CN112759640B - 一类glp-1/胃泌素受体双重激动剂及其应用 - Google Patents

一类glp-1/胃泌素受体双重激动剂及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112759640B
CN112759640B CN202011425955.3A CN202011425955A CN112759640B CN 112759640 B CN112759640 B CN 112759640B CN 202011425955 A CN202011425955 A CN 202011425955A CN 112759640 B CN112759640 B CN 112759640B
Authority
CN
China
Prior art keywords
acid
glu
glp
aeea
polypeptide compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202011425955.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112759640A (zh
Inventor
韩京
孟庆华
周凤
杨启萌
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangsu Normal University
Original Assignee
Jiangsu Normal University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangsu Normal University filed Critical Jiangsu Normal University
Priority to CN202011425955.3A priority Critical patent/CN112759640B/zh
Publication of CN112759640A publication Critical patent/CN112759640A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112759640B publication Critical patent/CN112759640B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Abstract

本发明提供了一类GLP‑1/gastrin受体双重激动多肽化合物。本发明的GLP‑1/gastrin受体双重激动多肽化合物在更为有效的降低血糖的同时具有更优异的促进胰腺组织的细胞增殖和胰岛再生作用，同时多肽化合物具有很好的减重和治疗糖尿病肾病的作用。本发明提供的多肽化合物化学性质稳定，具有低的免疫原性特性，适合作为治疗代谢性疾病，如糖尿病、肥胖、糖尿病肾病、NAFLD、NASH等药物的活性成分。

Description

一类GLP-1/胃泌素受体双重激动剂及其应用
技术领域
本发明涉有生物医药，具体涉及一类GLP-1/胃泌素受体双重激动剂及其应用。
背景技术
糖尿病是以高血糖为特征的代谢型疾病，是全世界最主要的慢性非传染病之一。糖尿病可分为胰岛素依赖型糖尿病(1型糖尿病，T1DM)和非胰岛素依赖型糖尿病(2型糖尿病，T2DM)，其中T2DM患者占糖尿病患者人数的85％以上。目前治疗T2DM最有效的方法是注射胰岛素，但是在治疗过程中会出现低血糖的危险。受到剂量大小、个体差异、注射途径、注射部位或注射后未进食等因素的影响，胰岛素使用过程可能会出现严重的低血糖反应。因此，寻找安全有效的降血糖新药成为当前糖尿病治疗药物研究的当务之急。
GLP-1是由末端空肠、回肠和结肠的L细胞所分泌的一种葡萄糖依赖性降血糖多肽激素，与GLP-1受体特异性结合后发挥降糖作用。GLP-1的主要优点是具有血糖依赖性的肠促胰岛素分泌作用，避免了糖尿病治疗中常存在的产生低血糖症的危险。除了调节血糖，GLP-1也可以阻止胰腺β细胞退化，刺激β细胞的增殖和分化，能从源头上改善糖尿病进程。此外，GLP-1还具有抑制胃酸分泌、延迟胃排空、抑制食欲等作用，具有部分减重效果。然而，天然GLP-1在体内的半衰期很短，这在试图将GLP-1作为一种药物的尝试中构成了一个重大的药理学挑战。GLP-1在体内会被二肽基肽酶IV(DPP-IV)迅速降解，导致其半衰期仅有几分钟。
两栖动物体内的GLP-1作用效果与人GLP-1类似，所以针对两栖动物GLP-1进行结构修饰，有望发现具有更高效和长效降糖作用的新型GLP-1类药物。XenGLP-1是从非洲爪蟾体内发现的一类动物源属的GLP-1类似物，与天然GLP-1相比，XenGLP-1的降糖活性和稳定性更优。此外，与GLP-1相比，除了更为耐受DPP-IV的降解，XenGLP-1还显示出对于中性内肽酶(NEP)的降解稳定得多。XenGLP-1是GLP-1受体的高效激动剂，具有许多用天然GLP-1观察到的葡萄糖调控作用，许多临床前研究都显示XenGLP-1具有若干有益的抗糖尿病特性，包括血糖依赖性的胰岛素合成和分泌增强、胃排空放慢、食物摄入和体重减少，以及促进β细胞增殖和恢复胰岛功能等(Biochem.Pharmacol.,2017,142,155–167； FASEB J.,2019,33,7113-7125)。这些效果不仅对于糖尿病人是有益的，并且对罹患肥胖症的患者也是有益的。
胃泌素(gastrin)是由胃粘膜细胞和十二指肠G细胞分泌的，它在人体的主要生理作用是刺激胃酸分泌和帮助胃运动。Gastrin的其他作用包括刺激细胞生长，有迹象表明gastrin 可能在胰岛新生中起作用，即刺激胰岛中分泌胰岛素的β细胞生长(见Korc,M.,J.Clin. Invest.,1993,92,1113-1114；Rooman et al.Diabetes,2002,51,686-690)，因此有助于调节血糖。Gastrin和另一种胃肠道激素胆囊收缩素(Cholecystokinin，CCK)共享受体，它们的受体分为两类，CCK-1受体和CCK-2受体(gastrin受体)，这两种受体对gastrin和CCK类似物具有不同的亲和力。CCK-1受体主要作为硫酸化CCK的受体，而CCK-2受体对CCK和gastrin具有类似的亲和力。其中CCK-2受体也被认为是gastrin受体，因为血浆中gastrin水平高于CCK(Foucaud et al.Reg.Peptides,2008,145,17-23)。
CCK-2受体与配体结合时可启动多种细胞内通路，CCK-2受体下游的一个关键途径是 MAPK(丝裂原活化蛋白激酶)或ERK(胞外调节激酶)通路，这些通路也被几种生长激素激活，这是gastrin在细胞增殖作用中的一个关键特征。由于CCK-2受体在胰腺中表达，gastrin能够促进胰腺组织的细胞增殖和胰岛再生。Gastrin在人体内主要以三种形式存在，按氨基酸数目可分为gastrin-34、gastrin-17和gastrin-14，此外，还存在一种短肽形式，即 gastrin-6。Gastrin-6的6个氨基酸是gastrin与CCK-2受体结合的关键氨基酸，并且其C端是酰胺化形式。
WO2005/072045公开了一种“GLP-1受体激动剂”和“gastrin化合物”的组合，在预防和/ 或治疗“GLP-1受体激动剂”或“gastrin化合物”已被证明具有治疗效果的条件和/或疾病中具有有益效果。WO2007/095737公开了“Exendin-4”和“gastrin化合物”的类似组合，在预防和/ 或治疗“Exendin-4激动剂”或“gastrin化合物”已被证明具有治疗效果的条件和/或疾病中同样具有有益效果。应注意，WO2005/072045或WO2007/095737均未提供任何体内、体外或其他数据来证实其中分别描述和使用的“GLP-1受体激动剂”/“gastrin化合物”或“Exendin-4”/“gastrin化合物”组合可能有益于例如类型的治疗T2DM。US10406207B2公开了一种exendin-4的截短形式和gastrin-6的缀合肽(ZP3022)，K.Fosgerau等揭示了ZP3022 在糖尿病模型小鼠中展现出了提高的治疗活性，由于没有长效化修饰，这种缀合肽的半衰期较短，必须频繁注射(Diabetes Obes Metab.,2013,15,62-71)。Xinyu Chen等揭示了一类 XenGLP-1与gastrin-6的缀合肽，但是，该类缀合肽如果采用一周一次给药的修饰手段，活性会显著下降，因而只能实现一天一次给药，无法实现一周一次给药。并且所需修饰手段涉及到多种氨基酸替换，所带来的化合物的免疫原性问题较为显著(J.Med.Chem.2020,63, 12595-12613)。
发明内容
本发明的目的是提供一种新的具有GLP-1/gastrin受体双重激动作用的多肽化合物，所述多肽是基于XenGLP-1序列设计的变体，可以同时激动GLP-1受体和gastrin受体，进一步提高了XenGLP-1的糖尿病的治疗作用。该类多肽化合物性质稳定，免疫原性低，可以实现一周一次给药。同时多肽化合物具有很好的减重和治疗糖尿病肾病的作用，比单一受体激动剂和已报道GLP-1/gastrin受体双重激动剂在制备用于治疗代谢综合征，诸如糖尿病、肥胖、NAFLD、NASH、糖尿病肾病等疾病的药物方面更具潜力。
为实现上述发明目的，本发明的技术方案具体如下：
一类GLP-1/gastrin受体双重激动多肽化合物，该类GLP-1受体和gastrin受体双重激动多肽化合物的氨基酸序列通式为：
His-Xaa1-Glu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Asn-Asp-Val-Thr-Glu-Tyr-Leu-Glu-Glu-Xaa2-Ala-Ala-Xaa3-Glu- Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-Lys-AEEA-AEEA-Xaa4-Xaa5-Tyr-Gly-Trp-Leu-Asp-Phe-NH2
其中：
Xaa1取自D-Ala，Gly或Aib；
Xaa2取自Glu、Lys或侧链被修饰的Lys；
Xaa3取自Lys或侧链被修饰的Lys；
Xaa4取自AEEA或不存在；
Xaa5取自AEEA或不存在；
其中侧链被修饰的Lys选自Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu-CO-(CH2)n-COOH)
Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu-CO-(CH2)n-COOH)的结构式如下式所示：
其中，n为自然数，且12≤n≤20。
优选的，所述n是16、18或20。
优选的，所述多肽化合物的氨基酸序列是下列序列之一：
(1)SEQ ID NO:1
His-Aib-Glu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Asn-Asp-Val-Thr-Glu-Tyr-Leu-Glu-Glu-Lys(AEEA-AEEA-γ-Gl u-CO-(CH2)16-COOH)-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-Lys-AEEA-AEEA-Tyr-Gly-Tr p-Leu-Asp-Phe-NH2
(2)SEQ ID NO:2
His-Aib-Glu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Asn-Asp-Val-Thr-Glu-Tyr-Leu-Glu-Glu-Lys(AEEA-AEEA-γ-Gl u-CO-(CH2)16-COOH)-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-Lys-AEEA-AEEA-AEEA-Tyr- Gly-Trp-Leu-Asp-Phe-NH2
(3)SEQ ID NO:3
His-Aib-Glu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Asn-Asp-Val-Thr-Glu-Tyr-Leu-Glu-Glu-Lys(AEEA-AEEA-γ-Gl u-CO-(CH2)16-COOH)-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-Lys-AEEA-AEEA-AEEA-AE EA-Tyr-Gly-Trp-Leu-Asp-Phe-NH2
(4)SEQ ID NO:4
His-Aib-Glu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Asn-Asp-Val-Thr-Glu-Tyr-Leu-Glu-Glu-Glu-Ala-Ala-Lys(AEE A-AEEA-γ-Glu-CO-(CH2)16-COOH)-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-Lys-AEEA-AEEA-Tyr-Gly-T rp-Leu-Asp-Phe-NH2
(5)SEQ ID NO:5
His-Aib-Glu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Asn-Asp-Val-Thr-Glu-Tyr-Leu-Glu-Glu-Glu-Ala-Ala-Lys(AEE A-AEEA-γ-Glu-CO-(CH2)16-COOH)-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-Lys-AEEA-AEEA-AEEA-Tyr -Gly-Trp-Leu-Asp-Phe-NH2
(6)SEQ ID NO:6
His-Aib-Glu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Asn-Asp-Val-Thr-Glu-Tyr-Leu-Glu-Glu-Glu-Ala-Ala-Lys(AEE A-AEEA-γ-Glu-CO-(CH2)16-COOH)-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-Lys-AEEA-AEEA-AEEA-AE EA-Tyr-Gly-Trp-Leu-Asp-Phe-NH2
本发明还提供了一类GLP-1/gastrin受体双重激动多肽化合物药学上可接受的盐。
优选的，所述的盐为GLP-1/gastrin受体双重激动多肽化合物与下述化合物中的一种所形成的盐：氢溴酸、盐酸、甲磺酸、磷酸、乙磺酸、甲酸、对甲苯磺酸、乙酸、乙酰乙酸、丙酮酸、果胶酯酸、丁酸、己酸、苯磺酸、庚酸、十一烷酸、苯甲酸、水杨酸、月桂酸、 2-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、樟脑酸、环戊烷丙酸、3-羟基-2-萘甲酸、樟脑磺酸、二葡糖酸、烟酸、扑酸、丙酸、过硫酸、、苦味酸、3-苯基丙酸、特戊酸、衣康酸、2-羟基乙磺酸、氨基磺酸、十二烷基硫酸、三氟甲磺酸、萘二磺酸、2-萘磺酸、柠檬酸、扁桃酸、抗坏血酸、酒硬脂酸、石酸、草酸、乳酸、琥珀酸、丙二酸、半硫酸、苹果酸、马来酸、藻酸、富马酸、D-葡糖酸、甘油磷酸、葡庚酸、天冬氨酸、硫氰酸或者磺基水杨酸。
本发明还提供了GLP-1/gastrin受体双重激动多肽化合物的药物组合物，该药物组合物包括：以上述任一GLP-1/gastrin受体双重激动多肽化合物或其药学上可接受的盐为有效原料，再加上药学上可接受的载体或稀释剂组成。
本发明还提供了含有上述GLP-1/gastrin受体双重激动多肽化合物的药剂，所述的药剂是任何一种药剂学上所说的胶囊、片剂、喷雾剂、吸入剂、注射剂、贴剂、乳剂、膜剂、散剂或者复方制剂，药剂由GLP-1/gastrin受体双重激动多肽化合物和药学上可接受的药用辅料、载体或稀释剂组成。
本发明还提供了本发明所述的GLP-1/gastrin受体双重激动多肽化合物、其药学上可接受的盐、其药物组合物或其药剂在制备用于治疗代谢性疾病或病症的药物中的应用。在特定方面，代谢性疾病或病症为糖尿病、糖尿病肾病、NAFLD、NASH或肥胖。在特定方面，糖尿病为1型糖尿病、T2DM或妊娠糖尿病。在特定方面，所述药物用于治疗超过一种代谢疾病或病症，例如，糖尿病和NAFLD、NASH或肥胖；糖尿病肾病和NAFLD、NASH 或肥胖；肥胖和NASH或NAFLD；糖尿病、NASH和肥胖；糖尿病、NAFLD和肥胖；或糖尿病和肥胖。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
与现有的GLP-1受体激动剂相比，本发明的GLP-1/gastrin受体双重激动多肽化合物在更为有效的降低血糖的同时具有更优异的促进胰腺组织的细胞增殖和胰岛再生作用，可以从根本上治疗糖尿病，逆转胰岛素抵抗，治疗糖尿病肾病并发症，与现有药物相比具有意想不到的有益作用。本发明的多肽化合物对GLP-1受体和gastrin受体的激动活性高于各受体的天然配体，本发明提供的多肽化合物化学性质稳定，不易被体内的DPP-IV和NEP降解，不易被肾小球滤过，化合物的稳定性显著提高，具有支持每周一次给药的药代动力学特征。本发明提供的多肽化合物具有提高的生物物理特性，在中性pH和pH 4.5的溶解性都高于天然GLP-1和gastrin-6，具备有利于制剂的特性。本发明提供的多肽化合物与已上市的GLP-1受体激动剂和已报道的GLP-1/gastrin受体双重激动剂相比具有更低的免疫原性特性，更优异的降血糖活性和减重作用，对T2DM、肥胖、糖尿病肾病、NAFLD、NASH 等代谢性疾病的治疗作用优于现有上市药物和已报道的GLP-1/gastrin受体双重激动剂。因此，本发明提供的多肽化合物，适合作为治疗代谢性疾病，如糖尿病、肥胖、糖尿病肾病、 NAFLD、NASH等药物的活性成分。
附图说明
图1显示的是各受试物单次给药在db/db小鼠非禁食状态下的长效降血糖作用；
图2显示的是各受试物在体外的免疫原性。
具体实施方式
在本说明书全文中采用以下缩写：
英文缩写 中文
Gly 甘氨酸
Ser 丝氨酸
Ala 丙氨酸
Thr 苏氨酸
Val 缬氨酸
Ile 异亮氨酸
Leu 亮氨酸
Tyr 酪氨酸
Phe 苯丙氨酸
His 组氨酸
Pro 脯氨酸
Asp 天冬氨酸
Met 蛋氨酸
Glu 谷氨酸
Trp 色氨酸
Lys 赖氨酸
Arg 精氨酸
Asn 天冬酰胺
Gln 谷氨酰胺
Cys 半胱氨酸
Aib α-氨基异丁酸
AEEA 8-氨基-3,6二氧杂辛酸
DCM 二氯甲烷
DMF 二甲基甲酰胺
Fmoc 9-芴基甲氧基羰基
Boc 叔丁氧羰基
DMSO 二甲基亚砜
DIC N,N’-二异丙基碳二亚胺
HOBT 1-羟基-苯并三氮唑
Alloc 烯丙氧羰基
Dde 1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代亚环己基)-乙基
Mtt 4-甲基三苯甲基
ivDde 1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代亚环己基)3-甲基-丁基
TFA 三氟乙酸
EDT 二巯基乙烷
HPLC 高效液相色谱
LC-MS 液质联用质谱
DMEM 杜贝可氏修饰伊格氏培养基
FBS 胎牛血清
PBS 磷酸盐缓冲盐水
HEPES 2-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸
BSA 牛血清白蛋白
IBMX 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤
HBSS Hanks’平衡盐溶液
AIMV 无血清细胞培养基
实施例1
SEQ ID NO:1多肽化合物的合成
His-Aib-Glu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Asn-Asp-Val-Thr-Glu-Tyr-Leu-Glu-Glu-Lys(AEEA-AEEA-γ- Glu-CO-(CH2)16-COOH)-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-Lys-AEEA-AEEA-Tyr-Gly- Trp-Leu-Asp-Phe-NH2
(1)树脂的溶胀
称取担载量为0.382mmol/g的Rink Amide MBHA树脂0.262g(0.1mmol当量)，放入25mL的反应器中，用7mL的DCM和甲醇交替清洗树脂1次，7mL的DCM清洗树脂2 次，然后用7mL的DCM溶胀树脂1h，最后用7mL DMF清洗树脂3次。
(2)树脂Fmoc保护基的脱除
将溶胀后的树脂转入PSI200多肽合成仪，加入7mL 20％哌啶/DMF(v/v)室温反应5min，滤去脱保护溶液，7mL DMF清洗树脂一次，再加入7mL 20％哌啶/DMF(v/v)脱保护溶剂与树脂反应15min，最后7mL DMF清洗树脂4次，每次1.5min，得到脱除Fmoc 保护基的Rink树脂。
(3)Fmoc-Phe-Rink amide-MBHA Resin的合成
称Fmoc-Phe-OH(0.4mmol)，用3mL 10％DMF/DMSO(v/v)溶解，加入2mL DIC/HOBt(0.4mmol/0.44mmol)缩合剂，预活化30min后，将活化好的氨基酸加入反应器中，室温震荡反应2h，滤去反应液后用7mL DMF清洗树脂4次，使用Kaiser试剂检测反应耦合是否完全，如不完全则2次耦合。
(4)肽链的延长
按照肽链的序列，重复上述脱保护和耦合的步骤依次连接上相应的氨基酸，直至肽链合成完毕。其中侧链修饰的Lys可以采用Fmoc-Lys(Alloc)-OH、Fmoc-Lys(Dde)-OH、Fmoc-Lys(Mtt)-OH或Fmoc-Lys(ivDde)-OH等。本实例中采用Fmoc-Lys(Dde)-OH保护策略，同时N末端的His使用的是Boc-His(Boc)-OH。
(5)Lys侧链的修饰
肽链合成完毕后，加入7mL 2％水合肼/DMF(v/v)选择性脱除Lys的Dde保护基，Dde保护基脱除后加入0.4mmol的Fmoc-AEEA-OH，0.4mmol的DIC及0.44mmol的 HOBt，震荡缩合反应2h。脱除Fmoc保护基后，再次加入0.4mmol的Fmoc-AEEA-OH， 0.4mmol的DIC及0.44mmol的HOBt，震荡缩合反应2h。脱除Fmoc保护基后，加入0.4 mmol的Fmoc-Glu-OtBu，0.4mmol的DIC及0.44mmol的HOBt，震荡缩合反应2h。脱除Fmoc保护基后，加入0.4mmol的十八烷二酸单叔丁酯，0.4mmol的DIC及0.44mmol的 HOBt缩合反应2h，反应完全后用7mL DMF清洗树脂4次。
(6)多肽的裂解
将上述得到的连有多肽的树脂转移至圆底瓶中，使用切割剂Reagent R(TFA/苯甲硫醚 /苯酚/EDT，90:5:3:2，V/V)5mL切割树脂，在油浴中恒温30℃反应2h，切割液倾入40mL冰乙醚中，冷冻离心后粗品用15mL冰乙醚洗涤3次，最后用氮气吹干，得到粗肽。
(7)多肽的纯化
将目标多肽粗品溶于水中，用0.25μm微孔滤膜过滤后进岛津制备型反相HPLC系统纯化。色谱条件为C18反相制备柱(250mm×20mm，12μm)；流动相A：0.1％TFA/水(V/V)，流动相B：甲醇(V/V)；流速为8mL/min；检测波长为214nm。采用线性梯度(20％B～80％ B/30min)洗脱，收集目标峰，除去甲醇后冻干得纯品0.20g，纯度大于98％，通过LC-MS 确认目标多肽的分子量。
实施例2
SEQ ID NO:2多肽化合物的合成
His-Aib-Glu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Asn-Asp-Val-Thr-Glu-Tyr-Leu-Glu-Glu-Lys(AEEA-AEEA-γ- Glu-CO-(CH2)16-COOH)-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-Lys-AEEA-AEEA-AEEA-T yr-Gly-Trp-Leu-Asp-Phe-NH2
合成方法同实施例1，收集目标峰冻干得纯品0.18g。
实施例3
SEQ ID NO:3多肽化合物的合成
His-Aib-Glu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Asn-Asp-Val-Thr-Glu-Tyr-Leu-Glu-Glu-Lys(AEEA-AEEA-γ- Glu-CO-(CH2)16-COOH)-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-Lys-AEEA-AEEA-AEEA-A EEA-Tyr-Gly-Trp-Leu-Asp-Phe-NH2
合成方法同实施例1，收集目标峰冻干得纯品0.19g。
实施例4
SEQ ID NO:4多肽化合物的合成
His-Aib-Glu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Asn-Asp-Val-Thr-Glu-Tyr-Leu-Glu-Glu-Glu-Ala-Ala-Lys(AE EA-AEEA-γ-Glu-CO-(CH2)16-COOH)-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-Lys-AEEA-AEEA-Tyr-Gly- Trp-Leu-Asp-Phe-NH2
合成方法同实施例1，收集目标峰冻干得纯品0.17g。
实施例5
SEQ ID NO:5多肽化合物的合成
His-Aib-Glu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Asn-Asp-Val-Thr-Glu-Tyr-Leu-Glu-Glu-Glu-Ala-Ala-Lys(AE EA-AEEA-γ-Glu-CO-(CH2)16-COOH)-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-Lys-AEEA-AEEA-AEEA-T yr-Gly-Trp-Leu-Asp-Phe-NH2
合成方法同实施例1，收集目标峰冻干得纯品0.16g。
实施例6
SEQ ID NO:6多肽化合物的合成
His-Aib-Glu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Asn-Asp-Val-Thr-Glu-Tyr-Leu-Glu-Glu-Glu-Ala-Ala-Lys(AE EA-AEEA-γ-Glu-CO-(CH2)16-COOH)-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-Lys-AEEA-AEEA-AEEA-A EEA-Tyr-Gly-Trp-Leu-Asp-Phe-NH2
合成方法同实施例1，收集目标峰冻干得纯品0.17g。
实施例7
多肽化合物对GLP-1受体、GCG受体和GIP受体的激动活性测定
通过功能测定法来确定多肽化合物对受体的激动作用，GLP-1受体激动活性所述测定法测量稳定表达人GLP-1受体的HEK-293细胞系的cAMP响应。将稳定表达GLP-1受体的细胞分入T175培养瓶并在培养基(DMEM/10％FBS)中过夜生长至接近汇合状态，然后除去培养基，并用无钙和镁的PBS洗涤细胞，然后用Accutase酶进行蛋白酶处理。洗涤脱离的细胞并将其重悬于测定缓冲液(20mM HEPES,0.1％BSA,2mM IBMX,1×HBSS)中，并确定细胞密度，并将25μL的等分试样分装至96孔板的孔中。为了测量，将25μL的测试多肽化合物在测定缓冲液中的溶液添加到孔中，然后室温温育30分钟。用Cisbio的试剂盒，基于均相时间分辨荧光(HTRF)来确定细胞的cAMP含量。添加稀释于裂解缓冲液(试剂盒组分)中的HTRF试剂后，将平板温育1小时，然后测量665/620nm处的荧光比。通过检测引起最大响应的50％激活的浓度(EC50)来对激动剂的体外效力进行量化。
稳定表达CCK-1受体或CCK-2受体的1321-N1细胞用DMEM-31966(含有10％FBS，1％丙酮酸钠，1％青霉素，1％链霉素)培养。试验前一天，将细胞转移至384孔板中，化合物溶解在IP-One缓冲溶液中(含有10mmol/L HEPES,1mmol/L CaCl2,4.2mmol/L KCl,146mmol/L NaCl,5.5mmol/L葡萄糖,50mmol/L LiCl)并稀释，加入384孔板中。在37℃孵育1小时后，使用IP-One HTRF Assay kit测定细胞内的1-磷酸肌醇浓度，通过检测引起最大响应的50％激活的浓度(EC50)来对激动剂的体外效力进行量化。
将本专利申请实施例中的检测数据(nM)显示于下表1中，虽然用一定数量的有效数字来陈述检测数据，但不应该认为表示数据已确定精确为有效数字的数。
表1：多肽化合物对GLP-1受体、CCK-1受体和CCK-2受体(gastrin受体)的EC50值(以nM表示)
样品 EC50(GLP-1受体) EC50(CCK-1受体) EC50(CCK-2受体)
GLP-1 0.088 >100000 >100000
gastrin-6 >100000 1198.6 1.39
ZP3022 0.099 1239.5 2.15
SEQ ID NO:1 0.035 >100000 1.25
SEQ ID NO:2 0.026 >100000 0.98
SEQ ID NO:3 0.031 >100000 0.85
SEQ ID NO:4 0.022 >100000 0.86
SEQ ID NO:5 0.033 >100000 1.11
SEQ ID NO:6 0.038 >100000 1.30
如表1所示，所有多肽化合物对GLP-1受体的激动活性都高于天然GLP-1和ZP3022，并且所有多肽化合物对CCK-2受体的激动活性也高于gastrin-6和ZP3022，同时所有多肽化合物都表现出了CCK-2受体激动的高选择性，选择性明显优于gastrin-6和ZP3022。
实施例8
多肽化合物的溶解度和稳定性测试
在测试多肽化合物的溶解度和稳定性之前，首先使用HPLC确定其纯度。然后，基于确定的％纯度，在不同的缓冲体系中，溶解10mg多肽化合物在1mL溶液中，温和搅拌2 小时。使用4500rpm离心20分钟后，取上清液进HPLC分析，确定峰面积。然后与相应样品标准溶液比对，计算得到受试样品溶液的相对浓度。对于稳定性测试，将溶解度获得的上清液的等分试样在40℃储存7天，然后样品在4500rpm离心20分钟，上清液进HPLC 分析，确定峰面积。通过比较稳定性实验开始前的峰面积(t0)和存储7天后的峰面积(t7)，得到“％剩余肽”。按以下公式计算：％剩余肽＝[(峰面积t7)×100]/峰面积t0，稳定性表示为“％剩余肽”，计算结果如下表2所示。
表2：多肽化合物的溶解度和稳定性
如表2结果显示，本发明的多肽化合物与天然GLP-1，gastrin-6和ZP3022相比，在机体可接受的注射液pH条件下的溶解性大幅改善，具备了有利于制剂的特性。本发明的多肽化合物在pH 4.5也具有高溶解性，该特性可能允许用于与胰岛素或胰岛素衍生物的组合治疗的共制剂。此外，在pH 4.5和中性pH条件下本发明的多肽化合物也具有更好的稳定性。
实施例9
多肽化合物对DPP-IV和NEP酶的稳定性
受试样品于37℃与纯化的人DPP-IV或NEP酶共孵0，2，4，8小时，使用HPLC法测定各时间点溶液中的残留样品峰面积，计算样品半衰期，结果如表3所示。
表3：多肽化合物在DPP-IV酶或NEP酶体系中的半衰期(以h表示)
样品 半衰期(DPP-IV中) 半衰期(NEP中)
GLP-1 1.3 2.1
ZP3022 4.8 4.1
SEQ ID NO:1 >8 >8
SEQ ID NO:2 >8 >8
SEQ ID NO:3 >8 >8
SEQ ID NO:4 >8 >8
SEQ ID NO:5 >8 >8
SEQ ID NO:6 >8 >8
如表3结果显示，本发明的多肽化合物在含DPP-IV酶溶液和NEP酶溶液体系中的半衰期均超过8个小时，优于天然GLP-1和ZP3022，说明可以有效耐受DPP-IV和NEP酶的降解。
实施例10
多肽化合物在大鼠体内的药代动力学性质
大鼠给予50nmol/kg的皮下(s.c.)注射给药，在给药后0.25，0.5，1，2，4，8，16，24，36和48小时收集血样。使用乙腈沉淀蛋白质后，用LC-MS分析血浆样品。用WinonLin5.2.1(非房室模型)计算药代参数和半衰期(表4)。
表4：多肽化合物在大鼠体内的药代动力学概貌
样品 T1/2(h) Cmax(ng/mL)
ZP3022 1.0 425
Semaglutide 8.2 481
SEQ ID NO:1 12.1 550
SEQ ID NO:6 12.8 581
如表4结果显示，本发明的多肽化合物的体内半衰期显著延长，优于一周一次给药的 semaglutide，半衰期显著优于ZP3022，具有支持每周一次给药的药代动力学特征。
实施例11
多肽化合物对糖尿病模型小鼠(db/db小鼠)血糖的影响
雄性db/db小鼠，随机分组，每组6只。空白组皮下注射给予生理盐水(10mg/kg)，给药组分为6组，小鼠实验期间自由进食和饮水，小鼠非空腹状态下分别皮下单次注射25nmol/kg的ZP3022，semaglutide，SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:6。在给药前0h，以及给药后4，6，24和48h用血糖仪测量各组小鼠血糖水平。
如图1结果所示，在db/db小鼠体内的降血糖实验结果表明，本发明的多肽化合物显示出了显著优于阳性对照药semaglutide和ZP3022的长效降血糖活性。
实施例12
多肽化合物对饮食诱导肥胖(DIO)小鼠血糖、体重和血脂的影响
雄性C57BL/6J小鼠，体重22g左右，模型组共42只，用Research Diets公司的D12492 高脂饲料饲养18周造DIO小鼠模型。在给药开始前，各组DIO小鼠按照体重随机分组，共分为5组，每组6只，分别为生理盐水组(对照高脂饮食组)、阳性对照组(ZP3022和semaglutide)和受试样品组(SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:6)。对照高脂饮食组每天三次皮下注射生理盐水(10mg/kg)，ZP3022(25nmol/kg)每天三次皮下注射，semaglutide，SEQ IDNO:1，SEQ ID NO:6(剂量都为25nmol/kg)每两天注射一次，给药周期21天。每天记录小鼠体重变化，实验开始前和结束时使用核磁共振(NMR)来测量体脂量，使用血糖仪测量空腹血糖。在实验结束后，各组小鼠取血，测量血清中甘油三酯和胆固醇含量。
表5：DIO小鼠在3周给药周期内的体重、体脂和空腹血糖变化(％)
样品 整体体重变化(％) 体脂变化(％) 空腹血糖变化(％)
对照高脂饮食 +1.2％(±0.6％) +2.3％(±1.0％) +2.8％(±1.1％)
ZP3022 -16.2％(±1.1％)*** -17.4％(±0.8％)*** -19.5％(±1.4％)***
Semaglutide -15.7％(±0.8％)*** -18.6％(±1.3％)*** -17.2％(±1.6％)***
SEQ ID NO:1 -29.5％(±1.6％)***,### -35.6％(±2.5％)***,### -28.5％(±1.9％)***,###
SEQ ID NO:6 -27.3％(±1.2％)***,### -37.4％(±3.2％)***,### -29.6％(±2.2％)***,###
***：与对照高脂饮食组相比P<0.001；###：与ZP3022和semaglutide组比P<0.001
如表5结果显示，本发明的多肽化合物的在DIO小鼠体内连续给药3周，可以显著降低小鼠的体重和体脂含量，降低空腹血糖值，并且本发明的多肽化合物的作用显著强于阳性对照药ZP3022和semaglutide。
表6：DIO小鼠在3周给药周期后的血脂数据(以mmol/L表示)
样品 甘油三酯 胆固醇
对照高脂饮食 1.26±0.07 2.3±0.2
ZP3022 1.02±0.08*** 1.7±0.1***
Semaglutide 1.03±0.06*** 1.8±0.2***
SEQ ID NO:1 0.80±0.04***,## 1.1±0.1***,##
SEQ ID NO:6 0.78±0.03***,## 1.0±0.1***,##
***：与对照高脂饮食组相比P<0.001；##：与ZP3022和semaglutide组比P<0.01
如表6结果显示，本发明的多肽化合物的在DIO小鼠体内连续给药3周，可以显著降低小鼠的甘油三酯和胆固醇含量，并且本发明的多肽化合物的作用显著强于阳性对照药ZP3022和semaglutide。
实施例13
多肽化合物对db/db小鼠糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖和胰岛面积的影响
雄性db/db小鼠，随机分组，每组6只。适应性饲养一周后，尾部取血测量治疗开始前初始HbA1c(％)数值和空腹血糖数值。空白组每天三次皮下注射给予生理盐水(10mg/kg)，给药组分为4组，分别皮下注射25nmol/kg的ZP3022(每天三次)，semaglutide(每两天一次)，SEQ ID NO:1(每两天一次)，SEQ ID NO:6(每两天一次)。治疗周期为5周，治疗结束后小鼠禁食过夜后测量空腹血糖数值，同时取血测量HbA1c(％)数值。最后小鼠处死，取胰腺做切片，HE染色后在10倍镜下测量各组小鼠的胰岛面积。
表7：db/db小鼠在5周给药周期内的HbA1c和空腹血糖变化(％)
样品(剂量) HbA1c变化(％) 空腹血糖变化(％)
生理盐水 +2.87％(±1.18％) +9.27％(±0.90％)
ZP3022 -4.16％(±0.83％)*** -6.07％(±0.97％)***
Semaglutide -4.27％(±0.80％)*** -5.39％(±0.70％)***
SEQ ID NO:1 -8.39％(±0.62％)***,## -13.62％(±1.22％)***,##
SEQ ID NO:6 -8.11％(±0.99％)***,## -12.39％(±1.27％)***,##
***：与对照高脂饮食组相比P<0.001；##：与ZP3022和semaglutide组比P<0.01
如表7结果显示，本发明的多肽化合物的在db/db小鼠体内连续给药5周，可以降低HbA1c和空腹血糖，显著优于阳性对照药ZP3022和semaglutide，说明具有很好的血糖控制作用。
表8：db/db小鼠在5周给药后的胰岛面积(以μm2表示)
样品(剂量) 胰岛面积
生理盐水 21296±1847
ZP3022 29698±1530***
Semaglutide 28156±1357***
SEQ ID NO:1 38956±1436***,###
SEQ ID NO:6 37156±1356***,###
***：与生理盐水组相比P<0.001；###：与liraglutide和semaglutide组比P<0.001
如表8结果显示，本发明的多肽化合物的在db/db小鼠体内连续给药5周，可以显著增加db/db小鼠的胰岛面积，说明具有很高的促进胰腺组织的细胞增殖和胰岛再生的作用，并且本发明的多肽化合物的作用显著强于阳性对照药ZP3022和semaglutide。
实施例14
多肽化合物的免疫原性
采用来自50例中国人捐赠者的外周血单个核细胞(PBMC)进行了诱导T细胞增殖的免疫原性实验。PBMC在AIMV培养基中培养，并添加到24孔板(2mL)中以达到最终浓度～3×106cells/mL，然后通过在AIMV培养基中添加ZP3022，semaglutide，6a(选自J.Med.Chem.2020,63,12595-12613)，SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:6来刺激PBMC。24孔板在37℃的二氧化碳培养箱(5％)中培养8天。第5天、第6天、第7天和第8天，将培养板各孔的细胞转移到96孔板上。用[3H]-胸腺嘧啶核苷对培养物进行处理，再培养18小时，并测定每个孔的每分钟计数(cpm)。刺激指数(SI)是通过将每个供体的试验孔的增殖反应(cpm) 除以培养基处理(cpm)的增殖反应来计算的，大于2.0的SI被视为阳性。通过将整个时间过程(5-8天)内有阳性反应的捐赠者数量占接受测试的捐赠者总数的百分比来计算捐赠者的响应百分比。
如图2结果所示，本发明的多肽化合物的捐赠者反应比例显著低于ZP3022，6a和semaglutide，说明本发明的多肽化合物具有更低的免疫原性。
实施例15
多肽化合物的在糖尿病肾病小鼠体内的活性
SD雄性大鼠，适应性饲养一周后，随机抽取6只作为正常对照组，其余分为5组，每组8只，采用高脂高糖饮食加低剂量STZ(30mg/kg)的造模方法用于制作动物模型，给予高脂饲料喂养1个月(高脂饲料组成：66.5％常规饲料，20.0％蔗糖，10.0％猪油，20.0％蔗糖，2.5％胆固醇，1.0％胆酸盐)。高脂高糖饲料喂养四周之后，给予造模组大鼠腹腔注射低剂量STZ(30mg/kg)，正常组则用柠檬酸缓冲液(pH＝4.4)腹腔注射。一周之后，尾静脉采血，用血糖仪及试纸测量大鼠血糖，如果造模组血糖≤16.7mmol/L，可再补注射一次，四周之后再次测量，以血糖≥16.7mmol/L为造模成功标志，造模过程中所有大鼠均不使用胰岛素。将造模成功的大鼠随机按随机数字表法随机等量分配至生理盐水组，ZP3022组， semaglutide组，SEQ ID NO:1组，SEQ ID NO:6组。正常组给予生理盐水腹腔注射(每天三次)，模型组中，生理盐水组每天三次腹腔注射，ZP3022每天三次腹腔注射(25nmol/kg)， semaglutide每两天一次腹腔注射(25nmol/kg)，SEQ ID NO:1每两天一次腹腔注射(25 nmol/kg)，SEQ IDNO:6每两天一次腹腔注射(25nmol/kg)，连续给药3周。在3周给药结束后，用代谢笼收集大鼠24小时尿液，在代谢笼收集大鼠尿液期间禁食不禁水，收集到大鼠尿液之后，记录各组大鼠尿量，然后用低温离心机3000转10分钟低速离心，吸取上层尿液，将收集到的尿液测定大鼠24h尿微量白蛋白(ELISA试剂盒测定)。实验结束后处死大鼠，取血制血清，测定血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)的数值。
表9：各组大鼠3周末24h尿微量白蛋白排泄率(UAER)的比较
样品(剂量) UAER(μg/24h)
正常对照组 75.6±12.8
生理盐水组 1658.5±126.9
ZP3022组 1413.4±156.5
Semaglutide组 1368.5±198.6
SEQ ID NO:1组 189.1±29.4***,###
SEQ ID NO:6组 254.3±45.8***,###
***：与生理盐水组相比P<0.001；###：与ZP3022和semaglutide组比P<0.001
实验3周末时，模型组生理盐水组24h尿微量白蛋白排泄率与正常对照组比较，明显增高。本发明的多肽化合物可有效降低UAER，并且本发明的多肽化合物的作用显著强于阳性对照药ZP3022和semaglutide，而ZP3022和semaglutide无显著降低UAER的作用。
表10：各组大鼠3周末血肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)的比较
***：与生理盐水组相比P<0.001；###：与ZP3022和semaglutide组比P<0.001
实验3周末时，模型组生理盐水组血肌酐和血尿素氮与正常对照组比较，明显增高。本发明的多肽化合物可显著降低血肌酐和血尿素氮的数值，并且本发明的多肽化合物的作用显著强于阳性对照药ZP3022和semaglutide。综上所述，本发明的多肽化合物能显著降低血尿素氮，降低血肌酐和蛋白尿，改善肾功能，对糖尿病肾病大鼠的病情进展能够得以延缓和治疗，具有优异的治疗糖尿病肾病的作用。
最后所应说明的是，以上具体实施方式仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照实例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
序列表
<110> 江苏师范大学
<120> 一类GLP-1-胃泌素受体双重激动剂及其应用
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
His Xaa Glu Gly Thr Tyr Thr Asn Asp Val Thr Glu Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Ile Lys Xaa Xaa Tyr Gly
20 25 30
Trp Leu Asp Phe
35
<210> 2
<211> 37
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
His Xaa Glu Gly Thr Tyr Thr Asn Asp Val Thr Glu Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Ile Lys Xaa Xaa Xaa Tyr
20 25 30
Gly Trp Leu Asp Phe
35
<210> 3
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
His Xaa Glu Gly Thr Tyr Thr Asn Asp Val Thr Glu Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Lys Ala Ala Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Ile Lys Xaa Xaa Xaa Xaa
20 25 30
Tyr Gly Trp Leu Asp Phe
35
<210> 4
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
His Xaa Glu Gly Thr Tyr Thr Asn Asp Val Thr Glu Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Ile Lys Xaa Xaa Tyr Gly
20 25 30
Trp Leu Asp Phe
35
<210> 5
<211> 37
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
His Xaa Glu Gly Thr Tyr Thr Asn Asp Val Thr Glu Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Ile Lys Xaa Xaa Xaa Tyr
20 25 30
Gly Trp Leu Asp Phe
35
<210> 6
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
His Xaa Glu Gly Thr Tyr Thr Asn Asp Val Thr Glu Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Ile Lys Xaa Xaa Xaa Xaa
20 25 30
Tyr Gly Trp Leu Asp Phe
35

Claims (6)

1.一类GLP-1/gastrin受体双重激动多肽化合物，其特征在于，所述多肽化合物的氨基酸序列是：
(1)
His-Aib-Glu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Asn-Asp-Val-Thr-Glu-Tyr-Leu-Glu-Glu-Lys(AEEA-AEEA-γ-Gl u-CO-(CH2)16-COOH)-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-Lys-AEEA-AEEA-Tyr-Gly-Tr p-Leu-Asp-Phe-NH2
2.权利要求1中所述一类GLP-1/gastrin受体双重激动多肽化合物的药学上可接受的盐。
3.根据权利要求2所述的盐，其特征在于，所述盐为GLP-1/gastrin受体双重激动多肽化合物与下述化合物中的一种所形成的盐：氢溴酸、盐酸、甲磺酸、磷酸、乙磺酸、甲酸、对甲苯磺酸、乙酸、乙酰乙酸、丙酮酸、果胶酯酸、丁酸、己酸、苯磺酸、庚酸、十一烷酸、苯甲酸、水杨酸、月桂酸、2-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、樟脑酸、环戊烷丙酸、3-羟基-2-萘甲酸、樟脑磺酸、二葡糖酸、烟酸、扑酸、丙酸、过硫酸、苦味酸、3-苯基丙酸、特戊酸、衣康酸、2-羟基乙磺酸、氨基磺酸、十二烷基硫酸、三氟甲磺酸、萘二磺酸、2-萘磺酸、柠檬酸、扁桃酸、抗坏血酸、酒硬脂酸、石酸、草酸、乳酸、琥珀酸、丙二酸、半硫酸、苹果酸、马来酸、藻酸、富马酸、D-葡糖酸、甘油磷酸、葡庚酸、天冬氨酸、硫氰酸或者磺基水杨酸。
4.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1中所述一类GLP-1/gastrin受体双重激动多肽化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体或稀释剂组成。
5.一种药剂，其特征在于，包括权利要求1中所述一类GLP-1/gastrin受体双重激动多肽化合物或权利要求4中所述药物组合物。
6.权利要求1中所述一类GLP-1/gastrin受体双重激动多肽化合物、其药学上可接受的盐、其药物组合物或其药剂在制备降糖药物中的应用。
CN202011425955.3A 2020-12-09 2020-12-09 一类glp-1/胃泌素受体双重激动剂及其应用 Active CN112759640B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011425955.3A CN112759640B (zh) 2020-12-09 2020-12-09 一类glp-1/胃泌素受体双重激动剂及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011425955.3A CN112759640B (zh) 2020-12-09 2020-12-09 一类glp-1/胃泌素受体双重激动剂及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112759640A CN112759640A (zh) 2021-05-07
CN112759640B true CN112759640B (zh) 2023-09-08

Family

ID=75693449

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011425955.3A Active CN112759640B (zh) 2020-12-09 2020-12-09 一类glp-1/胃泌素受体双重激动剂及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112759640B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116023444B (zh) * 2022-08-12 2023-08-01 重庆宸安生物制药有限公司 一种gip和glp-1双受体激动剂多肽化合物及其应用

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005072045A2 (en) * 2004-01-30 2005-08-11 Waratah Pharmaceuticals, Inc. The combined use of glp-1 agonists and gastrin for regulating blood glucose levels
CN1938334A (zh) * 2004-01-30 2007-03-28 瓦拉塔药品公司 Glp－1激动剂和胃泌素化合物的联合使用
WO2007095737A1 (en) * 2006-02-21 2007-08-30 Waratah Pharmaceuticals Inc. Combination therapy for the treatment of diabetes comprising an exendin agonist and a gastrin compound
CN104045698A (zh) * 2013-03-15 2014-09-17 深圳君圣泰生物技术有限公司 一种多肽、多肽衍生物、多肽的可药用盐及药物组合物
CN104144704A (zh) * 2011-11-03 2014-11-12 西兰制药公司 Glp-1受体激动剂肽胃泌素缀合物
CN106459170A (zh) * 2014-04-07 2017-02-22 赛诺菲 衍生自毒蜥外泌肽‑4的glp‑1/胰高血糖素受体双重激动剂
CN107987152A (zh) * 2017-11-24 2018-05-04 江苏师范大学 霉酚酸-非洲爪蟾胰高血糖素样肽-1缀合肽及其用途
CN108822222A (zh) * 2018-07-25 2018-11-16 中国药科大学 一种长效化降糖减重肽，及其制备方法与应用
CN109248323A (zh) * 2017-07-14 2019-01-22 杭州先为达生物科技有限公司 酰化的glp-1衍生物

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG184988A1 (en) * 2010-04-27 2012-11-29 Zealand Pharma As Peptide conjugates of glp-1 receptor agonists and gastrin and their use

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005072045A2 (en) * 2004-01-30 2005-08-11 Waratah Pharmaceuticals, Inc. The combined use of glp-1 agonists and gastrin for regulating blood glucose levels
CN1938334A (zh) * 2004-01-30 2007-03-28 瓦拉塔药品公司 Glp－1激动剂和胃泌素化合物的联合使用
WO2007095737A1 (en) * 2006-02-21 2007-08-30 Waratah Pharmaceuticals Inc. Combination therapy for the treatment of diabetes comprising an exendin agonist and a gastrin compound
CN104144704A (zh) * 2011-11-03 2014-11-12 西兰制药公司 Glp-1受体激动剂肽胃泌素缀合物
CN104045698A (zh) * 2013-03-15 2014-09-17 深圳君圣泰生物技术有限公司 一种多肽、多肽衍生物、多肽的可药用盐及药物组合物
CN106459170A (zh) * 2014-04-07 2017-02-22 赛诺菲 衍生自毒蜥外泌肽‑4的glp‑1/胰高血糖素受体双重激动剂
CN109248323A (zh) * 2017-07-14 2019-01-22 杭州先为达生物科技有限公司 酰化的glp-1衍生物
CN107987152A (zh) * 2017-11-24 2018-05-04 江苏师范大学 霉酚酸-非洲爪蟾胰高血糖素样肽-1缀合肽及其用途
CN108822222A (zh) * 2018-07-25 2018-11-16 中国药科大学 一种长效化降糖减重肽，及其制备方法与应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
胰高血糖素样肽-1受体激动剂治疗2型糖尿病的研究进展;谢星星;范玲;杜彪;;中国医院药学杂志(第13期);全文 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN112759640A (zh) 2021-05-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114349828B (zh) Glp-1/胰高血糖素受体双重激动剂及其应用
TWI451873B (zh) 調酸素肽類似物
TWI423812B (zh) 調酸素肽類似物
CA2455963C (en) Glp-1, exendin-4, peptide analogs and uses thereof
US11254721B2 (en) GIPR-agonist compounds
CN101778863A (zh) N-末端氨基酸经修饰的促胰岛素释放肽衍生物
CN116143884B (zh) 一类长效GLP-1/glucagon/GIP受体三重激动剂及其应用
CN112759640B (zh) 一类glp-1/胃泌素受体双重激动剂及其应用
EP3670529B1 (en) Acylated oxyntomodulin peptide analog
CN117729941A (zh) 双重胰淀素和降钙素受体激动剂及其用途
CN110759991B (zh) 吉非罗齐-非洲爪蟾胰高血糖素样肽-1衍生物及其应用
CN116410297A (zh) 长效glp-1多肽类似物及其制备方法和应用
CN112608378B (zh) 一类glp-1/胆囊收缩素-1受体双重激动剂及其应用
CN114437200A (zh) 一类glp-1/胃泌素受体双重激动剂及其应用
CN116120425A (zh) 一种glp-1/gip受体双重激动剂及其应用
CN115461360A (zh) 持续型glp-1以及胰高血糖素受体双重激动剂
CN115785249B (zh) 一类glp-1类似物及其应用
WO2016090628A1 (zh) 胃泌酸调节肽(oxm)类似物、其合成及应用
CN116589536B (zh) 一类长效glp-1/gip受体双重激动剂及其应用
CN115819551A (zh) 一种定点改造的一类glp-1/胰高血糖素/胃泌素受体三重激动剂及其应用
CN115960258B (zh) 一类GLP-1/glucagon/Y2受体三重激动剂及其应用
US20230183310A1 (en) Polypeptide Compounds and Use Thereof in the Prevention or Treatment of Diabetes or Diabetic Complications
CN117624333A (zh) 一类GLP-1受体、glucagon受体和GIP受体三激动多肽化合物及其应用
CN115819619A (zh) 一类glp-1/y2受体双重激动剂及其应用
CN117417430A (zh) 一类对glp-1和胰高血糖素受体具有激动活性的牛蛙glp-1类似物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant