍｍｕｎｗｏｒｋ）、ＳＴｎを標的とするＳＧＮ－ＳＴＮＶ（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＥＧＦＲを標的とするＨＴＩ－１５１１（Ａｂｚｅｎａ；Ｈａｌｏｚｙｍｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＯＴ－ＭＵＣ１（ｏｎｃｏ－ｔｅｔｈｅｒｅｄ－ＭＵＣ１）を標的とするＰｅｐｔｒｏｎ ＰＡｂ００１－ＡＤＣ（Ｐｅｐｔｒｏｎ；Ｑｉｌｕ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｃｏ．Ｌｔｄ．）、ＣＬＤＮ１８．２を標的とするＬＭ－１０２（ＬａＮｏｖａ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ）、メソテリンを標的とするＡｎｗｉｔａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＭＳＬＮ－ＭＭＡＥ（ＭＳＬＮ）（Ａｎｗｉｔａ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＤ２２８を標的とするＳＧＮ－ＣＤ２２８Ａ（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＨＥＲ－２を標的とするＮＢＴ８２８（ＮｅｗＢｉｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ；Ｇｅｎｏｒ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）、ＡＭＨＲ２を標的とするＧａｍａｍａｂｓ ＧＭ１０３（ＧａｍａＭａｂｓ Ｐｈａｒｍａ；Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＨＥＲ－２を標的とするＬＣＢ１４－０３０２（Ｌｅｇｏ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）を標的とするＢＡＹ７９－４６２０（Ｂａｙｅｒ；ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ）、ＣＤ７９ｂを標的とするＮＢＴ５０８（ＮｅｗＢｉｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、非開示を標的とするＰＡＴ－ＤＸ３－ＭＭＡＥ（Ｐａｔｒｙｓ；Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、ＣＤ３７を標的とするＡＧＳ６７Ｅ（Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ．；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＴＩＭ－１を標的とするＣＤＸ－０１４（Ｃｅｌｌｄｅｘ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＣＤ３３を標的とするＢＶＸ００１；ＣＤ７（Ｂｉｖｉｃｔｒｉｘ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、インテグリンβ－６を標的とするＳＧＮ－Ｂ６Ａ（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＥＧＦＲを標的とするＭＲＧ００３（Ｌｅｐｕ ｂｉｏｔｅｃｈ；Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｍｉｒａｃｏｇｅｎ Ｉｎｃ．（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｍｅｉｙａ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ））、及びＤＬＫ－１を標的とするＰＹＸ－２０２（Ｐｙｘｉｓ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ；Ｌｅｇｏ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）。
実施形態３４．前記ＭＭＡＥが、バリン及びシトルリンを含むリンカーを介して前記第１の抗体にコンジュゲートされる、実施形態３３に記載の方法。
実施形態３５．前記リンカー－ＭＭＡＥが、ｖｃＭＭＡＥである、実施形態３４に記載の方法。
実施形態３６．前記ＭＭＡＥが、ロイシン、アラニン、及びグルタミン酸を含むリンカーを介して前記第１の抗体にコンジュゲートされる、実施形態３３に記載の方法。
実施形態３７．前記リンカー－ＭＭＡＥが、ｄＬＡＥ－ＭＭＡＥである、実施形態３６に記載の方法。
実施形態３８．前記チューブリン破壊剤が、ＭＭＡＦである、実施形態１～３２のいずれか１項に記載の方法。
実施形態３８－１．前記抗体－薬物複合体が、ＭＭＡＦを含み、以下から選択される、実施形態３８に記載の方法：ＣＤ７０－ＡＤＣ、ＣＤ７０を標的とする（Ｋｏｃｈｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；Ｏｓａｋａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、ＩＧＮ７８６、ＳＡＩＬを標的とする（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；Ｉｇｅｎｉｃａ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＰＦ－０６２６３５０７、５Ｔ４を標的とする（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＧＰＣ１－ＡＤＣ、ＧＰＣ－１を標的とする（Ｋｏｃｈｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、ＡＤＣ－ＡＶＰ１０、ＣＤ３０を標的とする（Ａｖｉｐｅｐ）、Ｍ２９０－ＭＣ－ＭＭＡＦ、ＣＤ１０３を標的とする（Ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｈａｒｂｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、ＢＶＸ００１、ＣＤ３３を標的とする；ＣＤ７（Ｂｉｖｉｃｔｒｉｘ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、Ｔａｎａｂｅ Ｐ３Ｄ１２－ｖｃ－ＭＭＡＦ、ｃ－ＭＥＴを標的とする（Ｔａｎａｂｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＬＩＬＲＢ４－標的化ＡＤＣ、ＬＩＬＲＢ４を標的とする（Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｘａｓ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｈｏｕｓｔｏｎ）、ＴＳＤ１０１、別名ＡＢＬ２０１、ＢＣＭＡを標的とする（ＴＳＤ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ；ＡＢＬ Ｂｉｏ；Ｌｅｇｏ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、デパツキシズマブマフォドチン、別名ＡＢＴ－４１４、ＥＧＦＲを標的とする（Ａｂｂｖｉｅ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＡＧＳ１６Ｆ、別名ＡＧＳ－１６Ｃ３Ｆ；ＡＧＳ－１６Ｍ８Ｆ、ＥＮＰＰ３を標的とする（Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ．；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＡＶＧ－Ａ１１ ＢＣＭＡ ＡＤＣ、別名ＡＶＧ－Ａ１１－ｍｃＭＭＡＦ、ＢＣＭＡを標的とする（Ａｖａｎｔｇｅｎ）、ベランタマブマフォドチン、別名ＢＬＥＮＲＥＰ；ＧＳＫ２８５７９１６；Ｊ６Ｍ０－ｍｃＭＭＡＦ、ＢＣＭＡを標的とする（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＭＰ－ＨＥＲ３－ＡＤＣ、別名ＨＥＲ３－ＡＤＣ、ＨＥＲ－３を標的とする（ＭｅｄｉａＰｈａｒｍａ）、ＦＳ－１５０２、別名ＬＣＢ１４－０１１０、ＨＥＲ－２を標的とする（Ｌｅｇｏ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｆｏｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）、ＭＥＤＩ－５４７、別名ＭＩ－ＣＰ１７７、ＥｐｈＡ２を標的とする（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ボルセツズマブマフォドチン、別名ＳＧＮ－７５、ＣＤ７０を標的とする（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、Ｄｅｎｉｎｔｕｚｕｍａｂ ｍａｆｏｄｏｔｉｎ、別名ＳＧＮ－ＣＤ１９Ａ、ＣＤ１９を標的とする（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、及びＨＴＩ－１０６６、別名ＳＨＲ－Ａ１４０３、ｃ－ＭＥＴを標的とする（Ｊｉａｎｇｓｕ ＨｅｎｇＲｕｉ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）。
実施形態３９．前記チューブリン破壊剤が、チューブリシンである、実施形態１～３０のいずれか１項に記載の方法。
実施形態４０．前記チューブリシンが、チューブリシンＤ、チューブリシンＭ、チューブフェニルアラニン、及びチューブチロシンから選択される、実施形態３９に記載の方法。
実施形態４１．前記抗体－薬物複合体が、ＡｂＧｎ－１０７（Ａｂ１－１８Ｈｒ１）、ＡＧＳ６２Ｐ１（ＡＳＰ１２３５）、ＡＬＴ－Ｐ７（ＨＭ２－ＭＭＡＥ）、ＢＡ３０１１（ＣＡＢ－ＡＸＬ－ＡＤＣ）、ベランタマブマフォドチン、ブレンツキシマブベドチン、ｃｉｒｍｔｕｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ（ＶＬＳ－１０１、ＵＣ－９６１ＡＤＣ３）、コフェツズマブペリドチン（ＰＦ－０６６４７０２０、ＰＴＫ７－ＡＤＣ、ＰＦ－７０２０、ＡＢＢＶ－６４７）、ＣＸ－２０２９（ＡＢＢＶ－２０２９）、ｄｉｓｉｔａｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ（ＲＣ４８）、エナポタマブベドチン（ＨｕＭａｘ－ＡＸＬ－ＡＤＣ、ＡＸＬ－１０７－ＭＭＡＥ）、エンホルツマブベドチン（ＥＶ）、ＦＳ－１５０２（ＬＣＢ１４－０１１０）、ゲムツズマブオゾガマイシン、ＨＴＩ－１０６６（ＳＨＲ－Ａ１４０３）、イノツズマブオゾガマイシン、ＰＦ－０６８０４１０３（ＮＧ－ＨＥＲ２ ＡＤＣ）、ポラツズマブベドチン、サシツズマブゴビテカン、ＳＧＮ－Ｂ６Ａ、ＳＧＮ－ＣＤ２２８Ａ、ＳＧＮ－ＳＴＮＶ、ＳＴＩ－６１２９（ＣＤ３８ ＡＤＣ、ＬＮＤＳ１００１、ＣＤ３８－０７７ ＡＤＣ）、テリソツズマブベドチン（ＡＢＢＶ－３９９）、チソツマブベドチン（Ｈｕｍａｘ－ＴＦ－ＡＤＣ、ｔｆ－０１１－ｍｍａｅ、ＴＶ）、トラスツズマブデルクステカン、トラスツズマブエムタンシン、及びボルセツズマブマフォドチンから選択される、実施形態１～３２のいずれか１項に記載の方法。
実施形態４２．前記第１の抗体が、配列番号６１～６６のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗クローディン－１８．２抗体である、実施形態１～４１、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態４３．前記抗クローディン－１８．２抗体が、配列番号５９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、実施形態４２に記載の方法。
実施形態４４．前記抗クローディン－１８．２抗体が、ゾルベツキシマブ（１７５Ｄ１０）である、実施形態４３に記載の方法。
実施形態４５．前記第１の抗体が、配列番号６９～７４のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗クローディン－１８．２抗体である、実施形態１～４１、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態４６．前記抗クローディン－１８．２抗体が、配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、実施形態４５に記載の方法。
実施形態４７．前記第１の抗体が、配列番号７７～８２のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、実施形態１～４１、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態４８．前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号７６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、実施形態４７に記載の方法。
実施形態４９．前記第１の抗体が、配列番号８５～９０のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗ＡＬＰ抗体である、実施形態１～４１、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態５０．前記抗ＡＬＰ抗体が、配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、実施形態４９に記載の方法。
実施形態５１．前記第１の抗体が、配列番号９３～９８のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗Ｂ７Ｈ４抗体を含む、実施形態１～４１、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態５２．前記抗Ｂ７Ｈ４抗体が、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号９２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、実施形態５１に記載の方法。
実施形態５３．前記第１の抗体が、配列番号９９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１００のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗ＨＥＲ２抗体である、実施形態１～４１、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態５４．前記抗体－薬物複合体が、ｄｉｓｉｔａｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎである、実施形態５３に記載の方法。
実施形態５５．前記第１の抗体が、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗ＮａＰｉ２Ｂ抗体である、実施形態１～４１、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態５６．前記抗体－薬物複合体が、リファスツズマブベドチンである、実施形態５５に記載の方法。
実施形態５７．前記第１の抗体が、配列番号１０５～１１０のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗ネクチン－４抗体である、実施形態１～４１、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態５８．前記抗ネクチン－４抗体が、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、実施形態５７に記載の方法。
実施形態５９．前記抗体－薬物複合体が、エンホルツマブベドチンである、実施形態５８に記載の方法。
実施形態６０．前記第１の抗体が、配列番号１１３～１１８のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗ＡＶＢ６抗体である、実施形態１～４１、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態６１．前記抗ＡＶＢ６抗体が、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、実施形態６０に記載の方法。
実施形態６２．前記第１の抗体が、配列番号１２１～１２６のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗ＡＶＢ６抗体である、実施形態１～４１、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態６３．前記抗ＡＶＢ６抗体が、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、実施形態６２に記載の方法。
実施形態６４．前記第１の抗体が、配列番号１２９～１３４のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗ＣＤ２２８抗体である、実施形態１～４１、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態６５．前記抗ＣＤ２２８抗体が、配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、実施形態６４に記載の方法。
実施形態６６．前記第１の抗体が、配列番号１３７～１４２のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗ＬＩＶ－１抗体である、実施形態１～４１、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態６７．前記抗ＬＩＶ－１抗体が、配列番号１３５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、実施形態６６に記載の方法。
実施形態６８．前記第１の抗体が、配列番号１４５～１５０のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗組織因子抗体である、実施形態１～４１、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態６９．前記抗組織因子抗体が、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、実施形態６８に記載の方法。
実施形態７０．前記抗体－薬物複合体が、チソツマブベドチンである、実施形態６９に記載の方法。
実施形態７１．前記第２の抗体が、抗ミュラー管ホルモン受容体ＩＩ（ＡＭＨＲ２）、Ｂ７、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ２、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、Ｂｓｔ１／ＣＤ１５７、Ｃ５補体、ＣＣケモカイン受容体４（ＣＣＲ４）、ＣＤ１２３、ＣＤ１３７、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５（ＩＬ２ＲＡ）、ＣＤ２７６、ＣＤ２７８、ＣＤ３、ＣＤ３２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４及びＨＩＶ－１ｇｐ１２０結合部位、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ７０（ＴＮＦ受容体リガンドファミリーのメンバー）、ＣＤ８０、ＣＤ８６、クローディン１８．２、ｃ－ＭＥＴ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＴＬＡ－４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ ＭＥＴがん原遺伝子、ＥＰＨＡ３、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＦＧＦＲ２ｂ、ＦＬＴ３、ＧＩＴＲ、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体（ＧＩＴＲ）、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＬＡ、ＩＣＯＳ、ＩＤＯ１、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－３Ｒアルファ（ＣＤ１２３）、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－５Ｒアルファ、ＬＡＧ－３、ＭＥＴがん原遺伝子、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＶＲＩＧ、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）ＥＢＯＶ糖タンパク質（ＧＰ）の高度にグリコシル化されたムチン様ドメイン、アカゲザル（Ｒｈ）Ｄ、シアル酸免疫グロブリン様レクチン８（Ｓｉｇｌｅｃ－８）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭＦ７／ＣＳ１）、Ｔ細胞受容体細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４）、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３（ＨＡＶＣＲ２）、Ｍｕｃ１（ＴＡ－Ｍｕｃ１）、ＶＳＩＲ（ＶＩＳＴＡ）、及びＶＴＣＮ１の腫瘍特異的糖エピトープから選択される免疫細胞エンゲージャーを結合する、実施形態１～７０、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態７２．前記第２の抗体がＴＩＧＩＴを結合する、実施形態１～７１、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態７３．前記第２の抗体が、（ａ）配列番号７～９から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１０～１３から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号１４～１６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、実施形態７２に記載の方法。
実施形態７４．前記第２の抗体が、（ａ）配列番号７、１０、１４、１７、１８及び１９の配列をそれぞれ；または（ｂ）配列番号８、１１、１４、１７、１８及び１９の配列をそれぞれ；または（ｃ）配列番号９、１２、１５、１７、１８及び１９の配列をそれぞれ；または（ｄ）配列番号８、１３、１６、１７、１８及び１９の配列をそれぞれ；または（ｅ）配列番号８、１２、１６、１７、１８及び１９の配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、及びＣＤＲ３とを含む、実施形態７２の方法。
実施形態７５．前記第２の抗体が、配列番号１～５から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、実施形態７２に記載の方法。
実施形態７６．前記第２の抗体が、配列番号２０～２４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、実施形態７２に記載の方法。
実施形態７７．前記第２の抗体が、ＣＤ４０を結合する、実施形態１～７１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態７８．前記第２の抗体が、（ａ）配列番号３０、３１、３２、３３、３４、及び３５の配列をそれぞれ；または（ｂ）配列番号３０、３６、３２、３３、３４、及び３５の配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、及びＣＤＲ３と、を含む、実施形態７７に記載の方法。
実施形態７９．前記第２の抗体が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、実施形態７７に記載の方法。
実施形態８０．前記第２の抗体が、配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、実施形態７７に記載の方法。
実施形態８１．前記第２の抗体が、ＣＤ７０を結合する、実施形態１～７１、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態８２．前記第２の抗体が、配列番号５３～５８の配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、及びＣＤＲ３と、を含む、実施形態８１に記載の方法。
実施形態８３．前記第２の抗体が、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、実施形態８１に記載の方法。
実施形態８４．前記第２の抗体が、ＢＣＭＡを結合する、実施形態１～７１、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態８５．前記第２の抗体が、配列番号４７～５２の配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、及びＣＤＲ３と、を含む、実施形態８４に記載の方法。
実施形態８６．前記第２の抗体が、配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、実施形態８４に記載の方法。
実施形態８７．前記第２の抗体が、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である、実施形態１～８６、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態８８．前記第２の抗体が、抗体の組成物に含まれ、前記組成物中の少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の抗体が、非フコシル化されている、実施形態１～８７、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態８９．前記組成物中の各抗体が、前記第２の抗体と同じ重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を含む、実施形態８８に記載の方法。
実施形態９０．前記第２の抗体の前記Ｆｃは、同じアイソタイプの対応する野生型Ｆｃと比較して、１つ以上の活性化ＦｃγＲへの結合が増強されており、前記活性化ＦｃγＲが、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、及び／またはＦｃγＲＩのうちの１つ以上を含む、実施形態１～８９、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態９１．前記第２の抗体の前記Ｆｃは、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合が増強している、実施形態９０に記載の方法。
実施形態９２．前記第２の抗体の前記Ｆｃは、同じアイソタイプの対応する野生型Ｆｃと比較して、１つ以上の阻害性ＦｃγＲへの結合が減少している、実施形態１～９１、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態９３．前記第２の抗体の前記Ｆｃは、ＦｃγＲＩＩｂへの結合が減少している、実施形態９２に記載の方法。
実施形態９４．前記第２の抗体の前記Ｆｃは、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合が増強され、ＦｃγＲＩＩｂへの結合が減少している、実施形態１～９３、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態９５．前記第２の抗体が、モノクローナル抗体である、実施形態１～９４、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態９６．前記第２の抗体が、ヒト化抗体またはヒト抗体である、実施形態１～９５、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態９７．前記がんが、膀胱癌、乳癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、食道癌、胃腸癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、膵癌、大腸癌、結腸癌、腎癌、明細胞腎癌、頭頸部癌、肺癌、肺腺癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、胚細胞癌、骨癌、肝癌、甲状腺癌、皮膚癌、黒色腫、中枢神経系の新生物、中皮腫、リンパ腫、白血病、慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄腫、または肉腫である、実施形態１～９６、３３－１及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態９８．前記がんが、リンパ腫、白血病、慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、またはホジキンリンパ腫である、実施形態１～９７、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態９９．前記抗体－薬物複合体及び前記第２の抗体が同時に投与される、実施形態１～９８、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態１００．前記抗体－薬物複合体及び前記第２の抗体が１つの医薬組成物中で投与される、実施形態９９、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態１０１．前記抗体－薬物複合体及び前記第２の抗体が順次投与される、実施形態１～９８、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態１０２．前記抗体－薬物複合体の少なくとも初回用量が、前記第２の抗体の初回用量の前に投与されるか、または、前記第２の抗体の少なくとも初回用量が、抗体－薬物複合体の初回用量の前に投与される、実施形態１０１に記載の方法。
実施形態１０３．前記第２の抗体が、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させる、実施形態１－１０２、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態１０４．前記抗体－薬物複合体が、前記抗体－薬物複合体によって結合された前記抗原を発現する細胞に対して免疫記憶を誘導する、実施形態１～１０３、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態１０５．免疫記憶の前記誘導が、メモリーＴ細胞の誘導を含む、実施形態１０４に記載の方法。
実施形態１０６．前記第２の抗体が、抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化する、実施形態１～１０５、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態１０７．前記第２の抗体が、ＣＤ８Ｔ細胞応答を増強する、実施形態１～１０６、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態１０８．前記第２の抗体が、共刺激受容体を上方制御する、実施形態１～１０７、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態１０９．前記ＡＤＣ及び前記第２の抗体の投与が、免疫活性化サイトカインの放出を促進する、実施形態１～１０８、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態１１０．前記免疫活性化サイトカインが、ＣＸＣＬ１０またはＩＦＮγである、実施形態１０９に記載の方法。
実施形態１１１．前記ＡＤＣ及び前記第２の抗体が、相乗的に作用する、実施形態１～１１０、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態１１２．前記ＡＤＣ及び前記第２の抗体を組み合わせた投与が、前記ＡＤＣまたは前記第２の抗体のいずれかが単剤療法として投与される場合の毒性プロファイルと同等の毒性プロファイルを有する、実施形態１～１１１、３３－１、または３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態１１３．組み合わせて投与される場合の前記ＡＤＣ及び／または前記第２の抗体の有効用量が、単剤療法として投与される場合より少ない、実施形態１～１１２、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態１１４．前記がんが、高い腫瘍変異負荷を有する、実施形態１～１１３、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
実施形態１１５．前記がんが、マイクロサテライト不安定性を有する、実施形態１～１１４、３３－１、及び３８－１のいずれか１項に記載の方法。
非指向性化学療法剤により、Ｔ細胞応答が損なわれることを示す。 ＣＤ３０＋ＣＤ８Ｔ細胞のブレンツキシマブベドチン（ＢＶ）による処置を示す。Ｔ細胞への指向性送達を有するベドチンＡＤＣでは、増殖が阻害されない。 小胞体（ＥＲ）ストレスの誘導が、ベドチンベースのＡＤＣなどのアウリスタチン抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）において、異なるペイロードを有するＡＤＣと比較して、優れていることを示している。臨床的に承認されている様々なＡＤＣペイロードの表を示す。 小胞体（ＥＲ）ストレスの誘導が、ベドチンベースのＡＤＣなどのアウリスタチン抗体薬物複合体（ＡＤＣ）において、異なるペイロードを有するＡＤＣと比較して、優れていることを示している。ＥＲストレスシグナル伝達応答のグラフを示す。 小胞体（ＥＲ）ストレスの誘導が、ベドチンベースのＡＤＣなどのアウリスタチン抗体薬物複合体（ＡＤＣ）において、異なるペイロードを有するＡＤＣと比較して、優れていることを示している。異なるペイロードを有するＡＤＣまたはパクリタキセルのＩＣ５０濃度で３６時間または４８時間処置したＭＩＡ－ＰａＣａ－２細胞のウエスタンブロット分析を示す。 小胞体（ＥＲ）ストレスの誘導が、ベドチンベースのＡＤＣなどのアウリスタチン抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）において、異なるペイロードを有するＡＤＣと比較して、優れていることを示している。用量範囲において、異なるペイロードを有するＡＤＣにより処置された、ＣＨＯＰ駆動ルシフェラーゼレポーター（Ｓｉｇｎｏｓｉｓ，Ｉｎｃ．）を発現するＭＩＡ－ＰａＣａ－２細胞を示す。ＣＨＯＰ誘導は、未処置細胞と比較した倍数誘導により示す。 小胞体（ＥＲ）ストレスの誘導が、ベドチンベースのＡＤＣなどのアウリスタチン抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）において、異なるペイロードを有するＡＤＣと比較して、優れていることを示している。ＩＣ５０用量（細胞毒性）において、異なるペイロードを有するＡＤＣにより処置された、ＣＨＯＰ駆動ルシフェラーゼレポーター（Ｓｉｇｎｏｓｉｓ，Ｉｎｃ．）を発現するＭＩＡ－ＰａＣａ－２細胞を示す。ＣＨＯＰ誘導は、未処置細胞と比較した倍数誘導により示す。 臨床ＡＤＣペイロードの免疫原性細胞死（ＩＣＤ）の可能性を示す。異なるペイロードを含む１μｇ／ｍＬのＡＤＣにより７２時間処置したＭＩＡ－ＰａＣａ－２膵臓腫瘍細胞から上清を収集した。Ａは、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏによって測定した、放出されたＴＰを示す。Ｂは、ＥＬＩＳＡによって測定した、ＨＭＧＢ１の分泌を示す。 ＡＤＣペイロードの免疫活性化の判定を示す。ＡＤＣによる免疫活性化を示す。 ＡＤＣペイロードの免疫活性化の判定を示す。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）内の骨髄細胞上でのＭＨＣクラスＩＩ（ＨＬＡ－ＤＲ）の上方制御は、ＰＢＭＣと、異なるペイロードを有するＡＤＣを投与したＬ５４０ｃｙ細胞との４８時間の共インキュベーション後、フローサイトメトリーによって判定した（２４時間ＩＣ５０濃度）。ＡＤＣ曝露に応答した単球上のＭＨＣＩＩ発現を示す。 ＡＤＣペイロードの免疫活性化の判定を示す。サイトカインレベルについて、Ｌｕｍｉｎｅｘマルチプレックスアッセイによって２４時間の上清を判定した。免疫細胞活性の尺度として、ＡＤＣ曝露に応答した先天性サイトカインＣＸＣＬ－１０／ＩＰ１０発現を示す。 トラスツズマブ主鎖でのペイロードの評価を示す。評価を行ったトラスツズマブＡＤＣの表を示す。 トラスツズマブ主鎖でのペイロードの評価を示す。ＥＲストレスシグナル伝達応答のグラフを示す。 トラスツズマブ主鎖でのペイロードの評価を示す。ＡＤＣまたは薬物により７２時間処置したＢＴ４７４細胞のウエスタンブロットを示す。 トラスツズマブ主鎖でのペイロードの評価を示す。ベドチンＡＤＣが複数のＩＣＤ特徴の強力な活性化を示すことを示す。１μｇ／ｍＬまたは遊離ＭＭＡＥ（１００ｎＭ）で投与されたトラスツズマブＡＤＣは、ＳＫＢＲ３ ＨＥＲ２発現乳癌細胞で異なるＩＣＤ応答を示す。処置の４８時間または７２時間後、培地を収集し、ＡＴＰ放出を測定するために使用した。 トラスツズマブ主鎖でのペイロードの評価を示す。ベドチンＡＤＣが複数のＩＣＤ特徴の強力な活性化を示すことを示す。１μｇ／ｍＬまたは遊離ＭＭＡＥ（１００ｎＭ）で投与されたトラスツズマブＡＤＣは、ＳＫＢＲ３ ＨＥＲ２発現乳癌細胞で異なるＩＣＤ応答を示す。処置の４８時間または７２時間後、培地を収集し、ＨＭＧＢ１レベルを測定するために使用した。 免疫原性細胞死（ＩＣＤ）経路をさらに示す。 図７Ｂ～Ｅで使用する特定のＡＤＣのペイロードに関する情報を示す。 メイタンシン－ＡＤＣと比較して、ＭＭＡＥ－ＡＤＣによる処置に応答して生じたＪＮＫシグナル伝達活性化を示す。 カンプトテシン－ＡＤＣと比較して、ＭＭＡＥ－ＡＤＣによる処置に応答して生じたＪＮＫシグナル伝達活性化を示す。 アントラサイクリン－ＡＤＣと比較して、ＭＭＡＥ－ＡＤＣによる処置に応答して生じたＪＮＫシグナル伝達活性化を示す。 カリケアマイシン－ＡＤＣと比較して、ＭＭＡＥ－ＡＤＣによる処置に応答して生じたＪＮＫシグナル伝達活性化を示す。 メイタンシン－ＡＤＣと比較して、ＭＭＡＥ－ＡＤＣによる処置に応答して生じたＣＨＯＰ誘導を示す。 カンプトテシン－ＡＤＣと比較して、ＭＭＡＥ－ＡＤＣによる処置に応答して生じたＣＨＯＰ誘導を示す。 アントラサイクリン－ＡＤＣと比較して、ＭＭＡＥ－ＡＤＣによる処置に応答して生じたＣＨＯＰ誘導を示す。 他のタイプのＡＤＣ、例えば、オゾガマイシン－ＡＤＣ、テセリン－ＡＤＣ、及びＡＴ－ＡＤＣなどと比較して、ＭＭＡＥ－ＡＤＣによる処置に応答して生じたＣＨＯＰ誘導を示す。 メイタンシン－ＡＤＣと比較して、ＭＭＡＥ－ＡＤＣによる処置に応答して生じたＡＴＰ及びＨＭＧＢ１の放出を示す。 カンプトテシン－ＡＤＣと比較して、ＭＭＡＥ－ＡＤＣによる処置に応答して生じたＡＴＰ及びＨＭＧＢ１の放出を示す。 アントラサイクリン－ＡＤＣと比較して、ＭＭＡＥ－ＡＤＣによる処置に応答して生じたＡＴＰ及びＨＭＧＢ１の放出を示す。 他のタイプのＡＤＣ、例えば、オゾガマイシン－ＡＤＣ、テセリン－ＡＤＣ、及びＡＴ－ＡＤＣなどと比較して、ＭＭＡＥ－ＡＤＣによる処置に応答して生じたＡＴＰ及びＨＭＧＢ１の放出を示す。 メイタンシン－ＡＤＣと比較して、ＭＭＡＥ－ＡＤＣによる処置に応答して生じたＭＨＣＩＩの発現及びＣＸＣＬ－１０／ＩＰ１０の放出を示す。 カンプトテシン－ＡＤＣと比較して、ＭＭＡＥ－ＡＤＣによる処置に応答して生じたＭＨＣＩＩの発現及びＣＸＣＬ－１０／ＩＰ１０の放出を示す。 アントラサイクリン－ＡＤＣと比較して、ＭＭＡＥ－ＡＤＣによる処置に応答して生じたＭＨＣＩＩの発現及びＣＸＣＬ－１０／ＩＰ１０の放出を示す。 他のタイプのＡＤＣ、例えば、オゾガマイシン－ＡＤＣ及びテセリン－ＡＤＣなどと比較して、ＭＭＡＥ－ＡＤＣによる処置に応答して生じたＭＨＣＩＩの発現及びＣＸＣＬ－１０／ＩＰ１０の放出を示す。 図７Ｂ～Ｅ、図８Ａ～Ｄ、図９Ａ～Ｄ、及び図１０Ａ～Ｄの結果をまとめたものである。 チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）におけるＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、及びＦｃγＲＩＩＩａへの抗体結合を示す。判定した抗体を示す。 チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）におけるＦｃγＲＩＩａへの抗体結合を示す。 チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）におけるＦｃγＲＩＩＩａへの抗体結合を示す。 チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）におけるＦｃγＲＩＩｂへの抗体結合を示す。 ＣＤ４０アゴニスト及び化学療法剤により処置されたＭＩＡ－ＰａＣａ ２膵癌細胞中でのＣＸＣＬ１０のレベルを示す。 ＣＤ４０アゴニスト及び化学療法剤により処置されたＭＩＡ－ＰａＣａ ２膵癌細胞中でのＩＦＮγのレベルを示す。 ＣＤ４０アゴニスト及び化学療法剤により処置されたＭＩＡ－ＰａＣａ ２膵癌細胞中でのＩＬ１０のレベルを示す。 ＣＤ４０アゴニスト及び化学療法剤により処置されたＭＩＡ－ＰａＣａ ２膵癌細胞中でのマクロファージ由来サイトカイン（ＭＤＣ；ＣＣＬ２２）のレベルを示す。 ＣＤ４０アゴニスト及び化学療法により処置された黒色腫細胞株中でのＣＸＣＬ１０のレベルを示す。 ＣＤ４０アゴニスト及び化学療法により処置された黒色腫細胞株中でのＣＸＣＬ１０のレベルを示す。 ＣＤ４０アゴニスト及び化学療法により処置された黒色腫細胞株中でのＩＬ１０のレベルを示す。 ＣＤ４０アゴニスト及び化学療法により処置された黒色腫細胞株中でのＩＬ１０のレベルを示す。 黒色腫、肺、乳房、及び膵臓からの腫瘍細胞中でのＣＸＣＬ１４のレベルを示す。 黒色腫、肺、乳房、及び膵臓からの腫瘍細胞中でのＩＬ１４のレベルを示す。 黒色腫、肺、乳房、及び膵臓からの腫瘍細胞中でのＩＦＮγのレベルを示す。 腫瘍標的抗原がＴｈｙ１．１であるヒトＣＤ４０トランスジェニックモデルによって判定した、ＡＤＣ化学療法併用と組み合わせたＳＥＡ－ＣＤ４０ベドチンのｉｎ ｖｉｖｏデータを示す。 様々なエフェクター機能主鎖を有するＴＩＧＩＴ標的抗体と組み合わせて、腫瘍関連抗原指向性のＡＤＣ－ＭＭＡＥにより処置された腫瘍細胞株中でのＣＸＣＬ１０のレベルを示す。 様々なエフェクター機能主鎖を有するＴＩＧＩＴ標的抗体と組み合わせて、腫瘍関連抗原指向性のＡＤＣ－ＭＭＡＥにより処置された腫瘍細胞株中でのＩＦＮγのレベルを示す。 非フコシル化ＴＩＧＩＴ抗体及びｖｃ－ＭＭＡＥ ＡＤＣ（「ベドチンＡＤＣ」）の活性増強を実証するｉｎ ｖｉｔｒｏデータを示す。増強された（非フコシル化）ＩｇＧ１ Ｆｃ主鎖（ＳＥＡ－ＴＧＴ）を有する非フコシル化ＴＩＧＩＴ抗体が、エフェクターヌル主鎖（ＬＡＬＡ）または標準野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ主鎖のいずれかを有する対応するＴＩＧＩＴ抗体と比較して、これらの抗体を標的ｖｃ－ＭＭＡＥ ＡＤＣによって死滅させた腫瘍細胞と共培養した場合、サイトカインＩＰ１０誘導による免疫活性化の駆動に顕著に優れていたことを示す。ＳＥＡ－ＴＧＴとの併用は、免疫細胞の相乗的活性化を呈した。 非フコシル化ＴＩＧＩＴ抗体及びｖｃ－ＭＭＡＥ ＡＤＣ（「ベドチンＡＤＣ」）の活性増強を実証するｉｎ ｖｉｖｏデータを示す。ＣＴ２６同系腫瘍細胞を移植したマウスを以下により処置したときの抗腫瘍応答を示す：１）準最適用量のＡＤＣ（Ｔｈｙ１．１ ｖｃ－ＭＭＡＥ ＡＤＣ）；２）一連の準最適用量のｍＩｇＧ２ａ ＳＥＡ－ＴＧＴ（非フコシル化ヒトＩｇＧ１主鎖に対応する非フコシル化マウスＩｇＧ２ａとして再フォーマットしたＳＥＡ－ＴＧＴ抗体）；または３）両方の剤の組み合わせ。 非フコシル化ＴＩＧＩＴ抗体及びｖｃ－ＭＭＡＥ ＡＤＣ（「ベドチンＡＤＣ」）の活性増強を実証するｉｎ ｖｉｖｏデータを示す。Ｒｅｎｃａ同系腫瘍細胞を移植したマウスを以下で処置したときの抗腫瘍応答を示す：１）準最適用量のＡＤＣ（ＥｐｈＡ２ ｖｃ－ＭＭＡＥ ＡＤＣ）；２）一連の準最適用量のｍＩｇＧ２ａ ＳＥＡ－ＴＧＴ（非フコシル化ヒトＩｇＧ１主鎖に対応する非フコシル化マウスＩｇＧ２ａとして再フォーマットしたＳＥＡ－ＴＧＴ抗体）；または３）両方の剤の組み合わせ。これらの図からわかるように、これら２つの剤の同時投与は、これらの異なる腫瘍モデルにおいて高いパーセンテージの治癒的応答を生じるなど、治療効果を大幅に増大させた。 非フコシル化ＴＩＧＩＴ抗体（ＳＥＡ－ＴＧＴ）及びＳＧＮ－Ｂ７Ｈ４ベドチンＡＤＣ（Ｂ７Ｈ４Ｖ）の活性の増強を実証するｉｎ ｖｉｖｏデータを示す。図１９には、Ｒｅｎｃａ同系腫瘍細胞を移植したマウスを、治療量以下の用量のＳＥＡ－ＴＧＴ及び治療量以下の用量のＢ７Ｈ４Ｖ、または治療量以下の用量のＳＥＡ－ＴＧＴ及び治療量のオキサリプラチンにより処置したときの抗腫瘍応答を示す。図１９に示すとおり、ＳＥＡ－ＴＧＴとＢ７Ｈ４Ｖの同時投与では、それぞれの治療量以下の用量であっても、高い割合の治癒反応を生じるなど、治療効果を大幅に増大させた。 非フコシル化抗ＣＤ７０抗体であるＳＥＡ－ＣＤ７０と、ＭＭＡＥを含有する抗ＣＤ３０ ＡＤＣであるＳＧＮ－３５との組み合せ効果を示す。非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）異種移植モデルでのｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍成長評価を示す。 非フコシル化抗ＣＤ７０抗体であるＳＥＡ－ＣＤ７０と、ＭＭＡＥを含有する抗ＣＤ３０ ＡＤＣであるＳＧＮ－３５との組み合せ効果を示す。５００ｍｍ３腫瘍サイズエンドポイントでのＮＨＬ異種移植モデルのカプラン・マイヤー生存評価を示す。Ｔｘ（処置）及び矢印は、治療開始日（移植後１９日）を示す。 非フコシル化抗ＢＣＭＡ抗体であるＳＥＡ－ＢＣＭＡと、ＭＭＡＥを含有する抗ＣＤ４８ ＡＤＣであるＳＧＮ－ＣＤ４８Ａとの相乗効果を示す。異種移植モデルのｉｎ ｖｉｖｏ生存評価を示す。 非フコシル化抗ＢＣＭＡ抗体であるＳＥＡ－ＢＣＭＡと、ＭＭＡＥを含有する抗ＣＤ４８ ＡＤＣであるＳＧＮ－ＣＤ４８Ａとの相乗効果を示す。異種移植モデルでのｉｎ ｖｉｖｏルシフェラーゼ評価を示す。 ベドチンＡＤＣがｉｎ ｖｉｖｏにおいて免疫細胞動員及び活性化を誘導することを示す。ｖｃ－ＭＭＡＥ ＡＤＣまたは非結合ｖｃ－ＭＭＡＥアイソタイプＡＤＣにより８日間処置した動物から単離された腫瘍異種移植片であり、フローサイトメトリーまたはサイトカインプロファイリングに供した。 ベドチンＡＤＣがｉｎ ｖｉｖｏにおいて免疫細胞動員及び活性化を誘導することを示す。ＣＤ４５陽性免疫細胞をＣＤ１１ｃについて染色し、細胞表面上のＭＨＣクラスＩＩの発現について染色することによって活性化を観察した。 ベドチンＡＤＣがｉｎ ｖｉｖｏにおいて免疫細胞動員及び活性化を誘導することを示す。腫瘍内サイトカインは、Ｌｕｍｉｎｅｘによって測定した。 ｖｃ－ＭＭＡＥ ＡＤＣによるＴ細胞記憶の誘導を示す。Ｒｅｎｃａ同系モデルでは、マウスはｖｃ－ＭＭＡＥ ＡＤＣ処置により治癒した。 ｖｃ－ＭＭＡＥ ＡＤＣによるＴ細胞記憶の誘導を示す。処置により治癒したマウスは、Ｒｅｎｃａ腫瘍細胞により再チャレンジし、それらのマウスはその後移植された腫瘍細胞を拒絶した。 ＭＭＡＥまたはｖｃ－ＭＭＡＥ ＡＤＣにより処置された細胞によって得られる防御的抗腫瘍免疫を示す。Ａ２０がん細胞をブレンツキシマブベドチン（ＢＶ）またはＭＭＡＥにより処置し、死にかけている細胞及び死んだ細胞をマウスに投与した。図２４は、免疫マウスが、その後に移植されたＡ２０細胞を拒絶する、より強い免疫応答を示したことを示している。 非フコシル化抗ＣＤ４０抗体、ＳＥＡ－ＣＤ４０による受容体のクラスタリング及びアゴニズムの例示的モデル；及び非フコシル化抗ＴＩＧＩＴ抗体、ＳＥＡ－ＴＧＴによる受容体アゴニスト及びシナプス形成の例示的モデルを示す。示すとおり、ＳＥＡ－ＣＤ４０抗体は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に発現するＣＤ－４０を結合でき、抗体のＦｃ部分は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞または単球上に発現するＦｃγＲＩＩＩａに結合し、これにより受容体のクラスター化を促進させる。対照的に、ＳＥＡ－ＴＧＴ抗体は、Ｔ細胞上に発現するＴＩＧＩＴに結合し、抗体のＦｃ領域は、ＡＰＣ上に発現するＦｃγＲＩＩＩａに結合する。
Ｉ．序文
アポトーシスによる細胞死は、静かな寛容原性のプロセスである。しかし、アントラサイクリン、オキサリプラチン、または放射線などの特定の抗腫瘍剤を含む特定の細胞傷害剤は、免疫原性細胞死（ＩＣＤ）と呼ばれる特徴的な形態の細胞死を誘導する。ＩＣＤは、アポトーシスを起こしたがん性細胞に対するＰＢＭＣ及びＴ細胞の免疫応答を生じさせる調節された細胞死様式である。本明細書に示すとおり、アウリスタチン（例えば、ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）などの特定のチューブリン破壊剤による治療は、ＥＲ内に通常見られるタンパク質を細胞表面に露出させる。Ｔ細胞への腫瘍抗原の貪食取り込み及び提示の増加により、その後、適応免疫系がプライミングを受ける。本明細書でさらに示すとおり、ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦなどのアウリスタチンが、ＩＣＤ誘導を駆動できることは明らかであり、それによって免疫系が腫瘍に対する細胞傷害活性を認識して開始し得る。本質的に、ＩＣＤにより死にかけている細胞は、任意の残存疾患に対する、または再燃（ｒｅｌａｐｓｅ）／再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）のイベント時に、腫瘍特異的免疫応答を刺激するワクチンとして機能する。
本明細書に記載の実験結果によって示すとおり、ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦなどのアウリスタチンに応答してＩＣＤを受ける腫瘍細胞は、細胞表面へのカルレティキュリンの転座、アポトーシス中のＡＴＰの分泌、及び核タンパク質ＨＭＧＢ１の放出など、それらの免疫原性及びアポトーシスを増強する一連の固有の特徴を示す。ＩＣＤは、特定のＭＡＭＰＳ及び危険関連分子パターン（ＤＡＭＰ）の放出を誘導し、これらは、腫瘍抗原のＴ細胞認識を促進する炎症誘発性環境を確立する独自の能力を有する。本明細書に示すとおり、他の化学療法剤は、アポトーシスを誘導することができるが、すべてがＭＭＡＥ及びＭＭＡＦなどのアウリスタチンほど強力なＩＣＤ応答を誘導できるわけではない。
ＩＣＤの重要なステップでは、自然免疫系を活性化して腫瘍細胞を認識して除去する一連のシグナルを生成する。最初に、薬物は、ＥＲストレスを誘導し、次いで、これにより、カルレティキュリン、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ７０及びＨＳＰ９０）などのＤＡＭＰの表面露出、ＡＴＰの分泌、高移動度群タンパク質Ｂ１（ＨＭＧＢ１）の放出がもたらされる。これらのＤＡＭＰの露出及びＩＣＤプロセス中の免疫調節剤の分泌は、樹状細胞及び他の抗原提示細胞の活性化などの免疫応答を開始するために協調して作用し、ＥＲストレスを受けた細胞の食作用及び破壊につながる。
上記のように、ＩＣＤの開始は、ＥＲストレスに結びついている。折りたたまれていないポリペプチドに対するＥＲの能力を過負荷にするか、タンパク質の折りたたみ環境を破壊することにより、ＥＲストレス応答が開始される。ＥＲは、動的な集合及び収縮を通じて構造及び弾力性を提供する微小管ネットワークに密接に接続されている。微小管ネットワークの破壊により、ＥＲネットワークに衝突し、重度のＥＲストレスとなり、ＩＣＤ誘導に必要な特性の発現の引き金となり、小胞体ストレス応答（ＵＰＲ）と呼ばれるストレス応答を引き起こす。ＵＰＲ応答は、ｐＩＲＥ１の増加、ＪＮＫの下流リン酸化、及びＡＴＦ４切断など、複数のアームを有する。
本発明は、アウリスタチン（例えば、ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）などの特定のチューブリン破壊剤が、他の細胞傷害剤と比較して、特に、抗体－薬物複合体上で使用される他のペイロードと比較して、独特のＩＣＤ応答を生じることができるという発見に部分的に基づく。本発明はさらに、ＩＣＤを駆動するそのような剤の独特の能力を、免疫応答を増強する剤と組み合わせることにより、抗腫瘍活性を増幅できるという発見に基づくものである。これは、免疫シグナル伝達に関与する特定の標的を結合する能力を有し、増強されたＦｃ結合特性及びエフェクター機能を有する抗体を使用して、そのような免疫アゴニズムが達成されたときの場合であることがわかった。所望のＦｃ結合特性には、活性化ＦｃγＲへの結合の増強、阻害性ＦｃγＲへの結合の減少、ＡＤＣＣ活性の増強、及び／またはＡＤＣＰ活性の増強などの活性が含まれた。所望の活性を有する特定のそのような抗体は、非フコシル化された。
これらの集合的な発見に基づいて、本発明者らは、本明細書でより詳細に説明するように、増強されたＦｃ活性も有する免疫細胞エンゲージャーに対して向けられた抗体と組み合わせて、ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦなどの特定のチューブリン破壊剤を使用してＩＣＤを誘導することにより、相乗的に改善された抗腫瘍応答が得られることを示した。標準化学療法剤ではなくＡＤＣを使用することにより、従来の化学療法で見られるＴ細胞応答の障害が緩和されることも示されており、したがって、この特定の組み合わせアプローチに対してさらなる利点をもたらす。
したがって、本明細書で提供されるいくつかの実施形態は、がんを有する対象に（１）抗体－薬物複合体と、（２）免疫細胞エンゲージャーに結合する抗体と、を投与することを含む併用療法であり、ここで、抗体－薬物複合物は、腫瘍関連抗原を結合する第１の抗体にコンジュゲートさせたチューブリン破壊剤を含み、第２の抗体は、１つ以上の活性化ＦｃγＲへの結合が増強されているＦｃを含む。いくつかの実施形態では、第２の抗体は、非フコシル化されている。ある実施形態では、第２の抗体では、ＡＤＣＣ及び／またはＡＤＣＰ活性が増強されている。
ＩＩ．定義
別段の定義のない限り、本明細書で用いられている技術用語と科学用語は、当業者によって一般的に理解されている意味と同じ意味を有する。例えば、Ｌａｃｋｉｅ，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（４ｔｈ ｅｄ．２００７）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ １９８９）を参照されたい。本発明の実施の際には、本明細書に記載されている方法、器具及び材料と類似または同等の方法、器具及び材料のいずれかを用いることができる。
本明細書で使用する場合、内容上明らかに別段に示されている場合を除き、「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」という単数形には、複数の言及物が含まれる。したがって、例えば「ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ」への言及は、任意選択的に２つ以上のかかる分子の組み合わせなどを含む。
本明細書で使用される「約」という用語は、当業者であれば容易に理解するそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。
「抗体」という用語は、インタクト抗体及びその抗原結合フラグメントを含み、抗原結合フラグメントは、抗原結合領域と、ＣＨ２に位置するアスパラギン（Ｎ）２９７を含む重鎖定常領域の少なくとも一部とを含む。典型的には、「可変領域」は、抗体の抗原結合領域を含み、結合の特異性及び親和性に関与する。Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐａｕｌ，ｅｄ．，Ｗｏｌｔｅｒｓ Ｋｌｕｗｅｒ Ｈｅａｌｔｈ／Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０１３）を参照されたい。軽鎖は、典型的には、カッパまたはラムダのいずれかに分類される。重鎖は、典型的には、順番に免疫グロブリンクラス、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥそれぞれを定義する、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンに分類される。
「抗体」という用語には、二価または二重特異性分子、ダイアボディ、トリアボディ及びテトラボディも含まれる。二価及び二重特異性分子は、例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７、Ｐａｃｋ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９２）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３１：１５７９、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９３），ＰＮＡＳ．ＵＳＡ９０：６４４４、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８、Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．６：７８１、Ｈｕ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５６：３０５５、Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：４０２６及びＭｃＣａｒｔｎｅｙ，ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８：３０１に記載されている。
「抗体」という用語は、それ自体の抗体（裸の抗体）、または細胞毒性薬または細胞増殖抑制薬にコンジュゲートした抗体を含む。
「モノクローナル抗体」は、実質的に同種の抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る天然に存在する変異の可能性を除いて同一である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本発明による使用対象のモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５が初めて述べたハイブリドーマ法によって作製してもよく、または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４８１６５６７号を参照されたい）によって作製してもよい。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１－５９７に記載の技術を用いてファージ抗体ライブラリーから単離され得るか、または他の方法で作製され得る。本明細書に記載の抗体は、モノクローナル抗体である。
モノクローナル抗体のその標的抗原への特異的結合は、少なくとも１０６、１０７、１０８、１０９、または１０１０Ｍ－１の親和性を意味する。特異的結合は、その規模が検出可能なほど高く、少なくとも１つの無関係な標的に生じる非特異的結合と区別可能である。特異的結合は、特定の官能基間の結合形成または特定の空間適合（例えば、ロックアンドキー型）の結果であるのに対して、非特異的結合は通常、ファンデルワールス力の結果である。
基本的な抗体構造単位は、サブユニットの四量体である。各四量体は、２つの同一のポリペプチド鎖対を含み、各対は、１本の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１本の「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識に関与する約１００～１１０以上のアミノ酸長の可変領域を含む。この可変領域は、最初に切断可能なシグナルペプチドに連結して発現する。シグナルペプチドを含まない可変領域は、成熟可変領域と呼ばれることがある。したがって、例えば、軽鎖成熟可変領域は、軽鎖シグナルペプチドを含まない軽鎖可変領域を意味する。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能に関与する定常領域を画定する。
軽鎖は、カッパまたはラムダのいずれかに分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタまたはイプシロンとして分類され、これらによって、抗体のアイソタイプがそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥと定義される。軽鎖及び重鎖内で、可変領域及び定常領域は、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結され、重鎖は約１０以上のアミノ酸の「Ｄ」領域も含む。（一般に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，１９８９，Ｃｈ．７（これは、すべての目的のためにその全体が参照により組み込まれる）を参照のこと）。
各軽鎖／重鎖対の成熟可変領域は、抗体結合部位を形成する。したがって、インタクト抗体は、２つの結合部位を有する。二機能性または二重特異性抗体を除いて、２つの結合部位は同じである。鎖はすべて、相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる３つの超可変領域によって連結された、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を示す。各対の２本の鎖からのＣＤＲはフレームワーク領域によって整列され、これにより、特定のエピトープへの結合が可能になる。Ｎ末端からＣ末端へ、軽鎖及び重鎖の両方がドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７及び１９９１）またはＣｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３（１９８９）、またはＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）、ＡｂＭ またはＣｏｎｔａｃｔまたは他の従来のＣＤＲの定義に従う。また、Ｋａｂａｔは、異なる重鎖間または異なる軽鎖間の対応する残基に同じ番号が割り当てられる、広く使用されているナンバリング規則（Ｋａｂａｔナンバリング）も提供する。文脈から特に明らかでない限り、Ｋａｂａｔナンバリングを使用して、可変領域内のアミノ酸の位置を指定する。文脈から特に明らかでない限り、ＥＵナンバリングは、定常領域の指定された位置に使用される。
「ヒト化」抗体は、非ヒト抗体の反応性を保持しながら、ヒトにおける免疫原性が低い抗体である。これは、例えば、非ヒトＣＤＲ領域を保持し、抗体の残りの部分をそれらのヒト対応物と置換することによって達成され得る。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ｏｉ，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４４：６５－９２（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４－１５３６（１９８８）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．，２８：４８９－４９８（１９９１）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．，３１（３）：１６９－２１７（１９９４）を参照されたい。
本明細書で使用される「キメラ抗体」という用語は、（ａ）定常領域またはその一部が置換されて、これにより抗原結合部位（可変領域、ＣＤＲ、またはその一部）が異なる種の定常領域に連結している抗体分子を指す。
「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原上の任意の部位を指す。エピトープは、１つ以上のタンパク質の三次フォールディングが近接している連続アミノ酸または非連続アミノ酸から形成され得る。連続アミノ酸から形成されたエピトープは典型的には、変性溶媒にさらされたときに保持されるが、三次フォールディングによって形成されたエピトープは典型的には、変性溶媒で処理することにより喪失する。エピトープは、典型的には、少なくとも３つ、より通常は少なくとも５または８～１０のアミノ酸を固有の空間コンフォメーション内に含む。エピトープの空間コンフォメーションを決定する方法としては、例えば、Ｘ線結晶学及び２次元核磁気共鳴が挙げられる。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇｌｅｎｎ Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照されたい。
同じまたは重複するエピトープを認識する抗体は、ある抗体が別の抗体の標的抗原への結合と競合する能力を示す簡素なイムノアッセイにおいて同定され得る。抗体のエピトープは、その抗原に結合した抗体のＸ線結晶構造解析によって定義して、接触残基を同定することもできる。あるいは、一方の抗体の結合を減少させるかまたは排除する抗原中のすべてのアミノ酸変異が他方の結合を減少させるかまたは排除する場合には、２つの抗体は、同じエピトープを有する。一方の抗体の結合を減少させるかまたは排除するいくつかのアミノ酸変異が他方の結合を減少させるかまたは排除する場合には、２つの抗体は、重複するエピトープを有する。
抗体間の競合は、試験中の抗体が参照抗体の共通抗原への特異的結合を阻害するアッセイによって決定される（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０：１４９５，１９９０を参照されたい）。競合結合アッセイで測定したときに、過剰な試験抗体（例えば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍または１００倍）が、参照抗体の結合を少なくとも５０％、しかし好ましくは７５％、９０％または９９％阻害する場合、試験抗体は、参照抗体と競合している。競合アッセイによって同定される抗体（競合抗体）としては、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、及び立体障害が発生するために参照抗体が結合するエピトープに十分近い隣接エピトープに結合する抗体が挙げられる。
「特異的に結合する」という語句は、サンプル中のその標的に対して、非標的化合物に結合するよりも、より高い親和性、結合力、より容易に、及び／またはより長い持続時間で標的に結合する分子（例えば、抗体または抗体フラグメント）を指す。いくつかの実施形態では、標的に特異的に結合する抗体は、非標的化合物よりも少なくとも２倍高い親和性、例えば、少なくとも４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、２５倍、５０倍、または１００倍の親和性で標的に結合する抗体である。例えば、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗体は、典型的には、非ＴＩＧＩＴ標的よりも少なくとも２倍高い親和性でＴＩＧＩＴに結合する。この定義を読んだ当業者は、例えば、第１の標的に特異的または優先的に結合する抗体（または部分またはエピトープ）が、第２の標的に特異的または優先的に結合してもしなくてもよいことを理解するであろう。そのため、「特異的に結合する」は、排他的結合を（含むことはできるが）必ずしも必要としない。
「結合親和性」という用語は、本明細書では、２つの分子、例えば抗体またはそのフラグメントと抗原との間の非共有結合による相互作用の強度の尺度として使用される。「結合親和性」という用語は、一価の相互作用（内因性活性）を示すために使用される。
一価相互作用による２つの分子、例えば抗体またはそのフラグメントと抗原との間の結合親和性は、解離定数（ＫＤ）の決定によって定量化され得る。次に、ＫＤは、非限定的な例として、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標））を使用して、複合体形成及び解離の動態を測定することによって決定することができる。一価複合体の会合及び解離に対応する速度定数は、それぞれ会合速度定数ｋａ（またはｋｏｎ）及び解離速度定数ｋｄ（またはｋｏｆｆ）と呼ばれる。ＫＤは、式ＫＤ＝ｋｄ／ｋａによってｋａ及びｋｄに関連付けられる。解離定数の値は、周知の方法によって直接決定することができ、または例えばＣａｃｅｃｉ ｅｔ ａｌ．（１９８４，Ｂｙｔｅ ９：３４０－３６２）に記載のものなどの方法によって、複合混合物についても算出され得る。例えば、ＫＤは、Ｗｏｎｇ＆Ｌｏｈｍａｎ（１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５４２８－５４３２）によって開示されたものなど、二重フィルターニトロセルロースフィルター結合アッセイを使用して確立され得る。標的抗原に対する抗体などのリガンドの結合能力を評価するための他の標準アッセイは、当技術分野で知られており、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、ＲＩＡ、及びフローサイトメトリー分析、ならびに本明細書の他の場所で例示されている他のアッセイが挙げられる。抗体の結合動態及び結合親和性はまた、当技術分野で知られている、または以下の実施例のセクションに記載の標準アッセイ、例えばＢｉａｃｏｒｅ（商標）システムを使用することによる、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）；ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）などの結合平衡除外法；及びＢｉｏＬａｙｅｒ干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標）Ｏｃｔｅｔプラットフォームを使用）によって判定することもできる。いくつかの実施形態では、結合親和性は、ＢｉｏＬａｙｅｒ干渉測定アッセイを使用して決定される。例えば、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，３８：４００－４０７（２０１０）；Ｄｙｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，３７９：３０－４１（２０１２）；及びＥｓｔｅｐ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｂｓ，２０１３，５：２７０－２７８を参照されたい。
本明細書で使用される「交差反応」という用語は、抗体が産生された抗原以外の抗原に抗体が結合する能力を指す。いくつかの実施形態では、交差反応性は、抗体が産生された抗原とは別の種由来の抗原に結合する抗体の能力を指す。非限定的例として、ヒトＴＩＧＩＴ抗原に対して産生される本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、異なる種（例えば、マウスまたはサル）由来のＴＩＧＩＴとの交差反応性を呈し得る。
「単離された」抗体は、その自然環境の成分から同定され、分離及び／または回収された抗体、及び／または組換えにより産生された抗体を指す。「精製抗体」とは、典型的には、その産生または精製から生じる干渉タンパク質及び他の夾雑物に対して少なくとも５０％ｗ／ｗ純粋である抗体であるが、モノクローナル抗体が、過剰の薬学的に許容される担体（複数可）、またはその使用を容易にすることを意図した他のビヒクルと組み合わされる可能性を排除するものではない。干渉タンパク質及び他の夾雑物には、例えば、抗体が単離されるかまたは組換えにより産生される細胞の細胞成分が含まれ得る。場合によっては、モノクローナル抗体は、産生または精製による干渉タンパク質及び夾雑物に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５または９９％ｗ／ｗ純粋である。ラット、キメラ、加工（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）及びヒト化抗体を含む、本明細書に記載の抗体は、単離及び／または精製された形態で提供することができる。
「ＬＡＥ」という用語は、トリペプチドリンカーであるロイシン－アラニン－グルタミン酸を指す。「ｄＬＡＥ」という用語は、トリペプチドリンカーＤ－ロイシン－アラニン－グルタミン酸を指し、トリペプチドリンカー中のロイシンが、Ｄ型である。
「対象」、「患者」、「個体」などの用語は、互換的に使用され、指示されている場合を除き、ヒト及びヒト以外の霊長類などの哺乳動物、ならびにウサギ、ラット、マウス、ヤギ、ブタ、及び他の哺乳動物の種などを指す。この用語は、対象が特定の疾患と診断されたことを必ずしも示すものではないが、典型的には、医学的管理下にある個体を指す。
「治療法」、「治療」、及び「改善」という用語は、症状の重症度のあらゆる軽減を指す。がんを治療する場合、治療とは、例えば、腫瘍サイズ、がん細胞の数、成長速度、転移活性、非がん細胞の細胞死などを減少させることを指すことができる。本明細書で使用される「治療する」及び「防止する」は、絶対的用語であることを意図するものではない。治療及び予防とは、あらゆる発症の遅延、症状の改善、患者の生存率の改善、生存時間の延長または生存率の上昇などを指し得る。治療及び予防は、本明細書に記載の治療を受けていない患者よりも症状の頻度または重症度が低くなるように、完全（検出可能な症状が残っていない）または部分的であり得る。治療の効果は、治療を受けていない個体または個体のプール、または同じ患者の治療前または治療中の異なる時点と比較することができる。いくつかの態様では、疾患の重症度は、例えば、投与前の個体または治療を受けていない対照個体と比較して、少なくとも１０％低下する。いくつかの態様では、疾患の重症度は、少なくとも２５％、５０％、７５％、８０％、または９０％低下するか、場合によっては、標準診断技術を使用してもはや検出できない。
本明細書で使用される場合、剤（例えば、本明細書に記載の抗体）の「治療量」または「治療有効量」は、対象における疾患（例えば、がん）の症状を予防する、緩和する、和らげる、改善する、または重症度を軽減する剤の量である。
「投与する」、「投与される」、または「投与すること」という用語は、所望の生物学的作用部位に剤、化合物、または組成物を送達する方法を指す。これらの方法には、局所送達、非経口送達、静脈内送達、皮内送達、筋肉内送達、結腸送達、直腸送達、または腹腔内送達が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に記載の剤及び方法と共に任意に使用される投与技術としては、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄ．；Ｐｅｒｇａｍｏｎ；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡで論じられているものなどが挙げられる。
ＩＩＩ．免疫細胞エンゲージャーを結合する例示的抗体
上記のとおり、本発明者らは、免疫調節に直接的または間接的に関与するタンパク質を結合し、かつ増強されたＦｃ活性を有する抗体を使用して免疫応答を引き起こすことと組み合わせて、特定のチューブリン破壊剤（例えば、ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦなどのアウリスタチンなど）を含む抗体－薬物複合体を投与することによってＩＣＤを誘導することにより、相乗応答などの抗腫瘍応答の改善をもたらし得ることを見出した。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、免疫応答の調節に関与する標的を結合する抗体を、がんを有する対象に投与することを含み、そのような結合が、免疫応答を誘導、促進、または増強する。そのような抗体の標的は、「免疫細胞エンゲージャー」と呼ぶことができる。本明細書で使用される「免疫細胞エンゲージャー」は、正または負の免疫細胞応答の調節に関与する分子（例えば、膜貫通タンパク質）を指す。いくつかの実施形態では、抗体は、免疫細胞または腫瘍上の受容体に結合し、直接的な免疫細胞の結合をもたらすか、または負の阻害性シグナルを放出する。いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーは、Ｔ細胞シグナル伝達に関与する分子である。いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）を調節する（例えば、活性化する）。ある実施形態における免疫細胞エンゲージャーは、免疫チェックポイントタンパク質である。潜在的免疫細胞エンゲージャーの他の例を以下に示す。いくつかの実施形態では、抗体は、免疫細胞または腫瘍上の受容体に結合する。本明細書に記載の免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体のいずれも、本明細書に記載の抗体－薬物複合体のいずれかと組み合わせてもよい。
免疫調節に関与する標的（例えば、免疫細胞エンゲージャー）を結合する抗体は、以下の特徴のうちの１つ以上またはすべてを任意の組み合わせで有するＦｃも含む：１）１つ以上の活性化ＦｃγＲへの結合が増強されている、２）阻害性ＦｃγＲへの結合が減少している、３）非フコシル化されている、４）ＡＤＣＣ活性が増強されている、５）ＡＤＣＰ活性が増強されている、６）抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化している、７）ＣＤ８Ｔ細胞応答が増強されている、８）共刺激受容体を上方制御している、９）自然細胞免疫応答を活性化している、及び／または１０）ＮＫ細胞を結合している。
したがって、いくつかの実施形態では、抗体は、所望の増強されたＦｃγＲ結合プロファイルを得るために、１つ以上の活性化ＦｃγＲへの結合が増強され、及び／または１つ以上の阻害性ＦｃγＲへの結合が減少しているＦｃを含む。活性化ＦｃγＲには、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、及び／またはＦｃγＲＩのうちの１つ以上が含まれる。阻害性ＦｃγＲには、例えば、ＦｃγＲＩＩｂが含まれる。
ある実施形態では、抗体は、少なくともＦｃγＲＩＩＩａへの結合が増強されているＦｃを含む。他の実施形態では、抗体は、少なくともＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩａへの結合が増強されているＦｃを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、少なくともＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩへの結合が増強されているＦｃを含む。ある実施形態では、抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、及びＦｃγＲＩへの結合が増強されているＦｃを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、活性化ＦｃγＲへの結合の増強に加えて、またはそれとは別に、１つ以上の阻害性ＦｃγＲへの結合の減少を有する。したがって、いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃγＲＩＩａ及び／またはＦｃγＲＩＩｂへの結合が減少している。
いくつかの実施形態では、抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗体は、上記のＦｃγＲ結合プロファイルのうちの１つをさらに有する。
ある実施形態では、抗体のＦｃは、野生型Ｆｃと比較して、アミノ酸変化を含み、これにより、上記のようなＦｃγＲ結合プロファイルを得るために、活性化ＦｃγＲへの結合を増強し、及び／または１つ以上の阻害性ＦｃγＲへの結合を減少させる。例えば、いくつかの実施形態では、抗体のＦｃは、重鎖定常領域内に置換Ｓ２９３Ｄ、Ａ３３０Ｌ、及びＩ３３２Ｅを含む。
非フコシル化抗体を得るための方法と同様に、所望のＦｃγＲプロファイルを有する抗体を得るための方法に関する追加の詳細を以下に提供する。
Ａ．例示的免疫細胞エンゲージャー
抗体が標的とすることができる非限定的な例示的標的または免疫細胞エンゲージャーとしては、以下が挙げられる：ミュラー管ホルモン受容体ＩＩ（ＡＭＨＲ２）、Ｂ７、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ２、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、Ｂｓｔ１／ＣＤ１５７、Ｃ５補体、ＣＣケモカイン受容体４（ＣＣＲ４）、ＣＤ１２３、ＣＤ１３７、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５（ＩＬ２ＲＡ）、ＣＤ２７６、ＣＤ２７８、ＣＤ３、ＣＤ３２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４及びＨＩＶ－１ｇｐ１２０結合部位、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ７０（ＴＮＦ受容体リガンドファミリーのメンバー）、ＣＤ８０、ＣＤ８６、クローディン１８．２、ｃ－ＭＥＴ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＴＬＡ－４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ ＭＥＴがん原遺伝子、ＥＰＨＡ３、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＦＧＦＲ２ｂ、ＦＬＴ３、ＧＩＴＲ、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体（ＧＩＴＲ）、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＬＡ、ＩＣＯＳ、ＩＤＯ１、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－３Ｒアルファ（ＣＤ１２３）、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－５Ｒアルファ、ＬＡＧ－３、ＭＥＴがん原遺伝子、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＶＲＩＧ、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）ＥＢＯＶ糖タンパク質（ＧＰ）の高度にグリコシル化されたムチン様ドメイン、アカゲザル（Ｒｈ）Ｄ、シアル酸免疫グロブリン様レクチン８（Ｓｉｇｌｅｃ－８）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭＦ７／ＣＳ１）、Ｔ細胞受容体細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４）、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３（ＨＡＶＣＲ２）、Ｍｕｃ１（ＴＡ－Ｍｕｃ１）、ＶＳＩＲ（ＶＩＳＴＡ）、及びＶＴＣＮ１の腫瘍特異的糖エピトープ。
いくつかの実施形態では、抗体は、免疫細胞エンゲージャーのアゴニストである。いくつかのそのような実施形態では、抗体は、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ４０、ＶＴＣＮ１、ＣＤ２７６、ＩＦＮＡＲ２、ＩＦＮＡＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、ＶＳＩＲ（ＶＩＳＴＡ）、及びＨＬＡから選択される免疫細胞エンゲージャーのアゴニストである。
いくつかの実施形態では、抗体は、免疫細胞エンゲージャーのアンタゴニストである。いくつかのそのような実施形態では、抗体は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ－３、Ｂ７、ＴＩＭ３（ＨＡＶＣＲ２）、ＰＶＲＩＧ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２５（ＩＬ２ＲＡ）、及びＩＤＯ１から選択される免疫細胞エンゲージャーのアンタゴニストである。
ある実施形態では、本明細書で提供される方法のために免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、チェックポイントタンパク質に対する阻害剤であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法のために免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＰＤ－Ｌ２阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＬＡＧ－３阻害剤、Ｂ７阻害剤、ＴＩＭ３（ＨＡＶＣＲ２）阻害剤、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）阻害剤、ＧＩＴＲアゴニスト、ＣＤ１３７アゴニスト、またはＣＤ４０アゴニスト、ＶＴＣＮ１阻害剤、ＩＤＯ１阻害剤、ＣＤ２７６阻害剤、ＰＶＲＩＧ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ２５（ＩＬ２ＲＡ）阻害剤、ＩＦＮＡＲ２阻害剤、ＩＦＮＡＲ１阻害剤、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、ＶＳＩＲ（ＶＩＳＴＡ）阻害剤、またはＨＬＡを標的とする治療剤であり得る。そのような阻害剤、活性化剤、または治療剤は、以下にさらに提供される。本明細書の実施形態のいずれかにおいて、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、１つ以上の活性化ＦｃγＲへの結合が増強されているＦｃを含む抗体であり得る。いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、非フコシル化抗体である。
いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＣＴＬＡ－４阻害剤である。一実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、抗ＣＴＬＡ－４抗体である。抗ＣＴＬＡ－４抗体の例としては、米国特許第５，８１１，０９７号、同第５，８１１，０９７号、同第５，８５５，８８７号、同第６，０５１，２２７号、同第６，２０７，１５７号、同第６，６８２，７３６号、同第６，９８４，７２０号、及び同第７，６０５，２３８号に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されず、これらはすべて、それらの全体が本明細書に組み込まれる。一実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、トレメリムマブ（別名、チシリムマブまたはＣＰ－６７５，２０６）、またはその非フコシル化型である。別の実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、イピリムマブ（別名、ＭＤＸ－０１０またはＭＤＸ－１０１）またはその非フコシル化型である。イピリムマブは、ＣＴＬＡ－４に結合する完全ヒトモノクローナルＩｇＧ抗体である。イピリムマブは、商品名Ｙｅｒｖｏｙ（商標）で販売されている。
特定の実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤である。ＰＤ－ｌ／ＰＤ－Ｌ１阻害剤の例として、米国特許第７，４８８，８０２号、同第７，９４３，７４３号、同第８，００８，４４９号、同第８，１６８，７５７号、同第８，２１７，１４９号、及びＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２００３０４２４０２号、同第ＷＯ２００８１５６７１２号、同第ＷＯ２０１００８９４１１号、同第ＷＯ２０１００３６９５９号、同第ＷＯ２０１１０６６３４２号、同第ＷＯ２０１１１５９８７７号、同第ＷＯ２０１１０８２４００号、及び同第ＷＯ２０１１１６１６９９号に記載のものが挙げられるが、これらに限定されず、これらは全て、全体が本明細書中に援用される。
いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＰＤ－１阻害剤である。一実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体である。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＢＧＢ－Ａ３１７、ニボルマブ（ＯＮＯ－４５３８、ＢＭＳ－９３６５５８、またはＭＤＸ１１０６としても知られる）、ペンブロリズマブ（ＭＫ－３４７５、ＳＣＨ９００４７５、またはランブロリズマブとしても知られる）、またはそれらの非フコシル化型である。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブまたはその非フコシル化型である。ニボルマブは、ヒトＩｇＧ４抗ＰＤ－１モノクローナル抗体であり、Ｏｐｄｉｖｏ（商標）という商品名で販売されている。別の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ペンブロリズマブまたはその非フコシル化型である。ペンブロリズマブは、ヒト化モノクローナルＩｇＧ４抗体であり、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（商標）という商品名で販売されている。さらに別の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ヒト化抗体ＣＴ－０１１またはその非フコシル化型である。単独で投与されたＣＴ－０１１は、再発時に急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療への応答を示すことができていない。さらに別の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、融合タンパク質ＡＭＰ－２２４またはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＰＤ－１抗体は、ＢＧＢ－Ａ３１７またはその非フコシル化型である。ＢＧＢ－Ａ３１７は、Ｆｃガンマ受容体Ｉに結合する能力が特別に操作されており、高い親和性及び優れた標的特異性でもってＰＤ－１との独自の結合シグネチャを有するモノクローナル抗体である。一実施形態では、ＰＤ－１抗体は、セミプリマブまたはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＰＤ－１抗体は、カムレリズマブまたはその非フコシル化型である。さらなる実施形態では、ＰＤ－１抗体は、シンチリマブまたはその非フコシル化型である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１抗体は、ティスレリズマブまたはその非フコシル化型である。ある実施形態では、ＰＤ－１抗体は、ＴＳＲ－０４２またはその非フコシル化型である。さらに別の実施形態では、ＰＤ－１抗体は、ＰＤＲ００１またはその非フコシル化型である。さらに別の実施形態では、ＰＤ－１抗体は、トリパリマブまたはその非フコシル化型である。
ある実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤である。一実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ）またはその非フコシル化型である。別の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＢＭＳ－９３６５５９（別名、ＭＤＸ－１１０５－０１）またはその非フコシル化型である。さらに別の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、アテゾリズマブ（別名、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、及びＴｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標））またはその非フコシル化型である。さらなる実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、アベルマブまたはその非フコシル化型である。
いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＰＤ－Ｌ２阻害剤である。一実施形態では、ＰＤ－Ｌ２阻害剤は、抗ＰＤ－Ｌ２抗体である。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ２抗体は、ｒＨＩｇＭ１２Ｂ７Ａまたはその非フコシル化型である。
一実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）阻害剤である。一実施形態では、ＬＡＧ－３阻害剤は、可溶性Ｉｇ融合タンパク質ＩＭＰ３２１（Ｂｒｉｇｎｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００７，１７９，４２０２－４２１１）またはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＬＡＧ－３阻害剤は、ＢＭＳ－９８６０１６またはその非フコシル化型である。
一実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、Ｂ７阻害剤である。一実施形態では、Ｂ７阻害剤は、Ｂ７－Ｈ３阻害剤またはＢ７－Ｈ４阻害剤である。一実施形態では、Ｂ７－Ｈ３阻害剤は、抗Ｂ７－Ｈ３抗体ＭＧＡ２７１（Ｌｏｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２０１２，３８３４）またはその非フコシル化型である。いくつかの実施形態では、Ｂ７阻害剤は、Ｂ７－Ｈ４阻害剤である。Ｂ７－Ｈ４阻害剤の非限定的な例は、Ｂ７－Ｈ４に対する非フコシル化抗体であるＦＰＡ１５０である。ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０４７８０５を参照されたい。
一実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＴＩＭ３（Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３）阻害剤である（Ｆｏｕｒｃａｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２０１０，２０７，２１７５－８６；Ｓａｋｕｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２０１０，２０７，２１８７－９４）。
一実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）アゴニスト抗体である。ある実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、ＭＥＤＩ６４６９またはその非フコシル化型である。
一実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＧＩＴＲアゴニストである。一実施形態では、免疫細胞エンゲージャーは、抗ＧＩＴＲ抗体またはその非フコシル化型である。一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＴＲＸ５１８またはその非フコシル化型である。
一実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＣＤ１３７アゴニストである。一実施形態では、免疫細胞エンゲージャーは、抗ＣＤ１３７抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ１３７抗体は、ウレルマブまたはその非フコシル化型である。別の実施形態では、抗ＣＤ１３７抗体は、ＰＦ－０５０８２５６６またはその非フコシル化型である。
一実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＣＤ４０アゴニストである。一実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、抗ＣＤ４０抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＣＦ－８７０，８９３またはその非フコシル化型である。一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＭＰ０３１７（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐａｒｔｎｅｒｓ）またはその非フコシル化型である。一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＹＨ００３（Ｅｕｃｕｒｅ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）またはその非フコシル化型である。一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤＸ－１１４０（Ｃｅｌｌｄｅｘ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）またはその非フコシル化型である。一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＹＨ００３（Ｅｕｃｕｒｅ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）またはその非フコシル化型である。一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ミタザリマブ（Ａｌｌｉｇａｔｏｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）またはその非フコシル化型である。一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＢＢＶ－９２７（ＡｂｂＶｉｅ）またはその非フコシル化型である。一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ソチガリマブ（Ａｐｅｘｉｇｅｎ）またはその非フコシル化型である。一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＧＥＮ１０４２（Ｇｅｎｍａｂ）またはその非フコシル化型である。一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、２１４１Ｖ－１１（Ｒｏｃｋｅｆｅｌｌｅｒ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）またはその非フコシル化型である。一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、セリクレルマブ（Ｒｏｃｈｅ）またはその非フコシル化型である。一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、マウスＳ２Ｃ６の非フコシル化されたヒト化型であるＳＥＡ－ＣＤ４０（Ｓｅａｇｅｎ）であり、配列番号３０～３５のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む。対応するＶＨ及びＶＬは、配列番号２８及び２９のアミノ酸配列をそれぞれ含む。ＳＥＡ－ＣＤ４０は、米国特許公開第２０１７／０３３３５５６号及び同第２０１７／０１３７５２８号に記載されており、これらは両方とも参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＣＤ７０を結合する抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ７０である。例えば、米国特許第８，０６７，５４６号；本明細書の配列表を参照されたい。
いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＢＣＭＡを結合する抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＳＥＡ－ＢＣＭＡである。例えば、米国公開第２０１７／０２３３４８４号及びＷＯ２０１７／１４３０６９を参照のこと（それぞれ配列番号１３及び１９のＶＨ及びＶＬ；配列番号６０、６１、６２、９０、９１、９２のＣＤＲ、米国公開第２０１７／０２３３４８４号）；本明細書の配列表も参照されたい（それぞれ配列番号４５及び４６のＶＨ及びＶＬ；配列番号４７～５２のＣＤＲ）。
一実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、抗インターロイキン－１５抗体である。
一実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＶＴＣＮ阻害剤である。一実施形態では、ＶＴＣＮ阻害剤は、ＦＰＡ１５０またはその非フコシル化型である。
