EA016017B1

EA016017B1 - Спироциклы в качестве ингибиторов 11-бета гидроксилстероиддегидрогеназы типа 1

Info

Publication number: EA016017B1
Application number: EA201070039A
Authority: EA
Inventors: Вэньцин Яо; Цзиньцун Чжо; Колин Чжан
Original assignee: Инсайт Корпорейшн
Priority date: 2007-06-21
Filing date: 2008-06-20
Publication date: 2012-01-30
Also published as: MX2009014274A; HRP20120772T1; RS53839B1; PT2540723E; RS52519B; CA2691150C; PL2173750T3; PL2540723T3; EP2173750B9; HK1180325A1; US20160280708A1; DK2540723T3; RS52519B9; CR11183A; KR20100045440A; GEP20135754B; HK1143156A1; UA98651C2; EP2540723B8; EA201070039A1

Abstract

Настоящее изобретение относится к определенным спироциклическим соединениям, которые представляют собой ингибиторы 11-гидроксилстероиддегидрогеназы типа 1 (11HSD1), содержащим их композициям и способам их применения для лечения диабета, ожирения и других заболеваний.

Description

Настоящее изобретение относится к определенным спироциклическим соединениям, которые представляют собой ингибиторы 11-β гидроксилстероиддегидрогеназы типа 1 (11βΗ8Ό1), содержащим их композициям и способам их применения для лечения диабета, ожирения и других заболеваний.

Уровень техники настоящего изобретения

Важность гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой (НРА) оси в контролировании концентрации глюкокортикоидов является очевидной из того факта, что нарушение гомеостаза в НРА оси при или избыточной, или недостаточной секреции или действии приводит в результате к синдрому Кушинга или болезни Аддисона соответственно (М111ег аиб Сйтоикок (2001), Епбосппо1оду аиб Ме1аЬо1кт, ебк. Рейд аиб Ргойтаи (МсСгаи-ΗίΙΙ, Ыете Уогк), 4'¹' Еб.: 387-524). У пациентов с синдромом Кушинга (редкое заболевание, характеризующееся систематическим избытком глюкокортикоидов, синтезируемых опухолями надпочечника или гипофиза) или проходящих глюкокортикоидную терапию развивается обратимое висцеральное ожирение. Интересно, что фенотип пациентов с синдромом Кушинга наиболее напоминает фенотип метаболического синдрома Ривена (также известный как синдром X или синдром устойчивости к инсулину), симптомы которого включают висцеральное ожирение, непереносимость глюкозы, устойчивость к инсулину, гипертензию, диабет 2 типа и гиперлипидемию (Веауеп (1993), Апп. Вес. Меб. 44: 121-131). Однако роль глюкокортикоидов в преобладающих формах ожирения человека остается неясной, так как концентрации циркулирующих глюкокортикоидов не повышаются у большинства пациентов с метаболическим синдромом. Действительно, действие глюкокортикоида на ткань-мишень зависит не только от циркулирующих концентраций, но также от внутриклеточной концентрации, при метаболическом синдроме показана местная повышенная активность глюкокортикоидов в жировой ткани и скелетных мышцах. Большое количество данных свидетельствует о том, что ферментативная активность 11βΗ8Ό1, которая генерирует активные глюкокортикоиды из неактивных форм и играет центральную роль в регулировании внутриклеточной концентрации глюкокортикоидов, обычно повышается в жировых отложениях у индивидуумов с ожирением. Это наводит на мысль о роли местной реактивации глюкокортикоидов при ожирении и метаболическом синдроме.

Установив способность 11βΗ8Ό1 регенерировать кортизол из неактивного циркулирующего кортизона, большое внимание было уделено его роли в амплификации глюкокортикоидной функции. 11βΗ8Ό1 экспрессируется во многих ключевых СВ-обогащенных тканях, включая ткани значительной метаболической важности, такие как печень, жировая ткань и скелетные мышцы, и, в силу этого, постулируют, что он способствует тканеспецифической потенциации антагонизма, опосредованного глюкокортикоидами, инсулиновой функции. Принимая во внимание а) фенотипическую схожесть избыточной секреции глюкокортикоидов (синдром Кушинга) и метаболического синдрома с нормальной концентрацией циркулирующих глюкокортикоидов при последнем, также как Ь) способность 11βΗ8Ό1 генерировать активный кортизол из неактивного кортизона тканеспецифическим способом, предположили, что центральный тип ожирения и связанные с ним метаболические осложнения при синдроме X являются результатом повышенной активности 11βΗ8Ό1 в жировой ткани, приводя в результате к синдрому Кушинга сальника (Ви)а1кка е! а1. (1997), Ьапсе! 349: 1210-1213). Действительно, показано, что 11βΗ8Ό1 активируется в жировой ткани у людей и грызунов с ожирением (Ыушдйопе е! а1. (2000), Епбосгшо1оду 131: 560-563; Вакк е! а1. (2001), 1. С1ш. Епбосгшок Ме!аЬ. 86: 1418-1421; Ыпбкау е! а1. (2003), 1. С1ш. Епбосйпо1. Ме!аЬ. 88: 2738-2744; \\ аке е! а1. (2003), 1. С11п. Епбосгшок Ме!аЬ. 88: 3983-3988).

Дополнительное подтверждение данной идеи получено из исследований на моделях трансгенных мышей. Специфическая для жировой ткани гиперэкспрессия 11βΗ8Ό1 под контролем аР2 промотора у мышей приводит к фенотипу, удивительно напоминающему человеческий метаболический синдром (Макнхак! е! а1. (2001), 8аепсе 294: 2166-2170; Макнхак! е! а1. (2003), 1. С11шса1 1пуек!. 112: 83-90). Важно, что данный фенотип возникает без увеличения суммарного количества циркулирующего кортикостерона, но скорее обусловливается местным производством кортикостерона в жировых отложениях. Повышенная активность 11βΗ8Ό1 у данных мышей (2-3-кратная) является очень похожей на повышенную активность, наблюдаемую при ожирении у человека (Вакк е! а1. (2001), 1. С1ш. Епбосгшок Ме!аЬ. 86: 1418-1421). Это наводит на мысль, что местное превращение, опосредованное 11βΗ8Ό1, неактивного глюкокортикоида в активный глюкокортикоид может оказывать сложное влияние на чувствительность к инсулину всего тела.

На основании этих данных можно было бы предположить, что снижение концентрации 11βΗ8Ό1 могло бы привести к повышению инсулиновой чувствительности и толерантности к глюкозе в результате тканеспецифического недостатка концентраций активных глюкокортикоидов. В действительности, это является случаем, как показано в исследованиях с 11βΗ8^1-дефицитарными мышами, полученными гомологичной рекомбинацией (Ко!е1еук!еу е! а1. (1997), Ргос. N311. Асаб. 8ск 94: 14924-14929; Мойоп е! а1. (2001), 1. Вю1. Сйет. 276: 41293-41300; Мойоп е! а1. (2004), 01аЬе1ек 53: 931-938). Данные мыши полностью лишены 11-кеторедуктазной активности, подтверждая, что 11βΗ8Ό1 обусловливает только активность, отвечающую за генерирование активного кортикостерона из неактивного 11дегидрокортикостерона. 11βΗ8^1-дефицитарные мыши являются устойчивыми к гипергликемии, вы

- 1 016017 званной диетой или стрессом, обладают ослабленной индукцией печеночных глюконеогенных ферментов (РЕРСК, С6Р), обладают повышенной чувствительностью к инсулину в жировой ткани и имеют улучшенные липидные профили (сниженная концентрация триглицеридов и повышенная концентрация кардиозащитных ΗΌΕ). Дополнительно, данные животные обладают устойчивостью к ожирению, вызванному диетой с высоким содержанием жира. Взятые вместе, данные исследования на трансгенных мышах подтверждают роль локальной реактивации глюкокортикоидов в контролировании печеночной и периферической чувствительности к инсулину и позволяют предположить, что ингибирование 11βΗ8Ό1 активности может оказаться полезным при лечении ряда связанных с глюкокортикоидами расстройств, включая ожирение, устойчивость к инсулину, гипергликемию и гиперлипидемию.

Данные в поддержку настоящей гипотезы опубликованы. Недавно сообщалось, что 11βΗ8Ό1 играет роль в патогенезе ожирения центрального типа и появлении метаболического синдрома у людей. Повышенную экспрессию 11βΗ8Ό1 гена связывают с метаболическими нарушениями у женщин с ожирением и подозревают, что повышенная экспрессия данного гена делает вклад в повышенное местное превращение кортизона в кортизол в жировой ткани индивидуумов с ожирением (Епдсб. е! а1. (2004), ОЬек. Век. 12: 9-17).

Показано, что новый класс 11βΗ8Ό1 ингибиторов, арилсульфонамидотриазолы, увеличивает печеночную чувствительность к инсулину и снижает концентрацию глюкозы в крови у гипергликемических штаммов мышей (ВагГ е! а1. (2002), 1. Меб. Сйет. 45: 3813-3815; А1Ьег1к е! а1. Еибосгшо1оду (2003), 144: 4755-4762). Кроме того, недавно сообщалось, что селективные ингибиторы 11βΗ8Ό1 могут облегчать тяжелую гипергликемию у тучных мышей с генетическим диабетом. Таким образом, 11βΗ8Ό1 является обещающей фармацевтической мишенью для лечения метаболического синдрома (Макихакк е! а1. (2003), Сигг. Эгид Тагде!к 1ттипе Епбосг. Ме!аЬо1. Э1когб. 3: 255-62).

A. Ожирение и метаболический синдром.

Как описано выше, множество данных наводят на мысль, что ингибирование 11βΗ8Ό1 активности может быть эффективным в борьбе с ожирением и/или группой аспектов метаболического синдрома, включая непереносимость глюкозы, устойчивость к инсулину, гипергликемию, гипертензию и/или гиперлипидемию. Глюкокортикоиды являются известными антагонистами действия инсулина, и снижение местной концентрации глюкокортикоидов ингибированием превращения внутриклеточного кортизона в кортизол должно увеличивать печеночную и/или периферическую чувствительность к инсулину и теоретически ослаблять висцеральное ожирение. Как описано выше, 11βΗ8Ό1 нокаутные мыши являются устойчивыми к гипергликемии, обладают ослабленной индукцией ключевых печеночных глюконеогенных ферментов, обладают заметно повышенной чувствительностью к инсулину в жировой ткани и имеют улучшенные липидные профили. Дополнительно, данные животные проявляют устойчивость к ожирению, вызванному диетой с высоким содержанием жира (Ко!е1еук!еу е! а1. (1997), Ргос. №111. Асаб. 8с1. 94: 14924-14929; Мойои е! а1. (2001), 1. Вю1. Сйет. 276: 41293-41300; Мойои е! а1. (2004), 1)1№е1ек 53: 931938). Таким образом, предполагают, что ингибирование 11βΗ8Ό1 оказывает множество полезных действий в печени, жировой ткани и/или скелетных мышцах, в частности связано с облегчением симптома (симптомов) метаболического синдрома и/или ожирения.

B. Панкреатическая функция.

Известно, что глюкокортикоиды ингибируют стимулируемую глюкозой секрецию инсулина из панкреатических бета-клеток (ВШаибе1 апб 8и!!ег (1979), Иогш. Ме!аЬ. Век. 11: 555-560). И у крыс с синдромом Кушинга и у Га/Га крыс Зукера с диабетом секреция инсулина, стимулируемая глюкозой, заметно снижалась (Ода\та е! а1. (1992), 1. Сйп. 1пуек!. 90: 497-504). Сообщалось об 11βΗ8Ό1 мРНК и активности в панкреатических инсулоцитах оЬ/оЬ мышей, и ингибирование данной активности карбеноксолоном, 11βΗ8Ό1 ингибитором, усиливало высвобождение инсулина, стимулируемое глюкозой (Эауап1 е! а1. (2000), 1. Вю1. Сйет. 275: 34841-34844). Таким образом, предполагают, что ингибирование 11βΗ8Ό1 будет оказывать полезное действие на поджелудочную железу, включая усиление высвобождения инсулина, стимулируемого глюкозой.

C. Познавательная способность и деменция.

Умеренные когнитивные нарушения являются общей чертой старения, которые могут, в конце концов, быть связаны с прогрессированием деменции. И у старых животных, и у пожилых людей межличностные различия общих познавательных функций связывают с изменчивостью в продолжительном воздействии глюкокортикоидов (Йир1еп е! а1. (1998), №11. №еигокс1. 1: 69-73). Кроме того, предполагают, что дисрегуляция НРА оси, приводящая в результате к постоянному воздействию избыточных количеств глюкокортикоидов в определенных подрегионах мозга, делает вклад в ослабление когнитивной функции (МсЕ\теп апб 8аро1кку (1995), Сигг. Орш. №еигоЬю1. 5: 205-216). 11βΗ8Ό1 имеется в большом количестве в мозге и экспрессируется во множестве субрегионов, включая гипокампус, лобную кору и мозжечок (8апбеер е! а1. (2004), Ргос. №а!1. Асаб. 8ск Еаг1у Ебйюп: 1-6). Обработка первичных клеток гипокампа карбенооксолоном, являющимся 11βΗ8Ό1 ингибитором, защищает клетки от опосредованного глюкокортикоидами обострения нейротоксичности возбуждающей аминокислоты (Ва)ап е! а1. (1996), 1. №еигокс1. 16: 65-70). Дополнительно, 11βΗ8Ό1 дефицитарных мышей защищали от связанной с глюкокорти

- 2 016017 коидами дисфункции гипокампа, которая связана со старением (Уаи е! а1. (2001), Ргос. №111. Асаб. 8с1. 98: 4716-4721). В двух случайных, контролируемых плацебо, перекрестных исследованиях с двойной анонимностью, введение карбенооксолона усиливало беглость речи и вербальную память (8аибеер е! а1. (2004), Ргос. №111. Асаб. 8с1. Еаг1у Ебйюп: 1-6). Таким образом, полагают, что ингибирование 11βΗ8Ό1 ослабит воздействие глюкокортикоидов в мозге и защитит от вредных действий глюкокортикоидов на нейронную функцию, включая когнитивные нарушения, деменцию и/или депрессию.

Ό. Внутриглазное давление.

Глюкокортикоиды можно применять местно и системно для широкого диапазона состояний в клинической офтальмологии. Одним конкретным осложнением при данных режимах лечения является глаукома, вызванная кортикостероидами. Данная патология характеризуется значительным повышением внутриглазного давления (1ОР). В ее наиболее развитой и запущенной форме 1ОР может приводить к частичной скотоме и, в конечном счете, к слепоте.

1ОР определяется отношением между секрецией и оттоком водянистой влаги глаза. Секреция водянистой влаги глаза осуществляется в непигментированных эпителиальных клетках (№РЕ), и ее отток осуществляется через клетки трабекулярной сети. 11βΗ8Ό1 локализована в №РЕ клетках (8!окез е! а1. (2000), 1иуе81. Орй1йа1то1. У№ 8ск 41: 1629-1683; Каи/ е! а1. (2001), 1иуе81. Орй1йа1то1. У№ 8ск 42: 20372042) и ее функция, вероятно, имеет отношение к увеличению глюкокортикоидной активности в данных клетках. Данная точка зрения подтвердилась наблюдением, что концентрация свободного кортизола значительно превышает концентрацию кортизона в водянистой влаге глаза (14:1 отношение). Функциональное значение 11βΗ8Ό1 в глазе оценено, применяя ингибитор-карбенооксолон на здоровых добровольцах (Каи/ е! а1. (2001), 1пуез1. Ор11!11а1то1. У15. 8сг 42: 2037-2042). Через семь дней после обработки карбенооксолоном 1ОР снизилось на 18%. Таким образом, предполагают, что ингибирование 11βΗ8Ό1 в глазе снизит местные концентрации глюкокортикоидов и 1ОР, оказывая полезное действие в лечении глаукомы и других нарушений зрения.

Е. Гипертензия.

Предполагают, что вещества, повышающие давление, синтезируемые в жировых клетках, такие как лептин и ангиотензиноген, участвуют в патогенезе артериальной гипертензии, связанной с ожирением (Ма!51.1/а\\'а е! а1. (1999), Апп. N. Υ. Асаб. 8ск 892: 146-154; \Уа)с11епЬегд (2000), Епбосг. Кеу. 21: 697-738). Лептин, который секретируется в избытке у аР2-11 βΗ§01 трангенных мышей (Мази/ак1 е! а1. (2003), 1. Сйшса1 1пуеЧ. 112: 83-90), может активировать различные пути симпатической нервной системы, включая пути, которые регулируют кровяное давление (Ма!5иха\\'а е! а1. (1999), Апп. N. Υ. Асаб. 8ск 8 92: 146154). Дополнительно, показано, что ренин-ангиотензинная система (КА8) является главным определяющим фактором кровяного давления (^а1кег е! а1. (1979), ^рейе^ю! 1: 287-291). Ангиотензиноген, который синтезируется в печени и жировой ткани, является ключевым субстратом для ренина и управляет КА8 активацией. Концентрации ангиотензиногена в плазме заметно повышены у аР2-11 βΗ§01 трансгенных мышей, как концентрации ангиотензина II и альдостерона (Ма5ихак1 е! а1. (2003), 1. Сйшса1 1пуез!. 112: 83-90). Данные силы, вероятно, приводят к повышенному артериальному давлению, наблюдаемому у аР2-11 βΗ801 трансгенных мышей. Обработка мышей малыми дозами антагониста рецептора ангиотензина II устраняет данную гипертензию (Ма5ихак1 е! а1. (2003), 1. Сйшса1 1пуез!. 112: 83-90). Эти данные иллюстрируют важность местной реактивации глюкокортикоида в жировой ткани и печени и наводят на мысль, что гипертензия может быть вызвана или усилена 11βΗ8Ό1 активностью. Таким образом, предполагают, что ингибирование 11βΗ8Ό1 и снижение концентраций глюкокортикоидов в жировой ткани и/или печени будет оказывать лечебное действие на гипертензию и сердечно-сосудистые заболевания, связанные с гипертензией.

Е. Болезнь костей.

Глюкокортикоиды могут оказывать неблагоприятное действие на ткани скелета. Длительное воздействие даже умеренных доз глюкокортикоидов может приводить в результате к остеопорозу (СаппаНз (1996), 1. С1ш. Епбосгшо1. Ме1ай. 81: 3441-3447) и повышенному риску переломов. Эксперименты ίη уйго подтверждают вредное действие глюкокортикоидов и на клетки, резорбирующие костную ткань (также известные как остеокласты), и на клетки, формирующие костную ткань (остеобласты). Показано, что 11βΗ8Ό1 присутствует в культурах первичных остеобластов человека, также как в клетках костей взрослых людей, вероятно, смеси остеокластов и остеобластов (Соорег е! а1. (2000), Вопе 27: 375-381), и показано, что карбенооксолон, являющийся 11βΗ8Ό1 ингибитором, ослабляет отрицательное действие глюкокортикоидов на образование костей (Ве11о\\ъ е! а1. (1998), Вопе 23: 119-125). Таким образом, предполагают, что ингибирование 11βΗ8Ό1 снизит местную концентрацию глюкокортикоидов в остеобластах и остеокластах, вызывая лечебное действие при различных формах болезней костей, включая остеопороз.

В настоящее время разрабатываются ингибиторы 11βΗ8Ό1, являющиеся маленькими молекулами, для лечения или предотвращения заболеваний, связанных с 11βΗ8Ό1, таких как заболевания, описанные выше. Например, об определенных ингибиторах на основе амидов сообщают в XVО 2004/089470, XVО 2004/089896, XVО 2004/056745 и ^О 2004/065351. О дополнительных ингибиторах 11βΗ8Ό1, являющихся маленькими молекулами, сообщают в И8 2005/0282858, И8 2006/0009471, И8 2005/0288338,

- 3 016017

И8 2006/0009491, И8 2006/0004049, И8 2005/0288317, И8 2005/0288329, И8 2006/0122197, И8 2006/0116382 и И8 2006/0122210.

11) ΙΝ0Υ0035 (Ц8 2007/0066584).

Антагонисты 11βΗ8Ό1 апробированы в клинических испытаниях на людях (КигикШакипуа, с1 а1. (2003), Сигг. Меб. Сйет. 10: 123-53).

В свете экспериментальных данных, показывающих роль 11βΗ8Ό1 при заболеваниях, связанных с глюкокортикоидами, метаболическом синдроме, гипертензии, ожирении, устойчивости к инсулину, гипергликемии, гиперлипидемии, диабете 2 типа, избытке мужских половых гормонов (гирсутизм, нарушение менструального цикла, гиперандрогенизм) и синдроме поликистозных яичников (РСО8), терапевтические агенты, направленные на интенсификацию или подавление данных метаболических путей, модулированием сигнальной трансдукции глюкокортикоидов на уровне 11βΗ8Ό1, являются желательными.

Как подтверждается настоящим изобретением, существует постоянная необходимость в новых и улучшенных лекарственных средствах, которые действуют на 11βΗ8Ό1. Соединения, композиции и способы, описанные в настоящем изобретении, помогают удовлетворить данную и другие потребности.

Сущность настоящего изобретения

Настоящее изобретение относится, в частности, к ингибиторам 11βΗ8Ό1, имеющим формулу I

или их фармацевтически приемлемым солям, в которых переменные определяют ниже.

Кроме того, настоящее изобретение относится к композициям, содержащим соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способам ингибирования 11βΗ8Ό1 при взаимодействии 11βΗ8Ό1 с соединением формулы I или его фармацевтически приемлемой солью.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способам ингибирования активности 11βΗ8Ό1, включающим взаимодействие 11βΗ8Ό1 с соединением формулы I или его фармацевтически приемлемой солью.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способам ингибирования превращения кортизона в кортизол в клетке, включающим взаимодействие клетки с соединением формулы I или его фармацевтически приемлемой солью.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способам ингибирования синтеза кортизола в клетке, включающим взаимодействие клетки с соединением формулы I или его фармацевтически приемлемой солью.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способам лечения различных заболеваний, включая любое одно из следующих заболеваний или любую комбинацию двух или более из следующих заболеваний: ожирение; диабет; непереносимость глюкозы; устойчивость к инсулину; гипергликемия; гипертензия; гиперлипидемия; когнитивное нарушение; депрессия; деменция; глаукома; сердечно-сосудистые заболевания; остеопороз; воспаление; метаболический синдром; избыток мужских половых гормонов или синдром поликистозных яичников (РСО8) у пациента, включающим введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Кроме того, настоящее изобретение относится к соединению формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для применения в лечении тела животного или человека терапией.

Кроме того, настоящее изобретение относится к применению соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для применения в терапии.

- 4 016017

Подробное описание настоящего изобретения

В частности, настоящее изобретение относится к ингибиторам 11βΗ8Ό1, имеющим формулу I

О

I или их фармацевтически приемлемым солям, в которых

К¹ представляет собой Р, С1, Вг или I;

К² и К³ независимо выбирают из Η, С₁_₆алкила и С₃.₆циклоалкила.

В некоторых вариантах осуществления

К¹ представляет собой Р и С1;

К² и К³ независимо выбирают из Η и С1_-4алкила.

В некоторых вариантах осуществления К¹ представляет собой Р или С1.

В некоторых вариантах осуществления К¹ представляет собой Р.

В некоторых вариантах осуществления К¹ представляет собой С1.

В некоторых вариантах осуществления К² и К³ независимо выбирают из Η, метила и этила.

В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из К² и К³ является отличным от Η.

В некоторых вариантах осуществления соединения настоящего изобретения имеют формулу II

О

II.

В различных местах описания настоящего изобретения заместители соединений настоящего изобретения описывают в группах или в диапазонах. Специально предполагается, что настоящее изобретение включает все без исключения индивидуальные субкомбинации членов данных групп и диапазонов. Например, специально предполагается, что термин С^алкил отдельно описывает метил, этил, С₃алкил, С₄алкил, С₅алкил и С₆алкил.

Кроме того, специалистам ясно, что определенные признаки настоящего изобретения, которые для упрощения описывают в контексте отдельных вариантов осуществления, могут также быть даны в комбинации в отдельном варианте осуществления. Наоборот, несколько признаков настоящего изобретения, которые, для краткости, описывают в контексте отдельного варианта осуществления, могут быть даны отдельно или в любой подходящей субкомбинации.

Как применяют в настоящем изобретении, подразумевают, что термин алкил относится к насыщенной углеводородной группе, которая является нормальной неразветвленной или разветвленной. Примеры алкильных групп включают метил (Ме), этил (Е1), пропил (например, н-пропил и изопропил), бутил (например, н-бутил, изобутил, трет-бутил), пентил (например, н-пентил, изопентил, неопентил) и подобные.

Как применяют в настоящем изобретении, циклоалкил относится к неароматическим 3-7-членным карбоциклам, включающим, например, циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.

Соединения, описанные в настоящем изобретении, являются асимметричными (например, имеющими один или более стереоцентров). Подразумеваются все стереоизомеры, такие как энантиомеры, если не указано особо. Соединения настоящего изобретения, которые содержат асимметрично замещенные атомы углерода, можно выделить в оптически активной или рацемической форме. Способы по приготовлению оптически активных форм из оптически активных исходных соединений известны в данной области техники, такие как разделение рацемических смесей или стереоселективный синтез. Цис- и трансизомеры соединений настоящего изобретения описаны и их можно выделить в виде смеси изомеров или в виде отдельных изомерных форм.

Соединения настоящего изобретения могут также включать таутомерные формы. Таутомерные формы возникают в результате обмена одинарной связи с соседней двойной связью вместе с сопутствующей миграцией протона. Таутомерные формы включают прототропные таутомеры, которые являются изомерными протонированными состояниями, имеющими одинаковую эмпирическую формулу и суммарный заряд. Примеры прототропных таутомеров включают кетон - енольные пары, лактам - лактимные пары, амид - имидокислотные пары, енамин - иминовые пары и кольцевые формы, где протон может занимать два или более положений гетероциклической системы, например 1Н- и 3Н-имидазол, 1Н-, 2Н- и 4Н-1,2,4-триазол, 1Н- и 2Н-изоиндол и 1Н- и 2Н-пиразол. Таутомерные формы могут нахо

- 5 016017 диться в равновесии или стерически замыкаться в одну форму подходящим замещением.

Соединения настоящего изобретения могут также включать все изотопы атомов, встречающихся в промежуточных соединениях или конечных соединениях. Изотопы включают те атомы, которые имеют одинаковое атомное число, но различное массовое число. Например, изотопы водорода включают тритий и дейтерий.

Все соединения и их фармацевтически приемлемые соли можно получить в различных твердых формах, включая сольватированные или гидратированные формы. В некоторых вариантах осуществления твердая форма представляет собой кристаллическую форму. Способы получения и выявления различных твердых форм являются стандартными в данной области техники и включают, например, рентгеновскую порошковую дифракцию, дифференциальную сканирующую колориметрию, термогравиметрический анализ, динамическую сорбцию пара, ΕΤ-ΙΚ, способы комбинационного рассеяния, твердофазную ЯМР, титрование по Карлу-Фишеру и т.д.

В некоторых вариантах осуществления соединения настоящего изобретения и их соли являются практически полностью выделенными. Под практически полностью выделенными подразумевают то, что соединение, по меньшей мере, частично или практически полностью отделено от окружения, в котором оно образуется или обнаружено. Частичное выделение может включать, например, композицию, обогащенную соединением настоящего изобретения. Практически полное выделение может включать композицию, содержащую по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% по весу соединения настоящего изобретения или его соли. Способы выделения соединения и его солей являются стандартными в данной области техники.

Настоящее изобретение также включает фармацевтически приемлемые соли соединений, описанных в настоящем изобретении. Как применяют в настоящем изобретении, термин фармацевтически приемлемые соли относится к производным описанных соединений, в которых исходное соединение модифицируют превращением существующей кислотной или основной группировки в ее солевую форму. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, но не ограничиваются, соли минеральных или органических кислот с основными остатками, такими как амины; соли щелочных металлов или органические соли кислотных остатков, таких как карбоновые кислоты; и подобные. Фармацевтически приемлемые соли настоящего изобретения включают общепринятые нетоксичные соли исходного соединения, полученные, например, из нетоксичных неорганических или органических кислот. Фармацевтически приемлемые соли настоящего изобретения можно синтезировать из исходного соединения, которое содержит основную или кислотную группировку, общепринятыми химическими способами. Обычно данные соли можно получить реакцией формы свободной кислоты или основания данных соединений со стехиометрическим количеством подходящего основания или кислоты в воде или в органическом растворителе, или в смеси двух; обычно неводная среда, подобная эфиру, этилацетату, этанолу, изопропанолу или ацетонитрилу, является предпочтительной. Список подходящих солей можно найти в Рстшд1оп'5 Рйагтасеибса1 Заепсек, 17(Н еб., Маск РиЬНкЫпд Сотрапу, Еа§1оп, Ра., 1985, р. 1418 и 1оита1 о£ Ркагтасеибса1 8с1епсе, 66, 2 (1977), каждую из которых вводят в настоящее изобретение полностью с помощью ссылки.

Фразу фармацевтически приемлемый применяют в настоящем изобретении в отношении тех соединений, материалов, композиций и/или лекарственных форм, которые являются в пределах тщательной медицинской оценки подходящими для применения в контакте с тканями человека и животного без превышающей норму токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, с сопоставимым приемлемым соотношением риск/ожидаемая польза.

Соединения настоящего изобретения могут модулировать активность 11βΗ8Ό1. Подразумевается, что термин модулировать относится к способности увеличивать или уменьшать активность фермента или рецептора. Соответственно соединения настоящего изобретения можно применять в способах модуляции 11βΗ8Ό1 при взаимодействии фермента или рецептора с любым одним или более соединениями или композициями, описанными в настоящем изобретении. В некоторых вариантах осуществления соединения настоящего изобретения могут действовать в качестве ингибиторов 11βΗ8Ό1. В дополнительных вариантах осуществления соединения настоящего изобретения можно применять для модулирования активности 11βΗ8Ό1 у индивидуума, нуждающегося в модуляции фермента или рецептора, введением модулирующего количества соединения настоящего изобретения.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способам ингибирования превращения кортизона в кортизол в клетке или ингибирования синтеза кортизола в клетке, где превращение или синтез кортизола опосредован, по меньшей мере частично, 11βΗ8Ό1 активностью. Способы измерения скорости превращения кортизона в кортизол и наоборот, также как способы измерения концентраций кортизона и кортизола в клетках, являются стандартными в данной области техники.

- 6 016017

Кроме того, настоящее изобретение относится к способам повышения чувствительности к инсулину клетки при взаимодействии клетки с соединением настоящего изобретения. Способы измерения чувствительности к инсулину являются стандартными в данной области техники.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способам лечения заболевания, связанного с активностью или экспрессией, включая аномальную активность и повышенную экспрессию 11βΗ8Ό1, у индивидуума (например, пациента) введением индивидууму, нуждающемуся в данном лечении, терапевтически эффективного количества или дозы соединения настоящего изобретения, или его фармацевтически приемлемой соли, или его фармацевтической композиции. Примеры заболеваний могут включать любое заболевание, расстройство или состояние, которое непосредственно или косвенно связано с экспрессией или активностью фермента. Заболевание, связанное с 11βΗ8Ό1, может также включать любое заболевание, расстройство или состояние, которое можно предотвратить, облегчить или вылечить модулированием активности данного фермента.

Примеры заболеваний, связанных с 11βΗ8Ό1, включают ожирение, диабет, непереносимость глюкозы, устойчивость к инсулину, гипергликемию, гипертензию, гиперлипидемию, когнитивное нарушение, деменцию, депрессию (например, психотическую депрессию), глаукому, сердечно-сосудистые заболевания, остеопороз и воспаление. Дополнительные примеры заболеваний, связанных с 11βΗ8Ό1, включают метаболический синдром, диабет 2 типа, избыток мужских половых гормонов (гирсутизм, нарушение менструального цикла, гиперандрогенизм) и синдром поликистозных яичников (РСО8).

Как применяют в настоящем изобретении, подразумевается, что термин клетка относится к клетке, которая существует ίη νίίτο, ех νίνο или ίη νίνο. В некоторых вариантах осуществления ех νίνο клетка может быть частью образца ткани, вырезанного из организма, такого как млекопитающее. В некоторых вариантах осуществления ίη νίίτο клетка может быть клеткой в клеточной культуре. В некоторых вариантах осуществления ίη νίνο клетка является клеткой, находящейся в организме, таком как млекопитающее. В некоторых вариантах осуществления клетка является жировой клеткой, панкреатической клеткой, гепатоцитом, нейроном или клеткой глаза (клетка глаза).

Как применяют в настоящем изобретении, термин взаимодействие относится к сближению указанных фрагментов в ίη νίίτο системе или ίη νίνο системе. Например, взаимодействие 11βΗ8Ό1 фермента с соединением настоящего изобретения включает введение соединения настоящего изобретения индивидууму или пациенту, такому как человек, содержащему 11βΗ8Ό1, также как, например, введение соединения настоящего изобретения в образец, содержащий клеточный или очищенный препарат, содержащий 11βΗ8Ό1 фермент.

Как применяют в настоящем изобретении, термин индивидуум или пациент, применяемые взаимозаменяемо, относится к любому животному, включая млекопитающих, предпочтительно мышам, крысам, другим грызунам, кроликам, собакам, кошкам, свиньям, рогатому скоту, овцам, лошадям или приматам и самое предпочтительное людям.

Как применяют в настоящем изобретении, термин лечить или лечение относится к одному или более (1) предотвращению заболевания, например предотвращению заболевания, состояния или расстройства у индивидуума, который предрасположен к заболеванию, состоянию или расстройству, но еще не почувствовал или не проявил патологию или симптоматологию заболевания; (2) приостановке заболевания, например приостановке заболевания, состояния или расстройства у индивидуума, который почувствовал или проявляет патологию или симптоматологию заболевания, состояния или расстройства; и (3) облегчению заболевания, например облегчению заболевания, состояния или расстройства у индивидуума, который почувствовал или проявляет патологию или симптоматологию заболевания, состояния или расстройства (т. е. реверсии патологии и/или симптоматологию), такому как снижение тяжести заболевания.

При применении в качестве лекарственных средств соединения настоящего изобретения можно вводить в форме фармацевтических композиций, которые являются комбинацией соединения настоящего изобретения и по меньшей мере одного фармацевтически приемлемого носителя. Данные композиции можно получить способом, хорошо известным в области фармацевтики, и можно вводить различными маршрутами в зависимости от того, требуется ли местное или системное лечение и в зависимости от области, которую нужно вылечить. Введение может быть местным (включая офтальмическое и в мембраны слизистых оболочек, включая интраназальную, вагинальную и ректальную доставку), легочным (например, ингаляцией или инсуффляцией порошков или аэрозолей, включая аэрозольный препарат; интратекальным, интраназальным, эпидермальным и трансдермальным), глазным, пероральным или парентеральным. Способы глазной доставки могут включать местное введение (капли для глаз), подконъюнктивальный, периокулярный инъекционный раствор или раствор для введения в стекловидное тело, или введение баллонным катетером, или введение офтальмических вставок, помещенных хирургически в конъюнктивальный мешок. Парентеральное введение включает внутривенную, внутриартериальную, подкожную, внутрибрюшинную или внутримышечную инъекцию или инфузию; или внутричерепное, например интратекальное или интравентрикулярное, введение. Парентеральное введение может быть в форме единичной болюсной дозы или может осуществляться, например, посредством непрерывного

- 7 016017 перфузионного насоса. Фармацевтические композиции и составы для местного введения могут включать трансдермальные пластыри, мази, лосьоны, кремы, гели, капли, суппозитории, спреи, жидкости и порошки. Общепринятые фармацевтические носители, водные, порошковые или масляные основы, загустители и подобные могут быть необходимы и желательны.

Настоящее изобретение также включает фармацевтические композиции, которые содержат в качестве активного ингредиента одно или более вышеуказанных соединений настоящего изобретения в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями. При получении композиций настоящего изобретения активный ингредиент обычно смешивают со вспомогательным веществом, разбавляют вспомогательным веществом или помещают в данный носитель в форме, например, капсулы, саше, бумажной или другой емкости. Когда вспомогательное вещество служит в качестве разбавителя, оно может быть твердым, полутвердым или жидким материалом, который действует в качестве растворителя, носителя или среды для активного ингредиента. Таким образом, композиции могут быть в форме таблеток, пилюль, порошков, пастилок, саше, крахмальных капсул, эликсиров, суспензий, эмульсий, растворов, сиропов, аэрозолей (в твердом виде или в жидкой среде), мазей, содержащих, например, вплоть до 10% по весу активного соединения, мягких и твердых желатиновых капсул, суппозиториев, стерильных растворов для инъекции и упакованных в стерильных условиях порошков.

При получении состава активное соединение можно измельчать для получения подходящего размера частиц перед смешением с другими ингредиентами. Если активное соединение является практически нерастворимым, его можно измельчать до размера частиц, меньшего чем 200 меш. Если активное соединение по большей части является растворимым в воде, размер частиц можно регулировать измельчением для получения практически однородного распределения в составе, например, приблизительно до 40 меш.

Соединения настоящего изобретения можно измельчать, применяя известные способы измельчения, такие как мокрое измельчение, для получения размера частиц, подходящих для получения таблеток и других типов составов. Мелкоизмельченные (наночастицы) препараты соединений настоящего изобретения можно получить способами, известными в данной области техники, например, см. международную патентную заявку № \¥О 2002/000196.

Некоторые примеры подходящих вспомогательных веществ включают лактозу, декстрозу, сукрозу, сорбит, маннит, крахмалы, аравийскую камедь, фосфат кальция, альгинаты, трагакант, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, воду, сироп и метилцеллюлозу. Составы могут дополнительно содержать смазывающие вещества, такие как тальк, стеарат магния и минеральное масло; увлажняющие агенты; эмульгаторы и суспендирующие агенты; консерванты, такие как метил- и пропилгидроксибензоат; подсластители и ароматизирующие вещества. Композиции настоящего изобретения можно формулировать так, чтобы обеспечить быстрое, стабильное или замедленное высвобождение активного ингредиента после введения пациенту применением способов, известных в данной области техники.

Композиции можно формулировать в виде единичной лекарственной формы, причем каждая доза содержит от приблизительно 5 до приблизительно 100 мг, более обычно от приблизительно 10 до приблизительно 30 мг активного ингредиента. Термин единичные лекарственные формы относится к физически дискретным единичным формам, подходящим в качестве единичных доз для человека и других млекопитающих, причем каждая единичная форма содержит предварительно определенное количество активного материала, вычисленное для того, чтобы оказать требуемое терапевтическое действие, совместно с подходящим фармацевтическим вспомогательным веществом.

Активное соединение может быть эффективным в широком диапазоне доз, его обычно вводят в фармацевтически эффективном количестве. Однако ясно, что данное реально вводимое количество соединения будет обычно определяться лечащим врачом, согласно сопутствующим обстоятельствам, включая состояние, которое нужно лечить, выбранный путь введения, конкретное вводимое соединение, возраст, вес и реакцию конкретного пациента, тяжесть симптомов у пациента и подобные.

Для получения твердых композиций, таких как таблетки, основной активный ингредиент смешивают с фармацевтическим вспомогательным веществом для получения твердой предварительной композиции, содержащей гомогенную смесь соединения настоящего изобретения. При упоминании данных предварительных композиций в качестве гомогенных активный ингредиент обычно равномерно распределяют в композиции так, чтобы композицию можно было легко разделять на равные эффективные единичные лекарственные формы, такие как таблетки, пилюли и капсулы. Затем данные твердые предварительные составы разделяют на единичные лекарственные формы описанного выше типа, содержащие, например, от 0,1 до приблизительно 500 мг активного ингредиента настоящего изобретения.

Таблетки или пилюли настоящего изобретения можно покрывать или в других случаях смешивать для получения лекарственной формы, получая эффект продолжительного действия. Например, таблетка или пилюля может содержать внутреннюю дозовую и внешнюю дозовую компоненту, причем последняя представляет собой покрытие первой. Два компонента можно разделить энтеросолюбильным слоем, который служит для сопротивления распаду в желудке и позволяет внутреннему компоненту проходить неповрежденным в двенадцатиперстную кишку или служит для замедления высвобождения. Можно применять множество материалов для данных энтеросолюбильных слоев или покрытий, и данные мате

- 8 016017 риалы включают ряд полимерных кислот и смеси полимерных кислот с такими материалами, как шеллак, цетиловый спирт и ацетат целлюлозы.

Жидкие формы, в которые можно вводить соединения и композиции настоящего изобретения для перорального введения или введения посредством инъекции, включают водные растворы, подходящие ароматизированные сиропы, водные или масляные суспензии и ароматизированные эмульсии с пищевыми маслами, такими как хлопковое масло, кунжутное масло, кокосовое масло или арахисовое масло, также как эликсиры и аналогичные фармацевтические растворители.

Композиции для ингаляции или инсуффляции включают растворы и суспензии в фармацевтически приемлемых водных или органических растворителях или их смесях и порошки. Жидкие или твердые композиции могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, как описано выше. В некоторых вариантах осуществления композиции вводят пероральным или назальным респираторным путем для местного или общего действия. Композиции можно распылять применением инертных газов. Распыляемые растворы можно вдыхать непосредственно из распыляющего устройства или распыляющее устройство можно присоединять к маскам для лица или устройству для дыхания с положительным перемежающимся давлением. Композиции в виде раствора, суспензии или порошка можно вводить перорально или назально из приспособлений, которые подходящим способом доставляют состав.

Количество соединения или композиции, вводимое пациенту, будет зависеть от того, что вводят, цели введения, такой как профилактика или лечение, состояния пациента, способа введения и подобных. В терапевтических применениях композиции можно вводить пациенту, уже страдающему от заболевания, в количестве, достаточном для того, чтобы вылечить или, по меньшей мере, частично остановить симптомы заболевания и его осложнения. Эффективные дозы будут зависеть от состояния заболевания, которое нужно лечить, также как решения лечащего врача, зависящего от факторов, таких как тяжесть заболевания, возраст, вес и общее состояние пациента и подобных.

Композиции, вводимые пациенту, могут быть в форме фармацевтических композиций, описанных выше. Данные композиции можно стерилизовать общепринятыми способами стерилизации или их можно стерилизовать фильтрацией. Водные растворы можно упаковывать для применения, как есть, или лиофилизовать, причем лиофилизованный препарат смешивают со стерильным водным носителем перед введением. рН сложных препаратов обычно будет составлять от 3 и 11, более предпочтительно от 5 до 9 и самое предпочтительное от 7 до 8. Ясно, что применение определенных веществ из вышеуказанных вспомогательных веществ, носителей или стабилизаторов будет приводить к образованию фармацевтических солей.

Терапевтические дозы соединений настоящего изобретения могут изменяться в зависимости, например, от конкретного применения, для которого проводится лечение, способа введения соединения, здоровья и состояния пациента и решения лечащего врача. Количественное отношение или концентрация соединения настоящего изобретения в фармацевтической композиции может изменяться в зависимости от ряда факторов, включая дозу, химические характеристики (например, гидрофобность) и способ введения. Например, соединения настоящего изобретения можно получать в виде водного физиологического буферного раствора, содержащего от приблизительно 0,1 до приблизительно 10% вес./об. соединения для парентерального введения. Некоторые диапазоны стандартных доз составляют от приблизительно 1 мкг/кг до приблизительно 1 г/кг веса тела в день. В некоторых вариантах осуществления диапазон доз составляет от приблизительно 0,01 до приблизительно 100 мг/кг веса тела в день. Доза, вероятно, зависит от таких переменных, как тип и степень прогрессирования заболевания или расстройства, общего статуса здоровья конкретного пациента, относительной биологической активности выбранного соединения, состава вспомогательного вещества и пути его введения. Эффективные дозы можно экстраполировать, исходя из кривых доза-эффект, полученных в системах для испытаний ίη νίΐτο или на модельных животных.

Соединения настоящего изобретения можно также формулировать в комбинации с одним или более дополнительных активных ингредиентов, которые могут включать любой фармацевтический агент, такой как противовирусные агенты, вакцины, антибиотики, агенты, усиливающие иммунитет, иммуносупрессоры, противовоспалительные агенты, анальгетики и лекарственные средства для лечения диабета или ожирения, гипергликемии, гипертензии, гиперлипидемии и подобных. Агенты для лечения метаболических расстройств, с которыми соединение настоящего изобретения можно смешивать, включают, но не ограничиваются, амилиновые аналоги, инкретиновые миметики, ингибиторы дипептидилпептидазыIV, являющейся ферментом, разрушающим инкретин, агонисты рецептора, активируемого пролифератором пероксисом РРАК-а и РРАК-д, и ингибиторы СВ 1 каннабиноидного рецептора.

Настоящее изобретение будет описано более подробно посредством конкретных примеров. Следующие примеры представлены с иллюстративной целью, и не предполагается, что они ограничивают настоящее изобретение любым способом. Специалистам ясно, что множество некритических параметров, которые можно изменить или модифицировать, будут давать, по существу, те же результаты.

- 9 016017

Примеры

Все соединения очищали или колоночной флэш-хроматографией, или обращено-фазной жидкостной хроматографией, применяя \Уа1ег5 ЕгасбопЬупх БС-М8 систему с фракционированием по массе. Со1итп: \Уа1ег5 ХВпбде С₁₈ 5 мкм, 19x100 мм; подвижная фаза А: 0,15% ΝΗ₄ΟΗ в воде и подвижная фаза В: 0,15% ΝΗ₄ΟΗ в ацетонитриле; скорость потока была 30 мл/м, разделяющий градиент подбирали для каждого соединения, применяя Сотроипб 8рес1йс Ме11юб ΟρΙίιηίζαΙίοπ рго1осо1, как описано в литературе [Ргерагайуе ЬС-М8 Риййсайоп: Бпргоуеб Сотроипб Зреайс МеЛоб Οрί^т^ζаί^οη, К. В1от, В. С1а88, В. Зрагкк, А. СотЬк, 1. СотЫ. С1ет., 2004, 6, 874-883].

Затем выделенный продукт обычно подвергали аналитической БС/М8 для проверки чистоты при следующих условиях: йЩгишеЩ; АдбеШ 1100 кепек, ЬС/МЖ, колонка: \Уа1ег5 Зиийге™ С₁₈ 5 мкм, 2,1х5,0 мм, буферы: подвижная фаза А: 0,025% ТЕА в воде и подвижная фаза В: 0,025% ТЕА в ацетонитриле; градиент 2-80% буфера В в течение 3 мин при скорости потока 1,5 мл/мин.

Пример 1.

Стадия 1.

1-Бензил 3-этилпиперидин-1,3 -дикарбоксилат

СЬг

Бензилхлорформиат (А1бпсй, са1 №: 119938) (191 мл, 1,34 моль) медленно добавляли к охлажденной (0°С) смеси этилпиперидин-3-карбоксилата (А1бг1сН, са1 №: 194360) (200 г, 1,27 моль) и триэтиламина (266 мл, 1,91 моль) в хлористом метилене (1000 мл). Реакционную смесь постепенно нагревали до температуры окружающей среды и перемешивали в течение 3 ч. Реакцию прекращали добавлением водного раствора 1Ν ИС1 и продукт экстрагировали несколько раз хлористым метиленом. Объединенные экстракты промывали водой, насыщенным водным NаΗСΟз, водой, соляным раствором, сушили над Мд§О₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении для того, чтобы получить требуемый продукт в виде масла (359,8 г, 97%).

БС/М8 292,2 (М+Н)⁺.

Стадия 2.

1-Бензил 3-этил 3-(3 -метилбут-2-ен-1 -ил)пиперидин-1,3-дикарбоксилат

К раствору 1-бензил 3-этилпиперидин-1,3-дикарбоксилата (120,0 г, 0,412 моль) в ΤΗΕ (400 мл), охлажденному до -78°С, добавляли по каплям 270 мл раствора бис-(триметилсилил)амида натрия (1М раствор в ΤΗΕ от А1бг1сН, са1 №: 245585) более 2 ч. Смесь перемешивали при -78°С в течение дополнительного 1 ч. Затем медленно добавляли 1-бром-3-метилбут-2-ен (А1бг1сН са1 №: 249904) (71 мл, 0,62 моль) более 1 ч. Смесь перемешивали при -78°С в течение 30 мин, нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение дополнительных 3 ч. Реакцию прекращали 1Ν водным раствором ΗΟ. Большую часть ΤΗΕ удаляли при пониженном давлении. Остаток экстрагировали этилацетатом. Объединенные экстракты промывали насыщенным водным NаΗСΟз и соляным раствором, затем сушили над Мд§О₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на колонке с силикагелем с градиентом 10-20% этилацетата в гексане для того, чтобы получить требуемый продукт (140 г, 94%).

БС/М8: т/е=332,2 (М+Н)⁺.

- 10 016017

Стадия 3.

1-Бензил 3-этил 3-(2-оксоэтил)пиперидин-1 3-дикярбоксилат

СЬг

Озон пропускали через раствор 1-бензил 3-этил 3-(3-метилбут-2-ен-1-ил)пиперидин-1,3дикарбоксилата (35,2 г, 0,0979 моль) в хлористом метилене (800 мл) при -78°С до того момента, как цвет раствора становился синим. Затем реакционную смесь продували азотом до того момента, как исчезал синий цвет. Добавляли диметилсульфид (А1бг1сН. са! №: 274380) (14 мл, 0,19 моль) и триэтиламин (26,5 мл, 0,19 моль) и смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Летучий растворитель удаляли при пониженном давлении и очищали непосредственно флэш-хроматографией на колонке с силикагелем с градиентом 20% этилацетата в гексане для того, чтобы получить требуемый продукт с количественным выходом.

БС/М8 334,2 (М+Н)⁺.

Стадия 4.

Бензил 2-(цис-4-гидроксициклогексил)-1 -оксо-2,7-диазаспиро [4,5] декан-7-карбоксилат 'ОН

СЬг

К суспензии гидрохлорида цис-4-аминоциклогексанола (полученного у 8ί]ί;·ι МебсПет ЬаЬ, СЫпа) (13,8 г, 0,0910 моль) и 1-бензил 3-этил 3-(2-оксоэтил)пиперидин-1,3-дикарбоксилата (31,0 г, 0,0930 моль) в 1,2-дихлорэтане (250 мл) добавляли триэтиламин (23,3 мл, 0,167 моль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 40°С в течение ночи. Добавляли к вышеуказанной смеси триацетоксиборгидрид натрия (А1бпск са! №: 316393) (49,3 г, 0,232 моль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. БС/М8 данные показали, что исходный материал израсходовался и наблюдали промежуточный продукт с т/е: 433,2 (М+Н)⁺.

Затем смесь грели при 80°С в течение 4 ч или до того момента, как БС/М8 показала отсутствие промежуточного амина (т/е: 433,2). Реакцию прекращали водным ΝηΗ0Ο₃. Органический слой промывали соляным раствором, сушили над Мд§О₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный материал сушили при пониженном давлении в течение ночи для того, чтобы получить бесцветное вязкое масло (26,9 г, 66,8%).

БС/М8 т/е 387,2 (М+Н)⁺.

Стадия 5.

Бензил (58)-2-(цис-4-гидроксициклогексил)-1-оксо-2,7-диазаспиро[4,5]декан-7-карбоксилат 'он гч о СЬг

Рацемическую смесь, полученную в вышеуказанной стадии (26,9 г), очищали на АдПеп! 1100 кепек препаративной системе, применяя СЫга1се1 ΟΌ-Η колонку (3,0x25 см, размер частиц 5 мкм, СЫга1 ТесПпо1од1ек), элюируя смесью 30% этанол/гексаны (изократический, 22 мл/мин). Загрузка колонки составляла приблизительно 150 мг/инъекция, и сбор пиков осуществляли на основании УФ-поглощения при 220 нМ. Пик 1 элюировался приблизительно через 8,5 мин и пик 2 элюировался приблизительно через 9,8 мин. Фракции пика 2 собирали и концентрировали для того, чтобы получить требуемый продукт (11,9 г) в виде белого пенистого твердого остатка. Оптическую чистоту объединенного материала пика 2 определяли, применяя АдПеп! 1100 кепек аналитическую систему, снабженную СЫга1се1 ΟΌ-Η колонкой (4,6x250 мм, размер частиц 5 мкм, СЫга1 ТесЬпо1од1ек) и элюируя смесью 30% этанол/гексаны (изократический, 0,8 мл/мин).

БС/М8 т/е 387,2 (М+Н).

Абсолютную стереохимию пика 2 устанавливали на основании определения монокристаллической структуры близких аналогов с помощью рентгеновской дифракции: бензил (58)-2-(транс-4 гидроксициклогексил)-1-оксо-2,7-диазаспиро[4,5]декан-7-карбоксилата и (58)-2-(цис-4-{[третбутил(диметил)силил]окси}циклогексил)-2,7-диазаспиро[4,5]декан-1-она, полученных, как описано на стадиях 5а-с.

- 11 016017

Стадия 5 а.

Бензил 2-(цис-4-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}циклогексил)-1-оксо-2,7-диазаспиро[4,5]декан7-карбоксилат

бензил 2-(цис-4-гидроксициклогексил)-1-оксо-2,7 155,2 ммоль) в безводном Ν,Ν-диметилформамиде

466 ммоль) и третг,

К перемешиваемому раствору диазаспиро[4,5]декан-7-карбоксилата (60,00 (160 мл) при комнатной температуре добавляли 1Н-имидазол (32,0 г, бутилдиметилсилилхлорид (36,2 г, 233 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной темпе ратуре в течение 4 ч, реакцию прекращали водой (150 мл) и экстрагировали ЕЮАс (3x150 мл). Объединенные органические слои промывали соляным раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении для того, чтобы получить неочищенный продукт (84 г). Чистый продукт (55,4 г) получали перекристаллизацией неочищенного продукта из гептана. Маточный раствор концентрировали и подвергали очистке посредством флэш-хроматографии на колонке с силикагелем, элюируя смесью АсОЕ!/гексан, для того, что получить дополнительные 14,4 г продукта с суммарным выходом 89,7%.

Стадия 5Ь. 2-(цис-А-{[трет-Бутил(диметил)силил]окси}циклогексил)-2,7-диазаспиро[4,5]декан-1-он

N О Н

К раствору бензил 2-(цис-4-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}циклогексил)-1-оксо-2,7диазаспиро[4,5]декан-7-карбоксилата (18,0 г, 35,9 ммоль) в метаноле (150 мл) добавляли 10% палладийна-угле (А1йпс11. са! №: 520888) (1,8 г, 1,5 ммоль) в атмосфере азота. Реакционную смесь гидрировали и встряхивали при 50 фунт/кв.дюйм в течение 20 ч. Реакционную смесь фильтровали через слой целита и затем промывали метанолом (300 мл). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении для того, чтобы получить требуемый продукт в виде белого твердого остатка с количественным выходом.

Стадия 5с.

(5§)-2-(цис-4-{[трет-Бутил(диметил)силил]окси}циклогексил)-2,7-диазаспиро [4,5] декан-1 -он

ΟχΟ/χ

N О

2-(цис-4-{ [трет-Бутил(диметил)силил]окси}циклогексил)-2,7-диазаспиро[4,5]декан-1-он (7,00 г, 19,1 ммоль) растворяли в ацетонитриле (50 мл) и метаноле (7 мл) при комнатной температуре. После полного растворения исходного материала раствор нагревали до 70°С. К вышеуказанному раствору медленно добавляли раствор (2К)-гидрокси(фенил)уксусной кислоты (1,45 г, 9,55 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) при 65-70°С. После добавления раствор грели при 74°С в течение 10 мин и медленно охлаждали до комнатной температуры в течение ночи. Образовавшиеся кристаллы собирали фильтрацией для того, чтобы получить 3,38 г требуемого продукта в виде соли (2К)-гидрокси(фенил)уксусной кислоты. Полученную в результате соль (3,38 г) растворяли в воде (50 мл), и доводили рН~12 40 мл водного раствора К₂СО₃ (2,0 М). Смесь экстрагировали дихлорметаном (3 раза). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении для того, чтобы получить требуемый продукт в виде свободного основания (бесцветное твердое кристаллическое вещество) (2,37 г). Абсолютную стереохимию данного соединения устанавливали определением монокристаллической структуры соли (2К)-гидрокси(фенил)уксусной кислоты и (5§)-2-(цис-4-{[третбутил(диметил)силил]окси}циклогексил)-2,7-диазаспиро[4,5]декан-1-она с помощью рентгеновской дифракции.

Стадия 6.

(5§)-2-(цис-4-Гидроксициклогексил)-2,7-диазаспиро[4,5] декан-1-он

Бензил (5§)-2-(цис-4-гидроксициклогексил)-1 -оксо-2,7-диазаспиро [4,5]декан-7-карбоксилат, полученный на стадии 5 (0,266 г, 0,000688 моль), растворяли в метаноле (5,0 мл) и перемешивали в атмосфере водорода в присутствии 10% палладия-на-угле (АИпсй, са! №: 520888) (20,0 мг) при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь фильтровали и летучие растворители удаляли при пониженном давлении для того, чтобы получить требуемый продукт с количественным выходом.

ЬС/Μδ т/е 253,2 (М+Н)⁺.

- 12 016017

Стадия 7.

(58)-7-(4-Бром-2-фторфенил)-2-(цис-4-гидроксициклогексил)-2,7-диазаспиро[4,5]декан-1-он

Вг

Смесь (58)-2-(цис-4-гидроксициклогексил)-2,7-диазаспиро[4,5]декан-1-она (1,04 г, 0,00412 моль), 4бром-2-фтор-1-йодбензола (Л1бпсН, са! №: 283304) (1,85 г, 0,00615 моль), йодида меди(1) (ЛИпсН, са! №: 215554) (0,122 г, 0,000640 моль), фосфата калия (2,63 г, 0,0124 моль) и 1,2-этандиола (0,48 мл, 0,0086 моль) в 1-бутаноле (3,90 мл) грели при 100°С в атмосфере азота в течение 2 дней. Реакцию прекращали водой и экстрагировали эфиром. Органические слои объединяли, промывали водой, соляным раствором, сушили над Ыа₂8О₄ и фильтровали. Фильтрат упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя 0-5% метанола в ЭСМ для того, чтобы получить требуемый продукт (950 мг, 54,2%).

БС/М8 т/е 425,1/427,0 (М+Н)⁺.

Стадия 8.

5-3-Фтор-4-[(58)-2-(цис-4-гидроксициклогексил)-1-оксо-2,7-диазаспиро[4,5]дец-7-ил]фенил-Ыметилпиридин-2-карбоксамид.

Фосфат калия (637 мг, 0,00300 моль) в воде (3,00 мл) добавляли к смеси (58)-7-(4-бром-2фторфенил)-2-(цис-4-гидроксициклогексил)-2,7-диазаспиро[4,5]декан-1-она (425 мг, 0,00100 моль), Νметил-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2-карбоксамида (Бгопйег 1пс., са! №: М10074) (393 мг, 0,00150 моль) и тетракис(трифенилфосфин)палладия (Л1бпсН, са! №: 216666) (35 мг, 0,000030 моль) в 1,4-диоксане (3,00 мл). Полученную в результате смесь грели при 120°С в течение 24 ч. Смесь разбавляли этилацетатом и промывали водой и соляным раствором. Органический слой сушили над №₂8О₄, фильтровали, концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя 5% метанол в ЭСМ для того, чтобы получить требуемый продукт (285 мг, 59,3%).

БС/М8 т/е 481,2 (М+Н)⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, ΌΜδΟ-άβ): 8,89 (1Н, дд, 1=2,5, 0,6 Гц), 8,76 (1Н, кв, 1=4,7 Гц), 8,22 (1Н, дд, 1=8,4, 2,5 Гц), 8,03 (1Н, дд, 1=8,4, 0,6 Гц), 7,65 (1Н, дд, 1=14,2, 2,1 Гц), 7,56 (1Н, дд, 1=8,5, 2,1 Гц), 7,13 (1Н, т, 1=8,5 Гц), 4,37 (1Н, д, 1=3,1 Гц), 3,78 (1Н, м), 3,71 (1Н, м), 3,21-3,38 (3Н, м), 3,07 (1Н, д, 1=11,4 Гц), 2,81 (3Н, д, 1=4,7 Гц), 2,64-2,74 (2Н, м), 2,18-2,26 (1Н, м), 1,60-1,91 (8Н, м), 1,39-1,51 (3Н, м), 1,21-1,30 (2Н, м).

Пример 2.

5-{3-Фтор-4-[(58)-2-(цис-4-гидроксициклогексил)-1-оксо-2,7-диазаспиро[4,5]дец-7-ил]фенил}-^№ диметилпиридин-2-карбоксамид

Стадия 1.

5-Бром-^№диметилпиридин-2-карбоксамид

о

Оксалилхлорид (20,0 мл, 0,236 моль) добавляли к раствору 5-бромпиридин-2-карбоновой кислоты (Л1£а Лекаг, са! №: В25675) (10,1 г, 0,0500 моль) в хлористом метилене (60 мл) при комнатной температуре с последующим добавлением 5 капель ΌΜΡ. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Летучие компоненты упаривали при пониженном давлении. Остаток азеотропно упаривали с толуолом дважды. Затем остаток растворяли в ЭСМ (30 мл), с последующим добавлением 30 мл диметиламина в ΤΗΡ растворе (2,0 М) (Л1бпсН, са! №: 391956) и основания Хунига (20,0 мл) (Л1бпск са! №: 496219). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляли ЭСМ (100 мл) и промывали водой, 1Ν Ηί'Ί и соляным раствором. Органическую фазу сушили над №₂8О₄, фильтровали и концентрировали для того, чтобы получить требуемый продукт (10,5 г, 91,7%).

- 13 016017

Стадия 2.

^№Диметил-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2-карбоксамид о

Смесь 5-бром-Ы,М-диметилпиридин-2-карбоксамида (5,73 г, 0,0250 моль), 4,4,5,5,4',4',5',5'октаметил[2,2']би[[1,3,2]диоксабороланила] (6,98 г, 0,0275 моль) (Л1бпск са1 №: 473294), [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(11) в комплексе с дихлорметаном (1:1) (0,6 г, 0,0007 моль) (Л1бг1сй, саί №: 379670), 1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцена (0,4 г, 0,8 ммоль) (Л1бпск саί №: 177261) и ацетата калия (7,36 г, 0,0750 моль) в 1,4-диоксане (100 мл) грели при 120°С в течение 20 ч. После охлаждения смесь концентрировали, разбавляли этилацетатом и промывали насыщенным раствором ΝΗ.-ιΟ, водой, соляным раствором; сушили над Ыа₂8О₄. После фильтрации фильтрат концентрировали и неочищенный материал дополнительно очищали на колонке с силикагелем, элюируя смесью этилацетат/гексан для того, чтобы получить требуемый продукт (4,7 г, 68%).

Стадия 3.

5-{3-Фтор-4-[(58)-2-(цис-4-гидроксициклогексил)-1-оксо-2,7-диазаспиро[4,5]дец-7-ил]фенил}-^№ диметилпиридин-2-карбоксамид.

Данное соединение получали, применяя методики, которые были аналогичны методикам, описанным для синтеза примера 1, стадия 8, исходя из ^№диметил-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан2-ил)пиридин-2-карбоксамида и (58)-7-(4-бром-2-фторфенил)-2-(цис-4-гидроксициклогексил)-2,7диазаспиро [4,5] декан-1-она.

ЬС/М8 т/е 495,3 (М+Н)⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, ЭМ8О-б₆): 8,86 (1Н, д, 1=1,7 Гц), 8,15 (1Н, дд, 1=8,1, 2,3 Гц), 7,51-7,65 (3Н, м), 7,12 (1Н, т, 1=8,9 Гц), 4,37 (1Н, д, 1=3,1 Гц), 3,78 (1Н, м), 3,71 (1Н, м), 3,22-3,38 (3Н, м), 3,06 (1Н, д, 1=11,7 Гц), 3,00 (3Н, с), 2,97 (3Н, с), 2,64-2,74 (2Н, с), 2,18-2,27 (1Н, м), 1,60-1,91 (8Н, м), 1,39-1,51 (3Н, м), 1,221,30 (2Н, м).

Пример 3.

№этил-5-{3-фтор-4-[(58)-2-(цис-4-гидроксициклогексил)-1-оксо-2,7-диазаспиро[4,5]дец-7ил]фенил}пиридин-2-карбоксамид

ΌΗ

Стадия 1.

№Этил-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2-карбоксамид

Данное соединение получали, применяя методики, которые были аналогичны методикам, описанным для синтеза примера 2, стадии 1 и 2, исходя из 5-бромпиридин-2-карбоновой кислоты.

Стадия 2.

№Этил-5-{3-фтор-4-[(58)-2-(цис-4-гидроксициклогексил)-1-оксо-2,7-диазаспиро[4,5]дец-7ил]фенил}пиридин-2-карбоксамид.

Данное соединение получали, применяя методики, которые были аналогичны методикам, описанным для синтеза примера 1, стадия 8, исходя из №этил-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2ил)пиридин-2-карбоксамида и (58)-7-(4-бром-2-фторфенил)-2-(цис-4-гидроксициклогексил)-2,7диазаспиро [4,5] декан-1-она.

ЬС/М8 т/е 495,3 (М+Н)⁺.

- 14 016017

Пример 4.

5-{3-Хлор-4-[(5§)-2-(цис-4-гидроксициклогексил)-1-оксо-2,7-диазаспиро[4,5]дец-7-ил]фенил}-Мэтилпиридин-2-карбоксамид

Стадия 1.

(5Б)-7-(4-Бром-2-хлорфенил)-2-(цис-4-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}циклогексил)-2,7диазаспиро [4,5] декан-1-он отвз

ΟνΟ-

Вг

Смесь (5Б)-2-(цис-4-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}циклогексил)-2,7-диазаспиро[4,5]декан-1она (0,282 г, 0,000769 моль), 4-бром-2-хлор-1-йодбензола (0,293 г, 0,000922 моль) (Ьаиса81ег, са! №: 19245), йодида меди(1) (0,015 г, 0,000077 моль), фосфата калия (0,490 г, 0,00231 моль) и 1,2-этандиола (0,0857 мл, 0,00154 моль) в 1-бутаноле (0,75 мл) грели при 100°С в атмосфере азота в течение 2 дней. Реакционную смесь фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали флэшхроматографией на колонке с силикагелем (элюируя 0-50% этилацетата в гексане) для того, чтобы получить требуемый продукт.

Стадия 2.

5-{3-Хлор-4-[(5§)-2-(цис-4-гидроксициклогексил)-1-оксо-2,7-диазаспиро[4,5]дец-7-ил]фенил}-Ыэтилпиридин-2-карбоксамид.

К перемешиваемой смеси (5Б)-7-(4-бром-2-хлорфенил)-2-(цис-4-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}циклогексил)-2,7-диазаспиро[4,5]декан-1-она (20 мг, 0,00004 моль), [1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(11) в комплексе с дихлорметаном (1:1) (2,0 мг), тетракис(трифенилфосфин)палладия (1,0 мг) и карбоната калия (14,9 мг, 0,000108 моль) в безводном Ν,Νдиметилформамиде (1 мл) добавляли №этил-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2карбоксамид (14,5 мг, 0,054 ммоль). Полученную в результате реакционную смесь грели при 150°С и перемешивали в течение ночи с последующим удалением ТВ Б защитной группы добавлением 1,7 М фторкремниевой кислоты в воде (0,10 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуры в течение ночи. Затем реакционную смесь непосредственно очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ для того, чтобы получить требуемый продукт.

ЬС/МБ т/е 511,2 (М+Н)⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, ЭМБО-б₆): 8,92 (1Н, д, 1=2,3 Гц), 8,84 (1Н, т, 1=5,9 Гц), 8,26 (1Н, дд, 1=8,2, 2,3 Гц), 8,06 (1Н, д, 1=8,2 Гц), 7,89 (1Н, д, 1=2,2 Гц), 7,74 (1Н, дд, 1=8,5, 2,2 Гц), 7,30 (1Н, т, 1=8,5 Гц), 4,39 (1Н, д, 1=3,1 Гц), 3,80 (1Н, м), 3,72 (1Н, м), 3,24-3,44 (5Н, м), 3,01 (1Н, д, 1=11,4 Гц), 2,63-2,74 (2Н, м), 2,40-2,53 (1Н, м), 1,64-1,91 (8Н, м), 1,41-1,53 (3Н, м), 1,20-1,32 (2Н, м), 1,13 (3Н, т, 1=7,2 Гц).

Пример 5.

Сравнительные данные.

Неожиданно обнаружили, что соединения настоящего изобретения обладают полезным меньшим ингибированием активности ионных каналов (как измерено КЕКС пэтч-кламп анализом) по сравнению с аналогичными соединениями (5 Б)-7-(2,4-дифторфенил)-2-(транс-4-гидроксициклогексил)-2,7диазаспиро[4,5]декан-1-оном (сравнительный пример 1) и 3-фтор-4-[2-(транс-4-гидроксициклогексил)-1оксо-2,7-диазаспиро[4,5]дец-7-ил]бензонитрилом (сравнительный пример 2); см. XVО 2006/053024. Табл. 1 включает данные ниже относительно эффективности и ингибирования активности ионных каналов. Тогда как соединения настоящего изобретения (представленные примерами 1 и 2) обладают равной эффективностью с соединениями сравнительных примеров, соединения настоящего изобретения неожиданно ингибировали активность ионных каналов в 3-14 раз меньше, чем соединения сравнительных примеров. Соединения примеров 3 и 4 показали аналогичные свойства.

- 15 016017

Таблица 1

Соединение	1С₅₀ (нМ) Н-НЗР1	1С₅₀ (НМ) Ь-РВМС	ЬЕКС (Пэтч) % ΐηΐι @ 10 мкМ
Пример 1	<20	<20	<10
Пример 2	<2 0	<2 0	<18
Сравнительный пример 1	<2 0	<2 0	>7 4
Сравнительный пример 2	<2 0	<2 0	>45

НЕКС пэтч-кламп анализ проводили согласно методикам Натб11 О.Р. еб а1. бтргоуеб рабсН с1атр 1сс11пк.|ис5 бог Ιιίβΐι ге8о1ибюп сиггепб гесогбшд бгот се118 апб се11 бгее тетбгапе рабсбеб, Рббидегб АгсН. 1981, ν. 391, р. 85-100. Данные об эффективности получали проведением методик в примерах 6 и 7 ниже.

В табл. 2 ниже даны дополнительные сравнительные данные соединения примера 2 и сравнительного примера 3 (4-{5-хлор-6-[(58)-2-(цис-4-гидроксициклогексил)-1-оксо-2,7-диазаспиро[4,5]дец-7ил]пиридин-3-ил}-Ы,М-диметилбензамида; см. \УО 2006/053024).

Таблица 2

Параметр	Пример 2	Сравнительный пример 3
Свободная фракция в сыворотке человека	22%	4,4%
Эффективность в клетке (1С50)	0,3 нМ	0,6 нМ
Конечная концентрация лекарственного средства в плазме человека, равная 1С₅₀	1, 4 нМ	13,6 нМ
ЬЕКС РабсЪ @ 10 мкМ	14%	33%
Максимальная концентрация у крыс после пероральной дозы, равной 5 мг/кг	3,36 мкМ	0,4 мкМ

Воздействие на плазму после пероральной дозы, равной 5 мг/кг, АПС)

8,3(мкМ*Ь)

0,5 (мкМ*Н)

Свободную фракцию определяли выделением свободного лекарственного средства из связанного лекарственного средства в плазме равновесным диализом согласно стандартным методикам проведения. Данные об эффективности в клетке получали согласно методике примера 7 ниже. Конечную концентрацию лекарственного средства вычисляли делением эффективности в клетке на свободную фракцию. НЕКС пэтч-кламп данные получали согласно методике, описанной выше. Фармакокинетические исследования проводили согласно стандартным методикам на крысах, которым вводили единичную пероральную дозу, равную 5 мг/кг. Данные зависимости концентрации в плазме от времени применяли для определения С_т,_1Х и АИС фармакокинетических параметров стандартным некомпартментным способом, применяя \У|п№пбп® тегбоп 5.0.1.

Данный пример иллюстрирует определенные свойства заявленных соединений. Не показано, представляют ли соединения сравнительных примеров близкие структурные аналоги соединений настоящего изобретения, и не показано, представлены ли все возможные сравнительные данные, поскольку специалист может и должен отличать то, что образует близкий структурный аналог и что образует соответствующие сравнительные данные.

Пример 6.

Ферментный анализ 11βΗ8Ό1.

Все бп т1бго анализы проводили с очищенными лизатами в качестве источника 11βΗ8Ό1 активности. НЕК-293 транзитарные трансфектанты, экспрессирующие эпитоп-меченную версию человеческой 11βΗ8Ό1 с полной длиной, собирали центрифугированием. Приблизительно 2х10⁷ клеток суспендировали в 40 мл лизатного буфера (25 мМ ТИ8-НС1, рН 7,5, 0,1 М ЫаС1, 1 мМ МдС1₂ и 250 мМ сукрозы) и лизировали в микрофлюидной системе. Лизаты очищали центрифугированием и надосадочную жидкость разделяли на определенные количества и замораживали.

Ингибирование 11βΗ8Ό1 испытуемыми соединениями оценивали бп тббго сцинтилляционным анализом сближения (8РА). Сухие испытуемые соединения растворяли до 5 мМ в ΌΜ8Ο. Полученные растворы разбавляли в ΌΜ8Ο до подходящих концентраций для 8РА анализа. 0,8 мкл 2-кратного последовательного разбавления соединений наносили на 384-луночные планшеты в ΌΜ8Ο так, чтобы покрывались 3 логарифма концентрации соединения. К каждой лунке добавляли 20 мкл очищенного лизата. Реакции инициировали добавлением 20 мкл смеси субстрат-кофактор в буфере для анализа (25 мМ ТпзНС1, рН 7,5, 0,1 М ЫаС1, 1 мМ МдС1₂) до конечной концентрации, равной 400 мкМ ЫАИРН, 25 нМ ³Н-кортизона и 0,007% Тпбоп Х-100. Планшеты инкубировали при 37°С в течение 1 ч. Реакции прекращали добавлением 40 мкл 8РА гранул, покрытых антимышиными антителами, которые предварительно инкубировали с 10 мкМ карбенооксолона и кортизол-специфическими моноклональными антителами. После завершения реакции планшеты инкубировали в течение как минимум 30 мин при комнатной температуре перед считыванием на Торсоипб сцинтилляционном счетчике. Контрольные образцы, не содер

- 16 016017 жащие лизат, с ингибированным лизатом и не содержащие тЛЬ, исследовали стандартным способом. Концентрация введенного кортизона снижалась приблизительно на 30% 11βΗ8Ό1 при неингибированной реакции при данных условиях.

Пример 7.

Анализ 11βΗ8Ό1 активности на основе клеток.

Мононуклеары периферической крови (РВМС) выделяли у здоровых добровольцев центрифугированием в градиенте плотности фиколла. Клетки наносили при 4х10⁵ клеток/лунка в 200 мкл ΑΙΜ V (С1Ьео-ВВЬ) среде на 96-луночные планшеты. Клетки стимулировали в течение ночи 50 нг/мл рекомбинантного человеческого 1Ь-4 (Κ.&Ό 8у81етк). На следующее утро добавляли 200 нМ кортизона (81дта) в присутствии или в отсутствие различных концентраций соединения. Клетки инкубировали в течение 48 ч и затем собирали надосадочную жидкость. Превращение кортизона в кортизол определяли имеющимся на рынке ЕБ18А (Аккау Эскщп).

Различные модификации настоящего изобретения в добавление к вариантам осуществления, описанным в настоящем изобретении, будут ясны специалистам в данной области техники из вышеуказанного описания. Предполагается, что данные модификации также включены в объем прилагаемой формулы изобретения. Каждая ссылка, включая все патенты, патентные заявки и публикации, цитируемые в настоящем описании, вводятся в настоящее изобретение полностью с помощью ссылки.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение, представляющее собой 5-{3-фтор-4-[(58)-2-(цис-4-гидроксициклогексил)-1-оксо-2,7диазаспиро[4,5]дец-7-ил]фенил}-Ы,И-диметилпиридин-2-карбоксамид или его фармацевтически приемлемую соль.
2. Соединение, представляющее собой 5-{3-фтор-4-[(58)-2-(цис-4-гидроксициклогексил)-1-оксо-2,7диазаспиро[4,5]дец-7-ил]фенил}-Ы-метилпиридин-2-карбоксамид или его фармацевтически приемлемую соль.
3. Соединение, представляющее собой И-этил-5-{3-фтор-4-[(58)-2-(цис-4-гидроксициклогексил) -1оксо-2,7-диазаспиро[4,5]дец-7-ил]фенил}пиридин-2-карбоксамид или его фармацевтически приемлемую соль.
4. Соединение, представляющее собой 5-{3-хлор-4-[(58)-2-(цис-4-гидроксициклогексил)-1-оксо-2,7диазаспиро[4,5]дец-7-ил]фенил}-Ы-этилпиридин-2-карбоксамид или его фармацевтически приемлемую соль.
5. Композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.
6. Способ ингибирования активности 11βΗ8Ό1 (11-β гидроксилстероиддегидрогеназы типа 1), включающий взаимодействие указанной 11βΗ8Ό1 с соединением по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой солью.
7. Способ ингибирования превращения кортизона в кортизол в клетке, включающий взаимодействие клетки с соединением по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой солью.
8. Способ ингибирования синтеза кортизола в клетке, включающий взаимодействие клетки с соединением по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой солью.
9. Способ лечения ожирения; диабета; непереносимости глюкозы; устойчивости к инсулину; гипергликемии; гипертензии; гиперлипидемии; когнитивного нарушения; депрессии; деменции; глаукомы; сердечно-сосудистых заболеваний; остеопороза; воспаления; метаболического синдрома; избытка мужских половых гормонов или синдрома поликистозных яичников (РСО8) у пациента, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли.
10. Способ лечения диабета типа ΙΙ у пациента, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли.