BR112019019948A2 - derivado de 6-pirimidina-isoindol como inibidor de erk1/2 - Google Patents

Abstract

esta invenção refere-se ao composto (2r)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4-il)amino]pirimidin-4-il}-1-oxo-2,3-dihidro-1h-isoindol-2-il)-n-[(1s)-1-(3-fluoro-5-metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida e, em particular, a novas formas físicas do composto, um processo para preparar o composto e intermediários sintéticos para uso no processo e novas formulações contendo o composto, assim como usos terapêuticos do composto.

Description

DERIVADO DE 6-PIRIMIDINA-ISOINDOL COMO INIBIDOR DE ERK1/2 [001] Esta invenção refere-se ao composto (2R)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4i l)ami no] piri midin-4-il}-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-2-i l)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida e, em particular, a novas formas físicas do composto, um processo para preparar o composto e intermediários sintéticos para o uso no processo, e novas formulações contendo o composto, assim como usos terapêuticos do composto.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

Sinalização de MAPK e o papel de ERK1/2 [002] As quinases reguladas por sinal extracelular (ERK1/2) são proteínas serina/treonina quinases expressas de forma ubíqua que compreendem um componente-chave da via de sinalização da proteína quinase ativada por mitogênio (MAPK). A via MAPK é uma via de sinalização celular evolutiva conservada que regula uma variedade de processos celulares, incluindo progressão do ciclo celular, migração celular, sobrevivência celular, diferenciação, metabolismo, proliferação e transcrição. A via de sinalização ERK/MAPK responde à estimulação extracelular das tirosina quinases receptoras da superfície celular (RTKs). Após a ativação de RTKs, as RAS GTPases (K-RAS, N-RAS e H-RAS) são convertidas de um estado inativo ligado a GDP para um estado ligado a GTP ativo. RAS ativada fosforila e, portanto, ativa RAF (A-RAF, B-RAF e C-RAF), que por sua vez fosforila e ativa a quinase de dupla especificidade MEK (MEK1/2). Posteriormente, MEK ativada fosforila e ativa ERK1/2.Após a ativação, ERK1/2 ativa múltiplos substratos nucleares e citoplasmáticos. Atualmente, existem > 200 substratos ERK1/2 conhecidos, que incluem fatores de transcrição, cinases, fosfatases e proteínas do citoesqueleto (Roskoski, Pharmacol.Res.2012; 66:105-143).

[003] Foram identificadas várias isozimas de ERK (ERK1, ERK2, ERK3/4, ERK5, ERK7), mas as duas isoenzimas mais estudadas são ERK1 e ERK2: ver R. Roberts, J. Exp. Pharm., The extracellular signal-regulated kinase (ERK) pathway: a potential therapeutic target in hypertension, 2012:4, 77-83, e Cargnello et al., Microbiol.& Mol. Biol. Rev., Activation and Function of the MAPKs and Their Substrates, the MAPK-Activiated Protein Kinases 2011,50-83.

Regulação positiva da sinalização de ERK1/2 em câncer [004] A atividade de ERK1/2 é comumente regulada positivamente no

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2/109 câncer, como resultado de serem ativadas mutações nos componentes a montante da via MAPK. Aproximadamente 30% dos cânceres humanos contêm mutações de RAS ativadoras (Roberts e Der, Oncogene.2007; 26:3291-3310).K-RAS é a isoforma mutante mais frequente e é mutada em 22% de todos os tumores. As mutações KRAS são particularmente prevalentes no adenocarcinoma pancreático (70-90%), carcinoma de células não pequenas (10-20%) e câncer colorretal (2535%) (Neuzillet et al., 2014).Pharmacol.Ther. 141; 160-171). As mutações N-RAS e H-RAS ocorrem em 8% e 3% dos cânceres, respectivamente (Prior et al., Cancer Res.2012; 72 (10); 2457-2467). Notavelmente, a ativação de mutações N-RAS foi relatada em 15-20% dos casos de melanoma. Além disso, ativar mutações B-RAF ocorrem em 8% de todos os tumores e são particularmente prevalentes em melanoma (50-60%), câncer de tireoide papilar (40-60%), câncer colorretal (5-10%) e câncer de pulmão de células não pequenas (3-5%) (Neuzillet et al., 2014.Pharmacol.Ther. 141; 160-171). Além da ocorrência de ativação de mutações de RAS e RAF, a via de sinalização MAPK também pode ser regulada em câncer pela superexpressão ou ativação mutacional de RTKS a montante, como EGFR (Lynch et al., N Engl J Med. 2004; 350: 2129-2139), HER2 (Stephens et al., Nature. 2004; 431:525-526) e FGFR (Ahmed et al., Biochim.Biophys.Acta Mol. Cell.Res.2012; 1823:850-860).

[005] Existem múltiplos mecanismos pelos quais a sinalização de ERK1/2 aberrante pode contribuir para a progressão do câncer. Após a ativação, ERK1/2 fosforila e ativa uma ampla gama de fatores de transcrição que estão envolvidos na promoção da proliferação e diferenciação celular, como c-Fos (Murphy et al., Nat. Cell Biol. 2002:4 (8): 556-64) e ELK-1 (Gille et al., EMBO J.1995; 14 (5): 951-62). Além disso, a sinalização de ERK1/2 é conhecida por promover a progressão do ciclo celular através de múltiplos mecanismos, incluindo a indução de ciclinas de tipo D e a repressão do inibidor de quinase dependente de ciclina p27^KIP1 (Kawada et al., Oncogene.1997; 15:629 - 637, Lavoie et al., J. Biol.Chem.1996; 271:2060820616).AIém disso, a sinalização de ERK1/2 pode promover a sobrevivência celular através da regulação de uma gama de proteínas apoptóticas. Exemplos de tais mecanismos incluem a repressão dependente de ERK1/2 das proteínas BIM1 e BAD da família BCL-2 pró-apoptóticas (She et al., J. Biol Chem.2002; 277:2403924048.Ley et al., J. Biol. Chem.2003; 278:18811-18816) e a estabilização

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3/109 dependente de ERK1/2 de proteínas antiapoptóticas tais como MCL-1 (Domina et al., Oncogene.2004; 23:5301-5315).

Papel de ERK1/2 na resistência ao inibidor de MAPK [006] Uma ampla faixa de estudos pré-clínicos demonstrou que a inibição da via MAPK suprime o crescimento de linhagens celulares de câncer que abrigam mutações B-Raf ou Ras (Friday & Adjei, Clin.Cancer Res.2008; 14:342-346). Os inibidores de RAF vemurafenibe e dabrafenibe e o inibidor de MEK trametinibe são clinicamente aprovados para o tratamento de melanoma mutante de BRAF. Esses agentes obtêm respostas antitumorais profundas na maioria dos pacientes, embora a duração da resposta seja de curta duração, devido ao início da resistência adquirida aos medicamentos (Chapman et al., N.J. Med. 2011; 364 25072516.Hauschild et al., Lancet. 2012; 380:358-365.Solit e Rosen, N Engl J Med. 2011; 364 (8):772-774.Flaherty et al„ N.J. Med. 2012; 367:1694-1703). Múltiplos mecanismos de resistência ao inibidor de B-RAF adquirido foram identificados. Estes incluem a regulação positiva ou ativação de ativadores de MEK alternativos, como C-RAF ou COT1 (Villanueva et al., Cancer Cell.2010; 18:68395.Johannessen et al., Nature. 2010; 468.968-72), a regulação positiva da sinalização RTK ou NRAS (Nazarian et al., Nature. 2010; 468:973-7) e o início de mutações ativadoras de MEK (Wagle et al., J Clin Oncol.2011; 29:3085-96).Os mecanismos da resistência ao inibidor de MEK incluem a ocorrência de mutações MEK que reduzem ligação à droga ou aumentam a atividade intrínseca de MEK (Emery et al., Proc Natl. Acad. Sei. 2009; 106:20411-20416.Wang et al., Cancer Res.2011; 71:5535-5545) e amplificação de BRAF ou KRAS (Little et al., Biochem Soc.Trans.2012; 40(1 ):73-8).Uma característica comum dos mecanismos de resistência ao inibidor de RAF ou MEK é a reativação da sinalização de ERK1/2, que impulsiona a proliferação e a sobrevivência das células na presença de inibidores.Com base nessa observação, sugeriu-se que a inibição direta de ERK1/2 pode ser uma abordagem terapêutica efetiva para superar a resistência adquirida contra inibidores de RAF ou MEK. Há evidências pré-clínicas de que a inibição de ERK1/2 supera a resistência adquirida contra inibidores de RAF ou MEK (Hatzivassiliou et al., Mol Cancer Ther. 2012; 11 (5):1143-54.Morris et al., Cancer Discov.2013; 3 (7):742-50).

Outras doenças

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4/109 [007] Além da oncologia, a sinalização ERK1/2 anormal também foi relatada em outras doenças, incluindo doenças cardiovasculares (Muslin, Clin.Sei. 2008; 115:203-218), doença de Alzheimer (Giovannini et al., Neuroscience.2008; 153:618-633), doença renal policística (Omori et al., J Am Soc Nephrol.2006; 17:1604-1614), Asma (Duan et al., J Immunol. 2004; 172:7053-7059) e enfisema (Mercer et al., J. Biol. Chem.2004; 279:17690-17696).

(2fí)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4-il)amino]oirimidin-4-il}-1 -oxo-2,3-dihidro-1 Hisoindol-2-il)-N-[( /S)-1-(3-fluoro-5-metoxifenil)-2-hidroxietillDrooanamida [008] O pedido de patente internacional anterior n^s PCT/IB2016/001507 (cujo conteúdo é incorporado neste documento por referência) divulga uma classe de compostos de benzolactama como inibidores de ERK2.Um dos compostos especificamente divulgado no mesmo é o composto (2R)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4i l)ami no] piri midin-4-il}-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-2-i l)-N-[( 1 S)-1 -(3-f luoro-5metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida que tem a fórmula (1):

[009] A preparação desse composto é descrita no Exemplo 685 de

PCT/IB2016/001507 e envolve a reação de um composto da fórmula (2):

com um composto da fórmula (3):

MeO HO

em dimetilformamida (DMF) e trietilamina na presença do promotor de formação de ligação de amida tetrafluoroborato de 0-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'tetrametilurônio (TBTU).

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5/109 [010] No Exemplo 685, é divulgado que, após o processamento e purificação parcial por cromatografia em silica, o eluato da coluna de cromatografia foi evaporado para obter um vidro que foi então triturado com éter para obter o composto (1) como um sólido amorfo.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [011] No Exemplo 685 de PCT/IB2016/001507, o composto (1) é preparado em uma forma amorfa. No entanto, constatou-se agora que uma forma cristalina do composto da fórmula (1) pode ser preparada. Consequentemente, em um primeiro aspecto, a invenção fornece o composto da fórmula (1) em uma forma substancialmente cristalina.

[012] A presente invenção também fornece novos métodos para preparar o composto da fórmula (1) e intermediários sintéticos, e novas formulações compreendendo o composto da fórmula (1).

FORMAS CRISTALINAS DO COMPOSTO DA FÓRMULA (1) [013] Em um primeiro aspecto, a invenção fornece (2fí)-2-(6-{5-cloro-2[(oxan-4-i l)amino]pi ri midi n-4-i I}-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3fluoro-5-metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida, com a fórmula (1):

—o HO ci (1) ou uma forma tautomérica da mesma, em uma forma substancialmente cristalina.

[014] Embora o composto da fórmula (1) possa formar sais, as referências ao composto em uma forma cristalina são referências à base livre.

[015] As referências ao composto da fórmula (1), onde o contexto admite, incluem dentro do escopo todos os solvatos, tautômeros e variações isotópicas dos mesmos.

[016] E m um sólido amorfo, a estrutura tridimensional que normalmente existe em uma forma cristalina não existe e as posições das moléculas em relação umas às outras na forma amorfa são essencialmente aleatórias, vide, por exemplo,

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Hancock et al. J. Pharm.Sci. (1997), 86, 1).

[017] O termo “substancialmente cristalino” se refere a formas do composto da fórmula (1) nas quais é de 50% a 100% cristalinas. Dentro dessa faixa, o composto da fórmula (1) pode ser pelo menos 55% cristalino, ou pelo menos 60% cristalino, ou pelo menos 70% cristalino, ou pelo menos 80% cristalino, ou pelo menos 90% cristalino, ou pelo menos 95% cristalino, ou pelo menos 98% cristalino, ou pelo menos 99% cristalino, ou pelo menos 99,5% cristalino, ou pelo menos 99,9% cristalino, por exemplo, 100% cristalino.

[018] E m uma modalidade particular, a forma cristalina é de 95% a 100% cristalina, por exemplo pelo menos 98% cristalina, ou pelo menos 99% cristalina, ou pelo menos 99,5% cristalina, ou pelo menos 99,6% cristalina ou pelo menos 99,7% cristalina ou pelo menos 99,8% cristalino ou pelo menos 99,9% cristalino, por exemplo, 100% cristalino.

[019] As formas cristalinas do composto da invenção podem ser solvatadas (por exemplo, hidratadas) ou não solvatadas (por exemplo, anidras).

[020] Em uma modalidade, o composto é anidro.

[021] O termo anidro, conforme usado neste documento, não exclui a possibilidade da presença de alguma água sobre ou no composto (por exemplo, um cristal do composto).Por exemplo, pode haver alguma água presente na superfície do composto (por exemplo, cristal de composto), ou quantidades menores dentro do corpo do composto (por exemplo, cristal).Tipicamente, uma forma anidra contém menos de 0,4 moléculas de água por molécula de composto, e mais preferencialmente contém menos do que 0,1 moléculas de água por molécula de composto, por exemplo, 0 moléculas de água.

[022] Em outra modalidade, o composto é solvatado, por exemplo, hidratado. Onde as formas cristalinas são hidratadas, elas podem conter, por exemplo, até três moléculas de água de cristalização, mais geralmente até duas moléculas de água, por exemplo, uma molécula de água ou duas moléculas de água. Os hidratos não estequiométricos também podem ser formados em que o número de moléculas de água presentes é menor que um ou é, de outro modo, um não inteiro. Por exemplo, quando há menos do que uma molécula de água presente, pode haver, por exemplo, 0,4, ou 0,5, ou 0,6, ou 0,7 ou 0,8, ou 0,9 moléculas de água presentes por molécula do composto (1).

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7/109 [023] Em uma modalidade, a forma cristalina do composto (1) é um monohidrato e a forma cristalina contém uma molécula de água de cristalização.

[024] Outros solvatos incluem alcoolatos tais como etanolatos e isopropanolatos.

[025] As formas cristalinas descritas neste documento, os cristais das mesmas e a sua estrutura cristalina formam aspectos adicionais da invenção.

[026] Os cristais e suas estruturas de cristal podem ser caracterizados usando várias técnicas, incluindo difração de pó de raios-X (XRPD), difração de raios-X de cristal único, calorimetria exploratória diferencial (DSC) e análise termogravimétrica (TGA). O comportamento dos cristais em condições de umidade variante pode ser analisado por estudos de sorção de vapor gravimétrico (tal como sorção de vapor dinâmico).

[027] A estrutura cristalina de um composto pode ser analisada pela técnica de estado sólido da Difração de Pó de Raios X (XRPD).A XRPD pode ser realizada de acordo com métodos convencionais tais como os descritos neste documento (ver Exemplo 4A) e em Introduction to X-ray Powder Diffraction, Ron Jenkins and Robert L.Snyder (John Wiley & Sons, Nova Iorque, 1996).A presença de picos definidos (em oposição a ruído de fundo aleatório) em um difractograma XRPD indica que o composto tem um grau de cristalinidade.

[028] Um padrão de pó de raios X do composto é caracterizado pelos parâmetros de ângulo de difração (2Θ) e espaçamento interplanar (d) de um espectro de difração de raios X. Esses são relacionados pela equação de Bragg, nÀ=2d Sen Θ, (onde n=1; À=comprimento de onda da radiação dos raios X; d=espaçamento interplanar; e 0=ângulo de difração). Neste documento, espaçamentos interplanares, ângulo de difração e padrão geral são importantes para a identificação de cristais na difração de pó de raios X, devido às características dos dados. A intensidade relativa não deve ser estritamente interpretada, visto que pode variar dependendo da direção do crescimento do cristal, tamanhos das partículas e condições de medição. Além disso, os ângulos de difração geralmente significam aqueles que coincidem na faixa de 2Θ ± 0,2°.

[029] Duas formas cristalinas específicas da base livre do composto (1) foram identificadas até à data e essas são referidas neste documento como “forma A” e “forma B”. Dos dois, a forma B parece ser a forma mais estável. Os dados de

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8/109 caracterização tanto para a forma A quanto para a forma B são apresentados nos Exemplos abaixo.

[030] Ambas as formas A e B de (2fí)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4i l)ami no] piri midin-4-il}-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-2-i l)-N-[( 1S)-1 -(3-fluoro-5metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida cristalino da invenção foram caracterizadas por XRPD (ver Exemplos 3 e 4 e Figuras 1 e 2).

[031] E m cada caso, os padrões de difração de raios X de pó podem ser expressos em termos do ângulo de difração (2Θ), espaçamento interplanar (d) e intensidades relativas dos picos no difractograma.

Forma A [032] Uma primeira forma cristalina (forma A) da base livre do composto (1) pode ser formada por desproporcionamento a partir de uma solução do sal de ácido clorídrico do composto (1) em uma mistura solvente de água:propanol 3:1, conforme descrito no Exemplo 3A abaixo. O difratograma de XRPD para a forma A é mostrado na Figura 1.Durante o processo de desproporcionamento, o ácido se dissocia da base livre e permanece em solução para deixar uma suspensão da base livre do composto (1).

[033] A forma A cristalina também pode ser preparada suspendendo o sal de ácido clorídrico amorfo do composto (1) em água a 70°C durante um período prolongado (por exemplo, 96 horas) e depois filtrando o material cristalino.

Forma B [034] Uma segunda forma cristalina (forma B) da base livre também pode ser preparada por desproporcionamento de um sal de adição de ácido (tal como um sal de cloridrato, sulfato ou hidrobrometo) por agitação prolongada de uma suspensão aquosa do sal em água purificada, mas a uma temperatura mais baixa que a empregada para formar a forma A cristalina acima. Assim, a forma B pode ser preparada conforme descrito nos Exemplos 3B-3D abaixo suspendendo um sal de ácido mineral amorfo (tal como um sal de cloridrato, sulfato ou bromidrato) do composto (1) em água purificada a 18-23°C, depois agitando a mistura a 45-50°C durante 20 horas, seguida de agitação adicional a 30-35°C durante 96 horas e então filtrando os cristais da forma B.O difratograma de XRPD da forma B é mostrado na Figura 2.

[035] O desproporcionamento de um sal de adição de ácido amorfo do

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9/109 composto (1) na forma B cristalina pode ser auxiliado pela adição à mistura reacional de um co-solvente alcoólico, tal como isopropanol.

[036] Em outro método de fazer a forma B cristalina, o composto (1) na forma de base livre amorfa pode ser suspenso em água que pode ser não tamponada ou tamponada a um pH de cerca de 2 até pH 7 e então agitado a uma temperatura ligeiramente elevada (por exemplo, 30°C) durante um período de tempo (por exemplo, até seis dias, por exemplo, aproximadamente cinco dias) suficiente para permitir a conversão do composto amorfo (1) na forma B cristalina.

[037] O padrão de difração de raios X da forma B cristalina do composto (1) exibe picos de maior intensidade nos ângulos de difração estabelecidos na Tabela A, ou seja, 14,0^s, 20,6^s, 24,0^s e 24,2^S (±0,2^s).

Tabela A
Ângulo de Difração (°)	Intensidade Relativa
14,0	100
20,6	85
24,0	74
24,2	71

[038] Consequentemente, em outra modalidade, a invenção fornece uma forma substancialmente cristalina (forma B) de (2fí)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4i l)ami no] piri midin-4-il}-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-2-i l)-N-[( 1S)-1 -(3-fluoro-5metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida com um padrão de difração de pó de raios X caracterizado pela presença de grandes picos nos ângulos de difração (2Θ) 14,0^s e/ou 20,6^s e/ou 24,0^s e/ou 24,2^S (±0,2^s).

[039] Em uma modalidade, o padrão de difração de raios X é caracterizado pela presença de pelo menos um pico no ângulo de difração selecionado a partir de 14,0^s, 20,6^Q, 24,0^s e 24,2^S (±0,2^s).

[040] Assim, por exemplo, em uma modalidade, a invenção fornece uma forma substancialmente cristalina (forma B) do composto (1) com um padrão de difração de pó de raios X caracterizado pela presença de um pico principal no ângulo de difração de 14,0^s (±0,2^s).

[041] E m outra modalidade, a invenção fornece uma forma substancialmente cristalina (forma B) do composto (1) com um padrão de difração de pó de raios X caracterizado pela presença de um pico principal no ângulo de

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10/109 difração de 20,6^s (±0,2^s).

[042] Em ainda outra modalidade, a invenção fornece uma forma substancialmente cristalina (forma B) do composto (1) com um padrão de difração de pó de raios X caracterizado pela presença de um pico principal no ângulo de difração de 24,0^s (±0,2^s).

[043] Em ainda outra modalidade, a invenção fornece uma forma substancialmente cristalina (forma B) do composto (1) com um padrão de difração de pó de raios X caracterizado pela presença de um pico principal no ângulo de difração de 24,2^S (±0,2^s).

[044] Em outras modalidades, a forma substancialmente cristalina (forma B) do composto (1) tem um padrão de difração de raios X caracterizado pela presença de picos principais em dois ou mais, por exemplo, três ou mais, e em particular quatro ângulos de difração selecionados de 14,0^s, 20,6^s, 24,0^s e 24,2^S (±0,2^s).

[045] O padrão de difração de raios X da forma B cristalina do composto (1) também pode ter picos menores presentes nos ângulos de difração estabelecidos na Tabela B, ou seja, 8,8, 13,0, 13,8, 14,4, 17,3, 19,3, 21,3 e 28,7 (±0,2^s).

Tabela B
Angulo de Difração (°)	Intensidade Relativa
8,8	23
13,0	23
13,8	39
14,4	20
17,3	22
19,3	36
21,3	45
28,7	22

[046] A invenção, portanto, também fornece uma forma substancialmente cristalina (forma B) do composto (1) com um padrão de difração de raios X caracterizado pela presença de picos principais nos ângulos de difração de 14,0^s e/ou 20,6^s e/ou 24,0^s e/ou 24,2^S (±0,2^s) conforme definido acima e opcionalmente um ou mais picos adicionais em ângulos de difração selecionados de 8,8^s, 13,0^a, 13,8^s, 14,4^s, 17,3^s, 19,3^s, 21,3^s e/ou 28,7^S (±0,2^s).

[047] E m uma modalidade, a forma substancialmente cristalina (forma B) do

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11/109 composto (1) tem um padrão de difração de raios X caracterizado pela presença de picos principais nos ângulos de difração 14,0^s e/ou 20,6^s e/ou 24,0^s e/ou 24,2^S (±0,2^s); e opcionalmente um ou mais picos adicionais nos ângulos de difração de 13,8^s e/ou 19,3^s e/ou 21,3^S (±0,2^s).

[048] Em uma modalidade particular, a forma substancialmente cristalina (forma B) do composto (1) tem um padrão de difração de raios X caracterizado pela presença de picos principais nos ângulos de difração 14,0^s, 20,6^s, 24,0^s, 24,2^S, 13,8^s, 19,3^se21,3^s (±0,2^s).

[049] Em outra modalidade particular, a forma substancialmente cristalina (forma B) do composto (1) tem um padrão de difração de raios X caracterizado pela presença de picos principais nos ângulos de difração 14,0^s, 20,6^s, 24,0^s, 24,2^s, 8,8^s, 13,0^s, 13,8^s, 14,4^s, 17,3^s, 19,3^s, 21,3^s e 28,7^S (±0,2^s).

[050] O padrão de difração de raios X pode ser caracterizado adicionalmente pela presença de picos adicionais nos ângulos de difração (2Θ) (±0,2°) estabelecidos na Tabela C.

Tabela C
Ângulo de Difração (°)	Intensidade Relativa
12,0	13
16,9	12
23,5	18
26,2	18
29,8	13

[051] A invenção fornece adicionalmente uma forma substancialmente cristalina (forma B) do composto (1) que exibe picos com os mesmos ângulos de difração que os do padrão de difração de raios X mostrado na Figura

2.Preferencialmente, os picos têm a mesma intensidade relativa que os picos da Figura 2.

[052] E m uma modalidade preferencial, a invenção fornece uma forma substancialmente cristalina (forma B) do composto (1) com um padrão de difração de pó de raios X substancialmente conforme mostrado na Figura 2.

[053] A forma cristalina da invenção também pode ser caracterizada por calorimetria exploratória diferencial (DSC).

[054] A forma B cristalina do composto (1) foi analisada por DSC e

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12/109 constatou-se que exibe um evento endotérmico com uma temperatura de início entre 100^sC a 110^sC (mais particularmente de 101^SC a 108^sC) e um pico entre 110^sC e 125^SC (mais particularmente entre 111^SC e 114^SC) conforme mostrado na Figura 3 das figuras anexas. Esse evento é atribuído à liberação de água.

[055] Consequentemente, a invenção fornece uma forma substancialmente cristalina (forma B) do composto (1) que exibe um evento endotérmico com uma temperatura de início entre 100^sC a 110^sC (mais particularmente 101^SC a 108^sC) quando submetido a DSC.A invenção também fornece uma forma substancialmente cristalina (forma B) do composto (1) que exibe um evento endotérmico com um pico entre 110^sC e 125^SC (mais particularmente entre 111^SC e 113^SC).

[056] A forma cristalina (forma B) da invenção também pode ser caracterizada por análise termogravimétrica (TGA).

[057] A forma B substancialmente cristalina do composto (1) foi analisada por TGA e exibe uma transição de perda de peso com uma temperatura de início de 85^SC a 95^SC, por exemplo, 90,86^sC, que é completa entre 110^sC e 130^sC, por exemplo, 120^sC (ver Figura 4). A perda de peso corresponde à liberação de água.

[058] Com base nos dados de DSC e TGA, acredita-se que a forma B substancialmente cristalina do composto (1) descrita acima é um mono-hidrato. Isso também foi confirmado por estudos de difração de raios X de cristal único (ver Exemplo 4E abaixo).

[059] Na forma B substancialmente cristalina do composto (1), uma forma monocristalina pode predominar, embora outras formas cristalinas possam estar presentes em quantidades menores e preferencialmente insignificantes.

[060] Em uma modalidade preferencial, a invenção fornece o composto (1) em uma forma substancialmente cristalina (forma B) contendo uma forma monocristalina com as propriedades de XRPD descritas acima, e não mais de 5% em peso de quaisquer outras formas cristalinas do composto.

[061] Preferencialmente, a forma monocristalina (forma B) é acompanhada por menos de 4%, ou menos de 3%, ou menos de 2% de outras formas cristalinas, e em particular contém menos do que ou igual a cerca de 1% em peso de outras formas cristalinas. Mais preferencialmente, a forma monocristalina é acompanhada por menos de 0,9%, ou menos de 0,8%, ou menos de 0,7%, ou menos de 0,6%, ou

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13/109 menos de 0,5%, ou menos de 0,4%, ou menos de 0,3% ou menos de 0,2% ou menos de 0,1% ou menos de 0,05% ou menos de 0,01% em peso de outras formas cristalinas, por exemplo 0% em peso de outras formas cristalinas.

[062] Conforme será evidente a partir dos parágrafos anteriores, a forma cristalina (forma B) do composto (1) pode ser caracterizada por vários parâmetros físico-químicos diferentes. Consequentemente, em uma modalidade particular, a invenção fornece uma forma substancialmente cristalina (forma B) do composto (1), que é caracterizada por qualquer um ou mais (em qualquer combinação) ou todos dentre os parâmetros seguintes, nomeadamente que:

(a) tem um padrão de difração de pó de raios X caracterizado pela presença de picos principais nos ângulos de difração (2Θ) e intensidades estabelecidas na Tabela A e, opcionalmente, na Tabela B; e ainda opcionalmente, em que o padrão de difração de pó de raios X é caracterizado pela presença de picos principais nos ângulos de difração (2Θ) e intensidades estabelecidas na Tabela C; e/ou (b) exibe picos com os mesmos ângulos de difração que os do padrão de difração de pó de raios X mostrado na Figura 2 e opcionalmente em que os picos têm as mesmas intensidades relativas que os picos na Figura 2; e/ou (c) tem um padrão de difração de pó de raios X substancialmente conforme mostrado na Figura 2; e/ou (d) exibe um pico endotérmico entre 100^sC e 115^SC quando submetida a DSC; e/ou (e) apresenta uma perda de peso entre 85^SC e 130^sC (por exemplo, 90120^sC) quando submetida a análise termogravimétrica (TGA).

Processos para fazer formas cristalinas da base livre do composto (1) [063] A invenção também fornece processos para fazer formas cristalinas da base livre do composto (1).

[064] Consequentemente, em outro aspecto da invenção, é fornecido um processo para fazer uma forma substancialmente cristalina do composto (1); no qual o método compreende:

(i) formar uma suspensão aquosa de um sal de adição de ácido do composto (1) e agitar a suspensão a uma temperatura entre 25°C e 75°C durante um período de tempo suficiente para permitir o desproporcionamento do sal de adição de ácido e formação da forma cristalina da base livre do composto (1) ocorrer e depois disso

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14/109 isolar a forma cristalina; ou (ii) formar uma suspensão aquosa de uma forma amorfa da base livre do composto (1), em que a suspensão aquosa é não tamponada ou é tamponada a um pH de 1,75 a 7,25 e agitar a suspensão aquosa a uma temperatura entre 25°C e 55°C durante um período de tempo suficiente para permitir a conversão da forma amorfa da base livre do composto (1) na forma cristalina da base livre do composto (1) a ocorrer e, posteriormente, isolar a forma cristalina.

[065] Na variante do processo (i), a seleção da temperatura e do tempo de agitação terá uma influência sobre se a forma A cristalina ou a forma B cristalina é produzida. Assim, por exemplo, o processo pode ser realizado a uma temperatura mais alta, por exemplo 65-75°C (e mais particularmente aproximadamente 70°C) para obter a forma A. Por outro lado, o processo pode ser realizado a uma temperatura mais baixa, por exemplo 25-55°C, para obter a forma B cristalina.

[066] A formação de uma forma cristalina pode ser facilitada pela adição à mistura do processo de um álcool, tal como o isopropanol.

[067] O material de partida para a variante do processo (i) é um sal de adição de ácido do composto (1). O sal de adição de ácido pode ser amorfo.

[068] O sal de adição de ácido do composto (1) pode ser, por exemplo, um sal de ácido mineral, tal como um sal de cloridrato, bromidrato ou sulfato. Os métodos para fazer tais sais serão bem conhecidos àqueles versados na técnica. O sal pode ser preparado adicionando o composto de base livre a uma solução do contra-íon em um solvente. O solvente pode ser um solvente polar prótico, tal como

2-propanol ou metanol, e pode incluir um co-solvente polar aprótico, tal como diclorometano.

[069] A variante do processo (ii) normalmente leva à formação da forma B.

[070] Na variante do processo (ii), a suspensão aquosa pode ser tamponada ou não tamponada. Por exemplo, pode ser não tamponada ou tamponada a um pH de 2, 5 ou 7.A suspensão aquosa é agitada com aquecimento suave, por exemplo, a uma temperatura de cerca de 25°C a cerca de 35°C, por exemplo, aproximadamente 30°C. A suspensão aquosa é agitada durante um período de tempo suficiente para permitir a conversão da forma amorfa da base livre do composto (1) na forma cristalina da base livre do composto (1) a ocorrer. Tipicamente, ela é agitada durante pelo menos um dia, mais geralmente pelo

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15/109 menos dois dias ou pelo menos três dias e, em uma modalidade, é agitada durante cinco dias.

[071] E m um conjunto alternativo de condições na variante do processo (ii), o processo pode ser realizado durante um período de tempo mais curto (por exemplo pelo menos 12 horas, ou pelo menos 15 horas; por exemplo 20 horas) a uma temperatura mais alta (por exemplo 45-55°C, e em particular aproximadamente 50°C). Um cristal de semente ou qualquer forma A ou forma B pode ser vantajosamente adicionado para auxiliar a formação da forma B cristalina.

Sais amorfos do composto da fórmula (1) [072] Vários sais amorfos dos compostos da fórmula (1) foram preparados (ver Exemplo 2). Consequentemente, em um primeiro aspecto da invenção, é fornecido um composto da fórmula (1) em uma forma amorfa.

[073] O sal pode ser o sal de cloridrato, sulfato, napadisilato (naftaleno-1,5dissulfonato), edisilato (etanodissulfonato), tosilato (p-toluenossulfonato), mesilato (metanossulfonato), napsilato (2-naftalenosulfonato), besilato (benzenossulfonato), isetionato (2-hidroxietanossulfonato), esilato (etanossulfonato) ou bromidrato do composto da fórmula (1).

[074] Um conjunto de sais consiste nos sais de cloridrato, sulfato, bromidrato ou napadisilato amorfos do composto da fórmula (1).

Em outras modalidades, a invenção fornece:

• o sal de cloridrato amorfo do composto da fórmula (1);

• o sal de sulfato amorfo do composto da fórmula (1);

• o sal de bromidrato amorfo do composto da fórmula (1); e • o sal de napadisilato amorfo do composto da fórmula (1).

[075] Os sais amorfos podem ser preparados reagindo a forma de base livre do composto com o ácido apropriado em um solvente orgânico, preferencialmente um solvente polar aprótico (por exemplo, acetato de isopropil) ou uma mistura de um solvente polar aprótico e um solvente polar prótico (por exemplo, uma mistura de acetato de isopropil e 2- propanol).

[076] Os sais amorfos da invenção podem ser fornecidos na forma de partículas com um diâmetro mediano de massa na faixa de 1 pm a 100 pm.

[077] As partículas podem ter um diâmetro mediano de massa na faixa de 2 pm a 50 pm, por exemplo, de 2 pm a 25 pm ou de 2 pm a 10 pm. As partículas

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16/109 podem ser administradas oralmente (tipicamente como uma formulação administrável oralmente compreendendo opcionalmente um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis) ou através de outros meios, por exemplo, por inalação. Quando as partículas são destinadas à administração por inalação, as partículas normalmente têm um diâmetro mediano de massa de 1 pm a 10 pm ou 1 pm a 5 pm.

[078] Os tamanhos das partículas podem ser determinados por métodos de análise de imagem, métodos de difração a laser ou técnicas de peneiramento.

[079] As partículas podem ser produzidas através de processos mecânicos de micronização ou através de processos de separação de fases baseados em solução. Exemplos de processos mecânicos de micronização incluem técnicas de moagem.

[080] Técnicas baseadas em soluções geralmente envolvem o uso de líquidos, gases comprimidos, líquidos quase críticos ou fluidos supercríticos como solventes ou meios criogênicos para congelamento rápido. Essas técnicas envolvem a separação de fases do solvente e do composto farmacêutico por evaporação, expansão, congelamento ou alteração da composição do solvente.

[081] As partículas podem ser produzidas por liofilização. Alternativamente, as partículas podem ser formadas por secagem por pulverização. Consequentemente, em uma modalidade, os sais amorfos da invenção são secos por pulverização.

[082] Os sais amorfos podem ser usados como agentes terapêuticos ou podem ser usados como intermediários na preparação de formas cristalinas da base livre do composto da fórmula (1), conforme descrito acima.

MÉTODOS PARA A PREPARAÇÃO DO COMPOSTO DA FÓRMULA (1) [083] O composto (1) pode ser preparado pela série de etapas de processo mostradas no Esquema 1 abaixo.

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(6)

Esquema 1 [084] A reação do composto intermediário (2) com o composto intermediário (3) para obter o composto (1) é descrita no Exemplo 685 do pedido anterior PCT/IB2016/001507.A reação é realizada em dimetilformamida (DMF) e trimetilamina na presença do promotor de formação de ligação de amida tetrafluoroborato de 0-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametilurônio (TBTU).Em PCT/IB2016/001507, o composto intermediário (2) é preparado por hidrólise do éster terc-butílico que é, por si só, preparado por reação do composto intermediário (4) com a amina (6).

[085] De acordo com a presente invenção, várias modificações foram feitas no processo descrito em PCT/IB2016/001507.

[086] Em primeiro lugar, as condições do processo para a etapa final, a reação dos compostos intermediários (2) e (3) foram modificadas. Assim, em vez de usar o reagente de acoplamento TBTU, reagentes de acoplamento alternativos

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18/109 tais como hexafluorofosfato de A/,A/,A/',A/-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1il)urônio (HATU) e 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI) foram usados. Além disso, assim como a trietilamina, bases alternativas como diisopropiletilamina (DIPEA) e 4-dimetilaminopiridina (DMAP) foram usadas.

[087] E m segundo lugar, em vez de reagir o composto intermediário (4) com a amina (6) e depois hidrolisar a fração de éster terc-butílico para obter o composto (2) conforme descrito em PCT/IB2016/001507, a fração de éster terc-butílico no composto intermediário (4) é primeiro hidrolisado para obter o ácido carboxílico (5) o qual é então reagido com a amina (6) para obter o composto (2).

[088] De acordo com um aspecto adicional da invenção, é fornecido um processo para preparar o composto da fórmula (1), cujo processo compreende reagir um composto da fórmula (2) com um composto da fórmula (3):

MeO

HQ

HO

(3) um solvente aprótico na presença de uma base de amina terciária e um agente promotor de ligação amida em que o agente promotor de ligação amida é selecionado a partir de hexafluorofosfato de A/,A/,A/',A/'-tetrametil-0-(7azabenzotriazol-1-il)urônio (HATU) e 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI).

[089] Em uma modalidade particular, o agente promotor de ligação amida é hexafluorofosfato de A/,A/,A/',A/-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1 -il)urônio (HATU).

[090] Exemplos de bases de aminas terciárias para uso no processo são diisopropiletilamina (DIPEA), 4-dimetilaminopiridina (DMAP) e trietilamina e misturas das mesmas.

[091] E m uma modalidade particular, a base de amina terciária é diisopropiletilamina (DIPEA).

[092] Exemplos de solventes apróticos são diclorometano, acetato de etila e dimetilformamida.

[093] Em uma modalidade particular, o solvente aprótico é diclorometano.

[094] Em uma modalidade preferencial, é fornecido um processo para preparar o composto da fórmula (1), cujo processo compreende reagir um

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19/109 composto da fórmula (2) com um composto da fórmula (3) em um solvente aprótico que é diclorometano na presença de uma base de amina terciária que é diisopropiletilamina (DIPEA) e um agente promotor de ligação amida que é hexafluorofosfato de A/,A/,A/',A/-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1 -il)urônio (HATU).

[095] A reação entre os compostos (2) e (3) é tipicamente realizada sem aquecimento externo e pode, por exemplo, ser realizada a uma temperatura não superior a 25°C. Assim, por exemplo, uma vez que os reagentes foram misturados para formar uma mistura reacional, a mistura reacional pode ser agitada a uma temperatura na faixa de 15-25°C até a reação estar completa.

[096] Em outro aspecto, a invenção fornece um processo para fazer um composto da fórmula (1) conforme definido neste documento, cujo processo compreende:

a) reagir um composto da fórmula (5):

com um composto da fórmula (6)

para obter um composto da fórmula (2):

b) reagir o composto da fórmula (2) com um composto da fórmula (3):

MeO HO

^F (3) para obter o composto da fórmula (1) e em seguida, opcionalmente, formar um sal ou forma cristalina do mesmo.

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20/109 [097] A etapa (a) é tipicamente realizada em um solvente polar aprótico, tal como 1 -metil-2-pirrolidiona (NMP). A reação pode ser conduzida a temperaturas elevadas; por exemplo, uma temperatura em excesso de 60°C, mais geralmente em excesso de 70°C, e em particular uma temperatura na faixa de 75-95°C (por exemplo, 80 a 95°C).

[098] A etapa (a) é realizada na presença de uma base, que pode ser uma base inorgânica, tal como um carbonato de metal alcalino, por exemplo, carbonato de potássio.

[099] O progresso da reação entre os compostos das fórmulas (5) e (6) pode ser monitorizado para determinar a extensão da reação. Por exemplo, a reação pode ser monitorizada até que a quantidade residual do composto da fórmula (5) seja menor do que um nível desejado (por exemplo, menos de 1 mol% da sua quantidade original). A etapa (a) tem tipicamente um tempo de reação entre 1 a 8 horas, por exemplo, 2 a 7 horas, e tipicamente 4 a 6 horas.

[100] A etapa (b) é realizada nas condições descritas acima para a reação entre os compostos (2) e (3) para obter o composto (1).

[101] Em um aspecto adicional da invenção, é fornecido um processo para preparar o composto da fórmula (2), cujo processo compreende:

a) reagir um composto da fórmula (5):

com um composto da fórmula (6) h₂n

para obter o composto da fórmula (2):

o

[102] A reação pode ser realizada nas condições descritas em relação à etapa (b) acima.

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21/109 [103] O composto (5) pode ser preparado pela hidrólise de um composto de éster terc-butílico da fórmula (4):

-V .0

Cl (4) por exemplo, usando um ácido mineral tal como ácido clorídrico concentrado. A reação de hidrólise pode ser auxiliada por aquecimento suave, por exemplo, a uma temperatura na faixa de 30-45°C, e mais tipicamente na faixa de 35-40°C. Um co-solvente que pode ser um solvente de hidrocarboneto ou hidrocarboneto dorado pode ser usado. Uma vez tal co-solvente é tolueno.

[104] O composto (4) pode ser preparado pelos métodos descritos em PCT/IB2016/001507; ver por exemplo a Preparação 94 no mesmo.

COMPOSIÇÕES QUE COMPREENDEM O COMPOSTO DA FÓRMULA (1) [105] O composto da fórmula (1) tem solubilidade relativamente fraca em água. A presente invenção, portanto, fornece composições do composto (1) nas quais compreendem um veículo principal que é outro além da água. Tais composições são adequadas para administração oral.

[106] Constatou-se que o composto (1) tem boa solubilidade em vários solventes não aquosos. Consequentemente, a invenção proporciona uma composição farmacêutica compreendendo o composto da fórmula (1) e um veículo selecionado a partir de:

- um álcool C2-4;

- um composto poliéter;

- monoésteres de ácidos graxos de cadeia longa Cs a Cie com glicerol ou propilenoglicol;

- di ou triglicerídeos de ácidos graxos de cadeia longa Cs a C10;

e misturas dos mesmos.

[107] A composição farmacêutica pode tomar a forma de uma solução do composto (1) no veículo.

[108] E m um aspecto adicional da invenção, é fornecido um método de fazer uma composição farmacêutica compreendendo 0 composto da fórmula (1), em que 0 método compreende a dispersão de um composto da fórmula (1) em um veículo

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22/109 selecionado a partir de:

- um álcool C2-4;

- um composto poliéter;

- monoésteres de ácidos graxos de cadeia longa Cs a Cis com glicerol ou propilenoglicol;

- di ou triglicerídeos de ácidos graxos de cadeia longa Cs a C10;

e misturas dos mesmos.

[109] Geralmente, 0 composto da fórmula (1) é disperso no veículo para formar uma solução ou uma suspensão. Em uma modalidade, 0 composto da fórmula (1) é suspenso no veículo. Em outra modalidade, 0 composto da fórmula (1) é dissolvido no veículo para formar uma suspensão.

[110] O veículo pode compreender um álcool C2-4 monohídrico ou polihídrico, preferencialmente um álcool C2-3, por exemplo, etanol ou propilenoglicol.

[111] Quando 0 veículo compreende um composto poliéter, 0 composto poliéter pode ser um polietilenoglicol (PEG). O polietilenoglicol pode ter um peso molecular médio de 200 a 10.000 g/mol, por exemplo, 300 a 8.000 g/mol. Em uma modalidade, 0 polietilenoglicol tem um peso molecular médio de aproximadamente 200 a 400 g/mol, por exemplo, 300 a 450 g/mol.

[112] Dependendo da natureza e das quantidades relativas dos componentes do veículo, as composições podem ser líquidas, semissólidas ou sólidas. Por exemplo, quando um PEG de peso molecular mais alto é usado, a viscosidade da composição pode ser aumentada até ao ponto em que pode ser considerada como um “semissólido” ou sólido, enquanto PEGs de peso molecular mais baixo podem dar origem a composições líquidas. Referências a soluções no contexto de tais composições incluem soluções sólidas, assim como soluções líquidas (ou semissólidas) [113] Alternativa ou adicionalmente, 0 veículo pode compreender ácido caprílico ou cáprico e mono, di e triésteres de ácidos caprílico ou cáprico. Exemplos de tais ésteres incluem monocaprilato de propilenoglicol, monocaprilato de glicerol, dicaprilato de glicerol, tricaprilato de glicerol, monocaprato de glicerol, dicaprato de glicerol e tricaprato de glicerol. Os glicerídeos de Caprylocaprooye macrogol-8 (Labrasol® ALF) são veículos comercialmente disponíveis que contêm uma mistura

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23/109 de mono, di e triésteres de glicerol de ácidos caprílico e cáprico e também mono e diésteres de polietilenoglicóis com urn peso molecular médio entre 200 e 400 g/mol.

[114] E m outra alternativa, o veículo pode compreender um monoglicerídeo de um ácido graxo de cadeia mais longa, tal como ácido linoleico ou ácido oleico. Exemplos de tais veículos incluem monolinoleato de Glicerol (Maisine CC^TM) e monooleatos de Glicerol (tipo 40, Peceol™) [115] E m uma modalidade, o veículo é selecionado a partir de etanol, propilenoglicol, polietilenoglicol e misturas dos mesmos. Por exemplo, o veículo pode compreender uma combinação de propilenoglicol e etanol, tal como uma combinação de propilenoglicol e etanol em uma proporção de 50:50 para 90:10% p/p (por exemplo, propilenoglicol e etanol em uma proporção de 75:25 ou 85:15% p/p). Em uma modalidade, o veículo compreende uma combinação de propilenoglicol e etanol em uma proporção de 75:25 para 90:10% p/p.

[116] E m outra modalidade, o veículo é selecionado a partir de etanol, polietilenoglicol 400 (PEG 400) e propilenoglicol, e misturas dos mesmos.

[117] A composição tipicamente permite a administração oral do composto (1) para obter uma dose diária total de até 1,2 g por dia. Nas composições da invenção, a concentração do composto (1) no veículo pode estar na faixa de 10 mg/ml e 130 mg/ml, por exemplo, 40 mg/ml a 125 mg/ml, e mais particularmente 110 mg/ml a 125 mg/ml. Uma concentração de 120 mg/ml permite administrar uma dose de 1,2 g do composto (1) em 10 ml da composição.

[118] Alternativamente, a composição pode estar contida dentro de uma cápsula. As cápsulas adequadas para distribuir composições descritas neste documento incluem cápsulas de gelatina dura ou mole. Em uma modalidade, a composição está contida dentro de uma cápsula de gelatina mole. O termo “gelatina” conforme usado neste documento se refere não apenas a cápsulas feitas de gelatina como tal, mas também a cápsulas feitas de equivalentes não gelatinosos tais como pululano ou celuloses modificadas tais como hidroxipropilmetilcelulose.

[119] A composição também pode compreender um ou mais surfactantes para auxiliar a solubilidade do composto (1) no(s) veículo(s) selecionado(s). Os surfactantes também podem atuar para inibir a precipitação do composto da fórmula (1) quando a composição é diluída no trato gastrointestinal.

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24/109 [120] Os surfactantes são tipicamente surfactantes não iônicos.

[121] O surfactante não iônico pode ser, por exemplo, um éster de poliol, éster de polioxietileno ou poloxâmero.

[122] E m uma modalidade, o surfactante é um polietilenoglicol de tocoferol (TPG), tal como o succinato de polietilenoglicol D-a-tocoferol (TPGS), que tem a fórmula:

onde o valor médio de n está na região de cerca de 10 a cerca de 30, mais tipicamente na faixa de cerca de 15 a cerca de 27; por exemplo, na faixa de cerca de 20 a 25.Um TPGS particular é o succinato de polietilenoglicol a-tocoferol 1000 (peso molecular médio aproximado 1513) em que a fração de polioxietileno [-OCH2-CH2]n tem um peso molecular de cerca de 1000 (por exemplo, 950 a 1050) e o valor médio de n tem cerca de 22.Exemplos de ésteres de poliol incluem ésteres de glicol e glicerol e derivados de sorbitano.

[123] Ésteres de ácidos graxos de sorbitano (geralmente referidos como Spans) e os seus derivados etoxilados (geralmente referidos como Tweens) incluem monolaurato de Sorbitano (Span 20), monopalmitato de Sorbitano (Span 40), monoestearato de Sorbitano (Span 60), mono-oleato de Sorbitano (Span 80), triestearato de Sorbitano (Span 65), trioleato de Sorbitano (Span 8), monolaurato de sorbitano (Tween 20) de Polioxietileno (20), monopalmitato de sorbitano (Tween 40) de Polioxietileno (20), monoestearato de sorbitano (Tween 60) de Polioxietileno (20), mono-oleato de sorbitano (Tween 80) de Polioxietileno (20), triestearato de sorbitano (Tween 65) de Polioxietileno (20) e trioleato de sorbitano (Tween 85) de Polioxietileno (20).

[124] Outros exemplos particulares de surfactantes incluem óleo de rícino hidrogenado polioxil 40 (Cremophor RH 40, Kolliphor® RH40), óleo de rícino polioxil 35 (Cremophor EL, Kolliphor® EL), polissorbato 80 (Tween 80), Gelucire 44/14 (Lauroyl macrogol-32 glicerídeos), Solutol HS-15 (hidroxi-estearato de Macrogol 15) e Labrasol® ALF (glicerídeos de caprilocaproil macrogol-8). Em uma

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25/109 modalidade, o surfactante é Cremophor RH 40.

[125] E m uma modalidade, a composição compreende o composto da fórmula (1), etanol e um polietilenoglicol de tocoferol (TPG), por exemplo, succinato de polietilenoglicol D-a-Tocoferol 1000 (TPGS). O etanol e o TPG podem estar presentes em uma proporção na faixa de 20:80 de etanoLTPG para 60:40 de etanoLTPG, por exemplo, 30:70 de etanoLTPG para 50:50 de etanol.

[126] E m outra modalidade, a composição compreende, ademais ao composto da fórmula (1), um veículo compreendendo:

(i) propilenoglicol;

(ii) um surfactante não iônico (tal como Cremophor RH40 e um polietilenoglicol de tocoferol); e opcionalmente (iii) etanol.

Em outra modalidade, a composição compreende, ademais ao composto da fórmula (1), um veículo compreendendo:

(i) propilenoglicol;

(ii) um surfactante não iônico de éster de polioxietileno; e opcionalmente (iii) etanol.

[127] O surfactante não iônico de éster de polioxietileno pode ser, por exemplo, um polietilenoglicol de tocoferol (TPG), tal como um succinato de polietilenoglicol D-a-tocoferol (TPGS) conforme definido neste documento anteriormente.

[128] E m uma modalidade particular, as composições não contêm etanol (iii).

[129] E m outra modalidade particular, as composições contêm etanol (iii).

[130] E m outra modalidade particular, o veículo compreende propilenoglicol e um polietilenoglicol de tocoferol (TPG).Nessa modalidade, o veículo pode compreender TPGS em uma proporção em peso de 1:2 para 10:1 de propilenoglicoLTPGS e, opcionalmente pode compreender adicionalmente etanol em uma proporção em peso de 1:10 para 2:1 de etanoLpropilenoglicol (por exemplo, succinato de polietilenoglicol D-a-Tocoferol 1000 (TPGS)) em uma proporção em peso de a partir de 1:2 para 5:1 de propilenoglicolpolietilenoglicol de tocoferol; e opcionalmente compreender adicionalmente etanol em uma proporção em peso de etanoLpropilenoglicol de a partir de 1:10 para 2:1.

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26/109 [131] As composições compreendendo o composto da fórmula (1), propilenoglicol, surfactante não iônico de éster de polioxietileno; e opcionalmente, o etanol pode ser contido convenientemente dentro de uma cápsula, por exemplo, uma cápsula de gelatina dura ou de gelatina mole.

[132] O composto de fórmula (1) na etapa a) pode estar em uma forma cristalina. Em uma modalidade, o composto da fórmula (1) na etapa a) está em uma forma cristalina, conforme descrito neste documento.

[133] A baixa solubilidade aquosa dos compostos farmacêuticos pode ser melhorada reduzindo o tamanho das partículas sólidas dos compostos. Ao reduzir o tamanho de partícula do composto farmacêutico, a área de superfície disponível para a solvatação é aumentada.

[134] Consequentemente, em um aspecto adicional da invenção, é fornecido um composto da fórmula (1) na forma de partículas com um diâmetro mediano de massa entre 1 pm e 100 pm.

[135] As partículas podem ter um diâmetro mediano de massa entre 2 pm e 50 pm, por exemplo, entre 2 pm e 25 pm ou entre 2 pm e 10 pm. As partículas podem ser administradas oralmente (tipicamente como uma formulação administrável oralmente compreendendo opcionalmente um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis) ou através de outros meios, por exemplo, por inalação. Quando as partículas são destinadas à administração por inalação, as partículas normalmente têm um diâmetro mediano de massa de 1 pm a 10 pm ou 1 pm a 5 pm.

[136] Os tamanhos das partículas podem ser determinados por métodos de análise de imagem, métodos de difração a laser ou técnicas de peneiramento.

[137] As partículas podem ser produzidas através de processos mecânicos de micronização ou através de processos de separação de fases baseados em solução. Exemplos de processos mecânicos de micronização incluem técnicas de moagem.

[138] Técnicas baseadas em soluções geralmente envolvem o uso de líquidos, gases comprimidos, líquidos quase críticos ou fluidos supercríticos como solventes ou meios criogênicos para congelamento rápido. Essas técnicas envolvem a separação de fases do solvente e do composto farmacêutico por evaporação, expansão, congelamento ou alteração da composição do solvente.

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27/109 [139] As partículas podem ser produzidas por liofilização. Alternativamente, as partículas podem ser formadas por secagem por pulverização.

DEFINIÇÕES [140] O composto da fórmula (1) pode ser referido neste pedido pelo seu nome químico ou, por conveniência, como o composto, o composto da fórmula (1), composto (1) ou o composto da invenção. Cada um desses sinônimos se referem ao composto mostrado na fórmula (1) acima e com o nome químico (2fí)2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4-il)amino]pirimidin-4-il}-1-oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-2-il)N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5-metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida.

[141] O termo diâmetro mediano de massa, conforme usado neste documento para definir tamanhos de partículas, é definido como o diâmetro no qual 50% das partículas em massa são maiores em diâmetro e 50% são menores em diâmetro. O diâmetro se refere ao diâmetro esférico equivalente, que para uma partícula não esférica é igual ao diâmetro de uma partícula esférica com o mesmo volume da partícula não esférica.

[142] Por ERK1/2 nos referimos a uma ou a ambas as isozimas ERK1 e ERK2 de cinases reguladas por sinal extracelular (ERK).

[143] Potência é uma medida da atividade de drogas expressa em termos da quantidade necessária para produzir um efeito de intensidade dada. Uma droga altamente potente evoca uma resposta maior em baixas concentrações. A potência é proporcional à afinidade e à eficácia. A afinidade é a capacidade do medicamento para se ligar a uma enzima. A eficácia é a relação entre a ocupação do alvo e a capacidade de iniciar uma resposta a nível molecular, celular, tecido ou sistema.

[144] O termo inibidor refere-se a um inibidor enzimático que é um tipo de ligante ou medicamento que bloqueia ou amortece respostas biológicas mediadas por ERK1/2.Os inibidores medeiam seus efeitos ligando-se ao sítio ativo ou a sítios alostéricos em enzimas, ou podem interagir em locais de ligação únicos que normalmente não estão envolvidos na regulação biológica da atividade da enzima. A inibição pode surgir direta ou indiretamente e pode ser mediada por qualquer mecanismo e em qualquer nível fisiológico. Como resultado, a inibição por ligantes ou drogas pode, em circunstâncias diferentes, se manifestar de maneiras funcionalmente diferentes. A atividade inibidora pode ser reversível ou irreversível dependendo da longevidade do complexo inibidor-enzima, que, por sua vez,

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28/109 depende da natureza da ligação inibidor-enzima.

[145] O termo tratamento tal como aqui utilizado no contexto do tratamento de uma condição, isto é, estado, distúrbio ou doença, pertence geralmente ao tratamento e à terapia, seja para um humano ou um animal (por exemplo, em aplicações veterinárias), em que algum efeito terapêutico desejado é alcançado por exemplo, a inibição do progresso da condição e inclui uma redução na taxa de progresso, uma parada na taxa de progresso, melhoria da condição, diminuição ou alívio de pelo menos um sintoma associado ou causado pela condição a ser tratada, e cura da condição. Por exemplo, o tratamento pode ser a diminuição de um ou vários sintomas de um distúrbio ou a completa erradicação de um distúrbio.

[146] O termo “profilaxia” (ou seja, o uso de um composto como medida profilática) conforme usado neste documento no contexto de tratar uma condição, ou seja, estado, distúrbio ou doença, refere-se geralmente à profilaxia ou prevenção, seja para um humano ou um animal (por exemplo, aplicações veterinárias), em que algum efeito preventivo desejado é alcançado, por exemplo, na prevenção contra a ocorrência de uma doença ou na proteção contra uma doença. A profilaxia inclui o bloqueio completo e total de todos os sintomas de um distúrbio por um período de tempo indefinido, a simples desaceleração do início de um ou vários sintomas da doença, ou tornar a doença menos provável e não inclui melhora da condição, diminuição ou alívio de pelo menos um sintoma associado ou causado pela condição tratada e cura da condição.

[147] As referências à profilaxia ou ao tratamento de um estado ou estado de doença, como o câncer, incluem dentro do escopo de alívio ou redução da incidência, por exemplo, de câncer.

[148] Tal como aqui utilizado, o termo mediado, tal como utilizado, por exemplo, em conjunto com ERK1/2 como aqui descrito (e aplicado, por exemplo, a vários processos fisiológicos, doenças, estados, condições, terapias, tratamentos ou intervenções) destina-se a operar de forma tão limitada que os vários processos, doenças, estados, condições, tratamentos e intervenções a que se aplica o termo são aqueles em que a proteína desempenha um papel biológico. Nos casos em que o termo é aplicado a uma doença, estado ou condição, o papel biológico desempenhado pela proteína pode ser direto ou indireto e pode ser necessário e/ou suficiente para a manifestação dos sintomas da doença, estado ou condição (ou

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29/109 sua etiologia ou progressão).Assim, a função proteica (e, em particular, níveis aberrantes de função, por exemplo, sobre- ou subexpressão) não necessariamente é a causa proximal da doença, estado ou condição: em vez disso, é contemplado que as doenças, estados ou condições mediadas incluem aqueles que possuem etiologias multifatoriais e progressões complexas em que a proteína em questão é parcialmente envolvida. Nos casos em que o termo é aplicado ao tratamento, profilaxia ou intervenção, o papel desempenhado pela proteína pode ser direto ou indireto e pode ser necessário e/ou suficiente para a operação do tratamento, profilaxia ou resultado da intervenção. Assim, um estado de doença ou condição mediada por uma proteína inclui o desenvolvimento de resistência a qualquer droga ou tratamento específico para o câncer.

[149] As combinações da invenção podem produzir um efeito terapeuticamente eficaz relativamente ao efeito terapêutico dos compostos/agentes individuais quando administrados separadamente.

[150] O termo eficaz inclui efeitos vantajosos tais como aditividade, sinergismo, efeitos colaterais reduzidos, toxicidade reduzida, aumento do tempo até à progressão da doença, aumento do tempo de sobrevivência, sensibilização ou ressensibilização de um agente para outro, ou melhor taxa de resposta. Vantajosamente, um efeito eficaz pode permitir que doses mais baixas de cada um ou de qualquer dos componentes sejam administradas a um paciente, diminuindo assim a toxicidade da quimioterapia, ao mesmo tempo produzindo e/ou mantendo o mesmo efeito terapêutico. Um efeito sinérgico no contexto atual refere-se a um efeito terapêutico produzido pela combinação que é maior que a soma dos efeitos terapêuticos dos agentes da combinação quando apresentados individualmente. Um efeito aditivo no contexto atual refere-se a um efeito terapêutico produzido pela combinação que é maior que o efeito terapêutico de qualquer dos agentes da combinação quando apresentado individualmente. O termo taxa de resposta, tal como aqui utilizado, refere-se, no caso de um tumor sólido, ao grau de redução no tamanho do tumor num determinado ponto de tempo, por exemplo, 12 semanas. Assim, por exemplo, uma taxa de resposta de 50% significa uma redução no tamanho do tumor de 50%. As referências aqui a uma resposta clínica referemse a taxas de resposta de 50% ou mais. Uma resposta parcial é aqui definida como sendo uma taxa de resposta inferior a 50%, desde que seja superior a 0%.

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30/109 [151] Tal como aqui utilizado, o termo combinação, tal como aplicado a dois ou mais compostos e/ou agentes, destina-se a definir o material no qual os dois ou mais agentes estão associados. Os termos combinado e combinar neste contexto devem ser interpretadas em conformidade.

[152] A associação de dois ou mais compostos/agentes em uma combinação pode ser física ou não-física. Exemplos de compostos/agentes combinados fisicamente associados incluem:

• composições (por exemplo, formulações unitárias) que compreendem os dois ou mais compostos/agentes em mistura (por exemplo dentro da mesma dose de unidade);

• composições compreendendo material em que os dois ou mais compostos/agentes são quimicamente/fisicoquimicamente ligados (por exemplo, por reticulação, aglomeração molecular ou ligação a uma fração de veículo comum);

• composições compreendendo material em que os dois ou mais compostos/agentes são quimicamente/fisicoquimicamente co-embalados (por exemplo, dispostos em ou dentro de vesículas lipídicas, partículas (por exemplo, micro ou nanopartículas) ou gotículas de emulsão);

• kits farmacêuticos, pacotes farmacêuticos ou pacotes para pacientes em que os dois ou mais compostos/agentes estão empacotados conjuntamente ou apresentados conjuntamente (por exemplo, como parte de uma matriz de doses de unidade);

[153] Exemplos de compostos/agentes combinados não fisicamente associados incluem:

• material (por exemplo, uma formulação não-unitária) compreendendo pelo menos um dos dois ou mais compostos/agentes juntamente com instruções para a associação extemporânea da (pelo menos) unidade de composto formar uma associação física dos dois ou mais compostos/agentes;

• material (por exemplo, uma formulação não-unitária), compreendendo pelo menos um dos dois ou mais compostos/agentes juntamente com instruções para a terapia de combinação com os dois ou mais compostos/agentes;

• material compreendendo pelo menos um dos dois ou mais compostos/agentes juntamente com instruções para a administração a uma

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31/109 população de pacientes na qual o(s) outro(s) dos dois ou mais compostos/agentes foram (ou estão a ser) administrados;

• material compreendendo pelo menos um dos dois ou mais compostos/agentes em uma quantidade ou em uma forma que é especificamente adaptada para uso em combinação com os dois ou mais compostos/agentes;

[154] Como usado neste documento, a termo terapia de combinação destina-se a definir terapias que incluem o uso de uma combinação de dois ou mais compostos/agentes (conforme definido acima). Assim, as referências a terapia de combinação, combinações e o uso de compostos/agentes em combinação nesta aplicação podem referir-se aos compostos/agentes que são administrados como parte do mesmo regime de tratamento global. Como tal, a posologia de cada um dos dois ou mais compostos/agentes pode ser diferente: cada um pode ser administrado simultaneamente ou em momentos diferentes. Deverá, portanto, ser estimado que os compostos/agentes da combinação podem ser administrados em sequência (por exemplo, antes ou depois) ou simultaneamente, ou tanto na mesma formulação farmacêutica (ou seja, junto) quanto em diferentes formulações farmacêuticas (ou seja, separadamente). Simultaneamente, na mesma formulação está uma formulação unitária, enquanto simultaneamente em diferentes formulações farmacêuticas não é unitária. As posologias de cada um dos dois ou mais compostos/agentes em uma terapia de combinação podem ser diferentes também no que se refere à via de administração.

[155] Como usado aqui, o termo kit farmacêutico define uma matriz de uma ou mais doses de unidade de uma composição farmacêutica juntamente com meios de dosagem (por exemplo, dispositivo de medição) e/ou meios de aplicação (por exemplo, inalador ou seringa), opcionalmente, todos contidos em embalagem exterior comum. Em kits farmacêuticos que compreendem uma combinação de dois ou mais compostos/agentes, os compostos/agentes individuais podem ter formulações unitárias ou não unitárias. A(s) dose(s) de unidade pode(m) estar contida(s) em um pacote alveolar. O kit farmacêutico pode opcionalmente ainda incluir instruções de uso.

[156] Conforme usado neste documento, o termo pacote farmacêutico define uma matriz de uma ou mais doses de unidade de uma composição farmacêutica, opcionalmente contida dentro de embalagem exterior comum. Em

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32/109 pacotes farmacêuticos que compreendem uma combinação de dois ou mais compostos/agentes, os compostos/agentes individuais podem ter formulações unitárias ou não unitárias. A(s) dose(s) de unidade pode(m) estar contida(s) em um pacote alveolar. O pacote farmacêutico pode opcionalmente incluir ainda instruções de uso.

Sais, Solvatos, Tautômeros e Isótooos [157] Uma referência ao composto da fórmula (1) inclui formas iônicas, sais, solvatos, tautômeros e variantes isotópicas dos mesmos, a menos que o contexto indique o contrário.

Sais [158] O composto da fórmula (1) pode existir na forma de sais e, em particular, sais de adição de ácido. Todos esses sais estão dentro do escopo da presente invenção, e as referências ao composto da fórmula (1) incluem as formas de sal do composto, a menos que o contexto indique o contrário.

[159] Os sais do composto (1) podem ser sintetizados a partir do composto (1) por métodos químicos convencionais tais como os métodos descritos em Pharmaceutical Salts.Properties, Selection and Use, P.Heinrich Stahl (Editor), Camille G.Wermuth (Editor), ISBN:3-90639-026-8, Hardcover, 388 páginas, agosto de 2002.Geralmente, tais sais podem ser preparados reagindo a forma de base livre do composto com o ácido apropriado em água ou em um solvente orgânico, ou em uma mistura dos dois; geralmente, meios não aquosos tais como o éter, acetato de etil, etanol, isopropanol, ou acetonitrila são usados.

[160] Sais de adição de ácido (mono- ou di-sais) podem ser formados com uma grande variedade de ácidos, tanto inorgânicos como orgânicos. Exemplos de sais de adição de ácido incluem mono- ou di-sais formados com um ácido selecionado do grupo que consiste dos ácidos acético, 2,2-dicloroacético, adípico, algínico, ascórbico (por exemplo, L-ascórbico), L-aspártico, benzenossulfônico, benzoico, (+) 4-acetamidobenzoico, butanoico canfórico, canforsulfônico, (+)-(1 S)cânfora-10-sulfônico, cáprico, caproico, caprílico, cinâmico, cítrico, ciclâmico, dodecilsulfúrico, etano-1,2-disulfônico, etanesulfônico, 2-hidroxietanosulfônico, fórmico, fumárico, galactárico, gentísico, glucoheptônico, D-glucônico, glucurônico (por exemplo, D-glucurônico), glutâmico (por exemplo, L-glutâmico), a-oxoglutárico, glicólico, hipúricos, ácidos hidroalogênicos (por exemplo, hidrobromídrico,

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33/109 hidroclorídrico, hidroiodídrico), isetiônico, láctico (por exemplo, (+)-L-láctico, (±)-DLláctico), lactobiônico, maleico, málico,(-)-L-málico, malônico, (±)-DL-mandélico, metanossulfônico, naftaleno-2-sulfônico, naftaleno-1,5-disulfonic, 1-hidroxi-2naftoico, nicotínico, nítrico, oleico, orótico, oxálico, palmítico, pamoico, fosfórico, propiônico, pirúvico, L-piroglutâmico, salicílico, 4-amino-salicílico, sebácico, esteárico, succínico, ácido sulfúrico, tânico, (+)-L-tartárico, tiociânico, ptoluenossulfônico, undecilênico e valérico, bem como aminoácidos acilados e resinas de troca de cátions.

[161] Um grupo particular de sais consiste de sais formados a partir de ácido acético, clorídrico, iodídrico, fosfórico, nítrico, sulfúrico, cítrico, láctico, succínico, maleico, málico, isetiônico, fumárico, benzenossulfônico, toluenossulfônico, metanossulfônico (mesilato), etanossulfônico, naftalenossulfônico, valérico, ácido acético, propanoico, butanoico, malônico, glucorônico e ácidos lactobiônicos. Um determinado sal é o sal de cloridrato.

[162] As formas de sal dos compostos da invenção são normalmente sais farmaceuticamente aceitáveis, e exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis são discutidos em Berge et al., 1977, Pharmaceutically Acceptable Salts, J. Pharm.Sci., Vol. 66, pp. 1-19.No entanto, os sais que não são farmaceuticamente aceitáveis podem também ser preparados como formas intermédias que podem então ser convertidos em sais farmaceuticamente aceitáveis. Tais formas de sais não farmaceuticamente aceitáveis, que podem ser úteis, por exemplo, na purificação ou separação do composto da invenção, também formam parte da invenção.

Isômeros geométricos e tautômeros [163] Os compostos da fórmula (1) podem existir em várias formas tautoméricas geométricas diferentes e as referências aos compostos da fórmula (1) incluem todas essas formas, a menos que o contexto indique o contrário. Para evitar dúvidas, quando o composto puder existir em uma das formas tautoméricas e apenas um for especificamente descrito ou mostrado, todos os outros são, no entanto, abrangidos pela fórmula (1).

[164] A convenção de usar linhas hash ou encravadas para indicar estereoquímica tem sido usada para designar formas estereoquímicas particulares, por exemplo, conforme ilustrado pelas duas moléculas representadas abaixo.

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^Br (S)-2-(6-bromo-1-oxoisoindolin-2-il)-3-hidroxipropanoato de metila

(R)-2-(6-bromo-1 -oxoisoindolin-2-il)propanoato de terc-butila [165] Os isômeros ópticos podem ser caracterizados e identificados por sua atividade ótica (ou seja, como isômeros + e ou isômeros d e /) ou podem ser caracterizados em termos de sua estereoquímica absoluta usando a nomenclatura de R e S desenvolvida por Cahn, Ingold e Prelog, ver Advanced Organic Chemistry por Jerry March, 4^a Edição, John Wiley & Sons, Nova York, 1992, pp. 109-114, e ver também Cahn, Ingold & Prelog, Angew.Chem.lnt. Ed. Engl., 1966, 5, 385-415.

[166] Os isômeros óticos podem ser separados por um número de técnicas incluindo cromatografia quiral (cromatografia sobre um suporte quiral) e essas técnicas são bem conhecidas pela pessoa versada na técnica.

[167] Como uma alternativa à cromatografia quiral, os isômeros óticos podem ser separados, formando sais diastereoisoméricos com ácidos quirais tais como (+)-ácido tartárico, (-)-ácido piroglutâmico, (-)-di-toluoil-L-ácido tartárico, (+) ácido mandélico, (-)-ácido málico e (-)-canforassulfônico, separando os diastereoisômeros por cristalização preferencial e dissociando então os sais para chegar ao enantiõmero individual da base livre. Do mesmo modo, os isômeros óticos de compostos ácidos podem ser separados pela formação de sais diastereoisoméricos com aminas quirais, como Brucina, Cinconidina, Quinina etc.

[168] Adicionalmente, a separação enantiomérica pode ser alcançada ligando-se covalentemente um auxiliar quiral enantiomericamente puro no composto e depois efetuando-se a separação do diastereoisômero utilizando

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35/109 métodos convencionais, como a cromatografia. A isso se segue a divagem da ligação covalente supramencionada para gerar o produto enantiomericamente puro apropriado. Por exemplo, os isômeros óticos dos compostos quirais contendo um grupo hidroxila livre podem ser separados, formando ésteres de ácido de Mosher e depois separando-se os diastereoisômeros resultantes por cromatografia, seguido de divagem do éster para regenerar o grupo hidroxila livre.

[169] Quando uma configuração estereoquímica específica é mostrada em compostos no presente pedido, isso pode significar que pelo menos 55% (por exemplo, pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% ou 95%) do composto está presente nessa forma estereoquímica, distinta de outras formas isoméricas do composto. Em uma modalidade geral, 99% ou mais (por exemplo, substancialmente todos) da quantidade total do composto da fórmula (1) está presente na configuração estereoquímica representada.

Variações isotópicas [170] As referências neste documento ao composto (1), incluem todas as variações marcadas isotopicamente farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, em que um ou mais átomos são substituídos por átomos com o mesmo número atômico, mas uma massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número de massa geralmente encontrado na natureza.

[171] Exemplos de isótopos adequados para inclusão no composto da invenção compreendem isótopos de hidrogênio, como ²H (D) e ³H (T), carbono, como ¹¹C, ¹³C e ¹⁴C, cloro, como ³⁶CI, flúor, como ¹⁸F, nitrogênio, como ¹³N e ¹⁵N, e oxigênio, como ¹⁵0,¹⁷O e ¹⁸O.

[172] Determinados compostos marcados isotopicamente da fórmula (1), por exemplo, aqueles que incorporam um isótopo radioativo, são úteis em estudos de distribuição de fármacos e/ou substrato de tecido. O composto da fórmula (1) pode também ter propriedades de diagnóstico valiosas na medida em que pode ser utilizado para detectar ou identificar a formação de um complexo entre um composto marcado e outras moléculas, peptídeos, proteínas, enzimas ou receptores. Os métodos de detecção ou identificação podem usar compostos marcados com agentes de marcação, tais como radioisótopos, enzimas, substâncias fluorescentes, substâncias luminosas (por exemplo, luminol, derivados de luminol, luciferina, aequorina e luciferase), etc. O trítio de isótopos radioativos,

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36/109 isto é: ³H e carbono-14, isto é, ¹⁴C, é particularmente útil para essa finalidade, tendo em vista a sua facilidade de incorporação e seus meios da detecção.

[173] A substituição por isótopos mais pesados, tais como deutério, isto é, ²H(D), pode gerar determinadas vantagens terapêuticas resultando de maior estabilidade metabólica, por exemplo, maior meia vida in vivo ou regimes de dosagem reduzidos e, consequentemente, podem ser preferenciais em algumas circunstâncias. Particularmente, toda referência a hidrogênio no pedido deve ser considerada como abrangendo ¹H e ²H, independentemente de o hidrogênio estar definido explicitamente ou de o hidrogênio estar presente implicitamente para satisfazer a valência relevante do átomo (em particular do carbono).

[174] A substituição por isótopos emissores de positron, tais como ¹¹C, ¹⁸F, ¹⁵O e ¹³N, pode ser útil em estudos de Topografia de Emissão de Positron (PET) para examinar a ocupação do alvo.

[175] Os compostos marcados isotopicamente da fórmula (1) podem geralmente ser preparados por técnicas convencionais conhecidas pelos versados na técnica ou por processos análogos aos descritos nos Exemplos e Preparações que acompanham os reagentes isotopicamente apropriados em vez do reagente não marcado utilizado anteriormente.

Complexos [176] A fórmula (1) também incluem no escopo dos seus complexos (por exemplo, complexos de inclusão ou clatratos com compostos como ciclodextrinas ou complexos com metais) dos compostos. Os complexos de inclusão, os clatratos e os complexos metálicos podem ser formados por meio de métodos bem conhecidos pelos versados na técnica.

Propriedades biológicas [177] Está previsto que o composto (1) seja útil em medicina ou terapia.

[178] O composto da invenção é um inibidor de ERK1/2 e será útil na prevenção ou tratamento de estados ou condições de doença descritos neste documento, por exemplo, as doenças e condições discutidas abaixo e as doenças e condições descritas na seção de “Fundamentos da Invenção” acima em que o ERK1/2 desempenha um papel. Além disso, o composto da invenção será útil na prevenção ou no tratamento de doenças ou condições médicas mediadas por ERK1/2, por exemplo, doenças ou condições médicas tais como cânceres em que

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37/109 a atividade de ERK1/2 é necessária ou regulada positivamente como resultado da ativação de mutações nos componentes à montante (como RAS, K-RAS, NRAS e RAF) da via MAPK.

[179] As referências à prevenção ou profilaxia ou ao tratamento de um estado ou condição da doença, como o câncer, incluem dentro de seu escopo o alívio ou a redução da incidência da doença ou condição. Assim, por exemplo, está previsto que o composto da invenção seja útil para aliviar ou reduzir a incidência de câncer.

[180] As referências ao composto da fórmula (1) abaixo incluem as formas cristalinas do composto da fórmula (1) descrito neste documento e o composto da fórmula (1) preparado de acordo com os métodos descritos neste documento.

[181] Consequentemente, em outras modalidades da invenção, são fornecidos:

• O composto da fórmula (1) para uso em medicina.

• O composto da fórmula (1) para uso na prevenção ou tratamento de uma doença ou condição mediada por ERK1/2.

• O uso do composto da fórmula (1) para a fabricação de um medicamento para prevenção ou tratamento de uma doença ou condição mediada por ERK1/2.

• Um método de prevenção ou tratamento de uma doença ou condição mediada por ERK1/2 em um sujeito (por exemplo, um sujeito mamífero, tal como um humano, que dele necessite), cujo método compreende administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da fórmula (1).

• O composto da fórmula (1) para uso no alívio ou redução da incidência de uma doença ou condição mediada por ERK1/2.

• O uso do composto da fórmula (1) para a fabricação de um medicamento para alívio ou redução da incidência de uma doença ou condição mediada por ERK1/2.

• Um método de alívio ou redução da incidência de uma doença ou condição mediada por ERK1/2 em um sujeito (por exemplo, um sujeito mamífero, tal como um humano, que dele necessite), cujo método compreende administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da fórmula (1).

[182] Mais particularmente, o composto (1) é um inibidor de ERK1/2.Por exemplo, o composto da invenção tem potência inibidora contra ERK1 ou ERK2, e

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38/109 em particular contra ERK1/2.

[183] O composto inibidor de ERK da fórmula (1) é capaz de se ligar a ERK1/2 e apresentar potência para ERK1/2.Em uma modalidade, o composto inibidor da fórmula (1) apresenta seletividade para ERK1/2 em relação a outros membros da família quinase e podem ser capazes de se ligar e/ou apresentar a inibição de ERK1 e/ou ERK2, de preferência para se ligar e/ou apresentar a inibição de outros membros da família quinase.

[184] A função de ERK1/2 no controle da sinalização celular também foi implicada em muitas doenças, incluindo distúrbios associados à acumulação celular (por exemplo, câncer, doenças autoimunes, inflamação e restenose), distúrbios em que a apoptose excessiva resulta em perda de células (por exemplo, AVC, insuficiência cardíaca, neurodegeneração, como mal de Alzheimer, mal de Parkinson, doença de Huntington, esclerose lateral amiotrófica, AIDS, isquemia (acidente vascular encefálico, infarto do miocárdio) e osteoporose ou no tratamento de doenças autoimunes, como a esclerose múltipla (MS).

[185] A doença ou condição mediada por ERK1/2 referida em qualquer uma das modalidades anteriores pode ser qualquer uma ou mais das doenças e distúrbios acima.

[186] Por conseguinte, também está previsto que os compostos da invenção, conforme definido neste documento, podem ser úteis no tratamento de outras condições médicas, tais como inflamação, hepatite, colite ulcerativa, gastrite, autoimunidade, inflamação, restenose, acidente vascular cerebral, insuficiência cardíaca, doenças neurodegenerativas, como mal de Alzheimer, mal de Parkinson, doença de Huntington, distrofia miotônica e esclerose lateral amiotrófica, AIDS, isquemia, como lesão cerebral traumática, lesão medular, isquemia cerebral, lesão de isquemia cerebral/reperfusão (l/R), isquemia de lesão nervosa do CNS aguda e crônica, acidente vascular cerebral ou infarto do miocárdio, doenças degenerativas do sistema musculoesquelético, como osteoporose, doenças autoimunes, como esclerose múltipla (MS) e diabetes tipo I e doenças oculares, como a degeneração da retina resultante da perda do controle da morte celular programada.

[187] Como consequência da sua afinidade com ERK1/2, o composto da invenção será útil para proporcionar um meio de controlar a sinalização celular. Por conseguinte, prevê-se que o composto possa revelar-se útil no tratamento ou

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39/109 prevenção de distúrbios proliferativos, como cânceres.

[188] Nesse sentido, nas modalidades adicionais, a invenção fornece:

• O composto da fórmula (1) para uso na prevenção ou tratamento de distúrbios proliferativos tais como cânceres.

• O uso do composto da fórmula (1) para a fabricação de um medicamento para a prevenção ou tratamento de distúrbios proliferativos tais como cânceres.

• Um método para prevenção ou tratamento de distúrbios proliferativos, tais como cânceres em um sujeito (por exemplo, um sujeito mamífero, tal como um humano, que dele necessite), cujo método compreende administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da fórmula (1).

• O composto da fórmula (1) para uso no alívio ou redução da incidência de distúrbios proliferativos tais como cânceres.

• O uso do composto da fórmula (1) para a fabricação de um medicamento para o alívio ou redução da incidência de distúrbios proliferativos tais como cânceres.

• Um método para o alívio ou redução da incidência de distúrbios proliferativos, tais como cânceres em um sujeito (por exemplo, um sujeito mamífero, tal como um humano, que dele necessite), cujo método compreende administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da fórmula (1).

[189] Exemplos de cânceres (e suas contrapartes benignas) que podem ser tratados (ou inibidos) incluem, mas não estão limitados, a tumores de origem epitelial (adenomas e carcinomas de vários tipos, incluindo adenocarcinomas, carcinomas escamosos, carcinomas de células transicionais e outros carcinomas), como carcinomas da bexiga e do trato urinário, de mama, do trato gastrointestinal (incluindo o esôfago, estômago (gástrico), intestino delgado, cólon, reto e ânus), fígado (carcinoma hepatocelular), vesícula biliar e sistema biliar, pâncreas exócrino, rim, pulmão (por exemplo, adenocarcinomas, carcinomas de pulmão das células pequenas, carcinomas de pulmão de células não pequenas, carcinomas bronquioloalveolares e mesoteliomas), cabeça e pescoço (por exemplo, câncer de língua, cavidade bucal, laringe, faringe, nasofaringe, amígdalas, glândulas salivares, cavidade nasal e seios paranasais), ovário, trompas, peritônio, vagina, vulva, pênis, colo do útero, miométrio, endométrio, tireoide (por exemplo, carcinoma folicular da tireoide), suprarrenal, próstata, pele e anexos (por exemplo, melanoma,

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40/109 carcinoma basocelular, carcinoma espinocelular, queratoacantoma, nevos displásicos); Neoplasias hematológicas (leucemias, linfomas) e distúrbios hematológicos pré-malignos e distúrbios de malignidade limítrofe, incluindo malignidades hematológicas e condições relacionadas da linhagem linfoide (por exemplo, leucemia linfocítica aguda [ALL], leucemia linfocítica crônica [CLL], linfomas de células B difusas, como linfoma de células B grandes [DLBCL], linfoma folicular, linfoma de Burkitt, linfoma de células do manto, linfomas de células T e leucemia, linfomas de células matadoras naturais [NK], gamopatia monoclônica de significância incerta, mielomatose mieloma múltiplo, linfomas de Hodgkin, leucemia de células pilosas e transtornos linfoproliferativos pós-transplante) e malignidades hematológicas e relacionadas com as condições da linhagem mieloide (por exemplo, leucemia mieloide aguda [AML], leucemia mieloide crônica [CML], leucemia mielomonocítica crônica [CMML], síndrome hipereossinofílica, distúrbios mieloproliferativos, como policitemia vera, trombocitemia essencial e mielofibrose primária, síndrome mieloproliferativa, síndrome mielodisplásica e leucemia promielocítica); tumores de origem mesenquimal, por exemplo, sarcomas de partes moles, osso ou cartilagem, como osteossarcomas, fibrossarcomas, condrossarcomas, rabdomiossarcomas, leiomiossarcomas, lipossarcomas, angiossarcomas, sarcoma de Kaposi, sarcoma de Ewing, sarcomas sinoviais, sarcomas epitelioides, tumores do estroma gastrointestinais, histiocitomas benignos e malignos e dermatofibrossarcoma protuberante; tumores de células derivadas da crista neural, incluindo tumores melanociticos (melanoma maligno, por exemplo, ou melanoma da uveal), tumores dos nervos periféricos e cranianos, tumores embrionários do CNS, paranganglioma; tumores do sistema nervoso central ou periférico (por exemplo, astrocitomas, gliomas e glioblastomas, meningiomas, ependimomas, tumores pineais e schwannomas); tumores endócrinos (por exemplo, tumores pituitários, tumores adrenais, tumores de células insulares, tumores da paratireoide, tumores carcinoides e carcinoma medular da tiroide); tumores oculares e dos anexos (por exemplo, retinoblastoma); tumores das células germinativas e trofoblásticos (por exemplo, teratomas, seminomas, disgerminomas, moles hidatidiformes e coriocarcinomas); e tumores pediátricos e embrionários (por exemplo, meduloblastoma, neuroblastoma, tumor de Wilms e tumores neuroectodérmicos primitivos); ou síndromes, doenças congênitas ou

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41/109 outros, que deixam o paciente suscetível à malignidades (por exemplo, Xeroderma ou Pigmentosum).Outros exemplos de cânceres (e suas contrapartes benignas) que podem ser tratados (ou inibidos) incluem, mas não estão limitados a, tumores de testículos e cérebro (por exemplo, neuromas).

[190] Assim, nas composições farmacêuticas, os usos ou métodos desta invenção para o tratamento de uma doença ou condição que compreendem o crescimento celular anormal (ou seja, crescimento celular descontrolado e/ou rápido), a doença ou condição que compreende o crescimento celular anormal em uma modalidade é um câncer.

[191] E m uma modalidade, a malignidade hematológica é a leucemia. Em outra modalidade, a malignidade hematológica é um linfoma. Em uma modalidade, o composto da invenção é para uso na profilaxia ou no tratamento de leucemia, tal como leucemia aguda ou crônica, em particular leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica aguda (ALL), leucemia linfocítica crônica (CLL), ou leucemia mieloide crônica (CML).Em uma modalidade, o composto da invenção é para uso na profilaxia ou no tratamento de linfomas, tais como linfoma agudo ou crônico, em particular linfoma de Burkitt, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin ou linfoma difuso de células B grandes. Em uma modalidade, o composto da invenção é para uso na profilaxia ou no tratamento de leucemia mieloide aguda (AML) ou leucemia linfocítica aguda (ALL). Em uma modalidade, o câncer é AML. Em outra modalidade, o câncer é CLL.

[192] Muitas doenças são caracterizadas por angiogênese persistente e não regulada. As doenças proliferativas crônicas frequentemente são acompanhadas de angiogênese profunda, que pode contribuir para ou manter um estado inflamatório e/ou proliferativo ou que leva à destruição do tecido através da proliferação invasiva dos vasos sanguíneos. Verificou-se que o crescimento tumoral e a metástase são dependentes da angiogênese. O composto da invenção pode, portanto, ser útil para prevenir e interromper o início da angiogênese tumoral. Em particular, o composto da invenção pode ser útil no tratamento de metástases e cânceres metastáticos.

[193] A metástase ou doença metastática é a disseminação de uma doença de um órgão ou parte dele para outro órgão ou parte não adjacente. Os cânceres que podem ser tratados pelo composto da invenção incluem tumores primários (ou

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42/109 seja, células cancerígenas no local de origem), invasão local (células cancerígenas que penetram e se infiltram em tecidos normais circundantes na área local) e tumores metastáticos (ou secundários), ou seja: tumores que se formaram a partir de células malignas que circularam através da corrente sanguínea (disseminação hematogênica) ou da via linfática ou através de cavidades corporais (transcoelômicas) para outros locais e tecidos do corpo.

[194] Nas modalidades anteriores, os cânceres específicos incluem carcinoma hepatocelular, melanoma, esofágico, renal, do cólon, colorretal, do pulmão, por exemplo, mesotelioma ou adenocarcinoma pulmonar, de mama, da bexiga, gastrointestinal, câncer de ovário e de próstata.

[195] Outro subconjunto de cânceres consiste em cânceres renais, melanoma, do cólon, do pulmão, de mama, de ovário e de próstata.

[196] Outro subconjunto de câncer consiste em câncer pancreático.

[197] Outro subconjunto de cânceres consiste em leucemias, como leucemias aguda e crônica, leucemia mieloide aguda (AML) e leucemia linfocítica crônica (CLL).

[198] Um outro subconjunto de cânceres consiste em mesotelioma, incluindo mesotelioma peritoneal maligna ou mesotelioma pleural maligna.

[199] Alguns tipos de câncer são resistentes ao tratamento com drogas específicas. Isso pode ser devido ao tipo de tumor (as neoplasias malignas epiteliais mais comuns são inerentemente quimiorresistentes) ou a resistência pode surgir espontaneamente à medida que a doença progride ou como resultado do tratamento. A esse respeito, as referências ao mesotelioma incluem mesotelioma com resistência aos venenos da topoisomerasa, agentes alquilantes, antitublinas, antifolatos, compostos de platina e terapia de radiação, em particular mesotelioma resistente à cisplatina. Da mesma forma, as referências ao mieloma múltiplo incluem mieloma múltiplo com sensibilidade ao bortezomib ou mieloma múltiplo refratário e as referências à leucemia mieloide crônica incluem leucemia mieloide crônica sensível ao imitanib e leucemia mielogênica crônica refratária. A esse respeito, as referências ao câncer de próstata incluem câncer de próstata com resistência à terapia antiandrogênica, em particular abiraterona ou enzalutamida, ou câncer de próstata resistente à castração. As referências ao melanoma incluem melanomas que são resistentes ao tratamento com BRAF e/ou inibidores de MEK.

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43/109 [200] Os cânceres podem ser cânceres que são sensíveis à inibição de ERK1 ou ERK2 ou mais particularmente ERK1/2.

[201] É ainda previsto que o composto da invenção seja particularmente útil no tratamento ou na prevenção de cânceres de um tipo associado à ou caracterizado pela presença de sinalização de Ras, BRAF e/ou MEK.

[202] Níveis elevados de Ras, BRAF ou MEK são encontrados em muitos tipos de câncer e estão associados a um mau prognóstico. Além disso, os cânceres com ativação das mutações de Ras, BRAF ou MEK também podem ser sensíveis a um inibidor de ERK1/2.Os níveis elevados de sinalização de Ras, BRAF ou MEK e mutações em Ras, BRAF ou MEK podem ser identificados pelas técnicas descritas neste documento. Se um câncer específico for aquele que é sensível à inibição de ERK1/2 pode ser determinado por um método conforme estabelecido na seção intitulada Métodos de Diagnóstico.

[203] Um outro subconjunto de cânceres consiste em melanoma de NRas e AML de NRas.

[204] Outro subconjunto de cânceres consiste em câncer de pulmão de KRas, câncer pancreático de KRas e câncer colorretal de KRas (CRC).

[205] Outro subconjunto de câncer consiste em câncer colorretal de BRAF (CRC), câncer de pulmão de BRAF e melanoma de BRAF.

[206] Nas modalidades adicionais, a invenção fornece:

• O composto de fórmula (1) para uso na prevenção ou tratamento de uma doença ou condição com Ras mutante, BRAF mutante ou MEK mutante.

• O uso do composto da fórmula (1) para a fabricação de um medicamento para prevenção ou tratamento de uma doença ou condição com Ras mutante, BRAF mutante ou MEK mutante.

• Um método de prevenção ou tratamento de uma doença ou condição com Ras mutante, BRAF mutante ou MEK mutante em um sujeito (por exemplo, um sujeito mamífero, tal como um humano, que dele necessite), cujo método compreende administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da fórmula (1).

• O composto da fórmula (1) para uso no alívio ou na redução da incidência de uma doença ou condição com Ras mutante, BRAF mutante ou MEK mutante.

• O uso do composto da fórmula (1) para a fabricação de um medicamento

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44/109 para alívio ou redução da incidência de uma doença ou condição com Ras mutante, BRAF mutante ou MEK mutante.

• Um método de alívio ou redução da incidência de uma doença ou condição com Ras mutante, BRAF mutante ou MEK mutante em um sujeito (por exemplo, um sujeito mamífero, tal como um humano, que dele necessite), cujo método compreende administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da fórmula (1).

• O composto da fórmula (1) para uso no tratamento de (ou redução na incidência de) um câncer selecionado a partir de melanoma de NRas e AML de NRas.

• O composto da fórmula (1) para uso no tratamento de (ou redução na incidência de) um câncer selecionado a partir de câncer de KRas, câncer pancreático de KRas e câncer colorretal de KRas (CRC).

• O composto da fórmula (1) para uso no tratamento de (ou redução na incidência de) um câncer selecionado a partir de câncer colorretal de BRAF (CRC), câncer de pulmão de BRAF e melanoma de BRAF.

• O composto da fórmula (1) para uso no tratamento de (ou redução na incidência de) um câncer que é melanoma de BRAF.

• O uso do composto da fórmula (1) para a fabricação de um medicamento para a prevenção ou tratamento de um câncer conforme definido neste documento.

• Um método para tratamento ou redução da incidência de um câncer em um sujeito (por exemplo, um sujeito mamífero, tal como um humano), cujo método compreende administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da fórmula (1).

• O composto da fórmula (1) para uso no tratamento de uma doença ou condição, conforme descrito neste documento, em particular um câncer.

• O uso do composto da fórmula (1) para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou condição, conforme descrito neste documento, em particular um câncer.

• Um método de prevenção ou tratamento de uma doença ou condição, conforme descrito neste documento, em particular um câncer, em um sujeito (por exemplo, um sujeito mamífero, tal como um humano, que dele necessite), cujo método compreende administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente

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45/109 eficaz do composto da fórmula (1).

• O composto da fórmula (1) para uso no alívio ou redução da incidência de uma doença ou condição, conforme descrito neste documento, em particular um câncer.

• O uso do composto da fórmula (1) para a fabricação de um medicamento para o alívio ou redução da incidência de uma doença ou condição, conforme descrito neste documento, em particular um câncer.

• Um método de alívio ou redução da incidência de uma doença ou condição, conforme descrito neste documento, em particular um câncer, em um sujeito (por exemplo, um sujeito mamífero, tal como um humano, que dele necessite), cujo método compreende administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da fórmula (1).

[207] O composto da fórmula (1) também pode ser útil no tratamento do crescimento tumoral, da patogênese, da resistência à quimioterapia e da radioterapia ao sensibilizar as células para a quimioterapia e como agente antimetastático.

[208] As intervenções terapêuticas contra o câncer de todos os tipos aumentam necessariamente os estresses impostos às células tumorais alvo. Na mitigação dos efeitos deletérios desses estresses, ERK1/2 estão diretamente implicados na resistência aos efeitos de drogas cancerígenas e aos regimes de tratamento. Assim, os inibidores de ERK1/2 representam uma classe de quimioterapêuticos com potencial para:(i) sensibilizar células malignas a drogas e/ou tratamentos anticancerígenos; (ii) aliviar ou reduzir a incidência de resistência a drogas e/ou tratamentos anticancerígenos; (iii) resistência à reversão a medicamentos e/ou tratamentos anticancerígenos; (iv) potencialização da atividade de drogas e/ou tratamentos anticancerígenos; (v) retardar ou prevenir o aparecimento da resistência a drogas e/ou tratamentos anticancerígenos.

[209] Como consequência da sua inibição de ERK1/2, o composto será útil para proporcionar um meio de controlar a sinalização celular. Por conseguinte, também está previsto que o composto da invenção possa ser útil no tratamento de outras condições médicas, como distúrbios inflamatórios, tais como hepatite, colite ulcerativa e gastrite; condições neurodegenerativas, como mal de Alzheimer, mal de Parkinson, doença de Huntington, distrofia miotônica e esclerose lateral

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46/109 amiotrófica; AIDS, isquemia, como restenose, lesão cerebral traumática, lesão da medula espinhal, isquemia cerebral, lesão de isquemia/reperfusão cerebral (l/R), isquemia de lesão nervosa aguda e crônica, acidente vascular cerebral ou infarto do miocárdio; doenças degenerativas do sistema musculoesquelético, como osteoporose; doenças autoimunes, como esclerose múltipla (MS) e diabetes tipo I e doenças oculares, como a degeneração da retina.

[210] A afinidade dos compostos da invenção como um inibidor de ERK1/2 pode ser medida usando os ensaios biológicos e biofísicos estabelecidos nos exemplos apresentados neste documento.

Métodos de Diagnóstico [211] Antes da administração de um composto da fórmula (1), um sujeito (por exemplo, um paciente) pode ser avaliado para determinar se uma doença ou condição de que o paciente está sofrendo ou pode sofrer é tal que seria suscetível ao tratamento com um composto que apresenta a inibição de ERK1/2.0 termo paciente inclui pacientes humanos e veterinários.

[212] Por exemplo, uma amostra biológica retirada de um paciente pode ser analisada para determinar se uma condição médica ou doença, como o câncer, de que o paciente está sofrendo ou pode sofrer é aquela caracterizada por uma anormalidade genética ou expressão anormal da proteína que leva a uma regulação positiva dos níveis de sinalização ERK1/2 ou a uma sensibilização de uma via para a função de ERK1/2 normal ou para a regulação positiva de uma via bioquímica à jusante da ativação de ERK1/2.

[213] Exemplos dessas anormalidades, que resultam na ativação ou na sensibilização da via de ERK1/2, incluem a ativação de mutações em uma isoforma de Ras, como em KRAS ou em BRAF, conforme discutido na seção Fundamentos da Invenção.

[214] As mutações de Ras foram detectadas em linhas celulares e tumores primários, incluindo, entre outros, melanoma, câncer colorretal, câncer de pulmão de células não pequenas e câncer de pâncreas, de próstata, de tireoide, do trato urinário e do trato respiratório superior (Cancer Res.2012; 72:2457-2467).

[215] O termo regulação positiva inclui a expressão elevada ou superexpressão, incluindo a amplificação de genes (ou seja, múltiplas cópias de genes), a aberração citogenética e o aumento da expressão por um efeito

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47/109 transcricional ou o aumento da sinalização através da ativação de ERK1/2.Assim, o paciente pode ser submetido a um teste de diagnóstico para detectar um marcador característico de regulação positiva de ERK1/2.0 termo diagnóstico inclui avaliação. Por marcador, incluímos marcadores genéticos, incluindo, por exemplo, a medição da composição do DNA para identificar a presença de mutações de Ras (por exemplo, KRAS) ou de BRAF.O termo marcador também inclui marcadores que são característicos da regulação de ERK1/2, incluindo níveis de proteína, estado de proteína e mRNA das proteínas supramencionadas. A amplificação de genes inclui mais de 7 cópias, bem como ganhos de entre 2 e 7 cópias.

[216] Os ensaios de diagnóstico para detectar mutações de KRAS e BRAF são descritos em de Castro etal.Br.J. Cancer. 10 de julho de 2012; 107 (2): 345-51. doi:10.1038/bjc.2012.259.Epub 19 de junho de 2012, “A comparison of three methods for detecting KRAS mutations in formalin-fixed colorectal cancer specimens.”; e Gonzalez et al., Br J Dermatol. 2013, Apr; 168(4):700-7. doi: 10.1111/bjd. 12248, “BRAF mutation testing algorithm for vemurafenib treatment in melanoma: recommendations from an expert panel” e as referências citadas nestes.

[217] Uma série de testes de diagnóstico para mutações de BRAF foi aprovada pela FDA e os detalhes dos testes podem ser encontrados no site da FDA. Exemplos desses testes de diagnóstico incluem o teste de mutação cobas 4800 BRAF V600, um ensaio complementar para o produto de vemurafenib da Roche e o teste ThxlD BRAF, um teste complementar para os produtos de Tafinlar (dabrafenib) e Mekinist (trametinib).

[218] Os testes de diagnóstico e as avaliações geralmente são realizados em uma amostra biológica (ou seja, no tecido corporal ou em fluidos corporais) selecionados a partir de amostras de biópsias de tumores, amostras de sangue (isolamento e enriquecimento de células tumorais), líquido cefalorraquidiano, plasma, soro, saliva, biópsia de fezes, escarro, análise cromossômica, líquido pleural, líquido peritoneal, esfregaços bucais, biópsia cutânea ou urina.

[219] Os métodos de identificação e análise de aberração citogenética, amplificação genética, mutação e regulação positiva de proteínas são conhecidos a uma pessoa versada na técnica. Os testes clínicos para a maioria das variantes genéticas podem incluir, mas sem limitação, métodos padrão, como a reação em

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48/109 cadeia da polimerase específica (PCR), reação em cadeia da polimerase de transcriptase reversa (RT-PCR), análise da sequência de DNA por Sanger convencional ou métodos de sequenciação de última geração, sequenciamento de didesoxi de Sanger, pirossequenciamento, amplificação de sonda dependente de ligação multiplex (MLPA) ou PCR de ARMS. Os testes clínicos para o número de cópias de genes e as variações de genes estruturais podem incluir, sem limitação, métodos padrão, tais como Sequenciamento de RNA (RNAseq), ensaios de RNA nCounter de proximidade de hibridação de nanostring ou hibridação in situ, tal como hibridação fluorescente in situ (FISH).Com as novas tecnologias de sequenciamento de última geração (NGS), como sequenciamento massivamente paralelo, é possível um sequenciamento total de exoma ou sequenciamento do genoma total.

[220] Na triagem por RT-PCR, o nível de mRNA no tumor é avaliado através da criação de uma cópia de cDNA do mRNA seguida de amplificação do cDNA por PCR. Os métodos de amplificação por PCR, a seleção de primers e as condições para amplificação são conhecidos a uma pessoa versada na técnica. As manipulações de ácido nucleico e PCR são realizadas por métodos padrão, conforme descrito, por exemplo, em Ausubel, F.M. et al., eds. (2004) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc., ou Innis, M.A. et al., eds. (1990) PCR Protocols: a guide to methods and applications, Academic Press, San Diego. Reações e manipulações envolvendo técnicas de ácido nucleico também são descritas em Sambrook et al., (2001), 3^â Ed, Molecular Cloning:A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Alternativamente pode ser usado um kit disponível comercialmente para RT-PCR (por exemplo Roche Molecular Biochemicals), ou metodologia, conforme estabelecido nas patentes dos Estados Unidos 4.666.828; 4.683.202; 4.801.531; 5.192.659, 5.272.057, 5.882.864 e 6.218.529 e incorporadas neste documento por referência. Um exemplo de uma técnica de hibridização in situ para avaliar a expressão do mRNA seria hibridação fluorescente in situ (FISH) (ver Angerer, (1987) Meth.EnzymoL, 152:649).

[221] E m geral, a hibridização in situ compreende as seguintes etapas principais:(1) fixação de tecido a ser analisado; (2) tratamento de pré-hibridização da amostra para aumentar a acessibilidade de ácido nucleico alvo e para reduzir ligação não específica; (3) hibridização da mistura de ácidos nucleicos com o ácido

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49/109 nucleico na estrutura biológica ou tecido; (4) lavagens pós-hibridização para remover fragmentos de ácidos nucleicos não ligados na hibridização e (5) detecção de fragmentos de ácidos nucleicos hibridizados. As sondas utilizadas em tais aplicações são geralmente marcadas, por exemplo, com radioisótopos ou repórteres fluorescentes. As sondas específicas são suficientemente longas, por exemplo, de aproximadamente 50, 100 ou 200 nucleotídeos a aproximadamente 1000 ou mais nucleotídeos, para permitir a hibridização específica com o(s) ácido(s) nucleico(s) alvo sob condições rigorosas. Os métodos padrão para a realização de FISH são descritos em Ausubel, F.M. et al., eds. (2004) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc e Fluorescence In Situ HybridizatiomTechnical Overview por John M.S.Bartlett em Molecular Diagnosis of Cancer, Methods and Protocols, 2nd ed.;ISBN:1-59259-760-2; Março de 2004, pps.077-088; Series:Methods in Molecular Medicine.

[222] Os métodos para o perfil de expressão gênica são descritos por (DePrimo et al. (2003), BMC Cancer, 3:3). Em resumo, o protocolo é o seguinte: o cDNA de cadeia dupla é sintetizado a partir do RNA completo usando-se um oligômero (dT)24 para a síntese de cDNA de primeira cadeia, por exemplo, de mRNA poliadenilado, seguido da síntese de cDNA de segunda cadeia com íniciadores de hexâmeros aleatórios. O cDNA de fita dupla é usado como um modelo para a transcrição in vitro de cRNA usando ribonucleotídeos biotinilados. O cRNA é fragmentado quimicamente de acordo com os protocolos descritos por Affymetrix (Santa Clara, CA, EUA) e depois hibridizado durante a noite em Matrizes de Genoma Humano ou com sondas oligonucleotídicas específicas de gene em Matrizes de Genoma Humano. Alternativamente, as matrizes de polimorfismos de nucleotídeo único (SNP), um tipo de micromatriz de DNA, podem ser usadas para detectar polimorfismos em uma população.

[223] Como alternativa, os produtos de proteína expressos dos mRNAs podem ser analisados por imuno-histoquímica ou imunofluorescência de amostras de tumores, imunoensaio de fase sólida com placas de microtitulação, Western blotting, eletroforese capilar, eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamidaSDS, ELISA, citometria de fluxo e outros métodos conhecidos na técnica para a detecção de proteínas específicas. Os métodos de detecção incluem o uso de anticorpos de sítio específico. Aqueles versados na técnica reconhecerão que todas

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50/109 essas técnicas bem conhecidas para a detecção da regulação positiva de ERK1/2, detecção de variantes de ERK1/2 ou mutantes ou para a detecção da amplificação de 11q22 podem ser aplicáveis no presente caso.

[224] Níveis anormais de proteínas, como de ERK1/2, podem ser medidos utilizando ensaios de proteínas padrão, por exemplo, os ensaios aqui descritos. Níveis elevados ou sobrexpressão também podem ser detectados em uma amostra de tecido, por exemplo, um tecido tumoral, medindo-se os níveis de proteína com um ensaio como o da Chemicon International. A proteína de interesse seria imunoprecipitada a partir do lisado da amostra e dos seus níveis medidos. Os métodos de ensaio também incluem o uso de marcadores.

[225] A superexpressão de ERK pode ser medida por biópsia tumoral. Os métodos para avaliar as alterações das cópias dos genes incluem técnicas comumente usadas em laboratórios citogenéticos, como MLPA (amplificação de sonda dependente de ligação multiplex), um método de PCR multiplex que detecta os números de cópias anormais ou outras técnicas de PCR que podem detectar a amplificação, o ganho e a eliminação de genes.

[226] Os ensaios ex-funcionais também podem ser utilizados quando for apropriado, por exemplo, na medição de células de leucemia circulantes em um paciente com câncer, a fim de avaliar a resposta ao desafio com um inibidor.

[227] Portanto, todas essas técnicas também podem ser usadas para identificar tumores particularmente adequados para tratamento com o composto da invenção.

[228] Nesse sentido, nas modalidades adicionais, a invenção fornece:

• O composto da fórmula (1) para uso no tratamento ou na profilaxia de (ou para uso no alívio ou redução da incidência de) um estado ou condição da doença em um paciente que foi selecionado e foi determinado como sofrendo, ou está em risco de sofrer, de uma doença ou condição que seria suscetível ao tratamento com um composto que apresenta a inibição de ERK1/2 (ou seja, um inibidor de ERK1/2).

• O uso do composto da fórmula (1) para a fabricação de um medicamento para o tratamento ou a profilaxia de (para uso no alívio ou redução da incidência de) um estado ou condição da doença em um paciente que tenha sido avaliado e tenha se determinado que sofre ou está em risco de sofrer de uma doença ou condição que seria suscetível ao tratamento com um composto que apresenta

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51/109 inibição de ERK1/2 (ou seja, um inibidor de ERK1/2).

• Um método para tratamento ou profilaxia de (para uso no alívio ou na redução da incidência de) um estado ou condição da doença em um paciente que tenha sido avaliado e tenha sido determinado que sofre ou está em risco de sofrer de uma doença ou condição que seria suscetível ao tratamento com um composto que apresenta inibição de ERK1/2 (ou seja, um inibidor de ERK1/2), cujo método compreende administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da fórmula (1).

[229] Outro aspecto da invenção inclui um composto da invenção para uso na profilaxia ou no tratamento de câncer em um paciente selecionado a partir de uma subpopulação com superexpressão ou uma mutação ativadora na via de sinalização de ERK1/2 (por exemplo, Ras, BRAF ou MEK). Nesse sentido, nas modalidades adicionais, a invenção fornece:

• O composto da fórmula (1) para uso no tratamento ou profilaxia (ou para uso no alívio ou na redução da incidência) de câncer em um paciente selecionado a partir de uma subpoblação que possui uma superexpressão ou uma mutação ativadora na via de sinalização de ERK1/2, por exemplo, de Ras (por exemplo, KRAS), BRAF ou MEK.

• O uso do composto da fórmula (1) para fabricação de um medicamento para tratamento ou profilaxia (para uso no alívio ou redução da incidência) de câncer em um paciente selecionado a partir de uma subpopulação que possui superexpressão ou uma mutação ativadora na via de sinalização de ERK1/2 de Ras (por exemplo, KRAS), BRAF ou MEK.

• Um método para tratamento ou profilaxia (para uso no alívio ou na redução da incidência) de câncer em um paciente selecionado a partir de uma subpoblação que possui uma superexpressão ou uma mutação ativadora na via de sinalização de ERK1/2 de Ras (por exemplo, KRAS), BRAF ou MEK, cujo método compreende administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da fórmula (1).

• Um método para diagnóstico e tratamento de um estado ou condição de uma doença mediada por ERK1/2, cujo método compreende (i) a avaliação de um paciente para determinar se uma doença ou condição de que um paciente está sofrendo ou pode estar sofrendo seria suscetível ao tratamento com um composto

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52/109 com afinidade com ERK1/2; e (ii) onde é indicado que a doença ou condição médica a que o paciente é então susceptível, depois administrando ao paciente o composto da fórmula (1).

Formulações Farmacêuticas [230] O composto (1) feito pelo novo processo da invenção e novas formas cristalinas do composto (1) pode ser administrado a um sujeito por si próprio, mas é mais tipicamente apresentado como uma composição farmacêutica (por exemplo, formulação).

[231] Assim, em uma outra modalidade, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica compreendendo o composto da fórmula (1) e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável e opcionalmente outros agentes terapêuticos ou profiláticos, conforme descrito neste documento.

[232] A invenção proporciona ainda métodos de preparação de uma composição farmacêutica compreendendo a associação (por exemplo, a mistura) do composto da fórmula (1), pelo menos um entre os referidos excipientes farmaceuticamente aceitáveis e opcionalmente outros agentes terapêuticos ou profiláticos, conforme descrito neste documento.

[233] O excipiente farmaceuticamente aceitável pode ser selecionados a partir de, por exemplo, transportadores (por exemplo, um transportador sólido, líquido ou semissólido), adjuvantes, diluentes, enchimentos ou agentes de volume, agentes granulantes, agentes de revestimento, agentes de controle de liberação, agentes ligantes, desintegrantes, agentes lubrificantes, conservantes, antioxidantes, agentes tamponadores, agentes de suspensão, agentes de espessamento, agentes aromatizantes, adoçantes, agentes mascaradores de sabor, estabilizadores ou quaisquer outros excipientes convencionalmente usados em composições farmacêuticas. Exemplos de excipientes para vários tipos de composições farmacêuticas são estabelecidos em mais detalhes abaixo.

[234] O termo farmaceuticamente aceitável como usado aqui pertence aos compostos, materiais, composições e/ou formas de dosagem que são, no âmbito do julgamento médico, adequados para uso em contato com os tecidos de um indivíduo (por exemplo, um indivíduo humano) sem excessiva toxicidade, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação, avaliado de acordo com uma relação risco/benefício razoável. Cada excipiente deve também ser aceitável, no

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53/109 sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação.

[235] Composições farmacêuticas contendo o composto (1) podem ser formulados em conformidade com técnicas conhecidas, ver, por exemplo, Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, EUA.

[236] As composições farmacêuticas podem ser em qualquer formulário apropriado para administração oral, parenteral, tópica, intranasal, intrabrônquica, sublingual, oftalmológica, ótica, retal, intra vaginal, ou transdérmica. Onde as composições destinam-se à administração parenteral, elas podem ser formuladas para administração intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutânea ou para distribuição direta em um órgão ou tecido alvo por injeção, infusão ou outros meios de distribuição. A administração pode ser por injeção em bolo, infusão de curto prazo ou infusão de prazo mais longo e pode ser via entrega passiva ou através do uso de uma bomba de infusão adequada ou bomba de seringa.

[237] Formulações farmacêuticas adaptadas para administração parenteral incluem soluções de injeções esterilizadas aquosas e não aquosas que possam conter anti-oxidantes, tamponadores, bacteriostáticos, co-solventes, agentes ativos de superfície, misturas de solventes orgânicos, agentes complexantes ciclodextrina, agentes emulsificantes (para formar e estabilizar formulações de emulsões), componentes de lipossomas para a formação de lipossomas, polímeros gelificantes para formar géis poliméricos, protetores de liofilização e combinações de agentes para, inter alia, estabilizar o ingrediente ativo em uma forma solúvel e tornar a formulação isotônica com o sangue do recipiente visado. As formulações farmacêuticas para administração parenteral também podem assumir a forma de suspensões estéreis aquosas e não aquosas, que podem incluir agentes de suspensão e agentes de espessamento (R.G.Strickly, Solubilizing Excipients in oral and injectable formulations, Pharmaceutical Research, Vol 21 (2) 2004, p 201 -230).

[238] As formulações podem ser apresentadas em recipientes de doses única ou recipientes de doses múltiplas, por exemplo, ampolas seladas, frascos e seringas pré-carregadas e podem ser armazenadas em uma condição de congelamento a seco (liofilizada), exigindo apenas a adição do transportador líquido estéril, por exemplo, água para injeções, imediatamente antes do uso. Em uma modalidade, a formulação é proporcionada como um ingrediente farmacêutico ativo

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54/109 (por exemplo, em forma seca liofilizada ou outra forma seca dividida finamente) em um frasco para posterior reconstituição utilizando um diluente apropriado.

[239] A formulação farmacêutica pode ser preparada pela liofilização do composto de fórmula (1). Liofilização refere-se ao processo de congelamento a seco de uma composição. Congelamento a seco e liofilização, portanto, são utilizados aqui como sinônimos. A liofilização é um método de desidratação no qual um substrato contendo solvente é congelado e depois submetido a vácuo de modo que o solvente seja removido por sublimação, ou seja, conversão direta do estado sólido congelado para o estado gasoso. A liofilização compreende tipicamente três estágios; um estágio de congelamento; um estágio de secagem primário; e um estágio de secagem secundário. Durante o estágio de congelamento, o substrato é congelado a uma temperatura bem abaixo do seu ponto de fusão. Na fase de secagem primária subsequente, o substrato congelado é submetido a um vácuo, permitindo assim a remoção do solvente por sublimação. A maior parte do solvente é removida do substrato durante este estágio. No entanto, uma pequena quantidade de solvente pode permanecer ligada ou adsorvida ao substrato no final da fase de secagem primária. De modo a remover este solvente residual, o vácuo é mantido, mas o substrato parcialmente seco é aquecido a uma temperatura à qual já não está congelado. O solvente residual é, portanto, removido por evaporação.

[240] O processo de liofilização pode ser realizado em um aparelho de liofilização, cuja construção pode ser inteiramente convencional. O aparelho de liofilização tem tipicamente uma câmara na qual os recipientes de liofilização contendo solução podem ser colocados para secagem por congelamento. A câmara é tipicamente conectada a uma fonte de vácuo (por exemplo, uma bomba de vácuo) para permitir que a pressão dentro da câmara seja reduzida. O aparelho pode também ter meios para congelar ou aquecer o conteúdo da câmara.

[241] A formulação farmacêutica também pode ser preparada por secagem por pulverização do composto de fórmula (1). A secagem por pulverização é um método de produção de partículas de tamanho micron em que uma solução ou suspensão de um substrato em um solvente é finamente pulverizada para formar uma dispersão de gotículas da solução ou suspensão e então submetida a calor e/ou vácuo parcial para que o solvente seja removido por evaporação. O substrato é primeiramente dissolvido ou suspenso em um solvente adequado, e depois a

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55/109 solução é passada através de um atomizador ou bocal de pulverização para uma câmara de secagem. Um gás aquecido (por exemplo, ar ou nitrogênio) pode também ser injetado na câmara de secagem para contatar a alimentação atomizada ou a câmara de secagem pode ser submetida a um vácuo parcial, de modo a iniciar a evaporação do solvente. À medida que o solvente evapora, partículas sólidas do substrato são formadas e podem ser recuperadas. O tamanho das partículas resultantes no pó pode ser alterado por seleção do atomizador adequado ou bocal pulverizador.

[242] O procedimento de secagem por pulverização pode ser realizado com um secador por pulverização, cuja construção pode ser inteiramente convencional. O secador por pulverização normalmente tem um atomizador ou bico de pulverização que dispersa a solução em uma pulverização fina (normalmente com menos de 500pm de diâmetro). A pulverização fina é direcionada para uma câmara de secagem. A câmara de secagem tipicamente também tem uma entrada para receber um gás aquecido (como ar ou nitrogênio) e é opcionalmente também conectada a uma fonte de vácuo (por exemplo, uma bomba de vácuo) para permitir que a pressão dentro da câmara seja reduzida. A câmara de secagem pode também ter uma saída através da qual as partículas sólidas formadas a partir da evaporação do solvente a partir das gotículas de pulverização podem ser coletadas.

[243] Soluções de injeção e suspensões extemporâneas podem ser preparadas de talcos estéreis, grânulos e comprimidos.

[244] As composições farmacêuticas da presente invenção para injeção parenteral também podem incluir soluções aquosas ou não aquosas estéreis farmaceuticamente aceitáveis, dispersões, suspensões ou emulsões, bem como talcos estéreis para reconstituição em soluções injetáveis estéreis ou dispersões precisamente antes do uso. Os exemplos de transportadores aquosos e não aquosos apropriados, diluentes, solventes e veículos incluem água, etanol, polióis (propilenoglicol, polietilenoglicol, glicerol e afins), carboximetilcelulose e suas misturas apropriadas, óleos vegetais (como azeite, óleo de girassol, óleo de cártamo ou óleo de milho) e ésteres orgânicos injetáveis como oleato de etil. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de materiais de revestimento (ou de espessamento), como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula necessário no caso de dispersões, e pelo uso de surfatantes.

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56/109 [245] As composições da presente invenção podem também conter adjuvantes como conservantes, agentes umectantes, agentes emulsificantes e agentes de dispersão. A prevenção da ação de micro-organismos pode ser assegurada pela inclusão de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico e afins. Também pode ser desejável incluir agentes ajustadores de tonicidade, tais como açúcares, cloreto de sódio e afins. A absorção prolongada da forma farmacêutica injetável pode ser provocada pela inclusão de agentes que atrasem a absorção, tais como monoestearato de alumínio e gelatina.

[246] E m uma modalidade preferencial da invenção, a composição farmacêutica está em uma forma adequada para administração i.v., por exemplo, por injeção ou infusão. Para administração intravenosa, a solução pode ser dosada, como é, ou pode ser injetada em uma bolsa de infusão (contendo um excipiente farmaceuticamente aceitável, tal como salina 0,9% ou dextrose 5%), antes da administração.

[247] E m outra modalidade, a composição farmacêutica está em uma forma adequada para administração subcutânea (s.c.).

[248] As formas de dosagem farmacêutica adequadas para administração oral incluem comprimidos (revestidos ou não revestidos), cápsulas (rígidas ou gelatinosas), comprimidos ovais, pílulas, pastilhas, xaropes, soluções, pós, grânulos, elixires e suspensões, comprimidos sublinguais, bolachas ou adesivos, como adesivos bucais.

[249] As composições de comprimidos podem conter uma dosagem de unidade do composto ativo juntamente com um diluente inerte ou veículo, como um açúcar ou álcool de açúcar, por exemplo; lactose, sacarose, sorbitol ou manitol; e/ou um diluente não derivado de açúcar, como carbonato de sódio, fosfato de cálcio, carbonato de cálcio ou uma celulose ou derivado destes, tais como celulose microcristalina (MCC), metil celulose, etilcelulose, hidroxipropil metilcelulose e amidos, tais como o amido de milho. Os comprimidos também podem conter ingredientes padrão como agentes de ligação e granulação, tais como polivinilpirrolidona, desintegrantes (por exemplo, polímeros reticulados expansíveis, tal como carboximetilcelulose reticulada), agentes lubrificantes (por exemplo, estearatos), conservantes (por exemplo, parabenos), antioxidantes (por

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57/109 exemplo, BHT), agentes tamponantes (por exemplo, tampões de fosfato ou citrato) e agentes efervescentes tais como misturas de citrato/bicarbonato. Esses excipientes são bem conhecidos e não precisam ser discutidos em detalhes neste documento.

[250] Os comprimidos podem ser projetados para liberar a droga no momento do contato com os fluidos do estômago (comprimidos de liberação imediata) ou liberar de uma forma controlada (comprimidos de liberação controlada) durante um período prolongado de tempo, ou em uma região específica do trato Gl.

[251] As formulações de cápsula podem ser da variedade de gelatina dura ou de gelatina mole e podem conter o componente ativo na forma sólida, semissólida ou líquida. As cápsulas de gelatina podem ser formadas de gelatina animal ou sintética ou equivalentes derivados de planta da mesma.

[252] As formas de dosagem sólidas (por exemplo, comprimidos, cápsulas, etc.) podem ser revestidas ou não revestidas. Os revestimentos podem agir como uma película protetora (por exemplo, um polímero, cera ou verniz) ou como um mecanismo para controlar a liberação da droga ou podem servir para fins estéticos ou de identificação. O revestimento (por exemplo, um polímero do tipo Eudragit™) pode ser projetado para liberar o componente ativo em um local desejado no trato gastrointestinal. Assim, o revestimento pode ser selecionado de forma a se degradar sob determinadas condições de pH dentro do trato gastrointestinal, desse modo seletivamente liberando o composto no estômago ou no íleo, duodeno, cólon ou jejuno.

[253] Ao invés de, ou em adição a, um revestimento, a droga pode ser apresentada em uma matriz sólida compreendendo um agente de controle de liberação, por exemplo um agente de atraso de liberação que pode ser adaptado para liberar o composto de forma controlada no trato gastrointestinal. Como alternativa, a droga pode ser apresentada em um polímero de revestimento, por exemplo, um revestimento de polímero polimetacrilato, que pode ser adaptado para seletivamente liberar o composto sob condições de variação de acidez ou alcalinidade no trato gastrointestinal. Alternativamente, o material da matriz ou revestimento de liberação retardante pode assumir a forma de um polímero erodível (por exemplo, um polímero de anidrido maleico) que é substancial e continuamente erodido conforme a forma de dosagem atravessa o trato gastrointestinal. Em outra

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58/109 alternativa, o revestimento pode ser projetado para desintegrar-se sob ação microbiana no intestino. Como uma alternativa adicional, o composto ativo pode ser formulado em um sistema de distribuição que fornece controle osmótico da liberação do composto. A liberação osmótica e outras liberações retardadas ou formulações de liberação sustentada (por exemplo formulações à base de resinas de troca iônica) podem ser preparadas em conformidade com os métodos conhecidos para aqueles versados na técnica.

[254] O composto de fórmula (1) pode ser formulado com um carreador e administrado na forma de nanopartículas. As nanopartículas aumentam a área superficial, ajudando na absorção do composto e oferecem a possibilidade de penetração direta na célula. Os sistemas de administração de drogas de nanopartículas são descritos em “Nanoparticle Technology for Drug Delivery”, editada por Ram B Gupta e Uday B. Kompella, Informa Healthcare, ISBN 9781574448573, publicado em 13 de março de 2006. As nanopartículas para administração de medicamentos também são descritas em J. Control. Release, 2003, 91 (1-2), 167-172, and in Sinha et al., Mol. Cancer Ther. 1 de Agosto de (2006) 5, 1909.

[255] As composições farmacêuticas podem compreender cerca de 1 % (p/p) a cerca de 95% do ingrediente ativo e de 99% (p/p) a 5% (p/p) de um excipiente farmaceuticamente aceitável ou combinação de excipientes. Mais particularmente, as composições farmacêuticas podem compreender de cerca de 20% (peso/peso) a cerca de 90% em (peso/peso) do ingrediente ativo e de 80% (peso/peso) a 10% de um excipiente farmaceuticamente aceitável ou uma combinação de excipientes.

[256] Composições farmacêuticas de acordo com a invenção podem ser, por exemplo, na forma de dose única, tais como sob a forma de ampolas, frascos, supositórios, drágeas, comprimidos ou cápsulas ou seringas pré-cheias.

[257] O(s) excipiente(s) farmaceuticamente aceitável(is) pode(m) ser selecionados de acordo com a forma física desejada da formulação e pode(m), por exemplo, ser selecionado(s) dentre diluentes (por exemplo diluentes sólidos como enchimentos ou agentes de volume; e diluentes líquidos como solventes e cosolventes), desintegrantes, agentes tamponadores, lubrificantes, auxiliar de fluxo, agentes de controle de liberação (por exemplo, de retardamento ou atraso na liberação de polímeros e ceras), aglutinantes, agentes de granulação, pigmentos,

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59/109 plastificantes, antioxidantes, conservantes, aromatizantes, agentes de mascaramento de sabor, ajustadores de tonicidade e agentes de revestimento.

[258] Aqueles versados na técnica terão o conhecimento necessário para selecionar as quantidades adequadas de ingredientes para uso em formulações. Por exemplo, comprimidos e cápsulas normalmente contêm 0-20% de desintegrantes, 0-5% de auxiliar de fluxo e/ou 0 a 99% (p/p) de preenchimento/ou agentes de volume (dependendo da dose da droga). Eles também podem conter 010% (p/p) de aglutinantes de polímero, 0-5% (p/p) de antioxidantes, 0-5% (p/p) de pigmentos. Os comprimidos de liberação lenta também contêm polímeros de 0-99% (p/p) (dependendo da dose). Os filmes de revestimento do comprimido ou cápsula contêm tipicamente 0-10% (peso/peso) de polímeros de controle de liberação, 03% (peso/peso) de pigmentos e/ou 0-2% (peso/peso) de plastificantes.

[259] As formulações parenterais normalmente contêm de 0-20% (peso/peso) de tamponadores, 0-50% (peso/peso) de co-solventes e/ou 0-99% (peso/peso) de Água para Injeção (WFI) (dependendo da dose e se liofilizado). As formulações para depósitos intramusculares também podem conter de 0 a 99% (peso/peso) de óleos.

[260] As composições farmacêuticas para administração oral podem ser obtidas combinando o ingrediente ativo com transportadores sólidos, se desejável granulando uma mistura resultante e processando a mistura, se desejado ou necessário, após a adição de excipientes apropriados, em comprimidos, núcleos de drágeas ou cápsulas. Também é possível para estes serem incorporados em um polímero ou matriz cerosa que permita aos ingredientes ativos dispersar ou ser liberados em quantidade mensurada.

[261] O composto da invenção também pode ser formulado como dispersões sólidas. As dispersões sólidas são fases de dispersão homogêneas extremamente finas de dois ou mais sólidos. As soluções sólidas (sistemas molecularmente dispersos), um tipo de dispersão sólida, são bem conhecidas para uso em tecnologia farmacêutica (ver Chiou and Riegelman, J. Pharm. Sei. , 60, 1281-1300 (1971)) e são úteis no aumento das taxas de dissolução e aumento da biodisponibilidade de drogas pouco hidrossolúveis.

[262] A invenção também fornece formas farmacêuticas sólidas, compreendendo a solução sólida descrita acima. As formas farmacêuticas sólidas

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60/109 incluem comprimidos, cápsulas, comprimidos mastigáveis e comprimidos dispersíveis ou efervescentes. Os excipientes conhecidos podem ser misturados com a solução sólida para fornecer a forma farmacêutica desejada. Por exemplo, uma cápsula pode conter a solução sólida misturada com (a) um desintegrante e um lubrificante, ou (b) um desintegrante, um lubrificante e um surfactante. Ademais, uma cápsula pode conter um agente de volume, como a lactose ou celulose microcristalina. Um comprimido pode conter a solução sólida misturada com pelo menos um desintegrante, um lubrificante, um surfactante, um agente de volume e um deslizante. Um comprimido mastigável pode conter a solução sólida misturada com um agente de volume, um lubrificante e, se desejado, um agente adoçante adicional (tal como um adoçante artificial) e sabores apropriados. As soluções sólidas podem também ser formadas por pulverização de soluções de drogas e um polímero adequado na superfície de carreadores inertes, tais como pérolas de açúcar ('non-pareils'). Estas esferas podem subsequentemente ser introduzidas em cápsulas ou comprimidas em comprimidos.

[263] As formulações farmacêuticas podem ser apresentadas a um paciente em pacotes de paciente contendo um curso inteiro de tratamento em um único pacote, geralmente em uma embalagem protetora (blister). As embalagens para pacientes têm uma vantagem sobre as receitas tradicionais, onde um farmacêutico divide o fornecimento a um paciente de um item farmacêutico de um fornecimento a granel, de forma que o paciente sempre tem acesso à bula contida no pacote do paciente, normalmente ausente em prescrições para pacientes. Demonstrou-se que a inclusão de uma bula melhora a concordância do paciente às instruções do médico.

[264] As composições para uso tópico e administração nasal incluem pomadas, cremes, sprays, adesivos, géis, líquido em gotas e insere (por exemplo, inserções intra-oculares). Tais composições podem ser formuladas em conformidade com métodos conhecidos.

[265] Os exemplos de formulações para administração retal ou intravaginal incluem pessários e supositórios que podem ser, por exemplo, formados de um material ceroso ou de forma moldável contendo o composto ativo. As soluções do composto ativo também podem ser utilizadas para administração retal.

[266] As composições para a administração por inalação podem assumir a

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61/109 forma de composições de pó inalável ou líquido ou sprays em pó, e podem ser administradas na forma padrão usando dispositivos inaladores em pó ou dispositivo aplicador de aerossol. Esses dispositivos são bem conhecidos. Para administração por inalação, as formulações em pó normalmente compreendem o composto ativo juntamente com um diluente em pó sólido inerte tal como lactose.

[267] O composto da fórmula (1) geralmente será apresentado sob forma de dosagem única e, como tal, normalmente conterá o composto suficiente para fornecer um nível desejado de atividade biológica. Por exemplo, uma formulação pode conter de 1 nanograma a 2 gramas de ingrediente ativo, por exemplo, de 1 nanograma a 2 miligramas de ingrediente ativo. Dentro dessas faixas, sub-faixas particulares de composto são 0,1 mg a 2 gramas de ingrediente ativo (geralmente de 10 miligramas a 1 grama, por exemplo, 50 mg a 500 mg) ou 1 micrograma a 20 miligramas (por exemplo 1 micrograma a 10 miligramas, por exemplo, 0,1 mg a 2 miligramas de ingrediente ativo).

[268] Para composições orais, uma forma de dosagem única pode conter de 1 miligrama a 2 gramas, mais tipicamente de 10 miligramas a 1 grama, por exemplo 50 miligramas a 1 grama, por exemplo, 100 miligramas a 1 grama, do composto ativo.

[269] O composto da invenção será administrado a um paciente em necessidade do mesmo (por exemplo, um paciente humano ou animal) em uma quantidade suficiente para atingir o efeito terapêutico desejado.

Métodos de Tratamento [270] O composto da fórmula (1) pode ser útil na profilaxia ou tratamento de uma faixa de estágios de doença ou condições mediadas por ERK1/2. Exemplos desses estados de doença e condições médicas são estabelecidos acima.

[271] O composto é geralmente administrado a um sujeito em necessidade de tal administração, por exemplo, um paciente humano ou animal, particularmente um ser humano.

[272] O composto será tipicamente administrado em quantidades que são terapeuticamente ou profilaticamente úteis e que geralmente não são tóxicas. No entanto, em determinadas situações (por exemplo, no caso de doenças fatais), os benefícios de administração de um composto da fórmula (1) podem superar as desvantagens de quaisquer efeitos tóxicos ou efeitos colaterais, nesse caso pode

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62/109 ser considerado desejável administrar o composto em quantidades que estão associadas a um grau de toxicidade.

[273] O composto pode ser administrado durante um prazo prolongado para manter efeitos terapêuticos benéficos ou pode ser administrado por um curto período apenas. Como alternativa, ele pode ser administrado de forma contínua ou de maneira que forneça dosagem intermitente (por exemplo, de forma pulsátil).

[274] Uma dose diária típica do composto de fórmula (1) pode estar na faixa de 100 picogramas a 100 miligramas por quilograma de peso corporal, mais tipicamente 5 nanogramas a 25 miligramas por quilograma de peso corporal e mais comumente 10 nanogramas a 15 mg por quilograma (por exemplo, 10 nanogramas a 10 miligramas e mais tipicamente 1 micrograma por quilograma a 20 mg por quilograma, por exemplo, 1 micrograma a 10 mg por quilograma) por quilograma de peso corporal embora doses superiores ou inferiores possam ser administradas quando necessário. O composto da fórmula (1) e subfórmulas desta pode ser administrado diariamente ou em uma base de repetição a cada 2, ou 3, ou 4, ou 5, ou 6, ou 7, ou 10 ou 14, ou 21 ou 28 dias, por exemplo.

[275] O composto da invenção pode ser administrado oralmente em uma faixa de doses, por exemplo: de 1 a 1500 mg, 2 a 800 mg ou 5 a 500 mg, por exemplo: de 2 a 200 mg ou 10 a 1000 mg, os exemplos específicos de doses incluindo 10, 20, 50 e 80 mg. O composto pode ser administrado uma vez ou mais de uma vez por dia para obter o efeito terapêutico desejado. O composto pode ser administrado continuamente (isto é, tomado diariamente, sem interrupção durante a duração do regime de tratamento). Alternativamente, o composto pode ser administrado de forma intermitente (isto é, tomado continuamente durante um determinado período, como uma semana, e descontinuado por um período, como uma semana e, em seguida, retirado continuamente por outro período, tal como uma semana e assim por diante, durante todo o período do regime de tratamento). Exemplos de regimes de tratamento que envolvem a administração intermitente incluem regimes em que a administração se dá em ciclos de uma semana, com uma semana de intervalo; ou de duas semanas, com uma semana de intervalo; ou de três semanas, com uma semana de intervalo; ou de duas semanas, com duas semanas de intervalo; ou de quatro semanas a duas semanas de intervalo; ou de uma semana em três semanas de intervalo - para um ou mais ciclos, por exemplo:

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2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 ou mais ciclos. Esse tratamento descontínuo também pode ser baseado em números de dias em vez de uma semana completa. Por exemplo, o tratamento pode compreender a dosagem diária durante 1 a 6 dias, sem administração durante 1 a 6 dias, com este padrão repetido durante o protocolo de tratamento. O número de dias (ou semanas) em que os compostos da invenção não são dosados não necessariamente têm que igualar o número de dias (ou de semanas) igual àqueles em que os compostos da invenção são dosados.

[276] E m um determinado esquema de dosagem, um paciente receberá uma infusão de um composto das fórmula (1) e subfórmulas desta por períodos de uma hora por dia por até dez dias, em particular até cinco dias por uma semana, e o tratamento repetido em um intervalo desejado, como de duas a quatro semanas, em particular a cada três semanas.

[277] O composto da invenção também pode ser administrado por bolo ou infusão contínua. O composto da invenção pode ser administrado diariamente uma vez por semana ou uma vez a cada duas semanas, ou uma vez a cada três semanas, ou uma vez a cada quatro semanas durante o ciclo de tratamento. Se administrado diariamente durante um ciclo de tratamento, essa dosagem diária pode ser descontínua durante o número de semanas do ciclo de tratamento: por exemplo, administrado por uma semana (ou vários dias), sem administração por uma semana (ou vários dias), com o padrão de repetição durante o ciclo de tratamento.

[278] E m um esquema de dosagem, um paciente pode receber uma infusão de um composto da fórmula (1) deste por períodos de uma hora por dia durante 5 dias e o tratamento é repetido a cada três semanas.

[279] E m outro esquema de dosagem em particular, um paciente recebe uma infusão de 30 minutos a 1 hora, seguida de infusões de manutenção de duração variável, por exemplo, de 1 a 5 horas, por exemplo, de 3 horas.

[280] Em um outro esquema de dosagem em particular, um paciente recebe uma infusão contínua por um período de 12 horas a 5 dias, em particular uma infusão contínua de 24 horas a 72 horas.

[281] E m última análise, todavia, a quantidade do composto administrado e o tipo de composição usado serão avaliados de acordo com a natureza da doença ou condição fisiológica que está sendo tratada e estarão a critério do médico.

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64/109 [282] Verificou-se que os inibidores de ERK1/2 podem ser usados como agente único ou em combinação com outros agentes anticancerígenos. Por exemplo, pode ser benéfico combinar um inibidor que suprime a sinalização de ERK com outro agente que atua através de um ponto diferente na cascata de transdução de sinal ou um mecanismo diferente para regular o crescimento celular, tratando assim duas das características do desenvolvimento do câncer. Os experimentos de combinação podem ser realizados, por exemplo, conforme descrito em Chou TC, Talalay P. Quantitative analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors. Adv Enzyme Regulat 1984;22;27—55.

[283] O composto da invenção pode ser administrado como o único agente terapêutico ou ele pode ser administrado em terapia de combinação com um dos mais outros compostos (ou terapias) para o tratamento de um estado de doença específico, por exemplo, uma doença neoplásica, tal como um câncer conforme definido anteriormente. Para o tratamento das condições acima, o composto da invenção pode ser empregado vantajosamente em combinação com um ou mais outros agentes medicinais, mais particularmente com outros agentes ou adjuvantes anticancerígenos (agentes de suporte na terapia) na terapia do câncer. Exemplos de outros agentes terapêuticos ou tratamentos que podem ser administrados em conjunto (seja simultaneamente ou em intervalos de tempo diferentes) com o composto da fórmula (1) incluem, mas não estão limitados a:

• Inibidores de Topoisomerase I • Antimetabólitos • Agentes de segmentação de tubulina • Inibidores do aglutinante de DNA e da topoisomerase II • Agentes de Alquilação • Anticorpos Monoclônicos • Anti-Hormônios • Inibidores de transdução de sinal • Inibidores da via de ubiquitina-proteassoma • Imunoterapias • Reguladores da morte celular • Inibidores da metil transferase de DNA

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65/109 • Citocinas e retinoides • Terapias específicas de cromatina • Radioterapia e • Outros agentes terapêuticos ou profiláticos.

[284] Os exemplos em particular de agentes ou adjuvantes anticancerígenos (ou sais destes) incluem, mas não estão limitados a, um ou mais dos agentes selecionados dentre os grupos (i)-(xlviii) e, opcionalmente, do grupo (xlix) e ou (I), abaixo:

(i) Os compostos de platina, por exemplo, de cisplatina (opcionalmente combinada com amifostina), carboplatina ou oxaliplatina;

(ii) Os compostos de taxano, por exemplo: paclitaxel, partículas ligadas à proteína de paclitaxel (Abraxane™), docetaxel, cabazitaxel ou larotaxel;

(iii) Inibidores da topoisomerase I, por exemplo, compostos de camptotecina, por exemplo, camptotecina, irinotecano (CPT11), SN-38 ou topotecano;

(iv) Os inibidores de Topoisomerase II, por exemplo: epipodofilotoxinas antitumorais ou derivados de podofilotoxina, por exemplo, etopósido ou tenipósido;

(v) Os alcalóides Vinca, por exemplo: vinblastina, vincristina, vincristina lipossômica (Onco-TCS), vinorelbina, vindesina, vinflunina ou vinvesir;

(vi) Os derivados de nucleosídeos, por exemplo: 5-fluorouracilo (5-FU, opcionalmente em combinação com leucovorina), gemcitabina, capecitabina, tegafur, UFT, S1, cladribina, citarabina (Ara-C, arabinósido de citosina), fludarabina, clofarabina ou nelarabina;

(vii) Os antimetabólitos, por exemplo: clofarabina, aminopterina ou metotrexato, azacitidina, citarabina, floxuridina, pentostatina, tioguanina, tiopurina, 6-mercaptopurina ou hidroxiureia (hidroxicarbamida) ou trifluridina (opcionalmente em combinação com tipiracil);

(viii) Os agentes de alquilação, tais como mostarda de nitrogênio ou nitrosoureia, por exemplo: ciclofosfamida, clorambucil, carmustina (BCNU), bendamustina, tiotepa, melphalan, treosulfan, lomustina (CCNU), altretamina, bussulfano, dacarbazina, estramustina, fotemustina, ifosfamida (opcionalmente em combinação com mesna), pipobromano, procarbazina, estreptozocina, temozolomida, uracilo, mecloretamina, metilciclo-hexilcloroetilnitrosureia ou

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66/109 nimustina (ACNU);

(ix) Antraciclinas, antracenodionas e drogas relacionadas, por exemplo daunorrubicina, doxorrubicina (opcionalmente em combinação com dexrazoxano), formulações lipossômicas de doxorrubicina (por exemplo Caelyx ™, Myocet ™, Doxil ™), idarrubicina, mitoxantrona, epirrubicina, amsacrina ou valrubicina;

(x) As epotilonas, por exemplo, ixabepilona, patupilona, BMS-310705, KOS-862 e ZK-EPO, epotilona A, epotilona B, desoxiepotilona B (também conhecida como epotilona D ou KOS-862), aza-epotilona B (também conhecida como BMS- 247550), aulimalida, isolaulimalida ou lueterrobina;

(xi) Os inibidores de metil transferase do DNA, por exemplo: temozolomida, azacitidina, decitabina ou guadecitabina (SGI-110);

(xii) Os antifolatos, por exemplo: metotrexato, pemetrexed dissódico ou raltitrexed;

(xiii) Os antibióticos citotóxicos, por exemplo: antinomicina D, bleomicina, mitomicina C, dactinomicina, carminomicina, daunomicina, levamisol, plicamicina ou mitramicina;

(xiv) Os agentes de ligação à tubulina, por exemplo: combrestatina, colchicinas ou nocodazol;

(xv) Os linibidores de transdução de sinal, tais como os inibidores de quinase, por exemplo, inibidores de tirosina quinase receptora (por exemplo, inibidores de EGFR (receptor de fator de crescimento epitelial), inibidores de VEGFR (receptor de factor de crescimento endotelial vascular), inibidores de PDGFR (receptor de fator de crescimento derivado de plaquetas), inibidores de Axl, MTKI (inibidores de quinase com múltiplos alvo), inibidores de Raf, inibidores de ROCK, inibidores de mTOR, inibidores de MEK ou inibidores de PI3K), por exemplo: mesilato de imatinib, erlotinib, gefitinib, dasatinib, lapatinib, dovotinib, axitinib, nilotinib, vandetanib, vatalinib, pazopanib, sorafenib, sunitinib, temsirolimus, everolimus (RAD 001), vemurafenib (PLX4032 ou RG7204), dabrafenib, encorafenib, selumetinib (AZD6244), trametinib (GSK121120212), dactolisib (BEZ235), buparlisib (BKM-120; NVP-BKM-120), BYL719, copanlisib (BAY-80-6946), ZSTK-474, CUDC-907, apitolisib (GDC-0980; RG-7422), pictilisib (pictrelisib, GDC-0941, RG-7321), GDC-0032, GDC-0068, GSK -2636771, idelalisib (anteriormente CAL-101, GS 1101, GS-1101), MLN1117 (INK1117), MLN0128

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67/109 (INK128), IPI-145 (INK1197), LY-3023414, ipatasertib, afuresertib, MK-2206, MK8156, LY-3023414, LY294002, SF1126 ou PI-103, sonolisib (PX-866) ou AT13148.

(xvi) Os inibidores de Aurora quinase, por exemplo: AT9283, Barasertib (AZD1152), TAK-901, MK0457 (VX680), cenisertib (R-763), danusertib (PHA739358), alisertib (MLN-8237) ou MP-470;

(xvii) Os inibidores de CDK, por exemplo: AT7519, roscovitina, seliciclib, alvocidib (flavopiridol), dinaciclib (SCH-727965), 7-hidroxi-estaurosporina (UCN01), JNJ-7706621, BMS-387032 (também conhecido como SNS-032), PHA533533, ZK -304709 ou AZD-5438 e incluindo os inibidores de CDK4, tais como palbociclib (PD332991) e ribociclib (LEE-011);

(xviii) Os inibidores de PKA/B e inibidores da via de PKB (akt), por exemplo: AT13148, AZD5363, Semaphore, SF1126 e inibidores de MTOR, tais como análogos de rapamicina, AP23841 e AP23573, inibidores de calmodulina (inibidores de translocação forkhead), API-2 / TON (tricirribina), RX-0201, enzastaurina de HCI (LY317615), NL-71-101, SR-13668, PX-316 ou KRX-0401 (perifosina/NSC 639966);

(xix) Os inibidores de Hsp90, por exemplo: onalespib (AT13387), herbimicina, geldanamicina (GA), 17-alilamino-17-desmetoxi-gel-membranamicina (17-AAG), por exemplo: NSC-330507, Kos-953 e CNF-1010, cloridrato de 17dimetilaminoetil-17-desmetoxi-geladamina 17-DMAG), por exemplo: NSC-707545 e Kos-1022, NVP-AUY922 (VER-52296), NVP-BEP800, CNF-2024 (BIIB-021, uma purina oral), ganetespib (STA-9090), SNX-5422 (SC -102112) ou IPI-504 ou TAS116;

(xx) Os anticorpos monoclônicos (não conjugados ou conjugados com radioisótopos, toxinas ou outros agentes), derivados de anticorpos e agentes relacionados, tais como anticorpos anti-CD, anti-VEGFR, anti-HER2 ou anti-EGFR, por exemplo: rituximab (CD20), ofatumumab (CD20), ibritumomab tiuxetan (CD20), GA101 (CD20), tositumomab (CD20), epratuzumab (CD22), lintuzumab (CD33), gemtuzumab ozogamicina (CD33), alemtuzumab (CD52), galiximab (CD80), trastuzumab (anticorpo HER2), pertuzumab (HER2), trastuzumab-DM1 (HER2), ertumaxomab (HER2 e CD3), cetuximab (EGFR), panitumumab (EGFR), necitumumab (EGFR), nimotuzumab (EGFR), bevacizumab (VEGF), catumaxumab (EpCAM e CD3) , abagovomab (CA125), farletuzumab (receptor de folato),

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68/109 elotuzumab (CS1), denosumab (ligando RANK), figitumumab (IGF1R), CP751,871 (IGF1R), mapatumumab (receptor TRAIL), metMAB (met), mitumomab (GD3 gangliósido), naptumomab estafenatox (5T4) ou siltuximab (IL6) ou agentes imunomoduladores, como anticorpos bloqueadores de CTLA-4 e/ou anticorpos contra PD-1 e P D-L1 e/ou PD-L2, por exemplo: ipilimumab (CTLA4), MK-3475 (pembrolizumab, anteriormente lambrolizumab, anti-PD-1), nivolumab (anti-PD-1), BMS-936559 (anti-PD- L1), MPDL320A, AMP-514 ou MEDI4736 (anti-PD-L1) ou tremelimumab (anteriormente ticilimumab, CP-675,206, anti-CTLA-4);

(xxi) Os antagonistas dos receptores de estrogênio ou moduladores seletivos do receptor de estrogênio (SERMs) ou inibidores da síntese de estrogênio, por exemplo: tamoxifeno, fulvestrante, toremifeno, droloxifeno, faslodex ou raloxifeno;

(xxii) Os inibidores de aromatase e drogas relacionadas, tais como exemestano, anastrozol, letrazol, testolactona aminoglutetimida, mitotano ou vorozol;

(xxiii) Os antiandrogênios (isto é, antagonistas dos receptores de androgênio) e agentes relacionados, por exemplo: bicalutamida, nilutamida, flutamida, ciproterona ou cetoconazol;

(xxiv) Os hormônios e seus análogos, tais como medroxiprogesterona, dietilstilbestrol (também conhecido como dietilsstilboestrol) ou octreótido;

(xxv) Esteroides, por exemplo, propionato de dromostanolona, acetato de megestrol, nandrolona (decanoato, fenpropionato), fluoximestrona ou gossipol, (xxvi) um inibidor de citocromo esteroide P450 17-alfa-hidroxilase-17,20liase (CYP17), por exemplo: abiraterona;

(xxvii) Os agonistas ou antagonistas do hormônio de liberação de gonadotropina (GnRAs), por exemplo: abarelix, acetato de goserelina, acetato de histrelina, acetato de leuprolida, triptorelina, buserelina ou deslorelina;

(xxviii)Os glicocorticoides, por exemplo: prednisona, prednisolona, dexametasona;

(xxix) Os agentes diferenciadores, tais como retinoides, rexinoides, vitamina D ou ácido retinoico, e agentes de bloqueio do metabolismo do ácido retinoico (RAMBA), por exemplo: acutano, alitretinoína, bexaroteno ou tretinoína;

(xxx) Inibidores da farnesiltransferase, por exemplo: tipifarnib;

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69/109 (xxxi) As terapias específicas de cromatina, tais como inibidores de histona desacetilase (HDAC), por exemplo: butirato de sódio, ácido de hidroxamida de suberoilanilida (SAHA), depsipeptídeo (FR 901228), dacinostat (NVP-LAQ824), R306465 / JNJ-16241199, JNJ-26481585, tricotatina A, vorinostat, clamidocina, A173, JNJ-MGCD-0103, PXD-101 ou apicidina;

(xxxii) Os medicamentos que visam a via de ubiquitina-proteassoma, incluindo inibidores de proteassoma, por exemplo: bortezomib, carfilzomib, CEP18770, MLN-9708 ou ONX-0912; inibidores de NEDD8; antagonista de HDM2 e deubiquitinases (DUBs);

(xxxiii)Os medicamentos fotodinâmicos, por exemplo: porfímero de sódio ou temoporfina;

(xxxiv)Agentes anticancerígenos derivados de organismos marinhos, tais como trabectidina;

(xxxv) Medicamentos radiomarcados para radioimunoterapia, por exemplo, com um isótopo emissor de partículas beta (por exemplo, iodo -131, ítrio-90) ou um isótopo emissor de partículas alfa (por exemplo, Bismuto-213 ou Actínio-225), por exemplo: ibritumomab, r iodina ou rádio alfa;

(xxxvi) Inibidores da telomerase, por exemplo, telomestatina;

(xxxvii) Inibidores de metaloproteinase de matriz, por exemplo: batimastat, marimastat, prinostat ou metastat;

(xxxviii) Interferons recombinantes (tais como interferon-γ e interferona) e interleucinas (por exemplo, interleucina 2), por exemplo, aldesleucina, difina de denileucina, interferon alfa 2a, interferon alfa 2b ou peginterferon alfa 2b;

(xxxix)Moduladores de imunossolição seletiva, por exemplo, talidomida ou lenalidomida;

(xl) Vacinas terapêuticas, como sipuleucel-T (Provenge) ou OncoVex;

(xli) Os agentes ativadores de citocinas incluem Picibanil, Romurtida, Sizofiran, Virulizina ou Timosina;

(xlii) Trióxido arsênico;

(xliii) Os inibidores de receptores ligados à proteína G (GPCR), por exemplo atrasentano;

(xliv) Enzimas, como a L-asparaginase, pegaspargase, rasburicase ou pegademase;

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70/109 (xlv) Inibidores de reparo de DNA, tais como inibidores de PARP, por exemplo, olaparib, velaparib, iniparib, INO-1001, AG-014699 ou ONO-2231;

(xlvi) Receptor de Agonistas de Morte (por exemplo, receptor de um ligante indutor de apoptose relacionado com TNF (TRAIL), como mapatumumab (anteriormente HGS-ETR1), conatumumab (anteriormente AMG 655), PRO95780, lexatumumab, dulanermina, CS-1008, apomab ou ligantes TREIL recombinantes, como o ligante TRAIL /Apo2 humano recombinante;

(xlvii) Imunoterapias, tais como inibidores do ponto de controle imunológico; vacinas contra câncer e terapia com células CAR-T;

(xlviii) Reguladores da morte celular (apoptose), incluindo antagonistas de Bcl-2 (Iinfoma2 de células B), tais como venetoclax (ABT-199 ou GDC-0199), ABT737, ABT-263, TW-37, sabutoclax, obatoclax e MIM1 e antagonistas de IAP, incluindo LCL-161 (Novartis), Debio-1143 (Debiopharma/Ascenta), AZD5582, Birinapant/TL-32711 (TetraLogic), CUDC-427/ GDC-0917 / RG-7459 (Genentech), JP1201 (Joyant), T-3256336 (Takeda), GDC-0152 (Genentech), HGS-1029/AEG40826 (HGS/Aegera) ou ASTX-660;

(xlix) Agentes profiláticos (adjuvantes); ou seja, agentes que reduzem ou aliviam alguns dos efeitos colaterais associados aos agentes de quimioterapia, por exemplo:

-agentes anti-eméticos,

-agentes que previnem ou diminuem a duração da neutropenia associada à quimioterapia e previnem complicações decorrentes de níveis reduzidos de plaquetas, glóbulos vermelhos ou glóbulos brancos, por exemplo: interleucina-11 (por exemplo, oprelvecina), eritropoietina (EPO) e seus análogos (por exemplo, darbepoetina alfa), análogos do fator estimulante de colônias, como o fator estimulante de colônias de macrófagos de granulócitos (GM-CSF) (por exemplo, sargramostim) e o fator estimulante de colônias de granulócitos (G-CSF) e seus análogos (por exemplo, filgrastim, pegfilgrastim),

-agentes que inibem a reabsorção óssea, tal como denosumab ou bisfosfonatos, por exemplo, zoledronato, ácido zoledrônico, pamidronato e ibandronato,

-agentes que suprimem respostas inflamatórias, como dexametasona, prednisona e prednisolona,

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-agentes usados para reduzir os níveis sanguíneos de hormônio do crescimento e IGF-I (e outros hormônios) em pacientes com acromegalia ou outros tumores produtores de hormônios raros, tais como formas sintéticas do hormônio somatostatina, por exemplo, acetato de octreótido,

-antídoto para drogas que diminuem os níveis de ácido fólico, como leucovorina ou ácido folínico,

-agentes para a dor, por exemplo, opiáceos, como morfina, diacetilmorfina e fentanil,

-drogas antiinflamatórias não esteroides (NSAID), como inibidores de COX2, por exemplo: celecoxib, etoricoxib e lumiracoxib,

-agentes para mucosite, por exemplo: palifermina,

-agentes para o tratamento de efeitos colaterais, incluindo anorexia, cachexia, oedema ou episódios tromoembólicos, como acetato de megestrol; e (I) radioterapia para fins radicais, paliativos ou profiláticos (ou, para fins adjuvantes ou neoadjuvantes).

[285] Cada um dos compostos presentes nas combinações da invenção pode ser dado individualmente, variando-se os horários das doses e por diferentes vias. Como tal, a posologia de cada um dos dois ou mais agentes pode ser diferente: cada um pode ser administrado simultaneamente ou em momentos diferentes. Aqueles versados na técnica conhecerão, através do seu conhecimento geral, os regimes de dosagem e as terapias de combinação a serem usados. Por exemplo, o composto da invenção pode ser utilizado em combinação com um ou mais agentes que são administrados de acordo com o regime de combinação existente. Exemplos de regimes de combinação convencionais são fornecidos a seguir.

[286] O composto de taxano é administrado vantajosamente em uma dosagem de 50 a 400 mg por metro quadrado (mg/m²) de área de superfície corporal, por exemplo: de 75 a 250 mg/m², particularmente para o paclitaxel em uma dose de cerca de 175 a 250 mg/m² e para o docetaxel de cerca de 75 a 150 mg/m² por curso de tratamento.

[287] O composto de camptotecina é vantajosamente administrado em uma dosagem de 0,1 a 400 mg por metro quadrado (mg/m²) de área de superfície corporal, por exemplo: de 1 a 300 mg/m², particularmente para o irinotecano em

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72/109 uma dose de cerca de 100 a 350 mg/m² e para o topotecano de cerca de 1 a 2 mg/m² por curso de tratamento.

[288] O derivado anti-tumoral de podofilotoxina é administrado vantajosamente em uma dosagem de 30 a 300 mg por metro quadrado (mg/m²) de área de superfície corporal, por exemplo: de 50 a 250 mg/m², particularmente para o etoposido em uma dose de cerca de 35 a 100 mg/m² e para o tenipósido de cerca de 50 a 250 mg/m² por curso de tratamento.

[289] O alcalóide de vinca antitumoral é vantajosamente administrado em uma dosagem de 2 a 30 mg por metro quadrado (mg/m²) de área de superfície corporal, particularmente para vinblastina em uma dosagem de cerca de 3 a 12 mg/m², para vincristina em uma dosagem de cerca de 1 a 2 mg/m² , e para vinorelbina na dosagem de cerca de 10 a 30 mg /^m2 por curso de tratamento.

[290] O derivado de nucleosideo antitumoral é vantajosamente administrado em uma dosagem de 200 a 2500 mg por metro quadrado (mg/m²) de área superficial corporal, por exemplo, 700 a1500 mg/m², particularmente para 5-FU em uma dosagem de 200 a 500 mg/m², para a gemcitabina em uma dose de cerca de 800 a 1200 mg/m² e para a capecitabina em cerca de 1000 a 2500 mg/m² por curso de tratamento.

[291] Os agentes alquilantes, como mostarda de nitrogênio ou nitrosureia, são administrados vantajosamente em uma dosagem de 100 a 500 mg por metro quadrado (mg/m²) de área de superfície corporal, por exemplo: de 120 a 200 mg/m², particularmente para a ciclofosfamida em uma dosagem de cerca de 100 a 500 mg/m², para o clorambucil em uma dosagem de cerca de 0,1 a 0,2 mg/kg, para a carmustina em uma dosagem de cerca de 150 a 200 mg/m² e para a lomustina em uma dosagem de cerca de 100 a 150 mg/m² por curso de tratamento.

[292] O derivado de atraciclina antitumoral é vantajosamente administrado em uma dosagem de 10 a 75 mg por metro quadrado (mg/m²) de área superficial corporal, por exemplo, 15 a60 mg/m², particularmente para doxorrubicina em uma dosagem de cerca de 40 a 75 mg/m², para daunorrubicina em uma dosagem de cerca de 25 a 45 mg/m² e para idarrubicina em uma dosagem de cerca de 10 a 15 mg/m² por ciclo de tratamento.

[293] O agente antiestrogênio é administrado vantajosamente em uma dosagem de cerca de 1 a 100 mg diariamente, dependendo do agente específico e

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73/109 da condição a ser tratada. O tamoxifeno é vantajosamente administrado por via oral em uma dose de 5 a 50 mg, particularmente de 10 a 20 mg duas vezes por dia, continuando a terapia por tempo suficiente para atingir e manter um efeito terapêutico. O toremifeno é administrado vantajosamente por via oral na dose de cerca de 60mg uma vez ao dia, continuando a terapia por tempo suficiente para atingir e manter um efeito terapêutico. O anastrozol é administrado vantajosamente por via oral em uma dose de cerca de 1mg uma vez por dia. O droloxifeno é administrado vantajosamente por via oral em uma dose de cerca de 20-100 mg uma vez ao dia. O raloxifeno é administrado vantajosamente por via oral em uma dose de cerca de 60mg uma vez por dia. O exemestano é administrado vantajosamente por via oral em uma dose de cerca de 25mg uma vez por dia.

[294] Os anticorpos são administrados vantajosamente em uma dosagem de cerca de 1 a 5 mg por metro quadrado (mg/m²) de área de superfície corporal ou tal como conhecido na técnica, se forem diferentes. O trastuzumab é administrado vantajosamente em uma dosagem de 1 a 5 mg por metro quadrado (mg/m²) de área de superfície corporal, particularmente de 2 a 4 mg/m² por ciclo de tratamento.

[295] Onde o composto da fórmula (1) é administrado em terapia de combinação com um, dois, três, quatro ou mais outros agentes terapêuticos (particularmente um ou dois, mais particularmente um), os compostos podem ser administrados simultaneamente ou sequencialmente. Neste último caso, dois ou mais dos compostos serão administrados no prazo e em uma quantidade e forma suficientes para garantir que um efeito vantajoso e sinérgico seja obtido. Quando administrados sequencialmente, eles podem ser administrados em intervalos espaçados (por exemplo, durante um período de 5 a 10 minutos) ou em intervalos mais longos (por exemplo 1, 2, 3, 4 ou mais horas separadas, ou até mesmo períodos separados, se necessário), o regime de dosagem precisa ser avaliado de acordo com as propriedades do(s) agente(s) terapêutico(s). Essas dosagens podem ser administradas, por exemplo, uma, duas ou mais vezes por um curso de tratamento, que pode ser repetido, por exemplo, a cada 7, 14, 21 ou 28 dias.

[296] Será apreciado que o método em particular e a ordem da administração e as respectivas quantidades e regimes de dosagem para cada componente da combinação dependerão do outro agente medicinal específico e

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74/109 composto da presente invenção a serem administrados, sua vida de administração, o tumor específico a ser tratado e o hospedeiro específico a ser tratado. O método e a ordem da administração e as quantidades e regime de dosagem ideais podem ser determinados facilmente por aqueles versados na técnica usando métodos convencionais e tendo em conta as informações apresentadas neste documento.

[297] A razão em peso do composto de acordo com a presente invenção e um ou mais outros agentes anticancerígenos quando dada em uma combinação pode ser determinada pela pessoa versada na técnica. A razão e a dosagem exata e frequência de administração dependerão do composto em particular de acordo com a invenção e os outros agentes anticancerígenos usados, a condição em particular sendo tratada, a gravidade da condição sendo tratada, a idade, peso, gênero, dieta, tempo de administração e condição física geral do paciente em particular, o modo de administração, bem como outro medicamento que o indivíduo possa estar tomando, como é bem conhecido por aqueles versados na técnica. Adicionalmente, é evidente que a quantidade diária eficaz pode ser diminuída ou aumentada dependendo da resposta do sujeito tratado e/ou dependendo da avaliação do médico que prescreve o composto da presente invenção. Uma razão de peso em particular para o presente composto de fórmula (1) e para outro agente anticancerígeno podem variar de 1/10 a 10/1, mais particularmente de 1/5 a 5/1, ainda mais especialmente de 1/3 a 3/1.

[298] O composto da invenção também pode ser administrado em conjunto com tratamentos não quimioterapêuticos tais como radioterapia, terapia fotodinâmica, terapia genética; cirurgia e dietas controladas.

[299] O compostos da presente invenção pode também ter aplicações terapêuticas na sensibilização das células tumorais à radioterapia e à quimioterapia. Assim, o composto da presente invenção pode ser usado como radiossensibilizador e/ou quimiossensibilizador ou pode ser dado em combinação com outro radiossensibilizador e/ou quimiossensibilizador. Em uma modalidades, o composto da invenção é para uso como quimiossensibilizador.

[300] O termo radiossensibilizador é definido como uma molécula administrada a pacientes em quantidades terapeuticamente eficazes para aumentar a sensibilidade das células à radiação ionizante e/ou para promover o tratamento de doenças que são tratáveis com radiação ionizante.

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75/109 [301] O termo quimiossensibilizador é definido como uma molécula administrada a pacientes em quantidades terapeuticamente eficazes para aumentar a sensibilidade das células à quimioterapia e/ou para promover o tratamento de doenças que são tratáveis com quimioterapêuticos.

[302] Muitos protocolos de tratamento de câncer atualmente empregam radiossensibilizador juntamente com a radiação de raios-x. Os exemplos de radiossensibilizadores ativados por raios x incluem, mas não se limitam aos seguintes: metronidazol, misonidazol, desmetilmisonidazol, pimonidazol, etanidazol, nimorazol, mitomicina C, RSU 1069, SR 4233, EO9,RB 6145, nicotinamida, 5-bromodesoxiuridina (BUdR), 5- iododesoxiuridina (lUdR), bromodesoxicitidina, fluorodesoxiuridina (FudR), hidroxiureia, cisplatina e seus análogos e derivados terapeuticamente eficazes.

[303] A terapia fotodinâmica (PDT) de cânceres emprega luz visível como ativador de radiação do agente de sensibilização. Exemplos de radiossensibilizadores fotodinâmicos incluem os seguintes, mas sem limitação: derivados de hematoporfirina, fotofrina, benzoporfirina, como etioporfirina de estanho, feoborbido, bacterioclorofil-a, naftalocianinas, ftalocianinas, ftalocianina de zinco e análogos e derivados terapeuticamente eficazes seus.

[304] Os radiossensibilizadores podem ser administrados em conjunto com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais dos outros compostos, incluindo, sem limitação: compostos que promovem a incorporação de radiossensibilizadores às células de destino; compostos que controlam o fluxo dos terapêuticos, nutrientes e/ou oxigênio para as células de destino; agentes quimioterápicos que atuam sobre o tumor com ou sem radiação adicional; ou outros compostos terapeuticamente eficazes no tratamento de câncer ou de outras doenças.

[305] Os quimiossensibilizadores podem ser administrados em conjunto com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais dos outros compostos, incluindo, sem limitação: compostos que promovem a incorporação dos quimiossensibilizadores às células de destino; compostos que controlam o fluxo do terapêutico, nutrientes e/ou o oxigênio para as células de destino; agentes quimioterápicos que atuam sobre o tumor ou outros compostos terapeuticamente eficazes no tratamento de câncer ou de outra doença. Os antagonistas de cálcio,

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76/109 por exemplo: verapamil, mostram-se úteis em combinaçãocom agentes antineoplásticos para estabelecer a quimiossensibilidade em células tumorais resistentes aos agentes quimioterápicos aceitos e para potencializar a eficácia desses compostos em neoplasias malignas sensíveis à droga.

[306] Para uso em terapia de combinação com outro agente quimioterápico, o composto da fórmulas (1) e um, dois, três, quatro ou mais outros agentes terapêuticos podem ser formulados, por exemplo, em conjunto em uma forma de dosagem que contém dois, três, quatro ou mais agentes terapêuticos, ou seja, em uma composição farmacêutica unitária que contém todos os componentes. Em uma alternativa, os agentes terapêuticos individuais podem ser formulados separadamente e apresentados juntos na forma de um kit, opcionalmente, com instruções para seu uso.

[307] Será apreciado a partir do exposto anteriormente que, em uma modalidade adicional, a invenção fornece uma combinação do composto de fórmula (1) e outro agente terapêutico, por exemplo, outro agente terapêutico, como definido acima.

[308] Em outra modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo o composto de fórmula (1) em conjunto com um veículo farmaceuticamente aceitável e um ou mais agentes terapêuticos, como definido acima.

[309] Nas modalidades adicionais, a invenção fornece:

• Uma combinação, conforme definida neste documento, para uso no tratamento de (para uso no alívio ou redução da incidência de) uma doença ou condição, conforme descrita neste documento, em particular um câncer.

• O uso de uma combinação, conforme definido neste documento, para a fabricação de um medicamento para o tratamento de (para uso no alívio ou na redução da incidência de) uma doença ou condição médica, tal como descrito neste documento, em particular um câncer.

• Um método de prevenção e tratamento (para uso no alívio ou na redução da incidência de) uma doença ou condição médica, tal como descrito neste documento, em particular um câncer, em um sujeito (por exemplo, um sujeito mamífero, como um ser humano, em necessidade), cujo método é composto pela administração ao sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma

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77/109 combinação, conforme definido neste documento.

• Uma combinação, tal como definida neste documento, para uso na inibição do crescimento de células tumorais (por exemplo, em um paciente).

• O uso de uma combinação, conforme definido neste documento, para a fabricação de um medicamento para inibir o crescimento de células tumorais em um paciente.

• Um método de inibir o crescimento de células tumorais (por exemplo, em um paciente), cujo método compreende contatar as células tumorais com o composto de fórmula (1) ou uma combinação, conforme definida neste documento.

[310] E m cada uma das modalidades anteriores, o composto de fórmula (1) e um ou mais outros agentes terapêuticos, pelo menos um dos quais é um agente anticancerígeno, podem ser administrados simultaneamente, separadamente ou sequencialmente no tratamento de pacientes que sofrem de câncer.

[311] E m uma modalidade adicional, a invenção fornece um método para a profilaxia ou tratamento de (ou alívio ou redução da incidência de) câncer, cujo método compreende administrar a um paciente, em combinação com radioterapia ou quimioterapia, o composto de fórmula (1).

[312] E m outra modalidade, a invenção fornece o composto de fórmula (1) para uso na profilaxia ou tratamento de (ou alívio ou redução da incidência de) câncer em combinação com radioterapia ou quimioterapia.

EXEMPLOS [313] A invenção será agora ilustrada, mas não limitada, por referência às modalidades descritas nos exemplos a seguir. Os compostos são denominados utilizando um pacote de nomeação automatizado, como AutoNom (MDL) ou uma estrutura ChemAxon para nomear ou são denominados pelo fornecedor químico. Nos exemplos, as seguintes abreviações são usadas.

[314] Seguindo-se métodos semelhantes e/ou análogos aos procedimentos gerais abaixo, prepararam-se os compostos apresentados abaixo.

[315] Os procedimentos sintéticos a seguir são fornecidos para ilustrar os métodos usados; para uma determinada preparação ou etapa, o precursor utilizado pode não derivar necessariamente do lote individual sintetizado de acordo com a etapa na descrição fornecida.

[316] Quando é descrito um composto como uma mistura de dois

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78/109 diastereoisômedos/epímeros, a configuração do estereocentro não é especificada e é representada por linhas retas.

[317] Conforme entendido por aqueles versados na técnica, os compostos sintetizados usando os protocolos conforme indicado podem existir na forma de um solvato, por exemplo: um hidrato, e/ou conter um solvente residual ou impurezas menores. Os compostos isolados como uma forma salina podem ser estequiométricos inteiros, isto é, mono ou dissais ou de estequiometria intermediária.

[318] Alguns dos compostos abaixo são isolados tal como o sal, por exemplo, dependendo do ácido utilizado no método de purificação. Alguns compostos são isolados como a base livre.

Abreviações

ca.	Aproximadamente
conc.	Concentrada
Corr.	Corrigido
DCM	Diclorometano
DIPEA	A/,A/-Diisopropiletilamina
1,4-DMB	1,4-Dimetoxibenzeno
DMF	N,N, -Dimetilformamida
cfe-DMSO	Dimetilsulfóxido deuterado
eq. EtOAc	Equivalentes Acetato de etil
FaSSGF	Estado gástrico simulado de fluido gástrico
FaSSIF	Estado intestinal simulado em jejum
g GF/F	grama Classe de filtro de microfibra de vidro
h	horas
1H	Próton 3-óxido de hexafluorfosfato de 1 - [bis(dimetilamino)metileno]-1 H-1,2,3-
HATU	triazol[4,5-b]piridínio
HPLC	Cromatografia Líquida de Alta Eficiência
Kg	Quilograma

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L	Litro Cromatografia Liquida-Espectrometria de
LC-MS	Massa
M	Molar
MeCN	Acetonitrila
MeOH	Metanol
2-MeTHF	2-Metiltetra-hidrofurano
mg Mins	miligrama Minutos
mL	mililitro
mol	Moles
MW	Peso molecular
NMP	1 - Metil-2-pi rrolidi nona
NMR	Ressonância Magnética Nuclear
TFA	Ácido trifluoroacético
th	Teoria
TLC	Cromatografia em camada fina
TPGS	Succinatode D-a-tocoferol polietilenoglicol 1000
Incorr.	Não corrigido
UV	Ultravioleta
vol	Volumes
p/v p/p wrt	Peso/volume Peso/peso No que diz respeito a
wt	Pesos

[319] BINAP, 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1 '-binaftaleno; CDI, 1,1’-

carbonildiimidazol; DCE,

1,2-dicloroetano; DCM, Diclorometano; DIPEA,

diisopropiletilamina; DMSO, dimetilsulfóxido; DMF, Ν,Ν-dimetilformamida; DMAP, (dimetilamino)piridina; EtOAc, acetato de etil; h, hora; HATU, Λ/,Λ/,Λ/',Λ/'-tetrametil0-(7-azabenzotriazol-1-il)hexafluorofosfato de urônio; HBTU, hexafluorofosfato de

3-[Bis(dimetilamino)metiliumil]-3H-benzotriazol-1-óxido; HCI, ácido hidroclórico; HPLC, cromatografia líquida de alta pressão; LC-MS, cromatografia líquida—

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80/109 espectometria de massa; LiHMDS, bis(trimetilsilil)amida de litio; mins., minutos; MeCN, acetonitrila; MS, Espectrometria de Massa; NBS, N-bromosuccinimida; NMR, Espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear; PdCl2(dppf)2, dicloreto de (1,1 '-Bis(difenilfosfino)-ferroceno)paládio(ll); Pd2(dba)3, tris(dibenzilidina acetona)paládio (0); Petro, fração de éter de petróleo com ponto de ebulição que varia de 40 - 60°C; PyBOP, hexaflorofosfato de benzotriazol-1iloxi)tris(dimetilamino)fosfônio; RT, temperatura ambiente; Sat. , Saturado; SCX, resina de troca de cátions de fase sólida; SPhos, 2-Diciclo-hexilfosfino-2',6'dimetoxibifenil; S-Phos Pd G3, metanosulfonato de (2-Diciclo-hexilfosfino-2',6'dimetoxibifenil) [2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paládio(ll); TBDMSCI, cloreto de tercbutildimetilsilil; TBTU, tetrafluoroborato de 0-(Benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'tetrametilurônio; TFA, ácido trifluoroacético; THF, Tetra-hidrofurano; XPhos, 2Diciclo-hexilfosfino-2',4',6'-triisopropilbifenil; XantPhos, 4,5-Bis(difenilfosfino)-9,9dimetilxanteno.

[320] Quando as quantidades são dadas em equivalentes em peso (peso) e equivalentes em volume (vol), 1 vol é igual a 1 ml por grama do material de origem (que é definido como tendo um valor de equivalência em peso de 1 em peso). Por exemplo, quando são usados 50 mg (0,05 g) do material de origem (definido como tendo uma equivalência em peso de 1 peso), uma quantidade de 20 vol é igual a 1 mL (0,05x20 = 1).

Métodos Sintéticos [321] Todos os materiais de origem e solventes foram obtidos de fontes comerciais ou preparados de acordo com a citação da literatura. A menos que indicado de outra forma, todas as reações são agitadas. As soluções orgânicas foram secas rotineiramente sobre sulfato de magnésio anidro. As hidrogenações foram realizadas em um hidroneador de Parr, um reator de fluxo de cubo H de Thales em condições apresentadas ou sob um balão de hidrogênio. Foram feitas reações de microondas em um reator de microondas CEM Discover e Smithcreator, aquecendo a uma temperatura constante usando uma irradiação de microondas de energia variável. Foi feita rotineiramente uma cromatografia de coluna de fase normal em um sistema de cromatografia em flash automatizado, como um sistema CombiFlash Companion ou CombiFlash RF utilizando cartuchos de silica préempacotados (230-400 de malha, 40-63 pm). O SCX foi comprado da Supelco e

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81/109 tratado com ácido clorídrico de 1M antes do uso. Salvo indicado de outra forma, a mistura de reação a ser purificada foi primeiramente diluída com MeOH e tornada ácida com algumas gotas de AcOH. Essa solução foi carregada diretamente no SCX e lavada com MeOH. O material desejado foi então eluído lavando-se com 1% de NH₃em MeOH.

[322] Quando é descrito um composto como uma mistura de dois diastereoisômedos/epímeros, a configuração do estereocentro não é especificada e é representada por linhas retas.

Dados de NMR [323] Os espectros de NMR de ¹H foram adquiridos em um espectrômetro Bruker Avance III a 400 MHz. Os picos centrais de clorofórmio-d, dimetilsulfóxidoofe ou um padrão interno de tetrametilsilano foram usados como referências. Para os dados de NMR, em que o número de prótons atribuídos é inferior ao número hipotético de prótons na molécula, presume-se que o(s) sinal(is) aparentemente ausente(s) é/são obscurecidos pelos picos de solvente e/ou água. Além disso, quando os espectros foram obtidos em solventes de NMR próticos, a permuta de prótons de NH e/ou OH com solvente ocorre e, assim, tais sinais geralmente não são observados.

Breve Descrição das Figuras [324] A Figura 1 é um difractograma de raio X de pó de uma forma cristalina (“Forma A”) de (2R) -2- (6- {5-cloro-2 - [(oxan-4-il) amino] pirimidin-4- il} -1-oxo-2,3di-hidro-1 H-isoindol-2-il) -N - [(1S) -1- (3- fluoro-5-metoxifenil) -2-hidroxietil] propanamida.

[325] A Figura 2 é um difractograma de raio X de pó de outra forma cristalina (“Forma B”) de (2R) -2- (6- {5-cloro-2 - [(oxan-4-il) amino] pirimidin-4- il} -1-oxo-2,3di-hidro-1 H-isoindol-2-il) -N - [(1S) -1- (3- fluoro-5-metoxifenil) -2-hidroxietil] propanamida.

[326] A Figura 3 é uma análise por Calorimetria de Varredura Diferencial (DSC) da forma cristalina B de (2R)-2- (6- {5-cloro-2-[(oxan-4-il)amino]pirimidin-4il}-1 -oxo-2,3-di-h idro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3- fluoro-5-metoxifenil) -2hidroxietil]propanamida.

[327] A Figura 4 é um perfil de perda de peso obtido por análise termogravimétrica da forma cristalina B de (2R)-2-(6- {5-cloro-2-[(oxan-4-

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82/109 i l)ami no] piri midin-4-il}-1 -oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3- fluoro-5metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida.

[328] A Figura 5 mostra o perfil de peso da forma cristalina B de (2R)-2-(6{5-cloro-2-[(oxan-4-il)amino]pirimidin-4-il}-1-oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoindol-2-il)-N[(1S)-1-(3-fluoro-5-metoxifenil)-2- hidroxietil]propanamida a umidades variadas obtidas por análise de sorção por vapor dinâmica.

[329] A Figura 6 mostra o espectro de ¹H-NMR do sal cloridrato amorfo do composto de fórmula (1) obtido no Exemplo 2.

[330] A Figura 7 mostra o espectro de ¹H-NMR do sal sulfato amorfo do composto de fórmula (1) obtido no Exemplo 2.

[331] A Figura 8 mostra o espectro de ¹H-NMR do sal napadisilato amorfo do composto de fórmula (1) obtido no Exemplo 2.

[332] A Figura 9 mostra o espectro de ¹H-NMR do sal edisilato amorfo do composto de fórmula (1) obtido no Exemplo 2.

[333] A Figura 10 mostra o espectro de ¹H-NMR do sal tosilato amorfo do composto de fórmula (1) obtido no Exemplo 2.

[334] A Figura 11 mostra o espectro de ¹H-NMR do sal mesilato amorfo do composto de fórmula (1) obtido no Exemplo 2.

[335] A Figura 12 mostra o espectro de ¹H-NMR do sal napsilato amorfo do composto de fórmula (1) obtido no Exemplo 2.

[336] A Figura 13 mostra o espectro de ¹H-NMR do sal besilato amorfo do composto de fórmula (1) obtido no Exemplo 2.

[337] A Figura 14 mostra o espectro de ¹H-NMR do sal mesilato isetionato do composto de fórmula (1) obtido no Exemplo 2.

[338] A Figura 15 mostra o espectro de ¹H-NMR do sal esilato amorfo do composto de fórmula (1) obtido no Exemplo 2.

[339] A Figura 16 mostra o espectro de ¹H-NMRdo sal de bromidrato amorfo do composto de fórmula (1) obtido no Exemplo 2.

EXEMPLO 1

Síntese de (2R)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4-il)aminolpirimidin-4-il}-1 -oxo2,3-dihidro-1 H-isoindol-2-il)-N-[(1 S)-1 -(3-fluoro-5-metoxifenil)-2hidroxietillpropanamida

Etapa 1: 5-bromo-2-(bromometil)benzoato de metil

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A um balão de 10 litros de cinco tubuladuras equipado com condensador, barra de agitação, entrada de N2 e borbulhador foi adicionado metil-5-bromo-2metilbenzoato (500,0 g, 2,18 mol, 1,0 eq.) e N-bromossuccinimida (Fluorochem, 388,5 g, 2,18 mol, 1,0 eq.) a uma solução agitada de 1,2-dicloroetano (1,9 L). A mistura foi aquecida a 90°C (banho em óleo). Azobisisobutironitrila (5,0 g, 0,03 mol, 0,014 eq.) foi dissolvida em DCE (100 mL) e 20 mL foram adicionados a um funil de gotejamento. Esta foi adicionada lentamente quando a mistura de reação alcançou 85 °C. Quando o refluxo violento e formação de espuma cessaram, os 80 mL restantes foram adicionados em uma porção à mistura de reação e permitidos agitara 90°C durante 1 h. NMR mostrou que a reação estava completa com cerca de 11% do material de origem ainda remanescente. A mistura de reação foi então arrefecida até a temperatura ambiente usando cardice no banho em óleo e após a temperatura interna caiu para ~30°C, a mistura de reação foi extinta com água (2,0 L). Após 5 minutos, duas misturas de reação idênticas foram combinadas, transferidas para um funil de separação e a camada orgânica foi coletada. A camada aquosa foi extraída novamente usando DCM (2x2,0 L). Todas as camadas orgânicas foram combinadas e lavadas com água (2L) e salmoura (2L), secas com MgSCU, filtradas e concentradas sob vácuo para dar um líquido laranja (1,397 kg, 104%, de 2x500 g).

Etapa 2: (2R)-2-(6-bromo-1-oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoindol-2-il)propanoato de terc-butil

O [340] A um balão de 10 litros de cinco tubuladuras equipado com condensador, barra de agitação, entrada de N2 e borbulhador foi adicionado 5-

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84/109 bromo-2-(bromometil)benzoato de metil (da etapa 1) (660 g, 2,14 mol, 1,0 eq), tbutil (2R) -2-aminopropanoato. HCI (467 g, 2,57 mol, 1,2 eq) e diisopropiletilamina (1,0 L, 6,42 mol, 3,0 eq., d = 0,742) a uma solução agitada de THF (5,0 L). A mistura foi aquecida a 80°C em um banho em óleo durante a noite. A mistura de reação foi então arrefecida até a temperatura ambiente usando cardice e depois duas misturas de reação idênticas foram vertidas para um grande funil de separação. Foi adicionada uma solução aquosa saturada de NaHCOa (5,6 L) e a mistura foi agitada durante 5 minutos. A camada orgânica foi coletada e a fase aquosa foi extraída usando acetato de etil (2x4 L). As fases orgânicas foram combinadas e lavadas com salmoura (5,6 L) e agitadas durante 3 minutos, secas sobre MgSCU, filtradas e concentradas sob vácuo para dar um sólido pegajoso residual marrom-alaranjado que foi colocado em um forno a vácuo a 40°C durante a noite. O sólido (1,4 kg) foi empastado em éter de petróleo 40-60 (2,5 L) e agitado vigorosamente durante a noite antes de ser filtrado e lavado com éter de petróleo, 2 x 300 mL) para dar um sólido amarelo (480 g).

Etapa 3: (2R)-2-[1 -oxo-6-(4A5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-2,3-dihidro-1 H-isoindol -2-iHpropanoato de terc-butil [341] A um balão de 10 litros de cinco tubuladuras, equipado com agitador aéreo, condensador, termossonda e entrada de N2 e borbulhador, foi adicionado (2fí)-2- (6-bromo-1-oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoindol-2-il)propanoato de terc-butil (da etapa 2) (500 g, 1,469 mol, 1,0 eq), bis (pinacolato) diboro (446,3 g, 1,764 mol, 1,2 eq) e acetato de potássio anidro (433,9 g, 4,409 mol, 3 eq) a uma solução agitada de dioxano (4 L). Esta foi desgaseificada com N2 durante 30 minutos antes de Pd(dppf)Cl2 (21,5 g, 0,029 mol, 0,02 eq) ser adicionado e a mistura de reação foi adicionalmente desgaseificada durante 10 minutos e então aquecida até 90°C em um banho em óleo. Esta foi permitida agitar durante a noite (OBSERVAÇÃO: após 2-3 horas a 90°C, a reação realiza a exotermia de 88°C a 104°C com grande refluxo e a solução passa de uma solução vermelho alaranjada para marrom escuro

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85/109 durante ~30 minutos antes de arrefecer-se novamente para 90°C). As reações foram arrefecidas até a temperatura ambiente usando cardice antes de serem combinadas e filtradas através de uma almofada de celite (sinter 4L, almofada de 2 polegadas de espessura). A almofada foi lavada com dioxano (1 L) até toda a cor ter sido lavada.

Etapa 4: (2R)-2-[6-(2,5-dicloropirimidin-4-il)-1 -oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoindol2-il]propanoato de terc-butil

[342] A solução da Etapa 3 foi então reduzida para metade e cada metade colocada em um balão de cinco tubuladuras equipado da mesma maneira que na etapa anterior. A este balão de cinco tubuladuras foi adicionado 2,4,5tricloropirimidina (404,4 g, 252,8 mL, 2,205 mol, 1,5 eq, D = 1,6), carbonato de potássio (609,4 g, 4,409 mol, 3 eq) e, em seguida, desgaseificado com N2 durante 30 minutos antes da adição de Pd(dppf)Cl2 (21,5 g, 0,029 mol, 0,02 eq) e adicionamente desgaseificado durante 10 minutos. A mistura de reação foi aquecida a 65°C em um banho em óleo e depois foi adicionada água (500 mL) através de um funil de gotejamento ao longo de 5 minutos (Observação: exotermia de 62°C a 72°C durante alguns minutos após a adição inicial de água). A reação foi deixada durante a noite. As reações foram arrefecidas até a temperatura ambiente usando cardice e filtradas através de uma almofada de celite (sinterização de 4 L, almofada de ~3 polegadas de espessura), lavando a almofada com DCM (2 L). O filtrado foi então concentrado até quase a secura para dar um material bruto de alcatrão castanho escuro (1909 g).

[343] O material bruto foi dividido em dois e seco sobre uma coluna de silica e eluído com 6 x 4 L de acetato de etil a 40%/gasolina. (Observação: todas as frações foram misturadas de forma combinada e concentrada até quase a secura TLC do produto em 30% de acetato de etil/gasolina Rf = ~ 0,5). A mistura marrom restante foi arrefecida até a temperatura ambiente e gasolina (4 L) foi adicionada e agitada no rotativo durante 2 horas para cristalizar 0 produto. Esta foi filtrada e 0

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86/109 bolo foi lavado com gasolina (2x2 L) para dar um sólido branco (548 g).

[344] Alternativamente, (2R)-2-[6-(2,5-dicloropirimidina-4-il)-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindolin-2-il]propanoato de terc-butil (composto intermédiário (4)) pode ser preparado conforme descrito em PCT/IB2016/001507 (número de publicação internacional WO2017/068412) - ver Preparações 76, 89 e 94.

[345] (2R)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4-il)amino]pirimidin-4-il}-1-oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5-metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida amorfo (Composto 1) foi sintetizado de (2fí)-2-[6-(2,5-dicloropirimidin-4-il)-1 -oxo2,3-di-hidro-1 H-isoindolin-2-il]propanoato de terc-butil (da Etapa 4) de acordo com o esquema sintético mostrado abaixo:

Etapa 5: (2fí)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4-il)aminolpirimidin-4-il}-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-2-il)-N-[(1 S)-1 -(3-fluoro-5-metoxifenil)-2hidroximetillpropanamida

Estágio 1Oesprotecão BOC de (4)

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[346] A uma solução de (4) (fornecida por Manchester Organics) (1,0 em peso) em tolueno (13 vol) a 15 a 25°C foi adicionado ácido clorídrico concentrado (1 vol) seguido de uma lavagem em linha de tolueno (1 vol). A mistura foi aquecida a 35 a 40°C e agitada a esta temperatura até a compleção da reação ser alcançada (critério de aprovação:< 2,0% de área de (4), tempo de reação esperado de 16 a 24 horas). A suspensão foi concentrada sob pressão reduzida até 50°C até se obter um sólido úmido. Tolueno (3x10 vol) foi carregado com concentração sob pressão reduzida até 50°C para dar um sólido úmido após cada carga sucessiva. Tolueno (4 vol) foi carregado e a suspensão foi girada no evaporador rotativo em pressão atmosférica a até 50°C durante 10 a 20 minutos. O balão foi removido do evaporador rotativo e o conteúdo foi envelhecido durante pelo menos 1 h a 15 a 25°C. Os sólidos foram coletados por filtração, lavados com tolueno (2x2 vol) e secos sob nitrogênio até que o teor de tolueno fosse de < 6,0% p/p e o teor de água fosse de < 2,0% p/p. O intermediário (5) foi isolado como um sólido esbranquiçado a bege pálido (74 a 95% th, 64 a 82% p/p).

Estágio 2 Acoplamento de intermediário (5) com 4-aminotetra-hidropirano

(6) [347] A uma solução de (5) (1,0 em peso, 1,0 mol eq) em 1 -metil-2pirrolidinona (NMP) (9,5 vol) a 15 a 25°C adicionou-se carbonato de potássio (0,86 em peso, 2,2 mol eq), seguido por 4-aminotetra-hidropirano (6) (0,4 vol, 1,3 mol eq) a 15 a 40°C e um enxaguamento em linha de NMP (0,5 vol). A mistura foi aquecida a 80 a 95°C e agitada a esta temperatura até a compleção da reação ser alcançada (critério de aprovação:< 1,0 mol% Intermediário (5), tempo de reação de 4 a 6

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88/109 horas). Arrefeceu-se a mistura para 15 a 25°C e 3M de ácido clorídrico (10 vol) foi carregado, mantendo a temperatura entre 15 e 30°C. Diclorometano (DCM) (10 vol) foi adicionado e as fases foram separadas. A fase aquosa ácida foi extraída de volta com DCM (5 vol) e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com água purificada (8x10 vol) até que o conteúdo de NMP fosse controlado para < 15,0% p/p. A fase orgânica foi lavada com solução de NaCI a 13% p/p (10 vol), tratada com carvão ativado (0,3 em peso) e seca sobre sulfato de magnésio (1,0 em peso). A mistura foi filtrada para remover o agente de secagem, lavada com DCM (2x2 vol) e os filtrados combinados foram concentrados sob pressão reduzida a até 35 °C para render (2) como uma espuma castanha clara (74 a 90% em peso, 88 a 107% p/p).

Estágio 3:Preoaração do Composto 1

/=⁷ NH₂ . HCI f Composto 1 (3) [348] A uma solução de (2) (1,0 em peso, 1,0 mol eq) em DCM (12,5 vol) foi adicionada amina (3) (0,68 em peso, 1,27 mol eq). A suspensão foi arrefecida a 10 a 15°C e DIPEA (1,67 vol, 4,0 mol eq) foi carregado. A solução resultante foi agitada durante 5 a 10 minutos antes da adição em porções de HATU (1,15 peso, 1,27 mol eq), mantendo a temperatura de reação <25°C. A mistura foi agitada a de 15 a 25°C até que se considerou completa por HPLC (área a <0,5% (2), tipicamente 1 h). Após a compleção, a reação foi concentrada sob pressão reduzida até 38°C para dar um óleo laranja espesso e móvel. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (10 vol) e lavado com água purificada (10 vol), solução de cloreto de amônio 25% p/p (2x10 vol), solução de 8% p/p de NaHCOa (2x10 vol) e solução de 13% p/p de NaCI (6x10 vol), então foi seco sobre MgSO4 (1,0 em peso). O sólido foi removido por filtração e o bolo de filtração foi lavado com acetato de etil (2x2 vol). Os filtrados foram concentrados em um evaporador rotativo até 40°C para dar o Composto 1 bruto como uma espuma amarela pálida. O Composto Bruto 1 foi purificado por cromatografia do tipo flash seca.

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89/109 [349] A conversão total de (2) para Composto 1 foi também observada quando submetida às condições acima, mas em que 1-etil-3-(3dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI) foi usada como o agente de acoplamento em vez de HATU, 4-dimetilaminopiridina (4 -DMAP) foi usado como a base em vez de DIPEA e a dimetilformamida (DMF) foi usada como solvente em vez de DCM.

Procedimento cromatoqráfico:

[350] A silica (20 pesos) foi carregada na coluna do tipo flash seca e a silica foi lavada e empacotada ao eluir através de acetato de etil (2 x 20 vol típico). O Composto 1 bruto (1% em peso) foi dissolvido em DCM (4 vol) e cuidadosamente carregado na coluna. A coluna foi então eluída como se segue:

• EtOAc puro 40 x 20 vol F1-240 • 1 % de MeOH em EtOAc 10 x 20 vol F41 -50 • 5 a 10% de MeOH em EtOAc 3 x 20 vol coluna do tipo flash F51 -53 [351] Todas as frações coletadas foram analisadas por HPLC e o produto tipicamente foi eluído nas frações 12 a 45. Apenas as frações que pareciam ser as mais limpas e mais intensas por TLC (por exemplo, frações 15 a 25 na faixa de produtos de eluição do exemplo acima) foram juntamente agrupadas na ausência de dados de HPLC. As frações contendo o produto externo foram analisadas por HPLC para determinar se estas eram de pureza adequada para combinar com as frações principais do produto. Depois de todas as frações terem sido combinadas e concentradas em uma espuma ou a um volume baixo, o produto foi diluído com acetato de etil (por exemplo 10 vol), agitado para dar uma solução e depois clarificado através de papel de filtro de fibra de vidro. Os filtrados foram então concentrados para dar Composto 1 amorfo como uma espuma esbranquiçada a amarelo pálida (65 a 85% em th, 91 a 119% p/p).

EXEMPLO 2

Preparação dos Sais Amorfos do Composto 1 [352] Soluções estoque dos vários contraíons foram preparadas em 2propanol. A solução estoque relevante (500μΙ, 10vol) foi carregada em uma solução do composto 1 (preparada de acordo com o exemplo 1) em acetato de isopropil (2,5 mL, 50 vol) e foi agitada. Os sólidos que não cristalizaram ou originaram precipitados fracos foram arrefecidos, concentrados por evaporação ou posteriormente tratados com éter t-butilmetilico (TBME).

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90/109 [353] Os sólidos foram isolados por filtração, secos sob uma corrente de nitrogênio por 96 h, descarregados e analisados por ¹H NMR e XRPD (ver a tabela seguinte).

Contraíon Ácido	Estequiometri a de Contraíons	Nome de sal de uso comum	Composto 1 :Estequiometri a do contraíon, conforme determinado por 1H NMR (Espectro de 1H NMR)	Padrão de XRPD
Forma não ionizada	N/A	De Base Livre	N/A	Amorfo
Ácido clorídrico 4M (sol. 1,4dioxano, 99%)	1	Cloridrato	(Ver a Figura 6)	Amorfo
Ácido sulfúrico (95%)	2	Sulfato	(Ver Figura 7)	Amorfo
Ácido naftaleno-1,5dissulfónico tetra-hidratado (97%)	1	Napadisilate	1 a 1 (Ver Figura 8)	Amorfo
Ácido etano- 1,2dissulfônico triidratado (98%)	1	Edisilato	1 a 1 (Ver Figura 9)	Amorfo

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Mono-hidrato de ácido 4toluenossulfôni CO	1	Tosilato	1 a 1 (Ver Figura 10)	Amorfo
Ácido metanossulfôni co (99,5%)	1	Mesilato	1 a 1 (Ver Figura 11)	Amorfo
Mono-hidrato de ácido naftaleno-2sulfônico (99%)	1	Napsilato	1 a 1 (Ver a Figura 12)	Amorfo
Ácido benzenossulfô nico (90%)	1	Besilato	1 a 1 (Ver a Figura 13)	Amorfo
Sal de sódio do ácido 2hidroxietano sulfônico (98%)	1	Isetionato	(Ver Figura 14)	Amorfo
Ácido etanossulfônic o (95%)	1	Esilato	1 a 1 (Ver Figura 15)	Amorfo
Ácido bromídrico (99%), (48% em água)	1	Hidrobrometo	(Ver Figura 16)	Amorfo

EXEMPLO 3

Preparação de Formas Cristalinas do Composto 1

Exemplo 3A - Preparação da Forma Cristalina A [354] O sal cloridrato de (2R)-2-(6- {5-cloro-2-[(oxan-4-il)amino]pirimidin-4

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92/109 il}-1 -oxo-2,3-di-h idro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5-metoxifenil)-2hidroxietil]propanamida (preparada no Exemplo 2) foi suspensa em água purificada (35 volumes) a 70°C durante um período de 96 horas. O sólido foi isolado por filtração, seco sob uma corrente de nitrogênio durante 96 h, descarregado e analisado por XRPD (ver Figura 1).

Exemplo 3B - Preparação da Forma Cristalina B (Método I) [355] O sal cloridrato de (2R)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4-il)amino]pirimidin-4-il}1 -oxo-2,3-di-h idro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5-metoxifenil)-2hidroxietil]propanamida (preparada no Exemplo 2) foi suspensa em água purificada (2 mL, 20 vol) a 18 a 23°C. As soluções foram agitadas a 45°C a 50°C durante 20 hrs. A temperatura foi então baixada para 30 a 35°C e a solução foi agitada durante mais 96 horas. O XRPD do sólido obtido mostrado foi consistente com o padrão de XRPD da Figura 2.

Exemplo 3C - Preparação da Forma Cristalina B (Método II) [356] O sal de cloridrato de (2R)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4- il)amino]pirimidin-

4-i I}-1 -oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5-metoxifenil)-2hidroxietil]propanamida (preparada no Exemplo 2) foi suspensa em água purificada (20 vol) e a mistura foi agitada a 40 sob nitrogênio durante 20 hrs. O 2-propanol (7,6 vol) foi carregado e a mistura foi agitada a 40°C durante 20 hrs. O progresso da conversão foi monitorado por XRPD. O XRPD do sólido obtido mostrado foi consistente com o padrão de XRPD da Figura 2.

Exemplo 3D - Preparação da Forma Cristalina B (Método III) [357] (2R)-2-(6- {5-cloro-2-[(oxan-4-i l)am i no] pi ri m idi n-4-i I}-1 -oxo-2,3-di- hidro-1 H-isoindol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5-metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida (como preparado no Exemplo 1) (100 mg, 1,0% em peso) foi carregado em um vaso, seguido pelo acetato de etil ou tolueno (15 vol) e éterterc-butilmetílico (15 vol). A suspensão foi agitada durante 7 dias a 30°C. Após este tempo o produto foi isolado por filtração, lavado com solvente de maturação reciclado, seco sob uma corrente de nitrogênio a 18-23°C e analisado por XRPD para evidência de cristalização. O padrão de XRPD do sólido obtido foi consistente com o padrão de XRPD da Figura 2.

EXEMPLO 4

Caracterização Adicional da Forma Cristalina B do Composto 1

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93/109 [358] A Forma B cristalina do Composto 1 obtida nos Exemplos 3B, 3C e 3D foi estudada usando Difração de Raio X em Pó, Calorimetria de Varredura Diferencial, Análise Termogravimétrica e Sorção Dinâmica de Vapor.

Exemplo 4A - Difração de Raios X em Pó [359] Cristais do Composto 1 de Forma B cristalino foi preparado de acordo com o método do Exemplo 3. A análise por difração de raios X em pó (XRPD) foi realizada usando um difratômetro de pó Bruker D2 Phaser equipado com um detector LynxEye. As amostras foram submetidas a uma preparação mínima, mas, se necessário, foram moídas levemente em um pilão e argamassa antes da aquisição. Os espécimes foram localizados no centro de um porta-amostras de silício dentro de uma bolsa de 5 mm (cerca de 5 a 10 mg). As amostras foram continuamente centrifugadas durante a coleta de dados e digitalizadas usando um tamanho de etapa de 0,02° dois theta (2Θ) entre a faixa de 4^o a 40° dois theta e um tempo de etapa de 34,5 segundos. Os dados foram processados usando Bruker Diffrac. Suite. O Difratograma de Raios X de Pó da Forma B cristalina do composto é apresentado na Figura 2 e os ângulos de difração e intensidades de 2Θ associados a cada pico são mostrados na tabela abaixo.

Ângulo de Difração (°)	Intensidade Relativa
8,75	23
12,00	13
13,03	23
13,82	39
14,05	100
14,43	20
16,89	12
17,31	22
19,34	36
20,56	85
21,25	45
23,52	18
23,97	74
24,15	71

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26,18	18
28,74	22
29,84	13

Exemplo 4B - Calorimetria de Varredura Diferencial (DSC) [360] Os cristais do Composto 1 de Forma B cristalino foi preparado de acordo com o método do Exemplo 3. Um instrumento Mettler Toledo DSC 821 foi usado para a análise térmica operando com o software STAReTM. A análise foi realizada em placas de alumínio abertas de 40μΙ_, sob nitrogênio e amostras variaram de 1 a 10 mg. Tipicamente, a análise foi realizada ao longo de uma faixa de temperatura de 20°C a 250°C a uma temperatural gradual de 10°C/minuto. A varredura DSC do composto cristalino é mostrada na Figura 3.

Exemplo 4C - Análise Termoqravimétrica (TGA) [361] Cristais do Composto 1 de Forma B cristalino foi preparado de acordo com o método do Exemplo 3. Colocaram-se cerca de 7 mg de amostra em uma placa TGA de platina HT que tinha sido limpa usando um maçarico de butano e tarada usando a função de tara automática do instrumento. As amostras foram aquecidas sob atmosfera de nitrogênio de 25°C a 800°C a uma taxa de 10°C/min. O perfil de perda de peso do composto cristalino é mostrado na Figura 4.

Exemplo 4D - Análise de Sorção de Vapor Dinâmico [362] Cristais do Composto 1 de Forma B cristalino foi preparado de acordo com o método do Exemplo 3. Aproximadamente 20 mg de amostra foram pesados em uma placa de alumínio e carregados em um instrumento DVS Intrinsic mantido a 25°C. A amostra foi deixada a equilibrar durante três horas a 0% de RH antes de aumentar a umidade de 0-30% de RH a 5% de incrementos. Isto foi seguido de aumento de 10% até 90% de RH. Um perfil de rampa semelhante foi usado para a fase de dessorção. Em cada etapa, uma taxa de mudança em massa por unidade de tempo (dt) de 0,002%/min foi definida como o parâmetro de equilíbrio. O perfil de sorção/dessorção de vapor do composto é mostrado na Figura 5.

Exemplo 4E - Estudos de Difração de Raios X de Cristal Único [363] A estrutura de raios X de cristal único da Forma B do composto de fórmula (1) foi determinada a 100 K usando um cristal obtido por evaporação lenta de acetato de isopropil.

[364] Os dados foram coletados em um difratômetro Rigaku Oxford

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Diffraction Supernova Dual Source, Cu at Zero, Atlas CCD equipado com urn dispositivo de arrefecimento Oxford Cryosystems Cobra. Os dados foram coletados usando Cu Κα. As estruturas foram solvidas e refinadas usando o conjunto Bruker AXS SHELXTL. Detalhes completos podem ser encontrados na tabela abaixo. Salvo indicação em contrário, os átomos de hidrogênio ligados ao carbono foram colocados geometricamente e permitidos refinar com um parâmetro de deslocamento isotrópico de condução. Os átomos de hidrogênio ligados a um heteroátomo foram localizados em uma síntese de Fourier diferente e foram permitidos refinar livremente com um parâmetro de deslocamento isotrópico. Um difratograma de referência para a estrutura cristalina foi gerado usando mercúrio (CF a. Macrae, “Mercury: visualization and analysis of crystal structures,” J. Appl. Cryst. , Vol. 39, pp. 453-457, 2006).

Coleta de Dados e Refinamento de Estruturas

Difratômetro	SuperNova, Dual, Cu at Zero, Atlas
Fonte de Radiação	Fonte de Raios X SuperNova (Cu), CuKa
Método de Coleta de Dados	Varreduras
Faixa theta para coleta de dados	3,460 a 66,589°
Faixa de índice	-14 < Λ< 15, -10 < 9, -14 </< 15
Reflexões coletadas	24752
Reflexões independentes	4834 [R (int) = 0,0371]
Cobertura de Reflexões Independentes	97,4%
Correção de Absorção	Semi-empírica de equivalentes
Transmissão max. e min.	1,00000 e 0,80872
Técnica de solução de estrutura	Métodos Diretos
Solução de Estrutura/Programa de Refinamento	SHELXTL (Sheldrick, 2013)
Técnica de Refinamento	Ouadrados mínimos de matriz total em F2

Dados do Cristal

Solvente de cristalização	Acetato de isopropil
Método de cristalização	Evaporação lenta

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Fórmula empírica	C29H33CIFN5O6
Peso da Fórmula	602,05
Temperatura	100(2) K
Comprimento de onda	1,54178 Á
Tamanho do Cristal	0,180 x 0,060 x 0,050 mm
Hábito Cristalino	Bloco Incolor
Sistema cristalográfico	Monoclínico
Grupo Espacial	P2i
Dimensões de célula unitária	a = 12,6616 (2) À a = 90° b = 9,0139 (2) Â b = 103,2380 (10)° c= 13,1214 (2) Â g = 90°
Volume	1457,76 (5) À3

[365] Verificou-se que os cristais eram monoclínicos, grupo espacial P21 com o R1 final =[l>2s(l)] = 2,93%.

[366] A estereoquímica absoluta do composto foi determinada usando os dados de difração e foi confirmado conforme descrito na fórmula (1) neste documento com o parâmetro Flack = 0,004 (7).

[367] Na unidade assimétrica existe uma molécula do composto de fórmula (1) e uma molécula de água, ambas totalmente ordenadas, confirmando que a Forma B cristalina é um mono-hidrato do composto de fórmula (1).

EXEMPLO 5

Determinações da Solubilidade da Forma Cristalina B do Composto (1) em Solventes Aquosos [368] As solubilidades da forma cristalina B e da forma amorfa do composto de fórmula (1) foram determinadas em água purificada e tampões na mesma concentração em 24 hrs de tempo de agitação a 18 a 23°C. O pH e as temperaturas das soluções foram monitorados para confirmar que o desvio de pH não ocorreu no final do experimento.

Procedimento Geral [369] As amostras do composto de fórmula (1) (50 mg) foram, cada uma, suspensas em água purificada (2 mL) ou o tampão apropriado e agitadas à temperatura ambiente (18-23 °C) durante 20 a 24 hrs. Após este período, as pastas foram centrifugadas, diluídas, se apropriado, por diluente de amostra para HPLC

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97/109 (acetonitrila/água, 1/1, v/v) e analisadas pela área de pico de HPLC. Os valores medidos foram comparados com uma curva de calibração relevante para o composto de fórmula (1). As solubilidades aproximadas foram calculadas e os fatores de compensação foram aplicados para os fatores de diluição apropriados e os ensaios em % p/p. O fator de diluição garantiu que os valores da área de pico caíssem dentro das faixas desejadas da curva de calibração.

[370] O tampão de sólido que permaneceu no tubo da centrífuga foi seco em estufa de vácuo e analisado por XRPD. Se a amostra exibisse qualquer evidência de cristalinidade diferente do padrão de difração esperado para a forma cristalina do composto (1), análises adicionais por ¹H NMR foram realizadas para confirmar a identidade química.

[371] As preparações dos tampões usados no estudo são descritas abaixo:

[372] pH 1,2 - Mistura de 50mL de solução de 0,2M de cloreto de potássio com 85mL de solução de 0,2 M de ácido clorídrico.

[373] pH 2 - Mistura 50 mL de solução 0,2M de cloreto de potássio com 13 mL de solução de 0,2M de ácido clorídrico.

[374] pH 3 - Mistura de 100 mL de 0,1 M de hidrogenoftalato de potássio com 44,6 mL de solução de 0,1 M de ácido clorídrico.

[375] pH 4 - Mistura de 100 mL de 0,1 M de hidrogenoftalato de potássio com 0,2 mL de solução de 0,1 M de ácido clorídrico.

[376] pH 5 - Mistura de 100 mL de 0,1 M de hidrogenoftalato de potássio com 45,2 mL de solução de 0,1 M de hidróxido de sódio.

[377] pH 6 - Mistura de 100 mL de 0,1 M de ortofosfato de di-hidrogênio potássio com 11,2 mL de solução de 0,1 M de hidróxido de sódio.

Γ3781 pH 7 - Mistura de 100 mL de 0,1 M de ortofosfato de di-hidrogênio potássio com 58,2 mL de solução de 0,1 M de hidróxido de sódio.

Γ3791 pH 8 - Mistura de 100 mL de 0,1 M de ortofosfato de di-hidrogênio potássio com 93,4 mL de solução de 0,1 M de hidróxido de sódio.

Resultados

Entrad a

Pureza Químic a de Entrad

Tampão

pH de Equilíbrio/Mediçõ es de T°C (t=24h)

Solubilidade s medidas (mg/mL),

Termo Descritivo

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98/109

	a (% de área)
Forma Amorfa do Composto de Fórmula (1)	97,48	Água purificad a	7,73/20,6	<0,1 mg/mL (0,0234 mg/mL)	Praticament e insolúvel
Tampão de pH 1,2	1,12/20,2	>0,1 mg/ml (0,1249 mg/ml)	Ligeirament e solúvel
Tampão de pH 2	2,00/19,2	<0,1 mg/mL (0,0226 mg /mL)	Praticament e insolúvel
Tampão de pH 3	3,07/20,2	<0,1 mg/mL (0,0257 mg/mL)	Praticament e insolúvel
Tampão de pH 4	3,98/19,1	<0,1 mg/mL (0,0418 mg/mL)	Praticament e insolúvel
Tampão de pH 5	4,99/19,4	<0,1 mg/mL (0,0268 mg/mL)	Praticament e insolúvel
Tampão de pH 6	6,01/19,4	<0,1 mg/mL (0,0149 mg/mL)	Praticament e insolúvel
Tampão de pH 7	6,97/21,0	<0,1 mg/ml (0,0136 mg/ml)	Praticament e insolúvel
Tampão de pH 8	8,16/19,8	<0,1 mg/mL (0,0138 mg/mL)	Praticament e insolúvel

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99/109

Entrad a	Pureza Químic a de Entrad a (% de área)	Tampão	pH de Equilíbrio/Mediçõ es de T°C (t=24h)	Solubilidade s medidas (mg/mL)	Termo Descritivo
Forma Cristalina B do Composto de Fórmula (1)	99,10	Água purificad a	7,88/22,1	<0,1 mg/mL (0,0187 mg/mL)	Praticament e insolúvel
Tampão de pH 1,2	1,11/20,8	<0,1 mg/mL (0,0154 mg/mL)	Praticament e insolúvel
Tampão de pH 2	2,01/20,4	<0,1 mg/mL (0,0034 mg/mL)	Praticament e insolúvel
Tampão de pH 3	3,08/20,7	<0,1 mg/mL (0,0045 mg/mL)	Praticament e insolúvel
Tampão de pH 4	4,00/20,4	<0,1 mg/mL (0,0049 mg/mL)	Praticament e insolúvel
Tampão de pH 5	5,00/20,7	<0,1 mg/mL (0,0031 mg/mL)	Praticament e insolúvel
Tampão de pH 6	6,02/20,5	<0,1 mg/mL (0,0027 mg/mL)	Praticament e insolúvel
Tampão de pH 7	6,98/20,5	<0,1 mg/mL (0,0017 mg/mL)	Praticament e insolúvel
Tampão de pH 8	8,02/20,2	<0,1 mg/mL (0,0020	Praticament e insolúvel

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100/109

		mg/mL)
Água purificad a	7,71/20,4	<0,1 mg/mL (0,0012 mg/mL)	Praticament e insolúvel
Tampão de pH 1,2	1,19/19,5	<0,1 mg/mL (0,0164mg/m L)	Praticament e insolúvel

Conclusões e observações [380] As formas cristalina e amorfa do composto de fórmula (1) eram praticamente insolúveis em tampões de pH 1,2 a 8,0 (ca <0,1 mg/mL).

Determinações da Solubilidade da Forma Cristalina B do Composto (1) em Solventes Não Aquosos

Procedimento [381] A Forma B do Composto (1), preparada conforme descrito no Exemplo 3, foi carregada no solvente apropriado (2 mL) em intervalos de aproximadamente 1 hora. As soluções foram intencionalmente saturadas e permitidas agitar durante 72 h de 18 a 23°C. Após este tempo, as suspensões foram centrifugadas, seus sobrenadantes foram amostrados, diluídos em conformidade e as áreas de pico dos analitos correspondentes foram medidas por HPLC e comparadas com as dos calibres padrão. As solubilidades aproximadas foram calculadas e as solubilidades foram verificadas fisicamente em uma base livre de solvente anidro para confirmar que os resultados eram consistentes.

Observações e Resultados

	Etanol (2 mL)	Glicerol (2 mL)	PEG 400 (2 mL)	Propilenoglicol (2 mL)
Primeira carga /agitação 1 h em 18 a23°C	198,74 mg	200,30 mg	198,96 mg	200,91 mg
Segunda carga /agitação +1 h em 18 a	200,07 mg	—	200,78 mg	201,03mg

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101/109

23° C
Terceira carga /agitação +1,5 h em 18 a23°C	200,94 mg	—	200,27 mg	201,17 mg
Quarta carga /agitação +72h em 18 a 23°C	200,12 mg	—	—	199,76 mg
Quinta carga /agitação +2h em 18 a 23°C	200,34 mg	—	—	—

[382] As soluções saturadas foram centrifugadas e foram adicionados 10ΟμΙ do sobrenadante clarificado a 250 mL de volumetria (etanol) ou 100 mL de volumetria (restante) e foram acrescentadas ao volume do diluente da amostra. As amostras diluídas foram então analisadas por área de pico de HPLC e as solubilidades máximas estimadas foram calculadas e são relatadas na tabela abaixo.

Solvente	Solubilidades máximas estimadas (mg/mL), em 18 a 23°C
Etanol	337
Glicerol	5
PEG 400	229
Propilenoglicol	289

[383] Para confirmar que as solubilidades estimadas eram da ordem correta de grandeza, foram preparadas soluções até as concentrações máximas estimadas e as misturas foram agitadas durante a noite sob as mesmas condições para confirmar a dissolução.

Conclusão [384] O composto de fórmula (1) mostrou ter uma solubilidade significativamente maior em etanol, PEG 400 e propilenoglicol do que em água.

EXEMPLO 6

Formulações Líquidas -1

Solventes

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102/109

a. Propilenoglicol - P4347 SIGMA-ALDRICH (atende às especificações de testes USP)

b. Etanol - 29221 SIGMA-ALDRICH (testado de acordo com Ph. Eur.)

c. Super Refined ™ PEG 400 - Croda (JP, USP-NF, PhEur)

d. Combinação de propileno glicol e etanol, 75: 25 (% p/p)

e. Combinação de propilenoglicol e etanol, 85:15 (% p/p)

Protocolo [385] O composto de fórmula (1) é incubado em cada um dos solventes a 500 mg/mL em frascos de vidro (a 25°C usando um bloco aquecedor RS9000) e deixado sob agitação constante. Em T = 1,3, 7, 24 e 48 horas.

[386] A suspensão resultante é ultracentrifugada (isto é, 500 a 1000 μΙ de tamanho da amostra) durante 15 minutos a 13. 000 rpm e inspecionada visualmente para confirmar a clarificação. Se não for obtida uma clarificação satisfatória, então o procedimento de centrifugação é repetido para sedimentar qualquer composto não dissolvido restante. O sobrenadante é amostrado como relevante (por exemplo, 100 μΙ a 1000 μΙ), diluído conforme apropriado e analisado por HPLC-UV, a fim de estabelecer a concentração real.

EXEMPLO 7

Formulações Líquidas - II [387] As seguintes formulações líquidas foram preparadas.

[388] 7-1. Composto de fórmula (1) dissolvido em 5g de TPSG e 5g de propilenoglicol.

[389] 7-2. Composto de fórmula (1) dissolvido em 6g de TPSG e 6g de propilenoglicol.

[390] 7-3. Composto de fórmula (1) dissolvido em 2,5g de TPSG e 7,5g de propilenoglicol.

[391] 7-4. Composto de fórmula (1) dissolvido em TPGS (20% p/p), Etanol (15% p/p) e propilenoglicol (65% p/p) [392] 7-5. Composto de fórmula (1) dissolvido em propilenoglicol (100% p/p) [393] 7-6. Composto de fórmula (1) dissolvido em TPGS (10% p/p), Etanol (10% p/p) e propilenoglicol (80% p/p) [394] A concentração do composto de fórmula (1) em cada formulação foi de 100 mg/mL.

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103/109 [395] Cada formulação foi submetida a estudos de diluição em fluido gástrico simulado e fluido intestinal simulado pelos métodos descritos abaixo. Nos testes, as concentrações do composto de fórmula (1) foram determinadas usando o seguinte método HPLC-UV.

Parâmetros do Método LC [396] Coluna:Halo C18 150 x 4,6 mm; 2,7 pm [397] Inj. Volume:5 pL [398] Detecção:UV em 221 nm [399] Fase Móvel A:Água/acetonitrila/TFA (5/95/0,05 v/v/v) [400] Fase Móvel B:Água/acetonitrila/TFA (95/5/0,5 v/v/v)

Tempo (minutos)	%A	%B
0,0	100	0,0
2,0	100	0,0
24,0	60	40
28,0	50	50
33,0	0,0	100
36,0	0,0	100
36,1	100	0,0
40,0	100	0,0

[401] Taxa de fluxo:1,0 mL/min [402] Temperatura da coluna:40°C [403] Tempo de Execução:40 minutos [404] Tempo de lntegração:36 minutos [405] Frasco de lavagemOiluente da amostra

Estudos de Diluição [406] Cada formulação foi carregada em 50mL de FaSSGF (preparada de acordo com o método descrito em http://biorelevant. com/fassif-fessif-fassgf/howto-make/) e amostrada em três momentos (T = 5 minutos, 15 minutos e 30 minutos) com retirada de pelo menos 2mL por amostra.

[407] A mistura foi posteriormente diluída com 44 mL de fluido intestinal simulado em estado de jejum FaSSIF (preparada de acordo com o método descrito em http://biorelevant. com/fassif-fessif-fassgf/how-to-make/) e amostrada em oito momentos (T = 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 3 horas, 5

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104/109 horas e 7 horas). As amostras foram analisadas quanto ao composto de fórmula (1) por HPLC-UV.

[408] Para as Formulações 7-1 e 7-2, cerca de 65% do composto de fórmula (1) permaneceu solubilizado após 30 minutos de diluição em FaSSGF. Na etapa de diluição seguinte, quando se mudou para FaSSIF, a quantidade do composto solubilizado permaneceu em torno de 50% até 3 horas e depois diminuiu gradualmente. Extrapolando dos resultados deste estudo de diluição para um “cenário de diluição humana”, era esperado que >60% de uma dose de 1000 mg do composto de fórmula (1) se dissolvesse na Formulação 7-1 ou Formulação 7-2 (isto é, em torno de 600 mg) e permanecería em solução ao entrar no estômago.

[409] Para a Formulação 7-3, após 30 minutos de diluição em FaSSGF, cerca de 33% da droga permaneceu ainda solubilizado. Na etapa de diluição seguinte, quando se mudou para FaSSIF, a quantidade da droga solubilizada permaneceu em torno de 27% até 3 horas e depois diminuiu gradualmente. Extrapolando dos resultados deste estudo de diluição para um “cenário de diluição humana”, era esperado que >30% de uma dose de 1000 mg se dissolvesse na Formulação 7-3 (isto é, cerca de 300 mg) e permanecesse em solução quando entrasse no estômago.

[410] Para a Formulação 7-4, após 30 minutos de diluição em FaSSGF, cerca de 30% da droga permaneceu ainda solubilizada. Na etapa de diluição seguinte, quando se mudou para FaSSIF, a quantidade da droga solubilizada permaneceu em torno de 24% até 3 horas e depois diminuiu gradualmente. Extrapolando dos resultados deste estudo de diluição para um “cenário de diluição humana”, era esperado que >30% de uma dose de 1000 mg se dissolvesse na Formulação 7-4 (isto é, cerca de 300 mg) e permanecesse em solução quando entrasse no estômago.

[411] Para a Formulação 7-5, após 30 minutos de diluição em FaSSGF, cerca de 2% da droga permaneceu ainda solubilizada. Na etapa de diluição seguinte, quando se mudou para FaSSIF, a quantidade da droga solubilizada permaneceu em torno de 2%.

[412] Para a Formulação 7-6, após 30 minutos de diluição em FaSSGF, cerca de 17% da droga permaneceu ainda solubilizada. Na etapa de diluição seguinte, quando mudando para FaSSIF, a quantidade da droga solubilizada

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105/109 permaneceu em torno de 11%.

[413] A formulação 7-6 foi considerada particularmente vantajosa. A versão placebo (isto é, veículo sozinho e nenhum composto de fórmula (1) presente) desta formulação formou inicialmente um líquido claro contendo algum sedimento, porém o sedimento foi redissolvido por aquecimento a 50°C e o líquido permaneceu límpido sem sedimentos ou turvação após 24 e 96 horas. A versão ativa da formulação 7-6 contendo 100 mg/mL do composto de fórmula (1) formou uma solução clara que permaneceu como um líquido claro sem precipitado ou solução turva após 24 e 192 horas à temperatura ambiente.

EXEMPLO 8

Atividade biológica

Exemplo 8A - Ensaio de inibição in vitro ERK2 [414] A atividade inibidora do composto da invenção foi determinada usando o protocolo apresentado abaixo.

[415] A atividade da enzima ERK2 (Life Technologies) foi determinada usando um formato de fluorescência resolvido no tempo, medindo a fosforilação de uma versão truncada do fator de transcrição de ativação 2 marcado com proteína verde fluorescente (ATF2-GFP) (Life Technologies). Reações de ensaio contendo Tris 50 mM pH 7,5, 10 mlVhde MgCI, 1 mM de EGTA, 0,01% Triton X-100 a 1 mM, DTT a 1 mM, DMSO a 2,5%, ATF2-GFP a 0,4 pM, ATP 20 μΜ e ERK2 a 0,25 nM na presença de composto e deixaram-se prosseguir durante 30 min a temperatura ambiente. As reações foram então interrompidas utilizando o tampão de diluição TR-FRET (Life Technologies), 25 mM EDTA e 2 nM Tb-Anti-pATF2 (Thr71) (Life Technologies). Após um período de incubação adicional de pelo menos 30 minutos, a fluorescência foi lida em um leitor Pherastar (módulo óptico Lanthascreen, excitação 340 nm, emissão 520 nm (canal A), 495 nm (canal B)). A relação entre as contagens A e B foi utilizada para calcular o sinal. Os valores IC50 foram calculados usando uma equação de resposta à dose sigmoidal (software Prism GraphPad, La Jolla, CA, EUA).

[416] Nos ensaios usando ERK2, o composto de fórmula (1) tem um valor de IC50 de 0,0027 pM.

Exemplo 8B - Atividade antiproliferativa [417] As atividades antiproliferativas do composto da invenção foram

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106/109 determinadas medindo a capacidade do composto de fórmula (1) para inibir o crescimento na linhagem celular de melanoma humano A375.

[418] A proliferação celular foi determinada medindo-se a conversão da rezasurina (Alamar Blue) em resorufina em resposta à atividade mitocondrial (Nociari, Μ. M, Shalev, A., Benias, P., Russo, C. Journal of Immunological Methods 1998, 213, 157-167). As células A375 (American Type Culture Collection, Teddington, Reino Unido) foram cultivadas em Meio de Eagle Modificado por Dulbecco + 10% FBS. Cada poço de uma placa preta de 96 poços de fundo plano foi semeado com 2 x 10³ células em 200 pl de meio de cultura completo um dia antes do tratamento composto. As células foram incubadas com composto em 0,1 % (v/v) dimetilsulfóxido (DMSO) durante 4 dias antes da adição de 20 μΙ de azul Alamar. Após mais 6 h de incubação a 37° C, a placa foi lida num leitor Spectramax Gemini (Dispositivos moleculares, excitação 535 nm, emissão 590 nm). Os valores Gbo foram calculados usando uma equação de resposta à dose sigmoidal (software Prism GraphPad, La Jolla, CA, USA).

[419] Nos ensaios usando células A375, o composto de fórmula (1) tem um valor de Gbo de 0,0034 μΜ.

Protocolo de Combinação para Proliferação Celular [420] O efeito de um composto da fórmula (1) (Composto I) em combinação com um agente anticancerígeno (Composto II) pode ser avaliado utilizando a seguinte técnica. As linhas celulares de câncer humano (por exemplo, A375) foram semeadas em placas de cultura de tecidos de 96 poços a uma concentração de 2 x10³ - 4 x10³ células/poço. As células foram autorizadas a recuperar durante 1624 horas antes da adição de composto (s) ou controle de DMSO (0,1-0,5% de DMSO). As células foram incubadas com composto em 0,1% - 0,5% (v/v) dimetilsulfóxido (DMSO) durante 72-96 horas, antes da adição de 20 μΙ de azul Alamar. Após mais 6 h de incubação a 37° C, a placa foi lida em um leitor Spectramax Gemini (Dispositivos moleculares, excitação 535 nm, emissão 590 nm). Os valores Gbo foram calculados usando uma equação de resposta à dose sigmoidal (software Prism GraphPad, La Jolla, CA, USA). O Gbo para o Composto II na presença de doses variáveis do Composto I foi determinado. A sinergia foi determinada quando o Gbo diminuiu na presença de doses subeficazes do Composto I. A aditividade foi determinada quando a resposta ao Composto II e ao

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Composto I juntos resultaram em um efeito equivalente à soma dos dois compostos individualmente. Os efeitos antagonistas foram definidos como aqueles que fazem com que o Gbo aumente, ou seja, aqueles em que a resposta aos dois compostos, foram inferiores à soma do efeito dos dois compostos.

EXEMPLO 9

Formulações Farmacêuticas (i) Formulação de Comprimido [421] Uma composição de comprimido contendo um composto de fórmula (1) é preparada ao misturar uma quantidade apropriada do composto (por exemplo, 50-250 mg) com um diluente apropriado, desintegrador, agente de compressão e/ou deslizante. Um comprimido possível compreende 50 mg do composto com 197 mg de lactose (BP) como diluente e 3 mg de estearato de magnésio como lubrificante e comprimido para formar um comprimido de maneira conhecida. O comprimido pode ser opcionalmente revestido por película.

(ii) Formulação de Cápsula [422] Uma formulação de cápsula é preparada misturando 100-250 mg (por exemplo, 100 mg) de um composto de fórmulas (1) com uma quantidade equivalente de lactose (por exemplo, 100 mg) e preenchendo a mistura resultante em cápsulas de gelatina duras opacas. Um desintegrante e/ou deslizante apropriado pode ser incluído nas quantidades apropriadas conforme necessário.

(iii) Formulação Injetável I [423] Uma composição parenteral para administração por injeção pode ser preparada pela dissolução de um composto de fórmula (1) (por exemplo, em uma forma de sal) em água contendo 10% de propilenoglicol para gerar uma concentração de composto ativo de 1,5% em peso. A solução é então esterilizada por filtração, preenchida em uma ampola e vedada. Opcionalmente, a solução pode ser feita isotônica antes da esterilização.

(iv) Formulação Injetável II [424] Uma composição parenteral para injeção é preparada dissolvendo na água um composto de fórmula (1) (por exemplo, na forma de sal) (2 mg/ml) e manitol (50 mg/ml), filtrando de forma estéril a solução e preenchendo frascos ou ampolas vedáveis de 1 ml frascos ou seringas pré-preenchidas com esta.

(v) Formulação Injetável III

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108/109 [425] Uma formulação para administração intravenosa por injeção ou infusão pode ser preparada dissolvendo o composto de fórmula (1) (por exemplo, em uma forma de sal) em água a 20 mg/mL e, opcionalmente, depois ajustadas para isotonicidade. O frasco é então selado e esterilizado por autoclavagem. Alternativamente, pode ser preenchido em uma ampola ou frasco ou seringa prépreenchida, esterilizada por filtração e selada.

(vi) Formulação de injetável IV [426] Uma formulação para a distribuição i. v. por injeção ou infusão pode ser preparada dissolvendo o composto da fórmula (1) (por exemplo, em uma forma de sal) em água contendo um tampão (por exemplo, 0,2 M de acetato, pH 4,6) a 20 mg/ml. O frasco é então selado e esterilizado por autoclavagem. Alternativamente, uma seringa pré-preenchida é então selada e esterilizada por autoclavagem ou esterilizada por filtração e selada.

(vii) Formulação de Injeção Subcutânea ou Intramuscular [427] Uma composição para administração subcutânea (ou intramuscular) é preparada através da mistura de um composto de fórmula (1) com óleo de milho de qualidade farmacêutica para gerar uma concentração de 5-50 mg/mL (5 mg/mL). A composição é esterilizada e preenchida em um recipiente adequado.

(viii) Formulação Liofilizada [428] Alíquotas de composto formulado de fórmula (1) são colocadas em frascos de 50 mL e liofilizadas. Durante a liofilização, as composições são congeladas usando um protocolo de congelamento de uma etapa (-45°C). A temperatura é elevada a -10°C para anelamento, depois reduzida para congelamento -45°C, seguida de secagem primária a +25°C durante cerca de 3400 minutos, seguida de uma secagem secundária com etapas aumentadas se a temperatura for 50°C. A pressão durante a secagem primária e secundária é fixada em 80 militorr.

(ix) Formulação liofilizada II [429] Alíquotas do composto formulado das fórmulas (1) ou um sal destas, conforme definido neste documento, são colocadas em frascos de 50 mL e liofilizadas. Durante a liofilização, as composições são congeladas usando um protocolo de congelamento de uma etapa (-45°C). A temperatura é elevada a 10°C para anelamento, depois reduzida para congelamento -45°C, seguida de

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109/109 secagem primária a +25°C durante cerca de 3400 minutos, seguida de uma secagem secundária com etapas aumentadas se a temperatura for 50°C. A pressão durante a secagem primária e secundária é fixada em 80 militorr.

(x) Formulação liofilizada para uso na administração intravenosa III [430] Prepara-se uma solução tamponada aquosa dissolvendo o composto de fórmula (1) em um tampão. A solução tamponada é preenchida, com filtração para remover a matéria em partículas, em um recipiente (como um frasco de vidro tipo 1) que é parcialmente vedado (por exemplo, por meio de uma rolha Fluorotec). Se o composto e a formulação forem suficientemente estáveis, a formulação é esterilizada por autoclave a 121^SC por um período de tempo adequado. Se a formulação não é estável em autoclave, ela pode ser esterilizada usando um filtro adequado e preenchida em condições esterilizadas em frascos estéreis. A solução é liofilizada usando um ciclo adequado. Após o ciclo de liofilização, os frascos voltam novamente com nitrogênio à pressão atmosférica, tapados e fixados (por exemplo, com um crimpado de alumínio). Para administração intravenosa, o sólido liofilizado pode ser reconstituído com um diluente farmaceuticamente aceitável, tal como solução salina a 0,9% ou 5% de dextrose. A solução pode ser doseada tal como é, ou pode ser diluída adicionalmente em uma bolsa de infusão (contendo um diluente farmaceuticamente aceitável, tal como solução salina a 0,9% ou 5% de dextrose), antes da administração.

(xii) Pó em uma garrafa [431] Uma composição para administração oral é preparada ao preencher uma garrafa ou frasco com o composto de fórmula (1). A composição é então reconstituída com um diluente adequado, por exemplo água, suco de fruta ou veículo comercialmente disponível, tal como OraSweet ou Syrspend. A solução reconstituída pode ser dispensada em copos de dosagem ou seringas orais para administração.

Claims (16)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. (2fí)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4-il)amino]pirimidin-4-il}-1 -oxo-2,3-di-hidro-

   1 H-isoindol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5-metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida, caracterizada pelo fato de que tem a fórmula (1):

   

   ou uma forma tautomérica desta, em uma forma substancialmente cristalina.
2. 2. (2fí)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4-il)amino]pirimidin-4-il}-1-oxo-2,3-di-hidro-

   1 H-isoindol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5-metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que é pelo menos 55% cristalina, ou pelo menos 60% cristalina, ou pelo menos 70% cristalina, ou pelo menos 80% cristalina, ou pelo menos 90% cristalina, ou pelo menos 95% cristalina, ou pelo menos 98% cristalina, ou pelo menos 99% cristalina, ou pelo menos 99,5% cristalina, ou pelo menos 99,9% cristalina.
3. 3. Forma substancialmente cristalina de (2fí)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4i l)ami no] piri midin-4-il}-1 -oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5metoxifeni)-2-hidroxietil]propanamida, tendo um padrão de difração de raios X de pó, caracterizada pelo fato de que há presença de grandes picos nos ângulos de difração 14,0^s e/ou 20,6^s e/ou 24,0^s e/ou 24,2^S (±0,2^s).
4. 4. Forma substancialmente cristalina de (2fí)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4i l)ami no] pirimidin-4-il}-1 -oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida, tendo um padrão de difração de raios X de pó, caracterizada pelo fato de que há presença de picos maiores nos ângulos de difração e espaçamento interplanar estabelecidos na Tabela A:

   Tabela A Ângulo de Difração (°) Intensidade Relativa 14,0 100 20,6 85 24,0 74

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   24,2 71
5. 5. Forma substancialmente cristalina de (2F?)-2-(6-{5-c oro-2-[(oxan-4i l)ami no] piri midin-4-il}-1 -oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida, de acordo com a reivindicação 4, em que o padrão de difração de raios X de pó é adicionalmente caracterizado pelo fato de que há a presença de um ou mais picos adicionais nos ângulos de difração e espaçamentos interplanares estabelecidos na tabela B.

   Tabela B Ângulo de Difração (°) Intensidade Relativa 8,8 23 13,0 23 13,8 39 14,4 20 17,3 22 19,3 36 21,3 45 28,7 22
6. 6. Forma substancialmente cristalina de (2fí)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4i l)ami no] piri midin-4-il}-1 -oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida caracterizada pelo fato de que exibe picos substancialmente nos mesmos ângulos de difração, conforme aqueles do padrão de difração de raios X de pó mostrados na Figura 2.
7. 7. Forma substancialmente cristalina de (2fí)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4i l)ami no] piri midin-4-il}-1 -oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida, caracterizada pelo fato de que tem um padrão de difração de raios X de pó substancialmente, conforme mostrado na Figura 2.
8. 8. Forma substancialmente cristalina de (2fí)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4i l)ami no] piri midin-4-il}-1 -oxo-2,3-dihydro-1 H-isoi ndol-2-yl)-N-[(1 S)-1 -(3-fluoro-5metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida, caracterizada pelo fato de que exibe um evento endotérmico tendo uma temperatura inicial entre 100°C a 110°C (mais particularmente, 101 °C a 108°C) quando submetida à calorimetria de varredura diferencial.

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9. 9. Forma substancialmente cristalina de (2F?)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4i l)ami no] piri midin-4-il}-1 -oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida, caracterizada pelo fato de que exibe um evento endotérmico tendo um pico entre 110°C e 125°C (mais particularmente, entre 111 °C e 113°C) quando submetida à calorimetria de varredura diferencial.
10. 10. Forma substancialmente cristalina de (2fí)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4i l)ami no] piri midin-4-il}-1 -oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida, caracterizada pelo fato de que exibe uma perda de peso entre 85°C e 130°C (por exemplo, 90-120°C) quando submetida à análise termogravimétrica.
11. 11. Processo para produzir uma forma substancialmente cristalina de (2fí)2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4-il)amino]pirimidin-4-il}-1-oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoindol-2-il)N-[(1 S)-1-(3-fluoro-5-metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida; cujo método é caracterizado pelo fato de que compreende:

    (i) formar uma suspensão aquosa de um sal de adição de ácido de (2fí)-2(6-{5-cloro-2-[(oxan-4-il)amino]pirimidin-4-il}-1 -oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoindol-2-il)-N[(1 S)-1-(3-fluoro-5-metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida e agitar a suspensão a uma temperatura entre 25°C e 75°C por um período de tempo suficiente para permitir a desproporção do sal de adição de ácido e formação da forma cristalina de (2F?)-2-(6- {5-cloro-2-[(oxan-4-il)amino]pirimidin-4-il}-1 -oxo-2,3-di-h idro-1Hisoindol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5-metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida ocorra e, posteriormente, isolar a forma cristalina; ou (ii) formar uma suspensão aquosa de uma forma amorfa de (2fí)-2-(6-{5cloro-2-[(oxan-4-il)amino]pirimidin-4-il}-1 -oxo-2,3-di-h idro-1 H-isoindol-2-i l)-N-[( 1S)1-(3-fluoro-5-metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida, em que a suspensão aquosa é inalterada ou é tamponada a um pH de 1,75 a 7,25 e agitar a suspensão aquosa a uma temperatura entre 25°C e 55°C por um período de tempo suficiente para permitir que a conversão da forma amorfa de (2fí)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4i l)ami no] piri midin-4-il}-1 -oxo-2,3-di-h idro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1S)-1 -(3-fluoro-5metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida na forma cristalina de (2fí)-2-(6-{5-cloro-2[(oxan-4-i l)amino]pi ri midi n-4-i I}-1 -oxo-2,3-di-h idro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3fluoro-5-metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida ocorra e, posteriormente, isolar a forma cristalina.

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12. 12. Cloridrato amorfo, sulfato, napadisilato (naftaleno-1,5-dissulfonato), edisilato (etanodissulfonato), tosilato (p-toluenossulfonato), mesilato (metanossulfonato), napsilato (2-naftalenossulfonato), besilato, (2hidroxietanossulfonato), esilato (etanossulfonato) ou sal de bromidrato, caracterizados pelo fato de que são de (2fí)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4i l)ami no] piri midin-4-il}-1 -oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida.
13. 13. Sal cloridrato, sulfato, bromidrato ou napadisilato amorfo, caracterizados pelo fato de que são de (2fí)-2-(6- {5-cloro-2-[(oxan-4i l)ami no] piri midin-4-il}-1 -oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5metoxifenil)-2-hidroxietil]propanamida.
14. 14. Processo para preparar (2fí)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4-il)amino]pirimidin4-i I}-1 -oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5-metoxifenil)-2hidroxietil]propanamida, cujo processo é caracterizado pelo fato de que compreende reagir um composto da fórmula (2) com um composto da fórmula (3):

    

    um solvente aprótico na presença de uma base de amina terciária e um agente promotor de ligação amida em que o agente promotor de ligação amida é selecionado dentre A/,A/,A/',A/'-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1 -il)hexafluorofosfato de urônio (HATU) e 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI).
15. 15. Processo, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a base de amina terciária é diiisopropiletilamina (DIPEA).
16. 16. Processo para produzir (2fí)-2-(6-{5-cloro-2-[(oxan-4-il)amino]pirimidin4-i I}-1 -oxo-2,3-di-hidro-1 H-isoi ndol-2-il)-N-[( 1 S)-1 -(3-fluoro-5-metoxifenil)-2hidroxietil]propanamida, cujo processo é caracterizado pelo fato de que compreende:

    a) reagir um composto da fórmula (5):