EA031651B1 - Инсектицидные белки и способы их применения - Google Patents

Инсектицидные белки и способы их применения Download PDF

Info

Publication number
EA031651B1
EA031651B1 EA201690583A EA201690583A EA031651B1 EA 031651 B1 EA031651 B1 EA 031651B1 EA 201690583 A EA201690583 A EA 201690583A EA 201690583 A EA201690583 A EA 201690583A EA 031651 B1 EA031651 B1 EA 031651B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
xaa
ser
ala
val
leu
Prior art date
Application number
EA201690583A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201690583A1 (ru
Inventor
Скотт Дин
Джеймс Инглиш
Лу Лю
Азалеа Онг
Джарред Орал
Барбара Роузен
Уте Шелленбергер
Ингрид Удрансзки
Цзюнь-чжи Вэй
Вэйпин Се
Гэньхай Чжу
Original Assignee
Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. filed Critical Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк.
Publication of EA201690583A1 publication Critical patent/EA201690583A1/ru
Publication of EA031651B1 publication Critical patent/EA031651B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/21—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Pseudomonadaceae (F)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/50—Isolated enzymes; Isolated proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8286—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for insect resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/13—Plant traits
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/21—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Pseudomonadaceae (F)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants

Abstract

Представлены композиции и способы контроля вредителей. Способы включают трансформацию организмов последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей инсектицидный белок. В частности, последовательности нуклеиновой кислоты применимы для получения растений и микроорганизмов, которые обладают инсектицидной активностью. Таким образом, представлены трансформированные бактерии, растения, растительные клетки, растительные ткани и семена. Композиции представляют собой инсектицидные нуклеиновые кислоты и белки из видов бактерий. Последовательности находят применение при конструировании векторов экспрессии для последующей трансформации организмов, представляющих интерес, в том числе растений, в качестве зондов для выделения других гомологичных (или частично гомологичных) генов. Пестицидные белки находят применение при контроле, подавлении роста или уничтожении популяций вредителей из группы чешуекрылых, жесткокрылых, двукрылых, грибков, полужесткокрылых и нематод и для получения композиций с инсектицидной активностью.

