EA028951B1 - Пептидные конъюгаты агониста рецептора гастрина и глюкагон подобного пептида 1 - Google Patents

Пептидные конъюгаты агониста рецептора гастрина и глюкагон подобного пептида 1 Download PDF

Info

Publication number
EA028951B1
EA028951B1 EA201490790A EA201490790A EA028951B1 EA 028951 B1 EA028951 B1 EA 028951B1 EA 201490790 A EA201490790 A EA 201490790A EA 201490790 A EA201490790 A EA 201490790A EA 028951 B1 EA028951 B1 EA 028951B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
peptide
conjugate
pharmaceutically acceptable
compound
acceptable salt
Prior art date
Application number
EA201490790A
Other languages
English (en)
Other versions
EA028951B9 (ru
EA201490790A1 (ru
Inventor
Якоб Линд Толборг
Трине Сковлунд Риге Нееруп
Келд Фосгерау
Торбен Остерлунд
Дорте Леннерт Кристенсен Алмхолт
Лоун Фрост Ларсен
Original Assignee
Зилэнд Фарма А/С
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Зилэнд Фарма А/С filed Critical Зилэнд Фарма А/С
Publication of EA201490790A1 publication Critical patent/EA201490790A1/ru
Publication of EA028951B1 publication Critical patent/EA028951B1/ru
Publication of EA028951B9 publication Critical patent/EA028951B9/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/2207—Gastrins; Cholecystokinins [CCK]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/55—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/55—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds
    • A61K47/551—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds one of the codrug's components being a vitamin, e.g. niacinamide, vitamin B3, cobalamin, vitamin B12, folate, vitamin A or retinoic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes

Abstract

Изобретение относится, среди прочего, к некоторым конъюгатам пептидов и к применению указанных конъюгатов для лечения различных заболеваний и нарушений, включая диабет (1 типа и/или 2 типа), а также заболеваний и нарушений, связанных с диабетом.

Description

Изобретение относится, среди прочего, к некоторым конъюгатам пептидов и к применению указанных конъюгатов для лечения различных заболеваний и нарушений, включая диабет (1 типа и/или 2 типа), а также заболеваний и нарушений, связанных с диабетом.
028951 Β1
028951
Область техники
Настоящее изобретение относится, среди прочего, к определенным конъюгатам пептидов и к применению указанных конъюгатов для лечения и/или предотвращения различных заболеваний и нарушений, включая диабет (1 типа и/или 2 типа), и заболеваний и нарушений, связанных с диабетом.
Уровень техники
Диабет, в частности, диабет 1 типа и 2 типа, а также ожирение, которое считается главным фактором, вызывающим развитие диабета 2 типа, составляют крупнейшую и все еще растущую проблему здравоохранения в мире. Заболевания и нарушения, которые могут развиваться как последствия диабета, включают сердечно-сосудистые заболевания и заболевания периферических сосудов, микро- и макрососудистые осложнения, инсульт и, предположительно, некоторые формы рака.
Диабет характеризуется неполноценной физиологической регуляцией концентрации глюкозы в крови. Среди состояний, которые могут привести к диабету, выделяют уменьшение или утрату количества и функции Р-клеток поджелудочной железы с сопутствующим уменьшением или утратой секреции эндогенного инсулина и/или резистентностью к инсулину (уменьшением чувствительности к инсулину), т.е. уменьшением или утратой способности эндогенного инсулина адекватно регулировать концентрацию глюкозы в крови.
В ответ на поступление и всасывание питательных веществ в кишечнике, слизистой желудочнокишечного тракта секретируется несколько гормонов, которые уменьшают концентрацию глюкозы в крови. Они включают глюкагоноподобный пептид 1 (ГНП-1), глюкозозависимый инсулинотропный пептид (ГИП), гастрин и секретин.
ГПП-1 [см., например, 0г§коу, Э1аЬе1о1од1а 35: 701-711 (1992)] образуется в результате процессинга в тканях проглюкагона, пептида длиной 180 аминокислот [см., например, Эгисксг. Э|аЬс1с5 47: 159-169 (1998)]. Полная последовательность проглюкагона включает последовательность глюкагона длиной 29 аминокислот, последовательность ГНП-1 длиной 36 или 37 аминокислот и последовательность глюкагоноподобного пептида 2 (ГНП-2; интестинотропный пептид) длиной 34 аминокислоты.
Так называемые эксендины, составляющие другую группу пептидов, которые уменьшают концентрацию глюкозы в крови, характеризуются некоторым подобием (53%) последовательности ГПП-1(7-36) [см., например, Соке с1 а1, ί. ΒίοΙ. СЬет. 268: 19650-19655 (1993)]. Эксендины обнаружены в слюне видов ННоПегтаОПае (ядозубы). Эксендин-3 присутствует в слюне Не1оПегта ЬотПит (мексиканский ядозуб), тогда как эксендин-4 присутствует в слюне Не1оПегта шхресШт (ящерица-ядозуб). Аминокислотная последовательность эксендина-4, которая отличается от последовательности эксендина-3 в положениях два и три, имеет вид НСЕСТРТ8ПЕ8КОМЕЕЕАУКЕР1ЕАЕКНССР88САРРР8-НН2
Сообщалось, что эксендин-4 является сильным агонистом рецептора ГПП-1, что было подтверждено на изолированных клетках инсулиномы крысы [Соке е1 а1., ссылка, приводившаяся выше]. В международной заявке на патент АО 99/07404 описывается, что эксендин-4 при системном введении уменьшает концентрацию глюкозы в крови у диабетических мышей ПЬ/ПЬ на 40%, также сообщалось о длительном эффекте уменьшения концентрации глюкозы в крови диабетических мышей оЬ/оЬ после интраперитонеальной инъекции эксендина-4 один раз в день |Сг1ед е1 а1., Э|аЬе1о1од1а 42: 45-50 (1999)].
В Патенте США №5,424,286 и в международной заявке на патент АО 98/05351 было описывается, что агонисты эксендина-3, эксендина-4 и эксендина можно применять для лечения диабета, уменьшения перистальтики желудка и отсрочивания опорожнения желудка, а также для предотвращения гипергликемии; в международной заявке на патент АО 98/30231 также упоминается, что их можно использовать для уменьшения потребления пищи.
Пептидный гормон гастрин секретируется клетками слизистой желудка и С-клетками двенадцатиперстной кишки. Среди основных физиологических функций данного гормона у человека выделяют стимуляцию секреции желудочной кислоты (т.е. НС1) и способствование перистальтике желудка. Существуют свидетельства, что гастрин может принимать участие в процессе неогенеза островков поджелудочной железы, т.е. в стимуляции роста секретирующих инсулин Р-клеток в островках поджелудочной железы [см., например, Когс, М., 1. СЬи. 1иуе8к, 92: 1113-1114 (1993); Коотап е1 а1. Э|аЬе1е5 51: 686-690 (2002)], и тем самым способствовать регуляции концентрации глюкозы в крови.
Гастрин связывается с теми же рецепторами, что и другой желудочно-кишечный пептидный гормон, холецистокинин (ХЦК). Рецепторы ХЦК-А Р и ХЦК-В Р обладают различной аффинностью к гастрину и вариантам ХЦК. ХЦК-А Р (или ХЦК Р1) выступает в первую очередь в качестве рецептора для сульфатированного ХЦК, тогда как ХЦК-В Р (или ХЦК Р2) одинаково хорошо связывает как ХЦК, так и гастрин. ХЦК-В Р рассматривают как "рецептор гастрина" благодаря более высокой концентрации в плазме крови гастрина по сравнению с ХЦК [РоисаиП е1 а1. Кед. РерйПе® 145: 17-23 (2008)].
ХЦК-В Р после связывания лиганда может запускать несколько внутриклеточных путей передачи сигналов, и это рассматривают в качестве причины различных физиологических функций ХЦК. Ключевыми путями передачи сигналов от ХЦК-В Р являются пути МАРК (митоген-активируемых протеинкиназ) или ЕКК (внеклеточно регулируемых киназ), которые также активируются некоторыми гормонами роста. Поскольку ХЦК-В Р экспрессируется в поджелудочной железе, гастрин может способствовать пролиферации клеток и регенерации островков в этой ткани.
- 1 028951
У человека гастрин встречается в первую очередь в трех формах, а именно: гастрин-34, гастрин-17 и гастрин-14 (цифра в названии означает полное количество аминокислот в последовательности, о которой идет речь). Кроме того, был выявлен гастрин-6. Более короткие формы образуются в результате отщепления С-концевого амидированного фрагмента гастрина-34. Таким образом, гастрин-17 состоит из последних 17 С-концевых остатков гастрина-34 (соответствующих прогастрину (55-71)), гастрин-14 состоит из последних 14 С-концевых остатков гастрина-34 (соответствующих прогастрину (58-71)) и гастрин-6 состоит из последних 6 С-концевых остатков гастрина-34 (соответствующих прогастрину (66-71)). В гастрине-17 человека Ν-концевой аминокислотный остаток представляет собой остаток пироглутаминовой кислоты (РугоО1и). 6 амидированных С-концевых аминокислот представляют собой ключевые рецептор-связывающие остатки гастрина.
Краткое описание изобретения
Было обнаружено, что некоторые конъюгаты, включающие две ковалентно объединенные или связанные пептидные группы, могут демонстрировать неожиданно высокую терапевтическую активность при лечении, например, диабета (диабета 1 типа и/или 2 типа) или различных других заболеваний или нарушений, связанных с диабетом, по сравнению с терапевтической активностью комбинации двух отдельных пептидов, о которых идет речь.
В широком аспекте в соответствии настоящем изобретении предложен конъюгат пептидов, состоящий из агониста рецептора ГПП-1 и гастрина, в частности, гастрина с заменой в положении 15 гастрина17 (которое соответствует положению 4 гастрина-6), которая выбрана из Ьеи, Ν1β, Рйе и ТЬг. Более конкретно, в соответствии с настоящим изобретением предложены конъюгаты пептидов эксендина-4 и гастрина.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения, таким образом, предложен конъюгат пептидов, имеющий формулу I
Κ'-Ζ,-Κ,-Υ,-Κ' (I),
где К1 представляет собой Н, С1-4 алкил, ацетил, формил, бензоил или трифторацетил;
К2 представляет собой ОН или ΝΗ2 и
Ζ,, представляет собой пептидную последовательность, имеющую формулу 1а:
Н1к-О1у-О1и-О1у-Тйг-Рйе-Тйг-8ег-79-Ьеи-8ег-712-Ζ13-Ζ 14-01υ-Ζ 16-01и-А1а-Уа1-г20-БеиΡ1ι$-Ιΐ6-Ζ24-Ζ25-Τ6ΐι-Ζ27-Ζ28 (1а),
где Ζ9 выбран из Акр и О1и;
Ζ12 выбран из Бук, Агд и От;
Ζ13 выбран из О1и и Туг;
Ζ14 выбран из Ме! и Ьеи;
Ζ16 выбран из О1и, Сук, Агд, От и Бук;
Ζ20 выбран из Агд, Бук и От;
Ζ24 выбран из Бук, Агд, От и О1и;
Ζ25 выбран из Тгр, Бук, Сук и Рйе;
Ζ27 выбран из Бук, Агд и От; и
Ζ28 выбран из Акп и Акр или отсутствует;
Ба представляет собой пептидную последовательность, имеющую формулу 1Ь:
Т1-Б2-БЗ-Б4 (1Ь),
где Б1 выбран из От, 8Або, Сук, Бук и О1п или отсутствует;
Б2 выбран из От, 8Або, Сук, Бук и О1п или отсутствует;
Б3 выбран из От, 8Або, Сук, Бук и О1п или отсутствует; и
Б4 выбран из От, 8Або, Сук, Бук и О1п или отсутствует; и
Υα представляет собой пептидную последовательность, имеющую формулу 1с:
Υ12-Υ13-Υ14-Υ15-Ακρ-Υ17 (1с),
где Υ12 выбран из Туг и А1а или отсутствует;
Υ13 выбран из О1у и А1а или отсутствует;
Υ14 выбран из Тгр, Ша1 и Рйе;
Υ15 выбран из Ме!, Беи, Ме, Тйг и Рйе; и
Υ17 выбран из Рйе и 3-(3-пиридил)аланина;
причём по меньшей мере один остаток из Бук, От или Сук в формуле 1а и 1Ь является дополнительно конъюгированным с липофильным и/или биотинилированным заместителем и/или является пегилированным;
или фармацевтически приемлемая соль или сольват указанного соединения.
В других вариантах реализации настоящего изобретения предложен конъюгат пептидов согласно формуле I, где ΖΕΙ представляет собой пептидную последовательность, которая имеет формулу 11а:
Нщ-О1у-О1и-О1у-Тйг-Рйе-Тйг-8ег-29-Беи-Зег-Бук-213-Ζ 14-01 ι.ι-716-01и-А1а- Уа1-Аг§-ТеиРйе-Ие-О1и-225-Ьеи-Ьу5-г28 (Па),
- 2 028951
где Ζ9 выбран из С1и и Акр;
Ζ13 выбран из С1и и Туг;
Ζ14 выбран из Ме! и Ьеи;
Ζ16 выбран из С1и, Сук и Ьук;
Ζ25 выбран из Ьук, РЪе, Сук и Тгр; и
Ζ28 выбран из Акп и Акр или отсутствует;
Ьа представляет собой пептидную последовательность, которая имеет формулу 1Ъ, описанную выше; и
У,, представляет собой пептидную последовательность, которая имеет формулу 11с:
Туг-С1у-Тгр-У15-Акр-РЪе (Не), где Υ15 выбран из Ьеи и ТЪг; и
причём по меньшей мере один из остатков Ьук в положениях Ζ16 и Ζ25 формулы 11а является дополнительно конъюгированным с липофильным и/или биотинилированным заместителем и/или является пегилированным;
или фармацевтически приемлемая соль или сольват указанного соединения.
Согласно конкретным вариантам реализации настоящее изобретение относится к конъюгату пептидов, который имеет формулу:
Н-НОЕСТРТ80Т8КфТЕЕЕАУКТР1Е\УТКК-8А0о-К(гексадеканоил-15оС1и)-8А(1оΥΟΧνΤϋΡ-ΝΙΤ (Соединение 1)
Н-НОЕОТРТ8ОЬ8КфЬЕЕЕАУКЬГ1Е-К(гексадеканоил-ЪоО1и)-ЬККΥθ\νΐτ>ρ-ΝΗ2 (Соединение 2)
-8А4о-8А4оН-НОЕОТРТЗОЬЗК(ЗЕЕ-К(гексадеканоил-18оО1и)-ЕАУКЕР1ЕЗУЕКН-8Аао-8Ас1оΥίιλνίΟΡ-ΝΉ: (Соединение 3)
Ι1-ΗΟΕΟΤΓΤ80Ε8ΚΟΜΕΕΕΑνΕΕΠΕ\νΕΚΝ-8Α(1ο-ί’(ΕιιοιιΐΗ-Μ8ΐ)-8Α4ο-ΥΌννΕΟΓ-ΝΗ2 (Соединение 4)
Н-РГСтЕСтТГТ8Г)Т.$КС)ЕЕЕЕА УКТ.Е1Е-С(Биотин-Ма1)-Т.КК-8 ΑΗο-8 Αάο-Υ&\νΐ.Γ:>Ε-ΝΗ2 (Соединение 5)
Н-НОЕОТРТЗОЕЗК<ЗЕЕ-С(Биотин-Ма1)-ЕАУКЕР1ЕЗУЕК]Ч-8А(1о-8Аао-УОУТХ>Р-НН2 (Соединение 6)
Н-НСЕСТГТ8ЕЕЗКУЬЕЕЕАУКЕГ1Е-К(гексадеканоил-Ъо01и)-ЕК-8Аао-8Аао-УС\¥ЕОГΝΕΙ2 (Соединение 7)
Н-НОЕОТРТ8ЕЕ5КУЪЕЕЕАУКЕР1Е-К(гексадеканоил-15оО1и)-ЕК-8Аао-ффУО\УЕОРΝΗ2 (Соединение 8)
или к фармацевтически приемлемым солям или сольватам указанных соединений.
Согласно другим вариантам реализации в соответствии с настоящим изобретением предложен
конъюгат пептидов, имеющий формулу III к’-гь-Ьь-Уь-К2 (III),
где К1 представляет собой Н, С1-4 алкил, ацетил, формил, бензоил или трифторацетил;
К2 представляет собой ОН или ΝΗ2; и
ΖЪ представляет собой пептидную последовательность, имеющую формулу Ша Н1к-С1у-С1и-С1у-ТЬг-РЬе-ТЬг-5ег-С1и-Теи-8ег-Тук-Туг-Ееи-С1и-С1и-С1и-А1а-Уа1-Аг§-ЬеиРЬе-11е-О1и-225-Теи-Тук-г28 (Ша),
где Ζ25 выбран из РЪе и Тгр; и
Ζ28 выбран из Акп и Акр или отсутствует;
ЬЪ представляет собой пептидную последовательность, имеющую формулу ШЪ
ЬЭ-Ьб-ЬУ-ЬЗ (ШЪ),
где Ь5 выбран из 8АЪо, 8Аос, А1а, О1у и О1п или отсутствует;
Ь6 выбран из 8АЪо, 8Аос, А1а, О1у и О1п или отсутствует;
Ь7 выбран из 8АЪо, 8Аос, А1а, О1у и О1п или отсутствует; и Ь8 выбран из 8АЪо, 8Аос, А1а, О1у и О1п или отсутствует; и ΥЪ представляет собой пептидную последовательность, имеющую формулу Шс:
Υ10-Υ11 -Туг-ΟΙγ-Τιρ-Υ 15-Акр-РЬе (Шс),
где Υ10 представляет собой О1и или отсутствует;
Υ11 представляет собой А1а или отсутствует; и Υ15 выбран из Ьеи и ТЪг;
или фармацевтически приемлемая соль или сольват указанного соединения;
- 3 028951
при условии, что III не представляет собой
Н-НОЕОТРТ8ЕЬ8К¥ЬЕЕЕАУКЬР1ЕРЬК-8Або-8Або-УО\¥ЬОР-МН2,
Η-ΗΟΕΟΤΡΤ8ΕΕ8ΚΥΕΕΕΕΑνΚΡΡΙΕΡΡΚΥΟ\νΕΟΡ-ΝΗ2, и
Η-ΗΟΕΟΤΡΤδΕΕδΚΥΕΕΕΕΑνΚΤΡΙΕΡΕΚ-8Αάο-ΥΟΧνΕΟΡ-ΝΗ2
В других вариантах реализации настоящего изобретения предложен конъюгат пептидов согласно формуле III, где
ΖΗ представляет собой пептидную последовательность, имеющую формулу IV;·!
Н13-О1у-О1и-О1у-ТЬг-РЬе-ТЬг-8ег-О1и-Ьеи-8ег-Ьуз-Туг-Ееи-С1и-О1и-О1и-А1а-Уа1-Аг§-ЬеиРйе-Т1е-С1и-725-Реи-Т.ук-Акп (ТУа). где Ζ25 выбран из Ьук, Рйе и Тгр; и
Ьь представляет собой пептидную последовательность, имеющую формулу Шь, описанную выше
Ун представляет собой пептидную последовательность, имеющую формулу Ас:
Туг-С1у-Тгр-У15-Азр-РЬе (1Ус),
где Υ15 выбран из Ьеи и Тйг;
или фармацевтически приемлемая соль или сольват указанного соединения.
Согласно конкретным вариантам реализации настоящее изобретение относится к конъюгату пептидов, который имеет формулу:
Η-ΗΟΕΓτΤΡΤ5ΕΕ3ΚΥΕΕΕΕΑνΚΕΠΕΡΕΚΟΟΥΓτ\νΕΕ)Ρ-ΝΗ2 (Соединение 9)
Н-НСтРСтТРТЗЕЕЗКУЕЕРРА νΚΕΓΙΡΡΙ.Κ(,)ΟΡ.ΑΥ<_τ\νΐ.ΟΡ-ΝΗ> (Соединение 10)
Η-ΗΟΕΟΤΓΤ8ΕΕ3ΚΥΡΕΕΕΑνΚΡΓΙΕΡΕΚ-8Αάο-()<)ΥΟ\¥ΕΟΡ-ΝΗ2 (Соединение 11)
Η-ΗΟΕΟΤΡΤ8ΕΕ3ΚΥΕΕΕΕΑνΚΕΓΙΕΡΕΚΡ)ΥΟ\νΕΟΓ-ΝΗ2 (Соединение 12)
11-11СЕС|ТГТ£ПЕ8К\ТППЕА\'КЕГ1ЕГЕКАААУС|\\'ШГ-Х1Е (Соединение 13)
Η-Η0Ε6ΓΡΊ8ΕΕ8ΚΥΕΕΕΕΛνΚΕΡΙΕΡΕΚΓ00Υ0ν.Έί)Ρ-ΝΗ2 (Соединение 14)
Η-ΗΟΕΟΤΡΤ3ΕΕ3ΚΥΕΕΕΕΑνΚΕΡΙΕΡΕΚ-8Αοο-ΥΟΧΥΕΟΡ-ΝΗ2 (Соединение 15)
Η-ΗΟΕΟΤΡΤ8ΕΕ3ΚΥΕΕΕΕΑνΚΕΡΙΕΡΕΚΝΥΟ\νΕϋΡ-ΝΗ2 (Соединение 16)
Η-ΗΟΕΟΤΡΤ8ΕΕ5ΚΥΕΕΕΕΑνΚΕΡΙΕΡΕΚΑΥΟ\¥ΕϋΡ-ΝΗ2 (Соединение 17)
ΤΤ-ΤΤΟΓ<ιΤΓΤ3ΡΕ8Κ\7 ΡΡΕΑνΚΤ ΓΙΕΡΤ.ΚΝ-8Α(1ο-8Α(1ο-УСАУЕПГ-МТЕ (Соединение 18)
Η-ΗΟΕΟΤΓΤ3ΕΕ8ΚΥΕΕΕΕΑνΚΕΓΙΕΡΕΚΟ-8Αάο-8Αάο-ΥΟ\νΕΟΓ-ΝΗ2 (Соединение 19)
Η-ΗΟΕΟΤΡΤ8ΕΕ8ΚΥΕΕΕΕΑνΚΕΡΙΕΡΕΚΝΥΟ\νΤΟΡ-ΝΗ2 (Соединение 20)
Η-ΗΟΕΟΤΡΤ8ΕΕ8ΚΥΕΕΕΕΑνΚΕΡΙΕΡΕΚΟΥΟ\νΤϋΡ-ΝΗ2 (Соединение 21)
Η-ΗΟΕΟΓΡΊ8ΕΕ8ΚΥΕΕΕΕΛνΚΕΡΙΕΆΈΚΝΥΟΑΈΏΡ-ΝΗ: (Соединение 22)
Η-ΗΟΕΓιΤΡΤ5ΕΕ3ΚΑΤΕΕΕΛνΚ.ΕΡΙΕΑΤΚΡ)ΥΟ\νΕΡ)Ρ-1\Ή2 (Соединение 23)
или к фармацевтически приемлемым солям или сольватам указанных соединений.
Согласно конкретным вариантам реализации конъюгаты пептидов согласно настоящему изобретению могут быть получены с применением стандартных способов синтеза, с использованием рекомбинантных систем экспрессии или любым другим подходящим способом. Таким образом, конъюгаты можно синтезировать множеством путей, включая, например, способы, включающие:
(a) синтез конъюгата пептидов с применением стандартных методик твердофазного или жидкофазного синтеза, пошагового синтеза или с помощью сборки фрагментов, с последующим изолированием и очисткой конечного продукта - конъюгата пептидов;
(b) экспрессию конструкции нуклеиновой кислоты, кодирующей конъюгат пептидов, в клетке хозяина и выделение продукта экспрессии из культуры клеток хозяина; или
(c) применение бесклеточной экспрессии ίη νίΐΓΟ конструкции нуклеиновой кислоты, кодирующей конъюгат пептидов, и выделение продукта экспрессии;
или посредством комбинации способов (а), (ь) или (с) для получения фрагментов конъюгата пептидов, затем лигирования указанных фрагментов для получения конъюгата пептидов и выделения указанного конъюгата пептидов.
Среди других вариантов реализации настоящего изобретения выделяют способы лечения различных состояний, заболеваний или нарушений, включая диабет (1 типа и 2 типа), и различных состояний, заболеваний или нарушений, связанных с диабетом. Эти варианты реализации включают введение конъюгата пептидов согласно настоящему изобретению (в свободной форме или в форме его фармацевтически приемлемой соли или сольвата), а также фармацевтических композиций, которые содержат конъюгат пептидов согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль или сольват.
- 4 028951
Согласно некоторым вариантам реализации конъюгаты пептидов согласно настоящему изобретению могут быть полезными в качестве фармацевтических агентов для лечения резистентности к инсулину, нарушенной толерантности к глюкозе, преддиабета, метаболического синдрома, увеличения концентрации глюкозы в крови натощак, состояний болезни, связанных с увеличением концентрации глюкозы в крови, гипергликемии, диабета 1 типа и/или 2 типа, диабетической нейропатии, диабетической ретинопатии, диабетической нефропатии, почечной недостаточности, гипертензии и/или дислипидемии (или комбинации этих метаболических и сердечно-сосудистых факторов риска), атеросклероза, артериосклероза, заболеваний макрососудов, заболеваний микрососудов, ишемической болезни сердца, заболеваний периферических артерий и инсульта. Также они могут быть полезными для предотвращения увеличения массы тела, способствования уменьшению массы тела, уменьшения избыточной массы тела и/или лечения ожирения (например, путем контролирования аппетита, питания, потребления пищи, потребления калорий и/или расхода энергии), включая морбидное ожирение, а также связанных с ним заболеваний, нарушений и состояний здоровья, включая, но не ограничиваясь ими, воспаление, связанное с ожирением, заболевание желчного пузыря, связанное с ожирением, и синдром апноэ во сне, вызванный ожирением. Действие конъюгатов пептидов согласно настоящему изобретению на эти состояния может быть опосредовано полностью или частично воздействием на массу тела или может быть независимым от него.
Среди дополнительных вариантов реализации настоящего изобретения выделяют способы предотвращения различных состояний, заболеваний или нарушений, включая диабет (1 типа и 2 типа) и различных состояний, заболеваний или нарушений, связанных с диабетом. Эти варианты реализации включают введение конъюгата пептидов согласно настоящему изобретению (в свободной форме или в форме его фармацевтически приемлемой соли или сольвата), а также фармацевтических композиций, которые содержат конъюгат пептидов согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль или сольват.
Согласно некоторым вариантам реализации конъюгаты пептидов согласно настоящему изобретению могут быть полезными в качестве фармацевтических агентов для предотвращения резистентности к инсулину, нарушенной толерантности к глюкозе, преддиабета, метаболического синдрома, увеличения концентрации глюкозы в крови натощак, состояний болезни, связанных с увеличением концентрации глюкозы в крови, гипергликемии, диабета 1 типа и/или 2 типа, диабетической нейропатии, диабетической ретинопатии, диабетической нефропатии, почечной недостаточности, гипертензии и/или дислипидемии (или комбинации этих метаболических и сердечно-сосудистых факторов риска), атеросклероза, артериосклероза, заболеваний макрососудов, заболеваний микрососудов, ишемической болезни сердца, заболеваний периферических артерий и инсульта. Также они могут быть полезными для предотвращения увеличения массы тела, способствования уменьшению массы тела, уменьшения избыточной массы тела и/или лечения ожирения (например, с помощью контролирования аппетита, питания, потребления пищи, потребления калорий и/или расхода энергии), включая морбидное ожирение, а также связанных с ним заболеваний, нарушений и состояний здоровья, включая, но не ограничиваясь ими, воспаление, связанное с ожирением, заболевание желчного пузыря, связанное с ожирением, и синдром апноэ во сне, вызванный ожирением. Действие конъюгатов пептидов согласно настоящему изобретению на эти состояния может быть опосредовано полностью или частично воздействием на массу тела или может быть независимым от него.
Дополнительные аспекты настоящего изобретения станут очевидными из описания изобретения, приведенного ниже.
Описание фигур
Фиг. 1. Концентрация глюкозы в крови натощак после 3 недель лечения. Эффект ПК введения один раз в день наполнителя, лираглутида (100 нМоль/кг/день) и Соединения 18 (30 и 100 нМоль/кг/день) на концентрацию глюкозы в крови натощак у мышей 6Ъ/6Ъ после 3 недель лечения. Данные представлены в виде среднего значения со стандартной ошибкой среднего. Статистическая обработка: Данные сравнивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа ΑΝΟνΑ с последующим тестом Бонферрони МС против наполнителя или против лираглутида: ***р<0.001 против наполнителя, ##р<0.01 против лираглутида.
Фиг. 2. Концентрация глюкозы в крови натощак после 4 недель лечения с последующей 1 неделей отсутствия введения лекарства. Эффект ПК введения один раз в день наполнителя, лираглутида (100 нМоль/кг/день) и Соединения 18 (30 и 100 нМоль/кг/день) на концентрацию глюкозы в крови натощак у мышей 6Ъ/6Ъ после 4 недель лечения с последующей 1 неделей лекарственных каникул (введение наполнителя). Данные представлены в виде среднего значения со стандартной ошибкой среднего. Статистическая обработка: Данные сравнивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа ΑΝΟνΑ с последующим тестом Бонферрони МС против наполнителя или против лираглутида: **р<0.01 против наполнителя, #р<0.05 против лираглутида.
Фиг. 3. ОТТГ, АиС после 3 недель лечения. Эффект ПК введения один раз в день наполнителя, лираглутида (100 нМоль/кг/день) и Соединения 18 (30 и 100 нМоль/кг/день) на толерантность к глюкозе мышей 6Ъ/6Ъ после 3 недель лечения. Данные представлены в виде площади под кривой (АиС) со стандартной ошибкой среднего. Статистическая обработка: Данные сравнивали с помощью однофакторного
- 5 028951
дисперсионного анализа ΑΝΟνΑ с последующим тестом Бонферрони МС против наполнителя или против лираглутида: ***р<0.001 против наполнителя. ###р<0.001 против лираглутида.
Фиг. 4. ОТТГ, АиС после 4 недель лечения и 1 недели отсутствия введения лекарства Эффект ПК введения один раз в день наполнителя, лираглутида (100 нМоль/кг/день), и Соединения 18 (30 и 100 нМоль/кг/день) на толерантность к глюкозе мышей 4Ь/4Ь после 4 недель лечения с последующей 1 неделей отсутствия введения лекарства (введение наполнителя). Данные представлены в виде площади под кривой (АИС) со стандартной ошибкой среднего. Статистическая обработка: Данные сравнивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа ΑΝΟνΑ с последующим тестом Бонферрони МС против наполнителя или против лираглутида: *р<0.05, ***р<0.001 против наполнителя. ###р<0.001 против лираглутида.
Фиг. 5. Разница массы тела после 4 недель лечения. Эффект ПК введения один раз в день наполнителя, лираглутида (100 нМоль/кг/день) и Соединения 18 (30 и 100 нМоль/кг/день) на разницу массы тела (окончание эксперимента минус начало эксперимента) мышей 4Ь/4Ь после 4 недель лечения. Данные представлены в виде среднего значения со стандартной ошибкой среднего. Статистическая обработка: Данные сравнивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа ΑΝΟνΑ с последующим тестом Бонферрони МС против наполнителя или против лираглутида: ***р<0.001 против наполнителя. ##р<0.01 против лираглутида.
Фиг. 6. Концентрация глюкозы в крови натощак после 5 недель лечения. Эффект ПК введения два раза в день наполнителя, лираглутида (2x40 нМоль/кг/день) и Соединения 18 (2x10 и 2x40 нМоль/кг/день) на концентрацию глюкозы в крови натощак у крыс ΖΌΡ после 5 недель лечения. Данные представлены в виде среднего значения со стандартной ошибкой среднего. Статистическая обработка: Данные сравнивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа ΑΝΟνΑ с последующим тестом Бонферрони МС против наполнителя или против лираглутида: **р<0.01, ***р<0.001 против наполнителя, ###р<0.001 против лираглутида.
Фиг. 7. ОТТГ, АИС после 5 недель лечения. Эффект ПК введения один раз в день наполнителя, лираглутида (2x40 нМоль/кг/день) и Соединения 18 (2x10 и 2x40 нМоль/кг/день) на толерантность к глюкозе мышей 4Ь/4Ь после 5 недель лечения. Данные представлены в виде площади под кривой (АИС) со стандартной ошибкой среднего. Статистическая обработка: Данные сравнивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа ΑΝΟνΑ с последующим тестом Бонферрони МС против наполнителя или против лираглутида: ***р<0.001 против наполнителя. ###р<0.001 против лираглутида.