一実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、抗ＩＤＯアンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＴＩＧＩＴ阻害剤である。ある実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、抗ＴＩＧＩＴ抗体である。一実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＭＴＩＧ７１９２Ａまたはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＢＭＳ－９８６２０７（ＢＭＳ）またはその非フコシル化型である。さらに別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＯＭＰ－３１３Ｍ３２またはその非フコシル化型である。一実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＭＫ－７６８４である。別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＡＢ１５４またはその非フコシル化型である。さらに別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＣＧＥＮ－１５１３７またはその非フコシル化型である。一実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＳＥＡ－ＴＧＴである。別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＡＳＰ８３７４（Ａｓｔｅｌｌａｓ）またはその非フコシル化型である。さらに別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＡＪＵＤ００８またはその非フコシル化型である。一実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＡＢ３０８（Ａｒｃｕｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）またはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＡＧＥＮ１３２７（Ａｇｅｎｕｓ）またはその非フコシル化型である。さらに別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＡＫ１２７（Ａｋｅｓｏ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）またはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＢＡＴ６００５（Ｂｉｏ－Ｔｈｅｒａ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）またはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＢＡＴ６０２１（Ｂｉｏ－Ｔｈｅｒａ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）またはその非フコシル化型である。一実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＣＡＳＣ－６７４（Ｓｅａｇｅｎ）またはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＣＯＭ９０２（Ｃｏｍｐｕｇｅｎ）またはその非フコシル化型である。さらに別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ドムバナリマブ（Ａｒｃｕｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）またはその非フコシル化型である。一実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、エチギリマブ（Ｍｅｒｅｏ ＢｉｏＰｈａｒｍａ）またはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＧＳＫ４４２８８５９（ＧＳＫ）またはその非フコシル化型である。さらに別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＨＬ１８６（ＨａｎＡｌｌ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）またはその非フコシル化型である。一実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＭＩＬ－１００（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｍａｂｗｏｒｋｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）またはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＹＨ－２９１４３（Ｙｕ Ｈａｎ）またはその非フコシル化型である。一実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＨＬＸ５３（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｈｅｎｌｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）またはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＩＢＩ９３９（Ｉｎｎｏｖｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）またはその非フコシル化型である。さらに別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＪＳ００６（Ｊｕｎｓｈｉ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）またはその非フコシル化型である。一実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、Ｍ６２２３（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ）またはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＭＧ１１３１（Ｍｏｇａｍ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）またはその非フコシル化型である。さらに別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、オシペリマブ（ＢｅｉＧｅｎｅ）またはその非フコシル化型である。一実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、チラゴルマブ（Ｒｏｃｈｅ；米国特許第１０，０４７，１５８号に記載）またはその非フコシル化型である。さらに別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＴＪＴ６（Ｉ－Ｍａｂ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）またはその非フコシル化型である。さらに別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ビボストリマブ（ＭＳＤ；米国特許第１０，６１８，９５８号に記載）またはその非フコシル化型である。一実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＹＢＬ－０１２（Ｙ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）またはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＩＢＩ９３９（Ｉｎｎｏｖｅｎｔ）またはその非フコシル化型である。さらに別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＡＺＤ２９３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）またはその非フコシル化型である。一実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＥＯＳ－４４８（ｉＴｅｏｓ／ＧＳＫ）またはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＢＡＴ６００５（Ｂｉｏ Ｔｈｅｒａ）またはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＴＩＧＩＴ阻害剤は、ＡＧＥＮ１７７７（ＢＭＳ／Ａｇｅｎｕｓ）またはその非フコシル化型である。
いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＶＳＩＲ阻害剤である。ある実施形態では、ＶＳＩＲ阻害剤は、抗ＶＳＩＲ抗体である。一実施形態では、ＶＳＩＲ阻害剤は、ＭＴＩＧ７１９２Ａまたはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＶＳＩＲ阻害剤は、ＣＡ－１７０またはその非フコシル化型である。さらに別の実施形態では、ＶＳＩＲ阻害剤は、ＪＮＪ６１６１０５８８またはその非フコシル化型である。一実施形態では、ＶＳＩＲ阻害剤は、ＨＭＢＤ－００２またはその非フコシル化型である。
いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＴＩＭ３阻害剤である。ある実施形態では、ＴＩＭ３阻害剤は、抗ＴＩＭ３抗体である。一実施形態では、ＴＩＭ３阻害剤は、ＡＪＵＤ００９またはその非フコシル化型である。
いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＣＤ２５（ＩＬ２ＲＡ）阻害剤である。特定の実施形態では、ＣＤ２５（ＩＬ２ＲＡ）阻害剤は、抗ＣＤ２５（ＩＬ２ＲＡ）抗体である。一実施形態では、ＣＤ２５（ＩＬ２ＲＡ）阻害剤は、ダクリズマブまたはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＣＤ２５（ＩＬ２ＲＡ）阻害剤は、バシリキシマブまたはその非フコシル化型である。
いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＩＦＮＡＲ１阻害剤である。ある実施形態では、ＩＦＮＡＲ１阻害剤は、抗ＩＦＮＡＲ１抗体である。一実施形態では、ＩＦＮＡＲ１阻害剤は、アニフロルマブまたはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＩＦＮＡＲ１阻害剤は、シファリムマブまたはその非フコシル化型である。
いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体である。一実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤は、ペキシダルチニブまたはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤は、エマクツズマブまたはその非フコシル化型である。さらに別の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤は、カビラリズマブまたはその非フコシル化型である。一実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤は、ＡＲＲＹ－３８２またはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤は、ＢＬＺ９４５またはその非フコシル化型である。さらに別の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤は、ＡＪＵＤ０１０またはその非フコシル化型である。一実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤は、ＡＭＧ８２０またはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤は、ＩＭＣ－ＣＳ４またはその非フコシル化型である。さらに別の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤は、ＪＮＪ－４０３４６５２７またはその非フコシル化型である。一実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤は、ＰＬＸ５６２２またはその非フコシル化型である。別の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤は、ＦＰＡ００８またはその非フコシル化型である。
様々な実施形態において、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、以下の活性のうちの１つ以上またはすべてを任意の組み合わせで有する：１）制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞を枯渇させる、２）抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化する、３）ＣＤ８Ｔ細胞応答を増強する、４）共刺激受容体を上方制御する、及び／または５）免疫活性化サイトカイン（ＣＸＣＬ１０及び／またはＩＦＮγなど）の放出を促進する。いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、免疫抑制サイトカイン（ＩＬ１０及び／またはＭＤＣなど）よりも高い程度で免疫活性化サイトカイン（例えば、ＣＸＣＬ１０及びＩＦＮγ）の放出を促進する。
Ｂ．例示的な抗ＴＩＧＩＴ抗体
一態様では、免疫細胞エンゲージャーに対する抗体として、ヒトＴＩＧＩＴ（Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）に結合する抗体が提供される。本明細書に記載のとおり、いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＴＩＧＩＴとリガンドＣＤ１５５及びＣＤ１１２の一方または両方との間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、機能的バイオアッセイにおいてＴＩＧＩＴとＣＤ１５５との間の相互作用を阻害し、ＣＤ１５５－ＣＤ２２６シグナル伝達を生じさせ得る。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、抗ＰＤ－１剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体）または抗ＰＤ－Ｌ１剤（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）との相乗効果を呈する。いくつかの実施形態では、本方法で使用するための抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＳＥＡ－ＴＧＴであり、これは、配列番号７、１０、１４、１７、１８、及び１９のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む非フコシル化ＩｇＧ１抗体である。対応するＶＨ及びＶＬは、配列番号１及び６のアミノ酸配列をそれぞれ含む。
本発明者らは、驚くべきことに、増強されたエフェクター機能を有する抗ＴＩＧＩＴ抗体が、非フコシル化ＩｇＧ１抗体で達成され得るような、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇させ、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて有効性の改善を示すことを見出した。したがって、様々な実施形態において、非フコシル化抗ＴＩＧＩＴ抗体が提供される。
いくつかの実施形態では、非フコシル化抗ＴＩＧＩＴ抗体などの抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ヒトＴＩＧＩＴタンパク質（配列番号２１８）またはその一部に高親和性で結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＴＩＧＩＴに対して、５ｎＭ未満、１ｎＭ未満、５００ｐＭ未満、２５０ｐＭ未満、１５０ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、４０ｐＭ未満、３０ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、または約１０ｐＭ未満の結合親和性（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＴＩＧＩＴに対して５０ｐＭ未満の結合親和性（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＴＩＧＩＴに対して、約１ｐＭ～約５ｎＭ、例えば、約１ｐＭ～約１ｎＭ、約１ｐＭ～約５００ｐＭ、約５ｐＭ～約２５０ｐＭ、または約１０ｐＭ～約１００ｐＭの範囲のＫＤを有する。
いくつかの実施形態では、高親和性でのヒトＴＩＧＩＴへの結合に加えて、非フコシル化抗ＴＩＧＩＴ抗体は、カニクイザル（「ｃｙｎｏ」）ＴＩＧＩＴ及び／またはマウスＴＩＧＩＴとの交差反応性を呈する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、１００ｎＭ以下の結合親和性（ＫＤ）でマウスＴＩＧＩＴに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、５ｎＭ以下のＫＤでヒトＴＩＧＩＴに結合し、１００ｎＭ以下のＫＤでマウスＴＩＧＩＴと交差反応する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗ＴＩＧＩＴ抗体は、カニクイザルＴＩＧＩＴ及びマウスＴＩＧＩＴの両方との交差反応性も呈する。
いくつかの実施形態では、抗体交差反応性は、細胞（例えば、ヒトＴＩＧＩＴ、カニクイザルＴＩＧＩＴ、またはマウスＴＩＧＩＴを発現する細胞株、またはＴＩＧＩＴを内因的に発現する初代細胞、例えば、ヒトＴＩＧＩＴ、ｃｙｎｏＴＩＧＩＴ、またはマウスＴＩＧＩＴを内因的に発現する初代Ｔ細胞）上に発現するＴＩＧＩＴに対する抗ＴＩＧＩＴ抗体の特異的結合を検出することによって決定される。いくつかの実施形態では、抗体結合及び抗体交差反応性は、抗ＴＩＧＩＴ抗体の精製または組換えＴＩＧＩＴ（例えば、精製または組換えヒトＴＩＧＩＴ、精製または組換えｃｙｎｏＴＩＧＩＴ、または精製または組換えマウスＴＩＧＩＴ）へのまたはＴＩＧＩＴを含むキメラタンパク質（例えば、ヒトＴＩＧＩＴ、カニクイザルＴＩＧＩＴ、またはマウスＴＩＧＩＴを含むＦｃ融合タンパク質、またはヒトＴＩＧＩＴ、ｃｙｎｏＴＩＧＩＴ、またはマウスＴＩＧＩＴを含むＨｉｓタグ付きタンパク質）への特異的結合を検出することによって決定される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＴＩＧＩＴとリガンドＣＤ１５５との間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＴＩＧＩＴとリガンドＣＤ１１２との間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＴＩＧＩＴとリガンドＣＤ１５５及びＣＤ１１２の両方との間の相互作用を阻害する。
いくつかの実施形態では、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗ＴＩＧＩＴ抗体は、以下に記載の抗体：クローン１３、クローン１３Ａ、クローン１３Ｂ、クローン１３Ｃ、またはクローン１３Ｄのいずれかに由来する、軽鎖可変領域配列またはその一部、及び／または重鎖可変領域配列またはその一部を含む。抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３、クローン１３Ａ、クローン１３Ｂ、クローン１３Ｃ、及びクローン１３ＤのＣＤＲ、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、及び重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のアミノ酸配列は、以下の配列表に記載する。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、以下のうちの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、または６）を含む：
配列番号７、配列番号８、及び配列番号９から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；
配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、及び配列番号１３から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；
配列番号１４、配列番号１５及び１６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列；
配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；
配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び／または
配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号７、配列番号８、または配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号１４、配列番号１５、または１６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号７、配列番号８、または配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；配列番号１４、配列番号１５、または配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列；配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、
（ａ）配列番号７、１０、１４、１７、１８、及び１９のそれぞれ；または
（ｂ）配列番号８、１１、１４、１７、１８、及び１９のそれぞれ；または
（ｃ）配列番号９、１２、１５、１７、１８、及び１９のそれぞれ；または
（ｄ）配列番号８、１３、１６、１７、１８、及び１９のそれぞれ；または
（ｅ）配列番号８、１２、１６、１７、１８、及び１９のそれぞれ
のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、または配列番号５に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、または配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列は、参照配列（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、または配列番号５）に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上の置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、ヒトＴＩＧＩＴに結合する能力を保持し、任意により、ＣＤ１５５及び／またはＣＤ１１２のＴＩＧＩＴへの結合を遮断する能力を保持している。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号６に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、参照配列（例えば、配列番号６）に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上の置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、ヒトＴＩＧＩＴに結合する能力を保持し、任意により、ＣＤ１５５及び／またはＣＤ１１２のＴＩＧＩＴへの結合を遮断する能力を保持している。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、または配列番号５に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、かつ配列番号６に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、または配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、かつ配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は：
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｆ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号２０、２１、２２、２３、及び２４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の方法で使用するための抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＵＳ２００９／０２５８０１３、ＵＳ２０１６／０１７６９６３、ＵＳ２０１６／０３７６３６５、またはＷＯ２０１６／０２８６５６に開示されている抗ＴＩＧＩＴ抗体の非フコシル化型である。
Ｃ．例示的抗ＣＤ４０抗体
上記のとおり、いくつかの実施形態では、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体である。ダセツズマブを含むアゴニスティックＣＤ４０モノクローナル抗体は、単剤及び併用化学療法の設定において有望な臨床活性を示している。ダセツズマブは、ＮＨＬの第１相試験及びびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）の第２相試験で、ある程度の臨床活性を示した。例えば、Ａｄｖａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２７：４３７１－４３７７（２００９）及びＤｅ Ｖｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．７：１－９（２０１４）を参照されたい。さらに、ＣＤ４０に対するヒト化ＩｇＧ２アゴニスト抗体であるＣＰ－８７０，８９３は、パクリタキセル、カルボプラチン、またはゲムシタビンと組み合わせた場合、固形腫瘍の適応症において有望な活性を示した。これらの研究では、抗原提示細胞の活性化、サイトカイン産生、及び抗原特異的Ｔ細胞の生成が見られた。例えば、Ｂｅａｔｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９：６２８６－６２９５（２０１３）及びＶｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２：ｅ２３０３３（２０１３）を参照されたい。
いくつかの実施形態では、本発明の方法で使用するための非フコシル化抗ＣＤ４０抗体が提供される。いくつかの実施形態では、非フコシル化抗ＣＤ４０抗体は、マウスＳ２Ｃ６の非フコシル化されたヒト化型であるＳＥＡ－ＣＤ４０であり、配列番号３０～３５のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む。対応するＶＨ及びＶＬは、配列番号２８及び２９のアミノ酸配列をそれぞれ含む。ＳＥＡ－ＣＤ４０は、米国特許公開第２０１７／０３３３５５６号及び同第２０１７／０１３７５２８号に記載されており、これらは両方とも参照により本明細書に組み込まれる。Ｓ２Ｃ６は、本明細書においてｍＳ２Ｃ６と呼ばれる、ヒト膀胱癌に対して惹起されたマウスモノクローナル抗体として最初に単離された。例えば、Ｐａｕｌｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．１７：１６５－１７９（１９８４）を参照されたい。Ｓ２Ｃ６抗体は、ＣＤ４０シグナル伝達経路の部分アゴニストであり、いくつかの実施形態では、以下の活性を有する：ヒトＣＤ４０タンパク質への結合、カニクイザルＣＤ４０タンパク質への結合、ＣＤ４０シグナル伝達経路の活性化、ＣＤ４０とそのリガンドであるＣＤ４０Ｌとの相互作用の増強。例えば、米国特許第６，９４６，１２９号を参照されたい。
Ｓ２Ｃ６は、ヒト化されており、このヒト化抗体は、本明細書ではヒト化Ｓ２Ｃ６と呼ばれ、あるいはフコシル化ヒト化Ｓ２Ｃ６（ｆｈＳ２Ｃ６、またはＳＧＮ－４０）であるダセツズマブと呼ばれる。例えば、ＷＯ２００６／１２８１０３を参照されたい（これは、任意の目的のために参照により本明細書に組み込まれる）。ＳＥＡ－ＣＤ４０は、非フコシル化ヒト化Ｓ２Ｃ６抗体である。ヒト化Ｓ２Ｃ６の他のバージョンは、ＷＯ２００８／０９１９５４に開示されている。これらは、非フコシル化され、本明細書に開示の方法で使用され得る。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、以下のうちの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、または６）を含む：
配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；
配列番号３１または配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；
配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列；
配列番号３３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；
配列番号３４のアミノ酸を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び／または
配列番号３５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号３１または配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号３４のアミノ酸を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号３５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号３１または配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列；配列番号３３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号３５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、
（ａ）配列番号３０、３１、３３、３４、及び３５のそれぞれ；または
（ｂ）配列番号３０、３６、３３、３４、及び３５のそれぞれ
のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号２８に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、参照配列（例えば、配列番号２８）に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、ヒトＣＤ４０に結合する能力を保持する。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号２９に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、参照配列（例えば、配列番号２９）に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、ヒトＣＤ４０に結合する能力を保持する。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号２８に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、かつ配列番号２９に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、それぞれ配列番号２８及び２９として開示される重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、それぞれ配列番号２６及び２７として開示される重鎖及び軽鎖を含む。
Ｄ．例示的抗ＣＤ７０抗体
いくつかの実施形態では、非フコシル化抗ＣＤ７０抗体が、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体として本方法で使用するために提供される。いくつかの実施形態では、非フコシル化抗ＣＤ７０抗体は、米国特許第８，０６７，５４６号に記載のＳＥＡ－ＣＤ７０であり、配列番号５３～５８のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む。対応するＶＨ及びＶＬは、配列番号４１及び４２のアミノ酸配列をそれぞれ含む。ＣＤ７０分子は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）リガンドスーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）のメンバーであり、関連する受容体であるＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）に結合する。２つの分子間の相互作用は、両方の受容体からの細胞内シグナルを活性化する。通常状態では、ＣＤ７０の発現は一過性であり、活性化されたＴ細胞とＢ細胞、成熟樹状細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞に限定される。同様に、ＣＤ２７は、ナイーブ及び活性化エフェクターＴ細胞、ならびにＮＫ及び活性化Ｂ細胞の両方上に発現する。しかし、ＣＤ７０は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）などの様々な血液がん、及びがん腫でも異常に発現しており、腫瘍細胞の生存及び／または腫瘍免疫回避の両方に関与している。ＳＥＡ－ＣＤ７０は、ＣＤ７０／ＣＤ２７軸シグナル伝達を遮断し、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘発し、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を増強することによって作用する。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、以下のうちの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、または６）を含む：
配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；
配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；
配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列；
配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；
配列番号５７のアミノ酸を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び／または
配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号５７のアミノ酸を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列；配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、配列番号４１に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、参照配列（例えば、配列番号４１）に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、ヒトＣＤ７０に結合する能力を保持する。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、配列番号４２に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、参照配列（例えば、配列番号４２）に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、ヒトＣＤ７０に結合する能力を保持する。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、配列番号４１に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、かつ配列番号４２に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、それぞれ配列番号４１及び４２として開示される重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
Ｅ．例示的抗ＢＣＭＡ抗体
いくつかの実施形態では、非フコシル化抗ＢＣＭＡ抗体が、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体として本方法で使用するために提供される。いくつかの実施形態では、非フコシル化抗ＢＣＭＡ抗体は、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）を標的とする抗体であるＳＥＡ－ＢＣＭＡであり、配列番号４７～５２のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む。対応するＶＨ及びＶＬは、配列番号４５及び４６のアミノ酸配列をそれぞれ含む。ＢＣＭＡは、多発性骨髄腫（ＭＭ）で発現する。この抗体は、リガンド媒介ＢＣＭＡ細胞シグナル伝達、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、及び増強された抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を遮断することによって作用する。
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、以下のうちの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、または６）を含む：
配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；
配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；
配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列；
配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；
配列番号５１のアミノ酸を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び／または
配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列。
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号５１のアミノ酸を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列；配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号４５に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、参照配列（例えば、配列番号４５）に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、ヒトＢＣＭＡに結合する能力を保持する。
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号４６に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、参照配列（例えば、配列番号４６）に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、ヒトＢＣＭＡに結合する能力を保持する。
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号４５に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、かつ配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、それぞれ配列番号４５及び４６として開示される重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
Ｆ．増強されたＦＣ主鎖
上記のとおり、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、以下の活性のうちの１つ以上を有するＦｃを含む：１つ以上の活性化ＦｃγＲへの結合の増強；阻害性ＦｃγＲへの結合の減少；ＡＤＣＣ活性の増強；及び／またはＡＤＣＰ活性の増強。そのような活性及び所望の活性プロファイルを有するＦｃを有する抗体は、非フコシル化タンパク質の産生及び／または所望の活性をもたらす特定の変異を含むようにＦｃを操作することによるなど、様々な方法で生成することができる。このセクションでは、非フコシル化抗体を生成するための方法、及び例示的操作アプローチについて、さらなる詳細を示す。定常領域の選択及び抗体の製造に関する追加のガイダンスは、以下の他のセクションに記載する。
抗体は、定常領域中の保存された位置においてグリコシル化され得る（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ａｎｄ Ｌｕｎｄ，（１９９７）Ｃｈｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６５：１１１－１２８；Ｗｒｉｇｈｔ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，（１９９７）ＴｉｂＴＥＣＨ １５：２６－３２）。免疫グロブリンのオリゴ糖側鎖は、タンパク質の機能（Ｂｏｙｄ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１－１３１８；Ｗｉｔｔｗｅ ａｎｄ Ｈｏｗａｒｄ，（１９９０）Ｂｉｏｃｈｅｍ．２９：４１７５－４１８０）、及び糖タンパク質の立体構造に影響を与え得る糖タンパク質の部分と糖タンパク質の提示された三次元表面との間の分子内相互作用（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ａｎｄ Ｌｕｎｄ、上記；Ｗｙｓｓ ａｎｄ Ｗａｇｎｅｒ，（１９９６）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．７：４０９－４１６）に影響を与える。オリゴ糖はまた、特定の認識構造に基づいて、ある分子に特定の糖タンパク質を標的化する働きもし得る。例えば、アガラクトシル化ＩｇＧでは、オリゴ糖部分がＣＨ２間空間から「反転」し、末端のＮ－アセチルグルコサミン残基がマンノース結合タンパク質に結合できるようになることが報告されている（Ｍａｌｈｏｔｒａ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．１：２３７－２４３）。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞中で産生されたＣＡＭＰＡＴＨ－１Ｈ（ヒトリンパ球のＣＤｗ５２抗原を認識する組換えヒト化マウスモノクローナルＩｇＧ１抗体）からのオリゴ糖のグリコペプチダーゼによる除去は、補体媒介性溶解（ＣＭＣＬ）の完全な減少をもたらした（Ｂｏｙｄ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１－１３１８）が、ノイラミニダーゼを使用したシアル酸残基の選択的除去では、ＤＭＣＬは喪失しなかった。抗体のグリコシル化は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に影響を与えることも報告されている。特に、バイセクティングＧｌｃＮＡｃの形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼであるβ（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）のテトラサイクリン調節発現を有するＣＨＯ細胞は、ＡＤＣＣ活性を改善したことが報告された（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｍａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６－１８０）。
抗体のグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合またはＯ結合のいずれかである。Ｎ結合とは、アスパラギン残基の側鎖へ炭水化物部分が付着することを指す。トリペプチド配列であるアスパラギン－Ｘ－セリン及びアスパラギン－Ｘ－スレオニン（式中、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸である）は、炭水化物部分のアスパラギン側鎖への酵素結合の認識配列である。したがって、ポリペプチド中にこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在することにより、潜在的なグリコシル化部位が作製される。Ｏ結合グリコシル化とは、糖類であるＮ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはスレオニンへの結合を指すが、５－ヒドロキシプロリンまたは５－ヒドロキシリジンも使用され得る。
抗体のグリコシル化バリアントは、抗体のグリコシル化パターンが改変されたバリアントである。改変とは、抗体中に見られる１つ以上の炭水化物部分を欠失させること、抗体に１つ以上の炭水化物部分を付加すること、グリコシル化の組成（グリコシル化パターン）、グリコシル化の程度などを変更することを意味する。
抗体へのグリコシル化部位の付加は、アミノ酸配列を上述のトリペプチド配列のうちの１つ以上を含むように改変することによって達成され得る（Ｎ結合型グリコシル化部位の場合）。改変は、元の抗体の配列への１つ以上のセリンまたはスレオニン残基の付加、またはそれらによる置換によっても行われ得る（Ｏ結合型グリコシル化部位の場合）。同様に、グリコシル化部位の除去は、抗体の天然のグリコシル化部位内のアミノ酸改変によって達成することができる。
アミノ酸配列は、通常、基礎となる核酸配列を改変することによって改変される。これらの方法としては、天然源からの単離（天然に存在するアミノ酸配列バリアントの場合）または抗体の以前に調製されたバリアントまたは非バリアント型のオリゴヌクレオチド媒介（または部位特異的）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発、及びカセット変異誘発による調製が挙げられる。
抗体のグリコシル化（グリコシル化パターンを含む）は、アミノ酸配列または基礎となるヌクレオチド配列を改変することなく改変され得る。例えば、Ｐｅｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，２０１８，ＭＡｂｓ，１０（５）：６９３－７１１を参照されたい。グリコシル化は、抗体の発現に使用される宿主細胞に大きく依存する。潜在的な治療薬として、抗体などの組換え糖タンパク質の発現に使用される細胞型が天然細胞であることはめったにないため、抗体のグリコシル化パターンの有意な変動が予想される。例えば、Ｈｓｅ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：９０６２－９０７０を参照されたい。宿主細胞の選択に加えて、抗体の組換え産生中にグリコシル化に影響を与える因子としては、成長様式、培地配合、培養密度、酸素添加、ｐＨ、精製スキームなどが挙げられる。オリゴ糖産生に関与する特定の酵素の導入または過剰発現など、特定の宿主生物中で達成されるグリコシル化パターンを改変するために、様々な方法が提唱されている（米国特許第５０４７３３５号；同第５５１０２６１号；同第５２７８２９９号）。グリコシル化、または特定の種類のグリコシル化は、例えばエンドグリコシダーゼＨ（Ｅｎｄｏ Ｈ）を使用して、糖タンパク質から酵素的に除去することができる。さらに、組換え宿主細胞は、遺伝子操作することができ、例えば、特定の種類の多糖類のプロセシングを欠損させ得る。これら及び類似の技法は、当該技術分野で既知である。
抗体のグリコシル化構造は、レクチンクロマトグラフィー、ＮＭＲ、質量分析、ＨＰＬＣ、ＧＰＣ、単糖組成分析、逐次酵素消化、及び電荷に基づいてオリゴ糖を分離するために高ｐＨ陰イオン交換クロマトグラフィーを使用するＨＰＡＥＣ－ＰＡＤなど、炭水化物分析の従来の技術によって容易に分析できる。分析目的でオリゴ糖を放出するための方法も知られており、これらに限定されないが、酵素処理（通常、ペプチド－Ｎ－グリコシダーゼＦ／エンド－β－ガラクトシダーゼを使用して行われる）、過酷なアルカリ環境を使用して主にＯ結合構造を放出する脱離、及び無水ヒドラジンを使用してＮ及びＯ結合オリゴ糖の両方を放出する化学的方法が挙げられる。
抗体のグリコシル化の好ましい修飾形態は、コアフコシル化の減少である。「コアフコシル化」とは、Ｎ結合型グリカンの還元末端でのＮ－アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）へのフコースの付加（「フコシル化」）を指す。
「複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖」は、典型的にはアスパラギン２９７（Ｋａｂａｔのナンバーによる）に結合している。本明細書では、複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖とは、バイアンテナリー複合糖鎖を有し、主に以下の構造を有する：
Figure 2023548538000001
 ここで、±は、糖分子が存在するかまたは存在していないことを示し、数字は糖分子間の連結の位置を示す。上記構造において、アスパラギンと結合する糖鎖末端（右）を還元末端、反対側を非還元末端と呼ぶ。フコースは、通常、還元末端のＮ－アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）に、典型的にはα１，６結合（ＧｌｃＮＡｃの６位がフコースの１位に連結）によって結合している。「Ｇａｌ」はガラクトースを指し、「Ｍａｎ」はマンノースを指す。
「複合Ｎ－グリコシド結合糖鎖」には、以下を含む；１）複合型、ここでは、コア構造の非還元末端側が、ガラクトース－Ｎ－アセチルグルコサミン（「ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃ」ともいう）の０個または１個以上の分岐を有し、ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側が、任意によりシアル酸、バイセクティングＮ－アセチルグルコサミンなどを有する；及び２）ハイブリッド型、ここでは、コア構造の非還元末端側が、高マンノースＮ－グリコシド結合型糖鎖及び複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖の両方の分岐を有する。
本明細書で提供されるいくつかの方法では、少量のフコースのみが、抗体の複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖（複数可）に取り込まれる。例えば、様々な実施形態では、組成物中約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約３％未満の抗体がフコースによるコアフコシル化を有する。いくつかの実施形態では、組成物中約２％の抗体がフコースによるコアフコシル化を有する。様々な実施形態において、組成物中６０％未満の抗体がフコースによるコアフコシル化を有する場合には、組成物の抗体は「非フコシル化」または「アフコシル化」と称され得る。いくつかの実施形態では、組成物中少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の抗体が非フコシル化である。
ある実施形態では、少量のフコース類似体（またはフコース類似体の代謝産物または産物）のみが複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖（複数可）に取り込まれる。例えば、様々な実施形態では、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約３％未満の抗体がフコース類似体またはフコース類似体の代謝産物または産物によるコアフコシル化を有する。いくつかの実施形態では、抗体の約２％が、フコース類似体またはフコース類似体の代謝産物もしくは産物によるコアフコシル化を有する。
いくつかの実施形態では、組成物中約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約３％未満の抗体が、Ｇ０、Ｇ１、またはＧ２グリカン構造上にフコース残基を有する（例えば、Ｒａｊｕ ｅｔ ａｌ．，２０１２，ＭＡｂｓ ４：３８５－３９１，Ｆｉｇｕｒｅ ３を参照）。いくつかの実施形態では、組成物中約２％の抗体がＧ０、Ｇ１、またはＧ２グリカン構造上にフコース残基を有する。様々な実施形態において、組成物中６０％未満の抗体が、Ｇ０、Ｇ１、またはＧ２グリカン構造上にフコース残基を有する場合、組成物の抗体は「非フコシル化」と称され得る。いくつかの実施形態では、組成物中、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の抗体が、Ｇ０、Ｇ１、またはＧ２グリカン構造上にフコースを有しない。Ｇ０グリカンには、Ｇ０－ＧＮグリカンを含むことを留意されたい。Ｇ０－ＧＮグリカンは、１つの末端ＧｌｃＮＡｃ残基を有するモノアンテナグリカンである。Ｇ１グリカンには、Ｇ１－ＧＮグリカンを含む。Ｇ１－ＧＮグリカンは、１つの末端ガラクトース残基を有するモノアンテナグリカンである。Ｇ０－ＧＮ及びＧ１－ＧＮグリカンは、フコシル化または非フコシル化であり得る。
非フコシル化抗体を生成するためには、様々な方法を利用することができる。例示的な戦略は、フコシル化経路に関与する特定の生合成酵素を欠く細胞株の使用、またはフコシル化経路に関与する特定の遺伝子の阻害またはノックアウトが含まれる。このようなアプローチの概説は、Ｐｅｒｅｉｒａ，ｅｔ ａｌ．（２０１８）ＭＡＢＳ １０：６９３－７１１によって提供され、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
例えば、抗体産生細胞をフコース類似体とインキュベートすることによって非フコシル化抗体を作製する方法は、例えばＷＯ２００９／１３５１８１に記載されている。簡潔に言えば、該抗体を発現するように操作された細胞を、フコース類似体またはフコース類似体の細胞内代謝産物もしくは産物の存在下でインキュベートする。細胞内代謝産物は、例えば、ＧＤＰ修飾類似体または完全もしくは部分的に脱エステル化された類似体であり得る。産物は、例えば、完全にまたは部分的に脱エステル化された類似体であり得る。いくつかの実施形態では、フコース類似体は、フコースサルベージ経路における酵素（複数可）を阻害することができる。例えば、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝産物もしくは産物）は、フコキナーゼまたはＧＤＰ－フコース－ピロホスホリラーゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝産物もしくは産物）は、フコシルトランスフェラーゼ（好ましくは、１，６－フコシルトランスフェラーゼ、例えばＦＵＴ８タンパク質）を阻害する。いくつかの実施形態では、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝産物もしくは産物）は、フコースのｄｅ ｎｏｖｏ合成経路における酵素の活性を阻害することができる。例えば、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝産物もしくは産物）は、ＧＤＰ－マンノース４，６－デヒドラターゼまたはＧＤＰ－フコースシンテターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝産物もしくは産物）は、フコース輸送体（例えば、ＧＤＰ－フコース輸送体）を阻害することができる。
一実施形態では、フコース類似体は、２－フルオロフコースである。成長培地中のフコース類似体及び他のフコース類似体を使用する方法は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００９／１３５１８１に開示されている。
細胞株を操作してコアフコシル化を減少させるための他の方法としては、遺伝子ノックアウト、遺伝子ノックイン、及びＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）が挙げられる。例えば、Ｐｅｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，２０１８，ＭＡｂｓ，１０（５）：６９３－７１１を参照されたい。遺伝子ノックアウトでは、ＦＵＴ８（アルファ１，６－フコシルトランスフェラーゼ酵素）をコードする遺伝子が不活性化される。ＦＵＴ８は、ＧＤＰ－フコースからＮ－グリカンのＡｓｎ結合（Ｎ結合）ＧｌｃＮａｃの６位へのフコシル残基の転移を触媒する。ＦＵＴ８は、Ａｓｎ２９７でのＮ結合型バイアンテナリー炭水化物へのフコースの付加に関与する唯一の酵素であることが報告されている。遺伝子ノックインは、ＧＮＴＩＩＩまたはゴルジアルファマンノシダーゼＩＩなどの酵素をコードする遺伝子を付加する。細胞内においてそのような酵素のレベルが増加することにより、モノクローナル抗体をフコシル化経路からそらして（コアフコシル化の減少がもたらされる）、バイセクティングＮ－アセチルグルコサミンの量が増加する。ＲＮＡｉも、典型的には、ＦＵＴ８遺伝子発現を標的とし、ｍＲＮＡの転写レベルの低下、または遺伝子発現の完全なノックアウトなどをもたらす。
使用され得る他の戦略としては、ＧｌｙｃｏＭＡｂ（登録商標）（米国特許第６，６０２，６８４号）及びＰｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）（ＢｉｏＷａ）が挙げられる。
これらの方法のいずれかを使用して、非フコシル化抗体の産生が可能となる細胞株を生成することができる。
様々な工学的アプローチを利用して、所望のＦｃγＲ活性及びエフェクター機能を有するＦｃ領域を得ることもできる。いくつかの実施形態では、Ｆｃは、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅの変異の組み合わせを有するように操作し、これにより、ＦｃγＲＩＩＩＡに対するＦｃドメインの親和性を増大させ、結果としてＡＤＣＣを増加させる。ＦｃγＲＩＩＩａに対する親和性を増大させる追加の置換としては、例えば、Ｔ２５６Ａ、Ｋ２９０Ａ、Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ、及びＫ３３４Ａが挙げられる。活性化ＦｃγＲＩＩＩａへの結合を増強し、阻害性ＦｃγＲＩＩＩｂへの結合を減少させる置換としては、例えば、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ及びＦ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｌ２３５Ｖ／Ｐ３９６Ｌが挙げられる。いくつかの実施形態では、置換は、ＩｇＧ１ Ｆｃ主鎖中にある。
保存されたＡｓｎ２９７に共有結合により付着しているオリゴ糖は、ＩｇＧのＦｃ領域がＦｃγＲに結合する能力に関与している（Ｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：４９６３－６９；Ｗｒｉｇｈｔ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９９７，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：２６－３１）。このグリコフォームをＩｇＧ上で操作することにより、ＩｇＧ媒介ＡＤＣＣを顕著に改善できる。このグリコフォームへのバイセクティングＮ－アセチルグルコサミン修飾の付加（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：１７６－１８０；Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．７４：２８８－９４）、またはこのグリコフォームからのフコースの除去（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３－４０；Ｓｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：６５９１－６０４；Ｎｉｗａ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６４：２１２７－３３）は、ＩｇＧ ＦｃとＦｃγＲとの間の結合を改善し、それによってＩｇ媒介ＡＤＣＣ活性を増強するＩｇＧ Ｆｃ操作の２つの例である。
ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域の溶媒露出アミノ酸の全身的置換により、ＦｃγＲ結合親和性が変化したＩｇＧバリアントが生成される（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６０４）。親ＩｇＧ１と比較した場合、Ｔｈｒ２５６／Ｓｅｒ２９８、Ｓｅｒ２９８／Ｇｌｕ３３３、Ｓｅｒ２９８／Ｌｙｓ３３４、またはＳｅｒ２９８／Ｇｌｕ３３３／Ｌｙｓ３３４でのＡｌａへの置換を含むこれらのバリアントのサブセットは、ＦｃγＲに対する結合親和性及びＡＤＣＣ活性の両方の増大を示す（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６０４；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－４９）。
抗体でのフコシル化の量を決定するために、多くの方法が利用可能である。方法としては、例えば、ＰＬＲＰ－ＳクロマトグラフィーによるＬＣ－ＭＳ、エレクトロスプレーイオン化四重極ＴＯＦ ＭＳ、レーザー誘起蛍光によるキャピラリー電気泳動（ＣＥ－ＬＩＦ）、及び蛍光検出による親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）が挙げられる。
ＩＶ．例示的抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）
上記セクションでは、免疫調節に関与する標的（免疫細胞エンゲージャー）に結合する抗体の関連する態様について説明した。上記のとおり、本明細書で提供される方法のいくつかは、免疫細胞エンゲージャーに結合する抗体と組み合わせて、チューブリン破壊剤（例えば、アウリスタチン、例えばＭＭＡＥ及びＭＭＡＦなど）を含む抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）を投与することも含む。様々な実施形態において、抗体－薬物複合体は、細胞傷害剤にコンジュゲートされた抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞傷害剤は、チューブリン破壊剤である。いくつかの実施形態では、抗体は、腫瘍細胞上で発現する抗原を結合する。本明細書で提供される方法において利用されるＡＤＣに関するさらなる詳細は、このセクション及び以下の実施例で説明する。本明細書に記載のＡＤＣのいずれも、本明細書に記載の免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体のいずれかと組み合わせてもよい。
Ａ．例示的な標的抗原
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、腫瘍細胞上に発現した抗原を結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用されるＡＤＣは、細胞傷害剤にコンジュゲートされた抗体を含み、抗体は、５Ｔ４（ＴＰＢＧ）、ＡＤＡＭ－９、ＡＧ－７、ＡＬＫ、ＡＬＰ、ＡＭＨＲＩＩ、ＡＰＬＰ２、ＡＳＣＴ２、ＡＶＢ６、ＡＸＬ（ＵＦＯ）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４、ＢＣＭＡ、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ４．４ａ（ＬＹＰＤ３）、Ｃ５、Ｃ５ａ、ＣＡ６、ＣＡ９、ＣａｎＡｇ、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、カテプシンＤ、ＣＣＲ７、ＣＤ１、ＣＤ１０、ＣＤ１００、ＣＤ１０１、ＣＤ１０２、ＣＤ１０３、ＣＤ１０４、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１０７ｂ、ＣＤ１０８、ＣＤ１０９、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３、ＣＤ１１６、ＣＤ１１７、ＣＤ１１８、ＣＤ１１９、ＣＤ１１Ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２０ａ、ＣＤ１２１ａ、ＣＤ１２１ｂ、ＣＤ１２２、ＣＤ１２３、ＣＤ１２４、ＣＤ１２５、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤ１３、ＣＤ１３０、ＣＤ１３１、ＣＤ１３２、ＣＤ１３３、ＣＤ１３５、ＣＤ１３６、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１４、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ１４０ｂ、ＣＤ１４１、ＣＤ１４２、ＣＤ１４３、ＣＤ１４４、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５、ＣＤ１５０、ＣＤ１５１、ＣＤ１５４、ＣＤ１５５、ＣＤ１５６ａ、ＣＤ１５６ｂ、ＣＤ１５６ｃ、ＣＤ１５７、ＣＤ１５８ｂ２、ＣＤ１５８ｅ、ＣＤ１５８ｆ１、ＣＤ１５８ｈ、ＣＤ１５８ｉ、ＣＤ１５９ａ、ＣＤ１６、ＣＤ１６０、ＣＤ１６１、ＣＤ１６２、ＣＤ１６３、ＣＤ１６４、ＣＤ１６６、ＣＤ１６７ｂ、ＣＤ１６９、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ１７０、ＣＤ１７１、ＣＤ１７２ａ、ＣＤ１７２ｂ、ＣＤ１７２ｇ、ＣＤ１８、ＣＤ１８０、ＣＤ１８１、ＣＤ１８３、ＣＤ１８４、ＣＤ１８５、ＣＤ１９、ＣＤ１９４、ＣＤ１９７、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２００、ＣＤ２０１、ＣＤ２０２ｂ、ＣＤ２０３ｃ、ＣＤ２０４、ＣＤ２０５、ＣＤ２０６、ＣＤ２０８、ＣＤ２１、ＣＤ２１３ａ１、ＣＤ２１３ａ２、ＣＤ２１７、ＣＤ２１８ａ、ＣＤ２２、ＣＤ２２０、ＣＤ２２１、ＣＤ２２２、ＣＤ２２４、ＣＤ２２６、ＣＤ２２８、ＣＤ２２９、ＣＤ２３、ＣＤ２３０、ＣＤ２３２、ＣＤ２３９、ＣＤ２４３、ＣＤ２４４、ＣＤ２４８、ＣＤ２４９、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２６５、ＣＤ２６７、ＣＤ２６９、ＣＤ２７、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７９、ＣＤ２８、ＣＤ２８０、ＣＤ２８１、ＣＤ２８２、ＣＤ２８３、ＣＤ２８４、ＣＤ２８９、ＣＤ２９、ＣＤ２９４、ＣＤ２９５、ＣＤ２９８、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３０、ＣＤ３００ｆ、ＣＤ３０２、ＣＤ３０４、ＣＤ３０５、ＣＤ３０７、ＣＤ３１、ＣＤ３１２、ＣＤ３１５、ＣＤ３１６、ＣＤ３１７、ＣＤ３１８、ＣＤ３１９、ＣＤ３２、ＣＤ３２１、ＣＤ３２２、ＣＤ３２４、ＣＤ３２５、ＣＤ３２６、ＣＤ３２７、ＣＤ３２８、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３３１、ＣＤ３３２、ＣＤ３３３、ＣＤ３３４、ＣＤ３３７、ＣＤ３３９、ＣＤ３４、ＣＤ３４０、ＣＤ３４４、ＣＤ３５、ＣＤ３５２、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ３ｄ、ＣＤ３ｇ、ＣＤ４、ＣＤ４１、ＣＤ４２ｄ、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５、ＣＤ５０、ＣＤ５１、ＣＤ５１（インテグリンアルファ－Ｖ）、ＣＤ５２、ＣＤ５３、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６、ＣＤ６１、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ６６ａ－ｅ、ＣＤ６７、ＣＤ６８、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ７０、ＣＤ７０Ｌ、ＣＤ７１、ＣＤ７１（ＴｆＲ）、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８、ＣＤ８０、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５ｆ、ＣＤ８５ｉ、ＣＤ８５ｊ、ＣＤ８６、ＣＤ８７、ＣＤ８９、ＣＤ９０、ＣＤ９１、ＣＤ９２、ＣＤ９５、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９８、ＣＤＨ６、ＣＤＨ６（カドヘリン６）、ＣＤｗ２１０ａ、ＣＤｗ２１０ｂ、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＦＣ１Ｂ、ｃＫＩＴ、ＣＬＤＮ１８．２（クローディン１８．２）、ＣＬＤＮ６、ＣＬＤＮ９、ＣＬＬ－１、ｃ－ＭＥＴ、補体因子Ｃ３、Ｃｒｉｐｔｏ、ＣＳＰ－１、ＣＸＣＲ５、ＤＣＬＫ１、ＤＬＫ－１、ＤＬＬ３、ＤＰＥＰ３、ＤＲ５（デスレセプター５）、Ｄｙｓａｄｈｅｒｉｎ、ＥＦＮＡ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ野生型、ＥＧＦＲｖｉｉｉ、ＥＧＰ－１（ＴＲＯＰ－２）、ＥＧＰ－２、ＥＭＰ２、ＥＮＰＰ３、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、エフリン－Ａ４（ＥＦＮＡ４）、ＥＴＢＲ、ＦＡＰ、ＦｃＲＨ５、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＬＴ３、ＦＯＬＲ、ＦＯＬＲ１、ＦＯＬＲ－アルファ、ＦＳＨ、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＤ３、ｇｌｏｂｏ Ｈ、ＧＰＣ１、ＧＰＣ－１、ＧＰＣ３、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ２０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ－２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ－３、ＨＧＦＲ（ｃ－Ｍｅｔ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＭ１．２４、ＨＳＰ９０、Ｉａ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１５、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ７Ｒ、インテグリンアルファＶベータ３（インテグリンαＶβ３）、インテグリンベータ－６、インターロイキン－４受容体（ＩＬ４Ｒ）、ＫＡＡＧ－１、ＫＬＫ２、ＬＡＭＰ－１、Ｌｅ（ｙ）、ルイスＹ抗原、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＬＧＲ５、ＬＨ／ｈＣＧ、ＬＨＲＨ、脂質ラフト、ＬＩＶ－１（ＳＬＣ３９Ａ６またはＺＩＰ６）、ＬＲＰ－１、ＬＲＲＣ１５、ＬＹ６Ｅ、マクロファージマンノース受容体１、ＭＡＧＥ、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＭＥＴ、ＭＨＣクラスＩ鎖関連タンパク質Ａ及びＢ（ＭＩＣＡ及びＭＩＣＢ）、ＭＮ／ＣＡＩＸ、ＭＲＣ２、ＭＴ１－ＭＭＰ、ＭＴＸ３、ＭＴＸ５、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５、ＭＵＣ５ａｃ、ＮａＰｉ２ｂ、ＮＣＡ－９０、ＮＣＡ－９５、ネクチン－４、Ｎｏｔｃｈ３、ヌクレオリン、ＯＡｃＧＤ２、ＯＴ－ＭＵＣ１（ｏｎｃｏ－ｔｅｔｈｅｒｅｄ－ＭＵＣ１）、ＯＸ００１Ｌ、Ｐ１ＧＦ、ＰＡＭ４抗原、ｐ－カドヘリン（カドヘリン３）、ＰＤ－Ｌ１、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＰＲＬＲ、プロラクチン受容体（ＰＲＬＲ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ４、ＰＴＫ７、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）、ＲＮＦ４３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＡＩＬ、ＳＥＺ６、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＬＩＴＲＫ６、ＳＬＭＡＭＦ７（ＣＳ１）、ＳＬＴＲＫ６、ソルチリン（ＳＯＲＴ１）、ＳＳＥＡ－４、ＳＳＴＲ２、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（抗生物質）、ＳＴＥＡＰ－１、ＳＴＩＮＧ、ＳＴｎ、Ｔ１０１、ＴＡＡ、ＴＡＣ、ＴＤＧＦ１、テネイシン、ＴＥＮＢ２、ＴＧＦ－Ｂ、Ｔｈｏｍｓｏｎ－Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原、Ｔｈｙ１．１、ＴＩＭ－１、組織因子（ＴＦ；ＣＤ１４２）、ＴＭ４ＳＦ１、Ｔｎ抗原、ＴＮＦ－アルファ（ＴＮＦα）、ＴＲＡ－１－６０、ＴＲＡＩＬ受容体（Ｒ１及びＲ２）、ＴＲＯＰ－２、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）、ｕＰＡＲ、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ－２、及びｘＣＴから選択される抗原を特異的に結合する。
いくつかの実施形態は、ＡＤＣは、ＥＧＦＲ、ＫＡＡＧ１、ＭＥＴ、ＣＤ３０、ＨＥＲ２、ＣＤ３０、ＩＬ７Ｒ、ＣＤ２４８、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）、ＭＲＣ２、ＥＧＦＲ、ＣＤ７１、ＴＲＡ－１－６０、ＳＴｎ、ＣＬＤＮ１８．２、ＣＬＤＮ６、ＨＥＲ－２、ＣＤ３３、ＣＤ７、ＯＴ－ＭＵＣ１（ｏｎｃｏ－ｔｅｔｈｅｒｅｄ－ＭＵＣ１）、ＴＲＡ－１－６０、ＴＩＭ－１、ＧＣＣ、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＥＧＦＲ、ｇｐＮＭＢ、ＣＤ２０、ＡＭＨＲＩＩ、ＮａＰｉ２ｂ、ＣＤ１４２、ＲＯＲ１、インテグリンベータ－６、Ｌｙ６Ｅ、ｃＭＥＴ、ＣＤ３７、ＭＵＣ１６、ＳＴＥＡＰ－１、ＬＲＲＣ１５、ＳＬＩＴＲＫ６、ＭＵＣ１６、ＥＴＢＲ、ＦＣＲＨ５、Ａｘｌ、ＣＤ７９ｂ、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、ＳＬＡＭＦ７、ＰＳＭＡ、ＣＤ２２、ＣＤ２２８、ＣＤ４８、ＬＩＶ－１、ＥｐｈＡ２、ＳＬＣ４４Ａ４、ＣＡ９、Ａｘｌ、及びＬＧＲ５から選択される抗原を結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＢＣＭＡ、ＧＰＣ１、ＣＤ３０、ｃＭＥＴ、ＳＡＩＬ、ＨＥＲ３、ＣＤ７０、ｃ－ＭＥＴ、ＣＤ４６、ＨＥＲ２、５Ｔ４、ＥＮＰＰ３、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＢＣＭＡ、ＣＤ７０、ＢＣＭＡ、及びＥｐｈＡ２から選択される抗原を結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、Ｈｅｒ２、ＴＲＯＰ２、ＢＣＭＡ、ｃＭｅｔ、インテグリンアルファＶベータ６（インテグリンαＶβ６）、ＣＤ２２、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ３０、ＣＤ１９、ＣＤ７０、ＣＤ２２８、及びＣＤ４７から選択される抗原を結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＣＤ１４２、インテグリンベータ－６、ＥＮＰＰ３、ＣＤ１９、Ｌｙ６Ｅ、ｃＭＥＴ、Ｃ４．４ａ、ＣＤ３７、ＭＵＣ１６、ＳＴＥＡＰ－１、ＬＲＲＣ１５、ＳＬＩＴＲＫ６、ＭＵＣ１６、ＥＴＢＲ、ＦＣＲＨ５、Ａｘｌ、ＥＧＦＲ、ＣＤ７９ｂ、ＢＣＭＡ、ＣＤ７０、ＰＳＭＡ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２２８、ＣＤ４８、ＬＩＶ－１、ＥｐｈＡ２、ＳＬＣ４４Ａ４、ＣＤ３０、及びｓＴｎから選択される抗原を結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、５Ｔ４、ＡＤＡＭ－９、ＡＧ－７、ＡＬＫ、ＡＭＨＲＩＩ、ＡＰＬＰ２、ＡＳＣＴ２、Ａｘｌ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＣＭＡ、Ｃ４．４ａ、ＣＡ６、ＣＡ９、ＣａｎＡｇ、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、カテプシンＤ、ＣＣＲ７、ＣＤ１０３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１４７、ＣＤ１６、ＣＤ１６６、ＣＤ１８４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２０５、ＣＤ２０６、ＣＤ２２、ＣＤ２２８、ＣＤ２４８、ＣＤ２５、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３０、ＣＤ３００ｆ、ＣＤ３１７、ＣＤ３３、ＣＤ３５２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ５１、ＣＤ５６、ＣＤ７、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤＨ６、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、ｃＫＩＴ、ＣＬＤＮ１８．２、ＣＬＤＮ６、ＣＬＤＮ９、ＣＬＬ－１、ｃ－ＭＥＴ、Ｃｒｉｐｔｏ、ＣＳＰ－１、ＣＸＣＲ５、ＤＣＬＫ１、ＤＬＫ－１、ＤＬＬ３、ＤＰＥＰ３、ＤＲ５（デスレセプター５）、Ｄｙｓａｄｈｅｒｉｎ、ＥＦＮＡ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ野生型、ＥＧＦＲｖｉｉｉ、ＥＭＰ２、ＥＮＰＰ３、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥＴＢＲ、ＦＡＰ、ＦＣＲＨ５、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＬＴ３、ＦＯＬＲ、ＦＯＬＲ－アルファ、ＦＳＨ、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、ＧＰＣ－１、ＧＰＣ３、ｇｐＮＭＢ、ＧＰＲ２０、ＨＥＲ－２、ＨＥＲ－３、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＳＰ９０、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１５、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ７Ｒ、インテグリンベータ－６、インターロイキン－４受容体（ＩＬ４Ｒ）、ＫＡＡＧ－１、ＫＬＫ２、ＬＡＭＰ－１、ＬｅｗｉｓＹ抗原、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＬＧＲ５、ＬＨ／ｈＣＧ、ＬＨＲＨ、脂質ラフト、ＬＩＶ－１、ＬＲＰ－１、ＬＲＲＣ１５、Ｌｙ６Ｅ、マクロファージマンノース受容体１、ＭＡＧＥ、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＭＥＴ、ＭＨＣクラスＩ鎖関連プロテインＡ及びＢ（ＭＩＣＡ及びＭＩＣＢ）、ＭＲＣ２、ＭＴ１－ＭＭＰ、ＭＴＸ３、ＭＴＸ５、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ１６、ＮａＰｉ２ｂ、ネクチン－４、ＮＯＴＣＨ３、ヌクレオリン、ＯＡｃＧＤ２、ＯＴ－ＭＵＣ１（ｏｎｃｏ－ｔｅｔｈｅｒｅｄ－ＭＵＣ１）、ＯＸ００１Ｌ、Ｐ－カドヘリン、ＰＤ－Ｌ１、ホスファチジルセリン、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、プロラクチン受容体（ＰＲＬＲ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）、ＲＮＦ４３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＡＩＬ、ＳＥＺ６、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＬＩＴＲＫ６、ソルチリン（ＳＯＲＴ１）、ＳＳＥＡ－４、ＳＳＴＲ２、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（抗生物質）、ＳＴＥＡＰ－１、ＳＴＩＮＧ、ＳＴＩＮＧ（ペイロード標的）、ＳＴｎ、ＴＡＡ、ＴＧＦ－Ｂ、ＴＩＭ－１、ＴＭ４ＳＦ１、ＴＮＦ－ａｌｐｈａ、ＴＲＡ－１－６０、ＴＲＯＰ－２、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）、ＶＥＧＦＲ－２、ｘＣＴから選択される抗原を結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＡＭＨＲＩＩ、Ａｘｌ、ＣＡ９、ＣＤ１４２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２２８、ＣＤ２４８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ７、ＣＤ４８、ＣＤ７１、ＣＤ７９ｂ、ＣＬＤＮ１８．２、ＣＬＤＮ６、ｃ－ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＡ２、ＥＴＢＲ、ＦＣＲＨ５、ＧＣＣ、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、ｇｐＮＭＢ、ＨＥＲ－２、ＩＬ７Ｒ、インテグリンベータ－６、ＫＡＡＧ－１、ＬＧＲ５、ＬＩＶ－１、ＬＲＲＣ１５、Ｌｙ６Ｅ、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＭＥＴ、ＭＲＣ２、ＭＵＣ１６、ＮａＰｉ２ｂ、ネクチン－４、ＯＴ－ＭＵＣ１（ｏｎｃｏ－ｔｅｔｈｅｒｅｄ－ＭＵＣ１）、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＬＩＴＲＫ６、ＳＴＥＡＰ－１、ＳＴｎ、ＴＩＭ－１、ＴＲＡ－１－６０、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）から選択される抗原を結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＢＣＭＡ、ＧＰＣ－１、ＣＤ３０、ｃ－ＭＥＴ、ＳＡＩＬ、ＨＥＲ－３、ＣＤ７０、ＣＤ４６、ＨＥＲ－２、５Ｔ４、ＥＮＰＰ３、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＡ２から選択される抗原を結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣの抗体は、ネクチン－４に結合しない。
典型的には、ＡＤＣの抗体と免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体とは、２つの別個の抗体である。しかし、ある実施形態では、抗体は、二重特異性抗体を形成し得る。
Ｂ．例示的な細胞傷害剤
様々な実施形態において、本明細書で提供される方法は、抗体－薬物複合体を投与することを含み、抗体－薬物複合体は、チューブリン破壊剤にコンジュゲートされた抗体を含む。
ドラスタチン、アウリスタチン、チューブリシン、コルヒチン、ビンカアルカロイド、タキサン、Ｔ６７（Ｔｕｌａｒｉｋ）、クリプトフィシン、メイタンシノイド、ヘミアステリン、及び他のチューブリン破壊剤を含むがこれらに限定されない、様々なカテゴリーのチューブリン破壊剤が当該分野で知られている。
アウリスタチンは、天然物ドラスタチンの誘導体である。例示的アウリスタチンとしては、ドロスタチン－１０、アウリスタチンＥ、アウリスタチンＴ、ＭＭＡＥ（Ｎ－メチルバリン－バリン－ドライソロイイン－ドラプロイン－ノルエフェドリンまたはモノメチルアウリスタチンＥ）及びＭＭＡＦ（Ｎ－メチルバリン－バリン－ドライソロイイン－ドラプロイン－フェニルアラニンまたはドバリン－バリン－ドライソロイイン－ドラプロイン－フェニルアラニン）、ＡＥＢ（アウリスタチンＥとパラアセチル安息香酸との反応により生成するエステル）、ＡＥＶＢ（アウリスタチンＥとベンゾイル吉草酸の反応により生成するエステル）、及びＡＦＰ（ジメチルバリン－バリン－ドライソロイイン－ドラプロイン－フェニルアラニン－ｐ－フェニレンジアミンまたはアウリスタチンフェニルアラニンフェニレンジアミン）が挙げられる。ＷＯ２０１５／０５７６９９は、ＭＭＡＥを含むＰＥＧ化アウリスタチンについて記載している。使用が企図されている追加のドロスタチン誘導体は、任意の目的のために参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，３４５，７８５号に開示されている。例示的アウリスタチンの実施形態としては、２００４年３月２８日に発表された「Ｓｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅ４５，Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｕｍｂｅｒ ６２３」に開示され、米国特許公開第２００５／０２３８６４９号に記載された、Ｎ末端結合モノメチルアウリスタチン薬物ユニットＤＥ及びＤＦが挙げられ、その開示は、その全体が参照により明示的に組み込まれる。
ある実施形態では、ＡＤＣ細胞傷害剤は、ＭＭＡＥである。
他の実施形態では、ＡＤＣにコンジュゲートされた細胞傷害剤は、ＭＭＡＦである。
チューブリシンとしては、チューブリシンＤ、チューブリシンＭ、チューブフェニルアラニン及びチューブチロシンが挙げられるが、これらに限定されない。ＷＯ２０１７－０９６３１１及びＷＯ２０１６－０４０６８４は、チューブリシンＭなど、非限定的なチューブリシン類似体について記載している。
コルヒチンとしては、これらに限定されないが、コルヒチン及びＣＡ－４が挙げられる。
ビンカアルカロイドとしては、これらに限定されないが、ビンブラスチン（ＶＢＬ）、ビノレルビン（ＶＲＬ）、ビンクリスチン（ＶＣＲ）及びｖｉｎｄｆｅｓｉｎｅ（ＶＤＳ）が挙げられる。
タキサンとしては、これらに限定されないが、Ｔａｘｏｌ（登録商標）（パクリタキセル）及びＴａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）（ドセタキセル）が挙げられる。
クリプトフィシンとしては、これらに限定されないが、クリプトフィシン－１及びクリプトフィシン－５２が挙げられる。
メイタンシノイドとしては、これらに限定されないが、メイタンシン、メイタンシノール、メイタンシン類似体、ＤＭ１、ＤＭ３及びＤＭ４、ならびにアンサマトシン－２が挙げられる。例示的なメイタンシノイド薬物部分としては、修飾された芳香環を有するもの、例えば、Ｃ－１９－デクロロ（米国特許第４，２５６，７４６号）（アンサマイトシンＰ２の水素化アルミニウムリチウム還元により調製）；Ｃ－２０－ヒドロキシ（またはＣ－２０－デメチル）＋／－Ｃ－１９－デクロロ（米国特許第４，３６１，６５０号及び第４，３０７，０１６号）（ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓまたはＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓを使用した脱メチル化またはＬＡＨを使用した脱塩素化により調製）；及びＣ－２０－デメトキシ、Ｃ－２０－アシルオキシ（－ＯＣＯＲ）、＋／－デクロロ（米国特許第４，２９４，７５７号）（塩化アシルを使用したアシル化により調製）、及び他の位置に修飾を有するものが挙げられる。
メイタンシノイド薬物部分には、修飾を有するもの、例えば、Ｃ－９－ＳＨ（米国特許第４，４２４，２１９号）（メイタンシノールとＨ．ｓｕｂ．２５またはＰ．ｓｕｂ．２Ｓ．ｓｕｂ．５との反応によって調製される）；Ｃ－１４－アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ．ｓｕｂ．２０Ｒ）（米国特許第４，３３１，５９８号）；Ｃ－１４－ヒドロキシメチルまたはアシルオキシメチル（ＣＨ．ｓｕｂ．２０ＨまたはＣＨ．ｓｕｂ．２ＯＡｃ）（米国特許第４，４５０，２５４号）（Ｎｏｃａｒｄｉａから調製）；Ｃ－１５－ヒドロキシ／アシルオキシ（米国特許第４，３６４，８６６号）（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓによるメイタンシノールの変換により調製）；Ｃ－１５－メトキシ（米国特許第４，３１３，９４６号及び第４，３１５，９２９号）（Ｔｒｅｗｉａ ｎｕｄｌｆｌｏｒａから単離）；Ｃ－１８－Ｎ－デメチル（米国特許第４，３６２，６６３号及び第４，３２２，３４８号）（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓによるメイタンシノールの脱メチル化により調製）；及び４，５－デオキシ（米国特許第４，３７１，５３３号）（メイタンシノールの三塩化チタン／ＬＡＨ還元により調製）も含まれる。ＨＥＲ－２を結合するＴＡ．１－メイタンソノイド複合体の細胞毒性（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：１２７－１３１（１９９２）は、ヒト乳癌細胞株ＳＫ－ＢＲ－３に対してｉｎ ｖｉｔｒｏで試験した。薬物複合体は、遊離メイタンシノイド薬物と同様の細胞傷害度を達成し、１抗体分子あたりのメイタンシノイド分子の数を増加させることによって増大させることができた。
ヘミアステリンとしては、これらに限定されないが、ヘミアステリン及びＨＴＩ－２８６が挙げられる。
他のチューブリン破壊剤としては、タッカロノリドＡ、タッカロノリドＢ、タッカロノリドＡＦ、タッカロノリドＡＪ、タッカロノリドＡＩ－エポキシド、ディスコデルモライド、バッカチン誘導体、タキサン類似体（例えば、エポチロンＡ及びエポチロンＢ）、ノコダゾール、コルヒチン、コルシミド（ｃｏｌｃｉｍｉｄ）、エストラムスチン、ｃｅｍａｄｏｔｉｎ、コンブレタスタチン、ディスコデルモライド、エレウテロビン、エリブリン、ｐｒｏｌａｂｏｌｉｎ、フォモプシン、及びラウリマリドが挙げられる。
本明細書の方法で使用するためのＡＤＣは、いくつかの実施形態では、リンカーユニットを含み得る。例えば、ＡＤＣは、細胞傷害剤と抗体との間にリンカー領域を含み得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、プロテアーゼ切断可能リンカー、酸切断可能リンカー、ジスルフィドリンカー、または自己安定化リンカーである。様々な実施形態において、リンカーは、リンカーの切断が細胞内環境において抗体から治療剤を放出するように、細胞内条件下で切断可能である。
本明細書の方法で使用するためのＡＤＣは、リンカーを含んでもよく、ここで治療剤（例えば、チューブリン破壊剤）は、抗体から（例えば、加水分解、抗体分解、または切断剤によって）分離されない限り、その活性を低下させる方法で抗体にコンジュゲートすることができる。そのような治療剤は、リンカーを介して抗体に付着させ得る。リンカーにコンジュゲートさせた治療剤は、本明細書では薬物リンカーとも呼ばれる。リンカーの性質は、大きく異なり得る。リンカーを構成する成分は、コンジュゲートが送達される部位における条件によって部分的に決定され得るそれらの特性に基づいて選択される。
治療剤は、標的細胞の細胞内環境での切断に感受性が高いが、細胞外環境には実質的に感受性ではない切断可能なリンカーを用いて抗体に付着させることができる。これにより、複合体が、がん細胞によって内在化されたときに（例えば、エンドソーム内において、または、例えばｐＨ感受性またはプロテアーゼ感受性により、リソソーム環境内において、またはカベオラ環境内において）、抗体から切断されるようになる。治療剤はまた、切断不可能なリンカーを用いて抗体に付着させ得る。
示されるように、リンカーは、切断可能ユニットを含み得る。いくつかのそのような実施形態では、切断可能ユニットの構造及び／または配列は、標的部位（例えば、標的細胞）に存在する酵素の作用によって切断されるように選択される。他の実施形態では、ｐＨの変化（例えば、酸または塩基に不安定）、温度、または照射（例えば、光に不安定）によって切断可能な切断可能ユニットも使用することができる。
いくつかの実施形態では、切断可能ユニットは、１つのアミノ酸またはアミノ酸の連続配列を含み得る。アミノ酸配列は、酵素の標的基質であり得る。
いくつかの態様では、切断可能ユニットは、ペプチジルユニットであり、少なくとも２アミノ酸長である。切断剤としては、カテプシンＢ及びＤならびにプラスミンが含まれ得る（例えば、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，１９９９，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ８３：６７－１２３を参照されたい）。最も典型的なものは、標的細胞中に存在する酵素によって切断可能な切断可能ユニット、すなわち酵素切断可能リンカーである。したがって、このリンカーは、リソソームまたはエンドソームプロテアーゼなどの細胞内ペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素によって切断され得る。例えば、がん性組織中で高度に発現するチオール依存性プロテアーゼであるカテプシン－Ｂによって切断可能なリンカー（例えば、Ｐｈｅ－ＬｅｕまたはＶａｌ－ＣｉｔペプチドまたはＶａｌ－Ａｌａペプチドを含むリンカー）を使用することができる。
いくつかの実施形態では、リンカーは、切断可能ユニット（例えば、ペプチジルユニット）を含み、切断可能ユニットは、治療剤に直接コンジュゲートされる。他の実施形態では、切断可能ユニットは、追加の機能ユニット、例えば自己犠牲スペーサーユニットまたは非自己犠牲スペーサーユニットを介して、治療剤にコンジュゲートされる。非自己犠牲スペーサーユニットは、抗体－薬物複合体から切断可能ユニット（例えば、アミノ酸）の切断後、スペーサーユニットの一部または全部が薬物ユニットに結合したままであるユニットである。薬物を遊離させるために、独立した加水分解反応が標的細胞内で起こり、薬物からスペーサーユニットを切断する。
自己犠牲スペーサーユニットを使用することにより、別の加水分解ステップに薬物を必要とすることなく、薬物が放出される。リンカーが切断可能ユニット及び自己犠牲基を含む一実施形態では、切断可能ユニットは、酵素の作用によって切断可能であり、切断可能ユニットの切断後、自己犠牲基（複数可）が、治療剤を放出する。いくつかの実施形態では、リンカーの切断可能ユニットは、一方の端で治療剤に直接または間接的にコンジュゲートし、他方の端で抗体に直接または間接的にコンジュゲートする。いくつかのそのような実施形態では、切断可能ユニットは、一方の端で治療剤に直接的または間接的に（例えば、自己犠牲または非自己犠牲スペーサーユニットを介して）コンジュゲートし、他方の端でストレッチャーユニットを介して抗体にコンジュゲートする。ストレッチャーユニットは、抗体を残りの薬物及び／または薬物リンカーに連結する。一実施形態では、抗体と残りの薬物または薬物リンカーとの間の接続は、マレイミド基を介して、例えばマレイミドカプロイルリンカーを介して行われる。いくつかの実施形態では、抗体は、ジスルフィドを介して薬物に連結される（例えば、ジスルフィド連結メイタンシノイドコンジュゲートＳＰＤＢ－ＤＭ４及びＳＰＰ－ＤＭ１）。
抗体とリンカーとの間の接続は、複数の異なる経路、例えば、チオエーテル結合、ジスルフィド結合、アミド結合、またはエステル結合を介することができる。一実施形態では、抗体とリンカーとの間の接続は、抗体のシステイン残基のチオール基とリンカーのマレイミド基との間で形成される。いくつかの実施形態では、抗体の鎖間結合は、リンカーの官能基との反応前に遊離チオール基に変換される。いくつかの実施形態では、システイン残基は、抗体の重鎖または軽鎖に導入され、リンカーと反応する。抗体の重鎖または軽鎖における置換によるシステイン挿入の位置には、公開された米国特許出願第２００７－００９２９４０号及び国際特許公開第ＷＯ２００８０７０５９３号に記載されているものが含まれ、これらのそれぞれは、その全体がすべての目的で参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、抗体－薬物複合体は、以下の式Ｉを有する：
Ｌ－（ＬＵ－Ｄ）ｐ （Ｉ）
式中、Ｌは、抗体、ＬＵは、リンカーユニット、Ｄは、薬物ユニット（すなわち治療剤）である。下付き文字ｐの範囲は、１～２０である。そのような複合体は、リンカーを介して少なくとも１つの薬物に共有結合により連結された抗体を含む。リンカーユニットは、一方の端が抗体に、他方の端が薬物に接続されている。
薬物負荷は、抗体あたりの薬物分子の数であり、ｐによって表される。薬物負荷は、１抗体あたり１～２０個の薬物ユニット（Ｄ）の範囲であり得る。いくつかの態様では、下付き文字ｐは、１～２０までの範囲である（すなわち、１～２０までの整数値及び非整数値の両方）。いくつかの態様では、下付き文字ｐは、１～２０までの整数であり、１つの抗体上の薬物－リンカーの数を表す。他の態様では、ｐは、１抗体あたりの薬物－リンカー分子の平均数、例えば、反応混合物または組成物（例えば、医薬組成物）中の１抗体あたりの薬物－リンカーの平均数を表し、整数値または非整数値であり得る。したがって、いくつかの態様では、組成物（例えば、医薬組成物）について、ｐは、組成物中の抗体－薬物複合体の平均薬物負荷を表し、ｐは、１～２０の範囲である。
いくつかの実施形態では、ｐは、１抗体あたり約１～約８の薬物である。いくつかの実施形態では、ｐは１である。いくつかの実施形態では、ｐは２である。いくつかの実施形態では、ｐは１抗体あたり約２～約８の薬物である。いくつかの実施形態では、ｐは、１抗体あたり約２～約６、２～約５、または２～約４の薬物である。いくつかの実施形態では、ｐは、１抗体あたり約２、約４、約６または約８の薬物である。
複合反応からの調製物中の抗体ユニットあたりの薬物の平均数は、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、ＨＩＣ、及びＨＰＬＣなどの従来の手段によって特徴付けることができる。ｐによる複合体の定量的分布もまた、決定することができる。
例示的な抗体－薬物複合体には、アウリスタチンベースの抗体－薬物複合体、すなわち、薬物成分がアウリスタチン薬物である複合体が含まれる。アウリスタチンは、チューブリンを結合し、微小管ダイナミクスと核及び細胞分裂に干渉することが示され、抗がん活性を有する。通常、アウリスタチンベースの抗体－薬物複合体は、アウリスタチン薬物と抗体との間にリンカーを含む。アウリスタチンは、リンカーへの結合に好適である任意の位置で抗体に連結することができる。リンカーは、例えば、切断可能なリンカー（例えば、ペプチジルリンカー）または切断不可能なリンカー（例えば、抗体の分解によって放出されるリンカー）であり得る。アウリスタチンは、アウリスタチンＥまたはその誘導体であり得る。アウリスタチンは、例えば、アウリスタチンＥとケト酸との間で形成されるエステルであり得る。例えば、アウリスタチンＥは、パラアセチル安息香酸またはベンゾイル吉草酸と反応して、それぞれＡＥＢ及びＡＥＶＢを生成することができる。他の典型的なアウリスタチンとしては、ＭＭＡＦ（モノメチルアウリスタチンＦ）、及びＭＭＡＥ（モノメチルアウリスタチンＥ）が挙げられる。例示的なアウリスタチンの合成及び構造は、米国特許または公開第７，６５９，２４１号、第７，４９８，２９８号、第２００９－０１１１７５６号、第２００９－００１８０８６号、及び第７，９６８，６８７号に記載されており、これらのそれぞれは、その全体がすべての目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
例示的なアウリスタチンベースの抗体－薬物複合体としては、以下に示すｖｃＭＭＡＥ、ｖｃＭＭＡＦ、及びｍｃＭＭＡＦ抗体－薬物複合体（式中、Ａｂは本明細書に記載の抗体であり、ｖａｌ－ｃｉｔは、バリン－シトルリンジペプチドを表す）：
Figure 2023548538000002
Figure 2023548538000003
Figure 2023548538000004
 またはその薬学的に許容される塩が挙げられる。薬物負荷は、１抗体あたりの薬物－リンカー分子の数であり、ｐによって表される。文脈に応じて、ｐは１抗体あたりの薬物－リンカー分子の平均数を表すことができ、平均薬物負荷とも呼ばれる。変数ｐは、１～２０の範囲であり、好ましくは１～８である。いくつかの好ましい実施形態では、ｐが平均薬物負荷を表す場合、ｐは約２～約５の範囲である。いくつかの実施形態では、ｐは、約２、約３、約４、または約５である。いくつかの態様では、抗体は、システイン残基の硫黄原子を介してリンカーにコンジュゲートされる。いくつかの態様では、システイン残基は、抗体内に操作されたものである。他の態様では、システイン残基は、鎖間ジスルフィドシステイン残基である。
いくつかの他の実施形態では、抗体－薬物複合体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる出願ＵＳ２０１６０３１０６１２Ａ１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６０４７７）に開示されるリンカーユニットを有する。いくつかの他の実施形態では、抗体－薬物複合体は、以下の式（ＩＩ）を有する：
Figure 2023548538000005
 ここで、Ｄは、薬物ユニットであり、ＰＥＧは、薬物－リンカーの疎水性をマスクするポリエチレングリコールユニットであり、Ｌｐは、ＰＥＧユニットがＸ－Ｄに対して平行な配向になるようにする平行結合ユニットであり、Ａは、ｍが１より大きい場合は分岐ユニットであり、任意によりサブユニットで構成されるか、またはｍが１の場合は、Ａは存在しない。Ｘは、ＬＤＣからの各Ｄの放出を提供する放出可能アセンブリユニットであり、Ｚは任意選択のスペーサーユニットであり、それを介して抗体であるＬにＬｐが結合される。
いくつかの実施形態では、抗体－薬物複合体は、以下の式ＩＩＩを有する：
Figure 2023548538000006
 ここで、ＡＤは、ｔによって示されるＸ－Ｄ部分をＰＥＧユニットに平行な配向でさらに付着させる薬物付着ユニットであり、Ｌ、Ｌｐ、Ｚ、Ａ、Ｘ、Ｄ、ｍ、ｐ、及びｓは、式ＩＩについて定義したとおりである。
さらに他の主要な実施形態では、本発明のＬＤＣは、以下の式ＩＶの構造によって表される：
Figure 2023548538000007
 ここで、ＡＤ、Ｌ、Ｌｐ、ＰＥＧ、Ｚ、Ａ、Ｘ、Ｄ、ｍ、ｐ、ｓ、及びｔは、式ＩＩＩについて定義したとおりである。
いくつかの実施形態では、抗体－薬物複合体は、以下の式１：
Ｌ－［ＬＵ－Ｄ’］ｐ （１）
またはその塩、特に薬学的に許容される塩を有し、式中、
Ｌは、抗体であり；
ＬＵは、リンカーユニットであり；
Ｄ’は、式－ＬＵ－Ｄ’の各薬物リンカー部分における１～薬物ユニット（Ｄ）を表し；
下付き文字ｐは、１～１２、１～１０、または１～８の数であるか、または約４もしくは約８であり、
ここで、抗体は、腫瘍組織の抗原に選択的に結合して、薬物ユニットを遊離細胞傷害剤として放出することができ、
組成物の抗体－薬物複合体のそれぞれにおける式－ＬＵ－Ｄ’の薬物リンカー部分は、
式１Ａ：
Figure 2023548538000008
 その塩、特にその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中、波線は、Ｌへの共有結合による付着を示し；
Ｄは、細胞傷害剤の薬物ユニットであり；
ＬＢは、抗体の共有結合部分であり；
Ａは、最初の任意のストレッチャーユニットであり；
下付き文字ａは、０または１であり、これは、それぞれＡが存在しているかまたは存在しないことを示し；
Ｂは、任意の分岐ユニットであり；
下付き文字ｂは、０または１であり、これは、それぞれＢが存在しているかまたは存在しないことを示し；
ＬＯは、第２のリンカー部分であり、ここで第２のリンカーは、次式を有し；
Figure 2023548538000009
 式中、Ｙに隣接する波線は、ＬＯの薬物ユニットへの共有結合による付着部位を示し、Ａ’に隣接する波線は、薬物リンカー部分の残りへの共有結合による付着部位を示し；
Ａ’は、第２の任意のストレッチャーユニットであり、Ｂが存在しない場合は、Ａのサブユニットになり、
下付き文字ａ’は、０または１であり、これは、それぞれＡ’が存在しているかまたは存在しないことを示し；
Ｗは、ペプチド切断可能ユニットであり、ペプチド切断可能ユニットは、最大１２個（例えば、３～１２個または３～１０個）のアミノ酸の連続配列であり、その配列は、そのペプチド切断可能ユニットのペプチド配列がジペプチド－バリン－シトルリン－または－バリン－アラニン－である比較抗体－薬物複合体組成物の抗体－薬物複合体組成物から放出される細胞傷害剤と比較して、正常組織よりも腫瘍組織を、組成物の抗体－薬物コンジュゲートから放出される遊離細胞傷害剤に曝露させる選択性の改善をもたらす選択性付与トリペプチドで構成されており；
ここで、腫瘍及び正常組織は、げっ歯動物のものであり、式１の組成物は、以下によって実証される改善された曝露選択性を提供し：
比較抗体－薬物複合体組成物について以前に決定された同じ有効量及び投与スケジュールで投与された場合に、比較抗体－薬物複合体組成物の腫瘍異種移植片モデルにおける有効性を保持している、及び
腫瘍非担持げっ歯動物への腫瘍異種移植モデルと同じ有効量及び投与スケジュールで投与した場合に、両方の複合体組成物の抗体が非結合抗体に置き換えられている比較抗体－薬物複合体組成物の同等の（例えば、同じ）投与と比較して、組成物の抗体－薬物複合体から放出された遊離細胞傷害剤の血漿濃度の低下、及び／または組織中での正常細胞の保存を示している
ここで、腫瘍非担持げっ歯動物の組織中の正常細胞と同じ型のヒト組織中での細胞に対する細胞毒性は、治療有効量の比較複合体組成物を投与されたヒト対象における有害事象の少なくとも一部の原因であり；
Ｙは、自己犠牲スペーサーユニットであり；
下付き文字ｙは、０、１または２であり、それぞれＹが存在しないこと、または１つもしくは２つ存在することを示し；
下付き文字ｑは、１～４までの整数であり、
ただし、下付き文字ｂが０の場合、下付き文字ｑは１であり、下付き文字ｂが１の場合、下付き文字ｑは２、３、または４であり；
ここで、組成物の抗体－薬物複合体は、式１の構造を有し、式中、下付き文字ｐが下付き文字ｐ’で置き換えられ、下付き文字ｐ’は、１～１２、１～１０または１～８の整数であるか、または４もしくは８である。
関連する実施形態は、式Ｖの薬物リンカー：
ＬＵ’－（Ｄ’） （Ｖ）
またはその塩、特に薬学的に許容されるその塩を提供し、式中、ＬＵ’は、式１のＬとＬＵとの間に共有結合を提供することができ、したがってリンカーユニット前駆体とも呼ばれ；Ｄ’は、１～４個の薬物ユニットを表し、薬物リンカーは、式ＶＩの構造によってさらに定義される：
Figure 2023548538000010
 式中、ＬＢ’は、式ＶＩのＬＢに変換することができ、それによって式１のＬと共有結合を形成し、したがって、抗体共有結合前駆体部分とも呼ばれ、式ＶＩの残りの可変基は、式ＶＩについて定義したとおりである。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ（本明細書ではｖｃＭＭＡＥまたは１００６とも呼ばれる）、ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＦ、ｍｃ－ＭＭＡＦ、またはｍｐ－ｄＬＡＥ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ（本明細書ではｄＬＡＥ－ＭＭＡＥ、ｍｐ－ｄＬＡＥ－ＭＭＡＥ、または７０９２とも呼ばれる）、またはその薬学的に許容される塩にコンジュゲートされる抗体（例えば、本明細書に記載の任意の抗体）を含む。ｍｐ－ｄＬＡＥ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥは、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０２１／０５５８６５Ａ１号に記載されている。そのようなＡＤＣを以下に示し、ここで、Ａｂは、抗原結合タンパク質（例えば、本明細書に記載の任意の抗体）を含み、ｍｃは、マレイミドカプロイル基を表し、ｍｐは、マレイミドプロピオニル基：
Figure 2023548538000011
 を表し、ｖａｌ－ｃｉｔ（ｖｃ）は、バリン－シトルリンジペプチドを表し、ＰＡＢＣは、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル基を表し、ｄＬＡＥは、Ｄ－ロイシン－アラニン－グルタミン酸トリペプチドを表す：
Figure 2023548538000012
Figure 2023548538000013
Figure 2023548538000014
Figure 2023548538000015
 いくつかの実施形態では、薬物負荷は、１抗体あたりの薬物－リンカー分子の数であり、ｐによって表される。いくつかの実施形態では、ｐは、抗体の組成物中の１抗体あたりの薬物－リンカー分子の平均数を表すことができ、平均薬物負荷とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ｐは、１～２０の範囲である。いくつかの実施形態では、ｐは１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、ｐが平均薬物負荷を表す場合、ｐは約２～約５の範囲である。いくつかの実施形態では、ｐは約２、約３、約４、または約５である。いくつかの実施形態では、調製物中の１抗体あたりの薬物の平均数は、質量分析、ＨＩＣ、ＥＬＩＳＡアッセイ、及びＨＰＬＣなどの従来の手段によって特徴付けることができる。いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質（例えば、抗体）は、抗体のシステイン残基を介して薬物－リンカーに付着している。いくつかの実施形態では、システイン残基は、抗体内に操作されたものである。いくつかの実施形態では、システイン残基は、鎖間ジスルフィドシステイン残基である。
Ｃ．例示的ＡＤＣ
本方法で使用するための非限定的な例示的ＡＤＣとしては、本明細書に記載のチューブリン破壊剤のいずれかにコンジュゲートされた、本明細書に記載の例示的標的のいずれかを結合する抗体を含むＡＤＣが挙げられる。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、シアリルＴｎ抗原（ｓＴｎ）及びＭＭＡＥに結合する抗体を含む抗シアリルＴｎ抗原抗体－ＡＤＣである。例えば、米国特許公開第２０１８／０３２７５０９Ａ１号；ＷＯ２０１７０８３５８２Ａ１；本明細書の配列表を参照されたい。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）及びＭＭＡＦに結合する抗体を含むベランタマブマフォドチンである。例えば、米国特許第９，２７３，１４１号を参照されたい。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、抗クローディン－１８．２ ＡＤＣであり、以下のようなアウリスタチン及び抗体を含む：
米国特許第８，１６８，４２７号に開示されているゾルベツキシマブ（１７５Ｄ１０）であって、配列番号５９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むか、または配列番号６１～６６のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む；
米国特許第８，１６８，４２７号に開示されている１６３Ｅ１２であって、配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むか、または配列番号６９～７４のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む；
ＰＣＴ公開第ＷＯ２０２０／１３５６７４Ａ１号に開示されている任意の抗クローディン－１８．２抗体；または
ＰＣＴ公開第ＷＯ２０２１／０３２１５７Ａ１号に開示されている任意の抗クローディン－１８．２抗体。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体及びＭＭＡＥを含むＳＧＮ－ＰＤＬ１Ｖであり、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号７６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むか、または配列番号７７～８２のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、抗ＡＬＰ抗体及びＭＭＡＥを含むＳＧＮ－ＡＬＰＶであり、抗体は、配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むか、または配列番号８５～９０のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、抗Ｂ７Ｈ４抗体及びＭＭＡＥを含むＳＧＮ－Ｂ７Ｈ４Ｖであり、抗体は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号９２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むか、または配列番号９３～９８のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、抗ＨＥＲ２抗体及びＭＭＡＥを含むｄｉｓｉｔａｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎであり、抗体は、配列番号９９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１００のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、抗ＮａＰｉ２Ｂ抗体及びＭＭＡＥを含むリファスツズマブベドチンであり、抗体は、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ネクチン－４を結合する抗体及びＭＭＡＥを含むエンホルツマブベドチンである。例えば、米国特許第８，６３７，６４２号、ＷＯ２０１２／０４７７２４を参照されたい。いくつかの実施形態では、エンホルツマブベドチンの抗体は、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むか、または配列番号１０５～１１０のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＡＶＢ６に結合する抗体及びＭＭＡＥを含むＳＧＮ－Ｂ６Ａである。いくつかの実施形態では、ＳＧＮ－Ｂ６Ａは、配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むか、または配列番号１１３～１１８のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗ＡＶＢ６抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むか、または配列番号１２１～１２６のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗ＡＶＢ６抗体を含む。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＣＤ２２８を結合する抗体及びＭＭＡＥを含む抗ＣＤ２２８抗体－ＡＤＣである。例えば、米国特許公開第２０２０／０２４６４７９Ａ１号；ＷＯ２０２０／１６３２２５Ａ１を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、抗ＣＤ２２８抗体及びＭＭＡＥを含むＳＧＮ－ＣＤ２２８Ａであり、抗体は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むか、または配列番号１２９～１３４のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、抗ＬＩＶ－１抗体及びＭＭＡＥを含むＳＧＮ－ＬＩＶ１Ａ（ｌａｄｉｒａｔｕｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ；ＬＶ）であり、抗体は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むか、または配列番号１３７～１４２のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含み；
ここで、ＳＧＮ－ＬＩＶ１Ａは、ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ、ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＦ、ｍｃ－ＭＭＡＦ、またはｍｐ－ｄＬＡＥ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥにコンジュゲートされた抗ＬＩＶ－１抗体を含む。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、組織因子（ＴＦ）を結合する抗体及びＭＭＡＥを含む、チソツマブベドチン（ＴＶ）である。例えば、米国特許第９，１６８，３１４号及び第９，１５０，６５８号、ＷＯ２０１１／１５７７４１；ＷＯ２０１０／０６６８０３を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＴＶの抗体は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むか、または配列番号１４５～１５０のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣが、ＭＭＡＥを含み、ＡＭＨＲＩＩ、Ａｘｌ、ＣＡ９、ＣＤ１４２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２２８、ＣＤ２４８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ７、ＣＤ４８、ＣＤ７１、ＣＤ７９ｂ、ＣＬＤＮ１８．２、ＣＬＤＮ６、ｃ－ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＡ２、ＥＴＢＲ、ＦＣＲＨ５、ＧＣＣ、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、ｇｐＮＭＢ、ＨＥＲ－２、ＩＬ７Ｒ、インテグリンベータ－６、ＫＡＡＧ－１、ＬＧＲ５、ＬＩＶ－１、ＬＲＲＣ１５、Ｌｙ６Ｅ、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＭＥＴ、ＭＲＣ２、ＭＵＣ１６、ＮａＰｉ２ｂ、ネクチン－４、ＯＴ－ＭＵＣ１（ｏｎｃｏ－ｔｅｔｈｅｒｅｄ－ＭＵＣ１）、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＬＩＴＲＫ６、ＳＴＥＡＰ－１、ＳＴｎ、ＴＩＭ－１、ＴＲＡ－１－６０、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）から選択される標的を結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＭＭＡＥを含み、以下のうちの１つである：ＤＰ３０３ｃ、別名ＳＹＳＡ１５０１、ＨＥＲ－２を標的とする（ＣＳＰＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ；Ｄｏｐｈｅｎ Ｂｉｏｍｅｄ）、ＳＩＡ０１－ＡＤＣ、別名ＳＴ１、ＳＴｎを標的とする（Ｓｉａｍａｂ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、Ｌａｄｉｒａｔｕｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ、別名ＳＧＮ－ＬＩＶ１Ａ、ＬＩＶ－１を標的とする（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ．；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＡＢＢＶ－０８５、別名Ｓａｍｒｏｔａｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ、ＬＲＲＣ１５を標的とする（Ａｂｂｖｉｅ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＤＭＯＴ４０３９Ａ、別名ＲＧ７６００；αＭＳＬＮ－ＭＭＡＥ、メソテリン（ＭＳＬＮ）を標的とする（Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＣ６８、別名Ｒｅｍｅｇｅｎ ＥＧＦＲ ＡＤＣ、ＥＧＦＲを標的とする（ＲｅｍｅＧｅｎ（Ｒｏｎｇｃｈａｎｇ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（Ｙａｎｔａｉ）Ｃｏ．，Ｌｔｄ．））、ＲＣ１０８、別名ＲＣ１０８－ＡＤＣ、ｃ－ＭＥＴを標的とする（ＲｅｍｅＧｅｎ（Ｒｏｎｇｃｈａｎｇ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（Ｙａｎｔａｉ）Ｃｏ．，Ｌｔｄ．））、ＣＭＧ９０１、別名ＭＲＧ００５、ＣＬＤＮ１８．２を標的とする（Ｋｅｙｍｅｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｌｅｐｕ ｂｉｏｔｅｃｈ；Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｍｉｒａｃｏｇｅｎ Ｉｎｃ．）、ＹＢＬ－００１、別名ＬＣＢ６７、ＤＬＫ－１を標的とする（Ｌｅｇｏ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｐｙｘｉｓ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ；Ｙ－Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）、ＤＣＤＳ０７８０Ａ、別名Ｉｌａｄａｔｕｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ；ＲＧ７９８６、ＣＤ７９ｂを標的とする（Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、チソツマブベドチン、別名Ｈｕｍａｘ－ＴＦ－ＡＤＣ；ｔｆ－０１１－ｍｍａｅ；ＴＩＶＤＡＫ（商標）、ＣＤ１４２を標的とする（ＧｅｎＭａｂ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＧＯ－３Ｄ１－ＡＤＣ、別名ｈｕｍＡｂ－３Ｄ１－ＭＭＡＥ ＡＤＣ、ＭＵＣ１－Ｃを標的とする（Ｇｅｎｕｓ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ＬＬＣ）、ＡＬＴ－Ｐ７、別名ＨＭ２－ＭＭＡＥ、ＨＥＲ－２を標的とする（Ａｌｔｅｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．；Ｌｅｖｅｎａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ；３ＳＢｉｏ，Ｉｎｃ．）、バンドルツズマブベドチン、別名ＤＳＴＰ３０８６Ｓ；ＲＧ７４５０、ＳＴＥＡＰ－１を標的とする（Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、リファスツズマブベドチン、別名ＤＮＩＢ０６００Ａ；ＮａＰｉ２ｂ ＡＤＣ；ＲＧ７５９９、ＮａＰｉ２ｂを標的とする（Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ソフィツズマブベドチン、別名ＤＭＵＣ５７５４Ａ；ＲＧ７４５８、ＭＵＣ１６を標的とする（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．；Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＧ７８４１、別名ＤＬＹＥ５９５３Ａ、Ｌｙ６Ｅを標的とする（Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＲＧ７５９８、別名ＤＦＲＦ４５３９Ａ、ＦＣＲＨ５を標的とする（Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＲＧ７６３６、別名ＤＥＤＮ６５２６Ａ、ＥＴＢＲを標的とする（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．；Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ピナツズマブベドチン、別名ＤＣＤＴ２９８０Ｓ；ＲＧ７５９３、ＣＤ２２を標的とする（Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ポラツズマブベドチン、別名ＤＣＤＳ４５０１Ａ；ＰＯＬＩＶＹ（商標）；ＲＧ７５９６；ＲＯ－５５４１０７７、ＣＤ７９ｂを標的とする（Ｃｈｕｇａｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ；Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＤＭＵＣ４０６４Ａ、別名Ｄ－４０６４ａ；ＲＧ７８８２、ＭＵＣ１６を標的とする（Ｒｏｃｈｅ－Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＳＹＳＡ１８０１、別名ＣＰＯ１０２、ＣＬＤＮ１８．２を標的とする（Ｃｏｎｊｕｐｒｏ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ．；ＣＳＰＣ ＺｈｏｎｇＱｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．）、ＲＣ１１８、別名クローディン１８．２－ ＡＤＣ；ＹＨ００５、ＣＬＤＮ１８．２を標的とする（ＲｅｍｅＧｅｎ（Ｒｏｎｇｃｈａｎｇ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（Ｙａｎｔａｉ）Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）；Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ）、ＶＬＳ－１０１、別名Ｃｉｒｍｔｕｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ；ＭＫ－２１４０；ＵＣ－９６１ＡＤＣ３；Ｚｉｌｏｖｅｒｔａｍａｂ Ｖｅｄｏｔｉｎ、ＲＯＲ１を標的とする（ＶｅｌｏｓＢｉｏ．Ｉｎｃ）、グレンバツムマブベドチン、別名ＣＤＸ－０１１；ＣＲ０１１－ｖｃＭＭＡＥ、ｇｐＮＭＢを標的とする（Ｃｅｌｌｄｅｘ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＢＡ３０２１、別名ＣＡＢ－ＲＯＲ２－ＡＤＣ；オズリフタマブベドチン、ＲＯＲ２を標的とする（Ｂｉｏａｔｌａ；Ｈｉｍａｌａｙａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＢＡ３０１１、別名ＣＡＢ－ＡＸＬ－ＡＤＣ；メクボタマブベドチン、Ａｘｌを標的とする（Ｂｉｏａｔｌａ；Ｈｉｍａｌａｙａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＣＭ－０９、別名Ｂｓｔｒｏｎｇｘｉｍａｂ－ＡＤＣ、ＴＲＡ－１－６０を標的とする（ＣｕｒｅＭｅｔａ）、ＡＢＢＶ－８３８、別名Ａｚｉｎｔｕｘｉｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ、ＳＬＡＭＦ７を標的とする（Ａｂｂｖｉｅ）、エナポタマブベドチン、別名ＡＸＬ－１０７－ＭＭＡＥ；ＨｕＭａｘ－ＡＸＬ－ＡＤＣ、Ａｘｌを標的とする（ＧｅｎＭａｂ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＡＲＣ－０１、別名抗ＣＤ７９ｂ ＡＤＣ、ＣＤ７９ｂを標的とする（Ａｒａｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＡＧ）、Ｄｉｓｉｔａｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ、別名Ａｉｄｅｘｉ（登録商標）；ＲＣ４８、ＨＥＲ－２を標的とする（ＲｅｍｅＧｅｎ（Ｒｏｎｇｃｈａｎｇ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（Ｙａｎｔａｉ）Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、
ＡＳＧ－５ＭＥ、別名ＡＧＳ－５；ＡＧＳ－５ＭＥ、ＳＬＣ４４Ａ４を標的とする（Ａｇｅｎｓｙｓ，Ｉｎｃ．；Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ．；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、エンホルツマブベドチン、別名ＡＧＳ－２２Ｍ６Ｅ；ＡＳＧ－２２ＣＥ；ＡＳＧ－２２ＭＥ；ＰＡＤＣＥＶ（商標）、ネクチン－４を標的とする（Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ．；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＡＳＧ－１５ＭＥ、別名ＡＧＳ－１５Ｅ；Ｓｉｒｔｒａｔｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ、ＳＬＩＴＲＫ６を標的とする（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．；Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ．）、ブレンツキシマブベドチン、別名Ａｄｃｅｔｒｉｓ；ｃＡＣ１０－ｖｃＭＭＡＥ；ＳＧＮ－３５、ＣＤ３０を標的とする（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．；Ｔａｋｅｄａ）、テリソツズマブベドチン、別名ＡＢＢＶ－３９９、ｃ－ＭＥＴを標的とする（Ａｂｂｖｉｅ）、Ｌｏｓａｔｕｘｉｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ、別名ＡＢＢＶ－２２１、ＥＧＦＲを標的とする（Ａｂｂｖｉｅ）、ＣＸ－２０２９、別名ＡＢＢＶ－２０２９、ＣＤ７１を標的とする（Ａｂｂｖｉｅ；ＣｙｔｏｍＸ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＡＢ－３Ａ４－ＡＤＣ、別名ＡＢ－３Ａ４－ｖｃＭＭＡＥ、ＫＡＡＧ－１を標的とする（Ａｌｅｔｈｉａ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、インダサツマブベドチン、別名５Ｆ９－ｖｃＭＭＡＥ；ＭＬＮ０２６４；ＴＡＫ－２６４、ＧＣＣを標的とする（Ｔａｋｅｄａ；Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ）、ＣＤ４６を標的とするＦＯＲ４６（Ｆｏｒｔｉｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、ＥＧＦＲを標的とするＬＲ００４－ＶＣ－ＭＭＡＥ（Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｐｅｋｉｎｇ Ｕｎｉｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ）、ＣＤ３０を標的とするＣＤ３０－ＡＤＣ（ＮＢＥ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ；Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＣＤ２４８を標的とするＡｎｔｉ－ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ－ＭＣ－ＶＣ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ（Ｇｅｎｚｙｍｅ）、ＳＳＥＡ－４を標的とするＯＢＩ－９９８（ＯＢＩ Ｐｈａｒｍａ）、ＨＥＲ－２を標的とするＭＲＧ００２（Ｌｅｐｕ ｂｉｏｔｅｃｈ；Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｍｉｒａｃｏｇｅｎ Ｉｎｃ．（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｍｅｉｙａ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ））、ＣＤ２０を標的とするＴＲＳ００５（Ｔｅｒｕｉｓｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＤＲ５（デスレセプター５）を標的とするＯｂａ０１（Ｏｂｉｏ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｃｏｒｐ．，Ｌｔｄ．；Ｙａｎｔａｉ Ｏｂｉｏａｄｃ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｔｄ．）、ＰＳＭＡを標的とするＰＳＭＡ ＡＤＣ（Ｐｒｏｇｅｎｉｃｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＣＤ４８を標的とするＳＧＮ－ＣＤ４８Ａ（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＣＬＤＮ１８．２を標的とするＩＭＡＢ３６２－ｖｃＭＭＡＥ（Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ．；Ｇａｎｙｍｅｄ）、ＨＥＲ－２を標的とするＧＢ２５１（Ｇｅｎｏｒ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）、ＣＤ３０を標的とするＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ ＢＴＧ－ＡＤＣ（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ；Ｓａｎｏｆｉ）、ＭＲＣ２を標的とするＡＤＣｅｎｄｏ ｕＰＡＲＡＰ ＡＤＣ（ＡＤＣｅｎｄｏ）、ａｃｔＭを標的とするＸＣＮ－０１０（Ｘｉｃｏｎｉｃ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，ＬＬＣ）、ＨＥＲ－２を標的とするＡＮＴ－０４３（Ａｎｔｉｋｏｒ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、Ｇｌｏｂｏ Ｈを標的とするＯＢＩ－９９９（Ａｂｚｅｎａ；ＯＢＩ Ｐｈａｒｍａ）、ＭＥＴを標的とするＬＹ３３４３５４４（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ＴＡＧ－７２を標的とするＴａｇｗｏｒｋｓ ａｎｔｉ－ＴＡＧ７２ ＡＤＣ（Ｔａｇｗｏｒｋｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＣＬＤＮ６を標的とするＩＭＡＢ０２７－ｖｃＭＭＡＥ（Ｇａｎｙｍｅｄ；Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ．）、ＬＧＲ５を標的とするＬＧＲ５－ＡＤＣ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）、ＩＬ－７Ｒを標的とするＰｈｉｌｏｃｈｅｍ Ｂ１２－ＭＭＡＥ ＡＤＣ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｏ ｄｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｊｏａｏ Ｌｏｂｏ Ａｎｔｕｎｅｓ；Ｐｈｉｌｏｃｈｅｍ ＡＧ）、ＣＤ１９を標的とするＴＥ－１５２２（Ｉｍｍｕｎｗｏｒｋ）、ＳＴｎを標的とするＳＧＮ－ＳＴＮＶ（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＥＧＦＲを標的とするＨＴＩ－１５１１（Ａｂｚｅｎａ；Ｈａｌｏｚｙｍｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＯＴ－ＭＵＣ１（ｏｎｃｏ－ｔｅｔｈｅｒｅｄ－ＭＵＣ１）を標的とするＰｅｐｔｒｏｎ ＰＡｂ００１－ＡＤＣ（Ｐｅｐｔｒｏｎ；Ｑｉｌｕ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｃｏ．Ｌｔｄ．）、ＣＬＤＮ１８．２を標的とするＬＭ－１０２（ＬａＮｏｖａ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ）、メソテリンを標的とするＡｎｗｉｔａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＭＳＬＮ－ＭＭＡＥ（ＭＳＬＮ）（Ａｎｗｉｔａ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＤ２２８を標的とするＳＧＮ－ＣＤ２２８Ａ（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＨＥＲ－２を標的とするＮＢＴ８２８（ＮｅｗＢｉｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ；Ｇｅｎｏｒ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）、ＡＭＨＲ２を標的とするＧａｍａｍａｂｓ ＧＭ１０３（ＧａｍａＭａｂｓ Ｐｈａｒｍａ；Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＨＥＲ－２を標的とするＬＣＢ１４－０３０２（Ｌｅｇｏ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）を標的とするＢＡＹ７９－４６２０（Ｂａｙｅｒ；ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ）、ＣＤ７９ｂを標的とするＮＢＴ５０８（ＮｅｗＢｉｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、非開示を標的とするＰＡＴ－ＤＸ３－ＭＭＡＥ（Ｐａｔｒｙｓ；Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、ＣＤ３７を標的とするＡＧＳ６７Ｅ（Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ．；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＴＩＭ－１を標的とするＣＤＸ－０１４（Ｃｅｌｌｄｅｘ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＣＤ３３を標的とするＢＶＸ００１；ＣＤ７（Ｂｉｖｉｃｔｒｉｘ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、インテグリンβ－６を標的とするＳＧＮ－Ｂ６Ａ（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＥＧＦＲを標的とするＭＲＧ００３（Ｌｅｐｕ ｂｉｏｔｅｃｈ；Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｍｉｒａｃｏｇｅｎ Ｉｎｃ．（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｍｅｉｙａ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ））、及びＤＬＫ－１を標的とするＰＹＸ－２０２（Ｐｙｘｉｓ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ；Ｌｅｇｏ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＭＭＡＦを含み、ＢＣＭＡ、ＧＰＣ－１、ＣＤ３０、ｃ－ＭＥＴ、ＳＡＩＬ、ＨＥＲ－３、ＣＤ７０、ＣＤ４６、ＨＥＲ－２、５Ｔ４、ＥＮＰＰ３、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＡ２から選択される標的を結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＭＭＡＦを含み、以下のうちの１つである：ＣＤ７０－ＡＤＣ、ＣＤ７０を標的とする（Ｋｏｃｈｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；Ｏｓａｋａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、ＩＧＮ７８６、ＳＡＩＬを標的とする（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；Ｉｇｅｎｉｃａ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＰＦ－０６２６３５０７、５Ｔ４を標的とする（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＧＰＣ１－ＡＤＣ、ＧＰＣ－１を標的とする（Ｋｏｃｈｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、ＡＤＣ－ＡＶＰ１０、ＣＤ３０を標的とする（Ａｖｉｐｅｐ）、Ｍ２９０－ＭＣ－ＭＭＡＦ、ＣＤ１０３を標的とする（Ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｈａｒｂｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、ＢＶＸ００１、ＣＤ３３を標的とする；ＣＤ７（Ｂｉｖｉｃｔｒｉｘ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、Ｔａｎａｂｅ Ｐ３Ｄ１２－ｖｃ－ＭＭＡＦ、ｃ－ＭＥＴを標的とする（Ｔａｎａｂｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＬＩＬＲＢ４－標的化ＡＤＣ、ＬＩＬＲＢ４を標的とする（Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｘａｓ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｈｏｕｓｔｏｎ）、ＴＳＤ１０１、別名ＡＢＬ２０１、ＢＣＭＡを標的とする（ＴＳＤ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ；ＡＢＬ Ｂｉｏ；Ｌｅｇｏ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、デパツキシズマブマフォドチン、別名ＡＢＴ－４１４、ＥＧＦＲを標的とする（Ａｂｂｖｉｅ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＡＧＳ１６Ｆ、別名ＡＧＳ－１６Ｃ３Ｆ；ＡＧＳ－１６Ｍ８Ｆ、ＥＮＰＰ３を標的とする（Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ．；Ｓｅａｇｅｎ （Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＡＶＧ－Ａ１１ ＢＣＭＡ ＡＤＣ、別名ＡＶＧ－Ａ１１－ｍｃＭＭＡＦ、ＢＣＭＡを標的とする（Ａｖａｎｔｇｅｎ）、ベランタマブマフォドチン、別名ＢＬＥＮＲＥＰ；ＧＳＫ２８５７９１６；Ｊ６Ｍ０－ｍｃＭＭＡＦ、ＢＣＭＡを標的とする（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ＭＰ－ＨＥＲ３－ＡＤＣ、別名ＨＥＲ３－ＡＤＣ、ＨＥＲ－３を標的とする（ＭｅｄｉａＰｈａｒｍａ）、ＦＳ－１５０２、別名ＬＣＢ１４－０１１０、ＨＥＲ－２を標的とする（Ｌｅｇｏ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｆｏｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）、ＭＥＤＩ－５４７、別名ＭＩ－ＣＰ１７７、ＥｐｈＡ２を標的とする（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、ボルセツズマブマフォドチン、別名ＳＧＮ－７５、ＣＤ７０を標的とする（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、Ｄｅｎｉｎｔｕｚｕｍａｂ ｍａｆｏｄｏｔｉｎ、別名ＳＧＮ－ＣＤ１９Ａ、ＣＤ１９を標的とする（Ｓｅａｇｅｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）Ｉｎｃ．）、及びＨＴＩ－１０６６、別名ＳＨＲ－Ａ１４０３、ｃ－ＭＥＴを標的とする（Ｊｉａｎｇｓｕ ＨｅｎｇＲｕｉ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、表Ａ、表Ｂ、または表ＣのＡＤＣから選択される。表Ａ、表Ｂ、及び表Ｃでは、配列表に示す配列を有するＡＤＣは、アスタリスク（＊）で示している。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、エンホルツマブベドチンではない。ある実施形態では、ＡＤＣは、ブレンツキシマブベドチンではない。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、チソツマブベドチンではない。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ｌａｄｉｒａｔｕｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎではない。いくつかの実施形態、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＣＤ２２８Ａではない。


Figure 2023548538000016
Figure 2023548538000017
Figure 2023548538000018
Figure 2023548538000019
Figure 2023548538000020
Ｄ．抗体の調製
抗体を調製するために、当技術分野で知られている多くの技術を使用することができる。例えば、Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７（１９７５）；Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７２（１９８３）；Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，ｐｐ．７７－９６ ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８５）；Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９９１）；Ｈａｒｌｏｗ＆Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９８８）；及びＧｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（２ｎｄ ｅｄ．１９８６））を参照されたい。
目的の抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子は、細胞からクローニングすることができ、例えば、モノクローナル抗体をコードする遺伝子は、該抗体を発現するハイブリドーマからクローニングし、組換えモノクローナル抗体を産生するために使用することができる。モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子ライブラリーは、ハイブリドーマまたはプラズマ細胞からも作製できる。さらに、ファージまたは酵母ディスプレイ技術を使用して、選択された抗原に特異的に結合する抗体及びヘテロマーＦａｂフラグメントを同定することができる（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４（１９９０）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３（１９９２）；Ｌｏｕ ｅｔ ａｌ．（２０１０）ＰＥＤＳ ２３：３１１；及びＣｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，１：７５５－７６８（２００６）を参照されたい）。あるいは、抗体及び抗体配列は、例えばＸｕ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ，２０１３，２６：６６３－６７０；ＷＯ２００９／０３６３７９；ＷＯ２０１０／１０５２５６；及び２０１２／００９５６８に開示のものなど、酵母ベースの抗体提示系を使用して単離及び／または同定され得る。重鎖及び軽鎖の遺伝子産物のランダムな組み合わせは、異なる抗原特異性を有する抗体の大きいプールを生成する（例えば、Ｋｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（３ｒｄ ｅｄ．１９９７））を参照されたい）。単鎖抗体または組換え抗体の産生技術（米国特許第４，９４６，７７８号、米国特許第４，８１６，５６７号）も、抗体を産生するために適合させることができる。抗体を二重特異性にすることもでき、すなわち、２つの異なる抗原を認識できるようにすることもできる（例えば、ＷＯ９３／０８８２９，Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５－３６５９（１９９１）；及びＳｕｒｅｓｈ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １２１：２１０（１９８６）を参照されたい）。抗体はまた、ヘテロコンジュゲート体、例えば、共有結合により連結した２つの抗体、または免疫毒素に共有結合により結合した抗体であり得る（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、ＷＯ９１／００３６０；及びＷＯ９２／２００３７３を参照されたい）。
抗体は、原核生物及び真核生物の発現系など、任意の数の発現系を使用して産生することができる。いくつかの実施形態では、発現系は、ハイブリドーマまたはＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞である。このような系の多くは、商用供給業者から広く入手できる。抗体が重鎖及び軽鎖を両方とも含む実施形態では、重鎖及び重鎖及び軽鎖は、単一のベクターを使用して、例えば、二重シストロン発現ユニットで発現させてもよく、または異なるプロモーターの制御下にあり得る。他の実施形態では、重鎖及び軽鎖領域は、別個のベクターを使用して発現させ得る。本明細書に記載の重鎖及び軽鎖は、場合によりＮ末端にメチオニンを含んでもよい。
いくつかの実施形態では、抗体フラグメント（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、またはダイアボディなど）が生成される。抗体フラグメントを産生するための様々な技法が開発されている。従来、これらのフラグメントは、インタクト抗体のタンパク質分解消化により得られていた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈ．，２４：１０７－１１７（１９９２）；及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５））。しかしながら、これらのフラグメントは、現在、組換え宿主細胞により直接産生され得る。例えば、抗体フラグメントは、抗体ファージライブラリから単離され得る。あるいは、Ｆａｂ’－ＳＨフラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞から直接回収され、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを形成し得る（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：１６３－１６７（１９９２）を参照されたい）。別のアプローチに従って、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、組換え宿主細胞培養から直接単離することができる。抗体フラグメントを産生するための他の技術は、当業者には明らかであろう。他の実施形態では、最適な抗体は単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９３／１６１８５号、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。抗体フラグメントは、例えば米国特許第５，６４１，８７０号に記載の線形抗体であってもよい。
いくつかの実施形態では、抗体または抗体フラグメントを別の分子、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ化）または血清アルブミンにコンジュゲートして、ｉｎ ｖｉｖｏでの半減期を延長させ得る。抗体フラグメントのＰＥＧ化の例は、Ｋｎｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ １５：４０９，２００４（アブシキシマブに関して）；Ｐｅｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ７０：１１２６，１９９４（抗ＣＥＡ抗体に関して）；Ｃｈａｐｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：７８０，１９９９；及びＨｕｍｐｈｒｅｙｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．２０：２２７，２００７）に記載されている。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体が提供される。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原または同じ抗原の少なくとも２つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。多重特異性抗体を作製する方法としては、宿主細胞における重鎖及び軽鎖の２つの対の組換え共発現（例えば、Ｚｕｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ，２０００，１３：３６１－３６７参照）；「ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ」技術（例えば、Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ，１９９６，９：６１７－７２１を参照）；「ダイアボディ」技法（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ），１９９３，９０：６４４４－６４４８を参照）；及び分子内三量体化（例えば、Ａｌｖａｒｅｚ－Ｃｉｅｎｆｕｅｇｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１６，ｄｏｉ：／１０．１０３８／ｓｒｅｐ２８６４３参照）が挙げられるが、これに限定されない；また、Ｓｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１５，６７（２），Ｐａｒｔ Ａ：９５－１０６を参照されたい。
定常領域の選択
本明細書に記載の抗体の重鎖及び軽鎖可変領域は、ヒト定常領域の少なくとも一部に連結することができる。定常領域の選択は、抗体依存性細胞介在性細胞傷害、抗体依存性細胞食作用、及び／または補体依存性細胞傷害が望まれるか否かに部分的に依存する。例えば、ヒト同位体ＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、強い補体依存性細胞傷害性を有し、ヒトアイソタイプＩｇＧ２は、弱い補体依存性細胞傷害性を有し、ヒトＩｇＧ４は、補体依存性細胞傷害性を欠いている。ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、ヒトＩｇＧ２及びＩｇＧ４よりも強力な細胞媒介性エフェクター機能も誘導する。軽鎖定常領域は、ラムダまたはカッパであり得る。抗体は、２つの軽鎖と２つの重鎖を含む四量体として、別々の重鎖、軽鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖとして、または重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとがスペーサーを介して連結されている単鎖抗体として発現できる。
ヒト定常領域は、異なる個体間でアロタイプ多様体及びアイソアロタイプ多様体を示す。すなわち、定常領域は、異なる個体中の１つ以上の多型位置で異なり得る。アイソアロタイプは、アイソアロタイプを認識する血清が１つ以上の他のアイソタイプの非多型領域に結合するという点でアロタイプとは異なる。
軽鎖及び／または重鎖のアミノ末端またはカルボキシ末端の１つまたはいくつかのアミノ酸（重鎖のＣ末端リジンなど）は、分子の一部またはすべてで欠落しているかまたは誘導体化されて得る。置換は、補体介在性細胞傷害性またはＡＤＣＣなどのエフェクター機能を減少または増加させるために（例えば、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，６２４，８２１号；Ｔｓｏ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，８３４，５９７号；及びＬａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３：４００５，２００６を参照）、またはヒトでの半減期を延長するために（例えば、Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：６２１３，２００４を参照）、定常領域で行うことができる。
いくつかの実施形態では、所望の抗体－薬物複合体を構築するために、例示的な置換としては、アミノ酸位置２３４、２３５、２３７、２３９、２６７、２９８、２９９、３２６、３３０、または３３２に導入される、システイン残基への天然アミノ酸のアミノ酸置換、好ましくは、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ中のＳ２３９Ｃ変異（ナンバリングは、ＥＵインデックスに準拠（Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７及び１９９１）；ＵＳ２０１００１５８９０９を参照（参照により本明細書に組み込まれる））が挙げられる。追加のシステイン残基の存在により、鎖間ジスルフィド結合が形成され得る。このような鎖間ジスルフィド結合の形成は、立体障害を引き起こす可能性があり、それによってＦｃ領域とＦｃγＲの結合相互作用の親和性が低下する。ＩｇＧ定常領域のＦｃ領域内またはＦｃ領域に近接して導入されたシステイン残基（複数可）は、治療剤へコンジュゲートする（すなわち、薬物のマレイミド誘導体などのチオール特異的試薬を使用して細胞傷害性薬物を連結する）ための部位としても機能する。治療剤の存在は立体障害を引き起こし、それによってＦｃ領域－ＦｃγＲ結合相互作用の親和性をさらに低下させる。２３４位、２３５位、２３６位、及び／または２３７位のいずれかにおける他の置換は、Ｆｃγ受容体、特にＦｃγＲＩ受容体に対する親和性を低下させる（例えば、ＵＳ６，６２４，８２１、ＵＳ５，６２４，８２１を参照）。
抗体のｉｎ ｖｉｖｏ半減期も、そのエフェクター機能に影響を与え得る。抗体の半減期は、その治療活性を変化させるために延長または短縮することができる。ＦｃＲｎは、β２－ミクログロブリンと非共有結合により会合するＭＨＣクラスＩ抗原に構造的に類似した受容体である。ＦｃＲｎは、ＩｇＧの異化作用及び組織全体でのトランスサイトーシスを調節する（Ｇｈｅｔｉｅ ａｎｄ Ｗａｒｄ，２０００，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：７３９－７６６；Ｇｈｅｔｉｅ ａｎｄ Ｗａｒｄ，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．２５：９７－１１３）。ＩｇＧ－ＦｃＲｎ相互作用は、ｐＨ６．０（細胞内小胞のｐＨ）で発生するが、ｐＨ７．４（血液のｐＨ）では発生せず、この相互作用により、ＩｇＧを循環に戻すことができる（Ｇｈｅｔｉｅ ａｎｄ Ｗａｒｄ，２０００，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：７３９－７６６；Ｇｈｅｔｉｅ ａｎｄ Ｗａｒｄ，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｒｅｓ．２５：９７－１１３）。ＦｃＲｎ結合に関与するヒトＩｇＧ１上の領域がマッピングされている（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６０４）。ヒトＩｇＧ１のＰｒｏ２３８位、Ｔｈｒ２５６位、Ｔｈｒ３０７位、Ｇｌｎ３１１位、Ａｓｐ３１２位、Ｇｌｕ３８０位、Ｇｌｕ３８２位、またはＡｓｎ４３４位でのアラニン置換は、ＦｃＲｎ結合を増強する（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６０４）。これらの置換を保有するＩｇＧ１分子は、長い血清半減期を有する。その結果、これらの修飾されたＩｇＧ１分子は、非修飾のＩｇＧ１と比較して、より長い期間にわたってエフェクター機能を実施できるため、治療効果を発揮し得る。ＦｃＲｎへの結合を増加させるための他の例示的な置換としては、２５０位のＧｌｎ及び／または４２８位のＬｅｕが挙げられる。定常領域内のすべての位置に関しては、ＥＵナンバリングが使用される。
抗体の補体固定活性（Ｃ１ｑ結合及びＣＤＣ活性の両方）は、Ｌｙｓ３２６及びＧｌｕ３３３における置換によって改善することができる（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：２５７１－２５７５）。ヒトＩｇＧ２主鎖上での同じ置換は、Ｃ１ｑへの結合が弱く補体活性化活性が著しく欠損している抗体アイソタイプを、Ｃ１ｑの結合及びＣＤＣの媒介が両方とも可能なアイソタイプに変換することができる（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：２５７１－７５）。抗体の補体固定活性を改善するために、いくつかの他の方法も適用されている。例えば、ＩｇＭの１８アミノ酸のカルボキシル末端尾部ピースをＩｇＧのカルボキシル末端に移植することにより、そのＣＤＣ活性が大幅に向上する。これは、通常、検出可能なＣＤＣ活性を持たないＩｇＧ４でも観察される（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：２２２６－３６）。また、ＩｇＧ１重鎖のカルボキシ末端近くに位置するＳｅｒ４４４をＣｙｓで置換することにより、ＩｇＧ１の尾部から尾部への二量体化が誘導され、単量体ＩｇＧ１よりもＣＤＣ活性が２００倍増加した（Ｓｈｏｐｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８－２２）。さらに、Ｃ１ｑに対する特異性を有する二重特異性ダイアボディ構築物もＣＤＣ活性を付与する（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：６２９－３１）。
補体活性は、重鎖のアミノ酸残基３１８、３２０、及び３２２の少なくとも１つを、Ａｌａなどの異なる側鎖を有する残基に変異させることによって低下させることができる。Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、またはＶａｌなどの他のアルキル置換非イオン性残基、または３つの残基のうちのいずれか１つの代わりにあるＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、及びＰｒｏなどの芳香族非極性残基も、Ｃ１ｑ結合を減少させるかまたは無効にする。Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、及びＭｅｔは、Ｃ１ｑ結合活性を減少させるかまたは無効にするために、残基３２０及び３２２で使用できるが、３１８では使用できない。極性残基による３１８（Ｇｌｕ）残基の置換は、Ｃ１ｑ結合活性を変更し得るが、無効にする可能性はない。残基２９７（Ａｓｎ）をＡｌａに置き換えることにより、溶解活性が取り除かれるが、Ｃ１ｑに対する親和性はわずかに低下する（約３分の１になる）のみである。この変化は、グリコシル化部位と、補体活性化に必要な炭水化物の存在とを破壊する。この部位での任意の他の置換も、グリコシル化部位を破壊する。以下の変異及びそれらの任意の組み合わせもまた、Ｃ１ｑ結合を減少させる：Ｄ２７０Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｐ３２９Ａ、及びＰ３１１Ｓ（ＷＯ０６／０３６２９１を参照）。
ヒト定常領域への言及は、任意の天然のアロタイプまたは天然のアロタイプの多型位置を占める残基の置換を有する定常領域を含む。また、Ｆｃγ受容体結合を減少させるか、またはＦｃＲＮへの結合を増加させるために、上に示したものなど、天然ヒト定常領域に対して最大１、２、５、または１０個の変異が存在し得る。
核酸、ベクター及び宿主細胞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、組換え法を使用して調製される。したがって、いくつかの態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体のいずれか（例えば、本明細書に記載のＣＤＲのいずれか１つ以上）をコードする核酸配列を含む単離された核酸；そのような核酸を含むベクター；抗体をコードする核酸を複製するため及び／または抗体を発現するために使用される核酸が導入される宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；またはヒト細胞である。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、単離されたポリヌクレオチド）は、本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、本明細書に開示される１つ以上のアミノ酸配列（例えば、ＣＤＲ、重鎖、軽鎖、及び／またはフレームワーク領域）をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、本明細書に開示の配列（例えば、ＣＤＲ、重鎖、軽鎖、またはフレームワーク領域配列）に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。
さらなる態様では、本明細書に記載の抗体を作製する方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法は、抗体の発現に好適である条件下で、本明細書に記載の宿主細胞（例えば、本明細書に記載のポリヌクレオチドまたはベクターを発現する宿主細胞）を培養することを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、その後、宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収する。
本開示の抗体またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む好適なベクターとしては、クローニングベクター及び発現ベクターが挙げられる。選択されるクローニングベクターは、使用することを意図する宿主細胞に応じて異なり得るが、有用なクローニングベクターは、一般に自己複製能力を有しており、特定の制限エンドヌクレアーゼに対して単一の標的を有してもよく、及び／またはベクターを含むクローンの選択に使用できるマーカーの遺伝子を有してもよい。例には、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３及びｐＡＴ２８などのシャトルベクターが挙げられる。クローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの商用ベンダーから入手できる。
発現ベクターは、一般に、本開示の核酸を含む複製可能なポリヌクレオチド構築物である。発現ベクターは、宿主細胞内でエピソームとして、または染色体ＤＮＡの不可欠な部分として複製することができる。好適な発現ベクターとしては、これらに限定されないが、プラスミド、ウイルスベクター、例えば、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、及び任意の他のベクターが挙げられる。
組換え抗体の発現
抗体は、典型的には、組換え発現によって産生される。組換えポリヌクレオチド構築物は、典型的には、抗体鎖のコード配列に動作可能に連結された発現制御配列を含み、天然関連または異種プロモーター領域を含む。好ましくは、発現制御配列は、真核宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトできるベクター中の真核プロモーター系である。ベクターが適切な宿主に組み込まれると、宿主は、ヌクレオチド配列の高レベル発現、ならびに交差反応抗体の収集及び精製に好適な条件下で維持される。
哺乳動物細胞は、免疫グロブリンまたはそのフラグメントをコードするヌクレオチドセグメントを発現するための好ましい宿主である。Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ，（ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮＹ，１９８７）を参照されたい。インタクト異種タンパク質を分泌できる複数の好適な宿主細胞株が当技術分野で開発されており、ＣＨＯ細胞株（例えば、ＤＧ４４）、様々なＣＯＳ細胞株、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、Ｌ細胞、及び非抗体産生骨髄腫、例えばＳｐ２／０及びＮＳ０などが挙げられる。好ましくは、細胞は、非ヒトである。これらの細胞の発現ベクターは、複製起点、プロモーター、エンハンサーなどの発現制御配列（Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｒｅｖ．８９：４９（１９８６））、及びリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、及び転写ターミネーター配列などの必要な処理情報部位を含むことができる。好ましい発現制御配列は、内因性遺伝子、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルスなどに由来するプロモーターである。Ｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９（１９９２）を参照されたい。
一旦発現すると、抗体は、ＨＰＬＣ精製、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動など、当技術分野の標準手順に従って精製することができる（概して、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ，１９８２）を参照）。
抗体の特徴付け
結合親和性、結合動態、及び交差反応性を分析するための方法は、当技術分野で知られている。例えば、Ｅｒｎｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｃｏｎｓｔａｎｔｓ，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ ｅｄ．２００９）を参照されたい。これらの方法としては、これらに限定されないが、固相結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ）、免疫沈降、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、結合平衡除外法（例えば、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標））、フローサイトメトリー、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、ＢｉｏＬａｙｅｒ干渉法（例えば、Ｏｃｔｅｔ（商標）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ））、及びウエスタンブロット分析が挙げられる。ＳＰＲ技術は、例えば、Ｈａｈｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｄａｔａ Ｕｓｉｎｇ ＳＰＲ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ（２００４）に概説されている。典型的なＳＰＲ実験では、１つの相互作用物質（標的または標的化剤）がフローセル内のＳＰＲ活性な金コーティングガラススライド上に固定され、他の相互作用物質を含むサンプルが導入されて表面を流れる。特定の波長の光が表面に照射されると、金の光反射率の変化が結合及び結合の動態を示す。いくつかの実施形態では、結合平衡除外法を使用して親和性を決定する。この技術は、例えば、Ｄａｒｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｓｓａｙ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｖｏｌ．２，ｎｕｍｂｅｒ ６ ６４７－６５７（２００４）に記載されている。いくつかの実施形態では、ＢｉｏＬａｙｅｒ干渉法アッセイが、親和性を決定するために使用される。この技術は、例えば、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，３８：４００－４０７（２０１０）；Ｄｙｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，３７９：３０－４１（２０１２）に記載されている。
ＩＶ．治療方法
いくつかの実施形態では、対象におけるがんを治療するための方法が提供される。いくつかの実施形態では、この方法は、（１）腫瘍関連抗原を結合する第１の抗体及び細胞傷害剤を含む抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）と、（２）免疫細胞エンゲージャーに結合する第２の抗体と、を対象に投与することを含み、ここで、細胞傷害剤は、チューブリン破壊剤であり、第２の抗体は、１つ以上の活性化ＦｃγＲへの結合が増強されているＦｃを含む。いくつかの実施形態では、第２の抗体のＦｃは、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、及び／またはＦｃγＲＩのうちの１つ以上への結合が増強されている。いくつかの実施形態では、第２の抗体のＦｃは、１つ以上の阻害性ＦｃγＲへの結合が減少している。いくつかの実施形態では、第２の抗体のＦｃは、ＦｃγＲＩＩｂへの結合が減少している。
いくつかの実施形態では、がんを治療する方法は、がんを有する対象に（１）抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）及び（２）免疫細胞エンゲージャーを結合する第２の抗体を投与することを含み、ＡＤＣは、腫瘍関連抗原を結合する第１の抗体及び細胞傷害剤を含み、細胞傷害剤は、チューブリン破壊剤であり、第２の抗体は、同じアイソタイプの対応する野生型Ｆｃと比較して、増強されたＡＤＣＣ活性を有するＦｃを含む。いくつかの実施形態では、第２の抗体は、同じアイソタイプの対応する野生型Ｆｃと比較して、増強されたＡＤＣＣ及びＡＤＣＰ活性を有するＦｃを含む。いくつかの実施形態では、第２の抗体のＦｃは、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、及び／またはＦｃγＲＩのうちの１つ以上への結合が増強されている。いくつかの実施形態では、第２の抗体のＦｃは、１つ以上の阻害性ＦｃγＲへの結合が減少している。いくつかの実施形態では、第２の抗体のＦｃは、ＦｃγＲＩＩｂへの結合が減少している。
様々な実施形態において、第２の抗体は、非フコシル化抗体である。様々なそのような実施形態では、第２の抗体が、抗体の組成物に含まれ、組成物中の少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の抗体が、非フコシル化されている。
いくつかの実施形態では、第２の抗体は、ＴＩＧＩＴを結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗体は、ＣＤ４０を結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗体は、本明細書で提供される免疫細胞エンゲージャーを結合する。
様々な実施形態では、ＡＤＣ中の第１の抗体にコンジュゲートされているチューブリン破壊剤は、アウリスタチン、チューブリシン、コルヒチン、ビンカアルカロイド、タキサン、クリプトフィシン、メイタンシノイド、またはヘミアステリンである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＭＭＡＥまたはＭＭＡＦを含む。様々な実施形態では、第１の抗体は、本明細書に提供される腫瘍関連抗原などの腫瘍関連抗原を結合する。
本明細書に記載のＡＤＣのいずれも、本明細書に記載の免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体のいずれかと組み合わせてもよい。例えば、いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＰＤＬ１Ｖであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＡＬＰＶであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－Ｂ７Ｈ４Ｖであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、リファスツズマブベドチンであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＥＡ－ＣＤ４０であり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＥＡ－ＣＤ７０であり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－Ｂ６Ａであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＣＤ２２８Ａであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＬＩＶ１Ａであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＳＴＮＶであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ブレンツキシマブベドチン（ＳＧＮ－３５）であり、第２の抗体はＳＥＡ－ＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、エンホルツマブベドチンであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ｄｉｓｉｔａｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、チソツマブベドチンであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＢＣＭＡである。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＰＤＬ１Ｖであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ４０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＡＬＰＶであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ４０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－Ｂ７Ｈ４Ｖであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ４０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、リファスツズマブベドチンであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ４０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＥＡ－ＣＤ４０であり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ４０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＥＡ－ＣＤ７０であり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ４０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－Ｂ６Ａであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ４０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＣＤ２２８Ａであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ４０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＬＩＶ１Ａであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ４０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＳＴＮＶであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ４０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ブレンツキシマブベドチン（ＳＧＮ－３５）であり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ４０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、エンホルツマブベドチンであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ４０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ｄｉｓｉｔａｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ４０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、チソツマブベドチンであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ４０である。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＰＤＬ１Ｖであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ７０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＡＬＰＶであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ７０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－Ｂ７Ｈ４Ｖであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ７０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、リファスツズマブベドチンであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ７０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＥＡ－ＣＤ４０であり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ７０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＥＡ－ＣＤ７０であり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ７０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－Ｂ６Ａであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ７０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＣＤ２２８Ａであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ７０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＬＩＶ１Ａであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ７０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＳＴＮＶであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ７０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ブレンツキシマブベドチン（ＳＧＮ－３５）であり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ７０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、エンホルツマブベドチンであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ７０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ｄｉｓｉｔａｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ７０である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、チソツマブベドチンであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＣＤ７０である。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＰＤＬ１Ｖであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＴＧＴである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＡＬＰＶであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＴＧＴである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－Ｂ７Ｈ４Ｖであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＴＧＴである 。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、リファスツズマブベドチンであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＴＧＴである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＥＡ－ＣＤ４０であり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＴＧＴである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＥＡ－ＣＤ７０であり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＴＧＴである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－Ｂ６Ａであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＴＧＴである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＣＤ２２８Ａであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＴＧＴである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＬＩＶ１Ａであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＴＧＴである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ＳＧＮ－ＳＴＮＶであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＴＧＴである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ブレンツキシマブベドチン（ＳＧＮ－３５）であり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＴＧＴである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、エンホルツマブベドチンであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＴＧＴである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ｄｉｓｉｔａｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＴＧＴである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、チソツマブベドチンであり、第２の抗体は、ＳＥＡ－ＴＧＴである。
いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
いくつかの実施形態では、がんは、膀胱癌、乳癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、食道癌、胃腸癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、膵癌、大腸癌、結腸癌、腎癌、明細胞腎癌、頭頸部癌、肺癌、肺腺癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、胚細胞癌、骨癌、肝癌、甲状腺癌、皮膚癌、黒色腫、中枢神経系の新生物、中皮腫、リンパ腫、白血病、慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄腫、または肉腫である。いくつかの実施形態では、がんは、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、精巣癌、膵癌、肺腺癌、膀胱癌、頭頸部癌、前立腺癌、乳癌、中皮腫、及び明細胞腎癌から選択される。いくつかの実施形態では、がんは、これらに限定されないが、例えば、急性骨髄性、慢性骨髄性、急性リンパ性または慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、脾辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、または結節外辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫などのリンパ腫または白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、及びホジキンリンパ腫から選択される。いくつかの実施形態では、がん、転移性癌である。
いくつかの実施形態では、がんは、Ｔ細胞応答を駆動するためのより多くの抗原を有するので、高い腫瘍変異負荷を有するがんである。したがって、いくつかの実施形態では、がんは、肺癌、黒色腫、膀胱癌、または胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）などの変異負荷の高いがんである。いくつかの実施形態では、がんは、マイクロサテライト不安定性を有する。
様々な実施形態では、第２の抗体は、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞を枯渇させ、抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化し、ＣＤ８Ｔ細胞応答を増強し、共刺激受容体を上方制御し、及び／または免疫活性化サイトカイン（ＣＸＣＬ１０及び／またはＩＦＮγ）の放出を促進する。いくつかの実施形態では、第２の抗体は、免疫抑制サイトカイン（ＩＬ１０及び／またはＭＤＣなど）よりも高い程度まで免疫活性化サイトカインの放出を促進する。
ＡＤＣ及び第２の抗体は、同時にまたは順次投与され得る。順次投与では、ＡＤＣの初回用量を第２の抗体の初回用量の前に投与するか、または第２の抗体の初回用量をＡＤＣの前に投与することができる。同時投与では、いくつかの実施形態では、ＡＤＣ及び第２の抗体は、別の医薬組成物として、または同じ医薬組成物中で投与され得る。
いくつかの実施形態では、治療剤は、治療上有効な量または用量で投与される。１日用量範囲約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２００ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇを使用することができる。しかし、投与量は、いくつかの要因、例えば、選択された投与経路、組成物の製剤化、患者の応答、状態の重症度、対象の体重、及び処方医の判断に応じて変動し得る。投与量は、個々の患者の必要に応じて、時間の経過とともに増加または減少させることができる。場合によっては、患者は、最初に低用量が投与され、その後、患者が耐えられる有効な投与量まで増加させる。有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の特定の併用療法により観察される活性の増強は、対応する単剤療法と比較して、一定の利点を有する。例えば、いくつかの実施形態では、ＡＤＣ及び第２の抗体を組み合わせた投与が、ＡＤＣまたは第２の抗体のいずれかが単剤療法として投与される場合の毒性プロファイルと同等の毒性プロファイルを有する。いくつかの実施形態では、組み合わせて投与される場合のＡＤＣ及び／または第２の抗体の有効用量は、単剤療法として投与される場合より少ない。いくつかの実施形態では、ＡＤＣ及び第２の抗体を組み合わせて投与することにより、対応する単剤治療と比較して、より長い応答期間が得られる。いくつかの実施形態では、ＡＤＣ及び第２の抗体を組み合わせて投与することにより、対応する単剤療法と比較して、無増悪生存期間が長くなる。いくつかの実施形態では、ＡＤＣ及び第２の抗体の投与を使用して、いずれかの剤の個々による単独療法治療後に再発する再発がんを治療することができる。
医薬組成物の投与経路は、経口、腹腔内、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、吸入、局所、病変内、直腸、気管支内、経鼻、経粘膜、腸、眼または耳への送達、または当分野で知られている任意の他の方法であり得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の治療剤が、経口、静脈内、または腹腔内に投与される。
併用投与される治療剤は、一緒にまたは別々に、同時にまたは異なる時間に投与することができる。投与する場合、治療剤は独立して、必要に応じて、１日１回、２回、３回、４回、またはそれより多く、またはそれより少ない頻度で投与することができる。いくつかの実施形態では、投与される治療剤は、１日１回投与される。いくつかの実施形態では、投与される治療剤は、例えば混合物として同時に（複数可）投与される。いくつかの実施形態では、治療剤のうちの１つ以上が持続放出製剤中で投与される。
いくつかの実施形態では、治療剤は、同時に投与される。いくつかの実施形態では、治療剤は、順次投与される。例えば、いくつかの実施形態では、第１の治療剤は、第２の治療薬を投与する、例えば、約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１５日、２０日、２５日、３０日、４０日、５０日、６０日、７０日、８０日、９０日、１００日またはそれ以上前に投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される治療は、長期間にわたって、例えば、少なくとも３０日、４０日、５０日、６０日、７０日、８０日、９０日、１００日、１５０日、２００日、２５０日、３００日、３５０日、またはそれ以上の間、対象に投与される。
Ｖ．組成物及びキット
別の態様では、対象におけるがんの治療または予防に使用するための組成物及びキットが提供される。
医薬組成物
いくつかの実施形態では、本方法で使用するための医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、第１の医薬組成物中で投与され、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、第２の医薬組成物中で投与される。いくつかの実施形態では、ＡＤＣ及び免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体は、１つの医薬組成物中で投与される。
本発明で使用するための製剤を調製するためのガイダンスは、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄ．，２００６、上記；Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ：Ｔｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｄｒｕｇ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，Ｓｗｅｅｔｍａｎ，２００５，Ｌｏｎｄｏｎ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ；Ｎｉａｚｉ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ，２００４，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；及びＧｉｂｓｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｆｒｏｍ Ｃａｎｄｉｄａｔｅ Ｄｒｕｇ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍ，２００１，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ Ｐｒｅｓｓに記載され、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の医薬組成物は、当業者に知られている方法、すなわち、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、乳化、封入、捕捉または凍結乾燥プロセスによって製造することができる。以下の方法及び賦形剤は単なる例示であり、決して限定するものではない。
いくつかの実施形態では、１つ以上の治療剤が、持続放出、制御放出、延長放出、時限放出、または遅延放出製剤で、例えば、治療剤を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックス中で送達するために調製される。様々なタイプの持続放出材料が確立されており、当業者に周知である。現在の延長放出製剤としては、フィルムコーティング錠、多粒子またはペレットシステム、親水性または親油性材料を使用したマトリックス技術、及び細孔形成賦形剤を含むワックスベース錠剤が挙げられる（例えば、Ｈｕａｎｇ，ｅｔ ａｌ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．２９：７９（２００３）；Ｐｅａｒｎｃｈｏｂ，ｅｔ ａｌ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．２９：９２５（２００３）；Ｍａｇｇｉ，ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．５５：９９（２００３）；Ｋｈａｎｖｉｌｋａｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．２２８：６０１（２００２）；及びＳｃｈｍｉｄｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．２１６：９（２００１）を参照されたい）。持続放出送達システムは、その設計に応じて、数時間または数日にわたって、例えば、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１６時間、２０時間、２４時間、またはそれ以上にわたって化合物を放出することができる。通常、持続放出製剤は、天然または合成ポリマー、例えば、高分子ビニルピロリドン、例えば、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）；カルボキシビニル親水性ポリマー；疎水性及び／または親水性親水コロイド、例えば、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、及びヒドロキシプロピルメチルセルロース；及びカルボキシポリメチレンを使用して調製できる。
経口投与の場合、治療剤は、当技術分野で周知の薬学的に許容される担体と組み合わせることによって容易に製剤化され得る。そのような担体は、化合物を、治療される患者による経口摂取のために、錠剤、丸薬、糖衣錠、カプセル、エマルジョン、親油性及び親水性の懸濁液、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして製剤化することができる。経口使用のための医薬組成物は、化合物を固形賦形剤と混合することによって得ることができ、任意に、所望される場合、好適な補助剤を添加した後、結果として得られる混合物を粉砕し、顆粒の混合物を処理して、錠剤または糖衣錠芯を得る。好適な賦形剤としては、例えば、フィラー、例えば、糖類、例えば、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトール；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）が挙げられる。所望の場合、架橋ポリビニルピロリドン、アガー、またはアルギン酸もしくはその塩、例えば、アルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤が添加され得る。
治療剤は、ボーラス注射または継続的注入によるなど、注射による非経口投与用に製剤化され得る。注射用に、化合物（複数可）は、水性または非水性溶媒、例えば、植物性または他の類似の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステルまたはプロピレングリコール；及び必要ならば、可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤及び保存剤などの通常使用されている添加剤と共に、溶解、懸濁または乳化させることによって調製物中に製剤化することができる。いくつかの実施形態では、化合物は、水溶液、好ましくはハンクス液、リンゲル液、または生理食塩水緩衝液などの生理学的に適合する緩衝液中で製剤化することができる。注射用製剤は、単位剤形で、例えばアンプル中で提供することができ、または多用量容器に、保存剤を加えて提供することができる。組成物は、油性ビヒクルまたは水性ビヒクル中の懸濁液、溶液または乳濁液のような形態を取ることができ、懸濁化剤、安定剤及び／または分散剤のような製剤化剤を含むことができる。
治療剤は、経粘膜または経皮手段によって全身投与することができる。経粘膜または経皮投与のために、浸透させる障壁に適切な浸透剤が製剤中に使用される。局所投与のために、剤は、軟膏剤、クリーム、軟膏、粉末及びゲルに製剤化される。一実施形態では、経皮送達剤は、ＤＭＳＯであり得る。経皮送達システムには、例えばパッチが含まれ得る。経粘膜投与のために、浸透すべき障壁に適切な浸透剤が製剤に使用される。そのような浸透剤は、当技術分野で一般的に知られている。例示的な経皮送達製剤としては、米国特許第６，５８９，５４９号；同第６，５４４，５４８号；同第６，５１７，８６４号；同第６，５１２，０１０号；同第６，４６５，００６号；同第６，３７９，６９６号；同第６，３１２，７１７号及び同第６，３１０，１７７号に記載されているものが挙げられ、これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、許容される担体及び／賦形剤を含む。薬学的に許容される担体としては、生理学的に適合性があり、好ましくは治療剤の活性と干渉しないかまたは他の方法で阻害しない任意の溶媒、分散媒、またはコーティングが含まれる。いくつかの実施形態では、担体は、静脈内、筋肉内、経口、腹腔内、経皮、局所、または皮下投与に好適である。薬学的に許容される担体は、例えば、組成物を安定化する、または活性剤（複数可）の吸収を増加または減少させる働きをする、１つ以上の生理学的に許容される化合物を含むことができる。生理学的に許容される化合物としては、例えば、グルコース、スクロース、またはデキストランなどの炭水化物、アスコルビン酸またはグルタチオンなどの抗酸化剤、キレート剤、低分子量タンパク質、活性剤のクリアランスまたは加水分解を減少させる組成物、または賦形剤または他の安定剤及び／または緩衝剤を挙げることができる。他の薬学的に許容される担体及びそれらの製剤は周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ． Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５に一般的に記載されている。様々な薬学的に許容される賦形剤が当技術分野で周知であり、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（５ｔｈ ｅｄ．，Ｅｄ．Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）に記載されている。
本開示の医薬組成物の投与量及び所望の薬物濃度は、想定される特定の使用に応じて異なり得る。適切な投与量または投与経路の決定は、十分に当業者の技術の範囲内である。好適な投与量は本明細書にも記載されている。
キット
いくつかの実施形態では、がんを有する対象の治療に使用するためのキットが提供される。いくつかの実施形態では、キットは、以下を含む：
本明細書で提供される、チューブリン破壊剤にコンジュゲートされた第１の抗体を含む抗体－薬物複合体；及び
本明細書で提供される、免疫細胞エンゲージャーを結合する第２の抗体。
いくつかの実施形態では、キットは、本発明の方法を実施するための指示（すなわち、プロトコル）（例えば、がんを治療するためにキットを使用するための指示）を含む説明資料をさらに含むことができる。説明資料は、一般的に、書面または印刷資料を含むが、これらに限定されない。そのような指示を格納し、それらをエンドユーザーに伝達することができる任意の媒体が、本発明によって企図される。そのような媒体としては、これらに限定されないが、電子記憶媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学媒体（例えば、ＣＤ ＲＯＭ）などが挙げられる。そのような媒体としては、そのような説明資料を提供するインターネットサイトへのアドレスが含まれてもよい。
ＶＩ．実施例
以下に論じられる実施例は、単に本発明の例示となるよう意図されており、決して本発明を限定するものと見なされるべきではない。実施例は、以下の実験が実施された全ての実験または唯一の実験であることを表すようには意図されていない。使用される数（例えば、量、温度等）に対する正確さを確保するよう努力されているが、いくつかの実験誤差及び偏差が計上されるべきである。別途示されない限り、部は、重量部であり、分子量は、平均分子量であり、温度は、摂氏温度であり、圧力は、大気圧であるか、またはそれに近い。
実施例１：非指向性化学療法剤では、Ｔ細胞応答を損なう
１．１ 材料及び方法
ヒト初代Ｔ細胞は、ＣＤ３／ＣＤ２８コーティングビーズを使用して増殖するように誘導させた。２０，０００個のカルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル（ＣＳＦＥ）で標識された濃縮ＣＤ３＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ３ＣＤ２８ビーズ（４Ｔ細胞あたり１ビーズ）＋１０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２と共に４日間インキュベートした。ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で細胞を染色し、生細胞をフローサイトメトリーによりカウントした。
１．２ 結果
図１に示すとおり、初代ヒトＴ細胞の増殖は、試験したすべての単一遊離剤化学療法剤によって顕著に減少した。これらのデータは、化学療法剤への全身暴露が、免疫腫瘍剤（例えば、免疫細胞エンゲージャーを結合する抗体）からの応答など、患者のＴ細胞媒介活性を制限する可能性があることを示唆している。
実施例２：ベドチンＡＤＣは、Ｔ細胞への直接送達にもかかわらず、Ｔ細胞増殖を阻害しない（ＣＤ３０＋ＣＤ８Ｔ細胞のＢＶ（ＳＧＮ－３５）処置）
２．１ 材料及び方法
ヒト初代ＣＤ８Ｔ細胞をＣＳＦＥで標識し、抗ＣＤ３－ＣＤ２８ビーズ（４Ｔ細胞あたり１ビーズ）＋１０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２で４日間増殖させるように誘導させた。活性化中、ＣＤ３０は、Ｔ細胞の表面でアップレギュレートさせた。ＣＤ３０＋ＣＤ８Ｔ細胞は、ＣＤ３０指向ｖｃ－ＭＭＡＥ（ブレンツキシマブベドチン；ＢＶ；ＳＧＮ－３５）またはアイソタイプ対照のいずれかで処置した。ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で細胞を染色し、生細胞をフローサイトメトリーによりカウントした。
２．２ 結果
図２に示すとおり、初代ヒトＣＤ３０＋ＣＤ８Ｔ細胞の細胞増殖は、ＢＶによる処置によって有意に変化することはなかった。これらのデータは、ベドチンＡＤＣの全身曝露は、たとえＣＤ８Ｔ細胞を直接標的としたとしても、ＣＤ８媒介抗腫瘍応答に影響を与えないことを示唆している。
実施例３：小胞体ストレス誘導は、ベドチンＡＤＣで優れている
３．１ 材料及び方法
小胞体（ＥＲ）ストレスの誘導は、免疫原性細胞応答の開始に必要な最初のステップの１つである（図３Ｂ）。ＭＩＡ－ＰａＣａ－２膵癌細胞株は、ベドチン（ＭＭＡＥ）、エムタンシン（ＤＭ１）、エキサテカンＤＳ－８２０１（Ｅｘ）、及びこの系において細胞死を誘導するＩＣ５０濃度での遊離微小管安定剤パクリタキセルなど、異なるペイロードにコンジュゲートさせたＡＤＣにより処置した。処置の３６時間または４８時間後、ウエスタンブロット分析のために細胞を回収し、上流のＥＲストレスマーカーｐＪＮＫ（図３Ｂ）をウエスタンブロットによって判定した。
３．１．１ ウエスタンブロット
処置した細胞を１４，０００～１６，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、－２０℃で保存した。細胞ペレットを４Ｘ ＢＯＬＴ（商標）ＬＤＳサンプルバッファー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒカタログ番号Ｂ０００７）に再懸濁し、９５℃で５～１０分間加熱して溶解し、細胞ライセートを産生した。サンプルライセートを、ＭＯＰＳバッファー中、１４０Ｖで１時間４０分間、Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ４～１２％勾配ゲル上で泳動させた。次に、Ｂｉｓ－ＴｒｉｓゲルをｉＢｌｏｔ２を使用してニトロセルロース膜に転写した。膜を１Ｘ ＴＢＳで１回洗浄し、Ｌｉｃｏｒブロッキングバッファーで４℃で一晩インキュベートした。膜を１Ｘ ＴＢＳ－Ｔで４回、それぞれ５～１０分間洗浄した。画像は、８４μｍの解像度及び自動強度を使用して、Ｌｉｃｏｒ Ｏｄｙｓｓｅｙシステムで現像した。
３．１．２ ＣＨＯＰルシフェラーゼ誘導アッセイ
ＥＲストレス誘導への下流経路の判定は、ＣＨＯＰ駆動ルシフェラーゼレポーター細胞株で形質導入したＭＩＡ－ＰａＣａ－２細胞を使用して行った。ＣＨＯＰは、ＥＲストレス応答カスケードの最後のステップであり、その発現レベルはＥＲストレスによって増加する。臨床開発中のいくつかのＡＤＣペイロード（図３Ａ）を判定に使用した。ＣＨＯＰの誘導は、ＣＨＯＰ活性のレポーターシステムを使用して、製造業者の指示に従って測定した（Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイシステム、Ｐｒｏｍｅｇａ）。簡潔に説明すると、１００，０００細胞／ウェルを９６ウェルの平底透明プレートに播種した（アリコート１５０μＬ／ウェル）。２００μＬの培地をプレートの外側のウェルに分注し、細胞のウェルの周りに培地の「ブランケット」を提供した。２４、４８、及び７２時間で、プレートをインキュベーターから取り出し、室温に戻した。１００μＬの培地をウェルから取り出した。１００μＬのＢｒｉｇｈｔＧｌｏ試薬を各ウェルに添加した。プレートを少なくとも２分間振とう後に読み取った。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ ＣＴＧ ９６－ｗｅｌｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌを使用してプレートを読み取った。
３．２ 結果
図３Ｃ～３Ｅに示すとおり、アウリスタチンベースのＡＤＣ（ＭＭＡＥ－ＡＤＣまたはＭＭＡＦ－ＡＤＣ）処置は、試験対象の様々なＡＤＣペイロードの早期ＥＲストレス応答ｐＪＮＫシグナルを誘導することがわかった唯一の条件であった。ＥＲストレスの誘導は、ＥＲが細胞のタンパク質翻訳の必要性に対応するために拡張及び収縮するためにインタクトの微小管を必要とするため、微小管の破壊に結びつく。このＥＲストレスを誘導する微小管破壊剤としてのＭＭＡＥの能力は、示されているデータに例示される。
図３Ｄ～Ｅは、ＥＲストレス経路での下流シグナルであるＣＨＯＰが、ＭＭＡＥ ＡＤＣによって顕著に誘導されること、及びＥＲストレスへの下流経路も他のペイロードと比較してＭＭＡＥ ＡＤＣによって異なる方法で駆動されることを示している。
実施例４：異なる臨床ＡＤＣペイロードのＩＣＤの可能性
４．１ 材料及び方法
ＩＣＤの古典的なマーカーには、ＥＲストレス応答の誘導と同時に発生するカルレティキュリンの表面露出ならびにＡＴＰ及びＨＭＧＢ１の放出が含まれる。これらの分子は、危険シグナルと見なされ、自然免疫細胞を活性化し、腫瘍抗原特異的Ｔ細胞応答を増加させる。ＭＩＡ－ＰａＣａ－２がん細胞は、現在臨床段階にあるＩＣ５０濃度のＡＤＣ担持ペイロード、すなわちＭＭＡＥ、ＤＭ１、及びエキサテカン（Ｅｘ）により処置した。次に、処置した細胞をＩＣＤマーカーの誘導について分析した。シスプラチンは、細胞死を引き起こすことができるが、ＩＣＤを誘導することが知られていないため、ネガティブ対照として使用した。
１ウェルあたり１００，０００～１５０，０００個の細胞を９６ウェルディッシュに播種した。細胞は、５０～６０％のコンフルエンシーに達した。培地を除去し、細胞のウェルごとに新鮮な培養培地を添加した。１μＭの薬物１μｇ／ｍＬを細胞の各ウェルに添加した。２４時間後、２５０μＬ（ＡＴＰ放出アッセイの場合）または２００μＬ（ＨＭＧＢ１アッセイの場合）の培地を収集し、ラベル付きの１．５ｍＬエッペンドルフチューブに移した。サンプルの各チューブを１０，０００ｒｐｍで１分間遠心分離した。５０μＬの培地を９６ウェル透明底プレートのウェルに移した。５０μＬのＣＴＧを各ウェルに添加した。プレートを１～２分間振とうした。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒを使用してプレートを読み取った。
Ｅｎｖｉｓｉｏｎ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒを使用して、ウェルあたりの発光強度によってＨＭＧＢ１放出レベルをモニターした。ＨＭＧＢ１及びＡＴＰの放出レベルは、未処置サンプルのバックグラウンド値に対する倍率変化として報告した。取得した値をテキストファイルに変換し、Ｅｘｃｅｌ及びＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用してエクスポートし、分析した。
４．２ 結果
図４Ａに示すとおり、ｖｃ－ＭＭＡＥは、試験対象の他のペイロードと比較して、ＡＴＰの放出の駆動において強力であった。ＨＭＧＢ１の放出はＩＣＤの誘導に関連しているが、その放出は、細胞が壊死を起こし始めたときにも見られ、堅牢な免疫細胞の結合とは直接関連していない。ＭＩＡ－ＰａＣａ－２細胞をマイクロチューブリン破壊剤ｖｃ－ＭＭＡＥ及びＤＭ１により処置することにより、強力なＨＭＧＢ１放出が生じ、これはトポイソメラーゼ阻害剤エキサテカン（Ｅｘ）とは対照的である（図４Ｂ）。
実施例５：ＡＤＣペイロードの免疫活性化の判定
５．１ 材料及び方法
５．１．１ 細胞
図５Ａに示すとおり、ＭＭＡＥにコンジュゲートさせたＡＤＣは、微小管を破壊し、ＥＲストレス応答をもたらし、これにより、免疫原性細胞死（ＩＣＤ）をもたらす。死にかけている細胞は、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、ＡＴＰ、ＨＭＧＢ１、カルレティキュリン（ＣＲＴ）などの免疫活性化分子（損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ））を放出する。これらのＤＡＭＰは、ＬＰＲ１／ＣＤ９１、Ｐ２ＲＸ７、Ｐ２ＲＹ２、ＡＧＥＲ、ＴＬＲ２、及びＴＬＲ４などの受容体を結合し、これにより自然免疫系を活性化する。この活性化は、例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＨＬＡ－ＤＲ、及びＣＤ４０などのタンパク質の上方制御、単球でのＭＨＣＩＩの発現の増加、及びＣＸＣＬ－１０／ＩＰ１０及びＩＬ－１２などのサイトカインの放出をもたらし、これにより、抗腫瘍Ｔ細胞応答を開始する。このようなＴ細胞応答は、ＰＤ－１／Ｌ１阻害剤によってさらに増大される。本明細書では、ＩＣＤの免疫学的影響は、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）培養で判定した。異なるペイロードにコンジュゲートさせたＡＤＣにさらしたがん細胞をＰＢＭＣに添加した。
ＥＣ５０濃度のＡＤＣまたは遊離薬物に１８時間曝露（３７℃、５％ＣＯ２）したＬ５４０ｃｙがん細胞を洗浄し、１０ｘ１０６細胞／ｍＬに懸濁させた２５０ｕｌのＰＢＭＣを、細胞を死滅させたがん細胞株に４８時間添加した。組織培養培地を採取し、Ｌｕｍｉｎｅｘ判定によってサイトカインを測定した。
処置は、２名の独立したＰＢＭＣドナーに対して３回実施した。
５．１．２ 共刺激分子の表面発現
処置後、細胞ペレットを５０ｍＬのＢＤ ＦＡＣバッファーに再懸濁させ、９６ウェルの丸底マイクロタイタープレートに移した。Ｆｃ受容体は、氷上で３０分間、ヒト１００μｇ／ｍＬ Ｆｃフラグメントでブロックした。１：１００に希釈したＰＥ－ＨＬＡ－ＤＲ（ＭＨＣＩＩ）及びＡＰＣ－ＣＤ１４で構成されるマスターミックスは、１００ｍｇ／ｍＬのヒト精製Ｆｃフラグメントを含むＢＤ ＦＡＣバッファーで調製した。再懸濁細胞９０μｌを含む各ウェルにマスターミックス１０μｌを加え、サンプルを氷上で１時間インキュベートした。次いで、細胞を予冷したエッペンドルフ５８１０Ｒ遠心分離機で、４００ｘｇで５分間遠心分離した。上清を除去し、細胞を２００ｍＬのＢＤ ＦＡＣバッファーで洗浄した。洗浄を２回行い、細胞を２００ｍＬのＦＡＣバッファーに再懸濁し、サンプルをＡｔｔｕｎｅフローサイトメーターで分析した。ＨＬＡ－ＤＲ平均蛍光は、ＦｌｏｗＪｏ分析ソフトウェアを使用して決定した。
５．１．３ サイトカインの産生
処置後、ＰＢＭＣ／がん細胞共培養物を、プレートアダプターを用いてエッペンドルフ５８１０Ｒで８００ｒｐｍで５分間回転させた。血清または組織培養物上清を除去し、９６ストリップチューブラックに移し、サンプルを処理するまで－８０℃で凍結させた。凍結組織培養物上清及び血清を４℃で一晩解凍し、ＭｉｌｌｉｐｏｒｅのＬｕｍｉｎｅｘ Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ Ｋｉｔを使用してサイトカイン産生のために処理した。
組織培養物上清及び血清サンプルは、製造業者の指示に従って処理した。簡潔に説明すると、アッセイプレートを２００μＬ／ウェルの洗浄バッファーで洗浄し、その後２５μＬの標準またはバッファー、２５μＬのマトリックスまたはサンプル、及び２５μＬの多重化検体ビーズを各ウェルに添加した。サンプルを、４℃で激しく振盪しながら一晩インキュベートした。アッセイプレートは洗浄バッファーで２回洗浄する。
検出抗体（２５μＬ）を各ウェルに加え、室温で１時間インキュベートした。２５μＬのストレプトアビジン－フィコエリトリン（ＳＡ－ＰＥ）を添加し、サンプルを室温で３０分間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで２回洗浄し、ビーズを１５０μＬのシース液に再懸濁させた。Ｘｐｏｎｅｎｔソフトウェアシステムと組み合わせたＬｕｍｉｎｅｘ ＭａｇＰｉｘシステムを使用して、サンプルを分析した。サイトカインレベルは、標準曲線から計算した。
５．２ 結果
表面活性化マーカー（ＭＨＣＩＩ）の増加及び炎症性サイトカイン（ＣＸＣＬ－１０／ＩＰ１０）の放出によって証明されるように、自然細胞活性化が観察された（図５Ｂ～Ｃ）。自然免疫細胞は、ｖｃ－ＭＭＡＥにより処置された腫瘍細胞にさらされたときに活性化される。ｖｃ－ＭＭＡＥによる免疫細胞の活性化は、他のＡＤＣペイロードによる活性化よりもロバストであった（図５Ｂ～Ｃ）。
Ｖｃ－ＭＭＡＥ媒介ＩＣＤは、死んだ腫瘍細胞及び死にかけている腫瘍細胞からの抗原に対する適応免疫応答を活性化する調節細胞死であり、ロバストな自然免疫細胞の活性化、及びその後の特定の腫瘍細胞抗原に対する細胞傷害性Ｔ細胞応答が生じ得る。ここでは、ｖｃ－ＭＭＡＥががん細胞を死滅させることにより、表面ＭＨＣＩＩの増加、及び死細胞の取り込み後の単球／マクロファージからの強力な走化性及び炎症メディエーターである先天性サイトカインＣＸＣＬ１０の放出が誘発されることが実証された。
実施例６：トラスツズマブ主鎖でのペイロード評価
６．１ 材料及び方法
様々な臨床段階のペイロードを担持するトラスツズマブＡＤＣ複合体が、ＥＲストレス及び下流のＩＣＤマーカーであるＡＴＰ及びＨＭＧＢ１を誘導する能力を判定した。使用したペイロードは、ＤＭ１、ＭＭＡＥ、及びエキサテカン（Ｅｘ）であった。
６．２ 結果
２つの観察が得られた。（１）ｖｃＭＭＡＥにコンジュゲートさせたトラスツズマブは、ＡＴＰ及びＨＭＧＢ１の誘導に関連する最もロバストなＥＲストレス応答を引き起こした。（２）後期細胞死マーカーＨＭＧＢ１は、他のペイロードクラスにおいて上昇しているように見え、これは、二次壊死が直接的な（ｆｒａｎｋ）ＩＣＤではなくこれらのペイロードクラスに関連し得ることを示している（図６Ｃ～Ｅ）。ここで得られた知見は、Ｍｉａ－ＰａＣａ－２細胞を使用した実施例４で上述した知見と同様である（図４Ａ～Ｂ）。
実施例７：初期段階のＥＲストレスマーカーの誘導（ＪＮＫシグナル伝達の活性化）は、概してＭＭＡＥ ＡＤＣの方が優れている
７．１ 材料及び方法
実施例５に記載され、図５Ａに示すとおり、ＩＣＤ経路は、様々な態様を含む。この経路は、図７Ａにさらに描写する。図７Ａに示すとおり、及び上述のとおり、初期段階のＭＭＡＥなどのチューブリン破壊剤は、微小管を破壊し、それによってＥＲストレス及びＩＣＤを引き起こす。ＩＣＤは、ＤＡＭＰ、ＡＴＰ、ＨＭＧＢ１、及びＣＲＴなどの免疫活性化分子の放出を引き起こす。その後、これらの分子は、抗腫瘍Ｔ細胞応答を開始できる先天性細胞を活性化し、Ｔ細胞記憶を誘導することができる。このようなＴ細胞応答は、本明細書に記載の免疫細胞エンゲージャーなどの他の免疫モジュレーターと組み合わせることによってさらに増大することができる。以下の例のいくつかは、他のＡＤＣペイロードと比較して、ＩＣＤ経路の前述の様々な態様を誘導するＭＭＡＥの有効性を示す研究結果を報告している。
小胞体（ＥＲ）ストレスの誘導は、免疫原性細胞応答の開始の最初のステップのうちの１つであり、ＪＮＫシグナル伝達の活性化は、ＥＲストレスの指標である（図３Ｂを参照）。この指標を判定するために、ＭＩＡ－ＰａＣａ－２膵癌細胞を、図７Ｂに示すとおり、異なるペイロードにコンジュゲートさせた１μｇ／ｍＬのＡＤＣにより処置した。２４時間または４８時間の処置後、ウエスタンブロット分析のために細胞を回収し、上流のＥＲストレスマーカーｐＪＮＫをＳｉｍｐｌｅ Ｗｅｓｔｅｒｎイムノアッセイ（Ｗｅｓ（商標）、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ）によって判定した。
細胞スクレーパーを使用して、処置した細胞を培養プレートから解離させた。懸濁細胞を１０００ｒｐｍ、４℃で１０分間遠心分離した。上清を除去し、細胞ペレットを溶解バッファー（プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤を含む）に再懸濁させた。氷上で最低１０分間置いた後、サンプルを１３，５００ｇで１０分間遠心分離して、細胞破片をペレット化した。溶解溶液を別のチューブに移し、－８０℃で保存した。ライセートのタンパク質量は、Ｂｉｏ－Ｒａｄ ＤＣ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉ（カタログ番号５０００１１２）を使用して定量し、レーンのローディングが均等になるようにした。サンプルライセート及び試薬をアッセイプレートにロードし、Ｗｅｓ（商標）に入れた。Ｐｈｏｓｐｈｏ－ＪＮＫは、一次抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号９２５１Ｓ）を使用して同定し、ＨＲＰコンジュゲート二次抗体（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅカタログ番号０４２－２０６）及び化学発光基質を使用して免疫プローブした。得られた化学発光シグナルは、統合Ｃｏｍｐａｓｓソフトウェアによって検出し、定量化し、表示した。
７．２ 結果
図７Ｃ～Ｆに示すとおり、試験対象の異なるＡＤＣペイロードのうち、ＭＭＡＥ－ＡＤＣ（ＳＧＤ－１００６）処置は、初期のＥＲストレス応答であるＪＮＫリン酸化の最も強力な誘導因子のうちの１つであった。概して、ＭＭＡＥ－ＡＤＣ処置は、メイタンシン－ＡＤＣ（図７Ｃ）、カンプトテシン－ＡＤＣ（図７Ｄ）、アントラサイクリン－ＡＤＣ（図７Ｅ）、及びカリケアマイシン－ＡＤＣ（図７Ｆ）による処置と比較して、より強いｐＪＮＫシグナルを生成した。（図７Ｃ～ＦのｈＩｇＧは、対応するＡＤＣと同じペイロードを有する非標的化コンジュゲート体である）。唯一の例外は、アントラサイクリンｍｐ－ＥＤＡ－ＰＮＵ（ＳＧＤ－８３３５）を含むＡＤＣによる処置であり、ＭＭＡＥ－ＡＤＣによる処置のものに匹敵するｐＪＮＫシグナルが生じた（図７Ｅ）。ＥＲストレスの誘導は、ＥＲが細胞のタンパク質翻訳の必要性に対応するために拡張及び収縮するためにインタクトの微小管を必要とするため、微小管の破壊に結びつく。このＥＲストレスを誘導する微小管破壊剤としてのＭＭＡＥの能力は、示されているデータに例示される。
実施例８：後期ＥＲストレスマーカーの誘導（ＣＨＯＰ誘導）は、概してＭＭＡＥ ＡＤＣにおいて優れている。
８．１ 材料及び方法
ＣＨＯＰは、ＥＲストレス応答カスケードの最後のステップであり、その発現レベルはＥＲストレスによって増加する（図３Ｂを参照されたい）。ＥＲストレスへのこの下流経路の判定は、ＣＨＯＰ駆動型ルシフェラーゼレポーター（Ｓｉｇｎｏｓｉｓ，Ｉｎｃ．）を形質導入されたＭＩＡ－ＰａＣａ－２細胞を使用して行った。この判定では、異なるペイロードを含む複数のＡＤＣを使用した。図７Ａを参照のこと。
ＭＩＡ－ＰａＣａ－２細胞におけるＣＨＯＰの誘導は、ルシフェラーゼシグナルの検出によって測定した（Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｐｒｏｍｅｇａ）。簡潔に言えば、１０，０００細胞／ウェルを９６ウェル、黒色壁、平底透明プレートに７５μＬ／ウェルで播種した。ＡＤＣは、最終ＩＣ５０濃度を達成するために、２５μＬ／ウェルで投与した。３６、４８、及び７２時間で、プレートをインキュベーターから取り出し、室温に戻した。Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ試薬１００μＬを各ウェルに添加した。プレートを少なくとも５分間振とう後に読み取った。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ ＣＴＧ ９６－ｗｅｌｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌを使用してプレートを読み取った。
８．２ 結果
図８Ａ～Ｄに示すとおり、ｖｃ－ＭＭＡＥ（ＳＧＤ－１００６）を含むＡＤＣによる処置は、メルタンシン（ＳＰＰ－５３５１）またはラブタンシン（ＳＰＤＢ－５３５２）を含むＡＤＣによる処置（図８Ａ）及びｍｐ－ＥＤＡ－ＰＮＵ（ＳＧＤ－８３３５）またはｍｐ－Ｇｌｕｃ－ＤＸＺ（ＳＧＤ－８２４８）を含むＡＤＣによる処置（図８Ｃ）からのＣＨＯＰ誘導に匹敵するＣＨＯＰ誘導をもたらした。また、ＭＭＡＥ（ＳＧＤ－１００６）を含むＡＤＣによる処置は、カンプトテシン（図８Ｂ）、ＡＴ（ＳＧＤ－４８３０）（図８Ｄ）、またはテセリン（ＳＧＤ－７４５５）（図８Ｄ）を含むＡＤＣによる処置からのＣＨＯＰ誘導よりも強いＣＨＯＰ誘導をもたらした。対照的に、オゾガマイシン（ＳＧＤ－８６７７）を含むＡＤＣによる処置は、ｖｃ－ＭＭＡＥ（ＳＧＤ－１００６）（図８Ｄ）を含むＡＤＣによる処置よりもわずかに強いＣＨＯＰ誘導をもたらした。
実施例９：免疫刺激性ＤＡＭＰの誘導は、概してＭＭＡＥ ＡＤＣにおいて優れている
９．１ 材料及び方法
ＩＣＤは、ＡＴＰ、ＨＭＧＢ１、及びＣＲＴなどの免疫活性化分子（損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ））の放出を引き起こす。ＩＣＤを測定するために、ＡＴＰ及びＨＭＧＢ１放出を以下のように判定した。ＭＩＡ－ＰａＣａ－２がん細胞を、様々なペイロードを含むＩＣ５０濃度のＡＤＣにより処置して、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＩＣＤマーカーの誘導を判定した。図７Ａを参照のこと。
２００，０００個／ウェルの細胞を６ウェルＴＣプレートに播種し、プレートＯＮに付着させた。細胞は、５０～６０％のコンフルエンスに達した。ＩＣ５０濃度のＡＤＣを各処置ウェルに添加した。７２時間後、５００μＬ（ＡＴＰ放出アッセイの場合）または７５０μＬ（ＨＭＧＢ１アッセイの場合）の培養上清を収集し、ラベル付きの１．５ｍＬエッペンドルフチューブに移した。サンプルの各チューブを１３，０００ｒｐｍで１分間遠心分離した。５０μＬの培地を、９６ウェルの透明底板の３連ウェルに移した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）５０μＬを各ウェルに添加した。プレートを１～２分間振とうさせた。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ Ｐｌａｔｅ ＲｅａｄｅｒのＣＴＧ ９６－ｗｅｌｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌを使用してプレートを読み取った。次に、各チューブサンプルの上清を使用して、ＥＬＩＳＡ（ＩＢＬ）によって定量化したＨＭＧＢ１の放出レベルを測定した。ＨＭＧＢ１及びＡＴＰの放出レベルは、未処置サンプルのバックグラウンド値に対する倍率変化として報告した。取得した値をテキストファイルに変換し、Ｅｘｃｅｌ及びＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用してエクスポートし、分析した。
９．２ 結果
図９Ａ～Ｄに示すとおり、ｖｃ－ＭＭＡＥ（ＳＧＤ－１００６）を含むＡＤＣによる処置は、メイタンシンを含むＡＤＣによる処置（図９Ａ）及びカンプトテシンを含むＡＤＣによる処置（図９Ｂ）よりも強いＡＴＰ放出及びＨＭＧＢ１放出をもたらした。また、ｖｃ－ＭＭＡＥ（ＳＧＤ－１００６）を含むＡＤＣによる処置は、テセリン（ＳＧＤ－７４５５）またはアウリスタチンＡＴ（ＳＧＤ－４８３０）を含むＡＤＣによる処置よりも強いＡＴＰ放出及びＨＭＧＢ１放出をもたらした（図９Ｄ）。
ｖｃ－ＭＭＡＥ（ＳＧＤ－１００６）を含むＡＤＣによる処置は、アントラサイクリンを含むＡＤＣによる処置（ＨＭＧＢ１と比較して、ＡＴＰ放出は強度が低い）（図９Ｃ）及びオゾガマイシン（ＳＧＤ－８６７７）を含むＡＤＣによる処置（図９Ｄ）のものに匹敵するＡＴＰ放出及びＨＭＧＢ１放出をもたらした。
実施例１０：自然細胞の活性化（サイトカイン放出）は概してＭＭＡＥ ＡＤＣにおいて優れている
１０．１ 材料及び方法
ＤＡＭＰは、抗腫瘍Ｔ細胞応答を開始できる自然細胞を活性化する。例えば、単球上でのＭＨＣＩＩの発現、及びＣＸＣＬ－１０／ＩＰ１０などの先天性サイトカインの放出を増加させることができる。ＭＨＣＩＩの発現及びＣＸＣＬ－１０／ＩＰ１０は、次のように判定した。
ＩＣ５０濃度のＡＤＣまたはパクリタキセルに２４時間（３７℃、５％ＣＯ２で）曝露したＬ５４０ｃｙがん細胞を洗浄し、死滅させたがん細胞に０．２ｘ１０６細胞／ウェルのＰＢＭＣをＬ５４０ｃｙ：ＰＢＭＣ比１：１０で添加した。この実験で使用したＡＤＣのペイロードは、図７Ａに記載している。共培養物を４８時間インキュベートした。細胞培養物上清を２４時間で収集し、先天性サイトカインＣＸＣＬ－１０／ＩＰ１０を含むサイトカインをＬｕｍｉｎｅｘ判定によって測定した。
４８時間の共培養インキュベーションの後、細胞ペレットを５０μＬのＢＤ ＦＡＣバッファーに再懸濁させ、９６ウェル丸底マイクロタイタープレートに移した。Ｆｃ受容体は、氷上で３０分間、１００μｇ／ｍＬで、ヒトＦｃフラグメントによりブロックした。ＰＥ－Ｃｙ７抗ＨＬＡ－ＤＲ（ＭＨＣＩＩ）、ＰＥ抗ＣＤ１４、ＰＥ－Ｄａｚｚｌｅ５９４抗ＣＤ１１ｂ、ＢＶ６０５抗ＣＤ３、及びＢＶ４２１抗ＣＤ１９を含むマスターミックスを１：１００で希釈し、１００μｇ／ｍＬのヒト精製Ｆｃフラグメントを含むＢＤ ＦＡＣバッファー中で調製した。再懸濁細胞９０μＬを含む各ウェルにマスターミックス１０μＬを加え、サンプルを氷上で１時間インキュベートした。次いで、細胞を予冷したエッペンドルフ５８１０Ｒ遠心分離機で、４００ｘｇで５分間遠心分離した。上清を除去し、細胞を２００ｍＬのＢＤ ＦＡＣバッファーで洗浄した。洗浄を２回行い、細胞を２００ｍＬのＦＡＣバッファーに再懸濁した。サンプルは、Ａｔｔｕｎｅフローサイトメーターで分析した。単球は、ＣＤ１４＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ３－ＣＤ１９－として定義した。ＨＬＡ－ＤＲ平均蛍光は、ＦｌｏｗＪｏ分析ソフトウェアを使用して決定した。
１０．２ 結果
図１０Ａ～Ｄに示すとおり、ＭＭＡＥ（ＳＧＤ－１００６）を含むＡＤＣによる処置は、メイタンシン（図１０Ａ）、カンプトテシン（図１０Ｂ）、アントラサイクリン（図１０Ｃ）、及びカリケアマイシンオゾガマイシン（ＳＧＤ－８６７７）及びＰＢＤテセリン（ＳＧＤ－７４５５）（図１０Ｄ）などの他のペイロードを含むＡＤＣによる処置と同等またはそれよりも高い単球ＭＨＣＩＩの発現をもたらした。ＭＭＡＥ（ＳＧＤ－１００６）を含むＡＤＣによる処置はまた、同じペイロードを含むＡＤＣによる処置よりも一貫して高い先天性サイトカインＣＸＣＬ－１０／ＩＰ１０の放出ももたらした（図１０Ａ～Ｄ）。
１０．３ ＭＭＡＥ ＡＤＣの優れたＩＣＤの可能性のまとめ
これらの実験で示されるように、ＭＭＡＥ－ＡＤＣは、初期段階のＥＲストレスの誘導（例えば、ＪＮＫの活性化）、後期ＥＲストレスの誘導（例えば、ＣＨＯＰの誘導）、免疫活性化分子の誘導（例えば、ＡＴＰ及びＨＭＧＢ１の放出）、及び自然免疫細胞の活性化（例えば、マクロファージの活性化）など、様々なＩＣＤの特徴及び様々な免疫原性細胞応答を誘導できる。試験対象の他のＡＤＣペイロードのいずれも、これらのＩＣＤの特徴を一貫して誘導しなかった。図１０Ｅは、異なるタイプのペイロードを有するＡＤＣのＩＣＤの可能性（上記の特徴によって測定される）の要約を示し、チューブリン破壊剤、特にＭＭＡＥが全体的に優位であることを示す。
実施例１１：Ｆｃ主鎖に基づくＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂまたはＦｃγＲＩＩＩａへの異なるＦｃγＲの結合。
１１．１ 材料及び方法
抗体ＳＥＡ－ＣＤ４０、ＡＰＸ００５Ｍ、ＡＤＣ－１０１３、及びセリクレルマブ（図１１Ａ）を、フローサイトメトリーを使用して、ヒトＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂまたはＦｃγＲＩＩＩａでトランスフェクトしたＣＨＯ細胞へのＦｃγＲの結合について判定した。ＣＨＯ細胞を、漸増させた濃度の抗体と共にインキュベートし、二次抗体を使用して、フローサイトメトリーによってモニターして結合を判定した。
各細胞株について、５０００万個の細胞を５０ｍＬのＰＢＳで１回洗浄した。細胞を再度カウントし、ＢＤ染色バッファーに２２０万細胞／ｍＬで再懸濁させた。細胞を９６ウェル丸底プレートに０．１ｍＬの細胞／ウェルで播種した。
抗体溶液を希釈して、次の最終濃度を作製した：３ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．０３ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ、０．００３ｍｇ／ｍＬ、０．００１ｍｇ／ｍＬ、０．０００３ｍｇ／ｍＬ。各抗体溶液を１０倍に希釈し（すなわち、１１μＬの各抗体溶液を８９μＬの培地に添加）、次の濃度を生成した：３００、１００、３０、１０、３、１、０．０３．０．０１、０．００３、０．００１、及び０．０００３μｇ／ｍｌ。細胞から培地を除去し、細胞を培地で洗浄した。１００μＬの抗体溶液を各ウェルに添加した。縦方向に濃度を減少させながら抗体溶液を添加した。４℃で１時間インキュベートした後、プレートを遠心分離し、細胞の各ウェルを２００μＬのＢＤ染色バッファーで２回洗浄した。プレートをボルテックスすることにより、ペレット化細胞を再懸濁させた。
次に、ＰＥコンジュゲート抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体をＢＤ染色バッファー中で調製した（１ｍｇ／ｍｌ濃度の１／５０希釈＝３３μｇ／ｍＬ飽和濃度）。溶液を暗い冷蔵庫内で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを遠心分離し、上清を除去し、２００μＬ／ウェルのＢＤ染色バッファーで細胞を２回洗浄した。細胞をＰＢＳ＋１％パラホルムアルデヒドに再懸濁させ、フローサイトメトリーにより分析するまで４℃で保存した。Ａｔｔｕｎｅフローサイトメーターを使用してサンプルを分析した。蛍光強度の幾何平均（ＧＥＯ平均蛍光）のデータポイントは、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍを使用してグラフ化した。
１１．２ 結果
ＡＰＸ００５ Ｓ２６７Ｅは、ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＩＩｂに対して最も高い親和性を示した（図１１Ｂ～Ｄ）。ＳＥＡ－ＣＤ４０は、ＦｃγＲＩＩＩａに対する親和性が最も高く、ＦｃγＲＩＩｂに対する親和性が最も低かった（図１１Ｂ～Ｄ）。このデータは、異なるＦｃ主鎖が、異なるＦｃγＲへの結合に影響を与える可能性を示している。ＳＥＡ－ＣＤ４０非フコシル化主鎖は、活性化ＦｃγＲには結合するが阻害性ＦｃγＲには結合しないという点で、開発中の他のＣＤ４０抗体と比較して異なる結合を示す（図１１Ｂ～Ｄ）。
実施例１２：ＭＩＡ－ＰａＣａ－２細胞における細胞死の誘導
１２．１ 材料及び方法
ＭＩＡ－ＰａＣａ－２膵臓腫瘍細胞は、ＥＣ５０濃度の非ＩＣＤ誘導剤アブラキサン（上記の実施例３のパクリタキセルと同様に作用する）、または２つのＩＣＤ誘導剤オキサリプラチンまたはｖｃ－ＭＭＡＥで細胞死を受けるように誘導させた。細胞を各剤と共に１８時間インキュベートした。次いで、腫瘍細胞を、異なるＦｃ主鎖を有する様々なＣＤ４０指向性アゴニスト（１μｇ／ｍｌ）を加えたヒトＰＢＭＣに添加し（図１１Ａ）、免疫活性化を４８時間後に判定した。
１２．２ 結果
ｖｃＭＭＡＥ ＡＤＣと組み合わせたＳＥＡ－ＣＤ４０は、免疫活性化サイトカイン（ＣＸＣＬ１０及びＩＦＮγ；図１２Ａ～Ｂ）の優れた放出を誘導することにより、少なくとも部分的に腫瘍細胞を死滅させたが、異なるＦｃ主鎖を有する他のＣＤ４０アゴニストは、免疫抑制サイトカインを増幅した（ＩＬ－１０及びＭＤＣ；図１２Ｃ～Ｄ）。この実施例では、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合が増強されているＦｃ主鎖で観察された免疫応答の改善が示されている。
実施例１３：Ｆｃ主鎖の機能としてのアポトーシス性黒色腫細胞に対する異なる免疫活性化
１３．１ 材料及び方法
２つの黒色腫細胞株、ＳＫ－ＭＥＬ１２及びＳＫ－ＭＥＬ２８を、ＥＣ５０濃度のアブラキサン、オキサロプラチン、またはｖｃ－ＭＭＡＥにより１８時間処置した。ヒトＰＢＭＣ＋１μｇ／ｍｌの異なるＦｃ主鎖を有する様々なＣＤ４０指向アゴニスト（図１１Ａ）を、処置された黒色腫／腫瘍細胞に添加した。４８時間後に免疫活性化を判定した。
１３．２ 結果
ｖｃ－ＭＭＡＥ ＡＤＣと組み合わせたＳＥＡ－ＣＤ４０は、免疫活性化サイトカイン（ＣＸＣＬ１０；図１３Ａ～Ｂ）の放出を誘導したが、他のＣＤ４０アゴニストは、免疫抑制サイトカイン（ＩＬ－１０；図１３Ｃ～Ｄ）を増幅させた。
実施例１４：Ｆｃ主鎖の機能としての様々なアポトーシス腫瘍細胞型に対する異なる免疫活性化
１４．１ 材料及び方法
１４．１．１ 細胞
ＥＣ５０濃度のＩＣＤ誘導剤オキサリプラチンまたはｖｃ－ＭＭＡＥを使用して、１８時間のインキュベーションにより、黒色腫、肺、乳房、及び膵臓の腫瘍細胞中に細胞死を誘導した。処置した腫瘍細胞を、ヒトＰＢＭＣ及び異なるＦｃ主鎖を有する様々なＣＤ４０指向性アゴニストに添加した（図１１Ａ）。４８時間後に免疫活性化を判定した。ＰＢＭＣ及び腫瘍細胞株を、実施例５で上述したように処置した。ＭＩＡ－ＰａＣａ－２がん細胞（実施例５で使用）の代わりに、以下の細胞株を使用した：黒色腫細胞株ＳＫ－ＭＥＬ１２及びＳＫ－ＭＥＬ２８、肺癌細胞株Ａ５４９、乳癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、及び膵癌細胞株ＭＩＡ－ＰａＣａ－２。細胞を三重に処置した。
１４．１．２ サイトカインの産生
サイトカイン産生は、実施例５に上述したとおりに判定した。
１４．２ 結果
ｖｃ－ＭＭＡＥ ＡＤＣと組み合わせたＳＥＡ－ＣＤ４０は、免疫活性化サイトカイン（ＣＸＣＬ１０及びＩＦＮγ；図１４Ａ及び１４Ｃ）の優れた放出を駆動させたが、他のＣＤ４０アゴニストは、免疫抑制サイトカイン（ＩＬ－１０；図１４Ｂ）を増幅させた。実施例１２及び１３と同様に、この実施例は、他のＦｃ主鎖と比較して、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合が増強されているＦｃ主鎖で観察された免疫応答の改善を実証する。
実施例１５：非フコシル化ＳＥＡ－ＣＤ４０抗体とアウリスタチンベースのＡＤＣとの併用による相乗効果
１５．１ 材料及び方法
ヒトＣＤ４０トランスジェニックマウスに、抗原Ｔｈｙ１．１を発現するように操作したＡ２０細胞を移植した。０日目に腫瘍細胞を側腹に皮下移植した。平均腫瘍サイズ（体積（ｍｍ３）＝０．５ｘ長さｘ幅２の式を用いて測定、長さは寸法の長い方）が１００ｍｍ３に達したとき、マウス５匹／群の処置群に無作為に割り付けた。その後、動物は示された処置により腹腔内処置され；各処置は、３日に１回、合計３回の処置を施した。ストック濃度の抗体を適切な濃度まで希釈し、容量１００μｌで動物に注射した。最終投与量は、ＳＥＡ－ＣＤ４０が１ｍｇ／ｋｇ、Ｔｈｙ１．１に対するｖｃ－ＭＭＡＥ ＡＤＣが１ｍｇ／ｋｇとした。腫瘍の長さ、腫瘍の幅、及びマウスの体重を全試験で測定し、上記の式を使用して腫瘍体積を計算した。腫瘍体積が約１，０００ｍｍ３に達するまで動物を追跡し、その後動物を安楽死させた。
１５．２ 結果
図１５に示すとおり、Ａ２０腫瘍モデルの治療量以下の用量のＳＥＡ－ＣＤ４０による処置では、腫瘍成長の軽減及び腫瘍成長の遅延がもたらされた。同様に、ｖｃ－ＭＭＡＥを含む抗体－薬物複合体では、軽度の腫瘍成長の遅延が示された。しかし、２つの剤をタンデムで動物に投与した場合には、治癒的な抗腫瘍応答が観察された。このデータは、ＡＤＣを介して送達される増強されたＳＥＡ－ＣＤ４０抗体と免疫原性細胞死誘導化学療法との両方の併用における相乗利益を示しており、治癒的応答を達成する可能性も含む。
実施例１６：腫瘍関連抗原を標的とするアウリスタチンベースのＡＤＣ及び異なるＦｃ主鎖を有するＴＩＧＩＴ抗体により処置された様々な腫瘍細胞株における異なる活性
１６．１ 材料及び方法
この実施例では、５つの異なるヒトがん細胞株、ＳＫ－ＭＥＬ２８（黒色腫）、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８（乳房）、ＣＯＲＬ２３（肺）、Ａ５４９（肺）、及びＨＴ－２６（大腸）を使用した。各細胞株を、１μｇ／ｍｌの腫瘍標的抗体－ｖｃＭＭＡＥ ＡＤＣ（薬物対抗体比（ＤＡＲ）４）で１８時間処置した。３７℃でのインキュベーション後、腫瘍細胞を洗浄し、図１６に示すとおり、ヒトＰＢＭＣを１μｇ／ｍｌの抗ＴＩＧＩＴ抗体処置に加えた。使用した抗ＴＩＧＩＴ抗体は、様々なレベルの主鎖エフェクター機能を有しており、ＬＡＬＡ ＴＩＧＩＴ抗体は、ＦｃγＲ結合を有さず、ＳＥＡ－ＴＩＧＩＴ抗体は、ＦｃγＲ結合が増強されている（活性化ＦｃγＩＩＩａＲへの結合が増加し、阻害性ＦｃγＲＩＩｂＲへの結合が減少している）。以下の表Ｄは、異なるＴＧＴ抗体の相対的活性を示す。免疫細胞、抗ＴＩＧＩＴ抗体処置、及び死んだ／死にかけている腫瘍細胞のこれらの培養物を、さらに４８時間インキュベートした。各条件の上清を回収し、サイトカインの誘導について、製造業者の説明書に従ってＥＬＩＳＡを使用して評価した。
Figure 2023548538000021
１６．２ 結果
図１６に示すとおり、さらなる免疫調節処置をいずれも含まない（図１６の「未処置」）ＰＢＭＣインキュベーションによる死んだ／死にかけている腫瘍細胞は、先天性Ｉ型インターフェロン関連サイトカインＩＰ１０の産生によって見られるように、免疫細胞の若干の刺激を有した。ＩＰ１０の活性化レベルは、腫瘍細胞の種類に依存しており、ＳＫ－ＭＥＬ２８、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、及びＣＯＲＬ２３がＡ５４９またはＨＴ－２６細胞よりもはるかに多くのＰＢＭＣの活性化を誘導した。しかし、腫瘍細胞に関係なく、その後にエフェクター機能が増強された抗ＴＩＧＩＴ ｍＡｂ ＳＥＡ－ＴＧＴを共培養物に添加することにより、全体的に免疫細胞の活性化のさらなる増強が得られた。死細胞との同時インキュベーションのみでは実質的な活性化を駆動できない細胞株では、非フコシル化ＴＩＧＩＴ ｍＡｂ ＳＥＡ－ＴＧＴを含めることにより、活性化の最大の増加が見られ、その強力な活性化能力が示された。これらの細胞中では、ＩｇＧ１主鎖ＴＩＧＩＴ抗体は、増強されたｍＡｂと比較したときには抑制されていた免疫細胞の活性化を駆動できた。ＦｃγＲ結合能力を有しない抗ＴＩＧＩＴのＬＡＬＡ型は、いずれの免疫活性化の駆動時にも不活性であった。
実施例１７：腫瘍関連抗原を標的とするアウリスタチンベースのＡＤＣ及び異なるＦｃ主鎖を有するＴＩＧＩＴ抗体により処置された様々な腫瘍細胞株における異なる活性
１７．１ 材料及び方法
この実施例では、６つの異なるヒトがん細胞株、ＨＴ－２６（大腸）、Ａ５４９（肺）、ＣＯＲＬ２３（肺）、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８（乳房）、ＳＫ－ＭＥＬ２８（黒色腫）、及びＭｉａ－ＰａＣａ－２（膵臓）を使用した。各細胞株を、１μｇ／ｍｌの腫瘍標的抗体－ｖｃＭＭＡＥ ＡＤＣ（薬物対抗体比（ＤＡＲ）４）で１８時間処置した。３７℃でのインキュベーション後、腫瘍細胞を洗浄し、図１６に示すとおり、ヒトＰＢＭＣを１μｇ／ｍｌの抗ＴＩＧＩＴ抗体処置に加えた。免疫細胞、抗ＴＩＧＩＴ抗体処置、及び死んだ／死にかけている腫瘍細胞のこれらの培養物を、さらに４８時間インキュベートした。各条件の上清を回収し、サイトカインの誘導について、製造業者の説明書に従ってＥＬＩＳＡを使用して評価した。
１７．２ 結果
図１７に示すとおり、さらなる免疫調節処置をいずれも含まない（図１６の「未処置」）ＰＢＭＣインキュベーションによる死んだ／死にかけている腫瘍細胞は、獲得性サイトカインＩＦＮγの産生によって見られるように、免疫細胞の若干の刺激を有した。ＩＦＮγの活性化レベルは、腫瘍細胞の種類に依存しており、ＳＫ－ＭＥＬ２８、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、及びＣＯＲＬ２３がＡ５４９またはＨＴ－２６細胞よりも多くのＰＢＭＣの活性化を誘導した。しかし、腫瘍細胞に関係なく、その後にエフェクター機能が増強された非フコシル化ＳＥＡ－ＴＧＴ ｍＡｂを共培養物に添加することにより、全体的に免疫細胞の活性化のさらなる増強が得られた。死細胞との同時インキュベーションのみでは実質的な活性化を駆動できない細胞株では、非フコシル化ＴＩＧＩＴ ｍＡｂ ＳＥＡ－ＴＧＴを含めることにより、活性化の最大の増加が見られ、その強力な活性化能力が示された。これらの細胞中では、ＩｇＧ１主鎖のＴＩＧＩＴ抗体が免疫細胞の活性化を若干駆動できるが、増強されたｍＡｂと比べると、大幅に抑制されていた。ＦｃγＲ結合能力を有しない抗ＴＩＧＩＴのＬＡＬＡ型は、いずれの免疫活性化の駆動時にも不活性であった。
実施例１８：非フコシル化ＴＩＧＩＴ抗体とアウリスタチンベースのＡＤＣとの併用による相乗効果
１８．１ 材料及び方法
１８．１．１ ＴＩＧＩＴ抗体及びアウリスタチンベースのＡＤＣのｉｎ ｖｉｔｒｏ評価
Ａ５４９非小細胞肺癌のがん性細胞は、腫瘍細胞標的化抗体にコンジュゲートされた、ＥＣ５０濃度のＩＣＤ誘導剤ｖｃ－ＭＭＡＥにより細胞死を受けるように誘導した。細胞を剤と共に１８時間インキュベート後、様々な濃度（１、０．１、０．０１μｇ／ｍｌ）の抗ＴＩＧＩＴ ＬＡＬＡ、ＳＥＡ－ＴＧＴなど、異なるＦｃ主鎖を有する抗ＴＩＧＩＴ抗体及びＩｇＧ１抗体である抗体３１Ｃ６Ｈ４／Ｌ１（ＵＳ２０１８／００６６０５５Ａ１）と共にヒトＰＢＭＣに添加した。次に、共培養の４８時間後にサイトカイン（ＩＰ１０）レベルを測定することにより、免疫活性化を判定した。
１８．１．２ ＴＩＧＩＴ抗体及びアウリスタチンベースのＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ評価
０日目に、腫瘍抗原Ｔｈｙ１．１を発現するＣＴ２６同系腫瘍細胞株をＢａｌｂ／ｃマウスの側腹に皮下移植した。平均腫瘍サイズ（体積（ｍｍ３）＝０．５ｘ長さｘ幅２の式を用いて測定、長さは寸法の長い方）が１００ｍｍ３に達したとき、マウス５匹／群の処置群に無作為に割り付けた。その後、動物は示された処置により腹腔内処置され；各処置は、３日に１回、合計３回の処置を施した。ストック濃度の抗体を適切な濃度まで希釈し、１００μｌの量で動物に注射した。最終投与量は、ＳＥＡ－ＴＧＴ ｍＩｇＧ２ａが０．１ｍｇ／ｋｇであり、腫瘍標的化ｖｃ－ＭＭＡＥ Ｔｈｙ１．１ ＡＤＣが、５ｍｇ／ｋｇであった。使用した抗体は両方ともｍＩｇＧ２ａ主鎖上にあり、ＳＥＡ－ＴＧＴ ｍＩｇＧ２ａは、非フコシル型であった。腫瘍の長さ、腫瘍の幅、及びマウスの体重を試験全体で測定し、上記の式を使用して腫瘍の体積を計算した。腫瘍体積が約１，０００ｍｍ３に達するまで動物を追跡し、その後動物を安楽死させた。
０日目に、腫瘍抗原ＥｐｈＡ２を発現するＲｅｎｃａ同系腫瘍細胞株をＢａｌｂ／ｃマウスの側腹に皮下移植した。平均腫瘍サイズ（体積（ｍｍ３）＝０．５ｘ長さｘ幅２の式を用いて測定、長さは寸法の長い方）が１００ｍｍ３に達したとき、マウス５匹／群の処置群に無作為に割り付けた。その後、動物は示された処置により腹腔内処置され；各処置は、３日に１回、合計３回の処置を施した。ストック濃度の抗体を適切な濃度まで希釈し、１００μｌの量で動物に注射した。最終投与量は、ＳＥＡ－ＴＧＴが０．１ｍｇ／ｋｇであり、腫瘍標的化ｖｃ－ＭＭＡＥ ＥｐｈＡ２ ＡＤＣが１ｍｇ／ｋｇであった。使用した抗体は両方とも、ｍＩｇＧ２ａ主鎖上にあった。腫瘍の長さ、腫瘍の幅、及びマウスの体重を試験全体で測定し、上記の式を使用して腫瘍の体積を計算した。腫瘍体積が約１，０００ｍｍ３に達するまで動物を追跡し、その後動物を安楽死させた。
１８．２ 結果
図１８Ａに示すとおり、ＡＤＣのインキュベーションによって、細胞の免疫集団により腫瘍細胞が死滅し、これにより、サイトカインＩＰ１０の誘導によって測定される、ＭＭＡＥを介して誘導された免疫原性細胞死による免疫細胞のある程度の活性化がもたらされた（Ｘ軸上「０」と記されたバーを参照のこと）。さらに、ＳＥＡ－ＴＧＴの濃度を増加させて共培養物に添加した結果、このサイトカインの誘導が実質的に増加した。これは、エフェクターヌル抗ＴＩＧＩＴ抗体（ＬＡＬＡ）または標準抗ＴＩＧＩＴ ＩｇＧ１抗体（３１Ｃ６Ｈ４／Ｌ１）のいずれでも見られず、これは、ＳＥＡ－ＴＧＴの非フコシル化主鎖が、免疫原性細胞死を誘発するＭＭＡＥとの相乗効果を駆動し、優れた免疫細胞活性化を提供することを示している。
図１８Ｂ及び図１８Ｃに示すとおり、ＣＴ２６腫瘍モデル及びＲｅｎｃａ腫瘍モデルをそれぞれ０．１ｍｇ／ｋｇの治療量以下の用量のＳＥＡ－ＴＧＴで処置することにより、腫瘍成長の減少及び腫瘍成長の遅延がもたらされた。ｖｃ－ＭＭＡＥ（ベドチン）ＡＤＣは、それ自体で軽度の腫瘍成長の遅延を示した。２つの剤をタンデムで動物に投与したときに、動物の４０％において、腫瘍成長の大幅な減少、及び治癒的応答が観察された。これらのデータは、増強されたエフェクター機能を有するＳＥＡ－ＴＧＴ ｍＩｇＧ２ａ抗体（非フコシル化ヒトＩｇＧ１主鎖に対応する非フコシル化マウスＩｇＧ２ａとして再フォーマットさせたＳＥＡ－ＴＧＴ抗体）と、免疫原性細胞死を誘導するＡＤＣとの組み合わせにおける相乗利益を示している。
２つの異なる腫瘍細胞抗原を標的とするＡＤＣを使用して、２つの異なる腫瘍モデルにおいてこのような観察がなされた事は、この組み合わせの抗腫瘍活性が、異なる腫瘍タイプに広く適用し得ることを示唆するものである。
実施例１９：非フコシル化ＴＩＧＩＴ抗体と別のアウリスタチンベースのＡＤＣとの併用による相乗効果
１９．１ 材料及び方法
マウスＢ７Ｈ４を発現するように操作したＲｅｎｃａ細胞を、Ｂａｌｂ／ｃマウスに皮下移植した。腫瘍を１００ｍｍ３に達するまで成長させ、その時点でマウスを治療量以下のＳＥＡ－ＴＧＴ及びＳＧＮ－Ｂ７Ｈ４ ＭＭＡＥ ＡＤＣ（Ｂ７Ｈ４Ｖ）、または治療量以下のＳＥＡ－ＴＧＴ及び治療量のオキサリプラチンで処置した。化合物は同じ日に投与し、マウスは、７日間隔で合計３回投与を受けた。
１９．２ 結果
図１９に示すとおり、治療量以下のＳＥＡ－ＴＧＴを治療量以下のＢ７Ｈ４Ｖと組み合わせた場合、ＳＥＡ－ＴＧＴの組み合わせ活性が拡大されて、抗腫瘍活性の増大となった。ＳＥＡ－ＴＧＴ（治療量以下）とＢ７Ｈ４Ｖ（治療量以下）との組み合わせ活性は、ＳＥＡ－ＴＧＴ（治療量以下）と既知のＩＣＤ誘導因子であるオキサリプラチン（治療量）との組み合わせ活性と同様であった。しかし、オキサリプラチンは、アナフィラキシー及び腎毒性の徴候と関連し、治療用量で投与された場合、それ自体ではあまり活性がなく、多くの場合、様々な他の化学療法と組み合わせて使用される。
また、図１９に示すとおり、ＳＥＡ－ＴＧＴの治癒効果は、Ｂ７Ｈ４Ｖと組み合わせた場合に顕著に増加した。理論に拘束されることを望むものではないが、この効果は、ＩＣＤの誘導及びそのような組み合わせにより誘導される長寿命メモリーＴ細胞応答によるものと考えられる（下記の実施例２３も参照）。
要約すると、この実験の結果は、本明細書に記載されている他の結果と一致しており、免疫細胞エンゲージャーに対して向けられた非フコシル化抗体（この実験では、ＳＥＡ－ＴＧＴなどの非フコシル化抗ＴＩＧＩＴ抗体）は、免疫細胞死を誘導する剤（この特定の例では、ＭＭＡＥ ＡＤＣ（すなわち、Ｂ７Ｈ４Ｖ）及びオキサリプラチンの両方であった）と十分に組み合わせられることを示している。しかし、オキサリプラチンに関連する毒性のため、及びオキサリプラチンの治療用量と比較して治療量以下の用量のＡＤＣにおいて、匹敵する治療効果が観察されたため、ＭＭＡＥ ＡＤＣとの組み合わせが好ましい。
実施例２０：非フコシル化ＳＥＡ－ＣＤ７０抗体とアウリスタチンベースのＡＤＣとの併用による相乗効果
ＳＥＡ－ＣＤ７０（ＳＥＡ－ｈ１Ｆ６）は、ＣＤ７０抗原を標的とする非フコシル化抗体である。ＣＤ７０分子は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）リガンドスーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）のメンバーであり、関連する受容体であるＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）に結合する。２つの分子間の相互作用は、両方の受容体からの細胞内シグナルを活性化する。通常状態では、ＣＤ７０の発現は一過性であり、活性化されたＴ細胞とＢ細胞、成熟樹状細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞に限定される。同様に、ＣＤ２７は、ナイーブ及び活性化エフェクターＴ細胞、ならびにＮＫ及び活性化Ｂ細胞の両方上に発現する。しかし、ＣＤ７０は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）などの様々な血液がん、及びがん腫でも異常に発現しており、腫瘍細胞の生存及び／または腫瘍免疫回避の両方に関与している。ＳＥＡ－ＣＤ７０（それぞれ配列番号４１及び４２のＶＨ及びＶＬ、ならびに配列番号５３～５８のＣＤＲを含む）は、ＣＤ７０／ＣＤ２７軸シグナル伝達の遮断、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の誘発、ならびに抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の増強を介して作用する。以下に説明するように、ＳＥＡ－ＣＤ７０は、皮下ＮＨＬモデルにおいてブレンツキシマブベドチン（ＢＶ、ＳＧＮ－３５、ｃＡＣ１０－ＭＭＡＥ）と組み合わせて試験した。ＳＧＮ－３５とも呼ばれるブレンツキシマブベドチンは、モノクローナル抗体ｃＡＣ１０にコンジュゲートさせたＭＭＡＥを含む、ＣＤ３０を標的とするＡＤＣである。ＣＤ３０は、ホジキンリンパ腫で、及びＮＨＬ患者のサブセット内で発現する。
２０．１ 材料及び方法
ＮＨＬ異種移植モデルにおける皮下腫瘍成長のｉｎ ｖｉｖｏ評価
Ｆａｒａｇｅ細胞（２．５ｘ１０６細胞／動物）を０．１ｍＬの２５％マトリゲルに再懸濁させ、ＡＤＣＰ及びＡＤＣＣを媒介する活性な自然免疫エフェクター細胞を包含するＳＣＩＤマウスに皮下注射した。平均腫瘍サイズが１００ｍｍ３に達したとき（体積（ｍｍ３）＝０．５ｘ長さｘ幅２の式を用いて測定、長さは寸法の長い方）、マウスを６匹／群の治療群に無作為に割り付けた。処置は、腹腔内に行った。ストック濃度の抗体及び化学療法剤を適切な濃度まで希釈し、１０μＬ／ｇ体重で動物に注射した。腫瘍の長さ及び幅、ならびに動物の体重は、試験全体で少なくとも週に２回測定した。移植後１９日目に、３ｍｇ／ｋｇのＳＥＡ－ＣＤ７０及び／または１ｍｇ／ｋｇのＳＧＮ－３５で投与を開始した。ＳＥＡ－ＣＤ７０は、４日ごとに５回腹腔内（ＩＰ）投与し、ＳＧＮ－３５は、１９日目に１回ＩＰ投与した。測定した腫瘍体積が５００ｍｍ３を超えるまで動物を追跡し、その時点で動物を安楽死させた。腫瘍はより大きなサイズで潰瘍化する傾向があるため、腫瘍サイズのエンドポイントを５００ｍｍ３に選択した。
２０．２ 結果
図２０Ａに示すとおり、ＳＧＮ－３５とＳＥＡ－ＣＤ７０とを組み合わせることにより、単剤でのＳＧＮ－３５またはＳＥＡ－ＣＤ７０治療と比較すると、腫瘍成長が遅延した。未処置の腫瘍はすべて、２８．５日目（治療後９．５日）までに元のサイズの５倍を超えて体積が増加したが、ＳＥＡ－ＣＤ７０単剤またはＳＧＮ－３５単剤により処置した腫瘍は、それぞれ３４．５日目及び４６日目に平均５倍の増加に達した（治療後１５．５日及び２７日）。特に、ＳＥＡ－ＣＤ７０とＳＧＮ－３５との組み合わせで処置された腫瘍はいずれも、実験が終了する時（５０日目）までに確立されたサイズのエンドポイントに達しなかった（図２０Ｂ）。単剤でのＳＥＡ－ＣＤ７０またはＳＧＮ－３５処置と比較して、ＳＥＡ－ＣＤ７０とＳＧＮ－３５とを組み合わせた場合、明白な毒性またはさらなる体重減少は観察されなかった。これらのデータは、ＭＭＡＥペイロード（ＳＧＮ－３５）を担持するＡＤＣと非フコシル化抗体（ＳＥＡ－ＣＤ７０）との組み合わせが有効であり、十分に許容されることを示した。
実施例２１：非フコシル化ＳＥＡ－ＢＣＭＡ抗体とアウリスタチンＡＤＣとの併用による相乗効果
ＳＥＡ－ＢＣＭＡは、多発性骨髄腫（ＭＭ）上に発現するＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）を標的とする非フコシル化抗体である。ＳＥＡ－ＢＣＭＡ（それぞれ配列番号４５及び４６のＶＨ及びＶＬ、ならびに配列番号４７～５２のＣＤＲを有する）は、リガンド媒介ＢＣＭＡ細胞シグナル伝達、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）の遮断、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の増強によって作用する。以下に説明するように、播種性ＭＭ腫瘍異種移植モデルにおいて、ＳＥＡ－ＢＣＭＡをＳＧＮ－ＣＤ４８Ａと組み合わせて試験した。ＳＧＮ－ＣＤ４８Ａは、グルクロニド結合型ＭＭＡＥを含む、ＣＤ４８を標的とするＡＤＣである。ＣＤ４８は、ＭＭ中で広く発現する。
２１．１ 材料及び方法
２１．１．１ 異種移植モデルのｉｎ ｖｉｖｏ生存評価
ＭＭ１Ｓ ＭＭ細胞は、ＡＤＣＰ及びＡＤＣＣを仲介する活性な自然免疫エフェクター細胞を含むＳＣＩＤ動物にＩＶ注射した。移植７日後、０．１ｍｇ／ｋｇのＳＥＡ－ＢＣＭＡ及び／または０．０１ｍｇ／ｋｇのＳＧＮ－ＣＤ４８Ａの投与を開始し、動物の生存をモニターした。ＳＥＡ－ＢＣＭＡは、５週間毎週ＩＰ投与し、ＳＧＮ－ＣＤ４８Ａは、１回ＩＰ投与した。生存について動物を１６０日間追跡した（Ｎ＝８／群）。５１日目までに、ＩＡＣＵＣプロトコルに従って、未処置動物をすべて人道的に安楽死させた。
２１．１．２ 異種移植モデルのｉｎ ｖｉｖｏルシフェラーゼ評価
Ｌ３６３ルシフェラーゼＭＭ細胞をＳＣＩＤ動物にＩＶ注射し、ＭＭ細胞を骨髄にホーミングさせた。ルシフェラーゼシグナルを経時的にモニターした。移植後３０日目に、３ｍｇ／ｋｇのＳＥＡ－ＢＣＭＡ及び／または０．３ｍｇ／ｋｇのＳＧＮ－ＣＤ４８Ａの投与を開始した。ＳＥＡ－ＢＣＭＡは、５週間毎週ＩＰ投与し、ＳＧＮ－ＣＤ４８Ａは、１回ＩＰ投与した。動物を１７５日間追跡した（Ｎ＝５／群）。５８日目までに、ＩＡＣＵＣプロトコルに従って、未処置動物をすべて人道的に安楽死させた。
２１．２ 結果
図２１Ａ～Ｂに示すとおり、ＳＥＡ－ＢＣＭＡと組み合わせたＳＧＮ－ＣＤ４８Ａは、試験対象のマウスモデルにおいて完全な寛解及び生存期間の延長を誘導した。図２１Ａでは、１６０日目までに、ＳＥＡ－ＢＣＭＡ単独で処置した動物０匹及びＳＧＮ－ＣＤ８Ａ単独で処置した動物１匹と比較して、併用療法を受けた群では８匹の動物のうち５匹が依然として生存していた。図２１Ｂでは、３７日目までに、併用療法により処置されたすべての動物が検出可能なルシフェラーゼシグナルを示さず、これは１７５日目の試験の終わりまで存在しないままであった。この顕著な相乗効果は、ＩＣＤ誘導アウリスタチンＡＤＣと、ＳＥＡ－ＢＣＭＡを結合する自然免疫細胞との固有の組み合わせに起因し得る。
実施例２２：ベドチンＡＤＣは、ｉｎ ｖｉｖｏで免疫細胞動員及び活性化を誘導する
２２．１ 材料及び方法
腫瘍異種移植片は、ｖｃ－ＭＭＡＥ ＡＤＣまたは非結合ｖｃ－ＭＭＡＥアイソタイプＡＤＣにより８日間処置した動物から単離し、フローサイトメトリーまたはサイトカインプロファイリングに供した。ＣＤ１１ｃについてＣＤ４５陽性免疫細胞を染色し、細胞表面上でのＭＨＣクラスＩＩの発現について染色することによって活性化を観察した。腫瘍内サイトカインは、Ｌｕｍｉｎｅｘによって測定した。
２２．２ 結果
図２２に示すとおり、共通の腫瘍抗原を標的とするＭＭＡＥベースのＡＤＣ（ｖｃ－ＭＭＡＥ ＡＤＣ）で処置された担癌マウスは、腫瘍における免疫細胞の動員及び活性化の促進をもたらした。非結合対照（非結合ＡＤＣ）と比較して、腫瘍を標的とするＭＭＡＥベースのＡＤＣ（ｖｃＭＭＡＥ ＡＤＣ）により処置したときに、樹状細胞の浸潤及び樹状細胞の抗原提示の両方が顕著に増強された（図２２Ｂ）。腫瘍を標的とするＭＭＡＥベースのＡＤＣ（ｖｃ－ＭＭＡＥ ＡＤＣ）により処置した場合、腫瘍内サイトカインレベルも顕著に増強された（図２２Ｃ）。これらのデータは、チューブリン破壊剤を含むＡＤＣが、腫瘍中で免疫細胞の動員及び活性化を促進させる方法でＥＲストレス及び腫瘍細胞死を誘導することを示唆している。
これらの結果は、ＭＭＡＥベースのＡＤＣが免疫チェックポイント遮断剤の好ましいパートナーであることを示唆している。
実施例２３：ベドチンＡＤＣによるＴ細胞記憶の誘導
２３．１ 材料及び方法
０日目に、腫瘍抗原Ｅｐｈａ２を発現するＲｅｎｃａ同系腫瘍細胞をＢａｌｂ／ｃマウスの側腹に皮下移植した。平均腫瘍サイズ（体積（ｍｍ３）＝０．５ｘ長さｘ幅２の式を用いて測定、長さは寸法の長い方）が１００ｍｍ３に達したとき、マウスを５匹／群の処置群に無作為に割り付けた。次いで、示された処置により、腹腔内に動物に処置した（図２１Ａ）。各処置は１回ずつ行った。ストック濃度の抗体を適切な濃度まで希釈し、１００μｌの量で動物に注射した。腫瘍標的ＡＤＣ（ＡＤＣ－ｖｃＭＭＡＥ）及び非結合ＡＤＣ（アイソタイプｖｃＭＭＡＥ、別名ｈ００－ｖｃＭＭＡＥ）の最終投与量は、５ｍｇ／ｋｇであった。腫瘍の長さ、腫瘍の幅、及びマウスの体重を試験全体で測定し、上記の式を使用して腫瘍の体積を計算した。動物は、腫瘍体積が約１，０００ｍｍ３に達するまで動物を追跡し、その後安楽死させた。
治癒的な抗腫瘍応答を達成したマウスをモニターした。次いで、治癒を達成して３０日後、マウスにＲｅｎｃａ腫瘍細胞を再チャレンジし（図２１Ｂ）、新しい腫瘍の増殖及び拒絶を判定した。
２３．２ 結果
図２３Ａに示すとおり、Ｒｅｎｃａ同系モデルにおいて、単回用量の腫瘍標的ＭＭＡＥ ＡＤＣ（ＡＤＣ－ｖｃＭＭＡＥ）による処置は、強力な抗腫瘍活性及び治癒的応答をもたらした。図２３Ｂに示すとおり、ＭＭＡＥ ＡＤＣ処置で治癒したマウスをＲｅｎｃａ腫瘍細胞で再チャレンジして、免疫記憶の誘導を判定した場合、かかるマウスは、その後移植された腫瘍細胞を拒絶することができた。このような結果は、特定の抗腫瘍Ｔ細胞応答を誘発するＭＭＡＥ ＡＤＣの能力を示している。
実施例２４：ブレンツキシマブベドチン（ＢＶ；ＳＧＮ－３５）により処置された細胞は、防御的抗腫瘍免疫を付与する
２４．１ 材料及び方法
ヒトＣＤ３０を発現するＡ２０細胞を、ＣＤ３０－アウリスタチンＡＤＣ（ＢＶ；ＳＧＮ－３５）またはＭＭＡＥにより１８時間処置した。あるいは、細胞の１つのアリコートを瞬間凍結した。生細胞を除去するために、処置したサンプルのフィコール遠心分離を行った。アネキシンＶ／７ＡＡＤを用いたフローサイトメトリーにより、すべてのサンプルのアポトーシス及び生存率を分析した。死にかけている細胞及び死んだ細胞を洗浄し、ＰＢＳに再懸濁させて、マウスに腹腔内注射した。マウスは、７日間隔で２回免疫した。免疫化マウスをさらに７日間休ませた後、Ａ２０リンパ腫細胞でチャレンジし、腫瘍の成長または拒絶反応を経時的にモニターした。
２４．２ 結果
図２４に示すとおり、ＢＶまたはＭＭＡＥを使用して死滅させたＣＤ３０発現Ａ２０細胞で免疫化したマウスは、細胞死の非ＩＣＤ法である瞬間凍結で死滅させたＣＤ３０発現Ａ２０細胞で免疫化したマウスと比較して、移植されたＡ２０細胞を拒絶するより強い免疫応答を示した。これらの結果は、メモリーＴ細胞応答の誘導を示している。免疫記憶の誘導は、分子のＩＣＤ活性を判定するためのゴールドスタンダードと考えられている。
まとめると、前述の実施例に示された結果は、アウリスタチンベースのＡＤＣ（例えば、ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）の免疫原性細胞死を誘導する独特の能力を裏付けるものである。前述の例に示すとおり、アウリスタチンの作用機序及び微小管ネットワークを破壊する能力は、危険シグナル（ＤＡＭＰ）の露出及び分泌につながるＥＲストレス応答の誘導に関連していると考えられる。これらのＤＡＭＰの露出は、抗原特異的Ｔ細胞応答につながり得る自然免疫細胞応答を開始させる。腫瘍抗原を認識することができる新しい抗原特異的Ｔ細胞の誘導は、長期の免疫防御を提供する長期のメモリーＴ細胞応答に関連する治癒的な抗腫瘍活性を前臨床的に誘導することができる。
ＭＭＡＥ ＡＤＣによって誘導されるメモリーＴ細胞のこの集団は、非フコシル化抗体によってさらに増加及び／または増強され得る。ＭＭＡＥ ＡＤＣ誘導ＩＣＤによって生じる免疫学的記憶（例えば、上記のメモリーＴ細胞応答による）を確立後、ＳＥＡ－ＴＩＧＩＴなどの非フコシル化抗体は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１のチェックポイント阻害メカニズムと同様に、腫瘍遮断／阻害メカニズムを介して免疫応答をさらに増大することができる。
さらに、免疫原性細胞死を駆動するＭＭＡＥ ＡＤＣなどのアウリスタチンベースのＡＤＣ（例えば、ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）の能力を免疫細胞アゴニズムと合わせることにより、抗腫瘍活性を増幅することができる。免疫アゴニズムは、非フコシル化抗体、または活性化ＦｃγＲへの結合を増強する、及び／または阻害性ＦｃγＲへの結合を減少させるように操作された抗体（例えば、非フコシル化ＣＤ４０及びＢＣＭＡ抗体を用いた上記の実施例に示すとおり）を使用することによって、増幅することができる。非フコシル化抗体は、活性化ＦｃγＲＩＩＩａ受容体への結合を増加させ、阻害性ＦｃγＲＩＩｂ受容体への結合を減少させるかまたは最小限に抑えることができる。この属性は、抗体標的の性質に応じてマルチモーダルである。クラスター化されたときに最適に活性化されるＣＤ４０のような受容体の場合、非フコシル化抗体がＦｃγＲＩＩＡ＋細胞に結合することにより、受容体のクラスター化ならびに免疫のアゴニズム及び活性化が増加する。図２５を参照されたい。ＴＩＧＩＴの場合のように、非フコシル化抗体は、抗原（＋）Ｔ細胞と抗原提示細胞との間の免疫シナプスの強度を増大させる（図２５）。自然細胞上でのＦｃγＲＩＩＩａの結合により、それらの活性化、及び抗原特異的Ｔ細胞応答を増強できる因子の産生が増加する。最後に、非フコシル化主鎖は、標的抗原とは関係なく、自然免疫細胞またはガンマデルタＴ細胞などの他のＦｃγＲＩＩＩａ細胞に結合して、二次抗原特異的Ｔ細胞応答の誘発を補助し得る活性化状態を誘導することができる。非フコシル化抗体が働くこれらすべてのメカニズムは、抗腫瘍活性及び長寿命の免疫防御を駆動するＴ細胞応答につながり得る。ＦｃγＲＩＩｂへの結合の減少または欠如は、非フコシル化抗体によって駆動される免疫活性化を減少させるカウンターシグナルまたは阻害性シグナルがないことを意味する。
ＭＭＡＥ ＡＤＣなどのアウリスタチンＡＤＣの作用機序は、非フコシル化ｍＡｂによる免疫調節と合わせて、相乗的かつ相補的な活性をもたらし、本明細書で実証されているとおり、免疫活性化の増強及び治癒的抗腫瘍応答をもたらすことが示された。
本明細書に引用された公開文献、特許、特許出願、または他の文献は全て、あたかも各個別の公開文献、特許、特許出願、または他の文献があらゆる目的のために参照により援用されるように個別に示されるのと同じ範囲まで、あらゆる目的のために、それらの全体において参照により本明細書に援用される。


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Claims (115)

  1. がんを有する対象に、（１）抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）と、（２）免疫細胞エンゲージャーを結合する第２の抗体と、を投与することを含む、がんを治療する方法であって、ここで、前記抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）は、腫瘍関連抗原を結合する第１の抗体及び細胞傷害剤を含み、前記細胞傷害剤は、チューブリン破壊剤であり；前記第２の抗体は、１つ以上の活性化ＦｃγＲへの結合が増強されているＦｃを含み、前記活性化ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、及び／またはＦｃγＲＩのうちの１つ以上を含む、前記方法。
  2. 前記第２の抗体が、少なくともＦｃγＲＩＩＩａへの結合が増強されているＦｃを含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記第２の抗体が、少なくともＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩａへの結合が増強されているＦｃを含む、請求項１に記載の方法。
  4. 前記第２の抗体が、少なくともＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩへの結合が増強されているＦｃを含む、請求項１に記載の方法。
  5. 前記第２の抗体が、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩへの結合が増強されているＦｃを含む、請求項１に記載の方法。
  6. 前記第２の抗体の前記Ｆｃは、１つ以上の阻害性ＦｃγＲへの結合が減少している、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
  7. 前記第２の抗体の前記Ｆｃは、ＦｃγＲＩＩｂへの結合が減少している、請求項６に記載の方法。
  8. 前記第２の抗体の前記Ｆｃは、フコースレベルが低下しており、及び／または前記Ｆｃが、１つ以上の活性化ＦｃγＲへの結合が増強されているように、１つ以上の変異を含むように操作されている、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
  9. 前記第２の抗体が、非フコシル化されている、請求項８に記載の方法。
  10. 前記第２の抗体が、重鎖定常領域内に置換Ｓ２９３Ｄ、Ａ３３０Ｌ、及びＩ３３２Ｅを含む、請求項８に記載の方法。
  11. がんを有する対象に抗体－薬物複合体を投与することを含む、がんを治療する方法であって、前記抗体－薬物複合体が、細胞傷害剤にコンジュゲートされた第１の抗体及び免疫細胞エンゲージャーを結合する第２の抗体を含み、前記細胞傷害剤がチューブリン破壊剤であり、前記第２の抗体は、非フコシル化されている、前記方法。
  12. 前記第１の抗体が、腫瘍関連抗原を結合する、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
  13. がんを有する対象に（１）抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）及び（２）免疫細胞エンゲージャーを結合する第２の抗体を投与することを含む、がんを治療する方法であって、前記ＡＤＣは、腫瘍関連抗原を結合する第１の抗体及び細胞傷害剤を含み、前記細胞傷害剤は、チューブリン破壊剤であり、前記第２の抗体は、同じアイソタイプの対応する野生型Ｆｃと比較して、増強されたＡＤＣＣ活性を有するＦｃを含む、前記方法。
  14. 前記第２の抗体が、同じアイソタイプの対応する野生型Ｆｃと比較して、増強されたＡＤＣＣ及びＡＤＣＰ活性を有するＦｃを含む、請求項１３に記載の方法。
  15. 前記第２の抗体が、非フコシル化されている、請求項１３または１４に記載の方法。
  16. 前記第２の抗体が、１つ以上の活性化ＦｃγＲへの結合が増強されているＦｃを含み、前記活性化ＦｃγＲが、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、及び／またはＦｃγＲＩのうちの１つ以上を含む、請求項１３～１５のいずれか１つの方法。
  17. 前記第２の抗体が、少なくともＦｃγＲＩＩＩａへの結合が増強されているＦｃを含む、請求項１６に記載の方法。
  18. 前記第２の抗体が、少なくともＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩａへの結合が増強されているＦｃを含む、請求項１６に記載の方法。
  19. 前記第２の抗体が、少なくともＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩへの結合が増強されているＦｃを含む、請求項１６に記載の方法。
  20. 前記第２の抗体が、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩへの結合が増強されているＦｃを含む、請求項１６に記載の方法。
  21. 前記第２の抗体の前記Ｆｃは、１つ以上の阻害性ＦｃγＲへの結合が減少している、請求項１３～２０のいずれか１項に記載の方法。
  22. 前記第２の抗体の前記Ｆｃは、ＦｃγＲＩＩｂへの結合が減少している、請求項２１に記載の方法。
  23. 前記第１の抗体が、５Ｔ４（ＴＰＢＧ）、ＡＤＡＭ－９、ＡＧ－７、ＡＬＫ、ＡＬＰ、ＡＭＨＲＩＩ、ＡＰＬＰ２、ＡＳＣＴ２、ＡＶＢ６、ＡＸＬ（ＵＦＯ）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４、ＢＣＭＡ、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ４．４ａ（ＬＹＰＤ３）、Ｃ５、Ｃ５ａ、ＣＡ６、ＣＡ９、ＣａｎＡｇ、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、カテプシンＤ、ＣＣＲ７、ＣＤ１、ＣＤ１０、ＣＤ１００、ＣＤ１０１、ＣＤ１０２、ＣＤ１０３、ＣＤ１０４、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１０７ｂ、ＣＤ１０８、ＣＤ１０９、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３、ＣＤ１１６、ＣＤ１１７、ＣＤ１１８、ＣＤ１１９、ＣＤ１１Ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２０ａ、ＣＤ１２１ａ、ＣＤ１２１ｂ、ＣＤ１２２、ＣＤ１２３、ＣＤ１２４、ＣＤ１２５、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤ１３、ＣＤ１３０、ＣＤ１３１、ＣＤ１３２、ＣＤ１３３、ＣＤ１３５、ＣＤ１３６、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１４、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ１４０ｂ、ＣＤ１４１、ＣＤ１４２、ＣＤ１４３、ＣＤ１４４、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５、ＣＤ１５０、ＣＤ１５１、ＣＤ１５４、ＣＤ１５５、ＣＤ１５６ａ、ＣＤ１５６ｂ、ＣＤ１５６ｃ、ＣＤ１５７、ＣＤ１５８ｂ２、ＣＤ１５８ｅ、ＣＤ１５８ｆ１、ＣＤ１５８ｈ、ＣＤ１５８ｉ、ＣＤ１５９ａ、ＣＤ１６、ＣＤ１６０、ＣＤ１６１、ＣＤ１６２、ＣＤ１６３、ＣＤ１６４、ＣＤ１６６、ＣＤ１６７ｂ、ＣＤ１６９、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ１７０、ＣＤ１７１、ＣＤ１７２ａ、ＣＤ１７２ｂ、ＣＤ１７２ｇ、ＣＤ１８、ＣＤ１８０、ＣＤ１８１、ＣＤ１８３、ＣＤ１８４、ＣＤ１８５、ＣＤ１９、ＣＤ１９４、ＣＤ１９７、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２００、ＣＤ２０１、ＣＤ２０２ｂ、ＣＤ２０３ｃ、ＣＤ２０４、ＣＤ２０５、ＣＤ２０６、ＣＤ２０８、ＣＤ２１、ＣＤ２１３ａ１、ＣＤ２１３ａ２、ＣＤ２１７、ＣＤ２１８ａ、ＣＤ２２、ＣＤ２２０、ＣＤ２２１、ＣＤ２２２、ＣＤ２２４、ＣＤ２２６、ＣＤ２２８、ＣＤ２２９、ＣＤ２３、ＣＤ２３０、ＣＤ２３２、ＣＤ２３９、ＣＤ２４３、ＣＤ２４４、ＣＤ２４８、ＣＤ２４９、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２６５、ＣＤ２６７、ＣＤ２６９、ＣＤ２７、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７９、ＣＤ２８、ＣＤ２８０、ＣＤ２８１、ＣＤ２８２、ＣＤ２８３、ＣＤ２８４、ＣＤ２８９、ＣＤ２９、ＣＤ２９４、ＣＤ２９５、ＣＤ２９８、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３０、ＣＤ３００ｆ、ＣＤ３０２、ＣＤ３０４、ＣＤ３０５、ＣＤ３０７、ＣＤ３１、ＣＤ３１２、ＣＤ３１５、ＣＤ３１６、ＣＤ３１７、ＣＤ３１８、ＣＤ３１９、ＣＤ３２、ＣＤ３２１、ＣＤ３２２、ＣＤ３２４、ＣＤ３２５、ＣＤ３２６、ＣＤ３２７、ＣＤ３２８、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３３１、ＣＤ３３２、ＣＤ３３３、ＣＤ３３４、ＣＤ３３７、ＣＤ３３９、ＣＤ３４、ＣＤ３４０、ＣＤ３４４、ＣＤ３５、ＣＤ３５２、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ３ｄ、ＣＤ３ｇ、ＣＤ４、ＣＤ４１、ＣＤ４２ｄ、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５、ＣＤ５０、ＣＤ５１、ＣＤ５１（インテグリンアルファ－Ｖ）、ＣＤ５２、ＣＤ５３、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６、ＣＤ６１、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ６６ａ－ｅ、ＣＤ６７、ＣＤ６８、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ７０、ＣＤ７０Ｌ、ＣＤ７１、ＣＤ７１（ＴｆＲ）、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８、ＣＤ８０、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５ｆ、ＣＤ８５ｉ、ＣＤ８５ｊ、ＣＤ８６、ＣＤ８７、ＣＤ８９、ＣＤ９０、ＣＤ９１、ＣＤ９２、ＣＤ９５、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９８、ＣＤＨ６、ＣＤＨ６（カドヘリン６）、ＣＤｗ２１０ａ、ＣＤｗ２１０ｂ、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＦＣ１Ｂ、ｃＫＩＴ、ＣＬＤＮ１８．２（クローディン１８．２）、ＣＬＤＮ６、ＣＬＤＮ９、ＣＬＬ－１、ｃ－ＭＥＴ、補体因子Ｃ３、Ｃｒｉｐｔｏ、ＣＳＰ－１、ＣＸＣＲ５、ＤＣＬＫ１、ＤＬＫ－１、ＤＬＬ３、ＤＰＥＰ３、ＤＲ５（デスレセプター５）、Ｄｙｓａｄｈｅｒｉｎ、ＥＦＮＡ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ野生型、ＥＧＦＲｖｉｉｉ、ＥＧＰ－１（ＴＲＯＰ－２）、ＥＧＰ－２、ＥＭＰ２、ＥＮＰＰ３、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、エフリン－Ａ４（ＥＦＮＡ４）、ＥＴＢＲ、ＦＡＰ、ＦｃＲＨ５、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＬＴ３、ＦＯＬＲ、ＦＯＬＲ１、ＦＯＬＲ－アルファ、ＦＳＨ、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＤ３、ｇｌｏｂｏ Ｈ、ＧＰＣ１、ＧＰＣ－１、ＧＰＣ３、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ２０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ－２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ－３、ＨＧＦＲ（ｃ－Ｍｅｔ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＭ１．２４、ＨＳＰ９０、Ｉａ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１５、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ７Ｒ、インテグリンアルファＶベータ３（インテグリンαＶβ３）、インテグリンベータ－６、インターロイキン－４受容体（ＩＬ４Ｒ）、ＫＡＡＧ－１、ＫＬＫ２、ＬＡＭＰ－１、Ｌｅ（ｙ）、ルイスＹ抗原、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＬＧＲ５、ＬＨ／ｈＣＧ、ＬＨＲＨ、脂質ラフト、ＬＩＶ－１（ＳＬＣ３９Ａ６またはＺＩＰ６）、ＬＲＰ－１、ＬＲＲＣ１５、ＬＹ６Ｅ、マクロファージマンノース受容体１、ＭＡＧＥ、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＭＥＴ、ＭＨＣクラスＩ鎖関連タンパク質Ａ及びＢ（ＭＩＣＡ及びＭＩＣＢ）、ＭＮ／ＣＡＩＸ、ＭＲＣ２、ＭＴ１－ＭＭＰ、ＭＴＸ３、ＭＴＸ５、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５、ＭＵＣ５ａｃ、ＮａＰｉ２ｂ、ＮＣＡ－９０、ＮＣＡ－９５、ネクチン－４、Ｎｏｔｃｈ３、ヌクレオリン、ＯＡｃＧＤ２、ＯＴ－ＭＵＣ１（ｏｎｃｏ－ｔｅｔｈｅｒｅｄ－ＭＵＣ１）、ＯＸ００１Ｌ、Ｐ１ＧＦ、ＰＡＭ４抗原、ｐ－カドヘリン（カドヘリン３）、ＰＤ－Ｌ１、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＰＲＬＲ、プロラクチン受容体（ＰＲＬＲ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ４、ＰＴＫ７、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）、ＲＮＦ４３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＡＩＬ、ＳＥＺ６、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＬＩＴＲＫ６、ＳＬＭＡＭＦ７（ＣＳ１）、ＳＬＴＲＫ６、ソルチリン（ＳＯＲＴ１）、ＳＳＥＡ－４、ＳＳＴＲ２、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（抗生物質）、ＳＴＥＡＰ－１、ＳＴＩＮＧ、ＳＴｎ、Ｔ１０１、ＴＡＡ、ＴＡＣ、ＴＤＧＦ１、テネイシン、ＴＥＮＢ２、ＴＧＦ－Ｂ、Ｔｈｏｍｓｏｎ－Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原、Ｔｈｙ１．１、ＴＩＭ－１、組織因子（ＴＦ；ＣＤ１４２）、ＴＭ４ＳＦ１、Ｔｎ抗原、ＴＮＦ－アルファ（ＴＮＦα）、ＴＲＡ－１－６０、ＴＲＡＩＬ受容体（Ｒ１及びＲ２）、ＴＲＯＰ－２、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）、ｕＰＡＲ、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ－２、及びｘＣＴから選択される抗原を結合する、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。
  24. 前記第１の抗体が、ネクチン－４を結合しない、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。
  25. ネクチン－４を結合する抗体を含む抗体－薬物複合体を投与することを含まない、請求項１～２４のいずれか１項に記載の方法。
  26. 前記第１の抗体が、ＣＤ７１、Ａｘｌ、ＡＭＨＲＩＩ、及びＬＧＲ５、Ａｘｌ、ＣＡ９、ＣＤ１４２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２２８、ＣＤ２４８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４８、ＣＤ７、ＣＤ７１、ＣＤ７９ｂ、ＣＬＤＮ１８．２、ＣＬＤＮ６、ｃ－ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＡ２、ＥＴＢＲ、ＦＣＲＨ５、ＧＣＣ、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、ｇｐＮＭＢ、ＨＥＲ－２、ＩＬ７Ｒ、インテグリンベータ－６、ＫＡＡＧ－１、ＬＧＲ５、ＬＩＶ－１、ＬＲＲＣ１５、Ｌｙ６Ｅ、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＭＥＴ、ＭＲＣ２、ＭＵＣ１６、ＮａＰｉ２ｂ、ネクチン－４、ＯＴ－ＭＵＣ１（ｏｎｃｏ－ｔｅｔｈｅｒｅｄ－ＭＵＣ１）、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＬＩＴＲＫ６、ＳＴＥＡＰ－１、ＳＴｎ、ＴＩＭ－１、ＴＲＡ－１－６０、及び腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）から選択される抗原を結合する、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。
  27. 前記第１の抗体が、ＢＣＭＡ、ＧＰＣ１、ＣＤ３０、ｃＭＥＴ、ＳＡＩＬ、ＨＥＲ３、ＣＤ７０、ＣＤ４６、ＣＤ４８、ＨＥＲ２、５Ｔ４、ＥＮＰＰ３、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、及びＥｐｈＡ２から選択される抗原を結合する、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。
  28. 前記第１の抗体が、Ｈｅｒ２、ＴＲＯＰ２、ＢＣＭＡ、ｃＭｅｔ、インテグリンアルファＶベータ６（インテグリンαＶβ６）、ＣＤ２２、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ３０、ＣＤ１９、ＣＤ７０、ＣＤ２２８、ＣＤ４７、及びＣＤ４８から選択される抗原を結合する、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。
  29. 前記第１の抗体が、ＣＤ１４２、インテグリンベータ－６、インテグリンアルファＶベータ６、ＥＮＰＰ３、ＣＤ１９、Ｌｙ６Ｅ、ｃＭＥＴ、Ｃ４．４ａ、ＣＤ３７、ＭＵＣ１６、ＳＴＥＡＰ－１、ＬＲＲＣ１５、ＳＬＩＴＲＫ６、ＥＴＢＲ、ＦＣＲＨ５、Ａｘｌ、ＥＧＦＲ、ＣＤ７９ｂ、ＢＣＭＡ、ＣＤ７０、ＰＳＭＡ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２２８、ＣＤ４８、ＬＩＶ－１、ＥｐｈＡ２、ＳＬＣ４４Ａ４、ＣＤ３０、及びｓＴｎから選択される抗原を結合する、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。
  30. 前記チューブリン破壊剤が、アウリスタチン、チューブリシン、コルヒチン、ビンカアルカロイド、タキサン、クリプトフィシン、メイタンシノイド、またはヘミアステリンである、請求項１～２９のいずれか１項に記載の方法。
  31. 前記チューブリン破壊剤が、アウリスタチンである、請求項３０に記載の方法。
  32. 前記チューブリン破壊剤が、ドロスタチン－１０、ＭＭＡＥ（Ｎ－メチルバリン－バリン－ドライソロイイン－ドラプロイン－ノルエフェドリン）、ＭＭＡＦ（Ｎ－メチルバリン－バリン－ドライソロイイン－ドラプロイン－フェニルアラニン）、アウリスタチンＦ、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ、またはＡＦＰ（アウリスタチンフェニルアラニンフェニレンジアミン）である、請求項１～３１のいずれか１項に記載の方法。
  33. 前記チューブリン破壊剤がＭＭＡＥである、請求項１～３２のいずれか１項に記載の方法。
  34. 前記ＭＭＡＥが、バリン及びシトルリンを含むリンカーを介して前記第１の抗体にコンジュゲートされる、請求項３３に記載の方法。
  35. 前記リンカー－ＭＭＡＥが、ｖｃＭＭＡＥである、請求項３４に記載の方法。
  36. 前記ＭＭＡＥが、ロイシン、アラニン、及びグルタミン酸を含むリンカーを介して前記第１の抗体にコンジュゲートされる、請求項３３に記載の方法。
  37. 前記リンカー－ＭＭＡＥが、ｄＬＡＥ－ＭＭＡＥである、請求項３６に記載の方法。
  38. 前記チューブリン破壊剤が、ＭＭＡＦである、請求項１～３２のいずれか１項に記載の方法。
  39. 前記チューブリン破壊剤が、チューブリシンである、請求項１～３２のいずれか１項に記載の方法。
  40. 前記チューブリシンが、チューブリシンＤ、チューブリシンＭ、チューブフェニルアラニン、及びチューブチロシンから選択される、請求項３９に記載の方法。
  41. 前記抗体－薬物複合体が、ＡｂＧｎ－１０７（Ａｂ１－１８Ｈｒ１）、ＡＧＳ６２Ｐ１（ＡＳＰ１２３５）、ＡＬＴ－Ｐ７（ＨＭ２－ＭＭＡＥ）、ＢＡ３０１１（ＣＡＢ－ＡＸＬ－ＡＤＣ）、ベランタマブマフォドチン、ブレンツキシマブベドチン、ｃｉｒｍｔｕｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ（ＶＬＳ－１０１、ＵＣ－９６１ＡＤＣ３）、コフェツズマブペリドチン（ＰＦ－０６６４７０２０）、ＰＴＫ７－ＡＤＣ、ＰＦ－７０２０、ＡＢＢＶ－６４７）、ＣＸ－２０２９（ＡＢＢＶ－２０２９）、ｄｉｓｉｔａｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ（ＲＣ４８）、エナポタマブベドチン（ＨｕＭａｘ－ＡＸＬ－ＡＤＣ、ＡＸＬ－１０７－ＭＭＡＥ）、エンホルツマブベドチン（ＥＶ）、ＦＳ－１５０２（ＬＣＢ１４－０１１０）、ゲムツズマブオゾガマイシン、ＨＴＩ－１０６６（ＳＨＲ－Ａ１４０３）、イノツズマブオゾガマイシン、ＰＦ－０６８０４１０３（ＮＧ－ＨＥＲ２ ＡＤＣ）、ポラツズマブベドチン、サシツズマブゴビテカン、ＳＧＮ－Ｂ６Ａ、ＳＧＮ－ＣＤ２２８Ａ、ＳＧＮ－ＳＴＮＶ、ＳＴＩ－６１２９（ＣＤ３８ ＡＤＣ、ＬＮＤＳ１００１、ＣＤ３８－０７７ ＡＤＣ）、テリソツズマブベドチン（ＡＢＢＶ－３９９）、チソツマブベドチン（Ｈｕｍａｘ－ＴＦ－ＡＤＣ、ｔｆ－０１１－ｍｍａｅ、ＴＶ）、トラスツズマブデルクステカン、トラスツズマブエムタンシン、及びボルセツズマブマフォドチンから選択される、請求項１～３２のいずれか１項に記載の方法。
  42. 前記第１の抗体が、配列番号６１～６６のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗クローディン－１８．２抗体である、請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法。
  43. 前記抗クローディン－１８．２抗体が、配列番号５９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記抗クローディン－１８．２抗体が、ゾルベツキシマブ（１７５Ｄ１０）である、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記第１の抗体が、配列番号６９～７４のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗クローディン－１８．２抗体である、請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法。
  46. 前記抗クローディン－１８．２抗体が、配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、請求項４５に記載の方法。
  47. 前記第１の抗体が、配列番号７７～８２のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法。
  48. 前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号７６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、請求項４７に記載の方法。
  49. 前記第１の抗体が、配列番号８５～９０のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗ＡＬＰ抗体である、請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法。
  50. 前記抗ＡＬＰ抗体が、配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、請求項４９に記載の方法。
  51. 前記第１の抗体が、配列番号９３～９８のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗Ｂ７Ｈ４抗体を含む、請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法。
  52. 前記抗Ｂ７Ｈ４抗体が、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号９２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、請求項５１に記載の方法。
  53. 前記第１の抗体が、配列番号９９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１００のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む抗ＨＥＲ２抗体である、請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法。
  54. 前記抗体－薬物複合体が、ｄｉｓｉｔａｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎである、請求項５３に記載の方法。
  55. 前記第１の抗体が、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む抗ＮａＰｉ２Ｂ抗体である、請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法。
  56. 前記抗体－薬物複合体が、リファスツズマブベドチンである、請求項５５に記載の方法。
  57. 前記第１の抗体が、配列番号１０５～１１０のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗ネクチン－４抗体である、請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法。
  58. 前記抗ネクチン－４抗体が、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、請求項５７に記載の方法。
  59. 前記抗体－薬物複合体が、エンホルツマブベドチンである、請求項５８に記載の方法。
  60. 前記第１の抗体が、配列番号１１３～１１８のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗ＡＶＢ６抗体である、請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法。
  61. 前記抗ＡＶＢ６抗体が、配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、請求項６０に記載の方法。
  62. 前記第１の抗体が、配列番号１２１～１２６のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗ＡＶＢ６抗体である、請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法。
  63. 前記抗ＡＶＢ６抗体が、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、請求項６２に記載の方法。
  64. 前記第１の抗体が、配列番号１２９～１３４のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗ＣＤ２２８抗体である、請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法。
  65. 前記抗ＣＤ２２８抗体が、配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、請求項６４に記載の方法。
  66. 前記第１の抗体が、配列番号１３７～１４２のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗ＬＩＶ－１抗体である、請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法。
  67. 前記抗ＬＩＶ－１抗体が、配列番号１３５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、請求項６６に記載の方法。
  68. 前記第１の抗体が、配列番号１４５～１５０のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む抗組織因子抗体である、請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法。
  69. 前記抗組織因子抗体が、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、請求項６８に記載の方法。
  70. 前記抗体－薬物複合体が、チソツマブベドチンである、請求項６９に記載の方法。
  71. 前記第２の抗体が、抗ミュラー管ホルモン受容体ＩＩ（ＡＭＨＲ２）、Ｂ７、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ２、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、Ｂｓｔ１／ＣＤ１５７、Ｃ５補体、ＣＣケモカイン受容体４（ＣＣＲ４）、ＣＤ１２３、ＣＤ１３７、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５（ＩＬ２ＲＡ）、ＣＤ２７６、ＣＤ２７８、ＣＤ３、ＣＤ３２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４及びＨＩＶ－１ ｇｐ１２０結合部位、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ７０（ＴＮＦ受容体リガンドファミリーのメンバー）、ＣＤ８０、ＣＤ８６、クローディン１８．２、ｃ－ＭＥＴ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＴＬＡ－４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ ＭＥＴがん原遺伝子、ＥＰＨＡ３、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＦＧＦＲ２ｂ、ＦＬＴ３、ＧＩＴＲ、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体（ＧＩＴＲ）、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＬＡ、ＩＣＯＳ、ＩＤＯ１、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－３Ｒアルファ（ＣＤ１２３）、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－５Ｒアルファ、ＬＡＧ－３、ＭＥＴがん原遺伝子、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＶＲＩＧ、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）ＥＢＯＶ糖タンパク質（ＧＰ）の高度にグリコシル化されたムチン様ドメイン、アカゲザル（Ｒｈ）Ｄ、シアル酸免疫グロブリン様レクチン８（Ｓｉｇｌｅｃ－８）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭＦ７／ＣＳ１）、Ｔ細胞受容体細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４）、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３（ＨＡＶＣＲ２）、Ｍｕｃ１（ＴＡ－Ｍｕｃ１）、ＶＳＩＲ（ＶＩＳＴＡ）、及びＶＴＣＮ１の腫瘍特異的糖エピトープから選択される免疫細胞エンゲージャーを結合する、請求項１～７０のいずれか１項に記載の方法。
  72. 前記第２の抗体がＴＩＧＩＴを結合する、請求項１～７１のいずれか１項に記載の方法。
  73. 前記第２の抗体が、
    （ａ）配列番号７～９から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
    （ｂ）配列番号１０～１３から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；
    （ｃ）配列番号１４～１６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
    （ｄ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
    （ｅ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；及び
    （ｆ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
    を含む、請求項７２に記載の方法。
  74. 前記第２の抗体が、以下の配列：
    （ａ）それぞれ、配列番号７、１０、１４、１７、１８、及び１９；または
    （ｂ）それぞれ、配列番号８、１１、１４、１７、１８、及び１９；または
    （ｃ）それぞれ、配列番号９、１２、１５、１７、１８、及び１９；または
    （ｄ）それぞれ、配列番号８、１３、１６、１７、１８、及び１９；または
    （ｅ）それぞれ、配列番号８、１２、１６、１７、１８、及び１９
    を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、及びＣＤＲ３と、を含む、請求項７２に記載の方法。
  75. 前記第２の抗体が、配列番号１～５から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項７２に記載の方法。
  76. 前記第２の抗体が、配列番号２０～２４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項７２に記載の方法。
  77. 前記第２の抗体が、ＣＤ４０を結合する、請求項１～７１のいずれか１項に記載の方法。
  78. 前記第２の抗体が、（ａ）配列番号３０、３１、３２、３３、３４、及び３５をそれぞれ；または（ｂ）配列番号３０、３６、３２、３３、３４、及び３５の配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、及びＣＤＲ３と、を含む、請求項７７に記載の方法。
  79. 前記第２の抗体が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項７７に記載の方法。
  80. 前記第２の抗体が、配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項７７に記載の方法。
  81. 前記第２の抗体が、ＣＤ７０を結合する、請求項１～７１のいずれか１項に記載の方法。
  82. 前記第２の抗体が、配列番号５３～５８の配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、及びＣＤＲ３と、を含む、請求項８１に記載の方法。
  83. 前記第２の抗体が、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項８１に記載の方法。
  84. 前記第２の抗体がＢＣＭＡを結合する、請求項１～７１のいずれか１項に記載の方法。
  85. 前記第２の抗体が、配列番号４７～５２の配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、及びＣＤＲ３と、を含む、請求項８４に記載の方法。
  86. 前記第２の抗体が、配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項８４に記載の方法。
  87. 前記第２の抗体が、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である、請求項１～８６のいずれか１項に記載の方法。
  88. 前記第２の抗体が、抗体の組成物に含まれ、前記組成物中の少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の抗体が、非フコシル化されている、請求項１～８７のいずれか１項に記載の方法。
  89. 前記組成物中の各抗体が、前記第２の抗体と同じ重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項８８に記載の方法。
  90. 前記第２の抗体の前記Ｆｃは、同じアイソタイプの対応する野生型Ｆｃと比較して、１つ以上の活性化ＦｃγＲへの結合が増強されており、前記活性化ＦｃγＲが、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、及び／またはＦｃγＲＩのうちの１つ以上を含む、請求項１～８９のいずれか１項に記載の方法。
  91. 前記第２の抗体の前記Ｆｃは、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合が増強されている、請求項９０に記載の方法。
  92. 前記第２の抗体の前記Ｆｃは、同じアイソタイプの対応する野生型Ｆｃと比較して、１つ以上の阻害性ＦｃγＲへの結合が減少している、請求項１～９１のいずれか１項に記載の方法。
  93. 前記第２の抗体の前記Ｆｃは、ＦｃγＲＩＩｂへの結合が減少している、請求項９２に記載の方法。
  94. 前記第２の抗体の前記Ｆｃは、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合が増強され、ＦｃγＲＩＩｂへの結合が減少している、請求項１～９３のいずれか１項に記載の方法。
  95. 前記第２の抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１～９４のいずれか１項に記載の方法。
  96. 前記第２の抗体が、ヒト化抗体またはヒト抗体である、請求項１～９５のいずれか１項に記載の方法。
  97. 前記がんが、膀胱癌、乳癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、食道癌、胃腸癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、膵癌、大腸癌、結腸癌、腎癌、明細胞腎癌、頭頸部癌、肺癌、肺腺癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、胚細胞癌、骨癌、肝癌、甲状腺癌、皮膚癌、黒色腫、中枢神経系の新生物、中皮腫、リンパ腫、白血病、慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄腫、または肉腫である、請求項１～９６のいずれか１項に記載の方法。
  98. 前記がんが、リンパ腫、白血病、慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、またはホジキンリンパ腫である、請求項１～９７のいずれか１項に記載の方法。
  99. 前記抗体－薬物複合体及び前記第２の抗体が同時に投与される、請求項１～９８のいずれか１項に記載の方法。
  100. 前記抗体－薬物複合体及び前記第２の抗体が１つの医薬組成物中で投与される、請求項９９に記載の方法。
  101. 前記抗体－薬物複合体及び前記第２の抗体が順次投与される、請求項１～９８のいずれか１項に記載の方法。
  102. 前記抗体－薬物複合体の少なくとも初回用量が、前記第２の抗体の初回用量の前に投与されるか、または、少なくとも前記第２の抗体の初回用量が、前記抗体－薬物複合体の初回用量の前に投与される、請求項１０１に記載の方法。
  103. 前記第２の抗体が、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させる、請求項１～１０２のいずれか１項に記載の方法。
  104. 前記抗体－薬物複合体が、前記抗体－薬物複合体によって結合された前記抗原を発現する細胞に対して免疫記憶を誘導する、請求項１～１０３のいずれか１項に記載の方法。
  105. 免疫記憶の前記誘導が、メモリーＴ細胞の誘導を含む、請求項１０４に記載の方法。
  106. 前記第２の抗体が、抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化する、請求項１～１０５のいずれか１項に記載の方法。
  107. 前記第２の抗体が、ＣＤ８Ｔ細胞応答を増強する、請求項１～１０６のいずれか１項に記載の方法。
  108. 前記第２の抗体が、共刺激受容体を上方制御する、請求項１～１０７のいずれか１項に記載の方法。
  109. 前記ＡＤＣ及び前記第２の抗体の投与が、免疫活性化サイトカインの放出を促進する、請求項１～１０８のいずれか１項に記載の方法。
  110. 前記免疫活性化サイトカインが、ＣＸＣＬ１０またはＩＦＮγである、請求項１０９に記載の方法。
  111. 前記ＡＤＣ及び前記第２の抗体が、相乗的に作用する、請求項１～１１０のいずれか１項に記載の方法。
  112. 前記ＡＤＣ及び前記第２の抗体を組み合わせた投与が、前記ＡＤＣまたは前記第２の抗体のいずれかが単剤療法として投与される場合の毒性プロファイルと同等の毒性プロファイルを有する、請求項１～１１１のいずれか１項に記載の方法。
  113. 組み合わせて投与される場合の前記ＡＤＣ及び／または前記第２の抗体の有効用量が、単剤療法として投与される場合より少ない、請求項１～１１２のいずれか１項に記載の方法。
  114. 前記がんが、高い腫瘍変異負荷を有する、請求項１～１１３のいずれか１項に記載の方法。
  115. 前記がんが、マイクロサテライト不安定性を有する、請求項１～１１４のいずれか１項に記載の方法。
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