CN104093703B - Mglu 2/3激动剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供可用于治疗神经或精神病症的新的mGlu？2/3激动剂。

Description

MGLU 2/3激动剂
本发明涉及mGlu2/3激动剂，更特别地涉及新的4-取代的双环[3.1.0]己烷及其前药、其药物组合物、及其治疗用途。
L-谷氨酸是中枢神经系统中主要的兴奋性神经递质，并且被称为兴奋性氨基酸。代谢型谷氨酸(mGlu)受体是调节神经元兴奋性的G-蛋白偶联受体。神经或精神病症的治疗已经与mGlu兴奋性氨基酸受体的选择性活化相关。更具体而言，研究表明mGlu2/3激动剂具有止痛、抗精神病、抗焦虑、抗抑郁和神经保护的性质。因此，mGlu2/3激动剂的这些性质可用于治疗神经病症如慢性疼痛疾患或精神病症如精神分裂症、双相性障碍(也称为躁狂抑郁病症)、广泛性焦虑症和创伤后应激病症。
WO9717952公开了某些4-取代的双环[3.1.0]己烷化合物，被称为是兴奋性氨基酸受体拮抗剂。
过度的谷氨酸能调节(glutamatergictone)已经牵涉中枢神经系统的许多疾病状态；然而，在临床实践中缺少校正这种病理生理状态的有效活性剂。特别地，由于缺少具有适当的药物样特性的mGlu2/3激动剂，尚未实现临床应用。因此，对有效力的有效的mGlu2/3激动剂仍有需求。本发明提供新的4-取代的双环[3.1.0]己烷及其前药，它们是有效力的且有效的mGlu2/3激动剂。在本发明范围内的特定前药在口服施用后被充分吸收，随后被水解以释出活性代谢物到全身循环中，并因此适用于临床开发。本发明的这种新化合物可以解决对有效力的、有效治疗神经病症如慢性疼痛疾患(包括持续疼痛、神经性疼痛、慢性炎症性疼痛或内脏疼痛)、或精神病症如精神分裂症、双相性障碍、广泛性焦虑症或创伤后应激病症的需求。
本发明提供式I化合物或其药学上可接受的盐
其中
R1为氢，R2为氢，且R3为氢；
R1为氢，R2为(2S)-2-氨基丙酰基，且R3为氢；
R1为氢，R2为(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基，且R3为氢；
R1为氢，R2为2-氨基乙酰基，且R3为氢；
R1为苄基，R2为氢，且R3为苄基；或
R1为(2-氟苯基)甲基，R2为氢，且R3为(2-氟苯基)甲基。
本发明提供(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
作为特定实施方案，本发明提供(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸。
作为特定实施方案，本发明提供(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸的盐酸盐。
本发明提供(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
作为特定实施方案，本发明提供(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
作为特定实施方案，本发明提供(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸；1,4-二噁烷(1：0.5)；盐酸盐。
本发明提供(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
作为特定实施方案，本发明提供(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
本发明提供(1S,2S,5R,6S)-2-[(2-氨基乙酰基)氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
作为特定实施方案，本发明提供(1S,2S,5R,6S)-2-[(2-氨基乙酰基)氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
本发明提供(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二苄酯或其药学上可接受的盐。
作为特定实施方案，本发明提供(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二苄酯；1,4-二噁烷；盐酸盐。
本发明提供(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸双[(2-氟苯基)甲基]酯或其药学上可接受的盐。
作为特定实施方案，本发明提供(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸双[(2-氟苯基)甲基]酯盐酸盐。
本发明提供药物组合物，其包含(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-[(2-氨基乙酰基)氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二苄酯或其药学上可接受的盐、或(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸双[(2-氟苯基)甲基]酯或其药学上可接受的盐、以及药学上可接受的载体和任选地其它治疗成分。
本发明提供药物组合物，其包含(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-[(2-氨基乙酰基)氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二苄酯或其药学上可接受的盐、或(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸双[(2-氟苯基)甲基]酯或其药学上可接受的盐、和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明提供治疗神经或精神病症的方法，包括向需要其的患者施用有效量的(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-[(2-氨基乙酰基)氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二苄酯或其药学上可接受的盐、或(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸双[(2-氟苯基)甲基]酯或其药学上可接受的盐。
本发明提供(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-[(2-氨基乙酰基)氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二苄酯或其药学上可接受的盐、或(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸双[(2-氟苯基)甲基]酯或其药学上可接受的盐在制造用于治疗神经或精神病症的药物中的用途。
本发明提供用于治疗的(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-[(2-氨基乙酰基)氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二苄酯或其药学上可接受的盐、或(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸双[(2-氟苯基)甲基]酯或其药学上可接受的盐。本发明还提供用于治疗神经或精神病症的(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-[(2-氨基乙酰基)氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐、(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二苄酯或其药学上可接受的盐、或(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸双[(2-氟苯基)甲基]酯或其药学上可接受的盐。
此外，本发明提供本文所述的方法和用途的优选实施方案，其中神经病症选自下组：持续疼痛、神经性疼痛、慢性炎症性疼痛和内脏疼痛，并且精神病症选自下组：精神分裂症、双相性障碍、广泛性焦虑症和创伤后应激病症。
除非另外指出，否则如上所使用的和整篇本发明描述中的下列术语应理解为具有下列含义：
“发明的化合物”和“本发明化合物”包括前药、活性化合物和/或活性代谢物。“前药”是最初为非活性形式且通过正常代谢过程在体内转化为活性形式的一类药物，其中式I中的R1、R2和R3中的至少一个不是氢(例如R1为氢，R2为(2S)-2-氨基丙酰基，且R3为氢；R1为氢，R2为(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基，且R3为氢；R1为氢，R2为2-氨基乙酰基，且R3为氢；R1为苄基，R2为氢，且R3为苄基；或R1为(2-氟苯基)甲基，R2为氢，且R3为(2-氟苯基)甲基)。“活性化合物”或“活性”为例如静脉内或腹膜内向体内施用的活性形式的另一名称，其中式I中的R1、R2和R3为氢。“活性代谢物”为由前药通过正常代谢过程在体内的这种转化产生的活性形式的另一名称，其中式I中的R1、R2和R3为氢。
“药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂”是本领域中被普遍接受的用于递送生物活性剂至哺乳动物例如人的介质。
“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的相对无毒的无机和有机盐。
“治疗有效量”或“有效量”意指研究人员、兽医、医务人员或其它临床医师需求的将引起组织、系统、动物、哺乳动物或人的生物学或医学响应或在它们中产生所需治疗效果的本发明化合物或其药学上可接受的盐或本发明的含有化合物或其药学上可接受盐的药物组合物的量。
术语“治疗”、“处理”等意指包括减缓或逆转病症的进程。这些术语还包括缓解、改善、减弱、消除或减轻病症或疾患的一种或多种症状，即使所述病症或疾患实际上未被消除和即使所述病症或疾患的进程自身未被减缓或逆转。
在本公开通篇中使用的标准命名法中，首先描述了所命名侧链的末端部分，之后是朝向连接点的相邻官能度。例如，甲磺酰取代基与CH3-SO2-等同。
本发明化合物能够例如与许多无机和有机酸反应以形成药学上可接受的酸加成盐或碱加成盐。这类药学上可接受的盐及用于制备它们的常见方法是本领域熟知的。参见例如P.Stahl等人，HANDBOOKOFPHARMACEUTICALSALTS：PROPERTIES,SELECTIONANDUSE,(VCHA/Wiley-VCH,2002)；S.M.Berge等人，“PharmaceuticalSalts,“JournalofPharmaceuticalSciences,第66卷，No.1，1977年1月。
优选使用药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂将本发明化合物配制成药物组合物，通过多种途径施用。优选，这类组合物用于口服或静脉内施用。这类药物组合物和用于制备它们的方法是本领域熟知的。参见例如Remington：TheScienceandPracticeofPharmacy(A.Gennaro等人编，21sted.,MackPublishingCo.,2005)。
实际上施用的本发明化合物将由临床医师在相关情况下确定，所述相关情况包括待治疗的疾患、所选择的施用途径、施用的实际一种或多种本发明化合物、个体患者的年龄、重量和响应，和患者症状的严重性。每天的剂量通常落在约0.1至约300mg的范围内。在某些情况下，低于上述范围下限的剂量水平可能已经足够，而在其它情况下仍可以采用更大的剂量。
本发明化合物或其药学上可接受的盐可以通过本领域已知的多种方法以及下面制备例和实施例中所述的那些方法来制备。可以以不同方式合并所述每一种途径的具体合成步骤以制备本发明化合物或其药学上可接受的盐。
除非另外指出，否则取代基如前文所定义。试剂和原料对于本领域普通技术人员而言通常是易于获得的。其它试剂和原料可以通过有机和杂环化学的标准技术、与结构类似活性化合物和前药的合成类似的技术以及包括任何新方法的下面制备例和实施例中所述的方法来制备。下列制备例和实施例的命名使用SymyxDraw3.1进行。
如本文所使用的下列术语具有所示的含义：“HPLC”是指高压液相色谱；“LC”是指液相色谱；“MS(ES+)”是指使用电喷雾离子化的质谱法；“MS”是指质谱法；“SFC”是指超临界流体色谱；“NMR”是指核磁共振；“TLC”是指薄层色谱；“RT”是指保留时间；“UV”是指紫外；“EDTA”是指乙二胺四乙酸；“PBS”是指磷酸盐缓冲盐水；“PCR”是指聚合酶链反应；“SCX”是指强阳离子交换；和“HLB”是指亲水亲油平衡值。
制备例1
(1S,2S,5R,6S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二叔丁酯
向烘箱干燥的250mL圆底烧瓶加入甲基三苯基溴化鏻(5.41g，14.9mmol)和四氢呋喃(93mL)。将悬浮液冷却至0℃且滴加1M双(三甲基甲硅烷基)氨基钠在四氢呋喃(16.08mL，16.08mmol)中的溶液。在0℃将由此产生的亮黄色混合物搅拌20分钟，然后添加(1S,2S,5R,6R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氧代-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二叔丁酯(5.09g，12.4mmol，对于合成细节参见WO03/104217/A2)在四氢呋喃(31mL)中的溶液。使反应升温至室温并搅拌16小时。在乙酸乙酯(500mL)与水(350mL)之间分配混合物。弃去水层，用盐水(200mL)洗涤有机相。经硫酸镁干燥有机相，过滤，在减压下浓缩。通过用乙酸乙酯：异己烷(5:95至20:80)洗脱的快速色谱纯化，得到为白色固体的标题化合物(4.84g，11.2mmol)。1HNMR(CDCl3)δ1.45(m,27H),1.87(t,J＝2.9Hz,1H),1.98(m,1H),2.43(m,2H),3.07(brm,1H),4.86(brs,1H),5.03(d,J＝2Hz,1H),5.1-5.3(brs,1H)。
制备例2
(1S,2S,5R,6S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二叔丁酯
通过向Aldrichmini-Diazald装置的冷凝管加入干冰(cardice)和异丙醇并填充至三分之一来制备重氮甲烷在乙醚中的无乙醇溶液。在装置的反应部分放入氢氧化钾(740mg，13.2mmol)在水(1.5mL)中的溶液。向该溶液添加二甘醇单乙基醚(4mL)和乙醚(2.4mL)的混合物。将N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(1g，6.8mmol)溶解于乙醚(13mL)和二甘醇单乙基醚(4mL)的混合物中。将该溶液放置在配合至mini-Diazald装置的具有光滑玻璃接头的滴液漏斗中。将氢氧化钾溶液在保持在70℃的水浴中加热，确保在装置出口处收集瓶和用乙醚填充的鼓泡器于干冰/异丙醇浴中冷却。使N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍的溶液以等于由此产生的蒸馏速率的速率添加。一旦完成蒸馏，就通过滴液漏斗滴加另外的乙醚直至冷凝管上的冷凝物变成无色。将由此产生的溶液存储于干冰/异丙醇浴中一直到需要时。将乙酸钯(17.2mg；76.5μmol)悬浮于乙醚(10mL)中。滗析并过滤所得浅褐色溶液，小心添加至已达到环境温度的(1S,2S,5R,6S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二叔丁酯(330mg，765.5μmol)重氮甲烷溶液和乙醚(10mL)的混合物。一旦气体逸出停止，就过滤所得悬浮液，在减压下浓缩，得到260mg未反应的(1S,2S,5R,6S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二叔丁酯和标题化合物的混合物。
由氢氧化钾(2.5g，44.6mmol)在水(4mL)中的溶液、二甘醇单乙基醚(14mL)和乙醚(8mL)以及在乙醚(30mL)和二甘醇单乙基醚(15mL)的混合物中的N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(4g，27.2mmol)制备重氮甲烷在乙醚中的无乙醇溶液。取所得重氮甲烷溶液并在30分钟内将其分批添加至乙酸钯(20mg，89.1μmol)在先前制备的未反应的(1S,2S,5R,6S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二叔丁酯和标题化合物(260mg)的混合物在乙醚(3mL)中的溶液中的悬浮液。一旦气体逸出已停止，静置过夜，然后通过相分离器釉料过滤并在减压下浓缩，得到黑色油状物。通过用乙酸乙酯：异己烷(0:100至75:25)洗脱的快速色谱纯化，得到185mg未反应的(1S,2S,5R,6S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二叔丁酯和标题化合物的混合物。
由氢氧化钾(3.2g，57mmol)在水(5mL)中的溶液、二甘醇单乙基醚(4mL)和乙醚(10mL)以及在乙醚(35mL)和二甘醇单乙基醚(15mL)的混合物中的N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(5g，34mmol)制备重氮甲烷在乙醚中的无乙醇溶液。取所得重氮甲烷溶液并在60分钟内将其分批添加至乙酸钯(20mg，89.1μmol)在先前制备的未反应的(1S,2S,5R,6S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二叔丁酯和标题化合物(185mg)的混合物在乙醚(2mL)中的溶液中的悬浮液。一旦气体逸出已停止，静置30分钟，过滤并在减压下浓缩，得到黄色油状物。通过质量导向的HPLC(RT＝6.4分钟(UV),6.37分钟(MS)；LC柱：水XBridgeTM30mmx100mm5μm；水w/0.1％甲酸；梯度：28-62％乙腈/含0.1％甲酸的水达1.35分钟，然后62-95％达6.65分钟，然后保持在95％达3.55分钟。柱温：环境温度；流速：45mL/分钟)纯化，得到为无色油状物的标题化合物(55.3mg，130.6μmol)。MS(m/z)：446(M+23)。
制备例3
(1S,2S,5R,6R)-2-氨基-4-氧代-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯
向装备有冷凝器、氮气入口和温度计的500mL三颈烧瓶加入在乙醇(365mL)中的(1S,2S,5R,6R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氧代-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二叔丁酯(15g，36.4mmol)。在室温将亚硫酰氯(13.3mL，182.3mmol)经由注射器(略放热)添加至搅拌溶液，然后加热至回流。24小时后将反应冷却至室温，真空浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷(50mL)中，然后在旋转蒸发仪上浓缩(重复3次)。在乙酸乙酯(200mL)与饱和碳酸氢钠(150mL)之间分配残余物。用盐水(150mL)洗涤有机相，经硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩至干，得到为油状物的标题化合物(8.24g，32.3mmol)。MS(m/z)：256(M+1)。
制备例4
(1S,2S,5R,6R)-2-乙酰氨基-4-氧代-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯
在室温将乙酸酐(5mL，50.8mmol)添加至(1S,2S,5R,6R)-2-氨基-4-氧代-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯(7.2g，28.2mmol)和三乙胺(7.9mL，56.4mmol)在干燥二氯甲烷(72mL)中的搅拌溶液。2小时后，用水(100mL)淬灭并剧烈搅拌20分钟。经由疏水性釉料分离二氯甲烷层，蒸发至浅褐色油状物(9.6g)。通过用乙酸乙酯：异己烷(70:30至90:10)洗脱的快速色谱纯化，在干燥后得到为淡黄色玻璃泡沫的标题化合物(6.53g，22mmol)。MS(m/z)：298(M+1),320(M+23),617(2M+23)。
制备例5
(1S,2S,5R,6S)-2-乙酰氨基-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯
向烘箱干燥的250mL圆底烧瓶加入(甲基)三苯基溴化鏻(9.72g，26.7mmol)和无水四氢呋喃(122mL)。将悬浮液冷却至0℃至-5℃并以逐滴方式用2M双(三甲基甲硅烷基)氨基钠在四氢呋喃(13.3mL，26.7mmol)中的溶液处理。在0℃将由此产生的亮黄色混合物搅拌20分钟，然后用(1S,2S,5R,6R)-2-乙酰氨基-4-氧代-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯(6.1g,20.5mmol)在四氢呋喃(30mL)中的溶液处理。在3小时内使反应缓慢升温至室温。在室温搅拌20小时后，用冰水(200mL)淬灭并用乙酸乙酯(200mL)萃取。萃取液用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，干燥，过滤，蒸发至深褐色油状物。添加乙醚(70mL)和异己烷(20mL)。用三苯基氧膦对溶液种晶。允许静置2小时，滗析溶液，添加二氧化硅，在真空下浓缩。通过用乙酸乙酯：异己烷(60:40至80:20)洗脱的快速色谱纯化，得到含有三苯基氧膦的粉红色油状物(6.81g)。通过用乙酸乙酯：异己烷(60:40)洗脱的快速色谱再次纯化，得到为粘稠的黄色油状物的标题化合物(3.98g，13.5mmol)。MS(m/z)：296(M+1),318(M+23),613(2M+23)。
制备例6
(1S,2S,5R,6S)-2-乙酰氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯
在氮气下，将三氟乙酸(1.9mL，25mmol)在二氯甲烷(12.5mL)中的溶液非常缓慢地滴加至(冰浴)冷却的二乙基锌(1M于庚烷中)(25mL，25mmol)在二氯甲烷(12.5mL)中的搅拌溶液。10分钟后，添加二碘甲烷(2.01mL，25mmol)在二氯甲烷(12.5mL)中的溶液。10分钟后，添加(1S,2S,5R,6S)-2-乙酰氨基-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯(2.46g，8.3mmol)在二氯甲烷(12.5mL)中的溶液。60分钟后除去冰浴并留下反应混合物在室温搅拌过夜。通过在剧烈搅拌下将反应混合物滴加至0.2M盐酸水溶液(200mL)淬灭澄清的反应溶液。1小时后分离二氯甲烷层，用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩，得到含有未反应原料的所需产物(4.4g)。通过用乙酸乙酯：环己烷(50:50至100:0)洗脱的快速色谱纯化，得到无色油状物(3.1g)。通过SFC(RT＝2.48分钟(UV,200nm)；HPLC柱：AD-H30mmx250mm5μm；CO2梯度：5％异丙醇/0.2％二甲基乙基胺水溶液，0.5分钟，然后5％-27％达2.2分钟。柱温：35℃；压力：100000kPa；流速：210mL/分钟)纯化，得到未反应的(1S,2S,5R,6S)-2-乙酰氨基-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯(580mg，2.0mmol)和标题化合物(1.82g，5.9mmol)。MS(m/z)：310(M+1),332(M+23)。
制备例7
(1S,2S,5R,6S)-2-氨基-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯
方法1：
通过将三甲基甲硅烷基氯(13.8mL，108mmol)滴加至乙醇(110mL)来制备约1M氯化氢在乙醇中的溶液。将(1S,2S,5R,6S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二叔丁酯(7.4g，18.1mmol)溶解于该酸性溶液中，加热至60℃达16小时。蒸发至粘稠黄色油，再溶解于水(50mL)中并过滤混浊溶液以除去痕量不溶物。用碳酸氢钠(8.4g，0.1mol)中和酸性水溶液且用二氯甲烷萃取(2x100mL)。经由疏水性釉料干燥合并的二氯甲烷溶液，蒸发至淡黄色液体(4.14g)。通过用乙酸乙酯：异己烷(20:80至80:20)洗脱的氨基-键合型二氧化硅色谱纯化，得到无色液体(3.6g)。通过用乙酸乙酯：异己烷(20:80)洗脱的氨基-键合型二氧化硅色谱再纯化，得到标题产物的无色液体(2.81g，61％)。MS(m/z)：254(M+1)。
方法2：
在50℃真空干燥对甲苯磺酸一水合物(6.97g，36.6mmol)达3天。添加至(1S,2S,5R,6S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二叔丁酯(5.0g，12.2mmol)在乙醇(35.5mL)的搅拌溶液中，加热至60℃达3天。在减压下除去溶剂，得到残余物。将残余物溶解于水(100mL)中，使用碳酸氢钠变成碱性，用二氯甲烷萃取(3x100mL)。经硫酸钠干燥萃取液，过滤，然后在减压下浓缩，得到标题化合物的橙色残余物(1.52g，51％)。MS(m/z)：254(M+1)。
制备例8
(1S,2S,5R,6S)-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯
在5分钟内将固体氯甲酸9-芴基甲基酯(3.15g，12.2mmol)分批添加至冷却至0-5℃的(1S,2S,5R,6S)-2-氨基-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯(2.8g，11.1mmol)和碳酸氢钠(2.04g，24.3mmol)在四氢呋喃(28mL)和水(8.4mL)中的搅拌溶液。1小时后，添加水(10mL)，用乙酸乙酯(50mL)萃取。萃取液用盐水溶液(20mL)洗涤，干燥，过滤，蒸发至淡黄色油状物(6.5g)。通过用乙酸乙酯：异己烷(10:90至20:80)洗脱的快速色谱纯化，得到粘稠无色油状物(4.58g)。通过用乙酸乙酯：异己烷(20:80)洗脱的快速色谱再纯化，得到标题化合物的白色半固体泡沫(4.22g，80％)。MS(m/z)：476(M+1)。
制备例9
(1S,2S,5R,6S)-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯
在5分钟内在氮气下将三氟乙酸(2.66g，23.3mmol)在二氯甲烷(11.7mL)中的溶液滴加至冷却至0-5℃的1M二乙基锌的庚烷溶液(23.3mL，23.3mmol)在二氯甲烷(11.7mL)中的搅拌溶液(放热反应)。10分钟后，添加二碘甲烷(6.25g，23.3mmol)在二氯甲烷(11.7mL)中的溶液。10分钟后，添加(1S,2S,5R,6S)-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯(3.70g，7.8mmol)在二氯甲烷(11.7mL)中的溶液。在0℃2小时后，使其升温至室温并搅拌16小时。用冷0.5M盐酸(50mL)和二氯甲烷(20mL)淬灭反应混合物并剧烈搅拌。经由疏水性釉料分离二氯甲烷层，然后蒸发至淡黄色油状物。通过用乙酸乙酯：异己烷(10:90至20:80)洗脱的快速色谱纯化，得到无色油状物(3.49g)。通过用乙酸乙酯：异己烷(20:80)洗脱的快速色谱再纯化，取中央馏分，得到为无色泡沫的标题化合物(2.12g，56％)。MS(m/z)：490(M+1)。来自纯度较低的级分的第二批产物通过重复色谱获得(363mg，另外的9％)。
制备例10
(1S,2S,5R,6R)-2-苄基氧基羰基氨基-4-氧代-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯
方法1：
将二碳酸二苄酯(18.6mL，76.1mmol)添加至(1S,2S,5R,6R)-2-氨基-4-氧代-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯(16.2g，63.5mmol)在二氯甲烷(500mL)中的溶液，然后滴加三乙胺(10.6mL，76.1mmol)。将反应混合物搅拌30分钟，之后用1N盐酸(200mL)洗涤。用盐水洗涤二氯甲烷相，分离，真空浓缩。通过用乙酸乙酯：异己烷(0:100至75:25)洗脱的快速色谱纯化，得到标题化合物(11.6g，47％)。MS(m/z)：388(M+1),410(M+23)。
方法2：
向圆底烧瓶添加(1S,2S,5R,6R)-2-氨基-4-氧代-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯盐酸盐(226.86g，777.65mmol)、水(1.13L)和四氢呋喃(1.13L)。分5次缓慢添加碳酸氢钠(143.72g，1.71mol)(观察到CO2逸出，内部温度为31℃至25℃)。然后添加氯甲酸苄酯(120.6mL，855.42mmol)在四氢呋喃(226.9mL)中的溶液，使内部温度保持在28℃以下(10分钟)，将反应在25℃搅拌1小时。将混合物倒入甲基-叔丁基醚(1.25L)。分离各层，用乙酸乙酯(750ml)萃取水相，弃去水相。用盐水洗涤混合物，经硫酸镁干燥，过滤，浓缩至干，得到为无色油状物的标题化合物(302.82g，777.65mmol)。MS(m/z)：388(M+1)。
制备例11
(1S,2S,5R,6S)-2-苄基氧基羰基氨基-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯
方法1：
向烘箱干燥的500mL圆底烧瓶加入(甲基)三苯基溴化鏻(15.4g，43.1mmol)和无水四氢呋喃(112mL)。将悬浮液冷却至0℃至-5℃，以逐滴方式用2M在四氢呋喃中的双(三甲基甲硅烷基)氨基钠(23mL，46mmol)处理。将由此产生的亮黄色悬浮液在0℃搅拌30分钟，然后用(1S,2S,5R,6R)-2-苄基氧基羰基氨基-4-氧代-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯(11.2g，28.8mmol)在四氢呋喃(22.4mL)中的溶液处理。使反应缓慢升温至室温。4小时后，用冰(120g)、盐水(120mL)淬灭，用乙酸乙酯(250mL)萃取。用盐水(2x100mL)洗涤萃取液，干燥，过滤，蒸发至红色油状物。再溶解于乙醚(100mL)中，分批缓慢添加异己烷(80mL)，沉淀为红色半固体的三苯基氧膦(5.2g)。用干燥二氧化硅(～50g)处理溶液，浓缩至干。通过用乙酸乙酯：异己烷(20:80)洗脱的快速色谱纯化，得到为无色粘稠油状物的标题化合物(7.37g，66％)。MS(m/z)：388(M+1),410(M+23)。
方法2：
在室温将叔丁醇钾(104.72g，933.18mmol)添加至(甲基)三苯基溴化鏻(340.16g，933.18mmol)在四氢呋喃(1.82L)中的悬浮液(内部温度无变化)。然后添加(1S,2S,5R,6R)-2-苄基氧基羰基氨基-4-氧代-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯(302.82g，777.65mmol)在四氢呋喃(1.82L)中的溶液，保持温度在24℃。将混合物在50℃搅拌3小时。用乙酸乙酯(1.5L)稀释反应，用水(2x3L)和盐水洗涤。经硫酸镁干燥有机相，过滤，浓缩，提供深褐色油状物。通过用乙酸乙酯：己烷(9:1)洗脱的快速色谱纯化，得到为无色油状物的标题化合物(183.35g，473.25mmol)。MS(m/z).388(M+1),410(M+23)。
制备例12
(1S,2S,5R,6S)-2-苄基氧基羰基氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯
方法1：
在氮气下在10分钟内将1M二乙基锌的庚烷溶液(64.1mL，64.1mmol)在二氯甲烷(14.6mL)中的溶液缓慢滴加至冷却至0-5℃的三氟乙酸(4.27mL，56.5mmol)在二氯甲烷(73mL)中的搅拌溶液。10分钟后，添加二碘甲烷(4.6mL，56.5mmol)在二氯甲烷(14.6mL)中的溶液。10分钟后，添加(1S,2S,5R,6S)-2-苄基氧基羰基氨基-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯(7.3g，18.8mmol)在二氯甲烷(14.6mL)中的溶液。1小时后，去除冰浴，将混浊溶液在室温搅拌20小时。在24小时后，用冰冷的0.5M盐酸水溶液(160mL，80mmol)和二氯甲烷(200mL)淬灭反应混合物，剧烈搅拌混合物。分离二氯甲烷层，然后干燥二氯甲烷相，通过2疏水性釉料过滤。蒸发至淡黄色油状物，过夜变成褐色。通过用乙酸乙酯：异己烷(20:80)洗脱的快速色谱纯化，得到为无色油状物的标题化合物与未反应的(1S,2S,5R,6S)-2-苄基氧基羰基氨基-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯的混合物(5.1g)。
在氮气下在10分钟内将三氟乙酸(2.93mL，38.7mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液缓慢滴加至冷却至0-5℃的1M二乙基锌的庚烷溶液(38.7mL，38.7mmol)在二氯甲烷(50mL)中的搅拌溶液。10分钟后，将二碘甲烷(3.12mL，38.7mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液添加至反应混合物。10分钟后，添加烯烃(olefin)和(1S,2S,5R,6S)-2-苄基氧基羰基氨基螺[二环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯(5g，12.9mmol)的混合物在二氯甲烷(10mL)中的溶液。1小时后去除冰浴，在室温将混浊溶液搅拌16小时。20小时后，用冰冷的0.5M氯化氢(140mL，70mmol)和二氯甲烷(160mL)淬灭反应混合物，剧烈搅拌混合物。用0.5M盐酸水溶液(100mL)洗涤二氯甲烷层，经硫酸钠干燥，然后通过2疏水性釉料过滤。蒸发至淡黄色油状物(5.89g)。通过用乙酸乙酯：异己烷(15:85至25:75)洗脱的快速色谱纯化，得到为无色油状物的含有少量反应物的标题化合物(4.28g)。
再溶解于丙酮(40mL)、水(20mL)、碳酸氢钠(0.54g，6.45mmol)和硫酸镁(0.78g，6.45mmol)中。冷却至0℃，添加高锰酸钾(0.2g，1.29mmol)，得到亮紫色混合物。在室温3小时后，用固体硫代硫酸钠五水合物(0.32g，1.29mmol)淬灭，通过硅藻土垫过滤悬浮液，通过用丙酮洗涤。蒸发至小体积，用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(60mL)萃取。用盐水洗涤萃取液，干燥，过滤，蒸发至油状物。通过用乙酸乙酯：异己烷(15:85至25:75)洗脱的快速色谱纯化，得到为无色油状物的标题化合物(3.62g，70％)。MS(m/z)：402(M+1)。
方法2：
在0℃(浴温-5℃)经由插管将1M二乙基锌在庚烷中的溶液(1.6L,1.6mol)添加至二氯甲烷(870.9mL)，然后缓慢添加三氟乙酸(121.02mL，1.6mol)在二氯甲烷(870.9mL)中的溶液，保持温度在3℃以下。添加1小时后，将混合物搅拌5分钟，然后一次性添加二碘甲烷(130.3mL，1.6mol)并搅拌15分钟。在10分钟内添加(1S,2S,5R,6S)-2-苄基氧基羰基氨基-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯(183.35g，449.58mmol)在二氯甲烷(348.4mL)中的溶液，将混合物在室温搅拌过夜。冷却至0℃，用0.5M盐酸(1.5L)淬灭，剧烈搅拌混合物。分离有机层，用盐水洗涤，浓缩至干。溶解于水(733.4mL)和丙酮(733.4mL)中，冷却至0℃，然后添加硫酸镁(81.17g，674.37mmol)、碳酸氢钠(56.65g，674.37mmol)，之后高锰酸钾(28.42g，179.83mmol)。将混合物在室温搅拌。30分钟后，添加硫代硫酸钠五水合物(197.10g，311.03mmol)，之后添加硅藻土(100g)。搅拌30分钟，通过硅藻土垫过滤。用甲基-叔丁基醚洗涤垫，用甲基-叔丁基醚用萃取水层。经硫酸镁干燥有机层，过滤，真空浓缩。通过用己烷：甲基-叔丁基醚(10:90至50:50)洗脱的快速色谱纯化，得到为无色油状物的标题化合物(92.67g，51％)。1HNMR(CDCl3)δ：0.39-0.52(m,1H),0.55-0.78(m,3H),1.25(宽t,J＝7.1Hz,6H),1.58(宽dd,J＝2.9和6.3Hz,1H),1.64-1.73(m,1H),1.95(宽t,J＝2.9Hz,1H),2.03-2.17(m,1H),2.52(dd,J＝2.7和6.3Hz,1H),4.09(q,J＝7.1Hz,2H),4.16-4.32(m,2H),5.08(宽s,2H),5.44(宽s,1H),7.28-7.41(m,5H)。
还获得为副产物的(1S,2S,5R,6S)-2-(苄基氧基羰基(甲基)氨基)螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯(22.67g，5.46mmol)。1HNMR(CDCl3)δ：0.37-0.52(m,1H),0.54-0.80(m,3H),1.26(宽t,J＝7.1Hz,6H),1.55-1.68(m,1H),1.64-1.73(m,1H),1.70-1.80(m,1H),1.97(宽t,J＝3.1Hz,1H),2.30(dd,J＝3.1和6.3Hz,1H),3.16(s,3H),3.99-4.29(m,4H),5.09(宽s,2H),7.38-7.62(m,5H)。
制备例13
(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯
方法1：
在室温将哌啶(3.16g，37.2mmol)添加至(1S,2S,5R,6S)-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]2,6-二甲酸二乙酯(2.10g，4.29mmol)在二氯甲烷(10.5mL)中的搅拌溶液。30分钟后，蒸发至黄色固体。通过用乙酸乙酯：异己烷(30:70至80:20)洗脱的快速色谱纯化，首先洗脱出1-(9H-芴-9-基甲基)-哌啶，随后洗脱出为淡黄色液体的标题化合物(1.07g，93％)。MS(m/z)：268(M+1)。
方法2：
将(1S,2S,5R,6S)-2-苄基氧基羰基氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯(3.62g，9mmol)溶解乙醇(54mL)中，将溶液添加至10％钯碳(Degussa类型E101NE/W,0.18g，0.17mmol)。在345kPa于Parr装置中氢化4小时。通过硅藻土垫过滤反应物以去除催化剂，用乙醇洗涤，蒸发至为标题化合物的无色油状物(2.23g，93％)。MS(m/z)：268(M+1)。
制备例14
(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯
将(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1’-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯(1.92g，7.17mmol)、(2S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(1.92g，10mmol)、4-二甲基氨基吡啶(9mg，717μmol)和1-羟基苯并三唑(1.36g，10mmol)在二氯甲烷(48mL)中合并。添加三乙胺(1.5mL，10.8mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.92g，10mmol)并在氮气气氛下于室温搅拌2小时。用乙酸乙酯(200mL)、水(50mL)和盐水(50mL)稀释反应。剧烈搅拌，然后分离乙酸乙酯层，用0.2M盐酸(50mL)、水(50mL)、饱和碳酸氢钠(50mL)和盐水(50mL)洗涤。干燥，过滤，浓缩溶液，得到黄色油状物(3.48g)。通过用乙酸乙酯：异己烷(15:85至25:75)、然后(25:75至40:60)洗脱的快速色谱纯化，得到为油状物的材料。再溶解于二氯甲烷中，浓缩，在真空下干燥，得到为白色泡沫状材料的标题化合物(3.05g，6.95mmol)。MS(m/z)：461(M+23)。
基本上通过制备例14的方法制备下列化合物：
制备例17
(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1’-环丙烷]-2,6-二甲酸
方法1：
在氮气下将2M氢氧化锂在水中的溶液(27.8mL，55.6mmol)添加至冷的(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯(3.05g，6.9mmol)在四氢呋喃(36mL)中的搅拌溶液。将双层溶液在室温搅拌20小时。用2M盐酸(29mL)、冰(～20g)酸化，用乙酸乙酯(100mL)萃取。用盐水(50mL)洗涤萃取液，在硫酸钠上干燥，过滤，蒸发至白色半固体泡沫。将材料再溶解于热乙酸乙酯(15mL)中。过滤，在真空下干燥材料，得到为白色固体的标题化合物(2.06g，5.4mmol)。MS(m/z)：405(M+23)。
方法2：
将(1S,2S,5R,6S)-2-苄基氧基羰基氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯(159g，396.05mmol)溶解于乙醇(792.1mL)中，添加10％钯碳(15.9g，14.94mmol)，之后添加37.5％wt/wt盐酸水溶液(6.62mL，79.21mmol)。在室温于413kPa在2LParr装置中氢化。4小时后，将混合物通过硅藻土和玻璃微纤维滤器(Whatman)过滤，真空浓缩。将粗品溶解于四氢呋喃(396mL)中，添加氯二甲氧基三嗪(74.50g，415.86mmol)和(2S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(79.88g，415.86mmol)。将该混合物冷却至0℃，添加N-甲基吗啉(131.06mL，1.19mol)。在室温搅拌混合物。5小时后将粗品通过硅藻土过滤，用四氢呋喃(200mL)洗涤滤饼。在真空下去除部分溶剂且将所得橙色溶液冷却至0℃。滴加2M氢氧化钠水溶液(792.1mL，1.58mol)。将混合物搅拌过夜，使反应达到室温。添加二氯甲烷(1L)，分离各相。用更多的水(300mL)洗涤有机层。用1N硫酸氢钾将合并的水层酸化至pH＝2-3，然后用乙酸乙酯萃取。经硫酸镁干燥有机层，过滤，在真空下蒸发。将粗品溶解于四氢呋喃(600mL)中，加热至回流。添加庚烷(2.1L)，冷却溶液。过滤固体，在真空下干燥，得到为白色固体的标题化合物(149g，98％)。MS(m/z)：405(M+23)。
基本上通过制备例17的方法制备下列化合物：
制备例20
(1S,2S,5R,6S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯。
方法1：
向(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯(0.47g，722.38μmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液添加聚合物支撑的二异丙基-乙基胺(1.02g，3.61mmol)，之后添加在二氯甲烷(6.00mL)中的二碳酸二叔丁酯(0.41g，1.88mmol)，将反应混合物在室温搅拌过夜。添加另外的二碳酸二叔丁酯(0.32g，1.36mmol)，再搅拌2小时。用乙醇(20mL)稀释，通过用2柱体积的乙醇预处理的SCX-2离子交换树脂柱(10g)纯化。装载后，用4柱体积的乙醇洗涤柱子，然后真空浓缩洗脱液，得到粗产物(808mg)。通过用乙酸乙酯：环己烷(0:100至40:60)洗脱的快速色谱纯化粗材料，得到所需材料(100mg)。用2柱体积的3M在甲醇中的氨冲洗柱子，得到未反应的粗(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯的黄色固体(430mg)。将二碳酸二叔丁酯(0.32g，1.44mmol)添加至回收的在四氢呋喃(20mL)中的(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯，在室温搅拌过夜。然后添加(201.37μL，1.44mmol)和另外的二碳酸二叔丁酯(0.32g，1.44mmol)，保持搅拌72小时。添加过量三乙胺(201.37μL，1.44mmol)、二碳酸二叔丁酯(0.32g，1.44mmol)和催化剂N,N-二甲基4-氨基吡啶(40.93μmol)，搅拌过夜。用乙醇(30mL)稀释，通过用2柱体积的乙醇预处理的SCX-2离子交换树脂柱(10g)纯化溶液。用4柱体积的乙醇洗涤，真空浓缩溶液，得到757mg粗的所需产物。通过用乙酸乙酯：环己烷(0:100至40:60)洗脱的快速色谱纯化，得到所需标题产物的第二级分(24mg)。合并两个级分，得到标题化合物(337.47μmol,47％)。MS(m/z)：390(M+23),757(2M+23)。
方法2：
向(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯(1.4g，5.24mmol)在四氢呋喃(30mL)中的溶液添加二碳酸二叔丁酯(0.88g，4.01mmol)，在氮气下将反应混合物在室温搅拌过夜。通过疏水性釉料过滤，用乙酸乙酯洗涤无色凝胶。真空浓缩所合并的有机物，得到无色油状物。通过用乙酸乙酯：异己烷(0:100至30:70)洗脱的快速色谱纯化，得到1.82g油状物。在高真空下再干燥，得到标题化合物(1.79g，93％)。MS(m/z)：390(M+23),757(2M+23)。
制备例21
(1S,2S,5R,6S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸
将在四氢呋喃(29.2mL)中的(1S,2S,5R,6S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯(1.79g,4.87mmol)添加至新鲜制备的氢氧化锂一水合物(1.64g，38.97mmol)在水(19.5mL)中的溶液，在60℃搅拌过夜。用水(30mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(2x50mL)。分离水相和有机层。用2M盐酸洗涤有机层。用2M盐酸(25mL)洗涤水层，然后用乙酸乙酯萃取(2x50mL)。合并有机层，用盐水洗涤(15mL)。经硫酸镁干燥，过滤，浓缩至干。再溶解于二氯甲烷中，浓缩至干，得到标题化合物(1.49g，98％)。MS(m/z)：334(M+23)。
制备例22
(1S,2S,5R,6S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二苄酯
将碳酸铯(0.24g，730.7μmol)和苄基溴(87.16μL，730.7μmol)添加至(1S,2S,5R,6S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸(0.09g，292.29μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液。在氮气下在室温搅拌1.5小时。用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。分离各层，通过疏水性釉料过滤有机物，之后浓缩至干，得到粗产物(134mg)。通过用乙酸乙酯：异己烷(1:99至25:75)洗脱的快速色谱纯化，得到澄清油状物。进一步通过用乙酸乙酯：异己烷(1:9910:90)洗脱的快速色谱纯化，得到为澄清油状物的标题产物(105mg，68％)。MS(m/z)：514(M+23)。
基本上通过制备例22的方法制备下列化合物：
实施例1
(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐
向5mLReactiVial加入(1S,2S,5R,6S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二叔丁酯(55mg，129.8μmol)。向其添加5N盐酸水溶液(3mL；20.8mmol)和1,4-二噁烷(1mL)。将混合物在90℃搅拌1小时。密封ReactiVial，在90℃继续搅拌3小时。冷却至环境温度，静置3天。在减压下浓缩至深色固体。通过用2柱体积的甲醇洗涤，之后用6柱体积的水洗涤来制备HLBWaters(1g)柱。将深色固体溶解于水中，装载于柱子上。用水(2柱体积)洗涤柱子，收集洗脱液。冻干溶液，得到标题化合物(16.1mg，65μmol)。MS(m/z)：212(M+1)。1HNMR(D2O)δ0.45(m,1H),0.53(m,1H),0.64(m,1H),0.74(m,1H),1.72-1.78(m,2H)1.86(d,J＝14.2Hz,1H),2.07(m,1H),2.37(m,1H)。
实施例2
(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸
向2M氢氧化钠(11.5mL，23.1mmol)添加(1S,2S,5R,6S)-2-乙酰氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯(1.19g，3.8mmol)。在添加时将反应混合物在氮气覆盖层下加热至回流。21小时后添加过量2M氢氧化钠(5.8mL，11.5mmol)，继续加热120小时。通过如下阳离子交换色谱(DowexTM50X8-100)纯化。过滤任何不溶性颗粒，用HPLC级水漂洗。浓缩溶液至半。将溶液装载于树脂上，使其以约1滴/1-2秒的滴速流过柱子。起始装载后，体积已落至树脂表面，用HPLC级水(～1至2柱体积)漂洗树脂，重复3次。监测流出物的pH，用HPLC级水继续冲洗直至应用结束(pH返回至pH＝7)。一旦已观察到完整pH循环且流出物已返回至pH＝7，就用至少一个柱体积的HPLC级水、HPLC级水：四氢呋喃(1:1)、然后HPLC级水中的每一种洗涤柱子。用10％吡啶：HPLC级水替换来自树脂的产物，用10％吡啶：HPLC级水继续洗脱直至通过TLC未检测出另外的产物。将含有所需材料的级分合并，浓缩至干，得到白色固体。冻干，得到标题化合物(795mg，3.8mmol)。MS(m/z)：212(M+1).1HNMR(D2O+5％d5-吡啶)δ：0.38(m,1H),0.45(m,1H),0.55(m,1H),0.69(m,1H),1.50(dd,J＝2.9Hz,1H),1.62(d,J＝13.7Hz,1H),1.78(m,2H),2.11(dd,J＝2.9Hz,1H)。
实施例3
(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸；1,4-二噁烷(1：0.5)；盐酸盐
在室温在氮气下，将4M氯化氢在1,4-二噁烷中的溶液(1.57mL，6.3mmol)添加至(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸(0.16g，418.4μmol)在1,4-二噁烷(1.6mL)中的搅拌悬浮液。16小时后，过滤白色固体，用1,4-二噁烷洗涤，在60℃真空干燥过夜，得到标题化合物(0.14g)：MS(m/z)：283(M+1)。1HNMR(D2O)δ0.46(m,1H),0.65(m,1H),1.47(d,J＝7Hz,3H),1.70(dd,J＝2.7Hz,1H),1.81(q,J＝15Hz,2H),1.87(宽t,J＝2.7和2.9Hz,1H),2.65(dd,J＝2.7和2.9Hz,1H),3.68(s,4H),4.00(q,J＝7Hz,1H),4.70(m,2H)。
实施例4
(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸
将浓盐酸(36.94mL，430.11mmol)添加至(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸(82.24g，215.06mmol)在丙酮(822.4mL)中的溶液，在50℃搅拌混合物。1.5小时后，将混合物冷却至0℃，添加50％在水中的氢氧化钠使得pH＝3.6-3.8。将所得固体搅拌1小时，过滤，用水洗涤。在真空下干燥48小时，得到为白色固体的标题化合物(36g，127.53mmol)。MS(m/z)：283(M+1)。
实施例5
(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐
在室温在氮气下将4M在1,4-二噁烷中的氯化氢(20mL，80mmol)添加至(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸(2.06g，5.4mmol)在1,4-二噁烷(21mL)中的搅拌悬浮液。将反应混合物超声数分钟，然后保持搅拌16小时。过滤固体，用1,4-二噁烷洗涤，在60℃干燥真空6小时，得到2.2g白色固体。将材料再溶解于HPLC级水(20mL)中，过滤以除去任何不溶性颗粒且冻干滤液，得到标题化合物(1.51g，4.75mmol)。MS(m/z)：283(M+1)。1HNMR(D2O)δ0.46(m,1H),0.65(m,1H),1.46(d,J＝7.1Hz,3H),1.69(dd,J＝2.9Hz,1H),1.81(q,J＝14.3Hz,2H),1.87(宽t,J＝2.9Hz,1H),2.65(dd,J＝2.9Hz,1H),4.00(q,J＝7.02Hz,1H),4.70(m,2H)。
基本上通过实施例4的方法制备下列化合物。
实施例8
(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二苄酯；1,4-二噁烷；盐酸盐
在室温在氮气下，将4M在1,4-二噁烷中的氯化氢(493.30μL，1.97mmol)添加至(1S,2S,5R,6S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二苄酯(0.1g，0.2mmol)在1,4-二噁烷(970μL)中的搅拌悬浮液并搅拌20小时。添加过量4M在1,4-二噁烷中的氯化氢溶液(493.30μL，1.97mmol)，加热至80℃。浓缩至干，用乙腈磨碎，冻干悬浮液，得到为白色固体的标题化合物(89.9mg，88％)，为与1,4-二噁烷的(1:1)加合物。MS(m/z)：392(M+1)。
实施例9
(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸双[(2-氟苯基)甲基]酯盐酸盐
在室温在氮气下，将4M在1,4-二噁烷中的氯化氢溶液(4.64mL，18.58mmol)添加至(1S,2S,5R,6S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸双[(2-氟苯基)甲基]酯(0.98g，1.86mmol)在1,4-二噁烷(4.64mL)中的搅拌溶液，将溶液搅拌20小时。真空浓缩，得到油状物(0.93g)。溶解于乙腈(10mL)、水(30mL)的混合物中，冻干整个周末，得到白色固体(820mg)，为含有(1S,2S,5R,6S)-2-氨基-2-[(2-氟苯基)甲氧基羰基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-6-羧酸(～7-10％)的标题化合物的混合物。MS(m/z)：320(M+H)。将白色固体溶解于乙腈(8mL)中，得到透明溶液。允许静置1小时，然后过滤。真空浓缩滤液，得到粘性泡沫。再溶解于乙酸乙酯中，用碳酸氢钠饱和溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩，得到774mg。再溶解于乙醚(11mL)中，添加1M在乙醚中的氯化氢(1.86mL，1.86mmol)，真空浓缩，得到白色固体泡沫。进一步在50℃真空干燥过夜，得到标题化合物(0.74g，85％)。MS(m/z)：428(M+1),450(M+23)。
实施例10
(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二水合物
步骤1：(1S,2S,5R,6R)-2-氨基-4-氧代-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯盐酸盐
在氮气气氛下，将乙酰氯(86.5mL，1.2mol)滴加至无水乙醇(1.0L,17.2mol)，同时将内部反应温度保持在30℃以下。将所得混合物搅拌15分钟，一次性添加(1S,2S,5R,6R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氧代-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二叔丁酯(100g，0.24mol)。将所得混合物加热至回流16-20小时。将反应混合物在减压下浓缩至油状物。将粗产物溶解于二氯甲烷(250mL)中，真空浓缩。重复二氯甲烷/浓缩过程以提供白色泡沫。添加乙酸乙酯(150mL)，将混合物加热至65℃。添加甲基叔丁基醚(100mL)，将混合物在65℃搅拌15分钟。在15分钟内添加甲基叔丁基醚(300mL)，在65℃搅拌15分钟，然后停止加热，使浆液冷却至环境温度。过滤混合物，用甲基叔丁基醚(150mL)洗涤滤饼。将滤饼转移至真空烘箱，在25℃干燥过夜，提供粗产物(67.5g)。将固体转移至圆底烧瓶，用乙酸乙酯(170mL)稀释，将混合物加热至65℃。将混合物搅拌1小时，添加四氢呋喃(68mL)和乙醇(3mL)。关闭热源，在20分钟内添加甲基叔丁基醚(272mL)，使混合物冷却至环境温度。过滤浆液，用95/5甲基叔丁基醚/乙酸乙酯(2x75mL)洗涤滤饼，进一步在真空烘箱中在25℃干燥固体过夜，提供为白色固体的标题化合物(60.0g,98.0％)。MS(m/z)：256(M+1)。
步骤2：(1S,2S,5R,6R)-2-苄基氧基羰基氨基-4-氧代-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯
将(1S,2S,5R,6R)-2-氨基-4-氧代-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯盐酸盐(55.0g，188.5mmol)悬浮于四氢呋喃(220mL)中，然后添加水(220mL)和碳酸钾(92.1g，659.9mmol)。将所得混合物搅拌30分钟。在45分钟内将氯甲酸苄酯(26.7mL，175.3mmol)添加至混合物，将反应温度保持在25℃以下。将反应混合物搅拌30分钟，然后用乙酸乙酯(550mL)和水(275mL)稀释。分离各相，用乙酸乙酯(250mL)反萃取水层。将有机物合并，将其相继用HCl水溶液(0.5N,100mL)、饱和NaHCO3(100mL)和盐水(100mL)洗涤。经Na2SO4干燥有机溶液，过滤，真空浓缩，提供为澄清油状物的标题化合物(67.6g，92.1％)。1HNMR(CDCl3)δ1.24-1.26(m,6H),2.36(bs,1H),2.47(dd,1H),2.78(dd,1H),2.90(dd,1H),4.09-4.19(m,4H),5.08(s,2H),5.73(s,1H),7.24-7.36(m,5H)。
步骤3：(1S,2S,5R,6S)-2-苄基氧基羰基氨基-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯
在氮气气氛下，将甲基-三苯基溴化鏻(67.4g，184.9mmol)和四氢呋喃(300mL)在搅拌下合并。在15分钟内将叔丁醇钾(1M)在四氢呋喃中的溶液(184.9mL，184.9mmol)添加反应混合物，将所得浆液在环境温度搅拌3小时。将(1S,2S,5R,6R)-2-苄基氧基羰基氨基-4-氧代-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯(12.3kg,31.6mol)溶解于四氢呋喃(120mL)中，在1小时内添加至反应混合物，将反应温度保持在30℃以下。将所得浆液在环境温度搅拌过夜，然后用乙酸乙酯(600mL)稀释，用水(300mL)淬灭。将两相混合物搅拌30分钟后，分离各层，用水(300mL)、之后0.25MHCl(300mL)洗涤有机物。经Na2SO4干燥有机物，过滤，真空浓缩(45℃)，提供为黑色油状物的粗产物(111.0g)。通过硅胶塞色谱(1KgKieselgel-60,4L15％在庚烷中的EtOAc，然后10L30％在庚烷中的EtOAc)纯化材料，提供为澄清油状物的标题化合物(37.3g，87.9％效价，54.9％)。MS(m/z)：388(M+1)。
步骤4：(1S,2S,5R,6S)-2-苄基氧基羰基氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯
在氮气气氛下，向与冷却器单元连接的夹套反应瓶添加二乙基锌溶液(157.2mL，157.2mmol，1M于庚烷中)。将溶液冷却至-15℃，用冷的(-15℃)无水二氯乙烷(157.2mL)稀释。将三氟乙酸(11.1mL，146.7mmol)溶解于二氯乙烷(11.1mL)中，在50分钟内添加至反应容器，将内部温度保持在-10℃以下。将所得悬浮液在-10℃至-15℃搅拌30分钟。将二碘甲烷(12.7mL，42.1g，157.2mmol)溶解于二氯乙烷(12.7mL)中，在50分钟内添加至反应混合物，将内部温度保持在-10℃以下。将所得稀的白色悬浮液在-10℃至-15℃搅拌30分钟。将(1S,2S,5R,6S)-2-苄基氧基羰基氨基-4-亚甲基-双环[3.1.0]己烷-2,6-二甲酸二乙酯(20.3g，87.9％效价，46.0mmol)溶解于二氯乙烷(30.4mL)中，在10分钟内添加至反应混合物，将内部温度保持在-10℃以下。将澄清的淡黄色溶液在-10℃搅拌5分钟，监测潜在放热。将冷却器上的设定点改为0℃，将反应混合物在该温度搅拌48小时。通过在15分钟内添加5NHCl(62.9mL，314.4mmol)，淬灭反应混合物，将保持内部温度在6℃以下。将所得混合物在0-5℃搅拌20分钟，然后转移至漏斗，分离各层。用1NHCl(2x50mL)、之后1:1饱和NaHCO3/H2O(60mL)、1:1饱和Na2CO3/H2O(60mL)和水(50mL)洗涤有机层。经Na2SO4干燥有机相，真空浓缩，提供为淡黄色油状物的标题化合物(19.6g，60.3％功效，63.9％经校正收率)。1HNMR(DMSO-d6)δ0.37(m,2H),0.52-0.55(dm,2H),1.13-1.17(m,6H),1.49-1.50(m,1H),1.51-1.56(m,1H),1.60-1.79(m,2H),3.97-4.10(m,5H),5.00(s,2H),7.29-7.34(m,5H),8.04(s,1H)。
步骤5：(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯盐酸盐
将无水乙醇(100mL，10体积)、浓HCl(2.1mL，1.0N)和(1S,2S,5R,6S)-2-苄基氧基羰基氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯(9.7g，24.16mmol)加入至HEL反应器，之后加入Pd黑(3.9g，40wt％)。用氮气吹扫反应器三次，之后三次氢气吹扫，加压至40psi氢气。使反应在20-30℃之间搅拌至少2小时直至通过HPLC监测反应结束。通过HyfloSuper垫过滤所得浆液，用无水乙醇洗涤湿滤饼(2x30mL，3体积)。将滤液转移至透明反应器，基于由校准曲线获得的原位产率用乙酸异丙酯替换乙醇至约5体积。在至少3小时内将所得浆液冷却至0-5℃。过滤所得浆液，用冷的乙酸异丙酯洗涤湿滤饼(3x5mL，0.5体积)。在减压下于30℃干燥至少12小时，提供标题化合物(4.66g，15.34mmol.63.5％)。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)：δ8.84(s,3H),4.31-4.15(m,2H),4.03(q,J＝7.0,2H),2.42(dd,J＝3.1,2.6,1H),2.24(dd,J＝6.2,2.6,1H),1.94(d,J＝14.1,1H),1.68(d,J＝14.1,1H),1.63(dd,J＝6.6,3.1,1H),1.25(t,J＝7.0,3H),1.17(t,J＝7.0,3H),0.77-0.71(m,1H),0.65-0.59(m,1H),0.56-0.51(m,1H),0.50-0.44(m,1H)。
步骤6：(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯
将四氢呋喃(45mL，10体积)和(2S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(3.4g，1.2当量)加入至反应器，之后加入N-甲基吗啉(1.96mL，1.2当量)和2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(3.12g，1.2当量)。将所得稀浆液在20-25℃之间搅拌至少3小时直至通过HPLC监测反应结束。在20-25℃之间一次性加入(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1’-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯盐酸盐(4.55g，14.81mmol)，之后在至少10分钟内加入N-甲基吗啉(1.63mL，1.0当量)，将温度保持在20-25℃.之间。将所得浆液在20-25℃之间搅拌至少2小时直至通过HPLC监测反应结束。过滤所得固体，用四氢呋喃洗涤湿滤饼(2x10mL，2.2体积)，提供标题化合物，假定100％收率。在不经进一步纯化后使用标题化合物的淡琥珀色四氢呋喃溶液，假定100％收率。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)：δ8.46(s,1H),6.72(d,J＝7.9,1H),4.08-3.92(m,5H),2.42-2.37(m,1H),1.81-1.64(m,3H),1.47(dd,J＝6.6,3.1,1H),1.34(s,9H),1.18-1.08(m,9H),0.66-0.59(m,1H),0.57-0.52(m,1H),0.46-0.36(m,2H)。
步骤7：(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1’-环丙烷]-2,6-二甲酸
向反应器加入2NNaOH(37mL，5.0当量)和(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二乙酯(6.50g，14.81mmol)，在20-30℃之间搅拌至少12小时直至通过HPLC监测反应结束。将反应物转移至分液漏斗，使其静置至少10分钟。分离各相，将下层水层返回至反应器。将乙酸乙酯(90mL，13.8体积)添加至混合物，然后添加1NNaHSO4直至pH达到2至2.5。分离各层，用水(45mL，6.9体积)洗涤有机物。除去有机相中的水，用乙酸乙酯常压蒸馏除去残余水。在至少2小时内将所得浆液在20-30℃之间冷却，允许在该温度成粒至少90分钟。过滤所得固体，用乙酸乙酯洗涤湿滤饼(3x15mL，2.3体积)。在减压下于45℃干燥，提供为白色固体的标题化合物(4.45g，11.64mmol，78.6％)。1HNMR(DMSO-d6,400MHz,50℃)：δ12.01(s,2H),8.22(s,1H),6.49(bs,1H),4.00(bs,1H),2.43(dd,J＝6.5,2.8,1H),1.83(d,J＝14.0,1H),1.68-1.62(m,2H),1.42(dd,J＝6.5,2.8,1H),1.36(s,9H),1.15(d,J＝7.1,3H),0.67-0.61(m,1H),0.56-0.51(m,1H),0.46-0.36(m,2H)。
步骤8：(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二水合物
向反应器加入水(32mL，8体积)和(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1’-环丙烷]-2,6-二甲酸(3.99g，10.4mmol)，之后浓缩HCl(1.80mL，2.0当量)，然后将反应加热至45-55℃直至反应结束(通过HPLC监测)。将反应混合物冷却至20-30℃，用5NNaOH将pH调节至约3.6。在至少30分钟内在20-30℃之间将无水乙醇(15mL，3.75体积)添加至所得浆液。允许所得浆液在20-30℃之间成粒至少12小时。将混合物在-5-5℃之间冷却，使其制成至少60分钟。过滤所得固体，用30％在水中的无水乙醇洗涤滤饼(2x9mL，2.25体积)。在减压下于35℃干燥固体至少12小时，然后将所得固体放在天平上直至无另外的重量变化至少2小时，提供为白色固体的标题化合物(2.71g，8.51mmol，81.6％).1HNMR(D2O,400MHz)：δ3.90(q,J＝7.2,1H),2.56(dd,J＝6.5,2.9,1H),1.74-1.66(m,2H),1.62-1.54(m,2H),1.39(d,J＝7.1,3H),0.61-0.56(m,1H),0.55-0.49(m,1H),0.40-0.30(m,2H)。
在装备有CuKa源和Vantec检测器的以35kV和50mA操作的BrukerD4EndeavorX射线粉末衍射仪上获得结晶固体的X射线粉末衍射(XRD)图谱。在4-40°的2θ之间扫描样品，步长为0.0087°2θ和0.5秒/步的扫描速率，以及0.6mm发散狭缝、5.28mm固定防散射狭缝和9.5mm检测器狭缝。将干燥粉末装填在石英样品架上，使用盖玻片获得光滑表面。基于在2θ为8.85和26.77度的NIST675标准峰来调节衍射图谱。结晶学领域中熟知的是，对于任何给定晶体形式，衍射峰的相对强度可以由于由如晶体习性的因素产生的优选取向而变化，并且角度峰位可以轻微变化。例如，峰位可以由于分析样品的温度或湿度、样品位移而移动。在目前情况下，2θ为±0.2的峰位变异性将考虑所示的晶体形式，而不会妨碍所示晶型的清楚确认。可以基于特征峰(以°2θ为单位)、通常是更显著峰的任意独特组合而进行晶体形式的证实。在环境温度和相对湿度收集晶体形式衍射图谱。
因此，所制备的实施例10的样品的特征是采用使用CuKa照射的XRD图谱具有如下表1中所述的衍射峰(2θ值)。具体地，该图谱含有5.20的峰与一个或多个选自10.45、11.70、15.75、21.06和23.59的峰的组合，其中衍射角的限差为0.2度。
表1：实施例10的X射线粉末衍射峰
峰 角(2θ°) 强度(％)
1 5.20 100
2 10.45 43.9
3 11.70 23.8
4 13.09 24.1
5 15.75 45.9
6 16.80 56.4
7 20.49 15.3
8 21.06 79.3
9 23.58 96
10 26.44 20.9
mGlu受体是调节神经元兴奋性的G-蛋白偶联受体。更具体而言，改变的谷氨酸神经传递已经与神经学病症如慢性疼痛疾患(包括持续疼痛、神经病性疼痛、慢性炎症性疼痛或内脏疼痛)；精神病症如精神分裂症、双相性障碍、广泛性焦虑症或创伤后应激病症；或神经变性病症有关。
由于本发明化合物是mGlu2/3激动剂，所以它们可以适用于治疗前述疾患。
人mGlu2和mGlu3激动剂FLIPR测定
将AV-12细胞系用于这些研究，所述AV-12细胞系来源于SyrianHamster成纤维细胞，稳定表达人mGlu2或mGlu3受体并且与大鼠谷氨酸转运蛋白EAAT1(兴奋性氨基酸转运蛋白1)和Gα15亚单位共转染。Gα15的表达使得Gi偶联的受体通过磷脂酶C途径进行信号传导，导致能够通过荧光钙响应测定测量受体活化。将细胞系通过在补充有5％透析胎牛血清、1mM丙酮酸钠、10mMHEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)、1mML-谷氨酰胺和5μg/mL杀稻瘟素(所有培养基均购自Invitrogen)的具有高葡萄糖和盐酸吡哆醇的杜尔贝科氏改良伊格尔培养基(DMEM)中培养进行维持。每两周使用不含酶的解离溶液(ChemiconS-004-B)使汇合培养物传代。在测定之前24小时收集细胞，并且使用MatrixWell-Mate细胞接种器以85,000(mGlu2)或115,000(mGlu3)细胞/孔分配于96孔黑壁聚-D-赖氨酸包被的板(BDBioCoat#354640)中的仅含有250(mGlu2)或125(mGlu3)μML-谷氨酰胺(新鲜加入)的培养基中。
在添加化合物前后，使用荧光成像酶标仪(FLIPR,MolecularDevices)监测胞内钙水平。测定缓冲液由补充有20mMHEPES的Hank氏缓冲盐溶液(HBSS；Sigma)组成。除去培养基，在25℃将细胞与8μMFluo-3AM(MolecularProbes,F-1241；50μL/孔)温育在测定缓冲液中90分钟(mGlu2)或120分钟(mGlu3)。除去染料溶液，用新鲜测定缓冲液(50μL/孔)替换。在每个实验之前，进行对激动剂谷氨酸(FisherA125-100)而言产生11点浓度响应曲线(在10uM开始的3X稀释)的单一添加FLIPR测定，以确认典型EC50响应。使用Prismv4.03(GraphPad软件)分析结果。在单一添加FLIPR测定中、使用10点浓度响应曲线、使用3X稀释以25μM最终浓度开始，测试本发明化合物。将本发明化合物溶解于0.1NNaOH中作为10mM储备液，于-20C贮存。将它们通过三倍稀释系列稀释到测定缓冲液中。在FLIPR仪器上读取起始5秒荧光读数后，将本发明化合物加入到细胞板(50μL/孔)。在前30秒每秒收集数据，然后每隔3秒收集数据，总计90秒，以检测激动剂活性。最大响应被定义为ECmax(100μM谷氨酸)诱导的响应。化合物效应被测量为：以在不存在谷氨酸下测量的基础荧光校正的相对荧光单位(RFU)形式，最大峰高度减去最小峰高度。使用单一板进行测定。激动剂效应被定量为：相对于最大谷氨酸响应的由单独化合物诱导的刺激百分比。使用四参数逻辑曲线拟合程序(ActivityBasev5.3.1.22)将所有数据计算为相对EC50值。
在基本上如上所述运行的hmGlu2FLIPR测定中测量实施例2，具有39.0nM±5.9的EC50(n＝3，误差计算为SEM)。还在基本上如上所述运行的hmGlu3FLIPR测定中测量实施例2，具有285nM±52.5的EC50(n＝8，误差计算为SEM)。这些结果表明实施例2为有效的mGlu2和mGlu3激动剂。
福尔马林注射诱导的持续疼痛的逆转
将福尔马林施用至大鼠后爪的跖面导致防伤害行为的两个阶段(如舔、咬和缩回所注射的爪)：在福尔马林施用后约5分钟期间的早期和在福尔马林注射后约第10分钟至第60分钟的晚期。约第5分钟至第10分钟的休止期分开两期。可以利用借助于加速计检测大鼠活动的惊吓室(SR-Lab,SanDiego仪器,SanDiego,CA)自动对这些福尔马林诱导的行为评分。在注射足底内福尔马林前1小时，在未禁食的雄性Sprague-Dawley大鼠中给予(腹膜内途径)0.3-10mg/kg范围的测试化合物(活性)。然后为了适应将大鼠单独地置于测试室内的圆筒中。在注射足底内福尔马林前两小时，在未禁食的雄性Sprague-Dawley大鼠中口服给予0.45-15mg/kg范围的测试化合物(前药)。然后为了适应将大鼠单独地置于测试室内的圆筒中。在指定的时间点，从圆筒移除大鼠，将福尔马林(50μL的5％在盐水中的溶液)皮下施用至右后爪的跖面，立即将放回圆筒中。将圆筒放置在测试室内的检测系统的装载传感器上，从而以1秒仓(bin)持续地监测响应60分钟。在5-分钟间隔中合计防伤害事件数[具有>20-负载单位的1秒仓数]。20-负载单位阈值足够大，以使消除将正常生理事件如呼吸或嗅闻包含在内，而是仅包含显著幅度以检测防伤害事件。转换数据，在60分钟的数据收集内以每个1秒时间仓测定事件超过阈值(20负载单位)的次数。早期评分为从时间0至5分钟大于20负载单位的事件的总和。通过添加从第11分钟至第40分钟的数据收集期大于20负载单位的总事件数而获得晚期评分。通过单尾方差分析(ANOVA)评价福尔马林数据，使用JMP(v6.0.2)统计学分析程序(SASInstituteInc,Cary,NC)，通过双侧比较Dunnett’t’检验来分析适合的对照。如果p值小于0.05，则认为差异具有显著性。使用非线性回归曲线拟合各个剂量的百分比逆转转换数据，进行ED50计算。
在基本上如上所述运行的该测定中测量实施例2，具有0.7mg/kg的ED50(i.p.)。在基本上如上所述运行的该测定中测量实施例10，具有4.8mg/kg的ED50(p.o.)。这些结果表明在本发明范围内的化合物是对于持续疼痛有用的药物。
L5/L6神经结扎诱导的触觉异常性疼痛(tactileallodynia)的逆转
在大鼠中，神经支配后腿区域的神经的单侧结扎将导致慢性持续疼痛，表现为触觉异常性疼痛。进行L5/L6神经结扎(Kim等人Pain(1992)50,355-363)。在使用异氟烷(3％用于诱导，2％用于维持)和氧气的混合物的气体麻醉下，通过紧密结扎左L5和L6脊髓神经产生神经性损伤。在手术后最少14天后，通过以增量弯曲力(0.3至15g)测量受伤爪对vonFrey丝的触觉敏感性来评价触觉异常性疼痛(Chaplan等人，J.ofNeuroscienceMethods(1994)53,55-63)。当大鼠表现触觉异常性疼痛(响应于施加少于2克的弯曲力而缩爪)时它们被认为是超敏的。在评估测试化合物之前立即确定基线值。以15mg/kg口服给予测试化合物(前药)，在给药后1、2和4小时测量缩爪的触觉阈值。数据被表示为以克(g)计的响应阈值，对于每个时间点，数值具有平均值的标准误差(±SE平均)。使用分析方差、之后Dunnett事后分析来分析数据，表示疼痛阈值的绝对变化(Cmax＝最大响应基线)并且表示为平均值[log(最大响应)–(log给药前评分)](g)。
在基本上如上所述运行的该测定中测量以15mg/kg口服给予的实施例10的化合物(其中n＝8；误差计算为SEM)，在1、2和4小时具有显著增加的机械阈值，分别为9.06±2.26、12.31±1.86和8.63±1.98，而在媒介物处理后在1、2和4小时对应的值分别为：1.50±0.60、1.34±0.75和2.35±0.62。这些结果表明，在本发明范围内的化合物是对于神经性疼痛疾患有用的药物。
CFA-诱导的机械痛觉过敏的逆转
大鼠后爪中诱导局部炎症将导致持续的机械痛觉过敏，这可通过确定压力刺激以得到痛苦响应的阈值来测量。大鼠中完整Freund佐剂(CFA)诱导的机械痛觉过敏的方法在Iadarola等人BrainRes.(1988)455,205-212中大幅描述。将大鼠在异氟烷麻醉下放置，而右爪用50μlCFA(SigmaC5881,1mg/ml在85％石蜡油、15％二缩甘露醇单油酸酯中的分支杆菌属提取物)足底内注射。使动物在软垫笼中恢复，CFA注射后24小时测量机械痛觉过敏的变化。通过轻轻地束缚大鼠并将爪放在底座与推进器之间(UgoBasileAnalgesy-计量仪)确定机械痛觉过敏(RandallSellito测试)。记录动物撤回爪时的克力。施加不超过250克的最大力，如果大鼠不撤回爪，则记录250克的值。
在CFA注射之前测试大鼠的基线响应。第二天早上测试CFA后响应(注射CFA后约24小时)。基于CFA后响应使大鼠随机化，其中显示>150克评分的任何大鼠被排除在进一步测试之外。口服给予1.5至15mg/kg范围的测试化合物(前药)，给药后1和2小时测量缩爪的机械阈值。统计学显著性被定义为在每个时间点的协方差分析和随后Dunnett事后检验中p值<0.05。下表2提供基本上如上所述运行的实施例10的统计学显著性结果。这些结果表明，在本发明范围内的化合物是对于慢性炎症性疼痛疾患如骨关节炎或类风湿性关节炎有用的药物。
表2
数值为N＝8-10/组的平均值±SEM。
*在相同时间点相比于媒介物，p值<0.05(ANOVA和Dunnettt检验)
结直肠扩张诱导的疼痛行为的逆转
大鼠中的内脏疼痛可通过结直肠腔的扩张来诱导，并且疼痛通过评价腹部肌肉的反射收缩来监测。利用大鼠中由结直肠扩张造成的疼痛测量腹部肌肉反射收缩基本上如Fioramonti等人，NeurogastroenterologyandMotility(2003)15,363-369和Urban等人，J.ofPharmacologyandExp.Ther.(1999)290,207-213所述。用外科手术向雄性SpragueDawley大鼠的腹斜肌植入肌电图测量(EMG)电极，使其恢复一周，在此期间使动物适应于操作和部分束缚以使应激效应最小化。收集基线EMG测量并在将润滑胶乳气囊插入到直肠(8cm)中之后进行记录，所述润滑胶乳气囊附接至压力监测器/调节器以在20秒期间阶跃20、40和60mmHg之间的压力，其中试验之间为3分钟休止期。记录在每个压力下的一组三次暴露，之后将压力阶跃至下一水平。在压力刺激期间以EMG读数(μv/秒)的曲线下面积形式收集数据，并对三个实验求平均值。在开始结直肠扩张前90分钟，口服给予1.5至17mg/kg范围内的测试化合物(前药)。统计学显著性被定义为在协方差分析和随后Dunnett事后检验中p值<0.05。下表3提供基本上如上所述运行的实施例10的统计学显著性结果。这些结果表明，在本发明范围内的化合物是对于内脏疼痛疾患有用的药物。
表3
数值为N＝8-16/组的平均值±SEM。
*在相同时间点相比于媒介物，p值<0.05(ANOVA和Dunnettt检验)
大鼠中苯环利定(PCP)-诱导的运动过度活动的逆转
NMDA受体拮抗剂如氯胺酮或苯环利定(PCP)的施用在人类中产生拟精神病样效应，类似于在患有精神分裂症患者中观察到的那些症状。药物逆转NMDA拮抗剂的运动-刺激效应的能力常用作精神病的动物模型，表明对于检测用于精神分裂症和双相性障碍的药物的临床功效的良好预测有效性。
监测运动活动是通过将单个雄性Sprague-Dawley(Harlan,Indianapolis,IN)大鼠放置在具有1cm深木片作为垫草和笼顶部的金属格栅、尺寸为45x25x20cm的透明、塑料鞋盒笼中。运动监测器(KinderScientific)由高度为5cm的以8×4格式布置的12光束的矩形架(或15×7模式的22的高密度分组)，和高度为15cm的第二个架(用于检测直立行为)组成。鞋盒笼放置在这些架的内部，所述架在单独房间中的3英尺高台面上。在5mg/kg攻击剂量的苯环利定(PCP)之前30分钟，给予0.3-10mg/kg范围内的本发明化合物(活性)(腹膜内途径)。在5mg/kg攻击剂量的PCP之前4小时，在过夜禁食的大鼠中口服给予0.3-30mg/kg范围内的本发明化合物(前药)。在测试当天，将大鼠放置在测试笼中并在PCP攻击之前使其适应30分钟；在PCP施用后，监测大鼠另外60分钟。
使用GraphPadPrism(SanDiego,CA.USA)进行数据分析和ED50计算。权重(Power)分析已确定需要8-10只大鼠/组以具有合适的统计学功效用于检测治疗差异(权重＝0.8)。对总共60分钟运动活动进行单尾方差分析(ANOVA)和Dunnett事后多重比较检验。对各个剂量的百分比逆转转换数据进行非线性回归曲线拟合，进行ED50计算。
在基本上如上所述运行的该测定中测量实施例2，具有1.46mg/kg的ED50(i.p.)。在基本上如上所述运行的该测定中测量实施例5和6的化合物，分别具有2.95mg/kg(p.o.)和4.31mg/kg(p.o.)的ED50。这些结果表明，在本发明范围内的化合物是对于精神分裂症和双相性障碍有用的药物。
大鼠中应激-诱导的高热的减轻
高热即身体核心温度上升，是已在许多哺乳动物包括人中可靠证实的响应于应激的普遍现象。在很多焦虑症中，高热出现作为病理学的一部分并且被认为是疾病的症状。认为减弱动物中应激-诱导的高热的化合物可用于治疗人的焦虑症。广泛性焦虑症和创伤后应激病症是可用此类化合物治疗的病症的实例。用于分析应激-诱导的高热的常规和最低限度侵害方法是通过直肠温度计测量体温和应激-诱导的体温增加。测试重量为275–350g的雄性FischerF-344大鼠(Harlan,Indianapolis,IN,USA)。所有动物单独圈养，可随意获取食物和自动化水，保持12h光/暗周期(在06:00灯亮)。在实验前，使动物禁食约12-18小时，其在光阶段期间进行。用0.3、1、3和10mg/kg范围内的本发明化合物向大鼠腹膜内(IP)给予1mL/kg的剂量体积。媒介物为盐水+添加NaOH以达到5-7的pH。已在临床前模型中表明稳健的抗焦虑样活性的mGluR5拮抗剂MTEP(3-[(2-甲基-1,3-噻唑-4-基)乙炔基]吡啶)用作比较剂(5mg/kg，IP途径，溶解于水中)。在给药后立即将大鼠返回至它们的圈养笼，并且实验者关闭灯，离开房间。在剩余的1小时预处理期将给药室变黑。
预处理期后，将大鼠单独带至灯火通明的邻近房间，在那里通过插入使用矿物油润滑的直肠探头确定基线体温。使用具有PHYSITEMP大鼠直肠探头的PHYSITEMPMicroprobe温度计(PhysitempInstrumentInc.,Clifton,NJ,USA)评估体温。将探针插入直肠约2cm，以测量核心体温(这是摄氏度形式的基线体温，T1)。10分钟后，记录第二体温测量(T2)。体温(T2–T1)的差被定义为应激-诱导的高热响应。相对于媒介物响应，本发明化合物产生35％的应激-诱导的高热响应的降低的剂量被定义为T35剂量。
在基本上如上所述运行的该测定中测量实施例2，具有0.57mg/kg的T35。在基本上如上所述运行的该测定中测量实施例5，具有6.4mg/kg的T35。这些结果表明，在本发明范围内的化合物是对于焦虑症有用的药物。更具体而言，在本发明范围内的化合物可以是对于广泛性焦虑症和/或创伤后应激病症有用的药物。
体外PepT1GlySar抑制筛选和IC 50 测定
建立PepT1测定以检查前药与肠吸收转运蛋白PepT1相互作用的能力。
在5％CO2潮湿大气中、在37℃，使来源于人肠(AmericanTypeCultureCollection)的HeLa细胞在包含10％胎牛血清(FBS)、0.1mM非必需氨基酸(NEAA)和100单位/mL青霉素(含100μg/mL链霉素)的Hyclone培养基(Invitrogen,Cat#SH30243)中生长。细胞系使用多达40代，然后弃去。在水浴中将1mL小瓶中的冷冻细胞解冻1-2分钟并在37℃加入至5mL的细胞培养基。各个T-烧瓶装有8.5mL新鲜培养基和1.5mL细胞原液。在一周期间将细胞传代两次。这通过使用10mL磷酸盐缓冲盐水-乙二胺四乙酸(PBS-EDTA)冲洗烧瓶、添加2mL胰蛋白酶达2-5分钟以分离细胞并添加8mL新鲜培养基以抑制胰蛋白酶的进一步活性来完成。每个新烧瓶接受8.5mL新鲜培养基和1.5mL细胞原液的组合以获得1:6的细胞稀释液。在37℃温育细胞直至准备好用于摄取研究。
在转染操作之前1天，将在T-烧瓶中70-80％汇合的细胞铺板。使用PBS-EDTA和胰蛋白酶处理具有细胞储备液的烧瓶以分离细胞，并从该点使用转染培养基。转染培养基由达尔伯克氏改良伊格尔培养基(DMEM)+NEAA组成。向每个孔添加0.5mL细胞混合物(1.3×105是期望的细胞浓度)并将细胞在37℃温育过夜。在测定前24小时，使用PEPT1转染细胞。通过混合600μL不含血清的转染培养基、18μLFuGene6(RocheDiagnostics)和11μgPepT1DNA制备转染混合物。将转染试剂-DNA复合物温育20分钟并将24μL试剂-DNA复合物加入至各个孔。
如之前的公布(Zhang等人2004.J.Pharm.ExperTher.310:437-445)，在转染后24小时，在24-孔板中培养的细胞中测量PEPT1-介导的[甘氨酰基-1-2-14C]甘氨酰肌氨酸(GlySar)摄取活性的抑制。为了测量本发明化合物抑制[14C]Gly-Sar摄取的能力，在5μM[14C]Gly-Sar(MoravekBiochemicals)和20μM冷Gly-Sar存在下，在pH6.0摄取培养基中，孵育5mM的前药和80％至90％汇合的PepT1瞬时转染HeLa细胞。摄取培养基由140mMNaCl、5.4mMKCl、1.8mMCaCl2、0.8mMMgSO4、5mM葡萄糖、25mM三(羟基甲基)氨基甲烷缓冲液(TRIS)组成。然后，使用2-(N-吗啉代)乙烷磺酸将溶液调至pH6.0。温育体积为500μL并在室温进行3分钟。为了在温育时间结束时停止摄取，将摄取培养基从细胞单层吸出并将500μL冰冷PBS加入至孔。使用500μL不含Ca+2和Mg+2的室温PBS将细胞洗涤3次。然后，使用300μL的1％TritonX100H2O溶液将细胞裂解。除去200μL等份试样，并通过液体闪烁计数法测定放射性，以测量各个温育孔中存在的[14C]Gly-Sar。建立没有抑制剂的对照，并且关于该对照计算各个前药的百分比抑制。与各个实验平行进行阴性对照(甘氨酸)和两个阳性对照(头孢羟氨苄和头孢氨苄)，以证明测定系统的可行性。具有等于或大于头孢氨苄的GlySar摄取抑制的前药被认为是可接受的。甘氨酸的平均值±标准偏差为10.1±9.5％(n＝19)，头孢羟氨苄的平均值±标准偏差为53.2±13.2％(n＝19)，且头孢氨苄的平均值±标准偏差为37.5±14.7％(n＝18)。
对于PepTIC50测定，在5μM[14C]Gly-Sar和20μM冷Gly-Sar存在下，在(0.0625至25mM)的浓度范围下温育前药。温育和样品程序与上文所述的PepT1筛选完全相同。评价各个前药浓度的[14C]Gly-Sar摄取数据并计算IC50值。
在基本上如上所述运行的该测定中测量实施例5、6和7，在5mM时分别具有89％、87％和78％的hPepT1[3H]Gly-Sar摄取抑制。在基本上如上所述运行的该测定中测量实施例5和6，分别具有1.98mM和0.25mM的hPepT1[3H]Gly-Sar摄取抑制IC50。这些结果表明，本发明范围内的化合物经由PepT1转运蛋白口服吸收。
体外肠前药水解测定
从CelsiusINVitroTechnologies(Baltimore,MD)获得既不含苯甲基磺酰氟(PMSF)又不含EDTA的冷冻人十二指肠匀浆液(使用100mM三磷酸盐缓冲液的1:2组织:缓冲液比率，pH7.4)。
从单一供体获得各个批次的人十二指肠并将肠刮净并且单独冷冻切片。在4℃进行所有原始组织收集并立即在-70℃冷冻。将人肠匀浆液解冻并在温育之前立即在100mMPBS缓冲液，pH7.4中稀释至0.5mg/mL的最终蛋白质浓度。
在96-孔板中进行温育，并且每天一式两份运行所有前药。以1mM的浓度在水中制备前药溶液储备液。在37℃水浴中，将200μL0.5mg/mL肠匀浆液的等份试样和196μL100mMPBS缓冲液放置在96-孔板中。使用96-孔移液管将4μL1mM前药溶液转移到匀浆液中。在添加前药(时间零)后并在1小时温育后，立即使用自动化一次性同步96孔移液管移除50μL温育混合物样品，并直接添加至200μL包含100ng/mL内标的甲醇淬灭溶液。然后，在10℃将样品在3500rpm离心5分钟。将上清液(200μL)转移至最终的96孔PCR板并密封用于通过LC/MS/MS分析。
在具有Analyst版本1.4.2,TurboIonSpray、正离子化和选择反应监测(SRM)的SciexAPI4000四极质谱仪上使用LC/MS/MS检测测定温育混合物中水解的活性代谢物的浓度。在环境温度使用WatersT3(20x2.1mm,5μM)HPLC柱，流速为1.0mL/min和流动相梯度从0.1％流动相A至99％流动相A。流动相A为1000:5水:七氟丁酸且流动相B为1:1甲醇:冰乙酸。
肠温育混合物中水解的活性代谢物的浓度从标准曲线测定，所述标准曲线通过在100mMPBSpH7.4中复制10μM开始的两倍稀释液、并且随后使用与样品相同的甲醇-内标溶液淬灭而制备。使用Office2007计算平均偏差和标准偏差。水解的量确定为所形成的活性代谢物相对于添加的前药浓度的摩尔百分比。每个批次中运行的阳性对照、内部前药A至内部活性代谢物药物A的水解平均为75.3％(n＝20)。然后，相对于内部活性代谢物药物A的形成将最终值标准化。
在基本上如上所述运行的该测定中测量实施例5、6和7，分别具有相对于内部前药A的36％(n＝3,SD＝2.7)、44％(n＝3,SD＝4.1)和34％(n＝1)人肠水解。这些结果表明，在本发明范围内的化合物在人肠中水解。
体外人肝脏S-9匀浆液水解测定
从XenotechLLC(Lenexa,MO)获得肝脏S9部分。所述批次来自两种供体，即一种为雄性另一种为雌性的混合物(pool)。制备肝脏S9部分并使用由4℃的50mMTris(pH7.4)和不含EDTA的150mM氯化钾组成的均匀缓冲液稀释。在37℃，在肝脏匀浆液中将前药温育2小时，此后通过LC/MS/MS测定活性代谢物的浓度。氯吡格雷至氯吡格雷羧酸的水解用作测定阳性对照。
在96-孔形式中进行温育并每天一式两份运行所有前药。以1mM的浓度在水中制备前药溶液储备液。在100mMPBS缓冲液(pH7.4)中，将人肝脏S9部分稀释至0.5mg/mL的最终蛋白质浓度。
在37℃水浴中，将200μL0.5mg/mL人肝脏S-9匀浆液的等份试样和196μL100mMPBS缓冲液放置在96-孔板中。使用96-孔移液管，将4μL1mM前药溶液转移到匀浆液中。为了确保水解不是由于化学不稳定性而产生，还使用没有肝脏S-9的单独的PBS缓冲液温育前药。在添加前药(时间零)后并在1小时温育后立即使用自动化一次性同步96孔移液管移除50μL温育混合物样品，并直接添加至200μL包含100ng/mL内标的甲醇淬灭溶液。然后，在10℃将样品在3500rpm离心5分钟。将上清液(200μL)转移至最终的96孔PCR板并密封用于LC/MS/MS分析。
在SciexAPI4000，Analyst版本1.4.2，TurboIonSpray、正离子化和选择反应监控(SRM)上进行温育期间形成的活性代谢物的LC/MS/MS定量。使用的HPLC柱为在环境温度的WatersT3(20×2.1mm,5μm)，流动相流速为1.0mL/min。流动相A为1000:5水:七氟丁酸且流动相B为1:1甲醇/冰醋酸。使用流动相梯度，开始的流动相比率A/B为99.9/0.1且结束于1/99。
温育混合物中水解的活性代谢物的浓度从标准曲线测定，所述标准曲线通过在100mMPBSpH7.4中重复10μM开始的两倍稀释液、随后使用与样品相同的甲醇-内标溶液淬灭而制备。使用Office2007计算平均偏差和标准偏差。最终值表示为所形成的活性代谢物相对于添加的前药浓度的摩尔百分比。氯吡格雷至氯吡格雷羧酸的水解用作阳性对照且平均为73.0％(n＝27)。
在基本上如上所述运行的该测定中测量实施例8和9，分别具有23％和59.3％的人肝脏S9水解。这些结果表明，在本发明范围内的化合物在人肝脏中水解。
数据显示：所示例的氨基酸前药抑制PepT1底物GlySar的摄取与头孢羟氨苄和头孢氨苄一样好或优于它们(Zhang等人,2004.JPET310:437-445)，这表明人经由PepT1转运蛋白口服吸收的潜能。除了前药吸收之外，前药在进入体内时水解而得到活性代谢物是必需的。本发明体外水解研究显示：所示例的氨基酸前药可被人肠水解。所示例的二酯前药的水解在人肝脏匀浆液中发生，表明所示例的二酯前药可以在口服接触后在人中水解。这些数据一起预示：所示例的氨基酸前药和所示例的二酯前药可以在人中水解释出活性代谢物。
药动学测定
在标准交叉设计(N＝3，每只大鼠接受静脉内剂量和口服剂量)中，向禁食的雄性SpragueDawley大鼠静脉内施用1mg/kg的实施例2或通过口服管饲法施用7.5mg/kg剂量的实施例5(等于5mg/kg摩尔当量的实施例2)。对于静脉内施用，将实施例2溶解于水中，对于口服剂量，在羟基乙基纤维素(1％)、聚山梨酯80(0.25％)和止泡剂1510-US(0.05％)的水性媒介物中制备实施例5。插管用外科手术植入以方便系列血液收集。在给药后0-24小时的时间内将血液收集于EDTA管中，离心且将血浆冷冻贮存直至分析时间。
将血浆样品解冻，将50μL等分试样转移至96-孔板，加入50μL内标溶液，将样品混合。然后添加300μL乙腈，将样品漩涡3分钟并离心。将上清液的300μL等分试样转移至分别的板上并在40℃在氮气下蒸发。将残余物在100μL0.5％七氟丁酸水溶液中复原，涡旋，离心。通过LC/MS/MS、使用Shimadzu自动进样器和与正离子涡轮喷雾模式下的ABSciex4000质谱仪接口连接的HPLC系统，随后分析20μL等分试样。MS/MS过渡为283.2->44.2amu(对于前药实施例5)和212.1->103.1amu(对于活性实施例2)。使用流动相流速为1.0mL/分钟的AtlantisT3,50x2.1mm,5微米HPLC柱，二元流动相(A)0.2％甲酸水溶液和(B)乙腈-水(1:1,v/v)，在0.8分钟内2％B至98％B的梯度。实施例2的保留时间为约0.53分钟。
使用WatsonforWindows(ThermoScientific)从血浆浓度数据计算药动学参数。通过将在静脉内施用后活性实施例2的血浆浓度时间曲线下面积(AUC)与在口服施用前药实施例5后活性代谢物的AUC比较，确定相对口服生物利用度。
成功的前药必须在口服施用后充分吸收，随后水解以将活性代谢物释放全身循环。相对生物利用度包括通过将口服施用前药后活性代谢物的AUC与静脉内施用活性化合物后活性物的AUC比较的两个参数。在雄性大鼠中，在基本上如上所述运行的该测定中测量的前药实施例5口服施用后活性代谢物的相对生物利用度为60±14％(平均值±标准偏差)，这表明前药实施例5既被充分吸收又被广泛水解以得到体内活性代谢物。

Claims (52)

1.式I化合物或其药学上可接受的盐
其中
R1为氢，R2为氢，且R3为氢；
R1为氢，R2为(2S)-2-氨基丙酰基，且R3为氢；
R1为氢，R2为(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基，且R3为氢；
R1为氢，R2为2-氨基乙酰基，且R3为氢；
R1为苄基，R2为氢，且R3为苄基；或
R1为(2-氟苯基)甲基，R2为氢，且R3为(2-氟苯基)甲基。
2.根据权利要求1的化合物，其为(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
3.根据权利要求1的化合物，其为(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
4.根据权利要求1的化合物，其为(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
5.根据权利要求1的化合物，其为(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
6.化合物，其为(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二水合物。
7.根据权利要求1的化合物，其为(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
8.根据权利要求1的化合物，其为(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
9.根据权利要求1的化合物，其为(1S,2S,5R,6S)-2-[(2-氨基乙酰基)氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
10.根据权利要求1的化合物，其为(1S,2S,5R,6S)-2-[(2-氨基乙酰基)氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
11.根据权利要求1的化合物，其为(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二苄酯或其药学上可接受的盐。
12.根据权利要求1的化合物，其为(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸双[(2-氟苯基)甲基]酯或其药学上可接受的盐。
13.根据权利要求1的化合物，其为(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸双[(2-氟苯基)甲基]酯盐酸盐。
14.药物组合物，包含式I的化合物或其药学可接受的盐和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，
其中
R1为氢，R2为氢，且R3为氢；
R1为氢，R2为(2S)-2-氨基丙酰基，且R3为氢；
R1为氢，R2为(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基，且R3为氢；
R1为氢，R2为2-氨基乙酰基，且R3为氢；
R1为苄基，R2为氢，且R3为苄基；或
R1为(2-氟苯基)甲基，R2为氢，且R3为(2-氟苯基)甲基。
15.根据权利要求14的药物组合物，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
16.根据权利要求14的药物组合物，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
17.根据权利要求14的药物组合物，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
18.根据权利要求14的药物组合物，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
19.药物组合物，其包含(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二水合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
20.根据权利要求14的药物组合物，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
21.根据权利要求14的药物组合物，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
22.根据权利要求14的药物组合物，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-[(2-氨基乙酰基)氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
23.根据权利要求14的药物组合物，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-[(2-氨基乙酰基)氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
24.根据权利要求14的药物组合物，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二苄酯或其药学上可接受的盐。
25.根据权利要求14的药物组合物，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸双[(2-氟苯基)甲基]酯或其药学上可接受的盐。
26.根据权利要求14的药物组合物，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸双[(2-氟苯基)甲基]酯盐酸盐。
27.有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗选自持续疼痛、神经性疼痛、慢性炎症性疼痛和内脏疼痛的神经病症的药物中的用途，
其中
R1为氢，R2为氢，且R3为氢；
R1为氢，R2为(2S)-2-氨基丙酰基，且R3为氢；
R1为氢，R2为(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基，且R3为氢；
R1为氢，R2为2-氨基乙酰基，且R3为氢；
R1为苄基，R2为氢，且R3为苄基；或
R1为(2-氟苯基)甲基，R2为氢，且R3为(2-氟苯基)甲基。
28.根据权利要求27的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
29.根据权利要求27的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
30.根据权利要求27的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
31.根据权利要求27的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
32.(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二水合物在制备用于治疗选自持续疼痛、神经性疼痛、慢性炎症性疼痛和内脏疼痛的神经病症的药物中的用途。
33.根据权利要求27的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
34.根据权利要求27的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
35.根据权利要求27的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-[(2-氨基乙酰基)氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
36.根据权利要求27的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-[(2-氨基乙酰基)氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
37.根据权利要求27的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二苄酯或其药学上可接受的盐。
38.根据权利要求27的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸双[(2-氟苯基)甲基]酯或其药学上可接受的盐。
39.根据权利要求27的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸双[(2-氟苯基)甲基]酯盐酸盐。
40.式I化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗选自精神分裂症、双相性障碍、广泛性焦虑症和创伤后应激病症的精神病症的药物中的用途，
其中
R1为氢，R2为氢，且R3为氢；
R1为氢，R2为(2S)-2-氨基丙酰基，且R3为氢；
R1为氢，R2为(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基，且R3为氢；
R1为氢，R2为2-氨基乙酰基，且R3为氢；
R1为苄基，R2为氢，且R3为苄基；或
R1为(2-氟苯基)甲基，R2为氢，且R3为(2-氟苯基)甲基。
41.根据权利要求40的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
42.根据权利要求40的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
43.根据权利要求40的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
44.根据权利要求40的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
45.(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二水合物在制备用于治疗选自精神分裂症、双相性障碍、广泛性焦虑症和创伤后应激病症的精神病症的药物中的用途。
46.根据权利要求40的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
47.根据权利要求40的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-[[(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-丁酰基]氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
48.根据权利要求40的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-[(2-氨基乙酰基)氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸或其药学上可接受的盐。
49.根据权利要求40的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-[(2-氨基乙酰基)氨基]螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸盐酸盐。
50.根据权利要求40的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸二苄酯或其药学上可接受的盐。
51.根据权利要求40的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸双[(2-氟苯基)甲基]酯或其药学上可接受的盐。
52.根据权利要求40的用途，其中的化合物是(1S,2S,5R,6S)-2-氨基螺[双环[3.1.0]己烷-4,1'-环丙烷]-2,6-二甲酸双[(2-氟苯基)甲基]酯盐酸盐。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101481164B1 (ko) * 2008-01-30 2015-01-09 주식회사 미래셀바이오 체세포 유래 다능성 줄기세포의 제조 방법

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ323205A (en) 1995-11-16 1999-06-29 Lilly Co Eli Excitatory amino acid derivatives
GB9605429D0 (en) 1995-11-16 1996-05-15 Lilly Co Eli Excitatory amino acid receptor antagonists
ZA983930B (en) * 1997-05-14 1999-11-08 Lilly Co Eli Excitatory amino acid receptor modulators.
CN1247527C (zh) * 1998-08-31 2006-03-29 大正制药株式会社 6－氟双环[3.1.0]己烷衍生物
GB2355982A (en) * 1999-11-03 2001-05-09 Lilly Co Eli Heterocyclic amino acids
KR20030017562A (ko) * 2000-06-28 2003-03-03 다이쇼 세이야꾸 가부시끼가이샤 신규 디카르복실산 유도체
HUP0400620A3 (en) 2001-01-11 2012-09-28 Lilly Co Eli Prodrugs of excitatory amino acids and pharmaceutical compositions containing them and process for preparation the compounds
WO2002055485A1 (en) 2001-01-11 2002-07-18 Eli Lilly And Company Prodrugs of excitatory amino acids
EP1517915B1 (en) 2002-06-11 2009-01-21 Eli Lilly And Company Prodrugs of excitatory amino acids
JP4792971B2 (ja) 2003-06-26 2011-10-12 大正製薬株式会社 ２−アミノ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸エステル誘導体
AR079343A1 (es) * 2009-12-21 2012-01-18 Lilly Co Eli Compuesto de acido 2-amino-4-(4h-1,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxilico, composicion farmaceutica que lo comprende y su uso para preparar un medicamento util para tratar un trastorno psiquiatrico

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Publication number Publication date
GT201400168A (es) 2015-08-27
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