EA027603B1

EA027603B1 - Производные пиперазина, реверсирующие действие антикоагулянтов

Info

Publication number: EA027603B1
Application number: EA201490823A
Authority: EA
Inventors: Соломон С. Стейнер; Брайан Е. Лаулихт; Саша Х. Бахру; Эдит Матиовиц
Original assignee: Перосфере Инк.
Priority date: 2011-11-29
Filing date: 2012-11-29
Publication date: 2017-08-31
Also published as: RS54738B1; PT2785700E; SI2785700T1; HK1202858A1; DK2785700T3; CN104080772A; BR112014012892A8; HUE027452T2; EA201490823A1; JP6134731B2; ECSP14006696A; US20210169874A1; SG11201402713WA; US9522892B2; HRP20160513T1; BR112014012892B1; KR20140107259A; NZ625337A; PH12014501176B1; PL2785700T3

Abstract

В изобретении предложены новые соединения общей формулы (II)где L и L', М и М', Y и Y' являются такими, как определено в формуле изобретения, и их фармацевтически приемлемые соли. Указанные соединения представляют собой производные пиперазина, реверсирующие действие антикоагулянтов. Также предложены способы получения указанных соединений, фармацевтические композиции, содержащие указанные соединения, способы применения указанных соединений для реверсирования антикоагулирующего действия ингибиторов коагуляции, а также диагностический набор, включающий указанные соединения.

Description

В настоящем изобретении описаны соединения, которые полностью или частично реверсируют антикоагулирующее действие ингибиторов коагуляции, таких как нефракционированный гепарин (НФГ), низкомолекулярный гепарин (НМГ), фондапаринукс, и других антитромбин-связывающих антикоагулянтов, а также прямых ингибиторов Ха и 11а.

Уровень техники

Коагуляционный каскад представляет собой нормальный физиологический процесс, который направлен на предотвращение значительных потерь крови или кровотечения после повреждения сосудов. Однако бывают случаи, когда сгусток крови (тромб) образуется, когда это не нужно. Например, некоторые состояния с высокой степенью риска, такие как острая медицинская болезнь, продолжительная неподвижность, хирургическая операция или рак, могут повышать риск развития сгустка крови, что может потенциально приводить к серьезным последствиям, таким как атеросклеротическое сердечнососудистое заболевание и/или патологический сердечный ритм.

Коагуляционный каскад состоит из серии этапов, в которых протеаза расщепляет, а затем активирует следующую протеазу в последовательности. Каждая протеаза может активировать несколько молекул следующей протеазы в серии, усиливая этот биологический каскад. Конечный результат этих реакций заключается в превращении фибриногена, растворимого белка, в нерастворимые волокна фибрина. Вместе с тромбоцитами волокна фибрина образуют устойчивый сгусток крови.

Антитромбин (АТ), ингибитор серин-протеазы, представляет собой главный плазматический ингибитор коагуляционных протеаз. АТ блокирует коагуляционный каскад, например, за счет ингибирования тромбина (фактора 11а) и активированного фактора X (фактора Ха). Гепарин (нефракционированный гепарин) и низкомолекулярные гепарины (НМГ; фракционированный гепарин) ингибируют коагуляционные процесс за счет связывания с АТ по пентасахаридной последовательности. Это связывание приводит к конформационному изменению АТ, которое ускоряет его ингибирование факторов 11а, Ха, а также других протеаз, участвующих в свертывании крови. Будучи диссоциированным, гепарин и НМГ могут свободно связываться с другой молекулой антитромбина, а затем ингибировать дополнительные количества тромбина и фактора Ха.

Нефракционированный гепарин представляет собой смесь гликозаминогликанов (САС), которые, как было обнаружено в 1916 году учеными МсЬеап и Но\ус11 в университете Джонса Хопкинса, обладают антикоагулирующими свойствами в печени собак. Помимо антикоагуляции, было обнаружено, что нефракционированный гепарин обладает другими свойствами, включая противовоспалительное действие и ангиогенез. НМГ представляют собой гепарины, состоящие из коротких цепей полисахарида, как правило, имеющие молекулярный вес менее 8000 Да. НМГ и гепарин используют для предотвращения свертывания крови в организме, а также используют в различных ситуациях в клинических учреждениях.

Гепарин выпускают в виде жидкого раствора, вводимого парентерально. НМГ, такой как эноксапарин, представляет собой низкомолекулярную фракцию гепарина. Его также выпускают в виде жидкого раствора для инъекций. В настоящее время доступные такие торговые марки НМГ, одобренные ΡΌΛ в Соединенных штатах, как ΕΟΥΕΝΟΧ® (международное непатентованное название эноксапарин) и РКАСМЕХТ® (международное непатентованное название дальтепарин).

Низкомолекулярный или фракционированный гепарин обладает более высокой специфичностью к активности фактора крови Ха и фактора 11а, по сравнению с нефракционированным гепарином. Кроме того, НМГ обладает более воспроизводимым эффектом на активированное парциальное тромбопластиновое время (аРТТ), показатель времени коагуляции. Ь^МН характеризуется более низкой встречаемостью гепарин-индуцированной тромбоцитопении (Н1Т). Поскольку НМГ обладает более предсказуемой эффективностью и более низкой встречаемостью неблагоприятных эффектов, таких как Н1Т, пациенты могут самостоятельно вводить инъекции НМГ дома, хотя его также часто используют в больнице. По этим причинам НМГ завоевал лидирующие позиции на рынке антикоагулянтов.

Протамин, положительно заряженная молекула, может быть использован для реверсирования антикоагуляции, обусловленной введением сильно отрицательно заряженного нефракционированного гепарина или низкомолекулярного гепарина (НМГ). Протамин представляет собой природный продукт, который ассоциируется с перебоями в поставках, что подчеркивает необходимость в дополнительных, в идеале синтетических альтернативных агентах обратного действия. Антикоагулирующая активность НМГ может быть частично, но не полностью, реверсирована внутривенным введением протамина. Причина пониженной антикоагулирующей реверсирующей активности протамина в случае НМГ, предположительно, заключается в более низком связывающем сродстве к фракции НМГ в крови, чем к нефракцио- 1 027603 нированному гепарину. Протамин следует вводить медленно из-за гипотензивного эффекта и причин, касающихся анафилаксии.

Недавно официальное разрешение начали получать дополнительные антикоагуляционные агенты. Примеры таких антикоагулянтов включают дабигатран или РКЛЭЛХЛ®, аргатробан или ΛΚΘΑΤΚΟΒΑΝ®, ривароксабан или ХАКББТО®, апиксабан или ББ^ШЗ®, эдоксабан или Б1Х1ЛЫЛ®, и фондапаринукс или ЛК1ХТНЛ®. Эти антикоагулянты ингибируют распространение коагуляции фактора 11а или фактора Ха.

Для таких антикоагулянтов, как дабигатран, фондапаринукс, ривароксабан и апиксабан, одобренных агентов обратного действия нет. В настоящее время в данной области техники для реверсирования действия дабигатрана или РНЛЭЛХЛ® используют активированный уголь, пытаясь удалить дабигатран из крови, а также используют переливание крови. Помимо публикации ЕегепЬегд е! а1. СйсШайоп, 4 октября 2011 г.; 124(14): 1573-9, эл. публикация 6 сентября 2011 г., в которой описано, что в небольшом клиническом испытании концентрат комплекса протромбина мог реверсировать дабигатран, но не ривароксабан, отсутствуют данные или клинически доступный антидот для реверсирования любых из этих ингибиторов факторов коагуляции 11а или Ха. Следовательно, если пациентам для антикоагуляции ввели эти агенты, то неблагоприятные эффекты, связанные с передозировкой, очень большими или летальными кровотечениями, являются более опасными, чем побочные эффекты, связанные с введением нефракционированного гепарина. Таким образом, недостаток агентов обратного действия ограничивает применение этих лекарств.

По этой причине существует давняя, острая и неудовлетворенная клиническая необходимость в новых агентах, реверсирующих действие антикоагулянтов.

Краткое описание изобретения

Разработаны ингибиторы гепарина, гепариновых фрагментов, фондапаринукса и другие ингибиторы фактора Ха или фактора 11а. Общая структура рассматриваемых агентов, реверсирующих действие антикоагулянтов, представляет собой Κ-Ζ-К', где К и К' представляют собой положительно заряженные агенты при физиологическом рН, и могут быть одинаковыми или различными молекулами, а Ζ представляет собой гидрофобное циклическое или конденсированное кольцевое соединение. В одном варианте реализации настоящего изобретения ингибитор представляет собой соединение, представленное формулой (II), или его фармацевтически приемлемую соль:

о о (П)

где каждый из Б и Б' представляет собой замещенную или незамещенную С₁-С₁₀-алкиленовую цепь; каждый М и М' представляет собой замещенную алкиленовую цепь, при этом указанные заместители в алкиленовой цепи выбраны из С₁-С₁₀-алкила, гидроксила, гидрокси-С₁-С₁₀-алкила, амино, амино-С₁-С₁₀-алкила, алкокси и С₁-С₁₀-алкилалкокси; и

каждый из Υ и Υ' представляет собой ^ΝΗ2.

В другом варианте реализации настоящего изобретения ингибитор представляет собой соединение, представленное формулой (III), или его фармацевтически приемлемую соль:

где Б, Б', Μ, Μ', Υ и Υ' являются такими, как описано в настоящем документе.

В другом варианте реализации настоящего изобретения ингибитор представляет собой соединение, представленное формулой (IV), или его фармацевтически приемлемую соль:

о о где Υ и Υ' являются такими, как описано в настоящем документе; η равен от 3 до 5; т равен от 3 до 6;

С выбран из -ΝΗ₂ и ОН.

- 2 027603

Наиболее предпочтительно О представляет собой амино.

В предпочтительном варианте реализации соединение представляет собой диаргининпиперазин (ΌΆΡ), изображенный на формуле (V), или родственное соединение, изображенное на формуле (VI), или фармацевтически приемлемые соли любого из этих соединений:

2-амино-5-гуанидинопентановой кислоты (3-{4-[3 -(2-амино-5 -гуанидинопентаноиламино)пропил] пиперазин-1-ил}пропил)амид; или

2-амино-5-гуанидинопентановой кислоты {5-[(2-амино-5-гуанидинопентаноиламино)метил]пиперазин-2-илметил}амид.

В конкретном варианте реализации соединение формулы (V) представляет собой стереоизомер, изображенный на формуле (VII)

В другом конкретном варианте реализации соединение формулы (VI) представляет собой стереоизомер, изображенный на формуле (VIII)

Соединения настоящего изобретения могут быть введены в фармацевтической композиции, такой как водный раствор, в виде болюса и/или внутривенной инфузии, подкожной инъекции или перорально. В предпочтительном варианте реализации соединения вводят инъекцией (внутривенной, внутримышечной или подкожной) в носителе, таком как дистиллированная стерильная вода, солевой раствор, буфер- 3 027603 ный солевой раствор или другое фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество для инъекций. В некоторых вариантах реализации ингибитор может быть введен перорально, в слизистую оболочку (назально, пульмонально, вагинально, ректально или буккально) или с помощью депо.

Соединения настоящего изобретения могут быть введены в фармацевтической композиции пациенту, нуждающемуся в реверсировании действия гепарина, НМГ или другой антикоагуляции, опосредованной ингибитором тромбина, в эффективном количестве для восстановления нормальной коагуляции и гемостаза. Фармацевтические композиции, содержащие соединения настоящего изобретения, пригодны для применения в больнице или для не экстренного реверсирования на дому. Их вводят пациенту, нуждающемуся в реверсировании действия гепарина, НМГ или другой антикоагуляции, опосредованной ингибитором тромбина, в эффективном количестве для восстановления коагуляции. Соединения и фармацевтические композиции, описанные в настоящем документе, также могут быть использованы для снижения активности гепарин-связывающих факторов роста и/или для полного или частичного реверсирования действия комбинации одного или более антикоагулирующих агентов фактора 11а и/или фактора Ха.

Так, соединения настоящего изобретения могут быть использованы в способе полного или частичного реверсирования антикоагулирующего действия ингибитора коагуляции. Соединения настоящего изобретения также могут быть использованы в составе диагностического набора, например, диагностического набора для определения концентрации антикоагулянта в крови.

Примеры показывают, что ИАР напрямую связывает ривароксабан, апиксабан, нефракционированный гепарин, фондапаринукс и НМГ, реверсируя действие антикоагулянта. ИЛР реверсирует ίη νίνο антикоагуляцию при пероральном введении ривароксабана и подкожном введении НМГ, по результатам измерения аРТТ, а также при подкожном введении фондапаринукса, по результатам измерения активности Ха у крыс. Реверсирующее действие ИЛР, подтвержденное статистически значимым уменьшением кровопотери в анализе отсечения хвоста крыс, было продемонстрировано для апиксабана, дабигатрана, эдоксабана и ривароксабана. ИЛР полностью реверсирует действие апиксабана и ривароксабана в массовом соотношении доз около 10:1 ИАР:антикоагулянт в крови человека ех νίνο, по результатам измерения с помощью набора анти-Ха. ИЛР демонстрирует дозозависимое реверсирующее действие в отношении апиксабана и ривароксабана в крови человека ех νίνο. Реверсирование ривароксабана в свежем образце цельной крови человека подтверждено измерениями аРТТ ех νίνο. ИЛР не связывает аргатробан в концентрациях до 1:1000 ίη νίίτο. ИЛР ίη νίνο реверсирует действие дабигатрана, введенного перорально, по результатам измерения аРТТ у крыс. Антикоагулирующее действие на крысах, которым ввели дозу аргатробана, сохранилось после 200х внутривенной дозы ИАР, что демонстрирует безопасность ИАР и специфичность реверсирующего взаимодействия для гепарина и новых пероральных антикоагулянтов. Таким образом, эти примеры демонстрируют комплексообразование ИАР с гепарином и НМГ, а также тот факт, что ИАР служит превосходным агентом, реверсирующим действие гепарина, гепаринподобных соединений и других ингибиторов тромбина, включая дабигатран, одобренные низкомолекулярные гепарины, а также ривароксабан (ХАКЕЬТО®), фондапаринукс (АК1ХТКА®), эдоксабан (υΧΙΛΝΛ®) и апиксабан (ΕΡΙφυίδ®). по результатам ίη νίίτο анализов с кровью человека, анти-Ха и аРТТ тестов и/или ίη νίνο анализа отсечения хвоста у крыс.

Краткое описание графических материалов

Фиг. 1 представляет собой диаграмму теплового потока в зависимости от температуры, измеренную дифференциальной сканирующей калориметрией (ДСК), в которой ИАР нагревали от -20 до 200°С (1 или первое нагревание), охлаждали до -20°С и снова нагревали до 200°С (2 или второе нагревание).

Фиг. 2 представляет собой диаграмму только ИАР, только НФГ и комбинации ИАР-НФГ как функцию объемного процента, по сравнению с размером (ά, нм), измеренную динамическим светорассеянием (ДСР).

Фиг. 3 представляет собой диаграмму только ИАР, только ривароксабана и ИАР-ривароксабана в соотношениях 1:1 и 10:1, ИАР:ривароксабан как функцию объема (процента), по сравнению с размером (ά, нм), измеренную с помощью ДСР.

Фиг. 4 представляет собой диаграмму связывания только ИАР, только апиксабана и ИАР-апиксабана в соотношениях 1:1, 10:1 и 100:1 как функцию объема (процента), по сравнению с размером (ά, нм), измеренную с помощью ДСР.

Фиг. 5 представляет собой диаграмму связывания только ИАР, только фондапаринукса и ИАР-фондапаринукса в соотношениях 1:1, 10:1 и 100:1 как функцию объема (процента), по сравнению с размером (ά, нм), измеренную с помощью ДСР.

Фиг. 6 представляет собой диаграмму связывания только ИАР, только НМГ и ИАР-НМГ в соотношениях 1:1, 1:10 и 100:1 как функцию объема (процента), по сравнению с размером (ά, нм), измеренную с помощью ДСР.

Фиг. 7 представляет собой диаграмму связывания только ИАР, только аргатробана и ИАР-аргатробана в соотношениях 1:1, 10:1, 100:1 и 1000:1 как функцию объема (процента), по сравнению с размером (ά, нм), измеренную с помощью ДСР.

- 4 027603

Фиг. 8 представляет собой диаграмму активированного парциального тромбопластинового времени (аРТТ, секунды), измеренного в зависимости от времени (часы) в течение 5 ч после подкожного введения 10 мг бемипарина (НМГ) крысе. Через 4 ч после испытания крысе ввели внутривенную дозу 200 мг/кг (100 мг) ΌΆΡ.

Фиг. 9 представляет собой диаграмму активированного парциального тромбопластинового времени (аРТТ, секунды), измеренного в зависимости от времени (часы) после перорального введения ΡΚΛΌΆΧΆ® (дабигатран) крысе с последующим внутривенным введением 200 и 100 мг/кг (100г и 50 мг) ΌΆΡ.

Фиг. 10 представляет собой диаграмму активированного парциального тромбопластинового времени (аРТТ), измеренного в зависимости от времени (часы) после подкожного введения нефракционированного гепарина (НФГ) крысе с последующим внутривенным введением 200 мг/кг (100 мг) и 400 мг/кг (200 мг) ΌΆΡ.

Фиг. 11 представляет собой диаграмму (секунды), измеренного в зависимости от времени (часы) после перорального введения 5 мг/кг ривароксабана крысе с последующим введением 5 мг/кг (2 мг) ΌΆΡ.

Фиг. 12 представляет собой диаграмму активной концентрации фондапаринукса (мкг/мл), измеренную в зависимости от времени (минуты после реверсирования) после подкожного введения 5 мг/кг фондапаринукса крысе, с последующим внутривенным введением 200 мг/кг ΌΆΡ (т.е. реверсирование).

Фиг. 13 представляет собой диаграмму аРТТ (секунды), измеренную в зависимости от времени (минуты после реверсирования) после перорального введения 15,5 мг/кг ΡΚΛΌΆΧΆ® (дабигатран) крысе, с последующим внутривенным введением 100 мг/кг ΌΆΡ (т.е. реверсирование).

Фиг. 14 представляет собой диаграмму времени аРТТ (секунды) для 0, 2, 10, 25, 50 и 100 мг введенного внутривенно ΌΆΡ.

Фиг. 15 представляет собой диаграмму собранной крови (т.е. суммарные кровопотери) за 30 мин в анализе кровотечения при отсечении хвоста крысы, при введении крысам 2 мг ривароксабана и 0 мг ΌΆΡ, 2 мг ривароксабана и 2,5 мг ΌΆΡ, 2 мг ривароксабана и 12,5 мг ΌΛΡ или плацебо дозы реверсирующего агента и антикоагулянта (плацебо). В группах по три крысы одного возраста, доза 12,5 мг ΌΆΡ привела к уменьшению кровопотери до уровня плацебо дозы, со статистически значимой разницей (* р<0,05) по сравнению с крысами, которым ввели только ривароксабан.

Фиг. 16 представляет собой диаграмму собранной крови (т.е. суммарные кровопотери) за 30 мин в анализе кровотечения при отсечении хвоста крысы, при введении крысам 1,25 мг апиксабана и 0 мг ΌΆΡ, 1,25 мг апиксабана и 5 мг ΌΛΡ, 1,25 мг апиксабана и 1,25 мг ΌΛΡ или плацебо дозы реверсирующего агента и антикоагулянта (плацебо). В группах по три крысы одного возраста, дозы 5 и 12,5 мг ΌΛΡ привели к уменьшению кровопотери до уровня плацебо дозы, со статистически значимой разницей (*** р<0,01) по сравнению с крысами, которым ввели только апиксабан.

Фиг. 17 представляет собой диаграмму собранной крови (т.е. суммарные кровопотери) за 30 мин в анализе кровотечения при отсечении хвоста крысы, при введении крысам 1,25 мг эдоксабана и 0 мг ΌΛΡ, 1,25 мг эдоксабана и 12,5 мг ΌΆΡ или плацебо дозы реверсирующего агента и антикоагулянта (плацебо). В группах по три крысы одного возраста, доза 12,5 мг ΌΛΡ привела к уменьшению кровопотери до уровня плацебо дозы, со статистически значимой разницей (* р<0,05) по сравнению с крысами, которым ввели только эдоксабан.

Фиг. 18 представляет собой диаграмму собранной крови (т.е. суммарные кровопотери) за 30 мин в анализе кровотечения при отсечении хвоста крысы, при введении крысам 15 мг дабигатрана этексилата и 0 мг ΌΛΡ, 15 мг дабигатрана этексилата и 5 мг ΌΛΡ, 15 мг дабигатрана этексилата и 1,25 мг ΌΆΡ или плацебо дозы реверсирующего агента и антикоагулянта (плацебо). В группах по три крысы одного возраста, доза 12,5 мг ΌΆΡ привела к уменьшению кровопотери до уровня плацебо дозы, со статистически значимой разницей (*** р<0,01) по сравнению с крысами, которым ввели только дабигатрана этексилат.

Фиг. 19 представляет собой диаграмму аРТТ (секунды), измеренного в свежей крови человека, обработанной ех νίνο 50 мкг/мл ΌΛΡ, 0,25 мкг/мл ривароксабана, 50 мкг/мл ΌΆΡ и 0,25 мкг/мл ривароксабана или солевым раствором.

Фиг. 20 представляет собой диаграмму, демонстрирующую эффективную антикоагулирующую концентрацию, измеренную в анализе активности антифактора Ха в плазме человека, обработанной ех νίνο 218 мкл/л только ривароксабана или в комбинации с 1250 мг/л ΌΛΡ и 459 мкг/л только ривароксабана или в комбинации с 6250 мкг/л ΌΛΡ.

Фиг. 21 представляет собой диаграмму, демонстрирующую эффективную антикоагулирующую концентрацию, измеренную в анализе активности антифактора Ха в плазме человека, обработанной ех νίνο 156 мкл/л только апиксабана или в комбинации с 1156 мкг/л ΌΛΡ и 313 мкг/л только апиксабана или в комбинации с 3125 мкг/л ΌΛΡ.

Фиг. 22 представляет собой диаграмму, демонстрирующую эффективную антикоагулирующую концентрацию, измеренную в анализе активности антифактора Ха в плазме человека, обработанной ех νίνο 218 мкл/л ривароксабана, отдельно или в комбинации с повышающимися количествами (1,25, 12,5,

- 5 027603

125 и 1250 мкг/л) ΌΆΡ.

Подробное описание изобретения

I. Агенты, реверсирующие действие антикоагулянтов.

Описаны новые агенты, реверсирующие действие антикоагулянтов. Соединения настоящего изобретения включают соединения, описанные в настоящем документе, а также их фармацевтически приемлемые соли.

Были разработаны ингибиторы гепарина, гепариновых фрагментов, фондапаринукса и ингибиторов фактора Ха или фактора 11а (например, пероральных ингибиторов фактора Ха или фактора 11а). Общая структура рассматриваемых агентов, реверсирующих действие антикоагулянтов, представляет собой Κ-Ζ-К', где К и К' представляют собой положительно заряженные агенты при физиологическом рН, и могут быть одинаковыми или различными молекулами, а Ζ представляет собой гидрофобное циклическое или конденсированное кольцевое соединение. В одном варианте реализации настоящего изобретения ингибитор представляет собой соединение, представленное формулой (II), или его фармацевтически приемлемую соль:

о о (П)

при этом каждый из Б и Б' представляет собой замещенную или незамещенную С₁-С₁₀-алкиленовую цепь;

каждый из М и М' представляет собой замещенную С₁-С₁₀-алкиленовую цепь, при этом указанные заместители в алкиленовой цепи выбраны из С₁-С₁₀-алкила, гидроксила, гидрокси-С₁-С₁₀-алкила, амино, амино-С₁-С₁₀-алкила, алкокси и С₁-С₁₀-алкилалкокси;

каждый из Υ и Υ' представляет собой ^ΝΗ2.

При использовании в настоящем документе алкиленовая цепь представляет собой двухвалентный алкиленовый фрагмент, который имеет длину от С₁ до С₁₀, предпочтительно от С₃ до С₆ и который может быть замещенным или незамещенным. Иллюстративные заместители включают алкил, гидроксил, гидроксилалкил, амино, аминоалкил, алкокси, алкилалкокси. При использовании в настоящем документе термин алкил представляет собой С₁-С₁₀, предпочтительно С₁-С₆ прямой или разветвленный углеводород. В некоторых вариантах реализации соединение представляет собой пиперазиновое производное, в котором боковые аминокислотные цепи содержат один или более положительно заряженных атомов или атомов, которые становятся положительно заряженными в физиологических условиях. Примеры включают диаргинин-пиперазин. Другие аминокислоты, которые являются положительно заряженными или становятся положительно заряженными в физиологических условиях, могут быть представлять собой замену аргинина. Термин ароматические при использовании в настоящем документе относится к 5-12-членным, предпочтительно 5-, 6- и 7-членным ароматическим, гетероциклическим, конденсированным ароматическим, конденсированным гетероциклическим, биароматическим или бигетероциклическим кольцевым системам, необязательно замещенным. В широком определении, Аг, используемый в настоящем документе, включает 5-, 6- и 7-членные однокольцевые ароматические группы, которые могут содержать от нуля до четырех гетероатомов, например бензол, пиррол, фуран, тиофен, имидазол, оксазол, тиазол, тризаол, пиразол, пиридин, пиразин, пиридазин и пиримидин и т.п. Арильные группы, имеющие гетероатомы в кольцевой структуре, также могут быть упомянуты как арильные гетероциклы или гетероароматические. Ароматическое кольцо может быть замещенным в одном или более положениях кольца такими заместителями, как описаны выше, например галоген, азид, алкил, аралкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гидроксил, алкоксил, амино, нитро, сульгидрил, имино, амидо, фосфонат, фосфинат, карбонил, карбоксил, силил, простой эфир, алкилтио, сульфонил, сульфонамидо, кетон, альдегид, сложный эфир, гетероциклил, ароматические или гетероароматические фрагменты, -СБ₃, -СХ или т.п.

Термин Аг включает также полициклические кольцевые системы, имеющие два или более циклических кольца, в которых два или более атома углерода являются общими для двух смежных колец (т.е. конденсированные кольца, при этом по меньшей мере одно из указанных колец является ароматическим, например, другое циклическое кольцо или кольца могут быть циклоалкилами, циклоалкенилами, циклоалкинилами, арилами и/или гетероциклами. Примеры гетероциклических колец включают, но не ограничиваясь этим, бензимидазолил, бензофуранил, бензотиофуранил, бензотиофенил, бензоксазолил, бензоксазолинил, бензтиазолил, бензтриазолил, бензтетразолил, бензизоксазолил, бензизотиазолил, бензимидазолинил, карбазолил, 4аН-карбазолил, карболинил, хроманил, хроменил, циннолинил, декагидрохинолинил, 2Н,6Н-1,5,2-дитиазинил, дигидрофуро[2,3-Ь]тетрагидрофуран, фуранил, фуразанил, имида- 6 027603 золидинил, имидазолинил, имидазолил, 1Н-индазолил, индоленил, индолинил, индолизинил, индолил, ЗН-индолил, изатиноил, изобензофуранил, изохроманил, изоиндазолил, изоиндолинил, изоиндолил, изохинолинил, изотиазолил, изоксазолил, метилендиоксифенил, морфолинил, нафтиридинил, октагидроизохинолинил, оксадиазолил, 1,2,3-оксадиазолил, 1,2,4-оксадиазолил, 1,2,5-оксадиазолил,

1.3.4- оксадиазолил, оксазолидинил, оксазолил, оксиндолил, пиримидинил, фенантринидинл, фенантролинил, феназинил, фенотиазинил, феноксатинил, феноксазинил, фталазинил, пиперазинил, пиперидинил, пиперидонил, 4-пиперидонил, пиперонил, птеридинил, пуринил, пиранил, пиразинил, пиразолидинил, пиразолинил, пиразолил, пиридазинил, пиридооксазол, пиридоимидазол, пиридотиазол, пиридинил, пиридил, пиримидинил, пирролидинил, пирролинил, 2Н-пирролил, пирролил, хиназолинил, хинолинил, 4Н-хинолизинил, хиноксалинил, хинуклидинил, тетрагидрофуранил, тетрагидроизохинолинил, тетрагидрохинолинил, тетразолил, 6Н-1,2,5-тиадиазинил, 1,2,3-тиадиазолил, 1,2,4-тиадиазолил,

1.2.5- тиадиазолил, 1,3,4-тиадиазолил, тиантренил, тиазолил, тиенил, тиенотиазолил, тиенооксазолил, тиеноимидазолил, тиофенил и ксантенил.

Гетероцикл или гетероциклический при использовании в настоящем документе относится к циклическому радикалу, присоединенному через кольцевой атом углерода или азота моноциклического или бициклического кольца, содержащему 3-10 кольцевых атомов, предпочтительно от 5 до 6 кольцевых атомов, состоящему из углерода и от одного до четырех гетероатомов, каждый выбран из группы, состоящей из непероксидного кислорода, серы и Ν(Κ), где К отсутствует или представляет собой Н, О, (С1-С₄)алкил, фенил или бензил, и необязательно содержащему 1-3 двойные связи, и необязательно замещенному одним или более заместителями. Примеры гетероциклических колец включают, но не ограничиваясь этим, бензимидазолил, бензофуранил, бензотиофуранил, бензотиофенил, бензоксазолил, бензоксазолинил, бензтиазолил, бензтриазолил, бензтетразолил, бензизоксазолил, бензизотиазолил, бензимидазолинил, карбазолил, 4аН-карбазолил, карболинил, хроманил, хроменил, циннолинил, декагидрохинолинил, 2Н,6Н-1,5,2-дитиазинил, дигидрофуро[2,3-Ь]тетрагидрофуран, фуранил, фуразанил, имидазолидинил, имидазолинил, имидазолил, 1Н-индазолил, индоленил, индолинил, индолизинил, индолил, 3Н-индолил, изатиноил, изобензофуранил, изохроманил, изоиндазолил, изоиндолинил, изоиндолил, изохинолинил, изотиазолил, изоксазолил, метилендиоксифенил, морфолинил, нафтиридинил, октагидроизохинолинил, оксадиазолил, 1,2,3-оксадиазолил, 1,2,4-оксадиазолил, 1,2,5-оксадиазолил,

где Ь, Ь', Μ, Μ', Υ и Υ' являются такими, как описано ранее.

о о где Υ и Υ' являются такими, как описано ранее; η равен от 3 до 5; т равен от 3 до 6;

О выбран из -ΝΗ₂ и ОН.

Наиболее предпочтительно О представляет собой амино. Так, в одном из вариантов реализации соединение настоящего изобретения представляет собой диаргининпиперазин (ΌΆΡ), такой как соединение формулы V, или родственное соединение формулы (VI), или фармацевтически приемлемые соли любого из этих соединений:

- 7 027603

2-амино-5-гуанидинопентановой кислоты (3-{4-[3-(2-амино-5-гуанидинопентаноиламино)пропил]пиперазин-1-ил}пропил)амид; или

Выражение фармацевтически приемлемая соль соединения, используемое в настоящем документе, означает соль, которая является фармацевтически приемлемой и которая обладает заданной фармакологической активностью исходного соединения. Фармацевтически приемлемые соли включают соли кислотных или основных групп, присутствующих в соединениях настоящего изобретения. Фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот включают, но не ограничиваясь этим, гидрохлоридные, гидробромидные, гидройодидные, нитратные, сульфатные, бисульфатные, фосфатные, гидрофосфатные, изоникотинатные, ацетатные, лактатные, салицилатные, цитратные, тартратные, пантотенатные, битартратные, аскорбатные, сукцинатные, малеатные, гентизинатные, фумаратные, глюконатные, глюкаронатные, сахаратные, формиатные, бензоатные, глутаматные, метансульфонатные, этансульфонатные, бензолсульфонатные, п-толуолсульфонатные и памоатные (т.е. 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-3- 8 027603 золсульфонатные, п-толуолсульфонатные и памоатные (т.е. 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-3-нафтоатные)) соли. Подходящие соли оснований включают, но не ограничиваясь этим, соли алюминия, кальция, лития, магния, калия, натрия, цинка и диэтаноламина.

Соединения настоящего изобретения подавляют активность ингибиторов коагуляции. Один из предложенных механизмов действия соединений настоящего изобретения заключается в связывании отрицательно заряженных молекул (например, фондапаринукса, нефракционированного гепарина, НМГ, описанных в настоящем документе). Другие ингибиторы коагуляции (например, ингибиторы фактора 11а и фактора Ха, такие как дабигатран, апиксабан, эдоксабан и ривароксабан, описанные в настоящем документе) также имеют отрицательные заряды; следовательно, соединения настоящего изобретения могут ингибировать эти ингибиторы коагуляции за счет нейтрализации их отрицательно заряженных фрагментов.

Другой предложенный механизм действия соединения настоящего изобретения заключается в слабых физических взаимодействиях, таких как водородное связывание и гидрофобные взаимодействия с ингибиторами коагуляции. Пероральные ингибиторы фактора 11а и Ха имеют гидрофобные части, которые могут обусловливать гидрофобное связывание с соединением настоящего изобретения, например, ΌΆΡ. Так, в некоторых вариантах реализации соединения настоящего изобретения содержат по меньшей мере один циклический гидрофобный фрагмент, например, одно кольцо или комбинацию алифатических или ароматических колец, включая конденсированные кольца. В других вариантах реализации соединения настоящего изобретения содержат по меньшей мере один циклический гидрофобный фрагмент и по меньшей мере два положительно заряженных или частично заряженных фрагмента при физиологическом рН.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения, один или оба аргинина в соединениях формул (V) и (VI) (или соединения формул (VII) и (VIII)) замещены одной или более положительно заряженными аминокислотами, их производными или аналогичным образом заряженными соединениями, например, лизином, гистидином, орнитином. Аргинины в соединениях формул (V) и (VI) или положительно заряженные аминокислоты, заменяющие такие аргинины, могут быть природными аминокислотами (т.е. Ь-аминокислотами), их энантиомерами (т.е. Ό-аминокислотами) или их рацемическими или иными смесями. Энантиомеры относятся к двум стереоизомерам соединения, которые не совмещаются с зеркальным отражением друг друга. Стереохимические определения и обозначения, используемые в настоящем документе, как правило, следуют указаниям публикаций δ.Ρ. Рагкег, ред., МсОта^-НШ Эюиопагу οί Скет!са1 Тетшз (1984), МсОга\\-НП1 Воок Сотрапу, Нью-Йорк; ЕПе1, Е. апб Абеп, δ., ЕИегеоскетЩгу οί Отдашс Сотроипбз (1994), 1оЬп Айеу & 8опз, Ыс., Нью-Йорк. Многие органические соединения существуют в оптически активных формах, т.е. они обладают способностью вращать плоскость плоскополяризованного света. В описании оптически активного соединения приставки Ό и Ь или К и δ используют для обозначения абсолютной конфигурации молекулы относительно ее хирального центра(ов). Приставки Ό и Ь или (+) и (-) используют для обозначения знака вращения плоскополяризованного света соединением настоящего изобретения, где (-) или Ь обозначает, что соединение является левовращающим. Соединение с приставкой (+) или Ό является правовращающим. Для данной химической структуры эти стереоизомеры являются идентичными, за исключением того, что они представляют собой зеркальные отражения друг друга. Отдельный стереоизомер может упоминаться также как энантиомер, а смесь таких изомеров часто называют энантиомерной смесью. Смесь энантиомеров 50:50 упоминается как рацемическая смесь или рацемат, что может иметь место, если химическая реакция или способ не является стереоселективным или стереоспецифичным. Термины рацемическая смесь и рацемат относятся к эквимолярной смеси двух энантиомерных частиц, лишенной оптической активности. В других вариантах реализации настоящего изобретения соединение настоящего изобретения содержит по меньшей мере один циклический гидрофобный фрагмент, например, одно кольцо или комбинацию алифатических и ароматических колец, включая конденсированные кольца. Рассматриваемые соединения содержат по меньшей мере один циклический гидрофобный фрагмент и по меньшей мере два положительно заряженных или частично заряженных фрагмента при физиологическом рН. При разработке терапевтических агентов на пептидной основе следует учитывать особые ограничения, поскольку такие агенты могут вызывать нежелательные и зачастую сильные иммунологические реакции при введении субъекту. Соединение настоящего изобретения разработано так, что оно имеет достаточно низкий молекулярный вес для минимизации проблем иммуногенности. В одном из вариантов реализации, во избежание активации иммунного ответа, соединение разработано так, что его молекулярный вес составляет менее чем около 5000 Да, такое значение как около 1000 Да или менее, например около 500 Да. В одном из вариантов реализации молекулярный вес соединения составляет около 512 Да. Предпочтительно, что соединения настоящего изобретения не связываются или иным образом не ухудшают функцию ЕКО, калиевого ионного канала, который способствует электрической проводимости сердца. Ингибирование этого калиевого канала может приводить к потенциально летальному удлинению интервала РТ, а некоторые в остальном успешные потенциальные лекарства демонстрируют связывание ЕКО.

Кроме того, предпочтительно, что соединение настоящего изобретения не ингибирует или не служит в качестве подложки для связанных с мембраной ферментов цитохрома р450 (СУР). СУР представ- 9 027603 ляют собой главные ферменты, участвующие в метаболизме лекарства, и модуляция активности СУР может препятствовать клиренсу и метаболизму других лекарств, введенных субъектов, вызывая нежелательные взаимодействия между лекарствами.

Также предпочтительно, что соединения настоящего изобретения не проявляют существенного связывания белка плазмы ίη νίΐτο (например, связывания альбумина). Поскольку соединения настоящего изобретения в значительной степени не связаны с белками плазмы, они демонстрируют короткие полупериоды активности, минимизируя риск передозировки в результате их накапливания.

II. Синтез агентов, реверсирующих действие антикоагулянтов.

Соединения и их фармацевтически приемлемые соли, описанные в настоящем документе, получают с помощью различных способов, исходя из имеющихся в продаже соединений, известных соединений или соединений, полученных по известным способам. Иллюстративные синтетические пути для получения одного из соединений, описанных в настоящем документе (соединение формулы (V), диаргининпиперазин, ΌΆΡ), включены в схемы, представленные ниже. Представленные ниже схемы применимы также для стереоизомерного соединения ИАР формулы (VII) с выбором соответствующих стереоизомерных исходных соединений. Другие соединения настоящего изобретения могут быть синтезированы по таким же схемам синтеза. Специалистам в данной области понятно, что порядок стадий, представленных в настоящем документе, может быть изменен для размещения функциональности в целевой молекуле. Специалистам в данной области понятно также, что для синтеза могут быть необходимы различные стадии защиты и снятия защиты. Необходимость защиты и снятия защиты, а также выбор подходящих защитных групп представлен, например, в публикации Огеепе апй \Уи15. Рто1есйпд Огоирк ίη Огдаше 8уп1йе818, 2-е изд., ΐοΐιη \УПеу & §оп8 (1991), полное содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения защитная группа представляет собой третичную бутилоксикарбонильную группу (Вое). В других вариантах реализации настоящего изобретения защитная группа представляет собой 2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонильную группу (РЫ). В другом варианте реализации защитная группа для аминокислоты может быть, но не ограничиваясь этим, 2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-сульфонилом (РМС). Защитные группы могут быть удалены множеством способов. Снятие защитной группы включает, например, обработку защищенного соединения трифторуксусной кислотой (ТФК), водным раствором НС1 или нагреванием в уксусной кислоте.

Поскольку снятие защитных групп, например, удаление защитных групп в кислотных условиях, может приводить к образованию катионных частиц, которые могут алкилировать функциональные группы в пептидной цепи, на стадии снятия защиты могут быть добавлены поглотители, которые взаимодействуют со всеми свободными химически активными частицами. Примеры поглотителей включают, но не ограничиваясь этим, воду, производные анизола и производные тиола. Так, в одном из вариантов реализации снятие защитных групп включает обработку защищенного соединения ТФК и поглотителем (например, ТФК и водой).

На стадиях синтеза могут быть использованы различные растворители, например, органические растворители. Подходящие растворители включают, но не ограничиваясь этим, диметилсульфоксид, диметилформамид (ДМФ), тетрагидрофуран, метанол, этанол, метиленхлорид, толуол и ацетон. В некоторых вариантах реализации растворитель представляет собой ДМФ.

На стадиях синтеза могут быть использованы подходящие агенты связывания кислот. Они включают, но не ограничиваясь этим, органические основания, такие как, например, пиридин, триэтиламин, триэтаноламин, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен (ИВИ) и диизопропилэтиламин (ИША); и неорганические основания, такие как, например, гидрид натрия, карбонат калия и карбонаты натрия. В некоторых вариантах реализации агент связывания кислот представляет собой ИША.

Синтез может включать реагенты связывания пептида. Реагенты связывания пептида могут включать, но не ограничиваясь этим, 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (ЕЭС), Ν-гидроксибензотриазол (НОВ1), карбонилдиимидазол (СОЦ дициклогексилкарбодиимид (ОСС), активный эфир Ν-гидроксисукцинамида (О8и), О-бензотриазол-Н^№,№-тетраметилурония гексафторфосфат (НВТИ) и их комбинации. В одном из вариантов реализации реагент связывания пептида представляет собой НВТИ. В другом варианте реализации реагент связывания пептида представляет собой ЕЭС/НОВЕ В другом варианте реализации реагент связывания пептида представляет собой активный эфир О8и. Кроме того, синтез может включать стадию, на которой очищают неочищенный продукт, например, колоночной хроматографией. Заданные продукты на каждой стадии или группе стадий могут быть разделены и/или очищены до заданной степени однородности с помощью методик, общеизвестных в данной области. Как правило, такое разделение включает многофазную экстракцию, кристаллизацию из растворителя или смеси растворителей, дистилляцию, сублимацию или хроматографию. Хроматография может включать любое количество способов, включая, например: способы и оборудование обращенно-фазовой и нормально-фазовой; эксклюзионной; ионообменной; жидкостной хроматографии высокого, среднего и низкого давления; аналитическую маломасштабную; хроматографию с псевдодвижущимся слоем (ПДС) и препаративную тонкослойную или толстослойную хроматографию, а также приемы маломасштабной

- 10 027603 тонкослойной и флэш-хроматографии. На одной из схем соединение формулы V (ЮАР)

синтезируют взаимодействием избытка эквивалентов (например, по меньшей мере около 2 экв.) соединения (1) с 1 экв. соединения (2)

в присутствии агента связывания пептида с получением соединения (3)

где Р₁ представляет собой защитную группу, а Р₂ представляет собой защитную группу или водород.

В одном из вариантов реализации реагент связывания пептида представляет собой ΗΒΤϋ, НОС/НОВ1 или активный эфир ОЗи. В одном из вариантов реализации защитная группа Р₁ представляет собой Вое. В другом варианте реализации защитная группа Р₂ представляет собой РЬ£. В другом варианте реализации защитная группа Р₁ представляет собой Вое, а Р₂ представляет собой водород.

Затем соединение (3) может быть очищено. Очистка может включать различные способы колоночной хроматографии, известные в данной области.

Защитная группа соединения (3) может быть удалена различными способами, известными в данной области, с получением соединения формулы (V). Снятие защиты может быть достигнуто, например, удалением защитных групп с помощью трифторуксусной кислоты (ТФК) и воды, ТФК и воды или другого поглотителя, включая, но не ограничиваясь этим, водный раствор НС1, или нагреванием в уксусной кислоте.

Соединение может быть дополнительно очищено с помощью способа колоночной хроматографии, такого как ионообменная хроматография с солевыми буферами или препаративная ВЭЖХ с трифторуксусной кислотой или уксусной кислотой в качестве буфера.

- 11 027603

На более конкретной схеме указанное связывание включает взаимодействие соединения 1, где Ρχ представляет собой Вое и Р₂ представляет собой водород (изображенного ниже как Вос-Агд-ОН НС1), с соединением (2), как показано ниже:

Чистота полученного неочищенного продукта составила более 95%, по данным тонкослойной хроматографии (ТСХ).

Затем выполнили стадию снятия защиты, как показано ниже:

Продукт со снятой защитой очистили препаративной ВЭЖХ, используя буфер 1% уксусной кислоты. Наблюдали продукт с чистотой >98%. Остаточную ТФК удалили с помощью мелкосерийной смолы ΩΟΑΕΧ. Молекулярный вес ΏΑΡ (соединения формулы (V)) составил 512,4, и указанное соединение, синтезированное по представленной выше схеме, демонстрировало следующий основной пик массспектроскопии: [М+Н]+=513,4.

III. Фармацевтические композиции.

Представлены фармацевтические композиции, содержащие соединения, описанные в настоящем документе. Такие композиции могут содержать, помимо соединения настоящего изобретения, фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество. Термин фармацевтически приемлемый означает нетоксичный материал, который совмести с физическими и химическими характеристиками активного ингредиента и не ухудшает эффективность биологического действия активного соединения. Композиции могут содержать различные разбавители, наполнители, соли, буферы, стабилизаторы, солюбилизаторы и другие материалы, хорошо известные в данной области. Характеристики носителя зависят от способа введения и являются в основном общеизвестными в данной области. Фармацевтическая композиция настоящего изобретения может обеспечивать возможность энтерального введения - введения композиции, где указанная композиция абсорбируется через пищеварительный тракт, например, пероральный прием, ректальное введение. В других вариантах реализации фармацевтическая композиция настоящего изобретения может обеспечивать возможность парентерального введения - введения композиции, где указанную композицию вводят способом, отличным от пищеварительного тракта, например, внутривенным, подкожным, кожным, назальным, пульмональным, вагинальным, буккальным путем.

Подходящие фармацевтические композиции, например композиции для перорального введения, могут быть получены так, как описано в ссылках, таких как Рйагшасеийса1 йозаде £огш 1аЫе!з, ред. ПЬегшап е£. а1. (Нью-Йорк, Магсе1 Оеккег, 1пс., 1989 г.), КештдФп - ТНе зшепсе апй ргасйсе о£ рйагшасу, 20-е изд., Прртсой АПНатз & Айктз, Балтимор, штат Мэриленд, 2000 г., и Рйагшасеийса1 йозаде £огшз апй йгид йейчегу зуз1етз, 6-е изд., Апзе1 е!.а1. (Медиа, штат Пенсильвания: Аййашз апй Айктз, 1995 г.), включенных в настоящий документ посредством ссылки, в которых представлена информация о носителях, материалах (например, материалах покрытий), оборудовании и способах получения таблеток и капсул, а также лекарственных форм таблеток, капсул и гранул с замедленным высвобождением.

Примеры подходящих материалов покрытий включают, но не ограничиваясь этим, целлюлозные полимеры, такие как целлюлозы ацетат-фталат, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлозы фталат и гидроксипропилметиллцелюлозы ацетат-сукцинат;

- 12 027603 поливинилацетат-фталат, полимеры и сополимеры акриловой кислоты, и метакриловые смолы, которые имеются в продаже под торговым названием Еибгадй (ΚοίΗ РЬагта, Вестерштадт, Германия), зеин, шеллак и полисахариды. Кроме того, материалы покрытий могут содержать стандартные носители, такие как пластификаторы, пигменты, красители, глиданты, стабилизаторы, порообразователи и поверхностноактивные вещества.

Необязательные фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, присутствующие в таблетках, шариках, гранулах или частицах, содержащих лекарство, включают, но не ограничиваясь этим, разбавители, связующие вещества, смазывающие вещества, средства для улучшения распадаемости таблеток, красители, стабилизаторы и поверхностно-активные вещества.

Разбавители, также называемые наполнители, обычно необходимы для увеличения объема твердой лекарственной формы для обеспечения удобного размера для прессования таблеток или формирования шариков и гранул. Подходящие разбавители включают, но не ограничиваясь этим, дигидрат дикальция фосфата, сульфат кальция, лактозу, сахарозу, маннит, сорбит, целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, каолин, хлорид натрия, сухой крахмал, гидролизованные крахмалы, прежелатинизированный крахмал, диоксид кремния, оксид титана, силикат магния-алюминия и порошкообразный сахар.

Связующие вещества используют для придания когезивных качеств твердой лекарственной композиции и для обеспечения за счет этого целостности таблетки или шарика, или гранулы после формирования лекарственных форм. Подходящие связующие материалы включают, но не ограничиваясь этим, крахмал, прежелатинизированный крахмал, желатин, сахара (включая сахарозу, глюкозу, декстрозу, лактозу и сорбит), полиэтиленгликоль, воски, природные и синтетические смолы, такие как гуммиарабик, трагакант, альгинат натрия, целлюлозы, включая гидроксипропилметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, этилцеллюлозу и вигум, а также синтетические полимеры, такие как сополимеры акриловой кислоты и метакриловой кислоты, сополимеры метакриловой кислоты, сополимеры метилметакрилата, сополимеры аминоалкил-метакрилата, полиакриловую кислоту/полиметакриловую кислоту и поливинилпирролидон.

Смазывающие вещества используют для облегчения производства таблеток. Примеры подходящих смазывающих веществ включают, но не ограничиваясь этим, стеарат магния, стеарат кальция, стеариновую кислоту, бегенат глицерина, полиэтиленгликоль, тальк и минеральное масло.

Средства для улучшения распадаемости таблеток используют для облегчения распада лекарственной форм или разрушения после введения, и они, как правило, включают, но не ограничиваясь этим, крахмал, натрия крахмалгликолят, натрий-карбоксиметил крахмал, карбоксиметилцеллюлозу натрия, гидроксипропилцеллюлозу, прежелатинизированный крахмал, глины, целлюлозу, альгинин, смолы или поперечно сшитые полимеры, такие как поперечно сшитый ПВП (Ро1ур1а8Йоие ХЬ производства СЛЕ СЬет1еа1 Согр).

Стабилизаторы используют для ингибирования или подавления реакций разложения лекарства, которые включают, например, окислительные реакции. Поверхностно-активные вещества могут быть анионными, катионными, амфотерными или неионогенными поверхностно-активными агентами. Подходящие анионные поверхностно-активные вещества включают, но не ограничиваясь этим, вещества, содержащие ионы карбоксилата, сульфоната и сульфата. Примеры анионных поверхностно-активных веществ включают длинноцепные алкилсульфонаты и алкил-арилсульфонаты натрия, калия, аммония, такие как додецилбензолсульфонат натрия; диалкилнатрия сульфосукцинаты, такие как додецилбензолсульфонат натрия; диалкилнатрия сульфосукцинаты, такие как натрия бис-(2-этилтиоксил)сульфосукцинат; и алкилсульфаты, такие как лаурилсульфат натрия. Катионные поверхностно-активные вещества включают, но не ограничиваясь этим, четвертичные аммониевые соединения, такие как бензалкония хлорид, бензетония хлорид, цетримония бромид, стеарил-диметилбензил-аммония хлорид, полиоксиэтилен и амин кокосового масла. Примеры неионогенных поверхностно-активных веществ включают этиленгликоля моностеарат, пропиленгликоля миристат, глицерилмоностеарат, глицерилстеарат, полиглицерил-4-олеат, сорбитан ацилат, сахарозы ацилат, ПЭГ-150 лаурат, ПЭГ-400 монолаурат, полиоксиэтилена монолаурат, полисорбаты, полиоксиэтилена октилфениловый эфир, ПЭГ-1000 цетиловый эфир, полиоксиэтилена тридециловый эфир, полипропиленгликоля бутиловый эфир, Ро1охатег® 401, стеароилмоноизопропаноламид и полиоксиэтилена гидрированный талловый амид. Примеры амфотерных поверхностно-активных веществ включают натрия Ν-додецил-бета-аланин, натрия Ν-лаурил-бетаиминодипропионат, миристоамфоацетат, лаурил-бетаин и лаурил-сульфобетаин.

Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут быть разработаны для обеспечения замедленного, устойчивого, пульсирующего или другого модифицированного высвобождения.

При необходимости, таблетки, шарики, гранулы или частицы также могут небольшие количества нетоксичных вспомогательных веществ, таких как увлажняющие или эмульгирующие средства, красители, рН буферные агенты и консерванты. Для усиления поглощения или модификации высвобождения также могут быть использованы биоадгезивные композиции. Такие композиции известны в данной области. См., например, заявку на патент США № 20060045865, автор 1аеоЪ, которая включена в настоящий документ посредством ссылки.

- 13 027603

Также могут быть применимы фармацевтические композиции, обеспечивающие возможность доставки назальным или пульмональным введением. Аэрозоли для доставки терапевтических агентов в дыхательные пути описаны, например, в публикации Аб_)е1, А. аиб Оаггеи, ί. РЬагт. Ке8., 7: 565-569 (1990) и 2аиеи, Р. апб Ьатт, Т-\У.Т Ш(. 1. РЬагт., 114: 111-115 (1995). Дыхательные пути включают верхние дыхательные пути, в том числе ротоглотку и гортань, за ними следуют нижние дыхательные пути, которые включают трахею, затем ответвления на бронхи и бронхиолы. Верхние и нижние дыхательные пути называют дыхательными путями, в которых не происходит газообмен. Конечные бронхиолы затем делятся на дыхательные бронхиолы, которые затем ведут к окончательной зоне дыхания, альвеолам или глубоким легких. Оопба, I. ЛегоюЬ Гог беЬуегу оГ (Ьегареибс апб б1адпо8бс адеп(8 (о (Ье гекртаФгу (гас(, в СгШса1 Реу1е\\ъ ίη ТЬегареибс Эгид Сатег §у8(ет8, 6:273-313 (1990). Глубокие легкие или альвеолы, представляют собой основную мишень для ингаляционных терапевтических аэрозолей для системной доставки лекарства.

Лекарства, вводимые ингаляцией, могут принимать форму жидких аэрозольных композиций.

Для инъецируемых композиций (например, внутривенных композиций) носитель представляет собой дистиллированную стерильную воду, солевой раствор, буферный солевой раствор или другое фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество для инъекций. Добавки могут включать консерванты и кислоты или основания для регулировки рН, для изменения растворимости или поглощения.

В одном из вариантов реализации, если фармацевтическая композиция содержит соединение ИАР формулы (V) (или его стереоизомер формулы (VII)), и указанная композиция обеспечивает возможность парентерального введения в форме инъекции, то соединение растворяют в воде с подходящими модификаторами тоничности и моляльности (как фосфатно-солевой буферный раствор). Растворимость ИАР в воде составляет более 100 мг/мл. В одном из вариантов реализации ИАР представлен в виде стерильного раствора для внутривенного введения. В одном аспекте моляльность фармацевтической композиции, в которой ИАР обеспечивает возможность внутривенного введения, доведена до 290 мосмоль/л с помощью хлорида натрия, а рН доведен до 7,4 с помощью гидроксида натрия. Предпочтительно фармацевтическую композицию вводят в виде внутривенного болюса с медленным струйным введением.

IV. Способы применения.

В настоящем изобретении представлен способ полного или частичного реверсирования антикоагулирующего действия ингибитора коагуляции, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения настоящего изобретения (например, соединения формулы (I)-(VII) или (VIII)) или его фармацевтически приемлемой соли. В настоящем изобретении представлен также способ ускорения коагуляции у субъекта, нуждающегося в этом, при этом указанный субъект принимает ингибитор коагуляции, который включает введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества соединения настоящего изобретения или его фармацевтически приемлемой соли. Кроме того, в настоящем изобретении представлен способ нейтрализации или подавления действия ингибитора коагуляции, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения настоящего изобретения или его фармацевтически приемлемой соли.

В настоящем изобретении ингибитор коагуляции (упоминаемый также как антикоагулянт) представляет собой молекулу, которая ингибирует процесс коагуляции. Иллюстративные ингибиторы коагуляции включают, но не ограничиваясь этим, активаторы антитромбина (например, нефракционированный гепарин и НМГ), ингибиторы фактора На и ингибиторы фактора Ха.

Гепарин.

Гепарин представляет собой природный мукополисахарид, который действует в организме в качестве кофактора антитромбина для предотвращения внутрисосудистого свертывания. Это вещество вырабатывается базофилами и мастоцитами, которые в большом количестве встречаются в соединительной ткани, окружающей капилляры, в частности, в легких и в печени. В форме натриевой соли гепарин терапевтически используют в качестве антикоагулянта.

Низкомолекулярный гепарин.

Низкомолекулярный гепарин (НМГ) получают из гепарина, используя различные способы деполимеризации, включая окислительную деполимеризацию с пероксидом водорода, которая используется в производстве ардепарина (ΝΟΚΜΓΡΕΟ®); дезаминирующее расщепление с изоамил-нитритом, которое используется в производства цертопарина (δΑΝΏΘΡΑΚΙΝ®); щелочное бета-элиминирующее расщепление бензилового эфира гепарина, которое используется в производстве эноксапарина (ЬОУЕМОХ® и СЬЕХА№®); окислительную деполимеризацию с Си²' и пероксидом водорода, которая используется в производстве парнапарина (РЬИХИМ®); бета-элиминирующее расщепление с помощью фермента гепариназы, которое используется в производстве тинзапарина (ΓΝΝΟΗΕΡ® и ЬООРАКШ®); дезаминирующее расщепление с азотистой кислотой, которое используется в производстве дальтепарина (ΡΚΑΟΜΕΝΤ®), ревипарина (СиУАКШ®) и надропарина (РКАХФАКШ®), что приводит к образованию неприродного остатка ангидроманнозы на восстановительном конце полученных олигосахаридов. Затем он может быть преобразован в ангидроманнит с помощью подходящего восстанавливающего аген- 14 027603 та. Химическое и ферментативное бета-элиминирование приводит к образованию неприродного ненасыщенного уронатного остатка (ИА) на не восстановительном конце. Обзор антикоагулирующего действия некоторых НМГ представлен в табл. 1.

Таблица 1

Данные молекулярного веса и антикоагулирующего действия существующих продуктов НМГ

Выборка из публикации Огау Е. е! а1., ТЬготЬ Наетоз!, 99: 807-818 (2008).

Клинически, НМГ (средний молекулярный вес около 4,5 кДа) отличается от гепарина (т.е. нефракционированного гепарина; средний молекулярный вес около 15 кДа) в различных аспектах: (1) для НМГ требуется менее частое подкожное дозирование для послеоперационной профилактики венозной тромбоэмболии; (2) для НМГ требуется однократная или двукратная суточная инъекция для пациентов, проходящих лечение венозной тромбоэмолии и стенокардии, вместо внутривенной инфузии, необходимой в случае с гепарином; (3) для НМГ не требуется мониторинг параметра коагуляции аРТТ; (4) НМГ обеспечивает меньший риск кровотечения; (5) долговременное применение НМГ обеспечивает меньший риск остеопороза; и (6) НМГ обеспечивает меньший риск гепарин-индуцированной тромбоцитопении (потенциальный побочный эффект введения гепарина). Однако антикоагулирующее действие гепарина, как правило, обратимо при введении сульфата протамина, тогда как действие протамина на НМГ ограничено. Кроме того, НМГ слабее действует на активность тромбина (фактор Па), по сравнению с гепарином, тогда как НМГ и гепарин имеют одинаковое действие на активность фактора Ха.

Ингибиторы тромбина и другие ингибиторы фактора Па или Ха.

Примеры ингибиторов тромбина (фактора Па) и фактора Ха включают антикоагулянты, такие как дабигатран (РКАОАХА®), ривароксабан (ХАКЕБТО®), апиксабан (ЕЫРШЗ®), эдоксабан (БгаАЫА®), фондапаринукс (АК1ХТКА®) и аргатробан (ΑΚΟΑΤΚΟΒΑΝ®).

Химическое название перорального антикоагулянта РКАОАХА®, дабигатрана этексилат-мезилата, прямого ингибитора тромбина: ®-аланин, ^[[2-[[[4-[[[(гексилокси)карбонил]амино]иминометил]фенил]амино]метил]-1-метил-1Н-бензимидазол-5-ил]карбонил]-^2-пиридинил-, этиловый эфир, метансульфонат. Дабигатран и его ацильные глюкурониды представляют собой конкурентные, прямые ингибиторы тромбина. Поскольку тромбина (фактор Па, серин-протеаза) обеспечивают возможность превращения фибриногена в фибрин в ходе коагуляционного каскада, его ингибирование предотвращает образование тромба.

Ривароксабан, ингибитор фактора Ха, представляет собой активный ингредиент в ХАКЕБТО®, и имеет химическое название 5-хлор-^({(53)-2-оксо-3-[4-(3-оксо-4-морфолинил)фенил]-1,3-оксазолидин5-ил}метил)-2-тиофенкарбоксамид. Ривароксабан представляет собой чистый (З)-энантиомер. ХАКЕБТО® представляет собой перорально биодоступный ингибитор фактора Ха, который селективно ингибирует активный сайт фактора Ха и не требует кофактора (такого как антитромбин III) для своего действия. Апиксабан или ЕЫРШЗ® представляет собой 1-(4-метоксифенил)-7-оксо-6-[4-(2оксопиперидин-1-ил)фенил]-4,5-дигидропиразоло[5,4-с]пиридин-3-карбоксамид. Он представляет собой перорально вводимый прямой ингибитор фактора Ха, одобренный в Европе и в настоящее время проходящий испытания III фазы в США для предупреждения венозной тромбоэмболии.

Эдоксабан или ^IXIΑNΑ® представляет собой №-(5-хлорпиридин-2-ил)-Щ(13,2К,43)-4(диметилкарбамоил)-2-[(5-метил-6,7-дигидро-4Н-[1,3]тиазоло[5,4-с]пиридин-2-карбонил)амино]циклогексил]оксамид. Эдоксабан представляет собой прямой ингибитор фактора Ха, и он одобрен в Японии для применения для предупреждения венозной тромбоэмболии.

- 15 027603

АКЗХТКА® представляет собой фондапаринукс натрия. Он представляет собой синтетический и специфический ингибитор активированного фактора Х (Ха). Фондапаринукс натрия представляет собой метил О-2-дезокси-6-О-сульфо-2-(сульфоамино)-а-В-глюкопиранозил-(1^4)-О-в-Вглюкопирануронозил-(1 ^4)-О-2-дезокси-3,6-ди-О-сульфо-2-(сульфоамино)-а-В-глюкопиранозил(1^4)-О-2-О-сульфо -а-Ь-идопирануронозил-(1^4)-2-дезокси-6-О-сульфо-2-(сульфоамино)-а-Вглюкопиранозид, деканатриевую соль. Молекулярная формула фондапаринукса натрия С₃₁Н₄₃^№₁₀О₄₉5₈, и его молекулярный вес составляет 1728. Структурная формула представлена ниже:

Антитромботическая активность фондапаринукса натрия является результатом селективного ингибирования фактора Ха, опосредованного антитромбином III (АТШ). За счет селективного связывания с АТШ, фондапаринукс натрия ускоряет (примерно в 300 раз) естественную нейтрализацию фактора Ха за счет АТШ. Нейтрализация фактора Ха нарушает каскад коагуляции крови и посредством этого ингибирует образование тромбина и формирование тромба. Фондапаринукс натрия не инактивирует тромбин (активированный фактор II), и не имеет известного влияния на функцию тромбоцитов. В рекомендованной дозе фондапаринукс натрия не влияет на фибринолитическую активность или время кровотечения. Фармакодинамика/фармакокинетика фондапаринукса натрия получены из концентраций фондапаринукса в плазме, количественно определенных по активности антифактора Ха. Для калибровки анти-Ха анализа может быть использован только фондапаринукс. (Международные стандарты гепарина или НМГ не подходят для этого применения). Таким образом, активность фондапаринукса натрия выражают в миллиграммах (мг) от калибратора фондапаринукса. Анти-Ха активность лекарства увеличивается при увеличении концентрации лекарства, достигая максимальных значений приблизительно за 3 ч. Фондапаринукс натрия, введенный подкожной инъекцией, быстро и полностью поглощается (абсолютная биодоступность составляет 100%). У пациентов, проходящих лечение фондапаринуксом натрия, инъекция 2,5 мг, один раз в сутки, пик стационарной концентрации в плазме составляет, в среднем, от 0,39 до 0,50 мг/л и достигается приблизительно через 3 ч после введения дозы. У этих пациентов минимальная стационарная концентрация в плазме составляет от 0,14 до 0,19 мг/л. У пациентов с симптоматическим тромбозом глубоких вен и легочной эмболией, проходящих лечение фондапаринуксом натрия с инъекциями 5 мг (вес тела <50 кг), 7,5 мг (вес тела 50-100 кг) и 10 мг (вес тела >100 кг), один раз в сутки, дозы с поправкой на вес тела, обеспечивают такие же средние стационарные пики и минимальные концентрации в плазме во всех весовых категориях. Средняя пиковая стационарная концентрация в плазме находится в диапазоне от 1,20 до 1,26 мг/л. У этих пациентов средняя минимальная стационарная концентрация в плазме находится в диапазоне от 0,46 до 0,62 мг/л.

АКСАΤКОΒАN® представляет собой синтетический прямой ингибитор тромбина (фактора Па), полученный из Ь-аргинина. Химическое название АКСАΤКОΒАN®: 1-[5-[(аминоиминометил)амино]-1оксо-2-[[(1,2,3,4-тетрагидро-3-метил-8-хинолинил)сульфонил]амино]пентил]-4-метил-2пиперидинкарбоновая кислота, моногидрат. Молекулярная формула АКСАΤКОΒАN®:

С₂3Н36^О55-Н₂О.

Молекулярный вес составляет 526,66. АКСАΤКОΒАN® представляет собой прямой ингибитор тромбина, который обратимо связывается с активным сайтом тромбина. АКСАΤКОΒАN® не требует кофактора антитромбина III для своей антитромботической активности. АКСАΤКОΒАN® вводят инъекцией, и он проявляет свое антикоагулирующее действие за счет ингибирования тромбин-катализируемых или тромбин-индуцируемых реакций, включая образование фибрина; активации факторов коагуляции V, VIII и ХШ; активации белка С; и агрегации тромбоцитов. Антикоагулирующий эффект представляет собой любое действие ингибитора коагуляции (например, гепарина, НМГ, ингибитора фактора Ха, ингибитора фактора Па), которое является результатом его блокирования распространения коагуляционных каскадов. Не ограничивающие примеры антикоагуляционных эффектов включают повышающую регуляцию активности антитромбина, уменьшение активности фактора Ха, уменьшение активности фактора Па, увеличение кровопотери и любые другие обстоятельства, в которых активность или концентрация факторов свертывания изменяется таким образом, что замедляется формирование сгустков крови. Активность ингибитора коагуляции (т.е. его антикоагулирующее действие) может быть измерена различными способами, включая, но не ограничиваясь этим, хромогенный анализ активности антифактора Ха, анализ активированного парциального тромбопластинового времени, протромбинового времени, анализ кровотечения (например, анализ кровотечения из хвоста крыс), тромбоэластографию, анализ образования тромбина, время разбавленного яда гадюки Рассела, экариновое время свертывания крови, каолиновое время свертывания крови, международное нормализованное соотношение (ΓΝΚ), испытание фибриногена (Клаус), тромбиновое время (ТСТ), смешанное время и время лизиса эуглобулина. Эти способы

- 16 027603 помогают определить различные параметры антикоагуляции и известны специалистам в данной области. Так, в некоторых вариантах реализации антикоагуляцию можно контролировать одним из перечисленных выше анализов или их комбинацией.

Анализ антифактора Ха напрямую измеряет активность антифактора Ха. Методология анализа антифактора Ха заключается в том, что плазму пациента добавляют к известному количеству избытка фактора Ха и избытка антитромбина. Если ингибитор фактора Ха присутствует в плазме пациента, он снижает ферментативную активность фактора Ха. Количество остаточного фактора Ха обратно пропорционально количеству агента анти-Ха в плазме. Количество остаточного фактора Ха обнаруживают добавлением хромогенного субстрата, который имитирует природный субстрат фактора Ха, давая возможность его расщепления остаточным фактором Ха, высвобождая окрашенное соединение, которое может быть обнаружено спектрофотометром. Недостаток антитромбина в организме пациента не влияет на анализ, поскольку в реакции предусмотрены избыточные количества антитромбина. Результаты представляют в концентрации антикоагулянта в единицах/мл антифактора Ха, так что высокие значения указывают на высокие уровни антикоагуляции, а низкие значения указывают на низкие уровни антикоагуляции.

Анализ активированного парциального тромбопластинового времени (аРТТ) представляет собой анализ, в котором измеряют время, необходимое для свертывания крови. Образцы крови собирают для непосредственного измерения, или собирают в пробирки с оксалатом и цитратом для предотвращения коагуляции под действием кальция до выполнения анализа. В этом анализе в плазме смешивают фосфолипид, активатор (диоксид кремния, целит, каолин, эллаговую кислоту и т.д.) и кальций для инициации коагуляции. В анализе измеряют время до образования тромба (сгустка). Анализ кровотечения из хвоста крыс или анализ отсечения хвоста крыс представляет собой анализ, в котором измеряют кровопотери, например, кровопотери после введения лекарства. В одном из вариантов реализации при испытании влияния соединения настоящего изобретения (например, ΌΑΡ) во время Т_тах антикоагулянта внутривенно вводят ΌΑΡ. Через 20 мин отсекают хвосты крыс приблизительно в 1 мм от кончика, помещают в солевой раствор комнатной температуры, собирают кровь в течение 30 мин и взвешивают.

Анализы, используемые для измерения активности ингибиторов коагуляции, могут быть использованы в лаборатории или в больнице для измерения реверсирования антикоагулирующего действия ингибитора коагуляции, например, реверсирования антикоагулирующего действия ингибитора коагуляции за счет введения фармацевтической композиции, содержащей соединение настоящего изобретения. Так, в одном из вариантов реализации эти анализы используют для измерения полного или частичного реверсирования антикоагулирующего действия ингибитора коагуляции (такого как гепарин, НМГ, ингибитор фактора 11а и ингибитор фактора Ха). Полное реверсирование антикоагулирующего действия ингибитора коагуляции возникает при нейтрализации антикоагулирующего действия. В одном из вариантов реализации полное реверсирование антикоагулирующего действия ингибитора коагуляции, измеренное анализом анти-Ха активности, возникает при изменении концентрации антикоагулянта ниже минимально эффективной концентрации (МЭК) для антикоагуляции. МЭК при использовании в настоящем документе представляет собой минимальное количество лекарства (например, ингибитора коагуляции), необходимое для терапевтического эффекта. В другом варианте реализации полное реверсирование антикоагулирующего действия ингибитора коагуляции, измеренное в анализе аРТТ, возникает при возвращении аРТТ на уровень в пределах 10% от исходного значения. Исходное значение при использовании в настоящем документе относится к аРТТ в отсутствие ингибиторов коагуляции.

Во многих случаях антикоагуляция все еще необходима, но в меньшей степени. В этом случае может быть показано частичное реверсирование антикоагулирующего действия ингибитора коагуляции. Частичное реверсирование антикоагулирующего действия ингибитора коагуляции, измеренное в анализе анти-Ха активности, возникает при изменении концентрации антикоагулянта до значения ниже концентрации антикоагулянта в отсутствие агента, реверсирующего антикоагулирующее действие (например, соединения настоящего изобретения), но остается на уровне выше МЭК для антикоагуляции. Так, в некоторых вариантах реализации частичное реверсирование антикоагулирующего действия ингибиторов коагуляции возникает, если концентрация антикоагулянта ниже, чем примерно четырехкратная МЭК, предпочтительно примерно двукратная МЭК, более предпочтительно менее чем примерно двукратная МЭК (например, примерно равна МЭК). Частичное реверсирование антикоагулирующего действия ингибитора коагуляции, измеренное анализом аРТТ, возникает, если аРТТ снижается до более низкого значения, чем в отсутствие агента, реверсирующего антикоагулирующее действие (например, соединения настоящего изобретения), но выше исходного значения. Так, в других вариантах реализации частичное реверсирование антикоагулирующего действия ингибиторов коагуляции возникает, если измеренное значение аРТТ снижено до показателя ниже, чем примерно четырехкратное исходное значение, предпочтительно примерно двукратное исходное значение, более предпочтительно менее чем около двукратное исходное значение. Как правило, степень и продолжительность реверсирования антикоагуляции определяет лечащий врач или ветеринар.

При использовании в настоящем документе субъект, нуждающийся в этом представляет собой субъекта, нуждающегося в экстренном или плановом реверсировании антикоагуляции, например, субъ- 17 027603 ект, страдающий от передозировки антикоагулянта, субъект, страдающий от кровотечения (например, кровотечение в результате травмы или самопроизвольное кровотечение в желудочно-кишечном тракте или в ином месте), субъект, нуждающийся в плановом хирургическом вмешательстве, субъект, подлежащий инвазивной или неинвазивной процедуре, для которой необходима биопсия, субъект, подлежащий процедуре, в которой процедурная ошибка может приводить к риску кровотечения, если субъект продолжает находиться под действием антикоагулянта, субъект, нуждающийся в спинальной или эпидуральной анестезии. Субъект, нуждающийся в этом может быть пациентом, у которого наличие прямого ингибитора фактора (фактора Ха, фактора 11а и/или антитромбина) вызывает или может вызывать эффекты кровотечения. Таким образом, субъект, нуждающийся в этом, может быть субъектом, принимающим антикоагуляционную терапию (например, субъект, принимающий гепарин, НМГ, ингибитор фактора 11а или ингибитор фактора Ха) например, для предупреждения инсульта, хирургических и диагностических операций на сердце, при сердечной аритмии, для предупреждения тромбоза глубоких вен (ΌνΤ), легочной эмболии, общего предупреждения образования патологических кровяных сгустков.

Субъект, нуждающийся в этом при использовании в настоящем документе представляет собой животное. Субъект, нуждающийся в этом включает, без ограничения, человека, мышей, крыс, морских свинок, собак, котов, лошадей, коров, свиней, обезьян, шимпанзе, бабуинов или макак-резусов. В одном из вариантов реализации, субъект, нуждающийся в этом представляет собой млекопитающее. В другом варианте реализации субъект, нуждающийся в этом представляет собой человека.

При использовании в настоящем документе терапевтически эффективное количество относится к количеству агента, реверсирующего действие антикоагулянтов (например, соединения настоящего изобретения, описанного в настоящем документе), которое является эффективным, при введении однократной или многократных доз (например, болюса и/или поддерживающих доз) субъекту, для нейтрализации или ингибирования (полного или частичного реверсирования) антикоагулирующего действия ингибитора коагуляции или для ускорения коагуляции.

В одном аспекте терапевтически эффективное количество составляет дозу агента, реверсирующего действие антикоагулянта, которая находится в диапазоне от 0,01 до 10000 раз по весу от дозы антикоагулянта. В другом аспекте агент, реверсирующий действие антикоагулянта, вводят в массовом соотношении доз от около 1:1 до 1000:1 агента, реверсирующего действие антикоагулянта, к антикоагулянту, например, 100:1 агента, реверсирующего действие антикоагулянта, к антикоагулянту, такое значение как 10:1 агента, реверсирующего действие антикоагулянта, к антикоагулянту. В одном из вариантов реализации представленного способа терапевтически эффективное количество агента, реверсирующего действие антикоагулянта, может быть введено подкожным, внутримышечным или внутривенным путем введения. Например, оно может быть введено внутривенно в виде стерильного раствора. В другом варианте реализации терапевтически эффективное количество агента, реверсирующего действие антикоагулянта, вводят пероральным, назальным или пульмональным путем или в слизистую область (рот, прямая кишка или влагалище).

Терапевтически эффективное количество агента, реверсирующего действие антикоагулянта (т.е. соединения настоящего изобретения), обычно варьируется от около 0,001 мг/кг до около 1 г/кг веса тела в сутки; в другом варианте реализации - от около 0,01 до около 600 мг/кг веса тела в сутки;

в

другом

варианте

реализации -

от

около

0,01

до

около

250 мг/кг

веса

тела

в

сутки;

в

другом

варианте

реализации -

от

около

0,01

до

около

400 мг/кг

веса

тела

в

сутки;

в

другом

варианте

реализации -

от

около

0,01

до

около

200 мг/кг

веса

тела

в

сутки;

в

другом

варианте

реализации -

от

около

0,01

до

около

100 мг/кг

веса

тела

в

сутки;

в

одном

из вариантов реализации

-

от около 0,01 до около 25 мг/кг

веса

тела

в

сутки;

в

другом

варианте

реализации -

от

около

0,1

до

около

10 мг/кг

веса

тела

в

сутки;

в

другом

варианте

реализации -

от

около

0,001

до

около

100 мг/кг

веса

тела

в

сутки;

в

другом

варианте

реализации -

от

около

0,001

до

около

10 мг/кг веса тела в

сутки и

в другом варианте реализации - от около 0,001 до около 1 мг/кг веса тела в сутки. Для определения терапевтически эффективного количества могут быть использованы стандартные анализы коагуляции (такие как описаны в настоящем документе) и другие ίη νίίτο анализы. В некоторых аспектах настоящего изобретения соединение настоящего изобретения может быть введено совместно по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим агентом. В одном из вариантов реализации по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент может быть витамином К, который обычно используют для коррекции различий свертывания, вызванных варфариновыми соединениями.

В настоящем изобретении представлен также диагностический анализ для определения концентрации антикоагулянта в крови. Как показано ниже в примере 13, ΌΛΡ демонстрирует дозозависимый тренд в реверсировании ривароксабана ех νίνο в плазме человека, с использованием хромогенного анализа антифактора Ха с разрешением 510к. Таким образом, соединения настоящего изобретения, например, ΌΛΡ, могут быть использованы в диагностическом анализе для определения концентрации антикоагулянта, например, ингибитора фактора Ха, в крови. В таком анализе соединение настоящего изобретения, например, ΌΛΡ, может быть использовано или вместе с имеющимися реагентами набора, или в качестве субстрата прямого связывания вместо синтетических факторов, присутствующих в имеющихся наборах.

- 18 027603

В одном из вариантов реализации диагностический анализ может включать соединение настоящего изобретения (например, ЭАР) в качестве связывающего субстрата, при этом соединение настоящего изобретения связывает антикоагулянт в образце крови, и количественно измеряют остаточную активность фактора свертывания (например, фактора Ха) для определения концентрации антикоагулянта в образце. В другом варианте реализации диагностический анализ может включать соединение настоящего изобретения (например, ЭАР), сопряженное с магнитными микрочастицами, при этом соединение настоящего изобретения может связывать антикоагулянт в образце крови для удаления указанного антикоагулянта из образца или для его концентрирования. Хромогенный или портативный анализ на основе ЭАР по настоящему изобретению может способствовать определению концентрации антикоагулянта у субъектов, что в настоящее время представляет собой значительную неудовлетворенную клиническую потребность, поскольку существующие способы диагностики не позволяют с высокой точностью определять концентрации прямых ингибиторов в крови.

Кроме того, в настоящем изобретении представлен анализ, например хромогенный анализ, для определения концентрации соединения настоящего изобретения, например ЭАР. необходимой для реверсирования антикоагулянта, присутствующего в крови. В одном из вариантов реализации в указанном анализе используют ЭАР в качестве прямого связывающего агента для различных антикоагулянтов. В настоящем изобретении представлен также анализ, например хромогенный анализ, для определения количества соединения настоящего изобретения, например ЭАР, в крови. В таком анализе могут быть использованы заданные концентрации антикоагулянта.

В настоящем изобретении представлен также диагностический набор, который предназначен для диагностического анализа, описанного выше в настоящем документе. Так, в одном из вариантов реализации указанный набор используют для определения концентрации антикоагулянта в крови. Указанный набор может содержать другие компоненты, упаковку, инструкции, реагенты и/или другие материалы для облегчения определения концентрации антикоагулянта (например, ингибитора фактора Ха) или ЭАР и для облегчения применения набора. Кроме того, набор может быть использован для определения того, не будет ли ухудшена комбинация варфарина и другого антикоагулянта, отличного от варфарина, действием соединения настоящего изобретения, при сохранении других антикоагулянтов.

Как показано в следующих примерах, соединение настоящего изобретения (например, ЭАР) может связывать гепарин, инактивируя его ίη νίνο. Таким образом, помимо его влияния на коагуляцию, соединение настоящего изобретения также может быть использовано для исключения биохимического действия гепарина из тканей. Например, другие гепарин-связывающие молекулы демонстрируют способность снижать фактор роста фибробластов (РСР), эпидермальный фактор роста (ЕСР), фактор роста сосудистого эндотелия (УЕСР) и другие гепарин-связывающие факторы роста. Было показано, что депривация УЕСР и РСР применима в противораковой терапии, что делает соединения настоящего изобретения возможными кандидатами для лечения рака. Следовательно, в одном аспекте настоящего изобретения представлен способ лечения, предупреждения или улучшения рака у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения настоящего изобретения или его фармацевтически приемлемой соли.

Как показано в примерах, одно из соединений настоящего изобретения, ЭАР, связывает ХАКЕЬТО®, ΕΡίρυϊδ®, АК1ХТКА® и НМГ ίη νίίΓο, по результатам измерения динамическим светорассеянием (ДСР). ЭАР сохраняет подкожно введенный АК1ХТКА® и НМГ ίη νίνο. ЭАР сохраняет ХАКЕЬТО®, ΕΜΟυίδ®, РКАПАХА®, ЫХ1АХА®, нефракционированный гепарин и бемипарин ίη νίνο. ЭАР, введенный крысам внутривенно в дозах 100, 250 и 400 мг/кг, не демонстрировал никаких неблагоприятных эффектов. ЭАР у крыс перорально биодоступен. ЭАР демонстрирует отсутствие связывания с ЕКС человека, не ингибирует или не служит в качестве подложки для ферментов СУР и заметно не связывает какие-либо белки плазмы (данные не показаны). Кроме того, очевидно, что ЭАР имеет короткий период полуэлиминации, поскольку антикоагуляция, вызванная РКАПАХА®, восстановилась через 2030 мин после внутривенной болюсной дозы ЭАР у крыс. Более того, ЭАР устойчив к стерилизации (сохраняется при нагревании до 200°С) и к хранению в виде лиофилизированного порошка при 4°С в течение более одного года. Результаты реверсирования действия антикоагулянтов для ЭАР представлены в табл. 2.

- 19 027603

Таблица 2

Реверсирование действия антикоагулянтов

Торговая марка	Международное непатентованное название	Компания	Ингибируемый фактор крови	Способ введения	Связывание ϋΑΡ	Реверсирующие агенты
Ι,ονθηοχ® ШЬог®	Эноксапарин Бемипарин	Запой, Запбог/ МотеШа, Κονί	-80-90% Ха, -10-20% На	подкожная инъекция	X	Протамин* и ϋΑΡ
Апх1га®	Фондапаринукс	езк	Ха	подкожная инъекция	X	ϋΑΡ
Ε1ίςιπ3®	Апиксабан	ΡίϊζθΓ, В М3	Ха	перорально	X	ϋΑΡ
ХагеИо®	Ривароксабан	Вауег, бапззеп, б&б	Ха	перорально	X	ϋΑΡ
Агда1гоЬа п®	Аргатробан	езк	На	подкожная инъекция	-	нет
Ргабаха®	Дабигатрана этексилат	ВоеНппдег 1пде1Не1т	На	перорально	X	ϋΑΡ

*Протамин частично реверсирует низкомолекулярные гепарины.

Таблица 3

Корреляция ΐη νΐΐΓΟ-ΐη νΐνο

Международное непатентованное название лекарства	Молярное отношение связывания по ДСР [ОАР/ лекарство]	Молярное отношение реверсирования [ϋΑΡ/лекарство]	ϊη νΐνο измерение	Ингибируемый фактор (-ы) крови	Способ введения
Ривароксабан	9	3*	Анализ кровотечени я	Ха	Пероральный
Апиксабан	10	8*	Анализ кровотечени я	Ха	Пероральный
Фондапаринукс	3	130	Набор Ха	Ха	Подкожная инъекция
Бемипарин	7	140	аРТТ	-80-90% Ха, -10-20% Па	Подкожная инъекция
Аргатробан	Н.Д.	Н.Д.	аРТТ	Па	Подкожная инъекция

Пероральная биодоступность для ривароксабана принята за 60%, для апиксабана - 50% и для дабигатрана - 5%; биодоступность для инъецируемых антикоагулянтов принята за 100%.

Результаты ΐη νΐΐΓΟ-ΐη νΐνο корреляции при лечении ΌΆΡ представлены в табл. 3. Молярное отношение связывания по ДСР рассчитали делением минимального массового отношения ΌΆΡ к антикоагулянту, который демонстрирует значительное связывание, определенное по слиянию в фосфатно-солевом буферном растворе до видимого диаметра более 50 нм, на молекулярное весовое отношение ΌΆΡ и указанного антикоагулянта. Молекулярные массы, использованные при расчетах, составили 512 Да (ΌΆΡ), 436 Да (ривароксабан), 460 Да (апиксабан), 1,7 кДа (фондапаринукс), 3,6 кДа (бемипарин), 628 Да (дабигатран) и 509 Да (ΑΚΟΑΤΚΟΒΑΝ®). Таким же образом рассчитали реверсирующее молярное отношение, используя минимальную ΐη νΐνο реверсирующую дозу ΌΆΡ, необходимую для достижения реверсирования, по результатам измерения анализом кровотечения при отсечении хвоста крыс, хромогенным набором анти-Ха или по активированному парциальному тромбопластиновому времени (аРТТ). Для анализа кровотечения антикоагулянт считали реверсированным, если снижение кровопотери за период в 30 мин после отсечения хвоста, при погружении отрезанного хвоста в солевой раствор комнатной температуры, было в пределах 25% от контрольного значения (без введения антикоагулянта). При измерении набором Ха, реверсирование достигалось, если эффективная концентрация антикоагулянта изменилась до значения ниже минимальной эффективной концентрации (МЭК) для антикоагуляции. По результатам измерения аРТТ, реверсирование считали достигнутым, если аРТТ крысы, находящейся под действием антикоагулянта, возвращалось к значению в пределах 10% от исходного значения. В случае фондапаринукса, несмотря на то, что минимально введенная доза ΐη νΐνο составила 200 мг/кг ΌΆΡ, данные ΐη νΐΐΓο показывают, что возможны и более низкие реверсирующие дозы.

Полное содержание всех ссылок, патентных заявок и патентов, цитируемых в тексте, включено в настоящий документ посредством ссылки.

- 20 027603

Примеры

Настоящее изобретение дополнительно иллюстрировано в следующих не ограничивающих примерах. Эти примеры представлены для облегчения понимания настоящего изобретения, но они не предназначены и не должны толковаться как ограничивающие его рамки каким-либо образом. Примеры не включают подробное описание стандартных способов, хорошо известных специалистам в данной области.

Пример 1. Ιη νίίτο испытание стабильности диаргинин-пиперазина (ΌΑΡ).

Материалы и способы.

Ацетатную соль ΌΆΡ приготовили так, как описано в настоящем документе. Как описано в этих примерах, твердый или порошкообразный ΌΆΡ относится к ацетатной соли, тогда как ΌΆΡ в растворе относится к свободному основанию, поскольку соль ионизируется в водном растворе. Как описано в этих примерах, используемое соединение ΌΛΡ представляло собой соединение формулы (VII).

Порошкообразный ΌΛΡ испытывали на термостойкость двумя способами. ΌΆΡ хранили при 4°С в течение 7 месяцев до его использования. Дополнительно, твердое вещество ΌΛΡ испытывали дифференциальной сканирующей калориметрией (ДСК), нагревая от -20 до 200°С, снова охлаждая до -20°С и снова нагревая до 200°С.

Результаты.

Порошкообразный ΌΛΡ был устойчивым при 4°С в течение более 12 месяцев. Результаты ДСК представлены на фиг. 1. Второе нагревание (2) показало такое же термическое поведение, что и первое нагревание (1), что указывает на сохранение ΌΆΡ при повторном нагревании до 200°С. Это наблюдение показывает, что ΌΛΡ может выдерживать нагревание до температур, превышающих температуры, необходимые для стерилизации.

Пример 2. Связывание ΌΛΡ с гепарином и НМГ.

Материалы и способы.

Для оценки связывания 1 мг/мл нефракционированного гепарина и 1 мг/мл бемипарина (НМГ; ΗΙΒΟΚ®) отдельно или в комбинации с 100 мг/мл ΌΛΡ в воде (массовое отношение ΌΆΡ к гепарину или НМГ 100:1) использовали динамическое светорассеяние (ДСР).

Результаты.

ΌΑΡ физически связывается в воде как с нефракционированным гепарином (фиг. 2), так и с НМГ (не показано) с образованием физических агрегатов, которые увеличивают видимый диаметр. При смешивании растворов ΌΛΡ с растворами НМГ или нефракционированного гепарина, они образуют частицы за счет физических взаимодействий, что подкрепляет теорию, что ΌΆΡ реверсирует антикоагулирующее действие гепарина и ЬМ^С за счет физического связывания с этими молекулами.

Пример 3 Связывание ΌΆΡ с антикоагулянтами, измеренное с помощью ДСР.

Материалы и способы.

Отдельно ривароксабан (ХАКЕЬТО®), отдельно ΌΆΡ и комбинации ОАР:ривароксабана с массовыми отношениями 1:1 и 10:1 добавляли в водный раствор и анализировали с помощью динамического светорассеяния (ДСР) для оценки связывания ΌΆΡ и ривароксабана. Такой же эксперимент выполнили отдельно с апиксабаном (ЕЬ10и18®). отдельно с ΌΑΡ и с комбинациями ОАР:апиксабана с массовыми отношениями 1:1, 10:1 и 100:1. Таким же образом отдельно испытали фондапаринукс (ΑΚΙΧΤΚΑ®), отдельно ΌΑΡ и комбинации фондапаринукса:ОАР с массовыми отношениями 1:1, 10:1 и 100:1. Испытали также отдельно НМГ (бемипарин; ΗΙΒΟΚ®), отдельно ΌΑΡ и комбинации ΗΜΤ:ΌΑΡ с массовыми отношениями 1:1, 10:1 и 100:1. Испытанная концентрация НМГ составила 0,1 мг/мл. Таким образом, испытали ΌΑΡ при 1:1, 0,1 мг/мл, испытали ΌΑΡ при 10:1, 1 мг/мл и испытали ΌΑΡ при 100:1, 10 мг/мл. Кроме того, испытали отдельно дабигатран, отдельно ΌΑΡ и комбинации дабигатрана:ОАР с массовыми отношениями 1:1, 10:1, 100:1, 1000:1 и 10000:1 ΌΑΡ. Наконец, испытали отдельно ΑΚΠΑΤΚΟΒΑΝ®, отдельно ΌΑΡ или комбинации аргатробана:ОАР с массовыми отношениями 1:1, 10:1, 100:1 и 1000:1.

Результаты.

Результаты представлены на фиг. 3 для ривароксабана; на фиг. 4 для апиксабана; на фиг. 5 для фондапаринукса (ΑΚΙΧΤΚΑ®), на фиг. 6 для НМГ и на фиг. 7 для аргатробана. Каждая фигура иллюстрирует индивидуальные пики, представляющие отдельно ΌΑΡ и антикоагулянт в водном растворе. При смешивании антикоагулянта с ΌΑΡ при достаточно высоких массовых отношениях наблюдали изменение размера. В этом анализе даже слабое увеличение размера указывает на физическое взаимодействие между двумя веществами; но для оценки корреляции ίη νίίτο-ίη νίνο использовали только значительные изменения видимого диаметра. Видимый диаметр представляет собой меру степени взаимодействия.

Пример 4. Реверсирующее действие ΌΑΡ на антикоагуляцию НМГ ίη νίνο.

Материалы и способы.

Самцам крыс-альбиносов весом 470 г вводили 10 мг бемипарина (избыточная доза НМГ) подкожной инъекцией. Измеряли время аРТТ в течение 5 ч. Через 4 ч после введения НМГ крысам вводили внутривенную дозу 200 мг/кг ΌΑΡ (100 мг ΌΑΡ).

- 21 027603

Результаты.

При введении НМГ аРТТ увеличилось с 53 до 246 с через 4 ч. Внутривенное введение 200 мг/кг ΌΑΡ (100 мг ΌΑΡ) снизило время аРТТ до значения ниже исходного уровня за 60 мин (фиг. 8).

Пример 5. Реверсирующее действие ΌΑΡ на антикоагуляцию дабигатрана (ΡΚΑΌΑΧΑ®) ш У1уо; испытание избыточной дозы.

Материалы и способы.

Самцам крыс-альбиносов весом 430 г вводили 40 мг/кг ΡΚΑΌΑΧΑ® (20 мг ΡΚΑΌΑΧΑ®; избыточная доза ΡΚΑΌΑΧΑ®) через ротовой зонд. Приблизительно через 2 ч после обработки ΡΚΑΌΑΧΑ® ввели 200 мг/кг ΌΑΡ (100 мг ΌΑΡ) в виде внутривенной болюсной инъекции. Приблизительно через 2 ч крысам ввели дозу 100 мг/кг ΌΑΡ (50 мг ΌΑΡ). Еще через 1 ч крысам ввели еще одну дозу 100 мг/кг ΌΑΡ (50 мг ΌΑΡ). В течение всего экспериментального периода измеряли аРТТ.

Результаты.

Результаты представлены на фиг. 9 и 13. Через 2 ч после введения ΡΚΑΌΑΧΑ® увеличилось с 43 до 81 с, демонстрируя значительное антикоагулирующее действие. 100 мг ΌΑΡ ввели внутривенной болюсной инъекцией, в результате чего аРТТ уменьшилось до значения ниже исходного показателя за 25 мин. Через 2 ч аРТТ снова увеличилось до 79 с, и крысам ввели дозу 50 мг ΌΑΡ. Через 30 мин аРТТ уменьшилось до значения ниже исходного показателя. Оба раза, через 60 мин после введения ΌΑΡ значения аРТТ возвращались к показателям, превышающим исходное значение. После второй дозы ΌΑΡ аРТТ увеличилось до 53 с. Третью дозу ΌΑΡ, 100 мг/кг ΌΑΡ (50 мг ΌΑΡ) ввели внутривенно, и аРТТ снизилось до исходного значения за 20 мин. Фиг. 13 иллюстрирует аналогичный эксперимент, в котором после введения 15,5 мг/кг ΡΚΑΌΑΧΑ® аРТТ уменьшилось до нормального значения примерно за 30 мин после начала обработки 100 мг/кг ΌΑΡ.

Пример 6. Реверсирующее действие ΌΑΡ на антикоагуляцию нефракционированного гепарина (НФГ) ш У1уо.

Материалы и способы.

Самцам крыс-альбиносов весом 515 г вводили 10 мг/кг нефракционированного гепарина (5 мг НФГ) подкожной инъекцией. 200 мг/кг ΌΑΡ (100 мг ΌΑΡ) вводили двумя внутривенными болюсными инъекциями после введения НФГ. Затем крысам ввели дозу 400 мг/кг ΌΑΡ (200 мг ΌΑΡ). В течение всего экспериментального периода измеряли аРТТ.

Результаты.

Как показано на фиг. 10, время аРТТ существенно увеличилось с 28 до 102 с в течение 1 ч после введения гепарина. Внутривенно ввели 100 мг ΌΑΡ, в результате чего время аРТТ через 20 мин увеличилось до 48 с. Через 1 ч аРТТ увеличилось до 120 с, затем внутривенно ввели еще 100 мг ΌΑΡ. Через 15 мин аРТТ уменьшилось до 47 с. Через 1 ч аРТТ увеличилось до 96 с, затем внутривенно ввели дозу 200 мг ΌΑΡ. Через 10 мин аРТТ уменьшилось до 33 с.

Пример 7. Реверсирующее действие ΌΑΡ на антикоагуляцию ривароксабана (ΧΑΚΕΌΤΟ®) ш У1уо.

Материалы и способы.

Крысам перорально вводили 5 мг/кг ривароксабана (ΧΑΚΕΌΤΟ®). Через 4 ч внутривенно вводили 5 мг/кг ΌΑΡ (2 мг ΌΑΡ). аΡΡΤ измеряли в ноль, 15, 30, 45, 60 и 240 мин, до введения ΌΑΡ. аРТТ снова измеряли приблизительно через 5, 10, 25, 35, 45, 60, 120 и 240 мин после введения ΌΑΡ.

Результаты.

Пример 8. Реверсирующее действие ΌΑΡ на антикоагуляцию фондапаринукса (ΑΚΙΧΤΚΑ®) ш У1уо.

Материалы и способы.

Крысам подкожно вводили 5 мг/кг фондапаринукса. Через 2 ч внутривенно вводили 200 мг/кг ΌΑΡ. Активность измеряли с помощью хромогенного анализа фактора Xа с разрешением 510к (ВюрЬеп) через 10, 20, 30 и 60 мин после введения ΌΑΡ.

Результаты.

На фиг. 12 представлено ΌΑΡ-опосредованное реверсирование антикоагуляции фондапаринукса через 10 мин после введения.

Пример 9. Внутривенное введение ΌΑΡ не влияет на аРТТ.

Материалы и способы.

Самцам крыс линии СО с подобранной массой тела внутривенно вводили 0, 2, 10, 25, 50 или 100 мг ΌΑΡ и измеряли аРТТ.

Результаты.

Результаты, представленные на фиг. 16, демонстрируют, что ΌΑΡ, введенный внутривенно, не влияет на аРТТ дозозависимым образом в отсутствие антикоагулянтов. Величины ошибки представляют стандартную погрешность для семи аРТТ измерений, усредненных в течение 90 мин.

Пример 10. Реверсирующее действие ΌΑΡ на антикоагуляцию в модели отсечения хвоста крыс.

Материалы и способы.

Каждой из трех крыс вводили 2 мг ривароксабана. Одной крысе вводили реверсирующее плацебо, не содержащее ΌΑΡ, второй крысе вводили 2,5 мг ΌΑΡ. а третьей вводили 12,5 мг ΌΑΡ. Четвертой крысе

- 22 027603 вводили плацебо с антикоагулянтом и реверсирующими дозами (плацебо). Через 20 мин после введения реверсирующей дозы отсекали 1 мм от кончика хвоста, помещали в солевой раствор комнатной температуры, собирали кровопотери в течение 30 мин и взвешивали.

Такой же прием использовали с 1,25 мг апиксабана (ΕΟρυϊδ®), отдельно или в комбинации с 5 или 12,5 мг ИАР; с 15,5 мг дабигатрана этексилата ^НАВАХА®), отдельно или в комбинации с 5 или 12,5 мг ИАР; и с 5 мг эдоксабана (^IXIΛNΛ®). отдельно или в комбинации с 12,5 мг ИАР.

Результаты.

Результаты представлены на фиг. 15 для ривароксабана, на фиг. 16 - для апиксабана, на фиг. 17 для эдоксабана и на фиг. 18 - для дабигатрана этексилата. Анализ кровотечения при отсечении хвоста крыс аналогичен клинической ситуации, в которой необходимо экстренное реверсирование действия антикоагулянта. Результаты демонстрируют, что ИАР эффективно реверсирует действие антикоагулянта, приводя к статистически значимому снижения кровопотерь, по сравнению с крысами, которым ввели только антикоагулянт.

Пример 11. Реверсирующее действие ИАР на антикоагуляцию ривароксабана (ХАКЕЕТО®) в свежих образцах крови человека ех νίνο.

Материалы и способы.

Образцы крови взяли у добровольца. Ривароксабан при 0,25 мкг/мл добавляли отдельно или в комбинации с 50 мкг/мл ИАР. Контрольные образцы содержали 50 мкг/мл ИАР или солевой раствор. аРТТ измеряли в течение 2 мин после сбора крови.

Результаты.

Фиг. 19 иллюстрирует, что введение ИАР приводит к реверсированию ривароксабаниндуцированной антикоагуляции в свежих образцах крови человека, по результатам измерения аРТТ. Величины ошибки представляют стандартную погрешность для трех независимых экспериментов.

Пример 12. Реверсирующее действие ИАР на антикоагуляцию ривароксабана и апиксабана в плазме человека ех νίνο.

Материалы и способы.

В плазму человека добавляли 218 или 459 мкг/л ривароксабана с или без 1250 или 6250 мкг/л ИАР соответственно. Аналогично, в плазму человека добавляли 156 или 313 мкг/л апиксабана с или без 1156 или 3125 мкг/л ИАР соответственно. Влияние ИАР на антикоагуляцию измеряли с помощью хромогенного анализа антифактора Ха с разрешением 510к компании Вюркегг Концентрации ривароксабана определили сравнением с калибровочными стандартами плазмы, а концентрации апиксабана вывели из разбавлений исходного раствора, поскольку калибровочные стандарты еще не доступны.

Результаты.

Для обеих концентраций ривароксабана и апиксабана, ИАР вызвал возврат эффективной концентрации антикоагулянта до значения ниже минимально эффективной концентрации. На фиг. 20 представлены результаты для ривароксабана, а на фиг. 21 представлены результаты для апиксабана.

Пример 13. Дозозависимое реверсирующее действие ИАР на антикоагуляцию ривароксабана в плазме человека ех νίνο.

Материалы и способы.

В плазму человека добавляли 218 мкг/л ривароксабана, отдельно или в комбинации с 1,25, 12,5, 125 или 1250 мкг/л ИАР. Активность фактора Ха измеряли с помощью хромогенного аналитического набора анти-Ха с разрешением 510к компании ВюрНегг Концентрации ривароксабана определили сравнением с калибровочными стандартами плазмы.

Результаты.

Фиг. 22 иллюстрирует, что ИАР обладает дозозависимой эффективностью в отношении реверсирования антикоагулирующего действия ривароксабана в плазме человека, что демонстрируется его влиянием на концентрацию ривароксабана (измеряли анализом активности фактора Ха).

- 23 027603

1. Соединение формулы (II)

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ или его фармацевтически приемлемая соль, где каждый из Б и Б' представляет собой замещенную или незамещенную С₁-С₁₀-алкиленовую цепь; каждый из М и М' представляет собой замещенную С₁-С₁₀-алкиленовую цепь, при этом указанные заместители в алкиленовой цепи выбраны из С₁-С₁₀-алкила, гидроксила, гидрокси-С₁-С₁₀-алкила, амино, амино-С₁-С₁₀-алкила, С₁-С₁₀-алкокси и С₁-С₁₀-алкил-С₁-С₁₀-алкокси;

каждый из Υ и Υ' представляет собой
2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что указанное соединение представлено формулой (III) или его фармацевтически приемлемая соль.
3. Соединение по п.2, отличающееся тем, что указанное соединение представлено формулой (IV) (ТУ) или его фармацевтически приемлемая соль, где η равен от 3 до 5; т равен от 3 до 6;

С выбран из -ΝΗ₂ и ОН.
4. Соединение по п.3, отличающееся тем, что С представляет собой амино.
5. Соединение по п.1, отличающееся тем, что указанное соединение представлено формулой (V) или его фармацевтически приемлемая соль.
6. Соединение по п.1, отличающееся тем, что указанное соединение представлено формулой (VI) или его фармацевтически приемлемая соль.

- 24 027603
7. Соединение по п.1, отличающееся тем, что указанное соединение представлено формулой (VII) или его фармацевтически приемлемая соль.
8. Соединение по п.1, отличающееся тем, что указанное соединение представлено формулой (VIII) или его фармацевтически приемлемая соль.
9. Фармацевтическая композиция для реверсирования антикоагулирующей терапии, содержащая соединение по любому из пп. 1-8 и фармацевтически приемлемый носитель.
10. Фармацевтическая композиция по п.9, отличающаяся тем, что указанная композиция выполнена с возможностью энтерального введения.
11. Фармацевтическая композиция по п. 10, отличающаяся тем, что указанная композиция выполнена с возможностью перорального введения.
12. Фармацевтическая композиция по п.9, отличающаяся тем, что указанная композиция выполнена с возможностью парентерального введения.
13. Фармацевтическая композиция по п.12, отличающаяся тем, что указанная композиция выполнена с возможностью внутривенного или подкожного введения.
14. Способ полного или частичного реверсирования антикоагулирующего действия ингибитора коагуляции, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-8 или его фармацевтически приемлемой соли.
15. Способ по п.14, отличающийся тем, что указанный ингибитор коагуляции выбран из группы, состоящей из нефракционированного гепарина, низкомолекулярного гепарина (НМГ), ингибитора фактора Па и ингибитора фактора Ха.
16. Способ по п.15, отличающийся тем, что указанный ингибитор коагуляции представляет собой ингибитор фактора Ха.
17. Способ по п.16, отличающийся тем, что указанный ингибитор фактора Ха выбран из группы, состоящей из ривароксабана, апиксабана, эдоксабана и фондапаринукса.
18. Способ по п.14, отличающийся тем, что указанный субъект представляет собой млекопитающее.
19. Способ по п.18, отличающийся тем, что указанный субъект представляет собой человека.
20. Способ по п.14, отличающийся тем, что полное или частичное реверсирование антикоагулирующего действия ингибитора коагуляции измеряют посредством анализа активности антифактора Ха.
21. Способ по п.14, отличающийся тем, что субъект, нуждающийся в этом, представляет собой субъекта с показаниями к экстренному или плановому реверсированию антикоагуляции.
22. Способ по п.21, отличающийся тем, что указанный субъект с показаниями к экстренному или плановому реверсированию антикоагуляции представляет собой субъекта, страдающего от передозировки антикоагулянта, субъекта, страдающего от кровотечения, субъекта, нуждающегося в плановом хирургическом вмешательстве, субъекта, проходящего инвазивную или неинвазивную процедуру, для которой необходима биопсия, субъекта, проходящего процедуру, в которой процедурная ошибка может привести к кровотечению, если субъект остается под действием антикоагулянта, или субъекта, нуждающегося в спинальной или эпидуральной анестезии.
23. Способ по п.21, отличающийся тем, что субъект, нуждающийся в этом, представляет собой субъекта, принимающего антикоагулянты для предупреждения инсульта, в целях хирургических и диагностических процедур, при сердечной аритмии, для предупреждения тромбоза глубоких вен (^VТ), при легочной эмболии или в целом для предупреждения образования патологических сгустков крови.

- 25 027603
24. Способ по п.15, отличающийся тем, что указанный ингибитор коагуляции представляет собой низкомолекулярный гепарин (НМГ), при этом указанный НМГ выбран из группы, состоящей из бемипарина, цертопарина, дальтепарина, эноксапарина, надропарина, парнапарина, ревипарина и тинзапарина.
25. Способ по п.14, отличающийся тем, что указанное соединение или его фармацевтически приемлемую соль вводят в массовом отношении доз от примерно 0,01:1 до примерно 1000:1 соединения или его фармацевтически приемлемой соли к антикоагулянту.
26. Способ по п.25, отличающийся тем, что указанное соединение или его фармацевтически приемлемую соль вводят в массовом отношении доз примерно 10:1 соединения или его фармацевтически приемлемой соли к антикоагулянту.
27. Способ по п.14, отличающийся тем, что указанный способ включает введение по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента.
28. Способ по п.27, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент представляет собой витамин К.
29. Диагностический набор для определения концентрации антикоагулянта в крови, содержащий соединение по любому из пп.1-8 и другие компоненты, упаковку, инструкции и/или реагенты.