EA042757B1 - Аналоги амилина - Google Patents

Description

Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании заявки на европейский патент №

16188024.0, поданной 9 сентября 2016 г., содержание которой полностью включено в настоящее описание посредством ссылки.

Область техники

Настоящее изобретение относится к аналогам амилина, которые являются агонистами рецептора амилина, и их медицинскому применению для лечения и/или предотвращения ряда заболеваний, состояний или расстройств, включая лечение и/или предотвращение избыточного потребления пищи, ожирения и избыточной массы тела, метаболических заболеваний и других состояний и расстройств, описанных в настоящем описании. В частности, настоящее изобретение относится к стабильным аналогам амилина, которые имеют большую продолжительность действия и являются хорошо подходящими для применения в форме жидкого состава.

Уровень техники

Амилин является представителем семейства пептидных гормонов, которое включает амилин, кальцитонин, пептид, связанный с геном кальцитонина, адреномедуллин и интермедии (интермедии также известен как AFP-6), и вовлечен в различные метаболические заболевания и расстройства. Амилин человека был впервые выделен, очищен и охарактеризован как основной компонент отложений амилоида в островках поджелудочной железы у пациентов с диабетом типа 2.

Нативный амилин человека представляет собой пептид, состоящий из 37 аминокислот, имеющий формулу

H-KC()NTATC()ATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTY-NH₂, где Н- на N-конце обозначает атом водорода, что соответствует наличию свободной аминогруппы у N-концевого аминокислотного остатка [то есть остатка лизина (K) в положении номер 1 последовательности, представленной выше]; где -NH2 на С-конце указывает на то, что С-концевая карбоксильная группа находится в амидной форме; и где круглые скобки () при двух остатках цистеина (С, Cys) в положениях 2 и 7 последовательности указывают на наличие внутримолекулярного дисульфидного мостика между двумя рассматриваемыми остатками Cys.

Амилин может быть подходящим для применения для лечения нарушений обмена веществ, таких как диабет и/или ожирение. Полагают, что амилин регулирует опорожнение желудка и подавляет секрецию глюкагона и потребление пищи, регулируя таким образом скорость высвобождения глюкозы в кровоток. Амилин, по-видимому, дополняет действие инсулина. По сравнению со здоровыми взрослыми, у пациентов с диабетом типа 1 циркулирующий амилин отсутствует, а у пациентов с диабетом типа 2 наблюдается снижение концентраций амилина в постпрандиальном периоде. В исследованиях у людей было показано, что аналог амилина, известный как прамлинтид, описанный в WO 93/10146 и имеющий последовательность Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-SerAsn-Asn-Phe-Gly-Pro-lle-Leu-Pro-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr, которая также содержит дисульфидный мостик между остатками Cys в положениях 2 и 7, обеспечивает снижение массы тела или ограничивает увеличение массы тела. Альтернативный аналог амилина, содержащий N-метилированные остатки и имеющий сниженную склонность к фибриллообразованию, обозначаемый IAPP-GI, был описан в источнике Yan et al. (PNAS, 103(7), 2046-2051, 2006; Angew. Chem. Int. Ed. 2013, 52, 10378-10383; WO 2006/042745). Однако оказалось, что IAPP-GI обладает более низкой эффективностью, чем нативный амилин.

В WO 91/07978 описаны аналоги гипокальциемических пептидов, включая амилин, в котором внутренние дисульфидные мостики заменены на альтернативные циклические структуры. Влияние этих альтернативных структур на активность аналогов амилина не раскрыто. В WO 99/34764 представлены данные, показывающие, что ^2,7цикло-[2Asp,7Lys]-h-амилин обладает значительно более низкой активностью, чем некоторые другие аналоги амилина и сам амилин человека.

Другие аналоги амилина или прамлинтида описаны в WO 2013/156594, WO 2012/168430, WO 2012/168431 и WO 2012/168432, а также WO 2015/040182.

Полагают, что ожирение является основным причинным фактором развития диабета типа 2, который представляет собой возрастающую важнейшую проблему здравоохранения во всем мире. Заболевания или расстройства, которые могут развиваться вследствие отсутствия лечения диабета, включают сердечно-сосудистые заболевания и заболевания периферических артерий, заболевания мелких и крупных сосудов, инсульт и некоторые формы рака, в частности раковые заболевания системы кроветворения.

В данной области техники существует потребность в дополнительных аналогах амилина. Например, аналоги амилина, которые демонстрируют сниженную склонность к фибриллообразованию и/или высокую химическую стабильность при рН 7 или близком к нему, могут обеспечить возможность получения состава с физиологическим или близким к нему значением рН. Аналоги амилина, имеющие периоды полувыведения из плазмы подходящей длительности, могут также обеспечить возможность более длительных промежутков между введениями, чем это возможно в настоящее время (например, введение один раз в неделю или даже менее часто) и, следовательно, повысить комплаентность пациента. Также могут быть желательны высокие уровни агонистической активности в отношении рецептора амилина.

- 1 042757

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям, которые являются аналогами амилина человека.

В первом аспекте в настоящем изобретении предложен аналог амилина, который представляет собой соединение, имеющее формулу

R1-Z-R², где

R¹ представляет собой водород, C₁_₄-ацил, бензоил или C₁_₄-алкил или увеличивающий период полувыведения фрагмент М, где М необязательно связан с Z через линкерный фрагмент L;

R² представляет собой ОН или NHR³, где R³ представляет собой водород или C₁_₃-алкил; и

Z представляет собой аминокислотную последовательность формулы I:

X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-Ala-Thr-X10-Arg-Leu-Ala-X14-Phe-Leu-X17-Arg-X19-X20-PheGly(Me)-Ala-lle(Me)-X27-Ser-Ser-Thr-Glu-X32-Gly-Ser-X35-Thr-X37 (I), где

Х1 выбран из группы, состоящей из Arg, Lys и Glu;

Х3 выбран из группы, состоящей из Gly, Gln и Pro;

Х4 выбран из группы, состоящей из Thr и Glu;

Х5 выбран из группы, состоящей из Ala и Leu;

Х6 выбран из группы, состоящей из Thr и Ser;

Х10 выбран из группы, состоящей из Glu и Gln;

Х14 выбран из группы, состоящей из Aad, His, Asp, Asn и Arg;

X17 выбран из группы, состоящей из Gln, His и Thr;

Х19-Х20 выбран из Ser-Ser, Thr-Thr, Ala-Thr, Ala-Ala, Gly-Thr, Gly-Gly и Ala-Asn или отсутствует;

X27 выбран из группы, состоящей из Leu и Pro;

Х32 выбран из группы, состоящей из Val и Thr;

Х35 выбран из группы, состоящей из Asn и Ser;

Х37 выбран из группы, состоящей из Hyp и Pro и

Х2 и Х7 представляют собой аминокислотные остатки, боковые цепи которых совместно образуют лактамный мостик;

или его фармацевтически приемлемую соль или сольват.

В некоторых вариантах реализации Х1 выбран из Arg и Lys.

В некоторых вариантах реализации Х3 представляет собой Gly, X4 представляет собой Thr, Х5 представляет собой Ala и/или Х6 представляет собой Thr, например Х3 представляет собой Gly, X4 представляет собой Thr, X5 представляет собой Ala и Х6 представляет собой Thr.

В некоторых вариантах реализации Х14 выбран из His, Asp и Aad. В некоторых вариантах реализации Х17 представляет собой Gln.

В некоторых вариантах реализации Х19-Х20 выбран из Ser-Ser и Thr-Thr или отсутствует, например представляет собой Ser-Ser.

В некоторых вариантах реализации Х32 представляет собой Val, X35 представляет собой Asn и/или Х37 представляет собой Hyp.

Следовательно, Z может представлять собой аминокислотную последовательность формулы II:

X1-X2-Gly-Thr-Ala-Thr-X7-Ala-Thr-X10-Arg-Leu-Ala-X14-Phe-Leu-Gln-Arg-X19-X20-PheGly(Me)-Ala-lle(Me)-X27-Ser-Ser-Thr-Glu-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Hyp (II), где

Х1 выбран из группы, состоящей из Arg и Lys;

Х10 выбран из группы, состоящей из Glu и Gln;

Х14 выбран из группы, состоящей из Aad, Asp и His;

Х19-Х20 выбран из Ser-Ser и Thr-Thr или отсутствует;

Х27 выбран из группы, состоящей из Leu и Pro и

Х2 и Х7 представляют собой аминокислотные остатки, боковые цепи которых совместно образуют лактамный мостик.

В некоторых вариантах реализации Х14 представляет собой Aad, X19-X20 представляет собой SerSer и Х27 представляет собой Leu.

В настоящем описании положения аминокислот аналогов амилина пронумерованы в соответствии с соответствующим положением нативного амилина человека, имеющего последовательность, представленную выше. Последовательности формул I и II (и других формул в настоящем описании) содержат делецию двух аминокислот, соответствующих двум остаткам Asn21 и Asn22 амилина человека.

Таким образом, для простоты сравнения с последовательностью амилина остаток Phe, находящийся со стороны С-конца (в прямом направлении) непосредственно после положения Х20, обозначен как положение 23, поскольку он соответствует Phe23 амилина человека. Следовательно, нумерация любого отдельно взятого остатка в формулах I и II, представленных выше, и в других формулах во всем объеме настоящего описания указывает на соответствующий остаток амилина человека при условии оптималь- 2 042757 ного выравнивания с ним и не обязательно указывает на линейное положение указанного остатка в конкретной последовательности.

Очевидно, что любая из соответствующих формул, представленных в настоящем описании, может быть представлена так, чтобы включать остатки Х21-Х22 в соответствующих положениях, где Х21 и Х22 отсутствуют.

Известно, что нативный амилин почти мгновенно образует фибриллы в водном растворе. Следовательно, было предпринято много попыток повышения стабильности аналогов амилина в жидких составах. Склонность к фибриллообразованию может быть уменьшена путем введения N-метилированных остатков (упомянутых выше) и/или путем замены некоторых аминокислот в различных положениях. Однако, несмотря на эти возможности, сохраняется потребность в дополнительной оптимизации стабильности аналогов амилина в водном растворе. Аналоги амилина с дополнительно повышенной химической стабильностью в водном растворе будут способствовать разработке соответствующего фармацевтического продукта, возможно, даже в форме готового к применению состава, например, имеющего рН в диапазоне нейтральных или близких к ним значений (рН 7-7,4).

Нативный амилин и абсолютное большинство аналогов амилина (таких как прамлинтид) содержат дисульфидный мостик между остатками цистеина в положениях 2 и 7. Внутренняя циклизация, которую обеспечивает этот мостик, по-видимому, необходима для полной эффективности и активности. Несмотря на то, что соединения, содержащие внутреннюю дисульфидную связь, часто являются менее химически стабильными, чем это может быть желательно, и присутствие указанной связи может способствовать димеризации и олигомеризации, например, путем реакций дисульфидного обмена, не асообщалось, что дисульфидная связь в амилине или аналогах амилина является фактором, имеющим отношение к низкой химической стабильности в водных составах.

Сообщалось о нескольких попытках замены дисульфидного мостика в амилине. Как описано выше, Как описано выше, при попытке повысить стабильность и эффективность in vivo путем уменьшения химического и ферментативного протеолиза в WO 91/07978 предлагается заменить внутренние дисульфидные мостики гипокальциемических пептидов (включая, например, кальцитонин и амилин) альтернативными циклическими структурами. Однако влияние этих альтернативных структур на активность аналогов амилина не раскрыто. В WO 99/34764 представлены данные, показывающие, что замена дисульфидного мостика на внутримолекулярный лактамный мостик в последовательности нативного амилина человека приводит к получению аналога амилина (^2,7цикло-[2Asp,7Lys7Lys]-h-амилин), обладающего значительно более низкой эффективностью, чем амилин дикого типа и многие другие аналоги амилина, что может дополнительно объяснить, почему альтернативные варианты циклических структур в дальнейшем не были осуществлены.

Однако в настоящее время обнаружено, что циклические структуры на основе лактама хорошо совместимы с аналогами амилина, имеющими делеции в положениях 21 и 22, поскольку замена дисульфидного мостика на лактамный мостик приводит к значительному повышению стабильности в водном растворе (см. табл. 2), в то время как другие полезные свойства этих аналогов амилина, такие как низкая склонность к фибриллообразованию, высокая активность и хорошая растворимость, сохраняются. Несмотря на то, что известно, что такие лактамные мостики резко снижают активность пептидов (см. WO 91/07978, с. 45, строки 36-52; WO 99/34764, с. 84, табл. А), помимо этого в настоящее время обнаружено, что аналоги амилина согласно настоящему изобретению могут сохранять высокую активность/не проявлять снижения активности в отношении рецепторов hCT-R, hAMYR1, hAMYR2 и/или hAMYR3. Дополнительно или в качестве альтернативы они могут обладать превосходной химической стабильностью и устойчивостью к фибриллообразованию, в частности, но не исключительно, в диапазоне нейтральных значений рН.

Таким образом, аналог амилина согласно настоящему изобретению содержит лактамный мостик, образованный между боковыми цепями остатков в положениях Х2 и Х7. Для простоты положения 2 и 7 будут обсуждаться со ссылкой на остатки, условно присутствующие до образования лактама.

Один из остатков в положениях Х2 и Х7 представляет собой остаток с боковой цепью, содержащей группу карбоновой кислоты, а другой представляет собой остаток с боковой цепью, содержащей группу амина, где лактам (циклический амид) образуется между группами карбоновой кислоты и амина. Амин может представлять собой первичный или вторичный амин, но как правило представляет собой первичный амин. Подходящие аминокислоты, боковые цепи которых могут участвовать в образовании лактамного мостика, включают Asp, Glu и Aad (имеющие боковые цепи, содержащие группы карбоновой кислоты) и Dap, Dab, Orn, Lys и hLys (имеющие боковые цепи, содержащие группы амина). Любая из аминокислот, выбранных из Asp, Glu и Aad, по существу может образовывать лактамный мостик с любой из аминокислот, выбранных из группы, состоящей из Dap, Dab, Orn, Lys и hLys.

Таким образом, один из остатков в положении Х2 и Х7 может быть выбран из Asp, Glu и Aad, а другой может быть выбран из Dap, Dab, Orn, Lys и hLys.

В некоторых вариантах реализации компонент карбоновой кислоты лактамного мостика является производным аминокислоты в положении Х2, тогда как аминный компонент лактамного мостика является производным аминокислоты в положении Х7. Таким образом, Х2 может быть выбран из Asp, Glu и

- 3 042757

Aad, и Х7 может быть выбран из Dap, Dab, Orn, Lys и hLys.

Может быть полезно, чтобы боковая цепь остатка в положении Х2 имела такую же длину или являлась более короткой, чем боковая цепь остатка в положении Х7. Такие комбинации остатков могут обеспечить преимущества, в том числе более высокую эффективность по сравнению с другими комбинациями.

В этом контексте длина боковой цепи определяется числом атомов в линейной цепи от первого атома боковой цепи (который связан с атомом основной цепи пептида, то есть альфа-атомом углерода соответствующего остатка для большинства аминокислот) до атома, который участвует в образовании амидной связи лактамного мостика (то есть атом углерода функциональной группы карбоновой кислоты или атом азота аминогруппы), включительно.

Таким образом, предполагается, что обычные боковые цепи, содержащие группы кислоты и амина, имеют следующую длину:

Asp: 2 атома

Glu: 3 атома

Aad: 4 атома

Dap: 2 атома

Dab: 3 атома

Огп: 4 атома

Lys: 5 атомов hLys: 6 атомов

В некоторых вариантах реализации боковая цепь остатка в положении Х2 является более короткой, чем боковая цепь остатка в положении Х7.

Желательно, чтобы длина лактамного мостика, обеспечиваемая двумя боковыми цепями после образования амидной связи (не включая какие-либо атомы основной цепи пептида) составляла 4, 5, 6, 7 или 8 атомов, например 5, 6, 7 или 8 атомов, или 5, 6 или 7 атомов.

Таким образом, подходящие пары остатков в положениях Х2 и Х7, в которых боковая цепь в положении Х2 является более короткой, чем боковая цепь в положении Х7, включают:

Х2 представляет собой Asp и Х7 представляет собой Lys

Х2 представляет собой Asp и Х7 представляет собой Orn

Х2 представляет собой Asp и Х7 представляет собой Dab

Х2 представляет собой Asp и Х7 представляет собой hLys

Х2 представляет собой Dap и Х7 представляет собой Aad.

Примеры подходящих пар остатков, имеющих одинаковую длину боковых цепей, включают:

Х2 представляет собой Glu и Х7 представляет собой Dab

Х2 представляет собой Dab и Х7 представляет собой Glu

Другие пары, которые, тем не менее, могут быть рассмотрены, включают:

Х2 представляет собой Asp и Х7 представляет собой Dap

Х2 представляет собой Aad и Х7 представляет собой Dap

Х2 представляет собой Dap и Х7 представляет собой Asp

Х2 представляет собой Dab и Х7 представляет собой Asp

Х2 представляет собой Orn и Х7 представляет собой Asp

Парами, представляющими особый интерес, являются:

Х2 представляет собой Asp и Х7 представляет собой Lys

Х2 представляет собой Asp и Х7 представляет собой Orn.

В некоторых вариантах реализации формул, описанных выше:

Х1 может представлять собой Arg;

Х10 может представлять собой Glu.

Х14 может быть выбран из Asp и Aad.

Х19-Х20 может представлять собой Ser-Ser

Х27 может представлять собой Leu

Аналог амилина может иметь формулу:

R1-Z-R², где

R¹ представляет собой водород, C₁.₄-αцил, бензоил или C₁.₄-алкил или увеличивающий период полувыведения фрагмент М, где М необязательно связан с Z через линкерный фрагмент L;

- 4 042757

R² представляет собой ОН или NHR³, где R³ представляет собой водород или С_1-3-алкил; и

Z представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:

RDOGTAT-DapO-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RDOGTAT-DabO-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RD0GTAT-Orn0-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RD0GTAT-Orn0-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-PSSTEVGSNT-Hyp

RD0GTAT-Orn0-ATERLAHFLQRF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RD0GTAT-Orn0-ATERLAHFLHRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNTP

RD0GTAT-Orn0-ATQRLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RD0GTAT-Orn0-ATQRLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-PSSTEVGSNT-Hyp

RD0GTAT-Orn0-ATERLARFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

EDOGTATKOATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RDOGEATKOATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RDOGTLTKOATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RDOGTASKOATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RDOGTATKOATQRLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-PSSTEVGSNT-Hyp

RDOGTATKOATQRLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RDOGTATKOATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-PSSTEVGSNT-Hyp

RDOGTATKOATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RDOGTAT-hLysO-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-PSSTEVGSNT-Hyp

RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLTRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSST-Hyp

RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRTTF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRTTF-Gly(Me)-A-lle(Me)-PSSTEVGSNT-Hyp

RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRATF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRAAF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRGTF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

- 5 042757

RD0QTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRGTF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RDOPTATKOATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

EDOGTATKOATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-PSSTEVGSNT-Hyp

RDOGTATKOATERLA-Aad-FLQRAAF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RDOGTATKOATERLA-Aad-FLQRGGF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RDOGTATKOATERLA-Aad-FLQRANF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RDOGTATKOATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-PSSTEVGSNT-Hyp

RDOGTATKOATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RDOGTATKOATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTETGSNT-Hyp

EDOGTATKOATERLA-Aad-FLQRSSFGIy(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RDOGTATKOATERLA-Aad-FLQRTTF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

KDOGTATKOATQRLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-Alle(Me)-LSSTEVGSNTHyp

RDOGTATKOATQRLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RDOGTATKOATQRLADFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

RDOGTATKOATQRLADFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTETGSNT-Hyp

KDOGTATKOATQRLANFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

KDOGTATKOATQRLANFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTETGSNT-Hyp

R-DapO-GTATDOATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

R-DabO-GTATDOATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

R-Orn0-GTATD0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

R-DapO-GTAT-AadO-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

R-DabO-GTATEOATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

R-AadO-GTAT-DapO-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp

REOGTAT-DabO-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp или представлять собой фармацевтически приемлемую соль или сольват такого соединения.

Лактамный мостик в положениях 2 и 7 обозначен круглыми скобками (), расположенными после остатков в указанных положениях.

В некоторых вариантах реализации R¹ представляет собой М или M-L- и/или R² представляет собой NH2.

Конкретные соединения согласно настоящему изобретению включают:

- 6 042757

[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Dap0-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 1)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Dab0-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 2)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 3)
[19CD]-isoGlu-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-Alle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 4)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)PSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 5)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLAHFLQRF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 6)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLAHFLHRSSF-Gly(Me)-A4le(Me)LSSTEVGSNTP-NH2	(Соединение 7)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATQRLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 8)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATQRLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)PSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 9)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLARFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 10)
[19CD]-isoGlu-ED0GTATK0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 11)
[19CD]-isoGlu-RD0GEATK0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 12)
[19CD]-isoGlu-RD0GTLTK0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 13)
[19CD]-isoGlu-RD0GTASK0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 14)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATQRLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)PSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 15)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATKQATQRLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 16)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)PSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 17)

- 7 042757

[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 18)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-hLys0-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 19)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 20)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)PSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 21)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLTRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSST-Hyp-NH2	(Соединение 22)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRTTF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 23)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRTTF-Gly(Me)-A-lle(Me)PSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 24)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRATF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 25)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRAAF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 26)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRGTF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 27)
[19CD]-isoGlu-RD0QTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRGTF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 28)
[19CD]-isoGlu-RD0PTATK0ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 29)
[19CD]-isoGlu-ED0GTATK0ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)PSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 30)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATERLA-Aad-FLQRAAF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 31)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATERLA-Aad-FLQRGGF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 32)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATERLA-Aad-FLQRANF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 33)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)PSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 34)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 35)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTETGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 36)
[19CD]-isoGlu-ED0GTATK0ATERLA-Aad-FLQRSSFGIy(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 37)

- 8 042757

[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATERLA-Aad-FLQRTTF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 38)
[19CD]-isoGlu-KD0GTATK0ATQRLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-Alle(Me)LSSTEVGSNTHyp-NH2	(Соединение 39)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATQRLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 40)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATQRLADFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 41)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATQRLADFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTETGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 42)
[19CD]-isoGlu-KD0GTATK0ATQRLANFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 43)
[19CD]-isoGlu-KD0GTATK0ATQRLANFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTETGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 44)
[19CD]-isoGlu-R-Dap0-GTATD0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 45)
[19CD]-isoGlu-R-Dab0-GTATD0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 46)
[19CD]-isoGlu-R-Orn0-GTATD0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 47)
[19CD]-isoGlu-R-DapO-GTAT-AadO-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 48)
[19CD]-isoGlu-R-Dab0-GTATE0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 49)
[19CD]-isoGlu-R-AadO-GTAT-DapO-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 50)
[19CD]-isoGlu-RE0GTAT-Dab0-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 51)

и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

В настоящем изобретении также предложена композиция, содержащая аналог амилина, описанный выше. Указанная композиция может представлять собой фармацевтическую композицию и может содержать фармацевтически приемлемый носитель, вспомогательное вещество или переносящую среду.

В настоящем изобретении также предложен способ синтеза аналога амилина, описанного выше. Способ может включать стадии синтеза пептида с помощью твердофазной или жидкофазной методики и необязательно выделение и/или очистку конечного продукта. Способ может дополнительно включать стадию образования амидной связи между боковыми цепями в положениях 2 и 7.

В настоящем изобретении также предложен аналог амилина согласно настоящему изобретению для применения в способе терапевтического лечения.

Аналоги амилина пригодны для применения, среди прочего, для снижения потребления пищи, стимулирования снижения массы тела и замедления или ограничения увеличения массы тела. Вследствие этого они могут быть применены для лечения различных состояний, заболеваний или расстройств у субъекта, включая, но не ограничиваясь перечисленными, ожирение и различные связанные с ожирением состояния, заболевания или расстройства, такие как диабет (например, диабет типа 2), гипертензия, дислипидемия, апноэ во сне и сердечно-сосудистое заболевание. Субъект может быть подвержен ожирению, сопровождаемому по меньшей мере одним связанным с избыточной массой тела сопутствующим состоянием, таким как диабет (например, диабет типа 2), гипертензия, дислипидемия, апноэ во сне и сердечно-сосудистое заболевание. Следует понимать, что аналоги амилина, таким образом, могут быть введены субъектам, подверженным состояниям, характеризующимся недостаточным контролем аппетита или другими случаями избыточного питания, такими как компульсивное переедание и синдром ПрадераВилли. Будет понятно, что указанные аналоги могут быть применены для лечения комбинаций описанных состояний.

Таким образом, в настоящем изобретении предложен аналог амилина согласно настоящему изобретению для применения в способе лечения, замедления или ограничения увеличения массы тела, стимулирования снижения массы тела и/или уменьшения избыточной массы тела. Лечение может быть осуществлено, например, путем контроля аппетита, питания, потребления пищи, потребления калорий и/или затрат энергии.

В настоящем изобретении также предложен аналог амилина согласно настоящему изобретению для применения в способе лечения ожирения, а также связанных с ним заболеваний, расстройств и нарушений здоровья, включая, но не ограничиваясь перечисленными, патологическое ожирение, ожирение перед операцией, связанное с ожирением воспаление, связанное с ожирением заболевание желчного пузыря и вызванное ожирением апноэ во сне и респираторные нарушения, дегерацию хрящевой ткани, остео- 9 042757 артрит и осложнения со стороны репродуктивного здоровья, связанные с ожирением или избыточной массой тела, такие как бесплодие. Субъект может быть подвержен ожирению, сопровождаемому по меньшей мере одним связанным с избыточной массой тела сопутствующим состоянием, таким как диабет (например, диабет типа 2), гипертензия, дислипидемия, апноэ во сне и сердечно-сосудистое заболевание.

В настоящем изобретении также предложен аналог амилина согласно настоящему изобретению для применения в способе предотвращения или лечения болезни Альцгеймера, диабета, диабета типа 1, диабета типа 2, преддиабета, синдрома резистентности к инсулину, нарушения толерантности к глюкозе (НТГ), патологических состояний, связанных с повышенным содержанием глюкозы в крови, метаболического заболевания, включая метаболический синдром, гипергликемии, гипертензии, атерогенной дислипидемии, стеатоза печени (жировой дистрофии печени; включая неалкогольную жировую болезнь печени (НАЖБП), которая в свою очередь включает неалкогольный стеатогепатит (НАСГ)), почечной недостаточности, артериосклероза (например, атеросклероза), заболевания крупных сосудов, заболевания мелких сосудов, вызванного диабетом заболевания сердца (включая диабетическую кардиомиопатию и сердечную недостаточность в качестве осложнения диабета), ишемической болезни сердца, заболевания периферических артерий или инсульта и их комбинаций.

В настоящем изобретении также предложен аналог амилина согласно настоящему изобретению для применения в способе снижения содержания циркулирующих ЛНП и/или повышения отношения ЛВП/ЛНП.

Действие аналогов амилина на эти состояния может быть полностью или частично опосредовано действием на массу тела или может быть независимым от него.

В настоящем изобретении дополнительно предложено применение аналога амилина согласно настоящему изобретению для получения лекарственного средства для лечения, замедления или ограничения увеличения массы тела, стимулирования снижения массы тела и/или уменьшения избыточной массы тела.

В настоящем изобретении также предложено применение аналога амилина согласно настоящему изобретению для получения лекарственного средства для лечения ожирения, а также связанных с ним заболеваний, расстройств и нарушений здоровья, включая, но не ограничиваясь перечисленными, патологическое ожирение, ожирение перед операцией, связанное с ожирением воспаление, связанное с ожирением заболевание желчного пузыря и вызванное ожирением апноэ во сне и респираторные нарушения, дегерацию хрящевой ткани, остеоартрит и осложнения со стороны репродуктивного здоровья, связанные с ожирением или избыточной массой тела, такие как бесплодие. Субъект может быть подвержен ожирению, сопровождаемому по меньшей мере одним связанным с избыточной массой тела сопутствующим состоянием, таким как диабет (например, диабет типа 2), гипертензия, дислипидемия, апноэ во сне и сердечно-сосудистое заболевание.

В настоящем изобретении также предложено применение аналога амилина согласно настоящему изобретению для получения лекарственного средства для предотвращения или лечения болезни Альцгеймера, диабета, диабета типа 1, диабета типа 2, преддиабета, синдрома резистентности к инсулину, нарушения толерантности к глюкозе (НТГ), патологических состояний, связанных с повышенным содержанием глюкозы в крови, метаболического заболевания, включая метаболический синдром, гипергликемии, гипертензии, атерогенной дислипидемии, стеатоза печени (жировой дистрофии печени; включая неалкогольную жировую болезнь печени (НАЖБП), которая в свою очередь включает неалкогольный стеатогепатит (НАСГ)), почечной недостаточности, артериосклероза (например, атеросклероза), заболевания крупных сосудов, заболевания мелких сосудов, вызванного диабетом заболевания сердца (включая диабетическую кардиомиопатию и сердечную недостаточность в качестве осложнения диабета), ишемической болезни сердца, заболевания периферических артерий или инсульта и их комбинаций.

В настоящем изобретении также предложено применение аналога амилина согласно настоящему изобретению для получения лекарственного средства для снижения содержания циркулирующих ЛНП и/или повышения отношения ЛВП/ЛНП.

В настоящем изобретении также предложен способ лечения, замедления или ограничения увеличения массы тела, стимулирования снижения массы тела и/или уменьшения избыточной массы тела у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества аналога амилина согласно настоящему изобретению.

В настоящем изобретении также предложен способ лечения ожирения, а также связанных с ним заболеваний, расстройств и нарушений здоровья, включая, но не ограничиваясь перечисленными, патологическое ожирение, ожирение перед операцией, связанное с ожирением воспаление, связанное с ожирением заболевание желчного пузыря и вызванное ожирением апноэ во сне и респираторные нарушения, дегерацию хрящевой ткани, остеоартрит и осложнения со стороны репродуктивного здоровья, связанные с ожирением или избыточной массой тела, такие как бесплодие, у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества аналога амилина согласно настоящему изобретению. Субъект может быть подвержен ожирению, сопровождаемому по меньшей мере одним связанным с избыточной массой тела сопутствующим состоянием, таким как диабет (например, диабет типа 2), гипер- 10 042757 тензия, дислипидемия, апноэ во сне и сердечно-сосудистое заболевание.

В настоящем изобретении также предложен способ предотвращения или лечения болезни Альцгеймера, диабета, диабета типа 1, диабета типа 2, преддиабета, синдрома резистентности к инсулину, нарушения толерантности к глюкозе (НТГ), патологических состояний, связанных с повышенным содержанием глюкозы в крови, метаболического заболевания, включая метаболический синдром, гипергликемии, гипертензии, атерогенной дислипидемии, стеатоза печени (жировой дистрофии печени; включая неалкогольную жировую болезнь печени (НАЖБП), которая в свою очередь включает неалкогольный стеатогепатит (НАСГ)), почечной недостаточности, артериосклероза (например, атеросклероза), заболевания крупных сосудов, заболевания мелких сосудов, вызванного диабетом заболевания сердца (включая диабетическую кардиомиопатию и сердечную недостаточность в качестве осложнения диабета), ишемической болезни сердца, заболевания периферических артерий или инсульта и их комбинаций у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества аналога амилина согласно настоящему изобретению.

В настоящем изобретении также предложен способ снижения содержания циркулирующих ЛНП и/или повышения отношения ЛВП/ЛНП у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества аналога амилина согласно настоящему изобретению.

В настоящем изобретении также предложено применение аналога амилина, описанного выше, в способе эстетического (то есть нетерапевтического) снижения массы тела. Следует понимать, что ссылки на терапевтическое применение аналогов амилина и способы, в ключающие введение аналогов амилина, могут быть в равной степени рассмотрены как охватывающие применение и введение таких композиций.

Другие аспекты и варианты реализации настоящего изобретения станут очевидны из раскрытия, приведенного ниже.

Подробное описание изобретения

Если в настоящем описании не указано иное, научные и технические термины в контексте настоящего описания должны иметь значения, обычно понимаемые средними специалистами в данной области техники. Как правило, номенклатура, используемая в настоящем описании, относящаяся к методикам химии, молекулярной биологии, биологии клетки и рака, иммунологии, микробиологии, фармакологии и химии белка и нуклеиновых кислот, описанным в настоящем описании, является хорошо известной и широко используемой в данной области техники.

Все публикации, патенты и опубликованные патентные заявки, упомянутые в настоящей заявке, специально включены в настоящее описание посредством ссылки. В случае противоречий настоящее описание, включая его конкретные определения, будет иметь преимущественную силу.

В объеме настоящего описания слово включать/содержать или его варианты, такие как включает/содержит или включающий/содержащий, будет подразумевать включение указанного целого числа или компонента или указанной группы целых чисел или компонентов, но не исключение какого-либо другого целого числа или компонента или группы целых чисел или компонентов.

Определенные и неопределенные формы единственного числа включают формы множественного числа, если контекстом явным образом не продиктовано иное.

Термин включая используется в значении включая, но не ограничиваясь. Термины включая и включая, но не ограничиваясь используются взаимозаменяемо.

Термины пациент, субъект и индивидуум могут использоваться взаимозаменяемо и могут относиться как к человеку, так и животному, не являющемуся человеком. Субъекты, как правило, представляют собой млекопитающих, включая людей, приматов, не являющихся людьми (включая человекообразных приматов, мартышковых и цепкохвостых обезьян), домашний скот (например, крупный рогатый скот, свиней), животных-компаньонов (например, собак, кошек) и грызунов (например, мышей и крыс).

В контексте настоящего описания термин фармацевтически приемлемая соль предназначен для обозначения соли, которая не является опасной для пациента или субъекта, которому вводят указанную соль. Она может представлять собой соль, подходящим образом выбранную, например, из кислотноаддитивных солей и основных солей. Примеры кислотно-аддитивных солей включают хлориды, цитраты и ацетаты. Примеры основных солей включают соли, в которых катион выбран из катионов щелочных металлов, таких как ионы натрия или калия, катионов щелочноземельных металлов, таких как ионы кальция или магния, а также замещенных ионов аммония, таких как ионы типа N(R¹)(R²)(R³)(R⁴)⁺, где R¹, R², R³ и R⁴ независимо будут, как правило, обозначать водород, необязательно замещенный C₁.₆-алкил или необязательно замещенный С₂_₆-алкенил. Примеры подходящих C₁.₆-алкильных групп включают метильную, этильную, 1-пропильную и 2-пропильную группы. Примеры возможных подходящих С2-6алкенильных групп включают этенил, 1-пропенил и 2-пропенил. Другие примеры фармацевтически приемлемых солей описаны в источниках Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th edition, Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, USA, 1985 (и его более поздних изданиях), Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology, 3rd edition, James Swarbrick (Ed.), Informa Healthcare USA (Inc.), NY, USA, 2007 и J. Pharm. Sci. 66: 2 (1977).

- 11 042757

Термин сольват в контексте настоящего изобретения относится к комплексу определенной стехиометрии, образуемому между растворенным веществом (в данном случае пептидом или его фармацевтически приемлемой солью согласно настоящему изобретению) и растворителем. Растворитель в данном контексте может представлять собой, например, воду, этанол или другие фармацевтически приемлемые как правило, низкомолекулярные - органические вещества, такие как, но не ограничиваясь перечисленными, уксусная кислота или молочная кислота. В случае, если рассматриваемым растворителем является вода, такой сольват обычно называют гидратом.

Термин агонист, используемый в контексте настоящего изобретения, относится к веществу, которое активирует рассматриваемый тип рецептора, как правило, путем связывания с ним (то есть выступая в качестве лиганда).

Каждый вариант реализации настоящего изобретения, описанный в настоящем описании, может быть применен отдельно или в комбинации с одним или более другими вариантами реализации настоящего изобретения.

В объеме настоящего описания, если встречающиеся в природе аминокислоты не обозначены их полным наименованием (например, аланин, аргинин и т.д.), они обозначены их общепринятыми трехбуквенными или однобуквенными сокращениями (например, Ala или А для аланина, Arg или R для аргинина и т.д.). В случае некоторых менее распространенных или не встречающихся в природе аминокислот (то есть аминокислот, отличных от 20 кодируемых стандартным генетическим кодом млекопитающих), если они не обозначены их полным наименованием (например, саркозин, орнитин и т. д.), для их остатков используются часто применяемые трех- или четырехзначные коды, включая Orn (орнитин, то есть 2,5-диаминопентановая кислота), Aib (α-аминоизомасляная кислота), Dab (2,4-диаминобутановая кислота), Dap (2,3-диаминопропановая кислота), Har (гомоаргинин), γ-Glu (γ-глутаминовая кислота), Gaba (γаминобутановая кислота), β-Alа (то есть 3-аминопропановая кислота), 8Ado (8-амино-3,6диоксаоктановая кислота).

Если не указано иное, упоминаются L-изомерные формы рассматриваемых аминокислот.

Дополнительные сокращения включают следующие:

Gly(Me): N-метилглицин [также известный как саркозин (Sar)]

Пе(Ме): N-метилизолейцин

Aad: 2-аминоадипиновая кислота, например, (25)-2-аминоадипиновая кислота [также (25)-2-аминогександиовая кислота], также известная как гомоглутаминовая кислота

Нур: 4-гидроксипролин, например, (25,4^-4-гидроксипролин

[также обозначаемый (4^-4-гидрокси-Ь-пролин]

Dap: 2,3-диаминопропановая кислота, например, (25)-2,3-диаминопропановая кислота

Dab: 2,4-диаминобутановая кислота, например, (25)-2,4-диаминобутановая кислота hLys: 2-амино-7-аминогептановая кислота, также известная как гомолизин, например, (25)-2-амино-7-аминогептановая кислота

Термин терапевтически эффективное количество в настоящем описании в контексте описанных выше способов лечения или других терапевтических вмешательств согласно настоящему изобретению относится к количеству, которое является достаточным для лечения, улучшения, облегчения или частичного прекращения клинических проявлений конкретного заболевания, расстройства или состояния, которое представляет собой объект лечения или другого рассматриваемого терапевтического вмешательства, например, определяемому с помощью установленных клинических результатов или других биомаркеров (установленных или экспериментальных). Терапевтически значимое количество может быть эмпирически определено специалистом в данной области техники в зависимости от показаний, подлежащих лечению или предотвращению, и в зависимости от субъекта, которому вводят указанное терапевтически значимое количество. Например, квалифицированный специалист может определить один или более клинически значимых показателей биологической активности, описанных в настоящем описании, например, содержание жиров в плазме, содержание глюкозы в крови или высвобождение инсулина. Квалифицированный специалист может определить клинически значимое количество с помощью методов определения in vitro или in vivo. Другие иллюстративные показатели включают увеличение массы тела, снижение массы тела и изменение кровяного давления.

- 12 042757

Количество, достаточное для достижения любого или всех этих эффектов, определяется как терапевтически эффективное количество. Вводимое количество и способ введения могут быть подобраны для достижения оптимальной эффективности. Количество, эффективное для данной цели, будет зависеть, среди прочего, от тяжести заболевания, расстройства или состояния, являющегося объектом конкретного лечения или другого терапевтического вмешательства, от массы тела и общего состояния рассматриваемого субъекта, диеты, возможной сопутствующей лекарственной терапии и других факторов, хорошо известных специалистам в области медицины. Определение подходящего размера дозы и схемы введения, наиболее подходящей для введения человеку пептида или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата согласно настоящему изобретению, может основываться на результатах, полученных с помощью настоящего изобретения, и может быть подтверждено в надлежащим образом запланированных клинических исследованиях. Эффективная доза и протокол лечения могут быть определены общепринятыми способами, начиная с низкой дозы у лабораторных животных с последующим повышением дозы при наблюдении эффекта, а также при систематическом изменении схемы введения. При определении оптимальной дозы для данного субъекта лечащий врач может принимать во внимание множество факторов. Такие факторы хорошо известны специалисту.

Термин лечение и его грамматические варианты (например, подлежащий лечению, осуществление лечения, лечить), используемые в настоящем контексте, относятся к подходу для получения полезных или желаемых клинических результатов. Для целей настоящего изобретения полезные или желаемые клинические результаты включают, но не ограничиваются перечисленными, облегчение симптомов, уменьшение степени заболевания, стабилизацию (то есть отсутствие ухудшения) течения заболевания, задержку или замедление прогрессирования заболевания, улучшение или смягчение течения заболевания и ремиссию (частичную или полную), как обнаруживаемые, так и необнаруживаемые. Лечение также может означать увеличение выживаемости относительно ожидаемого времени выживаемости при отсутствии лечения. Таким образом, субъект (например, человек), нуждающийся в лечении, может представлять собой субъекта, уже страдающего от рассматриваемого заболевания или расстройства. Термин лечение включает подавление или снижение степени возрастания тяжести патологического состояния или симптомов (например, увеличения массы тела или гипергликемии) по сравнению с отсутствием лечения и не обязательно означает полное прекращение соответствующего заболевания, расстройства или состояния.

Термин предотвращение и его грамматические варианты (например, подлежащий предотвращению, осуществление предотвращения, предотвращать), используемые в настоящем контексте, относятся к подходу для препятствования развитию, или предотвращения развития состояния, заболевания или расстройства или изменения патологии, связанной с состоянием, заболеванием или расстройством. Соответственно, предотвращение может относиться к профилактическим или предупредительным мерам. Для целей настоящего изобретения полезные или желаемые клинические результаты включают, но не ограничиваются перечисленными, предотвращение или замедление развития симптомов, прогрессирования или развития заболевания, как обнаруживаемые, так и необнаруживаемые. Таким образом, субъект (например, человек), нуждающийся в предотвращении, может представлять собой субъекта, еще не страдающего от рассматриваемого заболевания или расстройства. Таким образом, термин предотвращение включает подавление или замедление начала заболевания по сравнению с отсутствием лечения и не обязательно означает длительное предотвращение соответствующего заболевания, расстройства или состояния.

Синтез аналогов амилина

В настоящем изобретении дополнительно предложен способ синтеза аналога амилина согласно настоящему изобретению. Аналоги амилина (которые также могут быть обозначены как соединения или пептиды) могут быть надлежащим образом получены с помощью стандартных способов синтеза. Таким образом, пептиды могут быть синтезированы, например, с применением способов, включающих синтез пептида с помощью стандартной твердофазной или жидкофазной методики либо путем ступенчатого синтеза, либо путем сборки фрагментов, и необязательно выделение и очистку конечного пептидного продукта. В этом контексте может быть приведена ссылка на WO 98/11125 или, среди прочего, Fields, G.B. et al., Principles and Practice of Solid-Phase Peptide Synthesis; в: Synthetic Peptides, Gregory A. Grant (ed.), Oxford University Press (2nd edition, 2002) и примеры синтеза, приведенные в настоящем описании. Способ, как правило, дополнительно включает стадию образования амидной связи между боковыми цепями в положениях 2 и 7, например, как описано ниже. В случае твердофазного синтеза циклизация может быть проведена in situ на твердой фазе (например, смоле), то есть до удаления пептида с твердой фазы.

С_1-4-ацильные группы

C₁.4-ацильные группы, которые могут присутствовать в качестве группы R¹ в контексте соединений согласно настоящему изобретению, включают формильную (то есть метаноильную), ацетильную (то есть этаноильную), пропаноильную, 1-бутаноильную и 2-метилпропаноильную группы.

C_1-4-алкильные группы

C₁.₄-алкильные группы, которые могут присутствовать в качестве группы R¹ в контексте соедине- 13 042757 ний согласно настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются перечисленными, C₁-₃алкильные группы, такие как метил, этил, 1-пропил или 2-пропил.

Ci-3-алкильные группы

C₁.₃-алкильные группы, которые могут присутствовать в качестве группы R³ в контексте соединений согласно настоящему изобретению, включают метил, этил, 1-пропил и 2-пропил.

Увеличивающие период полувыведения фрагменты М

Как описано в настоящем описании, N-концевой фрагмент R¹ в соединении согласно настоящему изобретению может представлять собой увеличивающий период полувыведения фрагмент М (иногда упоминаемый в литературе как, среди прочего, увеличивающий продолжительность действия фрагмент или связывающийся с альбумином фрагмент), необязательно связанный (ковалентно присоединенный) с пептидным фрагментом Z через линкерный фрагмент L. Среди подходящих увеличивающих период полувыведения фрагментов имеются определенные типы липофильных заместителей. Без привязки к какой-либо конкретной теории, полагают, что такие липофильные заместители (и другие классы увеличивающих период полувыведения фрагментов) связываются с альбумином в кровотоке, защищая тем самым соединение согласно настоящему изобретению от почечной фильтрации, а также ферментативного расщепления, и таким образом, вероятно, увеличивая период полувыведения соединения in vivo. Липофильный заместитель также может модулировать эффективность соединения в качестве агониста в отношении рецептора амилина (кальцитонина).

Липофильный заместитель может быть присоединен к N-концевому аминокислотному остатку или к линкеру L через сложный эфир, эфир сульфоновой кислоты, тиоэфир, амид, амин или сульфонамид. Соответственно, следует понимать, что липофильный заместитель предпочтительно содержит ацильную группу, сульфонильную группу, атом N, атом О или атом S, которые являются частью сложного эфира, эфира сульфоновой кислоты, тиоэфира, амида, амина или сульфонамида. Предпочтительно ацильная группа в липофильном заместителе является частью амида или сложного эфира с аминокислотным остатком или линкером.

Липофильный заместитель может содержать углеводородную цепь, содержащую от 10 до 24 атомов С, например, от 14 до 22 атомов С, например, от 16 до 20 атомов С. Предпочтительно она содержит по меньшей мере 14 атомов С и предпочтительно содержит 20 атомов С или менее. Например, углеводородная цепь может содержать 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 атомов углерода. Указанная углеводородная цепь может быть линейной или разветвленной и может являться насыщенной или ненасыщенной. Кроме того, она может содержать функциональную группу на конце углеводородной цепи, например, группу карбоновой кислоты, которая может быть защищена или не защищена во время синтеза. Из приведенного выше обсуждения также будет понятно, что углеводородная цепь предпочтительно содержит в качестве заместителя фрагмент, который участвует в присоединении к N-концевому аминокислотному остатку пептидного фрагмента Z или к линкеру L, например ацильную группу, сульфонильную группу, атом N, атом О или атом S.

Наиболее предпочтительно углеводородная цепь содержит в качестве заместителя ацильную группу и, соответственно, указанная углеводородная цепь может являться частью алканоильной группы, например, додеканоильной, 2-бутилоктаноильной, тетрадеканоильной, гексадеканоильной, гептадеканоильной, октадеканоильной, нонадеканоильной или эйкозаноильной группы. Примерами функционализированных углеводородных цепей являются 15-карбоксипентадеканоил, 17-карбоксигептадеканоил и 19-карбоксинонадеканоил.

Как указано выше, липофильный заместитель М может быть связан с N-концевым аминокислотным остатком Z через линкер L. В вариантах реализации линкерный фрагмент L сам может содержать один, два, три или более связанных субфрагментов L¹, L², L³, .. и т. д. В случаях, когда линкер L содержит только один такой фрагмент, он присоединен к липофильному заместителю и к N-концевому аминокислотному остатку Z. Следовательно, указанный линкер может быть независимо присоединен к липофильному заместителю и к N-концевому аминокислотному остатку Z посредством сложноэфирной, сульфонильной сложноэфирной, тиоэфирной, амидной, аминной или сульфонамидной связи. Соответственно, он может содержать два фрагмента, независимо выбранных из ацила, сульфонила, атома N, атома О и атома S. Линкер может состоять из линейной или разветвленной С1-10 углеводородной цепи или более предпочтительно линейной C_1-5 углеводородной цепи. Кроме того, линкер может содержать один или более заместителей, выбранных из C₁.₆-алкила, амино-С₁-₆-алкила, гидрокси-С₁-₆ алкила и карбокси-С₁-₆алкила.

В некоторых вариантах реализации линкер может содержать один или более (например, один, два или три) связанных аминокислотных остатков, каждый из которых может независимо представлять собой остаток любой встречающейся в природе или не встречающейся в природе аминокислоты. Например, линкер может содержать один, два или три связанных аминокислотных остатка, каждый из которых может независимо представлять собой остаток Gly, Pro, Ala, Val, Leu, lle, Met, Cys, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Gln, Asn, α-Glu, γ-Glu, ε-Lys, Asp, β-Asp, Ser, Thr, Gaba, Aib, β-Ala (то есть 3-аминопропаноил), 4аминобутаноил, 5-аминопентаноил, 6-аминогексаноил, 7-аминогептаноил, 8-аминооктаноил, 9аминононаноил, 10-аминодеканоил или 8Ado (то есть 8-амино-3,6-диоксаоктаноил).

- 14 042757

Упоминания γ-Glu, ε-Lys и β-Asp указывают на остатки аминокислот, которые участвуют в образовании связей посредством карбоксильных или аминных функциональных групп их боковых цепей. Таким образом, γ-Glu и β-Asp участвуют в образовании связей посредством альфа-аминогрупп и карбоксильных групп их боковых цепей, в то время как ε-Lys участвует посредством карбоксильной группы и аминной группы его боковой цепи. В контексте настоящего изобретения названия γ-Glu и изо-GIu используются взаимозаменяемо.

В некоторых вариантах реализации линкер содержит один, два или три остатка, независимо выбранных из Glu, γ-Glu, ε-Lys, β-Ala, 4-аминобутаноила, 8-аминооктаноила или 8Ado, или состоит из од ного, двух или трех указанных остатков.

В частности, предпочтительными могут являться линкеры, состоящие из u3oG1u и u3O-G1u-u3O-G1u.

Пример липофильного заместителя, содержащего липофильный фрагмент М и линкер L, представлен приведенной ниже формулой:

Здесь атом азота основной цепи остатка Arg (присутствующего в положении Х1 пептидной последовательности Z аналога амилина) ковалентно присоединен к карбоксильной группе боковой цепи фрагмента Glu посредством амидной связи. 19-карбоксинонадеканоильная группа ковалентно связана с альфа-аминогруппой линкера Glu посредством амидной связи. Таким образом, линкер Glu находится в конфигурации изо-Glu (или γ-Glu). Эта комбинация липофильного фрагмента и линкера, присоединенного к остатку Arg, может быть обозначена с помощью сокращенной записи [19CD]-isoGlu-R, например, когда она представлена в формулах конкретных соединений.

Специалисту хорошо известны подходящие методики получения соединений, применяемых в контексте настоящего изобретения. Примеры подходящих химических процессов см., например, в WO 98/08871, WO 00/55184, WO 00/55119, Madsen et al. (J. Med. Chem. 2007, 50, 6126-32) и Knudsen et al. 2000 (J. Med Chem. 43, 1664-1669).

Углеводородная цепь в липофильном заместителе может быть дополнительно замещена. Например, она может дополнительно содержать до трех заместителей, выбранных из NH₂, ОН и СООН. Если углеводородная цепь дополнительно замещена, она предпочтительно содержит только один заместитель. В качестве альтернативы или дополнительно углеводородная цепь может содержать циклоалкановый или гетероциклоалкановый фрагмент, например, представленный ниже:

В некоторых вариантах реализации циклоалкановый или гетероциклоалкановый фрагмент представляет собой шестичленное кольцо, например пиперидиновое кольцо.

В альтернативных вариантах реализации настоящего изобретения N-концевая аминокислота Z в соединении согласно настоящему изобретению может быть связана (ковалентно присоединена) с биотинильным заместителем, необязательно через линкерный фрагмент L. Без привязки к какой-либо конкретной теории, полагают, что такие биотинильные заместители связываются с альбумином в кровотоке, защищая тем самым соединение согласно настоящему изобретению от ферментативного расщепления и таким образом, вероятно, увеличивая период полувыведения соединения in vivo. Линкер, если он присутствует, может обеспечивать расстояние между пептидным фрагментом Z и биотинильным заместите лем.

Биотинильный заместитель может быть присоединен к N-концевому аминокислотному остатку или к линкеру посредством сложноэфирной связи малеимида, сульфонильной сложноэфирной связи, тиоэфирной связи, амидной связи, аминной связи или сульфонамидной связи. Соответственно, следует понимать, что биотинильный заместитель предпочтительно содержит группу малеимидо, ацильную группу, сульфонильную группу, атом N, атом О или атом S, которые участвуют в образовании рассматриваемой сложноэфирной, сульфонильной сложноэфирной, тиоэфирной, амидной, аминной или сульфонамидной связи.

Примеры биотинильных заместителей могут включать

Биотин известен как витамин Н, или коэнзим R, представляет собой водорастворимый витамин

- 15 042757 группы В (витамин В7). Было показано, что он повышает эффективность всасывания некоторых лекарственных средств при пероральном введении.

Эффективность соединений

Соединения согласно настоящему изобретению являются агонистами рецептора амилина, то есть они способны связываться с одним или более рецепторов или рецепторных комплексов, рассматриваемых в качестве физиологических рецепторов для амилина человека, и вызывать передачу сигнала с их участием. Указанные рецепторы включают рецептор кальцитонина человека hCT-R, а также комплексы, содержащие рецептор кальцитонина человека hCT-R и по меньшей мере один из модифицирующих активность рецептора белков человека, обозначаемых hRAMP1, hRAMP2 и hRAMP3. Комплексы между hCT-R и hRAMP1, hRAMP2 и hRAMP3 обозначают hAMYR1, hAMYR2 и hAMYR3 (то есть рецепторы амилина человека 1, 2 и 3) соответственно.

Без привязки к какой-либо конкретной теории, соединение может считаться агонистом рецептора амилина, если оно обладает агонистической активностью в отношении одного или более из hAMYR1, hAMYR2 и hAMYR3, например, в отношении hAMYR1 и/или hAMYR3, например, в отношении hAMYR3.

Как правило, агонист рецептора амилина также будет обладать агонистической активностью в отношении hCT-R при экспрессии в отсутствие hRAMP1, hRAMP2 и hRAMP3. Как правило, агонист будет обладать активностью в отношении hCT-R (при экспрессии в отсутствие hRAMP1, hRAMP2 и hRAMP3), которая менее чем в 10 раз превышает его активность в отношении любого из hAMYR1, hAMYR2 и hAMYR3 (то есть его активность в отношении всех этих рецепторов) в сопоставимом анализе. Агонистическая активность в отношении hCT-R может быть менее чем в 5 раз выше, чем агонистическая активность в отношении hAMYR1, hAMYR2 и hAMYR3, по существу равна (например, +/- 10%) агонистической активности в отношении hAMYR1, hAMYR2 и hAMYR3 или быть ниже агонистической активности в отношении hAMYR1, hAMYR2 и hAMYR3. В связи с этим может быть достаточно просто сравнить активность в отношении hCT-R и hAMYR3.

Способность индуцировать образование цАМФ (то есть индуцировать активность аденилатциклазы) в результате связывания с соответствующим рецептором или рецепторным комплексом, как правило, рассматривается как показатель агонистической активности. Другие внутриклеточные сигнальные пути или события также могут быть использованы в качестве регистрируемых показателей активности агонистов рецептора амилина. Они могут включать высвобождение кальция, вовлечение р-аррестина, интернализацию рецептора, активацию или инактивацию киназы, активацию липазы, высвобождение инозитолфосфата, высвобождение диацилглицерола или транслокацию ядерного транскрипционного фактора.

В подходящем формате сопоставимого анализа используют клетки, которые экспрессируют hCT-R и отличаются только по экспрессии hRAMP1, 2 и 3. Например, базовая линия клеток, которые не экспрессируют ни один из hCT-R, hRAMP1, hRAMP2 и hRAMP3 может быть сконструирована для получения клеток, которые экспрессируют (i) hCT-R и (ii) один из hAMYR1, hAMYR2 и hAMYR3 (то есть hCTR плюс один из hRAMP1, hRAMP2 и hRAMP3), например, hAMYR3. Базовые клетки, как правило, будут представлять собой клетки млекопитающих и могут представлять собой клетки приматов. Они могут представлять собой клетки приматов, не являющихся человеком. Предпочтительно базовая клетка не экспрессирует ни один из CT-R, RAMP1, RAMP2 или RAMP3 (как человека, так и нативных для базовой клетки, если указанная базовая клетка не является клеткой человека). Базовые клетки могут представлять собой фибробласты. Подходящие базовые клетки - фибробласты, не являющиеся фибробластами человека, включают клетки COS7 африканской зеленой мартышки, которые не экспрессируют нативный CT-R или RAMP.

Сравнительная активность может быть определена с помощью любых подходящих средств, как то посредством определения значений EC₅₀, как описано ниже. Будет очевидно, что регистрируемые биологические показатели должны быть одинаковыми для обоих типов рецепторов.

Соединения согласно настоящему изобретению могут проявлять ряд свойств, обеспечивающих преимущества в сравнении с амилином человека и его существующими аналогами, такими как прамлинтид, IAPP-GI и аналоги, описанные в WO 2012/168430, WO 2012/168431 и WO 2012/168432. По сравнению с амилином человека или любым из указанных аналогов соединения согласно настоящему изобретению могут, например, проявлять улучшенную эффективность (например, в виде улучшенной активности in vitro или эффективности в отношении одного или более из рецепторов hCT-R, hAMYR1, hAMYR2 или hAMYR3). Дополнительно или в качестве альтернативы, соединения согласно настоящему изобретению могут проявлять улучшенную растворимость в водных средах, в частности, при значениях рН в диапазоне от 4 до 7,5 или в диапазоне значений рН внутри этого диапазона. Кроме того, соединения согласно настоящему изобретению могут дополнительно или в качестве альтернативы проявлять пониженную склонность к фибриллообразованию в фармацевтически значимых водных средах, в частности, при значениях рН в диапазоне от 4 до 7 или в диапазоне значений рН внутри этого диапазона. Кроме того, соединения согласно настоящему изобретению могут дополнительно или в качестве альтернативы проявлять улучшенную химическую стабильность (то есть пониженную склонность к химической деградации) в водных средах, в частности, при значениях рН в диапазоне от 4 до 9 или в диапазоне значений рН

- 16 042757 внутри этого диапазона.

Соединения согласно настоящему изобретению могут, таким образом, являться хорошо подходящими для приготовления в кислых средах (например, рН 4) и в нейтральных или близких к нейтральным средах (например, рН 7 или 7,4). В отличие от, например, прамлинтида, который в целом проявляет недостаточную химическую стабильность и быстрое фибриллообразование в фармацевтически значимых водных средах при нейтральных значениях рН, соединения согласно настоящему изобретению могут, таким образом, являться хорошо подходящими для совместного приготовления с, например, инсулином, различными аналогами инсулина и/или другими терапевтическими (например, противодиабетическими или направленными против ожирения) агентами, для которых требуется нейтральное или близкое к нейтральному значение рН состава.

В целом предпочтительно использовать биологический анализ, который позволяет определить внутриклеточную передачу сигнала, вызванную связыванием соединения с соответствующим рецептором, как обсуждалось выше. Активация рецептора кальцитонина/амилина под действием соединений согласно настоящему изобретению (которые ведут себя как агонисты рецептора) индуцирует образование цАМФ и активацию внутриклеточных сигнальных путей и событий. Таким образом, выработка цАМФ или любой другой подходящий параметр в подходящих клетках, экспрессирующих рецептор, могут быть применены для регистрации агонистической активности в отношении указанного рецептора.

Специалисту известны подходящие форматы анализа, и примеры приведены ниже. Например, в анализах может использоваться рецептор кальцитонина человека (hCT-R, например, изоформа 2 hCT-R) или рецептор hAMYR3 (см. примеры ниже). В случае, если упоминаются последовательности белковпредшественников, следует понимать, что в анализах может использоваться зрелый белок, лишенный сигнальной последовательности.

Значения EC₅₀ могут быть применены в качестве численной меры эффективности агониста в отношении данного рецептора. Значение EC₅₀ является мерой концентрации соединения, необходимой для достижения половины максимальной активности этого соединения в конкретном анализе. Таким образом, например, соединение, имеющее более низкую EC₅₀ [hCT-R], чем EC₅₀ [hCT-R] нативного амилина человека, или более низкую, чем EC5₀ прамлинтида, в конкретном анализе может считаться имеющим более высокую эффективность или активность в отношении рецептора, чем нативный амилин человека, или более высокую, чем эффективность или активность прамлинтида, соответственно.

В некоторых вариантах реализации соединений согласно настоящему изобретению EC₅₀ в отношении hCT-R составляет менее 1,5 нМ (например, от 0,001 до 1,5 нМ).

В некоторых вариантах реализации соединений согласно настоящему изобретению EC₅₀ в отношении hCT-R составляет менее 0,9 нМ (например, от 0,001 до 0,9 нМ).

В некоторых вариантах реализации соединений согласно настоящему изобретению EC50 в отношении hCT-R составляет менее 0,5 нМ (например, от 0,001 до 0,5 нМ).

В некоторых вариантах реализации соединений согласно настоящему изобретению EC50 в отношении hCT-R составляет менее 0,3 нМ (например, от 0,001 до 0,3 нМ).

В некоторых вариантах реализации соединений согласно настоящему изобретению EC₅₀ в отношении hCT-R составляет менее 0,2 нМ (например, от 0,001 до 0,2 нМ).

EC₅₀ в отношении hCT-R может быть показателем действия соединения на потребление пищи, увеличение массы тела и/или снижение массы тела. Соединения с более низкими значениями EC₅₀ в отношении hCT-R могут обладать более выраженным действием на эти параметры.

В некоторых вариантах реализации соединений согласно настоящему изобретению EC50 в отношении hAMYR3 составляет менее 1,0 нМ (например, от 0,001 до 1,0 нМ).

В некоторых вариантах реализации соединений согласно настоящему изобретению EC50 в отношении hAMYR3 составляет менее 0,5 нМ (например, от 0,001 до 0,5 нМ).

В некоторых вариантах реализации соединений согласно настоящему изобретению EC50 в отношении hAMYR3 составляет менее 0,4 нМ (например, от 0,001 до 0,4 нМ).

В некоторых вариантах реализации соединений согласно настоящему изобретению EC₅₀ в отношении hAMYR3 составляет менее 0,3 нМ (например, от 0,001 до 0,3 нМ).

В некоторых вариантах реализации соединений согласно настоящему изобретению EC₅₀ в отношении hAMYR3 составляет менее 0,2 нМ (например, от 0,001 до 0,2 нМ).

EC₅₀ в отношении hCT-R (при экспрессии в отсутствие hRAMP1, hRAMP2 и hRAMP3) может быть меньше, чем EC₅₀ в отношении любого или всех из hAMYR1, hAMYR2 и hAMYR3, например, в отношении hAMYR3.

Например, EC50 в отношении hCT-R (при экспрессии в отсутствие hRAMP1, hRAMP2 и hRAMP3) может быть менее чем в 10 раз ниже, чем EC50 в отношении любого или всех из hAMYR1, hAMYR2 и hAMYR3, например, в отношении hAMYR3.

EC₅₀ в отношении hCT-R (при экспрессии в отсутствие hRAMP1, hRAMP2 и hRAMP3) может быть менее чем в 5 раз ниже, чем EC50 в отношении любого или всех из hAMYR1, hAMYR2 и hAMYR3, например, в отношении hAMYR3.

ЕС₅₀ в отношении hCT-R (при экспрессии в отсутствие hRAMP1, hRAMP2 и hRAMP3) может быть

- 17 042757 по существу равна (например, +/- 50%) EC₅₀ в отношении любого или всех из hAMYRl, hAMYR2 и hAMYR3, например, в отношении hAMYR3.

ЕС₅₀ в отношении hCT-R (при экспрессии в отсутствие hRAMP1, hRAMP2 и hRAMP3) может быть выше, чем EC₅₀ в отношении любого или всех из hAMYR1, hAMYR2 и hAMYR3, например, в отношении hAMYR3.

Такие анализы могут быть проведены при условиях, описанных ниже в примере 2.

Дополнительно или в качестве альтернативы, соединения согласно настоящему изобретению могут демонстрировать превосходную устойчивость к фибриллообразованию. Например, они могут демонстрировать отсутствие обнаруживаемого фибриллообразования через 96 ч при рН 4,0 и/или рН 7,0, например, при 40°С, например, при условиях, описанных в примере 4.

Дополнительно или в качестве альтернативы, соединения согласно настоящему изобретению могут демонстрировать превосходную химическую стабильность, то есть устойчивость к деградации в растворе. Например, они могут сохранять по меньшей мере 70% чистоты, по меньшей мере 75% чистоты, по меньшей мере 80% чистоты, по меньшей мере 85% чистоты, по меньшей мере 90% чистоты или по меньшей мере 95% чистоты после инкубирования при рН 4, рН 6 и/или рН 7 при 40°С в течение 72 ч или в течение 14 дней, например, при условиях, описанных в примере 5.

Терапевтическое применение

Соединения согласно настоящему изобретению подходят для применения, среди прочего, для снижения потребления пищи, стимулирования снижения массы тела и замедления или ограничения увеличения массы тела. Таким образом, они могут обеспечить перспективный вариант лечения, среди прочего, ожирения и метаболических заболеваний, вызванных, характеризующихся или связанных с избыточной массой тела.

Таким образом, указанные соединения могут быть применены в способе лечения, замедления или ограничения увеличения массы тела, стимулирования снижения массы тела, снижения потребления пищи и/или уменьшения избыточной массы тела. Лечение может быть осуществлено, например, путем контроля аппетита, питания, потребления пищи, потребления калорий и/или затрат энергии.

Указанные соединения могут быть применены в способе лечения ожирения, а также связанных с ним заболеваний, расстройств и нарушений здоровья, включая, но не ограничиваясь перечисленными, патологическое ожирение, ожирение перед операцией, связанное с ожирением воспаление, связанное с ожирением заболевание желчного пузыря и вызванное ожирением апноэ во сне и респираторные нарушения, дегерацию хрящевой ткани, остеоартрит и осложнения со стороны репродуктивного здоровья, связанные с ожирением или избыточной массой тела, такие как бесплодие.

Указанные соединения также могут быть применены в способе предотвращения или лечения болезни Альцгеймера, диабета, диабета типа 1, диабета типа 2, преддиабета, синдрома резистентности к инсулину, нарушения толерантности к глюкозе (НТГ), патологических состояний, связанных с повышенным содержанием глюкозы в крови, метаболического заболевания, включая метаболический синдром, гипергликемии, гипертензии, атерогенной дислипидемии, стеатоза печени (жировой дистрофии печени; включая неалкогольную жировую болезнь печени (НАЖБП), которая в свою очередь включает неалкогольный стеатогепатит (НАСГ)), почечной недостаточности, артериосклероза (например, атеросклероза), заболевания крупных сосудов, заболевания мелких сосудов, вызванного диабетом заболевания сердца (включая диабетическую кардиомиопатию и сердечную недостаточность в качестве осложнения диабета), ишемической болезни сердца, заболевания периферических артерий или инсульта.

Указанные соединения также могут быть пригодны для применения для снижения содержания циркулирующих ЛНП и/или повышения отношения ЛВП/ЛНП.

Действие соединений, описанных выше, может быть полностью или частично опосредовано действием на массу тела или может быть независимым от него.

Метаболический синдром характеризуется группой метаболических факторов риска у одного человека. Они включают абдоминальное ожирение (избыток жировой ткани вокруг внутренних органов брюшной полости), атерогенную дислипидемию (нарушения содержания жиров в крови, включая высокое содержание триглицеридов, низкое содержание холестерина ЛВП и/или высокое содержание холестерина ЛНП, что способствует формированию бляшек в стенках артерий), повышенное кровяное давление (гипертензию), резистентность к инсулину и нарушение толерантности к глюкозе, протромботическое состояние (например, высокое содержание фибриногена или ингибитора активатора плазминогена-1 в крови) и провоспалительное состояние (например, повышенное содержание С-реактивного белка в крови).

Индивидуумы с метаболическим синдромом подвергаются повышенному риску развития ишемической болезни сердца и других заболеваний, связанных с другими проявлениями артериосклероза (например, инсульта и заболевания периферических сосудов). Доминирующим основным фактором риска для этого синдрома, по-видимому, является абдоминальное ожирение.

Фармацевтические композиции

В объем настоящего изобретения также входят композиции, такие как фармацевтические компози- 18 042757 ции, содержащие аналоги амилина. Как и в случае аспектов настоящего изобретения, следует понимать, что указание на аналог амилина охватывает указание на фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

Аналоги амилина согласно настоящему изобретению могут быть приготовлены в виде фармацевтических композиций, которые являются подходящими для введения с возможностью хранения или без нее и которые, как правило, содержат терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного пептида согласно настоящему изобретению совместно с фармацевтически приемлемым носителем, вспомогательным веществом или переносящей средой.

Термин фармацевтически приемлемый носитель включает любой из стандартных фармацевтических носителей. Фармацевтически приемлемые носители для терапевтического применения хорошо известны в области фармации и описаны, например, в источнике Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th edition, Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, USA, 1985. Например, могут быть применены стерильный физиологический раствор и забуференный фосфатом физиологический раствор со слабокислым или физиологическим значением рН. Подходящие буферные агенты для поддержания рН могут представлять собой, например, фосфат, цитрат, ацетат, трис(гидроксиметил)аминометан (TRIS), К-трис(гидроксиметил)метил-3-аминопропансульфоновую кислоту (TAPS), бикарбонат аммония, диэтаноламин, гистидин, аргинин, лизин или ацетат (например, ацетат натрия) или их смеси. Термин дополнительно охватывает любые агенты-носители, перечисленные в Фармакопее США для применения у животных, включая людей.

Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может находиться в единичной лекарственной форме. В такой форме композиция разделена на единичные дозы, содержащие подходящие количества активного компонента или компонентов. Единичная лекарственная форма может быть представлена в виде упакованного препарата, причем упаковка содержит отдельные количества препарата, например, упакованные таблетки, капсулы или порошки во флаконах или ампулах. Единичная лекарственная форма также может представлять собой, например, капсулу, кахету (cachet) или таблетку или может представлять собой подходящее количество любой из этих упакованных форм. Единичная лекарственная форма также может быть представлена в инъекционной форме для однократного введения, например, в форме шприц-ручки, содержащей жидкофазную (как правило, водную) композицию. Композиции могут быть приготовлены для любого подходящего пути и способа введения. Фармацевтически приемлемые носители или разбавители включают те, которые применяют в составах, подходящих, например, для перорального, интравитреального, ректального, вагинального, назального, местного, энтерального или парентерального (включая подкожное (п/к), внутримышечное (в/м), внутривенное (в/в), внутрикожное и чрескожное) введения или введения путем ингаляции. В целях удобства составы могут быть представлены в единичной лекарственной форме и могут быть получены с применением любого из способов, хорошо известных в области фармацевтических составов.

Подкожные или чрескожные способы введения в некоторых случаях могут являться подходящими для пептидов согласно настоящему изобретению.

Другие варианты реализации относятся к устройствам, лекарственным формам и упаковкам, применяемым для доставки фармацевтических составов согласно настоящему изобретению. Таким образом, по меньшей мере один пептид в стабильном или содержащем консерванты составе или растворе, описанном в настоящем описании, может быть введен пациенту согласно настоящему изобретению с помощью различных способов доставки, в том числе путем п/к или в/м инъекции, или путем чрескожного, легочного или трансмукозального введения, или с помощью импланта, или с применением осмотического насоса, картриджа, микронасоса или других средств, известных специалисту в данной области техники.

Другие варианты реализации относятся к составам для перорального введения и пероральному введению. В составах для перорального введения может применяться совместное введение адъювантов (например, резорцинов и/или неионных поверхностно-активных веществ, таких как полиоксиэтиленолеиловый эфир и н-гексадецилполиэтиленовый эфир) для искусственного увеличения проницаемости стенок кишечника и/или совместное введение ингибиторов ферментов (например, ингибиторов трипсина поджелудочной железы, диизопропилфторфосфата (DFF) или трасилола) для ингибирования ферментативного расщепления. Соединение, являющееся активным компонентом твердой лекарственной формы для перорального введения, может быть смешано с по меньшей мере одной добавкой, такой как сахароза, лактоза, целлюлоза, маннитол, трегалоза, рафиноза, мальтитол, декстран, крахмалы, агар, альгинаты, хитины, хитозаны, пектины, трагакантовая камедь, аравийская камедь, желатин, коллаген, казеин, альбумин, синтетический или полусинтетический полимер или глицерид. Эти лекарственные формы также могут содержать другие типы добавок, например неактивный разбавитель, смазывающее вещество (такое как стеарат магния), парабен, консервант (такой как сорбиновая кислота, аскорбиновая кислота или альфа-токоферол), антиоксидант (такой как цистеин), разрыхлитель, связывающее вещество, загуститель, буферный агент, регулирующий рН агент, подслащивающий агент, вкусовой агент или ароматизирующий агент.

Дозы

Типичная доза аналога амилина, применяемая в контексте настоящего изобретения, может находиться в диапазоне от примерно 0,0001 до примерно 100 мг/кг массы тела в день, как от примерно 0,0005

- 19 042757 до примерно 50 мг/кг массы тела в день, как от примерно 0,001 до примерно 10 мг/кг массы тела в день, например, от примерно 0,01 до примерно 1 мг/кг массы тела в день, вводимых в одной или более дозах, как от одной до трех доз. Точная применяемая доза будет зависеть, среди прочего, от: природы и тяжести заболевания или расстройства, подлежащего лечению, от пола, возраста, массы тела и общего состояния субъекта, подлежащего лечению, от возможного другого сопутствующего заболевания или расстройства, которое подвергается или должно подвергаться лечению, а также от других факторов, которые будут известны практикующему врачу - специалисту в данной области техники.

Аналог амилина согласно настоящему изобретению можно вводить непрерывно (например, путем внутривенного введения или другим способом непрерывного введения лекарственного средства) или можно вводить субъекту через определённые промежутки времени, как правило, через равные промежутки времени в зависимости от желаемой дозы и фармацевтической композиции, выбранной практикующим специалистом для конкретного субъекта. При регулярном введении промежутки между введениями включают, например, введение один раз в день, два раза в день, один раз в два, три, четыре, пять или шесть дней, один или два раза в неделю, один или два раза в месяц и тому подобное. Такие схемы регулярного введения пептида при определенных обстоятельствах, таких как, например, во время длительного введения, могут предполагать обеспечивающие преимущество перерывы на некоторый период времени таким образом, что получающий лечение субъект сокращает количество или прекращает прием лекарственного средства, что часто называют отдыхом от лекарств. Отдых от лекарств подходит, например, для поддержания или восстановления чувствительности к лекарственному средству, в частности, во время длительного лечения или для уменьшения нежелательных побочных эффектов при длительном лечении субъекта с применением лекарственного средства. Продолжительность отдыха от лекарств зависит от продолжительности схемы регулярного введения и цели применения отдыха от лекарств (например, для восстановления чувствительности к лекарственному средству и/или уменьшения нежелательных побочных эффектов при непрерывном длительном введении). В некоторых вариантах реализации отдых от лекарств может представлять собой снижение дозы лекарственного средства (например, до уровня ниже терапевтически эффективного количества в течение некоторого промежутка времени). В других вариантах реализации введение лекарственного средства прекращают на некоторый промежуток времени перед тем, как снова начать введение с применением той же или другой схемы введения (например, с применением меньшей или большей дозы и/или частоты введения). Таким образом, отдых от лекарств согласно настоящему изобретению может быть выбран из широкого диапазона периодов времени и схем введения. Иллюстративный отдых от лекарств составляет два или более дней, одну или более недель или один или более месяцев, до примерно 24 месяцев отдыха от лекарств включительно. Так, например, схема с регулярным ежедневным введением пептида согласно настоящему изобретению может быть прервана отдыхом от лекарств, составляющим одну неделю, или две недели, или четыре недели, после чего возобновляют предшествующую схему регулярного введения (например, схему с ежедневным или еженедельным введением). Предполагают, что для введения пептидов согласно настоящему изобретению пригодны различные другие схемы отдыха от лекарств.

Таким образом, пептид может быть доставлен с помощью схемы введения, которая включает две или более фаз введения, разделенных соответствующими фазами отдыха от лекарств.

Во время каждой фазы введения пептид вводят получающему лечение субъекту в терапевтически эффективном количестве в соответствии с предварительно определенной схемой введения. Указанная схема введения может включать непрерывное введение лекарственного средства получающему лечение субъекту в течение фазы введения. В качестве альтернативы указанная схема введения может включать введение получающему лечение субъекту множества доз пептида, где указанные дозы разделены промежутками между введениями.

Схема введения может включать по меньшей мере две дозы на фазу введения, по меньшей мере пять доз на фазу введения, по меньшей мере 10 доз на фазу введения, по меньшей мере 20 доз на фазу введения, по меньшей мере 30 доз на фазу введения или более.

Указанные промежутки между введениями могут представлять собой промежутки, обеспечивающие регулярное введение, и могут быть такими, как указано выше, включая введение один раз в день, два раза в день, один раз в два, три, четыре, пять или шесть дней, один или два раза в неделю, один или два раза в месяц, или регулярно и даже менее часто, в зависимости от конкретной лекарственной формы, биодоступности и фармакокинетического профиля пептида.

Фаза введения может иметь продолжительность, составляющую по меньшей мере два дня, по меньшей мере одну неделю, по меньшей мере 2 недели, по меньшей мере 4 недели, по меньшей мере один месяц, по меньшей мере 2 месяца, по меньшей мере 3 месяца, по меньшей мере 6 месяцев или более.

Если схема введения включает множество доз, продолжительность возможной последующей фазы отдыха от лекарств превышает промежуток между введениями, используемый в этой схеме введения. Если промежутки между введениями являются неравными, продолжительность фазы отдыха от лекарств может превышать средний промежуток между дозами в течение фазы введения. В качестве альтернативы продолжительность отдыха от лекарств может превышать наибольший промежуток между последова

- 20 042757 тельно вводимыми дозами во время фазы введения.

Продолжительность возможной фазы отдыха от лекарств может быть по меньшей мере в два раза больше, чем продолжительность соответствующего промежутка между введениями (или ее среднее значение), по меньшей мере в 3 раза, по меньшей мере в 4 раза, по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в 10 раз или по меньшей мере в 20 раз больше, чем продолжительность соответствующего промежутка между введениями или ее среднее значение.

В рамках этих ограничений фаза отдыха от лекарств может иметь продолжительность, составляющую по меньшей мере два дня, по меньшей мере одну неделю, по меньшей мере 2 недели, по меньшей мере 4 недели, по меньшей мере один месяц, по меньшей мере 2 месяца, по меньшей мере 3 месяца, по меньшей мере 6 месяцев или более в зависимости от схемы введения во время предшествующей фазы введения.

Схема введения, предусматривающая применение отдыха от лекарств, включает по меньшей мере 2 фазы введения. Последовательные фазы введения разделены соответствующими фазами отдыха от лекарств. Таким образом, схема введения может включать по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 10, по меньшей мере 15, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25 или по меньшей мере 30 фаз введения или более, каждая из которых отделена соответствующими фазами отдыха от лекарств.

В последовательных фазах введения может быть применена одна и та же схема введения, хотя это не всегда может быть желательным или необходимым. Однако, если в комбинации с пептидом согласно настоящему изобретению вводят другие лекарственные средства или активные агенты, то, как правило, такую же комбинацию лекарственных средств или активных агентов вводят в последовательных фазах введения. В некоторых вариантах реализации получающий лечение субъект представляет собой человека.

Комбинированная терапия

Аналог амилина согласно настоящему изобретению может быть введен в качестве части комбинированной терапии совместно с другим активным агентом для лечения рассматриваемого заболевания или расстройства, например, противодиабетическим агентом, агентом против ожирения, агентом для лечения метаболического синдрома, антидислипидемическим агентом, антигипертензивным агентом, ингибитором протонного насоса или противовоспалительным агентом. В таких случаях два активных агента могут быть введены совместно или отдельно, например, в качестве компонентов одной фармацевтической композиции или состава или в виде отдельных составов.

Таким образом, пептид согласно настоящему изобретению может иметь некоторые преимущества при введении в комбинации с противодиабетическим агентом известного типа, включая, но не ограничиваясь перечисленными, метформин, сульфонилмочевину, глинид, ингибитор DPP-IV, глитазон, агонист рецептора GLP-1 (включая GLP-1 или аналог GLP-1, эксендин-4 или аналог эксендина-4, любой другой агонист рецептора GLP-1, включая лираглутид (Саксенда (Saxenda™), Виктоза (Victoza™)), дулаглутид или альбиглютид или двойной агонист рецептора глюкагона-GLP-1, например, описанный в WO 2008/101017, WO 2008/152403, WO 2010/070252, WO 2010/070253, WO 2010/070255, WO 2010/070251, WO 2011/006497, WO 2011/160630, WO 2011/160633, WO 2013/092703, WO 2014/041195, WO 2015/055801, WO 2015/055802), ингибитор SGLT2 (то есть ингибитор транспорта натрия-глюкозы, например, глифлозин, такой как эмпаглифлозин, канаглифлозин, дапаглифлозин или ипраглифлозин), агонист GPR40 (агонист FFAR1/FFA1, например, фазиглифам) или инсулин или аналог инсулина. Примеры подходящих аналогов инсулина включают, но не ограничиваются перечисленными, Лантус (Lantus™), Новорапид (Novorapid™), Хумалог (Humalog™), Новомикс (Novomix™), Актрафан НМ (Actraphane™ HM), Левемир (Levemir™), Деглюдек (Degludec™) и Апидру (Apidra™). Другие подходящие противодиабетические агенты в данном контексте включают агонисты рецептора GLP-1, такие как эксенатид (Баета (Byetta™) и Бидуреон (Bydureon™)-эксендин-4) и Баета LAR (Byetta LAR™), ликсисенатид (Ликсумия (Lyxumia™)) и лираглутид (Виктоза (Victoza™)).

Кроме того, пептид согласно настоящему изобретению может быть применен в комбинации с агентом против ожирения известного типа, включая, но не ограничиваясь перечисленными, пептид YY или его аналог, нейропептид Y (NPY) или его аналог, антагонист каннабиноидного рецептора 1, ингибитор липазы, проостровковый пептид человека (HIP), агонист рецептора меланокортина 4, агонист рецептора GLP-1 (включая GLP-1 или аналог GLP-1, эксендин-4 или аналог эксендина-4, любой другой агонист рецептора GLP-1, включая лираглутид (Саксенда (Saxenda™), Виктоза (Victoza™)), дулаглутид или альбиглютид или двойной агонист рецептора глюкагона-GLP-1, например, описанный в WO 2008/101017, WO 2008/152403, WO 2010/070252, WO 2010/070253, WO 2010/070255, WO 2010/070251, WO 2011/006497, WO 2011/160630, WO 2011/160633, WO 2013/092703, WO 2014/041195, WO 2015/055801, WO 2015/055802), Орлистат (Orlistat™), Сибутрамин (Sibutramine™), фентермин, антагонист рецептора меланиноконцентрирующего гормона 1, CCK, амилин, прамлинтид и лептин, а также их аналоги.

Пептид согласно настоящему изобретению, кроме того, может быть применен в комбинации с антигипертензивным агентом известного типа, включая, но не ограничиваясь перечисленными, ингибитор

- 21 042757 ангиотензин-превращающего фермента, блокатор рецепторов ангиотензина II, диуретик, бета-блокатор или блокатор кальциевых каналов.

Пептид согласно настоящему изобретению также может быть применен в комбинации с антидислипидемическим агентом известного типа, включая, но не ограничиваясь перечисленными, статин, фибрат, ниацин, ингибитор PSCK9 (пропротеиновой конвертазы субтилизин-кексинового типа 9) или ингибитор абсорбции холестерина.

Пептид согласно настоящему изобретению также может быть применен в комбинации с ингибитором протонного насоса (то есть фармацевтическим агентом, обладающим фармакологической активностью в качестве ингибитора Н⁺/K⁺-АТФазы) известного типа, включая, но не ограничиваясь перечисленными, агент типа производных бензимидазола или типа производных имидазопиридина, такой как Омепразол (Omeprazole™), Лансопразол (Lansoprazole™) Декслансопразол (Dexlansoprazole™), Эзомепразол (Esomeprazole™), Пантопразол (Pantoprazole™), Рабепразол (Rabeprazole™), Золпидем (Zolpidem™), Алпидем (Alpidem™), Сарипидем (Saripidem™) или Некопидем (Necopidem™).

Помимо этого, в отношении противовоспалительного лечения пептид согласно настоящему изобретению может иметь преимущества при введении в комбинации с противовоспалительным агентом известного типа, включая, но не ограничиваясь перечисленными стероиды и кортикостероиды, такие как беклометазон, метилпреднизолон, бетаметазон, преднизон, дексаметазон и гидрокортизон;

нестероидные противовоспалительные средства (НПВС), такие как производные пропионовой кислоты (например, алминопрофен, беноксапрофен, буклоксовая кислота, карпрофен, фенбуфен, фенопрофен, флупрофен, флурбипрофен, ибупрофен, индопрофен, кетопрофен, миропрофен, напроксен, оксапрозин, пирпрофен, пранопрофен, супрофен, тиапрофеновая кислота и тиоксапрофен); производные уксусной кислоты (например, индометацин, ацетаметацин, алклофенак, клиданак, диклофенак, фенклофенак, фенклозовая кислота, фентиазак, фурофенак, ибуфенак, изоксепак, окспинак, сулиндак, тиопинак, толметин, зидометацин и зомепирак); производные фенамовой кислоты (например, флуфенамовая кислота, меклофенамовая кислота, мефенамовая кислота, нифлумовая кислота и толфенамовая кислота); производные бифенилкарбоновой кислоты (например, дифлунизал и флуфенизал); оксикамы (например, изоксикам, пироксикам, судоксикам и теноксикам); салицилаты (например, ацетилсалициловая кислота и сульфасалазин) и пиразолоны (например, апазон, безпиперилон, фепразон, мофебутазон, оксифенбутазон и фенилбутазон);

ингибиторы СОХ II, такие как рофекоксиб и целекоксиб;

препараты интерферона бета (например, интерферон бета-1а или интерферон бета-1b);

и некоторые другие соединения, такие как 5-аминосалициловая кислота и ее пролекарства и фармацевтически приемлемые соли.

Также было показано, что метформин обладает противовоспалительными свойствами (см., например, Haffner et al., Diabetes 54: 1566-1572 (2005)) и, таким образом, также может быть пригоден для применения в комбинации с соединениями (пептидами) согласно настоящему изобретению.

Устройства и наборы

В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к устройству, содержащему аналог амилина или фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению, для доставки указанного аналога субъекту. С помощью таких устройств аналоги амилина могут быть введены пациенту посредством различных способов доставки, включая: внутривенную, подкожную, внутримышечную или внутрибрюшинную инъекцию; пероральное введение; чрескожное введение; легочное или трансмукозальное введение; введение с помощью импланта, осмотического насоса, картриджа или микронасоса; или с помощью других средств, известных специалисту в данной области техники.

В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к набору, содержащему аналог амилина согласно настоящему изобретению или фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению. В некоторых вариантах реализации указанный набор дополнительно содержит упаковку и/или инструкции по применению.

Указанные устройство или набор могут быть пригодны для применения для комбинированной терапии, описанной выше. Таким образом, устройство или набор могут дополнительно содержать дополнительный активный агент, например, противодиабетический агент, агент против ожирения, агент для лечения метаболического синдрома, антидислипидемический агент, антигипертензивный агент, ингибитор протонного насоса или противовоспалительный агент, описанные выше, или фармацевтическую композицию, содержащую такой активный агент.

Примеры

В следующих примерах продемонстрированы некоторые конкретные варианты реализации настоящего изобретения. Следующие примеры были выполнены с использованием стандартных методик, которые хорошо известны и являются обычными для специалистов в данной области техники, если подробно не описано иное. Следует понимать, что эти примеры предназначены только для иллюстративных целей и не являются определяющими однозначные условия или объем настоящего изобретения. Следователь- 22 042757 но, они никоим образом не должны рассматриваться как ограничивающие объем настоящего изобретения.

Сокращения, используемые в примерах, включают

Аст: '	ацетаминометил
Alloc:	аллилоксикарбонил
Вос:	mpem-бутоксикарбонил
БСА:	бычий сывороточный альбумин
цАМФ:	циклический аденозинмонофосфат
COMU™:	(1-циано-2-этокси-2-оксоэтилиденаминоокси)-диметиламиноморфолинокарбения гексафторфосфат
ДХМ:	дихлорметан
DIPEA:	диизопропилэтиламин
DMEM:	среда Игла в модификации Дульбекко
ДМФА:	Ν,Ν-диметилформамид
DODT:	3,6-диокса-1,8-октанд итиол
ESI-MC:	масс-спектрометрия с ионизацией электрораспылением
ЕЮН:	этанол
Et2O:	диэтиловый эфир
FCS:	эмбриональная телячья сыворотка
Fmoc:	9-флуоренилметоксикарбонил

- 23 042757

HATU:	2-(7-аза-1 Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония гексафторфосфат
HEPES:	Н-2-гидроксиэтилпиперазин-Н'-2-этансульфоновая кислота
ВЭЖХ:	высокоэффективная жидкостная хроматография
ИБМК:	З-изобутил-1-метилксантин
MeCN:	ацетонитрил
МС:	масс-спектрометрия
NEP:	N-этилпирролидон
NMP	N-метилпирролидон
ОАН:	аллиловый сложный эфир
ФСБ:	забуференный фосфатом физиологический раствор
p-ERK:	фосфорилированная внеклеточная регулируемая киназа
ОФ-ВЭЖХ:	высокоэффективная жидкостная хроматография с обращенной фазой
ТФУ:	трифторуксусная кислота
TIS:	триизопропилсилан
Trt:	тритил (то есть трифенилметил)
об./об.:	объем/объем
масс./об.:	масса/объем

Следующие примеры приведены для иллюстрации некоторых вариантов реализации настоящего изобретения и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.

Определение физиологических параметров

Если не указано иное, содержание глюкозы в цельной крови определяли в образцах крови из хвостовой вены с применением электрода Biosen (EKF Diagnostic, Германия), созданного на основе фермента. Образцы крови анализировали на наличие гликированного гемоглобина (НЬА1с) с использованием анализатора Cobas с111 (Roche Diagnostics, Mannheim, Германия).

Пример 1. Синтез соединений

Были синтезированы следующие соединения:

- 24 042757

[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Dap0-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 1)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Dab0-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 2)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 3)
[19CD]-isoGlu-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-Alle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 4)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)PSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 5)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLAHFLQRF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 6)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn()-ATERLAHFLHRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)- LSSTEVGSNTP-NH2	(Соединение 7)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATQRLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 8)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATQRLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)PSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 9)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLARFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 10)
[19CD]-isoGlu-ED0GTATK0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 11)
[19CD]-isoGlu-RD0GEATK0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 12)
[19CD]-isoGlu-RD0GTLTK0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 13)
[19CD]-isoGlu-RD0GTASK0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 14)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATQRLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)PSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 15)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK()ATQRLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 16)

- 25 042757

[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)PSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 17)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 18)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-hLys0-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 19)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 20)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)PSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 21)
[19CD]-isoGlu-RD()GTAT-Orn()-ATERLA-Aad-FLTRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSST-Hyp-NH2	(Соединение 22)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRTTF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 23)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRTTF-Gly(Me)-A-lle(Me)PSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 24)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRATF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 25)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRAAF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 26)
[19CD]-isoGlu-RD0GTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRGTF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 27)
[19CD]-isoGlu-RD0QTAT-Orn0-ATERLA-Aad-FLQRGTF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 28)
[19CD]-isoGlu-RD0PTATK0ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 29)
[19CD]-isoGlu-ED0GTATK0ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)PSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 30)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATERLA-Aad-FLQRAAF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 31)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATERLA-Aad-FLQRGGF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 32)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATERLA-Aad-FLQRANF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 33)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)PSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 34)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 35)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTETGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 36)

- 26 042757

[19CD]-isoGlu-ED0GTATK0ATERLA-Aad-FLQRSSFGIy(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 37)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATERLA-Aad-FLQRTTF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 38)
[19CD]-isoGlu-KD0GTATK0ATQRLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-Alle(Me)LSSTEVGSNTHyp-NH2	(Соединение 39)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATQRLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 40)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATQRLADFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 41)
[19CD]-isoGlu-RD0GTATK0ATQRLADFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTETGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 42)
[19CD]-isoGlu-KD0GTATK0ATQRLANFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 43)
[19CD]-isoGlu-KD0GTATK0ATQRLANFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTETGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 44)
[19CD]-isoGlu-R-Dap0-GTATD0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 45)
[19CD]-isoGlu-R-Dab0-GTATD0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 46)
[19CD]-isoGlu-R-Orn0-GTATD0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 47)
[19CD]-isoGlu-R-DapO-GTAT-AadO-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 48)
[19CD]-isoGlu-R-Dab0-GTATE0ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 49)
[19CD]-isoGlu-R-AadO-GTAT-DapO-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 50)
[19CD]-isoGlu-RE0GTAT-Dab0-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)LSSTEVGSNT-Hyp-NH2	(Соединение 51)

Для целей сравнения синтезировали три соединения, содержащих дисульфидные мостики (вместо лактамных мостиков), и два нециклизованных соединения:

[19CD]-isoGlu-RDGTAT-Om-ATERLAHFLQRSSF-Sar-A-lle(Me)-PSSTEVGSNT- Ср. 1

Hyp-NH₂

[19CD]-isoGlu-RC0GTATC0ATERLAHFLQRSSF-Sar-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT- Ср. 2

Hyp-NH₂

[19CD]dsoGlu-RDGTAT-Orn-ATERLA-Aad-FLQRSSF-Sar-A4le(Me)- Ср. 3

LSSTEVGSNT-Hyp-NH₂ [19CD]-isoGlu-RC0GTATC0ATERLA-Aad-FLQRSSF-Sar-A-lle(Me)- Ср. 4

LSSTEVGSNT-Hyp-NH₂

[19CD]-isoGlu-RC0NTATC0ATQRLADFLQRSSF-Sar-A4le(Me)-LSSTEVGSNT- Ср. 5

Hyp-NH₂

Дополнительное соединение сравнения, обозначаемое NN96, представляет собой {N-a-[(S)-4карбокси-4-(19-карбоксинонадеканоиламино)бутирил]-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-прамлинтид; раскрыто в виде примера 96 в WO 2012/168430 А2 и имеет аминокислотную последовательность RC()NTATC()ATQRLAEFLHHSSNNFGPILPPTNVGSNTP.

Круглые скобки () указывают на внутримолекулярные лактамные мостики (или дисульфидные мостики, если это применимо), образуемые между боковыми цепями остатков в положениях 2 и 7 соответствующих аминокислотных последовательностей.

Если не указано иное, реагенты и растворители, применяемые в следующих примерах, были коммерчески доступны в стандартной для лабораторных реагентов химической или аналитической степени чистоты и использовались без дополнительной очистки.

Общие методики твердофазного синтеза пептидов

Использовали синтезатор пептидов СЕМ Liberty или синтезатор пептидов СЕМ Liberty Blue с применением стандартных реактивов Fmoc. Смолу TentaGel™ S Ram (1 г; 0,25 ммоль/г) оставляли для набухания в ДМФА (10 мл), переносили между пробиркой и реакционным сосудом с помощью ДХМ и ДМФА и затем использовали. Псевдопролины [то есть дипептиды, используемые для минимизации агрегации во время синтеза пептидов, такие как Fmoc-Phe-Thr(ψ-Me,Me-Pro)-OH, и Fmoc-Asp-Ser(ψ-Ме,МеРго)-ОН, и Fmoc-Ser-Ser(ψ-Me,Me-Pro)-OH] использовали там, где это было необходимо, и не встречающиеся в природе аминокислоты и другие подходящие структурные элементы использовали без какихлибо изменений в общей методике.

При синтезе соединений использовали следующие оптические изомеры конкретных аминокислот

- 27 042757 (включая не встречающиеся в природе аминокислоты):

Hyp: (2S,4R)-4-гидроксипролин [также обозначаемый (4R)-4-гидрокси-L-пролин].

Aad: (25)-2-аминоадипиновая кислота

Dab: (25)-2,4-диаминобутановая кислота

Dap: (25)-2,3-диаминопропановая кислота hLys: (25)-2-амино-7-аминогептановая кислота, также известная как гомолизин

Gly(Me): N-метилглицин, также известный как саркозин

Пе(Ме): N-метилизолейцин

Реакция сочетания:

Синтезатор пептидов СЕМ Liberty: в микроволновом блоке СЕМ Discover к смоле добавляли Fmocаминокислоту в ДМФА/ДХМ (2:1; 0,2 М; 5 мл) совместно с COMU/ДМФА (0,5 М; 2 мл) и DIPEA/NMP (2,0 М; 1 мл). Смесь для реакции сочетания нагревали до 75°С в течение 5 мин, одновременно через смесь барботировали азот. Затем смолу промывали ДМФА (4x10 мл). В качестве альтернативы реакцию сочетания проводили без нагревания, и в этом случае время реакции увеличивали до 60 мин.

Синтезатор пептидов СЕМ Liberty Blue: в микроволновом блоке СЕМ Discover к смоле добавляли Fmoc-аминокислоту в ДМФА (0,2 М; 5 мл) совместно с DIC/ДМФА (0,5 М; 2 мл) и Oxyma/ДМФА (2,0 М; 1 мл). Смесь для реакции сочетания нагревали до 90°С в течение 2 мин, одновременно через смесь барботировали азот. Затем смолу промывали ДМФА (4x10 мл). В качестве альтернативы реакцию сочетания проводили без нагревания, и в этом случае время реакции увеличивали до 60 мин.

Независимо от типа синтезатора СЕМ в случае затрудненных реакций сочетания (например, присоединение остатка непосредственно после N-метилированного аминокислотного остатка или другого пространственно затрудненного аминокислотного остатка, известного специалисту в данной области техники) реакцию сочетания повторяли один или более раз.

Снятие защиты:

Для первоначального снятия защиты к смоле добавляли пиперидин/ДМФА (1:4, то есть 1 часть пиперидина на 4 части ДМФА по объему; 10 мл) и полученную смесь нагревали с помощью микроволнового излучения (40°С; 30 сек). Реакционный сосуд опорожняли, добавляли вторую порцию пиперидина/ДМФА (1:4; 10 мл) и повторно нагревали (75°С; 3 мин). Затем смолу промывали ДМФА (6x10 мл).

Окислительная циклизация

Реакцию образования внутримолекулярного кольца (образование дисульфидного мостика) между остатками Cys в положениях 2 и 7 (первоначально присоединенных в форме защищенных Acm цистеинов) проводили для пептида, все еще присоединенного к смоле, с применением 163 мг трифторацетата таллия (III) [TI(TFA)₃] в 5 мл NMP на стадии одновременного снятия защиты Acm и образования дисульфида (альтернативный способ: добавление к 50 мМ раствору связанного со смолой пептида в уксусной кислоте 10 экв. иода и перемешивание в течение 18-24 ч).

Лактамная циклизация

Следующая методика реакции сочетания Asp и Lys является типичной для получения всех лактамов, где боковая цепь аминокислоты, содержащая карбоксильную функциональную группу, защищена OAll и боковая цепь аминокислоты, содержащая аминогруппу, защищена Alloc. После сборки полной последовательности пептида снятие защиты Asp(OAll) в положении 2 и Lys(Alloc) в положении 7 проводили с применением 29 мг тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) и 125 мкл фенилсилана в 20 мл ДХМ. Затем проводили реакцию образования лактамного мостика между остатком Asp (2) и остатком Lys (7) с применением 414 мг HCTU и 346 мкл DIPEA в 20 мл ДМФА. Обе стадии проводили с пептидом, все еще присоединенным к смоле.

Расщепление:

Смолу промывали EtOH (3x10 мл) и Et₂O (3x10 мл) и сушили при комнатной температуре (к.т.) до постоянной массы. Неочищенный пептид отщепляли от смолы путем обработки ТФУ/TIS/Н₂О (90:5:5; 40 мл; 2 ч; к.т.) или, в качестве альтернативы, ТФУ/DODT (95:5; 40 мл; 2 ч; к.т.). Большую часть ТФУ удаляли при пониженном давлении, неочищенный пептид осаждали и промывали три раза Et2O и сушили при комнатной температуре до постоянной массы.

Очистка и определение характеристик:

Неочищенный пептид очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с применением градиента растворителя А (0,1% водной ТФУ) и растворителя В (0,1% ТФУ, 90% MeCN в воде) с помощью рабочей станции PerSeptive Biosystems VISION Workstation или системы Gilson system (насосы: Pump 305, 331 Pump, 332 Pump, 402 Syringe Pump; переключатель колонок Valvemate® II; УФ детектор UV/Vis-155 и коллектор фракций GX 281; оснащенной подходящей колонкой и коллектором фракций) или системы Waters Autopurification HPLC/MS System (насосная система 2525, Waters 2996

- 28 042757

DAD, пробоотборник Waters 2767, MS ZQ с одиночным квадруполем. Колонки: XSelect CSH 130 Prep

C18 5 mm ODB 30x150 мм или Kinetex 5 mm C8 100A 150x21,2 мм). Фракции анализировали с помощью аналитической ВЭЖХ и МС, и соответствующие фракции объединяли и подвергали лиофилизации. Конечный продукт характеризовали с помощью ВЭЖХ и МС.

Специалисту в данной области техники будет понятно, что для получения соединений согласно настоящему изобретению могут быть применены стандартные способы синтеза пептидов.

Пример 2. Анализ с применением hCT-R и hAMYR3

Для оценки активности исследуемых пептидов in vitro линии клеток, экспрессирующие рекомбинантный рецептор кальцитонина человека (hCT-R) или рекомбинантный рецептор амилина человека 3 (hAMYR3), из линии клеток 1321N1 астроцитомы человека, приобретали у DiscoveRx Corporation (номер по каталогу 95-0161С6 и 95-0166С6). hAMYR3 представляет собой гетероолигомер рецептора кальцитонина (изоформа 2; ген ID 799) и RAMP3 (ID гена 10268), который образуется, когда оба гена экспрессируются в одной и той же клетке. Линия клеток hCT-R экспрессирует только ген рекомбинантного рецептора кальцитонина человека (изоформа 2; ID гена 799). После активации hCT-R или hAMYR3 исследуемыми пептидами происходит индукция образования цАМФ, и его определяют с помощью набора для анализа AlphaScreen® cAMP Assay от Perkin-Elmer (номер по каталогу 6760635R).

Кратко, клетки 1321N1, экспрессирующие hCT-R или hAMYR3, высевали в 384-луночные планшеты для микротитрования (Falcon Optilux White, номер по каталогу 10448642) по 5000 клеток в 50 мкл среды для выращивания на лунку (AssayComplete 1321N1 Cell Culture Kit, DiscoveRx Corp.) и инкубировали в течение 24 ч при 37°С, 5% СО2. В день анализа среду для выращивания удаляли и клетки стимулировали путем добавления 10 мкл стимулирующего буфера (10 нМ Hepes, pH 7,4, 140 нМ NaCl, 3,6 нМ KCl, 0,5 нМ NaH₂PO₄, 0,5 нМ MgSO₄, 1,5 нМ CaCl₂, 5 нМ NaHCO₃, 0,5 нМ ИБМК, 0,1% БСА), содержащего возрастающие концентрации исследуемых пептидов, и инкубирования в течение 45 мин при комнатной температуре. Стимуляцию прекращали путем добавления 5,6 мкл/лунку смеси для детекции с донорными гранулами (5 мМ Hepes pH7,4, 0,5% TWEEN 20, 0,1% БСА, 0,05 мг/мл донорных гранул, 62,5 нМ биотинилированного цАМФ) и 4,5 мкл/лунку раствора акцепторных гранул (5 мМ Hepes, pH7,4, 0,5% TWEEN 20, 0,1% БСА, 0,05 мг/мл акцепторных гранул). После тщательного перемешивания планшеты инкубировали в темноте в течение 1 ч при комнатной температуре и оценивали содержание цАМФ в полученных лизатах клеток в соответствии инструкциями производителя AlphaScreen® cAMP Assay. Значения ЕС50 оценивали с помощью компьютерной аппроксимации кривых результатов по меньшей мере для 7 различных концентраций соединения.

Результаты определения активности in vitro (выраженные в виде значений EC₅₀) представлены ниже в табл. 1.

Пример 3. Определение растворимости

Исследуемый пептид взвешивают в подходящий флакон и добавляют соответствующий буфер (ацетатный буфер, рН 4,0, фосфатный буфер, рН 6, гистидиновый буфер, рН 6 и 7; все в концентрации 40 нМ) до общего объема 0,5 мл.

Флаконы встряхивают при комнатной температуре в течение 2 ч и фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Полученные растворы анализируют с помощью ОФ-ВЭЖХ на колонке С18 с градиентным элюированием с использованием системы муравьиная кислота/ацетонитрил/вода а качестве подвижной фазы. Площадь основного пика определяют с помощью спектроскопии в УФ-области при длине волны 230 нм в каждый момент времени отбора проб. Концентрацию растворённого вещества рассчитывают с помощью метода внешнего стандарта.

Пример 4. Оценка физической стабильности

Агрегация в форме образования фибрилл была обнаружена с помощью специфического по отношению к амилоиду красителя тиофлавина Т (ThT), который часто используют для демонстрации присутствия фибрилл в растворе (см., например, Groenning, M., J. Chem. Biol. 3(1) (2010), pp. 1-18; Groenning et al., J. Struct. Biol. 158 (2007) pp. 358-369; и Levine, H., III, Protein Sci. 2 (1993) pp. 404-410). Исследуемые пептиды (2 мг/мл) растворяли в деминерализованной воде, доведенной до рН 2,5 с помощью HCl, при температуре окружающей среды (как правило, 25°С). Растворы, содержащие (i) 1 мг/мл исследуемого пептида, 40 мкМ ThT и 50 мМ фосфатного (Ph) буфера (рН 7,0), (ii) 1 мг/мл исследуемого пептида, 40 мкМ ThT и 50 мМ гистидинового (His) буфера (рН 7,0) и (iii) 1 мг/мл исследуемого пептида, 40 мкМ ThT и 50 мМ ацетатного (Ас) буфера (рН 4,0), помещали в 96-луночные черные планшеты для флюоресцентных исследований (с прозрачным дном) в трех повторностях. Сбор данных проводили с фиксированными промежутками в 10 мин, каждому из которых предшествовало автоматическое перемешивание (взбалтывание) в течение 300 с, в течение 96 ч при 40°С. Физическую стабильность определяют путем измерения интенсивности флюоресценции в зависимости от времени. Значимое увеличение интенсивности оценивают как обнаружение фибриллообразования (ОФ). Данные представлены ниже в табл. 1.

Пример 5. Оценка химической стабильности

Образцы каждого исследуемого пептида растворяли в ацетатном буфере с рН 4 и фосфатном буфере с рН 6 и 7 (все буферы имеют концентрацию 40 мМ). Конечная концентрация пептида составляла 1

- 29 042757 мг/мл. Образцы помещали в стеклянные флаконы и инкубировали при 40°С. Образцы анализировали с помощью ОФ-ВЭЖХ на колонке С8 с градиентным элюированием с использованием системы трифторуксусная кислота/ацетонитрил/вода в качестве подвижной фазы. Процент площади (площадь-%) основного пика определяли с помощью спектроскопии в УФ-области при длине волны 220 нм в каждый момент времени отбора проб.

% деградации рассчитывали путем вычитания процента площади основного пика в начале (t=0) из процента площади основного пика в каждый момент времени отбора проб.

Результаты оценки химической стабильности после 3 дней инкубирования представлены в виде % деградации в табл. 1 (ниже).

Результаты оценки химической стабильности после 14 дней инкубирования представлены в виде % деградации в табл. 2 (ниже).

В альтернативном анализе пептиды растворяли в воде MilliQ и доводили рН до 4,0, 7,5 или 9,0. Образцы помещали в стеклянные флаконы и инкубировали при 40°С. Образцы анализировали с помощью ОФ-ВЭЖХ на колонке С8 с градиентным элюированием с использованием системы трифторуксусная кислота/ацетонитрил/вода в качестве подвижной фазы. Процент площади (площадь-%) основного пика определяли с помощью спектроскопии в УФ-области при длине волны 220 нм в каждый момент времени отбора проб.

% деградации рассчитывали путем вычитания процента площади основного пика в начале (t=0) из процента площади основного пика в каждый момент времени отбора проб.

Результаты оценки химической стабильности после 8 дней инкубирования представлены в виде % деградации в табл. 3 (ниже).

Таблица 1. Данные о EC50, химической стабильности и фибриллообразовании

№ соединения	hCT-R	hAMYR3	Фибриллообразование* (в буфере)	% деградации после 72 ч при 40 °C
ЕС50 [нМ]	ЕС50 [нМ]	pH 4 ацетат	pH 7 гистидин	pH 7 фосфат	pH 4 ацетат	pH 6 фосфат	pH 7 фосфат
1	13,6	9,3
2	0,105	0,032
3	0,081	0,035	НОФ	НОФ	ОФ	< 1	3,2	1,2
4	0,160	0,092	НОФ	НОФ	НОФ	< 1	< 1	< 1
5	0,114	0,032
6	0,327	0,011
7	0,289	0,032
8	0,129	0,059	НОФ	НОФ	НОФ	< 1	< 1	< 1

- 30 042757

9	0,027	0,013
10	0,345	0,068	ОФ	НОФ	НОФ	< 1	< 1	< 1
11	0,068	0,024	НОФ	НОФ	НОФ	< 1	< 1	< 1
12	0,893	0,999
13	1,411	0,456
14	0,386	0,108
15	0,056	0,017	НОФ	ОФ	ОФ	< 1	< 1	< 1
16	0,043	0,035
17	0,058	0,025	НОФ	НОФ	НОФ	1,2	< 1	< 1
18	0,085	0,031	НОФ	НОФ	НОФ	< 1	< 1	< 1
19	0,028	0,006
20	0,009	0,003	ОФ	НОФ	НОФ	1,0	1,3	2,0
21	0,037	0,010	НОФ	НОФ	НОФ	< 1	< 1	< 1
22	0,474	0,051
23	1,931	0,706
24	0,038	0,013
25	0,844	0,336	НОФ	НОФ	НОФ	-	-	< 1
26	0,769	0,120
27	0,521	0,325	НОФ	НОФ	НОФ	< 1	< 1	1,7
28	1,229	0,268
29	1,070	0,312
30	0,232	0,122	ОФ	НОФ	НОФ
31	0,227	0,066
32	0,006	0,005	ОФ	НОФ	НОФ	1,3	<1	2,2
33	0,019	0,009	НОФ	НОФ	НОФ	< 1	1	< 1
34	0,206	0,063	НОФ	НОФ	НОФ	< 1	< 1	2,8
35	0,066	0,028	НОФ	НОФ	НОФ	< 1	< 1	1,4
36	0,026	0,007	ОФ	НОФ	НОФ	2,5	2,1	1,0
37	0,116	0,031	ОФ	НОФ	НОФ	-	< 1	3,0
38	0,114	0,060	ОФ	НОФ	НОФ	< 1	< 1	< 1
39	0,094	0,024	ОФ	НОФ	НОФ	< 1	< 1	< 1

- 31 042757

40	0,028	0,008	ОФ	НОФ	НОФ	1,1	< 1	< 1
41	0,095	0,024	НОФ	НОФ	НОФ	< 1	< 1	< 1
42	0,006	0,003
43	0,021	0,007	ОФ	ОФ	ОФ
44	0,020	0,009	ОФ	НОФ	НОФ
45	299	279
46	7,5	5,5
47	10,8	7,7
48	0,107	0,020
49	1,038	0,442
50	3,3	1,5
51	0,861	0,306
Ср. 1	20,3	17,1
Ср. 2	0,019	0,003
Ср. 3	18,2	13,2
Ср. 4	0,075	0,031	НОФ	НОФ	НОФ
Ср. 5	0,063	0,028	ОФ	НОФ	НОФ

НОФ = не обнаружено фибриллообразования;

ОФ = обнаружено фибриллообразование

Таблица 2. Химическая стабильность

№ соединения	% деградации после 14 дней при 40 °C
pH 4 ацетат	pH 6 фосфат	pH 7 фосфат
32	<1	<1	<1
41	1,1	<1	<1
10	1,9	1,8	9,1
14	2,2	<1	2,6
18	<1	1,0	1,9
37	н/о	<1	<1
36	н/о	1,6	<1
4	1,6	<1	6,4
38	н/о	н/о	<1
20	н/о	<1	3,7
16	н/о	<1	н/о
3	н/о	1,0	н/о
35	2	<1	<1
Ср. 2	<1	4,6	н/о
Ср. 4	3,2	12,6	20,3
Ср. 5	3,0	5,1	12,7
NN96	3,0	10,1	33,2

н/о - не определено

- 32 042757

Таблица 3. Химическая стабильность

№ соединения	% деградации после 8 дней при 40°С
pH 4	рн 7,5	pH 9
51	3,1	4,6	4,6
49	1,7	2,1	3,0
48	1,8	2,3	2,5
19	3,9	6,2	4,2

Пример 6. Определение фармакокинетических (ФК) профилей у крыс

Самцам крыс Спрег-Доули путем однократной подкожной (п/к) болюсной инъекции вводили каждый из исследуемых пептидов, указанных ниже.

Вводили дозы соединения 30 нмоль/кг. До введения и через 24 и 96 ч после введения получали образцы крови из хвостовой вены. Сразу после последнего отбора образцов крови крыс подвергали эвтаназии путем удара и цервикальной дислокации.

Переносящая среда для введения, используемая для каждого исследуемого пептида, представляла собой маннитолсодержащий гистидиновый буфер (pH 7,0). После осаждения этанолом образцы плазмы анализировали с помощью жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии (ЖХ-МС/МС). Для расчета фармакокинетических параметров использовали средние значения концентраций в плазме.

Период полувыведения из плазмы в конечной фазе (ti/₂) определяли по формуле Ιη(2)/λζ, где λζ представляет собой величину наклона логарифмически-линейной регрессии логарифма концентрации в зависимости от времени во время конечной фазы.

Результаты

Периоды полувыведения из плазмы в конечной фазе (Ц/₂) для всех исследуемых пептидов были определены в диапазоне 21,3 до 36,1 ч.

Таблица 4. Период полувыведения in vivo

№ соединения	tl/2 [Ч]
3	21,3
4	31,9
18	30,1
20	31,1
35	36,1
38	31,8

Пример 7. Влияние на потребление пищи и массу тела у нормальных крыс Спрег-Доули в кратковременный период

Крыс Спрег-Доули (СД) получали от Janvier Labs, Франция. Животные прибыли по меньшей мере за 14 дней до начала исследования для адаптации к условиям эксперимента. С момента прибытия и на протяжении всего исследования крыс содержали в группах от 2 до 4 (п=2-4) в помещении с контролируемой освещенностью, температурой и влажностью. Животные имели доступ ad libitum к пище (KLIBA 3430, Provimi Kliba AG, Швейцария) и воде (водопроводная вода бытового качества) во время всего исследования. В группу включали 6-8 крыс. Группу, получавшую носитель, и группу положительного контроля включали в каждый набор тестов. Исследуемый пептид вводили крысам подкожно (п/к) один раз утром за 1 ч до выключения света, применяя дозу, скорректированную с учетом массы тела (30 нмоль/кг). Объем введения составлял 2 мл/кг. Потребление пищи регистрировали в реальном времени с использованием автоматической системы регистрации приема пищи (НМ02, MBRose, Дания) в течение 4 дней или вручную в 0 ч до введения и затем через 24, 48, 72 и 96 ч после введения. Массу тела определяли ежедневно.

Статистический анализ проводили с помощью GraphPad™ Prism версии 7. Сравнение определяемых параметров проводили с помощью двухфакторного ANOVA с последующим применением критериев Даннетта для множественных сравнений. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05.

Результаты

Через 48 ч после введения каждое из исследуемых соединений (исключениями являются соединения 30 и 37) вызывало явное, статистически значимое уменьшение потребления пищи (с поправкой на носитель, в %). Это уменьшение потребления пищи отражалось в снижении массы тела (с поправкой на носитель, в %). Впоследствии нормальное пищевое поведение восстанавливалось.

Claims (11)

1. Таблица 5. Действие на потребление пищи и массу тела № соединения Уменьшение потребления пищи в % через 48 ч Доза: 30 нмоль/кг Уменьшение массы тела в % через 48 ч Доза: 30 нмоль/кг

   41 75 11

   35 72 12

   18 58 10

   39 76 9,2

   40 83 7,3

   37 24 4,3

   30 < 20 0

   36 44 (в дозе 10 нмоль/кг) 5,2 (в дозе 10 нмоль/кг)

   4 34 4,6

   38 43 8,2

   20 49 7,8

   15 71 7,7

   16 66 7,4

   3 34 5,6

   Пример 8. Изменения базального содержания глюкозы после еды у крыс ZDF с диабетом в кратковременный период

   Самцов крыс Zucker Diabetic Fatty (ZDF-Lepr^fa/Crl) получают от Charles River, США. Животные адаптируются к условиям эксперимента в течение по меньшей мере 14 дней до начала исследования. С момента прибытия и на протяжении всего исследования крыс содержат в группах по 2 (n=2) в помещении с контролируемой освещенностью, температурой и влажностью. Животные имеют доступ ad libitum к пище (KLIBA 2437, Provimi Kliba AG, Швейцария) и воде (водопроводная вода бытового качества) во время всего исследования.

   Крыс случайным образом распределяют на основании содержания глюкозы в крови, НЬА1с и массы тела в определенную исследуемую группу и группу, получающую носитель. Общее количество животных на группу составляет 10 (n=10). Исследуемый пептид вводят крысам подкожно (п/к) один раз утром, применяя дозу, скорректированную с учетом массы тела (10 нмоль/кг). Объем введения составляет 2 мл/кг.

   Содержание глюкозы в образцах крови, взятых из хвостовой вены через 24, 72, 96 и 168 ч после введения, и содержание глюкозы в крови определяют с помощью глюкометра (GlucoSmart Swing™; MSP Bodmann GmbH, Германия).

   Статистический анализ проводят с помощью GraphPad™ Prism версии 7. Сравнение определяемых параметров проводят с помощью двухфакторного ANOVA с последующим применением критериев Сидака (Sidak) для множественных сравнений. Различия считают статистически значимыми при р < 0,05.

   ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Аналог амилина, имеющий формулу:

   [19CD]-isoGlu-RD()GTAT-Dab()-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 2) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [19CD]-isoGlu-RD()GTAT-Orn()-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 3) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [19CD]-isoGlu-isoGlu-RD()GTAT-Orn()-ATERLAHFLQRSSF- (Соединение 4)

   Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH₂

   [19CD]-isoGlu-RD()GTAT-Orn()-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 5) lle(Me)-PSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [19CD]-isoGlu-RD()GTAT-Orn()-ATERLAHFLQRF-Gly(Me)-A- (Соединение 6) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [19CD]-isoGlu-RD()GTAT-Orn()-ATERLAHFLHRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 7) lle(Me)-LSSTEVGSNTP-NH2

   [19CD]-isoGlu-RD()GTAT-Orn()-ATQRLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 8) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [19CD]-isoGlu-RD()GTAT-Orn()-ATQRLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 9) lle(Me)-PSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [19CD]-isoGlu-RD()GTAT-Orn()-ATERLARFLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 10) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   - 34 042757

   [19CD]-isoGlu-ED()GTATK()ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 11) lie(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH₂

   [ 19CD]-isoGiu-RD()GEATK()ATERLAHFLQRSSF-Giy(Me)-A- (Соединение 12) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH₂

   [ 19CD]-isoGlu-RD()GTASK()ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 14) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-RD()GTATK()ATQRLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 15) lle(Me)-PSSTEVGSNT-Hyp-NH₂

   [ 19CD]-isoGlu-RD()GTATK()ATQRLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 16) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-RD()GTATK()ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 17) lle(Me)-PSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [19CD]-isoGlu-RD()GTATK()ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 18) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-RD()GTAT-hLys()-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 19) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-RD()GTAT-Om()-ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)- (Соединение 20)

   A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-RD()GTAT-Om()-ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)- (Соединение 21)

   A-lle(Me)-PSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [19CD]-isoGlu-RD()GTAT-Om()-ATERLA-Aad-FLTRSSF-Gly(Me)- (Соединение 22)

   A-lle(Me)-LSSTEVGSST-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-RD()GTAT-Om()-ATERLA-Aad-FLQRTTF-Gly(Me)- (Соединение 24)

   A-lle(Me)-PSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-RD()GTAT-Om()-ATERLA-Aad-FLQRATF-Gly(Me)- (Соединение 25)

   A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-RD()GTAT-Om()-ATERLA-Aad-FLQRAAF-Gly(Me)- (Соединение 26)

   A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-RD()GTAT-Om()-ATERLA-Aad-FLQRGTF-Gly(Me)- (Соединение 27)

   A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-ED()GTATK()ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 30) lle(Me)-PSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [19CD]-isoGlu-RD()GTATK()ATERLA-Aad-FLQRAAF-Gly(Me)-A- (Соединение 31) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-RD()GTATK()ATERLA-Aad-FLQRGGF-Gly(Me)-A- (Соединение 32) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-RD()GTATK()ATERLA-Aad-FLQRANF-Gly(Me)-A- (Соединение 33) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-RD()GTATK()ATERLA-Aad-FLQRS SF-Gly(Me)-A- (Соединение 34) lle(Me)-PSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-RD()GTATK()ATERLA-Aad-FLQRS SF-Gly(Me)-A- (Соединение 35) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-RD()GTATK()ATERLA-Aad-FLQRS SF-Gly(Me)-A- (Соединение 3 6) lle(Me)-LSSTETGSNT-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-ED()GTATK()ATERLA-Aad-FLQRSSFGly(Me)-A- (Соединение 3 7) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-RD()GTATK()ATERLA-Aad-FLQRTTF-Gly(Me)-A- (Соединение 3 8) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [19CD]-isoGlu-KD()GTATK()ATQRLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)- (Соединение 39)

   Alle(Me)-LSSTEVGSNTHyp-NH2

   [19CD]-isoGlu-RD()GTATK()ATQRLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 40) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [19CD]-isoGlu-RD()GTATK()ATQRLADFLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 41) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-RD()GTATK()ATQRLADFLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 42) lle(Me)-LSSTETGSNT-Hyp-NH2

   [19CD]-isoGlu-KD()GTATK()ATQRLANFLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 43) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2

   [ 19CD]-isoGlu-KD()GTATK()ATQRLANFLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 44) lle(Me)-LSSTETGSNT-Hyp-NH2

   [19CD]-isoGlu-R-Dap()-GTAT-Aad()-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)- (Соединение 48)

   A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH₂ или

   - 35 042757

   [19CD]-isoGlu-RE()GTAT-Dab()-ATERLAHFLQRSSF-Gly(Me)-A- (Соединение 51) lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH₂ или их фармацевтически приемлемую соль или сольват; где круглые скобки () представляют собой внутримолекулярный лактамный мостик, образуемый между боковыми цепями остатков;

   [19CD] представляет собой 19-карбоксинонадеканоильную группу;

   isoGlu представляет собой остаток изоглутаминовой кислоты;

   Dab представляет собой 2,4-диаминобутановую кислоту;

   Gly(Me) представляет собой N-метилглицин;

   Пе(Ме) представляет собой N-метилизолейцин;

   Нур представляет собой 4-гидроксипролин;

   От представляет собой орнитин;

   hLys представляет собой 2-амино-7-аминогептановую кислоту (гомолизин);

   Aad представляет собой 2-аминоадипиновую кислоту и

   Dap представляет собой 2,3-диаминопропановую кислоту.
2. 2. Аналог амилина по п.1, имеющий формулу

   [19CD]-isoGlu-RD()GTATK()ATERLA-Aad-FLQRSSF-Gly(Me)-A-lle(Me)-LSSTEVGSNT-Hyp-NH2 (Соединение 35) или его фармацевтически приемлемую соль или сольват.
3. 3. Фармацевтическая композиция, содержащая аналог амилина по п.1 или 2 в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, вспомогательным веществом или носителем.
4. 4. Способ синтеза аналога амилина по п.1 или 2, включающий синтез указанного аналога с применением методики твердофазного или жидкофазного пептидного синтеза, необязательно включающий выделение и/или очистку конечного продукта и необязательно дополнительно включающий стадию образования амидной связи между боковыми цепями в положениях 2 и 7.
5. 5. Применение аналога амилина по п.1 или 2 в способе терапевтического лечения.
6. 6. Применение по п.5 для лечения ожирения, патологического ожирения, ожирения перед хирургической операцией, связанного с ожирением воспаления, связанного с ожирением заболевания желчного пузыря и вызванного ожирением апноэ во сне и респираторных нарушений, дегенерации хрящевой ткани, остеоартрита или осложнений со стороны репродуктивного здоровья, связанных с ожирением или избыточной массой тела.
7. 7. Применение по п.5 для предотвращения или лечения болезни Альцгеймера, диабета, диабета типа 1, диабета типа 2, преддиабета, синдрома резистентности к инсулину, нарушения толерантности к глюкозе (НТГ), патологических состояний, связанных с повышенным содержанием глюкозы в крови, метаболического заболевания, включая метаболический синдром, гипергликемии, гипертензии, атерогенной дислипидемии, стеатоза печени (жировой дистрофии печени; включая неалкогольную жировую болезнь печени (НАЖБП), которая в свою очередь включает неалкогольный стеатогепатит (НАСГ)), почечной недостаточности, артериосклероза (например, атеросклероза), заболевания крупных сосудов, заболевания мелких сосудов, вызванного диабетом заболевания сердца (включая диабетическую кардиомиопатию и сердечную недостаточность в качестве осложнения диабета), ишемической болезни сердца, заболевания периферических артерий или инсульта и их комбинаций.
8. 8. Применение по п.5 для снижения содержания циркулирующих ЛНП и/или повышения соотношения ЛВП/ЛНП.
9. 9. Применение аналога амилина по п.1 или 2 в способе лечения, замедления или ограничения увеличения массы тела, стимулирования снижения массы тела и/или уменьшения избыточной массы тела.
10. 10. Применение по любому из пп.6-9, где указанный аналог амилина вводят в качестве части комбинированной терапии совместно с противодиабетическим агентом, агентом против ожирения, агентом для лечения метаболического синдрома, антидислипидемическим агентом, антигипертензивным агентом, ингибитором протонного насоса или противовоспалительным агентом.
11. 11. Применение по п.10, где указанное средство против ожирения представляет собой пептид YY, нейропептид Y (NPY), антагонист каннабиноидного рецептора 1, ингибитор липазы, проостровковый пептид человека (HIP), агонист рецептора меланокортина 4, агонист рецептора GLP-1, антагонист рецептора меланинконцентрирующего гормона 1, ССК, амилин, прамлинтид или лептин.

    Евразийская патентная организация, ЕАПВ

    Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2