EA023678B1 - Агонисты mglu 2/3 - Google Patents

Агонисты mglu 2/3 Download PDF

Info

Publication number
EA023678B1
EA023678B1 EA201491291A EA201491291A EA023678B1 EA 023678 B1 EA023678 B1 EA 023678B1 EA 201491291 A EA201491291 A EA 201491291A EA 201491291 A EA201491291 A EA 201491291A EA 023678 B1 EA023678 B1 EA 023678B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
hexane
cyclopropane
bicyclo
amino
mmol
Prior art date
Application number
EA201491291A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201491291A1 (ru
Inventor
Стивен Ричард Бейкер
Кристофер Дэвид Бидл
Барри Питер Кларк
Джеймс Аллен Монн
Лурдес Прието
Original Assignee
Эли Лилли Энд Компани
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Эли Лилли Энд Компани filed Critical Эли Лилли Энд Компани
Publication of EA201491291A1 publication Critical patent/EA201491291A1/ru
Publication of EA023678B1 publication Critical patent/EA023678B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C55/00—Saturated compounds having more than one carboxyl group bound to acyclic carbon atoms
    • C07C55/26—Saturated compounds having more than one carboxyl group bound to acyclic carbon atoms containing rings other than aromatic rings
    • C07C55/30—Saturated compounds having more than one carboxyl group bound to acyclic carbon atoms containing rings other than aromatic rings containing condensed ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/46—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino or carboxyl groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton
    • C07C229/50—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino or carboxyl groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino groups and carboxyl groups bound to carbon atoms being part of the same condensed ring system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/01—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C233/45—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups
    • C07C233/52—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
    • C07C237/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C237/04—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C237/12—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to an acyclic carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/24—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atom of at least one of the carbamate groups bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/60—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton with the carbon atom of at least one of the carboxyl groups bound to nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/74—Esters of carboxylic acids having an esterified carboxyl group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring
    • C07C69/753—Esters of carboxylic acids having an esterified carboxyl group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring of polycyclic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0606—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing heteroatoms not provided for by C07K5/06086 - C07K5/06139, e.g. Ser, Met, Cys, Thr
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/07—Optical isomers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2602/00—Systems containing two condensed rings
    • C07C2602/02—Systems containing two condensed rings the rings having only two atoms in common
    • C07C2602/14—All rings being cycloaliphatic
    • C07C2602/18—All rings being cycloaliphatic the ring system containing six carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2603/00—Systems containing at least three condensed rings
    • C07C2603/02—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems
    • C07C2603/04—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems containing three rings
    • C07C2603/06—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems containing three rings containing at least one ring with less than six ring members
    • C07C2603/10—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems containing three rings containing at least one ring with less than six ring members containing five-membered rings
    • C07C2603/12—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems containing three rings containing at least one ring with less than six ring members containing five-membered rings only one five-membered ring
    • C07C2603/18—Fluorenes; Hydrogenated fluorenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2603/00—Systems containing at least three condensed rings
    • C07C2603/93—Spiro compounds
    • C07C2603/94—Spiro compounds containing "free" spiro atoms

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

В настоящем изобретении предложены новые агонисты mGlu 2/3 общей формулы Iподходящие для применения для лечения неврологических или психических расстройств.

Description

Настоящее изобретение относится к агонистам т01и 2/3, более конкретно к новому 4-замещенному бицикло[3.1.0]гексану и его пролекарствам, содержащим его фармацевтическим композициям и их терапевтическому применению.
Ь-глутамат является основным возбуждающим нейромедиатором в центральной нервной системе, его называют возбуждающей аминокислотой. Метаботропные глутаматные рецепторы (тО1и) представляют собой рецепторы, сопряженные с О-белком, которые модулируют возбудимость нейронов. Лечение неврологических или психических расстройств было связано с селективной активацией рецепторов возбуждающих аминокислот тО1и. Более конкретно, исследования показывают, что агонисты тО1и 2/3 имеют обезболивающие, антипсихотические, анксиолитические, антидепрессивные и нейропротекторные свойства. Таким образом, эти свойства агонистов тО1и 2/3 могут быть ценными для лечения неврологических расстройств, таких как состояния с хронической болью, или психических расстройств, таких как шизофрения, биполярное расстройство, также известное как маниакально-депрессивное расстройство, генерализованное тревожное расстройство и посттравматическое стрессовое расстройство.
В 00 9717952 предложены некоторые 4-замещенные бицикло[3.1.0]гексановые соединения, которые, как утверждается, являются антагонистами рецепторов возбуждающих аминокислот.
Чрезмерный глутаматергический уровень имеет место при многих болезненных состояниях центральной нервной системы; однако в клинической практике отсутствуют эффективные агенты для коррекции таких патофизиологических состояний. В частности, клиническое применение не было реализовано ввиду отсутствия агонистов тО1и 2/3 с соответствующими подобными лекарственным свойствами. Таким образом, все еще существует потребность в сильных эффективных агонистах тО1и 2/3. В настоящем изобретении предложен новый 4-замещенный бицикло[3.1.0]гексан и его пролекарства, которые являются сильными и эффективными агонистами тО1и 2/3. Конкретные пролекарства, входящие в объем настоящего изобретения, хорошо всасываются после перорального введения и после этого гидролизуются с высвобождением активного метаболита в системный кровоток и, следовательно, подходят для клинических исследований. Такие новые соединения согласно настоящему изобретению могут удовлетворить потребность в сильном эффективном лечении неврологических расстройств, таких как состояния с хронической болью, включая постоянную боль, невропатическую боль, хроническую воспалительную боль или висцеральную боль, или психических расстройств, таких как шизофрения, биполярное расстройство, генерализованное тревожное расстройство или посттравматическое стрессовое расстройство.
В настоящем изобретении предложено соединение формулы I
где
К1 представляет собой водород, К2 представляет собой водород и К3 представляет собой водород;
К1 представляет собой водород, К2 представляет собой (28)-2-аминопропаноил и К3 представляет собой водород;
К1 представляет собой водород, К2 представляет собой (28)-2-амино-4-метилсульфанилбутаноил и К3 представляет собой водород;
К1 представляет собой водород, К2 представляет собой 2-аминоацетил и К3 представляет собой водород;
К1 представляет собой бензил, К2 представляет собой водород и К3 представляет собой бензил; или
К1 представляет собой (2-фторфенил)метил, К2 представляет собой водород и К3 представляет собой (2-фторфенил)метил;
или его фармацевтически приемлемая соль.
В настоящем изобретении предложена (18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль.
В качестве конкретного варианта реализации настоящего изобретения предложена (18,28,5К,68)-2аминоспиро [бицикло [3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан] -2,6-дикарбоновая кислота.
В качестве конкретного варианта реализации настоящего изобретения предложена гидрохлоридная соль (18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты.
В настоящем изобретении предложена (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-аминопропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль.
В качестве конкретного варианта реализации настоящего изобретения предложен гидрохлорид (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-аминопропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты.
В качестве конкретного варианта реализации настоящего изобретения предложена (18,28,5К,68)-2- 1 023678 [[(28)-2-аминопропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновая кислота; 1,4-диоксан (1:0,5); гидрохлорид.
В настоящем изобретении предложена (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-амино-4-метилсульфанилбутаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль.
В качестве конкретного варианта реализации настоящего изобретения предложен гидрохлорид (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-амино-4-метилсульфанилбутаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан] -2,6-дикарбоновой кислоты.
В настоящем изобретении предложена (18,28,5К,68)-2-[(2-аминоацетил)амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль.
В качестве конкретного варианта реализации настоящего изобретения предложен гидрохлорид (18,28,5К,68)-2-[(2-аминоацетил)амино]спиро[бицикло [3.1.0]гексан-4,1 '-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты.
В настоящем изобретении предложен дибензил-(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилат или его фармацевтически приемлемая соль.
В качестве конкретного варианта реализации настоящего изобретения предложен дибензил(18,28,5К,68)-2-аминоспиро [бицикло [3.1.0]гексан-4,1 '-циклопропан] -2,6-дикарбоксилат; 1,4-диоксан;
гидрохлорид.
В настоящем изобретении предложен бис-[(2-фторфенил)метил]-(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилат или его фармацевтически приемлемая соль.
В качестве конкретного варианта реализации настоящего изобретения предложен гидрохлорид бис[(2-фторфенил)метил](18,28,5К,68)-2-аминоспиро-[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилата.
В настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая (18,28,5К,68)-2аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль, (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-аминопропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль, (18,28,5К,68)-2-[[(28)2-амино-4-метилсульфанилбутаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль, (18,28,5К,68)-2-[(2-аминоацетил)амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль, дибензил-(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6дикарбоксилат или его фармацевтически приемлемую соль или бис-[(2-фторфенил)метил]-(18,28,5К,68)2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилат или его фармацевтически приемлемую соль совместно с фармацевтически приемлемым носителем и, необязательно, другими терапевтическими ингредиентами.
В настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая (18,28,5К,68)-2аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль, (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-аминопропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбонову ю кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль, (18,28,5К,68)-2-[[(28)2-амино-4-метилсульфанилбутаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль, (18,28,5К,68)-2-[(2-аминоацетил)амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль, дибензил-(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6дикарбоксилат или его фармацевтически приемлемую соль или бис-[(2-фторфенил)метил](18,28,5К,68)2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилат или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество.
В настоящем изобретении предложен способ лечения неврологического или психического расстройства, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества (18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли, (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-аминопропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли, (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-амино-4-метилсульфанил бутаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли, (18,28,5К,68)-2-[(2аминоацетил)амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли, дибензил-(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'циклопропан]-2,6-дикарбоксилата или его фармацевтически приемлемой соли или бис-[(2-фторфенил)метил]-(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилата или его фармацевтически приемлемой соли.
В настоящем изобретении предложено применение (18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли, (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-аминопропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-ди- 2 023678 карбоновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли, (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-амино-4метилсульфанилбутаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли, (18,28,5К,68)-2-[(2-аминоацетил)амино]спиро[бицикло [3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли, дибензил-(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилата или его фармацевтически приемлемой соли или бис-[(2-фторфенил)метил]-(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилата или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения неврологического или психического расстройства.
В настоящем изобретении предложены (18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'циклопропан]-2,6-дикарбоновая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль, (18,28,5К,68)-2[[(28)-2-аминопропаноил]-амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль, (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-амино-4-метилсульфанил бутаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль, (18,28,5К,68)-2-[(2-аминоацетил)амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль, дибензил-(18,28,5К,68)-2аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилат или его фармацевтически приемлемая соль или бис-[(2-фторфенил)метил]-(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'циклопропан]-2,6-дикарбоксилат или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии. В настоящем изобретении также предложены (18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'циклопропан]-2,6-дикарбоновая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль, (18,28,5К,68)-2[[(28)-2-аминопропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль, (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-амино-4-метилсульфанилбутаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль, (18,28,5К,68)-2-[(2-аминоацетил)амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'циклопропан]-2,6-дикарбоновая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль, дибензил(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилат или его фармацевтически приемлемая соль или бис-[(2-фторфенил)метил]-(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилат или его фармацевтически приемлемая соль для применения для лечения неврологического или психического расстройства.
Кроме того, в настоящем изобретении предложены предпочтительные варианты реализации способов и применения, описанных в настоящем документе, в которых неврологическое расстройство выбрано из группы, состоящей из постоянной боли, невропатической боли, хронической воспалительной боли и висцеральной боли, а психическое расстройство выбрано из группы, состоящей из шизофрении, биполярного расстройства, генерализованного тревожного расстройства и посттравматического стрессового расстройства.
Следует понимать, что следующие термины, указанные выше и во всем описании изобретения, если не указано иначе, имеют следующие значения.
Соединение(я) согласно изобретению и соединение(я) согласно настоящему изобретению включают пролекарства, активные соединения и/или активные метаболиты. Пролекарство представляет собой класс лекарственных средств, исходно находящихся в неактивной форме, которая затем превращается в активную форму в организме путем нормальных метаболических процессов, где по меньшей мере один из К1, К2 и К3 в формуле I отличен от водорода (например, К1 представляет собой водород, К2 представляет собой (28)-2-аминопропаноил и К3 представляет собой водород; К1 представляет собой водород, К2 представляет собой (28)-2-амино-4-метилсульфанилбутаноил, и К3 представляет собой водород; К1 представляет собой водород, К2 представляет собой 2-аминоацетил, и К3 представляет собой водород; К1 представляет собой бензил, К2 представляет собой водород, и К3 представляет собой бензил; или К1 представляет собой (2-фторфенил)метил, К2 представляет собой водород, и К3 представляет собой (2-фторфенил)метил). Активное соединение или активное представляет собой другое название активной формы, вводимой в организм, например, внутривенно или внутрибрюшинно, где К1, К2 и К3 в формуле I представляют собой водород. Активный метаболит представляет собой другое название для активной формы, полученной в результате такого превращения пролекарства в организме путем нормальных метаболических процессов, где К1, К2 и К3 в формуле I представляют собой водород.
Фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество представляет собой среду, обычно принятую в данной области для доставки биологически активных агентов млекопитающим, например людям.
Термин фармацевтически приемлемые соли обозначает относительно нетоксичные неорганические и органические соли соединений согласно настоящему изобретению.
Терапевтически эффективное количество или эффективное количество означает количество соединения или его фармацевтически приемлемой соли согласно настоящему изобретению или фармацевтической композиции, содержащей соединение или его фармацевтически приемлемую соль согласно настоящему изобретению, которое вызывает биологический или медицинский ответ или необходимый
- 3 023678 терапевтический эффект на ткань, систему, животное, млекопитающее или человек, оцениваемый исследователем, ветеринаром, врачом или другим клиницистом.
Термины лечение, лечить, лечащий и т.п., согласно своему значению, включают замедление или обращение прогрессирования (восстановление от) расстройства. Данные термины включают смягчение, облегчение, ослабление, устранение или уменьшение одного или более симптомов расстройства или состояния, даже если указанное расстройство или состояние на самом деле не устранено и даже если прогрессирование расстройства или состояния само не замедляется или не направляется в обратную сторону.
Согласно стандартной номенклатуре, применяемой в настоящем описании, сначала описывается конечная часть обозначаемой боковой цепи, а потом указывается прилегающая функциональная группа по отношению к точке присоединения. Например, метилсульфонильный заместитель эквивалентен СН3О2-.
Соединения согласно настоящему изобретению способны вступать в реакцию, например, с рядом неорганических и органических кислот с получением фармацевтически приемлемых солей присоединения кислот и солей присоединения оснований. Такие фармацевтически приемлемые соли и общая методология их получения хорошо известны в данной области (см., например, Р. 8!аЬ1 е! а1., ΗΛΝΏΒΘΘΚ ОР РНАКМАСЕиТТСЛЬ 8АЬТ8: РКОРЕКТ1Е8, 8Е1.ЕСТ1ОХ ΛΝΏ И8Е, (УСНАЖПеу-УСН, 2002); 8.М. Вегде е! а1., РЬаттасеиЬса1 8аЙ5, 1оитиа1 оГ РЬаттасеийса1 8с1еисе8, Уо1 66, Νο. 1, 1аииату 1977).
Соединения согласно настоящему изобретению предпочтительно готовят в виде фармацевтических композиций с применением фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ и вводят различными путями. Предпочтительно такие композиции предназначены для перорального или внутривенного введения. Такие фармацевтические композиции и способы их получения хорошо известны в данной области (см., например, КеиппдЮп: ТЬе 8шеисе аиб РгасЬсе οί РЬаттасу (А. Сеииато, е! а1., еб§., 21δΐ еб., Маск РиЪЬкЬшд Со., 2005)).
Фактически вводимое соединение согласно настоящему изобретению будет определяться лечащим врачом в рамках соответствующих условий, включая состояние, подлежащее лечению, выбранный способ введения, конкретное(ые) вводимое(ые) соединение или соединения согласно настоящему изобретению, возраст, вес и реакцию отдельного пациента и тяжесть симптомов у пациента. Дозировки в день обычно находятся в диапазоне от примерно 0,1 до примерно 300 мг. В некоторых случаях уровни доз ниже нижнего предела вышеуказанного диапазона могут быть более чем достаточными, тогда как в других случаях могут быть использованы еще более высокие дозы.
Соединения согласно настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемые соли могут быть получены различными способами, известными в данной области техники, а также способами, которые описаны ниже в разделах под заголовками Пример получения и Пример. Конкретные стадии синтеза для каждого из описанных путей, могут быть объединены различными способами для получения соединений согласно настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемых солей.
Заместители, если не указано иное, являются такими, как определено ранее. Реагенты и исходные вещества, как правило, легко доступны любому специалисту в данной области. Остальное может быть получено с помощью стандартных методик органической химии и химии гетероциклических соединений, методик, аналогичных синтезу известных структурно похожих активных соединений и пролекарств, а также методик, описанных в Примерах получения и Примерах, включая любые новые методики. Названия, приведенные в Примерах получения и Примерах, сформированы с помощью программы 8утух Ога\у 3.1.
В настоящем документе следующие термины имеют указанные значения: ВЭЖХ обозначает высокоэффективную жидкостную хроматографию; ЖХ обозначает жидкостную хроматографию; МС (ЭР+) обозначает масс-спектроскопию с ионизацией электрораспылением; МС обозначает спектроскопию; СФХ обозначает сверхкритическую флюидную хроматографию; ЯМР обозначает ядерный магнитный резонанс; ТСХ обозначает тонкослойную хроматографию; КТ обозначает время удерживания; УФ обозначает ультрафиолет; ЭДТА обозначает этилендиаминтетрауксусную кислоту; РВ8 обозначает фосфатно-солевой буфер; ПЦР обозначает полимеразную цепную реакцию; СКО обозначает сильный катионный обмен и ГЛБ обозначает гидрофильно-липофильный баланс.
Пример получения 1 ди-трет-Бутил-(18,28,5К,68)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-4-метиленбицикло[3.1.0]гексан-2,6дикарбоксилат
В круглодонную колбу вместимостью 250 мл, высушенную в сушильном шкафу, помещали бромид метилтрифенилфосфония (5,41 г, 14,9 ммоль) и тетрагидрофуран (93 мл). Охлаждали суспензию до 0°С и
- 4 023678 по каплям добавляли 1М раствор бис-(триметилсилил)амид натрия в тетрагидрофуране (16,08 мл, 16,08 ммоль). Полученную смесь ярко-желтого цвета перемешивали при 0°С в течение 20 мин, после чего добавляли раствор ди-трет-бутил-(18,2§,5К,6§)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-4-оксобицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата (5,09 г, 12,4 ммоль, подробности синтеза см. νθ 03/104217/А2) в тетрагидрофуране (31 мл). Позволяли реакционной смеси нагреться до комнатной температуры и проводили перемешивание в течение 16 ч. Смесь распределяли между этилацетатом (500 мл) и водой (350 мл). Водную фазу удаляли, а органическую фазу промывали солевым раствором (200 мл). Органическую фазу сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при повышенном давлении. Проводили очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетат:изогексан (от 5:95 до 20:80) с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета (4,84 г, 11,2 ммоль). 'Н ЯМР (СБС13) δ 1,45 (т, 27Н), 1,87 (ί, 1=2,9 Гц, 1Н), 1,98 (т, 1Н), 2,43 (т, 2Н), 3,07 (ушир. т, 1Н), 4,86 (ушир. к, 1Н), 5,03 (ά, 1=2 Гц, 1Н), 5,1-5,3 (ушир. к, 1Н).
Пример получения 2 ди-трет-Бутил-(18,2§,5К,6§)-2-(трет-бугоксикарбониламино)спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан] -2,6-дикарбоксилат
Готовили безэтанольный раствор диазометана в диэтиловом эфире путем загрузки в пальцеобразный холодильник аппарата мини-Дизальд компании Αΐάπαΐι сухого льда и изопропанола, наполняя его на одну треть. В находящуюся в аппарате реакционную смесь помещали раствор гидроксида калия (740 мг, 13,2 ммоль) в воде (1,5 мл). К данному раствору добавляли смесь моноэтилового эфира диэтиленгликоля (4 мл) и диэтилового эфира (2,4 мл). Н-метил-И'-нитро-Н-нитрозогуанидин (1 г, 6,8 ммоль) растворяли в смеси диэтилового эфира (13 мл) и моноэтилового эфира диэтиленгликоля (4 мл). Данный раствор помещали в капельную воронку с притертыми шлифами и соединяли с аппаратом мини-Дизальд. Раствор гидроксида калия нагревали на водяной бане, в которой поддерживалась температура 70°С, контролируя, что и приемная колба, и воздуховод, наполненный диэтиловым эфиром на выходе из аппарата, охлаждаются в бане с сухим льдом/изопропанолом. Обеспечивали добавление раствора Н-метил-Н'-нитро-Ынитрозогуанидин со скоростью, равной скорости итоговой дистилляции. После завершения дистилляции через капельную воронку по каплям добавляли дополнительное количество диэтилового эфира до тех пор, пока конденсат в пальцеобразном холодильнике становился бесцветным. Полученный раствор выдерживали в бане с сухим льдом/изопропанолом до востребования. Ацетат палладия (17,2 мг; 76,5 мкмоль) суспендировали в диэтиловом эфире (10 мл). Полученный раствор бледно-коричневого цвета декантировали, фильтровали и аккуратно добавляли к смеси диазометанового раствора ди-трет-бутил(18,2§,5К,6§)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-4-метиленбицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата (330 мг, 765,5 мкмоль) и диэтилового эфира (10 мл), которую выдерживали до достижения комнатной температуры. После прекращения выделения газа полученную суспензию фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 260 мг смеси непрореагировавшего ди-трет-бутил-(18,2§,5К,6§)-2(трет-бутоксикарбониламино)-4-метиленбицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата и указанного в заголовке соединения.
Готовили безэтанольный раствор диазометана в диэтиловом эфире из раствора гидроксида калия (2,5 г, 44,6 ммоль) в воде (4 мл), моноэтилового эфира диэтиленгликоля (14 мл) и диэтилового эфира (8 мл) и Н-метил-Н'-нитро-Ы-нитрозогуанидина (4 г, 27,2 ммоль) в смеси диэтилового эфира (30 мл) и моноэтилового эфира диэтиленгликоля (15 мл). Брали полученный раствор диазометана и добавляли его по частям в течение 30 мин в суспензию ацетата палладия (20 мг, 89,1 мкмоль) в растворе ранее приготовленной смеси непрореагировавшего ди-трет-бутил-(18,2§,5К,6§)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-4-метиленбицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата и указанного в заголовке соединения (260 мг) в диэтиловом эфире (3 мл). После прекращения выделения газа смесь выдерживали в течение ночи, после чего фильтровали через фритту разделителя фаз и концентрировали при пониженном давлении с получением темного масла. Проводили очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетат:изогексан (от 0:100 до 75:25) с получением 185 мг смеси непрореагировавшего ди-трет-бутил(18,2§,5К,6§)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-4-метиленбицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата и указанного в заголовке соединения.
Готовили безэтанольный раствор диазометана в диэтиловом эфире из раствора гидроксида калия (3,2 г, 57 ммоль) в воде (5 мл), моноэтилового эфира диэтиленгликоля (4 мл) и диэтилового эфира (10 мл) и Н-метил-№-нитро-Н-нитрозогуанидина (5 г, 34 ммоль) в смеси диэтилового эфира (35 мл) и моноэтилового эфира диэтиленгликоля (15 мл). К полученному раствору диазометана по частям в течение 60 мин добавляли суспензию ацетата палладия (20 мг, 89,1 мкмоль) в растворе предварительно приготовленной смеси непрореагировавшего ди-трет-бутил-(18,2§,5К,6§)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-4-метиленби- 5 023678 цикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата и указанного в заголовке соединения (185 мг) в диэтиловом эфире (2 мл). После прекращения выделения газа смесь выдерживали в течение 30 мин, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением масла желтого цвета. Проводили очистку посредством ВЭЖХ с распределением по массе (КТ = 6,4 мин (УФ)), 6,37 мин (МС); колонка ЖХ: \Уа1ег5 ХВйбде™ 30 ммх100 мм 5 мкм; вода ν/0,1% муравьиная кислота; градиент: 28-62% ацетонитрил ν/0,1% муравьиная кислота за 1,35 мин, далее 62-95% за 6,65 мин, далее поддержание на уровне 95% в течение 3,55 мин. Температура колонки: температура окружающей среды; скорость потока: 45 мл/мин, с получением указанного в заголовке продукта в виде бесцветного масла (55,3 мг, 130,6 мкмоль). МС (т/ζ): 446 (М+23).
Пример получения 3
Диэтил-(18,28,5К,68)-2-амино-4-оксобицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилат
В трехгорлую колбу вместимостью 500 мл, снабженную холодильником, устройством для впуска азота и термоментром, помещали ди-трет-бутил-(18,28,5К,68)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-4-оксобицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилат (15 г, 36,4 ммоль) а этаноле (365 мл). К перемешиваемому раствору при комнатной температуре через шприц добавляли тионилхлорид (13,3 мл, 182,3 ммоль) (небольшой экзотермический эффект), после чего нагревали до кипения. Через 24 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в дихлорметане (50 мл) и далее концентрировали на роторном испарителе (повторяли 3 раза). Остаток распределяли между этилацетатом (200 мл) и насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (150 мл). Органическую фазу промывали солевым раствором (150 мл), сушили над сульфатом натрия, далее фильтровали концентрат досуха с получением указанного в заголовке соединения в виде масла (8,24 г, 32,3 ммоль). МС (т/ζ): 256 (М+1).
Пример получения 4
Диэтил-(18,28,5К,68)-2-ацетамидо-4-оксобицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилат
К перемешиваемому раствору диэтил-(18,28,5К,68)-2-амино-4-оксобицикло[3.1.0]гексан-2,6дикарбоксилата (7,2 г, 28,2 ммоль) и триэтиламина (7,9 мл, 56,4 ммоль) в сухом дихлорметане (72 мл) добавляли ангидрид уксусной кислоты (5 мл, 50,8 ммоль) при комнатной температуре. Через 2 ч реакцию гасили водой (100 мл) и интенсивно перемешивали реакционную смесь в течение 20 мин. Отделяли дихлорметановый слой через гидрофобную фритту и проводили выпаривание с получением масла светлокоричневого цвета (9,6 г). Проводили очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетат:изогексан (от 70:30 до 90:10) с получением указанного в заголовке соединения в виде стеклообразного вещества бледно-желтого цвета, которое вспенивается при сушке (6,53 г, 22 ммоль). МС (т/ζ): 298 (М+1), 320 (М+23), 617 (2М+23).
Пример получения 5
Диэтил-(18,28,5К,68)-2-ацетамидо-4-метиленбицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилат
В круглодонную колбу вместимостью 250 мл, высушенную в сушильном шкафу, помещали бромид (метил)трифенилфосфония (9,72 г, 26,7 ммоль) и сухой тетрагидрофуран (122 мл). Суспензию охлаждали до температуры от 0 до -5°С и по каплям обрабатывали 2М бис-(триметилсилил)амидом натрия в тетрагидрофуране (13,3 мл, 26,7 ммоль). Полученную смесь ярко-желтого цвета перемешивали при 0°С в течение 20 мин, далее обрабатывали раствором диэтил-(18,28,5К,68)-2-ацетамидо-4-оксобицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата (6,1 г, 20,5 ммоль) в тетрагидрофуране (30 мл). Реакционной смеси позволяли медленно остыть до комнатной температуры в течение 3 ч. После перемешивания в течение 20 ч при комнатной температуре реакцию гасили ледяной водой (200 мл) и проводили экстракцию этилацетатом (200 мл). Экстракты промывали водой (100 мл), солевым раствором (100 мл), сушили, фильтровали и упаривали с получением масла темно-коричневого цвета. Добавляли диэтиловый эфир (70 мл) и изогексан (20 мл) и обрабатывали раствор оксидом трифенилфосфина. Смесь выдерживали в течение 2 ч,
- 6 023678 раствор декантировали, добавляли диоксид кремния и проводили концентрирование под вакуумом. Проводили очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетат:изогексан (от 60:40 до 80:20) с получением масла розового цвета (6,81 г), содержащего примесь оксида трифенилфосфина. Проводили повторную очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетат:изогексан (60:40) с получением указанного в заголовке соединения в виде вязкого масла желтого цвета (3,98 г, 13,5 ммоль). МС (т/ζ): 296 (М+1), 318 (М+23), 613 (2М+23).
Пример получения 6
Диэтил-(18,2§,5К,6§)-2-ацетамидоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилат
К охлажденному (ледяная баня) перемешиваемому раствору диэтилцинка (1М в гептане) (25 мл, 25 ммоль) в дихлорметане (12,5 мл) очень медленно по каплям добавляли раствор трифторуксусной кислоты (1,9 мл, 25 ммоль) в дихлорметане (12,5 мл) в атмосфере азота. Через 10 мин добавляли раствор дииодметана (2,01 мл, 25 ммоль) в дихлорметане (12,5 мл). Через 10 мин добавляли раствор диэтил(18,2§,5К,6§)-2-ацетамидо-4-метиленбицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилат (2,46 г, 8,3 ммоль) в дихлорметане (12,5 мл). Через 60 мин ледяную баню удаляли и оставляли реакционную смесь перемешиваться в течение ночи при комнатной температуре. Прозрачный реакционный раствор гасили, добавляя по каплям реакционную смесь в 0,2 М водный раствор хлороводородной кислоты (200 мл) при интенсивном перемешивании. Через 1 ч дихлорметановый слой отделяли, промывали солевым раствором, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением необходимого продукта, содержащего примесь непрореагировавших исходных веществ (4,4 г). Проводили очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетат:циклогексан (от 50:50 до 100:0) с получением бесцветного масла (3,1 г). Проводили очистку посредством СФХ (КТ = 2,48 мин (УФ, 200 нм); колонка ВЭЖХ: ΆΌ-Η 30 ммх250 мм 5 мкм; СО2 градиент: 5% изопропиловый спирт ν/0,2% диметилэтиламин в течение 0,5 мин, далее 5%-27% в течение 2,2 мин; температура колонки: 35°С; давление: 100000 кПа; скорость потока: 210 мл/мин, с получением непрореагировавшего диэтил-(18,2§,5К,6§)-2ацетамидо-4-метиленбицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата (580 мг, 2,0 ммоль) и указанного в заголовке соединения (1,82 г, 5,9 ммоль). МС (т/ζ): 310 (М+1), 332 (М+23).
Пример получения 7
Диэтил-(18,2§,5К,6§)-2-амино-4-метиленбицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилат
Способ 1
Готовили приблизительно 1М раствор хлороводорода в этаноле путем добавления по каплям триметилсилилхлорида (13,8 мл, 108 ммоль) к этанолу (110 мл). В данном кислотном растворе растворяли ди-трет-бутил-(18,2§,5К,6§)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-4-метиленбицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилат (7,4 г, 18,1 ммоль) и нагревали до 60°С в течение 16 ч. Проводили выпаривание с получением вязкого масла желтого цвета, повторное растворение в воде (50 мл) и фильтрование мутного раствора для удаления следов нерастворимых веществ. Водный кислый раствор нейтрализовали нейтрализовали бикарбонатом натрия (8,4 г, 0,1 моль) и проводили экстракцию дихлорметаном (2x100 мл). Объединенные дихлорметановые растворы сушили с применением гидрофобной фритты и выпаривали с получением жидкости бледно-желтого цвета (4,14 г). Проводили очистку посредством хроматографии на диоксиде кремения с присоединенными аминогруппами, элюируя смесью этилацетат:изогексан (от 20:80 до 80:20) с получением бесцветной жидкости (3,6 г). Проводили повторную очистку посредством хроматографии на диоксиде кремения с присоединенными аминогруппами, элюируя смесью этилацетат:изогексан (20:80) с получением указанного в заголовке продукта в виде бесцветной жидкости (2,81 г, 61%). МС (т/ζ): 254 (М+1).
Способ 2
Моногидрат η-толуолсульфоновой кислоты (6,97 г, 36,6 ммоль) сушили под вакуумом при 50°С в течение 3 дней. Добавляли его к перемешиваемому раствору ди-трет-бутил-(18,2§,5К,6§)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-4-метиленбицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата (5,0 г, 12,2 ммоль) в этаноле (35,5 мл) и нагревали до 60°С в течение 3 дней. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением остатка. Полученный остаток помещали в воду (100 мл), подщелачивали с применением бикарбоната натрия и проводили экстракцию дихлорметаном (3x100 мл). Экстракты сушили над сульфатом натрия, фильтровали и далее концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке продукта в виде остатка оранжевого цвета (1,52 г, 51%). МС (т/ζ): 254 (М+1).
- 7 023678
Пример получения 8
Диэтил-(18,28,5К,68)-2-(9Н-флуорен-9-илметоксикарбониламино)-4-метиленбицикло[3.1.0]гексан2,6 -дикарбо ксилат
К перемешиваемому раствору диэтил-(18,28,5К,68)-2-амино-4-метиленбицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата (2,8 г, 11,1 ммоль) и бикарбоната натрия (2,04 г, 24,3 ммоль) в тетрагидрофуране (28 мл) и воды (8,4 мл) по частям в течение 5 мин добавляли твердый 9-флуоренилметилхлорформиат (3,15 г, 12,2 ммоль) при охлаждении до 0-5°С. Через 1 ч добавляли воду (10 мл) и проводили экстракцию этилацетатом (50 мл). Экстракт промывали солевым раствором (20 мл), сушили, фильтровали и упаривали с получением масла бледно-желтого цвета (6,5 г). Проводили очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетат:изогексан (от 10:90 до 20:80) с получением вязкого бесцветного масла (4,58 г). Проводили повторную очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетат:изогексан (20:80) с получением указанного в заголовке соединения в виде полутвердой пены белого цвета (4,22 г, 80%). МС (т/ζ): 476 (М+1).
Пример получения 9
Диэтил-(18,28,5К,68)-2-(9Н-флуорен-9-илметоксикарбониламино)спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'циклопропан] -2,6-дикарбоксилат
К перемешиваемому раствору 1М диэтилцинка в гептане (23,3 мл, 23,3 ммоль) в дихлорметане (11,7 мл), охлажденному до 0-5°С, в атмосфере азота по каплям в течение 5 минут добавляли раствор трифторуксусной кислоты (2,66 г, 23,3 ммоль) в дихлорметане (11,7 мл) (экзотермическая реакция). Через 10 мин добавляли раствор дииодметана (6,25 г, 23,3 ммоль) в дихлорметане (11,7 мл). Через 10 мин добавляли раствор диэтил-(18,28,5К,68)-2-(9Н-флуорен-9-илметоксикарбониламино)-4-метиленбицикло [3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата (3,70 г, 7,8 ммоль) в дихлорметане (11,7 мл). Через 2 ч выдерживания при 0°С реакционной смеси позволяли нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 ч. Реакционную смесь гасили холодной 0,5М хлороводородной кислотой (50 мл) и дихлорметаном (20 мл) и интенсивно перемешивали. Дихлорметановый слой отделяли через гидрофобную фритту и далее выпаривали с получением масла бледно-желтого цвета. Проводили очистку посредством флэшхроматографии, элюируя смесью этилацетагизогексан (от 10:90 до 20:80) с получением бесцветного масла (3,49 г). Проводили повторную очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетат:изогексан (20:80), отбирая центральные фракции с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветной пены (2,12 г, 56%). МС (т/ζ): 490 (М+1). Вторую партию продукта из менее чистых фракций получали посредством повторной хроматографии (363 мг, дополнительные 9%).
Пример получения 10
Диэтил-(18,28,5К,68)-2-бензилоксикарбониламино-4-оксобицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилат
Способ 1
К раствору диэтил-(18,28,5К,68)-2-амино-4-оксобицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата (16,2 г, 63,5 ммоль) в дихлорметане (500 мл) добавляли дибензилдикарбонат (18,6 мл, 76,1 ммоль), далее по каплям добавляли триэтиламин (10,6 мл, 76,1 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин, после чего промывали 1 н. хлороводородной кислотой (200 мл). Дихлорметановую фазу промывали солевым раствором, разделяли и концентрировали под вакуумом. Проводили очистку посредством флэш- 8 023678 хроматографии, элюируя смесью этилацетат:изогексан (от 0:100 до 75:25) с получением указанного в заголовке продукта (11,6 г, 47%). МС (т/ζ): 388 (М+1), 410 (М+23).
Способ 2
В круглодонную колбу помещали гидрохлорид диэтил-(18,28,5К,68)-2-амино-4-оксобицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата (226,86 г, 777,65 ммоль), воду (1,13 л) и тетрагидрофуран (1,13 л). Медленно добавляли бикарбонат натрия (143,72 г, 1,71 моль), разделив на 5 частей (наблюдая выделение СО2 и температуру внутри колбы от 31 до 25°С). Далее добавляли раствор бензилхлорформиата (120,6 мл, 855,42 ммоль) в тетрагидрофуране (226,9 мл) и поддерживали температуру внутри колбы ниже 28°С (10 мин), перемешивая реакционную смесь при 25°С в течение 1 ч. Смесь наливали в метил-трет-бутиловый эфир (1,25 л). Слои разделяли, проводили экстракцию водным раствором этилацетата (750 мл) и удаляли водную фазу. Смесь промывали солевым раствором, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали досуха с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (302,82 г, 777,65 ммоль). МС (т/ζ): 388 (М+1).
Пример получения 11
Диэтил-(18,28,5К,68)-2-бензилоксикарбониламино-4-метиленбицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилат
Способ 1
В высушенную в сушильном шкафу круглодонную колбу вместимостью 500 мл помещали бромид (метил)трифенилфосфония (15,4 г, 43,1 ммоль) и сухой тетрагидрофуран (112 мл). Полученную суспензию охлаждали до температуры от 0 до -5°С и по каплям обрабатывали 2М раствором бис-(триметилсилил)амида натрия в тетрагидрофуране (23 мл, 46 ммоль). Полученную суспензию ярко-желтого цвета перемешивали при температуре 0°С в течение 30 мин, после чего обрабатывали раствором диэтил(18,28,5К,68)-2-бензилоксикарбониламино-4-оксобицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата (11,2 г, 28,8 ммоль) в тетрагидрофуране (22,4 мл). Реакционной смеси позволяли медленно нагреться до комнатной температуры. Через 4 ч реакцию гасили льдом (120 г), солевым раствором (120 мл) и проводили экстракцию этил ацетатом (250 мл). Экстракты промывали солевым раствором (2x100 мл), сушили, фильтровали и упаривали с получением масла красного цвета. Проводили повторное растворение в диэтиловом эфире (100 мл) и медленно по частям добавляли изогексан (80 мл) с обеспечением осаждения оксида трифенилфосфина в виде полутвердого вещества красного цвета (5,2 г). Раствор обрабатывали сухим диоксидом кремния (~50 г) и концентрировали досуха. Проводили очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетагизогексан (20:80) с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного вязкого масла (7,37 г, 66%). МС (т/ζ): 388 (М+1), 410 (М+23).
Способ 2
К суспензии бромида (метил)трифенилфосфония (340,16 г, 933,18 ммоль) в тетрагидрофуране (1,82 Ь) при комнатной температуре добавляли трет-бутоксид калия (104,72 г, 933,18 ммоль) (изменений во внутренней температуре не было). Далее добавляли раствор диэтил-(18,28,5К,68)-2-бензилоксикарбониламино-4-оксо-бицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата (302,82 г, 777,65 ммоль) в тетрагидрофуране (1,82 л), поддерживая температуру на уровне 24°С. Смесь перемешивали при 50°С в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (1,5 л), промывали водой (2x3 л) и солевым раствором. Органическую фазу сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением масла темнокоричневого цвета. Проводили очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетатом:гексан (9:1) с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (183,35 г, 473,25 ммоль). МС (т/ζ): 388 (М+1), 410 (М+23).
Пример получения 12
Диэтил-(18,28,5К,68)-2-бензилоксикарбониламиноспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]2,6-дикарбо ксилат
- 9 023678
Способ 1
К перемешиваемому раствору трифторуксусной кислоты (4,27 мл, 56,5 ммоль) в дихлорметане (73 мл), охлажденному до 0-5°С в атмосфере азота, по каплям медленно в течение 10 мин добавляли раствор 1М диэтилцинка в гептане (64,1 мл, 64,1 ммоль) в дихлорметане (14,6 мл). Через 10 мин добавляли раствор дииодметана (4,6 мл, 56,5 ммоль) в дихлорметане (14,6 мл). Через 10 мин добавляли раствор диэтил(18,28,5К,68)-2-бензилоксикарбониламино-4-метиленбицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата (7,3 г, 18,8 ммоль) в дихлорметане (14,6 мл). Через 1 ч ледяную баню удаляли и оставляли мутный раствор перемешиваться в течение 20 ч при комнатной температуре. Через 24 ч реакционную смесь гасили ледяным 0,5М водным раствором хлороводородной кислоты (160 мл, 80 ммоль) и дихлорметаном (200 мл) и интенсивно перемешивали полученную смесь. Отделяли дихлорметановый слой и далее сушили дихлорметановую фазу, фильтруя через 2 гидрофобные фритты. Проводили выпаривание с получением масла бледно-желтого цвета, которое в течение ночи стало коричневым. Проводили очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетагизогексан (20:80) с получением указанного в заголовке соединения в виде смеси с непрореагировавшим диэтил-(18,28,5К,68)-2-бензилоксикарбониламино-4метиленбицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилатом в виде бесцветного масла (5,1 г).
К перемешиваемому раствору 1М диэтилцинка в гептане (38,7 мл, 38,7 ммоль) в дихлорметане (50 мл), охлажденном до 0-5°С в атмосфере азота по каплям медленно в течение 10 мин добавляли раствор трифторуксусной кислоты (2,93 мл, 38,7 ммоль) в дихлорметане (10 мл). Через 10 мин к реакционной смеси добавляли раствор дииодметана (3,12 мл, 38,7 ммоль) в дихлорметане (10 мл). Через 10 мин добавляли раствор смеси олефина и диэтил-(18,28,5К,68)-2-бензилоксикарбониламиноспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилата (5 г, 12,9 ммоль) в дихлорметане (10 мл). Через 1 ч ледяную баню удаляли и полученный мутный раствор оставляли перемешиваться в течение 16 ч при комнатной температуре. Через 20 ч реакционную смесь гасили ледяным 0,5М хлороводородом (140мл, 70 ммоль) и дихлорметаном (160 мл) и интенсивно перемешивали реакционную смесь. Дихлорметановый слой промывали 0,5М водным раствором хлороводородной кислоты (100 мл), сушили над сульфатом натрия и далее фильтровали через 2 гидрофобные фритты. Проводили выпаривание с получением масла бледно-желтого цвета (5,89 г). Проводили очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетат:изогексан (от 15:85 до 25:75) с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (4,28 г), содержащего примесь небольшого количества реагента.
Проводили повторное растворение в ацетоне (40 мл), воде (20 мл), бикарбонате натрия (0,54 г, 6,45 ммоль) и сульфате магния (0,78 г, 6,45 ммоль). Охлаждали до 0°С и добавляли перманганат калия (0,2 г,
1,29 ммоль) с получением смеси ярко-пурпурного цвета. Через 3 ч при комнатной температуре реакцию гасили твердым пентагидратом тиосульфата натрия (0,32 г, 1,29 ммоль) и фильтровали суспензию через слой диатомовой земли, проливая через него ацетон. Проводили упаривание до малого объема, разбавляли водой (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (60 мл). Экстракты промывали солевым раствором, сушили, фильтровали и упаривали с получением масла. Проводили очистку посредством флэшхроматографии, элюируя смесью этилацетат:изогексан (от 15:85 до 25:75) с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (3,62 г, 70%). МС (т/ζ): 402 (М+1).
Способ 2
К дихлорметану (870,9 мл) при 0°С (температура в бане -5°С) через канюлю добавляли раствор 1М диэтилцинка в гептане (1,6 л, 1,6 моль), далее медленно добавляли раствор трифторуксусной кислоты (121,02 мл, 1,6 моль) в дихлорметане (870,9 мл), поддерживая температуру ниже 3°С. Через 1 ч после добавления смесь перемешивали в течение 5 минут, далее за один раз добавляли дииодметан (130,3 мл, 1,6 моль) и перемешивали в течение 15 мин. Добавляли раствор диэтил-(18,28,5К,68)-2-бензилоксикарбониламино-4-метиленбицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата (183,35 г, 449,58 ммоль) в дихлорметане (348,4 мл) в течение 10 мин и перемешивали полученную смесь при комнатной температуре в течение ночи. Проводили охлаждение до 0°С, гасили 0,5М хлороводородной кислотой (1,5 л) и интенсивно перемешивали реакционную смесь. Органический слой отделяли, промывали солевым раствором и концентрировали досуха. Полученное вещество растворяли в воде (733,4 мл) и ацетоне (733,4 мл), охлаждали до 0°С, далее добавляли сульфат магния (81,17 г, 674,37 ммоль), бикарбонат натрия (56,65 г, 674,37 ммоль) и затем перманганат калия (28,42 г, 179,83 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 30 мин добавляли пентагидрат тиосульфата натрия (197,10 г, 311,03 ммоль), а после него диатомовую землю (100 г). Проводили перемешивание в течение 30 мин и фильтровали через слой диатомовой земли. Указанный слой промывали метил-трет-бутиловым эфиром и экстрагировали водный слой метил-трет-бутиловым эфиром. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Проводили очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью гексан:метил-трет-бутиловый эфир (от 10:90 до 50:50) с получением указанного в заголовке продукта в виде бесцветного масла (92,67 г, 51%). Ή ЯМР (СОС13) δ: 0,39-0,52 (т, 1Н), 0,55-0,78 (т, 3Н), 1,25 (ушир. ΐ, 1= 7,1 Гц, 6Н), 1,58 (ушир. άά, 1= 2,9 и 6,3 Гц, 1Н), 1,64-1,73 (т, 1Н), 1,95 (ушир. ΐ, 1= 2,9 Гц, 1Н), 2,03-2,17 (т, 1Н), 2,52 (άά, 1= 2,7 и 6,3 Гц, 1Н), 4,09 (ц, 1= 7,1 Гц, 2Н), 4,16-4,32 (т, 2Н), 5,08 (ушир. 5, 2Н), 5,44 (ушир. 5, 1Н), 7,28-7,41 (т, 5Н).
Также получали диэтил-(18,28,5К,68)-2-(бензилоксикарбонил(метил)амино)спиро[бицикло[3.1.0]
- 10 023678 гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилат в виде побочного продукта (22,67 г, 5,46 ммоль). 1Н ЯМР (СОС13) δ: 0,37-0,52 (т, 1Н), 0,54-0,80 (т, 3Н), 1,26 (ушир. ΐ, 1= 7,1 Гц, 6Н), 1,55-1,68 (т, 1Н), 1,64-1,73 (т, 1Н), 1,70-1,80 (т, 1Н), 1,97 (ушир. ΐ, 1=3,1 Гц, 1Н), 2,30 (άά, 1= 3,1 и 6,3 Гц, 1Н), 3,16 (5, 3Н), 3,99-4,29 (т, 4Н), 5,09 (ушир. 5, 2Н), 7,38-7,62 (т, 5Н).
Пример получения 13
Диэтил-( 18,2§,5К,6§)-2-аминоспиро [бицикло [3.1.0]гексан-4,1 '-циклопропан] -2,6-дикарбоксилат
Способ 1
К перемешиваемому раствору диэтил-(18,2§,5К,6§)-2-(9Н-флуорен-9-илметоксикарбониламино)спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилата (2,10 г, 4,29 ммоль) в дихлорметане (10,5 мл) добавляли пиперидин (3,16 г, 37,2 ммоль) при комнатной температуре. Через 30 мин проводили выпаривание с получением твердого вещества желтого цвета. Проводили очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетат:изогексан (от 30:70 до 80:20) с элюированием сначала 1-(9Н-флуорен-9-илметил)-пиперидина и далее указанного в заголовке соединения в виде жидкости бледно-желтого цвета (1,07 г, 93%). МС (т/ζ): 268 (М+1).
Способ 2
Диэтил-(18,2§,5К,6§)-2-бензилоксикарбониламиноспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]2,6-дикарбоксилат (3,62 г, 9 ммоль) растворяли в этаноле (54 мл) и добавляли раствор к 10% палладия на угле (тип Эеди55а Е101 ΝΕ/Ψ, 0,18 г, 0,17 ммоль). Проводили гидрирование в аппарате Парра в течение 4 ч при 345 кПа. Полученную реакционную смесь фильтровали через слой диатомовой земли для удаления катализатора, промывали этанолом и упаривали с получением указанного в заголовке продукта в виде бесцветного масла (2,23 г, 93%). МС (т/ζ): 268 (М+1).
Пример получения 14
Диэтил-(18,2§,5К,6§)-2-[[(2§)-2-(трет-бутоксикарбониламино)пропаноил]амино]спиро[бицикло [3.1.0]гексан-4,1 '-циклопропан] -2,6-дикарбоксилат
Объединяли диэтил-(18,2§,5К,6§)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилат (1,92 г, 7,17 ммоль), (2§)-2-(трет-бутоксикарбониламино)пропановую кислоту (1,92 г, 10 ммоль), 4-диметиламинопиридин (9 мг, 717 мкмоль) и 1-гидроксибензотриазол (1,36 г, 10 ммоль) в дихлорметане (48 мл). Добавляли триэтиламин (1,5 мл, 10,8 ммоль) и гидрохлорид 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (1,92 г, 10 ммоль) и проводили перемешивание в течение 2 ч при комнатной температуре в атмосфере азота. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (200 мл), водой (50 мл) и солевым раствором (50 мл). Проводили интенсивное перемешивание, далее отделяли этилацетатный слой, промывали 0,2М хлороводородной кислотой (50 мл), водой (50 мл), насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл) и солевым раствором (50 мл). Сушили, фильтровали и концентрировали раствор с получением масла желтого цвета (3,48 г). Проводили очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетагизогексан (от 15:85 до 25:75), далее (от 25:75 до 40:60) с получением вещества в виде масла. Проводили повторное растворение в дихлорметане, концентрировали и сушили под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде пенящегося вещества белого цвета (3,05 г, 6,95 ммоль). МС (т/ζ): 461 (М+23).
Следующие соединения были получены, по существу, по способу согласно примеру получения 14.
- 11 023678
№ прим, получ. Химическое название Структура Физи- ческие характе- ристики
15 Диэтил-(7£2£М05)-2-[[{25> 2-(трет- бутоксикарбониламино)-4- метил су л ьф ан ил бу танои л ] - амино]спиро[бицикло[3.1,0]ге ксан-4,1*-циклопропан]-2,6- дикарбоксилат Н 4 ОА ν-¥ ч МС (ηΐ/ζ)· 499 (М+1£ 521 (М+23)
16 Диэтил-(7& 28 58, <55>-2-[ [2- (трет- бутоксикарбониламино)ацети л] амино] спиро[бицикло- (3.1 0]гексан-4,Г- циклопропан]-2,6- дикарбоксилат γΑ 7 ΗΝ _ ¥ (А Л МС (ηι/ζ): 447 (М+23).
Пример получения 17 (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-(трет-Бутоксикарбониламино)пропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновая кислота
Способ 1
К холодному перемешиваемому раствору диэтил-(18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-(трет-бутоксикарбониламино)пропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилата (3,05 г, 6,9 ммоль) в тетрагидрофуране (36 мл) в атмосфере азота добавляли 2М раствор гидроксида лития в воде (27,8 мл, 55,6 ммоль). Полученный двухслойный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Проводили подкисление 2М хлороводородной кислотой (29 мл), добавляли лед (~20 г) и проводили экстракцию этилацетатом (100 мл). Экстракты промывали солевым раствором (50 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и упаривали с получением полутвердой пены белого цвета. Полученное вещество повторно растворяли в горячем этилацетате (15 мл). Проводили фильтрование и полученное вещество сушили под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета (2,06 г, 5,4 ммоль). МС (т/ζ): 405 (М+23).
Способ 2
Диэтил-(18,28,5К,68)-2-бензилоксикарбониламиноспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]2,6-дикарбоксилат (159 г, 396,05 ммоль) растворяли в этаноле (792,1 мл), и добавляли 10% палладия на угле (15,9 г, 14,94 ммоль), а после него 37,5% мас./мас. раствор хлористо-водородной кислоты в воде (6,62 мл, 79,21 ммоль). Проводили гидрирование в 2-л аппарате Парра при 413 кПа и при комнатной температуре. Через 4 ч полученную смесь фильтровали через фильтр с диатомовой землей и стеклянным микроволокном (Ватман) и концентрировали под вакуумом. Неочищенное вещество растворяли в тетрагидрофуране (396 мл), добавляли хлордиметокситриазин (74,50 г, 415,86 ммоль) и (28)-2-(трет-бутоксикарбониламино)пропановую кислоту (79,88 г, 415,86 ммоль). Данную смесь охлаждали до 0°С и добавляли Ν-метилморфолин (131,06 мл, 1,19 моль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 5 ч неочищенное вещество фильтровали через диатомовую землю и осадок промывали тетрагидрофураном (200 мл). Удаляли растворитель по частям под вакуумом и полученный раствор оранжевого цвета охлаждали до 0°С. По каплям добавляли 2 М раствор гидроксида натрия в воде (792,1 мл, 1,58 моль). Смесь перемешивали в течение ночи, позволяя реакционной смеси нагреться до комнатной температуры. Добавляли дихлорметан (1 л) и разделяли фазы. Органический слой промывали большим количеством воды (300 мл). Объединенные водные слои подкисляли до рН 2-3 1 н. гидросульфатом калия и далее проводили экстракцию этилацетатом. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и упаривали под вакуумом. Неочищенное вещество растворяли в тетрагидрофуране (600 мл) и нагревали до кипения. Добавляли гептан (2,1 л) и охлаждали раствор. Полученное твердое вещество отфильтровывали и сушили под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета (149 г, 98%). МС (т/ζ): 405 (М+23).
- 12 023678
Следующие соединения были получены, по существу, согласно способу 1 примера получения 17.
№ прим получ. Химическое название Структура Физи- ческие характе- ристики
18 (7^25.5Д.65)-2-[[(25)-2-(т^т- Бутоксикарбониламино)-4- метилсульфанилбутаноил]- амино]спиро[бицикло[3 1.0]- гексан-4,1 '-циклопропан]-2,6- дикарбоновая кислота Н г он ΗΝ Ά-Гд1 мс (ηι/ζ): слабый 465 (М+23)
19 (76',25,5й,6.$>2-[[2-(/«рет- Бутоксикарбониламино)ацетил]- амино]спиро[бицикло[3 1.0]- гексан-4,1 '-циклопропан]-2,6- дикарбоновая кислота мА но нГГон ΗΝ . Г°о Ад Д МС (т/ζ): 391 (М+23),
Пример получения 20
Диэтил-(18,28,5К,68)-2-(трет-бутоксикарбониламино)спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан] -2,6-дикарбоксилат
Способ 1
К раствору диэтил-(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилата (0,47 г, 722,38 мкмоль) в дихлорметане (5 мл) добавляли полимер на подложке из диизопропилэтиламина (1,02 г, 3,61 ммоль), а после этого ди-трет-бутилдикарбонат (0,41 г, 1,88 ммоль) в дихлорметане (6,00 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. Добавляли дополнительное количество ди-трет-бутилдикарбоната (0,32 г, 1,36 ммоль) и перемешивали еще в течение 2 ч. Проводили растворение в этаноле (20 мл) и очистку на картридже с ионообменной смолой 8СХ-2 (10 г), через который предварительно пропускали этанол в количестве 2 объемов колонки. После загрузки картридж промывали этанолом в количестве 4 объемов колонки, после чего элюент концентрировали под вакуумом с получением неочищенного продукта (808 мг). Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетат:циклогексан (от 0:100 до 40:60) с получением необходимого вещества (100 мг). Промывали картридж 3М раствором аммиака в метаноле в количестве 2 объемов колонки с получением твердого вещества желтого цвета (430 мг), соответствующего непрореагировавшему неочищенному диэтил-(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилату. К выделенному диэтил-(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилату в тетрагидрофуране (20 мл) добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (0,32 г, 1,44 ммоль), проводили перемешивание при комнатной температуре в течение ночи. Далее добавляли триэтиламин (201,37 мкл, 1,44 ммоль) и дополнительное количество ди-трет-бутилдикарбоната (0,32 г, 1,44 ммоль) и продолжали перемешивание в течение 72 ч. Добавляли избыток триэтиламина (201,37 мкл, 1,44 ммоль), ди-трет-бутилдикарбонат (0,32 г, 1,44 ммоль) и катализатор Ν,Νдиметил-4-аминопиридин (40,93 мкмоль) и проводили перемешивание в течение ночи. Проводили разбавление этанолом (30 мл) и очищали полученный раствор на картридже с ионообменной смолой 8СХ-2 (10 г), через который предварительно пропускали этанол в количестве 2 объемов колонки. Проводили промывку этанолом в количестве 4 объемов колонки и концентрировали раствор под вакуумом с получением 757 мг неочищенного необходимого продукта. Проводили очистку посредством флэшхроматографии, элюируя смесью этилацетат:циклогексан (от 0:100 до 40:60) с получением второй фракции необходимого указанного в заголовке продукта (24 мг). Обе фракции объединяли с получением указанного в заголовке продукта (337,47 мкмоль, 47%). МС (т/ζ): 390 (М+23), 757 (2М+23).
Способ 2
К раствору диэтил-(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилата (1,4 г, 5,24 ммоль) в тетрагидрофуране (30 мл) добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (0,88 г, 4,01 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в атмосфере азота при комнатной температуре в течение ночи. Фильтровали через гидрофобную фритту, бесцветный гель промывали этилацетатом. Объеди- 13 023678 ненные органические слои концентрировали в вакууме с получением бесцветного масла. Проводили очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетат:изогексан (от 0:100 до 30:70) с получением 1,82 г масла. После этого проводили сушку под высоким вакуумом с получением указанного в заголовке продукта (1,79 г, 93%). МС (т/ζ): 390 (М+23), 757 (2М+23).
Пример получения 21 (18,28,5К,68)-2-(трет-Бутоксикарбониламино)спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6дикарбоновая кислота
К свежеприготовленному раствору моногидрата гидроксида лития (1,64 г, 38,97 ммоль) в воде (19,5 мл) добавляли диэтил-(18,28,5К,68)-2-(трет-бутоксикарбониламино)спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'циклопропан]-2,6-дикарбоксилат (1,79 г, 4,87 ммоль) в тетрагидрофуране (29,2 мл) и перемешивали в течение ночи при 60°С. Проводили разбавление водой (30 мл), экстрагировали этилацетатом (2x50 мл). Разделяли водный и органический слои. Органический слой промывали 2М хлороводородной кислотой. Водный слой промывали 2М хлороводородной кислотой (25 мл) и далее проводили экстракцию этилацетатом (2x50 мл). Органические слои объединяли и промывали солевым раствором (15 мл). Сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали досуха. Проводили повторное растворение в дихлорметане и концентрировали досуха с получением указанного в заголовке продукта (1,49 г, 98%). МС (т/ζ): 334 (М+23).
Пример получения 22
Дибензил-(18,28,5К,68)-2-(трет-бутоксикарбониламино)спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан] -2,6-дикарбоксилат
К раствору (18,28,5К,68)-2-(трет-бутоксикарбониламино)спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты (0,09 г, 292,29 мкмоль) в Ν,Ν-диметилформамиде (2 мл) добавляли карбонат цезия (0,24 г, 730,7 мкмоль) и бензилбромид (87,16 мкл, 730,7 мкмоль). Проводили перемешивание при комнатной температуре в течение 1,5 ч в атмосфере азота. Реакцию гасили водой и проводили экстракцию этилацетатом. Слои разделяли и фильтровали органический слой через гидрофобную фритту, после чего концентрировали досуха с получением неочищенного продукта (134 мг). Проводили очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетат:изогексан (от 1:99 до 25:75) с получением прозрачного масла. Проводили дальнейшую очистку посредством флэш-хроматографии, элюируя смесью этилацетат:изогексан (1:99 10:90) с получением указанного в заголовке продукта (105 мг, 68%) в виде прозрачного масла. МС (т/ζ): 514 (М+23).
Следующее соединение было получено, по существу, по способу согласно примеру получения 22.
№ прим. получ. Химическое название Структура Физические характеристики
23 £7/с[(2-фторфенил)метил]- (18,28,5К, б8)-2-(трет- бутоксикарбонил амино)- спиро[бицикло[3 1.0]гексан- 4,Г-циклопропан]-2?6- дикарбоксилат АЬ Υ γ о МС (т/ζ): 550 (М+23)
Пример 1
Гидрохлорид (18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты
- 14 023678
Во флакон Рсас1Оа1 помещали 5 мл ди-трет-бутил-(18,28,5К,68)-2-(трет-бутоксикарбониламино)спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилат (55 мг, 129,8 мкмоль). К нему добавляли 5 н. водный раствор хлороводородной кислоты (3 мл; 20,8 ммоль) и 1,4-диоксан (1 мл). Смесь перемешивали при 90°С в течение 1 ч. Флакон Рсас1Оа1 запаивали и продолжали перемешивание при 90°С в течение 3 ч. Охлаждали до комнатной температуре и выдерживали в течение 3 дней. Проводили концентрирование при пониженном давлении с получением темного твердого вещества. Проводили подготовку картриджа ОаШ® НЬВ \Уа1сг5 (1 г) путем промывки его метанолом в количества 2 объемов колонки, а после этого водой в количестве 6 объемов колонки. Полученное темное твердое вещество растворяли в воде и загружали в картридж. Картридж промывали водой (2 объема колонки) и собирали элюент. Раствор подвергали сублимационной сушке с получением указанного в заголовке соединения (16,1 мг, 65 мкмоль). МС (т/ζ): 212 (М+1). Ίί ЯМР (Ό2Ο) δ 0,45 (т, 1Н), 0,53 (т, 1Н), 0,64 (т, 1Н), 0,74 (т, 1Н), 1,72-1,78 (т, 2Н) 1,86 (ά, 1=14,2 Гц, 1Н), 2,07 (т, 1Н), 2,37 (т, 1Н).
Пример 2 (18,28,5К,68)-2-Аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновая кислота
К диэтил-(18,28,5К,68)-2-ацетамидоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилату (1,19 г, 3,8 ммоль) добавляли 2М гидроксид натрия (11,5 мл, 23,1 ммоль). После добавления реакционную смесь нагревали до кипения в защитной атмосфере азота. Через 21 ч добавляли избыток 2М гидроксида натрия (5,8 мл, 11,5ммоль) и продолжали нагревание в течение 120 ч. Проводили очистку посредством катионообменной хроматографии (Όο\νοχ™ 50X8-100), как указано далее. Любые нерастворимые частицы отфильтровывали и промывали колонку водой класса для ВЭЖХ. Раствор концентрировали до половины. Полученный раствор наносили на смолу, обеспечивая его протекание через колонку со скоростью протекания примерно 1 капля каждые 1-2 с. После того, как исходно нанесенный объем прошел через поверхность смолы, смолу промывали водой класса для ВЭЖХ (~ от 1 до 2 объемов колонки), данную операцию повторяли 3 раза. Контролировали рН выходящего потока и продолжали промывку водой класса для ВЭЖХ до окончания выхода нанесенного раствора (значение рН возвращалось к рН 7). После того, как наблюдали завершение цикла рН и рН раствора на выходе возвращалось к рН 7, колонку промывали каждым из следующих элюентов в количестве по меньшей мере одного объема колонки: вода класса для ВЭЖХ, смесь вода класса для ВЭЖХ:тетрагидрофуран (1:1), далее вода класса для ВЭЖХ. Продукт десорбировали со смолы смесью 10% пиридин: вода класса для ВЭЖХ и продолжали элюирования смесью 10% пиридин: вода класса для ВЭЖХ пока ТСХ не показала отсутствие продукта. Фракции, содержащие необходимое вещество, объединяли, концентрировали с получением твердого вещества белого цвета. Проводили сублимационную сушку с получением указанного в заголовке продукта (795 мг, 3,8 ммоль). МС (т/ζ): 212 (М+1). Ή ЯМР (Ό2Ο + 5% ά,-пиридин) δ: 0,38 (т, 1Н), 0,45 (т, 1Н), 0,55 (т, 1Н), 0,69 (т, 1Н), 1,50 (άά, 1=2,9 Гц, 1Н), 1,62 (ά, 1=13,7 Гц, 1Н), 1,78 (т, 2Н), 2,11(άά, 1=2,9 Гц, 1Н).
Пример 3 (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-Аминопропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]2,6-дикарбоновая кислота; 1,4-диоксан (1:0,5); гидрохлорид
К перемешиваемой суспензии (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-(трет-бутоксикарбониламино)пропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты (0,16 г, 418,4 мкмоль) в 1,4-диоксане (1,6 мл) добавляли раствор 4М хлороводорода в 1,4-диоксане (1,57 мл, 6,3 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере азота. Через 16 ч твердое вещество белого цвета отфильтровывали, промывали 1,4-диоксаном, сушили под вакуумом при 60°С в течение ночи с получением указанного в заголовке продукта (0,14 г): МС (т/ζ): 283 (М+1). Ή ЯМР (Ό2Ο) δ 0,46 (т, 1Н), 0,65 (т, 1Н), 1,47 (ά, 1=1 Гц, 3Н), 1,70 (άά, 1=2,7 Гц, 1Н), 1,81 (ц, 1=15 Гц, 2Н), 1,87 (ушир. ΐ, 1=2,1 и 2,9 Гц, 1Н), 2,65 (άά, 1=2,1 и 2,9 Гц, 1Н), 3,68 (5, 4Н), 4,00 (д, 1= 7 Гц, 1Н), 4,70 (т, 2Н).
- 15 023678
Пример 4 (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-Аминопропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]2,6-дикарбоновая кислота
К раствору (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-(трет-бутоксикарбониламино)пропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты (82,24 г, 215,06 ммоль) в ацетоне (822,4 мл) добавляли концентрированную хлороводородную кислоту (36,94 мл, 430,11 ммоль) и перемешивали смесь при 50°С. Через 1,5 ч смесь охлаждали до 0°С и добавляли 50% раствор гидроксида натрия в воде до рН 3,6-3,8. Полученное твердое вещество перемешивали в течение 1 ч, отфильтровывали и промывали водой. Сушили под вакуумом в течение 48 ч с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета (36 г, 127,53 ммоль). МС (т/ζ): 283 (М+1).
Пример 5
Гидрохлорид (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-аминопропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты
К перемешиваемой суспензии (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-(трет-бутоксикарбониламино)пропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты (2,06 г, 5,4 ммоль) в
1,4-диоксане (21 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли 4М раствор хлороводорода в 1,4-диоксане (20 мл, 80 ммоль). Реакционную смесь подвергали действию ультразвука в течение нескольких минут и далее перемешивали ее в течение 16 ч. Полученное твердое вещество отфильтровывали, промывали 1,4-диоксаном, сушили под вакуумом при 60°С в течение 6 ч с получением 2,2 г твердого вещества белого цвета. Полученное вещество повторно растворяли в воде класса для ВЭЖХ (20 мл), фильтровали для удаления любых нерастворимых частиц и проводили сублимационную сушку фильтрата с получением указанного в заголовке соединения (1,51 г, 4,75 ммоль). МС (т/ζ): 283 (М+1). 1Н ЯМР (Ό20) δ 0,46 (т, 1Н), 0,65 (т, 1Н), 1,46 (б, 6=7,1 Гц, 3Н), 1,69 (бб, 1=2,9 Гц, 1Н), 1,81 (ц, 1=14,3 Гц, 2Н), 1,87 (ушир. ί, ί= 2,9 Гц, 1Н), 2,65 (бб, ί= 2,9 Гц, 1Н), 4,00 (ц, ί= 7,02 Гц, 1Н), 4,70 (т, 2Н).
Следующие соединения были получены, по существу, по способу согласно примеру 4.
№ прим. Химическое название Структура Физиче- ские характе- ристики
6 Гидрохлорид (/525,65,65)-2-(((25)- 2-амино-4- метилсульфанилбутаноил]амино]- спиро[бицикло[3.1 0]гексан-4?1 циклопропан]-2,6-дикарбон овой кислоты /ЖЖ Ж-/ но ΝΗ, НС1 МС (ητ/ζ): 343 (М+1)
7 Гидрохлорид (/525,65,65)-2-((2- аминоацетил)амино]спиро- [бицикло[3.1,0]гексан-4.1 ’- циклопропан]-2,6-дикарбон овой кислоты М ΗΝ О Г \н2 НС1 мс (ητ/ζ): 269 (М+1)
Пример 8
Дибензил-(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилат;
1,4-диоксан; гидрохлорид
- 16 023678
К перемешиваемой суспензии дибензил-(18,2§,5К,6§)-2-(трет-бутоксикарбониламино)спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилата (0,1 г, 0,2 ммоль) в 1,4-диоксане (970 мкл) добавляли 4М раствор хлороводорода в 1,4-диоксане (493,30 мкл, 1,97 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере азота и перемешивали в течение 20 ч. Добавляли избыток 4М раствора хлороводорода в 1,4диоксане (493,30 мкл, 1,97 ммоль) и нагревали до 80°С. Проводили концентрирование досуха, истирание с ацетонитрилом и проводили сублимационную сушку полученной суспензии с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета (89,9 мг, 88%) в виде (1:1) аддукта с 1,4диоксаном. МС (т/ζ): 392 (М+1).
Пример 9
Гидрохлорид бис-[(2-фторфенил)метил](18,2§,5К,6§)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан] -2,6-дикарбоксилата
К перемешиваемому раствору бис-[(2-фторфенил)метил]-(18,2§,5К,6§)-2-(трет-бутоксикарбониламино)спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилата (0,98 г, 1,86 ммоль) в 1,4диоксане (4,64 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли 4М раствор хлороводорода в 1,4-диоксане (4,64 мл, 18,58 ммоль) и перемешивали полученный раствор в течение 20 ч. Проводили концентрирование под вакуумом с получением масла (0,93 г). Полученное вещество растворяли в смеси ацетонитрила (10 мл), воды (30 мл) и подвергали сублимационной сушке в течение выходных с получением твердого вещества белого цвета (820 мг) в виде смеси указанного в заголовке соединения, содержащего примесь (1§,2§,5К,6§)-2-амино-2-[(2-фторфенил)метоксикарбонил]спиро[бицикло[3.1.0]гексан4,1'-циклопропан]-6-карбоновой кислоты (~7-10%). МС (т/ζ): 320 (М+Н). Полученное твердое вещество белого цвета растворяли в ацетонитриле (8 мл) с получением прозрачного раствора. Раствор выдерживали в течение 1 ч, после чего его фильтровали. Фильтрат концентрировали под вакуумом с получением клейкой пены. Полученную пену повторно растворяли этилацетате, промывали насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением 774 мг. Проводили повторное растворение в диэтиловом эфире (11 мл), добавляли 1М раствор хлороводорода в диэтиловом эфире (1,86 мл, 1,86 ммоль), концентрировали под вакуумом с получением твердой пены белого цвета. Далее проводили сушку в течение ночи под вакуумом при 50°С с получением указанного в заголовке продукта (0,74 г, 85%). МС (т/ζ): 428 (М+1), 450 (М+23).
Пример 10
Дигидрат (1§,2§,5К,6§)-2-[[(2§)-2-аминопропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты
Стадия 1
Г идрохлорид диэтил-(18,2§,5К,6§)-2-амино-4-оксобицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата
К абсолютному этанолу (1,0 л, 17,2 моль) в атмосфере азота по каплям добавляли ацетилхлорид (86,5 мл, 1,2 моль), поддерживая внутреннюю температуру реакции ниже 30°С. Полученную смесь перемешивали в течение 15 мин и за один раз добавляли ди-трет-бутил-(18,2§,5К,6§)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-4-оксобицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилат (100 г, 0,24 моль). Полученную смесь нагревали до кипения в течение 16-20 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением масла. Полученный неочищенный продукт растворяли в метиленхлориде (250 мл) и концентрировали под вакуумом. Процесс растворения в метиленхлориде/концентрирования с получением пены белого цвета. Добавляли этилацетат (150 мл) и нагревали смесь до 65°С. Добавляли метил-третбутиловый эфир (100 мл) и перемешивали смесь при 65°С в течение 15 мин. Добавляли метил- третбутиловый эфир (300 мл) в течение 15 мин, перемешивали при 65°С в течение 15 мин, далее источник тепла выключали и позволяли суспензии остыть до температуры окружающей среды. Смесь фильтровали и отфильтрованный осадок промывали метил-трет-бутиловым эфиром (150 мл). Отфильтрованный
- 17 023678 осадок переносили в вакуумную печь и сушили в течение ночи при 25°С с получением неочищенного продукта (67,5 г). Полученное твердое вещество переносили в круглодонную колбу, разбавляли этилацетатом (170 мл) и нагревали смесь до 65°С. Смесь перемешивали в течение 1 ч, добавляли тетрагидрофуран (68 мл) и этанол (3 мл). Источник тепла выключали и добавляли метил-трет-бутиловый эфир (272 мл) в течение 20 мин, позволяя смеси остыть до температуры окружающей среды. Суспензию фильтровали, отфильтрованный осадок промывали смесью 95/5 метил-трет-бутиловый эфир/этилацетат (2x75 мл) и далее сушили полученное твердое вещество в вакуумной печи в течение ночи при 25°С с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета (60,0 г, 98,0%). МС (т/ζ): 256 (М+1).
Стадия 2
Диэтил-(18,28,5К,68)-2-бензилоксикарбониламино-4-оксобицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилат
Гидрохлорид диэтил-(18,28,5К,68)-2-амино-4-оксобицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилата (55,0 г, 188,5 ммоль) суспендировали в тетрагидрофуране (220 мл), далее добавляли воду (220 мл) и карбонат калия (92,1 г, 659,9 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 30 мин. К смеси добавляли бензилхлорформиат (26,7 мл, 175,3 ммоль) в течение 45 мин, поддерживая температуру реакции ниже 25°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин, далее разбавляли этилацетатом (550 мл) и водой (275 мл). Фазы разделяли и водный слой повторно подвергали экстракции этилацетатом (250 мл). Органические слои объединяли и промывали их последовательно водным раствором НС1 (0,5 н., 100 мл), насыщенным раствором ЫаНСОз (100 мл) и солевым раствором (100 мл). Органический раствор сушили над Ыа28О4, фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде прозрачного масла (67,6 г, 92,1%). 1Н ЯМР (СИС13) δ 1,24-1,26 (т, 6Н), 2,36 (Ь5, 1Н), 2,47(66, 1Н), 2,78 (66, 1Н), 2,90 (66, 1Н), 4,09-4,19 (т, 4Н), 5,08 (5, 2Н), 5,73 (5, 1Н), 7,24-7,36 (т, 5Н).
Стадия 3
Диэтил-(18,28,5К,68)-2-бензилоксикарбониламино-4-метиленбицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилат
В атмосфере азота при взбалтывании объединяли бромид метилтрифенилфосфония (67,4 г, 184,9 ммоль) и тетрагидрофуран (300 мл). К реакционной смеси в течение 15 минут добавляли раствор третбутоксида калия (1М) в тетрагидрофуране, 184,9 мл, 184,9 ммоль) и перемешивали полученную суспензию при температуре окружающей среды в течение 3 ч. Диэтил-(18,28,5К,68)-2-бензилоксикарбониламино-4-оксобицикло[3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилат (12,3 кг, 31,6 моль) растворяли в тетрагидрофуране (120 мл) и добавляли к реакционной смеси в течение 1 ч, поддерживая температуру реакции ниже 30°С. Полученную суспензию перемешивали в течение ночи при температуре окружающей среды, далее разбавляли этилацетатом (600 мл) и гасили водой (300 мл). Полученную двухфазную смесь перемешивали в течение 30 мин, после чего слои разделяли и органический слой промывали водой (300 мл) и далее 0,25М НС1 (300 мл). Органический слой сушили над Ыа28О4, фильтровали и концентрировали под вакуумом (45°С) с получением неочищенного продукта в виде темного масла (111,0 г). Полученное вещество очищали посредством хроматографии с пропусканием через слой силикагеля (зШса де1 р1ид сЬготаЮдгарНу) (1 кг кизельгеля-60 (К1е8е1де1-60), 4 л 15% ЕЮЛс в гептане, далее 10 л 30% ЕЮЛс в гептане) с получением указанного в заголовке соединения в виде прозрачного масла (37,3 г, содержание вещества 87,9, 54,9%). МС (т/ζ): 388 (М+1).
Стадия 4
Диэтил-(18,28,5К,68)-2-бензилоксикарбониламиноспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]2,6-дикарбо ксилат
- 18 023678
В снабженную рубашкой реакционную колбу, соединенную с охлаждающим устройством, в атмосфере азота добавляли раствор диэтилцинка (157,2 мл, 157,2 ммоль, 1М в гептане). Раствор охлаждали до -15°С и разбавляли холодным (-15°С) сухим дихлорэтаном (157,2 мл). Трифторуксусную кислоту (11,1 мл, 146,7 ммоль) растворяли в дихлорэтане (11,1 мл) и добавляли в реакционный сосуд в течение 50 мин, поддерживая внутреннюю температуру ниже -10°С. Полученную суспензию перемешивали при температуре от -10 до -15°С в течение 30 мин. Дииодметан (12,7 мл, 42,1 г, 157,2 ммоль) растворяли в дихлорэтане (12,7 мл) и добавляли к реакционной смеси в течение 50 мин, поддерживая внутреннюю температуру ниже -10°С. Полученную неплотную суспензию белого цвета перемешивали при температуре от -10 до -15°С в течение 30 мин. Диэтил-(18,28,5К,68)-2-бензилоксикарбониламино-4-метиленбицикло [3.1.0]гексан-2,6-дикарбоксилат (20,3 г, содержание вещества 87,9%, 46,0 ммоль) растворяли в дихлорэтане (30,4 мл) и добавляли к реакционной смеси в течение 10 мин, поддерживая внутреннюю температуру ниже -10°С. Полученную прозрачную суспензию бледно-желтого цвета перемешивали при -10°С в течение 5 мин и контролировали на наличие латентных экзотермических эффектов. Меняли установленную температуру для охлаждающего устройства на 0°С и перемешивали реакционную смесь при этой температуре в течение 48 ч. Реакционную смесь гасили путем добавления 5 н. НС1 (62,9 мл, 314,4 ммоль) в течение 15 мин, поддерживая внутреннюю температуру ниже 6°С. Полученную смесь перемешивали при температуре 0-5°С в течение 20 мин, после чего переносили в воронку и разделяли слои. Органический слой промывали 1 н. НС1 (2x50 мл) и далее 1:1 насыщенным ЫаНСОз/Н2О (60 мл), 1:1 насыщенным Ыа2СО3/Н2О (60 мл) и водой (50 мл). Органические слои сушили над Ыа2ЗО4 и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде масла бледно-желтого цвета (19,6 г, 60,3% эффективный, 63,9% скорректированный выход). 'Н ЯМР (ЭМСО-Д6) δ 0,37 (т, 2Н), 0,52-0,55 (Дт, 2Н), 1,13-1,17 (т, 6Н), 1,49-1,50 (т, 1Н), 1,51-1,56 (т, 1Н), 1,60-1,79 (т, 2Н), 3,97-4,10 (т, 5Н), 5,00 (5, 2Н), 7,29-7,34 (т, 5Н), 8,04 (5, 1Н).
Стадия 5
Г идрохлорид диэтил-( 18,28,5К,68)-2-аминоспиро [бицикло [3.1.0]гексан-4,1 '-циклопропан] -2,6-дикарбоксилата
В реактор НЕЬ помещали абсолютный этанол (100 мл, 10 объемов), концентрированную НС1 (2,1мл, 1,0 н.) и диэтил-(18,28,5К,68)-2-бензилоксикарбониламиноспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилат (9,7 г, 24,16 ммоль) и далее палладиевый катализатор (3,9 г, 40 мас.%). Реактор продували три раза азотом, затем три раза водородом и создавали водородом давление примерно 276 кПа (40 ρ5ΐ). Реакционную смесь перемешивали при температуре 20-30°С в течение по меньшей мере 2 ч до завершения реакции, которое определяли посредством ВЭЖХ. Полученную суспензию фильтровали через слой Нуйо Зирег Се1® и промывали влажный осадок абсолютным этанолом (2x30 мл, 3 объемов). Фильтрат переносили в чистый реактор и заменяли этанол на изопропилацетат до примерно 5 объемов из расчета на выход продукта ш-5Йи по калибровочной кривой. Полученную суспензию охлаждали до 0-5°С в течение по меньшей мере 3 ч. Полученную суспензию фильтровали и промывали влажный осадок холодным изопропилацетатом (3x5 мл, 0,5 объемов). Проводили сушку при пониженном давлении при 30°С в течение по меньшей мере 12 ч с получением указанного в заголовке продукта (4,66 г, 15,34 ммоль. 63,5%). !Н ЯМР (1)МСО-1)6. 400 МГц): δ 8,84 (5, 3Н), 4,31-4,15 (т, 2Н), 4,03 (ц, 1 = 7,0, 2Н), 2,42 (ДД, 1 = 3,1, 2,6, 1Н), 2,24 (ДД, 1 = 6,2, 2,6, 1Н), 1,94 (Д, 1 = 14,1, 1Н), 1,68 (Д, 1 = 14,1, 1Н), 1,63 (ДД, 1 = 6,6, 3,1, 1Н), 1,25 (ΐ, 1 = 7,0, 3Н), 1,17 (ΐ, 1 = 7,0, 3Н), 0,77-0,71 (т, 1Н), 0,65-0,59 (т, 1Н), 0,56-0,51 (т, 1Н), 0,50-0,44 (т, 1Н).
Стадия 6
Диэтил-(18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-(трет-бутоксикарбониламино)пропаноил]амино]спиро[бицикло [3.1.0]гексан-4,1 '-циклопропан] -2,6-дикарбоксилат
В реактор помещали тетрагидрофуран (45 мл, 10 объемов) и (28)-2-(трет-бутоксикарбониламино)пропановую кислоту (3,4 г, 1,2 эквивалента) и далее Ν-метилморфолин (1,96 мл, 1,2 эквивалента) и 2-хлор-4,6-диметокси-1,3,5-триазин (3,12 г, 1,2 эквивалента). Полученную мелкодисперсную суспензию перемешивали при температуре 20-25°С в течение по меньшей мере 3 ч до завершения реак- 19 023678 ции, которое определяли посредством ВЭЖХ. В реактор за один раз помещали гидрохлорид диэтил(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилата (4,55 г, 14,81 ммоль) при температуре 20-25°С и далее Ν-метилморфолин (1,63 мл, 1,0 эквивалента) в течение по меньшей мере 10 мин, поддерживая температуру в диапазоне 20-25°С. Полученную суспензию перемешивали при температуре 20-25°С в течение по меньшей мере 2 ч до завершения реакции, определяемого посредством ВЭЖХ. Полученное вещество фильтровали и отфильтрованный осадок промывали тетрагидрофураном (2x10 мл, 2,2 объемов) с получением указанного в заголовке продукта, принимая, что выход составил 100%. Использовали полученный тетрагидрофурановый раствор указанного в заголовке продукта бледно-янтарного цвета без дальнейшей очистки, принимая, что выход составил 100%. 1Н ЯМР (ЭМСО-!)... 400 МГц): δ 8,46 (5, 1Н), 6,72 (ά, 1 = 7,9, 1Н), 4,08-3,92 (т, 5Н), 2,42-2,37 (т, 1Н), 1,81-1,64 (т, 3Н), 1,47 (άά, 1 = 6,6, 3,1, 1Н), 1,34 (5, 9Н), 1,18-1,08 (т, 9Н), 0,66-0,59 (т, 1Н), 0,57-0,52 (т, 1Н), 0,46-0,36 (т, 2Н).
Стадия 7 (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-(трет-Бутоксикарбониламино)пропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновая кислота
В реактор помещали 2 н. №ГОН (37 мл, 5,0 эквивалента) и диэтил-(18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-(третбутоксикарбониламино)пропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилат (6,50 г, 14,81 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение по меньшей мере 12 ч при температуре 20-30°С до завершения реакции, определяемого посредством ВЭЖХ. Реакционную смесь переносили в делительную воронку и позволяли ей осесть в течение по меньшей мере 10 мин. Фазы разделяли и нижний водный слой возвращали в реактор. К полученной смеси добавляли этилацетат (90 мл, 13,8 объемов) и далее добавляли 1 н. №-1Н8О4 до достижения значения рН от 2 до 2,5. Слои разделяли и органический слой промывали водой (45 мл, 6,9 объемов). Удаляли воду посредством атмосферной дистилляции органической фазы этилацетатом с удалением остаточной воды. Полученную суспензию охлаждали до температуры 20-30°С в течение по меньшей мере 2 ч обеспечивали грануляцию при той же температуре в течение по меньшей мере 90 мин. Полученное твердое вещество отфильтровывали и промывали отфильтрованный осадок этилацетатом (3x15 мл, 2,3 объемов). Проводили сушку при пониженном давлении при 45°С с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета (4,45 г, 11,64 ммоль, 78,6%). !Н ЯМР (ИМСОФ6, 400 МГц, 50°С): δ 12,01 (5, 2Н), 8,22 (5, 1Н), 6,49 (Ь5, 1Н), 4,00 (Ь5, 1Н), 2,43 (άά, 1 = 6,5, 2,8, 1Н), 1,83 (ά, 1 = 14,0, 1Н), 1,68-1,62 (т, 2Н), 1,42 (άά, 1 = 6,5, 2,8 Гц, 1Н), 1,36 (5, 9Н), 1,15 (ά, 1 = 7,1 Гц, 3Н), 0,67-0,61 (т, 1Н), 0,56-0,51 (т, 1Н), 0,46-0,36 (т, 2Н).
Стадия 8
Дигидрат (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-аминопропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты
В реактор помещали воду (32 мл, 8 объемов) и (18,28,5К,68)-2-[[(28)-2-(трет-бутоксикарбониламино)пропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновую кислоту (3,99 г, 10,4 ммоль), затем концентрированную НС1 (1,80 мл, 2,0 эквивалента) и далее нагревали реакционную смесь до 45-55°С до завершения реакции (контролируемого посредством ВЭЖХ). Реакционную смесь охлаждали до 20-30°С и доводили рН с помощью 5 н. №ЮН приблизительно до 3,6. К полученной суспензии добавляли абсолютный этанол (15 мл, 3,75 объемов) в течение по меньшей мере 30 мин при температуре 20-30°С. Обеспечивали гранулирование полученной суспензии при температуре 20-30°С в течение по меньшей мере 12 ч. Смесь охлаждали при температуре -5-5°С и обеспечивали ее гранулирование в течение по меньшей мере 60 мин. Полученное твердое вещество отфильтровывали и отфильтрованный осадок промывали 30% раствором абсолютного этанола в воде (2x9 мл, 2,25 объемов). Полученное твердое вещество сушили при пониженном давлении при 35°С в течение по меньшей мере 12 ч и далее выдерживали полученное твердое вещество в равновесии до прекращения изменения массы в течение по меньшей мере 2 ч с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета (2,71 г, 8,51 ммоль, 81,6%). Ή ЯМР (И2О, 400 МГц): δ 3,90 (д, 1 = 7,2 Гц, 1Н), 2,56 (άά, 1 =
- 20 023678
6,5, 2,9 Гц, 1Η), 1,74-1,66 (т, 2Η), 1,62-1,54 (т, 2Η), 1,39 (ά, 1 = 7,1 Гц, 3Η), 0,61-0,56 (т, 1Η), 0,55-0,49 (т, 1Η), 0,40-0,30 (т, 2Η).
Дифрактограммы рентгеновской порошковой дифракции (ХКЭ) для кристаллических твердых веществ были получены на дифрактометре рентгеновской порошковой дифракции Вгикег Ό4 Епбеауог, снабженном источником СиКа излучения (λ = 1,54060 А) и детектором УаШес, работающим при 35 кВ и 50 мА. Образец сканировали при углах от 4 до 40° 2Θ с размером шага 0,0087° 2Θ и скоростью сканирования 0,5 с/шаг, при размере щели расходимости 0,6 мм, фиксированной антирассеивающей щели 5,28 мм и щели детектора 9,5 мм. Сухой порошок помещали в кварцевый держатель для образцов и разглаживали поверхность с применением стеклянной пластинки. Дифрактограммы выравнивали по стандартным пикам ΝΙδΤ 675 при 8,85 и 26,77 градусах 2-тета. В области кристаллографии хорошо известно, что для любой заданной кристаллической формы относительные интенсивности дифракционных пиков могут отличаться ввиду предпочтительной ориентации, причиной которой являются такие факторы, как форма кристалла, и углы, характеризующие положения пиков, могут немного отличаться. Например, положения пиков могут быть сдвинуты ввиду изменения температуры или влажности, при которых анализируют образец, смещения образца. В данном случае вариабельность положений пиков, составляющая ± 0,2 в градусах 2Θ, учитывает такие возможные вариации, не препятствующие однозначной идентификации указанной кристаллической формы. Подтверждение кристаллической формы может быть произведено на основе любой уникальной комбинации отличительных пиков (в единицах ° 2Θ), как правило, наиболее выраженных пиков. Дифрактограммы кристаллической формы снимали при температуре и относительной влажности окружающей среды.
Таким образом, полученный в примере 10 образец характеризуется полученной с применением СиКа излучения дифрактограммой ХКЭ, содержащей дифракционные пики (значения 2-тета), представленные в табл. 1 ниже. В частности, дифрактограмма содержит пик при 5,20 в сочетании с одним или более пиками, выбранными из группы, состоящей из 10,45, 11,70, 15,75, 21,06 и 23,59 с допустимым отклонением углов дифракции на 0,2 градуса.
Таблица 1. Пики порошковой рентгеновской дифракции вещества согласно примеру 10
Рецепторы тО1и представляют собой рецепторы, сопряженные с О-белком, которые модулируют возбуждение нейронов. Более конкретно, измененная нейротрансмиссия глутамата была связана с неврологическими расстройствами, такими как состояния с хронической болью, включая постоянную боль, невропатическую боль, хроническую воспалительную боль или висцеральную боль; психическими состояниями, такими как шизофрения, биполярное расстройство, генерализованное тревожное расстройство или посттравматическое стрессовое расстройство; или нейрогенеративные расстройства.
Поскольку соединения согласно настоящему изобретению представляют собой агонисты тО1и 2/3, они могут подходить для лечения вышеуказанных состояний.
РЫРК-анализ агониста тО1и 2 и тО1и 3 человека
Для данного исследования применяли клеточные линии АУ-12, полученные из фибробластов сирийского хомяка, в которых стабильно экспрессируется рецептор тО1и 2 или тО1и 3 человека и которые трансфицированы переносчиком глутамата ЕААТ 1 крысы (переносчик 1 возбуждающей аминокислоты) и субъединицей Оа15. Экспрессия Оа15 позволяет сопряженным с Οί рецепторам передавать сигнал по пути фосолипазы С, что позволяет измерить активацию рецептора посредством флуориметрического анализа кальциевого ответа. Клеточные линии поддерживали посредством культивирования на модифицированной Дульбекко средой Игла (ΌΜΕΜ) с высоким содержанием глюкозы и гидрохлоридом пиридоксина, дополненной 5% диализованной фетальной бычьей сыворотке, 1 мМ пирувата натрия, 10 мМ ΗΕΡΕδ (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновой кислоты), 1 мМ Ь-глутамина и 5 мкг/мл бластицидина (все среды приобретали в компании 1пубгодеп). Конфлюэнтные культуры пересевали раз в две недели с применением раствора бесферментной диссоциации (СЬетюоп δ-004-В). Клетки собирали за 24 ч до исследования и распределяли с применением устройства для посева клеток Майгх ^Уе11-Ма1е при количестве 85000 (тО1и 2) или 115000 (тО1и 3) клеток на лунку в 96-луночные планшеты с черными
- 21 023678 стенками, покрытые поли-Э-лизином (ΒΌ ВюС’оа! #354640) в среде, содержащей только 250 (тО1и 2) или 125 (тО1и 3) мкМ Ь-глутамина (свежедобавленного).
Внутриклеточные уровни кальция контролировали до и после добавления соединений с применением считывателя НиоготеЫс 1тадшд Р1а!е Кеабег (РЫРК, Мо1еси1аг ЭеуюеЦ. Буфер для анализа состоял из буферного солевого раствора Хэнка (НВ88; 81дта) с добавкой 20 мМ НЕРЕ8. Среду удаляли и инкубировали клетки с 8 мкМ Р1ио-3АМ (Мо1еси1аг РгоЪек, Р-1241; 50 мкл на лунку) в буфере для анализа в течение 90 мин (т01и 2) или 120 мин (т01и 3) при 25 С. Раствор красителя удаляли и заменяли его свежим буфером для анализа (50 мкл на лунку). Анализ РЫРК с одним дополнением (8шд1е-аббШои РЫРК аккау), позволяющий получить кривую концентрация-ответ с 11 точками (разведения 3Х, начиная с 10 мкМ) для агониста глутамата (р18Ьег А125-100), проводили перед каждым экспериментов для подтверждения обычного ответа в случае ЕС50. Результаты анализировали с применением Ргйт ν4.03 (ОгарЬРаб 8оП\\аге). Соединения согласно настоящему изобретению тестировали с применением анализа РЫРК с одним дополнением, используя профиль концентрация-ответ с 10 точками, разведения 3Х, начиная с конечной концентрации 25 мкМ. Соединение согласно настоящему изобретению солюбилизировали в виде 10 мМ смеси в 0,1 н. №ГОН и хранили при -20°С. Их разбавляли буфером для анализа, получая серии с трехкратным разведением. После снятия исходных 5-секундных показаний флуоресценции на устройстве для РЫРК соединение согласно настоящему изобретению добавляли в планшет с клетками (50 мкл на лунку). Для установления агонистической активности снимали показания каждую секунду в течение первых 30 с и далее каждые 3 с в общем в течение 90 с. Было определено, что максимальный ответ достигается при ЕСтах (100 мкМ глутамата). Эффект соединения измеряли как высота максимального пика минус высота минимального пика в относительных единицах флуоресценции (КРИ) с коррекцией по базовой флуоресценции, измеряемой в отсутствие глутамата. Определения проводили с применением единых планшетов. Агонистические эффекты количественно оценивали как процент стимуляции, вызванной соединением отдельно, по отношению к максимальному глутаматному ответу. Все данные рассчитывали в виде относительных значений ЕС50 с применением программы аппроксимации четырехпараметрической логистической кривой (АсЙуЬуВаке ν5.3.1.22).
Соединение согласно примеру 2, для которого в исследовании ЬтО1и 2 РЫРК проводили измерения, по существу, как описано выше, характеризовалось значением ЕС50, составляющим 39,0 нМ ± 5,9 (и= 3, ошибку рассчитывали как стандартную ошибку среднего (8ЕМ)). Также соединение согласно примеру 2, для которого в исследовании ЬтО1и 3 РЫРК проводили измерения, по существу, как описано выше, характеризовалось значением ЕС50, составляющим 285 нМ ± 52,5 (и= 8, ошибку рассчитывали как 8ЕМ). Данные результаты показали, что соединение согласно примеру 2 является сильным агонистом т01и 2 и т01и 3.
Восстановление от постоянной боли, вызванной инъекцией формалина
В результате введения формалина в подошвенную поверхность задней лапы крысы возникают две фазы ноцицептивного поведения (такие как облизывание, укусы и вздрагивание лапы, в которую делали инъекцию): ранняя фаза, продолжающаяся примерно 5 мин после введения формалина, и поздняя фаза от примерно 10-й до 60-й мин после инъекции формалина. Данные две фазу разделяет период спокойствия от примерно 5-й до 10-й мин. Подсчет случаев такого поведения, вызванного формалином, можно автоматизировать с помощью камеры испуга (8К-ЬаЪ, 8аи Э1едо ЬЫгитепК 8аи И1едо, СА), которая определяет движение крыс посредством акселерометра. Тестируемое соединение (активное) вводили (внутрибрюшинным путем) неголодавшим самцам крыс Спрег-Доули в диапазоне доз, составляющем 0,3-10 мг/кг, за 1 ч до введения формалина в подошвенную область. Далее крыс помещали в отдельные цилиндры в пределах тестируемых камер для адаптации. Тестируемое соединение (пролекарство) вводили перорально в диапазоне доз, составляющем 0,45-15 мг/кг, неголодавшим самцам крыс Спрег-Доули за 2 ч перед инъекцией формалина в подошвенную область. Далее крыс помещали в отдельные цилиндры в пределах тестируемых камер для адаптации. В определенные моменты времени крыс вынимали из цилиндров, вводили им формалин (50 мкл 5% раствора в солевом растворе) подкожно в подошвенную поверхность задней правой лапы и сразу же помещали обратно в цилиндры. Цилиндры помещали в клетки системы определения, находящиеся в пределах тестируемых камер, обеспечивая тем самым непрерывное контролирование ответа в течение 60 мин с 1-секундными отсчетами. Число ноцицептивных явлений [число 1-секундных отчетов с периодичностью в 1 секунду с >20 единицами нагрузки] объединяли в 5минутные интервалы. Порог, составляющий 20 единиц нагрузки, был достаточно высок для устранения включения нормальных физиологических событий, таких как дыхание или нюх, но его величина была значительна для обнаружения ноцицептивных событий. Данные преобразовывали, определяя количество явлений, для которых было установлено превышение порога (20 единиц нагрузки) в каждый 1секундный отсчет в течение 60 мин сбора данных. Балл ранней фазы представляли собой общее количество явлений, для которых было установлено превышение 20 единиц нагрузки с период времени от 0 до 5 мин. Балл поздней фазы получали путем сложения общего числа событий с превышением 20 единиц загрузки с 11-й по 40-ю мин периода сбора данных. Данные по формалину оценивали посредством однофакторного дисперсионного анализа (ΛNΟУА) и анализировали подходящие контрасты с применени- 22 023678 ем ΐ-теста Даннета для двусторонних сравнений с применением программы для статистического анализа ίΜΡ (ν 6.0.2) (8А8 ΙηδΙίΙιιΑ 1пс, Сагу, N0). Различия считали значимыми, если значение р было менее 0,05 Расчеты ΕΌ50 проводили с использованием аппроксимации кривой нелинейной регрессии по проценту преобразованных данных о восстановлении для каждой дозы.
Соединения согласно примеру 2, для которого в данном исследовании проводили измерения, по существу, как описано выше, характеризовалось значением ΕΌ50, составляющим 0,7 мг/кг (внутрибрюшинное введение). Соединение согласно примеру 10, для которого в данном исследовании проводили измерения, по существу, как описано выше, характеризовалось значением ΕΌ50, составляющим 4,8 мг/кг (пероральное введение). Данные результаты показали, что соединения, находящиеся в рамках объема настоящего изобретения, являются подходящими лекарственными средствами от постоянной боли.
Восстановление от вызванной сшиванием нервов Ь5/Ь6 тактильной аллодинии
Одностороннее сшивание нервов, иннервирующих заднюю область лап, приводит к хронической постоянной боли, проявляющейся в виде тактильной аллодинии у крыс Сшивание нервов Ь5/Ь6 осуществляли (К1т с1 а1. Ραίη (1992) 50, 355-363). Нейропатическую травму наносят путем тугого сшивания левых спинномозговых нервов Ь5 и Ь6 под анестезией, обеспечиваемой газообразной смесью изофлурана (3% для индукции и 2% для поддержания) и кислорода. Минимум через 14 дней после хирургического вмешательства оценивали тактильную аллодинию путем измерения тактильной чувствительности пораненной лапы к нитям фон Фрея с возрастающими силами изгиба (от 0,3 до 15 г) (СНар1ап с1 а1. ΐ οί №иго8С1епсе МсЙюШ (1994) 53, 55-63). Крыс считали гиперчувствительными, если они демонстрировали тактильную аллодинию (отдергивания лапы в ответ на применение силы изгиба менее 2 г). Базовые значения определяли сразу же после оценки тестируемого соединения. Тестируемое соединение (пролекарство) вводили перорально в дозе 15 мг/кг и измеряли тактильный порог для отдергивания лапы при значениях времени 1, 2 и 4 ч после введения. Данные выражали в виде порога ответа в граммах (г) и представляли их вместе со стандартными ошибками среднего (± стандартная ошибка среднего) для каждого момента времени. Данные анализировали с применением дисперсионного анализа с последующим ροδί Нос тестом Даннетта, и они представляют абсолютное изменение болевого порога (Стах = максимальный базовый уровень ответа) и выражали в виде среднего [1од (максимальный ответ) - 1од балл для преддозы)] (г).
Соединение согласно примеру 10, введенное перорально в дозе 15 мг/кг (где п=8, ошибку рассчитывали как 8ΕΜ), для которого в данном исследовании проводили измерения, по существу, как описано выше, характеризовалось значительно повышенным механическим порогом через 1, 2 или 4 ч 9,06 ± 2,26, 12,31 ± 1,86 и 8,63 ± 1,98 соответственно, по сравнению с соответствующими значениями после лечения носителем 1,50 ± 0,60, 1,34 ± 0,75 и 2,35 ± 0,62 через 1, 2 или 4 ч соответственно. Данные результаты показали, что соединения, находящиеся в рамках объема настоящего изобретения, являются подходящими лекарственными средствами от состояний с невропатической болью.
Восстановление от вызванной СРА механической гипералгезии
Индукция местного воспалительного процесса в задней лапе крысы вызывает постоянную механическую гипералгезию, которая может быть измерена путем определения порога получения болезненной реакции в ответ на раздражители, связанные с давлением. Способ обеспечения вызванной полным адъювантом Фрейнда (СРА) механической гипералгезии у крыс, в целом, описан в источнике 1айаго1а е1 а1., Вгаш Рс5 (1988) 455, 205-212. Крыс помещали под действие изофлурановой анестезии, при этом в подошву правой лапы делали инъекцию 50 мкл СРА (81дта С5881, 1 мг/мл экстракт микобактерий в 85% парафиновом масле, 15% маннида моноолеат). Животным позволяли восстановиться в мягких клетках с подстилкой и измеряли изменения, соответствующие механической гипералгезии, через 24 ч после инъекции СРА. Механическую гипералгезию (тест РапйаП 8е1Н1о) определяли, осторожно придерживая крысу и размещая ее лапу между цоколем и толкателем (алгезиметр Идо ВахПе). Записывали грамм-силу, когда животное отдергивало лапу. Максимальная приложенная сила составляла не более 250 граммсилы, и если крыса не отдергивала лапу, значение записывали 250 грамм-силы.
До инъекции СРА у крыс определяли базовый ответ. Ответ после введения СРА определяли на следующее утро (примерно через 24 ч после инъекции СРА). Крыс рандомизировали на основании ответа после введения СРА и любых крыс, для которых значение было >150 грамм-силы, исключали из дальнейшего исследования. Тестируемое соединение (пролекарство) вводили перорально в диапазоне доз от 1,5 до 15 мг/кг и измеряли механический порог отдергивания лапы через 1 и 2 ч после введения. Статистическую значимость определяли как значение р < 0,05 при анализе ковариации с последующим ро$1 Нос тестом Даннетта в каждый момент времени. В нижеприведенной табл. 2 приведены статистически значимые результаты для соединения согласно примеру 10, анализ которого проводили, по существу, как описано выше. Эти результаты показали, что соединения, находящиеся в рамках настоящего изобретения, являются подходящими лекарственными средствами от состояний с хронической воспалительной болью, такие как остеоартрит и ревматоидный артрит.
- 23 023678
Таблица 2
Порог отдергивания лапы (грамм-сила)
Базовый уровень (до СРА) 24 часа (после СРА) Один час (после введения) Два часа (после введения)
Носитель (1% НЕС) 236 ± 7 112 ±9 98 ±7 109± 14
1,5 мг/кг соединения согласно примеру 10 перорально 243 ± 5 113 ± 8 180±14* 186±19*
4,5 мг/ кг соединения согласно примеру 10 перорально 221 ± 10 114 ±9 153 ±20* 221 ± 20‘
15 мг/кг соединения согласно примеру 10 перорально 244 ±4 108± 12 250 ± 0* 232±15*
Значения представлены в виде среднее ± ЗЕМ для И = 8-10 на группу.
* значение р < 0,05 по отношению к носителю в тот же момент времени (АЛОУА и 1тест Даннета)
Восстановление от поведения при боли, вызванной вздутием ободочной и прямой кишки Висцеральная боль у крыс может быть вызвана вздутием полости ободочной и прямой кишки, и такую боль контролировали посредством оценки рефлекторного сокращения брюшных мышц. Измерение рефлекторных сокращений брюшных мышц при боли, вызванной вздутием ободочной и прямой кишки у крыс, осуществляли, по существу, как описано ИотатоиИ е1 а1. Неиго§а51тоеп1его1о§у апй МоИШу (2003) 15, 363-369 и ИтЬап е1 а1. 1. о£ РЬаттасо1о§у апй Ехр. ТЬег. (1999) 290, 207-213. Самцам крыс Спраг-Доули хирургически имплантировали электромиографические (ЭМГ) электроды в косую мышцу живота и позволяли им восстановиться в течение одной недели, в течение которой животные приспосабливались к обработке и частичному ограничению, чтобы минимизировать воздействие стресса. Данные измерений базового ЭМГ собирали и записывали после вставки в прямую кишку (8 см) смазанного латексом баллона, присоединенного к контроллеру/регулятору давления до пошагового установления давления между 20, 40 и 60 мм рт.ст. в течение периода 20 с с 3-минутным периодом отдыха между попытками. Для каждого из указанных уровней давления регистрируется набор из трех данных по действию давления, после чего осуществляется переходом на следующий уровень давления. Данные собирают в виде площади под кривой для ЭМГ (мквольт в секунду) в процессе стимуляции давления и вычисляют среднее для трех испытаний. Тестируемое соединение (пролекарство) перорально вводят в диапазоне доз от 1,5 до 17 мг/кг за 90 мин до начала вздутия ободочной и прямой кишки. Статистическая значимость определяется как значение р<0,05 при анализе ковариации с последующим рок1 Ьос тестом Даннетта. В табл. 3 ниже представлены статистически значимые результаты для соединения согласно примеру 10, анализ которого проводили, по существу, как описано выше. Данные результаты показывают, что соединения, находящиеся в рамках объема настоящего изобретения, являются подходящими лекарственными средствами от состояний с висцеральной болью.
Таблица 3
АиС данных ЭМГ для брюшных мышц (мкВ/с) при давлении в ободочной и прямой кишке 60 мм рт. ст.
А1ТС данных ЭМГ для брюшных мышц (мкВ/с) при давлении в ободочной и прямой кишке 60 мм рт. ст. Базовый уровень (до введения) 90 минут (после введения)
Носитель (1% НЕС) 813 ± 101 849 ± 65
1.5 мг/кг соединения согласно примеру 10 перорально 853 ± 142 618 ±92
4,5 мг/кг соединения согласно примеру 10 перорально 887±152 531 ±99*
17 мг/кг соединения согласно примеру 10 перорально 773 ±134 266 ± 87*
Значения представлены в виде среднее ± ЗЕМ для Н = 8-16 на группу.
* значение р < 0,05 по отношению к носителю в тот же момент времени ('АЖ)УА и 1-тест Даннета)
Восстановление от вызванной фенилциклидином (РСР) гиперлокомоторной активности у крыс Введение антагонистов рецепторов Н-метил-И-аспартата (НМИА), таких как кетамин или фенциклидин (РСР), вызывают подобные психотомиметическим эффекты в организме человека, которые похожи на симптомы, наблюдаемые у пациентов с шизофренией. Способность агентов направлять в обрат- 24 023678 ную сторону эффекты антагонистов ΝΜΌΑ, стимулирующие опорно-двигательный аппарат, часто используется в качестве животной модели психоза, демонстрируя хорошую прогностическую валидность для обнаружения клинической эффективности лекарственных средств для шизофрении и биполярного расстройства.
Двигательную активность контролировали путем размещения отдельных самцов крыс Спрег-Доули (Наг1ап, Индианаполис, Индиана) в прозрачные пластиковые клетки, представляющие собой обувные коробки размером 45x25x20 см с подстилкой из древесной стружки глубиной 1 см и металлической решеткой в верхней части клетки. Устройства для контроля двигательной активности (Кш6ег 8аепййс) состояли из прямоугольной стойки из 12 фотолучей, расположенных в формате 8x4 (или при группировке с высокой плотностью - из 22 лучей в формате 15x7) на высоте 5 см, и второй стойки (для измерения поведения подъема) на высоте 15 см. Клетка, представляющая собой обувную коробку, находилась внутри этих стоек, а стойки находились на столешнице высотой примерно 0,9 м (3 фута) в изолированном помещении. Соединение согласно настоящему изобретению (активное) вводили (интраперитонеальным путем) в диапазоне доз 0,3-10 мг/кг в течение 30 мин до введения фенциклидина (РСР) в дозе 5 мг/кг. Соединение согласно настоящему изобретению (пролекарство) перорально вводили крысам натощак в диапазоне 0,3-30 мг/кг в течение ночи за 4 ч до введения РСР в дозе 5 мг/кг. В день исследования крыс помещали в испытательные клетки и позволяли адаптироваться в течение 30 мин до введения РСР; крыс контролировали в течение дополнительных 60 мин после введения РСР.
Анализ данных и расчеты ΕΌ50 проводили с применением ОгарйРа6 Рпкт (Сан-Диего, Калифорния. США). Посредством анализа мощности установили, что необходимо 8-10 крыс в группе, чтобы иметь соответствующую статистическую мощность выявления различий в лечении (мощность = 0,8). Однофакторный дисперсионный анализ (ΑΝΟνΑ) с множественным рок! йос сравнительным тестом Даннетта проводили по общей 60-минутной двигательной активности. Расчеты ΕΌ50 выполняли с использованием аппроксимации кривой нелинейной регрессии на процент данных о направлении трансформации в обратную сторону для каждой дозы.
Соединение согласно примеру 2, для которого в данном исследовании проводили измерения, по существу, как описано выше, характеризовалось значением ΕΌ50, составляющим 1,46 мг/кг (внутрибрюшинное введение). Соединения согласно примерам 5 и 6, для которых в данном исследовании проводили измерения, по существу, как описано выше, характеризовалось значениями ΕΌ50, составляющими 2,95 мг/кг (пероральное введение) и 4,31 мг/кг (пероральное введение) соответственно. Эти результаты показывают, что соединения, входящие в объем настоящего изобретения, являются подходящими лекарственными средствами для шизофрении и биполярного расстройства.
Ослабление вызванной стрессом гипертермии у крыс
Гипертермия, повышение температуры тела, представляет собой общее явление, которое достоверно установлено для многих млекопитающих, включая человека, в ответ на стресс. При многих тревожных расстройствах гипертермия происходит как часть патологии и считается одним из симптомов болезни. Соединения, которые ослабляют вызванную стрессом гипертермии у животных, как полагают, являются подходящими для лечения тревожных расстройств у человека. Генерализованное тревожное расстройство и посттравматическое стрессовое расстройство относятся к расстройствам, которые можно лечить с помощью таких соединений. Обычный и минимально инвазивной способ анализа вызванной стрессом гипертермии является измерение температуры тела, и вызванной стрессом повышение температуры тела посредством ректального термометра. Исследовали самцов крыс Иксйег Р-344 (Наг1ап, Индианаполис, Индиана, США) массой 275-350 г. Всех животных размещали индивидуально, снабжая пищей и автоматизированной подачей воды, доступной по желанию, и поддерживали при 12-часовом цикле свет/темнота (свет включали в 06:00). Животные голодали в течение примерно 12-18 ч до начала эксперимента, проводимого во время световой фазы. Крысам внутрибрюшинно вводили объем дозы 1 мл/кг с соединениями согласно настоящему изобретению в дозах из диапазона 0,3, 1, 3 и 10 мг/кг. Носитель представлял собой солевой раствор с добавкой №ОН до достижения рН 5-7. Антагонист тС1иК 5 МТЕР (3-[(2-метил-1,3-тиазол-4-ил)этинил]пиридин), который продемонстрировал надежную подобную анксиолитической активность в доклинических моделях, применяли в качестве вещества сравнения (5 мг/кг, внутрибрюшинный путь, при растворении в воде). Сразу же после дозирования крыс возвращали в их исходную клетку, экспериментатор выключал свет и выходил из комнаты. Комнату для введения затемняли на оставшуюся часть 1-часового периода предварительной обработки.
После окончания периода предварительной обработки крыс помещали в отдельную ярко освещенную соседнюю комнату, где определяли базовые температуры тела путем вставки ректального зонда, смазанного минеральным маслом. Температуру тела оценивали с помощью ректального зонда для крыс РНУ81ТЕМР КЕТ-2® (Рйукйетр 1п$1гитеп1$ 1пс., Клифтон, Нью-Джерси, США). Зонд вставляли примерно на 2 см в прямую кишку, чтобы измерить центральную температуру тела (это базовая температура тела, Т1, в градусах Цельсия). Через 10 мин измеряли вторую температуру тела (Т2). Разница температур тела (Т2 - Т1) обозначала вызванный стрессом гипертермический ответ. Дозу, при которой соединение согласно настоящему изобретению вызывает 35% уменьшение вызванного стрессом гипертермического
- 25 023678 ответа по отношению к ответу, вызываемому носителем, обозначали как дозу Т35.
Соединение согласно примеру 2, для которого в данном исследовании проводили измерения, по существу, как описано выше, характеризовалось значением Т35, составляющим 0,57 мг/кг. Соединение согласно примеру 5, для которого в данном исследовании проводили измерения, по существу, как описано выше, характеризовалось значением Т35, составляющим 6,4 мг/кг. Данные результаты показали, что соединения, находящиеся в рамках объема настоящего изобретения, являются подходящими лекарственными средствами от тревожных расстройств. Более конкретно, соединения, находящиеся в рамках объема настоящего изобретения, являются подходящими лекарственными средствами для генерализованного тревожного расстройства и/или посттравматического стрессового расстройства.
Скрининг ίη νίΐΓο ингибиторов РерТ1-опосредованного поглощения 01у8аг и определение 1С50
Анализы активности РерТ1 были разработаны с целью проверки способности пролекарств к взаимодействию с переносчиком РерТ1, опосредующим всасывание в кишечнике.
Клетки НеЬа, полученные из кишечника человека (Американская коллекция типовых культур), выращивали в среде Нус1опе (ЗпуПгодеп. № по каталогу 8Н30243), содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (ФБС), 0,1 мМ заменимых аминокислот (ЗАК) и 100 ед./мл пенициллина со 100 мкг/мл стрептомицина при 37°С в увлажненной атмосфере, содержащей 5% СО2. Клетки этой линии использовали для проведения вплоть до 40 пассажей, а затем выводили из эксперимента. Замороженные клетки во флаконах объемом 1 мл размораживали в водяной бане в течение 1-2 мин и добавляли к 5 мл питательной среды при 37°С. В каждый флакон серии Т помещали 8,5 мл свежей среды и 1,5 мл исходной суспензии клеток. Клетки пересеивали дважды в течение недели. Пересев осуществляли путем промывания флаконов 10 мл смеси фосфатно-солевой буфер-этилендиаминтетрауксусная кислота (ФСБ-ЭДТА), добавления 2 мл раствора трипсина на 2-5 мин для открепления клеток и добавления 8 мл свежей среды для ингибирования активности трипсина в дальнейшем. В каждый новый флакон помещали комбинацию из 8,5 мл свежей среды и 1,5 мл исходной суспензии клеток для разведения клеток в соотношении 1:6. Клетки инкубировали при 37°С до тех пор, пока они не были готовыми для исследования поглощения.
Клетки, достигшие 70-80% слияния во флаконах серии Т, высевали за 1 день до процедуры трансфекции. Флакон с исходной культурой обрабатывали ФСБ-ЭДТА и трипсином для открепления клеток и с этого момента применяли среду для трансфекции. Среда для трансфекции представляла собой модифицированную по способу Дульбекко среду Игла (ΌΜΕΜ) + ЗАК. В каждую лунку добавляли 0,5 мл смеси клеток (требуемая концентрация клеток составляла 1,3x10 ), и клетки инкубировали при 37°С в течение ночи. За 24 ч до анализа клетки трансфицировали геном РЕРТ1. Смесь для трансфекции получали путем объединения 600 мкл бессывороточной среды для трансфекции, 18 мкл реагента для трансфекции РиОепе6 (КосЬе Όί;·ΐβηο5(Χ5) и 11 мкг ДНК, кодирующей РерТ1. Комплекс реагент для трансфекции-ДНК инкубировали в течение 20 мин, и в каждую лунку добавляли 24 мкл комплекса реагент-ДНК.
Ингибирование РЕРТ1-опосредованного поглощения [глицил-1-2-14С]глицилсаркозина (01у8аг) измеряли в клетках, выращенных в 24-луночных планшетах, через 24 ч после трансфекции, как было опубликовано ранее (2Ьап§ е( а1. 2004. 1. РЬагт. Ехрег ТЬег. 310:437-445). Для определения способности соединения согласно изобретению ингибировать поглощение [14С]О1у-8аг пролекарства инкубировали с достигшими 80-90% слияния клетками НеЬа, временно трансфицированными геном РерТ1, в концентрации 5 мМ в среде для анализа поглощения с рН 6,0 в присутствии 5 мкМ [14С]О1у-8аг (Могауек ВюсЬеписак) и 20 мкМ 01у-8аг, не содержащего радиоактивной метки. Среда для анализа поглощения состояла из 140 мМ ЫаС1, 5,4 мМ КС1, 1,8 мМ СаС12, 0,8 мМ Мд8О4, 5 мМ глюкозы, 25 мМ трис-(гидроксиметил)аминометанового буфера (Трис). Далее рН раствора доводили до 6,0 с помощью 2-(Ы-морфолино)этансульфоновой кислоты. Инкубацию проводили в объеме 500 мкл при комнатной температуре в течение 3 мин. Для остановки поглощения по завершении времени инкубации среду для анализа поглощения отсасывали с помощью аспиратора от монослоя клеток и добавляли в лунки 500 мкл ледяного ФСБ. Клетки промывали 3 раза 500 мкл не содержащего Са+2 и Мд'2 ФСБ комнатной температуры. Затем клетки лизировали добавлением 300 мкл 1% водного раствора Тритона Х100 (ТгЪоп Х100). Отбирали аликвоты объемом 200 мкл и определяли радиоактивность с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика для измерения количества [14С]О1у-8аг, присутствующего в каждой из инкубационных лунок. Устанавливали значения для отрицательного контроля, не содержащего ингибиторов, и рассчитывали процент ингибирования для каждого пролекарства по отношению к этой контрольной пробе. Отрицательный контроль (глицин) и два положительных контроля (цефадроксил и цефалексин) включали параллельно в каждый эксперимент для подтверждения жизнеспособности системы анализа. Пролекарства, ингибировавшие поглощение 01у8аг так же или лучше, чем цефалексин, считали приемлемыми. Средние значения ± стандартное отклонение составляли 10,1 ±9,5% (п=19) для глицина, 53,2 ± 13,2 % (п= 19) для цефадроксила и 37,5 ± 14,7 % (п= 18) для цефалексина.
С целью определения 1С50 по отношению к РерТ1 пролекарства инкубировали в диапазоне концентраций (от 0,0625 до 25 мМ) в присутствии 5 мкМ [14С]О1у-8аг и 20 мкМ 01у-8аг, не содержащего радиоактивной метки. Процедуры инкубации и отбора проб в точности повторяли таковые для скрининга ингибиторов РерТ1, описанного выше. Для каждой концентрации пролекарств получали данные по погло- 26 023678 щению [14С]О1у-8аг и рассчитывали значения 1С50.
Соединения согласно примерам 5, 6 и 7, для которых в данном исследовании проводили измерения, по существу, как описано выше, в концентрации 5 мМ ингибировали НРерТ1-опосредованное поглощение [3Н]О1у-8аг на 89, 87 и 78% соответственно. Соединения согласно примерам 5 и 6, для которых в данном исследовании проводили измерения, по существу, как описано выше, характеризовались 1С50 для ингибирования НРерТ1-опосредованного поглощения [3Н]О1у-8аг, составляющими 1,98 и 0,25 мМ соответственно. Эти результаты показывают, что соединения, входящие в объем настоящего изобретения, при пероральном введении подвержены всасыванию, опосредованному переносчиком РерТ1.
Анализ ίη νίΐΓΟ гидролиза пролекарств в кишечнике
Замороженные гомогенаты двенадцатиперстной кишки человека (соотношение ткань:буфер 1:2 с применением 100 мМ Трис-фосфатного буфера, рН 7,4), не содержащие ни фенилметилсульфонилфторида (ФМСФ), ни ЭДТА, приобретали в Се1§18 Ιη νίίτο ТесНпо1од1е5 (Балтимор, Мэриленд).
Каждую партию двенадцатиперстной кишки человека получали от отдельного донора, кишку выскабливали, и срезы замораживали раздельно. Все исходные коллекции тканей обрабатывали при 4°С и немедленно замораживали при -70°С. Гомогенаты кишки человека размораживали и разводили до конечной концентрации белка 0,5 мг/мл в 100 мМ ФСБ, рН 7,4 непосредственно перед инкубациями.
Инкубации осуществляли в 96-луночных планшетах, и все пролекарства подвергали анализу в двух повторностях на каждый день. Готовили исходные растворы пролекарств в воде с концентрацией 1 мМ. Аликвоту гомогената кишки объемом 200 мкл с концентрацией белка 0,5 мг/мл и 196 мкл 100 мМ ФСБ помещали в 96-луночный планшет в водяной бане при 37°С. 4 мкл раствора пролекарства с концентрацией 1 мМ переносили в гомогенат с применением 96-канального дозатора. Сразу после добавления пролекарства (нулевой момент времени) и через 1 ч инкубации из инкубационной смеси отбирали образцы объемом 50 мкл с применением автоматического 96-канального дозатора с одноразовыми наконечниками и одновременным забором и добавляли непосредственно к 200 мкл метанольного раствора для остановки реакции, содержащего 100 нг/мл внутреннего стандарта. Далее образцы центрифугировали при 3500 об/мин в течение 5 мин при 10°С. Супернатант (200 мкл) переносили в заключительный 96луночный планшет для ПЦР и герметично закрывали для анализа посредством жх/мс/мс.
Концентрации гидролизованного активного метаболита в инкубационных смесях определяли методом ЖХ/МС/МС на квадрупольном масс-спектрометре ΑΡΙ 8с1ех 4000 с программным обеспечением Лпа1у51 версии 1.4.2, турбоэлектрической ионизацией, положительной ионизацией, в режиме мониторинга выбранных реакций (8КМ). Применяли колонку для ВЭЖХ \Уа1ег5 Λί1;πιίί$® Т3 (20x2,1 мм, 5 мкм) при комнатной температуре со скоростью потока 1,0 мл/мин и градиентом подвижной фазы от 0,1 % подвижной фазы А до 99 % подвижной фазы А. Подвижная фаза А представляла собой смесь 1000:5 вода:тептафтормасляная кислота, а подвижная фаза В - смесь 1:1 метанол:ледяная уксусная кислота.
Концентрации гидролизованного активного метаболита в инкубационных смесях, содержащих гомогенат двенадцатиперстной кишки, определяли по калибровочным кривым, полученным путем последовательного двукратного разведения стандартных образцов начиная с 10 мкМ в 100 мМ ФСБ, рН 7,4 и затем добавления содержащего внутренний стандарт метанольного раствора для остановки реакции, идентичного таковому для опытных образцов. Средние значения и стандартные отклонения рассчитывали с применением программного обеспечения Мюгокой® ОГПсе Ехсе1® 2007. Степень гидролиза определяли как молярный процент образующегося активного метаболита по отношению к концентрации добавленного пролекарства. Степень гидролиза положительного контроля, эталонного пролекарства А, до эталонного активного метаболита, лекарственного средства А, проводимого в каждой серии экспериментов, составляла в среднем 75,3 % (п= 20). Итоговые значения далее нормализовали к интенсивности образования эталонного активного метаболита, лекарственного средства А.
Соединения согласно примерам 5, 6 и 7, для которого в данном исследовании проводили измерения, по существу, как описано выше, характеризовались значениями степени гидролиза в присутствии гомогената кишки человека относительно эталонного пролекарства А, составляющими 36% (п = 3, 8И = 2,7), 44% (п = 3, 8И = 4,1) и 34 % (п= 1) соответственно. Эти результаты показывают, что соединения, входящие в объем настоящего изобретения, подвержены гидролизу в кишечнике человека.
Анализ ш νίίτο гидролиза в гомогенате фракции 89 печени человека
Фракции 89 печени приобретали в ХеШесН ЬЬС (Ьепеха, МО). Партия была отобрана из пула от двух доноров, одного мужчины и одной женщины. Препарат фракции 89 печени получали и разбавляли в не содержащем ЭДТА буфере для гомогенизации, состоящем из 50 мМ Трис, рН 7,4 и 150 мМ хлорида калия, при 4°С. Пролекарства инкубировали в гомогенате печени в течение 2 ч при 37°С, после чего концентрацию активного метаболита определяли посредством ЖХ/МС/МС. В качестве положительного контроля анализа применяли гидролиз клопидогрела до его производного в форме карбоновой кислоты.
Инкубации осуществляли в формате 96-луночных планшетов, и все пролекарства подвергали анализу в двух повторностях на каждый день. Готовили исходные растворы пролекарств в воде с концентрацией 1 мМ. Фракцию 89 печени человека разводили до конечной концентрации белка 0,5 мг/мл в 100 мМ ФСБ, рН 7,4.
- 27 023678
Аликвоту гомогената фракции 89 печени человека объемом 200 мкл с концентрацией белка 0,5 мг/мл и 196 мкл 100 мМ ФСБ помещали в 96-луночный планшет в водяной бане при 37°С. 4 мкл раствора пролекарства с концентрацией 1 мМ переносили в гомогенат с применением 96-канального дозатора. Для подтверждения того, гидролиз не обусловлен химической нестабильностью, пролекарства также инкубировали отдельно в ФСБ без фракции 89 печени. Сразу после добавления пролекарства (нулевой момент времени) и через 1 ч инкубации из инкубационной смеси отбирали образцы объемом 50 мкл с применением автоматического 96-канального дозатора с одноразовыми наконечниками и одновременным забором и добавляли непосредственно к 200 мкл метанольного раствора для остановки реакции, содержащего 100 нг/мл внутреннего стандарта. Далее образцы центрифугировали при 3500 об/мин в течение 5 мин при 10°С. Супернатант (200 мкл) переносили в заключительный 96-луночный планшет для ПЦР и герметично закрывали для анализа посредством ЖХ/МС/МС.
Количественное определение активного метаболита, образующегося в процессе инкубации, методом ЖХ/МС/МС осуществляли на квадрупольном масс-спектрометре 8с1ех ΑΡΙ 4000 с программным обеспечением Апа1уз1 версии 1.4.2, турбоэлектрической ионизацией, положительной ионизацией, в режиме мониторинга выбранных реакций (8КМ). Применяли колонку для ВЭЖХ ХУаЮгз Αΐΐαηΐίδ® Т3 (20x2,1 мм, 5 мкм) при комнатной температуре со скоростью потока 1,0 мл/мин. Подвижная фаза А представляла собой смесь 1000:5 вода:тептафтормасляная кислота, а подвижная фаза В - смесь 1:1 метанол:ледяная уксусная кислота. Применяли градиент подвижной фазы начиная с соотношения подвижных фаз А/В 99,9/0,1 и заканчивая 1/99.
Концентрации гидролизованного активного метаболита в инкубационных смесях определяли по калибровочным кривым, полученным путем последовательного двукратного разведения стандартных образцов начиная с 10 мкМ в 100 мМ ФСБ, рН 7,4 и затем добавления содержащего внутренний стандарт метанольного раствора для остановки реакции, идентичного таковому для опытных образцов. Средние значения и стандартные отклонения рассчитывали с применением программного обеспечения Мюгозой® Ойтсе Ехсе1® 2007. Итоговые значения представляли в виде молярного процента образующегося активного метаболита по отношению к концентрации добавленного пролекарства. В качестве положительного контроля применяли степень гидролиза клопидогрела до его производного в форме карбоновой кислоты, в среднем составлявшую 73,0 % (п= 27).
Соединения согласно примерам 8 и 9, для которых в данном исследовании проводили измерения, по существу, как описано выше, характеризовались значениями степени гидролиза в присутствии фракции 89 печени человека, составляющими 23 и 59,3% соответственно. Эти результаты показывают, что соединения, входящие в объем настоящего изобретения, подвержены гидролизу в печени человека.
Полученные данные демонстрируют, что приведенные в примерах аминокислотные пролекарства ингибировали поглощение субстрата РерТ1 С1у8аг так же хорошо или лучше, чем цефадроксил и цефалексин (Ζ1ι;·ιη§ е1 а1., 2004. ДРЕТ 310:437-445), что указывает на возможность их всасывания посредством переносчика РерТ1 в организме человека при пероральном введении. Кроме всасывания пролекарства, важное значение при попадании в организм имеет гидролиз пролекарства с образованием активного метаболита. Результаты описанных в настоящей заявке исследований гидролиза ίη νίΐτο свидетельствуют о том, что приведенные в примерах аминокислотные пролекарства подвержены гидролизу в кишечнике человека. Г идролиз приведенных в примерах сложнодиэфирных пролекарств происходил в гомогенатах печени человека, что указывает на возможность гидролиза этих сложнодиэфирных пролекарств в организме человека после перорального введения. В совокупности эти данные указывают на возможность гидролиза приведенных в примерах аминокислотных пролекарств и приведенных в примерах сложнодиэфирных пролекарств в организме человека с высвобождением активного метаболита.
Фармакокинетический анализ
Самцам крыс линии Спрег-Доули натощак вводили соединение согласно примеру 2 в дозе 1 мг/кг внутривенно или соединение согласно примеру 5 в дозе 7,5 мг/кг (равной в молярных эквивалентах 5 мг/кг соединения согласно примеру 2) через желудочный зонд в стандартном исследовании с перекрестным дизайном (Ν = 3, при этом каждая крыса получала и внутривенную, и пероральную дозу). Для внутривенного введения соединение согласно примеру 2 растворяли в воде, а для перорального введения соединение согласно примеру 5 получали в водной переносящей среде, состоящей из гидроксиэтилцеллюлозы (1%), полисорбата 80 (0,25%) и пеногасителя 1510-И8 (0,05%). Для облегчения серийных заборов крови хирургическим путем были имплантированы канюли. Кровь собирали в пробирки с ЭДТА в течение периода 0-24 ч после введения дозы, центрифугировали и плазму хранили в замороженном состоянии до момента анализа.
Образцы плазмы размораживали, аликвоты объемом 50 мкл переносили в 96-луночный планшет, добавляли 50 мкл раствора внутреннего стандарта, и образцы перемешивали. Затем добавляли 300 мкл ацетонитрила, образцы перемешивали на приборе типа вортекс в течение 3 мин и центрифугировали. Аликвоты супернатанта объемом 300 мкл переносили в отдельный планшет и выпаривали в атмосфере азота при 40°С. Остаток восстанавливали в 100 мкл 0,5% раствора гептафтормасляной кислоты в воде, перемешивали перемешивали на приборе типа вортекс и центрифугировали. Аликвоты объемом 20 мкл
- 28 023678 далее подвергали анализу посредством ЖХ/МС/МС с применением автоматического пробоотборника δΐιίιηαύζιι и системы для ВЭЖХ, соединенной с масс-спектрометром АВ §с1ех 4000, в режиме положительной турбоэлектрической ионизации. МС/МС переходы представляли собой 283,2 44,2 а.е.м. для пролекарства согласно примеру 5 и 212,1 103,1 а.е.м. для активного соединения согласно примеру 2.
Применяли колонку для ВЭЖХ Айаийк Т3, 50x2,1 мм, 5 мкм со скоростью потока подвижной фазы 1,0 мл/мин и двухкомпонентной подвижной фазой, состоящей из (А) 0,2% раствора муравьиной кислоты в воде и (В) смеси ацетонитрил-вода (1:1, об./об.), и градиентом от 2% В до 98% В в течение 0,8 мин. Время удерживания соединения согласно примеру 2 составляло приблизительно 0,53 мин.
Фармакокинетические параметры рассчитываются, исходя из данных концентрации плазмы с применением ХУакоп для νίηάοΥδ (ТЬегто δοίοηΙίΓίο). Относительная биодоступность при пероральном приеме определяется путем сравнения площади под кривой зависимости концентрации в плазме от времени (АиС) для активного соединения согласно примеру 2 после внутривенного введения с АИС активного метаболита после перорального введения пролекарства согласно примеру 5.
Эффективное пролекарство должно одновременно хорошо всасываться перорального введения и впоследствии гидролизоваться с обеспечением высвобождения активного метаболита в системный кровоток. Относительная биодоступность включает оба параметра путем сравнения АИС активного метаболита после перорального введения пролекарства с АИС активного соединения после внутривенного введения активного соединения. Для самцов крыс относительная биодоступность активного метаболита после перорального введения пролекарства согласно примеру 5 при измерении в данном исследовании, по существу, как описано выше, составляет 60 ± 14% (среднее значение ± стандартное отклонение), что демонстрирует, что пролекарство согласно примеру 5 одновременно хорошо всасывается и интенсивно гидролизуется с получением активного метаболита ίη νίνο.

Claims (27)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение формулы I где К1 представляет собой водород, К2 представляет собой водород и К3 представляет собой водород;
    К1 представляет собой водород, К2 представляет собой (2§)-2-аминопропаноил и К3 представляет собой водород;
    К1 представляет собой водород, К2 представляет собой (2§)-2-амино-4-метилсульфанилбутаноил и К3 представляет собой водород;
    К1 представляет собой водород, К2 представляет собой 2-аминоацетил и К3 представляет собой водород;
    К1 представляет собой бензил, К2 представляет собой водород и К3 представляет собой бензил; или
    К1 представляет собой (2-фторфенил)метил, К2 представляет собой водород и К3 представляет собой (2-фторфенил)метил;
    или его фармацевтически приемлемая соль.
  2. 2. Соединение по п.1, представляющее собой (1§,2§,5К,6§)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль.
  3. 3. Соединение по п.1, представляющее собой гидрохлорид (1§,2§,5К,6§)-2-аминоспиро[бицикло [3.1.0]гексан-4,1 '-циклопропан] -2,6-дикарбоновой кислоты.
  4. 4. Соединение по п.1, представляющее собой (1§,2§,5К,6§)-2-[[(2§)-2-аминопропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль.
  5. 5. Соединение по п.1, представляющее собой гидрохлорид (1§,2§,5К,6§)-2-[[(2§)-2-аминопропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты.
  6. 6. Соединение по п.1, представляющее собой дигидрат (1§,2§,5К,6§)-2-[[(2§)-2-аминопропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты.
  7. 7. Соединение по п.1, представляющее собой (1§,2§,5К,6§)-2-[[(2§)-2-аминопропаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновую кислоту; 1,4-диоксан (1:0,5); гидрохлорид.
  8. 8. Соединение по п.1, представляющее собой (1§,2§,5К,6§)-2-[[(2§)-2-амино-4-метилсульфанилбутаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль.
  9. 9. Соединение по п.1, представляющее собой гидрохлорид (1§,2§,5К,6§)-2-[[(2§)-2-амино-4-ме- 29 023678 тилсульфанилбутаноил]амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты.
  10. 10. Соединение по п.1, представляющее собой (18,28,5К,68)-2-[(2-аминоацетил)амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль.
  11. 11. Соединение по п.1, представляющее собой гидрохлорид (18,28,5К,68)-2-[(2-аминоацетил)амино]спиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоновой кислоты.
  12. 12. Соединение по п.1, представляющее собой дибензил-(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилат или его фармацевтически приемлемую соль.
  13. 13. Соединение по п.1, представляющее собой дибензил-(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло [3.1.0]гексан-4,1 '-циклопропан] -2,6-дикарбоксилат; 1,4-диоксан; гидрохлорид.
  14. 14. Соединение по п.1, представляющее собой бис-[(2-фторфенил)метил]-(18,28,5К,68)-2-аминоспиро[бицикло[3.1.0]гексан-4,1'-циклопропан]-2,6-дикарбоксилат или его фармацевтически приемлемую соль.
  15. 15. Соединение по п.1, представляющее собой гидрохлорид бис-[(2-фторфенил)метил](18,28,5К,68)-2-аминоспиро [бицикло [3.1.0]гексан-4,1 '-циклопропан] -2,6-дикарбоксилата.
  16. 16. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение или соль по любому из пп.1-15 и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество.
  17. 17. Применение соединения или соли по любому из пп.1-15 в терапии неврологических или психических расстройств.
  18. 18. Применение соединения или соли по любому из пп.1-15 для лечения неврологического расстройства, выбранного из группы, состоящей из постоянной боли, невропатической боли, хронической воспалительной боли и висцеральной боли.
  19. 19. Применение по п.18, где неврологическое расстройство представляет собой постоянную боль.
  20. 20. Применение по п.18, где неврологическое расстройство представляет собой невропатическую боль.
  21. 21. Применение по п.18, где неврологическое расстройство представляет собой хроническую воспалительную боль.
  22. 22. Применение по п.8, где неврологическое расстройство представляет собой висцеральную боль.
  23. 23. Применение соединения или соли по любому из пп.1-15 для лечения психического расстройства, выбранного из группы, состоящей из шизофрении, биполярного расстройства, генерализованного тревожного расстройства и посттравматического стрессового расстройства.
  24. 24. Применение по п.23, где психическое расстройство представляет собой шизофрению.
  25. 25. Применение по п.23, где психическое расстройство представляет собой биполярное расстройство.
  26. 26. Применение по п.23, где психическое расстройство представляет собой генерализованное тревожное расстройство.
  27. 27. Применение по п.23, где психическое расстройство представляет собой посттравматическое стрессовое расстройство.
EA201491291A 2012-02-01 2013-01-29 Агонисты mglu 2/3 EA023678B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP12382038 2012-02-01
US201261619139P 2012-04-02 2012-04-02
PCT/US2013/023529 WO2013116174A1 (en) 2012-02-01 2013-01-29 Mglu 2/3 agonists

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201491291A1 EA201491291A1 (ru) 2014-10-30
EA023678B1 true EA023678B1 (ru) 2016-06-30

Family

ID=48870759

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201491291A EA023678B1 (ru) 2012-02-01 2013-01-29 Агонисты mglu 2/3

Country Status (35)

Country Link
US (1) US8575214B2 (ru)
EP (1) EP2809647B1 (ru)
JP (1) JP5755821B2 (ru)
KR (1) KR101518365B1 (ru)
CN (1) CN104093703B (ru)
AP (1) AP2014007821A0 (ru)
AR (1) AR089718A1 (ru)
AU (1) AU2013215396B2 (ru)
BR (1) BR112014018760A8 (ru)
CA (1) CA2863085C (ru)
CL (1) CL2014001928A1 (ru)
CO (1) CO7020921A2 (ru)
CR (1) CR20140344A (ru)
DK (1) DK2809647T3 (ru)
DO (1) DOP2014000179A (ru)
EA (1) EA023678B1 (ru)
ES (1) ES2592166T3 (ru)
GT (1) GT201400168A (ru)
HK (1) HK1199014A1 (ru)
HR (1) HRP20160867T1 (ru)
HU (1) HUE028863T2 (ru)
IL (1) IL233732A0 (ru)
LT (1) LT2809647T (ru)
MA (1) MA35884B1 (ru)
MX (1) MX355779B (ru)
NZ (1) NZ626456A (ru)
PE (1) PE20141680A1 (ru)
PH (1) PH12014501725A1 (ru)
PL (1) PL2809647T3 (ru)
PT (1) PT2809647T (ru)
RS (1) RS54976B1 (ru)
SG (1) SG11201404138VA (ru)
SI (1) SI2809647T1 (ru)
TW (1) TW201343610A (ru)
WO (1) WO2013116174A1 (ru)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101481164B1 (ko) * 2008-01-30 2015-01-09 주식회사 미래셀바이오 체세포 유래 다능성 줄기세포의 제조 방법

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997017952A1 (en) * 1995-11-16 1997-05-22 Eli Lilly And Company Excitatory amino acid receptor antagonists
WO2003104217A2 (en) * 2002-06-01 2003-12-18 Eli Lilly And Company Prodrugs of excitatory amino acids
WO2011084437A1 (en) * 2009-12-21 2011-07-14 Eli Lilly And Company Mglu2 agonists

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL326695A1 (en) 1995-11-16 1998-10-26 Lilly Co Eli Derivatives of stimulating aminoacids
ZA983930B (en) 1997-05-14 1999-11-08 Lilly Co Eli Excitatory amino acid receptor modulators.
US6333428B1 (en) * 1998-08-31 2001-12-25 Taisho Pharmaceutical Co., Ltd. 6-fluorobicyclo[3.1.0]hexane derivatives
GB2355982A (en) * 1999-11-03 2001-05-09 Lilly Co Eli Heterocyclic amino acids
EP1295865A4 (en) * 2000-06-28 2005-06-01 Taisho Pharmaceutical Co Ltd NEW DICARBOXYLENE DERIVATIVES
WO2002055485A1 (en) 2001-01-11 2002-07-18 Eli Lilly And Company Prodrugs of excitatory amino acids
HUP0400620A3 (en) 2001-01-11 2012-09-28 Lilly Co Eli Prodrugs of excitatory amino acids and pharmaceutical compositions containing them and process for preparation the compounds
NZ544131A (en) 2003-06-26 2009-11-27 Taisho Pharmaceutical Co Ltd 2-Aminobicyclo[3.1.0]hexane-2,6-dicarboxylic ester derivative

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997017952A1 (en) * 1995-11-16 1997-05-22 Eli Lilly And Company Excitatory amino acid receptor antagonists
WO2003104217A2 (en) * 2002-06-01 2003-12-18 Eli Lilly And Company Prodrugs of excitatory amino acids
WO2011084437A1 (en) * 2009-12-21 2011-07-14 Eli Lilly And Company Mglu2 agonists

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
O'NEIL M.J. ET AL.: "Recent developments in metabotropic glutamate receptors as novel drug targets", DRUGS OF THE FUTURE, vol. 35, no. 4, 1 January 2010 (2010-01-01), page 307, XP055059811, ISSN: 0377-8282, DOI: 10.1358/dof.2010.035.04.1487693, page 314-page 316 *

Also Published As

Publication number Publication date
EA201491291A1 (ru) 2014-10-30
JP5755821B2 (ja) 2015-07-29
EP2809647A1 (en) 2014-12-10
CL2014001928A1 (es) 2014-11-07
IL233732A0 (en) 2014-09-30
CA2863085A1 (en) 2013-08-08
AR089718A1 (es) 2014-09-10
ES2592166T3 (es) 2016-11-28
PT2809647T (pt) 2016-08-29
AP2014007821A0 (en) 2014-07-31
SI2809647T1 (sl) 2016-08-31
CN104093703B (zh) 2016-01-20
AU2013215396A1 (en) 2014-07-17
PE20141680A1 (es) 2014-11-08
MX2014008598A (es) 2014-08-22
AU2013215396B2 (en) 2015-03-12
AU2013215396A8 (en) 2014-08-07
CO7020921A2 (es) 2014-08-11
DK2809647T3 (en) 2016-10-03
MA35884B1 (fr) 2014-12-01
US20130197079A1 (en) 2013-08-01
BR112014018760A8 (pt) 2017-07-11
MX355779B (es) 2018-04-30
NZ626456A (en) 2016-02-26
BR112014018760A2 (ru) 2017-06-20
CN104093703A (zh) 2014-10-08
EP2809647B1 (en) 2016-07-06
DOP2014000179A (es) 2014-10-15
KR20140107658A (ko) 2014-09-04
RS54976B1 (sr) 2016-11-30
JP2015512870A (ja) 2015-04-30
CA2863085C (en) 2015-11-17
HUE028863T2 (en) 2017-01-30
HRP20160867T1 (hr) 2016-10-07
GT201400168A (es) 2015-08-27
WO2013116174A1 (en) 2013-08-08
PL2809647T3 (pl) 2017-07-31
HK1199014A1 (en) 2015-06-19
KR101518365B1 (ko) 2015-05-08
LT2809647T (lt) 2016-10-10
PH12014501725A1 (en) 2014-11-24
CR20140344A (es) 2014-08-25
US8575214B2 (en) 2013-11-05
SG11201404138VA (en) 2014-08-28
TW201343610A (zh) 2013-11-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7462985B2 (ja) 芳香族化合物および抗腫瘍薬物の調製におけるその使用
CN102822171B (zh) 作为自分泌运动因子抑制剂的苯并萘啶胺类
US11072595B2 (en) Benzothiophene-based selective estrogen receptor downregulator compounds
JP2018528246A (ja) Ｔｅａｄ転写因子自己パルミトイル化阻害剤
ES2564952T3 (es) Nuevos derivados de N-(4-(azetidina-1-carbonil)fenil)-(hetero-)arilsulfonamida como moduladores de piruvato quinasa M2 (PKM2)
CN104513229A (zh) 喹唑啉衍生物及其制备方法
CA3183948A1 (en) Heteroalkyl dihydroquinoline sulfonamide compounds
BR112019019948A2 (pt) derivado de 6-pirimidina-isoindol como inibidor de erk1/2
EA020229B1 (ru) АГОНИСТЫ mGlu2
TW202045480A (zh) 化合物及使用方法
CA3008484C (en) Alkyl dihydroquinoline sulfonamide compounds
WO2018028491A1 (zh) 吲哚胺2，3-双加氧酶抑制剂及其在药学中的用途
EA023678B1 (ru) Агонисты mglu 2/3
JP6454413B2 (ja) アミノスルホニル系化合物、その製造方法、および使用
US9499552B2 (en) Pyrazolo[1,5-A]pyrimidine derivative and use of anti-tumor thereof
AU2021229979A1 (en) Crystal of tricyclic compound acting on CRBN protein and preparation method therefor
CN103596933B (zh) 作为mglu2受体激动剂的双环(3.1.0)己烷-2,6-二羧酸衍生物
WO2013141264A1 (ja) 新規システイン化合物及びその塩

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM