EA030377B1 - Снижение содержания тяжелых металлов в растениях - Google Patents

Abstract

Изобретение описывает мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растения или растительные клетки, содержащие: (a) полинуклеотид, выбранный из группы, состоящей из (i) полинуклеотида, включающего в себя, состоящего или преимущественно состоящего из последовательности, по меньшей мере на 71% идентичной SEQ ID NO: 1, 2, 27, 28, или 29, или 51; или (ii) полинуклеотида, включающего в себя, состоящего или преимущественно состоящего из последовательности, по меньшей мере на 65% идентичной одной из последовательностей SEQ ID NO: 3-23 или 30-50; или (iii) полинуклеотида, кодирующего полипептид NtMRP, включающего в себя, состоящего или преимущественно состоящего из последовательности, по меньшей мере на 65% идентичной одной из последовательностей SEQ ID NO: 24-26 или 52, где полипептид обладает активностью транспортера тяжелых металлов; или (b) полинуклеотидную конструкцию, содержащую по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов в длину, которая по меньшей мере на 65% идентична участку одной из последовательностей SEQ ID NO: 1-23 или 27-51; или (c) двухцепочечную РНК, содержащую по меньшей мере две последовательности, которые, по меньшей мере частично, комплементарны друг другу, где смысловая цепь содержит первую последовательность, а антисмысловая цепь содержит вторую последовательность, причем по меньшей мере одна из последовательностей содержит по меньшей мере 10 смежных нуклеотидов РНК NtMRP; или (d) вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид, описанный в п.(i), (ii) или (iii), или полинуклеотидную конструкцию, описанную в п.(b).

Description

(57) Изобретение описывает мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растения или растительные клетки, содержащие: (а) полинуклеотид, выбранный из группы, состоящей из (ι) полинуклеотида, включающего в себя, состоящего или преимущественно состоящего из последовательности, по меньшей мере на 71% идентичной 8Ερ ГО \О: 1, 2, 27, 28, или 29, или 51; или (ϊϊ) полинуклеотида, включающего в себя, состоящего или преимущественно состоящего из последовательности, по меньшей мере на 65% идентичной одной из последовательностей 8Ερ ГО \О: 3-23 или 30-50; или (ϊϊϊ) полинуклеотида, кодирующего полипептид \ЕМРР, включающего в себя, состоящего или преимущественно состоящего из последовательности, по меньшей мере на 65% идентичной одной из последовательностей 8Ερ ГО \О: 2426 или 52, где полипептид обладает активностью транспортера тяжелых металлов; или (Ь) полинуклеотидную конструкцию, содержащую по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов в длину, которая по меньшей мере на 65% идентична участку одной из последовательностей 8Ερ ΙΌ \О: 1-23 или 27-51; или (с) двухцепочечную РНК, содержащую по меньшей мере две последовательности, которые, по меньшей мере частично, комплементарны друг другу, где смысловая цепь содержит первую последовательность, а антисмысловая цепь содержит вторую последовательность, причем по меньшей мере одна из последовательностей содержит по меньшей мере 10 смежных нуклеотидов РНК \ЕМРР; или (й) вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид, описанный в п.(1), (ϊϊ) или (ϊϊϊ), или полинуклеотидную конструкцию, описанную в п.(Ь).

Область изобретения

Настоящее изобретение направлено на полинуклеотиды и полипептиды, кодирующие транспортеры АВС, участвующие в транспорте тяжелых металлов. Настоящее изобретение также направлено на модификацию экспрессии указанных полинуклеотидов или полипептидов в растениях. В частности, настоящее изобретение относится к модуляции (например, к понижению или ингибированию) экспрессии или активности одного или нескольких транспортеров АВС, участвующих в субклеточном транспорте тяжелых металлов.

Введение

Растения получают необходимые тяжелые металлы, такие как цинк и медь, путем абсорбции субстратов ионов металлов из окружающей среды посредством разных механизмов транспорта, опосредуемых трансмембранными транспортерами, экспрессируемыми на поверхности клеток корней и других сосудистых тканей. Один из механизмов включает в себя транспорт токсинов из цитозоля. Например, семейство насосов на основе конъюгатов с глутатионом δ (Οδ-Χ) представляет собой класс транспортеров АТФ-связывающей кассеты (АВС), отвечающих за устранение/разрушение соединений в растениях, а также в клетках млекопитающих и дрожжей. Молекулярная структура и функции насосов Οδ-Χ, кодируемых генами МРК, сМОАТ (каналикулярного мультиспецифического транспортера анионов) и УСР1 (дрожжевого кадмиевого фактора) являются консервативными на протяжении молекулярной эволюции.

Воздействие на растения экзогенных токсинов, таких как микробные продукты, аллелохимикаты, агрохимикаты и тяжелые металлы, делает выживание клеток зависимым от механизмов детоксикации или уменьшения накопления указанных средств. Тяжелые металлы, такие как свинец, кадмий, ртуть и др., представляют собой основные токсичные вещества окружающей среды, которые вызывают образование реакционноспособных окисляющих частиц, разрушение ДНК и инактивацию ферментов путем связывания с активными центрами ферментов в клетках живых организмов. Загрязнение окружающей среды тяжелыми металлами сильно увеличилось в результате индустриализации и растет в объеме совокупности. Почвы, загрязненные тяжелыми металлами, подавляют нормальный рост растений и вызывают загрязнение продуктов питания. Многие тяжелые металлы являются высокотоксичными для человека и канцерогенными в низких концентрациях.

Безотлагательное уменьшение содержания тяжелых металлов, таких как кадмий, в растениях и растительных продуктах, потребляемых животными и людьми, является в высокой степени желательным и необходимым. Цель настоящего изобретения включает в себя удовлетворение данной потребности.

Аспекты и воплощения изобретения

Аспекты и воплощения настоящего изобретения описаны в прилагающейся формуле изобретения.

В одном аспекте изобретение предлагает выделенный полинуклеотид, выбранный из группы, включающей в себя: выделенный полинуклеотид, включающий в себя, состоящий или преимущественно состоящий из последовательности, по меньшей мере на 71% идентичной δΕΟ ΙΌ N0: 1, или δΕΟ ΙΌ N0: 2, или δΕΟ ΙΌ N0: 27, или δΕΟ ΙΌ N0: 28, или δΕΟ ΙΌ N0: 29, или δΕΟ ΙΌ N0: 51; выделенный полинуклеотид, включающий в себя, состоящий или преимущественно состоящий из последовательности, по меньшей мере на 65% идентичной одной из последовательностей δΕΟ ΙΌ N0: 3-23 или 30-50; полинуклеотид, кодирующий полипептид №МКР, включающий в себя, состоящий или преимущественно состоящий из последовательности, по меньшей мере на 65% идентичной одной из последовательностей δΕΟ ΙΌ N0: 24-26 или 52, причем указанный полипептид предпочтительно обладает активностью транспортера тяжелых металлов.

В другом аспекте изобретение предлагает полинуклеотидную конструкцию, содержащую по меньшей мере 15 непрерывных нуклеотидов в длину, которая по меньшей мере на 65% идентична участку одной из последовательностей δΕΟ ΙΌ N0: 1-23 или 27-51.

В другом аспекте изобретение предлагает двухцепочечный рибополинуклеотид, содержащий по меньшей мере две последовательности, которые, по меньшей мере частично, комплементарны друг другу, где смысловая цепь содержит первую последовательность, а антисмысловая цепь содержит вторую последовательность, причем по меньшей мере одна из последовательностей содержит по меньшей мере 10 смежных нуклеотидов РНК №МКР.

Предпочтительно двухцепочечная РНК содержит первую последовательность, по меньшей мере на 65% идентичную последовательности, состоящей по меньшей мере из 10 нуклеотидов ДНК №МКР; вторую последовательность и третью последовательность, обратно комплементарную первой последовательности, расположенную в такой же ориентации, что и первая последовательность, где вторая последовательность расположена между первой последовательностью и третьей последовательностью и находится в функциональной связи с первой последовательностью и третьей последовательностью.

Предпочтительно первая последовательность по меньшей мере на 65% идентична последовательности, выбранной из группы, включающей в себя δΕΟ ΙΌ N0: 3, δΕΟ ΙΌ N0: 4, δΕΟ ΙΌ N0: 5, δΕΟ ΙΌ N0: 6, δΕΟ ΙΌ N0: 7, δΕΟ ΙΌ N0: 8, δΕΟ ΙΌ N0: 9, δΕΟ ΙΌ N0: 10, δΕΟ ΙΌ N0: 11, δΕΟ ΙΌ N0: 12, δΕΟ ΙΌ N0: 13, δΕΟ ΙΌ N0: 14, δΕΟ ΙΌ N0: 15 δΕΟ ΙΌ N0: 16, δΕΟ ΙΌ N0: 17, δΕΟ ΙΌ N0: 18, δΕΟ ΙΌ N0: 19, δΕΟ ΙΌ N0: 20, δΕΟ ΙΌ N0: 21, δΕΟ ΙΌ N0: 22, δΕΟ ΙΌ N0: 23, δΕΟ ΙΌ N0: 30, δΕΟ ΙΌ N0: 31, δΕΟ ΙΌ N0: 32, δΕΟ ΙΌ N0: 33, δΕΟ ΙΌ N0: 34, δΕΟ ΙΌ N0: 35, δΕΟ ΙΌ N0: 36, δΕΟ ΙΌ N0: 37, δΕΟ ΙΌ N0: 38,

- 1 030377 δΙΤ) ΙΌ N0: 39, δΕΟ ΙΌ N0: 40, δΕΟ ΙΌ N0: 41, δΕΟ ΙΌ N0: 42, δΕΟ ΙΌ N0: 43, δΕΟ ΙΌ N0: 44, δΕΟ ΙΌ N0: 45, δΕΟ ΙΌ N0: 46, δΕΟ ΙΌ N0: 47, δΕΟ ΙΌ N0: 48, δΕΟ ΙΌ N0: 49 и δΕΟ ΙΌ N0: 50.

Предпочтительно третья последовательность по меньшей мере на 65% идентична последовательности, обратно комплементарной одной из последовательностей δΕΟ ΙΌ N0: 3, δΕΟ ΙΌ N0: 4, δΕΟ ΙΌ N0: 5, δΕΟ ΙΌ N0: 6, δΕΟ ΙΌ N0: 7, δΕΟ ΙΌ N0: 8, δΕΟ ΙΌ N0: 9, δΕΟ ΙΌ N0: 10, δΕΟ ΙΌ N0: 11, δΕΟ ΙΌ N0: 12, δΕΟ ΙΌ N0: 13, δΕΟ ΙΌ N0: 14, δΕΟ ΙΌ N0: 15 δΕΟ ΙΌ N0: 16, δΕΟ ΙΌ N0: 17, δΕΟ ΙΌ N0: 18, δΕΟ ΙΌ N0: 19, δΕΟ ΙΌ N0: 20, δΕΟ ΙΌ N0: 21, δΕΟ ΙΌ N0: 22, δΕΟ ΙΌ N0: 23, δΕΟ ΙΌ N0: 30, δΕΟ ΙΌ

N0: 31, δΕΟ ΙΌ N0: 32, δΕΟ ΙΌ N0: 33, δΕΟ ΙΌ N0: 34, δΕΟ ΙΌ N0: 35, δΕΟ ΙΌ N0: 36, δΕΟ ΙΌ N0: 37, δΕΟ ΙΌ N0: 38, δΕΟ ΙΌ N0: 39, δΕΟ ΙΌ N0: 40, δΕΟ ΙΌ N0: 41, δΕΟ ΙΌ N0: 42, δΕΟ ΙΌ N0: 43, δΕΟ ΙΌ

N0: 44, δΕΟ ΙΌ N0: 45, δΕΟ ΙΌ N0: 46, δΕΟ ΙΌ N0: 47, δΕΟ ΙΌ N0: 48, δΕΟ ΙΌ N0: 49 и δΕΟ ΙΌ N0: 50.

В другом аспекте изобретение предлагает вектор экспрессии, содержащий выделенный полинуклеотид или полинуклеотидную конструкцию.

В другом аспекте изобретение предлагает мутантную, не встречающуюся в природе или трансгенную растительную клетку, содержащую выделенный полинуклеотид, полинуклеотидную конструкцию, двухцепочечный рибополинуклеотид или вектор экспрессии.

В другом аспекте изобретение предлагает мутантное, не встречающееся в природе или трансгенное растение, содержащее мутантную, не встречающуюся в природе или трансгенную растительную клетку.

В другом аспекте изобретение предлагает растительный материал, включающий в себя биомассу, семена или листья, который содержит клетки или ткани указанного растения.

В другом аспекте изобретение предлагает табачное изделие, содержащее часть указанного растения или растительной клетки, или указанный растительный материал.

В другом аспекте изобретение предлагает мутантное, не встречающееся в природе или трансгенное растение с пониженной экспрессией полинуклеотида №МРР и активностью кодируемого им белка или активностью кодируемого им белка, в листьях которого наблюдается снижение содержания кадмия по меньшей мере на 5% по сравнению с контрольным растением, в котором не наблюдается понижние экспрессии полинуклеотида №МКР и активности кодируемого им белка или активности кодируемого им белка.

В другом аспекте изобретение предлагает биомассу, семена или листья, содержащие ткань растения.

В другом аспекте изобретение предлагает способ понижения уровня кадмия по меньшей мере в части растения, включающий в себя стадию понижения экспрессии полинуклеотида №МКР и активности кодируемого им белка или активности кодируемого им белка по сравнению с контрольным растением, в котором не наблюдается понижения экспрессии полинуклеотида №МКР и активности кодируемого им белка или активности кодируемого им белка.

В другом аспекте изобретение предлагает мутантное, не встречающееся в природе или трансгенное растение, полученное или которое можно получить с помощью описанного здесь способа, по меньшей мере в части которого снижено содержание кадмия по меньшей мере примерно на 5% по сравнению с контрольным растением, в котором не наблюдается понижение экспрессии полинуклеотида №МКР и активности кодируемого им белка или активности кодируемого им белка.

В другом аспекте изобретение предлагает выделенный полипептид №МКР, экспрессированный с использованием последовательности, описанной в δΕΟ ΙΌ N0: 24-26 или δΕΟ ΙΌ N0: 52, причем указанный полипептид предпочтительно обладает активностью транспортера тяжелых металлов.

В другом аспекте изобретение предлагает антитело, способное специфически связываться с выделенным полипептидом.

В другом аспекте изобретение предлагает способ детекции полинуклеотида №МКР в образце, включающий в себя следующие стадии: (а) получение образца, содержащего полинуклеотид; (Ь) приведение в контакт указанного образца с одним или несколькими праймерами или одним или несколькими зондами с целью специфической детекции по меньшей мере части полинуклеотида №МКР; и (с) детекция продукта амплификации, наличие которого указывает на присутствие полинуклеотида №МКР в образце.

Ниже описаны другие аспекты настоящего изобретения.

Химерный ген, содержащий выделенный полинуклеотид, функционально связанный с одной или несколькими регуляторными последовательностями.

Полинуклеотидная конструкция или двухцепочечная РНК настоящего изобретения, где полинуклеотид включает в себя, состоит или преимущественно состоит из по меньшей мере 15-30 нуклеотидов, 30-50 нуклеотидов, 50-100 нуклеотидов, 100-150 нуклеотидов, 150-200 нуклеотидов, 200-300 нуклеотидов, 300-400 нуклеотидов, 400-500 нуклеотидов, 500-600 нуклеотидов или 600-700 нуклеотидов.

Конъюгат, содержащий выделенный полинуклеотид, химерный ген, полинуклеотидную конструкцию или двухцепочечную РНК настоящего изобретения и по меньшей мере один ковалентно связанный с ним ненуклеотидный или неполинуклеотидный фрагмент.

Мутантная, не встречающаяся в природе или трансгенная растительная клетка, содержащая выделенный полинуклеотид, химерный ген, полинуклеотидную конструкцию, двухцепочечную РНК, конъю- 2 030377 гат или вектор экспрессии настоящего изобретения.

Мутантное, не встречающееся в природе или трансгенное растение, содержащее мутантную, не встречающуюся в природе или трансгенную растительную клетку настоящего изобретения.

Предпочтительно сухая биомасса из собранных листьев представляет собой то же самое, что и контрольное растение.

Биомасса, семена или листья, содержащие ткань растения настоящего изобретения.

Предназначенный для потребления продукт, содержащий биомассу, семена или листья настоящего изобретения, или полученный с использованием биомассы, семян или листьев настоящего изобретения.

Биомасса, семена или листья настоящего изобретения или предназначенный для потребления продукт настоящего изобретения, в которых содержание кадмия по меньшей мере на 5% ниже, чем в биомассе, семенах или листьях контрольного растения, в котором не наблюдается понижение экспрессии полинуклеотида №МКР и активности кодируемого им белка или активности кодируемого им белка.

Клеточная линия, содержащая выделенный полинуклеотид, химерный ген, полинуклеотидную конструкцию, двухцепочечную РНК, конъюгат или вектор экспрессии настоящего изобретения.

Способ получения мутантного, не встречающегося в природе или трансгенного растения, включающий в себя стадию понижения экспрессии полинуклеотида №МКР и активности кодируемого им белка или активности кодируемого им белка по меньшей мере в части указанного растения по сравнению с контрольным растением, в котором не наблюдается понижение экспрессии полинуклеотида №МКР и активности кодируемого им белка или активности кодируемого им белка.

Способ снижения уровня кадмия по меньшей мере в части растения, включающий в себя стадию понижения экспрессии полинуклеотида №МРР и активности кодируемого им белка или активности кодируемого им белка, по сравнению с контрольным растением, в котором не наблюдается понижение экспрессии полинуклеотида №МКР и активности кодируемого им белка или активности кодируемого им белка.

Предпочтительно указанный способ включает в себя первую стадию приведения в контакт указанного растения с полинуклеотидной конструкцией, двухцепочечной РНК, конъюгатом, вектором экспрессии, мегануклеазой или белком цинковые пальцы.

Предпочтительно указанный способ включает в себя первую или дополнительную стадию приведения в контакт указанного растения с мутагеном.

Мутантное, не встречающееся в природе или трансгенное растение, полученное или которое можно получить с помощью способов настоящего изобретения, по меньшей мере в части которого снижено содержание кадмия по меньшей мере примерно на 5% по сравнению с контрольным растением, в котором не наблюдается понижение экспрессии полинуклеотида №МКР и активности кодируемого им белка или активности кодируемого им белка.

Способ модулирования (например, понижения или подавления) экспрессии полинуклеотида №МКР или активности кодируемого им белка в клетке, который включает в себя введение химерного гена, полинуклеотидной конструкции, двухцепочечной РНК, конъюгата или вектора экспрессии настоящего изобретения.

Способ детекции, выделения, амплификации или анализа полинуклеотида №МРР, включающий в себя стадию получения образца, содержащего полинуклеотид, и гибридизацию указанного полинуклеотида с молекулой полинуклеотида, включающей в себя последовательность по меньшей мере 10 смежных нуклеотидов из выделенной нуклеотидной последовательности настоящего изобретения.

Применение средства, способного модулировать (например, понижать или подавлять) экспрессию полинуклеотида №МКР и активность кодируемого им белка или активность кодируемого им белка, с целью снижения по меньшей мере в части растения содержания кадмия по меньшей мере на 5% по сравнению с контрольным растением, в котором не наблюдается понижения экспрессии полинуклеотида №МКР и активности кодируемого им белка или активности кодируемого им белка.

Способ применения настоящего изобретения, где указанное средство представляет собой полинуклеотид №МКР, химерный ген №МКР, полинуклеотидную конструкцию, содержащую полинуклеотид №МКР, антисмысловую РНК, двухцепочечную РНК, кДНК, конъюгат, содержащий полинуклеотид №МКР и по меньшей мере один ковалентно связанный с ним ненуклеотидный или неполинуклеотидный фрагмент, рибозим, мутаген, цинковый палец, маленькую молекулу или мегануклеазу или производное одного из перечисленных соединений.

В другом аспекте изобретение предлагает способ получения табачного изделия, включающий в себя следующие стадии: (а) получение семян от мутантного, не встречающегося в природе или трансгенного растения табака; (Ь) высевание семян и выращивание из них растения; (с) сбор растения и (б) получение табачного изделия из собранного растения.

Вышеупомянутые воплощения раскрываются как воплощения каждого из описанных выше аспектов.

Некоторые преимущества.

Получение мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растений (в том числе их биомассы, семян и листьев) с пониженным содержанием кадмия в настоящее время заключает в себе ряд

- 3 030377 преимуществ.

Например, растения, включающие в себя мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растения, можно выращивать в почвах, содержащих разные концентрации кадмия, или в почвах с концентрацией кадмия ниже желательной. Культивирование указанных растений и полученных из них семян можно осуществлять в широком диапазоне почвенных сред, что позволяет увеличить выбор подходящих для культивирования почв, доступных практикующим специалистам (таким как фермеры).

В следующем примере мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растения (в том числе полученные из них биомасса, семена и листья) имеют пониженное содержание кадмия по сравнению с контрольными аналогами и могут непосредственно употребляться в качестве пищевых продуктов. Употребление указанных пищевых продуктов может являться более полезным для здоровья выбором. Растения, подходящие для применения в раскрытых здесь способах, включают в себя растения, пригодные для культивирования в сельском хозяйстве, такие как табак, рис, кукуруза, тыква, соевые бобы, салат-латук, картофель, сорняки, сжигаемые для удобрения, кухонные травы, пшеница, ячмень, морковь и др.

В следующем примере мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растения имеют такую же высоту и/или массу, как и контрольные растения. Так, высушенные собранные листья растений практически не отличаются от контрольных, что указывает на то, что модулирование транскриптов №МКР не оказывает статистически значимого влияния на сухую биомассу. Это является преимуществом, поскольку растения используют для коммерческого получения разных продуктов, таких как табак, и изменение внешнего вида либо может быть не приемлемым для применения в промышленности, либо может приводить к неприемлемому уменьшению выхода продукции.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1(а) изображает схематическую диаграмму локуса №МКР4; на фиг. 1(Ь) показана нуклеотидная последовательность №МКР4, где участки 5'- и З'-ИТК обозначены подчеркиванием; экзоны обозначены заглавными буквами и выделены жирным шрифтом; интроны обозначены строчными буквами нормальным шрифтом; инициирующий кодон и стоп-кодон выделены серым цветом. Последовательности 5'- и З'-праймеров, используемых для получения последовательности РНКи №МКР4, выделены курсивом и перечеркнуты.

Фиг. 2 иллюстрирует экспрессию полинуклеотида №МКР4 в процессе обработки кадмием в гидропонных условиях в течение 7 дней. Проростки ΚΥ14 возрастом три недели обрабатывают 0, 0,05 и 0,5 СйС1₂ (а), а проростки N. шкйса и N. 1аЬаеиш (ΤΝ90) возрастом 4 недели обрабатывают 0,5 мкМ СйС1₂ в течение одной недели (Ь). РНК выделяют и анализируют методом полуколичественной ОТ-ПЦР.

Фиг. З иллюстрирует понижение содержания кадмия в листьях соответственно линиям 1 и 2 РНКи №МКР4 по сравнению с культивируемыми в полевых условиях растениями дикого типа.

Фиг. 4 иллюстрирует уменьшение содержания кадмия в листьях соответственно РНКи №МКР4 двух культивируемых линий. В данном эксперименте используют контрольный вектор, не содержащий вставки №МКР4.

На фиг. 5 приведены интрон-экзонная структура и расположение интронов и экзонов на протяжении геномной последовательности клона №РМ1-ВАС-ООТОЩЕ_5_§ДНК ВАС, включающей в себя участок, кодирующий №МКР4. Гомология последовательности кДНК (пары оснований 1-4521 верхней части цепи) и геномной последовательности клона ВАС, содержащей участок, кодирующий МКР4 (пары оснований 61781-69748 нижней части цепи), составляет 100%.

На фиг. 6 показана нуклеотидная последовательность №МКР3, где участки 5'- и З'-ИТК выделены курсивом; экзоны обозначены заглавными буквами и выделены жирным шрифтом; интроны обозначены строчными буквами нормальным шрифтом; инициирующий кодон и стоп-кодон обозначены заглавными буквами и выделены жирным шрифтом и курсивом.

Определения

Технические термины и выражения, используемые в объеме данной заявки, как правило, употребляются в значении, традиционно применяемом в соответствующей области растительной и молекулярной биологии. Все приведенные ниже определения терминов применимы ко всему содержанию данной заявки. Слово содержащий не исключает других элементов или стадий, а единственное число не исключает множественного. Одна стадия может соответствовать функциям нескольких признаков, описанных в формуле изобретения. Термины практически, примерно, приблизительно и т.п. в применении к признаку или значению, в частности, также точно определяет признак или значение соответственно. Термин примерно в контексте заданного численного значения или диапазона относится к значению или диапазону, варьирующему по отношению к заданному значению или диапазону в пределах 20%, в пределах 10% или в пределах 5, 4, 3, 2 или 1%.

Термин полинуклеотид относится к полимеру из нуклеотидов, который может представлять собой немодифицированный или модифицированный дезоксирибополинуклеотид (ДНК) или рибополинуклеотид (РНК). Соответственно, полинуклеотид может представлять собой, без ограничения, геномную ДНК, комплементарную ДНК (кДНК) (например, 8Еф ГО ΝΟ: 27), мРНК или антисмысловую РНК. Кроме того, полинуклеотид может представлять собой одноцепочечную или двухцепочечную ДНК, ДНК, содер- 4 030377 жащую смесь одноцепочечных и двухцепочечных участков, гибридную молекулу, содержащую ДНК и РНК, или гибридную молекулу, содержащую смесь одноцепочечных и двухцепочечных участков. Полинуклеотид также может включать в себя трехцепочечные участки, состоящие из ДНК, РНК или той и другой. Полинуклеотид может содержать одно или несколько модифицированных оснований, таких как фосфотиоаты, и может представлять собой пептидополинуклеотид (ΡΝΑ). Как правило, описанные здесь полинуклеотиды можно собрать из выделенных или клонированных фрагментов кДНК, геномной ДНК, олигонуклеотидов или отдельных нуклеотидов или из сочетания перечисленных соединений. Хотя описанные здесь полинуклеотидные последовательности показаны как последовательности ДНК, они включают в себя соответствующие последовательности РНК и комплементарные (например, полностью комплементарные) им последовательности ДНК или РНК, в том числе обратно комплементарные последовательности.

Термин полинуклеотид ΝίΜΚΡ охватывает полинуклеотиды, в которых полимер из нуклеотидов включает в себя, состоит или преимущественно состоит из последовательности, описанной в ЗЕф ГО N0: 1, 2, 27, 28, 29 или 51. Данный термин также охватывает полинуклеотидную последовательность, в значительной степени гомологичную (т.е. обладающую значительной степенью подобия последовательностей) или практически идентичную последовательностям ЗЕф ГО N0: 1, 2, 27, 28, 29 или 51; фрагментам ЗЕф ГО N0: 1, 2, 27, 28, 29 или 51 и фрагментам, в значительной степени гомологичным (т.е. обладающим значительной степенью подобия последовательностей) или практически идентичным фрагментам ЗЕф ГО N0: 1, 2, 27, 28, 29 или 51. Последовательность варианта может быть на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности выделенного гена №ΜΚΡ, такого как ген №ΜΚΡ3 или ген №ΜΡΡ4. Хотя описанные здесь последовательности полинуклеотида ΜΜΚΡ показаны как последовательности ДНК, они включают в себя соответствующие последовательности РНК и комплементарные (например, полностью комплементарные) им последовательности ДНК или РНК, в том числе обратно комплементарные последовательности и антисмысловые последовательности ДНК или РНК. Примеры фрагментов описаны в ЗЕф ГО N0: 3-23 и 30-50.

Термин полинуклеотид NίΜΚΡ3 относится к воплощению, в котором полимер из нуклеотидов включает в себя, состоит или преимущественно состоит из полинуклеотида, описанного здесь как ЗЕф ГО N0: 28, или ЗЕф ГО N0: 29, или ЗЕф ГО N0: 51. Данный термин охватывает варианты полинуклеотида, в значительной степени гомологичные (т.е. обладающие значительной степенью подобия последовательностей) или практически идентичные последовательностям ЗЕф ГО N0: 28, или ЗЕф ГО N0: 29, или ЗЕф ГО N0: 51; фрагментам ЗЕф ГО N0: 28, или ЗЕф ГО N0: 29, или ЗЕф ГО N0: 51; и фрагментам, в значительной степени гомологичным (т. е. обладающим значительной степенью подобия последовательностей) или практически идентичным фрагментам ЗЕф ГО N0: 28, или ЗЕф ГО N0: 29, или ЗЕф ГО N0: 51. В данном документе последовательность варианта может быть на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности выделенного гена №ΜΚΡ3. Примеры фрагментов описаны в ЗЕф ГО N0: 30-50.

Термин полинуклеотид NίΜΚΡ4 относится к воплощению, в котором полимер из нуклеотидов включает в себя, состоит или преимущественно состоит из полинуклеотида, описанного здесь как ЗЕф ГО N0: 1, или ЗЕф ГО N0: 2, или ЗЕф ГО N0: 27. Данный термин охватывает варианты полинуклеотида, в значительной степени гомологичные (т.е. обладающие значительной степенью подобия последовательностей) или практически идентичные последовательностям ЗЕф ГО N0: 1, или ЗЕф ГО N0: 2, или ЗЕф ГО N0: 27; фрагментам ЗЕф ГО N0: 1, или ЗЕф ГО N0: 2, или ЗЕф ГО N0: 27; и фрагментам, в значительной степени гомологичным (т. е. обладающим значительной степенью подобия последовательностей) или практически идентичным фрагментам ЗЕф ГО N0: 1, или ЗЕф ГО N0: 2, или ЗЕф ГО N0: 27. В данном документе последовательность варианта может быть на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности выделенного гена №ΜΡΡ3. Примеры фрагментов описаны в ЗЕф ГО N0: 3-23.

Термин полипептид NίΜΚΡ относится к полипептиду, который включает в себя, состоит или преимущественно состоит из аминокислотной последовательности, в значительной степени гомологичной (т.е. обладающей значительной степенью подобия последовательностей) или практически идентичной последовательностям ЗЕф ГО N0: 24-26 и 52; фрагментам ЗЕф ГО N0: 24-26 и 52 и фрагментам, в значительной степени гомологичным (т. е. обладающим значительной степенью подобия последовательностей) или практически идентичным фрагментам ЗЕф ГО N0: 24-26 и 52. Полипептиды ΜΜΚΡ включают в себя фрагменты и последовательности, характеризующиеся достаточной или значительной степенью идентичности или подобия ЗЕф ГО N0: 24-26 и 52, которые могут функционировать, транспортируя тяжелые металлы (например, кадмий) через клеточные мембраны. Полипептиды ΜΜΚΡ также включают в себя варианты или мутанты, образовавшиеся в результате введения любых изменений (таких как вставки, делеции или замены аминокислот; изменения в состояниях гликозилирования; изменения, оказывающие влияние на рефолдинг или изомеризацию, трехмерные структуры или самоассоциированные состояния), которые можно получить рекомбинантными методами или выделить из природного источника. Полипептиды ΜΜΚΡ могут быть линейными или их можно подвергнуть циклизации с помощью известных методов. Последовательность варианта может быть по меньшей мере на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68,

- 5 030377

69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности полипептида Ν1ΜΚΡ4.

Термин полипептид ΝΙΜΚΡ3 относится к воплощению, в котором полипептид включает в себя, состоит или преимущественно состоит из последовательности, описанной в δΕφ ΙΌ ΝΟ: 52, или к полипептиду, который включает в себя, состоит или преимущественно состоит из аминокислотной последовательности, в значительной степени гомологичной (т.е. обладающей значительной степенью подобия последовательностей) или практически идентичной последовательности δΕφ ΙΌ ΝΟ: 52; фрагментам δΕφ ΙΌ ΝΟ: 52 и фрагментам, в значительной степени гомологичным (т.е. обладающим значительной степенью подобия последовательностей) или практически идентичным фрагментам δΕφ ΙΌ ΝΟ: 52. Полипептиды ΝΙΜΚΡ3 включают в себя фрагменты и последовательности, характеризующиеся достаточной или значительной степенью идентичности или подобия δΕφ ΙΌ ΝΟ: 52, которые могут функционировать, транспортируя тяжелые металлы (например, кадмий) через клеточные мембраны. Полипептиды ΝΙΜΚΡ3 также включают в себя варианты или мутанты, образованные в результате введения любых изменений (таких как вставки, делеции или замены аминокислот; изменения в состояниях гликозилирования; изменения, оказывающие влияние на рефолдинг или изомеризацию, трехмерные структуры или самоассоциированные состояния), которые можно получить рекомбинантными методами или выделить из природного источника. Полипептиды ΝΙΜΚΡ3 могут быть линейными или их можно подвергнуть циклизации с помощью известных методов. Как описано в настоящем документе, последовательность варианта может быть по меньшей мере на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 80, 85, 90%, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности полипептида ΝΙΜΚΡ3.

Термин полипептид ΝΙΜΚΡ4 относится к воплощению, в котором полипептид включает в себя, состоит или преимущественно состоит из последовательности, описанной в δΕφ ΙΌ ΝΟ: 24, δΕφ ΙΌ ΝΟ: 25 или δΕφ ΙΌ ΝΟ: 26, или к полипептиду, который включает в себя, состоит или преимущественно состоит из аминокислотной последовательности, в значительной степени гомологичной (т.е. обладающей значительной степенью подобия последовательностей) или практически идентичной последовательности δΕφ ΙΌ ΝΟ: 24, δΕΕ) ΙΌ ΝΟ: 25 или δΕΕ) ΙΌ ΝΟ: 26; фрагментам δΕΕ) ΙΌ ΝΟ: 24, δΕΕ) ΙΌ ΝΟ: 25 или δΕΕ) ΙΌ ΝΟ: 26; и фрагментам, в значительной степени гомологичным (т.е. обладающим значительной степенью подобия последовательностей) или практически идентичным фрагментам δΕφ ΙΌ ΝΟ: 24, δΕφ ΙΌ ΝΟ: 25 или δΕφ ΙΌ ΝΟ: 26. Полипептиды ΝΕΜΡΡ4 включают в себя фрагменты и последовательности, характеризующиеся достаточной или значительной степенью идентичности или подобия δΕφ ΙΌ ΝΟ: 24, δΕφ ΙΌ ΝΟ: 25 или δΕφ ΙΌ ΝΟ: 26, которые могут функционировать, транспортируя тяжелые металлы (например, кадмий) через клеточные мембраны. Полипептиды ΝΙΜΚΡ4 также включают в себя варианты или мутанты, образованные в результате введения любых изменений (таких как вставки, делеции или замены аминокислот; изменения в состояниях гликозилирования; изменения, оказывающие влияние на рефолдинг или изомеризацию, трехмерные структуры или самоассоциированные состояния), которые можно получить рекомбинантными методами или выделить из природного источника. Полипептиды ΝΙΜΚΡ4 могут быть линейными, или их можно подвергнуть циклизации с помощью известных методов. Как описано в данном документе, последовательность варианта может быть по меньшей мере на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности полипептида ΝΙΜΚΡ4.

Термин выделенный относится к объекту, извлеченному из его природной среды, однако данный термин не охватывает понятие степень очистки.

Термин генная последовательность относится к нуклеотидной последовательности полинуклеотидной молекулы или полинуклеотида, которая кодирует полипептид или биологически активную РНК, и включает в себя нуклеотидную последовательность части кодирующей последовательности, которая кодирует только фрагмент белка.

Термин вектор относится к средству доставки полинуклеотида, которое содержит сочетание полинуклеотидных компонентов, обеспечивающих транспорт полинуклеотида, полинуклеотидных конструкций, конъюгатов полинуклеотида и т.п. Подходящие векторы включают в себя эписомы, способные к внехромосомной репликации, такие как циклические двухцепочечные полинуклеотидные плазмиды; линеаризованные двухцепочечные полинуклеотидные плазмиды; а также другие векторы любого происхождения.

Термин вектор экспрессии относится к средству доставки полинуклеотида, которое содержит сочетание полинуклеотидных компонентов, обеспечивающих экспрессию полинуклеотида, полинуклеотидных конструкций, конъюгатов полинуклеотида и т. п. Подходящие векторы включают в себя эписомы, способные к внехромосомной репликации, такие как циклические двухцепочечные полинуклеотидные плазмиды; линеаризованные двухцепочечные полинуклеотидные плазмиды; а также другие векторы любого происхождения. Вектор экспрессии содержит, по меньшей мере, промотор, расположенный выше полинуклеотида, полинуклеотидной конструкции или конъюгата полинуклеотида, и находящийся в функциональной связи с полинуклеотидом, полинуклеотидной конструкцией или конъюгатом полинуклеотида, как описано ниже.

Термин конструкция относится к двухцепочечному, рекомбинантному полинуклеотидному фраг- 6 030377 менту, содержащему один или несколько полинуклеотидов №МКР. Конструкция содержит матричную цепь, основания которой спарены с основаниями комплементарной смысловой или кодирующей цепи. Используемую конструкцию можно вставить в вектор в двух возможных ориентациях, в такой же (или смысловой) ориентации, как и промотор, входящий в состав вектора, такого как вектор экспрессии, или в противоположной (или антисмысловой) ориентации.

Термин конъюгат относится к соединению, образованному в результате ковалентного присоединения (конъюгирования) полинуклеотида к одному или нескольким фрагментам, которые сами по себе не являются полинуклеотидами или их мономерами (конъюгированные фрагменты).

Термин матричная цепь относится к цепи, последовательность которой комплементарна последовательности смысловой или кодирующей цепи полинуклеотидного дуплекса, и включает в себя геномный фрагмент №МКР, кДНК №МРР, конструкцию №МКР или любой полинуклеотидный фрагмент, содержащий полинуклеотидную последовательность, которая может транскрибироваться под действием РНК-полимеразы. В процессе транскрипции РНК-полимераза перемещается вдоль матричной цепи в 3'5'-направлении, синтезируя новую РНК.

Термины смысловая цепь и кодирующая цепь используются в настоящем документе как взаимозаменяемые и относятся к цепи, содержащей последовательность, комплементарную последовательности матирчной цепи в дуплексе ДНК. Например, последовательность смысловой цепи (смысловая последовательность) идентифицированного геномного клона №МКР обозначают §ЕЦ ГО N0: 1 или §ЕЦ ГО N0: 2. Например, если смысловая цепь содержит гипотетическую последовательность 5'ТЛЛТССССТ-3', то практически идентичная соответствующая последовательность гипотетической мишени мРНК представляет собой 5'-иЛЛиССССи-3'.

Термин обратно комплементарная последовательность относится к последовательности, комплементарной представляющей интерес смысловой последовательности (например, последовательности экзона), расположенной в той же цепи и в той же ориентации, что и смысловая последовательность. Например, если цепь содержит гипотетическую последовательность 5'-ТЛЛТССССТ-3', то обратно комплементарная последовательность представляет собой 5'-ЛССССЛТТЛ-3' и может быть функционально связана со смысловой последовательностью, отделенной спейсерной последовательностью.

Термин РНК-транскрипт №МКР, №МРР3 или №МРР4 включает в себя полирибонуклеотидные молекулы, полученные в представляющей интерес растительной клетке-хозяине в результате транскрипции эндогенного гена или кДНК №МКР3 или №МКР4, как описано в данном документе. Таким образом, данный термин включает в себя любые разновидности или варианты РНК, полученные как продукты транскрипции №МРР3 или №МКР4, или РНК №МКР3 или №МКР4, в том числе разновидности или варианты РНК, которые обладают достаточной степенью подобия на структурном/функциональном уровне. Например, транскрипты №МКР3 или РНК №МКР3 включают в себя, без ограничения: (1) пре-мРНК и мРНК, полученные в результате транскрипции выделенных гена или кДНК №МКР3; (2) пре-мРНК и мРНК, полученные в результате транскрипции любых генов, идентичных по меньшей мере на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% последовательности выделенного гена №МРР3 (т.е. в результате транскрипции других генов, практически идентичных идентифицированному гену №МКР3 и кодирующих родственные изоформы транспортеров АВС); и (3) премРНК и мРНК, полученные в результате транскрипции аллелей гена №МКР3. Транскрипты №МКР3 и РНК №МКР3 включают в себя варианты РНК, полученные в результате реакций альтернативного сплайсинга гетероядерных РНК (ЪпРНК) конкретного гена, варианты мРНК, полученные в результате таких реакций альтернативного сплайсинга РНК, и любые промежуточные варианты РНК.

В следующем примере транскрипты №МКР4 или РНК №МКР4 включают в себя: (1) пре-мРНК и мРНК, полученные в результате транскрипции выделенных гена или кДНК №МКР4; (2) пре-мРНК и мРНК, полученные в результате транскрипции любых генов, идентичных по меньшей мере на 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% последовательности выделенного гена №МРР4 (т.е. в результате транскрипции других генов, практически идентичных идентифицированному гену №МКР4 и кодирующих родственные изоформы транспортеров АВС); и (3) премРНК и мРНК, полученные в результате транскрипции аллелей гена №МКР или №МКР4. РНКтранскрипты №МКР и №МКР4 включают в себя варианты РНК, полученные в результате реакций альтернативного сплайсинга гетероядерных РНК (ЪпРНК) конкретного гена, варианты мРНК, полученные в результате таких реакций альтернативного сплайсинга РНК, и любые промежуточные варианты РНК.

Термины гомология, идентичность или подобие относятся к степени подобия последовательностей двух полипептидных или полинуклеотидных молекул, определяемой путем выравнивания последовательностей. Степень гомологии двух сравниваемых отдельных полинуклеотидных последовательностей является функцией от числа идентичных или совпадающих нуклеотидов в аналогичных положениях. Степень подобия, выраженную в виде процента идентичности, можно определить путем визуального исследования и математического расчета. Альтернативно процент идентичности двух полинуклеотидных последовательностей можно определить путем сравнения информации о последовательностях с помощью компьютерной программы САР, версия 6.0, описанной Осусгсих с1 а1. (Νιιαί. Αείάδ Кек. 12:387, 1984), которую можно приобрести в компьютерной группе Сепейек университета Висконсина (И^ССС),

- 7 030377

С1ик1аШ, ΒΕΑδΤ, ΡΑδΤΑ или δ^ίΕ-Ύαΐβ^Ηη. Типичные параметры по умолчанию для программы ОАР включают в себя: (1) одинарную матрицу сравнения (присваивающую каждому совпадению значение 1, а несовпадению - 0) нуклеотидов и взвешенную матрицу сравнения ОпЪккоу апб Вигдекк, №с1. Λοίάδ Кек. 14:6745, 1986, как описано в δάι\γ;·ιΠζ апб ЭауНоГГ. ебк., АИак оГ Рго(еш δе^иеηсе апб δίΓίκΕιίΌ, №Юопа1 Вютебюа1 Кекеагск РоипбаЕоп, рр. 353-358, 1979; (2) штраф 3,0 за каждый пробел и дополнительный штраф 0,10 за каждый символ в каждом пробеле; и (3) отсутствие штрафа за концевые пробелы. Альтернативно можно использовать разные программы, известные специалистам в области сравнения последовательностей.

Термин выше по ходу считывания обозначает направление/положение относительно конкретного элемента вдоль линейной полинуклеотидной последовательности, и указывает на направление/положение в сторону 5'-конца полинуклеотидной последовательности. Термин выше по ходу считывания можно использовать как взаимозаменяемый с термином 5'-конец элемента отнесения.

Термин функционально связанный относится к соединению разных полинуклеотидных элементов, фрагментов или последовательностей с получением функциональной транскрипционной конструкции или функционального вектора экспрессии.

Термин промотор относится к полинуклеотидному элементу/полинуклеотидной последовательности, как правило, расположенного выше двухцепочечного фрагмента ДНК, такого как конструкция РНКи №МКР, и функционально связанного с ним. Например, подходящий промотор обеспечивает транскрипционную активацию конструкции РНКи №МКР путем рекрутинга транскрипционного комплекса, содержащего РНК-полимеразу и разные факторы, с инициацией синтеза РНК. Промоторы можно получить полностью из участков, находящихся по соседству с представляющим интерес нативным геном, или их можно составить из разных элементов, полученных из разных нативных промоторов, или синтетических сегментов ДНК.

Термин энхансер относится к полинуклеотидной молекуле, или к полинуклеотидной последовательности, способной обеспечивать рекрутинг белков, регулирующих транскрипцию, таких как активаторы транскрипции, и увеличивать активацию транскрипции путем повышения активности промотора. Подходящие энхансеры можно получить из участков, находящихся по соседству с представляющим интерес нативным промотором (гомологичные источники), или их можно получить из источников, отличающихся от нативных (гетерологичные источники), и ввести их в состав конструкций №МКР, таких как векторы экспрессии РНКи так, чтобы они находились в функциональной связи с представляющим интерес промотором, что позволяет повысить активность или тканеспецифичность промотора. Некоторые энхансеры могут функционировать в любой ориентации относительно ориентации транскрипционного элемента. Например, энхансеры могут располагаться выше или ниже транскрипционного элемента, содержащего промотор и конструкцию №МКР.

В данном описании термин растение относится к любому растению на любой стадии его жизненного цикла или развития, а также к его потомству. В одном воплощении растение представляет собой растение табака, принадлежащее к роду №соЕапа. Предпочтительные виды, сорта, гибриды и разновидности табачного растения описаны в настоящем документе.

Термин растительная клетка относится к структурному и физиологическому элементу растения. Растительная клетка может находиться в виде протопласта, не имеющего клеточной стенки, выделенной отдельной клетки или культивируемой клетки, или в виде части более высокоорганизованного элемента, включающего в себя, без ограничения, ткань растения, орган растения или целое растение.

Термин растительный материал относится к любым твердым, жидким или газообразным композициям или их сочетаниям, получаемым из растения и включающим в себя биомассу, листья, листовые пластинки, жилки, стебли, корни, цветки или части цветков, плоды, пыльцу, яйцеклетки, зиготы, семена, обрезки, секреты, экстракты, культуры клеток или тканей или любые другие части или продукты растения. В одном воплощении растительный материал включает в себя или содержит биомассу, семена или листья. В другом воплощении растительный материал включает в себя или содержит листья.

Термин разновидность относится к популяции растений, обладающих общими постоянными характеристиками, которые позволяют отличить их от других растений того же вида. Разновидность также характеризуется очень низкой изменчивостью среди отдельных особей, однако может существовать один или несколько признаков, по которым растения одной разновидности могут отличаться друг от друга. Разновидность часто является предметом торговли.

Термин линия или селекционная линия относится к группе растений, которые используются в процессе селекции растений. Линия отличается от разновидности тем, что она характеризуется низкой изменчивостью среди особей по одному или нескольким представляющим интерес признакам, хотя среди особей может существовать некоторая изменчивость по другим признакам.

Термин уменьшать или уменьшенный относится к уменьшению примерно на 10-99% или к уменьшению, составляющему по меньшей мере 10, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 40, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 75, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 95, по меньшей мере 98, по меньшей мере 99 или по меньшей мере 100, 200 или 300% от количества или активности, включаю- 8 030377 щей в себя, без ограничения, полипептидную активность, транскрипционную активность и/или экспрессию белка.

Термин ингибировать или ингибированный в данном описании относится к уменьшению примерно на 98-100% или к уменьшению, составляющему по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, предпочтительно 100% от количества или активности, включающей в себя, без ограничения, полипептидную активность, транскрипционную активность и/или экспрессию белка.

Термин увеличивать или увеличенный относится к увеличению примерно на 10-99% или к увеличению, составляющему по меньшей мере 10, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 40, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 75, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 95, по меньшей мере 98, по меньшей мере 99, или по меньшей мере 100, 200 или 300% от количества или активности, включающей в себя, без ограничения, полипептидную активность, транскрипционную активность и/или экспрессию белка.

Термин контроль в контексте контрольного растения или контрольных растительных клеток относится к растению или растительным клеткам, в которых экспрессия или активность конкретного гена или белка, такого как ΝίΜΚΡ, не изменяется (например, не повышается или не уменьшается) и, следовательно, такое растение или такие растительные клетки можно использовать для сравнения с растением, в котором изменена экспрессия или активность конкретного гена или белка, такого как ΝίΜΚΡ. Контрольное растение может содержать пустой вектор. Контрольное растение может представлять собой растение дикого типа.

Подробное описание

В настоящем документе описаны полинуклеотиды и полипептиды ΝίΜΚΡ, в том числе полинуклеотиды и полипептиды ΝίΜΚΡ3 и ΝίΜΚΡ4. Как показано на фиг. 6, геномный клон ΝίΜΚΡ3, обозначаемый 8ЕЦ ГО ΝΟ: 28 или 8ЕЦ ГО ΝΟ: 29, содержит интрон 1 (8ЕЦ ГО ΝΟ:30), интрон 2 (8ЕЦ ГО ΝΟ:31), интрон 3 (81Т) ГО ΝΟ: 32), интрон 4 (81Т) ГО ΝΟ: 33), интрон 5 (81Т) ГО ΝΟ: 34), интрон 6 (81Т) ГО ΝΟ: 35), интрон 7 (81Т) ГО ΝΟ: 36), интрон 8 (81Т) ГО ΝΟ: 37), интрон 9 (81Т) ГО ΝΟ: 38), интрон 10 (81Т) ГО ΝΟ: 39), экзон 1 (81Т) ГО ΝΟ: 40), экзон 2 (81Т) ГО ΝΟ: 41), экзон 3 (81Т) ГО ΝΟ: 42), экзон 4 (81Т) ГО ΝΟ: 43), экзон 5 (81Т) ГО ΝΟ: 44), экзон 6 (81Т) ГО ΝΟ: 45), экзон 7 (81Т) ГО ΝΟ: 46) экзон 8 (81Т) ГО ΝΟ: 47), экзон 9 (81Т) ГО ΝΟ: 48), экзон 10 (81Т) ГО ΝΟ: 49) и экзон 11 (81Т) ГО ΝΟ: 50).

Разные воплощения направлены на выделенные полинуклеотиды, представляющие собой геномные фрагменты, выделенные из локуса ΝίΜΚΡ3, включающие в себя 8ЕЦ ГО ΝΟ: 28 или 8ЕЦ ГО ΝΟ: 29, фрагменты 8ЕЦ ГО ΝΟ: 28 или 8ЕЦ ГО ΝΟ: 29 или их варианты.

Разные воплощения направлены на выделенные полинуклеотиды, представляющие собой последовательности кДНК локуса ΝίΜΚΡ3, которые включают в себя 8ЕЦ ГО ΝΟ: 51, фрагменты 8ЕЦ ГО ΝΟ: 51 или их варианты. Разные воплощения направлены на варианты выделенного полинуклеотида ΝίΜΚΡ, по меньшей мере на 71, 72, 73, 74, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 и 99% идентичные последовательностям 8ЕЦ ГО ΝΟ: 28 или 8ЕЦ ГО ΝΟ: 29, или фрагментов 8ЕЦ ГО ΝΟ: 28 или 8ЕЦ ГО ΝΟ: 29.

Разные воплощения направлены на выделенные полинуклеотиды, комплементарные вариантам полинуклеотида ΝίΜΚΡ, которые по меньшей мере на 71, 72, 73, 74, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 и 99% идентичны последовательностям 8ЕЦ ГО ΝΟ: 28, или 8ЕЦ ГО ΝΟ: 29, или 8ЕЦ ГО ΝΟ: 51, или фрагментов 8ΙΤ) ГО ΝΟ: 28, или 81Т) ГО ΝΟ: 29, или 81Т) ГО ΝΟ: 51.

Разные воплощения направлены на выделенные полинуклеотиды, которые могут специфически гибридизоваться в условиях средней или высокой жесткости с полинуклеотидами, содержащими 8ЕЦ ГО ΝΟ: 28, или 8ЕЦ ГО ΝΟ: 29, или 8ЕЦ ГО ΝΟ: 51, или фрагменты 8ЕЦ ГО ΝΟ: 28, или 8ЕЦ ГО ΝΟ: 29, или 81Т) ГО ΝΟ: 51.

Как показано на фиг. 1, геномный клон ΝίΜΚΡ4, обозначаемый 8ЕЦ ГО ΝΟ: 1 или 8ЕЦ ГО ΝΟ: 2, содержит интрон 1 (8ЕЦ ГО ΝΟ: 3), интрон 2 (8ЕЦ ГО ΝΟ: 4), интрон 3 (8ЕЦ ГО ΝΟ: 5), интрон 4 (8ЕЦ ГО ΝΟ: 6), интрон 5 (8ЕЦ ГО ΝΟ: 7), интрон 6 (8ЕЦ ГО ΝΟ: 8), интрон 7 (8ЕЦ ГО ΝΟ: 9), интрон 8 (8ЕЦ ГО ΝΟ: 10), интрон 9 (81Т) ГО ΝΟ: 11), интрон 10 (81Т) ГО ΝΟ: 12), экзон 1 (81Т) ГО ΝΟ: 13), экзон 2 (81Т) ГО ΝΟ: 14), экзон 3 (81Т) ГО ΝΟ: 15), экзон 4 (81Т) ГО ΝΟ: 16), экзон 5 (81Т) ГО ΝΟ: 17), экзон 6 (81Т) ГО ΝΟ: 18), экзон 7 (81Т) ГО ΝΟ: 19), экзон 8 (81Т) ГО ΝΟ: 20), экзон 9 (81Т) ГО ΝΟ: 21), экзон 10 (81 (С) ГО ΝΟ: 21) и экзон 11 (81Т) ГО ΝΟ: 22), или 81Т) ГО ΝΟ: 23.

Разные воплощения направлены на выделенные полинуклеотиды, представляющие собой геномные фрагменты, выделенные из локуса ΝίΜΚΡ4, которые включают в себя 8ЕЦ ГО ΝΟ: 1 или 8ЕЦ ГО ΝΟ: 2, фрагменты 8ЕЦ ГО ΝΟ: 1 или 8ЕЦ ГО ΝΟ: 2 или их варианты.

Разные воплощения направлены на выделенную кДНК, содержащую 8ЕЦ ГО ΝΟ: 27, фрагменты 8ЕЦ ГО ΝΟ: 27 или их варианты.

Разные воплощения направлены на варианты выделенного полинуклеотида ΝίΜΚΡ, по меньшей мере на 71, 72, 73, 74, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 и 99% идентичные последовательностям 8ЕЦ ГО ΝΟ: 1, или 8ЕЦ ГО ΝΟ: 2, или 8ЕЦ ГО ΝΟ: 27, или фрагментов 8ЕЦ ГО ΝΟ: 1, или 8ЕЦ ГО ΝΟ: 2, или 8ЕЦ ГО ΝΟ: 27.

Разные воплощения направлены на выделенные полинуклеотиды, комплементарные вариантам по- 9 030377 линуклеотида №МКР, которые по меньшей мере на 71, 72, 73, 74, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 и 99% идентичны последовательностям 8ЕО ГО N0: 1, или 8Е0 ГО ΝΟ: 2, или 8Е0 ГО N0: 27, или фрагментов 8ЕС) ГО N0: 1, или 8ЕС) ГО N0: 2, или 8ЕС) ГО N0: 27.

Разные воплощения направлены на выделенные полинуклеотиды, которые могут специфически гибридизоваться в условиях средней или высокой жесткости с полинуклеотидами, содержащими 8Е0 ГО N0: 1, или 8Е0 ГО N0: 2, или 8Е0 ГО N0: 27, или фрагменты 8Е0 ГО N0: 1, или 8Е0 ГО N0: 2, или 8Е0 ГО N0: 27.

Описанный здесь полинуклеотид, как правило, содержит фосфодиэфирные связи, хотя в некоторых случаях изобретение охватывает аналоги полинуклеотида, которые могут иметь альтернативные скелеты, содержащие, например, фосфорамидатные, фосфоротиоатные, фосфородитиоатные или Ометилфосфороамидитные связи; а также пептидполинуклеотидные скелеты и связи. Другие аналоги полинуклеотидов включают в себя полинуклеотиды с положительно заряженными скелетами; неионными скелетами и нерибозными скелетами. Цели модификации рибозофосфатного скелета могут включать в себя, например, повышение стабильности и периода полужизни таких молекул в физиологической среде или получение зондов для биочипа. Можно получить смеси природных полинуклеотидов и их аналогов; альтернативно можно получить смеси разных аналогов полинуклеотидов и смеси природных полинуклеотидов и их аналогов.

Известны разные аналоги полинуклеотидов, например, содержащие фосфорамидатные, фосфоротиоатные, фосфородитиоатные или О-метилфосфороамидитные связи; а также пептидполинуклеотидные скелеты и связи. Другие аналоги полинуклеотидов включают в себя полинуклеотиды с положительно заряженными скелетами; неионными скелетами и нерибозными скелетами. В объем изобретения также входят полинуклеотиды, содержащие один или несколько карбоциклических сахаров.

Другие аналоги включают в себя пептидполинуклеотидные (ΡNΑ) аналоги. Их скелеты практически являются неионными в нейтральных условиях в отличие от сильно заряженного фосфодиэфирного скелета природных полинуклеотидов. Это может иметь ряд преимуществ. Во-первых, скелет ΡNΑ может характеризоваться улучшенной кинетикой гибридизации. ΡNΑ характеризуются большими изменениями температуры плавления (Т_пл) при несовпадениях по сравнению с идеально совпадающими парами оснований. Т_пл ДНК и РНК обычно уменьшается на 2-4°С при внутреннем несовпадении. Для неионного скелета ΡNΑ уменьшение составляет примерно 7-9°С. Подобным образом вследствие неионной природы указанных скелетов гибридизация присоединенных к ним оснований относительно нечувствительна к концентрации соли. Кроме того, под действием клеточных ферментов ΡNΑ не разрушаются или разрушаются в меньшей степени и, следовательно, они могут быть более стабильными.

Способы применения раскрытых полинуклеотидов №МКР и сочетаний их фрагментов включают в себя применение фрагментов в качестве зондов в анализах полинуклеотидов методом гибридизации или в качестве праймеров для применения в анализах полинуклеотидов методом амплификации, или применение фрагментов для получения разных полинуклеотидных конструкций, таких как молекулы РНКи. Такие фрагменты обычно содержат по меньшей мере примерно 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более смежных нуклеотидов последовательности ДНК. В других воплощениях фрагмент ДНК содержит по меньшей мере примерно 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60 или более смежных нуклеотидов последовательности ДНК. Таким образом, в другом аспекте изобретение предлагает способ детекции полинуклеотидов №МКР, включающий в себя применение описанных здесь зондов и/или праймеров.

Основные параметры, влияющие на выбор условий гибридизации, и руководство по выбору подходящих условий можно найти в 8атЬгоок, 1., Е.Р. РгШск. апк Т. Машакк (1989, Мо1еси1аг Скопищ: А ЬаЬота!огу Мапиа1, Со1к 8ргнщ НагЬог ЬаЬога1огу Ргекк, Со1к 8ргпщ НагЬог, ΝΥ.). Используя сведения о генетическом коде в сочетании с описанными выше аминокислотными последовательностями, можно получить наборы вырожденных олигонуклеотидов. Такие олигонуклеотиды можно использовать в качестве праймеров, например, в полимеразных цепных реакциях (ПЦР), где полинуклеотидные фрагменты выделяют и амплифицируют. В некоторых воплощениях вырожденные праймеры можно использовать в качестве зондов для получения нечеловеческих генетических библиотек. Такие библиотеки включают в себя, без ограничения, библиотеки кДНК, геномные библиотеки и даже электронные библиотеки Е8Т (маркеров экспрессируемых последовательностей) или ДНК.

Идентифицированные с помощью данного способа гомологмчные последовательности можно использовать в качестве зондов для идентификации нечеловеческих последовательностей, гомологичных идентифицированным здесь последовательностям №МВР.

Также можно использовать полинуклеотиды и олигонуклеотиды (например, праймеры или зонды), которые гибридизуются в условиях пониженной жесткости, в основном в условиях умеренной жесткости и часто в условиях высокой жесткости, с описанными здесь полинуклеотидами №МКР. Основные параметры, влияющие на выбор условий гибридизации, и руководство по выбору подходящих условий можно найти в 8атЬгоок, 1., Е.Р. РгЪкск, апк Т. Машакк (1989, Мо1еси1аг Скопищ: А ЬаЬога1огу Мапиа1, Со1к 8ргпщ НагЬог ЬаЬога1огу Ргекк, Со1к 8ргнщ НагЬог, ΝΥ.), соответственно, рядовые специалисты в данной области могут легко установить условия гибридизации на основе, например, длины или нуклеотидного состава полинуклеотида.

- 10 030377

Один из способов достижения условий умеренной жесткости включает в себя применение раствора для предварительного промывания, содержащего 5х стандартный раствор цитрата натрия, 0,5% додецилсульфата натрия, 1,0 мМ этилендиаминтетрауксусную кислоту (рН 8,0), буфера для гибридизации, содержащего примерно 50% формамида, 6х стандартный раствор цитрата натрия, температуры гибридизации, составляющей примерно 55°С (или других подобных растворов для гибридизации, таких как раствор, содержащий примерно 50% формамида, и температуры гибридизации, составляющей примерно 42°С), и условий промывания, включающих в себя температуру, составляющую примерно 60°С, и раствор для промывания, содержащий 0,5х стандартный раствор цитрата натрия, 0,1% додецилсульфата натрия. Как правило, условия высокой жесткости определяют как описанные выше условия гибридизации, но с промыванием примерно при 68°С раствором, содержащим 0,2х стандартный раствор цитрата натрия, 0,1% додецилсульфата натрия. 88ΡΕ (1х 88ΡΕ содержит 0,15М хлорид натрия, 10 мМ фосфат натрия и 1,25 мМ этилендиаминтетрауксусную кислоту, рН 7,4) можно заменить стандартным раствором цитрата натрия (1х стандартный раствор цитрата натрия содержит 0,15М хлорид натрия и 15 мМ цитрат натрия) в буферах для гибридизации и промывания; промывание проводят в течение 15 мин после завершения гибридизации. Следует понимать, что желательную степень жесткости можно достичь, варьируя по мере необходимости температуру промывания и концентрацию солевого раствора для промывания с учетом основных принципов реакций гибридизации и стабильности дуплекса, как известно специалистам в данной области и описано подробно ниже (см., например, 8ашЬтоок, 1., Е.Р. ЕпКск. апй Т. МашаЙ8 (1989, Мо1еси1аг С1ошпд: А ЬаЬота1огу Мапиа1, Со1й Зртшд НагЬог ЬаЬота1огу Рте88, Со1й Зрппд НагЬог, Ν.Υ.). При гибридизации полинуклеотида с полинуклеотидом-мишенью с неизвестной последовательностью предполагают, что длина гибрида равна длине гибридизующегося полинуклеотида. При гибридизации полинуклеотидов с известными последовательностями длину гибрида можно определить путем выравнивания последовательностей полинуклеотидов и идентификации участка или участков оптимальной комплементарности последовательностей. Температура гибридизации в случае образования гибридов с ожидаемой длиной менее 50 пар оснований должна быть на 5-10°С меньше чем температура плавления (Т_пл) гибрида, где Т_пл определяют по приведенным ниже уравнениям. Если длина гибридов составляет менее 18 пар оснований, Т_пл (°С)=2(число оснований А+Т)+4(число оснований С+С). Если длина гибридов составляет более 18 пар оснований, Т_пл (°С)=81,5+16,6(1од 10Ща+])+0,41 (% С+С)(600/Ν), где N обозначает число оснований в гибриде, а [Ν+] обозначает концентрацию ионов натрия в буфере для гибридизации (|Νη+| в 1х стандартном растворе цитрата натрия = 0,165М). Как правило, каждый такой гибридизующийся полинуклеотид имеет длину, составляющую по меньшей мере 25% (зачастую по меньшей мере 50, 60 или 70% и чаще всего по меньшей мере 80%) от длины полинуклеотида, с которым он гибридизуется, и последовательность, по меньшей мере на 60% (например, по меньшей мере на 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97,5 или по меньшей мере на 99%) идентичную последовательности полинуклеотида, с которым он гибридизуется.

Специалистам в данной области известно, что линейная ДНК может иметь две возможные ориентации: в направлении 5'-3' и в направлении 3'-5'. Например, если последовательность отнесения расположена в направлении 5'-3' и вторая последовательность расположена в направлении 5'-3' в той же полинуклеотидной молекуле/цепи, то последовательность отнесения и вторая последовательность расположены в одном и том же направлении,или имеют одинаковую ориентацию.

Как правило, последовательность промотора и представляющий интерес ген, регулируемый указанным промотором, находятся в одной ориентации. Однако если последовательность отнесения расположена в направлении 5'-3', а вторая последовательность расположена в направлении 3'-5' в той же полинуклеотидной молекуле/цепи, то последовательность отнесения и вторая последовательность расположены в антисмысловом направлении или имеют антисмысловую ориентацию. Две последовательности, имеющие антисмысловую ориентацию по отношению друг к другу, альтернативно можно описать как имеющие одинаковую ориентацию, если последовательность отнесения (направление 5'-3') и последовательность, обратно комплементарная последовательности отнесения (последовательность отнесения расположена в направлении 5'-3'), находятся в одной полинуклеотидной молекуле/цепи. Последовательности, описанные в настоящем документе, приведены в направлении 5'-3'.

Полипептиды №МКР включают в себя варианты, образовавшиеся в результате введения любых изменений (таких как вставки, делеции или замены аминокислот; изменения в состояниях гликозилирования; изменения, оказывающие влияние на рефолдинг или изомеризацию, трехмерные структуры или самоассоциированные состояния), которые можно получить рекомбинантными методами или выделить из природного источника. Полипептиды №МКР3 или №МКР4 могут быть линейными или их можно подвергнуть циклизации с помощью известных методов. Полипептиды №МКР4 содержат по меньшей мере 10, по меньшей мере 20, по меньшей мере 30 или по меньшей мере 40 смежных аминокислот.

Разные воплощения направлены на выделенные полипептиды №МКР3, кодируемые полинуклеотидной последовательностью, включающей в себя, состоящей или в основном состоящей из 8ΕΟ ГО ΝΟ: 28, или 8ΕΟ ГО ΝΟ: 29 или 8ΕΟ ГО ΝΟ: 51, или фрагменты 8ΕΟ ГО ΝΟ: 28, или 8ΕΟ ГО ΝΟ: 29 или 8ΕΟ ГО ΝΟ: 51, или их варианты.

- 11 030377

Разные воплощения направлены на выделенные полипептиды №МКР4 кодируемые полинуклеотидной последовательностью, включающей в себя, состоящей или в основном состоящей из 8ЕО ΙΌ N0: 1, или 8Е0 ΙΌ N0: 2, или 8Е0 ΙΌ N0: 27, фрагменты 8Е0 ΙΌ N0: 1, или 8Е0 ΙΌ N0: 2, или 8Е0 ΙΌ N0: 27 или их варианты.

Разные воплощения направлены на варианты выделенного полипептида №МКР, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 и 99% идентичные последовательностям 8Е0 ГО N0: 1, или 8Е0 ГО N0: 2, или 8Е0 ГО N0: 27, или 8Е0 ГО N0: 28, или 8Е0 ГО N0: 29, или 8Е0 ГО N0: 51, или фрагментам 8ЕТ) ГО N0: 1, или 8ЕТ) ГО N0: 2, или 8ЕО ГО N0: 27, или 8ЕО ГО N0: 28, или 8ЕО ГО N0: 29, или 8ЕО ГО N0: 51.

Мутантные полипептидные варианты №МКР, №МКР3 и №МКР4 также входят в объем формулы изобретения и раскрываются в данном описании как мутантные полипептидные варианты №МКР, №МКР3 и №МКР4, которые входят в состав мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растений (таких как мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растения табака).

Термин не встречающийся в природе в данном описании относится к объекту (такому как полинуклеотид, генетическая мутация, полипептид, растение, растительная клетка и растительный материал), который не образуется или не существует в природе. Такие не встречающиеся в природе или искусственные объекты можно получить, синтезировать, инициировать, модифицировать, подвергнуть вмешательству или манипуляциям с помощью способов, описанных в настоящем документе, или известных в данной области. Так, например, не встречающееся в природе растение, не встречающуюся в природе растительную клетку или не встречающийся в природе растительный материал можно получить с помощью традиционных методов селекции, таких как обратное скрещивание, или с помощью методов генетических манипуляций, таких как методы с применением антисмысловых РНК, интерферирующих РНК, мегануклеаз и т.п. В другом примере не встречающееся в природе растение, не встречающуюся в природе растительную клетку или не встречающийся в природе растительный материал можно получить путем интрогрессии или переноса одной или нескольких генетических мутаций (например, одного или нескольких полиморфизмов) из первого растения, или первой растительной клетки, во второе растение или вторую растительную клетку (которые сами по себе могут встречаться в природе), в результате чего полученные растение, растительная клетка или растительный материал или их потомство содержат генетическую структуру (такую как геном, хромосома или ее сегмент), которая не образуется или не встречается в природе. Таким образом, полученные растение, растительная клетка или растительный материал являются искусственными или не встречаются в природе. Соответственно, искусственные или не встречающиеся в природе растение или растительную клетку можно получить путем модификации генной последовательности в первом, встречающемся в природе растении, или в первой, встречающейся в природе растительной клетке, даже если полученная генная последовательность встречающейся в природе во втором растении или во второй растительной клетке, генетический фон которых отличается от генетического фона первого растения или первой растительной клетки. Различия в генетическом фоне можно детектировать по фенотипическим различиям или с помощью известных в данной области методов молекулярной биологии, таких как секвенирование полинуклеотидов, определение присутствия или отсутствия генетических маркеров (таких как микросателлитные РНК-маркеры).

Полипептид можно получить путем культивирования трансформированных или рекомбинантных клеток-хозяев в условиях, обеспечивающих экспрессию полипептида. Затем экспрессированный полипептид можно выделить из такой культуры с помощью известных методов очистки. Очистка полипептида также может включать в себя применение аффинной колонки, содержащей средства, способные связываться с полипептидом; одной или нескольких стадий очистки на колонке, содержащей такие аффинные смолы, как конканавалин А-агароза, гепарин-1оуореаг1® или СаЪасгош Ыие 30А Зерйагоке®; одной или нескольких стадий гидрофобной хроматографии с использованием таких смол, как простой фениловый эфир, простой бутиловый эфир или простой пропиловый эфир; или иммуноаффинной хроматографии. Альтернативно полипептид также можно экспрессировать в виде формы, облегчающей очистку. Например, его можно экспрессировать в виде гибрида с таким полипептидом, как мальтозосвязывающий полипептид (МВР), глутатион-5-трансфераза (08Т) или тиоредоксин (ТКХ). Наборы для экспрессии и очистки таких гибридных полипептидов можно приобрести в №\ν Еп§1апб ВюЬаЪ (Веуег1у, Ма88.), РНагшааа (Р|5еа1аиау. N.1.) и ШУйгодеп соответственно. К полипептиду также можно присоединить эпитоп и затем очистить его, используя специфическое антитело против такого эпитопа. И наконец, для дополнительной очистки полипептида можно использовать одну или несколько стадий высокоэффективной жидкостной хроматографии на обращенной фазе (ВЭЖХ на обращенной фазе) с применением гидрофобной среды для ВЭЖХ на обращенной фазе, такой как силикагель, содержащий выступающие метильные или другие алифатические группы. Для получения практически гомогенного рекомбинантного полипептида также можно использовать разные сочетания некоторых или всех вышеописанных стадий очистки. Очищенный таким образом полипептид, который практически не содержит других полипептидов, в настоящем описании определяют как практически очищенный полипептид; такие очищенные полипептиды включают в себя полипептид №МКР, его фрагмент, вариант и т.п. Экспрессию, выделение и очистку полипептидов и их фрагментов можно проводить с помощью любых подходящих способов,

- 12 030377 включающих в себя, без ограничения, описанные здесь способы.

Для аффинной очистки экспрессируемых полипептидов также можно использовать аффинную колонку, содержащую, например, моноклональное антитело против полипептидов. Указанные полипептиды можно удалить с аффинной колонки традиционными методами, например путем применения буфера для элюирования с высоким содержанием солей и затем диализа в буфере с низким содержанием солей для последующего применения или путем изменения рН или других факторов в зависимости от используемой аффинной основы, или путем конкурентного удаления с использованием природного субстрата аффинного фрагмента, такого как полипептид, полученный по способу настоящего изобретения.

Полипептид также можно получить с помощью известных традиционных методов химического синтеза. Синтетические методы конструирования полипептидов или их фрагментов известны специалистам в данной области. Поскольку полученные синтетическими методами полипептидные последовательности и нативные полипептиды обладают подобными характеристиками первичной, вторичной и третичной структуры или конформационными характеристиками, они также могут иметь общие биологические свойства, включающие в себя биологическую активность.

Воплощения направлены на способы получения мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растений, которые были модифицированы с целью уменьшения или блокирования транспорта тяжелых металлов (таких как кадмий) в пластину листа путем понижения уровня экспрессии полинуклеотида №МКР или путем понижения активности кодируемого им белка. Равновесный уровень транскриптов РНК №МКР можно понизить по сравнению с контрольным растением. Следовательно, число функционально активных транспортеров №МРР, способных транспортировать тяжелые металлы (например, кадмий) через клеточные мембраны, можно уменьшить так, чтобы снизить уровень кадмия в растении.

Понижение экспрессии полинуклеотида №МРР может составлять примерно от 5 до 100%, или уменьшение может составлять по меньшей мере 10, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 40, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 75, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 95, по меньшей мере 98, или 100%, где понижение включает в себя снижение транскрипционной активности.

Снижение активности белка №МРР может составлять примерно от 5 до 100%, или снижение составляет по меньшей мере 10, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 40, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 75, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 95, по меньшей мере 98, или до 100%.

Ингибирование относится к снижению, которое составляет примерно от 98 до 100%, или к снижению, которое составляет по меньшей мере 98, по меньшей мере 99 и предпочтитлеьно 100%.

Описанные здесь полинуклеотиды и рекомбинантные конструкции можно использовать для модулирования (например, уменьшения или ингибирования) экспрессии полипептида №МКР в представляющих интерес видах растений. Как известно, ряд способов, основанных на применении полинуклеотидов, в том числе применение антисмысловых РНК, расщепление РНК под действием рибозимов, посттранскрипционное молчание генов (РТС8), например, в результате РНК-интерференции (РНКи), и транскрипционное молчание генов (ТС8), включают в себя ингибирование экспрессии генов в растениях.

Подходящие полинуклеотиды включают в себя полноразмерные полинуклеотиды, кодирующие полипептиды №МРР, или фрагменты таких полноразмерных полинуклеотидов. В некоторых воплощениях можно использовать последовательность, комплементарную полноразмерному полинуклеотиду или его фрагменту. Как правило, фрагмент содержит по меньшей мере 10 смежных нуклеотидов, например по меньшей мере 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 30, 35, 40, 50, 80, 100, 200, 500 или более смежных нуклеотидов. Как правило, использование более коротких последовательностей требует применения более высокой степени гомологии.

Таким образом, композиции, способные модулировать (например, понижать или ингибировать) экспрессию или активность №МКР, включают в себя, без ограничения, последовательностьспецифичные полинуклеотиды, которые могут препятствовать транскрипции одного или нескольких эндогенных генов №МКР; последовательность-специфичные полинуклеотиды, которые могут препятствовать трансляции транскрииптов РНК №МКР (например, двухцепочечные РНК, миРНК, рибозимы); последовательность-специфичные полипептиды, способные снижать стабильность белков №МКР; последовательность-специфичные полинуклеотиды, способные уменьшать ферментативную активность белка №МКР или связывающую активность белка №МРР в отношении субстратов или регуляторных белков; антитела, специфичные по отношению к белку №МКР; низкомолекулярные соединения, которые могут снижать стабильность белка №МКР, или ферментативную активность белка №МКР, или связывающую активность белка №МКР; белки цинковые пальцы, способные связывать полинуклеотид №МРР; и мегануклеазы, обладающие активностью в отношении полинуклеотида №МКР. Антисмысловая технология является одним из хорошо известных методов модулирования (например, понижения или ингибирования) экспрессии полипептида №МКР. Полинуклеотидную последовательность гена, подлежащего экспрессии, клонируют и помещают в функциональной связи с регуляторным участком и последовательностью терминации транскрипции так, чтобы транскрибировать антисмысловую цепь РНК. Затем рекомби- 13 030377 нантную конструкцию используют для трансформации растений, как описано в данном документе, и получают антисмысловую цепь РНК. Полинуклеотид не обязательно включает в себя всю последовательность гена, подлежащего подавлению, но, как правило, он является практически комплементарным по меньшей мере части смысловой цепи гена, подлежащего подавлению.

Полинуклеотид можно транскрибировать в рибозим или каталитическую РНК, которая влияет на экспрессию мРНК. Рибозимы можно сконструировать так, чтобы они специфически спаривались практически с любой РНК-мишенью и расщепляли фосфодиэфирный скелет по конкретному положению, осуществляя функциональную инактивацию РНК-мишени. Гетерологичные полинуклеотиды могут кодировать рибозимы, способные расщеплять конкретные транскрипты мРНК, предотвращая экспрессию полипептида. Для разрушения конкретных мРНК можно использовать рибозимы в виде головки молотка, а также другие рибозимы, способные расщеплять мРНК по специфичным участкам последовательности. Рибозимы в виде головки молотка расщепляют мРНК в положениях, определяемых фланкирующими участками, которые образуют комплементарные пары оснований с мРНК-мишенью. Единственное требование включает в себя содержание в РНК-мишени нуклеотидной последовательности 5'-ИС-3'. Способы конструирования и получения рибозимов в виде головки молотка известны в данной области. Последовательности рибозимов в виде головки молотка можно вставить в стабильную РНК, такую как транспортная РНК (тРНК), чтобы повысить эффективность расщепления ίη νίνο.

Например, можно получить конструкцию, содержащую последовательность, которая транскрибируется в РНК, способную гибридизоваться сама с собой, такую как двухцепочечная РНК, имеющая структуру типа стебель-петля. В некоторых воплощениях одна цепь фрагмента стеблеобразной структуры двухцепочечной РНК содержит последовательность, подобную или идентичную смысловой кодирующей последовательности полинуклеотида №МКР или ее фрагменту, и содержащую примерно от 10 нуклеотидов до 2500 смежных нуклеотидов в длину. Длина последовательности, подобной или идентичной смысловой кодирующей последовательности может составлять от 10 смежных нуклеотидов до 500 смежных нуклеотидов, от 15 до 300 смежных нуклеотидов, от 20 до 100 смежных нуклеотидов или от 25 до 100 смежных нуклеотидов. Другая цепь стеблеобразного фрагмента двухцепочечной РНК содержит последовательность, подобную или идентичную антисмысловой цепи кодирующей последовательности полинуклеотида №МКР или ее фрагменту, длина которой может быть меньше, такой же или больше, чем длина соответствующей смысловой последовательности. В некоторых случаях одна цепь стеблеобразного фрагмента двухцепочечной РНК содержит последовательность, подобную или идентичную 3'- или 5'нетранслируемому участку мРНК, кодирующей полипептид №МКР, или его фрагменту, а другая цепь стеблеобразного фрагмента двухцепочечной РНК содержит последовательность, подобную или идентичную последовательности, комплементарной 3'- или 5'-нетранслируемому участку мРНК, кодирующей полипептид №МКР, или его фрагменту. В других воплощениях одна цепь стеблеобразного фрагмента двухцепочечной РНК содержит последовательность, подобную или идентичную последовательности интрона пре-мРНК, кодирующей полипептид №МКР, или ее фрагменту, а другая цепь стеблеобразного фрагмента содержит последовательность, подобную или идентичную последовательности, комплементарной последовательности интрона пре-мРНК, или ее фрагменту.

Петлеобразный фрагмент двухцепочечной РНК может содержать примерно от 3 нуклеотидов до 5000 нуклеотидов, например примерно от 15 до 1000 нуклеотидов, примерно от 20 до 500 нуклеотидов, примерно от 25 до 250 нуклеотидов. Петлеобразный фрагмент РНК может содержать интрон или его фрагмент. Двухцепочечная РНК может содержать ноль, один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять или более петлеобразных структур.

Конструкцию, содержащую последовательность, функционально связанную с регуляторным участком, или с последовательностью терминации транскрипции, способную транскрибироваться в РНК, которая может представлять собой двухцепочечную РНК, можно использовать для трансформации описанных здесь растений. Способы применения РНКи для подавления экспрессии гена известны специалистам в данной области.

Для подавления экспрессии гена также можно использовать конструкции, содержащие регуляторные участки, функционально связанные с полинуклеотидными молекулами в смысловой ориентации. Продукт транскрипции может быть подобен или идентичен смысловой последовательности, кодирующей полипептид №МКР, или ее фрагменту. В продукте транскрипции также может отсутствовать участок полиаденилирования, 5'-кэпирующая структура, или может присутствовать не поддающийся сплайсингу интрон. Способы ингибирования экспрессии гена с применением полноразмерной кДНК, а также фрагмента последовательности кДНК известны в данной области.

В некоторых воплощениях для подавления экспрессии гена используют конструкцию, содержащую полинуклеотид, состоящий по меньшей мере из одной цепи, которая является матрицей как для смысловой, так и антисмысловой последовательностей, комплементарных друг другу. Смысловая и антисмысловая последовательности могут составлять часть более крупной полинуклеотидной молекулы, или они могут входить в состав отдельных полинуклеотидных молекул, последовательности которых не являются комплементарными. Смысловая или антисмысловая последовательность может представлять собой последовательность, идентичную или комплементарную последовательности мРНК, 3'- или 5'- 14 030377 нетранслируемому участку мРНК или интрону, входящему в состав пре-мРНК, кодирующей полипептид №МКР, или фрагменту одной из указанных последовательностей. В некоторых воплощениях смысловая или антисмысловая последовательность является идентичной или комплементарной последовательности регуляторного участка, который управляет транскрипцией гена, кодирующего полипептид №МКР. Во всех случаях смысловая последовательность представляет собой последовательность, комплементарную антисмысловой последовательности.

Смысловая и антисмысловая последовательности могут иметь длину, превышающую примерно 10 нуклеотидов (например, примерно 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, З0 или более нуклеотидов). Например, длина антисмысловой последовательности может составлять примерно 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 нуклеотидов. Как правило, длина смысловой и антисмысловой последовательности варьирует примерно от 15 до 30 нуклеотидов, например примерно от 18 до 28 нуклеотидов, или примерно от 21 до 25 нуклеотидов, или примерно от 23 до 25 нуклеотидов.

В некоторых воплощениях антисмысловая последовательность представляет собой последовательность, комплементарную последовательности мРНК, кодирующей описанный здесь полипептид №МКР, или ее фрагменту. Смысловая последовательность, комплементарная антисмысловой последовательности, может представлять собой последовательность, присутствующую в мРНК, кодирующей полипептид №МКР. Чтобы снизить уровень целевой мРНК, как правило, смысловую и антисмысловую последовательности конструируют так, чтобы они соответствовали последовательности целевой мРНК, содержащей 15-30 нуклеотидов.

В некоторых воплощениях для подавления экспрессии гена можно использовать конструкцию, содержащую полинуклеотид, по меньшей мере одна цепь которого является матрицей для нескольких смысловых последовательностей (например, примерно для 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более смысловых последовательностей). Подобным образом, для подавления экспрессии гена можно использовать конструкцию, содержащую полинуклеотид, по меньшей мере одна цепь которого является матрицей для нескольких антисмысловых последовательностей (например, примерно для 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более антисмысловых последовательностей). Например, конструкция может содержать полинуклеотид, по меньшей мере одна цепь которого является матрицей для двух смысловых последовательностей и двух антисмысловых последовательностей. Несколько смысловых последовательностей могут быть одинаковыми или разными. Несколько антисмысловых последовательностей могут быть одинаковыми или разными. Например, конструкция может содержать полинуклеотид, одна цепь которого является матрицей для двух идентичных смысловых последовательностей и двух идентичных антисмысловых последовательностей, которые являются комплементарными двум идентичным смысловым последовательностям. Альтернативно выделенный полинуклеотид может содержать одну цепь, которая является матрицей для (1) двух идентичных смысловых последовательностей, содержащих примерно 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или более нуклеотидов в длину, (2) одной антисмысловой последовательности, комплементарной двум идентичным смысловым последовательностям, содержащим примерно 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или более нуклеотидов в длину, (3) смысловой последовательности, содержащей примерно 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или более нуклеотидов в длину, и (4) трех идентичных антисмысловых последовательностей, комплементарных смысловой последовательности, содержащей примерно 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или более нуклеотидов в длину. Предлагаемые в настоящем описании конструкции могут содержать смысловые и антисмысловые последовательности в любом порядке. Например, две идентичные смысловые последовательности могут располагаться перед двумя идентичными антисмысловыми последовательностями или между двумя идентичными антисмысловыми последовательностями.

Полинуклеотид, содержащий по меньшей мере одну цепь, которая является матрицей для одной или нескольких смысловых или антисмысловых последовательностей, может находиться в функциональной связи с регуляторным участком, управляющим транскрипцией молекулы РНК, содержащей смысловую или антисмысловую последовательность (последовательности). Кроме того, такой полинуклеотид может находиться в функциональной связи с последовательностью терминации транскрипции, такой как терминатор гена нопалинсинтазы (поз). В некоторых случаях два регуляторных участка могут управлять транскрипцией двух транскриптов: один из верхней цепи, а другой из нижней цепи. Два регуляторных участка могут быть одинаковыми или разными. Два транскрипта могут образовывать двухцепочечные молекулы РНК, которые индуцируют деградацию РНК-мишени. В некоторых случаях полинуклеотид может находиться в Т-ДНК или в перенесенной растительной ДНК (Р-ДНК), где левая и правая бордюрные последовательности Т-ДНК, или левая и правая бордюроподобные последовательности Р-ДНК, фланкируют полинуклеотид, или располагаются с каждой стороны полинуклеотида. Полинуклеотидная последовательность между двумя регуляторными участками может содержать примерно от 15 до 300 нуклеотидов в длину, примерно от 15 до 200 нуклеотидов в длину, примерно от 15 до 100 нуклеотидов в длину, примерно от 15 до 50 нуклеотидов в длину, примерно от 18 до 50 нуклеотидов в длину, примерно от 18 до 40 нуклеотидов в длину, примерно от 18 до 30 нуклеотидов в длину, или примерно от 18 до 25 нуклеотидов в длину.

- 15 030377

Соответственно, композиции, модулирующие (например, осуществляющие понижающую регуляцию) экспрессию или активность белка №МРР, включают в себя последовательность-специфичные полинуклеотиды, способные препятствовать транскрипции одного или нескольких эндогенных генов №МКР; последовательность-специфичные полинуклеотиды, способные препятствовать трансляции транскриптов РНК №МКР (такие как двухцепочечные РНК, миРНК, рибозимы); последовательностьспецифичные полипептиды, уменьшающие стабильность белков №МКР; последовательностьспецифичные полинуклеотиды, препятствующие ферментативной активности белка №МКР или связывающей активности белка №МКР в отношении субстратов или регуляторных белков; антитела, специфичные к белкам №МРР; низкомолекулярные соединения, способные уменьшать стабильность белка №МКР, или ферментативную активность белка №МКР, или связывающую активность белка №МКР; белки цинковые пальцы, способные связывать полинуклеотид №МКР; и мегануклеазы, обладающие активностью в отношении полинуклеотида №МРР.

Эффективный антагонист может уменьшать транспорт тяжелых металлов (таких как кадмий) в листья (например, в структуры листовой пластины) по меньшей мере на 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%. В одном воплощении последовательностьспецифичный полинуклеотид, способный препятствовать трансляции транскрипта (транскриптов) РНК №МКР, представляет собой РНКи.

РНК-интерференция (РНКи) или сайленсинг РНК представляет собой эволюционно консервативный процесс, посредством которого конкретные мРНК могут направляться для ферментативной деградации. Чтобы инициировать путь РНКи, двухцепочечные РНК (например, двухцепочечный РНК-вирус или РНКи полинуклеотиды №МКР) нужно ввести в клетку или обеспечить их продукцию в клетке. Двухцепочечные РНК могут превратиться в несколько дуплексов миРНК длиной 21-23 п.о. (миРНК) под действием РНКаз III, которые представляют собой эндонуклеазы, специфичные к двухцепочечным РНК (Оюег). Затем миРНК могут распознаваться индуцируемыми РНК комплексами сайленсинга (К1§С), которые инициируют раскручивание миРНК посредством АТФ-зависимого процесса. Раскрученная антисмысловая цепь миРНК направляет активированный К18С к целевой мРНК (такой как варианты РНК №МКР), содержащей последовательность, комплементарную антисмысловой цепи миРНК. Целевая мРНК и антисмысловая цепь могут образовать спираль А-формы, а главная бороздка спирали А-формы может распознаваться активированным К18С. Целевая мРНК может расщепляться активированным К18С по одному участку, определенному участком связывания 5'-конца цепи миРНК. Активированный К!§С может подвергаться рециклизации и катализировать другое событие расщепления.

Векторы экспрессии РНКи №МРР, содержащие конструкции РНКи №МКР, кодирующие полинуклеотиды РНКи №МКР, осуществляют интерференцию РНК, понижая уровень экспрессии мРНК №МКР, пре-мРНК №МКР или родственные варианты РНК №МКР. Векторы экспрессии могут содержать промотор, расположенный выше конструкции РНКи №МКР и находящийся с ней в функциональной связи, как подробно описано в данном документе. Векторы экспрессии РНКи №МКР могут содержать подходящий минимальный основной промотор, представляющую интерес конструкцию РНКи №МКР, расположенный выше (5') регуляторный участок, расположенный ниже (3') регуляторный участок, включающий в себя участок терминации транскрипции и сигналы полиаденилирования, а также другие последовательности, известные специалистам в данной области, такие как разные маркеры селекции.

Полинуклеотиды №МКР можно получить в виде разных форм, включающих в себя двухцепочечные структуры (такие как двухцепочечная молекула РНК, содержащая антисмысловую цепь и комплементарную смысловую цепь), двухцепочечные шпилечные структуры (дцРНКи), одноцепочечные структуры (такие как молекула оцРНК, содержащая только антисмысловую цепь). Полинуклеотиды могут иметь дуплексную, асимметричную дуплексную, шпилечную или асимметричную шпилечную вторичную структуру и содержать самокомплементарные смысловые и антисмысловые цепи. Под действием ферментов дцРНКи №МРР может превращаться в двухцепочечные миРНК №МКР. Одна из цепей дуплекса миРНК №МРР может гибридизоваться с комплементарной последовательностью, входящей в состав целевой мРНК №МРР и родственных вариантов РНК №МКР. Дуплексы миРНК/мРНК распознаются К18С, который расщепляет РНК №МКР по нескольким участкам в последовательность-зависимой манере, приводя к разрушению целевой мРНК №МКР и родственных вариантов РНК №МКР.

Двухцепочечные молекулы РНК могут включать в себя молекулы миРНК, собранные из одного олигонуклеотида в структуру типа стебель-петля, где самокомплементарные смысловые и антисмысловые участки молекулы миРНК соединены через нуклеотидный или ненуклеотидный линкер (линкеры), а также молекулы циклической одноцепочечной РНК, содержащие две или более петлеобразные структуры и стебель, содержащий самокомплементарные смысловые и антисмысловые цепи, где циклическая РНК может подвергаться процессингу как ίη νΐνο, так и ίη νίίτο, с образованием активной молекулы миРНК, способной опосредовать РНКи.

В настоящем документе также раскрываются маленькие шпилечные молекулы РНК (8ЙРНК), содержащие специфическую антисмысловую последовательность и обратно комплементарную (смысловую) последовательность, как правило, разделенные спейсерной или петлеобразной последовательностью. В результате расщепления спейсерной или петлеобразной последовательности образуется одноце- 16 030377 почечная молекула РНК и комплементарная ей молекула, которые могут гибридизоваться с образованием двухцепочечной молекулы РНК (необязательно с дополнительными стадиями процессинга, которые могут приводить к добавлению или удалению одного, двух, трех или более нуклеотидов на З'-конце или на 5'-конце одной из цепей или обеих цепей). Спейсер может иметь длину, достаточную для обеспечения гибридизации антисмысловой и смысловой последовательностей с образованием двухцепочечной структуры (или стеблеобразной структуры) до расщепления спейсера (и, необязательно, с последующими стадиями процессинга, которые могут приводить к добавлению или удалению одного, двух, трех, четырех или более нуклеотидов на З'-конце, или на 5'-конце одной из цепей, или обеих цепей). Как правило, спейсерная последовательность представляет собой независимую нуклеотидную последовательность, расположенную между двумя комплементарными нуклеотидными последовательностями, способными гибридизоваться с образованием двухцепочечного полинуклеотида, содержащего оцРНК. Спейсерная последовательность обычно содержит примерно от 3 до 100 нуклеотидов.

Любой представляющий интерес полинуклеотид РНК №МКР можно получить путем выбора состава последовательности, размера петлеобразного участка и длины стеблеобразного участка, подходящих для получения шпилечного дуплекса №МКР. Подходящий диапазон длин стеблеобразных участков шпилечного дуплекса включает в себя длины, составляющие по меньшей мере примерно 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеотидов, например примерно 14-30 нуклеотидов, примерно 30-50 нуклеотидов, примерно 50-100 нуклеотидов, примерно 100-150 нуклеотидов, примерно 150-200 нуклеотидов, примерно 200-300 нуклеотидов, примерно 300-400 нуклеотидов, примерно 400-500 нуклеотидов, примерно 500-600 нуклеотидов и примерно 600-700 нуклеотидов. Подходящий диапазон длин петлеобразных участков шпилечного дуплекса включает в себя длины, составляющие примерно 4-25 нуклеотидов, примерно 25-50 нуклеотидов или больше, если длина стеблеобразного участка шпилечного дуплекса является большой. В некоторых воплощениях молекула двухцепочечной РНК или 88РНК содержит примерно от 15 до 40 нуклеотидов в длину. В другом воплощении молекула миРНК представляет собой молекулу двухцепочечной РНК или 88РНК, содержащую примерно от 15 до 35 нуклеотидов в длину. В другом воплощении молекула миРНК представляет собой молекулу двухцепочечной РНК или 88РНК, содержащую примерно от 17 до 30 нуклеотидов в длину. В другом воплощении молекула миРНК представляет собой молекулу двухцепочечной РНК или 88РНК, содержащую примерно от 19 до 25 нуклеотидов в длину. В другом воплощении молекула миРНК представляет собой молекулу двухцепочечной РНК или 88РНК, содержащую примерно от 21 до 23 нуклеотидов в длину. В некоторых воплощениях шпилечные структуры, содержащие дуплексные участки длиной более 21 нуклеотида, могут обеспечивать эффективный сайленсинг, опосредуемый миРНК, независимо от последовательности и длины петлеобразной структуры.

Последовательность целевой мРНК обычно содержит примерно от 14 до 50 нуклеотидов в длину. Следовательно, целевую мРНК можно сканировать на участки, содержащие примерно от 14 до 50 нуклеотидов в длину, которые предпочтительно удовлетворяют одному или нескольким из нижеследующих критериев целевой последовательности: отношение А+Т/С+С составляет примерно от 2:1 до 1:2; на 5'конце целевой последовательности присутствует динуклеотид АА или динуклеотид СА; последовательность, содержащая по меньшей мере 10 смежных нуклеотидов, является уникальной для целевой мРНК; отсутствие участков, содержащих более трех последовательных остатков гуанина (С) или более трех последовательных остатков цитозина (С). Наличие указанных критериев можно оценить разными методами, известными в данной области, например, поиск в широкодоступных базах данных с целью определения, является ли выбранная целевая последовательность уникальной для целевой мРНК, можно проводить с помощью компьютерных программ, таких как ВЬА§Т. Альтернативно, целевую последовательность можно выбрать (и сконструировать последовательность миРНК) с помощью коммерчески доступного компьютерного программного обеспечения (такого как ОйдоЕпдше.ТМ. (§еай1е, \Уа8Н.); ОНагтасоп, 1пс. (ЕаГауейе, Со1о.); Татде! Ршйет, £тот АтЫоп 1пс. (Аи8Йп, Тех.) апй Не 8ΐΚΝΑ Ое81дп Тоо1, О1АСЕУ 1пс. (Уа1епс1а, СайГ.)).

В одном воплощении выбирают целевые последовательности мРНК, которые содержат примерно от 14 до 30 нуклеотидов в длину и удовлетворяют одному или нескольким из приведенных выше критериев. В другом воплощении выбирают целевые последовательности мРНК, которые содержат примерно от 16 до 30 нуклеотидов в длину и удовлетворяют одному или нескольким из приведенных выше критериев. В следующем воплощении выбирают целевые последовательности мРНК, которые содержат примерно от 19 до 30 нуклеотидов в длину и удовлетворяют одному или нескольким из приведенных выше критериев. В другом воплощении выбирают целевые последовательности мРНК, которые содержат примерно от 19 до 25 нуклеотидов в длину и удовлетворяют одному или нескольким из приведенных выше критериев.

В иллюстративном воплощении молекулы миРНК содержат специфическую антисмысловую последовательность, комплементарную последовательности, содержащей по меньшей мере 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 29, 30 или более смежных нуклеотидов одной из последовательностей, описанных в §ЕЦ ГО ΝΟ: 1-23.

Специфическая антисмысловая последовательность, входящая в состав молекулы миРНК, может

- 17 030377 быть идентичной или практически идентичной последовательности, комплементарной целевой последовательности. В одном воплощении специфическая антисмысловая последовательность, входящая в состав молекулы миРНК, по меньшей мере примерно на 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности, комплементарной целевой мРНК. Способы определения идентичности последовательностей известны в данной области и могут включать в себя, например, применение программы ΒΕΑδΤΝ, предоставляемой Компьютерной группой Университета Висконсина (ОСО), или находящейся на \\'сЬ-сайте ΝΟΒΙ.

Специфическая антисмысловая последовательность описанной здесь молекулы миРНК может варьировать, отличаясь (например, в результате нуклеотидной замены, включающей в себя преобразование или трансверсию) по одному, двум, трем, четырем или более нуклеотидам от последовательности целевой мРНК. Если такие нуклеотидные замены присутствуют в антисмысловой цепи двухцепочечной молекулы РНК, комплементарный нуклеотид смысловой цепи, с которым замещенный нуклеотид обычно образует пару оснований, соединенных водородной связью, тоже может быть необязательно замещен соответствующим образом, причем в объем изобретения также входят двухцепочечные молекулы РНК, которые содержат одну или несколько нуклеотидных замен в смысловой последовательности, но не в антисмысловой цепи. Если антисмысловая последовательность молекулы миРНК содержит одно или несколько несовпадений по сравнению с нуклеотидной последовательностью миРНК и целевой нуклеотидной последовательностью, как описано выше, несовпадения могут присутствовать на 3'-конце, 5'конце или в центральной части антисмысловой последовательности.

В другом воплощении молекулы миРНК содержат специфическую антисмысловую последовательность, способную селективно гибридизоваться в жестких условиях с фрагментом природного целевого гена или целевой мРНК. Подходящие жесткие условия включают в себя, например, традиционные условия гибридизации и условия промывания, включающие в себя 1-3 промывания стандартным раствором цитрата натрия, содержащим 0,1-1% додецилсульфата натрия, при 50-70°С, с заменой раствора для промывания примерно через 5-30 мин. Как известно рядовым специалистам в данной области, жесткость условий гибридизации можно варьировать путем изменения времени, температуры или концентраций растворов, используемых для гибридизации и стадий промывания. Подходящие условия также могут отчасти зависеть от конкретной используемой нуклеотидной последовательности, например последовательности целевой мРНК или целевого гена.

Молекулы РНКи, имеющие дуплексную или двухцепочечную структуру, такие как двухцепочечные РНК или 8ЙРНК, могут содержать тупые концы, или 3'- или 5'-липкие концы. В данном описании термин липкий конец относится к неспаренному нуклеотиду или неспаренным нуклеотидам, которые выступают из дуплексной структуры, если 3'-конец одной цепи РНК продолжается за пределами 5'-конца другой цепи (3'-липкий конец), или наоборот (5'-липкий конец). Нуклеотиды, составляющие липкий конец, могут представлять собой рибонуклеотиды, дезоксирибонуклеотиды или их модифицированные версии. В одном воплощении по меньшей мере одна цепь молекулы РНКи содержит 3'-липкий конец, длина которого составляет примерно от 1 до 6 нуклеотидов. В других воплощениях 3'-липкий конец содержит примерно от 1 до 5 нуклеотидов, примерно от 1 до 3 нуклеотидов и примерно от 2 до 4 нуклеотидов в длину.

Если молекула РНКи содержит 3'-липкий конец на одном конце молекулы, другой конец может быть тупым, или он также может быть липким (5' или 3'). Если молекула РНКи содержит липкие концы на обоих концах молекулы, длина липких концов может быть одинаковой или разной. В одном воплощении описанная здесь молекула РНКи содержит 3'-липкие концы длиной примерно от 1 до 3 нуклеотидов на обоих концах молекулы. В другом воплощении молекула РНКи представляет собой двухцепочечную РНК, содержащую 3'-липкий конец длиной 2 нуклеотида на обоих концах молекулы. В следующем воплощении нуклеотиды, составляющие липкий конец РНКи, представляют собой динуклеотиды ТТ или динуклеотиды ИИ.

При определении процента идентичности молекулы РНКи, содержащей один или несколько липких концов, последовательности целевой мРНК, липкий конец (липкие концы) могут принимать или не принимать в расчет. Например, нуклеотиды из 3'-липкого конца и не более 2 нуклеотидов из 5'- или 3'-конца двойной цепи можно модифицировать без существенной утраты активности молекулы миРНК.

Молекулы РНКи могут содержать одну или несколько 5'- или 3'-кэпирующих структур. Молекула РНКи может содержать котирующую структуру на 3'-конце смысловой цепи, антисмысловой цепи, или и смысловой, и антисмысловой цепи; или на 5'-конце смысловой цепи, антисмысловой цепи или и смысловой, и антисмысловой цепи молекулы РНКи. Альтернативно, молекула РНКи может содержать кэпирующую структуру как на 3'-конце, так и на 5'-конце молекулы РНКи. Термин котирующая структура относится к химической модификации, введенной на любом конце олигонуклеотида (см., например, патент США № 5998203), которая защищает молекулу от деградации под действием экзонуклеазы и, кроме того, может облегчать доставку или локализацию в клетке.

Молекулы РНКи также можно модифицировать путем химического присоединения к молекуле РНКи одного или нескольких фрагментов или конъюгатов, которые повышают активность, клеточное распределение, поглощение клетками, биодоступность или стабильность молекул РНКи. Полинуклеоти- 18 030377 ды можно синтезировать или модифицировать с помощью хорошо известных в данной области способов. Химические модификации могут включать в себя, без ограничения, 2'-модификации, введение неприродных оснований, ковалентное присоединение к лиганду и замену фосфатных связей тиофосфатными связями. В данном воплощении целостность дуплексной структуры стабилизируется по меньшей мере одной, чаще двумя химическими связями. Образование химической связи можно осуществлять с помощью ряда хорошо известных методов, включающих в себя введение ковалентных, ионных или водородных связей; гидрофобных взаимодействий, вандерваальсовых взаимодействий или стэкингвзаимодействий; координацию ионов металлов или применение аналогов пуринов.

В следующем воплощении нуклеотиды в одной или обоих из двух одиночных цепей можно модифицировать с целью предотвращения или ингибирования активации клеточных ферментов, например, включающих в себя, без ограничения, некоторые нуклеазы. Методы ингибирования активации клеточных ферментов известны в данной области и включают в себя, без ограничения, 2'-аминомодификации, 2'-фтормодификации, 2'-алкилмодификации, модификации, приводящие к образованию незаряженного скелета, морфолиномодификации, 2'-О-метилмодификации и получение фосфорамидата. Таким образом, по меньшей мере одну 2'-гидроксильную группу нуклеотидов, входящих в состав двухцепочечной РНК, заменяют химической группой. Кроме того, по меньшей мере один нуклеотид можно модифицировать с получением замкнутого нуклеотида. Такой замкнутый нуклеотид содержит метиленовый или этиленовый мостик, который соединяет 2'-кислород рибозы с 4'-углеродом рибозы. Введение замкнутого нуклеотида в состав олигонуклеотида улучшает сродство к комплементарной последовательности и повышает температуру плавления на несколько градусов.

Лиганды можно присоединить к молекуле РНКи, например, с целью повышения клеточной абсорбции. В отдельном воплощении, чтобы облегчить непосредственное проникновение через клеточную мембрану, к молекуле присоединяют гидрофобный лиганд. Указанные подходы используют для облегчения проникновения антисмысловых олигонуклеотидов в клетки. В некоторых случаях присоединение катионного лиганда к олигонуклеотидам часто приводит к повышению устойчивости к нуклеазам. Типичные примеры катионных лигандов включают в себя пропиламмоний и диметилпропиламмоний. Антисмысловые олигонуклеотиды могут сохранять высокое сродство связывания в отношении мРНК, если катионный лиганд рассредоточен по всей длине олигонуклеотида.

Описанные здесь молекулы и нуклеотиды можно получить с помощью хорошо известного метода твердофазного синтеза. Дополнительно или альтернативно для такого синтеза можно использовать любые другие средства.

Разные воплощения направлены на векторы экспрессии ΝίΜΡΡ (такие как векторы экспрессии ΝΙΜΡΡ3), содержащие полинуклеотид ΝίΜΡΡ или конструкции РНКи ΝίΜΡΡ, которые содержат один или несколько элементов, выбранных из группы, включающей в себя 8ЕО ГО N0: 28, 8Е0 ГО N0: 29, 8ЕО ГО N0: 51, интрон 1 (8ЕО ГО N0: 30), интрон 2 (8ЕО ГО N0: 31), интрон 3 (8ЕО ГО N0: 32), интрон 4 (8ЕО ГО N0: 33), интрон 5 (8ЕО ГО N0: 34), интрон 6 (8ЕО ГО N0: 35), интрон 7 (8ЕО ГО N0: 36), интрон 8 (8ЕО ГО N0: 37), интрон 9 (8ЕО ГО N0: 38), интрон 10 (8ЕО ГО N0: 39), экзон 1 (8ЕО ГО N0: 40), экзон 2 (8ЕО ГО N0: 41), экзон 3 (8ЕО ГО N0: 42) экзон 4 (8ЕО ГО N0: 43), экзон 5 (8ЕО ГО N0: 44), экзон 6 (8ЕО ГО 30 N0: 45), экзон 7 (8ЕО ГО N0: 46), экзон 8 (8ЕО ГО N0: 47), экзон 9 (8ЕО ГО N0: 48), экзон 10 (8Е0 ГО N0: 49) или экзон 11 (8Е0 ГО N0: 50), а также их фрагменты и варианты. Как указано в данном документе, ссылка на конкретные последовательности также включает в себя комплементарные или обратно комплементарные последовательности.

Разные воплощения направлены на векторы экспрессии №ΜΡΡ (такие как векторы экспрессии №ΜΡΡ4), содержащие полинуклеотид №ΜΡΡ или конструкции РНКи №ΜΡΡ, которые содержат один или несколько элементов, выбранных из группы, включающей в себя 8Е0 ГО N0: 1, 8Е0 ГО N0: 2, 8Е0 ГО N0: 27, интрон 1 (8Е0 ГО N0: 3), интрон 2 (8Е0 ГО N0: 4), интрон 3 (8Е0 ГО N0: 5), интрон 4 (8Е0 ГО N0: 6), интрон 5 (8Е0 ГО N0: 7), интрон 6 (8Е0 ГО N0: 8), интрон 7 (8Е0 ГО N0: 9), интрон 8 (8Е0 ГО N0: 10), интрон 9 (8ЕО ГО N0: 11), интрон 10 (8Е(5 ГО N0: 12), экзон 1 (8ЕО ГО N0: 13), экзон 2 (8ЕО ГО N0: 14), экзон 3 (8ЕО ГО N0: 15) экзон 4 (8Е(5 ГО N0: 16), экзон 5 (8ЕО ГО N0: 17), экзон 6 (8ЕО ГО N0: 18) экзон 7 (8ЕО ГО N0: 19) экзон 8 (8ЕО ГО N0: 20), экзон 9 (8ЕО ГО N0: 21), экзон 10 (8Е0 ГО N0: 21), экзон 11 (8Е0 ГО N0: 22) или 8Е0 ГО N0: 23, а также их фрагменты и варианты. Как указано в данном документе, ссылка на конкретные последовательности также включает в себя комплементарные или обратно комплементарные последовательности.

Разные воплощения направлены на векторы экспрессии, содержащие один или несколько полинуклеотидов №ΜΡΡ или конструкций РНКи №ΜΡΡ (например, полинуклеотид №ΜΡΡ3 или конструкции РНКи №ΜΡΡ3), последовательности которых по меньшей мере на 71, 72, 73, 74%, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 и 99% идентичны последовательности, выбранной из группы, включающей в себя 8Е0 ГО N0: 28, 8ЕО ГО N0: 29, интрон 1 (8ЕО ГО N0: 30), интрон 2 (8ЕО ГО N0: 31), интрон 3 (8ЕО ГО N0: 32), интрон 4 (8ЕО ГО N0: 33), интрон 5 (8ЕО ГО N0: 34), интрон 6 (8ЕО ГО N0: 35), интрон 7 (8ЕО ГО N0: 36), интрон 8 (8ЕО ГО N0: 37), интрон 9 (8ЕО ГО N0: 38), интрон 10 (8ЕО ГО N0: 39), экзон 1 (8ЕО ГО N0: 40), экзон 2 (8ЕО ГО N0: 41), экзон 3 (8ЕО ГО N0: 42) экзон 4 (8ЕО ГО N0: 43), экзон 5 (8ЕО ГО N0: 44), экзон 6 (8Е0 ГО N0: 45) экзон 7 (8Е0 ГО N0: 46), экзон 8 (8Е0 ГО N0: 47), экзон 9 (8Е0 ГО N0: 48), экзон

- 19 030377 (8Еф ΙΌ N0: 49), экзон 11 (8Еф ΙΌ N0: 50) или 8Еф ГО N0: 51, а также их фрагменты и варианты, или сочетание двух или более из вышеперечисленных элементов. Как указано в данном документе, ссылка на конкретные последовательности также включает в себя комплементарные или обратно комплементарные последовательности.

Разные воплощения направлены на векторы экспрессии, содержащие полинуклеотид №МКР или конструкции РНКи №МКР (например, полинуклеотид №МКР4 или конструкции РНКи №МКР4), последовательности которых по меньшей мере на 70, 71, 72, 73, 74, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 и 99% идентичны последовательности, выбранной из группы, включающей в себя 8Еф ГО N0: 1, 8Еф ГО N0: 2, интрон 1 (8Еф ГО N0: 3), интрон 2 (8Еф ГО N0: 4), интрон 3 (8Еф ГО N0: 5), интрон 4 (8Еф ГО N0: 6), интрон 5 (8Еф ГО N0: 7), интрон 6 (8Еф ГО N0: 8), интрон 7 (8Еф ГО N0: 9), интрон 8 (8Еф ГО N0: 10), интрон 9 (81+) ГО N0: 11), интрон 10 (81+) ГО N0: 12), экзон 1 (81+) ГО N0: 13), экзон 2 (81+) ГО N0: 14), экзон 3 (81+) ГО N0: 15), экзон 4 (81+) ГО N0: 16), экзон 5 (81+) ГО N0: 17), экзон 6 (81+) ГО N0: 18), экзон 7 (81+) ГО N0: 19), экзон 8 (81+) ГО N0: 20), экзон 9 (81+) ГО N0: 21), экзон 10 (81+) ГО N0: 21), экзон 11 (8Еф ГО N0: 22) или 8Еф ГО N0: 23, а также их фрагменты и варианты или сочетание двух или более из вышеперечисленных элементов. Как указано в данном документе, ссылка на конкретные последовательности также включает в себя комплементарные или обратно комплементарные последовательности.

Разные воплощения направлены на векторы экспрессии, содержащие полинуклеотид №МКР или конструкцию РНКи №МКР, кодирующие полинуклеотиды РНКи №МКР (например, полинуклеотид №МКР3 или конструкции РНКи №МКР3, кодирующие полинуклеотиды РНКи №МКР3), способные к самогибридизации с образованием шпилечной структуры, где конструкция содержит (а) первую последовательность, по меньшей мере на 71, 72, 73, 74, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 и 99% идентичную последовательности, выбранной из группы, включающей в себя 8Еф ГО N0: 28, 8Еф ГО N0: 29, интрон 1 (8Еф ГО N0: 30), интрон 2 (81+) ГО N0: 31), интрон 3 (81+) ГО N0: 32), интрон 4 (81+) ГО N0: 33), интрон 5 (81+) ГО N0: 34), интрон 6 (81+) ГО N0: 35), интрон 7 (81+) ГО N0: 36), интрон 8 (81+) ГО N0: 37), интрон 9 (81+) ГО N0: 38), интрон 10 (81+) ГО N0: 39), экзон 1 (81+) ГО N0: 40), экзон 2 (81+) ГО N0: 41), экзон 3 (81+) ГО N0: 42) экзон 4 (81+) ГО N0: 43), экзон 5 (81+) ГО N0: 44), экзон 6 (81+) ГО N0: 45), экзон 7 (81+) ГО N0: 46), экзон 8 (81+) ГО N0: 47), экзон 9 (81+) ГО N0: 48), экзон 10 (81+) ГО N0: 49), экзон 11 (8Еф ГО N0: 50) или 8Еф ГО N0: 51, а также их фрагменты и варианты, или сочетание двух или более из вышеперечисленных элементов; (Ь) вторую последовательность, кодирующую спейсерный элемент, который образует петлю шпилечной структуры; и (с) третью последовательность, включающую в себя последовательность, обратно комплементарную первой последовательности и расположенную в той же ориентации, что и первая последовательность, где вторая последовательность расположена между первой последовательностью и третьей последовательностью и находится в функциональной связи с первой последовательностью и третьей последовательностью. Как указано в данном документе, ссылка на конкретные последовательности также включает в себя комплементарные или обратно комплементарные последовательности. Разные воплощения направлены на векторы экспрессии, содержащие полинуклеотид №МКР или конструкцию РНКи №МКР, кодирующие полинуклеотиды РНКи №МКР (например, полинуклеотид №МКР4 или конструкции РНКи №МКР4, кодирующие полинуклеотиды РНКи №МКР4), способные к самогибридизации с образованием шпилечной структуры, где конструкция содержит (а) первую последовательность, по меньшей мере на 71, 72, 73, 74, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 и 99% идентичную последовательности, выбранной из группы, включающей в себя 8Еф ГО N0: 1, 8Еф ГО N0: 2, интрон 1 (8Еф ГО N0: 3), интрон 2 (8Еф ГО N0: 4), интрон 3 (8Еф ГО N0: 5), интрон 4 (8Еф ГО N0: 6), интрон 5 (8Еф ГО N0: 7), интрон 6 (8Еф ГО N0: 8), интрон 7 (8Еф ГО N0: 9), интрон 8 (8Еф ГО N0: 10), интрон 9 (81+) ГО N0: 11), интрон 10 (81+) ГО N0: 12), экзон 1 (81+) ГО N0: 13), экзон 2 (81+) ГО N0: 14), экзон 3 (81+) ГО N0: 15) экзон 4 (81+) ГО N0: 16), экзон 5 (81+) ГО N0: 17), экзон 6 (81+) ГО N0: 18) экзон 7 (81+) ГО N0: 19), экзон 8 (81+) ГО N0: 20), экзон 9 (81+) ГО N0: 21), экзон 10 (81+) ГО N0: 21), экзон 11 (8Еф ГО N0: 22), 8Еф ГО N0: 23 или 8Еф ГО N0: 51, а также их фрагменты и варианты, или сочетание двух или более из вышеперечисленных элементов; (Ь) вторую последовательность, кодирующую спейсерный элемент, который образует петлю шпилечной структуры; и (с) третью последовательность, включающую в себя последовательность, обратно комплементарную первой последовательности и расположенную в той же ориентации, что и первая последовательность, где вторая последовательность расположена между первой последовательностью и третьей последовательностью и находится в функциональной связи с первой последовательностью и третьей последовательностью. Как указано в данном документе, ссылка на конкретные последовательности также включает в себя комплементарные или обратно комплементарные последовательности. Раскрытые последовательности можно использовать для конструирования разных полинуклеотидов №МКР, которые не образуют шпилечные структуры. Например, двухцепочечную РНК №МКР можно получить путем (1) транскрипции первой цепи кДНК №МКР, где кодирующая последовательность находится в функциональной связи с первым промотором, и (2) транскрипции последовательности, обратно комплементарной первой цепи фрагмента кДНК №МКР и находящейся в функциональной связи со вторым промотором. Подлежащие транскрипции цепи полинуклеотида №МКР могут находиться в одном векторе экспрессии или в разных векторах экспрессии. РНК-дуплекс №МКР, обладающий активностью РНК-интерференции, под действием ферментов

- 20 030377 может превращаться в миРНК, уменьшающие уровни РНК ΝίΜΡΡ.

Разные воплощения направлены на векторы экспрессии ΝίΜΡΡ. содержащие полинуклеотид ΝίΜΡΡ или конструкцию РНКи ΝίΜΡΡ. кодирующие полинуклеотиды РНКи ΝίΜΡΡ (например, векторы экспрессии ΝίΜΡΡ3. содержащие полинуклеотид ΝίΜΡΡ3 или конструкции РНКи ΝίΜΡΡ3. кодирующие полинуклеотиды РНКи ΝίΜΡΡ3). способные к самогибридизации с образованием шпилечной структуры. где конструкция содержит (а) первую последовательность. по меньшей мере на 71. 72. 73. 74. 75. 80. 85. 90. 95. 96. 97. 98. 99 и 100% идентичную последовательности. выбранной из группы. включающей в себя 8ЕО ГО ΝΟ: 28. 8ЕО ГО ΝΟ: 29. 8ЕО ГО ΝΟ: 30. 8ЕО ГО ΝΟ: 31. 8ЕО ГО ΝΟ: 32. 8ЕО ГО ΝΟ: 33. 8ЕО ГО ΝΟ: 34. 8ЕО ГО ΝΟ: 35. 8ЕО ГО ΝΟ: 36. 8ЕО ГО ΝΟ: 37. 8ЕО ГО ΝΟ: 38. 20 8ЕО ГО ΝΟ: 39. 8ЕО ГО ΝΟ: 40. 8ЕО ГО ΝΟ: 41. 8ЕО ГО ΝΟ: 42. 8ЕО ГО ΝΟ: 43. 8ЕО ГО ΝΟ: 44. 8ЕО ГО ΝΟ: 45. 8ЕО ГО ΝΟ: 46. 8ЕО ГО ΝΟ: 47. 8ЕО ГО ΝΟ: 48. 8ЕО ГО ΝΟ: 49. 8ЕО ГО ΝΟ: 50 и 8ЕО ГО ΝΟ: 51. а также их фрагменты и варианты. или сочетание двух или более из вышеперечисленных элементов; и (Ь) вторую последовательность. включающую в себя последовательность. комплементарную (например. обратно комплементарную) первой последовательности и расположенную в той же ориентации. что и первая последовательность. Как указано в данном документе. ссылка на конкретные последовательности также включает в себя комплементарные или обратно комплементарные последовательности.

Другие воплощения направлены на векторы экспрессии ΝίΜΡΡ. содержащие полинуклеотид ΝίΜΡΡ или конструкцию РНКи ΝίΜΡΡ. кодирующие полинуклеотиды РНКи ΝίΜΡΡ (например. векторы экспрессии ΝίΜΡΡ4. содержащие полинуклеотид ΝίΜΡΡ4 или конструкции РНКи ΝίΜΡΡ4. кодирующие полинуклеотиды РНКи ΝίΜΡΡ4). способные к самогибридизации с образованием шпилечной структуры. где конструкция содержит (а) первую последовательность. по меньшей мере на 71. 72. 73. 74. 75. 80. 85. 90. 95. 96. 97. 98. 99 и 100% идентичную последовательности. выбранной из группы. включающей в себя 8Е0 ГО ΝΟ: 1. 8Е0 ГО ΝΟ: 2. 8Е0 ГО ΝΟ: 3. 8Е0 ГО ΝΟ: 4. 8Е0 ГО ΝΟ: 5. 8Е0 ГО ΝΟ: 6. 8Е0 ГО ΝΟ: 7. 8Е0 ГО ΝΟ: 8. 8Е0 ГО ΝΟ: 9. 8Е0 ГО ΝΟ: 10. 8Е0 ГО ΝΟ: 11. 8Е0 ГО ΝΟ: 12. 8Е0 ГО ΝΟ: 13. 8Е0 ГО ΝΟ: 14. 8Е0 ГО ΝΟ: 15. 8Е0 ГО ΝΟ: 16. 8Е0 ГО ΝΟ: 17. 8Е0 ГО ΝΟ: 18. 8Е0 ГО ΝΟ: 19. 8Е0 ГО ΝΟ: 20. 810 ГО ΝΟ: 21. 810 ГО ΝΟ: 21. 810 ГО ΝΟ: 22. 810 ГО ΝΟ: 23 и 810 ГО ΝΟ: 27. а также их фрагменты и варианты. или сочетание двух или более из вышеперечисленных элементов; и (Ь) вторую последовательность. включающую в себя последовательность. комплементарную (например. обратно комплементарную) первой последовательности и расположенную в той же ориентации. что и первая последовательность. Как указано в данном документе. ссылка на конкретные последовательности также включает в себя комплементарные или обратно комплементарные последовательности.

Изобретение предлагает разные композиции и способы. которые позволяют модулировать (например. понижать) уровни эндогенной экспрессии членов семейства генов ΝίΜΡΡ путем стимулирования косупрессии гена ΝίΜΡΡ. Феномен косупрессии возникает в результате введения нескольких копий трансгена в растительную клетку-хозяин. Интеграция нескольких копий трансгена приводит к уменьшению экспрессии трансгена и целевого эндогенного гена. Степень косупрессии зависит от степени идентичности последовательностей трансгена и целевого эндогенного гена. Сайленсинг как эндогенного гена. так и трансгена. может быть обусловлен экстенсивным метилированием отключаемых локусов (содержащих эндогенный промотор и представляющий интерес эндогенный ген). которое может препятствовать транскрипции. Альтернативно. в некоторых случаях косупрессия эндогенного гена и трансгена может возникать в результате пост-транскрипционного сайленсинга генов (ΡΤ08). при котором происходит образование транскриптов. однако повышенная скорость деградации препятствует их накоплению. Полагают. что механизм косупрессии. опосредуемой ΡΤ08. напоминает механизм РНК-интерференции. в котором РНК является и ключевым инициатором. и мишенью. и может опосредоваться. по меньшей мере отчасти. таким же молекулярным механизмом. возможно. включающим в себя РНК-регулируемую деградацию мРНК.

Косупрессию полинуклеотида ΝίΜΡΡ можно достичь путем интеграции нескольких копий кДНК ΝίΜΡΡ или ее фрагментов в качестве трансгенов в геном представляющего интерес растения. Растениехозяин можно трансформировать вектором экспрессии. содержащим промотор. находящийся в функциональной связи с кДНК ΝίΜΡΡ. или ее фрагментами. Разные воплощения направлены на векторы экспрессии. стимулирующие косупрессию эндогенных генов ΝίΜΡΡ. которые содержат промотор. функционально связанный с ΝίΜΡΡ (например. кДНК ΝίΜΡΡ). идентифицированным как 810 ГО ΝΟ: 1. 8Е0 ГО ΝΟ: 2. 8Е0 ГО ΝΟ: 28. 8Е0 ГО ΝΟ: 29 или 8Е0 ГО ΝΟ: 51. или его фрагментом. таким как один из 8Е0 ГО ΝΟ: 3-23 или 30-50. или его вариантом. последовательность которого по меньшей мере примерно на 65. 66. 67. 68. 69. 70. 71. 72. 73. 74. 75. 80. 85. 90. 95. 96. 97. 98 или 99% идентична его последовательности.

Разные воплощения направлены на способы модулирования (например. понижения или ингибирования) уровня экспрессии полинуклеотида ΝίΜΡΡ путем интеграции нескольких копий полинуклеотида ΝίΜΡΡ (например. кДНК ΝίΜΡΡ). идентифицированного как 8Е0 ГО ΝΟ: 1. 8Е0 ГО ΝΟ: 2. 8Е0 ГО ΝΟ: 28. или 8Е0 ГО ΝΟ: 29. или 8Е0 ГО ΝΟ: 51. или его фрагмента. такого как один из 8Е0 ГО ΝΟ: 3-23 или 30-50. или его варианта. последовательность которого по меньшей мере примерно на 65. 66. 67. 68. 69. 70. 71. 72. 73. 74. 75. 80. 85. 90. 95. 96. 97. 98 или 99% идентична его последовательности. в геном расте- 21 030377 ния, где указанные способы включают в себя трансформацию растительной клетки-хозяин вектором экспрессии, который содержит промотор, находящийся в функциональной связи с 8Еф ГО N0: 1, §Еф ГО N0: 2, §Еф ГО N0: 28, или §Еф ГО N0: 29, или §Еф ГО N0: 51, или его фрагментом, таким как один из §Еф ГО N0: 3-23 или 30-50, или его вариантом, последовательность которого по меньшей мере примерно на 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична его последовательности.

Изобретение предлагает разные композиции и способы, позволяющие понизить уровень экспрессии эндогенного гена №МКР путем ингибирования трансляции мРНК №МКР. Растительную клетку-хозяин можно трансформировать вектором экспрессии, содержащим промотор, находящийся в функциональной связи с полинуклеотидом №МКР, или его вариантом или фрагментом, расположенным в антисмысловой ориентации по отношению к промотору, чтобы обеспечить экспрессию полинуклеотидов РНК, содержащих последовательность, комплементарную фрагменту мРНК №МРР.

Разные векторы экспрессии, используемые для ингибирования трансляции мРНК №МКР, могут содержать промотор, находящийся в функциональной связи с №МКР (например, кДНК №МКР), идентифицированным как §Еф ГО N0: 1, или §Еф ГО N0: 2, или §Еф ГО N0: 27, или §Еф ГО N0: 28, или §Еф ГО N0: 29, или §Еф ГО N0: 51, или его фрагментом, таким как один из 8Еф ГО N0: 3-23 или 30-50, или его вариантом, последовательность которого по меньшей мере примерно на 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична его последовательности, которая расположена в антисмысловой ориентации по отношению к промотору. Длина антисмысловых полинуклеотидов РНК №МКР может варьировать в диапазоне, составляющем примерно 15-20 нуклеотидов, примерно 20-30 нуклеотидов, примерно 30-50 нуклеотидов, примерно 50-75 нуклеотидов, примерно 75-100 нуклеотидов, примерно 100-150 нуклеотидов, примерно 150-200 нуклеотидов и примерно 200-300 нуклеотидов.

Изобретение также предлагает способы получения мутантных полинуклеотидов и полипептидов №МКР. Любое представляющее интерес растение, включающее в себя растительную клетку или растительный материал, можно генетически модифицировать с помощью разных способов индукции мутагенеза, таких как сайт-направленный мутагенез, олигонуклеотид-направленный мутагенез, мутагенез, индуцированный химическими средствами, мутагенез, индуцированный облучением, мутагенез с применением модифицированных оснований, мутагенез с применением рваной дуплексной ДНК, мутагенез с разрывом двойной цепи, мутагенез с применением штаммов-хозяев с дефицитом репарации, мутагенез путем полного синтеза гена, перестановка в ДНК и другие эквивалентные способы.

Альтернативно гены №МКР можно инактивировать путем введения транспозонов (например, элементов 18) в геномы представляющих интерес растений. Указанные мобильные генетические элементы можно ввести путем перекрестного оплодотворения, после чего инсерционные мутанты можно подвергнуть скринингу на уменьшение активности белка №МКР, такой как транспорт кадмия. Разрушенный ген №МКР, присутствующий в исходном растении, можно ввести в другие растения путем скрещивания исходного растения с растением, не подвергавшимся транспозон-индуцированному мутагенезу, например, путем перекрестного оплодотворения. Можно использовать любые стандартные методы селекции, известные специалистам в данной области. В одном воплощении один или несколько №МКР-родственных генов можно инактивировать путем вставки одного или нескольких транспозонов. В результате мутаций может происходить гомозиготное разрушение одного или нескольких генов №МРР, гетерозиготное разрушение одного или нескольких генов №МКР или сочетание гомозиготного и гетерозиготного разрушения, если разрушается несколько генов №МКР. Подходящие транспонируемые элементы могут быть выбраны из двух больших классов, обозначаемых класс I и класс II. Подходящие транспонируемые элементы класса I включают в себя ретротранспозоны, ретропозоны и ЗГОЕ-подобные элементы. Такие способы известны специалистам в данной области.

Альтернативно гены №МРР можно инактивировать путем введения рибозимов, полученных из ряда маленьких циклических РНК, способных к саморасщеплению и репликации в растениях. Указанные РНК могут реплицироваться либо отдельно (вироидные РНК), либо в присутствии хелперного вируса (сателлитные РНК). Примеры подходящих РНК включают в себя РНК, полученные из вироида ауосабо 8ииЫо1сЬ, и сателлитные РНК, полученные из вируса табака гтдкро!, вируса преходящей полосатости люцерны, вируса пятнистости бархатистого табака, вируса пятнистости 8о1аиит иобШогит и вируса пятнистости клевера подземного. Специалистам в данной области известны разные рибозимы, специфичные к целевым РНК.

В некоторых воплощениях экспрессию полипептида №МРР модулируют, уменьшают или ингибируют с помощью нетрансгенных способов, таких как получение мутации в гене №МКР, включающем в себя ген №МКР3 и/или №МКР4. Способы произвольного введения мутации в последовательность гена могут включать в себя химический мутагенез, мутагенез ЕМ8 и лучевой мутагенез. Способы направленного введения одной или нескольких мутаций в клетку включают в себя, без ограничения, технологию корректирования генома, такую как мутагенез, опосредованный нуклеазой цинковые пальцы, ЕШид (исправленных индуцированных локальных повреждений в геномах) гомологичная рекомбинация, олигонуклеотид-направленный мутагенез и мутагенез, опосредованный мегануклеазой.

Некоторые примеры мутаций включают в себя делеции, инсерции и бессмысленные мутации по

- 22 030377 меньшей мере по одному нуклеотиду, однонуклеотидные полиморфизмы (ЗNΡ), простые повторы последовательности. После введения мутации можно провести скрининг с целью идентификации делеций, приводящих к образованию кодонов преждевременной остановки транскрипции или иных нефункциональных генов №ΜΚΡ. Скрининг мутантов можно проводить путем секвенирования или путем применения одного или нескольких зондов или праймеров, специфичных к гену или белку №ΜΚΡ. В полинуклеотиды №ΜΚΡ также можно ввести специфические мутации, которые могут приводить к уменьшению экспрессии гена №ΜΚΡ, снижению стабильности мРНК №ΜΚΡ или снижению стабильности белка №ΜΚΡ. В настоящем описании такие растения называют не встречающиеся в природе или мутантные растения.

Не встречающиеся в природе и мутантные растения могут содержать любое сочетание одной или нескольких мутаций, приводящих к уменьшению уровня полипептида №ΜΚΡ. Например, растения могут содержать одну мутацию в одном гене №ΜΚΡ или несколько мутаций в одном гене №ΜΚΡ. Соответственно, настоящее изобретение раскрывает мутантные или не встречающиеся в природе растения (например, мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растения табака и т.п., как описано в данном документе), которые содержат варианты мутантных полипептидов №ΜΚΡ, №ΜΚΡ3 и №ΜΚΡ4.

В одном воплощении мутагенезу подвергают семена растений, из которых выращивают мутантные растения первого поколения. Затем растения первого поколения подвергают самоопылению и из семян растений первого поколения выращивают растения второго поколения, которые подвергают скринингу на мутации в локусе №ΜΚΡ. Хотя мутантный растительный материал можно подвергнуть скринингу на мутации, преимущество скрининга растений второго поколения заключается в том, что все соматические мутации соответствуют зародышевым мутациям. Специалистам в данной области известно, что мутантные по №ΜΚΡ растения можно получить путем мутагенеза ряда растительных материалов, включающих в себя, без ограничения, семена, пыльцу, ткань или клетки растения. Однако тип подвергаемого мутагенезу растительного материала может иметь значение при проведении скрининга растительного полинуклеотида на мутации. Например, если пыльцу подвергают мутагенезу перед опылением не мутантного растения, из семян, полученных после такого опыления, выращивают растения первого поколения. Все клетки растений первого поколения содержат мутации, введенные в пыльцу; следовательно, указанные растения первого поколения можно подвергнуть скринингу на мутации №ΜΚΡ, не ожидая выращивания второго поколения.

Для введения мутаций можно использовать мутагены, в основном, вызывающие образование точечных мутаций и коротких делеций, инсерций, трансверсий и/или транзиций, такие как химические мутагены или облучение. Мутагены включают в себя, без ограничения, этилметансульфонат (ЕΜЗ), метилметансульфонат (ΜΜЗ), ТОэтил-ТОнитрозомочевина (ЕNυ), триэтилмеламин (ТЕМ), №метил-№ нитрозомочевина (ΜNυ), прокарбазин, хлорамбуцил, циклофосфамид, диэтилсульфат, акриламидный мономер, мелфалан, азотистый иприт, винкристин, диметилнитрозамин, ТОметил-№-нитронитрозогуанидин (ΜNNΟ), нитрозогуанидин, 2-аминопурин, 7,12-диметил-бенз(а)антрацен (ΌΜΒΑ), этиленоксид, гексаметилфосфорамид, бисульфан, диэпоксиалканы (диэпоксиоктан (ЭЕ0). диэпоксибутан (ВЕВ) и т.п.), 2-метокси-6-хлор-9-[3-(этил-2-хлорэтил)аминопропиламино]акридина дигидрохлорид (1СК-170) и формальдегид. Спонтанные мутации в локусе NίΜΚΡ, не вызываемые непосредственно мутагеном, также входят в объем изобретения при условии, что они вызывают описанные здесь желательные изменения фенотипа. Подходящие мутагенные средства также включают в себя, например, ионизирующее излучение, такое как рентгеновское излучение, гамма-излучение, облучение быстрыми нейронами и УФ-излучение.

Получение растительного полинуклеотида для скрининга на мутацию №ΜΚΡ можно осуществить с помощью любого способа получения растительных полинуклеотидов, известного специалистам в данной области.

Полинуклеотиды, полученные из отдельных растений, необязательно можно объединить, чтобы облегчить скрининг на мутации в гене №ΜΚΡ у всей популяции растений, полученных из мутантной растительной ткани. Скринингу можно подвергнуть одно или несколько из последующих поколений растений, растительных клеток или растительного материала. Размер необязательно объединенной группы зависит от чувствительности используемого метода скрининга.

После необязательного объединения образцов полинуклеотидов их можно подвергнуть методам амплификации, специфичным к полинуклеотиду NίΜΚΡ, таким как полимеразная цепная реакция (ПЦР). Для амплификации последовательности NίΜΚΡ, входящей в состав объединенного образца полинуклеотида, можно использовать один или несколько праймеров или зондов, специфичных к гену NίΜΚΡ, или последовательности, непосредственно примыкающей к гену №ΜΚΡ. Предпочтительно конструируют один или несколько праймеров или зондов, обеспечивающих амплификацию участков локуса №ΜΚΡ, в которых полезные мутации встречаются с наибольшей вероятностью. Наиболее предпочтительно конструируют один или несколько праймеров или зондов, позволяющих детектировать мутации в участках экзонов полинуклеотида №ΜΚΡ. Кроме того, для простоты скрининга точечных мутаций, предпочтительно конструируют один или несколько праймеров или зондов, которые не содержат известные полиморфные участки. Чтобы облегчить детекцию продуктов амплификации, один или несколько праймеров

- 23 030377 или зондов можно пометить с помощью любого традиционного метода ведения метки. Один или несколько праймеров или зондов можно сконструировать на основе описанной здесь последовательности №МКР, с помощью способов, хорошо известных в данной области. Полиморфизмы можно идентифицировать с помощью известных в данной области способов.

В другом аспекте изобретение предлагает способ получения мутантного растения. Способ включает в себя получение по меньшей мере одной клетки растения, содержащего ген, кодирующий функциональный полипептид №МКР. Затем по меньшей мере одну клетку растения обрабатывают в условиях, эффективных для модулирования активности гена №МКР. По меньшей мере одну мутантную растительную клетку размножают с получением мутантного растения, в котором уровень полипептида №МКР изменен по сравнению с контрольным растением. В одном воплощении способа получения мутантного растения стадия обработки включает в себя воздействие химического средства, вызывающего мутанез, по меньшей мере на одну клетку, как описано выше, в условиях, эффективных для получения по меньшей мере одной мутантной растительной клетки. В другом воплощении данного способа стадия обработки включает в себя облучение по меньшей мере одной клетки в условиях, эффективных для получения по меньшей мере одной мутантной растительной клетки. Термин мутантные растения включает в себя мутантные растения, генотип которых был изменен по сравнению с контрольным растением предпочтительно с помощью методов, отличных от методов генной инженерии или генной модификации.

В некоторых воплощениях мутантное растение, мутантная растительная клетка или мутантный растительный материал могут содержать одну или несколько мутаций, которые встречаются в природе в другом растении, растительной клетке или растительном материале и отвечают за желательный признак. Указанную мутацию можно ввести (например, путем интрогрессии) в другое растение, другую растительную клетку или другой растительный материал (такие как растение, растительная клетка или растительный материал, генетический фон которых отличается от генетического фона растения, в которое была введена мутация), чтобы придать им соответствующий признак. Так, например, мутацию, встречающуюся в природе в первом растении, можно ввести во второе растение, генетический фон которого отличается от генетического фона первого растения. Следовательно, специалист в данной области может выбрать и идентифицировать растение, несущее по природе в своем геноме один или несколько мутантных аллелей гена №МКР, которые придают растению желательный признак. Мутантный аллель (мутантные аллели), встречающийся в природе, можно перенести во второе растение с помощью разных методов, включающих в себя селекцию, обратное скрещивание и интрогрессию, с получением линий, разновидностей или гибридов, которые содержат одну или несколько мутаций в гене №МКР. С помощью скрининга из пула мутантных растений можно выбрать растения, имеющие желательный признак. Предпочтительно селекцию проводят, используя сведения об описанной здесь нуклеотидной последовательности №МКР. Следовательно, можно проводить скрининг по генетическому признаку, свидетельствующему об изменении (например, уменьшении) уровня кадмия по сравнению с контролем. Такой способ скрининга может включать в себя применение традиционных методов амплификации и/или гибридизации полинуклеотидов, описанных в настоящем документе. Так, другой аспект относится к способу идентификации мутантного растения, включающему в себя следующие стадии: (а) получение образца из растения, содержащего полинуклеотид №МКР; и (Ь) определение полинуклеотидной последовательности полинуклеотида №МКР, где отличие последовательности полинуклеотида №МКР от последовательности полинуклеотида №МКР контрольного растения свидетельствует о том, что указанное растение представляет собой мутантное растение №МКР. В другом аспекте изобретение предлагает способ идентификации мутантного растения, в котором уровень кадмия изменен (например, снижен) по сравнению с контрольным растением, где способ включает в себя следующие стадии: (а) получение образца из растения, подлежащего скринингу; (Ь) определение, содержит ли указанный образец одну или несколько мутаций в полинуклеотиде №МКР; и (с) определение содержания кадмия по меньшей мере в части указанного растения; причем содержание в указанном образце полинуклеотида №МКР с одной или несколькими мутациями, которые изменяют (например, понижают) экспрессию или активность кодируемого белка по сравнению с контрольным растением и измененное (например, уменьшенное) содержание кадмия по меньшей мере в части растения по сравнению с контрольным растением, в котором экспрессия или активность №МКР не модулируется (например, не уменьшается), указывает на растение с природной мутацией, которое содержит измененный (например, сниженный) уровень кадмия. В другом аспекте изобретение предлагает способ получения мутантного растения, которое содержит измененный (например, сниженный) уровень кадмия по сравнению с контрольным растением, где способ включает в себя следующие стадии: (а) получение образца из первого растения; (Ь) определение, содержит ли указанный образец одну или несколько мутаций в полинуклеотиде №МКР, которые приводят к изменению (например, снижению) уровня кадмия в растении; и (с) перенос одной или нескольких мутаций во второе растение. Мутацию (мутации) можно перенести во второе растение с помощью разных методов, известных в данной области, таких как рекомбинантные методы, генетические манипуляции, интрогрессия, селекция растений, обратное скрещивание и т. п. В одном воплощении первое растение представляет собой встречающееся в природе растение. В одном воплощении второе растение имеет генетический фон, отличающийся от генетического фона первого растения. В другом аспекте изобретение предлагает способ полу- 24 030377 чения мутантного растения, которое содержит измененный (например, пониженный) уровень кадмия по сравнению с контрольным растением, где способ включает в себя следующие стадии: (а) получение образца из первого растения; (Ъ) определение, содержит ли указанный образец одну или несколько мутаций в полинуклеотиде №МКР, которые приводят к изменению (например, снижению) уровня кадмия в растении; и (с) интрогрессию одной или нескольких мутаций из первого во второе растение. В одном воплощении стадия интрогрессии включает в себя селекцию растений, необязательно включающую в себя обратное скрещивание и т. п. В одном воплощении первое растение представляет собой встречающееся в природе растение. В одном воплощении второе растение имеет генетический фон, отличающийся от генетического фона первого растения. В одном воплощении первое растение не относится к культурному сорту (элитному сорту). В одном воплощении второе растение относится к культурному сорту (элитному сорту). Другой аспект относится к мутантному растению (включающему в себя культурный сорт или элитный сорт мутантного растения), полученному или которое можно получить с помощью описанных здесь способов. В некоторых воплощениях мутантные растения могут содержать одну или несколько мутаций, локализованных только в конкретном участке растения, например, в последовательности полинуклеотида №МКР. В соответствии с данным воплощением, остальные геномные последовательности мутантного растения остаются такими же или практически такими же, как последовательности, присутствующие в растении до мутагенеза.

В некоторых воплощениях мутантные растения могут содержать одну или несколько мутаций, локализованных в нескольких участках растения, например, в последовательности полинуклеотида №МКР и в одном или нескольких других участках генома. В соответствии с данным воплощением остальные геномные последовательности мутантного растения не являются такими же или практически такими же, как последовательности растения до мутагенеза. В некоторых воплощениях в мутантных растениях одна или несколько мутаций могут отсутствовать в одном или нескольких, двух или более, трех или более, четырех или более или пяти или более экзонах полинуклеотида №МКР; или одна или несколько мутаций могут отсутствовать в одном или нескольких, двух или более, трех или более, четырех или более или пяти или более интронах полинуклеотида №МКР; или одна или несколько мутаций могут отсутствовать в промоторе полинуклеотида №МКР; или одна или несколько мутаций могут отсутствовать в 3'нетранслируемом участке полинуклеотида №МКР; или одна или несколько мутаций могут отсутствовать в 5'-нетранслируемом участке полинуклеотида №МКР; или одна или несколько мутаций могут отсутствовать в кодирующем участке полинуклеотида №МКР; или одна или несколько мутаций могут отсутствовать в некодирующем участке полинуклеотида №МКР; или в любом сочетании из двух или более, трех или более, четырех или более, пяти или более или шести или более частей растения.

В другом аспекте изобретение предлагает способ идентификации растения, растительной клетки или растительного материала, содержащих мутацию в гене, кодирующем №МКР, где способ включает в себя следующие стадии: (а) мутагенез растения, растительной клетки или растительного материала; (Ъ) получение образца полинуклеотида из указанных растения, растительной клетки или растительного материала или их потомков; и (с) определение полинуклеотидной последовательности гена, кодирующего №МКР, или его варианта или фрагмента, где изменение указанной последовательности свидетельствует о наличии в ней одной или нескольких мутаций.

Белки цинковые пальцы можно использовать для модулирования (например, понижения или ингибирования) экспрессии или активности №МКР. В разных воплощениях геномную полинуклеотидную последовательность, содержащую часть кодирующей последовательности или всю кодирующую последовательность полинуклеотида №МКР, подвергают мутагенезу, опосредуемому нуклеазой цинковые пальцы. Геномную полинуклеотидную последовательность проверяют на наличие уникального участка связывания белка цинковые пальцы. Альтернативно, геномную полинуклеотидную последовательность проверяют на наличие двух уникальных участков связывания белка цинковые пальцы, где оба участка находятся на противоположных цепях близко друг к другу, например на расстоянии 1, 2, 3, 4, 5, 6 или более пар оснований. Соответственно, изобретение предлагает белки цинковые пальцы, которые связываются с полинуклеотидами №МКР. ДНК-связывающий домен или мотив цинковых пальцев содержит примерно 30 аминокислот, организованных в бета-бета-альфа структуру, альфа-спираль (α-спираль) которой включается в двойную спираль ДНК. Термин альфа-спираль относится к мотиву вторичной структуры белка, образующему правозакрученную или левозакрученную спираль, в которой атом водорода каждой группы Ν-Н аминокислоты связан с группой С=0 аминокислоты в положении -4 относительно первой аминокислоты. Термин бета-складка (β-складка) в данном описании относится к мотиву вторичной структуры, содержащему бета-цепи (β-цепи), в котором первая цепь соединена водородными связями со второй цепью с образованием замкнутой структуры. Термин бета-бета-альфа структура в данном описании относится к структуре белка, которая содержит β-складку, включающую в себя две антипараллельные β-цепи, и одну α-спираль. Термин ДНК-связывающий домен цинковых пальцев относится к белковому домену, содержащему ион цинка и способному связываться со специфической последовательностью ДНК, состоящей из трех пар оснований. Термин неприродный ДНК-связывающий домен цинковых пальцев относится к ДНК-связывающему домену цинковых пальцев, который не

- 25 030377 встречается в клетке или организме, содержащем ДНК, подлежащую модификации.

Ключевыми аминокислотами ДНК-связывающего домена или мотива цинковых пальцев, которые связываются с последовательностью целевой ДНК из трех пар оснований, являются аминокислоты -1, +1, +2, +3, +4, +5 и +6 относительно начала альфа-спирали (α-спирали). Аминокислоты в положениях -1, +1, +2, +3, +4, +5 и +6 относительно начала α-спирали ДНК-связывающего домена или мотива цинковые пальцы можно модифицировать с сохранением скелета бета-складки (β-складки) с получение новых ДНК-связывающих доменов или мотивов, которые связывают разные последовательности из трех пар оснований. Таким образом, новый ДНК-связывающий домен может представлять собой неприродный ДНК-связывающий домен цинковых пальцев. Помимо распознавания последовательности из трех пар оснований аминокислотами в положениях -1, +1, +2, +3, +4, +5 и +6 относительно начала α-спирали, некоторые из указанных аминокислот также могут взаимодействовать с парой оснований вне участка распознавания последовательности из трех пар оснований. Путем объединения двух, трех, четырех, пяти, шести или более ДНК-связывающих доменов или мотивов цинковых пальцев, можно получить белок цинковые пальцы, который специфически связывается с более длинной последовательностью ДНК. Например, белок цинковые пальцы, содержащий два ДНК-связывающих домена или мотива цинковых пальцев может распознавать специфическую последовательность из шести пар оснований, а белок цинковые пальцы, содержащий четыре ДНК-связывающих домена или мотива, может распознавать специфическую последовательность из двенадцати пар оснований. Белок цинковые пальцы может содержать два или более природных ДНК-связывающих доменов или мотивов цинковых пальцев, или два или более неприродных ДНК-связывающих доменов или мотивов цинковых пальцев, полученных из природного белка цинковые пальцы или из белка цинковые пальцы дикого типа путем усечения, или удлинения, или сайт-направленного мутагенеза в сочетании с методом селекции, включающим в себя, без ограничения, селекцию методом фагового дисплея, селекцию с использованием бактериальной двугибридной системы или селекцию с использованием бактериальной одногибридной системы, или любое сочетание природных и неприродных ДНК-связывающих доменов цинковые пальцы. Термин усечение в данном контексте относится к белку цинковые пальцы, который содержит не полное число ДНК-связывающих доменов или мотивов цинковых пальцев, обнаруженных в природном белке цинковые пальцы. Термин удлинение в данном контексте относится к белку цинковые пальцы, который содержит большее число ДНКсвязывающих доменов или мотивов, чем природный белок цинковые пальцы. Методы выбора из геномных последовательностей полинуклеотидных последовательностей, связывающихся с белком цинковые пальцы, известны в данной области.

Способы конструирования доменов белка цинковые пальцы, связывающих специфичные нуклеотидные последовательности, уникальные для целевого гена, известны в данной области. Рассчитано, что последовательность, содержащая 18 нуклеотидов, является достаточной для определения уникального местоположения в геноме высших организмов. Следовательно, домены белка цинковые пальцы содержат 6 цинковых пальцев, каждый из которых содержит α-спираль, специально сконструированную для взаимодействия с конкретным триплетом. Однако в некоторых случаях может быть желательной более короткая или более длинная целевая нуклеотидная последовательность. Так, домены цинковых пальцев в белках могут содержать от 2 до 12 пальцев, например от 3 до 8 пальцев, от 5 до 7 пальцев или 6 пальцев.

Используемые белки цинковые пальцы могут содержать по меньшей мере один полипептид цинкового пальца, соединенный через линкер, предпочтительно через гибкий линкер, по меньшей мере, со вторым ДНК связывающим доменом, который необязательно представляет собой второй полипептид цинковых пальцев. Белок цинковые пальцы может содержать более двух ДНК-связывающих доменов, а также один или несколько регуляторных доменов. Полипептиды цинковых пальцев можно сконструировать рекомбинантными методами так, чтобы они распознавали определенный участок представляющего интерес гена.

В одном воплощении белок цинковые пальцы содержит каркас (или скелет), полученный из природного белка цинковые пальцы. Можно использовать каркас (или скелет), полученный из любого природного белка цинковые пальцы. Например, можно использовать белок цинковые пальцы, содержащий каркас (или скелет), полученный из белка цинковые пальцы, включающего в себя мотив С2Н2.

В другом конкретном воплощении белок цинковые пальцы содержит каркас (или скелет), полученный из белка цинковые пальцы, в природе функционирующего в растительных клетках. Например, белок цинковые пальцы может содержать цинковый палец С3Н, мотив ЦАЕООН, мотив цинкового пальца КШ0-Н2, аминокислотный мотив С2Н2, мотив цинкового пальца АгаЫбор515 ΕδΌ1 и мотив цинкового пальца доменных белков ВВЕ/ЭоГ.

Белок цинковые пальцы можно предоставить растительным клеткам с помощью любого подходящего известного в данной области способа. Например, к растительным клеткам можно добавить экзогенный белок цинковые пальцы и затем поддерживать растительные клетки в условиях, обеспечивающих связывание белка цинковые пальцы с целевой нуклеотидной последовательностью и регуляцию экспрессии целевого гена в растительных клетках.

Альтернативно, нуклеотидную последовательность, кодирующую белок цинковые пальцы, можно

- 26 030377 экспрессировать в растительных клетках и затем поддерживать растительные клетки в условиях, обеспечивающих связывание экспрессированного белка цинковые пальцы с целевой нуклеотидной последовательностью и регуляцию экспрессии целевого гена в растительных клетках.

Ген цинковых пальцев можно экспрессировать в растении с использованием любого подходящего растительного вектора экспрессии. Типичные векторы, подходящие для экспрессии генов в высших растениях, хорошо известны в данной области. Помимо гибрида с регуляторными доменами, белок цинковые пальцы зачастую можно экспрессировать в виде гибридного белка с мальтозо-связывающим белком (МВР), глутатион-8-трансферазой (О8Т), гексагистидином, с-тус или эпитопом РЬАО, обеспечивающего простоту очистки, мониторинг экспрессии или мониторинг клеточной и субклеточной локализации.

В одном воплощении мутантное или не встречающееся в природе растение или мутантную или не встречающуюся в природе растительную клетку получают путем мутагенеза, опосредованного нуклеазой цинковые пальцы.

В конкретном воплощении геномную последовательность ДНК, содержащую всю последовательность, кодирующую полинуклеотид №МКР, или ее часть модифицируют путем мутагенеза, опосредованного нуклеазой цинковые пальцы. Геномную последовательность ДНК проверяют на наличие уникального участка связывания белка цинковые пальцы. Альтернативно геномную последовательность ДНК проверяют на наличие двух уникальных участков связывания белка цинковые пальцы, где оба участка расположены на противоположных цепях близко друг к другу. Два участка-мишени белка цинковые пальцы могут находиться на расстоянии 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или более пар оснований друг от друга. Участок связывания белка цинковые пальцы может находиться в кодирующей последовательности гена №МКР или в регуляторном элементе, регулирующем экспрессию гена №МКР, включающем в себя, без ограничения, промоторный участок гена №МКР. В частности, один или оба из белков цинковые пальцы представляют собой не природные белки цинковые пальцы.

Соответственно, изобретение предлагает белки цинковые пальцы, способные связываться с полинуклеотидом №МКР. Предполагается, что способ изменения генной последовательности, такой как геномная последовательность ДНК, кодирующая ген №МВР, путем мутагенеза, опосредованного нуклеазой цинковые пальцы, необязательно включает в себя одну или несколько из следующих стадий: (ί) получение по меньшей мере двух белков цинковые пальцы, которые селективно связываются с разными целевыми участками генной последовательности; (ΐΐ) конструирование двух конструкций экспрессии, которые кодируют разные нуклеазы цинковые пальцы, включающие в себя один из двух разных неприродных белков цинковые пальцы, полученных на стадии (ί), и нуклеазу, функционально связанную с последовательностью, регулирующей экспрессию, способной функционировать в растительной клетке; (ίίί) введение двух конструкций экспрессии в растительную клетку с получением двух разных нуклеаз цинковые пальцы, которые осуществляют разрыв двойной цепи геномной последовательности ДНК в геноме растительной клетки, по меньшей мере в одном из целевых участков или вблизи него. Введение двух конструкций экспрессии в растительную клетку можно проводить одновременно или последовательно, причем данная стадия необязательно включает в себя селекцию клеток, получивших первую конструкцию.

Термин двухцепочечной разрыв (Ό8Β) в настоящем описании относится к разрыву обоих цепей ДНК или РНК. Двухцепочечный разрыв может происходить в участке геномной последовательности ДНК с удалением из одного из целевых участков не более чем 5-1500 пар оснований, предпочтительно не более чем 5-200 пар оснований, предпочтительно не более чем 5-20 пар оснований. Двухцепочечный разрыв может способствовать негомологичному соединению концов, приводящему к мутации в геномной последовательности ДНК в целевом участке или вблизи него.

Термин негомологичное соединение концов (N№1)'' в настоящем описании относится к механизму репарации, который восстанавливает двухцепочечный разрыв путем непосредственного лигирования, без применения гомологичной матрицы, и, следовательно, может приводить к образованию последовательности, с точки зрения мутагенности родственной последовательности, существующей до двухцепочечного разрыва.

Способ может необязательно дополнительно включать в себя стадию (ίν) введения в растительную клетку полинуклеотида, содержащего, по меньшей мере, первый участок гомологии по отношению к нуклеотидной последовательности выше двухцепочечного разрыва и второй участок гомологии по отношению к нуклеотидной последовательности ниже двухцепочечного разрыва. Полинуклеотид может содержать нуклеотидную последовательность, которая соответствует полинуклеотидной последовательности №МКР, содержащей делецию или вставку гетерологичной нуклеотидной последовательности. Таким образом, полинуклеотид может обеспечивать гомологичную рекомбинацию в целевом участке или вблизи него, приводящую к вставке гетерологичной последовательности в геном, или к делеции геномной последовательности ДНК. Полученная в растительной клетке геномная последовательность ДНК может содержать мутацию, подавляющую ферментативную активность экспрессированного мутантного белка №МКР, кодон ранней терминации трансляции, или мотив последовательности, препятствующий соответствующему процессингу пре-мРНК с образованием мРНК и приводящий к уменьшению экспрессии или инактивации гена. Способы нарушения синтеза белка путем изменения последовательности ге- 27 030377 на, кодирующего белок, известны специалистам в данной области.

Нуклеазу цинковые пальцы можно сконструировать путем гибридизации первого полинуклеотида, кодирующего белок цинковые пальцы, который связывается с полинуклеотидом ΝίΜΚΡ, со вторым полинуклеотидом, кодирующим неспецифическую эндонуклеазу, включающую в себя, без ограничения, эндонуклеазы типа ΙΙδ. Эндонуклеаза типа ΙΙδ представляет собой фермент рестрикции, содержащий отдельный домен распознавания и домен эндонуклеазного расщепления, причем фермент расщепляет ДНК по участкам, удаленным из участка распознавания. Неограничивающие примеры эндонуклеаз типа ΙΙδ включают в себя, без ограничения, Аай, ВасЕ СбП, Όγ6ΙΙ, Бсб, ЕокЕ ЕанЕ ОбШ, НдаЕ Κ§ρ632Ι, ΜΒοΙΙ, ΡΗ1108Ι, Κ1β108Ι, ΚίβΑΙ, δаρI, ΤκρΌΤΙ или иЪаРГ

Способы разработки и конструирования гибридных белков, способы селекции и отделения эндонуклеазного домена эндонуклеазы типа ΙΙδ от домена распознавания последовательности, способы разработки и конструирования нуклеазы цинковые пальцы, включающей в себя гибрид белка цинковые пальцы и эндонуклеазы, известны в данной области. В конкретном воплощении нуклеазный домен нуклеазы цинковые пальцы представляет собой РоЫ. Гибрид белка цинковые пальцы и нуклеазы РоЫ может содержать спейсер, состоящий из двух пар оснований, или, альтернативно, спейсер может состоять из трех, четырех, пяти, шести или более пар оснований. В одном воплощении описан гибридный белок, содержащий спейсер из семи пар оснований, так, что эндонуклеаза первой нуклеазы цинковые пальцы может димеризоваться при контактировании со второй нуклеазой цинковые пальцы, где два белка цинковые пальцы, составляющую указанную нуклеазу цинковые пальцы, могут связываться выше и ниже целевой последовательности ДНК. При димеризации нуклеаза цинковые пальцы может вводить двухцепочечный разрыв в целевую нуклеотидную последовательность, который сопровождается негомологичным соединением концов или гомологичной рекомбинацией с экзогенной нуклеотидной последовательностью, гомологичной участкам, фланкирующим с обеих сторон двухцепочечный разрыв.

В следующем воплощении изобретение предлагает гибридный белок, содержащий белок цинковые пальцы и энхансерный белок, который функционирует как активатор цинковые пальцы. Активатор цинковые пальцы можно использовать в способе повышения регуляции или активации транскрипции гена ΝίΜΚΡ, включающем в себя следующие стадии: (ί) получение рекомбинантным методом белка цинковые пальцы, который связывается с участком промотора или с последовательностью, функционально связанной с кодирующей последовательностью гена ΝίΜΚΡ, (ίί) получение гибрида указанного белка цинковые пальцы и активатора транскрипции, (ίίί) получение экспрессионной конструкции, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую указанный активатор цинковые пальцы, под контролем промотора, способного функционировать в клетке, такой как растительная клетка, (ίν) введение указанной генной конструкции в клетку, (ν) культивирование клетки и обеспечение экспрессии активатора цинковые пальцы, и (νΐ) характеристика клетки с повышенной экспрессией белка ΝίΜΚΡ.

В следующем воплощении изобретение предлагает гибридный белок, содержащий белок цинковые пальцы и репрессор гена, который функционирует как репрессор цинковые пальцы. Репрессор цинковые пальцы можно использовать в способе осуществления понижающей регуляции или репрессии транскрипции полинуклеотида ΝίΜΚΡ, включающем в себя следующие стадии: (ί) получение рекомбинантным методом белка цинковые пальцы, который связывается с участком промотора или с последовательностью, функционально связанной с полинуклеотидом ΝίΜΚΡ, (ίί) получение гибрида указанного белка цинковые пальцы и репрессора транскрипции, (ίίί) получение генной конструкции, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую указанный репрессор цинковые пальцы, под контролем промотора, способного функционировать в клетке, такой как растительная клетка, (ίν) введение указанной генной конструкции в клетку, (ν) обеспечение экспрессии репрессора цинковые пальцы и (νΐ) характеристика клетки с пониженной экспрессией белка ΝίΜΚΡ.

В следующем воплощении изобретение предлагает гибридный белок, содержащий белок цинковые пальцы и метилазу, который функционирует как метилаза цинковые пальцы. Метилазу цинковые пальцы можно использовать в способе осуществления понижающей регуляции или ингибирования экспрессии полинуклеотида ΝίΜΚΡ в клетке, такой как растительная клетка, путем метилирования участка промотора полинуклеотида ΝίΜΚΡ, где способ включает в себя следующие стадии: (ί) получение рекомбинантным методом белка цинковые пальцы, который связывается с участком промотора полинуклеотида ΝίΜΚΡ, и (ίί) получение гибрида указанного белка цинковые пальцы и метилазы, и (ίίί) получение генной конструкции, содержащей полинуклеотид, кодирующий указанную метилазу цинковые пальцы, под контролем промотора, способного функционировать в клетке, и (ίν) введение указанной генной конструкции в клетку, и (ν) обеспечение экспрессии метилазы цинковые пальцы, и (νΐ) характеристика клетки, в которой экспрессия белка ΝίΜΚΡ снижена или практически отсутствует. В разных воплощениях с помощью описанных здесь способов можно выбрать белок цинковые пальцы, который связывается с регуляторной последовательностью полинуклеотида ΝίΜΚΡ. Более конкретно, регуляторная последовательность может содержать участок инициации транскрипции, старт-кодон, участок экзона, участок границы экзонинтрон, терминатор или стоп-кодон. Белок цинковые пальцы можно гибридизовать с нуклеазой, активаторным или репрессорным белком.

В разных воплощениях нуклеаза цинковые пальцы вводит двухцепочечный разрыв в регуляторный

- 28 030377 участок, кодирующий участок или некодирующий участок геномной последовательности ДНК полинуклеотида №МКР, и приводит к уменьшению, ингибированию или существенному ингибированию уровня экспрессии полинуклеотида №МКР, или к уменьшению, ингибированию или существенному ингибированию активности кодируемого белка.

Изобретение также предлагает способ модификации клетки, такой как растительная клетка, где геном растительной клетки модифицируют путем мутагенеза, опосредованного нуклеазой цинковые пальцы, где указанный способ включает в себя следующие стадии: (а) идентификация и получение по меньшей мере двух неприродных белков цинковые пальцы, которые селективно связываются с разными целевыми участками, с целью модификации геномной нуклеотидной последовательностью; (Ь) экспрессия по меньшей мере двух гибридных белков, каждый из которых содержит нуклеазу и один из по меньшей мере двух неприродных белков цинковые пальцы, в растительной клетке, так, чтобы ввести двухцепочечный разрыв в геномную нуклеотидную последовательность растительного генома, предпочтительно в целевом участке геномной нуклеотидной последовательности или вблизи него; и, необязательно, (с) введение в клетку полинуклеотида, содержащего нуклеотидную последовательность, которая содержит первый участок, гомологичный последовательности, расположенной выше двухцепочечного разрыва, и второй участок, гомологичный последовательности, расположенной ниже двухцепочечного разрыва, так, чтобы обеспечить рекомбинацию полинуклеотида с геномной ДНК. Также описываются клетки, содержащие одну или несколько экспрессионных конструкций, содержащих нуклеотидную последовательность, которая кодирует один или несколько гибридных белков.

В другом аспекте описание дополнительно предлагает способы получения мутантных, не встречающихся в природе, трансгенных или иных генетически модифицированных растений с использованием мегануклеаз, таких как 1-Сге1. Встречающиеся в природе мегануклеазы, а также рекомбинантные мегануклеазы можно использовать для того, чтобы осуществить специфический двухцепочечный разрыв по одному участку или по относительно небольшому числу участков геномной ДНК растения, с целью разрушения гена №МКР. Мегануклеаза может представлять собой рекомбинантную мегануклеазу с измененными свойствами, касающимися распознавания ДНК. Доставку белков мегануклеазы в растительные клетки можно осуществлять посредством ряда разных механизмов, известных в данной области. Мегануклеаза может представлять собой рекомбинантную мегануклеазу с измененными свойствами, касающимися распознавания ДНК. Данная ссылка описывает способы основанного на структуре рекомбинантного получения мегануклеаз из природной мегануклеазы 1-Сге1. Такие рекомбинантные мегануклеазы могут распознавать и расщеплять заранее определенные последовательности ДНК размером 22 пары оснований, обнаруженные в геномах растений. Доставку белков мегануклеазы в растительные клетки можно осуществлять посредством ряда разных механизмов, известных в данной области.

Аспекты изобретения позволяют использовать мегануклеазы для инактивации полинуклеотида №МКР в растительной клетке или в растении. Аспекты также относятся к способу инактивации полинуклеотида №МКР в растении с использованием мегануклеазы, который включает в себя следующие стадии: (а) получение растительной клетки, содержащей полинуклеотид №МКР; (Ь) введение мегануклеазы или конструкции, кодирующей мегануклеазу, в указанную растительную клетку; и (с) инактивация полинуклеотида №МКР под действием мегануклеазы.

Мегануклеазы можно использовать для расщепления участков распознавания мегануклеазы в участках, кодирующих полинуклеотид №МКР. Такое расщепление часто приводит к делеции ДНК по участку распознавания мегануклеазой с последующей мутагенной репарацией ДНК посредством негомологичного соединения концов. Такие мутации в кодирующей последовательности гена обычно являются достаточными для инактивации гена. Данный способ включает в себя вначале доставку экспрессионной кассеты мегануклеазы в растительную клетку с помощью подходящего метода трансформации. Для максимальной эффективности желательно присоединить к экспрессионной кассете мегануклеазы селектируемый маркер, позволяющий выбрать успешно трансформированные клетки в присутствии селекционного средства. Данный способ приводит к интеграции экспрессионной кассеты мегануклеазы в геном, однако он может быть не желательным, если для получения растения требуется разрешение контролирующего органа. В таких случаях экспрессионную кассету мегануклеазы (и связанного с ней селектируемого маркерного гена) можно удалить из растений последующих поколений с помощью традиционных методов селекции. Альтернативно растительные клетки можно вначале трансформировать экспрессионной кассетой мегануклеазы, не содержащей селектируемый маркер, и выращивать их на среде, не содержащей селекционное средство. В таких условиях фракция обработанных клеток приобретает экспрессионную кассету мегануклеазы и экспрессирует рекомбинантную мегануклеазу временно, без интеграции экспрессионной кассеты мегануклеазы в геном. Поскольку это не вносит вклад в эффективность трансформации, последняя процедура трансформации требует проведения скрининга для большего числа обработанных клеток, чтобы получить желательную модификацию генома.

После доставки экспрессионной кассеты мегануклеазы растительные клетки выращивают вначале в условиях, типичных для конкретной используемой процедуры трансформации. Это может означать выращивание трансформированных клеток на среде при температуре ниже 26°С, зачастую в темноте. Такие стандартные условия можно использовать в течение периода времени, предпочтительно составляющего

- 29 030377 от 1 до 4 дней, чтобы позволить растительной клетке восстановиться после процесса трансформации. В любой момент после указанного начального периода восстановления температуру выращивания можно повысить, чтобы стимулировать активность рекомбинантной мегануклеазы в отношении расщепления и изменить участок распознавания мегануклеазой.

В некоторых воплощениях может быть желательно удалить весь полинуклеотид №МКР из генома растения. Такие воплощения можно осуществить с помощью пары рекомбинантных мегануклеаз, каждая из которых расщепляет участок распознавания мегануклеазой с каждой стороны предназначенного для удаления участка. Рекомбинантные конструкции, которые предлагает настоящее изобретение, можно использовать для трансформации растений или растительных клеток с целью модулирования (например, уменьшения или ингибирования) уровня экспрессии белка №МКР.

Рекомбинантная полинуклеотидная конструкция может содержать полинуклеотид, кодирующий описанный здесь полипептид №МКР, функционально связанный с регуляторным участком, подходящим для экспрессии полипептида №МКР в растении или клетке. Таким образом, полинуклеотид может содержать последовательность, кодирующую описанный здесь полипептид №МКР или его вариант.

Полипептид №МКР, кодируемый рекомбинантным полинуклеотидом, может представлять собой нативный полипептид №МКР, или он может быть гетерологичным по отношению к клетке. В некоторых случаях рекомбинантная конструкция содержит полинуклеотид, который уменьшает или ингибирует экспрессию №МКР-модулирующего полипептида (полипептидов), функционально связанный с регуляторным участком. Примеры подходящих регуляторных участков описаны в данном документе.

Изобретение также предлагает векторы, содержащие рекомбинантные полинуклеотидные конструкции, такие как описанные здесь конструкции. Подходящие векторные основы включают в себя, например, традиционно используемые в данной области, такие как плазмиды, вирусы, искусственные хромосомы, ВАС, ΥАС или РАС. Подходящие векторы экспрессии включают в себя, без ограничения, плазмиды и вирусные векторы, полученные, например, из бактериофагов, бакуловирусов и ретровирусов. Многочисленные векторы и системы экспрессии можно приобрести на рынке.

Векторы также могут содержать, например, точки начала репликации, участки присоединения каркаса (8АК) или маркеры. Маркерный ген может придавать растительной клетке селектируемый фенотип. Например, маркер может придавать устойчивость к биоциду, такую как устойчивость к антибиотику (включающему в себя канамицин, 0418, блеомицин или гигромицин) или к гербициду (включающему в себя глифосат, хлорсульфурон или фосфинотрицин). Кроме того, вектор экспрессии может содержать маркерную последовательность, облегчающую обработку или детекцию (например, очистку или локализацию) экспрессируемого полипептида. Маркерные последовательности, такие как последовательности люциферазы, бета-глюкуронидазы (0И8), зеленого флуоресцентного белка (0РР), глутатион-8трансферазы (08Т), полигистидина, с-тус или гемагглютинина, обычно экспрессируют в виде гибрида с кодируемым полипептидом. Такие маркеры можно вставить в любой участок полипептида, в том числе их можно присоединить к карбоксильному концу или аминоконцу.

Разные воплощения направлены на мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растения, модифицированные с целью понижения уровня экспрессии гена №МКР с помощью разных методов, используемых для понижения или сайленсинга экспрессии гена №МКР, с получением растений, содержащих пониженный уровень экспрессии транспортеров №МКР в представляющих интерес тканях растений. Скорость транспорта тяжелых металлов и характер распределения транспорта тяжелых металлов, в частности транспорта кадмия, могут быть изменены в растениях, полученных с использованием раскрытых здесь способов и композиций.

Растения, подходящие для применения в способе генетической модификации, включают в себя однодольные и двудольные растения и системы растительных клеток, в том числе относящиеся к видам одного из следующих семейств: АсайНассас. АШасеае, АЫгостспассас. АтагуШйасеае, Аросупасеае, Агесасеае, Азйгасеае, ВегЬепйасеае, В1хасеае, Вгаззюасеае, ВготеРасеае, СаппаЬасеае, СагуорРу11асеае, СерРаЫахасеае, СРепороФасеае, Со1сЫсасеае, СисигЬРасеае, Пюзсогеасеае, ЕрРейгасеае, Егу1Ргоху1асеае, ЕирРогЫасеае, РаЬасеае, Ьатхасеае, Ршасеае, ЬусороФасеае, Макасеае, Ме1айЫасеае, Мизасеае, Муйасеае, ^ззасеае, Рарауегасеае, Ршасеае, Р1айадшасеае, Роасеае, Козасеае, КиЫасеае, 8аРсасеае, 8аршйасеае, 8о1апасеае, Тахасеае, ТНеасеае или УРасеае.

Подходящие виды могут включать в себя члены родов АЬе1тозсРиз, АЫез, Асег, Адгозйз, АШит, Акйоетепа, Апапаз, АпйгодгарР1з, Апйгородоп, Апет1з1а, Агипйо, Айора, ВегЬепз, Вей В1ха, Вгаззюа, Са1епйи1а, СатеШа, СатрюШеса, СапйаЫз, Сарзюит, СайРатиз, Са1РагайРиз, СерРа1о1ахиз, СРгузайРетит, СшсРопа, СРгиРиз, СоГГеа, Со1сРюит, Со1еиз, Сисит1з, СисигЬРа, Супойоп, ОаЫга, П1айРиз, Όί§ί1аРз, Оюзсогеа, Е1ае1з, ЕрРейга, ЕпайРиз, Егу1Ргоху1ит, Еиса1урЫз, РезЫса, Рыдала, 0а1айРиз, 01усше, Ооззуршт, НеРайРиз, Неуеа, Ногйеит, Нуозсуатиз, .ГайорРа, ЬасЫса, Ыпит, ЬоРит, Риршиз, Ьусорегз1соп, Ьусоройшт, МашРор Мейюадо, МейРа, М1зсайРиз, Миза, №сойапа, Огу/а, Рашсит, Рарауег, Раг1Реи1ит, РейшзеЫт, Рйиша, РРа1айз, РР1еит, Ршиз, Роа, Рошзей1а, Рори1из, КаитеоРга, Кгсшиз, Коза, 8ассРагит, 8аРх, 8апдшпайа, 8сороРа, 8еса1е, 8о1айит, 8огдРит, 8рагРпа, 8ршасеа, Тапасйит, Тахиз, ТРеоЬгота, ТйРсозеса1е, Тпйсит, Ийо1а, Уегайит, Ушса, УЫз и 2еа.

Подходящие виды могут включать в себя Рашсит зрр., 8огдРит зрр., М1зсайРиз зрр., 8ассРагит

- 30 030377

8рр., Епапбш8 8рр., Рори1и8 8рр., Апбгородоп дегагби (большой бородач), Рспш8с1ит ригригеит (слоновая трава), РНа1аг18 агипбшасеа (канареечник), Супобоп бас1у1оп (бермудская трава), Ре81иса агипбшасеа (овсяница гигантская), 8рагбпа ресбпа!а (луговая спартина), Мебкадо 8ηΙίνη (люцерна), Агипбо бопах (арундо тростниковый), 8еса1е сегеа1е (рожь), 8аПх зрр. (ива), Еиса1ур!и8 зрр. (эвкалипт), ТгШсо8еса1е (пшеница 1п1кит рожь бте8), бамбук, НеПапбш8 аппии8 (подсолнечник), СагШати8 бпскгш8 (сафлор), РИгорНа сигса8 (ятрофа), Ккши8 соттит8 (клещевина), Е1ае18 дшпееп818 (пальма), Ыпит И8баб881тит (лен), Вга881са .(ипсеа, Ве1а \'и1дап8 (сахарная свекла), Маш1ю1 е8си1ейа (маниок), Ьусорегекоп е8си1еп1ит (томат), ЬасШса 8а1ка (салат-латук), Ми8а рагаб181аса (банан), 8о1апит 1иЬего8ит (картофель), Вга881са о1егасеа (брокколи, цветная капуста, брюссельская капуста), СатеШа 8шеп818 (чай), Егадапа апапа88а (земляника), ТНеоЬгота сасао (какао), Со Пса агаЫса (кофе), νίίί8 \атГега (виноград), Апапа8 сото8и8 (ананас), Сар81сит аппит (острый и сладкий перец), АШит сера (лук), Сисит18 те1о (дыня), Сисит18 8аб\'и8 (огурец), СисигЬба тахта (тыква), СисшЬба то8сНа1а (тыква), 8ршасеа о1егасеа (шпинат), Сбги11и8 1апа1и8 (арбуз), ЛЬе1то8с1ш8 е8си1еп1и8 (окра), 8о1апит те1опдепа (баклажан), Ко8а 8рр. (роза), Э|ап11ш8 сагуорЬу11и8 (гвоздика), РеНниа 8рр. (петуния), РотвеШа рикНетта (пуансеттия), Ьирти8 а1Ьи8 (люпин), Ито1а ратси1а1а (овес), полевичник (Адго8Й8 8рр.), Рори1и8 1гети1о1бе8 (осина), Рши8 8рр. (сосна), АЫе8 8рр. (ель), Асег 8рр. (клен), Ногбеит мбдаге (ячмень), Роа ргакп818 (мятлик), Ьо1шт 8рр. (плевел) и РЫеит рга1еп8е (тимофеевка), Ратсит ν^^даΐит (просо), 8огдНит Ысо1ог (сорго, суданская трава), М18сапбш8 д1дайеи8 (мискантус), 8ассНагит 8р. (епегдусапе), Рори1и8 ЬаТапиГега (тополь), 2еа тау8 (кукуруза), С1усше тах (соевые бобы), Вга881са пари8 (канола), ТгНкит ае81кит (пшеница), Со88уршт Ыг8и1ит (хлопок), Огу/а 8а1ка (рис), Не11ап1Ьи8 аппии8 (подсолнечник), Мебкадо 8а1ка (люцерна), Ве1а νи1да^^8 (сахарная свекла) или Репш8е1ит д1аисит (просо американское).

Разные воплощения направлены на мутантные растения, не встречающиеся в природе растения или трансгенные растения, модифицированные с целью модулирования (например, понижения или ингибирования) уровня экспрессии гена №МКР, с получением растений, таких как растения табака с пониженным уровнем экспрессии №МКР в представляющих интерес тканях по сравнению с контрольным растением. Раскрытые композиции и способы можно применять к любым видам рода №собапа, включающим в себя N. ги8бса и N. 1аЬасит (например, ЬА В21, ΕΝ ΚΥ171, Т1 1406, Ва8та, Са1рао, Репсцю ВетНаП 1000-1 и Ребсо). Другие виды включают в себя Ν. асаи118, Ν. аситшак, Ν. аситта1а ν;π. тиШЯога, Ν. аГгкапа, Ν. а1а!а, Ν. атр1ехкаи118, Ν. агеп18п, Ν. абепиак, Ν. Ьепау1бе8и, Ν. ЬепЛатйапа, Ν. Ыде^и, Ν. Ьопагкп818, Ν. сауко1а, Ν. с^е1апбл, Ν. согбПоНа, Ν. согутЬо8а, Ν. беЬпеук Ν. ехсекюг, Ν. Погдебапа, Ν. Пгадгап8, Ν. д1аиса, Ν. д1ибпо8а, Ν. дооб8рееби, Ν. до88е1, Ν. гибрид, Ν. шди1Ьа, Ν. каиакати, Ν. ктдНбапа, Ν. 1апд8богГГи, Ν. 1теап8, Ν. кпдШога, Ν. тагШта, Ν. теда1о81рНоп, Ν. ткг8П, Ν. посбйога, Ν. пибь саи118, Ν. оЫи81Го11а, Ν. осс1бейа118, Ν. осс1беп1а118 8иЬ8р. Ье8рег18, Ν. оЮрНога, Ν. рапки1ак, Ν. раисШога, Ν. ре1ипю1бе8, Ν. р1итЬад1шГоНа, Ν. ^иаб^^νа1ν^8, Ν. гатопби, Ν. герапба, Ν. Го8и1а1а, Ν. го8и1а!а 8иЬ8р. тди1Ьа, Ν. гокипбгГоба, Ν. 8екНе11и, Ν. 8ти1ап8, Ν. 8о1апЛоНа, Ν. 8реда771пи, Ν. 8ксккпл, Ν. 8иауео1еп8, Ν. 8уке8бТ8, Ν. 1куг81Йога, Ν. 1отепк8а, Ν. ктепк81Гогт18, Ν. бтдопорНу11а, Ν. итЬгабса, Ν. ипби1а1а, Ν. νе1иί^ηа, Ν. \\лдапбк1бе8 и Ν. х 8апбегае.

Изобретение также охватывает применение сортов табака и элитных сортов табака. Следовательно, трансгенное, не встречающееся в природе или мутантное растение может представлять собой разновидность табака или элитный сорт табака, который содержит один или несколько трансгенов, одну или несколько генетических мутации, или их сочетание. Генетическая мутация (мутации) (например, один или несколько полиморфизмов) может представлять собой мутации, которые не существуют в природе в отдельной разновидности табака или в отдельном сорте табака (таком как элитный сорт табака), или она может представлять собой генетическую мутацию (мутации), которая встречается в природе, при условии, что мутация не встречается в природе в отдельной разновидности табака или в отдельном сорте табака (таком как элитный сорт табака).

Особенно полезные разновидности №собапа 1аЬасит включают в себя табак Берлей, темный табак, табак трубоогневой сушки и табак восточного типа. Неограничивающие примеры разновидностей или сортов включают в себя ВО 64, СС 101, СС 200, СС 27, СС 301, СС 400, СС 500, СС 600, СС 700, СС 800, СС 900, Сокег 176, Сокег 319, Сокег 371 Со1б, Сокег 48, СИ 263, ΌΡ911, ИТ 538 ЬС Са1рао табак, СЬ 26Н, СЬ 350, СЬ 600, СЬ 737, СЬ 939, СЬ 973, НВ 04Р, НВ 04Р ЬС, НВ3307РЬС, гибрид 403ЬС, гибрид 404ЬС, гибрид 501 ЬС, Κ 149, Κ 326, Κ 346, Κ 358, Κ394, Κ 399, Κ 730, КИН 959, КТ 200, КТ204ЬС, ΚΥ10, ΚΥ14, ΚΥ 160, ΚΥ 17, ΚΥ 171, ΚΥ 907, ΚΥ907Ι,(\ ΚТΥ14x^8 ЬС, Ьббе Сгйепбеп, МсСиг 373, Мс№и 944, тЖУ 14хЬ8, Хаггои 1.еаГ Мабо1е, Хаггои 1.еаГ Мабо1е ЬС, ОТН 98, Ν-126, Ν-777^, Ν7371ЬС, 100, 102, 2000, 291, 297, 299, 3, 4, 5, 6, ΝζΤ7, 606,

71, 72, 810, ВН 129, 2002, №а1 8тиН Мабо1е, ОХРОКО 207, РО 7302 ЬС, РИ 7309 ЬС, РИ

7312 ЬС, табак 'Репцие', Р\110+ Р\\ 109, Р\Н19, Р\\ Ι50, Р\Н51, К 610, К 630, К 7-11, К 7-12, КС 17, КС 81, КСН 51, КСН 4, КСН 51, К8 1410, 8ре1§Ы 168, 8ре1дЫ 172, 8ре1дЫ 179, 8ре1дЫ 210, 8ре1дЫ 220, 8ре1дЫ 225, 8ре1дЫ 227, 8ре1дЫ 234, 8ре1дН1 С-28, 8ре1дЫ С-70, 8ре1дЫ Н-6, 8ре1дЫ Н20, 8ре1дЫ ΝΡ3, Т1 1406, Т1 1269, ΊΝ 86, ΊΝ86ΕΟ ΊΝ 90, ΊΝ 97, ТN97^С, ΊΝ Ό94, ТN Ό950, ТК (Тот Ко88оп) Мабо1е,

309, \А359, АА 37-1, В 13Р, ХапНи (МбсНе11-Мог), Ве1-№3, 79-615, 8ат8ип Но1те8 ΝΝ, ХТ1ГОС номер 2 гибрид 49, Виг1еу 21, ΚΥ 8959, ΚΥ 9, МО 609, РС 01, РС 04, Р01, Р02, Р03, КС 11, КС 8, 509, А844,

- 31 030377

Вапкс! А1, Вахта Игата В84/31, Вахта I Ζίαίιηα ΖР4/Β, Вахта ХаШЫ ВХ 2А, Ва1ск. ВсхиЫ ктЬсг. С104, Сокег 347, С.’по11о М1Х1опсго, Оскгсхк О|сЬс1 81, ΌΥΗ 405, Са1рао Сотит, НВ04Р, Нккх ВгоаЛсаГ, КаЬаки1ак Е1аххопа, КЛхадс Е1, ЬА ВИ 21, ЫС 2326, ЫС 297, РУН2110, Ксб Кихх1ап, 8атхип, 8ар1ак, §1ттаЬа, Та1даг 28, ’МхЬса, УауаМад, РгЛср НС-72, РгЛср Р23, РгЛср РВ 156/1, РгЛср Р12-2/1, Уака ДК-48, Уака ,1В 125/3, Т1-1068, ΚΌΗ-960, Т1-1070, Т№136, Вахта, ТКЕ 4028, Ь8, ТКЕ 2002, СК141, Вахта хайЫ, СК149, СК153, Рс111 Науапа. Изобретение также охватывает подразновидности перечисленных выше сортов с низкой степенью преобразования, даже если они специально не указаны в данном описании.

В другом аспекте изобретение предлагает мутантное, не встречающееся в природе или трансгенное растение, описанное в данном документе, которое было дополнительно модифицировано с целью понижения экспрессии транспортеров №НМА, что может дополнительно снизить содержание кадмия в растении. Применение транспортеров МНМА для снижения содержания кадмия в растении описано в \УО 2009074325. Таким образом, в соответствии с одним воплощением получают мутантную, не встречающуюся в природе или трансгенную растительную клетку, содержащую выделенный полинуклеотид №МКР, химерный ген №МКР, полинуклеотидную конструкцию №МКР, двухцепочечную РНК №МКР, конъюгат ММК.Р и/или вектор экспрессии №МКР наряду с выделенным полинуклеотидом №НМА, химерным геном №НМА, полинуклеотидной конструкцией №НМА, двухцепочечной РНК №НМА, конъюгатом №НМА и/или вектором экспрессии №НМА.

Воплощения также направлены на композиции и способы, которые можно использовать для получения мутантных растений, не встречающихся в природе растений, гибридных растений или трансгенных растений, модифицированных с целью модулирования (например, понижения или ингибирования) экспрессии или активности №МКР, приводящего к снижению количества кадмия, накапливаемого в растениях, по сравнению с контролем. В некоторых воплощениях внешний вид (например, фенотип) полученных растений подобен или практически идентичен внешнему виду контрольных растений. Разные фенотипические характеристики, такие как степень зрелости, число листьев на растение, высота стебля, угол вставки листа, размер листа (ширина и длина), длина междоузлия и отношение пластина листажилки, можно оценить путем полевых наблюдений. В предпочтительном воплощении высота и масса полученных растений практически идентичны высоте и массе контрольных растений. В другом предпочтительном воплощении значительные различия в сухих собранных листьях полученных и контрольных растений отсутствуют, свидетельствуя о том, что модулирование транскриптов №МКР не оказывает статистически значимого влияния на сухую биомассу.

Один аспект относится к семенам мутантного растения, не встречающегося в природе растения, гибридного растения или трансгенного растения. Предпочтительно семя представляет собой семя табака. Другой аспект относится к пыльце или семяпочке мутантного растения, не встречающегося в природе растения, гибридного растения или трансгенного растения. Кроме того, изобретение описывает мутантное растение, не встречающееся в природе растение, гибридное растение, трансгенное растение, которое дополнительно содержит полинуклеотид, отвечающий за мужскую стерильность.

Изобретение также предлагает тканевую культуру регенерируемых клеток мутантного растения, не встречающегося в природе растения, гибридного растения, трансгенного растения, или его части, причем указанную культуру можно регенерировать с получением растений, способных экспрессировать все морфологические и физиологические характеристики исходного растения. Способные к регенерации клетки включают в себя, без ограничения, клетки листьев, пыльцы, зародышей, семядолей, гипокотилей, корней, кончиков корней, пыльников, цветков и их частей, семяпочек, побегов, стеблей, черенков, сердцевины и семенных коробочек, или полученных из них каллюса или протопластов.

В некоторых воплощениях растение с изменением (например, понижением или ингибированием) экспрессии полинуклеотида №МКР может содержать пониженные уровни тяжелого металла, такого как кадмий, особенно в листьях. Уровень кадмия можно снизить по меньшей мере примерно на 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98, 99% или более, например на 100, 125, 150, 200% или более по сравнению с уровнем кадмия в соответствующем контрольном растении, в котором экспрессию полинуклеотида №МКР не модулируют (например, не понижают или не ингибируют). В некоторых воплощениях растение, в котором модулируют (например, понижают или ингибируют) экспрессию полинуклеотида №МРР, может содержать повышенный или пониженный уровень кадмия в корнях. В некоторых воплощениях растение, в котором модулируют (например, понижают или ингибируют) экспрессию полинуклеотида №МРР, может содержать пониженный или повышенный уровень кадмия в корнях и пониженный уровень кадмия в листьях. В некоторых воплощениях растение, в котором модулируют (например, понижают или ингибируют) экспрессию полинуклеотида №МКР, может содержать пониженный уровень кадмия в заготавливаемой биомассе.

Экспрессию можно оценить с помощью методов, включающих в себя, например, ПЦР с обратной транскриптазой, нозерн-блоттинг, РНКазную защиту, удлинение праймеров, вестерн-блоттинг, гельэлектрофорез белков, иммунопреципитацию, ферментные иммуноанализы, анализы с использованием чипов и масс-спектрометрию. Следует отметить, что в случае экспрессии полипептида под контролем тканеспецифичного промотора или промотора, обеспечивающего экспрессию во всех тканях, экспрессию можно анализировать в целом растении, или в выбранной ткани. Подобным образом, если полипептид

- 32 030377 экспрессируется в определенном промежутке времени, таком как период развития или индукции, экспрессию можно избирательно анализировать в желательном промежутке времени.

Популяцию мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растений можно подвергнуть скринингу или селекции с выявлением членов популяции, имеющих желательный признак или фенотип. Например, популяцию потомства одиночного события трансформации можно подвергнуть скринингу с выявлением растений, имеющих желательный уровень экспрессии полипептида или полинуклеотида ΝίΜΚΡ. Для определения уровня экспрессии можно использовать физические и биохимические методы. Такие методы включают в себя саузерн-анализ или ПЦР-амплификацию, используемые для детекции полинуклеотида; нозерн-блоттинг, §1 РНКазную защиту, удлинение праймеров или амплификацию методом ПЦР с обратной транскриптазой, используемые для детекции транскриптов РНК; ферментативные анализы, используемые для детекции ферментативной или рибозимной активности полипептидов и полинуклеотидов; а также гель-электрофорез белков, вестерн-блоттинг, иммунопреципитацию, ферментные иммуноанализы, используемые для детекции полипептидов. Для детекции присутствия или экспрессии полипептидов или полинуклеотидов также можно использовать другие методы, такие как гибридизация ш 8Йи, ферментативное окрашивание и иммуноокрашивание.

Популяцию растений можно подвергнуть скринингу с выявлением растений, имеющих желательный признак, такой как модулированный (например, пониженный или ингибированный) уровень кадмия. Селекцию или скрининг можно проводить на одном или нескольких поколениях, или в нескольких географических регионах. В некоторых случаях мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растения можно выращивать и подвергать селекции в условиях, которые индуцируют желательный фенотип, или иным образом являются необходимыми для получения желательного фенотипа у мутантного, не встречающегося в природе или трансгенного растения. Кроме того, селекцию или скрининг можно проводить на определенной стадии развития, на которой может проявляться фенотип растения. Селекцию или скрининг можно проводить с целью выбора мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растений, характеризующихся статистически значимым отличием по содержанию кадмия от контрольного растения, в котором экспрессию или активность полинуклеотида или белка ΝίΜΚΡ не модулируют (например, не уменьшают или не ингибируют). Описанные здесь мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растительные клетки и растения содержат один или несколько рекомбинантных полинуклеотидов, таких как выделенный полинуклеотид, химерный ген, полинуклеотидная конструкция, двухцепочечная РНК, конъюгат или вектор экспрессии. Растение или растительную клетку можно трансформировать рекомбинантным полинуклеотидом с интеграцией его в геном и достижением стабильной трансформации. Стабильно трансформированные клетки обычно сохраняют введенный полинуклеотид после каждого клеточного деления. Растение или растительную клетку также можно временно трансформировать, без интеграции рекомбинантного полинуклеотида в геном. Временно трансформированные клетки после каждого деления обычно полностью или частично утрачивают введенный рекомбинантный полинуклеотид, который не детектируется в дочерних клетках после достаточного числа клеточных делений. Способы введения полинуклеотидов в однодольные и двудольные растения известны в данной области и включают в себя, например, трансформацию, опосредованную А§гоЬас1егшт, трансформацию, опосредованную вирусным вектором, электропорацию и трансформацию с использованием генной пушки. Систему А§гоЬас1егшт, позволяющую осуществлять интеграцию чужеродного полинуклеотида в растительные хромосомы, тщательно исследуют, модифицируют и применяют для получения рекомбинантных растений. Оголенные молекулы рекомбинантного полинуклеотида, которые содержат полинуклеотидные последовательности, соответствующие исследуемому очищенному белку и функционально связанные, в смысловой или антисмысловой ориентации, с регуляторными последовательностями, присоединяют к подходящей последовательности Т-ДНК традиционными способами. Полученные молекулы вводят в протопласты табака с помощью стандартных методов, включающих в себя применение полиэтиленгликоля или электропорацию. Альтернативно такие векторы, которые содержат молекулы рекомбинантного полинуклеотида, кодирующего исследуемый очищенный белок, вводят в живые клетки А§гоЬас1егшт, из которых полинуклеотид переносят в растительные клетки. Трансформацию оголенным полинуклеотидом, без применения векторной последовательности Т-ДНК, можно проводить путем гибридизации протопластов с полинуклеотид-содержащими липосомами или путем электропорации. Оголенный полинуклеотид, без применения векторной последовательности Т-ДНК, также можно использовать для трансформации клеток путем высокоскоростной бомбардировки инертными микрочастицами.

Если клетку или культивируемую ткань используют в качестве реципиентной ткани для трансформации, при желании растения можно регенерировать из трансформированных культур с помощью методов, известных специалистам в данной области.

Выбор регуляторных участков для включения в состав рекомбинантной конструкции зависит от нескольких факторов, включающих в себя, без ограничения, эффективность, селективность, возможность индуцирования, желательный уровень экспрессии и клеточно- или тканеспецифичной экспрессии. Рутинным способом, известным специалистам в данной области, является модуляция экспрессии кодирующей последовательности путем выбора подходящих регуляторных участков и их соответствующего

- 33 030377 расположения относительно кодирующей последовательности. Транскрипцию полинуклеотида можно модулировать подобным образом. Некоторые подходящие регуляторные участки инициируют транскрипцию только или преимущественно в клетках определенных типов. Способы идентификации и характеристики регуляторных участков в растительном геномном полинуклеотиде известны в данной области.

Подходящие промоторы включают в себя тканеспецифичные промоторы, распознаваемые тканеспецифичными факторами, присутствующими в разных типах тканей или клеток (например, кореньспецифичные промоторы, росток-специфичные промоторы, ксилема-специфичные промоторы), или присутствующими на разных стадиях развития, или появляющимися в ответ на разные условия окружающей среды. Подходящие промоторы включают в себя конститутивные промоторы, которые могут активироваться в большинстве типов клеток в отсутствии специфичных индукторов. Примеры промоторов, подходящих для регуляции продукции полипептида РНКи №МКР, включают в себя промоторы вируса мозаики цветной капусты 35δ (СаМV/35δ), δδυ, 0Сδ, ПЪ4, икр, δΊΈδ1, В33, пок или убихитина или фазеолина. Специалисты в данной области могут получить разные вариации рекомбинантных промоторов.

Тканеспецифичные промоторы представляют собой элементы, регулирующие транскрипцию, способные функционировать только в определенных клетках или тканях, таких как вегетативные ткани или репродуктивные ткани, на определенных стадиях развития растения. Тканеспецифичная экспрессия может быть предпочтительной, например, если экспрессию полинуклеотидов желательно проводить в определенных тканях. Примеры тканеспецифичных промоторов, зависимых от стадии развития, включают в себя промоторы, которые могут инициировать транскрипцию только (или преимущественно) в определенных тканях, включающих в себя вегетативные ткани, такие как корни или листья, или репродуктивные ткани, такие как плоды, семяпочки, семена, пыльца, пестики, цветки или любая зародышевая ткань. Промоторы, специфичные к репродуктивным тканям, могут включать в себя, например, пыльникспецифичные, семяпочка-специфичные, зародыш-специфичные, эндосперм-специфичные, оболочкаспецифичные, специфичные к семенам и семенной оболочке, пыльца-специфичные, лепестокспецифичные, чашелистик-специфичные или их сочетания.

Подходящие лист-специфичные промоторы включают в себя пируват, промотор ортофосфатдикиназы (ГРЭК) растения С4 (маис), промотор саЪ-т1Са+2 маиса, промотор туЪ-родственного гена (А(туЪ5) АгаЫборык (Накапа, промоторы рибулозобифосфатдекарбоксилазы (Ρ-ΒΟδ) (например, генов томата КΒСδ1, КΒСδ2 и КΒСδ3Α, экспрессируемых в листьях и выращенной на свету рассаде, КΒСδ1 и КΒСδ2, экспрессируемых в развивающихся плодах томата, или промотор рибулозобифосфаткарбоксилазы, экспрессируемой почти исключительно в мезофилльных клетках листовых пластин и листовых влагалищах на высоких уровнях).

Подходящие специфичные к увяданию промоторы включают в себя промотор томата, функционирующий на стадии созревания плодов, увядания и опадения листьев, промотор гена маиса, кодирующего цистеинпротеазу. Можно использовать подходящие пыльник-специфичные промоторы. Можно выбрать подходящие корень-предпочтительные промоторы, известные специалистам в данной области. Подходящие семя-специфичные промоторы включают в себя как семя-специфичные промоторы (промоторы, активные в период развития семени, такие как промоторы запасных белков семени) и промоторы, специфичные для периода проращивания семени (такие как промоторы, активные в период проращивания семени). Такие семя-специфичные промоторы включают в себя, без ограничения, С1т1 (цитокининдуцируемый промотор); с219В1 (зеин маиса размером 19 кДа); тЛрк (миоинозитол-1-фосфатсинтаза); т2Б40-2, также известный как Ζιη-40; пис1с; и се1А (целлюлозосинтаза). Гама-зеин представляет собой эндосперм-специфичный промотор. О1оЪ-1 представляет собой зародыш-специфичный промотор. В случае двудольных семя-специфичные промоторы включают в себя, без ограничения, β-фазеолин бобовых, напин, β-конглицинин, лектин соевых бобов, круциферин и т.п. В случае однодольных семяспецифичные промоторы включают в себя, без ограничения, промотор зеина маиса размером 15 кДа, промотор зеина размером 22 кДа, промотор зеина размером 27 кДа, промотор д-зеина, промотор γ-зеина размером 27 кДа (такой как промотор дζγ64Α, ОепЪапк, номер доступа δ78780), восковой промотор, промотор кНгипкеп 1, промотор кНгипкеп 2, промотор глобулина 1 (см. ОепЪапк, номер доступа Б22344), промотор Йр2, промотор Ыт1, промоторы маиса епб1 и епб2, промотор пис1, промотор Ζт40, еер1 и еер2; 1ес1, промотор тиоредоксина Н; промотор тПр15, промотор РСNΑ2 и промотор кНгипкеп-2.

Примеры индуцируемых промоторов включают в себя промоторы, отвечающие на воздействие патогена, анаэробные условия, повышенную температуру, свет, засуху, низкую температуру или высокую концентрацию соли. Патоген-индуцируемые промоторы включают в себя промоторы белков, связанных с патогенезом (белки РК), которые индуцируются после инфекции патогена (например, белки РК, белки δΑК, β-1,3-глюканаза, хитиназа).

Помимо растительных промоторов можно использовать другие подходящие промоторы, например промоторы бактериального происхождения, такие как промотор октопинсинтазы, промотор нопалинсинтазы и другие промоторы, полученные из плазмиды Τι), или вирусные промоторы (например, промоторы 35δ и 19δ РНК вируса мозаики цветной капусты (СаМУ), конститутивные промоторы вируса мозаики табака, промоторы вируса мозаики цветной капусты (СаМУ) 19δ и 35δ или промотор вируса мозаики

- 34 030377

358 норичника).

Примеры конъюгированных фрагментов включают в себя макромолекулярные соединения, такие как белки (например, антитела), жирнокислотные цепи, остатки сахаров, гликопротеины, полимеры (например, полиэтиленгликоль) или их сочетания. Олигонуклеотид можно конъюгировать с фрагментом, который повышает поглощение олигонуклеотида клеткой.

Неограничивающие примеры фрагментов включают в себя, без ограничения, антитела, полипептиды, липидные фрагменты, такие как фрагмент холестерина, холевую кислоту, простой тиоэфир, например гексил-8-тритилтиол, тиохолестерин, алифатическую цепь, например остатки додекандиола или ундецил, фосфолипид, например дигексадецил-гас-глицерин или триэтиламмония 1-ди-о-гексадецил-гасглицеро-8-Ь-фосфонат, полиаминовую или полиэтиленгликолевую цепь, адамантануксусную кислоту, пальмитиловый фрагмент, октадециламин или гексиламино-карбонил-оксихолестериновый фрагмент.

Фрагмент может представлять собой положительно заряженный полимер, такой как положительно заряженный пептид, содержащий, например, примерно от 1 до 50 аминокислотных остатков в длину, или полиалкиленоксид, такой как полиэтиленгликоль (РЕО) или полипропиленгликоль. Предпочтительно положительно заряженный полимер, такой как полиалкиленоксид, может быть присоединен к олигомеру через линкер, такой как высвобождаемый линкер.

Для измерения экспрессии полипептида №МКР можно определить количество мРНК, кодирующей полипептид №МКР, в клетке, например, методом ПЦР или нозерн-блоттинга. Для определения изменения количества полипептида №МКР в образце можно использовать детекцию №МКР с помощью антител против №МКР, позволяющую определить количество полипептида №МКР в клетке с помощью известных методов. Альтернативно можно измерить биологическую активность (например, транспорт тяжелого металла, такого как кадмий) до и после контакта с тестируемым средством.

В другом воплощении изобретение предлагает антитела, обладающие иммунореактивностью в отношении полипептидов. Полипептиды №МКР, их фрагменты, варианты, гибридные полипептиды и т.п., описанные выше, можно использовать в качестве иммуногенов для получения антител, обладающих иммунореактивностью по отношению к ним. Такие антитела специфически связываются с полипептидами посредством антиген-связывающих участков антитела. Специфически связывающиеся антитела представляют собой антитела, которые специфично распознают и связывают полипептиды семейства №МКР, их гомологи и варианты, но не другие молекулы. В одном воплощении антитела являются специфичными к полипептидам, содержащим аминокислотную последовательность №МКР, описанную в данном документе, и не вступают в перекрестные реакции с другими полипептидами.

Более конкретно, полипептиды, фрагменты, варианты, гибридные полипептиды и т.п. содержат антигенные детерминанты или эпитопы, которые вызывают образование антител. Указанные антигенные детерминанты или эпитопы могут быть линейными или конформационными (прерывающимися). Линейные эпитопы состоят из одной секции аминокислот полипептида, тогда как конформационные или прерывающиеся эпитопы состоят из аминокислотных секций разных участков полипептидной цепи, которые после укладки полипептида находятся в непосредственной близи друг к другу. Эпитопы можно идентифицировать с помощью любого известного в данной области способа. Кроме того, эпитопы полипептидов можно использовать в качестве реагентов для исследований при проведении анализов и для очистки специфичных связывающих антител от веществ, таких как поликлональная сыворотка или супернатанты культивируемых гибридом. Такие эпитопы или их варианты можно получить с помощью известных в данной области методов, таких как твердофазный синтез, химическое или ферментативное расщепление полипептида, или технологии рекомбинантных ДНК.

С помощью традициционных методов можно получить как поликлональные, так и моноклональные антитела против полипептидов. Изобретение также охватывает гибридомные клеточные линии, которые продуцируют моноклональные антитела, специфичные к полипептидам. Такие гибридомы можно получить и идентифицировать с помощью традиционных методов. Антитела можно получить в результате иммунизации разных животных-хозяев путем введения полипептида №МКР, его фрагмента, варианта или мутанта. Такие животные-хозяева включают в себя, в числе прочих, кроликов, мышей и крыс. Для усиления иммунного ответа можно использовать разные адъюванты. В зависимости от вида хозяина такие адъюванты включают в себя, без ограничения, адъювант Фрейнда (полный и неполный), минеральные гели, такие как гидроксид алюминия, поверхностно-активные вещества, такие как лизолецитин, плюроновые полиолы, полианионы, пептиды, масляные эмульсии, гемоцианин лимфы улитки, динитрофенол, и человеческие адъюванты потенциального применения, такие как ВСО (бацилла КальметтаГерена) и СогупеЪаЛегшт рагуит.

Моноклональные антитела можно получить традиционными методами. Такие моноклональные антитела могут относиться к любому классу иммуноглобулинов, включающему в себя Ι§0, ЦМ, !дЕ, Ι§Α, Ι§ϋ и все их подклассы.

Антитела также можно использовать для детекции присутствия полипептидов или их фрагментов ш νίΙΐΌ или ш У1уо. Антитела также можно использовать для очистки полипептидов или их фрагментов методом иммуноаффинной хроматографии.

Разные воплощения предлагают мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные расте- 35 030377 ния, а также биомассу и семена, в которых уровень экспрессии полинуклеотида №МКР значительно снижен с целью уменьшения или блокирования транспорта кадмия в пластине листа. Пластина листа может входить в состав разных продуктов потребления, включающих в себя разные табачные изделия, такие как сигары, сигареты и не дающие дыма табачные изделия (то есть негорючие).

% Уменьшения кадмия в указанных табачных изделиях и не дающих дыма продуктах может составлять по меньшей мере примерно 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%, 200% или 300% по сравнению с продуктами потребления, полученными из немутантных, не встречающийся в природе или нетрансгенных аналогов. В некоторых воплощениях содержание кадмия в указанных табачных изделиях и не дающих дыма продуктах может находиться в диапазоне примерно от 0,01 до 0,05 м.д., примерно от 0,01 до 0,1 м.д., примерно от 0,01 до 0,5 м.д., примерно от 0,01 до 1,0 м.д. или примерно от 0,01 до 5 м.д. В некоторых воплощениях содержание кадмия в указанных табачных изделиях и не дающих дыма продуктах составляет примерно 0,001 м.д. или менее, примерно 0,01 м.д. или менее, или примерно 0,05 м.д. или менее, или примерно 0,49 м.д. или менее, или примерно 0,5 м.д. или менее. Степень накопления кадмия в растениях может существенно варьировать в зависимости от нескольких параметров, обусловленных сложностью генотипа и условиями выращивания. Например, концентрации кадмия в листьях табака, выращенного в полевых условиях, могут сильно варьировать в зависимости от таких факторов, как агроклимат, качество земли, используемый сорт, а также тип и источник используемого удобрения. Кроме того, относительный характер распределения кадмия в разных частях растения табака может варьировать в зависимости от вида, органа/ткани и условий выращивания (включающих в себя полевые условия и гидропонные условия). Средняя концентрация кадмия в листьях (в том числе в сосудах и жилках) табака, выращенного в полевых условиях, может находиться в диапазоне, составляющем примерно от 0,5 до 5 м.д. (миллионных долей или микрограмм/грамм сухой массы листьев табака). Однако во многих публикациях уровень кадмия приводится без указания стадии созревания табака, разновидности табака или конкретных частей листьев (например, пластин листа, отделенных от черенков), собранных для анализа. У некоторых разновидностей нижние листья могут накапливать более высокое содержание кадмия, чем средние и нижние листья. Что касается внутриклеточного уровня, кадмий можно обнаружить в разных компонентах растительной клетки, включающих в себя клеточную стенку, цитоплазму, хлоропласт, ядро и вакуоли.

Кроме того, содержание кадмия, измеряемое в листьях табака, может значительно варьировать в зависимости от уровня кадмия в почве, в которой выращивают растения табака. В листьях табака, выращенного в загрязненных кадмием регионах, содержание кадмия может составлять примерно 35 м.д. или выше, тогда как содержание кадмия в листьях генетически идентичных аналогов, выращенных в незагрязненных регионах, может находиться в диапазоне, составляющем примерно от 0,4 до 8 м.д. Вакуоли листьев растений, выращенных в загрязненных кадмием регионах, могут накапливать очень высокие концентрации кадмия. Способы применения раскрытых композиций к конкретным представляющим интерес видам растений известны специалистам в данной области.

Содержание тяжелых металлов в растениях можно измерить с помощью разных способов, известных в данной области. Предпочтительный способ включает в себя применение масс-спектрофотометрии с индуктивно сопряженной плазмой (1СР-М8, ЛдПсШ 7500А; ЛдПсШ ТесЬпо1од1е8, Ра1о Αΐίο, СА).

Описанные здесь мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растения могут иметь другие применения, например, в сельском хозяйстве. Например, описанные здесь мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растения можно использовать для получения кормов для животных и пищевых продуктов для людей. Семена описанных здесь растений можно кондиционировать и упаковать в упаковочный материал с помощью известных в данной области способов с получением промышленного изделия. В данной области известны такие упаковочные материалы, как бумага и ткань. Упаковка семян может содержать этикетку, такую как бирка или этикетка, прикрепленная к упаковочному материалу, этикетка, отпечатанная на упаковочном материале, или этикетка, вставленная в упаковку, где этикетка содержит описание семян, находящихся в упаковке.

Растение, несущее мутантную аллель №МРР, можно использовать в программе селекции растений с получением полезных линий, разновидностей и гибридов. В частности, осуществляют интрогрессию мутантной аллели №МКР в описанные выше разновидности, имеющие коммерческую ценность. Таким образом, изобретение предлагает способы селекции растений, которые включают в себя скрещивание описанного здесь мутантного растения, не встречающегося в природе растения или трансгенного растения с растением, содержащим другой набор генов. Способ может дополнительно включать в себя скрещивание потомства растения с другим растением и, необязательно, повторение скрещивания до получения потомства с желательными генетическими признаками или желательным генетическим фоном. Одна из целей, достигаемых с помощью таких методов селекции, включает в себя введение желательного генетического признака в другие разновидности, селекционные линии, гибриды или сорта, в особенности, в те из них, которые имеют коммерческую ценность. Другая цель включает в себя обеспечение накопления модификаций разных генов в одной разновидности, в одной линии, в одном гибриде или в одном сорте растения. Можно проводить внутривидовые и межвидовые скрещивания. Дочерние растения, полученные в результате таких скрещиваний, также называемые селекционные линии, являются примера- 36 030377 ми не встречающихся в природе растений.

В одном воплощении изобретение предлагает способ получения не встречающегося в природе растения, включающий в себя (а) скрещивание мутантного или трансгенного растения со вторым растением с получением семян потомства; (Ъ) выращивание семян потомства в условиях выращивания растения с получением не встречающегося в природе растения. Способ может дополнительно включать в себя (с) скрещивание предыдущего поколения не встречающегося в природе растения самого с собой или с другим растением с получением семян потомства; (ά) выращивание семян потомства, полученных на стадии (с), в условиях выращивания растения с получением других не встречающихся в природе растений; и (е) повторение стадий (с) и (ά) скрещивания и выращивания несколько раз с получением следующих поколений не встречающихся в природе растений. Способ может необязательно включать в себя перед стадией (а) стадию получения исходного растения, содержащего охарактеризованный набор генов, который не является идентичным набору генов мутантного или трансгенного растения. В некоторых воплощениях в зависимости от программы селекции стадии скрещивания и выращивания повторяют от 0 до 2 раз, от 0 до 3 раз, от 0 до 4 раз, от 0 до 5 раз, от 0 до 6 раз, от 0 до 7 раз, от 0 до 8 раз, от 0 до 9 раз или от 0 до 10 раз, получая поколения не встречающихся в природе растений. Обратное скрещивание является примером такого способа, в котором потомство скрещивают с родительскими или с другим растением, генетически подобным родительскому растению, с получением дочернего растения в следующем поколении, набор генов которого близок набору генов одного из родителей. Методы селекции растений, в частности селекции растений табака, хорошо известны и могут использоваться в описанных здесь способах. Описание дополнительно предлагает не встречающиеся в природе растения, полученные с помощью указанных способов.

В некоторых воплощениях описанных здесь способов линии, полученные в результате селекции и скрининга на вариантные гены №МКР, анализируют в полевых условиях с помощью стандартных полевых методик. Используют контрольные генотипы, включающие в себя исходный немутантный родительский генотип, причем компоненты располагают на поле по рандомизированной полноблочной схеме или по другой подходящей полевой схеме. Для табака используют стандартные агрономические приемы, например, табак собирают, взвешивают и берут образцы для химических и других традиционных анализов до и в процессе заготовки. Проводят статистические анализы данных, чтобы подтвердить подобие выбранных линий родительской линии. Необязательно проводят цитогенетические анализы выбранных растений, чтобы подтвердить взаимозависимость набора хромосом и спаривания хромосом.

Для переноса мутантных аллелей гена (генов) №МКР в другие растения табака или воспроизведения мутантных аллелей гена (генов) №МКР в других растениях табака, как описано в данном документе, можно использовать программу маркер-опосредуемой селекции (МА§) с применением отпечатков пальцев ДНК, однонуклеотидного полиморфизма, микросателлитных маркеров или подобных им методов. Например, селекционер может создавать сегрегирующие популяции путем гибридизации генотипа, содержащего мутантный аллель, с агрономически желательным генотипом. Растения поколения Р2 или поколения, полученные в результате обратного скрещивания, можно подвергать скринингу с использованием маркера, полученного из геномной последовательности (геномных последовательностей) №МРР, или ее фрагмента (фрагментов), с помощью одного из перечисленных здесь методов. Растения, идентифицированные как содержащие мутантный аллель, можно подвергнуть обратному скрещиванию или самоопылению с получением второй популяции, подлежащей скринингу. В зависимости от ожидаемого характера наследования или используемой технологии МА§ может возникнуть необходимость самоопыления выбранных растений перед каждым циклом обратного скрещивания, с целью идентификации отдельных желательных растений. Обратное скрещивание или другую процедуру селекции можно повторять до получения рекуррентного родительского растения с желательным фенотипом.

В соответствии с настоящим описанием успешные скрещивания, проводимые в рамках программы селекции, дают фертильные растения поколения Р1. Выбранные растения Р1 можно подвергнуть скрещиванию с одним из родительских растений, после чего растения первого поколения обратного скрещивания подвергают самоопылению с получением популяции, которую вновь подвергают скринингу на экспрессию варианта гена №МРР (например, нулевой версии гена №МКР). Стадии обратного скрещивания, самоопыления и скрининга повторяют, например, по меньшей мере 4 раза до тех пор, пока последний скрининг не выявит фертильное растение, в достаточной степени подобное рекуррентному родительскому растению. Данное растение при желании подвергают самоопылению и полученное потомство снова подвергают скринингу, чтобы подтвердить, что в растении наблюдается экспрессия варианта гена №МКР. В некоторых воплощениях скринингу на экспрессию варианта гена №МКР подвергают популяцию растений поколения Р2, например растение, которое не экспрессирует №МКР вследствие отсутствия гена №МРР, идентифицируют с помощью стандартных методов, таких как метод ПЦР с использованием праймеров, полученных на основе информации об описанной здесь нуклеотидной последовательности №МКР.

Гибридные разновидности можно получить путем предотвращения самоопыления женских родительских растений (т. е. растений, дающих семена) первой разновидности, предоставление пыльце мужских родительских растений второй разновидности возможности оплодотворять женские родительские

- 37 030377 растения, и проращивание гибридных семян Р1 с получением женских растений. Самоопыление женских растений можно предотвратить путем удаления несозревших пестиков на ранней стадии развития цветков. Альтернативно образование пыльцы у женских родительских растений можно предотвратить, используя форму, характеризующуюся мужской стерильностью. Например, мужская стерильность может быть обусловлена цитоплазматической мужской стерильностью (СМ8) или трансгенной мужской стерильностью, где трансген ингибирует микроспорогенез и/или образование пыльцы, или самонесовместимостью. Особенно часто используют женские родительские растения, характеризующиеся СМ8. В воплощениях, в которых женские родительские растения характеризуются СМ8, пыльцу, собранную из мужских фертильных растений, вручную наносят на рыльца пестиков женских родительских растений, характеризующихся СМ8, и собирают полученные семена Р1.

Описанные здесь разновидности и линии можно использовать для получения простых гибридов Р1. В таких воплощениях растения родительских разновидностей можно вырастить как практически гомогенные примыкающие друг к другу популяции, чтобы обеспечить природное перекрестное опыление мужскими родительскими растениями женских родительских растений. Семена Р1, образовавшиеся на женских родительских растениях, селективно собирают традиционными методами. Разновидности родительских растений можно выращивать вместе, при этом собирают смесь гибридных семян Р1, образовавшихся на женском родительском растении, и семян, образовавшихся на мужском родительском растении в результате самоопыления. Альтернативно можно проводить трехстадийные скрещивания, где гибрид первого скрещивания Р1 используют в качестве женского родительского растения, которое скрещивают с другим мужским родительским растением. В качестве другой альтернативы можно получить гибриды двойного скрещивания, где потомство Р1 двух разных одиночных скрещиваний скрещивают само с собой.

Популяцию мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растений можно подвергнуть скринингу или отбору по членам популяции, которые имеют желательный признак или фенотип. Например, популяцию потомства, содержащего одно событие трансформации, можно подвергнуть скринингу на растения, имеющие желательный уровень экспрессии полипептида или полинуклеотида №МКР. Физические и биохимические методы можно использовать для идентификации уровней экспрессии. Такие методы включают в себя саузерн-анализ или амплификацию ПЦР для детекции полинуклеотидов; нозерн-блоттинг, РНКазную защиту 81, удлинение праймеров или амплификацию ПЦР с обратной транскриптазой для детекции транскриптов РНК; ферментативные анализы для детекции ферментативной или рибозимной активности полипептидов и полинуклеотидов; и гель-электрофорез белков, вестерн-блоттинг, иммунопреципитацию и ферментные иммуноанализы для детекции полипептидов. Для детекции присутствия или экспрессии полипептидов или полинуклеотидов также можно использовать другие методы, такие как гибридизация ίη вин, окрашивание ферментами и иммуноокрашивание.

В данном документе описаны мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растительные клетки и растения, содержащие один или несколько рекомбинантных полинуклеотидов, таких как один или несколько выделенных полинуклеотидов №МКР, одна или несколько полинуклеотидных конструкций, одна или несколько двухцепочечных РНК, один или несколько конъюгатов, или один или несколько векторов/векторов экспрессии.

Экспрессию №МКР можно определить с помощью методов, включающих в себя, например, ПЦР с обратной транскриптазой, нозерн-блоттинг, РНКазную защиту, удлинение праймеров, вестерн-блоттинг, гель-электрофорез белков, иммунопреципитацию, ферментные иммуноанализы, анализы с использованием чипов и масс-спектрометрию. Следует отметить, что в случае экспрессии полипептида под контролем тканеспецифичного промотора или промотора, обеспечивающего экспрессию во всех тканях, экспрессию можно анализировать в целом растении или в выбранной ткани. Подобным образом, если полипептид экспрессируется в определенном промежутке времени, таком как период развития или индукции, экспрессию можно избирательно анализировать в желательном промежутке времени.

Без ограничения, описанные здесь растения можно модифицировать с другими целями, до или после модуляции (например, уменьшения или ингибирования) экспрессии или активности №МКР. Одна или несколько из нижеследующих генетических модификаций может присутствовать в мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растениях. В одном воплощении один или несколько других генов, участвующих в поглощении или транспорте тяжелых металлов, модифицируют с получением растений или частей растений (таких как листья) с пониженным содержанием тяжелых металлов по сравнению с контрольными растениями или их частями, не содержащими модификации (модификаций). Неограничивающие примеры включают в себя гены семейства средств, обеспечивающих диффузию катионов (СОР), семейства ΖγΙ-, Ιή-подобных белков (Ζ№), семейства катионообменных средств (САХ), семейства транспортеров меди (СОРТ), семейства транспортирующих тяжелые металлы АТФ-аз Р-типа (НМА, описанных в νΟ 2009074325), семейства гомологов макрофагальных белков, ассоциированных с естественной устойчивостью ЩКАМР), и других членов семейства транспортеров АТФ-связывающей кассеты (АВС), которые участвуют в транспорте тяжелых металлов, таких как кадмий. Термин тяжелый металл в настоящем описании включает в себя переходные металлы. В другом воплощении модифицируют один или несколько генов, участвующих в превращении азотсодержащих метаболических промежуточных

- 38 030377 соединений, с получением растений или частей растений (таких как листья), которые после нагревания продуцируют более низкие уровни по меньшей мере одного табак-специфичного нитрозамина (такого как 4-(метилнитрозамино)-1-(3-пиридил)-1-бутанон, ^нитрозонорникотин, ^нитрозоанатабин и N нитрозоанабазин), чем контрольные растения или их части. Неограничивающие примеры генов, которые можно модифицировать, включают в себя гены, кодирующие никотиндеметилазу, такие как СΥΡ82Е4, СΥΡ82Е5 и СΥΡ82Е10, участвующие в превращении никотина в норникотин, которые описаны в \У0 2006091194, \\'0 2008070274, \\'0 2009064771 и РСТ/и8 2011/021088.

Примеры других модификаций включают в себя изменение устойчивости к гербицидам, таким как глифосат, который является активным ингредиентом многих гербицидов широкого спектра действия. Устойчивые к глифосату трансгенные растения получают путем переноса гена агоА (глифосат-синтетаза ЕР8Р из 8а1топе11а (урЫтипит и Е.сой). Устойчивые к сульфонилмочевине трансгенные растения получают путем введения мутантного гена АЬ8 (ацетолактатсинтетазы) АгаЫкоркк. Белок ОВ фотосистемы II из мутантного АтагапШиз йуЬйкиз вводят в растения с получением атразин-устойчивых трансгенных растений; а бромксинил-устойчивые трансгенные растения получают путем введения гена Ьхп бактерии К1еЬке11а рпеитошае. В другом примере модификация приводит к получению растений, устойчивых к насекомым. Применение токсинов ВасЫик Йшппщепкк (Βΐ) может представлять собой эффективный способ замедления появления Βΐ-устойчивых вредителей, как было недавно проиллюстрировано на брокколи, где постепенно увеличивающиеся гены ΒΙ сгу1Ас и сгу1С контролируют устойчивость капустной моли к какому-либо одному белку и значительно замедляют эволюцию устойчивых насекомых. В другом примере модификация приводит к получению растений, устойчивых к заболеваниям, вызываемым патогенами (такими как вирусы, бактерии, грибки). С помощью рекомбинатных способов получены растения, экспрессирующие ген Ха21 (отвечающий за устойчивость к бактериальным заболеваниям), и растения, экспрессирующие как гибридный ген ΒΙ, так и ген хитиназы (отвечающий за устойчивость к желтому стеблееду и толерантность к зйеа(й). В другом примере модификация приводит к изменению репродуктивной способности, такому как мужская стерильность. В другом примере модификация приводит к получению растений, устойчивых к абиотическому стрессу (обусловленному, например, засухой, изменением температуры и содержания солей), и толерантные трансгенные растения получают путем введения гена ацилглицеринфосфатного фермента АгаЫкоркк; генов, кодирующих маннитдегидрогензу и сорбитдегидрогензу, которые участвуют в синтезе маннита и сорбита, улучшая устойчивость к засухе. Другая иллюстративная модификация позволяет получить растения, которые продуцируют белки, обладающие иммуногенными свойствами, подходящими для применения у людей. Например, можно использовать растения, способные продуцировать белки, ^гликановые конъюгаты которых практически не содержат а-1,3-связанных остатков фукозы, |3-1.2-связанны.\ остатков ксилозы или тех и других. Другие иллюстративные модификации позволяют получить растения с улучшенными запасными белками и маслами, растения с повышенной эффективностью фотосинтеза, растения, характеризующиеся повышенным сроком хранения, растения с повышенным содержанием углеводов и растения, устойчивые к грибкам; растения, кодирующие фермент, участвующий в биосинтезе алкалоидов. В объем изобретения также входят трансгенные растения с модулированной экспрессией 8-аденозил-Ь-метионина (8АМ) и/или γсинтазы цистатионина (СО8).

Без ограничения, описанные здесь растения можно дополнительно модифицировать. Примеры таких дополнительных модификаций включают в себя, без ограничения (а) получение растений, устойчивых к гербицидам. Например, глифосат, является активным ингредиентом многих гербицидов широкого спектра действия. Устойчивые к глифосату трансгенные растения получают путем переноса гена агоА (глифосат-синтетазы ЕР8Р из 8а1топе11а 1урЫтштит и Е.сой); Устойчивые к сульфонилмочевине трансгенные растения получают путем введения мутантного гена АЬ8 (ацетолактатсинтетазы) АгаЫкоркк; белок ОБ фотосистемы II мутантного АтагапШиз йуЬйкиз вводят в растения с получением атразинустойчивых трансгенных растений; а бромксинил-устойчивые трансгенные растения получают путем введения гена Ьхп бактерии К1еЬке11а рпеитошае; (Ь) получение растений, устойчивых к насекомым. Применение токсинов Β;κί11ιΐ5 Шигш§1епз13 (Βΐ) может представлять собой эффективный способ замедления появления Βΐ-устойчивых вредителей, как было недавно проиллюстрировано на брокколи, где постепенно увеличивающиеся гены Βΐ сгу1Ас и сгу1С контролируют устойчивость капустной моли к какому-либо одному белку и значительно замедляют эволюцию устойчивых насекомых; (с) получение растений, устойчивых к вирусам. Растения, устойчивые к вирусу мозаики табака, получают путем введения белков вирусной оболочки. Другие устойчивые к вирусам трансгенные растения включают в себя растения картофеля, устойчивые к вирусу картофеля, К8У-устойчивый рис и ΥМV-устойчивые фасоль мунга и зеленый горох; (к) получение растений, устойчивых к бактериям. Рекомбинантными методами получают растения, экспрессирующие ген Ха21 (отвечающий за устойчивость к бактериальным заболеваниям), и растения, экспрессирующие как гибридный ген Βΐ, так и ген хитиназы (отвечающий за устойчивость к желтому стеблееду и толерантность к зйеаШ); (е) получение растений, устойчивых к стрессу: Трансгенные растения, устойчивые к низким температурам, получают путем введения гена ацилглицеринфосфатного фермента АгаЫкорз1з; гены, кодирующие маннитдегидрогензу и сорбитдегидрогензу,

- 39 030377 которые участвуют в синтезе маннита и сорбита, улучшают устойчивость к засухе; (ί) получение растений, которые продуцируют белки, обладающие иммуногенными свойствами, подходящими для применения у людей. Например, можно использовать растения, способные продуцировать белки, N гликановые конъюгаты которых практически не содержат а-1,3-связанных остатков фукозы, β-1,2связанных остатков ксилозы или тех и других; и (д) другие примеры трансгенных растений включают в себя растения с улучшенными запасными белками и маслами, растения с повышенной эффективностью фотосинтеза, растения, характеризующиеся повышенным сроком хранения, растения с повышенным содержанием углеводов и растения, устойчивые к грибкам; растения, кодирующие фермент, участвующий в биосинтезе алкалоидов; гены бактериального пути детоксикации органической ртути (ртутной редуктазы, тегА) и ртутьорганической лиазы, тегВ, объединяют путем скрещивания в АгаЫборз13, и полученные растения, экспрессирующие оба гена, могут расти в среде, содержащей концентрацию метилртути, в 50 раз превышающую концентрацию, в которой могут расти растения дикого типа.

Один или несколько таких признаков можно ввести путем интрогрессии в мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растения табака из другого сорта табака, или их можно непосредственно использовать для трансформации указанных растений. Интрогрессию признака (признаков) в мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растения табака можно осуществить с помощью любого способа селекции растений, известного в данной области, например, такого как чистосортовое разведение, обратное скрещивание, двойная гаплоидная селекция и т.п. (см. ^егизтаи, Е.А, аиб Кийу, К.С. 1987. СНар1ег ЗеуеШееп. ТоЬассо. Гадез 669-698 Ιη: СиШуаг Эеуе1ортеп1. Сгор Зреаез. ν.Η. РеЬг (еб.), ΜасΜ^11аη ЕнЬЕзЬтд Со, 1пс., №\ν Уогк, ΝΥ 761 рр.). Описанные выше методы молекулярной биологии, в частности методы с применением ΚΡΕΡ и микросателлитных маркеров, можно использовать при обратных скрещиваниях, чтобы идентифицировать потомство с наивысшей степенью генетической идентичности в отношении рекуррентного родителя. Указанные методы позволяют ускорить получение разновидностей, генетическая идентичность которых в отношении рекуррентного родителя составляет по меньшей мере 90%, предпочтительно по меньшей мере 95%, более предпочтительно по меньшей мере 99%, еще более предпочтительно полученные разновидности являются генетически идентичными рекуррентному родителю и дополнительно содержат признак (признаки), полученный путем интрогрессии от донорного родителя. Анализ генетической идентичности можно проводить с использованием молекулярных маркеров, известных в данной области.

Последнее поколение обратного скрещивания можно подвергнуть самоопылению, чтобы получить потомство чистой линии, содержащее переданный полинуклеотид (полинуклеотиды). Как правило, полученные растения имеют практически все морфологические и физиологические характеристики мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растений помимо переданного признака (признаков) (такого как один или несколько признаков, связанных с одним геном). Точная схема обратного скрещивания зависит от признака, подлежащего изменению, с определением подходящего метода тестирования. Хотя обратное скрещивание проще проводить, если передаваемый признак представляет собой доминантную аллель, рецессивную аллель также можно передавать. В данном случае может возникнуть необходимость в тестировании потомства с целью определения успешной передачи желательного признака.

Разные воплощения предлагают мутантные растения, не встречающиеся в природе растения или трансгенные растения, а также биомассу с пониженным уровнем экспрессии полинуклеотида NίΜΚΡ, обуславливающем уменьшение накопления кадмия.

Части таких растений, в частности растений табака, более конкретно листовые пластины и жилки растений табака, можно включить в состав, или использовать для получения разных продуктов потребления, включающих в себя, без ограничения, аэрозоль-образующие вещества, аэрозоль-образующие устройства, курительные изделия, изделия, которые можно курить, не дающие дыма продукты и табачные изделия. Примеры аэрозоль-образующих веществ включают в себя, без ограничения, композиции табака, табак, экстракт табака, измельченный табак, измельченный наполнитель, сушеный табак, взорванный табак, гомогенизированный табак, восстановленный табак и трубочный табак. Курительные изделия и изделия, которые можно курить, представляют собой типы аэрозоль-образующих устройств. Примеры курительных изделий и изделий, которые можно курить, включают в себя, без ограничения, сигареты, тонкие сигарки и сигары. Примеры не дающих дыма продуктов включают в себя жевательные табаки и нюхательные табаки. В некоторых аэрозоль-образующих устройствах для получения аэрозоля вместо горения используют нагревание табачной композиции или другого аэрозоль-образующего вещества с использованием одного или нескольких электронагревательных элементов. В другом типе нагревательного аэрозоль-образующего устройства аэрозоль получают путем переноса тепла из горючего топливного элемента или источника тепла на физически отдельное аэрозоль-образующее вещество, которое может располагаться внутри источника тепла, около источника тепла или под источником тепла. Не дающие дыма табачные продукты и разные табак-содержащие аэрозоль-образующие вещества могут содержать табак в любой форме, включающей в себя сухие частицы, кусочки, гранулы, порошки или взвеси, нанесенные на другие ингредиенты, смешанные с другими ингредиентами, окруженные другими ингредиентами или иным образом объединенные с другими ингредиентами в любом формате, таком как хлопья,

- 40 030377 пленки, таблетки, пены или гранулы. В данном описании термин курение используют для описания типа аэрозоля, продуцируемого курительными изделиями, такими как сигареты, или в результате горения аэрозоль-образующего вещества.

В одном воплощении изобретение также предлагает высушенное вещество, полученное из описанных здесь мутантных, трансгенных и не встречающихся в природе растений табака. Способы сушки зеленых листьев табака известны специалистам в данной области и включают в себя, без ограничения, воздушную сушку, огневую сушку, дымовую сушку и солнечную сушку. Способ сушки зеленых листьев табака зависит от типа собираемого табака. Например, виргинский дымовой табак (светлый) обычно получают путем дымовой сушки, табак Берлей и некоторые темные сорта обычно получают путем воздушной сушки, а трубочный табак, жевательный табак и нюхательный табак обычно получают путем огневой сушки.

В другом воплощении изобретение описывает табачные продукты, включающие в себя табаксодержащие аэрозоль-образующие вещества, включающие в себя листья, предпочтительно сушеные листья, полученные из описанных здесь мутантных растений табака, трансгенных растений табака или не встречающихся в природе растений табака. Описанные здесь табачные продукты могут включать в себя смешанный табачный продукт, который может дополнительно содержать немодифицированный табак.

Мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растения могут иметь другие применения, например, в сельском хозяйстве. Например, описанные здесь мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растения можно использовать для получения кормов для животных и пищевых продуктов для людей.

Описание также предлагает способы получения семян, включающие в себя культивирование описанного здесь мутантного растения, не встречающегося в природе растения или трансгенного растения и собирание семян культивируемых растений. Семена описанных здесь растений можно кондиционировать и упаковать в упаковочный материал с помощью известных в данной области способов с получением промышленного изделия. В данной области известны такие упаковочные материалы, как бумага и ткань. Упаковка семян может содержать этикетку, такую как бирка или этикетка, прикрепленная к упаковочному материалу, этикетка, отпечатанная на упаковочном материале, или этикетка, вставленная в упаковку, где этикетка содержит описание семян, находящихся в упаковке.

Изобретение охватывает композиции, способы и наборы для генотипирования растений с целью идентификации, селекции или выведения, которые могут включать в себя средства детекции присутствия полинуклеотида ΝίΜΚΡ в образце полинуклеотида. Соответственно, изобретение предлагает композицию, содержащую один или несколько праймеров для специфичной амплификации по меньшей мере части полинуклеотида ΝίΜΚΡ и, необязательно, один или несколько зондов и один или несколько реагентов для проведения амплификации или детекции.

Соответственно, изобретение раскрывает ген-специфичные олигонуклеотидные праймеры или зонды, содержащие примерно 10 или более смежных полинуклеотидов, соответствующих полинуклеотиду ΝίΜΚΡ. Указанные праймеры или зонды могут содержать или включать в себя примерно 15, 20, 25, 30, 40, 45, 50 или более смежных полинуклеотидов, способных гибридизоваться (например, специфично гибридизоваться) с полинуклеотидом ΝίΜΚΡ. В некоторых воплощениях праймеры или зонды могут содержать или включать в себя примерно 10-50 смежных нуклеотидов, примерно 10-40 смежных нуклеотидов, примерно 10-30 смежных нуклеотидов или примерно 15-30 смежных нуклеотидов, которые можно использовать в последовательность-зависимых методах идентификации генов (таких как саузернгибридизация), или выделения генов (таких как гибридизация ίη δίΐιι бактериальных колоний или бактериофагальных бляшек) или детекции генов (таких как амплификация или детекция полинуклеотида с использованием одного или нескольких праймеров). Можно сконструировать один или несколько специфичных праймеров или зондов и использовать их для амплификации или детекции полноразмерного полинуклеотида ΝίΜΚΡ или его части. В конкретном примере амплификацию полинуклеотидного фрагмента, кодирующего полинуклеотид ΝίΜΚΡ, такой как ДНК или РНК, осуществляют методом полимеразной цепной реакции с использованием двух праймеров. Полимеразную цепную реакцию также можно проводить с использованием одного праймера, полученного из полинуклеотидной последовательности ΝίΜΚΡ, и второго праймера, способного гибридизоваться с последовательностями, расположенными выше и ниже последовательности полинуклеотида ΝίΜΚΡ, включающими в себя промоторную последовательность ΝίΜΚΡ, 3'-конец предшественника мРНК или последовательность, входящую в состав вектора. Примеры термических и изотермических методов амплификации полинуклеотидов ίη νίΐτο хорошо известны в данной области. Образец может представлять собой растение, растительную клетку или растительный материал, или он может быть получен из них, или образец может представлять собой продукт, изготовленный или полученный из растения, растительной клетки или растительного материала, как описано в данном документе.

Таким образом, в другом аспекте изобретение предлагает способ детекции полинуклеотида ΝίΜΚΡ в образце, включающий в себя следующие стадии: (а) получение образца, содержащего или предположительно содержащего полинуклеотид; (Ъ) приведение указанного образца в контакт с одним или несколькими праймерами или одним или несколькими зондами с целью специфичной детекции по меньшей мере

- 41 030377 части полинуклеотида №МКР; и (с) детекция присутствия продукта амплификации, где присутствие продукта амплификации указывает на присутствие полинуклеотида №МКР в образце. В следующем аспекте изобретение также предлагает применение одного или нескольких праймеров или зондов для специфической детекции по меньшей мере части полинуклеотида №МКР. Изобретение также предлагает наборы для детекции по меньшей мере части полинуклеотида №МКР, которые содержат один или несколько праймеров или зондов для специфической детекции по меньшей мере части полинуклеотида №МКР. Набор может содержать реагенты для амплификации полинуклеотидов, например, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), или реагенты для методов детекции с применением гибридизации полинуклеотидных зондов, таких как саузерн-блоттинг, нозерн-блоттинг, гибридизация ίη Ун, или микрочипы. Набор может содержать реагенты для методов детекции с применением связывания антител, таких как вестерн-блоттинг, ΕΟδΆ, масс-спектрометрия δΕΕΌΙ или применение индикаторных полосок. Набор может содержать реагенты для секвенирования ДНК. Набор может содержать реагенты и/или инструкции для определения содержания тяжелых металлов, таких как кадмий. В некоторых воплощениях набор может содержать инструкции по проведению одного или нескольких из описанных способов. Описанные наборы можно использовать для определения генетической идентичности, филогенетических исследований, генотипирования, гаплотипирования, анализа происхождения или селекции растений, в частности, наряду с оценкой содоминирования.

Настоящее описание также предлагает способ генотипирования растения, растительной клетки или растительного материала, содержащих полинуклеотид №МКР. Генотипирование предоставляет средства идентификации гомологов пары хромосом и может использоваться для выявления сегрегантов в популяции растений. Методы на основе применения молекулярных маркеров можно использовать для филогенетических исследований, характеристики генетических взаимоотношений среди разновидностей сельскохозяйственной культуры, идентификации гибридов, полученных в результате скрещиваний, или соматических гибридов, локализации сегментов хромосом, влияющих на моногенетические признаки, клонирования на основе картирования и анализа наследования количественных признаков. В конкретном способе генотипирования можно использовать любое число аналитических методов, основанных на применении молекулярных маркеров, таких как амплификация полиморфизмов длин фрагментов (АРЬР). ЛЕЕР возникают в результате аллельных различий среди фрагментов амплификация, обусловленных вариабельностью нуклеотидных последовательностей. Таким образом, изобретение описывает способы сегрегации №МКР, а также хромосомных последовательностей, генетически связанных с указанными генами или полинуклеотидами, с использованием таких методов, как анализ АЕЬР.

Далее изобретение описывается со ссылкой на нижеследующие примеры, которые не предназначаются для ограничения объема изобретения, определенного в формуле изобретения.

Примеры

Нижеследующие примеры приведены для иллюстрации, но не для ограничения. Если не указано иначе, используются традиционные методы и способы молекулярной биологии, биологии растений, биоинформатики и селекции растений.

Пример 1. Идентификация геномной последовательности ДНК №МКР3.

Библиотека ВАС табака. Библиотеку бактериальных искусственных хромосом (ВАС) получают следующим способом: ядра выделяют из листьев выращенных в теплице растений разновидности Нюкк Вгоай БсаГ №сойапа 1аЬасит. Высокомолекулярную ДНК выделяют из ядер стандартными способами, частично расщепляют ВатШ и ΗίηάΙΙΙ и клонируют в участках ВатШ или ΗίηάΙΙΙ ВАС-вектора р1МОЮ05. Получают более 320000 клонов со средней длиной вставки 135 миллионов пар оснований, что перекрывает геном табака примерно в 9,7 раз.

Сборка последовательности генома табака. Большое число случайно выбранных клонов ВАС подвергают секвенированию методом Сэнджера, получая более 1780000 неочищенных последовательностей со средней длиной 550 пар оснований. Метиловую фильтрацию используют для трансформации штамма Мсг+ Ε8сЬе^^сЬ^а сой и выделения только гипометилированной ДНК. Сборку всех последовательностей осуществляют с помощью программы для сборки генома ΟΕΕΕΚΑ, получая более 800000 последовательностей, включающих в себя более 200000 контигов и 596970 отдельных последовательностей. Размер контигов варьирует от 120 до 15300 пар оснований со средней длиной 1100 пар оснований.

Геномную последовательность ДНК №МКР3 идентифицируют путем секвенирования ВАСсодержащей части генома, которая включает в себя ДНК №МКР3. Последовательность приведена на фиг. 6.

Пример 2. Трансформация разновидностей табака векторами экспрессии, содержащими РНКи №МКР3.

Семена табака стерилизуют и проращивают в чашке Петри, содержащей основную среду М8, дополненную 5 мл/л смеси растительных консервантов (РРМ). Проростки, полученные примерно через 710 дней после прорастания семян, используют для трансформации разными векторами экспрессии, содержащими РНКи №МКР3. Отдельную колонию ЛдгоЬасЮгшт ШтсГасющ ЙВА4404 вносят в жидкую среду ЬВ, содержащую 50 мг/л канамицина (моносульфата канамицина), и инкубируют в течение 48 ч при 28°С и возвратно-поступательном встряхивании (150 циклов/мин). Культивированные клетки соби- 42 030377 рают центрифугированием (6000х§. 10 мин) и суспендируют до получения конечной плотности 0.4-0.7 ΟΌ₆₀₀ в 20 мл жидкой среды Μ8. содержащей 20 г/л сахарозы. Эксплантаты рассады возрастом 7-10 дней погружают в суспензию бактерий на 5 мин и затем их промокают стерильной фильтровальной бумагой. Пятьдесят эксплантатов помещают в аликвоты среды для агара КЕО объемом 40 мл (основная среда Μ8. содержащая 0.1 мг/л 1-нафталинуксусной кислоты (ΝΑΑ) и 1 мг/л бензиламинопурина (ВАР)) в чашках Петри размером 100x20 мм. Эксплантаты культивируют совместно с АдгоЬаЧегшт при 25°С. После совместного культивирования в течение 3 дней эксплантаты промывают и переносят в среду ΡСΡΚ (среда Р1О. содержащая 100 мг/л канамицина. 500 мг/л карбенициллина и 5 мл РРМ) для селекции трансформантов. Эксплантаты субкультивируют каждые 2 недели. После выращивания в селективных условиях в течение 8-12 недель выжившие растения. представляющие собой трансформанты. содержащие интегрированные в их геномы экспрессионные конструкции РНКи ΝίΜΡΡ3. переносят в среду для образования корневой системы (основная среда Μ8. содержащая 100 мг/л канамицина). Пустившие корни растения переносят в горшки для дальнейшего выращивания.

Пример 3. Экспрессия полинуклеотида ΝίΜΡΡ3 в растениях табака.

Чтобы определить экспрессию полинуклеотида ΝίΜΡΡ3. общую клеточную РНК выделяют из разных частей растений. Общую РНК выделяют. используя реагент ΤΡΙ® (8щта-А1йпсй 8ΐ. Ьош8. МО). Чтобы удалить примеси ДНК. очищенную РНК обрабатывают не содержащей РНКазы ДНКазой (ΤυΡΒΟ ΌΝΑ-Ггее. АтЬюп. Λιι4ίη ΤΧ). Чтобы синтезировать первую цепь кДНК. примерно 10 мкг общей РНК подвергают обратной транскрипции с использованием набора Ηί§1ι Сарасйу сЭХА АгсЫуе (Аррйей ВюууЧепъ. РоЧег С|1у. СА). Чтобы измерить уровень транскриптов ΝίΜΡΡ3 в образцах. проводят количественную 2-стадийную ПЦР с обратной транскриптазой в соответствии с методом. основанным на применении зонда Τ;·κ|ΐη;·ιη ΜΟΒ. Смесь для проведения обратной транскрипции содержит 4 мкМ смеси άΝΤΡ. 1х рассеянные праймеры. 1х буфер для обратной транскрипции. 10 г кДНК. 50 ед. обратной транскриптазы ΜπίΕΐδοΓΛο (Аррйей ВюзуЧетз). 2 ед. ингибитора РНКазы 8ирега5е-1п (АтЬюп) и не содержащую нуклеазу воду. Смесь для ПЦР содержит 1х универсальную основную смесь для ПЦР Τа^таη (Аррйей ВюууЧепъ. РоЧег С|1у. СА). 400 нМ прямой праймер. 400 нМ обратный праймер. 250 нМ зонд Τ;·κ|ΐη;·ιη ΜΟΒ. 2 нг кДНК. и не содержащую нуклеазу воду. ПЦР с обратной транскриптазой проводят с использованием системы АВ1 7500. работающей в режиме реального времени (Аррйей ВюзуЧетз. РоЧег Сл1у„ СА). и следующие условия амплификации: 50°С в течение 2 мин; 95°С в течение 10 мин; 40 циклов при 95°С в течение 15 сек.; и 60°С в течение 1 мин.

Пример 4. Сайленсинг экспрессии полинуклеотида ΝίΜΡΡ3 в растениях табака.

Первая частичная последовательность. кодирующая предполагаемую транскрипцию ΝίΜΡΡ3. обнаружена с использованием аннотаций ШЬяссо Оепоте йийайуе (ΤΟΙ). На основе данной конкретной последовательности получают праймеры. обеспечивающие сайленсинг экспрессии полинуклеотида ΝίΜΡΡ3 в растениях табака посредством механизма РНКи. Соответствующую последовательность РНКи ΝίΜΡΡ3 амплифицируют методом ПЦР с обратной транскриптазой. используя в качестве матрицы кДНК. и затем вставляют ее в вектор Оа1е\уау рВ7О\У1\УО2(11) при посредстве исходного вектора. в точности следуя инструкциям производителя Цпуйгодеп). Указанный вектор содержит промотор (промотор вируса мозаики цветной капусты СаΜV 358). обеспечивающий конститутивную экспрессию трансгена во всех тканях растения. и ген Ьаг для селекции по устойчивости к гербициду с использованием ВаЧа на планшетах с агаром (30 мг/мл). Затем конструкцию вставляют в геном табака Берлей ΚΥ14. используя АдгоЬаЧегшт ЩтеГаШещ и классическую процедуру листового диска. Каллюсы регенерируют с получением отдельных линий. которые подвергают селекции по ВаЧа. Затем идентифицируют линии с сайленсингом РНКи. используя метод ПЦР с обратной транскриптазой. и выращивают их для получения семян. Семена Т1 собирают. снова выращивают на ВаЧа-содержащих агарных планшетах для проведения селекции. после чего устойчивые растения выращивают на плавающих лотках и затем культивируют на поле.

Примерно 500 мг растения взвешивают и обрабатывают 10 мл концентрированной ΗΝΟ₃. используя в качестве реакционной системы систему расщепления 5 с ускорением под действием микроволнового облучения (СЕМ согрогайоп. Μаίйе№8. ΝΟ). Концентрации тяжелых металлов определяют методом массспектрофотометрии с индуктивно сопряженной плазмой ('ΧΡ-Μ8. АдйеШ 7500А; АдПеШ Τесйηо1од^е8. Ρа1о А11о. СА). В качестве нетрансгенного контрольного табака в сравнимых условиях получают образец. состоящий из листьев табака Вирджиния. СТА-УГЬ-2 сертифицированных в Польше.

Пример 5. Идентификация геномной последовательности ДНК ΝίΜΡΡ4.

Геномную последовательность ДНК ΝίΜΡΡ4 идентифицируют путем секвенирования ВАСсодержащей части генома. которая включает в себя ДНК ΝίΜΡΡ4. Последовательность приведена на фиг. 1.

Пример 6. Трансформация разновидностей табака векторами экспрессии. содержащими РНКи ΝίΜΡΡ4.

Семена табака стерилизуют и проращивают в чашке Петри. содержащей основную среду Μ8. дополненную 5 мл/л смеси растительных консервантов (РРМ). Проростки. полученные примерно через 7- 43 030377 дней после прорастания семян, используют для трансформации разными векторами экспрессии, содержащими РНКи №МКР4. Отдельную колонию АдгоЪас1егшт 1итеГас1епк ЬВА4404 вносят в жидкую среду ЬВ, содержащую 50 мг/л канамицина (моносульфата канамицина), и инкубируют в течение 48 ч при 28°С и возвратно-поступательном встряхивании (150 циклов/мин). Культивированные клетки собирают центрифугированием (6000хд, 10 мин) и суспендируют до получения конечной плотности 0,4-0,7 0Ό₆₀₀ в 20 мл жидкой среды М8, содержащей 20 г/л сахарозы. Эксплантаты рассады возрастом 7-10 дней погружают в суспензию бактерий на 5 мин и затем промокают стерильной фильтровальной бумагой. Пятьдесят эксплантатов помещают в аликвоты среды для агара КЕО объемом 40 мл (основная среда М8, содержащая 0,1 мг/л 1-нафталинуксусной кислоты ЩАА) и 1 мг/л бензиламинопурина (ВАР)) в чашках Петри размером 100x20 мм. Эксплантаты культивируют совместно с АдгоЪас1егшт при 25°С. После совместного культивирования в течение 3 дней эксплантаты промывают и переносят в среду КСРК (среда КЕО, содержащая 100 мг/л канамицина, 500 мг/л карбенициллина и 5 мл РРМ) для селекции трансформантов. Эксплантаты субкультивируют каждые 2 недели. После выращивания в селективных условиях в течение 8-12 недель выжившие растения, представляющие собой трансформанты, содержащие интегрированные в их геномы экспрессионные конструкции РНКи №МКР4, переносят в среду для образования корневой системы (основная среда М8, содержащая 100 мг/л канамицина). Пустившие корни растения переносят в горшки для дальнейшего выращивания.

Пример 7. Экспрессия полинуклеотида №МКР4 в растениях табака.

Чтобы определить экспрессию полинуклеотида №МКР4, общую клеточную РНК выделяют из разных частей растений. Общую РНК выделяют, используя реагент ТЫ® (§1дта-А1кпск, δΐ. Ьошк, МО). Чтобы удалить примеси ДНК, очищенную РНК обрабатывают не содержащей РНКазы ДНКазой (ТИКВ0 ОНЛ-Ггее. АтЪюи, Аикйп ТХ). Чтобы синтезировать первую цепь кДНК, примерно 10 мкг общей РНК подвергают обратной транскрипции с использованием набора Ηί§1ι Сараску сЭХА АгсЫуе (Арркек Вюкуйетк, Рок1ег Ску, СА). Чтобы измерить уровень транскриптов №МКР4 в образцах, проводят количественную 2-стадийную ПЦР с обратной транскриптазой в соответствии с методом, основанным на применении зонда Тацтап МОВ. Смесь для проведения обратной транскрипции содержит 4 мкМ смеси кЫТР, 1х рассеянные праймеры, 1х буфер для обратной транскрипции, 10 г кДНК, 50 ед. обратной транскриптазы МиШЗспЪе (АррИек Вюкуйетк), 2 ед. ингибитора РНКазы ЗирегакеЧп (АтЪюи) и не содержащую нуклеазу воду. Смесь для ПЦР содержит 1х универсальную основную смесь для ПЦР Тацтап (АррИек Вюкук!етк, Рок1ег Ску, СА), 400 нМ прямой праймер, 400 нМ обратный праймер, 250 нМ зонд Тасрпап МОВ, 2 нг кДНК, и не содержащую нуклеазу воду. ПЦР с обратной транскриптазой проводят с использованием системы ЛВI 7500, работающей в режиме реального времени (АррИек Вюкук!етк, Рок1ег Ску, СА), и следующие условия амплификации: 50°С в течение 2 мин; 95°С в течение 10 мин; 40 циклов при 95°С в течение 15 с; и 60°С в течение 1 мин.

Метод ПЦР с обратной транскриптазой с использованием кДНК из лепестков, тычинок, пестиков, чашелистиков, коробочек, стеблей, листьев и корней показывает, что полинуклеотид №МКР4 экспрессируется в тканях табака.

Если растения табака культивируют в гидропонном растворе, экспрессия полинуклеотида №МКР4 подвергается небольшой повышающей регуляции под действием кадмия как в корнях, так и в листьях проростков N. ТаЪасит (Т№0, см. фиг. 2). Однако хотя обнаружено, что полинуклеотид №МКР4 также индуцируется в листьях N. гикйса, для корней N. гикйса получены данные, противоположные данным, полученным для N. 1аЪасит (понижающая регуляция), это позволяет предположить, что полинуклеотид №МКР4 может играть роль в накоплении кадмия в корнях и в высокой толерантности к кадмию N. гикйса.

Пример 8. Сайленсинг экспрессии полинуклеотида №МКР4 в растениях табака.

Первая частичная последовательность (СН0_8Ь022хЪ24Г1.аЪ1), кодирующая предполагаемую транскрипцию №МКР4, обнаружена с использованием аннотаций ТоЪассо Оеиоте !п111а11уе (ТОЦ. На основе данной конкретной последовательности получают праймеры, обеспечивающие сайленсинг экспрессии полинуклеотида №МКР4 в растениях табака посредством механизма РНКи (фиг. 1). Соответствующую последовательность РНКи №МКР4 амплифицируют методом ПЦР с обратной транскриптазой, используя в качестве матрицы кДНК, и затем вставляют ее в вектор Оа1е\уау рВТОХУПУОЭО!) с помощью исходного вектора, в точности следуя инструкциям производителя Дпукгодеп). Указанный вектор содержит промотор (промотор вируса мозаики цветной капусты СаМУ 35 δ), обеспечивающий конститутивную экспрессию трансгена во всех тканях растения, и ген Ъаг для селекции по устойчивости к гербициду с использованием Вак1а на планшетах с агаром (30 мг/мл). Затем конструкцию вставляют в геном табака Берлей ΚΥ14, используя АдгоЪаЫейит ЩтеГакОепк и классическую процедуру листового диска. Каллюсы регенерируют с получением отдельных линий, которые подвергают селекции по Вак1а. Затем идентифицируют линии с сайленсингом РНКи, используя метод ПЦР с обратной транскриптазой, и выращивают их для получения семян. Фиг. 3 демонстрирует, что сайленсинг №МКР4 является эффективным в трансгенных линиях, включающих в себя линии 1 и 2. Семена Т1 собирают и снова выращивают на Вак!а-содержащих агарных планшетах для проведения селекции, после чего устойчивые растения вы- 44 030377 ращивают на плавающих лотках и затем культивируют на поле.

Примерно 500 мг растения взвешивают и обрабатывают 10 мл концентрированной ΗΝΟ₃, используя в качестве реакционной системы систему расщепления 5 с ускорением под действием микроволнового облучения (СЕМ согрога!юп, Ма!Ее^з, ΝΟ). Концентрации тяжелых металлов определяют методом массспектрофотометрии с индуктивно сопряженной плазмой (ΙΟΡ-Μ8, АдИеп! 7500А; АдИеп! ТесЬпо1од1ез, Ραίο А1!о, СА). В качестве нетрансгенного контрольного табака в сравнимых условиях получают образец, состоящий из листьев табака Вирджиния, СТА-УТЬ-2 сертифицированных в Польше.

Фиг. 4 демонстрирует уменьшение содержания кадмия в листьях примерно на 20% в двух тестируемых линиях, содержащих РНКи ΝίΜΚΡ4 (линии 1 и 2), после двух последовательных полевых экспериментов в течение двух последовательных лет. В каждом случае один эксперимент состоит из четырех независимых повторов 4 собранных растений (растение дикого типа, растения линий 1 и 2 и векторсодержащее контрольное растение на второй год полевого эксперимента), рандомизированных в блоках. Кроме того, к блокам добавляют контрольные образцы, чтобы контролировать территориальные тенденции. Анализы линий, содержащих РНКи ΝίΜΚΡ4, демонстрируют сильное статистически значимое уменьшение среднего уровня кадмия.

Пример 9. Анализ высоты и массы растений, полученных из растений табака с сайленсингом экспрессии полинуклеотида ΝίΜΚΡ4.

Высота и масса линий с сайленсингом ΝίΜΚΡ4 немного изменяется по сравнению с контрольными растениями. Однако отсутствуют значительные различия в сухих собранных листьях растений, содержащих РНКи ΝίΜΚΡ4, и растений дикого типа или вектор-содержащих контрольных растений, свидетельствуя о том, что деградация транскриптов ΝίΜΚΡ4 статистически значимого влияния на сухую биомассу. Полученные результаты подтверждают в другом полевом эксперименте, демонстрирующем, что сверхэкспрессия АίΜΚΡ4 (гомологичного полинуклеотиду ΝίΜΚΡ4) в том же табачном фоне (ΚΥ14) приводит к увеличению накопления кадмия в листьях на 10-30% (в зависимости от трансгенных линий). Очевидно, что деградация мРНК, кодирующей белок ΝίΜΚΡ4, значительно снижает уровень кадмия в листьях табака.

Пример 10. Идентификация ЕМ8-индуцированных мутантов по ΝίΜΚΡ4.

Библиотеку ДНК получают с использованием растений №собапа 1аЬасиш, подвергавшихся воздействию этилметансульфоната (ЕМ8) с последующим скринингом на мутанты по экзону 1 и экзону 2 полинуклеотида ΝίΜΚΡ4 методом секвенирования соответствующей части гена ΝίΜΚΡ4 отдельных растений.

Для секвенирования экзона 1 используют

ЖМКР4Ехоп1ЕИ (5'-САТСТССТТАССААССАТАСТАСС-3') и

ΝΕΜΚΡ4Εχοη1 КЕУ (5-ССТССААССТСТССТТТТСТАА-З'), а для секвенирования экзона 2 используют

ΝΕΜΚΡ4Εχοη2ЕЙ (5'-СТССААТСТСССАААТАТАСТСАС-3') и

ΝΕΜΚΡ4Εχοη2ΚΕν (5'-ААААТСАСАТАССАССАТССАСТА-3').

Обзор всех мутаций, обнаруженных в экзоне 1 и в экзоне 2 полинуклеотида ΝίΜΚΡ4, приведен в табл. 1. Указаны исходный кодон (кодон оп) и мутантный кодон (кодон ти!), а также исходная аминокислота (А8 оп) и замещающая ее аминокислота (А8 ти!), или стоп-кодон.

Пример 11. Схема исследования для выбора участков-мишеней нуклеазы цинковые пальцы.

В данном примере показано, как проводить исследование гена Ν!ΜΚΡ4 путем анализа встречаемости уникальных участков-мишеней в заданной генной последовательности по сравнению с конкретной геномной базой данных с целью разработки средств для модификации экспрессии гена. Участкимишени, идентифицированные с помощью способов настоящего изобретения, включают в себя описанные ниже мотивы последовательностей, причем применение всех указанных участков или мотивов для модификации соответствующей генной последовательности растения, такого как табак, входит в объем изобретения.

Алгоритм поиска.

Разработана компьютерная программа, позволяющая проводить скрининг введенной запрашиваемой (целевой) нуклеотидной последовательности по встречаемости двух мотивов фиксированной длины подпоследовательности ДНК, разделенных спейсером определенного размера, с использованием подстрочной матрицы в базе данных ДНК, такой как, например, последовательность генома табака, собранная в примере 1. Для конструирования подстрочной матрицы и поиска используют открытый источник НЬФузиГзог! ИЬгагу-2.0.0 (Е!!р://со0е.доод1е.еот/р/11ЬФу5и!зог!/), который трансформирует любую введенную последовательность по методу Бурроу-Виллера. Программа сканирует полноразмерную введенную (целевую) нуклеотидную последовательность и возвращает все сочетания подпоследовательностей, встречающиеся менее определенного числа раз, в выбранную базу данных ДНК.

Выбор целевого участка запрашиваемой последователвности для мутагенеза, опосредованного нуклеазой цинковые палвцы.

ДНК-связывающий домен цинковых пальцев распознает нуклеотидную последовательность из трех пар оснований. Нуклеаза цинковые пальцы включает в себя белок цинковые пальцы, содержащий один,

- 45 030377 два, три, четыре, пять, шесть или более ДНК-связывающих доменов цинковых пальцев, и неспецифичную нуклеазу, такую как фермент рестрикции 118. Нуклеазу цинковые пальцы можно использовать для введения двухцепочечного разрыва в целевую последовательность. Для введения двухцепочечного разрыва требуется пара нуклеаз цинковые пальцы, одна из которых связывается с плюс-(верхней) цепью целевой последовательности, а вторая с минус-(нижней) цепью той же целевой последовательности, разделенными 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или более нуклеотидами. Путем применения множественного числа 3 для каждого из двух мотивов подпоследовательности ДНК, программу можно использовать для идентификации двух участков-мишеней белка цинковые пальцы, разделенных спейсером заданной длины.

Входные данные для программы.

1. Целевая запрашиваемая последовательность ДНК.

2. База данных ДНК, по которой предполагается проводить поиск.

3. Фиксированный размер первого мотива последовательности ДНК.

4. Фиксированный размер спейсера.

5. Фиксированный размер второго мотива последовательности ДНК.

6. Пороговое число встречаемости сочетания входных данных 3 и 5, разделенных входными данными 4, в выбранной базе данных ДНК, составляющей входные данные 2.

Выходные данные программы.

Список нуклеотидных последовательностей, где для каждой последовательности указано значение встречаемости последовательности в базе данных ДНК при максимальном значении пороговых входных данных 6.

Пример 12. Профилирование экспрессии транскриптов №ΜΡΡ3 и №ΜΡΡ4 в табаке.

Разработка и анализ ЕхопАггау табака. Используя клоны ВАС, полученные по способу примера 1, идентифицируют 272342 экзона путем объединения и сравнения библиотеки маркеров экспрессируемых последовательностей табака и метил- фильтрованных последовательностей, полученных в результате секвенирования ВАС. Для каждого из указанных экзонов конструируют четыре олигонуклеотида размером 25 мер, которые используют для конструирования ЕхопАггау табака. ЕхопАггау конструируют в АГГутс1пх (8ап1а С1ага, И8А), используя стандартные методы.

Экспрессия №ΜΡΡ3 и №ΜΡΡ4 в табаке. РНК выделяют из видов №соПаиа, выращенных на СП+ (загрязненных СП) и СП-(дефицитных по СП) почвах, и анализируют с помощью стандартных методов гибридизации и аналитических средств. Профилирование экспрессии проводят, чтобы идентифицировать набор генов, связанный с накоплением СП, и определить влияние почвенного СП на изменение содержания транскриптов №ΜΡΡ3 и №ΜΡΡ4. Используемые зонды №ΜΡΡ3 и №ΜΡΡ4 расположены в первом и последнем экзонах, а также в участке 3'υΤΡ. Результаты, приведенные в табл. 2, показывают, что листья растений N. 1аЪасит, выращенных в загрязненной СП почве, накапливают больше СП, чем листья растений N. КикПса, выращенных в такой же почве. Корни растений N. 1аЪасит накапливают меньше СП, чем корни растений N. гикПса. Интересно, что ни №ΜΡΡ3, ни №ΜΡΡ4 не регулируются СП, однако их экспрессия различается в двух видах №соПапа, позволяя предположить, что оба гена поразному управляют поглощением, перемещением и накоплением СП в видах №соПаиа (результаты приведены в виде 1од 2, соответствующего среднему значению от трех биологичесских повторов). В качестве контроля показана экспрессия трех внутренних генов (υΒΡ12, экзонов 1 и 2), α-тубулина и рибосомального белка 816.

Любая публикация, цитированная или описанная здесь, предлагает соответствующую информацию, раскрытую до даты подачи настоящей заявки. Приведенные здесь высказывания не следует понимать, как допущение, что авторы изобретения управомочены относить к более ранней дате такие описания. Все публикации, упомянутые в приведенном выше описании, включены в данный документ в качестве ссылки. Специалисты в данной области могут осуществить разные модификации и вариации, не отступая от объема и сущности изобретения. Хотя изобретение описано со ссылкой на конкретные предпочтительные воплощения, следует понимать, что заявляемое изобретение не должно ограничиваться такими конкретными воплощениями ненадлежащим образом. Действительно, предполагается, что разные модификации описанных вариантов осуществления изобретения, очевидные для специалистов в области клеточной биологии, молекулярной биологии и биологии растений или в родственных областях, входят в объем приведенной ниже формулы изобретения.

- 46 030377

Таблица 1

	Ампликон	Последовательность прямого праймера	Последовательность обратного праймера	Кодон ОГ1	А5 ОГ1	Кодон тиР	А5 тиР
Экзон 1	ΝΡΜΚΡ4-1	даадсРддааРд	аРРРРааадад	дай	азр	ааи	азп
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	аРдсРРаРР	даРсдасасР	еда	агд	ида	зРор
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	аддРРдРсаРд	РсадсРадас	идс	суз	иди	суз
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	РдсРсадсРа	асаддсРсаРд	ада	агд	ааа	1уз
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	асаддсРсаРд	РдРРддасад	дди	д1у	дай	азр
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	саддсРсаРд	РдРРддасад	дди	д1у	дай	азр
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	РдРРддаса	аРРдРаааРРаР	сад	д1п	саа	д1п
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	ссдРадаРдсР	адсадсРРРс	сад	д1п	иад	зРор
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	дсадсРдРсс	аРаРдаРдсРа	дай	азр	ааи	азп
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	дсРасадсРа	аРРссаРРРд	саи	Ыз	иаи	Руг
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	аРРссаРРРд	сРсаРдссаРР	идд	Ргр	ида	зРор
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	РдссаРРдсаа	РРРсРдРддс	дни	ла1	аии	Не
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	сРРРадссаРс	РРРаРасРРа	сии	1еи	иии	рПе
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	РРсаасРдРР	РаасасРадс	диа	ла1	аиа	Не
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	РддасРРдса	садРдаРддРа	дса	а1а	аса	РПг
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	аддсаасаааР	адаРдсРРа	дад	д1и	аад	1уз
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	РРаРааадРР	саддсаРддд	иис	рПе	иии	рПе
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	РРаРааадРР	саддсаРддда	иис	рПе	иии	суз
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	аРРдааРсРРР	сдсдадРссда	иис	рПе	иии	рПе
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	ааРсРРРссдс	адРссдадР	дад	д1и	аад	1уз
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	адРасддаРд	РРдРссаадРР	идд	Ргр	ида	зРор
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	адРРсРРдРасР	ааРадсРддР	иса	зег	ииа	1еи
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	саРРдРсРРдР	дадсасРссР	идд	Ргр	иад	зРор
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	РРдРсРРдРд	адсасРссРс	идд	Ргр	ида	зРор
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	РддадсасРс	РсРРсРадР	оси	рго	сии	1еи
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	РсРРсРадРРд	РасдсРсасРР	дси	а1а	дии	ла1
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	аРсссдсРРд	сдсаддааса	дед	а1а	асд	РПг
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	аРсссдсРРд	сдсаддааса	дид	ла1	аид	теР
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	даассдаРса	ддсРРРсссР	адд	агд	аад	1уз
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	аассдаРсад	дсРРРсссРс	адд	агд	ада	агд
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	саРдаРсРса	РРРсасаадса	сии	1еи	иии	суз
Экзон 1	ΝΡΜΗΡ4-1	аРсРсРРдаРа	аРРддасаааР	ада	агд	ааа	1уз
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	РаРРадаадсР	дааРддаРРРР	дда	д1у	ада	агд
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	РРсассдсда	аРсРсРсРРс	аса	РПг	аиа	Не
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	ааасаассааа	ададсааРдс	дад	д1у	аад	1уз
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	ссРРдаадааР	ааааРсРРсРс	иса	зег	ииа	1еи
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	адааРсааааР	РРсРсдаадаР	иси	зег	иии	рПе
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	РаРсРааддаа	аааасддада	даа	д1и	ааа	1уз
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	РсаасадРсРа	аРсРда	аса	РПг	аиа	Не
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	аРсРдаРадд	дддаРРсРааа	ддд	д1у	адд	агд
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	асРРаРааад	аадаадааад	даа	д1и	ааа	1уз
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	аасРРаРааад	аадаадааад	даа	д1и	ааа	1уз
Экзон 2	ΝΡΜΚΡ4-2	ааддаадаа	ааададааасРд	даа	д1и	ааа	1уз
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	дсРаРаРаРРа	РдаадсРРРРд	аси	РПг	аии	Не
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	дсРаРаРаРРа	РдаадсРРРРд	аси	РПг	аии	Не
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	даадсРРРРд	аРддРдддд	дда	д1у	даа	д1и
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	РРддаРддРд	ддсдРадРдсР	идд	Ргр	ида	зРор
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	РРдРддсааа	РРсРсРааРд	ади	зег	ааи	азп
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	дРРсРсРааР	дсаадрда	аид	1еи	аиа	1еи
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	дсааадРРсР	РааРддсаад	сиа	1еи	ииа	1еи
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	РаРРддсРд	саРаРдааас	дса	а1а	аса	РПг
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	саасаааРда	аРдсРРааРР	дад	д1и	даа	д1и
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	сРРсадсгдау	дРдссаРдРссР	сди	агд	иди	суз
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	РдРссРРсааР	сРРсРсРдРР	сси	рго	иси	зег
Экзон 2	ΝΡΜΗΡ4-2	ддсаРдддаа	аасаРРРРаа	даа	д1и	ааа	1уз

- 47 030377

Таблица 2

	Корень Л/.	гизйса	Корень	ΤΝ90	Лист /V.	гизНса	Лист'	ΤΝ90
	^изкий уровень СР	Высокий уровеньСР	Низкий уровень Сй Высокий уровеньСР	^изкий уровень СР	Высокий уровекьСй	Цизкий уровень СР	Высокий уровеньСР|
ΝΙΜΒΡ3_ экзон 1	5.9	4.9	7.5	7.7	5.6	5.8	7.5	7.9
ΝΙΜΡΡ3_ экзон 2	1.6	1.7	7.0	7.1	2.2	2.0	5.5	6.5
ΝίΜΡΡ3_ ЭКзон 2	6.1	5.6	9.6	9.6	4.1	4,5	9.0	9.6
ΝΙΜΡΡ3 экзон 8 и 10	5.3	5.4	7.5	7.4	5.3	5.1	6.5	7.1
ΝΙΜΡΡ4 экзон 1	6.4	6,4	5.1	4.5	7.6	8.2	7.6	7.3
Ν1ΜΡΡ4 3ΊΙΤΚ	6.2	6.4	3.9	3.8	7.9	7.9	5.9	6.5
Ν1ΜΡΡ4 экзон 1	7.5	7.7	5.9	5.4	9.3	9.1	9.1	9.4
Ν1ΜΡΡ4 экзон 11 {последний экзон)	6.2	6.1	5.0	4.8	7.6	7.6	7,2	7.2
Экзон 1 убихитан-специфичной протеазы 12 (ΙΙΒΡ12)	6.7	6.6	6.3	5.7	6.2	5.4	5.8	6.1
Экзон 2 убихитан-специфичной протеазы 12 (иВР12)	6.5	6.9	6.0	6.0	6.3	6.6	5.9	5.7
Бета-тубулин	5.8	5.6	5,7	6.0	5,4	5,5	5.6	5.6
Рибосомальный белок 316	9.9	10.1	9.9	10.5	11.7	11.7	11.3	11.3

Последовательности (затенение показывает расположение экзонов) 8ЕР ГО N0: 1 (последовательность ДНК №МКР4, содержащая 5'- и 3'-иТК) а’ЬддаСаЕдаддаасадСаСдЕсЕСсадааСсССдС’ЬЕадсаЕсасСССсЕСдЕСсСдс сСсса саЕСС сааЕсдСсададдаССсадсадССдС’ЬаааСддС’ЬаадаСЕсаЕСССссС сСсЪссаЕдСссасаааддасЬсЕЕсЕаСсЪ'ЬссаЪСдаЕдЪдсСдсСЕЪ'Ьдс'ЬЪасЪ'ЬЕ са-ЬЕдЕаТЕЕдсадЕасаааадЫздЕасЕсааадТЕдаддЕссаа-ЬдадсасЕсЕасЫзс

СадсаССдаСаадссСсСааС'ЬдсасасаасаддасС'ЬсСдС'ЬадаассааСс'ЬССддСС

СаадсСдСсСсСдаС'ЬССдСсадсСа'ЬСС'ЬадссССа'ЬсССсСаСадССС'ЬаСдсаСС'ЬС ддТ’Ьа’Ь’Ьд’ЬдддаааТ’Ьсссад’Ьсдсс’Ь’Ьддааад’Ьса’ЬадаТддасЕд’Ьа’Ь’ЬддЕ’ЬдТ’Ь

Ьсаддсда’Ь’ЬасасаТд’Ызд’ЬааТсас’ЬаТас’Ьаа’Ьад’ЫзсаТдадаааада’Ыз’Ьсасдс

ЬаЫАссса’ЬссасЕд’Ьссс’ЬдсдсдЕд’ЫАЕдда’Ь’Ьдсааас’Ь’ЫздЕадЕ’ЬаЕдад’ЫА д’ЬСсСССдд’ЬСд’ЬдддаСсасааддсССдСдСсасС’Ьааддааа’ЬСдаСссСааСССаад ааТдда’Ьда’Ьа’ЬаадТ’Ьса’Ь’ЬадТ’Ь’Ьса’ЬТ’Ьсс’Ьа’Ь’ЬТсТд’Ызд’ЬТсЕс’ЫзсаТ’Ьд’Ь’Ьдс саЕЕаааддС'ЬсдассддадС'ЬдсЕдЕаа'ЬЕадСдаС'ЬсЕдааЕс'ЬсасС'ЬаадЕдаСда аассааСддС-ЬаСдаасСссСддаСаааСссадСдСдадЕддсСС-ЬдсССсадсССсСсС ааЕаСсдааадссЬСЕСддаС'ЬСдда'ЬдаасссС'ЬСасСдсаааааддССасаадСсасс

ЬсТсаада’Ь’Ьда’Ьдаад’ЫзссТ’ЬсасТ’Ь’Ьссссас’ЬдсаТададсададааааТдЕс’Ьса асЕ'ЬЕ'ЬсдааадаааЕ'ЬддссЕааасс'Ьдаадааа'ЬаЕсааадсаЕсс'ЬдЕссдаасаас а'Ыздс'Ьдсд'ЫздсЕ'Ыз'ЬддааддаадЕ'ЬаЕ'Ыз'Ь'Ьас'Ьдсса'Ызс'ЫздсадЕааЕ'Ьаддд'Ь аСдСдССаСдЕа'ЬдСадддссаасасЕсаЕасааадаЕСЕдСЕдаЕСасасадсаддааа даддасаТс’Ьсс’ЬТаТдаадда’Ьас’ЬассТ’Ьа’ЬаддаасТс’Ьсс’ЬааЕадссаааЕ’Ь’Ьд’Ь ддаад-Ь-Ьс-ЬаассЕсЕсаЕсад-ЬЕсаас-Ыз-ЬаасЕсссаааадс-ЬЕддсаЕдсЕ-Ьа-Ь-Ьсд адсдасасЕСсЪсасЕЕсЕЪСдЪаЕаадааддддЕЪааддЕЪдЪсаЪдсЪсадсЪадаса ддсСсаСддСдССддасадаС'ЬдТаааССаСаСддссдСсдаТдс'Ьсадсадс'ЬдСссда

ЬаТда’Ьдс’Ьасадс’ЬасаТ’ЬссаТ’Ь’ЬддсТса’ЬдссаТ’Ьдсаад’ЬТ’Ьс’ЬдТддс’ЬЕ’Ьадд саЕсс'ЫАа'Ьас'ЬЕасс'ЬсддЕдс'Ь'Ьсаас'Ьд'Ь'Ьд'Ьаасдс'ЬадсЕддасЕ'Ьдсадсад'Ь даЕдд'ЬаЕ'Ь'Ьд'Ьдд'Ьд'Ь'Ызддаас'Ьаааадааасаасадд'Ь'Ызсаа'ЬЕ'ЬаасаЕса'Ьдаа даа’Ьсд’Ьда’Ызс’Ьадаа’Ьдааадсдасааа’Ьдада’Ьдс’ЫзааТ’ЬаТаЕдсдсдТ’Ьа’Ьааа д’ЫзссаддсаЕдддаадаасаЕ’ЫАаасаааадаа’Ь’ЬдааЕсс’Ь’Ьссдсдаа’ЬссдадЕа

ЕддаСддЕЕдЕссаадЕСсЕСдЕасСсаа'ЬсдсСдддааЕаСсаС'ЬдСсС'ЬдСддадсас

ЕссЪсЕЪсЕадЪддсЕасасСсасЕЪ'ЬЪддаадЪдсааЪсЕЪдЪСдддааЕсссдсЕЪдд

СдсадддасадСдТСсасТдсаасаСсСс'ЬсТСсаадаСдССдсаддаассда'Ьсадддс

СС'ЬсссСсаа'ЬссаСдаСсСсасЕССсасаадсааСдаСаСсЕсС'ЬдаСадаС'Ьддасаа аСаСаСдаСдадСааддадССадЕддаСааадсСдСддааадасСадааддССдСддддд

Ьасаа'Ыздс'Ьа'Ьдсадд'Ьдааада'Ьддадс'Ыз'Ь'ЫздсЕдддаЕдаЕдаааасад'Ьааада адааЕ’Ьдааааа’Ьд’Ьааас’Ь’ЫздадаТ’Ьадааааддададс’ЫздсадсадТадТддддас адССддддсддддаадСсССсссСссССдсаСсСдСасССддСдадаСдсасаадССдСс дддСсаддСаСддсСсСсаСссССсСдС’ЬСдСССда’ЬСааСасааасСССдс’ЬдссааСС асс’ЬЕ’Ь’Ьдсссс’ЬТдТ’Ьдс’ЬассТс’ЬТ’Ь’Ьс’Ьд’Ьдд’ЬаТаааааа’ЬТаа’ЬдТаддсЕааТд

ЕдТададТддаддТаТЕа-ЬаЕдсадаасааЕ-ЬдсааЕсаадсааЫзассЕдЕдадаЕасЕ аС'ЬССдС'ЬССсаСаС'ЬадСддасСддСасаС'ЬсСсаС'ЬддСдСаСсдСССдаСсСссасс ааадсададдЕЕЕ-ЬасЕддссдасададЕсааасЕас-ЬдЕдсЕЕсасЕссЕЕЕ-ЬасЕсса а’ЬссЕ’Ьад’Ьад’ЬсТ’ЫздсТ’ЬсТаа’ЬдаасТ’ЬсаадсдТдТааТадааасассаТ’Ьа’ЬаТ’Ь а’ЬТадс’Ьда’ЬТадТ’Ьас’Ыз’Ьасаа’Ь’ЬссададсаТа’ЬТ’ЬасаТ’Ь’ЬТсЕдсТ’Ьдд’ЬЕд’Ьс’Ь а’Ызас’ЬсТдда’Ьаасад’Ьсс’Ьааа’Ьдсаадсаааа’Ьсаас’ЬдТд’Ыз’ЬЕсад’ЬсТ’Ьдадс’Ь дассаа’ЫзадТ’Ьса’Ьда’Ьд’Ьсс’Ьсадс’Ь’Ьд’ЬссаадсТдд’Ьдсс’ЬсассддааТ’Ьа’ЬдТд ддассЕСсдСасЫз ааСсаасТадЕСсассЫз сЫз сЫз аааааСаТСдааТдаΤССдаТС ддТ’Ьаа’Ьад’ЫзссТ’ЬаааТд’ЬадТааТ’ЬаТ’ЫздсТаас’ЫзасТ’Ь’Ьассаасссс’ЬЕд’Ьсс аасадд’Ьсасаа’Ыз’Ьд’Ьдд’Ь’Ьсаас’ЬдссТаТд’Ыздсасаааса’ЬсдЕдда’ЫзсадааТд дсасдаСасаадааааСаЕссЕдЕССдд’ЬаСдссааСдаасададасадаЕасааддаад

ЬдаСссддд’ЫАдсСдсССддадааддасССддаааСааСддад’ЫАддадассадасСд аааСаддадаасдЕддсаЕсаассСсад’ЬддЕддЕсадаадсадсдааСссадсССдсаа дадсСдСЕСассаддасСдСдаСаССЕаСсСЕсСадаЕдаСдЕаСЕсадСдсадССдаЕд с’ЬсасасТддс’ЬсТдаааТс’ЬТсаадд’Ь’ЬадаадТссасаа’Ьд’Ьса’Ьд’ЬдТсаТ’Ьдаада

ЕЕ-ЬааЕЪ-ЬаадаЕадааа-ЬЪасаЕЕдЕЪЕсаЕЕсЕдсаааЕЪаЪддассЪаЪсададааа аа-ЬсаЕддаЕ-ЬЪЕдааЕддсЕасЕЕЪссссадЕдаадасасаЕаЕсаЕЕЪссЕдддадда

- 48 030377

35а+5+5заз5+5д°за5с+з+++зс+ссззззз5+а+зз+с+зззз5ас++++з++зз5 +++55^за55°'Ь'Ьзз+ссз+сз+++5++а+0+5++5^ ^ο1ξ3ο++5+ο+++3++3333++ο++ 0++35+0033+030+++053+5335++5³0+35+с++35+сзсс+5аз+зс+++ззз+с+ ++500++55^9+ 0+0+3+3++++035003+0+033++0053350+СЗ+3+++5++++С+С +++5+33+5+003+0+53335+++03+50++++++5035533+5+5^93599933++0++ 33353+3333003++++50++5+озозозссзз5++дас++с++5сз+зз+5++дасс+5 з+сс++5+аз5+++сз5а5+д++++а+сззсссс+++5дазссзз5+д+сзз5а5+а5+д +++с++5д++д++азз+5а++сзсз+5+д+д++дд+++с+з+ззззсс+5азс+++з+5+ +++3+03535+5++++50+++0++53355+03+505353+5553+53+05+5033+с+55 0333+3+33+5353+3++353350+5533+553++++3335350+35+350+50303+53 5300+0+++35330++5++5305+553330330033353535033+500+000++53353 З+СЗЗЗЗ+С++С+С5ЗЗ5З++З+С+ЗЗ55ЗЗ5ЗЗЗЗС55З5З+5З+ЗЗЗ+С+СЗЗСЗ5+с +зсз+С+53+35555553++с+ззз0++3+333553353353335353330+5533335+ 035+00+05+5+5+303350+3+3+3++30+53350++++553+55+5555+5+35+50+ 35++3+0++5++++05++0++5+5503335++0+0+33+550335+53++3++550+550 3+3+53330++0350553+05+5003+5+00++033+00++0+0+5+++3++5553+3+3 055+5++3++5035++5+++0++05++50+53+35+53+03553+5+3++++5+53030+ +3+55550+033530+5000333+3+++++05530353++0+++303503+30+503+50 +00+3+5+03++++++53030330300++005533533++0+535+0555+333+++0+5 35530335+++++00++++503+5+333++03330+++50+50++353+53++333+33+ 533333+3+003++503+5++++33+5+5+3+5303+5++3533++++533+35335++0 3++030+53+5++5353+5++++5++++++++0+5035503+0+33+53+0353003303 ++53+5+0++00+0005++++++3+533+0+030+++55003+5+++3+03030+50+05 О'сз.Асз.Асз.Асз.Асз.сз.Ао'ссз.з.Аз.ААсААо'О'ссАз.ссо'Е.з.с'Ьз.с'Ь'Ь'Ь'Ьо'з.'Ь'Ьсс'Ьс'Ьс^с} 5++55С++33+3+с+55+300555+3+535030+5+++3+33035005+00++++++0++ ++0++5+0+5330+0333+++533+00+++5+++35355033++35+0+50+0+53503+ +++550+53035++3++3+5+3+3++3333550330++++++3++05++0+5+00350+3 3330+++++30++3333+5+55++330+503+3+++0+5+5+0+00+3++++++53++3+ ++50330+0+53+033+0+353+++555533550++5++5++35++53+53с+353+3с+ 3350+0303+0+303++55++50335+3533++++0335++5+03++030++3+3++5++ +5330+355353++3503++0++0+50335535000+533+50++533335++3330353 3335333335++035550353+35303+33+5+5++3335+33++033++5535030353 +3+3+5303+5+5++3+++555350+3053333353+335530+3++3+5+3530+3033 ++5333+330355+33++03+++0+55+++3035553+3++3+0++5033сз+с+05+53 3++530+0550++530+033++30333350300+5++3++03+03+++0+0+5333503+ 0+0355+5++3+530+3+305++50+++3553350355353+5++++5+33053533+5+ 33300535+533++0033+0+50533+553+++003033033+553+0033+533+55++ 5550+++0530+5533++53+5553350++30++0+++5+5+++0+5033+5++03+53+ +5+0++300+3503503+03+033500355+3+3303005+0033+50+03+++3+5553 3++3+333++0+35+3+++53+33+00++0+5+30+++353+0+300+50+0+3с+5333 33+5333+535+3+5355333+3533+3+005++53503+++3+5+0+++0+3++33333 +++503++0+3+0++0++5+++0335+03333+0++5330330+3+3+0+353533++++ 00++0++5+5335+33+503+3+3+303+033535335+03535++50+533+5333+35 +353+0333+++335+5++5+500+3+333533++5+3+55+5353++533+3+35+55+ 03+3++3++++0+033+0++35+53++3335+3++003+303330353033503+++35+ 05+503++03++55030+303333++3+0330033535+33+3++0+++0350+++00+0 +5+3+3+5+5+5++0+3++0+55350+53353+330+33+3++0++++++3+++0+3035 3333+5++55+++5+030+3+03+3+550++5+0+0++33+35+5+00+3++0+55+003 +0+++5+535++50+++5+553333+3333+55+++0+5+0533353++3333035++0+ 035333+3003+03533503535+553533353+553++++0+000300++0335++550 0335005+55533+5++5350++5333305+50355+33+33++0+330+33++с+5+55 ++50+3+++50+3503+++503033335533330+3+333335++03+35+335533535 3555+350+5+3++33033500+30353++0+++33+++0333+3+5++305++533+0+ 0+3+3++5+++5++0+30+55+0330355++353+3+05+00533030+00+0+35+50+ +3335535++30+0+03503++3535555535353353+355+5++5++55+05+30355 555+553333+03303++33++0335++++0+++05+++55+553500+50350+55335 33+33+03++53+5305+353+3+3+003530++5550++03+53+0++353+0+050++ 05553+03++0000335350035+00+++++53355330+5+53533503303++53000 03++553033+3++0353+53+5333+++553355+33+0+330++50+53с+5333+33

- 49 030377 +с+++++дда++а+ааа++с+д+аададсааса+ас+а+++д++ад+дадаадаааадса +а+ас+ссад+д++++д++а+с+сссадаа+д+с+с+ааса+дааа+сд+д+аса++дса дадсс+сдаасдс+дссаас+сааада+д+дд+д+с+++аааасссдааааас++да++с ЗСС355+333++++СС+СС+С+305+сз+СС++5+55++0+++505533++3+5033ссз ЗС+++++3+5+5+++СЗзз+з+з+з+зс+53+33с+533+3С+5+03++55+333+03+3 5++5++53+33055353+330+5535+5+05530353550350++0+++50++5553353 5+53+50+333305+3503530++0+3+++3+553+53550330+500+0+5++53++03 03530353+5035+53++0353333+сз+0050535530+++505500+5+30+3+33+с 3503++5000303533+30033035+03+5530+5+53+3535++0++5++3+353+503 55+50+53+++0+0+00++++30+++5+300++3++++533+0+55+333+53++3+++3 +0+5+3+5+53+55+++00330033+03+35+035+300+++3+5335333++500+33+ 5++3500335+35+35+333+503+53 δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 2 (последовательность ДНК ΝίΜΚΡ4, не содержащая 5'- и 3'-ϋΤΚ) з+553+з+535533035+3+5+0++03533+0++5+++3503+030+++0++5++0+50

0+00303+++033+05+0353553++035035++5++333+55++3353++03++++00+

0+0+003+5+00303335530+0++0+3+0++003++53+5+50+50++++50++30+++ сз++5+з+++5сз5+зсзззэ5++5+зс+сзззд++5355+ссзз+535сзс+с+зс++с +35СЗ++53+аздсс+с+зз++дсзсзсзасз5дзс++с+5++35зассзз+с+++д5++ +аадс+д+с+с+да++++д+садс+а++++адсс++а+с++с+а+ад++++а+дса++++ дд++а++д+дддааа++сссад+сдсс++ддааад+са+ада+ддас+д+а++дд++д++ +саддсда++асаса+д++д+аа+сас+а+ас+аа+ад++са+дадаааада+++сасдс +а+++ссса+ссас+д+ссс+дсдсд+д++++дда++дсааас+++д+ад++а+дад+++ д++с+++дд++д+ддда+сасааддс++д+д+сас++ааддааа++да+сс+аа+++аад аа+дда+да+а+аад++са++ад+++са+++сс+а+++с+д++д++с+с++са++д++дс са++ааадд++сдассддад++дс+д+аа++ад+да++с+даа+с+сас++аад+да+да аассаа+дд++а+даас+сс+дда+ааа+ссад+д+дад+ддс+++дс++садс++с+с+ аа+а+сдааадсс++++дда+++дда+даассс+++ас+дсааааадд++асаад+сасс +с+саада++да+даад++сс++сас+++ссссас+дса+ададсададаааа+д+с+са ас++++сдааадааа++ддсс+ааасс+даадааа+а+сааадса+сс+д+ссдаасаас а++дс+дсд++дс++++ддааддаад++а+++++ас+дсса++с++дсад+аа++аддд+ а+д+д++а+д+а+д+адддссаасас+са+асааада+++д++да++асасадсаддааа даддаса+с+сс++а+даадда+ас+асс++а+аддаас+с+сс+аа+адссааа+++д+ ддаад++с+аасс+с+са+сад++саас+++аас+сссаааадс++ддса+дс++а++сд адсдасас++с+сас++с+++д+а+аадаадддд++аадд++д+са+дс+садс+адаса ддс+са+дд+д++ддасада++д+ааа++а+а+ддссд+сда+дс+садсадс+д+ссда +а+да+дс+асадс+аса++сса+++ддс+са+дсса++дсаад+++с+д+ддс+++адд са+сс+++а+ас++асс+сдд+дс++саас+д++д+аасдс+адс+ддас++дсадсад+ да+дд+а+++д+дд+д+++ддаас+аааадааасаасадд+++саа+++ааса+са+даа даа+сд+да++с+адаа+дааадсдасааа+дада+дс++аа++а+а+дсдсд++а+ааа д++ссаддса+дддаадааса++++аасаааадаа++даа+сс++ссдсдаа+ссдад+а +дда+дд++д+ссаад++с++д+ас+саа+сдс+дддаа+а+са++д+с++д+ддадсас +сс+с++с+ад+ддс+асас+сас++++ддаад+дсаа+с++д++дддаа+сссдс++дд +дсадддасад+д++сас+дсааса+с+с+с++саада+д++дсаддаассда+садддс +++ссс+саа+сса+да+с+сас+++сасаадсаа+да+а+с+с++да+ада++ддасаа а+а+а+да+дад+ааддад++ад+дда+ааадс+д+ддааадас+адаадд++д+ддддд +асаа++дс+а+дсадд+дааада+ддадс+++++дс+ддда+да+даааасад+ааада адаа++дааааа+д+ааас+++дада++адааааддададс++дсадсад+ад+ддддас ад++ддддсддддаад+с++ссс+сс++дса+с+д+ас++дд+дада+дсасаад++д+с ддд+садд+а+ддс+с+са+сс++с+д+++д+++да++аа+асааас+++дс+дссаа++ асс++++дсссс++д++дс+асс+с++++с+д+дд+а+аааааа++аа+д+аддс+аа+д +д+адад+ддадд+а++а+а+дсадаасаа++дсаа+саадсаа++асс+д+дада+ас+ а++++д++++са+а++ад+ддас+дд+аса++с+са++дд+д+а+сд+++да+с+ссасс ааадсададд++++ас+ддссдасадад+сааас+ас+д+дс++сас+сс++++ас+сса а+сс++ад+ад+с+++дс++с+аа+даас++саадсд+д+аа+адааасасса++а+а++ а++адс+да++ад++ас+++асаа++ссададса+а+++аса++++с+дс++дд++д+с+

- 50 030377 аббасбсбддабаасадбссбааабдсаадсаааабсаасбдбдббббсадбсббдадсб дассааббадббсабдабдбссбсадсббдбссаадсбддбдссбсассддааббабдбд ддассббсдбасббаабсаасбадббсассббсббсббааааабаббдаабдабббдабб ддббаабадббссббааабдбадбааббабббдсбаасббасбббассаассссббдбсс аасаддбсасаабббдбддббсаасбдссбабдббдсасааасабсдбддаббсадаабд дсасдабасаадаааабабссбдбббддбабдссаабдаасададасадабасааддаад бдабссдддбббдсбдсббддадааддасббддааабаабддадбббддадассадасбд ааабаддадаасдбддсабсаассбсадбддбддбсадаадсадсдаабссадсббдсаа дадсбдбббассаддасбдбдабабббабсббсбадабдабдбаббсадбдсадббдабд сбсасасбддсбсбдааабсббсааддббадаадбссасаабдбсабдбдбсаббдаада бббаабббаадабадаааббасаббдбббсаббсбдсаааббабддассбабсададааа аабсабддаббббдаабддсбасбббссссадбдаадасасабабсабббссбдддадда адабдбдааадбддсаадсбабббасбссааааадбабаабсбаааадасббббаббаад бббддааддсббаабссабсабббдббабсбдббдбсбасббдбсбббаббааааббсбб сббадбссаабсасбббсдабдаадббдасбадбсббадбсассбдаабасбббааабсб ббдссббддбдбсбсбабаббббсадссабсбсааббссдаадсбсабабббдббббсбс бббдбаабдбссабсбдааадбббсабдсббббббдсаддаабдбдбдаддддааббсбб ааадабаааассаббббдсббдбсасасассаадббдасббсббдсабаабдббдассбд абссббдбаадбббсададбдббббабсаассссбббддаассаадбдбсаададбадбд бббсббддббдббааабдаббсасабдбдбдббддбббсбабаааассбдаасбббабдб бббабсададбдббббдсбббсббдааддбсабдсдадабдддабдабсдбдсаабсбдд сааабабаабдадабаббадаадсбддаабддаббббааададсбадбадсбдсасабда дассбсбббадаасббдббдасдбддааасаассааадададсаабдссбсссббдаада абсаааабсббсбсдаадаббабсбааддаадаааасддадабдабааабсбсаасадбс басабсбдабаддддддаббсбааасббабаааддаадаадааададааасбддаааадб садбссбсдбдбдбасаадсбабабаббасбдаадсббббддабддбддддбдбадбдсб адббабсббдббббсдббсббдбддсааадббсбсбаабддсаадбдаббаббддсбддс абабдааасббсадсддабсдбдссабдбссббсаабссббсбсбдбббаббдддабаба сддбдббаббдсадббдбббсббсдббдсбдабадбдабсаддабдбаббббдбдасасб бабддддсбсаадасбдсссааабабббббсддасадаббсбббасадсабасбдсабдс бссбабдбсаббббббдасасаасассббссддаадааббсбдадбсдддбааабббсбд аддасаадбббббссббббдсабдбаааббсааасбббдсбдсббадабдаббааабааб дааааабабссаббдсабдббббаабдбдбабдасабдббадааббббдаабадаадббс аббсасбдабдббдадабдббббдббббббббсбдсаддсабсбаабдабсадассааса ббдабдбсббссбсссдббббббабдаабсбсасбббддссабдбббабсасасбдсбсд у Са иСа иСа иСа иСаСа су ССаа υά и иС и су у СС иаССу иаС иаС и и и су ά и иСС иС су у дббддсббаабабсбддбассдддбабдадсасбдбббабаасадссдбссббббббсбб ббсббдбсбдаасбсааабббдаабссбббдбббададдсааббадбсбдсбсбдадсаб бббддсбдасадббаббабдбабаббааааддсаасббббббаббсдббсбдбссадсба ааасбббббасббаааабдбддббаасбдсабабббсбдбдбсбссбаббббббдаббаб ббдсаасбсбдабсаабсбадабббддддааддсббдббдббадббдабдасбадабасб аадсбсасабсбасаббддббдсаадбадааббббсаадббдбсаббсасббабаббдбб бдаасбаддадаббадсаббсббсбдсааддадсссбдаабдсббдаааадббааасада ааадааааадббсадддсадабадасабаабдбдббааадбааббсааббддадсасада бабабдасабдбдббабббдддадсбасдааааадабааддасбаббабдбадасбасаа ббдааабаасаддбааббсабббсбддбббасадддабаббабсббдсаасабсбсдбда аббдасбсддсббдасбсааббасаааадсассбдббаббсабсабббсбсбдааадсаб сбсаддбдббабдасбабасдббдсбббаддаадсаддадабдббббдбаасдадаабдб ааассдадбдааббссаабсбдсдаабддабббссасаасаабддабссаабдаабддбб дддсбббсдасбддааббдабдддаадсббасббсбббдбдбббсбдсаабдббсабдаб бдбсббассбадсадсабсабсаадссаддбабаасассдбссаабдсбсабббабддда аббабаааббсбадбабббдабаабссббсбдбасбббадабсбассбдсбсбасбдааа аабдааабдадбабдаддааабадаабабссдббдадсабббабдбсбббсбаббааааа бббдсаббсбабсббсббдбббсаадбсаааабсббдаасаасбабабсбададаабббб ссббсббдбдаадбаабдсабабабасабсаададаадбсададббдсбдаабдааабад бадабсааабббаадбдббдбдссбабааадааббдбабддбдадаббдаабабадбддб сабаббаббббсбсаабсббадбдаббааадбаббссабасааасадасаадсабббадб сдбдсаббсаббддсасбасааааббабсаассаададбаабаббсбббсадсбббссбс бдбабабдбдбдббсбаббсбддадсбдаадабаасбаабаббсббббббабббсбасад

- 51 030377 аааа+д+одд+++дасас+а+са+а+ддс++д+сас++аа+ад+д+сс+а+ас+дд+сса +с+++д+дад++дс+++д+ддаааа+аааа+дд+++с+д+сдааада++аааасад++с+ садааа+асса+садаадсадад+ддадааада+дда++++с+сссасс++саад++ддс саадссд+дддаа+д++дадс++даааасд+дсадд+аа+аа++с+аас+аа++с+д+дд ++дс+а+++дс+адса+++дсасааааддаааас+а+ааааад++са+ад+ааддаадад аддд+адс+д+а++аасаадсс+асада++с+++аа+++сааа+а+д++асд++даа+с+ с+а+а++д+++д++с+ас+дд+саасадд++ада+а+сд+ссдаасас+сс+с+ад+дс+ +аааддад++ас+с+садса++ададддддададаада+адд+д++д++дд+сд+асадд ддд+ддаааа+сааса++ аа++саад++++с+++сд+++дд+ддадсс+дсадс+ддаад аа+аа+са++да+дасд+ада+а+а+ссадас++дддс++са+да+с++ада+с+сдс++ сддда+са++ссссаададссад+сс+++++дааддаас+д+дадаадсааса++дассс са++ддасаа+а++сада+да+дааа++Ьддаадд+аа+с+аас++дс+дас+дааа+аа +++асааааа+с+саааа+а+ад+асадад++адссаааса+д+с++с+дад+дс+дада +с+++++дда++а+ааа++с+д+аададсааса+ас+а+++д++ад+дадаадаааадса +а+ас+ссад+д++++д++а+с+сссадаа+д+с+с+ааса+дааа+сд+д+аса++дса дадсс+сдаасдс+дссаас+сааада+д+дд+д+с+++аааасссдааааас++да++с ассадд+ааа++++сс+сс+с+асд+са+сс++д+дд++с+++дсддаа++а+дсаасса а о+ +++ + а+д+д++-са а а+а +а + а +а с+да +аа с+да а + а с+д-оа ++дд-аа а +са +а д++д++да+аасддада+аас+ддад+д+сддасададдсадс++с+++дс++дддаада д+да+дс+аааасд+адсадас++с+а+++а+дда+даддсаас+дсс+с+д++да++са садасада+дсад+да++садаааа+са+ссдсдаддас+++дсддсс+д+ас+а+аа+с адса++дсссасадаа+ассаасад+са+ддас+д+да+адад++с++д++а+ада+дса дд+дс+да+++с+с+сс++++ас+++д+асс++а++++даа+с+дд+ааа+да++а+++а +с+д+а+д+да+дд+++ссаассаа+са+ад+сад+асс+++а+даадааа++дсс+аа+ д++адссаад+ад+ад+ааа+дсадад+са++адсс+а+++д++а+дда++а+д+дад +++са+ас++сааас+ддаадс++а+дс+а+ас+а+с+да+ссс++д+++д+а+ада++д с+++с++++сс+++++с+сдда+++а+с++а+а+а+аадсддасадад+аааадаа+д+а ааса+дсд+аа+++дасс+а+Ьа+адсада++а+++д+с++а++++ссадд+сдс+да++ ссас++а++аддад+ад++асасд+а+++а+с++++аад+дааа+аа+ад+д+ааад+++ с++++ддсас+д+сдд+д+ааадаад++ааас+сс+++с+++аассссддса+++с++а+ +са+дсаддаа+адсаааадад+++дасааасса+с+сд+++дс++даааддсс++сас+ ++++ддддс+++дд++саадаа+а+дссаассда+сс+с+дадс+с+аас

8НС) ГО N0: 3 (интрон 1) д+а+ддс+с+са+сс++с+д+++д+++да++аа+асааас+++дс+дссаа++асс++++дсссс++д++дс+асс+ с++++с+д+дд+а+аааааа++аа+д+аддс+аа+д+д+адад+ддадд+а++а+а+дсадаасаа++дсаа+саад саа++асс+д+дада+ас+а++++д++++са+а++ад+ддас+дд+аса++с+са++дд+д+а+сд+++да+с+сса ссааадсададд++++ас+ддссдасадад+сааас+ас+д+дс++сас+сс++++ас+ссаа+сс++ад+ад+с++ +дс++с+аа+даас++саадсд+д+аа+адааасасса++а+а++а++адс+да++ад++ас+++асаа++ссадад са+а+++аса++++с+дс++дд++д+с+а++ас+с+дда+аасад+сс+ааа+дсаадсаааа+саас+д+д++++с ад+с++дадс+дассаа++ад++са+да+д+сс+садс++д+ссаадс+дд+дсс+сассддаа++а+д+дддасс+ +сд+ас++аа+саас+ад++сасс++с++с++ааааа+а++даа+да+++да++дд++аа+ад++сс++ааа+д+ад +аа++а+++дс+аас++ас+++ассаасссс++д+ссаасад

8НС) ГО N0: 4(интрон 2) д++адаад+ссасаа+д+са+д+д+са++даада+++аа+++аада+адааа++аса++д+++са++с+дсааа++а +ддасс+а+сададааааа+са+дда++++даа+ддс+ас+++ссссад+даадасаса+а+са+++сс+дддадда ада+д+дааад+ддсаадс+а+++ас+ссааааад+а+аа+с+аааадас++++а++аад+++ддааддс++аа+сс а+са+++д++а+с+д++д+с+ас++д+с+++а++аааа++с++с++ад+ссаа+сас+++сда+даад++дас+ад+ с++ад+сасс+даа+ас+++ааа+с+++дсс++дд+д+с+с+а+а++++садсса+с+саа++ссдаадс+са+а++ +д++++с+с+++д+аа+д+сса+с+дааад+++са+дс++++++дсад

8НС) ГО N0: 5 (интрон 3) д+аад+++садад+д++++а+саасссс+++ддаассаад+д+саадад+ад+д+++с++дд++д++ааа+да++са са+д+д+д++дд+++с+а+аааасс+даас+++а+д++++а+садад+д++++дс+++с++даад

8НС) ГО N0: 6 (интрон 4) д+ааа+++с+даддасаад+++++сс++++дса+д+ааа++сааас+++дс+дс++ада+да++ааа+аа+дааааа +а+сса++дса+д++++аа+д+д+а+даса+д++адаа++++даа+адаад++са++сас+да+д++дада+д++++ д++++++++с+дсад

8НС) ГО N0: 7 (интрон 5) д+а+дадсас+д+++а+аасадссд+сс++++++с++++с++д+с+даас+сааа+++даа+сс+++д+++ададдс аа++ад+с+дс+с+дадса++++ддс+дасад++а++а+д+а+а++ааааддсаас++++++а++сд++с+д+ссад с+аааас+++++ас++аааа+д+дд++аас+дса+а+++с+д+д+с+сс+а++++++да++а+++дсаас+с+да+с аа+с+ада+++ддддааддс++д++д++ад++да+дас+ада+ас+аадс+саса+с+аса++дд++дсаад+адаа ++++саад++д+са++сас++а+а++д+++даас+аддада++адса++с++с+дсааддадссс+даа+дс++даа аад++ааасадаааадааааад++садддсада+адаса+аа+д+д++ааад+аа++саа++ддадсасада+а+а+ даса+д+д++а+++дддадс+асдааааада+ааддас+а++а+д+адас+асаа++дааа+аасадд+аа++са++ +с+дд+++асад

- 52 030377

8Η() ΙΌ N0: 8 (интрон 6) дбабаасассдбссаабдсб 0366636555931:1:363331:1: сбадбабббдабаабссббсбдбасбббадабсбас 06506063065333336533365356365355333635331:360056653503666365606660636633333666 дсаббсбабсббсббдбббсаадбсэааабсббдаасэзсбабабсбададзэббббссббсббдбдаадбззбдса бабабасабсаададаадбсададббдсбдаабдааабадбадабсааабббаадбдббдбдссбабааадааббдб абддбдадаббдаабабадбддбсабаббаббббсбсаабсббадбдаббааадбаббссабасааасадасаадса бббадбсдбдсаббсаббддсасбасааааббабсаассаададбаабаббсбббсадсбббссбсбдбабабдбдб дббсбаббсбддадсбдаадабаасбаабаббсббббббабббсбасад

81:0 ГО N0: 9 (интрон 7) дбаабааббсбаасбааббсбдбддббдсбабббдсбадсабббдсасааааддаааасбабааааадббсабадба аддаадададддбадсбдбаббаасаадссбасадаббсбббаабббсааабабдббасдббдаабсбсбабаббдб ббдббсбасбддбсаасад

81:0 ГО N0: 10 (интрон 8) дбаабсбаасббдсбдасбдааабаабббасааааабсбсаааабабадбасададббадссааасабдбсббсбда дбдсбдадабсбббббддаббабаааббсбдбаададсаасабасбабббдббадбдадаадаааадсабабасбсс адбдббббдббабсбоесадаабдбсбсбаасабдааабсдбдбасаббдса

81:0 ГО N0: 11 (интрон 9) адбсаббадссбабббдббббддаббббдбдадбббсабасббсааасбддаадсббабдсбабасбабсбдабссс ббдбббдбабадаббдсбббсббббссбббббсбсддабббабсббабабабаадсддасададбаааа

81:0 ГО N0: 12 (интрон 10) адбсаббадссбабббдббббддаббббдбдадбббсабасббсааасбддаадсббабдсбабасбабсбдабссс ббдбббдбабадаббдсбббсббббссбббббсбсддабббабсббабабабаадсддасададбаааа

81:0 ГО N0: 13 (экзон 1) бддабабдаддаасадбабдбсббсадаабсббдбббадсабсасбббсббдббсбдссбссасабббсаабсдбса даддаббсадсадббдббааабддббаадаббсаббббссбсбсбссабдбссасаааддасбсббсбабсббссаб бдабдбдсбдсббббдсббасбббсаббдбабббдсадбасаааадббдбасбсааадббдаддбссаабдадсасб сбасббсбадсаббдабаадссбсбааббдсасасаасаддасббсбдббадаассаабсбббддбббаадсбдбсб сбдаббббдбсадсбаббббадссббабсббсбабадббббабдсаббббддббаббдбдддаааббсссадбсдсс ббддааадбсабадабддасбдбаббддббдбббсаддсдаббасасабдббдбаабсасбабасбаабадббсабд адаааадабббсасдсбабббсссабссасбдбсссбдсдсдбдббббддаббдсааасбббдбадббабдадбббд ббсбббддббдбдддабсасааддсббдбдбсасббааддаааббдабссбаабббаадаабддабдабабаадббс аббадбббсабббссбабббсбдббдббсбсббсаббдббдссаббаааддббсдассддадббдсбдбааббадбд аббсбдаабсбсасббаадбдабдааассаабддббабдаасбссбддабааабссадбдбдадбддсбббдсббса дсббсбсбаабабсдааадссббббддабббддабдаасссбббасбдсаааааддббасаадбсассбсбсаадаб бдабдаадббссббсасбббссссасбдсабададсададаааабдбсбсаасббббсдааадаааббддссбааас сбдаадааабабсааадсабссбдбссдаасаасаббдсбдсдббдсббббддааддаадббабббббасбдссабб сббдсадбааббадддбабдбдббабдбабдбадддссаасасбсабасааадабббдббдаббасасадсаддааа даддасабсбссббабдааддабасбассббабаддаасбсбссбаабадссааабббдбддаадббсбаассбсбс абсадббсаасбббаасбсссаааадсббддсабдсббаббсдадсдасасббсбсасббсбббдбабаадаадддд ббааддббдбсабдсбсадсбадасаддсбсабддбдббддасадаббдбаааббабабддссдбсдабдсбсадса дсбдбссдабабдабдсбасадсбасаббссабббддсбсабдссаббдсаадбббсбдбддсбббаддсабссббб абасббассбсддбдсббсаасбдббдбаасдсбадсбддасббдсадсадбдабддбабббдбддбдбббддаасб аааадааасаасаддбббсаабббаасабсабдаадаабсдбдаббсбадаабдааадсдасааабдадабдсббаа ббабабдсдсдббабааадббссаддсабдддаадаасаббббаасаааадааббдаабссббссдсдаабссдадб абддабддббдбссаадббсббдбасбсаабсдсбдддаабабсаббдбсббдбддадсасбссбсббсбадбддсб асасбсасббббддаадбдсаабсббдббдддаабсссдсббддбдсадддасадбдббсасбдсаасабсбсбсбб саадабдббдсаддаассдабсадддсбббсссбсаабссабдабсбсасбббсасаадсаабдабабсбсббдаба даббддасааабабабдабдадбааддадббадбддабааадсбдбддааадасбадааддббдбдддддбасаабб дсбабдсаддбдааадабддадсбббббдсбдддабдабдаааасадбааадаадааббдааааабдбааасбббда даббадааааддададсббдсадсадбадбддддасадббддддсддддаадбсббсссбссббдсабсбдбасббд дбдадабдсасаадббдбсдддбсад

81:0 ГО N0: 14 (экзон 2) дбсасаабббдбддббсаасбдссбабдббдсасаасабсдбддаббсадаабддсасдабасаадаааабабссбд бббддбабдссаабдаасададасадабасааддаадбдабссдддбббдсбдсббддадааддасббддааабааб ддадбббддадассадасбдааабаддадаасдбддсабсаассбсадбддбддбсадаадсадсдаабссадсббд саададсбдбббассаддасбдбдабабббабсббсбадабдабдбаббсадбдсадббдабдсбсасасбддсбсб дааабсббсаад

81:0 ГО N0: 15 (экзон 3) даабдбдбдаддддааббсббааадабаааассаббббдсббдбсасасассаадббдасббсббдсабаабдббда ссбдабссбб

- 53 030377

ЗИО ΙΌ N0: 16 (экзон 4) д'Ьсабдсдада'Ьддда'Ьда'Ьсд'Ьдсаа'Ьс'Ьддсааа'Ьа'Ьаа'Ьдада'Ьа'Ь'Ьадаадс'Ьддаа'Ьддаб'Ь'Ь'Ьааададс'Ь ад'Ьадс'Ьдсаса'Ьдадасс'Ьс'Ь'Ьбадаас'Ь'Ьд'Ьбдасд'Ьддааасаассааадададсаа'Ьдссбссс'Ь'Ьдаадаа'Ь саааа'Ьс'Ь'Ьс'Ьсдаада'Ь'Ьа'Ьс'Ьааддаадаааасддада'Ьдабааа'Ьс'Ьсаасад'Ьс'Ьаса'Ьсбда'Ьадддддда'Ь 'Ьс'Ьааас'Ь'Ьа'Ьаааддаадаадааададааас'Ьддаааад'Ьсадбсс'Ьсд'Ьд'Ьдбасаадс'Ьа'Ьаба'Ь'Ьас'Ьдаадс 'Ь'Ь'Ьбдда'Ьдд'Ьдддд'Ьд'Ьад'Ьдсбад'Ь'Ьа'Ьс'Ь'Ьдбб'Ь'Ьсд'Ь'Ьсббд'Ьддсааадббс'Ьс'Ьаа'Ьддсаад'Ьда'Ь'Ьаб'Ь ддсбддсаба1;дааасЫ;садсдда + сд1;дсса1;дбссЫ;саа1;ссЫ;с1;с1;дЫ;баЫ;ддда1;абасдд1;дЫ;аЫ; дсадб'Ьд'Ь'Ь'Ьс'Ь'Ьсд'Ь'Ьдс'Ьда'Ьад'Ьда'Ьсаддабд'Ьа'Ь'Ь'Ь'Ьдбдасас'Ь'Ьа'Ьддддс'Ь саада сбдсссааа'Ьаб'Ь 'Ь'Ь'Ьсддасада'Ь'Ьсб'Ь'Ьасадсабас'Ьдса'Ьдсбсс'Ьа'Ьд'Ьсаббб'Ь'Ь'Ьдасасаасасс'Ь'Ьссддаадаа'Ь'Ьсбда дбсдд

ЗИП ГО N0: 17 (экзон 5) дсабсбаабдадсадассааса+бдабд+сЬбссб с ссдббббббабдаабсбса сЫзЕ ддссабд+Ызабсасасб дс'Ьсддса'Ьса'Ьсадса'Ьсаса'Ьдссаа'Ьа'Ь'Ьсд'Ьддсс'Ьассддас'Ьас'Ь'Ь'Ызда'Ь'Ьсс'Ьс'Ьддд'Ь'Ьддс'Ь'Ьааба бс'Ьдд'Ьассдд

ЗИП ГО N0: 18 (экзон 6) ддаЬаЪ'Ьа'Ьс'Ь'Ьдсааса'Ьс'ЬсдЪдаа'Ь'Ьдас'Ьсддс'Ь'Ьдас'ЬсааЪ'Ьасаааадсасс'Ьд'Ь'ЬаЬ'Ьса'Ьса'Ь'Ь'ЬсЬс 'Ьдааадса'Ьс'Ьсаддбд'Ь'Ьа'Ьдас'Ьа'Ьасд'Ь'Ьдсбб'Ьаддаадсаддада'Ьд'Ьб'Ьбд'Ьаасдадаа'Ьд'Ьааассдад 'Ьдааб'Ьссаа'Ьс'Ьдсдаа'Ьдда'Ьб'Ьссасаасаабдда'Ьссаабдаа'Ьдд'Ь'Ьдддс'Ь'Ь'Ьсдасбддаа'Ь'Ьда'Ьддда адсЬЬасЪЪсЪЪЕдЬдЪЪЪсЪдсааЬдЪЪсаЪдаЬЬдЪсЪЪассЬадсадсаЪсаЬсаадссад

ЗИП ГО N0: 19 (экзон 7) ааааЪд'Ь'Ьдд'Ь'Ь'ЬдЬсас'Ьа'ЬсаЪаЬддс'Ь'Ьд'ЬсЬс'Ь'Ьаа'ЬадЪдЬсс'Ьа'Ь'ЬсЪдд'Ьсса'Ьс'ЬЪ'Ьд'Ьдад'Ь'ЬдсЪ'ЬЕ дЪддааааЕааааЪдд'ЬЕ'Ьс'ЬдЪсдааада'Ь'Ьаааасад'Ь'Ьс'ЬсадаааЪассаЬсадаадсадад'ЬддадааадаЕ ддаЪЪ'Ь'ЬсЕсссассЬ'Ьсаад'ЬЪддссаадссд'Ьдддаа'Ьд'Ь'ЬдадсЪ'Ьдаааасд'Ьдсад

ЗИП ГО N0: 20 (экзон 8) дб'Ьада'Ьа'Ьсд'Ьссдаасас'Ьссбсбад'Ьдс'Ь'Ьаааддад'Ь'Ьасбс'Ьсадса'Ьбададддддададаада'Ьаддбд'Ь 'Ьд'Ьбдд'Ьсд'Ьасаддддд'Ьддаааабсааса'Ь'Ьааб'Ьсаад'Ь'Ь'Ьбс'Ь'Ь'Ьсд'Ь'Ьбдд'Ьддадссбдсадс'Ьддаадаа 'Ьаабса'Ь'Ьда'Ьдасдбада'Ьа'Ьабссадас'Ь'Ьдддс'Ь'Ьса'Ьда'Ьс'Ь'Ьада'Ьс'Ьсдс'Ь'Ьсдддабса'Ь'Ьссссаадад ссадбсс'Ь'Ь'Ь'Ь'Ьдааддаас'Ьд'Ьдадаадсааса'ЬЬдасссса'Ьбддасаа'Ьаб'Ьсада'Ьда'Ьдааа'Ь'Ь'Ьддаад

ЗИП ГО N0: 21 (экзон 9) адссЬсдаасдсЬ дссаасНсагадаНдН ддН д5 ей ННаааасссдааааасН НдаННсассад ЗИП ГО N0: 21 (экзон 10)

ТОдЕ'ЬдакаасддадакааскддадкдксддасададдсадсТОсТОЕдсТОдддаададкдаЕдсЪаааасдкадс адасННсНаСССакддаНдаддсаасНдссНсНдННдаНСсасадасадаНдсадНдайНсадааааНсаСссдсда ддасд‘Ы2дсддссдддас'Ьа'Ьаадсадса'Ы2дсссасадаадассаасаддсадддасддддададад'Ьдсддддда

ЕадаЬдсад

ЗИП ГО N0: 22 (экзон 11) дааНадсаааададНННдасааассаНсНсдННйдсННдаааддссННсасННйННддддс'ЬННддННсаадааНа·!;

дссаассдаНссНсНдадс'Ьс'Ьаа

ЗЕС) ГО N0: 23 (последовательность РНКи) аададссадНссСаНННдааддаасНдНсадаадзаасаННдассс са’ЬЕддасааСа'ЬЬсада'ЬдаСдааа'Ь'Ь'ЬддааддЬаа'Ьс'ЬаасЁЬдс'Ьдас'Ьдааа'Ьаа

ЬННасаааааЕсНсааааНаНадСасададННадссааасаНдНсННсНдадНдсНдада

Ьс'Ь'ЬЬ'Ь'Ьддай'Ьа'Ьааа'Ь'Ьс'Ьд'Ьаададсааса'ЬасЬа'Ь'Ь'Ьд'ЬЬад'Ьдадаадаааадса

ЬаНас'ЬссадНд'ЬНННдН'Ьа'Ьс'ЬсссадааНдЕсНсНаасаНдаааНсдНд'ЬасаН'Ьдса дадсс'Ьсдаасдс'Ьдссаас'Ьсааада'Ьд'ЬддйдЬсЬ'Ь'Ьаааасссдааааас'ЬЬда'ЬЬс ассаддйааай'Ь'Ь'Ьсс'Ьсс'ЬсЬасдйса'Ьсс'ЬЬдйдд'Ь'Ьс'Ь'Ь'ЬдсддааЬ'Ьа'Ьдсаасса асННН'ЬЕаЕдЕд'ЬНЕсааа'ЬаЕаНаЕас'ЬдаНаасНдаа'Ьас'ЬдНсаЕНдд'ЬаааНсаЕа дНСдННдаНаасддадаСаасСддадНдНсддасададссадсННсНСНдсНСдддаада д'ЬдаНдс'ЬаааасдЬадсадас'ЬНсЬа'ЫаЬа'Ьддайдаддсаасйдсс'Ьс'Ьд'Ь'Ьда'Ь'Ьса садасадаНдсадЪдаННсадааааНсаНссдсдаддасН'ЬНдсддссНдНас5аЬааНс адсаН'Ьдсссасадаа'ЬассаасадНса'ЬддасНдНда'ЬададННс'ЬНдН'Ьа'Ьада'Ьдса дд5дз5даЕ5Ес5сЕссдТО5асЕЕЕд5асс5ЕаЕЕЕ5саа5сЕддЕааа5дазНаЕЕЕа

Ьс'ЬдЬа'Ьдйда'ЬддкЬ'Ьссаассаакса'ЬадйсадЪасс'Ь'ЬЪаЪдаадааа'Ь'Ьдсс'ЬааЪ дСНадссаадЕадНадНаааСдсаНдаадСсаЕНадссСаСЕСдНЕНЕддаСЕНЕдЕдад

НЕНсаЕасЕНсааазЕддаадсНЕаЕдсНаЕасзаНсЕсаЕсссНЕдЕНЕдНазадаНЕд сЫсЬсЫсЫз ссРРРРРсР сддаНСНаНсННаНазаНаадсддасададНаааадааНдНа аасаНдсдЕааНННдассНаНЕаНадсадаННаНННдНсННаННННссаддНсдсНдаЕН ссасН'ЬаНЕаддадНадННасасдНа'ЬН'ЬаНсЕН'Ызаад'ЬдаааНааНад'ЬдНааад'ЬЕ'Ь сТОаНддсасЕдЕ сддНдЕааадаадННааасЕс'аЕННстаасс'сс'ддсаЕаЕа.ННаЕ

ЬсаНдсаддааНадсаааадад'ЬННдасааассаНсНсд'Ь'Ь'ЬдсННдаааддссННсас'Ь

СЕННддддсНЫзддННсаадааНаСдссаассдаН

ЗНС) ГО N0: 24 (белковая последовательность NΐΜΚΡ4; 5'-3' рамка считывания 1 - обозначает предполагаемый стоп-кодон)

- 54 030377

МОМКЫЗМЗЗЕЗСЬАЗЬЗСЗАЗТЕОЗЗЕОЗАЛТУКИЬКЕР ЕЬЗ РСРОКТЬЬЗЗЮУЬЬЬЬТЕ 1УЕАУфКЬУЗКЬКЗИЕНЗТ331ЕКРЫАННКТЗЗРИКУ1О6ЬУИЬЕфА1ТНУУ1Т1ЫУН ЕККЕНА13НРЬЗЬКУЕИ1АЯЕЛА/МЗЬЕЕБС61ТКЬУЗЬКЕ1ОРЫЬКМОО133ЬУЗЕР13У УЬЕ1УА1КОЗТОУАУ13ОЗЕЗНЬЗРЕТЕ6УЕЬЬ0К3 5У5БЕАЗАЗЫЗКАЕИ1ИМЫРЬЬ(2 КБУКЗРЬКЮЕУРЗЬЗРЬНКАЕКМ512ЬЕЕК№/;РКРЕЕ13КНРУКТТЬЬКСЕИКЕУ1ЕТА1 ЬАУ1КУСУМУУ6РТЫОКЕУЕУТА6ККТЗРУЕОУУЫБТЬЫАКЕУЕУЬТЗН1ЭЕИЕИЗОК ЬбМЫКАТЬЬТЗЬУККбЬКЬЗСЗАКОАНБУБОРШУМАУОАОБЬЗОММЬСЬНЗЬИЬМРЬС УЗУАЬ61ЬУТУЬ6АЗТУУТЬА6РААУМУЕУУЕ6ТКШ'™КЕ'2ЕЫ1МКРГКОЗКМКАТЫЕМЬЫ УМРУ1КЕ2АИЕЕНЕЫКК1ЕЗЕКЕЗЕУ6ИЬЗКЕЬУ31АБМ11УЬИЗТРЬЬУАТЬТЕБЗА1Ь Ь61РЬБАБТУЕТАТ5ЬЕКМЬ2ЕР1ВАЕР123М1ЗЬЗфАМ1ЗЬОКЬОКУММЗКЕЬУОКАУЕК ЬЕ6С66Т1АМ2УК06АЕСИ0ЕЕИ5КЕЕЬКМУМЕЕ1ККБЕЬААУУ6ТУ6А6К55ЬЬА5УЬ6 ЕМНКЬ36БУТ1С63ТАУУА0ТЗИ1а1\1БТ1аЕЫ1ЬЕОМРМЫКОКУКЕУ1КУССЬЕКОЬЕ1М ЕЕ6О0ТЕ16ЕК6И\ГЬ366<2К<2К1<2ЬАРАУУ<2ОСО1УЬЬООУЕ5АУОАНТ63Е1ЕКЕСУК6 1ЬКОКТ1ЬЬУТН<2УОЕЬНЫУРЫЬУМР.ОБМ1У<256КУЫЕ1ЬЕА6МОЕКЕЬУААНЕТЗЬЕЬ УОУЕТТКЕЗЫАЗЬЕЕЗКЗЗККРЗКЕЕЕбЕОКЗООЗТЗОКБОЗКЫКЕЕЕЕЕТБКУЗРКУУ КЬУ1ТЕАЕ6ИИ6УУЬУ1ЬЕЗЕЫл/1233ЬМАЗОУВДЬАУЕТ5АОНАМЗЕЫРЗЬЕ161У6У1АУ УЗЗЬЫУ1КМУЕУТЬГ4БЬКТА01ЕЕ6С1ЬУ31ЬНАРМЗЕЕОТТРЗБК1ЬЗКАЗИО2ТИЮ УЕЬРЕЕММЬТЬАМЕ1ТЬЬ61II1ТСБУ5ВДРТУЬЬЫРЬ6ИЬЫ1ИУК6УУЬАТЗКЕЬТКЬ0 31ТКАРУ1ННЕЗЕ3136УМТ1КСЕККдЕМЕСЫЕЫШКУЛЗЫЬКМ0ЕНММ63ЫЕИЬ6ЕКЬЕ ЬМСЗЬЬЬСУЗАМЕМ1УЬР33IIКРЕЫУБЬ3Ь3УБЬ3ЬЫ5УЬЕИЗIЕУЗСЕУЕЫКМУЗУЕК ЬКфЕЗЕРРЗЕАЕИККМОЕЬРРЗЗИРЗКбЕУЕЬЕЫУОУКУКРЫТРЬУЬКБУТЬЗЬКББЕКЬ БУУ6НТ666КЗТЫ12УЕЕКЬУЕРАА6К11Ю0У01ЗНЬ6ЬН0ЬНЗНЕ611 РфЕРУЬЕЕБТ УКЗЫ1ОР1Б12У5ООЕ1ИКЕРКТЬРТаКСБУЕКТККТ-ЕТ5С—КК-ЬЕСКТЕААЗЬЬБКЗ 0АКТ-БТ31У6-6ИСЬС-ЕТЕКСЗРЗЕЕНРК6ЬС6ЬУУ№НСРБЫТЫЗН6Ь—ЗЗСУКСК С-ЕЬЗЕУЕУРУЕЕЗБК-ЬЕ1СМ-ИЕРТМНЗ<2УЬУЕЕ1А-С-РЗЗЗКСМ δΕΟ ΙΌ N0: 25 (белковая последовательность №МКР4; 5'-3' рамка считывания 2 - обозначает предполагаемый стоп-кодон)

И1-СТУСЫ2МЬУ-ННЕЬУЬРРНЕ14Р<2Р.1<2<2ЬЬЕ6-О5Е5 5ЬНУНКСЬЕУЬРЬМССЕСЬЬЗ ЬУЫ2УКЗСТ123-6РМЗТЬЬЬАЫЗЬ-ЬНТТ6ЬЬКЬСК5-М0С1ССЕККЬНМЬ-ЗЬУ—ЕМ КК0ЕТЬЕР1НСРСАСЕ6Ы2ТЬ-Ь-УСЗЬУУ63<26ЬСНЬККЫЫ-ЕИМ1-УН-ЕНЕЬЕЬЬ Е55ЬЬРЬКУКРЕЬЬ-ЬУ1ЬИЬТ-УМКРМУМЕ5И1НРУ-УАЬЫ2ЬЬ-УККРЕ6Е6-ТЬУСК КУТЗНЬЗКЬМКЕЬНЕРНС1ЕБККСЫ4ЕЗКЕ16ЬКЬККУС31ЬЗЕБНССУАЕ6ККЬЕЬЬРЕ Ы2-Ь6УУЬСМ-6<2НЗУКОЬЫТ<2<2ЕР.БНЬЬМКОТТЬ-ЕЬ5 — РЫЬИКЕ-РЫЗЗТЬТРКЗ ЬАСЬЕЕКНЕЗЬЬС1КК6-6СНА<2ЬРКЬМУЬ0КЬ-11ИР5МЬ53СР1-СУЗУ1РЕ63СНСК ЕЬИЬ-АЗЕ1ЬТЗУЫЭЬЬ-К-ЬРЬСС-ИУЬИСЬЕЬКЕТТ6ЕЫЬТЗ-К1У1ЬЕ-КЕ1ЭМКСЫ IСАЬ-ЗЗРНБКЫЬТКЕЬЫРЗАЫРЗМББСРЗ ЗСТ(23ЬС1 ЗЬЗССАЬЬЕ-ИЬНЗЬЬЕУфЗС ИЕЗКЬУ12612С5Ы2НЬ55КССКМК56Ь5ЬЬР-ЗНЕНКО-УЬЫОИТМ1—УКЗ-И1КЬИК0 -КУУБУОЬЬСК-КМЕЬЕАбММКТУККЕ-КМ-ТЬКЬЕКЕЗЬОО-ИбОЬбКБЗЬРЗЬНЬУЬУ РСТЗСКУКЗ<2ЕУУ<2ЬРМЬНКНК6ЕКМАКУКК1 5СЬУС<2-ТЕТ0ТРК-36ЕААИККТ№К-И ЗЬЕТКЬК-ЕЫУАЗТЗУУУКЗЗЕЗЗЬ<2ЕЬЕТКТУ1ΕΙЕ-ММУЗУ2ЬМЬТЬАЬКЗЗКМУ-6Е ЕЬК1КРЕСЬЗНТКЬТЗС1МЬТ-ЗЬЗСЕМ6-ЗСЫЬАШМРУ-КЬЕИ1ЬКЗ—ЬНМРРЬ-ЫЬ Ь™КОРККАМРРЬКЫ2ЫЬЬЕЕУЬКККТЕМ1ЫЬЫЗЬНЫ661ЬМЬ-ККККЕКЬЕКЗУЬУСТ 8У1ЬЬКЬЬ066У-С-ЬЗСЕКЗС6КУЬ-№2У116ИНМКЬСК1УРСР81ЬЬСЬЬ6УТУЬЫ2Ь

ЕЬКС---36С1Ь-НЬ№63КЬРКУЕЗРКЕЕТАУСМЬЬСНЕЬТ'2НЬРЕЕЕ-У6НЬМ1КРТЬМ

533КЕЬ-13ЬИРСЬЗНСЗАЗЗЗЗНА141Ь6ЬРУУЕ-ЕЬИУ6Ы36Т6011Ы2НЬУ1\Г-Ь6ЬТ <2Ы2КНЬЬЕ113ЬКАЗ<2УЬ-ЬУУАЬСЗККСЕУТКМ-ТЕ-1Р1СЕИ13ТТМОРМЫ6ИАЕОИЫ -ИЕАУЕЕУЕЫ2СЗ-ЬЗУЬАА33312КМЬУСНУНМАС:ЬЫУ8У36Р5Ь-УАЬИК1КИЕЬЗКО -М5512КУН12К1256ЕКИ1Е5НЫ2Уб12АУ6МЬ5ЬКТСКЬ01УКТЬЬ-СЬКЕЬЬ5АЬЕ6ЕККУЬЬУУ(26УЕЫ<2Н-ЕКЕ8ЕУтата8Ь<2ЬЕЕ-ЗЬМТ-1УР0Ь6ЕМ1Ь0ЬА568ЕРК8<28ЕЬКЕЬ -ЕАТЬТРЬОГ'П<2ММКЕ6КЗЬЕКС<2ЬКРУУ5ЬКРЕКЬО5РУУОМСОМИЗУ6<2К<2ЬЬСЬБКУ МЫЖЗКЬЬЕМОЕАТАЗУОЗ<2ТРАУ1<2К1 1КЕ0ЕААСТ1 13 ΙΑΗΡΙ РТУМОСОКУЬУЮАБ АОЕЗРЕТЬУЫЬЫЬУКОУЬЗУСРБЕСРИУЗТЕМККЬРЫУЗОУУУКАδΕΟ ΙΌ N0: 26 (белковая последовательность №МКР4; 5'-3' рамка считывания 3 - обозначает предполагаемый стоп-кодон)

- 55 030377

СУЕЕ1ЭУУЕЕ1ЕЕ51ТЕЬЕСЬН131УРСЕЗЗС-МУК1НЕРЬЗМЗТКО331ЕН-СААЕАУЕН С1СЗТКУУЬКУЕУ0-АЪУР-Н—АЗМСТООРЕЕАЬЕЗНРИТУЪУУЗеОУТССЫНУТМЗЗЕК13КУЕР5ТУРАКУЪОСКЬСЗУЕЕУШЬ№ЕНКАСУТ-ЕМ-3-ЕКМС-УКЕ13Е13УЕСС ЗЬНССН-РЕРКЗССЫ—Е-13ЬК—№НЬ-ТРС-1ССЕИЬСЕЗЕЗМ1ЕЗЬЬРЬ0ЕРЕТАК КЫЭУТЗОО—ЗЗЕТЕРТА-ЗКЕЫУЗТЕКККЬА-Т-КМ1КАЗСРИЫ1ААЬЬЬЕСЗУЕУСНЗ СЗЫ-СМСУУСКАМТНТК1С-ЬНЗККЕО13Ь-К1ЬРУКЫЗРМЗр1ССЗЗМЬЗЗУдЪ-ЬРКА ННАУЗЗОТ5НЕЕУ-ЕСУКУУМЬ5-ТСЗНСКТОСКЬУСР.В.СЗААУВ.УОАТАТЕН1АНА1А5 ЕССЕКНРЬУЬРЕСЕЫССЫАЗНТСЗЗОЕ1СС\АТО-ККдСУ31-ННЕЕЗ-Е-ЫЕЗОК-ОА-Ь ΥΑΕΥΚνΡΕΜΕΚΤΕ-ςΚΝ-ΙΕΡΚΙΚννϊΜννςνΕνΕΝΚ№ΕΥΗΕΕνΕΗ3 3 3 3ΕΥΤΗΕνϊΚΟΝΕν ЕНРАИСКО5УНСШ5Ъ2ОУАЕТО<2еЕР31НОЬТЕТ5МО15— 1СС1У0Е-СУЗе-ЗСеКТ ККЪ№ЕУМСУАЕЕКВДЗЕЬЬе--К!2-К.К.1ЕКСКЬ-О-ККРАС3 55СОЗИеСЕУЕРРС1СТВДΟΑΩννθ3σΗΝΕΐΐΕΝΟΌΟΟΤΝΐνη3ΕΜΗΟΤΗΚΥΡνΤ/ίΥΑΝΕθπθΙΟΕ3ΏΡ6ΕΕΕΟΕΘΌαΝΝ6 мгм ΐΊΓλίλΐ б ΓΥ

3-К-МНЕАСНТРЗ-ЬЪА-С-РЕРСНАК™0РА1ТлГ01 — О1КЗИЫЕЕ-РАЗЗСТ-ОЪЕРТС -Κ6ΝΝ<2ΚΕζ)0ΕΡ-ΚΙΚΙΕ5ΚΙΙ-5ΚΚΚΚ—15ТУУ1 — ЕЕЕ-ТУКЕККККЖ/КЗ<255СУ<2 А1УУ-ЗЕЦМУЕСЗАЗУЬУЕУЬУАКЕЗМЕК-РЬАЕ1-НЕЗЕЗСНУЬСЗЕЗУУИО1КСУСЗС ЕЕУАОЗОСОУЕСОТУСАдОСРКПЕКТОЗЫЭНТАСЗУУ! Ε-ΗΝΤΕΚΚΝ3Ε3ΟΙ— 5О12Н-С ЬРРУЕУЕЗНЕСНУУНТАК.НННННМР1ЕЬАУКТТЕОЗЗЕЬА-УЪУРС1Ь5СЫ13-ЮЗА-Ь ЫУКЗТСУЗЗЕЪ-КНЬКСУОУТЬЪ-ЕАСОУЬ-ЕЕСКРЗЕЕОЗАЦеЕРЙСЦ10-МУ6ЪЗТЕ1 РСКЪТЗЬСЕСЫУНОСЪТ-2НН12АККС№ЕУТ11ИЬУЗ—СР1ЪУНЬСЕЬЬСЕК-ИЕЕСРК1 ΚΤνίιΡΝΤΙРЗРУЕКОЕЕЗРТЕКЪАКРИЕС-А-КЕАб-13ЗЕНЗЗЗА-РЗУЗОН-РСКЕОИ ССЮ5УР.ЕИК1Ы1Ы35ЕЪ5ЕЕСАС5ЮКМЫН—ККУ12ТИАЗ-5-13ЬКОН8РКАЗРЕ-ЖС ΕΚςΗ-ΡΗΗΤΙΕΡ—ЫЪЕОАЗМААЫЗКМИСЬ-МРКЫЪ1Н0ЬЬ1ТЕ1ТСУЗРРСЗЕЕАИЕЕС-ЫУАОЕУЬИМР0ЬРЪЪ1НН2МС-ЕККЗЗАКТЬКРУЪ-ЗАЬРТЕУС23ЧТУ1ЕЕЪЪ-М0У ЫЗЪЬЬЬСТЬЕ-ПлГ-МИУЬУУТЛУЗМСЗ-ЗУРЬ-КМСЬМЬАК---МН

ЗЕО ГО N0: 27 (последовательность кДНК Ы1МКР4, полученная на основе результатов прямого секвенирования кДНК) аЕддаЪаЬдаддаасадЬаЬдЕсЪЪсадааЪсЪЪдЪЪЬадса+сасЪЬЬсЪЕдЪЪсЪдссЪссасаЪЬЬсааЪсдЪс ададдаЕЕсадсадЕЕдЕЕаааЕддЕЕаадаЕЕсаЕЕЕЕссЕсЕсЕссаЕдЕссасаааддасЕсЕЕсЕабсЕЕсса

ЦЕдаЕдЕдсЕдсЕЕЕЕдсЕЕасЕЕЕсаЕЕдбаЕЕЕдсадЕасаааадЕЕдбасЕсааадЕбдаддЕссаабдадсас

ЕсЕасЕЕсЕадсаЕЕдаЕаадссЕсЕааЕЕдсасасаасаддасЕЕсЕдЕЕадаассааЬсЕЕЕддЕЕЕаадсЕдЕс

ЦсЕдаЕЕЕЕдбсадсЕаЕЕЕбадссЕЕаЕсбЕсЕаЕадЕЕбЕаЕдсаЕЕЕбддЕЕаЕЕдЕдддаааЕЕсссадЕсдс сЕЕддааадЬсаЕадаЕддасЕдЕаЕЕддЕЪдЕЕЕсаддсдаЕЕасасаЕдЕЕдЕааЕсасЕаЕасЕааЕадЕЕсаЪ дадаааадаЕбЕсасдсЕаЕбЕсссаЕссасЕдЕсссЕдсдсдЕдЕЕЕЕддаЕЕдсааасбЕЕдЕадЕЕабдадЕЕЕ дЕЕсЕЕЕддЕбдЕдддаЕсасааддсЕЕдЕдЕсасЕЕааддаааЕЕдаЕссЕааЕЕЕаадааЕддаЕдаЕаЕаадНЕ саЕЕадЕЬЬсаЕЕЕссЕа'ЬЬЕсЕдЕЕдЬЬсЕсЕЕсаЕЬдЬЕдссаЕЕаааддЕЕсдассддадЕЕдсЬдЬааЕЕадЕ даЕЕсЕдааЕсЕсасЕЕаадбдаЕдааассааЕддЕЕаЕдаасЕссЕддабаааЕссадЕдЕдадЕддсЕбЕдсЕЕс адсЕЕсЕсЬааЕаЕсдааадссЕЕЕЕддаЬЕЕддаЕдаасссЕЕЕасЬдсаааааддЬЬасаадЕсассЬсЕсаада

ЦЕдаЕдаадЕбссЕЕсасЕЕбссссасЕдсаЕададсададааааЕдЕсЕсаасЕЕЕЕсдааадаааЕЕддссЕааа сс+даадаааЪаЪсааадсаЪссЪдЪссдаасаасаЪЬдсЪдсдЪЪдсЬЬЪЕддааддаадЕЪаЪЪЪЬЬасЕдсса бЕсЕЕдсадЕааЕЕадддЕабдЕдЕЕаЕдЕаЕдЕадддссаасасЕсаЕасааадаЕЕЕдбЕдаЕЕасасадсадда аададдасаЕсЕссЕЕаЕдааддаЕасЕассЕЕаЕаддаасЕсЕссЕааЕадссаааЕЕЕдЕддаадНЕсбаассЕс

ЕсаЕсадЬЬсаасЕЕЕаасЬсссаааадсЬЕддсаЕдсЬЬаЕЕсдадсдасасЕЕсЕсасЕЕсЕЕЕдЬа'Ьаадаадд ддЕЕааддЕЕдЕсаЕдсЕсадсЕадасаддсЕсаЕддЕдЕбддасадаЕЕдЕаааЕЕаЕабддссдНсдабдсЕсад садсЕдЕссдаЕаЕдаЕдсЕасадсЕасаЕЪссаЕЕЕддсЪсаЕдссаЕЕдсаадЕЕЕсЕдЕддсЕЕЕаддсаРссЕ бЕаЕасЕЕассЕсддЕдсЕЕсаасЕдЕЕдЕаасдсЕадсЕддасЕЕдсадсадЕдаЕддЕаЕЕЕдЕддНдбЕЕддаа сЕаааадааасаасаддЕЕЕсааЕЕЕаасабсаЕдаадаабсдЕдаЕЕсЕадааЕдааадсдасаааЕдадаНдсЕЕ ааЕЕаЕаЕдсдсдЕЕаЕааадЕЕссаддсабдддаадаасаЕЕЕЕаасаааадааЕЕдаабссЕЕссдсдааНссда дЕаЕддаЕддбЕдЕссаадЕбсЕЕдЕасЕсааЕсдсЕдддааЕаЕсаЕЕдбсЕЕдЕддадсасЕссЕсЕЕсЕадЕдд сЕасасЕсасЕЕЕЕддаадЬдсааЕсЕЬдЬЕдддааЕсссдсЕЕддЕдсадддасадЬдЬЕсасЕдсаасаЕсЕсЕс

ЦЕсаадаЕдЕбдсаддаассдаЕсадддсЕбЕсссЕсааЕссаЕдаЕсЕсасЕЕЕсасаадсааЕдаЕаЕсЕсЕЕда

ЪадаЪЪддасаааЪаЪаЬдаЪдадЪааддадЕЪадЪддаЬааадсЪдЬддааадасЪадааддЪЪдЪддддд+асаа бЕдсЕаЕдсаддЕдааадаЕддадсЕЕЕЕЕдсЕдддаЕдабдаааасадЕааадаадааЕбдаааааЕдЕааасЕЕЕ дадаЕЕадааааддададсЕбдсадсадЕадЕддддасадбЕддддсддддаадЕсЕЕсссЕссЕЕдсаЕсЕдЕасЕ

ЕддЕдадаЬдсасаадЕЕдЕсдддЕсаддЕсасааЕЕЕдЕддЕЕсаасЕдссЕаЕдЕЕдсасааасаЬсдЕддаЕЕс адааЕддсасдаЕасаадааааЕаЕссЕдЕбЕддЕаЕдссааЕдаасададасадаЕасааддаадНдаЕссдддЕЕ

- 56 030377 бдсбдсббддадааддасббддааабаабддадбббддадассадасбдааабаддадаасдбддсабсаассбсад бддбддбсадаадсадсдаабссадсббдсаададсбдбббассаддасбдбдабабббабсббсбадабдабдбаб

6сад6дсад66да6дс6сасас6ддс6с6дааа6с66сааддаа6д6д6даддддаа66с66ааада6аааасса66

66дс66д6сасасассаад66дас66с66дса6аа6д66дасс6да6сс66д6са6дсдада6ддда6да6сд6дса а6с6ддсааа6а6аа6дада6а66адаадс6ддаа6дда6666ааададс6ад6адс6дсаса6дадасс6с666ад аас66д66дасд6ддааасаассааадададсаа6дсс6ссс66даадаа6саааа6с66с6сдаада66а6с6аад даадаааасддада6да6ааа6с6саасад6с6аса6с6да6адддддда66с6ааас66а6аааддаадаадааад адааас6ддаааад6сад6сс6сд6д6д6асаадс6а6а6а66ас6даадс6666дда6дд6дддд6д6ад6дс6ад

66а6с66д6666сд66с66д6ддсааад66с6с6аа6ддсаад6да66а66ддс6ддса6а6дааас66садсдда6

Сд6дсса6д6сс66саа6сс66с6с6д666а66ддда6а6асдд6д66а66дсад66д666с66сд66дс6да6ад6 да6садда6д6а6666д6дасас66а6ддддс6саадас6дсссааа6а66666сддасада66с666асадса6ас

6дса6дс6сс6а6д6са666666дасасаасасс66ссддаадаа66с6дад6сдддса6с6аа6да6садассаас а66да6д6с66сс6сссд666666а6даа6с6сас666ддсса6д666а6сасас6дс6сддса6са6са6са6сас а6дссаа6а66с66ддсс6ассд6ас6ас6666да66сс6с6ддд66ддс66аа6а6с6дд6ассдддда6а66а6с

66дсааса6с6сд6даа66дас6сддс66дас6саа66асаааадсасс6д66а66са6са666с6с6дааадса6с бсаддбдббабдасбабасдббдсбббаддаадсаддадабдббббдбаасдадаабдбааассдадбдааббссаа

6с6дсдаа6дда666ссасаасаа6дда6ссаа6даа6дд66дддс666сдас6ддаа66да6дддаадс66ас66с бббдбдбббсбдсаабдббсабдаббдбсббассбадсадсабсабсаадссадаааабдббддбббдбсасбабса

6а6ддс66д6с6с66аа6ад6д6сс6а66с6дд6сса6с666д6дад66дс666д6ддаааа6аааа6дд666с6д6 сдааада66аааасад66с6садааа6асса6садаадсадад6ддадааада6дда6666с6сссасс66саад66 ддссаадссд6дддаа6д66дадс66даааасд6дсадд66ада6а6сд6ссдаасас6сс6с6ад6дс66ааадда дббасбсбсадсаббададддддададаадабаддбдббдббддбсдбасадддддбддаааабсаасаббааббса адббббсбббсдбббддбддадссбдсадсбддаадаабаабсаббдабдасдбадабабабссадасббдддсббс а6да6с66ада6с6сдс66сддда6са66ссссаададссад6сс66666дааддаас6д6дадаадсааса66дас ссса66ддасаа6а66сада6да6дааа666ддаададсс6сдаасдс6дссаас6сааада6д6дд6д6с666ааа асссдааааасббдаббсассадббдббдабаасддадабаасбддадбдбсддасададдсадсббсбббдсббдд даададбдабдсбаааасдбадсадасббсбабббабддабдаддсаасбдссбсбдббдаббсасадасадабдса дбдаббсадаааабсабссдсдаддасбббдсддссбдбасбабаабсадсаббдсссасадаабассаасадбсаб ддасбдбдабададббсббдббабадабдсаддаабадсаааададбббдасааассабсбсдбббдсббдаааддс сббсасбббббддддсбббддббсаадаабабдссаассдабссбсбдадсбсбаа

8ЕР ГО N0: 28 (последовательность ДНК №МКР3, содержащая 5'- и 3'-ИТК)

- 57 030377 аббасаЕЕ'Ь'Ьс'Ь'Ь'Ьа'Ь'Ь'Ьадсссс'Ь'Ь'Ь'Ь'Ь'Ь'Ь'Ьсс'Ь'Ьа'Ь'Ьад'Ьд'Ьсаа'Ьс'Ь'Ь'Ьс'Ьд'Ь'Ьаса'Ьдс дбдааааб'Ьадс'Ьад'Ьаа'Ь'Ь'Ьсадаа'Ь'Ьаас'Ьсааа'Ьд'Ьас'Ь'Ь'Ьдд'Ьа'Ьдааааса ассасс+Е'Ь'Ь'Ьсд'Ьд'ЬЕс'Ь'Ь'Ьдсс'Ь'Ьсасаа'Ь'Ьа'Ь'Ьс'Ьас'Ьа'Ьа'Ьдс'Ь'Ь'Ь'Ь'Ьсаса ['Ьс'Ьсадааас'Ьаа'Ьс'Ь'Ьсд'Ь'Ьаа'Ьаа'Ьд'Ь'Ьасасдасда'Ьда'Ь дабдаааа'Ыааддддас'Ьс'Ьадас'Ьад'Ьасс'Ь'Ьад'Ьсда'Ьад'Ьд'Ь'Ь'Ь'Ьдад'Ь'Ь'Ьсса'Ьс'Ьд'Ьддасасса'Ьадс'Ь'Ьд аасаадаассадсдаааЕдсадд'Ьса'Ьдсс'Ьд'Ьддс'Ь'Ьдадддааас'Ьдсаасаа'Ьсс'Ьа'Ьддсадддааадааасс

ЕасаЕсЕад'Ьда'Ьдсаа'Ьа'Ь'Ьда'Ь'Ьд'Ьдаад'Ьддса'Ь'Ь'Ьд'Ь'Ь'Ь'Ь'Ьд'Ь'Ь'Ьадас'Ь'Ь'Ь'Ь'Ьда'Ьдадаааа'Ьд'Ьа'Ьасд'Ь аасбббдбдЕЕЕасааЕааЕЕЕдааЕдЕаЕдЕЕдадЕсаадЕдаЕЕадЕЕадЕЕаададЕдсасддаЕЕЕЕдсЕасЕ бсбдддбаааадаадЕааассЕЕдЕЕдЕЕдададЕЕдааадЕдаааЕЕасЕадЕдЕсдааЕЕЕЕдссдсаЕаадсЕа аабдааасасЕЕЕЕасдаЕааасЕссЕадЕдсаасаааддаааааЕЕсаЕЕддсаадасЕадсЕдЕЕЕаЕдЕЕЕсас дас

8ЕР ГО N0: 29 (последовательность ДНК №МКР3, не содержащая 5'- и 3'-иТК)

- 58 030377 (д'Ьа'Ьд'ЫхддсдЬ'Ьда'Ьдаа'Ьссс'Ьссдааасссса'Ь

Есс'Ь'Ьд'Ьаа'Ь'Ьс'Ь'Ьддд'ЬЕд'ЬдЕ'Ьд'Ь'Ьддаа'Ьасаа а дЬ да а Ь да Ь Га са ЬЬ Г Ь с> Ь Га Ь Ь Гад с сссНЬ ΓΓΓΓΓοοΓΓβϋΓ а аа'Ьд'Ь'Ь'Ь'Ьд'Ьдаааа'Ь'Ьадс'ЬадЬаа'Ь'Ь'ЬсадааЬ'Ьаас'Ьсааа'Ьд'Ьа а^аад^а^сЕсЕддЕд^аа^аЪдсадд^аа^д^ддЕаЕддд^ддЕаЕаЕсЕдаааас^ЕааЕад!

·9Β··Β······Β··Η···Η····Η·····ΒΒ···Μ··Ηη|· у д-идуч-адда^вуд^-ад -уд дало· --, и йс^сист . «к«уач,-,'-4>,4 44.4А) να 4,341.1.43014(-,3.4.-44--.443-. ллаи

ИИИИИИИИИИиЯИИИИИИИф^ВИИИ^ИИИИИИИИДИИ|ИИИИДИИ1ИЯИИИИИИИдЕд асадсЕЕддЫЁЕдссЕаЕЕЕЕ'ЬддаЕЪЬаЕЕЕбд'ЬЕЕсадаЕаддааааЕдасаааЕЕЕЕаЕЕЕЕаЕЕдадааасЁ ъ ъ д ъ д д да ΐ д Έ ъ а ъ д с ъ ε са д|ИИИИДИИИИ1ИИИИ^р^ИИ^И||ИИИ|ВИВИИрИНИ^ДДВРДИИИ1 :^^^^^^ДдЬаасдЬсааааассасаЕсад>дЬсЬдаЬааЬЕЬссаедЬ’Ь>адаас1:адааЬаадсаЬсйЬсаЬ>дс дЕЪ д с с дс а д|ИИИИИИИИВИИИЯИИИИВИ1ЯИ)ИИИИИИИИИИИИИ|ИИЯИИИИИИИИИИИИИ1 дЪодтасЪаЪ'Ьадн’Ьса^ду ι -) - д - ι г- - , ι ι - _ ι - д д - д - -ι л.-.’-21‘--<э : ι ; _ι <-('’ д-сссьсс'Ьасдсдацдсддса д|рирМИИИИИ|ИИИИ|1И|И1ДИИ|^ДИИИИИИИИИДИИИ^ИН1 :ИИИИИИИИИИИЯИИИИИИИИИИИИИ1ИИИИрИИИИИИИИИИИ|ИИИИИИИИИ1

8ЕО ГО N0: 30 (интрон 1 №ΜΡΡ3)

- 59 030377 д6а6д66ддсд66да6даа6ссс6ссдааасссса6666с66асд6д6саббад66д66с666дсасс6ддда66д66ес66 д6аа66с66ддд66д6д66д66ддаа6асаа6сад δΕΡ ΙΌ N0: 31 (интрон 2 №МКР3) д6аад6сс666са6а6а6а6дс666а6666са6дс66да6а6а6666асс6адссас66да66дассса6сс666аа ббдсад δΕΡ ΙΌ N0: 32 (интрон 3 №МКР3) д6ас6еб66сс66бсад6аа66а6дд666дсб6аа6абеаба6а6адасб6аас6са6б6аас6абдабабббсбс6 бсад δΕΡ ΙΌ N0: 33 (интрон 4 №МКР3) д6аад6даа6да66аса6666с666а666адсссс66666666сс66а66ад6д6саа6с666с6д66аса6дас6а а6саа6д6666.дбдаааа66адс6ад6аа6б6садаа66аас6сааабд6ас666ддЪа6дааааеад δΕΡ ΙΌ N0: 34 (интрон 5 №МКР3) д66дс6асдассасс66666сд6д66с666дсс66сасаа66а66с6ас6а6а6дс66666сасааад6дад6са6а ас666адсдаса66са6ааасд6дад66аса666аад6дд6дад666д6666са66дсад δΕΡ ΙΌ N0: 35 (интрон 6 №МКР3) д6аад66с6с6а6с66са6д6666с666сс66даад666д66д6д66даа6аас6с66аададсаса6666с6ссд6 ¢6066936.1:63/039 δΕΡ ΙΌ N0: 36 (интрон 7 №МКР3) д6ааа66аад66а66с6с6дд6д66аа66а6дсадд66аа666д66дд6а6ддд66дд6а6а6с6даааас6666аа 6а д δΕΡ ΙΌ N0: 37 (интрон 8 №МКР3) д6дасадс66дд6666дсс6а66666дда666а6666д666сада6аддаааа6дасааа6666а6666а66дадаа ас666д666да6д66а6дс66сад δΕΡ ΙΌ N0: 38 (интрон 9 №МКР3) д6аас66саадаассаса6са6666с6да6да666ссас6666ададс6д6аа6аа6са6с66са66дсд66дс6дс ад δΕΡ ΙΌ N0: 39 (интрон 10 №МКР3) д6аадаа6са6сд6б6а6дб6с6ддадсаадсддадааддааа66еббдд6ад66асс66666666а6дс6а6дс6д сад δΕΡ ΙΌ N0: 40 (экзон 1 №МКР3)

δΕΡ ΙΌ N0: 42 (экзон 3 №МКР3)

- 60 030377

ИВННННИНИНННИНННННВННННННННННИИННИИИНН11

81о II) ΝΟ 1' (экзон 4 Ν!ΜΚΡ3) |^ин^^ннв^^ннв^нн^н^нн|нн^цн||^нин·

ВДНИИ|Й|1^рИрИ|^ДН|1^ДИ|ЙЙИ^ИИИИИ^ИИИ|ИИ|И|ИИИИ|ЙИИ1^^ИиИ^ЙИИ^ИИ^В11

ЯННИИИННИИИИИНИИИИНИННЯНИИНИННИНИИЯЯИИИННИИН111

810 II) ΝΟ 44 (>кюп 5 ΜΙΚΡ3)

810 10 ΝΟ 45 ( экзон 6 ΜΙΚΡΗ

810 II) ΝΟ 46 ( эк,он 7 ΜΙΚΡΗ

810 II) ΝΟ 4 (экзон 8 ΜΙΚΡΗ

810 II) ΝΟ 48 ( эк,он 9 ΜΙΚΡΗ

810 II) ΝΟ 49 ( эк,он |0 ΜΙΚΡΗ

8Е0 Ιϋ ΝΟ: 50 (экзон 11 Ν!ΜΚΡ3) 'ИИИИИИИИИИИИИИИИНИВИИИИИИИИИИИИИРиииииииииииииииинии1

8Е0 Ιϋ ΝΟ: 51 (последовательность кДНК Ν!ΜΚΡ3, предсказанная на основе последовательности клона ВАС) аРддаааРЬдсааадддсаЬдЬс'ЬдЪдЬ'ЬЬсааЪсЬЪЬдаддадддасааеаакдскддс сасааасададбад'ЬасЬаддааЬдеСаддЬЕсЬкдЕаеЬасааа'ЬсаассЬЪдЕкЕЕдЕ ЪсааЪаддЕс'ЬадссаЕскд'ЬадсдъЪдЬдЬдаЪдЕдрдЬЪадсдсардЬ'Ьдадддд'ЬаЬ адаааЬддЬЪдд'ЬсадаадааааааЬЬадаасссЫЕЬддаЕЕдддсаЁЬааадЬЬдсЕа гтг*4” Г γτγτΊ 4~ гт Г'· г* а я'Г* г⁴ ’Н г* Ί* гтГ“ 4~ 4~ Ί~ γ~*+“ Ήγγγ*λ гэ г⁴ г^г* λγτ·Γ Ί“ г^-* г* Г* ^-5%. за4“ Ψ~ г⁴ Ή Ψ* ΓΓίΗ-Γϊ' л λ·α г*’г*5а л- за уф у- у— КД КД у- у* КД у·- У^*· Сл СД у< у>* у- у> у* КД V--· у. ц ЕЛм* у* у* КД у-*' ДД у^ Ο»Λ>· у V—- Сь νί у* К-* К-*я у^_х У* Д* УД УД Лу у· Ку у·- у, КД У КД уД УД уД К^у* КД, УД уД

ЕасссксРЕдддЬЪаададдЕЪддЬдддддсЬРЬЬсРЪеЪЕЬдРЕ'ЬсЕдд'ЬЪа'ЬЬдссЬР

- 61 030377

56136353001151113655553333533ссзз1с111зссззс1сзз111151а1зсс1 5365665^^^^ 03 01011315599^31101101511115^999^^3115113333 03

53535653593533131501103553300001011333155^3515^9^33155^15 53с!033353356°1ас15ддда1сззз0656^оасссс11з15^ооаз15°1азсз11111 351с1с111зс111с106655365551сссс1зз1110656655033СЗ35333СС3Ц3 530011535531511001035011030111536531351510333555351111001311 111353533333063533101515551555553331351330051515301300110315 015515335501115511110303503055335535363515113105501010110515 011011130506015505101111511550005630010311531300113511035636 015331553333053530111531331533551136510113515501503110110511 503335115565535151115505033355031155111110335515035035553555 6360555030555035030655111003333601303303355511133особ0600656 035603335033350030301351553535310310331111315303511536500535 355311551530110551155631315031531001155315513310313033511501 015503115515313010136333331011550013501501310500505111511501 303313313565315115503330310001113555351115035535335111035535 333060315533105333531353355315335501303101533510113355331365 353313010335011033501155535365335111015101355310115530010355 301303535503553155115365333131515130303103501315301301111510 110155511501001303111511106515305300111550501503315011315553 310003011533101555335363115101503011505303111353311011033535 сссзбсбзсзз!060003536303311103365311501033300333511106011531 051311503101110011106011531530115035001531510313535335011003 333551351106531533503311535311513551555330110501155531503100 300105301003011063335531513331011353515011331550315353511500 311151551303511551103553333603350113015101350311113553535315 000333113603555301311333011351553305335501131511503035105000 Ι553Ι303535655333536353553533С313Ц3111551333535315С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сзсззбззбз035061163 555311311553513315103033511503655035510110311510111311005510 311503511150360155115535033131130313003103503053533015503055 063331555303150333501003513313035030111500535303311103553603 350303311353351110536035533101353110035530303351315333115313 530331131101055001335111030360501501503315535155011151115051 ΙΙ553Ι3Ι5ΙΙ3Ι0606536030611150111с1с111зз1111с115з1с1с1с11сс1 511553303311530003351511506550113501511303131555011331015330 збззбз0335с!055511511155336011151315315533331333311311106566 5333533630660356363065060610033565336с1сс1с11з103635336ссззс 353003530001330155003601151553535511531111350331011035510053 131501001030315001060515115053550011303150301110111551553335 3353065533665105563553035503505563331013010133130353особенс 050363566533003506506553сззз1ззззз1з5з1551з1сз5сз1с1сс1сзз11 551115031531013055601353115351313311003035531003301315111535

- 62 030377 ддаасад66сдсадсаасс6адасссдс66даадад6а66сада6даасааа666дддад дсдсбсдабаадбдбсадсбаддадаадаадбдаддаадааадааддсааасбббаббсб асадбабсбдадаабддададаасбддадбдбаддссаааддсадсбддбсбдссббддс сдбдбдсбасбдааааададсааддбссбддбссббдасдаддсбасадсабсбдбсдас асбдсаасбдабаабсббаббсадсааасбсбааддсбдсасббсбсбдаббссасддбб абаассаббдсбсабаддаббасабсбдбдсббдасадбдабабддбссбасбаббадаб сабдддсбсаббдсбдаабасддсасбосадссаддббдббададааедаабссбсаб+д бббдсбаадсбсдбддсададбабадбабдаддбсаааббсаадббббдадаабдбббса дасабдбда

8Ер Ю N0: 52 (белковая последовательность №МКР3, 5'-3' - обозначает предполагаемый стопкодон)

МЕТЛКСМЗУЕОЗЬККВББЛСНКОЗЗТКМЛКЕЬУУКЗТЬЕСЗТСЬЛТЕЗЕУЬСЬЬЛНЕУБУ КБС№8ЕЕК11ТЬЬБЕАЬКЬЬА№Ь313УЕЬНТ0ЕЬМЗСЕТКУРЬУЬКУ1»СЬЕЕЕУЗСУСЬ У1БЬУУСЕКН03ЬРТ0ЕС1РВУУЕТЬМСЬЕЕСЕУСЕ1УКТЕ8ЕЕЫМЬ0ЕРЬЬБСЗУАБСМ ВЗККЗТСВОТУТРУАБАРЛЕЗЬЕТЕЗКМСРЫЗУСЫККРЬВБЕВУРОЬНЕВВЗУКСЗЕР! ЕКЕКЬЕЗУСССМЗМКУТТЕМЬУКАЬУЕТАККЕТУЬЗАЬГУЬЬУАЬАЗЕУСРУЫБТБУОУ ЬБСККВЕВЫЕСУУЬУААЕЕУАКЬУЕСЬАОКНАЕЕКУООСеУРАКААЬУЗКТУЫКСЬТЬЗС О 5 КО 8 НТ 8 СЕ 11N ЕМТ УБАЕК1 СО Ε®ίΥΜΗϋ РУШУ IОУАЕЛЬУ! Ь УКМЬСЬААТААЕУА ТИУМБАРЛРЬСЗЬОЕКЕОЕКЬМЕЗКВКРМКАТЗЕУЬКММРТБКЬОАКТЕМКЕЬЗРИБЬК ТТЕАСКЬМКУУУТЗАМТТЕУЕБУАРТЕУЗУТТЕСААМЬМС1РЬЕЗСК1ЬЗАЬАТЕК1Ь0Е Р1УМЬРБТ13М1А0ТКУЗЬБК1АЗЕЬЗЬББЬ0РБУ1ЕКЬРКСЗЗБЕА1Е1УССМЕАШБАЗ ТЗТРЬЬКБУ1'ТЬРУЬЫСМКУА1ССТУСЗСКЗЗББ331ЬСЕМРКБЗСТ1КЬЗСТКАУУАОЗР РЛОЗСК1ЕЕ1\ЛЬЕСКЕМОКЕКУБКУЬЕАСЗЬККБЬЕ1ЬЗЕСБОТЕ1СЕКС1МЬЗССОКОК 101АРААУ0ОАОУУЬЕООРЕ8АУГЗАНТЕЗНЬГ8ЕС1МеЬЬЫ8КТУЬУУТН0УЕЕЬРАУГ')Ь 1ЬУМКОЕР18ЕТЕКУЫОЬЬКЬеЗГ')ЕМЕЬУСАН0ЕАЬТА1Г')ТУКЕЕАЬКК8ЕЕМТСГ')ЫТМУ ОКБКМТЗБСОМСКУББТУСТКСОТУОЕЕЕКЕКСЗУСЕЗУУИКУТТТАУССАЬУРЕМБЬАО УЕЕ0ЬЬ01СЗЫУАМАИАТРУЗКЗЕРРРУСЗЗТЫ1УУУАЬЕ1АЗАЬС1ЬАКТМЕЬУТАСУ КТАЗЬЬЕНКМНЬСТЕКАРМЗЕЕБАТРЗСКТЬМРАЗТБОЗАТБЬМУРТОУСЗЕАЕТИОЬЬ ΘΙIеУМЗОУААОУЕТУЕ!РУТАУСТАЬЕОУУ!РЗАКЕЬАКЬМСТСКАРУТСНЕАЕТ!3Θ3 ЗТТРЗЕБОЕЗРЕОВТЗМКЫВБУЗРРКЕНТАААМЕБЬСЬРЬВМЬЗЫТЕАЕЗЫЕЫЗЬР УСТЮРЗУАСЬАУТУСЬМЬМИОАКУУЗТОЬСММЕМКИЗУЕКТЬОУТАЬРЗЕЗРЫТЕЗМ КРГЗРЬШРЗССЕУОЕЗРЬОУКУАРНМРЬУЬРСЬТСТЕЕЕСККТСТУЕКТЕЗЕКЗТЫОТЬЕ К1УЕРААС01К1БС131831СЬНБЬКЗКБ811Р0БРТМЕЕСТУКЗМЬБРЬЕЕУЗБЕ01Р/Е АЬОКСОЬеЕЕУРККЕЕКЬУЗТУЗЕМЕЕЖЕЗУЕОКОЬУСЬЕРУЬЬККЗКУЬУЬГЗЕАТАЗУР ТАТОЫЫ00ТЬКЬНЕЗРЗТУ1Т1АНК1Т8УЬГЗЗГ')МУЬЬЬГЗНСЫАЕУСТРАРЬЬЕМЕЗЗЬ ЕАКЬУАЕУЗМКЗМЗ 3 ЕЕМУЗ БМСПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> РЫПр Могг15 Ргойисбз 5.А.

Воуеб, Ьисяеп <120> Снижение содержания тяжелых металлов в растениях <130> 307486-20547 <140> РСТ/ЕР2011/004383 <141> 2011-08-31 <150> ЕР 10009180.0 <151> 2010-09-03 <160> 148 <170> Ра6еп61п уегзяоп 3.3 <210> 1 <211> 9001 <212> ДНК <213> Ы1соб1апа баЬасит <400> 1 бссбадбасб дбаадбдаас садсааддаа асбдсааадб адаббБсББд Ббсабсаааб 60 ааабссббда дсбдададаб абдабБББББ сбааддаабб БсбсбББддс бсбс+дбадб 120

- 63 030377

ддбдадбббд	аббсабаббб	саабсбадбб	бббадсбббд	сббаааадсб	бсббсббдсс	180
асбадассаа	абссббббсс	бббббдсабд	асасбббббб	дадбббсабб	бсбсббаббб	240
абададаааа	бсббббдабд	дддабддббб	бббббсбсбб	ббдсаббааб	даббадаабб	300
бабсаббдбб	ааабддбасб	сссбсаабаа	сбббббдабб	бааааааааа	асбдбссббб	360
саббсабааб	сабсабсбсс	бббаббабаб	басбсбааас	бдббдсбааа	дббссббббб	420
дбабаббббс	ссбасабдаа	сббббдсбдб	асбдбдааад	ббдабдаасб	бббаббдбас	480
аабдббббдд	бссадбадсб	аасадсссбб	ббабббаабб	сбдададдбс	бсбббсбсбб	540
бсбсббсаса	сбббсасабд	бббссдбббс	сбдбадаббб	сбссбббсбс	бббссббддб	600
бсбббббсса	асбсабаабс	ббсабдбдаб	ббсааббббб	дбббдббббб	аббссабссб	660
ббдбсбсббб	бдабабдддб	дасааасабс	ббсбсббдсб	даабаааааб	ббсассбббб	720
ббсадбдбаб	дсадаббсад	дддабабааа	дасабааадд	абдаабсббб	бабддбабаа	780
сабддабабд	аддаасадба	бдбсббсада	абсббдббба	дсабсасббб	сббдббсбдс	840
сбссасаббб	саабсдбсад	аддаббсадс	адббдббааа	бддббаадаб	бсаббббссб	900
сбсбссабдб	ссасааадда	сбсббсбабс	ббссаббдаб	дбдсбдсббб	бдсббасббб	960
саббдбаббб	дсадбасааа	адббдбасбс	ааадббдадд	бссаабдадс	асбсбасббс	1020
бадсаббдаб	аадссбсбаа	ббдсасасаа	саддасббсб	дббадаасса	абсбббддбб	1080
баадсбдбсб	сбдаббббдб	садсбабббб	адссббабсб	бсбабадббб	бабдсабббб	1140
ддббаббдбд	ддаааббссс	адбсдссббд	дааадбсаба	дабддасбдб	аббддббдбб	1200
бсаддсдабб	асасабдббд	баабсасбаб	асбаабадбб	сабдадаааа	дабббсасдс	1260
бабббсссаб	ссасбдбссс	бдсдсдбдбб	ббддаббдса	аасбббдбад	ббабдадббб	1320
дббсбббддб	бдбдддабса	сааддсббдб	дбсасббаад	даааббдабс	сбаабббаад	1380
аабддабдаб	абаадббсаб	бадбббсабб	бссбабббсб	дббдббсбсб	бсаббдббдс	1440
саббаааддб	бсдассддад	ббдсбдбааб	бадбдаббсб	даабсбсасб	баадбдабда	1500
аассаабддб	бабдаасбсс	бддабааабс	садбдбдадб	ддсбббдсбб	садсббсбсб	1560
аабабсдааа	дссббббдда	бббддабдаа	сссбббасбд	саааааддбб	асаадбсасс	1620
бсбсаадабб	дабдаадббс	сббсасбббс	сссасбдсаб	ададсадада	ааабдбсбса	1680
асббббсдаа	адаааббддс	сбааассбда	адааабабса	аадсабссбд	бссдаасаас	1740
аббдсбдсдб	бдсббббдда	аддаадббаб	ббббасбдсс	аббсббдсад	бааббадддб	1800
абдбдббабд	бабдбадддс	саасасбсаб	асааадаббб	дббдаббаса	садсаддааа	1860
даддасабсб	ссббабдаад	дабасбассб	бабаддаасб	сбссбаабад	ссааабббдб	1920
ддаадббсба	ассбсбсабс	адббсаасбб	баасбсссаа	аадсббддса	бдсббаббсд	1980

- 64 030377

адсдасасЕЕ	сЕсасЕЕсЕЕ	ЕдЕаЕаадаа	ддддЕЕаадд	ЕЕдЕсаЕдсЕ	садсЕадаса	2040
ддсЕсаЕддЕ	дЕЕддасада	ЕЕдЕаааЕЕа	ЕаЕддссдЕс	даЕдсЕсадс	адсЕдЕссда	2100
ЕаЕдаЕдсЕа	садсЕасаЕЕ	ссаЕЕЕддсЕ	саЕдссаЕЕд	саадЕЕЕсЕд	ЕддсЕЕЕадд	2160
саЕссЕЕЕаЕ	асЕЕассЕсд	дЕдсЕЕсаас	ЕдЕЕдЕаасд	сЕадсЕддас	ЕЕдсадсадЕ	2220
даЕддЕаЕЕЕ	дЕддЕдЕЕЕд	даасЕаааад	ааасаасадд	ЕЕЕсааЕЕЕа	асаЕсаЕдаа	2280
дааЕсдЕдаЕ	ЕсЕадааЕда	аадсдасааа	ЕдадаЕдсЕЕ	ааЕЕаЕаЕдс	дсдЕЕаЕааа	2340
дЕЕссаддса	Едддаадаас	аЕЕЕЕаасаа	аадааЕЕдаа	ЕссЕЕссдсд	ааЕссдадЕа	2400
ЕддаЕддЕЕд	ЕссаадЕЕсЕ	ЕдЕасЕсааЕ	сдсЕдддааЕ	аЕсаЕЕдЕсЕ	ЕдЕддадсас	2460
ЕссЕсЕЕсЕа	дЕддсЕасас	ЕсасЕЕЕЕдд	аадЕдсааЕс	ЕЕдЕЕдддаа	ЕсссдсЕЕдд	2520
Едсадддаса	дЕдЕЕсасЕд	саасаЕсЕсЕ	сЕЕсаадаЕд	ЕЕдсаддаас	сдаЕсадддс	2580
ЕЕЕсссЕсаа	ЕссаЕдаЕсЕ	сасЕЕЕсаса	адсааЕдаЕа	ЕсЕсЕЕдаЕа	даЕЕддасаа	2640
аЕаЕаЕдаЕд	адЕааддадЕ	ЕадЕддаЕаа	адсЕдЕддаа	адасЕадаад	дЕЕдЕддддд	2700
ЕасааЕЕдсЕ	аЕдсаддЕда	аадаЕддадс	ЕЕЕЕЕдсЕдд	даЕдаЕдааа	асадЕааада	2760
адааЕЕдааа	ааЕдЕааасЕ	ЕЕдадаЕЕад	ааааддадад	сЕЕдсадсад	ЕадЕддддас	2820
адЕЕддддсд	дддаадЕсЕЕ	сссЕссЕЕдс	аЕсЕдЕасЕЕ	ддЕдадаЕдс	асаадЕЕдЕс	2880
дддЕсаддЕа	ЕддсЕсЕсаЕ	ссЕЕсЕдЕЕЕ	дЕЕЕдаЕЕаа	ЕасааасЕЕЕ	дсЕдссааЕЕ	2940
ассЕЕЕЕдсс	ссЕЕдЕЕдсЕ	ассЕсЕЕЕЕс	ЕдЕддЕаЕаа	ааааЕЕааЕд	ЕаддсЕааЕд	3000
ЕдЕададЕдд	аддЕаЕЕаЕа	Едсадаасаа	ЕЕдсааЕсаа	дсааЕЕассЕ	дЕдадаЕасЕ	3060
аЕЕЕЕдЕЕЕЕ	саЕаЕЕадЕд	дасЕддЕаса	ЕЕсЕсаЕЕдд	ЕдЕаЕсдЕЕЕ	даЕсЕссасс	3120
ааадсададд	ЕЕЕЕасЕддс	сдасададЕс	ааасЕасЕдЕ	дсЕЕсасЕсс	ЕЕЕЕасЕсса	3180
аЕссЕЕадЕа	дЕсЕЕЕдсЕЕ	сЕааЕдаасЕ	ЕсаадсдЕдЕ	ааЕадаааса	ссаЕЕаЕаЕЕ	3240
аЕЕадсЕдаЕ	ЕадЕЕасЕЕЕ	асааЕЕссад	адсаЕаЕЕЕа	саЕЕЕЕсЕдс	ЕЕддЕЕдЕсЕ	3300
аЕЕасЕсЕдд	аЕаасадЕсс	ЕаааЕдсаад	сааааЕсаас	ЕдЕдЕЕЕЕса	дЕсЕЕдадсЕ	3360
дассааЕЕад	ЕЕсаЕдаЕдЕ	ссЕсадсЕЕд	ЕссаадсЕдд	ЕдссЕсассд	дааЕЕаЕдЕд	3420
ддассЕЕсдЕ	асЕЕааЕсаа	сЕадЕЕсасс	ЕЕсЕЕсЕЕаа	аааЕаЕЕдаа	ЕдаЕЕЕдаЕЕ	3480
ддЕЕааЕадЕ	ЕссЕЕаааЕд	ЕадЕааЕЕаЕ	ЕЕдсЕаасЕЕ	асЕЕЕассаа	ссссЕЕдЕсс	3540
аасаддЕсас	ааЕЕЕдЕддЕ	ЕсаасЕдссЕ	аЕдЕЕдсаса	аасаЕсдЕдд	аЕЕсадааЕд	3600
дсасдаЕаса	адааааЕаЕс	сЕдЕЕЕддЕа	ЕдссааЕдаа	сададасада	Еасааддаад	3660
ЕдаЕссдддЕ	ЕЕдсЕдсЕЕд	дадааддасЕ	ЕддаааЕааЕ	ддадЕЕЕдда	дассадасЕд	3720
аааЕаддада	асдЕддсаЕс	аассЕсадЕд	дЕддЕсадаа	дсадсдааЕс	садсЕЕдсаа	3780
дадсЕдЕЕЕа	ссаддасЕдЕ	даЕаЕЕЕаЕс	ЕЕсЕадаЕда	ЕдЕаЕЕсадЕ	дсадЕЕдаЕд	3840
сЕсасасЕдд	сЕсЕдаааЕс	ЕЕсааддЕЕа	даадЕссаса	аЕдЕсаЕдЕд	ЕсаЕЕдаада	3900

- 65 030377

ЕЕЕааЕЕЕаа	даЕадаааЕЕ	асаЕЕдЕЕЕс	аЕЕсЕдсааа	ЕЕаЕддассЕ	аЕсададааа	3960
ааЕсаЕддаЕ	ЕЕЕдааЕддс	ЕасЕЕЕсссс	адЕдаадаса	саЕаЕсаЕЕЕ	ссЕдддадда	4020
адаЕдЕдааа	дЕддсаадсЕ	аЕЕЕасЕсса	аааадЕаЕаа	ЕсЕаааадас	ЕЕЕЕаЕЕаад	4080
ЕЕЕддааддс	ЕЕааЕссаЕс	аЕЕЕдЕЕаЕс	ЕдЕЕдЕсЕас	ЕЕдЕсЕЕЕаЕ	ЕааааЕЕсЕЕ	4140
сЕЕадЕссаа	ЕсасЕЕЕсда	ЕдаадЕЕдас	ЕадЕсЕЕадЕ	сассЕдааЕа	сЕЕЕаааЕсЕ	4200
ЕЕдссЕЕддЕ	дЕсЕсЕаЕаЕ	ЕЕЕсадссаЕ	сЕсааЕЕссд	аадсЕсаЕаЕ	ЕЕдЕЕЕЕсЕс	4260
ЕЕЕдЕааЕдЕ	ссаЕсЕдааа	дЕЕЕсаЕдсЕ	ЕЕЕЕЕдсадд	ааЕдЕдЕдад	дддааЕЕсЕЕ	4320
ааадаЕаааа	ссаЕЕЕЕдсЕ	ЕдЕсасасас	саадЕЕдасЕ	ЕсЕЕдсаЕаа	ЕдЕЕдассЕд	4380
аЕссЕЕдЕаа	дЕЕЕсададЕ	дЕЕЕЕаЕсаа	ссссЕЕЕдда	ассаадЕдЕс	аададЕадЕд	4440
ЕЕЕсЕЕддЕЕ	дЕЕаааЕдаЕ	ЕсасаЕдЕдЕ	дЕЕддЕЕЕсЕ	аЕаааассЕд	аасЕЕЕаЕдЕ	4500
ЕЕЕаЕсадад	ЕдЕЕЕЕдсЕЕ	ЕсЕЕдааддЕ	саЕдсдадаЕ	дддаЕдаЕсд	ЕдсааЕсЕдд	4560
саааЕаЕааЕ	дадаЕаЕЕад	аадсЕддааЕ	ддаЕЕЕЕааа	дадсЕадЕад	сЕдсасаЕда	4620
дассЕсЕЕЕа	даасЕЕдЕЕд	асдЕддааас	аассааадад	адсааЕдссЕ	сссЕЕдаада	4680
аЕсааааЕсЕ	ЕсЕсдаадаЕ	ЕаЕсЕаадда	адаааасдда	даЕдаЕаааЕ	сЕсаасадЕс	4740
ЕасаЕсЕдаЕ	аддддддаЕЕ	сЕааасЕЕаЕ	аааддаадаа	дааададааа	сЕддаааадЕ	4800
садЕссЕсдЕ	дЕдЕасаадс	ЕаЕаЕаЕЕас	ЕдаадсЕЕЕЕ	ддаЕддЕддд	дЕдЕадЕдсЕ	4860
адЕЕаЕсЕЕд	ЕЕЕЕсдЕЕсЕ	ЕдЕддсааад	ЕЕсЕсЕааЕд	дсаадЕдаЕЕ	аЕЕддсЕддс	4920
аЕаЕдааасЕ	ЕсадсддаЕс	дЕдссаЕдЕс	сЕЕсааЕссЕ	ЕсЕсЕдЕЕЕа	ЕЕдддаЕаЕа	4980
сддЕдЕЕаЕЕ	дсадЕЕдЕЕЕ	сЕЕсдЕЕдсЕ	даЕадЕдаЕс	аддаЕдЕаЕЕ	ЕЕдЕдасасЕ	5040
ЕаЕддддсЕс	аадасЕдссс	аааЕаЕЕЕЕЕ	сддасадаЕЕ	сЕЕЕасадса	ЕасЕдсаЕдс	5100
ЕссЕаЕдЕса	ЕЕЕЕЕЕдаса	саасассЕЕс	сддаадааЕЕ	сЕдадЕсддд	ЕаааЕЕЕсЕд	5160
аддасаадЕЕ	ЕЕЕссЕЕЕЕд	саЕдЕаааЕЕ	сааасЕЕЕдс	ЕдсЕЕадаЕд	аЕЕаааЕааЕ	5220
даааааЕаЕс	саЕЕдсаЕдЕ	ЕЕЕааЕдЕдЕ	аЕдасаЕдЕЕ	адааЕЕЕЕда	аЕадаадЕЕс	5280
аЕЕсасЕдаЕ	дЕЕдадаЕдЕ	ЕЕЕдЕЕЕЕЕЕ	ЕЕсЕдсаддс	аЕсЕааЕдаЕ	садассааса	5340
ЕЕдаЕдЕсЕЕ	ссЕсссдЕЕЕ	ЕЕЕаЕдааЕс	ЕсасЕЕЕддс	саЕдЕЕЕаЕс	асасЕдсЕсд	5400
дсаЕсаЕсаЕ	саЕсасаЕдс	сааЕаЕЕсЕЕ	ддссЕассдЕ	асЕасЕЕЕЕд	аЕЕссЕсЕдд	5460
дЕЕддсЕЕаа	ЕаЕсЕддЕас	сдддЕаЕдад	сасЕдЕЕЕаЕ	аасадссдЕс	сЕЕЕЕЕЕсЕЕ	5520
ЕЕсЕЕдЕсЕд	аасЕсаааЕЕ	ЕдааЕссЕЕЕ	дЕЕЕададдс	ааЕЕадЕсЕд	сЕсЕдадсаЕ	5580
ЕЕЕддсЕдас	адЕЕаЕЕаЕд	ЕаЕаЕЕаааа	ддсаасЕЕЕЕ	ЕЕаЕЕсдЕЕс	ЕдЕссадсЕа	5640
ааасЕЕЕЕЕа	сЕЕааааЕдЕ	ддЕЕаасЕдс	аЕаЕЕЕсЕдЕ	дЕсЕссЕаЕЕ	ЕЕЕЕдаЕЕаЕ	5700
ЕЕдсаасЕсЕ	даЕсааЕсЕа	даЕЕЕдддда	аддсЕЕдЕЕд	ЕЕадЕЕдаЕд	асЕадаЕасЕ	5760

- 66 030377

аадс+саса+	с+аса++дд+	+дсаад+ада	а++++саад+	+д+са++сас	++а+а++д++	5820
+даас+адда	да++адса++	с++с+дсаад	дадссс+даа	+дс++даааа	д++ааасада	5880
ааадааааад	++садддсад	а+адаса+аа	+д+д++ааад	+аа++саа++	ддадсасада	5940
+а+а+даса+	д+д++а+++д	ддадс+асда	аааада+аад	дас+а++а+д	+адас+асаа	6000
++дааа+аас	адд+аа++са	+++с+дд+++	асаддда+а+	+а+с++дсаа	са+с+сд+да	6060
а++дас+сдд	с++дас+саа	++асаааадс	асс+д++а++	са+са+++с+	с+дааадса+	6120
с+садд+д++	а+дас+а+ас	д++дс+++ад	даадсаддад	а+д++++д+а	асдадаа+д+	6180
ааассдад+д	аа++ссаа+с	+дсдаа+дда	+++ссасаас	аа+дда+сса	а+даа+дд++	6240
дддс+++сда	с+ддаа++да	+дддаадс++	ас++с+++д+	д+++с+дсаа	+д++са+да+	6300
+д+с++асс+	адсадса+са	+саадссадд	+а+аасассд	+ссаа+дс+с	а+++а+ддда	6360
а++а+ааа++	с+ад+а+++д	а+аа+сс++с	+д+ас+++ад	а+с+асс+дс	+с+ас+дааа	6420
аа+дааа+да	д+а+даддаа	а+адаа+а+с	сд++дадса+	++а+д+с+++	с+а++ааааа	6480
+++дса++с+	а+с++с++д+	++саад+саа	аа+с++даас	аас+а+а+с+	ададаа++++	6540
сс++с++д+д	аад+аа+дса	+а+а+аса+с	аададаад+с	адад++дс+д	аа+дааа+ад	6600
+ада+сааа+	++аад+д++д	+дсс+а+ааа	даа++д+а+д	д+дада++да	а+а+ад+дд+	6660
са+а++а+++	+с+саа+с++	ад+да++ааа	д+а++сса+а	сааасадаса	адса+++ад+	6720
сд+дса++са	++ддсас+ас	аааа++а+са	ассаадад+а	а+а++с+++с	адс+++сс+с	6780
+д+а+а+д+д	+д++с+а++с	+ддадс+даа	да+аас+аа+	а++с++++++	а+++с+асад	6840
аааа+д++дд	+++д+сас+а	+са+а+ддс+	+д+с+с++аа	+ад+д+сс+а	++с+дд+сса	6900
+с+++д+дад	++дс+++д+д	даааа+аааа	+дд+++с+д+	сдааада++а	ааасад++с+	6960
садааа+асс	а+садаадса	дад+ддадаа	ада+дда+++	+с+сссасс+	+саад++ддс	7020
саадссд+дд	даа+д++дад	с++даааасд	+дсадд+аа+	аа++с+аас+	аа++с+д+дд	7080
++дс+а+++д	с+адса+++д	сасаааадда	ааас+а+ааа	аад++са+ад	+ааддаадад	7140
аддд+адс+д	+а++аасаад	сс+асада++	с+++аа+++с	ааа+а+д++а	сд++даа+с+	7200
с+а+а++д++	+д++с+ас+д	д+саасадд+	+ада+а+сд+	ссдаасас+с	с+с+ад+дс+	7260
+аааддад++	ас+с+садса	++ададдддд	ададаада+а	дд+д++д++д	д+сд+асадд	7320
ддд+ддаааа	+сааса++аа	++саад++++	с+++сд+++д	д+ддадсс+д	садс+ддаад	7380
аа+аа+са++	да+дасд+ад	а+а+а+ссад	ас++дддс++	са+да+с++а	да+с+сдс++	7440
сддда+са++	ссссаададс	сад+сс++++	+дааддаас+	д+дадаадса	аса++дассс	7500
са++ддасаа	+а++сада+д	а+дааа+++д	даадд+аа+с	+аас++дс+д	ас+дааа+аа	7560
+++асааааа	+с+саааа+а	+ад+асадад	++адссааас	а+д+с++с+д	ад+дс+дада	7620
+с+++++дда	++а+ааа++с	+д+аададса	аса+ас+а++	+д++ад+дад	аадаааадса	7680

- 67 030377

+а+ас+ссад	+д++++д++а	+с+сссадаа	+д+с+с+аас	а+дааа+сд+	д+аса++дса	7740
дадсс+сдаа	сдс+дссаас	+сааада+д+	дд+д+с+++а	ааасссдааа	аас++да++с	7800
ассадд+ааа	++++сс+сс+	с+асд+са+с	с++д+дд++с	+++дсддаа+	+а+дсаасса	7860
ас+++++а+д	+д+++сааа+	а+а+а+ас+д	а+аас+даа+	ас+д+са++д	д+ааа+са+а	7920
д++д++да+а	асддада+аа	с+ддад+д+с	ддасададдс	адс++с+++д	с++дддаада	7980
д+да+дс+аа	аасд+адсад	ас++с+а+++	а+дда+дадд	саас+дсс+с	+д++да++са	8040
садасада+д	сад+да++са	даааа+са+с	сдсдаддас+	++дсддсс+д	+ас+а+аа+с	8100
адса++дссс	асадаа+асс	аасад+са+д	дас+д+да+а	дад++с++д+	+а+ада+дса	8160
дд+дс+да++	+с+с+сс+++	+ас+++д+ас	с++а++++да	а+с+дд+ааа	+да++а+++а	8220
+с+д+а+д+д	а+дд+++сса	ассаа+са+а	д+сад+асс+	++а+даадаа	а++дсс+аа+	8280
д++адссаад	+ад+ад+ааа	+дса+даад+	са++адсс+а	+++д++++дд	а++++д+дад	8340
+++са+ас++	сааас+ддаа	дс++а+дс+а	+ас+а+с+да	+ссс++д+++	д+а+ада++д	8400
с+++с++++с	с+++++с+сд	да+++а+с++	а+а+а+аадс	ддасадад+а	ааадаа+д+а	8460
ааса+дсд+а	а+++дасс+а	++а+адсада	++а+++д+с+	+а++++ссад	д+сдс+да++	8520
ссас++а++а	ддад+ад++а	сасд+а+++а	+с++++аад+	дааа+аа+ад	+д+ааад+++	8580
с++++ддсас	+д+сдд+д+а	аадаад++аа	ас+сс+++с+	++аассссдд	са+++с++а+	8640
+са+дсадда	а+адсаааад	ад+++дасаа	асса+с+сд+	++дс++дааа	ддсс++сас+	8700
++++ддддс+	++дд++саад	аа+а+дссаа	ссда+сс+с+	дадс+с+аас	сасас+а+++	8760
+ддс+++са+	дсс++++дс+	д+ааа++дса	дс+а+с++дд	адда+адд+д	ааасаддааа	8820
аа+асс+а+с	сааа+д++ас	а+ада+++сс	ааа+ад+д++	а+с+сс+ас+	аадс+а+сса	8880
д+ада+++++	ддааа+д+аа	саа+а++ддд	а++аасаа++	д+аа++да+д	аа+с+а++аа	8940
+сааа+асаа	+да++а++с+	д++а+ада+д	+ад+с+д+дс	аа+д++а+а+	адас+да+++	9000

с 9001 <210> 2 <211> 7526

<212> ДНК
<213> Ы1со+1апа +аЪасит
<400> 2
а+дда+а+да	ддаасад+а+	д+с++садаа	+с++д+++ад	са+сас+++с	++д++с+дсс	60
+ссаса+++с	аа+сд+сада	дда++садса	д++д++ааа+	дд++аада++	са++++сс+с	120
+с+сса+д+с	сасаааддас	+с++с+а+с+	+сса++да+д	+дс+дс++++	дс++ас+++с	180
а++д+а+++д	сад+асаааа	д++д+ас+са	аад++дадд+	ссаа+дадса	с+с+ас++с+	240
адса++да+а	адсс+с+аа+	+дсасасаас	аддас++с+д	++адаассаа	+с+++дд+++	300

- 68 030377

аадсбдбсбс	бдаббббдбс	адсбабббба	дссббабсбб	сбабадбббб	абдсаббббд	360
дббаббдбдд	даааббссса	дбсдссббдд	ааадбсабад	абддасбдба	ббддббдббб	420
саддсдабба	сасабдббдб	аабсасбаба	сбаабадббс	абдадаааад	абббсасдсб	480
абббсссабс	сасбдбсссб	дсдсдбдббб	бддаббдсаа	асбббдбадб	бабдадбббд	540
ббсбббддбб	дбдддабсас	ааддсббдбд	бсасббаадд	аааббдабсс	баабббаада	600
абддабдаба	баадббсабб	адбббсаббб	ссбабббсбд	ббдббсбсбб	саббдббдсс	660
аббаааддбб	сдассддадб	бдсбдбаабб	адбдаббсбд	аабсбсасбб	аадбдабдаа	720
ассаабддбб	абдаасбссб	ддабааабсс	адбдбдадбд	дсбббдсббс	адсббсбсба	780
абабсдааад	ссббббддаб	ббддабдаас	ссбббасбдс	аааааддбба	саадбсассб	840
сбсаадаббд	абдаадббсс	ббсасбббсс	ссасбдсаба	дадсададаа	аабдбсбсаа	900
сббббсдааа	даааббддсс	бааассбдаа	дааабабсаа	адсабссбдб	ссдаасааса	960
ббдсбдсдбб	дсббббддаа	ддаадббабб	бббасбдсса	ббсббдсадб	ааббадддба	1020
бдбдббабдб	абдбадддсс	аасасбсаба	сааадабббд	ббдаббасас	адсаддааад	1080
аддасабсбс	сббабдаадд	абасбассбб	абаддаасбс	бссбаабадс	сааабббдбд	1140
даадббсбаа	ссбсбсабса	дббсаасббб	аасбсссааа	адсббддсаб	дсббаббсда	1200
дсдасасббс	бсасббсббб	дбабаадаад	дддббааддб	бдбсабдсбс	адсбадасад	1260
дсбсабддбд	ббддасадаб	бдбаааббаб	абддссдбсд	абдсбсадса	дсбдбссдаб	1320
абдабдсбас	адсбасаббс	сабббддсбс	абдссаббдс	аадбббсбдб	ддсбббаддс	1380
абссбббаба	сббассбсдд	бдсббсаасб	дббдбаасдс	бадсбддасб	бдсадсадбд	1440
абддбабббд	бддбдбббдд	аасбаааада	аасаасаддб	ббсаабббаа	сабсабдаад	1500
аабсдбдабб	сбадаабдаа	адсдасаааб	дадабдсбба	аббабабдсд	сдббабааад	1560
ббссаддсаб	дддаадааса	ббббаасааа	адааббдааб	ссббссдсда	абссдадбаб	1620
ддабддббдб	ссаадббсбб	дбасбсаабс	дсбдддааба	бсаббдбсбб	дбддадсасб	1680
ссбсббсбад	бддсбасасб	сасббббдда	адбдсаабсб	бдббдддааб	сссдсббддб	1740
дсадддасад	бдббсасбдс	аасабсбсбс	ббсаадабдб	бдсаддаасс	дабсадддсб	1800
ббсссбсааб	ссабдабсбс	асбббсасаа	дсаабдабаб	сбсббдабад	аббддасааа	1860
бабабдабда	дбааддадбб	адбддабааа	дсбдбддааа	дасбадаадд	ббдбдддддб	1920
асааббдсба	бдсаддбдаа	адабддадсб	ббббдсбддд	абдабдаааа	садбааадаа	1980
дааббдаааа	абдбааасбб	бдадаббада	аааддададс	ббдсадсадб	адбддддаса	2040
дббддддсдд	ддаадбсббс	ссбссббдса	бсбдбасббд	дбдадабдса	саадббдбсд	2100
ддбсаддбаб	ддсбсбсабс	сббсбдбббд	бббдаббааб	асааасбббд	сбдссаабба	2160

- 69 030377

ссббббдссс	сббдббдсба	ссбсббббсб	дбддбабааа	аааббаабдб	аддсбаабдб	2220
дбададбдда	ддбаббабаб	дсадаасааб	бдсаабсаад	сааббассбд	бдадабасба	2280
ббббдббббс	абаббадбдд	асбддбасаб	бсбсаббддб	дбабсдбббд	абсбссасса	2340
аадсададдб	бббасбддсс	дасададбса	аасбасбдбд	сббсасбссб	бббасбссаа	2400
бссббадбад	бсбббдсббс	баабдаасбб	саадсдбдба	абадааасас	саббабабба	2460
ббадсбдабб	адббасббба	сааббссада	дсабабббас	аббббсбдсб	бддббдбсба	2520
ббасбсбдда	баасадбссб	ааабдсаадс	аааабсаасб	дбдббббсад	бсббдадсбд	2580
ассааббадб	бсабдабдбс	сбсадсббдб	ссаадсбддб	дссбсассдд	ааббабдбдд	2640
дассббсдба	сббаабсаас	бадббсассб	бсббсббааа	аабаббдааб	дабббдаббд	2700
дббаабадбб	ссббааабдб	адбааббабб	бдсбаасбба	сбббассаас	сссббдбсса	2760
асаддбсаса	абббдбддбб	саасбдссба	бдббдсасаа	асабсдбдда	ббсадаабдд	2820
сасдабасаа	даааабабсс	бдбббддбаб	дссаабдаас	ададасадаб	асааддаадб	2880
дабссдддбб	бдсбдсббдд	адааддасбб	ддааабаабд	дадбббддад	ассадасбда	2940
аабаддадаа	сдбддсабса	ассбсадбдд	бддбсадаад	садсдаабсс	адсббдсаад	3000
адсбдбббас	саддасбдбд	абабббабсб	бсбадабдаб	дбаббсадбд	садббдабдс	3060
бсасасбддс	бсбдааабсб	бсааддббад	аадбссасаа	бдбсабдбдб	саббдаадаб	3120
ббаабббаад	абадааабба	саббдбббса	ббсбдсаааб	бабддассба	бсададаааа	3180
абсабддабб	ббдаабддсб	асбббсссса	дбдаадасас	абабсабббс	сбдддаддаа	3240
дабдбдааад	бддсаадсба	бббасбссаа	ааадбабааб	сбаааадасб	бббаббаадб	3300
ббддааддсб	баабссабса	бббдббабсб	дббдбсбасб	бдбсбббабб	ааааббсббс	3360
ббадбссааб	сасбббсдаб	даадббдасб	адбсббадбс	ассбдаабас	бббааабсбб	3420
бдссббддбд	бсбсбабабб	ббсадссабс	бсааббссда	адсбсабабб	бдббббсбсб	3480
ббдбаабдбс	сабсбдааад	бббсабдсбб	ббббдсадда	абдбдбдадд	ддааббсбба	3540
аадабаааас	саббббдсбб	дбсасасасс	аадббдасбб	сббдсабааб	дббдассбда	3600
бссббдбаад	бббсададбд	ббббабсаас	сссбббддаа	ссаадбдбса	ададбадбдб	3660
ббсббддббд	ббааабдабб	сасабдбдбд	ббддбббсба	баааассбда	асбббабдбб	3720
ббабсададб	дббббдсббб	сббдааддбс	абдсдадабд	ддабдабсдб	дсаабсбддс	3780
ааабабаабд	адабаббада	адсбддаабд	даббббааад	адсбадбадс	бдсасабдад	3840
ассбсбббад	аасббдббда	сдбддаааса	ассааадада	дсаабдссбс	ссббдаадаа	3900
бсаааабсбб	сбсдаадабб	абсбааддаа	даааасддад	абдабааабс	бсаасадбсб	3960
асабсбдаба	ддддддаббс	бааасббаба	ааддаадаад	ааададааас	бддаааадбс	4020
адбссбсдбд	бдбасаадсб	абабаббасб	даадсббббд	дабддбдддд	бдбадбдсба	4080

- 70 030377

д!!а!с!!д!	!!!сд!!с!!	д!ддсааад!	!с!с!аа!дд	саад!да!!а	!!ддс!ддса	4140
!а!дааас!!	садсдда!сд	!дсса!д!сс	!!саа!сс!!	с!с!д!!!а!	!ддда!а!ас	4200
дд!д!!а!!д	сад!!д!!!с	!!сд!!дс!д	а!ад!да!са	дда!д!а!!!	!д!дасас!!	4260
а!ддддс!са	адас!дссса	аа!а!!!!!с	ддасада!!с	!!!асадса!	ас!дса!дс!	4320
сс!а!д!са!	!!!!!дасас	аасасс!!сс	ддаадаа!!с	!дад!сддд!	ааа!!!с!да	4380
ддасаад!!!	!!сс!!!!дс	а!д!ааа!!с	ааас!!!дс!	дс!!ада!да	!!ааа!аа!д	4440
ааааа!а!сс	а!!дса!д!!	!!аа!д!д!а	!даса!д!!а	даа!!!!даа	!адаад!!са	4500
!!сас!да!д	!!дада!д!!	!!д!!!!!!!	!с!дсаддса	!с!аа!да!с	адассааса!	4560
!да!д!с!!с	с!сссд!!!!	!!а!даа!с!	сас!!!ддсс	а!д!!!а!са	сас!дс!сдд	4620
са!са!са!с	а!саса!дсс	аа!а!!с!!д	дсс!ассд!а	с!ас!!!!да	!!сс!с!ддд	4680
!!ддс!!аа!	а!с!дд!асс	ддд!а!дадс	ас!д!!!а!а	асадссд!сс	!!!!!!с!!!	4740
!с!!д!с!да	ас!сааа!!!	даа!сс!!!д	!!!ададдса	а!!ад!с!дс	!с!дадса!!	4800
Иддсбдаса	д!!а!!а!д!	а!а!!аааад	дсаас!!!!!	!а!!сд!!с!	д!ссадс!аа	4860
аас!!!!!ас	!!аааа!д!д	д!!аас!дса	!а!!!с!д!д	!с!сс!а!!!	!!!да!!а!!	4920
!дсаас!с!д	а!саа!с!ад	а!!!ддддаа	ддс!!д!!д!	!ад!!да!да	с!ада!ас!а	4980
адс!саса!с	!аса!!дд!!	дсаад!адаа	!!!!саад!!	д!са!!сас!	!а!а!!д!!!	5040
даас!аддад	а!!адса!!с	!!с!дсаадд	адссс!даа!	дс!!даааад	!!ааасадаа	5100
аадааааад!	!садддсада	!адаса!аа!	д!д!!ааад!	аа!!саа!!д	дадсасада!	5160
а!а!даса!д	!д!!а!!!дд	дадс!асдаа	ааада!аадд	ас!а!!а!д!	адас!асаа!	5220
!дааа!ааса	дд!аа!!са!	!!с!дд!!!а	саддда!а!!	а!с!!дсаас	а!с!сд!даа	5280
!!дас!сддс	!!дас!саа!	!асаааадса	сс!д!!а!!с	а!са!!!с!с	!дааадса!с	5340
!садд!д!!а	!дас!а!асд	!!дс!!!адд	аадсаддада	!д!!!!д!аа	сдадаа!д!а	5400
аассдад!да	а!!ссаа!с!	дсдаа!дда!	!!ссасааса	а!дда!ссаа	!даа!дд!!д	5460
ддс!!!сдас	!ддаа!!да!	дддаадс!!а	с!!с!!!д!д	!!!с!дсаа!	д!!са!да!!	5520
д!с!!асс!а	дсадса!са!	саадссадд!	а!аасассд!	ссаа!дс!са	!!!а!дддаа	5580
!!а!ааа!!с	!ад!а!!!да	!аа!сс!!с!	д!ас!!!ада	!с!асс!дс!	с!ас!даааа	5640
а!дааа!дад	!а!даддааа	!адаа!а!сс	д!!дадса!!	!а!д!с!!!с	!а!!ааааа!	5700
!!дса!!с!а	!с!!с!!д!!	!саад!сааа	а!с!!дааса	ас!а!а!с!а	дадаа!!!!с	5760
с!!с!!д!да	ад!аа!дса!	а!а!аса!са	ададаад!са	дад!!дс!да	а!дааа!ад!	5820
ада!сааа!!	!аад!д!!д!	дсс!а!ааад	аа!!д!а!дд	!дада!!даа	!а!ад!дд!с	5880
а!а!!а!!!!	с!саа!с!!а	д!да!!ааад	!а!!сса!ас	ааасадасаа	дса!!!ад!с	5940

- 71 030377

дЁдсаЁЁсаЁ	РддсасРаса	аааРРаРсаа	ссаададРаа	РаРРсРРРса	дсРРРссРсР	6000
дЁаЁаЁдЁдЁ	дЁЁсЁаЁЁсЁ	ддадсРдаад	аРаасРааРа	РРсРРРРРРа	РРРсРасада	6060
аааЁдЁЁддЁ	ЁЁдЁсасЁаЁ	саРаРддсРР	дРсРсРРааР	адРдРссРаР	РсРддРссаР	6120
сЁЁЁдЁдадЁ	ЁдсЁЁЁдЁдд	ааааРааааР	ддРРРсРдРс	дааадаРРаа	аасадРРсРс	6180
адаааРасса	Рсадаадсад	адРддадааа	даРддаРРРР	сРсссассРР	саадРРддсс	6240
аадссдРддд	ааРдРРдадс	РРдаааасдР	дсаддРааРа	аРРсРаасРа	аРРсРдРддР	6300
ЁдсЁаЁЁЁдс	ЁадсаЁЁЁдс	асааааддаа	аасРаРаааа	адРРсаРадР	ааддаадада	6360
дддЁадсЁдЁ	аРРаасаадс	сРасадаРРс	РРРааРРРса	ааРаРдРРас	дРРдааРсРс	6420
РаРаРРдРРР	дЁЁсЁасЁдд	РсаасаддРР	адаРаРсдРс	сдаасасРсс	РсРадРдсРР	6480
аааддадРРа	сРсРсадсаР	Рададдддда	дадаадаРад	дРдРРдРРдд	РсдРасаддд	6540
ддРддааааР	саасаРРааР	РсаадРРРРс	РРРсдРРРдд	РддадссРдс	адсРддаада	6600
аЁааЁсаЁЁд	аРдасдРада	РаРаРссада	сРРдддсРРс	аРдаРсРРад	аРсРсдсРРс	6660
дддаЁсаЁЁс	сссаададсс	адРссРРРРР	дааддаасРд	Рдадаадсаа	саРРдасссс	6720
аЁЁддасааЁ	аРРсадаРда	РдаааРРРдд	ааддРааРсР	аасРРдсРда	сРдаааРааР	6780
ЁЁасаааааЁ	сРсааааРаР	адРасададР	Радссаааса	РдРсРРсРда	дРдсРдадаР	6840
сЁЁЁЁЁддаЁ	РаРаааРРсР	дРаададсаа	саРасРаРРР	дРРадРдада	адаааадсаР	6900
аРасРссадР	дРРРРдРРаР	сРсссадааР	дРсРсРааса	РдаааРсдРд	РасаРРдсад	6960
адссРсдаас	дсРдссаасР	сааадаРдРд	дРдРсРРРаа	аасссдаааа	асРРдаРРса	7020
ссаддРаааР	РРРссРссРс	РасдРсаРсс	РРдРддРРсР	РРдсддааРР	аРдсаассаа	7080
сЁЁЁЁЁаЁдЁ	дРРРсаааРа	РаРаРасРда	РаасРдааРа	сРдРсаРРдд	РаааРсаРад	7140
ЁЁдЁЁдаЁаа	сддадаРаас	РддадРдРсд	дасададдса	дсРРсРРРдс	РРдддаадад	7200
ЁдаЁдсЁааа	асдРадсада	сРРсРаРРРа	РддаРдаддс	аасРдссРсР	дРРдаРРсас	7260
адасадаРдс	адРдаРРсад	ааааРсаРсс	дсдаддасРР	РдсддссРдР	асРаРааРса	7320
дсаРРдссса	садааРасса	асадРсаРдд	асРдРдаРад	адРРсРРдРР	аРадаРдсад	7380
дЁдсЁдаЁЁЁ	сРсРссРРРР	асРРРдРасс	РРаРРРРдаа	РсРддРаааР	даРРаРРРаР	7440
сЁдЁаЁдЁда	РддРРРссаа	ссааРсаРад	РсадРассРР	РаРдаадааа	РРдссРааРд	7500
РРадссаадР	адРадРаааР	дсаРда				7526

<210> 3 <211> 102 <212> ДНК <213> Ы1соР1апа РаЬасиш.

<400> 3 дРРадаасса аРсРРРддРР РаадсРдРсР сРдаРРРРдР садсРаРРРР адссРРаРсР 60

- 72 030377

ЕсЕаЕадЕЕЕ ЕаЕдсаЕЕЕЕ ддЕЕаЕЕдЕд ддаааЕЕссс ад 102 <210> 4 <211> 658 <212> ДНК <213> Ы1соЕ1апа ЕаЬасиш.

<400> 4

дЕаЕддсЕсЕ	саЕссЕЕсЕд	ЕЕЕдЕЕЕдаЕ	ЕааЕасааас	ЕЕЕдсЕдсса	аЕЕассЕЕЕЕ	60
дссссЕЕдЕЕ	дсЕассЕсЕЕ	ЕЕсЕдЕддЕа	ЕааааааЕЕа	аЕдЕаддсЕа	аЕдЕдЕадад	120
ЕддаддЕаЕЕ	аЕаЕдсадаа	сааЕЕдсааЕ	саадсааЕЕа	ссЕдЕдадаЕ	асЕаЕЕЕЕдЕ	180
ЕЕЕсаЕаЕЕа	дЕддасЕддЕ	асаЕЕсЕсаЕ	ЕддЕдЕаЕсд	ЕЕЕдаЕсЕсс	ассааадсад	240
аддЕЕЕЕасЕ	ддссдасада	дЕсааасЕас	ЕдЕдсЕЕсас	ЕссЕЕЕЕасЕ	ссааЕссЕЕа	300
дЕадЕсЕЕЕд	сЕЕсЕааЕда	асЕЕсаадсд	ЕдЕааЕадаа	асассаЕЕаЕ	аЕЕаЕЕадсЕ	360
даЕЕадЕЕас	ЕЕЕасааЕЕс	сададсаЕаЕ	ЕЕасаЕЕЕЕс	ЕдсЕЕддЕЕд	ЕсЕаЕЕасЕс	420
ЕддаЕаасад	ЕссЕаааЕдс	аадсааааЕс	аасЕдЕдЕЕЕ	ЕсадЕсЕЕда	дсЕдассааЕ	480
ЕадЕЕсаЕда	ЕдЕссЕсадс	ЕЕдЕссаадс	ЕддЕдссЕса	ссддааЕЕаЕ	дЕдддассЕЕ	540
сдЕасЕЕааЕ	саасЕадЕЕс	ассЕЕсЕЕсЕ	ЕаааааЕаЕЕ	дааЕдаЕЕЕд	аЕЕддЕЕааЕ	600
адЕЕссЕЕаа	аЕдЕадЕааЕ	ЕаЕЕЕдсЕаа	сЕЕасЕЕЕас	саассссЕЕд	Ессаасад	658

<210> 5 <211> 433 <212> ДНК <213> Ы1соЕ1апа ЕаЬасит <400> 5 дЕЕадаадЕс сасааЕдЕса ЕдЕдЕсаЕЕд аадаЕЕЕааЕ ЕЕаадаЕада ааЕЕасаЕЕд 60

ЕЕЕсаЕЕсЕд саааЕЕаЕдд ассЕаЕсада даааааЕсаЕ ддаЕЕЕЕдаа ЕддсЕасЕЕЕ 120 ссссадЕдаа дасасаЕаЕс аЕЕЕссЕддд аддаадаЕдЕ дааадЕддса адсЕаЕЕЕас 180

ЕссааааадЕ аЕааЕсЕааа адасЕЕЕЕаЕ ЕаадЕЕЕдда аддсЕЕааЕс саЕсаЕЕЕдЕ 240

ЕаЕсЕдЕЕдЕ сЕасЕЕдЕсЕ ЕЕаЕЕааааЕ ЕсЕЕсЕЕадЕ ссааЕсасЕЕ ЕсдаЕдаадЕ 300

ЕдасЕадЕсЕ ЕадЕсассЕд ааЕасЕЕЕаа аЕсЕЕЕдссЕ ЕддЕдЕсЕсЕ аЕаЕЕЕЕсад 360 ссаЕсЕсааЕ ЕссдаадсЕс аЕаЕЕЕдЕЕЕ ЕсЕсЕЕЕдЕа аЕдЕссаЕсЕ дааадЕЕЕса 420

ЕдсЕЕЕЕЕЕд сад 433 <210> 6 <211> 142 <212> ДНК <213> Ы1соЕ1апа ЕаЬасит <400> 6 дЕаадЕЕЕса дадЕдЕЕЕЕа ЕсаассссЕЕ Еддаассаад ЕдЕсаададЕ адЕдЕЕЕсЕЕ 60

- 73 030377

ддЕЕдЕЕааа	ЕдаЕЕсасаЕ	дЕдЕдЕЕддЕ	ЕЕсЕаЕаааа	ссЕдаасЕЕЕ	аЕдЕЕЕЕаЕс	120
ададЕдЕЕЕЕ	дсЕЕЕсЕЕда	ад				142
<210> 7 <211> 169 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит
<400> 7 дЕаааЕЕЕсЕ	даддасаадЕ	ЕЕЕЕссЕЕЕЕ	дсаЕдЕаааЕ	ЕсааасЕЕЕд	сЕдсЕЕадаЕ	60
даЕЕаааЕаа	ЕдаааааЕаЕ	ссаЕЕдсаЕд	ЕЕЕЕааЕдЕд	ЕаЕдасаЕдЕ	ЕадааЕЕЕЕд	120
ааЕадаадЕЕ	саЕЕсасЕда	ЕдЕЕдадаЕд	ЕЕЕЕдЕЕЕЕЕ	ЕЕЕсЕдсад		169

<210> 8 <211> 551 <212> ДНК <213> Ы1соЕ1апа ЕаЬасиш.

<400> 8 дЕаЕдадсас ЕдЕЕЕаЕаас адссдЕссЕЕ ЕЕЕЕсЕЕЕЕс ЕЕдЕсЕдаас ЕсаааЕЕЕда 60 аЕссЕЕЕдЕЕ ЕададдсааЕ ЕадЕсЕдсЕс ЕдадсаЕЕЕЕ ддсЕдасадЕ ЕаЕЕаЕдЕаЕ 120 аЕЕааааддс аасЕЕЕЕЕЕа ЕЕсдЕЕсЕдЕ ссадсЕаааа сЕЕЕЕЕасЕЕ ааааЕдЕддЕ 180

ЕаасЕдсаЕа ЕЕЕсЕдЕдЕс ЕссЕаЕЕЕЕЕ ЕдаЕЕаЕЕЕд саасЕсЕдаЕ сааЕсЕадаЕ 240

ЕЕддддаадд сЕЕдЕЕдЕЕа дЕЕдаЕдасЕ адаЕасЕаад сЕсасаЕсЕа саЕЕддЕЕдс 300 аадЕадааЕЕ ЕЕсаадЕЕдЕ саЕЕсасЕЕа ЕаЕЕдЕЕЕда асЕаддадаЕ ЕадсаЕЕсЕЕ 360 сЕдсааддад сссЕдааЕдс ЕЕдаааадЕЕ ааасадаааа дааааадЕЕс адддсадаЕа 420 дасаЕааЕдЕ дЕЕааадЕаа ЕЕсааЕЕдда дсасадаЕаЕ аЕдасаЕдЕд ЕЕаЕЕЕддда 480 дсЕасдаааа адаЕааддас ЕаЕЕаЕдЕад асЕасааЕЕд аааЕаасадд ЕааЕЕсаЕЕЕ 540 сЕддЕЕЕаса д 551 <210> 9 <211> 511 <212> ДНК <213> Ы1соЕ1апа ЕаЬасит <400> 9 дЕаЕаасасс дЕссааЕдсЕ саЕЕЕаЕддд ааЕЕаЕаааЕ ЕсЕадЕаЕЕЕ даЕааЕссЕЕ 60 сЕдЕасЕЕЕа даЕсЕассЕд сЕсЕасЕдаа аааЕдаааЕд адЕаЕдадда ааЕадааЕаЕ 120 ссдЕЕдадса ЕЕЕаЕдЕсЕЕ ЕсЕаЕЕаааа аЕЕЕдсаЕЕс ЕаЕсЕЕсЕЕд ЕЕЕсаадЕса 180 аааЕсЕЕдаа саасЕаЕаЕс ЕададааЕЕЕ ЕссЕЕсЕЕдЕ даадЕааЕдс аЕаЕаЕасаЕ 240 саададаадЕ сададЕЕдсЕ дааЕдаааЕа дЕадаЕсааа ЕЕЕаадЕдЕЕ дЕдссЕаЕаа 300 адааЕЕдЕаЕ ддЕдадаЕЕд ааЕаЕадЕдд ЕсаЕаЕЕаЕЕ ЕЕсЕсааЕсЕ ЕадЕдаЕЕаа 360

- 74 030377

ад+а++сса+	асааасадас	аадса+++ад	+сд+дса++с	а++ддсас+а	саааа++а+с	420
аассаадад+	аа+а++с+++	садс+++сс+	с+д+а+а+д+	д+д++с+а++	с+ддадс+да	480
ада+аас+аа	+а++с+++++	+а+++с+аса	д			511
<210> 10 <211> 173 <212> ДНК <213> Ыгсо+гапа +аЬасит
<400> 10 д+аа+аа++с	+аас+аа++с	+д+дд++дс+	а+++дс+адс	а+++дсасаа	ааддаааас+	60
а+ааааад++	са+ад+аадд	аадададдд+	адс+д+а++а	асаадсс+ас	ада++с+++а	120
а+++сааа+а	+д++асд++д	аа+с+с+а+а	++д+++д++с	+ас+дд+саа	сад	173

<210> 11 <211> 207 <212> ДНК <213> Ыгсо+гапа +аЬасит

<400> 11 д+аа+с+аас	++дс+дас+д	ааа+аа+++а	сааааа+с+с	аааа+а+ад+	асадад++ад	60
ссаааса+д+	с++с+дад+д	с+дада+с++	+++дда++а+	ааа++с+д+а	ададсааса+	120
ас+а+++д++	ад+дадаада	ааадса+а+а	с+ссад+д++	++д++а+с+с	ссадаа+д+с	180
+с+ааса+да	аа+сд+д+ас	а++дсад				207

<210> 12 <211> 116 <212> ДНК <213> Ыгсо+гапа +аЬасит

<400> 12 д+ааа++++с	с+сс+с+асд	+са+сс++д+	дд++с+++дс	ддаа++а+дс	аассаас+++	60
++а+д+д+++	сааа+а+а+а	+ас+да+аас	+даа+ас+д+	са++дд+ааа	+са+ад	116

<210> 13 <211> 279 <212> ДНК <213> Ы1со+1апа +аЬасит <400> 13

а+дда+а+да	ддаасад+а+	д+с++садаа	+с++д+++ад	са+сас+++с	++д++с+дсс	60
+ссаса+++с	аа+сд+сада	дда++садса	д++д++ааа+	дд++аада++	са++++сс+с	120
+с+сса+д+с	сасаааддас	+с++с+а+с+	+сса++да+д	+дс+дс++++	дс++ас+++с	180
а++д+а+++д	сад+асаааа	д++д+ас+са	аад++дадд+	ссаа+дадса	с+с+ас++с+	240
адса++да+а	адсс+с+аа+	+дсасасаас	аддас++с+			279

- 75 030377

<210> 14 <211> 1725 <212> ДНК <213> Г11соЕ1апа ЕаЬасиш. <400> 14 ЕсдссЕЕдда аадЕсаЕада ЕддасЕдЕаЕ	ЕддЕЕдЕЕЕс	аддсдаЕЕас	асаЕдЕЕдЕа	60
аЕсасЕаЕас	ЕааЕадЕЕса	Едадаааада	ЕЕЕсасдсЕа	ЕЕЕсссаЕсс	асЕдЕсссЕд	120
сдсдЕдЕЕЕЕ	ддаЕЕдсааа	сЕЕЕдЕадЕЕ	аЕдадЕЕЕдЕ	ЕсЕЕЕддЕЕд	ЕдддаЕсаса	180
аддсЕЕдЕдЕ	сасЕЕаадда	ааЕЕдаЕссЕ	ааЕЕЕаадаа	ЕддаЕдаЕаЕ	аадЕЕсаЕЕа	240
дЕЕЕсаЕЕЕс	сЕаЕЕЕсЕдЕ	ЕдЕЕсЕсЕЕс	аЕЕдЕЕдсса	ЕЕаааддЕЕс	дассддадЕЕ	300
дсЕдЕааЕЕа	дЕдаЕЕсЕда	аЕсЕсасЕЕа	адЕдаЕдааа	ссааЕддЕЕа	ЕдаасЕссЕд	360
даЕаааЕсса	дЕдЕдадЕдд	сЕЕЕдсЕЕса	дсЕЕсЕсЕаа	ЕаЕсдааадс	сЕЕЕЕддаЕЕ	420
ЕддаЕдаасс	сЕЕЕасЕдса	ааааддЕЕас	аадЕсассЕс	ЕсаадаЕЕда	ЕдаадЕЕссЕ	480
ЕсасЕЕЕссс	сасЕдсаЕад	адсададааа	аЕдЕсЕсаас	ЕЕЕЕсдааад	аааЕЕддссЕ	540
ааассЕдаад	аааЕаЕсааа	дсаЕссЕдЕс	сдаасаасаЕ	ЕдсЕдсдЕЕд	сЕЕЕЕддаад	600
даадЕЕаЕЕЕ	ЕЕасЕдссаЕ	ЕсЕЕдсадЕа	аЕЕадддЕаЕ	дЕдЕЕаЕдЕа	ЕдЕадддсса	660
асасЕсаЕас	ааадаЕЕЕдЕ	ЕдаЕЕасаса	дсаддааада	ддасаЕсЕсс	ЕЕаЕдаадда	720
ЕасЕассЕЕа	ЕаддаасЕсЕ	ссЕааЕадсс	аааЕЕЕдЕдд	аадЕЕсЕаас	сЕсЕсаЕсад	780
ЕЕсаасЕЕЕа	асЕсссаааа	дсЕЕддсаЕд	сЕЕаЕЕсдад	сдасасЕЕсЕ	сасЕЕсЕЕЕд	840
ЕаЕаадаадд	ддЕЕааддЕЕ	дЕсаЕдсЕса	дсЕадасадд	сЕсаЕддЕдЕ	ЕддасадаЕЕ	900
дЕаааЕЕаЕа	ЕддссдЕсда	ЕдсЕсадсад	сЕдЕссдаЕа	ЕдаЕдсЕаса	дсЕасаЕЕсс	960
аЕЕЕддсЕса	ЕдссаЕЕдса	адЕЕЕсЕдЕд	дсЕЕЕаддса	ЕссЕЕЕаЕас	ЕЕассЕсддЕ	1020
дсЕЕсаасЕд	ЕЕдЕаасдсЕ	адсЕддасЕЕ	дсадсадЕда	ЕддЕаЕЕЕдЕ	ддЕдЕЕЕдда	1080
асЕаааадаа	асаасаддЕЕ	ЕсааЕЕЕаас	аЕсаЕдаада	аЕсдЕдаЕЕс	ЕадааЕдааа	1140
дсдасаааЕд	адаЕдсЕЕаа	ЕЕаЕаЕдсдс	дЕЕаЕааадЕ	ЕссаддсаЕд	ддаадаасаЕ	1200
ЕЕЕаасаааа	дааЕЕдааЕс	сЕЕссдсдаа	ЕссдадЕаЕд	даЕддЕЕдЕс	саадЕЕсЕЕд	1260
ЕасЕсааЕсд	сЕдддааЕаЕ	саЕЕдЕсЕЕд	ЕддадсасЕс	сЕсЕЕсЕадЕ	ддсЕасасЕс	1320
асЕЕЕЕддаа	дЕдсааЕсЕЕ	дЕЕдддааЕс	ссдсЕЕддЕд	садддасадЕ	дЕЕсасЕдса	1380
асаЕсЕсЕсЕ	ЕсаадаЕдЕЕ	дсаддаассд	аЕсадддсЕЕ	ЕсссЕсааЕс	саЕдаЕсЕса	1440
сЕЕЕсасаад	сааЕдаЕаЕс	ЕсЕЕдаЕада	ЕЕддасаааЕ	аЕаЕдаЕдад	ЕааддадЕЕа	1500
дЕддаЕааад	сЕдЕддааад	асЕадааддЕ	ЕдЕдддддЕа	сааЕЕдсЕаЕ	дсаддЕдааа	1560
даЕддадсЕЕ	ЕЕЕдсЕддда	ЕдаЕдаааас	адЕааадаад	ааЕЕдааааа	ЕдЕааасЕЕЕ	1620
дадаЕЕадаа	ааддададсЕ	ЕдсадсадЕа	дЕддддасад	ЕЕддддсддд	даадЕсЕЕсс	1680
сЕссЕЕдсаЕ	сЕдЕасЕЕдд	ЕдадаЕдсас	аадЕЕдЕсдд	дЕсад		1725

- 76 030377 <210> 15 <211> 320 <212> ДНК <213> Г-Т1со+1апа +аЪасит <400> 15

д+сасаа+++	д+дд++саас	+дсс+а+д++	дсасааса+с	д+дда++сад	аа+ддсасда	60
+асаадаааа	+а+сс+д+++	дд+а+дссаа	+даасадада	сада+асаад	даад+да+сс	120
ддд+++дс+д	с++ддадаад	дас++ддааа	+аа+ддад++	+ддадассад	ас+дааа+ад	180
дадаасд+дд	са+саасс+с	ад+дд+дд+с	адаадсадсд	аа+ссадс++	дсаададс+д	240
+++ассадда	с+д+да+а++	+а+с++с+ад	а+да+д+а++	сад+дсад++	да+дс+саса	300
с+ддс+с+да	аа+с++саад					320

<210> 16 <211> 87 <212> ДНК <213> Г-Т1со+1апа +аЪасит <400> 16 даа+д+д+да ддддаа++с+ +ааада+ааа асса++++дс ++д+сасаса ссаад++дас 60 ++с++дса+а а+д++дасс+ да+сс++ 87 <210> 17 <211> 621 <212> ДНК <213> Г-Т1со+1апа +аЪасит <400> 17

д+са+дсдад	а+ддда+да+	сд+дсаа+с+	ддсааа+а+а	а+дада+а++	адаадс+дда	60
а+дда++++а	аададс+ад+	адс+дсаса+	дадасс+с++	+адаас++д+	+дасд+ддаа	120
асаассааад	ададсаа+дс	с+ссс++даа	даа+саааа+	с++с+сдаад	а++а+с+аад	180
даадаааасд	дада+да+аа	а+с+саасад	+с+аса+с+д	а+адддддда	++с+ааас++	240
а+аааддаад	аадааадада	аас+ддаааа	д+сад+сс+с	д+д+д+асаа	дс+а+а+а++	300
ас+даадс++	++дда+дд+д	ддд+д+ад+д	с+ад++а+с+	+д++++сд++	с++д+ддсаа	360
ад++с+с+аа	+ддсаад+да	++а++ддс+д	дса+а+дааа	с++садсдда	+сд+дсса+д	420
+сс++саа+с	с++с+с+д++	+а++ддда+а	+асдд+д++а	++дсад++д+	++с++сд++д	480
с+да+ад+да	+садда+д+а	++++д+даса	с++а+ддддс	+саадас+дс	ссааа+а+++	540
++сддасада	++с+++асад	са+ас+дса+	дс+сс+а+д+	са++++++да	сасаасасс+	600
+ссддаадаа	++с+дад+сд	д				621

<210> 18 <211> 165

- 77 030377 <212> ДНК <213> Ы1соб1апа баЬасиш.

<400> 18 дсабсбаабд абсадассаа саббдабдбс ббссбсссдб бббббабдаа бсбсасбббд 60 дссабдббба бсасасбдсб сддсабсабс абсабсасаб дссаабаббс ббддссбасс 120 дбасбасббб бдаббссбсб дддббддсбб аабабсбддб ассдд 165 <210> 19 <211> 295 <212> ДНК <213> Ы1соб1апа баЬасит <400> 19 ддабаббабс ббдсаасабс бсдбдааббд асбсддсббд асбсааббас аааадсассб 60 дббаббсабс абббсбсбда аадсабсбса ддбдббабда сбабасдббд сбббаддаад 120 саддадабдб бббдбаасда даабдбааас сдадбдаабб ссаабсбдсд аабддабббс 180 сасаасаабд дабссаабда абддббдддс бббсдасбдд ааббдабддд аадсббасбб 240 сбббдбдббб сбдсаабдбб сабдаббдбс ббассбадса дсабсабсаа дссад 295 <210> 20 <211> 215 <212> ДНК <213> Ы1соб1апа баЬасит <400> 20 аааабдббдд бббдбсасба бсабабддсб бдбсбсббаа бадбдбссба ббсбддбсса 60 бсбббдбдад ббдсбббдбд даааабаааа бддбббсбдб сдааадабба ааасадббсб 120 садааабасс абсадаадса дадбддадаа адабддаббб бсбсссассб бсаадббддс 180 саадссдбдд даабдббдад сббдаааасд бдсад 215 <210> 21 <211> 306 <212> ДНК <213> Ы1соб1апа баЬасит <400> 21 дббадабабс дбссдаасас бссбсбадбд сббаааддад ббасбсбсад саббададдд 60 ддададаада баддбдббдб бддбсдбаса дддддбддаа аабсаасабб ааббсаадбб 120 ббсбббсдбб бддбддадсс бдсадсбдда адаабаабса ббдабдасдб адабабабсс 180 адасббдддс ббсабдабсб бадабсбсдс ббсдддабса ббссссаада дссадбссбб 240 бббдааддаа сбдбдадаад саасаббдас сссаббддас аабаббсада бдабдааабб 300 бддаад 306 <210> 22

- 78 030377 <211> 64 <212> ДНК <213> И1соЕ1апа ЕаЬасиш.

<400> 22

адссЕсдаас ссад	дсЕдссаасЕ	сааадаЕдЕд	дЕдЕсЕЕЕаа	аасссдаааа	асЕЕдаЕЕса	60 64
<210> 23 <211> 1281 <212> ДНК <213> ЦТсоЕчапа ЕаЬасит <400> 23 аададссадЕ ссЕЕЕЕЕдаа ддаасЕдЕда	даадсаасаЕ	ЕдассссаЕЕ	ддасааЕаЕЕ	60
садаЕдаЕда	ааЕЕЕддаад	дЕааЕсЕаас	ЕЕдсЕдасЕд	аааЕааЕЕЕа	саааааЕсЕс	120
ааааЕаЕадЕ	асададЕЕад	ссааасаЕдЕ	сЕЕсЕдадЕд	сЕдадаЕсЕЕ	ЕЕЕддаЕЕаЕ	180
аааЕЕсЕдЕа	ададсаасаЕ	асЕаЕЕЕдЕЕ	адЕдадаада	ааадсаЕаЕа	сЕссадЕдЕЕ	240
ЕЕдЕЕаЕсЕс	ссадааЕдЕс	ЕсЕаасаЕда	ааЕсдЕдЕас	аЕЕдсададс	сЕсдаасдсЕ	300
дссаасЕсаа	адаЕдЕддЕд	ЕсЕЕЕаааас	ссдааааасЕ	ЕдаЕЕсасса	ддЕаааЕЕЕЕ	360
ссЕссЕсЕас	дЕсаЕссЕЕд	ЕддЕЕсЕЕЕд	сддааЕЕаЕд	саассаасЕЕ	ЕЕЕаЕдЕдЕЕ	420
ЕсаааЕаЕаЕ	аЕасЕдаЕаа	сЕдааЕасЕд	ЕсаЕЕддЕаа	аЕсаЕадЕЕд	ЕЕдаЕаасдд	480
адаЕаасЕдд	адЕдЕсддас	ададдсадсЕ	ЕсЕЕЕдсЕЕд	ддаададЕда	ЕдсЕаааасд	540
ЕадсадасЕЕ	сЕаЕЕЕаЕдд	аЕдаддсаас	ЕдссЕсЕдЕЕ	даЕЕсасада	садаЕдсадЕ	600
даЕЕсадааа	аЕсаЕссдсд	аддасЕЕЕдс	ддссЕдЕасЕ	аЕааЕсадса	ЕЕдсссасад	660
ааЕассааса	дЕсаЕддасЕ	дЕдаЕададЕ	ЕсЕЕдЕЕаЕа	даЕдсаддЕд	сЕдаЕЕЕсЕс	720
ЕссЕЕЕЕасЕ	ЕЕдЕассЕЕа	ЕЕЕЕдааЕсЕ	ддЕаааЕдаЕ	ЕаЕЕЕаЕсЕд	ЕаЕдЕдаЕдд	780
ЕЕЕссаасса	аЕсаЕадЕса	дЕассЕЕЕаЕ	даадаааЕЕд	ссЕааЕдЕЕа	дссаадЕадЕ	840
адЕаааЕдса	ЕдаадЕсаЕЕ	адссЕаЕЕЕд	ЕЕЕЕддаЕЕЕ	ЕдЕдадЕЕЕс	аЕасЕЕсааа	900
сЕддаадсЕЕ	аЕдсЕаЕасЕ	аЕсЕдаЕссс	ЕЕдЕЕЕдЕаЕ	адаЕЕдсЕЕЕ	сЕЕЕЕссЕЕЕ	960
ЕЕсЕсддаЕЕ	ЕаЕсЕЕаЕаЕ	аЕаадсддас	ададЕаааад	ааЕдЕаааса	ЕдсдЕааЕЕЕ	1020
дассЕаЕЕаЕ	адсадаЕЕаЕ	ЕЕдЕсЕЕаЕЕ	ЕЕссаддЕсд	сЕдаЕЕссас	ЕЕаЕЕаддад	1080
ЕадЕЕасасд	ЕаЕЕЕаЕсЕЕ	ЕЕаадЕдааа	ЕааЕадЕдЕа	аадЕЕЕсЕЕЕ	ЕддсасЕдЕс	1140
ддЕдЕааада	адЕЕааасЕс	сЕЕЕсЕЕЕаа	ссссддсаЕЕ	ЕсЕЕаЕЕсаЕ	дсаддааЕад	1200
саааададЕЕ	Едасааасса	ЕсЕсдЕЕЕдс	ЕЕдаааддсс	ЕЕсасЕЕЕЕЕ	ддддсЕЕЕдд	1260
ЕЕсаадааЕа	Едссаассда	Е				1281

<210> 24 <211> 1488

- 79 030377 <212> БЕЛОК <213> ЫЧсо+Чапа +аЬасит <220>

<221> УЧАСТОК <222> (1357)..(1357) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (1362)..(1363) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (1366)..(1366) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (1385)..(1385) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (1392)..(1392) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (1398)..(1398) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (1432)..(1433) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (1442)..(1442) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (1457)..(1457) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (1463)..(1463) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (1479)..(1479) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (1481)..(1481) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп кодон кодон кодон кодон кодон кодон кодон кодон кодон кодон кодон кодон <400> 24

МеР 1

Азр

МеР

Агд

Азп 5

Зег

МеР

Зег

Зег

О1и 10

Зег

Суз

Ьеи

А1а

Зег 15

Ьеи

Зег

Суз

Зег

А1а

Зег

ТЬг

РЬе

О1п

Зег

Зег

О1и

Азр

Зег

А1а

Уа1

Уа1

20

25

30

Ьуз

Тгр

Ьеи

Агд

РЬе

11е

РЬе

Ьеи

Зег

Рго

Суз

Рго

О1п

Агд

ТЬг

Ьеи

35

40

45

Ьеи

Зег

Зег

11е

Азр

Уа1

Ьеи

Ьеи

Ьеи

Ьеи

ТЬг

РЬе

11е

Уа1

РЬе

А1а

50

55

60

Уа1

О1п

Ьуз

Ьеи

Туг

Зег

Ьуз

Ьеи

Агд

Зег

Азп

О1и

Нгз

Зег

ТЬг

Зег

65

70

75

80

Зег

11е

Азр

Ьуз

Рго

Ьеи

11е

А1а

Нгз

Азп

Агд

ТЬг

Зег

Зег

Рго

Тгр

85

90

95

Ьуз

Уа1

11е

Азр

О1у

Ьеи

Туг

Тгр

Ьеи

РЬе

О1п

А1а

11е

ТЬг

Нгз

Уа1

100

105

110

Уа1

11е

ТЬг

11е

Ьеи

11е

Уа1

Нгз

О1и

Ьуз

Агд

РЬе

Нгз

А1а

11е

Зег

115

120

125

Ηΐ3

Рго

Ьеи

Зег

Ьеи

Агд

Уа1

РЬе

Тгр

11е

А1а

Азп

РЬе

Уа1

Уа1

МеР

130

135

140

Зег

Ьеи

РЬе

РЬе

О1у

Суз

О1у

11е

ТЬг

Агд

Ьеи

Уа1

Зег

Ьеи

Ьуз

О1и

145

150

155

160

11е

Азр

Рго

Азп

Ьеи

Агд

МеР

Азр

Азр

11е

Зег

Зег

Ьеи

Уа1

Зег

РЬе

165

170

175

Рго

11е

Зег

Уа1

Уа1

Ьеи

РЬе

11е

Уа1

А1а

11е

Ьуз

О1у

Зег

ТЬг

О1у

180

185

190

Уа1

А1а

Уа1

11е

Зег

Азр

Зег

О1и

Зег

Нгз

Ьеи

Зег

Азр

О1и

ТЬг

Азп

195

200

205

О1у

Туг

О1и

Ьеи

Ьеи

Азр

Ьуз

Зег

Зег

Уа1

Зег

О1у

РЬе

А1а

Зег

А1а

210

215

220

Зег

Ьеи

11е

Зег

Ьуз

А1а

РЬе

Тгр

11е

Тгр

МеР

Азп

Рго

Ьеи

Ьеи

О1п

225

230

235

240

Ьуз

О1у

Туг

Ьуз

Зег

Рго

Ьеи

Ьуз

11е

Азр

О1и

Уа1

Рго

Зег

Ьеи

Зег

- 81 030377

245 250 255

Рго

^еυ

Ηΐ3

Агд А1а О1и 260

^уз

Меб

Зег 265

О1п

^еυ

РЬе

О1и Агд Азп 270

Тгр

Рго

^уз

Рго

О1и

О1и

11е

Зег

^уз

Ηΐ3

Рго

Уа1

Агд

ТЬг

ТЬг

^еυ

^еυ

275

280

285

Агд

Суз

РЬе

Тгр

^уз

О1и

Уа1

11е

РЬе

ТЬг

А1а

11е

^еυ

А1а

Уа1

11е

290

295

300

Агд

Уа1

Суз

Уа1

Меб

Туг

Уа1

О1у

Рго

ТЬг

^еυ

11е

О1п

Агд

РЬе

Уа1

305

310

315

320

Азр

Туг

ТЬг

А1а

О1у

^уз

Агд

ТЬг

Зег

Рго

Туг

О1и

О1у

Туг

Туг

^еυ

325

330

335

11е

О1у

ТЬг

^еυ

^еυ

11е

А1а

^уз

РЬе

Уа1

О1и

Уа1

^еυ

ТЬг

Зег

Η13

340

345

350

О1п

РЬе

Азп

РЬе

Азп

Зег

О1п

^уз

^еυ

О1у

Меб

^еυ

11е

Агд

А1а

ТЬг

355

360

365

^еυ

^еυ

ТЬг

Зег

^еυ

Туг

^уз

^уз

О1у

^еυ

Агд

^еυ

Зег

Суз

Зег

А1а

370

375

380

Агд

О1п

А1а

Ηΐ3

О1у

Уа1

О1у

О1п

11е

Уа1

Азп

Туг

Меб

А1а

Уа1

Азр

385

390

395

400

А1а

О1п

О1п

^еυ

Зег

Азр

Меб

Меб

^еυ

О1п

^еυ

Ηΐ3

Зег

11е

Тгр

^еυ

405

410

415

Меб

Рго

^еυ

О1п

Уа1

Зег

Уа1

А1а

^еυ

О1у

11е

^еυ

Туг

ТЬг

Туг

^еυ

420

425

430

О1у

А1а

Зег

ТЬг

Уа1

Уа1

ТЬг

^еυ

А1а

О1у

^еυ

А1а

А1а

Уа1

Меб

Уа1

435

440

445

РЬе

Уа1

Уа1

РЬе

О1у

ТЬг

^уз

Агд

Азп

Азп

Агд

РЬе

О1п

РЬе

Азп

11е

450

455

460

Меб

^уз

Азп

Агд

Азр

Зег

Агд

Меб

^уз

А1а

ТЬг

Азп

О1и

Меб

^еυ

Азп

465

470

475

480

Туг

Меб

Агд

Уа1

11е

^уз

РЬе

О1п

А1а

Тгр

О1и

О1и

Η13

РЬе

Азп

^уз

485 490 495

- 82 030377

Агд

11е

О1и

Бег 500

РЬе

Агд

О1и

Бег

О1и 505

Туг

О1у

Тгр

Ьеи

Бег 510

Ьуз

РЬе

Ьеи

Туг

Бег

11е

А1а

О1у

Азп

11е

11е

Уа1

Ьеи

Тгр

Бег

ТЬг

Рго

Ьеи

515

520

525

Ьеи

Уа1

А1а

ТЬг

Ьеи

ТЬг

РЬе

О1у

Бег

А1а

11е

Ьеи

Ьеи

О1у

11е

Рго

530

535

540

Ьеи

О1у

А1а

О1у

ТЬг

Уа1

РЬе

ТЬг

А1а

ТЬг

Бег

Ьеи

РЬе

Ьуз

МеЬ

Ьеи

545

550

555

560

О1п

О1и

Рго

11е

Агд

А1а

РЬе

Рго

О1п

Бег

МеЬ

11е

Бег

Ьеи

Бег

О1п

565

570

575

А1а

МеЬ

11е

Бег

Ьеи

Азр

Агд

Ьеи

Азр

Ьуз

Туг

МеЬ

МеЬ

Бег

Ьуз

О1и

580

585

590

Ьеи

Уа1

Азр

Ьуз

А1а

Уа1

О1и

Агд

Ьеи

О1и

О1у

Суз

О1у

О1у

ТЬг

11е

595

600

605

А1а

МеЬ

О1п

Уа1

Ьуз

Азр

О1у

А1а

РЬе

Суз

Тгр

Азр

Азр

О1и

Азп

Бег

610

615

620

Ьуз

О1и

О1и

Ьеи

Ьуз

Азп

Уа1

Азп

РЬе

О1и

11е

Агд

Ьуз

О1у

О1и

Ьеи

625

630

635

640

А1а

А1а

Уа1

Уа1

О1у

ТЬг

Уа1

О1у

А1а

О1у

Ьуз

Бег

Бег

Ьеи

Ьеи

А1а

645

650

655

Бег

Уа1

Ьеи

О1у

О1и

МеЬ

Н1з

Ьуз

Ьеи

Бег

О1у

О1п

Уа1

ТЬг

11е

Суз

660

665

670

О1у

Бег

ТЬг

А1а

Туг

Уа1

А1а

О1п

ТЬг

Бег

Тгр

11е

О1п

Азп

О1у

ТЬг

675

680

685

11е

О1п

О1и

Азп

11е

Ьеи

РЬе

О1у

МеЬ

Рго

МеЬ

Азп

Агд

Азр

Агд

Туг

690

695

700

Ьуз

О1и

Уа1

11е

Агд

Уа1

Суз

Суз

Ьеи

О1и

Ьуз

Азр

Ьеи

О1и

11е

МеЬ

705

710

715

720

О1и

РЬе

О1у

Азр

О1п

ТЬг

О1и

11е

О1у

О1и

Агд

О1у

11е

Азп

Ьеи

Бег

725

730

735

О1у

О1у

О1п

Ьуз

О1п

Агд

11е

О1п

Ьеи

А1а

Агд

А1а

Уа1

Туг

О1п

Азр

740

745

750

- 83 030377

Суз	Азр	11е 755	Туг	Ьеи	Ьеи	Азр	Азр 760
ТЪг	О1у 770	Зег	О1и	11е	РЪе	Ьуз 775	О1и
Ьуз 785	ТЪг	11е	Ьеи	Ьеи	Уа1 790	ТЪг	Н1з
Азр	Ьеи	11е	Ьеи	Уа1 805	Меб	Агд	Азр
Туг	Азп	О1и	11е 820	Ьеи	О1и	А1а	О1у
А1а	Ηΐ3	О1и 835	ТЪг	Зег	Ьеи	О1и	Ьеи 840
Зег	Азп 850	А1а	Зег	Ьеи	О1и	О1и 855	Зег
О1и 865	О1и	Азп	О1у	Азр	Азр 870	Ьуз	Зег
Азр	Зег	Ьуз	Ьеи	11е 885	Ьуз	О1и	О1и
Рго	Агд	Уа1	Туг 900	Ьуз	Ьеи	Туг	11е
Уа1	Уа1	Ьеи 915	Уа1	11е	Ьеи	РЪе	Зег 920
А1а	Зег 930	Азр	Туг	Тгр	Ьеи	А1а 935	Туг
Зег 945	РЪе	Азп	Рго	Зег	Ьеи 950	РЪе	11е
Уа1	Зег	Зег	Ьеи	Ьеи 965	11е	Уа1	11е
О1у	Ьеи	Ьуз	ТЪг 980	А1а	О1п	11е	РЪе
Ьеи	Нгз	А1а 995	Рго	Меб	Зег	РЪе	РЪе 1000

Уа1	РЪе	Зег	А1а	Уа1 765	Азр	А1а	Н1з
Суз	Уа1	Агд	О1у 780	11е	Ьеи	Ьуз	Азр
О1п	Уа1	Азр 795	РЪе	Ьеи	Н1з	Азп	Уа1 800
О1у	Меб 810	11е	Уа1	О1п	Зег	О1у 815	Ьуз
Меб 825	Азр	РЪе	Ьуз	О1и	Ьеи 830	Уа1	А1а
Уа1	Азр	Уа1	О1и	ТЪг 845	ТЪг	Ьуз	О1и
Ьуз	Зег	Зег	Агд 860	Агд	Ьеи	Зег	Ьуз
О1п	О1п	Зег 875	ТЪг	Зег	Азр	Агд	О1у 880
О1и	Агд 890	О1и	ТЪг	О1у	Ьуз	Уа1 895	Зег
ТЪг 905	О1и	А1а	РЪе	О1у	Тгр 910	Тгр	О1у
РЪе	Ьеи	Тгр	О1п	Зег 925	Зег	Ьеи	Меб
О1и	ТЪг	Зег	А1а 940	Азр	Агд	А1а	Меб
О1у	11е	Туг 955	О1у	Уа1	11е	А1а	Уа1 960
Агд	Меб 970	Туг	РЪе	Уа1	ТЪг	Ьеи 975	Меб
РЪе 985	О1у	О1п	11е	Ьеи	Туг 990	Зег	11е

Азр ТЪг ТЪг Рго Зег О1у Агд 11е

1005

- 84 030377

Ьеи

Зег 1010

Агд

А1а

Зег

Азп

Азр 1015

О1п ТЬг

Азп

11е

Азр 1020

Уа1

РЬе

Ьеи

Рго

РЬе

РЬе

Ме+

Азп

Ьеи

ТЬг

Ьеи

А1а

Ме+

РЬе

11е

ТЬг

Ьеи

Ьеи

1025

1030

1035

О1у

11е

11е

11е

11е

ТЬг

Суз

О1п

Туг

Зег

Тгр

Рго

ТЬг

Уа1

Ьеи

1040

1045

1050

Ьеи

Ьеи

11е

Рго

Ьеи

О1у

Тгр

Ьеи

Азп

11е

Тгр

Туг

Агд

О1у

Туг

1055

1060

1065

Туг

Ьеи

А1а

ТЬг

Зег

Агд

О1и

Ьеи

ТЬг

Агд

Ьеи

Азр

Зег

11е

ТЬг

1070

1075

1080

Ьуз

А1а

Рго

Уа1

11е

НЧз

НЧз

РЬе

Зег

О1и

Зег

11е

Зег

О1у

Уа1

1085

1090

1095

Ме+

ТЬг

11е

Агд

Суз

РЬе

Агд

Ьуз

О1п

О1и

Ме+

РЬе

Суз

Азп

О1и

1100

1105

1110

Азп

Уа1

Азп

Агд

Уа1

Азп

Зег

Азп

Ьеи

Агд

Ме+

Азр

РЬе

НЧз

Азп

1115

1120

1125

Азп

С1у

Зег

Азп

О1и

Тгр

Ьеи

О1у

РЬе

Агд

Ьеи

О1и

Ьеи

Ме+

О1у

1130

1135

1140

Зег

Ьеи

Ьеи

Ьеи

Суз

Уа1

Зег

А1а

Ме+

РЬе

Ме+

11е

Уа1

Ьеи

Рго

1145

1150

1155

Зег

Зег

11е

11е

Ьуз

Рго

О1и

Азп

Уа1

О1у

Ьеи

Зег

Ьеи

Зег

Туг

1160

1165

1170

О1у

Ьеи

Зег

Ьеи

Азп

Зег

Уа1

Ьеи

РЬе

Тгр

Зег

11е

РЬе

Уа1

Зег

1175

1180

1185

Суз

РЬе

Уа1

О1и

Азп

Ьуз

Ме+

Уа1

Зег

Уа1

О1и

Агд

Ьеи

Ьуз

О1п

1190

1195

1200

РЬе

Зег

О1и

11е

Рго

Зег

О1и

А1а

О1и

Тгр

Агд

Ьуз

Ме+

Азр

РЬе

1205

1210

1215

Ьеи

Рго

Рго

Зег

Зег

Тгр

Рго

Зег

Агд

О1у

Азп

Уа1

О1и

Ьеи

О1и

1220

1225

1230

Азп

Уа1

С1п

Уа1

Агд

Туг

Агд

Рго

Азп

ТЬг

Рго

Ьеи

Уа1

Ьеи

Ьуз

- 85 030377

1235 1240 1245

οΐγ ναι

ТЬг

Ьеи

Зег

11е

Агд 1255

О1у

О1у

О1и

Ьуз

11е 1260

О1у

Уа1

Уа1

1250

О1у

Агд

ТЬг

О1у

О1у

О1у

Ьуз

Зег

ТЬг

Ьеи

11е

О1п

Уа1

РЬе

РЬе

1265

1270

1275

Агд

Ьеи

Уа1

О1и

Рго

А1а

А1а

О1у

Агд

11е

11е

11е

Азр

Азр

Уа1

1280

1285

1290

Азр

11е

Зег

Агд

Ьеи

О1у

Ьеи

Н1з

Азр

Ьеи

Агд

Зег

Агд

РЬе

О1у

1295

1300

1305

11е

11е

Рго

О1п

О1и

Рго

Уа1

Ьеи

РЬе

О1и

О1у

ТЬг

Уа1

Агд

Зег

1310

1315

1320

Азп

11е

Азр

Рго

11е

О1у

О1п

Туг

Зег

Азр

Азр

О1и

11е

Тгр

Ьуз

1325

1330

1335

О1и

Рго

Агд

ТЬг

Ьеи

Рго

ТЬг

О1п

Агд

Суз

О1у

Уа1

РЬе

Ьуз

ТЬг

1340

1345

1350

Агд

Ьуз

ТЬг

Хаа

РЬе

ТЬг

Зег

Суз

Хаа

Хаа

Агд

Агд

Хаа

Ьеи

О1и

1355

1360

1365

Суз

Агд

ТЬг

О1и

А1а

А1а

Зег

Ьеи

Ьеи

О1у

Ьуз

Зег

Азр

А1а

Ьуз

1370

1375

1380

ТЬг

Хаа

О1п

ТЬг

Зег

11е

Туг

О1у

Хаа

О1у

Азп

Суз

Ьеи

Суз

Хаа

1385

1390

1395

РЬе

ТЬг

Азр

Агд

Суз

Зег

Азр

Зег

О1и

Азп

Н1з

Рго

Агд

О1у

Ьеи

1400

1405

1410

Суз

О1у

Ьеи

Туг

Туг

Азп

О1п

Н1з

Суз

Рго

О1п

Азп

ТЬг

Азп

Зег

1415

1420

1425

Нчз

О1у

Ьеи

Хаа

Хаа

Зег

Зег

Суз

Туг

Агд

Суз

Агд

Суз

Хаа

РЬе

1430

1435

1440

Ьеи

Зег

РЬе

Туг

РЬе

Уа1

Рго

Туг

РЬе

О1и

Зег

О1у

Ьуз

Хаа

Ьеи

1445

1450

1455

РЬе

11е

Суз

Меб

Хаа

Тгр

РЬе

Рго

ТЬг

Азп

Нгз

Зег

О1п

Туг

Ьеи

1460 1465 1470

- 86 030377

Туг О1и О1и 11е А1а Хаа Суз Хаа Рго Зег Зег Зег Ьуз Суз Ме+ 1475 1480 1485

<210> <211> <212> <213>	25 1488 БЕЛОК ЫЧсо+Чапа +аЪасит
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(3)..(3)
<223>	Хаа обозначает предполагаемый стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(13)..(13)
<223>	Хаа обозначает предполагаемый стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(35)..(35)
<223>	Хаа обозначает предполагаемый стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(72)..(72)
<223>	Хаа обозначает предполагаемый стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(86)..(86)
<223>	Хаа обозначает предполагаемый стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(99)..(99)
<223>	Хаа обозначает предполагаемый стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(113)..(113)
<223>	Хаа обозначает предполагаемый стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(117)..(118)
<223>	Хаа обозначает предполагаемый стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(142)..(142)
<223>	Хаа обозначает предполагаемый стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(144)..(144)
<223>	Хаа обозначает предполагаемый стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(165)..(165)

<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(170)..(170)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(173)..(173)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(195)..(195)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(203)..(203)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(218)..(218)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(226)..(226)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(235)..(235)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(303)..(303)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(311)..(311)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(337)..(337)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(341)..(342)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(349)..(349)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>

<221> <222> <223>	УЧАСТОК (378)..(378) Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(394)..(394)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(407)..(407)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(425)..(425)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(438)..(438)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(440)..(440)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(446)..(446)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(465)..(465)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(472)..(472)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(485)..(485)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(529)..(529)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(571)..(571)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(578)..(578)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон

<220>

<221> УЧАСТОК <222> (588)..(589) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (593)..(593) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (601)..(601) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (612)..(612) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (628)..(628) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (631)..(631) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (643)..(643) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (699)..(699) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (707)..(707) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (719)..(719) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (728)..(728) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (758)..(758) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК кодон кодон кодон кодон кодон кодон кодон кодон кодон кодон кодон кодон

<222> <223>	(778)..(778) Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(802)..(802)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(810)..(810)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(821)..(821)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(830)..(831)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(838)..(838)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(885)..(885)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(913)..(913)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(915)..(915)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(927)..(927)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(965)..(967)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(973)..(973)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1009)..(1009)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон

<220>

<221> <222> <223>	УЧАСТОК (1027)..(1027) Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1055)..(1055)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1076)..(1076)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1099)..(1099)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1115)..(1115)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1118)..(1118)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1141)..(1141)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1154)..(1154)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1187)..(1187)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1201)..(1201)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1245)..(1245)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1260)..(1260)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1273)..(1273)

<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1288)..(1288)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1293)..(1293)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1321)..(1321)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1488)..(1488)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон

<400> 25

Тгр 1

11е

Хаа О1у

ТЬг 5

Уа1

Суз

Ьеи

О1п

Азп 10

Ьеи

Уа1

Хаа

Ηίδ

15

РЬе

Ьеи

Уа1

Ьеи

Рго

Рго

Ηΐ3

РЬе

Азп

Агд

О1п

Агд

11е

О1п

О1п

Ьеи

Ьеи

20

25

30

Азп

О1у

Хаа

Азр

Зег

РЬе

Зег

Зег

Ьеи

Ηΐ3

Уа1

Ηί8

Ьуз

О1у

Ьеи

РЬе

35

40

45

Туг

Ьеи

Рго

Ьеи

МеЕ

Суз

Суз

РЬе

Суз

Ьеи

Ьеи

Зег

Ьеи

Туг

Ьеи

О1п

50

55

60

Туг

Ьуз

Зег

Суз

ТЬг

О1п

Зег

Хаа

О1у

Рго

МеЕ

Зег

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Ьеи

65

70

75

80

А1а

Ьеи

11е

Зег

Ьеи

Хаа

Ьеи

Ηΐ3

ТЬг

ТЬг

О1у

Ьеи

Ьеи

Агд

Ьеи

О1у

85

90

95

Ьуз

Зег

Хаа

МеЕ

Азр

Суз

11е

О1у

Суз

РЬе

Агд

Агд

Ьеи

Ηί.8

МеЕ

Ьеи

100

105

110

Хаа

Зег

Ьеи

Туг

Хаа

Хаа

РЬе

МеЕ

Агд

Ьуз

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

РЬе

Рго

115

120

125

11е

Ηΐ3

Суз

Рго

Суз

А1а

Суз

РЬе

О1у

Ьеи

О1п

ТЬг

Ьеи

Хаа

Ьеи

Хаа

130

135

140

Уа1

Суз

Зег

Ьеи

Уа1

Уа1

О1у

Зег

О1п

О1у

Ьеи

Суз

Ηί8

Ьеи

Агд

Ьуз

145

150

155

160

- 93 030377

Ьеи

11е

Ьеи

11е

Хаа 165

О1и

Тгр

Меб

11е

Хаа 170

Уа1

Нбз

Хаа

РЬе

Нбз 175

РЬе

Ьеи

РЬе

Ьеи

Ьеи

РЬе

Зег

Зег

Ьеи

Ьеи

Рго

Ьеи

Ьуз

Уа1

Агд

Рго

О1и

180

185

190

Ьеи

Ьеи

Хаа

Ьеи

Уа1

11е

Ьеи

Азп

Ьеи

ТЬг

Хаа

Уа1

Меб

Ьуз

Рго

Меб

195

200

205

Уа1

Меб

Азп

Зег

Тгр

11е

Азп

Рго

Уа1

Хаа

Уа1

А1а

Ьеи

Ьеи

О1п

Ьеи

210

215

220

Ьеи

Хаа

Туг

Агд

Ьуз

Рго

РЬе

О1у

РЬе

О1у

Хаа

ТЬг

Ьеи

Туг

Суз

Ьуз

225

230

235

240

Ьуз

Уа1

ТЬг

Зег

Нбз

Ьеи

Зег

Агд

Ьеи

Меб

Ьуз

РЬе

Ьеи

Нбз

РЬе

Рго

245

250

255

Нбз

Суз

11е

О1и

О1п

Агд

Ьуз

Суз

Ьеи

Азп

РЬе

Зег

Ьуз

О1и

11е

О1у

260

265

270

Ьеи

Азп

Ьеи

Ьуз

Ьуз

Туг

О1п

Зег

11е

Ьеи

Зег

О1и

О1п

Нбз

Суз

Суз

275

280

285

Уа1

А1а

РЬе

О1у

Агд

Ьуз

Ьеи

РЬе

Ьеи

Ьеи

Рго

РЬе

Ьеи

О1п

Хаа

Ьеи

290

295

300

О1у

Туг

Уа1

Ьеи

Суз

Меб

Хаа

О1у

О1п

Нбз

Зег

Туг

Ьуз

Азр

Ьеи

Ьеи

305

310

315

320

11е

ТЬг

О1п

О1п

О1и

Агд

О1у

Нбз

Ьеи

Ьеи

Меб

Ьуз

Азр

ТЬг

ТЬг

Ьеи

325

330

335

Хаа

О1и

Ьеи

Зег

Хаа

Хаа

Рго

Азп

Ьеи

Тгр

Ьуз

РЬе

Хаа

Рго

Ьеи

11е

340

345

350

Зег

Зег

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Рго

Ьуз

Зег

Ьеи

А1а

Суз

Ьеи

РЬе

О1и

Агд

Нбз

355

360

365

РЬе

Зег

Ьеи

Ьеи

Суз

11е

Агд

Агд

О1у

Хаа

О1у

Суз

Нбз

А1а

О1п

Ьеи

370

375

380

Азр

Агд

Ьеи

Меб

Уа1

Ьеи

Азр

Агд

Ьеи

Хаа

11е

11е

Тгр

Рго

Зег

Меб

385

390

395

400

Ьеи

Зег

Зег

Суз

Рго

11е

Хаа

Суз

Туг

Зег

Туг

11е

Рго

РЬе

О1у

Зег

- 94 030377

405

410

415

Суз

Нчз

Суз

Ьуз

РЬе

Ьей

Тгр

Ьей

Хаа

А1а

Зег

РЬе

11е

Ьей

ТЬг

Зег

420

425

430

Уа1

Ьей

О1п

Ьей

Ьей

Хаа

Агд

Хаа

Ьей

Азр

Ьей

О1п

О1п

Хаа

Тгр

Туг

435

440

445

Ьей

Тгр

Суз

Ьей

О1и

Ьей

Ьуз

О1и

ТЬг

ТЬг

О1у

РЬе

Азп

Ьей

ТЬг

Зег

450

455

460

Хаа

Агд

11е

Уа1

11е

Ьей

О1и

Хаа

Ьуз

Агд

О1п

МеЕ

Агд

Суз

Ьей

11е

465

470

475

480

11е

Суз

А1а

Ьей

Хаа

Зег

Зег

Агд

Нчз

О1у

Ьуз

Азп

11е

Ьей

ТЬг

Ьуз

485

490

495

О1и

Ьей

Азп

Рго

Зег

А1а

Азп

Рго

Зег

МеЕ

Азр

О1у

Суз

Рго

Зег

Зег

500

505

510

Суз

ТЬг

О1п

Зег

Ьей

О1у

11е

Зег

Ьей

Зег

Суз

О1у

А1а

Ьей

Ьей

РЬе

515

520

525

Хаа

Тгр

Ьей

Нчз

Зег

Ьей

Ьей

О1и

Уа1

О1п

Зег

Суз

Тгр

О1и

Зег

Агд

530

535

540

Ьей

Уа1

О1п

О1у

О1п

Суз

Зег

Ьей

О1п

Нчз

Ьей

Зег

Зег

Агд

Суз

Суз

545

550

555

560

Агд

Азп

Агд

Зег

О1у

Ьей

Зег

Ьей

Азп

Рго

Хаа

Зег

Нчз

РЬе

Нчз

Ьуз

565

570

575

О1п

Хаа

Туг

Ьей

Ьей

11е

Азр

Тгр

ТЬг

Азп

11е

Хаа

Хаа

Уа1

Агд

Зег

580

585

590

Хаа

Тгр

11е

Ьуз

Ьей

Тгр

Ьуз

Азр

Хаа

Ьуз

Уа1

Уа1

О1у

Уа1

О1п

Ьей

595

600

605

Ьей

Суз

Агд

Хаа

Ьуз

МеЕ

О1и

Ьей

РЬе

А1а

О1у

МеЕ

МеЕ

Ьуз

ТЬг

Уа1

610

615

620

Ьуз

Ьуз

Азп

Хаа

Ьуз

МеЕ

Хаа

ТЬг

Ьей

Агд

Ьей

О1и

Ьуз

О1и

Зег

Ьей

625

630

635

640

О1п

О1п

Хаа

Тгр

О1у

О1п

Ьей

О1у

Агд

О1у

Зег

Ьей

Рго

Зег

Ьей

Нгз

645

650

655

- 95 030377

Ьеи

Туг

Ьеи

Уа1 660

Агд

Суз

ТЬг

Зег

Суз 665

Агд

Уа1

Агд

Зег

О1п 670

РЬе

Уа1

Уа1

О1п

Ьеи

Рго

МеЬ

Ьеи

Н1з

Ьуз

Н1з

Агд

О1у

РЬе

Агд

МеЬ

А1а

Агд

675

680

685

Туг

Ьуз

Ьуз

11е

Зег

Суз

Ьеи

Уа1

Суз

О1п

Хаа

ТЬг

О1и

ТЬг

Азр

ТЬг

690

695

700

Агд

Ьуз

Хаа

Зег

О1у

РЬе

А1а

А1а

Тгр

Агд

Агд

ТЬг

Тгр

Ьуз

Хаа

Тгр

705

710

715

720

Зег

Ьеи

О1и

ТЬг

Агд

Ьеи

Ьуз

Хаа

О1и

Азп

Уа1

А1а

Зег

ТЬг

Зег

Уа1

725

730

735

ναι

Уа1

Агд

Зег

Зег

О1и

Зег

Зег

Ьеи

О1п

О1и

Ьеи

РЬе

ТЬг

Агд

ТЬг

740

745

750

ναι

11е

РЬе

11е

РЬе

Хаа

МеЬ

МеЬ

Туг

Зег

Уа1

О1п

Ьеи

МеЬ

Ьеи

ТЬг

755

760

765

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьуз

Зег

Зег

Агд

Азп

Уа1

Хаа

О1у

О1и

РЬе

Ьеи

Ьуз

11е

770

775

780

Ьуз

Рго

РЬе

Суз

Ьеи

Зег

Н1з

ТЬг

Ьуз

Ьеи

ТЬг

Зег

Суз

11е

МеЬ

Ьеи

785

790

795

800

ТЬг

Хаа

Зег

Ьеи

Зег

Суз

О1и

МеЬ

О1у

Хаа

Зег

Суз

Азп

Ьеи

А1а

Азп

805

810

815

11е

МеЬ

Агд

Туг

Хаа

Ьуз

Ьеи

О1и

Тгр

11е

Ьеи

Ьуз

Зег

Хаа

Хаа

Ьеи

820

825

830

Ηίβ

МеЬ

Агд

Рго

Ьеи

Хаа

Азп

Ьеи

Ьеи

ТЬг

Тгр

Ьуз

О1п

Рго

Ьуз

Агд

835

840

845

А1а

МеЬ

Рго

Рго

Ьеи

Ьуз

Азп

О1п

Азп

Ьеи

Ьеи

О1и

Азр

Туг

Ьеи

Агд

850

855

860

Ьуз

Ьуз

ТЬг

О1и

МеЬ

11е

Азп

Ьеи

Азп

Зег

Ьеи

Н1з

Ьеи

11е

О1у

О1у

865

870

875

880

11е

Ьеи

Азп

Ьеи

Хаа

Агд

Ьуз

Ьуз

Ьуз

О1и

Ьуз

Ьеи

О1и

Ьуз

Зег

Уа1

885

890

895

Ьеи

Уа1

Суз

ТЬг

Зег

Туг

11е

Ьеи

Ьеи

Ьуз

Ьеи

Ьеи

Азр

О1у

О1у

Уа1

900

905

910

- 96 030377

Хаа Суз	Хаа Ьеи Зег Суз 915	РЬе Агд 920	Зег Суз О1у Ьуз Уа1 925	Ьеи Хаа Тгр
Ο1η Уа1	11е 11е О1у Тгр	Нчз Ме!	Ьуз Ьеи Ο1η Агд 11е	Уа1 Рго Суз
930		935	940
Рго Зег	11е Ьеи Ьеи Суз	Ьеи Ьеи	О1у Туг ТЬг Уа1 Ьеи	. Ьеи Ο1η Ьеи
945	950		955	960
РЬе Ьеи	Агд Суз Хаа Хаа	Хаа Зег	О1у Суз 11е Ьеи Хаа	. Нчз Ьеи Тгр
	965		970	975
О1у Зег	Агд Ьеи Рго Ьуз	Туг РЬе	Зег Азр Агд РЬе РЬе	ТЬг А1а Туг
	980		985	990
Суз Ме!	Ьеи Ьеи Суз Нчз	РЬе Ьеи	ТЬг Ο1η Нчз Ьеи Рго О1и О1и РЬе
	995	1000	1005
Хаа Уа1	О1у Нчз Ьеи Ме!	11е Агд Рго ТЬг Ьеи Ме!	Зег Зег Зег
1010		1015	1020
Агд РЬе	Ьеи Хаа 11е Зег	Ьеи Тгр Рго Суз Ьеи Зег	Нчз Суз Зег
1025		1030	1035
А1а Зег	Зег Зег Зег Нчз	А1а Азп 11е Ьеи О1у Ьеи	Рго Туг Туг
1040		1045	1050
РЬе Хаа	РЬе Ьеи Тгр Уа1	О1у Ьеи 11е Зег О1у ТЬг	О1у Азр 11е
1055		1060	1065
11е Ьеи	Ο1η Нчз Ьеи Уа1	Азп Хаа Ьеи О1у Ьеи ТЬг	Ο1η Ьеи Ο1η
1070		1075	1080
Ьуз Нчз	Ьеи Ьеи РЬе 11е	11е Зег Ьеи Ьуз А1а Зег	Ο1η Уа1 Ьеи
1085		1090	1095
Хаа Ьеи	Туг Уа1 А1а Ьеи	О1у Зег Агд Агд Суз РЬе	Уа1 ТЬг Агд
1100		1105	1110
Ме! Хаа	ТЬг О1и Хаа 11е	Рго 11е Суз О1и Тгр 11е	Зег ТЬг ТЬг
1115		1120	1125
Ме! Азр	Рго Ме! Азп О1у	Тгр А1а РЬе Азр Тгр Азп	Хаа Тгр О1и
1130		1135	1140
А1а Туг	РЬе РЬе Уа1 РЬе	Ьеи Ο1η Суз Зег Хаа Ьеи	Зег Туг Ьеи
1145		1150	1155

- 97 030377

А1а

А1а 1160

Зег

Зег

Зег

О1п

Ьуз 1165

Ме+

Ьеи

Уа1

Суз

НЧз 1170

Туг

НЧз

Ме+

А1а

Суз

Ьеи

Ьеи

11е

Уа1

Зег

Туг

Зег

О1у

Рго

Зег

Ьеи

Хаа

Уа1

1175

1180

1185

А1а

Ьеи

Тгр

Ьуз

11е

Ьуз

Тгр

РЪе

Ьеи

Зег

Ьуз

Азр

Хаа

Азп

Зег

1190

1195

1200

Зег

О1п

Ьуз

Туг

НЧз

О1п

Ьуз

О1п

Зег

О1у

О1и

Агд

Тгр

11е

РЪе

1205

1210

1215

Зег

Нчз

Ьеи

О1п

Уа1

О1у

О1п

А1а

Уа1

О1у

Ме+

Ьеи

Зег

Ьеи

Ьуз

1220

1225

1230

ТЪг

Суз

Агд

Ьеи

Азр

11е

Уа1

Агд

ТЪг

Ьеи

Ьеи

Хаа

Суз

Ьеи

Ьуз

1235

1240

1245

О1и

Ьеи

Ьеи

Зег

А1а

Ьеи

О1и

О1у

О1и

Агд

Агд

Хаа

Уа1

Ьеи

Ьеи

1250

1255

1260

Уа1

Уа1

О1п

О1у

Уа1

О1и

Азп

О1п

НЧз

Хаа

РЪе

Ьуз

РЪе

Зег

РЪе

1265

1270

1275

Уа1

Тгр

Тгр

Зег

Ьеи

О1п

Ьеи

О1и

О1и

Хаа

Зег

Ьеи

Ме+

ТЪг

Хаа

1280

1285

1290

11е

Туг

Рго

Азр

Ьеи

О1у

РЪе

Ме+

11е

Ьеи

Азр

Ьеи

А1а

Зег

О1у

1295

1300

1305

Зег

РЪе

Рго

Ьуз

Зег

О1п

Зег

РЪе

Ьеи

Ьуз

О1и

Ьеи

Хаа

О1и

А1а

1310

1315

1320

ТЪг

Ьеи

ТЪг

Рго

Ьеи

Азр

Азп

11е

О1п

Ме+

Ме+

Ьуз

РЪе

О1у

Агд

1325

1330

1335

Зег

Ьеи

О1и

Агд

Суз

О1п

Ьеи

Ьуз

Азр

Уа1

Уа1

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

1340

1345

1350

О1и

Ьуз

Ьеи

Азр

Зег

Рго

Уа1

Уа1

Азр

Азп

О1у

Азр

Азп

Тгр

Зег

1355

1360

1365

Уа1

О1у

О1п

Агд

О1п

Ьеи

Ьеи

Суз

Ьеи

О1у

Агд

Уа1

Ме+

Ьеи

Ьуз

1370

1375

1380

Агд

Зег

Агд

Ьеи

Ьеи

РЪе

Ме+

Азр

О1и

А1а

ТЪг

А1а

Зег

Уа1

Азр

- 98 030377

1385

1390

1395

Бег

О1п

ТЪг

Азр

А1а

Уа1

11е

О1п

Ьуз

11е

11е

Агд

О1и

Азр

РЪе

1400

1405

1410

А1а

А1а

Суз

ТЪг

11е

11е

Бег

11е

А1а

Н1з

Агд

11е

Рго

ТЪг

Уа1

1415

1420

1425

Меб

Азр

Суз

Азр

Агд

Уа1

Ьеи

Уа1

11е

Азр

А1а

О1у

А1а

Азр

РЪе

1430

1435

1440

Бег

Рго

РЪе

ТЪг

Ьеи

Туг

Ьеи

11е

Ьеи

Азп

Ьеи

Уа1

Азп

Азр

Туг

1445

1450

1455

Ьеи

Бег

Уа1

Суз

Азр

С1у

РЪе

О1п

Рго

11е

11е

Уа1

Бег

ТЪг

РЪе

1460

1465

1470

Меб

Ьуз

Ьуз

Ьеи

Рго

Азп

Уа1

Бег

О1п

Уа1

Уа1

Уа1

Азп

А1а

Хаа

1475

1480

1485

<210> 26 <211> 1487 <212> БЕЛОК <213> Ытсобтапа баЪасит.

<220>

<221> УЧАСТОК <222> (32)..(32) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп-кодон <220>

<221> УЧАСТОК <222> (52)..(52) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп-кодон <220>

<221> УЧАСТОК <222> (75)..(75) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп-кодон <220>

<221> УЧАСТОК <222> (80)..(80) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп-кодон <220>

<221> УЧАСТОК <222> (82)..(83) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп-кодон <220>

<221> УЧАСТОК <222> (120)..(120) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп-кодон <220>

<221> УЧАСТОК

<222> <223>	(158)..(158) Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(161)..(161)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(163)..(163)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(168)..(168)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(187)..(187)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(196)..(197)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(199)..(199)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(204)..(205)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(210)..(210)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(214)..(214)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(249)..(250)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(259)..(259)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(273)..(273)

100 030377

<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(275)..(275)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(304)..(304)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(320)..(320)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(331)..(331)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(356)..(356)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(374)..(374)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(384)..(384)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(454)..(454)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(462)..(462)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(468)..(468)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(470)..(470)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(476)..(476)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>

101 030377

<221> <222> <223>	УЧАСТОК (479)..(479) Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(494)..(494)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(498)..(498)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(581)..(582)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(590)..(590)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(595)..(595)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(620)..(621)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(624)..(624)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(633)..(633)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(635)..(635)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(660)..(660)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(726)..(726)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(753)..(753)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон

102 030377 <220>

<221> УЧАСТОК <222> (759)..(759) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (765)..(765) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (771)..(771) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (782)..(782) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (784)..(784) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (794)..(794) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (798)..(798) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (800)..(800) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (817)..(818) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (827)..(827) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (834)..(834) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК <222> (841)..(841) <223> Хаа обозначает предполагаемый стоп <220>

<221> УЧАСТОК кодон кодон кодон кодон кодон кодон кодон кодон кодон кодон кодон кодон

103 030377

<222> <223>	(853)..(853) Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(863)..(863)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(869)..(870)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(877)..(878)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(882)..(882)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(905)..(905)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(930)..(930)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(936)..(936)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1000)..(1000)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1013)..(1014)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1019)..(1019)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1061)..(1061)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1074)..(1074)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон

104 030377 <220>

<221> УЧАСТОК

<222> <223>	(1079)..(1079) Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1092)..(1092)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1104)..(1104)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1111)..(1111)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1132)..(1132)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1158)..(1158)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1177)..(1178)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1193)..(1193)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1230)..(1230)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1232)..(1232)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1237)..(1237)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1247)..(1247)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1254)..(1254)

105 030377

<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1290)..(1291)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1301)..(1301)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1303)..(1303)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1317)..(1317)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1325)..(1325)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1333)..(1334)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1351)..(1351)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1380)..(1380)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1382)..(1382)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1404)..(1404)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1418)..(1418)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1437)..(1437)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>

106 030377 <221> УЧАСТОК

<222> <223>	(1452)..(1452) Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1455)..(1455)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1469)..(1469)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1474)..(1474)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<220>
<221>	УЧАСТОК
<222>	(1483)..(1485)
<223>	Хаа обозначает	предполагаемый	стоп-кодон
<400>	26

О1у Туг О1и О1и О1п

Туг

Уа1

РЪе

Агд

11е 10

Ьеи

РЪе

Зег

11е

ТЪг 15

РЪе

1

5

Ьеи

РЪе

Суз

Ьеи

НЧз

11е

Зег

11е

Уа1

Агд

О1у

РЪе

Зег

Зег

Суз

Хаа

20

25

30

Меб

Уа1

Ьуз

11е

НЧз

РЪе

Рго

Ьеи

Зег

Меб

Зег

ТЪг

Ьуз

Азр

Зег

Зег

35

40

45

11е

РЪе

НЧз

Хаа

Суз

А1а

А1а

РЪе

А1а

Туг

РЪе

НЧз

Суз

11е

Суз

Зег

50

55

60

ТЪг

Ьуз

Уа1

Уа1

Ьеи

Ьуз

Уа1

О1и

Уа1

О1п

Хаа

А1а

Ьеи

Туг

РЪе

Хаа

65

70

75

80

НЧз

Хаа

Хаа

А1а

Зег

Азп

Суз

ТЪг

О1п

О1п

Азр

РЪе

РЪе

А1а

Ьеи

О1и

85

90

95

Зег

НЧз

Агд

Тгр

ТЪг

Уа1

Ьеи

Уа1

Уа1

Зег

О1у

Азр

Туг

ТЪг

Суз

Суз

100

105

110

Азп

НЧз

Туг

ТЪг

Азп

Зег

Зег

Хаа

О1и

Ьуз

11е

Зег

Агд

Туг

РЪе

Рго

115

120

125

Зег

ТЪг

Уа1

Рго

А1а

Агд

Уа1

Ьеи

Азр

Суз

Ьуз

Ьеи

Суз

Зег

Туг

О1и

130

135

140

- 107

РЬе 145

Уа1

Ьеи

Тгр

Ьеи

Тгр 150

Азр

НЧз

Ьуз

А1а

Суз 155

Уа1

ТЬг

Хаа

О1у

Азп 160

Хаа

Бег

Хаа

РЬе

Ьуз

Азп

О1у

Хаа

Туг

Ьуз

РЬе

11е

Бег

РЬе

11е

Бег

165

170

175

Туг

РЬе

Суз

Суз

Бег

Ьеи

НЧз

Суз

Суз

НЧз

Хаа

Агд

РЬе

Азр

Агд

Бег

180

185

190

Суз

Суз

Азп

Хаа

Хаа

РЬе

Хаа

11е

Бег

Ьеи

Ьуз

Хаа

Хаа

Азп

О1п

Тгр

195

200

205

Ьеи

Хаа

ТЬг

Рго

О1у

Хаа

11е

О1п

Суз

О1и

Тгр

Ьеи

Суз

РЬе

Бег

РЬе

210

215

220

Бег

Азп

11е

О1и

Бег

Ьеи

Ьеи

Азр

Ьеи

Азр

О1и

Рго

РЬе

ТЬг

А1а

Ьуз

225

230

235

240

Агд

Ьеи

О1п

Уа1

ТЬг

Бег

О1п

Азр

Хаа

Хаа

Бег

Бег

РЬе

ТЬг

РЬе

Рго

245

250

255

ТЬг

А1а

Хаа

Бег

Агд

О1и

Азп

Уа1

Бег

ТЬг

РЬе

Агд

Ьуз

Ьуз

Ьеи

А1а

260

265

270

Хаа

ТЬг

Хаа

Агд

Азп

11е

Ьуз

А1а

Бег

Суз

Рго

Азп

Азп

11е

А1а

А1а

275

280

285

Ьеи

Ьеи

Ьеи

О1и

О1у

Бег

Туг

РЬе

Туг

Суз

НЧз

Бег

Суз

Бег

Азп

Хаа

290

295

300

О1у

МеЬ

Суз

Туг

Уа1

Суз

Агд

А1а

Азп

ТЬг

НЧз

ТЬг

Ьуз

11е

Суз

Хаа

305

310

315

320

Ьеи

НЧз

Бег

Агд

Ьуз

О1и

Азр

11е

Бег

Ьеи

Хаа

Агд

11е

Ьеи

Рго

Туг

325

330

335

Агд

Азп

Бег

Рго

Азп

Бег

О1п

11е

Суз

О1у

Бег

Бег

Азп

Ьеи

Бег

Бег

340

345

350

Уа1

О1п

Ьеи

Хаа

Ьеи

Рго

Ьуз

А1а

Тгр

НЧз

А1а

Туг

Бег

Бег

Азр

ТЬг

355

360

365

Бег

НЧз

РЬе

РЬе

Уа1

Хаа

О1и

О1у

Уа1

Ьуз

Уа1

Уа1

МеЬ

Ьеи

Бег

Хаа

370

375

380

ТЬг

О1у

Бег

Тгр

Суз

Тгр

ТЬг

Азр

Суз

Ьуз

Ьеи

Туг

О1у

Агд

Агд

Суз

385

390

395

400

- 108

Бег

А1а

А1а

Уа1

Агд 405

Туг

Азр

А1а

ТЪг А1а 410

ТЪг

РЪе

Нчз

Ьеи

А1а 415

Нчз

А1а

11е

А1а

Бег

РЪе

Суз

О1у

РЪе

Агд

Нчз

Рго

Ьеи

Туг

Ьеи

Рго

Агд

420

425

430

Суз

РЪе

Азп

Суз

Суз

Азп

А1а

Бег

Тгр

ТЪг

Суз

Бег

Бег

Азр

О1у

11е

435

440

445

Суз

О1у

Уа1

Тгр

Азп

Хаа

Ьуз

Ьуз

О1п

О1п

Уа1

Бег

11е

Хаа

Нчз

Нчз

450

455

460

О1и

О1и

Бег

Хаа

РЪе

Хаа

Азп

О1и

Бег

Азр

Ьуз

Хаа

Азр

А1а

Хаа

Ьеи

465

470

475

480

Туг

А1а

Агд

Туг

Ьуз

Уа1

Рго

О1у

Меб

О1у

Агд

ТЪг

РЪе

Хаа

О1п

Ьуз

485

490

495

Азп

Хаа

11е

Ьеи

Рго

Агд

11е

Агд

Уа1

Тгр

Меб

Уа1

Уа1

О1п

Уа1

Ьеи

500

505

510

Уа1

Ьеи

Азп

Агд

Тгр

О1и

Туг

Нчз

Суз

Ьеи

Уа1

О1и

Нчз

Бег

Бег

Бег

515

520

525

Бег

О1у

Туг

ТЪг

Нчз

РЪе

Тгр

Ьуз

Суз

Азп

Ьеи

Уа1

О1у

Азп

Рго

А1а

530

535

540

Тгр

Суз

Агд

Азр

Бег

Уа1

Нчз

Суз

Азп

11е

Бег

Ьеи

О1п

Азр

Уа1

А1а

545

550

555

560

О1у

ТЪг

Азр

О1п

О1у

РЪе

Рго

Бег

11е

Нчз

Азр

Ьеи

ТЪг

РЪе

ТЪг

Бег

565

570

575

Азп

Азр

11е

Бег

Хаа

Хаа

11е

О1у

О1п

11е

Туг

Азр

О1и

Хаа

О1у

Уа1

580

585

590

Бег

О1у

Хаа

Бег

Суз

О1у

Ьуз

ТЪг

Агд

Агд

Ьеи

Тгр

О1у

Туг

Азп

Суз

595

600

605

Туг

А1а

О1у

О1и

Агд

Тгр

Бег

РЪе

Ьеи

Ьеи

О1у

Хаа

Хаа

Ьуз

О1п

Хаа

610

615

620

Агд

Агд

11е

О1и

Ьуз

Суз

Ьуз

Ьеи

Хаа

Азр

Хаа

Ьуз

Агд

Агд

А1а

Суз

625

630

635

640

Бег

Бег

Бег

О1у

Азр

Бег

Тгр

О1у

О1у

О1и

Уа1

РЪе

Рго

Рго

Суз

11е

645

650

655

- 109

Суз

Тбг

Тгр

Хаа Азр А1а О1п Уа1 660

Уа1 665

О1у

Зег

О1у

НЧз

Азп 670

Ьеи

Тгр

Рбе

Азп

Суз

Ьеи

Суз

Суз

ТЬг

Азп

11е

Уа1

Азр

Зег

О1и

Тгр

НЧз

Азр

675

680

685

ТЬг

Агд

Ьуз

Туг

Рго

Уа1

Тгр

Туг

А1а

Азп

О1и

О1п

Агд

О1п

11е

О1п

690

695

700

О1у

Зег

Азр

Рго

О1у

Ьеи

Ьеи

Ьеи

О1у

О1и

О1у

Ьеи

О1у

Азп

Азп

О1у

705

710

715

720

Уа1

Тгр

Агд

Рго

Азр

Хаа

Азп

Агд

Агд

ТЬг

Тгр

НЧз

О1п

Рго

О1п

Тгр

725

730

735

Тгр

Зег

О1и

А1а

А1а

Азп

Рго

А1а

Суз

Ьуз

Зег

Суз

Ьеи

Рго

О1у

Ьеи

740

745

750

Хаа

Туг

Ьеи

Зег

Зег

Агд

Хаа

Суз

11е

О1п

Суз

Зег

Хаа

Суз

Зег

НЧз

755

760

765

Тгр

Ьеи

Хаа

Азп

Ьеи

О1п

О1у

МеР

Суз

О1и

О1у

Азп

Зег

Хаа

Агд

Хаа

770

775

780

Азп

НЧз

РЬе

А1а

Суз

НЧз

ТЬг

Рго

Зег

Хаа

Ьеи

Ьеи

А1а

Хаа

Суз

Хаа

785

790

795

800

Рго

Азр

Рго

Суз

НЧз

А1а

Агд

Тгр

Азр

Азр

Агд

А1а

11е

Тгр

О1п

11е

805

810

815

Хаа

Хаа

Азр

11е

Агд

Зег

Тгр

Азп

О1у

РЬе

Хаа

Агд

А1а

Зег

Зег

Суз

820

825

830

Тбг

Хаа

Азр

Ьеи

РЬе

Агд

ТЬг

Суз

Хаа

Агд

О1у

Азп

Азп

О1п

Агд

О1и

835

840

845

О1п

Суз

Ьеи

Рго

Хаа

Агд

11е

Ьуз

11е

РЬе

Зег

Ьуз

11е

11е

Хаа

О1у

850

855

860

Агд

Ьуз

Агд

Агд

Хаа

Хаа

11е

Зег

ТЬг

Уа1

Туг

11е

Хаа

Хаа

О1у

О1у

865

870

875

880

Рбе

Хаа

ТЬг

Туг

Ьуз

О1у

Агд

Агд

Ьуз

Агд

Азп

Тгр

Ьуз

Зег

О1п

Зег

885

890

895

Зег

Суз

Уа1

О1п

А1а

11е

Туг

Туг

Хаа

Зег

РЬе

Тгр

МеР

Уа1

О1у

Суз

- 110

900

905

910

Зег

А1а

Зег 915

Туг

Ьеи

Уа1

РЬе

Уа1 920

Ьеи

Уа1

А1а

Ьуз

РЬе 925

Зег

Азп

С1у

Ьуз

Хаа 930

Ьеи

Ьеи

А1а

О1у

11е 935

Хаа

Азп

РЬе

Зег

О1у 940

Зег

Суз

Н1з

Уа1

Ьеи 945

О1п

Зег

РЬе

Зег

Уа1 950

Туг

Тгр

Азр

11е

Агд 955

Суз

Туг

Суз

Зег

Суз 960

РЬе

РЬе

Уа1

А1а

Азр 965

Зег

Азр

О1п

Азр

Уа1 970

РЬе

Суз

Азр

ТЬг

Туг 975

С1у

А1а

О1п

Азр

Суз 980

Рго

Азп

11е

РЬе

Агд 985

ТЬг

Азр

Зег

Ьеи

О1п 990

Нгз

ТЬг

А1а Суз Зег Туг Уа1 11е РЬе Хаа Н1з Азп ТЬг РЬе Агд Ьуз Азп Зег 995 1000 1005

О1и

Зег 1010

О1у

11е

Хаа

Хаа

Зег 1015

Азр

О1п

Н1з

Хаа

Суз 1020

Ьеи

Рго

Рго

Уа1

РЬе

Туг

О1и

Зег

Н1з

РЬе

О1у

Н1з

Уа1

Туг

Н1з

ТЬг

А1а

Агд

1025

1030

1035

Н1з

Н1з

Н1з

Н1з

Н1з

МеЬ

Рго

11е

РЬе

Ьеи

А1а

Туг

Агд

ТЬг

ТЬг

1040

1045

1050

РЬе

Азр

Зег

Зег

О1у

Ьеи

А1а

Хаа

Туг

Ьеи

Уа1

Рго

О1у

11е

Ьеи

1055

1060

1065

Зег

Суз

Азп

11е

Зег

Хаа

11е

Азр

Зег

А1а

Хаа

Ьеи

Азп

Туг

Ьуз

1070

1075

1080

Зег

ТЬг

Суз

Туг

Зег

Зег

РЬе

Ьеи

Хаа

Ьуз

Н1з

Ьеи

Агд

Суз

Туг

1085

1090

1095

Азр

Туг

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Хаа

О1и

А1а

О1у

Азр

Уа1

Ьеи

Хаа

Агд

О1и

1100

1105

1110

Суз

Ьуз

Рго

Зег

О1и

РЬе

О1п

Зег

А1а

Азп

О1у

РЬе

Рго

О1п

О1п

1115

1120

1125

Тгр

11е

О1п

Хаа

МеЬ

Уа1

О1у

Ьеи

Зег

ТЬг

О1у

11е

Азр

О1у

Ьуз

1130

1135

1140

- 111 030377

^еυ

ТЬг 1145

Зег

^еυ

Суз

РЬе

Суз 1150

Азп

Уа1

Η13

Азр

Суз 1155

^еυ

ТЬг

Хаа

О1п

Η13

Η13

О1п

А1а

Агд

^уз

Суз

Тгр

РЬе

Уа1

ТЬг

11е

11е

Тгр

1160

1165

1170

^еυ

Уа1

Зег

Хаа

Хаа

Суз

Рго

11е

^еυ

Уа1

Η13

^еυ

Суз

О1и

^еυ

1175

1180

1185

^еυ

Суз

О1у

^уз

Хаа

Азп

О1у

РЬе

Суз

Агд

^уз

11е

^уз

ТЬг

Уа1

1190

1195

1200

^еυ

Агд

Азп

ТЬг

11е

Агд

Зег

Агд

Уа1

О1и

^уз

Азр

О1у

РЬе

Зег

1205

1210

1215

Рго

ТЬг

РЬе

^уз

^еυ

А1а

^уз

Рго

Тгр

О1и

Суз

Хаа

А1а

Хаа

^уз

1220

1225

1230

Агд

А1а

О1у

Хаа

11е

Зег

Зег

О1и

Η13

Зег

Зег

Зег

А1а

Хаа

Агд

1235

1240

1245

Зег

Туг

Зег

О1п

Η13

Хаа

Агд

О1у

Агд

О1и

Азр

Агд

Суз

Суз

Тгр

1250

1255

1260

Зег

Туг

Агд

О1у

Тгр

^уз

11е

Азп

11е

Азп

Зег

Зег

РЬе

^еυ

Зег

1265

1270

1275

РЬе

О1у

О1у

А1а

Суз

Зег

Тгр

^уз

Азп

Азп

Η13

Хаа

Хаа

Агд

Агд

1280

1285

1290

Туг

11е

О1п

ТЬг

Тгр

А1а

Зег

Хаа

Зег

Хаа

11е

Зег

^еυ

Агд

Азр

1295

1300

1305

Η13

Зег

Рго

Агд

А1а

Зег

Рго

РЬе

Хаа

Агд

Азп

Суз

О1и

^уз

О1п

1310

1315

1320

Ηΐ3

Хаа

Рго

Η13

Тгр

ТЬг

11е

РЬе

Агд

Хаа

Хаа

Азп

^еυ

О1и

О1у

1325

1330

1335

А1а

Зег

Азп

А1а

А1а

Азп

Зег

^уз

Меб

Тгр

Суз

^еυ

Хаа

Азп

Рго

1340

1345

1350

^уз

Азп

^еυ

11е

Η13

О1п

^еυ

^еυ

11е

ТЬг

О1и

11е

ТЬг

О1у

Уа1

1355

1360

1365

Зег

Азр

Агд

О1у

Зег

РЬе

РЬе

А1а

Тгр

О1и

О1и

Хаа

Суз

Хаа

Азп

1370

1375

1380

- 112 030377

Уа1

А1а 1385

Азр

РЬе

Туг

Ьеи

Тгр 1390

Ме!

Агд

Ο1η

Ьеи

Рго 1395

Ьеи

Ьеи

11е

Нчз

Агд

Ο1η

Ме!

Ο1η

Хаа

РЬе

Агд

Ьуз

Зег

Зег

А1а

Агд

ТЬг

Ьеи

1400

1405

1410

Агд

Рго

Уа1

Ьеи

Хаа

Зег

А1а

Ьеи

Рго

ТЬг

О1и

Туг

Ο1η

Ο1η

Зег

1415

1420

1425

Тгр

ТЬг

Уа1

11е

О1и

РЬе

Ьеи

Ьеи

Хаа

Ме!

Ο1η

Уа1

Ьеи

11е

Зег

1430

1435

1440

Ьеи

Ьеи

Ьеи

Ьеи

Суз

ТЬг

Ьеи

РЬе

Хаа

11е

Тгр

Хаа

Ме!

11е

11е

1445

1450

1455

Туг

Ьеи

Туг

Уа1

Ме!

Уа1

Зег

Азп

Ο1η

Зег

Хаа

Зег

Уа1

Рго

Ьеи

1460

1465

1470

Хаа

Агд

Азп

Суз

Ьеи

Ме!

Ьеи

А1а

Ьуз

Хаа

Хаа

Хаа

Ме!

Нгз

1475

1480

1485

<210> 27 <211> 4521 <212> ДНК <213> Ы1со!1апа !аЬасит
<400> 27 а!дда!а!да	ддаасад!а!	д!с!!садаа	!с!!д!!!ад	са!сас!!!с	!!д!!с!дсс	60
!ссаса!!!с	аа!сд!сада	дда!!садса	д!!д!!ааа!	дд!!аада!!	са!!!!сс!с	120
!с!сса!д!с	сасаааддас	!с!!с!а!с!	!сса!!да!д	!дс!дс!!!!	дс!!ас!!!с	180
а!!д!а!!!д	сад!асаааа	д!!д!ас!са	аад!!дадд!	ссаа!дадса	с!с!ас!!с!	240
адса!!да!а	адсс!с!аа!	!дсасасаас	аддас!!с!д	!!адаассаа	!с!!!дд!!!	300
аадс!д!с!с	!да!!!!д!с	адс!а!!!!а	дсс!!а!с!!	с!а!ад!!!!	а!дса!!!!д	360
д!!а!!д!дд	дааа!!ссса	д!сдсс!!дд	ааад!са!ад	а!ддас!д!а	!!дд!!д!!!	420
саддсда!!а	саса!д!!д!	аа!сас!а!а	с!аа!ад!!с	а!дадаааад	а!!!сасдс!	480
а!!!ссса!с	сас!д!ссс!	дсдсд!д!!!	!дда!!дсаа	ас!!!д!ад!	!а!дад!!!д	540
!!с!!!дд!!	д!ддда!сас	ааддс!!д!д	!сас!!аадд	ааа!!да!сс	!аа!!!аада	600
а!дда!да!а	!аад!!са!!	ад!!!са!!!	сс!а!!!с!д	!!д!!с!с!!	са!!д!!дсс	660
а!!ааадд!!	сдассддад!	!дс!д!аа!!	ад!да!!с!д	аа!с!сас!!	аад!да!даа	720
ассаа!дд!!	а!даас!сс!	дда!ааа!сс	ад!д!дад!д	дс!!!дс!!с	адс!!с!с!а	780
а!а!сдааад	сс!!!!дда!	!!дда!даас	сс!!!ас!дс	ааааадд!!а	саад!сасс!	840

- 113 030377

с+саада++д	а+даад++сс	++сас+++сс	ссас+дса+а	дадсададаа	аа+д+с+саа	900
с++++сдааа	дааа++ддсс	+ааасс+даа	дааа+а+саа	адса+сс+д+	ссдаасааса	960
++дс+дсд++	дс++++ддаа	ддаад++а++	+++ас+дсса	++с++дсад+	аа++аддд+а	1020
+д+д++а+д+	а+д+адддсс	аасас+са+а	сааада+++д	++да++асас	адсаддааад	1080
аддаса+с+с	с++а+даадд	а+ас+асс++	а+аддаас+с	+сс+аа+адс	сааа+++д+д	1140
даад++с+аа	сс+с+са+са	д++саас+++	аас+сссааа	адс++ддса+	дс++а++сда	1200
дсдасас++с	+сас++с+++	д+а+аадаад	ддд++аадд+	+д+са+дс+с	адс+адасад	1260
дс+са+дд+д	++ддасада+	+д+ааа++а+	а+ддссд+сд	а+дс+садса	дс+д+ссда+	1320
а+да+дс+ас	адс+аса++с	са+++ддс+с	а+дсса++дс	аад+++с+д+	ддс+++аддс	1380
а+сс+++а+а	с++асс+сдд	+дс++саас+	д++д+аасдс	+адс+ддас+	+дсадсад+д	1440
а+дд+а+++д	+дд+д+++дд	аас+аааада	аасаасадд+	++саа+++аа	са+са+даад	1500
аа+сд+да++	с+адаа+даа	адсдасааа+	дада+дс++а	а++а+а+дсд	сд++а+ааад	1560
++ссаддса+	дддаадааса	++++аасааа	адаа++даа+	сс++ссдсда	а+ссдад+а+	1620
дда+дд++д+	ссаад++с++	д+ас+саа+с	дс+дддаа+а	+са++д+с++	д+ддадсас+	1680
сс+с++с+ад	+ддс+асас+	сас++++дда	ад+дсаа+с+	+д++дддаа+	сссдс++дд+	1740
дсадддасад	+д++сас+дс	ааса+с+с+с	++саада+д+	+дсаддаасс	да+садддс+	1800
++ссс+саа+	сса+да+с+с	ас+++сасаа	дсаа+да+а+	с+с++да+ад	а++ддасааа	1860
+а+а+да+да	д+ааддад++	ад+дда+ааа	дс+д+ддааа	дас+адаадд	++д+ддддд+	1920
асаа++дс+а	+дсадд+даа	ада+ддадс+	++++дс+ддд	а+да+даааа	сад+ааадаа	1980
даа++даааа	а+д+ааас++	+дада++ада	аааддададс	++дсадсад+	ад+ддддаса	2040
д++ддддсдд	ддаад+с++с	сс+сс++дса	+с+д+ас++д	д+дада+дса	саад++д+сд	2100
дд+садд+са	саа+++д+дд	++саас+дсс	+а+д++дсас	аааса+сд+д	да++садаа+	2160
ддсасда+ас	аадаааа+а+	сс+д+++дд+	а+дссаа+да	асададасад	а+асааддаа	2220
д+да+ссддд	+++дс+дс++	ддадааддас	++ддааа+аа	+ддад+++дд	адассадас+	2280
дааа+аддад	аасд+ддса+	саасс+сад+	дд+дд+сада	адсадсдаа+	ссадс++дса	2340
ададс+д+++	ассаддас+д	+да+а+++а+	с++с+ада+д	а+д+а++сад	+дсад++да+	2400
дс+сасас+д	дс+с+дааа+	с++сааддаа	+д+д+даддд	даа++с++аа	ада+аааасс	2460
а++++дс++д	+сасасасса	ад++дас++с	++дса+аа+д	++дасс+да+	сс++д+са+д	2520
сдада+ддда	+да+сд+дса	а+с+ддсааа	+а+аа+дада	+а++адаадс	+ддаа+дда+	2580
+++ааададс	+ад+адс+дс	аса+дадасс	+с+++адаас	++д++дасд+	ддааасаасс	2640
ааадададса	а+дсс+ссс+	+даадаа+са	ааа+с++с+с	даада++а+с	+ааддаадаа	2700
аасддада+д	а+ааа+с+са	асад+с+аса	+с+да+аддд	ддда++с+аа	ас++а+ааад	2760

- 114 030377

даадаадааа	дадааасЕдд	аааадЕсадЕ	ссЕсдЕдЕдЕ	асаадсЕаЕа	ЕаЕЕасЕдаа	2820
дсЕЕЕЕддаЕ	ддЕддддЕдЕ	адЕдсЕадЕЕ	аЕсЕЕдЕЕЕЕ	сдЕЕсЕЕдЕд	дсааадЕЕсЕ	2880
сЕааЕддсаа	дЕдаЕЕаЕЕд	дсЕддсаЕаЕ	дааасЕЕсад	сддаЕсдЕдс	саЕдЕссЕЕс	2940
ааЕссЕЕсЕс	ЕдЕЕЕаЕЕдд	даЕаЕасддЕ	дЕЕаЕЕдсад	ЕЕдЕЕЕсЕЕс	дЕЕдсЕдаЕа	3000
дЕдаЕсадда	ЕдЕаЕЕЕЕдЕ	дасасЕЕаЕд	дддсЕсаада	сЕдсссаааЕ	аЕЕЕЕЕсдда	3060
садаЕЕсЕЕЕ	асадсаЕасЕ	дсаЕдсЕссЕ	аЕдЕсаЕЕЕЕ	ЕЕдасасаас	ассЕЕссдда	3120
адааЕЕсЕда	дЕсдддсаЕс	ЕааЕдаЕсад	ассаасаЕЕд	аЕдЕсЕЕссЕ	сссдЕЕЕЕЕЕ	3180
аЕдааЕсЕса	сЕЕЕддссаЕ	дЕЕЕаЕсаса	сЕдсЕсддса	ЕсаЕсаЕсаЕ	сасаЕдссаа	3240
ЕаЕЕсЕЕддс	сЕассдЕасЕ	асЕЕЕЕдаЕЕ	ссЕсЕдддЕЕ	ддсЕЕааЕаЕ	сЕддЕассдд	3300
ддаЕаЕЕаЕс	ЕЕдсаасаЕс	ЕсдЕдааЕЕд	асЕсддсЕЕд	асЕсааЕЕас	аааадсассЕ	3360
дЕЕаЕЕсаЕс	аЕЕЕсЕсЕда	аадсаЕсЕса	ддЕдЕЕаЕда	сЕаЕасдЕЕд	сЕЕЕаддаад	3420
саддадаЕдЕ	ЕЕЕдЕаасда	дааЕдЕааас	сдадЕдааЕЕ	ссааЕсЕдсд	ааЕддаЕЕЕс	3480
сасаасааЕд	даЕссааЕда	аЕддЕЕдддс	ЕЕЕсдасЕдд	ааЕЕдаЕддд	аадсЕЕасЕЕ	3540
сЕЕЕдЕдЕЕЕ	сЕдсааЕдЕЕ	саЕдаЕЕдЕс	ЕЕассЕадса	дсаЕсаЕсаа	дссадааааЕ	3600
дЕЕддЕЕЕдЕ	сасЕаЕсаЕа	ЕддсЕЕдЕсЕ	сЕЕааЕадЕд	ЕссЕаЕЕсЕд	дЕссаЕсЕЕЕ	3660
дЕдадЕЕдсЕ	ЕЕдЕддаааа	ЕааааЕддЕЕ	ЕсЕдЕсдааа	даЕЕааааса	дЕЕсЕсадаа	3720
аЕассаЕсад	аадсададЕд	дадааадаЕд	даЕЕЕЕсЕсс	сассЕЕсаад	ЕЕддссаадс	3780
сдЕдддааЕд	ЕЕдадсЕЕда	ааасдЕдсад	дЕЕадаЕаЕс	дЕссдаасас	ЕссЕсЕадЕд	3840
сЕЕаааддад	ЕЕасЕсЕсад	саЕЕададдд	ддададаада	ЕаддЕдЕЕдЕ	ЕддЕсдЕаса	3900
дддддЕддаа	ааЕсаасаЕЕ	ааЕЕсаадЕЕ	ЕЕсЕЕЕсдЕЕ	ЕддЕддадсс	ЕдсадсЕдда	3960
адааЕааЕса	ЕЕдаЕдасдЕ	адаЕаЕаЕсс	адасЕЕдддс	ЕЕсаЕдаЕсЕ	ЕадаЕсЕсдс	4020
ЕЕсдддаЕса	ЕЕссссаада	дссадЕссЕЕ	ЕЕЕдааддаа	сЕдЕдадаад	саасаЕЕдас	4080
сссаЕЕддас	ааЕаЕЕсада	ЕдаЕдаааЕЕ	Еддаададсс	ЕсдаасдсЕд	ссаасЕсааа	4140
даЕдЕддЕдЕ	сЕЕЕаааасс	сдааааасЕЕ	даЕЕсассад	ЕЕдЕЕдаЕаа	сддадаЕаас	4200
ЕддадЕдЕсд	дасададдса	дсЕЕсЕЕЕдс	ЕЕдддаадад	ЕдаЕдсЕааа	асдЕадсада	4260
сЕЕсЕаЕЕЕа	ЕддаЕдаддс	аасЕдссЕсЕ	дЕЕдаЕЕсас	адасадаЕдс	адЕдаЕЕсад	4320
ааааЕсаЕсс	дсдаддасЕЕ	ЕдсддссЕдЕ	асЕаЕааЕса	дсаЕЕдссса	садааЕасса	4380
асадЕсаЕдд	асЕдЕдаЕад	адЕЕсЕЕдЕЕ	аЕадаЕдсад	дааЕадсааа	ададЕЕЕдас	4440
ааассаЕсЕс	дЕЕЕдсЕЕда	ааддссЕЕса	сЕЕЕЕЕдддд	сЕЕЕддЕЕса	адааЕаЕдсс	4500
аассдаЕссЕ	сЕдадсЕсЕа	а				4521

<210> 28

- 115 030377 <211> 6190 <212> ДНК <213> Ы1соб1апа баЬасиш.

<400> 28 ссдбсаассс адбсббддсс ассасабааа сасадсбббд асббдбсбсб сссббббссс 60 баббббсасс асссббббса абббсссасс ббабаббсаб баббабаббб аабсаабсаа 120 абсааадббд дааааааадд дадбаабааб сааабддадб адбабабаса бассадааса 180 абдааададс асбсабаадс бааадсссаб ааббсабсас дааассасаа бабададдаа 240 ассбдасдбд бсссббаааа бсбаассббд аассбсбдад ассбссаааа аааасабсаб 300 ддаааббдса аадддсабдб сбдбдбббса абсбббдадд бабдббддсд ббдабдаабс 360 ссбссдааас сссаббббсб басдбдбсаб бадббдббсб ббдсассбдд даббдббссб 420 бдбааббсбб дддббдбдбб дббддаабас аабсаддадд дасаабаабд сбддссасаа 480 асададбадб асбаддаабд сбаддббсбб дбасбасааа бсаассббдб бббдббсааб 540 аддбсбадсс абсбббадсб ббдбдббабд бббдббадсб сабббббабб ддбабадааа 600 бддббддбса даадаааааа ббабаасссб бббддабббб дсаббааадб бдсбадсббд 660 дббдбсаабс бсбдббббсб бдсасассса дббссббааб бсббдбдааа ссааабассс 720 бсббдбббба ададбббддб дддддсбббб сббсбббдбб бсббдббабб дссббдббаб 780 адассббдбб бабддддааа адаассаабс бббассаасб сааббббдба бассбдабдб 840 бдббббсасб сббабддддб баббсббсбд ббббдббддд бббаббдбба ааасададад 900 бдаддадааб абдсббсадд аассссбсбб ааабддбадб дббдссаабд дсабддасбс 960 ааадаадбсб асбддддабс ааасбдбсас сссббабдсс аабдсбааса бббббадбсб 1020 сбббасбббс бсббддабдд дбссссбааб ббсбдббддс аасаадааас саббадассб 1080 бдаддабдбб ссбсадсббс асбббдабда бадбдбсааа дддадббббс сбабббббад 1140 адааааасба даабсбдбдд дбдддддааа бадбаассдб дбдасбассб бсабдсбддб 1200 дааддсбббд дббббсасад сасддаадда дабадбдбба бсддсбсбсб бсдбдсббсб 1260 ббасдсбсбд дсдбсббббд ббддсссдба ссбсаббдаб ассббадббс адбабсбдаа 1320 бддаааасда дасбббдаба абдааддбба бдбсббадбд дсбдсаббсб бсдббдсааа 1380 дббддбддад бдбббддсдс аааддсаббд дбббббсаад дбдсадсадд дадддбабсд 1440 ддсасдддса дсасбддббб ссаааабсба саасаадддб ббаасссбсб ссбдбсадбс 1500 ааадсааадс сасасбадбд дададабсаб сааббббабд асадббдабд ссдададдаб 1560 бддбдасббс ддббддбаба бдсабдабсс ббддабддба абсабасаад ббдсбсбддс 1620 аббддбдаба сбсбабаааа абсббддссб адсбдсбабс дссдсдбббд ббдсбасааб 1680 аабадбдабд ббддсаааса бсссбббадд дадбббдсад дадаадбббс аддадааасб 1740

- 116 030377

сабддаабсд	ааадабадаа	ддабдааддс	басабсбдаа	дбсббаадда	абабдадааб	1800
асбсаадсбб	саадсббддд	адабдаадбб	бсбдбсбадд	абсббддасс	бсаддасбас	1860
ададдсадда	бддббдабда	аабабдбдба	сасабсадсб	абдасбасбб	ббдбсббсбд	1920
ддббдсбссб	асабббдббб	сбдбдасдас	сбббддсдсб	дсаабдсбба	бдддаабссс	1980
асббдаабсб	дддаадабаб	бдбсбдсасб	бдсдасаббб	адааббсббс	аададсссаб	2040
сбасаабсбс	ссадабасаа	бббсаабдаб	бдсбсааасс	ааадбббсбс	ббдабсдбаб	2100
бдсабсбббс	сбббсбсббд	абдасббдса	дссбдабдбс	абададаадс	ббссаааадд	2160
бадббсбдаб	даадсааббд	адаббдбадд	бдддаасббс	дсббдддабд	сабссассбс	2220
дасбссасбб	сбаааддабд	бааабсббад	адбдсббааб	ддсабдадад	ббдссабббд	2280
бддбасадбб	ддббсаддаа	аабсаадсбб	асбдбсбадс	аббббаддад	адабдсссаа	2340
аббабсаддд	асбаббааас	ббадбддаас	дааддсббаб	дббдсасадб	сдсссбддаб	2400
асададбдда	аадабададд	адаасабабб	абббддбааа	дадабдсада	дддадаадба	2460
бдабааадбб	сббдаадсдб	дсбссббааа	дааадассбд	даааббсбсб	сббббддсда	2520
бсааасадаа	абаддддада	ддддсаббаа	бббдадсддб	ддасадаадс	ададаабаса	2580
даббдсбсдб	дсбсбббасс	аадабдсбда	бдбббассба	бббдабдабс	сдббсадбдс	2640
бдбддабдсб	сабассддаб	сссабсбсбб	садбдбаадб	ссбббсабаб	абабдсббба	2700
ббббсабдсб	бдабабаббб	бассбадсса	сббдаббдас	ссабссббба	аббдсаддаа	2760
бдбабаабдд	ддсбаббдаа	ббсаааааса	дббббабабд	ббасасабса	адбддадббб	2820
ббдссбдсбд	сддабббдаб	сббддбасбс	бббссбббса	дбааббабдд	бббдсббааб	2880
абсабабаба	дасббаасбс	абббаасбаб	дабабббсбс	ббсаддбсаб	дааадабдда	2940
аддабсадбд	ааасбдддаа	абасаабдаб	сббсбсаааб	баддбадбда	сббсабддаа	3000
сббдбдддбд	сбсассаада	адсбббааса	дсааббдаса	садббааддд	адаадсаббд	3060
адааададбд	аддааабдас	бддбдабааб	асааабдбас	адааддабаа	ааабабббса	3120
дабддссааа	абддбааадб	ддабдабабб	дббддаасаа	адддасаааб	бдббсаддад	3180
даддааадад	адаааддбад	бдббддбббб	бсадбббасб	ддааабабаб	аасаасбдса	3240
бабддаддбд	сбсббдбдсс	абббабдсбд	ббддсасаад	ббддббббса	дсбссббсаа	3300
аббддаадса	аббаббддаб	ддсдбдддса	асбсссдбсб	сааададбда	дссассбссб	3360
дббдддадбб	сбасбсбсаб	саббдбсбаб	дббдсбббад	дааббдсаад	бдсбббабдс	3420
абссббдсба	даассабдбб	бсббдббасс	дсбддабаба	адасадссбс	бббдсббббс	3480
сабаааабдс	абсбббдсаб	бббссдбдсб	ссаабдбссб	бсббсдабдс	сасассдадб	3540
дддсддаббс	бааасададб	аадбдаабда	ббасаббббс	бббабббадс	сссббббббб	3600
бссббаббад	бдбсаабсбб	бсбдббасаб	дасбаабсаа	бдббббдбда	аааббадсба	3660

- 117 030377

дЕааЕЕЕсад	ааЕЕаасЕса	ааЕдЕасЕЕЕ	ддЕаЕдаааа	саддсаЕсда	садаЕсааад	3720
ЕдсааЕЕдаЕ	сЕдааЕдЕЕс	ссаЕЕсаадЕ	ЕддаЕссЕЕЕ	дссЕЕсасаа	ЕааЕасадсЕ	3780
ЕЕЕадддаЕЕ	аЕЕддадЕаа	ЕдЕсасаадЕ	ЕдсаЕддсад	дЕсЕЕсаЕЕд	ЕсЕЕЕаЕЕсс	3840
ддЕсаЕЕдса	дЕЕЕдсаЕсЕ	ддЕЕддаддЕ	ЕдсЕасдасс	ассЕЕЕЕЕсд	ЕдЕЕсЕЕЕдс	3900
сЕЕсасааЕЕ	аЕЕсЕасЕаЕ	аЕдсЕЕЕЕЕс	асааадЕдад	ЕсаЕаасЕЕЕ	адсдасаЕЕс	3960
аЕааасдЕда	дЕЕасаЕЕЕа	адЕддЕдадЕ	ЕЕдЕЕЕЕсаЕ	ЕдсадсааЕа	ЕЕасаЕасса	4020
Есадсасдад	аасЕддсасд	дсЕаааЕддд	асаЕдсааад	сЕссадЕааЕ	асадсасЕЕЕ	4080
дссдадасаа	ЕЕЕсаддаЕс	аадсасааЕЕ	адаадЕЕЕсд	аЕсаддааЕс	ЕадаЕЕссад	4140
дасасаадЕа	ЕдаааЕЕдаЕ	адасааЕЕаЕ	ЕсЕсддссЕа	адЕЕЕсасаЕ	сдсЕдсЕдса	4200
аЕддадЕддс	ЕЕЕдЕЕЕдсд	ЕЕЕддаЕаЕд	ЕЕаЕсЕсЕда	ЕсасЕЕЕЕдс	ЕЕЕсЕсЕЕЕа	4260
аЕЕЕЕсЕЕда	ЕсЕсЕсЕЕсс	ЕдЕЕддааса	аЕЕдасссаа	дЕаадЕЕсЕс	ЕаЕсЕЕсаЕд	4320
ЕЕЕЕсЕЕЕсс	ЕЕдаадЕЕЕд	ЕЕдЕдЕЕдаа	ЕаасЕсЕЕаа	дадсасаЕЕЕ	ЕсЕссдЕЕЕс	4380
ЕЕдаЕЕЕаса	ддЕдЕЕдсЕд	дсЕЕадсЕдЕ	ЕасаЕаЕддд	сЕЕааЕсЕда	асаЕааЕаса	4440
адсЕсдддЕЕ	дЕЕЕддааЕс	ЕЕЕдЕаЕдаЕ	ддааааЕааа	аЕЕаЕЕЕсЕд	ЕЕдааадааЕ	4500
асЕЕсадЕаЕ	асЕдсЕсЕЕс	саадЕдааЕс	ЕссЕсЕЕаЕс	аЕадааЕсса	асадассада	4560
сссЕаасЕдд	ссаЕсЕЕдЕд	дададдЕЕда	ЕЕЕЕадсааЕ	сЕЕсаддЕаа	аЕЕаадЕЕаЕ	4620
ЕсЕсЕддЕдЕ	ЕааЕЕаЕдса	ддЕЕааЕЕЕд	ЕЕддЕаЕддд	ЕЕддЕаЕаЕс	ЕдаааасЕЕЕ	4680
ЕааЕаддЕсс	даЕаЕдсЕсс	ЕсасаЕдссЕ	сЕсдЕдЕЕдс	даддссЕЕас	аЕдсасЕЕЕс	4740
ЕЕЕддЕддаа	адаадасЕдд	ааЕЕдЕсддЕ	аддасаддса	дсддЕаааЕс	ЕасЕсЕааЕа	4800
садасссЕсЕ	ЕссдсаЕадЕ	ЕдаассадсЕ	дсЕддасааа	ЕаааааЕада	ЕддЕаЕсадс	4860
аЕсЕссЕсаа	ЕЕддЕЕЕдса	ЕдаЕсЕасдд	ЕсЕадаЕЕда	дЕаЕааЕЕсс	асаддаЕсса	4920
асЕаЕдЕЕЕд	адддаасадЕ	Есдсадсаас	сЕадасссдс	ЕЕдаададЕа	ЕЕсадаЕдаа	4980
саааЕЕЕддд	аддЕдасадс	ЕЕддЕЕЕЕдс	сЕаЕЕЕЕЕдд	аЕЕЕаЕЕЕЕд	ЕЕЕсадаЕад	5040
дааааЕдаса	ааЕЕЕЕаЕЕЕ	ЕаЕЕдадааа	сЕЕЕдЕЕЕда	ЕдЕЕаЕдсЕЕ	саддсдсЕсд	5100
аЕаадЕдЕса	дсЕаддадаа	даадЕдадда	адааадаадд	сааасЕЕЕаЕ	ЕсЕасаддЕа	5160
асЕЕсаадаа	ссасаЕсаЕЕ	ЕЕсЕдаЕдаЕ	ЕЕссасЕЕЕЕ	ададсЕдЕаа	ЕааЕсаЕсЕЕ	5220
саЕЕдсдЕЕд	сЕдсадЕаЕс	ЕдадааЕдда	дадаасЕдда	дЕдЕаддсса	ааддсадсЕд	5280
дЕсЕдссЕЕд	дссдЕдЕдсЕ	асЕдааааад	адсааддЕсс	ЕддЕссЕЕда	сдаддсЕаса	5340
дсаЕсЕдЕсд	асасЕдсаас	ЕдаЕааЕсЕЕ	аЕЕсадсааа	сЕсЕааддсЕ	дсасЕЕсЕсЕ	5400
даЕЕссасдд	ЕЕаЕаассаЕ	ЕдсЕсаЕадд	аЕЕасаЕсЕд	ЕдсЕЕдасад	ЕдаЕаЕддЕс	5460
сЕасЕаЕЕад	аЕсаЕддЕаа	дааЕсаЕсдЕ	ЕЕаЕдЕЕсЕд	дадсаадсдд	адааддаааЕ	5520

- 118 030377 +с++дд+ад+ +асс++++++ ++а+дс+а+д с+дсадддс+ са++дс+даа +асддсас+с 5580 садссадд++ д++ададаас даа+сс+са+ +д+++дс+аа дс+сд+ддса дад+а+ад+а 5640 +дадд+сааа ++саад++++ дадаа+д+++ садаса+д+д ад+с+садаа ас+аа+с++с 5700 д++аа+аа+д ++асасдасд а+да+да+да ааа++адддд ас+с+адас+ ад+асс++ад 5760 +сда+ад+д+ +++дад+++с са+с+д+дда сасса+адс+ +даасаадаа ссадсдааа+ 5820 дсадд+са+д сс+д+ддс++ дадддааас+ дсаасаа+сс +а+ддсаддд ааадааасс+ 5880 аса+с+ад+д а+дсаа+а++ да++д+даад +ддса+++д+ ++++д+++ад ас+++++да+ 5940 дадаааа+д+ а+асд+аас+ ++д+д+++ас аа+аа+++да а+д+а+д++д ад+саад+да 6000 ++ад++ад++ аадад+дсас дда++++дс+ ас++с+ддд+ аааадаад+а аасс++д++д 6060 ++дадад++д ааад+дааа+ +ас+ад+д+с даа++++дсс дса+аадс+а аа+дааасас 6120 ++++асда+а аас+сс+ад+ дсаасааадд ааааа++са+ +ддсаадас+ адс+д+++а+ 6180 д+++сасдас 6190 <210> 29 <211> 5383 <212> ДНК <213> ЫЧсо+Чапа +аЪасит <400> 29 а+ддааа++д сааадддса+ д+с+д+д+++ саа+с+++да дд+а+д++дд сд++да+даа 60 +ссс+ссдаа асссса++++ с++асд+д+с а++ад++д++ с+++дсасс+ ддда++д++с 120 с++д+аа++с ++ддд++д+д ++д++ддаа+ асаа+садда дддасаа+аа +дс+ддссас 180 ааасадад+а д+ас+аддаа +дс+адд++с ++д+ас+аса аа+саасс++ д++++д++са 240 а+адд+с+ад сса+с+++ад с+++д+д++а +д+++д++ад с+са+++++а ++дд+а+ада 300 аа+дд++дд+ садаадаааа аа++а+аасс с++++дда++ ++дса++ааа д++дс+адс+ 360 +дд++д+саа +с+с+д++++ с++дсасасс сад++сс++а а++с++д+да аассааа+ас 420 сс+с++д+++ +аадад+++д д+дддддс++ ++с++с+++д +++с++д++а ++дсс++д++ 480 а+адасс++д +++а+дддда ааадаассаа +с+++ассаа с+саа++++д +а+асс+да+ 540 д++д++++са с+с++а+ддд д++а++с++с +д++++д++д дд+++а++д+ +аааасадад 600 ад+даддада а+а+дс++са ддаасссс+с ++ааа+дд+а д+д++дссаа +ддса+ддас 660 +сааадаад+ с+ас+дддда +сааас+д+с асссс++а+д ссаа+дс+аа са+++++ад+ 720 с+с+++ас++ +с+с++дда+ ддд+сссс+а а+++с+д++д дсаасаадаа асса++адас 780 с++дадда+д ++сс+садс+ +сас+++да+ да+ад+д+са аадддад+++ +сс+а+++++ 840 ададааааас +адаа+с+д+ ддд+ддддда аа+ад+аасс д+д+дас+ас с++са+дс+д 900 д+дааддс++ +дд++++сас адсасддаад дада+ад+д+ +а+сддс+с+ с++сд+дс++ 960

- 119 030377

сбббасдсбс	бддсдбсббб	бдббддсссд	бассбсаббд	абассббадб	бсадбабсбд	1020
аабддаааас	дадасбббда	баабдааддб	бабдбсббад	бддсбдсабб	сббсдббдса	1080
аадббддбдд	адбдбббддс	дсаааддсаб	бддбббббса	аддбдсадса	дддадддбаб	1140
сдддсасддд	садсасбддб	ббссаааабс	басаасаадд	дбббаасссб	сбссбдбсад	1200
бсааадсааа	дссасасбад	бддададабс	абсаабббба	бдасадббда	бдссдададд	1260
аббддбдасб	бсддббддба	бабдсабдаб	ссббддабдд	баабсабаса	адббдсбсбд	1320
дсаббддбда	басбсбабаа	ааабсббддс	сбадсбдсба	бсдссдсдбб	бдббдсбаса	1380
абаабадбда	бдббддсааа	сабсссббба	дддадбббдс	аддадаадбб	бсаддадааа	1440
сбсабддааб	сдааадабад	ааддабдаад	дсбасабсбд	аадбсббаад	даабабдада	1500
абасбсаадс	ббсаадсббд	ддадабдаад	бббсбдбсба	ддабсббдда	ссбсаддасб	1560
асададдсад	дабддббдаб	дааабабдбд	басасабсад	сбабдасбас	ббббдбсббс	1620
бдддббдсбс	сбасабббдб	ббсбдбдасд	ассбббддсд	сбдсаабдсб	бабдддаабс	1680
ссасббдааб	сбдддаадаб	аббдбсбдса	сббдсдасаб	ббадааббсб	бсаададссс	1740
абсбасаабс	бсссадабас	аабббсаабд	аббдсбсааа	ссааадбббс	бсббдабсдб	1800
аббдсабсбб	бссбббсбсб	бдабдасббд	садссбдабд	бсабададаа	дсббссаааа	1860
ддбадббсбд	абдаадсааб	бдадаббдба	ддбдддаасб	бсдсббддда	бдсабссасс	1920
бсдасбссас	ббсбааадда	бдбааабсбб	ададбдсбба	абддсабдад	адббдссабб	1980
бдбддбасад	ббддббсадд	аааабсаадс	ббасбдбсба	дсаббббадд	ададабдссс	2040
аааббабсад	ддасбаббаа	асббадбдда	асдааддсбб	абдббдсаса	дбсдсссбдд	2100
абасададбд	дааадабада	ддадаасаба	ббабббддба	аададабдса	дадддадаад	2160
бабдабааад	ббсббдаадс	дбдсбссбба	аадааадасс	бддаааббсб	сбсббббддс	2220
дабсааасад	ааабадддда	даддддсабб	аабббдадсд	дбддасадаа	дсададааба	2280
садаббдсбс	дбдсбсббба	ссаадабдсб	дабдбббасс	бабббдабда	бссдббсадб	2340
дсбдбддабд	сбсабассдд	абсссабсбс	ббсадбдбаа	дбссбббсаб	абабабдсбб	2400
баббббсабд	сббдабабаб	бббассбадс	сасббдаббд	асссабссбб	бааббдсадд	2460
аабдбабааб	ддддсбаббд	ааббсааааа	садббббаба	бдббасасаб	саадбддадб	2520
ббббдссбдс	бдсддабббд	абсббддбас	бсбббссббб	садбааббаб	ддбббдсбба	2580
абабсабаба	бадасббаас	бсабббаасб	абдабабббс	бсббсаддбс	абдааадабд	2640
дааддабсад	бдааасбддд	ааабасаабд	абсббсбсаа	аббаддбадб	дасббсабдд	2700
аасббдбддд	бдсбсассаа	даадсбббаа	садсааббда	сасадббаад	ддадаадсаб	2760
бдадааадад	бдаддааабд	асбддбдаба	абасааабдб	асадааддаб	ааааабаббб	2820
садабддсса	ааабддбааа	дбддабдаба	ббдббддаас	ааадддасаа	аббдббсадд	2880

- 120 030377

аддаддааад	ададааадд+	ад+д++дд++	+++сад+++а	с+ддааа+а+	а+аасаас+д	2940
са+а+ддадд	+дс+с++д+д	сса+++а+дс	+д++ддсаса	ад++дд++++	садс+сс++с	3000
ааа++ддаад	саа++а++дд	а+ддсд+ддд	саас+сссд+	с+сааадад+	дадссасс+с	3060
с+д++дддад	++с+ас+с+с	а+са++д+с+	а+д++дс+++	аддаа++дса	ад+дс+++а+	3120
дса+сс++дс	+адаасса+д	+++с++д++а	ссдс+дда+а	+аадасадсс	+с+++дс+++	3180
+сса+аааа+	дса+с+++дс	а++++ссд+д	с+ссаа+д+с	с++с++сда+	дссасассда	3240
д+дддсдда+	+с+ааасада	д+аад+даа+	да++аса+++	+с+++а+++а	дсссс+++++	3300
+++сс++а++	ад+д+саа+с	+++с+д++ас	а+дас+аа+с	аа+д++++д+	даааа++адс	3360
+ад+аа+++с	адаа++аас+	сааа+д+ас+	++дд+а+даа	аасаддса+с	дасада+саа	3420
ад+дсаа++д	а+с+даа+д+	+ссса++саа	д++дда+сс+	++дсс++сас	аа+аа+асад	3480
с++++аддда	++а++ддад+	аа+д+сасаа	д++дса+ддс	адд+с++са+	+д+с+++а++	3540
ссдд+са++д	сад+++дса+	с+дд++ддад	д++дс+асда	ссасс+++++	сд+д++с+++	3600
дсс++сасаа	++а++с+ас+	а+а+дс++++	+сасааад+д	ад+са+аас+	++адсдаса+	3660
+са+ааасд+	дад++аса++	+аад+дд+да	д+++д++++с	а++дсадсаа	+а++аса+ас	3720
са+садсасд	адаас+ддса	сддс+ааа+д	ддаса+дсаа	адс+ссад+а	а+асадсас+	3780
++дссдадас	аа+++садда	+саадсасаа	++адаад+++	сда+саддаа	+с+ада++сс	3840
аддасасаад	+а+дааа++д	а+адасаа++	а++с+сддсс	+аад+++сас	а+сдс+дс+д	3900
саа+ддад+д	дс+++д+++д	сд+++дда+а	+д++а+с+с+	да+сас++++	дс+++с+с++	3960
+аа++++с++	да+с+с+с++	сс+д++ддаа	саа++дассс	аад+аад++с	+с+а+с++са	4020
+д++++с+++	сс++даад++	+д++д+д++д	аа+аас+с++	аададсаса+	+++с+ссд++	4080
+с++да+++а	садд+д++дс	+ддс++адс+	д++аса+а+д	ддс++аа+с+	дааса+аа+а	4140
саадс+сддд	++д+++ддаа	+с+++д+а+д	а+ддаааа+а	ааа++а+++с	+д++дааада	4200
а+ас++сад+	а+ас+дс+с+	+ссаад+даа	+с+сс+с++а	+са+адаа+с	саасадасса	4260
дассс+аас+	ддсса+с++д	+ддададд++	да++++адса	а+с++садд+	ааа++аад++	4320
а++с+с+дд+	д++аа++а+д	садд++аа++	+д++дд+а+д	дд++дд+а+а	+с+даааас+	4380
+++аа+адд+	ссда+а+дс+	сс+саса+дс	с+с+сд+д++	дсдаддсс++	аса+дсас++	4440
+с+++дд+дд	ааадаадас+	ддаа++д+сд	д+аддасадд	садсдд+ааа	+с+ас+с+аа	4500
+асадассс+	с++ссдса+а	д++даассад	с+дс+ддаса	аа+ааааа+а	да+дд+а+са	4560
дса+с+сс+с	аа++дд+++д	са+да+с+ас	дд+с+ада++	дад+а+аа++	ссасадда+с	4620
саас+а+д++	+дадддааса	д++сдсадса	асс+адассс	дс++даадад	+а++сада+д	4680
аасааа+++д	ддадд+даса	дс++дд++++	дсс+а+++++	дда+++а+++	+д+++сада+	4740

- 121 030377

аддаааа+да	сааа++++а+	+++а++дада	аас+++д+++	да+д++а+дс	++саддсдс+	4800
сда+аад+д+	садс+аддад	аадаад+дад	даадааадаа	ддсааас+++	а++с+асадд	4860
+аас++саад	аассаса+са	++++с+да+д	а+++ссас++	++ададс+д+	аа+аа+са+с	4920
++са++дсд+	+дс+дсад+а	+с+дадаа+д	дададаас+д	дад+д+аддс	саааддсадс	4980
+дд+с+дсс+	+ддссд+д+д	с+ас+даааа	ададсаадд+	сс+дд+сс++	дасдаддс+а	5040
садса+с+д+	сдасас+дса	ас+да+аа+с	++а++садса	аас+с+аадд	с+дсас++с+	5100
с+да++ссас	дд++а+аасс	а++дс+са+а	дда++аса+с	+д+дс++дас	ад+да+а+дд	5160
+сс+ас+а++	ада+са+дд+	аадаа+са+с	д+++а+д++с	+ддадсаадс	ддадааддаа	5220
а++с++дд+а	д++асс++++	++++а+дс+а	+дс+дсаддд	с+са++дс+д	аа+асддсас	5280
+ссадссадд	++д++адада	асдаа+сс+с	а++д+++дс+	аадс+сд+дд	садад+а+ад	5340
+а+дадд+са	аа++саад++	++дадаа+д+	++садаса+д	+да		5383

<210> 30 <211> 117 <212> ДНК <213> ЫЧсо+Чапа +аЪасит <400> 30

д+а+д++ддс	д++да+даа+	ссс+ссдааа	сссса++++с	++асд+д+са	++ад++д++с	60
+++дсасс+д	дда++д++сс	++д+аа++с+	+ддд++д+д+	+д++ддаа+а	саа+сад	117

<210> 31 <211> 83 <212> ДНК <213> ЫЧсо+Чапа +аЪасит <400> 31 д+аад+сс++ +са+а+а+а+ дс+++а++++ са+дс++да+ а+а++++асс +адссас++д 60 а++дассса+ сс+++аа++д сад 83 <210> 32 <211> 81 <212> ДНК <213> ЫЧсо+Чапа +аЪасит <400> 32

д+ас+с+++с	с+++сад+аа	++а+дд+++д с++аа+а+са +а+а+адас+ +аас+са+++	60
аас+а+да+а	+++с+с++са	д	81

<210>	33
<211>	145
<212>	ДНК
<213>	ЫЧсо+Чапа +аЪасит
<400>	33
д+аад+даа+ да++аса+++ +с+++а+++а дсссс+++++ +++сс++а++ ад+д+саа+с	60

- 122 030377

ЕЕЕсЕдЕЕас	аЕдасЕааЕс	ааЕдЕЕЕЕдЕ	дааааЕЕадс	ЕадЕааЕЕЕс	адааЕЕаасЕ	120
саааЕдЕасЕ	ЕЕддЕаЕдаа	аасад				145
<210> 34 <211> 137 <212> ДНК <213> Ы1соЕ1апа ЕаЬасит
<400> 34 дЕЕдсЕасда	ссассЕЕЕЕЕ	сдЕдЕЕсЕЕЕ	дссЕЕсасаа	ЕЕаЕЕсЕасЕ	аЕаЕдсЕЕЕЕ	60
ЕсасааадЕд	адЕсаЕаасЕ	ЕЕадсдасаЕ	ЕсаЕааасдЕ	дадЕЕасаЕЕ	ЕаадЕддЕда	120
дЕЕЕдЕЕЕЕс	аЕЕдсад					137

<210> 35 <211> 91 <212> ДНК <213> Ы1соЕ1апа ЕаЬасиш.

<400> 35 дЕаадЕЕсЕс ЕаЕсЕЕсаЕд ЕЕЕЕсЕЕЕсс ЕЕдаадЕЕЕд ЕЕдЕдЕЕдаа ЕаасЕсЕЕаа 60 дадсасаЕЕЕ ЕсЕссдЕЕЕс ЕЕдаЕЕЕаса д 91 <210> 36 <211> 80 <212> ДНК <213> Ы1соЕ1апа ЕаЬасит.

<400> 36 дЕаааЕЕаад ЕЕаЕЕсЕсЕд дЕдЕЕааЕЕа ЕдсаддЕЕаа ЕЕЕдЕЕддЕа ЕдддЕЕддЕа 60

ЕаЕсЕдаааа сЕЕЕЕааЕад 80 <210> 37 <211> 101 <212> ДНК <213> Ы1соЕ1апа ЕаЬасит.

<400> 37 дЕдасадсЕЕ ддЕЕЕЕдссЕ аЕЕЕЕЕддаЕ ЕЕаЕЕЕЕдЕЕ ЕсадаЕадда аааЕдасааа 60

ЕЕЕЕаЕЕЕЕа ЕЕдадааасЕ ЕЕдЕЕЕдаЕд ЕЕаЕдсЕЕса д 101 <210> 38 <211> 79 <212> ДНК <213> Ы1соЕ1апа ЕаЬасит <400> 38 дЕаасЕЕсаа даассасаЕс аЕЕЕЕсЕдаЕ даЕЕЕссасЕ ЕЕЕададсЕд ЕааЕааЕсаЕ 60 сЕЕсаЕЕдсд ЕЕдсЕдсад 79

- 123 030377

<210>	39
<211>	80
<212>	ДНК
<213>	Ы1соЕ1апа ЕаЬасиш.
<400>	39
дЕаадааЕса ЕсдЕЕЕаЕдЕ ЕсЕддадсаа дсддадаадд аааЕЕсЕЕдд ЕадЕЕассЕЕ	60
ЕЕЕЕЕЕаЕдс ЕаЕдсЕдсад	80

<210>	40
<211>	41
<212>	ДНК
<213>	Ы1соЕ1апа ЕаЬасит
<400>	40
аЕддаааЕЕд сааадддсаЕ дЕсЕдЕдЕЕЕ сааЕсЕЕЕда д	41

<210>	41
<211>	2218
<212>	ДНК
<213>	Ы1соЕ1апа ЕаЬасит
<400>	41

дадддасааЕ	ааЕдсЕддсс	асааасадад	ЕадЕасЕадд	ааЕдсЕаддЕ	ЕсЕЕдЕасЕа	60
саааЕсаасс	ЕЕдЕЕЕЕдЕЕ	сааЕаддЕсЕ	адссаЕсЕЕЕ	адсЕЕЕдЕдЕ	ЕаЕдЕЕЕдЕЕ	120
адсЕсаЕЕЕЕ	ЕаЕЕддЕаЕа	даааЕддЕЕд	дЕсадаадаа	ааааЕЕаЕаа	сссЕЕЕЕдда	180
ЕЕЕЕдсаЕЕа	аадЕЕдсЕад	сЕЕддЕЕдЕс	ааЕсЕсЕдЕЕ	ЕЕсЕЕдсаса	сссадЕЕссЕ	240
ЕааЕЕсЕЕдЕ	дааассаааЕ	асссЕсЕЕдЕ	ЕЕЕаададЕЕ	ЕддЕдддддс	ЕЕЕЕсЕЕсЕЕ	300
ЕдЕЕЕсЕЕдЕ	ЕаЕЕдссЕЕд	ЕЕаЕадассЕ	ЕдЕЕЕаЕддд	даааадаасс	ааЕсЕЕЕасс	360
аасЕсааЕЕЕ	ЕдЕаЕассЕд	аЕдЕЕдЕЕЕЕ	сасЕсЕЕаЕд	дддЕЕаЕЕсЕ	ЕсЕдЕЕЕЕдЕ	420
ЕдддЕЕЕаЕЕ	дЕЕаааасад	ададЕдадда	дааЕаЕдсЕЕ	саддаасссс	ЕсЕЕаааЕдд	480
ЕадЕдЕЕдсс	ааЕддсаЕдд	асЕсааадаа	дЕсЕасЕддд	даЕсааасЕд	ЕсассссЕЕа	540
ЕдссааЕдсЕ	аасаЕЕЕЕЕа	дЕсЕсЕЕЕас	ЕЕЕсЕсЕЕдд	аЕдддЕсссс	ЕааЕЕЕсЕдЕ	600
Еддсаасаад	ааассаЕЕад	ассЕЕдадда	ЕдЕЕссЕсад	сЕЕсасЕЕЕд	аЕдаЕадЕдЕ	660
сааадддадЕ	ЕЕЕссЕаЕЕЕ	ЕЕададаааа	асЕадааЕсЕ	дЕдддЕдддд	даааЕадЕаа	720
ссдЕдЕдасЕ	ассЕЕсаЕдс	ЕддЕдааддс	ЕЕЕддЕЕЕЕс	асадсасдда	аддадаЕадЕ	780
дЕЕаЕсддсЕ	сЕсЕЕсдЕдс	ЕЕсЕЕЕасдс	ЕсЕддсдЕсЕ	ЕЕЕдЕЕддсс	сдЕассЕсаЕ	840
ЕдаЕассЕЕа	дЕЕсадЕаЕс	ЕдааЕддааа	асдадасЕЕЕ	даЕааЕдаад	дЕЕаЕдЕсЕЕ	900
адЕддсЕдса	ЕЕсЕЕсдЕЕд	сааадЕЕддЕ	ддадЕдЕЕЕд	дсдсаааддс	аЕЕддЕЕЕЕЕ	960
сааддЕдсад	садддадддЕ	аЕсдддсасд	ддсадсасЕд	дЕЕЕссаааа	ЕсЕасаасаа	1020
дддЕЕЕаасс	сЕсЕссЕдЕс	адЕсааадса	аадссасасЕ	адЕддадада	ЕсаЕсааЕЕЕ	1080
ЕаЕдасадЕЕ	даЕдссдада	ддаЕЕддЕда	сЕЕсддЕЕдд	ЕаЕаЕдсаЕд	аЕссЕЕддаЕ	1140

- 124 030377

ддЕааЕсаЕа	саадЕЕдсЕс	ЕддсаЕЕддЕ	даЕасЕсЕаЕ	аааааЕсЕЕд	дссЕадсЕдс	1200
ЕаЕсдссдсд	ЕЕЕдЕЕдсЕа	сааЕааЕадЕ	даЕдЕЕддса	аасаЕсссЕЕ	ЕадддадЕЕЕ	1260
дсаддадаад	ЕЕЕсаддада	аасЕсаЕдда	аЕсдааадаЕ	адааддаЕда	аддсЕасаЕс	1320
ЕдаадЕсЕЕа	аддааЕаЕда	дааЕасЕсаа	дсЕЕсаадсЕ	ЕдддадаЕда	адЕЕЕсЕдЕс	1380
ЕаддаЕсЕЕд	дассЕсадда	сЕасададдс	аддаЕддЕЕд	аЕдаааЕаЕд	ЕдЕасасаЕс	1440
адсЕаЕдасЕ	асЕЕЕЕдЕсЕ	ЕсЕдддЕЕдс	ЕссЕасаЕЕЕ	дЕЕЕсЕдЕда	сдассЕЕЕдд	1500
сдсЕдсааЕд	сЕЕаЕдддаа	ЕсссасЕЕда	аЕсЕдддаад	аЕаЕЕдЕсЕд	сасЕЕдсдас	1560
аЕЕЕадааЕЕ	сЕЕсаададс	ссаЕсЕасаа	ЕсЕсссадаЕ	асааЕЕЕсаа	ЕдаЕЕдсЕса	1620
аассааадЕЕ	ЕсЕсЕЕдаЕс	дЕаЕЕдсаЕс	ЕЕЕссЕЕЕсЕ	сЕЕдаЕдасЕ	ЕдсадссЕда	1680
ЕдЕсаЕадад	аадсЕЕссаа	ааддЕадЕЕс	ЕдаЕдаадса	аЕЕдадаЕЕд	ЕаддЕдддаа	1740
сЕЕсдсЕЕдд	даЕдсаЕсса	ссЕсдасЕсс	асЕЕсЕааад	даЕдЕаааЕс	ЕЕададЕдсЕ	1800
ЕааЕддсаЕд	ададЕЕдсса	ЕЕЕдЕддЕас	адЕЕддЕЕса	ддааааЕсаа	дсЕЕасЕдЕс	1860
ЕадсаЕЕЕЕа	ддададаЕдс	ссаааЕЕаЕс	адддасЕаЕЕ	ааасЕЕадЕд	даасдааддс	1920
ЕЕаЕдЕЕдса	садЕсдсссЕ	ддаЕасадад	ЕддааадаЕа	даддадааса	ЕаЕЕаЕЕЕдд	1980
ЕааададаЕд	сададддада	адЕаЕдаЕаа	адЕЕсЕЕдаа	дсдЕдсЕссЕ	Еааадааада	2040
ссЕддаааЕЕ	сЕсЕсЕЕЕЕд	дсдаЕсааас	адаааЕаддд	дададдддса	ЕЕааЕЕЕдад	2100
сддЕддасад	аадсададаа	ЕасадаЕЕдс	ЕсдЕдсЕсЕЕ	ЕассаадаЕд	сЕдаЕдЕЕЕа	2160
ссЕаЕЕЕдаЕ	даЕссдЕЕса	дЕдсЕдЕдда	ЕдсЕсаЕасс	ддаЕсссаЕс	ЕсЕЕсадЕ	2218

<210> 42 <211> 87 <212> ДНК <213> ЫтсоМапа ЕаЬасиш.

<400> 42 дааЕдЕаЕаа ЕддддсЕаЕЕ дааЕЕсаааа асадЕЕЕЕаЕ ЕЕЕЕЕдссЕд сЕдсддаЕЕЕ даЕсЕЕд	аЕдЕЕасаса	ЕсаадЕддад	60 87
<210> 43 <211> 633 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит
<400> 43
дЕсаЕдааад аЕддааддаЕ садЕдааасЕ дддаааЕаса	аЕдаЕсЕЕсЕ	саааЕЕаддЕ	60
адЕдасЕЕса ЕддаасЕЕдЕ дддЕдсЕсас саадаадсЕЕ	ЕаасадсааЕ	ЕдасасадЕЕ	120
аадддадаад саЕЕдадааа дадЕдаддаа аЕдасЕддЕд	аЕааЕасааа	ЕдЕасадаад	180
даЕаааааЕа ЕЕЕсадаЕдд ссааааЕддЕ ааадЕддаЕд	аЕаЕЕдЕЕдд	аасаааддда	240

- 125 030377

саааЕЕдЕЕс	аддаддадда	аадададааа	ддЕадЕдЕЕд	дЕЕЕЕЕсадЕ	ЕЕасЕддааа	300
ЕаЕаЕаасаа	сЕдсаЕаЕдд	аддЕдсЕсЕЕ	дЕдссаЕЕЕа	ЕдсЕдЕЕддс	асаадЕЕддЕ	360
ЕЕЕсадсЕсс	ЕЕсаааЕЕдд	аадсааЕЕаЕ	ЕддаЕддсдЕ	дддсаасЕсс	сдЕсЕсааад	420
адЕдадссас	сЕссЕдЕЕдд	дадЕЕсЕасЕ	сЕсаЕсаЕЕд	ЕсЕаЕдЕЕдс	ЕЕЕаддааЕЕ	480
дсаадЕдсЕЕ	ЕаЕдсаЕссЕ	ЕдсЕадаасс	аЕдЕЕЕсЕЕд	ЕЕассдсЕдд	аЕаЕаадаса	540
дссЕсЕЕЕдс	ЕЕЕЕссаЕаа	ааЕдсаЕсЕЕ	ЕдсаЕЕЕЕсс	дЕдсЕссааЕ	дЕссЕЕсЕЕс	600
даЕдссасас	сдадЕдддсд	даЕЕсЕааас	ада			633

<210> 44 <211> 165 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасиш.

<400> 44 дсаЕсдасад	аЕсааадЕдс	ааЕЕдаЕсЕд	ааЕдЕЕссса	ЕЕсаадЕЕдд	аЕссЕЕЕдсс	60
ЕЕсасааЕаа	ЕасадсЕЕЕЕ	адддаЕЕаЕЕ	ддадЕааЕдЕ	сасаадЕЕдс	аЕддсаддЕс	120
ЕЕсаЕЕдЕсЕ	ЕЕаЕЕссддЕ	саЕЕдсадЕЕ	ЕдсаЕсЕддЕ	Еддад		165
<210> 45 <211> 295 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит
<400> 45 сааЕаЕЕаса	ЕассаЕсадс	асдадаасЕд	дсасддсЕаа	аЕдддасаЕд	сааадсЕсса	60
дЕааЕасадс	асЕЕЕдссда	дасааЕЕЕса	ддаЕсаадса	сааЕЕадаад	ЕЕЕсдаЕсад	120
дааЕсЕадаЕ	Ессаддасас	аадЕаЕдааа	ЕЕдаЕадаса	аЕЕаЕЕсЕсд	дссЕаадЕЕЕ	180
сасаЕсдсЕд	сЕдсааЕдда	дЕддсЕЕЕдЕ	ЕЕдсдЕЕЕдд	аЕаЕдЕЕаЕс	ЕсЕдаЕсасЕ	240
ЕЕЕдсЕЕЕсЕ	сЕЕЕааЕЕЕЕ	сЕЕдаЕсЕсЕ	сЕЕссЕдЕЕд	даасааЕЕда	сссаа	295
<210> 46 <211> 215 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит
<400> 46 дЕдЕЕдсЕдд	сЕЕадсЕдЕЕ	асаЕаЕдддс	ЕЕааЕсЕдаа	саЕааЕасаа	дсЕсдддЕЕд	60
ЕЕЕддааЕсЕ	ЕЕдЕаЕдаЕд	дааааЕаааа	ЕЕаЕЕЕсЕдЕ	ЕдааадааЕа	сЕЕсадЕаЕа	120
сЕдсЕсЕЕсс	аадЕдааЕсЕ	ссЕсЕЕаЕса	ЕадааЕссаа	садассадас	ссЕаасЕддс	180
саЕсЕЕдЕдд	ададдЕЕдаЕ	ЕЕЕадсааЕс	ЕЕсад			215
<210> 47 <211> 306 <212> ДНК

- 126 030377

<213> Г-ПсобЬапа баЪасиш.
<400> 47 дбссдабабд сбссбсасаб дссбсбсдбд	ббдсдаддсс	ббасабдсас	бббсбббддб	60
ддааадаада сбддааббдб сддбаддаса	ддсадсддба	аабсбасбсб	аабасадасс	120
сбсббссдса бадббдаасс адсбдсбдда	сааабааааа	бадабддбаб	садсабсбсс	180
бсааббддбб бдсабдабсб асддбсбада	ббдадбабаа	ббссасадда	бссаасбабд	240
бббдадддаа садббсдсад саассбадас	ссдсббдаад	адбаббсада	бдаасааабб	300
бдддад				306
<210> 48 <211> 64 <212> ДНК <213> Ы1соб1апа баЪасит
<400> 48 дсдсбсдаба адбдбсадсб аддадаадаа	дбдаддаада	аадааддсаа	асбббаббсб	60
асад				64
<210> 49 <211> 240 <212> ДНК <213> Ы1соб1апа баЪасит
<400> 49 бабсбдадаа бддададаас бддадбдбад	дссаааддса	дсбддбсбдс	сббддссдбд	60
бдсбасбдаа ааададсаад дбссбддбсс	ббдасдаддс	басадсабсб	дбсдасасбд	120
саасбдабаа бсббаббсад сааасбсбаа	ддсбдсасбб	сбсбдаббсс	асддббабаа	180
ссаббдсбса баддаббаса бсбдбдсббд	асадбдабаб	ддбссбасба	ббадабсабд	240
<210> 50 <211> 125 <212> ДНК <213> Ы1соб1апа баЪасит
<400> 50 ддсбсаббдс бдаабасддс асбссадсса	ддббдббада	даасдаабсс	бсаббдбббд	60
сбаадсбсдб ддсададбаб адбабдаддб	саааббсаад	ббббдадааб	дбббсадаса	120
бдбда				125
<210> 51 <211> 4389 <212> ДНК <213> Ы1соб1апа баЪасит
<400> 51 абддаааббд сааадддсаб дбсбдбдббб	саабсбббда	ддадддасаа	баабдсбддс	60

- 127 030377

сасааасада	д!ад!ас!ад	даа!дс!адд	!!с!!д!ас!	асааа!саас	с!!д!!!!д!	120
!саа!адд!с	!адсса!с!!	!адс!!!д!д	!!а!д!!!д!	!адс!са!!!	!!а!!дд!а!	180
адааа!дд!!	дд!садаада	ааааа!!а!а	ассс!!!!дд	а!!!!дса!!	ааад!!дс!а	240
дс!!дд!!д!	саа!с!с!д!	!!!с!!дсас	асссад!!сс	!!аа!!с!!д	!дааассааа	300
!ассс!с!!д	!!!!аадад!	!!дд!ддддд	с!!!!с!!с!	!!д!!!с!!д	!!а!!дсс!!	360
д!!а!адасс	!!д!!!а!дд	ддаааадаас	саа!с!!!ас	саас!саа!!	!!д!а!асс!	420
да!д!!д!!!	!сас!с!!а!	дддд!!а!!с	!!с!д!!!!д	!!ддд!!!а!	!д!!ааааса	480
дадад!дадд	адаа!а!дс!	!саддаассс	с!с!!ааа!д	д!ад!д!!дс	саа!ддса!д	540
дас!сааада	ад!с!ас!дд	дда!сааас!	д!сасссс!!	а!дссаа!дс	!ааса!!!!!	600
ад!с!с!!!а	с!!!с!с!!д	да!ддд!ссс	с!аа!!!с!д	!!ддсаасаа	дааасса!!а	660
дасс!!дадд	а!д!!сс!са	дс!!сас!!!	да!да!ад!д	!сааадддад	!!!!сс!а!!	720
!!!ададааа	аас!адаа!с	!д!ддд!ддд	ддааа!ад!а	ассд!д!дас	!асс!!са!д	780
с!дд!даадд	с!!!дд!!!!	сасадсасдд	ааддада!ад	!д!!а!сддс	!с!с!!сд!д	840
с!!с!!!асд	с!с!ддсд!с	!!!!д!!ддс	ссд!асс!са	!!да!асс!!	ад!!сад!а!	900
с!даа!ддаа	аасдадас!!	!да!аа!даа	дд!!а!д!с!	!ад!ддс!дс	а!!с!!сд!!	960
дсааад!!дд	!ддад!д!!!	ддсдсааадд	са!!дд!!!!	!саадд!дса	дсадддаддд	1020
!а!сдддсас	дддсадсас!	дд!!!ссааа	а!с!асааса	аддд!!!аас	сс!с!сс!д!	1080
сад!сааадс	ааадссасас	!ад!ддадад	а!са!саа!!	!!а!дасад!	!да!дссдад	1140
адда!!дд!д	ас!!сдд!!д	д!а!а!дса!	да!сс!!дда	!дд!аа!са!	асаад!!дс!	1200
с!ддса!!дд	!да!ас!с!а	!ааааа!с!!	ддсс!адс!д	с!а!сдссдс	д!!!д!!дс!	1260
асаа!аа!ад	!да!д!!ддс	аааса!ссс!	!!адддад!!	!дсаддадаа	д!!!саддад	1320
ааас!са!дд	аа!сдааада	!адаадда!д	ааддс!аса!	с!даад!с!!	ааддаа!а!д	1380
адаа!ас!са	адс!!саадс	!!дддада!д	аад!!!с!д!	с!адда!с!!	ддасс!садд	1440
ас!асададд	садда!дд!!	да!дааа!а!	д!д!асаса!	садс!а!дас	!ас!!!!д!с	1500
!!с!ддд!!д	с!сс!аса!!	!д!!!с!д!д	асдасс!!!д	дсдс!дсаа!	дс!!а!ддда	1560
а!сссас!!д	аа!с!дддаа	да!а!!д!с!	дсас!!дсда	са!!!адаа!	!с!!саадад	1620
ссса!с!аса	а!с!сссада	!асаа!!!са	а!да!!дс!с	ааассааад!	!!с!с!!да!	1680
сд!а!!дса!	с!!!сс!!!с	!с!!да!дас	!!дсадсс!д	а!д!са!ада	даадс!!сса	1740
ааадд!ад!!	с!да!даадс	аа!!дада!!	д!адд!ддда	ас!!сдс!!д	дда!дса!сс	1800
асс!сдас!с	сас!!с!ааа	дда!д!ааа!	с!!адад!дс	!!аа!ддса!	дадад!!дсс	1860
а!!!д!дд!а	сад!!дд!!с	аддаааа!са	адс!!ас!д!	с!адса!!!!	аддадада!д	1920
сссааа!!а!	садддас!а!	!ааас!!ад!	ддаасдаадд	с!!а!д!!дс	асад!сдссс	1980

- 128 030377

+дда+асада	д+ддааада+	ададдадаас	а+а++а+++д	д+ааадада+	дсададддад	2040
аад+а+да+а	аад++с++да	адсд+дс+сс	++ааадааад	асс+ддааа+	+с+с+с++++	2100
ддсда+сааа	садааа+адд	ддададдддс	а++аа+++да	дсдд+ддаса	даадсадада	2160
а+асада++д	с+сд+дс+с+	++ассаада+	дс+да+д+++	асс+а+++да	+да+ссд++с	2220
ад+дс+д+дд	а+дс+са+ас	сдда+ссса+	с+с++сад+д	аа+д+а+аа+	ддддс+а++д	2280
ааПсааааа	сад++++а+а	+д++асаса+	саад+ддад+	++++дсс+дс	+дсдда+++д	2340
а+с++дд+са	+дааада+дд	аадда+сад+	дааас+ддда	аа+асаа+да	+с++с+сааа	2400
++адд+ад+д	ас++са+дда	ас++д+ддд+	дс+сассаад	аадс+++аас	адсаа++дас	2460
асад++аадд	дадаадса++	дадааадад+	даддааа+да	с+дд+да+аа	+асааа+д+а	2520
садаадда+а	аааа+а+++с	ада+ддссаа	аа+дд+ааад	+дда+да+а+	+д++ддааса	2580
аадддасааа	++д++садда	ддаддааада	дадааадд+а	д+д++дд+++	++сад+++ас	2640
+ддааа+а+а	+аасаас+дс	а+а+ддадд+	дс+с++д+дс	са+++а+дс+	д++ддсасаа	2700
д++дд++++с	адс+сс++са	аа++ддаадс	аа++а++дда	+ддсд+дддс	аас+сссд+с	2760
+сааадад+д	адссасс+сс	+д++дддад+	+с+ас+с+са	+са++д+с+а	+д++дс+++а	2820
ддаа++дсаа	д+дс+++а+д	са+сс++дс+	адаасса+д+	++с++д++ас	сдс+дда+а+	2880
аадасадсс+	с+++дс++++	сса+аааа+д	са+с+++дса	++++ссд+дс	+ссаа+д+сс	2940
++с++сда+д	ссасассдад	+дддсдда++	с+ааасадад	са+сдасада	+сааад+дса	3000
а++да+с+да	а+д++ссса+	+саад++дда	+сс+++дсс+	+сасаа+аа+	асадс++++а	3060
ддда++а++д	дад+аа+д+с	асаад++дса	+ддсадд+с+	+са++д+с++	+а++ссдд+с	3120
а++дсад+++	дса+с+дд++	ддадсаа+а+	+аса+асса+	садсасдада	ас+ддсасдд	3180
с+ааа+ддда	са+дсааадс	+ссад+аа+а	садсас+++д	ссдадасаа+	++садда+са	3240
адсасаа++а	даад+++сда	+саддаа+с+	ада++ссадд	асасаад+а+	дааа++да+а	3300
дасаа++а++	с+сддсс+аа	д+++саса+с	дс+дс+дсаа	+ддад+ддс+	++д+++дсд+	3360
++дда+а+д+	+а+с+с+да+	сас++++дс+	++с+с+++аа	++++с++да+	с+с+с++сс+	3420
д++ддаасаа	++дасссаад	+д++дс+ддс	++адс+д++а	са+а+дддс+	+аа+с+даас	3480
а+аа+асаад	с+сддд++д+	++ддаа+с++	+д+а+да+дд	аааа+аааа+	+а+++с+д++	3540
дааадаа+ас	++сад+а+ас	+дс+с++сса	ад+даа+с+с	с+с++а+са+	адаа+ссаас	3600
адассадасс	с+аас+ддсс	а+с++д+дда	дадд++да++	++адсаа+с+	+садд+ссда	3660
+а+дс+сс+с	аса+дсс+с+	сд+д++дсда	ддсс++аса+	дсас+++с++	+дд+ддааад	3720
аадас+ддаа	++д+сдд+ад	дасаддсадс	дд+ааа+с+а	с+с+аа+аса	дассс+с++с	3780
сдса+ад++д	аассадс+дс	+ддасааа+а	аааа+ада+д	д+а+садса+	с+сс+саа++	3840

- 129 030377

ддбббдсабд ддаасадббс	абсбасддбс бадаббдадб дсадсаассб адасссдсбб	абааббссас даададбабб	аддабссаас садабдааса	бабдбббдад аабббдддад	3900 3960
дсдсбсдаба	адбдбсадсб аддадаадаа	дбдаддаада	аадааддсаа	асбббаббсб	4020
асадбабсбд	адаабддада даасбддадб	дбаддссааа	ддсадсбддб	сбдссббддс	4080
сдбдбдсбас	бдааааадад сааддбссбд	дбссббдасд	аддсбасадс	абсбдбсдас	4140
асбдсаасбд	абаабсббаб бсадсааасб	сбааддсбдс	асббсбсбда	ббссасддбб	4200
абаассаббд	сбсабаддаб басабсбдбд	сббдасадбд	абабддбссб	асбаббадаб	4260
сабдддсбса	ббдсбдааба сддсасбсса	дссаддббдб	бададаасда	абссбсаббд	4320
бббдсбаадс	бсдбддсада дбабадбабд	аддбсааабб	саадббббда	даабдбббса	4380
дасабдбда					4389
<210> 52
<211> 1463
<212> БЕЛОК
<213> Ыгсобгапа баЬасиш.
<220>
<221> УЧАСТОК
<222> (1463)..(1463)
<223> Хаа	обозначает предполагаемый стоп-кодон
<400> 52
Меб О1и 11е	А1а Ьуз О1у Меб Зег	Уа1 РЬе О1п	Зег Ьеи Агд	Агд Азр
1	5	10		15
Азп Азп А1а	О1у НЧз Ьуз О1п Зег	Зег ТЬг Агд	Азп А1а Агд	РЬе Ьеи
	20	25	30
Туг Туг Ьуз	Зег ТЬг Ьеи РЬе Суз	Зег 11е О1у	Ьеи А1а 11е	РЬе Зег
35	40		45
РЬе Уа1 Ьеи	Суз Ьеи Ьеи А1а Нбз	РЬе Туг Тгр	Туг Агд Азп	О1у Тгр
50	55		60
Зег О1и О1и	Ьуз 11е 11е ТЬг Ьеи	Ьеи Азр РЬе	А1а Ьеи Ьуз	Ьеи Ьеи
65	70	75		80
А1а Тгр Ьеи	Зег 11е Зег Уа1 РЬе	Ьеи НЧз ТЬг	О1п РЬе Ьеи	Азп Зег
	85	90		95
Суз О1и ТЬг	Ьуз Туг Рго Ьеи Уа1	Ьеи Агд Уа1	Тгр Тгр О1у	Ьеи РЬе
	100	105	110
РЬе РЬе Уа1	Зег Суз Туг Суз Ьеи	Уа1 11е Азр	Ьеи Уа1 Туг	О1у О1и

- 130

115

120

125

Ьуз

Азп

О1п

Зег

Ьеи

Рго

ТЬг

О1п

РЬе

Суз

11е

Рго

Азр

Уа1

Уа1

РЬе

130

135

140

ТЬг

Ьеи

Ме+

О1у

Ьеи

РЬе

РЬе

Суз

РЬе

Уа1

О1у

РЬе

11е

Уа1

Ьуз

ТЬг

145

150

155

160

О1и

Зег

О1и

О1и

Азп

Ме+

Ьеи

О1п

О1и

Рго

Ьеи

Ьеи

Азп

О1у

Зег

Уа1

165

170

175

А1а

Азп

О1у

Ме+

Азр

Зег

Ьуз

Ьуз

Зег

ТЬг

О1у

Азр

О1п

ТЬг

Уа1

ТЬг

180

185

190

Рго

Туг

А1а

Азп

А1а

Азп

11е

РЬе

Зег

Ьеи

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Тгр

Ме+

195

200

205

О1у

Рго

Ьеи

11е

Зег

Уа1

О1у

Азп

Ьуз

Ьуз

Рго

Ьеи

Азр

Ьеи

О1и

Азр

210

215

220

Уа1

Рго

О1п

Ьеи

НЧз

РЬе

Азр

Азр

Зег

Уа1

Ьуз

О1у

Зег

РЬе

Рго

11е

225

230

235

240

РЬе

Агд

О1и

Ьуз

Ьеи

О1и

Зег

Уа1

О1у

О1у

О1у

Азп

Зег

Азп

Агд

Уа1

245

250

255

ТЬг

ТЬг

РЬе

Ме+

Ьеи

Уа1

Ьуз

А1а

Ьеи

Уа1

РЬе

ТЬг

А1а

Агд

Ьуз

О1и

260

265

270

11е

Уа1

Ьеи

Зег

А1а

Ьеи

РЬе

Уа1

Ьеи

Ьеи

Туг

А1а

Ьеи

А1а

Зег

РЬе

275

280

285

Уа1

О1у

Рго

Туг

Ьеи

11е

Азр

ТЬг

Ьеи

Уа1

О1п

Туг

Ьеи

Азп

О1у

Ьуз

290

295

300

Агд

Азр

РЬе

Азр

Азп

О1и

О1у

Туг

Уа1

Ьеи

Уа1

А1а

А1а

РЬе

РЬе

Уа1

305

310

315

320

А1а

Ьуз

Ьеи

Уа1

О1и

Суз

Ьеи

А1а

О1п

Агд

НЧз

Тгр

РЬе

РЬе

Ьуз

Уа1

325

330

335

О1п

О1п

О1у

О1у

Туг

Агд

А1а

Агд

А1а

А1а

Ьеи

Уа1

Зег

Ьуз

11е

Туг

340

345

350

Азп

Ьуз

О1у

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Зег

Суз

О1п

Зег

Ьуз

О1п

Зег

Нгз

ТЬг

Зег

355

360

365

- 131

О1у

О1и 370

11е

11е

Азп

РЪе

Меб 375

ТЪг Уа1

Азр А1а О1и Агд 380

11е

О1у

Азр

РЪе

О1у

Тгр

Туг

Меб

Нчз

Азр

Рго

Тгр

Меб

Уа1

11е

11е

О1п

Уа1

А1а

385

390

395

400

Ьеи

А1а

Ьеи

Уа1

11е

Ьеи

Туг

Ьуз

Азп

Ьеи

О1у

Ьеи

А1а

А1а

11е

А1а

405

410

415

А1а

РЪе

Уа1

А1а

ТЪг

11е

11е

Уа1

Меб

Ьеи

А1а

Азп

11е

Рго

Ьеи

О1у

420

425

430

Бег

Ьеи

О1п

О1и

Ьуз

РЪе

О1п

О1и

Ьуз

Ьеи

Меб

О1и

Бег

Ьуз

Азр

Агд

435

440

445

Агд

Меб

Ьуз

А1а

ТЪг

Бег

О1и

Уа1

Ьеи

Агд

Азп

Меб

Агд

11е

Ьеи

Ьуз

450

455

460

Ьеи

О1п

А1а

Тгр

О1и

Меб

Ьуз

РЪе

Ьеи

Бег

Агд

11е

Ьеи

Азр

Ьеи

Агд

465

470

475

480

ТЪг

ТЪг

О1и

А1а

О1у

Тгр

Ьеи

Меб

Ьуз

Туг

Уа1

Туг

ТЪг

Бег

А1а

Меб

485

490

495

ТЪг

ТЪг

РЪе

Уа1

РЪе

Тгр

Уа1

А1а

Рго

ТЪг

РЪе

Уа1

Бег

Уа1

ТЪг

ТЪг

500

505

510

РЪе

О1у

А1а

А1а

Меб

Ьеи

Меб

О1у

11е

Рго

Ьеи

О1и

Бег

О1у

Ьуз

11е

515

520

525

Ьеи

Бег

А1а

Ьеи

А1а

ТЪг

РЪе

Агд

11е

Ьеи

О1п

О1и

Рго

11е

Туг

Азп

530

535

540

Ьеи

Рго

Азр

ТЪг

11е

Бег

Меб

11е

А1а

О1п

ТЪг

Ьуз

Уа1

Бег

Ьеи

Азр

545

550

555

560

Агд

11е

А1а

Бег

РЪе

Ьеи

Бег

Ьеи

Азр

Азр

Ьеи

О1п

Рго

Азр

Уа1

11е

565

570

575

О1и

Ьуз

Ьеи

Рго

Ьуз

О1у

Бег

Бег

Азр

О1и

А1а

11е

О1и

11е

Уа1

О1у

580

585

590

О1у

Азп

РЪе

А1а

Тгр

Азр

А1а

Бег

ТЪг

Бег

ТЪг

Рго

Ьеи

Ьеи

Ьуз

Азр

595

600

605

Уа1

Азп

Ьеи

Агд

Уа1

Ьеи

Азп

О1у

Меб

Агд

Уа1

А1а

11е

Суз

О1у

ТЪг

610

615

620

- 132

Уа1 625

О1у Зег

О1у Ьуз

Зег 630

Зег Ьеи Ьеи

Зег

Зег 635

11е

Ьеи

О1у

О1и

Ме+ 640

Рго

Ьуз

Ьеи

Зег

О1у

ТЪг

11е

Ьуз

Ьеи

Зег

О1у

ТЪг

Ьуз

А1а

Туг

Уа1

645

650

655

А1а

О1п

Зег

Рго

Тгр

11е

О1п

Зег

О1у

Ьуз

11е

О1и

О1и

Азп

11е

Ьеи

660

665

670

РЪе

О1у

Ьуз

О1и

Ме+

О1п

Агд

О1и

Ьуз

Туг

Азр

Ьуз

Уа1

Ьеи

О1и

А1а

675

680

685

Суз

Зег

Ьеи

Ьуз

Ьуз

Азр

Ьеи

О1и

11е

Ьеи

Зег

РЪе

О1у

Азр

О1п

ТЪг

690

695

700

О1и

11е

О1у

О1и

Агд

О1у

11е

Азп

Ьеи

Зег

О1у

О1у

О1п

Ьуз

О1п

Агд

705

710

715

720

11е

О1п

11е

А1а

Агд

А1а

Ьеи

Туг

О1п

Азр

А1а

Азр

Уа1

Туг

Ьеи

РЪе

725

730

735

Азр

Азр

Рго

РЪе

Зег

А1а

Уа1

Азр

А1а

НЧз

ТЪг

О1у

Зег

НЧз

Ьеи

РЪе

740

745

750

Зег

О1и

Суз

11е

Ме+

О1у

Ьеи

Ьеи

Азп

Зег

Ьуз

ТЪг

Уа1

Ьеи

Туг

Уа1

755

760

765

ТЪг

НЧз

О1п

Уа1

О1и

РЪе

Ьеи

Рго

А1а

А1а

Азр

Ьеи

11е

Ьеи

Уа1

Ме+

770

775

780

Ьуз

Азр

О1у

Агд

11е

Зег

О1и

ТЪг

О1у

Ьуз

Туг

Азп

Азр

Ьеи

Ьеи

Ьуз

785

790

795

800

Ьеи

О1у

Зег

Азр

РЪе

Ме+

О1и

Ьеи

Уа1

О1у

А1а

НЧз

О1п

О1и

А1а

Ьеи

805

810

815

ТЪг

А1а

11е

Азр

ТЪг

Уа1

Ьуз

О1у

О1и

А1а

Ьеи

Агд

Ьуз

Зег

О1и

О1и

820

825

830

Ме+

ТЪг

О1у

Азр

Азп

ТЪг

Азп

Уа1

О1п

Ьуз

Азр

Ьуз

Азп

11е

Зег

Азр

835

840

845

О1у

О1п

Азп

О1у

Ьуз

Уа1

Азр

Азр

11е

Уа1

О1у

ТЪг

Ьуз

О1у

О1п

11е

850

855

860

Уа1

О1п

О1и

О1и

О1и

Агд

О1и

Ьуз

О1у

Зег

Уа1

О1у

РЪе

Зег

Уа1

Туг

865

870

875

880

- 133

Тгр

Ьуз

Туг

11е

ТЪг 885

ТЪг

А1а Туг О1у

О1у 890

А1а

Ьеи Уа1

Рго

РЪе 895

МеЬ

Ьеи

Ьеи

А1а

О1п

Уа1

О1у

РЪе О1п Ьеи

Ьеи

О1п

11е О1у

Зег

Азп

Туг

900

905

910

Тгр

МеЬ

А1а

Тгр

А1а

ТЪг

Рго Уа1 Зег

Ьуз

Зег

О1и Рго

Рго

Рго

Уа1

915

920

925

О1у

Зег

Зег

ТЪг

Ьеи

11е

11е Уа1 Туг

Уа1

А1а

Ьеи О1у

11е

А1а

Зег

930

935

940

А1а

Ьеи

Суз

11е

Ьеи

А1а

Агд ТЪг МеЬ

РЪе

Ьеи

Уа1 ТЪг

А1а

О1у

Туг

945

950

955

960

Ьуз

ТЪг

А1а

Зег

Ьеи

Ьеи

РЪе Ηΐ3 Ьуз

МеЬ

Н1з

Ьеи Суз

11е

РЪе

Агд

965

970

975

А1а

Рго

МеЬ

Зег

РЪе

РЪе

Азр А1а ТЪг

Рго

Зег

О1у Агд

11е

Ьеи

Азп

980

985

990

Агд

А1а

Зег

ТЪг

Азр

О1п

Зег А1а 11е Азр Ьеи Азп Уа1 Рго 11е О1п

995

1000

1005

Уа1

О1у

Зег

РЪе

А1а

РЪе

ТЪг 11е 11е О1п Ьеи Ьеи

О1у

11е

11е

1010

1015

1020

О1у

Уа1

МеЬ

Зег

О1п

Уа1

А1а Тгр О1п Уа1 РЪе 11е

Уа1

РЪе

11е

1025

1030

1035

Рго

Уа1

11е

А1а

Уа1

Суз

11е Тгр Ьеи О1и О1п Туг

Туг

11е

Рго

1040

1045

1050

Зег

А1а

Агд

О1и

Ьеи

А1а

Агд Ьеи Азп О1у ТЪг Суз

Ьуз

А1а

Рго

1055

1060

1065

Уа1

11е

О1п

Ηΐ3

РЪе

А1а

О1и ТЪг 11е Зег О1у Зег

Зег

ТЪг

11е

1070

1075

1080

Агд

Зег

РЪе

Азр

О1п

О1и

Зег Агд РЪе О1п Азр ТЪг

Зег

МеЬ

Ьуз

1085

1090

1095

Ьеи

11е

Азр

Азп

Туг

Зег

Агд Рго Ьуз РЪе Нтз 11е

А1а

А1а

А1а

1100

1105

1110

МеЬ

О1и

Тгр

Ьеи

Суз

Ьеи

Агд Ьеи Азр МеЬ Ьеи Зег

Ьеи

11е

ТЪг

- 134 030377

1115 1120 1125

РЬе

А1а 1130

РЬе

Зег

Ьеи

11е

РЬе 1135

Ьеи

11е

Зег

Ьеи

Рго 1140

Уа1

О1у

ТЬг

11е

Азр

Рго

Зег

Уа1

А1а

О1у

Ьеи

А1а

Уа1

ТЬг

Туг

О1у

Ьеи

Азп

1145

1150

1155

Ьеи

Азп

11е

11е

О1п

А1а

Агд

Уа1

Уа1

Тгр

Азп

Ьеи

Суз

Меб

Меб

1160

1165

1170

О1и

Азп

Ьуз

11е

11е

Зег

Уа1

О1и

Агд

11е

Ьеи

О1п

Туг

ТЬг

А1а

1175

1180

1185

Ьеи

Рго

Зег

О1и

Зег

Рго

Ьеи

11е

11е

О1и

Зег

Азп

Агд

Рго

Азр

1190

1195

1200

Рго

Азп

Тгр

Рго

Зег

Суз

О1у

О1и

Уа1

Азр

РЬе

Зег

Азп

Ьеи

О1п

1205

1210

1215

Уа1

Агд

Туг

А1а

Рго

НЧз

Меб

Рго

Ьеи

Уа1

Ьеи

Агд

О1у

Ьеи

ТЬг

1220

1225

1230

Суз

ТЬг

РЬе

РЬе

О1у

О1у

Ьуз

Ьуз

ТЬг

О1у

11е

Уа1

О1у

Агд

ТЬг

1235

1240

1245

О1у

Зег

О1у

Ьуз

Зег

ТЬг

Ьеи

11е

О1п

ТЬг

Ьеи

РЬе

Агд

11е

Уа1

1250

1255

1260

О1и

Рго

А1а

А1а

О1у

О1п

11е

Ьуз

11е

Азр

О1у

11е

Зег

11е

Зег

1265

1270

1275

Зег

11е

О1у

Ьеи

НЧз

Азр

Ьеи

Агд

Зег

Агд

Ьеи

Зег

11е

11е

Рго

1280

1285

1290

О1п

Азр

Рго

ТЬг

Меб

РЬе

О1и

О1у

ТЬг

Уа1

Агд

Зег

Азп

Ьеи

Азр

1295

1300

1305

Рго

Ьеи

О1и

О1и

Туг

Зег

Азр

О1и

О1п

11е

Тгр

О1и

А1а

Ьеи

Азр

1310

1315

1320

Ьуз

Суз

О1п

Ьеи

О1у

О1и

О1и

Уа1

Агд

Ьуз

Ьуз

О1и

О1у

Ьуз

Ьеи

1325

1330

1335

Туг

Зег

ТЬг

Уа1

Зег

О1и

Азп

О1у

О1и

Азп

Тгр

Зег

Уа1

О1у

О1п

1340 1345 1350

- 135 030377

Агд

О1п 1355

Ьеи

Уа1

Суз

Ьеи

О1у 1360

Агд

Уа1

Ьеи

Ьеи

Ьуз 1365

Ьуз

Зег

Ьуз

Уа1

Ьеи

Уа1

Ьеи

Азр

О1и

А1а

ТЬг

А1а

Зег

Уа1

Азр

ТЬг

А1а

ТЬг

1370

1375

1380

Азр

Азп

Ьеи

11е

О1п

О1п

ТЬг

Ьеи

Агд

Ьеи

Нчз

РЬе

Зег

Азр

Зег

1385

1390

1395

ТЬг

Уа1

11е

ТЬг

11е

А1а

Нгз

Агд

11е

ТЬг

Зег

Уа1

Ьеи

Азр

Зег

1400

1405

1410

Азр

МеЕ

Уа1

Ьеи

Ьеи

Ьеи

Азр

Нчз

О1у

Ьеи

11е

А1а

О1и

Туг

О1у

1415

1420

1425

ТЬг

Рго

А1а

Агд

Ьеи

Ьеи

О1и

Азп

О1и

Зег

Зег

Ьеи

РЬе

А1а

Ьуз

1430

1435

1440

Ьеи

Уа1

А1а

О1и

Туг

Зег

МеЕ

Агд

Зег

Азп

Зег

Зег

РЬе

О1и

Азп

1445

1450

1455

Уа1

Зег

Азр

МеЕ

Хаа

1460 <210> 53 <211> 386 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасиш.

<400> 53

ЕЕдЕЕдаЕаа	сддадаЕаас	ЕддадЕдЕсд	дасададдса	дсЕЕсЕЕЕдс	ЕЕдддаадад	60
ЕдаЕдсЕааа	асдЕадсада	сЕЕсЕаЕЕЕа	ЕддаЕдаддс	аасЕдссЕсЕ	дЕЕдаЕЕсас	120
адасадаЕдс	адЕдаЕЕсад	ааааЕсаЕсс	дсдаддасЕЕ	ЕдсддссЕдЕ	асЕаЕааЕса	180
дсаЕЕдссса	садааЕасса	асадЕсаЕдд	асЕдЕдаЕад	адЕЕсЕЕдЕЕ	аЕадаЕдсад	240
дЕдсЕдаЕЕЕ	сЕсЕссЕЕЕЕ	асЕЕЕдЕасс	ЕЕаЕЕЕЕдаа	ЕсЕддЕаааЕ	даЕЕаЕЕЕаЕ	300
сЕдЕаЕдЕда	ЕддЕЕЕссаа	ссааЕсаЕад	ЕсадЕассЕЕ	ЕаЕдаадааа	ЕЕдссЕааЕд	360
ЕЕадссаадЕ	адЕадЕаааЕ	дсаЕда				386

<210> 54 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая последовательность: Олигонуклеотид ЫЕМКР4Ехоп1ЬИ <400> 54 саЕсЕссЕЕа сдааддаЕас Еасс 24

- 136 030377 <210> 55 <211> 22 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая последовательность: Олигонуклеотид <400> 55 дсбдсаадсб сбссббббсб аа

ЫбМКР4Ехоп1КЕУ <210> 56 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая последовательность: Олигонуклеотид <400> 56 дбдсаабсбд дсааабабад бдад <210> 57 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая последовательность: Олигонуклеотид <400> 57 аааабдасаб аддадсабдс адба

ЫбМКР4Ехоп2РИ

ЫбМКР4Ехоп2КЕУ

<210>	58
<211>	12
<212>	ДНК
<213>	Ы1соб1апа баЬасит
<400>	58
даадсбддаа бд

<210>	59
<211>	11
<212>	ДНК
<213>	Ы1соб1апа баЬасит
<400>	59
аббббааада д

<210>	60
<211>	10
<212>	ДНК
<213>	Ы1соб1апа баЬасит
<400>	60

дабсдасасб

- 137 <210>

<211>

<212>

ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасиш.

<400> 61 аддЕЕдЕсаЕ д <210> 62 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 62

ЕсадсЕадас <210>

<211>

<212>

ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 63

ЕдсЕсадсЕа <210> 64 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 64 асаддсЕсаЕ д <210>

<211>

<212>

ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 65

ЕдЕЕддасад <210> 66 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 66 саддсЕсаЕд <400> 67 аЕЕдЕаааЕЕ аЕ <210> 67 <211> 12 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит

- 138 030377 <210>

<211>

<212>

ДНК <213> Ыйсобйапа баЬасит <400> 68 ссдбадабдс б <210> 69 <211> 10 <212> ДНК <213> Ыйсобйапа баЬасит <400> 69 адсадсбббс <210> 70 <211> 10 <212> ДНК <213> Ыйсобйапа баЬасит <400> 70 дсадсбдбсс <210> 71 <211> 11 <212> ДНК <213> Ыйсобйапа баЬасит <400> 71 абабдабдсб а <210>

<211>

<212>

ДНК <213> Ыйсобйапа баЬасит <400> 72 дсбасадсба <210>

<211>

<212>

ДНК <213> Ыйсобйапа баЬасит <400> 73 аббссабббд <400> 74 сбсабдссаб б <210> 74 <211> 11 <212> ДНК <213> Ыйсобйапа баЬасит

- 139 030377 <210> 75 <211> 11 <212> ДНК <213> Г-ПсобЬапа баЪасиш.

<400> 75 бдссаббдса а <210> 76 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсобЧапа баЪасит <400> 76 бббсбдбддс <210> 77 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсобЧапа баЪасит <400> 77 сбббадссаб с <210> 78 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсобЧапа баЪасит <400> 78 бббабасбба <210> 79 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсобЧапа баЪасит <400> 79 ббсаасбдбб <210> 80 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсобЧапа баЪасит <400> 80 баасасбадс <400> 81 бддасббдса <210> 81 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсобЧапа баЪасит

- 140 030377 <210>

<211>

<212>

ДНК <213> Г-НсоЕгапа ЕаЬасиш.

<400> 82 садЕдаЕддЕ а <210> 83 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 83 аддсаасааа Е <210>

<211>

<212>

ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 84

ЕЕаЕааадЕЕ <210> 85 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 85 саддсаЕддд <210> 86 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 86 саддсаЕддд а <210>

<211>

<212>

ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 87 аЕЕдааЕсЕЕ Е <400> 88 сдсдадЕссд а <210> 88 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит

- 141 030377 <210> 89 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасиш.

<400> 89 ааЕсЕЕЕссд с <210> 90 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 90 адЕасддаЕд <210> 91 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 91

ЕЕдЕссаадЕ Е <210> 92 <211> 12 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 92 адЕЕсЕЕдЕа сЕ <210> 93 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 93 ааЕадсЕддЕ <210> 94 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 94 саЕЕдЕсЕЕд Е <400> 95 дадсасЕссЕ <210> 95 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит

- 142 030377 <210> 96 <211> 10 <212> ДНК <213> Ыбсоббапа баЬасит <400> 96 ббдбсббдбд <210> 97 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫФсобФапа баЬасит <400> 97 адсасбссбс <210>

<211>

<212>

ДНК <213> Ыбсоббапа баЬасит <400> 98 бддадсасбс <210> 99 <211> 11 <212> ДНК <213> Ыбсоббапа баЬасит <400> 99 бсббсбадбб д <210> 100 <211> 11 <212> ДНК <213> Ыбсоббапа баЬасит <400> 100 басдсбсасб б <210> 101 <211> 10 <212> ДНК <213> Ыбсоббапа баЬасит <400> 101 абсссдсббд <400> 102 сдсаддааса <210> 102 <211> 10 <212> ДНК <213> Ыбсоббапа баЬасит

- 143 030377 <210>

<211>

<212>

103

ДНК <213> ЫгсобЧапа баЬасит <400> 103 даассдабса <210> 104 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсобЧапа баЬасит <400> 104 ддсбббсссб <210> 105 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсобЧапа баЬасит <400> 105 аассдабсад <210> 106 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсобЧапа баЬасит <400> 106 дсбббсссбс <210>

<211>

<212>

107

ДНК <213> ЫгсобЧапа баЬасит <400> 107 сабдабсбса <210>

<211>

<212>

108

ДНК <213> ЫгсобЧапа баЬасит <400> 108 бббсасаадс а <400> 109 абсбсббдаб а <210> 109 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсобЧапа баЬасит

- 144 030377 <210>

<211>

<212>

110

ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасиш.

<400> 110 аЕЕддасааа Е <210> 111 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 111

ЕаЕЕадаадс Е <210>

<211>

<212>

112

ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 112 дааЕддаЕЕЕ Е <210> 113 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 113

ЕЕсассдсда <210> 114 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 114 аЕсЕсЕсЕЕс <210> 115 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 115 ааасаассаа а <400> 116 ададсааЕдс <210> 116 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит

- 145 030377 <210> 117 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасиш.

<400> 117 ссЕЕдаадаа Е <210> 118 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 118 ааааЕсЕЕсЕ с <210> 119 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 119 адааЕсаааа Е <210> 120 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 120

ЕЕсЕсдаада Е <210> 121 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 121

ЕаЕсЕаадда а <210> 122 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит <400> 122 аааасддада <400> 123

ЕсаасадЕсЕ а <210> 123 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсоЕгапа ЕаЬасит

- 146 030377 <210>

<211>

<212>

124

ДНК <213> Г-ПсобЬапа баЪасиш.

<400> 124 абсбдабадд <210> 125 <211> 11 <212> ДНК <213> Ыгсобгапа баЪасит <400> 125 дддаббсбаа а <210> 126 <211> 10 <212> ДНК <213> Ыгсобгапа баЪасит <400> 126 асббабааад <210> 127 <211> 10 <212> ДНК <213> Ыгсобгапа баЪасит <400> 127 аадаадааад <210> 128 <211> 11 <212> ДНК <213> Ыгсобгапа баЪасит <400> 128 аасббабааа д <210> 129 <211> 12 <212> ДНК <213> Ыгсобгапа баЪасит <400> 129 ааададааас бд <400> 130 дсбабабабб а <210> 130 <211> 11 <212> ДНК <213> Ыгсобгапа баЪасит

- 147 030377 <210> 131 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсобЧапа баЬасит <400> 131 бдаадсбббб д <210> 132 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсобЧапа баЬасит <400> 132 даадсббббд <210>

<211>

<212>

133

ДНК <213> ЫгсобЧапа баЬасит <400> 133 ббддабддбд <210> 134 <211> 11 <212> ДНК <213> ЫгсобЧапа баЬасит <400> 134 ддсдбадбдс б <210> 135 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсобЧапа баЬасит <400> 135 ббдбддсааа <210> 136 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсобЧапа баЬасит <400> 136 ббсбсбаабд <400> 137 дббсбсбааб <210> 137 <211> 10 <212> ДНК <213> ЫгсобЧапа баЬасит

- 148 030377 <210>

<211>

<212>

138

ДНК <213> ШсоГапа !аЪасит <400> 138 дсааад!!с!

<210> 139 <211> 10 <212> ДНК <213> ШсоГапа !аЪасит <400> 139 !аа!ддсаад <210>

<211>

<212>

140

ДНК <213> ШсоГапа !аЪасит <400> 140 са!а!дааас <210> 141 <211> 10 <212> ДНК <213> ШсоГапа !аЪасит <400> 141 саасааа!да <210>

<211>

<212>

142

ДНК <213> ШсоГапа !аЪасит <400> 142 а!дс!!аа!!

<210>

<211>

<212>

143

ДНК <213> ШсоГапа !аЪасит <400> 143 с!!садсгда у <400> 144 д!дсса!д!с с!

<210> 144 <211> 12 <212> ДНК <213> ШсоГапа !аЪасит

- 149 030377

<210>	145
<211>	11
<212>	ДНК
<213>	ЦТсобЧапа
<400>	145
бдбссббсаа б
<210>	146
<211>	10
<212>	ДНК
<213>	ЦТсобЧапа
<400>	146
сббсбсбдбб
<210>	147
<211>	10
<212>	ДНК
<213>	ЦТсобЧапа
<400>	147
ддсабдддаа
<210>	148
<211>	10
<212>	ДНК
<213>	ЦТсобЧапа
<400>	148
аасаббббаа

баЪасит баЪасит баЪасит баЪасит

Claims (12)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Мутантное или трансгенное растение табака или растительная клетка табака, содержащие:

   (a) полинуклеотид, выбранный из группы, состоящей из (ί) полинуклеотида, включающего в себя или состоящего из последовательности, по меньшей мере на 71% идентичной 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 1, 2, 27, 28, или 29, или 51; или (ίί) полинуклеотида, включающего в себя или состоящего из последовательности, по меньшей мере на 65% идентичной одной из последовательностей 8ЕЦ ГО ΝΟ: 3-23, или 30-50, или 53; или (ίίί) полинуклеотида, кодирующего полипептид Ν!ΜΚΡ3 или Ν!ΜΚΡ4, включающий в себя или состоящий из последовательности, по меньшей мере на 65% идентичной одной из последовательностей 8ЕЦ ГО ΝΟ: 24-26 или 52, и где полипептид обладает активностью транспортера тяжелых металлов; или (b) полинуклеотидную конструкцию, содержащую по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов в длину, которая по меньшей мере на 65% идентична участку одной из последовательностей 8ЕЦ ГО ΝΟ: 1-23, или 27-51, или 53; или (c) двухцепочечную РНК, включающую в себя первую последовательность, которая по меньшей мере на 65% идентична по меньшей мере 10 смежным нуклеотидам генов Ν!ΜΚΡ3 или Ν!ΜΚΡ4;

   вторую последовательность и третью последовательность, которая обратно комплементарна первой последовательности и расположена в той же ориентации, что и первая последовательность, где вторая последовательность расположена между первой последовательностью и третьей последовательностью, и вторая последовательность находится в функциональной связи с первой последовательностью и с третьей последовательностью, где первая последовательность по меньшей мере на 65% идентична последовательности, выбранной из группы, включающей в себя 8ЕЦ ГО ΝΟ: 3-23 и 30-50 и 53, и где третья последовательность по меньшей мере на 65% идентична последовательности, обратно комплементарной соответствующей последо- 150 030377 вательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 3-23 и 30-50 и 53, или (й) вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид, охарактеризованный в подпункте (ί), (ίί) или (ίίί), или полинуклеотидную конструкцию, охарактеризованную в подпункте (Ь), где экспрессия полинуклеотида ΝΙΜΡΡ3 и активность кодируемого им белка ΝΙΜΚΡ3 или экспрессия полинуклеотида ΝΙΜΡΡ4 и активность кодируемого им белка ΝΙΜΚΡ4 понижена, причем в листьях указанного растения содержание кадмия снижено по меньшей мере на 5% по сравнению с контрольным растением, в котором не наблюдается понижение экспрессии полинуклеотида ΝΙΜΚΡ3 или ΝΙΜΚΡ4 и активности кодируемого им белка ΝΙΜΚΡ3 или активности кодируемого им белка ΝΙΜΚΡ4.
2. 2. Часть растения табака, имеющая сниженный уровень кадмия, включающая в себя семена или листья, содержащие клетки или ткани растения по п.1.
3. 3. Табачный продукт, имеющий сниженный уровень кадмия, содержащий часть растения табака по

   п.2.
4. 4. Способ уменьшения уровня кадмия по меньшей мере в части растения табака по сравнению с контрольным растением табака, включающий трансформацию клетки растения табака полинуклеотидом и инициацию в клетке растения табака экспрессии указанного полинуклеотида, где полинуклеотид выбран из группы, состоящей из (ί) полинуклеотида, включающего в себя или состоящего из последовательности, по меньшей мере на 71% идентичной 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 1, 2 или 27; или (ίί) полинуклеотида, включающего в себя или состоящего из последовательности, по меньшей мере на 65% идентичной одной из последовательностей 8ЕЦ ГО Ν0: 3-23; или (ίίί) полинуклеотида, кодирующего полипептид ΝΙΜΚΡ3 или ΝΙΜΚΡ4, включающий в себя или состоящий из последовательности, по меньшей мере на 65% идентичной одной из последовательностей 8ЕЦ ГО Ν0: 24-26, и где полипептид обладает активностью транспортера тяжелых металлов; или (ίν) двухцепочечной РНК, включающей в себя первую последовательность, имеющую по меньшей мере 65% идентичность по меньшей мере 10 смежным нуклеотидам гена ΝΙΜΚΡ4;

   вторую последовательность и третью последовательность, имеющую последовательность, обратно комплементарную первой последовательности и расположенную в той же ориентации, что и первая последовательность, где вторая последовательность расположена между первой последовательностью и третьей последовательностью, и вторая последовательность находится в функциональной связи с первой последовательностью и с третьей последовательностью, где первая последовательность по меньшей мере на 65% идентична последовательности, выбранной из группы, включающей в себя 8ЕЦ ГО Ν0: 3-23, и/или где третья последовательность по меньшей мере на 65% идентична последовательности, обратно комплементарной соответствующей последовательности 8ЕЦ ГО Ν0: 3-23.
5. 5. Мутантное или трансгенное растение табака, полученное с помощью способа по п.4, где по меньшей мере часть растения имеет содержание кадмия, сниженное по меньшей мере примерно на 5% по сравнению с контрольным растением табака.
6. 6. Выделенный полипептид ΝΙΜΡΡ3 или ΝΙΜΚΡ4, экспрессируемый полинуклеотидом, выбранным из группы, состоящей из (ί) полинуклеотида, который включает в себя или состоит из последовательности, по меньшей мере на 71% идентичной последовательности 8ЕЦ ГО Ν0: 1, 2, 27, 28, или 29, или 51; или (ίί) полинуклеотида, который включает в себя или состоит из последовательности, по меньшей мере на 65% идентичной последовательности 8ЕЦ ГО Ν0: 3-23, или 30-50, или 53; или выделенный полипептид ΝΙΜΡΡ3 или ΝΙΜΡΡ4, который включает в себя или состоит из последовательности, описанной в 8ЕЦ ГО Ν0: 24-26 или 52, где полипептид обладает активностью транспортера тяжелых металлов.
7. 7. Антитело, способное специфично связываться с выделенным полипептидом по п.6.
8. 8. Способ детекции полинуклеотида ΝΙΜΚΡ3 или ΝΙΜΚΡ4 в образце, включающий в себя следующие стадии:

   (a) получение образца, содержащего полинуклеотид;

   (b) приведение указанного образца в контакт с одним или несколькими праймерами или одним или несколькими зондами с целью специфичной детекции по меньшей мере части полинуклеотида ΝΙΜΚΡ3 или ΝΙΜΚΡ4; где один или более праймеров или один или более зондов содержит или состоит из последовательности, имеющей по меньшей мере 65% идентичность по меньшей мере 10 смежным нуклеотидам 8ЕЦ ГО Ν0: 1; и (c) детекция присутствия продукта амплификации, где присутствие продукта амплификации указывает на присутствие полинуклеотида ΝΙΜΚΡ3 или ΝΙΜΡΡ4 в образце.
9. 9. Выделенный полинуклеотид, препятствующий трансляции транскриптов РНК ΝΙΜΚΡ3 или ΝΙΜΚΡ4, выбранный из группы, состоящей из выделенного полинуклеотида, который включает в себя или состоит из последовательности, по меньшей мере на 71% идентичной последовательности 8ЕЦ ГО Ν0: 1, 2, 27, 28, или 29, или 51;

   - 151 030377 выделенного полинуклеотида, который включает в себя или состоит из последовательности, по меньшей мере на 65% идентичной последовательности 8НО ГО N0: 3-15 и 17-23, или 30-50, или 53;

   выделенного полинуклеотида, состоящего из 8НО ГО N0: 16, полинуклеотида, кодирующего полипептид Ы1МКР3 или Ы1МКР4, который включает в себя или состоит из последовательности, по меньшей мере на 65% идентичной последовательности 8Н) ГО N0: 24-26 или 52, и где полипептид обладает активностью транспортера тяжелых металлов.
10. 10. Полинуклеотидная конструкция по меньшей мере из 15-30 смежных нуклеотидов в длину, препятствующая трансляции транскриптов РНК Ы1МКР3 или Ы1МКР4, которая по меньшей мере на 65% идентична участку одной из последовательностей δЕ^ ГО N0: 1-15 и 17-23, или 27-32, или 34-51, или 53, или полинуклеотидная конструкция по меньшей мере из 15-30 смежных нуклеотидов в длину, препятствующая трансляции транскриптов РНК Ы1МКР3 или Ы1МКР4, которая по меньшей мере на 65% идентична участку 8НО ГО N0:16, полинуклеотидная конструкция по меньшей мере из 15-30 смежных нуклеотидов в длину, препятствующая трансляции транскриптов РНК Ы1МКР3 или Ы1МКР4, которая по меньшей мере на 65% идентична участку 8НО ГО N0: 33.
11. 11. Двухцепочечная РНК, препятствующая трансляции транскриптов РНК №МКР3 или №МКР4, содержащая первую последовательность, по меньшей мере на 65% идентичную последовательности, содержащей по меньшей мере 10 смежных нуклеотидов генов №МКР3 или №МКР4;

    вторую последовательность и третью последовательность, содержащую последовательность, обратно комплементарную первой последовательности и расположенную в той же ориентации, что и первая последовательность, где вторая последовательность расположена между первой последовательностью и третьей последовательностью, и вторая последовательность находится в функциональной связи с первой последовательностью и с третьей последовательностью, где первая последовательность по меньшей мере на 65% идентична последовательности, выбранной из группы, включающей в себя 8Н) ГО N0: 3-23 и 30-50 и 53, и третья последовательность по меньшей мере на 65% идентична последовательности, обратно комплементарной соответствующей последовательности 8НО ГО N0: 3-23 и 30-50 и 53.
12. 12. Вектор экспрессии, содержащий выделенный полинуклеотид по п.9 или полинуклеотидную конструкцию по п.10.