Фиг. 8. Концентрация ΗόΑ1α после 6 недель лечения. Эффект ПК введения два раза в день наполнителя, лираглутида (2x40 нМоль/кг/день) и Соединения 18 (2x10 и 2x40 нМоль/кг/день) на концентрацию Η6Α 1с у крыс ΖΌΡ после 6 недель лечения. Данные представлены в виде среднего значения со стандартной ошибкой среднего. Статистическая обработка: Данные сравнивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа ΑΝΟνΑ с последующим тестом Бонферрони МС против наполнителя или против лираглутида: ***р<0.001 против наполнителя, #р<0.05 против лираглутида.
Подробное описание изобретения
Как отмечалось выше, один аспект настоящего изобретения относится к конъюгату пептидов, который имеет формулу:
Н-НСтР.(.тТРТ8П1.8К01.Р.РРА\'Ш.Р1РЛУ[.КХ-8А(1о-К(гексалекано11л-15оСт1и)-5А0оΥθν.·ΈΟΓ-ΝΙΙ. (Соединение 1)
Н-НОЕОТРТ8ВЬ5КрЕЕЕЕАУКЬР1Е-К(гексадеканоил-15о01и)-ЬКХ-8А(1о-8А4оΥΟννί,ΟΓ-ΝΠ, (Соединение 2)
Р1-НСгЕСгТРТ8ВЕЗКС)ЕЕ-К(гексадеканоил48оСг1и)-ЕАУКЕР1Е\УЕК1У-8Ас1о-8А4оΥΟΑΈΕΡ-ΝΉ: (Соединение 3)
Η-Η(.^(.τΤΡΤ8ΠΙ.8ΚΟΜΡ.ΡΡΑνΚΙ.ΡΙΡΛν[.Κ4-8Α<1ο-(.~(ΡιιοτιΐΗ-ΜαΙ)-8Αάο-Υ(.τ\νΐ.ηΡ-ΝΗ2
(Соединение 4)
ΤΤ-ΤΚ+.0ΤΡΤ8ΓΑ3Κ0ΡΓΡΓΑνΡίΤ.ΓΤΓ,-Ε(Γ>ίΐθΊΐΐΗ-Μ3ΐ)-Τ-ΚΝ-8ΑίΙο-!ίΑ(Ιο-Υ0ννΤηΓ-ΝΤΡ
(Соединение 5)
Н-НОЕОТРТ80ЕЗК<ЗЕЕ-С(Биотин-Ма1)-ЕАУКЕР1Е№ЕКМ-8А(1о-8А(1о-УО\УЕОР-МН2
(Соединение 6)
Н-НОЕОТРТ8ЕЕЗКУЕЕЕЕАУКЕР1Е-К(гексадеканоил4зо01и)-ЕК-8Ас1о-8Ас1о-УО\УЕОРΝΉι (Соединение 7)
11-11СЕСТРТ8ЕР8К'[ТЕЕЕА\Т<ЕР1Е-К(гексадеканоил-18оС1и)-ЕК-8Ас1о-ООУС|\\'’ЕЕГΝΗι (Соединение 8).
К тому же, другой аспект настоящего изобретения относится к конъюгату пептидов, который имеет формулу:
- 6 028951
ΤΤ-ΤΤΟΡ<ιΤΓΤ8ΡΤ.3Τ<\Τ.ΓΡΡΑ\·ΓΚΤ.ΡΤΡπ.ΚΟΓ)ΥΕ,\νΤ.Γ)Γ-ΝΤΤ, (Соединение 9) Η-ΗΟΕΟΤΡΤ5ΕΕ3ΚΥΕΕΕΕΑνΚΕΡΙΕΡΕΚΟΟΕΑΥΟ\νΕΟΡ-ΝΗ2 (Соединение 10) Н-НОЕОТРТЗЕЬЗКУЬЕЕЕАУКЬНЕРЬК-ЗАао-ООУОХУЬОР-КНг (Соединение 11) Η-ΗΟΕϋΐΡΓ8ΕΕ8ΚΥΕΕΕΕΛνΚΕΡΙΕΡΕΚΟΥϋΆΈΟΓ-]\Η> (Соединение 12)
Н-НОЕОТРТЗЕЬЗКУЬЕЕЕАУКЬНЕРЬКАААУОХУЬОР-МНг (Соединение 13) Н-НОЕСТРТЗЕЬЗКУЬЕЕЕАУКЕНЕРЕКГССУОХУЬОР-ЯНз (Соединение 14)
ΤΤ-ΤΤΟΓ6ΤΓΤ8ΓΡ3Τ<ΥΡΕΕΓΑ νΚΤ.ΓΤΓΓΤ.Κ-8 Αο>ΥΟ\νΤ.ΌΡ-Ν1Τ, (Соединение 15) Н-НСЕСТГТЗЕЕЗКУЕЕЕЕАУКЕПЕГЕКАУСиЕОГ-КН. (Соединение 16) Н-НОЕОТРТЗЕЬЗКУЬЕЕЕАУКЕИЕРЬКАУОХУЬОР-КНг (Соединение 17) Н-НОЕ<УкРТ8ЕЕ8КУЕЕЕЕЛУ1ШР1ЕРкК.Х-8Л<1о-8Л6о-¥СЛ\ЕОГ-.ХН> (Соединение 18) Η-Η(τΕ(τΤΡΤ8ΕΕ8ΚΥΕΕΕΕΑ\Τ<ΕΡΙΕΡΕΚΕ-3Αύο-8Αύο-Υ(τ\νΕϋΓ-ΝΗ2 (Соединение 19) Η-ΗΟΕΟΤΡΤ5ΕΕ5ΚΥΕΕΕΕΑνΚΕΡΙΕΡΕΚΝΥΟ\¥ΤΟΡ-ΝΗ2 (Соединение 20) Η-ΗΟΕ<3ΤΡΤ5ΕΕ3ΚΥΕΕΕΕΑ\'ΚΕΡΙΕΡΕΚΟΥΓΛνΤΟΓ-ΝΗ> (Соединение 21) Η-ΗΟΕΟΤΡΤ8ΕΕ5ΚΥΕΕΕΕΑνΚΕΡΙΕ\νΕΚΝΥΟ\νίΟΡ-ΝΗ2 (Соединение 22) Η-ΗΟΕΟΤΡΤ8ΕΕ3ΚΥΕΕΕΕΑνΚΕΡΙΕ\νΕΚΟΥΟ\νίΟΡ-ΝΗ2 (Соединение 23) Η-ΗΟΕΟΤΡΤ8ΕΕ8ΚΥΕΕΕΕΑνΚΕΡΙΕΡΕΚΕΑΥΟ\νΕΟΡ-ΝΗ2 (Соединение 24),
Еще один аспект настоящего изобретения относится к конъюгату пептидов, который имеет формулу:
Н-НОЕОТРТЗЕЕ5КУЕЕЕЕАУКЕР1ЕРЕКК-К(гексадеканоил-15оО1и)-УО\УЕЦР-]УН2 (Соединение 25)
Н-НСЕСТРТ8ЕЕ5КУЕЕЕЕАУКЕР1ЕРЕКН-К(гексадеканоил-1зоС1и)-\УЕОР-ЧН2 (Соединение 26)
Н-НОЕОТРТЗЕЕЗКУЕЕ-К(гексадеканоил-15о01и)-ЕАУКЕР1ЕРЕКМУО\УЕОР-ЫН2 (Соединение 27)
Н-НСЕОТГТЗЕЕ8КУЕЕ-К(гексадеканоил-18оС1и)-ЕАУКЕР1ЕГЕКЬ1\УЕОР-МН2 (Соединение 28)
Н-НОЕОТРТЗЕЕЗКУЕЕЕЕАУКЕР1ЕРЕК-К(гексадеканоил-18о01и)-УО\УЕОР-ЧН2 (Соединение 29)
Н-НОЕОТРТ8ЕЕЗКУЕЕЕЕАУКЕР1ЕРЕК-К(гексадеканоил-18о01и)-\УЕОР-ЧН2 (Соединение 30)
Н-НОЕОТРТ8ЕЕЗК¥ЕЕ-К(гексадеканоил-130О1и)-ЕАУКЕР1ЕРЕКУО\УЕОР-ЧН2 (Соединение 31)
Т1-ТТС|ЕС|ТГТЗЕТ.8К,|Л.Е-К,1екса.чекано11л-18оС|1и)-Г.А\Щ1.РТЕГТК\¥Т.Г)Г-ХГТЕ
(Соединение 32)
Н-НОЕОГРГ8ЕЕ8КУЕЕЕЕЛ\Т<ЕР1Е-К|гексадека110ил-13оОк|)-ЕК-8Лс1о-УО\АЕОР-ЕН2 (Соединение 33)
Н-НСЕСТРТ8ЕЕ5КУЕЕЕЕАУКЕР1Е-К(гексадеканоил-15оС1и)-ЕКрр¥С\УЕОР-МН2 (Соединение 34)
Н-НОЕОГРГ8ЕЕ8К¥ЕЕЕЕЛ\'КЕР1Е-К(гексадс1(а11оил-13оОк|)-ЕК-Огп-Огп-¥С;\\ЕЕРΝΗ2 (Соединение 35)
Н-НСЕСТРТ8ЕЕЗК¥ЕЕЕЕАУКЕР1Е-К(гексадеканоил-18оС1и)-ЕКЫ¥С\УЕОР-КН2 (Соединение 36)
Н-НС1ЕОТРТ8ЕЕЗК’1ТЕЕЕА\'’В.ЕР1Е-К(гексадсваноил-18о(т1и)-ЕКО¥(т'А'ЕОР-к.Ш2 (Соединение 37).
Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к конъюгату пептидов, который имеет формулу:
- 7 028951
Η-ΗΟΕΟΤΡΤδΟΤ8ΚΟΕΕΕΕΑνΚΤΡΙΕε(ΡΕ05Κ)ΕΚΝ-8Αάο-8Αάο-ΥΟ\νΤΟΡ-ΝΗ2 (Соединение 38)
Η-ΗΟΕΟΤΡΤ8ΕΕ8ΚΥΕΕΕΕΑνΚΕΡΙΕ€(ΡΕΟ10Κ)ΕΚ-8Αάο-8Αάο-ΥΟ\νΕΟΡ-ΝΗ2 (Соединение 39)
Н-НОЕОТРТ8ЕЬ8КУЬЕЕЕАУКЬР1ЕС(РЕО20К)ЬК-8Аао-8Аао-¥О\\ЪОР-МН2 (Соединение 40)
Η-ΗΟΕΟΤΡΤ8ΕΕ8ΚΥΕΕΕΕΑνΚΕΡΙΕΟ(ΡΕΟ40Κ)ΕΚ-8Αάο-8Α£ΐο-ΥΟλνΕΟΡ-ΝΗ2 (Соединение 41)
Η-ΗΟΕΟΤΡΤ8ϋΙ.5ΚρΜΕΕΕΑνΚΕΡΙΕ\νΕΚΝΥΟ\νΤΟΓ-ΟΗ(Соединение 42) Η-ΗΟΕΟΤΡΤ8ΕΕ8ΚΥΙΈΕΕΑΥΚΕΡΙΕΓΕΚΝ-8Α4ο-8Αι1ο-ΥΟ\νΤΟΡ-ΝΗ, (Соединение 43)
или к его фармацевтически приемлемой соли или сольвату.
Аббревиатуры 8Айо, 8Аос, гексадеканоил, 15оС1и, Огп и Биотин-Ма1 обозначают следующие не существующие в природе аминокислотные группы, соответственно:
8Айо (или Ред3): -ИН-СНг-СНг-О-СНг-СНг-О-СНг-С^)- (производное 8-амино-3,6диоксаоктановой кислоты);
8Аос: -№Н-СН2-СН2-СН2-СН2-СН2-СН2-СН2-С(О)- (производное 8-аминооктановой кислоты);
Гексадеканоил: СН3-(СН2)!4-С(О)-; 15оС1и: -ИН-СН(СООН)-СН2-СН2-С(О)-; Огп: орнитин; и Биотин-Ма1: биотин-малеимид.
Относительно ориентации линкерной группы в конъюгате пептидов согласно настоящему изобретению, линкерная группа -8Айо-8Айо-. например, обозначает химическую группу
-МН-СН2-СН2-О-СН2-СН2-О-СН2-С(О)-Б1Н-СН2-СН2-О-СН2-СН2-О-СН2-С(О)-,
где группа -ΝΉ-.... на конце линкерной группы, о которой идет речь, ковалентно присоединена к
группе агониста ГНП-1 (например, производного эксендина-4) конъюгата пептидов, о котором идет речь, а группа ... .-С(О)- на правом конце линкерной группы, о которой идет речь, присоединена к группе производного гастрина конъюгата пептидов, о котором идет речь.
В отношении конъюгатов пептидов согласно настоящему изобретению, перечисленных выше, необходимо понимать, что группа пептидной последовательности эксендина-4(1-28) является производной последовательности эксендина-4 Не1ойетша кикресШш (аризонского ядозуба) или является ее аналогом.
Термин "аналог эксендина-4" в контексте настоящего изобретения обозначает пептидную последовательность, образованную в результате любых замен, укорачиваний, делеций, вставок или конъюгирования нативной последовательности эксендина-4. Они включают, но не ограничиваются ими, замены согласно настоящему изобретению.
Аналогично, группы [Ьеи4]гастрина-6 в конъюгатах получают синтетическим путем от гастрина человека.
Также аналогично группы [Ьеи15]гастрина-17 в конъюгатах получают синтетическим путем от гастрина человека.
Каждый из вышеупомянутых конъюгатов пептидов 1-41 отдельно, т.е. соединение 1 или соединение 2, или соединение 3... (и т.д., вплоть до соединения 41) или их фармацевтически приемлемая соль или сольват составляет дополнительный отдельный аспект настоящего изобретения.
В контексте настоящего изобретения за исключением случая, когда аминокислоты обозначены своими полными наименованиями (например, аланин, аргинин и т.д.), они обозначены общепринятыми трехбуквенными и/или однобуквенными аббревиатурами (например, А1а или А для аланина, Агд или К для аргинина и т.д.).
Термин "конъюгат пептидов" в контексте настоящего изобретения относится к молекуле, в которой первая пептидная группа представляет собой химическую группу, присоединенную (т. е. слитую или связанную) напрямую или посредством соединения (т. е. образования мостика или объединения посредством спейсера) ковалентной химической связью ко второй пептидной группе.
В конъюгатах пептидов согласно настоящему изобретению эксендин-4 или Ζ (Ζα или Ζβ) может быть по меньшей мере на 75% идентичным нативному эксендину-4 Н. кикрееШш, например, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичным.
В конъюгатах пептидов согласно настоящему изобретению гастрин или Υ (Υα или Υβ) может быть по меньшей мере на 70% идентичным нативному гастрину-17 и/или гастрину-6 человека, например, при возможности, по меньшей мере на 75%, 80%, 83%, 85%, 90%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичным.
Согласно некоторым вариантам реализации полипептиды согласно настоящему изобретению могут включать аминокислотную последовательность, представленную любым из соединений №: 1, 2, 3, 4, 5, 6,
- 8 028951
7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40 и 41 или ее функциональный фрагмент или вариант, который, по возможности, является по меньшей мере приблизительно на 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% или 99,5% идентичным одной или более из указанных последовательностей. Аминокислотные замены могут представлять собой, например, консервативные замены.
Термин "консервативная замена" в настоящей заявке обозначает, что одна или более аминокислот последовательности заменены другими биологически подобными остатками. Примеры включают замены на аминокислотные остатки с подобными свойствами, например, небольшие аминокислоты, кислые аминокислоты, полярные аминокислоты, основные аминокислоты, гидрофобные аминокислоты и ароматические аминокислоты. Например, согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения остатки Ме! заменены на норлейцин (Ме), который является биоизостерным соединением для Мс1. но который, в отличие от Ме!, не так легко окисляется. Другим примером консервативной замены на остаток, в норме не обнаруживаемый в эндогенных пептидах и белках млекопитающих, является консервативная замена Агд или Ьук на, например, орнитин, канаванин, аминоэтилцистеин или другую основную аминокислоту. Для дополнительной информации относительно фенотипически "молчащих" замен в пептидах и белках, см., например, публикацию Во\\зе е!.а1. 8с1еисе 247, 1306-1310, 1990. Консервативные замены аминокислот группируют по их физико-химическим свойствам на следующие группы: I: нейтральные, гидрофильные, II: кислоты и амиды, III: основные, IV: гидрофобные, V: ароматические крупные аминокислоты.
Согласно некоторым вариантам реализации полипептид согласно настоящему изобретению может включать функциональные фрагменты или варианты, которые содержат не более 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4,
3, 2 или 1 аминокислотных замен по сравнению с одной или более из перечисленных последовательностей. Полипептид согласно настоящему изобретению может дополнительно включать сигнальную последовательность или не включать ее.
Согласно некоторым вариантам реализации один или более цистеинов в полипептидах согласно настоящему изобретению могут быть замещены другими остатками, такими как серии.
Согласно некоторым вариантам реализации полипептиды согласно настоящему изобретению по меньшей мере на 99% идентичны аминокислотной последовательности любого из Соединений №: 1, 2, 3,
4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40 и 41.
Термин "фармацевтически приемлемая соль" в контексте настоящего изобретения (фармацевтически приемлемая соль конъюгата пептидов согласно настоящему изобретению) призван обозначить соль, которая не является опасной для пациента или субъекта, которому вводят соль, о которой идет речь. Она может соответственно представлять собой соль, которую выбирают, например, из солей присоединения кислоты и основных солей. Примеры солей присоединения кислоты включают хлориды, цитраты и ацетаты. Примеры основных солей включают соли, катион которых выбирают из катионов щелочных металлов, таких как ионы натрия и калия, катионов щелочноземельных металлов, таких как ионы кальция и магния, а также замещенных ионов аммония, таких как ионы типа Ν(Κ1)(Κ2)(Κ3)(Κ4)+, где К1, К2, К3 и К4 обычно независимо обозначают водород, возможно замещенный С1-6-алкил или возможно замещенный С2-6-алкенил. Примеры соответствующих С1-6-алкильных групп включают группы метил, этил, 1-пропил и 2-пропил. Примеры соответствующих С2-6-алкенильных групп включают винил, 1-пропенил и 2пропенил. Другие примеры фармацевтически приемлемых солей описаны в справочниках "КетшдЮи'з РЬаттасеийса1 Заеисек", 171П еййюи, АНопко К. Оеииато (Ей.), Магк РиЪИзЫид Сотрапу, ЕазЮп, РА, И8А, 1985 (и в более поздних изданиях) и "Еисус1орей1а о! Ркагтасеийса1 Тескио1оду", 3гй еййюи, 1ате8 ШагЪпск (Ей.), Шотта НеаШсате И8А (Лс.), ΝΥ, И8А, 2007 и в публикации 1. Ркагт. §с! 66: 2 (1977).
Термин "сольват" в контексте настоящего изобретения относится к комплексу с определенной стехиометрией, образованному между растворенным веществом (в данном случае, конъюгатом пептидов согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой солью) и растворителем. Растворителем при этом может выступать, например, вода, этанол или другое фармацевтически приемлемое, обычно низкомолекулярное органическое вещество, такое как, но не ограничиваясь ими, уксусная кислота или молочная кислота. Когда растворитель, о котором идет речь, представляет собой воду, такой сольват обычно обозначают как гидрат.
- 9 028951
Некоторые варианты реализации настоящего изобретения относятся к конъюгату пептидов согласно настоящему изобретению или к его фармацевтически приемлемой соли для применения в качестве лекарственного препарата или для производства или приготовления лекарственного препарата, или к применению конъюгата пептидов или его фармацевтически приемлемых солей в способе лечения или предотвращения ряда заболеваний или состояний, таких как, например, диабет 1 типа, диабет 2 типа, преддиабет, синдром резистентности к инсулину, нарушенной толерантности к глюкозе (НТГ), состояния заболевания, связанного с увеличенной концентрацией глюкозы в крови, гипергликемия, гипертензия, атерогенная дислипидемия, артериосклероз (например, атеросклероз), заболевание макрососудов, ишемическое заболевание сердца, заболевание периферических артерий, инсульт, заболевание микрососудов, заболевание желудка, метаболический синдром, рак (например, рак толстой кишки), воспалительное заболевание кишечника (ВЗК), синдром раздраженного кишечника (СРК), диабетическая нейропатия, диабетическая ретинопатия, диабетическая нефропатия и почечная недостаточность.
Дополнительные заболевания или нарушения, к которым имеет отношениие настоящее изоретение, включают ожирение, морбидное ожирение, воспаление, связанное с ожирением, заболевание желчного пузыря, связанное с ожирением, и синдром апноэ во сне, вызванный ожирением.
Согласно некоторым вариантам реализации лекарственный препарат согласно настоящему изобретению представляет собой лекарственный препарат для применения для лечения субъекта, нуждающегося в этом.
Согласно другим вариантам реализации лекарственный препарат согласно настоящему изобретению представляет собой лекарственный препарат для индуцирования у субъекта, нуждающегося в этом, неогенеза островков поджелудочной железы (например, для стимуляции образования новых β-клеток в островках поджелудочной железы).
Согласно другим вариантам реализации лекарственный препарат согласно настоящему изобретению представляет собой лекарственный препарат для индуцирования у субъекта, нуждающегося в этом, выживаемости β-клеток в островках поджелудочной железы (например, для предотвращения утраты βклеток в островках поджелудочной железы).
Согласно другим вариантам реализации лекарственный препарат согласно настоящему изобретению представляет собой лекарственный препарат для индуцирования у субъекта, нуждающегося в этом, пролиферации β-клеток в островках поджелудочной железы (например, стимуляции пролиферации существующих β-клеток в островках поджелудочной железы).
Согласно другим вариантам реализации лекарственный препарат согласно настоящему изобретению представляет собой лекарственный препарат для индуцирования у субъекта, нуждающегося в этом, любой комбинации перечисленных выше процессов, т.е. неогенеза островков поджелудочной железы, выживаемости β-клеток в островках поджелудочной железы и/или пролиферации β-клеток в островках поджелудочной железы.
Применение конъюгата пептидов или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата согласно варианту реализации пункта 39, где лекарственный препарат применяют для улучшения уровня выживаемости β-клеток островков поджелудочной железы у субъекта, нуждающегося в этом.
Согласно еще одному варианту реализации настоящего изобретения лекарственный препарат согласно настоящему изобретению представляет собой лекарственный препарат для предотвращения у субъекта, нуждающегося в этом, апаптоза и/или некроза β-клеток в островках поджелудочной железы (например, для предотвращения утраты β-клеток в островках поджелудочной железы).
Согласно другим вариантам реализации лекарственный препарат согласно настоящему изобретению представляет собой лекарственный препарат для применения для уменьшения у субъекта, нуждающегося в этом, концентрации в крови гемоглобина ЫАс (гликозилированный гемоглобин; НЬА1с).
Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к применению конъюгата пептидов согласно настоящему изобретению в производстве или приготовлении лекарственного препарата для лечения одного или более состояний, раскрытых в настоящей заявке, у субъекта, нуждающегося в этом.
Конъюгат пептидов согласно настоящему изобретению дополнительно можно применять в производстве лекарственного препарата для индуцирования неогенеза островков поджелудочной
железы у субъекта, нуждающегося в этом;
производстве лекарственного препарата для предотвращения апоптоза β-клеток в островках поджелудочной железы у субъекта, нуждающегося в этом;
производстве лекарственного препарата для применения с целью индуцирования выживаемости βклеток в островках поджелудочной железы у субъекта, нуждающегося в этом;
производстве лекарственного препарата для индуцирования пролиферации β-клеток поджелудочной железы у субъекта, нуждающегося в этом; производстве лекарственного препарата для уменьшения концентрации гемоглобина Ь1Ас (гликозилированный гемоглобин; НЬА1с) в крови у субъекта, нуждающегося в этом;
и/или в любых комбинациях указанных способах применения.
Помимо указанных аспектов, дополнительные аспекты настоящего изобретения соответствуют спо- 10 028951
собам лечения состояний, заболеваний или нарушений, которые выбирают из тех, которые раскрыты в настоящей заявке. Таким образом, один такой дополнительный аспект настоящего изобретения относится к способу лечения у субъекта, нуждающегося в этом, одного или более заболеваний, нарушений или состояний, упомянутых в настоящей заявке, к указанному способу, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества конъюгата пептидов согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.
Дополнительные варианты реализации настоящего изобретения относятся к способам индуцирования неогенеза островков поджелудочной железы у субъекта, нуждающегося в этом, к способу, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества конъюгата пептидов согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.
Дополнительные варианты реализации настоящего изобретения относятся к способам стимулирования выживаемости β-клеток в островках поджелудочной железы у субъекта, нуждающегося в этом, к способу, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества конъюгата пептидов согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.
Дополнительные варианты реализации настоящего изобретения относятся к способу уменьшения или предотвращения апоптоза и/или некроза β-клеток в островках поджелудочной железы у субъекта, нуждающегося в этом, к способу, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества конъюгата пептидов согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.
Дополнительные варианты реализации настоящего изобретения относятся к способу индуцирования пролиферации β-клеток в островках поджелудочной железы у субъекта, нуждающегося в этом, к способу, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества конъюгата пептидов согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.
Дополнительные варианты реализации настоящего изобретения относятся к способам индуцирования любой комбинации перечисленных выше процессов, т.е. неогенеза островков поджелудочной железы, выживаемости β-клеток в островках поджелудочной железы и/или пролиферации β-клеток в островках поджелудочной железы у субъекта, нуждающегося в этом, к способу, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества конъюгата пептидов согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.
Другие варианты реализации настоящего изобретения относятся к способам уменьшения концентрации гемоглобина ЫАс (гликозилированный гемоглобин; НЬЛ1с) в крови у субъекта, нуждающегося в этом, к способу, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества конъюгата пептидов согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.
Другие дополнительные варианты реализации настоящего изобретения относятся к следующему: способ лечения у субъекта, нуждающегося в этом, состояния заболевания, связанного с увеличением концентрации глюкозы в крови;
способ для уменьшения концентрации глюкозы в крови у субъекта, нуждающегося в этом; способ стимулирования секреции инсулина у субъекта, нуждающегося в этом; способ для регулирования опорожнения желудка у субъекта, нуждающегося в этом; способ для уменьшения концентрации липидов в крови у субъекта, нуждающегося в этом; способ уменьшения кровяного давления у субъекта, нуждающегося в этом; способ уменьшения массы тела у субъекта, нуждающегося в этом.
В каждом из последних способов согласно настоящему изобретению такой способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества конъюгата пептидов согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.
Термин "терапевтически эффективное количество", применяемый в контексте вышеописанных способов лечения или другого терапевтического воздействия согласно настоящему изобретению, относится к количеству, которое является достаточным для лечения, улучшения, облегчения или частичной приостановки клинических проявлений конкретного заболевания, нарушения или состояния, которое является объектом лечения или другого терапевтического воздействия, о котором идет речь, что устанавливают, например, с применением утвержденных клинических критериев оценки или других биомаркеров (утвержденных или определенных экспериментально). Терапевтически подходящее количество может быть определено эмпирически специалистом в данной области техники на основании симптомов, которые подвергают лечению или предотвращению, и субъекта, которому терапевтически подходящее количество будет вводиться. Например, специалист в данной области техники может измерять один или несколько клинически существенных симптомов биологической активности, описанных в настоящей заявке, например, концентрацию глюкозы в крови, секрецию инсулина и концентрацию липидов в крови. Специалист в данной области техники может определить клинически значимое количество с помощью измерений ίη νίΐτο или ίη νίνο. В качестве примера можно привести другие показатели, которые включают увеличение массы тела, уменьшение массы тела и изменения кровяного давление.
Количество, достаточное для того, чтобы оказать любое или все перечисленные действия, опреде- 11 028951
ляют как терапевтически эффективное количество. Вводимое количество и способ введения можно варьировать для достижения оптимальной эффективности. Количество, достаточное для достижения данной цели, будет зависеть, среди прочего, от тяжести заболевания, нарушения или состояния, которое является объектом конкретного лечения или другого терапевтического воздействия, от массы тела и общего состояния субъекта, о котором идет речь, от рациона, от возможного сопутствующего лечения и от других факторов, хорошо известных специалисту в области медицины. При определении соответствующего размера доз и режима дозирования, наиболее подходящих для введения человеку конъюгата пептидов согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, можно руководствоваться результатами, полученными в соответствии с настоящмим изобретением, которые можно подтвердить в рамках клинических исследований с надлежащим дизайном. Эффективные дозы и протокол лечения могут быть определены обычными средствами, начиная с введения низких доз лабораторным животным с последующим увеличением доз, наблюдением за эффектами и систематическим варьированием режима дозирования. При определении оптимальной дозы для введения субъекту клиницистом могут быть приняты во внимание многочисленные факторы. Такие факторы хорошо известны специалисту в данной области техники.
Термины "лечение" и его грамматические варианты (например, "вылеченный", "подвергаемый лечению", "лечить") используются в настоящей заявке для обозначения подхода для получения преимущественных или желаемых клинических результатов. Для целей настоящего изобретения преимущественные или желаемые клинические результаты включают, но не ограничиваются ими, облегчение симптоматики, уменьшение степени заболевания, стабилизацию (т.е. отсутствие ухудшения) состояния заболевания, отсрочку или замедление прогресса заболевания, облегчение или ослабление состояния заболевания и ремиссию (частичную или полную), обнаруживаемую или необнаруживаемую. "Лечение" может также обозначать продление выживаемости относительно ожидаемого времени жизни при отсутствии лечения. Субъект (например, человек), нуждающийся в лечении, может таким образом представлять собой субъекта, уже пораженного заболеванием или нарушением, о котором идет речь. Термин "лечение" включает ингибирование или уменьшение увеличения тяжести патологического состояния или его симптомов (например, увеличения массы тела или гипергликемии) относительно отсутствия лечения и не обязательно направлен на полное прекращение соответствующего заболевания, нарушения или состояния.
Термины "предотвращение" и его грамматические варианты (например, "предотвращенный", "предотвращая", "предотвратить"), применяемые в настоящей заявке, относятся к подходу для предотвращения развития или изменения патологии состояния, заболевания или нарушения. Соответственно, "предотвращение" может относиться к профилактическим или превентивным мерам. Для целей настоящего изобретения благоприятные или желаемые клинические результаты включают, но не ограничиваются ими, предотвращение или замедление симптомов прогрессирования или развития заболевания, как обнаруживаемых, так и необнаруживаемых. Субъект (например, человек), нуждающийся в предотвращении, может, таким образом, представлять собой субъекта, еще не пораженного заболеванием или нарушением, о котором идет речь. Термин "предотвращение", таким образом, включает замедление манифестации заболевания относительно отсутствия лечения и не обязательно направлен на постоянное предотвращение соответствующего заболевания, нарушения или состояния.
Термин "агонист" в контексте настоящего изобретения относится к веществу (лиганду), которое активирует тот тип рецептора, о котором идет речь.
Термин "агонист рецептора ГПП-1" в контексте настоящего изобретения (иногда называемый "агонист ГПП-1") относится к веществу (лиганду), которое активирует рецептор ГПП-1, такой как рецептор ГПП-1 человека. Вещества, которые активируют рецептор ГПП-1 человека, включают нативные пептидные гормоны ГПП-1 (7-37), амид ГПП-1 (7-36), оксинтомодулин, эксендин-3, эксендин-4, глюкагон, желудочный ингибиторный полипептид (ЖИП) и функциональные аналоги пептидов и их производные.
Термин "антагонист" в контексте настоящего изобретения относится к веществу (лиганду), которое блокирует, нейтрализует или препятствует действию другого вещества (лиганда), которое функционирует как агонист по отношению к рецептору того типа, о котором идет речь.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения субъект, нуждающийся в конкретном лечении или другом терапевтическом воздействии, о котором идет речь в связи с различными аспектами настоящего изобретения, описанными выше, представляет собой млекопитающее. Согласно другим вариантам реализации млекопитающее представляет собой человека.
Согласно дополнительным вариантам реализации настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, которые содержат конъюгат пептидов согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, вместе с фармацевтически приемлемым носителем, вспомогательным веществом или наполнителем.
Синтез конъюгатов пептидов
Конъюгаты пептидов согласно настоящему изобретению могут быть получены с применением стандартных способов синтеза, с использованием рекомбинантных систем экспрессии или любым другим подходящим способом. Таким образом, конъюгаты можно синтезировать множеством путей, вклю- 12 028951
чая, например, способы, включающие:
(a) синтез конъюгата пептидов стандартными методиками твердофазного или жидкофазного синтеза, пошагового синтеза или с помощью сборки фрагментов, с последующим изолированием и очисткой конечного продукта - конъюгата пептидов;
(b) экспрессию конструкции нуклеиновой кислоты, кодирующей конъюгат пептидов, в клетке хозяина и выделение продукта экспрессии из культуры клеток хозяина; или
(c) применение бесклеточной экспрессии конструкции нуклеиновой кислоты, кодирующей конъюгат пептидов, ίη νίΐτο и выделение продукта экспрессии;
или путем объединения способов (а), (Ь) или (с) для получения фрагментов конъюгата пептидов, последующего связывания фрагментов для получения конъюгата пептидов и выделения конъюгата пептидов.
Предпочтительно, конъюгаты согласно настоящему изобретению синтезируют с помощью твердофазного или жидкофазного пептидного синтеза. Более подробную информацию о методиках синтеза можно найти в международной заявке на патент ΥΘ 98/11125 или, среди прочего, в публикации Ие1Й8, О.В. е! а1, "Рттс1р1е8 и Ртасйсе οί 8ойй-Рйа8е РерНйе 8уп1Ье815"; в: 8уп1йейс Рерййек, Огедогу А. Огап! (ей.), ОхГогй Ипщегейу Рте88 (2пй еййюп, 2002) и в примерах синтеза, раскрытых в настоящей заявке.
Одна или более боковых цепей аминокислот в соединении согласно настоящему изобретению могут быть дополнительно конъюгированными с липофильным заместителем. Липофильный заместитель может быть ковалентно присоединен к атому боковой цепи аминокислоты или в качестве альтернативы может быть конъюгированным с боковой цепью аминокислоты посредством спейсера. Аминокислота может представлять собой часть пептида Ζ или часть пептида Ь.
Без какого-либо теоретического обоснования считают, что липофильный заместитель связывает альбумин в кровотоке, тем самым защищая соединения согласно настоящему изобретению от ферментативной деградации, что может увеличить период полужизни соединений. Спейсер, при наличии, может обеспечить пространственное разделение соединения и липофильного заместителя.
Липофильный заместитель можно присоединять к боковой цепи аминокислоты или к спейсеру посредством сложного эфира, сложного эфира сульфонила, сложного тиоэфира, амида или сульфонамида. Соответственно будет очевидным, что в некоторых вариантах реализации липофильный заместитель включает ацильную группу, сульфонильную группу, атом Ν, атом О или атом 8, которые образуют часть сложного эфира, сложного эфира сульфонила, сложного тиоэфира, амида или сульфонамида.
Предпочтительно ацильная группа в липофильном заместителе образует часть амида или сложного эфира с боковой цепью аминокислоты или спейсером.
Липофильный заместитель может включать углеводородную цепь, содержащую от 4 до 30 атомов С, например, по меньшей мере 8 или 12 атомов С, предпочтительно 24 атома С или меньше или 20 атомов С или меньше. Углеводородная цепь может быть линейной или разветвленной и может быть насыщенной или ненасыщенной. Будет очевидным, что углеводородная цепь предпочтительно замещена группой, которая образует часть присоединения к боковой цепи аминокислоты или спейсеру, например, ацильной группой, сульфонильной группой, атомом Ν, атомом О или атомом 8. Наиболее предпочтительно углеводородная цепь замещена ацильной группой и, соответственно, углеводородная цепь может представлять собой часть алканоильной группы, например, пальмитоил, капроил, лауроил, миристоил или стеароил.
Соответственно, липофильный заместитель может иметь формулу, приведенную ниже:
А'
А может представлять собой, например, ацильную группу, сульфонильную группу, ΝΗ, Ν-алкил, атом О или атом 8, предпочтительно ацил, η представляет собой число от 3 до 29. Согласно некоторым вариантам реализации η представляет собой минимум 7 или по меньшей мере 11. Согласно другим вариантам реализации п представляет собой 23 или менее. Согласно некоторым вариантам реализации п представляет собой 19 или менее.
Углеводородная цепь может быть дополнительно замещенной. Например, она может быть дополнительно замещенной более чем тремя заместителями, которые выбирают из ΝΗ2, ОН и СООН. Если углеводородная цепь дополнительно замещена, предпочтительно она дополнительно замещена только одним заместителем. В качестве альтернативы или дополнительно углеводородная цепь может включать циклоалкан или гетероциклоалкан, например, показанный ниже:
Согласно некоторым вариантам реализации циклоалкан или гетероциклоалкан представляет собой шестичленное кольцо. Согласно некоторым предпочтительным вариантам реализации он представляет собой пиперидин.
В качестве альтернативы основа липофильного заместителя может быть представлена скелетом циклопентанпергидрофенонтрена, который может быть частично или полностью ненасыщенным или
- 13 028951
насыщенным. Каждый атом углерода в скелете может быть замещен Ме или ОН. Например, липофильный заместитель может представлять собой холил, дезоксихолил или литохолил.
Как отмечалось выше, липофильный заместитель может быть конъюгирован с боковой цепью аминокислоты посредством спейсера. При наличии, спейсер присоединяют к липофильному заместителю и к боковой цепи аминокислоты. Спейсер может быть присоединен к липофильному заместителю и к боковой цепи аминокислоты независимо посредством сложного эфира, сложного эфира сульфонила, сложного тиоэфира, амида или сульфонамида. Соответственно, он может включать две группы, которые независимо выбраны из ацила, сульфонила, атома Ν, атома О или атома δ. Спейсер может иметь формулу
где В и Э, каждый независимо, выбраны из ацила, сульфонила, ΝΗ, Ν-алкила, атома О или атома δ, предпочтительно из ацила и ΝΗ. η предпочтительно представляет собой число от 1 до 10, например, от 1 до 5. Спейсер может в некоторых случаях дополнительно быть замещенным одним или более заместителями, которые выбирают из группы, включающей Сц6 алкил, Сц6 алкиламин, С3-6 алкилгидрокси и С3-6 алкилкарбокси.
В качестве альтернативы спейсер может содержать две или более повторяющихся единиц согласно формуле выше. В, Э и η выбирают независимо для каждой повторяющейся единицы. Смежные повторяющиеся единицы могут ковалентно присоединяться друг к другу посредством их соответствующих групп В и Э. Например, группы В и Э смежных повторяющихся единиц могут совместно образовывать сложный эфир, сложный эфир сульфонила, сложный тиоэфир, амид или сульфонамид. Свободные единицы В и Э на каждом конце спейсера присоединены к боковой цепи аминокислоты и к липофильному заместителю, как описано выше.
Предпочтительно спейсер содержит пять или менее, четыре или менее или три или менее повторяющихся единиц. Наиболее предпочтительно спейсер содержит две повторяющиеся единицы или представляет собой одну единицу.
Спейсер (или один или более повторяющихся единиц спейсера, если он содержит повторяющиеся единицы) может представлять собой, например, природную аминокислоту или аминокислоту, не встречающуюся в природе. Будет очевидным, что для аминокислот, имеющих функционализированные боковые цепи, В и/или Э могут представлять собой группу в пределах боковой цепи аминокислоты. Спейсер может представлять собой любую природную аминокислоту или аминокислоту, не встречающуюся в природе. Например, спейсер (или одна или более повторяющихся единиц спейсера, если он содержит повторяющиеся единицы) может представлять собой О1у, Рго, А1а, Уа1, Беи, 11е, Ме1, Суз, Рйе, Туг, Тгр, Ηΐ8, Буз, Агд, О1п, Азп, а-О1и, γ-Ο1ιι, Азр, δе^ Тйг, ОаЬа, А1Ь, ЬА1а, 5-аминопентаноил, 6-аминогексаноил, 7-аминогептаноил, 8-аминооктаноил, 9-аминононаноил или 10-аминодеканоил.
Например, спейсер может представлять собой единичную аминокислоту, которую выбирают из γО1и, ОаЬа, Ь-А1а и а-О1у.
Липофильный заместитель может быть конъюгированным с любой боковой цепью аминокислоты в соединениях согласно настоящему изобретению. Боковая цепь аминокислоты предпочтительно включает карбоксильную, гидроксильную, тиольную, амидную или аминогруппу для образования сложного эфира, сложного эфира сульфонила, сложного тиоэфира, амида или сульфонамида со спейсером или липофильным заместителем. Например, липофильный заместитель может быть конъюгированным с Азп, Азр, О1и, О1п, №з, Буз, Агд, δе^, Тйг, Туг, Тгр, Суз или ЭЬи, Орг или От. Предпочтительно липофильный заместитель является конъюгированным с Буз или Суз. Однако любая аминокислота, показанная как Буз в формуле, приведенной в настоящей заявке, может быть заменена на ОЬи, Орг или От при добавлении липофильного заместителя.
Пример липофильного заместителя и спейсера представлен формулой ниже:
В данном случае Буз в соединении согласно настоящему изобретению (например, в X) ковалентно присоединен к γ-Ο1υ (спейсер) посредством амидной группы. Пальмитоил ковалентно присоединен к спейсеру γ-Ο1υ посредством амидной группы.
В качестве альтернативы или дополнительно одна или более боковых цепей аминокислоты в соединении согласно настоящему изобретению могут быть дополнительно конъюгированными с биотинилированным заместителем. Биотинилированный заместитель может быть ковалентно связанным с атомом боковой цепи аминокислоты или в качестве альтернативы может быть конъюгированным с боковой цепью аминокислоты посредством спейсера. Аминокислота может представлять собой часть пептида Ζ или
- 14 028951
часть пептида Ь.
Без какого-либо теоретического обоснования считают, что биотинилированный заместитель связывает альбумин в кровотоке, тем самым защищая соединения согласно настоящему изобретению от ферментативной деградации, что может увеличить период полужизни соединений. Спейсер, при наличии, используется для обеспечения пространственного разделения соединения и биотинилированного заместителя.
Биотинилированный заместитель можно присоединить к боковой цепи аминокислоты или к спейсеру посредством сложного эфира малеимида, сложного эфира сульфонила, сложного тиоэфира, амида или сульфонамида. Соответственно будет очевидным, что предпочтительно биотинилированный заместитель включает малеимидную группу, ацильную группу, сульфонильную группу, атом Ν, атом О или атом 8, которые образуют часть сложного эфира, сложного эфира сульфонила, сложного тиоэфира, амида или сульфонамида.
Согласно предпочтительным вариантам реализации группу биотина сначала присоединяют к спейсеру и только после этого спейсер присоединяют к пептиду. Множество конъюгатов биотин-спейсер, функциональные свойства спейсера в которых позволяют присоединять пептиды к боковым цепям лизинов или цистеинов, являются коммерчески доступными. Согласно более предпочтительным вариантам реализации конъюгат биотин-спейсер содержит малеимидную функциональную группу, которая может селективно присоединяться к сульфгидрильной группе на боковой цепи цистеина.
Примеры биотинилированных заместителей, которые можно использовать в соответствии с настоящмим изобретением, включают:
а) Биотин известен как витамин Н или кофермент К и представляет собой водорастворимый витамин группы В (витамин В7). Было показано, что он увеличивает доступность некоторых лекарственных препаратов при пероральном приёме.
В качестве альтернативы или дополнительно одна или более боковых цепей аминокислот в соединении согласно настоящему изобретению могут быть конъюгированными с полимерной группой, например, с целью увеличения растворимости и/или периода полужизни ίη νΐνο (например, в крови) и/или биодоступности. Также известно, что такая модификация уменьшает клиренс (например, почечный клиренс) терапевтических белков и пептидов.
Полимерная группа является предпочтительно водорастворимой (амфифильной или гидрофильной), нетоксичной и фармацевтически инертной. Подходящие полимерные группы включают полиэтиленгликоль (ПЭГ), гомо- или сополимеры ПЭГ, монометил-замещенный полимер ПЭГ (мПЭГ) или полноксиэтилен глицерин (ПОГ). Подробности см., например, в публикациях ίηΐ. ί. Нета!о1оду 68:1 (1998); Вюсопщда!е Сйеш. 6:150 (1995); и Сгй. Кет. Тйегар. Бгид Сатег 8ук. 9:249 (1992).
Другие подходящие полимерные группы включают полиаминокислоты, такие как полилизин, полиаспарагиновая кислота и полиглутаминовая кислота (см., например, публикации СошЬо1/. е! а1. (1995), Вюсопщда!е Сйет., то1. 6: 332-351; Нибес/, е! а1. (1992), Вюсопщда!е Сйет., то1. 3, 49-57; Ткикаба, е! а1. (1984), ί. Ν!1. Сапсег ίηκ!., то1 73,: 721-729; и Рга!ек1, е! а1. (1985), Вг. ί. Сапсег, то1. 52: 841-848).
Полимерная группа может быть неразветвленной или разветвленной. Ее молекулярная масса может составлять 500-40000 Да, например 500-10000 Да, 1000-5000 Да, 10000-20000 Да или 20000-40000 Да.
Соединение согласно настоящему изобретению может включать две и более таких групп, и в таком случае общая молекулярная масса всех этих групп будет обычно находиться в диапазоне, приведенном выше.
Полимерная группа может быть присоединенной (с помощью ковалентной связи) к амино, карбоксильной или тиольной группе боковой цепи аминокислоты. Предпочтительные примеры представляют собой тиольные группы остатков Сук и эпсилон-аминогруппу остатков Ьук; также можно использовать карбоксильные группы остатков Акр и С1и.
Специалист в данной области техники хорошо осведомлен о подходящих методиках, которые можно применять для проведения реакции связывания. Например, группа ПЭГ, несущая метоксигруппу, может быть присоединена к тиольной группе Сук посредством малеимидной связи с применением реактивов, коммерчески доступных от компании №к!аг Тйегареийск АЬ. См. также международную заявку на патент νθ 2008/101017 и ссылки, цитировавшиеся выше, для получения подробной информации о подходящих химических приемах.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения ПЭГ с функциональной малеимидной группой присоединен к боковой цепи сульфгидрильной группы цистеина.
- 15 028951
Эффективность
Конъюгат пептидов согласно настоящему изобретению обладает одной или более биологическими активностями эксендина-4 и одной или более биологическими активностями гастрина.
Пептид Ζ (Ζα, Ζβ) при отсутствии гастрин-подобного компонента У (Уа, Уь) и какого-либо компонента-линкера Ь (Ьа, Ьь) обладает одной или более биологическими активностями эксендина-4. Иными словами, соединение К1 -Ζ-К2 будет обладать указанными одной или более биологическими активностями эксендина-4.
Пептид У (Уа, Уь) при отсутствии эксендин-4- подобного компонента Ζ (Ζα, Ζβ) и какого-либо компонента-линкера Ь (Ьа, Ьь) обладает одной или более биологическими активностями гастрина. Иными словами, соединение К1-У-К2 будет обладать указанными одной или более биологическими активностями гастрина.
Биологическая активность эксендина-4 может представлять собой активность агониста по отношению к рецептору ГПП-1. Биологическая активность гастрина может представлять собой активность агониста по отношению к рецептору ХЦК-В.
Предпочтительно активность агониста направлена на рецепторы ГПП-1 человека и/или ХЦК-В человека. "Активность агониста" может включать способность вызывать синтез внутриклеточного циклического АМФ (цАМФ) или фосфорилирование рЕКК после связывания с соответствующим рецептором.
Таким образом, связывание соответствующих соединений с рецепторами ГПП-1 или ХЦК-В можно использовать в качестве признака активности агониста, но в целом предпочтительно применять биологические способы анализа, которые оценивают внутриклеточную передачу сигналов, вызванную связыванием соединения с соответствующим рецептором. Например, активация рецептора ГПП-1 подходящим агонистом будет стимулировать образование внутриклеточного цАМФ. Аналогично активация рецептора ХЦК-В соответствующим агонистом будет стимулировать фосфорилирование клеточного рЕКК. Таким образом, образование цАМФ или фосфорилирование ЕКК (рЕКК) в подходящих клетках, экспрессирующих один из этих двух рецепторов, можно применять для мониторинга активности соответствующего рецептора. Подходящие пары типов клеток, каждый из которых экспрессирует один рецептор, но не экспрессирует второй, можно, следовательно, применять для определения активности агониста по отношению к обоим типам рецепторов.
Специалист в данной области техники хорошо осведомлен о подходящих форматах анализа; кроме того, ниже представлены соответствующие Примеры. В анализах можно использовать рецептор ГПП-1 человека (ΝΡ002053.3 01:166795283) и/или рецептор ХЦК-В человека (ΝΜ_176875.3 ОБ356995851). В тех случаях, когда даны ссылки на последовательность белков-предшественников, разумеется, необходимо понимать, что проводить анализ необходимо с применением зрелого белка без сигнальной последовательности.
Согласно предпочтительному варианту реализации полипептид согласно настоящему изобретению может иметь значение ЕС50 для рецептора ГПП-1 менее 0,1 нМ.
Согласно некоторым вариантам реализации полипептид согласно настоящему изобретению может иметь значение ЕС50 для рецептора ХЦК-В менее 100 нМ.
Согласно предпочтительному варианту реализации полипептид согласно настоящему изобретению может иметь значение ЕС50 для рецептора ХЦК-В менее 50 нМ
Значения ЕС50 можно измерять, как описано в примере 4.
Варианты терапевтического применения
Варианты применения конъюгатов пептидов согласно настоящему изобретению также включают в себя варианты применения их фармацевтически приемлемых солей или сольватов.
Применение конъюгатов пептидов согласно настоящему изобретению может предложить привлекательные варианты лечения метаболических заболеваний и нарушений, включая диабет, в частности, диабет 1 типа и/или 2 типа, и ожирение.
Диабет включает группу метаболических заболеваний, которые характеризуются гипергликемией, являющейся следствием нарушений секреции инсулина, функции инсулина или и того, и другого. Острые признаки диабета включают чрезмерное образование мочи, приводящее к компенсаторной жажде и увеличенному потреблению жидкости, расфокуссированние зрения, беспричинное уменьшение массы тела, сонливость и изменения в энергетическом метаболизме. Хроническая гипергликемия при диабете связана с макро- и микрососудистыми осложнениями, которые могут привести к долговременному повреждению, дисфункции, и - в некоторых случаях - в конечном итоге к нарушениям различных органов, в особенности глаз (в частности, в форме диабетической ретинопатии), почек (в форме диабетической нефропатии), нервов (в форме диабетической нейропатии), сердца и кровеносных сосудов. Диабет на основании патогенетических характеристик можно разделить на три класса, а именно на диабет 1 типа, диабет 2 типа и гестационный диабет.
На диабет 1 типа приходится 5-10% всех случаев заболевания диабетом; его вызывает аутоиммунное разрушение инсулин-секретирующих β-клеток поджелудочной железы.
На диабет 2 типа приходится 90-95% всех случаев заболевания диабетом, и он является следствием сложной совокупности метаболических нарушений. Диабет 2 типа является следствием того, что эндо- 16 028951
генная секреция инсулина и/или чувствительность к инсулину всего тела становятся недостаточными для поддержания концентрации глюкозы в крови на уровне ниже диагностического порога.
Гестационный диабет относится к любой степени нарушенной толерантности к глюкозе, обнаруженной во время беременности.
Также выделяют состояние, известное как преддиабет. Оно включает, например, увеличение концентрации глюкозы натощак и нарушение толерантности к глюкозе, и относится в общем виде к тем состояниям, которые возникают, когда концентрация глюкозы в крови увеличивается, но при этом находится ниже того уровня, который установлен для клинического диагностирования диабета.
Большинство пациентов с диабетом 2 типа и преддиабетом подвержены высокому риску заболеваемости и смертности в результате распространенных метаболических факторов риска, включая абдоминальное ожирение (чрезмерное образование жировой ткани вокруг внутренних органов брюшной полости), атерогенную дислипидемию (нарушения содержания жира в крови, включая высокую концентрацию триглицеридов, низкую концентрацию холестерина ЛПВП и/или высокую концентрацию холестерина ЛПНП, из которого образуются бляшки на стенках артерий), увеличенное кровяное давление (гипертензию), протромботическое состояние (например, высокую концентрацию в крови ингибитора-1 активатора фибриногена или плазминогена) и провоспалительное состояние (например, увеличенную концентрацию С-реактивного белка в крови).
С другой стороны, ожирение вызывает увеличенный риск развития, например, преддиабета, диабета 2 типа, некоторых типов рака, синдрома обструктивного апноэ во сне и заболевания желчного пузыря.
Дислипидемия связана с увеличенным риском развития сердечно-сосудистых заболеваний. Концентрация липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) представляет собой важный клинический показатель вследствие существующей обратной связи между концентрацией ЛПВП в крови и риском возникновения атеросклероза. Большее количество холестерина, который накапливается в атеросклеротических бляшках, происходит из пипоротеинов низкой плотности (ЛПНП) и, следовательно, увеличенная концентрация ЛПНП тесно связана с развитием атеросклероза. Соотношение ЛПВП/ЛПНП является параметром, который применяют для оценки клинического риска возникновения атеросклероза и, в частности, атеросклероза коронарных сосудов.
Без конкретного теоретического обоснования оказалось, что конъюгаты пептидов согласно настоящему изобретению могут неожиданным образом объединять физиологическое действие агонистов рецептора ГПП-1 со свойствами пептидов гастрина (см. выше) таким образом, что возникающая в результате этого активность может быть значительно более высокой, чем активность, которая наблюдается при применении соответствующей комбинации отдельных пептидных компонентов (не конъюгированных). Вследствие этого предполагают, что конъюгаты пептидов согласно настоящему изобретению могут обладать особенным преимуществом в лечении преддиабета, диабета (в частности, диабета 1 типа и/или 2 типа) и состояний, заболеваний и нарушений, связанных с диабетом, например, обсуждавшихся выше, включая лечение, направленное на стимулирование образования β-клеток островков поджелудочной железы (неогенез островков) и в результате - на стимулирование продукции инсулина, что благоприятно скажется на регуляции концентрации глюкозы в крови. Конъюгаты пептидов согласно настоящему изобретению могут вследствие этого быть особенно полезными, среди прочего, для ограничения или задержки прогрессирования заболевания при диабете 1 типа и/или 2 типа.
Пептиды согласно настоящему изобретению могут дополнительно быть полезными для стимулирования выживаемости и ингибирования апоптоза β-клеток в островках поджелудочной железы. Действие Г1Л1-1 и гастрина включает действия, направленные на пролиферацию и созревание β-клеток, а также на предотвращение апоптоза и/или некроза β-клеток и стимулирование неогенеза. Таким образом, действие пептидов согласно настоящему изобретению может включать указанные действия и их последствия на улучшение регуляции процессов, связанных с инсулином и глюкозой.
Конъюгаты пептидов согласно настоящему изобретению могут, таким образом, быть полезными в качестве фармацевтических агентов для лечения любого заболевания, нарушения или состояния, описанного в настоящей заявке. Типичные заболевания, нарушения или состояния включают резистентность к инсулину, нарушенную толерантность к глюкозе, преддиабет, болезненные состояния, связанные с увеличенной концентрацией глюкозы в крови (например, увеличенной концентрацией глюкозы в крови натощак), диабет 1 типа и/или 2 типа, гипергликемию, заболевание желудка, метаболический синдром, гипертензию и/или дислипидемию (или комбинацию этих метаболических факторов риска), атеросклероз, артериосклероз, ишемическое заболевание сердца, заболевание микрососудов, заболевание макрососудов, заболевание периферических артерий, инсульт, рак (например, рак толстой кишки), воспалительное заболевание кишечника (ВЗК), синдром раздраженного кишечника (СРК), диабетическую нейропатию, диабетическую ретинопатию, диабетическую нефропатию и почечную недостаточность.
Типичные эффекты лечения включают предотвращение увеличения массы тела, стимуляцию уменьшения массы тела, уменьшение чрезмерной массы тела и/или лечение ожирения (например, с помощью контролирования аппетита, питания, потребления пищи, потребления калорий и/или расхода энергии), включая морбидное ожирение, а также связанные с ним заболевания, нарушения и состояния
- 17 028951
здоровья, включая, но не ограничиваясь ими, воспаление, связанное с ожирением, заболевание желчного пузыря, связанное с ожирением, и синдром апноэ во сне, вызванный ожирением. Действие конъюгатов пептидов согласно настоящему изобретению на эти состояния может быть опосредовано полностью или частично воздействием на массу тела или может быть независимым от этого.
Фармацевтические композиции
В описании ниже должно быть очевидным, что упоминание о включении одного или более конъюгатов пептидов согласно настоящему изобретению в фармацевтическую композицию также охватывает включение фармацевтически приемлемой соли или сольвата конъюгата пептидов согласно настоящему изобретению.
Конъюгаты пептидов согласно настоящему изобретению могут быть включены в лекарственную форму в виде фармацевтических композиций, которые подходят для введения сразу же или после некоторого периода хранения и которые обычно включают терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного конъюгата пептидов согласно настоящему изобретению вместе с фармацевтически приемлемым носителем, вспомогательным веществом или наполнителем.
Термин "фармацевтически приемлемый носитель" включает любой из стандартных фармацевтических носителей. Фармацевтически приемлемые носители для терапевтического применения хорошо известны в области фармацевтики и описаны, например, в справочнике "КетшдЛи'к РЪаттасеибса1 8οίеисек", 171Н ебЛои, Абоико К. Оеииато (Еб.), Магк РиЪбкЛид Сотрапу, ЕакФи, РА, υδΑ, 1985. Например, можно применять стерильный солевой раствор и фосфатно-буферный раствор при слабокислом или физиологическом значении рН. Подходящие рН-забуферивающие агенты могут, например, представлять собой фосфат, цитрат, ацетат, трис(гидроксиметил)аминометан (трис), Штрис(гидроксиметил) метил-3аминопропансульфоновую кислоту (тапс), бикарбонат аммония, диэтаноламин, гистидин, аргинин, лизин или ацетат (например, в виде ацетата натрия) или их смеси. Данный термин дополнительно включает любые вещества-носители, перечисленные в Фармакопее США для применения у животных, включая человека.
Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может быть предложена в виде единичной лекарственной формы. В такой форме композиция разделена на единицы доз, содержащие соответствующие количества действующего вещества или веществ. Единичная лекарственная форма может быть представлена в виде упакованного препарата, упаковки, содержащей дискретные количества препарата, например, упакованных таблеток, капсул или порошков во флаконах или ампулах. Единичная лекарственная форма может представлять собой также, например, одну капсулу, саше или таблетку или она может представлять собой соответствующее количество любой из этих упакованных форм. Единичная лекарственная форма может также быть предложена в инъекционной форме с однократной дозой, например, в форме шприц-ручки, содержащей композицию в жидкой фазе (обычно водной). Композиции могут быть приготовлены в лекарственную форму для любого подходящего пути или средства введения. Фармацевтически приемлемые носители или растворители включают те из них, которые применяют в составах, подходящих для, например, орального, интравитреального, ректального, вагинального, назального, местного, энтерального или парентерального (включая подкожное (ПК), внутримышечное (ВМ), внутривенное (ВВ), внутрикожное и транскожное) введения или введения посредством ингаляции. Для удобства составы могут быть представленными в единичной лекарственной форме и могут быть приготовленными с помощью любого из способов, хорошо известных специалисту в области фармацевтических составов.
Подкожный или чрескожный типы введения могут быть в особенности подходящими для конъюгатов пептидов согласно настоящему изобретению.
Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к устройствам, дозированным формам и упаковкам, которые применяют для доставки фармацевтических составов согласно настоящему изобретению. Таким образом, по меньшей мере один конъюгат пептидов или его конкретная часть или вариант в стабильных составах или растворах или в составах или растворах, содержащих консерванты для стабилизации, описанных в настоящей заявке, может вводиться пациенту в соответствии с настоящим изобретением посредством различных способов доставки, включая ПК или ВМ инъекции; чрескожное, ингаляционное, трансмукозальное введение, введение с помощью имплантата, осмотического насоса, картриджа, микронасоса или других средств, хорошо известных специалисту в данной области техники.
Еще один дополнительный аспект настоящего изобретения относится к оральному введению и составам для него. Составы для орального введения могут разрабатываться для совместного введения вспомогательных веществ (например, резорцинов и неионных поверхностно-активных веществ, таких как сложный эфир полиоксиэтиленолеила и сложный эфир и-гексадецилполиэтилена) для искусственного увеличения проницаемости стенок кишечника, а также совместного введения ингибиторов ферментов (например, ингибиторов трипсина поджелудочной железы, диизопропилфторфосфата (ДФФ) и трасилола) для ингибирования ферментативной деградации. Соединение, которое является активным компонентом твердой дозированной лекарственной формы для орального введения, может быть смешанным с по меньшей мере одним вспомогательным веществом, включая сахарозу, лактозу, целлюлозу, маннитол, трегалозу, рафинозу, мальтит, декстран, крахмалы, агар, аргинаты, хитины, хитозаны, пектины, трага- 18 028951
кантовую камедь, аравийскую камедь, желатин, коллаген, казеин, альбумин, синтетический или полусинтетический полимер и глицерид. Эти дозированные формы могут также содержать другой тип или типы добавок, например, инертный разбавитель, смазывающее вещество, такое как стеарат магния, парабен, консерванты, такие как сорбиновая кислота, аскорбиновая кислота, альфа-токоферол, антиоксиданты, такие как цистеин, разрыхлители, связывающие вещества, загустители, забуферивающие вещества, вещества, регулирующие рН, подсластители, вкусовые добавки, ароматизаторы и т.д.
Дозы
Типичные дозы конъюгата пептидов согласно настоящему изобретению, которые применяются в контексте настоящего изобретения, могут находиться в диапазоне от приблизительно 0,0001 до приблизительно 100 мг/кг массы тела в день, например от приблизительно 0,0005 до приблизительно 50 мг/кг массы тела в день, например от приблизительно 0,001 до приблизительно 10 мг/кг массы тела в день, например от приблизительно 0,005 до приблизительно 5 мг/кг массы тела в день, например от приблизительно 0,01 до приблизительно 1 мг/кг массы тела в день, например от приблизительно 0,015 до приблизительно 0,1 мг/кг массы тела в день, введенных в одной или более дозах, например, от одной до трех доз. Как уже отмечалось выше, точная величина применяемой дозы будет зависеть, среди прочего, от: природы и серьезности заболевания или нарушения, которое подвергают лечению; пола, возраста, массы тела и общего состояния субъекта, которого лечат; возможного другого сопутствующего заболевания или нарушения, которое подвергается или должно подвергаться лечению; а также от других факторов, известных специалисту в данной области техники.
Конъюгат пептидов согласно настоящему изобретению можно вводить непрерывно (например, посредством внутривенного введения или другого непрерывного способа введения препарата) или его можно вводить субъекту с интервалами, обычно с регулярными промежутками времени, в зависимости от желаемой дозы и фармацевтической композиции, выбранной специалистом в данной области техники для конкретного субъекта.
Интервалы дозирования при регулярном введении включают, например, введение один раз в день, два раза в день, один раз в два, три, четыре, пять или шесть дней, один или два раза в неделю, один или два раза в месяц или регулярные и даже менее частые интервалы между приемами препарата, в зависимости от конкретного состава дозы, биодоступности и фармакокинетического профиля конъюгата пептидов.
Такое регулярное введение конъюгата пептидов согласно настоящему изобретению в некоторых обстоятельствах, таких как, например, при хроническом долговременном введении, можно предпочтительно приостанавливать на определенный период времени так, чтобы принимающий лекарственный препарат субъект вызывало уменьшение количество принимаемого препарата или прекращал прием лекарственного препарата. Такая приостановка приема препарата часто обозначается как "лекарственные каникулы". Лекарственные каникулы полезны для, например, поддержания или восстановления чувствительности к лекарственному препарату, особенно в течение хронического долговременного лечения, или для уменьшения нежелательных побочных действий хронического долговременного лечения субъекта препаратом.
Продолжительность лекарственных каникул (перерыва в ведении препарата) зависит от продолжительности регулярного режима дозирования и от целей проведения лекарственных каникул (например, для восстановления чувствительности к лекарственному препарату и/или для уменьшения нежелательных побочных действий непрерывного долгосрочного введения препарата). Согласно некоторым вариантам реализации лекарственные каникулы могут представлять собой уменьшение количества препарата (например, прием препарата в количестве меньшем, чем терапевтически эффективное количество, в течение определенного периода времени). Согласно другим вариантам реализации введение препарата прекращается на определенный период времени, после чего введение возобновляется в том же или другом режиме дозирования (например, с меньшей или большей дозой и/или частотой дозирования).
Таким образом, конъюгат пептидов может быть доставлен посредством режима введения, который включает две или более фазы введения, разделенных соответствующими фазами лекарственных каникул.
В течение каждой фазы введения конъюгат пептидов вводят субъекту-реципиенту в терапевтически эффективном количестве в соответствии с предопределенной схемой введения. Схема введения может включать непрерывное введение препарата субъекту-реципиенту в течение периода фазы введения. В качестве альтернативы схема введения может включать введение некоторого количества доз конъюгата пептидов субъекту-реципиенту, причем указанные дозы разделены интервалами дозирования.
Схема дозирования может включать по меньшей мере две дозы на фазу введения, по меньшей мере пять доз на фазу введения, по меньшей мере 10 доз на фазу введения, по меньшей мере 20 доз на фазу введения, по меньшей мере 30 доз на фазу введения или более.
Указанные интервалы введения доз препарата могут представлять собой регулярные интервалы дозирования, которые могут быть такими, как изложено выше, включая введение один раз в день, два раза в день, один раз в два, три, четыре, пять или шесть дней, один или два раза в неделю, один или два раза в месяц или регулярные и даже менее частые интервалы между приемами препарата в зависимости от конкретного состава дозы, биодоступности и фармакокинетического профиля конъюгата пептидов.
- 19 028951
Фаза введения может иметь длительность по меньшей мере два дня, по меньшей мере одну неделю, по меньшей мере 2 недели, по меньшей мере 4 недели, по меньшей мере один месяц, по меньшей мере 2 месяца, по меньшей мере 3 месяца, по меньшей мере 6 месяцев или более.
Если схема введения включает несколько доз, длительность последующей фазы лекарственных каникул является большей, чем продолжительность дозирования, применяемая в этой схеме введения. Если интервал дозирования является нерегулярным, длительность фазы лекарственных каникул может быть большей, чем длительность интервала между дозами в течение курса фазы введения. В качестве альтернативы длительность лекарственных каникул может быть большей, чем самый продолжительный интервал между последовательно введенными дозами в течение фазы введения.
Длительность фазы лекарственных каникул может быть по меньшей мере в два раза большей, чем длительность соответствующего интервала дозирования (или его среднего значения), по меньшей мере в 3 раза, по меньшей мере в 4 раза, по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в 10 раз или по меньшей мере в 20 раз большей, чем длительность соответствующего интервала дозирования или его среднего значения.
В рамках этих ограничений фаза лекарственных каникул может иметь длительность по меньшей мере два дня, по меньшей мере одну неделю, по меньшей мере 2 недели, по меньшей мере 4 недели, по меньшей мере один месяц, по меньшей мере 2 месяца, по меньшей мере 3 месяца, по меньшей мере 6 месяцев или более, в зависимости от схемы введения в течение предыдущей фазы введения.
Режим введения включает по меньшей мере 2 фазы введения. Последовательные фазы введения разделены соответствующими фазами лекарственных каникул. Таким образом, режим введения может включать по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 10, по меньшей мере 15, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25 или по меньшей мере 30 фаз введения или более, которые будут разделены соответствующими фазами лекарственных каникул.
В последовательных фазах введения можно применять одну и ту же схему введения, хотя это не всегда может быть желательным или необходимым. Однако если другие препараты или активные компоненты вводятся в комбинации с конъюгатом пептидов согласно настоящему изобретению, то обычно ту же комбинацию препаратов или активных компонентов применяют и в последовательных фазах введения. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения субъект-реципиент представляет собой человека.
Комбинированная терапия
Как уже отмечалось выше, будет очевидным, что последующие упоминания о конъюгате пептидов согласно настоящему изобретению также относятся к его фармацевтически приемлемой соли или сольвату, а также к композиции, которая содержит более одного из различных конъюгатов пептидов согласно настоящему изобретению.
Конъюгат пептидов согласно настоящему изобретению можно вводить в качестве комбинированной терапии вместе с другим активным веществом для лечения заболевания или нарушения, о котором идет речь, например диабета, ожирения, метаболического синдрома, дислипидемии или гипертензии, и в таких случаях два активных вещества можно вводить вместе или по отдельности, например, в качестве компонентов одной и той же фармацевтической композиции или состава или в виде отдельных составов.
Таким образом, конъюгат пептидов согласно настоящему изобретению можно также использовать в комбинации с агентом против диабета известного типа, включая, но не ограничиваясь ими, метформин, сульфонилмочевину, меглитинид, ингибитор дипептидилпептидазы IV (ДНП IV), глитазон или инсулин или аналог инсулина. Согласно предпочтительному варианту реализации конъюгат пептидов согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с инсулином или его аналогом, ингибитором ДНН IV, сульфонилмочевиной или метформином, в частности, с сульфонилмочевиной или метформином, для обеспечения достаточного гликемического контроля. Согласно более предпочтительному варианту реализации конъюгат пептидов вводят в комбинации с инсулином или его аналогом для достижения достаточного гликемического контроля. Примеры подходящих аналогов инсулина включают, но не ограничиваются ими, препараты Лантус™, Новорапид™, Хумалог™, Новомикс™, Актрафан™ НМ, Левемир™ Деглюдек™ и Апидра™. Другие подходящие агенты против диабета включают агонисты рецептора ГПП-1, такие как эксенатид (Баета™; эксендин-4) и Вуейа ЬЛК™, ликсисенатид (Ьухит1а™) и лираглутид (Виктоза™).
Конъюгат пептидов согласно настоящему изобретению можно также использовать в комбинации с агентом против ожирения известного типа, включая, но не ограничиваясь ими, пептид ΥΥ или его аналог, нейропептид Υ (ΝΡΥ) или его аналог, антагонист каннабиноидного рецептора 1, ингибитор липазы, проостровковый пептид человека (ППЧ), агонист меланокортинового рецептора 4, лираглутид, Орлистат™ и Сибутрамин™ или антагонист рецептора 1 меланин-концентрирующего гормона, ХЦК, амилин или лептин и их аналоги.
Конъюгат пептидов согласно настоящему изобретению можно также использовать в комбинации с агентом против гипертензии известного типа, включая, но не ограничиваясь ими, ингибитор ангиотензинконвертирующего фермента, блокатор рецептора ангиотензина II, диуретик, бета-блокатор или бло- 20 028951
катор кальциевых каналов.
Конъюгат пептидов согласно настоящему изобретению можно дополнительно использовать в комбинации с агентом против дислипидемии известного типа, включая, но не ограничиваясь ими, статин, фибрат, ниацин и/или ингибитор абсорбции холестерина.
Конъюгат пептидов согласно настоящему изобретению можно также использовать в комбинации с ингибитором протонного насоса (т.е. фармацевтическим агентом, обладающим фармакологической активностью ингибитора Н+/К+-АТФазы) известного типа, включая, но не ограничиваясь ими, агенты на основе производного бензимидазола или на основе производного имидазопиридина, такие как препараты Омепразол™, Лансопразол™, Декслансопразол™, Эзомепразол™, Пантопразол™, Рабепразол™, Золпидем™, А1рМет™, БапрПет™ или ЫесорЦет™.
Более того, конъюгат пептидов согласно настоящему изобретению можно использовать в комбинации с противовоспалительным агентом известного типа, включая, но не ограничиваясь ими:
стероиды и кортикостероиды, такие как беклометазон, метилпреднизолон, бетаметазон, преднизолон, дексаметазон, гидрокортизон;
нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП), такие как производные пропионовой кислоты (например, алминопрофен, беноксапрофен, буклоксовая кислота, карпрофен, фенбуфен, фенопрофен, флупрофен, флурбипрофен, ибупрофен, индопрофен, кетопрофен, миропрофен, напроксен, оксапрозин, пирпрофен, пранопрофен, супрофен, тиапрофеновая кислота и тиоксапрофен); производные уксусной кислоты (например, индометацин, ацеметацин, алклофенак, клиданак, диклофенак, фенклофенак, фенклозовая кислота, фентиазак, фурофенак, ибуфенак, изоксепак, окспинак, сулиндак, тиопинак, толметин, зидометацин и зомепирак); производные фенамовой кислоты (например, флуфенамовая кислота, меклофенамовая кислота, мефенамовая кислота, нифлумовая кислота и толфенамовая кислота); производные бифенилкарбоновой кислоты (например, дифлунизал и флуфенизал); оксикамы (например, изоксикам, пироксикам, судоксикам и теноксикам); салицилаты (например, ацетилсалициловая кислота и сульфасалазин); и пиразолоны (например, апазон, безпиперилон, фепразон, мофебутазон, оксифенбутазон и фенилбутазон);
ингибиторы циклооксигеназы II (ЦОК II), такие как рофекоксиб и целекоксиб; препараты интерферона бета (например, интерферон бета-1а или интерферон бета-1Ь);
и некоторые другие соединения, такие как 5-аминосалициловая кислота и предлекарства и их фармацевтически приемлемые соли.
Было продемонстрировано, что метформин также обладает противовоспалительными свойствами [см. НаЕГБег е1 а1, О1аЬе1с5 54: 1566-1572 (2005)] и вследствие этого также может быть полезным в контексте настоящего изобретения.
Следующие примеры иллюстрируют некоторые конкретные варианты реализации настоящего изобретения. Эксперименты, описанные в следующих примерах, проводили, применяя стандартные методики, которые хорошо известны и являются общепринятыми среди специалистов в данной области техники, за исключением случаев, когда подробно описано обратное. Необходимо понимать, что данные примеры приведены исключительно с целью иллюстрации, а не предназначены для определения условий или рамок настоящего изобретения. Вследствие этого они никоем образом не должны рассматриваться как ограничивающие рамки настоящего изобретения.
- 21 028951
Аббревиатуры, которые применяются при описании примеров, включают: ΝΜΡ: Ν-метилпирролидон
БСМ дихлорметан
□МЕ: Ν,Ν-диметилформамид
НАТО: 2-(7-аза- 1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуроний гексафторфосфат
□1ΡΕΛ: диизопропилэтиламин
ЕЮН: этанол
ЕцО: диэтиловый эфир
8Ас1о 8-амино-3,6-диоксаоктанол
8Аос: 8-аминооктаноил
ТРА: трифторуксусная кислота
МсСЫ: ацетонитрил
ВЭЖХ: высокоэффективная жидкостная хроматография
МС: масс-спектрометрия
ΙΒΜΧ: З-изобутил-1-метилксантин
□МЕМ среда Игла, модифицированная по способу Дульбекко
ПЕРЕ5: К-З-гидроксиэтилпиперазнн-К'-З-этансульфоновая кислота
р-ЕЕК фосфорилированная внеклеточно регулируемая киназа
Вос: 1-бутоксикарбонил ΝΕΡ: Ν-этилпирролидон
ФБР: фосфатный буферный раствор
БСА: бычий сывороточный альбумин
цАМФ: циклический аденозин монофосфат
ЭСТ: эмбриональная сыворотка теленка
Лираглутид: [Аг§34, Еу526(Гексадеканоил-15оСИи) ]ГПП-1(7-37)
Синтез соединений Материалы и методы
Если не указано обратное, реактивы и растворы, применяемые в следующих экспериментах, были коммерчески доступными, были стандартно химически чистыми или чистыми для анализа и использовались без дополнительной очистки.
Общая процедура синтеза конъюгатов пептидов согласно настоящему изобретению
Твердофазный пептидный синтез осуществляли на синтезаторе СЕМ ЫЬейу Рерййе 8уШНс51/сг. применяя стандартный химический подход на основе Ртос. Смолу ТеШаСеГ™ δ Кат (1 г; 0,25 мМоль/г), набухшую в ΝΕΡ (10 мл) перед использованием, наносили в реакционный сосуд, используя ЭСМ и ΝΕΡ. При необходимости использовали псевдопролины, представляющие собой дипептиды, которые применяют для минимизации агрегации в ходе синтеза пептидов, такие как Ртос-РЬе-ТЪгЩ-Ме,Ме-Рго)-ОН и Ртос-А5р-8егЩ-Ме,Ме-Рго)-ОН, а также аминокислоты, не существующие в природе (т.е. Ртос-8АйоОН); данные соединения использовали без каких-либо изменений в обычной процедуре.
Объединение.
Аминокислоту, защищенную Ртос (Ртос-аминокислоту), в NΕΡ/^МР/^СМ (1:1:1; 0,2 М; 5 мл) прибавляли к смоле в микроволновой печи СЕМ Э^соуег вместе с НАТИ/ЭМР (0,5 М; 2 мл) и ΌΙ- 22 028951
ΡΕΑ/ΝΕΡ (2,0 М; 1 мл). Полученную смесь нагревали до 75°С в течение 5 мин. пока из смеси не улетучивался азот в виде пузырьков. Затем смолу промывали ΝΕΡ (4x10 мл).
Снятие защиты.
10 мл пиперидина/ΝΕΡ (в соотношении 1:4, 1 часть пиперидина к 4 частям ΝΕΡ) прибавляли к смоле для инициации снятия защиты. Смесь нагревали в микроволновой печи (40°С; 30 сек.). Содержимое реакционного сосуда выливали, прибавляли в сосуд вторую порцию пиперидина/ΝΕΡ (1/4; 10 мл) и снова нагревали (75°С; 3 мин). Затем промывали смолу ΝΕΡ (6x10 мл).
Отщепление.
Смолу промывали ΕΐΟΗ (3x10 мл) и Εί2Ο (3x10 мл) и высушивали до постоянной массы при комнатной температуре (к.т.). Неочищенный пептид отщепляли от смолы обработкой ΤΡΑ/ΤΙδ/Η2Ο (90/5/5; 40 мл; 2 ч; к.т.). Значительную часть ΤΡΑ удаляли при пониженном давлении, после чего неочищенный пептид выпадал в осадок, который промывали три раза Εί2Ο и высушивали до постоянной массы при комнатной температуре.
Очистка и определение характеристик.
Неочищенный пептид очищали до чистоты более 90% методом препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ на хроматографе ΡβΓδβρίίνβ ВюхуЧепъ νΐδΙΟΝ, оснащенном подходящей колонкой и коллектором фракций, проводя разделение при градиенте буфера А (0,1% ΤΡΑ, водный раствор) и буфера В (0,1% ΤΡΑ, 90% ΜβΟΝ, водный раствор). Фракции анализировали методами аналитической ВЭЖХ и МС, целевые фракции объединяли и лиофилизовали. Конечный продукт характеризовали методами ВЭЖХ и МС.
Пример 1. Синтез соединения 2 |Еси14.Еу525(Тексадеканоил-15оС1и)|Эксендин-4(1-28)-8ЛДо-8ЛДо[Ьеи4]Гастрин-6.
1001114^1^^1^-4(1-28)-^00-^00-10011410101-1:)1^-6 синтезировали на синтезаторе пептидов СЕМ ЫЪеДу ΡορΙίάο δγπίΟοδίζοΓ, используя смолу ΤοηΙαΟοΙ δ Кат (1,13 г; 0,24 ммоль/г) и стандартный химический подход на основе Ртос, описанный выше. В точке присоединения для ацилирования использовали Ρтос-8-амино-3,6-диоксаоктановую кислоту (Ртос-8ΑДо-ΟΗ), а также Ртос-^у8(^Де)-ΟΗ.
Связанный со смолой защищенный линейный пептид промывали ΝΜΡ (3x2 мин). Ν-конец присоединенного к твердой фазе пептида защищали Вос, используя для этой цели ВосЮ (265 мг) и ΌΙΡΕΑ (47 мкл) в Ό0Μ (4 мл), и промывали ΝΜΡ (5x2 мин). Защитную группу ЭДе затем отрезали, используя гидразингидрат/ΝΕΡ (4/96; 2x15 мин), а смолу промывали ΝΜΡ (5x2 мин), ΌΙΕΑ/ΝΜΡ (1/9; 3x5 мин) и ΝΜΡ (8x2 мин). Синтез заканчивали на синтезаторе пептидов СЕМ ЫЪеДу Ρορΐίόο δλ-ηΐΗοδίζοΓ, как описано выше, используя Ртос-Ο1и-ΟΐВи и пальмитиновую кислоту.
Пептид отщепляли от смолы, как описано выше, и очищали на колонке СеттлЫХ (5x25 см; 10 мкм; С18) при скорости потока 35 мл/мин, смеси буфера А (0,1% ΤΡΑ; водный раствор) и буфера В (0,1% ΤΡΑ; 90% ΜοΡ’Ν; водный раствор). Продукт элюировали при линейном градиенте от 30 до 65% буфера В в течение 47 мин, фракции (9 мл) собирали с помощью коллектора фракций. Целевые фракции анализировали методом аналитической ВЭЖХ и МС, объединяли и лиофилизовали с образованием белого порошка (39 мг), чистота которого по результатам анализа методом аналитической ВЭЖХ составила 81%. Масса соединения, которую определяли методом МС, составила 4655,53 Да (расчетная масса составляет 4655,44 Да).
Пример 2. Синтез соединения 6 [Су816(Биотин-Μа1),^еи14]Эксендин-4(1-28)-8ΑДо-8ΑДо-[^еи4]Гастрин-6.
[Су816,^еи14]Эксендин-4(1-28)-8ΑДо-8ΑДо-[^еи4]Гастрин-6 синтезировали на синтезаторе пептидов СЕМ ЫЪеДу, используя 2 порции смолы Τοιίϊ;·ιΟο1 δ Кат (1,12 г; 0,25 ммоль/г) и стандартный химический подход на основе Ртос, описанный выше, применяя для этой цели Ртос-ΡЬе-ΤЬ^(ψ-Μе,Μе-Ρ^о)ΟΗ и Ртос-8-амино-3,6-диоксаоктановую кислоту (Ртос-8ΑДо-ΟΗ). Пептид отщепляли от смолы (порция № 1), как описано выше.
Очистка № 1. Неочищенный пептид со смолы № 1 очищали на колонке Сетт-МХ (5x25см; 10 мкм; С18) при скорости потока 35 мл/мин, смеси буфера А (0,1% ΤΡΑ; водный раствор) и буфера В (0,1% ΤΡΑ; 90% ΜοΡ’Ν; водный раствор). Продукт элюировали при линейном градиенте от 30 до 65% буфера В в течение 47 мин и фракции (9 мл) собирали с помощью коллектора фракций. Целевые фракции анализировали методом аналитической ВЭЖХ и МС, объединяли и лиофилизовали с образованием белого порошка (90 мг), чистота которого по результатам анализа методом аналитической ВЭЖХ составила 68%.
Очистка № 2. Продукт после очистки № 1 очищали на колонке Сетт-ИХ (10 мм ж 25 см; 5 мкм; С18) при скорости потока 4 мл/мин, смеси буфера А (0,1% ΤΡΑ; водный раствор) и буфера В (0,1% ΤΡΑ; 90% ΜοΡ’Ν; водный раствор). Продукт элюировали при линейном градиенте от 30 до 60% буфера В в течение 47 мин. и фракции (2 мл) собирали с помощью коллектора фракций. Целевые фракции анализировали методом аналитической ВЭЖХ и МС, объединяли и лиофилизовали с образованием белого порошка (25 мг), чистота которого по результатам анализа методом аналитической ВЭЖХ составила 91%.
Очистка № 3. Неочищенный пептид со смолы № 2 очищали на колонке 0ет1т (5x25 см; 10 мкм; С18) при скорости потока 35 мл/мин, смеси буфера А (0,1% ΤΡΑ; водный раствор) и буфера В (0,1%
- 23 028951
ТРА; 90% МеС^ водный раствор). Продукт элюировали при линейном градиенте от 30 до 65% буфера В в течение 47 мин. и фракции (9 мл) собирали с помощью коллектора фракций. Целевые фракции анализировали методом аналитической ВЭЖХ и МС, объединяли и лиофилизовали с образованием белого порошка (129 мг), чистота которого по результатам анализа методом аналитической ВЭЖХ составила 74%.
Очистка № 4. Объединенные продукты после очисток №№ 2 и 3 очищали на колонке ОетШ^Х (10 мм х 25 см; 5 мкм; С18) при скорости потока 4 мл/мин, смеси буфера А (0,1% ТРА; водный раствор) и буфера В (0,1% ТРА; 90% МеС^ водный раствор). Продукт элюировали при линейном градиенте от 30% до 55% буфера В в течение 47 мин. и фракции (2 мл) собирали с помощью коллектора фракций. Целевые фракции анализировали методом аналитической ВЭЖХ и МС, объединяли и лиофилизовали с образованием белого порошка (32 мг), чистота которого по результатам анализа методом аналитической ВЭЖХ составила 73%, и второго белого порошка (100 мг), чистота которого по результатам анализа методом аналитической ВЭЖХ составила 62%.
Очистка № 5. Объединенные продукты после очистки № 4 очищали на колонке Оетш1^Х (10 мм х 25см; 5 мкм; С18) при скорости потока 4 мл/мин, смеси буфера А (0,1% ТРА; водный раствор) и буфера В (0,1% ТРА; 90% МеС^ водный раствор). Продукт элюировали при линейном градиенте от 30 до 55% буфера В в течение 47 мин и фракции (2 мл) собирали с помощью коллектора фракций. Целевые фракции анализировали методом аналитической ВЭЖХ и МС, объединяли и лиофилизовали с образованием белого порошка (30 мг), чистота которого по результатам анализа методом аналитической ВЭЖХ составила 90%. Масса соединения, которую определяли методом МС, составила 4320,24 Да (расчетная масса составляет 4320,12 Да).
Конъюгирование. Продукт после очистки № 5 растворяли в буфере ФБР (6 мл; рН 7,4), получая в результате непрозрачный раствор (рН 6,2). Биотин-малеимид (10,7 мг) растворяли в ЭМ§0 (1,1 мл) и прибавляли к раствору пептида. За прохождением реакции наблюдали с помощью метода аналитической ВЭЖХ. Продукт очищали через 3 ч на колонке ОетШ^Х (10 мм х 25 см; 5 мкм; С18) при скорости потока 4 мл/мин, смеси буфера А (0,1% ТРА; водный раствор) и буфера В 60 55% буфера В в течение 47 мин, и фракции (2 мл) собирали с помощью коллектора фракций. Целевые фракции анализировали методом аналитической ВЭЖХ и МС, объединяли и лиофилизовали с образованием белого порошка (18 мг), чистота которого по результатам анализа методом аналитической ВЭЖХ составила 84%. Масса соединения, которую определяли методом МС, составила 4771,35 Да (расчетная масса составляет 4771,31 Да).
Пример 3. Синтез соединения 9 [С1и9,Ьеи14,РЬе25,Туг13]Эксендин-4(1-27)-ЦЦ-[Ьеи4]Гастрин-6.
Пептид синтезировали на синтезаторе пептидов СЕМ ЫЪеПу, используя смолу ТеШаСе1 δ Кат (1,10 г; 0,25 мМоль/г) и стандартный химический подход на основе Ртос, описанный выше, применяя для этой цели Ртос-РЬе-Тйт^-Ме,Ме-Рго)-0Н. Пептид отщепляли от смолы, как описано выше. Неочищенный пептид очищали на колонке ОетШ^Х (5 х 25см; 10 мкм; С18) при скорости потока 35 мл/мин, смеси буфера А (0,1% ТРА; водный раствор) и буфера В (0,1% ТРА; 90% МеС^ водный раствор). Продукт элюировали при линейном градиенте от 20% до 50% буфера В в течение 47 мин. и фракции (9 мл) собирали с помощью коллектора фракций. Целевые фракции анализировали методом аналитической ВЭЖХ и МС, объединяли и лиофилизовали с образованием белого порошка (137 мг), чистота которого по результатам анализа методом аналитической ВЭЖХ составила 78%. Масса соединения, которую определяли методом МС, составила 4208,11 Да (расчетная масса составляет 4208,09 Да).
Пример 4. Активация (ЕС50) рецептора ГПП-1 и рецептора гастрина ХЦК-В ίη уйто конъюгатами пептидов согласно настоящему изобретению.
Материалы и методы
Анализ эффективности рецептора ГПП-1 человека (ГПП-1 Р)
Действие ίη уйто конъюгатов пептидов согласно настоящему изобретению оценивали путем измерения индукции цАМФ после стимуляции рецептора ГПП-1 (7-36), эксендином-4(1-39) или конъюгатами согласно настоящему изобретению, используя набор для анализа цАМФ Р1а8ЙР1а1е™ производства компании Регкш-Е1тег. Вкратце, клетки НЕК293, экспрессирующие рецептор ГПП-1 человека (стабильная клеточная линия была получена в результате трансфекции клеток кДНК рецептора ГПП-1 и отбора стабильных клонов), высевали в концентрации 40000 клеток/лунку в 96-луночных планшетах для микротитрования, покрытых 0,01 % поли-Ь-лизином, и выращивали в течение 1 дня в культуре в 100 мкл среды роста [ЭМЕМ, 10% ЭСТ, пенициллин (100 МЕ/мл), стрептомицин (100 мкг/мл)]. В день проведения анализа среду роста удаляли, клетки промывали один раз 200 мкл буфера Тироде [соли Тироде (9,6 г/л), 10 мМ НЕРЕδ, рН 7,4]. Клетки инкубировали в течение 15 мин. при 37°С в 100 мкл буфера Тироде, содержащего увеличивающиеся концентрации исследуемых соединений, 100 мкМ ГВМХ, и 0,1% БСА. Реакцию останавливали добавлением 25 мкл 0,5 М НС1 и инкубированием на льду в течение 60 мин. Для дополнительных методических подробностей, см. международную заявку на патент Υ0 2008/152403.
Анализ эффективности рецептора ХЦК-В (ХЦК-В Р)
Действие ίη уйто конъюгатов пептидов согласно настоящему изобретению и контроля -аналога гастрина-17 [Ьеи15]гастрин-17-оценивали путем измерения содержания р-ЕКК (с помощью набора для анализа р-ЕКК А1р1иЛсгееп'™ διιΐΌΗΐΌ) в клетках НЕК293, стабильно экспрессирующих рецептор ХЦК-В
- 24 028951
человека (рецептор гастрина высокой аффинности; стабильная клеточная линия была получена в результате трансфекции клеток кДНК рецептора ХЦК-В и отбора стабильных клонов)). Анализ эффективности рецептора гастрина (с помощью набора А1рНа8сгееп™ ЗитеИте р-ЕКК) проводили следующим образом: В день 1 клетки, экспрессирующие ХЦК-В Р, высевали в планшете в концентрации 20000 клеток/лунку в 100 мкл среды роста [ΌΜΕΜ, 10% ЭСТ, пенициллин (100 МЕ/мл), стрептомицин (100 мкг/мл)] в 96луночном планшете, покрытом поли-Э-лизином. Клетки инкубировали в инкубаторе (37°С, 5% СО2) в течение двух дней. Затем среду роста меняли на 80 мкл бессывороточной среды [ΌΜΕΜ, пенициллин (100 МЕ/мл), стрептомицин (100 мкг/мл)] на лунку и продолжали инкубацию клеток в инкубаторе в течение ночи. В день анализа в планшет прибавляли соединения в увеличивающихся концентрациях в 20 мкл бессывороточной среды, содержащей, и инкубировали клетки в течение 5 мин при комнатной температуре. Среду для стимулирования отбрасывали, быстро переворачивая планшет, и прибавляли по 60 мкл на лунку 1х лизирующего буфера (из набора для анализа ЗитеИте). Для получения более подробной информации см. международную заявку на патент ΥΟ2011/134471.
Конъюгаты пептидов согласно настоящему изобретению исследовали в вышеописанном эксперименте (т.е. оценивали эффективность активации ГПП-1 Р человека и эффективность активации ХЦК-В Р человека).
В качестве положительного контроля при анализе активации ГПП-1 рецептора человека (чГПП-1 Р) использовали эксендин-4(1-39), в качестве положительного контроля при анализе активации ХЦК-В рецептора человека (чХЦК-В Р) использовали ч[Ьеи15]Гастрин-17.
Полученные результаты (значения ЕС50, в нМ) обобщены в табл. 1 ниже.
Таблица 1. Активность (ЕС50, нМ) соединений (конъюгатов пептидов) согласно настоящему изобретению ίη νίΐτο при активации чГПП-1 Р и чХЦК-В Р
- 25 028951
12 0,13 23
13 0,29 75
14 о,п 28
15 0,17 30
16 о,п 45
17 0,19 85
18 0,062 18
19 0,045 13
21 0,052 94
22 0,085 31
23 0,094 18
38 0,037 61
40 0,37 133
Результаты
Результаты, приведенные в табл. 1 выше, свидетельствуют, что конъюгаты пептидов согласно настоящему изобретению являются потенциальными агонистами двух рецепторов, о которых идет речь, и что они демонстрируют очень близкие уровни активности.
Пример 5. Исследование фармакокинетики (ФК) некоторых соединений на мышах.
Способ
Мышам С57В1 Ь/6.1 вводили единичную подкожную дозу 100 нМоль/кг каждого исследуемого пептида. Отбирали образцы крови через 5 и 30 мин, а также через 1, 2, 4, 6, 16 и 24 ч. В каждой временной точке отбирали образцы крови от двух мышей. Мышей после отбора проб незамедлительно умерщвляли смещением шейных позвонков.
Образцы плазмы анализировали после твердофазной экстракции (ТФЭ) методами жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии (ЖХ-МС/МС).
Таблица 2. Т1/2 после ПК введения 100 нМоль/кг мышам
Пример 6. Исследование мышей ПЬ/ПЬ ίη У1уо в течение трех недель.
Мышиная модель ПЬ/ПЬ ранее использовалась для оценки действия потенциальных терапевтических кандидатов, направленного на защиту β-клеток [Ко1ш, В. е! а1, Ат. ί. РЬу8ю1. ЕпПосгшо1. Ме!аЬ. 283: Е745-Е752 (2002)]. Некоторые исследования продемонстрировали корреляцию между содержанием инсулина поджелудочной железы и массой β-клеток [Ко1ш В. е! а1.; ссылка, приводившаяся выше; 8иагегРшгоп, А.Ь. е! а1., П1аЬе!е8: 54: 2596-2601 (2005); Зиагег-Ртгоп А.Ь. е! а1., П1аЬе!е8: 57: 3281-3288 (2008)].
Лечение
Мышей ПЬ/ПЬ разделяли на различные группы лечения в соответствии с концентрацией НЬА1с. Мыши получали один раз в день подкожные (ПК) инъекции в общей сложности в течение 21 дня. Объем инъекции составлял 5 мл/кг. В течение исследования ежедневно регистрировали массу тела (МТ) и использовали эти данные для корректировки вводимых доз пептида, исходя из массы тела.
- 26 028951
ОТТГ
В день 16 животным проводили оральный тест толерантности к глюкозе. Концентрацию глюкозы в крови измеряли до введения глюкозы (в момент времени ΐ = 0, базовая линия) и после введения глюкозы вплоть до 2 ч.
Завершение исследования
В завершении измеряли концентрацию глюкозы в крови и анализировали концентрацию НЬЛ1 в образцах крови.
Измерения
Общую концентрацию глюкозы в крови (в мМ) измеряли на анализаторе (ЕШе Ли1оапа1у5сг. Вауег, Дания) методом на основе иммобилизованной глюкозооксидазы. Концентрацию НЬА1 в образцах крови определяли на анализаторе СоЬаз с111 (КосЬе П1адпо8бс8, Мангейм, Германия).
Результаты
Оба двойных агониста эксендина и гастрина, соединение 18 и соединение 23, вызывали уменьшение концентрации глюкозы в крови натощак после 16 дней лечения. Соединение 18 вызывало уменьшение концентрации глюкозы в крови натощак в большей степени, чем соединение 23. Оба соединения вызывали уменьшение концентрацию НЬА1с в крови после 3 недель лечения без существенной разницы между соединениями (ΐ-критерий для двух независимых выборок).
Оба соединения, соединение 18 и соединение 23, вызывали уменьшение площади под кривой концентрации глюкозы (АИС) после проведения орального теста толерантности к глюкозе в день 16 (табл. 3), при этом соединение 18 вызывало уменьшение концентрации глюкозы в большей степени, чем соединение 23.
Наконец, как соединение 18, так и соединение 23 вызывало уменьшение увеличения массы тела в течение 3-х недельного курса исследования (табл. 3), причем соединение 18 вызывало уменьшение увеличения массы тела в больше степени, чем соединение 23.
Таблица 3. Результаты исследования мышей 6Ь/6Ь ίη νίνο в течение трех недель
Разница НЬА1с (%) оттг, лис (нМ*мин.) Разница МТ (г) Концентрация глюкозы в крови натощак (мМ)
Наполнитель - - -
Соединение 18 +++ +++ +++ +++
Соединение 23 -нн- ++ ++ ++
Подписи к табл. 3:
Разница НЬА1с: эффект ПК введения наполнителя, соединения 18 (100 нмоль/кг) и соединения 23 (100 нмоль/кг) на разницу концентрации НЬА1с (%) (концентрация НЬА1с при завершении вычитается из концентрации НЬА1с в начале исследования) после 21 дня лечения мышей 6Ь/6Ь. Данные представлены в виде среднего значения со стандартной ошибкой среднего (п= 11/группу). (-) означает разницу концентрации НЬА1с более 0,5%, (+) означает разницу концентрации НЬА1с от 0,25 до 0,5%, (++) означает разницу концентрации НЬА1с от 0% до 0,25%, (+++) означает разницу концентрации НЬА1с менее 0%.
ОТТГ, площадь под кривой (АИС): эффект ПК введения наполнителя, соединения 18 (100 нМоль/кг) и соединения 23 (100 нМоль/кг) на толерантность к глюкозе, которую оценивали путем измерения площади под кривой (АИС) после проведения теста толерантности к глюкозе на мышах 6Ь/6Ь после 16 дней лечения. Данные представлены в виде среднего значения со стандартной ошибкой среднего (п=11/группу). (-) означает АИС более 3000 мМоль*мин после ОТТГ, (+) означает АИС от 2000 до 3000 мМоль*мин после ОТТГ, (++) означает АИС от 1000 до 2000 Моль*мин после ОТТГ., (+++) означает АИС менее 1000 мМоль*мин после ОТТГ.
Разница МТ: эффект ПК введения наполнителя, соединения 18 (100 нМоль/кг) и соединения 23 (100 нМоль/кг) на разницу величины МТ (г) (МТ при завершении вычитается из МТ в начале исследования) после 21 дня лечения мышей 6Ь/6Ь. Данные представлены в виде среднего значения со стандартной ошибкой среднего (п=9-11 /группу). (-) означает разницу МТ более 8 г, (+) означает разницу МТ от 6 до 8 г, (++) означает разницу МТ от 4 до 6 г, (+++) означает разницу МТ менее 4 г.
Концентрация глюкозы в крови натощак: эффект ПК введения наполнителя, соединения 18 (100 нМоль/кг) и соединения 23 (100 нМоль/кг) на концентрацию глюкозы в крови натощак (мМоль) после 16 дней лечения мышей 6Ь/6Ь. Данные представлены в виде среднего значения со стандартной ошибкой среднего (п=11/группу). (-) означает концентрацию глюкозы в крови натощак более 12 мМ, (+) означает концентрацию глюкозы в крови натощак от 8 до 12 мМоль, (++) означает концентрацию глюкозы в крови натощак от 6 до 8 мМ, (+++) означает концентрацию глюкозы в крови натощак менее 6 мМоль.
Пример 7. Исследование мышей 6Ь/6Ь ίη νίνο: 4 недели лечения с последующими 2 неделями лекарственных каникул.
Лечение
Мышей 6Ь/6Ь распределяли на различные группы лечения в соответствии с концентрацией НЬА1с в крови. Мыши получали один раз в день подкожные (ПК) инъекции в общей сложности в течение 4 не- 27 028951
дель - после чего им вводили наполнитель в течение 2 недель. Объем инъекции составлял 5 мл/кг. В течение исследования ежедневно регистрировали массу тела (МТ) и использовали эти данные для корректировки вводимых доз пептида, исходя из массы тела.
ОТТГ
Через 3 и 5 недель животным проводили оральный тест толерантности к глюкозе. Концентрацию глюкозы в крови измеряли до введения глюкозы (в момент времени ΐ = 0, базовая линия) и после введения глюкозы вплоть до 2 ч.
Измерения
Общую концентрацию глюкозы в крови (в мМ) измеряли на анализаторе (ΕΙίΙο Ли1оапа1у5сг. Вауег, Дания) методом на основе иммобилизованной глюкозооксидазы.
Результаты
Двойной агонист эксендина и гастрина, соединение 18, вызывало уменьшение концентрацию глюкозы в крови натощак после 3 недель лечения по сравнению с наполнителем. Соединение 18 вызывало уменьшение концентрации глюкозы в крови натощак в большей степени, чем лираглутид в эквимолярных дозах, см. фиг. 1. После 4 недель лечения с последующей 1 неделей лекарственных каникул (введение наполнителя) соединение 18 вызывало существенное уменьшение концентрации глюкозы в крови натощак по сравнению с наполнителем. Соединение 18 вызывало уменьшение концентрации глюкозы в крови натощак в большей степени, чем лираглутид в эквимолярных дозах, см. фиг. 2.
Соединение 18 после 3 недель лечения вызывало уменьшение площади под кривой концентрации глюкозы (ЛИС) после орального теста толерантности к глюкозе, причем соединение 18 вызывало уменьшение площади под кривой концентрации глюкозы (АИС) в большей степени, чем лираглутид, см. фиг. 3.
Соединение 18 после 4 недель лечения с последующей 1 неделей лекарственных каникул (введение наполнителя) вызывало значительное уменьшение площади под кривой концентрации глюкозы (АИС) после орального теста толерантности к глюкозе по сравнению с наполнителем, см. фиг. 4. Соединение 18 вызывало уменьшение площади под кривой концентрации глюкозы (АИС) в большей степени, чем лираглутид в эквимолярных дозах.
Наконец, соединение 18 вызывало уменьшение увеличения массы тела в течение 4-недельного курса исследования, причем соединение 18 вызывало уменьшение массы тела в большей степени, чем лираглутид в эквимолярных дозах, см. фиг. 5.
Пример 8. Исследование крыс ΖΌΡ ίη νίνο: 6 недель лечения.
Лечение
Крыс ΖΌΡ распределяли на различные группы лечения в соответствии с концентрацией НЬА1с в крови. Крысы получали два раза в день подкожные (ПК) инъекции в общей сложности в течение 6 недель. Объем инъекции составлял 5 мл/кг. В течение исследования ежедневно регистрировали массу тела (МТ) и использовали эти данные для корректировки вводимых доз пептида, исходя из массы тела.
ОТТГ
Через 5 недель животным проводили оральный тест толерантности к глюкозе. Концентрацию глюкозы в крови измеряли до введения глюкозы (в момент времени ΐ = 0, базовая линия) и после введения глюкозы вплоть до 2 ч.
Завершение исследования
В завершении определяли концентрацию НЬА1с в образцах крови.
Измерения
Общую концентрацию глюкозы в крови (в мМоль) измеряли на анализаторе (ЕВ1е Аи1оапа1у8ет, Вауег, Дания) методом на основе иммобилизованной глюкозооксидазы). Концентрацию НЬА1 в образцах крови определяли на анализаторе СоЬа8 с111 (КосЬе О1адпо8ЙС8, Мангейм, Германия).
Результаты
Двойной агонист эксендина и гастрина, Соединение 18, вызывало уменьшение концентрации глюкозы в крови натощак после 5 недель лечения по сравнению с наполнителем. Соединение 18 вызывало уменьшение концентрации глюкозы в крови натощак в большей степени, чем лираглутид в эквимолярных дозах, см. фиг. 6.
Соединение 18 вызывало уменьшение площади под кривой концентрации глюкозы (АИС) после орального теста толерантности к глюкозе после 5 недель лечения, причем соединение 18 вызывало уменьшение площади под кривой концентрации глюкозы (АИС) в большей степени, чем лираглутид, см. фиг. 7.
Соединение 18 после 6 недель лечения вызывало значительное уменьшение концентрации НЬА1с по сравнению с наполнителем. Соединение 18 вызывало уменьшение концентрации НЬА1с в большей степени, чем лираглутид в эквимолярных дозах, см. фиг. 8.
- 28 028951

Claims (26)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Конъюгат пептидов, имеющий формулу I
    К^-ба-Уа-К2 (I)
    где К1 представляет собой Н, С1-4 алкил, ацетил, формил, бензоил или трифторацетил; и К2 представляет собой ОН или ΝΗ2;
    ΖΗ представляет собой пептидную последовательность, имеющую формулу 11а Н15-С1у-С1и-С1у-ТИг-РИе-ТИг-5ег-г9-6еи-5ег-6у8-г13-г14-С1и-г16-С1и-А1а-7а1-Агд-6еи-РИе-11еС1и-г25-1.еи-1-уз-г28 (На),
    где Ζ9 выбран из О1и и Акр;
    Ζ13 выбран из О1и и Туг;
    Ζ14 выбран из Ме! и Ьеи;
    Ζ16 выбран из О1и, Сук и Ьук;
    Ζ25 выбран из Ьук, РЪе, Сук и Тгр и Ζ28 выбран из Аки и Акр или отсутствует;
    Ьа представляет собой пептидную последовательность, имеющую формулу 1Ъ
    И-62-63-64 (1Ь)
    где Ь1 выбран из От, 8Або (8-амино-3,6-диоксаоктанола), Сук, Ьук и С1и или отсутствует;
    Ь2 выбран из От, 8Або, Сук, Ьук и С1и или отсутствует;
    Ь3 выбран из От, 8Або, Сук, Ьук и С1и или отсутствует и
    Ь4 выбран из От, 8Або, Сук, Ьук и С1и или отсутствует;
    Уа представляет собой пептидную последовательность, имеющую формулу 11с Туг-С1у-Тгр-У15-А£р-РИе (Нс)
    где Υ15 выбран из Ьеи и ТЪг; и
    где по меньшей мере один остаток из Ьук или Сук в положении Ζ16 или Ζ25 формулы 11а является дополнительно конъюгированным с липофильным заместителем, содержащим пальмитоил, капроил, лауроил, миристоил или стеароил; и/или биотинилированным заместителем;
    и/или является пегилированным;
    или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения.
  2. 2. Конъюгат пептидов по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, отличающиеся тем, что указанный пептид выбран из
    Н-Н6ЕОТРТ5065К06ЕЕЕАУР6Р1Е-К(гексадеканоил-15о01и)-6КМ-8Адо-8Ас1о-¥ОУУ60Р-МН2
    Н-Н6ЕОТРТ5068КС1бЕ-К(гексадеканоил-15оО1и)-ЕА\/РбР1Е\Л/бКМ-8Ас1о-8Ас1о^0\М_0Р-МН2
    Η-Η6ΕΟΤΡΤ8068ΚΩ6ΕΕΕΑνΡ6ΡΙΕ-0(ΒΗθΤΜΗ-Μ3ΐ)-6ΚΝ-8Αάο-8Α8ο-Υθνν60Ρ-ΝΗ2
    Н-НеЕСТРТЗОбЗКОЬЕ-С(Биотин-Ма1)-ЕАУР!ЬР1ЕУУЬКМ-8Адо-8Адо-УеУУЬОР-МН2
    Н-НСЕСТРТЗЕЬЗКУЬЕЕЕАУРЬР1Е-К(гексадеканоил-15оС1и)-ЬК-ЗАс1о-8Ас1о-¥С'А'ЬОР-МН2
    Н-НСЕСТРТЗЕ63К¥6ЕЕЕАУР6Р1Е-К(гексадеканоил-15оС1и)-6К-8Адо-ОаУСУУ60Р-МН2
    Н-НСЕСТРТЗЕ68К¥6Е-К(гексадеканоил-15оС1и)-ЕАУР6Р1ЕР6КМ¥СУУ6ОР-МН2
    Н-Н6ЕСТРТ5Е68К¥бЕ-К(гексадеканоил-13оС1и)-ЕА\/РбР1ЕР6КУ6УУ6ОР-МН2
    Н-НСЕСТРТЗЕ63К¥6ЕЕЕАУР6Р1Е-К(гексадеканоил-15оС1и)-6К-8Адо-УСУУ60Р-МН2
    Н-НСЕСТРТЗЕ1_5К¥1_ЕЕЕА\/Р6Р1Е-К(гексадеканоил-15оС1и)-6КС)С!У(3'Л/1_ОР-МН2
    Н-НСЕСТРТЗЕЬЗК¥ЬЕЕЕА7Р:ЬПЕ-К(геисадеканоил-13оС1и)-ЬК-От-Огп-¥е'А'ЬОР-МН2
    Н-Н6Е6ТРТ5Е65К¥бЕЕЕАУР!бР1Е-К(гексадеканоил-13оС1и)-бКМУСУУбОР-МН2
    Н-НСЕСТРТЗЕ63КУ6ЕЕЕАУР6Р1Е-К(гексадеканоил-15оС1и)-6КО¥СУУ6ОР-МН2
    Η-ΗΘΕ6ΤΡΤ50Ι_5Καΐ_ΕΕΕΑνΡ!Ι_ΡΙΕΟ(ΡΕ65Κ)Ι_ΚΝ-8Αάο-8Α£ΐο-ΥΘννΐ_ΟΡ-ΝΗ2
    Η-ΗΟΕΟΤΡΤ3ΕΙ_3ΚΥΙ_ΕΕΕΑνΡ!Ι-ΡΙΕΟ(ΡΕΘ10Κ)Ι_Κ-8Αόο-8Α8ο-Υ<3ννΐ-ΟΡ-ΝΗ2
    Η-ΗΘΕΘΤΡΤ3Ε63ΚΥ6ΕΕΕΑνΡ6ΡΙΕΟ(ΡΕΘ20Κ)6Κ-8ΑεΙο-8Α8ο-Υ<3νν6ΟΡ-ΝΗ2 апд
    Η-ΗΟΕΟΤΡΤ3ΕΙ_3ΚΥΙ_ΕΕΕΑνΡ!Ι-ΡΙΕΟ(ΡΕΘ40Κ)Ι_Κ-8ΑεΙο-8Αύο-Υ<3ννΐ-ΟΡ-ΝΗ2.
  3. 3. Конъюгат пептидов, имеющий формулу III
    Ρ’-Ζι,-Ι-ο-ΥιτΠ2 (III),
    где К1 представляет собой Н, С1-4 алкил, ацетил, формил, бензоил или трифторацетил;
    К2 представляет собой ОН или ΝΗ2;
    ΖЪ представляет собой пептидную последовательность, имеющую формулу Ша
    Н1з-61у-<31и-61у-Т11г-Рпе-Тпг-5ег-61и-беи-5ег-бу5-Туг-беи-<3111-С1и-<31и-А1а-\/а1-Агд-бе11-Рпе-11еО1и-225-беи-буз-228 (Ша),
    где Ζ25 выбран из РЪе и Тгр и
    Ζ28 выбран из Аки и Акр или отсутствует;
    ЬЪ представляет собой пептидную последовательность, имеющую формулу ШЪ 15-66-67-68 (ШЬ)
    - 29 028951
    где Ь5 выбран из 8Або, 8Аос (8-аминооктанола), А1а, С1у и С1п или отсутствует; Ь6 выбран из 8Або, 8Аос, А1а, С1у и С1п или отсутствует;
    Ь7 выбран из 8Або, 8Аос, А1а, С1у и С1п или отсутствует и Ь8 выбран из 8Або, 8Аос, А1а, С1у и С1п или отсутствует;
    Υ| представляет собой пептидную последовательность, имеющую формулу Шс
    где Υ10 представляет собой С1и или отсутствует;
    Υ11 представляет собой А1а или отсутствует и
    Υ15 выбирают из Ьеи и Тйг;
    или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения; при условии, что формула ίίί не представляет собой Η-ΗΘΕΘΤΡΤ5ΕΙ_5ΚΥΙ_ΕΕΕΑνΚΙ-ΡΙΕΡΙ_Κ-8Α6ο-8Αόο-ΥΘννΐ-ΟΡ-ΝΗ2; Η-ΗΘΕ<3ΤΡΤ3ΕΙ-3ΚΥΙ_ΕΕΕΑνΡΙ-ΡΙΕΡΙ_ΚΥ<3ννΐ-ΟΡ-ΝΗ2; и Н-НСЕСТРТ5ЕЬЗКУЬЕЕЕА7РЬР1ЕРЬК-8Ас1о-УС\ЛАОР-МН2
  4. 4. Конъюгат пептидов по п.3, отличающийся тем, что
    Ζ|, представляет собой пептидную последовательность, имеющую формулу !Уа
    Н|5-С1у-С1и-С1у-ТИг-РИе-ТИг-5ег-С1и-Ьеи-5ег-Ьуэ-Туг-Ьеи-О1и-<31и-С1и-А1а-Уа1-Агд-1-еи-РИе-11еО1и-г25-Ьеи-Ьу5-А5п (IУа),
    где Ζ25 выбран из Рйе и Тгр и
    Ьь представляет собой пептидную последовательность, имеющую формулу ШЬ;
    У|:, представляет собой пептидную последовательность, имеющую формулу 1Ус
    Туг-С1у-Тгр-У15-Азр-РИе (1Ус)
    где Υ15 выбран из Ьеи и Тйг;
    или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения.
  5. 5. Конъюгат пептидов или его фармацевтически приемлемая соль по п.3 или 4, отличающиеся тем, что указанный пептид выбран из
    Η-ΗΘΕΘΤΡΤ3ΕΙ_3ΚΥΙ_ΕΕΕΑνΡ!Ι-ΡΙΕΡΙ_Κ00Υ0\/νΐ_0Ρ-ΝΗ2,
    Η-ΗΟΕΟΤΡΤβΕΙ-δΚΥΙ-ΕΕΕΑνΡΙ-ΡΙΕΡΙ-ΚΟΟΕΑΥΘννί-ΟΡ-ΝΗί,
    Н-НСЕСТРТЗЕ13КУЕЕЕЕАУЗЬР1ЕРЬК-8Ас1о-СЮУСУУ1-ОР-МН2,
    Н- НС ЕСТРТЗЕ1_5КУ1.ЕЕЕАУР! Ι_ΓΙ ΕΠ-ΚΌΥΟΥ/Ι-ΟΡ-Ν Н2.
    Η-Η0Ε0ΤΡΤ3ΕΙ-3ΚΥΙ-ΕΕΕΑν3Ι-ΡΙΕΡΙ-ΚΑΑΑΥ0ννΐ-0Ρ-ΝΗ2,
    Η-ΗΘΕ0ΤΡΤ5ΕΙ_5ΚΥΙ_ΕΕΕΑνΡΙ-ΡΙΕΡΙ_ΚΓΘ0Υ0ννΐ-0Ρ-ΝΗ2,
    Η- НС ΕΘΤΡΤ5ΕΙ_3ΚΥΙ_ΕΕΕΑνΡ 1_Р1 ЕРЬК-вАос-УСУУЮР- N Н2,
    Η-ΗΟΕΟΤΡΤ3ΕΙ_3ΚΥΙ-ΕΕΕΑνΡ!Ι-ΡΙΕΡΙ-ΚΝΥθννΐ-ΟΡ-ΝΗ2,
    Н- НС ΕΘΤΡΤ5ΕΙ_5ΚΥΙ_ΕΕΕΑνΡ 1_Р1 ΕΡΙ_ΚΑΥΘννΐ_ΟΡ-Ν Н2,
    Η-Η0Ε0ΤΡΤ5Ε13ΚΥΙ_ΕΕΕΑνΡ!Ι_ΡΙΕΡΙ_ΚΝ-8Αάο-8Αάο-Υ0ννΐ-0Ρ-ΝΗ2,
    Η-ΗΟΕΟΤΡΤ5Ε13ΚΎΕΕΕΕΑνΗΙ_ΡΙΕΡΙ_ΚΟ-8Α0ο-3Α<1ο-ΥΟΥ/Ι_ΟΡ-ΝΗ2,
    Н- НС ΕΟΤΡΤ5ΕΙ_5ΚΥΙ_ΕΕΕΑνΡ! Ι_ΡΙ ΕΡΙ.ΚΝ УСУУТЦ Ρ-ΝΗ2,
    Н- НС ЕСТРТЗЕЬЗКУЬЕЕЕА УР 1_Р1 ЕР Ι-ΚΡΥΟΥ/ΤΌ Ρ- ΝΗ2,
    Н- НС ΕΘΤΡΤ3ΕΙ_3ΚΥΙ_ΕΕΕΑνΡ! Ι_ΡΙ Ε'ΑΊ_ΚΝ УСУУИЭР- N Н2.
    Н- НС ЕСТРТЗЕЬЗКУЬЕЕЕА УН 1_Г1ЕУУЬКОУСУУЬОР- N Н2.
    Н- НС ΕΘΤΡΤ5ΕΙ_5ΚΥΙ_ΕΕΕΑνΡ Ι_ΡΙ ΕΡΙ_ΚΕΑΥθννΐ_ΟΡ-Ν Н2,
    Н-НСЕСТРТЗЦЬЗКСМ ЕЕЕА УК1_Р1 ΕΆΈΚΝΥΟΆ4ΌΡ-ΟΗ; и Η-ΗΟΕΟΤΡΤ5ΕΙ_5ΚΥΙ_ΕΕΕΑνΡΙ-ΡΙΕΡΙ_ΚΝ-8Αάο-8Αάο-Υθν\/ΤΟΡ-ΝΗ2
  6. 6. Применение конъюгата пептидов или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.15 в качестве лекарственного препарата.
  7. 7. Применение конъюгата пептидов или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.15 в качестве лекарственного препарата для предотвращения или лечения заболевания или нарушения, выбранного из диабета 1 типа, диабета 2 типа, преддиабета, синдрома резистентности к инсулину, нарушенной толерантности к глюкозе (НТГ), болезненных состояний, связанных с увеличением концентрации глюкозы в крови, гипергликемии, гипертензии, атерогенной дислипидемии, артериосклероза (например, атеросклероза), ишемического заболевания сердца, заболевания периферических артерий, инсульта, заболевания микрососудов, заболевания желудка, метаболического синдрома, рака (например, рака толстой кишки), воспалительного заболевания кишечника (ВЗК), синдрома раздраженного кишечника (СРК), диабетической нейропатии, диабетической ретинопатии, диабетической нефропатии и почечной недостаточности.
  8. 8. Применение конъюгата пептидов или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1- 30 028951
    5 в качестве лекарственного препарата для индуцирования неогенеза β-клеток поджелудочной железы и/или островков поджелудочной железы, индуцирования выживаемости β-клеток островков поджелудочной железы, предотвращения апоптоза и/или некроза β-клеток в островках поджелудочной железы, индуцирования пролиферации β-клеток в островках поджелудочной железы у субъекта или комбинации указанного у субъекта, нуждающегося в этом.
  9. 9. Применение конъюгата пептидов или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.68, отличающееся тем, что указанный субъект, которому вводят указанный конъюгат пептидов, представляет собой человека.
  10. 10. Применение конъюгата пептидов или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.6-9, отличающееся тем, что соединение вводят в рамках комбинированной терапии вместе с ингибитором протонного насоса или агентом для лечения или предотвращения диабета, ожирения, дислипидемии или гипертензии.
  11. 11. Применение по п.10, отличающееся тем, что:
    (ί) указанный агент для лечения или предотвращения диабета представляет собой метформин, сульфонилмочевину, меглитинид, ингибитор ДПП IV, глитазон или инсулин или аналог инсулина;
    (ίί) указанный агент для лечения или предотвращения ожирения представляет собой агонист рецептора глюкагоноподобного пептида 1, пептид УУ или его аналог, антагонист каннабиноидного рецептора 1, ингибитор липазы, агонист меланокортинового рецептора 4 или антагонист рецептора 1 меланиноконцентрирующего гормона;
    (ш) указанный агент для лечения или предотвращения гипертензии представляет собой ингибитор ангиотензинконвертирующего фермента, блокатор рецептора ангиотензина II, диуретик, β-блокатор или блокатор кальциевых каналов;
    (ίν) указанный агент для лечения или предотвращения дислипидемии представляет собой статин, фибрат, ниацин и/или ингибитор абсорбции холестерина.
  12. 12. Способ предотвращения или лечения у нуждающегося в этом субъекта заболевания или нарушения, выбранного из группы, состоящей из диабета 1 типа, диабета 2 типа, преддиабета, синдрома резистентности к инсулину, нарушенной толерантности к глюкозе (НТГ), болезненных состояний, связанных с увеличением концентрации глюкозы в крови, гипергликемии, гипертензии, атерогенной дислипидемии, артериосклероза (например, атеросклероза), ишемического заболевания сердца, заболевания периферических артерий, инсульта, заболевания микрососудов, заболевания желудка, метаболического синдрома, рака (например, рака толстой кишки), воспалительного заболевания кишечника (ВЗК), синдрома раздраженного кишечника (СРК), диабетической нейропатии, диабетической ретинопатии, диабетической нефропатии и почечной недостаточности, указанный способ включает введение указанному нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества конъюгата пептидов или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-5.
  13. 13. Способ по п.12, отличающийся тем, что указанный субъект представляет собой человека.
  14. 14. Способ по любому из пп.12-13, отличающийся тем, что соединение вводят в рамках комбинированной терапии вместе с ингибитором протонного насоса или агентом для лечения или предотвращения диабета, ожирения, дислипидемии или гипертензии.
  15. 15. Способ по п.14, отличающийся тем, что:
    (ί) указанный агент для лечения или предотвращения диабета представляет собой метформин, сульфонилмочевину, меглитинид, ингибитор ДПП IV, глитазон или инсулин или аналог инсулина;
    (ίί) указанный агент для лечения или предотвращения ожирения представляет собой агонист рецептора глюкагоноподобного пептида 1, пептид УУ или его аналог, антагонист каннабиноидного рецептора 1, ингибитор липазы, агонист меланокортинового рецептора 4 или антагонист рецептора 1 меланиноконцентрирующего гормона;
    (ш) указанный агент для лечения или предотвращения гипертензии представляет собой ингибитор ангиотензинконвертирующего фермента, блокатор рецептора ангиотензина II, диуретик, β-блокатор или блокатор кальциевых каналов;
    (ίν) указанный агент для лечения или предотвращения дислипидемии представляет собой статин, фибрат, ниацин и/или ингибитор абсорбции холестерина.
  16. 16. Фармацевтическая композиция, которая содержит конъюгат пептидов или его фармацевтически приемлемую соль по любому из пп.1-5 и фармацевтически приемлемый носитель, вспомогательное вещество или наполнитель.
  17. 17. Применение конъюгата пептидов или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-5 в способе лечения или предотвращения состояния, которое вызвано или характеризуется избыточной массой тела, или для предотвращения увеличения массы тела, или для способствования уменьшению массы тела у субъекта, нуждающегося в этом.
  18. 18. Применение по п.17, отличающееся тем, что указанное состояние, которое вызвано или характеризуется избыточной массой тела, выбрано из группы, включающей ожирение, морбидное ожирение, воспаление, связанное с ожирением, заболевание желчного пузыря, связанное с ожирением, и синдром
    - 31 028951
    апноэ во сне, вызванный ожирением, метаболический синдром и преддиабет.
  19. 19. Применение конъюгата пептидов или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-5 в способе улучшения концентрации циркулирующей глюкозы, улучшения толерантности к глюкозе и/или улучшения концентрации циркулирующего холестерина, уменьшения концентрации циркулирующих ЛПНП, увеличения соотношения ЛПВП/ЛПНП или комбинации указанного.
  20. 20. Применение по п.19, отличающееся тем, что в режиме дозирования применяют лекарственные каникулы.
  21. 21. Применение по любому из пп.17-20, отличающееся тем, что соединение вводят в рамках комбинированной терапии вместе с ингибитором протонного насоса или агентом для лечения или предотвращения диабета, ожирения, дислипидемии или гипертензии.
  22. 22. Применение по п.21, отличающееся тем, что:
    (ί) указанный агент для лечения или предотвращения диабета представляет собой метформин, сульфонилмочевину, меглитинид, ингибитор ДНИ IV, глитазон или инсулин или аналог инсулина;
    (ίί) указанный агент для лечения или предотвращения ожирения представляет собой агонист рецептора глюкагоноподобного пептида 1, пептид ΥΥ или его аналог, антагонист каннабиноидного рецептора 1, ингибитор липазы, агонист меланокортинового рецептора 4 или антагонист рецептора 1 меланиноконцентрирующего гормона;
    (ίίί) указанный агент для лечения или предотвращения гипертензии представляет собой ингибитор ангиотензинконвертирующего фермента, блокатор рецептора ангиотензина II, диуретик, β-блокатор или блокатор кальциевых каналов;
    (ίν) указанный агент для лечения или предотвращения дислипидемии представляет собой статин, фибрат, ниацин и/или ингибитор абсорбции холестерина.
  23. 23. Способ производства конъюгата пептидов по любому из пп.1-5 посредством синтеза, включающий
    осуществление синтеза указанного конъюгата пептидов с использованием стандартной методики твердофазного или жидкофазного синтеза и
    выделение и очистку конечного продукта, представляющего собой указанный конъюгат пептидов.
  24. 24. Способ производства конъюгата пептидов по любому из пп.1-5 или его фармацевтически приемлемой соли с использованием рекомбинантных технологий, включающий:
    (a) осуществление экспрессии конструкции нуклеиновой кислоты, кодирующей конъюгат пептидов, в клетке-хозяине и выделение продукта экспрессии из культуры указанной клетки-хозяина; или
    (b) осуществление экспрессии конструкции нуклеиновой кислоты, кодирующей указанный конъюгат пептидов в бесклеточной системе ίη νίΐΓο, и выделение продукта экспрессии;
    или посредством осуществления комбинации этапов (а) и (Ь) для получения фрагментов конъюгата пептидов, затем лигирования указанных фрагментов с получением конъюгата пептидов и выделения указанного конъюгата пептидов.
  25. 25. Устройство, которое содержит по меньшей мере один конъюгат пептидов по любому из пп.1-5 или его фармацевтически приемлемую соль для доставки указанного конъюгата пептидов или его фармацевтически приемлемой соли субъекту.
  26. 26. Набор, включающий по меньшей мере один конъюгат пептидов или его фармацевтически приемлемую соль по любому из пп.1-5 и упаковку или инструкцию по применению.
    - 32 028951
EA201490790A 2011-11-03 2012-11-02 Пептидные конъюгаты агониста рецептора гастрина и глюкагон подобного пептида 1 EA028951B9 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161555435P 2011-11-03 2011-11-03
PCT/EP2012/071766 WO2013064669A1 (en) 2011-11-03 2012-11-02 Glp-1 receptor agonist peptide gastrin conjugates

Publications (3)

Publication Number Publication Date
EA201490790A1 EA201490790A1 (ru) 2014-10-30
EA028951B1 true EA028951B1 (ru) 2018-01-31
EA028951B9 EA028951B9 (ru) 2018-05-31

Family

ID=47146385

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201490790A EA028951B9 (ru) 2011-11-03 2012-11-02 Пептидные конъюгаты агониста рецептора гастрина и глюкагон подобного пептида 1

Country Status (13)

Country Link
US (2) US9259477B2 (ru)
EP (1) EP2773377B1 (ru)
JP (1) JP6359972B2 (ru)
KR (1) KR20140100947A (ru)
CN (1) CN104144704B (ru)
AR (1) AR088636A1 (ru)
AU (1) AU2012331053A1 (ru)
BR (1) BR112014010780A2 (ru)
CA (1) CA2853884A1 (ru)
EA (1) EA028951B9 (ru)
MX (1) MX2014005351A (ru)
TW (1) TW201326194A (ru)
WO (1) WO2013064669A1 (ru)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG184988A1 (en) 2010-04-27 2012-11-29 Zealand Pharma As Peptide conjugates of glp-1 receptor agonists and gastrin and their use
BR112014010780A2 (pt) 2011-11-03 2017-04-25 Zealand Pharma As conjugados do peptídeo agonista do receptor glp-1-gastrina
MX369770B (es) 2013-11-06 2019-11-21 Zealand Pharma As Compuestos agonistas triples de glucagón-glp-1-gip.
EP3065767B1 (en) 2013-11-06 2020-12-30 Zealand Pharma A/S Gip-glp-1 dual agonist compounds and methods
CA2965732A1 (en) 2014-10-29 2016-05-06 Zealand Pharma A/S Gip agonist compounds and methods
WO2016168388A2 (en) 2015-04-14 2016-10-20 Palatin Technologies, Inc. Therapies for obesity, diabetes and related indications
WO2017152861A1 (en) * 2016-03-10 2017-09-14 Shenzhen Hightide Biopharmaceutical, Ltd. Conjugates of islet neogenesis peptides and analogs, and methods thereof
JP6563614B1 (ja) 2016-12-09 2019-08-21 ジーランド・ファーマ・ア／エス アシル化ｇｌｐ−１／ｇｌｐ−２二重アゴニスト
BR112019028134A2 (pt) * 2017-06-29 2020-09-29 UREKA, Sarl peptídeo pró-fármaco com propriedades farmacêuticas
CN109248323B (zh) * 2017-07-14 2023-09-08 杭州先为达生物科技有限公司 酰化的glp-1衍生物
CN109331173B (zh) * 2018-12-17 2021-05-07 中国医学科学院医学实验动物研究所 胃泌素-二氧化硅微球及其用途
CN112759640B (zh) * 2020-12-09 2023-09-08 江苏师范大学 一类glp-1/胃泌素受体双重激动剂及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007095737A1 (en) * 2006-02-21 2007-08-30 Waratah Pharmaceuticals Inc. Combination therapy for the treatment of diabetes comprising an exendin agonist and a gastrin compound
WO2011084808A2 (en) * 2009-12-21 2011-07-14 Amunix Operating Inc. Bifunctional polypeptide compositions and methods for treatment of metabolic and cardiovascular diseases
WO2011134471A1 (en) * 2010-04-27 2011-11-03 Zealand Pharma A/S Peptide conjugates of glp-1 receptor agonists and gastrin and their use

Family Cites Families (99)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4288627A (en) 1980-02-12 1981-09-08 Phillips Petroleum Company Oxidation of thiols employing cobalt molybdate/triethylamine catalyst
US5614492A (en) 1986-05-05 1997-03-25 The General Hospital Corporation Insulinotropic hormone GLP-1 (7-36) and uses thereof
US5120712A (en) 1986-05-05 1992-06-09 The General Hospital Corporation Insulinotropic hormone
US5118666A (en) 1986-05-05 1992-06-02 The General Hospital Corporation Insulinotropic hormone
CA2073856C (en) 1990-01-24 2002-12-03 Douglas I. Buckley Glp-1 analogs useful for diabetes treatment
US5545618A (en) 1990-01-24 1996-08-13 Buckley; Douglas I. GLP-1 analogs useful for diabetes treatment
BR9106435A (pt) 1990-05-09 1993-05-04 Novo Nordisk As Preparado de celulase,enzima demonstrando atividade de andoglucanase,enzima de endoglucanase,construcao de dna,vetor de expressao celula,processo para produzir uma enzima de endoglucanase,aditivo composicao detergente,e processo para reduzir a taxa em que os tecidos contendo celulose,se tornam asperos,prover clareamento da cor de tecidos contendo celulose colorida,prover uma variacao localizada da cor de tecidos contendo colorida,e melhorar as propriedades de drenagem de polpa
DK36392D0 (da) 1992-03-19 1992-03-19 Novo Nordisk As Anvendelse af kemisk forbindelse
DK39892D0 (da) 1992-03-25 1992-03-25 Bernard Thorens Peptid
US5846747A (en) 1992-03-25 1998-12-08 Novo Nordisk A/S Method for detecting glucagon-like peptide-1 antagonists and agonists
US5424286A (en) 1993-05-24 1995-06-13 Eng; John Exendin-3 and exendin-4 polypeptides, and pharmaceutical compositions comprising same
WO1995005848A1 (en) 1993-08-24 1995-03-02 Novo Nordisk A/S Protracted glp-1
KR100429966B1 (ko) 1993-09-07 2004-05-04 아밀린 파마슈티칼스, 인크. 위장 운동성 조절을 위한 제약 조성물
US5705483A (en) 1993-12-09 1998-01-06 Eli Lilly And Company Glucagon-like insulinotropic peptides, compositions and methods
US5512549A (en) 1994-10-18 1996-04-30 Eli Lilly And Company Glucagon-like insulinotropic peptide analogs, compositions, and methods of use
US5523449A (en) 1995-05-17 1996-06-04 Bayer Corporation Process for preparing phosphorodichlorido-dithioates by reacting alkylmercaptans with phosphorus trichloride in the presence of sulfur
ATE316100T1 (de) 1996-06-05 2006-02-15 Roche Diagnostics Gmbh Exendin-analoga, verfahren zu deren herstellung und diese enthaltende arzneimittel
US6110703A (en) 1996-07-05 2000-08-29 Novo Nordisk A/S Method for the production of polypeptides
CA2262647C (en) 1996-08-08 2007-12-04 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Methods for regulating gastrointestinal motility
US6277819B1 (en) 1996-08-30 2001-08-21 Eli Lilly And Company Use of GLP-1 or analogs in treatment of myocardial infarction
US6006753A (en) 1996-08-30 1999-12-28 Eli Lilly And Company Use of GLP-1 or analogs to abolish catabolic changes after surgery
DE69737479T4 (de) 1996-08-30 2010-05-06 Novo Nordisk A/S Glp-1 derivate
US6458924B2 (en) 1996-08-30 2002-10-01 Novo Nordisk A/S Derivatives of GLP-1 analogs
US7235627B2 (en) 1996-08-30 2007-06-26 Novo Nordisk A/S Derivatives of GLP-1 analogs
US6268343B1 (en) 1996-08-30 2001-07-31 Novo Nordisk A/S Derivatives of GLP-1 analogs
US6384016B1 (en) 1998-03-13 2002-05-07 Novo Nordisk A/S Stabilized aqueous peptide solutions
DE69732640T2 (de) 1996-09-09 2006-01-12 Zealand Pharma A/S Festphasen-peptidsynthese
JP2001505872A (ja) 1996-09-09 2001-05-08 ジーランド ファーマシューティカルズ アクティーゼルスカブ α―ヒドロキシ酸リンカーを含むペプチドプロドラッグ
UA65549C2 (ru) 1996-11-05 2004-04-15 Елі Ліллі Енд Компані Применение аналогов и производных glp-1 для периферического введения для борьбы с ожирением
WO1998022577A1 (en) 1996-11-15 1998-05-28 Maria Grazia Masucci Fusion proteins having increased half-lives
ES2425559T5 (es) 1997-01-07 2018-02-02 Amylin Pharmaceuticals, Llc Composiciones farmacéuticas que comprenden las exendinas y los agonistas de las mismas
US6136784A (en) 1997-01-08 2000-10-24 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Amylin agonist pharmaceutical compositions containing insulin
US6410511B2 (en) 1997-01-08 2002-06-25 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Formulations for amylin agonist peptides
WO1998035033A1 (en) 1997-02-05 1998-08-13 1149336 Ontario Inc. Polynucleotides encoding proexendin, and methods and uses thereof
US5846937A (en) 1997-03-03 1998-12-08 1149336 Ontario Inc. Method of using exendin and GLP-1 to affect the central nervous system
CA2289094A1 (en) 1997-05-07 1998-11-12 Max-Planck-Gesellschaft zur Forderung der Wissenschaften E.V., Berlin New cysteine derivatives, processes for their production, and pharmaceuticals containing them
PT1019077E (pt) 1997-08-08 2008-02-21 Amylin Pharmaceuticals Inc Novos compostos agonistas de exendina
US7157555B1 (en) 1997-08-08 2007-01-02 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Exendin agonist compounds
US7220721B1 (en) 1997-11-14 2007-05-22 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Exendin agonist peptides
JP2003522721A (ja) 1997-11-14 2003-07-29 アミリン・ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド 新規なエキセンジンアゴニスト化合物
US7223725B1 (en) 1997-11-14 2007-05-29 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Exendin agonist compounds
DK1032587T4 (da) 1997-11-14 2013-04-08 Amylin Pharmaceuticals Llc Hidtil ukendte exendinagonist-forbindelser
JP2001525371A (ja) 1997-12-05 2001-12-11 イーライ・リリー・アンド・カンパニー Ｇｌｐ−１製剤
ATE366115T1 (de) 1998-02-13 2007-07-15 Amylin Pharmaceuticals Inc Inotropische und diuretische effekte von exendin und glp-1
US6703359B1 (en) 1998-02-13 2004-03-09 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Inotropic and diuretic effects of exendin and GLP-1
AU3247799A (en) 1998-02-27 1999-09-15 Novo Nordisk A/S Glp-1 derivatives of glp-1 and exendin with protracted profile of action
ATE466028T1 (de) 1998-02-27 2010-05-15 Novo Nordisk As N-terminal veränderte glp-1 abkömmlinge
JP4394279B2 (ja) 1998-03-09 2010-01-06 ジーランド ファーマ アクティーゼルスカブ 酵素加水分解に対する傾向が減少した薬理学的に活性なペプチド複合体
WO1999049788A1 (en) 1998-03-30 1999-10-07 Focus Surgery, Inc. Ablation system
SE9802080D0 (sv) 1998-06-11 1998-06-11 Hellstroem Pharmaceutical composition for the treatment of functional dyspepsia and/or irritable bowel syndrome and new use of substances therein
CA2339326A1 (en) 1998-08-10 2000-02-24 Josephine Egan Differentiation of non-insulin producing cells into insulin producing cells by glp-1 or exendin-4 and uses thereof
WO2000020592A1 (en) 1998-10-07 2000-04-13 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. Glucose-dependent insulinotropic peptide for use as an osteotropic hormone
US6284725B1 (en) 1998-10-08 2001-09-04 Bionebraska, Inc. Metabolic intervention with GLP-1 to improve the function of ischemic and reperfused tissue
ATE460942T1 (de) 1999-01-14 2010-04-15 Amylin Pharmaceuticals Inc Exendine zur glucagon suppression
CA2356706C (en) 1999-01-14 2014-09-30 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Novel exendin agonist formulations and methods of administration thereof
US7399489B2 (en) 1999-01-14 2008-07-15 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Exendin analog formulations
US6451987B1 (en) 1999-03-15 2002-09-17 Novo Nordisk A/S Ion exchange chromatography of proteins and peptides
EP1956000B1 (en) 1999-03-17 2016-10-05 Novo Nordisk A/S Acylating agents useful for acylating peptides
US6451974B1 (en) 1999-03-17 2002-09-17 Novo Nordisk A/S Method of acylating peptides and novel acylating agents
US6271241B1 (en) 1999-04-02 2001-08-07 Neurogen Corporation Cycloalkyl and aryl fused aminoalkyl-imidazole derivatives: modulators and GLP-1 receptors
CA2372214A1 (en) 1999-04-30 2000-11-09 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Modified exendins and exendin agonists
US6924264B1 (en) 1999-04-30 2005-08-02 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Modified exendins and exendin agonists
US7601691B2 (en) 1999-05-17 2009-10-13 Conjuchem Biotechnologies Inc. Anti-obesity agents
SI1180121T1 (en) 1999-05-17 2004-04-30 Conjuchem, Inc. Long lasting insulinotropic peptides
US6506724B1 (en) 1999-06-01 2003-01-14 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Use of exendins and agonists thereof for the treatment of gestational diabetes mellitus
US6344180B1 (en) 1999-06-15 2002-02-05 Bionebraska, Inc. GLP-1 as a diagnostic test to determine β-cell function and the presence of the condition of IGT and type II diabetes
US6528486B1 (en) 1999-07-12 2003-03-04 Zealand Pharma A/S Peptide agonists of GLP-1 activity
EP1076066A1 (en) 1999-07-12 2001-02-14 Zealand Pharmaceuticals A/S Peptides for lowering blood glucose levels
US6586438B2 (en) 1999-11-03 2003-07-01 Bristol-Myers Squibb Co. Antidiabetic formulation and method
US6894024B2 (en) 2000-10-20 2005-05-17 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of hibernating myocardium and diabetic cardiomyopathy with a GLP-1 peptide
GB0121709D0 (en) 2001-09-07 2001-10-31 Imp College Innovations Ltd Food inhibition agent
EP1837031B1 (en) * 2002-06-07 2009-10-14 Waratah Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating diabetes
AU2003243929B2 (en) 2002-07-04 2009-06-04 Zp Holding Spv K/S GLP-1 and methods for treating diabetes
KR20050083713A (ko) 2002-10-02 2005-08-26 질랜드 파마 에이/에스 안정화된 엑센딘-4 화합물
US7192922B2 (en) 2002-11-19 2007-03-20 Allegheny-Singer Research Institute Method of treating left ventricular dysfunction
US7623530B2 (en) 2003-11-20 2009-11-24 Nokia Corporation Indication of service flow termination by network control to policy decision function
RU2006131046A (ru) 2004-01-30 2008-03-10 Уэрейта Фармасьютикалз, Инк. (Ca) Совместное применение агониста glp-1 и соединений гастрина
US8076288B2 (en) 2004-02-11 2011-12-13 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Hybrid polypeptides having glucose lowering activity
CA2849552A1 (en) * 2004-02-11 2005-08-25 Amylin Pharmaceuticals, Llc Hybrid polypeptides with selectable properties
TW200716159A (en) * 2005-06-09 2007-05-01 Univ Maryland Method of use of antagonists of zonulin to prevent the loss of or to regenerate pancreatic cells
WO2007100535A2 (en) 2006-02-22 2007-09-07 Merck & Co., Inc. Oxyntomodulin derivatives
JP5819586B2 (ja) 2006-11-08 2015-11-24 ジーランド ファーマ アクティーゼルスカブ 選択的グルカゴン様ペプチド−２（ｇｌｐ−２）類似体
WO2008071010A1 (en) 2006-12-12 2008-06-19 Waratah Pharmaceuticals Inc. Combination treatments with selected growth/hormone regulatory factors for diabetes and related diseases
TWI428346B (zh) 2006-12-13 2014-03-01 Imp Innovations Ltd 新穎化合物及其等對進食行為影響
AU2008216265B2 (en) 2007-02-15 2014-04-03 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/GLP-1 receptor co-agonists
JP5385266B2 (ja) 2007-06-15 2014-01-08 ジーランド ファーマ アクティーゼルスカブ グルカゴン類似体
FR2917552B1 (fr) 2007-06-15 2009-08-28 Sagem Defense Securite Procede de regulation de la gigue de transmission au sein d'un terminal de reception
GB2455553B (en) 2007-12-14 2012-10-24 Nuaire Ltd Motor mounting assembly for an axial fan
CN102088989B (zh) 2008-06-17 2014-11-26 印第安纳大学研究及科技有限公司 在生理pH缓冲液中具有增强的溶解性和稳定性的胰高血糖素类似物
ES2477880T3 (es) 2008-12-15 2014-07-18 Zealand Pharma A/S Análogos del glucagón
MX2011006320A (es) 2008-12-15 2011-09-22 Zealand Pharma As Analogos de glucagon.
DK2370462T3 (da) 2008-12-15 2014-09-08 Zealand Pharma As Glucagon-analoger
UA104605C2 (ru) 2008-12-15 2014-02-25 Зіленд Фарма А/С Аналоги глюкагона
WO2010096052A1 (en) 2009-02-19 2010-08-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Oxyntomodulin analogs
MX342409B (es) 2010-01-20 2016-09-28 Zealand Pharma As Tratamiento de enfermedades cardiacas.
BR112014010780A2 (pt) 2011-11-03 2017-04-25 Zealand Pharma As conjugados do peptídeo agonista do receptor glp-1-gastrina
TWI608013B (zh) 2012-09-17 2017-12-11 西蘭製藥公司 升糖素類似物
PL3057984T3 (pl) 2013-10-17 2018-12-31 Zealand Pharma A/S Acylowane analogi glukagonu
US9988429B2 (en) 2013-10-17 2018-06-05 Zealand Pharma A/S Glucagon analogues

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007095737A1 (en) * 2006-02-21 2007-08-30 Waratah Pharmaceuticals Inc. Combination therapy for the treatment of diabetes comprising an exendin agonist and a gastrin compound
WO2011084808A2 (en) * 2009-12-21 2011-07-14 Amunix Operating Inc. Bifunctional polypeptide compositions and methods for treatment of metabolic and cardiovascular diseases
WO2011134471A1 (en) * 2010-04-27 2011-11-03 Zealand Pharma A/S Peptide conjugates of glp-1 receptor agonists and gastrin and their use

Also Published As

Publication number Publication date
JP6359972B2 (ja) 2018-07-18
EP2773377B1 (en) 2020-07-08
US9861706B2 (en) 2018-01-09
EP2773377A1 (en) 2014-09-10
CN104144704B (zh) 2018-03-23
US20140336107A1 (en) 2014-11-13
AU2012331053A1 (en) 2014-05-29
KR20140100947A (ko) 2014-08-18
MX2014005351A (es) 2014-05-28
WO2013064669A1 (en) 2013-05-10
CN104144704A (zh) 2014-11-12
US20160082118A1 (en) 2016-03-24
EA028951B9 (ru) 2018-05-31
TW201326194A (zh) 2013-07-01
EA201490790A1 (ru) 2014-10-30
BR112014010780A2 (pt) 2017-04-25
CA2853884A1 (en) 2013-05-10
AR088636A1 (es) 2014-06-25
US9259477B2 (en) 2016-02-16
JP2015502918A (ja) 2015-01-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA028951B1 (ru) Пептидные конъюгаты агониста рецептора гастрина и глюкагон подобного пептида 1
CN105829339B (zh) 胰高血糖素-glp-1-gip三重激动剂化合物
US11382956B2 (en) Amylin analogues
JP5969461B2 (ja) Ｇｌｐ−１受容体作動薬とガストリンとのペプチド複合体及びその使用
JP6898231B6 (ja) Ｇｉｐアゴニスト化合物及び方法
AU2016232218B2 (en) Amylin analogues
KR20160079875A (ko) Ｇｉｐ-ｇｌｐ-1 이원 효능제 화합물 및 방법
JP2017501107A (ja) アミリン類似体
WO2013098408A1 (en) Glucagon and cck receptor agonist peptide conjugates
EA042757B1 (ru) Аналоги амилина

Legal Events

Date Code Title Description
TH4A Publication of the corrected specification to eurasian patent
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM