EA022832B1 - Выделенное антитело, способное взаимодействовать с tlr3 - Google Patents

Выделенное антитело, способное взаимодействовать с tlr3 Download PDF

Info

Publication number
EA022832B1
EA022832B1 EA201170636A EA201170636A EA022832B1 EA 022832 B1 EA022832 B1 EA 022832B1 EA 201170636 A EA201170636 A EA 201170636A EA 201170636 A EA201170636 A EA 201170636A EA 022832 B1 EA022832 B1 EA 022832B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
antibodies
tab
amino acid
cells
antibody
Prior art date
Application number
EA201170636A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201170636A1 (ru
Inventor
Марк Каннингхэм
Лани Сан Матео
Роберт Т. Сариски
Рэймонд Свит
Роберт Раухенбергер
Марк Рутц
Ицин Фэн
Катарина Херинга
Цзиньцюань Ло
Фан Тэн
Алексей Тепляков
Шэн-Дзюн Ву
Original Assignee
Сентокор Орто Байотек Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Сентокор Орто Байотек Инк. filed Critical Сентокор Орто Байотек Инк.
Publication of EA201170636A1 publication Critical patent/EA201170636A1/ru
Publication of EA022832B1 publication Critical patent/EA022832B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/117—Nucleic acids having immunomodulatory properties, e.g. containing CpG-motifs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/17—Immunomodulatory nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Rheumatology (AREA)

Abstract

Описано выделенное антитело или его фрагмент, способное взаимодействовать с TLR3, содержащее вариабельные участки тяжелой и легкой цепи, при этом антитело содержит вариабельные участки тяжелой и легкой цепи с определенными последовательностями.

Description

Настоящее изобретение относится к антителам, являющимся антителами-антагонистами толлподобного рецептора 3 (ТЬК3), полинуклеотидам, кодирующим антитела-антагонисты ТЬК3 или их фрагменты, а также к способам получения и использования названных продуктов.
Предпосылки создания изобретения
Толл-подобный рецептор (ТЬК) регулирует активацию врожденного иммунного ответа, а также развитие адаптивного (специфического) иммунитета, активируя каскады внутриклеточной передачи сигнала в ответ на появление бактериальных, вирусных, паразитических, а в некоторых случаях и эндогенных лигандов (Ьапсак!ет е! а1., 1. ΡΗνκίοΙ. 563:945-955, 2005). Расположенные на плазматической мембране ТЬК, ТЬК1, ТЬК2, ТЬК4 и ЬК6 распознают лиганды, включая белковые или липидные компоненты бактерий и грибков. Преимущественно внутриклеточные Толл-подобные рецепторы, ТЬК3, ТЬК7 и ТЬК9 активируются двухцепочечными РНК, одноцепочечными РНК и неметилированными СрО ДНК соответственно. Считается, что дисрегуляция сигнального пути ТЬК является причиной множества проблем, и терапевтические стратегии развиваются в этом направлении (Нойшап е! а1., Ναι. Кеу. Эгид Этксоу. 4:879-880, 2005; Ре/аек 1п!. 1ттипорЬаттасо1. 6:863-869, 2006; \У1ске1дгеп. §с1епсе 312:184-187, 2006). Например, антагонисты ТЬК4, а также ТЬК 7 и ТЬК 9 находятся на стадии клинических испытаний в лечении тяжелого сепсиса и системной красной волчанки соответственно (Кап/1ег е! а1., №4. Мей. 13:552-559, 2007).
Сигнальный путь ТЬК3 активируется двухцепочечной РНК, матричной РНК или РНК, освобождаемой некротическими (погибшими) клетками в процессе воспаления или вирусной инфекции. Активация ТЬК3 индуцирует секрецию интерферонов и провоспалительных цитокинов, а также приводит к активации и увеличению числа иммунных клеток, защищая, таким образом, от некоторых микробных инфекций. Например, доминантно-негативный аллель ТЬК3 был ассоциирован с повышенной восприимчивостью к вирусу герпеса формы Негрек §1тр1ех епсерНаПОк после первичного инфицирования вирусом Н8У-1 в детском возрасте (2Ьепд е! а1., Баепсе 317:1522-1527, 2007). У мышей недостаток ТЬК3 связан с пониженной выживаемостью при проверочном заражении вирусом Коксаки (КюЬет е! а1., РЬо8 Опе 4:е4127, 2009). Было показано, тем не менее, что нарушенная регуляция сигнального пути ТЬК3 имеет отношение к заболеваемости и смертности при определенных вирусных инфекциях, включая вирус западнонильской лихорадки, флебовирус, вирус ваксиния и вирус гриппа типа А (\Уапд е! а1., №4. Мей. 10:1366-1373, 2004; Оотееп е! а1., I. 1ттипо1. 177:6301-6307, 2006; Ни!сЬепк е! а1., I. 1ттипо1. 180:483-491, 2008; Ье Оойю е! а1., Р1оЗ Райод. 2:Е53, 2006).
Также было продемонстрировано, что ТЬК3 определяет механизм патогенеза при целом ряде воспалительных, иммуноопосредованных и аутоиммунных заболеваний, включающих, например, септический шок (Сауаккат е! а1., 1. Ехр. Мей. 205:2609-2621, 2008), острое повреждение легких (Миггау е! а1., Ат. 1. Кекри. Сп!. Саге Мей. 178:1227-1237, 2008), ревматоидный артрит (Шт е! а1., 1ттипо1. Ье!!. 124:917, 2009; Вгейапо е! а1., АтЙ. КЬеит. 52:2656-2665, 2005), астму (§идшта е! а1., Ат. 1. Кекр. Се11 Мо1. Бю1. 40:654-662, 2009; МопкЫта е! а1., 1п!. АгсН. А11егду 1ттипо1. 145:163-174, 2008; §!отее11 е! а1., Кекри·. Кек. 10:43, 2009), воспалительные заболевания кишечника, такие как болезнь Крона и язвенный колит (УНои е! а1., 1. 1ттипо1. 178:4548-4556, 2007; 2Ьои е! а1., Ргос. №а!1. Асай. δοΐ. (И8А) 104:7512-7515, 2007), аутоиммунные заболевания печени (Ьапд е! а1., 1. С1ш. 1пуек!. 116:2456-2463, 2006) и диабет 1 типа (Оодикап е! а1., 0|аЬе1ек 57:1236-1245, 2008; Ыеп апй 21рпк, Сигг. Мол. Мей. 9:52-68, 2009). Более того, было показано, что орган-специфичное увеличение экспрессии ТЬК3 коррелирует со многими патологиями, которые возникают вследствие нарушения регуляции воспалительного ответа, такими как билиарный (холангиолитический) цирроз печени (Таки е! а1., ЬаЬ 1пуек!. 85:908-920, 2005), ревматоидный артрит суставов (Окре1! е! а1., АпНпОк КЬеит. 58:3684-3692, 2008), и с состоянием слизистой оболочки носа у пациентов с аллергическим ринитом (Ртапккоп е! а1., Кекри. Кек. 6:100, 2005).
При некрозе освобождение клеточного содержания, включающего эндогенные матричные РНК, индуцирует секрецию цитокинов, хемокинов и других факторов, которые инициируют процесс местного воспаления, облегчают уничтожение клеточных остатков и восстановительный процесс. Некроз часто приводит к непрекращающемуся воспалительному процессу, увеличивая возможность развития хронического или острого воспаления (ВегдкЬакеп е! а1., №а!иге Кеу1етек 7:99-109, 2009). Активация ТЬК3 в месте некроза может способствовать развитию ненормального воспалительного процесса и привести к возникновению провоспалительной положительной замкнутой обратной связи за счет освобожденных лигандов ТЬК3. Таким образом, антагонизм к ТЬК3 может играть положительную роль во многих заболеваниях, сопровождающихся хроническим или острым воспалением и/или некрозом.
Уменьшение активации ТЬК3 может рассматриваться как новая стратегия в лечении онкологических заболеваний, таких как почечно-клеточный рак и плоскоклеточный (эпидермальный) рак шеи (Мопкатеа е! а1., С1ш. Сапсег Кек. 13:5703-5709, 2007; Рпек е! а1., 1п!. 1. Мол. Мей. 21: 209-215, 2008). Кроме того, аллель ТЬК3Ъ423Р, приводящий к производству белка с уменьшенной активностью, был ассо- 1 022832 циирован с защитной функцией в случае сухой, вызываемой возрастными изменениями, макулярной дегенерацией (Уапд с1 а1., N. Епд1. 1. Меб. 359:1456-1463, 2008), указывая на то, что антагонисты ТЬК3 могут играть положительную роль при этом заболевании.
Заболевания, связанные с воспалением, также как и заболевания, вызываемые инфекциями, имеют значительное влияние на здоровье и, следовательно, большое экономическое значение. Тем не менее, несмотря на прогресс во многих областях медицины, существует относительно мало возможностей для лечения большинства названных заболеваний.
Таким образом, существует необходимость в супрессии активности ТЬК.3 для лечения связанных с функцией этого рецептора заболеваний.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 показан эффект моноклональных антител (шЛЬ) к ТЬК3 человека (ЬиТЬК3) в эксперименте с использованием гена-репортера ΝΡ-кВ.
На фиг. 2А и 2В показан эффект (% ингибирования) или эффект тАЬ к ЬиТЬК3 в эксперименте с использованием гена ВЕА8-2В.
На фиг. 3А и 3В показан эффект тАЬ к ЬиТЬК3 в эксперименте с использованием гена ΝΗΒΕ.
На фиг. 4 показан эффект тАЬ к ЬиТЬК3 в эксперименте с использованием гена РВМС.
На фиг. 5А и 5В показан эффект тАЬ к ЬиТЬК3 в эксперименте с использованием гена НА8М.
На фиг. 6А, 6В и 6С показано связывание тАЬ к ЬиТЬК3 с мутантами ТЬК3.
На фиг. 7А показаны эпитопы, распознаваемые тАЬ 15ЕУО (черным цветом) и С1068 (серым цветом) (верхняя часть рисунка), и эпитопы, распознаваемые тАЬ Ррур/рЗУ (черным цветом, нижняя часть рисунка), наложенные на изображение структуры ТЬК3 ЕСЭ человека. На фиг. 7В показана пертурбационная карта избирательного замещения водорода дейтерием в случае, когда ТЬК3 ЕСЭ образует комплекс с тАЬ 15ЕУО.
На фиг. 8А и 8В показан эффект суррогатных крысиных/мышиных тАЬ (тАЬ к мышиному ТЬК3, тАЬ 5429) в экспериментах с использованием А) гена-репортера ΝΡ-кВ и Б) гена-репортера 18КЕ.
На фиг. 9 показан эффект суррогатных тАЬ (тАЬ 5429, тАЬ с1811) в эксперименте с МЕР СХСБ10/1Р-10.
На фиг. 10 показана специфичность связывания суррогатных тАЬ с ТЬК3. Верхняя часть рисунка: изотипный контроль; нижняя часть рисунка: тАЬ с1811.
На фиг. 11 показано влияние суррогатных тАЬ на уровень репН в модели АНК.
На фиг. 12 показан эффект суррогатных тАЬ на общее число нейтрофилов в жидкости бронхоальвеолярного лаважа (ВАЬ) при гиперчувствительности дыхательных путей (АНК).
На фиг. 13 показан эффект влияния суррогатных тАЬ на уровень продукции СХСБ10/1Р-10 в жидкости ВАЬ при АНК.
На фиг. 14 показан эффект суррогатных тАЬ на гистопатологические показатели при использовании декстран сульфата натрия (Όδδ).
На фиг. 15 показан эффект суррогатных тАЬ на А) гистопатологические показатели и Б) приток нейтрофилов при переносе Т-клеток.
На фиг. 16 показан эффект суррогатных тАЬ на клинические показатели при коллагениндуцированном артрите (С1А).
На фиг. 17 показан эффект суррогатных тАЬ на площадь под кривой, описывающей динамику клинических показателей, при С1А.
На фиг. 18 показан эффект суррогатных тАЬ на выживаемость мышей С57ВБ/6 после интраназального введения вируса гриппа типа А/РК/8/34.
На фиг. 19 показан эффект суррогатных тАЬ на клинические показатели после заражения вирусом гриппа типа А/РК/8/34.
На фиг. 20 показан эффект суррогатных тАЬ на вес тела в течение 14 дней после заражения вирусом гриппа типа А/РК/8/34.
На фиг. 21 показан эффект суррогатных тАЬ на уровень глюкозы в крови у животных (А) \УТ ΌΙΘ и (В) ТБК3КО ΌΙΘ после пробного введения глюкозы.
На фиг. 22 показан эффект суррогатных тАЬ на уровень инсулина у животных \УТ ΌΙΘ.
На фиг. 23 показан эффект тАЬ 15ЕУО на (А) ЭТН1 и (В) продукцию СХСБ10/1Р-10 и ССЬ5/КАКТЕ§ в клетках ΝΗΒΕ, индуцированную риновирусом.
На фиг. 24 показано влияние тАЬ 15ЕУО на (А) уровень 81САМ-1 и (В) жизнеспособность клеток НИУЕС.
- 2 022832
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение относится к выделенному антителу или его фрагменту, способному взаимодействовать с ТЬК3, содержащим вариабельные участки тяжелой и легкой цепи, при этом антитело содержит:
a) вариабельный участок тяжелой цепи §ЕЦ ГО N0: 42; или
b) вариабельный участок легкой цепи §ЕЦ ГО N0: 41; или
c) вариабельный участок тяжелой цепи §ЕЦ ГО N0: 42 и вариабельный участок легкой цепи §ЕЦ ГО N0: 41; или
ά) аминокислотные последовательности СЭР 1, 2 и 3 тяжелой цепи §ЕЦ ГО N0: 82, 86 и 84; или е) аминокислотные последовательности СОК 1, 2 и 3 легкой цепи §ЕЦ ГО N0: 79, 80 и 87; или ί) аминокислотные последовательности СОК 1, 2 и 3 тяжелой цепи §ЕЦ ГО N0: 82, 86 и 84, и аминокислотные последовательности СОК 1, 2 и 3 легкой цепи §ЕЦ ГО N0: 79, 80 и 87; или
д) вариабельный участок тяжелой цепи, который по меньшей мере на 95% идентичен вариабельному участку с аминокислотной последовательностью 8ЕЦ ГО N0: 42; или
1ι) вариабельный участок легкой цепи, который по меньшей мере на 95% идентичен вариабельному участку с аминокислотной последовательностью 8ЕЦ ГО N0: 41;
ί) тяжелую цепь §ЕЦ ГО N0: 102; или
_)) легкую цепь §ЕЦ ГО N0: 156; или
к) тяжелую цепь §ЕЦ ГО N0: 102 и легкую цепь §ЕЦ ГО N0: 156.
Подробное описание изобретения
Все публикации, упоминаемые в данном описании, в том числе, помимо прочего, патенты и патентные заявки, включенные в настоящее описание путем ссылки, являются частью настоящего документа, как если бы они были изложены непосредственно в настоящем документе.
Используемый в данном изобретении термин антагонист означает молекулу, которая любым способом, частично или полностью, ингибирует эффект другой молекулы, такой как рецептор или внутриклеточный медиатор.
Используемый в данном изобретении термин антитела-антагонисты ТКГ3 или антитела, способные взаимодействовать с ТЬК3, относится к антителам, способным прямо или косвенно физически взаимодействовать, уменьшать или ингибировать биологическую активность ТЬК3 или активацию рецептора ТЬК3. Например, антитело, способное взаимодействовать с ТЬК3, может связываться непосредственно с ТЬК3 и нейтрализовывать активность ТЬК3, т.е. блокировать сигнальный путь ТЬК3, приводя к уменьшению продукции цитокинов и хемокинов либо к активации МР-кВ.
Используемый в данном изобретении термин антитела имеет широкое значение и относится к иммуноглобулинам или молекулам антител, включая поликлональные антитела, моноклональные антитела, включая мышиные/крысиные, человеческие, адаптированные к человеку, гуманизированные и химерные моноклональные антитела и фрагменты антител.
В общем смысле антитела являются белками или пептидными цепочками, которые специфично связываются со специфическим антигеном. Интактные антитела являются гетеротетрамерными гликопротеинами, состоящими из двух одинаковых легких цепей и двух одинаковых тяжелых цепей. Обычно каждая легкая цепь связана с тяжелой цепью посредством одного ковалентного дисульфидного мостика, тогда как число дисульфидных связей между тяжелыми цепями различных иммуноглобулиновых изотипов может варьировать. Каждая тяжелая и каждая легкая цепь также обладает регулярно расположенными внутренними дисульфидными мостиками. Каждая тяжелая цепь имеет на одном конце вариабельный домен (УН), за которым следуют несколько константных доменов. Каждая легкая цепь имеет на одном конце вариабельный домен (УЬ), а на другом конце константный домен. Константный домен легкой цепи находится напротив первого константного домена тяжелой цепи, а вариабельный домен легкой цепи находится напротив вариабельного домена тяжелой цепи. Исходя из аминокислотной последовательности константных доменов легкая цепь антитела любого вида позвоночных может быть отнесена к одному из двух четко различающихся типов, а именно каппа (к) и лямбда (λ).
Иммуноглобулины могут быть разделены на пять больших классов, а именно 1дА, 1дЭ. 1дЕ, 1дО и 1дМ, в зависимости от аминокислотного состава константного домена тяжелой цепи. 1дА и 1дО в свою очередь подразделяются на изотипы 1дА1, 1дА2, 1дО1, 1дО2, 1дО3 и 1дО4.
Термин фрагмент антитела относится к части интактного антитела, обычно это антигенсвязывающий или вариабельный участок интактного антитела. Например, к фрагментам антитела относятся фрагменты РаЬ, РаЬ', Р(аЬ')2 и Ρν, диатела, одноцепочечные фрагменты антитела и мультиспецифичные антитела, сформированные из по меньшей мере двух интактных антител.
Вариабельные участки легкой или тяжелой цепи состоят из каркасного участка, прерванного тремя антигенсвязывающими участками. Антигенсвязывающие участки могут называться по-разному, например:
(ί) термин определяющие комплементарность участки (СОК) отражает вариабельность последовательности (\Уи апй КаЬар 1. Ехр. Мей. 132:211-250, 1970). Как правило, антигенсвязывающий участок имеет шесть СОК; три из которых расположены на УН (НСГОРР НСОК2, НСОК3), а другие три - на УЬ
- 3 022832 (Έί'ΌΡΙ. БСОР2. ЬСОК3) (КаЬа! с1 а1., 8ециепсе5 оГ РгсЛсиъ оГ 1ттипо1одюа1 1п1сгс51. 5Й1 Ей. РиЬНс НеаНЬ 8егу1се, Ыайопа1 ΙηδΙίΙυΙοδ оГ НеаЪЬ, Вс1Нс5Йа. Мй., 1991);
(ίί) согласно определению Котии и Леска, термин гипервариабельный участок, НУК, или НУ относится к вариабельному домену антитела, который имеет гипервариабельную структуру (СНоЙиа апй Ьекк, Мо1. Вю1. 196:901-917, 1987). Как правило, антигенсвязывающий участок содержит шесть гипервариабельных участков, три из которых находятся в УН (Н1, Н2, Н3) и три - в УЬ (Ь1, Ь2, Ь3). Котия и Леск называют структурно консервативные НУ каноническими структурами;
(ίίί) согласно Лефранку (ЬеГгапс е1 а1., Оет. Сотратак 1ттипо1. 27:55-77, 2003) термин 1МСТ-СЭК основывается на сравнении пяти доменов иммуноглобулинов и рецепторов Т-клеток. В международной базе данных 1тМипоОепеТю8 (1МСТ; Ьйр://№№№_1тд1_отд) приводится стандартизованное обозначение и определение этих участков. Соответствие между СОК, НУ и 1МСТ подробно описано у ЬеГтапс е1 а1., Оеу. Сотратак 1ттипо1. 27:55-77, 2003;
(ίν) согласно Альмагро, антигенсвязывающий участок также может быть определен на основании определяющей специфичность используемости групп (8ОКИ) (А1тадго, Мо1. Кесодпй. 17:132-143, 2004), этот автор использует термин определяющие специфичность аминокислотные остатки (8ЭК) для обозначения аминокислотных остатков иммуноглобулинов, непосредственно вовлеченных в контакт с антигеном. Согласно Альмагро, основываясь на анализе кристаллической структуры комплексов антигенантитело, 8ОКИ являются точной мерой числа и распределения 8ЭК, отвечающих за связывание с различными типами антигенов.
Используемый в данном изобретении термин композитные последовательности означает антигенсвязывающий участок, включающий все аминокислотные остатки, индивидуально упомянутые у Кабата, Котии или в 1МСТ, или любые другие участки, определенные как антигенсвязывающие.
Название каркасный участок или каркасные последовательности относится к последовательностям вариабельных участков, которые не были определены как антигенсвязывающие. Поскольку для определения антигенсвязывающего участка могут использоваться разные термины, как указано выше, определение точной последовательности аминокислот каркасного участка зависит от определения антигенсвязывающего участка.
Используемый в данном изобретении термин антиген означает любую молекулу, которая прямо или косвенно может приводить к выработке антител. Понятие антиген также включает кодирующие белок нуклеиновые кислоты.
Используемый в данном изобретении термин по существу идентичный означает, что аминокислотные последовательности двух антител или фрагментов антител при сравнении являются идентичными или имеют незначительные отличия. Незначительными отличиями являются замещения 1, 2, 3, 4, 5 или 6 аминокислот в аминокислотной последовательности антитела или фрагмента антитела. Аминокислотные последовательности, по существу идентичные последовательностям, представленным в данном изобретении, также рассматриваются как часть данного изобретения. В некоторых случаях идентичность последовательностей может достигать 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более. Идентичность в процентном соотношении может быть вычислена, как это описано выше. Для сравнения пептидных цепочек наилучшим образом подходят вариабельные участки тяжелой или легкой цепи.
Используемый в данном изобретении термин эпитоп означает часть антигена, с которой специфически связываются антитела. Эпитопы обычно состоят из химически активных (неполярных, полярных или гидрофобных), поверхностно расположенных функциональных групп, таких как боковые группы аминокислот или полисахаридов, и могут иметь специфическую трехмерную структуру, а также специфический заряд. Строение эпитопа может быть линейным или прерывистым, например, конформационный эпитоп, который формируется в результате пространственного взаимодействия аминокислот, не находящихся в непрерывной аминокислотной последовательности антигена, в отличие от взаимодействия линейно связанных аминокислот. Конформационный эпитоп включает эпитопы, возникающие в результате пространственного свертывания белков антигенов, при котором аминокислоты из различных участков линейной последовательности антигена оказываются в тесной близости в трехмерном пространстве.
Используемый в данном изобретении термин специфическое связывание относится к антителам, проявляющим большую аффинность при связывании с определенными антигенами, по сравнению с другими антигенами или белками. Как правило, связывание антитела характеризуется константой диссоциации (Кс) 10-7 М или менее. Связывание с предопределенным антигеном происходит при Кс, в два раза меньшей, чем Кс связывания с неспецифичным антигеном (например, В8А, казеин, или любой другой полипептид), отличным от предопределенного антигена. Фразы антитело, распознающее антиген и антитело, специфичное к антигену используются как взаимозаменяемые вместе с выражениями антитело, которое специфически связывается с антигеном или специфичное к антигену антитело, например, антитело, специфичное к ТЬК3. Константа диссоциации может быть измерена с помощью стандартных способов, описанных далее.
Используемые в данном изобретении термины биологическая активность ТЬК3 и активация ТЬК3 относятся к любой активности, проявляющейся в результате связывания лиганда с ТЬК3. К лигандам ТЬК3 относятся двухцепочечные РНК, ро1у(1:С) и эндогенные матричные РНК, например эндо- 4 022832 генные матричные РНК, высвобождаемые некротическими клетками. В отдельных случаях активация ТГР3 приводит к активации ΝΡ-кВ в ответ на присутствие лигандов ТЬКЗ. Экспериментальная оценка активации ΝΡ-кВ может быть осуществлена с использованием гена-репортера после индукции рецептора лигандом ро1у(1:С) (А1ехорои1ои е! а1., №1иге 413:732-738, 2001; Наскег е! а1., ЕМВО I. 18:6973-6982, 1999). В других случаях активация Т1.Р3 приводит к активации факторов (ΙΚΕ-3, ΙΚΕ-7), участвующих в интерфероновом ответе, в ответ на присутствие лигандов Т1.Р3. Экспериментальная оценка опосредованной рецептором ТГР3 активации ΙΚΡ может быть сделана с помощью гена-репортера, контролируемого интерферон-стимулированными элементами (Ι8ΚΈ). В отдельных случаях активация ТГР3 приводит к секреции провоспалительных цитокинов и хемокинов, например ФНО-α, 1Ь-6, 1Ь-8, 1Ь-12, СХСЬ5/1Р-10 и ΚАNТЕδ. Высвобождение цитокинов и хемокинов из клеток, тканей или в циркуляционных потоках может быть измерено с помощью хорошо известных экспериментальных тестовых систем, таких как ЕЫ8А.
В данном изобретении использованы общепринятые одно- и трехбуквенные коды обозначения аминокислот.
Аминокислота Трехбуквенный код Однобуквенный код
Аланин А1а А
Аргинин Агд К
Аспарагин Азп N
Аспарагиновая Азр Ό
кислота
Цистеин Суз С
Глутаминовая С1и Е
кислота
Глутамин С1п Ω
Глицин С1у С
Гистидин Шз н
Изолейцин Не I
Лейцин Ьеи ь
Лизин Ьуз к
Метионин Меб м
Фенилаланин РНе £
Пролин Рго Р
Серин 5ег 5
Треонин ТНг Т
Триптофан Тгр N
Тирозин Туг Υ
Балин Уа1 V
Композиции данного изобретения
Настоящее изобретение относится к антителам-антагонистам, способным ингибировать биологическую активность ТГР3, и к использованию этих антител. Антагонисты Т1.Р3 могут связываться с ТГР3 и ингибировать активацию Т1.Р3. Указанные антитела могут ингибировать некоторые пути активации Т1.Р3, включая ингибирование ίη νίΐΐΌ, ΐη У1уо или ΐη л1и, путем связывания лигандов с Т1.Р3, ингибирования димеризации рецептора, ингибирования Т1.Р3 в эндосоме, ингибирования киназной активности дальнейшего сигнального пути или ингибирования транскрипции матричных РНК Т1.Р3. Другие антитела-антагонисты, способные ингибировать активацию ТГР3 за счет других механизмов, также являются частью настоящего изобретения. Данные антагонисты полезны в качестве исследовательских и диагностических реагентов, а также терапевтических агентов.
Разнообразие антител достигается за счет использования многих генов клеток зародышевой линии, кодирующих вариабельные участки, и разнообразных соматических клеток. Соматические события, приводящие к образованию участка УН, включают рекомбинацию переменного (V) генного сегмента, сегмента разнообразия (Ό) и сегмента присоединения (I), а при образовании участка VI, - рекомбинацию V и I. сегментов. Маловероятно, чтобы антитела и композиции, имеющие последовательности СЭР, идентичные или сходные с предложенными в настоящем изобретении последовательностями, были созданы независимо. В результате сборки и соматических мутаций последовательность генов, кодирующих антитела, является очень вариабельной, согласно существующим оценкам, эти вариабельные гены кодируют
- 5 022832
1010 молекул различных антител (1ттииод1оЪи1ш Сеиек, 2иб еб., ебк. Ιοηίο с1 а1., Асабетю Ргекк, 8аи Оюуо. СаИГ., 1995).
В настоящем изобретении предлагаются антигенсвязывающие участки, полученные из генных библиотек гена иммуноглобулина человека. Структура, несущая антигенсвязывающий участок, обычно является тяжелой или легкой цепью антитела, или частью указанных структур, где антигенсвязывающий участок располагается на своем естественном месте, согласно приведенному выше описанию.
В настоящем изобретении предлагаются выделенные антитела или их фрагменты, способные взаимодействовать с ТЬК3, содержащие вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, в том числе антитела, содержащие аминокислотные последовательности 1, 2 и 3 (НСОК1, НСОК2 и НСОК3) определяющего комплементарность участка тяжелой цепи (СОК) и аминокислотные последовательности 1, 2 и 3 (ЬСОК1, ЬСОК2 и ЬСОК3) определяющего комплементарность участка тяжелой цепи (СОК), показанные в табл. 1а.
Таблица 1а
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предлагаются выделенные антитела или их фрагменты, способные взаимодействовать с ТЬК3, содержащие вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, включая антитела, содержащие аминокислотную последовательность НСОК2 8ЕО ГО N0: 192, где НСОК2 последовательности 8Е0 ГО N0: 192 определен формулой (I)
- 6 022832
Хаа6“1-Хаа7-Хаав-К-3-Хаа9-И-У-Ы-О-У-А-У-3-У-К-3, (I) где Хаа6 может быть Агд или Ьу§;
Хаа7 может быть Туг, Ηίδ или Зег;
Хаа8 может быть Ме1. Агд или Туг и
Хаа9 может быть Ьу8 или Агд.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагаются выделенные антитела или их фрагменты, способные взаимодействовать с ТЬК3, содержащие вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, включая антитела, содержащие аминокислотную последовательность ΗΟΌΚ2 ЗЕЦ ГО N0: 194, где НСГОВ2 последовательности ЗЕЦ ГО N0: 194 определен формулой (III)
Ι-1-ς -Хаа15-К-5-К-И-¥-Ы-Хаа1б-Т-А-Хаа17-5-7-К-3, (III) где Хаа15 может быть Ьу8, ТНг или Не;
Хаа16 может быть Αδη или Αδρ и
Хаа17 может быть Уа1 или Ьеи.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагаются выделенные антитела или их фрагменты, способные взаимодействовать с ТЬК.3, содержащие вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, включая антитела, содержащие аминокислотную последовательность Η0ΌΚ2 ЗЕЦ ГО N0: 196, где Η0ΌΚ2 последовательности ЗЕЦ ГО N0: 196 определен формулой (V)
Хаа24-1-0-Р-5-0-5-У-Т-Ы-У-Хаа25-Р-3-Р-ф-С, (V) где Хаа24 может быть РНе или Агд и
Хаа25 может быть А1а или Зег.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагаются выделенные антитела или их фрагменты, способные взаимодействовать с ТЬК3, содержащие вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, включая антитела, содержащие аминокислотную последовательность ЬСГОКЗ ЗЕЦ ГО N0: 191, где ЬСГОКЗ последовательности ЗЕЦ ГО N0: 191 определен формулой (II)
Хаах-З-У-С»—Хаа2-Хааэ-Хаа4-Хаа5-Т-У, (II) где Хаа! может быть А1а, 01η, С1у или Зег;
Хаа2 может быть 01у, 01и или Зег;
Хаа3 может быть Αδρ или Αδη;
Хаа4 может быть 01и или Зег; и
Хаа5 может быть РНе, А1а или Ьеи.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагаются выделенные антитела или их фрагменты, способные взаимодействовать с ТЬКЗ, содержащие вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, включая антитела, содержащие аминокислотную последовательность ЬСГОКЗ ЗЕЦ ГО N0: 193, где ЬСГОКЗ последовательности ЗЕЦ ГО N0: 193 определен формулой (IV)
Хааю-З-У-Е)—Хаап-Р-Хаа^-Хаахэ-Хааи-У, (IV) где Хаа10 может быть 01η или Зег;
Хаап может быть ТЬг, 01и или Αδρ;
Хаа12 может быть Vа1 или Αδη;
Хаа13 может быть Туг или РЬе и
Хаа14 может быть Зег, Αδη или 01η.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагаются выделенные антитела или их фрагменты, способные взаимодействовать с ТЬКЗ, содержащие вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, включая антитела, содержащие аминокислотную последовательность ЬСГОКЗ ЗЕЦ ГО N0:195, где ЬСГОКЗ последовательности ЗЕЦ ГО N0: 195 определен формулой (VI)
О-О-Хаа18—Хаахз- Хааго-Хаагх — Ха а 22—Хаа2з— Т, (VI) где Хаа18 может быть Туг, 01у или А1а;
Хаа19 может быть 01у, 01и или Αδη;
Хаа20 может быть Зег или ТЬг;
Хаа21 может быть Vа1, Не или Ьеи;
Хаа22 может быть Зег или Ьеи и
Хаа23 может быть Не, Зег, Рго или Туг.
В настоящем изобретении также предлагаются выделенные антитела и их фрагменты, способные
- 7 022832 взаимодействовать с ТЬК3, содержащие аминокислотные последовательности 1, 2 и 3 (НСИК1, НСИК2 и НСИК3) определяющего комплементарность участка тяжелой цепи (СИК) и аминокислотные последовательности 1, 2 и 3 (ЬСОК1, ЬСОК2 и ЬСИКЗ) определяющего комплементарность участка легкой цепи (СИК), показанные в табл. 1а.
Антитела, чьи аминокислотные последовательности антигенсвязывающих участков не отличаются существенным образом от последовательностей, представленных в табл. 1а (8ЕЦ ГО ΝΘκ: 49-121 или 191-196), рассматриваются как часть настоящего изобретения. Как правило, это относится к аминокислотным замещениям с аминокислотами, имеющими сходный заряд, гидрофобные или стереохимические характеристики. Также могут быть сделаны дополнительные замещения в каркасных участках, в отличие от антигенсвязывающих участков, в случае, если они не изменяют свойств антитела. Могут быть осуществлены и замещения, улучшающие свойства антитела, такие, например, как стабильность или аффинность. Одно, два, три, четыре, пять или шесть замещений могут быть сделаны в антигенсвязывающем участке.
Консервативные модификации приведут к созданию молекул, имеющих функциональные и химические характеристики, близкие к исходной молекуле. Существенные модификации функциональных и/или химических характеристик молекул могут быть достигнуты путем тех замещений в аминокислотной последовательности, которые приводят к изменениям (1) в структуре каркаса молекулы в районе замещения, например, к плоской или спиральной конформации, (2) в заряде или гидрофобности молекулы в районе замещения или (3) в размере молекулы. Например, консервативные аминокислотные замещения могут означать замещения природных аминокислотных остатков на неприродные, которые не сопровождаются изменением полярности или с незначительными изменениями полярности в районе замещения. Более того, любой природный аминокислотный остаток в полипептиде может быть замещен аланином, согласно способу, описанному как аланин-сканирующий мутагенез (МасЬеппаи с( а1., Ас1а РЬу8ю1. 8саиб. 8ирр1. 643:55-67, 1998; ЗакаИ е( а1., Αάν. Βίορίινκ. 35:1-24, 1998). Любое желательное аминокислотное замещение (консервативное или нет) может быть запланировано специалистом в случае необходимости. Например, аминокислотное замещение может быть использовано для того, чтобы идентифицировать важные аминокислотные остатки в последовательности или с целью увеличения/уменьшения аффинности молекул, предложенных в настоящем изобретении. Некоторые аминокислотные замещения показаны в табл. 1Ь.
Таблица1Ь
Начальный остаток Примерные замены Более консервативные замены
АЬа (А) УаЬ, Ьеи, Не УаЬ
Агд (К) Ьуз, 61п, Азп Ьуз
Аз η ( Ν) 6ΪΠ С1П
Аз р (ϋ) СЬи СЬи
Суз (С) Зег, АЬа Зег
Οίη (0) Азп Азп
СЬу (О Рго, АЬа АЬа
Шз (Н) Азп, Οΐη, Ьуз, Агд Агд
Не ( I) Ьеи, УаЬ, МеЕ, А1а, РЬе, ЫогЬеисЬпа Ьеи
Ьеи (Ь) ЫогЬеисЬпе, Не, УаЬ, МеЕ, АЬа, РЬе Не
Ьуз (К) Агд, 1, 4 Αοίάο сНатбпо- Ъи£1г1со, С1п, Аз п Агд
Ме£ <м> Ьеи, РЬе, Не Ьеи
РЬе (Г) Ьеи, УаЬ, Не, АЬа, Туг Ьеи
Рго (Р) А1а СЬу
5ег (5) ТЬг, АЬа, Суз ТЬг
ТЬг (Т) Зег Зег
Тгр (И) Туг, РЬе Туг
Туг (Υ) Тгр, РЬе, ТЬг, Зег РЬе
УаЬ (V) Не, МеЕ, Ьеи, РЬе, АЬа, ЫогЬеисЬпе Ьеи
- 8 022832
В некоторых вариантах осуществления консервативные аминокислотные замещения могут быть осуществлены путем введения в молекулу неприродных аминокислотных остатков, которое обычно происходит при химическом синтезе белков. Аминокислотные замещения могут быть осуществлены, например, с помощью ПЦР мутагенеза (патент США № 4683195). Могут быть созданы библиотеки новых вариантов с помощью хорошо известных способов, например, применения случайных (ΝΝΚ) или неслучайных кодонов, таких как кодоны ΌΥΚ, кодирующие 11 аминокислот (ΑΟΟΕΟΚΝΚδΥΆ), а также поиска вариантов с необходимыми свойствами в уже существующих библиотеках, как показано в примере 1. В табл. 1Ь показаны замещения, сделанные с целью улучшения характеристик антител в трех родственных антителах-антагонистах ТЬК.3 в пределах участков ЬСЭКЗ и НСЭР2.
В зависимости от определения антигенсвязывающих участков аминокислотные остатки антигенсвязывающих участков антител, предложенных в настоящем изобретении и, следовательно, аминокислотные остатки каркасных участков могут слегка отличаться для каждой тяжелой и легкой цепи. В табл. 2а и 2Ь показаны остатки антигенсвязывающих участков некоторых антител, предложенных в настоящем изобретении, согласно Кабату, Котии и ΙΜΟΤ, а также их композитные последовательности.
Таблица 1с
Семейство 17 ьсокз ЗЕО. Ιϋ Ν*:
тАЬ
17 А 5 Υ 0 с 0 Б Б т V
3
4
5 0 Е Ξ А
6 5 Ξ N 5 Ъ
7 3 3 3 ъ
общий типичный элемент А, 0, <3, 3 5 Υ 0 6, Е, 3 0/ N Б, 3 г, А, Ь т V 191
Семейство 17 НС№2 ЗЕО. Ιϋ № :
тАЬ
17 К I γ и к 3 к м Ϊ N Υ А V 3 V к 5
3 н к
4 К 3 Υ к
5
6
- 9 022832
Семейство 19 ΙΧϋΚ2 5Е0. Ιϋ № :
тАЪ
19 0 <3 Υ с 3 V 5 I Т
13 с Е 5 I Ь Ξ
- 10 022832
14 А Е т Р
15 с И г ь Υ
15-1 с N т ь Υ
15-2 с N т ь У
15-3 6 N т ь Υ
15-4 е N т ь Υ
15-5 с N т ь Υ
15-6 с N т ь Υ
15-7 с N т ь Υ
15-8 с в т ъ Υ
15-9 6 N т ь Υ
общий типичный элемент о 0 Υ,β,Α Ο,Ε,Ν 5,Т ν,Ι г Ь 5,Ь 1,5,Р ,Υ т 195
- 11 022832
Таблица 2а
тАЪ Определение СОК НСИК1 НСИК2 нсонз
5Е0 10 Последова- тельность ЗЕ<3 Щ Последова- тельность 5Е£ 10 Последова- тельность
14 ΙΜΟΤ 82 СУЕГТЫУИ 86 Ι0Ρ505ΥΤΝΥ 84 ΑΚΕΙΛΌ6ΥΜ0ΊΤ05
14 Кабат НУИ’УЙ ΡΙ6Ρ3ϋ5ΥΤΝΥΑΡ5Ρ0 ΕΙΛΟΕΎΜΟΤΡΏε
14 Котия ΘΥ3ΡΓ Ρ5Ώ3ΥΤ ςυοουμοτγο
14 Общий типичный элемент 111 ΟΥΞΡΤΝΥΗνβ 112 ΓΙΟΡ5Ο5ΥΤΝΥΑΡ5Γ0 84 ΑΚΕΣ.Υ0ΟΥΜ0ΤΓΟ5
15 1МСТ 82 ου5γτνυη 86 ΙΟΡ5ϋ5ΥΤΝΥ 84 ΑΡΕΣΥ0ΟΥΜΟΤΓΟ5
15 Кабат ΝΥΗνΟ ΡΙΕΡ3Ο3ΥΤΝΥΑΡ3Γ0 ΕΙΥΟαΥΜϋΤΡϋΞ
15 Котия ΘΥ3ΡΓ Ρ5Ε3ΥΤ Ι,ΥβΟΥΜϋΤΡϋ
15 Общий ТИПИЧНЫЙ элемент 111 ΘΥΞΓΤΝΥΗνΟ 112 ΓΙΕΡ30ΞΥΤΝΥΑΡ3Γ0 84 ΑΚΕΣΥΟΕΥΜΟΤΡΏΞ
15-1 1МСТ 82 ΟΥΞΓΤΝΥΜ 86 ΙΟΡΞΟΞΥΤΝΥ 84 ΑΚΕΙ,ΥΟΟΥΜϋΤΡΟΞ
15-1 Кабат ΝΥΗνΟ ΚΙΏΡ3ϋ5¥ΤΝΥΑΡ5Ρ<3 ΕΙ>Υ06ΥΜΟΤΡϋ5
15-1 Котия ΟΥΞΓΤ Ρ3ΕΞΥΤ ΕΥΟΟΥΜΟΤΓΕ
15-1 Общий ТИПИЧНЫЙ элемент 111 3Υ3ΡΤΝΥΜνΰ 114 ΚΙΟΡΞΟ5ΥΤΝΥΑΡ5Ρ0 84 ΑΚΕΕΥ0ΟΥΗΟΤΡΟ5
15-2 1МСТ 82 ΰΥΒΓΤΝΥΝ 86 ΙΟΡΞΟΞΥΤΝΥ 84 АКЕЬУОСУМОТРОЗ
15-2 Кабат ΗΥΜίε ΡΙϋΡ3Ώ3ΥΤΝΥΑΡ3Ρ<2 ЕЬУССУМОТгОЗ
15-2 Котия 0Υ5ΡΤ Ρ3ϋ3ΥΤ ι,ΥοεΥΜϋΤΡϋ
15-2 Общий типичный элемент 115 6Υ3ΓΤΝΥΗΙ0 112 ΡΙ0Ρ505ΥΤΝΥΑΡ5Ρ0 84 ΑΚΕΕΥ06ΥΜΟΤΡΟ5
15-3 1МСТ 32 ΟΥδΓΤΝΥΜ 86 ΙΟΡΞΟΞΥΤΝΥ 84 АКЕЬУОСУМЕТРОЗ
15-3 Кабат ΝΥΗΙ3 86 ΡΙϋΡ5ϋ3ΥΤΝΥΑΡ3Ρ<2 84 ΕΕΥ0ΘΥΗϋΤΡϋ3
15-3 Котия еузрт Ρ3Ό3ΥΤ ΕΥΟΕΥΜϋτΡϋ
15-3 Общий типичный элемент 116 ΟΥ3ΕΤΝΥΗΙ5 112 ΡΙΌΡ305ΥΤΝΥΑΡ3Γ0 84 АКЕЬУОСУИОТЕЕЗ
15-4 1МСТ 82 0Υ5ΡΤΝΥΗ 86 ΙϋΡΞ03ΥΤΝΥ 84 ΑΚΕΙιΎζίΟΥΚΒΤΓΟΕ
15-4 Кабат ΝΥΜνΟ ΡΙ0Ρ303ΥΤΗΥ3Ρ3Ρ0 ЕБУОСУМЭТРЭЗ
15-4 Котия 0Υ5ΓΤ Ρ5ϋ5ΥΤ ЬУССУМОТРО
15-4 Общий типичный элемент 111 0Υ5ΡΤΜΥΗν0 117 ΠβΡ5Ο5ΥΤΗΥ3Ρ5Εΰ 84 ΑΚΕΠΥΟΟΥΜΟΤΓΟε
15-5 1МСТ 82 ΟΥΕΡΤΝΥΗ 86 Ι0Ρ5ϋ5ΥΤΝΥ 84 АКЕЬУССУМПГРИЗ
15-5 Кабат ΝΥΜΙ3 ΚΙϋΡ5Ο5ΥΤΝΥ5Ρ3Ρ<2 Ε1Υζ3ΟΥΜϋΓΡϋ3
15-5 Котия 0Υ3ΓΤ Ρ3Ρ3ΥΤ ΕΥΏΘΥΜϋΤΡϋ
15-5 Общий типичный элемент 116 εΥ5ΓΤΝΥΜΙ5 118 ΚΙ6ΡΞ0ΞΥΤΝΥ3ΡΞΡ0 84 АКЕЬУОСУМРТРЦЗ
- 12 022832
15-6 1МСТ 82 ΟΥ3ΓΤΝΥΜ 86 ΙϋΡΞ05ΥΤΝΥ ΑΚΟΣΥςΟΥΜΏΤΓΟΞ
15-6 Кабат ΝΥΗΙ5 ΈΊϋΡ5ΏΞΥΤΝΥΑΡ5ΕΌ ίΤΥΟΟΎΜΟΤΡΟΞ
15-6 Котия ΟΥ5ΓΤ Ρ5ϋ5ΪΤ ΐιΥΟΟΥΜΏΤΓϋ
15-6 Общий типичный элемент 116 ΟΥ3ΡΤΝΥΗΙ5 112 РЮРЗОЗУТПУАРЗРО 119 ΑΚ0ΙιΥ0ΟΥΜΌΤΕϋ3
15-7 ΙΜ6Τ 82 ΟΥΞΓΤΝΥΗ 86 ΙϋΡΞΟΞΥΤΝΥ 84 АВЕЪУОйУМОТГОЗ
15-7 Кабат ΝΥΚνΟ ΡΙϋΡΞϋ3ΥΤΝΥΑΡ3Γζϊ ΕΣΥΟΟΥΜΟΤΡΌΕ
15-7 Котия ΟΥ5ΓΤ Ρ5ϋ3ΥΤ ΣΥΟΟΥΜΌΤΡΌ
15-7 Общий типичный элемент 111 ΟΎΞΓΤΝΥΗνΟ 112 ΓΙϋΡ3ΟΞΥΤΝΥΑΡΞΓΩ 84 ΑΡΕΙιΥΏ6ΥΜ0ΤΓϋ5
15-8 1МСТ 82 ΟΥ3ΓΤΝΥΗ 86 ΙϋΡ3ΟΞΥΤΝΥ 84 ΑΚΕΙ,ΥΟΟΥΜΟΤΓΟε
15-8 Кабат ΝΥΝνΟ ΡΙϋΡ3Ώ3ΥΤΝΥΑΡ5Ρ0 ЕЬУОСУМВТРОЗ
15-8 Котия 6Υ3ΓΤ Ρ3Ο3ΥΤ Ι,ΥΟΟΥΜϋΤΕΌ
15-8 Общий типичный элемент 111 ΟΥΞΡΤΝΥΝνΟ 112 ΠΟΡΞΌ5ΥΤΝΥΑΡ5Ρ2 84 ΑΚΕβΥΟΟΥΜΟΤΡΟδ
15-9 1МСТ 32 0Ϊ5ΓΤΝΥΜ 86 ΙΟΡ503ΪΤΝΥ 119 ΑΡ0ΕΥ0ΟΥΜϋΤΕϋ3
15-9 кабат ΝΥΫϊΙΞ нтрзрзутнузрзгос ОЬУОСУМОТРОЗ
15-9 Котия ΟΥΞΕΎ Ρ3ϋ3ΥΤ ΙΥΟΟΥΜϋΤΓϋ
15-9 Общий типичный элемент 116 ΟΥ3ΡΤΝΥΗΙ5 118 ΚΙΌΡ5Ρ5ΥΤΝΥ3ΡΞΡΟΟ 119 ΑΚΟΣΥΟΕΥΜΟΤΕΟε
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагаются выделенные антитела или фрагменты антител, способные взаимодействовать с ТЬКЗ, содержащие вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, где антитела содержат аминокислотные последовательности вариабельных участков тяжелой (УН) и легкой (УЬ) цепей, а также предлагаются вариабельные участки для каждой отдельной тяжелой и легкой цепи, как показано в табл. За. Р17, Р18 и Р19 относятся к вариантам антител, содержащих аминокислотную последовательность-консенсунс для семейств 17, 18 и 19 соответственно (см. пример 1).
- 1З 022832
Таблица 2Ь
ГПАЬ Опрсде- ление С БЕ ЬСОЕ1 Ι«ΟϋΚ2 ЬСОКЗ
ЗЕО ГО N0: Последовательность ЗЕО 10 ИО: Последова- тельность 5Е0 Ιϋ НО: Последова- тельность
14 ΙΜ6Τ 79 80 ΑΑΞ 65 ООАЕТУЗРТ
14 Кабат ΚΑΞΟΞΙΟΠΥΙΑ ААЗЗЬОЗ □ОАЕТУЗРТ
14 Котия БОЗТОЬУ ЛАЙ ΑΕΤΥΞΡ
14 Общий типичный элемент 109 ΕΑ505ΙΘΙ.ΎΙΑ 110 ААЗЗЬОЗ 85 ОСАЕТУЗРТ
15 1МСТ 79 051С1Л 80 АА5 87 ООСНТЬЗУТ
15 Кабат ЕАЗОЗГСЬУЬА ААЗЗЪОЗ ООСНТЬЗУТ
15 Котия НОЗЮЬУ ЛАЙ ΟΝΤΕΞΥ
15 Общий ТИПИЧНЫЙ элемент 109 ΚΑ505Κ3ΕΥΙΑ 110 ААЗЗЬОЗ 113 МСИТЬЗУТ
15-1 1МСТ 79 031СЬУ 80 АА5 87 ОССНТЬЗУТ
15-1 Кабат КАЗОЗХСЬУЬА ААЗЗЬОЗ ООСНТЬЗУТ
15-1 Котия зоз ΐΰΐ,γ АА8 СНТЬЗУ
15-1 Общий типичный элемент 109 КАЗОЗЮЬУЬА 110 ААЗЗЬОЗ 113 ООСИТЬЙУТ
15-2 1МСТ 79 □51ЙЬУ 80 АА5 87 □ОСЫТЬЗУТ
15-2 Кабат ЕАЗОЗГСЬУЬА ААЗЙЬОЗ ООСИТЬЗУТ
15-2 Котия 5051СЕУ АА5 бИТЬЗУ
15-2 Общий типичный элемент 109 ЕАЗОЗГЙЬУЬА 110 ААЗЗЬОЗ 113 ООШТЬЙУТ
15-3 1МСТ 79 ΟΞΙΟΣΥ 80 ΑΑΞ 87 СЮТЯТЬЙУТ
15-3 Кабат КАЗОЗЮЬУЬА ААЗЙЬОЗ ООСЫТЬЗУТ
15-3 Котия 503 ЮЪУ АА5 ΟΝΤΕΞΥ
15-3 Общий типичный элемент 109 ЕАЗОЗГСЬУЬА 110 ААЗЙЬОЗ 113 ООСЫТЬЙУТ
15-4 1МОТ 79 ОЗГСЬУ 80 АА5 37 <20ΟΝΤΕ5ΥΤ
15-4 Кабат ЕАЗОЗЮЪУЬА ААЗЗЬОЙ ЗОбИТЬЗУТ
15-4 Котия 5051С1У АА5 6ΝΤΕΞΥ
15-4 Общий типичный элемент 109 ЕАЗОЗЮЬУЬА 110 ААЗЗЫЭЗ 113 ООСЫТЪЗУТ
15-5 1МСТ 79 ОЗЮЬУ 80 АА5 87 ΟΟΟΝΊΈΞΪΤ
15-5 кабат ЕАЗОЗТСЬУЬА ААЙЗЬОЗ ООСИТЬЗУТ
15-5 Котия 503 ЮЪУ АА5 СНТЬЗУ
- 14 022832
15-5 Общий типичный элемент 109 КАЗДЗГСЬУЬА 110 ААЗЗЬОЗ 113 ООСЫТЬЗ¥Т
15-6 1МСТ 79 031СЬ¥ 80 АА5 87 ООСЫТЬЗУТ
15-6 Кабат ЕАЗОЗГСЬУЬА ААЗЗЬОЗ ООСНТЬЗУТ
15-6 Котия 303ΐΰΣΥ ΑΑΞ СЫТЬЗУ
15-6 Общий типичный элемент 109 ЕА3031СЬУЬА 110 ААЗЗЬОЗ 113 00ΟΝΤΓ5ΥΤ
15-7 1МСТ 05Ι8ΞΎ 80 АА5 87 00£ΝΤΙ,5ΥΤ
15-7 Кабат ААЗЗЬОЗ ООСИТЬЗУТ
15-7 Котия 50ΞΙΞ5Ϊ АА5 СИТЬЗУ
15-7 Общий типичный элемент 120 ΚΑ303Ι33Ϊ1Λ 110 ААЗЗЬОЗ 113 оаоытьзут
15-е 1НСТ 79 051СЬУ 80 АА5 87 ООСМТЬЗУТ
15-е Кабат КА3051СЬ¥ЬЫ ААЗЗЬОЗ ООСЫТЬЗУТ
15-е Котия ЗОЗЮЬУ ААЗ СКТЬЗУ
15-е Общий типичный элемент 121 ЕА5031СЬ¥ЬК 110 ААЗЗЬОЗ 113 ООСЫТЬЗУТ
15-9 1МСТ 79 031СЬ¥ 80 ААЗ 87 ООСИТЬЗУТ
15-9 Кабат КАЗОЗЮЬУЬА ААЗЗЬОЗ ооеитьзут
15-9 Котия ЗОЗЮЬУ ААБ СИТЬЗУ
15-9 Общий типичный элемент 109 КАЗОЗЮЬУЬА 110 ААЗЗЬОЗ 113 ООСНТЬЗУТ
Таблица 3 а
тАЬ 5ЕО Ю N0: тАЬ 5Е<2 Ю N0:
νΗ VI,' νΗ VI,
16 6 5 15-1 124 41
17 8 7 15-2 125 41
18 10 9 15-3 126 41
19 12 11 15-4 127 41
1 14 13 15-5 128 41
2 16 15 15-6 129 41
3 18 17 15-7 42 122
4 20 19 15-8 42 123
5 22 21 15-9 159 41
6 24 23 Г17 198 197
7 26 25 Г18 200 199
8 28 27
9 30 29
10 32 31
11 34 33
12 36 35
13 38 37
14 40 39
15 42 41
Г19 202 201
С1811 164 163
90ν<2/<25ν 212 209
10θνβ/ζ35ν 213 210
12θνθ/β5ν 214 211
14Ενβ 215 39
15Ενβ 216 41
Хотя варианты осуществления, проиллюстрированные в примерах, содержат вариабельные участки, один для тяжелой и один для легкой цепи, специалисты поймут, что альтернативные варианты осуществления могут содержать различные вариабельные участки тяжелой или легкой цепи. Определенный ва- 15 022832 риабельный участок может использоваться для поиска доменов, формирующих двудоменный специфичный антигенсвязывающий фрагмент, способный, например, связываться с ТЬК3. Поиск может быть осуществлен путем комбинаторных фаговых способов поиска с помощью, например, иерархического двойного комбинаторного метода, предложенного в публикации РСТ № \УО 92/01047. Согласно указанному методу индивидуальная колония, содержащая клон Н или Ь цепей, используется для инфицирования всей библиотеки клонов, кодирующих другую цепь (Ь или Н), а появляющийся в результате двухцепочечный специфический антигенсвязывающий домен селективно отбирается в соответствии с комбинаторными фаговыми способами.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предлагаются выделенные антитела или фрагменты антител, способные взаимодействовать с ТЬК3, содержащие вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, имеющие по меньшей мере 95%-ное сходство с аминокислотной последовательностью определенного вариабельного участка, как показано в табл. 3 а.
Следующий аспект настоящего изобретения заключается в выделенных антителах, имеющих определенную аминокислотную последовательность тяжелой и легкой цепей, как показано в табл. 3Ь.
Следующий аспект данного изобретения заключается в выделенных полинуклеотидах, кодирующих любое из антител, представленных в настоящем изобретении и его дополнениях. Некоторые полинуклеотиды описываются в настоящем изобретении, однако, другие полинуклеотиды, которые, принимая во внимание вырожденность генетического кода или предпочтительность использования кодонов в данной экспрессионной системе, кодируют предложенные в настоящем изобретении антитела-антагонисты, также рассматриваются как часть настоящего изобретения.
Некоторыми антителами-антагонистами могут быть антитела изотипов 1дО, ΙβΌ. 1дО, 1дА или 1дМ. Кроме того, эти антитела-антагонисты могут модифицироваться на постранскрипционном уровне за счет таких процессов, как гликозилирование, изомеризация, дегликозилирование или ненатуральная ковалентная модификация, такая как добавление активной группы полиэтиленгликоля (РЕО) или липидизация. Такие модификации могут происходить ίη νίνο или ίη νίίτο. Например, предлагаемые в настоящем изобретении антитела могут быть конъюгированы с полиэтиленгликолем с целью усовершенствования их фармакокинетических характеристик. Конъюгация может быть выполнена с помощью известных специалистам способов. Было показано, что конъюгация терапевтических антител с РЕО усиливает их фармакодинамику и при этом не изменяет функцию. См. ОескеП с1 а1., Ιηΐ. 1. Сапсег 87:382-390, 2000; КшдЫ е! а1., Р1а1е1е18 15:409-418, 2004; Ьеопд е! а1., Су!окше 16:106-119, 2001; апй Уапд е! а1., Рго1еш Епд. 16:761-770, 2003.
Таблица 3Ь
Фармакокинетические свойства антител, описанных в настоящем изобретении, также могут быть усилены за счет модификаций Рс с применением способов, хорошо известных специалистам. Например, тяжелая цепь иммуноглобулина изотипа 1дО4 в шарнирном участке содержит мотив Су8-Рго-8ег-Су8 (СР8С), способный формировать дисульфидные мостики между тяжелыми цепями или внутри тяжелой
- 16 022832 цепи, например, два Суз остатка в мотиве СРБС могут образовывать дисульфидный мостик с двумя другими остатками в другой тяжелой цепи (между), или два остатка Суз внутри данного СРБС мотива могут образовывать дисульфидный мостик друг с другом (внутри). Считается, что ίη νίνο энзимы, осуществляющие изомеризацию, способны конвертировать дисульфидные мостики между тяжелыми цепями во внутрицепочечные мостики и \тсе уегза (Аа1Ьегзе апб БсЬиигтап, 1ттипо1оду 105:9-19, 2002). Соответственно, поскольку пара тяжелая:легкая цепи (Н:Ь) в молекулах иммуноглобулина 1дО4 с внутрицепочечными мостиками в шарнирном участке тяжелой цепи не связаны друг с другом ковалентной связью, она может диссоциировать на Н:Ь мономеры, а вслед за этим реассоциировать, формируя биспецифичную, гетеродимерную молекулу иммуноглобулина 1дО4. В биспецифичных антителах 1дО два участка РаЬз молекулы антитела отличаются эпитопами, с которыми они связываются. Замещение аминокислотного остатка Бег в мотиве СРБС шарнирного участка 1дО4 на остаток Рго приводит к 1дО1-подобному поведению, например, молекулы формируют стабильные дисульфидные мостики между тяжелыми цепями и, следовательно, не могут участвовать в обмене Н:Ь с другой молекулой иммуноглобулина 1дО4. В одном из вариантов осуществления описанные в данном изобретении антитела составляют Рс домен иммуноглобулина 1дО4 с мутацией δ в Р в мотиве СРБС. Мотив СРБС, как правило, расположен в позиции остатка 228 зрелой тяжелой цепи, но расположение этого мотива может изменяться в зависимости от длины СОК.
Кроме того, в антителах, описанных в настоящем изобретении, участки, влияющие на связывание с рецепторами Рс, отличными от рецептора РсКп, могут быть удалены. Например, в антителах, описанных в настоящем изобретении, участки, связывающие рецептор Рс, вовлеченный в активность АОСС, могут быть удалены. Например, мутация Ьеи234/Реи235 в шарнирном участке 1дО1 в Ь234А/Ь235А или мутация РЬе235/Ьеи236 в шарнирном участке 1дО4 в Р235А/Ь236А минимизирует связывание РсК и уменьшает способность иммуноглобулина опосредовать комплементарно зависимую цитотоксичность и АОСС. В одном варианте осуществления настоящего изобретения описанные антитела содержат Рс домен иммуноглобулина 1дО4 с мутацией Р235А/Ь236А. Расположение этих аминокислотных остатков в зрелых тяжелых цепях указано выше, но может изменяться в зависимости от длины СОК. Некоторые антитела с мутациями Р235А/Ь236А являются антителами, чьи тяжелые цепи кодируются последовательностью БЕЦ ГО N03: 218, 219 или 220.
Полностью человеческие, адаптированные к человеку, гуманизированные и аффинно-зрелые молекулы антител или фрагменты антител являются частью настоящего изобретения, также как гибридные и химерные белки. Аффинность антитела к антигену может быть улучшена с помощью продуманной конструкции или случайного созревания аффинности с использованием хорошо известных способов случайного или направленного мутагенеза или комбинаторных фаговых библиотек. Например, вариация расположенных в каркасном сегменте аминокислотных остатков зоны Верньера может быть использована для модулирования аффинности антитела согласно патенту США № 6639055. Недавно А1та§го е! а1. описали определяющие аффинность аминокислотные остатки, АОК, которые расположены в СОК. Биоинженерное вмешательство в архитектуру этих участков может увеличить аффинность (СоЬаидЬ е! а1., ί. Μο1 ΒίοΙ. 378: 622-633, 2008).
Частью настоящего изобретения являются полностью человеческие, адаптированные к человеку, гуманизированные, аффинно-зрелые молекулы антител или фрагментов антител, модифицированные с целью улучшения стабильности, селективности, перекрестной реактивности, аффинности, иммуногенности или достижения других желательных биологических характеристик. Стабильность антитела определяется целым рядом факторов, включая (1) свертывание индивидуальных доменов, влияющее на естественную стабильность, (2) поверхностное взаимодействие белков, определяющее спаривание НС и ЬС, (3) глубину расположения полярных и заряженных аминокислотных остатков, (4) сеть водородных мостиков между полярными и заряженными аминокислотными остатками; а также (5) поверхностный заряд и распределение полярных аминокислотных остатков наряду с другими внутри- и межмолекулярными взаимодействиями (ЛУогп е1 а1., ί. Мо1. Вю1., 305:989-1010, 2001). Способные дестабилизировать структуру аминокислотные остатки могут быть идентифицированы на основании кристаллической структуры антитела или путем молекулярного моделирования, а эффект определенных аминокислотных оснований на стабильность антитела может быть проверен путем создания мутаций и оценки их влияния. Один из способов увеличить стабильность антитела заключается в том, чтобы увеличить срединную точку термоперехода (Тт), измеряемую путем дифференциальной сканирующей калориметрии (ОБС). Как правило, Тт белка имеет положительную корреляцию с его стабильностью и отрицательную корреляцию с подверженностью нарушениям третичной структуры и денатурации в растворах, а также деградации, которая также зависит от склонности белка к нарушению третичной структуры (Кетте1е е! а1., ВюрЬагт., 13:36-46, 2000). Многие исследования свидетельствуют о корреляции между степенью физической стабильности, измеренной как термостабильность путем ЭЗС. и измерениями, проведенными с помощью других способов (Оир!а е! а1., ААРБ РЬагтБсЬ 5Е8, 2003; Ζΐιηηβ е! а1., ί. РЬагт. БсЬ 93:3076-3089, 2004; Маа е! а1., Ιη!. ί. РЬагт., 140:155-168, 1996; Веби-Аббо е! а1., РЬагт. Кез., 21:1353-1361, 2004; Кетте1е е! а1., РЬагт. Кез., 15:200-208, 1997). Исследования различных формул лекарственных композиций позволяют предположить, что Тт фрагмента РаЬ имеет значение для долгосрочной физической стабильности
- 17 022832 соответствующих тЛЬ. Различия в аминокислотной последовательности либо в каркасном сегменте, либо в пределах сегментов СГОК могут оказывать значительное влияние на термостабильность домена РаЬ (Уа5И1, е! а1., РЕВ8 Ьеб. 353:143-146, 1994).
Предложенные в настоящем изобретении антитела-антагонисты могут связывать ТЬК3 с Кь меньшей либо равной 10-, 10- , 10-, 10- , 10- или 10- М. Аффинность данной молекулы к ТЬК3, например, такой как антитело, может быть определена экспериментально с помощью любого подходящего способа. Такие способы могут включать использование аппаратуры В1асоге или ΚίηΕχΑ, набора реагентов ЕЬ18А или способов конкурентно-связывающего анализа, хорошо известных специалистам.
Антитела-антагонисты, с необходимой аффинностью связывающиеся с данным гомологом ТЬКЗ, могут быть выбраны в библиотеках вариантов или фрагментов с помощью способов, основанных на созревании аффинности антитела. Антитела-антагонисты могут быть идентифицированы с помощью соответствующих способов на основе их способности ингибировать биологическую активность ТЬКЗ. Такие способы могут включать тестовую систему с геном-репортером или измерение с помощью уже известных способов производства цитокинов, как показано в приложении.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения заключается в векторе, содержащем по меньшей мере один предложенный в данном изобретении полинуклеотид. Такие векторы могут быт плазмидными, вирусными, бакуловирусными экспрессионными векторами, векторами на основе транспозонов или любыми другими векторами, пригодными для интродукции предложенных в настоящем изобретении полинуклеотидов в данный организм или в данное генетическое окружение.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения заключается в клетках-хозяевах, имеющих любой из предложенных в настоящем изобретении полинуклеотидов, кодирующих полипептид, содержащий вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина с аминокислотной последовательностью 8ЕС ГО N0: 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 159, 198, 200, 202, 164, 212, 213, 214, 215 или 216 или вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина с аминокислотной последовательностью 8ЕЦ ГО N0: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 122, 123, 197, 199, 201, 163, 209 или 210.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения заключается в клетках-хозяевах, имеющих любой из предложенных в настоящем изобретении полинуклеотидов, кодирующих полипептид, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина с аминокислотной последовательностью, представленной в 8ЕЦ ГО N0: 102, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 160, 204, 206, 208, 220, 166 или 168, или легкую цепь иммуноглобулина с аминокислотной последовательностью, представленной в 8ЕЦ ГО N0: 155, 156, 157, 158, 203, 205, 207, 165 или 167. Такими клетками-хозяевами могут быть эукариотические, бактериальные, растительные клетки или клетки архей. Как правило, используются эукариотические клетки млекопитающих, насекомых, птиц или другие клетки животного происхождения. Эукариотические клетки млекопитающих включают бессмертные клеточные линии, такие как гибридомы или клеточные линии миеломы, например, 8Р2/0 (Американская коллекция типовых культур (АТСС), Манассас, УА, СКЬ-1581), N80 (Европейская коллекция клеточных культур (ЕСАСС), Солсбери, Уилтшир, Великобритания, ЕСАСС № 85110503), Р0 (АТСС СКЬ-1646) и Ад653 (АТСС СКЬ-1580) мышиные клеточные линии. Обычно используется линия клеток миеломы человека И266 (АТТС СКЬ-Т1В-196). Другие полезные клеточные линии включают линии, полученные из яичников китайского хомячка (СНО), например, линии СН0К18У (Гоη/а Вю1о§1е8, Уа1кег8\|11е. ΜΌ), СН0-К1 (АТСС СКЬ-61) или ΌΟ44.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения заключается в способе получения антител, способных взаимодействовать с ТЬК3, включающем культивирование предложенных в настоящем изобретении клеток-хозяев, и отборе антител, производимых клетками-хозяевами. Способы создания и очистки антител хорошо известны специалистам в данной области.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения заключается в клеточной линии гибридомы, производящей предложенные в настоящем изобретении антитела.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения заключается в выделенных антителах или их фрагментах, способных взаимодействовать с ТЬК3, причем данные антитела связываются по меньшей мере с одним принадлежащим ТЬК3 аминокислотным остатком из группы (а) аминокислотные остатки К467, К488 или К489 из последовательности 8ЕЦ ГО N0: 2; (Ь) аминокислотный остаток К467 из последовательности 8ЕС ГО N0: 2; (с) аминокислотный остаток К489 из последовательности 8ЕЦ ГО N0: 2; (б) аминокислотные остатки К467 в К489 из последовательности 8ЕЦ ГО N0: 2; (е) аминокислотные остатки К467, К488 и К489 в 8ЕЦ ГО N0: 2. Выделенные антитела могут связываться с по меньшей мере одним аминокислотным остатком ТЬК3, выбранным из аминокислотных остатков Υ465, Υ468, N517, Ό536, Ц538, Н539, N541, Е570 или К619 в 8ЕС ГО N0:2.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения заключается в описании выделенных антител или их фрагментов, причем антитела связывают по меньшей мере один аминокислотный остаток рецептора ТЬК3, выбранный из группы остатков Ό116 или К145 в 8ЕЦ ГО N0: 2.
Несколько хорошо известных способов могут быть использованы для определения эпитопа антител, предложенных в настоящем изобретении. Например, в случае, когда известна структура каждого из компонентов, может быть использован анализ ίη ЧПсо прикрепления одного белка к другому с целью иден- 18 022832 тификации способных к взаимодействию участков. Может быть проведено избирательное замещение водорода дейтерием в антигене и антителе с целью определения участков антигена, способных связываться с антителом. Сегментный и точечный мутагенез, модифицирующие антиген, могут быть использованы для локализации необходимых для связывания антитела аминокислот. Для таких больших белков, как ТЬК3, картирование путем точечного мутагенеза может быть облегчено предварительным определением участка связывания с помощью компьютерного анализа соединения белков, сегментного мутагенеза или избирательного замещения водорода дейтерием.
Другой аспект настоящего изобретения относится к выделенным антителам или их фрагментам, способным взаимодействовать с ТЬК3, которые конкурируют за связывание с ТЬК3 с моноклональными антителами, причем эти моноклональные антитела состоят из аминокислотных последовательностей участков 1, 2 и 3, определяющих комплементарность (СОК) определенных тяжелых цепей, аминокислотных последовательностей СОК 1, 2 и 3 определенных легких цепей, а также из аминокислотных последовательностей вариабельных участков определенных тяжелых цепей (УН) или аминокислотных последовательностей вариабельных участков определенных легких цепей (УЬ) Как правило, моноклональные антитела, представленные в настоящем изобретении, являются выделенными антителами, содержащими вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность 5>ЕО ΙΌ ΝΘ: 216, и аминокислотную последовательность вариабельного участка легкой цепи 5>ЕО ГО ΝΘ: 41, а также антитела, содержащие аминокислотную последовательность вариабельного участка тяжелой цепи 5>ЕО ГО ΝΘ: 214 и аминокислотную последовательность вариабельного участка легкой цепи 5>ЕО ГО ΝΘ: 211.
Анализ конкуренции за связывание с ТЬК3 может быть проведен ίη νίίτο с помощью уже известных способов. Например, оценка связывания МГО §и1£о-Тад™ NΗ§-эфир-меченого антитела с ТЬК3 в присутствии немеченого антитела может быть проведена с помощью ЕЫ8А. Как правило, в настоящем изобретении используются антитела тАЬ 12, тАЬ 15 и тАЬ с1811 (см. табл. 3а). Ранее известные антитела с1068 против ТЬК3 и их производные (см. описание в публ. РСТ № νΘ 06/060513А2), ТЬК3.7 (еВю8С1епсе8, саί по 14-9039) и 1тдепех 1МО-315А (1тдепех 1МО-315А; созданный против аминокислот аминокислотной последовательности 55-70, У^N^ТΗN^^КК^РААN, ТЬК3 человека) не конкурируют за связывание с ТЬК3 с тАЬ 12, 15 или с тАЬ с1811, как показано в примере 5.
Следующий аспект настоящего изобретения заключается в выделенных антителах, способных взаимодействовать с ТЬК3, причем антитела имеют по меньшей мере одно из следующих свойств:
a) уменьшают биологическую активность ТЬК3 при анализе ш νίίτο с использованием генарепортера ро1у(1:С) ΝΡ-кВ >50% при концентрации <1 мкг/мл;
b) ингибируют >60% продукцию 1Ь-6, либо СХСЬ5/1Р-10 в клетках ВЕА8-2В, стимулированных воздействием <100 нг/мл ро1у(1:С) при <10 мкг/мл;
c) ингибируют >50% продукцию ГО-6, либо СХСЬ5/1Р-10 в клетках ВЕА8-2В, стимулированных воздействием <100 нг/мл ро1у(1:С) при<0,4 мкг/мл;
б) ингибируют >50% продукцию ГО-6 в клетках NΗВΕ, стимулированных воздействием 62,5 нг/мл ро1у(1:С) при <5 мкг/мл;
е) ингибируют >50% продукцию ГО-6 в клетках NΗВΕ, стимулированных воздействием 62,5 нг/мл ро1у(1:С) при <1 мкг/мл;
ί) ингибируют >20% ро1у(1:С)-индуцированную продукцию ΙΡΝ-γ, ГО-6 или ГО-12 в клетках РВМС при <1 мкг/мл.
д) ингибируют биологическую активность ТЬК3 яванского макака в тестовой системе ш уйго, с использованием гена-репортера при Ю50 <10 мкг/мл; или
1ι) ингибируют биологическую активность ТЬК3 яванского макака в тестовой системе ш уйго, с использованием гена-репортера ГОКЕ при Ю50 <5 мкг/мл.
Способы лечения.
Предложенные в настоящем изобретении антагонисты ТЬК3, например антитела-антагонисты ТЬК3, могут использоваться для воздействия на иммунную систему. Опуская теоретическое обоснование, авторы утверждают, что предложенные в настоящем изобретении антагонисты могут модулировать иммунную систему, предотвращая или уменьшая связывание лиганда с ТЬК3, димеризацию ТЬК3, интернационализацию ТЬК3 или перенос ТЬК3. Предложенные в настоящем изобретении способы могут быть использованы для лечения любого животного. Например, это могут быть млекопитающие, в том числе человек, грызуны, собаки, кошки и сельскохозяйственные животные. Например, представленные в настоящем изобретении антитела могут быть полезны в качестве антагонистов активности ТЬК3 при лечении воспаления, воспалительных заболеваний и метаболических расстройств, а также в изготовлении медикаментозных препаратов для лечения указанных заболеваний, причем настоящее изобретение также предлагает предназначенную для введения дозу.
В целом воспалительные, инфекционные или иммуноопосредованные воспалительные заболевания, которые могут быть предотвращены или вылечены введением предложенных в настоящем изобретении антител-антагонистов ТЬК3, включают заболевания, опосредованные действием цитокинов или хемокинов, а также заболевания, которые целиком или частично возникают в результате активации ТЬК3 или
- 19 022832 сигнального пути ТЬК3. Примерами таких воспалительных заболеваний являются связанные с сепсисом заболевания, воспалительные заболевания пищеварительного тракта, аутоиммунные, воспалительные и инфекционные заболевания. Также считается, что рак, сердечно-сосудистые заболевания, нарушения метаболизма, невралгические и фиброзные заболевания могут быть предотвращены или вылечены введением предложенных в настоящем изобретении антител-антагонистов ТЬК3. Воспаление может затрагивать одну ткань или быть системным. Как правило, поражаются ткани дыхательных путей, легкие, желудочно-кишечный тракт, тонкий и толстый кишечник, толстая кишка, прямая кишка, сердечнососудистая система, ткань сердца, кровеносные сосуды, суставы, мозг, синовиальные ткани, хрящевая ткань, эпителий, эндотелий, печень и жировая ткань. Типичными системными воспалительными заболеваниями являются цитокиновый шторм или гиперцитокинемия, синдром системного воспалительного ответа (8ΙΚ8), реакция трансплантат против хозяина (ОУНО), синдром острой дыхательной недостаточности (АГОЭ8), синдром острой тяжелой дыхательной недостаточности (8АР8), катастрофический антифосфолипидный синдром, тяжелые вирусные инфекции, грипп, пневмония, шок или сепсис.
Воспаление является защитной реакцией организма на атаку проникающего агента. Воспаление состоит из последовательности событий, в которой участвуют многие клеточные или гуморальные медиаторы. С другой стороны, супрессия воспалительного ответа может приводить к ослаблению иммунитета; тем не менее, при отсутствии контроля, воспаление может приводить к серьезным осложнениям, таким, как хронические воспалительные заболевания, (например, астма, псориаз, артрит, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, воспалительное заболевание пищеварительного тракта и тому подобные), септическому шоку и полиорганной недостаточности. Важно, что все эти заболевания имеют общие воспалительные медиаторы, такие, как цитокины, хемокины, воспалительные клетки и другие медиаторы, секретируемые этими клетками.
Активация ТЬК3 лигандами ро1у(ПС), двухцепочечной РНК или эндогенными матричными РНК ведет к активации сигнального пути, приводящего к синтезу и секреции провоспалительных цитокинов, активации и рекрутингу участвующих в воспалительной реакции клеток, таких как макрофаги, гранулоциты, нейтрофилы и эозинофилы, а также к клеточной смерти и разрушению ткани. ТЬК3 индуцирует секрецию ГО-6, ГО-8, ГО-12, ФНО-α, ΜΙΡ-1, СХСЬ5/ГО-10 и ΚΑΝΨΕ8, а также провоспалительных цитокинов и хемокинов, участвующих в рекрутинге и активации иммунокомпетентных клеток, приводя к разрушению ткани в случае аутоиммунных и других воспалительных заболеваний. Эндогенные матричные РНК, являющиеся лигандами ТЬК3, освобождаются из некротических клеток в процессе воспаления, и могут приводить к возникновению замкнутой положительной обратной связи, которая активирует ТЬК3, приводя к продолжению воспалительного процесса и дальнейшему разрушению ткани. Антагонисты ТЬК3, такие как антитела-антагонисты ТЬК3, могут участвовать в нормализации секреции цитокинов, уменьшать рекрутинг участвующих в воспалительном процессе клеток, а также уменьшать повреждение ткани и клеточную смерть. Следовательно, антагонисты ТЬК3 имеют терапевтический потенциал в лечении воспаления и целого спектра воспалительных заболеваний.
Примером воспалительных заболеваний являются связанные с сепсисом заболевания, к которым относится синдром системного воспалительного ответа (8ΙΚ8), септический шок или синдром полиорганной недостаточности (ΜΟΌ8). Двухцепочечные РНК, освобождаемые при вирусных, бактериальных, грибковых или паразитарных инфекциях, а также некротическими клетками, могут способствовать возникновению сепсиса. Опуская теоретическое обоснование, утверждается, что лечение антагонистами ТЬК3 может дать положительный терапевтический эффект, увеличивая время жизни пациентов, страдающих от связанных с сепсисом воспалительных заболеваний, или предотвратит распространение местного воспалительного процесса (например, в легких) и превращения воспаления в системное заболевание за счет естественной антимикробной активности, а также за счет взаимодействия с антимикробными агентами, минимизируя локальное воспаление, участвующее в развитии патологии, или за счет любой комбинации указанных эффектов. Такое вмешательство может быть достаточным для возможности проведения необходимого для выживания пациента дополнительного лечения (например, лечения основной инфекции или уменьшения уровня цитокинов). Сепсис может исследоваться на животных моделях, например, у мышей, введением Ό-галактозамина и ро1у(ПС). В данных моделях Ό-галактозамин является гепатотоксином, который функционирует как агент, увеличивающий вероятность возникновения сепсиса, тогда как ро1у(ПС) является индуцирующим сепсис соединением, которое имитирует двухцепочечную РНК, и активирует ТЬК3. Лечение антагонистами ТЬК3 может увеличить показатели выживаемости при сепсисе у мышей, и, следовательно, антагонисты ТЬК3 могут быть полезны в лечении сепсиса.
Воспаление желудочно-кишечного тракта является воспалением слизистой оболочки и включает острое и хроническое состояние. Острое воспаление обычно характеризуется коротким начальным периодом и инфильтрацией или притоком нейтрофилов. Хроническое воспаление обычно характеризуется относительно более длинным начальным периодом и инфильтрацией или притоком мононуклеарных клеток. Слизистая оболочка может быть слизистой оболочкой пищеварительного тракта (включая тонкий и толстый кишечник), прямой кишки, выстилающего слоя желудка или ротовой полости. Типично к хроническим желудочно-кишечным воспалительным заболеваниям относятся воспалительное заболевание пищеварительного тракта (ΙΒΌ), индуцированные внешними воздействиями колиты (например, желу- 20 022832 дочно-кишечное воспаление (например, колиты), вызванное или сопутствующее (например, в качестве побочного эффекта) терапевтическим режимам, таким как химиотерапия, радиотерапия и т.п.), инфекционный колит, ишемический, коллагеновый или лимфоцитный колит, некротический энтероколит, колиты, вызванные другими заболеваниями, такими как хроническая грануломатозная болезнь или целиакия, пищевые аллергии, гастриты, инфекционные гастриты или энтероколиты (например, хронический гастрит, вызванный инфекцией НеНсоЬаСег ру1ог1), а также другие формы желудочно-кишечного воспаления, вызванные инфекционным агентом.
Воспалительные заболевания пищеварительного тракта (ΙΒΌ) включают группу хронических воспалительных заболеваний обычно неизвестной этиологии, например язвенный колит (ИС) и болезнь Крона (СО). Клинические и экспериментальные наблюдения позволяют предположить, что патогенез ΙΒΌ основан на многих факторах, включающих генетическую предрасположенность и влияние окружающей среды. При воспалении пищеварительного тракта повреждение ткани является результатом неправильного или чрезмерного иммунного ответа на антиген или микрофлору кишечника. Существует несколько животных моделей воспалительных заболеваний пищеварительного тракта. Наиболее широко используемыми являются модель колита, индуцированного введением 2,4,6-тринитробензолсульфоновой кислоты/этанола (ТПВ§), и модель с использованием оксазалона, который индуцирует хроническое воспаление и изъязвление прямой кишки (№игаЙ1 е1 а1., 1п1егп. Ке\'. 1ттипо1 19:51-62, 2000). Другая модель использует декстран сульфата натрия (Όδδ), который индуцирует острый колит, сопровождающийся такими симптомами, как кровавая диарея, потеря веса, сокращение прямой кишки и вызываемое инфильтрацией нейтрофилов изъязвление слизистой оболочки. Όδδ-индуцированные колиты гистологически характеризуются инфильтрацией участвующих в воспалении клеток в собственную пластинку слизистой оболочки, лимфоидной гиперплазией, поражением центральной крипты и изъязвлением эпителия (Непйпсккоп е1 а1., Сктса1 МюгоЬю1о§у Кеν^ете8 15:79-94, 2002). Другая модель основана на адоптивном переносе наивных СО45КВЬ1бЬ СЭ4 Т-клеток мышам линий КАО или 8СГО. В данной модели наивные Тклетки донора атакуют кишечник реципиента, вызывая хроническое воспаление пищеварительного тракта и симптомы, сходные с воспалительным заболеванием пищеварительного тракта человека (Кеай апй Ро\упе, Сигг. РгоЮс. 1ттипо1. СЬарЮг 15 υηίΐ 15.13, 2001). Введение предложенных в настоящем изобретении антагонистов в любую из названных моделей может быть использовано для оценки потенциальной эффективности указанных антагонистов в облегчении симптомов и изменении течения болезней, связанных с воспалительным процессом в пищеварительном тракте, например, воспалительного заболевания пищеварительного тракта. Существуют несколько возможностей лечения ΙΒΌ, например, лечение антителами против ФНО-α уже в течение десятилетия используется для лечения болезни Крона (Уап Аккске е1 а1., Еиг. 1. Ркагтасо1. ЕриЬ 0с1 2009). Тем не менее, значительная часть пациентов невосприимчива к используемым в настоящее время способам лечения (Напаиег е1 а1., Ьапсе! 359:1541-1549, 2002; Напаиег е1 а1., Оак1гоеп1его1о§у 130:323-333, 2006) и, следовательно, необходима выработка новых подходов для лечения указанных пациентов.
Другим примером воспалительного заболевания является воспаление легких. Типично, воспаление легких включает вызванные инфекцией заболевания легких, в том числе связанные с вирусными, бактериальными, грибковыми, паразитарными и прионовыми инфекциями; индуцированные аллергеном заболевания легких; индуцированные загрязнением окружающей среды заболевания легких, такие как асбестоз, силикоз и бериллиоз; вызванные аспирацией желудочного содержимого, а также вызванные иммунной дисрегуляцией заболевания, воспалительные заболевания, зависящие от генетической предрасположенности, такие как кистозный фиброз, заболевания, индуцированные физической травмой легких, например, нарушение легочной вентиляции. Указанные воспалительные заболевания также включают астму, эмфизему, бронхиты, хронические обструктивные заболевания легких (С0РЭ), саркоидозы, гистиоцистозы, лимфоангиоматозы, острое повреждение легких, синдром острого нарушения дыхания, хроническое заболевание легких, бронхопульмональная дисплазия, внебольничная пневмония, госпитальная пневмония, вызванная искусственной вентиляцией легких пневмония, сепсис, вирусная пневмония, инфекции гриппа, парагриппозные инфекции, инфекции ротавируса, инфекции человеческого метапневмовируса, респираторно-синциальные инфекции, легочный аспергиллез и другие грибковые инфекции. Как правило, связанные с инфекцией воспалительные заболевания могут включать вирусную или бактериальную пневмонию, в том числе тяжелую пневмонию, кистозный фиброз, бронхит, обострения заболеваний дыхательных путей и синдром острого нарушения дыхания (АКЭ8). Такие связанные с инфекцией заболевания могут вовлекать множественные инфекции, такие как первичную вирусную и вторичную бактериальную инфекции.
Астма является воспалительным заболеванием легких, которое характеризуется гиперчувствительностью дыхательных путей (АНК), бронхостенозом, хрипами в легких, эозинофильным или нейтрофильным воспалением, гиперсекрецией слизи, субэпителиальным фиброзом и увеличением уровня иммуноглобулина 1дЕ. Больные астмой пациенты испытывают приступы, ухудшение симптомов, чаще всего вследствие инфекций респираторного тракта (например, риновирус, грипп, гемофильная палочка НаеторЫ1ик тЛиеп/а, и пр.). Астматические атаки могут провоцироваться факторами окружающей среды (например, аскариды, насекомые, животные (например, кошки, собаки, кролики, мыши, крысы, хомячки,
- 21 022832 морские свинки и птицы), грибки, загрязнение воздуха (например, табачный дым), раздражающие газы, запахи, испарения, аэрозоли, химикаты, пыльца, физические упражнения или холодный воздух). Кроме астмы, некоторые хронические, поражающие легкие воспалительные заболевания характеризуются нейтрофильной инфильтрацией дыхательных путей, например хроническое обструктивное заболевание легких (СОРЭ), бактериальная пневмония и кистозный фиброз (Ыпйеп е! а1., Еиг. РекрН. I. 15:973-977, 2000; РаНтап е! а1., СНп. 1ттипо1. 115:268-276, 2005), а такие заболевания, как СОРЭ, аллергические риниты и кистозный фиброз характеризуются гиперчувствительностью дыхательных путей (РаНу апй О'Вугпе, Ат. I. Ре^рН. Сгй. Саге Мей. 163:822-823, 2001). В качестве животных моделей для изучения астмы и воспаления дыхательных путей обычно используют модель провокационного введения овальбумина, а также модели, в которых сенсибилизация животного достигается введением метахолина (Не88е1 е! а1., Еиг. I. РНагтасо1. 293:401-412, 1995). Ингибирование продукции цитокинов и хемокинов в культурах эпителиальных бронхиальных клеток человека, бронхиальных фибробластов или клеток гладкой мускулатуры дыхательных путей может быть использовано в качестве экспериментальных моделей ш уйго. Введение предложенных в настоящем изобретении антагонистов в любую из указанных моделей может быть использовано для оценки эффективности данных антагонистов в облегчении симптомов и изменении течения астмы, воспалений дыхательных путей, СОРИ и других подобных заболеваний.
Другие воспалительные заболевания и нейропатии, которые могут быть предупреждены или вылечены представленными в настоящем изобретении способами, являются болезнями, вызванными аутоиммунными заболеваниями. Эти заболевания и нейропатии включают рассеянный склероз, системную красную волчанку и нейродегенеративные заболевания и расстройства центральной нервной системы (ΟΝ8), например болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона, биполярное аффективное расстройство и амиотрофический боковой склероз (АЬ8), болезни печени, например первичный билиарный цирроз, первичный склерозирующий холангит, неалкогольная жировая инфильтрация (жировой метаморфоз) печени/стеатогепатит, фиброз, гепатит С (НСУ) и гепатит В (НВУ), диабет и резистентность к инсулину, сердечно-сосудистые расстройства, например, атеросклероз, церебральные кровотечения, инсульт и инфаркт миокарда, артрит, ревматоидный артрит, псориатический артрит и ювенильный ревматоидный артрит (ЖА), остеопороз, остеоартрит, панкреатит, фиброз, энцефалит, псориаз, гигантоклеточный артериит, анкилозный спондилит, аутоиммунный гепатит, вирус иммунодефицита человека (Ηΐν), воспалительные заболевания кожи, трансплантаты, рак, аллергии, эндокринные заболевания, заживление ран, другие аутоиммунные заболевания, гиперчувствительность дыхательных путей, а также клеточные, вирусные или опосредованные прионами инфекции и заболевания.
Артрит, включая остеоартрит, ревматоидный артрит, возникший в результате повреждения артрит суставов, и другие подобные заболевания, являются обычными воспалительными заболеваниями, лечение которых может быть улучшено за счет терапевтического использования противовоспалительных белков, таких, как представленные в настоящем изобретении антагонисты. Например, ревматоидный артрит (РА) является системным заболеванием, поражающим все тело, и одной из самых часто встречаемых форм артрита. Поскольку ревматоидный артрит приводит к поражению тканей, лиганды ТЬР3, скорее всего, присутствуют в том месте, где происходит воспаление. Активация сигнального пути ТЬР3 может приводить к непрекращающемуся воспалению и повреждению других тканей в воспаленном суставе.
Существуют животные модели для изучения ревматоидного артрита. Например, при моделировании коллагениндуцированного артрита (С1А) у мыши развивается хронический воспалительный артрит, который сильно напоминает человеческий ревматоидный артрит. Введение представленных в настоящем изобретении антагонистов ТЬР3 модельной мыши С1А может быть использовано для оценки применения указанных антагонистов для облегчения симптомов и изменения течения болезни.
Сахарный диабет (лат. Э|аЬе1е5 теШ!и§) является многофакторным заболеванием и характеризуется гипергликемией (ЬеРойН е! а1., (ейк.), Э|аЬе1е5 МеШ!ик, ЫрршсоН-Рауеп РиЬНкНегк, РИ1айе1рИа, Ра. И.8.А. 1996, а также все упомянутые в работе ссылки). Неконтролируемая гипергликемия может приводить к увеличению преждевременной смертности вследствие увеличения риска микро- и макроангиопатий, включая нефропатии, нейропатии, ретинопатии, гипертензии, цереброваскулярные заболевания и ишемическую болезнь сердца. Следовательно, контроль гомеостаза глюкозы является критически важным в лечении диабета.
Диабеты могут быть разделены на две большие группы, основываясь на вызывающих заболевание дефектах: диабет типа 1 (инсулинозависимый сахарный диабет, ΙΌΌΜ), возникающий при отсутствии в поджелудочной железе пациента производящих инсулин бета-клеток, и диабет типа 2 (инсулиннезависимый сахарный диабет, ΝΙΌΌΜ), возникающий у пациентов с нарушением секреции инсулина бетаклетками и/или резистентностью к действию инсулина.
Диабет типа 2 характеризуется устойчивостью к инсулину, сопровождаемой относительной, но не абсолютной, инсулиновой недостаточностью. У инсулинрезистентных индивидуумов секретируется аномально высокое количество инсулина, что имеет компенсаторный эффект. При наличии неадекватного количества инсулина для компенсации резистентности к инсулину и контроля уровня глюкозы развивается состояние нарушения толерантности к глюкозе. У значительного числа индивидуумов во время
- 22 022832 болезни секреция инсулина уменьшается, и уровень глюкозы в плазме возрастает, приводя к клиническому диабету. Связанные с жировой тканью воспаления в значительной степени связаны с развитием резистентности к инсулину, диабетом типа 2, дислипидемией и сердечно-сосудистыми заболеваниями. У страдающих ожирением пациентов макрофаги перемещаются в жировую ткань и накапливаются там, приводя к выработке провоспалительных цитокинов, таких как ФНО-α и 1Ь-6, свободных жирных кислот и адипокинов, способных оказывать влияние на инсулиновый сигнальный путь и индуцировать развитие резистентности к инсулину. Активация рецепторов ТЬК3 на макрофагах может приводить к возникновению провоспалительного состояния жировой ткани. Существует несколько моделей для изучения резистентности к инсулину. Например, модельные животные, страдающие алиментарным ожирением (ΌΙΘ), развивают гипергликемию и резистентность к инсулину, сопровождаемые потерей веса. Введение представленных в настоящем изобретении антагонистов ТЬК3 модельным животным ΌΙΘ может быть использовано для оценки эффективности антагонистов в облегчении осложнений, связанных с диабетом типа 2, и изменении течения болезни.
К раковым заболеваниям относятся злокачественные изменения в клетке, ткани, органе, организме, будь то животное или человек, включая, помимо прочего, такие заболевания, как лейкемия, острая лейкемия, острый лимфобластный лейкоз (лимфолейкоз) (АЬЬ), В-лимфобластный, либо Т-лимфобластный АЬЬ, острый мелиелоидный лейкоз (АМЬ), хронический мелиелоидный лейкоз (СМЬ), хронический лимфоцитарный лейкоз (СЬЬ), волосатоклеточный лейкоз, миелодиспластический синдром (МЭ8), лимфома, болезнь Ходжкина (лимфогранулематоз), злокачественная лимфома, неходжкинская лимфома, лимфома Беркитта, множественная миелома, саркома Капоши, колоректальная карцинома, карцинома поджелудочной железы, рак почки, рак молочной железы, назофарингеальная карцинома, злокачественный гистиоцитоз, паранеопластический синдром/гиперкальциемия, связанная со злокачественным ростом, твердые (локализованные) опухоли, аденокарциномы, плоскоклеточные карциномы, саркомы, злокачественная меланома, в особенности метастатическая меланома, гемангиома, метастазирующая опухоль, связанная с раком резорбция костной ткани и связанная с раком боль.
Примеры сердечно-сосудистых заболеваний включают сердечно-сосудистые заболевания в клетках, ткани, органе, организме, будь то животное или человек, включая, помимо прочего, такие заболевания, как синдром внезапной смерти, инфаркт миокарда, застойная сердечная недостаточность, инсульт, ишемический инсульт, кровотечение, артериосклероз, атеросклероз, рестеноз, атеросклероз на фоне сахарного диабета, гипертензия, артериальная гипертензия, вазоренальная гипертензия, обморок, шок, сифилис сердечно-сосудистой системы, остановка сердца, легочное сердце (лат. сог ри1тоиа1е), первичная легочная гипертензия, сердечные аритмии, суправентрикулярная эктопическая систола, трепетание предсердий, мерцание предсердий (хроническое или приступообразное/пароксизмальное), реперфузионный синдром, воспалительный ответ на искусственное кровообращение, хаотическая или политопная предсердная тахикардия, тахикардия с узкими комплексами 0К8. специфические аритмии, фибрилляция желудочков, аритмии связанные с нарушением функции пучка Гиса, атриовентрикулярный блок, атриовентрикулярная блокада, ишемии миокарда, заболевания коронарной артерии, стенокардия (лат. аи§1па рес1ог15), инфаркт миокарда, кардиомиопатия, дилатационная (застойная) кардиомиопатия, рестриктивная кардиомиопатия, порок сердца, эндокардит, перикардит, опухоли сердца, аневризм аорты и периферическая аневризма, расслаивающая аневризма аорты, воспаление аорты, окклюзия абдоминальной аорты и ее ответвлений, заболевания периферических кровеносных сосудов, окклюзии артериальных сосудов, атеросклероз периферических артерий, тромбоангиит (лат. ФготЬоаидлДк оЬШегаик), функциональные расстройства периферических артерий, феномен Рейно и виброболезнь, акроцианоз, эритромелалгия, венозные заболевания, тромбоз вен, варикозное расширение вен, артериовенозная фистула, лимфедема, липедема, нестабильная стенокардия, реперфузионное повреждение, постперфузионный синдром и ишемически-реперфузионное повреждение.
Примеры неврологических заболеваний включают неврологические заболевания в клетках, ткани, органе, организме, будь то животное или человек, включая, помимо прочего, такие заболевания, как нейродегенеративные болезни, рассеянный склероз, мигрень, СПИД-деменция, демиелинизирующие заболевания, такие как рассеянный склероз и острый поперечный миелит; экстрапирамидный синдром и церебеллярные расстройства, такие как поражения кортико-спинальной системы; заболевания, поражающие базальные ганглии или церебеллярные расстройства; гиперкинетические синдромы, такие как хорея Гентингтона и сенильная хорея; медикаментозные нарушения движения, такие как нарушения, вызываемые блокировкой допаминовых рецепторов; гипокинетические нарушения движения, такие как болезнь Паркинсона; прогрессирующий супрануклеарный паралич; структурные нарушения мозжечка; спиноцеребеллярные дегенерации, такие как спинальная атаксия, атаксия Фридрейха, мозжечковые кортикальные дегенерации, мультисистемные дегенерации (Менцеля, Дежерина-Тома, Ши-Драгера и МачадоДжозефа); системные расстройства (болезнь Рефсума, абеталипопротеинемия, атаксия, телеангиэктазия и митохондриальные мультисистемные расстройства); демиелинизирующие заболевания, такие как рассеянный склероз, острый поперечный миелит; и расстройства моторной функции, такие как нейрогенные мышечные атрофии (дегенерация моторных нейронов, например, амиотрофический боковой склероз, детская и юношеская спинальные мышечные атрофии); болезнь Альцгеймера; синдром Дауна в зрелом
- 23 022832 возрасте; деменция с тельцами Леви; сенильная деменция с тельцами Леви; синдром Вернике-Корсакова; хронический алкоголизм; болезнь Крейтцфельда-Якоба; подострый склерозирующий лейкоэнцефалит, болезнь Галлервордена-Шпатца и деменция боксеров.
Примеры фиброзных заболеваний включают фиброз печени (включая, помимо прочего, такие заболевания, как вызванный алкоголем цирроз, цирроз, индуцированный вирусной инфекцией, аутоиммунный гепатит); фиброз легких (включая, помимо прочего, такие заболевания, как склеродермия, идиопатический фиброз легких); фиброз почек (включая, помимо прочего, такие заболевания, как склеродермия, вызванный диабетом нефрит, гломерулонефрит, вызванный системной красной волчанкой нефрит); фиброзы кожи (включая, помимо прочего, такие заболевания, как склеродермия, гипертрофические и келлоидные рубцы); миелофиброз; нейрофиброматоз; фиброму; фиброзные изменения кишечника; и фиброзные спайки, возникающие в результате хирургического вмешательства. В этих способах фиброз может быть органоспецифическим или системным. Органоспецифический фиброз может быть связан по меньшей мере с одним из следующих заболеваний: фиброз легких, фиброз печени, фиброз почек, фиброз сердца, фиброз сосудов, фиброз кожи, фиброз глаза, фиброз костного мозга и пр. Фиброз легких может быть связан по меньшей мере с одним из следующих заболеваний: идиопатический легочный фиброз, медикаментозный легочный фиброз, астма, саркоидоз или хроническая обструктивная болезнь легких. Фиброз печени может быть связан по меньшей мере с одним из следующих заболеваний: цирроз, шистосомоз или холангит. Цирроз может быть либо алкогольным, либо возникшим после гепатита С или первичным билиарным циррозом. Холангит является склерозирующим холангитом. Фиброз почек может быть связан с диабетической нефропатией или с вызванным системной красной волчанкой гломерулосклерозом. Фиброз сердца может быть связан с инфарктом миокарда. Фиброз сосудов может быть связан с повторным сужением артерий после ангиопластии или атеросклерозом. Фиброз кожи может быть связан с возникшими в результате ожога рубцами, гипертрофическими рубцами, келлоидными рубцами или нефрогенной фиброзирующей дермопатией. Фиброз глаза может быть связан с ретроорбитальным фиброзом, с хирургическим вмешательством при лечении катаракты или пролиферативной витреоретинопатией. Фиброз костного мозга может быть связан с идиопатическим миелофиброзом или медикаментозным миелофиброзом. Другие фиброзы могут быть выбраны из таких заболеваний, как болезнь Пейрони, контрактура Дюпюитрена (синдром) или дерматомиозит. Системные фиброзы могут быть системными склерозами или реакцией трансплантат против хозяина.
Введение/Составление фармацевтических композиций.
Терапевтически эффективное количество агента, эффективного в лечении или профилактике заболевания, при котором желательна активность ТЬК3, может быть определено путем стандартных исследовательских способов. Например, доза агента, эффективная в лечении или профилактике воспалительных заболеваний, таких как астма, болезнь Крона, язвенных колит иди ревматоидный артрит, может быть определена введением агента в соответствующую модель, такую как представленные здесь модели.
Кроме того, в случае необходимости, для оптимизации дозы могут быть использованы тестовые системы ш ν^ι^о. Точное определение эффективной дозы (например, с помощью клинических испытаний) может быть осуществлено специалистами на основании нескольких факторов. Такими факторами являются: подлежащее лечению или профилактике заболевание, симптомы заболевания, масса тела пациента, иммунологический статус пациента и другие известные специалистам факторы. Точная доза, предназначенная для применения в формуле композиции, зависит от способа введения препарата, а также от тяжести болезни, и должна определяться на основании врачебного решения и состояния каждого пациента. Эффективная доза может быть экстраполирована исходя из кривой динамики доза-ответ, полученной в животных модельных тестовых системах ш νίΙΐΌ.
В представленных в настоящем изобретении способах антагонисты ТЬК3 могут вводиться по одному или в сочетании по меньшей мере с одной дополнительной молекулой. В качестве дополнительных молекул могут выступать другие молекулы-антагонисты ТЬК3 или молекулы, имеющие терапевтическое значение, не опосредованное сигнальным путем рецептора ТЬК3. Уменьшающие производство или активность цитокинов компаунды, состоящие из антибиотиков, противовирусных, паллиативных или прочих веществ, являются примерами таких дополнительных молекул.
Для введения агента, предназначенного для терапевтического использования, может быть использован любой приемлемый путь введения, который обеспечивает попадание агента к пациенту.
Фармацевтические композиции данных агентов являются особенно полезными при парентеральном введении, например, внутрикожном, внутримышечном, внутрибрюшном, внутривенном, подкожном или интраназальном.
Предложенный в данном изобретении агент может быть изготовлен в виде фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество агента в качестве активного компонента вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Термин носитель относится к растворителям, адъювантам, связывающим веществам или среде, вместе с которыми активное соединение будет вводиться. Фармацевтическая среда может быть жидкой, как, например, вода или масла, включая масла, получаемые из нефти, масла растительного, животного или синтетического происхождения, например, арахисовое, соевое, минеральное, кунжутное и другие подобные масла. Например, могут быть использованы 0,4% раствор по- 24 022832 варенной соли и 0,3% раствор глицина. Указанные растворы стерильны и обычно не содержат твердых примесей. Стерилизация проводится с использованием общепринятых, хорошо известных способов стерилизации (например, фильтрации). Композиции могут содержать принятые в фармацевтике вспомогательные вещества, необходимые для приближения к физиологическим условиям, например, вещества, необходимые для контроля и изменения рН, стабилизаторы, увеличивающие плотность, увлажняющие и придающие окраску агенты, и т.д. Концентрация предложенного в данном изобретении агента в таких фармацевтических формулировках может значительно варьировать, т.е., от менее, чем 0,5% (обычно по меньшей мере 1%) до 15-20% от веса и определяется, в первую очередь, на основании необходимой дозы, объеме, вязкости и т.д., в соответствии с выбранным способом введения.
Таким образом, предложенные в настоящем изобретении фармацевтические композиции, предназначенные для внутримышечного введения, могут содержать 1 мл стерильного буферного раствора, а также приблизительно от 1 нг до 100 мг, например, приблизительно от 50 нг до 30 мг, или предпочтительнее приблизительно от 5 до 25 мг предложенного в настоящем изобретении антитела-антагониста ТЬК3. Сходным образом, предложенная в настоящем изобретении фармацевтическая композиция для внутривенного введения может содержать приблизительно 250 мл стерильного раствора Рингера и приблизительно от 1 до 30 мг, или предпочтительнее приблизительно от 5 до 25 мг предложенного в настоящем изобретении антагониста. Способы изготовления парэнтерально вводимых композиций хорошо известны и их детальное описание может быть найдено, например, в Кенипфоп'з РЬаттасеийса1 8аепсе, 151Н ей., Маск РиЫЫипд Сотрапу, ЕаИоп. РА.
Предложенные в настоящем изобретении антитела-антагонисты могут быть лиофилизированы для хранения и впоследствии перед использованием восстановлены (растворены) в подходящем носителе. Было показано, что этот способ эффективен для обычно используемых иммуноглобулинов и белковых препаратов, при этом могут быть использованы известные специалистам способы лиофилизации и восстановления.
Настоящее изобретение сейчас будет охарактеризовано с помощью нижеприведенных примеров, описывающих настоящее изобретение, но не ограничивающих его.
Пример 1.
Идентификация и получение антагонистов тАЪ против 1шТБР3.
Комбинаторная библиотека антител человека МотрЬо8у5 и библиотека фаговых антител (НиСАЬ®) Со1й (Могрйокук АС, Мартинсрид, Германия) были использованы для поиска фрагментов антител человека и их сравнения с очищенным ТЬК3 антигеном, созданным в результате экспрессии аминокислот 1703 ТЬК.3 человека (ЬиТЬК3) (8ЕС ГО N0: 4), содержащим меченый полигистидином С-конец; очистка антигена была осуществлена с помощью иммобилизованной металл-аффинной хроматографии. Аминокислоты 1-703 соответствуют предсказанному внеклеточному домену (ЕСЭ) рецептора человека ЬиТЬК3. Фрагменты РаЪ, специфически связывающиеся с ЬиТКЬ3 ЕСИ, были отобраны на основе различных форм белка ТЬК3 так, что различные фрагменты антител могли быть выбраны, секвенированы и объявлены уникальными. Используя различные стратегии, было отобрано 62 белка-кандидата (с различными последовательностями У-сегмента), способных связываться исключительно с 1шТЕК3 ЕСИ.
Эти 62 белка, идентифицированные как способные связываться исключительно с 1шТЕК3 ЕСИ, были проверены на способность нейтрализовать активность с помощью целого ряда работающих на клеточном уровне тестовых систем, пригодных для анализа противовоспалительной активности. Используя предварительные показатели активности (см. далее пример 2), из 62 были отобраны четыре кандидата (РаЪ 16-19), определяющие семейства 16-19, в качестве исходного материала для созревания тяжелой цепи СИК2 (НСИК2) и легкой цепи СГОК3 (ЬСОК3). Один из исходных кандидатов (кандидат 19) имел Ν-связанный гликозилированный участок в НСИК2; с целью избавиться от гликозилированного участка в гене, кодирующем названный белок-кандидат, была индуцирована мутация заменяющая 8ег на А1а (8 на А). После созревания СИК четырех исходных кандидатов было выбрано 15 дочерних кандидатов (кандидаты 1-15) для дальнейшей характеризации, согласно описанию, приведенному ниже в примере 2. Перечисление вариабельных участков легкой и тяжелой цепей каждого из 19 кандидатов показано в табл. 3. Указанные кандидаты будут далее называться тАЪ 1-19 или РаЪк 1-19, в зависимости от того, являются ли они фрагментами антител РаЪ, или представляют собой полную клонированную последовательность антитела (пример 3). Вследствие особенности дизайна экспрессионного вектора крайними сегментами вариабельных участков зрелых антител у всех кандидатов являются СУЕ для тяжелой цепи и ΌΙ для легкой цепи. Предпочтительными последовательностями для указанных сегментов являются последовательности генов клеток зародышевой линии, имеющие высокую степень сходства с последовательностью кандидата. Для семейств 17 и 18 последовательность генов клеток зародышевой линии была СУС для УН и 8Υ для УЪ. Последовательности семейства 19 являются последовательностями ЕУС для УН и ΌΙ для УЪ. Последовательность 8Υ является уникальной для лямбды подгруппы 3, и существуют свидетельства гетерогенности 8 или Υ в отношении конечного остатка. Таким образом, было решено, что консенсус-последовательности терминального участка С8У подгруппы лямбда 1 лучше всего подходят для замещения ИГЕ в УЬ семействах 17 и 18. Данные изменения были введены в последовательностикандидаты 9, 10 и 12 из семейства 18, а также в кандидаты 14 и 15 из семейства 19. В процессе этого бы- 25 022832 ли оптимизированы кодоны в участках νΗ и УЬ данных антител. Варианты Шконца аминокислотных последовательностей вариабельного участка легкой цепи, полученные из клеток зародышевой линии, которые являются вариантами кандидатов 9, 10 и 11, показаны в ЗЕЦ ГО N0: 209-211, а варианты N конца аминокислотных последовательностей вариабельного участка тяжелой цепи, полученные из клеток зародышевой линии, которые являются вариантами кандидатов 9, 10, 12, 14, и 15 показаны в ЗЕО ГО N0: 212-216 соответственно. Варианты Шконца данных кандидатов называются в настоящем изобретении кандидат/тАЬ/РаЬ 9^V^/^Зν, 10^V^/^ЗV, 12^V^/^ЗV, 14ενθ или 15Ηνθ. Варианты Шконца, полученные из клеток зародышевой линии, экспрессированные как тАЬ, не оказывают влияния на связывание ТЬКЗ или на способность антител ингибировать биологическую активность ТЬКЗ по сравнению с исходными белками (данные не показаны).
Пример 2.
Определение активности антагониста ТЬКЗ ίη νίίτο.
охарактеризованных выше кандидатов с созревшим СОК были отобраны, как потенциально пригодные для лечения человека, была определена эффективность связывания и способность оказывать нейтрализующий эффект на активность рецептора. Результаты исследования активности и результаты для четырех исходных РаЬ, РаЬ 16-19 и фрагментов РаЬ 15, содержащих созревшие СОК, РаЬ 1-15, либо их ν-участки, не заимствованные из клеток зародышевой линии, приводятся далее.
Ингибирование МР-кБ и сигнальный каскад !ЗРЕ.
Клетки 293Т культивировали в средах ИМЕМ и О1и1аМах (ШЬтодей Карлсбад, Калифорния), содержащих инактивированный с помощью термического воздействия РВЗ, затем клетки были трансфицированы введением 30 нг ρNР-кВ или плазмидой-репортером ГОКЕ, содержащей ген люциферазы светлячка, 13,5 нг вектора рсЭКАЗ.Е 5 нг вектора рЬКЬ-ТК и 1,5 нг вектора рСГОКА, кодирующего РЬ ТЬКЗ (ЗЕО ГО N0: 2). Плазмида рЬКЬ-ТК содержит ген люциферазы Кеш11а (люцифераза коралла, Кеш11а гешГотГО), регулируемый ΟΆ промотором тимидинкиназы (Рготеда, Мадисон, Висконсин). Антитела ТЬКЗ инкубировали в течение 30-60 мин перед добавлением ро1у(ИС) (0Е ШаНксаю, Пискатауэй, НьюДжерси). Планшеты инкубировались в течение 6 или 24 ч при 37°С перед добавлением люциферазного реагента Эиа1-С1о; последующий анализ планшет проводился с помощью прибора ΕΕυ0δίΗΓ. Нормализацию значений (относительная интенсивность сигнала) получили делением КЬИ (интенсивность сигнала, измеренная в относительных единицах люминесценции) люциферазы светлячка на КЬИ коралловой люциферазы (КеиШа). После стимуляции агентом ро1у(ПС), являющимся агонистом ТЬКЗ (1 мкг/мл), добивались специфического ингибирования каскада передачи сигнала с участием ИР-кВ или ГОКЕ, стимулирующего производство люциферазы светлячка, что достигалось за счет инкубации клеток с антителами против ТЬКЗ (0,4, 2,0 и 10 мкг/мл). Результаты анализа ΗΕ-кВ показаны на фиг. 1, как выраженное в процентах относительное ингибирование люцифераз Е1геГ1у/Кеш11а, рассматривая 5465 в качестве положительного контроля (нейтрализация тАЬ против ТЬКЗ человека) и тАЬ против тканевого фактора человека (859) в качестве контроля для изотипа человека ^04. >50% ингибирование было достигнуто при концентрации тАЬ 0,4-10 мкг/мл с1068 и ТЬКЗ.7 ингибируют около 38 и 8% биологической активности ТЬКЗ при концентрации 10 мкг/мл. Сходные результаты были получены при использовании генарепортера ГОРЕ (данные не показаны).
Производство цитокинов клетками ВЕАЗ-2В.
Клетки ВЕАЗ-2В ^ν-40 трансформированные нормальные клетки бронхиального эпителия человека) высевали на чашки, покрытые коллагеном типа 1, и перед добавлением ро1у(НС) инкубировали с антителами против ТЬКЗ человека или без них. 24 ч спустя после обработки супернатанты были собраны и проанализированы на уровень содержания цитокинов или хемокинов с помощью адаптированной мультиплекс-тестовой системы, использующей микрочастицы и направленной на детекцию ГО-6, ГО-8, ССЬ-2/МСР-1, ССЬ5/КАЭТЕЗ и СХСЕГО/ГО-К). Результаты приведены на фиг. 2 как выраженное в процентном соотношении ингибирование индивидуальных цитокинов/хемокинов, полученное в результате обработки тАЬ при 0,4, 2,0 и 10 мкг/мл. 5465 - положительный контроль; 859 - изотипный контроль.
Производство цитокинов клетками ХИВЕ.
Производство цитокинов может быть также изучено в нормальных клетках эпителия человека (ЫЫВЕ) (Бои/а, Уолкерсвиль, Мэриленд). Клетки КВЕЕ были размножены, а затем перенесены на покрытые коллагеном чашки и инкубировались в течение 48 ч, после чего удалили использованную среду и добавили 0,2 мл свежей среды. Клетки инкубировались с тАЬ против ТЬКЗ человека или без них в течение 60 мин перед добавлением ро1у(ГОС). Спустя 24 ч супернатанты собрали и затем либо сохраняли при -20°С, либо анализировали на уровень содержания ГО-6. Результаты приведены в графиках, представленных на фиг. 3, как выраженное в процентном соотношении ингибирование секреции ГО-6 в результате обработки тАЬ дозами в диапазоне от 0,001 до 50 мкг/мл. 5465 положительный контроль, 859 - изотипный контроль. Большинство тАЬ ингибировали по меньшей мере 50% производства ГО-6 при <1 мкг/мл и достигали 75% ингибирования при <5 мкг/мл.
Производство цитокинов клетками РВМС.
Производство цитокинов также было изучено в мононулеарных клетках периферической крови человека (РВМС). Кровь, полученная от доноров, собиралась в содержащие гепарин пробирки, к которым
- 26 022832 осторожно, в качестве нижнего слоя, добавляли раствор Фиколл Пак Плюс. Пробирки центрифугировались и клетки РВМС, формирующие белый слой непосредственно над слоем Ρΐοοίΐ, были собраны и высеяны на планшеты. После чего, клетки РВМС культивировали с шЛЬ против ТЬКЗ человека или без них перед добавлением 25 мкг/мл ро1у(1:С). Супернатанты были собраны спустя 24 ч, и уровень цитокинов был определен с помощью технологии Битшех. Результаты представлены в графике на фиг. 4, где показано выраженное в процентном соотношении суммарное ингибирование ΙΡΝ-λ, 1Ь-12 и 1Ь-б при использовании единичной дозы тАЬ (0,4 мкг/мл) с 5465 в качестве положительного контроля; 1ш1дС4 использован в качестве контроля изотипа.
Производство цитокинов клетками НАБМ.
Коротко говоря, клетки гладкой мускулатуры дыхательных путей человека (НАБМ) инкубировались с тАЬ против ТЬКЗ человека или без них, после чего к клеткам была добавлена комбинация 500 нг/мл ро1у(1:С) и 10 нг/мл ФНО-α. Спустя 24 ч супернатанты собрали и определили уровень цитокинов с помощью технологии Ьитшех. Результаты показаны в графиках на фиг. 5 в виде уровней хемокина ССЬ5/КАОТЕ§ при трех дозах тАЬ (0,4, 2 и 10 мкг/мл). 5465 использован в качестве положительного контроля; 1ш1дС4 использован в качестве контроля изотипа.
Результаты исследования клеток человека ίη νίίτο подтверждают способность предложенных в настоящем изобретении антител уменьшать производство цитокинов и хемокинов в результате связывания с БиТЬКЗ.
Пример З.
Конструкции имеющих полную длину антител.
Четыре исходных фрагмента РаЬ (кандидаты № 16-19) и 15 дочерних РаЬк (кандидаты № 1-15) тяжелых цепей были клонированы в клетках, содержащих мутацию в гене иммуноглобулина 1§С4 (мутация Б229Р Рс). Кандидаты 9РУР/РБУ, ЮрУр/рБУ, 12рур/р§У, 14ЕУР или 15ЕУР были клонированы в клетках, содержащих мутации в гене иммуноглобулина 1дС4, мутации Р2З5А/Ь2З6А и Б229Р Рс.
Зрелые, имеющие полную длину аминокислотные последовательности тяжелых цепей, показаны в §ЕР ΙΌ ΝΟ: 90-102 и 218-220.
Кандидат 5Ер ΙΡ ΝΟ:
16 90
17 91
18 92
19 93
1 94
2 95
3 96
4 97
5, 7, 6 98
8 99
9 100
10, 12, 11 101
13, 15, 14 102
9Εν<2 218
ЮЕУО, 12ЕУ0 219
14ЕУ0, 15ЕУО 220
Для экспрессии данные последовательности тяжелых цепей могут содержать на Ν-конце лидерную последовательность, такую как МА\УУ\УТЕЕРЕМАААРБ1РА (БЕР ГО ΝΟ: 10З). Нуклеотидные последовательности, кодирующие тяжелую цепь кандидатов 14ЕУР и 15ЕУР с лидерной последовательностью, а также зрелая форма (без лидерной последовательности) показаны в БЕр ГО ΝΟ: 104 и 105 соответственно. Аналогичным образом, последовательности легких цепей предложенных в настоящем изобретении антител могут включать на Ν-конце лидерную последовательность, такую как МСУРТрУЪСЬЬЬЬ^ЬТПАКС (БЕР ГО ΝΟ: 106). Отдельные легкие цепи кандидата 15 с оптимизированными кодонами, имеющие лидерную последовательность, и зрелая форма (без лидерной последовательности) показаны в БЕр ГО ΝΟ: 107 и 108 соответственно.
Пример 4.
Характеристика связывания тАЬ против ТЬКЗ.
Значения ЕС50 при связывании тАЬ с внеклеточным доменом (ЕСГО) ТЬКЗ человека определяли способом ЕЫБА. Белок ЕСГО ТЬКЗ человека разводили до 2 мкг/мл в ФБР, и аликвоты по 100 мкл вноси- 27 022832 ли в каждую лунку 96-луночного планшета (Согтпд Ιικ., Эктон, Массачусетс). После инкубации в течение ночи при 4°С планшету трижды промывали отмывочным буфером, содержащим 0,05% Твин-20 (5адта-А1бпсП) в ФБР. Лунки блокировали 200 мкл блокирующего раствора, содержащего 2% ВВ1оск (АррПеб Вюкуйепъ, Фостер-Сити, Калифорния) и 0,05% Твин-20 в ФБР. После блокирования в течение 2 ч при комнатной температуре планшету промывали 3 раза, затем добавляли серийные разведения кандидатов тАЬ против ТЬК3 в отношении 1 к 19 в блокирующем буферном растворе. МАЬ против ТЬК3 инкубировали при комнатной температуре в течение 2 ч и трижды промывали. Затем добавляли конъюгированные с пероксидазой овечьи антитела против человека (ОЕ Неа1(Псаге, Пискатауэй, НьюДжерси), разведенные в соотношении 1:4000 в блокирующем буферном растворе, инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем трижды промыли в отмывочном буфере. Связывание выявляли путем 10-15-минутной инкубации в ТМВ-δ (РП/дега1б Пгбийпек ИЛегпаПопаП Пк., Конкорд, Массачусетс). Реакцию остановили 25 мкл 2Ν Η2δΘ4 и измерили поглощение при 450 нм (вычитая поглощение при 650 нм) с помощью спектрофотометра 8РЕСТКА Мах (Мо1еси1аг Эеуюек Согр., Саннивейл, Калифорния). Значения ЕС50 определяли способом нелинейной регрессии с помощью программного обеспечения СгарПРаб Ргйт (СгарЬРаб 5>оП\уаге, Ию., Сан-Диего, Калифорния).
Значения ЕС50 определяли в реакции связывания, инкубируя ПиТЬК3 (табл. 4) со 100 мкл 4кратных серийных разведений тАЬ: от 2,5 мкг/мл до 0,6 пг/мл. Отрицательными контрольными образцами служили античеловеческий тканевой фактор тАЬ 859 и Пи ^С4К.
Таблица 4
Аффинность связывания для ПиТЬК3 ЕСЭ определяли также с помощью В1асоте-анализа. Полученные данные (не показаны) продемонстрировали, что Кб тАЬ 1-19 при связывании с ПиТЬК3 ЕСЭ составляет менее 10-8 М.
Пример 5.
Конкурентное связывание с эпитопами.
Эксперименты по связыванию с эпитопами проводили с целью определения конкурентных групп или групп эпитопов антител против ТЬК3.
При конкурентном ЕЬГОА 5 мкл очищенного белка ТЬК3 ЕСЭ человека (20 мкг/мл), синтезированного в соответствии с описанием в примере 1, наносили в лунки планшета М8Э ШдПВшб (Меко 8са1е □15соуегу, Гейтерсбург, Мэриленд) и выдерживали 2 ч при комнатной температуре. В каждую лунку добавляли 150 мкл 5% блокирующего буфера А М8Э и инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре. Планшеты трижды промывали буфером 0,1 М НЕРЕ8, рН 7,4, затем добавляли смесь меченых тАЬ против ТЬК3 с разными конкурирующими агентами. Меченые антитела (10 нМ) инкубировали с увеличивающимися концентрациями (от 1 нМ до 2 мкМ) немеченых антител против ТЬК3, затем смесь добавляли в обозначенные лунки в объеме 25 мкл. После 2 ч инкубации с осторожным встряхиванием при комнатной температуре планшеты трижды промывали буфером 0,1 М НЕРЕ8 (рН 7,4). Буферный
- 28 022832 раствор Μ8Ό Кеай Ви£Гег Т разбавляли дистиллированной водой (4-кратно), разливали по 150 мкл/лунку и анализировали с помощью 8ЕСТОК 1тадег 6000. Антитела метили Μ8Ό 8и1£о-Тад™ NН8-эфиром в соответствии с инструкциями производителя.
Оценивали следующие антитела против ТЬК3: тАЬ 1-19, полученные из комбинаторной библиотеки антител человека МогрЬокук (показаны в табл. 3а); с1068 (описанные в \УО 06/060513А2), с1811 (крысиные тАЬ против мышиных ТЬК3, полученные из гибридомы крыс, иммунизированных мышиным белком ТЬК3), ТЬК3.7 (еВюкаеисек, Сан-Диего, Калифорния, кат. номер 14-9039) и 1МС-315А (против аминокислот ТЬК3 человека аминокислот 55-70 (У^N^ТНN^^КК^ΡΑΑN) от 1тдеиех, Сан-Диего, Калифорния). Для тАЬ 9, 10, 12, 14 и 15 в данном исследовании использовали варианты 9СУС/С8У, 10Ο\Ό/Ο8\\ 12Ο\Ό/Ο8\\ 14ΙΑΌ или 15ЕУЦ.
При количественной оценке конкуренции антитела против ТЬК3 взаимодействовали с пятью различными группами. Группа А: тАЬ 1, 2, 13, 14ЕУЦ, 15ЕУЦ, 16, 19; группа В: тАЬ 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9СУС/С8У, 10рур/р8У, 11, 12ОУО/О8У, 17, 18; группа С: антитело 1тдеиех 1МС-315А; группа Ό: антитела ТЬК3.7, с1068; и группа Е: антитело с1811.
Пример 6.
Картирование эпитопов.
Для дальнейшего картирования эпитопов в соответствии с описанием, приведенным в примере 5, отбирали репрезентативные антитела различных эпитопов. Картирование эпитопов проводили с помощью различных способов, в числе которых эксперименты по замене сегментов ТЬК3, мутагенез, замена Н/Ό (водорода на дейтерий) и компьютерное моделирование белок-белкового докинга (ТЬе ЕрЬоре Марршд Рго1осо1к, Ме(Ьойк ш Мо1еси1аг Вю1оду, Уо1ите 6, С1еи Е. Мотк ей., 1996).
Замена сегментов ТЬК3. Для определения местоположения антителосвязывающих доменов на ТЬК3 использовали химерные белки ТЬК3 мышь/человек. Внеклеточный домен белка ТЬК3 человека делили на три сегмента (аа 1-209, аа 210-436, аа 437-708 в соответствии с нумерацией аминокислот в ТЬК3 человека, СеиВаик Асс. №. ΝΡ_003256). Химерный белок МТ5420 был создан путем замены аминокислот ТЬК3 человека 210-436 и 437-708 на соответствующие мышиные аминокислоты (мышиный ТЬК3, СеиВаик Асс. №. ΝΡ_569054, аминокислоты 211-437 и 438-709). Химера МТ6251 была создана путем замены аминокислот человека в положениях 437-708 на аминокислоты мышиного ТЬК3 (мышиный ТЬК3, СеиВаик Асс. №. ΝΡ_569054, аминокислоты 438-709). Все конструкты были созданы на основе вектора рСЕР4 (Ы1с ТесЬиоЦдхек, Карлсбад, Калифорния) с помощью стандартных процедур клонирования. Белки экспрессировали в НЕК293 клетках как белки с У5-Н1к6, присоединенным к С-концу, и очищали в соответствии с описанием в примере 1.
тАЬ с1068. тАЬ с1068 с высокой аффинностью связывается с ТЬК3 ЕСО человека, однако не связывается надлежащим образом с мышиным ТЬК3. с1068 утеряло способность связываться как с МТ5420, так и с МТ6251, из чего можно сделать вывод, что сайт связывания располагался в пределах последовательности аминокислот 437-708 \УТ белка ТЬК3 человека.
тАЬ 12СУС/С8У. тАЬ 12СУС/С8У связывалось с обеими химерами, указывая на то, что сайт связывания тАЬ 12СУС/С8У располагался в пределах последовательности аминокислот 1-209 белка ТЬК3 человека с последовательностью 8ЕЦ ГО N0:2.
Компьютерное моделирование белок-белкового докинга. Кристаллическая структура тАЬ 15ЕУЦ (см. ниже) и опубликованная структура ТЬК3 человека (Ве11 е( а1., 1. Еийо1охш Кек. 12:375-378, 2006) были минимизированы по энергии в СНАКМт (Вгоокк е( а1., ί. СотрШаГ СЬет. 4:187-217, 1983) для использования в качестве стартовых моделей для докинга. Белковый докинг проводился с 2ООСКрго 1.0 (АссеЬук, Сан-Диего, Калифорния), эквивалентным ΖΌΟΟΚ 2.1 (СЬеи и ^еид, РгсЯеюк 51: 397-408, 2003) с угловым гридом 6 градусов. Известный сайт Ν-гликозилирования по остатку Аки в ТЬК3 человека (Аки 52, 70, 196, 252, 265, 275, 291, 398, 413, 507 и 636) (8ии е1 а1., 1. Вю1. СЬет. 281:11144-11151, 2006) блокировали так, чтобы он не участвовал в формировании интерфейса комплекса антитело-антиген (по энергии) по алгоритму ΖΌΟΟΚ. Были просчитаны и сгруппированы 2000 начальных положений, положения с докингом были уточнены и заново просчитаны в КООСК (Ы е( а1., РгсЯеюк 53:693-707, 2003). Визуально проверили 200 положений с наиболее высокими начальными оценками по Ζ^ΟСК и 200 лучших положений по КООСК.
Кристаллизация тАЬ 15ЕУЦ проводилась способом диффузии пара при 20°С (Вет'егшО и Маидаш, №1иге Рго1осо1к 2:1633-51, 2007). Начальный скрининг проводили с помощью робота Нуйга на 96луночных планшетах. В эксперименте капли по 0,5 мкл раствора белка смешивали с 0,5 мкл резервуарного раствора. Капли уравновешивали против 90 мкл резервуарного раствора. Раствор РаЬ в 20 мМ Трисбуфера, рН 7,4, содержащий 50 мМ №С1, концентрировали до 14,3 мг/мл с помощью ячеек Атюои ИЬга5 1ГОа. Скрининг проводили с помощью \У1/агй I & II (ЕтегаМ Вю8ук1етк, Бейнбридж Айленд, Вашингтон) и производственных экранов для кристаллизации.
Данные по дифракции рентгеновских лучей собирали и обрабатывали с помощью микрофокусного генератора рентгеновских лучей Шдаки МюгоМах™-007НР, снабженного конфокальной оптикой Октс™ УапМах™, детектором 8а1иги 944 ССГО и системой криоохлаждения Х-к(геат™ 2000 (Шдаки, Вуд- 29 022832 лендс, Техас). Интенсивность дифракции выявляли по вращению кристалла более чем на 270°, причем время экспозиции при повороте кристалла на полградуса составляло 120 с. Данные рентгенографии обрабатывали с помощью программы Э*ТКЕК (К1§аки). Структуру определяли способом молекулярного замещения с помощью программы РЬазег или СNX (Ассе1гуз, Сан-Диего, Калифорния). Положения атомов и температурные коэффициенты уточняли с помощью КЕРМАС, используя все данные в диапазоне разрешения 15-2,2 А для тАЬ 15 и в диапазоне 50-1,9 А для тАЬ 12. Молекулы воды добавляли при (РоРс) максимальной электронной плотности с порогом 3σ. Все кристаллографические расчеты проводили с помощью пакета программ ССР4 (Со11аЬогаПуе Сотри!аДопа1 Ргсдес!, ШтЬег 4. 1994. Пакет ССР4: программы для кристаллографии белков. Ас!а Сгуз1а11одг. Ό50:760-763). Коррекцию модели осуществляли с помощью программы С00Т (Етз1еу е! а1., Ас!а Сгуз1а11о§г. Ό60:2126-2132, 2004).
Расшифровка кристаллической структуры тАЬ 15ЕУЦ показала, что на участке контакта с антителом в тяжелой цепи содержится множество отрицательно заряженных остатков (Ό52, Ό55, Е99, Ό106 и Ό109). Таким образом, в распознавании тАЬ 15ЕУЦ и ТЬК3, по всей вероятности, участвуют положительно заряженные остатки. Имитации белок-белкового докинга выявили хорошую комплементарность антитела и двух больших участков ТЬК3 с множеством положительно заряженных остатков. При симуляции взаимодействия ТЬК3 с антителом против ТЬК3 были выявлены остатки на ТЬК3, участвующие в этом взаимодействии: К64, К182, К416, К467, Υ468, К488, К489 и К493.
Исследования с помощью мутагенеза. С помощью единичных и комбинированных точечных мутаций изменяли поверхностные остатки ТЬК3 ЕСЭ в участках, которые, как было установлено выше, формировали эпитопы тАЬ 12 и тАЬ 15ЕУЦ, и проверяли способность полученных мутантных белков к связыванию антител.
Нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислоты 1-703 ТЬК3 (ЕСЭ) человека, (8ЕЦ ГО N0: 4; ОепВапк номер доступа №_003256) клонировали согласно стандартным протоколам. Все мутанты создавали способом сайт-направленного мутагенеза с помощью набора реагентов ЦшсксЬапде II ХЬ (8!га!адепе, Сан-Диего, Калифорния) в соответствии с протоколом производителя и с использованием олигонуклеотидов, показанных в табл. 5а. Мутации идентифицировали секвенированием ДНК. Белки экспрессировали под контролем СМУ-промотора, присоединяя к С-концу гистидиновый хвост (Н1з-1ад), в клетках линии НЕК293 и очищали в соответствии с описанием в примере 1.
Таблица 5а
Олигонуклеотиды, используемые для сайт-направленного мутагенеза. Показаны последовательности смысловых олигонуклеотидов. При реакции мутагенеза использовали антисмысловые олигонуклеотиды с комплементарными последовательностями.
Вариант Олиго Зея Ю № :
К64Е 5' ССТТАСССАТААТСААСТССА6А6АТТАССАССССССААС 3' 136
К182Е 5’СААСАССТТСТАТТАТСАААСААТСАСАТТСААССССТАААААСТСААС5’ 137
- 30 022832
К416Е 5' ССТТАСАСАТАСТСААССТААСССАСААТААААТСТСАААААТА6 3' 138
Κ467Ε/Υ46 8А 5' САААТСТАТСТТТССТАСААС6АСССССТССАССТСАСТАССААСТС 3' 139
К488/Е.489 /К493Е 5' СССТТСААССАСТСАТССТССАССАССТСССССТТСАСААТСТССАТАССТСТССТТС 3' 140
Т4723/К47 3Τ/Ν4745 5' СТАССТССАССТСТСТАССАССТССТГТСССТТССТССС 3' 141
Ν196Α 5' СААСААСТ6САТАГСТТТ6СС6СТТСАТСТТТАААААААТТАСА6ТТС 3' 169
0167А 5' СТСАТСТАСААААТТАССААСТССССТТСАССТССААААТСТСС 3' 170
К163Е 5' СТСАТААТСССТТСТСАТСТАСАСААТТАССААСТСАССТТСАСС 3' 171
К147Е 5' СААААТТАААААТААТСССТТТСТСААССАССАСААТТТА А ТСА САТТА СА ТСТСТС 3' 172
К145Е 5' СААААТТАААААТААТСССТТТСТССАССАСААСААТТТА А ТСА САТТА 6 3' 173
У144А 5' САСААААТТАААААТААТСССТТТССА А А6САСА АСА АТТТА АТСАСА ТТЛ С 3' 174
Н140А 5' ССААСТСААТССАСААААТТАААССТААТСССТТТСТСААССАСААС 3' 175
И116К 5' СА АТСАССТАТСТСА А СТТТСТССТААААССТТТСССТТСТССАС 3' 176
Э536К 5' СТСТТСАСАААСТАСАААТТСТСААСТТССАССАТААСААСТТАССАС 3' 177
Ц536А 5' СТТСАСАААСТАСАААТТСТСССАТТССАССАТААСААСТТАССАС 3' 178
К619Е 5' СТААА6ТСАТТСААССТТСАССАСААТСТСАТААСАТСССТТС 3' 179
К619А 5' СТСТАААСТСАТТСААССТТСАССССААТСТСАТААСАТСССТТСАС 3' 180
Е570К 5' ССАСАТССТТААСТТСАССТССААССССТТТСАССАС 3' 181
Ν541Α 5' САААТТСТССАТТТССАССАТААССССТТАССАССССТСТССАААС 3' 182
Ц538А 5' САСАААСТАСАААТТСТСбАТТТСССССАТААСААСГТАССАСееС 3' 183
Н539Е 5' СТАСАААТТСГССАТТТССАССААААСААСТТАССАССССТСТ6 3' 184
Н539А 5' СТАСАААТТСТССАТТТССАОССТААСААСТТАССАССССТСТС 3' 185
Ν517Α 5' САТТСТССАТСТААССААСААССССАТАСССААСАТАААТСАТСАС 3' 186
Υ465Α 5' СААААТАТТТТССАА А ТСТА ТСТТТСССССА А СА А СТА ССТССА ССТСА С 3' 187
К488Е 5' СССТТСААССАСТСАТССТССАААСССТСССССТТАААААТС 3' 188
К489Е 5' СТТСААССАСТ6АТ6СТСС6А6АССТСССССТТАААААТСТ6С 3' 189
К467Е 5' ССАААТСТАТСТТТССТАСААССАСТАССТССАССТСАСТАС 3' 190
Количественная оценка связывания. Активность связывания тАЪ 12ОУО/О8У и тАЪ 15ЕУЦ с ТЬК3 человека и его искусственными вариантами оценивали с помощью ЕЫ8А. Для ускорения процесса мутантов в предсказанном сайте связывания тАЪ 15ЕУО коэкспрессировали в клетках НЕК, осуществляя котрансфекцию мутантного ТЬК3 ЕСЭ. содержащего гистидиновый хвост на С-конце, с тАЪ 12РУО/О8У. а затем очищали металл-аффинной хроматографией. Полученный образец представлял собой комплекс мутантного ТЬК3 с тАЪ 12. Данный способ годится потому, что сайты связывания тАЪ 12ОУО/О8У и тАЪ 15ЕУЦ расположены вдали друг от друга, и, таким образом, точечные мутации в одном сайте вряд ли повлияют на эпитоп другого сайта. Эти комплексы использовали при оценке связывания с помощью ЕЫ8А. В лунки планшеты Μ8Ό НщЪВтЪ (Меко 8са1е О18со\'егу, Гейтерсбург, Мэриленд) наносили по 5 мкл раствора ТЬК3 ЕСЭ дикого типа или мутантных белков в ФБР (20 мкг/мл). Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 60 мин и блокировали, оставляя планшеты на ночь в блокирующем буфере А Μ8Ό (Меко 8са1е ОЬ^'егу, Гейтерсбург, Мэриленд) при 4°С. На следующий день планшеты промывали и добавляли на 1,5 ч меченые Μ8Ό 8и1Го-1ад тАЪ 15ЕУЦ в концентрациях от 500 до 1 пМ. После промывания меченые антитела выявляли с помощью буферного раствора Μ8Ό КеаЪ ВиГГег Т, и анализировали планшеты с помощью 8ЕСТОР Ъпадег 6000. Для оценки активности связывания тАЪ 12ОУО/О8У с ТЬК3 человека и его вариантами осуществляли совместную экспрессию с тАЪ 15ЕУО, оценивали связывание с помощью ЕЫ8А, как было описано для тАЪ 15ЕУЦ
- 31 022832 (только детектирующие антитела помечали тАЬ 12ОУО/О8У).
тАЬ 12ОУО/О8У. Как было определено в исследованиях с заменой сегмента, сайт связывания с тАЬ 12ОУО/О8У располагался в пределах аминокислотной последовательности 1-209 ТЬК3 человека. Были проанализированы следующие ТЬК3 мутанты: И116К, Ш96А. Ш40А. У144А, К145Е, К147Е, К163Е и Ц167А. ТЬК3 дикого типа и мутант У144А связывались с тАЬ 12ОУО/О8У с приблизительно одинаковой активностью (фиг. 6А). Антитело не связывалось с мутантным ТЬК3 И116К, и аффинность связывания с мутантом К145Е была значительно меньше. Таким образом, было определено, что близко стоящие остатки И116 и К145 на поверхности ТЬК3 являются ключевыми фрагментами эпитопа для тАЬ 12000/080 (фиг. 7А).
Два критических остатка тАЬ 12ОУО/О8У, связывающиеся с эпитопом, располагались вблизи поверхности сайта связывания бкКИА на Оконце эктодомена ТЬК3 (РбЬет, е! а1., №Циге 8(гис1. & Мо1. ΒίοΙ., 15:761-763, 2008). Эпитоп содержит и другие остатки, относящиеся к соседним участкам, не выявленные мутационным анализом. Без связи с какой-либо теорией считается, что связывание тАЬ 12ОУО/О8У с соответствующим эпитопом на ТЬК3 может прямо или косвенно препятствовать связыванию ббКИА с эктодоменом ТЬК3, из-за чего нарушается димеризация рецептора и активация сигналов с нижележащих сигнальных путей.
тАЬ 15ЕУЦ. Анализу подверглись следующие мутанты ТЬК3: К64Е, К182Е, К416Е, Υ465Α, К467Е, К488Е, К489Е, И517А И536А, И536К, Ц538А, Н539А, Н539Е, И541А Е570К, К619А, К619Е, двойной мутант К467ЕА468А, тройной мутант Т4728/К473Т/Ш748 и тройной мутант К488Е/К489Е/К493Е. ТЬК3 дикого типа, мутанты К64Е, К182Е, К416Е и тройной мутант Т4728/К473Т/Ш748 продемонстрировали сопоставимую активность связывания с тАЬ 15ЕУЦ (фиг. 6В и табл. 5В). Антитело не связывается с мутантами ТЬК3 К467Е, К489Е, К467Е/Т468А и К488Е/К489Е/К493Е (фиг. 6В и 6С). У остальных вариантов белка активность связывания была средней в сравнении с наибольшей активностью К488Е. Все эти мутанты связываются с тАЬ 12ОУО/О8У. Эти результаты говорят о том, что остатки К467 и К489 были критическими детерминантами эпитопа тАЬ 15ЕУЦ. Остаток К488 также является частью эпитопа. Эти остатки находились близко друг от друга на той же поверхности ТЬК3 (фиг. 7А). Полученные результаты продемонстрировали также, что остатки Υ465, Υ468, N517, И536, Ц538, Н539, N541, Е570 и К619, расположенные на той же поверхности, что и К467, К488 и К489, также являются частью эпитопа. Этот вывод был в дальнейшем подкреплен исследованиями по замене Н/И в тАЬ 15ЕУЦ. На фиг. 7А показаны эпитопы сайтов связывания тАЬ 12000/080 и 15ЕУ0 (черный) и С1068 тАЬ (серый), наложенные на структуру ТЬК3 человека. Эпитоп для тАЬ 15ЕУ0 формируется остатками Υ465, К467, Υ468, К488, К489, N517, И536, 0538, Н539, N541, Е570 и К619.
Исследования с заменой Н/Ό. При замене Н/И процедуры, используемые для анализа возмущения антителами, были аналогичны описанным ранее (Натиго е! а1., ί. Вюто1. ТесЬтциек 14:171-182, 2003; Ногп е( а1., ВюсЬеппЫгу 45:8488-8498, 2006) с некоторыми модификациями. Рекомбинантный ТЬК3 ЕСИ (экспрессированный из клеток 8Г9 с гистидиновым хвостом на С-конце и очищенный) инкубировали в растворе на основе дейтерированной воды в течение указанного периода времени, при этом в него внедрялся дейтерий, заменяющий атомы водорода. Дейтерированный ТЬК3 ЕСИ захватывали на колонке, содержащей иммобилизованные тАЬ 15ЕУ0, и промывали буферным водным раствором. Затем белок ТЬК3 ЕСИ элюировали с колонки и - после обработки протеазами - определяли местоположение дейтерий-содержащих фрагментов с помощью масс-спектрометрического анализа. Используемый в качестве эталона образец ТЬК3 ЕСИ был обработан тем же способом, но с дейтерированной водой его выдерживали после иммобилизации на колонке с антителами, а затем промывали и элюировали так же, как экспериментальный образец. Областями, связанными с антителом, считались те, в которых замена дейтерия на водород происходила в минимальной степени, и, таким образом, в них содержалось больше дейтерия, чем в эталонном образце ТЬК3 ЕСИ. Приблизительно 80% белка можно было картировать относительно специфических пептидов. Карты замен Н/И при возмущении ТЬК3 ЕСИ антителами тАЬ 15ЕУ0 показаны на фиг. 7В. Для ясности изображен только сегмент ТЬК3 вблизи участка, подвергшегося воздействию тАЬ 15ЕУЦ. Оставшиеся части белка ТЬК3 ЕСИ дальше к N и С-концу практически не были затронуты.
В исследованиях с заменой Н/И были идентифицированы пептидные сегменты .465ΥNΚΥ^^^.4-|. 5148МНК1А№ИИИМЬ526 и 529ЬЕКЬ532 8ЕЦ 1И N0: 2, которые являлись участками, где ТЬК3 особенно сильно изменился при связывании с тАЬ 15ЕУЦ. По своей природе замена Н/И является способом линейного картирования, и обычно с помощью этого способа нельзя определить, какие остатки пептидного сегмента в большей степени затронуты связыванием антитела. Однако, обширное совпадение результатов исследований с заменой Н/И и мутациями, позволяет удостовериться, что поверхность, показанная на фиг. 7А, служит сайтом связывания с тАЬ 15. Этот сайт связывания находится в том же участке последовательности аминокислот, что и сайт, описанный выше для тАЬ с1068 (публ. РСТ № \00 06/060513А2), но который был обнаружен на неперекрывающейся поверхности (фиг. 7А), что согласуется с данными об отсутствии перекрестной конкуренции между этими антителами.
Эпитоп, с которым связывается тАЬ 15ЕУ0, располагается проксимальнее сайта связывания б§КNΑ на С-конце ТЬК3 (Ве11 е! а1., Ргос. №й1. Асаб. 8ск (И8А) 103: 8792-8797, 2006; КаирН-Китат е! а1., 1. Вю1 СЬет, 282: 7668-7678, 2007; Ьш е! а1., 8аепсе, 320: 379-381, 2008). Без связи с какой-либо теорией
- 32 022832 считается, что при связывании тАЬ 15ЕУЦ с его эпитопом ТЪК3 возникает стерическое несоответствие с молекулой лиганда йкК№А и/или с димером-партнером, т.е. становятся невозможными связывание лиганда и лиганд-индуцированная димеризация рецептора.
Таблица 5Ь
Вариант тАЫ5 Вариант тАЫ2
не ТЬЕЗ ЕСО +++ иС ТЬЕЗ ЕСЦ +++
Е64Е +++ Ц116К -
К182Е +++ Ν14 0Α ++
К416Е +++ У144А +++
Υ4 65Α ++ К145Е +
К467Е - К147Е ++
Е488Е + К163Е ++
Е489Е 0167А ++
Ы517А ++ Ы196А ++
Ц536К ++
Ц536А + +
0538А ++
Н539Е + +
Н539А ++
Ν541Α ++
Е570Е ++
К619Е ++
К619А ++
Κ467Ε/Υ468Α
В488/Е489/К493Е -
Τ4723/Κ473Τ/Ν474 5 +++
Пример 7.
Синтез вариантов с повышенной термостабильностью.
Для создания вариантов антител с повышенной термостабильностью и с одновременным сохранением биологической активности и минимизацией иммуногенности применялись способы структурной инженерии.
Для инженерии выбрали тАЬ 15ЕУЦ. С целью минимизации иммуногенности вызывали мутации только гаметического типа, которые, на основании данных о структуре, могли быть полезными. В результате поиска ВЪАЗТ установили, что генам человека гаметического типа соответствовали УЪ и УН последовательности тАЬ 15ЕУЦ (§ЕЦ ГО N0: 41 и §ЕЦ ГО N0: 216 соответственно). Наиболее близкородственными последовательностями гаметического типа были последовательности ОепВапк Асс. № ААС09093 и Х59318 для УН и УЪ соответственно. Между УН и УЪ гаметического типа и УН и УЪ последовательностями тАЬ 15ЕУЦ были обнаружены следующие отличия: (УН) У341, О35З, Р50К, А61З и Ц67Н; (УЪ) О30З, Ъ31§ и А34№. Выявленные отличия в последовательности нанесли на карту кристаллической структуры тАЬ 15ЕУЦ и выбрали для инженерии те остатки, которые, предположительно, могли изменить упаковку и интерфейс взаимодействия. По кристаллической структуре антител (см. пример 6) определили потенциально дестабилизирующие структуру остатки. (1) В ядре УН около У34 была идентифицирована маленькая замкнутая полость. Эта полость была достаточно большой, чтобы вместить чуть большую боковую цепь, такую как 11е. (2) УН СЭК3 (Е99) была погружена в УН/УЪ интерфейс без водородных связей. Отрицательно заряженная карбоксилатная группа Е99 в практически гидрофобном окружении была связана с соседними остатками преимущественно вандерваальсовыми (уйте) связями. Погружение заряженной группы обычно является энергетически невыгодным и оказывает дестабилизирующее действие. (3) Р50 УН - это остаток в составе УН/УЪ интерфейса. У него объемистая ароматическая боковая цепь, которая может, таким образом, отрицательно влиять на процесс конъюгации. Были просчитаны и визуально проверены в Руто1 (тетете://_руто1_огд) водородные связи и уйте связи для Ρν. Погруженные полости в УН и УЪ доменах были просчитаны с помощью С’а\'ег (Ре1гек е! а1., ВМС БюшГогтаЕск. 7:316, 2006). Вся молекулярная графика создавалась в Руто1. Мутации в векторах экспрессии,
- 33 022832 кодирующих фрагменты РаЬ или 1дО4 полностью антител человека, созданных в соответствии с методикой, описанной в примере 3, вносили с использованием стандартных способов клонирования с помощью набора для сайт-направленного мутагенеза Цшск СЬапде II ХЬ (81га!адепе, Сан-Диего, Калифорния), СЬапде-1Т Ми1Ир1е МШайоп 8Ие О|гес1ей Ми1адепе818 КН (И8В СогрогаНоп, Кливленд, Огайо) или набора для сайт-направленного мутагенеза Цшск СЬапде II (81га!адепе, Сан-Диего, Калифорния). Реакции проводили в соответствии с рекомендациями соответствующего производителя. Полученные клоны секвенировали для проверки, полученные варианты инженерных антител назвали тАЬ с 15-1 по 15-9. Список номеров 8ЕЦ для СОК, вариабельных участков легких и тяжелых цепей и полных тяжелых и легких цепей для тАЬ 15ЕУЦ и его инженерных вариантов приведены в табл. 6. В табл. 7 указаны праймеры, используемые при создании каждого из вариантов.
Таблица 6
5Е<2. Ю № :
Кандидат №: НСЦК1 НС£>Н2 нсовз ЬСБН1 ΙΧϋΚ2 ьсокз ι,ν Ην Тяжелая цепь 1дС4 Легкая цепь
15 111 112 84 109 110 113 41 216 220 156
15-1 111 114 84 109 110 113 41 124 130 156
15-2 115 112 84 109 110 113 41 125 131 156
15-3 116 112 84 109 110 113 41 126 132 156
15-4 111 117 84 109 110 113 41 127 133 156
15-5 116 118 84 109 110 113 41 128 134 156
15-6 116 112 119 109 110 113 41 129 135 156
15-7 111 112 84 120 110 113 122 42 102 157
15-8 111 112 84 121 110 113 123 42 102 158
15-9 116 118 119 109 110 113 41 159 160 156
Связывание тАЬ 15-1 - 15-9 с ТЬК3 количественно оценивали с помощью иммуноанализа ЕЫ8А. ТЬК3 ЕСО человека (100 мкл ТЬК3-ЕСО в концентрации 2 мкг/мл) иммобилизовали на черных планшетах Мах18огЬ (еВюзаепсе) в течение ночи при 4°С. Планшеты промывали и блокировали, растворенные антитела наносили порциями по 50 мкл в каждую лунку по два раза. Осторожно встряхивая, планшету инкубировали при комнатной температуре в течение 2 ч. Связывание обнаруживали с помощью люминесцентного субстрата РОО (КосЬе АррПей 8с1епсе, Маннхейм, Германия, кат. № 11582950001) и козьих античеловеческих Рс:НКР Цаскзоп ЬптипоКезеагсЬ Вест Гроув, Пенсильвания, кат. № 109-035-098), планшету помещали в ридер для планшет 8рес!гаМах (Мо1еси1аг Ос^'Кез, Саннивейл, Калифорния) и проводили анализ.
- 34 Таблица 7
Кандидат К>: Мутанты Праймеры ЗЕО. Ю №: Полу- ченная плазмида № Плазми- да- матрица для мутагенеза №
15 1 НС: Р50Е ЕССТССАСТССАТССеССССАТСОАССССАССе 142 5042 р4595
СбСТСбСбТССАТССбССССАТССАСТССАССС 143
15-2 НС: УЗ 41 АСАССТААСТССССТТСС6С 144 5046 р4584
СЗСАТСТСеСССАСССА(ЗСС13АТССА6ТА6ТТ6(ЗТеАА(3 145
15-3 НС: 7341/(3355 АСЗАС6Т ААС ТСС С СТТ (ЗС66 146 5045 р4584
есАтстессесАсссАсстсАтссАСТАеттеетсААС 147
15-4 НС: А615/Ц67Н АСЗАСЕТААСТССССТТССЕС 144 5048 р4584
СеСТЕАТ6СТСАССТС(ЗСССТС(ЗААССТАССеСТ6ТА(ЗТТ (Зстстас 143
15-5 НС: Ε50Ε/ν34Ι/ ¢3355/ А615/067Н СТТСАССААСТАСТ6САТСА(ЗСТ(ЗС6Т(ЗС6ССАСАТ6С 149 5069 р5042
СССТСАТССТСАС<ЗТО(ЗСССТ(3<ЗАА<ЗСТАСЗ(36СТСТА(ЗТТ ЗСТСТАС 148
15-6 НС: У341/С358/ Е99С С(ЗССАТ6ТАСТАСТ(ЗССЗССС<ЗССА<ЗСТ<ЗТАССАССССТАС 150 5070 р5045
<ЗТА<ЗСССТССТАСА<ЗСТ<36С(3<3<ЗСССА(ЗТАСТАСАТ<3(ЗС6 151
15-7 ЬС: С305/Ь315 ЕССАСССАСАССАТСАССАССТАССТЕСССТССТАССАСС 152 5043 р4595
ЗСТ6СТАССАССССАССТАССТССТСАТ6СТСТСССТССС 153
15-8 ЬС: Α34Ν АСАССТААСТССССТТСССС 144 5047 р4 538
С6<3 (ЗСТТС ТССТС6Т АС С АСТ ТС АССТА6СТ С СТ6АТСС Т СТС 154
15-9 НС: Г50Е/У341/ 0355 /А615/О67Н /Е99О ССССАТСТАСТАСТСССССССССАССТСТАССАССССТАС 150 5097 р5069*
СТАССССТССТАСАССТСССССССССАСТАСТАСАТСССО 151
* р5069 как единичный ген тяжелой цепи. Вариабельный участок р5069 заменяется на остов р5070.
Э8С эксперименты проводили на МюгоСаГк Аи1о УР-капиллярной системе Э8С (М1сгоСа1, ЬЬС, Нортгемптон, Массачусетс), в которой температурные различия между эталонными и опытными лунками непрерывно измерялись и калибровались по блокам питания. Образцы нагревали с 10 до 95°С со скоростью нагревания 60°С/ч. Время до сканирования составляло 15 мин, период фильтрования - 10 с. Концентрация при О§С-экспериментах составляла приблизительно 0,5 мг/мл. Анализ полученных термограмм проводили с помощью программного обеспечения М1сгоСа1 0пдт 7 (М1сгоСа1, ЬЬС).
Термостабильность (Тт) созданных вариантов измеряли с помощью Э8С (табл. 8). Связывание вариантов антител с ТЬК3 было сопоставимым со связыванием исходного антитела.
- 35 022832
Таблица 8
Краткий обзор температур плавления (ТМ) вариантов и обоснование для их изготовления
Кандидат №: Мутации Обоснование ТМ (’С) АТМ (°С)
15Ενζ) нт 64,7 0
15-1 Ην Ε50Κ взаимодействие УН/УЬ 69,3 4,6
15-2 Ην ν34Ι упаковка ядра νκ 66,9 2,2
15-3 Ην ν34Ι/6355 водородная связь, упаковка ядра νκ 71,2 6,5
15-4 Ην Α615/067Η упаковка νΗ/νΐ, распределение заряда по поверхности УН 65,4 0,7
15-5 НУ Е50Н/У341/6 353/ Α613/067Η взаимодействие νΗ/νΣ, водородная связь, упаковка ядра УН, упаковка νΗ/νΐι, распределение заряда по поверхности νΗ 76,2 11,5
15-6 Ην У341/С343/Е 990 водородная связь, упаковка ядра νΗ, нейтрализация наведенного заряда 75 10,3
15-7 ЬУ 0303/1,313 поверхностные полярные остатки Е-С0К1 63,1 -1,6
15-8 ЬУ Α34Ν взаимодействие УЪ/УН 64 -0,7
15-9 НУ Р50К/У341/С 353/ Α613/067Η/Ε 99<2 взаимодействие \7Н/\7Ь, водородная связь, упаковка ядра νΗ, упаковка νΗ/νΕ, распределение заряда по поверхности νΗ, нейтрализация наведенного заряда 76 11,3
Пример 8.
Создание суррогатного антитела против ТЬР3.
Химерное (крыса/мышь) антагонистическое антитело против мышиного ТЬР3, называемое здесь тАЬ 5429, было создано для оценки эффектов ингибирования сигналов ТЬР3 в разных моделях ш νί\Ό, поскольку гуманизированные антитела, создание которых описано в примере 1, не обладают достаточной специфичностью или антагонистической активностью по отношению к мышиному ТЬР3. Суррогат химерного тАЬ 5429, а также родительского крысиного антитела против мышиного ТЬР3 с1811 ингибировал сигналы мышиного ТЬР3 ш νίΙΐΌ и ш νί\Ό, и облегчал патогенез при моделировании некоторых заболеваний мышей.
Данные, которые обсуждаются ниже, наводят на мысль о роли ТЬР3 в индукции и поддержании патологического воспаления, и частично обосновывают терапевтическое применение антагонистов ТЬР3 и антител-антагонистов ТЬР3, например, при острых и хронических воспалительных заболеваниях, в том числе, при гиперцитокинемии, астме и воспалении дыхательных путей, воспалительных заболеваниях пищеварительного тракта и ревматоидном артрите, вирусных инфекциях и сахарном диабете ΙΙ типа.
Создание суррогатного тАЬ 5429.
СО крыс иммунизировали рекомбинантным мышиным эктодоменом ТЬР3 (аминокислоты 1-703 8ЕЦ ГО NО: 162, ОепВапк Асс. №. ΝΓ_569054), созданным обычными способами. Лимфоциты двух крыс, демонстрировавших титры антител, специфичных к мышиному ТЬР3, сливали с РО миеломными клетками. Идентифицировали ряд моноклональных антител, реагирующих с мышиным ТЬР3, и проверили их эффективность в качестве антагонистов ш уПго путем количественных измерений с мышиным люциферазным репортером и мышиными эмбриональными фибробластами. Для дальнейшей работы выбрали гибридомную линию С1811А. Функциональные гены вариабельного участка тАЬ с1811, секретируемого гибридомой, секвенировали. Затем клонированные гены вариабельных участков тяжелой и лег- 36 022832 кой цепи вставляли в плазмидные векторы экспрессии, что позволило получить кодирующие последовательности для создания химерного Ка1/Ва1Ъ С ши1дС1/К шАЪ, созданного, как и шАЪ 5429, с помощью рутинных способов. Антитела экспрессировали в соответствии с описанием в примере 3. Аминокислотные последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей тАЪ 5429 показаны, соответственно, в 8ЕЦ ГО N0:164 и 8ЕЦ ГО N0: 163, а полные последовательности тяжелой и легкой цепей показаны в 8ЕЦ ГО N0:166 и 8ЕЦ ГО N0: 165 соответственно. Полные последовательности тяжелой и легкой цепей шАЪ с1811 показаны, соответственно, в 8ЕЦ ГО N0: 168 и 8ЕЦ ГО N0: 167.
Характеристика тАЪ 5429.
Способность шАЪ 5429 к нейтрализации сигналов ТЬК3 охарактеризовали в ходе анализов ίη νΐίτο. Анализ и результаты активности описываются ниже.
Анализ мышиного люциферазного гена-репортера.
кДНК мышиного ТЬК3 (8ЕЦ ГО N0: 161, СеиВаик Асс. N0: ИМ_126166) амплифицировали способом ПЦР из кДНК мышиной селезенки (ΒΌ Вюкаеисек, ВебГогб, МА), и клонировали в векторе рСЕР4 (ЬГе ТесЬио1од1ек, Карлсбад, Калифорния) стандартными способами. 200 мкл клеток НЕК293Т помещали в 96-луночные планшеты с белым прозрачным дном в концентрации 4х104 клеток/лунку в полной ΌΜΕΜ, и использовали на следующий день для трансфекции с помощью ЫроГесЦипте 2000 (1^Фодеи Согр., Карлсбад, Калифорния) с использованием 30 нг рИР-кВ люциферазы светлячка (8(га(адеие, СанДиего, Калифорния) или 30 нг р18КЕ люциферазы светлячка (ΒΌ Вюкаеисек. Бедфорд, Массачусетс), 5 нг рПКЬ-ТК контрольной люциферазы КеиШа (Ргошеда Согр., Мэдисон, Висконсин) репортерных плазмид, 1,5 нг рСЕР4, кодирующего полный мышиный ТЬК3, и 13,5 нг пустого рсЭХА3.1 вектора (ЬтГе ТесЬио1од1ек, Карлсбад, Калифорния) для внесения суммарного количества ДНК, равного 50 нг/лунку. Через 24 ч после трансфекции к клеткам добавляли антитела против мышиного ТЬК3 в свежей бессывороточной ΌΜΕΜ и инкубировали в течение 30-60 мин при 37°С, затем добавляли 0,1 или 1 мкг/мл ро1у(1:С). Через 24 ч считывали данные с планшет с помощью системы для анализа люциферазы Эна1-С1о (Ргошеда, Мэдисон, Висконсин). Количество относительных световых единиц измеряли с помощью мультиридера РЬи0к(аг 0РТ1МА с программным обеспечением 0РТ1МА (ВМС ЬаЪЗесП СшЪН, Германия). Нормализованные уровни (люциферазные отношения) получали путем деления относительных световых единиц со светлячковыми люциферазами (КЬИ) на КЬИ КеиШа. шАЪ 5429, а также его родительские шАЪ с1811 и шАЪ 15 (табл. 3а), уменьшали индуцированную ро1у(1:С) активацию ИР-кВ и 18КЕ пропорционально дозе (фиг. 8А и 8В), что доказывает их способность быть антагонистами ТЬК3. Измеренные в ходе анализа 18КЕ 1С50 составляли соответственно 0,5, 22 и 0,7 мкг/мл для шАЪ 5249, шАЪ 15 и шАЪ с1811.
Анализ с использованием мышиных эмбриональных фибробластов (МЕР).
Клетки С57ВЬ/6 МЕР получили из АгПк 0рПшик (0рП-МЕР™ С57ВЬ/6-0001). Клетки помещали в лунки 96-луночной плоскодонной планшеты (ВИ Ра1сои) в количестве 20000 клеток/лунку в 200 мкл среды МЕР (ИМЕМ с глутамаксом, 10% инактивированных нагреванием РВ8, 1х ИЕАА и 10 мкг/мл гентамицина). Все инкубации проводили при 37°С/5%СО2. Через 24 ч в лунки планшет добавляли шАЪ 5429 или шАЪ с1811. Планшеты инкубировали с шАЪ в течение 1 ч, после чего в каждую лунку добавляли ро1у(1:С) в концентрации 1 мкг/мл. Супернатанты собирали после 24 ч инкубации. Уровни цитокинов определяли с помощью набора бусин (ΙπνΠΐΌ^αι Согр., Карлсбад, Калифорния) для обнаружения СХСЫ0/1Р-10 согласно протоколу производителя. Результаты представили в виде графиков, созданных с помощью программного обеспечения СгарЬРаб Рпкш. Оба антитела уменьшали индуцированные ро1у(1:С) уровни СХСЫ0/1Р-10 в зависимости от дозы. Это показывает, что такие антитела могут быть антагонистами эндогенных ТЬК3 и могут ингибировать сигналы ТЬК3 (фиг. 9).
Проточная цитометрия - поверхностное окрашивание.
Мыши с нокаутом С57ВЬ/6 и ТЬК3 (ТЬК3К0) (С57ВЬ/6 фон; самки, 8-12 недель, Асе Атша1к, 1ис.), по 10 животных в группе, получали внутрибрюшинно дозу в 1 мл 3% тиогликолевой среды (81дша), через 96 ч мышей подвергали эвтаназии и брюшину каждой мыши промывали 10 мл стерильного ФБР. Извлеченные тиогликолевой средой брюшинные макрофаги ресуспендировали в ФБР, затем оценивали жизнеспособность клеток с помощью окрашивания Трипановым синим. Клетки осаждали центрифугированием и ресуспендировали в 250 мкл буфера РАС8 (ФБР -Са2+-Мд2+, содержащий 1% инактивированного нагреванием РВ8 и 0,09% азида натрия) и хранили на льду. Для блокирования Рс-рецепторов на макрофагах применяли реагент СИ16/32 (еВюкаеисе) в концентрации 10 мкг/106 клеток в течение 10 мин. Клетки в концентрации 106 клеток вносили аликвотами по 100 мкл/лунку для поверхностного окрашивания. Конъюгированные с А1еха-Р1иог 647 (Мо1еси1аг РгоЪек) шАЪ с1811 и шАЪ 1679 (крысиные антитела против мышиного ТЬК3, не специфичные по отношению к ТЬК3, используются в качестве изотипического контроля) добавляли в концентрации 0,25 мкг/106 клеток и инкубировали на льду в темноте в течение 30 мин. Клетки промывали и ресуспендировали в 250 мкл буфера РАС8. При окрашивании для оценки жизнеспособности 7-ААИ (ВИ Вюкаеисек, Бедфорд, Массачусетс) добавляли в концентрации 5 мкл/лунку не более чем за 30 мин до исследования образцов на РАС8 СаПЪиг, что позволяло выявить мертвые клетки. Образцы собирали с помощью РАС8 СаПЪиг, применяя программное обеспечение Се11
- 37 022832
Сие51 Рго. Для анализа собранных данных путем построения гистограмм применяли РС8 Ехрге88.
Связывание тАЬ с1811 с мышиными брюшинными макрофагами (полученными с помощью тиогликолевой среды) из С57ВЬ/6 и ТЬКЗКО мышей оценивали способом проточной цитометрии для оценки специфичности связывания. тАЬ 5429 при таком количественном определении не использовали, так как мышиный Рс участок этого химерного антитела, предположительно, участвует в неспецифическом связывании. тАЬ с1811 не связывался с макрофагами ТЬКЗКО и увеличивал связывание с поверхностью клеток С57ВЬ/6 брюшинных макрофагов, что говорит о специфичности тАЬ по отношению к ТЬКЗ (фиг. 10). тАЬ 5429 с теми же участками связывания, что и у тАЬ с1811, предположительно, обладает такой же специфичностью при связывании, как и тАЬ с1811.
Пример 9.
Антитела-антагонисты ТЬКЗ защищают от опосредованного ТЬКЗ системного воспаления.
Модель.
В качестве модели опосредованного ТЬКЗ системного воспаления использовали индуцированную ро1у(1:С) системную цитокин/хемокиновую модель. В этой модели ро1у(1:С) (Р1С), введенный внутрибрюшинно, индуцировал системные цитокиновый и хемокиновый ответы, которые были частично опосредованы ТЬКЗ.
Самки мыши С57ВЬ/6 (8-10 недельные) или самки мыши ТЬКЗКО (С57ВЬ/6 фон; 8-10 недельные, Асе Аштак, 1пс.) получали подкожно: тАЬ 5429 в концентрации 10, 20 или 50 мг/кг в 0,5 мл ФБР, тАЬ с1811 - в концентрации 2, 10 или 20 мг/кг в 0,5 мл ФБР или 0,5 мл ФБР (контроль с помощью среды). Через 24 ч после введения дозы антител мышам вводили внутрибрюшинно по 50 мкг ро1у(1:С) (Атег5Йат кат. № 26-47З2 партия № ΙΗ0156) в 0,1 мл ФБР. Кровь из глазной орбиты собирали через 1 и 4 ч после инъекции ро1у(1:С). Сыворотку получали из цельной крови и определяли в ней концентрации цитокина и хемокина с помощью Ьитшех.
Результаты.
Ро1у(1:С) при внутрибрюшинном введении индуцировал системный цитокиновый и хемокиновый ответ, который был частично опосредован ТЬКЗ, как было доказано по значительно уменьшившемуся синтезу ряда цитокинов и хемокинов у животных ТЬКЗКО (табл. 9А). Зависимыми от ТЬКЗ индуцированными ро1у(1:С) медиаторами были 1Ь-6, КС, ССЬ2/МСР-1 и ФНО-α через 1 ч после инъекции ро1у (1:С) и 1Ь-1а, ССЬ5/КАЫТЕ8 и ФНО-α через 4 ч после инъекции ро1у(1:С). Как тАЬ с1811, так и тАЬ 5429 значительно снижали концентрации этих ТЬКЗ-зависимых медиаторов, что доказывает способность антител уменьшать количество сигналов с ТЬКЗ ίη У1уо (табл. 9В). В табл. 9 указаны средние концентрации цитокина и хемокина (пг/мл) у шести животных/группа ±8ЕМ. Полученные данные наводят на мысль, что антагонисты ТЬКЗ могут быть полезными при снижении избыточных опосредованных ТЬКЗ уровней цитокинов и хемокинов при таких состояниях, как цитокиновый шторм или смертельный шок.
Таблица 9А
С57ВЬ/6 ТЬКЗКО
Р1С - + - +
гпЛЪ 5429 (мг/кг) - - - -
тАЬ с1811 (мг/кг) - - - -
1 ч, обработка Р1С
ФНОа 6,005+0,32 319,4+34,1* 9,13+4,41 43,80+10,13**
КС 129,3+9,83 2357+491, 5* 152,0+21,34 432,3+90,66**
1Ь-6 40,91+5,66 5317+856,7* 120,1+99,99 1214+294,9**
МСР-1 84,67+18,45 694,6+127,8* 67,85+34,16 249,9+55,60**
4 ч. обработка Р1С
ΙΙ,-Ια 28,21+17,78 796,7+45,0* 13,94+13,84 408,5+29,91**
ΚΑΝΤΕ5 20,87+1,738 4511+783,4* 36,01+4,484 706,3+84,36**
ФНОа 0,10+0 561,7+81,84* 3,215+3,115 305,8+53,63**
* р<0,001: однофакторный АЛОУА для С57ВЬ/6 ФБР ** р<0,001: однофакторный АЛОУА для С57ВЬ/6 Р1С
- З8 Таблица 9В
С57ВЬ/6
Р1С + + + + + +
тАЪ 5429 (мг/кг) 50 20 10 - - -
тАЪ С1811 (мг/кг) - - - 20 10 2
1 ч, обработка Р1С
ФНОа 29,33± 31,05± 59,55± 32,54± 42,22± 42,61+
3,78*** 1,59*** 12,71*** 3,89*** 7,04*** 10,58***
КС 466, 3+ 440,3± 744,6± 637,3+ 944,2± 919, 3±
92,35*** 10,01*** 103,1** 151,0*** 130,9** 231,2**
11,-6 480,2+ 375,9± 705,2+ 739,2± 1047+ 1229+
62,88*** 46,14*** 149,3*** 113,3*** 222* * * 378,4***
МСР-1 168,5± 321,6+ 219, 2± 184,0± 278,3± 414,9±
15,04** 206,7 70,58* 14,92** 53, 57 97,17
4 ч, обработка Р1С
1Ь-1а 343,0+ 452,6± 481,1± 354,8± 351,7+ 352,4±
33,01*** 94,86** 121,0* 45,43*** 68,85*** 39,60***
ΚΑΝΤΕ5 1381± 2439± 1601+ 1303± 1365± 2209±
169,7*** 308,7** 398,9*** 168,0*** 474,1*** 402,5**
ФНОа 100,1± 205,1 + 226,1+ 138,9± 121,6± 223,3±
8,5*** 41,85*** 64,72*** 26,0*** 38,85*** 47,74***
*** р<0,001, **р<0,01, *р<0,05: Статистические данные однофакторного ΑΝΟνΑ
сравнивали с группой С57ВЬ/6+Р1С
Пример 10.
Антитела-антагонисты ТЬК3 снижают гиперчувствительность дыхательных путей.
Модель.
Гиперчувствительность дыхательных путей индуцировали ро1у(1:С).
Самок мышей С57ВЬ/6 (12-недельных) или самок мышей ТБК3КО (С57ВЬ/6 фон; 12-недельные, Асе Ашшак, 1пс.) анестезировали изофлураном и вводили им интраназально несколько доз (10-100 мкг) ро1у (1:С) в 50 мкл стерильного ФБР. Мыши получали ро1у(1:С) (или ФБР) трижды с 24-часовыми интервалами. Через 24 ч после последнего введения ро1у(1:С)(или ФБР) с помощью плетизмографии всего тела (системы ВИХСО) измеряли параметры функции легких и гиперчувствительность дыхательных путей к метахолину. Мышей помещали в камеру для плетизмографии всего тела и позволяли привыкнуть к обстановке в течение 5 мин. После определения исходных показателей мышам давали увеличивающиеся дозы распыляемого метахолина (Бщша, Сент-Луис, Миссури). Распыляемый метахолин давали в течение 2 мин, затем в течение 5 мин собирали данные, затем делали 10-минутный перерыв перед последующими увеличивающимися дозами метахолина. Измеряли резистентность к увеличению потока воздуха (улучшенный показатель паузы (РепЪ)) и представляли в виде среднего значения РепЪ за 5 мин записи (система ВИХСО). После измерений легочной функции мышь подвергали эвтаназии и канюлировали легкие. Делали инъекцию 1 мл ФБР в легкие, вытягивали жидкость обратно и получали таким образом смыв с бронхов и легких (ВАИ). Ткани легких вынимали и замораживали. ВАИ центрифугировали (1200 об/мин, 10 мин), собирали бесклеточные супернатанты и хранили при -80°С до момента анализа. Осадок клеток ресуспендировали в 200 мкл ФБР для подсчета общего количества клеток и отдельных фракций клеток. Мультиплексный анализ проводили в соответствии с протоколом производителя с помощью набора Ми1Ър1ех 1тшипоа88ау (МППроге. Биллерика, Массачусетс).
Результаты.
Предшествующие наблюдения показали, что интраназальное введение ро1у(1:С) индуцировало опосредованное ТЬК.3 ухудшение функции легких у мышей при одновременном повышении улучшенного показателя паузы (РепН) в ходе плетизмографии всего тела (Вихсо) в сравнении с исходным показателем, и повышение гиперчувствительности к распыляемому метахолину (индикатору гиперчувствительности дыхательных путей) (публ. РСТ № \УО 06/060513А2). Такое ухудшение функции легких связано с притоком нейтрофилов в легкие и увеличением уровней провоспалительных цитокинов/хемокинов в легких. В этом исследовании эффект тАЪ 1811 и тАЪ 5429 оценивали при индуцированном ро1у(1:С) ухуд- 39 022832 шении функции легких путем подкожного введения каждого из антител в дозе 50 мг/кг перед введением ро1у(кС).
Опосредованное ТЬК3 ухудшение функции легких значительно уменьшалось при введении животным антител-антагонистов ТЬК3 перед введением ро1у(ГОС). Опосредованное ТЬК3 повышение исходного РепН и чувствительности дыхательных путей к метахолину удалось предотвратить у животных, которым вводили антитела против ТЬК3 (фиг. 11). У животных, получивших антитела против ТЬК3, опосредованный ТЬК3 приток нейтрофилов в легкие мышей и образование хемокинов в дыхательных путях снижался. Число нейтрофилов (фиг. 12) и уровень СХСЬЮЛР-Ю (фиг. 13) определяли в бронхолегочном смыве (ВАЬР). Исследования повторяли по меньшей мере три раза с похожими результатами. Данные, приведенные на фиг. 11, 12 и 13, получены в одном репрезентативном исследовании. Каждый символ представляет собой один результат по одной мыши, а горизонтальные черточки показывают среднее значение для группы. Исследование показало, что антитела-антагонисты ТЬК3 при системном введении достигают легких, снижая в используемой модели опосредованное ТЬК3 ухудшение функции легких, инфильтрацию нейтрофилами дыхательных путей, образование хемокинов и воспаление дыхательных путей. Таким образом, антагонисты ТЬК3 могут быть полезны при лечении или профилактике респираторных заболеваний, для которых характерна гиперчувствительность дыхательных путей, например астмы, аллергического ринита, хронического обструктивного заболевания легких (СΘР^) и муковисцидоза.
Пример 11.
Антитела-антагонисты ТЬК3 защищают от воспалительных заболеваний пищеварительного тракта.
Модель.
В качестве модели воспалительного заболевания пищеварительного тракта использовали модель Όδδ колита.
Самок мышей С57ВЬ/6 (<8-недельные) или самок мышей (С57ВЬ/6 фон; <8-недельные весом от 16,5 до 18 г, Асе Аттак, Юс.) кормили радиоактивной пищей, начиная с -1 дня. Όδδ (сульфат декстрана) (МР Вютебюак, Аврора, Огайо, кат. № 160110; 35-50 кДа; 18-20% серы, партия № 8247Л) разбавляли в автоклавированной подкисленной питьевой воде до конечной концентрации 5%. Воду с Όδδ давали в течение 5 дней, после чего заменили ее на простую воду. Воду мышам на протяжении всего исследования давали без ограничений. Каждый день все бутылки с водой взвешивали для учета потребления воды. В 0,2 и 4 день мышам вводили внутрибрюшинно 5 мг/кг (0,1 мг в 0,1 мл ФБР) тАЬ 5429, мышиных антител против ФНО-α или ФБР в качестве контроля. На протяжении всего исследования за мышами ежедневно наблюдали и взвешивали их с 0 по 4 дни и на 7 день. На 2 и 7 дни исследования мышей подвергали эвтаназии. Брюшную полость мышей вскрывали, восходящую ободочную кишку отрезали в месте соединения со слепой кишкой. Отрезки кишки собирали и фиксировали в 10% нейтральном буферном формалине. Затем отрезки кишки заливали парафином, готовили срезы и окрашивали гематоксилином-эозином (Н&Е) (ОнаНек Мо1еси1аг ЬаЬк, Санта-Барбара, Калифорния). Гистопатологические исследования кишки проводили ветеринарные патологи слепым способом, описанным ниже (РаЛоМейгх, Сан-Хосе, Калифорния).
Гистопатологические исследования.
Исследовали два сегмента толстого кишечника, тонкого кишечника и прямой кишки и рассчитывали следующие изменяющиеся показатели: (ί) некроз отдельных клеток; (ίί) эпителиальные язвы; (ίίί) отторжение эпителиальных масс; (ίν) абсцесс крипт; (ν) пролиферацию клеток; (νί) пролиферацию клеток крипт; (νίί) образование грануляционной ткани в 1атша ргорпа (собственной пластинке слизистой оболочки); (νίίί) грануляционной ткани в подслизистой оболочке; (ίχ) инфильтрации подслизистой оболочки воспалительными клетками, преимущественно нейтрофилами; и (х) отек подслизистой оболочки.
Однократно определяли тяжесть состояния на основании следующих стандартных определений:
- отсутствуют;
- легкие, очаговые или редко встречается;
- легкие, множественные очаги;
- умеренные, часто встречаются, но на ограниченных участках;
- тяжелые, часто встречаются на многих участках или на больших участках соответствующей ткани;
- очень тяжелые, на больших участках соответствующей ткани.
Результаты.
Предшествующие наблюдения показали, что у животных ^431^ значительно меньше гистопатологических изменений в сравнении с мышами дикого типа при моделировании воспалительного заболевания пищеварительного тракта, индуцированного приемом Όδδ внутрь (публ. РСТ № νΘ 06/60513А2), что наводит на мысль о том, что сигналы ТЬК3 играют какую-то роль при патогенезе этой модели. Известно, что РНК условно-патогенных бактерий или РНК млекопитающих, высвобождающаяся из некротических клеток, может быть эндогенным лигандом, стимулирующим сигналы ТЬК3 (Капко еί а1., Ιιηшипйу 23165-231175, 2005; Капко еί а1., ί. Вю1. СПет. 279:12542-12550, 2004), и, следовательно, стимуляция эндогенными лигандами ТЬК3 кишечника может усиливать и закреплять воспаление в модели Όδδ колита.
- 40 022832
Тяжесть заболевания была меньше у получивших Όδδ животных при введении им антител против ТЬКЗ, судя по суммарным гистопатологическим показателям (фиг. 14). На фиг. 14 в виде горизонтальных линий показаны средние значения, стандартные отклонения и 95% доверительные интервалы параметров, используемых при оценке тяжести заболевания. Значительное ухудшение параметров наблюдалось у животных дикого типа, получивших Όδδ, при введении антител против ТЬКЗ (р<0,05) в сравнении с животными дикого типа, не получавшими антител. ТЬКЗКЮ животные, получившие Ό88, были защищены от индуцированных ЭББ заболеваний. Получившие Όδδ животные, которым вводили тАЬ против мышиного ФНО-α, демонстрировали отсутствие улучшения гистопатологических параметров при моделировании Όδδ. Следовательно, модель Όδδ может быть полезна при оценке изучаемых терапевтических средств, предназначенных для людей, не отвечающих на анти-ФНО-α терапию, а нейтрализующие антитела против ТЬКЗ могут быть полезны пациентам с воспалительными заболеваниями пищеварительного тракта, которые не отвечают на анти-ФНО-α терапию.
Модель.
В качестве модели воспалительного заболевания пищеварительного тракта использовали модель переноса Т-клеток. При использовании такой модели у мышей БСГО воспаление кишечника индуцировали переносом популяции избегнувших Т-супрессоров наивных Т-клеток иммунокомпетентных мышей, которые атаковали антиген-презентующие клетки в слизистой кишечника.
Для индукции хронического колита наивные Т-клетки (СО4+СЭ45КВ высокие Т-клетки) инъецировали внутрибрюшинно в реципиентов БСГО. Мышам вводили либо ФБР (500 мкл/мышь внутрибрюшинно; контроль со средой), тАЬ 5429 (0,1 мг/мышь внутрибрюшинно), либо антитела против ФНО-α (0,05 мг/мышь внутрибрюшинно; положительный контроль), начиная с 48 ч после переноса Т-клеток, а после этого - дважды в неделю на протяжении 8 недель исследования. Через 8 недель после переноса Т-клеток (или когда мышь теряет > 15% от начального веса тела) животных подвергали эвтаназии и вырезали у них кишечник. Кишечник фиксировали, заливали парафином и окрашивали гематоксилином-эозином (Н&Е). Гистопатологические параметры (инфильтрации клеток, абсцессы крипт, эпителиальные эрозии, потерю бокаловидных клеток и утолщение стенок пищеварительного тракта) количественно оценивали специалисты слепым способом.
Результаты.
У животных, перенесших перенос Т-клеток, при лечении антителами против ТЬКЗ тяжесть заболевания уменьшалась, о чем говорит значительное снижение у них величины сводной гистопатологической оценки в сравнении с контрольными животными (р<0,05) (фиг. 15А). Для получения сводной оценки оценивали абсцессы крипт, язвы, нейтрофильный инфлюкс, потерю бокаловидных клеток, количество ненормальных крипт, воспаление 1атша ргорпа и трансмуральное вовлечение. Наблюдалось значительное уменьшение абсцессов крипт, числа язвенных очагов и нейтрофильных инфлюксов (для всех р<0,05) (фиг. 15В). Антитела против ФНО-α в дозах, достоверно обеспечивающих оптимальное улучшение, использовали как положительный контроль.
Исследования с помощью хорошо изученных моделей воспалительных заболеваний пищеварительного тракта (Όδδ и перенос Т-клеток) показали, что при системном введении антитела-антагонисты ТЬКЗ достигают слизистой кишечника и уменьшают воспаление пищеварительного тракта, индуцированное двумя разными патогенными механизмами. Таким образом, антагонисты ТЬКЗ могут быть полезны при лечении воспалительных заболеваний пищеварительного тракта, в том числе в случае устойчивости против ФНО-α, и в других случаях опосредованных иммунными механизмами патологий пищеварительного тракта.
Пример 12
Антитела-антагонисты ТЬКЗ защищают от коллаген-индуцированного артрита.
Модель.
Коллаген-индуцированный артрит (С1А) использовали как модель ревматоидного артрита.
Самцов мышей В10К111 (6-8-недельных, .Тасккоп ЬаЬк) делили на группы по 15 животных в группе (группы артрита) или по 4 на группу (контрольные животные). Животных в группах артрита подвергали анестезии изофлураном и делали им инъекции коллагена II типа (Е1а81ш Рго6ис18) и полного адъюванта Фрейнда с М. 1иЬегси1о818 (01Гсо) на 0 и 15 дни. На 12 день мышей с развивающимся из-за коллагена II типа артритом рандомизировали в зависимости от веса тела на группы терапии и вводили им подкожно (БС) на 12, 17 и 22 (612, 617, 262) дни тАЬ 5429 (25 мг/кг), в качестве отрицательного контроля - антитело СУАМ (рекомбинантное тАЬ, неспецифичное в отношении мышей) (5 мг/кг) или антитела против ФНО-α (5 мг/кг, положительный контроль). Кроме того, контрольную группу мышей обрабатывали средой (ФБР) или дексаметазоном (0,5 мг/кг, Эех, эталонным компонентом) подкожно (БС) ежедневно (РО) на 12-25 дни. Животных оценивали ежедневно с 12 по 26 дни. Передние и задние лапы оценивали по клинической шкале (показана ниже). Животные подвергались эвтаназии на 26 день исследования, их гистопатологические показатели оценивали слепым способом (шкала приведена ниже). Исследование эффективности проводили с учетом веса тела животных и оценок по клинической шкале артрита. Все животные выжили к концу исследования.
- 41 022832
Критерии клинической оценки для кистей передних и задних конечностей:
- норма;
- затронуты суставы задних или передних кистей, или минимальные диффузная эритема и припухлость;
- затронуты суставы задних или передних кистей, или легкие диффузная эритема и припухлость;
- затронуты суставы задних или передних кистей, или умеренные диффузная эритема и припухлость;
- заметные диффузная эритема и припухлость, или =суставы 4 пальцев затронуты;
- тяжелая диффузная эритема и тяжелая опухоль всей кисти, неспособность сгибать пальцы.
Способы гистопатологической оценки суставов мышей при артрите, спровоцированным коллагеном II типа.
При оценке кистей или голеностопных (лучезапястных) суставов у мышей с артритом, спровоцированным коллагеном II типа, учитывается тяжесть изменений, а также число отдельных пораженных заболеванием суставов. При поражении только 1-3 суставов кисти или голеностопных (лучезапястных) суставов без поражения метакарпальных/метатарзальных/пальцевых или тарзальных/тибиотарзальных суставов, произвольно оценивали максимальную тяжесть по 1, 2 или 3 параметрам из перечисленных ниже в зависимости от тяжести изменений. Если поражены более 2 суставов, критерии, перечисленные ниже, применяются к наиболее тяжело пораженному/большинству суставов.
Клинические данные с целью оценки кистей анализировали с помощью АИС в 1-15 дни и рассчитывали % ингибирования с учетом контрольных показателей.
Оценка:
- норма;
- минимальная инфильтрация воспалительными клетками синовиального слоя и околосуставной ткани пораженных суставов;
- легкая инфильтрация, в случае кистей, ограниченность в пораженных суставах;
- умеренная инфильтрация с умеренным отеком, в случае кистей, ограниченность движений в пораженных суставах;
- заметная инфильтрация в большинстве участков с заметным отеком;
- тяжелая диффузная инфильтрация с тяжелым отеком.
Паннус:
- норма;
- минимальная инфильтрация паннуса в хряще и субхондральной кости;
- легкая инфильтрация с краевыми зонами деструкции твердых тканей в пораженных суставах;
- умеренная инфильтрация с умеренной деструкцией пораженных суставов;
- заметная инфильтрация с заметной деструкцией архитектуры сустава в большинстве суставов;
- тяжелая инфильтрация и тотальная или почти тотальная деструкция архитектуры сустава, поражены все суставы.
Повреждения хряща:
- норма;
- минимальная или небольшая потеря окраски толуидиновым синим в отсутствие явной потери хондроцитов или разрыва коллагена в пораженных суставах;
- небольшая потеря окраски толуидиновым синим с очаговой легкой (поверхностной) потерей хондроцитов и/или разрывами коллагена в пораженных суставах;
- умеренная потеря окраски толуидиновым синим и многоочаговой умеренной (глубокой в средней зоне) потерей хондроцитов и/или разрушением коллагена в пораженных суставах;
- заметная потеря окраски толуидиновым синим с многоочаговой заметной (глубокой в глубокой зоне) потерей хондроцитов и/или разрушением коллагена в большинстве суставов;
- сильная потеря окраски толуидиновым синим с многоочаговой выраженной (от глубокой до крайней) потерей хондроцитов и/или разрушением коллагена во всех суставах.
Резорбция кости:
- норма;
- минимальная с маленькими участками резорбции, не явно выраженная при малом увеличении, редкие остеокласты в пораженных суставах;
- легкая с более многочисленными участками резорбции, не явно выраженная при малом увеличении, более многочисленные остеокласты в пораженных суставах;
- умеренная с заметной резорбцией медуллярной трабекулярной и кортикальной кости без распространяющихся на весь кортекс дефектов, потеря некоторых медуллярных трабекул, явные повреждения при малом увеличении, более многочисленные остеокласты в пораженных суставах;
- заметные распространяющиеся на весь кортекс дефекты, часто с искаженным профилем остальной кортикальной поверхности, с заметной потерей медуллярной кости, многочисленными остеокластами, поражено большинство суставов;
- тяжелые распространяющиеся на весь кортекс дефекты и разрушение архитектуры всех суста- 42 022832 вов.
Результаты.
Дексаметазон (Эех) и антитела против мышиного ФНО-α использовали как положительный контроль, ФБР использовали как контроль среды, а СУАМ использовали как отрицательный контроль антител. Все виды терапии начинались на 12 день исследования при развитии заболевания суставов. Заболеваемость у контрольных животных, обработанных средой, составила 100% на 22 день исследования. Группа, используемая в качестве отрицательного контроля, получавшая среду или СУАМ антитела, имела наиболее высокие клинические показатели. Значительно ниже клинические показатели были в группах, получавших Эех (р<0,05 в Й18-Й26), 5 мг/кг антител против ФНО-α (р<0,05 в Й18-26) или 25 мг/кг тАЪ 5429 (р<0,05 в Й18-Й23 и Й25-Й26) (фиг. 16). Клинические показатели артрита, выражаемые как площадь под кривой (АИС), были значительно ниже при введении 25 мг/кг тАЪ 5429 (снижение на 43%), 5 мг/кг антител против ФНО-α (52%) или Эех (69%) в сравнении с контролем при введении среды. На фиг. 17 показаны средние и стандартные отклонения АИС для каждой группы.
Также оценивались гистопатологические эффекты разных препаратов. Резорбция костей кистей значительно снижалась при введении 25 мг/кг тАЪ 5429 (снижение на 47%) в сравнении с контролем при введении среды. У мышей из группы положительного контроля, получивших 5 мг/кг антител против ФНО-α, значительно уменьшалось воспаление кистей (33%), повреждение хрящей (38%) и снижалась сводная оценка кистей (37%). Введение Эех значительно уменьшило все гистопатологические параметры кистей (73%-ное снижение сводных оценок).
Эти данные демонстрируют, что антитела-антагонисты ТЬК3 облегчают симптомы клинических и гистопатологических заболеваний в модели С1А, что наводит на мысль о возможности применения антагонистов ТЬК3 для лечения ревматоидного артрита.
Пример 14.
Антитела-антагонисты ТЬК3 защищают от острых летальных вирусных инфекций.
Модель.
Моделирование заражения вирусом гриппа А использовали в качестве модели острой летальной вирусной инфекции.
На 1, 4, 8 и 12 дни самки мышей С57ВЬ/6 (12-недельные) или самки мышей ТЬК3К0 (С57ВЬ/6 фон; 12-недельные, АСЕ Аттак, шс., по 15 мышей в группе) получали подкожно тАЪ 5429 в дозе 20 мг/кг или только ФБР. На 0 день мышей подвергали анестезии изофлураном и вводили интраназально вирус гриппа А/РК/8/34 (АТСС, Рокленд, Мэриленд, партия № 218171) в 25 мкл ФБР (эквивалент 105,55 СЕГО50). Животных в течение 14 дней осматривали дважды в день: измеряли вес тела и проверяли выживаемость. Для оценки прогрессирования заболевания и небольших улучшений в ответ на обработку вирусом гриппа А использовали шкалу клинической оценки.
Шкала клинической оценки:
- нормальные, живые и реагирующие животные, без видимых признаков заболевания;
- взъерошенная шерсть, обычная или слегка уменьшенная подвижность;
- взъерошенная шерсть, сгорбленная поза при ходьбе, животное неохотно двигается, затрудненное дыхание;
- взъерошенная шерсть, затрудненное дыхание, неподвижность, тремор;
- взъерошенная шерсть, животное неспособно ходить даже при небольшом подталкивании, потеря сознания, холодное тело при прикосновении;
- смерть.
Результаты.
В рамках исследования оценивали выживаемость, ежедневно определяли оценку по шкале клинической оценки и регистрировали изменения веса. Инфицированным гриппом А мышам в группе \УТ вводили тАЪ 5429 (20 мг/кг), тогда как инфицированные мыши в группе А ТЬК3К0 не получали тАЪ 5429. При этом в обеих группах обнаружено статистически значимое увеличение выживаемости (р<0,001 и р<0,01, соответственно) в сравнении с инфицированными вирусом гриппа мышами С57ВЬ/6, что указывает на возможность профилактики гибели от гриппа с помощью антагонистов ТЬК3 или путем создания дефицита ТЬК3 (фиг. 18). Оценка по шкале клинической оценки была значительно ниже в группе, получавшей 20 мг/кг тАЪ 5429, а также в группе ТЬК3К0 (фиг. 19). Вес мышей оценивали в течение 14 дней после введения вируса гриппа. У мышей С57ВЬ/6, получивших дозу вируса гриппа А, вес неизменно снижался. Однако и у мышей С57ВЬ/6, получавших 20 мг/кг тАЪ 5429, и у мышей ТЬК3К0 вес тела был значительно больше, чем у мышей \УТ С57ВЬ/6, зараженных вирусом гриппа (фиг. 20). Полученные результаты показывают, что при моделировании острой летальной вирусной инфекции антителаантагонисты ТЬК3 уменьшают тяжесть клинических симптомов и смертность, и наводят на мысль о применении антагонистов ТЬК3 в качестве средства профилактики у людей с острыми инфекциями.
Пример 15.
Антитела-антагонисты ТЬК3 улучшают течение гипергликемии и снижают уровень инсулина в плазме крови.
- 43 022832
Модель.
Моделирование алиментарного ожирения (ЭЮ) использовали в качестве модели гипергликемии с инсулинорезистентностью и ожирением.
Животных С57ВЧ/6 №Т (приблизительно 3-недельных, ^аскδοη ЧаГО) и животных ТЬК3К0 (С57ВЧ/6 фон; приблизительно 3-недельных, Асе АштаЦ ГОс.) содержали на диете с высоким содержанием жиров в течение 12-16 недель. Как мыши ТЬК3К0, так и мыши №Т С57ВЧ/6 получали либо нормальную пищу, либо пищу с высоким содержанием жиров (Риппи Теδΐ^^еΐ кат. № 58126), содержащую 60,9% ккал жиров и 20,8% ккал углеводов. Цикл день:ночь составлял 12:12 ч, воду и пищу мыши получали без ограничений. Вес каждой мыши в каждой из групп измеряли еженедельно. МАЬ 5429 вводили внутрибрюшинно дважды в неделю в течение первой недели, затем один раз в неделю в течение 7 недель. Для измерений концентраций инсулина в указанные сроки использовали сыворотку из образцов крови из глазницы. Проверку переносимости глюкозы проводили через 7 недель путем внутрибрюшинного введения глюкозы в дозе 1,0 мг/г веса тела после ночи натощак. Кроме того, измеряли инсулин и глюкозу натощак.
Η0МΑ-IК рассчитывали, подставляя концентрации глюкозы натощак и инсулина (12) в следующее уравнение: НОМА4К=(глюкоза натощак (ммоль/л) х инсулин натощак (мЕд/л))/22,5 (№а11асе е! а1., Ч1аЬеΐеδ Саге 27:1487-1495, 2004). Глюкозу в крови натощак (ВО) определяли с помощью глюкозооксидазного анализа. Инсулин натощак определяли с помощью набора реагентов ЕЫЗА для определения инсулина у крыс/мышей (Сгуж1а1 СЬет, кат. № 90060).
Результаты.
После 12-16 недель на диете с высоким содержанием жиров у животных №Т ЧЮ развивалась гипергликемия и гиперинсулинемия. При введении тАЬ 5429 улучшилась переносимость глюкозы у животных №Т ЧЮ, но не у животных ТЬК3К0 ЧЮ. Значительно более низкие в сравнении с контролем (только ФБР) уровни глюкозы в крови наблюдались у животных, получавших тАЬ 5429, после введения глюкозы через 60, 90, 120 и 180 мин (фиг. 21А). По сравнению с мышами №Т ЧЮ, не получавшими тАЬ, АИС у получавших тАЬ 5429 животных №Т ЧЮ была ниже примерно на 21%. Также у животных №Т ЧЮ, получавших тАЬ 5429, уменьшались уровни инсулина натощак (фиг. 22). У животных ТЬК3К0 ЧЮ улучшений в уровне инсулина натощак при введении тАЬ 5429 не наблюдалось. Анализ результатов исследования гомеостатической модели (НОМА) выявил улучшение чувствительности к инсулину у животных №Т ЧЮ, получавших тАЬ 5429, но не у животных ТЬК3К0 ЧЮ. Уровни НОМАГО составляли соответственно 14,0±9,8, 8,7±4,9, 9,0±3,0 у животных №Т ЧЮ, не получавших тАЬ 5429, животных №Т ЧЮ, получавших 5 мг/кг тАЬ 5429 и 20 мг/кг тАЬ 5429. Никакого воздействия на животных ТЬК3К0 ЧЮ антитела не оказывали.
Исследование показало, что антитела-антагонисты ТЬКЗ повышали инсулинорезистентность и снижали уровни глюкозы натощак при моделировании ЧЮ без потери веса, т.е. антагонисты ТЬКЗ могут быть полезными при лечении гипергликемии, инсулинорезистентности и диабета II типа.
Пример 16.
Антитела-антагонисты ТЬКЗ защищают от бактерий и индуцированных вирусами воспалительных реакций.
Реагенты.
Нетипируемые ЧаеторЫЬ^ тЛиеи/а (НТЧ!) штаммы 35, выделенные из организма пациентов с С0РЧ с бактериальными осложнениями, были получены от д-ра Т.Р. МигрЬу (Медицинский центр ВиГГа1о VΑ, Баффало, Нью-Йорк). Человеческий риновирус 16 получили из Американской коллекции типовых культур (АТСС) с ТСГО(50)=2,8х107/мл.
Анализ стимуляции N^1
Клетки МВЕ (Еои/а, Уокерсвилл, Мэриленд) сеяли на 96-луночные планшеты для культивирования тканей Мюго!^1 (ВО ВШаегк^, Бедфорд, Массачусетс) в количестве 1х105/лунку. ЭТИ, выросшие на агаровых планшетах в течение 16-20 ч, ресуспендировали в питательной среде до концентрации ~2х108 КОЕ/мл, добавляли 100 мкг/мл гентамицина на 30 мин и наносили в концентрации ~2х107/лунку на 96-луночные планшеты, содержащие NΗВЕ. Через 3 ч супернатанты отбрасывали и заменяли свежей питательной средой с антителами или без них (до конечной концентрации 0,08-50 мкг/мл). Еще через 24 ч инкубации трижды определяли содержание в клеточных супернатантах цитокинов и хемокинов с помощью набора реагентов Су1окше 25-р1ех АВ Ьеаб, Читай (включающим ЕЪ-1 β, ГО-1КА, [Ц-Э, ГО-2К, ГО4, ГО-5, ГО-6, ГО-7, ГО-8, ГО-10, ГО12р40р70, ГО-13, ГО-15, ГО-17, ФНО-α, Ж-о, ГОШу, ОМ-СЗР, МГО-1а, МГО-1 β, ЕР-10, МЮ, Ео1ах1и, КАЫТЕЗ и МСР-1) (ЫГе ТесЬηο1οд^еδ, Карлсбад, Калифорния) и мультиплексного флуоресцентного анализатора Ьиттех 100^ и ридера (Ьиттех СогрогаЬои, Остин, Техас).
Анализ стимуляции риновирусами.
Клетки NΗВЕ сеяли на 96-луночные планшеты для культивирования тканей Мюго^1 (ВЧ ВШсЧ еηсеδ, Бедфорд, Массачусетс) в количестве 1х 105 клеток/лунку. На следующий день антитела (в конечной концентрации 0,08-50 мкг/мл) добавляли к клеткам NΗВЕ или ВЕАЗ-2В и инкубировали в течение 1 ч, затем добавляли 10 мкл/лунку риновируса. Еще через 24 ч инкубации наличие цитокинов и хемокинов
- 44 022832 в клеточных супернатантах оценивали с помощью Ьиштех анализов в соответствии с вышеприведенным описанием.
Результаты.
тАЬ 15ЕУЦ ингибировали индуцированный ЭТН1 синтез 1Р-10/СХСЫ0 и КА№ТЕБ/ССЬ5 в зависимости от дозы, тогда как при введении контрольного антитела, 1дО4 человека (Бщта, Сент-Луис, Миссури), было выявлено отсутствие ингибирования стимуляции ХТШ (фиг. 23А). тАЬ 15ЕУЦ также ингибировали индуцированный риновирусом синтез СХСЫ0/1Р-10 и ССЬ5/КАЭТЕ§ (фиг. 23В).
Пример 17.
Антитела-антагонисты ТЬК3 подавляют воспалительные реакции в астроцитах.
Способы.
Нормальные астроциты человека от 2 доноров (Ьоп/а, Уолкерсвилл, Мэриленд) поместили на 24луночную планшету в количестве 75000 клеток/лунку и позволили прикрепиться к подложке в течение ночи. На следующий день к астроцитам добавили 200 нг/мл ро1у(1:С) и/или 10 мкг/мл тАЬ 18 на 24 ч. Концентрацию цитокинов измеряли с помощью Битшех.
Результаты.
Индуцированный ро1у(1:С) синтез 1Ь-6, 1Ь-8, 1Ь-12, ΙΤΝ-ϋ, ΙΓΝ-γ, СХСЬ9/М1О, ССЬ3/М1Р-1а, ССЬ4, ССЬ5/КАетЕ§ и СХСЫ0/1Р-10 ингибировали тАЬ 18, как показано в табл. 10.
Таблица 10
Донор 1 1Ь-б 11,-8 11,-12 ΙΕΉ-α ΙΓΝ-γ
Без обработки 876,0+ 36,8 539,71 32,6 16,б± 0,5 28,8+1,5 12,310,3
тАЬ 18 1011,9+ 57,4 1401,9+ 49,7 17,110,5 31,6+0,7 10,4+0,2
Ро1у<1:С) о1* о1 30,3+1,5 47,113,1 35,911,0
Ро1у(1:С)+ тАЬ 18 2225,01 108,1 6104,41 259,9 16,8+0,9 30,5+1,6 11,7+0,6
Донор 2
Без обработки 729,117,1 248,214,7 1410,5 19,511,8 10,510,5
тАЬ 18 779,019,8 1132,6+ 30,6 14,3+0,6 20,811,9 10,510,1
Ро1у(1:С) о1 о1 25,510,4 36,3+1,9 30,810,9
Ро1у|1:С)+ тАЬ 18 3393,3± 107,5 8660,41 354,3 16,210,3 24,711,2 12,6+0,3
- 45 022832
Донор 1 СХСЪ9/М1С ССЬЗ/М1Р-1а ССЬ4 ССЬ5/КАЫТЕ5 СХСЫ0/1Р- 10
Без обработки 12,610,7 21+0,9 14,810,7 Ы Ы
тАЬ 18 14,8+1,7 19,5+1,5 14,8+1,1 ы ы
Ро1у(1:С) 78,3+4,8 1569,3+36,9 159,7+12,7 738,2+94,9 461,4+10,3
Ро1у(1:С)+ тАЬ 18 18,511,6 31,211,9 13,210,9 Ы 6,910,5
Донор 2
Без обработки 9,911,6 12,311,7 11,310,3 Ы Ы
тАЬ 18 8,910,7 13,211,5 11,110,7 Ы Ы
Ро1у(1:С) 6213,3 1552,9+ 41,1 140,714,8 546,8121,7 533,2115
Ро1у(1:С)+ тАЬ 18 18,312,7 66,6+3,8 12,110,8 Ы 29,116,2
*о1: выше предела обнаружения
**Ы: ниже предела обнаружения
Пример 18.
Антитела-антагонисты ТЬК3 подавляют воспалительные реакции в клетках эндотелия.
Способы.
Клетки НИУЕС (Ъоп/а, Уолкерсвилл, Мэриленд) культивировали в содержащей сыворотку питательной среде, рекомендованной компанией Ьоп/а. Клетки ресуспендировали в бессывороточной среде (Ъоп/а, Уолкерсвилл, Мэриленд), сеяли на 96-луночные планшеты в количестве 3х105 клеток/мл, и инкубировали при 37°С, 5% СО2 в течение 24 ч. Ро1у(1:С) (ОЕ НеаЬЬсаге, Р1кса1атеау, Νί) добавляли в увеличивающихся концентрациях (1,5-100 мкг/мл) и инкубировали в течение еще 24 ч при 37°С. Для анализа ингибирования цитокинов тАЬ 15ЕУЦ добавляли к клеткам в различных концентрациях (0-50 мкг/мл) и инкубировали в течение 30 мин, после чего добавляли 20 мкг/мл ро1у(1:С) на 24 ч. Собирали клеточные супернатанты, измеряли в них уровни цитокинов с помощью набора цитокинов человека 30-р1ех и технологии Ьиштех МАР (ЪцЦгодеп Согр., Карлсбад, Калифорния). Для определения уровня экспрессии к1САМ-1 к клеткам НИУЕС добавляли 20 мкг/мл ро1у(1:С) и различные концентрации тАЬ 15ЕУЦ (0,850 мкг/мл). Уровни экспрессии к1САМ-1 в клеточных супернатантах определяли с помощью ЕЫ8А (К&И кук!етк). Жизнеспособность клеток измеряли с помощью набора реагентов Се11ТЬегО1о (Рготеда, Мэдисон, Висконсин).
Результаты.
Клетки НИУЕС в ответ на ро1у(1:С) продуцировали следующие цитокины: 1Ь-1КА, 1Ь-2, 1Ь-2К, 1Ь6, 1Ь-7, СХСЬ8/1Ь-8, 1Ь-12 (р40/р70), 1Ь-15, 1Ь-17, ФНО-α, ΙΡΝ-α, ΙΡΝ-γ, ОМ-СЗР, ССЬ3/М1Р-1а, СС1.4/\ПР-1|/ СХСЫ0/1Р-10, ССЬ5/КАЭТЕ8, ССБ2/МСР-1, УЕОР, О-СЗР, РОР-Ьакю и НОР (табл. 11). тАЬ 15ЕУЦ в зависимости от дозы снижали уровни всех цитокинов, индуцированных ро1у(1:С) (табл. 12). Способность тАЬ 15ЕУЦ снижать индуцированный ро1у(1:С) синтез ФНО-α, ССЬ2/МСР-1, ССЬ5/КА№ГЕ§ и СХСЫ0/1Р-10 наводит на мысль, что ингибирование опосредованных ТЬК3 реакций может защищать от инфильтрации лейкоцитами и Т-клетками (которая может привести к атеросклерозу). Ингибирование УЕОР тАЬ 15ЕУЦ также наводит на мысль о потенциальной пользе блокады ТЬК3 при патологиях, опосредованных УЕОР, в том числе при ангиогенезе ряда злокачественных опухолей и заболеваний глаз, таких как возрастная макулодистрофия.
Функция ФНО-α и ΙΡΝ-γ при рекрутинге лейкоцитов и повышении экспрессии адгезионных молекул на активированном эндотелии (Иоикак е! а1., Ат. ί. Ра!Ьо1. 145:137-47, 1994; РоЬег е! а1., Ат. ί. Ра!Ьо1. 133:426-33, 1988). ССЬ2/МСР-1, ССЬ5/КА№ГЕ§ и СХСЫ0/1Р-10 участвовали в рекрутинге моноцитов и Т-клеток и вносили вклад в развитие атеросклероза (Ъипйдегд е! а1., С1ш. 1шшипо1. 2009). Клетки эндотелия синтезируют УЕОР при ангиогенезе при аномальном росте тканей или развитии ряда злокачественных опухолей (Шепдоой е! а1., Се11. 1шшипо1. 249:55-62, 2007).
Растворимый фактор межклеточной адгезии 1 (к1САМ-1), образующийся при протеолизе, является маркером активации клеток эндотелия. 1САМ-1 играет ключевую роль в миграции и активации лейкоцитов, его концентрация в клетках эндотелия и эпителия при воспалении повышается, он опосредует адгезию этих клеток к лейкоцитам через молекулы интегринов ЬРА-1 и Мас-1. В активированных с помощью
- 46 022832 ро1у(1:С) клетках эндотелия повышается экспрессия 51СЛМ-1, которая снижается при добавлении тАЬ 15ΙΑΌ (фиг. 24А).
Таблица 11
Ро1у (1:0 мкг/мл 11,-6 СХСЬЭ/1Ь-8 ССБ2/МСР-1
10 848,8+50,9 12876,0+2314,0 11813,4+1420,9
5 751,3+2,1 11363,7+108,2 11365,7+113,1
2,5 607,1+91,6 10961,5+2200,7 11607,3+2155,7
1,25 419, 2 + 178, 4 9631,5+3675,8 11690,9+3189,9
0,63 263,8+81,4 6231,9+1568,0 9075,6+1152,2
0,31 183,5+168,3 5257,9+1855,0 8106,8+1193,1
0,16 111,9+72,5 4057,6+1127,4 6619,8+1728,2
без ро1у(1:С) 0,00 1286, 6+300,3 1360, 1+245, 4
Ро1у(1:С) мкг/мл 1Ь-2К 11,-15 11,-17
100 784,4+45,4 61,3+12,5 43,8+5,3
50 718, 6+56, 8 61,3+12,5 47,6+0
25 735,7+23,4 56,7+18, 9 58,3+4,9
12,5 650,5+29,8 38,8+6,5 39,8+10,9
6,25 643,4+39,9 34,2+0 32,1+0
3,13 681,8+24,3 38,8+6,5 43,8+5,3
1,56 578,6+10,5 29,4+6,7 36,1+5,6
без ро1у(1:С) 0,0 0,0 0,0
Ро1у(1:С) мкг/мл ΙΕΝ σ СХСЫ0/1Р-Ю ССБ4/М1Р-1,3
100 50,7+0 3803,1+185,5 234,5+19,7
50 44,9+1,7 2235,9+184,6 291,6+41,8
25 46,1+0 2403,0+271,9 278,7+4,7
12,5 41,2+3,5 2185,4+64,9 243,8+63,4
- 47 022832
6,25 36,1+0 2100,0+238,1 201, 9+46,2
3,13 40,0+1,8 3553,2+197,1 191,5+20,8
1,56 42,5+1,7 2064,3+242,1 165,3+16,3
без ро!у (I:С) 0,0 О о 0, 0
Ро1у(1:С) мкг/мл ΚΑΝΤΕΞ ΦΗΟα νΕ<3Γ
100 6266,9+1708,7 12,8+3,2 581,1+181,4
50 2919,7+119,4 11,5+3,2 637,9+47,7
25 2805,1 + 176,7 9,8+2,8 700,3+62,5
12,5 2598,6+68,6 7,3+0,9 513,2+73,5
6,25 2449,2+830,6 6,9+1,4 440, 4+29,5
3,13 3117,1+795,7 7,3+0,9 393,9+40,2
1, 56 2481,0+719,3 6,0+1,8 358,4+74,8
без ро!у(Г:С) 4,9+4,5 1, 9+0,4 32,1+8,8
концентрация в пг/мл
Таблица 12
тАЬ 15 (мкг/мл) 50,00 10,00 2,00 0,40 0, 08 0, 016 0,003 0
Р1С + + + + + + + -
1Ь-б 177,8±5,б* 214,6+3,6* 359,2+57,6* 727,2+50,5* юооо+о 10000+0 10000+0 10000+0
схсъа/1ь-8 1040,7± 185,9 1765,9+971 6460,3+ 3684,4 57349,5+ 6293,4 72422,8+ 88279,2 470475+ 52393,1 76066,5+ 11354,1 964780+ 122298,4
ССЕ2/МСР-1 11877+ 165,4* 1955,4+ 72,7* 9054,4+ 4110,9* 20000+0,0 20000+0,0 20000+0,0 20000+0,0 20000+0,0
1Ь-2К 25,0±35,3* 0,0+0,0* 312,3+1376* 521,5+5,5 664,7+9,8 661,2+14,8 698,4+57,6 654,2+14,8
1Ь-15 0,0+0,0* 0,0+0,0* 0,0+0,0* 4,1+0,0* 38,8+6,5 43,4+0,0 38,8+6,5 43,4+0,0
1Б-17 1,311,8* 11,8+16,8 11,8+16,8 279+6,0 474 + 10, 4 54,3+20,2 40,0+0,0 51,2+5,1
ΙΓΝα 0,9+1,3* 0,9+1,3* 19,0+77* 36,1+0,0 44,9+1,7 41,2+3,5 473+1,7 40,0+1,8
СХСЫ0/1Р- 10 0,0±0,0* 58,1+2,6* 633,0+ 471,6* 1441,4+971 3023,8+ 166, 1 21075+372,6 2346,4+ 226,1 21574+282,7
ССЬ4/ ΜΙΡ- 1р 0,0±0,0* 0,0+0,0* 2,9+4,1* 62,1+7,2* 176,6+21,3* 2275+19,9 2483+19,4 281,7+375
ΚΑΝТЕЗ 3,0±0,0* 15,4+4,5* 201,1+ 169,1* 952,4+41,1* 2454,4+ 98, 5* 2698,1+ 88, 6* 2624,4+ 129,8* 3459,7+ 181,8
ΦΗΟα 1,9+0,4* 1,6+0,0* 2,2+0,0* 3,4+0,0 6,3+0,5 8,5+0,0 7,6+1,4 6,9+2,3
νεορ 87,2+8,7* 28,6+8,7* 883+52,1* 156,1+6,4* 479,6+14,1 544,6+8,3 533,5+70,2 6073+29,9
*Псказывает значимые р-уровни (менее 0,05) в сравнении концентраций тАЫ5 только с ро1у(1:С)
Средние значения (пг/мл)
Это наводит на мысль о том, что антитела-антагонисты ТЬК3 могут ингибировать движение лейкоцитов и, следовательно, повреждение тканей, спровоцированное инфлюксом воспалительных клеток.
Для анализа жизнеспособности клетки НИУЕС культивировали, сеяли на планшеты и стимулировали роГу^С), как описывалось выше. тАЬ 15ЕУЦ в зависимости от дозы восстанавливали индуцированное ро1у(ИС) снижение жизнеспособности клеток НИУЕС (фиг. 24В).
Снижение активации клеток эндотелия может уменьшать избыточную инфильтрацию иммунных клеток и повреждение тканей, спровоцированное цитокинами, концентрация которых при воспалении увеличивается. Воспаление и сверхэкспрессия цитокинов и молекул адгезии в клетках эндотелия играют основную роль при развитии атеросклероза и гипертензии. Полученные данные позволяют обосновать потенциально полезное применение антагонистов ТЬК3 при болезнях кровеносных сосудов, в том числе васкулитах, и при болезнях, вызывающих дисфункцию эндотелия. Другое заболевание, для которого свойственно воспаление и сверхэкспрессия цитокинов, - это саркома Капоши (К8), которая часто встречается при иммуносупрессии и у ВИЧ-инфицированных пациентов, возбудителем которой является герпесвирус саркомы Капоши (К8НУ). Синтез УЕСР и цитокинов обусловливает выживание клеток К8 (Ыхепдоой е! а1., Се11 Iттиηо1. 249:55-62, 2007). Антагонисты ТЬК3 могут быть полезны при снижении ан- 48 022832 гиогенного риска, связанного с К8 и другими опухолями, при профилактике потери жизнеспособности клетками, при сохранении целостности защитного эндотелиального барьера, который предотвращает транссудацию, потенциально серьезное заболевание, связанное с повреждением органов и угрожающим жизни воспалением, таким как сепсис. Антагонисты ТЬК3 могут быть полезными и при вирусных инфекциях, провоцирующих патологии клеток эндотелия, например, при вирусной геморрагической лихорадке, возбудителями которой являются члены семейства флавивирусов (например, Денге, желтой лихорадки), филовирусов (Эбола, Марбурга), буньявирусов (например, хантавирус, найровирус, флебовирус) и аренавирусов (например, Луйо, Ласса, аргентинская, боливийская, венесуэльская геморрагические лихорадки (§1ЫЪат1уа е! а1., В1оой 113:714-722, 2009).
Пример 19.
Перекрестные реакции антител-антагонистов с ТЬК3 яванских макак и мышей.
Эффективность действия антагонистов на ТЬК3 яванских макак и мышей оценивали путем количественного определения гена-репортера 18КЕ, в соответствии с описанием в примере 2. кДНК ТЬК3 макаки (8ЕО ГО N0: 217) и мыши (8Е0 ГО N0: 161) амплифицировали из цельной крови, клонировали в векторе рСЕР4 (С1оп1есН) и экспрессировали, как описано выше. У макак при анализах ΝΡ-кВ и 18КЕ 1С50 тАЪ 15ЕУ0 составляли соответственно 4,18 и 1,74 мкг/мл, тогда как для ТЬК3 человека при ΝΡ-кВ и 18КЕ 1С50 составляли 0,44 и 0,65 мкг/мл соответственно. Контрольные изотипные антитела не влияли на ТЬК3 по результатам этих анализов.
- 49 022832
Список последовательностей <110> СЕКТОСОВ. ОКГНО ВЮТЕСН 1ЫС.
<120 АНТАГОНИСТЫ ТОЛЛ-ПОДОБНОГО РЕЦЕПТОРА 3 <130 СЕЫ5242РСТ <140 РСТ/Ц809/62813 <141> 2009-10-30 <150 61/109974 <151> 2008-10-31 <150> 61/161860 <151> 2009-03-20 <150> 61/165100 <151> 2009-03-31 <150> 61/173686 <151> 2009-04-29 <160 220 <170> ГазЕЗЕО для Μίηάονδ версии 4.0 <210> 1 <211> 2712 <212> ДНК <213> Ното аарЬепз <400> 1 аЕдадасада сЕЕЕдссЕЕд ЕаЕсЕасЕЕЕ Едддддддсс ЕЕЕЕдсссЕЕ ЕдддаЕдсЕд 60
ЕдЕдсаЕссЕ ссассассаа дЕдсасЕдЕЕ адссаЕдаад ЕЕдсЕдасЕд садссассЕд 120 аадЕЕдасЕс аддЕасссда ЕдаЕсЕассс асааасаЕаа садЕдЕЕдаа ссЕЕасссаЕ 180 ааЕсаасЕса даадаЕЕасс адссдссаас ЕЕсасааддЕ аЕадссадсЕ аасЕадсЕЕд 240 даЕдЕаддаЕ ЕЕаасассаЕ сЕсаааасЕд дадссадааЕ ЕдЕдссадаа асЕЕсееаЕд 300
ЕЕаааадЕЕЕ ЕдаассЕсса дсасааЕдад сЕаЕсЕсаас ЕЕЕсЕдаЕаа аассЕЕЕдсс 360
ЕЕсЕдсасда аЕЕЕдасЕда асЕссаЕсЕс аЕдЕссаасЕ сааЕссадаа ааЕЕаааааЕ 420 ааЕсссЕЕЕд Есаадсадаа дааЕЕЕааЕс асаЕЕадаЕс ЕдЕсЕсаЕаа ЕддсЕЕдЕса 480
ЕсЕасааааЕ ЕаддаасЕса ддЕЕеадсЕд дааааЕсЕсс аададсЕЕсЕ аЕЕаЕсааас 540 ааЕааааЕЕс аадсдсЕааа аадЕдаадаа сЕддаЕаЕсЕ ЕЕдссааЕЕс аЕсЕЕЕаааа 600 аааЕЕададЕ ЕдЕсаЕсдаа ЕсаааЕЕааа дадЕЕЕЕсЕс садддЕдЕЕЕ ЕсасдсааЕЕ 660 ддаадаЕЕаЕ ЕЕддссЕсЕЕ ЕсЕдаасааЕ дЕссадсЕдд дЕсссадссЕ Еасададаад 720 сЕаЕдЕЕЕдд ааЕЕадсааа сасаадсаЕЕ сддааЕсЕдЕ сЕсЕдадЕаа садссадсЕд 780
Ессассасса дсааЕасаас ЕЕЕсЕЕддда сЕааадЕдда саааЕсЕсас ЕаЕдсЕсдаЕ 840 сЕЕЕссЕаса асаасЕЕааа ЕдЕддЕЕддЕ аасдаЕЕссЕ ЕЕдсЕЕддсЕ ЕссасаасЕа 900 дааЕаЕЕЕсЕ ЕссЕададЕа ЕааЕааЕаЕа садсаЕЕЕдЕ ЕЕЕсЕсасЕс ЕЕЕдсасддд 960 сЕЕЕЕсааЕд ЕдаддЕассЕ дааЕЕЕдааа сддЕсЕЕЕЕа сЕааасааад ЕаЕЕЕсссЕЕ 1020 дссЕсасЕсс ссаадаЕЕда ЕдаЕЕЕЕЕсЕ ЕЕЕсадЕддс ЕааааЕдЕЕЕ ддадсассЕЕ 1080 аасаЕддаад аЕааЕдаЕаЕ ЕссаддсаЕа аааадсааЕа ЕдЕЕеаеадд аЕЕдаЕааас 1140 сЕдаааЕасЕ ЕаадЕсЕаЕс саасЕссЕЕЕ асаадЕЕЕдс даасЕЕЕдас аааЕдаааса 1200
ЕЕЕдЕаЕсас ЕЕдсЕсаЕЕс ЕсссЕЕасас аЕасЕсаасс Еаассаадаа ЕааааЕсЕса 1260 ааааЕадада дЕдаЕдсЕЕЕ сЕсЕЕддЕЕд ддссассЕад аадЕасЕЕда ссЕдддссЕЕ 1320 ааЕдаааЕЕд ддсаадаасЕ сасаддссад дааЕддадад дЕсЕадаааа ЕаЕЕЕЕсдаа 1380 аЕсЕаЕсЕЕЕ ссЕасаасаа дЕассЕдсад сЕдасЕадда асЕссЕЕЕдс сЕЕддЕссса 1440 адссЕЕсаас дасЕдаЕдсЕ ссдаадддЕд дсссЕЕаааа аЕдЕддаЕад сЕсЕссЕЕса 1500 ссаЕЕссадс сЕсЕЕсдЕаа сЕЕдассаЕЕ сЕддаЕсЕаа дсаасаасаа саЕадссаас 1560 аЕаааЕдаЕд асаЕдЕЕдда дддЕсЕЕдад ааасЕадааа ЕЕсЕсдаЕЕЕ дсадсаЕаас 1620 аасЕЕадсас ддсЕсЕддаа асасдсааас ссЕддЕддЕс ссаЕЕЕаЕЕЕ ссЕааадддЕ 1680 сЕдЕсЕсасс ЕссасаЕссЕ ЕаасЕЕддад ЕссаасддсЕ ЕЕдасдадаЕ сссадЕЕдад 1740 дЕсЕЕсаадд аЕЕЕаЕЕЕда асЕааадаЕс аЕсдаЕЕЕад даЕЕдааЕаа ЕЕЕааасаса 1800
- 50 022832 сЬЬссадсаЪ сЪдЪсЬЪЪаа ЪааЪсаддЪд ЪсЬсЬааадЬ саЬЬдаассЬ ЬсадаадааЪ 1860 сгсаЬаасаг ссдЬЬдадаа дааддЪГЪЪс дддссадсЬС бсаддаассЬ дасЬдадЬЬа 1920 даЪаСдсдсС. ЬЬааЪоссЪЬ ЪдаЬЪдсасд СдЬдааадСа ЪЪдссЬддЪС ЪдССааЪЪдд 1980 аЬЪаасдада сссаЪассаа сагсссбдад сЬдЬсаадсс асЬассЬЪЬд саасасЬсса 2040 ссЬсасЪаЬс аЪдддЬЬссс адЪдадасЪЪ ЪЪЪдаЬасаЬ сагсСЬдсаа адасадЬдсс 2100 сссЪПдаас ЬсЬЫЛЬсаС даЬсааЪасс адЪаЪссЪдЬ Ьдагъъььаъ сЪЪЬаЪЪдЬа 2160 сЬЪсЬсаЬсс асЬЬ'Ьдаддд скддаддаЬа ЬсЬЬНГаГГ ддааЪдЪ.Ь'Ьс адЬасаЬсда 2220 дЬЬсЪЬддЬЬ ЪсааадаааЪ адасадасад асадаасадб гсдааЬаЬдс адсаЬаЬаЬа 2280 аЬЬсаЬдссЬ асааадаъаа ддаггдддгс ЬдддаасаЬЬ ГсЬсЬЬсааЬ ддааааддаа 2340 дассааЪсЬс ЬсаааЬЬЪЪд ЬсЬддаадаа адддасЬЪЬд аддсдддЬдЬ ЪЪЬЬдаасЬа 2400 даадсааССд ЬЬаасадсаС саааадаадс адааааасьа ЪЪЪЪЬдЬЬаС аасасассаь 2460 сЬаЬЬаааад асссаъьаьд саааадаНс ааддЬасаЬс аЬдсадЪЪса асаадсЪаЪЪ 2520 дааеааааЬс ЬддаЬЬссаЬ ЬаЬаГГддЫ; ЪЪссЬЪдадд ада+Хссада ЬГаГааасЬд 2580 аассаЬдсас ЬсЬдЬЬЪдсд аададдааЪд ЪЪЪаааЪсгс асЬдсаЬсЪЪ даасъддсса 2640 дЪЪсадааад аасддаГадд ГдссНЬсдЪ саЬаааЪЪдс аадбадоасЪ ЪддаЬссааа 2700 аасЪсЪдЪас аЬ 2712 <210> 2 <211> 904 <212> БЕЛОК <213> Ното зарЪепз <400> 2
Мек Агд С1п ТЬг Ъеи Рго Суз Не Туг РЬе Тгр СЪу 31у Ъеи Ъеи Рго
1 5 10 15
РЬе С1у МеЪ Ъеи Суз АЪа Зег Зег ТЬг ТЬг Ъуз Суз ТЬг УаЪ Зег НЪз
20 25 30
61и Уа1 А1а Азр Суз Зег НЪз Ъеи Ъуз Ъеи ТЬг С1п Уа1 Рго Азр Азр
35 40 45
Ъеи Рго ТЬг Азп Ие ТЬг Уа1 Ъеи Азп Ъеи ТЬг НЪз Азп СЪп Ъеи Агд
50 55 60
Агд Ъеи Рго АЪа А1а Азп РЬе ТЬг Агд Туг Зег СЪп Ъеи ТЬг Зег Ъеи
65 70 75 80
Аар Уа1 С1у РЬе Азп ТЬг Пе Зег Ъуз Ъеи С1и Рго СЪи Ъеи Суз С1п
85 90 95
Ъуз Ъеи Рго МеЪ Ъеи Ъуз УаЪ Ъеи Азп Ъеи С1п НЪз Азп СЪи Ъеи Зег
100 105 110
С1п Ъеи Зег Азр Ъуз ТЬг РЬе А1а РЬе Суз ТЬг Азп Ъеи ТЬг С1и Ъеи
115 120 125
НЪз Ъеи МеЪ Зег АЗП Зег Не С1п Ъуз Ие Ъуз Азп Азп Рго РЬе УаЪ
130 135 140
Ъуз СЪп Ъуз Азп Ъеи 11е ТЬг Ъеи Азр Ъеи Зег НЪз Азп С1у Ъеи Зег
145 150 155 160
Зег ТЬг Ъуз Ъеи С1у ТЬг СЪп УаЪ С1п Ъеи СЪи Азп Ъеи 61п СЪи Ъеи
165 170 175
Ъеи Ъеи Зег Азп Азп Ъуз Не СЪп А1а Ъеи Ъуз Зег СЪи СЪи Ъеи Азр
180 185 190
Не РЬе АЪа Азп Зег Зег Ъеи Ъуз Ъуз Ъеи СЪи Ъеи Зег Зег Азп С1п
195 200 205
Не Ъуз 61и РЬе Зег Рго С1у Суз РЬе НЪз АЪа Не С1у Агд Ъеи РЬе
210 215 220
С1у Ъеи РЬе Ъеи Азп Азп Уа1 СЪп Ъеи С1у Рго Зег Ъеи ТЬг 61и Ъуз
225 230 235 240
Ъеи Суз Ъеи СЪи Ъеи АЪа Азп ТЬг Зег Не Агд Азп Ъеи Зег Ъеи Зег
245 250 255
Азп Зег СЪп Ъеи Зег ТЬг ТЬг Зег Азп ТЬг ТЬг РЬе Ьеи С1у Ъеи Ъуз
260 265 270
Тгр ТЬг Азп Ъеи ТЬг МеЪ Ъеи Азр Ъеи Зег Туг Азп Азп Ъеи Азп УаЪ
275 280 285
Уа1 С1у Азп Азр Зег РЬе АЪа Тгр Ъеи Рго 61п Ъеи СЪи Туг РЬе РЬе
290 295 300
Ъеи СЪи Туг Азп Азп Не СЪп НЪз Ъеи РЬе Зег НЪз Зег Ъеи НЪз С1у
305 310 315 320
Ъеи РЬе Азп УаЪ Агд Туг Ъеи Азп Ъеи Ъуз Агд Зег РЬе ТЬг Ъуз СЪп
325 330 335
Зег Ые Зег Ьеи АЬа Зег Ьеи Рго Ьуз Ые Азр Азр РНе Зег РНе СЬп
340 345 350
Тгр Ьеи Ьуз Суз Ьеи С1и НЬз Ьеи Азп МеН С1и Азр Азп Азр Ые Рго
355 360 365
С1у Ые Ьуз Зег Азп МеН РНе ТНг СЬу Ьеи Ые Азп Ьеи Ьуз Туг Ьеи
370 375 380
Зег Ьеи Зег Азп Зег РНе ТНг Зег Ьеи Агд ТНг Ьеи ТНг Азп СЬи ТНг
335 390 395 400
РНе Уа1 Зег Ьеи А1а НЬз Зег Рго Ьеи НЬз Ые Ьеи Азп Ьеи ТНг Ьуз
405 410 415
Азп Ьуз Ые Зег Ьуз Ые С1и Зег Азр АЬа РНе Зег Тгр Ьеи СЬу Нгз
420 425 430
Ьеи С1и УаЬ Ьеи Азр Ьеи СЬу Ьеи Азп СЬи Ые СЬу СЬп СЬи Ьеи ТЬг
435 440 445
СЬу СЬп С1и Тгр Агд СЬу Ьеи СЬи Азп Ые РНе 61и Ые Туг Ьеи Зег
450 455 460
Туг Азп Ьуз Туг Ьеи СЬп Ьеи ТНг Агд Азп Зег РНе АЬа Ьеи УаЬ Рго
465 470 475 480
Зег Ьеи С1п Агд Ьеи МеН Ьеи Агд Агд УаЬ АЬа Ьеи Ьуз Азп УаЬ Азр
485 490 495
5ег Зег Рго Зег Рго РНе С1п Рго Ьеи Агд Азп Ьеи ТНг Ые Ьеи Азр
500 505 510
Ьеи Зег Азп Азп Азп Ые А1а Азп Ые Азп Азр Азр МеН Ьеи С1и СЬу
515 520 525
Ьеи С1и Ьуз Ьеи С1и Ые Ьеи Азр Ьец С1п НЬз Азп Азп Ьеи АЬа Агд
530 535 540
Ьеи Тгр Ьуз НЬз А1а Азп Рго СЬу СЬу Рго Ые Туг РНе Ьеи Ьуз СЬу
545 550 555 560
Ьеи Зег НЬз Ьеи НЬз Ые Ьеи Азп Ьеи СЬи Зег Азп СЬу РНе Азр СЬи
565 570 575
Не Рго Уа1 С1и Уа1 РНе ьуз Азр Ьеи РНе С1и Ьеи Ьуз Ые Ые Азр
580 585 590
Ьеи СЬу Ьеи Азп Азп Ьеи Азп ТНг Ьеи Рго А1а Зег УаЬ РНе Азп Азп
595 600 605
СЬп Уа1 Зег Ьеи Ьуз Зег Ьеи Азп Ьеи С1п Ьуз Азп Ьеи Ые ТНг Зег
610 615 620
Уа1 С1и Ьуз Ьуз Уа1 РНе СЬу Рго А1а РНе Агд Азп Ьеи ТЬг С1и Ьеи
625 630 635 640
Азр МеС Агд РНе Азп Рго РНе Азр Суз ТНг Суз 61и Зег Ые АЬа Тгр
645 650 655
РНе Уа1 Азп Тгр Ые Азп СЬи ТНг НЬз ТНг Азп Ые Рго С1и Ьеи Зег
660 665 670
Зег НЬз Туг Ьеи Суз Азп ТНг Рго Рго НЬз Туг НЬз СЬу РНе Рго УаЬ
675 680 685
Агд Ьеи РНе Азр ТНг Зег Зег Суз Ьуз Азр Зег А1а Рго РНе С1и Ьеи
690 695 700
РНе РНе МеН Ые Азп ТНг Зег Ые Ьеи Ьеи Ые РНе Ые РНе Ые УаЬ
705 710 715 720
Ьеи Ьеи Ые НЬз РНе С1и СЬу Тгр Агд Ые Зег РНе Туг Тгр Азп УаЬ
725 730 735
Зег Уа1 НЬз Агд Уа1 Ьеи СЬу РНе Ьуз С1и Ые Азр Агд СЬп ТНг С1и
740 745 750
СЬп РНе С1и Туг АЬа АЬа Туг 11е Ые НЬз А1а Туг Ьуз Азр Ьуз Азр
755 760 765
Тгр Уа1 Тгр С1и НЬз РНе Зег Зег мен С1и Ьуз 61и Азр СЬп Зег Ьеи
770 775 780
Ьуз РНе Суз Ьеи 61и С1и Агд Азр РНе С1и А1а СЬу УаЬ РНе С1и Ьеи
785 790 795 800
С1и А1а Ые Уа1 Азп Зег Ые ьуз Агд Зег Агд Ьуз Ые 11е РНе Уа1
805 810 815
Ые ТНг НЬз НЬз Ьеи Ьеи Ьуз Азр Рго Ьеи Суз Ьуз Агд РНе ьуз УаЬ
820 825 830
НЬз НЬз АЬа Уа1 СЬп СЬп АЬа Ые С1и СЬп Азп Ьеи Азр Зег Ые Ые
835 840 845
Ьеи Уа1 РЬе Ьеи СЬи СЬи Не Рго Азр Туг Ьуз Ьеи Азп НЬз АЬа Ьеи
850 855 860
Суз Ьеи Агд Агд СЬу Мек РЬе Ьуз Зег НЬз Суз Не Ьеи Азп Тгр Рго
865 870 875 880
Уа1 СЬп Ьуз СЬи Агд Не СЬу А1а РЬе Агд НЬз ьуз Ьеи СЬп УаЬ АЬа
885 890 895
Ьеи СЬу Зег Ьуз Азп Зег Ча1 Ηί3
900
<210> 3 <211> 2109 <212> ДНК <213> Ното зарЬепз <400> 3 акдадасада скккдссккд какскасккк кдддддддсс ккккдссскк кдддакдскд 60 кдкдсаксск ссассассаа дкдсаскдкк адссакдаад ккдскдаскд садссасскд 120 аадккдаскс аддкасссда кдакскассс асааасакаа садкдккдаа ссккасссак 180 ааксааскса даадаккасс адссдссаас кксасааддк акадссадск ааскадсккд 240 дакдкаддак ккаасассак сксааааскд дадссадаак кдкдссадаа аскксссакд 300 ккаааадккк кдаассксса дсасаакдад скаксксаас кккскдакаа аасскккдсс 360 ккскдсасда акккдаскда аскссакскс акдкссааск саакссадаа ааккааааак 420 аакссскккд ксаадсадаа даакккаакс асаккадакс кдксксакаа кддсккдкса 480 кскасаааак каддааскса ддкксадскд дааааксксс аададсккск аккаксааас 540 аакааааккс аадсдскааа аадкдаадаа скддакакск ккдссааккс акскккаааа 600 аааккададк кдксаксдаа ксаааккааа дадккккскс садддкдккк ксасдсаакк 660 ддаадаккак ккддсскскк кскдаасаак дкссадскдд дксссадсск касададаад 720 скакдкккдд ааккадсааа сасаадсакк сддаакскдк скскдадкаа садссадскд 780 кссассасса дсаакасаас ккксккддда скааадкдда саааксксас какдсксдак 840 сккксскаса асаасккааа кдкддккддк аасдакксск ккдсккддск кесасааска 900 даакакккск ксскададка каакаакака садсакккдк ккксксаскс кккдсасддд 960 скккксаакд кдаддкасск даакккдааа сддкскккка скааасааад какккссскк 1020 дссксасксс ссаадаккда кдакккккск ккксадкддс каааакдккк ддадсасскк 1080 аасакддаад акаакдакак кссаддсака аааадсаака кдкксасадд аккдакааас 1140 скдааакаск каадкскакс сааскссккк асаадкккдс дааскккдас ааакдаааса 1200 кккдкаксас ккдсксаккс ксссккасас акасксаасс каассаадаа каааакскса 1260 аааакадада дкдакдсккк сксккддккд ддссасскад аадкасккда сскдддсскк 1320 аакдаааккд ддсаадааск сасаддссад даакддадад дкскадаааа какккксдаа 1380 акскаксккк сскасаасаа дкасскдсад скдаскадда асксскккдс сккддкссса 1440 адсскксаас даскдакдск ссдаадддкд дсссккаааа акдкддакад скскссккса 1500 ссаккссадс скскксдкаа сккдассакк скддакскаа дсаасаасаа сакадссаас 1560 акааакдакд асакдккдда дддксккдад аааскадааа кксксдаккк дсадсакаас 1620 аасккадсас ддскскддаа асасдсааас сскддкддкс ссакккаккк сскааадддк 1680 скдксксасс кссасаксск каасккддад кссаасддск ккдасдадак сссадккдад 1740 дкскксаадд акккакккда аскааадакс аксдакккад даккдаакаа кккааасаса 1800 сккссадсак скдкскккаа кааксаддкд кскскааадк саккдаасск ксадаадаак 1860 сксакаасак ссдккдадаа дааддккккс дддссадскк ксаддаасск даскдадкка 1920 дакакдсдск ккаакссскк кдаккдсасд кдкдааадка ккдсскддкк кдккааккдд 1980 аккаасдада сссакассаа сакссскдад скдксаадсс аскасскккд саасасксса 2040 ссксаекакс акдддккссс адкдадаскк кккдакасак саксккдсаа адасадкдсс 2100 ссскккдаа 2109 <210> 4 <211> 703 <212> БЕЛОК <213> Ното зарЬепз <400> 4
Мек Агд СЬп ТЬг Ьеи Рго Суз Не Туг РЬе Тгр СЬу СЬу Ьеи Ьеи Рго
1 5 10 15
РЬе СЬу Мек Ьеи Суз А1а Зег Зег ТЬг ТЬг Ьуз Суз ТЬг Ча1 Зег НЬз
20 25 30
- 53 022832
СЬи УаЬ А1а Азр 35 Суз Зег НЬз Ьей 40 Ьуз Ьей ТЬг СЬп УаЬ 45 Рго Азр Азр
Ьей Рго ТЬг Азп Не ТЬг УаЪ Ьей Азп Ьей ТЬг НЬз Азп 61п Ъеи Агд
50 55 60
Агд Ьей Рго АЬа АЬа Азп РНе ТЬг Агд Туг Зег СЬп Ьей ТЬг Зег Ьей
65 70 75 80
Азр УаЬ СЪу РЬе АЗП ТЬг Не Зег Ьуз Ьей СЬи Рго СЬи Ьей Суз СЬп
85 90 95
Ьуз Ьей Рго меъ Ьей Ьуз УаЬ Ьей Азп Ьей СЬп НЬз Азп СЬи Ъеи Зег
100 105 но
СЬп Ьей Зег Азр Ьуз ТЬг РЬе АЬа РЬе Суз ТЬг АЗП Ьей ТЬг СЬи Ьей
115 120 125
НЬз Ьей МеЪ Зег Азп Зег 11е СЬп Ьуз Не Ьуз Азп Азп Рго РЬе УаЬ
130 135 140
Ьуз С1п Ьуз Азп Ьей Не ТЬг Ьей Азр Ьей Зег НЬз Азп 61у Ьей Зег
145 150 155 160
Зег ТЬг Ьуз Ьей СЬу ТЬг СЬп УаЬ СЬп Ьей СЬи Азп Ьей СЬп СЬи Ьей
165 170 175
Ьей Ьей Зег Азп Азп Ьуз Не СЬп АЬа Ьей Ьуз Зег СЬи СЬи Ьей Азр
180 185 190
Не РЬе А1а Азп Зег Зег Ьей Ьуз Ьуз Ьей СЬи Ьей Зег Зег Азп СЬп
195 200 205
Не Ьуз СЬи РЬе Зег Рго 61 у Суз РЬе ΗΪ3 АЬа Не СЬу Агд Ьей РЬе
210 215 220
СЬу Ьей РЬе Ьей Азп Азп УаЬ СЬп Ьей СЬу Рго Зег Ьей ТЬг СЬи Ьуз
225 230 235 240
Ьей Суз Ьей СЬи Ьей АЬа АЗП ТЬг Зег Не Агд Азп Ьей Зег Ъеи Зег
245 250 255
Азп Зег СЬп Ьей Зег ТЬг ТЬг Зег Азп ТНг ТЫ РЬе Ьей 61у Ьей Ьуз
260 265 270
Тгр ТЬг Азп Ьей ТЬг МеЪ Ьей Азр Ьей Зег Туг Азп Азп Ьей Азп УаЬ
275 280 285
УаЬ СЬу Азп Азр Зег РЬе АЬа Тгр Ьей Рго СЬп Ьей СЬи Туг РЬе РЬе
290 295 300
Ьей СЬи Туг Азп Азп Не СЬп НЬз Ьей РЬе Зег НЬз Зег Ьей НЬз СЬу
305 310 315 320
Ьеп РЬе Азп УаЬ Агд Туг Ьей АЗП Ьей Ьуз Агд Зег РЬе ТЬг Ъуз СЬп
325 330 335
Зег Не Зег Ьей А1а Зег Ьей Рго Ьуз Не Азр Азр РЬе Зег РЬе СЬп
340 345 350
Тгр Ъеи Ьуз Суз Ьей СЬи НЬз Ьей Азп МеЪ СЬи Азр Азп Азр Не Рго
355 360 365
СЬу Не Ьуз Зег Азп МеЪ РЬе ТЬг СЬу Ьей 11е Азп Ьей Ьуз Туг Ьей
370 375 380
Зег Ьей зег АЗП Зег РЬе ТЬг Зег Ьей Агд ТЬг Ьей ТЬг АЗП СЬи ТЬг
385 390 395 400
РЬе УаЬ Зег Ьей АЬа Шз Зег Рго Ьей ΗΪ3 11е Ьей Азп Ьей ТЬг Ьуз
405 410 415
Азп ьуз Не Зег Ьуз Не СЬи Зег Азр А1а РЬе Зег Тгр Ьей СЬу НЬз
420 425 430
Ьей СЬи УаЬ Ъеи Азр Ьей СЬу Ьей Азп СЬи Не СЬу СЬп СЬи Ъеи ТЬг
435 440 445
СЬу СЬп СЬи Тгр Агд СЬу Ьей СЬи Азп Не РЬе СЪи Не Туг Ъеи Зег
450 455 460
Туг Азп Ъуз Туг Ьей СЬп Ъеи ТЬг Агд Азп Зег РЬе АЬа Ьей УаЬ Рго
465 470 475 430
Зег Ьей 61п Агд Ьей МеЪ Ьей Агд Агд УаЬ АЬа Ьей Ьуз Азп УаЬ Азр
485 490 495
Зег Зег Рго Зег Рго РЬе СЬп Рго Ьей Агд Азп Ьей ТЬг 11е Ъеи Азр
500 505 510
Ьей Зег Азп Азп Азп Не АЬа Азп Не Азп Азр Азр МеЪ Ьей СЬи СЬу
515 520 525
Ьей СЬи Ьуз Ьей СЬи Не Ьей Азр Ьей СЬп НЬз Азп Азп Ъеи АЬа Агд
- 54 022832
530 535 540
Ьей Тгр Ьуз ΗΪ3 АЬа Азп Рго СЬу 61 у Рго Не Туг РЬе Ьей Ьуз 61у
545 550 555 560
Ьей Зег ΗΪ3 Ьей НЬз Не Ьей Азп Ьей СЬи Бег АЗП СЬу РЬе Азр СЬи
565 570 575
Не Рго УаЬ СЬи УаЬ РЬе Ьуз Азр Ьей РЬе СЬи Ьей Ьуз Не 11е Азр
580 585 590
1еи СЬу 1еи Азп Азп Ьей Азп ТЬг Ьей Рго АЬа Бег УаЬ РЬе Азп Азп
595 600 605
СЬп Уа1 Зег Ьей Ьуз Бег Ьей Азп Ьей СЬп Ьуз Азп Ьей Не ТЬг Бег
610 615 620
Уа1 61и Ьув Ьуз Уа1 РЬе СЬу Рго АЬа РЬе Агд Азп Ьей ТНг СЬи Ьей
625 630 635 640
Азр Меб Агд РЬе Азп Рго РЬе Азр Суз ТЬг Суз СЬи Бег Не АЬа Тгр
645 650 655
РЬе Уа1 Авп Тгр Пе Азп СЬи ТЬг ΗΪ3 ТЬг Азп Не Рго СЬи Ьей Бег
660 665 670
Эег НЬз Туг Ьей Суз Азп ТЬг Рго Рго НЬз Туг НЬз СЬу РЬе Рго УаЬ
675 680 685
Агд Ьей РНе Азр ТЬг Бег Бег Суз Ьуз Азр Бег АЬа Рго РЬе 61 и
690 695 700
<210> 5 <2Η> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220 <223> Кандидат 16 VI, <400 5
Азр 1 Не СЬп МеЬ ТЬг 5 СЬп Бег Рго Бег Бег Ьей Бег АЬа Бег УаЬ 6Ьу
10 15
Азр Агд УаЬ ТЬг Не ТЬг Суз Агд АЬа Бег СЬп СЬу Ые Бег Бег Тгр
20 25 30
Ьей Азп Тгр Туг 61 п СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьей Ьей Не
35 40 45
Туг СЬу АЬа Бег Азп Ьей СЬп Бег СЬу УаЬ Рго Бег Агд РЬе Бег СЬу
50 55 60
Бег 61 у Бег СЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьей ТЬг ТЬе Бег Бег Ьей СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа Уа1 Туг Туг Суз СЬп СЬп Туг АЗр Азр РНе Бег Пе
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи Не Ьуз
100 105
<210> б <211> 116 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 16 УН <400> 6
СЬп УаЬ СЬи Ьей УаЬ СЬп Бег СЬу АЬа 6Ьи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу СЬи
1 5 10 15
Бег Ьей Ьуз Не Бег Суз Ьуз СЬу Бег СЬу Туг Бег РЬе Азп Азп Туг
20 25 30
Тгр Пе СЬу Тгр УаЬ Агд СЬп МеЬ Рго СЬу Ьуз СЬу Ьей СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Пе Пе Азр Рго СЬу Азр Бег Туг ТЬг Азп Туг АЬа Рго Бег РЬе
- 55 022832
55 60
С1п С1у С1п Уа1 ТЬг Не Зег А1а Азр Ьуз Зег Не Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Ьеи 61п Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз АЬа Зег Азр ТЬг А1а Мес Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд АЗП Не Туг СЬи РЬе Азр Туг Тгр С1у 61п 61у ТЬг Ьеи УаЬ
100 105 110
ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 7 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат : 17 УЬ
<400> 7 Азр 11е СЬи Ьеи ТЬг СЬп Рго Рго Зег УаЬ Зег УаЬ АЬа Рго СЬу СЬп
1 5 10 15
ТЬг АЬа Агд Пе Зег Суз Зег С1у Азр АЬа Ьеи С1у СЬу Туг РЬе УаЬ
20 25 30
Зег Тгр Туг СЬп С1п Ьуз Рго С1у СЬп АЬа Рго УаЬ Ьеи УаЬ Не Туг
35 40 45
Азр Азр Азр Азп Агд Рго Зег СЬу Пе Рго СЬи Агд РЬе Зег ОЬу Зег
50 55 60
Азп Зег СЬу Азп ТЬг АЬа ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег С1у ТЬг СЬп АЬа СЬи
65 70 75 80
Азр С1и АЬа Азр Туг Туг Суз АЬа Зег Туг Азр 61у Азр СЬи РЬе ТЬг
85 90 95
УаЬ РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи
100 105
<210> 8 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 17 УН
<400> Э
СЬп Уа1 С1и Ьеи 61п С1п Зег С1у Рго С1у Ьеи УаЬ Ьуз Рго Зег СЬп
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз А1а Не Зег С1у Азр Зег УаЬ Зег ТЬг Агд
20 25 30
Зег А1а А1а Тгр С1у Тгр Не Агд СЬп Зег Рго С1у Агд С1у Ьеи СЬи
35 40 45
Тгр Ьеи С1у Агд Не Туг МеЬ Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг АЬа
50 55 60
УаЬ Зег УаЬ Ьуз Зег Агд Не ТЬг Не Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
СЬп РЬе Зег Ьеи СЬп Ьеи Азп Зег УаЬ ТЬг Рго С1и Азр ТЬг АЬа Уа1
85 90 95
Туг Туг Суз АЬа Агд НЬз ТЬг Туг Рго Туг Ьеи Зег РЬе Азр Уа1 Тгр
100 105 110
61у С1п 61у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 <210> 9 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 13 VI <400> 9
Азр Не 61и Ъеи ТНг 61п Рго Рго зег Уа1 зег Уа1 А1а Рго Е1у С1п
1 5 10 15
ТНг А1а Агд Не Зег Суз Зег 61у Азр Азп 11е С1у Зег Туг Туг Уа1
20 25 30
Ηί3 Тгр Туг 61п С1п Ъуз Рго 51у С1п А1а Рго Уа1 Ъеи Уа1 11е Туг
35 40 45
С1и Азр Зег С1и Агд Рго Зег С1у Не Рго <31и Агд РНе Зег С1у Зег
50 55 60
Азп Зег О1у Азп ТНг А1а ТНг Ъеи ТНг Не Зег С1у ТНг С1п А1а С1и
65 70 75 80
АЗр С1и А1а Азр Туг Туг Суз С1п Зег Туг Азр Зег С1п РЬе Зег РНе
35 90 95
С1у Уа1 РНе С1у С1у С1у ТНг Ъуз Ъеи ТНг Уа1 Ъеи
100 105
<210> 10
<211> 122
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат : 18 УН
<400> 10
С1п Уа1 С1и Ъеи С1п С1п Зег С1у Рго С1у Ъеи Уа1 Ъуз Рго Зег С1п
1 5 10 15
ТНг Ъеи Зег Ъеи ТНг Суз А1а Не Зег С1у Азр Зег Уа1 Зег Зег Азп
20 25 30
Зег А1а А1а Тгр О1у Тгр Не Агд С1п Зег Рго С1у Агд С1у Ъеи С1и
35 40 45
Тгр Ъеи 51у Не Не С1п Ъуз Агд Зег Ъуз Тгр Туг Азп Азп Туг А1а
50 55 60
Уа1 5ег Уа1 Ъуз Зег Агд 11е ТЬг 11е Азп Рго Азр ТЬг Зег Ъуз Азп
65 70 75 80
С1п РНе Зег Ъеи С1п Ъеи Азп Зег Уа1 ТНг Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1
85 90 95
Туг Туг Суз А1а Агд Туг Зег Туг Рго РНе Туг Зег 11е Азр Туг Тгр
100 105 110
61у Е1п О1у ТНг Ъеи Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 11 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 19 УЪ <400> 11
Азр Не С1п МеЬ ТНг С1п Зег Рго Зег Зег Ъеи Зег А1а Зег Уа1 С1у 15 10 15
- 57 022832
Азр Агд УаЬ ТЬг 20 Не ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег 25 Ые СЬу Ьеи 30 Туг
Ьеи А1а Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг АЬа АЬа Зег Зег Ьеи СЬп Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РНе ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа ТЬг Туг Туг Суз СЬп СЬп туг СЬу Зег УаЬ Зег Ые
85 30 95
ТЬг РЬе СЬу СЬп СЬу ТНг Ьуз УаЬ СЬи Ые Ьуз
100 105
<210> 12 <211> 121 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 19 УН
<400> 12 УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу 15 СЬи
СЬп 1 УаЬ СЬи Ьеи УаЬ 5 СЬп Зег ЕЬу АЬа СЬи 10
Зег Ьеи Ьуз Ые Зег Суз Ьуз СЬу Зег СЬу Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Тгр УаЬ СЬу Тгр УаЬ Агд СЬп Мер Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Мер
35 40 45
СЬу РЬе Ые АЗр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг АЬа Рго Зег РЬе
50 55 60
СЬп СЬу СЬп УаЬ ТЬг Ые Зег АЬа Азр Ьуз Зег Ые Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз АЬа Зег Азр ТЬг АЬа Мер Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд СЬи Ьеи Туг СЬп СЬу Туг Мер Азр ТЬг РЬе Азр Зег Тгр СЬу
100 105 110
СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Бег Зег
115 120
<210> <211> <2Ь2> <213> ЬЗ ЬОЗ БЕЛОК Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат Ь УЬ
<400> ЬЗ
Азр ЬЬе УаЬ Ьеи ТЬг СЬп Зег Рго АЬа ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго СЬу
Ь 5 ЬО 15
СЬи Агд АЬа ТЬг Ьеи Зег Суз Агд АЬа Зег СЬп Туг Ые Азр Ые Зег
20 25 30
Туг Ьеи АЬа Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи
35 40 45
ЬЬе Туг Азр АЬа Зег Зег Агд АЬа ТЬг СЬу УаЬ Рго АЬа Агд РЬе Зег
50 55 60
СЬу Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Ые Бег Зег Ьеи СЬи
65 70 75 80
Рго СЬи Азр РЬе АЬа УаЬ Туг Туг Суз СЬп СЬп Туг Туг Бег Ьеи Зег
85 90 95
- 58 022832
Не ТЬг РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьуз νβΐ 61и Не Ьуз 100 105 <210> 14 <211> 119 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 1 νΗ <400> 14
С1у Уа1 61и Ьеи Уа1 61п Зег 61у А1а 61и Уа1 Ьуз Ьуз Рго 61у С1и
1 5 10 15
5ег Ьеи Ьуз Не Зег Суз ьуз С1у Зег С1у Туг Зег РЬе ТЬг Азр Азп
20 25 30
Тгр Не Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго <31у Ьуз 61у Ьеи С1и Тгр МеЬ
35 40 45
С1у 7а1 Не Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг А1а Рго Зег РЬе
50 55 60
С1п С1у С1п Уа1 ТЬг Не Зег А1а Азр Ьуз Зег Не Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Ьеи 61п Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз А1а Зег Азр ТЬг А1а МеЬ Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд 61и Тгр 61у Не 61у 61у МеЬ Уа1 Азр Не Тгр 61у 61п 61у
100 105 110
ТНг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 15 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 2 VI, <400> 15
Азр 1 11е О1п МеЬ ТЬг 5 61п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 61у
10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг Суз Агд А1а Зег 61п 61 у Не Зег Зег Тгр
20 25 30
Ьеи Азп Тгр Туг С1п 61п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Туг 61у А1а Бег Азп Ьеи 61п Зег 61у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег 61у
50 55 60
Зег С1у Зег 61у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи 61п Рго
65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а Уа1 Туг Туг Суз 61п 61п Туг Азр Азр РЬе Зег Не
85 90 95
ТЬг РЬе 61у 61п 61у ТЬг Ьуз Уа1 61и Не Ьуз
100 105
<210> 16 <211> 116 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 2 νΗ
- 59 022832
<400> 16 С1п УаХ С1и Ъеи УаХ 5 Зег С1п Суз Зег С1у АХа СХи Уа1 Ьуз Зег Ьуз РЬе Рго Азп 30 СХу 15 Азп СХи Туг
1 Зег Ьеи Ьуз Пе 20 Ьуз С1у Зег 25 10 СХу Туг
Тгр Не С1у Тгр Уа1 Агд С1п Мер Рго СХу Ьуз СХу Ьеи СХи Тгр мех
35 40 45
СХу Пе Пе Азр Рго СХп Азр Зег Тгр ТЬг Азп Туг АХа Рго Зег РЬе
50 55 60
61п С1у С1п УаХ ТЬг Не Зег А1а Азр Ьуз Зег Пе Зег ТЬг АХа Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз А1а Зег Азр ТЬг АХа МеЪ Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азп Пе Туг С1и РЬе Азр Туг Тгр СХу СХп СХу ТЬг Ьеи УаХ
100 105 ХХО
ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 17 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 3 УЬ
<400> 17
Азр Пе СХи Ьеи ТЬг С1п Рго Рго Зег Уа1 Зег УаХ А1а Рго С1у С1п
X 5 10 15
ТЬг АХа Агд Пе Зег Суз Зег С1у Азр А1а Ьеи С1у 61у Туг РЬе Уа1
20 25 30
Зег Тгр Туг СХп СХп Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Уа1 Ьеи УаХ Пе Туг
35 40 45
Азр Азр Азр Азп Агд Рго Зег СХу Пе Рго С1и Агд РЬе Зег С1у Зег
50 55 60
Азп Зег С1у Азп ТЬг А1а ТЬг Ьеи ТЬг Пе Зег С1у ТНг С1п А1а С1и
65 70 75 80
Азр СХи А1а Азр Туг Туг Суз А1а Бег Туг Азр С1у Азр С1и РЬе ТЬг
85 90 95
УаХ РЬе СХу СХу СХу ТЬг ьуз ьеи ТЬг Уа1 Ьеи
100 105
<210> 18 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 3 УН
<400> 18
С1п УаХ СХи Ьеи СХп С1п Зег С1у Рго СХу Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1п
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТНг Суз А1а Пе Зег СХу Азр Зег Уа1 Зег ТЬг Агд
20 25 30
Зег А1а А1а Тгр С1у Тгр Пе Агд СХп Зег Рго С1у Агд 61у Ьеи С1и
35 40 45
Тгр Ьеи С1у Агд Пе ΗΪ3 Агд Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг А1а
50 55 60
УаХ Зег Уа1 Ьуз Зег Агд Пе ТЬг Пе Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
С1п РЬе Зег Ьеи С1п Ьеи Азп Зег Уа1 ТКг Рго 61и Азр ТЬг А1а Уа1
85 90 95
Туг Туг Суа А1а Агд Шз ТКг Туг Рго Туг Ьеи Зег РЬе Азр Уа1 Тгр
100 105 110
С1у θΐη С1у ТКг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 19 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 4 VI, <400> 19
Азр 1 Не 61и Ьеи ТЬг С1п Рго Рго Зег Уа1 Зег ν3ΐ А1з Рго С1у 15 С1п
5 10
ТЬг А1а Агд 11е Зег Суз Зег С1у Азр А1а Ьеи 61у С1у Туг РКе Уа1
20 25 30
Зег Тгр Туг 61п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Уа1 Ьеи Уа1 Не Туг
35 40 45
Азр Азр Азр Азп Агд Рго Зег С1у 11е Рго С1и Агд РЬе Зег С1у Зег
50 55 60
Азп Зег С1у Азп ТЬг А1а ТНг Ьеи ТКг Не зег 61у ТКг С1п А1а 61и
65 70 75 80
Азр С1и А1а Азр Туг Туг Суз А1а Зег Туг Азр С1у Азр С1и РЬе ТКг
85 90 95
Уа1 РКе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Ьеи ТКг Уа1 Ьеи
100 105
<210> <211> <212> <213> 20 122 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 4 УН
<400> 20
С1п 7а 1. 61и Ьеи О1п С1п Зег О1у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1п
1 5 10 15
ТКг Ьеи Зег Ьеи ТКг Суз А1а Не Зег С1у Азр Зег Уа1 Зег ТКг Агд
20 25 30
Зег А1а А1а Тгр С1у Тгр 11е Агд С1п Зег Рго <31у Агд 61у Ьеи 51и
35 40 45
Тгр Ьеи С1у Ьуз Не Зег Туг Агд Зег Агд Тгр Туг Азп Азр Туг А1а
50 55 60
Уа1 Зег Уа1 Ьуз Зег Агд 11е ТКг 11е Азп Рго Азр ТКг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
С1п РКе Зег Ьеи 61п Ьеи Азп Зег Уа1 ТЬг Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1
85 90 95
Туг Туг Суз А1а Агд Шз ТКг Туг Рго Туг Ьеи Зег РКе Азр Уа1 Тгр
100 105 110
С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 <210> 21 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 5 УЬ <400> 21
Азр Не С1и Ъеи ТЬг С1п Рго Рго Зег Уа1 Зег Уа1 А1а Рго Е1у СЬп
1 5 10 15
ТЬг А1а Агд Не Зег Суз Зег С1у Азр А1а Ьеи Е1у С1у Туг РЬе Уа1
20 25 30
Зег Тгр Туг С1п 61п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Уа1 Ьеи Уа1 Не Туг
35 40 45
Азр Азр Азр Азп Агд Рго Зег С1у Не Рго С1и Агд РЬе Зег 61у 5ег
50 55 60
Азп Зег СЬу Азп ТЬг А1а ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег С1у ТЬг С1п А1а СЬи
65 70 75 80
Азр Е1и А1а Азр Туг Туг Суз 61п Зег Туг Азр С1и Азр Зег А1а ТЬг
85 90 95
Уа1 РЬе Й1у С1у Й1у ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи
100 105
<210> <211> <212> <213> 22 122 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 5 УН
<400> 22
С1п Уа1 С1и Ьеи С1п С1п Зег 61у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Бег 61п
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз А1а Не Зег 51у Азр Бег Уа1 Зег ТЬг Агд
20 25 30
Зег А1а А1а Тгр Й1у Тгр Не Агд Е1п Зег Рго С1у Агд С1у Ьеи С1и
35 40 45
Тгр Ьеи С1у Агд Не Туг МеЬ Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг А1а
50 55 60
Уа1 Зег Уа1 Ьуз Зег Агд Не ТЬг Не Азп Рго Азр ТНг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
Й1п РЬе Бег Ьеи Е1п Ьеи Азп Зег Уа1 ТЬг Рго Й1и Азр ТНг А1а Уа1
85 90 95
Туг Туг Суз А1а Агд Нгз ТЬг Туг Рго Туг Ьеи Зес РЬе Азр Уа1 Тгр
100 105 110
С1у СЬп С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 23 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220> <223> Кандидат 6 УЬ
<400> 23
Азр Не 61и Ьеи ТЬг 61п Рго Рго Зег Уа1 Зег Уа1 АЬа Рго СЬу СЬп
1 5 10 15
ТЬг А1а Агд Не Зег Суз Зег С1у Азр А1а Ьеи СЬу О1у Туг РЬе Уа1
20 25 30
- 62 022832
Бег Тгр Туг 35 С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а 40 Рго Уа! Ьеи УаЬ 45 11е Туг
Азр Азр Азр Азп Агд Рго Бег СЬу Не Рго СЬи Агд РЬе Зег СЬу Бег
50 55 60
АЗП Зег СЬу Азп ТЬг АЬа ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег СЬу ТЬг С1п АЬа СЬи
65 70 75 80
Азр С1и А1а Азр Туг Туг Суз С1у Бег Туг Азр Бег Азп Бег Ьеи ТЬг
35 90 95
УаЬ РЬе СТу СЬу СЬу ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи
100 105
<210> <211> <212> <213> 24 122 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат б УН
<400> 24
С1п Уа! С1и Ьеи С1п С1п Бег СЬу Рго СЬу Ьеи УаЬ Ьуз Рго Зег СЬп
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Бег Ьеи ТЬг Суз АЬа 11е Бег СЬу Азр Бег УаЬ Бег ТЬг Агд
20 25 30
Зег АЬа АЬа Тгр СЬу Тгр 11е Агд С1п Бег Рго СЬу Агд СЬу Ьеи СЬи
35 40 45
Тгр Ьеи СЬу Агд 11е Туг МеЬ Агд Бег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг АЬа
50 55 60
УаЬ Бег УаЬ Ьуз Бег Агд 11е ТЬг 11е Азп Рго Азр ТНг Бег Ьуз Азп
65 70 75 80
С1п РЬе Зег Ьеи С1п Ьеи Азп Зег УаЬ ТЬг Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ
85 90 95
Туг Туг Суз АЬа Агд НЬз ТЬг Туг Рго Туг Ьеи Зег РЬе Азр УаЬ Тгр
100 105 110
СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг УаЬ Бег Зег
115 120
<210> 25 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 7 УЬ <400> 25
Азр 1 Не СЬи Ьеи ТЬг 5 С1п Рго Рго Бег УаЬ 10 Бег Уа1 АЬа Рго СЬу 15 С1п
ТЬг АЬа Агд 11е Зег Суз Бег СЬу Азр АЬа Ьеи СЬу СЬу туг РЬе УаЬ
20 25 30
Зег Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп А1а Рго УаЬ Ьеи УаЬ 11е Туг
35 40 45
Азр Азр Азр АЗП Агд Рго Бег СЬу 11е Рго СЬи Агд РЬе Бег СЬу Бег
50 55 60
Азп Зег СЬу Азп ТЬг АЬа ТЬг Ьеи ТЬг Не Бег СЬу ТЬг СЬп А1а СЬи
65 70 75 80
Азр СЬи АЬа Азр Туг Туг Суз Бег Бег Туг Азр Бег Азр Бег Ьеи ТЬг
85 90 95
УаЬ РЬе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг Уа! Ьеи
100 105
<210> 26 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 7 УН <400> 26
С1п УаЬ СЬи Ьеи СЬп СЬп Зег СЬу Рго 61у Ьеи УаЬ Ьуз Рго Бег СЬп
1 5 10 15
ТНг Ьеи Зег Ьеи ТНг Суз АЬа Не Зег СЬу Азр Зег УаЬ Зег ТНг Агд
20 25 30
Зег АЬа АЬа Тгр СЬу Тгр Не Агд СЬп Зег Рго СЬу Агд СЬу Ьеи СЬи
35 40 45
Тгр Ьеи С1у Агд Не Туг МеЬ Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг А1а
50 55 60
УаЬ Зег УаЬ Ьуз Зег Агд Пе ТНг Не Азп Рго Азр ТНг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
СЬп РНе Зег Ьеи СЬп Ьеи Азп Зег УаЬ ТНг Рго СЬи Азр ТНг АЬа УаЬ
85 90 95
Туг Туг Суз А1а Агд НЬз ТНг Туг Рго Туг Ьеи Зег РНе Азр УаЬ Тгр
100 105 110
51 у СЬп СЬу ТНг Ьеи УаЬ ТНг УаЬ Зег Зег
115 120
<210> 27 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 8 УЬ
<400> 27
Азр 11е С1и Ьеи ТНг СЬп Рго Рго Зег Уа1 Зег Уа1 АЬа Рго С1у С1п
1 5 10 15
ТНг А1а Агд Не Зег Суз Зег СЬу Азр Азп Не СЬу Зег Туг Туг УаЬ
20 25 30
НЬз Тгр Туг СЬп 61п Ьуз Рго СЬу СЬп АЬа Рго УаЬ Ьеи УаЬ Не Туг
35 40 45
СЬи Азр Зег С1и Агд Рго Зег СЬу Не Рго СЬи Агд РЬе Зег СЬу Зег
50 55 60
Азп Зег СЬу Азп ТНг АЬа ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег СЬу ТЬг СЬп АЬа СЬи
65 70 75 80
Азр СЬи А1а Азр Туг Туг Суз СЬп Зег Туг Азр Зег СЬп РЬе Зег РЬе
85 90 95
СЬу УаЬ РНе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи
100 105
<210> 28 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220> <223> Кандидат 8 УН <400> 28 С1п Уа1 С1и Ьеи С1п С1п Зег С1у Рго СЬу Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег СЬп
1 5 10 15
- 64 022832
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз АЬа Не Зег 25 61у Азр Зег УаЬ Зег 30 Зег Азп
20
Зег АЬа АЬа Тгр СЬу Тгр Не Агд СЬп Зег Рго СЬу Агд СЬу Ьеи СЬи
35 40 45
Тгр Ьеи СЬу 11е 11е СЬп ТЬг Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг АЬа
50 55 60
УаЬ Зег УаЬ Ьуз Зег Агд Не ТЬг Не Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
СЬп РЬе Зег Ьеи СЬп Ьеи Азп Зег УаЬ ТЬг Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ
85 90 95
Туг Туг Суз А1а Агд Туг Зег Туг Рго РЬе Туг Зег Не Азр Туг Тгр
100 105 110
СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115 120
<210> <211> <212> <213> 29 108 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 9 УЬ
<400> 29
Азр 11е СЬи Ьеи ГЬг СЬп Рго Рго Зег УаЬ Зег УаЬ АЬа Рго СЬу СЬп
1 5 10 15
ТЬг АЬа Агд 11е Зег Суз Зег СЬу Азр Азп 11е СЬу Зег Туг Туг УаЬ
20 25 30
НЬз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп АЬа Рго УаЬ Ьеи УаЬ Не Туг
35 40 45
СЬи Азр Зег СЬи Агд Рго Зег СЬу 11е Рго СЬи Агд РЬе Зег СЬу Зег
50 55 60
Азп Зег СЬу Азп ТЬг АЬа ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег СЬу ТЬг СЬп АЬа СЬи
65 70 75 80
Азр СЬи АЬа Азр Туг Туг Суз СЬп Зег Туг Азр Зег СЬп РЬе Зег РЬе
85 90 95
СЬу УаЬ РЬе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи
100 105
<210> <211> <212> <213> 30 122 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 9 УН
<400> 30
СЬп УаЬ СЬи Ьеи СЬп С1п Бег С1у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1п
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз А1а 11е Бег С1у Азр Зег Уа1 Зег Зег Азп
20 25 30
Зег АЬа АЬа Тгр СЬу Тгр Не Агд 61п Зег Рго С1у Агд СЬу Ьеи СЬи
35 40 45
Тгр Ьеи СЬу 11е Не СЬп Не Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг АЬа
50 55 60
Ьеи Зег УаЬ Ьуз Зег Агд Не ТЬг Не Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
СЬп РЬе Зег Ьеи СЬп Ьеи Азп Зег УаЬ ТЬг Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ
85 90 95
Туг Туг Суз АЬа Агд Туг Зег Туг Рго РЬе Туг Зег Не Азр Туг Тгр
100 105 НО
- 65 022832
61у 61п С1у ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115 120 <210> 31 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 10 УЬ <400> 31
Азр 1 Не СЬи Ьеи ТНг С1п 5 Рго Рго Зег УаЬ 10 Зег Уа1 АЬа Рго 61у 15 СЬп
ТЬг А1а Агд Не Зег Суз Зег СЬу Азр Азп 11е СЬу Зег Туг Туг УаЬ
20 25 30
Н13 Тгр туг 61п СЬп Ьуз Рго 61 у 61п А1а Рго УаЬ Ьеи УаЬ Не Туг
35 40 45
61 и Азр Зег 61и Агд Рго Зег 61 у 11е Рго 61и Агд РЬе Зег 61 у Зег
50 55 60
Азп Зег 61у Азп ТЬг АЬа ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег СЬу ТЬг СЬп АЬа СЬи
65 70 75 80
Азр 61и АЬа АЗр туг Туг Суз СЬп Зег Туг Азр ТЬг Рго УаЬ Туг Зег
85 90 95
УаЬ РЬе 61у 61у 61у ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи
100 105
<210> 32 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 10 УН
<400> 32
61п УаЬ 61и Ьеи 61п ОЬп Зег 61у Рго 61у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Бег 61п
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз А1а Не Зег 61у Азр Зег Уа1 Бег Бег Азп
20 25 30
Зег АЬа АЬа Тгр С1у Тгр 11е Агд 61п Зег Рго СЬу Агд СЬу Ьеи С1и
35 40 45
Тгр Ьеи С1у Не Ые ОЬп Ьуз Агд Бег Ьуз Тгр Туг Азп Азп Туг АЬа
50 55 60
УаЬ Зег УаЬ Ьуз Зег Агд Не ТЬг Не Азп Рго Азр ТЬг Бег Ьуз Азп
65 70 75 80
61п РЬе Зег Ьеи СЬп Ьеи Азп Бег УаЬ ТЬг Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ
85 90 95
Туг Туг Суз АЬа Агд Туг Бег Туг Рго РЬе Туг Бег Не Азр Туг Тгр
100 105 110
С1у 61п 61у ТЬг Ьеи УаЬ ТНг УаЬ Зег Зег 115 120 <210> 33 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 11 УЬ
- 66 022832 <400> 33
Азр 1 11е С1и Ьеи ТЬг 5 СХп Рго Рго Зег УаХ 10 Зег Уа1 А1а Рго 01 у 15 С1п
ТЬг А1а Агд Пе Зег Суз Зег С1у Азр Азп 31е С1 у Зег Туг Туг Уа1
20 25 30
ΗΪ3 Тгр Туг СХп С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Уа1 Ьеи УаХ Пе Туг
35 40 45
СХи Азр Зег СХи Агд Рго Зег СХу Пе Рго С1и Агд РЬе Зег СХу Зег
50 55 60
Азп Зег СХу Азп ТЬг АХа ТЬг Ьеи ТНг Пе Зег 61 у ТЬг 61п А1а С1и
65 70 75 80
Азр 61и А1а Азр Туг Туг Суз Зег Зег Туг Азр С1и Рго Азп РЬе Азп
85 90 95
Уа1 РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи
100 105
<210> 34 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 11 УН
<400> 34
С1п УаХ 61и Ьеи С1п С1п Зег СХу Рго СХу Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег СХп
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз А1а Пе Зег С1у Азр Зег Уа1 Зег Зег Азп
20 25 30
Зег АХа А1а Тгр С1у Тгр Пе Агд 61п Зег Рго 61у Агд 61у Ьеи С1и
35 40 45
Тгр Ьеи С1у Пе Пе С1п Ьуз Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азп Туг А1а
50 55 60
Уа1 Зег Уа1 Ьуз Зег Агд Пе ТЬг Пе Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
СХп РЬе Зег Ьеи С1п Ьеи Азп 5ег Уа1 ТЬг Рго С1и Азр ТЬг А1а УаХ
85 90 95
Туг Туг Суз А1а Агд Туг Зег Туг Рго РЬе Туг Зег Пе Азр Туг Тгр
100 105 110
С1у 61п С1у ТЬг Ьеи УаХ ТЬг УаХ Зег Зег
115 120
<210> 35 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 12 УЬ <400> 35
Азр Пе С1и Ьеи С1п С1п Зег С1у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1п
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз А1а Пе Зег СХу Азр Зег Уа1 Зег Зег Азп
20 25 30
Зег А1а А1а Тгр С1у Тгр 11е Агд С1п Зег Рго 61у Агд СХу Ьеи С1и
35 40 45
Тгр Ьеи С1у Пе Пе С1п Ьуз Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азп Туг А1а
50 55 60
Уа1 Зег Уа1 Ьуз Зег Агд Пе ТЬг Пе Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
- 67 022832
СЬп РЬе Зег Ьеи СЬп 85 Ъеи Азп Зег УаЬ ТЬг 90 Рго СЬи Азр ТЬг АЬа 95 УаЬ
Туг Туг Суз АЬа Агд Туг Зег Туг Рго РЬе Туг Зег Ые Азр Туг Тгр
100 105 110
СЬу СЬп СЬу ТЬг Ъеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115 120
<210> 36 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 12 УН
<400> 36 СЬп УаЬ СЬи Ъеи СЬп СЬп Зег СЬу Рго СЬу Ъеи УаЬ Ъуз Рго Зег СЬп
1 5 10 15
ТЬг Ъеи Зег Ъеи ТЬг Суз АЬа Ые Зег СЬу Азр Зег УаЬ Зег Зег Азп
20 25 30
Зег АЬа АЬа Тгр СЬу Тгр Ые Агд СЬп Зег Рго СЬу Агд СЬу Ъеи СЬи
35 40 45
Тгр Ъеи СЬу Ые Ые СЬп Ъуз Агд Зег Ъуз Тгр Туг Азп АЗП туг АЬа
50 55 60
УаЬ Зег УаЬ Ъуз Зег Агд Ые ТЬг Ые Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
СЬп РЬе Зег Ъеи СЬп Ъеи Азп Зег УаЬ ТЬг Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ
85 90 95
Туг Туг Суз АЬа Агд Туг Зег Туг Рго РЬе Туг Зег 11е Азр Туг Тгр
100 105 110
СЬу СЬп СЬу ТЬг Ъеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115 120
<210> 37 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 13 УЬ
<400> 37 Азр Ые СЬп МеЬ ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег Ъеи Зег АЬа Зег УаЬ СЬу
1 5 10 15
Азр Агд УаЬ ТНг ТЬе ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег 11е СЬу Ъеи Туг
20 25 30
Ъеи АЬа Тгр Туг СЬп СЬп Ъуз Рго СЬу Ъуз АЬа Рго Ъуз Ъеи Ъеи Ые
35 40 45
Туг АЬа АЬа Зег Зег Ъеи СЬп Зег СЬу УаЬ РГО Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг Ъеи ТЬг Ые Зег Зег Ъеи СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РНе АЬа ТЬг Туг Туг Суз СЬп СЬп СЬу СЬи Зег Ые Ъеи Зег
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи 11е Ъуз 100 105 <210> 38 <211> 121 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
- 68 022832 <220>
<223> Кандидат 13 ЧН <400> 38
С1п ЧаЬ СЬи Ьеи ЧаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи ЧаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу СЬи
1 5 10 15
Зег Ьеи Ьуз Не Зег Суз Ьуз СЬу Зег СЬу Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Тгр ЧаЬ СЬу Тгр ЧаЬ Агд СЬп Мек Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Мек
35 40 45
С1у РЬе Х1е Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг АЬа Рго Зег РЬе
50 55 60
СЬп СЬу СЬп ЧаЬ ТЬг ТЬе Зег АЬа Азр Ьуз Зег Не Зег ТЬг АХа Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз АЬа Зег Азр ТЬг АЬа Мек Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд СЬи Ьеи Туг СЬп СЬу Туг Мек Азр ТЬг РЬе Азр Зег Тгр СЬу
ЬОО 105 110
СЬп СЬу ТЬг Ьеи ЧаЬ ТЬг ЧаЬ Зег Зег
115 120
<210> 39 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 14 ЧЬ
<400> 39 Азр Не СЬп Мек ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег АЬа Зег ЧаЬ СЬу
1 5 10 15
Азр Агд ЧаЬ ТЬг 11е ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег 11е СЬу Ьеи Туг
20 25 30
Ьеи АЬа Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Туг АЬа АЬа Зег Зег Ьеи СЬп Зег СЬу ЧаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег 61у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа ТЬг Туг Туг Суз СЬп СЬп АЬа СЬи ТЬг Ча! Зег Рго
85 90 95
ТНг РЬе СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьуз ЧаЬ СЬи Не Ьуз
100 105
<210> 40 <211> 121 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 14 ЧН
<400> 40
СЬп ЧаЬ СЬи Ьеи ЧаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи ЧаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу СЬи
1 5 10 15
Зег Ьеи Ьуз Не Зег Суз Ьуз СЬу Зег СЬу Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Тгр ЧаЬ СЬу Тгр ЧаЬ Агд СЬп Мек Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Мек
35 40 45
СЬу РЬе 11е Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг АЬа Рго Зег РЬе
- 69 022832
50 55 60
61η СЬу СЬп УаЬ ГЬг Не Зег АЬа Азр Ьуз Зег Не Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьей СЬп Тгр Зег Зег Ьей Ьуз АЬа Зег Азр ТЬг АЬа МеЕ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд СЬи Ьей Туг СЬп СЬу Туг Мер Азр ТЬг РЬе Азр Зег Тгр СЬу
100 105 110
61η СЬу ТЬг Ьей УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115 120
<210> 41 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<22 3> Кандидат 15 УЬ
<400> 41
Азр Не СЬп Мес ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег Ьей Зег АЬа Зег УаЬ СЬу
1 5 10 15
Азр Агд УаЬ ТЬг Не ТНг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Не СЬу Ьей Туг
20 25 30
Ьей АЬа Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьей Ьей Не
35 40 45
Туг АЬа АЬа Зег Зег Ьей СЬп Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РНе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РНе ТЬг Ьей ТНг Не Зег Зег Ьей СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа ТЬг Туг Туг Суз СЬп СЬп СЬу Азп ТНг Ьей Зег Туг
85 90 95
ТЬг РНе СЬу СЬп СЬу ТНг Ьуз УаЬ СЬи Не Ьуз
100 105
<210> 42 <211> 121 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 15 7Н
<400> 42
СЬп УаЬ СЬи Ьей УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу СЬи
1 5 10 15
Зег Ьей Ьуз Не Зег Суз Ьуз СЬу Зег СЬу Туг Зег РНе ТНг Азп Туг
20 25 30
Тгр УаЬ СЬу Тгр УаЬ Агд СЬп Мер Рго СЬу Ьуз СЬу Ьей СЬи Тгр Мер
35 40 45
СЬу РНе Не Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТНг Азп Туг АЬа Рго Зег РНе
50 55 60
СЬп СЬу СЬп УаЬ ТНг Ые Зег АЬа Азр Ьуз Зег Не Зег ТНг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьей СЬп Тгр Зег Зег Ьей Ьуз АЬа Зег Азр ТНг АЬа Мер Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд СЬи Ьей Туг СЬп СЬу Туг МеР Азр ТЬг РЬе Азр Зег Тгр СЬу
100 105 110
СЬп СЬу ТНг Ьей УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115 120
- 70 022832 <210> 43 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 1 Σ,ΟϋΚΙ <400> 43
С1п Туг Не Азр 11е Зег Туг 1 5 <210> 44 <211> 3 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 1 ЬСЭК2 <400> 44
Азр А1а Зег 1 <210> 45 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 1 ЬСЭЕЗ <400> 45
Е1п С1п Туг Туг Зег Ьеи Зег 11е ТЬг 1 5 <210> 46 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 1 НСОЕ1 <400> 46
61у Туг Зег РЬе ТЬг Азр Азп Тгр 1 5 <210> 47 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 1 НСОЕ2 <400> 47
11е Азр Рго Зег Азр Зег ΰΐη ТЬг 1 5
- 71 022832 <210> 48 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 1 НСБКЗ <400> 48
А1а Агд Е1и Тгр С1у 11е 61у 61у МеЬ Уа1 Азр 11е 15 10 <210> 49 <211> 6 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 2 ЬСйК1 <400> 49
С1п 61у 11е 8ег Бег Тгр 1 5 <210> 50 <211> 3 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 2 ЬСОК2 <400> 50
С1у А1а Бег <210> 51 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 2 ЬСБКЗ <400> 51
61п С1п Туг Азр Азр РЬе Бег 11е ТЬг 1 5 <210> 52 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 2 НСОП1 <400> 52
61у Туг Бег РЬе Азп Азп Туг Тгр 1 5
- 72 022832 <210> 53 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 2 НСРК2 <400> 53
11е Аэр Рго 61п Азр Зег Тгр ТЬг 1 5 <210> 54 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<22 3> Кандидат 2 ЕСЭЕЗ <400> 54
АЬа Агд Азп Не Туг СЬи РЬе Азр Туг 1 5 <210> 55 <211> 6 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <2 2 0 >
<223> Кандидаты 3,4,5,6, 7 ЬССЕ1 <400> 55
АЬа Ьеи СЬу СЬу Туг РЬе 1 5 <210> 56 <211> 3 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидаты 3,4,5,6, 7 ЬСОР.2 <400> 56
Азр Азр Азр 1 <210> 57 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидаты 3,4 ЬСЬКЗ
- 73 022832 <400> 57
А1а Бег Туг Азр С1у Азр С1и РЬе ТЬг Уа1 15 10 <210> 58 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 3 НСОР.1 <400> 58
С1у Азр Бег Уа1 Зег ТЬг Агд Зег А1а А1а 15 10 <210> 59 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 3 НСРЕ2 <400> 59
11е ΗΪ3 Агд Агд Зег Ьуз Туг Тгр Азп Азр 15 10 <210> 60 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидаты 3,4,5,6,7 НСБКЗ <400> 60
А1а Агд Ньз ТЬг Туг Рго Туг Ьеи Зег РЬе Азр Уа1 15 10 <210> 61 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидаты 4,5,6,7 НСОР.1 <400> 61
Е1у Азр Зег Уа1 Зег ТЬг Агд Зег А1а А1а 15 10 <210> 62
- 74 022832 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 4 НСОЕ2 <400> 62
Не Зег Туг Агд Зег Агд Тгр Туг Азп Азр 1 5 10 <210> 63 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 5 ЬСБКЗ <400> 63
С1п Зег Туг Азр С1и Азр Зег А1а ТНг Уа1 15 10 <210> 64 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидаты 5,6,7 НСБК2 <400> 64
Не Туг МеН Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп 1 5 <210> 65 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<22 3> Кандидат 6 ЬСйКЗ <400> 65
61у Зег Туг Азр Зег Азп Зег Ьеи ТНг Уа1 15 10 <210> 66 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 7 ЬСРБЗ
- 75 022832 <400> 66
Зег Зег Туг Азр Зег Азр Зег Ьеи ТЬг Уа1 15 10 <210> 67 <211> 6 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 8,9,10,11,12 ЬСОР1 <400> 67
Азп 11е С1у Зег Туг Туг 1 5 <210> 68 <211> 3 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 8,9,10,11,12 ЬСОВ.2 <400> 68
61и Азр Зег 1 <210> 69 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 8,9 ЬСБКЗ <400> 69
61п Зег Туг Азр Зег 61п РЬе Зег РЬе С1у Уа1 1 5 10 <210> 70 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 78,9,10,11,12 ΗΟϋΚΙ <400> 70
С1у Азр Зег Уа1 Зег Зег Азп Зег А1а А1а 1 5 10 <210> 71 <211> 9
- 76 022832 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 3 НСБН2 <400> 71
11е С1п ТЬг Агд Зег Ьуз Туг Тгр Азп 1 5 <210> 72 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 8,9,10,11,12 ЙСОЕЗ <400> 72
А1а Агд Туг Зег Туг Рго РЬе Туг Зег 11е Азр Туг 15 10 <210> 73 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220 <223> Кандидат 9 ЯСПВ.2 <400> 73
11е С1п 11е Агд Зег Ьуз Туг Тгр Азп 1 5 <210> 74 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<22 3> Кандидат 10 ЬСйКЗ <400> 74
61п Зег Туг Азр ТЬг Рго Уа1 Туг Зег Уа! 15 10 <210> 75 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 10 НС0В.2 <400> 75
- 77 022832
11е С1п Ьуз Агд Зег Ьуз Туг Тгр Азп 1 5 <210> 76 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 11 ЬСОКЗ <400> 76
Зег Зег Туг Азр С1и Рго Азп РЬе Азп Уа1 15 10 <210> 77 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 11,12 НСЗК2 <400> 77
Не С1п Ьуз Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп 1 5 <210> 78 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 12 ЬСЬйЗ <400> 78
Зег Зег Туг Азр Азр Рго Азп РЬе С1п Уа1 15 10 <210> 79 <211> 6 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 13, 14, 15 ЬСБЕ1 <400> 79
С1п Зег 11е С1у Ьеи Туг 1 5 <210> 30 <211> 3 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
- 78 022832 <220>
<223> Кандидат 13, 14, 15 ЬСБК2 <400> 80
А1а А1а 5ег 1 <210> 81 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 13 ЬСОКЗ <400> 81
61п 61п С1у С1и Зег 11е Ьеи 5ег ТНг 1 5 <210> 82 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 13, 14, 15 НСБЕ1 <400> 82
С1у Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг Тгр 1 5 <210> 83 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 13 НСШ2 <400> 83
11е Азр Рго Зег Азр 5ег Туг ТЬг 1 5 <210> 84 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидаты 13, 14, 15, 15-1, 15-2, 15-3, 15-4, 15-5, 15-7,15-8 НСБР.З <400> 84
- 79 022832
АЬа Агд 61и Ъеи Туг СЬп СЬу Туг МеН Азр ТЬг РЬе Азр Зег 15 10 <210> 85 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 14 ЪСОКЗ <400> 85
С1п С1п А1а С1и ТЬг Уа1 Зег Рго ТЬг 1 5 <210> 86 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 14, 15 НСБК2 <400> 86
Х1е Азр Рго 5ег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг 15 10 <210> 87 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<22 3> Кандидат 15 ЪСБЕЗ <400> 87
С1п С1п СЬу Азп ТЬг Ъеи Зег Туг ТЬг 1 5 <210> 88 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 16 НСОЕЗ <400> 88
11е Азр Рго С1у Азр Зег Туг ТНг 1 5 <210> 89 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
- 80 022832 <220>
<223> Кандидат 10 ЬСРЕЗ <400> 89
С1п С1п Туг 61у Зег Уа1 Зег 11е ТНг 1 5 <210> 90 <211> 443 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вся длина тяжелой цепи кандидата 16 <400> 90
С1п Уа1 С1и Ьеи Уа1 61п Зег Е1у А1а СЬи Уа1 Ьуз Ьуз Рго СЬу 61и
1 5 10 15
Зег Ьеи Ьуз Не Зег Суз Ьуз С1у Зег С1у Туг Зег РЬе Азп Азп Туг
20 25 30
Тгр Не СЬу Тгр νβΐ Агд С1п МеЬ Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи С1и Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Пе Не Азр Рго С1у Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг А1а Рго Зег РЬе
50 55 60
С1п С1у СЬп Уа1 ТЬг Не Зег А1а Азр Ьуз Зег Не Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз А1а Зег Азр ТЬг А1а меь Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азп Не Туг С1и РЬе Азр Туг Тгр СЬу 61п С1у ТЬг Ьеи Уа1
100 105 но
ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз СЬу Рго Зег Уа1 РНе Рго Ьеи А1а
115 120 125
Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег СЬи Зег ТЬг А1а АЬа Ьеи СЬу Суз Ьеи
130 135 140
Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег СЬу
145 150 155 160
А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 ΗΪ5 ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег
165 170 175
С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг УаЬ Рго Зег Зег Зег Ьеи
180 185 190
С1у ТЬг Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр Шз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг
195 200 205
Ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд Уа1 С1и Зег Ьуз Туг С1у Рго Рго Суз Рго Рго
210 215 220
Суз Рго А1а Рго СЬи РЬе Ьеи С1у С1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго
225 230 235 240
РГО Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи меь 11е Зег Агд ТЬг Рго СЬи Уа1 ТЬг
245 250 255
Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег С1п С1и Азр Рго С1и Уа1 С1п РЬе Азп
260 265 270
Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 ΗΪ5 Азп АЬа Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд
275 280 285
С1и С1и СЬп РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд УаЬ Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1
290 295 300
Ьеи ΗΪ3 СЬп Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз СЬи Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег
305 310 315 320
Азп Ьуз С1у Ьеи Рго Зег Зег Не С1и Ьуз ТНг Не Зег Ьуз АЬа Ьуз
325 330 335
С1у С1п Рго Агд СЬи Рго С1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег СЬп СЬи
340 345 350
61и МеЬ Туг Рго ТЬг 355 Зег ьуз Азр Азп 61п Уа1 Уа1 375 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи 360 Уа1 365 61 у Ьуз 61п С1у Рго РЬе С1и
11е А1а
61и Тгр С1и Зег Азп 380
370
Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр 61у 5ег РЬе
385 390 395 400
РЬе Ьеи туг Зег Агд Ьеи ТЬг νβΐ Азр Ьуз Зег Агд Тгр 61п Е1ц 61у
405 410 415
Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 меь Нгз 61и А1а Ьеи Нгз Азп Ηίδ Туг
420 425 430
ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи С1у Ьуз
435 440
<210> 91 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вся длина тяжелой цепи кандидата 17
<400> 91
61п Уа1 61и Ьеи 61η 61п Зег 61у Рго С1у Ьеи 7а1 Ьуз Рго Зег 61η
1 5 10 15
ТНг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз А1а Не Зег 61у Азр Зег Уа1 Зег ТЬг Агд
20 25 30
Зег А1а А1а Тгр 61у Тгр 11е Агд 61п 5ег Рго Е1у Агд С1у Ьеи 61и
35 40 45
Тгр Ьеи 61у Агд 11е Туг МеГ Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг А1а
50 55 60
Уа1 Зег Уа1 Ьуз Зег Агд 11е ТЬг 11е Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
61п РЬе Зег Ьеи 61п Ьеи Азп Зег Уа1 ТЬг Рго 61и Азр ТЬг А1а Уа1
85 90 95
Туг Туг Суз А1а Агд Нгз ТЬг Туг Рго Туг Ьеи Зег РЬе Азр Уа1 Тгр
100 105 110
61у 61п 61у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз 61у Рго
115 120 125
Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Бег С1и Зег ТЬг
130 135 140
А1а А1а Ьеи 61у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго Е1и Рго Уа1 ТЬг
145 150 155 160
Уа1 Зег Тгр Азп Зег 61у А1а Ьец ТЬг Зег 61у Уа1 Нгз ТЬг РНе Рго
165 170 175
А1а л/а1 Ьеи 61п Зег Зег 61у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа] ТЬг
180 185 190
Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи 61у ТЬг Ьуз ТЬг Туг ТНг Суз Азп Уа1 Азр
195 200 205
Нгз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд Уа1 61и Зег Ьуз Туг
210 215 220
61у Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго Е1и РЬе Ьеи 61у 61у Рго
225 230 235 240
Зег Уа1 РНе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг ьеи Мег 11е Зег
245 250 255
Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег 61п С1и Азр
260 265 270
Рго С1и Уа1 61п РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр 61у Уа1 61и Уа1 Нгз Азп
275 280 285
А1а Ьуз ТНг Ьуз Рго Агд 61и 61и 61п РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1
290 295 300
Уа! Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Нгз 61п Азр Тгр Ьеи Азп 61у Ьуз 61и
305 310 315 320
Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз СЬу Ьеи Рго Зег Зег Пе СЬи Ьуз
325 330 335
ТЬг 11е Зег Ьуз АЬа Ьуз С1у С1п Рго Агд СЬи Рго С1п УаЬ Туг ТНг
340 345 350
Ьеи Рго Рго Зег С1п СЬи 61и Мег ТНг Ьуз Азп С1п УаЬ Еег Ьеи ТНг
355 360 365
Суз Ьеи Уа1 Ьуз СЬу РНе Туг Рго Зег Азр 11е АЬа Уа1 СЬи Тгр СЬи
370 375 380
Бег Азп СЬу С1п Рго СЬи АЗП Азп туг Ьуз ТНг ТНг Рго Рго УаЬ Ьеи
385 390 395 400
Азр Зег Азр СЬу Зег РНе РНе Ьеи Туг Зег Агд Ьеи ТНг УаЬ Азр Ьуз
405 410 415
Зег Агд тгр 61п СЬи СЬу Азп УаЬ РНе Зег Суг Зег УаЬ Мер Нгз СЬи
420 425 430
АЬа Ьеи Шз Азп Нгз Туг ТНг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи СЬу
435 440 445
Ьуз
<210> 92 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вся длина тяжелой цепи кандидата 18
<400> 92
С1п УаЬ СЬи Ьеи СЬп С1п Зег СЬу Рго СЬу Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег СЬп
1 5 10 15
ТНг Ьеи Зег Ьеи ТНг Суз АЬа Пе Зег С1у Азр Зег УаЬ Зег Зег Азп
20 25 30
Бег А1а АЬа Тгр СЬу Тгр 11е Агд С1п Зег Рго С1у Агд СЬу Ьеи СЬи
35 40 45
Тгр Ьеи СЬу 11е 11е С1п Ьуз Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азп Туг АЬа
50 55 60
УаЬ 5ег УаЬ Ьуз Зег Агд Пе ТНг Пе Азп Рго Азр ТНг Зег ьуз Азп
65 70 75 80
С1п РНе Бег Ьеи С1п Ьеи Азп Зег УаЬ ТНг Рго СЬи Азр ТНг АЬа УаЬ
85 90 95
Туг Туг Суз АЬа Агд Туг Зег Туг Рго РНе Туг Зег Не Азр Туг Тгр
100 105 110
СЬу СЬп СЬу ТНг Ьеи УаЬ ТНг УаЬ Зег Зег АЬа Зег ТНг Ьуз СЬу Рго
115 120 125
Зег УаЬ РНе Рго Ьеи АЬа Рго Суз Зег Агд Зег ТНг Зег СЬи Зег ТНг
130 135 140
АЬа АЬа Ьеи СЬу Суз Ьеи УаЬ ьуз Азр Туг РНе Рго СЬи Рго УаЬ ТНг
145 150 155 160
УаЬ Зег Тгр Азп Зег СЬу АЬа Ьеи ТНг Зег С1у УаЬ Н1з ТНг РНе Рго
165 170 175
АЬа Уа1 Ьеи СЬп Зег Зег СЬу ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег УаЬ УаЬ ТНг
180 185 190
УаЬ Рго Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТНг Ьуз ТНг Туг ТНг Суз Азп УаЬ Азр
195 200 205
Ηίε Ьуз Рго Зег Азп ТНг Ьуз УаЬ Азр Ьуз Агд УаЬ СЬи Зег ьуз Туг
210 215 220
СЬу Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго АЬа Рго 61и РНе Ьеи СЬу СЬу Рго
225 230 235 240
Зег УаЬ РНе Ьеи РНе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТНг Ьеи МеН Пе Зег
245 250 255
Агд ТНг Рго СЬи УаЬ ТНг Суз УаЬ УаЬ УаЬ 265 Азр УаЬ Зег С1п 270 СЬи Азр
260
Рго СЬи УаЬ СЬп РНе Азп Тгр Туг УаЬ Азр СЬу УаЬ СЬи УаЬ НЬз Азп
275 280 285
А1а Ьуз ТНг Ьуз Рго Агд СЬи СЬи СЬп РЬе Азп Зег ТНг Туг Агд УаЬ
290 295 300
УаЬ Зег УаЬ Ьеи ТНг УаЬ Ьеи НЬз СЬп Азр Тгр Ьеи Азп СЬу Ьуз СЬи
305 310 315 320
Туг Ьуз Суз Ьуз УаЬ Зег Азп Ьуз СЬу Ьеи Рго Зег Зег 11е СЬи Ьуз
325 330 335
ТНг Не Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи Рго СЬп УаЬ Туг ТНг
340 345 350
Ьеи Рго РГО Зег СЬп СЬи СЬи Мен ТНг Ьуз Азп СЬп УаЬ Зег Ьеи ТНг
355 360 365
Суз Ьеи УаЬ Ьуз СЬу РНе Туг Рго Зег Азр Не АЬа УаЬ СЬи Тгр СЬи
370 375 380
Зег Азп СЬу СЬп Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТНг ТНг Рго Рго УаЬ Ьеи
385 390 395 400
Азр Зег Азр СЬу Зег РЬе РНе Ьеи Туг Зег Агд Ьеи ТНг УаЬ Азр Ьуз
405 410 415
Зег Агд Тгр СЬп СЬи СЬу Азп УаЬ РНе Зег Суз Зег УаЬ МеН НЬз СЬи
420 425 430
АЬа Ьеи ΗΪ5 Азп ΗΪ3 Туг ТЬг СЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи СЬу
435 440 445
Ьуз
<210> 93 <2Ы> 448 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220> <22 3> Вся длина тяжелой цеш ι кандидата : 19
<400> 93
СЬп УаЬ СЬи Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу СЬи
1 5 10 15
Зег Ьеи Ьуз Не Зег Суз Ьуз С1у Зег С1у Туг Зег РНе ТНг Азп Туг
20 25 30
Тгр УаЬ СЬу Тгр УаЬ Агд СЬп МеН Рго СЬу Ьуз С1у Ьеи СЬи Тгр МеН
35 40 45
СЬу РНе 1Ье Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТНг Азп Туг АЬа Рго Зег РНе
50 55 60
СЬп СЬу СЬп УаЬ ТНг Не Зег АЬа Азр Ьуз Зег 11е Зег ТНг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз АЬа Зег Азр ТЬг АЬа МеН Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд СЬи Ьеи Туг СЬп СЬу Туг МеН Азр ТНг РНе Азр Зег Тгр СЬу
100 105 110
СЬп СЬу ТНг Ьеи УаЬ ТНг УаЬ Зег Зег АЬа Зег ТНг Ьуз СЬу Рго Зег
115 120 125
УаЬ РНе Рго Ьеи АЬа Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег С1и Зег ТНг АЬа
130 135 140
АЬа Ьеи СЬу Суз Ьеи УаЬ Ьуз Азр Туг РНе Рго СЬи Рго УаЬ ТЬг УаЬ
145 150 155 160
Зег Тгр Азп Зег СЬу АЬа Ьеи ТНг Зег СЬу УаЬ НЬз ТНг РНе Рго АЬа
165 170 175
УаЬ Ьеи СЬп Зег Зег СЬу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег УаЬ УаЬ ТНг УаЬ
180 185 190
Рго Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЬг Ьуз ТНг Туг ТЬг Суз Азп УаЬ Азр НЬз
195 200 205
- 84 022832
Ьуз Рго Зег 210 Азп ТНг Ьуз УаЬ Азр Ьуз Агд УаЬ СЬи Зег Ьуз Туг СЬу
215 220
Рго Рго Суз Рго Рго суз Рго АЬа Рго СЬи РНе Ьей СЬу СЬу Рго Зег
225 230 235 240
Уа1 РНе Ьей РНе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТНг Ьей Мер Ые Зег Агд
245 250 255
ТНг Рго СЬи УаЬ ТНг Суз Уа1 УаЬ УаЬ Азр УаЬ Зег СЬп СЬи Азр Рго
260 265 270
Е1и Уа1 СЬп РНе Азп Тгр Туг УаЬ Азр СЬу УаЬ СЬи УаЬ НЬз Азп АЬа
275 280 285
Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд СЬи СЬи СЬп РНе Азп зег ТЬг Туг Агд УаЬ УаЬ
290 295 300
Вег Уа1 Ьей ТЬг УаЬ Ьей НЬз СЬп Азр Тгр Ьей Азп СЬу Ьуз СЬи Туг
305 310 315 320
Ьуз Суз Ьуз УаЬ Зег Азп Ьуз СЬу Ьей Рго Зег Бег Ые СЬи Ьуз ТЬг
325 330 335
Ые Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи Рго СЬп УаЬ Туг ТЬг Ьей
340 345 350
Рго Рго Зег СЬп СЬи СЬи Мер ТЬг ьуз Азп СЬп УаЬ Зег Ьей ТНг Суз
355 360 365
Ьей УаЬ Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр Ые АЬа УаЬ СЬи Тгр СЬи Зег
370 375 380
Азп СЬу СЬп Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТНг Рго Рго УаЬ Ьей Азр
335 390 395 400
Зег Азр СЬу Зег РЬе РНе Ьей Туг Зег Агд Ьей ТЬг УаЬ Азр Ьуз Зег
405 410 415
Агд Тгр СЬп С1и СЬу Азп УаЬ РНе Зег Суз Зег УаЬ МеР НЬз СЬи АЬа
420 425 430
Ьей НЬз Азп НЬз Туг ТНг СЬп Ьуз Зег Ьей Зег Ьей Зег Ьей СЬу Ьуз
435 440 445
<210> 94 <211> 446 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вся длина тяжелой цепи кандидата 1
<400> 94
СЬп УаЬ СЬи Ьей УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу СЬи
1 5 10 15
Зег Ьей Ьуз Ые Зег Суз Ьуз СЬу Зег СЬу Туг Зег РНе ТНг Азр Азп
20 25 30
Тгр Ые Зег Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз С1у Ьей СЬи Тгр Мер
35 40 45
СЬу УаЬ 11е Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТНг Азп Туг АЬа Рго Зег РНе
50 55 60
СЬп СЬу СЬп УаЬ ТЬг Ые Зег АЬа Азр Ьуз Зег Ые Зег ТНг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьей СЬп Тгр Зег Зег Ьей Ьуз АЬа Бег Азр ТНг А1а Мер Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд СЬи Тгр СЬу Ые СЬу СЬу Мер УаЬ Азр Ые Тгр СЬу СЬп СЬу
100 105 110
ТНг Ьей УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег АЬа Зег ТНг Ьуз СЬу Рго Зег УаЬ РНе
115 120 125
Рго Ьей АЬа Рго Суз Зег Агд Зег ТНг Зег СЬи Зег ТЬг АЬа АЬа Ьей
130 135 140
СЬу Суз Ьей УаЬ Ьуз Азр Туг РНе Рго СЬи Рго УаЬ ТНг УаЬ Зег Тгр
145 150 155 160
Азп Зег 61у А1а Ьей ТНг Зег С1у Уа1 НЬз ТНг РНе Рго А1а Уа1 Ьей
165 170 175
- 85 022832
СЬп Зег Зег СЬу Ъеи Туг Зег 180 Ъеи Зег Зег УаЬ УаЬ ТЬг УаЬ Рго Зег
185 190
Зег Зег Ъеи СЬу ТЬг Ъуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп УаЬ Азр НЬз Ъуз Рго
195 200 205
Зег Азп ТЬг Ъуз УаЬ Азр Ъуз Агд УаЬ СЬи Зег Ъуз Туг СЬу Рго Рго
210 215 220
Суз Рго Рго Суз Рго АЬа Рго СЬи РЬе Ъеи СЬу СЬу Рго Зег УаЬ РЬе
225 230 235 240
Ъеи РЬе Рго Рго Ъуз Рго Ъуз Азр ТЬг Ъеи Мер 11е Зег Агд ТЬг Рго
245 250 255
СЬи УаЬ ТЬг Суз УаЬ УаЬ УаЬ Азр УаЬ Зег СЬп СЬи Азр Рго СЬи УаЬ
260 265 270
С1п РЬе Азп Тгр Туг УаЬ Азр СЬу УаЬ СЬи УаЬ НЬз Азп АЬа Ъуз ТЬг
275 280 285
Ъуз Рго Агд СЬи СЬи СЬп РНе Азп Зег ТЬг Туг Агд УаЬ УаЬ Зег УаЬ
290 295 300
Ъеи ТЬг УаЬ Ъеи НЬз СЬп Азр Тгр Ъеи Азп СЬу Ъуз СЬи Туг Ъуз Суз
305 310 315 320
Ъуз УаЬ Зег Азп Ъуз СЬу Ъеи Рго Зег Зег Ые СЬи Ъуз ТЬг Ые Зег
325 330 335
Ъуз АЬа Ъуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи Рго СЬп УаЬ Туг ТНг Ъеи Рго Рго
340 345 350
Зег СЬп СЬи СЬи Мер ТЬг Ъуз Азп СЬп УаЬ Зег Ъеи ТЬг Суз Ъеи УаЬ
355 360 365
Ъуз СЬу РЬе Туг Рго Зег Азр Ые АЬа УаЬ СЬи Тгр СЬи Зег Азп СЬу
370 375 380
СЬп Рго СЬи Азп Азп Туг Ъуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЬ Ъеи Азр Зег Азр
385 390 395 400
СЬу Зег РЬе РЬе Ъеи Туг Зег Агд Ъеи ТНг УаЬ Азр Ъуз Зег Агд Тгр
405 410 415
СЬп СЬи 61у Азп УаЬ РЬе Зег Суз Зег УаЬ Мер НЬз СЬи АЬа Ъеи НЬз
420 425 430
Азп НЬз Туг ТЬг СЬп Ъуз Зег Ъеи Зег Ъеи Зег Ъеи СЬу Ъуз
435 440 445
<210> 95 <211> 443 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вся длина тяжелой цепи кандидата 2
<400> 95
СЬп УаЬ СЬи Ъеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ъуз Ъуз Рго СЬу СЬи
1 5 10 15
Зег Ъеи Ъуз Ые Зег Суз Ъуз С1у Зег С1у Туг Зег РЬе Азп Азп Туг
20 25 30
Тгр Ые СЬу Тгр УаЬ Агд СЬп Мер Рго СЬу Ъуз СЬу Ъеи СЬи Тгр Мер
35 40 45
СЬу Ые Ые Азр Рго СЬп Азр Зег Тгр ТЬг Азп Туг АЬа Рго Зег РЬе
50 55 60
СЬп СЬу СЬп УаЬ ТЬг 11е Зег АЬа Азр Ъуз Зег 11е Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ъеи СЬп Тгр Зег Зег Ъеи Ъуз АЬа Зег Азр ТЬг АЬа Мер Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд Азп Ые Туг СЬи РНе Азр Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТНг Ъеи УаЬ
100 105 110
ТЬг УаЬ Зег Зег АЬа Зег ТЬг Ъуз СЬу Рго Зег УаЬ РЬе Рго Ъеи АЬа
115 120 125
Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег СЬи Зег ТЬг АЬа АЬа Ъеи СЬу Суз Ъеи
130 135 140
Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у
145 150 155 160
А1а Ьеи ТЬг Зег 01 у Уа1 Шз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег
165 170 175
61 у Ьеи туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи
180 185 190
61у ТНг Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр Шз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг
195 200 205
Ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд Уа1 С1и Зег Ьуз Туг СЬу Рго Рго Суз Рго Рго
210 215 220
Суз Рго А1а Рго С1и РЬе Ьеи 01у 61у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго
225 230 235 240
Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЕ 11е Зег Агд ТНг Рго 61ц Уа1 ТЬг
245 250 255
Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег 61п 61и Азр Рго С1и Уа1 С1п РЬе Азп
260 265 270
Тгр Туг Уа1 Азр 61у Уа1 С1и Уа1 Шз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд
275 280 285
С1и С1и С1п РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд Ца1 Уа1 Зег νβΐ Ьеи ТЬг Уа1
290 295 300
Ьеи ΗΪ5 С1п Азр Тгр Ьеи Азп Е1у Ьуз 61и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег
305 310 315 320
Азп Ьуз <31 у Ьеи РЕО Зег Зег 11е Е1и Ьуз ТНе 11е Зег Ьуз А1а Ьуз
325 330 335
С1у 61п Рго Агд 61ц Рго 61 п Уа1 Туг ТНг Ьеи Рго Рго Зег С1п 61и
340 345 350
С1и МеЕ ТНг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи ТНг Суз Ьеи Уа1 Ьуз 61у РЬе
355 360 365
Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 61и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п РЕО С1и
370 375 380
Азп Авп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе
385 390 395 400
РЬе Ьеи Туг Зег Агд Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п 61и 61у
405 410 415
Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЕ Шз С1и А1а Ьеи Шз Азп Н1з Туг
420 425 430
ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи Е1у Ьуз
435 440
<210> 96 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вся длина тяжелой цепи кандидата 3
<400> 96
61п Уа1 С1и Ьеи С1п 61п Зег 61у Рго 61у Ьеи 7а1 Ьуз Рго Зег С1п
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТНг Суз А1а 11е Зег С1у Азр Зег V,?) Зег ТЬг Агд
20 25 30
Зег А1а А1а Тгр С1у Тгр 11е Агд С1п Зег Рго 61у Агд С1у Ьеи С1и
35 40 45
Тгр Ьеи С1у Агд 11е Шз Агд Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг А1а
50 55 60
'7а 1 Зег 7а 1 Ьуз Зег Агд 11е ТЬг 11е Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
С1п РЬе Зег Ьеи 61п Ьеи Азп Зег 7а1 ТЬг Рго С1и Азр ТЬг А1а 7а1
85 90 95
Туг Туг Суз А1а Агд Шз ТЬг Туг Рго Туг Ьеи Зег РЬе Азр Уа1 Тгр
100 105 110
- 87 022832
61у 31η 61у ТЬг 115 Ьеи Уа1 ТНг Уа1 120 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз 125 61у Рго
Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег С1и Зег ТЬг
130 135 140
А1а А1а Ьеи 61 у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго 61и Рго 7а 1 ТЬг
145 150 155 160
νβΐ Зег Тгр Азп Зег 61у А1а Ьеи ТЬг Зег 61у Уа1 Низ ТЬг РЬе Рго
165 170 175
А1а Уа1 Ьеи 61 п Зег Зег 61у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег 7а 1 7а 1 ТЬг
180 185 190
7а1 Рго Зег Зег Зег Ьеи 61у ТЬг Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп 7а 1 Азр
195 200 205
Шз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд 7а1 61и Зег Ьуз Туг
210 215 220
61у Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и РЬе Ьеи С1у 61у Рго
225 230 235 240
Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е Зег
245 250 255
Агд ТЬг Рго 61и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 7а1 Азр 7а1 Зег 61п С1и Азр
260 265 270
Рго 61и Уа1 61п РЬе Азп Тгр Туг 7а1 Азр 61у 7а1 61и Уа1 Н1з Азп
275 280 235
А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд 61 и С1и 61п РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1
290 295 300
7а1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи ΗΪ3 61п Азр Тгр Ьеи АЗП 61у Ьуз 61и
305 310 315 320
Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз 61у Ьеи Рго Зег Зег 11е 61и Ьуз
325 330 335
ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз 61у 61п Рго Агд 61и Рго 61п 7а 1 туг ТЬг
340 345 350
Ьеи Рго Рго Зег 61п 61и 61и МеЬ ТЬг Ьуз Азп 61п 7а 1 Зег Ьеи ТЬг
355 360 365
Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а 7а 1 С1и тгр С1и
370 375 380
Зег Азп 61у 61 п Рго 61и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи
385 390 395 400
Азр Зег Азр 61 у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Агд Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз
405 410 415
Зег Агд Тгр 61п 61и □ 1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег 7а1 МеЬ Низ 61и
420 425 430
А1а Ьеи ΗΪΞ Азп Н1з Туг ТЬг 61п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи 61у
435 440 445
Ьуз
<210> 97 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вся длина тяжелой цепи кандидата 4
<400> 97
61п 7а1 61и Ьеи 61η 61п Зег 61у Рго 61у Ьеи 7а1 Ьуз Рго Зег 61п
15 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз А1а Не Зег 61у Азр Зег 7а1 Зег ТЬг Агд
20 25 30
Зег А1а А1а Тгр 61у Тгр 11е Агд 61п Зег Рго 61у Агд 61у Ьеи 61и
35 40 45
Тгр Ьеи 61у Ьуз 11е Зег Туг Агд Зег Агд Тгр Туг Азп Азр Туг А1а
55 60
- 88 022832
УаЪ Зег УаЪ Ьуз Зег Агд 11е ТНг Не Азп Рго Азр ТНг Зег Ъуз Азп
65 70 75 80
СЪп РНе Зег Ьеи СЪп Ьеи Азп Зег УаЪ ТЬг Рго СЪи Азр ТНг АЪа УаЪ
85 90 95
Туг Туг Суз АЪа Агд НЪз ТЬг Туг Рго Туг Ьеи Зег РНе Азр УаЪ Тгр
100 105 но
СЪу СЪп СЪу ТЬг ьеи УаЪ ТЬг УаЪ Зег Зег АЪа Зег ТНг Ъуз СЪу Рго
115 120 125
Зег УаЪ РЬе Рго Ьеи АЪа Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег СЪи Зег ТНг
130 135 140
АЪа АЪа Ъеи <31 у Суз Ьеи УаЪ Ъуз Азр Туг РЬе Рго СЪи Рго УаЪ ТНг
145 150 155 160
УаЪ Зег Тгр АЗП Зег СЪу А1а Ъеи ТНг Зег СЪу УаЪ НЪз ТНг РНе Рго
165 170 175
АЪа УаЪ Ъеи СЪп Зег Зег СЪу Ъеи Туг Зег Ъеи Зег Зег УаЪ УаЪ ТНг
180 185 190
УаЪ Рго Зег Зег Зег Ьеи еъу ТНг Ъуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп УаЪ Азр
195 200 205
НЪз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз УаЪ Азр Ьуз Агд УаЪ СЪи Зег Ъуз Туг
210 215 220
СЪу Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго АЪа Рго СЪи РНе Ъеи СЪу СЪу Рго
225 230 235 240
Зег УаЪ РЬе Ьеи РЬе Рго Рго ъуз Рго Ьуз Азр ТНг Ъеи Мес Не Зег
245 250 255
Агд ТНг Рго СЪи УаЪ ТЬг Суз УаЪ УаЪ УаЪ Азр УаЪ Зег СЪп СЪи Азр
260 265 270
Рго СЪи УаЪ СЪп РЬе Азп Тгр Туг УаЪ Азр СЪу УаЪ СЪи УаЪ НЪз Азп
275 280 285
АЪа Ьуз ТЬг ьуз Рго Агд СЪи СЪи СЪп РЬе Азп Зег ТНг Туг Агд УаЪ
290 295 300
УаЪ Зег УаЪ Ьеи ТЬг УаЪ Ъеи НЪз СЪп Азр Тгр Ъеи Азп 61у Ъуз СЪи
305 310 315 320
Туг Ьуз Суз Ьуз УаЪ Зег Азп Ъуз С1у Ьеи Рго Зег Зег 11е СЪи Ъуз
325 330 335
ТНг 11е Зег Ьуз АЪа Ьуз СЪу СЪп Рго Агд СЪи Рго СЪп УаЪ Туг ТНг
340 345 350
Ьеи Рго Рго Зег СЪп СЪи СЪи Мес ТНг Ьуз Азп СЪп УаЪ Зег Ъеи ТНг
355 360 365
Суз Ьеи УаЪ Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е АЪа УаЪ СЪи Тгр СЪи
370 375 380
Зег Азп С1 у СЪп Рго СЪи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЪ Ъеи
385 390 395 400
Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РНе Ьеи Туг Зег Агд Ъеи ТЬг УаЪ Азр Ъуз
405 410 415
Зег Агд Тгр СЪп СЪи СЪу Азп УаЪ РНе Зег Суз Зег УаЪ МеС НЪз СЪи
420 425 430
АЪа Ьеи НЪз Азп НЪз Туг ТНг СЪп Ьуз Зег Ьеи Зег Ъеи Зег Ъеи СЪу
435 440 445
Ьуз
<210> 98 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вся длина тяжелой цепи кандидатов 5,6,7 <400> 98
СЪп УаЪ СЪи Ьеи СЪп СЪп Зег СЪу Рго С1у Ьеи УаЪ Ьуз Рго Зег СЪп 15 10 15
- 89 022832
ТНг Ьей Зег Ьей ТЬг Суз А1а Не Зег О1у Азр 25 Зег Уа1 Зег 30 ТЬг Агд
20
Зег А1а А1а Тгр СЬу Тгр 11е Агд С1п Зег РГО СЬу Агд С1у Ьей С1и
35 40 45
Тгр Ьей 61у Агд Не Туг Меъ Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг АЬа
50 55 60
Уа1 Зег Уа1 Ьуз зег Агд 11е ТЬг Не Азп Рго АЗр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
С1п РЬе Зег Ьей Οίη ьей Азп Зег Уа1 ТЬг Рго 61и Азр ТЬг А1а νβΐ
85 90 95
Туг Туг Суз А1а Агд ΗΪ3 ТЬг Туг Рго Туг Ьеп Зег РЬе Азр Уа1 Тгр
100 105 но
С1у С1п С1у ТЬг Ьей Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег АЬа Зег ТЬг Ьуз СЬу Рго
115 120 125
Зег 17а 1 РЬе Рго Ьей А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТНг Зег СЬи Зег ТЬг
130 135 140
А1а А1а Ьей С1у Суз Ьей Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго 1/а1 ТЬг
145 150 155 160
Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у АЬа Ьей ТНг Зег С1у 17а1 Шз ТЬг РЬе Рго
165 170 175
А1а Уа1 Ьей С1п Зег Зег С1у Ьей Туг Зег Ьей Зег Зег 17а 1 17а 1 ТЬг
180 185 190
Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьей С1у ТЬг Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп !7а1 Азр
195 200 205
НЬз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд Уа1 СЬи Зег Ьуз Туг
210 215 220
С1у Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго АЬа Рго СЬи РЬе Ьей СЬу 61у Рго
225 230 235 240
Зег Уа1 РНе Ьей РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьей МеЪ Не Зег
245 250 255
Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег СЬп СЬи Азр
260 265 270
Рго С1и Уа1 С1п РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 Шз Азп
275 280 285
АЬа Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и СЬп РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1
290 295 300
Уа1 Зег Уа1 Ьей ТЬг Уа1 Ьей Шз 61п Азр Тгр Ьей Азп СЬу Ьуз СЬи
305 310 315 320
Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз СЬу Ьей Рго Зег Зег Не 61и Ьуз
325 330 335
ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз <31 у С1п Рго Агд С1и Рго СЬп Уа1 Туг ТЬг
340 345 350
ьей Рго Рго Зег С1п С1и <31 и МеЪ ТЬг Ьуз АЗП С1п Уа1 Зег Ьей ТЬг
355 360 365
Суз Ьей Уа1 Ьуз 61у РЬе Туг Рго 5ег Азр Не АЬа 7а1 СЬи Тгр СЬи
370 375 380
5ег Азп С1у С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТНг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьей
385 390 395 400
Азр Зег Азр С1у Зег РНе РЬе Ьей Туг Зег Агд Ьей ТЬг Уа1 Азр Ьуз
405 410 415
Зег Агд Тгр СЬп 61и С1у Азп Уа1 РНе Зег Суз Зег ν3ι МеЪ Шз СЬи
420 425 430
А1а Ьей Нхе Азп НЬз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьей Зег Ьей Зег Ьей С1у
435 440 445
Ьуз <210> 99 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
- 90 022832 <220>
<22 3> Вся длина тяжелой цепи кандидата 8 <400> 99
СЬп ЧаЬ СЬи Ьеи СЬп СЬп Зег СЬу Рго СЬу Ьеи ЧаЬ Ъуз Рго Зег СЬп
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз АЬа ТЬе Зег СЬу Азр Зег ЧаЬ Зег Зег Азп
20 25 30
Зег АЬа А1а тгр СЬу тгр 11е Агд СЬп Зег Рго СЬу Агд СЬу Ъеи СЬи
35 40 45
Тгр Ьеи СЬу 11е 11е СЬп ТЬг Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг АЬа
50 55 60
ЧаЬ Зег ЧаЬ Ьуз Зег Агд 11е ТЬг 11е Азп Рго Азр ТЬг Зег Ъуз Азп
65 70 75 80
СЬп РЬе Зег Ъеи СЬп Ьеи Азп Зег ЧаЬ ТНг Рго СЬи Азр ТЬг АЬа ЧаЬ
85 90 95
Туг Туг Суз АЬа Агд Туг Зег Туг Рго РЬе Туг Зег Ые Азр Туг Тгр
100 105 ЫО
СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи ЧаЬ ТЬг ЧаЬ Зег Зег АЬа Зег ТЬг Ъуз СЬу Рго
115 120 125
Зег ЧаЬ РЬе Рго Ъеи АЬа Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег СЬи Зег ТЬг
130 135 140
АЬа АЬа Ьеи СЬу Суз Ьеи ЧаЬ Ъуз Азр Туг РЬе Рго СЬи Рго ЧаЬ ТЬг
145 150 155 160
ЧаЬ Зег Тгр Азп Зег СЬу АЬа Ъеи ТЬг Зег СЬу ЧаЬ НЬз ТЬг РЬе Рго
165 170 175
АЬа ЧаЬ Ъеи СЬп Зег Зег СЬу Ъеи Туг Зег Ъеи Зег Зег ЧаЬ ЧаЬ ТЬг
180 185 190
ЧаЬ Рго Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЬг Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп ЧаЬ Азр
195 200 205
НЬз ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ъуз ЧаЬ Азр Ъуз Агд ЧаЬ СЬи Зег Ъуз Туг
210 215 220
СЬу Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго АЬа Рго СЬи РЬе Ъеи СЬу СЬу Рго
225 230 235 240
Зег ЧаЬ РЬе Ъеи РЬе Рго Рго Ъуз Рго Ъуз Азр ТЬг Ъеи Мек Ые Зег
245 250 255
Агд ТЬг Рго СЬи ЧаЬ ТЬг Суз ЧаЬ ЧаЬ ЧаЬ Азр ЧаЬ Зег СЬп СЬи Азр
260 265 270
Рго СЬи ЧаЬ СЬп РЬе Азп Тгр Туг ЧаЬ Азр СЬу ЧаЬ СЬи ЧаЬ НЬз Азп
275 280 285
А1а Ьуз ТЬг Ъуз Рго Агд СЬи СЬи СЬп РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд ЧаЬ
290 295 300
ЧаЬ Зег ЧаЬ Ъеи ТЬг ЧаЬ Ъеи НЬз СЬп Азр Тгр Ъеи Азп СЬу Ъуз С1и
305 310 315 320
Туг Ъуз Суз Ъуз ЧаЬ Зег Азп Ъуз СЬу Ъеи Рго Зег Зег 11е СЬи Ъуз
325 330 335
ТНг 11е Зег Ъуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи Рго СЬп ЧаЬ Туг ТЬг
340 345 350
Ьеи Рго Рго Зег СЬп СЬи СЬи Мек ТЬг Ъуз Азп СЬп ЧаЬ Зег Ъеи ТЬг
355 360 365
Сун Ьеи ЧаЬ Ъуз СЬу РЬе Туг Рго Зег Азр 11е АЬа ЧаЬ СЬи Тгр СЬи
370 375 380
Зег Азп СЬу СЬп Рго 61 и Азп Азп Туг Ъуз ТЬг ТНг Рго Рго ЧаЬ Ъеи
385 390 395 400
Авр Зег Азр СЬу Зег РЬе РЬе Ъеи Туг Зег Агд Ъеи ТЬг ЧаЬ Азр Ъуз
405 410 415
Зег Агд Тгр СЬп СЬи СЬу Азп ЧаЬ РЬе Зег Суз Зег ЧаЬ Мек НЬз СЬи
420 425 430
АЬа Ьеи НЬз Азп НЬз туг ТЬг СЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ъеи Зег Ъеи СЬу
435 440 445
Ьуз
- 91 022832 <210> 100 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вся длина тяжелой цепи кандидата 9 <400> 100
С1п Уа1 61и Ьеи 61п 61п Зег Б1у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег СЬп
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз А1а Не Зег <31у Азр Зег Уа1 Зег Зег Азп
20 25 30
Зег А1а А1а Тгр С1у Тгр 11е Агд С1п Зег Рго С1у Агд С1у Ьеи СЬи
35 40 45
Тгр Ьеи 61у 11е 11е С1п 11е Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг АЬа
50 55 60
Ьеи Зег Уа1 Ьуз Зег Агд 11е ТЬг 11е Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
С1п РЬе Зег Ьеи С1п Ьеи Азп Зег Уа1 ТЬг Рго С1и Азр ТНг АЬа УаЬ
85 90 95
Туг Туг Суз А1а Агд Туг Зег Туг Рго РЬе Туг бег 11е Азр Туг Тгр
100 105 110
С1у 61п С1у ТНг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зех ТЬг Ьуз СЬу Рго
115 120 125
Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег С1и Зег ТЬг
130 135 140
А1а А1а Ьеи 51у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго 61и Рго УаЬ ТЬг
145 150 155 160
Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 ΗΪ3 ТЬг РЬе Рго
165 170 175
А1а 1/а1 Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег УаЬ УаЬ ТЬг
180 185 190
Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп УаЬ Азр
195 200 205
Ηί3 Ьуз Рго Зег Азп ТЬг ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд Уа1 СЬи зег Ьуз туг
210 215 220
51у Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и РЬе Ьеи С1у СЬу Рго
225 230 235 240
Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мер 1Ье Зег
245 250 255
Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег С1п СЬи Азр
260 265 270
Рго 61и Уа1 О1п РНе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 Нгз Азп
275 280 285
А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и С1п РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд УаЬ
290 295 300
Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи ΗΪ3 С1п Азр Тгр Ьеи Азп 61 у Ьуз СЬи
305 310 315 320
Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз С1у Ьеи Рго Зег Зег 11е СЬи Ьуз
325 330 335
ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз 61у 61п Рго Агд 61и Рго С1п Уа1 Туг ТЬг
340 345 350
Ьеи Рго Рго Зег С1п С1и С1и Мер ТЬг Ьуз Азп С1п νβΐ Зег Ьеи ТЬг
355 360 365
Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр Не А1а Уа1 С1и Тгр СЬи
370 375 380
Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЬ Ьеи
385 390 395 400
Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Агд Ьеи ТЬг УаЬ Азр Ьуз
405 410 415
Зег Агд Тгр <31п С1и С1у Азп Уа1 РНе Зег Суз Зег Уа1 Мер ΗΪ3 СЬи
420 425 430
АХа Ьеи Ηΐ3 Азп Нхз Туг ТЬг СХп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи С1у 435 440 445
Ьуз <210> 101 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вся длина тяжелой цепи кандидатов 10, 11, 12 <400> 101
51п 1 Уа1 СХи Ьеи 61п 5 С1п Зег 61у
ТЬг Ьеи Зег Ьеи 20 ТЬг Суз АХа Пе
Зег А1а А1а 35 Тгр С1у Тгр 11е Агд 40
Тгр Ьеи 50 С1у Пе Пе СХп Ьуз 55 Агд
Уа1 65 Зег Уа1 Ьуз Зег Агд 70 11е ТЬг
С1п РЬе Зег Ьеи С1п 85 Ьеи Азп Зег
Туг Туг Суз А1а 100 Агд Туг Зег Туг
С1у С1п С1у 115 ТНг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 120
Бег Уа1 130 РЬе Рго Ьеи А1а Рго 135 Суз
А1а 145 А1а Ьеи С1у Суз Ьеи 150 Уа1 Ьуз
Уа1 Зег Тгр Азп Зег 165 С1у АХа Ьеи
А1а Уа1 Ьеи С1п 180 Зег Зег 51 у Ьеи
Уа1 Рго Зег 195 Зег Зег Ьеи СХу ТЬг 200
ΗΪ3 Ьуз 210 Рго Зег Азп ТЬг Ьуз 215 Уа1
С1у 225 Рго Рго Суз Рго Рго 230 Суз Рго
Зег УаХ РЬе Ьеи РЬе 245 Рго Рго Ьуз
Агд ТЬг Рго С1и 260 Уа1 ТЬг Суз Уа1
Рго 61и Уа1 275 61п РЬе Азп Тгр Туг 230
А1а Ьуз 290 ТЬг Ьуз Рго Агд С1и 295 С1и
Уа1 305 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 310 Ьеи ΗΪ3
Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 325 Зег Азп Ьуз
ТЬг Пе Зег Ьуз 340 А1а Ьуз С1у С1п
Ьеи Рго Рго 355 Зег С1п С1и С1и МеЪ 360
Суз Ьеи 370 УаХ Ьуз СХу РЬе Туг 375 Рго
Рго С1у 10 Ьеи νβΐ Ьуз Рго Зег 15 С1п
Зег 25 СХу Азр Зег Уа1 Зег 30 Зег Азп
С1п Зег Рго С1у Агд 45 С1у Ьеи С1и
Зег Ьуз Тгр Туг 60 Азп Азп Туг А1а
Пе Азп Рго 75 Азр ТЬг Зег Ьуз Азп 80
Уа1 ТЬг 90 Рго С1и Азр ТЬг А1а 95 Уа1
Рго 105 РЬе Туг Зег Пе Азр ПО Туг Тгр
Зег Зег АХа Зег ТНг 125 Ьуз С1у Рго
Зег Агд Зег ТНг 140 Зег СХи Зег ТЬг
Азр Туг РЬе 155 Рго С1и Рго Уа1 ТЬг 160
ТЬг Зег 170 С1у Уа1 НХЗ ТЬг РЬе 175 Рго
Туг 185 Зег Ьеи Зег 5ег УаХ 190 Уа1 ТЬг
ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз 205 Азп Уа1 Азр
Азр Ьуз Агд Уа1 220 СХи Зег Ьуз Туг
А1а Рго СХи 235 РНе Ьеи С1у С1у Рго 240
Рго Ьуз 250 Азр ТНг Ьеи меъ 11е 255 Зег
Уа1 265 Уа1 Азр Уа1 Зег СХп 270 С1и Азр
Уа1 Азр СХу Уа1 С1и 285 Уа1 ΗΪ3 Азп
С1п РЬе Азп Зег 300 ТЬг Туг Агд Уа1
61п Азр Тгр 315 Ьеи Азп 51 у Ьуз С1и 320
С1у Ьеи 330 Рго Зег Зег Пе С1и 335 Ьуз
Рго 345 Агд СХи Рго 61п Уа1 350 Туг ТЬг
ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 365 Зег Ьеи ТЬг
Зег Азр 11е А1а Уа1 СХи Тгр С1и
380
- 93 022832
Бег Азп С1у 61 п Рго 61и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи
385 390 395 400
Азр 5ег Азр 61 у Бег РЬе РЬе Ьеи Туг Бег Агд Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз
405 410 415
Бег Агд Тгр 61 п С1и С1у Азп 57а 1 РЬе Бег Суз Зег Уа1 Мер Н13 С1и
420 425 430
А1а Ьеи Шз АЗП ΗΪ3 Туг ТЬг 61п Ьуз Бег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи 61у
435 440 445
Ьуз <210> 102 <211> 448 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вся длина тяжелой цепи кандидатов 13,14,15,15-7,15-8 <400> 102
61п 5/а1 61и Ьеи Уа1 61п Зег 61у А1а 61и Уа1 Ьуз Ьуз Рго 61у 61и
1 5 10 15
Зег Ьеи Ьуз 11е Зег Суз Ьуз б1у Зег С1у Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Тгр 57а 1 С1у Тгр Уа1 Агд С1п МеЬ Рго С1у Ьуз С1у Ьеи 61 и Тгр МеЬ
35 40 45
С1у РЬе Не Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг А1а Рго Зег РНе
50 55 60
С1п С1у 61п Уа1 ТЬг 11е Бег А1а Азр Ьуз Зег Пе Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Ьеи 61п Тгр Бег Зег Ьеи Ьуз А1а Зег Азр ТЬг А1а Мер Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд 61и Ьеи Туг 61п 61 у Туг МеГ Азр ТЬг РЬе Азр Зег Тгр С1у
100 105 110
О1п 61у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг 57а 1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег
115 120 125
Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег С1и Зег ТЬг А1а
130 135 140
А1а Ьеи 61у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго 61и Рго 57а 1 ТЬг Уа1
145 150 155 160
Зег Тгр Азп Зег 61у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Ца1 Шз ТЬг РЬе РГО А1а
165 170 175
57а 1 Ьеи 61 п Зег Зег 61у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг νβΐ
180 185 190
Рго Зег Зег Зег Ьеи 61у ТЬг Ьуз ТЬг Туг ТНг Суз Азп Уа1 Азр Шз
195 200 205
Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд 57а 1 61и Зег Ьуз Туг 61у
210 215 220
Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго 61и РЬе Ьеи 61 у С1у Рго Зег
225 230 235 240
57а 1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е Зег Агд
245 250 255
ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз 57а 1 Уа1 57а 1 Азр Уа1 Зег 61 п 61и Азр Рго
260 265 270
61и Уа1 С1п РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Ца1 61и Уа1 ΗΪ3 Азп А1а
275 280 285
Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд 61и 61и 61п РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд 57а1 57а1
290 295 300
Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Шз С1п Азр Тгр Ьеи АЗП 61 у Ьуз С1и Туг
305 310 315 320
Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз 61у Ьеи Рго Зег Зег 11е 61и Ьуз ТЬг
325 330 335
11е Зег Ьуз А1а Ьуз СЬу 61 п Рго Агд 61и 345 Рго 61п Уа1 Туг 350 ТНг Ьеи
340
Рго Рго Зег С1п С1и С1и МеС ТНг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи ТНг Суз
355 360 365
Ьеи Уа1 Ьуз С1у РНе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег
370 375 380
Азп 61 у 61п Рго С1и Азп Азп Туг ьуз ТНг ТНг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр
385 390 395 400
5ег Азр Е1у Зег РНе РНе Ьеи Туг Зег Агд Ьеи ТНг Уа1 Азр Ьуз Зег
405 410 415
Агд Тгр С1п С1и С1у Азп Уа1 РНе Зег Суз Зег Уа1 МеС НЬз С1и А1а
420 425 430
Ьеи Н1з Азп НЬз Туг ТНг 61п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи СЬу Ьуз
435 440 445
<210> 103 <211> 19 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Ν-концевая лидерная последовательность для экспрессии тяжелых цеп· <400> 103
МеС А1а Тгр Уа1 Тгр ТНг Ьеи Ъеи РНе Ьеи МеС А1а А1а А1а С1п Зег 15 10 15
11е С1п А1а <210> 104 <211> 1401 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Все тяжелые цепи 1дС4 кандидата 15ЕУ<Э с лидерной последовательностью <400> 104 аСддсССддд СдСддассСС дсСаССссСд аСддсадсСд сссааадСаС ссаадсадад 60 дСдсадсСдд Сдсададсдд сдссдаддЬд аадаадсссд дсдададссС даадаСсадс 120 Ьдсаадддса дсддсСасад сССсассаас СасСдддСдд дсСдддСдсд ссадаЬдссс 180 ддсаадддсс СддадСддас дддсССсаСс дассссадсд асадсСасас саасСасдсд 240 ссСадсССсс адддссаддс дассаСсадс дссдасаада дсаСсадсас сдссСассСд 300 садсддадса дссСдааддс садсдасасс дссаСдСасС асСдсдсссд сдадсСдСас 360 садддсСаса СддасасдЬС сдасадсСдд ддссадддса сссСддСдас сдСдадсадс 420 дсССссасса адддсссаЬс сдЬсССсссс сСддсдсссЬ дсСссаддад сассСссдад 480 адсасадссд сссСдддсСд ссСддСсаад дассасССсс ссдаассддС дасддСдСсд 540 СддаасСсад дсдсссСдас садсддсдСд сасассССсс сддсСдСссС асадЬссЬса 600 ддасСсСасС сссСсадсад сдСддСдасс дЬдсссСсса дсадсССддд сасдаааасс 660 СасассСдса асдСадаСса саадсссадс аасассаадд Сддасаадад адССдадСсс 720 ааасасддсс ссссаСдссс ассаСдссса дсассСдадд ссдссддддд ассаСсадСс 780 ССссСдССсс ссссаааасс сааддасасС сСсаСдаСсС сссддасссс СдаддСсасд 840 СдсдСддСдд СддасдСдад ссаддаадас сссдаддссс адССсаасСд дСасдСддаС 900 ддсдсддадд СдсаСааСдс саадасааад ссдсдддадд адсадССсаа садсасдСас 960 сдСдСддСса дсдСссСсас сдСссСдсас саддасСддс Сдаасддсаа ддадСасаад 1020 СдсааддСсС ссаасааадд ссСсссдСсс СссаСсдада ааассаСсСс сааадссааа 1080 дддсадсссс дададссаса ддСдСасасс сСдсссссаС сссаддадда даЬдассаад 1140 аассаддСса дссСдассСд ссСддСсааа ддсССсСасс ссадсдасаС сдссдСддад 1200 Сдддададса аСдддсадсс ддадаасаас Сасаадасса сдссСсссдС десддасссс 1260 дасддсСссС ссССссСсса садсаддсСа ассдСддаса ададсаддСд дсаддадддд 1320
- 95 022832 ааРдРсРРсР саРдсРссдР даРдсаРдад дсРсРдсаса сРсРсссРдР сРсРдддРаа а <210> 105 <211> 1344 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Тяжелые цепи 1дС4 кандидата 15ЕУС без лидерной последовательности ассасРасас асадаададс
1380
1401 <400> 105 даддрдсадс адсРдсаадд сссддсаадд дсдссРадсР срдсадрдда
РассадддсР адсдсРРсса дададсасад
РсдРддаасР
РсаддасРсР ассРасассР
РссаааРаРд дРсРРссРдР асдрдсдрдд дарддсдрдд
РассдРдРдд аадрдсаадд ааадддсадс аадаассадд дадрдддада
РссдасддсР дддааРдРсР адссРсРссс
РддРдсадад дсадсддсРа дссрддадрд
Рссадддсса дсадссРдаа асаРддасас ссаадддссс ссдсссРддд саддсдсссР асРсссРсад дсаасдРада дРсссссаСд
Рссссссааа рддрддасдр аддРдсаРаа рсадсдрсср
РсРссаасаа сссдададсс
РсадссРдас дсааРдддса ссРРсРРссР
РсРсаРдсРс рдрсрсрддд сддсдссдад садсРРсасс даРдддсРРс ддрдассарс ддссадсдас дррсдасадс аРссдРсРРс сРдссРддРс дассадсддс садсдрддрд
Рсасаадссс сссассаРдс асссааддас дадссаддаа рдссаадаоа сассдрссрд аддссРсссд асаддРдРас сРдссРддРс дссддадаас сРасадсадд сдрдардсар
Рааа дрдаадаадс аасРасРддд аРсдасссса адсдссдаса ассдссардр рддддссадд ссссРддсдс ааддасРасР дрдсасасср ассдрдссср адсаасасса ссадсассРд асРсРсарда дассссдадд аадссдсддд сассаддасР
РссРссаРсд асссРдсссс аааддсРРсР аасРасаада сраассдрдд даддсРсРдс ссддсдадад
РдддсРдддР дсдасадсРа ададсаРсад асРасРдсдс дсасссРддР ссРдсРссад
Рссссдаасс
РсссддсРдР ссадсадсРР аддрддасаа аддссдссдд
РсРсссддас
РссадРРсаа аддадсадРР ддсРдаасдд адаааассаР сарсссадда ассссадсда ссасдссРсс асаададсад асаассасРа ссРдаадаРс дсдссадаРд сассаасРас сассдссРас ссдсдадсрд дассдРдадс дадсассРсс ддрдасддрд ссРасадРсс дддсасдааа дададРРдад дддассаРса сссРдаддРс сРддРасдРд саасадсасд сааддадРас сРссааадсс ддадардасс саРсдссдРд сдрдсрддас дрддсаддад сасасадаад
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
1020
1030
1140
1200
1260
1320
1344 <210> 106 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Н-концевая лидерная последовательность для экспрессии легких цепей <400> 106 Мер 61у Уа1
Азр А1а Агд
Рго ТЬг С1п Уа1 Ьец Е1у Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Тгр Ьеи ТНг 5 10 15
Суз <210> 107 <211> 702 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Все легкие цепи кандидата 15 с лидерной последовательностью
- 96 022832 <400> 107 аНдддНдНдс саасбсаддД аННаддаСНа сНдсНдсНдН дасабссада пдасссадад ссссадсадс сбдадсдсса аГсассСдсс дсдссадсса дадсабсддс сНдНассНдд ддсааддссс ссаадсНдсН даНоНасдсс дссадсадсс сдсННсадсд дсадсддсад сддсассдас ННсасссНда даддасНЬсд ссассбасЬа сНдссадсад ддсаасассс ддсассаадд НддадаЬсаа дсдГасддСд дсНдсассаН НсНдаНдадс адННдаааНс НддаасНдсс НсПдНПдНдП сссадададд ссаааднаса дНддааддСд дабаасдссс дададНдНса сададсадда садсааддас адсассСаса сЬдадсааад садасНасда дааасасааа дНсНасдссН сНдадсНсдс ссдЬсасааа дадсННсаас аддддададН <210> 108 <211> 642 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Легкая цепь кандидата 15 без лидерной последовательности (начинает ЫО) ддсННасада дсдСдддсда ссСддСасса
Ндсададсдд ссассадсад
НдадсНасас сНдНсСНсаН дссСдсНдаа
НссааНсддд дсснсадсад дсдаадНсас дк
НдсаадаЬдН ссдсдндасс дсадаадссс сдНдсссадс ссНдсадссс сННсддссад сННсссдсса наасннснан
НаасНсссад сасссндасд ссаНсадддс
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
702 <400> 108 дасаНссада аНсассНдсс ддсааддссс сдсННсадсд даддасннсд ддсассаадд
НсНдаНдадс сссадададд дададНдНса сндадсааад сНдадсСсдс
Ндасссадад дсдссадсса ссаадсндсн дсадсддсад ссасснасна
НддадаНсаа адПНдаааНс ссааадНаса сададсадда садаснасда ссдНсасааа ссссадсадс дадсаНсддс данснасдсс сддсассдас сндссадсад дсдНасддНд
НддаасНдсс дНддааддНд садсааддас дааасасааа дадсннсаас сНдадсдсса сбдНассНдд дссадсадсс
ННсасссНда ддсаасассс дсНдсассаб
ЬсНдЬНдНдС даНаасдссс адсассНаса дНсбасдссН аддддададс дсдНдддсда ссНддНасса
Ндсададсдд ссансадсад
НдадсНасас сНдНсННсаН дссНдсНдаа
НссааНсддд дссНсадсад дсдаадНсас дк ссдсдНдасс дсадаадссс сдНдсссадс ссндсадссс сннсддссад сННсссдсса
НаасННсНаН
НаасНсссад сасссНдасд ссаЬсадддс
120
180
240
300
360
420
480
540
600
642 <210> 109 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Композитная последовательность ЬСОК1 кандидатов 15, 15-1, 15-2, 15-3, 15-4, 15-5, 15-6, 15-9 <400> 109
Агд А1а Зег С1п Зег Не 61у Ьеи Туг Ьеи А1а 15 10 <210> 110 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидаты ЬСЬР.2 15, 15-1 □ 15-9 <400> 110
А1а А1а Зег Зег Ьеи С1п Зег 1 5
- 97 022832 <210> 111 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Композитная последовательность НСВЕ.1 кандидатов 15, 15-1, 15-4, 15-7, 15-8 <400> 111
С1у Туг Зег РЬе ТЬе Азп Туг Тгр Уа1 С1у 15 10 <210> 112 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Композитная последовательность НСЭР.2 кандидатов 15, 15-2, 15-3, 15-6, 15-7, 15-8 <400> 112
РЬе 11е Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг А1а Рго Зег РЬе О1п 15 10 15
61у <210> 113 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Композитная последовательность БСОКЗ кандидатов 15, 15-1 □ 15-9 <400> 113
О1п С1п С1у Авп ТЬг Беи Зег Туе ТЬг 1 5 <210> 114 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидаты НСОР.2 15-1 <400> 114
Агд 11е Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг А1а Рго Зег РЬе С1п 15 10 15
С1у <210> 115 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
- 98 022832 <220>
<223> Кандидаты НСЭЕ1 15-2 <400> 115
51у Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг Тгр 11е С1у 15 10 <210> 116 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидаты НСОК1 15-3, 15-5, 15-6, 15-9 <400> 116
С1у Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг Тгр Не Зег 15 10 <210> 117 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидаты НСОК2 15-4 <400> 117
РЬе 11е Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг Зег Рго Зег РЬе С1п
1 61у 5 10 15
<210> 118
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидаты НСОВ.2 15-5, 15-9
<400> 118
Агд 11е Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг Зег Рго Зег РЬе С1п
1 5 10 15
С1у
<210> 119
<211> 14
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидаты НСБКЗ 15-6, 15-9
<400> 119
А1а Агд С1п Ьеи Туг С1п 61у Туг МеГ Азр ТЬг РЬе Азр Зег
5 10
- 99 022832 <210> 120 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидаты ЬСОКЪ 15-7
<400> 120 Агд АЪа Зег СЪп Зег 11е Зег Зег Туг Ееи АЪа
1 5 10
<210> 121 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидаты ЬСОКЪ 15-8
<400> 121
Агд АЪа Зег СЪп Зег 11е 61у Ьеи Туг Ьеи Азп
15 10
<210> 122 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидаты 15-7 УЬ
<400> 122 Мер ТНг СЪп Зег Рго 5 Зег Зег Ьеи 10 Зег АЪа Зег УаЪ 15 Зег Ьеи СЪу Туг Не
Азр 1 Азр Ьеи Не СЪп
Агд АЪа УаЪ Тгр 35
ТНг Не 20 ТЬг Суз Агд Рго 40 АЪа 25 СЪу Зег СЪп Зег Рго Не Ьуз 45 Зег 30 Ьеи
СЪп Ьуз Ьуз АЪа
Туг СЪп
Туг АЪа АЪа Зег Зег Ьеи СЪп Зег СЪу УаЪ Рго Зег Агд РЬе Зег СЪу
50 55 60
Зег С1у Зег СЪу ТЬг Азр РНе ТНг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи СЪп Рго
65 70 75 80
СЪи Азр РНе АЪа ТНг Туг Туг Суз СЪп СЪп СЪу Азп ТНг Ьеи Зег Туг
85 90 95
ТНг РНе СЪу СЪп СЪу ТНг Ьуз УаЪ СЪи Не Ьуз
100 105 <210> 123 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидаты 15-8 УЬ <400> 123
Азр Не СЪп МеГ ТЬг СЪп Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег АЪа Зег УаЪ 01 у
1 5 10 15
Азр Агд УаЪ ТНг Не ТЬг Суз Агд АЪа Зег СЪп Зег ЪЪе СЪу Ьеи Туг
- 100 022832
20 25 30
Ьеи Азп тгр Туг СЬп СЬп Ъуз Рго СЬу Ъуз АЬа Рго Ъуз Ъеи Ъеи ЬЬе
35 40 45
Туг А1а АЬа Зег Зег Ъеи СЬп Зег СЬу ЧаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг Ъеи ТЬг ЬЬе Зег Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи А8р РЬе АЬа ТЬг Туг Туг Суз СЬп СЬп СЬу Азп ТЬг Ъеи Зег Туг
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу СЬп СЬу ТЬг Ъуз ЧаЬ СЬи ЬЬе Ъуз
100 105 <210> 124 <211> 121 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидаты 15-1 ЧН
<400> 124
СЬи ЧаЬ СЬп Ъеи ЧаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи ЧаЬ Ъуз ъуз Рго СЬу СЬи
1 5 10 15
Зег Ъеи Ъуз ЬЬе Бег Суз Ъуз СЬу Зег СЬу Туг Зег РЬе ТНг Азп Туг
20 25 30
тгр ЧаЬ СЬу Тгр ЧаЬ Агд СЬп Мек Рго СЬу Ъуз СЬу Ъеи СЬи Тгр Мек
35 40 45
СЬу Агд Ые Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп туг АЬа Рго Зег РЬе
55 60
СЬп СЬу СЬп ЧаЬ ТЬг Ые Зег АЬа Азр Ъуз Зег Ые Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ъеи СЬп Тгр Зег Зег Ъеи Ъуз АЬа Зег Азр ТЬг А1а Мек Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд СЬи Ъеи Туг СЬп СЬу Туг Мек Азр ТЬг РЬе Азр Зег Тгр СЬу
100 105 110
СЬп СЬу ТЬг Ъеи ЧаЬ ТЬг ЧаЬ Зег Зег
115 120
<210> 125
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 15-2 ЧН
<400> 125
61и ЧаЬ С1п Ъеи ЧаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи ЧаЬ Ъуз Ъуз Рго СЬу СЬи
1 5 10 Ь5
Зег Ъеи Ъуз Ые Зег Суз Ъуз СЬу Зег СЬу Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Тгр Ые СЬу Тгр ЧаЬ Агд СЬп Мек Рго СЬу Ъуз СЬу Ъеи СЬи Тгр Мек
35 40 45
СЬу РЬе ЬЬе Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг АЬа Рго Зег РЬе
50 55 60
СЬп СЬу СЬп ЧаЬ ТЬг Ые Зег АЬа Азр Ъуз Зег ЬЬе Зег ТНг АЬа Туг
65 70 75 80
Ъеи СЬп Тгр Зег Зег Ъеи Ъуз АЬа Зег Азр ТЬг АЬа Мек Туг Туг Суз
85 90 95
- 101 022832
А1а Агд С1и Ьеи Туг С1п 61у Туг Мер Айр ТЬг РНе Айр Зег Тгр СЬу 100 105 110
С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 <210> 126 <211> 121 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 15-3 УН <400> 126
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у АЬа СЬи Уа1 Ьуз Ьуз Рго СЬу С1и
1 5 10 15
Зег Ьеи Ьуз Пе Зег Суз Ьуз СЬу Зег СЬу Туг Зег РЬе ТНг Азп Туг
20 25 30
Тгр Ие Зег Тгр Уа1 Агд 61п Мер Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи С1и Тгр МеР
35 40 45
С1у РЬе Пе Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг АЗП Туг А1а Рго Зег РЬе
50 55 60
С1п СЬу С1п Уа1 ТЬг Пе Зег А1а Азр Ьуз Зег 11е Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз А1а Зег Азр ТЬг А1а Мер Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд С1и Ьеи Туг С1п С1у Туг Мер Азр ТЬг РНе Азр Зег Тгр СЬу
100 105 по
С1п СЬу ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 127 <211> 121 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кандидат 15-4 УН <400> 127
СЬи УаЬ СЬп Ьеи Уа1 С1п Зег С1у АЬа СЬи Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у С1и
1 5 10 15
Зег Ьеи Ьуз Пе Зег Суз Ьуз С1у 5ег С1у Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Тгр Уа1 С1у Тгр УаЬ Агд С1п Мер Рго С1у Ьуз СЬу Ьеи С1и Тгр Мер
35 40 45
С1у РЬе 11е Азр Рго Зег Азр 5ег Туг ТЬг Азп Туг Зег Рго Зег РЬе
50 55 60
С1п С1у НЬз Уа1 ТЬг 11е Зег А1а Азр Ьуз Зег 11е Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз АЬа Зег Азр ТЬг А1а МеР Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд СЬи Ьеи Туг С1п СЬу Туг Мер Азр ТЬг РЬе Азр Зег Тгр СЬу
100 105 110
СЬп С1у ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 128 <211> 121 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
- 102 022832 <220>
<223> Кандидат 15-5 УН <400> 128
Е1и Уа1 С1п Ьей Уа1 Е1п Зег Е1у А1а Е1и Уа1 Буз Буз Рго Е1у Е1и
1 5 10 15
Зег Ьей Ьуз 11е Зег Суз Ьуз Е1у Зег 61у Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Тгр 11е Зег Тгр Уа1 Агд Е1п мен Рго Е1у Буз Е1у Ьей С1и Тгр мен
35 40 45
С1у Агд 11е Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТНг Азп Туг Зег Рго Зег РНе
50 55 60
Е1п Е1у ΗίΞ Уа1 ТНг 11е зег АБа Азр Буз Зег 11е Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Ьей С1п Тгр Зег Зег Беи Буз А1а Бег Азр ТНг А1а МеГ Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд С1и Беи туг Е1п Е1у туг МеН Азр ТНг РНе Азр Зег Тгр С1у
100 105 110
С1п Е1у ТНг Беи Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 129 <211> 121 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 15-6 УН
<400 129 С1и Уа1 Е1п Ьей Уа1 Е1п Зег С1у А1а Е1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго Е1у 61и
1 5 10 15
Зег Ьей Ьуз 11е Зег Суз Ьуз 61у Зег С1у Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Тгр 11е Зег Тгр Уа1 Агд С1п МеН Рго Е1у Ьуз Е1у Ьей С1и Тгр МеН
35 40 45
С1у РЬе 11е Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг А1а Рго Зег РЬе
50 55 60
Е1п Е1у Е1п Уа1 ТЬг 11е Зег А1а Азр Ьуз Зег 11е Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Ьей С1п Тгр Зег Зег Ьей Ьуз А1а Зег Азр ТЬг А1а МеН Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Е1п Ьей Туг □ 1п Е1у туг Мен Азр ТЬг РНе Азр зег Тгр Е1у
100 105 110
Е1п С1у ТЬг Ьей Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 130 <211> 448 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220 <223> Вся тяжелая цепь кандидата 15-1 <400 130
Е1и Уа1 Е1п Ьей Уа1 Е1п Зег Е1у А1а Е1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у 61и
1 5 10 15
Зег Беи Ьуз 11е Зег Суз Ьуз Е1у Зег Е1у Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
- 103 022832
Тгр УаЬ СЬу 35 Тгр Уа1 Агд С1п Мер 40 Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи 45 СЬи Тгр Мер
СЬу Агд Ые Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг АЬа Рго Зег РЬе
50 55 60
С1п СЬу СЬп УаЬ ТЬг Ые Зег АЬа Азр Ьуз Зег Пе Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Ьеи С1 п Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз АЬа Зег Азр ТЬг АЬа Мер Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд СЬи Ьеи Туг С1п СЬу Туг Мер Азр ТЬг РЬе Азр Зег Тгр СЬу
100 105 110
С1п СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег АЬа Зег ТЬг Ьуз СЬу Рго Зег
115 120 125
УаЬ РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег СЬи Зег ТЬг АЬа
130 135 140
А1а Ьеи СЬу Суз Ьеи УаЬ Ьуз Азр Туг РЬе Рго СЬи Рго УаЬ ТЬг УаЬ
145 150 155 160
Зег Тгр Азп Зег С1у АЬа Ьеи ТЬг Зег СЬу Уа1 Ηίε ТЬг РЬе Рго А1а
165 170 175
УаЬ Ьеи СЬп Зег Зег СЬу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег УаЬ Уа1 ТЬг УаЬ
180 185 190
Рго Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЬг Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр Нгз
195 200 205
Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз УаЬ Азр Ьуз Агд УаЬ СЬи Бег Ьуз Туг СЬу
210 215 220
Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго СЬи А1а АЬа СЬу СЬу Рго Зег
225 230 235 240
УаЬ РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мер Пе Зег Агд
245 250 255
ТЬг Рго СЬи УаЬ ТЬг Суз УаЬ УаЬ УаЬ Азр УаЬ Зег С1п С1и Азр Рго
260 265 270
СЬи УаЬ С1п РЬе Азп Тгр Туг УаЬ Азр СЬу УаЬ СЬи УаЬ НЬз Азп АЬа
275 280 285
Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд 61и СЬи С1п РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд УаЬ УаЬ
290 295 300
Зег УаЬ Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи Нгз С1п Азр Тгр Ьеи Азп СЬу Ьуз СЬи Туг
305 310 315 320
Ьуз Суз Ьуз УаЬ Зег Азп Ьуз СЬу Ьеи Рго Бег Зег Пе СЬи Ьуз ТЬг
325 330 335
Пе Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи Рго СЬп УаЬ Туг ТЬг Ьеи
340 345 350
РГО Рго Зег СЬп СЬи СЬи Мег ТЬг Ьуз Азп СЬп УаЬ Зег Ьеи ТЬг Суз
355 360 365
Ьеи УаЬ Ьуз СЬу РЬе Туг Рго Зег Азр Пе А1а УаЬ С1и Тгр СЬи Зег
370 375 380
Азп СЬу С1п Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЬ Ьеи Азр
385 390 395 400
Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Агд Ьеи ТЬг УаЬ Азр Ьуз Зег
405 410 415
Агд Тгр С1п СЬи СЬу Азп УаЬ РЬе Зег Суз Зег УаЬ Мер Ηίβ СЬи АЬа
420 425 430
Ьеи Н1з Азп Ηίε Туг ТЬг 61п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи СЬу Ьуз
435 440 445
<210> 131 <2Ы> 448 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вся тяжелая цепь кандидата 15-2 <400> 131
- 104 022832
61и Уа1 61п ьеи Уа1 61п Зег б1у А1а 61и Уа! Ьуз Ьуз Рго 61у 61и
1 5 10 15
Зег Ьеи ьуз 11е Зег Суз Ьуз 61у Зег 61у Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
тгр 11е 61у Тгр Уа1 Агд 61п МеЬ Рго 61у Ьуз 61у Ьеи 61и Тгр меь
35 40 45
61 у РЬе 11е Азр Рго Зег Азр Зег туг ТЬг Азп Туг А1а Рго Бег РЬе
50 55 60
61 η 61у 61п Уа1 ТНг 11е Зег А1а Азр Ьуз Зег 11е Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Ьеи 61 п Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз А1а Зег Азр ТНг А1а Меь Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд С1и Ьеи Туг 61п 61у Туг МеЬ Азр ТНг РЬе Азр Зег Тгр 61 у
100 105 110
С1п 61у ТЬг Ьеи 7а1 ТНг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТНг Ьуз 61у Рго Зег
115 120 125
Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТНг Зег 61и Бег ТЬг А1а
130 135 140
А1а Ьеи 61у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго 61и Рго Уа1 ТЬг Уа1
145 150 155 160
Зег Тгр Азп Зег С1 у А1а Ьеи ТЬг Зег 61у Уа1 Шз ТЬг РЬе Рго А1а
165 170 175
Уа1 Ьеи 61п Зег Зег 61у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 17а 1 ТЬг Уа1
180 185 190
Рго Зег Зег Зег Ьеи 61у ТЬг ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр Шз
195 200 205
Ьуз Рго Зег Азп ТЬг ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд νβΐ 61и Зег Ьуз Туг 61у
210 215 220
Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго 61и А1а А1а 61у 61 у Рго Бег
225 230 235 240
Уа1 РНе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Меь 11е Зег Агд
245 250 255
ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Бег 61п С1и Азр Рго
260 265 270
61и Уа1 61п РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 61и Уа1 Шз Азп А1а
275 280 285
Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд 51и 61и 61 п РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1
290 295 300
Зег νβΐ Ьеи ТЬг νβΐ Ьеи Шз 61 п Азр Тгр Ьеи Азп 61у Ьуз 61и Туг
305 310 315 320
Ьуз Суз ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз 61 у Ьеи РГО Зег Зег 11е С1и Ьуз ТЬг
325 330 335
11е Зег Ьуз А1а Ьуз 61у 61п Рго Агд 61и Рго 61п Уа1 Туг ТНг Ьеи
340 345 350
Рго Рго Зег 61п 61и 61и Мег ТНг Ьуз Азп 61п Уа1 Зег Ьеи ТНг Суз
355 360 365
Ьеи Уа1 Ьуз 61у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 61ц Тгр 61и Бег
370 375 380
Азп 51 у 61п Рго 61и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр
385 390 395 400
Зег Азр 61у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Агд Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Бег
405 410 415
Агд Тгр 61п С1и 61 у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 Меь Шз 61 и А1а
420 425 430
Ьеи ΗΪ3 Азп Шз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи 61 у Ьуз
435 440 445
<210> 132 <211> 448 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
- 105 022832 <223> Вся тяжелая цепь кандидата 15-3 <400> 132
С1и УаЬ С1п Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго 61у СЬи
1 5 10 15
Зег Ьеи Ьуз Не Зег Суз Ьуз СЬу Зег СЬу Туг Зег РЬе ТНг Азп Туг
20 25 30
Тгр 11е Зег тгр Уа1 Агд СЬп МеЕ Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр МеЕ
35 40 45
СЬу РЬе Не Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТНг Азп Туг АЬа Рго Зег РЬе
50 55 60
61п СЬу СЬп УаЬ ТНг 11е Бег АЬа Азр Ьуз Зег Не Зег ТЬг АЬа туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз АЬа Зег Азр ТЬг АЬа МеЕ Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд СЬи Ьеи Туг СЬп СЬу Туг МеЕ Азр ТЬг РЬе Азр Зег Тгр СЬу
100 105 но
61п СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег зег А1а Зег ТЬг Ьуз СЬу Рго Зег
115 120 125
Уа1 РЬе Рго Ьеи АЬа Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег СЬи Зег ТЬг АЬа
130 135 140
А1а Ьеи СЬу суз Ьеи УаЬ Ьуз Азр Туг РЬе Рго СЬи Рго УаЬ ТЬг УаЬ
145 150 155 160
Зег Тгр Азп Зег СЬу АЬа Ьеи ТЬг Зег СЬу УаЬ НЬз ТЬг РЬе Рго АЬа
165 170 175
Уа1 Ьеи СЬп Зег Зег СЬу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег УаЬ УаЬ ТЬг УаЬ
180 185 190
Рго Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЬг Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп УаЬ Азр НЬз
195 200 205
Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз УаЬ Азр Ьуз Агд УаЬ СЬи Зег Ьуз Туг СЬу
210 215 220
Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго СЬи АЬа АЬа СЬу СЬу Рго Зег
225 230 235 240
УаЬ РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЕ Не Зег Агд
245 250 255
ТНг Рго СЬи УаЬ ТЬг Суз УаЬ УаЬ УаЬ Азр УаЬ Зег СЬп СЬи Азр Рго
260 265 270
СЬи УаЬ СЬп РЬе АЗП Тгр Туг УаЬ Азр СЬу УаЬ СЬи УаЬ Ηί з АЗП АЬа
275 280 285
Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд 61и 61и СЬп РЬе Азп Зег ТНг Туг Агд УаЬ УаЬ
290 295 300
Зег УаЬ Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи НЬз СЬп Азр Тгр Ьеи Азп СЬу Ьуз СЬи Туг
305 310 315 320
Ьуз Суз Ьуз УаЬ Зег Азп Ьуз СЬу Ьеи Рго Зег Зег Не СЬи Ьуз ТЬг
325 330 335
11е Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи Рго СЬп УаЬ Туг ТЬг Ьеи
340 345 350
Рго Рго Зег СЬп СЬи 61и МеЕ ТЬг Ьуз Азп СЬп УаЬ Зег Ьеи ТЬг Суз
355 360 365
Ьеи УаЬ Ьуз СЬу РЬе Туг Рго Зег Азр Не АЬа УаЬ СЬи Тгр СЬи Зег
370 375 380
АЗП СЬу СЬп Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЬ Ьеи Азр
385 390 395 400
Зег Азр СЬу Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Бег Агд Ьеи ТЬг УаЬ Азр Ьуз Зег
405 410 415
Агд Тгр СЬп СЬи СЬу Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег УаЬ МеЕ НЬз 61и АЬа
420 425 430
Ьеи Ηίε Азп НЬз Туг ТНг 61 п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи 61 у Ьуз
435 440 445
<210> 133 <211> 448
- 106 022832
<212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вся тяжелая цепь кандидата 15-4
<400> 133
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у АЬа С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у СЬи
1 5 10 15
Зег Ьеи Ьуз 11е Зег Су5 Ьуз СЬу Зег СЬу Туг Зег РНе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Тгр Уа1 СЬу Тгр Уа1 Агд С1п Меб Рго С1у Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр МеД
35 40 45
С1у РНе 11е Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг Зег Рго Зег РЬе
50 55 60
61п С1у НЬз Уа1 ТНг 11е Зег АЬа Азр Ьуз Зег Не Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз А1а Зег Азр ТЬг АЬа МеД Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд С1и Ьеи Туг С1п СЬу Туг МеД Азр ТЬг РЬе Азр Зег Тгр СЬу
100 105 110
С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег АЬа Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег
115 120 125
Уа1 РЬе Рго Ьеи АЬа Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег С1и Зег ТЬг АЬа
130 135 140
А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1
145 150 155 160
Зег Тгр Азп Зег 61у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 НЬз ТЬг РЬе Рго АЬа
165 170 175
Уа1 Ьеи С1п Зег Зег 61у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа! ТЬг УаЬ
180 185 190
Рго Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЬг Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр Βίβ
195 200 205
Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд Уа1 СЬи Зег Ьуз Туг СЬу
210 215 220
Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго АЬа Рго С1и А1а АЬа СЬу СЬу Рго Зег
225 230 235 240
Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеД 11е Зег Агд
245 250 255
ТЬг Рго СЬи Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег СЬп С1и Азр Рго
260 265 270
С1и Уа1 СЬп РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр СЬу Уа1 С1и Уа1 НЬз Азп А1а
275 280 285
Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд СЬи СЬи СЬп РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1
290 295 300
Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи НЬз С1п Азр Тгр Ьеи Азп СЬу Ьуз С1и Туг
305 310 315 320
Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз С1у Ьеи Рго Зег Зег Не С1и Ьуз ТЬг
325 330 335
11е Зег Ьуз А1а Ьуз С1у Е1п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи
340 345 350
Рго Рго Зег СЬп СЬи С1и МеД ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз
355 360 365
Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 СЬи Тгр 61и Зег
370 375 380
Азп С1у СЬп Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЬ Ьеи Азр
385 390 395 400
Зег Азр 61у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Агд Ьеи ТЬг УаЬ Азр Ьуз Зег
405 410 415
Агд Тгр СЬп 61и С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеД НЬз С1и АЬа
420 425 430
Ьеи НЬз Азп Н1з Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи СЬу Ьуз
435 440 445
- 107 022832 <210> 134 <2Η> 448 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вся тяжелая цепь кандидата 15-5 <400> 134
Уа1 СХп ьеи Уа1 61п 5 Зег 61у А1а 61и 10 Уа1 Ьуз Туг Зег Ьуз РЬе Ьеи 45 Рго 61у 61и
1 Зег Тгр Ьеи Ьуз ТЬг 30 С1и 15 Азп Тгр Туг Меб
Не 20 Тгр Зег Уа1 Суз Агд Ьуз 61у Зег 61у 25
61п МеГ 40
11е Зег 35 Рго 61у Ьуз 61у
С1у Агд Не Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг Зег Рго Зег РЬе
50 55 60
61п С1у Шз Уа1 ТЬг Не Зег А1а Азр Ьуз Зег Не Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Ьеи 61п Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз А1а Зег Азр ТЬг А1а Меб Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд 51и Ьеи Туг 61п 61у Туг Меб Азр ТЬг РЬе Азр Зег Тгр 61 у
100 105 110
61п 61у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТНг Ьуз 61у Рго Зег
115 120 125
Уа1 РНе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег 61и Зег ТЬг А1а
130 135 140
А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго 61и Рго Уа1 ТЬг Уа1
145 150 155 160
Зег Тгр Азп Зег 61у А1а Ьеи ТЬг Зег 61у Уа1 ΗΪ3 ТЬг РЬе Рго А1а
165 170 175
Уа1 Ьеи 61п Зег Зег 61у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1
180 185 190
Рго Зег Зег Зег Ьеи 61у ТЬг Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр Нгз
195 200 205
Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд Уа1 61и Зег Ьуз Туг 61 у
210 215 220
Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго 61и А1а А1а 61у 61у Рго Зег
225 230 235 240
Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеГ Не Зег Агд
245 250 255
ТЬг Рго 61и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег 61п 61и Азр Рго
260 265 270
С1и Уа1 С1п РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 61и Уа1 ΗΪ3 Азп А1а
275 280 285
Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд 61 и 61и 61п РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1
290 295 300
Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Н1з 61п Азр Тгр Ьеи Азп 61у Ьуз 61и Туг
305 310 315 320
Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз С1у Ьеи Рго Зег Зег Не 61и Ьуз ТЬг
325 330 335
Не Зег Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд 61и Рго 61п Уа1 Туг ТЬг Ьеи
340 345 350
Рго Рго Зег 61п 61и 61и Мер ТЬг Ьуз Азп 61п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз
355 360 365
Ьеи Уа1 Ьуз 61 у РЬе Туг Рго Зег Азр Не А1а Уа1 61и Тгр 61и Зег
370 375 380
Азп 61у С1п Рго 61и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр
385 390 395 400
Зег Азр 61у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Агд Ьеи ТНг Уа1 Азр Ьуз Зег
405 410 415
- 108
Агд Тгр С1п С1и 420 СЬу Азп Уа1 РНе Зег Суз Зег 425 Уа1 МеС ΗΪ3 430 С1и АЬа
Ьеи Ηίε Азп Шз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи СЬу Ьуз
435 440 445
<210> 135 <211> 448 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вся тяжелая цепь кандидата 15-6
<400> 135
61и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег СЬу АЬа С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у 61и
1 5 10 15
Зег Ьеи Ьуз 11е Зег Суз Ьуз 61у Зег С1у Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Тгр 11е Зег Тгр Уа1 Агд СЬп МеЬ Рго СЬу Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр МеЬ
35 40 45
С1у РНе 11е Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТНг Азп Туг А1а Рго Зег РНе
50 55 60
С1п С1у 61п Уа1 ТЬг 11е Зег АЬа Азр Ьуз Зег 11е Зег ТНг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз А1а Зег Азр ТНг А1а МеЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд С1п Ьеи Туг 61п С1у Туг МеЬ Азр ТНг РНе Азр Зег Тгр 61у
100 105 110
С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег
115 120 125
Уа1 РЬе Рго Ьеи АЬа Рго Суз Зег Агд Зег ТНг Зег С1и Зег ТЬг А1а
130 135 140
АЬа Ьеи С1у Суз Ьеи 7=1 Ьуз Азр Туг РНе Рго 61и Рго Уа1 ТНг Уа1
145 150 155 160
Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТНг Зег С1у Уа1 Н1з ТЬг РНе Рго А1а
165 170 175
Уа1 Ьеи С1п Зег Зег 61у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТНг Уа1
180 185 190
Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у ТНг Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп 7а1 Азр Шз
195 200 205
Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд Уа1 С1и Зег Ьуз Туг С1у
210 215 220
Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и А1а АЬа С1у С1у Рго Зег
225 230 235 240
Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеН 11е Зег Агд
245 250 255
ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз 7а1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег 61п 61и Азр Рго
260 265 270
С1и Уа1 С1п РЬе Азп Тгр Туг 7а1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 Н1з Азп А1а
275 280 285
Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и С1п РНе Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1
290 295 300
Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Шз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг
305 310 315 320
Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз С1у Ьеи Рго Зег Зег 11е С1и Ьуз ТНг
325 330 335
11е Зег Ьуз А1а Ьуз С1у 61п Рго Агд С1и Рго С1п 7а1 Туг ТНг Ьеи
340 345 350
Рго Рго Зег 61п 61и С1и МеЬ ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи ТНг Суз
355 360 365
Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег
370 375 380
- 109 022832
АЗП С1у С1п Рго 61и Азп Азп Туг Ьуз ТНг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр
385 390 395 400
5ег Азр С1у Зег РНе РНе Ьеи Туг Зег Агд Ьеи ТНг УаЬ Азр Ьуз Зег
405 410 415
Агд Тгр С1п 51и й1у Азп УаЬ РНе Зег Суз Зег Уа1 МеЛ Ηί3 С1и А1а
420 425 430
Ьеи ΗΪ3 Азп Нгз Туг ТЬг 61п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи С1у Ьуз
435 440 445
<210> 136 <211> 40 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Праймер <400> 136 ссЛЛасссаЛ ааЛсаасЛсд ададаЛЛасс адссдссаас 40 <210> 137 <211> 49 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Праймер <400> 137 саададсЛЛс ЛаЛЛаЛсааа сааЛдадаЛЛ саадсдсЛаа ааадЛдаад 49 <210> 138 <211> 45 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<22 3> Праймер <400> 138 сслласасал аслсаассла ассдадааЛа аааЛсЛсааа ааЛад 45 <210> 139 <211> 47 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Праймер <400> 139 даааЛсЛаЛс ЛЛЛссЛасаа сдаддсссЛд садслдасла ддаасЛс 47 <210> 140 <211> 58 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Праймер <400> 140 дссллсаасд аслдалдслс даддаддлдд сссллдадаа лдлддаладс ЛсЛссЛЛс 58
- 110 022832 <210> 141 <211> 39 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Праймер <400> 141 дЪассЪдсад сЪдЪсЪасда дсЪссЪЪЪдс сЪЪддЪссс 39 <210> 142 <211> 33 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Праймер <400> 142 дссЪддадЪд даЪдддссдд аЪсдасссса дед 33 <210> 143 <211> 33 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Праймер <400> 143 сдсЪддддЪс даЪссддссс аъссасъсса ддс 33 <210> 144 <211> 20 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Праймер <400> 144 ададдЪаасЪ сссдЪЬдсдд 20 <210> 145 <211> 38 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Праймер <400> 145 дсаъссддсд сасссадссд аЪссадЪадЪ Ъддсдаад 38 <210> 146 <211> 20 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Праймер
- 111 022832 <400> 146 ададдЪаасЪ сссдЪЪдсдд 20 <210> 147 <211> 38 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220 <223> Праймер <400 147 дсаЪсЪддсд сасссадсЪд аЪссадЪадЪ ЪддЪдаад 38 <210 148 <211> 47 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220 <223> Праймер <400 148 сдсСдаЪддЪ сасдЪддссс Ъддаадсъад ддсЪдЪадСС ддЪдЪад 47 <210 149 <211> 38 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<22 3> Праймер <400> 149 сЪЪсассаас ЬасЪддаЪса дсЪдддЪдсд ссадаЪдс 38 <210 150 <211> 40 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220 <223> Праймер <400 150 сдссаЪдЪас ЪасЪдсдссс дссадсЪдЪа ссадддсЬас 40 <210 151 <211> 40 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Праймер <400> 151 дЪадсссЪдд ъасадсъддс дддсдсадъа дЪасаЪддсд 40 <210 152 <211> 40 <212> ДНК <213> Ното зарЬепз <400> 152
- 112 022832 дссадссада дсалсадсад сЕассЬддсс Ьддсассадс 40 <210> 153 <211> 40 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Праймер <400> 153 дсьддьасса ддссаддьад сьдсьдаьдс ЬсЬддсЬддс 40 <210> 154 <211> 43 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Праймер <400> 154 сдддсЬЬсЬд сЬддЬассад ЬЬсаддЬадс ЬдсЬдаЬдсЬ сЬд 43 <210> 155 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вся длина легкой цепи кандидата 14 <400> 155
Αερ 11е 61п МеЬ ТЬг 61п Зег Рго Зег Зег 10 Ьеи Зег А1а Зег ν3ι 15 61у
1 5
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зел 61п Зег 11е 61у Ьеи Туг
20 25 30
Ьеи А1а Тгр Туг С1п 61п Ьуз Рго 61у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг А1а А1а Зег Зег Ьеи С1п Зег 61у Уа1 Рго Зег Агд РНе Бег 61у
50 55 60
Зег С1у Зег 61у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи 61п Рго
65 70 75 80
61и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз 61п 61п А1а 61и ТЬг Уа1 Зег Рго
85 90 95
ТЬг РЬе 61 у 61п 61 у ТЬг Ьуз Уа1 61и 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а А1а
100 105 110
Рго Зег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр С1и С1п Ьеи Ьуз Зег 61у
115 120 125
ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд С1и А1а
130 135 140
Ьуз Уа1 61п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи 61п Зег 61 у Азп Зег 61п
145 150 155 160
61и Бег Уа1 ТЬг 61и 61п АЗр Бег Ьуз Азр Зег ТЬг туг Зег Ьеи Зег
165 170 175
Зег ТЬг Ьеи ТНг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг 61и Ьуз Ηίδ Ьуз Ча1 Туг
180 185 190
А1а Суз 61и Уа1 ТЬг ΗΪ3 61п 61у Ьеи Зег Зег Рго νβΐ ТЬг Ьуз Зег
195 200 205
РНе Азп Агд С1у С1и Суз 210
- 113 022832 <210> 156 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вся длина легкой цепи кандидатов 15, 15-1, 15-2, 15-3, 15-4, 15-5, 15-6, 15-9 <400> 156
Азр 1 Ые СЬп Меь ТНг 5 СЬп Зег Рго Зег Зег Ъеи Зег АЬа Зег ЧаЬ СЬу
10 15
Азр Агд ЧаЬ ТЬг 1Ье ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег 11е СЬу Ъеи Туг
20 25 30
Ъеи АЬа Тгр Туг СЬп СЬп Ъуз Рго СЬу Ъуз А1а Рго ъуз Ъеи Ъеи Не
35 40 45
Туг АЬа АЬа Зег Зег Ъеи СЬп Зег СЬу ЧаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг Ъеи ТЬг 11е 5ег Зег Ъеи СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа ТНг Туг Туг Суз СЬп СЬп СЬу Азп ТЬг Ъеи Зег Туг
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу СЬп СЬу ТЬг Ъуз ЧаЬ СЬи Ые Ъуз Агд ТЬг ЧаЬ АЬа АЬа
100 105 110
Рго Зег ЧаЬ РЬе Ые РЬе Рго Рго Зег Азр СЬи СЬп Ъеи Ъуз Зег СЬу
115 120 125
ТЬг АЬа Зег ЧаЬ ЧаЬ Суз Ъеи Ъеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд СЬи АЬа
130 135 140
Ъуз ЧаЬ СЬп Тгр Ъуз ЧаЬ Азр Азп АЬа Ъеи СЬп Зег СЬу Азп Зег С1п
145 150 155 160
С1и Зег ЧаЬ ТЬг СЬи СЬп Азр Зег Ъуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ъеи Зег
165 170 175
Зег ТЬг Ъеи ТЬг Ъеи Зег Ъуз АЬа Азр Туг СЬи Ъуз НЬз Ъуз ЧаЬ Туг
180 185 190
АЬа Суз СЬи ЧаЬ ТЬг НЬз СЬп СЬу Ъеи Зег Зег Рго Ча1 ТЬг Ъуз Зег
195 200 205
РЬе Азп Агд СЬу СЬи Суз
210
<2Х0> <211> <212> <213> 157 214 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220>
<223> Вся длина легкой цепи кандидата 15-7
<400> 157
Азр Ые СЬп МеЬ ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег Ъеи Зег АЬа Зег ЧаЬ СЬу
1 5 10 15
Азр Агд ЧаЬ ТЬг Ые ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег Зег Туг
20 25 30
Ъеи АЬа Тгр Туг СЬп СЬп Ъуз Рго СЬу Ъуз АЬа Рго Ъуз Ъеи Ъеи ХЬе
35 40 45
Туг АЬа АЬа Зег Зег Ъеи СЬп Зег СЬу ЧаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг Ъеи ТЬг Ые Зег Зег Ъеи СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа ТЬг Туг Туг Суз СЬп СЬп СЬу Азп ТЬг Ъеи Зег Туг
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу СЬп СЬу ТЬг Ъуз Ча1 СЬи 11е Ъуз Агд ТЬг Ча! АЬа АЬа
- 114 022832
Рго Зег Уа1 115 100 РЬе 105 110 Ьуз Зег С1у
Х1е РЬе Рго Рго Зег Азр СЬи СЬп Ьеи
120 125
ТНг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд СЬи А1а
130 135 140
Ьуз Уа1 С1п Тгр Ьуз УаЬ Азр Азп А1а Ьеи СЬп Зег С1у Азп Зег СЬп
145 150 155 160
С1и Зег Уа1 ТЬг С1и СЬп Азр Зег Ьуз АЗР Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег
165 170 175
Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз АЬа Азр Туг СЬи Ьуз ΗΪ3 Ьуз УаЬ Туг
180 185 190
А1а Суз С1и Уа1 ТЬг Нгз СЬп С1у Ьеи Зег Зег Рго УаЬ ТЬг Ьуз Зег
195 200 205
РЬе Азп Агд С1у С1и Суз
210
<210> 158 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<22 3> Вся длина легкой цепи кандидата 15-8
<400> 158
Азр 11е С1п Мер ТНг СЬп Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег АЬа Зег УаЬ С1у
1 5 10 15
Азр Агд УаЬ ТЬг 11е ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег 11е СЬу Ьеи Туг
20 25 30
Ьеи Азп Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго С1у Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг АЬа АЬа Зег Зег Ьеи СЬп Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег ОЬу Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи ОЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа ТЬг Туг Туг Суз СЬп СЬп С1у Азп ТЬг Ьеи Зег Туг
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи 11е Ьуз Агд ТНг УаЬ АЬа АЬа
100 105 110
Рго Зег УаЬ РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр 61и С1п Ьеи Ьуз Зег С1у
115 120 125
ТНг АЬа Зег УаЬ УаЬ Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд С1и АЬа
130 135 140
Ьуз УаЬ СЬп Тгр Ьуз УаЬ Азр Азп АЬа Ьеи СЬп Зег С1у Азп Зег СЬп
145 150 155 160
СЬи Зег УаЬ ТЬг СЬи С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег
165 170 175
Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг С1и Ьуз Ηίε Ьуз Уа1 Туг
180 185 190
АЬа Суз СЬи УаЬ ТЬг НЬз С1п 61у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег
195 200 205
РЬе Азп Агд 61у С1и Суз 210
<210> <211> <212> <213> 159 121 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220>
<223> Кандидат 15-9 УН
- 115 <400> 159
С1и 7а 1 61п Ъеи 7а1 61п Зег 61у АЪа 61и Уа1 10 Ъуз Ъуз Рго СЪу 61и 15
1 5
Зег Ъеи Ъуз 11е Бег Суз Ъуз С1у Зег 61 у Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Тгр 11е Зег Тгр Уа1 Агд С1п МеЪ Рго СЪу Ъуз 61у Ъеи СЪи Тгр МеЪ
35 40 45
СЪу Агд Пе Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг Зег Рго Зег РЬе
50 55 60
С1п С1у Шз Уа1 ТЬг Пе Зег АЪа Азр Ъуз Зег Пе Зег ТЬг АЪа Туг
65 70 75 80
Ъеи 61п Тгр Зег Зег Ъеи ъуз АЪа Зег Азр ТНг АЪа МеЪ Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд С1п Ъеи Туг С1п СХу Туг МеЬ Азр ТЬг РЬе Азр 5ег Тгр 61у
100 105 110
С1п 61у ТЬг Ъеи Уа! ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 160 <211> 448 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вся тяжелая цепь кандидата 15- -9
<400> 160
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 СЪп Зег СЪу АЪа 61 и Уа1 Ьуз Ьуз Рго СЪу СЪи
1 5 10 15
Зег Ъеи ъуз 11е Зег Суз Ьуз СЪу Зег СЪу туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Тгр Пе Зег Тгр Уа1 Агд СЪп Ме! Рго СЪу Ьуз СЪу Ьеи СЪи Тгр МеЬ
35 40 45
СЪу Агд Пе Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг Зег Рго Зег РЬе
50 55 60
61п СЪу НЪз Уа1 ТЬг Пе Бег АЪа Азр Ьуз Зег 11е Зег ТЬг АЪа Туг
65 70 75 80
Ъеи С1п Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз АЪа Бег Азр ТЬг АЪа МеГ Туг Туг Суз
85 90 95
АЪа Агд С1п Ьеи Туг 61п 61 у Туг меь Азр ТЬг РЬе Азр Зег тгр 61у
100 105 110
С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег АЪа Зег ТЬг Ьуз СЪу Рго Зег
115 120 125
Уа1 РЬе Рго Ьеи АЪа Рго Суз Зег Агд Зег ТНг Зег СЪи Зег ТЬг АЪа
130 135 140
АЪа Ъеи 61у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго 61и Рго Уа1 ТЬг Уа1
145 150 155 160
Бег Тгр Азп Зег С1у АЪа Ьеи ТЬг Бег С1у Уа1 ΗΪΞ ТЬг РЬе Рго АЪа
165 170 175
Уа1 Ъеи С1п Зег Зег СЪу Ъеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 νβΐ ТЬг Уа1
180 185 190
Рго Зег Бег Зег ьеи СЪу ТЬг Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Ча1 Азр НЪз
195 200 205
Ъуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз 7а1 Азр Ьуз Агд Уа1 СЪи Зег Ьуз Туг С1у
210 215 220
Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго АЪа Рго С1и АЪа АЪа СЪу СЪу Рго Зег
225 230 235 240
Уа1 РЬе Ъеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЪ Пе Зег Агд
245 250 255
ТНг Рго СЪи Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег 61п СЪи Азр Рго
260 265 270
- 116 022832
Е1и Уа1 С1п РНе Азп Тгр Туг Уа1 280 Азр О1у Уа1 Е1и Уа1 285 ΗΪ3 Азп А1а
275
Ьуз ТНг Ьуз Рго Агд Е1и С1и С1п РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1
290 295 300
Зег Уа1 Ьей ТНг Уа1 Ьей НХЕ еьп Азр Тгр Ьей Азп Е1у Ьуз Е1и Туг
305 310 315 320
Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз Е1у Ьей Рго Зег Зег 11е Н1и Ьуз ТЬг
325 330 335
11е Зег Ьуз А1а Ьуз е1у С1п Рго Агд 61и Рго Е1п Уа1 Туг ТЬг Ьей
340 345 350
Рго Рго Зег 61п 61и Е1и МеС ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьей ТЬг Суз
355 360 365
Ьей Уа1 Ьуз Е1у РНе Туг Рго Зег Азр Не А1а Уа1 Е1и Тгр СЬи Зег
370 375 330
Азп 01у С1п Рго Е1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьей Азр
385 390 395 400
Зег Азр Е1у Зег РЬе РЬе Ьей Тух Зег Агд Ьей ТЬг УаЬ Азр Ьуз Зег
405 410 415
Агд Тгр О1п Е1и Е1у Азп Уа1 РЬе 5ег Суз Зег Уа1 МеС Ηΐε 61и А1а
420 425 430
Ьей ΗΪ3 Азп Н1з Туг ТЬг 61п Ьуз Зег ьей Зег Ьей Зег Ьей С1у Ьуз
435 440 445
<210> 161 <211> 2718 <212> ДНК <213> Миз тизси1из <400> 161 аЪдааадддЪ дЪЪссЪеЪЪа ЪеЪааЪдСас ЪссЪЪЪдддд дасЪЪЪЪдЪс ссЪаЪддаЪЪ 60 сЪЪсЪддЬдЪ сЪЪосасааа ссааЪдсась дЪдадаЪаса асдЪадсЪда сЪдсадссаЪ 120
ЬЬдаадсЪаа сасасаЪасс ЪдаЪдаЪсЪЪ сссЪсЪааса ъаасадЪдЪЪ дааЪсЪЪасЪ 180 сасаассаас ЪсадаадаЬЬ ассассЪасс аасЪЪЪасаа даЪасадсса асЪЪдсгаСс 240
ЬЪддаЪдсад даЪЪЪаасЪс саЪЪЪсаааа сЪддадссад аасЪдЪдсса ааЪасЪсссЪ 300
СЪдЪЪдааад ъаъъдаассъ дсаасабааъ дадсСсСсЪс адаъъъсъда ЪсааассЪЪЪ 360 дЪсЪЪсЪдса сдаассЪдас адаасЪсдаЪ сЪааЪдЪсЬа асЪсааЪаса сааааьЪааа 420 адсаасссъъ ъсааааасса даадааЪсЪа аЪсаааСЪад аъъъдъсъса ЪааЪддСЪЪа 480
ЬсаЪсЪасаа адЬЪдддаас дддддЪссаа сСддадаасс СссаадаасЪ дсСсССадса 540 аааааъаааа сссССдсдСС дсдаадСдаа даасССдадС ССсССддсаа ССсССсСССа 600 сдааадССдд асССдСсаЬс аааСссасСЪ ааададССсС ссссддддСд СЪСссадаса 660 аъСддсаадС СаССсдсссС ссСсССдаас аасдсссаас Сдаассссса ссСсасадад 720 аадсЪЪСдсС дддаасСЬСс ааасасаадс аСссадааСс СсСсСсСддс Саасаассад 780 сЪдсСддсса ссадсдадад сасСССсСсс дддесдаадс ддасаааСсС сасссадсСс 840 даСсЬЪСссС асаасаассС ссаСдаСдСс ддсаасддСС ссССсСссЪа СсСсссаадс 900 съдаддСаСс СдСсСсСдда дСасаасаас аСасадсдСс СдСссссСсд сСсСССССаС 960 ддасЬсСсса ассСдаддСа ссСдадСССд аадсдадсаС СЬасСаадса аадСдСССса 1020 сССдсЪСсас аСсссаасаС СдасдаСССС СссСССсааС ддССааааСа СССддааъаС 1080 сСсаасаСдд аСдасааСаа СаССссаадС ассаааадса аСассССсас дддассддсд 1140 адСсСдаадС ассСаадСсС ССссаааасъ гСсасаадсС сдсааасССС аасаааЪдаа 1200 асаССЪдСдС сасССдсСса ессСсссССд сСсасСсЪса асССаасдаа аааСсасаСс 1260
СсаааааСад саааЬддЬас ССЬсСсССдд ССаддссаас ъсаддаСасС СдаСсСсддс 1320 сСЬааЪдааа ССдаасаааа асСсадсддс саддааСдда даддСсСдад аааСаЪаССС 1380 дадаСсСасс СаСссСаСаа саааСассСс саасЪдСсСа ссадССссСС СдсаССддСс 1440 сссадссССс ааадасСдаЬ дсСсаддадд дСддсссССа ааааЬдСдда СаСсСссссС 1500
ЪсассССссс дсссСсССсд СаасССдасс аССсЪддасС саадсаасаа саасаСадсс 1560 аасаСаааСд аддасССдсС ддадддСсСС дадааСсСад аааСссСдда ССССсадсас 1620 ааСаасССад ссаддсьссд дааасдсдса аассссддСд дСсссдССаа СССссСдаад 1680 дддсСдСсСс ассСссасаС сССдааСЪСа дадСссаасд дсСЬадаСда ааСсссадСс 1740 ддддССССса адаасССаСС сдаасСааад адсаСсааСс СаддасСдаа СаасССааас 1800 ааасССдаас саССсаЬССЬ ЬдаСдассад асаСсСсСаа ддСсаседаа ееСесадаад 1860 аассЪсаЬаа саЬсЪдЪЪда дааддаЬдСС ССсдддссдс сССССсаааа ссСдаасадС 1920
СЬадаСаСдс дсССсааСсс дССсдасСдс асдЬдСдааа дСаЪССссСд дСССдССаас 1980
СддаЪсаасс адасссасас СааСаСсСсС дадсЬдСсса сСсасСассЬ сСдСаасасС 2040
117 022832 есасаСсаСС дсссссСССд дСасСдсСса сддаССсССд аСааССсаСд саадассааС сССдаадсаа саСССаССаа аССдадсааа сСааассаСд ссадССсада сддааССсад аССаСддсСС аасСссСсСС
ССсасаСсда дСССсаадда сссаСааада сСсСсаааСС
ССдССааСад аадаеесСеС аСсСддаССс сасСсСдССС аадааеддас сасаССаа сссссСдаад саСааСсадс дддсСддадд ааСадасаса сададасСдд
ССдссСадаа саСсаааада дСдсадаада ааССаСасСд дсдаададда аааСдссССС сССССсдаСа ассадСаСдс аСоСоссссС саддсСдадс дСсСдддаас дааадддасС адссдааааа
ССсааддСас аСССССсСсс аСдСССаааС саСсаСаааС саСсаСссСд
СссСддсссс асСддааСдС адСССдааСа ассьсСсссс
ССдаадсадд
СсаССССсдС аСсасдсадС адааСаССсс сСсасСдсаС
СдсаадСадс
Сааадасадс
СаСасССдСд
ССсадСдсаС
СасадссСас аасддаадаа сдСссССдда
СаСсасасас
СсадсаадсС адаССаСааа сССдаасСдд асССддаСсС
2100
2160
2220
2280
2340
2400
2460
2520
2580
2640
2700
271В <210> 162 <211> 905 <212> БЕЛОК <213> Миз шизси1из <400> 162
Мес Ьуз 61у Суз 1 Зег Ьеи Тгр Не Зег Зег Туг Ьеи 5 МеС Туг Зег РЬе С1у 10 Зег ТЬг Азп С1п Суз 25 СЬу ТЬг 30 Пе Азп Ьеи 15 Уа1 Рго С1п ьеи Агд Азр Ьеи
Ьеи Ьеи Уа1 Зег ТЬг 55 Зег Н13 40 Уа1
Туг Азп Уа1 35 20 А1а Зег
Азр Азп Суз Не Ьеи Ьеи Ьуз Ьеи ТЬг ТЬг 60 Шз 45 Н1з
Азр Ьеи Рго 50 Азп Ьеи
Агд Агд Ьеи Рго Рго ТЬг Азп РЬе ТЬг Агд Туг Зег С1п Ьеи АЬа Пе
65 70 75 80
Ьеи Азр А1а С1у РЬе Азп Зег Не Зег Ьуз Ьеи ст Рго С1и Ьеи Суз
85 90 95
С1п Не Ьеи Рго Ьеи Ьеи Ьуз Уа1 Ьеи Азп Ьеи ст Н1з Азп СЬи Ьеи
100 105 ПО
Зег С1п Не Зег Азр СЬп ТЬг РЬе Уа1 РЬе Суз ТЬг Азп Ьеи ТЬг С1и
115 120 125
Ьеи Азр Ьеи Мес Зег Азп Зег 11е Н13 Ьуз 11е Ьуз Зег Азп Рго РЬе
130 135 140
Ьуз Азп С1п Ьуз Азп Ьеи Не Ьуз Ьеи Азр Ьеи Зег Шз Азп С1у Ьеи
145 150 155 160
Зег Зег ТЬг Ьуз Ьеи СЬу ТЬг С1у Уа1 С1п Ьеи С1и Азп Ьеи С1п ст
165 170 175
Ьеи Ьеи Ьеи А1а Ьуз Азп Ьуз Не Ьеи А1а Ьеи Агд Зег СЬи С1и Ьеи
180 185 190
С1и РЬе Ьеи СЬу Азп Зег Зег Ьеи Агд Ьуз Ьеи Азр Ьеи Зег Зег Азп
195 200 205
Рго Ьеи Ьуз С1и РЬе Зег Рго С1у Суз РЬе ет ТЬг Пе СЬу Ьуз Ьеи
210 215 220
РЬе А1а Ьеи Ьеи Ьеи Азп Аэп А1а ст Ьеи А5П Рго Шз Ьеи ТЬг 61и
225 230 235 240
Ьуз Ьеи суз тгр СЬи Ьеи Зег Азп ТЬг Зег Не ст Азп Ьеи Зег Ьеи
245 250 255
А1а Азп Азп С1п Ьеи Ьеи А1а ТЬг Зег 61и Зег ТЬг РЬе Зег С1у Ьеи
260 265 270
Ьуз Тгр ТЬг Азп Ьеи ТЬг С1п Ьеи АЗр Ьеи Зег Туг Азп Азп ьеи Шз
275 280 285
Азр Уа1 С1у Азп 61у Зег РЬе Зег Туг Ьеи Рго Зег Ьеи Агд Туг Ьеи
290 295 300
Зег Ьеи С1и Туг Азп Азп Не С1п Агд Ьеи Зег Рго Агд Зег РЬе Туг
305 310 315 320
61у Ьеи Зег Азп Ьеи Агд Туг Ьеи Зег Ьеи Ьуз Агд А1а РЬе ТЬг Ьуз
325 330 335
С1п Зег Уа1 Зег Ьеи А1а Зег Н1з Рго Азп Пе Азр Азр РЬе Зег РЬе
340 345 350
- 118 022832
С1п Тгр Ьеи Ьуз Туг Ьеи С1и Туг Ьеи Азп Мер Азр Азр Азп Азп Ые
355 360 365
Рго Зег ТНг Ьуз Зег Азп ТЬг РЬе ТЬг С1у Ьеи Уа1 Зег Ьеи Ьуз Туг
370 375 380
Ьеи Зег Ьеи Бег Ьуз ТЬг РЬе ТЬг Зег Ьеи СЬп ТЬг Ьеи ТЬг Азп СЬи
385 390 395 400
ТЬг РЬе Уа1 Зег Ьеи АЬа НЬз Зег Рго Ьеи Ьеи ТЬг Ьеи Азп Ьеи ТЬг
405 410 415
Ьуз Азп НЬз Ые Зег Ьуз Ые АЬа Азп С1у ТЬг РЬе Зег Тгр Ьеи С1у
420 425 430
61п Ьеи Агд Ые Ьеи Азр Ьеи С1у Ьеи Азп 61и Ые С1и С1п Ьуз Ьеи
435 440 445
Зег СЬу С1п С1и Тгр Агд СЬу Ьеи Агд Азп Ые РЬе СЬи Ые Туг Ьеи
450 455 460
Зег Туг Азп Ьуз Туг Ьеи СЬп Ьеи Зег ТЬг Зег Зег РЬе А1а Ьеи Уа1
465 470 475 480
Рго Зег Ьеи С1п Агд Ьеи Мер Ьеи Агд Агд Уа1 А1а Ьеи Ьуз Азп Уа1
485 490 495
Азр Ые Зег Рго Зег Рго РЬе Агд Рго Ьеи Агд Азп Ьеи ТЬг Ые Ьеи
500 505 510
Азр Ьеи Зег Азп Азп Азп Ые А1а Азп Пе Азп СЬи Азр Ьеи Ьеи СЬи
515 520 525
61у Ьеи 61и АЗП Ьеи СЬи Ые Ьеи Азр РЬе С1п НЬз АЗП Азп ьеи А1а
530 535 540
Агд Ьеи Тгр Ьуз Агд АЬа Азп Рго СЬу СЬу Рго Уа1 Азп РЬе Ьеи Ьуз
545 550 555 560
СЬу Ьеи Зег НЬз Ьеи НЬз Ые Ьеи АЗП Ьеи СЬи Зег Азп С1у Ьеи Азр
565 570 575
СЬи Ые Рго УаЬ С1у Уа1 РЬе Ьуз Азп Ьеи РЬе С1и Ьеи Ьуз Зег Ые
580 585 590
Азп Ьеи С1у Ьеи Азп Азп Ьеи Азп ьуз Ьеи 61и Рго РЬе Ые РЬе Азр
595 600 605
Азр СЬп ТЬг Зег Ьеи Агд Зег Ьеи Азп Ьеи СЬп Ьуз Азп Ьеи Ые ТЬг
610 615 620
Зег Уа1 С1и Ьуз Азр Уа1 РЬе С1у Рго Рго РЬе С1п Азп Ьеи Азп Зег
625 630 635 640
Ьеи Азр МеР Агд РЬе Азп Рго РЬе Азр Суз ТЬг Суз 61и Зег Ые Зег
645 650 655
Тгр РЬе Уа1 Азп Тгр 11е Азп С1п ТЬг НЬз ТЬг Азп Ые Зег 61и Ьеи
660 665 670
Зег ТЬг НЬз Туг Ьеи Суз Азп ТЫ Рго НЬз ньз Туг Туг 61у РЬе Рго
675 680 685
Ьеи Ьуз Ьеи РЬе Азр ТЬг Зег Зег Суз Ьуз Азр Зег АЬа Рго РЬе СЬи
690 695 700
Ьеи Ьеи РЬе Ые Ые Зег ТЬг Зег МеР Ьеи Ьеи Уа1 РЬе Ые Ьеи Уа1
705 710 715 720
УаЬ Ьеи Ьеи Ые НЬз Ые СЬи С1у Тгр Агд Ые Зег РЬе Туг Тгр Азп
725 730 735
УаЬ Зег Уа1 НЬз Агд Ые Ьеи С1у РЬе Ьуз 61и Ые Азр ТЬг С1п А1а
740 745 750
СЬи СЬп РЬе СЬи Туг ТЬг А1а Туг Ые Ые НЬз А1а НЬз Ьуз Азр Агд
755 760 765
Азр Тгр Уа1 Тгр С1и НЬз РЬе Зег Рго Мер С1и С1и 61п Азр Θΐη Зег
770 775 780
Ьеи Ьуз РЬе Суз Ьеи С1и СЬи Агд Азр РЬе СЬи А1а СЬу Уа1 Ьеи С1у
785 790 795 800
Ьеи 31 и А1а Ые Уа1 Азп Зег Ые Ьуз Агд Зег Агд Ьуз 11е Ые РЬе
805 810 815
УаЬ 11е ТЬг НЬз НЬз Ьеи Ьеи Ьуз Азр Рго Ьеи Суз Агд Агд РЬе Ьуз
820 825 830
Уа1 НЬз НЬз А1а Уа1 СЬп С1п АЬа Ые 61 и СЬп Азп Ьеи Азр Зег Ые
335 840 845
Ые Ьеи Ые РЬе Ьеи СЬп Азп Ые Рго Азр Туг Ьуз Ьеи Азп НЬз А1а
850 855 860
- 119 022832
Ьеи Суз Ьеи Агд Агд 61 у МеС РНе Ьуз Зег Нгз Суз 11е Ьеи Азп Тгр
865 870 875 880
Рго Уа1 С1п Ьуз С1и Агд Не Азп А1а РНе Нгз Нгз Ьуз Ьеи С1п Уа1
885 890 895
А1а Ьеи О1у Зег Агд Азп Зег А1а Нгз
900 905
<210> 163 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> КаССи; > гаССиз
<400> 163 Азр 11е С1п МеЬ ТНг 61п Зег Рго ТНг Зег Ьеи Зег А1а Зег Ьеи С1у
1 5 10 15
С1и ТНг Уа1 ТЬг 11е 61и суз Агд А1а Зег С1и Азр Не Туг Азп 61 у
20 25 30
Ьеи А1а Тгр Туг С1п СЬп ьуз Рго С1у Ьуз Зег Рго СЬп Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг Азр Зег Азп Зег Ьеи Нгз ТНг б1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег 61у
50 55 60
Агд 61у Зег 61у ТНг 61п Туг Зег Ьеи Агд Не Азп Зег Ьеи 61п Зег
65 70 75 80
С1и Азр Уа1 А1а Зег Туг РЬе Суз С1п С1п Туг Туг Азр Туг Рго Ьеи
85 90 95
ТНг РНе С1у Зег 61у ТНг Ьуз Ьеи 61и 11е Ьуз
100 105
<210> 164 <211> 119 <212> БЕЛОК <213> КаССиг ; гаССиз
<400> 164 С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 А1а Бег 61у С1у 61у Ьеи Уа1 Ьуз Рго 61 у А1а
1 5 10 15
Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Суз νβΐ А1а Зег 61у РЬе ТЬг РНе Зег Азр Туг
20 25 30
Тгр МеС А1а Тгр Уа1 Агд 61п ТЬг Рго С1у Ьуз Рго МеС 61и Туг 11е
35 40 45
С1у Азр Не Ьуз Зег Азр С1у Зег Ьуз Уа1 Азп Туг А1а Рго Зег Ьеи
50 55 60
Ьуз Азп Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр АЗП А1а Агд ТНг ТНг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи 61η Мес Зег Азп Уа1 Агд Зег СЬи Азр ТЬг А1а ТНг Туг Туг Суз
85 90 95
Азп Агд Азр Не С1у Рго Азр Тгр Туг РЬе Азр РЬе Тгр 61у Рго б1у
100 105 110
ТНг Мес УаЬ ТНг УаЬ 5ег Зег 115 <210> 165 <211> 234 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <22й>
<223> Гибрид вариабельного участка крысы и константного участка мыши <400> 165
МеС 61у Уа1 Рго ТЬг 61п Ееи Беи 61у Ееи Ьеи Ьеи Ьеи Тгр Не ТНг
- 120 022832
1 5 10 15
Αερ А1а Не Суз Азр Не 61п МеД ТЬг С1п Зег Рго ТЬг Зег Ьеи Зег
20 25 30
А1а Зег Ьеи 61у 61и ТЬг Уа1 ТЬг Не 61и Суз Агд А1а Зег 61и Азр
35 40 45
Не Туг Азп С1у Ьеи А1а Тгр Туг 61п С1п Ьуз Рго 61у Ьуз Зег Рго
50 55 60
С1п Ьеи Ьеи Не Туг Азр Зег Азп Зег Ьеи Ηίε ТЬг 61у Уа1 Рго Зег
65 70 75 80
Агд РЬе Зег С1у Агд С1у Зег 61у ТЬг 61п Туг Зег Ьеи Агд Не Азп
85 90 95
Зег Ьеи 61п Зег С1и Азр Уа1 А1а Зег Туг РЬе Суз 61п С1п Туг Туг
100 105 НО
Азр Туг Рго Ьеи ТЬг РЬе С1у Зег 61у ТЬг ьуз Ьеи С1и Не Ьуз Агд
115 120 125
А1а Азр А1а А1а Рго ТЬг Уа1 5ег Ие РЬе Рго Рго Зег Зег 61и 61п
130 135 140
Ьеи ТЬг Зег 61у 61у А1а Зег Уа1 Уа1 Суз РНе Ьеи Азп Азп РЬе Туг
145 150 155 160
Рго Ьуз Азр Не Азп Уа1 Ьуз Тгр Ьуз Не Азр 61у Зег 61и Агд 61п
165 170 175
Азп 61у Уа1 Ьеи Азп Зег Тгр ТЬг Азр 61п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТНг
180 185 190
туг Зег Мед Зег Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи ТЬг Ьуз Азр 61и Туг 61 и Агд
195 200 205
Ηίε Азп Зег Туг ТЬг Суз 61и А1а ТЬг Ηίε ьуз ТЬг Зег ТЬг Зег Рго
210 215 220
Не Уа1 Ьуз Зег РЬе Азп Агд АЗП С1и Суз
225 230 <210> 166 <211> 462 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Гибрид вариабельного участка крысы и константного участка мыши <400> 166
МеД Ьуз Ьеи Агд Ьеи Зег Ьеи Не РЬе Не Суз А1а Ьеи Ьеи Ьуз Азр
1 5 10 15
Уа1 61п Суз 61и Уа1 С1п Ьеи Уа1 А1а Зег 61 у 61у 61 у Ьеи Уа1 Ьуз
20 25 30
Рго С1у А1а Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Суз Уа1 А1а 5ег 61 у РЬе ТЬг РЬе
35 40 45
Зег Азр Туг Тгр МеД А1а Тгр Уа1 Агд εΐη ТЬг Рго 61 у Ьуз Рго МеД
50 55 60
61и Туг Не 61у Азр Не Ьуз Зег Азр 61у Зег Ьуз νηΐ Азп Туг А1а
65 70 75 80
Рго Зег Ьеи Ьуз Азп Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Агд ТЬг
85 90 95
ТЬг Ьеи Туг Ьеи С1п МеД Зег Азп Уа1 Агд Зег 61и Азр ТЬг А1а ТЬг
100 105 но
Туг Туг Суз Азп Агд Азр Не С1у Рго Азр Тгр Туг РЬе Азр РЬе Тгр
115 120 125
С1у Рго С1у ТЬг МеД Уа1 ТЬг νβΐ Зег Зег А1а Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго
130 135 140
Зег Уа1 Туг Рго Ьеи А1а Рго С1у Зег А1а А1а 61п ТЬг Азп Зег МеД
145 150 155 160
Уа1 ТЬг Ьеи 61у Суз Ьеи Уа1 Ьуз 01 у туг РЬе Рго 61и Рго Уа1 ТЬг
165 170 175
Уа1 ТЬг тгр АЗП Зег С1у Зег Ьеи Зег Зег С1у Уа1 Ηίε ТЬг РЬе Рго
- 121
180 185 190
АЬа УаЬ Ьеи С1и Зег Азр Ьеи Туг ТЬг Ъеи Зег Зег Зег УаЬ ТЬг УаЬ
195 200 205
Рго Зег Зег Рго Агд Рго Зег 61и ТЬг УаЬ ТЬг Суз Азп УаЬ АЬа НЬз
210 215 220
Рго А1а Зег Зег ТЬг Ьуз УаЬ Азр Ьуз Ьуз Не УаЬ Рго Агд Азр Суз
225 230 235 240
СЬу Суз Ьуз Рго Суз ЬЬе Суз ТЬг Уа1 Рго СЬи УаЬ Зег Зег УаЬ РЬе
245 250 255
Пе РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр УаЬ Ьеи ТЬг 11е ТНг Ъеи ТЬг Рго
260 265 270
ьуз УаЬ ТНг Суз Уа1 УаЬ УаЬ Азр Не Зег Ьуз Азр Азр Рго СЬи УаЬ
275 280 285
СЬп РЬе Зег Тгр РЬе УаЬ Азр АЗр УаЬ СЬи УаЬ НЬз ТЬг АЬа СЬп ТЬг
290 295 300
СЬп Рго Агд 61и СЬи СЬп РЬе Азп Зег ТЬг РЬе Агд Зег УаЬ Зег СЬи
305 310 315 320
Ьеи Рго Не МеЕ Н1з СЬп Азр Тгр Ъеи Азп СЬу Ъуз СЬи РЬе Ъуз Суз
325 330 335
Агд УаЬ Азп Зег А1а АЬа РНе Рго АЬа Рго 11е СЬи Ъуз ТЬг Пе Зег
340 345 350
Ьуз ТЬг Ьуз С1у Агд Рго Ьуз А1а Рго СЬп УаЬ Туг ТНг Не Рго Рго
355 360 365
Рго Ьуз СЬи СЬп МеЕ АЬа Ьуз Азр Ъуз УаЬ Зег Ьеи ТЬг Суз МеЕ Пе
370 375 380
ТЬг Азр РНе РЬе Рго СЬи Азр Пе ТЬг УаЬ СЬи Тгр СЬп Тгр Азп СЬу
385 390 395 400
СЬп Рго АЬа СЬи Азп Туг Ьуз Азп ТНг СЬп Рго Не МеЕ Азп ТЬг Азп
405 410 415
СЬу Зег Туг РЬе УаЬ Туг Зег Ьуз Ъеи Азп УаЬ СЬп Ъуз Зег Азп Тгр
420 425 430
СЬи АЬа 61у Азп ТЬг РЬе ТЬг Суз Зег УаЬ Ьеи НЬз СЬи 61у Ъеи НЬз
435 440 445
Азп Н1з НЬз ТЬг СЬи Ьуз Зег Ьеи Зег НЬз Зег Рго СЬу Ъуз
450 455 460
<210> 167 <211> 234 <212> БЕЛОК <213> КаЕЕиз гаЕЕиз
<400> 167
МеЕ СЬу Уа1 Рго ТЬг СЬп Ъеи Ъеи СЬу Ъеи Ъеи Ъеи Ъеи Тгр Пе ТЬг
1 5 10 15
Азр АЬа Пе Суз Азр Пе СЬп МеЕ ТЬг С1п Зег Рго ТЬг Зег Ъеи Зег
20 25 30
АЬа Зег Ъеи сьу СЬи ТЬг УаЬ ТНг Пе С1и Суз Агд АЬа Зег СЬи Азр
35 40 45
Пе Туг Азп СЬу Ъеи АЬа Тгр Туг СЬп С1п Ъуз Рго 61 у Ъуз Зег Рго
50 55 60
СЬп Ъеи Ъеи Пе Туг Азр Зег АЗП Зег Ъеи НЬз ТЬг 61 у УаЬ Рго Зег
65 70 75 80
Агд РЬе Зег СЬу Агд СЬу Зег СЬу ТЬг СЬп Туг Зег Ъеи Агд Пе Азп
85 90 95
Зег Ъеи С1п Зег СЬи Азр УаЬ АЬа Зег Туг РЬе Суз С1п СЬп Туг Туг
100 105 НО
Азр Туг Рго Ъеи ТЬг РЬе СЬу Зег СЬу ТЬг Ъуа Ъеи СЬи Пе Ъуз Агд
115 120 125
АЬа Азр А1а А1а Рго ТЬг УаЬ Зег Пе РЬе Рго Рго Зег Зег СЬи СЬп
130 135 140
Ъеи ТЬг Зег С1у СЬу АЬа Зег УаЬ УаЬ Суз РЬе Ъеи Азп Азп РЬе Туг
145 150 155 160
Рго Ъуз Азр Пе Азп УаЬ Ъуз Тгр Ъуз 11е Азр СЬу Зег 61и Агд СЬп
122 022832
165 170 175
Ай П СЬу ча! Ьеи Азп Зег Тгр ТЬг Азр СЬп Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг
180 185 190
Туг Зег Меь Зег Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи ТЬг Ьуз Азр СЬи Туг СЬи Агд
195 200 205
ΗΪ5 Азп Бег Туг ТЬг Суз СЬи АЬа ТЬг НЬз Ьуз ТЬг Зег ТЬг Зег Рго
210 215 220
Ые ЧаЬ Ьуз Зег РЬе Азп Агд Азп СЬи Суз
225 230
<210> 168 <211> 462 <212> БЕЛОК <213> Еаккие ϊ гаккиз
<400> 168
МеЬ Ьуз Ьеи Агд Ьеи Зег Ьеи Ые РЬе Ые Суз АЬа Ьеи Ьеи Ьуз Азр
1 5 10 15
ЧаЬ СЬп Суз СЬи ЧаЬ СЬп Ьеи ЧаЬ АЬа Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи ЧаЬ Ьуз
20 25 30
Рго СЬу АЬа Зег Ьеи Ьуз Ьеи Бег суз ЧаЬ АЬа Зег СЬу РЬе ТНг РЬе
35 40 45
Бег Азр Туг Тгр Мек АЬа тгр ЧаЬ Агд СЬп ТЬг Рго СЬу Ьуз Рго мек
50 55 60
СЬи Туг Ые СЬу Азр Ые Ьуз Зег Азр СЬу Зег Ьуз ЧаЬ Азп Туг АЬа
65 70 75 80
Рго Зег Ьеи Ьуз Азп Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп АЬа Агд ТЬг
85 90 95
ТЬг Ьеи Туг Ьеи СЬп Мек Бег Азп ЧаЬ Агд Бег СЬи Азр ТЬг АЬа ТЬг
100 105 110
туг Туг Суз Азп Агд Азр Ые СЬу Рго Азр Тгр Туг РЬе Азр РЬе Тгр
115 120 125
СЬу Рго СЬу ТЬг Мек ЧаЬ ТЬг ЧаЬ Бег Бег АЬа Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго
130 135 140
Зег ЧаЬ Туг Рго Ьеи АЬа Рго СЬу Бег АЬа АЬа СЬп ТЬг Азп Зег Мек
145 150 155 160
ЧаЬ ТЬг Ьеи СЬу Суз Ьеи ЧаЬ Ьуз СЬу Туг РЬе Рго СЬи Рго ЧаЬ ТЬг
165 170 175
ЧаЬ ТЬг Тгр Азп Зег СЬу Зег Ьеи Зег Бег СЬу ЧаЬ НЬз ТЬг РЬе Рго
180 185 190
АЬа ЧаЬ Ьеи СЬи Бег Азр Ьеи Туг ТЬг Ьеи Зег Зег Зег ЧаЬ ТЬг ЧаЬ
195 200 205
Рго Бег Бег Рго Агд Рго Бег СЬи ТЬг ЧаЬ ТЬг Суз Азп ЧаЬ АЬа Нгз
210 215 220
Рго АЬа Зег Зег ТЬг Ьуз ЧаЬ Азр Ьуз Ьуз 11е ЧаЬ Рго Агд Азр Суз
225 230 235 240
СЬу Суз Ьуз Рго Суз 11е Суз ТЬг ЧаЬ Рго СЬи ЧаЬ Зег Бег ЧаЬ РЬе
245 250 255
Ые РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ЧаЬ Ьеи ТЬг Ые ТЬг Ьеи ТЬг Рго
260 265 270
Ьуз ЧаЬ ТЬг Суз ЧаЬ ЧаЬ ЧаЬ Азр Ые Зег Ьуз Азр Азр Рго СЬи ЧаЬ
275 280 285
СЬп РЬе Зег Тгр РЬе ЧаЬ Азр Азр ЧаЬ СЬи ЧаЬ НЬз ТЬг АЬа СЬп ТЬг
290 295 300
СЬп Рго Агд СЬи СЬи СЬп РЬе Азп Бег ТЬг РЬе Агд Зег ЧаЬ Зег СЬи
305 310 315 320
Ьеи Рго Ые Мек НЬз СЬп Азр Тгр Ьеи Азп СЬу Ьуз СЬи РЬе Ьуз Суз
325 330 335
Агд ЧаЬ Азп Бег АЬа АЬа РЬе Рго АЬа Рго Ые СЬи Ьуз ТЬг Ые Зег
340 345 350
Ьуз ТЬг Ьуз СЬу Агд Рго Ьуз АЬа Рго СЬп ЧаЬ туг ТЬг Ые Рго Рго
355 360 365
Рго Ьуз СЬи СЬп Мек АЬа Ьуз Азр Ьуз ЧаЬ Зег Ьеи ТЬг Суз Мек Ые
- 123 022832
370 375 380
ТЬг Азр РЬе РЬе Рго С1и Азр 11е ТЬг Уа1 С1и Тгр С1п Тгр Азп С1у
385 390 395 400
εΐη Рго А1а С1и Азп Туг Ьуз Азп ТЬг СЬп Рго 11е Мер Азп ТЬг Азп
405 410 415
С1у Зег Туг РЬе Уа1 Туг Зег Ьуз Ьей Азп Уа1 СЬп Ьуз Зег Азп Тгр
420 425 430
61и АЬа СЬу Азп ТЬг РЬе ТЬг Суз Зег Уа1 Ьей НЬз С1и С1у Ьей НЬз
435 440 445
Азп Н1з ΗΪ3 ТЬг С1и Ьуз Зег Ьей Зег Нгз Зег Рго С1у Ьуз
450 455 460
<210> 169 <211> 48 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза ТЬКЗ <400> 169 даадаасьдд агагсЬЬЬдс сдсннсансн нсааааааан СададННд 48 <210> 170 <211> 44 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬКЗ <400> 170 дНсассНаса аааНСаддаа сндсддннса дсНддааааН снсс 44 <210> 171 <211> 45 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬКЗ <400> 171 сНсаНааНдд сНЬдНсаНсН асадааННад даасНсаддЬ Нсадс 45 <210> 172 <211> 57 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬКЗ <400> 172 дааааЬЬааа ааЬааЬсссЬ ЬЬдЬоаадса ддадааЬрра аЬсасаЬЬад арсрдЬс 57 <210> 173 <211> 50 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬКЗ
- 124 022832 <400> 173 дааааРРааа ааРааРсссР РРдРсдадса даадааРРРа аРсасаРРад 50 <210 174 <211> 52 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬЕЗ <400 174 садааааРРа ааааРааРсс сРРРдсааад садаадааРР РааРсасаРР ад 52 <210> 175 <211> 47 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬКЗ <400 175 ссаасРсааР ссадааааРР ааадсРааРс ссрррдрсаа дсадаад 47 <210> 176 <211> 45 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬКЗ <400 176 саардадсра РсРсаасРРР сРсдРаааас сРРРдссРРс Рдсас 45 <210> 177 <211> 48 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220 <223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬКЗ <400> 177 дРсРРдадаа асРадаааРР срсаадррдс адсаРаасаа сРРадсас 48 <210> 178 <211> 46 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬКЗ <400> 178 сРРдадааас РадаааРРсР сдсаррдсад сараасааср Радсас 46 <210> 179 <211> 43 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность
- 125 022832 <220>
<22 3> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬКЗ <40Э> 179 спааадпеаь ПдааесППса ддадааьспс апаасапесд ППд 43 <210> 180 <211> 47 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬКЗ <400> 180 сбсЬааадЬс аббдаассЬЪ саддсдааЬс ЬсабаасаЬс сдППдад 47 <210> 181 <211> 37 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬКЗ <400> 131 ссасаЪссьЬ аасЬЬдаддЬ ссаасддсЬЬ Ьдасдад 37 <210> 182 <211> 46 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬКЗ <400> 182 даааЬЬсЬсд аЫЬдсадса ЬаасдссЬДа дсасддсЬсЬ ддааас 46 <210> 183 <211> 46 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬКЗ <400> 183 дадааасбад аааСбсРсда СППддсдсаЬ аасаасПЬад сасддс 46 <210> 184 <211> 44 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬКЗ <400> 184 сьадаааььс СсдаСПЬдса ддаааасаас ССадсасддс СсПд 44 <210> 185 <211> 44 <212> ДНК
- 126 022832 <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬЕЗ <400> 185 сЬадаааРРс Ьсда+ЬЬдса ддсбаасаас СЬадсасддс РсДд 44 <210> 186 <211> 46 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<2 23> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬЕЗ <400> 186 сасгсНддаД сЬаадсааса асдссаРадс саасасааас дабдас 46 <210> 187 <211> 50 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬЕЗ <400> 187 дааааДаЁ£Ё ГсдаааРсДа ЬсббЪссдсс аасаадЬасс ДдсадсРдас 50 <210> 188 <211> 41 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬЕЗ <400> 188 дссНсаасд асРдаДдсРд ааадддЪддс ссНаааааЬ д 41 <210> 189 <211 > 43 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬЕЗ <400> 189 сМсаасдас ДдаДдсРссд ададдбддсс сЕЛаааааСд тдд 4 3 <210> 190 <211> 42 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид для мутагенеза варианта ТЬЕЗ <400> 190 сдаааСсРаР сбббссСаса асдаддассд дсадсндасГ ад 42 <210> 191
- 127 022832 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусная последовательность для семейства 17 ЬСОКЗ <220>
<221> га1зс_£еа£иге <222> (1) <223> где Хаа может быть А1а, С1п, С1у или Зег <220>
<221> т1зс_£еа£иге <222> (5) <223> где Хаа может быть С1у, С1ц или Зег <220>
<221> т!зс_£еа£иге <222> (6) <223> где Хаа может быть Азр или Азп <220>
<221> т1гс_£еаСиге <222> (7) <223> где Хаа может быть 61и или Зег <220>
<221> пп.зс_£еа£иге <222> (8) <223> где Хаа может быть РНе, А1а или Ьеи <400> 191
Хаа Зег Туг Азр Хаа Хаа Хаа Хаа ТЬг Оа1 15 10 <210> 192 <211> 18 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусная последовательность для семейства 17 НСОК2 <220>
<221> т1зс_£еа£иге <222> <1>
<223> где Хаа может быть Агд или Ьуз <220>
<221> т1зс_£еа£иге <222> (3) <223> где Хаа может быть Туг, Шз или Зег <220>
<221> ш1зс_£еасиге <222> (4) <223> где Хаа может быть Ме£, Агд или Туг <220>
<221> пизс^ГеаЪиге <222> (7) <223> где Хаа может быть Ьуз или Ахд
- 128 022832 <400> 192
Хаа 11е Хаа Хаа Агд Зег Хаа Тгр Туг Азп Азр Туг А1а Уа1 Зег Уа1 15 10 15
Ьуз Зег <210> 193 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусная последовательность для семейства 18В ЬСРНЗ <220>
<221> т1зс_£еа£иге <222> (1) <223> где Хаа может быть С1п или Зег <220>
<221> т1зс_£еа£иге <222> (5) <223> где Хаа может быть ТЬг, 61и или Азр <220>
<221> т1зс_£еа£иге <222> (7) <223> где Хаа может быть 7а1 или Азп <220>
<221> т1зс_£еа£иге <222> (8) <223> где Хаа может быть Туг или РЬе <220>
<221> т1зс_£еатиге <222> (9) <223> где Хаа может быть Зег, Азп или 61п <400> 193
Хаа Зег Туг Азр Хаа Рго Хаа Хаа Хаа Уа1 15 10 <210> 194 <211> 18 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусная последовательность для семейства 18В НСБНЗ <220>
<221> ш1зс_£еа£иге <222> (4) <223> где Хаа может быть Ьуз, ТЬг или Не <220>
<221> т1зс_£еа£иге <222> (11) <223> где Хаа может быть Азп или Азр
- 129 022832 <220>
<221> πιίεο £еабиге <222> (14) <223> где Хаа может быть Уа1 или Ьеи <400> 194
Пе Пе С1п Хаа Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Хаа Туг А1а Хаа Зег УаЬ 15 10 15
Ьуз Зег <210> 195 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусная последовательность для семейства 19 ЬСВКЗ <220>
<221> Ш1зс_£еариге <222> (3) <223> где Хаа может быть Туг, О1у или А1а <220>
<221> т1зс_£еариге <222> (4) <223> где Хаа может быть 31у, О1и или Азп <220>
<221> т1зс_£еаРиге <222> (5) <223> где Хаа может быть Зег или ТЬг <220>
<221> т1зс_£еаРиге <222> (6) <223> где Хаа может быть Уа1, Пе или Ьеи <220>
<221> т!зс_£еаРиге <222> (7) <223> где Хаа может быть 5ег или Ьеи <220>
<221> тйзс_1еаРиге <222> (8) <223> где Хаа может быть Пе, Зег, Рго или Туг <400> 195
С1п 61 η Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа ТЬг 1 5 <210> 196 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
- 130 022832 <223> Консенсусная последовательность для семейства 19 НСОР.2 <220>
<221> т1£с_Геабиге <222> (1) <223> где Хаа может быть РЬе или Агд <220>
<221> т±зс_£еабиге <222> (12) <223> где Хаа может быть А1а или Зег <400> 196
Хаа 11е Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг Хаа Рго Зег РЬе С1п 15 10 15
С1у <210> 197 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусная последовательность для семейства 17 <220>
<221> χίзс_£еабиге <222> (88) <223> где Хаа может быть А1а, 61η, б1у или Зег <220>
<221> 1гп_зс_£еа£иге <222> (92) <223> где Хаа может быть 61у, С1и или Зег <220>
<221> т1зс_£еабиге <222> (93) <223> где Хаа может быть Азр или Азп <220>
<221> т1зс_£еабиге <222> (94) <223> где Хаа может быть 61и или Зег <220>
<221> тгзс_£еабиге <222> (95) <223> где Хаа может быть РЬе, А1а или Ьеи <400> 197
Азр 1 11е С1и Ьеи ТЬг 5 61п Рго Рго Зег Уа1 10 Зег Уа1 А1а Рго С1у 15 61п
ТЬг А1а Агд 11е Зег Суз Зег С1у Азр А1а Ьеи С1у 61 у Туг РЬе Уа1
20 25 30
Зег Тгр Туг С1п 61п Ьуз Рго 61 у 61п А1а Рго Уа1 Ьеи Уа1 11е Туг
35 40 45
Азр Азр Азр Азп Агд Рго Зег 61у Не Рго С1и Агд РЬе Зег 61у Бег
131
50 55 60
Азп Зег 61у Азп ТЬг АЬа ГЬг Ьей ТЬг 11е Зег С1у ТЬг 01 η А1а СЬи
65 70 75 80
Азр 61ч А1а Азр Туг Туг Суз Хаа Зег Туг Азр Хаа Хаа Хаа Хаа ТЬг
85 90 95
Уа1 РЬе С1у СЬу СЬу ТЬг Ьуз Ьен ТЬг Уа1 Ьей
100 105
<210> 198 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусная последовательность для семейства 17 <220>
<221> тЬзс£еабиге <222> (52) <223> где Хаа может быть Агд или Ьув <220>
<221> тЬзсТеабиге <222> (54) <223> где Хаа может быть Туг, НЬз или Зег <220>
<221> шЬзс_£еаЬиге <222> (55) <223> где Хаа может быть МеС, Агд или Туг <220>
<221> шЬзс_£еабиге <222> (58) <22 3> где Хаа может быть Ьуз или Агд
<400> 198
61п Уа1 С1и Ьей 61п 61п Зег СЬу Рго СЬу Ьей Уа1 Ьуз Рго Зег С1п
1 5 10 15
ТЬг Ьей Зег Ьен ТЬг Суз А1а 11е Зег 61у Азр Зег Уа1 Зег ТЬг Агд
20 25 30
Зег АЬа А1а Тгр С1у Тгр 11е Агд С1п Зег Рго 61 у Агд СЬу Ьей С1и
35 40 45
Тгр Ьей С1у Хаа 11е Хаа Хаа Агд 5ег Хаа Тгр Туг Азп Азр туг АЬа
50 55 60
Уа1 Зег УаЬ Ьуз Зег Агд 11е ТЬг Пе Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
СЬп РЬе Зег Ьей С1п Ьен АЗП Зег УаЬ ТЬг Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1
85 90 95
Туг Туг Суз АЬа Агд НЬз ТЬг Туг Рго Туг Ьей Зег РЬе Азр Уа1 Тгр
100 105 но
61у 61п С1у ТЬг Ьей УаЬ ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 199 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусная вариабельная легкая цепь семейства 18В
- 132 022832 <220>
<221> гп1зс_£еаЬиге <222> (88) <223> где Хаа может быть 61п или Зег <220>
<221> гиде Геабиге <222> (92) <223> где Хаа может быть ТЬг, С1и или Азр <220>
<221> Ш1зс_£еасиге <222> (94) <223> где Хаа может быть Уа! или Азп <220>
<221> т1зс_£еаЬиге <222> (95) <223> где Хаа может быть Туг или РЬе <220>
<221> т1зс_£еа£иге <222> (96) <223> где Хаа может быть Зег, Азп или С1п
<400> 199
Азр 11е С1и Ьеи ТЬг С1п Рго Рго Зег Уа1 Зег Уа1 А1а Рго СЬу 61п
1 5 10 15
ТЬг А1а Агд Х1е Зег Суз Зег СЬу Азр Азп Ые 61у Зег туг туг Уа1
20 25 30
Из Тгр Туг СЬп 61п Ьуз Рго СЬу С1п АЬа Рго Уа1 Ьеи Уа1 11е Туг
35 40 45
С1и Азр Зег С1и Агд Рго Зег СЬу 11е Рго С1и Агд РЬе Зег СЬу Зег
50 55 60
Азп Зег С1у Азп ТЬг АЬа ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег СЬу ТЬг СЬп А1а С1и
65 70 75 80
Азр Е1и А1а Азр Туг Туг Суз Хаа зег Туг Азр Хаа Рго Хаа Хаа Хаа
85 90 95
Уа1 РЬе 61у СЬу СЬу ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи
100 105
<210> 200 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусная вариабельная тяжелая цепь семейства 18А и 18В <220>
<221> т1зс_£еаЬиге <222> (55) <223> где Хаа может быть Ьуз, ТЬг или 11е <220>
<221> т1зс_£еа£иге <222> (62) <22 3> где Хаа может быть Азп или Азр <220>
<221> пп_зс £еабиге
- 1ЗЗ 022832 <222> (65) <22 3> где Хаа может быть Ча1 или Ьеи
<400> 200
СЬп ЧаЬ СЬи Ьеи СЬп СЬп Зег СЬу Рго СЬу Ьеи Ча1 Ьуз Рго Зег СЬп
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз АЬа Ые Зег СЬу Азр Зег Ча1 Зег Зег Азп
20 25 30
Зег АХа АЬа Тгр СЬу Тгр Ые Агд СЬп Зег Рго СЬу Агд СЬу Ьеи СЬи
35 40 45
Тгр Ьеи СЬу Ые ЬЬе СЬп Хаа Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Хаа Туг АЬа
50 55 60
Хаа Зег ЧаЬ Ьуз Зег Агд Ые ТЬг Не Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
СЬп РЬе Зег Ьеи СЬп Ьеи Азп Зег ЧаЬ ТЬг Рго СЬи Азр ТЬг АЬа ЧаЬ
85 90 95
Туг туг Суз А1а Агд Туг Зег Туг Рго РЬе Туг Зег Ые Азр Туг Тгр
100 105 110
СЬу (Пп СЬу ТЬг Ъеи Ча1 ТЬг ЧаЬ Зег Зег
115 120
<210> 201
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусная вариабельная легкая цепь семейства 19 <220>
<221> тЬзс_Теабиге <222> (91) <223> где Хаа может быть Туг, СЬу или АЬа <220>
<221> гп1зс_£еабиге <222> (92) <223> где Хаа может Сыть СЬу, СЬи или Азп <220>
<221> т1зс_£еа£иге <222> (93) <223> где Хаа может быть Зег или ТЬг <220>
<221> тЬзс_£еа£иге <222> (94) <223> где Хаа может быть Ча1, 11е или Ьеи <220>
<221> т!зс_£еабиге <222> (95) <223> где Хаа может быть Зег или Ьеи <220>
<221> тЬзс_£еа£иге <222> (96) <223> где Хаа может быть 11е, Зег, Рго или Туг <400> 201
Азр 11е СЬп Меб ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Ча1 СЬу
- 134 022832
1 5 10 15
АЗр Агд УаЬ ТЬг Пе ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег 11е 61 у Беи Туг
20 25 30
Беи А1а Тгр Туг СЬп С1п Буз Рго СЬу Буз АЬа Рго Буз Беи Беи Пе
35 40 45
Туг А1а А1а Зег Зег Беи СЬп Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег 61у Зег СЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг Беи ТЬг Пе Зег Зег Беи СЬп Рго
65 70 75 80
С1и Азр РЬе АЬа ТЬг Туг Туг Суз СЬп 61 п Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа
85 90 95
ТЬг РНе СЬу СЬп СЬу ТЬг Буз Уа1 СЬи 11е Буз
100 105 <210> 202 <211> 121 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусная вариабельная тяжелая цепь семейства 19 <220>
<221> ш1зс_£еаЕиге <222> (50) <223> оде Хаа может быть РЬе или Агд <220>
<221> т!зс_£еаЕиге <222> (61) <223> где Хаа может быть А1а или Зег <400> 202
СЬп УаЬ СЬи Беи УаЬ 61п Зег СЬу А1а 61 и Уа1 Буз Буз Рго СЬу СЬи
1 5 10 15
Зег Беи Буз Пе Зег Суз Буз СЬу Зег 61у Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Тгр УаЬ СЬу Тгр УаЬ Агд СЬп МеЕ Рго 61у Буз 61у Беи СЬи Тгр МеЕ
35 40 45
СЬу Хаа Пе Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг Хаа Рго Зег РЬе
50 55 60
СЬп СЬу СЬп УаЬ ТЬг Пе Зег АЬа Азр Буз Зег 11е Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Беи СЬп Тгр Зег Зег Беи Буз А1а Зег Азр ТЬг А1а МеЕ Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд СЬи Беи Туг СЬп СЬу Туг МеЕ Азр ТЬг РЬе Азр Зег Тгр СЬу
100 105 110
СЬп СЬу ТЬг Беи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115 120
<210> 203 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вся консенсусная тяжелая цепь, семейство 17 <220>
<221> тгзс_£еаЕиге <222> (88)
- 135 022832
<223> где Хаа может быть А1а, 61п, 61у или Зег
<220> <221> ш1зс £еаЬиге <222> (92) <223> где Хаа может быть 61у, С1и или Зег
<220>
<221> тгзс_ГеаЬиге <222> (93) <223> где Хаа может быть Азр или Азп <220>
<221> ш1зс_£еаЬиге <222> (94) <223> где Хаа может быть С1и или Зег <220>
<221> т1зс_£еаСиге <222> (95) <223> где Хаа может быть РНе, А1а или Ьеи
<400> 203
Азр 11е С1и Ьеи ТНг СЬп Рго Рго 5ег УаЬ Зег Уа1 А1а Рго С1у СЬп
1 5 10 15
ТНг А1а Агд 11е Зег Суз Зег 61у Азр А1а Ьеи 61у 61у Туг РЬе УаЬ
20 25 30
Зег Тгр Туг 61п 61п Ьуз Рго 61 у С1п А1а Рго Уа1 Ьеи Уа1 Не Туг
35 40 45
Азр Азр Азр Азп Агд Рго Зег С1у 11е Рго С1и Агд РЬе Зег 61у Зег
50 55 60
Азп Зег 61 у Азп ТНг А1а ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег С1у ТЬг С1п А1а 61и
65 70 75 80
Азр С1и А1а Азр Туг Туг Суз Хаа Зег Туг Азр Хаа Хаа Хаа Хаа ТЬг
85 90 95
Уа1 РНе 61у 61у 61у ТНг Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Агд ТЬг Уа1 А1а А1а
100 105 110
Рго Зег Уа1 РНе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр 61и 61п Ьеи Ьуз Зег 61у
115 120 125
ТНг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд СЬи А1а
130 135 140
Ъуз Уа1 С1п Тгр Ъуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи С1п Зег С1у Азп Зег 61п
145 150 155 160
61и Зег Уа1 ТНг 61и 61п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТНг Туг Зег Ьеи Зег
165 170 175
Зег ТНг Ьеи ТНг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр туг С1и ьуз Нгз Ьуз УаЬ Туг
180 185 190
А1а Суз 61и Уа1 ТНг Н1з СЬп 61у Ьеи Зег 5ег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег
195 200 205
РНе Азп Агд 61у 61и Суз
210
<210> 204 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вся консенсусная тяжелая цепь, семейство 17 <220>
<221> тгзс СеаСиге
- 1З6 022832 <222> (52) <22 3> где Хаа может быть Агд или Ьуз <220>
<221> т)-Зс_:£еаГиге <222> (54) <223> где Хаа может быть Туг, Н1з или Зег <220>
<221> т1зс_ТеаГиге <222> (55) <223> где Хаа может быть Мег, Агд или Туг <220>
<221> т13с_ТеаГиге <222> (58) <223> где Хаа может быть Ьуз или Агд <400> 204
61п Уа1 61и Ьеи 61п 61п Зег 61 у Рго 61у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег 61п
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз А1а Не Зег 61у Азр Зег Уа1 Зег ТЬг Агд
20 25 30
Зег А1а А1а Тгр 61у Тгр Не Агд 61п Зег Рго 61у Агд 61у Ьеи 61и
35 40 45
Тгр Ьеи 61 у Хаа 11е Хаа Хаа Агд Зег Хаа Тгр Туг Азп Азр Туг А1а
50 55 60
УаЬ Зег Уа1 Ьуз Зег Агд Не ТЬг Не Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
61п РЬе Зег Ьеи С1п Ьеи Азп Зег Уа1 ТЬг Рго 61и Азр ТЬг А1а Уа1
85 90 95
Туг Туг Суз А1а Агд Нгз ТЬг Туг Рго Туг Ьеи Зег РЬе Азр Уа1 Тгр
100 105 НО
С1у 61п 61у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз 61 у Рго
115 120 125
Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег С1и Зег ТЬг
130 135 140
А1а А1а Ьеи 61у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго 61и Рго Уа1 ТЬг
145 150 155 160
Уа1 Зег Тгр Азп Зег 61у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 Нгз ТЬг РЬе Рго
165 170 175
А1а Уа1 Ьеи 61п Зег Зег 61 у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг
180 185 190
Уа1 Рго зег Зег Зег Ьеи 61у ТЬг Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Ца1 Азр
195 200 205
Н1з Ьуз РГО Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд Уа1 61и Зег Ьуз Туг
210 215 220
61у Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго 61и А1а А1а 61 у 61у Рго
225 230 235 240
Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ Не Зег
245 250 255
Агд ТЬг Рго 61и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег 61п 61и Азр
260 265 270
Рго С1и Уа1 С1п РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр 61у Уа1 С1и Уа1 ΗΪ8 Азп
275 280 285
А1а ьуз ТЬг ьуз Рго Агд 61и 61и 61п РЬе Азп зег ТЬг Туг Агд Уа1
290 295 300
Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи ΗΪ5 61п Азр Тгр Ьеи Азп 61 у Ьуз 61и
305 310 315 320
Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз 61у Ьеи Рго Зег Зег Не 61и Ьуз
325 330 335
ТЫ 11е 5ег Ьуз А1а Ьуз 61у 61п Рго Агд 61и Рго 61п Уа1 Туг ТЬг
- 137 022832
340 345 350
Ьеи Рго Рго Зег СЪп СЪи С1и Ме£ ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг
355 360 365
Суз Ьеи Уа1 Ьуз 61у РЬе Туг Рго Зег АЗр Пе А1а Уа1 61и Тгр СЪи
370 375 380
Зег Азп 61у С1п Рго 61 и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи
385 390 395 400
АЗр Зес АЗр СЪу Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Агд Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз
405 410 415
Зег Агд Тгр С1п 61и 61 у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 Ме£ НЪз С1и
420 425 430
А1а Ьеи НЪз АЗП НЪз Туг ТЬг 61п Ьуз Зег Ьеи Зег ьеи Зег Ьеи 61у
435 440 445
Ьуз
<210> 205 <211> 21-3 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вся консенсусная легкая цепь, семейство 18В <220>
<221> тЪзс £еа£иге <222> (88) <223> где хаа может быть С1п или Зег <220>
<221> тЪзс_£еа£иге <222> (92) <223> где Хаа может быть ТЬг, С1и или Азр <220>
<221> т!зс_£еа£иге <222> (94) <223> где Хаа может быть Уа1 или Азп <220>
<221> шЪзс_£еа£иге <222> (95) <223> где Хаа может быть Туг или РЬе <220>
<221> т!зс_£еа£иге <222> (96) <223> где Хаа может быть Зег, Азп или С1п <400> 205
Азр 11е СЪи Ьеи ТЬг 61п Рго Рго Зег Уа1 Зег Уа1 А1а Рго СЪу С1п
1 5 10 15
ТЬг АЪа Агд 11е Зег Суз Зег СЪу Азр Азп Пе 61у Зег Туг Туг Уа1
20 25 30
НЪз Тгр Туг С1п СЪп Ьуз Рго 61у СЪп АЪа Рго Уа1 Ьеи Уа1 Пе Туг
35 40 45
С1и Азр Зег СЪи Агд Рго Зег СЪу Пе Рго С1и Агд РЬе Зег С1у Зег
50 55 60
АЗП Зег СЪу АЗП ТЬг АЪа ТЬг Ьеи ТЬг Пе Зег 61у ТНг 61п А1а СЪи
65 70 75 80
Азр 61и АЪа Азр Туг Туг Суз Хаа Зег Туг Азр Хаа Рго Хаа Хаа Хаа
85 90 95
138 022832
Уа1 РНе С1у С1у 100 С1у ТНг Ьуз Ьеи ТНг 105 Уа1 Ьеи Агд ТНг Уа1 но А1а А1а
Рго Зег νβΐ РНе Не РНе Рго Рго Зег Азр 61и 61п Ьеи Ьуз Зег 61у
115 120 125
ТНг А1а Зег Уа1 УаЬ Суз Ьеи Ьеи АЗП Азп РНе Туг Рго Агд С1и А1а
130 135 140
ьуз Оа1 С1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи С1п Зег 61у Азп Зег 61п
145 150 155 160
С1и Зег Уа1 ТНг С1и С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТНг Туг Зег Ьеи Зег
165 170 175
Зег ТНг Ьеи ТНг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг С1и Ьуз Шз Ьуз Уа1 Туг
180 185 190
А1а Суз С1и Уа1 ТНг Шз С1п Й1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег
195 200 205
РНе Азп Агд С1у С1и Суз 210 <210> 206 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вся консенсусная тяжелая цепь, семейство 18А и 18В <220>
<221> т1зс_£еаПиге <222> (55) <223> где Хаа может быть Ьуз, ТНг или Не <220>
<221> гп1зс_£еас.иге <222> (62) <223> где Хаа может быть Азп или Азр <220>
<221> тЬзс_£еаСиге <222> (65) <223> где Хаа может быть 1/а1 или Ьеи <400> 206
61п 1 Уа1 61и Ьеи 61п 5 С1п Зег 61у Рго С1у Ьеи ν&1 10 Ьуз Рго Зег 15 61п
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТНг Суз А1а Не Зег СЬу Азр Зег Уа1 Зег Зег Азп
20 25 30
Зег А1а А1а Тгр С1у Тгр Не Агд С1п Зег Рго 61у Агд С1у Ьеи С1и
35 40 45
Тгр Ьеи 61у Не 11е 61п Хаа Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Хаа Туг А1а
50 55 60
Хаа Зег Уа1 ьуз Зег Агд Ые ТНг Ые Азп Рго Азр ТНг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
С1п РНе зег ьеи 61п ьеи Азп Зег νβΐ ТНг Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1
85 90 95
Туг Туг Суз А1а Агд Туг Зег Туг Рго РНе Туг Зег Не Азр Туг Тгр
100 105 но
С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТНг Ьуз С1у Рго
115 120 125
Зег Уа1 РНе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТНг Зег С1и Зег ТНг
130 135 140
А1а А1а Ьеи 61у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РНе Рго 61и Рго Уа1 ТНг
145 150 155 160
139 022832
Уа1 Зег Тгр Азп Зег 61у А1а 165 Ьеи ТЬг Зег 61у УаЬ Шз ТЬг РЬе Рго
170 175
А1а Уа1 Ьеи 61п Зег Зег 61у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег УаЬ Уа1 ТЬг
180 185 190
Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи 61у ТЬг Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр
195 200 205
Н1з Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд Уа1 С1и Зег Ьуз Туг
210 215 220
С1у Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и АЬа А1а 61 у С1у Рго
225 230 235 240
Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е Зег
245 250 255
Агд ТЬг Рго 61 и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр УаЬ Зег С1п 61и Азр
260 265 270
Рго С1и Уа1 61п РЬе Азп Тгр Туг νβΐ Азр 61у УаЬ С1и Уа1 Шз Азп
275 280 285
А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд 61и 61и 61п РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1
290 295 300
Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Н1з 61п Азр тгр Ьеи Азп 61у ьуз 61и
305 310 315 320
Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз 61у Ьеи Рго Зег Зег 11е СЬи Ьуз
325 330 335
ТЬг Не Зег Ьуз А1а Ьуз 61у 61п Рго Агд С1и Рго СЬп Уа1 Туг ТЬг
340 345 350
Ьеи Рго Рго Зег 61п 61 и С1и Мес ТЬг Ьуз Азп СЬп Уа1 Зег Ьеи ТЬг
355 360 365
Суз Ьеи Уа1 Ьуз 61у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е АЬа Уа1 СЬи Тгр СЬи
370 375 380
Зег Азп СЬу 61п Рго 61 и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи
385 390 395 400
Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Агд Ьеи ТНг Уа1 Азр Ьуз
405 410 415
Зег Агд Тгр 61 п 61и 61 у Азп Уа1 РЬе Бег Суз Зег Уа1 Мер Шз СЬи
420 425 430
А1а Ьеи Н1з Азп Η13 Туг ТЬг СЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи 61у
435 440 445
Ьуз
<210> 207 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вся консенсусная легкая цепь, семейство 19 <220>
<221> т±зс_1еаГиге <222> (91) <223> где Хаа может быть Туг, С1у или А1а <220>
<221> ш1зс_1еаЬиге <222> (92) <223> где Хаа может быть 61у, 61и или Азп <220>
<221> т1зс_£еаГиге <222> (93) <223> где Хаа может быть Зег или ТЬг
- 140 022832 <220>
<221> тгзс_£еа£цге <222> (94) <223> где Хаа может быть Уа1, Х1е или Ьеи <220>
<221> тЬзс_£еаЬиге <222> (95) <223> где Хаа может быть Бег или Ьеи <220>
<221> пи5С_£еаЬиге <222> (96) <223> где Хаа может быть Не, Зег, Рго или Туг <400> 207
Азр Не 1 СЬп Меб ТЬг 5 01п Зег Рго Зег Зег 10 Ьеи Зег А1а Зег Уа1 15 СЬу
Азр Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг Суз Агд А1а Зег 01п Зег Не С1у Ьеи Туг
20 25 30
Ьеи А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг А1а А1а Зег Зег Ьеи 01п Зег 61у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег 61у Зег СЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Х1е Зег Зег Ьеи С1п Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе А1а ТНг Туг Туг Суз С1п С1п Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу 61п СЬу ТЬг Ьуз Уа1 С1и 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а АЬа
100 105 110
Рго Зег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр СЬи СЬп Ьеи Ьуз Зег С1у
115 120 125
ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд С1и А1а
130 135 140
Ьуз Уа1 С1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи С1п Зег С1у Азп Зег С1п
145 150 155 160
С1и Зег Уа1 ТЬг С1 и 61п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег
165 170 175
Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг О1и Ьуз Н13 Ьуз Уа1 Туг
180 185 190
А1а Суз 01и Уа1 ТЬг Ηί3 Οίη 01 у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег
195 200 205
РЬе Азп Агд С1у 51и Суз
210
<210> 208 <211> 448 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вся консенсусная тяжелая цепь, семейство 19 <220>
<221> тгзс_£еа£иге <222> (50) <223> где Хаа может быть РЬе или Агд <220>
<221> ш1зс_£еаЬиге <222> (61) <223>
- 141 022832
<400> 208
61п Уа1 СЬи Ьеи Уа1 61п Зег С1у АЬа СЬи Уа1 Ьуз Ьуз Рго 61у 61и
1 5 10 15
Зег Ьеи Ьуз Пе Зег Суз Ьуз 61у Зег 61 у Туг Зег РНе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Тгр УаЬ 61у Тгр Уа1 Агд 61 п МеГ Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи С1и Тгр МеГ
35 40 45
СЬу Хаа Пе Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг Хаа Рго Зег РЬе
50 55 60
С1п СЬу С1п УаЬ ТЬг Пе Зег АЬа Азр Ьуз Зег Ые Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз АЬа зег Азр ТЬг А1а МеГ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд СЬи Ьеи Туг 61п СЬу Туг Меь Азр ТНг РЬе Азр Зег тгр 61у
100 105 110
С1п 61у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег АЬа Зег ТЬг Ьуз 61у Рго Зег
115 120 125
Уа1 РНе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТНг Зег С1и Зег ТЬг АЬа
130 135 140
АЬа Ьеи 61 у Суз Ьеи УаЬ Ьуз Азр Туг РЬе Рго 61и Рго Уа1 ТЬг Уа1
145 150 155 160
Зег Тгр Азп Зег СЬу АЬа Ьеи ТЬг Зег 61 у Уа1 Шз ТЬг РЬе Рго А1а
165 170 175
Уа1 Ьеи С1п Зег Зег СЬу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТНг Уа1
180 185 190
Рго Зег Зег Зег Ьеи 61у ТЬг Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр Шз
195 200 205
Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд УаЬ СЬи Зег Ьуз Туг СЬу
210 215 220
Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго АЬа Рго 61 и АЬа АЬа 61у 61у Рго зег
225 230 235 240
Уа1 РНе Ьеи РНе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мег. Пе Зег Агд
245 250 255
ТНг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег С1п 61и Азр Рго
260 265 270
С1и Уа1 С1п РНе Азп Тгр Туг Уа1 Азр 61у Уа1 СЬи Уа1 Шз Азп АЬа
275 280 285
Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд СЬи 61и С1п РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1
290 295 300
Зег Уа1 Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи Шз С1п Азр Тгр Ьеи Азп СЬу Ьуз 61 и Туг
305 310 315 320
Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз 61 у Ьеи Рго Зег Зег Пе СЬи Ьуз ТЬг
325 330 335
Пе зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу 61 п Рго Агд С1и Рго 61п Уа1 Туг ТЬг Ьеи
340 345 350
Рго Рго Зег С1п СЬи 61и МеЬ ТЬг Ьуз Азп 61п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз
355 360 365
Ьеи Уа1 Ьуз 61 у РНе Туг Рго Зег Азр Пе АЬа Уа1 С1и Тгр С1и Зег
370 375 380
Азп СЬу 61п Рго 61и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр
385 390 395 400
Зег Азр СЬу Зег РНе РНе Ьеи Туг Зег Агд Ьеи ТНг Уа1 Азр Ьуз Зег
405 410 415
Агд Тгр С1п С1и СЬу Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеГ НЬз 61и АЬа
420 425 430
Ьеи Шз Азп Шз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи С1у Ьуз
435 440 445
<210> 209 <211> 108 <212> БЕЛОК
142 022832 <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вариант ОЗУ вариабельной легкой цепи кандидата 9 <400> 209
61п Зег Уа1 Ьеи ТНг С1п Рго Рго Зег Уа1 Зег Уа1 А1а Рго 61у 61п
1 5 10 15
ТЬг А1а Агд Не Зег Суз Зег С1у Азр Азп Не 61у Зег туг Туг Уа1
20 25 30
ΗΪ3 Тгр Туг 61п 61п Ьуз Рго 61у 61п А1а Рго Уа1 Ьеи Уа1 Не Туг
35 40 45
61и Азр Зег 61и Агд Рго Зег 61у Не Рго 61и Агд РЬе Зег 61у Зег
50 55 60
Азп Зег 61у Азп ТЬг А1а ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег 61у ТЬг С1п А1а 61и
65 70 75 80
Азр 61 и А1а Азр Туг Туг Суз 61п Зег Туг Азр Зег 61 п РЬе Зег РЬе
85 90 95
61у Уа1 РЬе 61у 61у 61у ТЬг Ьуз ьеи ТЬг Уа1 Ьеи
100 105
<210> 210 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вариант ОБУ вариабельной легкой цепи кандидата 10 <400> 210
61п Зег Уа1 Ьеи ТЬг 61п Рго Рго Зег Уа1 Зег Уа1 А1а Рго 61у 61п
1 5 10 15
ТЬг А1а Агд Не Зег Суз Зег 61у Азр Азп Не 61у Зег Туг Туг Уа1
20 25 30
Н1з Тгр Туг С1п 61п Ьуз Рго С1у 61п А1а Рго Уа1 Ьеи Уа1 Не Туг
35 40 45
С1и Азр Зег 61и Агд Рго Зег 61у Ие Рго 61и Агд РЬе Зег 61у Зег
50 55 60
Азп Зег 61у Азп ТЬг А1а ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег 61 у ТЬг 61 п А1а 61и
65 70 75 80
Азр С1и А1а Азр Туг Туг Суз 61п Зег Туг Азр ТЬг Рго Уа1 Туг Зег
85 90 95
Уа1 РЬе 61у 61у 61у ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи
100 105
<210> 211 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вариант ОЗУ вариабельной легкой цепи кандидата 12 <400> 211
61п Зег Уа1 Ьеи ТЬг 61п Рго Рго Зег Уа1 Зег Уа1 А1а Рго С1у 61п
1 5 10 15
ТЬг А1а Агд Не Зег Суз Зег 61 у Азр Азп Не 61 у Зег Туг Туг Уа1
20 25 30
ΗΪ3 Тгр Туг 61п 61п Ьуз Рго 61у 61п А1а Рго Уа1 Ьеи Уа1 Не Туг
35 40 45
61и Азр Зег 61и Агд Рго Зег 61у Не Рго 61и Агд РЬе Зег 61у Зег
50 55 60
143 022832
АЗП Бег 61у Азп ТЬг А1а ТЬг Ьеи ТЬг Не Бег С1у ТЬг С1п А1а С1и
65 70 75 80
Азр 61и А1а Азр Туг Туг Суз Бег Бег Туг Азр Азр Рго Азп РЬе 61 п
85 90 95
Уа1 РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи
100 105 <210> 212 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вариант ОБО вариабельной тяжелой цепи кандидата 9 <400> 212
61п Уа1 С1п Ьеи С1п С1п Бег С1у Рго 61 у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Бег С1п
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Бег Ьеи ТЬг Суз А1а Не Бег 61 у Азр Зег Уа1 Зег Бег Азп
20 25 30
Бег А1а А1а Тгр 61у Тгр Не Агд С1п Бег Рго 61у Агд 61у Ьеи 61и
35 40 45
Тгр Ьеи 61у Не Не 61п Не Агд Бег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг А1а
50 55 60
Ьеи Бег Уа1 Ьуз Бег Агд Не ТЬг Не Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 30
61п РЬе Бег Ьеи 61п Ьеи Азп Бег Уа1 ТЬг Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1
85 90 95
Туг Туг Суз А1а Агд Туг Бег Туг Рго РЬе Туг Бег Не Азр Туг Тгр
100 105 НО
С1у С1п 61у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120 <210> 213 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вариант <2ν<2 вариабельной тяжелой цепи кандидата 10 <400> 213
61п 1 Уа1 61п Ьеи 61п 5 61п Бег 61у Рго С1у 10 Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег 15 61п
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз А1а Не Бег 61 у Азр Бег Уа1 Зег Зег Азп
20 25 30
Бег А1а А1а Тгр 61у Тгр Не Агд 61п Зег Рго 61у Агд 61у Ьеи 51и
35 40 45
Тгр Ьеи 61у Не Не 61п Ьуз Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азп Туг А1а
50 55 60
Уа1 Зег Уа1 Ьуз Зег Агд Не ТЬг Не Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
61п РЬе Бег Ьеи С1п Ьеи Азп Бег Уа1 ТЬг Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1
85 90 95
Туг Туг Суз А1а Агд Туг Бег Туг Рго РЬе Туг Бег Не Азр Туг Тгр
100 105 НО
61у 61п 61у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 214 <211> 122
- 144 022832 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вариант фЧС вариабельной тяжелой цепи кандидата 12 <400> 214
СЬп ЧаЬ СЬп Ьеи СЬп СЬп Зег СЬу Рго СЬу Ьеи ЧаЬ Ьуз Рго Зег СЬп
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз АЬа Ые Зег СЬу Азр Зег ЧаЬ Зег Зег Азп
20 25 30
Зег АЬа АЬа Тгр СЬу Тгр 11е Агд СЬп Зег Рго СЬу Агд СЬу Ьеи СЬи
35 40 45
Тгр Ьеи СЬу Ые Ые СЬп Ьуз Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азп Туг АЬа
50 55 60
ЧаЬ Зег ЧаЬ Ьуз Зег Агд Ые ТЬг 11е Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
СЬп РЬе Зег Ьеи СЬп Ьеи Азп Зег ЧаЬ ТЬг Рго СЬи Азр ТЬг АЬа ЧаЬ
85 90 95
Туг Туг Суз АЬа Агд Туг Зег Туг Рго РЬе Туг Зег 11е Азр Туг Тгр
100 105 110
СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи ЧаЬ ТЬг ЧаЬ Зег Зег
115 120
<210> 215 <211> 121 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вариант Ε4ζ) кандидата 14 <400> 215
СЬи ЧаЬ СЬп Ьеи ЧаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи ЧаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу СЬи
1 5 10 15
Зег Ьеи Ьуз Ые Зег Суз Ьуз СЬу Зег СЬу Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Тгр ЧаЬ СЬу Тгр ЧаЬ Агд СЬп Мек Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Мек
35 40 45
СЬу РЬе 11е Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг АЬа Рго Зег РЬе
50 55 60
СЬп СЬу СЬп ЧаЬ ТЬг 11е Зег АЬа АЗр Ьуз Зег Ые Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Тгр Зег Бег Ьеи Ьуз АЬа Зег Азр ТЬг АЬа Мек Туг Туг суз
85 90 95
АЬа Агд СЬи Ьеи Туг СЬп СЬу Туг Мек Азр ТЬг РЬе Азр Зег Тгр СЬу
100 105 ЫО
СЬп СЬу ТЬг Ьеи ЧаЬ ТЬг ЧаЬ Зег Зег
115 120
<210> 216 <2Ы> 121 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вариант ЕЧО кандидата 15 <400> 216
СЬи ЧаЬ СЬп Ьеи ЧаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи ЧаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу СЬи
1 5 10 15
Зег Ьеи Ьуз Ые Зег Суз Ьуз СЬу Зег СЬу Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг
- 145 022832
20 25 30
Тгр Уа1 СЬу Тгр УаЬ Агд СЬп МеЕ Рго СЬу Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр МеЕ
35 40 45
С1у РЬе ЬЬе Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп Туг А1а Рго Зег РЬе
50 55 60
СЬп СЬу СЬп УаЬ ТЬг Не Зег АЬа Азр Ьуз Зег Ые Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Ьеи 61п Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз АЬа Зег Азр ТЬг АЬа МеЕ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд СЬи Ьеи Туг СЬп СЬу Туг МеЕ Азр ТЬг РЬе Азр Зег Тгр СЬу
100 105 по
С1п СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115 120
<210> 217 <211> 2712 <212> ДНК <213> Масаса ЕазсЬсиЬагЬз <400> 217 аЕдадасада сЕЕЕдссЕЕа ЕассЕасЕЕЕ ЕддЕддддас ЕЕЕЕдсссЕЕ ЕдддаЕдсЕд 60
ЕдЕдсаЕссЕ ссассаасаа аЕдсасЕдЕЕ адссаадаад ЕЕдсЕдасЕд садссассЕд 120 аадЕЕаасЕс аддЕасссда ЕдаЕсЕсссс асааасаЕаа садЕдЕЕдаа ЕсЕЕасссаЕ 180 ааЕсаасЕса даадаЕЕасс адсЕдссааЕ ЕЕЕасаадаЕ аЕадссаасЕ аасЕаЕсЕЕд 240 даЕдЕаддаЕ ЕЕаасЕссаЕ сЕсаааасЕд дадссадааЕ ЕдЕдссаааа асЕЕсссаЕд 300
ЕЕаааадЕЕЕ ЕдаассЕсса дсасааЕдад сЕаЕсЕсаас ЕЕЕсЕдаЕаа аасЕЕЕЕдсс 360
ЕЕсЕдсасда аЕЕЕдасдда асЕссаЕсЕс аЕдЕссаасЕ сааЕссадаа ааЕЕаааааЕ 420 ааЕсссЕЕЕд Еааадсадаа дааЕЕЕааЕс асаЕЕадаЕс ЕдЕсЕсаЕаа ЕддсЕЕдЕса 480
ЕсЕасааааЕ ЕаддаасЕса ддЕЕеадсЕд дааааЕсЕсс аададсЕЕсЕ аЕЕаЕсааас 540 ааЕааааЕсс аадсдсЕааа аадЕдаадаа сЕЕддЕаЕсс ЕЕдссааЕЕс аЕсЕЕЕаааа 600 аадЕЕададЕ ЕдЕсаЕсдаа ЕсаааЕЕааа дадЕЕЕЕсЕс садддЕдЕЕЕ ЕсасдсааЕЕ 660 ддаадаЕЕаЕ ЕдддссЕсЕЕ ЕсЕдаасааЕ дЕссадсЕдд дЕссссдссЕ еасададаад 720 сЕаЕдЕЕЕдд ааЕЕадсааа сасаадсдЕЕ сддааЕсЕдЕ сЕсЕдадЕаа садссадсЕд 780
Ессассасса дсааЕасаас ЕЕЕсЕЕддда сЕааадЕдда сааассЕсас ЕаЕдсЕсдаЕ 840 сЕЕЕсссаса асаасЕЕааа ЕдЕдаЕЕддЕ аасдаЕЕссЕ ЕЕдЕЕЕддсЕ ЕссасаЕсЕа 900 дааЕаЕЕЕсЕ ЕссЕддадЕа ЕааЕааЕаЕа садсаЕЕЕдс ЕсЕсЕсасЕе ЕЕЕдсасддд 960 сЕЕЕЕсааЕд ЕдсддЕассЕ дааЕЕЕдааа сддЕсЕЕЕЕа сЕааасааад ЕаЕЕЕсссЕЕ 1020 дсЕЕсдсЕсс ссаадаЕЕда ЕдаЕЕЕЕЕсЕ ЕЕЕсддЕддс ЕаасаЕдЕЕЕ ддадсассЕЕ 1080 аасаЕддаад аЕааЕдаЕаЕ ЕЕсаддсаЕа аааадсааЕа ЕдЕЕеаеадд аЕЕдаЕааас 1140 сЕдаааЕасЕ ЕаадЕсЕаЕс саасЕссЕЕЕ асаадЕЕЕдс ааасЕЕЕдас аааЕдаааса 1200
ЕЕЕдЕаЕсас ЕЕдсЕсаЕЕс ЕсссЕЕасас аЕасЕсаасс Еаассаадаа ЕааааЕсЕса 1260 ааааЕадада дЕддЕдссЕЕ сЕсЕЕддЕЕд ддссассЕад аадЕасЕЕда сЕЕдддссЕЕ 1320 ааЕдаааЕЕд ддсаадаасЕ сасаддссад дааЕддадЕд дЕсЕадаааа ЕаЕЕЕЕсдаа 1380 аЕсЕаЕсЕЕЕ ссЕасаасаа дЕассЕдсаа сЕдасЕаада асЕссЕЕЕдс сЕЕддЕссда 1440 адссЕЕсаас дасЕдаЕдсЕ ссдаадддЕд дсссЕЕаааа аЕдЕддаЕЕд сЕсЕссЕЕса 1500 ссаЕЕссадс сЕсЕЕддЕаа ссЕдассаЕЕ сЕддаЕсЕаа дсаасаасаа саЕадссаас 1560 аЕаааЕдаЕд асаЕдЕЕдда аддЕсЕЕдад ааасЕадааа ЕЕсЕддаЕЕЕ дсадсаЕаас 1620 аасЕЕадсас ддсЕсЕддаа асасдсааас ссЕддЕддЕс СЕдЕЕЕаЕЕЕ ссЕааадддЕ 1680 сЕдЕсЕсасс ЕссасаЕссЕ ЕаасЕЕддад ЕсЕааЕддсЕ ЕЕдасдадаЕ сссадЕЕдад 1740 дЕсЕЕсаадд аЕЕЕаЕсЕда асЕааадаЕс аЕЕдаЕЕЕад даЕЕдааЕаа ЕЕЕааасаса 1800 сЕЕссадсдЕ сЕдЕсЕЕЕда ЕааЕсаддЕд ЕсЕсЕааадЕ саЕЕдаассЕ ЕсадаадааЕ 1860 сЕсаЕаасаЕ садЕЕдадаа дааддЕЕЕЕс дддссадсЕЕ ЕсаддаассЕ дадЕаасЕЕа 1920 даЕаЕдсдсЕ ЕЕааЕсссЕЕ ЕдаЕЕдсаса ЕдЕдааадЕа ЕЕдссЕддЕЕ ЕдЕЕааЕЕдд 1980 аЕЕаасаада сссасдссаа саЕсссЕдад сЕдЕсаадсс асЕассЕЕЕд саасасЕсса 2040 ссссасЕаЕс аЕдддЕЕссс адЕдадасЕЕ ЕЕЕдаЕасаЕ саЕссЕдсаа адасадЕдсс 2100 сссЕЕЕдаас ЕсЕЕЕЕЕсаЕ даЕсааЕасс адЕаЕссЕдЕ ЕдаЕЕЕЕЕаЕ сЕЕЕдЕЕдЕа 2160 сЕЕсЕсаЕсс асЕЕЕдаддд сЕддаддаЕа ЕсЕЕЕЕЕасЕ ддааЕдЕЕЕс адЕасаЕсда 2220 дЕЕсЕЕддЕЕ ЕсааадаааЕ адасадасад асадаасадЕ ЕЕдааЕаЕдс адсаЕаЕаЕа 2280 аЕЕсасдссс аЕааадаЕаа ддаЕЕдддЕс ЕдддаасаЕЕ ЕсЕсЕЕсааЕ ддааааддаа 2340 дассааЕсЕс ЕсаааЕЕЕЕд ЕсЕддаадаа адддасЕЕЕд аддсаддЕдЕ ЕЕЕЕдаасЕд 2400 даадсааЕЕд ЕЕаасадсаЕ саааадаадс адаааааЕЕа ЕЕЕЕЕаЕЕаЕ аасасассаЕ 2460 сЕаЕЕаааад асссаЕЕаЕд саааадаЕЕс ааддЕасаЕс аЕдссдЕЕса асаадсЕаЕЕ 2520 даасааааЕс ЕддаЕЕссаЕ ЕаЕаЕЕдаЕЕ ЕЕссЕЕдадд адаЕЕссада ЕЕаЕааасЕд 2580
- 146 022832 аассаСдсас сердсссдсд аададдааСд СССааагсСс ассдоаСсСС даасгддсса 2640 дССоадааад ааоддасадд СдссСССсаС саСааасСдс аадСадсасС СддаСссааа 2700 аасСсадСас аС 2712 <210> 218 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вся тяжелая цепь кандидата 9ЕУЭ с 3229Р,
Р235А/Ь236А <400> 218
СЬи УаЬ СЬп Ьей СЬп СЬп Бег СЬу Рго СЬу Ьей УаЬ Ьуз Рго Зег СЬп
1 5 10 15
ТЬг Ьей Зег Ьей ТЬг Суз А1а Пе Зег СЬу Азр Зег УаЬ Зег Зег АЗП
20 25 30
Зег АЬа АЬа Тгр СЬу Тгр 11е Агд СЬп Зег Рго СЬу Агд СЬу Ьей СЬи
35 40 45
Тгр Ьен СЬу Пе Не СЬп Пе Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азр Туг АЬа
50 55 60
Ьен Зег Уа1 Ьуз Зег Агд Пе ТЬг Пе Азп Рго Азр ТЬг Зег Ьуз Азп
65 70 75 80
СЬп РЬе Зег Ьей СЬп Ьей Азп Зег УаЬ ТЬг Рго С1и Азр ТЬг АЬа УаЬ
85 90 95
Туг Туг суз А1а Агд Туг Зег Туг Рго РЬе Туг Зег 11е Азр Туг Тгр
100 105 110
СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьей УаЬ ТЬг УаЬ 5ег Зег АЬа Зег ТЬг Ьуз СЬу Рго
115 120 125
Зег УаЬ РЬе Рго Ьей А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег СЬи Зег ТЬг
130 135 140
АЬа А1а Ьей СЬу Суз Ьей УаЬ Ьуз Азр Туг РЬе Рго СЬи Рго УаЬ ТЬг
145 150 155 160
УаЬ Зег Тгр Азп Зег СЬу АЬа Ьей ТЬг Зег СЬу УаЬ НЬз ТЬг РЬе Рго
165 170 175
АЬа УаЬ Ьей С1п Зег Бег 61 у Ьен Туг Зег Ьей Зег Зег УаЬ УаЬ ТЬг
180 185 190
УаЬ Рго Зег Зег Зег Ьен СЬу ТЬг Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп УаЬ Азр
195 200 205
НЬз Ьуз Рго Бег Азп ТЬг Ьуз УаЬ Азр Ьуз Агд УаЬ СЬи Бег Ьуз Туг
210 215 220
СЬу Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго АЬа Рго СЬи А1а А1а СЬу СЬу Рго
225 230 235 240
Зег УаЬ РЬе Ьей РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьей Мес Пе Зег
245 250 255
Агд ТЬг Рго СЬи УаЬ ТЬг Суз УаЬ УаЬ УаЬ Азр УаЬ Бег СЬп СЬи Азр
260 265 270
Его СЬи УаЬ СЬп РЬе Азп Тгр Туг УаЬ Азр СЬу УаЬ СЬи УаЬ НЬз Азп
275 280 285
АЬа Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд 61 и СЬи СЬп РЬе АЗП Зег ТЬг Туг Агд УаЬ
290 295 300
УаЬ Зег УаЬ Ьей ТЬг УаЬ Ьей Ηίδ СЬп Азр Тгр Ьей Азп СЬу Ьуз СЬи
305 310 315 320
Туг Ьуз Суз Ьуз УаЬ Зег Азп Ьуз СЬу Ьей Рго Зег Зег Пе СЬи Ьуз
325 330 335
ТЬг 11е Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи РГО СЬп УаЬ Туг ТЬг
340 345 350
Ьей Рго Рго Зег С1п СЬи СЬи МеС ТЬг Ьуз Азп СЬп УаЬ Зег Ьей ТЬг
355 360 365
Суз Ьей УаЬ ьуз СЬу РЬе Туг Рго Бег Азр Не АЬа УаЬ 61и Тгр СЬи
370 375 380
Зег Азп СЬу СЬп Рго С1ц Азп Азп Туг Ьуз ГЬг ТЬг Рго Рго УаЬ Ьей
- 147 022832
385 390 395 400
АЗр Зег Азр СЬу Бег РЬе РЬе Ьец Туг Бег Агд Ьеи ТЬг 7а 1 Азр Ьуз
405 410 415
Бег Агд Тгр С1п С1и СЬу Азп Уа1 РЬе Зег Суз Бег 7а1 Мег НЬз С1и
420 425 430
АЬа Ьеи НЬз Азп Н1з Туг ТЬг СЬп Ьуз Бег Ьеи Бег Ьеи Бег Ьеи 61у
435 440 445
Ьуз <210> 219 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Тяжелая цепь кандидатов 10Е7<2, 12ЕУО с Ξ229Ρ, Г235А/Ь236А <400> 219
С1и Уа1 СЬп Ьеи СЬп СЬп Бег СЬу Рго СЬу Ьеи Уа1 ьуз Рго Зег С1п
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Бег Ьеи ТЬг Суз АЬа Ые Зег СЬу Азр Бег Уа1 Бег Зег Азп
20 25 30
Бег АЬа АЬа Тгр СЬу Тгр Ые Агд С1п Бег Рго С1у Агд СЬу Ьеи С1и
35 40 45
Тгр Ьеи 61у Ые Ые С1п Ьуз Агд Зег Ьуз Тгр Туг Азп Азп Туг А1а
50 55 60
Уа1 Бег 7а 1 Ьуз Зег Агд Пе ТЬг Ые Азп Рго Азр ТНг Бег Ьуз Азп
65 70 75 80
СЬп РЬе Бег Ьеи С1п Ьеи Азп Зег νβΐ ТЬг Рго 61и Азр ТЬг АЬа Уа1
85 90 95
Туг Туг Суз АЬа Агд Туг Бег Туг Рго РЬе Туг Бег 11е Азр Туг Тгр
100 105 110
С1у С1п С1у ТЬг Ьеи 7а 1 ТНг νβΐ Зег Бег А1а Бег ТЬг ьуз СЬу Рго
115 120 125
Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег С1и Зег ТЬг
130 135 140
АЬа А1а Ьеи СЬу Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг
145 150 155 160
Уа1 Бег Тгр Азп Бег 61у А1а Ьеи ТЬг Бег С1у 7а 1 НЬз ТЬг РНе Рго
165 170 175
АЬа Уа1 Ьеи С1п Бег Бег С1у Ьеи Туг Бег Ьеи Бег Зег νβΐ 7а1 ТЬг
180 185 190
Уа1 Рго Бег Бег Бег Ьеи С1у ТЬг Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр
195 200 205
Шз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз 7а 1 Азр Ьуз Агд 7а1 01и Бег Ьуз Туг
210 215 220
СЬу Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго АЬа Рго С1и А1а А1а СЬу С1у Рго
225 230 235 240
Бег Уа1 РЬе Ьеи РНе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Меь Ые Зег
245 250 255
Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз 7а1 Уа1 7а 1 Азр 7а 1 Бег СЬп С1и Азр
260 265 270
Рго 61и Уа1 СЬп РНе Азп Тгр Туг Уа1 Азр СЬу 7а 1 С1и 7а 1 НЬз Азп
275 280 285
А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и 61п РЬе Азп Бег ТЬг Туг Агд Ца1
290 295 300
Уа1 Бег Уа1 Ьеи ТНг 7а 1 Ьеи Шз С1п Азр Тгр Ьеи Азп 61 у Ьуз С1и
305 310 315 320
Туг ьуз Суз Ьуз Уа1 Бег Азп Ьуз С1у Ьеи Рго Бег Зег Ые С1и ьуз
325 330 335
ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз СЬу СЬп Рго Агд С1и Рго С1п 7а1 Туг ТЬг
148 022832
340 345 350
Ьеи Рго Рго Зег СЪп СЪи СЪи МеС ТЬг Ьуз Азп СЪп Уа1 Зег Ьеи ТЬг
355 360 365
Суз Ьеи Уа1 Ьуз СЪу РКе Туг Рго Бег Азр 11е АХа Уа1 С1и Тгр СЪи
370 375 380
Зег Азп СЪу СЪп Рго СЪи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи
385 390 395 400
Азр Зег Азр 61у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Агд Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз
405 410 415
Зег Агд Тгр СЪп СЪи СЪу Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 Мес НЪз С1и
420 425 430
А1а Ьеи НЪз Азп НЪз Туг ТНг СЪп Ьуз Бег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи СЪу
435 440 445
Ьуз
<210> 220 <211> 448 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Вся тяжелая цепь 8229Р, Р235А/Ь23бА варианта ЕУ(3 шАЫ4 и шАЫ5 <400> 220
СЪи Уа1 С1п Ьеи Уа1 СЪп Зег СЪу АЪа СЪи УаЪ Ьуз Ьуз Рго СЪу С1и
1 5 10 15
Зег Ьеи Ьуз Пе Зег Суз Ьуз СЪу Зег СЪу Туг Зег РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Тгр Уа1 О1у Тгр Уа1 Агд СЪп МеС Рго 61у Ьуз СЪу Ьеи СЪи Тгр Мес
35 40 45
СЪу РЬе 11е Азр Рго Зег Азр Зег Туг ТЬг Азп туг АЪа Рго Зег РЬе
50 55 60
СЪп СЪу СЪп Уа1 ТЬг 11е Зег АЪа Азр Ьуз Бег Х1е Зег ТЬг АЪа Туг
65 70 75 80
Ьеи 51п Тгр Зег Зег Ьеи Ьуз АЪа Зег Азр ТЬг А1а МеС Туг Туг Суз
85 90 95
АЪа Агд СЪи Ьеи Туг СЪп СЪу Туг МеС Азр ТЬг РЬе Азр Зег Тгр СЪу
100 105 110
СЪп С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг УаЪ зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз 61у Рго Зег
115 120 125
Уа1 РЬе Рго Ьеи АЪа Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег СЪи Зег ТЬг АЪа
130 135 140
АЪа Ьеи 61у Суз Ьеи УаЪ Ьуз Азр Туг РЬе Рго СЪи Рго УаЪ ТЬг УаЪ
145 150 155 160
Зег Тгр Азп Зег СЪу А1а Ьеи ТЬг Зег СЪу Уа1 НЪз ТЬг РЬе Рго А1а
165 170 175
Уа1 Ьеи С1п Зег Зег СЪу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 УаЪ ТЬг Уа1
180 185 190
Рго Зег Зег Зег Ьеи СЪу ТЬг Ьуз ТЬг туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр НЪз
195 200 205
Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз УаЪ Азр Ьуз Агд УаЪ СЪи Зег Ьуз Туг СЪу
210 215 220
Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго АЪа Рго СЪи АЪа АЪа СЪу 61у Рго Зег
225 230 235 240
Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мес Пе Зег Агд
245 250 255
ТЬг Рго 61и Уа1 ТЬг Суз νβΐ Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег СЪп С1и Азр Рго
260 265 270
С1и Уа1 СЪп РЬе Азп Тгр Туг УаЪ Азр СЪу УаЪ СЪи УаЪ НЪз Азп А1а
275 280 285
- 149
Ьуз ТЬг 2 90 Ьуз Рго Агд СЬи СЬи 295 СЬп РЬе Азп Зег ТЬг 300 Туг Агд УаЬ УаЬ
Зег УаЬ Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи ΗΪ5 СЬп Азр Тгр Ьеи Азп СЬу Ьуз СЬи Туг
305 310 315 320
Ьуз Суз Ьуз УаЬ Зег Азп Ьуз СЬу Ьеи Рго Зег Зег 1Ье СЬи Ьуз ТЬг
325 330 335
Не Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи Рго СЬп УаЬ Туг ТЬг Ьеи
340 345 350
Рго Рго Зег СЬп СЬи СЬи МеЬ ТЬг Ьуз Азп СЬп УаЬ Зег Ьеи ТЬг Суз
355 360 365
Ьеи УаЬ Ьуз СЬу РЬе туг Рго Зег Азр 11е АЬа УаЬ СЬи Тгр СЬи Зег
370 375 330
Азп СЬу СЬп Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЬ Ьеи Азр
385 390 395 400
Зег Азр СЬу Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Агд Ьеи ТЬг УаЬ Азр Ьуз Зег
405 410 415
Агд Тгр СЬп СЬи СЬу Азп УаЬ РЬе Зег Суз Зег УаЬ МеЬ НЬз СЬи АЬа
420 425 430
Ьеи НЬз Азп ΗΪ3 Туг ТЬг СЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи СЬу Ьуз
435 440 445
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims (1)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    Выделенное антитело или его фрагмент, способное взаимодействовать с ТБК3, содержащее вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, при этом антитело содержит:
    a) вариабельный участок тяжелой цепи 81%) 10 N0: 42; или
    b) вариабельный участок легкой цепи 81 %) ГО N0: 41; или
    c) вариабельный участок тяжелой цепи 81%) ГО N0: 42 и вариабельный участок легкой цепи 81%) ГО
    N0: 41; или
    й) аминокислотные последовательности СОК 1, 2 и 3 тяжелой цепи 81%) ГО N0: 82, 86 и 84; или е) аминокислотные последовательности СОК 1, 2 и 3 легкой цепи 81%) ГО N0: 79, 80 и 87; или ί) аминокислотные последовательности СОК 1, 2 и 3 тяжелой цепи 81%) ГО N0: 82, 86 и 84 и аминокислотные последовательности СОК 1, 2 и 3 легкой цепи 81%) ГО N0: 79, 80 и 87; или
    д) вариабельный участок тяжелой цепи, который по меньшей мере на 95% идентичен вариабельному участку с аминокислотной последовательностью 81%) ГО N0: 42; или
    Ιί) вариабельный участок легкой цепи, который по меньшей мере на 95% идентичен вариабельному участку с аминокислотной последовательностью 81%) ГО N0: 41; ΐ) тяжелую цепь 81%) ГО N0: 102; или 3) легкую цепь 81%) ГО N0: 156; или
    к) тяжелую цепь 81%) ГО N0: 102 и легкую цепь 81%) ГО N0: 156.
EA201170636A 2008-10-31 2009-10-30 Выделенное антитело, способное взаимодействовать с tlr3 EA022832B1 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US10997408P 2008-10-31 2008-10-31
US16186009P 2009-03-20 2009-03-20
US16510009P 2009-03-31 2009-03-31
US17368609P 2009-04-29 2009-04-29
PCT/US2009/062813 WO2010051470A2 (en) 2008-10-31 2009-10-30 Toll-like receptor 3 antagonists

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201170636A1 EA201170636A1 (ru) 2012-03-30
EA022832B1 true EA022832B1 (ru) 2016-03-31

Family

ID=42129569

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201170636A EA022832B1 (ru) 2008-10-31 2009-10-30 Выделенное антитело, способное взаимодействовать с tlr3
EA201500316A EA201500316A1 (ru) 2008-10-31 2009-10-30 Антагонисты толл-подобного рецептора 3

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201500316A EA201500316A1 (ru) 2008-10-31 2009-10-30 Антагонисты толл-подобного рецептора 3

Country Status (33)

Country Link
US (8) US8409567B2 (ru)
EP (1) EP2350304B1 (ru)
JP (1) JP5751631B2 (ru)
KR (1) KR101683033B1 (ru)
CN (2) CN102300997B (ru)
AU (1) AU2009308763B2 (ru)
BR (1) BRPI0921696A2 (ru)
CA (1) CA2742014A1 (ru)
CL (1) CL2011000975A1 (ru)
CO (1) CO6362052A2 (ru)
CY (1) CY1118797T1 (ru)
DK (1) DK2350304T3 (ru)
EA (2) EA022832B1 (ru)
EC (1) ECSP11011072A (ru)
ES (1) ES2618567T3 (ru)
HK (1) HK1166105A1 (ru)
HR (1) HRP20170415T1 (ru)
HU (1) HUE031756T2 (ru)
IL (1) IL212545A (ru)
LT (1) LT2350304T (ru)
MX (1) MX2011004635A (ru)
MY (1) MY183144A (ru)
NI (1) NI201100085A (ru)
NZ (2) NZ603824A (ru)
PE (1) PE20110808A1 (ru)
PL (1) PL2350304T3 (ru)
PT (1) PT2350304T (ru)
RS (1) RS55861B1 (ru)
SI (1) SI2350304T1 (ru)
SM (1) SMT201700127B (ru)
SV (1) SV2011003891A (ru)
UA (1) UA109397C2 (ru)
WO (1) WO2010051470A2 (ru)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2742014A1 (en) 2008-10-31 2010-05-06 Centocor Ortho Biotech Inc. Toll-like receptor 3 antagonists
US20130090457A1 (en) * 2008-10-31 2013-04-11 Janssen Biotech, Inc. Toll-Like Receptor 3 Antagonists for the Treatment of Metabolic and Cardiovascular Diseases
US8460659B2 (en) 2008-10-31 2013-06-11 Janssen Biotech, Inc. Toll-like receptor 3 antagonists for the treatment of metabolic and cardiovascular diseases
KR20120040141A (ko) * 2009-04-29 2012-04-26 얀센 바이오테크 인코포레이티드 톨-유사 수용체 3 길항제
JP5800809B2 (ja) 2009-07-10 2015-10-28 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． Ｔｌｒ３結合剤
US20140065154A1 (en) 2011-01-12 2014-03-06 Innate Pharma Tlr3 binding agents
NZ622260A (en) * 2011-09-12 2016-11-25 Janssen Biotech Inc Toll-like receptor 3 antagonists
CN104379603B (zh) 2012-05-31 2017-11-07 先天制药公司 Tlr3结合剂
EP2990419B1 (en) * 2013-04-22 2019-09-18 The University of Tokyo Preventive or therapeutic agent for inflammatory disease
US9198898B2 (en) 2013-06-24 2015-12-01 Tigercat Pharma, Inc. Use of NK-1 receptor antagonists in pruritus
US8906951B1 (en) 2013-06-24 2014-12-09 Tigercat Pharma, Inc. Use of NK-1 receptor antagonists in pruritus
WO2015016282A1 (ja) * 2013-07-30 2015-02-05 国立大学法人東京大学 放射線誘導性消化管症候群の予防又は治療用医薬組成物
GB201522394D0 (en) * 2015-12-18 2016-02-03 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
MX2018008939A (es) 2016-01-22 2019-08-21 Merck Sharp & Dohme Anticuerpos anti-factor de la coagulacion xi.
AR108717A1 (es) 2016-06-14 2018-09-19 Merck Sharp & Dohme Anticuerpos antifactor de la coagulación xi
US10429214B2 (en) * 2017-03-07 2019-10-01 Newtonoid Technologies, L.L.C. Modular elongated wall-mounted sensor system and method
CN109136231B (zh) * 2018-09-14 2019-08-30 苏州大学 一种翘嘴鳜tlr3基因及其应用
WO2023235771A2 (en) * 2022-05-31 2023-12-07 The University Of Chicago Chemical screen of modulators for vaccine adjuvants

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US6407213B1 (en) 1991-06-14 2002-06-18 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
CN1633598A (zh) * 2001-10-05 2005-06-29 科勒制药股份公司 Toll样受体3信号传导的激动剂和拮抗剂
JP2004016021A (ja) * 2002-06-12 2004-01-22 Japan Science & Technology Corp 抗体および阻害剤並びにそれを用いた形質転換方法および形質転換キット
WO2005007672A2 (en) * 2003-06-20 2005-01-27 Coley Pharmaceutical Gmbh Small molecule toll-like receptor (tlr) antagonists
CA2483732A1 (en) 2004-09-29 2006-03-29 Ronan Le Goffic Toll-like receptor 3, its signalling associated molecule trif and their use thereof
TWI487535B (zh) * 2004-11-30 2015-06-11 Centocor Inc 類鐸受體３（ｔｏｌｌ ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ３）拮抗劑，方法及用途
CN101415438B (zh) * 2004-11-30 2013-03-27 森托科尔公司 Toll样受体3拮抗剂、方法和用途
EP1945820B1 (en) * 2005-10-27 2013-08-28 Janssen Biotech, Inc. Toll like receptor 3 modulators, methods and uses
EP2134172A4 (en) * 2007-03-05 2011-06-01 Univ Utah State RESTRICTIVE AGONIST OF THE TOLL LIKE RECEPTOR 3
US20080299138A1 (en) * 2007-05-25 2008-12-04 Duffy Karen E Toll-Like Receptor 3 Modulators and Uses Thereof
US8273541B2 (en) * 2008-09-17 2012-09-25 Innate Pharma Compositions and methods for detecting TLR3
JP2012504651A (ja) * 2008-10-02 2012-02-23 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド Ｔｏｌｌ様受容体の活性を抑制するための方法
CA2742014A1 (en) 2008-10-31 2010-05-06 Centocor Ortho Biotech Inc. Toll-like receptor 3 antagonists
US20100188778A1 (en) * 2009-01-29 2010-07-29 Castagna Joseph T Disk Drive Assembly Having Flexible Support for Flexible Printed Circuit Board
KR20120040141A (ko) 2009-04-29 2012-04-26 얀센 바이오테크 인코포레이티드 톨-유사 수용체 3 길항제
JP5800809B2 (ja) * 2009-07-10 2015-10-28 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． Ｔｌｒ３結合剤

Also Published As

Publication number Publication date
NZ603824A (en) 2013-11-29
US9481731B2 (en) 2016-11-01
EP2350304A2 (en) 2011-08-03
CN105601742A (zh) 2016-05-25
CY1118797T1 (el) 2017-07-12
HRP20170415T1 (hr) 2017-05-05
NZ592542A (en) 2013-01-25
JP2012507564A (ja) 2012-03-29
CN102300997A (zh) 2011-12-28
JP5751631B2 (ja) 2015-07-22
SI2350304T1 (sl) 2017-04-26
US20140093508A1 (en) 2014-04-03
MY183144A (en) 2021-02-16
IL212545A0 (en) 2011-06-30
IL212545A (en) 2014-07-31
PT2350304T (pt) 2017-03-23
ECSP11011072A (es) 2011-06-30
US20100166778A1 (en) 2010-07-01
US9255153B2 (en) 2016-02-09
EP2350304A4 (en) 2014-04-16
US20140212426A1 (en) 2014-07-31
US20170058041A1 (en) 2017-03-02
UA109397C2 (uk) 2015-08-25
HUE031756T2 (en) 2017-07-28
CA2742014A1 (en) 2010-05-06
DK2350304T3 (en) 2017-03-13
US20130280263A1 (en) 2013-10-24
SV2011003891A (es) 2011-07-21
CN102300997B (zh) 2016-01-20
AU2009308763B2 (en) 2017-03-09
CO6362052A2 (es) 2012-01-20
WO2010051470A2 (en) 2010-05-06
US9522957B2 (en) 2016-12-20
EA201500316A1 (ru) 2016-01-29
ES2618567T3 (es) 2017-06-21
NI201100085A (es) 2011-11-21
MX2011004635A (es) 2011-07-19
US20180179294A1 (en) 2018-06-28
PE20110808A1 (es) 2011-10-31
KR101683033B1 (ko) 2016-12-06
BRPI0921696A2 (pt) 2015-08-18
EP2350304B1 (en) 2016-12-14
US8540986B2 (en) 2013-09-24
EA201170636A1 (ru) 2012-03-30
RS55861B1 (sr) 2017-08-31
HK1166105A1 (zh) 2012-10-19
KR20110081874A (ko) 2011-07-14
US9932404B2 (en) 2018-04-03
LT2350304T (lt) 2017-02-10
US20110008352A1 (en) 2011-01-13
US8409567B2 (en) 2013-04-02
US20130244281A1 (en) 2013-09-19
CL2011000975A1 (es) 2012-02-03
US9238693B2 (en) 2016-01-19
AU2009308763A1 (en) 2010-05-06
SMT201700127B (it) 2017-03-08
PL2350304T3 (pl) 2017-06-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA022832B1 (ru) Выделенное антитело, способное взаимодействовать с tlr3
EA021512B1 (ru) Антагонисты толл-подобного рецептора 3
RU2640254C2 (ru) Антитела против фактора роста нервов и способы их получения и применения
RU2644235C2 (ru) Антитела против фактора роста нервов и способы их получения и применения
JP6181043B2 (ja) 抗神経成長因子抗体ならびにそれを調製および使用する方法
EA024751B1 (ru) Мутанты fgf21 и их применение
EA015589B1 (ru) Антитела против миостатина и их применение
US20130090457A1 (en) Toll-Like Receptor 3 Antagonists for the Treatment of Metabolic and Cardiovascular Diseases
US8460659B2 (en) Toll-like receptor 3 antagonists for the treatment of metabolic and cardiovascular diseases
MX2014002982A (es) Antagonistas del receptor tipo toll 3.

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ KZ KG TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): BY MD RU