Description

Область изобретения
Настоящее раскрытие относится к области молекулярной биологии. Представлены новые гены, которые кодируют пестицидные белки. Эти пестицидные белки и последовательности нуклеиновой кислоты, которые их кодируют, применимы в приготовлении пестицидных составов и в получении трансгенных растений, устойчивых к вредителям.
Предпосылки изобретения
Биологический контроль насекомых-вредителей, имеющих сельскохозяйственное значение, с применением микробного средства, такого как грибы, бактерии или другие виды насекомых, представляет не оказывающую отрицательного влияния на окружающую среду и коммерчески привлекательную альтернативу синтетическим химическим пестицидам. В целом можно сказать, что применение биопестицидов приводит к меньшему риску загрязнения и неблагоприятных воздействий на окружающую среду и биопестициды обеспечивают большую специфичность по отношению к мишени по сравнению со специфичностью, характерной для традиционных химических инсектицидов широкого спектра действия. Кроме того, зачастую производство биопестицидов стоит дешевле, и вследствие этого улучшается экономически эффективный выход продукции для широкого спектра сельскохозяйственных культур.
Определенные виды микроорганизмов из рода Bacillus, как известно, обладают пестицидной активностью против ряда насекомых-вредителей, в том числе Lepidoptera, Diptera, Coleoptera, Hemiptera и др. Bacillus thuringiensis (Bt) и Bacillus popilliae входят в число наиболее успешных средств биологического контроля, обнаруженных на сегодняшний день. Патогенность в отношении насекомых также приписывалась штаммам B. larvae, B. lentimorbus, B. sphaericus и B. cereus. Микробные инсектициды, в частности, полученные из штаммов Bacillus, сыграли важную роль в сельском хозяйстве как альтернатива химическому контролю вредителей.
Были разработаны культурные растения с повышенной устойчивостью к насекомым при помощи генной инженерии культурных растений для выработки пестицидных белков Bacillus. Например, с помощью генной инженерии были созданы растения кукурузы и хлопчатника для выработки пестицидных белков, выделенных из штаммов Bt. Эти сельскохозяйственные культуры, созданные при помощи генной инженерии, на сегодняшний день широко применяются в сельском хозяйстве и предоставляют фермеру не оказывающую негативного влияния на окружающую среду альтернативу традиционным способам контроля насекомых. Несмотря на то что они были признаны очень успешными с коммерческой точки зрения, эти созданные при помощи генной инженерии устойчивые к насекомым культурные растения предусматривают устойчивость только к узкому диапазону важных в экономическом отношении насекомых-вредителей. В некоторых случаях, насекомые могут развивать устойчивость к различным инсектицидным соединениям, что повышает необходимость в идентификации альтернативных биологических средств контроля для контроля вредителей.
Следовательно, остается необходимость в новых пестицидных белках с различными диапазонами инсектицидной активности против насекомых-вредителей, например инсектицидных белках, которые активны против ряда насекомых из отряда Lepidoptera и отряда Coleoptera, в том числе, без ограничения, насекомых-вредителей, которые развили устойчивость к существующим инсектицидам.
Краткое описание изобретения
Представлены композиции и способы обеспечения пестицидной активности у бактерий, растений, растительных клеток, тканей и семян. Композиции включают молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие последовательности пестицидных и инсектицидных полипептидов, векторы, содержащие такие молекулы нуклеиновой кислоты, и клетки-хозяева, содержащие векторы. Композиции также включают последовательности пестицидных полипептидов и антитела к таким полипептидам. Последовательности нуклеиновой кислоты можно применять в ДНК-конструкциях или кассетах экспрессии для трансформации и экспрессии в организмах, в том числе микроорганизмах и растениях. Нуклеотидные или аминокислотные последовательности могут представлять собой синтетические последовательности, которые были сконструированы для экспрессии в организме, в том числе, без ограничения, микроорганизме или растении. Композиции также включают трансформированные бактерии, растения, растительные клетки, ткани и семена.
В частности, представлены выделенные или рекомбинантные молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие полипептиды, инсектицидный белок-72 Pseudomonas (PIP-72), в том числе аминокислотные замены, делеции, вставки, их фрагменты и их комбинации. Дополнительно, охватываются аминокислотные последовательности, соответствующие полипептидам PIP-72. Представлены выделенные или рекомбинантные молекулы нуклеиновой кислоты, способные кодировать полипептид PIP-72 SEQ ID NO: 849, а также аминокислотные замены, делеции, вставки, их фрагменты и их комбинации. Также охватываются последовательности нуклеиновой кислоты, которые комплементарны последовательности нуклеиновой
- 1 031651 кислоты согласно вариантам осуществления или которые гибридизуются с последовательностью согласно вариантам осуществления. Также представлены выделенные или рекомбинантные полипептиды PIP-72 SEQ ID NO: 849, а также аминокислотные замены, делеции, вставки, их фрагменты и их комбинации.
Представлены способы получения полипептидов и применения данных полипептидов для контроля или уничтожения вредителей из группы чешуекрылых, жесткокрылых, нематод, грибков и/или двукрылых. Трансгенные растения согласно вариантам осуществления экспрессируют одну или несколько пестицидных последовательностей, раскрытых в данном документе. В различных вариантах осуществления трансгенное растение дополнительно содержит один или несколько дополнительных генов устойчивости к насекомым, например, один или несколько дополнительных генов для контроля вредителей из группы жесткокрылых, чешуекрылых, полужесткокрылых или нематод. Специалисту в данной области будет понятно, что трансгенное растение может содержать какой-либо ген, обеспечивающий агрономический признак, представляющий интерес.
Также включены способы выявления нуклеиновых кислот и полипептидов согласно вариантам осуществления в образце. Представлен набор для выявления присутствия полипептида PIP-72 или выявления присутствия нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид PIP-72, в образце. Набор может быть представлен вместе со всеми реагентами и контрольными образцами, необходимыми для осуществления способа выявления предполагаемого средства, а также с инструкциями по применению.
Композиции и способы согласно вариантам осуществления применимы для получения организмов с повышенной устойчивостью к вредителям или переносимостью вредителей. Эти организмы и композиции, содержащие организмы, подходят для сельскохозяйственных целей. Композиции согласно вариантам осуществления также применимы для получения измененных или улучшенных белков, которые обладают пестицидной активностью, или для выявления присутствия полипептидов PIP-72 или нуклеиновых кислот в продуктах или организмах.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1 представлено выравнивание аминокислотной последовательности PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2), PIP-72Ba (SEQ ID NO: 4); PIP-72Ca (SEQ ID NO: 6); PIP-72Cb (SEQ ID NO: 8); PIP-72Da (SEQ ID NO: 10); PIP-72Db (SEQ ID NO: 12); PIP-72Dc (SEQ ID NO: 14); PIP-72Ea (SEQ ID NO: 16), PIP-72Fa (SEQ ID NO: 18); GBP A3175 (SEQ ID NO: 20), SRBS 294080 (SEQ ID NO: 22); JG43047 (SEQ ID NO: 24); SwiRh 4910 (SEQ ID NO: 26); PIP-72Ff (SEQ ID NO: 28), PFL 6283 (SEQ ID NO: 30); PIP-72Gb (SEQ ID NO: 32); XBJ1 1078 (SEQ ID NO: 34); plu2373 (SEQ ID NO: 36) и PIP-72Ge (SEQ ID NO: 38). Отличие последовательности выделено. Аминокислоты 37-51 (мотив 1) относительно PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) подчеркнуты.
На фиг. 2 представлено выравнивание аминокислотных последовательностей PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2), PIP-72Ab (SEQ ID NO: 927); PIP-72Ba (SEQ ID NO: 4); PIP-72Bb (SEQ ID NO: 928); PIP-72Ca (SEQ ID NO: 6); PIP-72Cb (SEQ ID NO: 8); WP 030131237 (SEQ ID NO: 929); PIP-72Da (SEQ ID NO: 10); PIP-72Db (SEQ ID NO: 12); PIP-72Dc (SEQ ID NO: 14); PIP-72Fa (SEQ ID NO: 18) и GBP A3175 (SEQ ID NO: 20). Различие аминокислот между PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) и другими гомологами указано штриховкой.
На фиг. 3 представлено выравнивание аминокислотной последовательности PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2), PIP-72Ba (SEQ ID NO: 4); PIP-72Ca (SEQ ID NO: 6); PIP-72Cb (SEQ ID NO: 8); PIP-72Da (SEQ ID NO: 10); PIP-72Db (SEQ ID NO: 12) и PIP-72Dc (SEQ ID NO: 14). Различие аминокислот между PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) и другими гомологами указано штриховкой.
На фиг. 4 представлено выравнивание аминокислотной последовательности из WP 030131237 (SEQ ID NO: 929); PIP-72Ca (SEQ ID NO: 6) PIP-72Cb (SEQ ID NO: 8); PIP-72Da (SEQ ID NO: 10); PIP-72Db (SEQ ID NO: 12); и PIP-72Dc (SEQ ID NO: 14). Различие аминокислот между PIP-72Da (SEQ ID NO: 10) и другими гомологами указано штриховкой.
На фиг. 5 представлено выравнивание аминокислотных последовательностей PIP-72Fh (SEQ ID NO: 932), PIP-72Gi (SEQ ID NO: 941); PIP-72Fi (SEQ ID NO: 933); PIP-72G1 (SEQ ID NO: 944); PIP-72Fa (SEQ ID NO: 14). Различие аминокислот между PIP-72Ca (SEQ ID NO: 2) и другими гомологами указано штриховкой.
На фиг. 6 представлены результаты эффективности T0 GH для трансформантов, полученных из конструкций PHP61664, PHP61666, PHP61668, PHP64465, PHP64468, PHP64471 и PHP69828. Эффективность для трансформантов, полученных от обеих конструкций, устанавливали относительно трансформантов отрицательного контроля, которую оценивали по защите корня от западного кукурузного жука. Защиту корня оценивали, основываясь на количестве узлов пораженных корней (CRWNIS = показатель поражения узлов кукурузным жуком), с применением способа, разработанного Oleson, et al. (2005) [J. Econ Entomol. 98(1): 1-8]. Показатель поражения корня оценивали от 0 до 3, при этом 0 указывает на отсутствие видимого поражения корня, 1 означает один узел корневого повреждения, 2 означает два узла корневого повреждения и 3 означает максимальный показатель в три узла корневого повреждения. Каждый символ (треугольник, квадрат или круг) обозначает один трансформант.
- 2 031651
Подробное описание
Следует понимать, что настоящее раскрытие не ограничивается конкретными описанными методиками, протоколами, клеточными линиями, родами и реагентами, в связи с этим они могут варьировать. Также следует понимать, что терминология, используемая в данном документе, предназначена лишь для описания конкретных вариантов осуществления и не подразумевается как ограничивающая объем настоящего раскрытия.
Используемая в данном документе форма единственного числа включает ссылки на множественное число, если в контексте явно не указано иное. Так, например, указание на клетку включает множество таких клеток, и ссылка на белок включает ссылку на один или несколько белков или их эквивалентов, известных специалистам в данной области техники, и т.д. Все технические и научные выражения, используемые в данном документе, имеют то же самое значение, как обычно понимается специалистом в области техники, к которой принадлежит настоящее раскрытие, если явно не указано иное.
Настоящее раскрытие относится к композициям и способам контроля вредителей. Способы включают трансформацию организмов последовательностями нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид PIP-72. В частности, последовательности нуклеиновой кислоты согласно вариантам осуществления применимы для получения растений и микроорганизмов, которые обладают пестицидной активностью. Таким образом, представлены трансформированные бактерии, растения, растительные клетки, растительные ткани и семена. Композиции представляют собой пестицидные нуклеиновые кислоты и белки из видов бактерий. Последовательности нуклеиновой кислоты находят применение в конструировании векторов экспрессии для последующей трансформации организмов, представляющих интерес, в качестве зондов для выделения других гомологичных (или частично гомологичных) генов и для получения измененных полипептидов PIP-72 при помощи способов, известных из уровня техники, таких как сайтнаправленный мутагенез, замена доменов или ДНК-шаффлинг. Полипептиды PIP-72 находят применение при контроле или уничтожении популяций вредителей из группы чешуекрылых, жесткокрылых, двукрылых, грибковых, полужесткокрылых и нематод и для получения композиций с инсектицидной активностью. Насекомые-вредители, представляющие интерес, включают, без ограничения, виды из отряда Lepidoptera, в том числе, без ограничения, моль капустную, например Helicoverpa zea Boddie; соевую совку, например Pseudoplusia includens Walker, и гусеницу ночницы, питающуюся бархатными бобами, например Anticarsia gemmatalis Hubner, и виды из отряда Coleoptera, в том числе, без ограничения, западного кукурузного жука (Diabrotica virgifera) - WCRW, блошку 11-точечную Говарда (Diabrotica undecimpunctata howardi) - SCRW и северного кукурузного жука (Diabrotica barberi) - NCRW.
Под пестицидным токсином или пестицидным белком, как используется в настоящем документе, подразумевают токсин, который обладает токсической активностью против одного или нескольких вредителей, в том числе, без ограничения, представителей отряда Lepidoptera, Diptera, Hemiptera и Coleoptera или типа Nematoda, или белок, который характеризуется гомологией с таким белком. Пестицидные белки были выделены из организмов, в том числе, например, Bacillus sp., Pseudomonas sp., Photorhabdus sp., Xenorhabdus sp., Clostridium bifermentans и Paenibacillus popilliae. Пестицидные белки включают, без ограничения, инсектицидные белки из Pseudomonas sp., такие как PSEEN3174 (Monalysin; (2011), PLoS Pathogens 7:1-13); из штамма CHA0 и Pf-5 Pseudomonas protegens (ранее fluorescens) (Pechy-Tarr, (2008), Environmental Microbiology, 10:2368-2386; Номер доступа в GenBank EU400157); из Pseudomonas Taiwanensis (Liu, et al., (2010), J. Agric. Food Chem., 58:12343-12349) и из Pseudomonas pseudoalcligenes (Zhang, et al., (2009), Annals of Microbiology, 59:45-50 и Li, et al., (2007), Plant Cell Tiss. Organ Cult. 89:159-168); инсектицидные белки из Photorhabdus sp. и Xenorhabdus sp. (Hinchliffe, et al., (2010), The Open Toxicology Journal, 3:101-118 и Morgan, et al., (2001), Applied and Envir. Micro. 67:20622069); патенты США № 6048838 и 6379946; полипептид PIP-1 из патента США № 13/792861; полипептиды AfIP-1A и/или AfIP-1B из патента США № 13/800233; полипептиды PHI-4 из патента США № 13/839702; полипептиды PIP-47 из патента США № 61/866747; инсектицидные белки из публикации заявки на патент США № 61/863761 и 61/863763 и δ-эндотоксины, в том числе, без ограничения, классы
Сгу1, Сгу2, СгуЗ, Сгу4, Сгу5, Сгуб, Сгу7, Сгу8, Сгу9,
Сгу10, Сгу11, Сгу12, Сгу13, Сгу14, Сгу15, Сгу16, Сгу17, Сгу18, Сгу19, Сгу20, Сгу21,
Cry22, Cry23, Cry24, Cry25, Cry26, Cry27, Cry 28, Cry 29, Cry 30, Cry31, Сгу32, СгуЗЗ, Cry34, Сгу35,Сгу36, Сгу37, Сгу38, СгуЗЭ, Сгу40, Сгу41, Сгу42, Сгу43, Сгу44, Сгу45, Cry 46, Cry47, Cry49, Cry 51, Cry52, Cry 53, Cry 54, Cry55, Сгу56, Сгу57, Сгу58, Сгу59. СгубО, Сгу61, Сгу62, СгубЗ, Сгу64, Сгу65, Сгубб, Сгу67, Сгу68, Сгу69, Сгу70 и Сгу71 гены δ-эндотоксинов и гены цитолитических токсинов cyt1 и cyt2 В. thuringiensis.
- 3 031651
Представители этих классов инсектицидных белков B. thuringiensis включают, без ограничения:
Сгу1Аа1 (№ доступа ААА22353); Сгу1Аа2 (№ доступа № доступа
ААА22552); Сгу1АаЗ (№ доступа ВАА00257); Сгу1Аа4 (№ доступа САА31886);
Сгу1Аа5 (№ доступа ВАА04468); Сгу1Аа6 (№ доступа ААА86265); Сгу1Аа7 (№ доступа AAD46139); Сгу1Аа8 (№ доступа 126149); Сгу1Аа9 (№ доступа ВАА77213);
Сгу1Аа10 (№ доступа AAD55382); Сгу1Аа11 (№ доступа САА70856); Сгу1Аа12 (№ доступа ААР80146); Сгу1Аа13 (№ доступа ААМ44305); Сгу1Аа14 (№ доступа ААР40639); Сгу1Аа15 (№ доступа AAY66993); Сгу1Аа16 (№ доступа HQ439776);
Сгу1Аа17 (№ доступа HQ439788); Сгу1Аа18 (№ доступа HQ439790); Сгу1Аа19 (№ доступа HQ685121); Сгу1Аа20 (№ доступа JF340156); Сгу1Аа21 (№ доступа JN651496); Сгу1Аа22 (№ доступа КС158223); Сгу1АЫ (№ доступа ААА22330);
Сгу1АЬ2 (№ доступа ААА22613); Сгу1АЬЗ (№ доступа ААА22561); Сгу1АЬ4 (№ доступа ВАА00071 ); Сгу1АЬ5 (№ доступа САА28405); Сгу1АЬ6 (№ доступа ААА22420); Сгу1АЬ7 (№ доступа САА31620); Сгу1АЬ8 (№ доступа ААА22551);
Сгу1АЬ9 (№ доступа САА38701); Сгу1АЫ0 (№ доступа А29125); Сгу1АЫ 1 (№ доступа 112419); Сгу1АЬ12 (№ доступа ААС64003); Сгу1АЬ13 (№ доступа AAN76494); Сгу1АЫ4 (№ доступа AAG16877); Сгу1АЫ5 (№ доступа ААО13302);
Сгу1АЫ6 (№ доступа ААК55546); Сгу1АЫ7 (№ доступа ААТ46415); Сгу1АЫ8 (№ доступа AAQ88259); Сгу1АЬ19 (№ доступа AAW31761); Сгу1АЬ20 (№ доступа АВВ72460); Сгу1АЬ21 (№ доступа ABS18384); Сгу1АЬ22 (№ доступа ABW87320);
Сгу1АЬ23 (№ доступа HQ439777); Сгу1АЬ24 (№ доступа HQ439778); Сгу1АЬ25 (№ доступа HQ685122); Сгу1АЬ26 (№ доступа HQ847729); Сгу1АЬ27 (№ доступа
- 4 031651
JN135249); Cry1Ab28 (№ доступа JN135250); Cry1Ab29 (№ доступа JN135251); Cry1Ab30 (№ доступа JN135252); Cry1Ab31 (№ доступа JN135253); Cry1Ab32 (№ доступа JN135254); Cry1Ab33 (№ доступа AAS93798); Cry1Ab34 (№ доступа KC156668); CrylAb-подобный (№ доступа ААК14336); CrylAb-подобный (№ доступа ААК14337); CrylAb-подобный (№ доступа ААК14338); CrylAb-подобный (№ доступа ABG88858); Сгу1Ас1 (№ доступа ААА22331); Сгу1Ас2 (№ доступа ААА22338); Сгу1АсЗ (№ доступа САА38098); Сгу1Ас4 (№ доступа ААА73077); Сгу1Ас5 (№ доступа ААА22339); Сгу1Ас6 (№ доступа ААА86266); Сгу1Ас7 (№ доступа ААВ46989); Сгу1Ас8 (№ доступа ААС44841); Сгу1Ас9 (№ доступа ААВ49768); Сгу1Ас10 (№ доступа САА05505 ); Сгу1Ас11 (№ доступа САА10270); Сгу1Ас12 (№ доступа 112418); Сгу1Ас13 (№ доступа AAD38701); Сгу1Ас14 (№ доступа AAQ06607); Сгу1Ас15 (№ доступа AAN07788); Сгу1Ас16 (№ доступа AAU87037); Сгу1Ас17 (№ доступа ААХ18704); Сгу1Ас18 (№ доступа AAY88347); Сгу1Ас19 (№ доступа ABD37053); Сгу1Ас20 (№ доступа АВВ89046 ); Сгу1Ас21 (№ доступа AAY66992 ); Сгу1Ас22 (№ доступа ABZ01836); Сгу1Ас23 (№ доступа CAQ30431); Сгу1Ас24 (№ доступа ABL01535); Сгу1Ас25 (№ доступа FJ513324); Сгу1Ас26 (№ доступа FJ617446); Сгу1Ас27 (№ доступа FJ617447); Сгу1Ас28 (№ доступа АСМ90319); Сгу1Ас29 (№ доступа DQ438941); Сгу1АсЗО (№ доступа GQ227507); Сгу1Ас31 (№ доступа GU446674); Сгу1Ас32 (№ доступа НМ061081); Сгу1АсЗЗ (№ доступа GQ866913); Сгу1Ас34 (№ доступа HQ230364); Сгу1Ас35 (№ доступа JF340157); Сгу1Ас36 (№ доступа JN387137); Сгу1Ас37 (№ доступа JQ317685); Cry1Ad1 (№ доступа ААА22340); Cry1Ad2 (№ доступа САА01880); Сгу1Ае1 (№ доступа ААА22410); Cry1Af1 (№ доступа ААВ82749); Cry1Ag1 (№ доступа AAD46137); Cry1Ah1 (№ доступа AAQ14326); Cry1Ah2 (№ доступа АВВ76664); Cry1Ah3 (№ доступа HQ439779); Cry1Ai1 (№ доступа ААО39719); Cry1Ai2 (№ доступа HQ439780); Сгу1А-подобный (№ доступа ААК14339); Сгу1Ва1 (№ доступа САА29898); Сгу1Ва2 (№ доступа САА65003); Сгу1ВаЗ (№ доступа ААК63251); Сгу1Ва4 (№ доступа ААК51084); Сгу1Ва5 (№ доступа АВО20894); Сгу1Ва6 (№ доступа ABL60921); Сгу1Ва7 (№ доступа HQ439781); Сгу1ВЬ1 (№ доступа ААА22344); Сгу1ВЬ2 (№ доступа HQ439782); Сгу1Вс1 (№ доступа САА86568); Cry1Bd1 (№ доступа AAD10292); Cry1Bd2 (№ доступа ААМ93496); Сгу1Ве1 (№ доступа ААС32850); Сгу1Ве2 (№ доступа AAQ52387); Сгу1ВеЗ (№ доступа ACV96720); Сгу1Ве4 (№ доступа НМ070026); Cry1Bf1 (№ доступа САС50778); Cry1Bf2 (№ доступа AAQ52380); Cry1Bg1 (№ доступа ААО39720); Cry1Bh1 (№ доступа HQ589331); Cry1Bi1 (№ доступа КС156700); Сгу1Са1 (№ доступа САА30396); Сгу1Са2 (№ доступа САА31951); Сгу1СаЗ (№ доступа ААА22343);
- 5 031651
Cry1Ca4 (№ доступа CAA01886); Cry1Ca5 (№ доступа CAA65457); Cry1Ca6 [1] (№ доступа AAF37224 ); Сгу1Са7 (№ доступа AAG50438); Сгу1Са8 (№ доступа ААМ00264); Сгу1Са9 (№ доступа AAL79362); Сгу1Са10 (№ доступа AAN16462); Сгу1Са11 (№ доступа ААХ53094); Сгу1Са12 (№ доступа НМ070027); Сгу1Са13 (№ доступа HQ412621); Сгу1Са14 (№ доступа JN651493); Сгу1 СМ (№ доступа М97880); Сгу1СЬ2 (№ доступа AAG35409); Сгу1СЬЗ (№ доступа ACD50894 ); CrylCbподобный (№ доступа ААХ63901); Cry1Da1 (№ доступа САА38099); Cry1Da2 (№ доступа 176415); СгуЮаЗ (№ доступа HQ439784); Cry1Db1 (№ доступа САА80234 ); Cry1Db2 (№ доступа ААК48937 ); Cry1Dc1 (№ доступа АВК35074); Сгу1Еа1 (№ доступа САА37933); Сгу1Еа2 (№ доступа САА39609); Сгу1ЕаЗ (№ доступа ААА22345); Сгу1Еа4 (№ доступа AAD04732); Сгу1Еа5 (№ доступа А15535); Сгу1Еа6 (№ доступа AAL50330); Сгу1Еа7 (№ доступа AAW72936); Сгу1Еа8 (№ доступа АВХ11258); Сгу1Еа9 (№ доступа HQ439785); Сгу1Еа10 (№ доступа ADR00398); Сгу1Еа11 (№ доступа JQ652456); Сгу1ЕЫ (№ доступа ААА22346); Cry1Fa1 (№ доступа ААА22348); Cry1Fa2 (№ доступа ААА22347); Cry1Fa3 (№ доступа НМ070028); Cry1Fa4 (№ доступа НМ439638); Cry1Fb1 (№ доступа САА80235); Cry1Fb2 (№ доступа ВАА25298); Cry1Fb3 (№ доступа AAF21767); Cry1Fb4 (№ доступа ААС10641); Cry1Fb5 (№ доступа ААО13295); Cry1Fb6 (№ доступа ACD50892); Cry1Fb7 (№ доступа ACD50893); Cry1Ga1 (№ доступа САА80233); Cry1Ga2 (№ доступа САА70506); Cry1Gb1 (№ доступа AAD10291); Cry1Gb2 (№ доступа ААО13756); Cry1Gc1 (№ доступа AAQ52381); Сгу1На1 (№ доступа САА80236); Сгу1НЬ1 (№ доступа ААА79694); Сгу1НЬ2 (№ доступа HQ439786); Сгу1Н-подобный (№ доступа AAF01213); Сгу11а1 (№ доступа САА44633); Сгу11а2 (№ доступа ААА22354); Cry11аЗ (№ доступа ААС36999); Сгу11а4 (№ доступа ААВ00958); Сгу11а5 (№ доступа САА70124); Cry1 Ia6 (№ доступа ААС26910); Сгу11а7 (№ доступа ААМ73516); Сгу11а8 (№ доступа ААК66742); Сгу11а9 (№ доступа AAQ08616); Сгу11а10 (№ доступа ААР86782); Сгу11а11 (№ доступа САС85964 ); Сгу11а12 (№ доступа AAV53390); Сгу11а13 (№ доступа ABF83202); Сгу11а14 (№ доступа ACG63871); Сгу11а15 (№ доступа FJ617445); Сгу11а16 (№ доступа FJ617448); Сгу11а17 (№ доступа GU989199); Сгу11а18 (№ доступа ADK23801); Сгу11а19 (№ доступа HQ439787); Сгу11а20 (№ доступа JQ228426); Сгу11а21 (№ доступа JQ228424); Сгу11а22 (№ доступа JQ228427); Сгу11а23 (№ доступа JQ228428); Сгу11а24 (№ доступа JQ228429); Сгу11а25 (№ доступа JQ228430); Сгу11а26 (№ доступа JQ228431); Сгу11а27 (№ доступа JQ228432); Сгу11а28 (№ доступа JQ228433); Сгу11а29 (№ доступа JQ228434); Сгу11а30 (№ доступа JQ317686); Сгу11а31 (№ доступа JX944038); Сгу11а32 (№ доступа JX944039); Сгу11аЗЗ (№
- 6 031651 доступа JX944040); Cryllbl (№ доступа ААА82114); Cry1lb2 (№ доступа ABW88019); Cry1lb3 (№ доступа ACD75515); Cry1lb4 (№ доступа НМ051227); Cry1lb5 (№ доступа НМ070028); Cry1lb6 (№ доступа ADK38579); Cry1lb7 (№ доступа JN571740); Cry1lb8 (№ доступа JN675714); Cry1lb9 (№ доступа JN675715); Cry1lb10 (№ доступа JN675716); Cry1 Ib11 (№ доступа JQ228423); Cryllcl (№ доступа AAC62933); Cry1lc2 (№ доступа AAE71691); Crylldl (№ доступа AAD44366); Cry1ld2 (№ доступа JQ228422); Cryllel (№ доступа AAG43526); Cry1le2 (№ доступа HM439636); Cry1le3 (№ доступа КС156647); Сгу11е4 (№ доступа КС156681); Cryllfl (№ доступа AAQ52382); Cryllgl (№ доступа КС156701); Cryll-подобный (№ доступа ААС31094); Cryll-подобный (№ доступа ABG88859); Cry1Ja1 (№ доступа ААА22341); Cry1Ja2 (№ доступа НМ070030); Cry1Ja3 (№ доступа JQ228425); Cry1Jb1 (№ доступа ААА98959); Cry1Jc1 (№ доступа ААС31092); Cry1Jc2 (№ доступа AAQ52372); Cry1Jd1 (№ доступа САС50779); Сгу1Ка1 (№ доступа ААВ00376); Сгу1Ка2 (№ доступа HQ439783); Сгу11_а1 (№ доступа AAS60191); Сгу11_а2 (№ доступа НМ070031); Сгу1Ма1 (№ доступа FJ884067); Сгу1Ма2 (№ доступа КС156659); Cry1Na1 (№ доступа КС156648); Cry1Nb1 (№ доступа КС156678); Сгу1-подобный (№ доступа ААС31091); Сгу2Аа1 (№ доступа ААА22335); Сгу2Аа2 (№ доступа ААА83516); Сгу2АаЗ (№ доступа D86064); Сгу2Аа4 (№ доступа ААС04867); Сгу2Аа5 (№ доступа САА10671); Сгу2Аа6 (№ доступа САА10672); Сгу2Аа7 (№ доступа САА10670); Сгу2Аа8 (№ доступа ААО13734); Сгу2Аа9 (№ доступа ААО13750 ); Сгу2Аа10 (№ доступа AAQ04263); Сгу2Аа11 (№ доступа AAQ52384); Сгу2Аа12 (№ доступа ABI83671); Сгу2Аа13 (№ доступа ABL01536); Сгу2Аа14 (№ доступа ACF04939); Сгу2Аа15 (№ доступа JN426947); Сгу2АЫ (№ доступа ААА22342); Сгу2АЬ2 (№ доступа САА39075); Сгу2АЬЗ (№ доступа AAG36762); Сгу2АЬ4 (№ доступа ААО13296 ); Сгу2АЬ5 (№ доступа AAQ04609); Сгу2АЬ6 (№ доступа ААР59457); Сгу2АЬ7 (№ доступа AAZ66347); Сгу2АЬ8 (№ доступа АВС95996); Сгу2АЬ9 (№ доступа АВС74968); Сгу2АЫ0 (№ доступа EF157306); Сгу2АЫ1 (№ доступа САМ84575); Сгу2АЬ12 (№ доступа АВМ21764); Сгу2АЬ13 (№ доступа ACG76120); Сгу2АЫ4 (№ доступа ACG76121); Сгу2АЫ5 (№ доступа НМ037126); Сгу2АЫ6 (№ доступа GQ866914); Сгу2АЬ17 (№ доступа HQ439789); Сгу2АЬ18 (№ доступа JN135255); Сгу2АЫ9 (№ доступа JN135256); Сгу2АЬ20 (№ доступа JN135257); Сгу2АЬ21 (№ доступа JN135258); Сгу2АЬ22 (№ доступа JN135259); Сгу2АЬ23 (№ доступа JN135260); Сгу2АЬ24 (№ доступа JN135261); Сгу2АЬ25 (№ доступа JN415485); Сгу2АЬ26 (№ доступа JN426946); Сгу2АЬ27 (№ доступа JN415764); Сгу2АЬ28 (№ доступа JN651494); Сгу2Ас1 (№ доступа САА40536); Сгу2Ас2 (№ доступа AAG35410); Сгу2АсЗ (№ доступа AAQ52385); Сгу2Ас4 (№
- 7 031651 доступа АВС95997); Cry2Ac5 (№ доступа АВС74969); Сгу2Ас6 (№ доступа АВС74793); Сгу2Ас7 (№ доступа CAL18690); Сгу2Ас8 (№ доступа САМ09325); Сгу2Ас9 (№ доступа САМ09326); Сгу2Ас10 (№ доступа ABN15104); Сгу2Ас11 (№ доступа САМ83895); Сгу2Ас12 (№ доступа САМ83896); Cry2Ad1 (№ доступа AAF09583); Cry2Ad2 (№ доступа АВС86927); Cry2Ad3 (№ доступа САК29504); Cry2Ad4 (№ доступа САМ32331); Cry2Ad5 (№ доступа САО78739 ); Сгу2Ае1 (№ доступа AAQ52362); Cry2Af1 (№ доступа АВО30519); Cry2Af2 (№ доступа GQ866915); Cry2Ag1 (№ доступа АСН91610); Cry2Ah1 (№ доступа EU939453); Cry2Ah2 (№ доступа ACL80665); Cry2Ah3 (№ доступа GU073380); Cry2Ah4 (№ доступа КС156702); Сгу2АИ (№ доступа FJ788388); Cry2Aj (№ доступа ); Сгу2Ак1 (№ доступа КС156660); Сгу2Ва1 (№ доступа КС156658); СгуЗАа1 (№ доступа ААА22336); СгуЗАа2 (№ доступа ААА22541); СгуЗАаЗ (№ доступа САА68482); СгуЗАа4 (№ доступа ААА22542); СгуЗАаб (№ доступа ААА50255); СгуЗАаб (№ доступа ААС43266); СгуЗАа7 (№ доступа САВ41411); СгуЗАа8 (№ доступа AAS79487); СгуЗАаЭ (№ доступа AAW05659); СгуЗАаЮ (№ доступа AAU29411); СгуЗАа11 (№ доступа AAW82872); СгуЗАа12 (№ доступа ABY49136 ); СгуЗВа1 (№ доступа САА34983); СгуЗВа2 (№ доступа САА00645); СгуЗВаЗ (№ доступа JQ397327); СгуЗВЫ (№ доступа ААА22334); СгуЗВЬ2 (№ доступа ААА74198); СгуЗВЬЗ (№ доступа 115475); СгуЗСа1 (№ доступа САА42469); Сгу4Аа1 (№ доступа САА68485); Сгу4Аа2 (№ доступа ВАА00179); Сгу4АаЗ (№ доступа CAD30148); Сгу4Аа4 (№ доступа AFB18317); Сгу4А-подобный (№ доступа AAY96321); Сгу4Ва1 (№ доступа САА30312); Сгу4Ва2 (№ доступа САА30114); Сгу4ВаЗ (№ доступа ААА22337); Сгу4Ва4 (№ доступа ВАА00178); Сгу4Ва5 (№ доступа CAD30095); Сгу4Ва-подобный (№ доступа АВС47686); Сгу4Са1 (№ доступа EU646202); Сгу4СЫ (№ доступа FJ403208); Сгу4СЬ2 (№ доступа FJ597622); Сгу4Сс1 (№ доступа FJ403207); Сгу5Аа1 (№ доступа ААА67694); СгубАЫ (№ доступа ААА67693); Сгу5Ас1 (№ доступа I34543); Cry5Ad1 (№ доступа ABQ82087); Сгу5Ва1 (№ доступа ААА68598); Сгу5Ва2 (№ доступа ABW88931); СгубВаЗ (№ доступа AFJ04417); Сгу5Са1 (№ доступа НМ461869); Сгу5Са2 (№ доступа ZP_04123426); Cry5Da1 (№ доступа НМ461870); Cry5Da2 (№ доступа ZP_04123980); Cry5Ea1 (№ доступа НМ485580); Cry5Ea2 (№ доступа ZP_04124038); Сгу6Аа1 (№ доступа ААА22357); Сгу6Аа2 (№ доступа ААМ46849); СгубАаЗ (№ доступа АВН03377); Сгу6Ва1 (№ доступа ААА22358); Сгу7Аа1 (№ доступа ААА22351); Сгу7АЬ1 (№ доступа ААА21120); Сгу7АЬ2 (№ доступа ААА21121); Сгу7АЬЗ (№ доступа АВХ24522); Сгу7АЬ4 (№ доступа EU380678); Сгу7АЬ5 (№ доступа АВХ79555); Сгу7АЬ6 (№ доступа ACI44005); Сгу7АЬ7 (№ доступа ADB89216); Сгу7АЬ8 (№ доступа
- 8 031651
GU145299); Cry7Ab9 (№ доступа ADD92572); Сгу7Ва1 (№ доступа АВВ70817); Сгу7ВЫ (№ доступа КС156653); Сгу7Са1 (№ доступа ABR67863); Сгу7СЫ (№ доступа КС156698); Cry7Da1 (№ доступа ACQ99547); Cry7Da2 (№ доступа НМ572236); Cry7Da3 (№ доступа КС156679); Сгу7Еа1 (№ доступа НМ035086); Сгу7Еа2 (№ доступа НМ132124); Сгу7ЕаЗ (№ доступа ЕЕМ19403); Cry7Fa1 (№ доступа НМ035088); Cry7Fa2 (№ доступа ЕЕМ19090); Cry7Fb1 (№ доступа НМ572235); Cry7Fb2 (№ доступа КС156682); Cry7Ga1 (№ доступа НМ572237); Cry7Ga2 (№ доступа КС156669); Cry7Gb1 (№ доступа КС156650); Cry7Gc1 (№ доступа КС156654); Cry7Gd1 (№ доступа КС156697); Сгу7На1 (№ доступа КС156651); Сгу71а1 (№ доступа КС156665); Cry7Ja1 (№ доступа КС156671); Сгу7Ка1 (№ доступа КС156680); Сгу7КЬ1 (№ доступа ВАМ99306); Сгу71_а1 (№ доступа ВАМ99307); Сгу8Аа1 (№ доступа ААА21117); Сгу8АЫ (№ доступа EU044830); Сгу8Ас1 (№ доступа КС156662); Cry8Ad1 (№ доступа КС156684); Сгу8Ва1 (№ доступа ААА21118); Сгу8ВЬ1 (№ доступа CAD57542); Сгу8Вс1 (№ доступа CAD57543); Сгу8Са1 (№ доступа ААА21119); Сгу8Са2 (№ доступа AAR98783); Сгу8СаЗ (№ доступа EU625349); Сгу8Са4 (№ доступа ADB54826); Cry8Da1 (№ доступа ВАС07226); Cry8Da2 (№ доступа BD133574); Cry8Da3 (№ доступа BD133575); Cry8Db1 (№ доступа BAF93483); Сгу8Еа1 (№ доступа AAQ73470); Сгу8Еа2 (№ доступа EU047597); Сгу8ЕаЗ (№ доступа КС855216); Cry8Fa1 (№ доступа ААТ48690); Cry8Fa2 (№ доступа HQ174208); Cry8Fa3 (№ доступа AFH78109); Cry8Ga1 (№ доступа ААТ46073); Cry8Ga2 (№ доступа АВС42043); Cry8Ga3 (№ доступа FJ198072); Сгу8На1 (№ доступа AAW81032); Сгу81а1 (№ доступа EU381044); Cry8la2 (№ доступа GU073381); Cry8la3 (№ доступа НМ044664); Cry8la4 (№ доступа КС156674); Сгу81Ь1 (№ доступа GU325772); Cry8lb2 (№ доступа КС156677); Cry8Ja1 (№ доступа EU625348); Сгу8Ка1 (№ доступа FJ422558); Сгу8Ка2 (№ доступа ACN87262); Сгу8КЫ (№ доступа НМ123758); Сгу8КЬ2 (№ доступа КС156675); Сгу81_а1 (№ доступа GU325771); Сгу8Ма1 (№ доступа НМ044665); Сгу8Ма2 (№ доступа ЕЕМ86551); Сгу8МаЗ (№ доступа НМ210574); Cry8Na1 (№ доступа НМ640939); Сгу8Ра1 (№ доступа HQ388415); Cry8Qa1 (№ доступа HQ441166); Cry8Qa2 (№ доступа КС152468); Cry8Ra1 (№ доступа AFP87548); Cry8Sa1 (№ доступа JQ740599); Сгу8Та1 (№ доступа КС156673); Сгу8подобный (№ доступа FJ770571); Сгу8-подобный (№ доступа ABS53003); Сгу9Аа1 (№ доступа САА41122); Сгу9Аа2 (№ доступа САА41425); СгуЭАаЗ (№ доступа GQ249293); Сгу9Аа4 (№ доступа GQ249294); Сгу9Аа5 (№ доступа JX174110); СгуЭАа like (№ доступа AAQ52376); Сгу9Ва1 (№ доступа САА52927); Сгу9Ва2 (№ доступа GU299522); СгуЭВЫ (№ доступа AAV28716); Сгу9Са1 (№ доступа
- 9 031651
САА85764); Cry9Ca2 (№ доступа AAQ52375); Cry9Da1 (№ доступа ВАА19948); Cry9Da2 (№ доступа ААВ97923); Cry9Da3 (№ доступа GQ249293); Cry9Da4 (№ доступа GQ249297); Cry9Db1 (№ доступа ААХ78439); Cry9Dc1 (№ доступа КС156683); Сгу9Еа1 (№ доступа ВАА34908); Сгу9Еа2 (№ доступа ААО12908); СгуЭЕаЗ (№ доступа АВМ21765); Сгу9Еа4 (№ доступа АСЕ88267); Сгу9Еа5 (№ доступа ACF04743); СгуЭЕаб (№ доступа ACG63872 ); Сгу9Еа7 (№ доступа FJ380927); Сгу9Еа8 (№ доступа GQ249292); Сгу9Еа9 (№ доступа JN651495); СгуЭЕЫ (№ доступа САС50780); Сгу9ЕЬ2 (№ доступа GQ249298); СгуЭЕЬЗ (№ доступа КС156646); Сгу9Ес1 (№ доступа ААС63366); Cry9Ed1 (№ доступа ААХ78440); Сгу9Ее1 (№ доступа GQ249296); Сгу9Ее2 (№ доступа КС156664); Cry9Fa1 (№ доступа КС156692); Cry9Ga1 (№ доступа КС156699); Сгу9-подобный (№ доступа ААС63366); Сгу10Аа1 (№ доступа ААА22614); Сгу10Аа2 (№ доступа Е00614); СгуЮАаЗ (№ доступа CAD30098); Сгу10Аа4 (№ доступа AFB18318); СгуЮА-подобный (№ доступа DQ167578); Сгу11Аа1 (№ доступа ААА22352); Сгу11Аа2 (№ доступа ААА22611); Сгу11АаЗ (№ доступа CAD30081); Сгу11Аа4 (№ доступа AFB18319); Сгу11Аа-подобный (№ доступа DQ166531); Сгу11Ва1 (№ доступа САА60504); Сгу11ВЬ1 (№ доступа ААС97162); Сгу11ВЬ2 (№ доступа НМ068615); Сгу12Аа1 (№ доступа ААА22355); Сгу13Аа1 (№ доступа ААА22356); Сгу14Аа1 (№ доступа ААА21516); Сгу14АЬ1 (№ доступа КС156652); Сгу15Аа1 (№ доступа ААА22333); Сгу16Аа1 (№ доступа САА63860); Сгу17Аа1 (№ доступа САА67841); Сгу18Аа1 (№ доступа САА67506); Сгу18Ва1 (№ доступа AAF89667); Сгу18Са1 (№ доступа AAF89668); Сгу19Аа1 (№ доступа САА68875); Сгу19Ва1 (№ доступа ВАА32397); Сгу19Са1 (№ доступа AFM37572); Сгу20Аа1 (№ доступа ААВ93476); Сгу20Ва1 (№ доступа ACS93601); Сгу20Ва2 (№ доступа КС156694); Сгу20-подобный (№ доступа GQ144333); Сгу21Аа1 (№ доступа I32932); Сгу21Аа2 (№ доступа I66477); Сгу21Ва1 (№ доступа ВАС06484); Сгу21Са1 (№ доступа JF521577); Сгу21Са2 (№ доступа КС156687); Cry21Da1 (№ доступа JF521578); Сгу22Аа1 (№ доступа I34547); Сгу22Аа2 (№ доступа CAD43579); Сгу22АаЗ (№ доступа ACD93211); Сгу22АЬ1 (№ доступа ААК50456); Сгу22АЬ2 (№ доступа CAD43577); Сгу22Ва1 (№ доступа CAD43578); Сгу22ВЬ1 (№ доступа КС156672); Сгу23Аа1 (№ доступа AAF76375); Сгу24Аа1 (№ доступа ААС61891); Сгу24Ва1 (№ доступа BAD32657); Сгу24Са1 (№ доступа CAJ43600); Сгу25Аа1 (№ доступа ААС61892); Сгу26Аа1 (№ доступа AAD25075); Сгу27Аа1 (№ доступа ВАА82796); Сгу28Аа1 (№ доступа AAD24189); Сгу28Аа2 (№ доступа AAG00235); Сгу29Аа1 (№ доступа САС80985); СгуЗОАа1 (№ доступа САС80986); СгуЗОВа1 (№ доступа BAD00052); СгуЗОСа1 (№ доступа BAD67157); СгуЗОСа2 (№ доступа ACU24781); Cry30Da1 (№
- 10 031651 доступа EF095955); Cry30Db1 (№ доступа ВАЕ80088); Cry30Ea1 (№ доступа АСС95445); Cry30Ea2 (№ доступа FJ499389); Cry30Fa1 (№ доступа ACI22625 ); Cry30Ga1 (№ доступа ACG60020); Cry30Ga2 (№ доступа HQ638217); Сгу31Аа1 (№ доступа ВАВ11757); Сгу31Аа2 (№ доступа AAL87458); Сгу31АаЗ (№ доступа ВАЕ79808); Сгу31Аа4 (№ доступа BAF32571); Сгу31Аа5 (№ доступа BAF32572); Сгу31Аа6 (№ доступа BAI44026); Сгу31АЬ1 (№ доступа ВАЕ79809); Сгу31АЬ2 (№ доступа BAF32570); Сгу31Ас1 (№ доступа BAF34368); Сгу31Ас2 (№ доступа АВ731600); Cry31Ad1 (№ доступа BAI44022); Сгу32Аа1 (№ доступа AAG36711); Сгу32Аа2 (№ доступа GU063849); Сгу32АЫ (№ доступа GU063850); Сгу32Ва1 (№ доступа ВАВ78601); Сгу32Са1 (№ доступа ВАВ78602); Сгу32СЫ (№ доступа КС156708); Cry32Da1 (№ доступа ВАВ78603); Сгу32Еа1 (№ доступа GU324274); Сгу32Еа2 (№ доступа КС156686); Сгу32ЕЬ1 (№ доступа КС156663); Cry32Fa1 (№ доступа КС156656); Cry32Ga1 (№ доступа КС156657); Сгу32На1 (№ доступа КС156661); Сгу32НЫ (№ доступа КС156666); Сгу321а1 (№ доступа КС156667); Cry32Ja1 (№ доступа КС156685); Сгу32Ка1 (№ доступа КС156688); Сгу321_а1 (№ доступа КС156689); Сгу32Ма1 (№ доступа КС156690); Сгу32МЬ1 (№ доступа КС156704); Cry32Na1 (№ доступа КС156691); Сгу320а1 (№ доступа КС156703); Сгу32Ра1 (№ доступа КС156705); Cry32Qa1 (№ доступа КС156706); Cry32Ra1 (№ доступа КС156707); Cry32Sa1 (№ доступа КС156709); Сгу32Та1 (№ доступа КС156710); Cry32Ua1 (№ доступа КС156655); СгуЗЗАа1 (№ доступа AAL26871); Сгу34Аа1 (№ доступа AAG50341); Сгу34Аа2 (№ доступа ААК64560); Сгу34АаЗ (№ доступа ААТ29032); Сгу34Аа4 (№ доступа ААТ29030); Сгу34АЫ (№ доступа AAG41671); Сгу34Ас1 (№ доступа AAG50118); Сгу34Ас2 (№ доступа ААК64562); Сгу34АсЗ (№ доступа ААТ29029); Сгу34Ва1 (№ доступа ААК64565); Сгу34Ва2 (№ доступа ААТ29033); Сгу34ВаЗ (№ доступа ААТ29031); Сгу35Аа1 (№ доступа AAG50342); Сгу35Аа2 (№ доступа ААК64561); СгуЗбАаЗ (№ доступа ААТ29028); Сгу35Аа4 (№ доступа ААТ29025); СгуЗбАЫ (№ доступа AAG41672); Сгу35АЬ2 (№ доступа ААК64563); СгуЗбАЬЗ (№ доступа AY536891); Сгу35Ас1 (№ доступа AAG50117); Сгу35Ва1 (№ доступа ААК64566); Сгу35Ва2 (№ доступа ААТ29027); СгуЗбВаЗ (№ доступа ААТ29026); Сгу36Аа1 (№ доступа ААК64558); Сгу37Аа1 (№ доступа AAF76376 ); Сгу38Аа1 (№ доступа ААК64559); Сгу39Аа1 (№ доступа ВАВ72016); Сгу40Аа1 (№ доступа ВАВ72018); Сгу40Ва1 (№ доступа ВАС77648); Сгу40Са1 (№ доступа EU381045); Cry40Da1 (№ доступа ACF15199); Сгу41Аа1 (№ доступа BAD35157); Сгу41АЬ1 (№ доступа BAD35163); Сгу41Ва1 (№ доступа НМ461871); Сгу41Ва2 (№ доступа ZP_04099652); Сгу42Аа1 (№ доступа BAD35166); Сгу43Аа1 (№ доступа BAD15301); Сгу43Аа2 (№ доступа BAD95474 ); Сгу43Ва1 (№
- 11 031651 доступа BAD15303); Cry43Ca1 (№ доступа КС156676); Cry43Cb1 (№ доступа
КС156695); Cry43Cc1 (№ доступа КС156696); Сгу43-подобный (№ доступа
BAD15305); Сгу44Аа (№ доступа BAD08532); Сгу45Аа (№ доступа BAD22577); Сгу46Аа (№ доступа ВАС79010); Сгу46Аа2 (№ доступа BAG68906); Сгу46АЬ (№ доступа BAD35170); Сгу47Аа (№ доступа AAY24695); Сгу48Аа (№ доступа САЛ8351); Сгу48Аа2 (№ доступа CAJ86545); Сгу48АаЗ (№ доступа CAJ86546 ); Сгу48АЬ (№ доступа CAJ86548); Сгу48АЬ2 (№ доступа CAJ86549); Сгу49Аа (№ доступа САН56541); Сгу49Аа2 (№ доступа CAJ86541); Сгу49АаЗ (№ доступа CAJ86543); Сгу49Аа4 (№ доступа CAJ86544); Сгу49АЬ1 (№ доступа CAJ86542); Сгу50Аа1 (№ доступа ВАЕ86999); Сгу50Ва1 (№ доступа GU446675); Сгу50Ва2 (№ доступа GU446676); Сгу51Аа1 (№ доступа ABI14444); Сгу51Аа2 (№ доступа GU570697); Сгу52Аа1 (№ доступа EF613489); Сгу52Ва1 (№ доступа FJ361760); Сгу53Аа1 (№ доступа EF633476); СгубЗАЫ (№ доступа FJ361759); Сгу54Аа1 (№ доступа АСА52194); Сгу54Аа2 (№ доступа GQ140349); Сгу54Ва1 (№ доступа GU446677); Сгу55Аа1 (№ доступа ABW88932); Сгу54АЬ1 (№ доступа JQ916908); Сгу55Аа2 (№ доступа ААЕ33526); Сгу56Аа1 (№ доступа ACU57499); Сгу56Аа2 (№ доступа GQ483512); СгуббАаЗ (№ доступа JX025567); Сгу57Аа1 (№ доступа ANC87261); Сгу58Аа1 (№ доступа ANC87260); Сгу59Ва1 (№ доступа JN790647); Сгу59Аа1 (№ доступа ACR43758); Сгу60Аа1 (№ доступа ACU24782); Сгу60Аа2 (№ доступа ЕАО57254); СгубОАаЗ (№ доступа ЕЕМ99278); Сгу60Ва1 (№ доступа GU810818); Сгу60Ва2 (№ доступа ЕАО57253); СгубОВаЗ (№ доступа ЕЕМ99279); Сгу61Аа1 (№ доступа НМ035087); Сгу61Аа2 (№ доступа НМ132125); Сгу61АаЗ (№ доступа ЕЕМ19308); Сгуб2Аа1 (№ доступа НМ054509); Сгу63Аа1 (№ доступа BAI44028); Сгу64Аа1 (№ доступа BAJ05397); Сгу65Аа1 (№ доступа НМ461868); Сгу65Аа2 (№ доступа ZP_04123838); Сгу66Аа1 (№ доступа НМ485581); Сгу66Аа2 (№ доступа ZP_04099945); Сгу67Аа1 (№ доступа НМ485582); Сгу67Аа2 (№ доступа ZP_04148882); Сгу68Аа1 (№ доступа HQ113114); Сгу69Аа1 (№ доступа HQ401006); Сгу69Аа2 (№ доступа JQ821388); СгубЭАЫ (№ доступа JN209957); Сгу70Аа1 (№ доступа JN646781); Сгу70Ва1 (№ доступа AD051070); Сгу70ВЬ1 (№ доступа EEL67276); Сгу71Аа1 (№ доступа JX025568); Сгу72Аа1 (№ доступа JX025569); CytlAa (№ доступа GenBank Х03182); CytlAb (№ доступа Х98793); Cyt1 В (№ доступа U37196); Cyt2A (№ доступа Z14147) и Cyt2B (№ доступа U52043).
Примеры δ-эндотоксинов также включают, без ограничения, белки CrylA из патентов США № 5880275, 7858849, 8530411, 8575433 и 8686233; токсин DIG-3 или DIG-11 (N-концевая делеция вариантов α-спирали одного и/или α-спирали двух белков Cry, например Cry1A, Cry3A) из патентов США № 8304604, 8304605 и 8476226, Cry1B из заявки на патент США № 10/525318; Cry1C из патента США № 6033874; Cry1F из патентов США № 5188960 и 6218188; химеры Cry1A/F из патентов США № 7070982; 6962705 и 6713063); белок Cry2, например белок Cry2Ab из патента США № 7064249); белок Cry3A, в том числе, без ограничения, разработанный гибридный инсектицидный белок (eHIP), созданный путем слияния уникальных комбинаций вариабельных участков и консервативных блоков по меньшей мере двух различных белков Cry (публикация заявки на патент США № 2010/0017914); белок Cry4; белок Cry5; белок Cry6; белки Cry8 из патентов США № 7329736, 7449552, 7803943, 7476781, 7105332, 7378499 и 7462760; белок Cry9, например представители семейств Cry9A, Cry9B, Cry9C, Cry9D, Cry9E и Cry9F, в том числе, без ограничения, белок Cry9D из заявки на патент США № 8802933 и белок Cry9B из заявки на патент США № 8802934; белок Cry15 из Naimov, et al., (2008), Applied and Environmental Microbiology, 74:7145-7151; белок Cry22, Cry34Ab1 из патентов США № 6127180, 6624145 и 6340593; белок CryET33 и CryET34 из патентов США № 6248535, 6326351, 6399330, 6949626, 7385107 и 7504229; гомологи CryET33 и CryET34 из публикаций патентов США № 2006/0191034, 2012/0278954 и публикации согласно PCT № WO 2012/139004; белок Cry35Ab1 из патентов США № 6083499, 6548291 и 6340593; белок Cry46, белок Cry51, бинарный токсин Cry; TIC901 или родственный токсин; TIC807 из публикации заявки на патент США № 2008/0295207; ET29, ET37, TIC809, TIC810, TIC812, TIC127, TIC128 из PCT US 2006/033867; токсины TIC853 из патента США 8513494, AXMI-027, AXMI-036 и AXMI-038 из патента США № 8236757; AXMI-031, AXMI-039, AXMI-040, AXMI-049 из патента США № 7923602; AXMI-018, AXMI-020 и AXMI-021 из WO 2006/083891; AXMI-010 из WO 2005/038032;
- 12 031651
AXMI-003 из WO 2005/021585; AXMI-008 из публикации заявки на патент США № 2004/0250311; AXMI-006 из публикации заявки на патент США № 2004/0216186; AXMI-007 из публикации заявки на патент США № 2004/0210965; AXMI-009 из публикации заявки на патент США № 2004/0210964; AXMI014 из публикации заявки на патент США № 2004/0197917; AXMI-004 из публикации заявки на патент США № 2004/0197916; AXMI-028 и AXMI-029 из WO 2006/119457; AXMI-007, AXMI-008, AXMI0080rf2, AXMI-009, AXMI-014 и AXMI-004 из WO 2004/074462; AXMI-150 из патента США № 8084416; AXMI-205 из публикации заявки на патент США № 2011/0023184; AXMI-011, AXMI-012, AXMI-013, AXMI-015, AXMI-019, AXMI-044, AXMI-037, AXMI-043, AXMI-033, AXMI-034, AXMI-022, AXMI-023, AXMI-041, AXMI-063 и AXMI-064 из публикации заявки на патент США № 2011/0263488; AXMI-R1 и родственные белки из публикации заявки на патент США № 2010/0197592; AXMI221Z, AXMI222z, AXMI223z, AXMI224Z и AXMI225Z из WO 2011/103248; AXMI218, AXMI219, AXMI220, AXMI226, AXMI227, AXMI228, AXMI229, AXMI230 и АХМ1231 из WO 11/103247 и патента США № 8759619; AXMI-115, AXMI-113, AXMI-005, AXMI-163 и AXMI-184 из патента США № 8334431; AXMI-001, AXMI-002, AXMI-030, AXMI-035 и AXMI-045 из публикации заявки на патент США № 2010/0298211; AXMI-066 и AXMI-076 из публикации заявки на патент США № 2009/0144852;
АХМИЗО, AXMI131, АХМИЗЗ, AXMI140, AXMI141, AXMI142,
AXMI143, AXMI144, AXMI146, AXMI148, AXMI149, AXMI152, AXMI153, AXMI154,
AXMI155, AXMI156, AXMI157, AXMI158, AXMI162, AXMI165, AXMI166, AXMI167,
AXMI168, AXMI169, AXMI170, AXMI171, AXMI172, AXMI173, AXMI174, AXMI175,
AXMI176, AXMI177, AXMI178, AXMI179, AXMI180, AXMI181, AXMI182, AXMI185,
AXMI186, AXMI187, AXMI188AXMI128, AXMI189 ι из патента ι США № 8318900;
AXMI079, AXMI080, AXMI081, AXMI082, AXMI091, AXMI092, AXMI096, AXMI097,
AXMI098, AXMI099, AXMI100, AXMI101, AXMI102, AXMI103, AXMI104, AXMI107,
AXMI108, AXMI109, AXMI110, AXMI111, AXMI112, AXMI114, AXMI116, AXMI117,
AXMI118, AXMI119, AXMI120, AXMI121, AXMI122, AXMI123, AXMI124, AXMI1257,
AXMI1268 , AXMI127, AXMI129, AXMI164, AXMI151 , AXMI161, AXMI183, AXMI132,
AXMI138, AXMI137
из публикации заявки на патент США № 2010/0005543; AXMI270 из публикации заявки на патент США № US20140223598, AXMI279 из публикации заявки на патент США № US20140223599, белки Cry, такие как Cry1A и Cry3A с модифицированными сайтами протеолитического расщепления из патента США № 8319019; и белок-токсин Cry1Ac, Cry2Aa и Cry1Ca из штамма VBTS 2528 Bacillus thuringiensis из публикации заявки на патент США № 2011/0064710.
Другие белки Cry хорошо известны специалисту в данной области (см. Crickmore, et al., Bacillus thuringiensis toxin nomenclature (2011), на сайте lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil Crickmore/Bt/, доступ к которому можно получить во всемирной сети Интернет с применением префикса www). Инсектицидная активность белков Cry хорошо известна специалисту в данной области (см. обзор у van Frannkenhuyzen, (2009), J. Invert. Path. 101:1-16). Применение белков Cry в качестве признаков трансгенного растения хорошо известно специалисту в данной области, и Cry-трансгенные растения, в том числе, без ограничения, растения, экспрессирующие Cry1Ac, Cry1Ac+Cry2Ab, Cry1Ab, Cry1A.105, Cry1F, Cry1Fa2, Cry1F+Cry1Ac, Cry2Ab, Cry3A, mCry3A, Cry3Bb1, Cry34Ab1, Cry35Ab1, Vip3A, mCry3A, Cry9c и CBI-Bt, получили разрешение контролирующих органов (см., Sanahuja, (2011), Plant. Biotech. Journal, 9:283-300 и CERA (2010), GM Crop Database Center for Environmental Risk Assessment (CERA), ILSI Research Foundation, Washington D.C. на сайте cera-gmc.org/index.php?action=gm crop database, доступ к которому можно получить во всемирной сети Интернет с применением префикса www). В растениях также может экспрессироваться несколько пестицидных белков, хорошо известных специалисту в данной области, таких как Vip3Ab и Cry1Fa (US2012/0317682); Cry1BE и Cry1F (US2012/0311746); Cry1CA и Cry1AB (US2012/0311745); Cry1F и CryCa (US2012/0317681); Cry1DA и Cry1BE (US2012/0331590); Cry1DA и Cry1Fa (US2012/0331589); Cry1AB и Cry1BE (US2012/0324606); Cry1Fa и Cry2Aa и Cry1I и Cry1E (US2012/0324605); Cry34Ab/35Ab и Cry6Aa (US2013/0167269); Cry34Ab/VCry35Ab и Cry3Aa (US2013/0167268); Cry1Ab и Cry1F (US2014/0182018), Cry3A и Cry1Ab или Vip3Aa (US2013/0116170). Пестицидные белки также включают инсектицидные липазы, в том числе гидролазы омыляемых липидов из патента США № 7491869 и холестериноксидазы, например, из Streptomyces (Purcell et al. (1993), Biochem Biophys Res Commun, 15:1406-1413). Пестицидные белки также включают токсины VIP (инсектицидные белки вегетативной фазы) из патентов США № 5877012, 6107279, 6137033, 7244820, 7615686 и 8237020 и т.п. Другие белки VIP хорошо известны специалисту в данной области техники (см. lifesci.sussex.ac.uk/home/NeilCrickmore/Bt/vip.html, доступ к которому можно получить во всемирной сети Интернет с применением префикса www). Пестицидные белки также включают белки токсинового комплекса (TC), которые можно получить из организмов, таких как Xenorhabdus, Photorhabdus и
- 13 031651
Paenibacillus (см. патенты США № 7491698 и 8084418). Некоторые TC-белки обладают самостоятельной инсектицидной активностью, а другие TC-белки повышают активность самостоятельных токсинов, производимых тем же данным организмом. Токсичность самостоятельного TC-белка (из Photorhabdus, Xenorhabdus или Paenibacillus, например) может усиливаться при помощи одного или нескольких TC-белков, усилителей, полученных из организма-источника из другого рода. Существуют три основных типа TC-белков. Как изложено в данном документе, белки класса A (белок A) представляют собой самостоятельные токсины. Белки класса B (белок B) и белки класса C (белок C) усиливают токсичность белков класса A. Примеры белков класса A представляют собой TcbA, TcdA, XptA1 и XptA2. Примеры белков класса B представляют собой TcaC, TcdB, XptB1Xb и XptC1Wi. Примеры белков класса C представляют собой TccC, XptC1Xb и XptB1Wi. Пестицидные белки также включают белки яда пауков, змей и скорпионов. Примеры пептидов яда пауков включают, без ограничения, пептиды ликотоксин-1 и его мутантные формы (патент США № 8334366).
В некоторых вариантах осуществления полипептиды PIP-72 включают аминокислотные последовательности, выведенные из последовательностей нуклеиновой кислоты полной длины, раскрытых в данном документе, и аминокислотные последовательности, которые короче, чем последовательности полной длины, либо полученные в результате применения альтернативного сайта инициации, расположенного ниже, либо в результате процессинга, дающего более короткий белок с пестицидной активностью. Процессинг может происходить в организме, в котором экспрессируется белок, или во вредителе после поглощения белка.
Таким образом, в данном документе представлены новые выделенные или рекомбинантные последовательности нуклеиновой кислоты, которые обеспечивают пестицидную активность. Также представлены аминокислотные последовательности полипептидов PIP-72. Белок, полученный в результате трансляции генов этих полипептидов PIP-72, в клетках обеспечивает возможность контроля или уничтожения вредителей, которые поглощают их.
Бактериальные штаммы.
Один аспект относится к бактериальным штаммам, которые экспрессируют полипептид PIP-72. В некоторых вариантах осуществления бактериальный штамм представлен родом Halomonas, Photorhabdus, Xenorhabdus, Burkholderia, Paludibacterium или Pseudomonas. В некоторых вариантах осуществления бактериальным штаммом является штамм Halomonas anticariensis, Photorhabdus luminescens, Xenorhabdus bovienii, Burkholderia pseudomallei, Burkholderia multivorans, Burkholderia thailandensis, Paludibacterium yongneupense, Pseudomonas rhodesiae; Pseudomonas entomophila, Pseudomonas chlororaphis; Pseudomonas mandelii; Pseudomonas congelans; Pseudomonas mandelii; Pseudomonas plecoglossicida, Pseudomonas protegens, Pseudomonas ficuserectae; Pseudomonas mosselii или Pseudomonas brassicacearum. В некоторых вариантах осуществления бактериальный штамм представляет собой биологически чистую культуру штамма SS143D5 Pseudomonas chlororaphis, депонированного 7 февраля 2013 г. под номером доступа NRRL B-50810 в коллекции культур службы сельскохозяйственных исследований (NRRL), 1815 North University Street, Пеория, Иллинойс 61604, (nrrl.ncaur.usda.gov, доступ к которому можно получить во всемирной сети Интернет с применением префикса www). Депонирование будет обеспечено согласно условиям Будапештского договора о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры. Эти депонирования созданы только для удобства специалистов в данной области техники, и это не является признанием того, что депонирование требуется согласно §112 статьи 35 U.S.С. Доступ к этому депонированному материалу будет предоставлен во время нахождения заявки на рассмотрении комиссаром по патентам и товарным знакам, и лиц, определенных комиссаром, как обладающих правом на это по первому требованию. Сразу после одобрения каких-либо пунктов формулы в настоящей заявке заявитель(и) будет делать общедоступными, согласно § 1.808 статьи 37 C.F.R., образец(ы) депонирования в коллекции культур службы сельскохозяйственных исследований (NRRL), 1815 North University Street, Пеория, Иллинойс 61604. Это депонирование будет сохранено в депозитарии NRRL, который является общедоступным депозитарием, сроком на 30 или 5 лет после самого последнего запроса или в течение имеющего законную силу времени действия патента, в зависимости от того, какой срок является более длинным, и будет замещено, если в течение данного периода оно станет нежизнеспособным. Эти депонирования безоговорочно и без ограничения условий будут общедоступны после выдачи патента. Дополнительно заявитель(и) удовлетворил(и) все требования §§1.801-1.809 статьи 37 C.F.R., в том числе предоставление отчета о жизнеспособности образца при депонировании. Заявитель(и) не обладает(ют) полномочиями отказываться от каких-либо ограничений, налагаемых законом, относительно передачи биологического материала или его транспортировки в коммерческих целях. Заявитель(и) не отказывается(ются) от признания какого-либо нарушения своих прав, предоставляемых согласно настоящему патентному документу. Однако следует понимать, что доступность депонирования не является разрешением для осуществления заявленного изобретения на практике с ограничением патентных прав, предоставляемых государственным регулированием.
Молекулы нуклеиновой кислоты, а также их варианты и фрагменты.
Один аспект относится к выделенным или рекомбинантным молекулам нуклеиновой кислоты, содержащим последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие полипептиды PIP-72 или их биоло
- 14 031651 гически активные части, а также к молекулам нуклеиновой кислоты, подходящим для применения в качестве гибридизационных зондов для идентификации молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих белки с участками гомологии последовательностей. Используемое в данном документе выражение молекула нуклеиновой кислоты относится к молекулам ДНК (например, рекомбинантной ДНК, кДНК, геномной ДНК, пластидной ДНК, митохондриальной ДНК), и молекулам РНК (например, мРНК), и аналогам ДНК или РНК, полученным с применением аналогов нуклеотидов. Молекула нуклеиновой кислоты может быть одноцепочечной или двухцепочечной, но предпочтительно представляет собой двухцепочечную ДНК.
Выделенная молекула нуклеиновой кислоты (или ДНК) применяется в данном документе для обозначения последовательности нуклеиновой кислоты (или ДНК), которая больше не находится в своей естественной среде, например находится in vitro. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты (или ДНК) применяется в данном документе для обозначения последовательности нуклеиновой кислоты (или ДНК), которая находится в рекомбинантной бактериальной или растительной клетке-хозяине. В некоторых вариантах осуществления выделенная или рекомбинантная нуклеиновая кислота не содержит последовательности (предпочтительно последовательности, кодирующие белок), которые в естественных условиях фланкируют нуклеиновую кислоту (т.е. последовательности, расположенные на 5'- и 3'-концах нуклеиновой кислоты) в геномной ДНК организма, из которого получена нуклеиновая кислота. В контексте настоящего раскрытия выражения выделенные или рекомбинантные при применении для обозначения молекул нуклеиновой кислоты исключают выделенные хромосомы. Например, в различных вариантах осуществления рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид PIP-72, может содержать менее приблизительно 5 т.н., 4 т.н., 3 т.н., 2 т.н., 1 т.н., 0,5 т.н. или 0,1 т.н. последовательностей нуклеиновой кислоты, которые в естественных условиях фланкируют молекулу нуклеиновой кислоты в геномной ДНК клетки, из которой получена нуклеиновая кислота.
В некоторых вариантах осуществления выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид PIP-72, имеет одно или несколько изменений в последовательности нуклеиновой кислоты по сравнению с нативной или геномной последовательностью нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления изменение в нативной или геномной последовательности нуклеиновой кислоты включает, без ограничения, изменения в последовательности нуклеиновой кислоты вследствие вырожденности генетического кода; изменения в последовательности нуклеиновой кислоты вследствие аминокислотной замены, вставки, делеции и/или добавления по сравнению с нативной или геномной последовательностью; удаление одного или нескольких интронов; делецию одного или нескольких регуляторных участков, расположенных выше или ниже; и делецию 5'- и/или 3'-нетранслируемого участка, ассоциированного с геномной последовательностью нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид PIP-72, представляет собой последовательность, отличающуюся от геномной.
Предполагается ряд полинуклеотидов, которые кодируют полипептиды PIP-72 или родственные белки. Такие полинуклеотиды применимы для получения полипептидов PIP-72 в клетках-хозяевах, если они функционально связаны с подходящим промотором, терминатором транскрипции и/или последовательностями полиаденилирования. Такие полинуклеотиды также применимы в качестве зондов для выделения гомологичных или фактически гомологичных полинуклеотидов, которые кодируют полипептиды PIP-72 или родственные белки.
Источники полинуклеотидов, которые кодируют полипептиды PIP-72 или родственные белки, включают, без ограничения, штамм Halomonas anticariensis, Photorhabdus luminescens, Xenorhabdus bovienii, Burkholderia pseudomallei, Burkholderia multivorans, Burkholderia thailandensis, Paludibacterium yongneupense, Pseudomonas rhodesiae; Pseudomonas entomophila, Pseudomonas chlororaphis; Pseudomonas mandelii; Pseudomonas congelans; Pseudomonas mandelii; Pseudomonas plecoglossicida, Pseudomonas protegens, Pseudomonas ficuserectae; Pseudomonas mosselii или Pseudomonas brassicacearum. Источники полинуклеотидов, которые кодируют полипептиды PIP-72 или родственные белки, включают, без ограничения, штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Aa SEQ ID NO: 1, кодирующий полипептид PIP-72Aa SEQ ID NO: 2; штамм Pseudomonas rhodesiae, который содержит полинуклеотид PIP-72Ba SEQ ID NO: 3, кодирующий полипептид PIP-72Ba SEQ ID NO: 4; штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Ca SEQ ID NO: 5, кодирующий полипептид PIP-72Ca SEQ ID NO: 6; штамм Pseudomonas mandelii, который содержит полинуклеотид PIP-72Cb SEQ ID NO: 7, кодирующий полипептид PIP-72Cb SEQ ID NO: 8; штамм Pseudomonas congelans, который содержит полинуклеотид PIP-72Da SEQ ID NO: 9, кодирующий полипептид PIP-72Da SEQ ID NO: 10; штамм Pseudomonas mandelii, который содержит полинуклеотид PIP-72Db SEQ ID NO: 11, кодирующий полипептид PIP-72Db SEQ ID NO: 12; штамм Pseudomonas ficuserectae, который содержит полинуклеотид PIP-72Dc SEQ ID NO: 13, кодирующий полипептид PIP-72Dc SEQ ID NO: 14; штамм Pseudomonas mosselii, который содержит полинуклеотид PIP-72Fa SEQ ID NO: 17, кодирующий полипептид PIP-72Fa SEQ ID NO: 18; штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Ff SEQ ID NO: 27, кодирующий полипептид PIP-72Ff SEQ ID NO: 28; штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Gb SEQ ID NO: 31, кодирующий по
- 15 031651 липептид PIP-72Gb SEQ ID NO: 32; штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Ab SEQ ID NO: 949, кодирующий полипептид PIP-72Ab SEQ ID NO: 927; штамм Pseudomonas brassicacearum, который содержит полинуклеотид PIP-72Bb SEQ ID NO: 950, кодирующий полипептид PIP-72Ab SEQ ID NO: 928; штамм Pseudomonas entomophila, который содержит полинуклеотид PIP-72Fh SEQ ID NO: 954, кодирующий полипептид PIP-72AFh SEQ ID NO: 932; штамм Pseudomonas entomophila, который содержит полинуклеотид PIP-72Fh SEQ ID NO: 955, кодирующий полипептид PIP-72AFh SEQ ID NO: 933; штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Fj SEQ ID NO: 956, кодирующий полипептид PIP-72AFj SEQ ID NO: 934; штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Fk SEQ ID NO: 957, кодирующий полипептид PIP-72Fk SEQ ID NO: 935; штамм Burkholderia multivorans, который содержит полинуклеотид PIP-72Fl SEQ ID NO: 958, кодирующий полипептид PIP-72Fl SEQ ID NO: 936; штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Gg SEQ ID NO: 961, кодирующий полипептид PIP-72Gg SEQ ID NO: 939; штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Gh SEQ ID NO: 962, кодирующий полипептид PIP-72Gh SEQ ID NO: 940; штамм Pseudomonas mosselii, который содержит полинуклеотид PIP-72Gi SEQ ID NO: 963, кодирующий полипептид PIP-72Gi SEQ ID NO: 941; штамм Pseudomonas protegens, который содержит полинуклеотид PIP-72Gk SEQ ID NO: 965, кодирующий полипептид PIP-72Gk SEQ ID NO: 943; штамм Pseudomonas plecoglossicida, который содержит полинуклеотид PIP-72Gl SEQ ID NO: 966, кодирующий полипептид PIP-72Gl SEQ ID NO: 944; и штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Gn SEQ ID NO: 968, кодирующий полипептид PIP-72Gn SEQ ID NO: 946. Эти полинуклеотидные последовательности были выделены из хозяина Halomonas, Photorhabdus, Xenorhabdus, Burkholderia, Paludibacterium или Pseudomonas и, таким образом, являются подходящими для экспрессии кодируемого полипептида PIP-72 в других бактериях-хозяевах. Например, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 27 и SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 949, SEQ ID NO: 950, SEQ ID NO: 955, SEQ ID NO: 956, SEQ ID NO: 957, SEQ ID NO: 958, SEQ ID NO: 961, SEQ ID NO: 962, SEQ ID NO: 963, SEQ ID NO: 965, SEQ ID NO: 966, SEQ ID NO: 967, SEQ ID NO: 968 можно применять для экспрессии полипептидов PIP-72 в бактериях-хозяевах, которые включают, без ограничения, бактериальные клетки-хозяева Agrobacterium, Bacillus, Escherichia, Salmonella, Pseudomonas и Rhizobium. Полинуклеотиды также применимы в качестве зондов для выделения гомологичных или фактически гомологичных полинуклеотидов, которые кодируют полипептиды PIP-72 или родственные белки. Такие зонды можно применять для идентификации гомологичных или фактически гомологичных полинуклеотидов, полученных из Halomonas, Photorhabdus, Xenorhabdus, Burkholderia, Paludibacterium, Pseudomonas или других родственных бактерий.
Полинуклеотиды, которые кодируют полипептид PIP-72, также можно синтезировать de novo, исходя из последовательности полипептида PIP-72. Последовательность гена полинуклеотида можно вывести, исходя из последовательности полипептида PIP-72, с применением генетического кода. Компьютерные программы, такие как BackTranslate (GCG™ Package, Acclerys, Inc., Сан-Диего, Калифорния), можно применять для перевода пептидной последовательности в соответствующую нуклеотидную последовательность, кодирующую пептид. Примеры последовательностей полипептида PIP-72, которые можно применять для получения соответствующих нуклеотидных кодирующих последовательностей, включают, без ограничения, полипептид PIP-72 с последовательностью SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941 SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946. Кроме того, можно сконструировать синтетические последовательности полинуклеотида PIP-72 согласно настоящему раскрытию таким образом, что они будут экспрессироваться в растениях. В патенте США № 5500365 описан способ синтеза генов растения для повышения уровня экспрессии белка, кодируемого синтезированным геном. Этот способ относится к модификации последовательностей структурных генов экзогенного трансгена, что приводит к их более эффективной транскрипции, процессингу, трансляции и экспрессии в растении. Свойства генов, которые хорошо экспрессируются в растениях, включают удаление последовательностей, которые могут вызывать нежелательный сплайсинг интронов или полиаденилирование в пределах кодирующего участка генного транскрипта, при этом в существенной мере сохраняется аминокислотная последовательность токсичной части инсектицидного белка. Аналогичный способ для получения усиленной экспрессии трансгенов в однодольных растениях раскрыт в патенте США № 5689052.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид PIP-72, представляет собой полинуклеотид последовательности, изложенной SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13,
SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 949, SEQ ID NO: 950, SEQ ID NO: 955,
SEQ ID NO: 956, SEQ ID NO: 957, SEQ ID NO: 958, SEQ ID NO: 961, SEQ ID NO: 962, SEQ ID NO: 963,
SEQ ID NO: 965, SEQ ID NO: 966, SEQ ID NO: 967, SEQ ID NO: 968, и его варианты, фрагменты и комплементарные ему последовательности. Комплементарная последовательность применяется в данном
- 16 031651 документе для обозначения последовательности нуклеиновой кислоты, которая в достаточной степени комплементарна заданной последовательности нуклеиновой кислоты, так что она может гибридизоваться с заданной последовательностью нуклеиновой кислоты с образованием, тем самым, стабильного дуплекса. Варианты полинуклеотидной последовательности применяются в данном документе для обозначения последовательности нуклеиновой кислоты, которая, за исключением вырожденности генетического кода, кодирует один и тот же полипептид.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид PIP-72, представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, отличающуюся от геномной. Используемые в данном документе последовательность нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, или молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, относятся к молекуле нуклеиновой кислоты, которая имеет одно или несколько изменений в последовательности нуклеиновой кислоты по сравнению с нативной или геномной последовательностью нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления изменение по отношению к молекуле нативной или геномной нуклеиновой кислоты включает, без ограничения, изменения в последовательности нуклеиновой кислоты, обусловленные вырожденностью генетического кода; оптимизацию кодонов последовательности нуклеиновой кислоты для экспрессии в растениях; изменения в последовательности нуклеиновой кислоты для введения по меньшей мере одной аминокислотной замены, вставки, делеции и/или добавления по сравнению с нативной или геномной последовательностью; удаление одного или нескольких интронов, ассоциированных с геномной последовательностью нуклеиновой кислоты; вставку одного или нескольких гетерологичных интронов; делецию одного или нескольких расположенных выше или ниже регуляторных участков, ассоциированных с геномной последовательностью нуклеиновой кислоты; вставку одного или нескольких гетерологичных регуляторных участков, расположенных выше или ниже; делецию 5'- и/или 3'-нетранслируемого участка, ассоциированного с геномной последовательностью нуклеиновой кислоты; вставку гетерологичного 5'- и/или 3'-нетранслируемого участка и модификацию сайта полиаденилирования. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, представляет собой кДНК. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, представляет собой синтетическую последовательность нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, не является последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 949, SEQ ID NO: 950, SEQ ID NO: 955, SEQ ID NO: 956, SEQ ID NO: 957, SEQ ID NO: 958, SEQ ID NO: 961, SEQ ID NO: 962, SEQ ID NO: 963, SEQ ID NO: 965, SEQ ID NO: 966, SEQ ID NO: 967, SEQ ID NO: 968.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8,
SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32,
SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935,
SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944,
SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8, где полипептид обладает пестицидной активностью.
- 17 031651
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 12, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 14, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 18, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 32, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 927, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 928, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 932, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 933, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 934, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 935, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по мень
- 18 031651 шей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 936, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 939, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 940, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 941, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 943, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 944, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 945, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 946, где полипептид обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946 и где полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 2 и полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 4 и полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
- 19 031651
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 6 и полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 8 и полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 10 и полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 12, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 12 и полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 14, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 14, и полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 60% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 18, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 18 и полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 28 и полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 32, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 32 и где полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 927, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 927 и где полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 928, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 928 и где полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 932, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 932 и где полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 933, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 933 и где полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по мень
- 20 031651 шей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 934, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 934 и где полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 935, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 935 и где полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 936, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 936 и где полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 939, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 939 и где полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 940, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 940 и где полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 941, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 941 и где полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 943, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 943 и где полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 944, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 944 и где полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 945, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 945 и где полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 946, где полипептид PIP-72 имеет по меньшей мере одно изменение по аминокислоте по сравнению с SEQ ID NO: 946 и где полипептид PIP-72 обладает пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946.
- 21 031651
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 4.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 6.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 8.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 10.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 12.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 14.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 или 36 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 18.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 28.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32 с 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 32.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 927 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 927.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 928 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 928.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 932 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной ами
- 22 031651 нокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 932.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 933 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 933.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 934 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 934.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 935 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 935.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 936 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 936.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 939 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 939.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 940 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 940.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 941 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 941.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 943 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 943.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 944 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 944.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 945 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 945.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 946 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 946.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 846 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами в положениях, обозначенных Xaa, по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геном
- 23 031651 ной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 847 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами в положениях, обозначенных Xaa, по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 848 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами в положениях, обозначенных Xaa, по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, отличающаяся от геномной, кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 849 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами в положениях, обозначенных Xaa, по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует полипептид PIP72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 846, где
Xaa в положении 2 представляет собой Gly, Ala, Cys, Asp, Glu, Ile, Lys, Leu, Asn, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 3 представляет собой Ile или Trp;
Xaa в положении 4 представляет собой Thr, Ala, Asp, Glu, His, Ile, Lys, Leu, Arg, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 5 представляет собой Val, Ala, Cys, Gly, His, Ile или Tyr;
Xaa в положении 6 представляет собой Thr, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Trp или Tyr;
Xaa в положении 7 представляет собой Asn, Ala или Val;
Xaa в положении 8 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Gln, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 9 представляет собой Ser, Ala, Cys, Gly или Thr;
Xaa в положении 10 представляет собой Ser, Ala, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr или Trp;
Xaa в положении 11 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Gln, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 12 представляет собой Pro, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Lys, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 13 представляет собой Ile, Asn, Gln или Val;
Xaa в положении 14 представляет собой Glu, Ala, Cys, Phe, His, Lys или Gln;
Xaa в положении 15 представляет собой Val, Ala, Cys, Ile, Met или Arg;
Xaa в положении 17 представляет собой Ile, Glu или Val;
Xaa в положении 18 представляет собой Asn или Ser;
Xaa в положении 19 представляет собой His, Ala, Glu, Lys, Leu, Pro, Arg, Ser или Tyr;
Xaa в положении 20 представляет собой Trp, Ala или Thr;
Xaa в положении 22 представляет собой Ser, Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 23 представляет собой Asp, Ala, Gly, His, Lys, Met, Asn, Gln, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 24 представляет собой Gly, Asp или Phe;
Xaa в положении 25 представляет собой Asp, Ala, Glu, Phe, Asn или Gln;
Xaa в положении 26 представляет собой Thr, Glu или Pro;
Xaa в положении 27 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Asn, Gln, Arg или Thr;
Xaa в положении 28 представляет собой Phe, Pro, Trp или Tyr;
Xaa в положении 29 представляет собой Phe, Ala, Cys, Ile, Leu, Gln, Arg, Trp или Tyr;
Xaa в положении 30 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 31 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 32 представляет собой Gly, Ala, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 33 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 34 представляет собой Gly, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Tyr;
Xaa в положении 35 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 36 представляет собой Gln, Ala, Cys, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser,
- 24 031651
Thr или Val;
Xaa в положении 37 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 38 представляет собой Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 39 представляет собой Trp или Phe;
Xaa в положении 40 представляет собой Asp, Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 42 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 44 представляет собой Ser, Ala, Asp, Glu, Gly, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 45 представляет собой Arg, Lys или Ser;
Xaa в положении 46 представляет собой Gly, Ala или Gln;
Xaa в положении 47 представляет собой Phe, Cys, Val или Tyr;
Xaa в положении 48 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 49 представляет собой Leu, Cys, Phe, Met, Arg или Tyr;
Xaa в положении 50 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Ile, Met, Pro, Gln, Thr или Val;
Xaa в положении 51 представляет собой Leu, Ala, Cys, Met или Val;
Xaa в положении 52 представляет собой Lys, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Ser, Thr, Trp или Tyr;
Xaa в положении 53 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 54 представляет собой Asn, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Lys, Met, Gln, Arg, Ser или Trp;
Xaa в положении 56 представляет собой Ala, Gly, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser или Thr;
Xaa в положении 57 представляет собой Gln, Glu, Leu, Met, Ser или Thr;
Xaa в положении 58 представляет собой His, Ala, Asp, Phe, Leu, Met, Asn, Arg, Trp или Tyr;
Xaa в положении 60 представляет собой Tyr, Glu или Phe;
Xaa в положении 63 представляет собой Gln, Cys, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 64 представляет собой Ala, Phe, Gly, His, Arg, Ser или Tyr;
Xaa в положении 65 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Thr или Val;
Xaa в положении 66 представляет собой Ser, Ala или Gly;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 68 представляет собой Ile Asp, Leu или Val;
Xaa в положении 69 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 70 представляет собой Val, Cys или Ile;
Xaa в положении 71 представляет собой Asp, Ala, Cys, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 72 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Trp;
Xaa в положении 73 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 74 представляет собой Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 75 представляет собой Val, Cys, Ile или Leu;
Xaa в положении 76 представляет собой Lys, Ala, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 77 представляет собой Asp Tyr;
Xaa в положении 78 представляет собой Gln, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 79 представляет собой Gly, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp или Tyr;
Xaa в положении 80 представляет собой Arg, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 81 представляет собой Leu, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 82 представляет собой Ile, Ala, Leu, Met, Arg или Val;
Xaa в положении 83 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
- 25 031651
Xaa в положении 84 представляет собой Pro, Ala, Cys, Glu, Ile, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 85 представляет собой Leu, Cys, Gly или Val и
Xaa в положении 86 представляет собой Ser, Ala, Ile, Thr или Val, и где 1-14 аминокислот необязательно удалены с N-конца и/или С-конца полипептида PIP-72.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 847, где
Xaa в положении 2 представляет собой Gly, Lys или Ala;
Xaa в положении 3 представляет собой Ile или Leu;
Xaa в положении 4 представляет собой Thr или Ser;
Xaa в положении 5 представляет собой Val или Ile;
Xaa в положении 6 представляет собой Thr или Lys;
Xaa в положении 8 представляет собой Asn, Lys, Gly или Ser;
Xaa в положении 9 представляет собой Ser или Ala;
Xaa в положении 11 представляет собой Asn, Lys, His или Thr;
Xaa в положении 12 представляет собой Pro, Thr, Lys или Ser;
Xaa в положении 13 представляет собой Ile или Val;
Xaa в положении 14 представляет собой Glu или Asp;
Xaa в положении 15 представляет собой Val, Ala или Ile;
Xaa в положении 16 представляет собой Ala или Ser;
Xaa в положении 17 представляет собой Ile или Val;
Xaa в положении 18 представляет собой Asn или Ser;
Xaa в положении 19 представляет собой His, Lys, Arg, Gln или Ala;
Xaa в положении 21 представляет собой Gly или Arg;
Xaa в положении 22 представляет собой Ser, Lys, Asn, Asp или Thr;
Xaa в положении 25 представляет собой Asp или Asn;
Xaa в положении 26 представляет собой Thr или Asp;
Xaa в положении 27 представляет собой Ser, Thr, Asn или Lys;
Xaa в положении 28 представляет собой Phe, Tyr или Pro;
Xaa в положении 29 представляет собой Phe или Tyr;
Xaa в положении 30 представляет собой Ser, Gly или Lys;
Xaa в положении 31 представляет собой Val, Ile или Met;
Xaa в положении 32 представляет собой Gly, Ala или Asp;
Xaa в положении 33 представляет собой Asn, Ser, Gln или Pro;
Xaa в положении 35 представляет собой Lys, Glu или Ser;
Xaa в положении 36 представляет собой Gln, Asn или Ser;
Xaa в положении 37 представляет собой Glu или Asp;
Xaa в положении 38 представляет собой Thr или Ser;
Xaa в положении 42 представляет собой Ser или Asn;
Xaa в положении 44 представляет собой Ser, Asp, Ala или Leu;
Xaa в положении 47 представляет собой Phe или Tyr;
Xaa в положении 48 представляет собой Leu или Met;
Xaa в положении 49 представляет собой Leu или Met;
Xaa в положении 50 представляет собой Ser, Ala или Tyr;
Xaa в положении 51 представляет собой Leu или Val;
Xaa в положении 52 представляет собой Lys или Gln;
Xaa в положении 53 представляет собой Lys, Arg, Met или Leu;
Xaa в положении 54 представляет собой Asn, Lys или Gly;
Xaa в положении 55 представляет собой Gly или Ser;
Xaa в положении 56 представляет собой Ala, Thr, Gln или Ser;
Xaa в положении 57 представляет собой Gln, Val или Ala;
Xaa в положении 58 представляет собой His, Ala, Lys, Tyr или Thr;
Xaa в положении 59 представляет собой Pro или Thr;
Xaa в положении 62 представляет собой Val или Ile;
Xaa в положении 63 представляет собой Gln, Ser или Leu;
Xaa в положении 64 представляет собой Ala, Gln или Ser;
Xaa в положении 65 представляет собой Ser или Thr;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Gln, Arg или Asn;
Xaa в положении 69 представляет собой Glu, Lys или Val;
Xaa в положении 70 представляет собой Val или Ile;
Xaa в положении 71 представляет собой Asp, Glu или Tyr;
Xaa в положении 72 представляет собой Asn, His, Ser или Asp;
Xaa в положении 73 представляет собой Asn, Ser или Asp;
- 26 031651
Xaa в положении 74 представляет собой Ala, Thr, Met, Ile или Lys;
Xaa в положении 76 представляет собой Lys или Thr;
Xaa в положении 78 представляет собой Gln, His или Ser;
Xaa в положении 80 представляет собой Arg, Glu или Gln;
Xaa в положении 81 представляет собой Leu, Pro, Ala или Thr;
Xaa в положении 82 представляет собой Ile или Leu;
Xaa в положении 83 представляет собой Glu, His, Asn, Gln или Leu;
Xaa в положении 85 представляет собой Leu, Val или Ala; и Xaa в положении 86 представляет собой Ser, Ala, Tyr или Asn, и где 1-14 аминокислот необязательно удалены с N-конца и/или C-конца полипептида PIP-72 и/или аминокислота вставлена между остатком 24 и 25 относительно SEQ ID NO: 847.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 848, где
Xaa в положении 2 представляет собой Gly, Lys, Ala или Arg;
Xaa в положении 3 представляет собой Ile, Leu или Val;
Xaa в положении 4 представляет собой Thr или Ser;
Xaa в положении 5 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 6 представляет собой Thr, Lys, Ser или Arg;
Xaa в положении 8 представляет собой Asn, Lys, Gly, Ser, Gln, Arg, Thr или Ala;
Xaa в положении 9 представляет собой Ser, Ala или Thr;
Xaa в положении 11 представляет собой Asn, Lys, Thr, Gln, Arg, His или Ser;
Xaa в положении 12 представляет собой Pro, Thr, Lys, Ser или Arg;
Xaa в положении 13 представляет собой Ile, Val или Leu;
Xaa в положении 14 представляет собой Glu или Asp;
Xaa в положении 15 представляет собой Val, Ala, Ile или Leu;
Xaa в положении 16 представляет собой Ala или Ser;
Xaa в положении 17 представляет собой Ile, Val или Leu;
Xaa в положении 18 представляет собой Asn, Ser, Gln или Thr;
Xaa в положении 19 представляет собой His, Lys, Ala, Gln, Asn или Arg;
Xaa в положении 21 представляет собой Gly, Arg или Lys;
Xaa в положении 22 представляет собой Ser, Lys, Asn, Thr, Arg, Asp, Glu или Gln;
Xaa в положении 25 представляет собой Asp, Asn, Glu или Gln;
Xaa в положении 26 представляет собой Thr, Asp, Ser или Glu;
Xaa в положении 27 представляет собой Ser, Thr, Lys, Asn, Gln или Arg;
Xaa в положении 28 представляет собой Phe, Tyr, Pro или Trp;
Xaa в положении 29 представляет собой Phe, Tyr или Trp;
Xaa в положении 30 представляет собой Ser, Gly, Lys, Thr или Arg;
Xaa в положении 31 представляет собой Val, Ile, Met или Leu;
Xaa в положении 32 представляет собой Gly, Ala, Asp или Glu;
Xaa в положении 33 представляет собой Asn, Ser, Gln, Pro или Thr;
Xaa в положении 35 представляет собой Lys, Glu, Ser, Arg или Thr;
Xaa в положении 36 представляет собой Gln, Ser, Asn или Thr;
Xaa в положении 37 представляет собой Glu или Asp;
Xaa в положении 38 представляет собой Thr или Ser;
Xaa в положении 42 представляет собой Ser, Asn, Thr или Gln;
Xaa в положении 44 представляет собой Ser, Asp, Ala, Leu, Thr, Glu, Ile или Val;
Xaa в положении 47 представляет собой Phe, Tyr или Trp;
Xaa в положении 48 представляет собой Leu, Met, Ile или Val;
Xaa в положении 49 представляет собой Leu, Met, Ile или Val;
Xaa в положении 50 представляет собой Ser, Ala, Tyr или Thr;
Xaa в положении 51 представляет собой Leu, Val или Ile;
Xaa в положении 52 представляет собой Lys, Gln, Arg или Asn;
Xaa в положении 53 представляет собой Lys, Arg, Met, Leu, Ile или Val;
Xaa в положении 54 представляет собой Asn, Lys, Gly, Gln или Arg;
Xaa в положении 55 представляет собой Gly, Ser или Thr;
Xaa в положении 56 представляет собой Ala, Thr, Gln, Ser или Asn;
Xaa в положении 57 представляет собой Gln, Val, Ala, Asn, Leu или Ile;
Xaa в положении 58 представляет собой His, Ala, Lys, Tyr или Thr;
Xaa в положении 59 представляет собой Pro, Thr или Ser;
Xaa в положении 62 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 63 представляет собой Gln, Ser, Leu, Asn, Thr, Ile или Val;
Xaa в положении 64 представляет собой Ala, Gln, Ser, Asn или Thr;
- 27 031651
Xaa в положении 65 представляет собой Ser или Thr;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Gln, Asn или Arg;
Xaa в положении 69 представляет собой Glu, Val, Asp, Lys, Arg, Ile или Leu;
Xaa в положении 70 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 71 представляет собой Asp, Glu, Tyr или Trp;
Xaa в положении 72 представляет собой Asn, His, Ser, Asp, Gln, Thr или Glu;
Xaa в положении 73 представляет собой Asn, Ser, Asp, Gln, Thr или Glu;
Xaa в положении 74 представляет собой Ala, Thr, Met, Ile, Lys, Ser, Leu, Val или Arg;
Xaa в положении 76 представляет собой Lys, Thr, Arg или Ser;
Xaa в положении 78 представляет собой Gln, His, Ser, Asn или Thr;
Xaa в положении 80 представляет собой Arg, Glu, Gln, Lys, Asp или Asn;
Xaa в положении 81 представляет собой Leu, Pro, Thr, Ile, Val, Ala или Ser;
Xaa в положении 82 представляет собой Ile, Leu или Val;
Xaa в положении 83 представляет собой Glu, His, Asn, Leu, Gln, Ile или Val;
Xaa в положении 85 представляет собой Leu, Val или Ala; и Xaa в положении 86 представляет собой Ser, Ala, Tyr, Asn или Thr, и где 1-14 аминокислот необязательно удалены с N-конца и/или C-конца полипептида PIP-72 и/или аминокислота вставлена между остатком 24 и 25 относительно SEQ ID NO: 848.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует полипептид PIP-72, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 849, где
Xaa в положении 2 представляет собой Gly, Ala, Cys, Asp, Glu, Ile, Lys, Leu, Asn, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 3 представляет собой Ile, Leu, Val или Trp;
Xaa в положении 4 представляет собой Thr, Ala, Asp, Glu, His, Ile, Lys, Leu, Arg, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 5 представляет собой Val, Ala, Cys, Gly, His, Ile, Leu или Tyr;
Xaa в положении 6 представляет собой Thr, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Trp или Tyr;
Xaa в положении 7 представляет собой Asn, Ala или Val;
Xaa в положении 8 представляет собой Asn, Lys, Gly, Ser, Gln, Arg, Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, His, Ile, Leu, Met или Val;
Xaa в положении 9 представляет собой Ser, Ala, Cys, Gly или Thr;
Xaa в положении 11 представляет собой Asn, Lys, Thr, Gln, Arg, Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Val или Tyr;
Xaa в положении 12 представляет собой Pro, Thr, Lys, Ser, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Leu, Asn, Gln, Arg, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 13 представляет собой Ile, Asn, Gln, Leu или Val;
Xaa в положении 14 представляет собой Glu, Ala, Cys, Phe, His, Lys, Asp или Gln;
Xaa в положении 15 представляет собой Val, Ala, Ile, Leu, Cys, Met или Arg;
Xaa в положении 16 представляет собой Ala или Ser;
Xaa в положении 17 представляет собой Ile, Glu, Leu или Val;
Xaa в положении 18 представляет собой Asn, Gln, Thr или Ser;
Xaa в положении 19 представляет собой His, Lys, Ala, Arg, Glu, Leu, Pro, Ser или Tyr;
Xaa в положении 20 представляет собой Trp, Ala или Thr;
Xaa в положении 21 представляет собой Gly, Arg или Lys;
Xaa в положении 22 представляет собой Ser, Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 23 представляет собой Asp, Ala, Gly, His, Lys, Met, Asn, Gln, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 24 представляет собой Gly, Asp или Phe;
Xaa в положении 25 представляет собой Asp, Ala, Glu, Phe, Asn или Gln;
Xaa в положении 26 представляет собой Thr, Glu, Asp, Ser или Pro;
Xaa в положении 27 представляет собой Ser, Thr, Lys, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Asn или Gln;
Xaa в положении 28 представляет собой Phe, Tyr, Pro или Trp;
Xaa в положении 29 представляет собой Phe, Ala, Cys, Ile, Leu, Gln, Arg, Trp или Tyr;
Xaa в положении 30 представляет собой Ser, Gly, Lys, Thr, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 31 представляет собой Val, Ile, Met или Leu;
Xaa в положении 32 представляет собой Gly, Ala, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 33 представляет собой Asn, Ser, Gln, Pro, Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Arg, Val или Tyr;
- 28 031651
Xaa в положении 34 представляет собой Gly, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Tyr;
Xaa в положении 35 представляет собой Lys, Glu, Ala, Cys, Asp, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 36 представляет собой Gln, Ala, Cys, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 37 представляет собой Glu, Asp, Ala, Cys, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 38 представляет собой Thr, Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 39 представляет собой Trp или Phe;
Xaa в положении 40 представляет собой Asp, Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 42 представляет собой Ser, Asn, Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Arg, Val, Trp, Tyr или Gln;
Xaa в положении 44 представляет собой Ser, Asp, Ala, Leu, Thr, Glu, Ile, Ala, Gly, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Val, Tyr или Val;
Xaa в положении 45 представляет собой Arg, Lys или Ser;
Xaa в положении 46 представляет собой Gly, Ala или Gln;
Xaa в положении 47 представляет собой Phe, Tyr Cys, Val или Trp;
Xaa в положении 48 представляет собой Leu, Met, Ile, Cys, Phe, Met, Arg, Tyr или Val;
Xaa в положении 49 представляет собой Leu, Met, Ile или Val;
Xaa в положении 50 представляет собой Ser, Ala, Tyr, Cys, Asp, Ile, Met, Pro, Gln, Val или Thr;
Xaa в положении 51 представляет собой Leu, Val, Ala, Cys, Met или Ile;
Xaa в положении 52 представляет собой Lys, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Ser, Thr, Gln, Trp или Tyr;
Xaa в положении 53 представляет собой Lys, Arg, Met, Leu, Ile, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Asn, Gln, Ser, Thr, Tyr или Val;
Xaa в положении 54 представляет собой Asn, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Lys, Met, Gln, Arg, Ser или Trp;
Xaa в положении 55 представляет собой Gly, Ser или Thr;
Xaa в положении 56 представляет собой Ala, Thr, Gln, Ser, Gly, Leu, Pro, Arg или Asn;
Xaa в положении 57 представляет собой Gln, Glu, Leu, Met, Ser, Val, Ala, Asn, Ile или Thr;
Xaa в положении 58 представляет собой His, Ala, Lys, Asp, Phe, Leu, Met, Asn, Arg, Trp, Tyr или Thr;
Xaa в положении 59 представляет собой Pro, Thr или Ser;
Xaa в положении 60 представляет собой Tyr, Glu или Phe;
Xaa в положении 62 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 63 представляет собой Gln, Ser, Cys, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 64 представляет собой Ala, Gln, Asn, Phe, Gly, His, Arg, Ser или Tyr;
Xaa в положении 65 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Val или Thr;
Xaa в положении 66 представляет собой Ser, Ala или Gly;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Gln, Asn или Arg;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 68 представляет собой Ile Asp, Leu или Val;
Xaa в положении 69 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 70 представляет собой Val, Ile, Cys или Leu;
Xaa в положении 71 представляет собой Asp, Glu, Tyr, Ala, Cys, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Ser, Thr, Val или Trp;
Xaa в положении 72 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, His или Trp;
Xaa в положении 73 представляет собой Asn, Ser, Asp, Gln, Thr, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Val, Tyr или Glu;
Xaa в положении 74 представляет собой Ala, Thr, Met, Ile, Lys, Ser, Leu, Val, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Asn, Gln, Tyr или Arg;
Xaa в положении 75 представляет собой Val, Cys, Ile или Leu;
Xaa в положении 76 представляет собой Lys, Ala, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 77 представляет собой Asp Tyr;
Xaa в положении 78 представляет собой Gln, His, Ser, Asn, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Val, Tyr или Thr;
- 29 031651
Xaa в положении 79 представляет собой Gly, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp или Tyr;
Xaa в положении 80 представляет собой Arg, Glu, Gln, Lys, Asp, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Ser, Thr, Val, Tyr или Asn;
Xaa в положении 81 представляет собой Leu, Pro, Thr, Ile, Val, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His или Ser;
Xaa в положении 82 представляет собой Ile, Ala, Leu, Met, Arg и Val;
Xaa в положении 83 представляет собой Glu, His, Asn, Leu, Gln, Ile, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, Lys, Pro, Arg, Ser, Thr, Tyr или Val;
Xaa в положении 84 представляет собой Pro, Ala, Cys, Glu, Ile, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 85 представляет собой Leu, Val, Cys, Gly или Ala и
Xaa в положении 86 представляет собой Ser, Ala, Tyr, Asn, Ile, Val или Thr, и где 1-14 аминокислот необязательно удалены с N-конца и/или C-конца полипептида PIP-72 и/или аминокислота вставлена между остатком 24 и 25 относительно SEQ ID NO: 849.
В некоторых вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты кодируют полипептид PIP-72, содержащий аминокислотный мотив, представленный положениями 37-51 SEQ ID NO: 846, SEQ ID NO: 847, SEQ ID NO: 848 или SEQ ID NO: 849.
В некоторых вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты кодируют полипептид PIP72, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности, изложенной SEQ ID NO: 2
В некоторых вариантах осуществления иллюстративные молекулы нуклеиновой кислоты кодируют полипептид PIP-72 SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 - SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 852, любой из SEQ ID NO: 903 - 914, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946, а также аминокислотные замены, делеции, вставки, и их фрагменты, и их комбинации.
В некоторых вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты кодируют полипептид PIP-72 из табл. 14, 17, 20, 23, 24, 26, 28 и/или 29, комбинации его аминокислотных замен и его делеций и/или вставок.
Также представлены молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют продукты транскрипции и/или трансляции, которые впоследствии подвергаются сплайсингу с образованием, в конечном итоге, функциональных полипептидов PIP-72. Сплайсинг может осуществляться in vitro или in vivo, и он может включать цис- или транс-сплайсинг. Субстратом для сплайсинга могут быть полинуклеотиды (например, РНК-транскрипты) или полипептиды. Примером цис-сплайсинга полинуклеотида является ситуация, когда интрон, вставленный в кодирующую последовательность, удаляется и два фланкирующих экзонных участка соединяются с образованием последовательности, кодирующей полипептид PIP-72. Примером транс-сплайсинга будет ситуация, когда полинуклеотид кодируется с разделением кодирующей последовательности на два или более фрагментов, которые могут транскрибироваться раздельно, а затем соединяться с образованием пестицидной кодирующей последовательности полной длины. Применение последовательности энхансера сплайсинга, которую можно вводить в конструкцию, может облегчать сплайсинг, как цис-, так и транс-сплайсинг полипептидов (патенты США № 6365377 и 6531316). Таким образом, в некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды напрямую не кодируют полипептид PIP-72 полной длины, а кодируют фрагмент или фрагменты полипептида PIP-72. Эти полинуклеотиды можно применять для экспрессии функционального полипептида PIP-72 посредством механизма, включающего сплайсинг, при этом сплайсинг может происходить на уровне полинуклеотида (например, интрон/экзон) и/или полипептида (например, интеин/экстеин). Это может быть применимо, например, при регуляции экспрессии пестицидной активности, поскольку функциональный пестицидный полипептид будет экспрессироваться только в том случае, если все требуемые фрагменты экспрессируются в среде, которая обеспечивает возможность процессов сплайсинга с образованием функционального продукта. В другом примере введение одной или нескольких последовательностей вставок в полинуклеотид может облегчать рекомбинацию с полинуклеотидом с низкой гомологией; применение интрона или интеина для последовательности вставки облегчает удаление встроенной последовательности, что тем самым восстанавливает функцию кодируемого варианта.
Молекулы нуклеиновой кислоты, которые являются фрагментами этих последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующих полипептиды PIP-72, также охватываются вариантами осуществления. Используемый в данном документе фрагмент относится к части последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид PIP-72. Фрагмент последовательности нуклеиновой кислоты может кодировать биологически активную часть полипептида PIP-72, или он может представлять собой фрагмент, который можно применять в качестве гибридизационного зонда или ПЦР-праймера с применением раскрытых ниже способов. Молекулы нуклеиновой кислоты, которые являются фрагментами последова
- 30 031651 тельности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид PIP-72, содержат по меньшей мере приблизительно 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250 или 260 смежных нуклеотидов или вплоть до количества нуклеотидов, присутствующих в последовательности нуклеиновой кислоты полной длины, кодирующей полипептид PIP-72, раскрытый в данном документе, в зависимости от предполагаемого применения. Смежные нуклеотиды применяется в данном документе для обозначения нуклеотидных остатков, которые непосредственно прилегают друг к другу. Фрагменты последовательностей нуклеиновой кислоты согласно вариантам осуществления будут кодировать фрагменты белка, которые сохраняют биологическую активность полипептида PIP-72 и, вследствие этого, сохраняют инсектицидную активность. Сохранять активность PIP-72 применяется в данном документе для обозначения полипептида, обладающего по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 70, 80, 90, 95% или большей инсектицидной активностью полипептида полной длины PIP-72Aa SEQ ID NO: 2. В одном варианте осуществления инсектицидная активность представляет собой активность в отношении Lepidoptera. В одном варианте осуществления инсектицидная активность представляет собой активность против видов жесткокрылых. В одном варианте осуществления инсектицидная активность представляет собой активность против вида Diabrotica. В одном варианте осуществления инсектицидная активность представляет собой активность против одного или нескольких насекомых-вредителей из группы кукурузного жука: западного кукурузного жука, Diabrotica virgifera virgifera; северного кукурузного жука, D. barberi: блошки 11точечной Говарда или жука-блошки 11-точечной; Diabrotica undecimpunctata howardi, и мексиканского кукурузного жука, D. virgifera zeae. В одном варианте осуществления инсектицидная активность представляет собой активность против западного кукурузного жука, Diabrotica virgifera virgifera.
В некоторых вариантах осуществления фрагмент последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид PIP-72, кодирующий биологически активную часть белка, будет кодировать по меньшей мере приблизительно 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84 или 85 смежных аминокислот или вплоть до общего количества аминокислот, присутствующих в полипептиде полной длины PIP-72 согласно вариантам осуществления. В некоторых вариантах осуществления фрагмент характеризуется N-концевым и/или C-концевым усечением по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или более аминокислот с N-конца и/или C-конца относительно SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 - SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 852, любой из SEQ ID NO: 903 - 914, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933 - SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939 - SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946 или их вариантов, например, путем протеолиза, вставки старт-кодона, делеции кодонов, кодирующих удаляемые аминокислоты, с одновременной вставкой стоп-кодона или путем вставки стопкодона в кодирующую последовательность. В некоторых вариантах осуществления фрагменты, охваченные в данном документе, получены в результате удаления N-концевых 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 или более аминокислот с N-конца относительно SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 852, любой из SEQ ID NO: 903 SEQ ID NO: 914, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946 или их вариантов, например, путем протеолиза или путем вставки старт-кодона в кодирующую последовательность. В некоторых вариантах осуществления фрагменты, охваченные в данном документе, получены в результате удаления N-концевых 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 аминокислот относительно SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28 или SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 852, любой из SEQ ID NO: 903 SEQ ID NO: 914, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946 или их вариантов, например, путем протеолиза или путем вставки старт-кодона в кодирующую последовательность.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, достаточно гомологичной последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 949, SEQ ID NO: 950, SEQ ID NO: 954, SEQ ID NO: 955, SEQ ID NO: 956, SEQ ID NO: 957, SEQ ID NO: 958, SEQ ID NO: 961, SEQ ID NO: 962, SEQ ID NO: 963, SEQ ID NO: 965, SEQ ID NO: 966, SEQ ID NO: 967 или SEQ ID NO: 968. Достаточно гомологичный применяется в данном документе для обозначения аминокислотной последовательности или последовательности нуклеиновой кислоты, последовательность которой по меньшей мере приблизи
- 31 031651 тельно на 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более гомологична эталонной последовательности с применением одной из программ выравнивания, описанных в данном документе, с применением стандартных параметров. Специалисту в данной области будет понятно, что эти значения можно соответствующим образом скорректировать для определения соответствующей гомологии белков, кодируемых двумя последовательностями нуклеиновой кислоты, принимая во внимание вырожденность кодонов, аминокислотное сходство, расположение рамки считывания и т.п. В некоторых вариантах осуществления гомология последовательностей определяется в отношении последовательности полной длины полинуклеотида, кодирующего полипептид PIP-72, или в отношении последовательности полной длины полипептида PIP-72. В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 характеризуется по меньшей мере приблизительно 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичностью последовательности по сравнению с SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28 или SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932 - SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939 - SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943 SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946. В некоторых вариантах осуществления идентичность последовательностей определяется в отношении последовательности полной длины полинуклеотида, кодирующего полипептид PIP-72, или в отношении последовательности полной длины полипептида PIP-72. В некоторых вариантах осуществления идентичность последовательностей рассчитывают с применением алгоритма ClustalW в модуле ALIGNX® пакета программ Vector NTI® Program Suite (Invitrogen Corporation, Карлсбад, Калифорния) со всеми параметрами по умолчанию. В некоторых вариантах осуществления идентичность последовательностей рассчитывают по всей длине полипептида с применением алгоритма ClustalW в модуле ALIGNX пакета программ Vector NTI Program Suite (Invitrogen Corporation, Карлсбад, Калифорния) со всеми параметрами по умолчанию.
Для определения процентной идентичности двух аминокислотных последовательностей или двух последовательностей нуклеиновой кислоты осуществляют выравнивание последовательностей для целей оптимального сравнения. Процентная идентичность двух последовательностей является функцией количества идентичных положений, имеющихся в последовательностях (т.е. процентная идентичность=количество идентичных положений/общее количество положений (например, перекрывающихся положений)х100). В одном варианте осуществления две последовательности имеют одинаковую длину. В другом варианте осуществления сравнение проводят по всей протяженности эталонной последовательности (например, по всей протяженности одной из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2). Процентную идентичность двух последовательностей можно определить с применением методик, аналогичных описанным ниже, которые допускают наличие гэпов или их отсутствие. При расчете процентной идентичности, как правило, подсчитывают точные совпадения.
Определение процентной идентичности двух последовательностей можно выполнять с применением математического алгоритма. Неограничивающим примером математического алгоритма, используемого для сравнения двух последовательностей, является алгоритм Karlin and Altschul, (1990), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:2264, в модификации согласно Karlin and Altschul, (1993), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:5873-5877. Такой алгоритм внедрен в программы BLASTN и BLASTX от Altschul, et al., (1990), J. Mol. Biol. 215:403. Поиски нуклеотидных последовательностей в BLAST можно выполнять с помощью программы BLASTN, балл = 100, длина слова = 12, с получением последовательностей нуклеиновой кислоты, гомологичных пестицидным молекулам нуклеиновой кислоты согласно вариантам осуществления. Поиски белковых последовательностей в BLAST можно выполнять с помощью программы BLASTX, балл = 50, длина слова = 3, с получением аминокислотных последовательностей, гомологичных молекулам белка согласно вариантам осуществления. Для получения выравниваний с введением гэпов для целей сравнения можно использовать Gapped BLAST (в BLAST 2.0), как описано в Altschul, et al., (1997), Nucleic Acids Res. 25:3389. Альтернативно, можно применять PSI-Blast для осуществления итерационного поиска, при помощи которого выявляют отдаленные связи между молекулами. См. Altschul, et al., (1997) выше. При использовании программ BLAST, Gapped BLAST и PSI-Blast можно применять параметры по умолчанию соответствующих программ (например, BLASTX и BLASTN). Выравнивание можно проводить вручную путем просмотра.
Другим неограничивающим примером математического алгоритма, используемого для сравнения последовательностей, является алгоритм ClustalW (Higgins, et al., (1994), Nucleic Acids Res. 22:46734680). ClustalW сравнивает последовательности и выравнивает всю протяженность аминокислотной последовательности или ДНК-последовательности, и, таким образом, он может предоставлять данные о консервативности последовательностей для полной аминокислотной последовательности. Алгоритм ClustalW применяется в нескольких коммерчески доступных пакетах программного обеспечения для анализа ДНК/аминокислотных последовательностей, таких как модуль ALIGNX® пакета программ Vector NTI® Program Suite (Invitrogen Corporation, Карлсбад, Калифорния). После выравнивания аминокислотных последовательностей с помощью ClustalW можно оценивать процентную идентичность аминокислотных последовательностей. Неограничивающим примером программного обеспечения, применимого для анализа выравниваний ClustalW, является GENEDOC™. GENEDOC™ (Karl Nicholas) обеспе
- 32 031651 чивает оценку сходства и идентичности аминокислотных (или ДНК) последовательностей между несколькими белками. Другим неограничивающим примером математического алгоритма, используемого для сравнения последовательностей, является алгоритм Myers and Miller, (1988), CABIOS 4:11-17. Такой алгоритм внедрен в программу ALIGN (версия 2.0), которая является частью программного пакета GCG Wisconsin Genetics Software Package, версии 10 (доступного от Accelrys, Inc., 9685 Scranton Rd., СанДиего, Калифорния, США). При использовании программы ALIGN для сравнения аминокислотных последовательностей можно применять таблицу весов замен остатков PAM120, штраф за продолжение гэпа 12 и штраф за открытие гэпа 4.
Другим неограничивающим примером математического алгоритма, используемого для сравнения последовательностей, является алгоритм Needleman and Wunsch, (1970), J. Mol. Biol. 48(3):443-453, использующий программное обеспечение GAP, версия 10, для определения идентичности и сходства последовательностей с применением следующих параметров по умолчанию: % идентичности и % сходства для последовательности нуклеиновой кислоты с применением штрафа за открытие гэпа 50, и штрафа за продолжение гэпа 3, и матрицы замен nwsgapdna.cmpii; % идентичности или % сходства для аминокислотной последовательности с применением штрафа за открытие гэпа 8, и штрафа за продолжение гэпа 2, и матрицы замен BLOSUM62. Также можно применять эквивалентные программы. Эквивалентная программа применяется в данном документе для обозначения любой программы для сравнения последовательностей, которая для любых двух исследуемых последовательностей генерирует выравнивание, характеризующееся идентичными совпадениями нуклеотидов и идентичной процентной идентичностью последовательности при сравнении с соответствующим выравниванием, сгенерированным с помощью GAP версии 10.
Варианты осуществления также охватывают молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие варианты полипептида PIP-72. Варианты последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующих полипептид PIP-72, включают последовательности, которые кодируют полипептиды PIP-72, раскрытые в данном документе, но которые отличаются консервативными заменами, обусловленными вырожденностью генетического кода, а также последовательности, которые являются достаточно идентичными и которые рассматривались выше. Встречающиеся в природе аллельные варианты можно идентифицировать с применением хорошо известных методик молекулярной биологии, таких как полимеразная цепная реакция (ПЦР) и методика гибридизации, изложенных ниже. Вариантные последовательности нуклеиновой кислоты также включают синтетически полученные последовательности нуклеиновой кислоты, которые были получены, например, с применением сайт-направленного мутагенеза, но которые все еще кодируют раскрытые полипептиды PIP-72, которые рассматриваются ниже.
Настоящее раскрытие представляет выделенные или рекомбинантные полинуклеотиды, которые кодируют любые из полипептидов PIP-72, раскрытых в данном документе. Специалисты в данной области техники легко поймут, что вследствие вырожденности генетического кода существует множество нуклеотидных последовательностей, кодирующих полипептиды PIP-72 согласно настоящему раскрытию. Табл. 1 представляет собой таблицу кодонов, которая представляет синонимичные кодоны для каждой аминокислоты. Например, все кодоны AGA, AGG, CGA, CGC, CGG и CGU кодируют аминокислоту аргинин. Таким образом, в каждом положении в нуклеиновых кислотах согласно настоящему раскрытию, в котором аргинин обозначен кодоном, кодон может быть изменен на любой из соответствующих кодонов, описанных выше, без изменения кодируемого полипептида. Понятно, что U в последовательности РНК соответствует T в последовательности ДНК.
- 33 031651
Таблица 1
Аланин Ala A GCA GCC GCG GCU
Цистеин Cys C UGC UGU
Аспарагиновая кислота Asp D GAC GAU
Глутаминовая кислота Glu E GAA GAG
Фенилаланин Phe F UUC UUU
Глицин Gly G GGA GGC GGG GGU
Г истидин His CAC CAU
Изолейцин lie 1 AUA AUC AUU
Лизин Lys К AAA AAG
Лейцин Leu L UUA UUG CUA cue CUG CUU
Метионин Met M AUG
Аспарагин Asn N AAC AAU
Пролин Pro P CCA CCC CCG ecu
Глутамин Gin Q CAA CAG
Аргинин Arg R AGA AGG CGA CGC CGG CGU
Серин Ser S AGC AGU UCA UCC UCG UCU
Треонин Thr T АСА ACC ACG ACU
Валин Vai V GUA GUC GUG UU
Триптофан Trp WUGG
Тирозин Tyr Y UAC UAU
Также специалисту в данной области будет понятно, что изменения можно вводить путем внесения мутаций в последовательности нуклеиновой кислоты, что ведет к изменениям в аминокислотной последовательности кодируемых полипептидов PIP-72 без изменения биологической активности белка. Таким образом, вариантные молекулы нуклеиновой кислоты можно создавать путем введения одной или нескольких нуклеотидных замен, добавлений и/или делеций в соответствующую последовательность нуклеиновой кислоты, раскрытую в данном документе, так что одна или несколько аминокислотных замен, добавлений или делеций вводятся в кодируемый белок. Мутации можно вводить при помощи стандартных методик, таких как сайт-направленный мутагенез и ПЦР-опосредованный мутагенез. Такие вариантные последовательности нуклеиновой кислоты также охватываются настоящим раскрытием.
Альтернативно, вариантные последовательности нуклеиновой кислоты можно создавать путем введения мутаций случайным образом по всей или части кодирующей последовательности, как, например, путем сайт-насыщающего мутагенеза, и полученных мутантов можно подвергать скринингу в отношении способности обеспечивать пестицидную активность для идентификации мутантов, которые сохраняют активность. После мутагенеза кодируемый белок можно экспрессировать рекомбинантным способом, и активность белка можно определять с применением стандартных методик анализа.
Полинуклеотиды согласно настоящему раскрытию и их фрагменты необязательно применяют в качестве субстратов для ряда реакций рекомбинации и рекуррентной рекомбинации, в дополнение к стандартным способам клонирования, изложенным, например, в Ausubel, Berger and Sambrook, т.е. для получения дополнительных гомологов пестицидных полипептидов и их фрагментов с требуемыми свойствами. Известен ряд таких реакций, в том числе разработанные авторами настоящего изобретения и их сотрудниками. Способы получения варианта любой нуклеиновой кислоты, приведенной в данном документе, включают рекуррентную рекомбинацию такого полинуклеотида со вторым (или большим количеством) полинуклеотидом, таким образом, получение библиотеки вариантных полинуклеотидов также представляет собой варианты осуществления согласно настоящему раскрытию, так же как и полученные библиотеки, клетки, содержащие библиотеки и любой рекомбинантный полинуклеотид, полученный такими способами. Дополнительно, такие способы необязательно включают отбор вариантного полинуклеотида из таких библиотек на основе пестицидной активности, как есть, где такую рекуррентную рекомбинацию осуществляют in vitro или in vivo.
Ряд протоколов создания разнообразия, в том числе протоколы рекуррентной рекомбинации нуклеиновых кислот, доступен и полностью описан в уровне техники. Методики можно применять отдельно и/или в комбинации для получения одного или нескольких вариантов нуклеиновой кислоты или набора
- 34 031651 нуклеиновых кислот, а также вариантов кодируемых белков. По отдельности и вместе эти методики обеспечивают надежные, широко используемые пути получения диверсифицированных нуклеиновых кислот и наборов нуклеиновых кислот (в том числе, например, библиотек нуклеиновых кислот), применимых, например, для конструирования или быстрой эволюции нуклеиновых кислот, белков, метаболических путей, клеток и/или организмов с новыми и/или улучшенными характеристиками.
Хотя в ходе следующего обсуждения для ясности делают разграничение и классификацию, будет принято во внимание, что методики часто не являются взаимоисключающими. Более того, различные способы можно применять по отдельности или в комбинации, одновременно или последовательно, для достижения различных вариантов последовательностей.
Результатом осуществления любой из методик создания разнообразия, описанных в данном документе, может быть создание одной или нескольких нуклеиновых кислот, которые можно подвергнуть отбору или скринингу в отношении нуклеиновых кислот, имеющих требуемые свойства или обеспечивающих их, или нуклеиновых кислот, которые кодируют белки, имеющие требуемые свойства или обеспечивающие их. После диверсификации с помощью одного или нескольких способов, описанных в данном документе или иным образом доступных специалисту в данной области, любые получаемые нуклеиновые кислоты можно подвергать отбору в отношении требуемой активности или свойства, например, пестицидной активности или такой активности при требуемом pH и т.д. Это может включать идентификацию любой активности, которую можно выявить, например, в автоматизированном или автоматизируемом формате, посредством любого из анализов, известных из уровня техники, см., например, обсуждение скрининга в отношении инсектицидной активности, ниже. Можно оценивать ряд связанных (или даже несвязанных) свойств последовательно или одновременно, на усмотрение специалиста-практика.
Описания ряда методик создания разнообразия для создания модифицированных последовательностей нуклеиновой кислоты, например последовательностей, кодирующих полипептиды с пестицидной активностью или их фрагменты, можно найти в следующих публикациях и литературе, процитированной в них: Soong, et al., (2000), Nat. Genet. 25(4):436-439; Stemmer, et al., (1999), Tumor Targeting, 4:1-4; Ness, et al., (1999), Nat. Biotechnol. 17:893-896; Chang, et al., (1999), Nat. Biotechnol. 17:793-797; Minshull and Stemmer, (1999), Curr Opin Chem Biol 3:284-290; Christians, et al., (1999), Nat. Biotechnol. 17:259-264; Crameri, et al., (1998) Nature 391:288-291; Crameri, et al., (1997), Nat. Biotechnol. 15:436-438; Zhang, et al., (1997), PNAS USA 94:4504-4509; Patten, et al., (1997), Curr Opin Biotechnol 8:724-733; Crameri, et al., (1996), Nat. Med. 2:100-103; Crameri, et al., (1996), Nat. Biotechnol. 14:315-319; Gates, et al., (1996), J. Mol. Biol. 255:373-386; Stemmer, (1996), Sexual PCR and Assembly PCR в The Encyclopedia of Molecular Biology. VCH Publishers, New York, p. 447-457; Crameri and Stemmer, (1995), BioTechniques 18:194-195; Stemmer, et al., (1995), Gene, 164:49-53; Stemmer, (1995), Science 270: 1510; Stemmer, (1995), Bio/Technology 13:549-553; Stemmer, (1994), Nature 370:389-391 и Stemmer, (1994), PNAS USA 91:1074710751.
Мутационные способы создания разнообразия включают, например, сайт-направленный мутагенез (Ling, et al., (1997), Anal Biochem 254(2):157-178; Dale, et al., (1996), Methods Mol Biol 57:369-374; Smith, (1985), Ann Rev Genet 19:423-462; Botstein and Shortle, (1985), Science 229:1193-1201; Carter, (1986) Biochem J 237:1-7 и Kunkel, (1987), The efficiency of oligonucleotide directed mutagenesis в Nucleic Acids & Molecular Biology (Eckstein and Lilley, eds., Springer Verlag, Berlin)); мутагенез с применением урацилсодержащих матриц (Kunkel, (1985), PNAS USA 82:488-492; Kunkel, et al., (1987), Methods Enzymol 154:367-382 и Bass, et al., (1988), Science 242:240-245); олигонуклеотид-направленный мутагенез (Zoller and Smith, (1983) Methods Enzymol 100:468-500; Zoller and Smith, (1987), Methods Enzymol 154:329-350 (1987); Zoller and Smith, (1982), Nucleic Acids Res 10:6487-6500), мутагенез фосфоротиоатмодифицированной ДНК (Taylor, et al., (1985), Nucl Acids Res 13:8749-8764; Taylor, et al., (1985), Nucl Acids Res 13:8765-8787 (1985); Nakamaye and Eckstein, (1986) Nucl Acids Res 14:9679-9698; Sayers, et al., (1988), Nucl Acids Res 16:791-802 и Sayers, et al., (1988), Nucl Acids Res 16:803-814); мутагенез с применением дуплексной ДНК с брешью (Kramer, et al., (1984), Nucl Acids Res 12:9441-9456; Kramer and Fritz, (1987), Methods Enzymol 154:350-367; Kramer, et al., (1988), Nucl Acids Res 16:7207 и Fritz, et al., (1988), Nucl Acids Res 16:6987-6999). Дополнительные подходящие способы включают точечную репарацию ошибочно спаренных оснований (Kramer, et al., (1984), Cell 38:879-887), мутагенез с применением штаммов-хозяев с недостаточностью репарации (Carter, et al., (1985), Nucl Acids Res 13:4431-4443 и Carter, (1987), Methods in Enzymol 154:382-403), делеционный мутагенез (Eghtedarzadeh and Henikoff, (1986), Nucl Acids Res 14:5115), рестрикцию-отбор и рестрикцию-очистку (Wells, et al., (1986), Phil Trans R Soc Lond A 317:415-423), мутагенез посредством полного синтеза гена (Nambiar, et al., (1984), Science 223:1299-1301; Sakamar and Khorana, (1988), Nucl Acids Res 14:6361-6372; Wells, et al., (1985), Gene 34:315-323 и Grundstrom, et al., (1985), Nucl Acids Res 13:3305-3316), репарацию двухцепочечных разрывов (Mandecki, (1986), PNAS USA, 83:7177-7181, и Arnold, (1993), Curr Opin Biotech 4:450-455). Дополнительные сведения по многим из вышеуказанных способов можно найти в Methods Enzymol, том 154, в котором также описаны полезные руководства по поиску и устранению проблем в случае различных способов мутагенеза.
- 35 031651
Дополнительные сведения, касающиеся различных способов создания разнообразия, можно найти в следующих патентах США, публикациях и заявках согласно PCT и публикациях EPO: патенты США № 5723323, 5763192, 5814476, 5817483, 5824514, 5976862, 5605793, 5811238, 5830721, 5834252, 5837458, WO 1995/22625, WO 1996/33207, WO 1997/20078, WO 1997/35966, WO 1999/41402, WO 1999/41383, WO 1999/41369, WO 1999/41368, EP 752008, EP 0932670, WO 1999/23107, WO 1999/21979, WO 1998/31837, WO 1998/27230, WO 1998/27230, WO 2000/00632, WO 2000/09679, WO 1998/42832, WO 1999/29902, WO 1998/41653, WO 1998/41622, WO 1998/42727, WO 2000/18906, WO 2000/04190, WO 2000/42561, WO 2000/42559, WO 2000/42560, WO 2001/23401 и PCT/US01/06775.
Нуклеотидные последовательности согласно вариантам осуществления также можно применять для выделения соответствующих последовательностей из других организмов, в частности других бактерий, в частности видов рода Pseudomonas и, более конкретно, штамма Pseudomonas putida, Pseudomonas fulva или Pseudomonas chlororaphis. Таким образом, такие способы как ПЦР, гибридизация и т.п., можно применять для идентификации таких последовательностей на основе гомологии их последовательности с последовательностями, изложенными в данном документе. Вариантами осуществления охватываются последовательности, выбранные на основе идентичности последовательности с полными последовательностями, изложенными в данном документе, или их фрагментами. Такие последовательности включают последовательности, которые являются ортологами раскрытых последовательностей. Выражение ортологи относится к генам, происходящим от общего предкового гена и выявляемым у различных видов вследствие видообразования. Гены, обнаруживаемые у различных видов, считаются ортологами, если их нуклеотидные последовательности и/или кодируемые ими белковые последовательности имеют существенную степень идентичности, как определено в других разделах в данном документе. Функции ортологов часто являются высококонсервативными среди видов.
В случае подхода, основанного на ПЦР, олигонуклеотидные праймеры можно сконструировать для применения в ПЦР-реакциях для амплификации соответствующих последовательностей ДНК исходя из кДНК или геномной ДНК, извлеченных из какого-либо организма, представляющего интерес. Способы конструирования ПЦР-праймеров и ПЦР-клонирования в целом известны из уровня техники и раскрыты в Sambrook, et al., (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, New York), в дальнейшем Sambrook. См. также, Innis, et al., eds. (1990), PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Academic Press, New York); Innis and Gelfand, eds. (1995), PCR Strategies (Academic Press, New York); и Innis and Gelfand, eds. (1999), PCR Methods Manual (Academic Press, New York). Известные способы ПЦР включают, но без ограничения, способы с применением спаренных праймеров, вложенных праймеров, единичных специфических праймеров, вырожденных праймеров, ген-специфических праймеров, вектор-специфических праймеров, частично ошибочно спаренных праймеров и т.п.
Для идентификации потенциальных полипептидов PIP-72 из коллекций бактерий, лизаты бактериальных клеток можно подвергать скринингу с помощью антител, вырабатываемых против полипептида PIP-72, с применением способов вестерн-блоттинга и/или ELISA. Этот тип анализов можно проводить высокопроизводительным образом. Положительные образцы можно дополнительно анализировать при помощи различных методик, таких как очистка и идентификация белков при помощи антител. Способы получения антител хорошо известны из уровня техники, как обсуждается ниже.
Альтернативно, для идентификации гомологов полипептидов PIP-72 можно применять способ идентификации белков на основе масс-спектрометрии с применением протоколов из литературных источников (Scott Patterson, (1998), 10.22, 1-24, Current Protocol in Molecular Biology, опубликованный John Wiley & Son Inc). Точнее говоря, способ идентификации белков на основе LC-MS/MS применяют для установления связи MS-данных указанных клеточных лизатов или образцов, обогащенных молекулами с требуемым молекулярным весом (вырезанных из геля SDS-PAGE с полосками с молекулярным весом, соответствующим PIP-72), с информацией о последовательности PIP-72 (например, SEQ ID NO: 2) и его гомологов. Любое совпадение в пептидных последовательностях указывает на возможность наличия гомологов в образцах. Дополнительные методики (очистки белка и методики молекулярной биологии) можно применять для выделения белка и идентификации последовательностей гомологов.
В способах гибридизации для скрининга кДНК или геномных библиотек можно применять всю или часть последовательности пестицидной нуклеиновой кислоты. Способы для конструирования таких кДНК и геномных библиотек в целом известны из уровня техники и раскрыты в Sambrook and Russell, (2001), выше. Так называемые гибридизационные зонды могут представлять собой фрагменты геномной ДНК, фрагменты кДНК, фрагменты РНК или другие олигонуклеотиды, и они могут быть помечены детестируемой группой, такой как 32P, или любым другим детектируемым маркером, таким как другие радиоактивные изотопы, флуоресцентным соединением, ферментом или кофактором фермента. Зонды для гибридизации можно создавать путем мечения синтетических олигонуклеотидов, основанных на известной последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид PIP-72, раскрытой в данном документе. Дополнительно можно применять вырожденные праймеры, сконструированные на основе консервативных нуклеотидов или аминокислотных остатков в последовательности нуклеиновой кислоты или кодируемой аминокислотной последовательности. Зонд, как правило, содержит участок по
- 36 031651 следовательности нуклеиновой кислоты, который гибридизуется при жестких условиях по меньшей мере приблизительно с 12, по меньшей мере приблизительно с 25, по меньшей мере приблизительно с 50, 75, 100, 125, 150, 175 или 200 смежными нуклеотидами последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид PIP-72 согласно настоящему раскрытию или его фрагмент или вариант. Способы получения зондов для гибридизации, в целом, известны из уровня техники и раскрыты в Sambrook and Russell, (2001), выше, включенном в данный документ посредством ссылки.
Например, полную последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид PIP-72, раскрытую в данном документе, или одну или несколько ее частей можно применять в качестве зонда, способного специфично гибридизоваться с соответствующими последовательностями нуклеиновой кислоты, кодирующими последовательности, подобные полипептиду PIP-72, и матричными РНК. Для достижения специфической гибридизации при различных условиях такие зонды включают последовательности, которые являются уникальными, и, предпочтительно, состоят по меньшей мере приблизительно из 10 нуклеотидов в длину или по меньшей мере приблизительно из 20 нуклеотидов в длину. Такие зонды можно применять для амплификации соответствующих пестицидных последовательностей из выбранного организма с помощью ПЦР. Эту методику можно применять для выделения дополнительных кодирующих последовательностей из требуемого организма или в качестве диагностического анализа для определения присутствия кодирующих последовательностей в организме. Методики гибридизации включают гибридизационный скрининг высеянных ДНК-библиотек (либо бляшек, либо колоний; см., например, Sambrook, et al., (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.).
Гибридизацию таких последовательностей можно проводить в жестких условиях. Жесткие условия или жесткие условия гибридизации применяются в данном документе для обозначения условий, при которых зонд будет гибридизоваться со своей целевой последовательностью в явно большей степени, чем с другими последовательностями (например, по меньшей мере в 2 раза больше по сравнению с фоном). Жесткие условия являются зависимыми от последовательности и будут отличаться при различных обстоятельствах. Путем регулирования жесткости условий гибридизации и/или отмывки можно идентифицировать целевые последовательности, которые на 100% комплементарны зонду (гибридизация с гомологичным зондом). Альтернативно, условия жесткости можно скорректировать для обеспечения некоторого ошибочного спаривания в последовательностях с тем, чтобы выявлять более низкие степени сходства (гибридизация с гетерологичным зондом). В целом, зонд составляет менее приблизительно 1000 нуклеотидов в длину, предпочтительно менее 500 нуклеотидов в длину.
Как правило, жесткие условия будут такими, при которых концентрация соли составляет менее приблизительно 1,5 М ионов Na, как правило, концентрация ионов Na (или других солей) составляет приблизительно 0,01-1,0 М при pH 7,0-8,3, а температура составляет по меньшей мере приблизительно 30°C для коротких зондов (например, 10-50 нуклеотидов) и по меньшей мере приблизительно 60°C для длинных зондов (например, более 50 нуклеотидов). Жесткие условия также могут быть достигнуты с помощью добавления дестабилизирующих средств, таких как формамид. Иллюстративные условия низкой жесткости включают гибридизацию в буферном растворе с 30-35% формамида, 1 М NaCl, 1% SDS (додецилсульфата натрия) при 37°C и отмывку в 1/-2/ SSC (20/ SSC=3,0 M NaCl/0,3 M цитрата тринатрия) при 50-55°C. Иллюстративные условия умеренной жесткости включают гибридизацию в 40-45% формамиде, 1,0 М NaCl, 1% SDS при 37°C и отмывку в 0,5/-1/ SSC при 55-60°C. Иллюстративные условия высокой жесткости включают гибридизацию в 50% формамиде, 1 М NaCl, 1% SDS при 37°C и отмывку в 0,1/SSC при 60-65°C. Необязательно, отмывочные буферы могут содержать от приблизительно 0,1 до приблизительно 1% SDS. Длительность гибридизации в целом составляет менее приблизительно 24 ч, обычно от приблизительно 4 до приблизительно 12 ч.
Специфичность, как правило, зависит от отмывок после гибридизации, причем ключевыми факторами являются ионная сила и температура конечного отмывочного раствора. Для гибридов ДНК-ДНК Tm можно приблизительно рассчитать из уравнения Meinkoth and Wahl, (1984), Anal. Biochem. 138:267284: Tm=81,5°C+16,6(logM)+0,41(%GC)-0,61(%формамида)-500/л; где М представляет собой молярность одновалентных катионов, % GC представляет собой процентную долю гуанозиновых и цитозиновых нуклеотидов в ДНК, % формамида представляет собой процентную долю формамида в растворе для гибридизации, и L представляет собой длину гибрида в парах оснований. Tm представляет собой температуру (при определенной ионной силе и pH), при которой 50% комплементарной целевой последовательности гибридизуется с идеально совпадающим зондом. Tm снижают приблизительно на 1°C для каждого 1% ошибочного спаривания; таким образом, Tm, условия гибридизации и/или отмывки можно скорректировать для гибридизации с последовательностями с требуемой идентичностью. Например, если необходимы последовательности, идентичные на >90%, Tm можно снизить на 10°C. Обычно выбирают жесткие условия так, чтобы они были приблизительно на 5°C ниже температуры плавления (Tm) для конкретной последовательности и комплементарной ей последовательности при определенной ионной силе и pH. Однако при условиях сильной жесткости можно применять гибридизацию и/или отмывку при температуре на 1, 2, 3 или 4°C ниже температуры плавления (Tm); при условиях умеренной жесткости можно применять гибридизацию и/или отмывку при температуре на 6, 7, 8, 9 или 10°C ниже температуры
- 37 031651 плавления (Tm); при условиях низкой жесткости можно применять гибридизацию и/или отмывку при температуре на 11, 12, 13, 14, 15 или 20°C ниже температуры плавления (Tm). Специалистам будет понятно, что изменения жесткости растворов для гибридизации и/или отмывки по сути описаны с применением уравнения, композиций для гибридизации и отмывки и требуемой Tm. Если требуемая степень ошибочного спаривания приводит к Tm меньше 45°C (водный раствор) или 32°C (раствор формамида), предпочтительно повышать концентрацию SSC так, чтобы можно было применять более высокую температуру. Расширенное руководство по гибридизации нуклеиновых кислот приведено в Tijssen, (1993), Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization with Nucleic Acid Probes, Part I, Chapter 2 (Elsevier, N.Y.); и Ausubel, et al., eds. (1995), Current Protocols in Molecular Biology, Chapter 2 (Greene Publishing and Wiley-lnterscience, New York). См. Sambrook, et al., (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.).
В некоторых вариантах осуществления представлены молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или более идентична аминокислотной последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 929, SEQ ID NO: 930, SEQ ID NO: 931, SEQ ID NO: 937, SEQ ID NO: 938, SEQ ID NO: 942, SEQ ID NO: 947 или SEQ ID NO: 948, где полипептид обладает инсектицидной активностью.
Белки, а также их варианты и фрагменты.
Полипептиды PIP-72 также охвачены настоящим раскрытием. Выражения инсектицидный белок72 Pseudomonas, полипептид PIP-72 или белок PIP-72, которые используются в данном документе взаимозаменяемо, относятся к полипептиду с пестицидной активностью, в том числе, без ограничения, инсектицидной активностью против одного или нескольких насекомых-вредителей из отряда Coleoptera и достаточно гомологичному белку SEQ ID NO: 2. Предполагается ряд полипептидов PIP-72. Источники полинуклеотидов, которые кодируют полипептиды PIP-72 или родственные белки, включают, без ограничения, штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Aa SEQ ID NO: 1, кодирующий полипептид PIP-72Aa SEQ ID NO: 2; штамм Pseudomonas rhodesiae, который содержит полинуклеотид PIP-72Ba SEQ ID NO: 3, кодирующий полипептид PIP-72Ba SEQ ID NO: 4; штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Ca SEQ ID NO: 5, кодирующий полипептид PIP-72Ca SEQ ID NO: 6; штамм Pseudomonas mandelii, который содержит полинуклеотид PIP-72Cb SEQ ID NO: 7, кодирующий полипептид PIP-72Cb SEQ ID NO: 8; штамм Pseudomonas congelans, который содержит полинуклеотид PIP-72Da SEQ ID NO: 9, кодирующий полипептид PIP-72Da SEQ ID NO: 10; штамм Pseudomonas mandelii, который содержит полинуклеотид PIP-72Db SEQ ID NO: 11, кодирующий полипептид PIP-72Db SEQ ID NO: 12; штамм Pseudomonas ficuserectae, который содержит полинуклеотид PIP-72Dc SEQ ID NO: 13, кодирующий полипептид PIP-72Dc SEQ ID NO: 14; штамм Pseudomonas mosselii, который содержит полинуклеотид PIP-72Fa SEQ ID NO: 17, кодирующий полипептид PIP-72Fa SEQ ID NO: 18; штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Ff SEQ ID NO: 27, кодирующий полипептид PIP-72Ff SEQ ID NO: 28; и штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Gb SEQ ID NO: 31, кодирующий полипептид PIP-72Gb SEQ ID NO: 32; штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Ab SEQ ID NO: 949, кодирующий полипептид PIP-72Ab SEQ ID NO: 927; штамм Pseudomonas brassicacearum, который содержит полинуклеотид PIP-72Bb SEQ ID NO: 950, кодирующий полипептид PIP-72Ab SEQ ID NO: 928; штамм Pseudomonas entomophila, который содержит полинуклеотид PIP-72Fh SEQ ID NO: 954, кодирующий полипептид PIP-72AFh SEQ ID NO: 932; штамм Pseudomonas entomophila, который содержит полинуклеотид PIP-72Fh SEQ ID NO: 955, кодирующий полипептид PIP-72AFh SEQ ID NO: 933; штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Fj SEQ ID NO: 956, кодирующий полипептид PIP-72AFj SEQ ID NO: 934; штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Fk SEQ ID NO: 957, кодирующий полипептид PIP-72Fk SEQ ID NO: 935; штамм Burkholderia multivorans, который содержит полинуклеотид PIP-72Fl SEQ ID NO: 958, кодирующий полипептид PIP-72Fl SEQ ID NO: 936; штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Gg SEQ ID NO: 961, кодирующий полипептид PIP-72Gg SEQ ID NO: 939; штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Gh SEQ ID NO: 962, кодирующий полипептид PIP-72Gh SEQ ID NO: 940; штамм Pseudomonas mosselii, который содержит полинуклеотид PIP-72Gi SEQ ID NO: 963, кодирующий полипептид PIP-72Gi SEQ ID NO: 941; штамм Pseudomonas protegens, который содержит полинуклеотид PIP-72Gk SEQ ID NO: 965, кодирующий полипептид PIP-72Gk SEQ ID NO: 943; штамм Pseudomonas plecoglossicida, который содержит полинуклеотид PIP-72Gl SEQ ID NO: 966, кодирующий полипептид PIP-72Gl SEQ ID NO: 944; и штамм Pseudomonas chlororaphis, который содержит полинуклеотид PIP-72Gn SEQ ID NO: 968, кодирующий полипептид PIP-72Gn SEQ ID NO: 946. В некоторых вариантах осуществления инсектицидная активность представляет собой активность против западного кукурузного жука, Diabrotica virgifera virgifera.
- 38 031651
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 достаточно гомологичен аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10,
SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 927,
SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936,
SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946. Выражение достаточно гомологичный используется в данном документе для обозначения аминокислотой последовательности, которая по меньшей мере приблизительно на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% или более гомологична эталонной последовательности с применением одной из программ выравнивания, описанных в данном документе, с применением стандартных параметров. Специалисту в данной области будет понятно, что эти значения можно соответствующим образом скорректировать для определения соответствующей гомологии белков, принимая во внимание аминокислотное сходство и т.п. В некоторых вариантах осуществления гомологию последовательности определяют относительно последовательности полной длины полипептида PIP-72. В некоторых вариантах осуществления полипептиды PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% или более идентичны при сравнении с SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946. В некоторых вариантах осуществления идентичность последовательности определяют относительно последовательности полной длины полипептида PIP-72. В некоторых вариантах осуществления идентичность последовательностей рассчитывают с применением алгоритма ClustalW в модуле ALIGNX® пакета программ Vector NTI® Program Suite (Invitrogen Corporation, Карлсбад, Калифорния) со всеми параметрами по умолчанию. В некоторых вариантах осуществления идентичность последовательностей рассчитывают по всей длине полипептида с применением алгоритма ClustalW в модуле ALIGNX® пакета программ Vector NTI® Program Suite (Invitrogen Corporation, Карлсбад, Калифорния) со всеми параметрами по умолчанию.
Используемые в данном документе выражения белок, пептидная молекула или полипептид включают любую молекулу, которая содержит пять или более аминокислот. Из уровня техники хорошо известно, что белковые, пептидные или полипептидные молекулы могут быть подвержены модификации, в том числе посттрансляционным модификациям, таким как, без ограничения, образование дисульфидных связей, гликозилирование, фосфорилирование или олигомеризация. Таким образом, используемые в данном документе выражения белок, пептидная молекула или полипептид включают любой белок, который модифицирован посредством любого биологического или небиологического процесса. Выражения аминокислота и аминокислоты относятся к встречающимся в природе L-аминокислотам.
Выражение рекомбинантный белок используется в данном документе для обозначения белка, который более не находится в своей естественной среде, а например, in vitro или в рекомбинантной бактериальной или растительной клетке-хозяине. Полипептид PIP-72, фактически чистый от клеточного материала, включает препараты белка, имеющие менее приблизительно 30, 20, 10 или 5% (по сухому весу) белка, не относящегося к пестицидному (также называемого в данном документе загрязняющим белком).
Фрагменты или биологически активные части включают фрагменты полипептида, содержащие аминокислотные последовательности, достаточно идентичные полипептиду PIP-72 и которые проявляют инсектицидную активность. Фрагменты или биологически активные части полипептидов PIP-72 включают фрагменты, содержащие аминокислотные последовательности, достаточно идентичные аминокислотной последовательности, изложенной SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10,
SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, под любым из
SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 - SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771,
SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 852, любой из SEQ ID NO: 903 - SEQ ID NO: 914, SEQ ID NO: 927,
SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932 - SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939 - SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943 или SEQ ID NO: 946 соответственно. Биологически активная часть полипептида PIP-72 может представлять собой полипептид, который состоит, например, из 10, 25, 50, 55, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84 или 85 или более аминокислот в длину. Такие биологически активные части можно получать при помощи рекомбинантных методик и оценивать в отношении инсектицидной активности. Как используется в данном документе, фрагмент содержит по меньшей мере 8 смежных аминокислот полипептида PIP-72. В некоторых вариантах осуществления фрагмент полипептида PIP-72 содержит по меньшей мере 8 смежных аминокислот из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 852, любой из SEQ ID NO: 903
- 39 031651
SEQ ID NO: 914, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932 - SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939 SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943 - SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946. В некоторых вариантах осуществления фрагмент полипептида PIP-72 характеризуется N-концевым и/или C-концевым усечением по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или более аминокислот с N-конца и/или C-конца относительно SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528 -SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 - SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 852, любой из SEQ ID NO: 903 - SEQ ID NO: 914, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946, например, путем протеолиза, путем вставки старт-кодона, путем делеции кодонов, кодирующих удаляемые аминокислоты, и одновременной вставки старт-кодона и/или вставки стопкодона.
В некоторых вариантах осуществления фрагменты полипептида PIP-72, охваченные в данном документе, получены в результате удаления N-концевых 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 или более аминокислот относительно SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 - SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 852, любой из SEQ ID NO: 903 - SEQ ID NO: 914, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946, например, путем протеолиза или путем вставки старт-кодона, путем делеции кодонов, кодирующих удаляемые аминокислоты, и одновременной вставки старт-кодона.
В некоторых вариантах осуществления фрагменты полипептида PIP-72, охваченные в данном документе, получены в результате удаления N-концевых 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислот относительно SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8 или их вариантов, в том числе, без ограничения, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 - SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 852, любой из SEQ ID NO: 903 - SEQ ID NO: 914, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946.
В некоторых вариантах осуществления усечение составляет первые 4 аминокислоты SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32 или их вариантов, в том числе, без ограничения, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 - SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 852, любой из SEQ ID NO: 903 - SEQ ID NO: 914, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946.
Выражение варианты, как используется в данном документе, относится к белкам или полипептидам с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере приблизительно на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична исходной аминокислотной последовательности. Выражение приблизительно, используемое в данном документе в отношении % идентичности последовательности, означает значение вплоть до и включающее ±0,5% с шагом 0,1%. Например, приблизительно 90% идентичности последовательности включает 89,5, 89,6, 89,7, 89,8, 89,9, 90, 90,1, 90,2, 90,3, 90,4 и 90,5%.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине
- 40 031651 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99%или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99%или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99%или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99%или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 12.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99%или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 14.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 18.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 32.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 927.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 928.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 932.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 933.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 934.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 935.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 936.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 939.
- 41 031651
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 940.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 941.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 943.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 944.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 945.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 по меньшей мере приблизительно на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичен по всей длине аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 946.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 или SEQ ID NO: 14, где полипептид обладает инсектицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 или SEQ ID NO: 14, где полипептид обладает инсектицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, где полипептид обладает инсектицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4, где полипептид обладает инсектицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6, где полипептид обладает инсектицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8, где полипептид обладает инсектицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10, где полипептид обладает инсектицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 12, где полипептид обладает инсектицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 14, где полипептид обладает инсектицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления идентичность последовательностей рассчитывают по всей длине полипептида с применением алгоритма ClustalW в модуле ALIGNX® пакета программ Vector NTI® Program Suite (Invitrogen Corporation, Карлсбад, Калифорния) со всеми параметрами по умолчанию.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотный мотив, представленный аминокислотными остатками 37-51 из SEQ ID NO: 846, SEQ ID NO: 847, SEQ ID NO: 848 или SEQ ID NO: 849.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 с аминокислотной заменой по одному или нескольким остаткам, выбранным из
- 42 031651 остатков 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 56, 57, 58, 59, 60, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85 или 86 из SEQ ID NO: 2, в любой комбинации, и необязательно полипептид PIP-72 дополнительно содержит делецию 1-5 аминокислот, вставку 1-5 аминокислот, добавление одной или нескольких аминокислот на N-конце и/или добавление одной или нескольких аминокислот на С-конце относительно SEQ ID NO: 2 в любой комбинации.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 с аминокислотной заменой по одному или нескольким остаткам, выбранным из остатков 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 17, 18, 19, 20, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 56, 58, 60, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70,
71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85 или 86 из SEQ ID NO: 2, в любой комбинации, и необязательно полипептид PIP-72 дополнительно содержит делецию 1-5 аминокислот, вставку 1-5 аминокислот, добавление одной или нескольких аминокислот на N-конце или добавление одной или нескольких аминокислот на С-конце относительно SEQ ID NO: 2 в любой комбинации.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 с аминокислотной заменой по 1-45 остаткам, выбранным из остатков 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 56, 57, 58, 59, 60, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71,
72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85 и 86, из SEQ ID NO: 2, в любой комбинации, и необязательно полипептид PIP-72 дополнительно содержит делецию 1-5 аминокислот, вставку 1-5 аминокислот, добавление одной или нескольких аминокислот на N-конце и/или добавление одной или нескольких аминокислот на С-конце относительно SEQ ID NO: 2 в любой комбинации.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 с аминокислотной заменой относительно нативной аминокислоты из SEQ ID NO: 2 по 1-45 остаткам, выбранным из остатков 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 17, 18, 19, 20, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 56, 58, 60, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85 и 86, из SEQ ID NO: 2, в любой комбинации, и необязательно полипептид PIP-72 дополнительно содержит делецию 1-5 аминокислот, вставку 1-5 аминокислот, добавление одной или нескольких аминокислот на N-конце и/или добавление одной или нескольких аминокислот на С-конце относительно SEQ ID NO: 2 в любой комбинации.
В конкретных вариантах осуществления замена представляет собой замену аланином нативной аминокислоты в указанном(ых) положении(ях). Также охвачены последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие вариантный белок или полипептид.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 846, где
Xaa в положении 2 представляет собой Gly, Ala, Cys, Asp, Glu, Ile, Lys, Leu, Asn, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 3 представляет собой Ile или Trp;
Xaa в положении 4 представляет собой Thr, Ala, Asp, Glu, His, Ile, Lys, Leu, Arg, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 5 представляет собой Val, Ala, Cys, Gly, His, Ile или Tyr;
Xaa в положении 6 представляет собой Thr, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Trp или Tyr;
Xaa в положении 7 представляет собой Asn, Ala или Val;
Xaa в положении 8 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Gln, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 9 представляет собой Ser, Ala, Cys, Gly или Thr;
Xaa в положении 10 представляет собой Ser, Ala, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr или Trp;
Xaa в положении 11 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Gln, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 12 представляет собой Pro, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Lys, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 13 представляет собой Ile, Asn, Gln или Val;
Xaa в положении 14 представляет собой Glu, Ala, Cys, Phe, His, Lys или Gln;
Xaa в положении 15 представляет собой Val, Ala, Cys, Ile, Met или Arg;
Xaa в положении 17 представляет собой Ile, Glu или Val;
Xaa в положении 18 представляет собой Asn или Ser;
Xaa в положении 19 представляет собой His, Ala, Glu, Lys, Leu, Pro, Arg, Ser или Tyr;
Xaa в положении 20 представляет собой Trp, Ala или Thr;
Xaa в положении 22 представляет собой Ser, Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln,
- 43 031651
Arg, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 23 представляет собой Asp, Ala, Gly, His, Lys, Met, Asn, Gln, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 24 представляет собой Gly, Asp или Phe;
Xaa в положении 25 представляет собой Asp, Ala, Glu, Phe, Asn или Gln;
Xaa в положении 26 представляет собой Thr, Glu или Pro;
Xaa в положении 27 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Asn, Gln, Arg или Thr;
Xaa в положении 28 представляет собой Phe, Pro, Trp или Tyr;
Xaa в положении 29 представляет собой Phe, Ala, Cys, Ile, Leu, Gln, Arg, Trp или Tyr;
Xaa в положении 30 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 31 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 32 представляет собой Gly, Ala, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 33 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 34 представляет собой Gly, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Tyr;
Xaa в положении 35 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 36 представляет собой Gln, Ala, Cys, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 37 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 38 представляет собой Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 39 представляет собой Trp или Phe;
Xaa в положении 40 представляет собой Asp, Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 42 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 44 представляет собой Ser, Ala, Asp, Glu, Gly, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 45 представляет собой Arg, Lys или Ser;
Xaa в положении 46 представляет собой Gly, Ala или Gln;
Xaa в положении 47 представляет собой Phe, Cys, Val или Tyr;
Xaa в положении 48 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 49 представляет собой Leu, Cys, Phe, Met, Arg или Tyr;
Xaa в положении 50 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Ile, Met, Pro, Gln, Thr или Val;
Xaa в положении 51 представляет собой Leu, Ala, Cys, Met или Val;
Xaa в положении 52 представляет собой Lys, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Ser, Thr, Trp или Tyr;
Xaa в положении 53 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 54 представляет собой Asn, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Lys, Met, Gln, Arg, Ser или Trp;
Xaa в положении 56 представляет собой Ala, Gly, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser или Thr;
Xaa в положении 57 представляет собой Gln, Glu, Leu, Met, Ser или Thr;
Xaa в положении 58 представляет собой His, Ala, Asp, Phe, Leu, Met, Asn, Arg, Trp или Tyr;
Xaa в положении 60 представляет собой Tyr, Glu или Phe;
Xaa в положении 63 представляет собой Gln, Cys, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 64 представляет собой Ala, Phe, Gly, His, Arg, Ser или Tyr;
Xaa в положении 65 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Thr или Val;
Xaa в положении 66 представляет собой Ser, Ala или Gly;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 68 представляет собой Ile Asp, Leu или Val;
Xaa в положении 69 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 70 представляет собой Val, Cys или Ile;
Xaa в положении 71 представляет собой Asp, Ala, Cys, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 72 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser,
- 44 031651
Thr, Val или Trp;
Xaa в положении 73 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 74 представляет собой Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 75 представляет собой Val, Cys, Ile или Leu;
Xaa в положении 76 представляет собой Lys, Ala, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 77 представляет собой Asp Tyr;
Xaa в положении 78 представляет собой Gln, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 79 представляет собой Gly, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp или Tyr;
Xaa в положении 80 представляет собой Arg, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 81 представляет собой Leu, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 82 представляет собой Ile, Ala, Leu, Met, Arg или Val;
Xaa в положении 83 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 84 представляет собой Pro, Ala, Cys, Glu, Ile, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 85 представляет собой Leu, Cys, Gly или Val и
Xaa в положении 86 представляет собой Ser, Ala, Ile, Thr или Val, и где 1-14 аминокислот необязательно удалены с N-конца и/или C-конца полипептида PIP-72.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 846 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами, в любой комбинации, по остаткам, обозначенным Xaa, в SEQ ID NO: 846 по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 846 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 или 29 аминокислотными заменами, в любой комбинации, по остаткам, обозначенным Xaa, в SEQ ID NO: 846 по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 847, где
Xaa в положении 2 представляет собой Gly, Lys или Ala;
Xaa в положении 3 представляет собой Ile или Leu;
Xaa в положении 4 представляет собой Thr или Ser;
Xaa в положении 5 представляет собой Val или Ile;
Xaa в положении 6 представляет собой Thr или Lys;
Xaa в положении 8 представляет собой Asn, Lys, Gly или Ser;
Xaa в положении 9 представляет собой Ser или Ala;
Xaa в положении 11 представляет собой Asn, Lys, His или Thr;
Xaa в положении 12 представляет собой Pro, Thr, Lys или Ser;
Xaa в положении 13 представляет собой Ile или Val;
Xaa в положении 14 представляет собой Glu или Asp;
Xaa в положении 15 представляет собой Val, Ala или Ile;
Xaa в положении 16 представляет собой Ala или Ser;
Xaa в положении 17 представляет собой Ile или Val;
Xaa в положении 18 представляет собой Asn или Ser;
Xaa в положении 19 представляет собой His, Lys, Arg, Gln или Ala;
Xaa в положении 21 представляет собой Gly или Arg;
Xaa в положении 22 представляет собой Ser, Lys, Asn, Asp или Thr;
Xaa в положении 25 представляет собой Asp или Asn;
Xaa в положении 26 представляет собой Thr или Asp;
Xaa в положении 27 представляет собой Ser, Thr, Asn или Lys;
Xaa в положении 28 представляет собой Phe, Tyr или Pro;
Xaa в положении 29 представляет собой Phe или Tyr;
Xaa в положении 30 представляет собой Ser, Gly или Lys;
Xaa в положении 31 представляет собой Val, Ile или Met;
Xaa в положении 32 представляет собой Gly, Ala или Asp;
Xaa в положении 33 представляет собой Asn, Ser, Gln или Pro;
- 45 031651
Xaa в положении 35 представляет собой Lys, Glu или Ser;
Xaa в положении 36 представляет собой Gln, Asn или Ser;
Xaa в положении 37 представляет собой Glu или Asp;
Xaa в положении 38 представляет собой Thr или Ser;
Xaa в положении 42 представляет собой Ser или Asn;
Xaa в положении 44 представляет собой Ser, Asp, Ala или Leu;
Xaa в положении 47 представляет собой Phe или Tyr;
Xaa в положении 48 представляет собой Leu или Met;
Xaa в положении 49 представляет собой Leu или Met;
Xaa в положении 50 представляет собой Ser, Ala или Tyr;
Xaa в положении 51 представляет собой Leu или Val;
Xaa в положении 52 представляет собой Lys или Gln;
Xaa в положении 53 представляет собой Lys, Arg, Met или Leu;
Xaa в положении 54 представляет собой Asn, Lys или Gly;
Xaa в положении 55 представляет собой Gly или Ser;
Xaa в положении 56 представляет собой Ala, Thr, Gln или Ser;
Xaa в положении 57 представляет собой Gln, Val или Ala;
Xaa в положении 58 представляет собой His, Ala, Lys, Tyr или Thr;
Xaa в положении 59 представляет собой Pro или Thr;
Xaa в положении 62 представляет собой Val или Ile;
Xaa в положении 63 представляет собой Gln, Ser или Leu;
Xaa в положении 64 представляет собой Ala, Gln или Ser;
Xaa в положении 65 представляет собой Ser или Thr;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Gln, Arg или Asn;
Xaa в положении 69 представляет собой Glu, Lys или Val;
Xaa в положении 70 представляет собой Val или Ile;
Xaa в положении 71 представляет собой Asp, Glu или Tyr;
Xaa в положении 72 представляет собой Asn, His, Ser или Asp;
Xaa в положении 73 представляет собой Asn, Ser или Asp;
Xaa в положении 74 представляет собой Ala, Thr, Met, Ile или Lys;
Xaa в положении 76 представляет собой Lys или Thr;
Xaa в положении 78 представляет собой Gln, His или Ser;
Xaa в положении 80 представляет собой Arg, Glu или Gln;
Xaa в положении 81 представляет собой Leu, Pro, Ala или Thr;
Xaa в положении 82 представляет собой Ile или Leu;
Xaa в положении 83 представляет собой Glu, His, Asn, Gln или Leu;
Xaa в положении 85 представляет собой Leu, Val или Ala и
Xaa в положении 86 представляет собой Ser, Ala, Tyr или Asn, и где 1-14 аминокислот необязательно удалены с N-конца и/или C-конца полипептида PIP-72 и/или аминокислота вставлена между остатком 24 и 25 относительно SEQ ID NO: 847.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 847 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами, в любой комбинации, по остаткам, обозначенным Xaa, в SEQ ID NO: 847 по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 847 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 или 29 аминокислотными заменами, в любой комбинации, по остаткам, обозначенным Xaa, в SEQ ID NO: 847 по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 848, где
Xaa в положении 2 представляет собой Gly, Lys, Ala или Arg;
Xaa в положении 3 представляет собой Ile, Leu или Val;
Xaa в положении 4 представляет собой Thr или Ser;
Xaa в положении 5 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 6 представляет собой Thr, Lys, Ser или Arg;
Xaa в положении 8 представляет собой Asn, Lys, Gly, Ser, Gln, Arg, Thr или Ala;
Xaa в положении 9 представляет собой Ser, Ala или Thr;
Xaa в положении 11 представляет собой Asn, Lys, Thr, Gln, Arg, His или Ser;
Xaa в положении 12 представляет собой Pro, Thr, Lys, Ser или Arg;
Xaa в положении 13 представляет собой Ile, Val или Leu;
Xaa в положении 14 представляет собой Glu или Asp;
- 46 031651
Xaa в положении 15 представляет собой Val, Ala, Ile или Leu;
Xaa в положении 16 представляет собой Ala или Ser;
Xaa в положении 17 представляет собой Ile, Val или Leu;
Xaa в положении 18 представляет собой Asn, Ser, Gln или Thr;
Xaa в положении 19 представляет собой His, Lys, Ala, Gln, Asn или Arg;
Xaa в положении 21 представляет собой Gly, Arg или Lys;
Xaa в положении 22 представляет собой Ser, Lys, Asn, Thr, Arg, Asp, Glu или Gln;
Xaa в положении 25 представляет собой Asp, Asn, Glu или Gln;
Xaa в положении 26 представляет собой Thr, Asp, Ser или Glu;
Xaa в положении 27 представляет собой Ser, Thr, Lys, Asn, Gln или Arg;
Xaa в положении 28 представляет собой Phe, Tyr, Pro или Trp;
Xaa в положении 29 представляет собой Phe, Tyr или Trp;
Xaa в положении 30 представляет собой Ser, Gly, Lys, Thr или Arg;
Xaa в положении 31 представляет собой Val, Ile, Met или Leu;
Xaa в положении 32 представляет собой Gly, Ala, Asp или Glu;
Xaa в положении 33 представляет собой Asn, Ser, Gln, Pro или Thr;
Xaa в положении 35 представляет собой Lys, Glu, Ser, Arg или Thr;
Xaa в положении 36 представляет собой Gln, Ser, Asn или Thr;
Xaa в положении 37 представляет собой Glu или Asp;
Xaa в положении 38 представляет собой Thr или Ser;
Xaa в положении 42 представляет собой Ser, Asn, Thr или Gln;
Xaa в положении 44 представляет собой Ser, Asp, Ala, Leu, Thr, Glu, Ile или Val;
Xaa в положении 47 представляет собой Phe, Tyr или Trp;
Xaa в положении 48 представляет собой Leu, Met, Ile или Val;
Xaa в положении 49 представляет собой Leu, Met, Ile или Val;
Xaa в положении 50 представляет собой Ser, Ala, Tyr или Thr;
Xaa в положении 51 представляет собой Leu, Val или Ile;
Xaa в положении 52 представляет собой Lys, Gln, Arg или Asn;
Xaa в положении 53 представляет собой Lys, Arg, Met, Leu, Ile или Val;
Xaa в положении 54 представляет собой Asn, Lys, Gly, Gln или Arg;
Xaa в положении 55 представляет собой Gly, Ser или Thr;
Xaa в положении 56 представляет собой Ala, Thr, Gln, Ser или Asn;
Xaa в положении 57 представляет собой Gln, Val, Ala, Asn, Leu или Ile;
Xaa в положении 58 представляет собой His, Ala, Lys, Tyr или Thr;
Xaa в положении 59 представляет собой Pro, Thr или Ser;
Xaa в положении 62 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 63 представляет собой Gln, Ser, Leu, Asn, Thr, Ile или Val;
Xaa в положении 64 представляет собой Ala, Gln, Ser, Asn или Thr;
Xaa в положении 65 представляет собой Ser или Thr;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Gln, Asn или Arg;
Xaa в положении 69 представляет собой Glu, Val, Asp, Lys, Arg, Ile или Leu;
Xaa в положении 70 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 71 представляет собой Asp, Glu, Tyr или Trp;
Xaa в положении 72 представляет собой Asn, His, Ser, Asp, Gln, Thr или Glu;
Xaa в положении 73 представляет собой Asn, Ser, Asp, Gln, Thr или Glu;
Xaa в положении 74 представляет собой Ala, Thr, Met, Ile, Lys, Ser, Leu, Val или Arg;
Xaa в положении 76 представляет собой Lys, Thr, Arg или Ser;
Xaa в положении 78 представляет собой Gln, His, Ser, Asn или Thr;
Xaa в положении 80 представляет собой Arg, Glu, Gln, Lys, Asp или Asn;
Xaa в положении 81 представляет собой Leu, Pro, Thr, Ile, Val, Ala или Ser;
Xaa в положении 82 представляет собой Ile, Leu или Val;
Xaa в положении 83 представляет собой Glu, His, Asn, Leu, Gln, Ile или Val;
Xaa в положении 85 представляет собой Leu, Val или Ala и
Xaa в положении 86 представляет собой Ser, Ala, Tyr, Asn или Thr, и где 1-14 аминокислот необязательно удалены с N-конца и/или C-конца полипептида PIP-72 и/или аминокислота вставлена между остатком 24 и 25 относительно SEQ ID NO: 848.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 848 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами, в любой комбинации, по остаткам, обозначенным Xaa, в SEQ ID NO: 848 по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 2.
- 47 031651
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 848 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 или 29 аминокислотными заменами, в любой комбинации, по остаткам, обозначенным Xaa, в SEQ ID NO: 848 по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 849, где
Xaa в положении 2 представляет собой Gly, Ala, Cys, Asp, Glu, Ile, Lys, Leu, Asn, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 3 представляет собой Ile, Leu, Val или Trp;
Xaa в положении 4 представляет собой Thr, Ala, Asp, Glu, His, Ile, Lys, Leu, Arg, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 5 представляет собой Val, Ala, Cys, Gly, His, Ile, Leu или Tyr;
Xaa в положении 6 представляет собой Thr, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Trp или Tyr;
Xaa в положении 7 представляет собой Asn, Ala или Val;
Xaa в положении 8 представляет собой Asn, Lys, Gly, Ser, Gln, Arg, Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, His, Ile, Leu, Met или Val;
Xaa в положении 9 представляет собой Ser, Ala, Cys, Gly или Thr;
Xaa в положении 11 представляет собой Asn, Lys, Thr, Gln, Arg, Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Val или Tyr;
Xaa в положении 12 представляет собой Pro, Thr, Lys, Ser, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Leu, Asn, Gln, Arg, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 13 представляет собой Ile, Asn, Gln, Leu или Val;
Xaa в положении 14 представляет собой Glu, Ala, Cys, Phe, His, Lys, Asp или Gln;
Xaa в положении 15 представляет собой Val, Ala, Ile, Leu, Cys, Met или Arg;
Xaa в положении 16 представляет собой Ala или Ser;
Xaa в положении 17 представляет собой Ile, Glu, Leu или Val;
Xaa в положении 18 представляет собой Asn, Gln, Thr или Ser;
Xaa в положении 19 представляет собой His, Lys, Ala, Arg, Glu, Leu, Pro, Ser или Tyr;
Xaa в положении 20 представляет собой Trp, Ala или Thr;
Xaa в положении 21 представляет собой Gly, Arg или Lys;
Xaa в положении 22 представляет собой Ser, Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 23 представляет собой Asp, Ala, Gly, His, Lys, Met, Asn, Gln, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 24 представляет собой Gly, Asp или Phe;
Xaa в положении 25 представляет собой Asp, Ala, Glu, Phe, Asn или Gln;
Xaa в положении 26 представляет собой Thr, Glu, Asp, Ser или Pro;
Xaa в положении 27 представляет собой Ser, Thr, Lys, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Asn или Gln;
Xaa в положении 28 представляет собой Phe, Tyr, Pro или Trp;
Xaa в положении 29 представляет собой Phe, Ala, Cys, Ile, Leu, Gln, Arg, Trp или Tyr;
Xaa в положении 30 представляет собой Ser, Gly, Lys, Thr, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 31 представляет собой Val, Ile, Met или Leu;
Xaa в положении 32 представляет собой Gly, Ala, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 33 представляет собой Asn, Ser, Gln, Pro, Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Arg, Val или Tyr;
Xaa в положении 34 представляет собой Gly, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Tyr;
Xaa в положении 35 представляет собой Lys, Glu, Ala, Cys, Asp, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 36 представляет собой Gln, Ala, Cys, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 37 представляет собой Glu, Asp, Ala, Cys, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 38 представляет собой Thr, Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 39 представляет собой Trp или Phe;
Xaa в положении 40 представляет собой Asp, Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 42 представляет собой Ser, Asn, Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met,
- 48 031651
Arg, Val, Trp, Tyr или Gln;
Xaa в положении 44 представляет собой Ser, Asp, Ala, Leu, Thr, Glu, Ile, Ala, Gly, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Val, Tyr или Val;
Xaa в положении 45 представляет собой Arg, Lys или Ser;
Xaa в положении 46 представляет собой Gly, Ala или Gln;
Xaa в положении 47 представляет собой Phe, Tyr Cys, Val или Trp;
Xaa в положении 48 представляет собой Leu, Met, Ile, Cys, Phe, Met, Arg, Tyr или Val;
Xaa в положении 49 представляет собой Leu, Met, Ile или Val;
Xaa в положении 50 представляет собой Ser, Ala, Tyr, Cys, Asp, Ile, Met, Pro, Gln, Val или Thr;
Xaa в положении 51 представляет собой Leu, Val, Ala, Cys, Met или Ile;
Xaa в положении 52 представляет собой Lys, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Ser, Thr, Gln, Trp или Tyr;
Xaa в положении 53 представляет собой Lys, Arg, Met, Leu, Ile, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Asn, Gln, Ser, Thr, Tyr или Val;
Xaa в положении 54 представляет собой Asn, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Lys, Met, Gln, Arg, Ser или Trp;
Xaa в положении 55 представляет собой Gly, Ser или Thr;
Xaa в положении 56 представляет собой Ala, Thr, Gln, Ser, Gly, Leu, Pro, Arg или Asn;
Xaa в положении 57 представляет собой Gln, Glu, Leu, Met, Ser, Val, Ala, Asn, Ile или Thr;
Xaa в положении 58 представляет собой His, Ala, Lys, Asp, Phe, Leu, Met, Asn, Arg, Trp, Tyr или Thr;
Xaa в положении 59 представляет собой Pro, Thr или Ser;
Xaa в положении 60 представляет собой Tyr, Glu или Phe;
Xaa в положении 62 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 63 представляет собой Gln, Ser, Cys, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 64 представляет собой Ala, Gln, Asn, Phe, Gly, His, Arg, Ser или Tyr;
Xaa в положении 65 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Val или Thr;
Xaa в положении 66 представляет собой Ser, Ala или Gly;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Gln, Asn или Arg;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 68 представляет собой Ile Asp, Leu или Val;
Xaa в положении 69 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 70 представляет собой Val, Ile, Cys или Leu;
Xaa в положении 71 представляет собой Asp, Glu, Tyr, Ala, Cys, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Ser, Thr, Val или Trp;
Xaa в положении 72 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, His или Trp;
Xaa в положении 73 представляет собой Asn, Ser, Asp, Gln, Thr, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Val, Tyr или Glu;
Xaa в положении 74 представляет собой Ala, Thr, Met, Ile, Lys, Ser, Leu, Val, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Asn, Gln, Tyr или Arg;
Xaa в положении 75 представляет собой Val, Cys, Ile или Leu;
Xaa в положении 76 представляет собой Lys, Ala, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 77 представляет собой Asp Tyr;
Xaa в положении 78 представляет собой Gln, His, Ser, Asn, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Val, Tyr или Thr;
Xaa в положении 79 представляет собой Gly, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp или Tyr;
Xaa в положении 80 представляет собой Arg, Glu, Gln, Lys, Asp, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Ser, Thr, Val, Tyr или Asn;
Xaa в положении 81 представляет собой Leu, Pro, Thr, Ile, Val, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His или Ser;
Xaa в положении 82 представляет собой Ile, Ala, Leu, Met, Arg и Val;
Xaa в положении 83 представляет собой Glu, His, Asn, Leu, Gln, Ile, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, Lys, Pro, Arg, Ser, Thr, Tyr или Val;
Xaa в положении 84 представляет собой Pro, Ala, Cys, Glu, Ile, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 85 представляет собой Leu, Val, Cys, Gly или Ala и
Xaa в положении 86 представляет собой Ser, Ala, Tyr, Asn, Ile, Val или Thr, и где 1-14 аминокислот необязательно удалены с N-конца и/или C-конца полипептида PIP-72 и/или аминокислота вставлена между остатком 24 и 25 относительно SEQ ID NO: 849.
- 49 031651
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 849 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 аминокислотными заменами, в любой комбинации, по остаткам, обозначенным Xaa, в SEQ ID NO: 849 по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 849 с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 или 29 аминокислотными заменами, в любой комбинации, по остаткам, обозначенным Xaa, в SEQ ID NO: 849 по сравнению с нативной аминокислотой в соответствующем положении SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах осуществления иллюстративные полипептиды PIP-72 кодируются полинуклеотидной последовательностью, изложенной в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 31, в любой из SEQ ID NO: 287 - SEQ ID NO: 527, в любой из SEQ ID NO: 796 SEQ ID NO: 815, SEQ ID NO: 769, SEQ ID NO: 770, SEQ ID NO: 850, SEQ ID NO: 852, в любой из SEQ ID NO: 853 - SEQ ID NO: 864, в любой из SEQ ID NO: 915 - SEQ ID NO: 926, SEQ ID NO: 949, SEQ ID NO: 950, SEQ ID NO: 954, SEQ ID NO: 955, SEQ ID NO: 956, SEQ ID NO: 957, SEQ ID NO: 958, SEQ ID NO: 961, SEQ ID NO: 962, SEQ ID NO: 963, SEQ ID NO: 965, SEQ ID NO: 966, SEQ ID NO: 967 или SEQ ID NO: 968.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 кодируется полинуклеотидом SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 769, SEQ ID NO: 770, SEQ ID NO: 850, SEQ ID NO: 852, SEQ ID NO: 949, SEQ ID NO: 950, SEQ ID NO: 954, SEQ ID NO: 955, SEQ ID NO: 956, SEQ ID NO: 957, SEQ ID NO: 958, SEQ ID NO: 961, SEQ ID NO: 962, SEQ ID NO: 963, SEQ ID NO: 965, SEQ ID NO: 966, SEQ ID NO: 967 или SEQ ID NO: 968.
В некоторых вариантах осуществления иллюстративные полипептиды PIP-72 изложены SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO
530, SEQ ID NO 536, SEQ ID NO 542, SEQ ID NO 548, SEQ ID NO 554, SEQ ID NO 560, SEQ ID NO 566, SEQ ID NO 572, SEQ ID NO 578, SEQ ID NO 584, SEQ ID NO 590, SEQ ID NO 596, SEQ ID NO 602, SEQ ID NO 608, SEQ ID NO 614, SEQ ID NO 620, SEQ ID NO 626, SEQ ID NO 632, SEQ ID NO 638, SEQ ID NO 644, SEQ ID NO 650, SEQ ID NO 656, SEQ ID NO 662, SEQ ID NO 668, SEQ ID NO 674, SEQ ID NO 680, SEQ ID NO 686, SEQ ID NO 692, SEQ ID NO 698, SEQ ID NO 704, SEQ ID NO 710, SEQ ID NO 716, SEQ ID NO 722, SEQ ID NO 728, SEQ ID NO 734, SEQ ID NO
18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 528, SEQ ID NO 531, SEQ ID NO 537, SEQ ID NO 543, SEQ ID NO 549, SEQ ID NO 555, SEQ ID NO 561, SEQ ID NO 567, SEQ ID NO 573, SEQ ID NO 579, SEQ ID NO 585, SEQ ID NO 591, SEQ ID NO 597, SEQ ID NO 603, SEQ ID NO 609, SEQ ID NO 615, SEQ ID NO 621, SEQ ID NO 627, SEQ ID NO 633, SEQ ID NO 639, SEQ ID NO 645, SEQ ID NO 651, SEQ ID NO 657, SEQ ID NO 663, SEQ ID NO 669, SEQ ID NO 675, SEQ ID NO 681, SEQ ID NO 687, SEQ ID NO 693, SEQ ID NO 699, SEQ ID NO 705, SEQ ID NO 711, SEQ ID NO 717, SEQ ID NO 723, SEQ ID NO 729, SEQ ID NO 735, SEQ ID NO
532, SEQ ID NO 538, SEQ ID NO 544, SEQ ID NO 550, SEQ ID NO 556, SEQ ID NO 562, SEQ ID NO 568, SEQ ID NO 574, SEQ ID NO 580, SEQ ID NO 586, SEQ ID NO 592, SEQ ID NO 598, SEQ ID NO 604, SEQ ID NO 610, SEQ ID NO 616, SEQ ID NO 622, SEQ ID NO 628, SEQ ID NO 634, SEQ ID NO 640, SEQ ID NO 646, SEQ ID NO 652, SEQ ID NO 658, SEQ ID NO 664, SEQ ID NO 670, SEQ ID NO 676, SEQ ID NO 682, SEQ ID NO 688, SEQ ID NO 694, SEQ ID NO 700, SEQ ID NO 706, SEQ ID NO 712, SEQ ID NO 718, SEQ ID NO 724, SEQ ID NO 730, SEQ ID NO 736, SEQ ID NO
533, SEQ ID NO 539, SEQ ID NO 545, SEQ ID NO 551, SEQ ID NO 557, SEQ ID NO 563, SEQ ID NO 569, SEQ ID NO 575, SEQ ID NO 581, SEQ ID NO 587, SEQ ID NO 593, SEQ ID NO 599, SEQ ID NO 605, SEQ ID NO 611, SEQ ID NO 617, SEQ ID NO 623, SEQ ID NO 629, SEQ ID NO 635, SEQ ID NO 641, SEQ ID NO 647, SEQ ID NO 653, SEQ ID NO 659, SEQ ID NO 665, SEQ ID NO 671, SEQ ID NO 677, SEQ ID NO 683, SEQ ID NO 689, SEQ ID NO 695, SEQ ID NO 701, SEQ ID NO 707, SEQ ID NO 713, SEQ ID NO 719, SEQ ID NO 725, SEQ ID NO 731, SEQ ID NO 737, SEQ ID NO
534, SEQ ID NO 540, SEQ ID NO 546, SEQ ID NO 552, SEQ ID NO 558, SEQ ID NO 564, SEQ ID NO 570, SEQ ID NO 576, SEQ ID NO 582, SEQ ID NO 588, SEQ ID NO 594, SEQ ID NO 600, SEQ ID NO 606, SEQ ID NO 612, SEQ ID NO 618, SEQ ID NO 624, SEQ ID NO 630, SEQ ID NO 636, SEQ ID NO 642, SEQ ID NO 648, SEQ ID NO 654, SEQ ID NO 660, SEQ ID NO 666, SEQ ID NO 672, SEQ ID NO 678, SEQ ID NO 684, SEQ ID NO 690, SEQ ID NO 696, SEQ ID NO 702, SEQ ID NO 708, SEQ ID NO 714, SEQ ID NO 720, SEQ ID NO 726, SEQ ID NO 732, SEQ ID NO 738, SEQ ID NO
529,
535,
541,
547,
553,
559,
565,
571,
577,
583,
589,
595,
601,
607,
613,
619,
625,
631,
637,
643,
649,
655,
661,
667,
673,
679,
685,
691,
697,
703,
709,
715,
721,
727,
733,
739,
- 50 031651
SEQ ID NO: 740, SEQ ID NO: 741, SEQ ID NO: 742, SEQ ID NO: 743, SEQ ID NO: 744, SEQ ID NO: 745,
SEQ ID NO: 746, SEQ ID NO: 747, SEQ ID NO: 748, SEQ ID NO: 749, SEQ ID NO: 750, SEQ ID NO: 751,
SEQ ID NO: 752, SEQ ID NO: 753, SEQ ID NO: 754, SEQ ID NO: 755, SEQ ID NO: 756, SEQ ID NO: 757,
SEQ ID NO: 758, SEQ ID NO: 759, SEQ ID NO: 760, SEQ ID NO: 761, SEQ ID NO: 762, SEQ ID NO: 763,
SEQ ID NO: 764, SEQ ID NO: 765, SEQ ID NO: 766, SEQ ID NO: 767, SEQ ID NO: 768, SEQ ID NO: 771,
SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 825, SEQ ID NO: 826, SEQ ID NO: 827, SEQ ID NO: 828, SEQ ID NO: 829,
SEQ ID NO: 830, SEQ ID NO: 831, SEQ ID NO: 832, SEQ ID NO: 833, SEQ ID NO: 834, SEQ ID NO: 835,
SEQ ID NO: 836, SEQ ID NO: 837, SEQ ID NO: 838, SEQ ID NO: 839, SEQ ID NO: 840, SEQ ID NO: 841,
SEQ ID NO: 842, SEQ ID NO: 843, SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 852, SEQ ID NO: 853, SEQ ID NO: 854,
SEQ ID NO: 855, SEQ ID NO: 856, SEQ ID NO: 857, SEQ ID NO: 858, SEQ ID NO: 859, SEQ ID NO: 860,
SEQ ID NO: 861, SEQ ID NO: 862, SEQ ID NO: 863, SEQ ID NO: 864, SEQ ID NO: 903, SEQ ID NO: 904,
SEQ ID NO: 905, SEQ ID NO: 906, SEQ ID NO: 907, SEQ ID NO: 908, SEQ ID NO: 909, SEQ ID NO: 910,
SEQ ID NO: 911, SEQ ID NO: 912, SEQ ID NO: 913, SEQ ID NO: 914, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928,
SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939,
SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 и SEQ ID NO: 946.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14; SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946.
В некоторых вариантах осуществления иллюстративные полипептиды PIP-72 представляют собой полипептиды, представленные в табл. 14, 17, 20, 23, 24, 26, 28 и/или. 29, и любые комбинации их аминокислотных замен, а также делеций и/или вставок и их фрагменты.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 характеризуется расчетным молекулярным весом от приблизительно 6 до приблизительно 13 кДа, от приблизительно 7 до приблизительно 12 кДа, от приблизительно 8 до приблизительно 11 кДа, от приблизительно 9 до приблизительно 10 кДа, приблизительно 8,75 кДа, приблизительно 9 кДа, приблизительно 9,25 кДа, приблизительно 9,5 кДа, приблизительно 9,75 кДа, приблизительно 10 кДа, приблизительно 10,25 кДа и приблизительно 10,5 кДа. Как используется в данном документе, выражение приблизительно, используемое в контексте молекулярного веса полипептида PIP-72, обозначает ±0,25 кДа.
В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 характеризуется модифицированным физическим свойством. Как используется в данном документе, выражение физическое свойство относится к любому параметру, который подходит для описания физико-химических характеристик белка. Как используется в данном документе, выражения физическое свойство, представляющее интерес и свойство, представляющее интерес используются взаимозаменяемо для обозначения физических свойств белков, подлежащих исследованию и/или модификации. Примеры физических свойств включают, без ограничения, суммарный поверхностный заряд и распределение зарядов на поверхности белка, суммарную гидрофобность и распределение гидрофобных остатков на поверхности белка, плотность поверхностного заряда, плотность гидрофобности поверхности, общее число поверхностных ионизируемых групп, поверхностное натяжение, размер белка и его распределение в растворе, температуру плавления, теплоемкость и второй вириальный коэффициент. Примеры физических свойств также включают, без ограничения, растворимость, фолдинг, стабильность и усвояемость. В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 характеризуется повышенной перевариваемостью фрагментов, полученных в результате протеолитического расщепления, в кишечнике насекомого. Модели для переваривания при помощи искусственного желудочного сока известны специалисту в данной области (Fuchs, R.L. and Astwood J.D., Food Technology, 50:83-88, 1996; Astwood, J.D., et al. Nature Biotechnology, 14:1269-1273, 1996; Fu T.J. et al. J. Agric. Food. Chem. 50:7154-7160, 2002).
В некоторых вариантах осуществления варианты включают полипептиды, которые отличаются по аминокислотной последовательности вследствие мутагенеза. Вариантные белки, охваченные настоящим раскрытием, являются биологически активными, т.е. они продолжают обладать требуемой биологической активностью (т.е. пестицидной активностью) нативного белка. В некоторых вариантах осуществления вариант будет обладать по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80% или более инсектицидной активности нативного белка. В некоторых вариантах осуществления варианты могут обладать повышенной активностью по сравнению с нативным белком.
Бактериальные гены довольно часто имеют несколько метиониновых инициаторных кодонов вблизи стартового сайта открытой рамки считывания. Зачастую, инициация трансляции по одному или нескольким из этих старт-кодонов будет приводить к образованию функционального белка. Эти старткодоны могут включать кодоны ATG. Однако бактерии, такие как Bacillus sp., также распознают кодон GTG в качестве старт-кодона, и белки, трансляция которых инициируется по кодонам GTG, в качестве первой аминокислоты содержат метионин. В редких случаях, трансляция в бактериальных системах мо
- 51 031651 жет инициироваться по кодону TTG, хотя в этом случае TTG кодирует метионин. Кроме того, зачастую a priori не определяют, какой из этих кодонов естественным образом используется в бактерии. Таким образом, понятно, что применение одного из переменных метиониновых кодонов может также приводить к образованию пестицидных белков. Эти пестицидные белки охватываются настоящим раскрытием и могут применяться в способах согласно настоящему раскрытию. Будет понятно, что при экспрессии в растениях будет необходимо изменить переменный старт-кодон на ATG для полноценной трансляции.
В другом аспекте полипептид PIP-72 может экспрессироваться в виде белка-предшественника с вставочной последовательностью, которая катализирует многостадийный, посттрансляционный сплайсинг белка. Сплайсинг белка включает вырезание вставочной последовательности из полипептида с одновременным соединением фланкирующих последовательностей с получением нового полипептида (Chong, et al., (1996), J. Biol. Chem., 271:22159-22168). Эта вставочная последовательность или элемент сплайсинга белка, именуемые интеинами, которые катализируют свое собственное вырезание посредством трех согласованных реакций на N-концевой и C-концевой границах сплайсинга: ацильную перестройку N-концевого цистеина или серина; реакцию переэтерификации между двумя концами с образованием разветвленного сложноэфирного или тиоэфирного промежуточного соединения и расщепление пептидной связи, сопряженное с образованием кольца C-концевым аспарагином интеина с высвобождением интеина (Evans, et al., (2000), J. Biol. Chem., 275:9091-9094. Выяснение механизма сплайсинга белка привело к возникновению ряда применений, связанных с интеинами (Comb et al., патент США № 5496714; Comb et al., патент США № 5834247; Camarero and Muir, (1999), J. Amer. Chem. Soc. 121:5597-5598; Chong, et al., (1997), Gene 192:271-281, Chong, et al., (1998), Nucleic Acids Res. 26:51095115; Chong, et al., (1998), J. Biol. Chem. 273:10567-10577; Cotton, et al., (1999), J. Am. Chem. Soc. 121:1100-1101; Evans, et al., (1999), J. Biol. Chem. 274:18359-18363; Evans, et al., (1999), J. Biol. Chem. 274:3923-3926; Evans, et al., (1998), Protein Sci. 7:2256-2264; Evans, et al., (2000), J. Biol. Chem. 275:90919094; Iwai and Pluckthun, (1999), FEBS Lett. 459:166-172; Mathys, et al., (1999), Gene 231:1-13; Mills, et al., (1998), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95:3543-3548; Muir, et al., (1998), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95:67056710; Otomo, et al., (1999), Biochemistry, 38:16040-16044; Otomo, et al., (1999), J. Biolmol. NMR 14:105114; Scott, et al., (1999), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96:13638-13643; Severinov and Muir, (1998), J. Biol. Chem. 273:16205-16209; Shingledecker, et al., (1998), Gene, 207:187-195; Southworth, et al., (1998), EMBO, J. 17:918-926; Southworth, et al., (1999), Biotechniques, 27:110-120; Wood, et al., (1999), Nat. Biotechnol. 17:889-892; Wu, et al., (1998a), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95:9226-9231; Wu, et al., (1998b), Biochim Biophys Ada, 1387:422-432; Xu, et al., (1999), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96:388-393; Yamazaki, et al., (1998) J. Am. Chem. Soc, 120:5591-5592). Относительно применения интеинов в растительных трансгенах, см. Yang, et al., (Transgene Res 15:583-593 (2006)) и Evans, et al., (Annu. Rev. Plant Biol. 56:375-392 (2005)).
В другом аспекте полипептид PIP-72 может кодироваться двумя отдельными генами, при этом интеин белка-предшественника берет начало от двух генов, он называется сплит-интеин, и две части предшественника соединяются при образовании пептидной связи. Это образование пептидной связи осуществляется при помощи транс-сплайсинга, опосредованного интеином. Для этой цели первая и вторая кассеты экспрессии, содержащие два отдельных гена, дополнительно кодируют интеины, способные опосредовать транс-сплайсинг белков. При помощи транс-сплайсинга белки и полипептиды, кодируемые первым и вторым фрагментами, могут быть связаны посредством образования пептидной связи. Интеины для транс-сплайсинга можно выбирать из ядерного генома или генома органелл различных организмов, в том числе эукариот, архебактерий и эубактерий. Интеины, которые можно применять, перечислены на сайте neb.com/neb/inteins.html, доступ к которому можно получить во всемирной сети Интернет с применением префикса www). Нуклеотидную последовательность, кодирующую интеин, можно расщеплять на 5'- и 3'-часть, которые кодируют 5'- и 3'-часть интеина соответственно. Части последовательности, которые не являются необходимыми для интеин-сплайсинга (например, домен хомингэндонуклеазы), могут быть удалены. Интеин-кодирующая последовательность расщепляется, так что 5'и 3'-части способны к транс-сплайсингу. Для выбора подходящего сайта расщепления интеинкодирующей последовательности можно следовать рекомендациям, опубликованным Southworth, et al., (1998), EMBO J. 17:918-926. При конструировании первой и второй кассеты экспрессии 5' интеинкодирующую последовательность соединяют с 3'-концом первого фрагмента, кодирующего N-концевую часть полипептида PIP-72, а 3' интеин-кодирующую последовательность соединяют с 5'-концом второго фрагмента, кодирующего C-концевую часть полипептида PIP-72.
В целом, партнеров для транс-сплайсинга можно конструировать с применением любого сплитинтеина, в том числе любых встречающихся в природе или искусственно расщепленных сплит-интеинов. Известны несколько встречающихся в природе сплит-интеинов, например: сплит-интеин гена DnaE PCC6803 Synechocystis sp. (см. Wu, et al., (1998), Proc Natl Acad Sci uSa, 95(16):9226-31 и Evans, et al., (2000), J Biol Chem. 275(13):9091-4 и гена DnaE Nostoc punctiforme (см., Iwai, et al., (2006), FEBS Lett. 580(7):1853-8). Интеины, не относящиеся к сплит-интеинам, были искусственно расщеплены в лаборатории с созданием новых сплит-интеинов, например искусственно расщепленный интеин Ssp DnaB (см. Wu, et al., (1998), Biochim Biophys Ada. 1387:422-32), расщепленный интеин Sce VMA (см. Brenzel, et al., (2006), Biochemistry. 45(6):1571-8) и искусственно расщепленный мини-интеин грибкового происхожде
- 52 031651 ния (см. Elleuche, et al., (2007), Biochem Biophys Res Commun. 355(3):830-4). Также доступны базы данных по интеинам, в которых перечислены известные интеины (см., например, базу данных, доступную в режиме реального времени на сайте bioinformatics.weizmann.ac.il/~pietro/inteins/lnteinstable.html, доступ к которому можно получить во всемирной сети Интернет с применением префикса www).
Встречающиеся в природе интеины, не относящиеся к сплит-интеинам, могут обладать эндонуклеазной или другой ферментативной активностью, которую, как правило, можно устранять при конструировании искусственно расщепленного сплит-интеина. Такие мини-интеины или минимизированные сплит-интеины хорошо известны из уровня техники, и, как правило, они состоят из менее 200 аминокислотных остатков (см. Wu, et al., (1998), Biochim Biophys Acta. 1387:422-32). Подходящие сплит-интеины могут иметь другие предусматривающие очистку полипептидные элементы, добавляемые к их структуре, при условии, что такие элементы не ингибируют сплайсинг сплит-интеина, или их добавляют таким способом, позволяющим им быть удаленными перед сплайсингом. Сообщалось о сплайсинге белка с применением белков, которые включают бактериальные интеин-подобные (BIL) домены (см. Amitai, et al., (2003), Mol. Microbiol. 47:61-73) и самопроцессирующиеся домены hedgehog (Hog) (последние вместе с интеинами называют суперсемейством Hog/интеин или семейством HINT (см. Dassa, et al., (2004), J. Biol. Chem. 279:32001-7), и такие домены, которые можно также применять для получения искусственно расщепленных интеинов. В частности, не подвергающихся сплайсингу представителей таких семейств можно модифицировать при помощи методик молекулярной биологии для введения или восстановления активности сплайсинга в таких родственных разновидностях. Последние исследования показывают, что сплайсинг можно наблюдать, когда обеспечивают реакцию N-концевого компонента сплит-интеина с Cконцевым компонентом сплит-интеина, при этом в естественных условиях он не является его партнером; например, сплайсинг наблюдали при использовании партнеров, которые всего на 30-50% гомологичны естественному сплайсинг-партнеру (см. Dassa, et al., (2007), Biochemistry. 46(1):322-30). Было показано, что другие такие смеси несовместимых партнеров сплит-интеинов не реагируют друг с другом (см. Brenzel, et al., (2006), Biochemistry. 45(6):1571-8). Однако специалист в соответствующей области техники может определять, может ли конкретная пара полипептидов связываться друг с другом с обеспечением функционального интеина, с применением стандартных способов и без использования изобретательских навыков.
В другом аспекте полипептид PIP-72 представляет собой вариант с круговыми перестановками. В определенных вариантах осуществления полипептид PIP-72 представляет собой вариант с круговыми перестановками полипептида SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, с любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 - SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 852, любой из SEQ ID NO: 903 - SEQ ID NO: 914, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946.
Разработка способов с применением рекомбинантной ДНК обеспечила возможность исследовать эффекты транспозиции последовательностей на фолдинг, структуру и функцию белка. Подход, применяемый при создании новых последовательностей, походит на ситуацию, что происходит среди встречающихся в природе пар белков, которые связываются посредством линейной реорганизации их аминокислотных последовательностей (Cunningham, et al., (1979), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 76:3218-3222; Teather and Erfle, (1990), J. Bacteriol. 172:3837-3841; Schimming, et al., (1992), Eur. J. Biochem. 204:13-19; Yamiuchi and Minamikawa, (1991), FEBS Lett. 260:127-130; MacGregor, et al., (1996), FEBS Lett. 378:263266). Первое in vitro применение данного типа перестановки у белков описали Goldenberg and Creighton (J. Mol. Biol. 165:407-413, 1983). При создании варианта с круговыми перестановками новый N-конец выбирают во внутреннем сайте (точечный разрыв) оригинальной последовательности, при этом новая последовательность имеет такой же порядок аминокислот как и оригинальная, начиная от точечного разрыва до тех пор, пока она не достигает аминокислоты, которая находится в оригинальном C-конце или вблизи него. В этой точке новая последовательность соединяется либо напрямую, либо через дополнительную часть последовательности (линкер) с аминокислотой, которая находится на оригинальном N-конце или вблизи него, и новая последовательность продолжается с такой же последовательностью, что и оригинальная до тех пор, пока она не достигнет точки, которая находится в месте аминокислоты, которая была N-концевой по отношению к сайту точечного разрыва, или вблизи него, причем этот остаток образует новый C-конец цепи. Длину аминокислотной последовательности линкера можно выбирать эмпирически, или исходя из информации о структуре, или путем применения комбинации двух этих подходов. Если информация о структуре является недоступной, можно получить небольшие серии линкеров для тестирования с применением конструкции, длина которой варьирует для охвата диапазона от 0 до 50 А, и последовательность которой выбрана таким образом, чтобы соответствовать доступности поверхностных групп (гидрофильность, Hopp and Woods, (1983), Mol. Immunol. 20:483-489; Kyte and Doolittle, (1982), J. Mol. Biol. 157:105-132; площади поверхности, доступной воздействию растворителя, Lee and Richards, (1971), J. Mol. Biol. 55:379-400) и способности принимать необходимую конформацию
- 53 031651 без нарушения конфигурации пестицидного полипептида (конформационно подвижного; Karplus and Schulz, (1985), Naturwissenschaften 72:212-213). При условии, что при трансляции средняя длина остатка составляет 2,0-3,8 А, это будет означать, что длина, подлежащая тестированию, будет составлять от 0 до 30 остатков, при этом предпочтительным диапазоном является 0-15 остатков. Примером такой эмпирической серии будет конструирование линкеров с применением кассетной последовательности, такой как Gly-Gly-Gly-Ser, повторяемой n раз, где n равно 1, 2, 3 или 4. Специалистам в данной области техники будет понятно, что существует множество таких последовательностей, варьирующих в длину или по составу, которые могут служить в качестве линкеров с таким основным соображением, что они не являются ни чрезмерно длинными, ни чрезмерно короткими (см. также, Sandhu, (1992) Critical Rev. Biotech. 12:437-462); причем, если они являются слишком длинными, энтропийные эффекты, вероятно, будут дестабилизировать трехмерную укладку и также могут делать фолдинг кинетически невыполнимым, а если они являются слишком короткими, они, вероятно, будут дестабилизировать молекулу вследствие скручивающей или стерической деформации. Специалистам, разбирающимся в анализе информации о структуре белка, будет понятно, что расстояние между концами цепей, определяемое как расстояние между с-альфа атомами углерода, можно применять для определения длины применяемой последовательности или, по меньшей мере, для ограничения числа возможностей, которые требуется протестировать при эмпирическом отборе линкеров. Они также будут понимать, что иногда встречается случай, когда положения концов полипептидной цепи являются нечеткими в структурных моделях, полученных с помощью данных рентгеноструктурного анализа или ядерной магнитно-резонансной спектроскопии, и в случае такой ситуации, следовательно, ее необходимо принимать во внимание для правильной оценки длины требуемого линкера. На основании остатков, положение которых четко определено, выбирают два остатка, которые близки по последовательности к концам цепи, и расстояние между их с-альфа атомами углерода применяют для расчета приблизительной длины линкера между ними. С применением расчетной длины в качестве предварительных данных, далее выбирают линкеры в пределах диапазона количества остатков (из расчета длины остатка 2-3,8 А). Эти линкеры можно составлять из оригинальной последовательности, укороченной или удлиненной, в случае необходимости, и в случае удлинения можно выбирать дополнительные остатки, которые являются гибкими и гидрофильными, как описано выше; или, необязательно, оригинальная последовательность может быть замещена с применением серии линкеров, причем одним примером является подход с применением кассеты Gly-Gly-Gly-Ser, упомянутой выше; или, необязательно, можно применять комбинацию оригинальной последовательности и новой последовательности, имеющей подходящую общую длину. Последовательности пестицидных полипептидов, способных к фолдингу с образованием биологически активных состояний, можно получать путем соответствующего выбора начальных (аминоконец) и концевых (карбоксильный конец) положений внутри оригинальной полипептидной цепи, при этом с применением линкерной последовательности, как описано выше. Амино- и карбоксильные концы выбирают из общего отрезка последовательности, называемого участком точечного разрыва, с применением рекомендаций, описанных ниже. Новую аминокислотную последовательность, таким образом, получают путем выбора амино- и карбоксильных концов из такого же участка точечного разрыва. Во многих случаях выбор новых концов будет таким, что оригинальное положение карбоксильного конца непосредственно предшествует положению аминоконца. Однако специалистам в данной области техники будет понятно, что выбор концов в каком-либо месте в пределах участка может оказывать действие, и что он, фактически, будет приводить либо к делециям, либо к добавлениям к амино- или карбоксильным частям новой последовательности. Основным положением молекулярной биологии является то, что первичная аминокислотная последовательность белка обуславливает фолдинг в трехмерную структуру, необходимую для проявления его биологической функции. Специалистам в данной области техники известны способы получения и интерпретации информации о трехмерной структуре с применением рентгеноструктурного анализа одиночных кристаллов белка или ядерной магнитно-резонансной спектроскопии растворов белка. Примеры информации о структуре, которая подходит для идентификации участков точечного разрыва, включают расположение и тип вторичной структуры белка (альфа и 3-10 спирали, параллельные и антипараллельные бета-слои, обращения или повороты цепи и петли; Kabsch and Sander, (1983), Biopolymers, 22:2577-2637; степень доступности для растворителя аминокислотных остатков, масштаб и тип взаимодействий остатков друг с другом (Chothia, (1984), Ann. Rev. Biochem. 53:537-572) и статическое и динамическое распределение конформаций на протяжении полипептидной цепи (Alber and Mathews, (1987), Methods Enzymol. 154:511533). В некоторых случаях известна дополнительная информация о доступности остатков для растворителя; причем одним примером является сайт посттрансляционного присоединения углеводов, который обязательно находится на поверхности белка. Если экспериментальная информация о структуре не доступна или ее невозможно получить, также доступны способы для анализа первичной аминокислотной последовательности с тем, чтобы делать прогнозы о третичной и вторичной структуре белка, доступности для растворителя и наличия поворотов и петель. Для эмпирического определения доступности поверхностных групп также иногда применимы биохимические способы, если прямые способы определения структуры невозможны; например, применение идентификации сайтов деполимеризации после ограниченного протеолиза для того, чтобы делать заключение о доступности поверхностных групп (Gentile
- 54 031651 and Salvatore, (1993),. Eur. J. Biochem. 218:603-621). Таким образом, путем применения либо информации о структуре, полученной экспериментальным путем, либо прогностических способов (например, Srinivisan and Rose, (1995), Proteins: Struct., Funct. & Genetics 22:81-99) проводят исследование исходной аминокислотной последовательности для классификации участков в отношении того, важны ли они для поддержания вторичной и третичной структуры. Наличия последовательностей в участках, которые, как известно, вовлечены в периодическую вторичную структуру (альфа и 3-10 спирали, параллельные и антипараллельные бета-слои), следует избегать. Аналогично, участки аминокислотной последовательности, которые, как наблюдается или прогнозируется, обладают низкой степенью доступности для действия растворителя, наиболее вероятно, являются частью так называемого гидрофобного ядра белка, и их следует также избегать при выборе амино- или карбоксильных концов. В отличие от этого, участки, которые, как известно или прогнозируется, находятся в поверхностных поворотах или петлях, и, в частности, участки, о которых известно, что они не требуются для биологической активности, являются предпочтительными сайтами для расположения противоположных концов полипептидной цепи. Предпочтительные непрерывные участки аминокислотной последовательности, основанные на вышеприведенных критериях, называют участком точечного разрыва. Полинуклеотиды, кодирующие полипептиды PIP-72 с круговыми перестановками с новым N-концом/С-концом, которые содержат линкерный участок, отделяющий оригинальный С-конец и N-конец, фактически, можно создавать по способу, описанному в Mullins, et al., (1994), J. Am. Chem. Soc. 116:5529-5533. Несколько стадий амплификации посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР) применяют для перестройки последовательности ДНК, кодирующей первичную аминокислотную последовательность белка. Полинуклеотиды, кодирующие полипептиды PIP-72 с круговыми перестановками с новым N-концом/С-концом, которые содержат линкерный участок, отделяющий оригинальный С-конец и N-конец, можно создавать на основе способа тандемных повторов, описанного в Horlick, et al., (1992), Protein Eng. 5:427-431. Амплификацию новых генов N-конца/С-конца посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР) проводят с применением ДНК-матрицы с тандемными повторами.
В другом аспекте представлены белки слияния, в аминокислотную последовательность которых включена аминокислотная последовательность, содержащая полипептид PIP-72, в том числе, без ограничения, полипептид SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 - SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 846, SEQ ID NO: 847, SEQ ID NO: 848, SEQ ID NO: 849, SEQ ID NO: 852, любой из SEQ ID NO: 903 - SEQ ID NO: 914, любой из SEQ ID NO: 927 - SEQ ID NO: 948 и его активные фрагменты.
Способы разработки и конструирования белков слияния (и кодирующих их полинуклеотидов) известны специалистам в данной области техники. Полинуклеотиды, кодирующие полипептид PIP-72, могут быть слиты с сигнальными последовательностями, которые будут управлять локализацией полипептида PIP-72 в конкретных компартментах прокариотической или эукариотической клетки и/или управлять секрецией полипептида PIP-72 согласно вариантам осуществления из прокариотической или эукариотической клетки. Например, в E. coli, может потребоваться направить экспрессию белка в периплазматическое пространство. Примеры сигнальных последовательностей или белков (или их фрагментов), с которыми можно сливать полипептид PIP-72 с тем, чтобы направлять экспрессию полипептида в периплазматическое пространство бактерий, включают, без ограничения, сигнальную последовательность pelB, сигнальную последовательность белка, связывающего мальтозу (MBP), MBP, сигнальную последовательность ompA, сигнальную последовательность B-субъединицы периплазматического неустойчивого к нагреванию энтеротоксина E. coli и сигнальную последовательность щелочной фосфатазы. Для конструирования белков слияния коммерчески доступны несколько векторов, которые будут управлять локализацией белка, такие как серия векторов pMAL (в частности, серия pMAL-p), доступная от New England Biolabs® (County Road, 240, Ипсуич, Массачусетс, 01938-2723). В конкретном варианте осуществления полипептид PIP-72 можно сливать с сигнальной последовательностью пектатлиазы pelB для повышения эффективности экспрессии и очистки таких полипептидов грамотрицательных бактерий (см. патенты США № 5576195 и 5846818). Слияния пластидный транзитный пептид растения/полипептид хорошо известны из уровня техники (см. патент США № 7193133). Апопластные транзитные пептиды, такие как сигнальная последовательность для секреции альфа-амилазы риса или ячменя, также хорошо известны из уровня техники. Пластидный транзитный пептид, как правило, сливают со стороны N-конца с полипептидом, подлежащим нацеливанию (например, партнер слияния). В одном варианте осуществления белок слияния состоит, фактически, из пластидного транзитного пептида и полипептида PIP-72, подлежащего нацеливанию. В другом варианте осуществления белок слияния состоит из пластидного транзитного пептида и полипептида, подлежащего нацеливанию. В таких вариантах осуществления пластидный транзитный пептид, предпочтительно, находится на N-конце белка слияния. Однако дополнительные аминокислотные остатки могут находиться на N-конце относительно пластидного транзитного пептида при условии, что белок слияния, по меньшей мере частично, нацеливается на пластиду. В конкретном варианте осуществления пластидный транзитный пептид находится на N-концевой половине,
- 55 031651
N-концевой трети или N-концевой четверти белка слияния. Большая часть или весь пластидный транзитный пептид, как правило, вырезается из белка слияния после вставки в пластиду. Положение расщепления может незначительно варьировать между видами растений, на различных стадиях развития растения, в результате специфических внутриклеточных условий или конкретной комбинации применяемого транзитного пептида/партнера слияния. В одном варианте осуществления сайт расщепления пластидного транзитного пептида является гомогенным, так что сайт расщепления является идентичным в группе белков слияния. В другом варианте осуществления сайт расщепления пластидного транзитного пептида не является гомогенным, так что сайт расщепления варьирует в пределах 1-10 аминокислот в группе белков слияния. Пластидный транзитный пептид можно рекомбинантно сливать со вторым белком с применением одного из нескольких путей. Например, сайт распознавания рестрикционной эндонуклеазы можно вводить в нуклеотидную последовательность транзитного пептида в положении, соответствующем его C-терминальному концу, и такой же или совместимый сайт можно вводить с помощью методик генной инженерии в нуклеотидную последовательность белка, подлежащего нацеливанию, по его N-терминальному концу. При конструировании этих сайтов нужно заботиться о том, чтобы кодирующие последовательности транзитного пептида и второго белка содержались в рамке для обеспечения синтеза требуемого белка слияния. В некоторых случаях предпочтительным может быть удаление инициаторного метионинового кодона второго белка при введении нового сайта рестрикции.
Введение сайтов распознавания рестрикционной эндонуклеазы в обе исходные молекулы и их последующее связывание с помощью методик с применением рекомбинантной ДНК может приводить к добавлению одной или нескольких дополнительных аминокислот между транзитным пептидом и вторым белком. Это, как правило, не влияет на активность в отношении нацеливания, поскольку сайт расщепления транзитного пептида остается доступным и функционирование второго белка не изменится при добавлении этих дополнительных аминокислот по его N-концу. Альтернативно, специалист в данной области техники может создать точный сайт расщепления между транзитным пептидом и вторым пептидом (с наличием инициирующего метионина или без него) с применением синтеза генов (Stemmer, et al., (1995), Gene, 164:49-53) или аналогичных способов. В дополнение, слияние транзитного пептида может целенаправленно включать аминокислоты ниже сайта расщепления. Аминокислоты на N-конце зрелого белка могут воздействовать на способность транзитного пептида нацеливать белки в пластиды и/или эффективность расщепления после импорта белков. Это может зависеть от белка, подлежащего нацеливанию. См. например, Comai, et al., (1988), J. Biol. Chem. 263(29): 15104-9.
В некоторых вариантах осуществления представлены белки слияния, содержащие полипептид PIP-72 и инсектицидный полипептид, соединенные аминокислотным линкером.
В некоторых вариантах осуществления представлены белки слияния, представленные формулой, выбранной из группы, состоящей из
R-L-R. R;-L-R'. R'-R; или R''-R'.
где R1 представляет собой полипептид PIP-72 или полипептид SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 852, любой из SEQ ID NO: 903 SEQ ID NO: 914, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946;
R2 представляет собой инсектицидный полипептид.
Полипептид R1 слит либо непосредственно, либо через линкерный (L) сегмент с полипептидом R2 Выражение непосредственно обозначает слияния, в которых полипептиды соединены без пептидного линкера. Таким образом, L представляет собой химическую связь или полипептидный сегмент, с которым оба R1 и R2 слиты в рамке, при этом наиболее часто L представляет собой линейный пептид, с которым R1 и R2 связаны посредством амидных связей, связывающих карбоксильный конец R1 с аминоконцом L и карбоксильный конец L с аминоконцом R2 Под слиты в рамке подразумевается, что между рамками считывания R1 и R2 отсутствуют сайты терминации трансляции или разрыв. Связывающая группа (L) представляет собой обычно полипептид от 1 до 500 аминокислот в длину. Линкеры, соединяющие две молекулы, предпочтительно конструируют так, чтобы они (1) давали возможность двум молекулам сворачиваться и действовать независимо друг от друга; (2) не характеризовались склонностью к развитию упорядоченной вторичной структуры, которая может негативно воздействовать на функциональные домены двух белков; (3) имели минимальную гидрофобную или характеристику в отношении зарядов, которая влияет на функциональные домены белка; и (4) обеспечивали стерическое разделение R1 и R2, так что R1 и R2 могли одновременно взаимодействовать со своими соответствующими рецепторами на одной клетке. Как правило, поверхностные аминокислоты в гибких участках белка включают Gly, Asn и Ser. По сути, любое сочетание аминокислотных последовательностей, содержащих Gly, Asn и Ser, как ожидается, будет удовлетворять вышеуказанным критериям для линкерной последовательности. Другие нейтральные аминокислоты, такие как Thr и Ala, также можно применять в линкерной последовательности. Дополнительные аминокислоты также можно включать в линкеры, поскольку добавление
- 56 031651 уникальных сайтов рестрикции в линкерную последовательность облегчает конструирование слияний.
В некоторых вариантах осуществления линкеры содержат последовательности, выбранные из группы с формулами: (Gly3Ser)n, (Gly4Ser)n, (Gly5Ser)n, (GlynSer)n или (AlaGlySer)n, где n представляет собой целое число. Одним примером очень гибкого линкера является спейсерный участок, богатый (GlySer), присутствующий в белке pIII нитевидных бактериофагов, например, бактериофагов М13 или fd (Schaller, et al., 1975). Этот участок обеспечивает длинный гибкий спейсерный участок между двумя доменами поверхностного белка pIII. Также включены линкеры, в состав которых входит последовательность распознавания эндопептидазы. Такой сайт расщепления может быть необходимым для разделения индивидуальных компонентов слияния для определения того, являются ли они правильным образом свернутыми и активными in vitro. Примеры различных эндопептидаз включают, без ограничения, плазмин, энтерокиназу, калликреин, урокиназу, тканевой активатор плазминогена, клострипаин, химозин, коллагеназу, протеазу яда гадюки Рассела, фермент расщепления постпролина, протеазу V8, тромбин и фактор Xa. В некоторых вариантах осуществления линкер содержит аминокислоты EEKKN (SEQ ID NO: 488) из мультигенного экспрессионного проводника (MGEV), который расщепляется протеазами вакуолей, как раскрыто в публикации заявки на патент США № 2007/0277263. В других вариантах осуществления пептидные линкерные сегменты из шарнирного участка тяжелой цепи иммуноглобулинов IgG, IgA, IgM, IgD или IgE обеспечивают угловое взаимодействие между прикрепленными полипептидами. В частности, применимыми являются такие шарнирные участки, в которых цистеины замещены на серины. Линкеры согласно настоящему раскрытию включают последовательности, полученные из шарнирного участка IgG гамма 2b мыши, в котором цистеины были заменены на серины. Белки слияния не ограничиваются формой, размером или количеством применяемых линкерных последовательностей, а единственным требованием для линкера является то, что функционально он не влияет негативным образом на фолдинг и функционирование отдельных молекул слияния.
В другом аспекте представлены химерные полипептиды PIP-72, которые получают путем соединения двух или более частей генов PIP-72, которые изначально кодируют отдельные белки PIP-72, для создания химерного гена. Трансляция химерного гена приводит к единому химерному полипептиду PIP-72 с участками, мотивами или доменами, полученными из каждого из исходных полипептидов. В определенных вариантах осуществления химерный белок содержит части, мотивы или домены PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2), PIP-72Ba (SEQ ID NO: 4), PIP-72Ca (SEQ ID NO: 6) и PIP-72Cb (SEQ ID NO: 8), PIP-72Da (SEQ ID NO: 10), PIP-72Db (SEQ ID NO: 12), PIP-72Dc (SEQ ID NO: 14), PIP-72Fa (SEQ ID NO: 18), PIP-72Ff (SEQ ID NO: 28) и PIP-72Gb (SEQ ID NO: 32), PIP-72Ab (SEQ ID NO: 927), PIP-72Bb (SEQ ID NO: 928), PIP-72Fh (SEQ ID NO: 932), PIP-72Fi (SEQ ID NO: 933), PIP-72Fj (SEQ ID NO: 934), PIP-72Fk (SEQ ID NO: 935), PIP-72Fl (SEQ ID NO: 936), PIP-72Gg (SEQ ID NO: 939), PIP-72Gh (SEQ ID NO: 940), PIP-72Gi (SEQ ID NO: 941), PIP-72Gk (SEQ ID NO: 943), PIP-72Gl (SEQ ID NO: 944), PIP-72Gm (SEQ ID NO: 945) или PIP-72Gn (SEQ ID NO: 946) в любой комбинации.
Понятно, что последовательности ДНК можно изменять различными способами, и что эти изменения могут приводить к образованию последовательностей ДНК, кодирующих белки с аминокислотными последовательностями, отличающимися от тех, которые кодируют пестицидный белок дикого типа (или нативный). В некоторых вариантах осуществления полипептид PIP-72 можно изменять различными путями, в том числе с помощью аминокислотных замен, делеций, усечений и вставок одной или нескольких аминокислот, включая до 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45 или более аминокислотных замен, делеций и/или вставок или их комбинаций по сравнению с SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 852, SEQ ID NO: 846, SEQ ID NO: 847, SEQ ID NO: 848, SEQ ID NO: 849, любой из SEQ ID NO: 903 - SEQ ID NO: 914, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946.
Способы осуществления таких манипуляций, как правило, известны из уровня техники. Например, варианты аминокислотной последовательности полипептида PIP-72 можно получать при помощи мутаций в ДНК. Это также можно осуществлять при помощи одной из нескольких форм мутагенеза и/или путем направленной эволюции. В некоторых аспектах изменения, закодированные в аминокислотной последовательности, не будут существенно влиять на функцию белка. Такие варианты будут обладать требуемой пестицидной активностью. Однако понятно, что способность полипептида PIP-72 обеспечивать пестицидную активность можно повышать путем применения таких методик в композициях согласно настоящему раскрытию.
Например, можно делать консервативные аминокислотные замены по одному или нескольким прогнозируемым несущественным аминокислотным остаткам. Несущественный аминокислотный остаток представляет собой остаток, который можно изменять относительно последовательности дикого типа полипептида PIP-72 без изменения биологической активности. Консервативная аминокислотная замена
- 57 031651 представляет собой замену, при которой аминокислотный остаток замещен на аминокислотный остаток, имеющий аналогичную боковую цепь. Семейства аминокислотных остатков, имеющие аналогичные боковые цепи, были определены в уровне техники. Эти семейства включают аминокислоты с основными боковыми цепями (например, лизин, аргинин, гистидин); кислотными боковыми цепями (например, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту); полярными отрицательно заряженными остатками и их амидами (например, аспарагиновую кислоту, аспарагин, глутаминовую кислоту, глутамин); незаряженными полярными боковыми цепями (например, глицин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин); небольшими алифатическими неполярными или слабополярными остатками (например, аланин, серин, треонин, пролин, глицин); неполярными боковыми цепями (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин, триптофан); крупными алифатическими неполярными остатками (например, метионин, лейцин, изолейцин, валин, цистин); бета-разветвленными боковыми цепями (например, треонин, валин, изолейцин); ароматическими боковыми цепями (например, тирозин, фенилаланин, триптофан, гистидин); крупными ароматическими боковыми цепями (например, тирозин, фенилаланин, триптофан).
Аминокислотные замены можно проводить в неконсервативных участках, которые сохраняют функцию. В целом, такие замены не следует проводить для консервативных аминокислотных остатков или для аминокислотных остатков, находящихся в консервативном мотиве, где такие остатки являются существенными для активности белка. Примеры остатков, которые являются консервативными и которые могут быть существенными для активности белка, включают, например, остатки, которые идентичны у всех белков, содержащихся в выравнивании аналогичных или родственных токсинов с последовательностями согласно вариантам осуществления (например, остатки, которые идентичны при выравнивании гомологов). Примеры остатков, которые являются консервативными, но которые могут позволять консервативные аминокислотные замены и сохранять активность, включают, например, остатки, которые характеризуются только консервативными заменами у всех белков, содержащихся в выравнивании аналогичных или родственных токсинов с последовательностями согласно вариантам осуществления (например, остатки, которые характеризуются только консервативными заменами у всех белков, содержащихся в выравнивании гомологов). Однако специалисту в данной области будет понятно, что функциональные варианты могут иметь незначительные консервативные или неконсервативные изменения по консервативным остаткам. Указания в отношении подходящих аминокислотных замен, которые не влияют на биологическую активность белка, представляющего интерес, можно найти в модели Dayhoff, et al., (1978), Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D.C.), включенной в данный документ посредством ссылки.
При осуществлении таких изменений можно учитывать индекс гидропатичности аминокислот. Важность индекса гидропатичности аминокислот для обеспечения согласованной биологической функции белка, в целом, понятна из уровня техники (Kyte and Doolittle, (1982), J Mol. Biol. 157(1):105-32). Принято считать, что относительная гидропатичность аминокислоты вносит вклад во вторичную структуру полученного в результате белка, что, в свою очередь, определяет взаимодействие белка с другими молекулами, например, ферментами, субстратами, рецепторами, ДНК, антителами, антигенами и т.п.
Из уровня техники известно, что определенные аминокислоты можно замещать другими аминокислотами, имеющими аналогичный индекс или показатель гидропатичности, и в результате это все еще приводит к белку с аналогичной биологической активностью, т.е. по-прежнему получают белок с эквивалентной биологической функцией. Каждой аминокислоте был присвоен индекс гидропатичности на основании ее гидрофобности и характеристик в отношении заряда (Kyte and Doolittle, там же). Они являются следующими: изолейцин (+4,5); валин (+4,2); лейцин (+3,8); фенилаланин (+2,8); цистеин/цистин (+2,5); метионин (+1,9); аланин (+1,8); глицин (-0,4); треонин (-0,7); серин (-0,8); триптофан (-0,9); тирозин (-1,3); пролин (-1,6); гистидин (-3,2); глутамат (-3,5); глутамин (-3,5); аспартат (-3,5); аспарагин (-3,5); лизин (-3,9) и аргинин (-4,5). При осуществлении таких изменений предпочтительной является замена аминокислот, индексы гидропатичности которых находятся в пределах до +2, особенно предпочтительной с индексами в пределах до +1 и наиболее предпочтительной с индексами в пределах до +0,5.
Из уровня техники также понятно, что замену подобных аминокислот можно эффективно проводить на основании гидрофильности. В патенте США № 4554101 заявляется, что наибольшая локальная средняя гидрофильность белка, определяемая гидрофильностью смежных аминокислот, коррелирует с биологическим свойством белка.
Как подробно описано в патенте США № 4554101, аминокислотным остаткам были присвоены следующие значения гидрофильности: аргинин (+3,0); лизин (+3,0); аспартат (+3,0, +0,1); глутамат (+3,0, +0,1); серин (+0,3); аспарагин (+0,2); глутамин (+0,2); глицин (0); треонин (-0,4); пролин (-0,5, +0,1); аланин (-0,5); гистидин (-0,5); цистеин (-1,0); метионин (-1,3); валин (-1,5); лейцин (-1,8); изолейцин (-1,8); тирозин (-2,3); фенилаланин (-2,5); триптофан (-3,4).
Альтернативно, изменения можно осуществлять в белковой последовательности многих белков на амино- или карбоксильном конце без существенного воздействия на активность. Они могут включать вставки, делеции или изменения, введенные при помощи современных молекулярных способов, таких как ПЦР, в том числе амплификации посредством ПЦР, которые изменяют или удлиняют последова
- 58 031651 тельность, кодирующую белок, посредством включения последовательностей, кодирующих аминокислоты, в олигонуклеотиды, используемые при амплификации посредством ПЦР. Альтернативно, добавленные белковые последовательности могут включать последовательности, кодирующие весь белок, например, такие, которые обычно применяются в уровне техники для получения белковых слияний. Такие белки слияния часто применяют для (1) усиления экспрессии белка, представляющего интерес, (2) введения связывающего домена, ферментативной активности или эпитопа для облегчения очистки белка, либо выявления белка или других экспериментальных применений, известных из уровня техники, (3) нацеливания секреции или трансляции белка во внутриклеточную органеллу, такую как периплазматическое пространство грамотрицательных бактерий, митохондрии или хлоропласты растений или эндоплазматический ретикулум эукариотических клеток, причем последнее зачастую приводит к гликозилированию белка.
Вариантные нуклеотидные и аминокислотные последовательности согласно настоящему раскрытию также охватывают последовательности, полученные с помощью процедур, связанных с мутациями и рекомбинациями, такими как шаффлинг ДНК. С помощью такой процедуры один или несколько различных кодирующих участков полипептида PIP-72 можно применять для создания нового полипептида PIP72, обладающего требуемыми свойствами. Таким образом, библиотеки рекомбинантных полинуклеотидов получают из группы родственных по последовательностям полинуклеотидов, содержащих участки последовательностей, которые характеризуются значительной идентичностью последовательности и могут подвергаться гомологичной рекомбинации in vitro или in vivo. Например, с применением этого подхода, мотивы с последовательностями, кодирующими домен, представляющий интерес, можно подвергать шаффлингу между пестицидным геном и другими известными пестицидными генами с получением нового гена, кодирующего белок с улучшенным свойством, представляющим интерес, таким как повышенная инсектицидная активность. Стратегии для такого ДНК-шаффлинга известны из уровня техники. См., например, Stemmer, (1994), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91:10747-10751; Stemmer, (1994), Nature, 370:389-391; Crameri, et al., (1997), Nature Biotech. 15:436-438; Moore, et al., (1997), J. Mol. Biol. 272:336347; Zhang, et al., (1997), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94:4504-4509; Crameri, et al., (1998), Nature, 391:288291 и патенты США № 5605793 и 5837458.
Замена доменов или шаффлинг представляет собой другой механизм получения измененных полипептидов PIP-72. Можно проводить замену доменов между полипептидами PIP-72, что дает гибридные или химерные токсины с повышенной пестицидной активностью или спектром мишеней. Способы получения рекомбинантных белков и тестирования их в отношении пестицидной активности хорошо известны из уровня техники (см., например, Naimov, et al., (2001), Appl. Environ. Microbiol. 67:5328-5330; de Maagd, et al., (1996), Appl. Environ. Microbiol. 62:1537-1543; Ge, et al., (1991), J. Biol. Chem. 266:1795417958; Schnepf, et al., (1990), J. Biol. Chem. 265:20923-20930; Rang, et al., (1999), Appl. Environ. Microbiol. 65:2918-2925).
Как ДНК-шаффлинг, так и сайт-направленный мутагенез применяли для определения полипептидных последовательностей, которые обладают пестицидной активностью. В примере 8 и 9 ДНКшаффлинг применяли для получения библиотеки активных вариантов путем рекомбинации разнообразия, присутствующего в GBP A3175 (SEQ ID NO: 20) и PIP-72Da (SEQ ID NO: 10). Специалист в данной области техники сможет применять сравнения с другими белками или функциональные анализы для дальнейшего определения мотивов. Для тестирования вариаций этих мотивов можно применять высокопроизводительный скрининг для определения роли специфических остатков. Принимая во внимание данные о некоторых мотивах, затем можно определять требования относительно функционального белка. Данные о мотивах позволяют специалисту в данной области сконструировать вариации последовательностей, которые не будут влиять на функцию.
Выравнивание гомологов PIP-72 (фиг. 1-5) позволило идентифицировать остатки, которые являются высококонсервативными среди гомологов в данном семействе (фиг. 1). В примере 10 и 11 насыщающий мутагенез применяли для осуществления и тестирования замен в выбранных положениях аминокислот. Эти мутанты тестировали в отношении активности и идентифицировали ряд активных замен, не присутствующих у гомологов, что объясняет функциональные ограничения по этим остаткам.
В некоторых вариантах осуществления представлены полипептиды, содержащие аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере 95% или более идентична аминокислотной последовательности, изложенной SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 24 SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 929, SEQ ID NO: 930, SEQ ID NO: 931, SEQ ID NO: 937, SEQ ID NO: 938, SEQ ID NO: 942, SEQ ID NO: 947 или SEQ ID NO: 948, где полипептид обладает инсектицидной активностью.
Композиции.
Также охвачены композиции, содержащие полипептид PIP-72. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит полипептид PIP-72. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит белок слияния PIP-72.
- 59 031651
Антитела.
Также охвачены антитела к полипептиду PIP-72 согласно вариантам осуществления или к его вариантам или фрагментам. Антитела согласно настоящему раскрытию включают поликлональные и моноклональные антитела, а также их фрагменты, которые сохраняют их способность связываться с белками PIP-72, обнаруженными в кишечнике насекомого. Считается, что антитело, моноклональное антитело или его фрагмент способны связывать молекулу, если они способны специфично взаимодействовать с молекулой, тем самым, связывать молекулу с антителом, моноклональным антителом или его фрагментом. Как подразумевается, выражение антитело (Ab) или моноклональное антитело (Mab) включает интактные молекулы, а также их фрагменты, или связывающие участки, или домены (такие как, например, фрагменты Fab и F(ab)2), которые способны связывать гаптен. Такие фрагменты, как правило, получают при помощи протеолитического расщепления, например с помощью папаина или пепсина. Альтернативно, гаптенсвязывающие фрагменты можно получать посредством применения технологии рекомбинантной ДНК или при помощи синтетической химии. Способы получения антител согласно настоящему раскрытию, как правило, известны из уровня техники. Например, см., Antibodies, A Laboratory Manual, Ed Harlow and David Lane (eds.) Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (1988), а также процитированные в нем литературные источники. Стандартные справочные издания, излагающие общие принципы иммунологии, включают: Klein, J. Immunology: The Science of Cell-Noncell Discrimination, John Wiley & Sons, N.Y. (1982); Dennett, et al., Monoclonal Antibodies, Hybridoma: A New Dimension in Biological Analyses, Plenum Press, N.Y. (1980) и Campbell, Monoclonal Antibody Technology, в Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Vol. 13, Burdon, et al., (eds.), Elsevier, Amsterdam (1984). См. также, патенты США № 4196265; 4609893; 4713325; 4714681; 4716111; 4716117 и 4720459. Антитела к полипептиду PIP-72 или их антигенсвязывающие части можно получать при помощи ряда методик, в том числе традиционных методик с применением моноклональных антител, например, стандартной методики гибридизации соматических клеток согласно Kohler and Milstein, (1975), Nature, 256:495. Также можно использовать другие методики получения моноклонального антитела, такие как вирусная или онкогенная трансформация B-лимфоцитов. Животная система для получения гибридом представляет собой мышиную систему. Из уровня техники известны протоколы и методики выделения спленоцитов иммунизированных животных для слияния. Также известны партнеры для слияния (например, клетки миеломы мыши) и процедуры слияния. Антитело и моноклональные антитела согласно настоящему раскрытию можно получить путем использования полипептида PIP-72 в качестве антигенов.
Представлен набор для выявления присутствия полипептида PIP-72 или выявления присутствия нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид PIP-72, в образце. В одном варианте осуществления в наборе имеются реагенты на основе антител для выявления присутствия полипептида PIP-72 в образце ткани. В другом варианте осуществления в наборе имеются меченые зонды из нуклеиновой кислоты, применяемые для выявления присутствия одного или нескольких полинуклеотидов, кодирующих полипептид(ы) PIP-72. В наборе также имеются соответствующие реагенты и контрольные образцы для проведения способа выявления, а также инструкции для применения набора.
Идентификация и выделение рецепторов.
Также охвачены рецепторы к полипептиду PIP-72 согласно вариантам осуществления или к его вариантам или фрагментам. Способы идентификации рецепторов, хорошо известные из уровня техники (см. Hofmann, et. al., (1988), Eur. J. Biochem. 173:85-91; Gill, et al., (1995), J. Biol. Chem. 27277-27282), можно использовать для идентификации и выделения рецептора, который распознает полипептиды PIP-72 с применением мембранных везикул щеточной каемки восприимчивых насекомых. В дополнение к способу радиоактивного мечения, приведенному в процитированных литературных источниках, полипептид PIP-72 можно метить с помощью флуоресцентного красителя и других общепринятых меток, таких как стрептавидин. Мембранные везикулы щеточной каемки (BBMV) восприимчивых насекомых, таких как соевая совка и щитники, можно получать в соответствии с протоколами, приведенными в ссылочных документах, и разделять в геле SDS-PAGE, и переносить на подходящую мембрану. Меченые полипептиды PIP-72 можно инкубировать с подвергнутой блоттингу мембраной BBMV, и при этом меченые полипептиды PIP-72 можно идентифицировать при помощи меченых репортеров. Идентификацию белковой полоски(полосок), которые взаимодействуют с полипептидами PIP-72, можно выявлять при помощи определения последовательности N-концевых аминокислотных остатков в газовой фазе или способа идентификации белков на основе масс-спектрометрии (Patterson, (1998) 10.22, 1-24, Current Protocol in Molecular Biology published by John Wiley & Son Inc). После идентификации белка соответствующий ген можно клонировать из библиотеки геномной ДНК или кДНК восприимчивых насекомых, и сродство связывания можно оценивать непосредственно при помощи полипептидов PIP-72. Рецепторную функцию в отношении инсектицидной активности полипептидов PIP-72 можно подтвердить путем осуществления при помощи способа нокаута гена RNAi-типа (Rajagopal, et al., (2002), J. Biol. Chem. 277:4684946851).
- 60 031651
Нуклеотидные конструкции, кассеты экспрессии и векторы.
Применение выражения нуклеотидные конструкции в данном документе не предназначено ограничивать варианты осуществления нуклеотидными конструкциями, содержащими ДНК. Специалистам в данной области техники будет понятно, что нуклеотидные конструкции, в частности полинуклеотиды и олигонуклеотиды, состоящие из рибонуклеотидов и комбинаций рибонуклеотидов и дезоксирибонуклеотидов, также можно использовать в способах, раскрытых в данном описании. Нуклеотидные конструкции, нуклеиновые кислоты и нуклеотидные последовательности согласно вариантам осуществления дополнительно охватывают все комплементарные формы таких конструкций, молекул и последовательностей. Кроме того, нуклеотидные конструкции, нуклеотидные молекулы и нуклеотидные последовательности согласно вариантам осуществления охватывают все нуклеотидные конструкции, молекулы и последовательности, которые можно использовать в способах согласно вариантам осуществления для трансформации растений, в том числе, без ограничения, состоящие из дезоксирибонуклеотидов, рибонуклеотидов и их комбинаций. Такие дезоксирибонуклеотиды и рибонуклеотиды предусматривают как встречающиеся в природе молекулы, так и синтетические аналоги. Нуклеотидные конструкции, нуклеиновые кислоты и нуклеотидные последовательности согласно вариантам осуществления также охватывают все формы нуклеотидных конструкций, в том числе, без ограничения, одноцепочечные формы, двухцепочечные формы, шпильки, структуры стебель-и-петля и т.п.
Дополнительный вариант осуществления относится к трансформированному организму, такому как организм, выбранный из растительных клеток или клеток насекомых, бактерий, дрожжей, бакуловируса, простейших, нематод и водорослей. Трансформированный организм содержит молекулу ДНК согласно вариантам осуществления, кассету экспрессии, содержащую молекулу ДНК, или вектор, содержащий кассету экспрессии, которые могут быть стабильно встроенными в геном трансформированного организма.
Последовательности согласно вариантам осуществления представлены в составе ДНК-конструкций для экспрессии в организме, представляющем интерес. Конструкции будут включать 5' и 3' регуляторные последовательности, функционально связанные с последовательностью согласно вариантам осуществления. Выражение функционально связанные, как используется в данном документе, относится к функциональной связи между промотором и второй последовательностью, где последовательность промотора инициирует и опосредует транскрипцию последовательности ДНК, соответствующей второй последовательности. Как правило, функционально связанный означает, что связанные последовательности нуклеиновой кислоты являются смежными и, при необходимости, соединяют два кодирующих белок участка в одной рамке считывания. Конструкция может дополнительно содержать по меньшей мере один дополнительный ген, подлежащий введению в организм путем котрансформации. Альтернативно, дополнительный(ые) ген(ы) может(гут) быть представлены в нескольких ДНК-конструкциях.
В некоторых вариантах осуществления ДНК-конструкция содержит полинуклеотид, кодирующий полипептид PIP-72 согласно вариантам осуществления, функционально связанный с гетерологичной регуляторной последовательностью.
В некоторых вариантах осуществления ДНК-конструкция содержит полинуклеотид, кодирующий полипептид, по меньшей мере на 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 929, SEQ ID NO: 930, SEQ ID NO: 931, SEQ ID NO: 937, SEQ ID NO: 938, SEQ ID NO: 942, SEQ ID NO: 947 или SEQ ID NO: 948, функционально связанный с гетерологичной регуляторной последовательностью.
В некоторых вариантах осуществления ДНК-конструкция содержит полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 929, SEQ ID NO: 930, SEQ ID NO: 931, SEQ ID NO: 937, SEQ ID NO: 938, SEQ ID NO: 942, SEQ ID NO: 947 или SEQ ID NO: 948, функционально связанный с гетерологичной регуляторной последовательностью.
Такая ДНК-конструкция снабжена несколькими сайтами рестрикции для вставки последовательности гена полипептида PIP-72, транскрипция которой будет регулироваться регуляторными участками. ДНК-конструкция может дополнительно содержать гены селектируемых маркеров.
В направлении транскрипции 5'-3' ДНК-конструкция, как правило, будет включать: участок инициации транскрипции и трансляции (т.е. промотор), последовательность ДНК согласно вариантам осуществления и участок терминации транскрипции и трансляции (т.е. участок терминации), функционирующие в организме, выступающем в качестве хозяина. Участок инициации транскрипции (т.е. промотор) может быть нативным, аналогичным, чужеродным или гетерологичным относительно организмахозяина и/или последовательности согласно вариантам осуществления. Кроме того, промотор может быть природной последовательностью или, альтернативно, синтетической последовательностью. Используемое в данном документе выражение чужеродный указывает на то, что промотор отсутствует в нативном организме, в который введен промотор. Если промотор является чужеродным или гетерологичным относительно последовательности согласно вариантам осуществления, предполагается, что промотор не является нативным или встречающимся в природе промотором для функционально связан- 61 031651 ной последовательности согласно вариантам осуществления. Используемый в данном документе химерный ген содержит кодирующую последовательность, функционально связанную с участком инициации транскрипции, который является гетерологичным для кодирующей последовательности. Если промотор является нативной или природной последовательностью, экспрессия функционально связанной последовательности изменена по сравнению с экспрессией дикого типа, что приводит к изменению фенотипа.
В некоторых вариантах осуществления ДНК-конструкция может также включать последовательность транскрипционного энхансера. Используемое в данном документе выражение энхансер относится к последовательности ДНК, которая может стимулировать активность промотора и которая может представлять собой характерный элемент промотора или гетерологичный элемент, вставленный для повышения уровня активности или тканевой специфичности промотора. Из уровня техники известны различные энхансеры, в том числе, например, интроны со свойствами усиления экспрессии гена в растениях (заявка публикации на патент США № 2009/0144863, убиквитиновый интрон (т.е. убиквитиновый интрон 1 маиса (см., например, последовательность из NCBI S94464; Christensen and Quail (1996), Transgenic Res. 5:213-218; Christensen et al. (1992), Plant Molecular Biology 18:675-689)), энхансер омега и энхансер омега штрих (Gallie, et al., (1989), Molecular Biology of RNA ed. Cech (Liss, New York) 237-256 и Gallie, et al., (1987), Gene 60:217-25), энхансер CaMV 35S (см., например, Benfey, et al., (1990), EMBO J. 9:1685-96), интрон Adhl маиса (Kyozuka et al. (1991), Mol. Gen. Genet. 228:40-48; Kyozuka et al. (1990), Maydica 35:353-357), также можно применять энхансеры из патента США № 7803992 и энхансер палочковидного вируса сахарного тростника (SCBV) WO 2013/130813, каждый из которых включен посредством ссылки. Приведенный выше перечень транскрипционных энхансеров не предназначен для ограничения. В вариантах осуществления можно применять любой подходящий транскрипционный энхансер.
Участок терминации может быть нативным относительно участка инициации транскрипции, может быть нативным относительно функционально связанной последовательности ДНК, представляющей интерес, может быть нативным относительно растения-хозяина или может быть получен из другого источника (т.е. чужеродный или гетерологичный для промотора, последовательности, представляющей интерес, растения-хозяина или какой-либо их комбинации).
Подходящие участки терминации доступны из Ti-плазмиды A. tumefaciens, такие как участки терминации генов октопинсинтазы и нопалинсинтазы. См. также Guerineau, et al., (1991), Mol. Gen. Genet. 262:141-144; Proudfoot, (1991), Cell 64:671-674; Sanfacon, et al., (1991), Genes Dev. 5:141-149; Mogen, et al., (1990), Plant Cell 2:1261-1272; Munroe, et al., (1990), Gene 91:151-158; Ballas, et al., (1989), Nucleic Acids Res. 17:7891-7903 и Joshi, et al., (1987), Nucleic Acid Res. 15:9627-9639.
При необходимости нуклеиновую кислоту можно оптимизировать для усиления экспрессии в организме-хозяине. Таким образом, если организм-хозяин является растением, для усиления экспрессии можно синтезировать синтетические нуклеиновые кислоты с применением кодонов, предпочтительных для растений. См., например, Campbell and Gowri, (1990), Plant Physiol. 92:1-11; с целью рассмотрения использования кодонов, предпочтительных для хозяина. Например, хотя последовательности нуклеиновой кислоты согласно вариантам осуществления могут экспрессироваться как у видов однодольных, так и двудольных растений, последовательности можно модифицировать с учетом специфических предпочтений кодонов и предпочтений по содержанию GC у однодольных или двудольных, если было показано, что предпочтения отличаются (Murray et al. (1989), Nucleic Acids Res. 17:477-498). Таким образом, кодон, предпочтительный для маиса, для конкретной аминокислоты можно получить из известных генных последовательностей маиса. Данные о частоте использования кодонов в маисе для 28 генов из растений маиса приведены в табл. 4 по Murray, et al., выше. Из уровня техники доступны способы синтеза генов, предпочтительных для растений. См., например, патенты США № 5380831 и 5436391, и Murray, et al., (1989), Nucleic Acids Res. 17:477-498 и Liu H. et al. Mol. Bio. Rep. 37:677-684, 2010, включенные в данный документ посредством ссылки. Таблицу частоты использования кодонов Zea maize также можно найти на сайте kazusa.or.jp/codon/cgi-bin/showcodon.cgi?species=4577, доступ к которому можно получить с применением префикса www. В табл. 2 показан анализ оптимальных кодонов маиса (адаптировано из Liu H. et al. Mol. Bio. Rep. 37:677-684, 2010).
- 62 031651
Таблица 2
Амин о- Код OH Высокая RS си Низкая RS си Амин о- Код OH Высокая RS си Низкая RS си
ки сл встречае встречае кисл встречае встречае
ота мость мость ота мость мость
Phe uuu 115 0, 2, 301 1, Ala GCU 629 0, 3,063 1,
04 22 17 59
uuc 5, 269 1, 1, 485 0, GCC 8,057 2, 1,136 0,
96 78 Λ· 16 59
Ser ucu 176 0, 2, 498 1, GCA 369 0, 2,872 1,
13 48 1 49
ucc 3, 489 2, 1, 074 0, GCG 5,835 1, 630 0,
48 63 Λ· 57 33
UCA 104 0, 2, 610 1, Туг UAU 71 0, 1,632 1,
07 54 04 22
UCG 1, 975 1, 670 0, UAC 3,841 1, 1,041 0,
4 4 Λ· 96 78
AGU 77 0, 1, 788 1, His CAU 131 0, 1,902 1,
05 06 09 36
AGC 2, 617 1, 1, 514 0, CAC 2,800 1, 897 0,
86 89 Λ· 91 64
Leu UUA 10 0, 1, 326 0, Cys UGU 52 0, 1,233 1,
01 79 04 12
UUG 174 0, 2, 306 1, UGC 2,291 1, 963 0,
09 37 Λ· 96 88
CUU 223 0, 2, 396 1, Gln CAA 99 0, 2,312 1,
11 43 05 04
cue 5, 979 з, 1, 109 0, CAG 3,557 1, 2,130 0,
08 66 Λ· 95 96
CUA 106 0, 1, 280 0, Arg CGU 153 0, 751 0,
05 76 12 74
CUG 5, 161 2, 1, 646 0, CGC 4,278 3, 466 0,
66 98 Λ· 25 46
Pro ecu 427 0, 1, 900 1, CGA 92 0, 659 0,
22 47 07 65
ccc 3, 035 1, 601 0, CGG 1,793 1, 631 о,
59 47 Λ· 36 62
CCA 311 0, 2,140 1, AGA 83 0, 1,948 1,
16 66 06 91
CCG 3, 846 2, 513 0, AGG 1,493 1, 1,652 1,
02 4 Λ· 14 62
Ile AUU 138 0, 2,388 1, Asn AAU 131 0, 3,074 1,
09 3 07 26
AUC 4,380 2, 1, 353 0, AAC 3,814 1, 1,807 0,
85 74 Λ· 93 74
AUA 88 0, 1, 756 0, Lys AAA 130 0, 3,215 0,
06 96 05 98
Thr ACU 136 0, 1, 990 1, AAG 5,047 1, 3,340 1,
09 43 Λ· 95 02
ACC 3, 398 2, 991 0, Asp GAU 312 0, 4,217 1,
25 71 09 38
АСА 133 0, 2,075 1, GAC 6, 729 1, 1,891 0,
09 5 Λ· 91 62
ACG 2,378 1, 495 о, Gly GGU 363 0, 2,301 1,
57 36 13 35
Val GUU 182 0, 2, 595 1, GGC 7,842 2, 1,282 0,
07 51 Λ· 91 75
GUC 4,584 1, 1, 096 0, GGA 397 0, 2,044 1,
82 64 15 19
GUA 74 0, 1, 325 0, GGG 2,186 0, 1,215 0,
03 77 Λ· 81 71
GUG 5, 257 2, 1, 842 1, Glu GAA 193 0, 4,080 1,
08 07 06 1
GAG 6, 010 1, 3,307 0,
Λ· 94 9
Частоту использования кодонов сравнивали с применением критерия сопряженности хи-квадрат для идентификации оптимальных кодонов. Кодоны, которые встречаются статистически более часто (P=0,01), обозначены звездочкой.
- 63 031651
Таблица частоты использования кодонов Glycine max показана в виде табл. 3, и ее также можно найти на сайте kazusa.or.jp/codon/cgi-bin/showcodon.cgi?species=3847&aa=1&style=N, доступ к которому можно получить с применением префикса www.
Таблица 3
ттт F 21,2 (10493) ТСТ S 18,4 (9107)
ттс F 21,2 (10487) ТСС S 12,9 (6409)
ТТА L 9,2 (4545) ТСА S 15,6 (7712)
TTG L 22,9 (11340) TCG S 4,8 (2397)
СТТ L 23,9 (11829) ССТ P 18,9 (9358)
СТС L 17,1 (8479) ССС P 10,1 (5010)
СТА L 8,5 (4216) ССА P 19,1 (9461)
CTG L 12,7 (6304) CCG P 4,7 (2312)
АТТ 1 25,1 (12411) ACT T 17,1 (8490)
АТС 1 16,3 (8071) ACC T 14,3 (7100)
АТА 1 12,9 (6386) АСА T 14,9 (7391)
ATG М 22,7 (11218) ACG T 4,3 (2147)
GTT V 26,1 (12911) GCT A 26,7 (13201)
GTC V 11,9 (5894) GCC A 16,2 (8026)
GTA V 7,7 (3803) GCA A 21,4 (10577)
GTG V 21,4 (10610) GCG A 6,3 (3123)
ТАТ Y 15,7 (7779) TGT C 8,1 (3995)
ТАС Y 14,9 (7367) TGC C 8,0 (3980)
ТАА * 0,9 (463) TGA * 1,0 (480)
TAG * 0,5 (263) TGG w 13,0 (6412)
CAT н 14,0 (6930) CGT R 6,6 (3291)
САС н 11,6 (5759) CGC R 6,2 (3093)
САА Q 20,5 (10162) CGA R 4,1 (2018)
CAG Q 16,2 (8038) CGG R 3,1 (1510)
ААТ N 22,4 (11088) AGT S 12,6 (6237)
ААС N 22,8 (11284) AGC S 11,3 (5594)
ААА К 26,9 (13334) AGA R 14,8 (7337)
AAG К 35,9 (17797) AGG R 13,3 (6574)
GAT D 32,4 (16040) GGT G 20,9 (10353)
GAC D 20,4 (10097) GGC G 13,4 (6650)
GAA Е 33,2 (16438) GGA G 22,3 (11022)
GAG Е 33,2 (16426) GGG G 13,0 (6431)
В некоторых вариантах осуществления рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид PIP-72, имеет кодоны, оптимизированные для маиса.
Известны дополнительные модификации последовательности для усиления экспрессии гена у клеточного хозяина. Они включают удаление последовательностей, кодирующих ложные сигналы полиаденилирования, сигналы сайта сплайсинга экзонов и интронов, транспозон-подобные повторы и другие хорошо изученные последовательности, которые могут быть вредны для экспрессии гена. Содержание GC в последовательности можно скорректировать до уровней, средних для данного клеточного хозяина, рассчитываемых с учетом известных генов, экспрессируемых в клетке-хозяине. Используемое в данном документе выражение клетка-хозяин относится к клетке, которая содержит вектор и которая поддерживает репликацию и/или экспрессию предполагаемых векторов экспрессии. Клетки-хозяева могут быть прокариотическими клетками, такими как Е. coli, или эукариотическими клетками, такими как клетки дрожжей, насекомых, амфибий или млекопитающих, или клетками однодольных или двудольных растений. Примером клетки-хозяина, относящейся к однодольному растению, является клетка-хозяин маиса. Если возможно, последовательность модифицируют для того, чтобы избежать образования прогнозируемых шпилечных вторичных структур мРНК.
Кассеты экспрессии могут дополнительно содержать 5'-лидерные последовательности. Такие лидерные последовательности могут способствовать усилению трансляции. Из уровня техники известны трансляционные лидерные последовательности, и они включают лидерные последовательности пикорнавирусов, например, лидерную последовательность EMCV (5'-некодирующий участок генома вируса энцефаломиокардита) (Elroy-Stein et al., (1989), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:6126-6130); лидерные последовательности потивирусов, например лидерная последовательность TEV (вирус гравировки табака) (Gallie, et al., (1995), Gene 165(2):233-238), лидерная последовательность MDMV (вирус карликовой мозаики кукурузы) и белок, связывающий тяжелую цепь иммуноглобулина человека (BiP) (Macejak, et al., (1991), Nature, 353:90-94); нетранслируемую лидерную последовательность мРНК белка оболочки вируса
- 64 031651 мозаики люцерны (AMV RNA 4) (Jobling, et al., (1987), Nature, 325:622-625); лидерную последовательность вируса табачной мозаики (TMV) (Gallie, et al., (1989), в Molecular Biology of RNA, ed. Cech (Liss, New York), p. 237-256) и лидерную последовательность вируса хлорозной мозаичности маиса (MCMV) (Lommel, et al., (1991), Virology 81:382-385). См. также Della-Cioppa, et al., (1987), Plant Physiol. 84:965968. Такие конструкции могут также содержать сигнальную последовательность или лидерную последовательность для облегчения сопряженного с трансляцией или посттрансляционного транспорта пептида в определенные внутриклеточные структуры, такие как хлоропласт (или другая пластида), эндоплазматический ретикулум или аппарат Г ольджи.
Используемая в данном документе сигнальная последовательность относится к последовательности, которая, как известно или как ожидается, приводит к сопряженному с трансляцией или посттрансляционному транспорту пептида через клеточную мембрану. У эукариот это, как правило, подразумевает секрецию в пузырьках аппарата Гольджи, при этом происходит некоторое гликолизирование. Инсектицидные токсины бактерий зачастую синтезируются в виде протоксинов, которые активируются под действием протеолиза в кишечнике целевого вредителя (Chang, (1987), Methods Enzymol. 153:507-516). В некоторых вариантах осуществления сигнальная последовательность расположена в нативной последовательности или может быть получена из последовательности согласно вариантам осуществления. Используемая в данном документе лидерная последовательность относится к любой последовательности, которая при трансляции приводит к аминокислотной последовательности, способной запускать сопряженный с трансляцией транспорт пептидной цепи во внутриклеточную органеллу. Таким образом, это включает лидерные последовательности, нацеливающие транспорт и/или гликозилирование путем перехода в эндоплазматический ретикулум, перехода в вакуоли, пластиды, в том числе хлоропласты, митохондрии и т.п. Кодируемые в ядре белки, нацеленные в компартмент полости тилакоида хлоропластов, имеют характерный двойной транзитный пептид, состоящий из сигнального пептида, нацеливающего на строму, и сигнального пептида, нацеливающего на полость. Информация для нацеливания на строму находится в ближайшей к аминоконцу части транзитного пептида. Сигнальный пептид, нацеливающий на строму, находится в ближайшей к карбоксильному концу части транзитного пептида и содержит всю информацию для нацеливания на полость. Последние исследования по протеомике хлоропластов высших растений добились успеха в идентификации многочисленных кодируемых в ядре белков полости (Kieselbach et al. FEBS LETT, 480:271-276, 2000; Peltier et al. Plant Cell, 12:319-341, 2000; Bricker et al. Biochim. Biophys Acta, 1503:350-356, 2001), из которых сигнальный пептид, нацеливающий на полость, может потенциально применяться в соответствии с настоящим раскрытием. О приблизительно 80 белках из Arabidopsis, а также гомологичных белках из шпината и гороха огородного сообщается в Kieselbach et al., Photosynthesis Research, 78:249-264, 2003. В частности, в табл. 2 этой публикации, которая включена в настоящее описание посредством ссылки, раскрыто 85 белков из полости хлоропласта, идентифицированных по их номеру доступа (см. также публикацию заявки на патент США 2009/09044298). В дополнение, опубликованная недавно предварительная версия генома риса (Goff et al., Science, 296:92-100, 2002) является подходящим источником для информации о сигнальном пептиде, нацеливающим на полость, который можно применять в соответствии с настоящим раскрытием.
Подходящие транзитные пептиды хлоропластов (CTP), хорошо известные специалисту в данной области, также включают химерные CTP, содержащие без ограничения N-концевой домен, центральный домен или C-концевой домен из CTP из 1-дезокси-Э ксилоза-5-фосфатсинтазы Oryza sativa, супероксиддисмутазы Oryza sativa, синтазы растворимого крахмала Oryza sativa, NADP-зависимого фермента, действующего на яблочную кислоту, Oryza sativa, фосфо-2-дегидро-3-дезоксигептонатальдолазы 2 Oryza sativa, L-аскорбатпероксидазы 5 Oryza sativa, фосфоглюкан-вода-дикиназы Oryza sativa, ssRUBISCO Zea Mays, бета-глюкозидазы Zea Mays, малатдегидрогеназы Zea Mays, тиоредоксина M-типа Zea Mays (заявка публикации на патент США 2012/0304336). Транзитные пептиды хлоропластов из заявок публикации на патент США US2013/0205440A1, ^2013/0205441А1 и US2013/0210114A1.
Ген полипептида PIP-72, подлежащего нацеливанию в хлоропласт, можно оптимизировать для экспрессии в хлоропласте с учетом отличий по использованию кодонов между растительным ядром и этой органеллой. Таким образом, нуклеиновые кислоты, представляющие интерес, можно синтезировать с применением кодонов, предпочтительных для хлоропласта. См., например, патент США № 5380831, включенный в данный документ посредством ссылки.
При получении кассеты экспрессии с различными фрагментами ДНК можно проводить манипуляции так, чтобы получить последовательности ДНК в надлежащей ориентации и, при необходимости, в надлежащей рамке считывания. С этой целью, для соединения фрагментов ДНК можно использовать адаптеры или линкеры, или можно задействовать другие манипуляции для обеспечения подходящих сайтов рестрикции, удаления избыточной ДНК, удаления сайтов рестрикции и т.п. С этой целью можно задействовать мутагенез in vitro, репарацию с помощью праймеров, рестрикцию, гибридизацию, повторные замены, например, транзиции и трансверсии.
При практическом осуществлении вариантов осуществления можно применять ряд промоторов. Промоторы можно выбирать, исходя из требуемого результата. Нуклеиновые кислоты можно комбинировать с конститутивными, специфическими в отношении ткани, индуцируемыми или другими промото
- 65 031651 рами для экспрессии в организме-хозяине. Промоторы по настоящему изобретению включают гомологи цис-элементов, которые, как известно, влияют на регуляцию генов, характеризующихся гомологией с промоторными последовательностями по настоящему изобретению. Эти цис-элементы включают, без ограничения, чувствительные к кислороду цис-элементы (Cowen et al., J Biol. Chem. 268(36):26904-26910 (1993)), элементы, регулируемые светом (Bruce and Quaill, Plant Cell, 2(11):1081-1089 (1990); Bruce et al., EMBO J. 10:3015-3024 (1991); Rocholl et al., Plant Sci. 97:189-198 (1994); Block et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:5387-5391 (1990); Giuliano et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:7089-7093 (1988); Staiger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:6930-6934 (1989); Izawa et al., Plant Cell, 6:1277-1287 (1994); Menkens et al., Trends in Biochemistry, 20:506-510 (1995); Foster et al., FASEB J. 8:192-200 (1994); Plesse et al., Mol Gen Gene, 254:258-266 (1997); Green et al., EMBO J. 6:2543-2549 (1987); Kuhlemeier et al., Ann. Rev Plant Physiol. 38:221-257 (1987); Villain et al., J. Biol. Chem. 271:32593-32598 (1996); Lam et al., Plant Cell, 2:857866 (1990); Gilmartin et al., Plant Cell, 2:369-378 (1990); Datta et al., Plant Cell, 1:1069-1077 (1989); Gilmartin et al., Plant Cell, 2:369-378 (1990); Castresana et al., EMBO J. 7:1929-1936 (1988); Ueda et al., Plant Cell, 1:217-227 (1989); Terzaghi et al., Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 46:445-474 (1995); Green et al., EMBO J. 6:2543-2549 (1987); Villain et al., J. Biol. Chem. 271:32593-32598 (1996); Tjaden et al., Plant Cell, 6:107-118(1994); Tjaden et al., Plant Physiol. 108:1109-1117 (1995); Ngai et al., Plant J. 12:1021-1234 (1997); Bruce et al., EMBO J. 10:3015-3024 (1991); Ngai et al., Plant J. 12:1021-1034 (1997)), elements responsive to gibberellin, (Muller et al., J. Plant Physiol. 145:606-613 (1995); Croissant et al., Plant Science 116:27-35 (1996); Lohmer et al., EMBO J. 10:617-624 (1991); Rogers et al., Plant Cell, 4:1443-1451 (1992); Lanahan et al., Plant Cell, 4:203-211 (1992); Skriver et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:7266-7270 (1991); Gilmartin et al., Plant Cell, 2:369-378 (1990); Huang et al., Plant Mol. Biol. 14:655-668 (1990), Gubler et al., Plant Cell, 7:1879-1891 (1995)), элементы, чувствительные к абсцизовой кислоте (Busk et al., Plant Cell, 9:2261-2270 (1997); Guiltinan et al., Science, 250:267-270 (1990); Shen et al., Plant Cell, 7:295-307 (1995); Shen et al., Plant Cell, 8:1107-1119 (1996); Seo et al., Plant Mol. Biol. 27:1119-1131 (1995); Marcotte et al., Plant Cell 1:969-976 (1989); Shen et al., Plant Cell, 7:295-307 (1995); Iwasaki et al., Mol. Gen. Genet. 247:391-398 (1995); Hattori et al., Genes Dev. 6:609-618 (1992); Thomas et al., Plant Cell, 5:1401-1410 (1993)), элементы, подобные элементами, чувствительным к абсцизовой кислоте (Ellerstrom et al., Plant Mol. Biol. 32:1019-1027 (1996)), элементы, чувствительные к ауксину (Liu et al., Plant Cell, 6:645-657 (1994); Liu et al., Plant Physiol. 115:397-407 (1997); Kosugi et al., Plant J. 7:877-886 (1995); Kosugi et al., Plant Cell, 9:1607-1619 (1997); Ballas et al., J. Mol. Biol. 233:580-596 (1993)), цис-элемент, чувствительный к действию метилжасмоната (Beaudoin and Rothstein, Plant Mol. Biol. 33:835-846 (1997)), цис-элемент, чувствительный к абсцизовой кислоте и стрессовой реакции (Straub et al., Plant Mol. Biol. 26:617-630 (1994)), цис-элементы, чувствительные к этилену (Itzhaki et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91:8925-8929 (1994); Montgomery et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:5939-5943 (1993); Sessa et al., Plant Mol. Biol. 28:145-153 (1995); Shinshi et al., Plant Mol. Biol. 27:923-932 (1995)), цис-элементы, чувствительные к салициловой кислоте (Strange et al., Plant J. 11:1315-1324 (1997); Qin et al., Plant Cell 6:863-874 (1994)), цис-элементы, которые отвечают на водный стресс и абсцизовую кислоту (Lam et al., J. Biol. Chem. 266:17131-17135 (1991); Thomas et al., Plant Cell 5:1401-1410 (1993); Pla et al., Plant Mol. Biol. 21:259-266 (1993)), цис-элемент, необходимый для специфической для M-фазы экспрессии (Ito et al., Plant Cell, 10:331-341 (1998)), элементы, чувствительные к сахарозе (Huang et al., Plant Mol. Biol. 14:655-668 (1990); Hwang et al., Plant Mol. Biol. 36:331-341 (1998); Grierson et al., Plant J. 5:815-826 (1994)), элементы, чувствительные к тепловому шоку (Pelham et al., Trends Genet. 1:31-35 (1985)), элементы, чувствительные к ауксину и/или салициловой кислоте и также, как описано, к регуляции светом (Lam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:7890-7897 (1989); Benfey et al., Science 250:959-966 (1990)), элементы, чувствительные к этилену и салициловой кислоте (Ohme-Takagi et al., Plant Mol. Biol. 15:941-946 (1990)), элементы, чувствительные к повреждению и абиотическому стрессу (Loake et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:9230-9234 (1992); Mhiri et al., Plant Mol. Biol. 33:257-266 (1997)), элементы, чувствительные к антиоксидантам (Rushmore et al., J. Biol. Chem. 266:11632-11639; Dalton et al., Nucleic Acids Res. 22:5016-5023 (1994)), Sph-элементы (Suzuki et al., Plant Cell 9:799-807 1997)), элементы, чувствительные к элиситору (Fukuda et al., Plant Mol. Biol. 34:81-87 (1997); Rushton et al., EMBO J. 15:5690-5700 (1996)), элементы, чувствительные к металлам (Stuart et al., Nature 317:828-831 (1985); Westin et al., EMBO J. 7:3763-3770 (1988); Thiele et al., Nucleic Acids Res. 20:1183-1191 (1992); Faisst et al., Nucleic Acids Res. 20:3-26 (1992)), элементы, чувствительные к низким температурам (Baker et al., Plant Mol. Biol. 24:701-713 (1994); Jiang et al., Plant Mol. Biol. 30:679-684 (1996); Nordin et al., Plant Mol. Biol. 21:641-653 (1993); Zhou et al., J. Biol. Chem. 267:23515-23519 (1992)), элементы, чувствительные к засухе (Yamaguchi et al., Plant Cell 6:251-264 (1994); Wang et al., Plant Mol. Biol. 28:605-617 (1995); Bray EA, Trends in Plant Science 2:48-54 (1997)) энхансерные элементы к глютенину (Colot et al., EMBO J. 6:3559-3564 (1987); Thomas et al., Plant Cell 2:1171-1180 (1990); Kreis et al., Philos. Trans. R. Soc. Lond., B314:355-365 (1986)), не зависящие от света регуляторные элементы (Lagrange et al., Plant Cell 9:1469-1479 (1997); Villain et al., J. Biol. Chem. 271:32593-32598 (1996)), OCS-энхансерные элементы (Bouchez et al., EMBO J. 8:4197-4204 (1989); Foley et al., Plant J. 3:669-679 (1993)), ACGT-элементы (Foster et al., FASEB J. 8:192-200 (1994); Izawa et al., Plant Cell 6:1277-1287 (1994); Izawa et al., J. Mol. Biol. 230:1131-1144 (1993)), отрицательные цис-элементы в генах, связанных с
- 66 031651 пластидами (Zhou et al., J. Biol. Chem. 267:23515-23519 (1992); Lagrange et al., Mol. Cell Biol. 13:2614-2622 (1993); Lagrange et al., Plant Cell, 9:1469-1479 (1997); Zhou et al., J. Biol. Chem. 267:23515-23519 (1992)), бокс-элементы проламина (Forde et al., Nucleic Acids Res. 13:7327-7339 (1985); Colot et al., EMBO J. 6:3559-3564 (1987); Thomas et al., Plant Cell, 2:1171-1180 (1990); Thompson et al., Plant Mol. Biol. 15:755764 (1990); Vicente et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94:7685-7690 (1997)), элементы в энхансерах из гена тяжелой цепи IgM (Gillies et al., Cell, 33:717-728 (1983); Whittier et al., Nucleic Acids Res. 15:2515-2535 (1987)). Примеры промоторов включают описанные в патенте США № 6437217 (промотор RS81 маиса), патенте США № 5641876 (промотор актина риса), патенте США № 6426446 (промотор RS324 маиса), патенте США № 6429362 (промотор PR-1 маиса), патенте США № 6232526 (промотор A3 маиса), патенте США № 6177611 (конститутивные промоторы маиса), патентах США № 5322938, 5352605, 5359142 и 5530196 (промотор 35S), патенте США № 6433252 (промотор L3 олеозина маиса, P-Zm.L3), патенте США № 6429357 (промотор 2 актина риса, а также интрон 2 актина риса), патенте США № 5837848 (промотор, специфичный для корней), патенте США № 6294714 (индуцируемые светом промоторы), патенте США № 6140078 (индуцируемые солями промоторы), патенте США № 6252138 (индуцируемые патогенами промоторы), патенте США № 6175060 (индуцируемые недостаточностью фосфора промоторы), патенте США № 6635806 (промотор гамма-коиксина, P-CI.Gcx), публикации заявки на патент США № 09/757089 (промотор альдолазы хлоропластов маиса) и патенте США № 8772466 (фактор транскрипции маиса ядерный фактор B (NFB2)).
Подходящие конститутивные промоторы для применения в растительной клетке-хозяине включают, например, коровый промотор промотора Rsyn7 и другие конститутивные промоторы, раскрытые в WO 1999/43838 и патенте США № 6072050; коровый промотор CaMV 35S (Odell, et al., (1985), Nature, 313:810-812); промотор актина риса (McElroy, et al., (1990), Plant Cell 2:163-171); убиквитина (Christensen, et al., (1989), Plant Mol. Biol. 12:619-632 и Christensen, et al., (1992), Plant Mol. Biol. 18:675689); pEMU (Last, et al., (1991) Theor. Appl. Genet. 81:581-588); MAS (Velten, et al., (1984), EMBO J. 3:2723-2730); ALS (патент США № 5659026) и т.п. Другие конститутивные промоторы включают, например, раскрытые в патентах США № 5608149; 5608144; 5604121; 5569597; 5466785; 5399680; 5268463; 5608142 и 6177611. Подходящие конститутивные промоторы также включают промоторы, которые характеризуются значительной экспрессией почти во всех тканях, однако, характеризуются низкой экспрессией в пыльце, в том числе без ограничения: промоторы вируса полосатости банана (Acuminata Yunnan) (BSV(AY)), раскрытые в патенте США US8338662; промоторы вируса полосатости банана (Acuminata Vietnam) (BSV(AV)), раскрытые в патенте США US8350121, и промоторы вируса полосатости банана (Mysore) (BSV(MYS)), раскрытые в патенте США US8395022.
В зависимости от требуемого результата, может быть полезно экспрессировать ген при помощи индуцируемого промотора. Особый интерес для регуляции экспрессии нуклеотидных последовательностей согласно вариантам осуществления у растений представляют собой индуцируемые ранением промоторы. Такие индуцируемые ранением промоторы могут реагировать на повреждение, вызванное питанием насекомого, и они включают ген ингибитора протеиназы картофеля (pin II) (Ryan, (1990), Ann. Rev. Phytopath. 28:425-449; Duan, et al., (1996), Nature Biotechnology 14:494-498); wun1 и wun2, патент США № 5428148; win1 и win2 (Stanford, et al., (1989), Mol. Gen. Genet. 215:200-208); системин (McGurl, et al., (1992) Science 225:1570-1573); WIP1 (Rohmeier, et al., (1993) Plant Mol. Biol. 22:783-792; Eckelkamp, et al., (1993) FEBS Letters 323:73-76); ген MPI (Corderok, et al., (1994), Plant J. 6(2):141-150) и т.п., включенные в данный документ посредством ссылки.
Кроме того, в способах и нуклеотидных конструкциях согласно вариантам осуществления можно использовать индуцируемые патогеном промоторы. Такие индуцируемые патогеном промоторы включают промоторы из патоген-связанных белков (PR-белки), которые индуцируются после заражения патогеном; например, PR-белки, SAR-белки, бета-1,3-глюканаза, хитиназа и т.д. См., например, Redolfi, et al., (1983), Neth. J. Plant Pathol. 89:245-254; Uknes, et al., (1992) Plant Cell 4: 645-656 и Van Loon, (1985), Plant Mol. Virol. 4:111-116. См. также WO 1999/43819, включенную в данный документ посредством ссылки.
Представляют интерес промоторы, которые экспрессируются локально в месте заражения патогеном или рядом с ним. См., например, Marineau, et al., (1987), Plant Mol. Biol. 9:335-342; Matton, et al., (1989), Molecular Plant-Microbe Interactions 2:325-331; Somsisch, et al., (1986), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83:2427-2430; Somsisch, et al., (1988), Mol. Gen. Genet. 2:93-98 и Yang, (1996), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93:14972-14977. См. также Chen, et al., (1996), Plant J. 10:955-966; Zhang, et al., (1994), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:2507-2511; Warner, et al., (1993), Plant J. 3:191-201; Siebertz, et al., (1989), Plant Cell, 1:961968; патент США № 5750386 (индуцируемый нематодами) и ссылочные документы, процитированные в них. Особый интерес представляет индуцируемый промотор для гена маиса PRms, экспрессия которого индуцируется патогеном Fusarium moniliforme (см., например, Cordero et al. Mol. Plant Path. 41:189-200).
Регулируемые химическими веществами промоторы можно применять для модуляции экспрессии гена в растении посредством внесения экзогенного химического регулятора. В зависимости от цели промотор может представлять собой индуцируемый химическим веществом промотор, при этом применение химического вещества индуцирует экспрессию гена, или репрессируемый химическим веществом промотор, при этом применение химического вещества подавляет экспрессию гена. Индуцируемые химиче
- 67 031651 скими веществами промоторы известны из уровня техники и включают, без ограничения, промотор In2-2 маиса, который активируется антидотами к бензолсульфонамидным гербицидам, промотор GST маиса, который активируется гидрофобными электрофильными соединениями, которые применяются в качестве предвсходовых гербицидов, и промотор PR-1a табака, который активируется салициловой кислотой. Другие регулируемые химическими веществами промоторы, представляющие интерес, включают чувствительные к стероидам промоторы (см., например, индуцируемый глюкокортикоидом промотор в Schena, et al., (1991), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:10421-10425 и McNellis, et al., (1998), Plant J. 14(2):247-257), а также индуцируемые тетрациклинами и репрессируемые тетрациклинами промоторы (см., например, Gatz, et al., (1991) Mol. Gen. Genet. 227:229-237 и патенты США № 5814618 и 5789156), включенные в данный документ посредством ссылки.
Для целенаправленного воздействия на усиленную экспрессию полипептида PIP-72 в конкретной ткани растения можно использовать предпочтительные для тканей промоторы. Промоторы, активные преимущественно в определенной ткани, включают промоторы, рассматриваемые в Yamamoto, et al., (1997), Plant J. 12(2):255-265; Kawamata, et al., (1997), Plant Cell Physiol. 38(7):792-803; Hansen, et al., (1997), Mol. Gen Genet. 254(3):337-343; Russell, et al., (1997), Transgenic Res. 6(2):157-168; Rinehart, et al., (1996), Plant Physiol. 112(3):1331-1341; Van Camp, et al., (1996), Plant Physiol. 112(2):525-535; Canevascini, et al., (1996), Plant Physiol. 112(2):513-524; Yamamoto, et al., (1994), Plant Cell Physiol. 35(5):773-778; Lam, (1994), Results Probl. Cell Differ. 20:181-196; Orozco, et al., (1993), Plant Mol Biol. 23(6):1129-1138; Matsuoka, et al., (1993), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90(20):9586-9590 и Guevara-Garcia, et al., (1993), Plant. J. 4(3):495-505. В случае необходимости, такие промоторы можно модифицировать с получением слабой экспрессии.
Промоторы, активные преимущественно в листьях, известны из уровня техники. См., например, Yamamoto, et al., (1997), Plant J. 12(2):255-265; Kwon, et al., (1994), Plant Physiol. 105:357-67; Yamamoto, et al., (1994), Plant Cell Physiol. 35(5):773-778; Gotor, et al., (1993), Plant J. 3:509-18; Orozco, et al., (1993), Plant Mol. Biol. 23(6):1129-1138 и Matsuoka, et al., (1993), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90(20):9586-9590. Известны промоторы, активные преимущественно в корнях, или промоторы, специфические в отношении к корней, и их можно выбирать из многих доступных из литературы или выделенных de novo из различных совместимых видов. См., например, Hire, et al., (1992), Plant Mol. Biol. 20(2):207-218 (специфичный в отношении корней сои ген глутаминсинтетазы); Keller and Baumgartner, (1991), Plant Cell, 3(10):1051-1061 (специфичный в отношении корней регуляторный элемент в гене GRP 1.8 фасоли); Sanger, et al., (1990), Plant Mol. Biol. 14(3):433-443 (специфичный в отношении корней ген маннопинсинтазы (MAS) Agrobacterium tumefaciens) и Miao, et al., (1991), Plant Cell, 3(1):11-22 (клон кДНК полной длины, кодирующий цитозольную глутаминсинтазу (GS), которая экспрессируется в корнях и корневых клубеньках сои). См. также Bogusz et al. (1990), Plant Cell, 2(7):633-641, где описаны два промотора, специфические в отношении корней, выделенные из генов гемоглобина из азотфиксирующего растения Parasponia andersonii, не относящегося к бобовым, и родственного растения Trema tomentosa, не относящегося к бобовым и не являющегося азотфиксирующим. Промоторы этих генов были связаны с репортерным геном β-глюкуронидазы и введены как в Nicotiana tabacum, не относящееся к бобовым, так и в бобовое Lotus corniculatus, и при этом в обоих случаях специфическая в отношении корней активность промотора сохранялась. Leach and Aoyagi (1991) описывают свой анализ промоторов, обеспечивающих высокий уровень экспрессии генов rolC и rolD Agrobacterium rhizogenes, индуцирующих разрастание корней (см. Plant Science (Limerick) 79(1):69-76). Авторы пришли к выводу, что в этих промоторах энхансер и ДНК-детерминанты, активные преимущественно в определенной ткани, разделены. Teeri et al. (1989) применяли слияние гена с lacZ для того, чтобы показать, что ген из T-ДНК Agrobacterium, кодирующий октопинсинтазу, является особенно активным в эпидермисе кончика корня, и что ген TR2' является специфическим в отношении корней в интактном растении и стимулируется при ранении в ткани листа, что является особенно целесообразной комбинацией характеристик для применения с инсектицидным или ларвицидным геном (см. EMBO J. 8(2):343-350). Ген TRT, слитый с nptII (неомицинфосфотрансфераза II), продемонстрировал аналогичные характеристики. Дополнительные промоторы, активные преимущественно в корнях, включают промотор гена VfENOD-GRP3 (Kuster, et al., (1995), Plant Mol. Biol. 29(4):759-772) и промотор rolB (Capana, et al., (1994), Plant Mol. Biol. 25(4):681-691.
См. также патенты США № 5837876; 5750386; 5633363; 5459252; 5401836; 5110732 и 5023179. Регуляторные последовательности, активные преимущественно в корнях Arabidopsis thaliana, раскрыты в US20130117883. Промоторы RCc3, активные преимущественно в корнях сорго (Sorghum bicolor), раскрыты в заявке на патент США US20120210463. Промоторы, активные преимущественно в корнях маиса, раскрыты в публикации заявки на патент США 20030131377, патентах США № 7645919 и 8735655. Промоторы, специфические по отношению к корневому чехлику маиса 1 (ZmRCPI), раскрыты в публикации заявки на патент США 20130025000. Промоторы, активные преимущественно в корнях маиса, раскрыты в публикации заявки на патент США 20130312136.
Промоторы, активные преимущественно в семени, включают как промоторы, специфические по отношению к семени (промоторы, которые активны во время развития семени, такие как промоторы запасных белков семени), так и промоторы прорастания семени (промоторы, которые активны во время
- 68 031651 прорастания семени). См. Thompson, et al., (1989), BioEssays 10:108, включенную в настоящий документ посредством ссылки. Такие промоторы, активные преимущественно в семени, включают, без ограничения, Cim1 (индуцируемый цитокинином транскрипт); CZ19B1 (19 кДа зеин маиса) и milps (миоинозитол-1-фосфатсинтаза); (см. патент США № 6225529, включенный в настоящий документ посредством ссылки). γ-зеин и Glb-1 представляют собой специфические в отношении эндосперма промоторы. В случае двудольных растений, промоторы, специфические в отношении семени, включают, без ограничения, промотор гена ингибитора трипсина Кунитца 3 (KTi3) (Jofuku and Goldberg, (1989), Plant Cell 1:10791093), β-фазеолина бобов, напина, β-конглицинина, глицинина 1, лектина сои, круциферина и т.п. В случае однодольных растений, промоторы, специфические в отношении семени, включают, без ограничения, промоторы из генов 15 кДа зеина маиса, 22 кДа зеина, 27 кДа зеина, γ-зеина, waxy, shrunken 1, shrunken 2, глобулина 1 и т.д. См. также WO 2000/12733, где раскрыты промоторы, активные преимущественно в семени, из генов end1 и end2, включенную в данный документ посредством ссылки. У двудольных растений, промоторы, специфические по отношению к семени, включают, без ограничения, промотор гена белков семенной оболочки из Arabidopsis, pBAN; а также промоторы генов раннего развития семян из Arabidopsis, p26, p63 и p63tr (патенты США № 7294760 и 7847153). Промотор, характеризующийся преимущественной экспрессией в конкретной ткани, экспрессируется в такой ткани в большей степени, чем по меньшей мере в одной другой растительной ткани. Для некоторых промоторов, активных преимущественно в определенной ткани, показана экспрессия почти исключительно в конкретной ткани.
Если требуется низкий уровень экспрессии, будут применяться слабые промоторы. Как правило, используемое в данном документе выражение слабый промотор относится к промотору, который управляет экспрессией кодирующей последовательности на низком уровне. Под низким уровнем экспрессии подразумевают уровни от приблизительно 1/1000 до приблизительно 1/100000 транскриптов, до приблизительно 1/500000 транскриптов. В качестве альтернативы понятно, что выражение слабые промоторы также охватывает промоторы, которые управляют экспрессией только в некоторых клетках и не управляют в других, что приводит к общему низкому уровню экспрессии. Если промотор управляет экспрессией с неприемлемо высокими уровнями, части промоторной последовательности можно удалить или модифицировать для снижения уровней экспрессии.
Такие слабые конститутивные промоторы включают, например, коровый промотор промотора Rsyn7 (WO 1999/43838 и патент США № 6072050), коровый промотор 35S CaMV и т.п. Другие конститутивные промоторы включают, например, раскрытые в патентах США № 5608149; 5608144; 5604121; 5569597; 5466785; 5399680; 5268463; 5608142 и 6177611, включенных в данный документ посредством ссылки.
Приведенный выше перечень промоторов не предназначен для ограничения. В вариантах осуществления можно применять любой подходящий промотор.
Как правило, кассета экспрессии будет содержать ген селектируемого маркера для отбора трансформированных клеток. Гены селектируемых маркеров используют для отбора трансформированных клеток или тканей. Гены маркеров включают гены, кодирующие устойчивость к антибиотику, такие как гены, кодирующие неомицинфосфотрансферазу II (NEO) и гигромицинфосфотрансферазу (HPT), а также гены, обеспечивающие устойчивость к гербицидным соединениям, таким как глуфосинат аммония, бромоксинил, имидазолиноны и 2,4-дихлорфеноксиацетат (2,4-D). Дополнительные примеры генов подходящих селектируемых маркеров включают, без ограничения, гены, кодирующие устойчивость к хлорамфениколу (Herrera Estrella, et al., (1983), EMBO J. 2:987-992); метотрексату (Herrera Estrella, et al., (1983), Nature 303:209-213 и Meijer, et al., (1991), Plant Mol. Biol. 16:807-820); стрептомицину (Jones, et al., (1987), Mol. Gen. Genet. 210:86-91); спектиномицину (Bretagne-Sagnard, et al., (1996), Transgenic Res. 5:131-137); блеомицину (Hille, et al., (1990), Plant Mol. Biol. 7:171-176); сульфонамиду (Guerineau, et al., (1990), Plant Mol. Biol. 15:127-136); бромоксинилу (Stalker, et al., (1988), Science, 242:419-423); глифосату (Shaw, et al., (1986), Science, 233:478-481 и патентные заявки США № 10/004357 и 10/427692); фосфинотрицину (DeBlock, et al., (1987), EMBO J. 6:2513-2518). См. в общих чертах Yarranton, (1992), Curr. Opin. Biotech. 3:506-511; Christopherson, et al., (1992), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:6314-6318; Yao, et al., (1992), Cell 71:63-72; Reznikoff, (1992), Mol. Microbiol. 6:2419-2422; Barkley, et al., (1980), в The Operon, p. 177-220; Hu, et al., (1987), Cell, 48:555-566; Brown, et al., (1987), Cell, 49:603-612; Figge, et al., (1988), Cell, 52:713722; Deuschle, et al., (1989), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:5400-5404; Fuerst, et al., (1989), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:2549-2553; Deuschle, et al., (1990), Science, 248:480-483; Gossen, (1993), Ph.D. Thesis, University of Heidelberg; Reines, et al., (1993), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:1917-1921; Labow, et al., (1990), Mol. Cell. Biol. 10:3343-3356; Zambretti, et al., (1992), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:3952-3956; Baim, et al., (1991), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:5072-5076; Wyborski, et al., (1991), Nucleic Acids Res. 19:4647-4653; Hillenand-Wissman, (1989), Topics Mol. Struc. Biol. 10:143-162; Degenkolb, et al., (1991), Antimicrob. Agents Chemother. 35:1591-1595; Kleinschnidt, et al., (1988), Biochemistry, 27:1094-1104; Bonin, (1993), Ph.D. Thesis, University of Heidelberg; Gossen, et al., (1992), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:55475551; Oliva, et al., (1992), Antimicrob. Agents Chemother. 36:913-919; Hlavka, et al., (1985), Handbook of
- 69 031651
Experimental Pharmacology, Vol. 78 (Springer-Verlag, Berlin) и Gill, et al., (1988), Nature, 334:721-724. Такие раскрытия включены в данный документ посредством ссылки.
Приведенный выше перечень генов селектируемых маркеров не предназначен для ограничения. Любой ген селектируемого маркера можно применять в вариантах осуществления.
Трансформация растений.
Способы согласно вариантам осуществления включают введение полипептида или полинуклеотида в растение. Используемое в данном документе введение означает включение в растение полинуклеотида или полипептида таким образом, что последовательность попадает внутрь клетки растения. Способы согласно вариантам осуществления не зависят от конкретного способа введения полинуклеотида или полипептида в растение, нужно только, чтобы полинуклеотид или полипептиды попадали внутрь по меньшей мере одной клетки растения. Из уровня техники известны способы введения полинуклеотида или полипептидов в растения, в том числе без ограничений способы стабильной трансформации, способы временной трансформации и способы трансформации, опосредованной вирусами.
Используемая в данном документе стабильная трансформация означает, что нуклеотидная конструкция, введенная в растение, интегрируется в геном растения и может наследоваться его потомством. Используемая в данном документе временная трансформация означает, что полинуклеотид вводится в растение и не интегрируется в геном растения, или в растение вводится полипептид. Используемое в данном документе растение относится к целым растениям, органам растения (например, листьям, стеблям, корням и т.д.), семенам, растительным клеткам, частям растения для вегетативного размножения, зародышам и их потомству. Растительные клетки могут быть дифференцированными или недифференцированными (например, клетками каллюса, клетками суспензионных культур, протопластами, клетками листьев, клетками корней, клетками флоэмы и пыльцой).
Протоколы трансформации, а также протоколы для введения нуклеотидных последовательностей в растения могут варьировать в зависимости от типа растения или растительной клетки, т.е. однодольного или двудольного растения, предназначенного для трансформации. Подходящие способы введения нуклеотидных последовательностей в растительные клетки и последующей вставки в геном растения включают микроинъекцию (Crossway, et al., (1986) Biotechniques 4:320-334), электропорацию (Riggs, et al., (1986), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83:5602-5606), трансформацию, опосредованную Agrobacterium (патенты США № 5563055 и 5981840), прямой перенос генов (Paszkowski, et al., (1984), EMBO J. 3:2717-2722) и баллистическое ускорение частиц (см., например, патенты США № 4945050; 5879918; 5886244 и 5932782; Tomes, et al., (1995), в Plant Cell, Tissue, and Organ Culture: Fundamental Methods, ed. Gamborg and Phillips, (Springer-Verlag, Berlin) и McCabe, et al., (1988), Biotechnology, 6:923-926) и трансформацию гена Led (WO 00/28058). Что касается трансформации картофеля, см. Tu, et al., (1998), Plant Molecular Biology, 37:829-838 и Chong, et al., (2000), Transgenic Research 9:71-78. Дополнительные процедуры трансформации можно найти у Weissinger, et al., (1988), Ann. Rev. Genet. 22:421-477; Sanford, et al., (1987), Particulate Science and Technology, 5:27-37 (лук); Christou, et al., (1988), Plant Physiol. 87:671-674 (соя); McCabe, et al., (1988), Bio/Technology, 6:923-926 (соя); Finer and McMullen, (1991), In Vitro Cell Dev. Biol. 27P:175-182 (соя); Singh, et al., (1998) Theor. Appl. Genet. 96:319-324 (соя); Datta, et al., (1990), Biotechnology, 8:736-740 (рис); Klein, et al., (1988), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:4305-4309 (маис); Klein, et al., (1988), Biotechnology 6:559-563 (маис); патенты США № 5240855; 5322783 и 5324646; Klein, et al., (1988), Plant Physiol. 91:440-444 (маис); Fromm, et al., (1990), Biotechnology, 8:833-839 (маис); Hooykaas-Van Slogteren, et al., (1984), Nature (London) 311:763-764; патент США № 5736369 (злаки); Bytebier, et al., (1987), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84:5345-5349 (Liliaceae); De Wet, et al., (1985), в The Experimental Manipulation of Ovule Tissues, ed. Chapman, et al., (Longman, New York), p. 197-209 (пыльца); Kaeppler, et al., (1990), Plant Cell Reports, 9:415-418 и Kaeppler, et al., (1992), Theor. Appl. Genet. 84:560566 (трансформация, опосредованная вискерами); D'Halluin, et al., (1992), Plant Cell, 4:1495-1505 (электропорация); Li, et al., (1993), Plant Cell Reports, 12:250-255 и Christou and Ford, (1995), Annals of Botany, 75:407-413 (рис); Osjoda, et al., (1996), Nature Biotechnology, 14:745-750 (трансформация маиса с помощью Agrobacterium tumefaciens); все из которых включены в данный документ посредством ссылки.
В конкретных вариантах осуществления последовательности согласно вариантам осуществления можно вводить в растение с применением ряда способов временной трансформации. Такие способы временной трансформации включают, без ограничения, введение полипептида PIP-72 или его вариантов и фрагментов непосредственно в растение или введение транскрипта полипептида PIP-72 в растение. Такие способы включают, например, микроинъекцию или бомбардировку частицами. См., например, Crossway, et al., (1986), Mol. Gen. Genet. 202:179-185; Nomura, et al., (1986), Plant Sci. 44:53-58; Hepler, et al., (1994), Proc. Natl. Acad. Sci. 91:2176-2180 и Hush, et al., (1994), The Journal of Cell Science, 107:775-784, все из которых включены в данный документ посредством ссылки. Альтернативно, растение можно временно трансформировать с помощью полинуклеотида для полипептида PIP-72 с применением методик, известных из уровня техники. Такие методики включают применение вирусной векторной системы и осаждение полинуклеотида таким способом, который исключает последующее высвобождение ДНК. Таким образом, может происходить транскрипция ДНК, связанной с частицами, но частота, с которой она высвобождается для интеграции в геном, в значительной степени снижена. Такие способы включают при
- 70 031651 менение частиц, покрытых полиэтиленимином (PEI; Sigma, кат. № Р3143).
Из уровня техники известны способы нацеленной вставки полинуклеотида в специфическое местоположение в геноме растения. В одном варианте осуществления вставку полинуклеотида в требуемое местоположение в геноме выполняют с использованием системы сайт-специфической рекомбинации. См., например, WO 1999/25821, WO 1999/25854, WO 1999/25840, WO 1999/25855 и WO 1999/25853, все из которых включены в данный документ посредством ссылки. Вкратце, полинуклеотид согласно вариантам осуществления может содержаться в кассете для переноса, фланкированной двумя неидентичными сайтами рекомбинации. Кассету для переноса вводят в растение со стабильно встроенным целевым сайтом в своем геноме, который фланкирован двумя неидентичными сайтами рекомбинации, которые соответствуют сайтам кассеты для переноса. Обеспечивают подходящую рекомбиназу, и кассета для переноса интегрируется в целевой сайт. Полинуклеотид, представляющий интерес, таким образом, интегрируется в конкретное хромосомное положение в геноме растения.
Векторы для трансформации растений могут состоять из одного или нескольких ДНК-векторов, необходимых для достижения трансформации растения. Например, общепринятой практикой в уровне техники является использование векторов для трансформации растений, которые состоят из более одного смежного сегмента ДНК. В уровне техники эти векторы зачастую называют бинарными векторами. Бинарные векторы, а также векторы с плазмидами-помощниками наиболее часто применяются при трансформации, опосредованной Agrobacterium, при этом размер и сложность сегментов ДНК, необходимых для достижения эффективной трансформации, являются очень большими, и предпочтительным является разделение функций на отдельных молекулах ДНК. Бинарные векторы, как правило, содержат плазмидный вектор, который содержит действующие в цис-положении последовательности, требуемые для переноса T-ДНК (как, например, левой границы и правой границы), селектируемый маркер, который разрабатывают таким образом, что он может экспрессироваться в растительной клетке, и ген, представляющий интерес (ген, разработанный таким образом, что он может экспрессироваться в растительной клетке, из которой требуется получить трансгенные растения). Также в этом плазмидном векторе присутствуют последовательности, требуемые для репликации в бактериях. Действующие в цис-положении последовательности расположены так, чтобы обеспечить возможность эффективного переноса в растительные клетки и экспрессии в них. Например, ген селектируемого маркера и пестицидного гена расположены между левой и правой границами. Часто второй плазмидный вектор содержит действующие в трансположении факторы, которые опосредуют перенос T-ДНК из Agrobacterium в растительные клетки. Эта плазмида часто содержит функции вирулентности (гены Vir), что обеспечивает возможность заражения растительных клеток Agrobacterium и перенос ДНК путем расщепления по граничным последовательностям и переноса ДНК, опосредованного vir, как понятно из уровня техники (Hellens and Mullineaux, (2000) Trends in Plant Science 5:446-451). Несколько типов штаммов Agrobacterium (например, LBA4404, GV3101, EHA101, EHA105 и т.п.) можно применять для трансформации растений. Второй плазмидный вектор не является необходимым для трансформации растений другими способами, такими как бомбардировка микрочастицами, микроинъекция, электропорация, с помощью полиэтиленгликоля и т.д.
В целом, способы трансформации растений включают перенос гетерологичной ДНК в целевые растительные клетки (например, незрелые или зрелые зародыши, суспензионные культуры, недифференцированный каллюс, протопласты и т.д.) с последующим применением соответствующего отбора с максимальным пороговым значением (в зависимости от гена селектируемого маркера) для выделения трансформированных растительных клеток из группы нетрансформированной клеточной массы. После интеграции гетерологичной чужеродной ДНК в растительные клетки затем применяют соответствующий отбор с максимальным пороговым значением в среде для уничтожения нетрансформированных клеток и отделения и размножения предположительно трансформированных клеток, которые переживают эту обработку с отбором, посредством регулярного переноса на свежую среду. При помощи продолжающегося пассирования и проверки при помощи соответствующего отбора идентифицируют и размножают клетки, которые трансформированы плазмидным вектором. Затем можно применять молекулярные и биохимические способы для подтверждения присутствия интегрированного гетерологичного гена, представляющего интерес, в геноме трансгенного растения.
Эксплантаты, как правило, переносят на свежую порцию той же среды и культивируют обычным способом. Впоследствии трансформированные клетки дифференцируются в побеги после помещения в среду для регенерации, дополненную селективным средством с максимальным пороговым значением. Побеги затем переносят на селективную среду для выращивания растений с получением укоренившихся побегов или саженцев. Затем трансгенный саженец выращивают до зрелого растения и получают фертильные семена (например, Hiei, et al., (1994), Plant Journal 6:271-282; Ishida, et al., (1996), Nature Biotechnology, 14:745-750). Эксплантаты, как правило, переносят на свежую порцию той же среды и культивируют обычным способом. Общее описание методик и способов для получения трансгенных растений приведены в Ayres and Park, (1994), Critical Reviews in Plant Science, 13:219-239 и Bommineni and Jauhar, (1997), Maydica 42:107-120. Поскольку трансформированный материал содержит множество клеток, как трансформированные, так и нетрансформированные клетки присутствуют в любой части под
- 71 031651 вергнутого воздействию целевого каллюса, или ткани, или группы клеток. Возможность уничтожать нетрансформированные клетки и обеспечивать размножение трансформированных клеток приводит в результате к трансформированным растительным культурам. Зачастую, возможность удаления нетрансформированных клеток является ограничивающим фактором для быстрого выделения трансформированных растительных клеток и успешного выращивания трансгенных растений.
Из клеток, которые были трансформированы, можно вырастить растения в соответствии с традиционными способами. См., например, McCormick, et al., (1986), Plant Cell Reports, 5:81-84. Эти растения затем можно выращивать и опылять либо с использованием такого же трансформированного штамма, либо другого штамма и идентифицировать полученный гибрид с конститутивной или индуцируемой экспрессией требуемой фенотипической характеристики. Можно вырастить два или более поколений для того, чтобы убедиться в том, что экспрессия требуемой фенотипической характеристики стабильно поддерживается и наследуется, а затем собрать семена, чтобы убедиться в том, что экспрессия требуемой фенотипической характеристики была достигнута.
Нуклеотидные последовательности согласно вариантам осуществления можно обеспечить в растении при помощи контакта растения с вирусом или вирусными нуклеиновыми кислотами. Как правило, такие способы включают встраивание нуклеотидной конструкции, представляющей интерес, в вирусную молекулу ДНК или РНК. Понятно, что рекомбинантные белки согласно вариантам осуществления можно первоначально синтезировать как часть вирусного полипротеина, который позже может быть процессирован путем протеолиза in vivo или in vitro с получением требуемого полипептида PIP-72. Также понятно, что такой вирусный полипротеин, содержащий по меньшей мере часть аминокислотной последовательности полипептида PIP-72 согласно вариантам осуществления, может обладать требуемой пестицидной активностью. Такие вирусные полипротеины и нуклеотидные последовательности, которые их кодируют, охвачены вариантами осуществления. Способы обеспечения растений с нуклеотидными конструкциями и получения кодируемых белков в растениях, которые включают вирусные молекулы ДНК или РНК, известны из уровня техники. См., например, патенты США № 5889191; 5889190; 5866785; 5589367 и 5316931; включенные в данный документ посредством ссылки.
Способы трансформации хлоропластов известны из уровня техники. См., например, Svab, et al., (1990), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:8526-8530; Svab and Maliga, (1993), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:913-917; Svab and Maliga, (1993), EMBO J. 12:601-606. Способ основан на доставке генной пушкой ДНК, содержащей селектируемый маркер, и нацеливании ДНК на геном пластид с помощью гомологичной рекомбинации. Кроме того, трансформацию пластид можно осуществлять трансактивацией молчащего трансгена, находящегося в пластидах, путем экспрессии, осуществляемой преимущественно в определенной ткани, РНК-полимеразы, кодируемой ядерным геномом и функционирующей в пластиде. О такой системе сообщали в McBride, et al., (1994), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91:7301-7305.
Варианты осуществления дополнительно относятся к материалу для размножения трансформированного растения согласно вариантам осуществления, в том числе, без ограничения, семенам, клубням, клубнелуковицам, луковицам, листьям и черенкам корней и побегов.
Варианты осуществления можно применять для трансформации любых видов растений, в том числе, без ограничения, однодольных и двудольных. Примеры растений, представляющих интерес, включают, без ограничений, кукурузу (Zea mays), Brassica sp. (например, B. napus, B. rapa, В. juncea), в частности виды Brassica, пригодные в качестве источников масла из семян растений, люцерну (Medicago sativa), рис (Oryza sativa), рожь (Secale cereale), сорго (Sorghum bicolor, Sorghum vulgare), просо (например, пеннисетум рогозовидный (Pennisetum glaucum), просо культурное (Panicum miliaceum), щетинник итальянский (Setaria italica), просо пальчатое (Eleusine coracana)), подсолнечник (Helianthus annuus), сафлор (Carthamus tinctorius), пшеницу (Triticum aestivum), сою (Glycine max), табак (Nicotiana tabacum), картофель (Solarium tuberosum), разновидности арахиса (Arachis hypogaea), хлопчатник (Gossypium barbadense, Gossypium hirsutum), сладкий картофель (Ipomoea batatus), маниок (Manihot esculenta), кофейное дерево (Coffea spp.), кокосовую пальму (Cocos nucifera), ананас (Ananas comosus), цитрусовые деревья (Citrus spp.), шоколадное дерево (Theobroma cacao), чайный куст (Camellia sinensis), банан (Musa spp.), авокадо (Persea americana), инжир (Ficus casica), гуаву (Psidium guajava), манго (Mangifera indica), маслину (Olea europaea), папайю (Carica papaya), кешью (Anacardium occidentale), макадамию (Macadamia integrifolia), миндаль (Prunus amygdalus), разновидности сахарной свеклы (Beta vulgaris), сахарный тростник (Saccharum spp.), разновидности овса, ячмень, овощи, декоративные растения и хвойные деревья.
Овощи включают томаты (Lycopersicon esculentum), латук (например, Lactuca sativa), зеленую фасоль (Phaseolus vulgaris), лимскую фасоль (Phaseolus limensis), горох (Lathyrus spp.) и представителей рода Cucumis, таких как огурец (C. sativus), канталупа (C. cantalupensis) и дыня мускусная (C. melo).
Декоративные растения включают азалию (Rhododendron spp.), гортензию (Macrophylla hydrangea), гибискус (Hibiscus rosasanensis), розы (Rosa spp.), тюльпаны (Tulipa spp.), нарциссы (Narcissus spp.), петунии (Petunia hybrida), гвоздику (Dianthus caryophyllus), пуансеттию (Euphorbia pulcherrima) и хризантему.
Хвойные, которые можно использовать при практическом осуществлении вариантов осуществления, включают, например, виды сосны, такие как сосна ладанная (Pinus taeda), сосна Эллиота (Pinus
- 72 031651 elliotii), сосна желтая (Pinus ponderosa), сосна скрученная широкохвойная (Pinus contorta) и сосна лучистая (Pinus radiata); псевдотсугу Мензиса (Pseudotsuga menziesii); тсугу канадскую (Tsuga canadensis); ель сизую (Picea glauca); секвойю (Sequoia sempervirens); виды пихты, такие как пихта миловидная (Abies amabilis) и пихта бальзамическая (Abies balsamea), и виды туйи, такие как туя гигантская (Thuja plicata) и каллитропсис нутканский (Chamaecyparis nootkatensis).
Растения согласно вариантам осуществления включают культурные растения (например, кукурузу, люцерну, подсолнечник, Brassica, сою, хлопчатник, сафлор, арахис, сорго, пшеницу, просо, табак и т.д.), такие как растения кукурузы и сои.
Разновидности газонной травы включают, без ограничения, мятлик однолетний (Poa annua); райграс однолетний (Lolium multiflorum); мятлик сплюснутый (Роа compressa); овсяницу красную Чуинга (Festuca rubra); полевицу тонкую (Agrostis tenuis); полевицу болотную (Agrostis palustris); житняк пустынный (Agrostis desertorum); житняк гребенчатый (Agropyron cristatum); овсяницу длиннолистную (Festuca longifolia); мятлик луговой (Роа pratensis); ежу сборную (Dactylis glomerata); плевел многолетний (Lolium perenne); овсяницу красную (Festuca rubra); полевицу белую (Agrostis alba); мятлик обыкновенный (Poa trivialis); овсяницу овечью (Festuca ovina); костер безостый (Bromus inermis); овсяницу тростниковую (Festuca arundinacea); тимофеевку луговую (Phleum pratense); полевицу собачью (Agrostis canina); бескильницу расставленную (Puccinellia distans); пырей Смита (Agropyron smithii); свинорой пальчатый (Cynodon spp.); узкобороздник однобокий (Stenotaphrum secundatum); зойсию (Zoysia spp.); гречку заметную (Paspalum notatum); аксонопус афинский (Axonopus affinis); эремохлою змеехвостую (Eremochloa ophiuroides); кикуйю (Pennisetum clandesinum); паспалум влагалищный (Paspalum vaginatum); москитную траву (Bouteloua gracilis); бизонову траву (Buchloe dactyloids); боковой овес (Bouteloua curtipendula).
Растения, представляющие интерес, включают зерновые растения, которые дают семена, представляющие интерес, масличные растения и бобовые растения. Семена, представляющие интерес, включают семена зерновых культур, таких как кукуруза, пшеница, ячмень, рис, сорго, рожь, просо и т.д. Масличные растения включают хлопчатник, сою, сафлор, подсолнечник, Brassica, маис, люцерну, пальму, кокосовую пальму, лен, клещевину, маслину и т.д. Бобовые растения включают разновидности бобов и разновидности гороха. Бобы включают гуар, рожковое дерево, пажитник, сою, разновидности обыкновенной фасоли, вигну китайскую, золотистую фасоль, лимскую фасоль, стручковую фасоль, разновидности чечевицы, турецкий горох и т.д.
Оценка трансформации растений.
После введения гетерологичной чужеродной ДНК в растительные клетки трансформацию или интеграцию гетерологичного гена в геном растения подтверждают при помощи различных способов, таких как анализ нуклеиновых кислот, белков и метаболитов, связанных с интегрированным геном.
ПЦР-анализ представляет собой быстрый способ скрининга трансформированных клеток, ткани или побегов в отношении присутствия встроенного гена ранней стадии перед высаживанием в почву (Sambrook and Russell, (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY). ПЦР проводят с применением олигонуклеотидных праймеров, специфических к гену, представляющему интерес, или к исходным последовательностям вектора на основе Agrobacterium и т.д.
Трансформацию растений можно подтвердить с помощью саузерн-блот анализа геномной ДНК (Sambrook and Russell, (2001) выше). В целом, общую ДНК экстрагируют из трансформанта, разрезают соответствующими ферментами рестрикции, фракционируют в агарозном геле и переносят на нитроцеллюлозную или найлоновую мембрану. Затем мембрану или блот анализируют с помощью зонда, например, целевого фрагмента ДНК с радиоактивной меткой 32Р для подтверждения интеграции внедренного гена в геном растения в соответствии со стандартными методиками (Sambrook and Russell, (2001) выше).
При нозерн-блот анализе РНК выделяют из специфических тканей трансформанта, фракционируют в агарозном геле, содержащем формальдегид, и переносят на найлоновый фильтр в соответствии со стандартными процедурами, которые обычно применяются в уровне техники (Sambrook and Russell, (2001) выше). Экспрессию РНК, кодируемой пестицидным геном, затем тестировали при помощи гибридизации фильтра с радиоактивным зондом, полученным из пестицидного гена, посредством способов, известных из уровня техники (Sambrook and Russell, (2001) выше).
Вестерн-блот, биохимические анализы и подобные можно проводить в отношении трансгенных растений для подтверждения присутствия белка, кодируемого пестицидным геном, при помощи стандартных процедур (Sambrook and Russell, 2001, выше) с применением антител, которые связываются с одним или несколькими эпитопами, присутствующими на полипептиде PIP-72.
Пакетирование признаков в трансгенном растении.
Трансгенные растения могут содержать пакет из одного или нескольких инсектицидных полинуклеотидов, раскрытых в данном документе, с одним или несколькими дополнительными полинуклеотидами, приводящими к продукции или супрессии нескольких полипептидных последовательностей. Трансгенные растения, содержащие пакеты из последовательностей полинуклеотидов, можно получить либо при помощи традиционных способов скрещивания, либо посредством способов генной инженерии,
- 73 031651 либо применяя и то, и другое. Эти способы включают без ограничений скрещивание индивидуальных линий, при этом каждая содержит полинуклеотид, представляющий интерес, трансформацию трансгенного растения, содержащего ген, раскрытый в данном документе, дополнительным геном и котрансформацию генами одной растительной клетки. Применяемое в данном документе выражение пакетированный включает состояние, при котором несколько признаков присутствуют в одном растении (т.е. оба признака внедрены в ядерный геном, один признак внедрен в ядерный геном и один признак внедрен в геном пластиды или оба признака внедрены в геном пластиды). В одном неограничивающем примере пакетированные признаки включают молекулярный пакет, где последовательности физически прилегают одна к другой. Используемый в данном документе признак относится к фенотипу, обусловленному конкретной последовательностью или группами последовательностей. Котрансформацию генов можно проводить с применением единичных векторов для трансформации, содержащих несколько генов, или нескольких векторов, которые несут отдельные гены. Если последовательности пакетированы с помощью генетической трансформации растений, то представляющие интерес полинуклеотидные последовательности можно комбинировать в любое время и в любом порядке. Признаки в протоколе котрансформации можно вводить одновременно с представляющими интерес полинуклеотидами, представленными любой комбинацией кассет для трансформации. Например, если будут вводиться две последовательности, то эти две последовательности могут содержаться в отдельных кассетах для трансформации (транс) или содержаться в одной кассете для трансформации (цис). Экспрессия этих последовательностей может управляться одним и тем же промотором или разными промоторами. В определенных случаях может потребоваться введение кассеты для трансформации, которая будет супрессировать экспрессию представляющего интерес полинуклеотида. Ее можно комбинировать с любой комбинацией других кассет для супрессии или кассет для сверхэкспрессии с целью получения требуемой комбинации признаков в растении. Кроме того, считается, что полинуклеотидные последовательности можно пакетировать в требуемом местоположении в геноме с применением системы для сайт-специфической рекомбинации. См., например, WO 1999/25821, WO 1999/25854, WO 1999/25840, WO 1999/25855 и WO 1999/25853, все из которых включены в данный документ посредством ссылки.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, кодирующие полипептиды PIP-72, раскрытые в данном документе, отдельно или пакетированные с одним или несколькими признаками устойчивости к насекомым, можно пакетировать с одним или несколькими дополнительными вводимыми признаками, влияющими на затраты (например, устойчивость к гербициду, устойчивость к грибам, устойчивость к вирусам, переносимость стрессов, устойчивость к заболеваниям, мужская стерильность, сила стебля и т.п.), или признаками, влияющими на выход (например, повышенная урожайность, модифицированные разновидности крахмала, улучшенный профиль масел, сбалансированные аминокислоты, высокое содержание лизина или метионина, повышенная усвояемость, улучшенное качество волокон, устойчивость к засухе и т.п.). Таким образом, варианты осуществления полинуклеотида можно применять для обеспечения полного комплекса агротехнических признаков, обеспечивающих улучшенное качество сельскохозяйственной культуры, с возможностью гибкого и экономически эффективного контроля любого числа сельскохозяйственных вредителей.
Трансгены, пригодные для пакетирования, без ограничения включают следующие.
1. Трансгены, которые обеспечивают устойчивость к насекомым или заболеваниям и которые кодируют следующее.
(A) Гены устойчивости растения к заболеваниям. Защитные механизмы растений зачастую активируются посредством специфического взаимодействия между продуктом гена устойчивости к заболеваниям (R) в растении и продуктом соответствующего гена авирулентности (Avr) в патогене. Разновидность растений можно трансформировать с помощью клонированного гена устойчивости для разработки растений, которые устойчивы к специфическим штаммам патогена. См., например, Jones, et al., (1994), Science, 266:789 (клонирование гена Cf-9 томата, обеспечивающего устойчивость к Cladosporium fulvum); Martin, et al., (1993), Science, 262:1432 (ген Pto томата, обеспечивающий устойчивость к Pseudomonas syringae pv. томата, кодирует протеинкиназу); Mindrinos, et al., (1994), Cell, 78:1089 (ген RSP2 Arabidopsis, обеспечивающий устойчивость к Pseudomonas syringae), McDowell and Woffenden, (2003), Trends Biotechnol. 21(4):178-83 и Toyoda, et al., (2002), Transgenic Res. 11(6):567-82. Растение, устойчивое к заболеванию, представляет собой растение, которое более устойчиво к патогену в сравнении с растением дикого типа.
(B) Гены, кодирующие белок Bacillus thuringiensis, его производное или синтетический полипептид, смоделированный на его основе. См., например, Geiser, et al., (1986) Gene 48:109, которые раскрывают клонирование и нуклеотидную последовательность гена дельта-эндотоксина Bt. Кроме того, молекулы ДНК, кодирующие гены дельта-эндотоксина, можно приобрести в Американской коллекции типовых культур (Роквилл, Мэриленд), например, под номерами доступа ATCC® 40098, 67136, 31995 и 31998. Другие неограничивающие примеры трансгенов Bacillus thuringiensis, разработанных с помощью методик генной инженерии, приведены в следующих патентах и заявках на патент и, тем самым, включены посредством ссылки для этой цели: патенты США № 5188960; 5689052; 5880275; 5986177; 6023013; 6060594; 6063597; 6077824; 6620988; 6642030; 6713259; 6893826; 7105332; 7179965; 7208474; 7227056;
- 74 031651
7288643; 7323556; 7329736; 7449552; 7468278; 7510878; 7521235; 7544862; 7605304; 7696412;, 7629504; 7705216; 7772465; 7790846; 7858849 и WO 1991/14778; WO 1999/31248; WO 2001/12731; WO 1999/24581 и WO 1997/40162.
Гены, кодирующие пестицидные белки, можно также пакетировать в том числе без ограничения: с инсектицидными белками из Pseudomonas sp., такими как PSEEN3174 (Monalysin, (2011), PLoS Pathogens, 7:1-13), из штамма CHA0 и Pf-5 Pseudomonas protegens (ранее fluorescens) (Pechy-Tarr, (2008) Environmental Microbiology, 10:2368-2386: GenBank Accession No. EU400157); из Pseudomonas Taiwanensis (Liu, et al., (2010), J. Agric. Food Chem. 58:12343-12349) и из Pseudomonas pseudoalcligenes (Zhang, et al., (2009), Annals of Microbiology, 59:45-50 и Li, et al., (2007), Plant Cell Tiss. Organ Cult. 89:159-168); инсектицидными белками из Photorhabdus sp. и Xenorhabdus sp. (Hinchliffe, et al., (2010), The Open Toxinology Journal 3:101-118 и Morgan, et al., (2001), Applied and Emir. Micro. 67:2062-2069), из патента США № 6048838 и патента США № 6379946; полипептидом PIP-1 из патента США № 13792861; полипептидами AfIP-1A и/или AfIP-1B из патента США № 13/800233; полипептидом PHI-4 из патента США № 13/839702; полипептидом PIP-47 из патента США № 61/866747; инсектицидными белками из патента США № 61/863761 и 61/863763 и δ-эндотоксинами, в том числе без ограничения классами генов δ-эндотоксинов
Сгу1, Сгу2, СгуЗ, Сгу4, Сгу5, Сгуб, Сгу7, Сгу8, Сгу9,
Сгу10, Сгу11, Сгу12, Сгу13, Сгу14, Сгу15, Сгу16, Сгу17, Сгу18, Сгу19, Сгу20, Сгу21,
Cry22, Cry23, Cry24, Cry25, Cry26, Cry27, Cry 28, Cry 29, Cry 30, Cry31, Сгу32, СгуЗЗ, Cry34, Сгу35,Сгу36, Сгу37, Сгу38, СгуЗЭ, Сгу40, Сгу41, Сгу42, Сгу43, Сгу44, Сгу45, Cry 46, Cry47, Cry49, Cry 51, Cry52, Cry 53, Cry 54, Cry55, Сгу56, Сгу57, Сгу58, Сгу59. СгубО, Сгу61, Сгу62, СгубЗ, Сгу64, Сгу65, Сгубб, Сгу67, Сгу68, Сгу69, Сгу70 и Сгу71 и цитолитическими генами Cyt1 и Cyt2 B. thuringiensis.
Представители этих классов инсектицидных белков В. thuringiensis включают, без ограничения:
Сгу1Аа1 (Accession # ААА22353).; Сгу1Аа2 (№ доступа № доступа ААА22552); Сгу1АаЗ (№ доступа ВАА00257); Сгу1Аа4 (№ доступа САА31886); Сгу1Аа5 (№ доступа
ВАА04468); Сгу1Аа6 (№ доступа ААА86265); Сгу1Аа7 (№ доступа AAD46139);
Сгу1Аа8 (№ доступа 126149); Сгу1Аа9 (№ доступа ВАА77213); Сгу1Аа10 (№ доступа
AAD55382); Сгу1Аа11 (№ доступа САА70856); Сгу1Аа12 (№ доступа ААР80146);
Сгу1Аа13 (№ доступа ААМ44305); Сгу1Аа14 (№ доступа ААР40639); Сгу1Аа15 (№ доступа AAY66993); Сгу1Аа16 (№ доступа HQ439776); Сгу1Аа17 (№ доступа HQ439788); Сгу1Аа18 (№ доступа HQ439790); Сгу1Аа19 (№ доступа HQ685121); Сгу1Аа20 (№ доступа JF340156); Сгу1Аа21 (№ доступа JN651496); Сгу1Аа22 (№ доступа КС158223); Сгу1АЬ1 (№ доступа ААА22330); Сгу1АЬ2 (№ доступа ААА22613); Сгу1АЬЗ (№ доступа ААА22561); Сгу1АЬ4 (№ доступа ВАА00071 ); Сгу1АЬ5 (№ доступа САА28405); Сгу1АЬ6 (№ доступа ААА22420); Сгу1АЬ7 (№ доступа САА31620); Сгу1АЬ8 (№ доступа ААА22551); Сгу1АЬ9 (№ доступа САА38701); Сгу1АЫ0 (№ доступа А29125); Сгу1 АЫ1 (№ доступа 112419); Сгу1АЫ2 (№ доступа ААС64003); Сгу1АЫЗ (№ доступа AAN76494); Сгу1АЬ14 (№ доступа AAG16877); Сгу1АЬ15 (№ доступа ААО13302); Сгу1АЬ16 (№ доступа ААК55546); Сгу1АЬ17 (№ доступа ААТ46415); Сгу1АЬ18 (№ доступа AAQ88259); Сгу1АЬ19 (№ доступа AAW31761); Сгу1АЬ20 (№ доступа АВВ72460); Сгу1АЬ21 (№ доступа ABS18384); Сгу1АЬ22 (№ доступа ABW87320); Сгу1АЬ23 (№ доступа HQ439777); Сгу1АЬ24 (№ доступа HQ439778); Сгу1АЬ25 (№ доступа HQ685122); Сгу1АЬ26 (№ доступа HQ847729); Сгу1АЬ27 (№ доступа JN135249); Сгу1АЬ28 (№ доступа JN135250); Сгу1АЬ29 (№ доступа JN135251); Сгу1АЬ30 (№ доступа JN135252); Сгу1АЬ31 (№ доступа JN135253); Сгу1АЬ32 (№ доступа JN135254); Сгу1АЬЗЗ (№ доступа AAS93798); Сгу1АЬ34 (№ доступа КС156668); CrylAb-подобный (№ доступа ААК14336); CrylAb-подобный (№ доступа ААК14337); CrylAb-подобный (№ доступа
- 75 031651
ААК14338); CrylAb-подобный (№ доступа ABG88858); Cry1Ac1 (№ доступа ААА22331); Cry1Ac2 (№ доступа ААА22338); Cry1Ac3 (№ доступа САА38098); Cry1Ac4 (№ доступа ААА73077); Cry1Ac5 (№ доступа ААА22339); Cry1Ac6 (№ доступа ААА86266); Cry1Ac7 (№ доступа ААВ46989); Cry1Ac8 (№ доступа ААС44841); Cry1Ac9 (№ доступа ААВ49768); Cry1Ac10 (№ доступа САА05505 ); Cry1Ac11 (№ доступа САА10270); Cry1Ac12 (№ доступа 112418); Cry1Ac13 (№ доступа AAD38701); Cry1Ac14 (№ доступа AAQ06607); Cry1Ac15 (№ доступа AAN07788); Cry1Ac16 (№ доступа AAU87037); Cry1Ac17 (№ доступа ААХ18704); Cry1Ac18 (№ доступа AAY88347); Cry1Ac19 (№ доступа ABD37053); Cry1Ac20 (№ доступа АВВ89046 ); Cry1Ac21 (№ доступа AAY66992 ); Cry1Ac22 (№ доступа ABZ01836); Cry1Ac23 (№ доступа CAQ30431); Cry1Ac24 (№ доступа ABL01535); Cry1Ac25 (№ доступа FJ513324); Cry1Ac26 (№ доступа FJ617446); Cry1Ac27 (№ доступа FJ617447); Cry1Ac28 (№ доступа АСМ90319); Cry1Ac29 (№ доступа DQ438941); Cry1Ac30 (№ доступа GQ227507); Cry1Ac31 (№ доступа GU446674); Cry1Ac32 (№ доступа НМ061081); Cry1Ac33 (№ доступа GQ866913); Cry1Ac34 (№ доступа HQ230364); Cry1Ac35 (№ доступа JF340157); Cry1Ac36 (№ доступа JN387137); Cry1Ac37 (№ доступа JQ317685); Cry1Ad1 (№ доступа ААА22340); Cry1Ad2 (№ доступа САА01880); Сгу1Ае1 (№ доступа ААА22410); Cry1Af1 (№ доступа ААВ82749); Cry1Ag1 (№ доступа AAD46137); Cry1Ah1 (№ доступа AAQ14326); Cry1Ah2 (№ доступа АВВ76664); Cry1Ah3 (№ доступа HQ439779); Cry1Ai1 (№ доступа ААО39719); Cry1 Ai2 (№ доступа HQ439780); Сгу1А-подобный (№ доступа ААК14339); Сгу1Ва1 (№ доступа САА29898); Сгу1Ва2 (№ доступа САА65003); Сгу1ВаЗ (№ доступа ААК63251); Сгу1Ва4 (№ доступа ААК51084); Сгу1Ва5 (№ доступа АВО20894); Сгу1Ва6 (№ доступа ABL60921); Сгу1Ва7 (№ доступа HQ439781); Сгу1ВЫ (№ доступа ААА22344); Сгу1ВЬ2 (№ доступа HQ439782); Сгу1Вс1 (№ доступа САА86568); Cry1Bd1 (№ доступа AAD10292); Cry1Bd2 (№ доступа ААМ93496); Сгу1Ве1 (№ доступа ААС32850); Сгу1Ве2 (№ доступа AAQ52387); Сгу1ВеЗ (№ доступа ACV96720); Сгу1Ве4 (№ доступа НМ070026); Cry1 Bf 1 (№ доступа САС50778); Cry1Bf2 (№ доступа AAQ52380); Cry1Bg1 (№ доступа ААО39720); Cry1Bh1 (№ доступа HQ589331); Cry1Bi1 (№ доступа КС156700); Сгу1Са1 (№ доступа САА30396); Сгу1Са2 (№ доступа САА31951); Сгу1СаЗ (№ доступа ААА22343); Сгу1Са4 (№ доступа САА01886); Сгу1Са5 (№ доступа САА65457); СгуЮаб [1] (№ доступа AAF37224 ); Сгу1Са7 (№ доступа AAG50438); Сгу1Са8 (№ доступа ААМ00264); Сгу1Са9 (№ доступа AAL79362); Сгу1Са10 (№ доступа AAN16462); Сгу1Са11 (№ доступа ААХ53094); Сгу1Са12 (№ доступа НМ070027); Сгу1Са13 (№ доступа HQ412621); Сгу1Са14 (№
- 76 031651 доступа JN651493); Сгу1СЫ (№ доступа М97880); Cry1Cb2 (№ доступа AAG35409); Cry1Cb3 (№ доступа ACD50894 ); CrylCb-подобный (№ доступа ААХ63901); Cry1Da1 (№ доступа САА38099); Cry1Da2 (№ доступа 176415); СгуЮаЗ (№ доступа HQ439784); Cry1Db1 (№ доступа САА80234 ); Cry1Db2 (№ доступа ААК48937 ); Cry1Dc1 (№ доступа АВК35074); Сгу1Еа1 (№ доступа САА37933); Сгу1Еа2 (№ доступа САА39609); Сгу1ЕаЗ (№ доступа ААА22345); Сгу1Еа4 (№ доступа AAD04732); Сгу1Еа5 (№ доступа А15535); Сгу1Еа6 (№ доступа AAL50330); Сгу1Еа7 (№ доступа AAW72936); Сгу1Еа8 (№ доступа АВХ11258); Сгу1Еа9 (№ доступа HQ439785); Сгу1Еа10 (№ доступа ADR00398); Сгу1Еа11 (№ доступа JQ652456); Сгу1ЕЫ (№ доступа ААА22346); Cry1Fa1 (№ доступа ААА22348); Cry1Fa2 (№ доступа ААА22347); Cry1Fa3 (№ доступа НМ070028); Cry1Fa4 (№ доступа НМ439638); Cry1Fb1 (№ доступа САА80235); Cry1Fb2 (№ доступа ВАА25298); Cry1Fb3 (№ доступа AAF21767); Cry1Fb4 (№ доступа ААС10641); Cry1Fb5 (№ доступа ААО13295); Cry1Fb6 (№ доступа ACD50892); Cry1Fb7 (№ доступа ACD50893); Cry1Ga1 (№ доступа САА80233); Cry1Ga2 (№ доступа САА70506); Cry1Gb1 (№ доступа AAD10291); Cry1Gb2 (№ доступа ААО13756); Cry1Gc1 (№ доступа AAQ52381); Сгу1На1 (№ доступа САА80236); СгуШЫ (№ доступа ААА79694); Сгу1НЬ2 (№ доступа HQ439786); СгуШ-подобный (№ доступа AAF01213); Сгу11а1 (№ доступа САА44633); Сгу11а2 (№ доступа ААА22354); Сгу11аЗ (№ доступа ААС36999); Сгу11а4 (№ доступа ААВ00958); Сгу11а5 (№ доступа САА70124); Сгу11а6 (№ доступа ААС26910); Сгу11а7 (№ доступа ААМ73516); Сгу11а8 (№ доступа ААК66742); Сгу11а9 (№ доступа AAQ08616); Сгу11а10 (№ доступа ААР86782); Сгу11а11 (№ доступа САС85964 ); Сгу11а12 (№ доступа AAV53390); Сгу11а13 (№ доступа ABF83202); Сгу11а14 (№ доступа ACG63871); Сгу11а15 (№ доступа FJ617445); Сгу11а16 (№ доступа FJ617448); Сгу11а17 (№ доступа GU989199); Сгу11а18 (№ доступа ADK23801); Сгу11а19 (№ доступа HQ439787); Сгу11а20 (№ доступа JQ228426); Сгу11а21 (№ доступа JQ228424); Сгу11а22 (№ доступа JQ228427); Сгу11а23 (№ доступа JQ228428); Сгу11а24 (№ доступа JQ228429); Сгу11а25 (№ доступа JQ228430); Сгу11а26 (№ доступа JQ228431); Сгу11а27 (№ доступа JQ228432); Сгу11а28 (№ доступа JQ228433); Сгу11а29 (№ доступа JQ228434); Сгу11а30 (№ доступа JQ317686); Сгу11а31 (№ доступа JX944038); Сгу11а32 (№ доступа JX944039); Сгу11аЗЗ (№ доступа JX944040); Сгу11Ы (№ доступа ААА82114); Сгу11Ь2 (№ доступа ABW88019); Сгу11ЬЗ (№ доступа ACD75515); Сгу11Ь4 (№ доступа НМ051227); Сгу11Ь5 (№ доступа НМ070028); Сгу11Ь6 (№ доступа ADK38579); Сгу11Ь7 (№ доступа JN571740); Сгу11Ь8 (№ доступа JN675714); Сгу11Ь9 (№ доступа JN675715); Сгу11Ы0(№ доступа JN675716); Сгу11Ы1
- 77 031651 (№ доступа JQ228423); Cry1lc1 (№ доступа ААС62933); Cry1lc2 (№ доступа ААЕ71691); Crylldl (№ доступа AAD44366); Cry1ld2 (№ доступа JQ228422); Cryllel (№ доступа AAG43526); Cry1le2 (№ доступа НМ439636); Cry1le3 (№ доступа КС156647); Сгу11е4 (№ доступа КС156681); Cry1 If 1 (№ доступа AAQ52382); Cryllgl (№ доступа КС156701); Cryll-подобный (№ доступа ААС31094); Cryll-подобный (№ доступа ABG88859); Cry1Ja1 (№ доступа ААА22341); Cry1Ja2 (№ доступа НМ070030); Cry1Ja3 (№ доступа JQ228425); Cry1Jb1 (№ доступа ААА98959); Cry1Jc1 (№ доступа ААС31092); Cry1Jc2 (№ доступа AAQ52372); Cry1Jd1 (№ доступа САС50779); Сгу1Ка1 (№ доступа ААВ00376); Сгу1Ка2 (№ доступа HQ439783); Сгу11_а1 (№ доступа AAS60191); Сгу11_а2 (№ доступа НМ070031); Сгу1Ма1 (№ доступа FJ884067); Сгу1Ма2 (№ доступа КС156659); Cry1Na1 (№ доступа КС156648); Cry1Nb1 (№ доступа КС156678); Сгу1-подобный (№ доступа ААС31091); Сгу2Аа1 (№ доступа ААА22335); Сгу2Аа2 (№ доступа ААА83516); Сгу2АаЗ (№ доступа D86064); Сгу2Аа4 (№ доступа ААС04867); Сгу2Аа5 (№ доступа САА10671); Сгу2Аа6 (№ доступа САА10672); Сгу2Аа7 (№ доступа САА10670); Сгу2Аа8 (№ доступа ААО13734); Сгу2Аа9 (№ доступа ААО13750 ); Сгу2Аа10 (№ доступа AAQ04263); Сгу2Аа11 (№ доступа AAQ52384); Сгу2Аа12 (№ доступа ABI83671); Сгу2Аа13 (№ доступа ABL01536); Сгу2Аа14 (№ доступа ACF04939); Сгу2Аа15 (№ доступа JN426947); Сгу2АЬ1 (№ доступа ААА22342); Сгу2АЬ2 (№ доступа САА39075); Сгу2АЬЗ (№ доступа AAG36762); Сгу2АЬ4 (№ доступа ААО13296 ); Сгу2АЬ5 (№ доступа AAQ04609); Сгу2АЬ6 (№ доступа ААР59457); Сгу2АЬ7 (№ доступа AAZ66347); Сгу2АЬ8 (№ доступа АВС95996); Сгу2АЬ9 (№ доступа АВС74968); Сгу2АЬ10 (№ доступа EF157306); Сгу2АЬ11 (№ доступа САМ84575); Сгу2АЬ12 (№ доступа АВМ21764); Сгу2АЬ13 (№ доступа ACG76120); Сгу2АЬ14 (№ доступа ACG76121); Сгу2АЬ15 (№ доступа НМ037126); Сгу2АЬ16 (№ доступа GQ866914); Сгу2АЬ17 (№ доступа HQ439789); Сгу2АЬ18 (№ доступа JN135255); Сгу2АЬ19 (№ доступа JN135256); Сгу2АЬ20 (№ доступа JN135257); Сгу2АЬ21 (№ доступа JN135258); Сгу2АЬ22 (№ доступа JN135259); Сгу2АЬ23 (№ доступа JN135260); Сгу2АЬ24 (№ доступа JN135261); Сгу2АЬ25 (№ доступа JN415485); Сгу2АЬ26 (№ доступа JN426946); Сгу2АЬ27 (№ доступа JN415764); Сгу2АЬ28 (№ доступа JN651494); Сгу2Ас1 (№ доступа САА40536); Сгу2Ас2 (№ доступа AAG35410); Сгу2АсЗ (№ доступа AAQ52385); Сгу2Ас4 (№ доступа АВС95997); Сгу2Ас5 (№ доступа АВС74969); Сгу2Ас6 (№ доступа АВС74793); Сгу2Ас7 (№ доступа CAL18690); Сгу2Ас8 (№ доступа САМ09325); Сгу2Ас9 (№ доступа САМ09326); Сгу2Ас10 (№ доступа ABN15104); Сгу2Ас11 (№ доступа САМ83895); Сгу2Ас12 (№ доступа САМ83896); Cry2Ad1 (№ доступа AAF09583);
- 78 031651
Cry2Ad2 (№ доступа ABC86927); Cry2Ad3 (№ доступа CAK29504); Cry2Ad4 (№ доступа CAM32331); Cry2Ad5 (№ доступа CAO78739 ); Cry2Ae1 (№ доступа AAQ52362); Cry2Af1 (№ доступа ABO30519); Cry2Af2 (№ доступа GQ866915); Cry2Ag1 (№ доступа ACH91610); Cry2Ah1 (№ доступа EU939453); Cry2Ah2 (№ доступа ACL80665); Cry2Ah3 (№ доступа GU073380); Cry2Ah4 (№ доступа KC156702); Cry2Ai1 (№ доступа FJ788388); Cry2Aj (№ доступа ); Cry2Ak1 (№ доступа КС 156660); Cry2Ba1 (№ доступа КС 156658); СгуЗАа1 (№ доступа ААА22336); СгуЗАа2 (№ доступа ААА22541); СгуЗАаЗ (№ доступа САА68482); СгуЗАа4 (№ доступа ААА22542); СгуЗАаб (№ доступа ААА50255); СгуЗАаб (№ доступа ААС43266); СгуЗАа7 (№ доступа САВ41411); СгуЗАа8 (№ доступа AAS79487); СгуЗАаЭ (№ доступа AAW05659); СгуЗАаЮ (№ доступа AAU29411); СгуЗАа11 (№ доступа AAW82872); СгуЗАа12 (№ доступа ABY49136 ); СгуЗВа1 (№ доступа САА34983); СгуЗВа2 (№ доступа САА00645); СгуЗВаЗ (№ доступа JQ397327); СгуЗВЫ (№ доступа ААА22334); СгуЗВЬ2 (№ доступа ААА74198); СгуЗВЬЗ (№ доступа 115475); СгуЗСа1 (№ доступа САА42469); Сгу4Аа1 (№ доступа САА68485); Сгу4Аа2 (№ доступа ВАА00179); Сгу4АаЗ (№ доступа CAD30148); Сгу4Аа4 (№ доступа AFB18317); Сгу4А-подобный (№ доступа AAY96321); Сгу4Ва1 (№ доступа САА30312); Сгу4Ва2 (№ доступа САА30114); Сгу4ВаЗ (№ доступа ААА22337); Сгу4Ва4 (№ доступа ВАА00178); Сгу4Ва5 (№ доступа CAD30095); Сгу4Ва-подобный (№ доступа АВС47686); Сгу4Са1 (№ доступа EU646202); Сгу4СЫ (№ доступа FJ403208); Сгу4СЬ2 (№ доступа FJ597622); Сгу4Сс1 (№ доступа FJ403207); Сгу5Аа1 (№ доступа ААА67694); СгубАЫ (№ доступа ААА67693); Сгу5Ас1 (№ доступа I34543); Cry5Ad1 (№ доступа ABQ82087); Сгу5Ва1 (№ доступа ААА68598); Сгу5Ва2 (№ доступа ABW88931); СгубВаЗ (№ доступа AFJ04417); Сгу5Са1 (№ доступа НМ461869); Сгу5Са2 (№ доступа ZP_04123426); Cry5Da1 (№ доступа НМ461870); Cry5Da2 (№ доступа ZP_04123980); Cry5Ea1 (№ доступа НМ485580); Cry5Ea2 (№ доступа ZP_04124038); Сгу6Аа1 (№ доступа ААА22357); Сгу6Аа2 (№ доступа ААМ46849); СгубАаЗ (№ доступа АВН03377); Сгу6Ва1 (№ доступа ААА22358); Сгу7Аа1 (№ доступа ААА22351); Сгу7АЬ1 (№ доступа ААА21120); Сгу7АЬ2 (№ доступа ААА21121); Сгу7АЬЗ (№ доступа АВХ24522); Сгу7АЬ4 (№ доступа EU380678); Сгу7АЬ5 (№ доступа АВХ79555); Сгу7АЬ6 (№ доступа ACI44005); Сгу7АЬ7 (№ доступа ADB89216); Сгу7АЬ8 (№ доступа GU145299); Сгу7АЬ9 (№ доступа ADD92572); Сгу7Ва1 (№ доступа АВВ70817); Сгу7ВЬ1 (№ доступа КС156653); Сгу7Са1 (№ доступа ABR67863); Сгу7СЫ (№ доступа КС156698); Cry7Da1 (№ доступа ACQ99547); Cry7Da2 (№ доступа НМ572236); Cry7Da3 (№ доступа КС156679); Сгу7Еа1 (№ доступа НМ035086); Сгу7Еа2 (№ доступа
- 79 031651
НМ132124); Cry7Ea3 (№ доступа ЕЕМ19403); Cry7Fa1 (№ доступа НМ035088); Cry7Fa2 (№ доступа ЕЕМ19090); Cry7Fb1 (№ доступа НМ572235); Cry7Fb2 (№ доступа КС156682); Cry7Ga1 (№ доступа НМ572237); Cry7Ga2 (№ доступа КС156669); Cry7Gb1 (№ доступа КС156650); Cry7Gc1 (№ доступа КС156654); Cry7Gd1 (№ доступа КС156697); Сгу7На1 (№ доступа КС156651); Сгу71а1 (№ доступа КС156665); Cry7Ja1 (№ доступа КС156671); Сгу7Ка1 (№ доступа КС156680); Сгу7КЫ (№ доступа ВАМ99306); Сгу71_а1 (№ доступа ВАМ99307); Сгу8Аа1 (№ доступа ААА21117); Сгу8АЫ (№ доступа EU044830); Сгу8Ас1 (№ доступа КС156662); Cry8Ad1 (№ доступа КС156684); Сгу8Ва1 (№ доступа ААА21118); Сгу8ВЫ (№ доступа CAD57542); Сгу8Вс1 (№ доступа CAD57543); Сгу8Са1 (№ доступа ААА21119); Сгу8Са2 (№ доступа AAR98783); Сгу8СаЗ (№ доступа EU625349); Сгу8Са4 (№ доступа ADB54826); Cry8Da1 (№ доступа ВАС07226); Cry8Da2 (№ доступа BD133574); Cry8Da3 (№ доступа BD133575); Cry8Db1 (№ доступа BAF93483); Сгу8Еа1 (№ доступа AAQ73470); Сгу8Еа2 (№ доступа EU047597); Сгу8ЕаЗ (№ доступа КС855216); Cry8Fa1 (№ доступа ААТ48690); Cry8Fa2 (№ доступа HQ174208); Cry8Fa3 (№ доступа AFH78109); Cry8Ga1 (№ доступа ААТ46073); Cry8Ga2 (№ доступа АВС42043); Cry8Ga3 (№ доступа FJ198072); Сгу8На1 (№ доступа AAW81032); Сгу81а1 (№ доступа EU381044); Cry8la2 (№ доступа GU073381); Cry8la3 (№ доступа НМ044664); Cry8la4 (№ доступа КС156674); Сгу81Ь1 (№ доступа GU325772); Cry8lb2 (№ доступа КС156677); Cry8Ja1 (№ доступа EU625348); Сгу8Ка1 (№ доступа FJ422558); Сгу8Ка2 (№ доступа ACN87262); Сгу8КЬ1 (№ доступа НМ123758); Сгу8КЬ2 (№ доступа КС156675); Сгу81_а1 (№ доступа GU325771); Сгу8Ма1 (№ доступа НМ044665); Сгу8Ма2 (№ доступа ЕЕМ86551); Сгу8МаЗ (№ доступа НМ210574); Cry8Na1 (№ доступа НМ640939); Сгу8Ра1 (№ доступа HQ388415); Cry8Qa1 (№ доступа HQ441166); Cry8Qa2 (№ доступа КС152468); Cry8Ra1 (№ доступа AFP87548); Cry8Sa1 (№ доступа JQ740599); Сгу8Та1 (№ доступа КС156673); Сгу8подобный (№ доступа FJ770571); Сгу8-подобный (№ доступа ABS53003); Сгу9Аа1 (№ доступа САА41122); Сгу9Аа2 (№ доступа САА41425); СгуЭАаЗ (№ доступа GQ249293); Сгу9Аа4 (№ доступа GQ249294); Сгу9Аа5 (№ доступа JX174110); СгуЭАа like (№ доступа AAQ52376); Сгу9Ва1 (№ доступа САА52927); Сгу9Ва2 (№ доступа GU299522); СгуЭВЫ (№ доступа AAV28716); Сгу9Са1 (№ доступа САА85764); Сгу9Са2 (№ доступа AAQ52375); Cry9Da1 (№ доступа ВАА19948); Cry9Da2 (№ доступа ААВ97923); Cry9Da3 (№ доступа GQ249293); Cry9Da4 (№ доступа GQ249297); Cry9Db1 (№ доступа ААХ78439); Cry9Dc1 (№ доступа КС156683); Сгу9Еа1 (№ доступа ВАА34908); Сгу9Еа2 (№ доступа ААО12908);
- 80 031651
СгуЭЕаЗ (№ доступа АВМ21765); Сгу9Еа4 (№ доступа АСЕ88267); Сгу9Еа5 (№ доступа ACF04743); СгуЭЕаб (№ доступа ACG63872 ); Сгу9Еа7 (№ доступа FJ380927); Сгу9Еа8 (№ доступа GQ249292); Сгу9Еа9 (№ доступа JN651495); СгуЭЕЫ (№ доступа САС50780); Сгу9ЕЬ2 (№ доступа GQ249298); СгуЭЕЬЗ (№ доступа КС156646); Сгу9Ес1 (№ доступа ААС63366); Cry9Ed1 (№ доступа ААХ78440); Сгу9Ее1 (№ доступа GQ249296); Сгу9Ее2 (№ доступа КС156664); Cry9Fa1 (№ доступа КС156692); Cry9Ga1 (№ доступа КС156699); Сгу9-подобный (№ доступа ААС63366); Сгу10Аа1 (№ доступа ААА22614); СгуЮАа2 (№ доступа Е00614); СгуЮАаЗ (№ доступа CAD30098); Сгу10Аа4 (№ доступа AFB18318); СгуЮА-подобный (№ доступа DQ167578); Сгу11Аа1 (№ доступа ААА22352); Сгу11Аа2 (№ доступа ААА22611); Сгу11АаЗ (№ доступа CAD30081); Сгу11Аа4 (№ доступа AFB18319); Сгу11Аа-подобный (№ доступа DQ166531); Сгу11Ва1 (№ доступа САА60504); Сгу11ВЬ1 (№ доступа ААС97162); Сгу11ВЬ2 (№ доступа НМ068615); Сгу12Аа1 (№ доступа ААА22355); Сгу13Аа1 (№ доступа ААА22356); Сгу14Аа1 (№ доступа ААА21516); Сгу14АЫ (№ доступа КС156652); Сгу15Аа1 (№ доступа ААА22333); Сгу16Аа1 (№ доступа САА63860); Сгу17Аа1 (№ доступа САА67841); Сгу18Аа1 (№ доступа САА67506); Сгу18Ва1 (№ доступа AAF89667); Сгу18Са1 (№ доступа AAF89668); Сгу19Аа1 (№ доступа САА68875); Сгу19Ва1 (№ доступа ВАА32397); Сгу19Са1 (№ доступа AFM37572); Сгу20Аа1 (№ доступа ААВ93476); Сгу20Ва1 (№ доступа ACS93601); Сгу20Ва2 (№ доступа КС156694); Сгу20-подобный (№ доступа GQ144333); Сгу21Аа1 (№ доступа I32932); Сгу21Аа2 (№ доступа I66477); Сгу21Ва1 (№ доступа ВАС06484); Сгу21Са1 (№ доступа JF521577); Сгу21Са2 (№ доступа КС156687); Cry21Da1 (№ доступа JF521578); Сгу22Аа1 (№ доступа I34547); Сгу22Аа2 (№ доступа CAD43579); Сгу22АаЗ (№ доступа ACD93211); Сгу22АЫ (№ доступа ААК50456); Сгу22АЬ2 (№ доступа CAD43577); Сгу22Ва1 (№ доступа CAD43578); Сгу22ВЫ (№ доступа КС156672); Сгу23Аа1 (№ доступа AAF76375); Сгу24Аа1 (№ доступа ААС61891); Сгу24Ва1 (№ доступа BAD32657); Сгу24Са1 (№ доступа CAJ43600); Сгу25Аа1 (№ доступа ААС61892); Сгу26Аа1 (№ доступа AAD25075); Сгу27Аа1 (№ доступа ВАА82796); Сгу28Аа1 (№ доступа AAD24189); Сгу28Аа2 (№ доступа AAG00235); Сгу29Аа1 (№ доступа САС80985); СгуЗОАа1 (№ доступа САС80986); СгуЗОВа1 (№ доступа BAD00052); СгуЗОСа1 (№ доступа BAD67157); СгуЗОСа2 (№ доступа ACU24781); Cry30Da1 (№ доступа EF095955); СгуЗСЮЫ (№ доступа ВАЕ80088); СгуЗОЕа1 (№ доступа АСС95445); СгуЗОЕа2 (№ доступа FJ499389); Cry30Fa1 (№ доступа ACI22625 ); Cry30Ga1 (№ доступа ACG60020); Cry30Ga2 (№ доступа HQ638217); Сгу31Аа1 (№ доступа ВАВ11757); Сгу31Аа2 (№ доступа AAL87458); Сгу31АаЗ (№ доступа
- 81 031651
ВАЕ79808); Cry31Aa4 (№ доступа BAF32571); Сгу31Аа5 (№ доступа BAF32572); Сгу31Аа6 (№ доступа BAI44026); Сгу31АЫ (№ доступа ВАЕ79809); Сгу31АЬ2 (№ доступа BAF32570); Сгу31Ас1 (№ доступа BAF34368); Сгу31Ас2 (№ доступа АВ731600); Cry31Ad1 (№ доступа BAI44022); Сгу32Аа1 (№ доступа AAG36711); Сгу32Аа2 (№ доступа GU063849); Сгу32АЬ1 (№ доступа GU063850); Сгу32Ва1 (№ доступа ВАВ78601); Сгу32Са1 (№ доступа ВАВ78602); Сгу32СЫ (№ доступа КС156708); Cry32Da1 (№ доступа ВАВ78603); Сгу32Еа1 (№ доступа GU324274); Сгу32Еа2 (№ доступа КС156686); Сгу32ЕЬ1 (№ доступа КС156663); Cry32Fa1 (№ доступа КС156656); Cry32Ga1 (№ доступа КС156657); Сгу32На1 (№ доступа КС156661); Сгу32НЫ (№ доступа КС156666); Сгу321а1 (№ доступа КС156667); Cry32Ja1 (№ доступа КС156685); Сгу32Ка1 (№ доступа КС156688); Сгу321_а1 (№ доступа КС156689); Сгу32Ма1 (№ доступа КС156690); Сгу32МЬ1 (№ доступа КС156704); Cry32Na1 (№ доступа КС156691); Сгу320а1 (№ доступа КС156703); Сгу32Ра1 (№ доступа КС156705); Cry32Qa1 (№ доступа КС156706); Cry32Ra1 (№ доступа КС156707); Cry32Sa1 (№ доступа КС156709); Сгу32Та1 (№ доступа КС156710); Cry32Ua1 (№ доступа КС156655); СгуЗЗАа1 (№ доступа AAL26871); Сгу34Аа1 (№ доступа AAG50341); Сгу34Аа2 (№ доступа ААК64560); Сгу34АаЗ (№ доступа ААТ29032); Сгу34Аа4 (№ доступа ААТ29030); Сгу34АЬ1 (№ доступа AAG41671); Сгу34Ас1 (№ доступа AAG50118); Сгу34Ас2 (№ доступа ААК64562); Сгу34АсЗ (№ доступа ААТ29029); Сгу34Ва1 (№ доступа ААК64565); Сгу34Ва2 (№ доступа ААТ29033); Сгу34ВаЗ (№ доступа ААТ29031); Сгу35Аа1 (№ доступа AAG50342); Сгу35Аа2 (№ доступа ААК64561); СгуЗбАаЗ (№ доступа ААТ29028); Сгу35Аа4 (№ доступа ААТ29025); СгуЗбАЫ (№ доступа AAG41672); Сгу35АЬ2 (№ доступа ААК64563); СгуЗбАЬЗ (№ доступа AY536891); Сгу35Ас1 (№ доступа AAG50117); Сгу35Ва1 (№ доступа ААК64566); Сгу35Ва2 (№ доступа ААТ29027); СгуЗбВаЗ (№ доступа ААТ29026); Сгу36Аа1 (№ доступа ААК64558); Сгу37Аа1 (№ доступа AAF76376 ); Сгу38Аа1 (№ доступа ААК64559); Сгу39Аа1 (№ доступа ВАВ72016); Сгу40Аа1 (№ доступа ВАВ72018); Сгу40Ва1 (№ доступа ВАС77648); Сгу40Са1 (№ доступа EU381045); Cry40Da1 (№ доступа ACF15199); Сгу41Аа1 (№ доступа BAD35157); Сгу41АЬ1 (№ доступа BAD35163); Сгу41Ва1 (№ доступа НМ461871); Сгу41Ва2 (№ доступа ZP_04099652); Сгу42Аа1 (№ доступа BAD35166); Сгу43Аа1 (№ доступа BAD15301); Сгу43Аа2 (№ доступа BAD95474 ); Сгу43Ва1 (№ доступа BAD15303); Сгу43Са1 (№ доступа КС156676); Сгу43СЫ (№ доступа КС156695); Сгу43Сс1 (№ доступа КС156696); Сгу43-подобный (№ доступа BAD15305); Сгу44Аа (№ доступа BAD08532); Сгу45Аа (№ доступа BAD22577); Сгу46Аа (№ доступа ВАС79010); Сгу46Аа2 (№ доступа BAG68906); Сгу46АЬ (№
- 82 031651 доступа BAD35170); Cry47Aa (№ доступа AAY24695); Сгу48Аа (№ доступа
САЛ8351); Сгу48Аа2 (№ доступа CAJ86545); Сгу48АаЗ (№ доступа CAJ86546 );
Сгу48АЬ (№ доступа CAJ86548); Сгу48АЬ2 (№ доступа CAJ86549); Сгу49Аа (№ доступа САН56541); Сгу49Аа2 (№ доступа CAJ86541); Сгу49АаЗ (№ доступа CAJ86543); Сгу49Аа4 (№ доступа CAJ86544); Сгу49АЬ1 (№ доступа CAJ86542); Сгу50Аа1 (№ доступа ВАЕ86999); Сгу50Ва1 (№ доступа GU446675); Сгу50Ва2 (№ доступа GU446676); Сгу51Аа1 (№ доступа ABI14444); Сгу51Аа2 (№ доступа GU570697); Сгу52Аа1 (№ доступа EF613489); Сгу52Ва1 (№ доступа FJ361760); Сгу53Аа1 (№ доступа EF633476); СгубЗАЫ (№ доступа FJ361759); Сгу54Аа1 (№ доступа АСА52194); Сгу54Аа2 (№ доступа GQ140349); Сгу54Ва1 (№ доступа GU446677); Сгу55Аа1 (№ доступа ABW88932); Сгу54АЬ1 (№ доступа JQ916908); Сгу55Аа2 (№ доступа ААЕ33526); Сгу56Аа1 (№ доступа ACU57499); Сгу56Аа2 (№ доступа GQ483512); СгуббАаЗ (№ доступа JX025567); Сгу57Аа1 (№ доступа ANC87261); Сгу58Аа1 (№ доступа ANC87260); Сгу59Ва1 (№ доступа JN790647); Сгу59Аа1 (№ доступа ACR43758); Сгу60Аа1 (№ доступа ACU24782); Сгу60Аа2 (№ доступа ЕАО57254); СгубОАаЗ (№ доступа ЕЕМ99278); Сгу60Ва1 (№ доступа GU810818); Сгу60Ва2 (№ доступа ЕАО57253); СгубОВаЗ (№ доступа ЕЕМ99279); Сгу61Аа1 (№ доступа НМ035087); Сгу61Аа2 (№ доступа НМ132125); Сгу61АаЗ (№ доступа ЕЕМ19308); Сгу62Аа1 (№ доступа НМ054509); Сгу63Аа1 (№ доступа BAI44028); Сгу64Аа1 (№ доступа BAJ05397); Сгу65Аа1 (№ доступа НМ461868); Сгу65Аа2 (№ доступа ZP_04123838); Сгу66Аа1 (№ доступа НМ485581); Сгу66Аа2 (№ доступа ZP_04099945); Сгу67Аа1 (№ доступа НМ485582); Сгу67Аа2 (№ доступа ZP_04148882); Сгу68Аа1 (№ доступа HQ113114); Сгу69Аа1 (№ доступа HQ401006); Сгу69Аа2 (№ доступа JQ821388); СгубЭАЫ (№ доступа JN209957); Сгу70Аа1 (№ доступа JN646781); Сгу70Ва1 (№ доступа AD051070); Сгу70ВЬ1 (№ доступа EEL67276); Сгу71Аа1 (№ доступа JX025568); Сгу72Аа1 (№ доступа JX025569).
Примеры δ-эндотоксинов также включают, без ограничения, белки Cry1A из патентов США № 5880275, 7858849, 8530411, 8575433 и 8686233; токсин DIG-3 или DIG-11 (N-концевая делеция вариантов α-спирали 1 и/или α-спирали 2 вариантов белков Cry, например, Cry1A, Cry3A) из патентов США № 8304604, 8304605 и 8476226; Cry1B из заявки на патент США № 10/525318; Cry1C из патента США № 6033874; Cry1F из патентов США № 5188960 и 6218188; химеры Cry1A/F из патентов США № 7070982, 6962705 и 6713063); белок Cry2, например, белок Cry2Ab из патента США № 7064249); белок Cry3A, в том числе, без ограничения, полученный с помощью методик генной инженерии гибридный инсектицидный белок (eHIP), созданный путем слияния уникальных комбинаций вариабельных участков и консервативных блоков по меньшей мере двух различных белков Cry (публикация заявки на патент США № 2010/0017914); белок Cry4; белок Cry5; белок Cry6; белки Cry8 из патентов США № 7329736, 7449552, 7803943, 7476781, 7105332, 7378499 и 7462760; белок Cry9, например, представители семейств Cry9A, Cry9B, Cry9C, Cry9D, Cry9E и Cry9F, в том числе, без ограничения, белок Cry9D из патента США № 8802933 и белок Cry9B из патента США № 8802934; белок Cry15 из Naimov, et al., (2008), Applied and Environmental Microbiology 74:7145-7151; Cry22, белок Cry34Ab1 из патентов США № 6127180, 6624145 и 6340593; белок CryET33 и cryET34 из патентов США № 6248535, 6326351, 6399330, 6949626, 7385107 и 7504229; гомологи CryET33 и CryET34 из публикаций патентов США № 2006/0191034, 2012/0278954 и публикации согласно PCT № WO 2012/139004; белок Cry35Ab1 из патентов США № 6083499, 6548291 и 6340593; белок Cry46, белок Cry51, бинарный токсин Cry; TIC901 или родственный токсин; TIC807 из публикации заявки на патент США № 2008/0295207; ET29, ET37, TIC809, TIC810, TIC812, TIC127, TIC128 из PCT US 2006/033867; токсины TIC853 из патента США 8513494, AXMI-027, AXMI-036 и AXMI-038 из патента США № 8236757; AXMI-031, AXMI-039, AXMI-040, AXMI-049 из патента США № 7923602; AXMI-018, AXMI-020 и AXMI-021 из WO 2006/083891; AXMI-010 из WO 2005/038032; AXMI-003 из WO2005/021585; AXMI-008 из публикации заявки на патент США № 2004/0250311; AXMI-006 из публикации заявки на патент США № 2004/0216186; AXMI-007 из публикации заявки на патент США № 2004/0210965; AXMI-009 из публикации заявки на патент США № 2004/0210964; AXMI-014 из публикации заявки на патент США № 2004/0197917; AXMI-004 из публикации заявки на патент США № 2004/0197916; AXMI-028 и AXMI-029 из WO 2006/119457; AXMI-007, AXMI-008, AXMI-0080rf2, AXMI-009, AXMI-014 и AXMI-004 из WO 2004/074462; AXMI-150 из патента США № 8084416; AXMI-205 из публикации заявки на патент США № 2011/0023184; AXMI-011, AXMI-012,
- 83 031651
AXMI-013, AXMI-015, AXMI-019, AXMI-044, AXMI-037, AXMI-043, AXMI-033, AXMI-034, AXMI-022, AXMI-023, AXMI-041, AXMI-063 и AXMI-064 из публикации заявки на патент США № 2011/0263488; AXMI-R1 и родственные белки из публикации заявки на патент США № 2010/0197592; AXMI221Z, AXMI222z, AXMI223z, AXMI224Z и AXMI225Z из WO 2011/103248; AXMI218, AXMI219, AXMI220, AXMI226, AXMI227, AXMI228, AXMI229, AXMI230 и AXMI231 из WO11/103247 и патента США № 8759619; AXMI-115, AXMI-113, AXMI-005, AXMI-163 и AXMI-184 из патента США № 8334431; AXMI-001, AXMI-002, AXMI-030, AXMI-035 и AXMI-045 из публикации заявки на патент США № 2010/0298211; AXMI-066 и AXMI-076 из публикации заявки на патент США № 2009/0144852;
AXMI128, АХМИЗО, AXMI131, АХМИЗЗ, AXMI140, AXMI141,
AXMI142, AXMI143, AXMI144, AXMI146, AXMI148, AXMI149, AXMI152, AXMI153,
AXMI154, AXMI155, AXMI156, AXMI157, AXMI158, AXMI162, AXMI165, AXMI166,
AXMI167, AXMI168, AXMI169, AXMI170, AXMI171, AXMI172, AXMI173, AXMI174,
AXMI175, AXMI176, AXMI177, AXMI178, AXMI179, AXMI180, AXMI181, AXMI182,
AXMI185, AXMI186, AXMI187, AXMI188, AXMI189 из патента США № 8318900;
AXMI079, AXMI080, AXMI081, AXMI082, AXMI091, AXMI092, AXMI096, AXMI097,
AXMI098, AXMI099, AXMI100, AXMI101, AXMI102, AXMI103, AXMI104, AXMI107,
AXMI108, AXMI109, AXMI110, AXMI111, AXMI112, AXMI114, AXMI116, AXMI117,
AXMI118, AXMI119, AXMI120, AXMI121, AXMI122, AXMI123, AXMI124, AXMI1257,
AXMI1268 , AXMI127, AXMI129, AXMI164, AXMI151, AXMI161, AXMI183, AXMI132,
AXMI138, AXMI137
из публикации заявки на патент США № 2010/0005543; AXMI270 из публикации заявки на патент США № US20140223598, AXMI279 из публикации заявки на патент США № US20140223599, белки Cry, такие как, Cry1A и Cry3A с модифицированными сайтами протеолитического расщепления из патента США № 8319019 и белок-токсин Cry1Ac, Cry2Aa и Cry1Ca из штамма VBTS 2528 Bacillus thuringiensis из публикации заявки на патент США № 2011/0064710.
Другие белки Cry хорошо известны специалисту в данной области (см. Crickmore, et al., Bacillus thuringiensis toxin nomenclature (2011), на сайте lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/, доступ к которому можно получить во всемирной сети Интернет с применением префикса www). Инсектицидная активность белков Cry хорошо известна специалисту в данной области (обзор см. у van Frannkenhuyzen, (2009) J. Invert. Path. 101:1-16). Применение белков Cry в качестве признаков трансгенного растения хорошо известно специалисту в данной области, и Cry-трансгенные растения, в том числе, без ограничения, Cry1Ac, Cry1Ac+Cry2Ab, Cry1Ab, Cry1A.105, Cry1F, Cry1Fa2, Cry1F+Cry1Ac, Cry2Ab, Cry3A, mCry3A, Cry3Bb1, Cry34Ab1, Cry35Ab1, Vip3A, mCry3A, Cry9c и CBI-Bt, получили разрешение контролирующих органов (см., Sanahuja, (2011), Plant Biotech Journal, 9:283-300 и CERA (2010), GM Crop Database Center for Environmental Risk Assessment (CERA), ILSI Research Foundation, Washington D.C. на сайте cera-gmc.org/index.php?action=gm_crop_database, доступ к которому можно получить во всемирной сети Интернет с применением префикса www). В растениях также может экспрессироваться несколько пестицидных белков, хорошо известных специалисту в данной области, таких как Vip3Ab и Cry1Fa (US2012/0317682); Cry1BE и Cry1F (US2012/0311746); Cry1CA и Cry1AB (US2012/0311745); Cry1F и CryCa (US2012/0317681); Cry1DA и Cry1BE (US2012/0331590); Cry1DA и Cry1Fa (US2012/0331589); Cry1AB и Cry1BE (US2012/0324606); Cry1Fa и Cry2Aa, и Cry1I и Cry1E (uS2012/0324605); Cry34Ab/35Ab и Cry6Aa (US20130167269); Cry34Ab/VCry35Ab и Cry3Aa (US20130167268); Cry1Ab и Cry1F (US20140182018) и Cry3A и Cry1Ab или Vip3Aa (US20130116170). Пестицидные белки также включают инсектицидные липазы, в том числе гидролазы омыляемых липидов из патента США № 7491869 и холестериноксидазы, например, из Streptomyces (Purcell et al. (1993), Biochem Biophys Res Commun 15:1406-1413). Пестицидные белки также включают токсины VIP (вегетативные инсектицидные белки) из патентов США № 5877012, 6107279, 6137033, 7244820, 7615686 и 8237020 и т.п.
Другие белки VIP хорошо известны специалисту в данной области (см. lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/vip.html, доступ к которому можно получить во всемирной сети Интернет с применением префикса www). Пестицидные белки также включают белки токсинового комплекса (TC), которые можно получить из организмов, таких как Xenorhabdus, Photorhabdus и Paenibacillus (см. патенты США № 7491698 и 8084418). Некоторые TC-белки обладают самостоятельной инсектицидной активностью, а другие TC-белки повышают активность самостоятельных токсинов, производимых тем же данным организмом. Токсичность самостоятельного TC-белка (из Photorhabdus, Xenorhabdus или Paenibacillus, например) может усиливаться при помощи одного или нескольких TC-белков, усилителей, полученных из организма-источника из другого рода. Существуют три основных типа TC-белков. Как изложено в данном документе, белки класса A (белок A) представляют собой
- 84 031651 самостоятельные токсины. Белки класса B (белок B) и белки класса C (белок C) усиливают токсичность белков класса A. Примеры белков класса A представляют собой TcbA, TcdA, XptA1 и XptA2. Примеры белков класса B представляют собой TcaC, TcdB, XptB1Xb и XptC1Wi. Примеры белков класса C представляют собой TccC, XptC1Xb и XptB1Wi. Пестицидные белки также включают белки яда пауков, змей и скорпионов. Примеры пептидов яда пауков включают, без ограничения, пептиды ликотоксин-1 и его мутантные формы (патент США № 8334366).
(C) Полинуклеотид, кодирующий специфический в отношении насекомых гормон или феромон, такой как экдистероид и ювенильный гормон, его вариант, миметик на его основе или его антагонист или агонист. См., например, раскрытие Hammock, et al., (1990), Nature, 344:458 экспрессии в бакуловирусе клонированной эстеразы ювенильного гормона, деактиватора ювенильного гормона.
(D) Полинуклеотид, кодирующий специфический в отношении насекомых пептид, который при экспрессии нарушает физиологию насекомого, на которого оказывают воздействие. Например, см. раскрытия Regan, (1994), J. Biol. Chem. 269:9 (экспрессионное клонирование приводит к получению ДНК, кодирующей рецептор диуретического гормона насекомых); Pratt, et al., (1989), Biochem. Biophys. Res. Comm. 163:1243 (аллостатин, идентифицированный у Diploptera puntata); Chattopadhyay, et al., (2004), Critical Reviews in Microbiology 30(1):33-54; Zjawiony, (2004), J. Nat. Prod. 67(2):300-310; Carlini and Grossi-de-Sa, (2002), Toxicon, 40(11):1515-1539; Ussuf, et al., (2001), Curr Sci. 80(7):847-853 и Vasconcelos and Oliveira, (2004), Toxicon, 44(4):385-403. См. также патент США № 5266317, Tomalski, et al., в котором раскрываются гены, кодирующие специфические в отношении насекомых токсины.
(E) Полинуклеотид, кодирующий фермент, ответственный за гипернакопление монотерпена, сесквитерпена, стероида, гидроксамовой кислоты, производного фенилпропаноида или другой небелковой молекулы с инсектицидной активностью.
(F) Полинуклеотид, кодирующий фермент, вовлеченный в модификацию, в том числе посттрансляционную модификацию, биологически активной молекулы; например, гликолитический фермент, протеолитический фермент, липолитический фермент, нуклеаза, циклаза, трансаминаза, эстераза, гидролаза, фосфатаза, киназа, фосфорилаза, полимераза, эластаза, хитиназа и глюканаза, либо натуральные, либо синтетические. См. заявку согласно PCT WO 1993/02197 от имени Scott, et al., в которой раскрыта нуклеотидная последовательность гена каллазы. Молекулы ДНК, которые содержат последовательности, кодирующие хитиназу, можно получить, например, из ATCC® под номерами доступа 39637 и 67152. См. также Kramer, et al., (1993), Insect Biochem. Molec. Biol. 23:691, где показана нуклеотидная последовательность кДНК, кодирующей хитиназу табачного бражника, и Kawalleck, et al., (1993), Plant Molec. Biol. 21:673, где представлена нуклеотидная последовательность гена полиубиквитина ubi4-2 петрушки, и патенты США № 6563020; 7145060 и 7087810.
(G) Полинуклеотид, кодирующий молекулу, которая стимулирует сигнальную трансдукцию. Например, см. раскрытие в Botella, et al., (1994), Plant Molec. Biol. 24:757 нуклеотидных последовательностей клонов кДНК кальмодулина маша и Griess, et al., (1994), Plant Physiol. 104:1467, где представлена нуклеотидная последовательность клона кДНК кальмодулина маиса.
(H) Полинуклеотид, кодирующий пептид с гидрофобным моментом. См. заявку согласно PCT WO 1995/16776 и патент США № 5580852, раскрывающие пептидные производные тахиплезина, которые ингибируют грибные патогены растений, и заявку согласно PCT WO 1995/18855, а также патент США № 5607914 (в котором раскрыты синтетические противомикробные пептиды, которые придают устойчивость к заболеваниям).
(I) Полинуклеотид, кодирующий мембранную пермеазу, каналообразователь или блокатор каналов. Например, см. раскрытие в Jaynes, et al., (1993), Plant Sci. 89:43 гетерологичной экспрессии аналога цекропин-бета литического пептида для придания трансгенным растениям табака устойчивости к Pseudomonas solanacearum.
(J) Ген, кодирующий вирусный инвазивный белок или сложный токсин, полученный из него. Например, накопление белков вирусной оболочки в трансформированных растительных клетках придает устойчивость к вирусной инфекции и/или развитию заболевания, вызванного вирусом, из которого получен ген белка оболочки, а также родственными вирусами. См. Beachy, et al., (1990), Ann. Rev. Phytopathol. 28:451. Устойчивость, опосредованную белком оболочки, придавали трансформированным растениям в отношении вируса мозаики люцерны, вируса мозаики огурца, вируса полосатости табака, вируса X картофеля, вируса Y картофеля, вируса гравировки табака, вируса погремковости табака и вируса табачной мозаики. Там же.
(K) Ген, кодирующий антитело, специфическое в отношении насекомого, или иммунотоксин, полученный из него. Таким образом, антитело, нацеленное на критическую метаболическую функцию в кишке насекомого, будет инактивировать фермент, на который оказывается воздействие, с уничтожением насекомого. Ср. Taylor, et al., Abstract #497, SEVENTH INT'L SYMPOSIUM ON MOLECULAR PLANT-MICROBE INTERACTIONS (Edinburgh, Scotland, 1994) (ферментативная инактивация в трансгенном табаке посредством выработки одноцепочечных фрагментов антител).
(L) Ген, кодирующий антитело, специфическое в отношении вируса. См., например, Tavladoraki, et al., (1993), Nature, 366:469, где показано, что трансгенные растения, экспрессирующие гены рекомби
- 85 031651 нантного антитела, защищены от нападения вируса.
(M) Полинуклеотид, кодирующий белок, останавливающий развитие, вырабатываемый в природе патогеном или паразитом. Таким образом, грибные эндо-альфа-1,4-О-полигалактуроназы облегчают грибную колонизацию и высвобождение питательных веществ растения путем солюбилизации гомоальфа-1,4-Э-галактуроназы клеточной стенки растения. См. Lamb, et al., (1992), Bio/Technology, 10:1436. Клонирование и определение характеристик гена, который кодирует белок, ингибирующий эндополигалактуроназу бобов, описан в Toubart, et al., (1992), Plant J. 2:367.
(N) Полинуклеотид, кодирующий белок, останавливающий развитие, вырабатываемый в природе растением. Например, Logemann, et al., (1992), Bio/Technology 10:305 показали, что трансгенные растения, экспрессирующие ген ячменя, инактивирующий рибосомы, обладали повышенной устойчивостью к грибковым заболеваниям.
(O) Гены, вовлеченные в реакцию системной приобретенной устойчивости (SAR), и/или гены, связанные с патогенезом. Briggs, (1995), Current Biology 5(2), Pieterse and Van Loon, (2004) Curr. Opin. Plant Bio. 7(4):456-64 и Somssich, (2003), Cell 113(7):815-6.
(P) Противогрибковые гены (Cornelissen and Melchers, (1993), Pl. Physiol. 101:709-712 и Parijs, et al., (1991), Planta 183:258-264, а также Bushnell, et al., (1998), Can. J. of Plant Path. 20(2):137-149.) Также см. заявки на патенты США № 09/950933; 11/619645; 11/657710; 11/748994; 11/774121 и патенты США № 6891085 и 7306946. Киназы, подобные рецептору LysM, для восприятия фрагментов хитина, как первый этап в защитной реакции растения против грибов-патогенов (US 2012/0110696).
(Q) Гены системы детоксикации, такие как кодирующие фумонизин, беауверицин, монилиформин и зеараленон и их структурно родственные производные. Например, см. патенты США № 5716820; 5792931;5798255; 5846812; 6083736;6538177; 6388171 и 6812380.
(R) Полинуклеотид, кодирующий цистатин и ингибиторы цистеиновой протеиназы. См. патент США № 7205453.
(S) Гены дефензинов. См. WO 2003/000863 и патенты США № 6911577; 6855865; 6777592 и 7238781.
(T) Гены, обеспечивающие устойчивость к нематодам. См., например, заявку согласно PCT WO 1996/30517; заявку согласно PCT WO 1993/19181, WO 2003/033651 и Urwin, et al., (1998), Planta 204:472-479, Williamson, (1999), Curr Opin Plant Bio. 2(4):327-31; патенты США № 6284948 и 7301069 и гены miR164 (WO 2012/058266).
(U) Гены, которые обеспечивают устойчивость к корневой гнили, вызываемой Phytophthora, такие как Rps 1, Rps 1-a, Rps 1-b, Rps 1-c, Rps 1-d, Rps 1-е, Rps 1-k, Rps 2, Rps 3-a, Rps 3-b, Rps 3-c, Rps 4, Rps 5, Rps 6, Rps 7 и другие гены Rps. См., например, Shoemaker, et al., Phytophthora Root Rot Resistance Gene Mapping in Soybean, Plant Genome IV Conference, San Diego, Calif. (1995).
(V) Гены, которые обеспечивают устойчивость к бурой стеблевой гнили, такие как описаны в патенте США № 5689035, включенном посредством ссылки с этой целью.
(W) Гены, которые обеспечивают устойчивость к Colletotrichum, такие как описанные в публикации заявки на патент США US 2009/0035765, включенной посредством ссылки с этой целью. Они включают локус Rcg, который можно использовать как конверсию одного локуса.
2. Трансгены, которые обеспечивают устойчивость к гербициду, например.
(A) Полинуклеотид, кодирующий устойчивость к гербициду, который ингибирует конус нарастания или меристему, такому как имидазолинон или сульфонилмочевина. Иллюстративные гены в этой категории кодируют мутантный фермент ALS и AHAS, как описано, например, у Lee, et al., (1988), EMBO J. 7:1241 и Miki, et al., (1990), Theor. Appl. Genet. 80:449, соответственно. См. также патенты США № 5605011; 5013659; 5141870; 5767361; 5731180; 5304732; 4761373; 5331107; 5928937 и 5378824; заявку на патент США № 11/683737 и публикацию международной заявки WO 1996/33270.
(B) Полинуклеотид, кодирующий белок для устойчивости к глифосату (устойчивость придают мутантные гены 5-енолприрувил-3-фосфошикиматсинтазы (EPSP) и aroA, соответственно) и другим соединениям с фосфоновыми группами, таким как глуфосинат (гены фосфинотрицин-ацетилтрансферазы (PAT) и фосфинотрицин-ацетилтрансферазы (bar) Streptomyces hygroscopicus), и пиридинокси- или феноксипропионовым кислотам и циклогексонам (гены, кодирующие ингибитор АССазы). См., например, патент США № 4940835, Shah, et al., в котором раскрыта нуклеотидная последовательность формы EPSPS, которая может придавать устойчивость к глифосату. В патенте США № 5627061, Barry, et al., также описаны гены, кодирующие ферменты EPSPS. См. также патенты США № 6566587; 6338961; 6248876 B1; 6040497; 5804425; 5633435; 5145783; 4971908; 5312910; 5188642; 5094945, 4940835; 5866775; 6225114 B1; 6130366; 5310667; 4535060; 4769061; 5633448; 5510471; RE 36449; RE 37287 E и 5491288, а также публикации международных заявок EP 1173580; WO 2001/66704; EP 1173581 и EP 1173582, которые включены в данный документ посредством ссылки для данной цели. Устойчивость к глифосату также придается растениям, которые экспрессируют ген, кодирующий фермент глифосат-оксидоредуктазу, как более подробно описано в патентах США № 5776760 и 5463175, которые включены в данный документ посредством ссылки с этой целью. Кроме того, устойчивость к глифосату может придаваться растениям посредством сверхэкспрессии генов, кодирующих глифосат-Ы-ацетилтрансферазу. См., например,
- 86 031651 патенты США № 7462481; 7405074 и публикацию заявки на патент США № US 2008/0234130. Молекулу ДНК, кодирующую мутантный ген aroA, можно получить под номером доступа ATCC® 39256, а нуклеотидная последовательность мутантного гена раскрыта в патенте США № 4769061, выданном Comai. В заявке EP № 0333033, Kumada, et al., и патенте США № 4975374, выданном Goodman, et al., раскрыты нуклеотидные последовательности генов глутаминсинтетазы, придающие устойчивость к гербицидам, таким как L-фосфинотрицин. Нуклеотидная последовательность гена фосфинотрицинацетилтрансферазы представлена в заявках EP № 0242246 и 0242236, Leemans, et al.; De Greef, et al., (1989), Bio/Technology 7:61, где описано получение трансгенных растений, которые экспрессируют химерные гены bar, кодирующие фосфинотрицин-ацетилтрансферазную активность. См. также патенты США № 5969213; 5489520; 5550318; 5874265; 5919675; 5561236; 5648477; 5646024; 6177616 B1 и 5879903, которые включены в данный документ посредством ссылки с этой целью. Иллюстративные гены, придающие устойчивость к феноксипропионовым кислотам и циклогексонам, таким как сетоксидим и галоксифоп, представляют собой гены Acc1-S1, Acc1-S2 и Acc1-S3, описанные у Marshall, et al., (1992), Theor. Appl. Genet. 83:435.
(C) Полинуклеотид, кодирующий белок, обеспечивающий устойчивость к гербициду, который ингибирует фотосинтез, такому как триазин (гены psbA и gs+) и бензонитрил (ген нитрилазы). Przibilla, et al., (1991), Plant Cell 3:169 описывают трансформацию Chlamydomonas с помощью плазмид, кодирующих мутантные гены psbA. Нуклеотидные последовательности генов нитрилазы раскрыты в патенте США № 4810648, выданном Stalker, и молекулы ДНК, содержащие эти гены, доступны под номерами доступа ATCC® 53435, 67441 и 67442. Клонирование и экспрессия ДНК, кодирующей глутатион^-трансферазу, описана у Hayes, et al., (1992) Biochem. J. 285:173.
(D) Полинуклеотид, кодирующий белок, обеспечивающий устойчивость к синтазе ацетогидроксикислот, которая, как было обнаружено, делает растения, которые экспрессируют этот фермент, устойчивыми к нескольким типам гербицидов, был введен в ряд растений (см., например, Hattori, et al., (1995), Mol Gen Genet. 246:419). Другие гены, которые придают устойчивость к гербицидам, включают ген, кодирующий химерный белок цитохрома P4507A1 крысы и NADPH- цитохром P450-оксидоредуктазы дрожжей (Shiota, et al., (1994), Plant Physiol 106:17), гены, кодирующие глутатионредуктазу и супероксиддисмутазу (Aono, et al., (1995), Plant Cell Physiol 36:1687), и гены, кодирующие различные фосфотрансферазы (Datta, et al., (1992), Plant Mol Biol 20:619).
(E) Полинуклеотид, кодирующий устойчивость к гербициду, целенаправленно воздействующему на протопорфириноген-оксидазу (protox), которая необходима для выработки хлорофилла. Фермент protox служит в качестве мишени для ряда гербицидных соединений. Эти гербициды также ингибируют рост всех присутствующих различных видов растений, вызывая их полное разрушение. Разработка растений, характеризующихся измененной protox-активностью, которые устойчивы к этим гербицидам, описана в патентах США № 6288306 B1; 6282837 B1 и 5767373 и публикации международной заявки WO 2001/12825.
(F) Ген aad-1 (изначально из Sphingobium herbicidovorans) кодирует белок арилоксиалканоатдиоксигеназу (AAD-1). Признак обеспечивает переносимость гербицидов на основе 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты и арилоксифеноксипропионата (обычно называемых фопгербициды, таких как квизалофоп). Ген aad-1, как таковой, обеспечивающий переносимость гербицида у растений, впервые был раскрыт в WO 2005/107437 (см. также US 2009/0093366). Ген aad-12, полученный из Delftia acidovorans, который кодирует белок арилоксиалканоат-диоксигеназу (AAD-12), приводящий к переносимости гербицидов на основе 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты и пиридилоксиацетата посредством инактивации некоторых гербицидов с арилоксиалканоатным фрагментом, в том числе фенокси-ауксина (например, 2,4-D, MCPA), а также видов пиридилокси-ауксина (например, флуроксипира, триклопира).
(G) Полинуклеотид, кодирующий устойчивую к гербициду дикамба-монооксигеназу, раскрытый в публикации заявки на патент США 2003/0135879, для придания переносимости дикамбы.
(H) Полинуклеотидная молекула, кодирующая бромоксинилнитрилазу (Bxn), раскрытая в патенте США № 4810648, для придания переносимости бромоксинила.
(I) Полинуклеотидная молекула, кодирующая фитоен (crtl), описанный у Misawa, et al., (1993), Plant J. 4:833-840 и у Misawa, et al., (1994), Plant J. 6:481-489, для переносимости норфлуразона.
3. Трансгены, которые обеспечивают измененные характеристики зерна или вносят в них вклад, такие как представленные ниже.
(A) Измененные жирные кислоты, например, посредством следующего.
(1) Подавление стеароил-ACP для повышения содержания стеариновой кислоты в растении. См. Knultzon, et al., (1992), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:2624 и WO 1999/64579 (гены для изменения липидных профилей в кукурузе (Genes to Alter Lipid Profiles in Corn)).
(2) Повышение содержания олеиновой кислоты посредством модификации гена FAD-2 и/или снижение содержания линоленовой кислоты посредством модификации гена FAD-3 (см. патенты США № 6063947; 6323392; 6372965 и WO 1993/11245).
(3) Изменение содержания конъюгированных линоленовой или линолевой кислоты, например, как в
- 87 031651
WO 2001/12800.
(4) Изменение LEC1, AGP, Dek1, Superal1, mil ps, различных генов lpa, таких как lpa1, lpa3, hpt или hggt. Например, см. WO 2002/42424, WO 1998/22604, WO 2003/011015, WO 2002/057439, WO 2003/011015, патенты США № 6423886, 6197561, 6825397 и публикации заявок на патенты США № US 2003/0079247, US 2003/0204870 и Rivera-Madrid, et al., (1995), Proc. Natl. Acad. Sci. 92:5620-5624.
(5) Гены, кодирующие А8-десатуразу для получения длинноцепочечных полиненасыщенных жирных кислот (патенты США № 8058571 и 8338152), Δ9 десатуразу для снижения содержания насыщенных жиров (патент США № 8063269), Δ6-десатуразу примулы для улучшения профилей омега-3-жирных кислот.
(6) Выделенные нуклеиновые кислоты и белки ассоциированные с регуляцией метаболизма липидов и сахаров, в частности, белка липидного метаболизма (LMP), применяемых в способах получения трансгенных растений и модуляции уровней запасных веществ семени, в том числе липидов, жирных кислот, видов крахмала или запасных белков семени, и их применения в способах модуляции размера семени, количества семян, веса семян, длины корней и размера листьев растений (EP 2404499).
(7) Изменения экспрессии белка, индуцируемого сахарами 2 (HSI2), с высоким уровнем экспрессии в растении для повышения или снижения экспрессии HSI2 в растении. Повышение экспрессии HSI2 повышает содержание масла, тогда как понижение экспрессии HSI2 снижает восприимчивость к абсцизовой кислоте и/или повышает устойчивость к засухе (публикация заявки на патент США № 2012/0066794).
(8) Экспрессии цитохрома b5 (Cb5) отдельно или вместе с FAD2 для модуляции содержания масла в семени растения, в частности, для повышения уровней омега-3-жирных кислот и улучшения соотношения омега-6- и омега-3-жирных кислот (публикация заявки на патент США № 2011/0191904).
(9) Молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих wrinkled1-подобные полипептиды для модуляции метаболизма сахаров (патент США № 8217223).
(B) Измененное содержание фосфора, например, посредством следующего.
(1) Введения гена, кодирующего фитазу, при этом будет улучшаться распад фитата, что приводит к большему количеству свободного фосфата в трансформированном растении. Например, см. Van Hartingsveldt, et al., (1993), Gene, 127:87 относительно раскрытия нуклеотидной последовательности гена фитазы Aspergillus niger.
(2) Модуляции гена, который снижает содержание фитата. У маиса это, например, можно осуществлять при помощи клонирования, а затем повторного введения ДНК, ассоциированной с одним или несколькими аллелями, такими как аллели LPA, идентифицированные у мутантов маиса, характеризующихся низкими уровнями фитиновой кислоты, как, например, в WO 2005/113778, и/или посредством изменения активности инозитолкиназы, как в WO 2002/059324, публикации заявки на патент США № 2003/0009011, WO 2003/027243, публикации заявки на патент США № 2003/0079247, WO 1999/05298, патенте США № 6197561, патенте США № 6291224, патенте США № 6391348, WO 2002/059324, публикации заявки на патент США № 2003/0079247, WO 1998/45448, WO 1999/55882, WO 2001/04147.
(C) Измененные углеводы, на которые воздействовали, например, посредством изменения гена, кодирующего фермент, который воздействует на паттерн ветвления крахмала, или гена, изменяющего тиоредоксин, такого как NTR и/или TRX (см. патент США № 6531648, который включен посредством ссылки с этой целью), и/или нокаута гамма-зеина или использования мутанта, такого как cs27, или TUSC27, или en27 (см. патент США № 6858778 и публикацию заявки на патент США № 2005/0160488, публикацию заявки на патент США № 2005/0204418, которые включены посредством ссылки с этой целью). См. Shiroza, et al., (1988), J. Bacteriol. 170:810 (нуклеотидная последовательность мутантного гена фруктозилтрансферазы Streptococcus), Steinmetz, et al., (1985), Mol. Gen. Genet. 200:220 (нуклеотидная последовательность гена левансахаразы Bacillus subtilis), Pen, et al., (1992), Bio/Technology 10:292 (получение трансгенных растений, которые экспрессируют альфа-амилазу Bacillus licheniformis), Elliot, et al., (1993), Plant Molec. Biol. 21:515 (нуклеотидные последовательности генов инвертазы томата), Sogaard, et al., (1993), J. Biol. Chem. 268:22480 (сайт-направленный мутагенез гена альфа-амилазы ячменя) и Fisher, et al., (1993), Plant Physiol. 102:1045 (фермент ветвления крахмала эндосперма маиса II), WO 1999/10498 (улучшенная усвояемость и/или экстракция крахмала благодаря модификации UDP-D-ксилоза-4эпимеразы, Fragile 1 и 2, Ref1, HCHL, C4H), патент США № 6232529 (способ получения семян с высоким содержанием масла путем модификации уровней крахмала (AGP)). Гены модификации жирных кислот, упомянутые в данном документе, также можно применять для воздействия на содержание и/или состав крахмала благодаря взаимосвязи путей метаболизма крахмала и масла.
(D) Измененное содержание или состав антиоксидантов, как, например, изменение токоферола или токотриенолов. Например, см. патент США № 6787683, публикацию заявки на патент США № 2004/0034886 и WO 2000/68393, предусматривающие манипуляцию с уровнями антиоксидантов, и WO 2003/082899, благодаря изменению гомогентизатгеранил-геранилтрансферазы (hggt).
(E) Измененные незаменимые аминокислоты семян. Например, см. патент США № 6127600 (способ повышения накопления незаменимых аминокислот в семенах), патент США № 6080913 (бинарные способы повышения накопления незаменимых аминокислот в семенах), патент США № 5990389 (высокое
- 88 031651 содержание лизина), WO 1999/40209 (изменение аминокислотного состава семян), WO 1999/29882 (способы изменения содержания аминокислот в белках), патент США № 5850016 (изменение аминокислотного состава семян), WO 1998/20133 (белки с повышенными уровнями незаменимых аминокислот), патент США № 5885802 (высокое содержание метионина), патент США № 5885801 (высокое содержание треонина), патент США № 6664445 (растительные ферменты биосинтеза аминокислот), патент США № 6459019 (повышенное содержание лизина и треонина), патент США № 6441274 (бета-субъединица растительной триптофансинтазы), патент США № 6346403 (ферменты метаболизма метионина), патент США № 5939599 (высокое содержание серы), патент США № 5912414 (повышенное содержание метионина), WO 1998/56935 (растительные ферменты биосинтеза аминокислот), WO 1998/45458 (разработанный белок семени, имеющий более высокую процентную долю незаменимых аминокислот), WO 1998/42831 (повышенное содержание лизина), патент США № 5633436 (повышение содержания серосодержащих аминокислот), патент США № 5559223 (синтетические запасные белки с определенной структурой, содержащие программируемые уровни незаменимых аминокислот для улучшения питательной ценности растений), WO 1996/01905 (повышенное содержание треонина), WO 1995/15392 (повышенное содержание лизина), публикацию заявки на патент США № 2003/0163838, публикацию заявки на патент США № 2003/0150014, публикацию заявки на патент США № 2004/0068767, патент США № 6803498, WO 2001/79516.
4. Гены, регулирующие мужскую стерильность.
Доступно несколько способов обеспечения генетической мужской стерильности, как, например, несколько мутантных генов в отдельных положениях в пределах генома, которые придают мужскую стерильность, как раскрыто в патентах США № 4654465 и 4727219, Brar, et al., и хромосомные транслокации, как описано Patterson в патентах США № 3861709 и 3710511. В дополнение к этим способам Albertsen, et al. в патенте США № 5432068 описывают систему ядерной мужской стерильности, которая включает: идентификацию гена, который важен для мужской фертильности; сайленсинг этого нативного гена, который важен для мужской фертильности; удаление нативного промотора из гена, важного для мужской фертильности, и замещение его на индуцируемый промотор; вставку этого полученного с помощью методик генной инженерии гена обратно в растение и, таким образом, создание растения, которое характеризуется мужской стерильностью, поскольку индуцируемый промотор не включен, в результате чего ген мужской фертильности не транскрибируется. Фертильность восстанавливают посредством индуцирования или включения промотора, который, в свою очередь, обеспечивает транскрипцию гена, который придает мужскую фертильность.
(A) Введение гена деацетилазы под управлением промотора, специфического в отношении тапетума, и с применением химического N-Ac-PPT (WO 2001/29237).
(B) Введение различных промоторов, специфических в отношении тычинок (WO 1992/13956, WO 1992/13957).
(C) Введение барназы или гена барстара (Paul, et al., (1992), Plant Mol. Biol. 19:611-622).
Дополнительные примеры систем и генов ядерной мужской и женской стерильности см. также в патентах США № 5859341; 6297426; 5478369; 5824524; 5850014 и 6265640, все из которых, тем самым, включены посредством ссылки.
5. Гены, которые создают сайт для сайт-специфической интеграции ДНК.
Подразумевается введение сайтов FRT, которые можно применять в системе FLP/FRT, и/или сайтов Lox, которые можно применять в системе Cre/Loxp. Например, см. Lyznik, et al., (2003), Plant Cell Rep. 21:925-932 и WO 1999/25821, которые включены в данный документ посредством ссылки. Другие системы, которые можно применять, включают рекомбиназу Gin из фага Mu (Maeser, et al., (1991,) Vicki Chandler, The Maize Handbook ch. 118 (Springer-Verlag 1994), рекомбиназу Pin из E. coli (Enomoto, et al., 1983) и систему R/RS из плазмиды pSRi (Araki, et al., 1992).
6. Гены, которые воздействуют на устойчивость к абиотическому стрессу.
В том числе без ограничений на цветение, развитие початка и семени, повышение эффективности использования азота, измененную реактивность в отношении азота, устойчивость к засухе или ее переносимость, устойчивость к холоду или его переносимость, а также устойчивость к засолению или его переносимость и повышенную урожайность при стрессе.
(A) Например, см. WO 2000/73475, где эффективность использования воды изменяется посредством изменения малата; патенты США № 5892009, 5965705, 5929305, 5891859, 6417428, 6664446, 6706866,
6717034, 6801104,
WO 2001/035727,
WO 2002/017430,
WO 2000/060089,
WO 2001/036444,
WO 2002/077185,
WO 2001/026459,
WO 2001/036597,
WO 2002/079403,
WO 2001/035725,
WO 2001/036598,
WO 2003/013227,
WO
WO
WO
2001/034726,
2002/015675,
2003/013228,
WO 2003/014327, WO 2004/031349, WO 2004/076638, WO 199809521.
(B) WO 199938977, в которой описаны гены, в том числе гены CBF, и факторы транскрипции, эффективные при ослаблении негативных эффектов замораживания, высокого содержания солей и засухи на растения, а также приводящие к другим положительным эффектам в отношении фенотипа растения.
(C) Публикация заявки на патент США № 2004/0148654 и WO 2001/36596, где в растениях изменяется содержание абсцизовой кислоты, что приводит к улучшенному фенотипу растения, такому как по- 89 031651 вышенная урожайность и/или повышенная переносимость абиотического стресса.
(D) WO 2000/006341, WO 2004/090143, патенты США № 7531723 и 6992237, где экспрессия цитокинина модифицируется, что приводит к растениям с повышенной переносимостью стрессов, как, например, переносимостью засухи, и/или повышенной урожайностью. Также см. WO 2002/02776, WO 2003/052063, JP 2002/281975, патент США № 6084153, WO 2001/64898, патент США № 6177275 и патент США № 6107547 (улучшение использования азота и измененная реактивность в отношении азота).
(E) Что касается изменения содержания этилена, см. публикацию заявки на патент США № 2004/0128719, публикацию заявки на патент США № 2003/0166197 и WO 2000/32761.
(F) Что касается растительных факторов транскрипции или транскрипционных регуляторов, связанных с реакцией на абиотический стресс, см., например, публикацию заявки на патент США № 2004/0098764 или публикацию заявки на патент США № 2004/0078852.
(G) Гены, которые повышают экспрессию вакуолярной пирофосфатазы, такие как AVP1 (патент США № 8058515), для повышенной урожайности; нуклеиновая кислота, кодирующая полипептиды HSFA4 или HSFA5 (фактор теплового шока класса A4 или A5), полипептид, подобный белку транспортера олигопептидов, (OPT4-подобный); пластохрон-2-подобный (PLA2-подобный) полипептид или Wuschel-родственный гомеобокс-1-подобный (WOX1-подобный) полипептид (публикация заявки на патент США № US 2011/0283420).
(H) Подавление полинуклеотидов, кодирующих белки поли-(АДФ-рибоза)-полимеразы (PARP), с целью модуляции запрограммированной гибели клеток (патент США № 8058510) для повышения мощности.
(I) Полинуклеотид, кодирующий полипептиды DTP21, для обеспечения устойчивости к засухе (публикация заявки на патент США № US 2011/0277181).
(J) Нуклеотидные последовательности, кодирующие белки ACC-синтазы 3 (ACS3) для модуляции развития, модуляции реакции на стресс и модуляции переносимости стрессов (публикация заявки на патент США № US 2010/0287669).
(K) Полинуклеотиды, которые кодируют белки, которые приводят к фенотипу переносимости засухи (DTP), для обеспечения устойчивости к засухе (WO 2012/058528).
(L) Гены токоферолциклазы (TC) для обеспечения переносимости засухи и засоления (публикация заявки на патент США № 2012/0272352).
(M) Белки семейства протеаз, нацеленные на CAAX-концевые аминокислоты, для придания переносимости стрессов (патент США № 8338661).
(N) Мутации в гене, кодирующем SAL1, характеризовались повышенной переносимостью стрессов, в том числе характеризовались повышенной устойчивостью к засухе (публикация заявки на патент США № 2010/0257633).
(O) Экспрессия последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, выбранный из группы, состоящей из: полипептида GRF, RAA1- подобного полипептида, полипептида SYR, полипептида ARKL и полипептида YTP, усиливающих признаки, связанные с урожайностью (публикация заявки на патент США № 2011/0061133).
(P) Модуляция экспрессии в растении нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид трегалозофосфатфосфатазу (TPP) класса III для улучшения признаков, связанных с урожайностью, у растений, в частности, повышения урожайности семян (публикация заявки на патент США № 2010/0024067).
(Q) Экспрессия последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид фенотипа переносимости засухи (DTP6), в частности, AT-DTP6 из публикации заявки на патент США US 2014/0223595.
Другие гены и факторы транскрипции, которые воздействуют на рост и агротехнические признаки растений, такие как урожайность, цветение, рост растения и/или структура растения, можно вводить или интрогрессировать в растения, см., например, WO 1997/49811 (LHY), WO 1998/56918 (ESD4), WO 1997/10339 и патент США № 6573430 (TFL), патент США № 6713663 (FT), WO 1996/14414 (CON), WO 1996/38560, WO 2001/21822 (VRN1), WO 2000/44918 (VRN2), WO 1999/49064 (GI), WO 2000/46358 (FR1), WO 1997/29123, патент США № 6794560, патент США № 6307126 (GAI), WO 1999/09174 (D8 и Rht) и WO 2004/076638, а также WO 2004/031349 (факторы транскрипции).
7. Гены, которые обеспечивают повышенную урожайность.
(A) Трансгенное культурное растение, трансформированное при помощи нуклеиновой кислоты, кодирующей 1-аминоциклопропан-1-карбоксилатдезаминаза-подобный полипептид (ACCDP), где экспрессия последовательности нуклеиновой кислоты в культурном растении приводит к повышенному росту корней, и/или повышенной урожайности, и/или повышенной переносимости стрессов под влиянием факторов окружающей среды у растения по сравнению с разновидностью дикого типа растения (патент США № 8097769).
(B) Сверхэкспрессия гена белков цинковых пальцев маиса (Zm-ZFP1) с применением промотора, активного преимущественно в семенах, как было показано, усиливает рост растения, увеличивает количество зерен и общий вес зерен на растение (публикация заявки на патент США № 2012/0079623).
- 90 031651 (C) Конститутивная сверхэкспрессия белка с доменом границ латеральных органов (LOB) (Zm-LOBDP1) маиса, как было показано, увеличивает количество зерен и общий вес зерен на растение (публикация заявки на патент США № 2012/0079622).
(D) Улучшение признаков, связанных с урожайностью, у растений посредством модуляции экспрессии у растения нуклеиновой кислоты, кодирующей VIM1- (вариант с метилированием 1) подобный полипептид или VTC2-подобный (GDP-L-галактоза-фосфорилаза) полипептид, или полипептид DUF1685, или ARF6-подобный (восприимчивый к ауксину фактор) полипептид (WO 2012/038893).
(E) Модуляция экспрессии в растении нуклеиновой кислоты, кодирующей Ste20-подобный полипептид или его гомолог, позволяет растениям производить повышенный урожай относительно контрольных растений (EP 2431472).
(F) Гены, кодирующие полипептиды нуклеозиддифосфаткиназы (NDK) и их гомологи для модификации строения корня растения (публикация заявки на патент США № 2009/0064373).
8. Гены, которые обеспечивают усвояемость растения (A) Изменение уровня ксилана, присутствующего в клеточной стенке растения, посредством модуляции экспрессии ксилансинтазы (патент США № 8173866).
В некоторых вариантах осуществления пакетированный признак может представлять собой признак или трансформант, который получил разрешение контролирующих органов, в том числе, без ограничения, является трансформантом из табл. 4A-4F.
Таблица 4A
Рис Oryza sativa
Трансформант Компания Описание
CL121, CL141, CFX51 BASF Inc. Переносимость имидазолинонового гербицида, имазетапира, индуцированная химическим мутагенезом фермента ацетолактатсинтазы (ALS) с применением этилметансульфоната (EMS).
IMINTA-1, IMINTA-4 BASF Inc. Переносимость имидазолиноновых гербицидов, индуцированная химическим мутагенезом фермента ацетолактатсинтазы (ALS) с применением азида натрия.
LLRICE06, LLRICE62 Aventis CropScience Рис с переносимостью гербицида глуфосината аммония, полученный посредством вставки гена, кодирующего модифицированную фосфинотрицинацетилтрансферазу (РАТ), из почвенной бактерии Streptomyces hygroscopicus.
LLRICE601 Bayer CropScience (Aventis CropScience (AgrEvo)) Рис с переносимостью гербицида глуфосината аммония, полученный посредством вставки гена, кодирующего модифицированную фосфинотрицинацетилтрансферазу (РАТ), из почвенной бактерии Streptomyces hygroscopicus.
PWC16 BASF Inc. Переносимость имидазолинонового
гербицида,имазетапира, индуцированная химическим мутагенезом фермента ацетолактатсинтазы (ALS) с применением этилметансульфоната (EMS).
Таблица 4B Люцерна Medicago sativa
Трансформант Компания Описание
J101, J163 Monsanto Company и Forage Genetics International Люцерна (люцерна посевная) с переносимостью гербицида глифосата, полученная посредством вставки гена, кодирующего фермент 5енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазу (EPSPS) из штамма СР4 Agrobacterium tumefaciens.
- 91 031651
Таблица 4C
Пшеница Triticum aestivum
Трансформант Компания Описание
AP205CL BASF Inc. Отбор в отношении подвергнутой мутагенезу версии фермента ацетогидроксикислотасинтазы (AHAS), также известной как ацетолактатсинтаза (ALS) или ацетолактатпируват-лиаза.
AP602CL BASF Inc. Отбор в отношении подвергнутой мутагенезу версии фермента ацетогидроксикислотасинтазы (AHAS), также известной как ацетолактатсинтаза (ALS) или ацетолактатпируват-лиаза.
BW255-2, BW238-3 BASF Inc. Отбор в отношении подвергнутой мутагенезу версии фермента ацетогидроксикислотасинтазы (AHAS), также известной как ацетолактатсинтаза (ALS) или ацетолактатпируват-лиаза.
BW7 BASF Inc. Переносимость имидазолиноновых гербицидов, индуцированная посредством химического мутагенеза гена ацетогидроксикислота-синтазы (AHAS) с применением азида натрия.
MON71800 Monsanto Company Сорт пшеницы с переносимостью глифосата, полученный посредством вставки гена, кодирующего модифицированную 5енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазу (EPSPS), из почвенной бактерии Agrobacterium tumefaciens штамма СР4.
SWP965001 Cyanamid Crop Protection Отбор в отношении подвергнутой мутагенезу версии фермента ацетогидроксикислотасинтазы (AHAS), также известной как ацетолактатсинтаза (ALS) или ацетолактатпируват-лиаза.
Teal 11А BASF Inc. Отбор в отношении подвергнутой мутагенезу версии фермента ацетогидроксикислотасинтазы (AHAS), также известной как ацетолактатсинтаза (ALS) или ацетолактатпируват-лиаза.
Таблица 4D
Подсолнечник Helianthus annuus
Трансформант Компания Описание
Х81359 BASF Inc. Переносимость имидазолиноновых гербицидов при помощи отбора встречающегося в природе мутанта.
- 92 031651
Соя Glycine max L
Таблица 4E
Трансформант Компания Описание
A2704-12, A2704-21, A5547-35 Bayer CropScience (Aventis CropScience (AgrEvo)) Соя с переносимостью гербицида гпуфосината аммония, попученная посредством вставки гена, кодирующего модифицированную фосфинотрицинацетиптрансферазу (РАТ), из почвенной бактерии Streptomyces viridochromogenes.
A5547-127 Bayer CropScience (Aventis CropScience (AgrEvo)) Соя с переносимостью гербицида гпуфосината аммония, полученная посредством вставки гена, кодирующего модифицированную фосфинотрицинацетилтрансферазу (РАТ), из почвенной бактерии Streptomyces viridochromogenes.
BPS-CV127-9 BASF Inc. Введенный ген csr1-2 из Arabidopsis thaliana кодирует белок ацетогидроксикислотасинтазу, который обеспечивает переносимость имидазолиноновых гербицидов вследствие точковой мутации, которая приводит к замене одной аминокислоты, при которой остаток серина в положении 653 замещен аспарагином (S653N).
DP-305423 Pioneer Hi-Bred International Inc. Соя с высоким содержанием олеиновой кислоты, полученная посредством вставки дополнительных копий части гена, кодирующего омега-6-десатуразу, gm-fad2-1, что приводит к сайленсингу гена эндогенной омега-6-десатуразы (FAD2-1).
DP356043 Pioneer Hi-Bred International Inc. Трансформант сои с двумя генами переносимости гербицидов: геном глифосатN-ацетилтрансферазы, которая нейтрализует глифосат, и геном модифицированной ацетолактатсинтазы (ALS), которая не восприимчива к ALS-ингибирующим гербицидам.
G94-1, G94-19, G168 DuPont Canada Agricultural Products Соя с высоким содержанием олеиновой кислоты, полученная посредством вставки второй копии гена, кодирующего десатуразу жирной кислоты (GmFad2-1), из сои, что приводит к сайленсингу эндогенного гена хозяина.
GTS 40-3-2 Monsanto Company Сорт сои с переносимостью глифосата, полученный посредством вставки гена, кодирующего модифицированную 5енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазу (EPSPS), из почвенной бактерии Agrobacterium tumefaciens.
- 93 031651
GU262 Bayer CropScience (Aventis CropScience (AgrEvo)) Соя с переносимостью гербицида глуфосината аммония, полученная посредством вставки гена, кодирующего модифицированную фосфинотрицинацетилтрансферазу (РАТ), из почвенной бактерии Streptomyces viridochromogenes.
MON87701 Monsanto Company Устойчивость к чешуекрылым вредителям сои, в том числе к гусенице бархатных бобов (Anticarsia gemmatalis) и соевой совке (Pseudoplusia includens).
MON87701 х MON89788 Monsanto Company Переносимость гербицида глифосата благодаря экспрессии гена, кодирующего EPSPS, из штамма СР4 A. tumefaciens, и устойчивость к чешуекрылым вредителям сои, в том числе к гусенице бархатных бобов (Anticarsia gemmatalis) и соевой совке (Pseudoplusia includens) благодаря экспрессии гена, кодирующего Сгу1Ас, из В. thuringiensis.
MON89788 Monsanto Company Соя с переносимостью глифосата, полученная посредством вставки гена агоА (epsps), кодирующего модифицированную 5енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазу (EPSPS), из Agrobacterium tumefaciens СР4.
ОТ96-15 Agriculture & Agri-Food Canada Соя с низким содержанием линоленовой кислоты, полученная благодаря традиционному кроссбридингу, для введения нового признака, обусловленного встречающимся в природе мутантом гена fan1, который отбирали в отношении низкого содержания линоленовой кислоты.
W62, W98 Bayer CropScience (Aventis CropScience (AgrEvo)) Соя с переносимостью гербицида глуфосината аммония, полученная посредством вставки гена, кодирующего модифицированную фосфинотрицинацетилтрансферазу (РАТ), из почвенной бактерии Streptomyces hygroscopicus.
- 94 031651
Маис Zea mays L
Таблица 4F
Трансформант Компания Описание
176 Syngenta Seeds, Inc. Маис с устойчивостью к насекомым, полученный посредством вставки гена CrylAb из Bacillus thuringiensis, подвид kurstaki. Генетическая модификация придает устойчивость к нападению огневки кукурузной (ЕСВ).
3751IR Pioneer Hi-Bred International Inc. Отбор сомаклональных вариантов путем культивирования зародышей на среде, содержащей имидазолинон.
676, 678, 680 Pioneer Hi-Bred International Inc. Маис с мужской стерильностью и переносимостью гербицида глуфосината аммония, полученный посредством вставки генов, кодирующих ДНК-аденин-метилазу и фосфинотрицин-ацетилтрансферазу (РАТ) из Escherichia coli и Streptomyces viridochromogenes, соответственно.
B16 (DLL25) Dekalb Genetics Corporation Маис с переносимостью гербицида глуфосината аммония, полученный посредством вставки гена, кодирующего фосфинотрицин-ацетилтрансферазу (РАТ), из Streptomyces hygroscopicus.
BT11 (X4334CBR, X4734CBR) Syngenta Seeds, Inc. Маис с устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицидов, полученный посредством вставки гена CrylAb из Bacillus thuringiensis, подвид kurstaki, и гена, кодирующего фосфинотрицин-Nацетилтрансферазу (РАТ), из S. viridochromogenes.
BT11 x GA21 Syngenta Seeds, Inc. Маис с пакетированной устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицидов, полученный при помощи традиционного кроссбридинга родительских линий ВТ11 (уникальный идентификатор OECD: SYNВТО11-1) и GA21 (уникальный идентификатор OECD: MON-OOO21-9).
BT11 xMIR162x MIR604 x GA21 Syngenta Seeds, Inc. Устойчивость к жесткокрылым вредителям, в частности к вредителям кукурузным жукам (Diabrotica spp.) и к нескольким чешуекрылым вредителям кукурузы, в том числе к огневке кукурузной (ЕСВ, Ostrinia nubilalis), хлопковой совке (CEW, Helicoverpa zea), кукурузной листовой совке (FAW, Spodoptera frugiperda) и совке-ипсилон (BCW, Agrotis ipsilon); переносимость гербицидов, содержащих глифосат и глуфосинат аммония.
BT11 XMIR162 Syngenta Seeds, Inc. Маис с пакетированной устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицидов, полученный при помощи традиционного кроссбридинга родительских линий ВТ11 (уникальный идентификатор OECD: SYNВТО11-1) и MIR162 (уникальный идентификатор OECD: SYN-IR162-4). Устойчивость к огневке кукурузной и переносимость гербицида глуфосината аммония (Liberty) получают от ВТ11, которая содержит ген CrylAb из Bacillus thuringiensis, подвид kurstaki, и ген, кодирующий фосфинотрицин-Ы-ацетилтрансферазу (РАТ), из S. viridochromogenes. Устойчивость к другим чешуекрылым вредителям, в том числе Н. zea, S. frugiperda, A. ipsilon и S. albicosta, получают от MIR162, которая содержит ген vip3Aa из штамма АВ88 Bacillus thuringiensis.
- 95 031651
ВТ11 xMIR162x MIR604 Syngenta Seeds, Inc. Белок дельта-эндотоксин CrylAb от Bacillus thuringiensis и генетический материал, необходимый для его выработки (с помощью элементов вектора pZO1502) в трансгенном объекте Bt11 кукурузы (уникальный идентификатор OECD: SYN-BTO11-1), х инсектицидный белок Vip3Aa20 от Bacillus thuringiensis и генетический материал, необходимый для его выработки (с помощью элементов вектора pNOV1300) в трансгенном объекте MIR162 маиса (уникальный идентификатор OECD: SYN-IR162-4), х модифицированный белок СгуЗА и генетический материал, необходимый для его выработки (с помощью элементов вектора pZM26) в трансгенном объекте MIR604 кукурузы (уникальный идентификатор OECD: SYN-IR6O4-5).
СВН-351 Aventis CropScience Маис с устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицида гпуфосината аммония, разработанный посредством вставки генов, кодирующих белок СгуЭС из Bacillus thuringiensis, подвид tolworthi, и фосфинотрицин-ацетилтрансферазу (РАТ) из Streptomyces hygroscopicus.
DAS-06275-8 DOW AgroSciences LLC Маис с устойчивостью к чешуекрылым насекомым и переносимостью гербицида гпуфосината аммония, полученный вставкой гена Cry1F из Bacillus thuringiensis вар. aizawai и фосфинотрицин-ацетилтрансферазы (РАТ) из Streptomyces hygroscopicus.
ВТ11 х MIR604 Syngenta Seeds, Inc. Маис с пакетированной устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицидов, полученный при помощи традиционного кроссбридинга родительских линий ВТ11 (уникальный идентификатор OECD: SYNВТО11-1) и MIR604 (уникальный идентификатор OECD: SYN-IR6O5-5). Устойчивость к огневке кукурузной и переносимость гербицида гпуфосината аммония (Liberty) получают от ВТ11, которая содержит ген CrylAb из Bacillus thuringiensis, подвид kurstaki, и ген, кодирующий фосфинотрицин-Ы-ацетилтрансферазу (РАТ), из S. viridochromogenes. Устойчивость к кукурузному жуку получают от MIR604, которая содержит ген тСгуЗА из Bacillus thuringiensis.
- 96 031651
ВТ11 x MIR604 x GA21 Syngenta Seeds, Inc. Маис с пакетированной устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицидов, полученный при помощи традиционного кроссбридинга родительских линий ВТ11 (уникальный идентификатор OECD: SYNВТО11-1), MIR604 (уникальный идентификатор OECD: SYN-IR6O5-5) и GA21 (уникальный идентификатор OECD: MON00021-9). Устойчивость к огневке кукурузной и переносимость гербицида глуфосината аммония (Liberty) получают от ВТ11, которая содержит ген CrylAb из Bacillus thuringiensis, подвид kurstaki, и ген, кодирующий фосфинотрицин-Ы-ацетилтрансферазу (РАТ), из S. viridochromogenes. Устойчивость к кукурузному жуку получают от MIR604, которая содержит ген тСгуЗА из Bacillus thuringiensis. Переносимость гербицида глифосата получают от GA21, которая содержит ген модифицированной EPSPS из маиса.
DAS-59122-7 DOW AgroSciences LLC и Pioneer Hi-Bred International Inc. Маис с устойчивостью к кукурузному жуку, полученный посредством вставки генов Сгу34АЬ1 и Сгу35АЬ1 из штамма PS149B1 Bacillus thuringiensis. Ген, кодирующий РАТ, из Streptomyces viridochromogenes вводили в качестве селектируемого маркера.
DAS-59122-7 xTC1507 x NK603 DOW AgroSciences LLC и Pioneer Hi-Bred International Inc. Маис с пакетированной устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицидов, полученный при помощи традиционного кроссбридинга родительских линий DAS59122-7 (уникальный идентификатор OECD: DAS-59122-7) и ТС1507 (уникальный идентификатор OECD: DAS-O1507-1) с NK603 (уникальный идентификатор OECD: MON-OO6O3-6). Устойчивость к кукурузному жуку получают от DAS-59122-7, которая содержит гены Сгу34АЬ1 и Сгу35АЬ1 из штамма PS149B1 Bacillus thuringiensis. Устойчивость к чешуекрылым и переносимость гербицида глуфосината аммония получают от ТС1507. Переносимость гербицида глифосата получают от NK603.
DBT418 Dekalb Genetics Corporation Маис с устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицида глуфосината аммония, разработанный посредством вставки генов, кодирующих белок Сгу1 АС из Bacillus thuringiensis, подвид kurstaki, и фосфинотрицин-ацетилтрансферазу (РАТ) из Streptomyces hygroscopicus.
- 97 031651
MIR604 x GA21 Syngenta Seeds, Inc. Маис с пакетированной устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицидов, полученный при помощи традиционного кроссбридинга родительских линий MIR604 (уникальный идентификатор OECD: SYNIR6O5-5) и GA21 (уникальный идентификатор OECD: MON-OOO21-9). Устойчивость к кукурузному жуку получают от MIR604, которая содержит ген тСгуЗА из Bacillus thuringiensis. Переносимость гербицида глифосата получают от GA21.
MON80100 Monsanto Company Маис с устойчивостью к насекомым, полученный посредством вставки гена CrylAb из Bacillus thuringiensis, подвид kurstaki. Генетическая модификация придает устойчивость к нападению огневки кукурузной (ЕСВ).
MON802 Monsanto Company Маис с устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицида глифосата, полученный посредством вставки генов, кодирующих белок CrylAb из Bacillus thuringiensis и 5-енолпирувилшикимат-Зфосфатсинтазу (EPSPS) из штамма СР4 А. tumefaciens.
MON809 Pioneer Hi-Bred International Inc. Устойчивость к огневке кукурузной (Ostrinia nubilalis) при помощи введения синтетического гена CrylAb. Устойчивость к глифосату с помощью введения бактериальной версии растительного фермента, 5-енолпирувилшикимат-Зфосфатсинтазы (EPSPS).
MON810 Monsanto Company Маис с устойчивостью к насекомым, полученный посредством вставки усеченной формы гена CrylAb из Bacillus thuringiensis, подвид kurstaki HD-1. Генетическая модификация придает устойчивость к нападению огневки кукурузной (ЕСВ).
MON810 x LY038 Monsanto Company Маис с пакетированной устойчивостью к насекомым и повышенным содержанием лизина, полученный в результате традиционного кроссбридинга родительских линий MON810 (идентификатор OECD: MON00810-6) и LY038 (идентификатор OECD: REN-OOO38-3).
- 98 031651
MON810 x MON88017 Monsanto Company Маис с пакетированной устойчивостью к насекомым и переносимостью глифосата, полученный в результате традиционного кроссбридинга родительских линий MON810 (идентификатор OECD: MON-OO81O-6) и MON88017 (идентификатор OECD: MON88017-3). Устойчивость к огневке кукурузной (ЕСВ) получена благодаря усеченной форме гена CrylAb из Bacillus thuringiensis, подвид kurstaki HD-1, присутствующего в MON810. Устойчивость к кукурузному жуку получают благодаря гену СгуЗВЬ1 из штамма EG4691 Bacillus thuringiensis, подвид kumamotoensis, присутствующему в MON88017. Переносимость глифосата получают благодаря гену, кодирующему 5енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазу (EPSPS), из штамма СР4 Agrobacterium tumefaciens, присутствующему в MON88017.
MON832 Monsanto Company Введение посредством бомбардировки частицами глифосатоксидазы (GOX) и модифицированной 5-енолпирувилшикимат3-фосфатсинтазы (EPSPS), фермента, вовлеченного в биохимический метаболический путь шикимата, для выработки ароматических аминокислот.
MON863 Monsanto Company Маис с устойчивостью к кукурузному жуку, полученный посредством вставки гена СгуЗВЬ1 из Bacillus thuringiensis, подвид kumamotoensis.
MON863 x MON810 Monsanto Company Гибрид кукурузы с пакетированной устойчивостью к насекомым, полученный в результате традиционного кроссбридинга родительских линий MON863 (идентификатор OECD: MON-OO863-5) и MON810 (идентификатор OECD: MON-OO81O-6)
MON863 x MON810 х NK603 Monsanto Company Гибрид кукурузы с пакетированной устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицидов, полученный в результате традиционного кроссбридинга гибрида с пакетированными генами MON00863-5 х MON-OO81O-6 и NK603 (идентификатор OECD:MON-OO6O3-6).
MON863 x NK603 Monsanto Company Гибрид кукурузы с пакетированной устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицидов, полученный в результате традиционного кроссбридинга родительских линий MON863 (идентификатор OECD:MON-OO863-5) и NK603 (идентификатор OECD: MON-OO6O3-6).
MON87460 Monsanto Company MON 87460 разрабатывали для обеспечения сниженной потери урожая в условиях ограниченного количества воды относительно традиционного маиса. Эффективность по отношению к MON 87460 получают при помощи экспрессии вставленного белка холодового шока В (CspB) Bacillus subtilis.
- 99 031651
MON88017 Monsanto Company Маис с устойчивостью к кукурузному жуку, полученный посредством вставки гена СгуЗВЫ из штамма EG4691 из Bacillus thuringiensis, подвид kumamotoensis. Переносимость глифосата получают посредством вставки гена, кодирующего 5енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазу (EPSPS), из штамма СР4 Agrobacterium tumefaciens.
MON89034 Monsanto Company Трансгенный объект маиса, экспрессирующий два различных инсектицидных белка из Bacillus thuringiensis, обеспечивающий устойчивость к ряду чешуекрылых вредителей.
MON89034 х MON88017 Monsanto Company Маис с пакетированной устойчивостью к насекомым и переносимостью глифосата, полученный в результате традиционного кроссбридинга родительских линий MON89034 (идентификатор OECD: MON89034-3) и MON88017 (идентификатор OECD:MON-88O17-3). Устойчивость к чешуекрылым насекомым получают благодаря двум генам Cry, присутствующим в MON89043. Устойчивость к кукурузному жуку получают благодаря одному гену Cry, и переносимость глифосата получают благодаря гену, кодирующему 5енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазу (EPSPS) из Agrobacterium tumefaciens, присутствующему в MON88017.
MON89034 x NK603 Monsanto Company Маис с пакетированной устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицидов, полученный при помощи традиционного кроссбридинга родительских линий MON89034 (идентификатор OECD: MON89034-3) с NK603 (уникальный идентификатор OECD: MON-OO6O3-6). Устойчивость к чешуекрылым насекомым получают благодаря двум генам Cry, присутствующим в MON89043. Переносимость гербицида глифосата получают от NK603.
NK603 x MON810 Monsanto Company Гибрид кукурузы с пакетированной устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицидов, полученный в результате традиционного кроссбридинга родительских линий NK603 (идентификатор OECD: MON-OO6O3-6) и MON810 (идентификатор OECD: MON-OO81O-6).
MON89034 ХТС1507 х MON88017 х DAS59122-7 Monsanto Company и Mycogen Seeds c/o Dow AgroSciences LLC Маис с пакетированной устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицидов, полученный при помощи традиционного кроссбридинга родительских линий: MON89034, ТС1507, MON88017 и DAS-59122. Устойчивость к наземным и подземным насекомым-вредителям и переносимость гербицидов глифосата и глуфосината аммония.
- 100 031651
MS3 Bayer CropScience (Aventis CropScience (AgrEvo)) Мужская стерильность, вызванная экспрессией гена рибонуклеазы барназы из Bacillus amyloliquefaciens·, устойчивость к РРТ присутствовала благодаря РРТацетилтрансферазе (РАТ).
MS6 Bayer CropScience (Aventis CropScience (AgrEvo)) Мужская стерильность, вызванная экспрессией гена рибонуклеазы барназы из Bacillus amyloliquefaciens·, устойчивость к РРТ присутствовала благодаря РРТацетилтрансферазе (РАТ).
NK603 Monsanto Company Введение посредством бомбардировки частицами модифицированной 5енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазы (EPSPS), фермента, вовлеченного в биохимический метаболический путь шикимата, для выработки ароматических аминокислот.
NK603 х Т25 Monsanto Company Гибрид маиса с пакетированной переносимостью гербицида глуфосината аммония и глифосата, полученный в результате традиционного кроссбридинга родительских линий NK603 (идентификатор OECD: MON-OO6O3-6) и Т25 (идентификатор OECD: ACS-ZM003-2).
Т25 х MON810 Bayer CropScience (Aventis CropScience (AgrEvo)) Гибрид кукурузы с пакетированной устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицидов, полученный в результате традиционного кроссбридинга родительских линий Т25 (идентификатор OECD: ACS-ZMOO3-2) и MON810 (идентификатор OECD:MON-OO810-6).
ТС1507 Mycogen (c/o Dow AgroSciences); Pioneer (c/o DuPont) Маис с устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицида глуфосината аммония, полученный посредством вставки гена Cry1F из Bacillus thuringiensis вар. aizawai и гена, кодирующего фосфинотрицин-Nацетилтрансферазу, из Streptomyces viridochromogenes.
TC1507XNK603 DOW AgroSciences LLC Гибрид кукурузы с пакетированной устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицидов, полученный в результате традиционного кроссбридинга родительских линий 1507 (идентификатор OECD: DAS-O1507-1) и NK603 (идентификатор OECD: MON-OO6O3-6).
ТС1507 х DAS-59122-7 DOW AgroSciences LLC и Pioneer Hi-Bred International Inc. Маис с пакетированной устойчивостью к насекомым и переносимостью гербицидов, полученный при помощи традиционного кроссбридинга родительских линий ТС1507 (уникальный идентификатор OECD: DAS01507-1) cDAS-59122-7 (уникальный идентификатор OECD: DAS-59122-7). Устойчивость к чешуекрылым насекомым получают отТС1507 вследствие присутствия гена Cry1F из Bacillus thuringiensis вар. aizawai. Устойчивость к кукурузному жуку получают от DAS-59122-7, которая содержит гены Сгу34АЬ1 и Сгу35АЬ1 из штамма PS149B1 Bacillus thuringiensis. Переносимость гербицида глуфосината аммония получают от ТС1507 благодаря гену, кодирующему фосфинотрицин-Ы-ацетилтрансферазу из Streptomyces viridochromogenes.
Другие трансгенные объекты, разрешенные контролирующими органами, хорошо известны специалисту в данной области, и их можно найти на сайте Центра оценки риска для окружающей среды (ceragmc.org/?action=gm_crop_database, доступ к которому можно получить с применением префикса www) и на сайте Международной службы по приобретению агробиотехнологических приложений (isaaa.org/gmapprovaldatabase/default.asp, доступ к которому можно получить с применением префикса www).
Сайленсинг генов.
В некоторых вариантах осуществления пакетированный признак может представлять собой форму, применяемую для сайленсинга одного или нескольких полинуклеотидов, представляющих интерес, что приводит к супрессии одного или нескольких целевых полипептидов вредителя. В некоторых вариантах осуществления сайленсинг достигается благодаря применению супрессионной ДНК-конструкции.
В некоторых вариантах осуществления один или несколько полинуклеотидов, кодирующих полипептиды из полипептидов PIP-72 или их фрагментов или вариантов, могут быть пакетированы с одним
- 101 031651 или несколькими полинуклеотидами, кодирующими один или несколько полипептидов, характеризующихся инсектицидной активностью или агрономическими признаками, изложенными выше, и необязательно может дополнительно предусматривать один или несколько полинуклеотидов, предусмотренных для сайленсинга генов одного или нескольких целевых полинуклеотидов, как обсуждается ниже.
Супрессионная ДНК-конструкция представляет собой рекомбинантную ДНК-конструкцию, которая при трансформации или стабильной интеграции в геном растения приводит к сайленсингу целевого гена в растении. Целевой ген может быть эндогенным или трансгенным по отношению к растению. Сайленсинг, применяемый в данном документе по отношению к целевому гену, обычно относится к супрессии уровней мРНК или белка/фермента, экспрессируемых целевым геном, и/или уровня активности фермента или функциональности белка. Выражение супрессия включает в себя понижение, снижение, ухудшение, уменьшение, ингибирование, устранение и предотвращение. Сайленсинг или сайленсинг генов не указывает на механизм, а включает, без ограничения, антисмысловую супрессию, косупрессию, вирусную супрессию, шпильковую супрессию, супрессию типа стебель-петля, подходы, основанные на RNAi, и подходы, основанные на малых РНК.
Супрессионная ДНК-конструкция может содержать участок, происходящий от целевого гена, представляющего интерес, и может содержать всю или часть последовательности нуклеиновой кислоты смысловой нити (или антисмысловой нити) целевого гена, представляющего интерес. В зависимости от подхода, который будет использоваться, участок может быть на 100% идентичным или менее чем на 100% идентичным (например, по меньшей мере на 50% или на любое целое число от 51 до 100% идентичным) всей смысловой нити (или антисмысловой нити) гена, представляющего интерес, или ее части.
Супрессионные ДНК-конструкции хорошо известны из уровня техники, легко конструируются сразу после выбора целевого гена, представляющего интерес, и включают, без ограничения, косупрессионные конструкции, антисмысловые конструкции, вирусные супрессионные конструкции, шпильковые супрессионные конструкции, супрессионные конструкции типа стебель-петля, конструкции, вырабатывающие двухнитевые РНК, и, в более общем смысле, конструкции для RNAi (РНК-интерференции) и конструкции на основе малых РНК, такие как конструкции на основе siRNA (коротких интерферирующих РНК) и miRNA (микроРНК).
Антисмысловое ингибирование относится к выработке антисмысловых РНК-транскриптов, способных супрессировать экспрессию целевого белка.
Антисмысловая РНК относится к РНК-транскрипту, который комплементарен всему или части целевого первичного транскрипта или мРНК и который блокирует экспрессию фрагмента целевой выделенной нуклеиновой кислоты (патент США № 5107065). Комплементарность антисмысловой РНК может быть с любой частью конкретного генного транскрипта, т.е. с 5'-некодирующей последовательностью, 3'некодирующей последовательностью, интронами или кодирующей последовательностью.
Косупрессия относится к выработке смысловых РНК-транскриптов, способных супрессировать экспрессию целевого белка. Смысловая РНК относится к РНК-транскрипту, который включает в себя мРНК и может быть транслирован в белок в клетке или in vitro. Ранее конструкции косупрессии у растений разрабатывались с упором на сверхэкспрессию последовательностей нуклеиновой кислоты, имеющих гомологию с нативной мРНК, в смысловой ориентации, что приводит к снижению уровней всех РНК, имеющих гомологию со сверхэкспрессированной последовательностью (см., Vaucheret, et al., (1998), Plant J. 16:651-659 и Gura, (2000), Nature, 404:804-808).
В другом варианте описывается применение последовательностей растительных вирусов для управления супрессией проксимальных последовательностей, кодирующих мРНК (публикация согласно PCT WO 1998/36083).
В недавней работе было описано применение шпильковых структур, которые включают всю или часть последовательности, кодирующей мРНК, в комплементарной ориентации, что приводит к потенциальной структуре стебель-петля у экспрессированной РНК (публикация согласно PCT WO 1999/53050). В данном случае стебель формируется полинуклеотидами, соответствующими гену, представляющему интерес, в смысловой или в антисмысловой ориентации по отношению к промотору, а петля формируется несколькими полинуклеотидами гена, представляющего интерес, которые не имеют комплементарной последовательности в конструкции. Это повышает частоту косупрессии или сайленсинга в регенерированных трансгенных растениях. Обзор шпильковой супрессии см. в Wesley, et al., (2003), Methods in Molecular Biology, Plant Functional Genomics: Methods and Protocols 236:273-286.
Конструкция, в которой стебель образован по меньшей мере 30 нуклеотидами из гена, который подлежит супрессии, и петля образована случайной нуклеотидной последовательностью, также эффективно применялась для супрессии (публикация согласно PCT WO 1999/61632).
Также было описано применение последовательностей поли-T и поли-A для получения стебля в структуре стебель-петля (публикация согласно PCT WO 2002/00894).
Еще один вариант включает применение синтетических повторов, способствующих образованию стебля в структуре стебель-петля. Было показано, что трансгенные организмы, полученные с такими фрагментами рекомбинантной ДНК, характеризуются сниженными уровнями белка, кодируемого нуклеотидным фрагментом, который образует петлю, как описано в публикации согласно PCT
- 102 031651
WO 2002/00904.
РНК-интерференция относится к процессу, специфичному для последовательности посттранскрипционного сайленсинга генов у животных, который опосредован короткими интерферирующими РНК (siRNA) (Fire, et al., (1998), Nature, 391:806). Соответствующий процесс у растений обычно называют посттранскрипционным сайленсингом генов (PTGS) или РНК-опосредованным сайленсингом, и также называют подавлением в случае грибов. Процесс посттранскрипционного сайленсинга генов считается эволюционно-консервативным механизмом клеточной защиты, применяющимся для предотвращения экспрессии чужеродных генов, и он широко распространен среди различных растений и других типов организмов (Fire, et al., (1999), Trends Genet. 15:358). Такая защита от экспрессии чужеродных генов могла развиться в ответ на выработку двухцепочечных РНК (dsRNA), полученных в результате вирусной инфекции или в результате случайной интеграции транспозонных элементов в геном хозяина, путем клеточного ответа, который опосредует специфическое разрушение гомологичной одноцепочечной РНК вирусной геномной РНК. Присутствие dsRNA в клетках вызывает RNAi-ответ с помощью механизма, который полностью еще не охарактеризован.
Присутствие длинных dsRNA в клетках стимулирует активность фермента рибонуклеазы III, называемого дайсер. Дайсер вовлечен в процессинг dsRNA с образованием коротких фрагментов dsRNA, называемых короткими интерферирующими РНК (siRNA) (Berstein et al., Nature, 409:363, 2001). Короткие интерферирующие РНК, полученные в результате активности дайсера, как правило, имеют длину от приблизительно 21 до приблизительно 23 нуклеотидов и содержат дуплексы приблизительно из 19 пар оснований (Elbashir, et al., (2001) Genes Dev. 15:188). Кроме того, дайсер вовлечен в вырезание 21- и 22нуклеотидных малых временных РНК (stRNA) из РНК-предшественника консервативной структуры, которые вовлечены в регуляцию на уровне трансляции (Hutvagner, et al., (2001), Science, 293:834). Для RNAi-ответа также характерен эндонуклеазный комплекс, обычно называемый комплексом РНКиндуцированного сайленсинга (RISC), который опосредует расщепление одноцепочечной РНК, последовательность которой комплементарна антисмысловой цепи дуплекса siRNA. Расщепление целевой РНК происходит в середине участка, комплементарного антисмысловой цепи дуплекса siRNA (Elbashir, et al., (2001), Genes Dev. 15:188). Кроме того, РНК-интерференция также может включать сайленсинг генов, опосредованный малыми РНК (например, miRNA), предположительно посредством клеточных механизмов, которые регулируют структуру хроматина, и, тем самым, предотвращают транскрипцию последовательностей целевых генов (см., например, Allshire, (2002), Science, 297:1818-1819; Volpe, et al., (2002), Science, 297:1833-1837; Jenuwein, (2002), Science, 297:2215-2218 и Hall, et al., (2002), Science, 297:22322237). Таким образом, молекулы miRNA согласно настоящему раскрытию можно применять для опосредования сайленсинга генов путем взаимодействия с РНК-транскриптами или, иначе, взаимодействия с конкретными генными последовательностями, где такое взаимодействие приводит к сайленсингу генов либо на транскрипционном, либо на посттранскрипционном уровне.
Дополнительно представлены способы и композиции, которые обеспечивают возможность увеличения количества RNAi, полученной с помощью элемента сайленсинга. В таких вариантах осуществления в способах и композициях используется первый полинуклеотид, содержащий элемент сайленсинга для целевой последовательности вредителя, функционально связанный с промотором, активным в растительной клетке; и второй полинуклеотид, содержащий усиливающий супрессию элемент, содержащий целевую последовательность вредителя или ее активный вариант или фрагмент, функционально связанные с промотором, активным в растительной клетке. Комбинированная экспрессия элемента сайленсинга с усиливающим супрессию элементом ведет к увеличению амплификации ингибиторных РНК, вырабатываемых на основе элемента сайленсинга сверх того уровня, который достигается при экспрессии только элемента сайленсинга самого по себе. В дополнение к увеличенной амплификации специфических видов RNAi самих по себе, способы и композиции дополнительно обеспечивают возможность выработки отличной группы видов RNAi, которые могут повышать эффективность нарушения экспрессии целевого гена. Таким образом, когда усиливающий супрессию элемент экспрессируется в растительной клетке в комбинации с элементом сайленсинга, способы и композиции могут обеспечивать возможность системной выработки RNAi в растении; выработку больших количеств RNAi, чем можно было бы наблюдать в случае только конструкции элемента сайленсинга отдельно; и повышенную нагрузку RNAi во флоэме растения, таким образом, обеспечивается лучший контроль насекомых, питающихся флоэмой, при помощи подхода с RNAi. Таким образом, различные способы и композиции предусматривают улучшенные способы доставки ингибиторных РНК в целевой организм. См., например, публикацию заявки на патент США 2009/0188008.
Используемый в данном документе усиливающий супрессию элемент содержит полинуклеотид, содержащий целевую последовательность, подлежащую супрессии, или ее активный фрагмент или вариант. Понятно, что усиливающий супрессию элемент не должен быть идентичным целевой последовательности, а скорее, усиливающий супрессию элемент может содержать вариант целевой последовательности при условии, что последовательность усиливающего супрессию элемента в достаточной степени идентична целевой последовательности, чтобы обеспечить возможность повышенного уровня RNAi, вырабатываемых на основе элемента сайленсинга, сверх того уровня, который достигается при экспрессии
- 103 031651 только элемента сайленсинга. Аналогично, усиливающий супрессию элемент может содержать фрагмент целевой последовательности, где фрагмент имеет достаточную длину, чтобы обеспечить возможность повышенного уровня RNAi, вырабатываемых на основе элемента сайленсинга, сверх того уровня, который достигается при экспрессии только элемента сайленсинга.
Понятно, что можно использовать несколько усиливающих супрессию элементов из одной целевой последовательности, или из различных целевых последовательностей, или из различных участков одной целевой последовательности. Например, используемые усиливающие супрессию элементы могут содержать фрагменты целевой последовательности, полученные из другого участка целевой последовательности (т.е. из 3'UTR, кодирующей последовательности, интрона и/или 5'UTR). Кроме того, усиливающий супрессию элемент может содержаться в кассете экспрессии, как описано в другой части данного документа, и в определенных вариантах осуществления усиливающий супрессию элемент находится в одном или в другом ДНК-векторе или конструкции, по отношению к элементу сайленсинга. Усиливающий супрессию элемент может быть функционально связан с промотором, раскрытым в данном документе. Понятно, что усиливающий супрессию элемент может экспрессироваться конститутивно, или, альтернативно, он может вырабатываться зависящим от стадии образом, с использованием различных индуцируемых, или активных преимущественно в определенной ткани, или регулируемых в процессе развития промоторов, которые рассмотрены в другой части данного документа.
В конкретных вариантах осуществления при использовании как элемента сайленсинга, так и усиливающего супрессию элемента системная выработка RNAi происходит по всему растению. В дополнительных вариантах осуществления растение или части растения согласно настоящему раскрытию имеют повышенную нагрузку RNAi во флоэме растения, по сравнению с той, которую можно было наблюдать при экспрессии конструкции элемента сайленсинга отдельно, и, таким образом, обеспечивается лучший контроль насекомых, питающихся флоэмой, при помощи подхода с RNAi. В определенных вариантах осуществления растения, части растения и растительные клетки согласно настоящему раскрытию можно дополнительно охарактеризовать, как обеспечивающие возможность выработки разнообразных видов RNAi, которые могут повышать эффективность нарушения экспрессии целевого гена.
В конкретных вариантах осуществления комбинированная экспрессия элемента сайленсинга и усиливающего супрессию элемента повышает концентрацию ингибиторных РНК в растительной клетке, растении, части растения, растительной ткани или флоэме сверх того уровня, который достигается при экспрессии элемента сайленсинга отдельно.
Используемый в данном документе повышенный уровень ингибиторных РНК включает любое статистически значимое повышение уровня RNAi, вырабатываемых в растении, обладающем комбинированной экспрессией при сравнении с подходящим контрольным растением. Например, повышение уровня RNAi в растении, части растения или растительной клетке может включать по меньшей мере приблизительно 1%, приблизительно 1-5%, приблизительно 5-10%, приблизительно 10-20%, приблизительно 20-30%, приблизительно 30-40%, приблизительно 40-50%, приблизительно 50-60%, приблизительно 60-70%, приблизительно 70-80%, приблизительно 80-90%, приблизительно 90-100% или большее повышение уровня RNAi в растении, части растения, растительной клетке или флоэме при сравнении с соответствующим контролем. В других вариантах осуществления повышение уровня RNAi в растении, части растения, растительной клетке или флоэме может включать по меньшей мере приблизительно 1-кратное, приблизительно 1-5-кратное, приблизительно 5-10-кратное, приблизительно 10-20-кратное, приблизительно 20-30-кратное, приблизительно 30-40-кратное, приблизительно 40-50-кратное, приблизительно 50-60-кратное, приблизительно 60-70-кратное, приблизительно 70-80-кратное, приблизительно 80-90-кратное, приблизительно 90-100-кратное или большее повышение уровня RNAi в растении, части растения, растительной клетке или флоэме при сравнении с соответствующим контролем. Примеры комбинированной экспрессии элемента сайленсинга с усиливающим супрессию элементом для контроля щитников и представителей рода Lygus можно найти в публикации заявки на патент США 2011/0301223 и публикации заявки на патент США 2009/0192117.
Некоторые варианты осуществления относятся к понижающей регуляции экспрессии целевых генов у видов насекомых-вредителей при помощи интерферирующих молекул рибонуклеиновой кислоты (РНК). В публикации согласно PCT WO 2007/074405 описаны способы подавления экспрессии целевых генов у беспозвоночных-вредителей, в том числе колорадского жука. В публикации согласно PCT WO 2005/110068 описаны способы подавления экспрессии целевых генов у беспозвоночных вредителей, в том числе, в частности, у западного кукурузного жука, в качестве средств контроля заражения насекомыми. Кроме того, в публикации согласно PCT WO 2009/091864 описаны композиции и способы супрессии целевых генов видов насекомых-вредителей, в том числе вредителей рода Lygus. Молекулы нуклеиновой кислоты, в том числе RNAi для нацеливания на H-субъединицу вакуолярной АТФ-азы, применимы для контроля популяции и заражения жесткокрылыми вредителями, как описано в публикации заявки на патент США 2012/0198586. В публикации согласно PCTT WO 2012/055982 описана рибонуклеиновая кислота (РНК или двухцепочечная РНК), которая подавляет или обеспечивает понижающую регуляцию экспрессии целевого гена, который кодирует: рибосомальный белок насекомого, такой как рибосомальный белок L19, рибосомальный белок L40 или рибосомальный белок S27A; субъединицу протеасомы
- 104 031651 насекомого, такую как белок Rpn6, Pros 25, белок Rpn2, белок бета 1 субъединицы протеасомы или белок бета 2 Pros; β-коатомер COPI-везикулы насекомого, γ-коатомер COPI-везикулы, β'-коатомерный белок или ζ-коатомер COPI-везикулы; белок тетраспанин 2A насекомого, который представляет собой предполагаемый белок трасмембранного домена; белок насекомого, принадлежащий к семейству актина, такой как актин 5C; белок убиквитин-5E насекомого; белок Sec23 насекомого, который представляет собой активатор ГТФ-азы, вовлеченной во внутриклеточный транспорт белков; белок crinkled насекомого, который представляет собой нестандартный миозин, который вовлечен в двигательную активность; белок crooked neck насекомого, который вовлечен в регуляцию ядерного альтернативного сплайсинга мРНК; белок G-субъединицы вакуолярной H+-AТФ-азы насекомого и Tbp-1 насекомого, такой как Tat-связывающий белок. В публикациях заявок на патент США 2012/029750, US 20120297501 и 2012/0322660 описаны интерферирующие рибонуклеиновые кислоты (РНК или двухцепочечная РНК), которые функционируют при поглощении видами насекомых-вредителей с понижающей регуляцией экспрессии целевого гена в указанном насекомом-вредителе, где РНК содержит по меньшей мере один элемент сайленсинга, где элемент сайленсинга представляет собой участок двухцепочечной РНК, содержащий гибридизованные комплементарные цепи, из которых одна цепь содержит или состоит из последовательности нуклеотидов, которая, по меньшей мере частично, комплементарна целевой нуклеотидной последовательности в пределах целевого гена. В публикации заявки на патент США 2012/0164205 описаны потенциальные мишени для интерферирующих двухцепочечных рибонуклеиновых кислот для подавления беспозвоночных вредителей, в том числе гомологичная последовательность Chd3, гомологичная последовательность бета-тубулина, гомологичная последовательность 40 кДа V-АТФ-азы, гомологичная последовательность EF1a, гомологичная последовательность субъединицы p28 протеосомы 26S, гомологичная последовательность эпоксидгидролазы ювенильного гормона, гомологичная последовательность белка хлоридных каналов, зависимых от набухания, гомологичная последовательность белка глюкозо-6-фосфат-1-дегидрогеназы, гомологичная последовательность белка Act42A, гомологичная последовательность фактора 1 АДФ-рибозилирования, гомологичная последовательность белка фактора транскрипции IIB, гомологичные последовательности хитиназы, гомологичная последовательность фермента, конъюгирующего убиквитин, гомологичная последовательность глицеральдегид-3фосфатдегидрогеназы, гомологичная последовательность убиквитина B, гомолог эстеразы ювенильного гормона и гомологичная последовательность альфа-тубулина. В публикации заявки на патент США 2009/0192117 описана супрессия целевого полинуклеотида из Lygus.
Применение для контроля с помощью пестицидов.
Из уровня техники известны общие способы использования штаммов, содержащих последовательность нуклеиновой кислоты согласно вариантам осуществления или ее вариант, для контроля с помощью пестицидов или при разработке других организмов в качестве пестицидных средств. См., например, патент США № 5039523 и EP 0480762А2.
Могут быть выбраны микроорганизмы-хозяева, которые, как известно, заселяют фитосферу (филлоплан, филлосферу, ризосферу и/или ризоплан) одной или нескольких сельскохозяйственных культур, представляющих интерес. Эти микроорганизмы выбирают таким образом, чтобы они могли успешно конкурировать в конкретной окружающей среде с микроорганизмами дикого типа, обеспечивать стабильное поддержание и экспрессию гена, экспрессирующего полипептид PIP-72, и, желательно, обеспечивать улучшенную защиту пестицида от разрушения и инактивации в окружающей среде.
Такие микроорганизмы включают бактерии, водоросли и грибы. Особый интерес представляют микроорганизмы, такие как бактерии, например, Pseudomonas, Erwinia, Serratia, Klebsiella, Xanthomonas, Streptomyces, Rhizobium, Rhodopseudomonas, Methylius, Agrobacterium, Acetobacter, Lactobacillus, Arthrobacter, Azotobacter, Leuconostoc и Alcaligenes, грибы, в частности дрожжи, например, Saccharomyces, Cryptococcus, Kluyveromyces, Sporobolomyces, Rhodotorula и Aureobasidium. Особый интерес представляют такие виды бактерий фитосферы как Pseudomonas syringae, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas chlororaphis, Serratia marcescens, Acetobacter xylinum, Agrobacteria, Rhodopseudomonas spheroides, Xanthomonas campestris, Rhizobium melioti, Alcaligenes entrophus, Clavibacter xyli и Azotobacter vinelandii и виды дрожжей фитосферы, такие как Rhodotorula rubra, R. glutinis, R. marina, R. aurantiaca, Cryptococcus albidus, C. diffluens, C. laurentii, Saccharomyces rosei, S. pretoriensis, S. cerevisiae, Sporobolomyces roseus, S. odorus, Kluyveromyces veronae и Aureobasidium pollulans. Особый интерес представляют пигментированные микроорганизмы. Организмы-хозяева, представляющие особый интерес, включают дрожжи, такие как Rhodotorula spp., Aureobasidium spp., Saccharomyces spp. (такие как S. cerevisiae), Sporobolomyces spp., организмы филлоплана, такие как Pseudomonas spp. (такие как P. aeruginosa, P. fluorescens, P. chlororaphis), Erwinia spp. и Flavobacterium spp., и другие такие организмы, в том числе Agrobacterium tumefaciens, E. coli, Bacillus subtilis, Bacillus cereus и т.п.
Гены, кодирующие полипептиды PIP-72 согласно вариантам осуществления, можно вводить в микроорганизмы, которые размножаются на растениях (эпифиты) для доставки полипептидов PIP-72 в организм потенциальных целевых вредителей. Эпифиты, например, могут представлять собой грамположительные или грамотрицательные бактерии.
- 105 031651
Бактерии, колонизирующие корни, например, можно выделять из растений, представляющих интерес, при помощи способов, известных из уровня техники. А именно, штамм Bacillus cereus, который колонизирует корни, можно выделять из корней растения (см., например, Handelsman et al. (1991), Appl. Environ. Microbiol. 56:713-718). Гены, кодирующие полипептиды PIP-72 согласно вариантам осуществления, можно вводить в Bacillus cereus, колонизирующие корни, при помощи стандартных способов, известных из уровня техники.
Гены, кодирующие полипептиды PIP-72, можно вводить, например, в Bacillus, колонизирующие корни, посредством электротрансформации. А именно, гены, кодирующие полипептиды PIP-72, можно клонировать в челночный вектор, например pHT3101 (Lerecius, et al., (1989), FEMS Microbiol. Letts. 60:211-218. При помощи челночного вектора pHT3101, содержащего кодирующую последовательность конкретного гена полипептида PIP-72, можно, например, трансформировать Bacillus, колонизирующую корни, посредством электропорации (Lerecius, et al., (1989), FEMS Microbiol. Letts. 60:211-218).
Системы экспрессии можно конструировать таким образом, что полипептиды PIP-72 секретируются вне цитоплазмы грамотрицательных бактерий, таких как, например, E. coli. Преимущества секреции полипептидов PIP-72 являются следующими: (1) предупреждение потенциальных цитотоксических эффектов экспрессированных полипептидов PIP-72 и (2) повышение эффективности очистки полипептида PIP72, в том числе, без ограничения, повышение эффективности выделения и очистки белка на объем клеточного бульона и снижение времени и/или затрат на выделение и очистку на индивидуальный белок.
С целью секретирования в E. coli, полипептиды PIP-72 можно создавать, например, путем слияния соответствующего сигнального пептида E. coli с аминотерминальным концом полипептида PIP-72. Сигнальные пептиды, распознаваемые E. coli, можно найти в ранее известных белках, которые секретируются E. coli, например белок OmpA (Ghrayeb, et al., (1984), EMBO J, 3:2437-2442). OmpA представляет собой главный белок внешней мембраны E. coli, и, таким образом, полагают, что его сигнальный пептид является эффективным в процессе транслокации. Также, сигнальный пептид OmpA не нужно модифицировать перед процессингом, как может быть в случае других сигнальных пептидов, например сигнального пептида липопротеинов (Duffaud, et al., (1987), Meth. Enzymol. 153:492).
Полипептиды PIP-72 согласно вариантам осуществления можно ферментировать в бактериихозяине, а полученные бактерии обрабатывать и использовать в виде микробных распыляемых растворов таким же образом, что и штаммы Bt, которые применяли в виде инсектицидных распыляемых растворов. В случае полипептида(ов) PIP-72, который(ые) секретируется(ются) Bacillus, сигнал секреции удаляют или подвергают мутации с применением процедур, известных из уровня техники. Такие мутации и/или делеции предотвращают секрецию полипептида(ов) PIP-72 в ростовую среду во время процесса ферментации. Полипептиды PIP-72 остаются в клетке, и клетки затем обрабатывают с получением инкапсулированных полипептидов PIP-72. Для этой цели можно применять любой подходящий микроорганизм. Pseudomonas применяли для экспрессии Bf-токсинов в качестве инкапсулированных белков и полученные клетки обрабатывали и распыляли в качестве инсектицида (Gaertner, et al., (1993), в Advanced Engineered Pesticides, ed. Kim).
Альтернативно, полипептиды PIP-72 получают путем введения гетерологичного гена в клеткухозяина. Экспрессия гетерологичного гена приводит, прямо или опосредованно, к выработке и сохранению пестицида внутри клетки. Эти клетки затем обрабатывают в условиях, которые продлевают активность токсина, вырабатываемого в клетке, в случае внесения клетки в окружающую среду целевого(ых) вредителя(ей). Полученный продукт сохраняет токсичность токсина. Эти инкапсулированные естественным образом полипептиды PIP-72 затем можно составлять в соответствии с традиционными методиками для внесения в среду пребывания целевого вредителя, например, в почву, воду и на листву растений. См., например, EPA 0192319 и ссылочные документы, процитированные в нем.
Пестицидные композиции.
В некоторых вариантах осуществления активные ингредиенты можно вносить в форме композиций и можно вносить на возделываемую посевную площадь или наносить на растение, подлежащие обработке, одновременно или последовательно, с другими соединениями. Эти соединения могут представлять собой удобрения, средства борьбы с сорняками, криопротекторы, поверхностно-активные вещества, детергенты, пестицидные мыла, масла, применяемые во время состояния покоя, полимеры и/или составы с носителем с замедленным высвобождением или биоразлагаемым носителем, который обеспечивает длительное дозированное внесение на целевой площади после однократного внесения состава. Они также могут представлять собой селективные гербициды, химические инсектициды, вируциды, микробоциды, амебоциды, пестициды, фунгициды, бактерициды, нематоциды, моллюскоциды или смеси из нескольких этих препаратов, при необходимости, вместе с дополнительными приемлемыми с точки зрения сельского хозяйства носителями, поверхностно-активными веществами или вспомогательными средствами, способствующими нанесению, традиционно используемыми в области техники, связанной с получением составов.
Подходящие носители и вспомогательные средства могут быть твердыми или жидкими и соответствуют веществам, обычно используемым в технологии составления, например природным или регенерированным минеральным веществам, растворителям, диспергирующим веществам, смачивающим сред
- 106 031651 ствам, веществам, придающим клейкость, связующим или удобрениям. Аналогично, составы можно получать в виде съедобных приманок или формировать в ловушки для вредителей, что обеспечивает питание или поглощение целевым вредителем пестицидного состава.
Способы нанесения активного ингредиента или агрохимической композиции, которая содержит по меньшей мере один из полипептидов PIP-72, вырабатываемых штаммами бактерий, включают нанесение на листья, покрытие семян и внесение в почву. Количество применений и норма применения зависят от интенсивности заражения соответствующим вредителем.
Композицию можно составлять в виде порошка, дуста, пеллеты, гранулы, распыляемого раствора, эмульсии, коллоидного вещества, раствора и т.п., и ее можно получать при помощи таких традиционных способов как сушка, лиофилизация, гомогенизация, экстракция, фильтрация, центрифугирование, осаждение или концентрирование культуры клеток, содержащих полипептид. Во всех таких композициях, которые содержат по меньшей мере один такой пестицидный полипептид, полипептид может присутствовать в концентрации от приблизительно 1 до приблизительно 99 вес.%.
Вредителей из группы чешуекрылых, двукрылых, настоящих клопов, нематод, полужесткокрылых или жесткокрылых можно уничтожать или уменьшать их количество на указанной площади при помощи способов согласно настоящему раскрытию, или средства можно вносить профилактически на площадь окружающей среды для предотвращения заражения восприимчивым вредителем. Предпочтительно вредитель поглощает пестицидно эффективное количество полипептида или контактирует с ним. Используемое в данном документе пестицидно эффективное количество относится к количеству пестицида, которое может приводить к гибели по меньшей мере одного вредителя или к заметно сниженному росту, питанию или нормальному физиологическому развитию вредителя. Это количество будет варьировать в зависимости от таких факторов, как, например, конкретные целевые вредителеи, подлежащие контролю, конкретная окружающая среда, местоположение, растения, культуры или сельскохозяйственный участок, подлежащий обработке, условия окружающей среды и способ, нормы, концентрации, стабильности и количества применений пестицидно эффективной полипептидной композиции. Составы также могут варьировать в зависимости от климатических условий, экологических соображений, и/или частоты нанесения, и/или тяжести заражения вредителями.
Описанные пестицидные композиции можно создавать путем составления либо суспензии бактериальных клеток, кристаллов и/или спор, либо выделенного белкового компонента с требуемым носителем, приемлемым с точки зрения сельского хозяйства. Композиции можно составлять перед введением с помощью соответствующих способов, таких как лиофилизация, сублимационная сушка, высушивание, или в водном носителе, среде или подходящем разбавителе, таком как солевой раствор или другой буфер. Составленные композиции могут находиться в форме дуста, или гранулированного материала, или суспензии в масле (растительном или минеральном), или водных эмульсий или эмульсий масло/вода, или в виде смачиваемого порошка, или в комбинации с любым другим материалом в качестве носителя, подходящим для сельскохозяйственного применения. Подходящие носители, приемлемые с точки зрения сельского хозяйства, могут быть твердыми или жидкими и хорошо известны из уровня техники. Выражение приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель охватывает все вспомогательные средства, инертные компоненты, диспергирующие вещества, поверхностно-активные вещества, вещества, придающие клейкость, связующие и т.д., которые обычно применяют в технологии составления пестицидов; причем они хорошо известны специалистам по составлению пестицидов. Составы можно смешивать с одним или несколькими твердыми или жидкими вспомогательными средствами и получать при помощи различных способов, например путем равномерного перемешивания, смешивания и/или размалывания пестицидной композиции с подходящими вспомогательными средствами с применением традиционных методик составления. Подходящие составы и способы нанесения описаны в патенте США № 6468523, включенном в данный документ посредством ссылки. Растения можно также обрабатывать одной или несколькими химическими композициями, в том числе одним или несколькими гербицидами, инсектицидами или фунгицидами.
Иллюстративные химические композиции включают следующее.
Гербициды для фруктов/овощей: атразин, бромацил, диурон, глифосат, линурон, метрибузин, симазин, трифлуралин, флуазифоп, глуфосинат, галосульфурон от Gowan, паракват, пропизамид, сетоксидим, бутафенацил, галосульфурон, индазифлам;
инсектициды для фруктов/овощей: альдикарб, Bacillus thuriengiensis, карбарил, карбофуран, хлорпирифос, циперметрин, дельтаметрин, диазинон, малатион, абамектин, цифлутрин/бета-цифлутрин, эсфенвалерат, лямбда-цигалотрин, ацеквиноцил, бифеназат, метоксифенозид, новалурон, кромафенозид, тиаклоприд, динотефуран, флуакрипирим, толфенпирад, клотианидин, спиродиклофен, гаммацигалотрин, спиромезифен, спиносад, ринаксипир, циазипир, спинотерам, трифлумурон, спиротетрамат, имидаклоприд, флубендиамид, тиодикарб, метафлумизон, сульфоксафлор, цифлуметофен, цианопирафен, имидаклоприд, клотианидин, тиаметоксам, спиноторам, тиодикарб, флоникамид, метиокарб, эмамектин-бензоат, индоксакарб, фортиазат, фенамифос, кадусафос, пирипроксифен, фенбутатин-оксид, гекстиазокс, метомил, 4-[[(6-хлорпиридин-3-ил)метил](2,2-дифторэтил)амино]фуран-2(5H)-он;
- 107 031651 фунгициды для фруктов/овощей: карбендазим, хлороталонил, EBDC, сера, тиофанат-метил, азоксистробин, цимоксанил, флуазинам, фосетил, ипродион, крезоксим-метил, металаксил/мефеноксам, трифлоксистробин, этабоксам, ипроваликарб, трифлоксистробин, фенгексамид, окспоконазола фумарат, циазофамид, фенамидон, зоксамид, пикоксистробин, пираклостробин, цифлуфенамид, боскалид;
гербициды для злаков: изопротурон, бромоксинил, иоксинил, феноксисоединения, хлорсульфурон, клодинафоп, диклофоп, дифлуфеникан, феноксапроп, флорасулам, флуроксипир, метсульфурон, триасульфурон, флукарбазон, йодосульфурон, пропоксикарбазон, пиколинафен, мезосульфурон, бефлубутамид, пиноксаден, амидосульфурон, тифенсульфурон-метил, трибенурон, флупирсульфурон, сульфосульфурон, пирасульфотол, пироксулам, флуфенацет, тралкоксидим, пироксасульфон;
фунгициды для злаков: карбендазим, хлороталонил, азоксистробин, ципроконазол, ципродинил, фенпропиморф, эпоксиконазол, крезоксим-метил, квиноксифен, тебуконазол, трифлоксистробин, симеконазол, пикоксистробин, пираклостробин, димоксистробин, протиоконазол, флуоксастробин;
инсектициды для злаков: диметоат, лямбда-цигалотрин, дельтаметрин, альфа-циперметрин, β-цифлутрин, бифентрин, имидаклоприд, клотианидин, тиаметоксам, тиаклоприд, ацетамиприд, динетофуран, хлорпирифос, метамидофос, оксидеметон-метил, пиримикарб, метиокарб;
гербициды для маиса: атразин, алахлор, бромоксинил, ацетохлор, дикамба, клопиралид, (Ъ-)диметенамид, глуфосинат, глифосат, изоксафлутол, (Ъ-)метолахлор, мезотрион, никосульфурон, примисульфурон, римсульфурон, сулькотрион, форамсульфурон, топрамезон, темботрион, сафлуфенацил, тиенкарбазон, флуфенацет, пироксасульфон;
инсектициды для маиса: карбофуран, хлорпирифос, бифентрин, фипронил, имидаклоприд, лямбдацигалотрин, тефлутрин, тербуфос, тиаметоксам, клотианидин, спиромезифен, флубендиамид, трифлумурон, ринаксипир, дельтаметрин, тиодикарб, β-цифлутрин, циперметрин, бифентрин, люфенурон, трифлуморон, тефлутрин, тебупиримфос, этипрол, циазипир, тиаклоприд, ацетамиприд, динетофуран, авермектин, метиокарб, спиродиклофен, спиротетрамат;
фунгициды для маиса: фенитропан, тирам, протиоконазол, тебуконазол, трифлоксистробин;
гербициды для риса: бутахлор, пропанил, азимсульфурон, бенсульфурон, цигалофоп, даимурон, фентразамид, имазосульфурон, мефенацет, оксазикломефон, пиразосульфурон, пирибутикарб, квинклорак, тиобенкарб, инданофан, флуфенацет, фентразамид, галосульфурон, оксазикломефон, бензобициклон, пирифталид, пеноксулам, биспирибак, оксадиаргил, этоксисульфурон, претилахлор, мезотрион, тефурилтрион, оксадиазон, феноксапроп, пиримисульфан;
инсектициды для риса: диазинон, фенитротион, фенобукарб, монокротофос, бенфуракарб, бупрофезин, динотефуран, фипронил, имидаклоприд, изопрокарб, тиаклоприд, кромафенозид, тиаклоприд, динотефуран, клотианидин, этипрол, флубендиамид, ринаксипир, дельтаметрин, ацетамиприд, тиаметоксам, циазипир, спиносад, спиноторам, эмамектин-бензоат, циперметрин, хлорпирифос, картап, метамидофос, этофенпрокс, триазофос, 4-[[(6-хлорпиридин-3-ил)метил](2,2-дифторэтил)амино]фуран-2(5Н)-он, карбофуран, бенфуракарб;
фунгициды для риса: тиофанат-метил, азоксистробин, карпропамид, эдифенфос, феримзон, ипробенфос, изопротиолан, пенцикурон, пробеназол, пироквилон, трициклазол, трифлоксистробин, диклоцимет, феноксанил, симеконазол, тиадинил;
гербициды для хлопчатника: диурон, флуометурон, MSMA, оксифлуорфен, прометрин, трифлуралин, карфентразон, клетодим, флуазифоп-бутил, глифосат, норфлуразон, пендиметалин, пиритиобакнатрий, трифлоксисульфурон, тепралоксидим, глуфосинат, флумиоксазин, тидиазурон;
инсектициды для хлопчатника: ацефат, альдикарб, хлорпирифос, циперметрин, дельтаметрин, малатион, монокротофос, абамектин, ацетамиприд, эмамектин бензоат, имидаклоприд, индоксакарб, лямбдацигалотрин, спиносад, тиодикарб, гамма-цигалотрин, спиромезифен, пиридалил, флоникамид, флубендиамид, трифлумурон, ринаксипир, бета-цифлутрин, спиротетрамат, клотианидин, тиаметоксам, тиаклоприд, динетофуран, флубендиамид, циазипир, спиносад, спиноторам, гамма-цигалотрин, 4-[[(6-хлорпиридин-3-ил)метил](2,2-дифторэтил)амино]фуран-2(5Н)-он, тиодикарб, авермектин, флоникамид, пиридалил, спиромезифен, сульфоксафлор, профенофос, триазофос, эндосульфан;
фунгициды для хлопчатника: этридиазол, металаксил, квинтозен;
гербициды для сои: алахлор, бентазон, трифлуралин, хлоримурон-этил, хлорансулам-метил, феноксапроп, фомесафен, флуазифоп, глифосат, имазамокс, имазаквин, имазетапир, (Ъ-)метолахлор, метрибузин, пендиметалин, тепралоксидим, глуфосинат;
инсектициды для сои: лямбда-цигалотрин, метомил, паратион, тиокарб, имидаклоприд, клотианидин, тиаметоксам, тиаклоприд, ацетамиприд, динетофуран, флубендиамид, ринаксипир, циазипир, спиносад, спиноторам, эмамектин-бензоат, фипронил, этипрол, дельтаметрин, β-цифлутрин, гамма- и лямбда-цигалотрин, 4-[[(6-хлорпиридин-3-ил)метил](2,2-дифторэтил)амино]фуран-2(5Н)-он, спиротетрамат, спинодиклофен, трифлумурон, флоникамид, тиодикарб, бета-цифлутрин;
фунгициды для сои: азоксистробин, ципроконазол, эпоксиконазол, флутриафол, пираклостробин, тебуконазол, трифлоксистробин, протиоконазол, тетраконазол;
гербициды для сахарной свеклы: хлоридазон, десмедифам, этофумезат, фенмедифам, триаллат, клопиралид, флуазифоп, ленацил, метамитрон, квинмерак, циклоксидим, трифлусульфурон, тепралокси
- 108 031651 дим, квизалофоп;
инсектициды для сахарной свеклы: имидаклоприд, клотианидин, тиаметоксам, тиаклоприд, ацетамиприд, динетофуран, дельтаметрин, β-цифлутрин, гамма/лямбда-цигалотрин, 4-[[(6-хлорпиридин-3ил^етил^Ц-дифторэтилЦмино^уран^^Щ-он, тефлутрин, ринаксипир, циаксипир, фипронил, карбофуран;
гербициды для канолы: клопиралид, диклофоп, флуазифоп, глуфосинат, глифосат, метазахлор, трифлуралин, этаметсульфурон, квинмерак, квизалофоп, клетодим, тепралоксидим;
фунгициды для канолы: азоксистробин, карбендазим, флудиоксонил, ипродион, прохлораз, винклозолин;
инсектициды для канолы: карбофурановые фосфороорганические соединения, пиретроиды, тиаклоприд, дельтаметрин, имидаклоприд, клотианидин, тиаметоксам, ацетамиприд, динетофуран, β-цифлутрин, гамма и лямбда-цигалотрин, тау-флувалериат, этипрол, спиносад, спиноторам, флубендиамид, ринаксипир, циазипир, 4-[[(6-хлорпиридин-3-ил)метил](2,2-дифторэтил)амино]фуран-2(5H)-он.
В некоторых вариантах осуществления гербицид представляет собой атразин, бромацил, диурон, хлорсульфурон, метсульфурон, тифенсульфурон-метил, трибенурон, ацетохлор, дикамба, изоксафлутол, никосульфурон, римсульфурон, пиритиобак-натрий, флумиоксазин, хлоримурон-этил, метрибузин, квизалофоп, S-метолахлор, гексазинон или их комбинации.
В некоторых вариантах осуществления инсектицид представляет собой эсфенвалерат, хлорантранилипрол, метомил, индоксакарб, оксамил или их комбинации.
В некоторых вариантах осуществления гербицид представляет собой гербицид, ингибирующий гомогентизатсоланезилтрансферазу (HST), и/или гербицид, ингибирующий гидроксифенилпируватдиоксигеназу (HPPD), из патентной публикации США US 2011173718.
Пестицидная и инсектицидная активность.
Вредитель включает, без ограничений, насекомых, грибы, бактерии, нематод, клещей, иксодовых клещей и т.п. Насекомые-вредители включают насекомых, выбранных из отрядов Coleoptera, Diptera, Hymenoptera, Lepidoptera, Mallophaga, Homoptera, Hemiptera, Orthroptera, Thysanoptera, Dermaptera, Isoptera, Anoplura, Siphonaptera, Trichoptera и т.д., в частности Lepidoptera и Coleoptera.
Специалистам в данной области техники будет понятно, что не все соединения в равной степени эффективны против всех вредителей. Соединения согласно вариантам осуществления проявляют активность против насекомых-вредителей, которые могут включать важных в экономическом отношении агрономических, лесных, тепличных вредителей, вредителей питомников, декоративных растений, продуктов питания и тканей, продуктов, связанных со здоровьем людей и животных, продуктов, связанных с бытовой и коммерческой структурой, товаров для дома и продуктов, предназначенных для хранения.
Личинки из отряда Lepidoptera включают, без ограничения, совок, подгрызающих совок, пядениц и гелиотин семейства Noctuidae Spodoptera frugiperda JE Smith (совка травяная); S. exigua Hubner (совка малая); S. litura Fabricius (табачная совка, гусеница, пожирающая соцветия); Mamestra configurata Walker (совка Берта); М. brassicae Linnaeus (совка капустная); Agrotis ipsilon Hufnagel (совка-ипсилон); A. orthogonia Morrison (совка прямоугольная); A. subterranea Fabricius (совка зернистая); Alabama argillacea Hubner (совка хлопковая американская); Trichoplusia ni Hubner (совка ни); Pseudoplusia includens Walker (соевая совка); Anticarsia gemmatalis Hubner (гусеница вельветовых бобов); Hypena scabra Fabricius (совка клеверная); Heliothis virescens Fabricius (табачная листовертка); Pseudaletia unipuncta Haworth (совка луговая); Athetis mindara Barnes и Mcdunnough (шершавая совка); Euxoa messoria Harris (чернобокая гусеница совки); Earias insulana Boisduval (совка хлопковая египетская); E. vittella Fabricius (совка пятнистая); Helicoverpa armigera Hubner (совка щетинконогая резедовая); H. zea Boddie (совка кукурузная или хлопковая совка); Melanchra picta Harris (совка); Egira (Xylomyges) curialis Grote (цитрусовая совка); огневки, чехлоноски, бабочки, строящие паутинные гнезда, конусные бабочки и вредители, скелетирующие листья, из семейства Pyralidae Ostrinia nubilalis Hubner (мотылек стеблевой кукурузный); Amyelois transitella Walker (гусеницы, повреждающие рубчики цитрусовых); Anagasta kuehniella Zeller (огневка мельничная); Cadra cautella Walker (огневка сухофруктовая); Chilo suppressalis Walker (желтая рисовая огневка); C. partellus (сорговая огневка); Corcyra cephalonica Stainton (огневка рисовая); Crambus caliginosellus Clemens (огневка кукурузная); C. teterrellus Zincken (огневка мятликовая); Cnaphalocrocis medinalis Guenee (листовертка рисовая); Desmia funeralis Hubner (виноградная листовертка); Diaphania hyalinata Linnaeus (дынная огневка); D. nitidalis Stoll (огневка огурцовпикули); Diatraea grandiosella Dyar (огневка кукурузная юго-западная), D. saccharalis Fabricius (огневка сахарного тростника); Eoreuma loftini Dyar (мексиканская рисовая огневка); Ephestia elutella Hubner (огневка зерновая (какао)); Galleria mellonella Linnaeus (большая восковая моль); Herpetogramma licarsisalis Walker (огневка-травянка); Homoeosoma electellum Hulst (огневка подсолнечниковая); Elasmopalpus lignosellus Zeller (малая кукурузная огневка); Achroia grisella Fabricius (малая восковая моль); Loxostege sticticalis Linnaeus (луговой мотылек); Orthaga thyrisalis Walker (чайная моль); Maruca testulalis Geyer (огневка акациевая); Plodia interpunctella Hubner (моль индийская мучная); Scirpophaga incertulas Walker (стеблевая рисовая огневка); Udea rubigalis Guenee (огневка ржаво-коричневая); и листовертки, листовертки-почкоеды, плодожорки и гусеницы-вредители плодов семейства Tortricidae Acleris gloverana
- 109 031651
Walsingham (западная черноголовая листовертка); A. variana Fernald (восточная черноголовая листовертка); Archips argyrospila Walker (листовертка плодовых деревьев); A. rosana Linnaeus (европейская листовертка) и другие виды Archips, Adoxophyes orana Fischer von Rosslerstamm (листовертка сетчатая); Cochylis hospes Walsingham (полосатая подсолнечниковая моль); Cydia latiferreana Walsingham (лещинная плодожорка); С. pomonella Linnaeus (яблонная плодожорка); Platynota flavedana Clemens (листовертка изменчивая); P. stultana Walsingham (листовертка всеядная); Lobesia botrana Denis & Schiffermuller (листовертка европейская виноградная); Spilonota ocellana Denis & Schiffermuller (листовертка почковая); Endopiza viteana Clemens (листовертка виноградная); Eupoecilia ambiguella Hubner (листовертка гроздевая); Bonagota salubricola Meyrick (листовертка бразильская яблочная); Grapholita molesta Busck (плодожорка восточная персиковая); Suleima helianthana Riley (листовертка подсолнечниковая); Argyrotaenia spp.; Choristoneura spp.
Другие выбранные сельскохозяйственные вредители из отряда Lepidoptera включают, без ограничения, Alsophila pometaria Harris (осенний плодовый червь); Anarsia lineatella Zeller (моль фруктовая полосатая); Anisota senatoria J.E. Smith (сатурния оранжевая дубовая); Antheraea pernyi Guerin-Meneville (китайский дубовый шелкопряд); Bombyx mori Linnaeus (тутовый шелкопряд); Bucculatrix thurberiella Busck (кривоусая хлопковая моль); Colias eurytheme Boisduval (люцерновая желтушка); Datana integerrima Grote и Robinson (хохлатка ореховая); Dendrolimus sibiricus Tschetwerikov (сибирский шелкопряд), Ennomos subsignaria Hubner (пяденица ильмовая); Erannis tiliaria Harris (пяденица липовая); Euproctis chrysorrhoea Linnaeus (шелкопряд золотистый); Harrisina americana Guerin-Meneville (пироморфида американская); Hemileuca oliviae Cockrell (гусеница бабочки-сатурнии); Hyphantria cunea Drury (американская белая бабочка); Keiferia lycopersicella Walsingham (томатная моль); Lambdina fiscellaria fiscellaria Hulst (пяденица гемлоковая восточная); L. fiscellaria lugubrosa Hulst (пяденица гемлоковая западная); Leucoma salicis Linnaeus (волнянка ивовая); Lymantha dispar Linnaeus (непарный шелкопряд); Manduca quinquemaculata Haworth (бражник пятиточечный, томатный бражник); M. sexta Haworth (томатный бражник, табачный бражник); Operophtera brumata Linnaeus (пяденица зимняя); Paleacrita vernata Peck (пяденица весенняя); Papilio cresphontes Cramer (парусник кресфонтес, апельсиновая собака); Phryganidia californica Packard (коконопряд кольчатый калифорнийский); Phyllocnistis citrella Stainton (цитрусовая мушка-минер); Phyllonorycter blancardella Fabricius (моль-пестрянка плодовая нижнесторонняя); Pieris brassicae Linnaeus (белянка капустная большая); P. rapae Linnaeus (белянка капустная малая); P. napi Linnaeus (белянка брюквенная); Platyptilia carduidactyla Riley (пальцекрылка артишоковая); Plutella xylostella Linnaeus (моль капустная); Pectinophora gossypiella Saunders (розовый коробочный червь); Pontia protodice Boisduval and Leconte (клетчатая белянка); Sabulodes aegrotata Guenee (всеядная пяденица); Schizura concinna J.E. Smith (хохлатка); Sitotroga cerealella Olivier (моль ячменная ангумуазская); Thaumetopoea pityocampa Schiffermuller (походный шелкопряд сосновый); Tineola bisselliella Hummel (моль комнатная); Tuta absoluta Meyrick (томатная моль); Yponomeuta padella Linnaeus (горностаевая моль плодовая); Heliothis subflexa Guenee; Malacosoma spp. и Orgyia spp.
Представляют интерес личинки и имаго из отряда Coleoptera, в том числе долгоносики из семейств Anthribidae, Bruchidae и Curculionidae (в том числе без ограничения: Anthonomus grandis Boheman (долгоносик хлопковый); Lissorhoptrus oryzophilus Kuschel (долгоносик рисовый водяной); Sitophilus granarius Linnaeus (долгоносик амбарный); S. oryzae Linnaeus (долгоносик рисовый); Hypera punctata Fabricius (долгоносик точечный); Cylindrocopturus adspersus LeConte (долгоносик подсолнечниковый стеблевой); Smicronyx fulvus LeConte (красный долгоносик подсолнечника); S. sordidus LeConte (серый долгоносик подсолнечника); Sphenophorus maidis Chittenden (долгоносик маисовый)); земляные блошки, блошки, корневые черви, листоеды, картофельные жуки и листовые минеры семейства Chrysomelidae (в том числе без ограничения: Leptinotarsa decemlineata Say (колорадский жук); Diabrotica virgifera virgifera LeConte (западный кукурузный жук); D. barberi Smith and Lawrence (северный кукурузный жук); D. undecimpunctata howardi Barber (южный кукурузный жук); Chaetocnema pulicaria Melsheimer (земляная кукурузная блошка); Phyllotreta cruciferae Goeze (блошка крестоцветная); Phyllotreta striolata (полосатая блошка); Colaspis brunnea Fabricius (листоед виноградный); Oulema melanopus Linnaeus (пьявица красногрудая); Zygogramma exclamationis Fabricius (подсолнечниковый листоед)); жуки семейства Coccinellidae (в том числе без ограничения: Epilachna varivestis Mulsant (мексиканская фасолевая коровка)); хрущи и другие жуки из семейства Scarabaeidae (в том числе без ограничения: Popillia japonica Newman (хрущик японский); Cyclocephala borealis Arrow (дупляк северный, хрущ); C. immaculata Olivier (дупляк южный, хрущ); Rhizotrogus majalis Razoumowsky (нехрущ майский); Phyllophaga crinita Burmeister (хрущ); Ligyrus gibbosus De Geer (жук морковный)); кожееды из семейства Dermestidae; проволочники из семейства Elateridae, Eleodes spp., Melanotus spp.; Conoderus spp.; Limonius spp.; Agriotes spp.; Ctenicera spp.; Aeolus spp.; короеды из семейства Scolytidae и жуки из семейства Tenebrionidae.
Представляют интерес имаго и незрелые особи отряда Diptera, в том числе минирующие мушки Agromyza parvicornis Loew (кукурузная минирующая мушка); галлицы (в том числе, без ограничения, Contarinia sorghicola Coquillett (галлица сорговая); Mayetiola destructor Say (гессенская муха); Sitodiplosis mosellana Gehin (оранжевая зерновая галлица); Neolasioptera murtfeldtiana Felt, (подсолнечниковая галлица)); плодовые мушки (Tephritidae), Oscinella frit Linnaeus (плодовые мушки); цветочные мухи (в том
- 110 031651 числе без ограничения: Delia platura Meigen (муха ростковая); D. coarctata Fallen (муха озимая) и другие Delia spp., Meromyza americana Fitch (американская меромиза); Musca domestica Linnaeus (комнатная муха); Fannia canicularis Linnaeus, F. femoralis Stein (малые комнатные мухи); Stomoxys calcitrans Linnaeus (жигалка осенняя)); мухи полевые, жигалки, мухи мясные, Chrysomya spp.; Phormia spp. и другие мухивредители надсемейства Muscoidea, слепни Tabanus spp.; носоглоточные оводы Gastrophilus spp.; Oestrus spp.; бычьи оводы Hypoderma spp.; пестряки Chrysops spp.; Melophagus ovinus Linnaeus (рунец овечий) и другие Brachycera, комары Aedes spp.; Anopheles spp.; Culex spp.; мошки Prosimulium spp.; Simulium spp.; мокрецы, москиты, сциариды и другие Nematocera.
В качестве насекомых, представляющих интерес, включены имаго и личинки из отрядов Hemiptera и Homoptera, такие как без ограничения хермесы из семейства Adelgidae, слепняки из семейства Miridae, цикады из семейства Cicadidae, цикадки, Empoasca spp.; из семейства Cicadellidae, насекомые надсемейства Fulgoroidea из семейств Cixiidae, Flatidae, Fulgoroidea, Issidae и Delphacidae, горбатки из семейства Membracidae, листоблошки из семейства Psyllidae, белокрылки из семейства Aleyrodidae, тли из семейства Aphididae, филлоксеры из семейства Phylloxeridae, мучнистые червецы из семейства Pseudococcidae, червецы из семейств Asterolecanidae, Coccidae, Dactylopiidae, Diaspididae, Eriococcidae Ortheziidae, Phoenicococcidae и Margarodidae, кружевницы из семейства Tingidae, щитники из семейства Pentatomidae, клопы-черепашки, Blissus spp.; и другие наземники из семейства Lygaeidae, пенницы из семейства Cercopidae, краевики из семейства Coreidae и красноклопы и красноклопы хлопковые из семейства Pyrrhocoridae.
Важные с точки зрения сельского хозяйства представители отряда Homoptera дополнительно включают, без ограничения, Acyrthisiphon pisum Harris (тля гороховая); Aphis craccivora Koch (тля люцерновая); A. fabae Scopoli (тля свекловичная); A. gossypii Glover (тля хлопковая, тля бахчевая); A. maidiradicis Forbes (тля кукурузная корневая); A. pomi De Geer (тля яблонная); A. spiraecola Patch (тля зеленая цитрусовая); Aulacorthum solani Kaltenbach (тля картофельная обыкновенная); Chaetosiphon fragaefolii Cockerell (тля земляничная американская); Diuraphis noxia Kurdjumov/Mordvilko (русская пшеничная тля); Dysaphis plantaginea Paaserini (тля яблоневая розовая); Eriosoma lanigerum Hausmann (тля яблонная кровяная); Brevicoryne brassicae Linnaeus (капустная тля); Hyalopterus pruni Geoffroy (тля сливовая опыленная); Lipaphis erysimi Kaltenbach (тля ложнокапустная); Metopolophium dirrhodum Walker (розанно-злаковая тля); Macrosiphum euphorbiae Thomas (большая картофельная тля); Myzus persicae Sulzer (тля персиковая, тля оранжерейная); Nasonovia ribisnigri Mosley (тля салатная зеленая); Pemphigus spp. (тли корневые и тли галловые); Rhopalosiphum maidis Fitch (тля сорговая); R. padi Linnaeus (тля черемуховая обыкновенная); Schizaphis graminum Rondani (тля злаковая обыкновенная); Sipha flava Forbes (тля жёлтая сахарного тростника); Sitobion avenae Fabricius (тля листовая); Therioaphis maculata Buckton (пятнистая люцерновая тля); Toxoptera aurantii Boyer de Fonscolombe (тля померанцевая) и T. citricida Kirkaldy (тля цитрусовая); Melanaphis sacchari (тля сахарного тростника); Adelges spp. (хермесы); Phylloxera devastatrix Pergande (филлоксера гикори); Bemisia tabaci Gennadius (белокрылка табачная, белокрылка хлопковая); B. argentifolii Bellows и Perring (белокрылка магнолиевая); Dialeurodes citri Ashmead (белокрылка цитрусовая); Trialeurodes abutiloneus (белокрылка полосатокрылая) и T. vaporariorum Westwood (белокрылка тепличная); Empoasca fabae Harris (цикадка картофельная); Laodelphax striatellus Fallen (темная цикадка); Macrolestes quadrilineatus Forbes (цикадка астровая); Nephotettix cinticeps Uhler (цикадка зелёная); N. nigropictus Stal (рисовая цикадка); Nilaparvata lugens Stal (бурая рисовая цикадка); Peregrinus maidis Ashmead (цикадка кукурузная); Sogatella furcifera Horvath (цикадка белоспинная); Sogatodes orizicola Muir (дельфацид рисовый); Typhlocyba pomaria McAtee (цикадка яблонная); Erythroneoura spp. (цикадки виноградные); Magicicada septendecim Linnaeus (периодическая цикада); Icerya purchasi Maskell (червец австралийский желобчатый); Quadraspidiotus perniciosus Comstock (щитовка калифорнийская); Planococcus citri Risso (мучнистый червец виноградный); Pseudococcus spp. (другие мучнистые червецы); Cacopsylla pyricola Foerster (листоблошка грушевая); Trioza diospyri Ashmead (листоблошка хурмовая).
Виды, представляющие интерес с точки зрения сельского хозяйства, из отряда Hemiptera включают, без ограничения, Acrosternum hilare Say (щитник зеленый); Anasa tristis De Geer (клоп-ромбовик печальный); Blissus leucopterus leucopterus Say (клоп-черепашка); Corythuca gossypii Fabricius (кружевница хлопковая); Cyrtopeltis modesta Distant (клоп томатный); Dysdercus suturellus Herrich-Schaffer (красноклоп хлопковый); Euschistus servus Say (клоп коричневый вонючий); E. variolarius Palisot de Beauvois (щитник однопятнистый); Graptostethus spp. (комплекс клопов-наземников); Leptoglossus corculus Say (клопкраевик сосновый); Lygus lineolaris Palisot de Beauvois (клоп луговой); L. Hesperus Knight (слепняк западный матовый); L. pratensis Linnaeus (клопик полевой); L. rugulipennis Poppius (клоп травяной); Lygocoris pabulinus Linnaeus (зеленый слепняк); Nezara viridula Linnaeus (зеленый овощной клоп); Oebalus pugnax Fabricius (клоп-щитник рисовый); Oncopeltus fasciatus Dallas (клоп молочайный большой); Pseudatomoscelis seriatus Reuter (клоп-слепняк хлопковый).
Кроме того, варианты осуществления могут быть эффективными против Hemiptera, например, Calocoris norvegicus Gmelin (клопик картофельный); Orthops campestris Linnaeus; Plesiocoris rugicollis Fallen (клоп яблонный северный); Cyrtopeltis modestus Distant (томатный клоп); Cyrtopeltis notatus Distant (клоп
- 111 031651 слепняк); Spanagonicus albofasciatus Reuter (слепняк белоточечный); Diaphnocoris chlorionis Say (клопслепняк гледичии); Labopidicola allii Knight (слепняк луковый); Pseudatomoscelis seriatus Reuter (слепняк хлопковый); Adelphocoris rapidus Say (клоп быстрый); Poecilocapsus lineatus Fabricius (слепняк четырехлинейный); Nysius ericae Schilling (низиус вересковый); Nysius raphanus Howard (ложная черепашка); Nezara viridula Linnaeus (зеленый овощной клоп); Eurygaster spp.; Coreidae spp.; Pyrrhocoridae spp.; Tinidae spp.; Blostomatidae spp.; Reduviidae spp. и Cimicidae spp.
Также включены имаго и личинки из отряда Acari (клещи), такие как Aceria tosichella Keifer (галловый клещ пшеничный); Petrobia latens Muller (петробия многоядная); клещики паутинные и клещики красные семейства Tetranychidae, Panonychus ulmi Koch (красный плодовый клещ); Tetranychus urticae Koch (обыкновенный паутинный клещ); (T. mcdanieli McGregor (клещик Макданиела); T. cinnabarinus Boisduval (красный паутинный клещик); Т. turkestani Ugarov & Nikolski (туркестанский паутинный клещик); плоские клещи семейства Tenuipalpidae, Brevipalpus lewisi McGregor (оранжевый клещ); ржавчинные и почковые клещи семейства Eriophyidae и другие клещи, питающиеся листьями, и клещи, опасные для здоровья человека и животных, т.е. пылевые клещи семейства Epidermoptidae, железницы семейства Demodicidae, зерновые клещи семейства Glycyphagidae, иксодовые клещи отряда Ixodidae. Ixodes scapulahs Say (черноногий клещ); I. holocyclus Neumann (австралийский паралитический клещ); Dermacentor variabilis Say (клещ иксодовый собачий); Amblyomma americanum Linnaeus (иксодовый клещ Amblyomma) и конские и чесоточные клещи семейств Psoroptidae, Pyemotidae и Sarcoptidae.
Представляющими интерес насекомыми-вредителями из отряда Thysanura являются, например, Lepisma saccharina Linnaeus (чешуйница); Thermobia domestica Packard (термобия).
Дополнительные охваченные вредители-артроподы включают пауков из отряда Araneae, таких как Loxosceles reclusa Gertsch and Mulaik (бурый паук-отшельник) и Latrodectus mactans Fabricius (черная вдова), и многоножек из отряда Scutigeromorpha, таких как Scutigera coleoptrata Linnaeus (обыкновенная мухоловка).
Насекомое-вредитель, представляющее интерес, включает надсемейство щитников и других родственных насекомых, в том числе без исключения виды, принадлежащие к семейству Pentatomidae (Nezara viridula, Halyomorpha halys, Piezodorus guildini, Euschistus servus, Acrosternum hilare, Euschistus heros, Euschistus tristigmus, Acrosternum hilare, Dichelops furcatus, Dichelops melacanthus и Bagrada hilaris (клоп из рода Bagrada)), семейству Plataspidae (Megacopta cribraria-полушаровидный щитник) и семейству Cydnidae (Scaptocoris castanea - коричневый клоп-землекоп), и виды Lepidoptera, в том числе без исключения моль капустная, например, Helicoverpa zea Boddie; соевая совка, например Pseudoplusia includens Walker, и гусеница, питающаяся бархатными бобами, например, Anticarsia gemmatalis Hubner.
Способы измерения пестицидной активности хорошо известны из уровня техники. См., например, Czapla and Lang, (1990), J. Econ. Entomol. 83:2480-2485; Andrews, et al., (1988), Biochem. J. 252:199-206; Marrone, et al., (1985), J. of Economic Entomology, 78:290-293 и патент США № 5743477, все из которых включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Как правило, белок смешивают и применяют в анализах с кормлением. См., например, Marrone, et al., (1985), J. of Economic Entomology, 78:290-293. Такие анализы могут включать приведение растений в контакт с одним или несколькими вредителями и определение способности растения выживать и/или вызывать гибель вредителей.
Нематоды включают паразитических нематод, таких как галловые, цистообразующие и ранящие нематоды, в том числе Heterodera spp., Meloidogyne spp. и Globodera spp.; в частности представителей цистообразующих нематод, в том числе, без ограничения, Heterodera glycines (соевая цистообразующая нематода); Heterodera schachtii (цистообразующая нематода свеклы); Heterodera avenae (цистообразующая нематода злаков), и Globodera rostochiensis, и Globodera pailida (цистообразующие нематоды картофеля). Ранящие нематоды включают Pratylenchus spp.
Средство для обработки семян.
Для защиты и для повышения урожайности и улучшения технологий усовершенствования признаков дополнительные средства для обработки семян могут обеспечивать дополнительную приспособляемость культурных растений и экономически эффективный контроль насекомых, сорняков и заболеваний. Семенной материал можно обрабатывать, как правило, обрабатывать поверхность с помощью композиции, содержащей комбинации химических или биологических гербицидов, антидотов гербицидов, инсектицидов, фунгицидов, ингибиторов и усилителей прорастания, питательных веществ, регуляторов и активаторов роста растений, бактерицидов, нематоцидов, авицидов и/или моллюскоцидов. Эти соединения, как правило, составляют вместе с дополнительными носителями, поверхностно-активными веществами или вспомогательными средствами, способствующими нанесению, традиционно используемыми в области техники, связанной с получением составов. Покрытия можно наносить с помощью пропитки материала для размножения жидким составом или с помощью покрытия комбинированным влажным или сухим составом. Примеры различных типов соединений, которые можно применять в качестве средств для обработки семян, представлены в The Pesticide Manual: A World Compendium, C.D.S. Tomlin Ed., Published by the British Crop Production Council, который включен в данный документ посредством ссылки.
- 112 031651
Некоторые средства для обработки семян, которые можно применять для семян культур, включают, без ограничения, один или несколько из абсцизовой кислоты, ацибензолар^-метила, авермектина, амитрола, азаконазола, азоспириллума, азадирахтина, азоксистробина, Bacillus spp. (в том числе один или несколько из видов cereus, firmus, megaterium, pumilis, sphaericus, subtilis и/или thuringiensis), bradyrhizobium spp. (в том числе один или несколько из betae, canariense, elkanii, iriomotense, japonicum, liaonigense, pachyrhizi и/или yuanmingense), каптана, карбоксина, хитозана, клотианидина, меди, циазипира, дифеноконазола, этидиазола, фипронила, флудиоксонила, флуоксастробина, флуквинконазола, флуразола, флуксофенима, белка гарпина, имазалила, имидаклоприда, ипконазола, изофлавеноидов, липохитоолигосахарида, манкозеба, марганца, манеба, мефеноксама, металаксила, метконазола, миклобутанила, PCNB, пенфлуфена, пинециллума, пентиопирада, перметрина, пикоксистробина, протиоконазола, пираклостробина, ринаксипира, S-метолахлора, сапонина, седаксана, TCMTB, тебуконазола, тиабендазола, тиаметоксама, тиокарба, тирама, толклофос-метила, триадименола, триходермы, трифлоксистробина, тритиконазола и/или цинка. Покрытие для семян PCNB, относящееся к номеру регистрации EPA 00293500419, содержит квинтозен и терразол. TCMTB называется 2-(тиоцианометилтио)бензотиазол.
Сорта семян и семена с конкретными трансгенными признаками можно тестировать для определения того, какие дополнительные варианты обработки семян и нормы внесения могут дополнять такие сорта и трансгенные признаки для повышения урожайности. Например, сорт с хорошей потенциальной урожайностью, но восприимчивостью к пыльной головне, может выиграть от применения средства для обработки семян, которое обеспечивает защиту от пыльной головни, сорт с хорошей потенциальной урожайностью, но восприимчивостью к цистообразующим нематодам, может выиграть от применения средства обработки семян, которое обеспечивает защиту от цистообразующей нематоды и т.д. Аналогично, сорт, включающий трансгенный признак, обеспечивающий устойчивость к насекомым, может выиграть от второго механизма действия, придаваемого средством для обработки семян, сорт, включающий трансгенный признак, придающий устойчивость к гербициду, может выиграть от средства обработки семян с антидотом, который повышает устойчивость растений к такому гербициду и т.д. К тому же, хорошее укоренение и ранняя всхожесть, которые являются результатом правильного применения средства для обработки семян, могут приводить к более эффективному использованию азота, лучшей способности переносить засуху и общему повышению потенциальной урожайности сорта или сортов, содержащих определенный признак, в комбинации со средством для обработки семян.
Способы уничтожения насекомого-вредителя и контроля популяции насекомых
В некоторых вариантах осуществления представлены способы уничтожения насекомого-вредителя, включающие приведение в контакт насекомого-вредителя с инсектицидно эффективным количеством рекомбинантного полипептида PIP-72. В некоторых вариантах осуществления представлены способы уничтожения насекомого-вредителя, включающие приведение в контакт насекомого-вредителя с инсектицидно эффективным количеством рекомбинантного пестицидного белка SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772 или SEQ ID NO: 852 или его варианта.
В некоторых вариантах осуществления представлены способы контроля популяции насекомоговредителя, включающие приведение в контакт популяции насекомого-вредителя с инсектицидно эффективным количеством рекомбинантного полипептида PIP-72. В некоторых вариантах осуществления представлены способы контроля популяции насекомого-вредителя, включающие приведение в контакт популяции насекомого-вредителя с инсектицидно эффективным количеством рекомбинантного пестицидного белка SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 - SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772 или SEQ ID NO: 852 или его варианта.
Используемые в данном документе контроль популяции вредителя или контролировать вредителя относятся к какому-либо эффекту в отношении вредителя, который приводит к ограничению повреждения, которое вызывает вредитель. Контроль вредителя включает, без ограничений, уничтожение вредителя, подавление развития вредителя, изменение плодовитости или роста вредителя таким образом, что вредитель наносит меньшее повреждение растению, снижение количества производимого потомства, получение менее приспособленных вредителей, получение вредителей, более восприимчивых к нападению хищников или удержание вредителей от поедания растения.
В некоторых вариантах осуществления представлены способы контроля популяции насекомоговредителя, устойчивого к пестицидному белку, включающие приведение в контакт популяции насекомого-вредителя с инсектицидно эффективным количеством рекомбинантного полипептида PIP-72. В некоторых вариантах осуществления представлены способы контроля популяции насекомого-вредителя, устойчивого к пестицидному белку, включающие приведение в контакт популяции насекомого-вредителя с инсектицидно эффективным количеством рекомбинантного пестицидного белка SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528
- 113 031651
SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 - SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772 или SEQ ID NO: 852 или его варианта.
В некоторых вариантах осуществления представлены способы защиты растения от насекомоговредителя, включающие экспрессию в растении или его клетке рекомбинантного полинуклеотида, кодирующего полипептид PIP-72. В некоторых вариантах осуществления представлены способы защиты растения от насекомого-вредителя, включающие экспрессию в растении или его клетке рекомбинантного полинуклеотида, кодирующего пестицидный белок SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772 или SEQ ID NO: 852 или его вариантов.
В некоторых вариантах осуществления представлены способы уничтожения насекомого-вредителя, включающие приведение в контакт насекомого-вредителя с инсектицидно эффективным количеством рекомбинантного полипептида SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 929, SEQ ID NO: 930, SEQ ID NO: 931, SEQ ID NO: 937, SEQ ID NO: 938, SEQ ID NO: 942, SEQ ID NO: 947 или SEQ ID NO: 948 или его варианта.
В некоторых вариантах осуществления представлены способы контроля популяции насекомоговредителя, включающие приведение в контакт популяции насекомого-вредителя с эффективным количеством рекомбинантного полипептида SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 929, SEQ ID NO: 930, SEQ ID NO: 931, SEQ ID NO: 937, SEQ ID NO: 938, SEQ ID NO: 942, SEQ ID NO: 947 или SEQ ID NO: 948 или его варианта. Используемые в данном документе контроль популяции вредителя или контролировать вредителя относятся к какому-либо эффекту в отношении вредителя, который приводит к ограничению повреждения, которое вызывает вредитель. Контроль вредителя включает без ограничений уничтожение вредителя, подавление развития вредителя, изменение плодовитости или роста вредителя таким образом, что вредитель наносит меньшее повреждение растению, снижение количества производимого потомства, получение менее приспособленных вредителей, получение вредителей, более восприимчивых к нападению хищников или удержание вредителей от поедания растения.
В некоторых вариантах осуществления представлены способы контроля популяции насекомоговредителя, устойчивого к пестицидному белку, включающие приведение в контакт популяции насекомого-вредителя с эффективным количеством рекомбинантного полипептида SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 929, SEQ ID NO: 930, SEQ ID NO: 931, SEQ ID NO: 937, SEQ ID NO: 938, SEQ ID NO: 942, SEQ ID NO: 947 или SEQ ID NO: 948 или его варианта.
В некоторых вариантах осуществления представлены способы защиты растения от насекомоговредителя, включающие экспрессию в растении или его клетке рекомбинантного полинуклеотида, кодирующего пестицидный белок SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 929, SEQ ID NO: 930, SEQ ID NO: 931, SEQ ID NO: 937, SEQ ID NO: 938, SEQ ID NO: 942, SEQ ID NO: 947, или SEQ ID NO: 948 или его варианты.
Стратегии борьбы с устойчивостью насекомых (IRM)m
Было доказано, что экспрессия δ-эндотоксинов B. thuringiensis в трансгенных растениях кукурузы является эффективным средством контроля важных с точки зрения сельского хозяйства насекомыхвредителей (Perlak, et al., 1990; 1993). Однако возникли насекомые, которые устойчивы к δ-эндотоксинам B. thuringiensis, экспрессирующимся в трансгенных растениях. Такая устойчивость, если она станет широко распространенной, будет явно ограничивать коммерческую ценность идиоплазмы, содержащей гены, кодирующие такие δ-эндотоксины B. thuringiensis.
Одним путем повышения эффективности трансгенных инсектицидов против целевых вредителей и одновременного снижения развития устойчивых к инсектицидам вредителей является применение полученных нетрансгенных (т.е. с неинсектицидным белком) рефугиев (раздел неинсектицидных сельскохозяйственных культур/кукурузы) для применения трансгенных сельскохозяйственных культур, вырабатывающих один инсектицидный белок, активный против целевых вредителей. Управление по охране окружающей среды Соединенных Штатов (epa.gov/oppbppdl/biopesticides/pips/bt_corn_refuge_2006.htm, доступ к которому можно получить с применением префикса www) публикует требования по применению трансгенных сельскохозяйственных культур, вырабатывающих один Bt-белок, активный против целевых вредителей. В дополнение, Национальная ассоциация кукурузоводов на своем веб-сайте: (ncga.com/insect-resistance-management-fact-sheet-bt-corn, доступ к которому можно получить с применением префикса www) также представляет аналогичные руководства, касающиеся требований к рефугиям. Из-за потерь, обусловленных насекомыми в пределах зоны регуфиев, более крупные рефугии могут снижать общую урожайность.
Другим путем повышения эффективности трансгенных инсектицидов против целевых вредителей и одновременного снижения развития устойчивых к инсектицидам вредителям будет хранилище инсекти
- 114 031651 цидных генов, которые эффективны против групп насекомых-вредителей и которые проявляют свои эффекты посредством отличающихся механизмов действия.
Экспрессия в растении двух или более инсектицидных композиций, токсичных для одного вида насекомых, при этом каждый инсектицид экспрессируется на эффективных уровнях, будет представлять собой другой путь достижения контроля развития устойчивости. Это основано на принципе, что развитие устойчивости к двум отдельным механизмам действия значительно менее вероятно, чем только к одному. Roush, например, описывает стратегию двух токсинов, также называемую создание пирамиды или пакетирование, для управления инсектицидными трансгенными сельскохозяйственными культурами. (The Royal Society. Phil. Trans. R. Soc. Lond. B. (1998), 353:1777-1786). Пакетирование или создание пирамиды из двух различных белков, каждый из которых эффективен против целевых вредителей и при этом отсутствует перекрестная устойчивость или она невелика, может обеспечивать возможность применения меньшего рефугия. Управление по охране окружающей среды США требует существенно меньший (как правило, 5%) структурированный рефугий для высаживания кукурузы, не являющейся Bt, чем для продуктов с одним признаком (как правило, 20%). Существуют различные пути обеспечения эффектов IRM рефугия, в том числе схемы посадки различной геометрии в полях и смеси семян в мешке, дополнительно рассматриваемые в Roush.
В некоторых вариантах осуществления полипептиды PIP-72 согласно настоящему раскрытию применимы в качестве стратегии борьбы с устойчивостью насекомых в комбинации (т.е. в составе пирамиды) с другими пестицидными белками, включающими без ограничения Bt-токсины, инсектицидные белки Xenorhabdus sp. или Photorhabdus sp. и т.п.
Представлены способы контроля заражения(й) насекомыми отряда Lepidoptera и/или Coleoptera трансгенного растения, которые содействуют борьбе с устойчивостью насекомых, и предусматривают экспрессию в растении по меньшей мере двух различных инсектицидных белков, имеющих отличающиеся механизмы действия.
В некоторых вариантах осуществления способы контроля заражения насекомыми из отряда Lepidoptera и/или Coleoptera трансгенного растения и содействия борьбе с устойчивостью насекомых по меньшей мере к одному из инсектицидных белков включают полипептид PIP-72, инсектицидный в отношении насекомых из отряда Lepidoptera и/или Coleoptera.
В некоторых вариантах осуществления способы контроля заражения насекомыми из отряда Lepidoptera и/или Coleoptera трансгенного растения и содействия борьбе с устойчивостью насекомых по меньшей мере к одному из инсектицидных белков включают белок SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 852, любой из SEQ ID NO: 903 SEQ ID NO: 914, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946 или их варианты, инсектицидные в отношении насекомых из отряда Lepidoptera и/или Coleoptera.
В некоторых вариантах осуществления способы контроля заражения насекомыми из отряда Lepidoptera и/или Coleoptera трансгенного растения и содействия борьбе с устойчивостью насекомых включают экспрессию в трансгенном растении полипептида PIP-72 и белка Cry, инсектицидных в отношении насекомых из отряда Lepidoptera и/или Coleoptera, причем они имеют отличающиеся механизмы действия.
В некоторых вариантах осуществления способы контроля заражения насекомыми из отряда Lepidoptera и/или Coleoptera трансгенного растения и содействия борьбе с устойчивостью насекомых включают экспрессию в трансгенном растении белка SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28,
SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 852, любой из SEQ ID NO: 903 SEQ ID NO: 914, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934,
SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943,
SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945, или SEQ ID NO: 946 или их вариантов и белка Cry, инсектицидных в отношении насекомых из отряда Lepidoptera и/или Coleoptera, причем они имеют отличающиеся механизмы действия.
Также представлены способы снижения вероятности появления устойчивости у насекомых из отряда Lepidoptera и/или Coleoptera к трансгенным растениям, экспрессирующим в растениях инсектицидные белки для контроля видов насекомых, включающие экспрессию полипептида PIP-72, инсектицидного в отношении видов насекомых, в комбинации со вторым белком, инсектицидным в отношении вида насекомого, причем они имеют отличающиеся механизмы действия.
Также представлены способы снижения вероятности появления устойчивости у насекомых из отряда Lepidoptera и/или Coleoptera к трансгенным растениям, экспрессирующим в растениях инсектицидные белки для контроля вида насекомого, включающие экспрессию белка SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4,
- 115 031651
SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 852, любой из SEQ ID NO: 903 SEQ ID NO: 914, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946 или их вариантов, инсектицидных в отношении вида насекомого, в комбинации со вторым белком, инсектицидным в отношении вида насекомого, причем они имеют отличающиеся механизмы действия.
Также представлены средства для эффективной борьбы с устойчивостью насекомых из отряда Lepidoptera и/или Coleoptera к трансгенным растениям, включающие совместную экспрессию на высоких уровнях в растениях двух или более инсектицидных белков, токсичных для насекомых из отряда Lepidoptera и/или Coleoptera, но при этом каждый характеризуется отличающимся механизмом осуществления его активности в отношении уничтожения, где два или более инсектицидных белка включают полипептид PIP-72 и белок Cry. Также представлены средства для эффективной борьбы с устойчивостью насекомых из отряда Lepidoptera и/или Coleoptera к трансгенным растениям, включающие совместную экспрессию на высоких уровнях в растениях двух или более инсектицидных белков, токсичных для насекомых из отряда Lepidoptera и/или Coleoptera, но при этом каждый характеризуется отличающимся механизмом осуществления его активности в отношении уничтожения, где два или более инсектицидных белка включают белок SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 - SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772, SEQ ID NO: 852, любой из SEQ ID NO: 903 - SEQ ID NO: 914, SEQ ID NO: 927, SEQ ID NO: 928, SEQ ID NO: 932, SEQ ID NO: 933, SEQ ID NO: 934, SEQ ID NO: 935, SEQ ID NO: 936, SEQ ID NO: 939, SEQ ID NO: 940, SEQ ID NO: 941, SEQ ID NO: 943, SEQ ID NO: 944, SEQ ID NO: 945 или SEQ ID NO: 946 или их варианты и белок Cry.
В дополнение, представлены способы получения разрешения контролирующих органов для выращивания или коммерческой реализации растений, экспрессирующих белки, инсектицидные в отношении насекомых из отряда Lepidoptera и/или Coleoptera, включающие стадию обращения, предоставления или ссылки на данные анализов связывания белков насекомых, демонстрирующие, что полипептид PIP-72 не конкурирует с сайтами связывания белков Cry у таких насекомых. В дополнение, представлены способы получения разрешения контролирующих органов для выращивания или коммерческой реализации растений, экспрессирующих белки, инсектицидные в отношении насекомых из отряда Lepidoptera и/или Coleoptera, включающие стадию обращения, предоставления или ссылки на данные анализов связывания белков насекомых, показывающих, что белок SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, любой из SEQ ID NO: 528 - SEQ ID NO: 768, любой из SEQ ID NO: 825 - SEQ ID NO: 844, SEQ ID NO: 771, SEQ ID NO: 772 или SEQ ID NO: 852 или их варианты не конкурируют с сайтами связывания для белков Cry у таких насекомых.
Способы повышения урожайности растения.
Представлены способы повышения урожайности. Способы включают получение растения или растительной клетки, экспрессирующих полинуклеотид, кодирующий пестицидную полипептидную последовательность, раскрытую в данном документе, и выращивание растения или его семени в поле, зараженном вредителем, в отношении которого полипептид обладает пестицидной активностью. В некоторых вариантах осуществления полипептид обладает пестицидной активностью против вредителей из группы чешуекрых, жесткокрылых, двукрылых, полужесткокрылых или нематод, и поле заражено вредителями из группы чешуекрылых, полужесткокрылых, жесткокрылых, двукрылых или нематод.
Как определено в данном документе, урожайность растения относится к качеству и/или количеству биомассы, вырабатываемой растением. Используемая в данном документе биомасса относится к любому измеренному растительному продукту. Увеличением выработки биомассы является любое улучшение урожайности измеренного растительного продукта. Повышение урожайности растения имеет несколько коммерческих применений. Например, увеличение биомассы листьев растения может приводить к увеличению урожайности листовых овощей для потребления человеком или животными. Кроме того, увеличение биомассы листьев можно применять для увеличения производства фармацевтических или промышленных продуктов растительного происхождения. Повышение урожайности может включать любое статистически значимое увеличение, в том числе, без ограничения, по меньшей мере 1% повышение, по меньшей мере 3% повышение, по меньшей мере 5% повышение, по меньшей мере 10% повышение, по меньшей мере 20% повышение, по меньшей мере 30% повышение, по меньшей мере 50% повышение, по меньшей мере 70% повышение, по меньшей мере 100% или большее повышение урожайности по сравнению с растением, не экспрессирующим пестицидную последовательность.
В конкретных способах урожайность растения повышается в результате улучшенной устойчивости к вредителю растения, экспрессирующего полипептид PIP-72, раскрытый в данном документе. Экспрессия полипептида PIP-72 приводит к сниженной способности вредителя к заражению растения или пита
- 116 031651 нию на растении, таким образом, улучшая урожайность растения.
Способы переработки.
Дополнительно представлены способы переработки растения, части растения или семени с получением пищевого или кормового продукта из растения, части растения или семени, содержащих полипептид PIP-72. Растения, части растения или семена, представленные в данном документе, можно перерабатывать с получением масла, белковых продуктов и/или побочных продуктов, которые являются производными, полученными путем переработки, которые имеют коммерческое значение. Неограничивающие примеры включают трансгенные семена, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид PIP-72, который можно перерабатывать с получением соевого масла, соевых продуктов и/или соевых побочных продуктов.
Переработка относится к любым физическим и химическим способам, применяемым для получения какого-либо соевого продукта, и они включают, без ограничения, кондиционирование нагреванием, вальцевание и измельчение, экструзию, экстракцию растворителем или вымачивание в воде и экстракцию цельных или дробленых семян.
Следующие примеры представлены для иллюстрирования, а не для ограничения.
Экспериментальная часть
Пример 1. Идентификация инсектицидного белка, активного против западного кукурузного жука (WCRW) из штамма SS143D5.
Белок PIP-72Aa, активный против WCRW (Diabrotica virgifera virgifera), идентифицировали при помощи очистки белка, жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (LC-MS/MS) и ПЦР-клонирования из штамма SS143D5 Pseudomonas chlororaphis следующим образом.
Инсектицидную активность против WCRW (Diabrotica virgifera virgifera) наблюдали из прозрачного лизата клеток SS143D5, выращенных в триптиказо-соевой среде (триптон 17 г/л, продукт ферментативного расщепления соевой муки 3 г/л, декстроза 2,5 г/л, хлорид натрия 5 г/л, K2HPO4 2,5 г/л), и культивировали в течение ночи при 26°C со встряхиванием при 250 об./мин. Данная инсектицидная активность характеризовалась чувствительностью к нагреванию и протеиназе, указывая на белковую природу. Для экстракции белка клетки размораживали и повторно суспендировали в 50 мМ натрий-ацетатного буфера, pH 5 (буфер A), содержащего смесь V ингибиторов протеаз от CalBiochem. Исходный очищенный лизат получали путем пропускания клеток через гомогенизатор при 30000 фунт/кв. дюйм с последующим центрифугированием при 13800xg в течение 20 мин.
Биологические анализы с WCRW проводили с применением образцов клеточных лизатов объемом 10 мкли, смешанных с расплавленной легкоплавкой питательной средой для WCRW (Southland Products Inc., Лейк Виллидж, Арканзас) в 96-луночном формате. Новорожденных Diabrotica virgifera virgifera помещали в каждую лунку 96-луночного планшета. Анализ проводили в течение 4 дней при 25°C и затем проводили оценку смертности насекомых и остановку роста насекомых. Баллами отмечали мертвых, со значительной остановкой роста (незначительный рост или отсутствие роста, но живые), с остановкой роста (рост до второй личиночной стадии, но не эквивалентные контролям) или отсутствие активности.
Геномную ДНК из штамма SS143D5 экстрагировали при помощи набора для экстракции бактериальной геномной ДНК Sigma-Aldrich® Bacterial Genomic DNA Extraction Kit (№ по кат. NA2110-KT, Sigma-Aldrich, PO Box 14508, St. Louis, MO 63178) в соответствии с инструкциями производителя. Концентрацию ДНК определяли при помощи спектрофотометра NanoDrop™ (Thermo Scientific, 3411 Silverside Road, Bancroft Building, Suite 100, Уилмингтон, Делавер, 19810) и геномную ДНК разводили до 40 нг/мкл стерилизованной водой. 25 мкл смеси для ПЦР-реакции получали путем объединения 80 нг геномной ДНК, 2 мкл (5 мкМ) праймеров 16S рибосомальных ДНК TACCTTGTTACGACTT (SEQ ID NO: 285) и AGAGTTTGATCMTGGCTCAG (SEQ ID NO: 286), 1 мкл 10 мМ dNTP, 1х буфера Phusion HF и 1 единицы высокоточной ДНК-полимеразы Phusion® (New England Biolabs, № по кат. M0530L, 240 County Road, Ипсуич, Массачусетс, 01938-2723). ПЦР-реакцию проводили в термоциклере MJ Research PTC-200 (Bio-Rad Laboratories, Inc., 1000 Alfred Nobel Drive, Херкулиз, Калифорния, 94547, США) со следующей программой: 96°C 1 мин.; 30 циклов 96°C 15 с, 52°C 2 мин и 72°C 2 мин; 72°C 10 мин и удерживали при 4°C. ПЦР-продукты очищали при помощи набора для очистки ДНК QiaQuick® DNA purification Kit (№ по кат. 28104, QIAGEN Inc., 27220 Turnberry Lane, Валенсия, Калифорния, 91355). Очищенный ПЦР-образец подвергали ДНК-секвенированию и полученную последовательность 16S рибосомальной ДНК подвергали поиску BLAST относительно базы данных NCBI, что показало, что SS143D5 является штаммом Pseudomonas chlororaphis. Штамм SS143D5 Pseudomonas chlororaphis депонировали 7 февраля 2013 г. под № доступа NRRL B-50810 в коллекции культур службы сельскохозяйственных исследований (NRRL), 1815 North University Street, Пеория, Иллинойс 61604, (nrrl.ncaur.usda.gov, доступ к которому можно получить во всемирной сети Интернет с применением префикса www).
Выделенную геномную ДНК из штамма SS143D5 также получали в соответствии с протоколом конструирования библиотеки, разработанным Illumina™, и секвенировали с применением Illumina® Genome Analyzer® IIx (№ по кат. SY-301-1301, Illumina Inc., 9885Towne Center Drive, Сан-Диего, Кали
- 117 031651 форния, 92121). Собирали последовательности контигов нуклеиновых кислот и получали открытые рамки считывания.
Клеточную массу полученной в течение ночи культуры из SS143D5, выращенной в 2* YT бульоне при 26°C со встряхиванием при 250 об/мин, лизировали при ~20000 фунт/кв. дюйм после ресуспендирования в ацетатном буфере, pH 5. Исходный лизат очищали центрифугированием и загружали на S-HP колонку HiTrap™ (GE Healthcare, 800 Centennial Avenue, P.O. Box 1327, Пискатауэй, Нью-Джерси 08855). Связанные белки элюировали линейным градиентом хлорида натрия и разделяли. Фракции, содержащие белок, представляющий интерес, объединяли, и буфер заменяли для загрузки на колонку MonoQ™ (GE Healthcare), анализировали при pH 8. PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) элюировали линейным градиентом хлорида натрия и после подтверждения активности дополнительно очищали при помощи хроматографии с гидрофобным взаимодействием. Для этого к белку добавляли 0,8 М сульфата аммония, загружали на бутил-HP колонку HiTrap™ (GE Healthcare) и активный белок извлекали в несвязанной фракции. В анализе с помощью SDS-PAGE наблюдали одну полоску после окрашивания красителем Coomassie™ Blue. Полоску с белком вырезали, расщепляли трипсином и анализировали при помощи нано-жидкостной хроматографии/тандемной масс-спектрометрии нано-LC/ESI-MS/MS) на масс-спектрометре Thermo Q Exactive™ Orbitrap™ (Thermo Fisher Scientific®, 81 Wyman Street, Уолтем, Массачусетс 02454), сопряженного с системой Eksigent 1-D Plus nano-lc (AB Sciex™, 500 Old Connecticut Path, Фрамингэм, Массачусетс 01701, США). Десять спектров ионов-продуктов собирали в зависимом от информации режиме обнаружения после MS1-обзорного сканирования.
Идентификацию белков выполняли с помощью поисков в базах данных с использованием Mascot® (Matrix Science, 10 Perrins Lane, Лондон NW3 1QY, Великобритания). С помощью поиска относительно лабораторной базы данных Bacteria-Plus, которая объединяет все последовательности белков бактерий и последовательности кератина, полученных из базы данных неизбыточных последовательностей NCBI (nr), а также лабораторные последовательности белков, идентифицировали новый ген, кодируемый штаммом SS143D5, который был обозначен как PIP-72Aa (SEQ ID NO: 1).
Пример 2. Идентификация гомологов PIP-72Aa.
Генную идентичность можно определить посредством проведения поисков BLAST (средство поиска основного локального выравнивания 20; Altschul, et al., (1993), J. Mol. Biol. 215:403-410; см. также ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/, доступ к которому можно получить с применением префикса www) с параметрами по умолчанию относительно сходства с последовательностями, которые содержатся в общедоступной базе данных BLAST nr (содержащей все неизбыточные CDS трансляции из GenBank, последовательности, полученные на основании 3-мерной структуры базы данных белков Brookhaven, последней главной версии базы данных белковых последовательностей 25 SWISS-PROT, баз данных EMBL и DDBJ). В дополнение к общедоступным базам данных, проводили поиск по внутренним базам данных DuPont Pioneer. Полинуклеотидные последовательности SEQ ID NO: 1.
В результате поиска идентифицировали несколько гомологов PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) с различными процентными идентичностями по отношению к PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2). Гомологи PIP-72Aa с инсектицидной активностью обозначены в данном документе следующим образом: PIP-72Ba (SEQ ID NO: 4); PIP-72Ca (SEQ ID NO: 6); PIP-72Cb (SEQ ID NO: 8); PIP-72Da (SEQ ID NO: 10); PIP-72Db (SEQ ID NO: 12); PIP-72Dc (SEQ ID NO: 14); PIP-72Fa (SEQ ID NO: 18); PIP-72Ff (SEQ ID NO: 28) и PIP-72Gb (SEQ ID NO: 32) идентифицировали из внутренней базы данных бактериальных геномов DuPont Pioneer из: Pseudomonas rhodesiae; Pseudomonas chlororaphis; Pseudomonas mandelii; Pseudomonas congelans; Pseudomonas mandelii; Pseudomonas ficuserectae; Pseudomonas mosselii; Pseudomonas chlororaphis и Pseudomonas chlororaphis соответственно. PIP-72Ba (SEQ ID NO: 4); PIP-72Ca (SEQ ID NO: 6); PIP-72Cb (SEQ ID NO: 8); PIP-72Da (SEQ ID NO: 10); PIP-72Db (SEQ ID NO: 12); PIP-72Dc (SEQ ID NO: 14); PIP-72Fa (SEQ ID NO: 18); PIP-72Ff (SEQ ID NO: 28) и PIP-72Gb (SEQ ID NO: 32) кодируются SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 13; SEQ ID NO: 17; SEQ ID NO: 27 и SEQ ID NO: 31 соответственно. Неактивные гомологи с низкой идентичностью, обозначены в данном документе как PIP-72Ea (SEQ ID NO: 16) и PIP-72Ge (SEQ ID NO: 38) идентифицировали из внутренней базы данных бактериальных геномов DuPont Pioneer из Pseudomonas congelans и Pseudomonas chlororaphis соответственно. PIP-72Ea и PIP-72Ge кодируются SEQ ID NO: 15 и SEQ ID NO: 37 соответственно.
Наиболее отдаленные гомологи с инсектицидной активностью обозначены в данном документе следующим образом: GBP A3175 (SEQ ID NO: 20-гипотетический белок GBP346 A3175, № доступа YP 002897852); JG43047 (SEQ ID NO: 24 - гипотетический белок, № доступа JGI - 2165143047) и PFL 6283 (SEQ ID NO: 30 - гипотетический белок, № доступа YP 004842361.1) идентифицировали из внешних общедоступных баз данных из: Burkholderia pseudomallei MSHR346; Pseudomonas sp. и Pseudomonas protegens Pf-5 соответственно. GBP A3175 (SEQ ID NO: 20); JG43047 (SEQ ID NO: 24) и PFL 6283 (SEQ ID NO: 30) кодируются SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 23 и SEQ ID NO: 29, соответственно.
Более отдаленные гомологи, которые не экспрессировались или были неактивными в исследуемых концентрациях, обозначали как SRBS 294080 (SEQ ID NO: 22 - гипотетический белок из ризосферы про
- 118 031651 са прутьевидного MC, № доступа JGI 2021745495); SwiRh 4910 (SEQ ID NO: 26 - гипотетический белок из ризосферы проса прутьевидного, № доступа JGI - SwiRh 1014910); XBJ1 1078 (SEQ ID NO: 34 гипотетический белок XBJ1 1078 из Xenorhabdus bovienii SS-2004, № доступа YP 003467009) и plu2373 (SEQ ID NO: 36 - гипотетический белок plu2373 из Photorhabdus luminescens subsp. laumondii TTO1, № доступа NP 929618) идентифицировали из внешних общедоступных баз данных; Xenorhabdus кодируются SEQ ID NO: 21; SEQ ID NO: 25; SEQ ID NO: 33 и SEQ ID NO: 35, соответственно.
Дополнительные гомологи PIP-72 идентифицировали при поиске с использованием BLAST из общедоступных баз данных и внутренних баз данных DuPont Pioneer, в основном, как описано выше. В табл. 5 приведено обозначение полипептида PIP-72, процентная идентичность относительно IPD072Aa (SEQ ID NO: 2), источник бактериального штамма и виды бактерий. В табл. 6 приведены обозначение полипептида PIP-72, идентификатор полипептидных последовательностей и идентификатор полинуклеотидных последовательностей.
Таблица 5
Гомолог PIP- 72 Идентичность относительно PIP-72Aa SEQ ID NO: 2 Источник Виды
PIP-72A6 94,2% внутренний активный штамм - SSP587D6-1 Pseudomonas chlororaphis
PIP-72Bb 87,4% внутренняя коллекция - SSP555A5b; JH54973-1 Pseudomonas brassicacearum
WP 030131237 77,9% гипотетический белок WP 030131237 NCBI Pseudomonas sp . QTF5
WP 016417435 50, 6% гипотетический белок WP 016417435.1 NCBI Halomonas anticariensis
BDL 2850 41, 1% гипотетический белок BDL 2850 (АНЕ26696) NCBI Burkholderla pseudomallei
PIP-72Fh 41, 9% внутренний активный штамм SSP533D8d; SS143C5; SSP436A3a; SSP535F2a; SSP429C9a Pseudomonas entomophila L48
PIP-72Fi 41, 9% внутренний активный штамм SSP533Gla Pseudomonas entomophila
PIP-72Fj 39, 5% внутренний активный штамм JH44835-2; JH59153-1 Pseudomonas chlororaphis
PIP-72Fk 41, 9% внутренний активный штамм JH52442-1; JH52448-2 Pseudomonas chlororaphis
PIP-72F1 44,9% внутренний активный штамм JH59178-1; JH59094-1 Burkholderia multivorans
BBK 2354 43, 0% гипотетический белок WP 023360071.1 ВВК 2354 NCBI Burkholderia pseudomallei
D512 15386 38, 6% гипотетический белок D512 15386 ZP 23811189.1 NCBI Burkholderia pseudomallei MSHR1043
PIP-72Gg 33% внутренняя коллекция SSP459B9-3; SSP541A113; SSP560B2a; SSP560B12C Pseudomonas chlororaphis
PIP-72Gh 38, 4% внутренняя коллекция - SSP469F10 Pseudomonas chlororaphis
PIP-72Gi 39, 5% внутренняя коллекция SSP471Dla; SSP471Dlc; SSP4G8; SSP514E4-3; SSP514E2-1; Pseudomonas mosselii
BTI 1023 37, 5% гипотетический белок BTI 1023, YP 007917531; EMBL-N0ALH1 BURTH Burkholderia tha Hardens is
PIP-72Gk 37, 5% внутренняя коллекция - JH34931-1 Pseudomonas protegens
PIP-72G1 39, 5% внутренняя коллекция SSP490Blla; SSP514E2-1; SSP341E4-3 Pseudomonas piecoglossicida
PIP-72Gm 37, 8% внутренняя коллекция - JH23445-2
PIP-72Gn 38, 4% внутренняя коллекция SSP579D5-2, SSP581D7-1; SSP579D8-1 Pseudomonas chlororaphis
WP 028536646 39, 5% гипотетический белок WP 028536646.1 NCBI Paludibacterium yongneupense
BTRA 1468 38, 9% гипотетический белок AIC88674.1 (BTRA 1468)NCBI Burkholderia thailandensis
- 119 031651
Таблица 6
Гомолог PIP-72 Полипептид Полинуклеотид
Р1Р-72АЬ SEQ ID NO: 927 SEQ ID NO: 949
Р1Р-72ВЬ SEQ ID NO: 928 SEQ ID NO: 950
WP 030131237 SEQ ID NO: 929 SEQ ID NO: 951
WP 016417435 SEQ ID NO: 930 SEQ ID NO: 952
BDL 2850 SEQ ID NO: 931 SEQ ID NO: 953
PIP-72Fh SEQ ID NO: 932 SEQ ID NO: 954
PIP-72F1 SEQ ID NO: 933 SEQ ID NO: 955
PIP-72Fj SEQ ID NO: 934 SEQ ID NO: 956
PIP-72Fk SEQ ID NO: 935 SEQ ID NO: 957
PIP-72F1 SEQ ID NO: 936 SEQ ID NO: 958
BBK 2354 SEQ ID NO: 937 SEQ ID NO: 959
D512 15386 SEQ ID NO: 938 SEQ ID NO: 960
PIP-72Gg SEQ ID NO: 939 SEQ ID NO: 961
PIP-72Gh SEQ ID NO: 940 SEQ ID NO: 962
PIP-72Gi SEQ ID NO: 941 SEQ ID NO: 963
BTI 1023 SEQ ID NO: 942 SEQ ID NO: 964
PIP-72Gk SEQ ID NO: 943 SEQ ID NO: 965
PIP-72G1 SEQ ID NO: 944 SEQ ID NO: 966
PIP-72Gm SEQ ID NO: 945 SEQ ID NO: 967
PIP-72Gn SEQ ID NO: 946 SEQ ID NO: 968
WP 028536646 SEQ ID NO: 947 SEQ ID NO: 969
BTRA 1468 SEQ ID NO: 948 SEQ ID NO: 970
На фиг. 1 представлено выравнивание аминокислотной последовательности PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2), PIP-72Ba (SEQ ID NO: 4); PIP-72Ca (SEQ ID NO: 6); PIP-72Cb (SEQ ID NO: 8); PIP-72Da (SEQ ID NO: 10); PIP-72Db (SEQ ID NO: 12); PIP-72Dc (SEQ ID NO: 14); PIP-72Ea (SEQ ID NO: 16), PIP-72Fa (SEQ ID NO: 18); GBP A3175 (SEQ ID NO: 20), SRBS 294080 (SEQ ID NO: 22); JG43047 (SEQ ID NO: 24); SwiRh 910 (SEQ ID NO: 26); PIP-72Ff (SEQ ID NO: 28), PFL 6283 (SEQ ID NO: 30); PIP-72Gb (SEQ ID NO: 32); XBJ1 1078 (SEQ ID NO: 34); plu2373 (SEQ ID NO: 36) и PIP-72Ge (SEQ ID NO: 38). Отличие последовательности выделено. Аминокислоты 37-51 (мотив 1) относительно PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) подчеркнуты.
На фиг. 2 представлено выравнивание аминокислотных последовательностей PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2), PIP-72Ab (SEQ ID NO: 927); PIP-72Ba (SEQ ID NO: 4); PIP-72Bb (SEQ ID NO: 928); PIP-72Ca (SEQ ID NO: 6); PIP-72Cb (SEQ ID NO: 8); WP 030131237 (SEQ ID NO: 929); PIP-72Da (SEQ ID NO: 10); PIP-72Db (SEQ ID NO: 12); PIP-72Dc (SEQ ID NO: 14); PIP-72Fa (SEQ ID NO: 18) и GBP A3175 (SEQ ID NO: 20). Отличие аминокислот между PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) и другими гомологами указано штриховкой.
На фиг. 3 представлено выравнивание аминокислотной последовательности PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) PIP-72Ba (SEQ ID NO: 4); PIP-72Ca (SEQ ID NO: 6); PIP-72Cb (SEQ ID NO: 8); PIP-72Da (SEQ ID NO: 10); PIP-72Db (SEQ ID NO: 12); и PIP-72Dc (SEQ ID NO: 14). Отличие аминокислот между PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) и другими гомологами указано штриховкой.
На фиг. 4 представлено выравнивание аминокислотной последовательности из WP 030131237 (SEQ ID NO: 929) PIP-72Ca (SEQ ID NO: 6); PIP-72Cb (SEQ ID NO: 8); PIP-72Da (SEQ ID NO: 10); PIP-72Db (SEQ ID NO: 12); и PIP-72Dc (SEQ ID NO: 14). Отличие аминокислот между PIP-72Da (SEQ ID NO: 10) и другими гомологами указано штриховкой.
На фиг. 5 представлено выравнивание аминокислотных последовательностей PIP-72Fh (SEQ ID NO: 932) PIP-72Gi (SEQ ID NO: 941); PIP-72Fi (SEQ ID NO: 933); PIP-72Gl (SEQ ID NO: 944); PIP-72Fa (SEQ ID NO: 14). Отличие аминокислот между PIP-72Ca (SEQ ID NO: 2) и другими гомологами указано штриховкой.
В табл. 7 продемонстрирована идентичность последовательностей между гомологами PIP-72.
- 120 031651
Таблица 7
GBP A3175 SEQ ID NO: 20 PIP-72Ab SEQ ID NO: 927 PIP-72Bb SEQ ID NO: 928 WP 030131237 SEQ ID NO: 929 WP 016417435 SEQ ID NO: 930 BDL 2850 SEQ ID NO: 931 PIP-72Fh SEQ ID NO: 932 PIP-72Fi SEQ ID NO: 933 PIP-72Fj SEQ ID NO: 934 PIP-72Fk SEQ ID NO: 935
PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) 42,2 94,2 88,4 77,9 51,2 41,1 39,6 39,6 35,4 37,5
GBP A3175 - 43,3 46, 7 46, 7 47,8 97,8 34,4 38,7 38,1 41,2
PIP-72Ab - - 87,2 75,6 48,8 42,2 39,6 39,6 33,3 35,4
PIP-72Bb - - - 80,2 48,8 45,6 40,7 40,7 31,2 33,3
WP 030131237 - - - - 52,3 45,6 37,4 37,4 34,4 35,4
WP 016417435 - - - - - 46, 7 33,0 33,0 35,4 37,4
BDL 2850 - - - - - - 33,3 37,6 38,1 41,2
PIP-72Fh - - - - - - - 93,4 52,1 55,2
PIP-72Fi - - - - - - - - 53,1 56,2
PIP-72Fj - - - - - - - - - 80,2
PIP-72Fk - - - - - - - - - -
PIP-72F1 - - - - - - - - - -
BBK 2354 - - - - - - - - - -
D512 15386 - - - - - - - - - -
PIP-72Gg - - - - - - - - - -
PIP-72Gh - - - - - - - - - -
PIP-72Gi - - - - - - - - - -
BTI 1023 - - - - - - - - - -
PIP-72Gk - - - - - - - - - -
PIP-72G1 - - - - - - - - - -
PIP-72Gm - - - - - - - - - -
PIP-72Gn - - - - - - - - - -
WP 028536646 - - - - - - - - - -
BTRA 1468 - - - - - - - - - -
JG43047 - - - - - - - - - -
PFL 6283 - - - - - - - - - -
PIP-72Ba - - - - - - - - - -
PIP-72Ca - - - - - - - - - -
PIP-72Cb - - - - - - - - - -
PIP-72Da - - - - - - - - - -
PIP-72Db - - - - - - - - - -
PIP-72DC - - - - - - - - - -
PIP-72Ea - - - - - - - - - -
PIP-72Fa - - - - - - - - - -
PIP-72Ff - - - - - - - - - -
PIP-72Gb - - - - - - - - - -
PIP-72Ge - - - - - - - - - -
Plu2373 - - - - - - - - - -
SRBS 294080 - - - - - - - - - -
SwiRh 4910 - - - - - - - - - -
XBJ1 1078 - - - - - - - - - -
- 121 031651
PIP-72F1 SEQ ID NO: 936 BBK_2354 SEQ ID NO: 937 D512 15386SEQ ID NO: 938 PIP-72Gg SEQ ID NO: 939 PIP-72Gh SEQ ID NO: 940 PIP-72Gi SEQ ID NO: 941 BTI 1023 SEQ ID NO: 942 PIP-72Gk SEQ ID NO: 943 PIP-72G1 SEQ ID NO: 944 PIP-72Gm SEQ ID NO: 945
PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) 44,9 41,1 37, 0 33, 7 34, 4 37, 4 30, 0 37, 4 39, 6 37, 8
GBP A3175 42, 9 98, 9 89,1 34, 7 38, 1 37, 6 77,8 43,2 37, 6 39, 1
PIP-72Ab 46, 1 42,2 38, 0 31, 6 32, 3 37, 4 30, 0 38, 5 39, 6 35, 6
PIP-72Bb 43,8 45,6 41,3 33, 7 30, 2 38, 5 32,2 39, 6 40,7 36, 7
WP 030131237 47,2 45,6 42, 4 31, 6 33, 3 35, 2 34, 4 37, 4 37, 4 35, 6
WP 016417435 36, 0 46, 7 42, 4 35, 8 34, 3 33, 0 35, 6 34, 1 33, 0 35, 5
BDL 2850 41,8 98, 9 91, 3 33, 7 38, 1 36, 6 80,0 42, 1 36, 6 38, 0
PIP-72Fh 28,3 33, 3 32, 6 43,4 52, 1 94, 5 29,0 53, 3 94, 5 56, 0
PIP-72Fi 27,2 37, 6 36, 8 41,7 53, 1 94, 5 32, 3 53, 3 98, 9 56, 0
PIP-72Fj 34, 0 38, 1 38, 4 48,5 92, 7 55, 2 29,9 48,5 52, 1 59, 4
PIP-72Fk 32, 0 41,2 39, 4 42, 6 80,2 58, 3 33, 0 50, 5 55, 2 53, 1
PIP-72F1 - 41,8 37, 6 35, 4 36, 1 29,3 31, 9 28,3 27,2 35, 9
BBK 2354 - - 90, 2 34, 7 38, 1 36, 6 78,9 43,2 36, 6 39, 1
D512 15386 - - - 33, 7 38, 4 35, 8 73,9 41,2 35, 8 36, 2
PIP-72Gg - - - - 50, 5 43,8 28,1 46, 9 41,7 67, 4
PIP-72Gh - - - - - 55, 2 29,9 48,5 52, 1 59, 4
PIP-72Gi - - - - - - 31, 2 53, 3 95, 6 58,2
BTI 1023 - - - - - - - 34, 7 31, 2 30, 4
PIP-72Gk - - - - - - - - 52,2 51, 6
PIP-72G1 - - - - - - - - - 56, 0
PIP-72Gm - - - - - - - - - -
PIP-72Gn - - - - - - - - - -
WP 028536646 - - - - - - - - - -
BTRA 1468 - - - - - - - - - -
JG43047 - - - - - - - - - -
PFL 6283 - - - - - - - - - -
PIP-72Ba - - - - - - - - - -
PIP-72Ca - - - - - - - - - -
PIP-72Cb - - - - - - - - - -
PIP-72Da - - - - - - - - - -
PIP-72Db - - - - - - - - - -
PIP-72DC - - - - - - - - - -
PIP-72Ea - - - - - - - - - -
PIP-72Fa - - - - - - - - - -
PIP-72Ff - - - - - - - - - -
PIP-72Gb - - - - - - - - - -
PIP-72Ge - - - - - - - - - -
Plu2373 - - - - - - - - - -
SRBS 294080 - - - - - - - - - -
SwiRh 4910 - - - - - - - - - -
XBJ1 1078 - - - - - - - - - -
- 122 031651
PIP-72Gn SEQ ID NO: 946 WP 028536646 SEQ ID NO: 947 BTRA 1468 SEQ ID N0:948 JG43047 SEQ ID NO: 24 PFL 6283 SEQ ID NO: 30 PIP-72Ba SEQ ID NO: 4 PIP-72Ca SEQ ID NO: 6 PIP-72Cb SEQ ID NO: 8 PIP-72Da SEQ ID NO: 10 PIP-72Db SEQ ID NO: 12
PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) 33,7 40,0 31,1 35,7 34,8 83,7 72,1 69,8 68,6 69,8
GBP A3175 37,4 34,4 77,8 37,4 35,1 45,6 44,4 43,3 45,6 44,4
PIP-72Ab 31,6 35,2 32,2 33,7 32,6 82,6 69,8 67,4 66, 3 67,4
PIP-72Bb 29,6 36, 7 33,3 31,6 35,9 91,9 68,6 70,9 67,4 68,6
WP 030131237 32,7 36, 4 35,6 34,7 34,8 77,9 68,6 68,6 67,4 68,6
WP 016417435 33,7 35,6 36, 7 34,7 35,9 51,7 47,7 46, 5 47,7 46, 5
BDL 2850 37,4 34,4 80,0 37,4 34,0 44,4 43,3 42,2 44,4 43,3
PIP-72Fh 52,0 24,2 30,1 52,0 47,3 40,7 35,2 37,4 36, 3 37,4
PIP-72Fi 54,1 24,2 33,3 53,1 44,1 40,7 36, 3 38,5 37,4 38,5
PIP-72Fj 90,8 25,0 30,9 96,9 48,0 33,3 35,4 34,4 36, 5 35,4
PIP-72Fk 77,6 21,9 35,4 79,6 43,9 35,4 34,4 33,3 35,4 34,4
PIP-72F1 34,3 30,9 34,1 32,3 29,0 44,9 51,7 49,4 48,3 48,3
BBK 2354 37,4 33,3 78,9 37,4 35,1 44,4 43,3 42,2 44,4 43,3
D512 15386 37,6 29,3 73,9 37,6 35,1 40,2 39,1 38,0 40,2 39,1
PIP-72Gg 48,5 21,2 28,4 48,5 69,5 35,8 31,6 32,6 32,3 31,2
PIP-72Gh 91,8 24,0 30,9 89,8 48,0 31,2 33,3 32,3 34,4 33,3
PIP-72Gi 55,1 23,1 32,3 55,1 46,2 38,5 34,1 36, 3 35,2 36, 3
BTI 1023 29,3 28,1 94,7 29,3 27,7 31,1 33,3 32,2 35,6 34,4
PIP-72Gk 48,5 30,2 34,0 50,0 47,3 40,7 39,6 41,8 40,7 39,6
PIP-72G1 53,1 24,2 32,3 52,0 45,2 40,7 36, 3 38,5 37,4 38,5
PIP-72Gm 56, 1 22,8 32,3 59,2 66, 3 37,8 37,4 38,5 39,6 38,5
PIP-72Gn - 22,4 30,3 90,8 46, 0 31,6 33,7 32,7 34,7 33,7
WP 028536646 - - 29,2 23,5 24,5 36, 3 38,5 38,5 36, 0 37,2
BTRA 1468 - - - 30,3 28,7 32,2 34,4 33,3 35,6 34,4
JG43047 - - - - 48,0 33,7 33,7 32,7 34,7 33,7
PFL 6283 - - - - - 35,9 33,7 34,8 34,8 33,7
PIP-72Ba - - - - - - 72,1 74,4 69,8 70,9
PIP-72Ca - - - - - - - 97,7 93,0 93,0
PIP-72Cb - - - - - - - - 93,0 93,0
PIP-72Da - - - - - - - - - 97,7
PIP-72Db - - - - - - - - - -
PIP-72DC - - - - - - - - - -
PIP-72Ea - - - - - - - - - -
PIP-72Fa - - - - - - - - - -
PIP-72Ff - - - - - - - - - -
PIP-72Gb - - - - - - - - - -
PIP-72Ge - - - - - - - - - -
Plu2373 - - - - - - - - - -
SRBS 294080 - - - - - - - - - -
SwiRh 4910 - - - - - - - - - -
XBJ1 1078 - - - - - - - - - -
- 123 031651
PIP-72DC SEQ ID NO: 14 PIP-72Ea SEQ ID NO: 16 PIP-72Fa SEQ ID NO: 18 PIP-72Ff SEQ ID NO: 28 PIP-72Gb SEQ ID NO: 32 PIP-72Ge SEQ ID NO: 38 Plu2373 SEQ ID NO: 3 6 SRBS 294080 SEQ ID NO: 22 SwiRh 4910 SEQ ID NO: 26 XBJ1 1078 SEQ ID NO: 34
Р1Р-72Аа (SEQ ID NO: 2) 69,8 51,7 38,5 36, 7 34,4 33,7 38,9 41,1 38,9 36, 7
GBP А3175 45,6 46, 7 36, 6 40,4 40,6 37,4 41,8 39,1 39,1 43,3
PIP-72Ab 67,4 52,9 38,5 34,7 32,3 31,6 39,4 38,9 36, 7 35,6
PIP-72Bb 68,6 52,9 39,6 32,7 30,2 29,6 40,4 40,0 37,8 36, 7
WP 030131237 67,4 50,6 36, 3 34,7 33,3 32,7 42,6 38,9 36, 7 38,9
WP 016417435 47,7 43,7 31,9 36, 6 34,3 33,7 31,2 37,6 35,5 36, 7
BDL 2850 44,4 46, 7 35,5 40,4 40,6 37,4 43,9 38,0 38,0 45,6
PIP-72Fh 36, 3 35,2 95,6 54,1 53,1 52,0 24,0 56, 0 57,1 31,5
PIP-72Fi 37,4 35,2 97,8 55,1 54,2 53,1 25,3 56, 0 57,1 30,4
PIP-72Fj 36, 5 35,4 52,1 79,6 94,8 90,8 31,7 58,3 59,4 28,1
PIP-72Fk 35,4 35,4 55,2 96, 9 78,1 80,6 32,7 54,2 54,2 28,1
PIP-72F1 48,3 40,4 27,2 32,3 35,1 35,4 32,3 34,1 35,9 31,5
BBK 2354 44,4 46, 7 35,5 40,4 40,6 37,4 42,9 39,1 39,1 44,4
D512 15386 40,2 45,7 34,7 38,6 40,8 37,6 38,0 36,2 36,2 40,2
PIP-72Gg 32,3 34,4 41,7 42,7 49,5 49,5 27,9 63,2 67,4 28,4
PIP-72Gh 34,4 35,4 52,1 79,6 92,7 95,9 30,8 58,3 59,4 28,1
PIP-72G1 35,2 33,0 96, 7 57,1 56,2 55,1 24,0 58,2 59,3 29,3
BTI 1023 35,6 36, 7 31,2 32,3 32,3 29,3 36, 1 30,4 30,4 37,5
PIP-72Gk 40,7 33,7 52,2 52,0 49,5 50,0 33,3 50,5 51,6 31,9
PIP-72G1 37,4 35,2 98,9 54,1 53,1 52,0 24,0 56, 0 57,1 30,4
PIP-72Gm 39,6 37,4 56, 0 53,1 59,4 58,2 31,3 93,3 98,9 31,9
PIP-72Gn 34,7 34,7 53,1 79,6 92,9 94,9 30,2 55,1 56,1 27,6
WP 028536646 36, 0 30,1 24,2 21,4 24,0 23,5 34,7 23,3 22,8 37,1
BTRA 1468 35,6 37,8 32,3 34,7 30,9 30,3 37,1 32,3 32,3 38,6
JG43047 34,7 34,7 52,0 82,7 91,8 91,8 32,1 58,2 59,2 27,6
PFL 6283 34,8 35,9 45,2 44,0 48,0 47,0 22,9 63,0 67,4 29,0
PIP-72Ba 70,9 51,7 39,6 34,7 32,3 31,6 41,5 41,1 38,9 35,6
PIP-72Ca 91,9 46, 0 35,2 33,7 34,4 33,7 40,4 35,6 37,4 37,8
PIP-72Cb 91,9 44,8 37,4 32,7 33,3 32,7 40,4 36, 7 38,5 37,8
PIP-72Da 98,8 44,8 36, 3 34,7 35,4 34,7 41,5 37,8 39,6 34,4
PIP-72Db 97,7 46, 0 37,4 33,7 34,4 33,7 39,4 36, 7 38,5 35,6
PIP-72DC - 44,8 36, 3 34,7 35,4 34,7 41,5 37,8 39,6 34,4
PIP-72Ea - - 34,1 34,7 35,4 34,7 35,8 35,6 37,4 35,6
PIP-72Fa - - - 54,1 53,1 52,0 24,0 56, 0 57,1 30,4
PIP-72Ff - - - - 77,6 83,7 32,1 54,1 54,1 27,6
PIP-72Gb - - - - - 92,9 30,8 58,3 59,4 28,1
PIP-72Ge - - - - - - 30,2 57,1 58,2 27,6
Plu2373 - - - - - - - 31,6 31,3 41,2
SRBS 294080 - - - - - - - - 94,4 33,0
SwiRh 4910 - - - - - - - - - 31,9
XBJ1 1078 - - - - - - - - - -
Пример 3. Экспрессия PIP-72Aa и гомологов E. Coli.
Ген PIP-72Aa амплифицировали при помощи ПЦР с применением геномной ДНК, выделенной из штамма SS143D5: прямой праймер (SEQ ID NO: 39) и обратный праймер (SEQ ID NO: 40). Полученный ПЦР-продукт подтверждали ДНК-секвенированием и субклонировали в pCOLD™ 1 (Takara Bio Inc., Seta 3-4-1, Otsu, Сига, Япония, 520-2193) в рамку с N-концевой His-6-меткой, за которой следовал сайт расщепления для фактора Xa. Полинуклеотиды, кодирующие гомологи PIP-72Aa, идентифицированные из внутренних штаммов (PIP-72Ba, PIP-72Ca, PIP-72Cb, PIP-72Da, PIP-72Db, PIP-72Dc, PIP-72Db, PIP-72Ea, PIP-72Fa, JG43047, IDP072Ff, PFL 6283, PIP-72Gb, PIP-72Ge), клонировали, как описано выше, с применением препарата соответствующей им геномной ДНК в качестве матрицы для амплификации генов при помощи ПЦР и последовательностей праймеров, указанных в табл. 8.
Гомологи PIP-72Aa, которых идентифицировали из внешних баз данных (GBP A3175, SRBS 294080, SwiRh 4910, XBJ1 1078, Plu2373, WP 030131237 и WP 016417435), получали при помощи синтеза генов с сопоставимыми 5'- и 3'-концами для последующего клонирования в pCOLD™-1.
- 124 031651
Таблица 8
Ген прямой праймер обратный праймер
Р1Р-72Ва SEQ ID NO: 41 SEQ ID NO: 42
Р1Р-72Са SEQ ID NO: 43 SEQ ID NO: 44
Р1Р-72СЬ SEQ ID NO: 45 SEQ ID NO: 46
PIP-72Da SEQ ID NO: 47 SEQ ID NO: 48
PIP-72DC SEQ ID NO: 49 SEQ ID NO: 50
PIP-72Db SEQ ID NO: 51 SEQ ID NO: 52
PIP-72Ea SEQ ID NO: 53 SEQ ID NO: 54
PIP-72Fa SEQ ID NO: 55 SEQ ID NO: 56
JG43047 SEQ ID NO: 57 SEQ ID NO: 58
PIP-72Ff SEQ ID NO: 59 SEQ ID NO: 60
PFL 6283 SEQ ID NO: 61 SEQ ID NO: 62
PIP-72Gb SEQ ID NO: 63 SEQ ID NO: 64
PIP-72Ge SEQ ID NO: 65 SEQ ID NO: 66
PIP-72Ge SEQ ID NO: 67 SEQ ID NO: 68
PIP-72Ab SEQ ID NO: 971 SEQ ID NO: 972
PIP-72Bb SEQ ID NO: 973 SEQ ID NO: 974
PIP-72F1 SEQ ID NO: 975 SEQ ID NO: 976
PIP-72Gh SEQ ID NO: 977 SEQ ID NO: 978
PIP-72Gg SEQ ID NO: 979 SEQ ID NO: 980
Компетентные клетки Е. coli BL21-DE3 трансформировали плазмидной ДНК pCOLD™-1, содержащей соответствующую вставку гена PIP-72 для экспрессии рекомбинантного белка. Клетки Е. coli выращивали в течение ночи при 37°C с селекцией с применением карбенициллина и затем инокулировали в свежую среду 2xYT (1:25) и далее выращивали до оптической плотности приблизительно 0,8. На этой стадии клетки остужали в присутствии 1 мМ ITPG и далее выращивали при 16°C в течение 16 ч для индуцирования экспрессии белка. Экспрессированные E. coli белки очищали при помощи хроматографии с использованием иммоблизированных ионов металла с применением агарозы Ni-NTA (Qiagen, Германия) в соответствии с протоколами производителя.
Пример 4. Инсектицидная активность PIP-72Aa и гомологов.
Анализировали серию концентраций образца очищенного белка в отношении насекомых Coleoptera и в двух независимых экспериментах рассчитывали концентрации, вызывающие 50% смертность (LC50), или ингибирующее действие у 50% особей (IC50). Результаты в отношении WCRW для PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) показаны в табл. 9.
Таблица 9
ppm 95% доверительный интервал (ppm)
LC50 80 30-130
IC50 20 10-40
Для измерения инсектицидной активности других полипептидов PIP-72 в отношении WCRW (Diabrotica virgifera virgifera) проводили биологические анализы с применением 20 мкл образцов очищенного белка, наносимых поверхностно на 75 мкл искусственной питательной среды для WCRW (основываясь на Bio-Serv F9800B) в каждой из 96 лунок планшета для биологического анализа (BD Falcon 353910), после чего высушивали на воздухе. Различное количество новорожденных Diabrotica virgifera virgifera (3-9) помещали в каждую лунку 96-луночного планшета. Анализ проводили в течение 4 дней при 25°C без света и затем оценивали смертность и остановку роста. Инсектицидная активность в отношении WCRW для различных полипептидов PIP-72 показана в табл. 10.
PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) дополнительно исследовали в отношении южного кукурузного жука (Diabrotica undecimpunctata howardi) и бразильского кукурузного жука (Diabrotica speciosa), также против сосущего насекомого Lygus hesperus. PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) не обладал инсектицидным действием против этих вредителей в исследуемых концентрациях (вплоть до 875 ppm очищенного белка).
Несколько полипептидов PIP-72 также исследовали в отношении SCRW (Diabrotica undecimpunctata howardi). Биологические анализы проводили с использованием 10мкл образцов очищенного белка, смешанных с 50 мкл искусственной питательной среды для SCRW (основываясь на Bio-Serv F9800B) в каждой из 96 лунок планшета для биологического анализа (BD Falcon 353910). Различное количество новорожденных Diabrotica undecimpunctata howardi (3-5) помещали в каждую лунку 96-луночного планшета. Анализ проводили в течение 4 дней при 25°C без света и затем оценивали смертность и остановку роста.
- 125 031651
Таблица 10
Активность в отношении WCRW, эффект Наибольшая исследуемая концентрация, мкг/см2 (ppm) IC50, мкг/см2 IC50, ppm
PIP-72Aa SEQ ID NO: 2 активный, гибель 300 5-15 10-40
PIP-72Ab SEQ ID NO: 927 активный, гибель 1000 50
PIP-72Ba SEQ ID NO: 4 активный, гибель (1900) 10-40
PIP-72Bb SEQ ID NO: 928 активный, гибель 1000 50
PIP-72Ca SEQ ID NO: 6 активный, гибель 1500 10-30 70
PIP-72Cb SEQ ID NO: 8 активный, гибель 1000 10-30 84
PIP-72Da SEQ ID NO: 10 активный, гибель (1666) не исследовано в формате наложения 40-80
PIP-72Db SEQ ID NO: 12 активный, гибель 750 10-30 95
PIP-72DC SEQ ID NO: 14 активный, гибель 450 5-15 -100
PIP-72Ea SEQ ID NO: 16 Неактивный при исследуемой концентрации (2150)
PIP-72Fa SEQ ID NO: 18 активный, значительная остановка роста 1132 141
PIP-72Fi SEQ ID NO: 933 активный, значительная остановка роста 1000
PIP-72Gg SEQ ID NO: 939 активный, значительная остановка роста 1000 500
- 126 031651
PIP-72Gh SEQ ID NO: 940 активный f значительная остановка роста 1000
GBP A3175 SEQ ID NO: 20 активный r гибель 224 15-30
SRBS 294080 SEQ ID NO: 22 не экспрессируется — —
JG43047 SEQ ID NO: 24 слабоактивный г незначительная остановка роста 218 >218
SwiRh 4910 SEQ ID NO: 26 Неактивный при исследуемой концентрации 708 —
WP 030131237 SEQ ID NO: 929 активный г гибель 400
WP 016417435 SEQ ID NO: 930 неактивный г низкая экспрессия
PIP-72Ff SEQ ID NO: 28 слабоактивный г остановка роста 565 ~ 500
PFL 6283 SEQ ID NO: 30 слабоактивный г незначительная остановка роста 414 > 414
PIP-72Gb SEQ ID NO: 32 активный г значительная остановка роста 571 71
XBJ1 1078 SEQ ID NO: 34 неактивный 97 —
Plu2373 SEQ ID NO: 36 не экспрессируется — —
PIP-72Ge SEQ ID NO: 38 неактивный 457 —
Анализы с кормлением Lepidoptera проводили с применением искусственной питательной среды в системе с использованием 96-луночного планшета. Очищенный белок включали в специфичную для чешуекрылых искусственную питательную среду в соотношении 10 мкл очищенного лизата и 40 мкл смеси питательной среды. Две из пяти новорожденных личинок помещали в каждую лунку для кормления ad libitum в течение 5 дней. Результаты выражали как положительные реакции в отношении личинок, такие как остановка роста и/или смертность. Результаты выражали как отрицательные, если личинки были подобны отрицательному контролю, который питается рационом, в который вносили только вышеуказанный буфер.
PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2), PFL 6283 (SEQ ID NO: 30), PIP-72Da (SEQ ID NO: 10), PIP-72Fa (SEQ ID NO: 18) и PIP-72Gb (SEQ ID NO: 32) оценивали на огневке кукурузной (Ostrinia nubilalis), совке кукурузной (Helicoverpa zea), совке-ипсилон (Agrotis ipsilon), совке травяной (Spodoptera frugiperda) и соевой совке (Pseudoplusia includens). Активности против видов Lepidoptera не наблюдалось ни для каких исследуемых полипептидов PIP-72 при концентрации белка вплоть до 800 ppm.
Пример 5. Отсутствие перекрестной устойчивости PIP-72Aa у устойчивого к mCry3A штамма WCRW.
Штамм WCRW, устойчивый к mCry3A, получали путем отбора WCRW на генетически модифицированных mCry3A растениях маиса с T0-уровнем экспрессии mCry3A при >10000 ррт общего белка в корнях. Выполняли семь отборов в отношении личинок F3, F6, F7, F8, F10, F12, F14. Яйца F16 устойчивых к mCry3A насекомых характеризовались показателем устойчивости (RR) к mCry3A в >46-раз большим по сравнению с восприимчивой колонией, полученной в лаборатории, и их применяли для исследования перекрестной устойчивости к PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2). Биологические анализы с включением стандартизированной питательной среды для WCRW использовали для оценки эффектов PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) на личинок WCRW. Новорожденную личинку WCRW помещали на чашки, содержащие питательную среду для биологического анализа и инсектицидный белок в 4 повторностях для каждой концентрации для обработки в течение 3 дней после начала каждого биологического анализа. Оценивали смертность и значительную остановку роста насекомых и применяли для расчета ингибиторующих концентраций (IC50 и LC50), исходя из пробит-анализа. Показатель устойчивости (RR) рассчитывали следующим образом: RR=(LC50/IC50 устойчивого WCRW)/(LC50/IC50 восприимчивого WCRW). Как показано в табл. 11, устойчивые к Cry3A насекомые WCRW были чувствительны к PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2).
- 127 031651
Таблица 11
Колония WCRW LC/IC PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2), ppm 95%CL показатель устойчивости
Чувствительный к СгуЗА LC50 168, 9 97,81-429,5 1
IC50 15,38 11,64-19,68 1
Устойчивый к СгуЗА LC50 212, 3 102,9-1071 1,3
IC50 25,97 17,71-38,35 1,7
Пример 6. Стабильная трансформация маиса, опосредованная Agrobacterium.
В отношении полипептидов PIP-72, полученных вследствие трансформации маиса, опосредованной Agrobacterium, использовали способ Zhao (патент США № 5981840 и международная патентная публикация WO 1998/32326, содержание которых включено в данный документ посредством ссылки). Вкратце, незрелые зародыши выделяли из маиса и зародыши приводили в контакт с суспензией Agrobacterium, где бактерии были способны переносить полинуклеотид, кодирующий PIP-72, по меньшей мере в одну клетку меньшей мере одного из незрелых зародышей (стадия 1: стадия инфицирования). На этой стадии незрелые зародыши погружали в суспензию Agrobacterium для инициации инокуляции. Зародыши в течение определенного времени культивировали совместно с Agrobacterium (стадия 2: стадия совместного культивирования). Незрелые зародыши культивировали на твердой среде с антибиотиком, но без селективного средства, для исключения Agrobacterium и для обеспечения фазы покоя для инфицированных клеток. Затем инокулированные зародыши культивировали на среде, содержащей селективное средство, и выделяли растущий трансформированный каллюс (стадия 4: стадия селекции). Незрелые зародыши культивировали на твердой среде с селективным средством, что приводило к селективному росту трансформированных клеток. Затем каллюс регенерировали в растения (стадия 5: стадия регенерации) и каллюсы, выращенные на селективной среде, культивировали на твердой среде для регенерации растений.
Для выявления полипептида PIP-72 в ткани листьев 4 лиофилизированных листовых штампа/образца растирали в порошок и ресуспендировали в 100 мкл PBS, содержащем 0,1% TWEEN™ 20 (PBST), 1% бета-меркаптоэтанола, содержащего 1 таблетку/7 мл ингибитора протеиназы complete Mini (Roche 1183615301). Суспензию обрабатывали ультразвуком в течение 2 мин и затем центрифугировали при 4°C, 20000/g в течение 15 мин. К надосадочной жидкости добавляли аликвоту из 1/3 объема 3X NuPAGE® LDS буфера для образца (Invitrogen™ (CA, USA), 1% B-ME, содержащего 1 таблетку/7 мл ингибитора протеиназы complete Mini. Реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 10 мин и затем центрифугировали. Образец надосадочной жидкости загружали на гели 4-12% Bis-Tris Midi с подвижным буфером MES в соответствии с инструкциями производителя (Invitrogen™) и переносили на нитроцеллюлозную мембрану с применением устройства iBlot® (Invitrogen™). Нитроцеллюлозную мембрану инкубировали в PBST, содержащем 5% порошка обезжиренного молока, в течение 2 ч перед инкубацией в течение ночи с очищенным с помощью аффинной хроматографии антителом кролика к PIP-72Aa в PBST в течение ночи. Мембрану три раза промывали PBST и затем инкубировали в PBST в течение 15 мин, а затем дважды по 5 мин перед инкубацией в течение 2 ч в PBST с антителом козы к Ig кролика, конъюгированным с HRP, в течение 3 ч. Выявленные белки визуализировали с применением реагентов для вестерн-блоттинга ECL (GE Healthcare, № по кат. RPN2106) и пленки Kodak® Biomax® MR. Для выявления белка PIP-72Aa в корнях корни лиофилизировали и 2 мг порошка на образец ресуспендировали в LDS, добавляли 1% бета-меркаптоэтанола, содержащего 1 таблетку/7 мл ингибитора протеиназы Complete Mini. Реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 10 мин и затем центрифугировали при 4°C, 20000g в течение 15 мин. Образец супернатанта загружали на гели 4-12% Bis-Tris Midi с подвижным буфером MES в соответствии с инструкциями производителя (Invitrogen™) и переносили на нитроцеллюлозную мембрану с применением устройства iBIot® (Invitrogen™). Нитроцеллюлозную мембрану инкубировали в PBST, содержащем 5% порошка обезжиренного молока, в течение 2 ч перед инкубацией в течение ночи с очищенным с помощью аффинной хроматографии поликлональным антителом кролика к PIP-72Aa в PBST в течение ночи. Мембрану трижды промывали PBST и затем инкубировали в PBST в течение 15 мин, а затем дважды по 5 мин перед инкубацией в течение 2 ч в PBST с антителом козы к Ig кролика, конъюгированным с HRP, в течение 3 ч. Связанные с антителом инсектицидные белки выявляли с применением реагентов для вестерн-блоттинга ECL™ (GE Healthcare, № по кат. RPN2106) и пленки Kodak® Biomax® MR.
Трансгенные растения маиса, положительные в отношении экспрессии инсектицидных белков, тестировали на предмет пестицидной активности с применением стандартных биологических анализов, известных из уровня техники. Такие способы включают, например, биологические анализы с иссечением корня и биологические анализы целого растения. См., например, публикацию заявки на патент США № US 2003/0120054 и международную публикацию WO 2003/018810.
Пример 7. Конструкции векторов экспрессии для экспрессии PIP-72Aa в растениях.
Конструировали векторы экспрессии растений PHP61666, PHP61668, PHP61664 так, чтобы они включали кассету трансгена, содержащую нативный PIP-72Aa (SEQ ID NO: 1), оптимизированный вари
- 128 031651 ант 1 PIP-72Aa маиса (SEQ ID NO: 850) и оптимизированный вариант 2 PIP-72Aa маиса (SEQ ID NO: 851) соответственно, под контролем промотора вируса мозаики мирабилиса (MMV) [Dey N and Maiti IB, 1999, Plant Mol. Biol. 40(5):771-82] в комбинации с энхансерным элементом. Дополнительные векторы PHP64465, PHP64471 и PHP64468, экспрессирующие PIP-72Aa (оптимизированный вариант 1 маиса) при различных комбинациях промоторов, интронов и терминаторов, также исследовали в трансгенных трансформантах маиса. PHP64465 экспрессирует PIP-72Аа (вариант 1) под контролем промотора полиубиквитина маиса и связанного 5'UTR и интрона (Christensen A.H. and Quail R.H., 1996, Transgenic Res 5:213-218), объединенных с энхансером 35S (Kay et al., 1987, Science, 236(4806):1299-1302. PHP64471 и PHP64468 экспрессируют вариант 1 под контролем промотора вируса полосатости банана [BSV(AY)TR] (Diehn S., Lu A.L. and Simmons CR, 2012, патент США 8338662В2) или с интроном ZM-HPLV9 (Diehn S. et al., 2011, US2011039696), или с интроном ZM-ADH1 (Callis et al., 1987, Genes Develop, 1:1183-1200) соответственно. PHP69828 экспрессирует оптимизированный вариант 3 PIP-72Aa маиса (SEQ ID NO: 853) с теми же регуляторными элементами, как в PHP64471.
Эти конструкции применяли для получения трансгенных трансформантов маиса с тем, чтобы исследовать эффективность против кукурузного жука при условии экспрессии PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2).
На фиг. 8 показаны результаты эффективности T0 в условиях теплицы для трансформантов, полученных включением этих конструкций. Эффективность для трансформантов, полученных включением каждой из конструкций, наблюдали относительно трансформантов отрицательного контроля, которую оценивали по защите корня от западного кукурузного жука. Защиту корня оценивали, основываясь на количестве узлов пораженных корней (CRWNIS = показатель поражения узлов кукурузным жуком), с применением способа, разработанного Oleson, et al. (2005) [J. Econ Entomol. 98(1):1-8]. Показатель поражения корня оценивали от 0 до 3, при этом 0 указывает на отсутствие видимого поражения корня, 1 означает один узел корневого повреждения, 2 означает два узла корневого повреждения, и 3 означает максимальный показатель в три узла корневого повреждения. Средние показатели (например, 1,5) указывают на дополнительную долю узлов повреждения (например, один с половиной пораженный узел).
На фиг. 8 показано, что большая часть трансформантов, полученных включением исследуемых конструкций (каждая представляет отдельный трансформант, полученный включением конструкции), характеризовалась более хорошими результатами, чем отрицательный контроль с показателями поражения личинкой, повреждающей корни, составляющими <1,0. Несколько конструкций, такие как PHP64471 и PHP64468, характеризовались показателями поражения личинкой, повреждающей корни, которые составляли в среднем <0,2 среди всех исследуемых трансгенных трансформантов.
Пример 8. Варианты PIP-72Aa с несколькими аминокислотными заменами.
Для создания вариантов PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) с несколькими аминокислотными изменениями получали библиотеки вариантов при помощи шаффлинга синтетической ДНК (Ness et al., 2002, Nature Biotechnology, 20, 1251-5) PIP-72Aa (SEQ ID NO: 1) и GBP A3175 (SEQ ID NO: 19) или при помощи сайтнаправленного мутагенеза (методика QuikChange™ Lightning или методика QuikChange™ II, Agilent, Санта-Клара, Калифорния). На фиг. 5 представлено выравнивание аминокислотной последовательности PIP-72Aa (SEQ ID nO: 2) и GBP A3175 (SEQ ID NO: 20). Вкратце, реакции синтеза генов выполняли с применением олигонуклеотидов, представленных в табл. 12.
- 129 031651
Таблица 12
Название Последовательность
олигонуклеотид 10 SEQ ID NO: 69
олигонуклеотид 103 SEQ ID NO: 70
олигонуклеотид 104 SEQ ID NO: 71
олигонуклеотид 105 SEQ ID NO: 72
олигонуклеотид 106 SEQ ID NO: 73
олигонуклеотид 107 SEQ ID NO: 74
олигонуклеотид 108 SEQ ID NO: 75
олигонуклеотид 109 SEQ ID NO: 76
олигонуклеотид 110 SEQ ID NO: 77
олигонуклеотид 111 SEQ ID NO: 78
олигонуклеотид 112 SEQ ID NO: 79
олигонуклеотид 113 SEQ ID NO: 80
олигонуклеотид 114 SEQ ID NO: 81
олигонуклеотид 115 SEQ ID NO: 82
олигонуклеотид 116 SEQ ID NO: 83
олигонуклеотид 117 SEQ ID NO: 84
олигонуклеотид 118 SEQ ID NO: 85
олигонуклеотид 119 SEQ ID NO: 86
олигонуклеотид 120 SEQ ID NO: 87
олигонуклеотид 121 SEQ ID NO: 88
олигонуклеотид 122 SEQ ID NO: 89
олигонуклеотид 123 SEQ ID NO: 90
олигонуклеотид 124 SEQ ID NO: 91
олигонуклеотид 125 SEQ ID NO: 92
олигонуклеотид 126 SEQ ID NO: 93
олигонуклеотид 127 SEQ ID NO: 94
олигонуклеотид 128 SEQ ID NO: 95
олигонуклеотид 129 SEQ ID NO: 96
олигонуклеотид 130 SEQ ID NO: 97
олигонуклеотид 131 SEQ ID NO: 98
олигонуклеотид 132 SEQ ID NO: 99
олигонуклеотид 133 SEQ ID NO: 100
олигонуклеотид 134 SEQ ID NO: 101
олигонуклеотид 135 SEQ ID NO: 102
олигонуклеотид 136 SEQ ID NO: 103
олигонуклеотид 137 SEQ ID NO: 104
олигонуклеотид 138 SEQ ID NO: 105
Название Последовательность
олигонуклеотид 139 SEQ ID NO: 106
олигонуклеотид 140 SEQ ID NO: 107
олигонуклеотид 141 SEQ ID NO: 108
олигонуклеотид 142 SEQ ID NO: 109
олигонуклеотид 143 SEQ ID NO: 110
олигонуклеотид 144 SEQ ID NO: 111
олигонуклеотид 145 SEQ ID NO: 112
олигонуклеотид 146 SEQ ID NO: 113
олигонуклеотид 147 SEQ ID NO: 114
олигонуклеотид 148 SEQ ID NO: 115
олигонуклеотид 149 SEQ ID NO: 116
олигонуклеотид 150 SEQ ID NO: 117
олигонуклеотид 151 SEQ ID NO: 118
олигонуклеотид 152 SEQ ID NO: 119
олигонуклеотид 153 SEQ ID NO: 120
олигонуклеотид 154 SEQ ID NO: 121
олигонуклеотид 155 SEQ ID NO: 122
олигонуклеотид 156 SEQ ID NO: 123
олигонуклеотид 157 SEQ ID NO: 124
олигонуклеотид 158 SEQ ID NO: 125
олигонуклеотид 159 SEQ ID NO: 126
олигонуклеотид 160 SEQ ID NO: 127
олигонуклеотид 161 SEQ ID NO: 128
олигонуклеотид 162 SEQ ID NO: 129
олигонуклеотид 163 SEQ ID NO: 130
олигонуклеотид 164 SEQ ID NO: 131
олигонуклеотид 165 SEQ ID NO: 132
олигонуклеотид 166 SEQ ID NO: 133
олигонуклеотид 167 SEQ ID NO: 134
олигонуклеотид 168 SEQ ID NO: 135
олигонуклеотид 169 SEQ ID NO: 136
олигонуклеотид 170 SEQ ID NO: 137
олигонуклеотид 171 SEQ ID NO: 138
олигонуклеотид 172 SEQ ID NO: 139
олигонуклеотид 173 SEQ ID NO: 140
олигонуклеотид 174 SEQ ID NO: 141
олигонуклеотид 175 SEQ ID NO: 142
- 130 031651
Несколько синтетических генов получали с применением различных наборов праймеров, как указано в табл. 13. В каждой из реакций синтеза генов F46, F31 и F39 использовали наборы из 10 отдельных олигонуклеотидных праймеров. В реакциях синтеза генов deg7, deg15, deg20 использовали наборы олигонуклеотидных праймеров с вырожденностью последовательностей, при этом получали библиотеки последовательностей. Реакции синтеза генов F46, F31, F39, deg7, deg15 и deg20 объединяли и скринировали в виде одной библиотеки.
Таблица 13
Реакция Праймеры
F4 6 ю, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111
deg7 ю, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120
degl5 ю, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129
F31 ю, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138
ю, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147,
deg2 0 148, 149 , 150 , 151 , 152 , 153 , 154 , 155 , 156 , 157,
158, 159 , 160 , 161 , 162 , 163 , 164 , 165 , 166
F39 ю, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175
Фрагменты синтетических генов субклонировали в вектор экспрессии pCOLD™ 1, как описано в примере 3. Полученные плазмидные ДНК трансформировали в E. coli, и белок экспрессировался, как описано в примере 3. Биологические анализы проводили на западном кукурузном жуке, как описано в примере 4, с тем, чтобы определить, какие варианты генов сохраняли инсектицидную активность. ДНКсеквенирование проводили на активных вариантах генов. Нуклеотидная и аминокислотная последовательности полученных активных вариантов полипептида PIP-72 представлены в табл. 14. Выделяли пять активных вариантов из 59 уникальных вариантов, которые скринировали. В табл. 15 показаны аминокислотные замены полученных активных вариантов полипептида PIP-72 относительно PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2).
Таблица 14
% идентичность с PIP72Aa SEQ ID NO: 2 Клон Обозначение Полинуклеотид SEQ ID NO Полипептид SEQ ID NO
53% PIP-72Aa-Fb-01 SEQ ID NO: 287 SEQ ID NO: 528
48% PIP-72Aa-Fb-09 SEQ ID NO: 288 SEQ ID NO: 529
5 6% PIP-72Aa-Fb-27 SEQ ID NO: 289 SEQ ID NO: 530
57% PIP-72Aa-Fb-28 SEQ ID NO: 290 SEQ ID NO: 531
67% PIP-72Aa-Fb-33 SEQ ID NO: 291 SEQ ID NO: 532
- 131 031651
Таблица 15
Обозначение клона Полипептид Аминокислотные (SEQ ID NO: 2 э замены относительно Р1Р-72Аа
G002A, T004S, T006K, S009A, I013V, S022T,
S027K, F028P, G032A, N033P, К035А, Q036S,
E037D, T038S, S042N, S044L, L049M, S050Y,
PIP-72Aa-Fb-01 SEQ ID NO: 528 L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A,
Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I,
D071Y, N072D, N073D, А074К, К076Т, Q078S,
R080Q, L081T, I082L, E083L
G002A, T004S, T006K, N008S, S009A, Р012Т,
I013V, A016S, S022T, S027K, F028P, S030K,
V031M, G032A, N033P, К035А, Q036S, E037D,
PIP-72Aa-Fb-09 SEQ ID NO: 529 S042N, K053L, S044L, N054G, L049M, A056S, S050Y, Q057A, L051V, Н058Т, K052Q, Q063L,
A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y,
N072D, N073D, АО 7 4 К, К076Т, Q078S, R080Q,
L081T, I082L, E083L
G002A, T006K, N008S, S009A, Р012Т, A016S,
S022T, S027K, F028P, S030K, G032A, N033P,
K035A, Q036S, S042N, S044L, S050Y, L051V,
PIP-72Aa-Fb-27 SEQ ID NO: 530 K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, Н058Т,
Q063L, A064S, K067N, E069V, V070I, D071Y,
N072D, N073D, АО 7 4 К, К076Т, Q078S, R080Q,
L081T, E083L
G002A, T006K, N008S, S009A, Р012Т, A016S,
S027K, F028P, S030K, G032A, N033P, К035А,
Q036S, S042N, S044L, S050Y, K052Q, K053L,
PIP-72Aa-Fb-28 SEQ ID NO: 531 N054G, A056S, Q057A, Н058Т, Q063L, A064S,
S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D,
N073D, E083L A074K, К076Т, Q078S, R080Q, L081T,
G002A, T004S, S009A, I013V, S022T, G032A,
E037D, T038S, S044L, L049M, L051V, K052Q,
PIP-72Aa-Fb-33 SEQ ID NO: 532 Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I,
D071Y, N072D, N073D, А074К, К076Т, Q078S,
R080Q, L081T, I082L, E083L
Для получения дополнительных активных полипептидов PIP-72 выполняли дополнительный сайтнаправленный мутагенез с применением полинуклеотидных последовательностей PIP-72Aa-Fb-9 (SEQ ID NO: 288), PIP-72Aa-Fb-27 (SEQ ID NO: 289) и PIP-72Aa-Fb-33 (SEQ ID NO: 291) в качестве матриц при помощи методики QuikChange™ (Agilent, 5301 Stevens Creek Blvd., Санта-Клара, Калифорния) с применением олигонуклеотидных праймеров, представленных в табл. 16. Праймеры PIP-72Aa-Fb 9-27 1 (SEQ ID NO: 143), PIP-72Aa-Fb 9-27 2 (SEQ ID NO: 144), PIP-72Aa-Fb 9-27 3 (SEQ ID NO: 145), PIP-72Aa-Fb 9-27 12 (SEQ ID NO: 146), PIP-72Aa-Fb 9-27 13 (SEQ ID NO: 147) и PIP-72Aa-Fb 9-27 14 (SEQ ID NO: 148) применяли для мутагенеза матриц плазмидной ДНК PIP-72Aa-Fb-09 (SEQ ID NO: 288) и PIP-72Aa-Fb-27 (SEQ ID NO: 289). Праймеры PIP-72Aa-Fb 33 1-PIP-72Aa-Fb 33 11 (SEQ ID NO: 149 SEQ ID NO: 159) применяли для мутагенеза матрицы плазмидной ДНК PIP-72Aa-Fb-33 (SEQ ID NO: 291).
Таблица 16
Название праймера Идентификатор последовательн ости Название праймера Идентификатор последовательн ости
PIP-72Aa-Fb 9-27 1 SEQ ID NO: 143 PIP-72Aa-Fb 33 10 SEQ ID NO: 158
PIP-72Aa-Fb 9-27 2 SEQ ID NO: 144 PIP-72Aa-Fb 33 11 SEQ ID NO: 159
PIP-72Aa-Fb 9-27 3 SEQ ID NO: 145 PIP-72Aa-Fb 33 12 SEQ ID NO: 160
PIP-72Aa-Fb 9-27 12 SEQ ID NO: 146 PIP-72Aa-Fb 33 13 SEQ ID NO: 161
PIP-72Aa-Fb 9-27 13 SEQ ID NO: 147 PIP-72Aa-Fb 33 14 SEQ ID NO: 162
PIP-72Aa-Fb 9-27 14 SEQ ID NO: 148 PIP-72Aa-Fb 33 15 SEQ ID NO: 163
PIP-72Aa-Fb 33 1 SEQ ID NO: 149 PIP-72Aa-Fb 33 16 SEQ ID NO: 164
PIP-72Aa-Fb 33 2 SEQ ID NO: 150 PIP-72Aa-Fb 33 17 SEQ ID NO: 165
PIP-72Aa-Fb 33 3 SEQ ID NO: 151 PIP-72Aa-Fb 33 18 SEQ ID NO: 166
PIP-72Aa-Fb 33 4 SEQ ID NO: 152 PIP-72Aa-Fb 33 19 SEQ ID NO: 167
PIP-72Aa-Fb 33 5 SEQ ID NO: 153 PIP-72Aa-Fb 33 20 SEQ ID NO: 168
PIP-72Aa-Fb 33 6 SEQ ID NO: 154 PIP-72Aa-Fb 33 21 SEQ ID NO: 169
PIP-72Aa-Fb 33 7 SEQ ID NO: 155 PIP-72Aa-Fb 33 22 SEQ ID NO: 170
PIP-72Aa-Fb 33 8 SEQ ID NO: 156 PIP-72Aa-Fb 33 9 SEQ ID NO: 157
PIP-72Aa-Fb 33 9 SEQ ID NO: 157 PIP-72Aa-Fb 33 10 SEQ ID NO: 158
Полученные плазмидные ДНК трансформировали в E. coli, и белок экспрессировался, как описано в примере 3. Биологические анализы проводили на западном кукурузном жуке, как описано в примере 4, с
- 132 031651 тем, чтобы определить, какие варианты генов сохраняли инсектицидную активность. ДНКсеквенирование проводили на активных вариантах генов. Процентная идентичность относительно PIP72Aa (SEQ ID NO: 2), идентификация клонов, полинуклеотидные и полипептидные последовательности полученных активных вариантов представлены в табл. 17. Варианты полипептида PIP-72 на основе PIP72Aa-Fb-9 (SEQ ID NO: 530) давали 33 активных варианта из 72, которые скринировали. Варианты полипептида PIP-72 на основе PIP-72Aa-Fb-27 (SEQ ID NO: 530) давали 11 активных вариантов из 52, которые скринировали. Варианты полипептида PIP-72 на основе PIP-72Aa-Fb-33 (SEQ ID NO: 532) давали 47 активных вариантов из 79, которые скринировали. В табл. 18 показаны аминокислотные замены полученных активных вариантов полипептида PIP-72 относительно PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2).
Таблица 17
% идентичность с Р1Р-72Аа Обозначение клона Полинуклеотид, SEQ ID NO Полипептид SEQ ID NO
5 5% D D0414317 SEQ ID NO: 292 SEQ ID NO: 533
5 6% D D0414326 SEQ ID NO: 293 SEQ ID NO: 534
57% D D0414327 SEQ ID NO: 294 SEQ ID NO: 535
5 5% D D0414355 SEQ ID NO: 295 SEQ ID NO: 536
53% D D0414366 SEQ ID NO: 296 SEQ ID NO: 537
57% D D0414388 SEQ ID NO: 297 SEQ ID NO: 538
52% D D0414411 SEQ ID NO: 298 SEQ ID NO: 539
53% D D0414412 SEQ ID NO: 299 SEQ ID NO: 540
49% D D0414416 SEQ ID NO: 300 SEQ ID NO: 541
48% D D0414422 SEQ ID NO: 301 SEQ ID NO: 542
50% D D0414424 SEQ ID NO: 302 SEQ ID NO: 543
49% D D0414425 SEQ ID NO: 303 SEQ ID NO: 544
53% D D0414427 SEQ ID NO: 304 SEQ ID NO: 545
46% D D0414430 SEQ ID NO: 305 SEQ ID NO: 546
51% D D0414433 SEQ ID NO: 306 SEQ ID NO: 547
50% D D0414439 SEQ ID NO: 307 SEQ ID NO: 548
49% D D0414449 SEQ ID NO: 308 SEQ ID NO: 549
49% D D0414450 SEQ ID NO: 309 SEQ ID NO: 550
49% D D0414453 SEQ ID NO: 310 SEQ ID NO: 551
48% D D0414454 SEQ ID NO: 311 SEQ ID NO: 552
52% D D0414455 SEQ ID NO: 312 SEQ ID NO: 553
50% D D0414459 SEQ ID NO: 313 SEQ ID NO: 554
48% D D0414462 SEQ ID NO: 314 SEQ ID NO: 555
50% D D0414466 SEQ ID NO: 315 SEQ ID NO: 556
51% D D0414470 SEQ ID NO: 316 SEQ ID NO: 557
49% D D0414471 SEQ ID NO: 317 SEQ ID NO: 558
51% D D0414475 SEQ ID NO: 318 SEQ ID NO: 559
50% D D0414479 SEQ ID NO: 319 SEQ ID NO: 560
51% D D0414486 SEQ ID NO: 320 SEQ ID NO: 561
50% D D0414489 SEQ ID NO: 321 SEQ ID NO: 562
50% D D0414493 SEQ ID NO: 322 SEQ ID NO: 563
69% D D0419050 SEQ ID NO: 323 SEQ ID NO: 564
70% D D0419051 SEQ ID NO: 324 SEQ ID NO: 565
70% D D0419053 SEQ ID NO: 325 SEQ ID NO: 566
69% D D0419057 SEQ ID NO: 326 SEQ ID NO: 567
71% D D0419058 SEQ ID NO: 327 SEQ ID NO: 568
66% D D0419060 SEQ ID NO: 328 SEQ ID NO: 569
71% D D0419062 SEQ ID NO: 329 SEQ ID NO: 570
70% D D0419064 SEQ ID NO: 330 SEQ ID NO: 571
66% D D0419066 SEQ ID NO: 331 SEQ ID NO: 572
69% D D0419071 SEQ ID NO: 332 SEQ ID NO: 573
70% D D0419072 SEQ ID NO: 333 SEQ ID NO: 574
69% D D0419075 SEQ ID NO: 334 SEQ ID NO: 575
72% D D0419077 SEQ ID NO: 335 SEQ ID NO: 576
71% D D0419082 SEQ ID NO: 336 SEQ ID NO: 577
69% D D0419083 SEQ ID NO: 337 SEQ ID NO: 578
66% D D0419084 SEQ ID NO: 338 SEQ ID NO: 579
70% D D0419087 SEQ ID NO: 339 SEQ ID NO: 580
69% D D0419091 SEQ ID NO: 340 SEQ ID NO: 581
73% D D0419093 SEQ ID NO: 341 SEQ ID NO: 582
70% D D0419095 SEQ ID NO: 342 SEQ ID NO: 583
71% D D0419096 SEQ ID NO: 343 SEQ ID NO: 584
70% D D0419098 SEQ ID NO: 344 SEQ ID NO: 585
70% D D0419099 SEQ ID NO: 345 SEQ ID NO: 586
70% D D0419101 SEQ ID NO: 346 SEQ ID NO: 587
69% D D0419102 SEQ ID NO: 347 SEQ ID NO: 588
- 133 031651
71% D D0419106 SEQ ID NO: 348 SEQ ID NO: 589
70% D D0419108 SEQ ID NO: 349 SEQ ID NO: 590
67% D D0419109 SEQ ID NO: 350 SEQ ID NO: 591
67% D D0419110 SEQ ID NO: 351 SEQ ID NO: 592
69% D D0419111 SEQ ID NO: 352 SEQ ID NO: 593
67% D D0419114 SEQ ID NO: 353 SEQ ID NO: 594
70% D D0419115 SEQ ID NO: 354 SEQ ID NO: 595
72% D D0419117 SEQ ID NO: 355 SEQ ID NO: 596
74% D D0419118 SEQ ID NO: 356 SEQ ID NO: 597
67% D D0419119 SEQ ID NO: 357 SEQ ID NO: 598
69% D D0419120 SEQ ID NO: 358 SEQ ID NO: 599
72% D D0419124 SEQ ID NO: 359 SEQ ID NO: 600
72% D D0419126 SEQ ID NO: 360 SEQ ID NO: 601
71% D D0419127 SEQ ID NO: 361 SEQ ID NO: 602
70% D D0419128 SEQ ID NO: 362 SEQ ID NO: 603
71% D D0419132 SEQ ID NO: 363 SEQ ID NO: 604
69% D D0419138 SEQ ID NO: 364 SEQ ID NO: 605
65% D D0419142 SEQ ID NO: 365 SEQ ID NO: 606
69% D D0419145 SEQ ID NO: 366 SEQ ID NO: 607
Таблица 18
Обозначение клона Полипептид Аминокислотные замены относительно PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2)
D D0414317 SEQ ID NO: 533 G002A, T004S, T006K, N008S, S009A, P012T, I013V, S022T, S027K, F028P, S030K, G032A, N033P, K035A, Q036S, S042N, S044L, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, E083L
D D0414326 SEQ ID NO: 534 G002A, T006K, N008S, S009A, P012T, I013V, S022T, S027K, F028P, S030K, G032A, N033P, K035A, Q036S, S042N, S044L, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, E083L
D D0414327 SEQ ID NO: 535 G002A, T006K, N008S, S009A, P012T, S022T, S027K, F028P, S030K, G032A, N033P, K035A, Q036S, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, E083L
D D0414355 SEQ ID NO: 536 G002A, T006K, N008S, S009A, P012T, A016S, S022T, S027K, F028P, S030K, G032A, N033P, K035A, Q036S, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, E083L
D D0414366 SEQ ID NO: 537 G002A, T006K, N008S, S009A, P012T, A016S, S022T, S027K, F028P, S030K, G032A, N033P, K035A, Q036S, E037D, T038S, S042N, S044L, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, E083L
- 134 031651
D D0414388 SEQ ID NO: 538 G002A, T004S, T006K, N008S, P012T, S022T, S027K, F028P, S030K, G032A, N033P, K035A, Q036S, S042N, S044L, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, E083L
D D0414411 SEQ ID NO: 539 G002A, T006K, P012T, A016S, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, T038S, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414412 SEQ ID NO: 540 G002A, T006K, S009A, P012T, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, T038S, S042N, S044L, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414416 SEQ ID NO: 541 G002A, T004S, T006K, S009A, P012T, I013V, A016S, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, E037D, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414422 SEQ ID NO: 542 G002A, T004S, T006K, N008S, S009A, P012T, I013V, A016S, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, T038S, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414424 SEQ ID NO: 543 G002A, T004S, T006K, N008S, P012T, A016S, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, E037D, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414425 SEQ ID NO: 544 G002A, T004S, T006K, N008S, S009A, P012T, I013V, A016S, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, E037D, S042N, S044L, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414427 SEQ ID NO: 545 G002A, T006K, N008S, P012T, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
- 135 031651
D D0414430 SEQ ID NO: 546 G002A, T004S, T006K, N008S, S009A, P012T, I013V, A016S, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, E037D, T038S, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414433 SEQ ID NO: 547 G002A, T004S, T006K, N008S, P012T, A016S, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414439 SEQ ID NO: 548 G002A, T004S, T006K, N008S, S009A, P012T, I013V, A016S, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, S042N, S044L, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414449 SEQ ID NO: 549 G002A, T006K, N008S, S009A, P012T, I013V, A016S, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, T038S, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414450 SEQ ID NO: 550 G002A, T004S, T006K, N008S, S009A, P012T, A016S, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, T038S, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414453 SEQ ID NO: 551 G002A, T004S, T006K, N008S, S009A, P012T, I013V, A016S, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414454 SEQ ID NO: 552 G002A, T004S, T006K, N008S, S009A, P012T, I013V, A016S, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, E037D, T038S, S042N, S044L, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414455 SEQ ID NO: 553 G002A, T006K, S009A, P012T, I013V, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
- 136 031651
D D0414459 SEQ ID NO: 554 G002A, T004S, T006K, P012T, A016S, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, E037D, T038S, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414462 SEQ ID NO: 555 G002A, T004S, T006K, N008S, S009A, P012T, A016S, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, E037D, T038S, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414466 SEQ ID NO: 556 G002A, T004S, T006K, N008S, P012T, I013V, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, E037D, T038S, S042N, S044L, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414470 SEQ ID NO: 557 G002A, T006K, N008S, S009A, P012T, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, E037D, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414471 SEQ ID NO: 558 G002A, T004S, T006K, N008S, S009A, P012T, I013V, A016S, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, E037D, S042N, S044L, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414475 SEQ ID NO: 559 G002A, T004S, T006K, P012T, I013V, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, T038S, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414479 SEQ ID NO: 560 G002A, T004S, T006K, N008S, P012T, I013V, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, T038S, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
D D0414486 SEQ ID NO: 561 G002A, T006K, N008S, S009A, P012T, I013V, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M, G032A, N033P, K035A, Q036S, E037D, S042N, S044L, L049M, S050Y, L051V, K053L, N054G, A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
- 137 031651
D D0414489 SEQ ID NO: 562 G002A, I013V, V031M, S042N, A056S, K067N, A074K, E083L T004S, A016S, G032A, S044L, Q057A, E069V, K076T, T006K, S022T, N033P, S050Y, H058T, V070I, Q078S, N008S, S027K, K035A, L051V, Q063L, D071Y, R080Q, S009A, F028P, Q036S, K053L, A064S, N072D, L081T, P012T, S030K, E037D, N054G, S065T, N073D, I082L,
G002A, T004S, T006K, N008S, P012T, I013V,
A016S, S022T, S027K, F028P, S030K, V031M,
G032A, N033P, K035A, Q036S, E037D, S042N,
D0414493 SEQ ID NO: 563 S044L, S050Y, L051V, K052Q, K053L, N054G,
A056S, Q057A, H058T, Q063L, A064S, S065T,
K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D,
A074K, E083L K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L,
G002A, T004S, N008S, S009A, I013V, S022T,
SEQ ID NO: 564 G032A, T038S, S044L, L049M, L051V, Q063L,
D D0419050 A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y,
N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q,
L081T, I082L, E083L
G002A, T004S, S009A, I013V, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 5 65 E037D, T038S, S044L, L049M, L051V, K052Q,
D D0419051 Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I,
D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S,
R080Q, E083L
G002A, T004S, S009A, S022T, G032A, T038S,
SEQ ID NO: 5 66 S044L, L049M, L051V, K052Q, Q063L, A064S,
D D0419053 S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D,
N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T,
I082L, E083L
G002A, T004S, S009A, I013V, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 567 E037D, T038S, S044L, L049M, L051V, Q063L,
D D0419057 A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y,
N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q,
L081T, I082L, E083L
G002A, T004S, S009A, S022T, G032A, S044L,
SEQ ID NO: 568 L049M, L051V, K052Q, Q063L, A064S, S065T,
D D0419058 K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D,
A074K, E083L K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L,
G002A, T004S, N008S, S009A, I013V, S022T,
SEQ ID NO: 569 G032A, E037D, T038S, S044L, L049M, L051V,
D D0419060 K052Q, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V,
V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T,
Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
G002A, T004S, S009A, I013V, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 570 S044L, L051V, K052Q, Q063L, A064S, S065T,
D D0419062 K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D,
A074K, E083L K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L,
G002A, T004S, S009A, I013V, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 571 T038S, S044L, L051V, K052Q, Q063L, A064S,
D D0419064 S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D,
N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T,
I082L, E083L
G002A, T004S, S009A, I013V, A016S, S022T,
SEQ ID NO: 572 G032A, E037D, T038S, S044L, L049M, L051V,
D D0419066 K052Q, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V,
V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T,
Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
- 138 031651
D D0419071 SEQ ID NO: 573 G002A, E037D, Q063L, D071Y, R080Q, T004S, T038S, A064S, N072D, L081T, S009A, S044L, S065T, N073D, I082L I013V, L049M, K067N, A074K, S022T, L051V, E069V, K076T, G032A, K052Q, V070I, Q078S,
G002A, T004S, S009A, I013V, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 574 S044L, L049M, L051V, K052Q, Q063L, A064S,
D D0419072 S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D,
N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T,
I082L, E083L
G002A, T004S, S009A, I013V, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 575 T038S, S044L, L049M, L051V, K052Q, Q063L,
D D0419075 A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y,
N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q,
L081T, I082L, E083L
G002A, T004S, S022T, G032A, E037D, T038S,
D0419077 SEQ ID NO: 576 S044L, L051V, Q063L, A064S, S065T, K067N,
E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K,
K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
G002A, T004S, S022T, G032A, E037D, S044L,
SEQ ID NO: 577 L049M, L051V, K052Q, Q063L, A064S, S065T,
D D0419082 K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D,
A074K, E083L K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L,
G002A, T004S, S009A, S022T, G032A, E037D,
SEQ ID NO: 578 T038S, S044L, L049M, L051V, K052Q, Q063L,
D D0419083 A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y,
N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q,
L081T, I082L, E083L
G002A, T004S, N008S, S009A, I013V, A016S,
SEQ ID NO: 579 S022T, G032A, E037D, S044L, L049M, L051V,
D D0419084 K052Q, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V,
V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T,
Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
G002A, T004S, S009A, I013V, A016S, S022T,
SEQ ID NO: 580 G032A, S044L, L049M, L051V, K052Q, Q063L,
D D0419087 A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y,
N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q,
L081T, E083L
G002A, T004S, S009A, I013V, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 581 T038S, S044L, L049M, L051V, K052Q, Q063L,
D D0419091 A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y,
N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q,
L081T, I082L, E083L
G002A, I013V, S022T, G032A, S044L, L051V,
D0419093 SEQ ID NO: 582 Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I,
D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S,
R080Q, L081T, I082L, E083L, L085A
G002A, T004S, S009A, I013V, A016S, S022T,
SEQ ID NO: 583 G032A, S044L, L049M, L051V, Q063L, A064S,
D D0419095 S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D,
N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T,
I082L, E083L
G002A, T004S, S009A, S022T, G032A, T038S,
SEQ ID NO: 584 S044L, L049M, L051V, K052Q, Q063L, A064S,
D D0419096 S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D,
N073D, L085A A074K, K076T, Q078S, R080Q, E083L,
G002A, T004S, S009A, I013V, A016S, S022T,
SEQ ID NO: 585 G032A, E037D, T038S, S044L, L049M, L051V,
D D0419098 K052Q, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V,
V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T,
Q078S, R080Q
- 139 031651
D D0419099 SEQ ID NO: 586 G002A, S044L, S065T, N073D, I082L, T004S, L049M, K067N, A074K, E083L S022T, L051V, E069V, K076T, G032A, K052Q, V070I, Q078S, E037D, Q063L, D071Y, R080Q, T038S, A064S, N072D, L081T,
G002A, T004S, S009A, S022T, G032A, T038S,
SEQ ID NO: 587 S044L, L049M, L051V, K052Q, Q063L, A064S,
D D0419101 S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D,
N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T,
I082L, E083L
G002A, T004S, N008S, S009A, I013V, S022T,
SEQ ID NO: 588 G032A, S044L, L049M, L051V, K052Q, Q063L,
D D0419102 A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y,
N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q,
L081T, I082L, E083L
G002A, T004S, S009A, A016S, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 589 S044L, L049M, L051V, K052Q, Q063L, A064S,
D D0419106 S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D,
N073D, I082L A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T,
G002A, T004S, S009A, I013V, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 590 E037D, T038S, S044L, L049M, L051V, Q063L,
D D0419108 A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y,
N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q,
L081T, E083L
G002A, T004S, S009A, I013V, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 591 E037D, S044L, L049M, L051V, K052Q, Q063L,
D D0419109 A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y,
N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q,
L081T, I082F, E083V, L085V
G002A, N008S, S009A, I013V, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 592 E037D, T038S, S044L, L049M, L051V, K052Q,
D D0419110 Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I,
D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S,
R080Q, L081T, I082L, E083L
G002A, T004S, S009A, I013V, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 593 E037D, S044L, L049M, L051V, K052Q, Q063L,
D D0419111 A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y,
N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q,
L081T, I082L, E083L
G002A, T004S, N008S, I013V, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 594 E037D, T038S, S044L, L049M, L051V, K052Q,
D D0419114 Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V, V070I,
D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S,
R080Q, L081T, I082L, E083L
G002A, T004S, S009A, S022T, G032A, E037D,
SEQ ID NO: 595 T038S, S044L, L049M, L051V, Q063L, A064S,
D D0419115 S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D,
N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T,
I082L, E083L
G002A, T004S, S009A, I013V, S022T, G032A,
D D0419117 SEQ ID NO: 596 T038S, S044L, L049M, L051V, K052Q, Q063L,
A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y,
N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q
G002A, T004S, S009A, I013V, S022T, G032A,
D0419118 SEQ ID NO: 597 T038S, S044L, L051V, Q063L, A064S, S065T,
K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D,
A074K, K076T, Q078S, R080Q
G002A, S009A, I013V, A016S, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 598 T038S, S044L, L049M, L051V, K052Q, Q063L,
D D0419119 A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y,
N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q,
L081T, I082L, E083L, S086N
- 140 031651
G002A, N008S, S009A, I013V, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 599 E037D, T038S, S044L, L049M, L051V, Q063L,
D D0419120 A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y,
N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q,
L081T, I082L, E083L
G002A, T004S, S009A, I013V, S022T, G032A,
D0419124 SEQ ID NO: 600 S044L, L051V, Q063L, A064S, S065T, K067N,
E069V, V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K,
K076T, Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L
G002A, T004S, S022T, G032A, E037D, T038S,
D0419126 SEQ ID NO: 601 S044L, L049M, L051V, K052Q, Q063L, A064S,
S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D,
N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T
G002A, T004S, S009A, I013V, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 602 E037D, S044L, L049M, L051V, Q063L, A064S,
D D0419127 S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D,
N073D, E083L A074K, K076T, Q078S, R080Q, I082L,
G002A, T004S, S009A, I013V, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 603 S044L, L049M, L051V, K052Q, Q063L, A064S,
D D0419128 S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y, N072D,
N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q, L081T,
E083L, S086N
G002A, T004S, S009A, I013V, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 604 E037D, T038S, S044L, L049M, L051V, Q063L,
D D0419132 A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y,
N072D, I082L N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q,
G002A, T004S, S009A, I013V, A016S, S022T,
SEQ ID NO: 605 G032A, E037D, T038S, S044L, L049M, L051V,
D D0419138 K052Q, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V,
V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T,
Q078S, R080Q, I082L
G002A, T004S, N008S, I013V, A016S, S022T,
SEQ ID NO: 606 G032A, E037D, T038S, S044L, L049M, L051V,
D D0419142 K052Q, Q063L, A064S, S065T, K067N, E069V,
V070I, D071Y, N072D, N073D, A074K, K076T,
Q078S, R080Q, L081T, I082L, E083L, L0 8 5A
G002A, T004S, S009A, I013V, S022T, G032A,
SEQ ID NO: 607 E037D, T038S, S044L, L051V, K052Q, Q063L,
D D0419145 A064S, S065T, K067N, E069V, V070I, D071Y,
N072D, N073D, A074K, K076T, Q078S, R080Q,
L081T, I082L, E083L
Пример 9. Варианты PIP-72Aa с несколькими аминокислотными заменами.
Для получения дополнительных вариантов полипептида PIP-72 выполняли сайт-направленный мутагенез с использованием олигонуклеотидных праймеров, представленных в табл. 19, с введением аминокислотных замен от PIP-72Da (SEQ ID NO: 10) в PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) или от PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) в PIP-72Da (SEQ ID NO: 845 - повторно синтезирован для облегчения мутагенеза). На фиг. 6 представлено выравнивание аминокислотной последовательности PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) и PIP-72Da (SEQ ID NO: 10). Фрагменты синтетических генов субклонировали в вектор экспрессии pCOLD™ 1, как описано в примере 3.
Таблица 19
Праймер Идентификатор последовательно сти Праймер Идентификатор последовательно сти
72 DG laF SEQ ID NO: 171 72 DG 5aF-2 SEQ ID NO: 181
72 DG lbF SEQ ID NO: 172 72 DG 5bF-2 SEQ ID NO: 182
72 DG lcF SEQ ID NO: 173 72 DG 5cF-2 SEQ ID NO: 183
72 DG ldF SEQ ID NO: 174 72 DG 5dF-2 SEQ ID NO: 184
72 DG 2F SEQ ID NO: 175 72c Div IF SEQ ID NO: 185
72 DG 3aF SEQ ID NO: 176 72c Div 2F SEQ ID NO: 186
72 DG 3bF SEQ ID NO: 177 72c Div 3F SEQ ID NO: 187
72 DG 3cF SEQ ID NO: 178 72c Div 4F SEQ ID NO: 188
72 DG 3dF SEQ ID NO: 179 72c Div 5F-2 SEQ ID NO: 189
72 DG 4F SEQ ID NO: 180
- 141 031651
Полученные плазмидные ДНК трансформировали в E. coli, и инсектицидный белок экспрессировался, как описано в примере 3. Биологические анализы проводили на западном кукурузном жуке, как описано в примере 4, с тем, чтобы определить, какие варианты генов сохраняли инсектицидную активность. ДНК-секвенирование проводили на активных вариантах генов. Процентная идентичность относительно PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2), обозначение клонов, нуклеотидная и аминокислотная последовательности полученных активных вариантов полипептида PIP-72 представлены в табл. 20. Примерно из 180 уникальных вариантов полипептида PIP-72, которые скринировали, идентифицировали 156 активных вариантов. В табл. 21 приведена % идентичность активных вариантов относительно PIP-72Aa (SEQ ID NO: 17), число клонов с каждой % идентичностью и идентификация клонов. В табл. 22 показаны аминокислотные замены полученных активных вариантов полипептида PIP-72 относительно PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2).
Таблица 20
86% D D0403844 SEQ ID NO: 370 SEQ ID NO: 611
86% D D0403865 SEQ ID NO: 371 SEQ ID NO: 612
86% D D0403897 SEQ ID NO: 372 SEQ ID NO: 613
86% D D0403907 SEQ ID NO: 373 SEQ ID NO: 614
95% D D0404048 SEQ ID NO: 374 SEQ ID NO: 615
98% D D0404051 SEQ ID NO: 375 SEQ ID NO: 616
96% D D0404052 SEQ ID NO: 376 SEQ ID NO: 617
98% D D0404054 SEQ ID NO: 377 SEQ ID NO: 618
95% D D0404056 SEQ ID NO: 378 SEQ ID NO: 619
98% D D0404057 SEQ ID NO: 379 SEQ ID NO: 620
96% D D0404062 SEQ ID NO: 380 SEQ ID NO: 621
95% D D0404066 SEQ ID NO: 381 SEQ ID NO: 622
96% D D0404067 SEQ ID NO: 382 SEQ ID NO: 623
95% D D0404068 SEQ ID NO: 383 SEQ ID NO: 624
95% D D0404073 SEQ ID NO: 384 SEQ ID NO: 625
98% D D0404074 SEQ ID NO: 385 SEQ ID NO: 626
95% D D0404078 SEQ ID NO: 386 SEQ ID NO: 627
88% D D0404079 SEQ ID NO: 387 SEQ ID NO: 628
98% D D0404098 SEQ ID NO: 388 SEQ ID NO: 629
92% D D0404103 SEQ ID NO: 389 SEQ ID NO: 630
98% D D0404111 SEQ ID NO: 390 SEQ ID NO: 631
99% D D0404113 SEQ ID NO: 391 SEQ ID NO: 632
99% D D0404116 SEQ ID NO: 392 SEQ ID NO: 633
98% D D0404119 SEQ ID NO: 393 SEQ ID NO: 634
96% D D0404120 SEQ ID NO: 394 SEQ ID NO: 635
96% D D0404121 SEQ ID NO: 395 SEQ ID NO: 636
96% D D0404122 SEQ ID NO: 396 SEQ ID NO: 637
96% D D0404128 SEQ ID NO: 397 SEQ ID NO: 638
98% D D0404130 SEQ ID NO: 398 SEQ ID NO: 639
95% D D0404135 SEQ ID NO: 399 SEQ ID NO: 640
91% D D0405129 SEQ ID NO: 400 SEQ ID NO: 641
92% D D0405130 SEQ ID NO: 401 SEQ ID NO: 642
94% D D0405132 SEQ ID NO: 402 SEQ ID NO: 643
95% D D0405135 SEQ ID NO: 403 SEQ ID NO: 644
90% D D0405137 SEQ ID NO: 404 SEQ ID NO: 645
94% D D0405139 SEQ ID NO: 405 SEQ ID NO: 646
87% D D0405141 SEQ ID NO: 406 SEQ ID NO: 647
85% D D0405142 SEQ ID NO: 407 SEQ ID NO: 648
92% D D0405145 SEQ ID NO: 408 SEQ ID NO: 649
99% D D0405148 SEQ ID NO: 409 SEQ ID NO: 650
98% D D0405151 SEQ ID NO: 410 SEQ ID NO: 651
98% D D0405153 SEQ ID NO: 411 SEQ ID NO: 652
98% D D0405157 SEQ ID NO: 412 SEQ ID NO: 653
96% D D0405159 SEQ ID NO: 413 SEQ ID NO: 654
99% D D0405163 SEQ ID NO: 414 SEQ ID NO: 65 5
87% D D0405169 SEQ ID NO: 415 SEQ ID NO: 65 6
99% D D0405174 SEQ ID NO: 416 SEQ ID NO: 657
90% D D0405177 SEQ ID NO: 417 SEQ ID NO: 658
93% D D0405183 SEQ ID NO: 418 SEQ ID NO: 659
88% D D0405187 SEQ ID NO: 419 SEQ ID NO: 660
95% D D0405191 SEQ ID NO: 420 SEQ ID NO: 661
93% D D0405192 SEQ ID NO: 421 SEQ ID NO: 662
93% D D0405193 SEQ ID NO: 422 SEQ ID NO: 663
94% D D0405199 SEQ ID NO: 423 SEQ ID NO: 664
- 142 031651
91% D D0405204 SEQ ID NO: 424 SEQ ID NO: 665
93% D D0405205 SEQ ID NO: 425 SEQ ID NO: 666
98% D D0405213 SEQ ID NO: 426 SEQ ID NO: 667
82% D D0405218 SEQ ID NO: 427 SEQ ID NO: 668
82% D D0405219 SEQ ID NO: 428 SEQ ID NO: 669
98% D D0405227 SEQ ID NO: 429 SEQ ID NO: 670
96% D D0405228 SEQ ID NO: 430 SEQ ID NO: 671
99% D D0405230 SEQ ID NO: 431 SEQ ID NO: 672
96% D D0405231 SEQ ID NO: 432 SEQ ID NO: 673
99% D D0405233 SEQ ID NO: 433 SEQ ID NO: 674
94% D D0405238 SEQ ID NO: 434 SEQ ID NO: 675
94% D D0405239 SEQ ID NO: 435 SEQ ID NO: 676
96% D D0405241 SEQ ID NO: 436 SEQ ID NO: 677
96% D D0405242 SEQ ID NO: 437 SEQ ID NO: 678
98% D D0405243 SEQ ID NO: 438 SEQ ID NO: 679
96% D D0405244 SEQ ID NO: 439 SEQ ID NO: 680
99% D D0405249 SEQ ID NO: 440 SEQ ID NO: 681
96% D D0405251 SEQ ID NO: 441 SEQ ID NO: 682
98% D D0405252 SEQ ID NO: 442 SEQ ID NO: 683
99% D D0405254 SEQ ID NO: 443 SEQ ID NO: 684
99% D D0405258 SEQ ID NO: 444 SEQ ID NO: 685
98% D D0405260 SEQ ID NO: 445 SEQ ID NO: 686
98% D D0405261 SEQ ID NO: 446 SEQ ID NO: 687
98% D D0405281 SEQ ID NO: 447 SEQ ID NO: 688
93% D D0405282 SEQ ID NO: 448 SEQ ID NO: 689
94% D D0405284 SEQ ID NO: 449 SEQ ID NO: 690
96% D D0405285 SEQ ID NO: 450 SEQ ID NO: 691
95% D D0405288 SEQ ID NO: 451 SEQ ID NO: 692
95% D D0405289 SEQ ID NO: 452 SEQ ID NO: 693
95% D D0405290 SEQ ID NO: 453 SEQ ID NO: 694
98% D D0405291 SEQ ID NO: 454 SEQ ID NO: 695
95% D D0405292 SEQ ID NO: 455 SEQ ID NO: 696
99% D D0405294 SEQ ID NO: 456 SEQ ID NO: 697
94% D D0405297 SEQ ID NO: 457 SEQ ID NO: 698
95% D D0405299 SEQ ID NO: 458 SEQ ID NO: 699
94% D D0405300 SEQ ID NO: 459 SEQ ID NO: 700
99% D D0405302 SEQ ID NO: 460 SEQ ID NO: 701
94% D D0405307 SEQ ID NO: 461 SEQ ID NO: 702
91% D D0405309 SEQ ID NO: 462 SEQ ID NO: 703
99% D D0405310 SEQ ID NO: 463 SEQ ID NO: 704
94% D D0405311 SEQ ID NO: 464 SEQ ID NO: 705
96% D D0405312 SEQ ID NO: 465 SEQ ID NO: 706
94% D D0405313 SEQ ID NO: 466 SEQ ID NO: 707
96% D D0405320 SEQ ID NO: 467 SEQ ID NO: 708
70% D D0408199 SEQ ID NO: 468 SEQ ID NO: 709
70% D D0408201 SEQ ID NO: 469 SEQ ID NO: 710
71% D D0408212 SEQ ID NO: 470 SEQ ID NO: 711
76% D D0408220 SEQ ID NO: 471 SEQ ID NO: 712
77% D D0408221 SEQ ID NO: 472 SEQ ID NO: 713
73% D D0408223 SEQ ID NO: 473 SEQ ID NO: 714
77% D D0408226 SEQ ID NO: 474 SEQ ID NO: 715
73% D D0408229 SEQ ID NO: 475 SEQ ID NO: 716
72% D D0408231 SEQ ID NO: 476 SEQ ID NO: 717
73% D D0408234 SEQ ID NO: 477 SEQ ID NO: 718
- 143 031651
72% D D0408238 SEQ ID NO: 478 SEQ ID NO: 719
72% D D0408241 SEQ ID NO: 479 SEQ ID NO: 720
71% D D0408246 SEQ ID NO: 480 SEQ ID NO: 721
76% D D0408250 SEQ ID NO: 481 SEQ ID NO: 722
73% D D0408253 SEQ ID NO: 482 SEQ ID NO: 723
72% D D0408254 SEQ ID NO: 483 SEQ ID NO: 724
71% D D0408261 SEQ ID NO: 484 SEQ ID NO: 725
70% D D0408267 SEQ ID NO: 485 SEQ ID NO: 726
72% D D0408268 SEQ ID NO: 486 SEQ ID NO: 727
73% D D0408270 SEQ ID NO: 487 SEQ ID NO: 728
70% D D0408275 SEQ ID NO: 488 SEQ ID NO: 729
72% D D0408276 SEQ ID NO: 489 SEQ ID NO: 730
74% D D0408277 SEQ ID NO: 490 SEQ ID NO: 731
78% D D0408283 SEQ ID NO: 491 SEQ ID NO: 732
74% D D0408284 SEQ ID NO: 492 SEQ ID NO: 733
73% D D0408286 SEQ ID NO: 493 SEQ ID NO: 734
76% D D0408287 SEQ ID NO: 494 SEQ ID NO: 735
77% D D0408294 SEQ ID NO: 495 SEQ ID NO: 736
73% D D0408295 SEQ ID NO: 496 SEQ ID NO: 737
79% D D0408296 SEQ ID NO: 497 SEQ ID NO: 738
74% D D0408297 SEQ ID NO: 498 SEQ ID NO: 739
71% D D0408298 SEQ ID NO: 499 SEQ ID NO: 740
74% D D0408302 SEQ ID NO: 500 SEQ ID NO: 741
74% D D0408308 SEQ ID NO: 501 SEQ ID NO: 742
73% D D0408309 SEQ ID NO: 502 SEQ ID NO: 743
72% D D0408314 SEQ ID NO: 503 SEQ ID NO: 744
74% D D0408318 SEQ ID NO: 504 SEQ ID NO: 745
73% D D0408319 SEQ ID NO: 505 SEQ ID NO: 746
72% D D0408322 SEQ ID NO: 506 SEQ ID NO: 747
79% D D0408329 SEQ ID NO: 507 SEQ ID NO: 748
78% D D0408331 SEQ ID NO: 508 SEQ ID NO: 749
74% D D0408338 SEQ ID NO: 509 SEQ ID NO: 750
78% D D0408340 SEQ ID NO: 510 SEQ ID NO: 751
70% D D0408353 SEQ ID NO: 511 SEQ ID NO: 752
78% D D0408357 SEQ ID NO: 512 SEQ ID NO: 753
76% D D0408359 SEQ ID NO: 513 SEQ ID NO: 754
73% D D0408361 SEQ ID NO: 514 SEQ ID NO: 755
78% D D0408366 SEQ ID NO: 515 SEQ ID NO: 756
74% D D0408368 SEQ ID NO: 516 SEQ ID NO: 757
73% D D0408370 SEQ ID NO: 517 SEQ ID NO: 758
73% D D0408372 SEQ ID NO: 518 SEQ ID NO: 759
74% D D0408373 SEQ ID NO: 519 SEQ ID NO: 760
72% D D0408374 SEQ ID NO: 520 SEQ ID NO: 761
73% D D0408377 SEQ ID NO: 521 SEQ ID NO: 762
72% D D0408381 SEQ ID NO: 522 SEQ ID NO: 763
74% D D0408382 SEQ ID NO: 523 SEQ ID NO: 764
73% D D0408384 SEQ ID NO: 524 SEQ ID NO: 765
76% D D0408385 SEQ ID NO: 525 SEQ ID NO: 766
72% D D0408386 SEQ ID NO: 526 SEQ ID NO: 767
74% D D0408387 SEQ ID NO: 527 SEQ ID NO: 768
78% D D0348839 SEQ ID NO: 770 SEQ ID NO: 772
85% D D0347298 SEQ ID NO: 769 SEQ ID NO: 771
- 144 031651
Таблица 21
Идентичность с Р1Р-72Аа (%) № вариантов Название вариантов
46% 1 D D0414430
48% 4 D D0407437, D D0414422, D D0414454, D D0414462
49% 6 D D0414416, D D0414425, D D0414449, D D0414450, D D0414453, D D0414471
50% 7 D D0414424, D D0414439, D D0414459, D D0414466, D D0414479, D D0414489, D D0414493
51% 4 D D0414433, D D0414470, D D0414475, D D0414486
52% 2 D D0414411, D D0414455
53% 4 D D0407429, D D0414366, D D0414412, D D0414427
55% 2 D D0414317, D D0414355
56% 2 D D0407455, D D0414326
57% 3 D D0407456, D D0414327, D D0414388
65% 1 D D0419142
66% 3 D D0419060, D D0419066, D D0419084
67% 5 D D0407461, D D0419109, D D0419110, D D0419114, D D0419119
69% 11 D D0419050, D D0419057, D D0419071, D D0419075, D D0419083, D D0419091, D D0419102, D D0419111, D D0419120, D D0419138, D D0419145
70% 17 D D0419051, D D0419053, D D0419064, D D0419072, D D0419087, D D0419095, D D0419098, D D0419099, D D0419101, D D0419108, D D0419115, D D0419128, D D0408199, D D0408201, D D0408267, D D0408275, D D0408353
71% 11 D D0419058, D D0419062, D D0419082, D D0419096, D D0419106, D D0419127, D D0419132, D D0408212, D D0408246, D D0408261, D D0408298
72% 15 D D0419077, D D0419117, D D0419124, D D0419126, D D0408231, D D0408238, D D0408241, D D0408254, D D0408268, D D0408276, D D0408314, D D0408322, D D0408374, D D0408381, D D0408386
73% 15 D D0419093, D D0408223, D D0408229, D D0408234, D D0408253, D D0408270, D D0408286, D D0408295, D D0408309, D D0408319, D D0408361, D D0408370, D D0408372, D D0408377, D D0408384
74% 12 D D0419118, D D0408277, D D0408284, D D0408297, D D0408302, D D0408308, D D0408318, D D0408338, D D0408368, D D0408373, D D0408382, D D0408387
76% 5 D D0408220, D D0408250, D D0408287, D D0408359, D D0408385
- 145 031651
77% 3 D D0408221, D D0408226, D D0408294
78% 6 D D0408283, D D0408331, D D0408340, D D0408357, D D0408366, D D0348839
79% 2 D D0408296, D D0408329
82% 2 D D0405218, D D0405219
85% 2 D D0405142, D D0347298
86% 7 D D0403719, D D0403734, D D0403823, D D0403844, D D0403865, D D0403897, D D0403907
87% 2 D D0405141, D D0405169
88% 2 D D0404079, D D0405187
90% 2 D D0405137, D D0405177
91% 3 D D0405129, D D0405204, D D0405309
92% 3 D D0404103, D D0405130, D D0405145
93% 5 D D0405183, D D0405192, D D0405193, D D0405205, D D0405282
94% 11 D D0405132, D D0405139, D D0405199, D D0405238, D D0405239, D D0405284, D D0405297, D D0405300, D D0405307, D D0405311, D D0405313
95% 14 D D0404048, D D0404056, D D0404066, D D0404068, D D0404073, D D0404078, D D0404135, D D0405135, D D0405191, D D0405288, D D0405289, D D0405290, D D0405292, D D0405299
96% 17 D D0404052, D D0404062, D D0404067, D D0404120, D D0404121, D D0404122, D D0404128, D D0405159, D D0405228, D D0405231, D D0405241, D D0405242, D D0405244, D D0405251, D D0405285, D D0405312, D D0405320
98% 19 D D0404051, D D0404054, D D0404057, D D0404074, D D0404098, D D0404111, D D0404119, D D0404130, D D0405151, D D0405153, D D0405157, D D0405213, D D0405227, D D0405243, D D0405252, D D0405260, D D0405261, D D0405281, D D0405291
99% 13 D D0404113, D D0404116, D D0405148, D D0405163, D D0405174, D D0405230, D D0405233, D D0405249, D D0405254, D D0405258, D D0405294, D D0405302, D D0405310
- 146 031651
Таблица 22
Обозначение клона Полипептид Аминокислотные замень i относительно PIP-72Aa
(SEQ IE NO: 2)
N011G, S027Q, S030P, N033S, T038S, S044D,
ПП /10 7 7 1 Q
K053N, D071E, A074Y, Q078S, R080E, E083L
N011G, P012D, S027Q, S030K, G032A, N033P,
T038S, S044A, K053N, D071E, R080Q, E083L
N011G, P012D, S030K, G032A, N033P, S044D,
K053N, D071E, N073D, A074Y, R080Q, E083L
S009L, P012D, S027Q, S030K, N033P, T038S,
S044A, D071E, N073D, Q078S, R080E, E083L
N008S, N011G, P012D, S030K, N033S, T038S,
L/UtUOJjU-j S044D, K053N, D071E, A074Y, Q078S, R080E
N011G, S027Q, S030K, G032A, N033P, T038S,
S044D, K053N, D071E, N073D, Q078S, R080E
N008S, N011G, P012D, S027Q, S030K, N033S,
S044D, K053N, D071E, N073D, Q078S, R080Q
D D0404048 SEQ ID NO: 615 N011K, V015A, K053R, H058A
D D0404051 SEQ ID NO: 616 T038S, K053R
D D0404052 SEQ ID NO: 617 N011K, R080Q, E083Q
D D0404054 SEQ ID NO: 618 N011K, T038S
D D0404056 SEQ ID NO: 619 V015A, H019K, K053R, H058A
D D0404057 SEQ ID NO: 620 N011K, A074T
D D0404062 SEQ ID NO: 621 K053R, E083H, L085V
D D0404066 SEQ ID NO: 622 K053R, H058A, E083H, L085V
D D0404067 SEQ ID NO: 623 N011K, V015A, K053R
D D0404068 SEQ ID NO: 624 N033S, K053R, A074T, R080E
D D0404073 SEQ ID NO: 625 T038S, K053R, H058A, L085V
D D0404074 SEQ ID NO: 626 K053R, E083H
D D0404078 SEQ ID NO: 627 N011K, P012K, H019K, H058A
N011K, S030G, G032D, T038S, K053R, S065T,
D D0404079 SEQ ID NO: 628
D071E, A074T, L085V, S086A
D D0404098 SEQ ID NO: 629 S065T, V070I
V015A, H019K, V031I, G032D, N033S, T038S,
D D0404103 SEQ ID NO: b3U
K053R
D D0404111 SEQ ID NO: 631 T038S, K053R
D D0404113 SEQ ID NO: 632 K053N
D D0404116 SEQ ID NO: 633 E083H
D D0404119 SEQ ID NO: 634 P012K, H019K
D D0404120 SEQ ID NO: 635 S030G, N033S, T038S
D D0404121 SEQ ID NO: 636 H058A, R080E, L085V
D D0404122 SEQ ID NO: 637 E083H, L085V, S086A
D D0404128 SEQ ID NO: 638 N011K, V015A, E083H
D D0404130 SEQ ID NO: 639 N011K, H019K
D D0404135 SEQ ID NO: 640 S030G, V031I, N033S, T038S
N011K, P012K, V015A, H019K, S065T, V070I,
D D0405129 SEQ ID NO: 641
D071E, A074T
H019K, K053R, H058A, S065T, V070I, D071E,
D D0405130 SEQ ID NO: 642
A074T
D D0405132 SEQ ID NO: 643 S030G, V031I, G032D, N033S, T038S
D D0405135 SEQ ID NO: 644 N011K, P012K, V015A, H019K
N011K, P012K, V015A, H019K, S030G, V031I,
D D0405137 SEQ ID NO: 645
G032D, N033S, T038S
D D0405139 SEQ ID NO: 646 N011K, P012K, V015A, H019K, K053S
N011K, P012K, V015A, H019K, T038S, K053R,
H058A, S065T, V070I, D071E, A074T
- 147 031651
D D0405142 SEQ ID NO: 648 N011K, G032D, A074T P012K, N033S, V015A, T038S, H019K, S065T, S030G, V070I, V031I, D071E,
S030G, V031I, G032D, N033S, T038S, K053R,
D D0405145 SEQ ID NO: 649
H058A
D D0405148 SEQ ID NO: 650 T038S
D D0405151 SEQ ID NO: 651 V015A, H019K
D D0405153 SEQ ID NO: 652 K053R, H058A
D D0405157 SEQ ID NO: 653 T038S, H058A
D D0405159 SEQ ID NO: 654 K053R, H058A, A074T
D D0405163 SEQ ID NO: 655 K053R
N011K, P012K, V015A, H019K, S030G, V031I,
G032D, N033S, T038S, K053R, H058A
D D0405174 SEQ ID NO: 657 H058A
S030G, V031I, G032D, N033S, T038S, S065T,
D D0405177 SEQ ID NO: 658
V070I, D071E, A074T
D D0405183 SEQ ID NO: 659 N011K, P012K, V015A, H019K, T038S, H058A
N011K, P012K, V015A, H019K, S030G, V031I,
D D0405187 SEQ ID NO: 660
G032D, N033S, K053R, H058A
D D0405191 SEQ ID NO: 661 S065T, V070I, D071E, A074T
D D0405192 SEQ ID NO: 662 K053R, H058A, S065T, V070I, D071E, A074T
D D0405193 SEQ ID NO: 663 N011K, P012K, V015A, H019K, N033S, T038S
D D0405199 SEQ ID NO: 664 K053R, H058A, V070I, D071E, A074T
S030G, V031I, G032D, N033S, T038S, K053R,
D D0405204 SEQ ID NO: 665
H058A, A074T
D D0405205 SEQ ID NO: 666 N011K, P012K, V015A, H019K, K053R, H058A
D D0405213 SEQ ID NO: 667 K053S, H058A
N011K, P012K, V015A, H019K, S030G, V031I,
D D0405218 SEQ ID NO: 668 G032D, N033S, T038S, K053R, H058A, R080E,
E083H, L085V, S086A
N011K, P012K, V015A, H019K, S030G, V031I,
D D0405219 SEQ ID NO: 669 G032D, N033S, T038S, K053R, H058A, S065T,
V070I, D071E, A074T
D D0405227 SEQ ID NO: 670 R080E, S086A
D D0405228 SEQ ID NO: 671 N011K, V015A, L085V
D D0405230 SEQ ID NO: 672 H019K
D D0405231 SEQ ID NO: 673 N011K, E083H, L085V
D D0405233 SEQ ID NO: 674 N011K
D D0405238 SEQ ID NO: 675 N011K, V015A, E083H, L085V, S086A
D D0405239 SEQ ID NO: 676 N011K, H058A, R080E, L085V, S086A
D D0405241 SEQ ID NO: 677 N011K, P012K, V015A
D D0405242 SEQ ID NO: 678 N011K, R080E, S086A
D D0405243 SEQ ID NO: 679 N011K, V015A
D D0405244 SEQ ID NO: 680 N011K, V015A, H019K
D D0405249 SEQ ID NO: 681 P012K
D D0405251 SEQ ID NO: 682 P012K, V015A, H019K
D D0405252 SEQ ID NO: 683 P012K, V015A
D D0405254 SEQ ID NO: 684 V015A
D D0405258 SEQ ID NO: 685 R080E
- 148 031651
D D0405260 SEQ ID NO: 686 H019K, K053R
D D0405261 SEQ ID NO: 687 E083H, L085V
D D0405281 SEQ ID NO: 688 N033S, T038S
D D0405282 SEQ ID NO: 689 S030G, V031I, G032D, N033S, T038S, K053R
D D0405284 SEQ ID NO: 690 V031I, G032D, T038S, R080E, L085V
D D0405285 SEQ ID NO: 691 K053R, R080E, S086A
D D0405288 SEQ ID NO: 692 S030G, N033S, R080E, S086A
D D0405289 SEQ ID NO: 693 G032D, K053R, R080E, E083H
D D0405290 SEQ ID NO: 694 S030G, V031I, G032D, N033S
D D0405291 SEQ ID NO: 695 S030G, K053R
D D0405292 SEQ ID NO: 696 N033S, K053R, R080E, S086A
D D0405294 SEQ ID NO: 697 S030G
D D0405297 SEQ ID NO: 698 S030G, V031I, G032D, N033S, K053R
D D0405299 SEQ ID NO: 699 K053H, H058P, E083H, S086A
D D0405300 SEQ ID NO: 700 G032D, N033S, T038S, L085V, S086A
D D0405302 SEQ ID NO: 701 N033S
D D0405307 SEQ ID NO: 702 N033S, T038S, K053R, H058A, R080E
D0405309 SEQ ID NO: 703 S030G, V031I, N033S, T038S, K053R, H058A,
D
R080E, L085V
D D0405310 SEQ ID NO: 704 G032D
D D0405311 SEQ ID NO: 705 S030G, G032D, N033S, L085V, S086A
D D0405312 SEQ ID NO: 706 S030G, V031I, T038S
D D0405313 SEQ ID NO: 707 S030G, G032D, N033S, T038S, H058A
D D0405320 SEQ ID NO: 708 S030G, N033S, H058A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S,
D D0408199 SEQ ID NO: 709 S044D, K053R, H058A, S065T, V070I, D071E,
N073S, A074T, Q078H, R080E, L081T, E083H,
L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S,
D D0408201 SEQ ID NO: 710 S044D, A056T, H058A, S065T, V070I, D071E,
N073S, A074T, Q078H, R080E, L081T, E083H,
L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S,
D D0408212 SEQ ID NO: 711 S044D, H058A, S065T, V070I, D071E, N073S,
A074T, S086A Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V,
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
D0408220 SEQ ID NO: 712 S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S,
S044D, H058A, S065T, V070I, D071E, N073S,
A074T, E083H, L085V
N011K, V015A, S027K, S030G, V031I, G032D,
D0408221 SEQ ID NO: 713 N033S, T038S, S044D, S065T, V070I, D071E,
N073S, A074T, Q078H, R080E, L081T, E083H,
L085V, S086A
N011K, V015A, H019K, S027K, S030G, V031I,
D0408223 SEQ ID NO: 714 G032D, N033S, T038S, S044D, K053R, H058A,
S065T, V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H,
R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
- 149 031651
D D0408226 SEQ ID NO: 715 N011K, G032D, S065T, E083H, V015A, N033S, V070I, L085V H019K, T038S, D071E, S027K, S044D, N073S, S030G, K053R, A074T, V031I, H058A, R080E,
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
η D0408229 SEQ ID NO: 716 S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S,
и S044D, K053R, S065T, V070I, D071E, N073S,
A074T, Q078H, R080E, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
η D0408231 SEQ ID NO: 717 S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S,
и S044D, S065T, V070I, D071E, N073S, A074T,
Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
η D0408234 SEQ ID NO: 718 S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S,
и S044D, K053R, A056T, H058A, S065T, V070I,
D071E, N073S, A074T, R080E, S086A
P012K, V015A, H019K, S027K, S030G, V031I,
η D0408238 SEQ ID NO: 719 G032D, N033S, T038S, S044D, K053R, A056T,
и H058A, S065T, V070I, D071E, N073S, A074T,
Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
η D0408241 SEQ ID NO: 720 S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S,
и S044D, K053R, H058A, S065T, V070I, D071E,
N073S, A074T, R080E, E083H, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
S022R, S027K, S030G, V031I, G032D, N033S,
D D0408246 SEQ ID NO: 721 T038S, S044D, K053R, A056T, H058A, S065T,
V070I, S086A D071E, N073S, A074T, E083H, L085V,
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
гх D0408250 SEQ ID NO: 722 V031I, N033S, S044D, K053R, S065T, V070I,
и D071E, N073S, A074T, Q078H, R080E, L081T,
E083H, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
гх D0408253 SEQ ID NO: 723 S030G, N033S, S044D, K053R, A056T, H058A,
и S065T, V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H,
R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
гх D0408254 SEQ ID NO: 724 S030G, G032D, N033S, S044D, K053R, A056T,
и H058A, S065T, V070I, D071E, N073S, A074T,
Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
S030G, G032D, N033S, T038S, S044D, K053R,
D D0408261 SEQ ID NO: 725 A056T, H058A, S065T, V070I, D071E, N073S,
A074T, S086A Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V,
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S,
D D0408267 SEQ ID NO: 726 K053R, A056T, H058A, S065T, V070I, D071E,
N073S, A074T, Q078H, R080E, L081T, E083H,
L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
D D0408268 SEQ ID NO: 727 S030G, N033S, T038S, S044D, K053R, A056T,
H058A, S065T, V070I, D071E, N073S, A074T,
Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
гх D0408270 SEQ ID NO: 728 V031I, G032D, N033S, S044D, K053R, S065T,
и S066N, V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H,
R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, S044D,
D D0408275 SEQ ID NO: 729 K053R, A056T, H058A, S065T, V070I, D071E,
N073S, A074T, Q078H, R080E, L081T, E083H,
L085V, S086A
- 150 031651
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
η D0408276 SEQ ID NO: 730 S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, K053R,
и H058A, S065T, V070I, D071E, N073S, A074T,
Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
η D0408277 SEQ ID NO: 731 S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, S044D,
и K053R, H058A, S065T, V070I, D071E, N073S,
A074T, R080E, E083H, L085V
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
η D0408283 SEQ ID NO: 732 S027K, S030G, N033S, S044D, K053R, A056T,
и H058A, R080E S065T, V070I, D071E, N073S, A074T,
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
η D0408284 SEQ ID NO: 733 S030G, G032D, N033S, S044D, K053R, S065T,
и V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H, R080E,
L081T, E083H, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
η D0408286 SEQ ID NO: 734 S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S,
и S044D, K053R, S065T, V070I, D071E, N073S,
A074T, R080E, E083H, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
η D0408287 SEQ ID NO: 735 N033S, S044D, K053R, H058A, S065T, V070I,
и D071E, N073S, A074T, Q078H, R080E, L081T,
E083H, L085V, S086A
H019K, S027K, S030G, V031I, G032D, N033S,
гх D0408294 SEQ ID NO: 736 T038S, S044D, K053R, S065T, V070I, D071E,
и N073S, A074T, Q078H, R080E, L081T, E083H,
L085V, S086A
P012K, V015A, H019K, S027K, S030G, V031I,
η D0408295 SEQ ID NO: 737 G032D, N033S, T038S, S044D, K053R, H058A,
и S065T, V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H,
R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
H019K, S027K, S030G, V031I, G032D, N033S,
D D0408296 SEQ ID NO: 738 T038S, S044D, K053R, A056T, H058A, V070I,
D071E, R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
ГХ D0408297 SEQ ID NO: 739 S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S,
и S044D, H058A, S065T, V070I, D071E, N073S,
A074T, R080E, E083H, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S,
D D0408298 SEQ ID NO: 740 S044D, K053R, S065T, V070I, D071E, N073S,
A074T, S086A Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V,
N011K, P012K, V015A, H019K, S027K, S030G,
гх D0408302 SEQ ID NO: 741 V031I, G032D, N033S, T038S, S044D, S065T,
и V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H, R080E,
L081T, E083H, L085V, S086A
N011K, V015A, S027K, S030G, V031I, G032D,
гх D0408308 SEQ ID NO: 742 N033S, T038S, S044D, K053R, H058A, S065T,
и V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H, R080E,
L081T, E083H, L085V, S086A
N011K, V015A, S027K, S030G, V031I, G032D,
гх D0408309 SEQ ID NO: 743 N033S, T038S, S044D, K053R, A056T, H058A,
и S065T, V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H,
R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
гх D0408314 SEQ ID NO: 744 S030G, V031I, G032D, N033S, T038S, S044D,
и H058A, S065T, V070I, D071E, N073S, A074T,
Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
гх D0408318 SEQ ID NO: 745 S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S,
и S044D, K053R, S065T, D071E, Q078H, R080E,
L081T, E083H, L085V, S086A
- 151 031651
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
D0408319 SEQ ID NO: 746 S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S,
- S044D, K053R, S065T, V070I, A074T, Q078H,
R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
N011K, P012K, V015A, S027K, S030G, V031I,
D0408322 SEQ ID NO: 747 G032D, N033S, T038S, S044D, K053R, A056T,
- H058A, S065T, V070I, D071E, N073S, A074T,
Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
N011K, V015A, H019K, S027K, S030G, V031I,
D D0408329 SEQ ID NO: 748 G032D, N033S, T038S, S044D, K053R, H058A,
S065T, V070I, D071E, N073S, A074T, E083H
N011K, V015A, H019K, G032D, N033S, S044D,
D0408331 SEQ ID NO: 749 K053R, H058A, S065T, V070I, D071E, N073S,
A074T, Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V,
S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, H019K, S030G,
D0408338 SEQ ID NO: 750 N033S, S044D, K053R, A056T, H058A, S065T,
V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H, R080E,
L081T, E083H, L085V, S086A
H019K, S027K, S030G, V031I, N033S, T038S,
D0408340 SEQ ID NO: 751 S044D, K053R, S065T, V070I, D071E, N073S,
A074T, Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V,
S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S,
D D0408353 SEQ ID NO: 752 S044D, K053S, H058A, S065T, V070I, D071E,
N073S, A074T, Q078H, R080E, L081T, E083H,
L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
D0408357 SEQ ID NO: 753 S030G, N033S, S044D, S065T, V070I, D071E,
D N073S, S086A A074T, R080E, L081T, E083H, L085V,
N008K, N011K, P012K, V015A, H019K, S027K,
D0408359 SEQ ID NO: 754 S030G, V031I, G032D, N033S, T038S, S044D,
- V070I, D071E, A074T, Q078H, R080E, L081T,
E083H, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, S030G,
D0408361 SEQ ID NO: 755 V031I, G032D, N033S, T038S, S044D, K053R,
- S065T, V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H,
R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
D D0408366 SEQ ID NO: 756 S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S,
S044D, S086A K053R, S065T, V070I, D071E, L085V,
N011K, S027K, S030G, V031I, G032D, N033S,
D0408368 SEQ ID NO: 757 T038S, S044D, K053R, A056T, H058A, S065T,
- V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H, R080E,
L081T, E083H, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, H019K, S027K,
D0408370 SEQ ID NO: 758 S030G, V031I, G032D, N033S, T038S, S044D,
- S065T, V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H,
R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
N011K, V015A, H019K, S027K, S030G, V031I,
D0408372 SEQ ID NO: 759 G032D, N033S, T038S, S044D, K053R, H058A,
- S065T, V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H,
R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
D0408373 SEQ ID NO: 760 S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S,
- S044D, K053R, S065T, V070I, D071E, N073S,
A074T, R080E, E083H, L085V
N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K,
D0408374 SEQ ID NO: 761 S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, S044D,
- K053R, S065T, V070I, D071E, N073S, A074T,
Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
- 152 031651
D D0408377 SEQ ID NO: 762 N011K, P012K, S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S, S044D, K053R, A056T, H058A, S065T, V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
D D0408381 SEQ ID NO: 763 N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K, S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S, S044D, S065T, V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
D D0408382 SEQ ID NO: 764 N011K, P012K, H019K, S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S, S044D, K053R, S065T, V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
D D0408384 SEQ ID NO: 765 N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S, S044D, S065T, V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
D D0408385 SEQ ID NO: 766 N011K, P012K, H019K, S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S, S044D, S065T, V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
D D0408386 SEQ ID NO: 767 N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K, S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, S044D, H058A, S065T, V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
D D0408387 SEQ ID NO: 768 N008K, N011K, P012K, S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S, S044D, K053R, S065T, V070I, D071E, N073S, A074T, Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
D D0348839 SEQ ID NO: 772 N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K, S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S, S044D, Q078H, R080E, L081T, E083H, L085V, S086A
D D0347298 SEQ ID NO: 771 N008K, N011K, P012K, V015A, A016S, H019K, S027K, S030G, V031I, G032D, N033S, T038S, S044D
Пример 10. Идентификация аминокислотных положений, влияющих на функцию PIP-72Aa.
На фиг. 2 показано выравнивание белковой последовательности PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) и других активных представителей семейства PIP-72Da (SEQ ID NO: 10), PIP-72Fa (SEQ ID NO: 18), GBP A3175 (SEQ ID NO: 20) и PIP-72Gb (SEQ ID NO: 32). На основе выравнивания были выбраны консервативные положения 7, 10, 20, 23, 24, 34, 60, 61, 66, 68, 75, 77, 79, 84 для насыщающего мутагенеза с применением олигонуклеотидных праймеров, указанных в табл. 23 (методика QuikChange™, Agilent, 5301 Stevens Creek Blvd, Санта-Клала, Калифорния). В дополнение, положения 8, 11, 12, 15, 16, 19, 27, 30, 31, 32, 33, 53, 56, 58, 65, 70, 71, 73, 74, 78, 80, 81, 83, 85, 86, которые различаются между PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) и PIP-72Da (SEQ ID NO: 10), подвергали насыщающему мутагенезу с применением модификации способа QuikChange™ с помощью высокоточной ДНК-полимеразы Phusion® (New England Biolabs®, № по кат. M0530L, 240 County Road, Ипсуич, Майами 01938-2723), с применением олигонуклеотидных праймеров, указанных в табл. 23.
Полученные плазмидные ДНК трансформировали в E. coli, и белок экспрессировался, как описано в примере 3. Биологические анализы проводили на западном кукурузном жуке, как описано в примере 4, с тем, чтобы определить, какие варианты генов сохраняли инсектицидную активность. В табл. 23 представлены положения, которые были изучены, и обобщены полученные данные. Показаны аминокислотные замены, которые были идентифицированы с помощью анализа последовательностей ДНК. Для каждого положения показаны аминокислотные замены, которые давали варианты PIP-72Aa, которые сохраняли активность против западного кукурузного жука.
- 153 031651
Таблица 23
Положение Название олигонуклео тида идентификатор последовательное ти олигонуклеотида Идентифицированы ые Замены Активные Замены
N7 NNK7 F SEQ ID NO: 190 A, V, С, E, F, G, H, I, K,L,M,P,Q,R,S,T, W, Y A,V
MNN7 R SEQ ID NO: 191
N8 N8N F SEQ ID NO: 192 A, C, D, E, G, Η, I, K, L, M, Q, R, S, T, V, F, P,W, Y A, C, D, E, G, Η, I, К , L,M, Q, R, S, T, V
N8N R SEQ ID NO: 193
S10 NNK10 F SEQ ID NO: 194 A, E, F, G, Η, I, K, L, N,P,Q,R,T,W A, E, F, G, H, I, K, L , N, P, Q, R, T, W
MNN10 R SEQ ID NO: 195
N11 NUN F SEQ ID NO: 196 A, C, D, E, G, Η, I, K, L,M,Q, S,T,V, Y, P, R,W A, C, D, E, G, H, I, К , L,M, Q, S, T, V, Y
NUN R SEQ ID NO: 197
Р12 P12N F SEQ ID NO: 198 A, C, D, E, G, Η, K, L, N, Q, R, S, T, V, W, Y, I A, C, D, E, G, Η, K, L , N, Q, R, S, T, V, W, Y
P12N R SEQ ID NO: 199
VI5 V15N F SEQ ID NO: 200 A, C, I,M, R, D, F, G, H,L,P,Q,S,T,W,Y A,C,I,M,R
V15N R SEQ ID NO: 201
Al 6 A16N F SEQ ID NO: 202 C, D, E, F, G, Η, I, K, L,M,N,P,Q,R,S,T, V,W, Y отсутствует
A16N R SEQ ID NO: 203
Н19 H19N F SEQ ID NO: 204 A, E, K, L, P, R, S, Y, C, D, F, G, I, Μ, N, T, V,W A, E, К, L, P, R, S, Y
H19N R SEQ ID NO: 205
W2 0 NNK2 0 F SEQ ID NO: 206 A, T, D, E, G, I, K, L, Μ, N, P, Q, R, S, V, Y A, T
MNN2 0 R SEQ ID NO: 207
D2 3 NNK2 3 F SEQ ID NO: 208 A, G, Η, K, Μ, N, Q, S, T, V, C, L, P, R, W, Y A, G, Η, K, Μ, N, Q, S , T, V
MNN2 3 R SEQ ID NO: 209
G2 4 NNK2 4 F SEQ ID NO: 210 D, F, A, E, Η, I, L, M, N, P, R, S, T, V, W, Y 0, F
MNN2 4 R SEQ ID NO: 211
S27 S27N F SEQ ID NO: 212 A, C, D, E, F, G, Η, N, Q, R, T, I, K, L, Μ, P, W, Y A, C, D, E, F, G, Η, N , Q, R, T
S27N R SEQ ID NO: 213
S30 S30N F SEQ ID NO: 214 A, C, D, E, F, G, Η, K, L, Μ, N, P, Q, R, T, V, W, Y A, C, D, E, F, G, Η, К ,L,M,N,P,Q,R,T, V,W, Y
S30N R SEQ ID NO: 215
V31 V31N F SEQ ID NO: 216 I, L,A, C, D, E, F, G, H,K,N,P,Q,R,S,T, W, Y I, L
V31N R SEQ ID NO: 217
G32 G32N F SEQ ID NO: 218 A, D, E, F, Η, K, L, M, A, D, E, F, Η, K, L, M
- 154 031651
G32N R SEQ ID NO: 219 N, P, Q, R, S, T, V, W, Y , N, P, Q, R, S, T, V, W, Y
N33 N33N F SEQ ID NO: 220 A, C, D, E, F, G,H, I, K, L, P, Q, R, S, T, V, Y,W A, C, D, E, F, G, Η, I , K, L, P, Q, R, S, T, V, Y
N33N R SEQ ID NO: 221
G34 NNK34 F SEQ ID NO: 222 E,F,H,K,L,M,N,Q, R, S,T, Y,I,P,V,W E,F,H,K,L,M,N,Q , R, S, T, Y
MNN34 R SEQ ID NO: 223
К5 3 K53N F SEQ ID NO: 224 A, C, D, E, F, Η, I, L, Μ, N, p, Q, R, S, T, V, Y, G,W A, C, D, E, F, Η, I, L ,M,N, Q, R, S, T, V, Y
K53N R SEQ ID NO: 225
А5 6 A56N F SEQ ID NO: 226 G,L,N,P,Q,R,S,T, C, D, E, F, H, I, K, Y G,L,N,P,Q,R,S,T
A56N R SEQ ID NO: 227
Н58 H58N F SEQ ID NO: 228 A, D, F, L,M,N, R,W, Y, C, G, I, К, P, S, T, V A,D,F,L,M,N,R,W , Y
H58N R SEQ ID NO: 229
Y60 NNK60 F SEQ ID NO: 230 E, F,A, D, G, I, K, L, Μ, N, P, Q, R, S, T, V E, F
MNN60 R SEQ ID NO: 231
Y61 NNK61 F SEQ ID NO: 232 A, C, D, G, I, K, L,N, P,R,S,T,V,W отсутствует
MNN61 R SEQ ID NO: 233
S65 S65N F SEQ ID NO: 234 A, C, D, E, F, G,H, I, L, N, T, V, P, R, Y A, C, D, E, F, G, Η, I ,L,N,T,V
S65N R SEQ ID NO: 235
S66 NNK66 F SEQ ID NO: 236 A, G, C, D, E, I, K, L, Μ, N, P, R, T, V, W A, G
MNN66 R SEQ ID NO: 237
168 NNK68 F SEQ ID NO: 238 D, L,V,A, С, E, F, G, H,K,M,N,P,Q,R,T, W, Y D, L,V
MNN68 R SEQ ID NO: 239
V7 0 V70N F SEQ ID NO: 240 С, I, A, D, F, G, H, L, M,N,P,Q,R,S,T,Y C, I
V70N R SEQ ID NO: 241
D71 D71N F SEQ ID NO: 242 A, C, G, Η, I, L, Μ, N, S, T, V, Y, F, P, R A, C, G, Η, I, L, Μ, N , S, T, V, Y
D71N R SEQ ID NO: 243
N73 N73N F SEQ ID NO: 244 A, C, D, F, G, Η, I, L, R, S,T,V, Y, P A, C, D, F, G, Η, I, L , R, S, T, V, Y
N73N R SEQ ID NO: 245
А7 4 A74N F SEQ ID NO: 246 C, D, F, G, Η, I, L, N, Q, R, S, T, V, Y, P C, D, F, G, Η, I, L, N , Q, R, S, T, V, Y
A74N R SEQ ID NO: 247
V7 5 NNK75 F SEQ ID NO: 248 С, I, L, A, D, F, G, H, K,M,P,Q,R,S,T,W, Y С, I, L
MNN75 R SEQ ID NO: 249
D77 NNK77 F SEQ ID NO: 250 Y, A, E, F, G, Η, K, L, Μ, N, P, Q, R, T, V, W Y
MNN77 R SEQ ID NO: 251
Q78 Q78N F SEQ ID NO: 252 A, C, D, F, G, Η, I, L, M,N, R, S,T,V, Y, P A, C, D, F, G, Η, I, L ,M,N, R, S, T, V, Y
Q78N R SEQ ID NO: 253
R7 9 NNK79 F SEQ ID NO: 254 A, C, D, E, F, Η, K, L, N,Q,R,S,T,W,Y,I, P,V A, C, D, E, F, Η, K, L , N, Q, R, S, T, W, Y
MNN79 R SEQ ID NO: 255
R8 0 R80N F SEQ ID NO: 256 A, C, D, F, G, Η, I, L, N, S,T,V, Y, P A, C, D, F, G, Η, I, L ,N, S,T,V, Y
R80N R SEQ ID NO: 257
L81 L81N F SEQ ID NO: 258 A, C, D, F, G, H, I, N, P,R,S,T,V,Y A, C, D, F, G, Η, I, N , P, R, S, T, V
L81N R SEQ ID NO: 259
Е83 E83N F SEQ ID NO: 260 A, C, D, F, G, H, I, K, A, C, D, F, G, H, I, К
E83N R SEQ ID NO: 261 L, N, P, R, S, T, V, Y , L,N,P,R,S,T, V, Y
P84 NNK84 F SEQ ID NO: 262 A, С, E, I, S, V, W, Y, F,G,H,L,N,R,T A, С, E, I, S, V, W, Y
MNN84 R SEQ ID NO: 263
L85 L85N F SEQ ID NO: 264 C, G, V, A, D, E, F, H, I, N, P, Q, R, S, T, Y C, G,V
L85N R SEQ ID NO: 265
S86 S8 6N F SEQ ID NO: 266 A, I, T, V, C, D, F, G, H, L, Μ, N, P, Q, R, Y A, I,T,V
S8 6N R SEQ ID NO: 267
Пример 11. Идентификация мотива 1 и анализ аминокислотных положений, влияющих на функцию PIP-72Aa.
На основе выравнивания белковой последовательности PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) и других активных представителей семейства, в том числе PIP-72Da (SEQ ID NO: 10), PIP-72Fa (SEQ ID NO: 18), GBP A3175 (SEQ ID NO: 20) и PIP-72Gb (SEQ ID NO: 32), показанных на фиг. 2, был идентифицирован консервативный мотив 1 в качестве потенциального важного для функции (подчеркнут на фиг. 2 относительно PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2). Каждое положение в мотиве 1 (37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50
- 155 031651 и 51) подвергали насыщающему мутагенезу с применением олигонуклеотидных праймеров, указанных в табл. 24. Полученные плазмидные ДНК трансформировали в E. coli, и белок экспрессировался, как описано в примере 3. Биологические анализы проводили на западном кукурузном жуке, как описано в примере 4, с тем, чтобы определить, какие варианты генов сохраняли инсектицидную активность. В табл. 24 указаны положения, которые подвергали мутагенезу, и обобщены полученные данные. Для каждого положения показаны аминокислотные замены, которые давали варианты полипептида PIP-72A, которые сохраняли активность против западного кукурузного жука. Также отмечены аминокислотные замены, связанные с экспрессией растворимых белков в E. coli.
Таблица 24
Остаток НаЗвани е олигону клеотид а Идентификато Р последовател ьности Идентифицирован ные Замены Активные Замены Экспрессия растворимых форм
Е37 37nnk F SEQ ID NO: 268 А, С, D, Е, F, G, I, К, L, М, N, S, Т, V, И, Р, R, W, Y А, С, D, F, G, I, К, L, Μ, N, S, Т, V А, С, D, Е, F, G, I, К, L, Μ, N, S, Т, V, И, R, W, Y
A, c, D, E, F, A, c, D, E, F, A, C, D, E,
T38N F SEQ ID NO: G, H, I, L, M, G, H, I, L, M, F, G, H, I,
269 N, Q, R, s, V, N, Q, R, s, v, L, M, N, Q,
Т38 W, Y, K, W, Y R, s, V, w,
T38N R SEQ ID NO: Y
270
F, A, C, D, E, F F, W, Y
W39 39nnk F SEQ ID NO: G, M, H, N, I, K, Q, L, R,
271 P,
s. T, v. Y
A, C, E, F, G, A, C, E, F, G, A, C, D, E,
SEQ ID NO: H, I, K, L, M, H, I, K, L, M, F, G, H, I,
D40 40nnk F N, Q, R, s, T, N, Q, R, s, T, K, L, M, N,
272
V, w, Y, P V, w, Y Q, R, s, T,
v, W, Y, P
A, C, D, E, F, отсутствует F, I, L, N,
R41 41nnk F SEQ ID NO: G, N, I, K, Q, L, M, V
273 P, s, T,
V, w, Y
A, C, D, E, F, A, C, D, E, F, A, c. D, E,
SEQ ID NO: G, I, K, L, M, G, I, K, L, M, F, G, I, K,
S42 42nnk F N, Q, R, s, T, N, Q, R, T, v, L, M, N, Q,
274
V, w, Y, P W, Y R, s, T, V,
W, Y, P
A, C, E, F, G, отсутствует
D43 43nnk F SEQ ID NO: H, I, Q, K, R, L, N,
275 P, s, T,
V, w, Y
A, D, E, G, L, A, D, E, G, L, A, D, E, G,
S44N F SEQ ID NO: M, N, P, Q, T, M, N, P, Q, T, L, M, N, P,
S44 276 V, R, Y, W H, I, K, V, Y Q, H, T, I, V, K, Y, R,
S44N R SEQ ID 277 NO: w
K, R, S, A, c. K, S K, R, L, M,
R45 45nnk F SEQ ID NO: D, E, M, F, N, G, H, Q, Q, S, Y
278 L, P,
T, v, W, Y
A, Q, C, D, E, A, Q A, G, Q
G46 46nnk F SEQ ID NO: F, M, H, N, I, K, R, L,
279 P, s,
T, V, w, Y
c. V, Y, A, D, c. V, Y C, F, V, Y,
F47 47nnk F SEQ ID NO: E, G, M, H, N, I, K, Q, H, L, M
280 L, P,
R, s, T, W
I, L, A, C, D, I, L, I, L, V
V4 8 48nnk F SEQ ID NO: E, M, F, N, G, H, Q, K, R,
281 P,
s, W
c. F, M, R, Y, c. F, M, R, Y C, F, L, M,
L49 49nnk F SEQ ID NO: A, D, K, E, N, G, H, Q, R, Y
282 I, P,
s, T, V, w
A, c, D, I, M, A, c, D, I, M, A, c, D, I,
S50 50nnk F SEQ ID NO: P, Q, s, T, v, P, Q, T, V M, Q, s, T,
283 F, G, H, K, L, v, F, H, L,
N, R, W, Y N, R, W, Y
A, c, M, V, D, A, C, Μ, V A, C, L, M,
SEQ ID NO: E, F, G, H, K, V
L51 51nnk F
284 N, P, Q, R, S,
T, W, Y
- 156 031651
Пример 12. Варианты PIP-72Aa с несколькими аминокислотными заменами в мотиве 1.
Варианты PIP-72Aa с несколькими выбранными аминокислотными заменами в мотиве 1 получали при помощи методики QuikChange™ (Agilent, Санта-Клара, Калифорния) с применением комбинации олигонуклеотидных праймеров, указанных в табл. 25. Полученные плазмидные ДНК трансформировали в E. coli, и белок экспрессировался, как описано в примере 3. Биологические анализы проводили на западном кукурузном жуке, как описано в примере 4, с тем, чтобы определить, какие варианты генов сохраняли инсектицидную активность. ДНК-секвенирование проводили на активных вариантах генов. Нуклеотидная и аминокислотная последовательности активных вариантов представлены в табл. 26. Из 78 скринированных вариантов 20 характеризовались детектируемой активностью против западного кукурузного жука. Активные варианты содержали 2-7 аминокислотных замен относительно PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2). В табл. 27 показаны аминокислотные замены полученных активных вариантов полипептида PIP-72 относительно PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2).
Таблица 25
Праймер Идентификатор последовательност и Праймер Идентификатор последовательност и
CombiMMl:1 Т SEQ ID NO: 773 CombiMMl:17 T SEQ ID NO: 789
CombiMMl:2 Т SEQ ID NO: 774 CombiMMl:18 T SEQ ID NO: 790
CombiMMl:3 Т SEQ ID NO: 775 CombiMMl:19 T SEQ ID NO: 791
CombiMMl:4 Т SEQ ID NO: 776 CombiMMl:20 T SEQ ID NO: 792
CombiMMl:5 Т SEQ ID NO: 777 CombiMMl:21 T SEQ ID NO: 793
CombiMMl:6 Т SEQ ID NO: 778 CombiMMl:22 T SEQ ID NO: 794
CombiMMl:7 Т SEQ ID NO: 779 CombiMMl:23 T SEQ ID NO: 795
CombiMMl:8 T SEQ ID NO: 780 CombiMMl:24 T SEQ ID NO: 796
CombiMMl:9 T SEQ ID NO: 781 CombiMMl:25 T SEQ ID NO: 797
CombiMMl:10 T SEQ ID NO: 782 CombiMMl:2 6 T SEQ ID NO: 798
CombiMMl:11 T SEQ ID NO: 783 CombiMMl:27 T SEQ ID NO: 799
CombiMMl:12 T SEQ ID NO: 784 CombiMMl:28 T SEQ ID NO: 800
CombiMMl:13 T SEQ ID NO: 785 CombiMMl:29 T SEQ ID NO: 801
CombiMMl:14 T SEQ ID NO: 786 CombiMMl:30 T SEQ ID NO: 802
CombiMMl:15 T SEQ ID NO: 787 CombiMMl:31 T SEQ ID NO: 803
CombiMMl:16 T SEQ ID NO: 788 CombiMMl:32 T SEQ ID NO: 804
- 157 031651
Таблица 26
% идентичность с Р1Р-72Аа Обозначение клона Полинуклеотид Полипептид
95,35% D D0416473 SEQ ID NO: 805 SEQ ID NO: 825
95,35% D D0416474 SEQ ID NO: 806 SEQ ID NO: 826
96,51% D D0416483 SEQ ID NO: 807 SEQ ID NO: 827
94,19% D D0416488 SEQ ID NO: 808 SEQ ID NO: 828
95,35% D D0416490 SEQ ID NO: 809 SEQ ID NO: 829
97,67% D D0416492 SEQ ID NO: 810 SEQ ID NO: 830
97,67% D D0416493 SEQ ID NO: 811 SEQ ID NO: 831
95,35% D D0416502 SEQ ID NO: 812 SEQ ID NO: 832
96,51% D D0416506 SEQ ID NO: 813 SEQ ID NO: 833
94,19% D D0416507 SEQ ID NO: 814 SEQ ID NO: 834
94,19% D D0416514 SEQ ID NO: 815 SEQ ID NO: 835
94,19% D D0416520 SEQ ID NO: 816 SEQ ID NO: 836
91,86% D D0416521 SEQ ID NO: 817 SEQ ID NO: 837
96,51% D D0416527 SEQ ID NO: 818 SEQ ID NO: 838
94,19% D D0416528 SEQ ID NO: 819 SEQ ID NO: 839
95,35% D D0416542 SEQ ID NO: 820 SEQ ID NO: 840
94,19% D D0416543 SEQ ID NO: 821 SEQ ID NO: 841
95,35% D D0416551 SEQ ID NO: 822 SEQ ID NO: 842
91,86% D D0416552 SEQ ID NO: 823 SEQ ID NO: 843
95,35% D D0416555 SEQ ID NO: 824 SEQ ID NO: 844
Таблица 27
Обозначение клонов Полипептид Замены относительно SEQ ID NO: 2
D D0416473 SEQ ID NO: 825 E037V, T038S, D040E, S044A
D D0416474 SEQ ID NO: 826 E037V, D040G, S044A, S050G
D D0416483 SEQ ID NO: 827 L049M, S050C, L051M
D D0416488 SEQ ID NO: 828 T038G, S044A, L049M, S050C, L051M
D D0416490 SEQ ID NO: 829 D040G, S042T, S044N, S050C
D D0416492 SEQ ID NO: 830 S050C, L051M
D D0416493 SEQ ID NO: 831 S044N, L049M
D D0416502 SEQ ID NO: 832 E037V, T038S, D040A, S050C
D D0416506 SEQ ID NO: 833 E037C, T038G, S050C
D D0416507 SEQ ID NO: 834 E037V, T038G, S044A, L049M, S050A
D D0416514 SEQ ID NO: 835 E037V, T038G, D040E, S044N, S050C
D D0416520 SEQ ID NO: 836 E037C, T038G, S042T, S044N, L049M
D D0416521 SEQ ID NO: 837 E037V, S050C, T038S, L051M D040G, S044A, V048I,
D D0416527 SEQ ID NO: 838 T038G, S042T, S050C
D D0416528 SEQ ID NO: 839 E037D, D040A, S042T, L049M, S050C
D D0416542 SEQ ID NO: 840 E037C, D040G, L049M, S050A
D D0416543 SEQ ID NO: 841 E037C, T038S, D040E, S042T, S050C
D D0416551 SEQ ID NO: 842 E037V, T038S, D040A, S042N
D D0416552 SEQ ID NO: 843 E037V, S050C, D040E, L051M S042T, S044N, L049M,
D D0416555 SEQ ID NO: 844 E037D, T038S, S044A, S050C
Пример 13. Идентификация дополнительных аминокислотных положений, влияющих на функцию PIP-72Aa.
Оставшиеся аминокислотные положения 2, 3, 4, 5, 6, 9, 13, 14, 17, 18, 21, 22, 25, 26, 28, 29, 35, 36, 52, 54, 55, 57, 59, 62, 63, 64, 67, 69, 72, 76, 82 подвергали насыщающему мутагенезу, как описано в примере 11, с применением олигонуклеотидных праймеров, указанных в табл. 27. Полученные плазмидные ДНК трансформировали в E. coli, и белок экспрессировался, как описано в примере 3. Биологические анализы проводили на западном кукурузном жуке, как описано в примере 4, с тем, чтобы определить, какие варианты генов сохраняли инсектицидную активность. В табл. 28 указаны положения, которые подвергали мутагенезу, и приведены аминокислотные замены, идентифицированные с помощью секвенирования ДНК, и показаны аминокислотные замены, которые давали варианты PIP-72Aa, которые сохраняли активность против западного кукурузного жука.
- 158 031651
Таблица 28
ПОЛОЖЕНИ Е НАЗВАНИЕ ОЛИГОНУК ЛЕОТИДА ИДЕНТИФИКАТОР ПОСЛЕДОВАТЕЛЕН ости ИДЕНТИФИЦИРОВАЛИ ЫЕ ЗАМЕНЫ АКТИВНЫЕ ЗАМЕНЫ
G2 NNK2 НМ SEQ ID NO: 865 А, С, D, Е, I, К, L,N, R, S,T,V,W, Y А, С, D, Е, I, К, L,N ,R,S,T,V,W,Y
13 NNK3 НМ SEQ ID NO: 866 А, С, D, Е, F, G, Н, L, Ν, Ρ, Q, R, S, V, W, Υ W
Т4 NNK4 НМ SEQ ID NO: 867 A, D, E, F, G, H, I, K, L, P, R, S, V, W, Y A, D, E, Η, I, K, L, R ,S,V,W,Y
V5 NNK5 НМ SEQ ID NO: 868 A, С, E, G, H, I, K, L, N, Q, R, S, T, W, Y A,C,G,H,I,Y
Тб NNK6 НМ SEQ ID NO: 869 A, C, D, E, F, G, H, I, K, L, Μ, N, P, Q, R, S, V,W, Y A, C, F, G, H, I, К, M ,P,Q,R,S,W,Y
S9 NNK9 SEQ ID NO: 889 A, C, D, E, F, G, H, I, K, L, Μ, P, Q, R, T, V, W, Y A, C, G, T
MNN9 SEQ ID NO: 890
113 NNK13 НМ SEQ ID NO: 870 A, C, D, F, G, Η, K, L, Μ, N, P, Q, R, S, T, V, W, Y N,Q,V
Е14 NNK14 НМ SEQ ID NO: 871 A, C, D, F, G, Η, K, L, Μ, N, P, Q, R, S, T, V, W, Y A,C,F,H,K,Q
117 NNK17 НМ SEQ ID NO: 872 A, C, D, E, F, G, Η, K, L, Μ, N, P, Q, R, S, T, V,W, Y E, V
N18 NNK18 НМ SEQ ID NO: 873 A, C, D, E, F, G, H, I, K, L, M, Q, R, S, T, V, Y S
G21 NNK21 НМ SEQ ID NO: 874 A, D, F, I, L,M, P, R, S,T,V,W ОТСУТСТВУЕТ
S22 NNK22 НМ SEQ ID NO: 875 A, C, D, E, F, G, H, I, K, L, Μ, N, P, Q, R, T, V,W, Y A, D, F, G, Η, I, К, L , Μ, N, P, Q, R, T, V, Y
D25 NNK25 НМ SEQ ID NO: 876 A, С, E, F, G, H, L, N, P,Q,R,S,V,W A,E,F,N,Q
Т26 NNK26 НМ SEQ ID NO: 877 A, C, D, E, F, G, H, I, K, L, Μ, N, P, Q, R, S, V,W, Y E,P
F2 8 NNK2 8 SEQ ID NO: 891 A, C, D, E, G, H, I, K, L, Μ, N, P, Q, R, S, T, V,W, Y P,W, Y
MNN2 8 SEQ ID NO: 892
F2 9 NNK2 9 SEQ ID NO: 893 A, C, D, E, G, H, I, K, L,M,N, P, S,T,V,W, Y A, С, I, L, Q, R, W, Y
MNN2 9 SEQ ID NO: 894
К35 NNK35 SEQ ID NO: 895 A, C, D, G, Η, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, Y A, C, D, G, Η, I, L, M ,N,Q,R,S,T,V
MNN35 SEQ ID NO: 896
Q36 NNK36 НМ SEQ ID NO: 878 A, С, E, G, H, I, K, L, Μ, N, P, R, S, T, V, W, Y A, С, E, G, H, I, K, L ,N,P,R,S,T,V
К52 NNK52 SEQ ID NO: 897 A, C, D, E, F, G, H, I, L, Μ, N, P, R, S, T, V, W, Y C, F, Η, I, L, Μ, N, R ,S,T,W,Y
MNN52 SEQ ID NO: 898
N54 NNK54 НМ SEQ ID NO: 879 A, C, D, E, F, G, I, K, L, Μ, P, Q, R, S, T, V, W, Y C,D,E, F,G,K,M,Q ,R,S,W
G55 NNK55 НМ SEQ ID NO: 880 A, C, D, E, F, H, I, K, L, Μ, N, P, Q, R, S, T, V,W, Y ОТСУТСТВУЕТ
Q57 NNK57 НМ SEQ ID NO: 881 A, C, D, E, F, G, H, I, K, L, Μ, P, R, S, T, V, W E,L,M,S,T
- 159 031651
Р59 NNK59 НМ SEQ ID NO: 882 A, C, D, E, F, G, Η, I, K, L, Μ, N, Q, R, S, T, V,W, Y ОТСУТСТВУЕТ
V62 NNK62 НМ SEQ ID NO: 883 A, C, D, E, F, G, Η, K, L, Μ, N, P, Q, R, S, T, W, Y ОТСУТСТВУЕТ
Q63 NNK63 НМ SEQ ID NO: 884 A, C, D, E, F, G, Η, I, K, L, Μ, N, P, R, S, T, V,W, Y C, G, I, L, Μ, N, T, V ,Y
А64 NNK64 НМ SEQ ID NO: 885 C, D, E, F, G, H, I, K, L, Μ, N, P, Q, R, S, T, V,W, Y F,G,H,R, S,Y
К67 NNK67 SEQ ID NO: 899 A, C, D, F, G, Η, I, L, Μ, N, P, Q, R, S, T, V, W, Y A, C, D, F, Η, I, L, M , N, Q, R, S , T, V, W, Y
MNN67 SEQ ID NO: 900
Е69 NNK69 НМ SEQ ID NO: 886 A, C, D, F, G, H, I, K, L, Μ, N, P, Q, R, S, T, V,Y A, C, D, F, Η, I, L, M ,Q,R,S,T,V,Y
N72 NNK72 НМ SEQ ID NO: 887 A, C, D, E, F, G, I, K, L, Μ, P, Q, R, S, T, V, W, Y A,C,D,E,G,Κ,Μ,P ,Q,R,S,T,V,W
К7 6 NNK7 6 SEQ ID NO: 901 A, C, D, E, F, G, Η, I, , L, N, P, Q, R, S, T, V ,W,Y A, C, F, Η, I, L, Q, R , S,T,V,W,Y
MNN7 6 SEQ ID NO: 902
182 NNK82 НМ SEQ ID NO: 888 A, D, E, F, G, Η, K, L, Μ, N, P, Q, R, S, T, V, W, Y A, L,M,R,V
Пример 14. Варианты PIP-72Aa с повышенной активностью против западного кукурузного жука.
Для создания вариантов PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) с повышенной активностью против западного кукурузного жука получали библиотеки при помощи шаффлинга синтетической ДНК (Ness et al., 2002, Nature Biotechnology, 20, 1251-5) PIP-72Aa (SEQ ID NO: 1) и при помощи сайт-направленного мутагенеза (методика QuikChange™ Lightning или методика QuikChange™ II, Agilent, Санта-Клара, Калифорния). Идентифицировали 12 полипептидов варианта PIP-72 с повышенной специфической активностью против западного кукурузного жука. Полипептиды варианта PIP-72 A5, A5:10E, A5:10T, A5:10V, A5:10A, A5:10L, A5:10E/78H, A5:8M, A5:71H/83F, A5:4S/54Q/78H, A5:71H и 3 68 характеризовались приблизительно 1,2-2-кратной повышенной инсектицидной активностью против западного кукурузного жука по сравнению с PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2). В табл. 29 представлены аминокислотные замены относительно PIP-72Aa (SEQ ID NO: 2) для каждого из полипептидов варианта PIP-72, идентификатор соответствующей аминокислотной последовательности и идентификатор соответствующей последовательности нуклеиновой кислоты. Аминокислотные замены относительно A5 выделены жирным шрифтом.
- 160 031651
Таблица 29
Вариант Аминокислотные замены относительно SEQ ID NO: 2 Полипептидная последовательность Полинуклеотидная последовательность
72Аа SEQ ID NO 2 SEQ ID NO 1
Combi3 68 S10E, L49M, E83Y SEQ ID NO: 903 SEQ ID NO: 915
А5 S30G, V31I, G32D, N33S, T38S, K53R, Н57А SEQ ID NO: 904 SEQ ID NO: 916
А5:10Е S10E,S30G, V31I, G32D, N33S, T38S, K53R, H57A SEQ ID NO: 905 SEQ ID NO: 917
А5: ЮТ S10T, S30G, V31I, G32D, N33S, T38S, K53R, H57A SEQ ID NO: 906 SEQ ID NO: 918
А5:10V S10V, S30G, V31I, G32D, N33S, T38S, K53R, H57A SEQ ID NO: 907 SEQ ID NO: 919
А5:10А S10A, S30G, V31I, G32D, N33S, T38S, K53R, H57A SEQ ID NO: 908 SEQ ID NO: 920
А5:10L S10L, S30G, V31I, G32D, N33S, T38S, K53R, H57A SEQ ID NO: 909 SEQ ID NO: 921
А5:10Е/78Н S10E, S30G, V31I, G32D, N33S, T38S, K53R, H57A, Q78H SEQ ID NO: 910 SEQ ID NO: 922
А5: 8М N8M, S30G, V31I, G32D, N33S, T38S, K53R, H57A SEQ ID NO: 911 SEQ ID NO: 923
А5:71H/83F S30G, V31I, G32D, N33S, T38S, K53R, H57A, D71H, E83F SEQ ID NO: 912 SEQ ID NO: 924
А5:4S/ 54Q/78H S30G, V31I, G32D, N33S, T38S, K53R, N54Q, H57A, Q78H SEQ ID NO: 913 SEQ ID NO: 925
А5:71Н S30G, V31I, G32D, N33S, T38S, K53R, H57A, D71H SEQ ID NO: 914 SEQ ID NO: 926
Для определения активности против западного кукурузного жука исследуемые белки анализировали, как описано в примере 4. Использовали систему баллов от 0 до 3 на основании размера и смертности. Если не наблюдали ответа или нормального роста, то присваивали балл 0. Если рост был несколько замедлен без какой-либо смертности, то это соответствовало баллу 1. Балл 2 означал частичную гибель (в каждой лунке применяли по несколько насекомых) и значительное подавление роста. Балл 3 указывал на полную смертность. Каждую обработку повторяли 6 раз для возможного наибольшего балла 18. В этой системе баллов балл 9 при 6 повторах одной обработки означает 50% ответ (9 из 18) обработки и называется ILC50 (подавление роста и летальная концентрация для 50% ответа). Данные по активности показаны в табл. 30. Сведенные значения ILC50 представляют средние из 2-20 экспериментов.
- 161 031651
Таблица 30
Вариант сведенное ILC50 сведенный нижний диапазон сведенный верхний диапазон Кратность повышения
Р1Р-72Аа SEQ ID NO: 2 56, 68 48,32 66, 69 1 η = 18
3 68 SEQ ID NO: 903 48,86 40,78 58,22 1, 16 η = 4
A5 SEQ ID NO: 904 36, 68 30,76 43,24 1, 55 η = 20
A5 :10E SEQ ID NO: 905 33, 96 27,78 41,01 1, 67 η = 10
A5:10T SEQ ID NO: 906 30, 54 23,78 38,48 1, 86 η = 4
A5 :10V SEQ ID NO: 907 31, 35 25,69 37,87 1, 81 η = 4
A5:10A SEQ ID NO: 908 42, 38 35,61 50,27 1, 34 η = 2
A5:10L SEQ ID NO: 909 39, 05 31,87 47,78 1, 45 η = 2
A5:10E/78H SEQ ID NO: 910 36, 04 28,64 44,66 1, 57 η = 10
A5: 8M SEQ ID NO: 911 25, 02 19,34 30,90 2,27 Π = 6
A5:71H/83F SEQ ID NO: 912 32,24 26, 72 38,44 1, 78 η = 4
A5:4S/54Q/78H SEQ ID NO: 913 29, 01 23,42 35,20 1, 95 η = 4
A5 :71H SEQ ID NO: 914 26, 82 20,57 33,75 2,1 η = 2
Приведенное выше описание различных проиллюстрированных вариантов осуществления согласно настоящему раскрытию не подразумевается как исчерпывающее или для ограничения настоящего объема точной раскрытой формой. Хотя конкретные варианты осуществления и примеры описаны в данном документе для иллюстративных целей, в пределах объема настоящего раскрытия возможны различные эквивалентные модификации, как будет понятно специалистам в данной области техники. Представленные в данном документе идеи можно применять для других целей, отличающихся от примеров, описанных выше. В свете вышеизложенных идей возможны многочисленные модификации и вариации, и, следовательно, они находятся в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.
Эти и другие изменения можно выполнять в свете вышеизложенного подробного описания. В целом, в следующей формуле изобретения используемые выражения не должны рассматриваться как ограничивающие объем настоящего изобретения конкретными вариантами осуществления, раскрытыми в описании и формуле изобретения.
Полное раскрытие каждого процитированного документа (в том числе патенты, патентные заявки, статьи из научных журналов, рефераты, руководства, книги или другие раскрытия) в предпосылках изобретения, подробном описании и примерах включено в данный документ посредством ссылки во всей их полноте.
Были приложены усилия по обеспечению точности в отношении применяемых чисел (например, количества, температуры, концентрации и т.д.), но могут быть допущены некоторые экспериментальные ошибки и отклонения.
- 162 031651
Перечень последовательностей <110> Пионер Хай-Брэд Интернешнл, Инк.
Диен, Скотт
Инглиш, Джеймс лю, лу
Онг, Азалия
Орал, джарред Розен, Барбара шелленбергер, Уте Удраншки, Ингрид вэй, цзюнь-чжи Се, вэйпин Чжу, гэнхай <120> ИНСЕКТИЦИДНЫЕ БЕЛКИ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ <130> 5345-WO-PCT <150> 61/877,625 <151> 2013-09-13 <160> 980 <170> Patentin версия 3.5 <210> 1 <211> 261 <212> ДНК <213> Pseudomonas chlororaphis <400>1 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210> 2 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> Pseudomonas chlororaphis <400> 2
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a G1 n Hi s pro туг Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 3 <211> 261 <212> ДНК <213> Pseudomonas rhodesiae <400> 3 atgggtatta ctgttaaaaa caattcatcc aacacaattg aagttgcagt ggaaaagatg gggatacaag cttcttctca atcgctaacg gcaagcagga aggtctgaca gtcgcggctt tgtactctcc ttaaagagaa atggagcaca tatgttcagg ccagtagcca aattgaagtt gaccataacg cagtgaagga cctattcacc cgctctcgta a caaccattgg aagctgggac acacccatac tcatggcgag
120
180
240
261 <210> 4 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> Pseudomonas rhodesiae
- 163 031651 <400> 4
Met Gly lie Thr val Lys Asn Asn Ser Ser Asn Thr lie Glu val Al a
1 5 10 15
val Asn Hi s Trp Gly Lys Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser Ile Ala
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Gln lie Glu val Asp Hi s Asn Al a val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Pro lie Hi s Pro Leu Ser
85
<210>5 <211> 261 <212> ДНК <213> Pseudomonas chlororaphis <400>5 atgggtatta ccgttaccaa caaatcatcg aaaaagattg aagtctcgat caacaaatgg60 ggcagcgacg gcgacaccac cttctttgga gtcgacagcg gcaagcagga aagctgggac120 cgatcggacg accgtggctt tgtgctgtcc ctgaaaagaa acggcaccca ggcgccttac180 tatgtacagg caacgagcaa gatcgaagtt gatagcagca ccgtgaaaga ccacggtgag240 actattcacc cggtcgcctg a261 <210> 6 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> Pseudomonas chlororaphis <400> 6
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu val Ser
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Thr Phe Phe Gly val Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Thr Gln Al a pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu val Asp Ser Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210>7 <211> 261 <212> ДНК <213> Pseudomonas mandelii <400>7 atgggtatta ccgttaccaa caaatcatcg aaaaagattg aagtctcggt caacaaatgg60 ggcagcgacg gcgacaccac cttctttgga atcgacagcg gcaagcagga aagctgggac120 agatcggacg accgtggctt tgtgctgtcc ctgaaaagga acggcaccca ggcgccttac180 tatgtccagg ccacgagcaa gatcgaagtt gatagcagca ccgtgaaaga ccacggtgag240 actattcacc cggtcgccta a261 <210> 8 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> Pseudomonas mandelii <400>8
Met Gly ile Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu val Ser 15 1015 val Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Thr Phe Phe Gly lie Asp
2530
- 164 031651
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Thr Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser LyS lie Glu val Asp Ser Ser Thr val LyS Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210>9 <211>258 <212> ДНК <213> Pseudomonas congelans <400>9 atgggtatta ccgttaccaa caaatcatcg aaaaaaattg aagcctcgat caacaaatgg60 ggtagcgacg gcgacaccaa gttcttcgga atcgatagcg gcaagcagga aagctgggac120 cgatcagacg accgtggctt tgtgctgtca ctgaaaagga acggcaccca ggcgccttac180 tatgtacagg ccacgagcaa gatcgaaatt gaaaacagta cggtgaaaga ccacggtgaa240 accattcacc cggtcgcg258 <210> 10 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> Pseudomonas congelans <400> 10
Met Gly lie Thr val Thr Asn LyS Ser Ser LyS LyS lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr LyS Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Thr Gin Al a Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser LyS lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val LyS Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 11 <211> 261 <212> ДНК <213> Pseudomonas mandelii <400>11 atgggtatta ccgttaccaa caaatcatcg aaaaaaattg aagcctcgat caacaaatgg60 ggtagcgacg gcgacaccaa attcttcgga atcgatagcg gcaagcagga aagctgggac120 agatcagacg atcgcggctt tgtgctatcc ctgaaaagga acggcaccca ggcgccttac180 tatgtacagg ccacgagcaa gatcgaagtt gaaaacagta tggtgaaaga ccacggcgaa240 actattcacc cggtcgcgta a261 <210> 12 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> Pseudomonas mandelii <400> 12
Met Gly lie Thr val Thr Asn LyS Ser Ser LyS LyS lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr LyS Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Thr Gin Ala pro Tyr Tyr val Gin Ala
50 55 60
Thr Ser LyS lie Glu val Glu Asn Ser Met val LyS Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
165 031651
Thr lie His Pro val Ala <210>13 <211> 261 <212> ДНК <213> Pseudomonas ficuserectae <400>13 atgggtatta ccgttaccaa caaatcatcg aaaaaaattg aagcctcgat caacaaatgg60 ggtagcgacg gcgacaccaa gttcttcgga atcgatagcg gcaagcagga aagctgggac120 cgatcagacg accgtggctt tgtgctgtca ctgaaaagga acggcaccca ggcgccttac180 tatgtacagg ccacgagcaa gatcgaaatt gaaaacagtg cggtgaaaga ccacggtgaa240 accattcacc cggtcgcgta a261 <210>14 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> Pseudomonas ficuserectae <400> 14
Met Gly lie Thr val Thr Asn LyS Ser Ser LyS LyS lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr LyS Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Thr Gin Al a Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser LyS lie Glu lie Glu Asn Ser Al a val LyS Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210>15 <211>264 <212> ДНК <213> Pseudomonas congelans <400>15 atgagcatta ccgttaaaaa taacacctcg aatataattg aagttgccat taaccaatgg60 gacacggacg gcgacactcg ttactctccg ctcgctgcgg gagcatcaga taagtgggtt120 agaaaggaca gtagaggata tgttctttca ctaagacaag gaggtactga aaagccatat180 tacgtactgg ttgacagcaa cattgtggtt gccaacactg aggtaaaaga caacgatacg240 gttatttctc caatcagtag ataa264 <210> 16 <211>87 <212> БЕЛОК <213> Pseudomonas congelans <400> 16
Met Ser lie Thr val LyS Asn Asn Thr Ser Asn lie lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Gin Trp Asp Thr Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Leu Al a
20 25 30
Al a Gly Al a Ser Asp LyS Trp val Arg LyS Asp Ser Arg Gly Tyr val
35 40 45
Leu Ser Leu Arg Gin Gly Gly Thr Glu LyS Pro Tyr Tyr val Leu val
50 55 60
Asp Ser Asn lie val val Al a Asn Thr Glu val LyS Asp Asn Asp Thr
65 70 75 80
val lie Ser Pro lie Ser Arg
85
<210>17 <211>273 <212> ДНК
- 166 031651 <213> Pseudomonas mosselii <400>17 atgaagctca cgatcaccaa tggcgcaagc acatcgattg acattgcagt gagtgcatgg60 cgtaacgacg gcaatgacag ttactactcg atagctcaag gggaatctga tacctgggac120 cgcagcgacg caagagggta cttgatggcg gtaaaaatga aatcccaggt aaaaacctac180 tacatatccc aaaccagcaa gatagttgtt gaagacaaca ttgttaaaga ccacggccaa240 acccttaacc cgctatacgc agtaaacaac atg273 <210> 18 <211>91 <212> БЕЛОК <213> Pseudomonas mosselii <400> 18
Met LyS Leu Thr lie Thr Asn Gly Al a Ser Thr Ser lie Asp lie Al a
1 5 10 15
val Ser Al a Trp Arg Asn Asp Gly Asn Asp Ser Tyr Tyr Ser lie Al a
20 25 30
Gin Gly Glu Ser Asp Thr Trp Asp Arg Ser Asp Al a Arg Gly Tyr Leu
35 40 45
Met Al a val LyS Met LyS Ser Gin val LyS Thr Tyr Tyr lie Ser Gin
50 55 60
Thr Ser LyS lie val val Glu Asp Asn lie val LyS Asp Hi s Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Asn Pro Leu Tyr Al a val Asn Asn Met
85 90
<210>19 <211>273 <212> ДНК <213> Burkholderia pseudomallei <400>19 atggcgataa gcgtcaaaaa cagcgcatcg aacacggttg aagtgtcgat caatcactgg60 ggaacggacg gagacaccaa gccgttcaag atggcgcccg gagccagcga ttcctgggat120 cgcaacgacc tacgtggctt cgtcatgtat gtgcagctgg gcgggtcggc gacgccgtac180 tatgtgctga gcaccagtaa tatcgtgatc tacgacgaca aggtgacgga tagcgggcaa240 acgctccttc ccgcaaacaa gcgttttggc tga273 <210> 20 <211>90 <212> БЕЛОК <213> Burkholderia pseudomallei <400> 20
Met Al a lie Ser val LyS Asn Ser Al a Ser Asn Thr val Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr LyS Pro Phe LyS Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Asp Ser Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Al a Asn LyS Arg Phe Gly
85 90
<210> 21 <211>270 <212> ДНК <213> неизвестный <220>
<223> кодирует гипотетический белок из ризосферы проса прутьевидного <400> 21 atgagcatca caatcacaaa cggagcaagc agacagtcca aattgcagtc agcgtatggg 60
- 167 031651 ggcgagacgg tagtgacgat tattattcac tagagcccgg caaaggtgat acatggggac120 gtaatgaccc aagaggttac ttgatggcca taaaggccaa cccaagcagg tgtatattac180 gtcgcctttg acagtcaaat tgtcatagaa gacaaccttg taaaggatcg cggccgaact240 atcaacccac tcgcttcgaa taatcaataa270 <210> 22 <211>89 <212> БЕЛОК <213> неизвестный <220>
<223> Гипотетический белок из ризосферы проса прутьевидного <400> 22
Met Ser lie Thr lie Thr Asn Gly Al a Ser Gin Thr val Gin lie Al a
1 5 10 15
val Ser val Trp Gly Arg Asp Gly Ser Asp Asp Tyr Tyr Ser Leu Glu
20 25 30
pro Gly LyS Gly Asp Thr Trp Gly Arg Asn Asp Pro Arg Gly Tyr Leu
35 40 45
Met Al a lie LyS Al a Asn Pro Al a Gly val Tyr Tyr val Al a Phe Asp
50 55 60
Ser Gin lie val lie Glu Asp Asn Leu val LyS Asp Arg Gly Arg Thr
65 70 75 80
lie Asn Pro Leu Al a Ser Asn Asn Gin
85
<210> 23 <211> 297 <212> ДНК <213> неизвестный <220>
<223> кодирует гипотетический белок из ризосферы проса прутьевидного <400>23 atgaacatga gcatcacagt caccaacggg gcaagcacag tagttaacgt ggcaatcagt60 acatgggaaa aagacggcag tgacgcttac tggccattag agcaaggcaa aggtgatacc120 tggaaacgta gtgacccaag gggttacttg atggccatac aggataaatc ccaaacaact180 gaatactacg tcacctgcaa cagtgtaatt gtcatcgaag acaacctcgt gaaggatcac240 ggccggactc ttaacccact cgccgcggcc gggaagaaaa atgtggtaaa tgcgtaa297 <210>24 <211>98 <212> БЕЛОК <213> неизвестный <220>
<223> Гипотетический белок из ризосферы проса прутьевидного <400> 24
Met Asn Met Ser lie Thr val Thr Asn Gly Al a Ser Thr val val Asn
1 5 10 15
val Al a lie Ser Thr Trp Glu LyS Asp Gly Ser Asp Al a Tyr Trp Pro
20 25 30
Leu Glu Gin Gly LyS Gly Asp Thr Trp LyS Arg Ser Asp Pro Arg Gly
35 40 45
Tyr Leu Met Al a lie Gin Asp LyS Ser Gin Thr Thr Glu Tyr Tyr val
50 55 60
Thr Cys Asn Ser val lie val lie Glu Asp Asn Leu val LyS Asp Hi s
65 70 75 80
Gly Arg Thr Leu Asn Pro Leu Al a Al a Al a Gly LyS LyS Asn val val
85 90 95
Asn Al a
<210> 25 <211> 273 <212> ДНК <213> неизвестный <220>
- 168 031651 <223> Гипотетический белок из ризосферы проса прутьевидного <400> 25 atgagcatca gggcgagacg cgtaatgacc tacgtcgcct actatcaacc caatcacaaa gtagtgacga caagaggtta ttgacagtca cactcgcttc cggagcaagc ttattattca cttgatggcc aattgtcata gaataatcaa agaacagtcc ctagagcccg ataaaaggcc gaagacaacc taa aaattgcagt gcaaaggtga aaacccaagc ttgtaaagga cagcgtatgg tacatgggga aggtgtatat tcgcggccga
120
180
240
273 <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
БЕЛОК неизвестный г ипотетический белок из ризосферы проса прутьевидного <400>
Met Ser lie Thr lie Thr Asn Gly Al a Ser Arg Thr val Gin lie Al a
1 5 10 15
val Ser val Trp Gly Arg Asp Gly Ser Asp Asp Tyr Tyr Ser Leu Glu
20 25 30
pro Gly LyS Gly Asp Thr Trp Gly Arg Asn Asp pro Arg Gly Tyr Leu
35 40 45
Met Al a lie LyS Gly Gin Thr G1 n Al a Gly val Tyr Tyr val Al a Phe
50 55 60
Asp Ser Gin lie val lie Glu Asp Asn Leu val LyS Asp Arg Gly Arg
65 70 75 80
Thr lie Asn Pro Leu Al a Ser Asn Asn Gin
85 90
<210>
<211>
<212>
<213>
297
ДНК
Pseudomonas chlororaphis <400> atgaacatga acatggcaga tggaaacgta gaatactacg ggtcgaactc gcatcacagt aagacggcaa gcgacccaag tttcctgcaa ttaacccact cacaaacggt tgacgatttc gggctacttg cagcgccatc cattgcggcc gcaagcgcag tggtcattag atggccgtac gttatcgaag gggcagaaga tagttaaagt atcaaggcgc aagacaagtc acaatctcgt acgtggctaa agccattagc aagcgatacc ccgcacaact caaagatcac tgcgtaa
120
180
240
297 <210>
<211>
<212>
<213>
БЕЛОК
Pseudomonas chlororaphis <400>
Met Asn Met Ser lie Thr val Thr Asn Gly Al a Ser Al a val val LyS
1 5 10 15
val Ala lie Ser Thr Trp Gin LyS Asp Gly Asn Asp Asp Phe Trp Ser
20 25 30
Leu Asp G1 n Gly Al a Ser Asp Thr Trp LyS Arg Ser Asp Pro Arg Gly
35 40 45
Tyr Leu Met Al a val Gin Asp LyS Ser Arg Thr Thr Glu Tyr Tyr val
50 55 60
Ser Cys Asn Ser Al a lie val lie Glu Asp Asn Leu val LyS Asp Hi s
65 70 75 80
Gly Arg Thr Leu Asn Pro Leu lie Al a Al a Gly Gin LyS Asn val Al a
85 90 95
Asn Al a
<210>
<211>
<212>
<213>
309
ДНК
Pseudomonas protegens
- 169 031651 <400>29 atggaacaat caatccaaaa aaggaatata aatatgagca tatctatcac gaacgcagga60 agcagagaga tccaagttgc agtcagtact tggagcacag atagcgacat cagtgatgcc120 tattactctc tggcacccga caagggtgac aaatggaaac gtaacgaccc aagaggttac180 ttaatgactg taaaaggcca atcccaacaa ggcgtatatt acgttgcctt tgacagcgaa240 attttcatag aagacagcct tgtaaaggat cgcggaaaaa ctatcaccaa gctcgcgctg300 gaagttcaa309 <210>30 <211>92 <212> БЕЛОК <213> Pseudomonas protegens <400> 30
Met Ser lie Ser lie Thr Asn Al a Gly Ser Arg Glu lie Gln val Al a
1 5 10 15
val Ser Thr Trp Ser Thr Asp Ser Asp lie Ser Asp Al a Tyr Tyr Ser
20 25 30
Leu Al a pro Asp Lys Gly Asp Lys Trp Lys Arg Asn Asp Pro Arg Gly
35 40 45
Tyr Leu Met Thr val Lys Gly Gln Ser Gln Gln Gly val Tyr Tyr val
50 55 60
Al a Phe Asp Ser Glu lie Phe lie Glu Asp Ser Leu val Lys Asp Arg
65 70 75 80
Gly Lys Thr lie Thr Lys Leu Al a Leu Glu val Gln
85 90
<210>31 <211> 288 <212> ДНК <213> Pseudomonas chlororaphis <400>31 atgagcatca cagtcacaaa cggggcaagc acagtagtta acgtggcaat cagcacatgg60 gagaaagacg gcagtgacgc ttactaccca ttagagcaag gcaacggtga cacctggaaa120 cgtagtgacc caaggggtta cttgatggcc atacaggata agtcccaaac aactgaatac180 tacgtcacct gcaacagtgt aattgtcatc gaagacaacc tcgtgaagga tcacggccga240 actcttaacc cagtcgctgc ggccgggaag agaaaagtgg caaatgcg288 <210>32 <211>96 <212> БЕЛОК <213> Pseudomonas chlororaphis <400> 32
Met Ser lie Thr val Thr Asn Gly Al a Ser Thr val val Asn val Al a
1 5 10 15
ile Ser Thr Trp Glu Lys Asp Gly Ser Asp Al a Tyr Tyr Pro Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Asn Gly Asp Thr Trp Lys Arg Ser Asp Pro Arg Gly Tyr Leu
35 40 45
Met Al a lie G1 n Asp Lys Ser Gln Thr Thr Glu Tyr Tyr val Thr Cys
50 55 60
Asn Ser val lie val lie Glu Asp Asn Leu val Lys Asp Hi s Gly Arg
65 70 75 80
Thr Leu Asn Pro val Al a Al a Al a Gly Lys Arg Lys val Al a Asn Al a
85 90 95
<210>33 <211>267 <212> ДНК <213> xenorhabdus bovienii <400>33 atgaagataa taaataatac acaaagtaat atcatagttt ctgttaataa atggggcgat60 gatggacaaa cgggtcggtt tacggtatca cctggcagaa gtggatcatg gaatcgcact120 gatgagcgcg gttttgtcat ggcaatactg aaaaaaggtg tacaagattc cttttatatt180 ttttctgata gtgacatcaa ggttttcgac agttatgtta ctgataatgg cagaagaatc240
- 170 031651 aaacccgcaa ctgaccgata ttattag267 <210>34 <211> 88 <212> БЕЛОК <213> xenorhabdus bovienii <400> 34
Met Lys lie lie Asn Asn Thr Gin Ser Asn lie ile val Ser val Asn
1 5 10 15
Lys Trp Gly Asp Asp Gly Gin Thr Gly Arg Phe Thr val Ser Pro Gly
20 25 30
Arg Ser Gly Ser Trp Asn Arg Thr Asp Glu Arg Gly Phe val Met Al a
35 40 45
lie Leu Lys Lys Gly val Gin Asp Ser Phe Tyr lie Phe Ser Asp Ser
50 55 60
Asp lie Lys val Phe Asp Ser Tyr val Thr Asp Asn Gly Arg Arg lie
65 70 75 80
Lys Pro Al a Thr Asp Arg Tyr Tyr
85
<210>35 <211> 282 <212> ДНК <213> Photorhabdus luminescens <400>35 atgattattg ttaaaaattc ttcaaataag gtgactaaag tttcaattaa taagtggggg60 aaagatggta atacaggtta ttgggatatt aatccgggag atacagcgag ttggaatcgc120 actgatggtc gtggttttgt aatgtcaata atacgtgaga atgaggacca aaagtcatat180 tttgtcttag caaatagcaa cattgttatt tatgataaag atgctactgg ttacggtaaa240 aatgttcagg ataatggtcg ttggatatat cctttaaatt ga282 <210>36 <211>93 <212> БЕЛОК <213> Photorhabdus luminescens <400> 36
Met lie lie val Lys Asn Ser Ser А5П Lys val Thr Lys val Ser Ile
1 5 10 15
Asn Lys Trp Gly Lys Asp Gly Asn Thr Gly Tyr Trp Asp lie Asn Pro
20 25 30
Gly Asp Thr Al a Ser Trp Asn Arg Thr Asp Gly Arg Gly Phe val Met
35 40 45
Ser ile lie Arg Glu Asn Glu Asp Gin Lys Ser Tyr Phe val Leu Al a
50 55 60
Asn Ser Asn lie val lie Tyr Asp Lys Asp Al a Thr Gly Tyr Gly Lys
65 70 75 80
Asn val Gin Asp Asn Gly Arg Trp ile Tyr Pro Leu Asn
85 90
<210>37 <211>297 <212> ДНК <213> Pseudomonas chlororaphis <400>37 atgaacatga gcatcacagt cacaaacgga gcaagcgcag tagttaacgt ggcaatcagc60 acatgggaga aagacggcag tgacgcttac tacccattag agcaaggcag cggtgacacc120 tggaaacgta gtgacccaag gggttacttg atggccatac aggataaatc ccaaacaact180 gaatactacg tctcctgcaa cagtgcaatt gtcatcgaag acaacctcgt aaaggatcac240 ggccgaactc ttaacccagt cgctgcggcc gggaagaaaa aagtggcaaa tgcgtaa297 <210>38 <211>98 <212> БЕЛОК <213> Pseudomonas chlororaphis
- 171 031651 <400> 38
Met Asn Met Ser lie Thr val Thr Asn Gly Al a Ser Al a val val Asn
1 5 10 15
val Al a lie Ser Thr Trp Glu Lys Asp Gly Ser Asp Al a Tyr Tyr Pro
20 25 30
Leu Glu Gln Gly Ser Gly Asp Thr Trp Lys Arg Ser Asp Pro Arg Gly
35 40 45
Tyr Leu Met Al a lie Gln Asp Lys Ser Gln Thr Thr Glu Tyr Tyr val
50 55 60
Ser Cys Asn Ser Ala Ile val lie Glu Asp Asn Leu val Lys Asp Hi s
65 70 75 80
Gly Arg Thr Leu Asn Pro val Al a Al a Al a Gly Lys Lys Lys val Al a
85 90 95
Asn Al a
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
ДНК искусственная последовательность праймер для клонирования <400>
atatatgcat gcatatgggt attaccgtta caaacaattc <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
ДНК искусственная последовательность праймер для клонирования <400> aaggatcctt acgagagcgg ctcgatcaac c <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
ДНК искусственная последовательность праймер для клонирования <400>
gggaaacata tgggtattac tgttaaaaac aattcatcc <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
ДНК искусственная последовательность праймер для клонирования <400>
tttcccggat ccttacgaga gcggcagcaa tgtc <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
ДНК искусственная последовательность праймер для клонирования <400>
ttattcatat gggtattacc gttaccaaca aatc <210> 44
- 172 031651 <211> 35 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400>44 aaggatcctc aggcgaccgg gtgaatagtc tcacc35 <210>45 <211>34 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400>45 ttattcatat gggtattacc gttaccaaca aatc34 <210>46 <211>35 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400>46 aaggatcctc aggcgaccgg gtgaatagtc tcacc35 <210>47 <211>34 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400>47 atcatcatat gggtattacc gttaccaaca aatc34 <210>48 <211>34 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400>48 aaggatcctt acgcgaccgg gtgaatggtt tcac34 <210>49 <211>34 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400>49 ttattcatat gggtattacc gttaccaaca aatc34 <210>50 <211>36 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400> 50 aaggatcctt acgcgaccgg gtgaatggtt tcaccg 36
- 173 031651
<210>
<211>
<212>
<21В>
<220>
<22В>
ДНК искусственная последовательность праймер для клонирования <400> 51 ttattcatat gggtattacc gttaccaaca aatcatc <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
ДНК искусственная последовательность праймер для клонирования <400> 52 aaggatcctt acgcgaccgg gtgaatagtt tcgcc
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
ДНК искусственная последовательность праймер для клонирования <400> 53 gggaaacata tgagcattac cgttaaaaat аасасс
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
ДНК искусственная последовательность праймер для клонирования <400> 54 tttcccggat ccttatctac tgattggaga aataaccg
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
ДНК искусственная последовательность праймер для клонирования <400> 55 atcatcatat gaagctcacg atcaccaatg g
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
ДНК искусственная последовательность праймер для клонирования <400> 56 ttggatcctt acatgttgtt tactgcgtat agcg
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
ДНК искусственная последовательность праймер для клонирования
- 174 031651 <400> 57 gagatcatat gaacatgagc atcacagtca ссаас <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
ДНК искусственная последовательность праймер для клонирования <400>
gtcttggatc cttacgcatt taccacattt ttcttcc <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
ДНК искусственная последовательность праймер для клонирования <400>
gagatcatat gaacatgagc atcacagtca caaacg <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
ДНК искусственная последовательность праймер для клонирования <400>
gtcttggatc cttacgcatt agccacgttc ttctgcc <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
ДНК искусственная последовательность праймер для клонирования <400> aataacatat ggaacaatca atccaaaaaa gg <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
ДНК искусственная последовательность праймер для клонирования <400>
aaggatcctt attgaacttc cagcgcgagc ttgg <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
ДНК искусственная последовательность праймер для клонирования <400> cagaacatat gagcatcaca gtcacaaacg <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
ДНК искусственная последовательность
- 175 031651 <223> праймер для клонирования <400>64 ttggatcctt acgcatttgc cacttttctc ttcc34 <210>65 <211>36 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400>65 gagatcatat gaacatgagc atcacagtca caaacg36 <210> 66 <211>37 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400>66 gtcttggatc cttacgcatt tgccactttt ttcttcc37 <210>67 <211>33 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400>67 ttattcatat gagcatcaca gtcacaaacg gag33 <210> 68 <211>34 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400>68 aaggatcctt acgcatttgc cacttttttc ttcc34 <210>69 <211>24 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <400>69 aagcttgaat tcggatcctt acga24 <210>70 <211> 60 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <400>70 atcgaaggta ggcatatggc gatttctgtt aaaaacaatg cgtccaaccc cgtcgaagtc60 <210>71 <211> 60 <212> ДНК
- 176 031651
<21В> <220> <22В> искусственная последовательность праймер для мутагенеза
<400> 71
gccatcaatc attggggtac agacggagac accaaaccgt tttccgtcgc gccgggcgcc 60
<210> 72
<211> 60
<212> ДНК
<213> <220> искусственная последовательность
<223> праймер для мутагенеза
<400> 72
tccgatagct gggacaggaa cgaccttcgt ggcttcgtga tgtatgttca actgggcggc 60
<210> 73
<211> 60
<212> ДНК
<213> <220> искусственная последовательность
<223> праймер для мутагенеза
<400> 73
tccgcacacc cttactacgt tctgagcacc agcaacattg tgatctatga cgataaagtg 60
<210> 74
<211> 54
<212> ДНК
<213> <220> искусственная последовательность
<223> праймер для мутагенеза
<400> 74
accgattcgg gccaaactct tctgccgctc tcgtaaggat ccgaattcaa gctt 54
<210> 75
<211> 60
<212> ДНК
<213> <220> искусственная последовательность
<223> праймер для мутагенеза
<400> 75
gtctccgtct gtaccccaat gattgatggc gacttcgacg gggttggacg cattgttttt 60
<210> 76
<211> 60
<212> ДНК
<213> <220> искусственная последовательность
<223> праймер для мутагенеза
<400> 76
acgaaggtcg ttcctgtccc agctatcgga ggcgcccggc gcgacggaaa acggtttggt 60
<210> 77
<211> 60
<212> ДНК
<213> <220> искусственная последовательность
<223> праймер для мутагенеза
<400> 77
ggtgctcaga acgtagtaag ggtgtgcgga gccgcccagt tgaacataca tcacgaagcc 60
<210> 78
- 177 031651 <211> 60 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <400> 78
gagcggcaga agagtttggc ccgaatcggt cactttatcg tcatagatca caatgttgct 60
<210> 79
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> S представляет собой G или С
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> s представляет собой g или с
<400> 79
atcgaaggta ggcatatggs cattagcgtt aaaaacagcg catccaacac ggtcgaagtc 60
<210> 80
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (1)..(1)
<223> к представляет собой g или t
<220>
<221> другой признак
<222> (50)..(50)
<223> s представляет собой g или с
<400> 80
kcaatcaatc attggggtac tgacggagac accaaaccgt ttaaaatggs cccgggcgct 60
<210> 81
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (7)..(7)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (40)..(40)
<223> m представляет собой а или с
<400> 81
agcgatwctt gggacaggaa cgaccttcgt ggcttcgtgm tgtacgtgca actggggggc 60
<210> 82 <211> 60 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
- 178 031651
<22В> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢1)..(1)
<22В> к представляет собой g или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢28)..(28)
<22В> w представляет собой а или t
<400> 82
kcagcgactc cttactacgt tcttagcwct agcaatattg tcatttacga tgataaagtg 60
<210> 83
<211> 54
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 83
acagatagcg gccagacact gctgccgctc tcgtaaggat ccgaattcaa gctt 54
<210> 84
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (30)..(30)
<223> m представляет собой а или с
<400> 84
gtctccgtca gtaccccaat gattgattgm gacttcgacc gtgttggatg cgctgttttt 60
<210> 85
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 85
acgaaggtcg ttcctgtccc aagwatcgct agcgcccggg sccattttaa acggtttggt 60
<210> 86
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢3)..(3)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (30)..(30)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (51)..(51)
<223> к представляет собой g или t
<400> 86
agwgctaaga acgtagtaag gagtcgctgm gccccccagt tgcacgtaca kcacgaagcc 60
- 179 031651 <210> 87 <211> 60 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> праймер для мутагенеза <400> 87
gagcggcagc agtgtctggc cgctatctgt cactttatca tcgtaaatga caatattgct 60
<210> 88
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (26)..(26)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (52)..(52)
<223> г представляет собой а или g
<400> 88
atcgaaggta ggcatatggs cattastgtt aaaaacagcg cgtccaacac trttgaagtc 60
<210> 89
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (1)..(1)
<223> к представляет собой g или t
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (246)..(46)
<223> г представляет собой а или g
<400> 89
kcgatcaatc attggggtas tgacggagac accaagccgt ttaaartggc tccaggcgcc 60
<210> 90 <211> 60 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (6)..(6) <22В> w представляет собой а или t <220>
<221> другой_признак <222> (8)..(8)
- 180 031651 <223> s представляет собой g или с <220>
<221> другой_признак <222> (40)..(40) <223> w представляет собой а или t <220>
<221> другой_признак <222> (46)..(46) <223> s представляет собой g или с <400> 90
agtgawastt gggacaggaa cgacttacgt ggcttcgtgw tgtacstgca gctgggtggc 60
<210> 91
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (1)..(1)
<223> к представляет собой g или t
<220>
<221> другой признак
<222> (29)..(29)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (43)..(43)
<223> г представляет собой а или g
<400> 91
kcggctaccc cttactacgt tttgtcaast agcaacattg tcrtttacga tgataaagtg 60
<210> 92
<211> 54
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (14)..(14)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> (19)..(19)
<223> m представляет собой а или с
<400> 92
accgatagtg gccrgacgmt tttgccgctc tcgtaaggat ccgaattcaa gctt 54
<210> 93 <211> 60 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> (11)..(11)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (30)..(30)
<223> m представляет собой а или с
<220>
- 181 031651 <221> другой_признак <222> (38)..(38) <223> у представляет собой с или t <400> 93
gtctccgtca staccccaat gattgatcgm gacttcaaya gtgttggacg cgctgttttt 60
<210> 94
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 94
acgtaagtcg ttcctgtccc aastwtcact ggcgcctgga gccaytttaa acggcttggt 60
<210> 95
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (2)..(2)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (30)..(30)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (45)..(45)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (51)..(51)
<223> w представляет собой а или t
<400> 95
asttgacaaa acgtagtaag gggtagccgm gccacccagc tgcasgtaca wcacgaagcc 60
<210> 96
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (12)..(12)
<223> к представляет собой g или t
<220>
<221> другой признак
<222> (17)..(17)
<223> у представляет собой с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (47)..(47)
<223> у представляет собой с или t
<400> 96
gagcggcaaa akcgtcyggc cactatcggt cactttatca tcgtaaayga caatgttgct 60
<210> 97 <211> 60 <212> ДНК
- 182 031651
<21В> <220> <22В> искусственная последовательность праймер для мутагенеза
<400> 97
atcgaaggta ggcatatggc aatttcagtt acaaacaatg cgtccaaccc cgtggaagtc 60
<210> 98
<211> 60
<212> ДНК
<213> <220> искусственная последовательность
<223> праймер для мутагенеза
<400> 98
gccatcaatc attggggtac ggacggagac accagcttct tttccgtcgc aaacggcaag 60
<210> 99
<211> 60
<212> ДНК
<213> <220> искусственная последовательность
<223> праймер для мутагенеза
<400> 99
caggactctt gggacaggtc cgacctgcgt ggcttcgtga tgtccgtgca gaagaatggc 60
<210> 100
<211> 60
<212> ДНК
<213> <220> искусственная последовательность
<223> праймер для мутагенеза
<400> 100
gcgcaacacc cttactacgt tctttccacc agcaatattg tcatttatga tgacaaggtg 60
<210> 101
<211> 54
<212> ДНК
<213> <220> искусственная последовательность
<223> праймер для мутагенеза
<400> 101
acggattccg gccagacatt gctgccgctc tcgtaaggat ccgaattcaa gctt 54
<210> 102
<211> 60
<212> ДНК
<213> <220> искусственная последовательность
<223> праймер для мутагенеза
<400> 102
gtctccgtcc gtaccccaat gattgatggc gacttccacg gggttggacg cattgtttgt 60
<210> 103
<211> 60
<212> ДНК
<213> <220> искусственная последовательность
<223> праймер для мутагенеза
<400> 103
acgcaggtcg gacctgtccc aagagtcctg cttgccgttt gcgacggaaa agaagctggt 60
<210> 104
- 183 031651 <211> 60 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <400> 104
ggtggaaaga acgtagtaag ggtgttgcgc gccattcttc tgcacggaca tcacgaagcc 60
<210> 105
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 105
gagcggcagc aatgtctggc cggaatccgt caccttgtca tcataaatga caatattgct 60
<210> 106
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢32)..(32)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (49)..(49)
<223> m представляет собой а или с
<400> 106
atcgaaggta ggcatatggc aattagtgtt amaaacartg cctccaacmc tgtggaagtc 60
<210> 107
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 107
gccatcaatc attggggtac tgacggagac accagcttct ttaaggtcgc caatggcgct 60
<210> 108
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 108
gccatcaatc attggggtac tgacggagac accagcttct ttaaggtcgc cccgggcgct 60
<210> 109
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 109
gccatcaatc attggggtac tgacggagac accagcccat ttaaggtcgc caatggcgct 60
<210> 110
- 184 031651 <211> 60 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> праймер для мутагенеза <400> 110
gccatcaatc attggggtac tgacggagac accagcccat ttaaggtcgc cccgggcgct 60
<210> 111
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢8)..(8)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢20)..(20)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢26)..(26)
<223> у представляет собой с или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢44)..(44)
<223> m представляет собой а или с
<400> 111
tcggatasct gggacaggar cgactyacgt ggcttcgtga tgtmtgtaca attaaatggc 60
<210> 112
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢8)..(8)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢20)..(20)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢26)..(26)
<223> у представляет собой с или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢44)..(44)
<223> m представляет собой а или с
<400> 112
tcggatasct gggacaggar cgactyacgt ggcttcgtga tgtmtgtaca attagggggc 60
<210> 113 <211> 60 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
- 185 031651
<221> другой признак
<222> ¢8)..(8)
<22В> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<22В> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> (26)..(26)
<22В> у представляет собой с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (44)..(44)
<22В> m представляет собой а или с
<400> 113
tcggatasct gggacaggar cgactyacgt ggcttcgtga tgtmtgtaca aaaaaatggc 60
<210> 114
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢8)..(8)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> (26)..(26)
<223> у представляет собой с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (44)..(44)
<223> m представляет собой а или с
<400> 114
tcggatasct gggacaggar cgactyacgt ggcttcgtga tgtmtgtaca aaaagggggc 60
<210> 115
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 115
tctgcacacc cttactacgt tcwgtctacc agcaawattg waatckacra cracgccgtg 60
<210> 116
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 116
tctcagcacc cttactacgt tcwgtctacc agcaawattg waatckacra cracgccgtg 60
<210> 117 <211> 54 <212> ДНК
- 186 031651 <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (2)..(2) <223> m представляет собой а или с <400> 117
amagattctg gccagaccct tttaccgctc tcgtaaggat ccgaattcaa gctt 54
<210> 118
<211> 54
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (2)..(2)
<223> m представляет собой а или с
<400> 118
amagatcaag gccagaccct tttaccgctc tcgtaaggat ccgaattcaa gctt 54
<210> 119
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (42)..(42)
<223> к представляет собой g или t
<220>
<221> другой признак
<222> (53)..(53)
<223> у представляет собой с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (59)..(59)
<223> к представляет собой g или t
<400> 119
gtctccgtca gtaccccaat gattgatggc gacttccaca gkgttggagg caytgtttkt 60
<210> 120
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (5)..(5)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> (И). .(И)
<223> у представляет собой с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> s представляет собой g или с
<400> 120
acgtragtcg ytcctgtccc agstatccga agcgccattg gcgaccttaa agaagctggt 60
- 187 031651 <210> 121 <211> 60 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> ¢5)..(5)
<22В> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢11)..(11)
<22В> у представляет собой с ot t
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<22В> s представляет собой g или с
<400> 121
acgtragtcg ytcctgtccc agstatccga agcgcccggg gcgaccttaa agaagctggt 60
<210> 122
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (5). .(5)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> (И). .(И)
<223> у представляет собой с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> s представляет собой g или с
<400> 122
acgtragtcg ytcctgtccc agstatccga agcgccattg gcgaccttaa atgggctggt 60
<210> 123
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (5). .(5)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> (И). .(И)
<223> у представляет собой с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> s представляет собой g или с
<400> 123
acgtragtcg ytcctgtccc agstatccga agcgcccggg gcgaccttaa atgggctggt 60
<210> 124
- 188 031651 <211> 60 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой признак
<222> ¢8)..(8)
<22В> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (47)..(47)
<22В> к представляет собой g или t
<400> 124
ggtagacwga acgtagtaag ggtgtgcaga gccatttaat tgtacakaca tcacgaagcc 60
<210> 125
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (8)..(8)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (47)..(47)
<223> к представляет собой g или t
<400> 125
ggtagacwga acgtagtaag ggtgctgaga gccatttaat tgtacakaca tcacgaagcc 60
<210> 126
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (8)..(8)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (47)..(47)
<223> к представляет собой g или t
<400> 126
ggtagacwga acgtagtaag ggtgtgcaga gccccctaat tgtacakaca tcacgaagcc 60
<210> 127 <211> 60 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (8)..(8)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (47)..(47)
<223> к представляет собой g или t
- 189 031651
<400> ggtaga 127
cwga acgtagtaag ggtgctgaga gccccctaat tgtacakaca tcacgaagcc 60
<210> 128
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (8)..(8)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (47)..(47)
<223> к представляет собой g или t
<400> 128
ggtagacwga acgtagtaag ggtgtgcaga gccatttttt tgtacakaca tcacgaagcc 60
<210> 129
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (8)..(8)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (47)..(47)
<223> к представляет собой g или t
<400> 129
ggtagacwga acgtagtaag ggtgctgaga gccatttttt tgtacakaca tcacgaagcc 60
<210> 130
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (8)..(8)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (47)..(47)
<223> к представляет собой g или t
<400> 130
ggtagacwga acgtagtaag ggtgtgcaga gccccctttt tgtacakaca tcacgaagcc 60
<210> 131 <211> 60 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (8)..(8) <223> w представляет собой а или t <220>
- 190 031651 <221> другой_признак <222> (47)..(47) <22В> к представляет собой g или t <400>131 ggtagacwga acgtagtaag ggtgctgaga gccccctttt tgtacakaca tcacgaagcc60 <210>132 <211> 60 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> (29)..(29)
<223> к представляет собой g или t
<220>
<221> другой признак
<222> (39)..(39)
<223> у представляет собой с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (42)..(42)
<223> у представляет собой с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (45)..(45)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (50)..(50)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (55)..(55)
<223> w представляет собой а или t
<400>132 gagcggtaaa agggtctggc cagaatctkt cacggcgtyg tygtmgattw caatwttgct60 <210>133 <211> 60 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> (29)..(29)
<223> к представляет собой g или t
<220>
<221> другой признак
<222> (39)..(39)
<223> у представляет собой с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (42)..(42)
<223> у представляет собой с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (45)..(45)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (50)..(50)
<223> w представляет собой а или t
<220>
- 191 031651
<221> другой признак
<222> ¢55)..(55)
<22В> w представляет собой а или t
<400> 133
gagcggtaaa agggtctggc cttgatctkt cacggcgtyg tygtmgattw caatwttgct 60
<210> 134
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 134
atcgaaggta ggcatatggg tattagtgtt aaaaacagcg cgtccaacac ggtggaagtc 60
<210> 135
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 135
gccatcaatc attggggtac ggacggagac accagcccgt ttaaagtcgg tccgggcgcc 60
<210> 136
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 136
agtgatacct gggacaggaa cgaccttcgt ggcttcgtgc tttatgtaca gttgggcggc 60
<210> 137
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 137
gcggcgcacc cttactacgt tctgtctagc agcaacattg ttatctatga tgataaggtg 60
<210> 138
<211> 54
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 138
actgattcgg gccagaccct gcttccgctc tcgtaaggat ccgaattcaa gctt 54
<210> 139
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 139
gtctccgtcc gtaccccaat gattgatggc gacttccacc gtgttggacg cgctgttttt 60
<210> 140
- 192 031651 <211> 60 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <400> 140
acgaaggtcg ttcctgtccc aggtatcact ggcgcccgga ccgactttaa acgggctggt 60
<210> 141
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 141
gctagacaga acgtagtaag ggtgcgccgc gccgcccaac tgtacataaa gcacgaagcc 60
<210> 142
<211> 60
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 142
gagcggaagc agggtctggc ccgaatcagt caccttatca tcatagataa caatgttgct 60
<210> 143
<211> 75
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (32)..(32)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> (34)..(34)
<223> к представляет собой g или t
<220>
<221> другой признак
<222> (46)..(46)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> (55)..(55)
<223> к представляет собой g или t
<400> 143
ggtaggcata tggccattas cgttaaaaac arckcttcca acacgrttga agtckctatc 60
aatcattggg gtact 75
<210> 144 <211> 42 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак
- 193 031651 <222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
¢4)..(4) г представляет другой_признак (24)..(24) w представляет другой_признак (26)..(26) s представляет
144 <400> aaartggccc cgggcgctag <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
собой собой собой или или или cgawasctgg gacaggaacg
145
ДНК искусственная последовательность праймер для мутагенеза другой_признак (16)..(16) m представляет собой а или с ас другой_признак (25). .(25) m представляет собой а или с
145 <400> cttcgtggct tcgtgmtgta cgtgmagctg gggggctcag cgact <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
146
ДНК искусственная последовательность праймер для мутагенеза другой_признак ¢21)..(21) m представляет другой_признак (30)..(30) у представляет другой_признак ¢42)..(42) m представляет другой_признак (44)..(44) у представляет другой_признак (56)..(56) s представляет
146 <400>
agtaccccaa tgattgatag ggccatatgc ctacc <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
собой собой собой собой собой или или или или или mgacttcaay cgtgttggaa gmgytgtttt taacgstaat
147
ДНК искусственная последовательность
- 194 031651
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> (17)..(17)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (19)..(19)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (39)..(39)
<223> у представляет собой с или t
<400> 147 gtcgttcctg tcccagstwt cgctagcgcc cggggccayt tt <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
148
ДНК искусственная последовательность праймер для мутагенеза другой_признак (21)..(21) к представляет собой g или t другой_признак (30)..(30) к представляет собой g или t <400> 148 agtcgctgag ccccccagct kcacgtacak cacgaagcca cgaag <210> 149 <211> 75 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (32)..(32)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> (34)..(34)
<223> к представляет собой g или t
<220>
<221> другой признак
<222> (46)..(46)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> (55). .(55)
<223> к представляет собой g или t
<400> 149 ggtaggcata tggcaattas tgttacaaac artkcgtcca accccrttga agtckcgatc aatcattggg gtacg <210> 150 <211> 39
- 195 031651 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (21)..(21) <22В> w представляет собой а или t <220>
<221> другой_признак <222> (23)..(23) <223> s представляет собой g или с <400>150 gtcgcaaacg gcaagcagga wasttgggac aggtccgac39 <210>151 <211>45 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (16)..(16) <223> w представляет собой а или t <220>
<221> другой_признак <222> (25)..(25) <223> m представляет собой а или с <400>151 ctgcgtggct tcgtgwtgtc cgtgmagaag aatggcgcgc aacac45 <210>152 <211>57 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <223> m представляет собой а или с <220>
<221> другой_признак <222> (35)..(35) <223> г представляет собой а или g <400>152 gtgacggatt ccggccagtt amttttgccg ttaarttaag gatccgaatt caagctt57 <210>153 <211>57 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (35). .(35)
<223> г представляет собой а или g
<400> 153
- 196 031651
gtgacggatt ccggccagtt amttttgccg gctarttaag gatccgaatt caagctt 57
<210> 154
<211> 57
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (35). .(35)
<223> г представляет собой а или g
<400> 154
gtgacggatt ccggccagtt amttgaaccg ttaarttaag gatccgaatt caagctt 57
<210> 155
<211> 57
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (35). .(35)
<223> г представляет собой а или g
<400> 155
gtgacggatt ccggccagtt amttgaaccg gctarttaag gatccgaatt caagctt 57
<210> 156
<211> 57
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (35). .(35)
<223> г представляет собой а или g
<400> 156
gtgacggatt ccggccagac gmttttgccg ttaarttaag gatccgaatt caagctt 57
<210> 157 <211> 57 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <223> m представляет собой а или с <220>
<221> другой_признак
- 197 031651
<222> ¢35)..(35)
<223> г представляет собой а или g
<400> 157
gtgacggatt ccggccagac gmttttgccg gctarttaag gatccgaatt caagctt 57
<210> 158
<211> 57
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (35)..(35)
<223> г представляет собой а или g
<400> 158
gtgacggatt ccggccagac gmttgaaccg ttaarttaag gatccgaatt caagctt 57
<210> 159
<211> 57
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (35)..(35)
<223> г представляет собой а или g
<400> 159
gtgacggatt ccggccagac gmttgaaccg gctarttaag gatccgaatt caagctt 57
<210> 160 <211> 75 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (30)..(30)
<223> у представляет собой с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (42)..(42)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (44)..(44)
<223> у представляет собой с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (56)..(56)
<223> s представляет собой 9 или с
- 198 031651 <400> 160 cgtaccccaa tgattgatcg mgacttcaay ggggttggac gmaytgtttg taacastaat tgccatatgc ctacc <210> 161 <211> 39 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> ¢17)..(17) <223> s представляет собой g или с <220>
<221> другой_признак <222> ¢19)..(19) <223> w представляет собой а или t <400> 161 gtcggacctg tcccaastwt cctgcttgcc gtttgcgac <210> 162 <211> 45 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> ¢21)..(21) <223> k представляет собой g или t <220>
<221> другой_признак <222> ¢390)..(30) <223> w представляет собой а или t <400>162 gtgttgcgcg ccattcttct kcacggacaw cacgaagcca cgcag45 <210>163 <211>57 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> ¢23)..(23) <223> у представляет собой с или t <220>
<221> другой_признак <222> ¢36)..(36) <223> к представляет собой g или t <400>163 aagcttgaat tcggatcctt aayttaacgg caaaaktaac tggccggaat ccgtcac57 <210>164 <211>57 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> ¢23)..(23)
- 199 031651 <22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
у представляет собой с или t другой_признак (36)..(36) к представляет собой g или t
164 <400> aagcttgaat tcggatcctt aaytagccgg caaaaktaac tggccggaat ccgtcac <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
165
ДНК искусственная последовательность праймер для мутагенеза другой_признак (23)..(23) у представляет собой с или t другой_признак (36)..(36) к представляет собой g или t
165 <400> aagcttgaat tcggatcctt aayttaacgg ttcaaktaac tggccggaat ccgtcac <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
166
ДНК искусственная последовательность праймер для мутагенеза другой_признак (23)..(23) у представляет собой с или t другой_признак (36)..(36) к представляет собой g или t
166 <400> aagcttgaat tcggatcctt aaytagccgg ttcaaktaac tggccggaat ccgtcac <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
167
ДНК искусственная последовательность праймер для мутагенеза другой_признак (23)..(23) у представляет собой с или t другой_признак (36)..(36) к представляет собой g или t
167 <400> aagcttgaat tcggatcctt aayttaacgg caaaakcgtc tggccggaat ccgtcac <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
168
ДНК искусственная последовательность
- 200 031651 <223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> у представляет собой с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (36)..(36)
<223> к представляет собой g или t
<400> 168
aagcttgaat tcggatcctt aaytagccgg caaaakcgtc tggccggaat ccgtcac 57
<210> 169
<211> 57
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> у представляет собой с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (36)..(36)
<223> к представляет собой g или t
<400> 169
aagcttgaat tcggatcctt aayttaacgg ttcaakcgtc tggccggaat ccgtcac 57
<210> 170
<211> 57
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> у представляет собой с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (36)..(36)
<223> к представляет собой g или t
<400> 170
aagcttgaat tcggatcctt aaytagccgg ttcaakcgtc tggccggaat ccgtcac 57
<210> 171
<211> 69
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (35)..(35)
<223> у представляет собой с или t
<400> 171
accgttacaa acaattcgtc caasaaaatc gaagyggcca tcaataaatg gggtagcgac 60
ggagacacc 69
- 201 031651 <210> 172 <211> 69 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (24)..(24) <223> s представляет собой g или с <220>
<221> другой_признак <222> (35)..(35) <223> у представляет собой с или t <400> 172
accgttacaa acaattcgtc caasaaaatc gaagyggcca tcaatcactg gggtagcgac 60
ggagacacc 69
<210> 173
<211> 69
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (35)..(35)
<223> у представляет собой с или t
<400> 173
accgttacaa acaattcgtc caasccgatc gaagyggcca tcaataaatg gggtagcgac 60
ggagacacc 69
<210> 174
<211> 69
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (35)..(35)
<223> у представляет собой с или t
<400> 174
accgttacaa acaattcgtc caasccgatc gaagyggcca tcaatcactg gggtagcgac 60
ggagacacc 69
<210> 175 <211> 78 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (31)..(31) <223> г представляет собой а или g <220>
- 202 031651 <221> другой_признак <222> (34)..(34) <223> г представляет собой а или g <220>
<221> другой_признак <222> (38)..(38) <223> г представляет собой а или g <220>
<221> другой_признак <222> (41)..(41) <223> г представляет собой а или g <220>
<221> другой_признак <222> (55)..(55) <223> w представляет собой а или t <400> 175
tggggtagcg acggagacac cagcttcttt rgcrttgrta gacaggtccg acagccgt rcggcaagca ggaawcctgg 60 78
<210> 176
<211> 57
<212> ДНК
<213> <220> искусственная последовательность
<223> праймер для мутагенеза
<400> 176
ggcttcgtgc tttccctgaa gaagaatggc gcgcaacacc cttactacgt tcaggcc 57
<210> 177
<211> 57
<212> ДНК
<213> <220> искусственная последовательность
<223> праймер для мутагенеза
<400> 177
ggcttcgtgc tttccctgaa gaagaatggc gcgcaagcac cttactacgt tcaggcc 57
<210> 178
<211> 57
<212> ДНК
<213> <220> искусственная последовательность
<223> праймер для мутагенеза
<400> 178
ggcttcgtgc tttccctgaa gcgcaatggc gcgcaacacc cttactacgt tcaggcc 57
<210> 179
<211> 57
<212> ДНК
<213> <220> искусственная последовательность
<223> праймер для мутагенеза
<400> 179
ggcttcgtgc tttccctgaa gcgcaatggc gcgcaagcac cttactacgt tcaggcc 57
<210> 180 <211> 63 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак
- 203 031651 <222> (19)..(19) <22В> w представляет собой а или t <220>
<221> другой_признак <222> (34)..(34) <223> г представляет собой а или g <220>
<221> другой_признак <222> (38)..(38) <223> m представляет собой а или с <220>
<221> другой_признак <222> (46)..(46) <223> г представляет собой а или g <400> 180
ccttactacg ttcaggccwc cagcaaaatt gaarttgama acaacrccgt gaaagatcag 60
ggc 63
<210> 181
<211> 55
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (31)..(31)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (34)..(34)
<223> к представляет собой g или t
<400> 181
gtgaaagatc agggcgaatt gatcgagccg stgkcttaag gatccgaatt caagc 55
<210> 182
<211> 55
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (31)..(31)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (34)..(34)
<223> к представляет собой g или t
<400> 182
gtgaaagatc agggcgaatt gatccacccg stgkcttaag gatccgaatt caagc 55
<210> 183 <211> 55 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (31)..(31) <223> s представляет собой g или с <220>
<221> другой_признак <222> (34)..(34)
- 204 031651
<22В> к представляет собой g или t
<400> 183
gtgaaagatc agggccgttt gatcgagccg stgkcttaag gatccgaatt caagc 55
<210> 184
<211> 55
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (31)..(31)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (34)..(34)
<223> к представляет собой g или t
<400> 184
gtgaaagatc agggccgttt gatccacccg stgkcttaag gatccgaatt caagc 55
<210> 185
<211> 69
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 185
accgttacaa acaattcgtc caagaagatc gaagctgcca tcaataaatg gggtagcgac 60
ggagacacc 69
<210> 186
<211> 78
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 186
tggggtagcg acggagacac cagcttcttt ggcattgaca gcggcaagca ggaatcttgg 60
gacaggtccg acagccgt 78
<210> 187
<211> 57
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 187
ggcttcgtgc tttccctgaa gcgtaatggc gcgcaagctc cttactacgt tcaggcc 57
<210> 188
<211> 63
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<400> 188
ccttactacg ttcaggccac tagcaaaatt gaaattgaaa acaacacggt gaaagatcag 60
ggc 63
<210> 189 <211> 55
- 205 031651 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> праймер для мутагенеза <400>189 gtgaaagatc agggcgaatt gatccacccg gtcgcataag gatccgaatt caagc55 <210>190 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> к представляет собой д или t
<400>190 atatgggtat taccgttaca nnkaattcgt ccaaccccat cga43 <210>191 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<400>191 tcgatggggt tggacgaatt mnntgtaacg gtaataccca tat43
<210> 192
<211> 43
<212> ДНК
<213> искусственная ι юследовател ьность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой_признак
- 206 031651 <222> (24)..(24) <22В> к представляет собой g или t <400>192 atgggtatta ccgttacaaa cnnktcgtcc aaccccatcg aag <210>193 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<400>193 cttcgatggg gttggacgam nngtttgtaa cggtaatacc cat <210>194 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> к представляет собой д или t
<400>194 ttaccgttac aaacaattcg nnkaacccca tcgaagtcgc cat <210>195 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(23)
<223> η представляет собой д, а, с или t
- 207 031651 <400>195 atggcgactt cgatggggtt mnncgaattg tttgtaacgg taa <210>196 <211>48 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢28)..(28)
<223> η представляет собой 9, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (29)..(29)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (30)..(30)
<223> к представляет собой д или t
<400>196 ggtattaccg ttacaaacaa ttcgtccnnk cccatcgaag tcgccatc <210>197 <211>48 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢19)..(19)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<400>197 gatggcgact tcgatgggmn nggacgaatt gtttgtaacg gtaatacc <210>198 <211>44 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (25). .(25)
<223> к представляет собой д или t
<400> 198
- 208 031651 cgttacaaac aattcgtcca acnnkatcga agtcgccatc aatc <210>199 <211>44 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<400>199 gattgatggc gacttcgatm nngttggacg aattgtttgt aacg <210> 200 <211>46 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (25). .(25)
<223> к представляет собой д или t
<400>200 caattcgtcc aaccccatcg aannkgccat caatcattgg ggtagc <210> 201 <211>46 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<400>201 gctaccccaa tgattgatgg cmnnttcgat ggggttggac gaattg
- 209 031651 <210> 202 <211> 45 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> η представляет собой 9, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> к представляет собой д или t
<400>202 cgtccaaccc catcgaagtc nnkatcaatc attggggtag cgacg <210>203 <211>45 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (25)..(25)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<400>203 cgtcgctacc ccaatgattg atmnngactt cgatggggtt ggacg <210>204 <211>44 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> к представляет собой д или t
<400>204 ccatcgaagt cgccatcaat nnktggggta gcgacggaga cacc <210>205 <211>44
- 210 031651
<212> ДНК
<21В> искусственная последовательность
<220>
<22В> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<22В> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<22В> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<22В> η представляет собой д, а, с или t
<400> 205
ggtgtctccg tcgctacccc amnnattgat ggcgacttcg atgg 44
<210> 206
<211> 43
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<22B> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<22B> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<22B> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<22B> к представляет собой g или t
<400> 206
tcgaagtcgc catcaatcat nnkggtagcg acggagacac cag 43
<210> 207
<211> 43
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<400> 207
ctggtgtctc cgtcgctacc mnnatgattg atggcgactt cga 43
<210> 208
<211> 43
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
- 211 031651 <220>
<22В> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (21)..(21) <22В> η представляет собой д, а, с или t <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <22В> η представляет собой д, а, с или t <220>
<221> другой_признак <222> (23)..(23) <223> к представляет собой g или t <400>208 ccatcaatca ttggggtagc nnkggagaca ccagcttctt ttc <210>209 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<400>209 gaaaagaagc tggtgtctcc mnngctaccc caatgattga tgg <210> 210 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> к представляет собой д или t
<400>210 tcaatcattg gggtagcgac nnkgacacca gcttcttttc cgt <210> 211 <211>43 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
- 212 031651
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<400>211 acggaaaaga agctggtgtc mnngtcgcta ccccaatgat tga <210> 212 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> к представляет собой д или t
<400>212 ggggtagcga cggagacacc nnkttctttt ccgtcggtaa egg <210>213 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<400>213 ccgttaccga eggaaaagaa mnnggtgtct ccgtcgctac ccc <210>214 <211>44 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак
- 213 031651 <220>
<221> другой_признак <222> (23)..(23) <223> η представляет собой д, а, с или t <220>
<221> другой_признак <222> ¢24)..(24) <223> η представляет собой д, а, с или t <400>217 ggtttcctgc ttgccgttac cmnnggaaaa gaagctggtg tctcc <210> 218 <211>48 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (25)..(25)
<223> η представляет собой 9, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (26)..(26)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (27)..(27)
<223> к представляет собой д или t
<400>218 ggagacacca gcttcttttc cgtcnnkaac ggcaagcagg aaacctgg <210>219 <211>48 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<400>219 ccaggtttcc tgcttgccgt tmnngacgga aaagaagctg gtgtctcc <210> 220 <211>42 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> ¢21)..(21) <223> n представляет собой g, а, с или t <220>
<221> другой_признак
- 214 031651
<222> (22)..(22)
<223> n представляет собой g, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> k представляет собой g или t
<400> 220
ccagcttctt ttccgtcggt nnkggcaagc aggaaacctg gg 42
<210> 221 <211> 42 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<400>221 cccaggtttc ctgcttgccm nnaccgacgg aaaagaagct gg42 <210> 222 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> к представляет собой д или t
<400>222 gcttcttttc cgtcggtaac nnkaagcagg aaacctggga cag43 <210>223 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (21)..(21) <223> m представляет собой а или с <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <223> n представляет собой g, а, с или t
- 215 031651 <220>
<221> другой_признак <222> (23)..(23) <223> η представляет собой д, а, с или t <400>223 ctgtcccagg tttcctgctt mnngttaccg асддаааада age <210>224 <211>44 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> η представляет собой 9, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> к представляет собой д или t
<400>224 gettegtget ttccctgaag nnkaatggcg сдсаасассс ttac <210>225 <211>44 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<400>225 gtaagggtgt tgcgcgccat tmnncttcag ддааадсасд аадс <210> 226 <211>46 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (23)..(23) <223> η представляет собой д, а, с или t <220>
<221> другой_признак <222> (24)..(24) <223> η представляет собой д, а, с или t <220>
<221> другой_признак
- 216 031651 <222> (25)..(25) <22В> к представляет собой g или t <400>226 gctttccctg aagaagaatg gcnnkcaaca cccttactac gttcag46 <210>227 <211>46 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<400>227 ctgaacgtag taagggtgtt gmnngccatt cttcttcagg gaaagc46 <210> 228 <211>44 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <223> n представляет собой g, а, с или t <220>
<221> другой_признак <222> (23)..(23) <223> n представляет собой g, а, с или t <220>
<221> другой_признак <222> (24)..(24) <223> k представляет собой g ot t <400>228 ctgaagaaga atggcgcgca annkccttac tacgttcagg ccag44 <210>229 <211>44 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, с или t
- 217 031651
<222> (23). .(23)
<223> n представляет собой g, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> n представляет собой g, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (25). .(25)
<223> к представляет собой g или t
<400> 214
cgacggagac accagcttct ttnnkgtcgg taacggcaag cagg 44
<210> 215 <211> 44 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<400>215 cctgcttgcc gttaccgacm nnaaagaagc tggtgtctcc gtcg44 <210> 216 <211>45 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> η представляет собой д, а, с или t
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> к представляет собой д или t
<400>216 ggagacacca gcttcttttc cnnkggtaac ggcaagcagg aaacc45 <210>217 <211>45 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> ¢22)..(22) <223> m представляет собой а или с
- 218 031651 <400>229 ctggcctgaa cgtagtaagg mnnttgcgcg ccattcttct tcag <210>230 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> η представляет собой 9, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> к представляет собой д или t
<400>230 agaatggcgc gcaacaccct nnktacgttc aggccagcag caa <210>231 <211>44 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (44)..(44)
<223> η представляет собой а, с, д, или t
<400>231 ttgctgctgg cctgaacgta mnnagggtgt tgcgcgccat tctn
<210> 232
<211> 43
<212> ДНК
<213> искусственная ι тоследовател ьность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д, a, t или с
<220>
<221> другой_признак
- 219 031651
<222> (23)..(23)
<22В> к представляет собой g или t
<400> 232
atggcgcgca acacccttac nnkgttcagg ccagcagcaa aat 43
<210> 233
<211> 43
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<400> 233
attttgctgc tggcctgaac mnngtaaggg tgttgcgcgc cat 43
<210> 234
<211> 45
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> к представляет собой g или t
<400> 234
cacccttact acgttcaggc cnnkagcaaa attgaagtcg асаас 45
<210> 235
<211> 45
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> η представляет собой g, a, t или с
- 220 031651
<400> 235
gttgtcgact tcaattttgc tmnnggcctg aacgtagtaa gggtg 45
<210> 236
<211> 43
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> к представляет собой g или t
<400> 236
cttactacgt tcaggccagc nnkaaaattg aagtcgacaa саа 43
<210> 237
<211> 43
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<400> 237
ttgttgtcga cttcaatttt mnngctggcc tgaacgtagt аад 43
<210> 238
<211> 43
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> к представляет собой g или t
<400> 238
- 221 031651 acgttcaggc cagcagcaaa nnkgaagtcg acaacaacgc cgt <210> 239 <211> 43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<400>239 acggcgttgt tgtcgacttc mnntttgctg ctggcctgaa cgt <210>240 <211>41 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> к представляет собой д или t
<400>240 ggccagcagc aaaattgaan nkgacaacaa cgccgtgaaa g <210>241 <211>41 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<400> 241 ctttcacggc gttgttgtcm nnttcaattt tgctgctggc c
- 222 031651 <210> 242 <211> 44 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> η представляет собой 9, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> к представляет собой д или t
<400>242 ccagcagcaa aattgaagtc nnkaacaacg ccgtgaaaga tcag44 <210>243 <211>44 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<400>243 ctgatctttc acggcgttgt tmnngacttc aattttgctg ctgg44 <210>244 <211>43 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> к представляет собой д или t
<400>244 gcaaaattga agtcgacaac nnkgccgtga aagatcaggg ccg43 <210>245 <211>43
- 223 031651
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<400> 245
cggccctgat ctttcacggc mnngttgtcg acttcaattt tgc 43
<210> 246
<211> 47
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (25). .(25)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (26)..(26)
<223> к представляет собой g или t
<400> 246
gcaaaattga agtcgacaac aacnnkgtga aagatcaggg ccggttg 47
<210> 247
<211> 47
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<400> 247
caaccggccc tgatctttca cmnngttgtt gtcgacttca attttgc 47
<210> 248
<211> 43
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
- 224 031651 <220>
<22В> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (21)..(21) <22В> η представляет собой g, a, t или с <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <22В> η представляет собой g, a, t или с <220>
<221> другой_признак <222> (23)..(23) <223> к представляет собой g или t <400>248 ttgaagtcga caacaacgcc nnkaaagatc agggccggtt gat <210>249 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<400>249 atcaaccggc cctgatcttt mnnggcgttg ttgtcgactt caa <210>250 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> к представляет собой д или t
<400>250 tcgacaacaa cgccgtgaaa nnkcagggcc ggttgatcga gcc <210>251 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
- 225 031651
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<400>251 ggctcgatca accggccctg mnntttcacg gcgttgttgt cga <210>252 <211>42 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> к представляет собой д или t
<400>252 gacaacaacg ccgtgaaaga tnnkggccgg ttgatcgagc eg <210>253 <211>42 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢19)..(19)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<400>253 cggctcgatc aaccggccmn natctttcac ggcgttgttg tc <210>254 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак
- 226 031651
<222> ¢21)..(21)
<223> n представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> n представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> к представляет собой д или t
<400>254 acaacgccgt gaaagatcag nnkcggttga tcgagccgct etc43 <210>255 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<400>255 gagagegget cgatcaaccg mnnetgatet ttcacggcgt tgt43 <210>256 <211>49 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (25)..(25)
<223> к представляет собой д или t
<400>256 caacgccgtg aaagatcagg gennkttgat cgagccgctc tegtaaggr49 <210>257 <211>48 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> ¢24)..(24) <223> m представляет собой а или с
- 227 031651 <220>
<221> другой_признак <222> (25)..(25) <22В> η представляет собой g, a, t или с <220>
<221> другой_признак <222> (26)..(26) <22В> η представляет собой g, a, t или с <400>257 ccttacgaga gcggctcgat caamnngccc tgatctttca cggcgttg <210>258 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> к представляет собой д или t
<400>258 ccgtgaaaga tcagggccgg nnkatcgagc cgctctcgta agg <210>259 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<400>259 ccttacgaga gcggctcgat mnnccggccc tgatctttca egg <210> 260 <211>44 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (23)..(23) <223> n представляет собой g, a, t или c <220>
<221> другой_признак
- 228 031651 <222> (24)..(24) <223> η представляет собой g, a, t или с <220>
<221> другой_признак <222> (25)..(25) <223> к представляет собой g или t <400>260 gaaagatcag ggccggttga tcnnkccgct ctcgtaagga tccg44 <210> 261 <211>44 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<400>261 cggatcctta cgagagcggm nngatcaacc ggccctgatc tttc44 <210> 262 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> к представляет собой д или t
<400>262 atcagggccg gttgatcgag nnkctctcgt aaggatccga att43 <210>263 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (21)..(21) <223> m представляет собой а или с <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <223> n представляет собой g, a, t или c
- 229 031651 <220>
<221> другой_признак <222> (23)..(23) <223> η представляет собой g, a, t или с <400>263 aattcggatc cttacgagag mnnctcgatc aaccggccct gat43 <210>264 <211>45 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой 9, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> к представляет собой д или t
<400>264 cagggccggt tgatcgagcc gnnktcgtaa ggatccgaat tcaag45 <210>265 <211>45 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<400>265 cttgaattcg gatccttacg amnncggctc gatcaaccgg ccctg45
<210> 266
<211> 42
<212> ДНК
<213> <220> искусственная последовательность
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> <220> η представляет собой д, a, t или с
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> <220> η представляет собой д, a, t или с
<221> другой_признак
- 230 031651
<222> (23)..(23)
<22В> к представляет собой g или t
<400> 266
gccggttgat cgagccgctc nnktaaggat ccgaattcaa дс 42
<210> 267
<211> 42
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<400> 267
gcttgaattc ggatccttam nngagcggct cgatcaaccg дс 42
<210> 268
<211> 45
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> к представляет собой g или t
<400> 268
tccgtcggta acggcaagca gnnkacctgg gacaggtccg асадс 45
<210> 269
<211> 42
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> к представляет собой g или t
- 231 031651
<400> cggtaa 269 egge aagcaggaan nktgggacag gtccgacagc eg 42
<210> 270
<211> 42
<212> ДНК
<21В> искусственная последовательность
<220>
<22В> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<22В> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<22В> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<22В> η представляет собой g, a, t или с
<400> 270
cggctgtcgg acctgtccca mnnttcctgc ttgccgttac eg 42
<210> 271
<211> 45
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> к представляет собой g или t
<400> 271
ggtaaeggea agcaggaaac cnnkgacagg tccgacagcc gtggc 45
<210> 272
<211> 45
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> к представляет собой g или t
<400> 272
- 232 031651 aacggcaagc aggaaacctg gnnkaggtcc gacagccgtg gcttc <210>273 <211>45 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д> а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> η представляет собой д> а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> к представляет собой д или t
<400>273 ggcaagcagg aaacctggga cnnktccgac agccgtggct tcgtg <210>274 <211>45 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д> а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> η представляет собой д> а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> к представляет собой д или t
<400>274 aagcaggaaa cctgggacag gnnkgacagc cgtggcttcg tgctt <210>275 <211>45 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой д> а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> η представляет собой д> а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> к представляет собой д или t
<400>275 caggaaacct gggacaggtc cnnkagccgt ggcttcgtgc tttcc
- 233 031651 <210> 276 <211> 42 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой 9, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> к представляет собой д или t
<400>276 gaaacctggg acaggtccga cnnkcgtggc ttcgtgcttt cc42 <210>277 <211>42 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> (19)..(19)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<400>277 ggaaagcacg aagccacgmn ngtcggacct gtcccaggtt tc42 <210>278 <211>45 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> к представляет собой д или t
<400>278 acctgggaca ggtccgacag cnnkggcttc gtgctttccc tgaag45 <210>279 <211>45
- 234 031651
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> к представляет собой g или t
<400> 279
tgggacaggt ccgacagccg tnnkttcgtg ctttccctga agaag 45
<210> 280
<211> 45
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> к представляет собой g или t
<400> 280
gacaggtccg acagccgtgg cnnkgtgctt tccctgaaga agaat 45
<210> 281
<211> 45
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> η представляет собой g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> к представляет собой g или t
<400> 281
aggtccgaca gccgtggctt cnnkctttcc ctgaagaaga atggc 45
<210> 282
<211> 45
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
- 235 031651 <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <223> η представляет собой g, a, t или с <220>
<221> другой_признак <222> (23)..(23) <223> η представляет собой g, a, t или с <220>
<221> другой_признак <222> (24)..(24) <223> к представляет собой g или t <400>282 tccgacagcc gtggcttcgt gnnktccctg aagaagaatg gcgcg45 <210>283 <211>45 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> к представляет собой д или t
<400>283 gacagccgtg gcttcgtgct tnnkctgaag aagaatggcg cgcaa45 <210>284 <211>45 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> η представляет собой д, а, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> к представляет собой д или t
<400>284 agccgtggct tcgtgctttc cnnkaagaag aatggcgcgc aacac45 <210>285 <211> 16 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер 16s
- 236 031651 <400> 285 taccttgtta cgactt 16 <210> 286 <211> 20 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер 16s <400>286 agagtttgat cmtggctcag20 <210>287 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>287 atggcgattt ctgttaaaaa caatgcgtcc aaccccgtcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtacagacg gagacaccaa accgttttcc gtcgcgccgg gcgcctccga tagctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtat gttcaactgg gcggctccgc acacccttac180 tacgttctga gcaccagcaa cattgtgatc tatgacgata aagtgaccga ttcgggccaa240 actcttctgc cgctctcgta a261 <210> 288 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>288 atggccatta gcgttaaaaa cagcgcatcc aacacggtcg aagtctcaat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga tacttgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtac gtgcaactgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>289 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>289 atggccatta ctgttaaaaa cagcgcgtcc aacactattg aagtctcgat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa gccgtttaaa gtggctccag gcgccagtga aacttgggac120 aggaacgact tacgtggctt cgtgttgtac gtgcagctgg gtggctcggc taccccttac180 tacgttttgt caagtagcaa cattgtcatt tacgatgata aagtgaccga tagtggccag240 acgattttgc cgctctcgta a261 <210>290 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>290 atggccatta ctgttaaaaa cagcgcgtcc aacactattg aagtctcgat caatcattgg60 ggtagtgacg gagacaccaa gccgtttaaa gtggctccag gcgccagtga aacttgggac120 aggaacgact tacgtggctt cgtgttgtac ctgcagctgg gtggctcggc taccccttac180 tacgttttgt caactagcaa cattgtcatt tacgatgata aagtgaccga tagtggccag240
- 237 031651 acgattttgc cgctctcgta a 261 <210> 291 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>291 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgtgg aagtcgccat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga ctcttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>292 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>292 atggccatta gcgttaaaaa cagcgcttcc aacacggttg aagtcgctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa gccgtttaaa gtggctccag gcgccagtga aacttgggac120 aggaacgact tacgtggctt cgtgttgtac gtgcagctgg gtggctcggc taccccttac180 tacgttttgt caagtagcaa cattgtcatt tacgatgata aagtgaccga tagtggccag240 acgattttgc cgctctcgta a261 <210>293 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>293 atggccatta ctgttaaaaa cagcgcttcc aacacggttg aagtcgctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa gccgtttaaa gtggctccag gcgccagtga aacttgggac120 aggaacgact tacgtggctt cgtgctgtac gtgcagctgg ggggctcggc taccccttac180 tacgttttgt caagtagcaa cattgtcatt tacgatgata aagtgaccga tagtggccag240 acgattttgc cgctctcgta a261 <210>294 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>294 atggccatta ctgttaaaaa cagcgcgtcc aacactattg aagtcgctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa gccgtttaaa gtggctccag gcgccagtga aacttgggac120 aggaacgact tacgtggctt cgtgatgtac gtgaagctgg ggggctcggc taccccttac180 tacgttttgt caagtagcaa cattgtcatt tacgatgata aagtgaccga tagtggccag240 acgattttgc cgctctcgta a261 <210>295 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>295 atggccatta ctgttaaaaa cagcgcgtcc aacactattg aagtctcgat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa gccgtttaaa gtggccccgg gcgctagcga aacctgggac120
- 238 031651 aggaacgact tacgtggctt cgtgatgtac gtgcagctgg ggggctcggc taccccttac tacgttttgt caagtagcaa cattgtcatt tacgatgata aagtgaccga tagtggccag acgattttgc cgctctcgta a
180
240
261 <210> 296 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>296 atggccatta ctgttaaaaa cagcgcgtcc aacactattg aagtctcgat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa gccgtttaaa gtggccccgg gcgctagcga tagctgggac120 aggaacgact tacgtggctt cgtgttgtac gtgcagctgg gtggctcggc taccccttac180 tacgttttgt caagtagcaa cattgtcatt tacgatgata aagtgaccga tagtggccag240 acgattttgc cgctctcgta a261 <210>297 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>297 atggccatta gcgttaaaaa cagctcttcc aacacgattg aagtcgctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa gccgtttaaa gtggctccag gcgccagtga aacttgggac120 aggaacgact tacgtggctt cgtgttgtac gtgcagctgg gtggctcggc taccccttac180 tacgttttgt caagtagcaa cattgtcatt tacgatgata aagtgaccga tagtggccag240 acgattttgc cgctctcgta a261 <210>298 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>298 atggccatta ccgttaaaaa caactcttcc aacacgattg aagtctctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga aagctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtac gtgcaactgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>299 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>299 atggccatta ccgttaaaaa caacgcttcc aacacgattg aagtcgctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga aagctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgctgtac gtgcagctgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>300 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400> 300
- 239 031651 atggccatta gcgttaaaaa caacgcttcc aacacggtcg aagtctctat caatcattgg ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga tacttgggac aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtac gtgcaactgg ggggctcagc gactccttac tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag acactgctgc cgctctcgta a
120
180
240
261 <210> 301 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>301 atggccatta gcgttaaaaa cagcgcatcc aacacggtcg aagtctcaat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga aagctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtac gtgcaactgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>302 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>302 atggccatta gcgttaaaaa cagctcttcc aacacgattg aagtctctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga tacctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtac gtgcaactgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>303 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>303 atggccatta gcgttaaaaa cagcgcatcc aacacggtcg aagtctcaat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga tacttgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgctgtac gtgcagctgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>304 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>304 atggccatta ccgttaaaaa cagctcttcc aacacgattg aagtcgctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga aacctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtac gtgcagctgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>305 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72
- 240 031651 <400> 305 atggccatta gcgttaaaaa cagcgcatcc aacacggtcg aagtctcaat caatcattgg ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga tagctgggac aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtac gtgcaactgg ggggctcagc gactccttac tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag acactgctgc cgctctcgta a
120
180
240
261 <210> 306 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>306 atggccatta gcgttaaaaa cagctcttcc aacacgattg aagtctctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga aacctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtac gtgcagctgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>307 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>307 atggccatta gcgttaaaaa cagcgcatcc aacacggtcg aagtctcaat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga aacctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgctgtac gtgcagctgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>308 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>308 atggccatta ccgttaaaaa cagcgcttcc aacacggttg aagtctctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga aagctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtac gtgcaactgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>309 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>309 atggccatta gcgttaaaaa cagcgcatcc aacacgattg aagtctctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga aagctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtac gtgcaactgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>310 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность
- 241 031651 <220>
<22В> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400> 310 atggccatta gcgttaaaaa cagcgcatcc aacacggtcg aagtctcaat caatcattgg ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga aacctgggac aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtac gtgcaactgg ggggctcagc gactccttac tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag acactgctgc cgctctcgta a
120
180
240
261 <210> 311 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>311 atggccatta gcgttaaaaa cagcgcatcc aacacggtcg aagtctcaat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga tagctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgctgtac gtgcagctgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>312 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>312 atggccatta ccgttaaaaa caacgcttcc aacacggttg aagtcgctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga aacctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtac gtgcagctgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>313 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>313 atggccatta gcgttaaaaa caactcttcc aacacgattg aagtctctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga tagctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtac gtgcaactgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>314 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>314 atggccatta gcgttaaaaa cagcgcttcc aacacgattg aagtctctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga tagctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtac gtgcaactgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>315 <211> 261
- 242 031651 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>315 atggccatta gcgttaaaaa cagctcttcc aacacggttg aagtcgctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga tagctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgctgtac gtgcagctgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>316 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>316 atggccatta ccgttaaaaa cagcgcttcc aacacgattg aagtcgctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga tacctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtac gtgcaactgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>317 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>317 atggccatta gcgttaaaaa cagcgcatcc aacacggtcg aagtctcaat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga tacctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgctgtac gtgcagctgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>318 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>318 atggccatta gtgttaaaaa caactcttcc aacacggttg aagtcgctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga aagctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtac gtgcaactgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>319 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>319 atggccatta gcgttaaaaa cagctcttcc aacacggttg aagtcgctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga aagctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtac gtgcagctgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261
- 243 031651 <210> 320 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>320 atggccatta ccgttaaaaa cagcgcttcc aacacggttg aagtcgctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga tacctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgatgtac gtgaagctgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>321 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>321 atggccatta gcgttaaaaa cagcgcatcc aacacggtcg aagtctcaat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga tacttgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgctgtac gtgaagctgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>322 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>322 atggccatta gcgttaaaaa cagctcttcc aacacggttg aagtctctat caatcattgg60 ggtactgacg gagacaccaa accgtttaaa atggccccgg gcgctagcga tacctgggac120 aggaacgacc ttcgtggctt cgtgctgtac gtgcagctgg ggggctcagc gactccttac180 tacgttctta gcactagcaa tattgtcatt tacgatgata aagtgacaga tagcggccag240 acactgctgc cgctctcgta a261 <210>323 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>323 atggcaatta gtgttacaaa cagtgcgtcc aaccccgttg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aagttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>324 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>324 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgtgg aagtcgccat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga ctcttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240
- 244 031651 ttaattttgc cgttaagtta a
261 <210> 325 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>325 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccattg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aagttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>326 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>326 atggcaatta gtgttacaaa caatgcgtcc aaccccgttg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga ctcttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>327 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>327 atggcaatta gtgttacaaa caatgcgtcc aaccccattg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aacttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>328 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>328 atggcaatta gtgttacaaa cagtgcgtcc aaccccgttg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga tagttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>329 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72
329 <400> 329 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgtgg aagtcgccat caatcattgg ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aacttgggac
120
- 245 031651 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgttgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>330 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>330 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgtgg aagtcgccat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aagttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgttgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>331 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>331 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgttg aagtctcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga tagttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta g261 <210>332 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>332 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgttg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga ctcttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acgcttgaac cgttaagtta a261 <210>333 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>333 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgtgg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aacttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>334 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400> 334
- 246 031651 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgtgg aagtcgccat caatcattgg ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aagttgggac aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag acattgctgc cgctctcgta a
120
180
240
261 <210> 335 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>335 atggcaattt cagttacaaa caattcgtcc aaccccattg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga ctcttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgttgtcc gtgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>336 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>336 atggcaatta gtgttacaaa caattcgtcc aaccccattg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga tacttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>337 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>337 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccattg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga ctcttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>338 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>338 atggcaattt cagttacaaa cagtgcgtcc aaccccgttg aagtctcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga tacttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>339 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72
- 247 031651 <400>339 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgttg aagtctcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aacttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acgattttgc cgttaagtta a261 <210>340 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>340 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgtgg aagtcgccat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aagttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>341 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72
341 <400> atggcaatta tacgttcttt ggtacggacg aggtccgacc tacgttcttt acgcttttgc ctgttacaaa ccaccagcaa gagacaccag tgcgtggctt ccaccagcaa cggctagtta caattcgtcc tattgtcatt cttcttttcc cgtgttgtcc tattgtcatt a aaccccgttg tatgatgaca gtcgcaaacg gtgaagaaga tatgatgaca aagtcgcgat aggtgacgga gcaagcagga atggcgcgca aggtgacgga caatcattgg ttccggccag aacttgggac acacccttac ttccggccag
240
120
180
240
261 <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
342
261
ДНК искусственная последовательность кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>342 atggcaatta gtgttacaaa caatgcgtcc aaccccgttg aagtctcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aacttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>343 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>343 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccattg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aagttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 ttaattttgc cggctagtta a261 <210>344 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность
- 248 031651 <220>
<22В> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400> 344 atggcaatta gtgttacaaa caatgcgtcc aaccccgttg aagtctcgat caatcattgg ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga tagttgggac aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag ttaattgaac cgttaagtta a
120
180
240
261 <210> 345 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>345 atggcaatta gtgttacaaa caattcgtcc aaccccattg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga ctcttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>346 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>346 atggcaatta gtgttacaaa caatgcgtcc aaccccattg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aagttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>347 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>347 atggcaatta gtgttacaaa cagtgcgtcc aaccccgttg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aacttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>348 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>348 atggcaatta gtgttacaaa caatgcgtcc aaccccattg aagtctcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aacttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acgcttgaac cgttaagtta a261 <210>349 <211> 261
- 249 031651 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>349 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgtgg aagtcgccat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga ctcttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acgattttgc cgttaagtta a261 <210>350 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>350 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgttg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga tacttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acatttgtac cggtttctta a261 <210>351 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>351 atggcaatta ctgttacaaa cagtgcgtcc aaccccgttg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga tagttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>352 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>352 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgtgg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga tacttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>353 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>353 atggcaatta gtgttacaaa cagttcgtcc aaccccgttg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga ctcttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261
- 250 031651 <210> 354 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>354 atggcaatta gtgttacaaa caatgcgtcc aaccccattg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga ctcttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>355 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>355 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgttg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aagttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 ttaattgaac cgttaagtta a261 <210>356 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>356 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgttg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aagttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgttgtcc gtgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 ttaattgaac cgttaagtta a261 <210>357 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>357 atggcaatta ctgttacaaa caatgcgtcc aaccccgttg aagtctcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aagttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acgcttttgc cgttaaatta a261 <210>358 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>358 atggcaatta ctgttacaaa cagtgcgtcc aaccccgttg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga tagttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240
- 251 031651 acattgctgc cgctctcgta a 261 <210> 359 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>359 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgttg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aacttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgttgtcc gtgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>360 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>360 atggcaatta gtgttacaaa caattcgtcc aaccccattg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga ctcttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acgattgaac cgttaagtta a261 <210>361 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>361 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgttg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga tacttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 ttacttttgc cgttaagtta a261 <210>362 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>362 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgtgg aagtcgccat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga aacttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acgattttgc cgttaaatta a261 <210>363 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>363 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgtgg aagtcgccat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga tagttgggac120
- 252 031651 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 ttacttgaac cgttaagtta a261 <210>364 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>364 atggcaatta gtgttacaaa caatgcgtcc aaccccgttg aagtctcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga ctcttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 ttacttgaac cgttaagtta a261 <210>365 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>365 atggcaatta gtgttacaaa cagttcgtcc aaccccgttg aagtctcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga ctcttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgatgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acgcttttgc cggctagtta a261 <210>366 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>366 atggcaattt cagttacaaa caatgcgtcc aaccccgttg aagtcgcgat caatcattgg60 ggtacggacg gagacaccag cttcttttcc gtcgcaaacg gcaagcagga tagttgggac120 aggtccgacc tgcgtggctt cgtgttgtcc gtgcagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcttt ccaccagcaa tattgtcatt tatgatgaca aggtgacgga ttccggccag240 acattgctgc cgctctcgta a261 <210>367 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>367 atgggtatta ccgttacaaa caactcgtcc ggcccgatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccca attctttcct gtcggcagcg gcaagcagga atcttgggac120 aggtccgacg atcgtggctt cgtgctttcc ctgaagaata atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gagaacaact acgtgaaaga ttctggcgag240 ttgatcctgc cgctctcgta a261 <210>368 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400> 368
- 253 031651 atgggtatta ccgttacaaa caactcgtcc ggcgacatcg aagtcgccat caatcattgg ggtagcgacg gagacaccca attctttaag gtcgccccag gcaagcagga atcttgggac aggtccgacg ctcgtggctt cgtgctttcc ctgaagaata atggcgcgca acacccttac tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gagaacaacg cggtgaaaga tcagggccag ttgatcctgc cgctctcgta a
120
180
240
261 <210> 369 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>369 atgggtatta ccgttacaaa caactcgtcc ggcgacatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacacctc cttctttaag gtcgccccag gcaagcagga aacttgggac120 aggtccgacg atcgtggctt cgtgctttcc ctgaagaata atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gagaacgact acgtgaaaga tcagggccag240 ttgatcctgc cgctctcgta a261 <210>370 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>370 atgggtatta ccgttacaaa caacttgtcc aacgacatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccca attctttaag gtcggcccag gcaagcagga atcttgggac120 aggtccgacg ctcgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gagaacgacg cggtgaaaga ttctggcgag240 ttgatcctgc cgctctcgta a261 <210>371 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>371 atgggtatta ccgttacaaa cagctcgtcc ggcgacatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacacctc cttctttaag gtcggcagcg gcaagcagga atcttgggac120 aggtccgacg atcgtggctt cgtgctttcc ctgaagaata atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gagaacaact acgtgaaaga ttctggcgag240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>372 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>372 atgggtatta ccgttacaaa caactcgtcc ggcccgatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccca attctttaag gtcgccccag gcaagcagga atcttgggac120 aggtccgacg atcgtggctt cgtgctttcc ctgaagaata atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gagaacgacg cggtgaaaga ttctggcgag240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>373 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72
- 254 031651 <400>373 atgggtatta ccgttacaaa cagctcgtcc ggcgacatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccca attctttaag gtcggcagcg gcaagcagga aacttgggac120 aggtccgacg atcgtggctt cgtgctttcc ctgaagaata atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gagaacgacg cggtgaaaga ttctggccag240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>374 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>374 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagcggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>375 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>375 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aacccgatcg aagtggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>376 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>376 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagtggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccag240 ttgatccagc cgctctcgta a261 <210>377 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>377 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagtggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>378 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность
- 255 031651 <220>
<22В> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>378 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aacccgatcg aagcggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>379 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>379 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagtggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtt gacaacaaca ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>380 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>380 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgt240 ttgatccacc cggtgtctta a261 <210>381 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>381 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgt240 ttgatccacc cggtgtctta a261 <210>382 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>382 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagcggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>383 <211> 261
- 256 031651 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>383 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttagc gttggtagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg cctccagcaa aattgaagtt gacaacaaca ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatcgagc cgctgtctta a261 <210>384 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>384 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgt240 ttgatcgagc cggtgtctta a261 <210>385 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>385 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aacccgatcg aagtggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgt240 ttgatccacc cgctgtctta a261 <210>386 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>386 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaaaatcg aagtggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>387 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>387 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagtggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacactag cttctttggc gttgataacg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaagtt gaaaacaaca ccgtgaaaga tcagggccgt240 ttgatcgagc cggtggctta a261
- 257 031651 <210> 388 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>388 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>389 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>389 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aacccgatcg aagcggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttagc attgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>390 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>390 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>391 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>391 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctgtctta a261 <210>392 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>392 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgt240
- 258 031651 ttgatccacc cgctgtctta a 261 <210> 393 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>393 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aacaaaatcg aagtggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>394 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>394 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aacccgatcg aagtggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc gttggtagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>395 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>395 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatcgagc cggtgtctta a261 <210>396 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>396 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgt240 ttgatccacc cggtggctta a261 <210>397 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>397 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagcggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120
- 259 031651 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgt ttgatccacc cgctgtctta a
180
240
261 <210> 398 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>398 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagtggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>399 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>399 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attggtagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtt gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgt240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>400 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>400 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaagatcg aagctgccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccactagcaa aattgaaatt gaaaacaaca cggtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>401 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>401 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca agctccttac180 tacgttcagg ccactagcaa aattgaaatt gaaaacaaca cggtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>402 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400> 402
- 260 031651 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attgacagcg gcaagcagga atcttgggac aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg ttgatcgagc cgctctcgta a
120
180
240
261 <210> 403 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>403 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaagatcg aagctgccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>404 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>404 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaagatcg aagctgccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attgacagcg gcaagcagga atcttgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>405 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>405 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaagatcg aagctgccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagagta atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>406 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>406 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaagatcg aagctgccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga atcttgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca agctccttac180 tacgttcagg ccactagcaa aattgaaatt gaaaacaaca cggtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>407 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72
- 261 031651 <400> 407 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaagatcg aagctgccat caataaatgg ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attgacagcg gcaagcagga atcttgggac aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac tacgttcagg ccactagcaa aattgaaatt gaaaacaaca cggtgaaaga tcagggccgg ttgatcgagc cgctctcgta a
120
180
240
261 <210> 408 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида pip-72 <400>408 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attgacagcg gcaagcagga atcttgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca agctccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>409 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида pip-72 <400>409 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga atcttgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>410 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида pip-72 <400>410 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagctgccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>411 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида pip-72 <400>411 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca agctccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>412 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность
- 262 031651 <220>
<22В> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400> 412 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga atcttgggac aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca agctccttac tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg ttgatcgagc cgctctcgta a
120
180
240
261 <210> 413 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>413 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca agctccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaaca cggtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>414 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>414 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>415 <211> 261 <212> днк <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>415 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaagatcg aagctgccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attgacagcg gcaagcagga atcttgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca agctccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>416 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>416 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca agctccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>417 <211> 261
- 263 031651 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>417 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attgacagcg gcaagcagga atcttgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccactagcaa aattgaaatt gaaaacaaca cggtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>418 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>418 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaagatcg aagctgccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga atcttgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca agctccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg cggtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>419 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>419 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaagatcg aagctgccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attgacagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca agctccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>420 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>420 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccactagcaa aattgaaatt gaaaacaaca cggtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>421 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>421 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca agctccttac180 tacgttcagg ccactagcaa aattgaaatt gaaaacaaca cggtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261
- 264 031651 <210> 422 <211> 261 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>422 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaagatcg aagctgccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtagcg gcaagcagga atcttgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>423 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>423 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca agctccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaaatt gaaaacaaca cggtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>424 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>424 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attgacagcg gcaagcagga atcttgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca agctccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaaca cggtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>425 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>425 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaagatcg aagctgccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca agctccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>426 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>426 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagagta atggcgcgca agctccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240
- 265 031651 ttgatcgagc cgctctcgta a 261 <210> 427 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>427 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaagatcg aagctgccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attgacagcg gcaagcagga atcttgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca agctccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatccacc cggtcgcata a261 <210>428 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>428 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaagatcg aagctgccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attgacagcg gcaagcagga atcttgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca agctccttac180 tacgttcagg ccactagcaa aattgaaatt gaaaacaaca cggtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>429 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>429 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatcgagc cgctggctta a261 <210>430 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>430 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagcggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgt240 ttgatcgagc cggtgtctta a261 <210>431 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>431 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120
- 266 031651 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg ttgatcgagc cgctctcgta a
180
240
261 <210> 432 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>432 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagtggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgt240 ttgatccacc cggtgtctta a261 <210>433 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>433 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagtggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>434 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>434 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagcggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgt240 ttgatccacc cggtggctta a261 <210>435 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>435 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagtggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatcgagc cggtggctta a261 <210>436 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400> 436
- 267 031651 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaaaatcg aagcggccat caatcactgg ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg ttgatcgagc cgctctcgta a
120
180
240
261 <210> 437 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>437 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagtggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatcgagc cgctggctta a261 <210>438 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>438 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagcggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>439 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>439 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagcggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>440 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>440 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aacaaaatcg aagtggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>441 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72
- 268 031651 <400> 441 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aacaaaatcg aagcggccat caataaatgg ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg ttgatcgagc cgctctcgta a
120
180
240
261 <210> 442 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>442 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aacaaaatcg aagcggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>443 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>443 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aacccgatcg aagcggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>444 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>444 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatcgagc cgctgtctta a261 <210>445 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>445 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aacccgatcg aagtggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>446 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность
- 269 031651 <220>
<22В> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400> 446 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgt ttgatccacc cggtgtctta a
120
180
240
261 <210> 447 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>447 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttagc gttggtagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>448 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>448 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>449 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>449 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttagc attgataacg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatcgagc cggtgtctta a261 <210>450 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>450 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatcgagc cgctggctta a261 <210>451 <211> 261
- 270 031651 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>451 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc gttggtagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatcgagc cgctggctta a261 <210>452 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>452 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttagc gttgataacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatccacc cgctgtctta a261 <210>453 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>453 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attgatagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>454 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>454 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc gttggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>455 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>455 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttagc gttggtagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatcgagc cgctggctta a261
- 271 031651 <210> 456 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <22О>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>456 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc gttggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>457 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <22О>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>457 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attgatagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>458 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>458 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcaca atggcgcgca acccccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgt240 ttgatccacc cgctcgctta a261 <210>459 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <22О>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>459 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttagc gttgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgt240 ttgatcgagc cggtggctta a261 <210>460 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <22О>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>460 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttagc gttggtagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240
- 272 031651 ttgatcgagc cgctctcgta a 261 <210> 461 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>461 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttagc gttggtagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatcgagc cgctgtctta a261 <210>462 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>462 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attggtagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatcgagc cggtgtctta a261 <210>463 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>463 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttagc gttgataacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>464 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>464 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc gttgatagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgt240 ttgatcgagc cggtggctta a261 <210>465 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>465 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attggtaacg gcaagcagga atcctgggac120
- 273 031651 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg ttgatcgagc cgctctcgta a
180
240
261 <210> 466 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>466 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc gttgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>467 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>467 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc gttggtagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>468 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>468 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>469 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>469 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcactca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>470 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400> 470
- 274 031651 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca agcaccttac tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa accatccacc cggtagcata a
120
180
240
261 <210> 471 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>471 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcagggccgt240 ttgatccacc cggtgtctta a261 <210>472 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>472 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagcggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>473 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>473 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagcggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>474 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>474 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagcggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatccacc cggtgtctta a261 <210>475 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72
- 275 031651 <400> 475 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca acacccttac tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa ttgatcgagc cggtggctta a
120
180
240
261 <210> 476 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>476 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>477 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>477 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcactca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatcgagc cgctggctta a261 <210>478 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>478 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aacaaaatcg aagcggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcactca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>479 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>479 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatccacc cggtggctta a261 <210>480 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность
- 276 031651 <220>
<22В> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400> 480 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg ggtagagacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcactca agcaccttac tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcagggccgt ttgatccacc cggtggctta a
120
180
240
261 <210> 481 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>481 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttagc attggtagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>482 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>482 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc gttggtagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcactca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>483 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>483 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc gttgatagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcactca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>484 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>484 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc gttgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcactca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>485 <211> 261
- 277 031651 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>485 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcactca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>486 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>486 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc gttggtagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcactca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>487 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>487 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttagc attgatagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccaacaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>488 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>488 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcactca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>489 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>489 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261
- 278 031651 <210> 490 <211> 261 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>490 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatccacc cggtgtctta a261 <210>491 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>491 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc gttggtagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcactca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatcgagc cgctgtctta a261 <210>492 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>492 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc gttgatagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>493 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>493 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatccacc cggtggctta a261 <210>494 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>494 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttagc gttggtagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240
- 279 031651 accatccacc cggtagcata a 261 <210> 495 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>495 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aacccgatcg aagtggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>496 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>496 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aacaaaatcg aagcggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>497 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>497 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aacccgatcg aagtggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcactca agcaccttac180 tacgttcagg cctccagcaa aattgaaatt gaaaacaacg ccgtgaaaga tcagggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>498 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>498 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatccacc cgctggctta a261 <210>499 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>499 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120
- 280 031651 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa accatccacc cggtagcata a
180
240
261 <210> 500 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида pip-72 <400>500 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaaaatcg aagcggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>501 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида pip-72 <400>501 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccaatcg aagcggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>502 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида pip-72 <400>502 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagcggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcactca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>503 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида pip-72 <400>503 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>504 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида pip-72 <400> 504
- 281 031651 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac tacgttcagg ccaccagcaa aattgaagtt gaaaacaacg ccgtgaaaga tcatggcgaa accatccacc cggtagcata a
120
180
240
261 <210> 505 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>505 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gacaacaaca ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>506 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <22О>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>506 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaaaatcg aagcggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcactca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>507 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>507 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagcggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcagggccgt240 ttgatccacc cgctgtctta a261 <210>508 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>508 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagcggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttagc gttgatagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>509 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72
- 282 031651
<400> 509 60 120 180 240 261
atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagcggccat caataaatgg
ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc gttggtagcg gcaagcagga aacctgggac
aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcactca agcaccttac
tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa
accatccacc cggtggctta a
<210> 510 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220> <223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72
<400> 510
atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aacccgatcg aagtggccat caataaatgg 60
ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc attggtagcg gcaagcagga atcctgggac 120
aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac 180
tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa 240
accatccacc cggtagcata a 261
<210> 511 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220> <223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72
<400> 511
atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg 60
ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac 120
aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagagca atggcgcgca agcaccttac 180
tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa 240
accatccacc cggtagcata a 261
<210> 512 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220> <223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72
<400> 512
atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg 60
ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc gttggtagcg gcaagcagga aacctgggac 120
aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac 180
tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcagggcgaa 240
accatccacc cggtagcata a 261
<210> 513 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220> <223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72
<400> 513
atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagcggccat caataaatgg 60
ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac 120
aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac 180
tacgttcagg cctccagcaa aattgaaatt gaaaacaaca ccgtgaaaga tcatggcgaa 240
accatccacc cggtagcata a 261
<210> 514 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность
- 283 031651 <220>
<22В> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400> 514 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caatcactgg ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa accatccacc cggtagcata a
120
180
240
261 <210> 515 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>515 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgt240 ttgatcgagc cggtggctta a261 <210>516 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>516 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagtggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcactca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>517 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>517 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagcggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>518 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>518 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagccgatcg aagcggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>519 <211> 261
- 284 031651 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>519 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcagggcgaa240 ttgatccacc cggtgtctta a261 <210>520 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>520 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>521 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>521 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaaaatcg aagtggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcactca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>522 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>522 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>523 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>523 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaaaatcg aagtggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261
- 285 031651 <210> 524 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>524 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>525 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>525 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aagaaaatcg aagtggccat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>526 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>526 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>527 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>527 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagtggccat caatcactgg60 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgca atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>528 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 528
Met Al a lie Ser val Lys Asn Asn Al a Ser Asn pro val Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Ser val Ala
20 25 30
- 286 031651
Pro Gly Al a Ser Asp Ser Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser <210> 529 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 529
Met Al a lie Ser val LyS Asn Ser Al a Ser Asn Thr val Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr LyS Pro Phe LyS Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Asp Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 530 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 530
Met Al a lie Thr val LyS Asn Ser Al a Ser Asn Thr lie Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr LyS Pro Phe LyS val Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Glu Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Ser Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr lie Leu Pro Leu Ser
85
<210> 531 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 531
Met Al a lie Thr val LyS Asn Ser Al a Ser Asn Thr lie Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr LyS pro Phe LyS val Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Glu Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Tyr Leu G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
- 287 031651
65 Thr lie 70 75 80
Leu Pro Leu Ser 85
<210> 532
<211> 86
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 532
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 533 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 533
Met Al a lie Ser val LyS Asn Ser Al a Ser Asn Thr val Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr LyS Pro Phe LyS val Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Glu Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Ser Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr lie Leu Pro Leu Ser
85
<210> 534 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 534
Met Al a lie Thr val LyS Asn Ser Al a Ser Asn Thr val Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr LyS Pro Phe LyS val Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Glu Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Ser Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr lie Leu Pro Leu Ser <210> 535
- 288 031651 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 535
Met Al a lie Thr val Lys Asn Ser Al a Ser Asn Thr lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys val Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Glu Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val Lys Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Ser Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr lie Leu Pro Leu Ser
85
<210> 536 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 536
Met Al a lie Thr val Lys Asn Ser Al a Ser Asn Thr lie Glu val Ser
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys val Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Glu Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Ser Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr lie Leu Pro Leu Ser
85
<210> 537
<211> 86
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 537
Met Al a lie Thr val Lys Asn Ser Al a Ser Asn Thr lie Glu val Ser
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys val Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Asp Ser Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Ser Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr lie Leu Pro Leu Ser
85
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 538 86 БЕЛОК искусственная последовательность полипептид PIP-72
- 289 031651 <400> 538
Met Al a lie Ser val Lys Asn Ser Ser Ser Asn Thr lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys val Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Glu Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Ser Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr lie Leu Pro Leu Ser
85
<210> 539 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 539
Met Al a lie Thr val Lys Asn Asn Ser Ser Asn Thr lie Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Glu Ser Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 540 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 540
Met Al a lie Thr val Lys Asn Asn Al a Ser Asn Thr lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Glu Ser Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 541 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 541
Met Al a lie Ser val Lys Asn Asn Al a Ser Asn Thr val Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys Met Al a
- 290 031651
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Asp Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu pro Leu Ser
85
<210> 542 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 542
Met Al a lie Ser val LyS Asn Ser Al a Ser Asn Thr val Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr LyS Pro Phe LyS Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Glu Ser Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 543 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 543
Met Al a lie Ser val LyS Asn Ser Ser Ser Asn Thr lie Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr LyS Pro Phe LyS Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Asp Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 544 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 544
Met Al a lie Ser val LyS Asn Ser Al a Ser Asn Thr val Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr LyS Pro Phe LyS Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Asp Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
- 291 031651
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln 80
65 Thr Leu Leu Pro Leu 85 70 Ser 75
<210> 545
<211> 86
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 545
Met Al a lie Thr val Lys Asn Ser Ser Ser Asn Thr lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Glu Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 546 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 546
Met Al a lie Ser val Lys Asn Ser Al a Ser Asn Thr val Glu val Ser
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Asp Ser Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 547 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 547
Met Al a lie Ser val Lys Asn Ser
1 5
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly
20
Pro Gly Al a Ser Glu Thr Trp Asp
35 40
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser
50 55
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp
65 70
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
Ser Ser Asn Thr lie Glu val 15 Ser
10
Asp 25 Thr Lys Pro Phe Lys 30 Met Al a
Arg Asn Asp Leu Arg 45 Gly Phe val
Al a Thr Pro Tyr 60 Tyr val Leu Ser
Asp Lys val 75 Thr Asp Ser Gly Gln 80
- 292 031651 <210> 548 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 548
Met Al a lie Ser val Lys Asn Ser Al a Ser Asn Thr val Glu val Ser
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Glu Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
<210> 549 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 549
Met Ala Ile Thr val Lys Asn Ser Al a Ser Asn Thr val Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Glu Ser Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 550
<211> 86
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 550
Met Ala Ile Ser val Lys Asn Ser Al a Ser Asn Thr lie Glu val Ser
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys pro Phe Lys Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Glu Ser Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser <210> 551 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
- 293 031651 <22В> полипептид PIP-72 <400> 551
Met Al a lie Ser val Lys Asn Ser Al a Ser Asn Thr val Glu val Ser
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Glu Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 552 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 552
Met Al a lie Ser val Lys Asn Ser Al a Ser Asn Thr val Glu val Ser
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Asp Ser Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 553 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 553
Met Al a lie Thr val Lys Asn Asn Al a Ser Asn Thr val Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Glu Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 554 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 554
Met Ala lie Ser val Lys Asn Asn Ser Ser Asn Thr lie Glu val Ser
10 15
- 294 031651
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe LyS Met Ala
20 25 30
pro Gly Al a Ser Asp Ser Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 555 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 555
Met Ala ile Ser val Lys Asn Ser Ala Ser Asn Thr lie Glu val Ser
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Asp Ser Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 556 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 556
Met Al a lie Ser val Lys Asn Ser Ser Ser Asn Thr val Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Asp Ser Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 557 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 557
Met Al a lie Thr val Lys Asn Ser Al a Ser Asn Thr ile Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Asp Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
- 295 031651
50 55 60
Th г Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Th г Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 558 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 558
Met Al a lie Ser val Lys Asn Ser Al a Ser Asn Thr val Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Asp Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 559 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 559
Met Al a lie Ser val Lys Asn Asn Ser Ser Asn Thr val Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Glu Ser Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 560 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 560
Met Al a lie Ser val Lys Asn Ser Ser Ser Asn Thr val Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys pro Phe Lys Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Glu Ser Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
- 296 031651 <210> 561 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 561
Met Al a lie Thr val LyS Asn Ser Al a Ser Asn Thr val Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr LyS Pro Phe LyS Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Asp Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val LyS Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
<210> 562 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 562
Met Ala lie Ser val LyS Asn Ser Al a Ser Asn Thr val Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr LyS Pro Phe LyS Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Asp Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Tyr val LyS Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 563
<211> 86
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 563
Met Ala lie Ser val LyS Asn Ser Ser Ser Asn Thr val Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr LyS pro Phe LyS Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Asp Thr Trp Asp Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser <210> 564 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность
- 297 031651 <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 564
Met Al a lie Ser val Thr Asn Ser Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val LyS LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 565 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 565
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn Ile val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Leu lie Leu Pro Leu Ser
<210> 566 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 566
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 567 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 567
Met Ala lie Ser val Thr Asn Asn Ala Ser Asn Pro val Glu val Ala
- 298 031651
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val LyS LyS Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
<210> 568 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 568
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n LyS Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
<210> 569 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 569
Met Al a lie Ser val Thr Asn Ser Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n LyS Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
<210> 570 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 570
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
- 299 031651
Leu Ser val G1 n LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Th г Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Th г Leu Leu Pro Leu Ser
<210> 571 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 571
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn ile val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
<210> 572 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 572
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Ser
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
<210> 573 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 573
Met Al a ile Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Glu Pro Leu Ser
300 031651 <210> 574 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 574
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr T rp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a G1 n Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn Ile val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
<210> 575 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 575
Met Ala Ile Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Ser T rp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a G1 n Hi s pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 576
<211> 86
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 576
Met Ala Ile Ser val Thr Asn Asn Ser Ser Asn pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr ASp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Ala
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Asp Ser T rp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser val Lys Lys Asn Gly Al a G1 n Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser <210> 577 <211> 86 <212> БЕЛОК
- 301 031651 <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72
<400> ! 577
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Asp Thr Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
<210> 578 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 578
Met Ala lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 579
<211> 86
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 579
Met Ala lie Ser val Thr Asn Ser Al a Ser Asn pro val Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Asp Thr Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser <210> 580 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 580
- 302 031651
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys Gln Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr lie Leu Pro Leu Ser
<210> 581 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 581
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 582 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 582
Met Ala ile Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro val Glu val Ala
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Val Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr Val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Al a Ser
85
<210> 583 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 583
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Ser
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
303 031651
35 40 45
Met Ser val Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hl s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
<210> 584 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 584
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hl s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a Gln Hl s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Leu lie Leu Pro Al a Ser
85
<210> 585 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 585
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Ser
1 5 10 15
ile Asn Hl s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a Gln Hl s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 586 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 586
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hl s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys Gln Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a Gln Hl s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
- 304 031651
Thr Leu Leu Pro Leu Ser <210> 587 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 587
Met Al a Ile Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 588
<211> 86
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 588
Met Al a ile Ser val Thr Asn Ser Al a Ser Asn pro val Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> 589
<211> 86
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 589
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn pro lie Glu val Ser
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Glu Pro Leu Ser <210> 590 <211> 86
305 031651 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 590
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val LyS LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly G1 n
65 70 75 80
Thr lie Leu Pro Leu Ser
85
<210> 591 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 591
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Asp Thr Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly G1 n
65 70 75 80
Thr Phe val Pro val Ser
85
<210> 592
<211> 86
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 592
Met Al a lie Thr val Thr Asn Ser Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly G1 n
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
85
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 593 86 БЕЛОК искусственная последовательность полипептид PIP-72
- 306 031651 <400> 593
Met Ala lie Ser val Thr Asn Asn Ala Ser А5П Pro val Glu val Ala
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Asp Thr Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
<210> 594 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 594
Met Al a lie Ser val Thr Asn Ser Ser Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
<210> 595 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 595
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val LyS LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp LyS val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
<210> 596 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 596
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn pro val Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
- 307 031651
Asn Gly Lys G1 n G1 u Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a G1 n Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn ile val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 597 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 597
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser phe phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n G1 u Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser val Lys Lys Asn Gly Al a G1 n Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 598 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 598
Met Al a lie Thr val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Ser
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n G1 u Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a G1 n Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Asn
<210> 599 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 599
Met Al a lie Thr val Thr Asn Ser Al a Ser Asn pro val Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val Lys Lys Asn Gly Al a G1 n Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
308 031651
70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser <210> 600 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 600
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser val Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
<210> 601 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 601
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr lie Glu Pro Leu Ser
<210> 602 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 602
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr ASp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Ala
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Asp Thr Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Leu Leu Leu Pro Leu Ser <210> 603
- 309 031651 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 603
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr lie Leu Pro Leu Asn
<210> 604 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 604
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Leu Leu Glu Pro Leu Ser
<210> 605 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> i полипептид PIP-72
<400> i 605
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Leu Leu Glu Pro Leu Ser <210> 606 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72
- 310 031651 <400> 606
Met Al a lie Ser val Thr Asn Ser Ser Ser Asn Pro val Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Al a Ser
<210> 607 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 607
Met Al a lie Ser val Thr Asn Asn Al a Ser Asn Pro val Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser val G1 n Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Leu Ser
<210> 608 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 608
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Gly Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Gln Phe Phe Pro val Gly
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Asn Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Glu Asn Asn Tyr val Lys Asp Ser Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Leu Pro Leu Ser
<210> 609 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 609
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Gly Asp lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Gln Phe Phe Lys val Al a
- 311 031651
20 25 30
Pro Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Al a Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Asn Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val G1 u Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Gln
65 70 75 80
Leu lie Leu Pro Leu Ser
<210> 610 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 610
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Gly Asp lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Lys val Al a
20 25 30
Pro Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Asn Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys Ile Glu val Glu Asn Asp Tyr val Lys Asp Gln Gly Gln
65 70 75 80
Leu lie Leu Pro Leu Ser
85
<210> 611 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 611
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Leu Ser Asn Asp ile Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Gln Phe Phe Lys val Gly
20 25 30
Pro Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Al a Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys Ile Glu val Glu Asn Asp Al a val Lys Asp Ser Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Leu Pro Leu Ser
85
<210> 612 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 612
Met Gly ile Thr val Thr Asn Ser Ser Ser Gly Asp lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Lys val Gly
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Asn Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
- 312 031651
Ser Ser Lys lie Glu val Glu Asn Asn Tyr val Lys Asp Ser Gly Glu 65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser <210> 613 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 613
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Gly Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Gin Phe Phe Lys val Al a
20 25 30
Pro Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Asn Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Glu Asn Asp Al a val Lys Asp Ser Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 614 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 614
Met Gly lie Thr val Thr Asn Ser Ser Ser Gly Asp lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Gin Phe Phe Lys val Gly
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Asn Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Glu Asn Asp Al a val Lys Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 615 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 615
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Pro lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Ala Gin Ala Pro Tyr Tyr val Gin Ala
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
- 313 031651
<210> <211> <212> <21В> <220> <22В> 616 86 БЕЛОК искусственная последовательность полипептид PIP-72
<400> 616
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 617 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 617
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Gin
65 70 75 80
Leu lie Gin Pro Leu Ser
85
<210> 618 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 618
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys Gin Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> <211> <212> <213> <220> 619 86 БЕЛОК искусственная последовательность
- 314 031651 <22В> полипептид PIP-72 <400> 619
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Al a pro Tyr Tyr val G1 n Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 620 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 620
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val G1 n Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Thr val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 621 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 621
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val G1 n Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Ala val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Hi s pro val Ser
85
<210> 622 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 622
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Ala
10 15
- 315 031651
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n G1 u Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie G1 u val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Hi s Pro val Ser
<210> 623 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 623
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser LyS Pro lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n G1 u Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie G1 u val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 624 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 624
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n G1 u Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie G1 u val Asp Asn Asn Thr val LyS Asp Gin Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 625 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 625
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n G1 u Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
- 316 031651
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Ala val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro val Ser
<210> 626 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 626
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Hi s Pro Leu Ser
85
<210> 627 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 627
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser LyS LyS lie Glu val Ala
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 628 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 628
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser LyS Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly val Asp
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser LyS lie Glu val Glu Asn Asn Thr val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro val Ala
- 317 031651 <210> 629 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 629
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Ala Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Ala
50 55 60
Thr Ser LyS lie Glu lie Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 630 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 630
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu Ala Ala
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS Gln Glu Ser Trp ASp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a G1 n Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 631 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 631
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a G1 n Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> <211> <212> <213> 632 86 БЕЛОК искусственная последовательность
- 318 031651 <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 632
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Asn Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 633 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 633
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Ala val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Hi s pro Leu Ser
85
<210> 634 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 634
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Lys lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys Ile Glu val Asp Asn Asn Ala val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 635 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 635
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Ala
- 319 031651
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly val Gly
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n G1 u Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile G1 u val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 636 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <22О>
<223> полипептид PIP-72 <400> 636
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n G1 u Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Al a pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile G1 u val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro val Ser
85
<210> 637 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <22О>
<223> полипептид PIP-72 <400> 637
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n G1 u Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Ala val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Hi s pro val Al a
85
<210> 638 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <22О>
<223> полипептид PIP-72 <400> 638
Met Gly ile Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Pro lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n G1 u Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
- 320 031651
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie G1 u val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Hi s Pro Leu Ser
<210> 639 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <22О>
<223> полипептид PIP-72 <400> 639
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n G1 u Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile G1 u val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 640 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <22О>
<223> полипептид PIP-72 <400> 640
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly ile Gly
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n G1 u Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Ala Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Ala
50 55 60
Ser Ser Lys lie G1 u val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 641 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <22О>
<223> полипептид PIP-72 <400> 641
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n G1 u Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys Ile G1 u lie Glu Asn Asn Thr val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
- 321 031651 <210> 642 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 642
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser LyS lie Glu lie Glu Asn Asn Thr val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 643 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 643
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 644 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 644
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser LyS LyS lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Ala Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Ala
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 645 <211> 86 <212> БЕЛОК
- 322 031651 <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 645
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 646 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 646
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Ser Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 647
<211> 86
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 647
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys Gln Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Al a pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys ile Glu lie Glu Asn Asn Thr val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 648 86 БЕЛОК искусственная последовательность полипептид PIP-72
<400> 648
- 323 031651
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr Val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys ile Glu lie Glu Asn Asn Thr val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 649 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <22О>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 649
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly ile Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Al a pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 650 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <22О>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 650
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 651 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <22О>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 651
Met Gly ile Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
- 324 031651
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 652 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <22О>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 652
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 653 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <22О>
<223> полипептид PIP-72 <400> 653
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 654 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <22О>
<223> полипептид PIP-72 <400> 654
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Thr val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
- 325 031651
Leu lie Glu Pro Leu Ser <210> 655 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 655
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Ala
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp G1 n Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 656 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 656
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Lys lie G1 u Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Al a Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp G1 n Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 657 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 657
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie G1 u val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys Gin Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp G1 n Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 658 <211> 86
- 326 031651 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 658
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys Gln Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys ile Glu lie Glu Asn Asn Thr val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 659 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 659
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 660 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 660
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 661 86 БЕЛОК искусственная последовательность полипептид PIP-72
- 327 031651 <400> 661
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Asn Thr val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 662 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 662
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys Gln Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Al a pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Asn Thr val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 663 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 663
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Ser Gly Lys Gln Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe Val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 664 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 664
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
328 031651
Asn Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu lie Glu Asn Asn Thr val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 665 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 665
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Thr val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 666 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 666
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser LyS LyS lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gin Al a Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 667 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 667
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Ser Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
- 329 031651
70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser <210> 668 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 668
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Hi s Pro Val Al a
<210> 669 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 669
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Al a pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys ile Glu lie Glu Asn Asn Thr val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 670 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 670
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ala
85
<210> 671
- 330 031651 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 671
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser LyS Pro lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val G1 n Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Ala val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro val Ser
85
<210> 672 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 672
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val G1 n Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 673 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 673
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser LyS Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS Gin Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val G1 n Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Hi s Pro val Ser
85
<210> 674 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72
- 331 031651 <400> 674
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 675 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 675
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Pro lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 676 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 676
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Al a Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro val Al a
85
<210> 677 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 677
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
- 332 031651
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 678 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 678
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Al a
85
<210> 679 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 679
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Pro lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 680 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 680
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys pro lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
- 333 031651
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Ala val Lys Asp Gln Gly Arg 65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser <210> 681 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 681
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Lys lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 682 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 682
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Lys lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys Ile Glu val Asp Asn Asn Ala val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 683 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 683
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Lys lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
- 334 031651
<210> <211> <212> <21В> <220> <22В> 684 86 БЕЛОК искусственная последовательность полипептид PIP-72
<400> 684
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 685 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 685
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Ala Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Ala
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 686 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 686
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> <211> <212> <213> <220> 687 86 БЕЛОК искусственная последовательность
- 335 031651 <223> полипептид PIP-72 <400> 687
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Thr T rp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Hi s Pro val Ser
<210> 688 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 688
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser T rp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 689 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 689
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser T rp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 690 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 690
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Ala
10 15
- 336 031651
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser lie Asp
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro val Ser
<210> 691 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 691
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Al a
85
<210> 692 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 692
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser phe Phe Gly val Gly
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Al a
85
<210> 693 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 693
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Asp
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
337 031651
50 55 60
Ser Ser LyS ile Glu val Asp Asn Asn Ala val LyS Asp Gin Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Hi s pro Leu Ser
<210> 694 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 694
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly ile Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 695 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 695
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 696 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 696
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Ser Gly LyS Gin Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Al a
85
- 338 031651
<210> <211> <212> <21В> <220> <22В> 697 86 БЕЛОК искусственная последовательность полипептид PIP-72
<400> 697
Met Gly ile Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu Ile Glu Pro Leu Ser
85
<210> 698 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 698
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly ile Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 699 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 699
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Hi s Asn Gly Al a Gln Pro Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Hi s Pro Leu Al a
85
<210> 700 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность
- 339 031651 <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 700
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro val Al a
<210> 701 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 701
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 702 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 702
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 703 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 703
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Ala
- 340 031651
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Gly
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Al a pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Val Ser
<210> 704 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 704
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Asp
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 705 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 705
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly val Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro val Al a
85
<210> 706 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 706
Met Gly ile Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly ile Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
- 341 031651
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 707 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 707
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly val Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 708 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 708
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly val Gly
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Al a pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 709 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 709
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie G1 u Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
- 342 031651 <210> 710 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 710
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Thr Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 711 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 711
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 712
<211> 86
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 712
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Hi s Pro val Ser
85
<210> 713 <211> 86 <212> БЕЛОК
- 343 031651 <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 713
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Pro lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 714 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 714
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Pro lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Al a Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 715
<211> 86
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 715
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Pro lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Al a Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Gin Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Hi s Pro val Ser
85
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 716 86 БЕЛОК искусственная последовательность полипептид PIP-72
<400> 716
- 344 031651
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro val Al a
<210> 717 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 717
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 718 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 718
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Thr Gin Al a Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Gin Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Al a
85
<210> 719 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 719
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Lys lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
- 345 031651
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Thr Gln Al a pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
<210> 720 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 720
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Gln Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 721 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 721
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Arg Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Thr Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 722 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 722
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser lie Gly
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
- 346 031651
Thr lie His Pro val Ala <210> 723 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 723
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly val Gly
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Thr Gln Al a pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
<210> 724 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 724
Met Gly Ile Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly val Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Thr Gln Al a pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 725
<211> 86
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 725
Met Gly Ile Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly val Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Thr Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys ile Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie His Pro val Ala <210> 726 <211> 86
347 031651 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 726
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Thr Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 727 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 727
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly val Gly
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Thr Gln Al a pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 728 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 728
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Asn Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 729 86 БЕЛОК искусственная последовательность полипептид PIP-72
- 348 031651 <400> 729
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Thr Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
<210> 730 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 730
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 731 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 731
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Gln Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Hi s Pro val Ser
85
<210> 732 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 732
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly val Gly
20 25 30
349 031651
Ser Gly Lys G1 n G1 u Thr Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Thr Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie G1 u lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Gin Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 733 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 733
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly val Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n G1 u Thr Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie G1 u lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 734 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 734
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n G1 u Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie G1 u lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Gin Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 735 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 735
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n G1 u Thr Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie G1 u lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
- 350 031651
70 75 80
Thr lie His Pro val Ala <210> 736 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 736
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 737 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 737
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Lys lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
<210> 738 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 738
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Thr Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie His Pro val Ala <210> 739
351 031651 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72
<4оо> ; 739
Met Gly lie Thr val Thr Asn LyS Ser Ser LyS LyS lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr LyS Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS Gin Glu Ser Trp Asp Arg Ser ASp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Al a Gin Al a Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser LyS lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val LyS Asp Gin Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Hi s Pro Leu Al a
85
<210> 740 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 740
Met Gly lie Thr val Thr Asn LyS Ser Ser LyS LyS lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr LyS Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Ala Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Ala
50 55 60
Thr Ser LyS lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val LyS Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 741 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 741
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser LyS LyS lie Glu Ala Ala
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr LyS Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser LyS lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val LyS Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s pro val Al a
85
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 742 86 БЕЛОК искусственная последовательность полипептид PIP-72
- 352 031651 <400> 742
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser LyS Pro lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr LyS Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n G1 u Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gin Al a Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser LyS lie G1 u lie Glu Asn Ser Thr val LyS Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
<210> 743 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 743
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser LyS Pro lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr LyS Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n G1 u Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Thr Gin Al a Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser LyS lie G1 u lie Glu Asn Ser Thr val LyS Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 744 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 744
Met Gly lie Thr val Thr Asn LyS Ser Ser LyS LyS lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n G1 u Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Al a Gin Al a Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser LyS lie G1 u lie Glu Asn Ser Thr val LyS Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 745 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 745
Met Gly lie Thr val Thr Asn LyS Ser Ser LyS LyS lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr LyS Phe Phe Gly lie Asp
- 353 031651
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser LyS lie Glu val Glu Asn Asn Al a val LyS Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
<210> 746 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 746
Met Gly lie Thr val Thr Asn LyS Ser Ser LyS Lys lie G1 u Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn LyS T rp Gly Ser Asp Gly Asp Thr LyS Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser LyS lie Glu lie Asp Asn Asn Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 747 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 747
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Lys lie G1 u Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s T rp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Thr Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 748 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 748
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Pro lie G1 u Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn Lys T rp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
- 354 031651
Thr Ser LyS lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Hi s pro Leu Ser
85
<210> 749 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 749
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Pro lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 750 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 750
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly val Gly
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Thr Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 751 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 751
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Gly
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
355 031651 <210> 752 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 752
Met Gly lie Thr val Thr Asn LyS Ser Ser LyS LyS lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr LyS Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Ser Asn Gly Al a Gin Al a Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser LyS lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val LyS Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 753 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 753
Met Gly lie Thr val Thr Asn LyS Ser Ser LyS LyS lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
ile Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly val Gly
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser LyS lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val LyS Asp Gin Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 754
<211> 86
<212> БЕЛОК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> полипептид PIP-72
<400> 754
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
ile Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu lie Glu Asn Asn Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> <211> <212> <213> <220> 755 86 БЕЛОК искусственная последовательность
- 356 031651 <22В> полипептид PIP-72 <400> 755
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
<210> 756 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 756
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser Lys ile Glu lie Glu Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro val Al a
85
<210> 757 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 757
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Thr Gin Al a Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 758 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 758
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Ala Ala
1 5 10 15
- 357 031651
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr LyS Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS LyS Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser LyS lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val LyS Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
<210> 759 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 759
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser LyS Pro lie Glu Al a Al a
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr LyS Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gin Al a Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser LyS lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val LyS Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
<210> 760 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 760
Met Gly lie Thr val Thr Asn LyS Ser Ser LyS LyS lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr LyS Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Thr Ser LyS lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val LyS Asp Gin Gly Glu
65 70 75 80
Leu lie Hi s Pro val Ser
<210> 761 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 761
Met Gly lie Thr val Thr Asn LyS Ser Ser LyS LyS lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
lie Asn LyS Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr LyS Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly LyS G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu LyS Arg Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
358 031651
50 55 60
Thr Ser Lys lie G1 u lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp His Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s pro val Al a
85
<210> 762 <211> 86 <212> БЕЛОК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 762
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Lys lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n G1 u Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Thr Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie G1 u lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 763 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 763
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys ile Glu Al a Ser
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n G1 u Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys Ile Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 764 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 764
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Lys lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n G1 u Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie G1 u lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
359 031651 <210> 765 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72
<4оо> ; 765
Met Gly ile Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Ala Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys Gln Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys ile Glu ile Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s pro val Al a
85
<210> 766 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 766
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Lys Lys lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 767 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 767
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 768 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность
- 360 031651 <220>
<22В> полипептид PIP-72 <400> 768
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Thr Ser Lys lie Glu lie Glu Asn Ser Thr val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro val Al a
85
<210> 769 <211> 261 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>769 atgggtatta ccgttaccaa caaatcatcg aaaaaaattg aagcctcgat caacaaatgg60 ggtagcgacg gcgacaccaa gttcttcgga atcgatagcg gcaagcagga aagctgggac120 cgatcagacg accgtggctt tgtgctgtca ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>770 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>770 atgggtatta ccgttaccaa caaatcatcg aaaaaaattg aagcctcgat caacaaatgg60 ggtagcgacg gcgacaccaa gttcttcgga atcgatagcg gcaagcagga aagctgggac120 cgatcagacg accgtggctt tgtgctgtca ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga ccacggcgaa240 accatccacc cggtcgcgta a261 <210>771 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 771
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 772 <211> 86
- 361 031651 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 772
Met Gly lie Thr val Thr Asn Lys Ser Ser Lys Lys lie Glu Al a Ser
1 5 10 15
ile Asn Lys Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Lys Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys Gln Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Hi s Gly Glu
65 70 75 80
Thr lie Hi s Pro Val Al a
85
<210> 773 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (29)..(29) <223> s представляет собой g или с <220>
<221> другой_признак <222> (35)..(35) <223> v представляет собой a, g или с <220>
<221> другой_признак <222> (52)..(52) <223> г представляет собой а или g <220>
<221> другой_признак <222> (55)..(55) <223> m представляет собой а или с <220>
<221> другой_признак <222> (61)..(61) <223> m представляет собой а или с <400> 773 gtcggtaacg gcaagcagtg cggttgggsc aggavcgacg cacgtggctt crtcmtgtgt mtgaagaaga atggcgcgca a <210> 774 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (29)..(29) <223> s представляет собой g или с <220>
<221> другой_признак <222> (45)..(45) <223> v представляет собой а, с или g <220>
<221> другой_признак <222> (52)..(52) <223> г представляет собой а или g
- 362 031651 <220>
<221> другой_признак <222> (55)..(55) <22В> m представляет собой а или с <220>
<221> другой_признак <222> (58)..(58) <22В> d представляет собой a, g или t <220>
<221> другой_признак <222> (61)..(61) <22В> m представляет собой а или с <400>774 gtcggtaacg gcaagcagtg cggttgggsc aggavcgacg cacgtggctt crtcmtgdcc60 mtgaagaaga atggcgcgca a81 <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
775
ДНК искусственная последовательность праймер для мутагенеза другой_признак (29)..(29) s представляет другой_признак (35). .(35) v представляет другой_признак (41)..(41) г представляет другой_признак (52)..(52) г представляет другой_признак (55)..(55) m представляет другой_признак (61)..(61) m представляет
775 <400>
gtcggtaacg gcaagcagtg mtgaagaaga atggcgcgca собой собой собой собой собой собой g или с а, с или g или или или или cggttgggsc aggavcgaca rccgtggctt crtcmtgtgt a <210> 776 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (29)..(29) <223> s представляет собой g или с <220>
<221> другой_признак <222> (35)..(35) <223> v представляет собой а, с или g <220>
<221> другой_признак
- 363 031651 <222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
(41)..(41) г представляет другой_признак (52)..(52) г представляет другой_признак (55)..(55) m представляет другой_признак (58)..(58) d представляет другой_признак (61)..(61) m представляет
776 <400>
gtcggtaacg gcaagcagtg mtgaagaaga atggcgcgca <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
собой собой собой собой собой или или или a, g или t а или с cggttgggsc aggavcgaca rccgtggctt crtcmtgdcc a
111
ДНК искусственная последовательность праймер для мутагенеза другой_признак (30)..(30) w представляет другой_признак (35)..(35) v представляет другой_признак (52)..(52) г представляет другой_признак (55)..(55) m представляет другой_признак (61)..(61) m представляет
777 <400>
gtcggtaacg gcaagcagtg mtgaagaaga atggcgcgca <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
собой собой собой собой собой или или или или или g cggttgggaw aggavcgacg cacgtggctt crtcmtgtgt a
778
ДНК искусственная последовательность праймер для мутагенеза другой_признак (30)..(30) w представляет собой а или другой_признак (35)..(35) v представляет собой а или g
- 364 031651
<220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> другой признак ¢52)..(52) г представляет собой а или g другой признак (55). .(55) m представляет собой а или с другой признак ¢58)..(58) d представляет собой a, g или t другой признак (61)..(61) m представляет собой а или с
<400> 778
gtcggtaacg gcaagcagtg cggttgggaw aggavcgacg cacgtggctt crtcmtgdcc 60 mtgaagaaga atggcgcgca a 81 <210> 779 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> (30)..(30)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (35). .(35)
<223> v представляет собой а , с или g
<220>
<221> другой признак
<222> (41)..(41)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢52)..(52)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢55)..(55)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (61)..(61)
<223> m представляет собой а или с
<400> 779 gtcggtaacg gcaagcagtg cggttgggaw aggavcgaca rccgtggctt crtcmtgtgt mtgaagaaga atggcgcgca a <210> 780 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> ¢30)..(30) <223> w представляет собой а или t <220>
<221> другой_признак
- 365 031651 <222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
(35)..(35) v представляет собой а , с или g другой_признак (41)..(41) г представляет собой а или g другой_признак (52)..(52) г представляет собой а или g другой_признак (55)..(55) m представляет собой а или с другой_признак (58)..(58) d представляет собой a, g или t другой_признак (61)..(61) m представляет собой а или с <400> 780 gtcggtaacg gcaagcagtg mtgaagaaga atggcgcgca cggttgggaw aggavcgaca rccgtggctt crtcmtgdcc a <210> 781 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (29)..(29)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (35)..(35)
<223> v представляет собой а , с или g
<220>
<221> другой признак
<222> (52)..(52)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> (55)..(55)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (61)..(61)
<223> m представляет собой а или с
<400> 781 gtcggtaacg gcaagcagtg cwcttgggsc aggavcgacg cacgtggctt crtcmtgtgt mtgaagaaga atggcgcgca a
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 782 81 ДНК искусственная последовательность праймер для мутагенеза
- 366 031651 <220>
<221>
<222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
другой_признак ¢22)..(22) w представляет другой_признак (29)..(29) s представляет другой_признак (35)..(35) v представляет другой_признак ¢52)..(52) г представляет другой_признак ¢55)..(55) m представляет другой_признак ¢58)..(58) d представляет другой_признак ¢61)..(61) m представляет
782 <400>
gtcggtaacg gcaagcagtg mtgaagaaga atggcgcgca собой собой собой собой собой собой собой или или или или или g a, g или t а или с cwcttgggsc aggavcgacg cacgtggctt crtcmtgdcc a <210> 783 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (29)..(29)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (35)..(35)
<223> v представляет собой а , с или g
<220>
<221> другой признак
<222> (41)..(41)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢52)..(52)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢55)..(55)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (61)..(61)
<223> m представляет собой а или с
- 367 031651 <400>783 gtcggtaacg gcaagcagtg cwcttgggsc aggavcgaca rccgtggctt crtcmtgtgt60 mtgaagaaga atggcgcgca a81 <210>784 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (29)..(29)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (35)..(35)
<223> v представляет собой а , с или g
<220>
<221> другой признак
<222> (41)..(41)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢52)..(52)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢55)..(55)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой_признак <222> ¢58)..(58) <223> d представляет собой a, g или t <220>
<221> другой_признак <222> ¢61)..(61) <223> m представляет собой а или с <400>784 gtcggtaacg gcaagcagtg cwcttgggsc aggavcgaca rccgtggctt crtcmtgdcc60 mtgaagaaga atggcgcgca a81 <210>785 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> ¢22)..(22) <223> w 1 г а или t <220>
<221> другой_признак <222> ¢30)..(30) <223> w 1 г а или t <220>
<221> другой_признак <222> ¢35)..(35) <223> v представляет собой a , с или g <220>
<221> другой_признак <222> ¢52)..(52)
- 368 031651 <22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
г представляет собой а или g другой_признак (55)..(55) m представляет собой а или с другой_признак (61)..(61) m представляет собой а или с <400> 785 gtcggtaacg gcaagcagtg cwcttgggaw aggavcgacg cacgtggctt crtcmtgtgt mtgaagaaga atggcgcgca a <210> 786 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (30)..(30)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (35)..(35)
<223> v представляет собой а , с или g
<220>
<221> другой признак
<222> (52)..(52)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> (55). .(55)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой_признак <222> (58)..(58) <223> d представляет собой a, g или t <220>
<221> другой_признак <222> (61)..(61) <223> m представляет собой а или с <400> 786 gtcggtaacg gcaagcagtg cwcttgggaw aggavcgacg cacgtggctt crtcmtgdcc mtgaagaaga atggcgcgca a <210> 787 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (30)..(30)
<223> w представляет собой а или t
<220>
- 369 031651 <221>
<222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
другой_признак (35)..(35) v представляет другой_признак (41)..(41) г представляет другой_признак (52)..(52) г представляет другой_признак (55)..(55) m представляет другой_признак (61)..(61) m представляет
787 <400>
gtcggtaacg gcaagcagtg mtgaagaaga atggcgcgca собой собой собой собой собой или или или или или g cwcttgggaw aggavcgaca rccgtggctt crtcmtgtgt a <210> 788 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (30)..(30)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (35)..(35)
<223> v представляет собой а , с или g
<220>
<221> другой признак
<222> (41)..(41)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> (52)..(52)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> (55)..(55)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой_признак <222> (58)..(58) <223> d представляет собой a, g или t <220>
<221> другой_признак <222> (61)..(61) <223> m представляет собой а или с <400> 788 gtcggtaacg gcaagcagtg cwcttgggaw aggavcgaca rccgtggctt crtcmtgdcc mtgaagaaga atggcgcgca a <210> 789
- 370 031651 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (29)..(29)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (35)..(35)
<223> v представляет собой а , с или g
<220>
<221> другой признак
<222> (52)..(52)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> (55)..(55)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (61)..(61)
<223> m представляет собой а или с
<400> 789 gtcggtaacg gcaagcaggw wggttgggsc aggavcgacg cacgtggctt crtcmtgtgt mtgaagaaga atggcgcgca a <210> 790 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (29)..(29)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (35)..(35)
<223> v представляет собой а , с или g
<220>
<221> другой признак
<222> (52)..(52)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> (55)..(55)
<223> m представляет собой а или с
- 371 031651
<220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> другой признак (58)..(58) d представляет собой a, g или t другой признак (61)..(61) m представляет собой а или с
<400> 790
gtcggtaacg gcaagcaggw wggttgggsc aggavcgacg cacgtggctt crtcmtgdcc 60 mtgaagaaga atggcgcgca a 81 <210> 791 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (29)..(29)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (35)..(35)
<223> v представляет собой а , с или g
<220>
<221> другой признак
<222> (41)..(41)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> (52)..(52)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> (55)..(55)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (61)..(61)
<223> m представляет собой а или с
<400> 791 gtcggtaacg gcaagcaggw wggttgggsc aggavcgaca rccgtggctt crtcmtgtgt mtgaagaaga atggcgcgca a <210> 792 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (20)..(20) <223> w представляет собой а или t <220>
<221> другой_признак
- 372 031651
<222> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> ¢21)..(21) w представляет собой а или t другой признак (29)..(29) s представляет собой g или с другой признак (35)..(35) v представляет собой а, с или g другой признак (41)..(41) г представляет собой а или g другой признак ¢52)..(52) г представляет собой а или g другой признак (55). .(55) m представляет собой а или с другой признак ¢58)..(58) d представляет собой а, с или g другой признак (61)..(61) m представляет собой а или с
<400> 792
gtcggtaacg gcaagcaggw wggttgggsc aggavcgaca rccgtggctt crtcmtgdcc 60 mtgaagaaga atggcgcgca a 81 <210> 793 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (30)..(30)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (35)..(35)
<223> v представляет собой а , с или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢52)..(52)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢55)..(55)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (61)..(61)
- 373 031651 <22B> m представляет собой а или с <400> 793 gtcggtaacg gcaagcaggw wggttgggaw aggavcgacg cacgtggctt crtcmtgtgt mtgaagaaga atggcgcgca a <210> 794 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (30)..(30)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (35)..(35)
<223> v представляет собой а , с или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢52)..(52)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢55)..(55)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой_признак <222> ¢58)..(58) <223> d представляет собой а, с или g <220>
<221> другой_признак <222> ¢61)..(61) <223> m представляет собой а или с <400> 794 gtcggtaacg gcaagcaggw wggttgggaw aggavcgacg cacgtggctt crtcmtgdcc mtgaagaaga atggcgcgca a <210> 795 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (30)..(30)
<223> w представляет собой а или t
<220>
- 374 031651 <221>
<222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
<220>
<221>
<222>
<22B>
другой_признак (35)..(35) v представляет другой_признак (41)..(41) г представляет другой_признак ¢52)..(52) г представляет другой_признак ¢55)..(55) m представляет другой_признак (61)..(61) m представляет
795 <400> gtcggtaacg gcaagcaggw mtgaagaaga atggcgcgca собой собой собой собой собой или или или или или g wggttgggaw aggavcgaca rccgtggctt crtcmtgtgt a <210> 796 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (30)..(30)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (35)..(35)
<223> v представляет собой а , с или g
<220>
<221> другой признак
<222> (41)..(41)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢52)..(52)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢55)..(55)
<223> m представляет собой а или c
<220>
<221> другой_признак <222> ¢58)..(58) <223> d представляет собой a, g или t <220>
<221> другой_признак <222> ¢61)..(61) <223> m представляет собой а или с <400> 796
- 375 031651 gtcggtaacg gcaagcaggw wggttgggaw aggavcgaca rccgtggctt crtcmtgdcc mtgaagaaga atggcgcgca a <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
797
ДНК искусственная последовательность праймер для мутагенеза другой_признак ¢20)..(20) w представляет другой_признак ¢21)..(21) w представляет другой_признак ¢22)..(22) w представляет другой_признак ¢29)..(29) s представляет другой_признак ¢35)..(35) v представляет другой_признак ¢52)..(52) г представляет другой_признак ¢55)..(55) m представляет другой_признак ¢61)..(61) m представляет
797 <400> gtcggtaacg gcaagcaggw mtgaagaaga atggcgcgca собой собой собой собой собой собой собой собой или или или или или или или или g wwcttgggsc aggavcgacg cacgtggctt crtcmtgtgt a
<210> 798
<211> 81
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢20)..(20)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢29)..(29)
<223> s представляет собой g или с
- 376 031651 <220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
другой_признак ¢35)..(35) v представляет собой а , с или g другой_признак ¢52)..(52) г представляет собой а или g другой_признак (55)..(55) m представляет собой а или с другой_признак ¢58)..(58) d представляет собой a, g или t другой_признак (61)..(61) m представляет собой а или с <400> 798 gtcggtaacg gcaagcaggw wwcttgggsc aggavcgacg cacgtggctt crtcmtgdcc mtgaagaaga atggcgcgca a <210> 799 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (29)..(29)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> (35)..(35)
<223> v представляет собой а , с или g
<220>
<221> другой признак
<222> (41)..(41)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢52)..(52)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢55)..(55)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой признак
<222> (61)..(61)
<223> m представляет собой а или с
- 377 031651 <400>799 gtcggtaacg gcaagcaggw wwcttgggsc aggavcgaca rccgtggctt crtcmtgtgt60 mtgaagaaga atggcgcgca a81 <210> 800 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(29)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (29)..(29)
<223> s представляет собой g или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢35)..(35)
<223> v представляет собой а , с или g
<220>
<221> другой признак
<222> (41)..(41)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢52)..(52)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢55)..(55)
<223> m представляет собой а или с
<220>
<221> другой_признак <222> (58)..(58) <223> d представляет собой a, g или t <220>
<221> другой_признак <222> (61)..(61) <223> m представляет собой а или с <400> 800 gtcggtaacg gcaagcaggw mtgaagaaga atggcgcgca wwcttgggsc aggavcgaca rccgtggctt crtcmtgdcc a <210> 801 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (20)..(20) <223> w представляет собой а или t <220>
<221> другой_признак <222> (21)..(21)
- 378 031651 <22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
w представляет собой а или t другой_признак (22)..(212) w представляет собой а или t другой_признак ¢30)..(30) w представляет собой а или t другой_признак ¢35)..(35) v представляет собой а , с или g другой_признак ¢52)..(52) г представляет собой а или g другой_признак ¢55)..(55) m представляет собой а или с другой_признак ¢61)..(61) m представляет собой а или с <400> 801 gtcggtaacg gcaagcaggw wwcttgggaw aggavcgacg cacgtggctt crtcmtgtgt mtgaagaaga atggcgcgca a <210> 802 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢20)..(20)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢30)..(30)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢35)..(35)
<223> v представляет собой а , С или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢52)..(52)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢55)..(55)
<223> m представляет собой а или c
<220>
<221> другой признак
<222> ¢58)..(58)
<223> d представляет собой а, g | /1ЛИ t
- 379 031651
<220> <221> <222> <223> другой признак ¢61)..(61) m представляет собой а или с
<400> 802
gtcggtaacg gcaagcaggw wwcttgggaw aggavcgacg cacgtggctt crtcmtgdcc 60 mtgaagaaga atggcgcgca a 81 <210> 803 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> <220> праймер для мутагенеза
<221> другой признак
<222> ¢20)..(20)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (30)..(30)
<223> w представляет собой а или t
<220>
<221> другой признак
<222> (35)..(35)
<223> v представляет собой а , с или g
<220>
<221> другой признак
<222> (41)..(41)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢52)..(52)
<223> г представляет собой а или g
<220>
<221> другой признак
<222> ¢55)..(55)
<223> m представляет собой а или c
<220>
<221> другой признак
<222> (61)..(61)
<223> m представляет собой а или c
<400> 803 gtcggtaacg gcaagcaggw wwcttgggaw aggavcgaca rccgtggctt crtcmtgtgt mtgaagaaga atggcgcgca a <210> 804 <211> 81 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> ¢20)..(20) <223> w представляет собой а или t <220>
<221> другой_признак
- 380 031651 <222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
¢21)..(21) w представляет собой а или t другой_признак ¢22)..(22) w представляет собой а или t другой_признак (30)..(30) w представляет собой а или t другой_признак (35)..(35) v представляет собой а , с или g другой_признак (41)..(41) г представляет собой а или g другой_признак ¢52)..(52) г представляет собой а или g другой_признак (55). .(55) m представляет собой а или с другой_признак (58)..(58) d представляет собой a, g или t другой_признак (61)..(61) m представляет собой а или с <400> 804 gtcggtaacg gcaagcaggw mtgaagaaga atggcgcgca wwcttgggaw aggavcgaca rccgtggctt crtcmtgdcc a <210> 805 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>805 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcaggt aagttgggaa120 aggtccgacg cccgtggctt cgtgctttcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210> 806 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>806 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcaggt tacttggggc120 aggagcgacg cacgtggctt cgtcctgggc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>807
- 381 031651 <211> 261 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>807 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtcatgtgt atgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210> 808 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>808 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aggttgggat120 aggagcgacg cacgtggctt cgtcatgtgt atgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>809 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>809 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctggggc120 aggaccgaca accgtggctt cgtcctgtgt ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210> 810 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>810 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtcctgtgt atgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210> 811 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>811 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca accgtggctt cgtcatgtcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261
- 382 031651 <210> 812 <211> 261 <212> ДНК <21В> искусственная последовательность <220>
<22В> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>812 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcaggt atcttgggcc120 aggagcgaca gccgtggctt cgtcctgtgt ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>813 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>813 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagtg cggttgggat120 aggagcgaca gccgtggctt cgtcctgtgt ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>814 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>814 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcaggt aggttgggat120 aggagcgacg cacgtggctt cgtcatggcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>815 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>815 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcaggt aggttgggaa120 aggagcgaca accgtggctt cgtcctgtgt ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210> 816 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72
816 <400> 816 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagtg cggttgggat aggaccgaca accgtggctt cgtcatgtcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac
120
180
- 383 031651 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>817 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>817 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcaggt ttcttggggc120 aggagcgacg cacgtggctt catcctgtgt atgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210> 818 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>818 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aggttgggat120 aggaccgaca gccgtggctt cgtcctgtgt ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>819 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>819 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga tacttgggcc120 aggaccgaca gccgtggctt cgtcatgtgt ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210> 820 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>820 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagtg cacttggggc120 aggagcgaca gccgtggctt cgtcatggcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210> 821 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400> 821 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg 60
- 384 031651 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagtg ctcttgggaa120 aggaccgaca gccgtggctt cgtcctgtgt ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210> 822 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>822 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcaggt ttcttgggcc120 aggaacgaca gccgtggctt cgtcctgtcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>823 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>823 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcaggt aacttgggaa120 aggaccgaca accgtggctt cgtcatgtgt atgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>824 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>824 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga ttcttgggat120 aggagcgacg cacgtggctt cgtcctgtgt ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcgta a261 <210>825 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 825
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n val Ser Trp Glu Arg Ser Asp Al a Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
385 031651 <210> 826 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 826
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n val Thr Trp Gly Arg Ser Asp Al a Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Gly Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 827 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 827
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Cys Met Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 828 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 828
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu Val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Gly Trp Asp Arg Ser Asp Al a Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Cys Met Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> <211> <212> <213> <220> 829 86 БЕЛОК искусственная последовательность
- 386 031651 <22В> полипептид PIP-72 <400> 829
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Gly Arg Thr Asp Asn Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Cys Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 830 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 830
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys Gin Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Cys Met Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 831 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 831
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Asn Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 832 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 832
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Ala
10 15
- 387 031651
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n val Ser Trp Al a Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Cys Leu Lys Lys Asn Gly Al a G1 n Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys ile Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 833 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 833
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Cys Gly Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Cys Leu Lys Lys Asn Gly Ala Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Ala
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 834 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 834
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n val Gly Trp Asp Arg Ser Asp Al a Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Al a Leu Lys Lys Asn Gly Al a G1 n Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 835 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 835
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n val Gly Trp Glu Arg Ser Asp Asn Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Cys Leu Lys Lys Asn Gly Al a G1 n Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
388 031651
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Ala val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 836 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 836
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Cys Gly Trp Asp Arg Thr Asp Asn Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser Leu LyS LyS Asn Gly Al a G1 n Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 837 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 837
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n val Ser Trp Gly Arg Ser Asp Al a Arg Gly Phe lie
35 40 45
Leu Cys Met LyS LyS Asn Gly Al a G1 n Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 838 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 838
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Ala
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly LyS G1 n Glu Gly Trp Asp Arg Thr Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Cys Leu LyS LyS Asn Gly Al a G1 n Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser LyS lie Glu val Asp Asn Asn Al a val LyS Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
389 031651
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 839 86 БЕЛОК искусственная последовательность полипептид PIP-72
<400> 839
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Asp Thr Trp Al a Arg Thr Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Cys Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 840 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 840
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Cys Thr Trp Gly Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Al a Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 841 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 841
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Cys Ser Trp Glu Arg Thr Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Cys Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> <211> <212> <213> 842 86 БЕЛОК искусственная последовательность
- 390 031651 <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 842
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n val Ser Trp Al a Arg Asn Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s Pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie G1 u val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
843
БЕЛОК искусственная последовательность полипептид PIP-72 <400>
843
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n val Thr Trp Glu Arg Thr Asp Asn Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Cys Met Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie G1 u val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
844
БЕЛОК искусственная последовательность полипептид PIP-72 <400>
844
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Asp Ser Trp Asp Arg Ser Asp Al a Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Cys Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie G1 u val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
845
261
ДНК искусственная последовательность кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400> 845 atgggtatta ccgttacaaa caaatcgtcc aaaaaaatcg aagctagcat caataaatgg 60
- 391 031651 ggtagcgacg gagacaccaa attctttggc atcgatagcg gcaagcagga atcctgggac120 aggtccgacg accgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcactca agcaccttac180 tacgttcagg ccaccagcaa aattgaaatt gaaaactcta ccgtgaaaga tcatggcgaa240 accatccacc cggtagcata a261 <210>846 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> тест <220>
<221> другой_признак <222> ¢2)..(2) <223> хаа в положении 2 представляет собой Gly, Ala, Cys, Asp, Glu, lie, Lys, Leu, Asn, Arg, Ser, Thr, val, Trp или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> ¢3)..(3) <223> хаа в положении 3 представляет собой lie или Trp <220>
<221> другой_признак <222> (4)..(4) <223> хаа в положении 4 представляет собой Thr, Ala, Asp, Glu, His, lie, Lys, Leu, Arg, Ser, val, Trp или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> ¢5)..(5) <223> хаа в положении 5 представляет собой val, Ala, Cys, Gly, His, lie или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> ¢6)..(6) <223> хаа в положении 6 представляет собой Thr, Ala, Cys, Phe, Gly,
His, lie, Lys, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Trp или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> ¢7)..(7) <223> хаа в положении 7 представляет собой Asn, Ala или val <220>
<221> другой_признак <222> ¢8)..(8) <223> хаа в положении 8 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu,
Gly, His, lie, Lys, Leu, Met, Gin, Arg, Ser, Thr или val <220>
<221> другой_признак <222> ¢9)..(9) <223> хаа в положении 9 представляет собой Ser, Ala, Cys, Gly или Thr <220>
<221> другой_признак <222> ¢10)..(10) <223> хаа в положении 10 представляет собой Ser, Ala, Glu, Phe, Gly,
His, lie, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr или Trp <220>
<221> другой_признак <222> ¢11)..(11) <223> хаа в положении 11 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu,
Gly, His, lie, Lys, Leu, Met, Gin, Ser, Thr, val или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> ¢12)..(12) <223> хаа в положении 12 представляет собой Pro, Ala, Cys, Asp, Glu,
Gly, His, Lys, Leu, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> ¢13)..(13) <223> хаа в положении 13 представляет собой lie, Asn, Gin или val <220>
- 392 031651 <221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
другой_признак (14)..(14) хаа в положении Lys или G другой_признак (15)..(15) хаа в положении или Arg другой_признак (17)..(17) хаа в положении другой_признак (18)..(18) хаа в положении другой_признак (19)..(19) <220>
представляет представляет представляет представляет собой собой собой собой
Glu, val ,
Не,
Ala, Cys, Phe,
Ala, Cys, lie,
Glu или val
Asn или Ser
Hi s ,
Met другой_признак (20)..(20) хаа в положении 20 представляет собой Trp, Ala или Thr другой_признак (22)..(22) хаа в положении 22 представляет собой Ser, Ala, Asp, Phe, Gly, His, lie, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, val или Tyr другой_признак (23). .(23) хаа в положении 23 представляет собой Asp, Ala, Gly, His, Lys, Met, Asn, Gln, Ser, Thr или val другой_признак (24)..(24) хаа в положении другой_признак (25). .(25) хаа в положении или Gln другой_признак (26)..(26) хаа в положении представляет представляет представляет собой собой собой другой_признак (27). .(27) хаа в положении . ..
Phe, Gly, His, Asn, Gln, Arg или Thr представляет собой
Gly,
Asp,
Thr,
Ser,
Asp или Phe
Ala, Glu, Phe,
Glu или Pro
Ala,
Cys, Asp,
Asn
Glu, другой_признак (28)..(28) хаа в положении 28 представляет собой Phe, Pro, тгр или туг другой_признак (29) ..(29) хаа в положении 29 представляет собой Phe, Ala, Cys, lie, Leu, Gln, Arg, тгр или Tyr другой_признак (30) ..(30) хаа в положении 30 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, val, тгр или Tyr
- 393 031651 <221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
другой_признак (31)..(31) хаа в положении 31 представляет собой val, lie или Leu другой_признак ¢32)..(32) хаа в положении 32 представляет собой Gly, Ala, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp или Tyr другой_признак (33). .(33) хаа в положении 33 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lie, Lys, Leu, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val или Tyr другой_признак ¢34)..(34) хаа в положении 34 представляет собой Gly, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr или Tyr другой_признак ¢35)..(35) хаа в положении 35 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Gly, His, lie, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr или val другой_признак ¢36)..(36) хаа в положении 36 представляет собой Gin, Ala, Cys, Glu, Gly, His, lie, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr или val другой_признак ¢37)..(37) хаа в положении 37 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, lie, Lys, Leu, Met, Asn, Ser, Thr или val другой_признак ¢38)..(38) хаа в положении 38 представляет собой Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lie, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, val, Trp или Tyr другой_признак ¢39)..(39) хаа в положении 39 представляет собой тгр или Phe другой_признак (40)..(40) хаа в положении 40 представляет собой Asp, Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, lie, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, тгр или Tyr другой_признак ¢42)..(42) хаа в положении 42 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, lie, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Thr, val, Trp или Tyr другой_признак (44) ..(44) хаа в положении 44 представляет собой Ser, Ala, Asp, Glu, Gly, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Thr, val или Tyr другой_признак (45) ..(45) хаа в положении 45 представляет собой Arg, Lys или Ser другой_признак (46) ..(46)
- 394 031651
<22B> хаа в положении 46 представляет собой Gly, Ala или Gin
<220>
<221> другой признак
<222> (47)..(47)
<22B> хаа в положении 47 представляет собой Phe, Cys, val или Tyr
<220>
<221> другой признак
<222> (48)..(48)
<22B> хаа в положении 48 представляет собой val, lie или Leu
<220>
<221> другой признак
<222> (49)..(49)
<22B> хаа в положении 49 представляет собой Leu, Cys, Phe, Met, Arg
или Туг
<220>
<221> другой признак
<222> (50)..(50)
<22B> хаа в положении 50 представляет собой Ser, Al a, Cys, Asp, He,
Met, Pro, Gin, Thr или val
<220>
<221> другой признак
<222> ¢51)..(51)
<22B> хаа в положении 51 представляет собой Leu, Al a, Cys, Met или val
<220>
<221> другой признак
<222> (52)..(52)
<22B> хаа в положении 52 представляет собой Lys, Cys, Phe, Hi s, He,
Leu, Met, Asn, Arg, Ser, Thr, тгр или Tyr
<220>
<221> другой признак
<222> ¢53)..(53)
<22B> хаа в положении 53 представляет собой Lys, Al a, Cys, Asp, Glu,
Phe, His, lie, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> ¢54)..(54)
<223> хаа в положении 54 представляет собой Asn, Cys, Asp, Glu, Phe
Gly, Lys, Met, Gin, Arg, Ser или тгр
<220>
<221> другой признак
<222> ¢56)..(56)
<223> хаа в положении 56 представляет собой Ala, Gly, Leu, Asn , Pro
Gin, Arg, Ser или Thr
<220>
<221> другой признак
<222> ¢57)..(57)
<223> хаа в положении 57 представляет собой Gin, Glu, Leu, Met, Ser
или Thr
<220>
<221> другой признак
<222> ¢58)..(58)
<223> хаа в положении 58 представляет собой His, Ala, Asp, Phe, Leu
Met, Asn, Arg, тгр или Tyr
<220>
<221> другой признак
<222> ¢60)..(60)
<223> хаа в положении 60 представляет собой туг, Glu или Phe
<220>
<221> другой признак
<222> ¢63)..(63)
<223> хаа в положении 63 представляет собой Gin, Cys, Gly, lie, Leu
Met, Asn, Thr, val или Tyr
<220>
<221> другой признак
<222> ¢64)..(64)
<223> хаа в положении 64 представляет собой Ala, Phe, Gly, His, Arg
Ser или Tyr <220>
- 395 031651 <221> другой_признак <222> ¢65)..(65) <22В> хаа в положении 65 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu Phe, Gly, His, lie, Leu, Asn, Thr или val <220>
<221> другой_признак <222> ¢66)..(66) <22B> xaa в положении 66 представляет собой Ser, Ala или Gly <220>
<221> другой_признак <222> ¢67)..(67) <22B> xaa в положении 67 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Phe His, lie, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> ¢68)..(68) <22B> xaa в положении 68 представляет собой lie Asp, Leu или val <220>
<221> другой_признак <222> ¢69)..(69) <22B> xaa в положении 69 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe His, lie, Leu, Met, Gin, Arg, Ser, Thr, val или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> ¢70)..(70) <22B> xaa в положении 70 представляет собой val, Cys или lie <220>
<221> другой_признак <222> ¢71)..(71)
<22B> xaa в положении lie, Leu, Met, 71 представляет собой Asn, Ser, Thr, val или Asp, туг Ala, cys, Gly, Hi s,
<220>
<221> другой признак
<222> ¢72)..(72)
<22B> xaa в положении 72 представляет собой Asn , Ala, cys, Asp, Glu,
Gly, Lys, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val или Trp
<220>
<221> другой признак
<222> (73)..(73)
<22B> xaa в положении 73 представляет собой Asn , Ala, cys, Asp, Phe,
Gly, His, lie, Leu, Ser, Thr, val или Туг
<220>
<221> другой признак
<222> (74)..(74)
<22B> xaa в положении 74 представляет собой Ala, Cys, Asp, Phe, Gly,
His, lie, Leu, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> ¢75)..(75) <22B> xaa в положении 75 представляет собой val, Cys, lie или Leu <220>
<221> другой_признак <222> ¢76)..(76)
<223> <220> xaa в положении lie, Leu, Gin, 76 представляет собой Lys, Ala, Tyr Cys, Phe, Hi s,
Arg, Ser, Thr, val, Trp или
<221> другой признак
<222> ¢77)..(77)
<223> xaa в положении 77 представляет собой Asp Tyr
<220>
<221> другой признак
<222> ¢78)..(78)
<223> хаа в положении 78 представляет собой Gin, Ala, cys, Asp, Phe,
Gly, His, lie, Leu, Met, Asn, Arg, Ser, Th r, val или Tyr
<220>
<221> другой признак
<222> ¢79)..(79)
<223> хаа в положении 79 представляет собой Gly, Arg, Ala, Cys, Asp,
- 396 031651
Glu, Phe, His, Lys, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> ¢80)..(80)
<223> хаа в положении Gly, His, lie, 80 Leu, представляет собой Asn, Ser, Thr, val Arg, или Ala, туг cys, Asp, Phe,
<220>
<221> другой признак
<222> ¢81)..(81)
<223> хаа в положении 81 представляет собой Leu, Ala, cys, Asp, Phe,
Gly, His, lie, . Asn , Pro, Arg, Ser, Thr ' или val
<220>
<221> другой признак
<222> ¢82)..(82)
<223> хаа в положении 82 представляет собой Не, Ala, Leu, Met, Arg
и val
<220>
<221> другой признак
<222> ¢82)..(82)
<223> хаа в положении 82 представляет собой Не, Ala, Leu, Met, Arg
или val
<220>
<221> другой признак
<222> (83)..(83)
<223> хаа в положении 83 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe,
Gly, His, lie, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, val или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> ¢84)..(84) <223> xaa в положении 84 представляет собой Pro, Ala, Cys, Glu, lie, Ser, val, Trp или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> ¢85)..(85) <223> xaa в положении 85 представляет собой Leu, Cys, Gly или val <220>
<221> другой_признак <222> ¢86)..(86) <223> xaa в положении 86 представляет собой Ser, Ala, lie, Thr или val <400> 846
Met xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa Al a
1 5 10 15
xaa xaa xaa xaa Gly xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa
20 25 30
xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa Arg xaa Asp xaa xaa xaa xaa xaa
35 40 45
xaa xaa xaa xaa xaa xaa Gly xaa xaa xaa pro xaa Tyr val xaa xaa
50 55 60
xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa
65 70 75 80
xaa xaa xaa xaa xaa xaa
85
<210> 847 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> отметка <220>
<221> другой_признак <222> ¢2)..(2) <223> xaa в положении 2 представляет собой Gly, Lys или Ala <220>
<221> другой_признак <222> ¢3)..(3) <223> xaa в положении 3 представляет собой lie или Leu
- 397 031651 <220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
другой_признак ¢4)..(4)
хаа в положении 4 представляет собой Thr или Ser
другой признак ¢5)..(5) хаа в положении 5 представляет собой val или lie
другой признак ¢6)..(6) хаа в положении 6 представляет собой Thr или Lys
другой_признак ¢8)..(8) хаа в положении 8 представляет собой Asn, Lys, Gly или Ser другой_признак ¢9)..(9) хаа в положении 9 представляет собой Ser или Ala другой_признак (И) (И) хаа в положении 11 представляет собой Asn, Lys, His или Thr другой_признак ¢12)..(12) хаа в положении 12 представляет собой Pro, Thr,
Lys или Ser
другой признак (13)..(13) хаа в положении 13 представляет
другой признак (14)..(14) хаа в положении 14 представляет
другой признак ¢15)..(15) хаа в положении 15 представляет
другой признак (16)..(16) хаа в положении 16 представляет
другой признак ¢17)..(17) хаа в положении 17 представляет
другой признак ¢18)..(18) хаа в положении 18 представляет
другой признак (19)..(19) хаа в положении 19 представляет
другой признак ¢21)..(21) хаа в положении 21 представляет
другой признак ¢22)..(22) хаа в положении 22 представляет
другой признак (25)..(25) хаа в положении 25 представляет
собой lie или val собой Asp или Asn
собой Glu или Asp
собой val, Ala или lie
собой Ala или Ser
собой lie или val
собой Asn или Ser
собой His, Lys, Arg, Gln или Ala
собой Gly или Arg
собой Ser, Lys, Asn, Asp или Thr
- 398 другой_признак ¢26)..(26) хаа в положении представляет собой
Thr или Asp <220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
другой_признак ¢27)..(27) хаа в положении другой_признак ¢28)..(28) хаа в положении другой_признак ¢29)..(29) хаа в положении другой_признак ¢30)..(30) хаа в положении другой_признак ¢31)..(31) хаа в положении другой_признак ¢32)..(32) хаа в положении другой_признак (33)..(33) хаа в положении другой_признак ¢35). .(35) хаа в положении другой_признак ¢36)..(36) хаа в положении другой_признак (37)..(37) хаа в положении другой_признак ¢38)..(38) хаа в положении другой_признак ¢42)..(42) хаа в положении другой_признак ¢44)..(44) хаа в положении другой_признак ¢47)..(47) хаа в положении другой_признак ¢48)..(48) хаа в положении другой_признак ¢49)..(49) хаа в положении представляет представляет представляет представляет представляет представляет представляет представляет представляет представляет представляет представляет представляет представляет представляет представляет собой собой собой собой собой собой собой собой собой собой собой собой собой собой собой собой
Ser, Thr, Asn или
Phe, Туг или
Phe или Туг
Ser, val ,
Gly,
Asn ,
Lys,
Gln,
Glu
Thr
Ser
Pro
Gly lie
Al а или или или
Lys
Met
Asp
Ser, Gln или
Glu или Ser
Asn или Ser или или или
Lys
Pro
Asp
Ser
Asn
Ser, Asp, Ala или
Phe
Leu
Leu или или или
Leu туг
Met
Met
- 399 <220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
другой признак (50)..(50) хаа в положении 50 представляет собой Ser, Ala или Tyr
другой признак (51)..(51) хаа в положении 51 представляет собой Leu или val
другой признак (52)..(52) хаа в положении 52 представляет собой Lys или Gln
другой признак (53)..(53) хаа в положении 53 представляет собой Lys, Arg, Met : или Leu
другой признак (54)..(54) хаа в положении 54 представляет собой Asn, Lys или Gly
другой признак (55)..(55) хаа в положении 55 представляет собой Gly или Ser
другой признак (56)..(56) хаа в положении 56 представляет собой Ala, Thr, Gln 1 или Ser
другой признак (57)..(57) хаа в положении 57 представляет собой Gln, val или Al a
другой признак (58)..(58) хаа в положении 58 представляет собой His, Ala, Lys, Tyr или Thr
другой признак (59)..(59) хаа в положении 59 представляет собой Pro или Thr
другой признак (62)..(62) хаа в положении 62 представляет собой val или lie
другой признак (63)..(63) хаа в положении 63 представляет собой Gln, Ser или Leu
другой признак (64)..(64) хаа в положении 64 представляет собой Ala, Gln или Ser
другой признак (65)..(65) хаа в положении 65 представляет собой Ser или Thr
другой признак (67)..(67) хаа в положении 67 представляет собой Lys, Gln, Arg | или Asn
другой признак (69)..(69) хаа в положении 69 представляет собой Glu, Lys или val
другой признак (70)..(70) хаа в положении 70 представляет собой val или lie
- 400 031651 <220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
другой признак ¢71)..(71) хаа в положении 71 представляет собой Asp,
Glu или Tyr
другой признак ¢72)..(72) хаа в положении 72 представляет собой Asn , His, Ser или Asp
другой признак (73)..(73) хаа в положении 73 представляет собой Asn , Ser или Asp
другой признак (74)..(74) хаа в положении 74 представляет собой Ala, Thr, Met, lie или Lys
другой признак (76)..(76) хаа в положении 76 представляет собой Lys или Thr
другой признак ¢78)..(78) хаа в положении 78 представляет собой Gln, His или Ser
другой признак (80)..(80) хаа в положении 80 представляет собой Arg, Glu или Gln
другой признак ¢81)..(81) хаа в положении 81 представляет собой Leu, Pro, Ala или Thr
другой признак ¢82)..(82) хаа в положении 82 представляет собой ile или Leu
другой признак (83)..(83) хаа в положении 83 представляет собой Glu, His, Asn, Gln или Leu
другой признак (85)..(85) хаа в положении 85 представляет собой Leu, val или Ala
другой признак (86)..(86) хаа в положении 86 представляет собой Ser, Ala, Туг или Asn
<400> 847
Met xaa xaa xaa xaa xaa Asn xaa xaa Ser xaa xaa xaa xaa xaa xaa
1 5 10 15
xaa xaa xaa Trp xaa xaa Asp Gly xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa
20 25 30
xaa Gly xaa xaa xaa xaa Trp Asp Arg xaa Asp xaa Arg Gly xaa xaa
35 40 45
xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa Tyr Tyr xaa xaa xaa
50 55 60
xaa Ser xaa lie xaa xaa xaa xaa xaa xaa val xaa Asp xaa Gly xaa
65 70 75 80
xaa xaa xaa pro xaa xaa
85
<210> 848 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
- 401 031651 <22В>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
отметка другой_признак ¢2)..(2) хаа в положении другой_признак ¢3)..(3) хаа в положении другой_признак ¢4)..(4) xaa в положении другой_признак (5). .(5)
Хаа в положении другой_признак ¢6)..(6) хаа в положении другой_признак ¢8)..(8) хаа в положении I Arg, Thr или Ala представляет представляет представляет представляет представляет представляет собой собой собой собой собой собой
Gly, Lys, Ala или Arg lie, Leu или val
Thr или Ser
Val ,
Thr,
Asn , lie или Leu
Lys, Ser или Arg
Lys, Gly, Ser, Gin, другой_признак ¢9)..(9) хаа в положении представляет собой
Ser,
Ala или Thr другои_признак (И). .(И) xaa в положении 11 представляет His или Ser другой_признак ¢12)..(12) хаа в положении 12 представляет
другой признак (13)..(13) xaa в положении 13 представляет
другой признак (14)..(14) хаа в положении 14 представляет
другой признак ¢15)..(15) хаа в положении 15 представляет
другой признак (16)..(16) хаа в положении 16 представляет
другой признак ¢17)..(17) хаа в положении 17 представляет
другой признак ¢18)..(18) хаа в положении 18 представляет
другой признак ¢19)..(19) хаа в положении 19 представляет
Asn или Arg
собой lie, val или Leu собой Glu или Asp собой Ala или Ser собой lie, val или Leu собой Asn, Lys, Thr, Gin, Arg, собой Pro, Thr, Lys, Ser или Arg собой val, Ala, lie или Leu собой Asn, Ser, Gin или Thr собой His, Lys, Ala, Gin,
- 402 031651 <220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
другой признак (21)..(21) хаа в положении 21 представляет собой Gly, Arg или Lys
другой признак (22)..(22) хаа в положении 22 Asp, Glu или Gln представляет собой Ser, Lys, Asn, Thr, Arg,
другой признак (25). .(25) хаа в положении 25 представляет собой Asp, Asn , Glu или Gln
другой признак (26)..(26) хаа в положении 26 представляет собой Thr, Asp, Ser или Glu
другой признак (27). .(27) хаа в положении Gln или Arg 27 представляет собой Ser, Thr, Lys, Asn,
другой признак (28)..(28) хаа в положении 28 представляет собой Phe, Tyr, Pro или Trp
другой признак (29)..(29) хаа в положении 29 представляет собой Phe, Tyr или Trp
другой признак (30)..(30) хаа в положении 30 представляет собой Ser, Gly, Lys, Thr или Arg
другой признак (31)..(31) хаа в положении 31 представляет собой val, He, Met или Leu
другой признак (32)..(32) хаа в положении 32 представляет собой Gly, Al a, Asp или Glu
другой признак (33). .(33) хаа в положении 33 представляет собой Asn , Ser, Gln, Pro или Thr
другой признак (35). .(35) хаа в положении 35 представляет собой Lys, Glu, Ser, Arg или Thr
другой признак (36)..(36) хаа в положении 36 представляет собой Gln, Ser, Asn или Thr
другой признак (37). .(37) хаа в положении 37 представляет собой Glu или Asp
другой признак (38)..(38) хаа в положении 38 представляет собой Thr или Ser
другой признак (42)..(42) хаа в положении 42 представляет собой Ser, Asn, Thr или Gln
другой_признак
- 403 031651 <222> (44)..(44)
<22В> хаа в положении Glu, lie или val 44 представляет собой Ser, Asp, Ala, Leu, Thr,
<220> <221> другой признак
<222> (47)..(47)
<22В> хаа в положении 47 представляет собой Phe, Туг или Trp
<220> <221> другой признак
<222> (48)..(48)
<22В> хаа в положении 48 представляет собой Leu, Met, lie или val
<220> <221> другой признак
<222> (49)..(49)
<223> хаа в положении 49 представляет собой Leu, Met, ile или val
<220> <221> другой признак
<222> (50)..(50)
<22В> хаа в положении 50 представляет собой Ser, Ala, Туг или Thr
<220> <221> другой признак
<222> (51)..(51)
<22В> <220> хаа в положении 51 представляет собой Leu, val или lie
<221> другой признак
<222> (52)..(52)
<22В> хаа в положении 52 представляет собой Lys, Gln, Arg или Asn
<220> <221> другой признак
<222> (53)..(53) собой
<22В> хаа в положении или val 53 представляет Lys, Arg, Met, Leu, lie
<220> <221> другой признак
<222> (54)..(54)
<22В> хаа в положении 54 представляет собой Asn , Lys, Gly, Gln или Arg
<220> <221> другой признак
<222> (55)..(55)
<22В> хаа в положении 55 представляет собой Gly, Ser или Thr
<220> <221> другой признак
<222> (56)..(56)
<22В> хаа в положении 56 представляет собой Ala, Thr, Gln, Ser или Asn
<220> <221> другой признак
<222> (57)..(57)
<22В> хаа в положении или lie 57 представляет собой Gln, val, Ala, Asn, Leu
<220> <221> другой признак
<222> (58)..(58)
<22В> <220> хаа в положении 58 представляет собой Hi s, Ala, Lys, Tyr или Thr
<221> другой признак
<222> (59)..(59)
<22В> хаа в положении 59 представляет собой Pro, Thr или Ser
<220> <221> другой признак
<222> (62)..(62)
<22В> хаа в положении 62 представляет собой val, lie или Leu
<220> <221> другой признак
<222> (63)..(63)
<22В> хаа в положении 63 представляет собой Gln, Ser, Leu, Asn, Thr,
ile или val <220>
<221> другой_признак
- 404 031651 <222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
¢64)..(64) хаа в положении другой_признак ¢65)..(65) хаа в положении другой_признак ¢67)..(67) хаа в положении другой_признак ¢69)..(69) хаа в положении lie или Leu другой_признак ¢70)..(70) хаа в положении другой_признак ¢71)..(71) хаа в положении другой_признак ¢72)..(72) хаа в положении Thr или Glu другой_признак ¢73)..(73) хаа в положении или Glu представляет представляет представляет представляет представляет представляет представляет представляет собой собой собой собой собой собой собой собой
Ala, Gin, Ser, Asn или Thr
Ser или Thr
Lys,
Glu, val ,
Asp,
Asn,
Asn,
Gin, Asn или Arg val, Asp, Lys, Arg, lie или Leu
Glu,
Hi s,
Ser,
Туг или тгр
Ser,
Asp,
Gin,
Asp,
Gin,
Thr <220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
другой_признак ¢74)..(74) хаа в положении Ser, Leu, val или Arg другой_признак ¢76)..(76) хаа в положении другой_признак ¢78)..(78) хаа в положении другой_признак ¢80)..(80) хаа в положении или Asn другой_признак ¢81)..(81) хаа в положении Ala или Ser другой_признак ¢82)..(82) хаа в положении другой_признак ¢83)..(83) хаа в положении lie или val другой_признак представляет представляет представляет представляет представляет представляет представляет собой собой собой собой собой собой собой
Ala,
Thr,
Met,
He,
Lys,
Lys,
Thr,
Arg или Ser
Gin,
Arg,
Leu,
He,
Glu,
Hi s,
Glu,
Pro,
Ser,
Gin,
Thr,
Asn или Thr
Lys,
He,
Leu или val
His, Asn, Leu,
Asp val ,
Gin,
- 405 031651 <222> (85)..(85) <223> хаа в положении 85 представляет собой Leu, val или Ala <220>
<221> другой_признак <222> (86)..(86) <223> хаа в положении 86 представляет собой Ser, Ala, туг, Asn или Thr <400> 848
Met xaa xaa xaa xaa xaa Asn xaa xaa Ser xaa xaa xaa xaa xaa xaa
1 5 10 15
xaa xaa xaa Trp xaa xaa Asp Gly xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa
20 25 30
xaa Gly xaa xaa xaa xaa Trp Asp Arg xaa Asp xaa Arg Gly xaa xaa
35 40 45
xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa xaa Tyr Tyr xaa xaa xaa
50 55 60
xaa Ser xaa lie xaa xaa xaa xaa xaa xaa val xaa Asp xaa Gly xaa
65 70 75 80
xaa xaa xaa pro xaa xaa
85
<210> 849 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <220>
<221> другой_признак <222> (2)..(2) <223> хаа в положении 2 представляет собой Gly, Ala, Cys, Asp, Glu lie, Lys, Leu, Asn, Arg, Ser, Thr, val, Trp или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> (3)..(3)
<223> xaa в положении 3 представляет собой Не, Leu, val или Trp
<220>
<221> другой признак
<222> (4)..(4)
<223> хаа в положении 4 представляет собой Thr, Ala, Asp, Glu, His
ile, Lys, Leu, Arg, Ser, val, Trp или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> (5)..(5)
<223> xaa в положении 5 lie, Leu или Tyr представляет собой val , Ala, Cys, Gly, Hi s,
<220>
<221> другой признак
<222> (6)..(6)
<223> xaa в положении 6 представляет собой Thr, Ala, Cys, Phe, Gly,
His, lie, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Trp или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> (7)..(7) <223> xaa в положении 7 представляет собой Asn, Ala или val <220>
<221> другой_признак <222> (8)..(8) <223> xaa в положении 8 представляет собой Asn, Lys, Gly, Ser, Gln Arg, Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, His, lie, Leu, Met или val <220>
<221> другой_признак <222> (9)..(9)
<223> <220> xaa в положении 9 представляет собой Ser, Ala, Cys, Gly или Thr
<221> <222> <223> другой признак (11)..(11) хаа в положении 11 представляет собой Asn, Lys, Thr, , Gln , Arg,
- 406 031651
Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, lie, Leu, Met, val или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> (12)..(12) <22B> хаа в положении 12 представляет собой Pro, Thr, Lys, Ser, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Leu, Asn, Gin, Arg, val, Trp или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> (13)..(13)
<223> хаа в положении 13 представляет собой Не, Asn, Gin, Leu или val
<220>
<221> другой признак
<222> (14)..(14)
<223> хаа в положении 14 представляет собой Glu, Al a, Cys, Phe, Hi s,
Lys или Gin
<220>
<221> другой признак
<222> (15)..(15)
<223> хаа в положении 15 представляет собой val , Ala, lie, Leu, Cys,
Met или Arg
<220>
<221> другой признак
<222> (16)..(16)
<223> хаа в положении 16 представляет собой Al а или Ser
<220>
<221> другой признак
<222> (17)..(17)
<223> хаа в положении 17 представляет собой Не, Glu, Leu или val
<220>
<221> другой признак
<222> (18)..(18)
<223> хаа в положении 18 представляет собой Asn , Gin, Thr или Ser
<220>
<221> другой признак
<222> (19)..(19)
<223> хаа в положении 19 представляет собой Hi s, Lys, Ala, Arg, Glu,
Leu, Pro, Ser или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> (20)..(20)
<223> <220> хаа в положении 20 представляет собой тгр, Al а или Thr
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> хаа в положении 21 представляет собой Gly, Arg или Lys
<220>
<221> другой признак
<222> (22)..(22)
<223> хаа в положении 22 представляет собой Ser, Ala, , Asp, Phe, Gly,
His, lie, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> (23)..(23)
<223> хаа в положении Met, Asn, Gin, 23 Ser, представляет , Thr или val собой Asp, Ala, Gly, His, Lys,
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> хаа в положении 24 представляет собой Gly, Asp или Phe
<220>
<221> другой признак
<222> (25)..(25)
<223> хаа в положении 25 представляет собой Asp, Ala, Glu, Phe,
Asn или Gin
<220>
<221> другой признак
<222> (26)..(26)
- 407
<223> <220> хаа в положении 26 представляет собой Thr, Glu, Asp, Ser или Pro
<221> другой признак
<222> (27)..(27)
<223> хаа в положении 27 представляет собой Ser, Thr, Lys, Arg, Ala,
Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Asn или Gin
<220>
<221> другой признак
<222> (28)..(28)
<223> хаа в положении 28 представляет собой Phe, туг, Pro или Trp
<220>
<221> другой признак
<222> (29)..(29)
<223> хаа в положении 29 представляет собой Phe, Ala, cys, lie, Leu,
Gin, Arg, тгр или Туг
<220>
<221> другой признак
<222> (30)..(30)
<223> хаа в положении 30 представляет собой Ser, Gly, Lys, Thr, Arg,
Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, val, Trp или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> (31)..(31) <223> хаа в положении 31 представляет собой val, lie, Met или Leu <220>
<221> другой_признак <222> (32)..(32) <223> хаа в положении 32 представляет собой Gly, Ala, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> (33)..(33) <223> хаа в положении 33 представляет собой Asn, Ser, Gin, Pro, Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lie, Lys, Leu, Arg, val или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> (34)..(34) <223> хаа в положении 34 представляет собой Gly, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> (35)..(35) <223> хаа в положении 35 представляет собой Lys, Glu, Ala, Cys, Asp, Gly, His, lie, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr или Val <220>
<221> другой_признак <222> (36)..(36) <223> хаа в положении 36 представляет собой Gin, Ala, Cys, Glu, Gly, His, lie, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr или val <220>
<221> другой_признак <222> (37)..(37) <223> хаа в положении 37 представляет собой Glu, Asp, Ala, Cys, Phe, Gly, lie, Lys, Leu, Met, Asn, Ser, Thr или val <220>
<221> другой_признак <222> (38)..(38) <223> хаа в положении 38 представляет собой Thr, Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lie, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, val, Trp или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> (39)..(39) <223> хаа в положении 39 представляет собой тгр или Phe <220>
<221> другой_признак <222> (40)..(40) <223> хаа в положении 40 представляет собой Asp, Ala, Cys, Glu, Phe,
- 408 031651
Gly, His, lie, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, val, тгр или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> (42)..(42) <22B> хаа в положении 42 представляет собой Ser, Asn, Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, lie, Lys, Leu, Met, Arg, val, тгр, туг или Gln <220>
<221> другой_признак <222> (44)..(44) <22B> хаа в положении 44 представляет собой Ser, Asp, Ala, Leu, Thr, Glu, lie, Ala, Gly, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, val, туг или val <220>
<221> другой_признак <222> (45)..(45)
<22B> <220> хаа в положении 45 представляет собой Arg, Lys или Ser
<221> другой признак
<222> (46)..(46)
<22B> хаа в положении 46 представляет собой Gly, Al a или Gln
<220>
<221> другой признак
<222> (47)..(47)
<22B> хаа в положении 47 представляет собой Phe, Tyr Cys, val или Trp
<220>
<221> другой_признак <222> (48)..(48) <22B> хаа в положении 48 представляет собой Leu, Met, lie, Cys, Phe Met, Arg, Туг или val <220>
<221> другой_признак <222> (49)..(49)
<22B> хаа в положении 49 представляет собой Leu, Met, lie или val
<220> <221> другой признак
<222> (50)..(50)
<22B> хаа в положении 50 представляет собой Ser, Ala, туг, Cys, Asp,
lie, Met, Pro, Gln, val или Thr
<220>
<221> другой признак
<222> (51)..(51)
<22B> хаа в положении или lie 51 представляет собой Leu, val, Ala, Cys, Met
<220> <221> другой признак
<222> (52)..(52)
<22B> хаа в положении 52 представляет собой Lys, cys, Phe, Hi s, He,
Leu, Met, Asn, Arg, Ser, Thr, тгр или туг
<220> <221> другой признак
<222> (53)..(53)
<22B> хаа в положении 53 представляет собой Lys, Arg, Met, Leu, He,
Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Asn, Gln, Ser, Thr, туг или val
<220>
<221> другой признак
<222> (54)..(54)
<22B> хаа в положении 54 представляет собой Asn , cys, Asp, Glu, Phe,
Gly, Lys, Met, Gln, Arg, Ser или Trp
<220> <221> другой признак
<222> (55)..(55)
<22B> хаа в положении 55 представляет собой Gly, Ser или Thr
<220> <221> другой признак
<222> (56)..(56)
<22B> хаа в положении 56 представляет собой Ala, Thr, Gln, Ser, Gly,
Leu, Pro, Arg или Asn
<220>
- 409 031651 <221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
<221>
<222>
<22В>
<220>
другой_признак (57)..(57) хаа в положении 57 Ala, Asn, lie, Ser представляет собой или Thr другой_признак (58)..(58) хаа в положении 58 ...
Leu, Met, Asn, Arg, Trp, туг или Thr представляет собой
Gin,
Glu, Leu, Met,
Ala, Lys, Asp,
Val , другой_признак (59)..(59) хаа в положении другой_признак (60)..(60) хаа в положении другой_признак (62)..(62) хаа в положении другой_признак (63)..(63) хаа в положении lie или val представляет представляет представляет представляет другой_признак (64)..(64) хаа в положении , His, Arg, Ser или туг представляет собой собой собой собой собой другой_признак (65)..(65) хаа в положении 65 представляет Phe, Gly, His, lie, Leu, Asn, val или другой_признак (66)..(66) хаа в положении другой_признак (67)..(67) хаа в положении другой_признак (68)..(68) хаа в положении другой_признак (69)..(69) хаа в положении His, lie, Leu, I
Pro, туг,
Gin,
Ala,
Thr
Glu lie или или или
Ser,
Gin,
Ser
Phe
Leu
Leu,
Asn,
Thr,
Asn ,
Phe,
Gly, собой
Ser, Thr
Ala,
Cys,
Asp,
Glu, представляет представляет представляет представляет собой собой собой собой
Ser,
Lys,
Ala или Gly
Gin, Asn или Arg lie Asp, Leu или val
Glu, Ala,
I 69 . .. . .
Met, Gin, Arg, Ser, Thr, val или другой_признак (70)..(70) хаа в положении 70 представляет собой val, lie,
Cys, Asp, Phe, Tyr
Cys или Leu другой_признак (71) ..(71) хаа в положении 71 представляет собой Asp, Glu, туг, Ala, Cys, Gly, His, lie, Leu, Met, Asn, Ser, Thr, val или Trp другой_признак (72) ..(72) хаа в положении 72 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, His или Trp
- 410 031651 <221> другой_признак <222> ¢73)..(73) <223> хаа в положении 73 представляет собой Asn, Ser, Asp, Gln, Thr, Ala, Cys, Phe, Gly, His, lie, Leu, val, туг или Glu <220>
<221> другой_признак <222> (74)..(74) <223> xaa в положении 74 представляет собой Ala, Thr, Met, lie, Lys, Ser, Leu, val, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Asn, Gln, туг или Arg <220>
<221> другой_признак <222> ¢75)..(75) <223> xaa в положении 75 представляет собой val, Cys, lie или Leu <220>
<221> другой_признак <222> ¢76)..(76) <223> xaa в положении 76 представляет собой Lys, Ala, Cys, Phe, His, lie, Leu, Gln, Arg, Ser, Thr, val, Trp или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> (77)..(77) <223> xaa в положении 77 представляет собой Asp туг <220>
<221> другой_признак <222> ¢78)..(78) <223> хаа в положении 78 представляет собой Gln, His, Ser, Asn, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, lie, Leu, Met, Asn, Arg, val, туг или Thr <220>
<221> другой_признак <222> ¢79)..(79) <223> xaa в положении 79 представляет собой Gly, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp или Tyr <220>
<221> другой_признак <222> ¢80)..(80) <223> xaa в положении 80 представляет собой Arg, Glu, Gln, Lys, Asp, Ala, Cys, Phe, Gly, His, lie, Leu, Ser, Thr, val, туг или Asn <220>
<221> другой_признак <222> ¢81)..(81)
<223> <220> xaa в положении Ala, Cys, Asp, 81 Phe, представляет Gly, His или собой 1 Ser Leu, Pro, Thr, He, val
<221> другой признак
<222> ¢82)..(82)
<223> xaa в положении 82 представляет собой lie, Ala, Leu, Met,
Arg и val
<220>
<221> другой признак
<222> ¢83)..(83)
<223> хаа в положении 83 представляет собой Glu, His, Asn, Leu, Gln
ile, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, Lys, Pro, Arg, Ser, Thr, туг или val <220>
<221> другой_признак <222> ¢84)..(84)
<223> xaa в положении 84 представляет собой Ser, val, тгр или туг Pro, Ala, Cys, Glu, lie,
<220>
<221> другой признак
<222> ¢85)..(85)
<223> хаа в положении 85 представляет собой Leu, val , cys, Gly или Ala
<220>
<221> другой признак
<222> ¢86)..(86)
<223> хаа в положении 86 представляет собой Ser, Ala, туг, Asn, lie,
val или Thr <400> 849
- 411
Met хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа Ser хаа хаа хаа хаа хаа хаа
1 5 10 15
хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа
20 25 30
хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа Arg хаа Asp хаа хаа хаа хаа хаа
35 40 45
хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа туг хаа хаа хаа
50 55 60
хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа хаа
65 70 75 80
хаа хаа хаа хаа хаа хаа
85
<210> 850 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>850 atggcgatca ccgtgacgaa caactcctcc aacccgatcg aggtggcgat caaccactgg60 ggcagcgacg gcgacaccag cttcttctcc gtcggcaacg gcaagcagga gacctgggac120 aggtccgaca gccgcggctt cgtgctctcc ctgaagaaga acggcgctca gcacccgtac180 tacgtccagg ccagcagcaa gatcgaggtc gacaacaacg ccgtgaagga ccagggtcgg240 ctgatcgagc cgctctcgtg a261 <210>851 <211> 261 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> кодирующая последовательность для полипептида PIP-72 <400>851 atggcgatca cggtgacgaa caactcgagc aaccctatcg aggtcgcgat caaccactgg60 ggctctgacg gggacacgag cttcttcagc gtcgggaacg ggaagcagga gacgtgggac120 cgcagcgact cgcgcggctt cgtcctgtcg ctcaagaaga acggtgccca gcacccgtac180 tacgtgcagg cgtcgtcgaa gatcgaggtc gacaacaacg cggtcaagga ccagggcagg240 ctcatcgagc cgctgtcctg a261 <210>852 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> полипептид PIP-72 <400> 852
Met Ala lie Thr val Thr Asn А5П Ser Ser Asn Pro lie Glu val Ala
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 853 <211> 258 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> PlP-72Aa кодирующая последовательность с оптимизированными
- 412 031651 кодонами маиса <400>853 atgggtatca cggtcaccaa caacagcagc aaccctatcg aagtggcgat caaccactgg60 ggcagcgacg gcgacaccag cttcttcagc gtcggcaacg gcaagcagga aacgtgggac120 aggtccgact cacgcggctt cgtgctgtcc ctgaagaaga acggcgcgca gcatccgtac180 tacgtgcagg cgtcgtcgaa gatcgaggtg gacaacaacg cggtcaagga ccagggtagg240 ctgattgagc cgctgtct258 <210>854 <211>258 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> PiP-72Aa кодирующая последовательность с оптимизированными кодонами маиса <400>854 atggggatca cagtcaccaa caacagcagc aacccaatcg aggtcgcgat caaccactgg60 ggaagcgacg gagacacctc gttcttcagc gtcggcaacg gcaagcagga gacttgggac120 aggtcagact ccagaggctt cgtactgtcc ctgaagaaga acggcgctca gcatccgtac180 tacgtgcaag cctcgtcgaa gatcgaggtg gacaacaacg cggtcaagga tcagggtagg240 ctgatcgagc cactgtct258 <210>855 <211>258 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> PlP-72Aa кодирующая последовательность с оптимизированными кодонами маиса <400>855 atgggaatca ctgtcaccaa caactcgtcc aaccctatcg aggtcgcgat caaccactgg60 ggttccgatg gggacacgtc cttcttcagc gtcggcaatg gcaagcagga gacgtgggac120 aggtccgact ccagaggctt cgtgctctcg ctgaagaaga acggcgctca gcacccttac180 tacgtgcagg cctcgtcgaa gatcgaggtg gacaacaacg cggttaagga tcagggtagg240 ctgattgagc ctctgtct258 <210>856 <211>258 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> PlP-72Aa кодирующая последовательность с оптимизированными кодонами маиса <400>856 atgggaatca cagtcaccaa caacagcagc aacccgatcg aggtcgcgat caaccactgg60 ggtagcgacg gcgacaccag cttcttctcc gtgggcaacg gcaaacagga gacgtgggac120 aggtcagaca gccgcggctt cgtgctgtcc ctcaagaaga acggcgccca gcacccatac180 tacgtgcaag cctcgtcgaa gatcgaggtg gacaacaacg cggtgaagga ccagggtaga240 ctgattgagc cgctgagc258 <210>857 <211>258 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> PlP-72Aa кодирующая последовательность с оптимизированными кодонами маиса <400> 857
- 413 031651 atgggtatca cagtcaccaa caactcctca aacccgatcg aggtggcgat caaccactgg60 ggcagcgacg gcgatacctc attcttcagc gttgggaacg gcaagcagga gacgtgggat120 cggtctgaca gcagagggtt tgttctgtcg ctgaagaaga acggcgctca gcacccatac180 tacgtccaag cctcctcgaa gatcgaggtt gacaacaacg ccgttaagga tcagggcaga240 ctgattgagc cactgtcc258 <210>858 <211>258 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> PlP-72Aa кодирующая последовательность с оптимизированными кодонами маиса <400>858 atgggaataa cagtcaccaa caacagcagc aacccgatcg aagtggcgat caaccactgg60 ggtagcgacg gcgacacctc cttcttcagc gtcggcaacg gcaagcagga gacgtgggac120 aggtccgact ctcgcggatt cgtcctgtcg ctcaagaaga acggtgccca gcacccctac180 tacgtgcagg cctcgtcgaa gatcgaggtg gacaacaacg cggtcaagga ccaagggagg240 ctgatcgagc cgctgtcg258 <210>859 <211>258 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> PlP-72Aa кодирующая последовательность с оптимизированными кодонами маиса <400>859 atggggatca cggtgacgaa caactcctcc aatccgatcg aggtggcgat caaccactgg60 ggatcagacg gtgacacgag cttcttcagc gttggcaacg ggaagcagga gacgtgggac120 aggtctgaca gcagaggttt tgtgctgtcg ctcaagaaga acggcgctca acacccatac180 tacgtccaag cctcctctaa gatcgaggtg gacaacaacg ctgtgaagga tcagggcaga240 ctcatcgagc cactgtcg258 <210> 860 <211>258 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> PlP-72Aa кодирующая последовательность с оптимизированными кодонами маиса <400>860 atgggaatca ccgtcaccaa caacagcagc aaccctatcg aagtcgctat caaccactgg60 ggaagcgacg gcgacacctc cttcttcagc gtcggcaatg gcaagcagga gacgtgggac120 aggtccgact ccagaggatt cgtgctgtcc ctgaagaaga acggcgctca gcacccatac180 tacgtgcaag cttcgtcgaa gatcgaggtg gacaacaacg cggtcaagga tcaagggagg240 ctgatcgagc cgctgtcc258 <210> 861 <211>258 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> PlP-72Aa кодирующая последовательность с оптимизированными кодонами маиса <400> 861 atgggtatca cggtgaccaa caactcctcc aacccgatcg aggtggcgat caaccactgg 60 ggctcggacg gcgacacgag cttcttcagc gtcggcaacg ggaagcagga gacgtgggac 120 cgctctgaca gcagaggttt cgtgctgtcg ctcaagaaga acggcgctca acacccgtac 180 tacgtccaag cctcctccaa gatcgaggtc gacaacaacg ccgtgaagga ccaaggcaga 240
- 414 031651 ctcatcgagc cgctgtcg 258 <210> 862 <211> 258 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> PlP-72Aa кодирующая последовательность с оптимизированными кодонами маиса <400>862 atgggtataa ccgtgacgaa caactcctca aatccgatcg aggtcgcgat caaccactgg60 gggtcagacg gtgacacgag cttcttctcc gtgggcaacg gtaagcagga gacctgggat120 aggtcggact caaggggctt tgtgctgagc ctcaagaaga acggtgctca gcacccgtac180 tacgtccaag cgagctccaa gatcgaggtg gacaacaacg ctgtcaagga ccaaggtagg240 ctgatcgaac cgctgagc258 <210>863 <211>258 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> PlP-72Aa кодирующая последовательность с оптимизированными кодонами маиса <400>863 atggggatca cagtcaccaa caacagcagc aacccgatcg aagtcgcgat caaccactgg60 ggaagcgacg gcgacacctc gttcttcagc gtcggcaacg gcaagcagga gacgtgggat120 aggtccgact cacgcggctt cgtgctgtcc ctgaagaaga acggcgccca gcatccgtac180 tacgtgcaag cctcgtcgaa gatcgaggtg gacaacaacg cggtgaagga ccagggtaga240 ctgatcgagc cactgtcc258 <210>864 <211>258 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> PiP-72Aa кодирующая последовательность с оптимизированными кодонами маиса <400>864 atgggtatca cggtgacgaa caactcctcc aatcctatcg aggtcgcgat caaccactgg60 gggtcagacg gtgacacgag cttcttctcc gtgggcaacg gcaagcagga gacctgggac120 aggtcggact caaggggctt cgtcctgagc ctcaagaaga acggcgctca gcacccgtac180 tacgtccaag cgagctccaa gatcgaggtg gacaacaacg ccgtcaagga ccagggtagg240 ctgatcgaac cgctgagc258 <210>865 <211>42 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> ¢20)..(20) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> ¢21)..(21) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> ¢22)..(22) <223> k = g или t
- 415 031651
<400> 865
tatcgaaggt aggcatatgn nkattaccgt tacaaacaat tc 42
<210> 866
<211> 42
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> k = g или t
<400> 866
cgaaggtagg catatgggtn nkaccgttac aaacaattcg tc 42
<210> 867
<211> 42
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> k = g или t
<400> 867
gaaggtaggc atatgggtat tnnkgttaca aacaattcgt сс 42
<210> 868
<211> 41
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> k = g или t
<400> 868
- 416 031651
gtaggcatat gggtattacc nnkacaaaca attcgtccaa с 41
<210> 869
<211> 44
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> k = g или t
<400> 869
ggcatatggg tattaccgtt nnkaacaatt cgtccaaccc catc 44
<210> 870
<211> 43
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (21)..(21)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> k = g или t
<400> 870
caaacaattc gtccaacccc nnkgaagtcg ccatcaatca ttg 43
<210> 871
<211> 42
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> k = g или t
<400> 871
aacaattcgt ccaaccccat cnnkgtcgcc atcaatcatt gg 42
- 417 031651
<210> 872
<211> 41
<212> ДНК
<21В> искусственная последовательность
<220>
<22В> вариант полипептида PIP-72
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<22В> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<22В> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<22В> k = g или t
<400> 872
ccaaccccat cgaagtcgcc nnkaatcatt ggggtagcga с 41
<210> 873
<211> 41
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢18)..(18)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢19)..(19)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> k = g или t
<400> 873
ccatcgaagt cgccatcnnk cattggggta gcgacggaga с 41
<210> 874
<211> 42
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢19)..(19)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (20)..(20)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> k = g или t
<400> 874
gtcgccatca atcattggnn kagcgacgga gacaccagct tc 42
<210> 875
<211> 42
- 418 031651
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> k = g или t
<400> 875
gtcgccatca atcattgggg tnnkgacgga gacaccagct tc 42
<210> 876
<211> 45
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (25). .(25)
<223> k = g или t
<400> 876
caatcattgg ggtagcgacg gannkaccag cttcttttcc gtcgg 45
<210> 877
<211> 45
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> k = g или t
<400> 877
cattggggta gcgacggaga cnnkagcttc ttttccgtcg gtaac 45
<210> 878
<211> 44
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
- 419 031651 <220>
<22В> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (21)..(21) <22В> n = g, a, t или с <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <22В> n = g, a, t или с <220>
<221> другой_признак <222> (23)..(23) <223> k = g или t <400>878 tttccgtcgg taacggcaag nnkgaaacct gggacaggtc cgac <210>879 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (20)..(20) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> (21)..(21) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <223> k = g или t <400> 879 cgtgctttcc ctgaagaagn nkggcgcgca acacccttac tac <210> 880 <211> 43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (21)..(21) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> (23)..(23) <223> k g или t <400> 880 tgctttccct gaagaagaat nnkgcgcaac acccttacta cgt <210> 881 <211> 42 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза
- 420 031651 <220>
<221> другой_признак <222> (20)..(20) <22В> η = g, a, t или с <220>
<221> другой_признак <222> (21)..(21) <22В> η = g, a, t или с <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <22В> k = g или t <400> 881 cctgaagaag aatggcgcgn nkcaccctta ctacgttcag gc <210> 882 <211> 42 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (20)..(20) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> (21)..(21) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <223> k = g или t <400>882 gaagaatggc gcgcaacacn nktactacgt tcaggccagc ag <210>883 <211>41 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (20)..(20) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> (21)..(21) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <223> k = g или t <400>883 cgcgcaacac ccttactacn nkcaggccag cagcaaaatt g <210>884 <211>42 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак
- 421 031651
<222> ¢21)..(21)
<22В> n = g, a, t или c
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<22В> η = g, a, t или c
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<22В> k = g или t
<400> 884
cgcaacaccc ttactacgtt nnkgccagca gcaaaattga ад 42
<210> 885
<211> 43
<212> ДНК
<21В> искусственная последовательность
<220>
<22В> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<22В> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<22В> k = g или t
<400> 885
caacaccctt actacgttca gnnkagcagc aaaattgaag teg 43
<210> 886
<211> 42
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (24)..(24)
<223> k = g или t
<400> 886
gttcaggcca gcagcaaaat tnnkgtcgac aacaacgccg tg 42
<210> 887
<211> 42
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> n = g, a, t или с
- 422 031651 <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <22В> η = g, a, t или с <220>
<221> другой_признак <222> (23)..(23) <223> k = g или t <400> 887 gcagcaaaat tgaagtcgac nnkaacgccg tgaaagatca gg <210> 888 <211> 42 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (20)..(20) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> (21)..(21) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <223> k = g или t <400>888 gaaagatcag ggccggttgn nkgagccgct ctcgtaagga tc <210>889 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (21)..(21) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(2) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <223> n представляет собой a, c, g, или t <220>
<221> другой_признак <222> (23)..(23) <223> k = g или t <400>889 gtattaccgt tacaaacaat nnktccaacc ccatcgaagt cgc <210>890 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак
- 423 031651
<222> ¢21)..(21)
<22В> m = а или c
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<22В> η = g, a, t или c
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<22В> η = g, a, t или c
<400> 890
gcgacttcga tggggttgga mnnattgttt gtaacggtaa tac 43
<210> 891
<211> 43
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<223> k = g или t
<400> 891
gtagcgacgg agacaccagc nnkttttccg tcggtaacgg саа 43
<210> 892
<211> 43
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> m = а или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> n = g, a, t или с
<400> 892
ttgccgttac cgacggaaaa mnngctggtg tctccgtcgc tac 43
<210> 893
<211> 43
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> n = g, a, t или с
- 424 031651 <220>
<221> другой_признак <222> ¢22)..(22) <22В> η = g, a, t или с <220>
<221> другой_признак <222> ¢23)..(23) <223> к = а или с <400>893 gcgacggaga caccagcttc nnktccgtcg gtaacggcaa gca <210>894 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> ¢21)..(21) <223> m = а или c <220>
<221> другой_признак <222> ¢22)..(22) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> ¢23)..(23) <223> n = g, a, t или c <400>894 tgcttgccgt taccgacgga mnngaagctg gtgtctccgt cgc <210>895 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> ¢21)..(21) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> ¢22)..(22) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> ¢23)..(23) <223> k = g или c <400>895 tcttttccgt cggtaacggc nnkcaggaaa cctgggacag gtc <210>896 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> ¢21)..(21) <223> m = а или c <220>
<221> другой_признак
- 425 031651
<222> ¢22)..(22)
<22В> n = g, a, t или c
<220>
<221> другой признак
<222> (23)..(23)
<22В> η = g, a, t или c
<400> 896
gacctgtccc aggtttcctg mnngccgtta ccgacggaaa ада 43
<210> 897
<211> 43
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> k = g или t
<400> 897
gtggcttcgt gctttccctg nnkaagaatg gcgcgcaaca ссс 43
<210> 898
<211> 43
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> m = а или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> (23). .(23)
<223> n = g, a, t или с
<400> 898
gggtgttgcg cgccattctt mnncagggaa agcacgaagc сас 43
<210> 899
<211> 43
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер для мутагенеза
<220>
<221> другой признак
<222> ¢21)..(21)
<223> n = g, a, t или с
<220>
<221> другой признак
<222> ¢22)..(22)
<223> n = g, a, t или с
- 426 031651 <220>
<221> другой_признак <222> (23)..(23) <223> m = а или с <400>899 actacgttca ggccagcagc nnkattgaag tcgacaacaa cgc <210>900 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (2)..(23) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> (21)..(21) <223> m = а или c <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <223> n = g, a, t или c <400>900 gcgttgttgt cgacttcaat mnngctgctg gcctgaacgt agt <210>901 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (21)..(21) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак <222> (23)..(23) <223> k = g или t <400>901 aagtcgacaa caacgccgtg nnkgatcagg gccggttgat cga <210>902 <211>43 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для мутагенеза <220>
<221> другой_признак <222> (21)..(21) <223> m = а или c <220>
<221> другой_признак <222> (22)..(22) <223> n = g, a, t или c <220>
<221> другой_признак
- 427 031651 <222> ¢23)..(23) <223> η = g, a, t или с <400>902 tcgatcaacc ggccctgatc mnncacggcg ttgttgtcga ctt43 <210>903 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> вариант полипептида PIP-72 <400> 903
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Glu Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gin Hi s pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Tyr Pro Leu Ser <210> 904 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> вариант полипептида PIP-72 <400> 904
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 905 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> вариант полипептида PIP-72 <400> 905
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Glu Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
- 428 031651 <210> 906 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> вариант полипептида PIP-72 <400> 906
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Thr Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 907 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> вариант полипептида PIP-72 <400> 907
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser val Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 908 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> вариант полипептида PIP-72 <400> 908
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Al a Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> <211> <212> <213> 909 86 БЕЛОК искусственная последовательность
- 429 031651 <220>
<223> вариант полипептида PIP-72 <400> 909
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Leu Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 910 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> вариант полипептида PIP-72 <400> 910
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Glu Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Hi s Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 911 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> вариант полипептида PIP-72 <400> 911
Met Gly lie Thr val Thr Asn Met Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gin Al a pro Tyr Tyr val Gin Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gin Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 912 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> вариант полипептида PIP-72 <400> 912
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Ala
- 430 031651
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser T rp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Al a pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Hi s Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Phe Pro Leu Ser
<210> 913 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность <220>
<223> i вариант i полипептида l 3ip-: 72
<400> ' 913
Met Gly lie Ser val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser T rp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Gln Gly Al a Gln Al a Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Hi s Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
<210> 914 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> искусственная последовательность
<220> <223> i вариант полипептида PIP-72
<400> 1 914
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Gly lie Asp
20 25 30
Ser Gly Lys G1 n Glu Ser T rp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Arg Asn Gly Al a Gln Al a pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Hi s Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Arg
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser <210> 915 <211> 258 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> вариант полипептида PIP-72 <400>915 atgggtatta ccgttacaaa caattcggaa aaccccatcg aagtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttcttttcc gtcggtaacg gcaagcagga aacctgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgatgtcc ctgaagaaga atggcgcgca acacccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatctatc cgctctcg258
- 431 031651 <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
916
258
ДНК искусственная последовательность вариант полипептида PIP-72
916 <400> atgggtatta ggtagcgacg aggtccgaca tacgttcagg ttgatcgagc ccgttacaaa gagacaccag gccgtggctt ccagcagcaa cgctctcg caattcgtcc cttctttggc cgtgctttcc aattgaagtc aaccccatcg attgacagcg ctgaagcgta gacaacaacg aagtcgccat gcaagcagga atggcgcgca ccgtgaaaga caatcattgg atcttgggac agctccttac tcagggccgg
120
180
240
258 <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
917
258
ДНК искусственная последовательность вариант полипептида PIP-72
917 <400> atgggtatta ggtagcgacg aggtccgaca tacgttcagg ttgatcgagc ccgttacaaa gagacaccag gccgtggctt ccagcagcaa cgctctcg caattcggaa cttctttggc cgtgctttcc aattgaagtc aaccccatcg attgacagcg ctgaagcgta gacaacaacg aagtcgccat gcaagcagga atggcgcgca ccgtgaaaga caatcattgg atcttgggac agctccttac tcagggccgg
120
180
240
258 <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
918
258
ДНК искусственная последовательность вариант полипептида PIP-72
918 <400> atgggtatta ggtagcgacg aggtccgaca tacgttcagg ttgatcgagc ccgttacaaa gagacaccag gccgtggctt ccagcagcaa cgctctcg caattcgacg cttctttggc cgtgctttcc aattgaagtc aaccccatcg attgacagcg ctgaagcgta gacaacaacg aagtcgccat gcaagcagga atggcgcgca ccgtgaaaga caatcattgg atcttgggac agctccttac tcagggccgg
120
180
240
258 <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
919
258
ДНК искусственная последовательность вариант полипептида PIP-72
919 <400> atgggtatta ggtagcgacg aggtccgaca tacgttcagg ttgatcgagc ccgttacaaa gagacaccag gccgtggctt ccagcagcaa cgctctcg caattcggtt cttctttggc cgtgctttcc aattgaagtc aaccccatcg attgacagcg ctgaagcgta gacaacaacg aagtcgccat gcaagcagga atggcgcgca ccgtgaaaga caatcattgg atcttgggac agctccttac tcagggccgg
120
180
240
258 <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
920
258
ДНК искусственная последовательность вариант полипептида PIP-72
920 <400> atgggtatta ggtagcgacg aggtccgaca tacgttcagg ccgttacaaa gagacaccag gccgtggctt ccagcagcaa caattcggct cttctttggc cgtgctttcc aattgaagtc aaccccatcg attgacagcg ctgaagcgta gacaacaacg aagtcgccat gcaagcagga atggcgcgca ccgtgaaaga caatcattgg atcttgggac agctccttac tcagggccgg
120
180
240
- 432 031651 ttgatcgagc cgctctcg
258 <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
921
258
ДНК искусственная последовательность вариант полипептида PIP-72
921 <400> atgggtatta ggtagcgacg aggtccgaca tacgttcagg ttgatcgagc ccgttacaaa gagacaccag gccgtggctt ccagcagcaa cgctctcg caattcgttg cttctttggc cgtgctttcc aattgaagtc aaccccatcg attgacagcg ctgaagcgta gacaacaacg aagtcgccat gcaagcagga atggcgcgca ccgtgaaaga caatcattgg atcttgggac agctccttac tcagggccgg
120
180
240
258 <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
922
258
ДНК искусственная последовательность вариант полипептида PIP-72
922 <400> atgggtatta ggtagcgacg aggtccgaca tacgttcagg ttgatcgagc ccgttacaaa gagacaccag gccgtggctt ccagcagcaa cgctctcg caattcggaa cttctttggc cgtgctttcc aattgaagtc aaccccatcg attgacagcg ctgaagcgta gacaacaacg aagtcgccat gcaagcagga atggcgcgca ccgtgaaaga caatcattgg atcttgggac agctccttac tcatggccgg
120
180
240
258 <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
923
258
ДНК искусственная последовательность вариант полипептида PIP-72
923 <400> atgggtatta ggtagcgacg aggtccgaca tacgttcagg ttgatcgagc ccgttacaaa gagacaccag gccgtggctt ccagcagcaa cgctctcg catgtcgtcc cttctttggc cgtgctttcc aattgaagtc aaccccatcg attgacagcg ctgaagcgta gacaacaacg aagtcgccat gcaagcagga atggcgcgca ccgtgaaaga caatcattgg atcttgggac agctccttac tcagggccgg
120
180
240
258 <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
924
258
ДНК искусственная последовательность вариант полипептида PIP-72
924 <400> atgggtatta ggtagcgacg aggtccgaca tacgttcagg ttgatcttcc ccgttacaaa gagacaccag gccgtggctt ccagcagcaa cgctctcg caattcgtcc cttctttggc cgtgctttcc aattgaagtc aaccccatcg attgacagcg ctgaagcgta cataacaacg aggtcgccat gcaagcagga atggcgcgca ccgtgaaaga caatcattgg atcttgggac agctccttac tcagggccgg
120
180
240
258 <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
925
258
ДНК искусственная последовательность вариант полипептида PIP-72
925 <400>
atgggcatta gcgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attgacagcg aagtcgccat gcaagcagga caatcattgg gtcttgggac
120
- 433 031651 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgtc aaggcgccca agctccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc gacaacaacg ccgtgaaaga tcatggccgg240 ttgatcgagc cgctctcc258 <210>926 <211>258 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> вариант полипептида PIP-72 <400>926 atgggtatta ccgttacaaa caattcgtcc aaccccatcg aggtcgccat caatcattgg60 ggtagcgacg gagacaccag cttctttggc attgacagcg gcaagcagga atcttgggac120 aggtccgaca gccgtggctt cgtgctttcc ctgaagcgta atggcgcgca agctccttac180 tacgttcagg ccagcagcaa aattgaagtc cacaacaacg ccgtgaaaga tcagggccgg240 ttgatcgagc cgctctcg258 <210>927 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> Pseudomonas chlororaphis <400> 927
Met Gly lie Thr val Lys Asn Asn Ser Ser Asn Pro lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Arg Trp Gly Asn Asp Gly Asp Thr Asn Phe Phe Ser val Gly
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Thr Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Lys lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Gln
65 70 75 80
Leu lie Glu Pro Leu Ser
85
<210> 928
<211> 86
<212> БЕЛОК
<213> Pseudomonas 1 jrassi cacearum
<400> 928
Met Gly lie Thr val Lys Asn Asn Ser Ser Asn Thr lie Glu val Al a
1 5 10 15
val Asn Hi s Trp Gly Ser Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser lie Al a
20 25 30
Asn Gly Lys G1 n Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Ser Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Ser Leu Lys Lys Asn Gly Al a Gln Hi s Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Arg lie Glu val Asp Asn Asn Al a val Lys Asp Gln Gly Gln
65 70 75 80
Pro lie Gln Pro Leu Ser
85
<210> 929
<211> 86
<212> БЕЛОК
<213> Pseudomonas : sp. QTF5
<400> 929
Met Gly lie Thr val Thr Asn Asn Ser Ser Hi s Thr lie Glu val Al a
1 5 10 15
lie Asn Gln Trp Gly Asp Asp Gly Asp Thr Ser Phe Phe Ser lie Al a
20 25 30
Asn Gly Lys Asn Glu Ser Trp Asp Arg Ser Asp Asp Arg Gly Phe val
35 40 45
- 434 031651
Leu Ser Leu G1 n Lys Asn Gly Al a Gln Tyr Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Ser Ser Asn lie Lys val Asp Asn Asn Gly val Thr Asp Gln Gly Glu
65 70 75 80
Al a lie Tyr Pro Leu Al a
<210>930 <211> 86 <212> БЕЛОК <213> Halomonas anticariensis
<400> 930
Met Thr lie G1 n val Thr Asn Asn Al a Gln Gln Glu val Glu val Al a
1 5 10 15
ile Asn Glu Trp Gly Thr Gly Gly Asp Thr Ser Phe Phe Thr Leu Hi s
20 25 30
Gln Gly Lys Ser Glu Lys T rp Asp Arg val Asp Glu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Al a val Lys Hi s Arg Gly Al a Gln Arg Pro Tyr Tyr val Gln Hi s
50 55 60
Gln Ser Asn lie Asn lie Tyr Asp Hi s Arg val Thr Asp Hi s Asp Ser
65 70 75 80
ile lie Arg Thr lie Asp
<210> 931 <211> 90 <212> БЕЛОК
<213> l surkholderi a pseudomal1ei
<400> ' 931
Met Al a lie Ser val Lys Asn Ser Al a Ser Asn Thr val Glu val Ser
1 5 10 15
ile Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys Pro Phe Lys Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Asp Ser T rp Asn Arg Thr Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val Gln Leu Gly Gly Ser Ala Thr pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn Ile val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Al a Asn Lys Arg Phe Gly
90 <210>932 <211>91 <212> БЕЛОК <213> Pseudomonas entomophila
<400> 932
Met Lys Leu Thr lie Thr Asn Gly Ala Ser Thr Ser lie ASp ile Ala
1 5 10 15
val Ser Al a Trp Arg Asn Asp Gly Asn Asp Ser Tyr Tyr Ser lie Al a
20 25 30
Gln Gly Glu Ser Asp Thr T rp Asp Arg Ser Asp Al a Arg Gly Tyr Leu
35 40 45
Met Al a val Lys Met Lys Ser Gln val Lys Thr Tyr Tyr lie Ser Gln
50 55 60
Al a Ser Lys lie val val Glu Asp Asn Leu val Lys Asp Hi s Gly Gln
65 70 75 80
Thr lie Asn Pro Leu Tyr Al a val Asn Ser Met
90 <210>933 <211>91 <212> БЕЛОК <213> Pseudomonas entomophila
- 435 031651 <400> 933
Met Lys Leu Thr lie Thr Asn Gly Al a Ser Thr Ser lie Glu lie Al a
1 5 10 15
val Ser Al a Trp Arg Asn Asp Gly Asn Asp Ser Tyr Tyr Ser ile Al a
20 25 30
Gln Gly Glu Ser Asp Thr Trp Asp Arg Ser Asp Al a Arg Gly Tyr Leu
35 40 45
Met Al a val Lys Met Lys Ser Gln val Lys Thr Tyr Tyr lie Ser Gln
50 55 60
Thr Ser Lys lie val val Glu Asp Asn lie val Lys Asp Hi s Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Asn Pro Leu Tyr Al a Al a Asn Asn Met
85 90
<210>934 <211>96 <212> БЕЛОК <213> Pseudomonas chlororaphis <400> 934
Met Ser lie Thr val Thr Asn Gly Al a Ser Thr val val Asn val Al a
1 5 10 15
ile Ser Thr Trp Glu Lys Asp Gly Ser Asp Al a Tyr Trp Pro Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Lys Gly Asp Thr Trp Lys Arg Ser Asp Pro Arg Gly Tyr Leu
35 40 45
Met Al a lie G1 n Asp Lys Ser Gln Thr Thr Glu Tyr Tyr val Thr Cys
50 55 60
Asn Ser val lie val lie Glu Asp Asn Leu val Lys Asp Hi s Gly Arg
65 70 75 80
Thr Leu Asn Pro val Al a Al a Al a Gly Lys Lys Asn val val Asn Al a
85 90 95
<210>935 <211>96 <212> БЕЛОК <213> Pseudomonas chlororaphis <400> 935
Met Ser lie Thr val Thr Asn Gly Al a Ser Al a val val Lys val Al a
1 5 10 15
ile Ser Thr Trp Gln Lys Asp Gly Asn Asp Asp Phe Trp Ser Leu Asp
20 25 30
Gln Gly Al a Ser Asp Thr Trp Lys Arg Ser Asp Thr Arg Gly Tyr Leu
35 40 45
Met Al a val G1 n Asp Lys Ser Arg Thr Thr Glu Tyr Tyr val Ser Cys
50 55 60
Asn Ser Al a lie val lie Glu Asp Asn Leu val Lys Asp Hi s Gly Arg
65 70 75 80
Thr Leu Asn Pro Leu ile Al a Al a Gly Gln Lys Asn val Al a Asn Al a
85 90 95
<210> ' 936
<211> ; 89
<212> БЕЛОК
<213> 1 Burkholderi a multivorans
<400> 1 936
Met Al a lie Thr val Thr Asn Lys Ser Al a Glu Asp val Gln val Ser
1 5 10 15
ile Ser Thr Trp Gly Asn Hi s Gly Asp Pro Asn Pro Tyr Pro val Lys
20 25 30
Thr Gly val Thr Glu Ser Trp Asp Arg Lys Asp Pro Arg Gly Phe val
35 40 45
Leu Tyr Leu G1 n Lys Gly Al a Thr Al a Gln Pro Tyr Tyr val Gln Al a
50 55 60
Gly Al a Al a lie val Phe Phe Ser Phe Gln Glu val Thr Asp Asn Gly
- 436 031651
65 Glu Pro lie Hi s Pro 85 70 val Ser Ala Pro 75 80
<210> 937
<211> 90
<212> БЕЛОК
<213> Burkholderi a pseudomal1ei
<400> 937
Met Al a lie Ser val Lys Asn Ser Al a Ser Asn Thr val Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys pro Phe Lys Met Al a
20 25 30
Pro Gly Al a Ser Asp Ser Trp Asn Arg Asn Asp Leu Arg Gly Phe val
35 40 45
Met Tyr val G1 n Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val Leu Ser
50 55 60
Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser Gly Gin
65 70 75 80
Thr Leu Leu Pro Al a Asn Lys Arg Phe Gly
85 90
<210> 938
<211> 92
<212> БЕЛОК
<213> Burkholderi a pseudomal1ei
<400> 938
Met Al a lie Ser val Lys Asn Ser Al a Ser Asn Thr val Glu val Ser
1 5 10 15
lie Asn Asn Trp Glu Thr Asp val Asp Thr Ser Thr Lys Pro Phe Lys
20 25 30
Met Al a Pro Gly Al a Ser Asp Ser Trp Asn Arg Thr Asp Leu Arg Gly
35 40 45
Tyr val lie Tyr val Gin Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val
50 55 60
Met Ser Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser
65 70 75 80
Gly Gin Thr Leu Leu Pro Al a Asn Lys Arg Phe Gly
85 90
<210> 939
<211> 95
<212> БЕЛОК
<213> Pseudomonas < zhlororaphi s
<400> 939
Met Ser lie Lys lie Thr Asn Gly Al a Thr Arg Glu val Gin val Al a
1 5 10 15
val Ser Phe Trp Tyr Thr Asp Gly Lys Al a Gly Asp val Ser Asp Thr
20 25 30
Tyr Tyr Pro Leu Lys pro Gly Ser Gly Glu Glu Trp Lys Arg Asn Asp
35 40 45
Pro Arg Gly Tyr Leu Met Thr lie Lys Gly Gin Ser Gin Al a Gly val
50 55 60
Tyr Tyr val Al a Phe Asp Ser Glu lie Leu lie Glu Asp Asn Leu val
65 70 75 80
Lys Asp Arg Gly Glu Thr lie Thr Arg Leu Ser Leu Lys Phe Glu
85 90 95
<210> 940
<211> 96
<212> БЕЛОК
<213> Pseudomonas < zhlororaphi s
<400> 940
Met Ser lie Thr val Thr Asn Gly Al a Ser Al a val val Asn val Al a
- 437 031651
1 5 10 15
lie Ser Thr T rp Glu Lys Asp Gly Ser Asp Al a Tyr Tyr pro Leu G1 u
20 25 30
Gin Gly Ser Gly Asp Thr Trp Lys Arg Ser Asp Pro Arg Gly Tyr Leu
35 40 45
Met Al a lie G1 n Asp Lys Ser Gin Thr Thr Glu Tyr Tyr val Ser Cys
50 55 60
Asn Ser Al a lie val lie Glu Asp Asn Leu val Lys Asp Asp Gly Arg
65 70 75 80
Thr Leu Asn Pro val Al a Al a Al a Gly Lys Lys Lys val val Asn Al a
90 95 <210>941 <211>91 <212> БЕЛОК <213> Pseudomonas mosselii
<400> 941
Met Lys Leu Thr lie Thr Asn Gly Al a Ser Thr Ser val Asp ile Al a
1 5 10 15
val Ser Thr T rp Arg Asn Asp Gly Asn Asp Ser Tyr Tyr Ser lie Al a
20 25 30
Gin Gly Glu Ser Asp Thr Trp Asp Arg Ser Asp Al a Arg Gly Tyr Leu
35 40 45
Met Ala val Lys Met Lys Ser Gin val Lys Thr Tyr Tyr Ile Ser Gin
50 55 60
Thr Ser Lys lie val val Glu Asp Asn Leu val Lys Asp Hi s Gly G1 n
65 70 75 80
Thr Leu Asn pro Leu Tyr Al a val Asn Asn Met
85 90
<210> 942
<211> 76
<212> БЕЛОК
<213> Burkholderia thailandensis
<400> 942
Met Ser lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Lys pro Phe Lys
1 5 10 15
Met Ala Pro Gly Ala Ser Asp Ser Trp Asn Cys Thr Asp Phe Arg Gly
20 25 30
Tyr val Met Tyr val Gin Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val
35 40 45
Leu Ser Thr Ser Asn lie val lie Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser
50 55 60
Gly Gin Thr Leu Leu Pro Al a Asn Lys Arg Phe Gly
65 70 75
<210> 943
<211> 91
<212> БЕЛОК
<213> Pseudomonas protegens
<400> 943
Met Gly Thr ile Ser val Ser Asn Gly Ala Ser Gly Glu lie Asn val
1 5 10 15
Ser val Ser Thr Trp Gin Lys Asp Gly val Asp Thr Tyr Phe Thr lie
20 25 30
Ala Pro Gly Asn Phe Glu Thr Trp Thr Arg Asn Asp Pro Arg Gly Tyr
35 40 45
Leu Met Al a val Asn Gly Asn Thr Lys Lys Asn Glu Tyr Tyr lie Ser
50 55 60
Pro Thr Ser Lys lie val ile Glu Asp Asn Leu val Lys Asp Hi s Gly
65 70 75 80
Gin Thr lie Tyr Pro Leu lie Leu Al a Asn Al a
90 <210>944
- 438 031651 <211>91 <212> БЕЛОК <21В> Pseudomonas plecoglossicida <400> 944
Met Lys Leu Thr lie Thr Asn Gly Al a Ser Thr Ser lie Glu lie Al a
1 5 10 15
val Ser Al a Trp Arg Asn Asp Gly Asn Asp Ser Tyr Tyr Ser lie Al a
20 25 30
Gln Gly Glu Ser Asp Thr Trp Asp Arg Ser Asp Al a Arg Gly Tyr Leu
35 40 45
Met Al a val Lys Met Lys Ser Gln val Lys Thr Tyr Tyr lie Ser Gln
50 55 60
Thr Ser Lys ile val val Glu Asp Asn ile val Lys Asp Hi s Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Asn pro Leu Tyr Al a val Asn Asn Met
90 <210>945 <211>90 <212> БЕЛОК <21В> неизвестный <220>
<22В> неизвестный <400> 945
Met Ser lie Thr lie Thr Asn Gly Al a Ser Arg Thr val Gln lie Al a
1 5 10 15
val Ser val Trp Gly Arg Asp Gly Ser Asp Asp Tyr Tyr Al a Leu Glu
20 25 30
pro Gly Lys Gly Asp Thr Trp Gly Arg Asn Asp Pro Arg Gly Tyr Leu
35 40 45
Met Al a lie Lys Gly Gln Thr Gln Al a Gly val Tyr Tyr val Al a Phe
50 55 60
Asp Ser Gln lie val lie Glu Asp Asn Leu val Lys Asp Arg Gly Arg
65 70 75 80
Thr lie Asn Pro Leu Al a Ser Asn Asn Gln
90 <210> 946 <211> 98 <212> БЕЛОК <21В> Pseudomonas chlororaphis <400> 946
Met Lys Met Ser lie Thr val Thr Asn Gly Al a Ser Thr val val Asn
1 5 10 15
val Ala lie Ser Thr Trp Glu Lys Asp Gly Ser Asp Al a Tyr Tyr Pro
20 25 30
Leu Gln Gln Gly Ser Gly Asp Thr Trp Lys Arg Ser Asp Pro Arg Gly
35 40 45
Tyr Leu Met Al a lie Gln Asp Lys Ser Gln Thr Thr Glu Tyr Tyr val
50 55 60
Ser Cys Asn Ser val lie val lie Glu Asp Asn val val Lys Asp Hi s
65 70 75 80
Gly Arg Thr Leu Asn Pro val Al a Al a Al a Gly Lys Lys Lys val Al a
85 90 95
Asn Ala
<210> 947
<211> 85
<212> БЕЛОК
<213> Paludibacteriurn yongneupense
<400> 947
Met lie Lys val lie Asn Lys Thr Gly Leu Pro lie Lys val Ser lie
1 5 10 15
- 439 031651
Asn Hi s Trp Gly Ser Gly Gly Asp Thr Ser Tyr Phe Thr lie Glu Lys
20 25 30
Asp Lys Al a G1 u Thr Trp Asp Arg Thr Asp Al a Arg Gly Phe val Met
35 40 45
Al a Thr lie val Lys Gly val Gly Arg Ser G1 n lie val Phe Al a Gly
50 55 60
Thr Glu val val val Asp Glu Lys Tyr Leu Ser Gly Ser val Lys Thr
65 70 75 80
Glu Al a val G1 u Al a
85
<210>
<211>
<212>
<213>
948
БЕЛОК
Burkholderi a thai1andensi s <400>
948
Met Ser lie Asn Hi s Trp Gly Thr Asp Gly Asp Thr Asn Pro Phe Lys
1 5 10 15
Met Al a Pro Gly Al a Ser Asp Ser Trp Asn Arg Thr Asp Leu Arg Gly
20 25 30
Tyr val Met Tyr val Gln Leu Gly Gly Ser Al a Thr Pro Tyr Tyr val
35 40 45
Leu Ser Thr Ser Asn lie val ile Tyr Asp Asp Lys val Thr Asp Ser
50 55 60
Gly Gln Thr Leu Leu Pro Al a Asn Gln Arg Phe Gly
65 70 75
<210>
<211>
<212>
<213>
949
258
ДНК
Pseudomonas chlororaphis
949 <400> atgggtatta ggtaacgacg aggtccgaca tacgttcagg ttgatcgagc ccgttaaaaa gagacaccaa gccgtggctt ccagcagcaa cgctctcg caattcgtcc cttcttttcc cgtgctttcc aattgaagtc aaccccatcg gtcggtaacg ctgaagaaga gacaacaacg aagttgccat gcaaacagga atggcgcgca ccgtgaaaga caatcgttgg aacctgggac acacccgtac tcagggccag
120
180
240
258 <210>
<211>
<212>
<213>
950
258
ДНК
Pseudomonas brassicacearum
950 <400> atgggcatta ggcagcgacg aggtccgaca tacgttcagg cctattcaac ctgttaaaaa gagataccag gccgcggttt ccagtagcag ccctctcc taactcatcc cttcttttca tgtactctcc aattgaagtc aacaccattg atcgctaacg ttgaagaaaa gacaataatg aagttgcggt gcaagcagga atggagcaca cagtgaagga caatcattgg aagctgggac acatccgtac tcagggccag
120
180
240
258 <210>
<211>
<212>
<213>
951
258
ДНК
Pseudomonas sp. QTF5
951 <400> atgggcatta ggagatgacg cggtctgacg tacgttcagg gctatttatc ccgttacaaa gggatacgag atcgcggctt ccagtagcaa ctctagcc taactcatca ttttttttca tgttctctct tattaaagtt cacactattg atagctaacg ttacaaaaaa gacaataacg aagttgcaat gcaaaaacga atggagcaca gagtaacgga caatcagtgg aagctgggat atatccgtat tcagggcgag
120
180
240
258 <210>
<211>
<212>
<213>
952
258
ДНК
Halomonas anticariensis
- 440 031651 <400> 952 atgactatcc aagtcacaaa taacgcccaa caagaggttg aagttgccat caatgagtgg ggtaccggcg gcgataccag ctttttcaca ttacatcaag gcaagtccga gaaatgggat cgcgtcgatg aacgcggctt tgtgatggca gtgaaacata ggggggcgca acgcccatat tacgtccagc atcaaagcaa cattaacatc tatgaccata gagttaccga tcacgactcg attattcgta cgatagac
120
180
240
258 <210>953 <211>270 <212> ДНК <213> Burkholderia pseudomallei <400>953 atggcgataa gcgtcaaaaa cagcgcatcg aacacggttg aagtgtcgat caatcactgg60 ggaacggacg gagacaccaa gccgttcaag atggcgcccg gagccagcga ttcctggaat120 cgcaccgacc tacgtggctt cgtcatgtat gtgcagctgg gcgggtcggc gacgccgtac180 tatgtgctga gcaccagcaa tatcgtgatc tacgacgaca aggtgacgga tagcgggcaa240 acgctccttc ccgcaaacaa gcgttttggc270 <210>954 <211>273 <212> ДНК <213> Pseudomonas entomophila <400>954 atgaagctca cgatcaccaa tggcgcaagc acatcgattg atattgcagt gagtgcatgg60 cgtaacgacg gcaatgacag ttactactcg atagctcaag gagagtctga tacctgggac120 cgcagcgacg ccagagggta cttgatggcg gtaaaaatga aatcccaagt aaaaacctac180 tatatttctc aagccagcaa gatcgttgtt gaagacaacc ttgtgaaaga ccacggtcaa240 actattaatc cgctgtacgc agtaaatagc atg273 <210>955 <211>273 <212> ДНК <213> Pseudomonas entomophila <400>955 atgaagctca cgatcaccaa tggcgcaagc acatcgattg aaattgcagt gagtgcatgg60 cgtaacgacg gcaatgacag ttactactcg atagctcaag gggaatctga tacctgggac120 cgcagcgacg caagagggta cttgatggcg gtaaaaatga aatcccaggt aaaaacctac180 tacatatccc aaaccagcaa gatagttgtt gaagacaaca ttgttaaaga ccacggccaa240 acccttaacc cgctatacgc agcaaacaac atg273 <210>956 <211>291 <212> ДНК <213> Pseudomonas chlororaphis <400>956 atgagcatca cagtcaccaa cggggcaagc acagtagtta acgtggcaat cagtacatgg60 gagaaagacg gcagtgacgc ttactggcca ttagagcaag gcaaaggtga tacctggaaa120 cgtagtgacc caaggggtta cttgatggcc atacaggata aatcccaaac aactgaatac180 tacgtcacct gcaacagtgt aattgtcatc gaagacaacc tcgtgaagga tcacggccgg240 actcttaacc cagtcgccgc ggccgggaag aaaaatgtgg taaatgcgta a291 <210>957 <211> 288 <212> ДНК <213> Pseudomonas chlororaphis <400>957 atgagcatca cagtcacaaa cggtgcaagc gcagtagtta aagtagccat tagcacatgg60 cagaaagacg gcaatgacga tttctggtca ttagatcaag gcgcaagcga tacctggaaa120 cgtagcgaca caaggggcta cttgatggcc gtgcaagaca agtcccgcac aactgaatac180 tacgtttcct gcaacagcgc catcgttatc gaagacaacc tcgtcaaaga tcacggtcga240 actcttaacc cactcattgc ggccgggcag aagaacgtgg cgaatgcg288
- 441 031651
<210> 958
<211> 267
<212> ДНК
<21В> Burkholderia multivorans
<400> 958
atggcaatta ctgtgacgaa caaatcggca gaagatgtcc aggtgtccat cagcacctgg 60
ggcaatcacg gcgacccgaa tccgtacccg gtcaagaccg gggtcacgga aagctgggac 120
cgcaaggacc cgcgcggctt cgtgctgtac ctgcagaaag gggcgacggc gcagccgtac 180
tacgtacagg ccggcgcagc aatcgtgttc ttctccttcc aggaggtcac ggacaacggc 240
gagccgatcc acccggtgag tgcgccg 267
<210> 959
<211> 270
<212> ДНК
<213> Burkholderia pseudomallei
<400> 959
atggcgataa gcgtcaaaaa cagcgcatcg aacacggttg aagtgtcgat caatcactgg 60
ggaacggacg gagacaccaa gccgttcaag atggcgcccg gagccagcga ttcctggaat 120
cgcaacgacc tacgtggctt cgtcatgtat gtgcagttgg gcgggtcggc gacgccgtac 180
tatgtgctga gcaccagtaa tatcgtgatc tacgacgaca aggtgacgga tagcgggcaa 240
acgctccttc ccgcaaacaa gcgttttggc 270
<210> 960
<211> 276
<212> ДНК
<213> Burkholderia pseudomallei
<400> 960
atggcgataa gcgtcaaaaa cagcgcatcg aacacggttg aagtgtcgat caataactgg 60
gaaacggacg tagacaccag caccaagccg ttcaagatgg cgcccggagc cagcgattcc 120
tggaatcgca ccgacctacg tggctacgtc atctatgtgc agctgggcgg gtcggcgacg 180
ccgtactatg tgatgagcac cagcaatatc gtgatctacg acgacaaggt gacggatagc 240
gggcaaacgc tccttcccgc aaacaagcgt tttggc 276
<210> 961
<211> 285
<212> ДНК
<213> Pseudomonas chlororaphis
<400> 961
atgagcatca aaatcacaaa cggggccacc agagaggtcc aagtcgcagt cagcttttgg 60
tatacagatg gtaaagccgg tgacgtcagt gatacctatt acccactgaa gcccggcagt 120
ggtgaagaat ggaaacgcaa tgacccaaga ggttacttga tgaccataaa aggccaatcc 180
caagcaggtg tatattacgt tgcctttgac agcgaaatcc tcatagaaga caaccttgta 240
aaggaccgcg gcgaaaccat tacccgacta tctttgaagt ttgaa 285
<210> 962
<211> 288
<212> ДНК
<213> Pseudomonas chlororaphis
<400> 962
atgagcatca cagtcacaaa cggagcaagc gcagtagtta acgtggcaat cagcacatgg 60
gagaaagacg gcagtgacgc ttactaccca ttagagcaag gcagcggtga cacctggaaa 120
cgtagtgacc caaggggtta cttgatggcc atacaggata aatcccaaac aactgaatac 180
tacgtctcct gcaacagtgc aattgtcatc gaagacaacc tcgtaaagga tgacggccga 240
actcttaacc cagtcgctgc ggccgggaag aaaaaagtgg taaatgcg 288
<210> 963
<211> 273
<212> ДНК
<213> Pseudomonas mosselii
<400> 963
atgaagctca cgatcaccaa tggcgcaagc acctcagttg acattgcagt gagtacatgg 60
cgtaacgacg gcaatgacag ctactactca atagctcaag gggaatctga tacctgggac 120
- 442 031651
cgcagcgacg caagagggta cttgatggcg tacatctccc aaaccagcaa gatcgttgtt gtaaaaatga aatcccaggt aaaaacctac ccacggtcaa 180 240 273
gaagacaacc atg ttgtgaaaga
acgcttaatc cgctatatgc agtgaataac
<210> 964
<211> 228
<212> ДНК
<213> Burkholderia thai1andensis
<400> 964
gtgtcgatca atcactgggg aacggacggc gacaccaagc cgttcaagat ggcgcccgga 60
gccagcgatt cctggaattg caccgacttt cgcggctacg tcatgtatgt gcagctgggc 120
gggtcggcga cgccgtacta tgtgctgagc accagcaata tcgtgatcta cgacgacaag 180
gtgacggata gcgggcaaac gctccttccc gcaaacaagc gttttggc 228
<210> 965
<211> 273
<212> ДНК
<213> Pseudomonas protegens
<400> 965
atgggtacaa tctcggtctc aaacggtgca agcggggaaa ttaatgtttc agttagcaca 60
tggcaaaaag acggtgttga cacttatttc acaatagccc cgggcaactt tgaaacttgg 120
acgcgcaacg atccaagagg ctatttaatg gccgtaaatg gcaacaccaa gaaaaacgaa 180
tactacatct cccccaccag caaaatagtt atcgaggaca accttgtaaa ggaccacggc 240
caaactattt acccattaat tctagctaac gcg 273
<210> 966
<211> 276
<212> ДНК
<213> Pseudomonas plecoglossicida
<400> 966
atgaagctca cgatcaccaa tggcgcaagc acctcagttg acattgcagt gagtacatgg 60
cgtaacgacg gtaatgacag ctactactca atagctcaag gggaatctga tacttgggac 120
cgcagcgacg caagagggta cttgatggcg gtaaaaatga aatcccaagt aaaaacctac 180
tacatctccc aaaccagtaa gatcgttgtt gaagacaaca ttgtaaaaga ccacggccaa 240
acgcttaatc cgctatacgc attaaataac atgtag 276
<210> 967
<211> 270
<212> ДНК
<213> неизвестный
<220>
<223> неизвестный
<400> 967
atgagcatca caatcacaaa cggagcaagc agaacggtcc aaattgcagt cagcgtatgg 60
gggcgagacg gcagtgacga ttattatgca ctggagcccg gcaaaggtga tacatggggg 120
cgtaatgacc caagaggtta cttgatggcc ataaaaggcc agacccaagc aggtgtatat 180
tacgttgcct ttgacagtca aatcgtcata gaagacaacc ttgtaaagga tcgcggccga 240
actatcaacc cactcgcttc gaacaatcaa 270
<210> 968
<211> 288
<212> ДНК
<213> Pseudomonas chlororaphis
<400> 968
atgagcatca cagtcacaaa cggggcaagc acagtagtta acgtggcaat cagtacatgg 60
gagaaagacg gcagtgacgc ttactaccca ttacagcaag gcagcggtga cacctggaaa 120
cgtagtgacc caaggggtta cttgatggcc attcaggata aatcccaaac aactgaatac 180
tacgtctcct gcaacagtgt aattgtcatc gaagacaacg tcgtgaagga tcacggccgg 240
actcttaacc cagtcgctgc ggccgggaag aaaaaagtgg caaatgcg 288
<210> 969
<211> 255
<212> ДНК
- 443 031651 <213> Paludibacteriurn yongneupense <400> 969 atgatcaaag ttatcaataa aaccggtctt ccgatcaagg tttcgatcaa ccactgggga agcggcggcg atacgagcta cttcacgata gaaaaagaca aggctgaaac gtgggaccgc actgacgccc gtggcttcgt gatggcaacg atcgtcaagg gcgtcggtcg ctcacaaatc gtgttcgcag gcacggaggt cgtcgttgat gaaaaatatc tctcaggctc ggttaaaacc gaggcagtag aagca
120
180
240
255 <210>970 <211> 228 <212> ДНК <213> Burkholderia thai1andensis <400>970 gtgtcgatca atcactgggg aacggacgga gacaccaatc cgttcaagat ggcgcccgga60 gccagcgatt cctggaatcg caccgacctt cgcggctacg tcatgtatgt gcagttgggc120 gggtcggcga cgccgtacta tgtgctgagt accagcaata tcgtgatcta cgacgacaag180 gtgacggata gcgggcaaac gctccttccc gcaaaccagc gttttggc228 <210>971 <211>38 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400>971 atgatcatat gggtattacc gttaaaaaca attcgtcc38 <210>972 <211>38 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400>972 atggatcctt acgagagcgg ctcgatcaac tggccctg38 <210>973 <211>38 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400>973 atgatcatat gggcattact gttaaaaata actcatcc38 <210>974 <211>35 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400>974 atggatcctt aggagagggg ttgaataggc tggcc35 <210>975 <211>34 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400> 975
- 444 031651 atgatcatat gaagctcacg atcaccaatg gcgc34 <210>976 <211>35 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400>976 atggatcctt acatgttgtt tgctgcgtat agcgg35 <210>977 <211>37 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400>977 atgatcatat gagcatcaca gtcacaaacg gagcaag37 <210>978 <211>36 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400>978 atggatcctt acgcatttac cacttttttc ttcccg36 <210>979 <211>37 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400>979 atgatcatat gagcatcaaa atcacaaacg gggccac37 <210>980 <211>39 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> праймер для клонирования <400> 980 atggatcctt attcaaactt caaagatagt cgggtaatg 39
- 445 031651

Claims (51)

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1 50 (1) --MGITVTNNSSNPIEVAINHWGSDG—DTSFFSVGNGKQETWDRSDSRG (1) —MGITVKNNSSNTIEVAVNHWGKDG—DTSFFSIANGKQESWDRSDSRG (1) --MGITVTNKSSKKIEVSINKWGSDG—DTTFFGVDSGKQESWDRSDDRG (1) --MGITVTNKSSKKIEVSVNKWGSDG—DTTFFGIDSGKQESWDRSDDRG (1) --MGITVTNKSSKKIEASINKWGSDG—DTKFFGIDSGKQESWDRSDDRG (1) --MGITVTNKSSKKIEASINKWGSDG—DTKFFGIDSGKQESWDRSDDRG (1) --MGITVTNKSSKKIEASINKWGSDG—DTKFFGIDSGKQESWDRSDDRG (1) --MSITVKNNTSNIIEVAINQWDTDG—DTRYSPLAAGASDKWVRKDSRG (1) --MKLTITNGASTSIDIAVSAWRNDG--NDSYYSIAQGESDTWDRSDARG (1) --MAISVKNSASNTVEVSINHWGTDG—DTKPFKMAPGASDSWDRNDLRG (1) --MSITITNGASQTVQIAVSVWGRDG—SDDYYSLEPGKGDTWGRNDPRG (1) MNMSITVTNGASTWNVAISTWEKDG—SDAYWPLEQGKGDTWKRSDPRG (1) --MSITITNGASRTVQIAVSVWGRDG—SDDYYSLEPGKGDTWGRNDPRG (1) --MSITITNGASRTVQIAVSVWGRDG—SDDYYSLEPGKGDTWGRNDPRG (1) --MSISITNAGSREIQVAVSTWSTDSDISDAYYSLAPDKGDKWKRNDPRG (1) - -MS I TVTNGASTWNVAI STWEKDG- - SDAYYPLEQGNGDTWKRSDPRG (1) ----MKIINNTQSNIIVSVNKWGDDG—QTGRFTVSPGRSGSWNRTDERG (1) ---MIIVKNSSNKVTKVSINKWGKDG—NTGYWDINPGDTASWNRTDGRG (1) MNMSITVTNGASAWNVAISTWEKDG--SDAYYPLEQGSGDTWKRSDPRG
PIP-72Aa (47) PIP-72Ba (47) PIP-72Ca (47) PIP-72Cb (47) PIP-72Da (47) PIP-72Db (47) PIP-72DC (47) PIP-72Ea (47) PIP-72Fa (47) GBP A3175 (47) SRBS 294080 (47) JG43047 (49) SwiRh 4910 (47) PIP-72Ff (47) PFL_6283 (49) PIP-72Gb (47) XBJ1 1078 (45) plu2373 (46) PIP-72Ge (49)
1. ДНК-конструкция, содержащая гетерологичную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид PIP-72 с инсектицидной активностью против западного кукурузного жука (Diabrotica virgifera virgifera), где кодируемый полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична SEQ ID NO: 2.
2. ДНК-конструкция по п.1, где кодируемый полипептид PIP-72 содержит 1-45 аминокислотных замен в положении 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 56, 57, 58, 59, 60, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85 или 86 относительно соответствующей аминокислоты SEQ ID NO: 2.
3. ДНК-конструкция по п.1, где кодируемый полипептид PIP-72 содержит 1-45 аминокислотных замен в положении 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 17, 18, 19, 20, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 56, 58, 60, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85 или 86 относительно соответствующей аминокислоты SEQ ID NO: 2.
4. ДНК-конструкция по п.1 или 3, где кодируемый полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 846:
Met 1 Xaa Xaa Xaa Xaa 5 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 10 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 15 Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 40 45 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Gln Xaa Pro Xaa Tyr Val Xaa Xaa 50 55 60 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 65 70 75 80
Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа где Xaa в положении 2 представляет собой Gly, Ala, Cys, Asp, Glu, Ile, Lys, Leu, Asn, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 3 представляет собой Ile или Trp;
Xaa в положении 4 представляет собой Thr, Ala, Asp, Glu, His, Ile, Lys, Leu, Arg, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 5 представляет собой Val, Ala, Cys, Gly, His, Ile или Tyr;
Xaa в положении 6 представляет собой Thr, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Trp или Tyr;
Xaa в положении 7 представляет собой Asn, Ala или Val;
Xaa в положении 8 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Gln, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 9 представляет собой Ser, Ala, Cys, Gly или Thr;
Xaa в положении 10 представляет собой Ser, Ala, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr или Trp;
Xaa в положении 11 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Gln, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 12 представляет собой Pro, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Lys, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 13 представляет собой Ile, Asn, Gln или Val;
Xaa в положении 14 представляет собой Glu, Ala, Cys, Phe, His, Lys или Gln;
Xaa в положении 15 представляет собой Val, Ala, Cys, Ile, Met или Arg;
Xaa в положении 17 представляет собой Ile, Glu или Val;
Xaa в положении 18 представляет собой Asn или Ser;
Xaa в положении 19 представляет собой His, Ala, Glu, Lys, Leu, Pro, Arg, Ser или Tyr;
Xaa в положении 20 представляет собой Trp, Ala или Thr;
Xaa в положении 22 представляет собой Ser, Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 23 представляет собой Asp, Ala, Gly, His, Lys, Met, Asn, Gln, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 24 представляет собой Gly, Asp или Phe;
Xaa в положении 25 представляет собой Asp, Ala, Glu, Phe, Asn или Gln;
Xaa в положении 26 представляет собой Thr, Glu или Pro;
- 446 031651
Xaa в положении 27 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Asn, Gln, Arg или Thr;
Xaa в положении 28 представляет собой Phe, Pro, Trp или Tyr;
Xaa в положении 29 представляет собой Phe, Ala, Cys, Ile, Leu, Gln, Arg, Trp или Tyr;
Xaa в положении 30 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn,
Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 31 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 32 представляет собой Gly, Ala, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 33 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 34 представляет собой Gly, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Tyr;
Xaa в положении 35 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 36 представляет собой Gln, Ala, Cys, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 37 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 38 представляет собой Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 39 представляет собой Trp или Phe;
Xaa в положении 40 представляет собой Asp, Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 42 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 44 представляет собой Ser, Ala, Asp, Glu, Gly, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 45 представляет собой Arg, Lys или Ser;
Xaa в положении 46 представляет собой Gly, Ala или Gln;
Xaa в положении 47 представляет собой Phe, Cys, Val или Tyr;
Xaa в положении 48 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 49 представляет собой Leu, Cys, Phe, Met, Arg или Tyr;
Xaa в положении 50 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Ile, Met, Pro, Gln, Thr или Val;
Xaa в положении 51 представляет собой Leu, Ala, Cys, Met или Val;
Xaa в положении 52 представляет собой Lys, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Ser, Thr, Trp или Tyr;
Xaa в положении 53 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 54 представляет собой Asn, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Lys, Met, Gln, Arg, Ser или Trp;
Xaa в положении 56 представляет собой Ala, Gly, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser или Thr;
Xaa в положении 57 представляет собой Gln, Glu, Leu, Met, Ser или Thr;
Xaa в положении 58 представляет собой His, Ala, Asp, Phe, Leu, Met, Asn, Arg, Trp или Tyr;
Xaa в положении 60 представляет собой Tyr, Glu или Phe;
Xaa в положении 63 представляет собой Gln, Cys, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 64 представляет собой Ala, Phe, Gly, His, Arg, Ser или Tyr;
Xaa в положении 65 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Thr или Val;
Xaa в положении 66 представляет собой Ser, Ala или Gly;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 68 представляет собой Ile Asp, Leu или Val;
Xaa в положении 69 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 70 представляет собой Val, Cys или Ile;
Xaa в положении 71 представляет собой Asp, Ala, Cys, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 72 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Trp;
Xaa в положении 73 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 74 представляет собой Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
- 447 031651
Xaa в положении 75 представляет собой Val, Cys, Ile или Leu;
Xaa в положении 76 представляет собой Lys, Ala, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 77 представляет собой Asp Tyr;
Xaa в положении 78 представляет собой Gln, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 79 представляет собой Gly, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp или Tyr;
Xaa в положении 80 представляет собой Arg, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 81 представляет собой Leu, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 82 представляет собой Ile, Ala, Leu, Met, Arg или Val;
Xaa в положении 83 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 84 представляет собой Pro, Ala, Cys, Glu, Ile, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 85 представляет собой Leu, Cys, Gly или Val и
Xaa в положении 86 представляет собой Ser, Ala, Ile, Thr или Val.
5. ДНК-конструкция по пп.1 или 2, где кодируемый полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 849:
Met 1 Хаа Хаа Хаа Хаа 5 Хаа Хаа Хаа Хаа Ser 10 Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 15 Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 20 Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 25 Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 30 Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 35 Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 40 Агд Хаа Asp Хаа Хаа 45 Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 50 Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 55 Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 60 Туг Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 65 70 75 80
Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа где Xaa в положении 2 представляет собой Gly, Ala, Cys, Asp, Glu, Ile, Lys, Leu, Asn, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 3 представляет собой Ile, Leu, Val или Trp;
Xaa в положении 4 представляет собой Thr, Ala, Asp, Glu, His, Ile, Lys, Leu, Arg, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 5 представляет собой Val, Ala, Cys, Gly, His, Ile, Leu или Tyr;
Xaa в положении 6 представляет собой Thr, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Trp или Tyr;
Xaa в положении 7 представляет собой Asn, Ala или Val;
Xaa в положении 8 представляет собой Asn, Lys, Gly, Ser, Gln, Arg, Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, His, Ile, Leu, Met или Val;
Xaa в положении 9 представляет собой Ser, Ala, Cys, Gly или Thr;
Xaa в положении 11 представляет собой Asn, Lys, Thr, Gln, Arg, Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Val или Tyr;
Xaa в положении 12 представляет собой Pro, Thr, Lys, Ser, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Leu, Asn, Gln, Arg, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 13 представляет собой Ile, Asn, Gln, Leu или Val;
Xaa в положении 14 представляет собой Glu, Ala, Cys, Phe, His, Lys, Asp или Gln;
Xaa в положении 15 представляет собой Val, Ala, Ile, Leu, Cys, Met или Arg;
Xaa в положении 16 представляет собой Ala или Ser;
Xaa в положении 17 представляет собой Ile, Glu, Leu или Val;
Xaa в положении 18 представляет собой Asn, Gln, Thr или Ser;
Xaa в положении 19 представляет собой His, Lys, Ala, Arg, Glu, Leu, Pro, Ser или Tyr;
Xaa в положении 20 представляет собой Trp, Ala или Thr;
Xaa в положении 21 представляет собой Gly, Arg или Lys;
Xaa в положении 22 представляет собой Ser, Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 23 представляет собой Asp, Ala, Gly, His, Lys, Met, Asn, Gln, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 24 представляет собой Gly, Asp или Phe;
- 448 031651
Xaa в положении 25 представляет собой Asp, Ala, Glu, Phe, Asn или Gln;
Xaa в положении 26 представляет собой Thr, Glu, Asp, Ser или Pro;
Xaa в положении 27 представляет собой Ser, Thr, Lys, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Asn или
Gln;
Xaa в положении 28 представляет собой Phe, Tyr, Pro или Trp;
Xaa в положении 29 представляет собой Phe, Ala, Cys, Ile, Leu, Gln, Arg, Trp или Tyr;
Xaa в положении 30 представляет собой Ser, Gly, Lys, Thr, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 31 представляет собой Val, Ile, Met или Leu;
Xaa в положении 32 представляет собой Gly, Ala, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 33 представляет собой Asn, Ser, Gln, Pro, Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Arg, Val или Tyr;
Xaa в положении 34 представляет собой Gly, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Tyr;
Xaa в положении 35 представляет собой Lys, Glu, Ala, Cys, Asp, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 36 представляет собой Gln, Ala, Cys, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 37 представляет собой Glu, Asp, Ala, Cys, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 38 представляет собой Thr, Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 39 представляет собой Trp или Phe;
Xaa в положении 40 представляет собой Asp, Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 42 представляет собой Ser, Asn, Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Arg, Val, Trp, Tyr или Gln;
Xaa в положении 44 представляет собой Ser, Asp, Ala, Leu, Thr, Glu, Ile, Ala, Gly, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Val, Tyr или Val;
Xaa в положении 45 представляет собой Arg, Lys или Ser;
Xaa в положении 46 представляет собой Gly, Ala или Gln;
Xaa в положении 47 представляет собой Phe, Tyr Cys, Val или Trp;
Xaa в положении 48 представляет собой Leu, Met, Ile, Cys, Phe, Met, Arg, Tyr или Val;
Xaa в положении 49 представляет собой Leu, Met, Ile или Val;
Xaa в положении 50 представляет собой Ser, Ala, Tyr, Cys, Asp, Ile, Met, Pro, Gln, Val или Thr;
Xaa в положении 51 представляет собой Leu, Val, Ala, Cys, Met или Ile;
Xaa в положении 52 представляет собой Lys, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Ser, Thr, Gln, Trp или Tyr;
Xaa в положении 53 представляет собой Lys, Arg, Met, Leu, Ile, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Asn, Gln, Ser, Thr, Tyr или Val;
Xaa в положении 54 представляет собой Asn, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Lys, Met, Gln, Arg, Ser или Trp;
Xaa в положении 55 представляет собой Gly, Ser или Thr;
Xaa в положении 56 представляет собой Ala, Thr, Gln, Ser, Gly, Leu, Pro, Arg или Asn;
Xaa в положении 57 представляет собой Gln, Glu, Leu, Met, Ser, Val, Ala, Asn, Ile или Thr;
Xaa в положении 58 представляет собой His, Ala, Lys, Asp, Phe, Leu, Met, Asn, Arg, Trp, Tyr или Thr;
Xaa в положении 59 представляет собой Pro, Thr или Ser;
Xaa в положении 60 представляет собой Tyr, Glu или Phe;
Xaa в положении 62 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 63 представляет собой Gln, Ser, Cys, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 64 представляет собой Ala, Gln, Asn, Phe, Gly, His, Arg, Ser или Tyr;
Xaa в положении 65 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Val или Thr;
Xaa в положении 66 представляет собой Ser, Ala или Gly;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Gln, Asn или Arg;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 68 представляет собой Ile Asp, Leu или Val;
Xaa в положении 69 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 70 представляет собой Val, Ile, Cys или Leu;
Xaa в положении 71 представляет собой Asp, Glu, Tyr, Ala, Cys, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Ser, Thr,
- 449 031651
Val или Trp;
Xaa в положении 72 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser,
Thr, Val, His или Trp;
Xaa в положении 73 представляет собой Asn, Ser, Asp, Gln, Thr, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Val,
Tyr или Glu;
Xaa в положении 74 представляет собой Ala, Thr, Met, Ile, Lys, Ser, Leu, Val, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Asn, Gln, Tyr или Arg;
Xaa в положении 75 представляет собой Val, Cys, Ile или Leu;
Xaa в положении 76 представляет собой Lys, Ala, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 77 представляет собой Asp Tyr;
Xaa в положении 78 представляет собой Gln, His, Ser, Asn, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Val, Tyr или Thr;
Xaa в положении 79 представляет собой Gly, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp или Tyr;
Xaa в положении 80 представляет собой Arg, Glu, Gln, Lys, Asp, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Ser, Thr, Val, Tyr или Asn;
Xaa в положении 81 представляет собой Leu, Pro, Thr, Ile, Val, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His или Ser;
Xaa в положении 82 представляет собой Ile, Ala, Leu, Met, Arg и Val;
Xaa в положении 83 представляет собой Glu, His, Asn, Leu, Gln, Ile, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, Lys, Pro, Arg, Ser, Thr, Tyr или Val;
Xaa в положении 84 представляет собой Pro, Ala, Cys, Glu, Ile, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 85 представляет собой Leu, Val, Cys, Gly или Ala и
Xaa в положении 86 представляет собой Ser, Ala, Tyr, Asn, Ile, Val или Thr.
6. ДНК-конструкция по любому из пп.1-3, где кодируемый полипептид PIP-72 содержит аминокислотный мотив, представленный положениями 37-51 SEQ ID NO: 846, SEQ ID NO: 847, SeQ ID NO: 848 или SEQ ID NO: 849.
7. ДНК-конструкция, содержащая полинуклеотид, кодирующий полипептид, последовательность которого по меньшей мере на 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 929 - SEQ ID NO: 931, SEQ ID NO: 937, SEQ ID NO: 938, SEQ ID NO: 942, SEQ ID NO: 947 или SEQ ID NO: 948; и гетерологичную регуляторную последовательность, где полинуклеотид функционально связан с гетерологичной регуляторной последовательностью.
8. ДНК-конструкция, содержащая химерную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный полипептид PIP-72, содержащий, по меньшей мере, первую составляющую, содержащую часть первого полипептида PIP-72, и вторую составляющую, содержащую комплементарную часть второго полипептида PIP-72, где первый полипептид PIP-72 и второй полипептид PIP-72 характеризуются отличающимися аминокислотными последовательностями в соответствующих частях.
9. Выделенный полинуклеотид, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид PIP-72 с инсектицидной активностью против западного кукурузного жука (Diabrotica virgifera virgifera), где кодируемый полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична SEQ ID NO: 2.
10. Выделенный полинуклеотид по п.9, где кодируемый полипептид PIP-72 содержит 1-45 аминокислотных замен в положении 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 56, 57, 58, 59, 60, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85 или 86 относительно соответствующей аминокислоты SEQ ID NO: 2.
11 представляет собой Asn, Lys, His или Thr;
11. Выделенный полинуклеотид по п.9, где кодируемый полипептид PIP-72 содержит 1-45 аминокислотных замен в положении 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 17, 18, 19, 20, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 56, 58, 60, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85 и 86 относительно соответствующей аминокислоты SEQ ID NO: 2.
12 представляет собой Pro, Thr, Lys или Ser;
12. Выделенный полинуклеотид по п.9 или 11, где кодируемый полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 846:
- 450 031651
Met 1 Xaa Xaa Xaa Xaa 5 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 10 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 15 Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 40 45 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Gln Xaa Pro Xaa Tyr Val Xaa Xaa 50 55 60 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 65 70 75 80
Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа где Xaa в положении 2 представляет собой Gly, Ala, Cys, Asp, Glu, Ile, Lys, Leu, Asn, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 3 представляет собой Ile или Trp;
Xaa в положении 4 представляет собой Thr, Ala, Asp, Glu, His, Ile, Lys, Leu, Arg, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 5 представляет собой Val, Ala, Cys, Gly, His, Ile или Tyr;
Xaa в положении 6 представляет собой Thr, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Trp или Tyr;
Xaa в положении 7 представляет собой Asn, Ala или Val;
Xaa в положении 8 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Gln, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 9 представляет собой Ser, Ala, Cys, Gly или Thr;
Xaa в положении 10 представляет собой Ser, Ala, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr или Trp;
Xaa в положении 11 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Gln, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 12 представляет собой Pro, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Lys, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 13 представляет собой Ile, Asn, Gln или Val;
Xaa в положении 14 представляет собой Glu, Ala, Cys, Phe, His, Lys или Gln;
Xaa в положении 15 представляет собой Val, Ala, Cys, Ile, Met или Arg;
Xaa в положении 17 представляет собой Ile, Glu или Val;
Xaa в положении 18 представляет собой Asn или Ser;
Xaa в положении 19 представляет собой His, Ala, Glu, Lys, Leu, Pro, Arg, Ser или Tyr;
Xaa в положении 20 представляет собой Trp, Ala или Thr;
Xaa в положении 22 представляет собой Ser, Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 23 представляет собой Asp, Ala, Gly, His, Lys, Met, Asn, Gln, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 24 представляет собой Gly, Asp или Phe;
Xaa в положении 25 представляет собой Asp, Ala, Glu, Phe, Asn или Gln;
Xaa в положении 26 представляет собой Thr, Glu или Pro;
Xaa в положении 27 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Asn, Gln, Arg или Thr;
Xaa в положении 28 представляет собой Phe, Pro, Trp или Tyr;
Xaa в положении 29 представляет собой Phe, Ala, Cys, Ile, Leu, Gln, Arg, Trp или Tyr;
Xaa в положении 30 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 31 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 32 представляет собой Gly, Ala, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 33 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 34 представляет собой Gly, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Tyr;
Xaa в положении 35 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 36 представляет собой Gln, Ala, Cys, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 37 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 38 представляет собой Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln,
- 451 031651
Arg, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 39 представляет собой Trp или Phe;
Xaa в положении 40 представляет собой Asp, Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln,
Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 42 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 44 представляет собой Ser, Ala, Asp, Glu, Gly, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 45 представляет собой Arg, Lys или Ser;
Xaa в положении 46 представляет собой Gly, Ala или Gln;
Xaa в положении 47 представляет собой Phe, Cys, Val или Tyr;
Xaa в положении 48 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 49 представляет собой Leu, Cys, Phe, Met, Arg или Tyr;
Xaa в положении 50 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Ile, Met, Pro, Gln, Thr или Val;
Xaa в положении 51 представляет собой Leu, Ala, Cys, Met или Val;
Xaa в положении 52 представляет собой Lys, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Ser, Thr, Trp или Tyr;
Xaa в положении 53 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 54 представляет собой Asn, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Lys, Met, Gln, Arg, Ser или Trp;
Xaa в положении 56 представляет собой Ala, Gly, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser или Thr;
Xaa в положении 57 представляет собой Gln, Glu, Leu, Met, Ser или Thr;
Xaa в положении 58 представляет собой His, Ala, Asp, Phe, Leu, Met, Asn, Arg, Trp или Tyr;
Xaa в положении 60 представляет собой Tyr, Glu или Phe;
Xaa в положении 63 представляет собой Gln, Cys, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 64 представляет собой Ala, Phe, Gly, His, Arg, Ser или Tyr;
Xaa в положении 65 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Thr или Val;
Xaa в положении 66 представляет собой Ser, Ala или Gly;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 68 представляет собой Ile Asp, Leu или Val;
Xaa в положении 69 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 70 представляет собой Val, Cys или Ile;
Xaa в положении 71 представляет собой Asp, Ala, Cys, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 72 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Trp;
Xaa в положении 73 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 74 представляет собой Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 75 представляет собой Val, Cys, Ile или Leu;
Xaa в положении 76 представляет собой Lys, Ala, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 77 представляет собой Asp Tyr;
Xaa в положении 78 представляет собой Gln, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 79 представляет собой Gly, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp или Tyr;
Xaa в положении 80 представляет собой Arg, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 81 представляет собой Leu, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 82 представляет собой Ile, Ala, Leu, Met, Arg или Val;
Xaa в положении 83 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 84 представляет собой Pro, Ala, Cys, Glu, Ile, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 85 представляет собой Leu, Cys, Gly или Val и
Xaa в положении 86 представляет собой Ser, Ala, Ile, Thr или Val.
13 представляет собой Ile или Val;
13. Выделенный полинуклеотид по п.9 или 11, где кодируемый полипептид PIP-72 содержит ами- 452 031651 нокислотную последовательность SEQ ID NO: 847:
Met 1 Хаа Хаа Хаа Хаа 5 Хаа Asn Хаа Хаа Ser 10 Хаа Хаа Хаа Ха. а. Хаа 15 Хаа Хаа Хаа Хаа Тгр 20 Хаа Хаа Asp Gly Хаа 25 Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 30 Хаа Хаа Хаа Gly Хаа 35 Хаа Хаа Хаа Trp Asp 40 Агд Хаа Asp Хаа Агд 45 Gly Хаа Хаа Хаа Хаа 50 Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 55 Хаа Хаа Хаа Хаа Туг 60 Туг Хаа Хаа Хаа Хаа 65 Ser Хаа Не Хаа Хаа 70 Хаа Хаа Хаа Хаа Val 75 Хаа Asp Хаа Gly Хаа 80 Хаа Хаа Хаа Pro Хаа 85 Хаа
в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в в где Xaa в положении 2 представляет собой Gly, Lys или Ala;
Xaa в положении 3 представляет собой Ile или Leu;
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
14. Выделенный полинуклеотид по п.9 или 11, где кодируемый полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 848:
Met Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Trp Xaa Xaa Asp Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Asp Arg Xaa Asp Xaa Arg Gly Xaa Xaa 35 40 45 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Tyr Xaa Xaa Xaa 50 55 60 Xaa Ser Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Val Xaa Asp Xaa Gly Xaa 65 70 75 80 Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Xaa
где Xaa в положении 2 представляет собой Gly, Lys, Ala или Arg;
Xaa в положении 3 представляет собой Ile, Leu или Val;
Xaa в положении 4 представляет собой Thr или Ser;
Xaa в положении 5 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 6 представляет собой Thr, Lys, Ser или Arg;
Xaa в положении 8 представляет собой Asn, Lys, Gly, Ser, Gln, Arg, Thr или Ala;
Xaa в положении 9 представляет собой Ser, Ala или Thr;
Xaa в положении 11 представляет собой Asn, Lys, Thr, Gln, Arg, His или Ser;
Xaa в положении 12 представляет собой Pro, Thr, Lys, Ser или Arg;
Xaa в положении 13 представляет собой Ile, Val или Leu;
Xaa в положении 14 представляет собой Glu или Asp;
Xaa в положении 15 представляет собой Val, Ala, Ile или Leu;
Xaa в положении 16 представляет собой Ala или Ser;
Xaa в положении 17 представляет собой Ile, Val или Leu;
Xaa в положении 18 представляет собой Asn, Ser, Gln или Thr;
Xaa в положении 19 представляет собой His, Lys, Ala, Gln, Asn или Arg;
Xaa в положении 21 представляет собой Gly, Arg или Lys;
Xaa в положении 22 представляет собой Ser, Lys, Asn, Thr, Arg, Asp, Glu или Gln;
Xaa в положении 25 представляет собой Asp, Asn, Glu или Gln;
Xaa в положении 26 представляет собой Thr, Asp, Ser или Glu;
Xaa в положении 27 представляет собой Ser, Thr, Lys, Asn, Gln или Arg;
Xaa в положении 28 представляет собой Phe, Tyr, Pro или Trp;
Xaa в положении 29 представляет собой Phe, Tyr или Trp;
Xaa в положении 30 представляет собой Ser, Gly, Lys, Thr или Arg;
Xaa в положении 31 представляет собой Val, Ile, Met или Leu;
Xaa в положении 32 представляет собой Gly, Ala, Asp или Glu;
Xaa в положении 33 представляет собой Asn, Ser, Gln, Pro или Thr;
Xaa в положении 35 представляет собой Lys, Glu, Ser, Arg или Thr;
Xaa в положении 36 представляет собой Gln, Ser, Asn или Thr;
Xaa в положении 37 представляет собой Glu или Asp;
Xaa в положении 38 представляет собой Thr или Ser;
Xaa в положении 42 представляет собой Ser, Asn, Thr или Gln;
Xaa в положении 44 представляет собой Ser, Asp, Ala, Leu, Thr, Glu, Ile или Val;
- 454 031651
Xaa в положении 47 представляет собой Phe, Tyr или Trp;
Xaa в положении 48 представляет собой Leu, Met, Ile или Val;
Xaa в положении 49 представляет собой Leu, Met, Ile или Val;
Xaa в положении 50 представляет собой Ser, Ala, Tyr или Thr;
Xaa в положении 51 представляет собой Leu, Val или Ile;
Xaa в положении 52 представляет собой Lys, Gln, Arg или Asn;
Xaa в положении 53 представляет собой Lys, Arg, Met, Leu, Ile или Val;
Xaa в положении 54 представляет собой Asn, Lys, Gly, Gln или Arg;
Xaa в положении 55 представляет собой Gly, Ser или Thr;
Xaa в положении 56 представляет собой Ala, Thr, Gln, Ser или Asn;
Xaa в положении 57 представляет собой Gln, Val, Ala, Asn, Leu или Ile;
Xaa в положении 58 представляет собой His, Ala, Lys, Tyr или Thr;
Xaa в положении 59 представляет собой Pro, Thr или Ser;
Xaa в положении 62 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 63 представляет собой Gln, Ser, Leu, Asn, Thr, Ile или Val;
Xaa в положении 64 представляет собой Ala, Gln, Ser, Asn или Thr;
Xaa в положении 65 представляет собой Ser или Thr;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Gln, Asn или Arg;
Xaa в положении 69 представляет собой Glu, Val, Asp, Lys, Arg, Ile или Leu;
Xaa в положении 70 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 71 представляет собой Asp, Glu, Tyr или Trp;
Xaa в положении 72 представляет собой Asn, His, Ser, Asp, Gln, Thr или Glu;
Xaa в положении 73 представляет собой Asn, Ser, Asp, Gln, Thr или Glu;
Xaa в положении 74 представляет собой Ala, Thr, Met, Ile, Lys, Ser, Leu, Val или Arg;
Xaa в положении 76 представляет собой Lys, Thr, Arg или Ser;
Xaa в положении 78 представляет собой Gln, His, Ser, Asn или Thr;
Xaa в положении 80 представляет собой Arg, Glu, Gln, Lys, Asp или Asn;
Xaa в положении 81 представляет собой Leu, Pro, Thr, Ile, Val, Ala или Ser;
Xaa в положении 82 представляет собой Ile, Leu или Val;
Xaa в положении 83 представляет собой Glu, His, Asn, Leu, Gln, Ile или Val;
Xaa в положении 85 представляет собой Leu, Val или Ala и
Xaa в положении 86 представляет собой Ser, Ala, Tyr, Asn или Thr.
14 представляет собой Glu или Asp;
15. Выделенный полинуклеотид по п.9 или 11, где кодируемый полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 849:
Met 1 Xaa Xaa Xaa Xaa 5 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 10 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 25 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 40 Arg Xaa Asp Xaa Xaa 45 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 50 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 55 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 60 Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa 65 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 70 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 75 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 80 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 85 Xaa
где Xaa в положении 2 представляет собой Gly, Ala, Cys, Asp, Glu, Ile, Lys, Leu, Asn, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 3 представляет собой Ile, Leu, Val или Trp;
Xaa в положении 4 представляет собой Thr, Ala, Asp, Glu, His, Ile, Lys, Leu, Arg, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 5 представляет собой Val, Ala, Cys, Gly, His, Ile, Leu или Tyr;
Xaa в положении 6 представляет собой Thr, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Trp или Tyr;
Xaa в положении 7 представляет собой Asn, Ala или Val;
Xaa в положении 8 представляет собой Asn, Lys, Gly, Ser, Gln, Arg, Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, His, Ile, Leu, Met или Val;
Xaa в положении 9 представляет собой Ser, Ala, Cys, Gly или Thr;
Xaa в положении 10 представляет собой Ser, Ala, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr или Trp;
Xaa в положении 11 представляет собой Asn, Lys, Thr, Gln, Arg, Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Val или Tyr;
- 455 031651
Xaa в положении 12 представляет собой Pro, Thr, Lys, Ser, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Leu,
Asn, Gln, Arg, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 13 представляет собой Ile, Asn, Gln, Leu или Val;
Xaa в положении 14 представляет собой Glu, Ala, Cys, Phe, His, Lys, Asp или Gln;
Xaa в положении 15 представляет собой Val, Ala, Ile, Leu, Cys, Met или Arg;
Xaa в положении 16 представляет собой Ala или Ser;
Xaa в положении 17 представляет собой Ile, Glu, Leu или Val;
Xaa в положении 18 представляет собой Asn, Gln, Thr или Ser;
Xaa в положении 19 представляет собой His, Lys, Ala, Arg, Glu, Leu, Pro, Ser или Tyr;
Xaa в положении 20 представляет собой Trp, Ala или Thr;
Xaa в положении 21 представляет собой Gly, Arg или Lys;
Xaa в положении 22 представляет собой Ser, Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 23 представляет собой Asp, Ala, Gly, His, Lys, Met, Asn, Gln, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 24 представляет собой Gly, Asp или Phe;
Xaa в положении 25 представляет собой Asp, Ala, Glu, Phe, Asn или Gln;
Xaa в положении 26 представляет собой Thr, Glu, Asp, Ser или Pro;
Xaa в положении 27 представляет собой Ser, Thr, Lys, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Asn или Gln;
Xaa в положении 28 представляет собой Phe, Tyr, Pro или Trp;
Xaa в положении 29 представляет собой Phe, Ala, Cys, Ile, Leu, Gln, Arg, Trp или Tyr;
Xaa в положении 30 представляет собой Ser, Gly, Lys, Thr, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 31 представляет собой Val, Ile, Met или Leu;
Xaa в положении 32 представляет собой Gly, Ala, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 33 представляет собой Asn, Ser, Gln, Pro, Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Arg, Val или Tyr;
Xaa в положении 34 представляет собой Gly, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Tyr;
Xaa в положении 35 представляет собой Lys, Glu, Ala, Cys, Asp, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 36 представляет собой Gln, Ala, Cys, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 37 представляет собой Glu, Asp, Ala, Cys, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 38 представляет собой Thr, Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 39 представляет собой Trp или Phe;
Xaa в положении 40 представляет собой Asp, Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 42 представляет собой Ser, Asn, Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Arg, Val, Trp, Tyr или Gln;
Xaa в положении 44 представляет собой Ser, Asp, Ala, Leu, Thr, Glu, Ile, Ala, Gly, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Val, Tyr или Val;
Xaa в положении 45 представляет собой Arg, Lys или Ser;
Xaa в положении 46 представляет собой Gly, Ala или Gln;
Xaa в положении 47 представляет собой Phe, Tyr Cys, Val или Trp;
Xaa в положении 48 представляет собой Leu, Met, Ile, Cys, Phe, Met, Arg, Tyr или Val;
Xaa в положении 49 представляет собой Leu, Met, Ile или Val;
Xaa в положении 50 представляет собой Ser, Ala, Tyr, Cys, Asp, Ile, Met, Pro, Gln, Val или Thr;
Xaa в положении 51 представляет собой Leu, Val, Ala, Cys, Met или Ile;
Xaa в положении 52 представляет собой Lys, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Ser, Thr, Gln, Trp или Tyr;
Xaa в положении 53 представляет собой Lys, Arg, Met, Leu, Ile, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Asn, Gln, Ser, Thr, Tyr или Val;
Xaa в положении 54 представляет собой Asn, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Lys, Met, Gln, Arg, Ser или Trp;
Xaa в положении 55 представляет собой Gly, Ser или Thr;
Xaa в положении 56 представляет собой Ala, Thr, Gln, Ser, Gly, Leu, Pro, Arg или Asn;
Xaa в положении 57 представляет собой Gln, Glu, Leu, Met, Ser, Val, Ala, Asn, Ile или Thr;
Xaa в положении 58 представляет собой His, Ala, Lys, Asp, Phe, Leu, Met, Asn, Arg, Trp, Tyr или Thr;
Xaa в положении 59 представляет собой Pro, Thr или Ser;
- 456 031651
Xaa в положении 60 представляет собой Tyr, Glu или Phe;
Xaa в положении 62 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 63 представляет собой Gln, Ser, Cys, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 64 представляет собой Ala, Gln, Asn, Phe, Gly, His, Arg, Ser или Tyr;
Xaa в положении 65 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Val или Thr;
Xaa в положении 66 представляет собой Ser, Ala или Gly;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Gln, Asn или Arg;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 68 представляет собой Ile Asp, Leu или Val;
Xaa в положении 69 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 70 представляет собой Val, Ile, Cys или Leu;
Xaa в положении 71 представляет собой Asp, Glu, Tyr, Ala, Cys, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Ser, Thr, Val или Trp;
Xaa в положении 72 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, His или Trp;
Xaa в положении 73 представляет собой Asn, Ser, Asp, Gln, Thr, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Val, Tyr или Glu;
Xaa в положении 74 представляет собой Ala, Thr, Met, Ile, Lys, Ser, Leu, Val, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Asn, Gln, Tyr или Arg;
Xaa в положении 75 представляет собой Val, Cys, Ile или Leu;
Xaa в положении 76 представляет собой Lys, Ala, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 77 представляет собой Asp Tyr;
Xaa в положении 78 представляет собой Gln, His, Ser, Asn, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Val, Tyr или Thr;
Xaa в положении 79 представляет собой Gly, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp или Tyr;
Xaa в положении 80 представляет собой Arg, Glu, Gln, Lys, Asp, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Ser, Thr, Val, Tyr или Asn;
Xaa в положении 81 представляет собой Leu, Pro, Thr, Ile, Val, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His или Ser;
Xaa в положении 82 представляет собой Ile, Ala, Leu, Met, Arg и Val;
Xaa в положении 83 представляет собой Glu, His, Asn, Leu, Gln, Ile, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, Lys, Pro, Arg, Ser, Thr, Tyr или Val;
Xaa в положении 84 представляет собой Pro, Ala, Cys, Glu, Ile, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 85 представляет собой Leu, Val, Cys, Gly или Ala и
Xaa в положении 86 представляет собой Ser, Ala, Tyr, Asn, Ile, Val или Thr.
15 представляет собой Val, Ala или Ile;
16. Выделенный полинуклеотид по любому из пп.9-15, где кодируемый полипептид PIP-72 содержит аминокислотный мотив, представленный положениями 37-51 SEQ ID NO: 846 - SEQ ID NO: 848 или SEQ ID NO: 849.
16 представляет собой Ala или Ser;
17. Выделенный полинуклеотид, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный полипептид PIP-72, содержащий, по меньшей мере, первую составляющую, содержащую часть первого полипептида PIP-72, и вторую составляющую, содержащую комплементарную часть второго полипептида PIP-72, где первый полипептид PIP-72 и второй полипептид PIP-72 характеризуются отличающимися аминокислотными последовательностями в соответствующих частях.
17 представляет собой Ile или Val;
18. Кассета экспрессии, содержащая выделенный полинуклеотид по любому из пп.9-17, функционально связанный с гетерологичным регуляторным элементом.
18 представляет собой Asn или Ser;
19. Кассета экспрессии по п.18, где регуляторный элемент представляет собой промотор, способный к экспрессии белка в растениях.
19 представляет собой His, Lys, Arg, Gln или Ala;
положении 4 представляет собой Thr или Ser; положении 5 представляет собой Val или Ile; положении 6 представляет собой Thr или Lys; положении 8 представляет собой Asn, Lys, Gly или Ser; положении 9 представляет собой Ser или Ala; положении положении положении положении положении положении положении положении положении положении 21 представляет собой Gly или Arg;
положении 22 представляет собой Ser, Lys, Asn, Asp или Thr; положении 25 представляет собой Asp или Asn;
положении 26 представляет собой Thr или Asp; положении 27 представляет собой Ser, Thr, Asn или Lys; положении 28 представляет собой Phe, Tyr или Pro; положении 29 представляет собой Phe или Tyr;
положении 30 представляет собой Ser, Gly или Lys; положении 31 представляет собой Val, Ile или Met; положении 32 представляет собой Gly, Ala или Asp; положении положении положении положении положении 38 представляет собой Thr или Ser; положении 42 представляет собой Ser или Asn; положении 44 представляет собой Ser, Asp, Ala или Leu; положении 47 представляет собой Phe или Tyr; положении 48 представляет собой Leu или Met; положении 49 представляет собой Leu или Met;
положении положении положении положении положении положении положении положении положении положении положении 62 представляет собой Val или Ile; положении 63 представляет собой Gln, Ser или Leu; положении 64 представляет собой Ala, Gln или Ser;
20. Трансгенное растение, содержащее ДНК-конструкцию по любому из пп.1-8.
21. Трансгенное растение, стабильно трансформированное ДНК-конструкцией по любому из пп.1-8.
22. Семя, полученное из растения по п.20 или 21, где семя содержит молекулу нуклеиновой кислоты.
23. Растение-потомок, полученное из семени по п.22.
24. Клетка-хозяин, трансформированная ДНК-конструкцией по любому из пп.1-8.
25. Клетка-хозяин по п.24, где клетка-хозяин представляет собой бактериальную клетку или растительную клетку.
26. Клетка-хозяин по п.24, где растительная клетка представляет собой клетку однодольного растения или двудольного растения.
27. Рекомбинантный полипептид PIP-72 с инсектицидной активностью против западного кукуруз- 457 031651 ного жука (Diabrotica virgifera virgifera), где полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична SEQ ID NO: 2.
28. Рекомбинантный полипептид PIP-72 по п.27, где полипептид PIP-72 содержит 1-45 аминокислотных замен в положении 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 56, 57, 58, 59, 60, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85 или 86 относительно соответствующей аминокислоты SEQ ID NO: 2.
29. Рекомбинантный полипептид PIP-72 по п.27, где полипептид PIP-72 содержит 1-45 аминокислотных замен в положении 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 17, 18, 19, 20, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 56, 58, 60, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85 или 86 относительно соответствующей аминокислоты SEQ ID NO: 2.
30. Рекомбинантный полипептид PIP-72 по п.27 или 29, где полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 846:
Met 1 Xaa Xaa Xaa Xaa 5 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 10 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 15 Ala Xaa Xaa Xaa Xaa 20 Gly Xaa Xaa Xaa Xaa 25 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 40 Arg Xaa Asp Xaa Xaa 45 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 50 Xaa Xaa Xaa Xaa Gly 55 Xaa Gln Xaa Pro Xaa 60 Tyr Val Xaa Xaa Xaa 65 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 70 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 75 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 80 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 85 Xaa
где Xaa в положении 2 представляет собой Gly, Ala, Cys, Asp, Glu, Ile, Lys, Leu, Asn, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 3 представляет собой Ile или Trp;
Xaa в положении 4 представляет собой Thr, Ala, Asp, Glu, His, Ile, Lys, Leu, Arg, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 5 представляет собой Val, Ala, Cys, Gly, His, Ile или Tyr;
Xaa в положении 6 представляет собой Thr, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Trp или Tyr;
Xaa в положении 7 представляет собой Asn, Ala или Val;
Xaa в положении 8 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Gln, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 9 представляет собой Ser, Ala, Cys, Gly или Thr;
Xaa в положении 10 представляет собой Ser, Ala, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr или Trp;
Xaa в положении 11 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Gln, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 12 представляет собой Pro, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Lys, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 13 представляет собой Ile, Asn, Gln или Val;
Xaa в положении 14 представляет собой Glu, Ala, Cys, Phe, His, Lys или Gln;
Xaa в положении 15 представляет собой Val, Ala, Cys, Ile, Met или Arg;
Xaa в положении 17 представляет собой Ile, Glu или Val;
Xaa в положении 18 представляет собой Asn или Ser;
Xaa в положении 19 представляет собой His, Ala, Glu, Lys, Leu, Pro, Arg, Ser или Tyr;
Xaa в положении 20 представляет собой Trp, Ala или Thr;
Xaa в положении 22 представляет собой Ser, Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 23 представляет собой Asp, Ala, Gly, His, Lys, Met, Asn, Gln, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 24 представляет собой Gly, Asp или Phe;
Xaa в положении 25 представляет собой Asp, Ala, Glu, Phe, Asn или Gln;
Xaa в положении 26 представляет собой Thr, Glu или Pro;
Xaa в положении 27 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Asn, Gln, Arg или Thr;
Xaa в положении 28 представляет собой Phe, Pro, Trp или Tyr;
Xaa в положении 29 представляет собой Phe, Ala, Cys, Ile, Leu, Gln, Arg, Trp или Tyr;
Xaa в положении 30 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp или Tyr;
- 458 031651
Xaa в положении 31 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 32 представляет собой Gly, Ala, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln,
Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 33 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Pro, Gln,
Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 34 представляет собой Gly, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Tyr;
Xaa в положении 35 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 36 представляет собой Gln, Ala, Cys, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 37 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 38 представляет собой Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 39 представляет собой Trp или Phe;
Xaa в положении 40 представляет собой Asp, Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 42 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 44 представляет собой Ser, Ala, Asp, Glu, Gly, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 45 представляет собой Arg, Lys или Ser;
Xaa в положении 46 представляет собой Gly, Ala или Gln;
Xaa в положении 47 представляет собой Phe, Cys, Val или Tyr;
Xaa в положении 48 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 49 представляет собой Leu, Cys, Phe, Met, Arg или Tyr;
Xaa в положении 50 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Ile, Met, Pro, Gln, Thr или Val;
Xaa в положении 51 представляет собой Leu, Ala, Cys, Met или Val;
Xaa в положении 52 представляет собой Lys, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Ser, Thr, Trp или Tyr;
Xaa в положении 53 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 54 представляет собой Asn, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Lys, Met, Gln, Arg, Ser или Trp;
Xaa в положении 56 представляет собой Ala, Gly, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser или Thr;
Xaa в положении 57 представляет собой Gln, Glu, Leu, Met, Ser или Thr;
Xaa в положении 58 представляет собой His, Ala, Asp, Phe, Leu, Met, Asn, Arg, Trp или Tyr;
Xaa в положении 60 представляет собой Tyr, Glu или Phe;
Xaa в положении 63 представляет собой Gln, Cys, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 64 представляет собой Ala, Phe, Gly, His, Arg, Ser или Tyr;
Xaa в положении 65 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Thr или Val;
Xaa в положении 66 представляет собой Ser, Ala или Gly;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 68 представляет собой Ile Asp, Leu или Val;
Xaa в положении 69 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 70 представляет собой Val, Cys или Ile;
Xaa в положении 71 представляет собой Asp, Ala, Cys, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 72 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Trp;
Xaa в положении 73 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 74 представляет собой Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 75 представляет собой Val, Cys, Ile или Leu;
Xaa в положении 76 представляет собой Lys, Ala, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 77 представляет собой Asp Tyr;
Xaa в положении 78 представляет собой Gln, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Ser,
- 459 031651
Thr, V al или Tyr;
Xaa в положении 79 представляет собой Gly, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp или Tyr;
Xaa в положении 80 представляет собой Arg, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 81 представляет собой Leu, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 82 представляет собой Ile, Ala, Leu, Met, Arg или Val;
Xaa в положении 83 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 84 представляет собой Pro, Ala, Cys, Glu, Ile, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 85 представляет собой Leu, Cys, Gly или Val и
Xaa в положении 86 представляет собой Ser, Ala, Ile, Thr или Val.
31. Рекомбинантный полипептид PIP-72 по п.27 или 28, где полипептид PIP-72 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 849:
Met 1 Xaa Xaa Xaa Xaa 5 Xaa Xaa Xaa Xaa Ser 10 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 40 45 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa 50 55 60 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 65 70 75 80
Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа где Xaa в положении 2 представляет собой Gly, Ala, Cys, Asp, Glu, Ile, Lys, Leu, Asn, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 3 представляет собой Ile, Leu, Val или Trp;
Xaa в положении 4 представляет собой Thr, Ala, Asp, Glu, His, Ile, Lys, Leu, Arg, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 5 представляет собой Val, Ala, Cys, Gly, His, Ile, Leu или Tyr;
Xaa в положении 6 представляет собой Thr, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Trp или Tyr;
Xaa в положении 7 представляет собой Asn, Ala или Val;
Xaa в положении 8 представляет собой Asn, Lys, Gly, Ser, Gln, Arg, Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, His, Ile, Leu, Met или Val;
Xaa в положении 9 представляет собой Ser, Ala, Cys, Gly или Thr;
Xaa в положении 11 представляет собой Asn, Lys, Thr, Gln, Arg, Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Val или Tyr;
Xaa в положении 12 представляет собой Pro, Thr, Lys, Ser, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Leu, Asn, Gln, Arg, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 13 представляет собой Ile, Asn, Gln, Leu или Val;
Xaa в положении 14 представляет собой Glu, Ala, Cys, Phe, His, Lys, Asp или Gln;
Xaa в положении 15 представляет собой Val, Ala, Ile, Leu, Cys, Met или Arg;
Xaa в положении 16 представляет собой Ala или Ser;
Xaa в положении 17 представляет собой Ile, Glu, Leu или Val;
Xaa в положении 18 представляет собой Asn, Gln, Thr или Ser;
Xaa в положении 19 представляет собой His, Lys, Ala, Arg, Glu, Leu, Pro, Ser или Tyr;
Xaa в положении 20 представляет собой Trp, Ala или Thr;
Xaa в положении 21 представляет собой Gly, Arg или Lys;
Xaa в положении 22 представляет собой Ser, Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 23 представляет собой Asp, Ala, Gly, His, Lys, Met, Asn, Gln, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 24 представляет собой Gly, Asp или Phe;
Xaa в положении 25 представляет собой Asp, Ala, Glu, Phe, Asn или Gln;
Xaa в положении 26 представляет собой Thr, Glu, Asp, Ser или Pro;
Xaa в положении 27 представляет собой Ser, Thr, Lys, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Asn или Gln;
Xaa в положении 28 представляет собой Phe, Tyr, Pro или Trp;
- 460 031651
Xaa в положении 29 представляет собой Phe, Ala, Cys, Ile, Leu, Gln, Arg, Trp или Tyr;
Xaa в положении 30 представляет собой Ser, Gly, Lys, Thr, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Leu,
Met, Asn, Pro, Gln, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 31 представляет собой Val, Ile, Met или Leu;
Xaa в положении 32 представляет собой Gly, Ala, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 33 представляет собой Asn, Ser, Gln, Pro, Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Arg, Val или Tyr;
Xaa в положении 34 представляет собой Gly, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Tyr;
Xaa в положении 35 представляет собой Lys, Glu, Ala, Cys, Asp, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 36 представляет собой Gln, Ala, Cys, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 37 представляет собой Glu, Asp, Ala, Cys, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Ser, Thr или Val;
Xaa в положении 38 представляет собой Thr, Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 39 представляет собой Trp или Phe;
Xaa в положении 40 представляет собой Asp, Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 42 представляет собой Ser, Asn, Thr, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Arg, Val, Trp, Tyr или Gln;
Xaa в положении 44 представляет собой Ser, Asp, Ala, Leu, Thr, Glu, Ile, Ala, Gly, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Val, Tyr или Val;
Xaa в положении 45 представляет собой Arg, Lys или Ser;
Xaa в положении 46 представляет собой Gly, Ala или Gln;
Xaa в положении 47 представляет собой Phe, Tyr Cys, Val или Trp;
Xaa в положении 48 представляет собой Leu, Met, Ile, Cys, Phe, Met, Arg, Tyr или Val;
Xaa в положении 49 представляет собой Leu, Met, Ile или Val;
Xaa в положении 50 представляет собой Ser, Ala, Tyr, Cys, Asp, Ile, Met, Pro, Gln, Val или Thr;
Xaa в положении 51 представляет собой Leu, Val, Ala, Cys, Met или Ile;
Xaa в положении 52 представляет собой Lys, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Ser, Thr, Gln, Trp или Tyr;
Xaa в положении 53 представляет собой Lys, Arg, Met, Leu, Ile, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Asn, Gln, Ser, Thr, Tyr или Val;
Xaa в положении 54 представляет собой Asn, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Lys, Met, Gln, Arg, Ser или Trp;
Xaa в положении 55 представляет собой Gly, Ser или Thr;
Xaa в положении 56 представляет собой Ala, Thr, Gln, Ser, Gly, Leu, Pro, Arg или Asn;
Xaa в положении 57 представляет собой Gln, Glu, Leu, Met, Ser, Val, Ala, Asn, Ile или Thr;
Xaa в положении 58 представляет собой His, Ala, Lys, Asp, Phe, Leu, Met, Asn, Arg, Trp, Tyr или Thr;
Xaa в положении 59 представляет собой Pro, Thr или Ser;
Xaa в положении 60 представляет собой Tyr, Glu или Phe;
Xaa в положении 62 представляет собой Val, Ile или Leu;
Xaa в положении 63 представляет собой Gln, Ser, Cys, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 64 представляет собой Ala, Gln, Asn, Phe, Gly, His, Arg, Ser или Tyr;
Xaa в положении 65 представляет собой Ser, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Val или Thr;
Xaa в положении 66 представляет собой Ser, Ala или Gly;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Gln, Asn или Arg;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 68 представляет собой Ile Asp, Leu или Val;
Xaa в положении 69 представляет собой Glu, Ala, Cys, Asp, Phe, His, Ile, Leu, Met, Gln, Arg, Ser, Thr, Val или Tyr;
Xaa в положении 70 представляет собой Val, Ile, Cys или Leu;
Xaa в положении 71 представляет собой Asp, Glu, Tyr, Ala, Cys, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Ser, Thr, Val или Trp;
Xaa в положении 72 представляет собой Asn, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, His или Trp;
Xaa в положении 73 представляет собой Asn, Ser, Asp, Gln, Thr, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Val, Tyr или Glu;
- 461 031651
Xaa в положении 74 представляет собой Ala, Thr, Met, Ile, Lys, Ser, Leu, Val, Cys, Asp, Phe, Gly, His,
Asn, Gln, Tyr или Arg;
Xaa в положении 75 представляет собой Val, Cys, Ile или Leu;
Xaa в положении 76 представляет собой Lys, Ala, Cys, Phe, His, Ile, Leu, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 77 представляет собой Asp Tyr;
Xaa в положении 78 представляет собой Gln, His, Ser, Asn, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Arg, Val, Tyr или Thr;
Xaa в положении 79 представляет собой Gly, Arg, Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp или Tyr;
Xaa в положении 80 представляет собой Arg, Glu, Gln, Lys, Asp, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Ser, Thr, Val, Tyr или Asn;
Xaa в положении 81 представляет собой Leu, Pro, Thr, Ile, Val, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His или Ser;
Xaa в положении 82 представляет собой Ile, Ala, Leu, Met, Arg и Val;
Xaa в положении 83 представляет собой Glu, His, Asn, Leu, Gln, Ile, Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, Lys, Pro, Arg, Ser, Thr, Tyr или Val;
Xaa в положении 84 представляет собой Pro, Ala, Cys, Glu, Ile, Ser, Val, Trp или Tyr;
Xaa в положении 85 представляет собой Leu, Val, Cys, Gly или Ala и
Xaa в положении 86 представляет собой Ser, Ala, Tyr, Asn, Ile, Val или Thr.
32. Рекомбинантный полипептид PIP-72 по п.27 или 28, где полипептид PIP-72 содержит аминокислотный мотив, представленный положениями 37-51 SEQ ID NO: 846 - SEQ ID NO: 848 или SEQ ID NO: 849.
33. Рекомбинантный полипептид, выбранный из полипептида, который по меньшей мере на 95% идентичен аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 929 - SEQ ID NO: 931, SEQ ID NO: 937, SEQ ID NO: 938, SEQ ID NO: 942, SEQ ID NO: 947 или SEQ ID NO: 948.
33 представляет собой Asn, Ser, Gln или Pro;
34. Химерный полипептид PIP-72, содержащий, по меньшей мере, первую составляющую, содержащую часть первого полипептида PIP-72, и вторую составляющую, содержащую комплементарную часть второго полипептида PIP-72, где первый полипептид PIP-72 и второй полипептид PIP-72 характеризуются отличающимися аминокислотными последовательностями в соответствующих частях.
35. Композиция, содержащая рекомбинантный полипептид PIP-72 по любому из пп.27-32, полипептид по п.33 или химерный полипептид PIP-72 по п.34.
35 представляет собой Lys, Glu или Ser;
36. Белок слияния, содержащий полипептид PIP-72 по любому из пп.27-32, полипептид по п.33 или химерный полипептид PIP-72 по п.34.
36 представляет собой Gln, Asn или Ser;
37. Способ контроля популяции насекомого-вредителя, включающий приведение в контакт популяции насекомого-вредителя с инсектицидно эффективным количеством полипептида PIP-72 по любому из пп.27-32, полипептида по п.33 или химерного полипептида PIP-72 по п.34.
37 представляет собой Glu или Asp;
38. Способ подавления роста или уничтожения насекомого-вредителя, включающий приведение в контакт насекомого-вредителя с композицией, содержащей инсектицидно эффективное количество полипептида PIP-72 по любому из пп.27-32, полипептида по п.33 или химерного полипептида PIP-72 по п.34.
39. Способ контроля популяции насекомого-вредителя, устойчивой к пестицидному белку, включающий приведение в контакт популяции насекомого-вредителя с инсектицидно эффективным количеством полипептида PIP-72 по любому из пп.27-32, полипептида по п.33 или химерного полипептида PIP72 по п.34.
40. Способ контроля заражения насекомыми трансгенного растения и обеспечения борьбы с устойчивостью насекомых, включающий экспрессию в растении полипептида PIP-72 по любому из пп.28-34, полипептида по п.35 или химерного полипептида PIP-72 по п.36.
41. Трансгенное растение, содержащее ДНК-конструкцию по п.7.
42. Трансгенное растение, стабильно трансформированное ДНК-конструкцией по п.7.
43. Семя, полученное от растения по п.41 или 42, где семя содержит указанную молекулу нуклеиновой кислоты.
44. Растение-потомок, полученное из семени по п.43.
45. Клетка-хозяин, трансформированная ДНК-конструкцией по п.7.
46. Клетка-хозяин по п.45, где клетка-хозяин представляет собой бактериальную клетку или растительную клетку.
47. Клетка-хозяин по п.46, где растительная клетка представляет собой клетку однодольного растения или двудольного растения.
48. Способ идентификации в биологическом образце нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид PIP-72 по любому из пп.27-32, полипептид по п.33 или химерный полипептид PIP-72 по п.34, при этом указанный способ включает приведение в контакт указанного образца с полинуклеотидом, который гибридизуется с нуклеотидной последовательностью при жестких условиях гибридизации, и
- 462 031651 выявление связывания указанного полинуклеотида с указанной нуклеотидной последовательностью, где указанное связывание является критерием идентификации указанной нуклеотидной последовательности в указанном образце.
49. Способ идентификации в образце полипептида PIP-72 по любому из пп.27-32, полипептида по п.33 или химерного полипептида PIP-72 по п.34, при этом указанный способ включает приведение в контакт указанного образца с антителом, которое специфично связывается с указанным полипептидом, и выявление связывания, где указанное связывание является критерием идентификации в отношении присутствия указанного полипептида в указанном образце.
Р1Р-72Аа
Р1Р-72Ва
Р1Р-72Са
Р1Р-72СЬ
PIP-72Da
PIP-72Db
PIP-72DC
PIP-72Ea
PIP-72Fa
GBP_A3175 SRBS_294080
JG43047
SwiRh_4910
PIP-72Ff
PIP-72Ga
PIP-72Gb XBJ1_1O78 plu2373 PIP-72Ge
50 представляет собой Ser, Ala или Tyr;
51 представляет собой Leu или Val;
52 представляет собой Lys или Gln;
53 представляет собой Lys, Arg, Met или Leu;
54 представляет собой Asn, Lys или Gly;
55 представляет собой Gly или Ser;
56 представляет собой Ala, Thr, Gln или Ser;
57 представляет собой Gln, Val или Ala;
58 представляет собой His, Ala, Lys, Tyr или Thr;
59 представляет собой Pro или Thr;
- 453 031651
Xaa в положении 65 представляет собой Ser или Thr;
Xaa в положении 67 представляет собой Lys, Gln, Arg или Asn;
Xaa в положении 69 представляет собой Glu, Lys или Val;
Xaa в положении 70 представляет собой Val или Ile;
Xaa в положении 71 представляет собой Asp, Glu или Tyr;
Xaa в положении 72 представляет собой Asn, His, Ser или Asp;
Xaa в положении 73 представляет собой Asn, Ser или Asp;
Xaa в положении 74 представляет собой Ala, Thr, Met, Ile или Lys;
Xaa в положении 76 представляет собой Lys или Thr;
Xaa в положении 78 представляет собой Gln, His или Ser;
Xaa в положении 80 представляет собой Arg, Glu или Gln;
Xaa в положении 81 представляет собой Leu, Pro, Ala или Thr;
Xaa в положении 82 представляет собой Ile или Leu;
Xaa в положении 83 представляет собой Glu, His, Asn, Gln или Leu;
Xaa в положении 85 представляет собой Leu, Val или Ala и
Xaa в положении 86 представляет собой Ser, Ala, Tyr или Asn.
51 100
FVLSLKKNG-AQHPYYVQASSKIEVDNNAVKDQGRLIEPLS--------FVLSLKRNG-AQHPYYVQASSQIEVDHNAVKDHGEPIHPLS--------FVLSLKRNG-TQAPYYVQATSKIEVDSSTVKDHGETIHPVA--------FVLSLKRNG-TQAPYYVQATSKIEVDSSTVKDHGETIHPVA--------FVLSLKRNG-TQAPYYVQATSKIEIENSTVKDHGETIHPVA--------FVLSLKRNG-TQAPYYVQATSKIEVENSMVKDHGETIHPVA--------FVLSLKRNG-TQAPYYVQATSKIEIENSAVKDHGETIHPVA--------YVLSLRQGG-TEKPYYVLVDSNIWANTEVKDNDTVISPISR-------YLMAVKMKS-QVKTYYISQTSKIWEDNIVKDHGQTLNPLYAVNNM---FVMYVQLGG-SATPYYVLSTSNIVIYDDKVTDSGQTLLPANKRFG----YLMAIKAN--PAGVYYVAFDSQIVIEDNLVKDRGRTINPLASNNQ----YIMAIQDKS -QTTEYYVTCNSVIVIEDNLVKDHGRTLNPLAAAGKKNWNA YLMAIKGQT-QAGVYYVAFDSQIVIEDNLVKDRGRTINPLASNNQ----YUdAIKGQT-QAGVYYVAFDSQIVIEDNLVKDRGRTINPLASNNQ----YLMTVKGQS-QQGVYYVAFDSEIFIEDSLVKDRGKTITKLALEVQ----YLMAIQDKS-QTTEYYVTCNSVIVIEDNLVKDHGRTLNPVAAAGKRKVANA FVMAILKKG-VQDSFYIFSDSDIKVFDSYVTDNGRRIKPATDRYY----FVMSIIRENEDQKSYFVLANSNIVIYDKDATGYGKNVQDNGRWIYPLN-YLMAIQDKS-QTTEYYVSCNSAIVIEDNLVKDHGRTLNPVAAAGKKKVANA
EA201690583A 2013-09-13 2014-09-11 Инсектицидные белки и способы их применения EA031651B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361877625P 2013-09-13 2013-09-13
PCT/US2014/055128 WO2015038734A2 (en) 2013-09-13 2014-09-11 Insecticidal proteins and methods for their use

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201690583A1 EA201690583A1 (ru) 2016-07-29
EA031651B1 true EA031651B1 (ru) 2019-02-28

Family

ID=52666510

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201690583A EA031651B1 (ru) 2013-09-13 2014-09-11 Инсектицидные белки и способы их применения

Country Status (12)

Country Link
US (3) US10667524B2 (ru)
EP (3) EP3692786B1 (ru)
CN (1) CN105705007A (ru)
AR (1) AR097658A1 (ru)
BR (3) BR122020001770B1 (ru)
CA (4) CA3223359A1 (ru)
EA (1) EA031651B1 (ru)
ES (2) ES2937045T3 (ru)
MX (3) MX2018010689A (ru)
UA (1) UA120598C2 (ru)
WO (1) WO2015038734A2 (ru)
ZA (1) ZA201601430B (ru)

Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3692786B1 (en) 2013-09-13 2022-11-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
CN108064303A (zh) * 2015-03-11 2018-05-22 先锋国际良种公司 基于结构的用于修饰pip-72多肽及由其衍生的pip-72多肽的方法
EA038923B1 (ru) * 2015-03-11 2021-11-10 Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. Инсектицидная днк-конструкция и способы её применения
CA2985198A1 (en) 2015-05-19 2016-11-24 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
EA201890066A1 (ru) 2015-06-16 2018-06-29 Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. Композиции и способы контроля насекомых-вредителей
MX2018001523A (es) 2015-08-06 2018-03-15 Pioneer Hi Bred Int Proteinas insecticidas derivadas de plantas y metodos para su uso.
KR101748651B1 (ko) 2015-09-15 2017-06-19 동아대학교 산학협력단 신규한 바실러스속 미생물 및 그를 이용한 피레트로이드의 생물학적 분해 방법
RU2755282C2 (ru) * 2015-10-14 2021-09-14 Байер Кропсайенс Лп Ген ахм1554, кодирующий дельта-эндотоксин, и способы его применения
CN108575091A (zh) * 2015-12-18 2018-09-25 先锋国际良种公司 杀昆虫蛋白及其使用方法
UA126966C2 (uk) 2016-04-14 2023-03-01 Піонір Хай-Бред Інтернешнл, Інк. Інсектицидний поліпептид, що характеризується поліпшеним спектром активності, та його застосування
MX2018013249A (es) 2016-05-04 2019-02-13 Pioneer Hi Bred Int Proteinas insecticidas y metodos para sus usos.
EP3472323A1 (en) 2016-06-16 2019-04-24 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods to control insect pests
CN109788735A (zh) 2016-07-01 2019-05-21 先锋国际良种公司 来自植物的杀昆虫蛋白及其使用方法
US20210292778A1 (en) 2016-07-12 2021-09-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods to control insect pests
WO2018111551A1 (en) 2016-12-14 2018-06-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
MX2019007491A (es) 2016-12-22 2019-09-06 Pioneer Hi Bred Int Proteinas insecticidas y metodos para su uso.
EP3342780A1 (en) 2016-12-30 2018-07-04 Dow AgroSciences LLC Pre-mrna processing factor 8 (prp8) nucleic acid molecules to control insect pests
CA3048994A1 (en) * 2017-01-03 2018-07-12 Monsanto Technology Llc Microbial compositions and methods
BR112019023628A2 (pt) 2017-05-11 2020-06-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Polipeptídeo inseticida recombinante, proteína inseticida quimérica, proteína de fusão, composição agrícola, polinucleotídeo recombinante, construto de dna, planta transgênica, método para inibir o crescimento ou exterminar uma praga de inseto ou população de praga, método para controlar os danos por praga de inseto, método para controlar infestação de praga e método para melhorar o rendimento de uma cultura
EP3630982A1 (en) 2017-05-26 2020-04-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal polypeptides having improved activity spectrum and uses thereof
WO2019074598A1 (en) 2017-10-13 2019-04-18 Pioneer Hi-Bred International, Inc. VIRUS-INDUCED GENETIC SILENCING TECHNOLOGY FOR THE CONTROL OF INSECTS IN MAIZE
WO2019165245A1 (en) 2018-02-22 2019-08-29 Zymergen Inc. Method for creating a genomic library enriched for bacillus and identification of novel cry toxins
JP2021514643A (ja) 2018-03-02 2021-06-17 ザイマージェン インコーポレイテッド 殺虫タンパク質発見プラットフォームおよびそこから発見される殺虫タンパク質
WO2019169150A1 (en) 2018-03-02 2019-09-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant health assay
US11820791B2 (en) * 2018-03-14 2023-11-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins from plants and methods for their use
CN112055753A (zh) * 2018-04-27 2020-12-08 先锋国际良种公司 玉米事件dp-023211-2及其检测方法
US11878999B2 (en) 2018-08-29 2024-01-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
US20220015372A1 (en) 2018-12-14 2022-01-20 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Biologicals and their use in plants
CN110452896B (zh) * 2019-08-08 2022-08-16 南京农业大学 一种植物抗虫相关蛋白OsPAL6和OsPAL8及其编码基因与应用
WO2021076346A1 (en) 2019-10-18 2021-04-22 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize event dp-202216-6 and dp-023211-2 stack
TW202142114A (zh) 2020-02-04 2021-11-16 美商陶氏農業科學公司 具有殺有害生物效用之組成物及與其相關之方法
CA3186978A1 (en) 2020-07-14 2022-01-20 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
US20230348928A1 (en) 2020-08-10 2023-11-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant regulatory elements and methods of use thereof
AR124445A1 (es) 2020-12-21 2023-03-29 Monsanto Technology Llc Proteínas inhibidoras de insectos novedosas
UY39585A (es) 2020-12-23 2022-07-29 Monsanto Technology Llc Proteínas que exhiben actividad inhibidora de insectos frente a plagas con importancia agrícola de plantas de cultivo y semillas
KR20230127241A (ko) 2020-12-31 2023-08-31 몬산토 테크놀로지 엘엘씨 신규한 곤충 저해 단백질
WO2023216140A1 (zh) * 2022-05-11 2023-11-16 北京大北农生物技术有限公司 杀虫蛋白的用途
TW202345696A (zh) 2022-05-18 2023-12-01 美商科迪華農業科技有限責任公司 具有殺有害生物效用之組成物及與其相關的方法

Family Cites Families (449)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3710511A (en) 1971-04-21 1973-01-16 Univ Illinois Procedures for use of genic male sterility in production of commercial hybrid maize
US3861709A (en) 1973-07-12 1975-01-21 Amsted Ind Inc Shiftable fifth wheel construction
US4196265A (en) 1977-06-15 1980-04-01 The Wistar Institute Method of producing antibodies
US4554101A (en) 1981-01-09 1985-11-19 New York Blood Center, Inc. Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity
US4714681A (en) 1981-07-01 1987-12-22 The Board Of Reagents, The University Of Texas System Cancer Center Quadroma cells and trioma cells and methods for the production of same
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
US4535060A (en) 1983-01-05 1985-08-13 Calgene, Inc. Inhibition resistant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthetase, production and use
US5094945A (en) 1983-01-05 1992-03-10 Calgene, Inc. Inhibition resistant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase, production and use
US5352605A (en) 1983-01-17 1994-10-04 Monsanto Company Chimeric genes for transforming plant cells using viral promoters
US4713325A (en) 1983-06-14 1987-12-15 The Regents Of The University Of California Hybridomas producing monoclonal antibodies specific for FeLV p27
US5380831A (en) 1986-04-04 1995-01-10 Mycogen Plant Science, Inc. Synthetic insecticidal crystal protein gene
US4716117A (en) 1984-10-26 1987-12-29 Chiron Corporation Monoclonal antibodies to factor VIIIC
CA1207852A (en) 1984-02-29 1986-07-15 William D. Cornish Non-resonant microwave frequency halver
US5304732A (en) 1984-03-06 1994-04-19 Mgi Pharma, Inc. Herbicide resistance in plants
US5331107A (en) 1984-03-06 1994-07-19 Mgi Pharma, Inc. Herbicide resistance in plants
US4761373A (en) 1984-03-06 1988-08-02 Molecular Genetics, Inc. Herbicide resistance in plants
US4945050A (en) 1984-11-13 1990-07-31 Cornell Research Foundation, Inc. Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor
ATE93542T1 (de) 1984-12-28 1993-09-15 Plant Genetic Systems Nv Rekombinante dna, die in pflanzliche zellen eingebracht werden kann.
DE3685968T2 (de) 1985-01-22 1993-07-01 Mycogen Corp Zellulare einkapselung biologischer pestizide.
US4720459A (en) 1985-02-14 1988-01-19 Medical College Of Wisconsin Research Foundation, Inc. Myelomas for producing human/human hybridomas
DE3590766T (ru) 1985-03-30 1987-04-23
US5569597A (en) 1985-05-13 1996-10-29 Ciba Geigy Corp. Methods of inserting viral DNA into plant material
US4654465A (en) 1985-07-18 1987-03-31 Agracetus Genic male-sterile maize
US4940835A (en) 1985-10-29 1990-07-10 Monsanto Company Glyphosate-resistant plants
DK175922B1 (da) 1985-08-07 2005-07-04 Monsanto Technology Llc Glyphosat-resistente planter
US5576195A (en) 1985-11-01 1996-11-19 Xoma Corporation Vectors with pectate lyase signal sequence
US4810648A (en) 1986-01-08 1989-03-07 Rhone Poulenc Agrochimie Haloarylnitrile degrading gene, its use, and cells containing the gene
EP0242236B2 (en) 1986-03-11 1996-08-21 Plant Genetic Systems N.V. Plant cells resistant to glutamine synthetase inhibitors, made by genetic engineering
US4975374A (en) 1986-03-18 1990-12-04 The General Hospital Corporation Expression of wild type and mutant glutamine synthetase in foreign hosts
US5107065A (en) 1986-03-28 1992-04-21 Calgene, Inc. Anti-sense regulation of gene expression in plant cells
US5273894A (en) 1986-08-23 1993-12-28 Hoechst Aktiengesellschaft Phosphinothricin-resistance gene, and its use
US5013659A (en) 1987-07-27 1991-05-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
US5378824A (en) 1986-08-26 1995-01-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
US5605011A (en) 1986-08-26 1997-02-25 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
US5268463A (en) 1986-11-11 1993-12-07 Jefferson Richard A Plant promoter α-glucuronidase gene construct
US5763192A (en) 1986-11-20 1998-06-09 Ixsys, Incorporated Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique
US4727219A (en) 1986-11-28 1988-02-23 Agracetus Genic male-sterile maize using a linked marker gene
US5608142A (en) 1986-12-03 1997-03-04 Agracetus, Inc. Insecticidal cotton plants
US5322938A (en) 1987-01-13 1994-06-21 Monsanto Company DNA sequence for enhancing the efficiency of transcription
US5359142A (en) 1987-01-13 1994-10-25 Monsanto Company Method for enhanced expression of a protein
US5145783A (en) 1987-05-26 1992-09-08 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-endolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US5312910A (en) 1987-05-26 1994-05-17 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US4971908A (en) 1987-05-26 1990-11-20 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US5316931A (en) 1988-02-26 1994-05-31 Biosource Genetics Corp. Plant viral vectors having heterologous subgenomic promoters for systemic expression of foreign genes
EP0333033A1 (en) 1988-03-09 1989-09-20 Meiji Seika Kaisha Ltd. Glutamine synthesis gene and glutamine synthetase
US5990387A (en) 1988-06-10 1999-11-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Stable transformation of plant cells
US5039523A (en) 1988-10-27 1991-08-13 Mycogen Corporation Novel Bacillus thuringiensis isolate denoted B.t. PS81F, active against lepidopteran pests, and a gene encoding a lepidopteran-active toxin
US5023179A (en) 1988-11-14 1991-06-11 Eric Lam Promoter enhancer element for gene expression in plant roots
AU638438B2 (en) 1989-02-24 1993-07-01 Monsanto Technology Llc Synthetic plant genes and method for preparation
US5110732A (en) 1989-03-14 1992-05-05 The Rockefeller University Selective gene expression in plants
US5240855A (en) 1989-05-12 1993-08-31 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Particle gun
US5879918A (en) 1989-05-12 1999-03-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Pretreatment of microprojectiles prior to using in a particle gun
US5188960A (en) 1989-06-27 1993-02-23 Mycogen Corporation Bacillus thuringiensis isolate active against lepidopteran pests, and genes encoding novel lepidopteran-active toxins
US5310667A (en) 1989-07-17 1994-05-10 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthases
US5550318A (en) 1990-04-17 1996-08-27 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US5322783A (en) 1989-10-17 1994-06-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Soybean transformation by microparticle bombardment
US5641876A (en) 1990-01-05 1997-06-24 Cornell Research Foundation, Inc. Rice actin gene and promoter
US5837848A (en) 1990-03-16 1998-11-17 Zeneca Limited Root-specific promoter
US5187091A (en) 1990-03-20 1993-02-16 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis cryiiic gene encoding toxic to coleopteran insects
ES2187497T3 (es) 1990-04-12 2003-06-16 Syngenta Participations Ag Promotores preferentemente en tejidos.
US5824524A (en) 1990-06-12 1998-10-20 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Nucleotide sequences mediating fertility and method of using same
US5478369A (en) 1990-06-12 1995-12-26 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Nucleotide sequences mediating male fertility and method of using same
US6297426B1 (en) 1990-06-12 2001-10-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods of mediating female fertility in plants
US5432068A (en) 1990-06-12 1995-07-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Control of male fertility using externally inducible promoter sequences
US5498830A (en) 1990-06-18 1996-03-12 Monsanto Company Decreased oil content in plant seeds
EP0536330B1 (en) 1990-06-25 2002-02-27 Monsanto Technology LLC Glyphosate tolerant plants
US5633435A (en) 1990-08-31 1997-05-27 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases
US5866775A (en) 1990-09-28 1999-02-02 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthases
US5266317A (en) 1990-10-04 1993-11-30 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Insect-specific paralytic neurotoxin genes for use in biological insect control: methods and compositions
CA2051562C (en) 1990-10-12 2003-12-02 Jewel M. Payne Bacillus thuringiensis isolates active against dipteran pests
US5932782A (en) 1990-11-14 1999-08-03 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant transformation method using agrobacterium species adhered to microprojectiles
US5459252A (en) 1991-01-31 1995-10-17 North Carolina State University Root specific gene promoter
DE69233718T2 (de) 1991-02-07 2008-12-04 Bayer Bioscience N.V. Staubblatt spezifische promotoren aus mais
JP3462497B2 (ja) 1991-02-08 2003-11-05 バイエル・バイオサイエンス・エヌ・ヴェー コメ由来の雄ずい特異的プロモーター
MX9200621A (es) 1991-02-14 1993-02-01 Du Pont Gen de una proteina con alto contenido de azufre de una semilla y metodo para aumentar el contenido de azufre en aminoacidos de las plantas.
FR2673643B1 (fr) 1991-03-05 1993-05-21 Rhone Poulenc Agrochimie Peptide de transit pour l'insertion d'un gene etranger dans un gene vegetal et plantes transformees en utilisant ce peptide.
USRE36449E (en) 1991-03-05 1999-12-14 Rhone-Poulenc Agro Chimeric gene for the transformation of plants
FR2673642B1 (fr) 1991-03-05 1994-08-12 Rhone Poulenc Agrochimie Gene chimere comprenant un promoteur capable de conferer a une plante une tolerance accrue au glyphosate.
US5399680A (en) 1991-05-22 1995-03-21 The Salk Institute For Biological Studies Rice chitinase promoter
GB9115909D0 (en) 1991-07-23 1991-09-04 Nickerson Int Seed Recombinant dna
US5731180A (en) 1991-07-31 1998-03-24 American Cyanamid Company Imidazolinone resistant AHAS mutants
JPH07502163A (ja) 1991-08-09 1995-03-09 イー・アイ・デユポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー 植物の栄養価改良用のプログラム可能水準の必須アミノ酸類を含有する規定された構造を有する合成貯蔵蛋白質
EP0600993B1 (en) 1991-08-27 1999-11-10 Novartis AG Proteins with insecticidal properties against homopteran insects and their use in plant protection
EP0612208B1 (en) 1991-10-04 2004-09-15 North Carolina State University Pathogen-resistant transgenic plants
TW261517B (ru) 1991-11-29 1995-11-01 Mitsubishi Shozi Kk
WO1993011245A1 (en) 1991-12-04 1993-06-10 E.I. Du Pont De Nemours And Company Fatty acid desaturase genes from plants
US5324646A (en) 1992-01-06 1994-06-28 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods of regeneration of Medicago sativa and expressing foreign DNA in same
US5773691A (en) 1992-03-19 1998-06-30 E. I. Du Pont De Nemours And Company Chimeric genes and methods for increasing the lysine and threonine content of the seeds of plants
DK39692D0 (da) 1992-03-25 1992-03-25 Danisco Biologisk materiale
US5428148A (en) 1992-04-24 1995-06-27 Beckman Instruments, Inc. N4 - acylated cytidinyl compounds useful in oligonucleotide synthesis
US5401836A (en) 1992-07-16 1995-03-28 Pioneer Hi-Bre International, Inc. Brassica regulatory sequence for root-specific or root-abundant gene expression
CA2140910C (en) 1992-07-27 1999-03-23 Jeffrey A. Townsend An improved method of agrobacterium-mediated transformation of cultured soybean cells
US5743477A (en) 1992-08-27 1998-04-28 Dowelanco Insecticidal proteins and method for plant protection
US6372965B1 (en) 1992-11-17 2002-04-16 E.I. Du Pont De Nemours And Company Genes for microsomal delta-12 fatty acid desaturases and hydroxylases from plants
US5496714A (en) 1992-12-09 1996-03-05 New England Biolabs, Inc. Modification of protein by use of a controllable interveining protein sequence
US5834247A (en) 1992-12-09 1998-11-10 New England Biolabs, Inc. Modified proteins comprising controllable intervening protein sequences or their elements methods of producing same and methods for purification of a target protein comprised by a modified protein
IL108241A (en) 1992-12-30 2000-08-13 Biosource Genetics Corp Plant expression system comprising a defective tobamovirus replicon integrated into the plant chromosome and a helper virus
US5607914A (en) 1993-01-13 1997-03-04 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Synthetic antimicrobial peptides
WO1994016078A2 (en) 1993-01-13 1994-07-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. High lysine derivatives of alpha-hordothionin
IL108814A0 (en) 1993-03-02 1994-06-24 Du Pont Improved feedcrops enriched in sulfur amino acids and methods for improvement
US5877012A (en) 1993-03-25 1999-03-02 Novartis Finance Corporation Class of proteins for the control of plant pests
US5814618A (en) 1993-06-14 1998-09-29 Basf Aktiengesellschaft Methods for regulating gene expression
US5789156A (en) 1993-06-14 1998-08-04 Basf Ag Tetracycline-regulated transcriptional inhibitors
US6107547A (en) 1993-10-06 2000-08-22 New York University Transgenic plants that exhibit enhanced nitrogen assimilation
CA2177351C (en) 1993-11-30 2007-04-24 Saverio Carl Falco Chimeric genes and methods for increasing the lysine content of the seeds of corn, soybean and rapeseed plants
US5580852A (en) 1993-12-17 1996-12-03 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Derivatives of tachyplesin having inhibitory activity towards plant pathogenic fungi
US5689052A (en) 1993-12-22 1997-11-18 Monsanto Company Synthetic DNA sequences having enhanced expression in monocotyledonous plants and method for preparation thereof
US5605793A (en) 1994-02-17 1997-02-25 Affymax Technologies N.V. Methods for in vitro recombination
US6335160B1 (en) 1995-02-17 2002-01-01 Maxygen, Inc. Methods and compositions for polypeptide engineering
US6117679A (en) 1994-02-17 2000-09-12 Maxygen, Inc. Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination
US5834252A (en) 1995-04-18 1998-11-10 Glaxo Group Limited End-complementary polymerase reaction
US5837458A (en) 1994-02-17 1998-11-17 Maxygen, Inc. Methods and compositions for cellular and metabolic engineering
IL113685A0 (en) 1994-05-13 1995-08-31 Du Pont Nucleic acid fragments chimeric genes and methods for increasing the methionine content of the seeds of plants
US5633363A (en) 1994-06-03 1997-05-27 Iowa State University, Research Foundation In Root preferential promoter
US5767373A (en) 1994-06-16 1998-06-16 Novartis Finance Corporation Manipulation of protoporphyrinogen oxidase enzyme activity in eukaryotic organisms
HUT77112A (hu) 1994-07-08 1998-03-02 E.I. Du Pont De Nemours And Company Kiméragének és eljárás növényi magvak treonintartalmának növelésére
US5736369A (en) 1994-07-29 1998-04-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Method for producing transgenic cereal plants
US5792931A (en) 1994-08-12 1998-08-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Fumonisin detoxification compositions and methods
US5608144A (en) 1994-08-12 1997-03-04 Dna Plant Technology Corp. Plant group 2 promoters and uses thereof
GB9422083D0 (en) 1994-11-02 1994-12-21 Innes John Centre Genetic control of flowering
US5659026A (en) 1995-03-24 1997-08-19 Pioneer Hi-Bred International ALS3 promoter
US5994627A (en) 1995-03-31 1999-11-30 Common Wealth Scientific And Industrial Research Organisation Genetic sequences conferring nematode resistance in plants and uses therefor
DE69636637T2 (de) 1995-04-20 2007-08-23 Basf Ag Auf basis ihrer struktur entworfene herbizid-resistente produkte
US5853973A (en) 1995-04-20 1998-12-29 American Cyanamid Company Structure based designed herbicide resistant products
WO1996038574A1 (en) 1995-05-31 1996-12-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods of increasing accumulation of essential amino acids in seeds
CN1192239A (zh) 1995-06-02 1998-09-02 先锋高级育种国际公司 α-hordothionin的高甲硫氨酸衍生物
BR9609200A (pt) 1995-06-02 1999-05-11 Pioneer Hi Bred Int Derivados de alta treonina de alpha-hordotionina
GB9511196D0 (en) 1995-06-02 1995-07-26 Innes John Centre Genetic control of flowering
FR2736926B1 (fr) 1995-07-19 1997-08-22 Rhone Poulenc Agrochimie 5-enol pyruvylshikimate-3-phosphate synthase mutee, gene codant pour cette proteine et plantes transformees contenant ce gene
FR2736929B1 (fr) 1995-07-19 1997-08-22 Rhone Poulenc Agrochimie Sequence adn isolee pouvant servir de zone de regulation dans un gene chimere utilisable pour la transformation des plantes
US5837876A (en) 1995-07-28 1998-11-17 North Carolina State University Root cortex specific gene promoter
GB9518731D0 (en) 1995-09-13 1995-11-15 Innes John Centre Flowering genes
US5689035A (en) 1995-09-26 1997-11-18 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Brown stem rot resistance in soybeans
GB9602796D0 (en) 1996-02-12 1996-04-10 Innes John Centre Innov Ltd Genetic control of plant growth and development
US6084153A (en) 1996-02-14 2000-07-04 The Governors Of The University Of Alberta Plants having enhanced nitrogen assimilation/metabolism
US5850016A (en) 1996-03-20 1998-12-15 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Alteration of amino acid compositions in seeds
US6096548A (en) 1996-03-25 2000-08-01 Maxygen, Inc. Method for directing evolution of a virus
US6083499A (en) 1996-04-19 2000-07-04 Mycogen Corporation Pesticidal toxins
US6072050A (en) 1996-06-11 2000-06-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Synthetic promoters
GB9613132D0 (en) 1996-06-21 1996-08-28 Innes John Centre Innov Ltd Genetic control of flowering
US5850026A (en) 1996-07-03 1998-12-15 Cargill, Incorporated Canola oil having increased oleic acid and decreased linolenic acid content
US6177275B1 (en) 1996-07-24 2001-01-23 New York University Plant nitrogen regulatory P-PII genes
US6706866B1 (en) 1996-09-04 2004-03-16 Michigan State University Plant having altered environmental stress tolerance
US5892009A (en) 1996-09-04 1999-04-06 Michigan State University DNA and encoded protein which regulates cold and dehydration regulated genes
US6417428B1 (en) 1996-09-04 2002-07-09 Michael F. Thomashow Plant having altered environmental stress tolerance
EP0865496A1 (en) 1996-09-05 1998-09-23 Unilever N.V. Salt-inducible promoter derivable from a lactic acid bacterium, and its use in a lactic acid bacterium for production of a desired protein
US6063756A (en) 1996-09-24 2000-05-16 Monsanto Company Bacillus thuringiensis cryET33 and cryET34 compositions and uses therefor
US6080913A (en) 1996-09-25 2000-06-27 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Binary methods of increasing accumulation of essential amino acids in seeds
CA2270289C (en) 1996-11-01 2005-09-27 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Proteins with enhanced levels of essential amino acids
US6232529B1 (en) 1996-11-20 2001-05-15 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods of producing high-oil seed by modification of starch levels
US6713063B1 (en) 1996-11-20 2004-03-30 Monsanto Technology, Llc Broad-spectrum δ-endotoxins
US6017534A (en) 1996-11-20 2000-01-25 Ecogen, Inc. Hybrid Bacillus thuringiensis δ-endotoxins with novel broad-spectrum insecticidal activity
US5846812A (en) 1996-11-22 1998-12-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Zearalenone detoxification compositions and methods
US5798255A (en) 1996-11-22 1998-08-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Beauvericin detoxification compositions and methods
ES2151748T3 (es) 1996-11-22 2001-01-01 Pioneer Hi Bred Int Composiciones y procedimientos de destoxificacion de la moniliformina.
US5942664A (en) 1996-11-27 1999-08-24 Ecogen, Inc. Bacillus thuringiensis Cry1C compositions toxic to lepidopteran insects and methods for making Cry1C mutants
DE19652284A1 (de) 1996-12-16 1998-06-18 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Neue Gene codierend für Aminosäure-Deacetylasen mit Spezifität für N-Acetyl-L-Phosphinothricin, ihre Isolierung und Verwendung
US5986177A (en) 1997-01-10 1999-11-16 Agricultural Genetic Engineering Research Institute Bacillus thuringiensis isolates with broad spectrum activity
ATE334225T1 (de) 1997-01-17 2006-08-15 Maxygen Inc Evolution prokaryotischer ganzer zellen durch rekursive sequenzrekombination
US6326204B1 (en) 1997-01-17 2001-12-04 Maxygen, Inc. Evolution of whole cells and organisms by recursive sequence recombination
JP2001508661A (ja) 1997-01-20 2001-07-03 プラント ジエネテイツク システムズ エヌ．ブイ 病原体誘導植物プロモーター
US5981840A (en) 1997-01-24 1999-11-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods for agrobacterium-mediated transformation
GB9703146D0 (en) 1997-02-14 1997-04-02 Innes John Centre Innov Ltd Methods and means for gene silencing in transgenic plants
US5922564A (en) 1997-02-24 1999-07-13 Performance Plants, Inc. Phosphate-deficiency inducible promoter
ATE418608T1 (de) 1997-03-18 2009-01-15 Novozymes As Methode zur herstellung einer bibliothek mittels dna-shuffling
JP2001515356A (ja) 1997-03-18 2001-09-18 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ Ｄｎａライブラリーの試験管内作製方法
US5948653A (en) 1997-03-21 1999-09-07 Pati; Sushma Sequence alterations using homologous recombination
US6153410A (en) 1997-03-25 2000-11-28 California Institute Of Technology Recombination of polynucleotide sequences using random or defined primers
CA2280196C (en) 1997-03-27 2012-05-15 E.I. Du Pont De Nemours And Company Chimeric genes and methods for increasing the lysine content of the seeds of plants
US6040497A (en) 1997-04-03 2000-03-21 Dekalb Genetics Corporation Glyphosate resistant maize lines
US7105724B2 (en) 1997-04-04 2006-09-12 Board Of Regents Of University Of Nebraska Methods and materials for making and using transgenic dicamba-degrading organisms
ZA981569B (en) 1997-04-08 1999-08-25 Du Pont An engineered seed protein having a higher percentage of essential amino acids.
CA2281896C (en) 1997-04-08 2012-06-26 E.I. Du Pont De Nemours And Company Soybean plant producing seeds with reduced levels of raffinose saccharides and phytic acid
ID22425A (id) 1997-05-05 1999-10-14 Dow Agrosciences Llc Toksin-toksin protein insektisida dari xenorhabdus
WO1998055601A2 (en) 1997-06-06 1998-12-10 E.I. Du Pont De Nemours And Company Plant amino acid biosynthetic enzymes
EP1002113B1 (en) 1997-06-12 2009-03-11 E.I. Du Pont De Nemours And Company Plant amino acid biosynthetic enzymes
GB9712415D0 (en) 1997-06-13 1997-08-13 Innes John Centre Innov Ltd Genetic control of flowering
US6291224B1 (en) 1998-07-17 2001-09-18 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Genes controlling phytate metabolism in plants and uses thereof
US6197561B1 (en) 1997-07-22 2001-03-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Genes controlling phytate metabolism in plants and uses thereof
BR9810807A (pt) 1997-07-22 2005-12-06 Pioneer Hi Bred Int Genes controlando metabolismo de filato em plantas e seus usos
GB9717192D0 (en) 1997-08-13 1997-10-22 Innes John Centre Innov Ltd Genetic control of plant growth and development
WO1999010498A2 (en) 1997-08-27 1999-03-04 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Genes encoding enzymes for lignin biosynthesis and uses thereof
US5929305A (en) 1997-10-14 1999-07-27 Michigan State University Plant material containing non-naturally introduced binding protein for regulating cold and dehydration regulatory genes
WO1999021979A1 (en) 1997-10-28 1999-05-06 Maxygen, Inc. Human papillomavirus vectors
EP1030861A4 (en) 1997-10-31 2001-09-05 Maxygen Inc MODIFICATION OF VIRAL TROPISM AND THE DIVERSITY OF HOST SPECIES BY RECOMBINATION OF THE VIRAL GENOME
US6218188B1 (en) 1997-11-12 2001-04-17 Mycogen Corporation Plant-optimized genes encoding pesticidal toxins
NZ504510A (en) 1997-11-18 2002-10-25 Pioneer Hi Bred Int Methods and compositions for increasing efficiency of excision of a viral replicon from T-DNA that is transferred to a plant by agroinfection
ES2308327T3 (es) 1997-11-18 2008-12-01 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Composiciones y metodos para modificacion genetica de plantas.
AU1526199A (en) 1997-11-18 1999-06-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Targeted manipulation of herbicide-resistance genes in plants
ATE317440T1 (de) 1997-11-18 2006-02-15 Pioneer Hi Bred Int Neuartige methode zur integration von fremd-dna ins eukaryotische genom
DK2270234T3 (da) 1997-12-08 2013-06-03 California Inst Of Techn Fremgangsmåde til fremstilling af polynukleotid- og polypeptidsekvenser
AR017831A1 (es) 1997-12-10 2001-10-24 Pioneer Hi Bred Int Metodo para alterar la composicion de aminoacidos de una proteina nativa de interes, proteina elaborada, y polinucleotido
US6077824A (en) 1997-12-18 2000-06-20 Ecogen, Inc. Methods for improving the activity of δ-endotoxins against insect pests
US6060594A (en) 1997-12-18 2000-05-09 Ecogen, Inc. Nucleic acid segments encoding modified bacillus thuringiensis coleopteran-toxic crystal proteins
US6063597A (en) 1997-12-18 2000-05-16 Monsanto Company Polypeptide compositions toxic to coleopteran insects
PT1040192E (pt) 1997-12-18 2006-12-29 Monsanto Technology Llc Plantas transgénicas resistentes a insectos e métodos para melhoramento da actividade 8-endotoxina contra insectos
US6023013A (en) 1997-12-18 2000-02-08 Monsanto Company Insect-resistant transgenic plants
US7053282B1 (en) 1998-02-09 2006-05-30 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Alteration of amino acid compositions in seeds
CA2320960A1 (en) 1998-02-11 1999-08-19 Maxygen, Inc. Optimization of immunomodulatory properties of genetic vaccines
AU3289199A (en) 1998-02-11 1999-08-30 Maxygen, Inc. Antigen library immunization
ES2273127T3 (es) 1998-02-26 2007-05-01 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Promotor alfa-tubulin 3-18 del maiz.
WO1999043819A1 (en) 1998-02-26 1999-09-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Family of maize pr-1 genes and promoters
US6887708B1 (en) 1998-03-20 2005-05-03 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant control genes
ATE507299T1 (de) 1998-04-08 2011-05-15 Commw Scient Ind Res Org Verfahren und mittel zum erhalt von veränderten phänotypen
US6225530B1 (en) 1998-04-15 2001-05-01 The Salk Institute For Biological Studies Flowering locus T (FT) and genetically modified plants having modulated flower development
EP1071790A1 (en) 1998-04-24 2001-01-31 E.I. Dupont De Nemours And Company Phytic acid biosynthetic enzymes
US6635806B1 (en) 1998-05-14 2003-10-21 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for expression of transgenes in plants
US6307123B1 (en) 1998-05-18 2001-10-23 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for transgene identification
US6284948B1 (en) 1998-05-18 2001-09-04 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Genes and methods for control of nematodes in plants
EP0959133A1 (en) 1998-05-22 1999-11-24 Centrum Voor Plantenveredelings- En Reproduktieonderzoek (Cpro-Dlo) A process for inhibiting expression of genes
US7008664B1 (en) 1998-06-11 2006-03-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Method for improving the carcass quality of an animal
AU761570B2 (en) 1998-06-29 2003-06-05 Bristol-Myers Squibb Company Methods for generating highly diverse libraries
US6538177B1 (en) 1998-07-15 2003-03-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for fumonisin detoxification
JP2000083680A (ja) 1998-07-16 2000-03-28 Nippon Paper Industries Co Ltd 光誘導型プロモ―タ―の制御下に置かれた不定芽再分化遺伝子を選抜マ―カ―遺伝子とする植物への遺伝子導入方法及びこれに用いる植物への遺伝子導入用ベクタ―
US6693185B2 (en) 1998-07-17 2004-02-17 Bayer Bioscience N.V. Methods and means to modulate programmed cell death in eukaryotic cells
GB9816681D0 (en) 1998-07-31 1998-09-30 Minnesota Mining & Mfg Cleaning pads formed from non-woven abrasive web material,especially for domestic use
FR2782323B1 (fr) 1998-08-12 2002-01-11 Proteus Procede de production in vitro de sequences polynucleotidiques recombinees, banques de sequences et sequences ainsi obtenues
CA2339483C (en) 1998-08-17 2006-01-31 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize cellulose synthases and uses thereof
US6930225B2 (en) 1998-08-17 2005-08-16 Pioneer Hi-Bred Int'l Inc. Maize cellulose synthases and uses thereof
US7179955B2 (en) 1998-08-17 2007-02-20 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize cellulose synthases genes and uses thereof
US20040068767A1 (en) 1998-08-17 2004-04-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize cellulose synthases and uses thereof
DE69928264T2 (de) 1998-08-20 2006-07-13 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Samen-bevorzugende promotoren
WO2000012733A1 (en) 1998-08-28 2000-03-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Seed-preferred promoters from end genes
US6346403B1 (en) 1998-09-08 2002-02-12 E.I. Du Pont De Nemours And Company Methionine metabolic enzymes
US6664446B2 (en) 1999-03-23 2003-12-16 Mendel Biotechnology, Inc. Transgenic plants comprising polynucleotides encoding transcription factors that confer disease tolerance
US20050086718A1 (en) 1999-03-23 2005-04-21 Mendel Biotechnology, Inc. Plant transcriptional regulators of abiotic stress
US6717034B2 (en) 2001-03-30 2004-04-06 Mendel Biotechnology, Inc. Method for modifying plant biomass
US20030041356A1 (en) 2001-03-27 2003-02-27 Lynne Reuber Methods for modifying flowering phenotypes
WO2000018906A2 (en) 1998-09-29 2000-04-06 Maxygen, Inc. Shuffling of codon altered genes
KR20010073216A (ko) 1998-10-23 2001-07-31 칼튼 제이. 에이블 약 15ｋＤａ 및 약 45ｋＤａ 살충성 단백질을 코딩하는식물에 최적화된 폴리뉴클레오티드
US6468523B1 (en) 1998-11-02 2002-10-22 Monsanto Technology Llc Polypeptide compositions toxic to diabrotic insects, and methods of use
US6489542B1 (en) 1998-11-04 2002-12-03 Monsanto Technology Llc Methods for transforming plants to express Cry2Ab δ-endotoxins targeted to the plastids
JP2002529096A (ja) 1998-11-09 2002-09-10 パイオニア ハイ−ブレッド インターナショナル， インコーポレイテッド 転写アクチベータｌｅｃ１核酸、ポリペプチドおよびそれらの使用
US6825397B1 (en) 1998-11-09 2004-11-30 Pioneer Hi-Bred International, Inc. LEC1 trancriptional activator nucleic acids and methods of use thereof
ATE354283T1 (de) 1998-11-20 2007-03-15 Pioneer Hi Bred Int Verfahren zur verringerung der cholesterinkonzentration in tierprodukten
IL143338A0 (en) 1998-11-25 2002-04-21 Univ Pennsylvania Ethylene-response-factor (erfi) in plants
US6531648B1 (en) 1998-12-17 2003-03-11 Syngenta Participations Ag Grain processing method and transgenic plants useful therein
AU2415200A (en) 1999-01-18 2000-08-01 Maxygen, Inc. Methods of populating data structures for use in evolutionary simulations
US6436675B1 (en) 1999-09-28 2002-08-20 Maxygen, Inc. Use of codon-varied oligonucleotide synthesis for synthetic shuffling
IL137868A0 (en) 1999-01-19 2001-10-31 Maxygen Inc Oligonucleotide mediated nucleic acid recombination
GB9901927D0 (en) 1999-01-28 1999-03-17 John Innes Foundation Methods and means for modification of plant characteristics
GB9902660D0 (en) 1999-02-05 1999-03-31 Plant Bioscience Ltd Plant gene
US6323392B1 (en) 1999-03-01 2001-11-27 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Formation of brassica napus F1 hybrid seeds which exhibit a highly elevated oleic acid content and a reduced linolenic acid content in the endogenously formed oil of the seeds
CA2364997A1 (en) 1999-03-05 2000-09-08 Maxygen, Inc. Encryption of traits using split gene sequences
US6531316B1 (en) 1999-03-05 2003-03-11 Maxyag, Inc. Encryption of traits using split gene sequences and engineered genetic elements
US6835540B2 (en) 2001-03-16 2004-12-28 Mendel Biotechnology, Inc. Biosynthetic pathway transcription factors
WO2000056908A2 (en) 1999-03-24 2000-09-28 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize chitinases and their use in enhancing disease resistance in crop plants
JP2003525589A (ja) 1999-04-07 2003-09-02 メンデル・バイオテクノロジー・インコーポレーテッド 遺伝的形質育種法
US7531723B2 (en) 1999-04-16 2009-05-12 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Modulation of cytokinin activity in plants
US6992237B1 (en) 1999-04-16 2006-01-31 Pioneer Hi-Bred International Inc. Regulated expression of genes in plant seeds
MXPA01010922A (es) 1999-04-29 2003-06-24 Syngenta Ltd Plantas resistentes a herbicidas.
CN1359422A (zh) 1999-04-29 2002-07-17 辛甄塔有限公司 抗除草剂植物
AU4134000A (en) 1999-04-29 2000-11-17 Syngenta Limited Herbicide resistant plants
US6855865B2 (en) 1999-05-07 2005-02-15 E.I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acids encoding plant defensins and methods of use thereof
CA2372687A1 (en) 1999-05-07 2000-11-16 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Phytyl/prenyltransferase nucleic acids, polypeptides and uses thereof
US6429357B1 (en) 1999-05-14 2002-08-06 Dekalb Genetics Corp. Rice actin 2 promoter and intron and methods for use thereof
US6194636B1 (en) 1999-05-14 2001-02-27 Dekalb Genetics Corp. Maize RS324 promoter and methods for use thereof
US6207879B1 (en) 1999-05-14 2001-03-27 Dekalb Genetics Corporation Maize RS81 promoter and methods for use thereof
US6232526B1 (en) 1999-05-14 2001-05-15 Dekalb Genetics Corp. Maize A3 promoter and methods for use thereof
US6653535B1 (en) 1999-05-28 2003-11-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods for modulating water-use efficiency or productivity in a plant by transforming with a DNA encoding a NAPD-malic enzyme operably linked to a guard cell or an epidermal cell promoter
US6441274B1 (en) 1999-06-16 2002-08-27 E. I. Du Pont De Nemours & Company Plant tryptophan synthase beta subunit
WO2001004147A2 (en) 1999-07-12 2001-01-18 E.I. Du Pont De Nemours And Company Plant inositol polyphosphate phosphatase homologs
US6388171B1 (en) 1999-07-12 2002-05-14 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for fumonisin detoxification
CA2381927A1 (en) 1999-08-13 2001-02-22 Syngenta Participations Ag Herbicide-tolerant protoporphyrinogen oxidase
WO2001012800A2 (en) 1999-08-16 2001-02-22 E.I. Du Pont De Nemours And Company Method for the production of calendic acid, a fatty acid containing delta-8,10,12 conjugated double bonds and dimorphecolic acid, a fatty acid containing a 9-hydroxy group and delta-10,12 conjugated double bonds
AU6785900A (en) 1999-08-19 2001-03-13 Ppg Industries Ohio, Inc. Hydrophobic particulate inorganic oxides and polymeric compositions containing same
US6423886B1 (en) 1999-09-02 2002-07-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Starch synthase polynucleotides and their use in the production of new starches
GB9922071D0 (en) 1999-09-17 1999-11-17 Plant Bioscience Ltd Methods and means for modification of plant characteristics
AU1569801A (en) 1999-10-12 2001-04-23 Robert Creelman Flowering time modification
US6384304B1 (en) 1999-10-15 2002-05-07 Plant Genetic Systems N.V. Conditional sterility in wheat
CA2388791C (en) 1999-10-21 2006-11-21 Fluor Corporation Methods and apparatus for high propane recovery
US20020178464A1 (en) 1999-11-10 2002-11-28 Whitehead Institute For Biomedical Research Proton transporters and uses in plants
WO2001036596A2 (en) 1999-11-17 2001-05-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Modulation of plant response to abscisic acid
EP2133360A3 (en) 1999-11-17 2010-03-03 Mendel Biotechnology, Inc. Environmental stress tolerance genes
US6248535B1 (en) 1999-12-20 2001-06-19 University Of Southern California Method for isolation of RNA from formalin-fixed paraffin-embedded tissue specimens
US7049115B2 (en) 2000-02-29 2006-05-23 E. I. Du Pont De Nemours & Company Genes encoding denitrification enzymes
BR0109118A (pt) 2000-03-09 2002-11-26 Monsanto Technology Llc Métodos para produzir plantas tolerantes a glifosato e composições disso
MXPA02010012A (es) 2000-04-14 2003-04-25 Pioneer Hi Bred Int Celulosa sintetasas de maiz y usos de las mismas.
US6777592B2 (en) 2000-04-14 2004-08-17 E.I. Du Pont Denemours And Company Arthropod defensins of Scolopendra canidens, Vaejovis carolinianus, and Argiope spp.
BR0111839A (pt) 2000-06-23 2003-09-16 Du Pont Construções recombinantes, método para a redução da expressão de um mrna alvo ou qualquer mrna endógeno substancialmente similar, rna e método para a identificação ou seleção de um gene vegetal essencial
AU2001291656A1 (en) 2000-06-30 2002-01-08 Willem Broekaert Gene silencing vector
CN1137265C (zh) 2000-07-06 2004-02-04 中国科学院微生物研究所 一种提高植物氮素同化效率的方法
WO2002015675A1 (en) 2000-08-22 2002-02-28 Mendel Biotechnology, Inc. Genes for modifying plant traits iv
EP1312132A1 (en) 2000-08-22 2003-05-21 Paratek Microwave, Inc. Combline filters with tunable dielectric capacitors
US6713259B2 (en) 2000-09-13 2004-03-30 Monsanto Technology Llc Corn event MON810 and compositions and methods for detection thereof
EP1346035A2 (en) 2000-10-24 2003-09-24 E. I. du Pont de Nemours and Company Plant transcription factors
US7605304B2 (en) 2000-10-24 2009-10-20 E.I. Du Pont De Nemours And Company Genes encoding novel bacillus thuringiensis proteins with pesticidal activity against coleopterans
US7462481B2 (en) 2000-10-30 2008-12-09 Verdia, Inc. Glyphosate N-acetyltransferase (GAT) genes
US7741533B2 (en) 2000-11-07 2010-06-22 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Grain quality through altered expression of seed proteins
US6858778B1 (en) 2000-11-07 2005-02-22 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plants transformed with a DNA construct comprising a nucleic acid molecule encoding an 18 kD α-globulin
US20050160488A1 (en) 2000-11-07 2005-07-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Grain quality through altered expression of seed proteins
US20030024005A1 (en) 2000-11-17 2003-01-30 Hillyard Jeanna R. Cotton event PV-GHBK04 (757) and compositions and methods for detection thereof
US7122658B1 (en) 2000-11-22 2006-10-17 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Seed-preferred regulatory elements and uses thereof
MXPA03006190A (es) 2001-01-12 2004-12-03 Pioneer Hi Bred Int Genes de quinasa polifosfato inositol novedosos y usos de los mismos.
US6812380B2 (en) 2001-03-27 2004-11-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods of zearalenone detoxification
JP2002281975A (ja) 2001-03-28 2002-10-02 Yamaguchi Technology Licensing Organization Ltd 大豆のナイトレートトランスポーター１遺伝子ファミリーに属する遺伝子
AR035799A1 (es) 2001-03-30 2004-07-14 Syngenta Participations Ag Toxinas insecticidas aisladas de bacillus thuringiensis y sus usos.
US6891085B2 (en) 2001-04-20 2005-05-10 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Nucleic acid encoding the FUS6 antimicrobial polypeptide of Agrotis ipsilon and its use to enhance disease resistance in a plant
WO2002090540A1 (en) 2001-05-10 2002-11-14 The Salk Institute For Biological Studies Ethylene insensitive plants
BR0210593A (pt) 2001-06-22 2007-01-02 Pioneer Hi Bred Int polinucleotìdeos de defensina e métodos de uso
US7294759B2 (en) 2001-06-29 2007-11-13 E. I. Du Pont De Nemours And Company Alteration of oil traits in plants
EP1421183A4 (en) 2001-08-02 2006-05-17 Pioneer Hi Bred Int PROCESS FOR IMPROVING THE PROPERTIES OF SEEDS AND CEREALS
WO2003014348A1 (en) 2001-08-06 2003-02-20 Monsanto Technology Llc Dna molecules from maize and methods of use thereof
AU2002313749A1 (en) 2001-08-09 2003-02-24 Mendel Biotechnology, Inc. Biochemistry-related polynucleotides and polypeptides in plants
US7230167B2 (en) 2001-08-31 2007-06-12 Syngenta Participations Ag Modified Cry3A toxins and nucleic acid sequences coding therefor
EP1961293A3 (en) 2001-09-27 2009-01-28 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Phytate polynucleotides and methods of use
US7041873B2 (en) 2001-10-16 2006-05-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for promoting expression of nucleic acids in plants
US7145060B2 (en) 2001-11-07 2006-12-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Nucleic acid encoding a chitinase and methods of using it to make fungal resistant plants
US7087810B2 (en) 2001-11-07 2006-08-08 Muller Mathis L Isolated nucleic acids encoding proteins with chitinase activity and uses thereof
WO2003052063A2 (en) 2001-12-14 2003-06-26 The Nitrate Elimination Company, Inc. Simplified eukaryotic nitrate reductase
DE60332711D1 (de) 2002-03-22 2010-07-08 Bayer Bioscience Nv Neue insektizide proteine von bazillus thuringiensis
US7154029B2 (en) 2002-03-22 2006-12-26 E.I. Du Pont De Nemours And Company Compositions and methods for altering tocotrienol content
US20040128719A1 (en) 2002-06-21 2004-07-01 Klee Harry J. Materials and methods for tissue-specific targeting of ethylene insensitivity in transgenic plants
BR0312064A (pt) 2002-06-26 2005-08-09 Du Pont Genes que codificam proteìnas com atividade pesticida
US7462760B2 (en) 2002-06-26 2008-12-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Genes encoding plant protease-resistant pesticidal proteins and method of their use
EP1532247A4 (en) 2002-07-29 2006-08-30 Monsanto Technology Llc PAVING THE EVENT PV-ZMIR13 (MON863) AND COMPOSITIONS AND METHODS FOR DETECTING THEREOF
US20040078852A1 (en) 2002-08-02 2004-04-22 Thomashow Michael F. Transcription factors to improve plant stress tolerance
PT1546336E (pt) 2002-09-18 2012-04-09 Mendel Biotechnology Inc Polinucleótidos e polipéptidos em plantas
BRPI0406856A (pt) 2003-01-21 2005-12-27 Dow Agrosciences Llc Mistura e compatibilidade de proteìnas de tc para controle de peste
US20040210965A1 (en) 2003-02-20 2004-10-21 Athenix Corporation AXMI-007, a delta-endotoxin gene and methods for its use
US7355099B2 (en) 2003-02-20 2008-04-08 Athenix Corporation AXMI-004, a delta-endotoxin gene and methods for its use
US7351881B2 (en) 2003-02-20 2008-04-01 Athenix Corporation AXMI-008, a delta-endotoxin gene and methods for its use
ATE503835T1 (de) 2003-02-20 2011-04-15 Athenix Corp Delta-endotoxin-gene und verfahren zu ihrer verwendung
US20040210964A1 (en) 2003-02-20 2004-10-21 Athenix Corporation AXMI-009, a delta-endotoxin gene and methods for its use
US20040197917A1 (en) 2003-02-20 2004-10-07 Athenix Corporation AXMI-014, delta-endotoxin gene and methods for its use
US20040216186A1 (en) 2003-02-20 2004-10-28 Athenix Corporation AXMI-006, a delta-endotoxin gene and methods for its use
EP1613730A4 (en) 2003-03-28 2007-12-05 Monsanto Technology Llc NEW PLANT PROMOTORS FOR USE IN THE EARLY SEED DEVELOPMENT PHASE
CN101220358A (zh) 2003-04-04 2008-07-16 先锋高级育种国际公司 植物中细胞分裂素活性的调节
WO2004099447A2 (en) 2003-05-02 2004-11-18 Dow Agrosciences Llc Corn event tc1507 and methods for detection thereof
BRPI0412390A (pt) 2003-07-07 2006-09-19 Monsanto Technology Llc proteìnas inseticidas secretadas de espécies bacillus e uso dessas proteìnas
US7253343B2 (en) 2003-08-28 2007-08-07 Athenix Corporation AXMI-003, a delta-endotoxin gene and methods for its use
WO2005030967A2 (en) 2003-09-25 2005-04-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Crop plant cystatin proteinase inhibitors and methods of use
US20050183161A1 (en) 2003-10-14 2005-08-18 Athenix Corporation AXMI-010, a delta-endotoxin gene and methods for its use
CA2450000A1 (en) 2003-12-18 2005-06-18 Alberta Research Council Inc. Method of creating plants with reduced level of saturated fatty acid in seed oil
WO2005066202A2 (en) 2003-12-22 2005-07-21 E.I. Du Pont De Nemours And Company Bacillus cry9 family members
MXPA06009411A (es) 2004-02-20 2007-03-29 Pioneer Hi Bred Int Lipasas y metodos de uso.
KR101225918B1 (ko) 2004-02-25 2013-01-24 파이어니어 하이 부렛드 인터내쇼날 인코포레이팃드 신규한 바실루스 투링기엔시스 결정 폴리펩티드,폴리뉴클레오티드, 및 이의 조성물
US20070006340A1 (en) 2004-03-05 2007-01-04 Lang Bruce A Combinations of Cry1Ab and Cry1Fa as an insect resistance management tool
US7179965B2 (en) 2004-03-26 2007-02-20 Dow Agrosciences Llc Cry1F and Cry1Ac transgenic cotton lines and event-specific identification thereof
CA2762011C (en) 2004-04-09 2019-05-07 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for control of insect infestations in plants
US7405074B2 (en) 2004-04-29 2008-07-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Glyphosate-N-acetyltransferase (GAT) genes
ES2408244T5 (es) 2004-04-30 2017-08-08 Dow Agrosciences Llc Nuevo gen de resistencia a los herbicidas
EP1756286B1 (en) 2004-05-20 2010-04-28 Pioneer-Hi-Bred International, Inc. Maize multidrug resistance-associated protein polynucleotides and methods of use
AU2005254993B2 (en) 2004-06-09 2009-08-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plastid transit peptides
AU2005262493A1 (en) 2004-06-16 2006-01-19 Basf Plant Science Gmbh Nucleic acid molecules encoding wrinkled1-like polypeptides and methods of use in plants
US7301069B2 (en) 2004-06-30 2007-11-27 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods of protecting plants from pathogenic fungi and nematodes
AU2005270059A1 (en) 2004-07-02 2006-02-09 E.I. Du Pont De Nemuors And Company Antifungal polypeptides
WO2006039376A2 (en) 2004-09-29 2006-04-13 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Corn event das-59122-7 and methods for detection thereof
WO2006083891A2 (en) 2005-01-31 2006-08-10 Athenix Corporation Axmi-018, axmi-020, and axmi-021, a family of delta-endotoxin genes and methods for their use
EP2045327B8 (en) 2005-03-08 2012-03-14 BASF Plant Science GmbH Expression enhancing intron sequences
US7601498B2 (en) 2005-03-17 2009-10-13 Biotium, Inc. Methods of using dyes in association with nucleic acid staining or detection and associated technology
ATE548378T1 (de) 2005-04-01 2012-03-15 Athenix Corp Axmi-036 ein delta-endotoxin-gen und verfahren zur dessen verwendung
US20060223102A1 (en) 2005-04-04 2006-10-05 E.I. Du Pont De Nemours And Company Polynucleotides and methods for making plants resistant to fungal pathogens
US7622572B2 (en) 2005-05-02 2009-11-24 Athenix Corporation AXMI-028 and AXMI-029, a family of novel delta-endotoxin genes and methods for their use
BRPI0612710A2 (pt) 2005-07-06 2012-10-02 Cropdesign Nv método para aumentar o rendimento de plantas com relação às plantas de controle, e para produzir uma planta transgênica tendo rendimento aumentado, planta, construção, partes coletáveis de uma planta, produtos, e, uso de um ácido nucleico / gene de tipo ste20 ou variante do mesmo, ou uso de um polipeptìdeo de tipo ste20 ou seu homólogo
MX2008000429A (es) 2005-07-18 2008-03-10 Basf Plant Science Gmbh Aumento del rendimiento en plantas con sobreexpresion de los genes accdp.
US7803992B2 (en) 2005-08-24 2010-09-28 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions for expressing an herbicide-tolerant polynucleotide
EP2295584B1 (en) 2005-09-16 2015-06-10 deVGen N.V. Transgenic plant-based methods for plant pests using RNAi
CN101263229A (zh) 2005-09-16 2008-09-10 拜尔农科股份有限公司 表达靶向内腔的蛋白质的转质体植物
US7629455B2 (en) 2005-12-07 2009-12-08 Monsanto Technology Llc Zea mays NFB2 promoter
US7329736B2 (en) 2006-04-14 2008-02-12 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Bacillus thuringiensis cry gene and protein
US7449552B2 (en) 2006-04-14 2008-11-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Bacillus thuringiensis cry gene and protein
AU2007266307C1 (en) 2006-05-25 2012-10-25 Hexima Limited Multi-gene expression vehicle
CN101501066B (zh) 2006-06-14 2012-05-30 阿则耐克斯公司 δ-内毒素基因家庭，AXMI-031、AXMI-039、AXMI-040和AXMI-049，及其使用方法
EP2455394B1 (en) 2006-06-15 2017-04-12 Athenix Corporation A family of pesticidal proteins and methods for their use
DE602007004340D1 (de) 2006-07-21 2010-03-04 Du Pont Verfahren zur identifizierung neuer gene
CL2007002135A1 (es) 2006-07-21 2008-03-14 Pioneer Hi Bred Int Acido nucleico de bacillus thuringiensis que codifican polipeptidos con actividad plaguicida; construccion de adn y celula huesped que lo comprenden; metodo de proteccion de una planta contra una plaga; polipeptidos y metodo de produccion; y composic
BRPI0715354A2 (pt) 2006-08-07 2015-06-23 Univ Missouri Quinases semelhantes a receptor lysm para melhora da resposta de defesa de plantas contra fungos patogênicos
AR064216A1 (es) 2006-12-08 2009-03-18 Pioneer Hi Bred Int Polipeptidos cristalinos de bacillus thuringiensis, polinucleotidos y composiciones de los mismos
EP2468873A1 (en) 2006-12-15 2012-06-27 CropDesign N.V. Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
CN103588865B (zh) 2007-03-28 2016-09-07 先正达参股股份有限公司 杀虫的蛋白质
US7790156B2 (en) 2007-04-10 2010-09-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Δ-8 desaturases and their use in making polyunsaturated fatty acids
US8609936B2 (en) 2007-04-27 2013-12-17 Monsanto Technology Llc Hemipteran-and coleopteran active toxin proteins from Bacillus thuringiensis
EP2164959B1 (en) 2007-06-20 2012-12-19 The Australian National University Method for improving stress resistance in plants and materials therefor
US7772465B2 (en) 2007-06-26 2010-08-10 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity
MX2009013648A (es) 2007-07-13 2010-01-27 Basf Plant Science Gmbh Plantas transgenicas con mejor tolerancia a la tension y produccion.
EP2180780A2 (en) 2007-08-29 2010-05-05 E. I. du Pont de Nemours and Company Methods involving genes encoding nucleoside diphosphatase kinase (ndk) polypeptides and homologs thereof for modifying the plant's root architecture
EP2537940A3 (en) 2007-09-14 2013-04-10 BASF Plant Science GmbH Plants having increased yield-related traits and a method for making the same
US20090144852A1 (en) 2007-10-16 2009-06-04 Athenix Corporation Axmi-066 and axmi-076: delta-endotoxin proteins and methods for their use
BRPI0820653B1 (pt) 2007-12-03 2023-05-16 Syngenta Participations Ag Fitase isolada termotolerante e enzimaticamente suscetível, polinucleotídeo, cassete de expressão, vetor, célula hospedeira microbiana, método para preparar a referida fitase, preparação e ração animal
US8173866B1 (en) 2008-01-11 2012-05-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Modulation of plant xylan synthases
US8809625B2 (en) 2008-01-17 2014-08-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for the suppression of target polynucleotides from Lygus
US20090188008A1 (en) 2008-01-17 2009-07-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for the suppression of target polynucleotides
EP2112149A1 (de) 2008-04-22 2009-10-28 Bayer CropScience Aktiengesellschaft 2-[(1h-Pyrazol-4-ylmethyl)-sulfonyl]-Oxazol-Derivate, 2-[(1H-Pyrazol-4-ylmethyl)-sulfanyl]-Oxazol-Derivate und chirale 2-[(1H-Pyrazol-4-ylmethyl)-sulfinyl]-Oxazol-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren
CN102066408B (zh) 2008-06-25 2015-07-01 阿森尼克斯公司 毒素基因及其使用方法
MX357562B (es) 2008-07-02 2018-07-13 Athenix Corp Axmi-115, axmi-113, axmi-005, axmi-163 y axmi-184: proteinas insecticidas vip3a de bacillus thuringiensis y metodos para su uso.
GB0816880D0 (en) 2008-09-15 2008-10-22 Syngenta Ltd Improvements in or relating to organic compounds
ATE497631T1 (de) 2008-10-08 2011-02-15 Research In Motion Ltd Zweistufiger einzeltaster
CN102388143A (zh) 2008-12-23 2012-03-21 阿森尼克斯公司 AXMI-150 δ-内毒素基因及其使用方法
BRPI0924153A2 (pt) 2009-01-23 2016-05-24 Pioneer Hi Bred Int molécula de ácido nucleico isolado, construção de dna, célula hospedeira, planta transgênica, semente transformada, polipeptídeo isolado com atividade pesticida, composição e método para controlar uma população de praga de insetos, para exterminar uma praga de insetos, para produzir um polipeptídeo com atividade pesticida e para proteger uma planta de uma praga
CN104232679A (zh) 2009-01-28 2014-12-24 巴斯夫植物科学有限公司 具有增强的产量相关性状的植物及其制备方法
CN102369286B (zh) 2009-02-05 2014-12-10 阿森尼克斯公司 变体axmi-r1δ-内毒素基因和使用它们的方法
EA026111B1 (ru) 2009-02-27 2017-03-31 Атеникс Корпорейшн Пестицидные белки и способы их применения
AR075818A1 (es) 2009-03-11 2011-04-27 Athenix Corp Axmi-001, axmi- 002, axmi-030 y axmi -035 y axmi -045: genes de toxina y metodos para su uso
US8033349B2 (en) 2009-03-12 2011-10-11 Ford Global Technologies, Inc. Auto-seek electrical connection for a plug-in hybrid electric vehicle
CA2757581A1 (en) 2009-04-14 2010-10-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Modulation of acc synthase improves plant yield under low nitrogen conditions
EP2419441B1 (en) 2009-04-17 2015-01-21 Dow AgroSciences LLC Dig-3 insecticidal cry toxins
US8334366B1 (en) 2009-04-29 2012-12-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Mutant lycotoxin-1 peptide sequences for insecticidal and cell membrane altering properties
US20120066794A1 (en) 2009-05-28 2012-03-15 Nirmala Sharma Increased Seed Oil and Abiotic Stress Tolerance Mediated by HSI2
US8338662B2 (en) 2009-06-04 2012-12-25 Pioneer Hi Bred International Inc Viral promoter, truncations thereof, and methods of use
US8350121B2 (en) 2009-06-04 2013-01-08 Pioneer Hi Bred International Inc Viral promoter, truncations thereof, and methods of use
MX2011013675A (es) 2009-06-16 2012-01-20 Dow Agrosciences Llc Toxinas cry dig-11 insecticidas.
CA2766800C (en) 2009-07-02 2019-08-06 Athenix Corp. Axmi-205 pesticidal gene and methods for its use
WO2011031922A1 (en) 2009-09-11 2011-03-17 Valent Bioscience Corporation Novel bacillus thuringiensis isolate
WO2011050675A1 (en) 2009-10-30 2011-05-05 Institute Of Genetics And Developmental Biology, Chinese Academy Of Sciences Genes conferring drought and salt tolerance and uses thereof
US8916746B2 (en) 2009-10-30 2014-12-23 Japan Tobacco, Inc. Drought tolerant plants and related constructs and methods involving genes encoding DTP21 polypeptides
US8395022B2 (en) 2009-11-12 2013-03-12 Pioneer Hi Bred International Inc Viral promoter, truncations thereof, and methods of use
US20120331589A1 (en) 2009-12-16 2012-12-27 Dow Agrosciences Llc COMBINED USE OF CRY1Da AND CRY1Fa PROTEINS FOR INSECT RESISTANCE MANAGEMENT
PT2512222T (pt) 2009-12-16 2018-04-16 Dow Agrosciences Llc Utilização combinada das proteínas cry1ca e cry1fa para a gestão da resistência de insetos
EP2513317B1 (en) 2009-12-16 2018-01-24 Dow Agrosciences LLC Use of cry1da in combination with cry1be for management of resistant insects
US20120324605A1 (en) 2009-12-16 2012-12-20 Dow Agrosciences Llc Insectcidal protein combinations for controlling fall armyworm and european corn borer, and methods for insect resistance management
JP5908408B2 (ja) 2009-12-16 2016-04-26 ダウ アグロサイエンシィズ エルエルシー 抵抗性昆虫対応のためのＶｉｐ３ＡｂとＣｒｙ１Ｆａとの併用
US9139844B2 (en) 2009-12-16 2015-09-22 Dow Agrosciences Llc Combined use of Cry1Ca and Cry1Ab proteins for insect resistance management
EP2513318B1 (en) 2009-12-16 2018-01-24 Dow AgroSciences LLC Use of cry1ab in combination with cry1be for management of resistant insects
US20130025000A1 (en) 2009-12-17 2013-01-24 Tong Zhu Promoter for regulation of gene expression in plant roots
EP2513319A4 (en) 2009-12-17 2013-05-08 Univ Missouri PLANT GENES ASSOCIATED WITH SEED OIL CONTENT AND METHODS OF USE
EP2536266A2 (en) 2010-02-18 2012-12-26 Athenix Corp. Axmi218, axmi219, axmi220, axmi226, axmi227, axmi228, axmi229, axmi230, and axmi231 delta-endotoxin genes and methods for their use
WO2011103248A2 (en) 2010-02-18 2011-08-25 Athenix Corp. AXMI221z, AXMI222z, AXMI223z, AXMI224z, AND AXMI225z DELTA-ENDOTOXIN GENES AND METHODS FOR THEIR USE
AU2011242490B2 (en) 2010-04-23 2014-11-06 Dow Agrosciences Llc Combinations including Cry3Aa and Cry6Aa proteins to prevent development of resistance in corn rootworms (Diabrotica spp.)
US8872001B2 (en) 2010-06-04 2014-10-28 Pioneer Hi Bred International Inc Compositions and methods for insecticidal control of stinkbugs
UA111592C2 (uk) 2010-07-07 2016-05-25 Сінгента Партісіпейшнс Аг Спосіб контролю над твердокрилими комахами-шкідниками
WO2012006426A2 (en) 2010-07-09 2012-01-12 Grassroots Biotechnology, Inc. Regulatory polynucleotides and uses thereof
WO2012024176A2 (en) 2010-08-19 2012-02-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Novel bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity
CA2807375A1 (en) 2010-08-19 2012-02-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Novel bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity
US20120079622A1 (en) 2010-09-24 2012-03-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Yield Enhancement in Plants by Modulation of a ZM-LOBDP1 Protein
MX2013003411A (es) 2010-09-24 2013-09-26 Basf Plant Science Co Gmbh Plantas que tienen mejores rasgos relacinados con el rendimiento y un metodo para producirlas.
US8772024B2 (en) 2010-09-27 2014-07-08 Pioneer Hi Bred International Inc Yield enhancement in plants by modulation of a ZM-ZFP1 protein
AU2011322510B2 (en) 2010-10-27 2016-05-05 Devgen Nv Down-regulating gene expression in insect pests
US9624504B2 (en) 2010-10-28 2017-04-18 E I Du Pont De Nemours And Company Drought tolerant plants and related constructs and methods involving genes encoding DTP6 polypeptides
CA2815096A1 (en) 2010-10-29 2012-05-03 Xiang Huang Overexpression of plant mirnas for parasite control
BRPI1107329A2 (pt) 2010-12-30 2019-11-19 Dow Agrosciences Llc moléculas de ácido nucléico que direcionadas à subunidade h de atpase vacuolar que conferem resistência a pragas de coleópteros, vetor de transformação de planta, célula transformada, bem como métodos para controlar uma população de praga de coleóptero, controlar uma infestação pela dita praga, melhorar o rendimento de uma safra e para produzir uma célula transgênica
BR112013020382A2 (pt) 2011-02-11 2016-10-25 Monsanto Technology Llc ácidos nucleicos e proteínas pesticidas e usos dos mesmos
MX344356B (es) 2011-02-15 2016-12-14 Pioneer Hi Bred Int Promotores preferidos para raices y metodos de uso.
US8878007B2 (en) * 2011-03-10 2014-11-04 Pioneer Hi Bred International Inc Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity
CN111269921B (zh) 2011-04-07 2023-12-05 孟山都技术公司 具有对抗半翅目和/或鳞翅目昆虫的活性的昆虫抑制毒素家族
US8513494B2 (en) 2011-04-08 2013-08-20 Chunren Wu Plants and seeds of spring canola variety SCV695971
CN110452908A (zh) 2011-04-20 2019-11-15 德福根有限公司 在昆虫害虫中下调基因表达
US9150625B2 (en) 2011-05-23 2015-10-06 E I Du Pont De Nemours And Company Chloroplast transit peptides and methods of their use
MX363910B (es) 2011-07-28 2019-04-08 Athenix Corp Gen de la toxina axmi270 y sus metodos de uso.
UA122657C2 (uk) 2011-07-29 2020-12-28 Атенікс Корп. Ген пестициду axmi279 та спосіб його застосування
CA2863201A1 (en) 2012-02-01 2013-08-08 Dow Agrosciences Llc Glyphosate resistant plants and associated methods
IN2014DN06986A (ru) 2012-02-29 2015-04-10 Dow Agrosciences Llc
US20130312136A1 (en) 2012-05-21 2013-11-21 Syngenta Participations Ag Methods and Compositions for Modulating Gene Expression in Plants
US9688730B2 (en) 2012-07-02 2017-06-27 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
CN106232820A (zh) 2013-08-16 2016-12-14 先锋国际良种公司 杀昆虫蛋白及其使用方法
EP3692786B1 (en) 2013-09-13 2022-11-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
WO2015134256A1 (en) 2014-02-28 2015-09-11 E. I. Du Pont De Nemours And Company Combinatorial libraries
WO2015130893A1 (en) 2014-02-28 2015-09-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Synthetic oligoglucosamines for improvement of plant growth and yield
WO2015130890A1 (en) 2014-02-28 2015-09-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Synthetic salt complexes for improvement of plant growth and yield

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
UniProt Submission C4KSV9 (29 May 2013) [Retrieved from the Internet 12 December 2014: <http://www.uniprot.org/uniprot/C4KSV9.txt?version=11>]; in entirety *

Also Published As

Publication number Publication date
US20200404926A1 (en) 2020-12-31
US10667524B2 (en) 2020-06-02
MX2016003208A (es) 2016-08-11
EP3043635B1 (en) 2020-02-12
US11325949B2 (en) 2022-05-10
CA2923726A1 (en) 2015-03-19
CA3175984A1 (en) 2015-03-19
BR112016005543A2 (pt) 2018-01-30
BR122020001770B1 (pt) 2022-11-29
US20220340620A1 (en) 2022-10-27
MX2022013348A (es) 2022-12-13
EP4159028A1 (en) 2023-04-05
BR112016005543B1 (pt) 2022-03-08
UA120598C2 (uk) 2020-01-10
MX359027B (es) 2018-09-12
CN105705007A (zh) 2016-06-22
AR097658A1 (es) 2016-04-06
EP3692786B1 (en) 2022-11-02
WO2015038734A3 (en) 2015-06-11
CA3223359A1 (en) 2015-03-19
EA201690583A1 (ru) 2016-07-29
BR122021005579B1 (pt) 2022-11-29
ES2937045T3 (es) 2023-03-23
ES2776730T3 (es) 2020-07-31
EP3043635A4 (en) 2017-03-15
US20160366891A1 (en) 2016-12-22
ZA201601430B (en) 2017-05-31
CA3175967A1 (en) 2015-03-19
EP3692786A1 (en) 2020-08-12
CA2923726C (en) 2024-01-30
EP3043635A2 (en) 2016-07-20
WO2015038734A2 (en) 2015-03-19
MX2018010689A (es) 2023-01-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11325949B2 (en) Insecticidal proteins and methods for their use
US11162112B2 (en) Insecticidal proteins and methods for their use
US11203619B2 (en) Insecticidal proteins and methods for their use
US10563221B2 (en) Insecticidal proteins and methods for their use
RU2733898C2 (ru) Инсектицидные белки и способы их применения
US11208440B2 (en) Structure based methods for modification of PIP-72 polypeptides and PIP-72 polypeptides derived therefrom
US20230340522A1 (en) Insecticidal proteins and methods for their use
RU2666914C2 (ru) Новые инсектицидные белки и способы их применения

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM