EA018152B1

EA018152B1 - Кристаллическая форма дигидрохлорида метил ((1s)-1-(((2s)-2-(5-(4'-(2-((2s)-1-((2s)-2-((метоксикарбонил)амино)-3-метилбутаноил)-2-пирролидинил)-1н-имидазол-5-ил)-4-бифенилил)-1н-имидазол-2-ил)-1-пирролидинил)карбонил)-2-метилпропил)карбамата

Info

Publication number: EA018152B1
Application number: EA201000196A
Authority: EA
Inventors: Суджин Ким; Ки Джао; Фуканг Янг
Original assignee: Бристол-Маерс Сквибб Компани
Priority date: 2007-08-08
Filing date: 2008-07-31
Publication date: 2013-05-30
Also published as: IL203684A; MX2010001368A; BRPI0815142B8; CN101778840B; NZ583148A; CL2008002354A1; KR20100042641A; TW200911790A; JP2010535785A; EP2183244B1; AU2008284100A1; US8629171B2; AR070016A1; BRPI0815142A2; EA201000196A1; AU2008284100B2; ZA201000843B; CA2695729A1; JP5244179B2; CN101778840A

Abstract

Описание в целом относится к кристаллической форме дигидрохлорида метил ((1S)-1-(((2S)-2-(5-(4'-(2-((2S)-1-((2S)-2-((метоксикарбонил)амино)-3-метилбутаноил)-2-пирролидинил)-1Н-имидазол-5-ил)-4-бифенилил)-1Н-имидазол-2-ил)-1-пирролидинил)карбонил)-2-метилпропил)карбамата. Описание в целом также относится к фармацевтической композиции, включающей данную кристаллическую форму, а также к способам использования кристаллической формы в лечении гепатита С и способам получения такой кристаллической формы.

Description

(57) Описание в целом относится к кристаллической форме дигидрохлорида метил ((18)-1-(((28)-2-(5(4'-(2-((28)-1-((28)-2-((метоксикарбонил)амино)-3-метилбутаноил)-2-пирролидинил)-1Н-имидазол-5-ил)-4-бифенилил)-1Н-имидазол-2-ил)-1-пирролидинил)карбонил)-2-метилпропил)карбамата. Описание в целом также относится к фармацевтической композиции, включающей данную кристаллическую форму, а также к способам использования кристаллической формы в лечении гепатита С и способам получения такой кристаллической формы.

Настоящее изобретение в целом относится к кристаллической форме дигидрохлорида метил ((18)-1(((28)-2-(5-(4'-(2-((28)-1 -((28)-2-((метоксикарбонил)амино)-3-метилбутаноил)-2-пирролидинил)-1 Н-имидазол-5-ил)-4-бифенилил)-1 Н-имидазол-2-ил)-1 -пирролидинил)карбонил)-2-метилпропил)карбамата. Настоящее изобретение также в целом относится к фармацевтической композиции, включающей эту кристаллическую форму, а также к способам использования кристаллической формы в лечении вируса гепатита С (НСУ) и способам получения кристаллической формы.

Вирус гепатита С (НСУ) является распространенной патологией человека, поражающей 170 млн человек в мире, примерно в пять раз больше числа инфицированных вирусом иммунодефицита человека типа 1. У значительной части инфицированных НСУ людей развиваются серьезные поражения печени, включая цирроз и гепатоцеллюларную карциному.

В настоящее время наиболее эффективная терапия НСУ включает комбинацию альфа-интерферона и рибавирина, что дает стойкий эффект у 40% пациентов. Недавние клинические данные показывают, что пегилированный альфа-интерферон превосходит немодифицированный альфа-интерферон, если его применяют в качестве единственного средства. Однако даже в экспериментах с терапевтическими режимами, включающими комбинации пегилированного альфа-интерферона и рибавирина, у значительного числа пациентов не отмечается стойкого уменьшения вирусной нагрузки. Таким образом, существует четкая и до сих пор не удовлетворенная потребность в разработке эффективных терапевтических средств для лечения НСУ-инфекции.

Для лечения НСУ-инфекции используют метил ((18)-1-(((28)-2-(5-(4'-(2-((28)-1-((28)-2((метоксикарбонил)амино)-3-метилбутаноил)-2-пирролидинил)-1Н-имидазол-5-ил)-4-бифенилил)-1Нимидазол-2-ил)-1-пирролидинил)карбонил)-2-метилпропил)карбамат. Это соединение плохо кристаллизуется, что ухудшает воспроизводимость при получении чистого продукта. Однако было установлено, что его соль в виде дигидрохлорида, представленная формулой (I) и называемая здесь соединением (I), можно многократно кристаллизовать с образованием единственной полиморфной модификации, называемой здесь формой N-2, которая хорошо растворима в воде и ее легко получить в чистом виде.

В первом аспекте настоящее изобретение предлагает форму N-2

Во втором аспекте настоящее изобретение предлагает форму N-2

которая имеет следующие параметры элементарной ячейки:

размеры ячейки:

а=7.5680 А,

Ь=9.5848 А, с=16.2864 А, α=74.132°, β=84.132°, γ=70.646°;

пространственная группа Р1:

число молекул в элементарной ячейке 1, причем параметры ячейки указанной кристаллической формы определены при температуре примерно 20-25°С.

- 1 018152

В третьем аспекте настоящее изобретение предлагает форму N-2

с координатами атомов в элементарной ячейке, приведенными в табл. 3. В четвертом аспекте настоящее изобретение предлагает форму N-2

с характеристическими пиками на порошковой рентгенограмме при значениях 2θ, равных 10.3±0.1, 12.4±0.1, 12.8±0.1, 13.3±0.1, 13.6±0.1, 15.5±0.1, 20.3±0.1, 21.2±0.1, 22.4±0.1, 22.7±0.1 и 23.7±0.1, полученной на дифрактометре (СиКа) с вращающимся капилляром при температуре примерно 20-25°С, причем значения 2Θ калибровали по другому подходящему эталону из базы ΝΙ8Τ.

В пятом аспекте настоящее изобретение предлагает форму Ν-2

со следующими характеристиками:

a) элементарная ячейка с параметрами, практически равными следующим величинам: размеры ячейки:

а=7.5680 А,

Ь= 9.5848 А, с=16.2864 А, а=74.132°, β=84.132°, γ=70.646;

пространственная группа Р1:

число молекул в элементарной ячейке 1, причем параметры указанной кристаллической формы определены при температуре примерно 20-25°С:

b) характеристические пики на порошковой рентгенограмме при значениях 2Θ, равных 10.3±0.1, 12.4±0.1, 12.8±0.1, 13.3±0.1, 13.6±0.1, 15.5±0.1, 20.3±0.1, 21.2±0.1, 22.4±0.1, 22.7±0.1 и 23.7±0.1, зарегистрированных при температуре примерно 20-25°С на высококачественной рентгенограмме, полученной на дифрактометре (СиКа) с вращающимся капилляром и калибровкой 2Θ по другому подходящему эталону из базы ΝΙ8Τ; и/или

c) расплав с эндотермическим эффектом разложения, начало которого обычно находится в интервале 225-245°С.

В шестом аспекте настоящее изобретение предлагает практически чистую форму Ν-2

В первом варианте шестого аспекта чистота указанной формы Ν-2 составляет по меньшей мере 95 мас.%. Во втором варианте шестого аспекта чистота указанной формы Ν-2 составляет по меньшей мере 99 мас.%.

В седьмом аспекте настоящее изобретение предлагает практически чистую форму Ν-2

с характеристическими пиками на порошковой рентгенограмме при значениях 2Θ 10.3±0.1, 12.4±0.1, 12.8±0.1, 13.3±0.1, 13.6±0.1, 15.5±0.1, 20.3±0.1, 21.2±0.1, 22.4±0.1, 22.7±0.1 и 23.7±0.1, наблюдаемыми на высококачественной рентгенограмме, зарегистрированной при температуре примерно 2025°С на дифрактометре (СиКа) с вращающимся капилляром и калибровкой 2Θ по другому подходящему

- 2 018152 эталону из базы ΝΙ8Τ.

В восьмом аспекте настоящее изобретение предлагает фармацевтическую композицию, включающую форму N-2

и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

В девятом аспекте настоящее изобретение предлагает фармацевтическую композицию, содержащую практически чистую форму N-2

и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. В первом варианте девятого аспекта чистота указанной формы N-2 составляет по меньшей мере 95 мас.%. Во втором варианте девятого аспекта чистота указанной формы N-2 составляет по меньшей мере 99 мас.%.

В десятом аспекте настоящего изобретения предлагается фармацевтическая композиция, содержащая форму N-2

в комбинации с одним или несколькими дополнительными соединениями, обладающими анти-НСУ активностью. В первом варианте десятого аспекта чистота указанной формы N-2 составляет по меньшей мере 90 мас.%. Во втором варианте десятого аспекта чистота указанной формы N-2 составляет по меньшей мере 95 мас.%. В третьем варианте десятого аспекта чистота указанной формы N-2 составляет по меньшей мере 99 мас.%.

В варианте десятого аспекта настоящего изобретения по меньшей мере одно из дополнительных соединений с анти-НСУ активностью представляет собой интерферон или рибавирин. В пятом варианте десятого аспекта интерферон выбирают из интерферона альфа 2В, пегилированного интерферона альфа, консенсусного интерферона, интерферона альфа 2А и лимфобластоидного интерферона тау.

В другом варианте десятого аспекта настоящее изобретение предлагает фармацевтическую композицию, включающую форму N-2

Н₃СО

в комбинации с одним или двумя дополнительными соединениями, обладающими анти-НСУ активностью, причем по меньшей мере одно из дополнительных соединений выбирают из интерлейкина 2, интерлейкина 6, интерлейкина 12, соединения, стимулирующего отклик Т-хелпера клетки типа 1, интерферирующей РНК, антисенс-РНК, имихимода, рибавирина, ингибитора инозин 5'монофосфатдегидрогеназы, амантадина и римантадина.

В одиннадцатом аспекте настоящее изобретение предлагает способ лечения НСУ-инфекции у млекопитающего, включающий введение млекопитающему терапевтически эффективного количества формы N-2

В варианте одиннадцатого аспекта указанная форма N-2 имеет чистоту по меньшей мере 90 мас.%. Во втором варианте одиннадцатого аспекта указанная форма N-2 имеет чистоту по меньшей мере 95 мас.%. В третьем варианте одиннадцатого аспекта указанная форма N-2 имеет чистоту по меньшей мере 99 мас.%. В четвертом варианте одиннадцатого аспекта млекопитающее представляет собой человека.

Другие варианты настоящего изобретения могут включать подходящие комбинации двух или не

- 3 018152 скольких приведенных в нем вариантов и/или аспектов.

Другие варианты и аспекты изобретения будут очевидны из изобретения, приведенного ниже.

Соединения настоящего изобретения также существуют как таутомеры; поэтому настоящее изобретение включает также все таутомерные формы.

Фиг. 1 иллюстрирует экспериментальные и модельные порошковые дифрактограммы (СиКа λ=1.54178 А при комнатной температуре) кристаллической формы N-2 соединения (I).

Фиг. 2 иллюстрирует результаты исследования кристаллической формы N-2 соединения (I) методом дифференциальной сканирующей калориметрии.

Фиг. 3 демонстрирует спектры твердофазного ЯМР для кристаллической формы N-2 соединения (I). Настоящее изобретение относится к кристаллической форме соединения (I)

Использованный здесь термин полиморфная модификация относится к кристаллическим формам одинакового химического состава, но с различным пространственным расположением молекул, атомов и/или ионов, образующих кристалл.

Использованный здесь термин фармацевтически приемлемый относится к соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые с точки зрения здравого медицинского смысла пригодны для контакта с тканями человека и животных без избыточной токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблемных осложнений при разумном соотношении успеха и риска.

Использованный здесь термин практически чистый относится к форме N-2 соединения (I), чистота которой не ниже 90%. Это означает, что полиморфная модификация соединения (I) содержит не более примерно 10% любого другого соединения и, в частности, не более примерно 10% любой другой формы соединения (I).

Использованный здесь термин терапевтически эффективное количество включает количество кристаллических форм соединения (I), которое эффективно при введении в чистом виде или в комбинации для лечения гепатита С. При использовании комбинации соединения (I) с другим медикаментом описанная здесь комбинация соединений может проявить синергетический эффект. Синергизм, как описано, например, у СИои апТ Та1а1ау, Αάν. Еп/уте Ке§и1. 1984, 22, 27-55, проявляется тогда, когда эффект от соединений, вводимых в комбинации, оказывается большим, чем эффект от суммы соединений, вводимых по отдельности.

Термин лечение относится к (1) профилактике заболевания, расстройства или состояния у пациента, склонного к заболеванию, расстройству или состоянию, которые еще не диагностированы; (и) ингибированию заболевания, расстройства или состояния, т.е. остановке их развития; и/или (ϊϊϊ) облегчению заболевания, расстройства или состояния, т.е. обратному развитию заболевания, расстройства и/или состояния.

В одном варианте данное изобретение предлагает кристаллическую форму соединения (I). Эту кристаллическую форму соединения (I) можно использовать в фармацевтических композициях, которые могут необязательно включать один или несколько компонентов, которые выбирают, например, из группы, состоящей из эксципиентов, носителей, или один из других активных фармацевтических ингредиентов с активными химическими фрагментами другой молекулярной структуры.

В одном варианте на фазовую однородность кристаллической формы указывает тот факт, что площадь дополнительных пиков, отсутствующих на модельной рентгенограмме, составляет менее 10%, в другом варианте менее 5% и в еще одном варианте менее 2% от общей площади пиков на полученной экспериментально рентгенограмме кристаллической формы. В другом варианте на фазовую однородность кристаллической формы указывает тот факт, что площадь дополнительных пиков, отсутствующих на модельной рентгенограмме, составляет менее 1% от общей площади пиков на экспериментально определенной рентгенограмме кристаллической формы.

В одном варианте предложена композиция, состоящая исключительно из кристаллической формы N-2 соединения (I). Композиция по данному варианту может включать по меньшей мере 90 мас.% кристаллической формы N-2 соединения (I) в расчете на массу соединения (I) в композиции. Остальное вещество представляет собой другие формы соединения и/или примеси от реакции, и/или примеси от обработки, попавшие в ходе приготовления.

Присутствие примесей от реакции и/или примесей от обработки можно определить аналитическими методами, известными в данной области, такими как, например, хроматография, масс-спектрометрия или инфракрасная спектроскопия.

- 4 018152

Получение кристаллических материалов.

Кристаллические формы можно получить разными способами, включая, например, кристаллизацию или перекристаллизацию из подходящего растворителя, возгонку, выращивание из расплава, твердофазное превращение из другой фазы, кристаллизацию из сверхкритической жидкости и струйное распыление. Методики кристаллизации или перекристаллизации кристаллических форм из смеси растворителей включают, например, упаривание растворителя, понижение температуры смеси растворителей, внесение в перенасыщенную смесь растворителей затравки кристалла молекулярной формы или ее соли, сушку смеси растворителей с замораживанием и добавление антирастворителей (противорастворителей).

Для получения кристаллических форм, включая полиморфные модификации, можно использовать высокопроизводительные способы кристаллизации. Кристаллы лекарственных соединений, включая полиморфные модификации, способы их получения и характеризация кристаллов лекарственных соединений описаны в книге Твердофазная химия лекарств, 8.К. Вугп, В.В. РГеШег, аиб 1.6. 81оте11, 2'¹ Εάίΐίοη, 88С1, \Уе51 ЬаГауеОе. Ιηάίαηα (1999).

В методике кристаллизации с применением растворителя выбор растворителя или растворителей обычно зависит от одного или нескольких факторов, таких как растворимость соединения, методика кристаллизации и давление пара растворителя. Можно использовать комбинацию растворителей; например соединение можно растворить в первом растворителе с образованием раствора, затем добавить антирастворитель для уменьшения растворимости соединения в растворе и образования кристаллов.

Антирастворитель представляет собой растворитель, в котором данное соединение имеет низкую растворимость.

В одном способе получения кристаллов соединение суспендируют и/или перемешивают в подходящем растворителе с образованием суспензии, которую для ускорения растворения можно нагреть. Использованный здесь термин суспензия означает насыщенный раствор соединения, который может также содержать дополнительное количество соединения с образованием гетерогенной смеси соединения и растворителя при данной температуре.

Затравочные кристаллы можно добавить к любой кристаллизационной смеси для ускорения кристаллизации. Внесение затравки можно использовать для регулирования роста конкретной полиморфной модификации или для регулирования распределения частиц кристаллического продукта по размерам. Соответственно расчет необходимого количества затравки зависит от размера доступной затравки и нужного среднего размера частиц, как описано, например, в работе Программированное охлаждение периодических кристаллизаторов, 1ЛУ. МиШи аиб 1. Ыуу11, Сйеш1са1 Еидтеепид 8с1еисе, 1971, 26, 369377. В целом затравки из частиц малого размера нужны для регулирования эффективности роста кристаллов в данной порции. Частицы затравки малого размера можно получить путем отсеивания, измельчения или дробления крупных кристаллов до микронных размеров или микрокристаллизацией из растворов. Следует обращать внимание на то, чтобы измельчение или дробление до микронных размеров не приводили к изменениям кристалличности нужной кристаллической формы (т.е. изменению до аморфной фазы или другой полиморфной модификации).

Охлажденную кристаллизационную смесь можно отфильтровать в вакууме и промыть выделенное твердое вещество подходящим растворителем, таким как холодный растворитель перекристаллизации, и высушить в атмосфере азота с образованием нужной кристаллической формы. Выделенные твердые вещества можно проанализировать подходящими спектроскопическими или аналитическими методами, такими как твердофазный ядерный магнитный резонанс, дифференциальная сканирующая калориметрия, рентгеновская порошковая дифракция и т.п., для подтверждения образования предпочтительной кристаллической формы продукта. Конечную кристаллическую форму обычно получают с выходом более примерно 70 мас.%, предпочтительно более 90 мас.% в расчете на массу исходного соединения, введенного в процедуру кристаллизации. Если нужно, продукт можно измельчить или пропустить через сито.

Кристаллические формы можно приготовить непосредственно в реакционной смеси на конечной стадии процесса приготовления соединения (I). Это можно осуществить, например, применяя на конечной стадии растворитель или смесь растворителей, из которых можно кристаллизовать соединение (Ι). Альтернативно кристаллические формы можно получить способами дистилляции или введения растворителя. Подходящие растворители для этой цели включают, например, приведенные выше неполярные растворители и полярные растворители, в том числе протонные полярные растворители типа спиртов и апротонные полярные растворители типа кетонов.

Присутствие в образце более одной полиморфной модификации можно установить такими методами, как порошковая рентгеновская дифракция (РХКЭ) или спектроскопия твердофазного ядерного магнитного резонанса (88ΝΜΚ.). Например, присутствие дополнительных пиков на экспериментальной рентгенограмме РХКП образца по сравнению с модельной рентгенограммой РХКЭ может указать на наличие более одной полиморфной модификации. Модельную рентгенограмму РХКЭ можно рассчитать из рентгеновских данных для монокристалла; см. 8ш11й, Ό.Κ., Программа ΕΘΚ.ΤΚΑ.Ν для расчета рентгеновских порошковых дифрактограмм, Ьаигеисе К.а61а1юи ЬаЬога1огу, Ькегшоге, СайГогша, иСВЬ7196 (Арп1 1963).

- 5 018152

Характеризация.

Форму N-2 соединения (I) можно охарактеризовать разными методами, хорошо известными специалистам в данной области. Примеры способов характеризации включают, но не ограничиваются ими, рентгеноструктурный анализ, порошковую рентгеновскую дифракцию (РХКП), модельные порошковые дифрактограммы (Υίη, 8.; 8сагшде, К.Р.; И1Магсо, 1.; Са1е11а, М. аиб СоидоШач 1. Ζ., Атепсаи РйагтасеиПса1 Кеу1ете, 2003, 6, 2, 80), дифференциальную сканирующую калориметрию (И8С), твердофазный ¹³С ЯМР (Еаг1, \У.Е апб Уаи бег Най, И.Ь., 1. Мади. Кекои., 1982, 48, 35-54), спектроскопию комбинационного рассеяния, инфракрасную спектроскопию, изотермы сорбции влаги, термогравиметрический анализ (ТСА) и методы с использованием нагревательного столика.

Кристаллические формы можно охарактеризовать и различить методом рентгеновской дифракции, основанным на определении параметров элементарной ячейки в монокристалле формы N-2. Подробное описание элементарных ячеек содержится в работе 81ои1 & 1еи5еи, Х-Кау 8йисШге БеЮгттабоп: А РгасПса1 Сшбе, МастШаи Со., №\ν Υо^к (1968), Скар1ег 3, которая включена здесь ссылкой. Помимо этого можно определить пространственное расположение атомов в кристаллической решетке по наблюдаемым координатам атомов. Другим способом характеризации кристаллической структуры является метод порошковой рентгеновской дифракции, в котором экспериментальную рентгенограмму сравнивают с модельной дифрактограммой для чистого порошкового материала при условии, что обе дифрактограммы получены при одной и той же температуре в виде набора значений углов 2θ.

Специалисту в данной области понятно, что рентгенограмма может быть получена с определенной погрешностью, которая зависит от условий измерений. В частности, общеизвестно, что интенсивность пиков на рентгеновской дифрактограмме может быть различной в зависимости от условий измерения. Кроме того, понятно, что относительные интенсивности могут также изменяться в зависимости от экспериментальных условий и соответственно точный порядок интенсивности не следует принимать во внимание. Кроме того, ошибка в измерении угла дифракции для традиционной рентгеновской дифрактограммы обычно составляет примерно 5% или менее и такую величину ошибки измерения надо учитывать при определении указанных выше углов дифракции. Следовательно, следует понимать, что кристаллические формы в данном изобретении не ограничиваются только теми кристаллическими формами, которые дают рентгенограммы, полностью идентичные с рентгенограммами, приведенными на сопровождающих чертежах. Любая кристаллическая форма, которая дает рентгенограмму, И8С-термограмму или ЯМР-спектр, практически идентичные с теми, которые приведены на сопровождающих чертежах, попадают в объем настоящего изобретения. Способность оценить практическую идентичность рентгенограмм входит в компетенцию специалиста в данной области.

Применение.

Форму N-2 соединения (I), одну или в комбинации с другими соединениями, можно использовать для лечения инфекции НСУ.

Настоящее изобретение также предлагает композиции, включающие терапевтически эффективное количество формы N-2 соединения (I) и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.

Количество активного ингредиента, т.е. формы N-2 соединения (I), в таких композициях обычно составляет 0.1-99.9 мас.% от всей композиции и часто составляет примерно 5-95 мас.%. В некоторых случаях для повышения стабильности соединения или его выделенной формы рН препарата можно установить с помощью фармацевтически приемлемых модификаторов (таких как карбонат кальция и оксид магния). Препараты полиморфной модификации настоящего изобретения могут также содержать добавки для повышения абсорбции и биологической доступности.

Фармацевтические композиции по данному изобретению можно вводить перорально, парентерально или через имплантированный резервуар. Использованный здесь термин парентерально включает методики подкожного, внутрикожного, внутривенного, внутримышечного, внутрисуставного, внутрисиновиального, интрастенального, интратекального и внутрирубцового введения или инфузии.

Фармацевтические композиции могут быть в форме стерильного препарата для инъекций, например в виде стерильной водной или масляной суспензии для инъекций. Эту суспензию можно приготовить по методикам, известным в данной области, с использованием подходящих диспергирующих или смачивающих реагентов и суспендирующих реагентов. Подробности, касающиеся приготовления таких соединений, известны специалистам в данной области.

При пероральном введении фармацевтические композиции по данному изобретению можно вводить в любой приемлемой лекарственной форме, включая, но не ограничиваясь этим, капсулы, таблетки и водные суспензии и растворы. В случае таблеток для перорального применения обычно используемые носители включают лактозу и кукурузный крахмал. Можно также добавить смазывающие компоненты, такие как стеарат магния. Для перорального введения в виде капсул пригодные носители/разбавители включают лактозу, высоко- и низкомолекулярные полиэтиленгликоли и высушенный кукурузный крахмал. При пероральном введении водных суспензий активный ингредиент комбинируют с эмульгирующими и суспендирующими реагентами. При желании можно добавить подсластители, и/или отдушки, и/или красители.

Другие подходящие носители для указанных выше композиций можно найти в стандартных фарма

- 6 018152 цевтических текстах, например в Кетшд1оп'к Рйагтасеибса1 8с1еисек, 19(Н еб., Маск РиЬНкЫпд Сотрапу, Еак1оп. Репп., 1995. Другие подробности относительно разработки и приготовления подходящих лекарственных форм фармацевтических композиций настоящего изобретения известны специалистам в данной области.

В монотерапии для профилактики и/или лечения заболеваний с участием НСУ типичными являются дозы соединений по настоящему изобретению примерно 0.05-100 мг/кг массы тела в сутки, более конкретно примерно 0.1-50 мг/кг массы тела в сутки. Обычно фармацевтические композиции по данному изобретению вводят примерно 1-3 раза в сутки или альтернативно путем непрерывного вливания. Такое введение можно использовать в терапии хронического или острого течения болезни. Количество активного ингредиента, которое можно комбинировать с носителями для получения одной лекарственной формы, будет варьироваться в зависимости от объекта лечения и конкретного способа введения.

Специалисту очевидно, что могут потребоваться меньшие или большие дозы. Конкретная доза и режим лечения пациента будут зависеть от многих факторов, в том числе активности конкретного используемого соединения, возраста, массы тела, общего состояния здоровья, пола, диеты, времени введения, продолжительности лечения, скорости выведения, сочетания лекарств, остроты и течения болезни, реакции пациента на инфекцию и заключения лечащего врача. В одном варианте препараты с единичной дозой содержат суточную дозу или ее часть, как указано выше, или соответствующую часть активного ингредиента. Обычно лечение начинают с малых доз, значительно меньших, чем оптимальная доза белка. Затем дозу понемногу увеличивают до достижения оптимального эффекта в данных обстоятельствах. В целом наиболее желательно вводить соединение в такой концентрации, которая приводит к эффективному антивирусному результату без вредных или опасных побочных эффектов.

Поскольку композиции по данному изобретению включают комбинацию полиморфной модификации по данному изобретению и одного или нескольких дополнительных терапевтических или профилактических реагентов, то как соединение, так и дополнительный реагент обычно составляют примерно 10100% и более предпочтительно примерно 10-80% от дозы, обычно вводимой в режиме монотерапии. Один или несколько дополнительных реагентов можно вводить до, после или одновременно с полиморфной модификацией по настоящему изобретению.

Поскольку полиморфная модификация находится вместе с фармацевтически приемлемым носителем, полученную композицию можно вводить ш νΐνο млекопитающим, например человеку, для ингибирования Ν85Ά или лечения либо профилактики вирусной инфекции НСУ. Такое лечение можно также провести с использованием полиморфной модификации по данному изобретению в комбинации с реагентами, которые включают, но не ограничиваются ими: иммуномодуляторы, такие как интерфероны; другие антивирусные реагенты типа рибавирина, амантадина; другие ингибиторы Ν85Ά; ингибиторы других мишеней жизненного цикла НСУ, такие как геликаза, протеаза, полимераза, металлопротеиназа или внутренний сайт связывания рибосомы; или их комбинации. Для создания единой лекарственной формы к полиморфной модификации по данному изобретению можно добавить дополнительные реагенты. Альтернативно, эти дополнительные реагенты можно вводить млекопитающему отдельно в виде части сложной лекарственной формы.

Ниже в табл. 1 приведены иллюстрирующие примеры соединений, которые можно вводить вместе с соединениями по данному изобретению. Соединения по данному изобретению можно вводить с другими соединениями, обладающими анти-НСУ активностью, вместе или отдельно или комбинируя соединения в композицию.

- 7 018152

Таблица 1

Патентованное название	Физиологиче ский класс	Тип ингибитора или мишень	Компанияпоставщик
ΝΙΜ811		Ингибитор циклофилина	Ыочагбгз
гас1ах1п		Иммуномодулятор	Зс1с1опе
5 шли 5		Метиленовый	Βίοθηνίείο
	голубой	η
АсбИоп		Агонист	Со1еу
(СРС10101)		ТЬКЭ
			Ти1аг1к
ВабаЬиНп	Противора-	Ингибитор	1пс., ЗопТЪ. Зап
(Т67)	ковый Антивирусный	β-тубулина	Ггапсгзсо, СА 1313 РЬагтасеиб 1са1з 1пс, СагФзЬаб.,
1313 14803	Антисенс	СА/Е1ап РЬатасеиб1 са1з 1пс., Ыеад Уогк, ΝΥ Εηάο Ркагтасеиб 1са1з




Зиттебге1	Антивирусный	Антивирусный	НоШФпдз 1пс. , Скабдз года, ра

03-9132 (АСН-	Антивирус-	Ингибитор	АсЫШоп
806)	ный	НСУ	/ ОНеаа
Соединения и соли пиразолопиримидина	Антивирусный	Ингибиторы НСУ	Аггоад ТкегареиЫ
из МО-	сз ьра.
2005047288 26 мая 2005			К1Ьаркагт
ΙιθνονίΓΐη	Антивирус-	Ингибитор	1пс. ,
ный	ΙΜΡΌΗ	Созба Меза, СА

- 8 018152

Компанияпоставщик

Патентованное название

Физиологиче ский класс

Тип ингибитора или мишень

Мег1теросНЬ (УХ-497)

Антивирусный

Ингибитор

ΙΜΡΌΗ

ХТЬ-6865 (ХТЬ002)

Антивирусный

Моноклональ ное антитело

Те1аргеч1г (νχ-950, ЬУ570310)

Антивирусный

Ингибитор N83 серинпротеазы

ЧегРех РкагшасеиР 1са1з 1ПС . , СашЬгхдде, МА_______

ХТЬ Вгоркагшас еиР1са1з ьра., ВекочоР, 1згае1____

ЧегРех РкагшасеиР 1са1з 1пс. , СатЬггЦде, МА/ Ε1Ϊ Ы11у апй Со. 1пс., 1пШапаро1 ιέ, ΙΝ

НСЧ-796

Антивирусный

ΝΜ-283

Антивирусный

СЬ-59728

Антивирусный

СЬ-60667

Антивирусный

2'С МеА

Антивирусный

Ρ8Ι 6130

Антивирусный

К1626

Антивирусный

2'С МеРку1 айепозтпе

Антивирусный

Ингибитор Ν85Β репликазы Ингибитор Ν85Β репликазы Ингибитор Ν35Β репликазы Ингибитор Ν85Β репликазы Ингибитор Ν85Β репликазы Ингибитор Ν85Β репликазы Ингибитор Ν85Β репликазы Ингибитор Ν85Β репликазы

ИуеРк / Чггоркагта

Ιάβηίχ / ЫочагРгз

Сепе ЬаЪз / ΝονβΓΡϊε

Сепе ЬаЬз / МочагРтз

СНеай

Воске

Мегск

- 9 018152

Патентованное название	Физиологиче ский класс	Тип ингибитора или мишень	Компанияпоставщик
СГТК-003	Антивирусный	Ингибитор ΚάΚρ	Дар ап ТоЬассо 1пс. , Токуо, Дарап
Ьеуоутгтп	Антивирусный	рибавирин	1СЫ Ркагшасеиб 1са1з, Созба Меза, СА
ΚίϋβνίΓίη	Антивирусный	Рибавирин	Зсйег1пд- Р1оидй СогрогаЫо п, КепИздогСЬ , Ш
У1гаш1сИпе	Антивирусный	Предшествен -ник рибавирина	КгЬарйагт 1пс. , Созба Меза, СА
Нербагуше	Антивирусный	рибозим	КгЬогуте Рйагтасеиб 1са1з 1пс. , Вои1с1ег, СО
В1ЬЫ-2061	Антивирусный	Ингибитор серинпротеазы	ВоейгТпдег 1пде1Ие1т Рйагта КС, 1пдеИ1ед.т, Сегтапу
ЗСН 503034	Антивирусный	Ингибитор серинпротеазы	Зсйеггпд Р1оидй
габагйт	Иммуномодулятор	Иммуномодулятор	ЗсЮ1опе Рйагтасеиб гса1з 1пс., Зап Мабео, СА
СерТепе	Иммуномодулятор	Иммуномодулятор	Мах1т Ркагтасеиб 1са1з 1пс., Зап Игедо, СА

- 10 018152

Патентованное название	Физиологиче ский класс	Тип ингибитора или мишень	Компанияпоставщик
СеПСерб	Иммунодепрессант	НСУ 1дС иммунодепрессант	Р. Но££таппЬа Коске ЬТБ, Вазе1, Ззд1£гег1ап ά
С1Уас1г	Иммунодепрессант	НСУ 1дС иммунодепрессант	ЫаЫ Вгоркагтас еи£1са1з 1пс., Воса Кабоп, ЕЬ
А1Ьи£егоп - а	Интерферон	альбумин 1ЕЫ-а2Ь	Нитап Сепоте Зсгепсез 1пс. , КосЫПе, МБ
1п£егдеп А	Интерферон	ΙΕΝ альфакон-1	1пбегМипе Ркагтасеиб 1са1в 1пс. , ВггзЬапе, СА
Отеда ΙΕΝ	Интерферон	ΙΕΝ-ω	1пбагс1а Ткегареибг СЗ
ΙΕΝ-β апй ΕΜΖ701	Интерферон	ΙΕΝ-β и ΕΜΖ701	Тгапз1б1оп Ткегареиб1 сз 1пс., 0пбаг1о, Сапайа
КеЫ£	Интерферон	ΙΕΝ-βΙβ	Зегопо, Сепеуа, 3^1бгег1ап а
Ко£егоп А	Интерферон	1ЕЫ-а2а	Е. Но££таппЬа Коске ЬТБ, Вазе1, Зи71бгег1ап а

- 11 018152

Патентованное название	Физиологиче ский класс	Тип ингибитора или мишень	Компанияпоставщик
1пбгоп А	Интерферон	ΙΕΝ-агЬ	ЗсЬегФпдР1оид11 СогрогаЫо п, ΚθπιΙμογΡΙί , Ш
1пбгоп А апб габахФп	Интерферон	1ЕЫ-а2Ь/а1- тимозин	КедепеКх ВгорЬагтгс еиХФса1з 1пс. , ВебЬезба, МО/Зс1С1оп е РИагтасеиб гса1з 1пс, Зап Мабео, СА
РеЬебгоп	Интерферон	ΙΓΝ- а2Ь/рибавирин	ЗсЬегФпд- Р1оидЪ СогрогаЫо п, ΚθηίΙνίΟΓϋΗ , Ш
АсЫштипе	Интерферон	ΙΝΕ-γ	1пбегМипе 1пс. , Вг1зЬапе, СА
ΙηϋθΓίθΓοη-β	Интерферон	Интерферон- Р-1а	Зегопо
Ми1£1£егоп	Интерферон	ΙΕΝ длительного действия	Уггадеп/Уа 1епЫз
Ме11£егоп	Интерферон	Лимфобласто -ид ΙΡΝ-αηΙ	СЦахоЗпйбЬ КИпе р1с, ихЬгФбде, ик
ОшпФФегоп	Интерферон	природный ΙΡΝ-α	Уггадеп 1пс., Р1апба£1оп , ЕЬ
Редазуз	Интерферон	Пегилирован ный 1РЫ-а2а	Г. Но££таппЬа КосЬе ΤιΤΌ, Вазе1, ЗмгРгегТап ά

- 12 018152

Патентованное название	Физиологиче ский класс	Тип ингибитора или мишень	Компанияпоставщик
		Пегилирован	МахФт
Редазуз апб Сер1епе		ный ΙΕΝ-	РЪагтасеиб
Интерферон	а2а/ иммуномоду-	Фса1з 1пс., Зап
		лятор	Огедо, СА
Редазуз апб ΚίϋβνίΓίη		Пегилирован	Но££тапп- Ьа ВосЬе
Интерферон	ный ΙΕΝ- а2а/рибави-	ЬТР, Вазе1,
		рин	Зм1£гег1ап ά Зсйег1пд- Р1оидЬ
РЕС-1ПБГОП	Интерферон	Пегилирован ный 1ЕЫ-а2Ь	Согрогабго п, Кеп11адог£Ь

			ЗсЬегтпд-
		Пегилирован	Р1оидЬ
РЕС-1п£гоп/ ΚίϋβνίΓΪη	Интерферон	ный ΙΡΝа2Ь/рибавирин	Согрогабго п, КепИюогбЬ , ш Ιηάθνυ,ε РЬагтасеиб
Противофиброзный
ΙΡ-501	Гепатопро-	1са1з
	тектор	препарат	1пс. , Ьех1пд£оп, МА 1бип РЬагтасеиб
ΙϋΝ-6556	Гепатопро-	Ингибитор	1са1з
	тектор	каспазы Ингибитор	1пс., Зап Ц1едо, СА 1пбегМипе Рйагтасеиб
ΙΤΜΝ-191 (К-	Антивирус-	1са1з
7227)	ный	серин-	1пс. ,
	протеазы	ВггзЬапе, СА

СЬ-59728	Антивирус-	Ингибитор Ν35Β	Сепе1аЬз
	ный	репликазы
ΑΝΑ-971	Антивирусный	Агонист ТЬЕ-7	Апабуз

Другой аспект данного изобретения предлагает способы ингибирования НСУ Н85Л-активности у пациентов путем введения полиморфной модификации по настоящему изобретению.

В одном варианте эти способы полезны для уменьшения активности НСУ Ν85Ά у пациента. Если фармацевтическая композиция содержит в качестве активного компонента только полиморфную модификацию по данному изобретению, то такие способы могут дополнительно включать стадию введения указанному пациенту реагента, выбранного из иммуномодулятора, антивирусного реагента, ингибитора НСУ Ν85Ά или ингибитора других мишеней в жизненном цикле НСУ, таких как, например, геликаза, полимераза, протеаза или металлопротеиназа. Такой дополнительный реагент можно ввести пациенту до, одновременно или после введения соединений по данному изобретению.

В другом варианте эти способы приводят к ингибированию размножения вирусов у пациента. Такие способы можно применять в лечении или профилактике заболевания НСУ.

Полиморфную модификацию по данному изобретению можно также использовать в качестве лабораторного реагента. Полиморфная модификация может быть полезна при разработке методов исследования вирусной репликации, при тестировании методов изучения животных и при структурных биологических исследованиях для более глубокого понимания механизма заболевания НСУ.

Полиморфную модификацию по данному изобретению можно также использовать для лечения или профилактики вирусного заражения материалов и таким образом уменьшить риск вирусного инфицирования персонала лабораторий, медицинского персонала или пациентов, которые контактируют с такими материалами, например кровью, тканями, хирургическими инструментами и одеждой, лабораторным

- 13 018152 инструментарием и одеждой, а также аппаратурой и материалами для забора и переливания крови.

Следующие неограничивающие примеры иллюстрируют данное изобретение.

Примеры

Вг

Синтез соединения 2

В трехгорлую круглодонную колбу на 1 л с механической мешалкой, термопарой и трубкой для подачи азота загрузили 20 г (83.9 ммоль, 1 экв.) 1,1'-(бифенил-4,4'-диил)диэтанона, 200 мл СН₂С1₂ и 8.7 мл (27.1 г, 169.3 ммоль, 2.02 экв.) брома. Смесь перемешивали в атмосфере азота в течение примерно 20 ч при обычных условиях. К полученной суспензии добавили 200 мл СН₂С1₂ и сконцентрировали до объема примерно 150 мл вакуумной дистилляцией. Затем растворитель отогнали в вакууме и добавили 200 мл ТГФ. Суспензию охладили до 20-25°С в течение 1 ч и перемешивали при 20-25°С еще в течение 1 ч. Отфильтровали желтоватые кристаллы и промыли 150 мл СН₂С1₂. Продукт высушили в вакууме при 60°С и получили 27.4 г (69.2 ммоль, 82%) целевого соединения: ¹Н ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 7.95-7.85 (м, 4Н), 7.60-7.50 (м, 4Н), 4.26 (с, 4Н); ¹³С ЯМР (100 МГц, СБС13) δ 191.0, 145.1, 133.8, 129.9, 127.9, 30.8; ИК (КВг, см’¹) 3007, 2950, 1691, 1599, 1199; выч. для С^Н^В^: С, 48.52; Н, 3.05; Вг, 40.34. Найдено: С, 48.53; Н, 3.03; Вг, 40.53. НКМ8 рассч. для С16Н13ВГ2О2 (М+Н; ИС!'): 394.9282. Найдено: 394.9292. Т.пл. 224-226°С.

о Вос

Синтез соединения 3

В 500-мл колбу с рубашкой, термопарой, механической мешалкой и трубкой для подачи азота загрузили 20 г (50.5 ммоль, 1 экв.) соединения 2, 22.8 г (105.9 моль, 2.10 экв.) 1-(трет-бутоксикарбонил)-Гпролина и 200 мл ацетонитрила. Суспензию охладили до 20°С и добавили 18.2 мл (13.5 г, 104.4 ммоль, 2.07 экв.) ΌΙΡΕΆ. Суспензию нагрели до 25°С и перемешивали в течение 3 ч. Полученный прозрачный органический раствор промыли 3x100 мл 13 мас.% водным №С1. Затем ацетонитрил отогнали в вакууме и добавили толуол до объема 215 мл, так что концентрация ацетонитрила была ниже 0.5 об.%.

К раствору соединения 3 в толуоле добавили 78 г (1.011 моль, 20 экв.) ацетата аммония и нагрели до 95-100°С. Смесь перемешивали при 95-100°С в течение 15 ч. После завершения реакции смесь охладили до 70-80°С и добавили 7 мл уксусной кислоты, 40 мл н-бутанола и 80 мл 5 об.% водной уксусной кислоты. Полученный двухфазный раствор расслоился при температуре >50°С. К органическому слою добавили 80 мл 5 об.% водного раствора уксусной кислоты, 30 мл уксусной кислоты и 20 мл н-бутанола при температуре >50°С. Полученный двухфазный раствор расслоился при температуре >50°С и органический слой промыли дополнительно 80 мл 5 об.% водной уксусной кислоты. Растворитель отогнали в вакууме и добавили 215 мл толуола. При температуре >60°С добавили 64 мл метанола. Полученную суспензию нагрели до 70-75°С и выдержали в течение 1 ч. Суспензию охладили до 20-25°С в течение 1 ч и выдержали при этой температуре еще 1 ч. Суспензию профильтровали и осадок на фильтре промыли 200 мл смеси толуол:метанол 10:3. Продукт высушили в вакууме при 70°С и получили 19.8 г (31.7 ммоль, 63%) целевого продукта: ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Й6) δ 13.00-11.00 (с, 2Н), 7.90-7.75 (м, 4Н), 7.75-7.60 (м, 4Н), 7.60-7.30 (с, 2Н), 4.92-4.72 (м, 2Н), 3.65-3.49 (м, 2Н), 3.49-3.28 (м, 2Н), 2.39-2.1 (м, 2Н), 2.10-1.87

- 14 018152 (м, 6Н), 1.60-1.33 (с, 8Н), 1.33-1.07 (с, 10Н); ¹³С ЯМР (100 МГц, ДМСО-б₆) δ 154.1, 153.8, 137.5, 126.6, 125.0, 78.9, 78.5, 55.6, 55.0, 47.0, 46.7, 33.7, 32.2, 28.5, 28.2, 24.2, 23.5; ИК (КВг, см^-1) 2975, 2876, 1663, 1407, 1156, 1125; ИКМ8 рассч. для С36Н45ЯО4 (М+Н; ЕМ⁺): 625.3502. Найдено: 625.3502. Т.пл. 190195°С (разл.).

В 250-мл реактор, снабженный механической мешалкой и трубкой для подачи азота, загрузили 25.0 г соединения 4 (40.01 ммоль, 1 экв.) и затем 250 мл метанола и 32.85 мл (400.1 ммоль, 10 экв.) 6 М водного раствора НС1. Температуру повысили до 50°С и перемешивали при 50°С в течение 5 ч. Полученную суспензию охладили до 20-25°С и перемешивали примерно 18 ч. Отфильтровали и получили твердое вещество, которое промыли последовательно 100 мл 90% смеси метанол/вода (У/У) и 2x100 мл метанола. Влажный осадок высушили в вакуумном сушильном шкафу при 50°С в течение ночи и получили 18.12 г (31.8 ммоль, 79.4%) целевого соединения.

Перекристаллизация соединения 5.

В 250-мл реактор с механической мешалкой и трубкой для подачи азота загрузили 17.8 г указанного выше соединения 5 и затем 72 мл метанола. Полученную суспензию перемешивали при 50°С в течение 4 ч, охладили до 20-25°С и перемешивали при 20-25°С в течение 1 ч. Кристаллическое твердое вещество отфильтровали и промыли 60 мл метанола. Полученный влажный осадок высушили в вакуумном сушильном шкафу при 50°С в течение 4 дней и получили 14.7 г (25.7 ммоль, 82.6%) очищенного продукта: ¹Н ΝΜΚ (400 МГц, ДМСО-46) δ 10.5-10.25 (ш, 2Н), 10.1-9.75 (ш, 2Н), 8.19 (с, 2Н), 7.05 (д, 1=8.4, 4Н), 7.92 (д, 1=8.5, 4Н), 5.06 (м, 2Н), 3.5-3.35 (м, 4Н), 2.6-2.3 (м, 4Н), 2.25-2.15 (м, 2Н), 2.18-1.96 (м, 2Н); ¹³С ЯМР (100 МГц, ДМСО-46) δ 156.6, 142.5, 139.3, 128.1, 127.5, 126.1, 116.9, 53.2, 45.8, 29.8, 24.3; ИК (КВг, ем'¹) 3429, 2627, 1636, 1567, 1493, 1428, 1028. Рассч. для С26Н₃₂Н>С14: С, 54.75; Н, 5.65; С1, 24.86; Для продукта, содержащего 1.9% воды: С, 53.71; Н, 5.76; Ν, 14.46; С1, 24.39. Найдено: С, 53.74; Н, 5.72; Ν, 14.50; С1, 24.49; КР=1.9. Т.пл. 240°С (разл.).

В 1-л колбу с рубашкой, механической мешалкой и трубкой для подачи азота загрузили последовательно 100 мл ацетонитрила, 13.69 г (89.4 ммоль, 2.5 экв.) гидрата гидроксибензотриазола, 15.07 г (86 ммоль, 2.4 экв.) ^(метоксикарбонил)-Г-валина, 16.46 г (85.9 ммоль, 2.4 экв.) 1-(3-диметиламинопропил)3-этилкарбодиимид гидрохлорида и еще 100 мл ацетонитрила. Полученный раствор перемешивали при 20°С в течение 1 ч и затем добавили 20.4 г (35.8 ммоль, 1 экв.) очищенного соединения 5. Суспензию охладили до примерно 0°С и добавили 18.47 г (142.9 ммоль, 4 экв.) диизопропилэтиламина в течение 30 мин при температуре ниже 10°С. Раствор медленно нагрели до 15°С в течение 3 ч и выдержали при 15°С в течение 12 ч. К полученному раствору добавили 120 мл 13 мас.% водного раствора ΝαΟΊ и нагрели до 50°С в течение 1 ч. После охлаждения до 20°С добавили 100 мл изопропилацетата. Двухфазный раствор профильтровали через 0.45-мкм фильтр, чтобы смесь расслоилась. Органический слой промыли двумя порциями по 240 мл 0.5 N раствора ΝαΟΗ, содержащего 13 мас.% №С1, и затем 120 мл 13 мас.% водного раствора №С1. Растворитель отогнали в вакууме и добавили изопропилацетат до объема 400 мл. Полученный мутный раствор охладили до 20°С и профильтровали через 0.45-мкм фильтр. Из прозрачного раствора отогнали в вакууме растворитель и добавили этанол до объема 140 мл. При температуре 50°С добавили 66.4 мл (82.3 ммоль, 2.3 экв.) 1.24 М раствора НС1 в этаноле. Затем к смеси добавили 33 мг (0.04 ммоль, 0.001 экв.) затравочных кристаллов соединения (I) (см. получение ниже) и полученную суспензию перемешивали при 50°С в течение 3 ч. Смесь охладили до 20°С в течение 1 ч и выдержали при этой температуре еще 22 ч. Суспензию отфильтровали и влажный осадок промыли 100 мл смеси ацетон:этанол 2:1. Твердое вещество высушили в вакуумном сушильном шкафу при 70°С и получили 22.15 г (27.3 ммоль, 76.3%) целевого соединения.

Н₃СО

- 15 018152

Обработка углем и перекристаллизация соединения (I).

Приготовили раствор соединения (I) растворением 3.17 г описанного выше соединения (I) в 22 мл метанола. Раствор профильтровали через 47-мм фильтр Сипо /е1а СагЬоп 538Р при ~5 фунт/кв. дюйм и скорости потока ~58 мл/мин. Угольный фильтр смочили 32 мл метанола. Раствор сконцентрировали вакуумной дистилляцией до объема 16 мл. Поддерживая температуру 40-50°С, добавили 15.9 мл ацетона и 5 мг затравочных кристаллов соединения (I) (см. методику ниже). Затем к полученной суспензии добавили 32 мл ацетона в течение 30 мин. Суспензию выдержали при 50°С в течение 2 ч, охладили до 20°С в течение примерно 1 ч и выдержали при 20°С в течение примерно 20 ч. Твердое вещество отфильтровали, промыли 16 мл смеси ацетон:метанол 2:1, высушили в вакуумном сушильном шкафу при 60°С и получили 2.14 г (67.5%) очищенного соединения (I): ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6, 80°С): 8.02 (д, 1=8.34 Гц, 4 Н), 7.97 (с, 2Н), 7.86 (д, 1=8.34 Гц, 4Н), 6.75 (с, 2Н), 5.27 (т, 1=6.44 Гц, 2Н), 4.17 (т, 1=6.95 Гц, 2Н), 3.974.11 (м, 2Н), 3.74-3.90 (м, 2Н), 3.57 (с, 6Н), 2.32-2.46 (м, 2Н), 2.09-2.31 (м, 6Н), 1.91-2.07 (м, 2Н), 0.88 (д, 1=6.57 Гц, 6Н), 0.79 (д, 1=6.32 Гц, 6Н); ¹³С ЯМР (75 МГц, ДМСО^): δ 170.9, 156.9, 149.3, 139.1, 131.7, 127.1, 126.5, 125.9, 115.0, 57.9, 52.8, 51.5, 47.2, 31.1, 28.9, 24.9, 19.6, 17.7; ИК (неразб., см^-1): 3385, 2971, 2873, 2669, 1731, 1650. Анализ: вычисл. для С40И₅₂Ы₈О₆С1₂: С, 59.18; Н, 6.45; Ν, 13.80; С1, 8.73. Найдено С, 59.98; Н, 6.80; Ν, 13.68; С1, 8.77. Т.пл. 267°С (разл.).

Получение затравочных кристаллов соединения (I).

В 250-мл круглодонную колбу загрузили 6.0 г (10.5 ммоль, 1 экв.) соединения 5, 3.87 г (22.1 ммоль, 2.1 экв.) №(метоксикарбонил)-Е-валина, 4.45 г (23.2 ммоль, 2.2 экв.) 1-(3-диметиламинопропил)-3этилкарбодиимид гидрохлорида, 0.289 г (2.14 ммоль, 0.2 экв.) 1-гидроксибензотриазола и 30 мл ацетонитрила. К полученной суспензии добавили 7.33 мл (42.03 ммоль, 4 экв.) диизопропилэтиламина и перемешивали при 24-30°С в течение примерно 18 ч. К смеси добавили 6 мл воды и нагрели до 50°С в течение 5 ч. Смесь охладили и добавили 32 мл этилацетата и 30 мл воды. Слои разделили и органический слой промыли 30 мл 10 мас.% водного №11СО₃, 30 мл воды и 20 мл 10 мас.% водного раствора №С1. Органический слой высушили над М§8О₄, отфильтровали и упарили досуха. Сырой материал очистили флэш-хроматографией (силикагель, 0-10% метанола в дихлорметане) и получили свободное основание соединения (I).

Свободное основание соединения (I) (0.03 г) растворили в 1 мл изопропанола при 20°С. Добавили безводный этанольный раствор НС1 (70 мкл, концентрация примерно 1.25 М) и реакционную смесь перемешали. К раствору добавили метил-трет-бутиловый эфир (1 мл) и полученную суспензию энергично перемешивали при 40-50°С в течение 12 ч. Суспензию кристаллов охладили до 20°С и отфильтровали. Влажный осадок высушили на воздухе при 20°С. Получили белое кристаллическое вещество (форма Ν-2 соединения (I)).

Форму Ν-2 анализировали одним или несколькими описанными ниже методами тестирования.

1. Рентгеноструктурный анализ кристаллов.

Для получения данных по дифракции при комнатной температуре использовали дифрактометр Вгикег АРЕХ2 Карра ССТ) с вращающимся анодным генератором СиКа-излучения (λ=1.54178 А). Индексацию и обработку полученных данных по интенсивности пиков провели с помощью программного пакета АРЕХ2 (АРЕХ2 1)а1а со11ес1юп апб ргосеззшд изег пДегГасе: АРЕХ2 Изег Мапиа1, ν1. 27; ВКИКЕК АХ8, Шс, 5465 Еаз! СКегу! Рагкмау, Маб1зоп, 53711 И8А). Конечные параметры элементарной ячейки определили с использованием полного массива данных.

Структуру расшифровали прямыми методами и уточнили полноматричным методом наименьших квадратов с использованием программного пакета 8НЕЕХТЕ (8йе1бпск, О.М., 1997, 8НЕЕХТЕ. 81гис1иге Пе1егшта1юп Ргодгашз. Уегзюп 5.10, Вгикег АХ8, Маб1зоп, Ш1зсопзт, И8А.). Минимизированная функция при уточнении

К определили как

и = [Σ„( |р₀|-|е_с| )²/Σ„ |ро|²]^1/2, где \ν представляет собой соответствующую взвешенную функцию отклонений наблюдаемых интенсивностей. На всех этапах уточнения проводили разностный синтез Фурье. Для всех неводородных атомов уточнили анизотропные тепловые параметры. Водородно-связанные атомы водорода локализовали из конечного разностного синтеза Фурье, а положения остальных атомов водорода определили на основе идеализированной геометрии со стандартными значениями длин связей и углов. Им были приписаны изотропные тепловые параметры, которые были использованы в качестве фиксированных значений при расчете структурных параметров.

Кристаллографические данные для кристалла формы Ν-2 приведены в табл. 2. Координаты атомов даны в табл. 3. Специалисту в данной области следует понимать, что возможны небольшие отклонения в координатах, которые, тем не менее, позволяют включить их в объем настоящего изобретения.

- 16 018152

Таблица 2 Кристаллографические данные для кристалла формы N-2

Температура комнатная

Длина волны 1.54178 А

Кристаллическая система, пространственная группа триклинная, Р1

Размеры элементарной ячейки а = 7.5680(2) А, а1рЬа =

74.132 (2) °

Ь = 9.5848(3) А, ЬеИа = 84.132(2)° с = 16.2864(5) А, датта = 70.646(2)°

Объем ячейки 1072.06(5) А³

Ζ, Рассчитанная плотность 1, 1.257 мг/м³

Таблица 3

Координаты атомов

Атом	X	Υ	Ζ	Атом	X	Υ	Ζ
С7	0.0807	-0.0688	0.0165	НЗ	0.0264	0.2281	-0.0035
С16	-0.5489	0.4635	-0.1121	Н17	-0.7884	0.4046	-0.0848
С4	-0.0807	0.0688	-0.0165	Н2	-0.2192	0.4393	-0.0575

- 17 018152

Атом	X	Υ	Ζ	Атом	X	Υ	Ζ
С18	-0.7034	0.6975	-0.1863	Н5	-0.2549	-0.0380	-0.0365
С13	0.5516	-0.4628	0.1105	Н6	-0.5015	0.1728	-0.0892
С15	0.7037	-0.6988	0.1841	Н9	0.5090	-0.1737	0.0755
СЗ	-0.0789	0.2157	-0.0218	Н14	0.7875	-0.4013	0.0906
СЮ	0.3885	-0.3317	0.0771	Н12	-0.0376	-0.2264	0.0165
С1	-0.3895	0.3303	-0.0781	НИ	0.2109	-0.4403	0.0683
С17	-0.7335	0.4794	-0.1115	Н8	0.2590	0.0389	0.0270
С2	-0.2275	0.3428	-0.0531	Н19	0.8664	-0.8827	0.2693
С5	-0.2458	0.0584	-0.0412	Н20А	0.6721	-0.9411	0.1489
С6	-0.3950	0.1847	-0.0720	Н20В	0.8848	-1.0218	0.1745
С9	0.3978	-0.1858	0.0641	Н22А	0.4299	-0.9831	0.2863
С14	0.7330	-0.4774	0.1143	Н22В	0.5433	-1.0623	0.3720
С12	0.0728	-0.2143	0.0290	Н24	0.4288	-0.8972	0.4553
СИ	0.2233	-0.3439	0.0597	Н29А	0.3610	-0.6896	0.7199
С8	0.2471	-0.0573	0.0347	Н29В	0.5410	-0.6388	0.7042
С19	0.7480	-0.8565	0.2404	Н29С	0.5552	-0.8060	0.7046
С20	0.7591	-0.9804	0.1959	Н26А	0.0099	-0.5669	0.3086
С22	0.5494	-1.0075	0.3126	Н26В	0.2158	-0.5619	0.2923
С24	0.3932	-0.7895	0.4232	Н26С	0.1027	-0.5160	0.3723
С28	0.4299	-0.7573	0.5628	Н25	0.2074	-0.8105	0.3478
С29	0.4783	-0.7007	0.6895	Н21А	0.6629	-1.1660	0.2427
С2 6	0.1249	-0.5830	0.3353	Н21В	0.8099	-1.1619	0.3036
С25	0.1972	-0.7461	0.3866	Н27А	0.0368	-0.7163	0.4938
С21	0.7052	-1.0999	0.2661	Н27В	0.1093	-0.8874	0.4894
С27	0.0588	-0.7834	0.4569	Н27С	0.0572	-0.7699	0.4319
С23	0.5435	-0.7711	0.3553	НЗО	0.6271	0.8706	-0.2714
сзо	-0.7440	0.8547	-0.2454	Н31А	0.9249	0.9498	-0.1547
С34	-0.8171	0.7743	-0.3628	Н31В	-0.7674	1.0278	-0.1856
С31	-0.8522	0.9853	-0.2037	НЗЗА	-1.1460	0.9828	-0.2916
СЗЗ	-1.0373	1.0092	-0.3191	нззв	-1.0659	1.0635	-0.3783
С32	-0.9782	1.1019	-0.2736	Н32А	-1.0859	1.1679	-0.2499
С38	-0.8340	0.7734	-0.5748	Н32В	-0.9111	1.1645	-0.3120
С36	-1.1117	0.7288	-0.3922	Н3 6	-1.1758	0.7856	-0.3502
С39	-0.6953	0.7302	-0.7067	Н39А	-0.7874	0.7037	-0.7301
С37	-1.0485	0.5605	-0.3464	Н39В	-0.5733	0.6820	-0.7276
С35	-0.9477	0.7893	-0.4312	Н39С	-0.7221	0.8392	-0.7235
N1	0.5385	-0.6067	0.1537	Н37А	-1.1562	0.5276	-0.3279
N4	-0.5358	0.6044	-0.1590	Н37В	-0.9757	0.5444	-0.2977
N2	0.8232	-0.6215	0.1585	Н37С	-0.9736	0.5027	-0.3846
N3	-0.8254	0.6252	-0.1572	Н35	-0.9995	0.8976	-0.4608
N6	-0.8719	0.8722	-0.3123	Н1	0.4378	0.6316	0.1597
N5	0.5974	-0.8687	0.3055	Н4	-0.4338	0.6276	-0.1688
N8	-0.8375	0.7087	-0.4913	Н2А	0.9413	0.6576	0.1685
N7	0.3941	-0.6991	0.4812	НЗА	-0.9442	0.6631	-0.1654
04	-0.6651	0.6742	-0.3518	Н8А	-0.7710	0.6146	-0.4726
01	0.6094	-0.6663	0.3446	Н7	0.3699	0.6020	0.4611
02	0.4413	-0.8890	0.6028	Н40А	-1.1909	0.7164	-0.5066
ОЗ	0.4448	-0.6524	0.5991	Н40В	-1.3113	0.8675	-0.4819
05	-0.9383	0.8955	-0.6125	Н40С	-1.3481	0.7128	-0.4362
Об	-0.7001	0.6782	-0.6138
Атом	X	Υ	Ζ	Атом	X	Υ	Ζ
С40	-1.2538	0.7592	-0.4606
СИ	-0.2486	0.7587	-0.1475
С12	0.2421	-0.7524	0.1377

2. Порошковая рентгеновская дифракция.

В контейнер прибора для исследования порошковой рентгеновской дифракции (РХКО) фирмы Ρήΐΐΐρδ поместили примерно 200 мг образца и перенесли его в камеру прибора РЫИр§ ΜΡΌ (45 КУ, 40 тА, СиКа). Накопление данных проводили при комнатной температуре в интервале углов 2Θ от 2 до 32 (непрерывное сканирование, скорость сканирования 0.03 °/с, коллиматор с противорассеивающими щелями, приемная щель 0.2 мм, вращение образца: включено).

Экспериментальная и модельная рентгенограммы, рассчитанные из данных рентгеноструктурного анализа, приведены на фиг. 1.

В табл. 4 показаны характеристические пики ΡΧΚΌ для формы N-2 соединения (I).

- 18 018152

Таблица 4

Положения характеристических дифракционных пиков (градусы 2θ±0.1) при комнатной температуре на высококачественной дифрактограмме, полученной на дифрактометре (СиКа) с вращающимся капилляром и значениях угла 2θ, откалиброванных с помощью эталонов из базы ΝΙ8Τ

3. Дифференциальная сканирующая калориметрия.

Опыты по дифференциальной сканирующей калориметрии (Э8С) проводили на приборе ТА™ модели ^2000, (^1000 или 2920. Массу образца (примерно 2-6 мг) взвесили в алюминиевой чашке с точностью до сотых долей миллиграмма и затем перенесли в Э8С калориметр. Прибор продули азотом со скоростью 50 мл/мин. Данные записывали в интервале температур от комнатной до 300°С при скорости нагрева 10°С/мин. Эндотермические пики на кривой Э8С показаны обращенными вниз.

Результаты показаны на фиг. 2.

4. Твердофазный ЯМР (88ΝΜΚ).

Анализ методом С-13 ЯМР проведен на спектрометре Вгикег Ό8Χ-400, 400 МГц. Спектры высокого разрешения регистрировали с развязкой от протонов, ТРРМ-последовательностью импульсов и наклонной амплитудной кросс-поляризацией (ΚΑΜΡ-СР) с вращением под магическим углом (ΜΑ8) при примерно 12 кГц (А.Е. Веппей е1 а1. I. СНет. РНуз. 1995, 103, 6951; О. Ме1г, X. Аи, апб 8.Θ. 8шйй, I. Мадп. Кезоп. А., 1994, 110, 219-227). В каждом опыте использовали примерно 70 мг образца, упакованного в пустотелом роторе из оксида циркония. Химические сдвиги (δ) регистрировали с использованием внешнего образца - адамантана, для которого резонансная частота равна 38.56 м.д. (А.1.. Еаг1 апб ΌΑ. УапбегНаг1, I. Мадп. Кезоп., 1982, 48, 35-54).

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Форма Ν-2

Н₃СО характеризующаяся одной или несколькими следующими особенностями:

а) элементарной ячейкой с параметрами, по существу, равными следующим: размеры ячейки:

а=7.5680 А,

Ь= 9.5848 А, с =16.2864 А, α=74.132°, β=84.132°,

- 20 018152 γ=70.646°;

пространственная группа Р1:

число молекул в элементарной ячейке 1, причем определение указанной кристаллической формы проводят при температуре примерно 2025°С; или

b) координатами атомов в элементарной ячейке, приведенными в табл. 3; или

c) характеристическими пиками на порошковой дифрактограмме при значениях параметра 2Θ 10.3±0.1, 12.4±0.1, 12.8±0.1, 13.3±0.1, 13.6±0.1, 15.5±0.1, 20.3±0.1, 21.2±0.1, 22.4±0.1, 22.7±0.1 и 23.7±0.1 при температуре примерно 20-25°С; и/или

ά) плавлением с эндотермическим пиком разложения, начинающимся обычно в интервале 225245°С.
2. Форма по п.1, имеющая чистоту по меньшей мере 95 мас.%.
3. Форма по п.1, имеющая чистоту по меньшей мере 99 мас.%.
4. Фармацевтическая композиция для лечения НСУ-инфекции, включающая форму N-2 2НС1

ОСН₃ и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
5. Фармацевтическая композиция по п.4, в которой форма N-2 имеет чистоту по меньшей мере 95 мас.%.
6. Фармацевтическая композиция по п.4, в которой форма N-2 имеет чистоту по меньшей мере 99 мас.%.
7. Фармацевтическая композиция, включающая форму N-2

Н₃СО • 2НС1

ОСН₃ в комбинации с одним или несколькими дополнительными соединениями, обладающими анти-НСУ активностью.
8. Фармацевтическая композиция по п.7, в которой форма N-2 имеет чистоту по меньшей мере 90 мас.%.
9. Фармацевтическая композиция по п.7, в которой форма N-2 имеет чистоту по меньшей мере 95 мас.%.
10. Фармацевтическая композиция по п.7, в которой форма N-2 имеет чистоту по меньшей мере 99 мас.%.
11. Композиция по п.7, в которой по меньшей мере одно из дополнительных соединений с антиНСУ активностью представляет собой интерферон или рибавирин.
12. Композиция по п.11, в которой интерферон выбирают из интерферона альфа 2В, пегилированного интерферона альфа, консенсусного интерферона, интерферона альфа 2А и лимфобластоидного интерферона тау.
13. Композиция по п.7, в которой по меньшей мере одно дополнительное соединение выбирают из интерлейкина 2, интерлейкина 6, интерлейкина 12, соединения, стимулирующего выработку отклика Тхелпера клетки типа 1, интерферирующей РНК, антисенс-РНК, имихимода, рибавирина, ингибитора инозин 5'-монофосфатдегидрогеназы, амантадина и римантадина.
14. Способ лечения НСУ-инфекции у млекопитающих, включающий введение млекопитающему терапевтически эффективного количества формы N-2