EA015827B1 - Ингибиторы вируса гепатита с - Google Patents

Abstract

Раскрыты ингибиторы вируса гепатита С, имеющие общую формулу (I). Также раскрыты композиции, содержащие соединения и способы использования соединений для ингибирования HCV.

Description

Настоящее изобретение, главным образом, направлено на противовирусные соединения и, более конкретно, направлено на соединения, которые могут ингибировать функцию протеазы N83 (также обозначаемой в настоящем изобретении как сериновая протеаза), кодируемой вирусом гепатита С (НСУ), на композиции, содержащие такие соединения, и способы ингибирования функции протеазы N83.

Вирус гепатита С (НСУ) является основным патогеном человека, инфицировавшим предположительно 170 млн человек по всему миру, что, грубо говоря, в пять раз больше, чем инфицированных вирусом иммунодефицита человека 1 типа. У значительного числа инфицированных НСУ индивидуумов развивается серьезное прогрессирующее заболевание печени, включая цирроз и печеночно-клеточный рак.

В настоящее время наиболее эффективная терапия НСУ включает комбинацию α-интерферона и рибавирина, которые приводят к устойчивому эффекту у 40% пациентов. Последние клинические результаты демонстрируют, что пегилированный α-интерферон предпочтителен по сравнению с немодифицированным α-интерфероном в виде монотерапии. Тем не менее, даже при экспериментальных терапевтических режимах, включающих комбинации пегилированного α-интерферона и рибавирина, у существенной части пациентов не отмечается устойчивого снижения вирусной нагрузки. Таким образом, существует очевидная и важная необходимость развивать эффективные лекарственные средства для лечения НСУ инфекции.

НСУ является положительно закрученным РНК вирусом. Основываясь на сравнении вычисленной последовательности аминокислот и значительном сходстве в 5'-нетранслируемой области, НСУ классифицируется как отдельный род в семействе Т1ау1утбае. Все представители семейства Т1ау1У1Г1бае имеют оболочечные вирионы, которые содержат положительно закрученный РНК геном, кодирующий все известные вирус-специфические белки через трансляцию единичной непрерывной открытой рамки считывания.

Существенная гетерогенность найдена в нуклеотидной и кодированной аминокислотной последовательности по всему геному НСУ. Шесть основных генотипов и более чем 50 подтипов были описаны. Основные генотипы НСУ отличаются по распространенности в мире и клиническое значение генетической гетерогенности НСУ остается неясным, несмотря на множество исследований возможного действия генотипов на патогенез и терапию.

Геном одноцепочечной РНК НСУ составляет приблизительно 9500 нуклеотидов в длину и имеет одну открытую рамку считывания (ОКТ), кодирующую один большой полипротеин, состоящий примерно из 3000 аминокислот. В инфицированных клетках этот полипротеин расщепляется по многим сайтам клеточными и вирусными протеазами до получения структурных и неструктурных (N8) белков. В случае НСУ поколение зрелых неструктурных белков (N82, N83, Ν84Α, Ν84Β, Ν85Α и Ν85Β) подвергается воздействию двух вирусных протеаз. Первая расщепляет N82^83 связь; вторая является сериновой протеазой, содержащей на Х-кошю N83 (также обозначаемая как N83 протеаза), и опосредует все последующие расщепления ниже по каскаду N83 как в цис-положении, в сайте расщепления N83-N84Α, так и в транс-положении, для остальных сайтов Χ84Α-Χ84Β, №4В-№5А, Χ85Α-Χ85Β. Χ84Α белок, как представляется, выполняет множество функций, действуя как кофактор для N83 протеазы, и возможно способствует расположению в мембране N83 и других компонентов вирусной репликазы. Образование комплекса N83 белка и №4А представляется необходимым для эффективного полибелкового процессинга, повышая протеолитическое расщепление во всех сайтах. Белок N83 также проявляет активность нуклеозидной трифосфатазы и РНК хеликазы. №5В (также обозначаемая как НСУ полимераза) является РНКзависимой РНК полимеразой, которая вовлечена в репликацию НСУ.

Настоящее изобретение раскрывает пептидные соединения, которые могут ингибировать функционирование N83 протеазы, например, в комбинации с №4А протеазой. Кроме того, настоящее изобретение описывает введение пациенту комбинированной терапии, посредством чего соединение в соответствии с настоящим изобретением, которое является эффективным для ингибирования НСУ N83 протеазы, может быть введено с одним или двумя дополнительными соединениями, имеющими противо-НСУ активность.

В первом аспекте объектом настоящего изобретения является соединение формулы (I)

или его фармацевтически приемлемая соль, где η равно 1;

К¹ выбран из гидрокси и ^802^

К² представляет собой С₂алкил, С₂алкенил или дифторметил;

(I),

- 1 015827

К³ представляет собой 4-бифенил-4-ил;

К⁴ представляет собой -ОК⁸;

К⁵ представляет собой С_3-4алкил, С₇алкенил или 4-трет-бутилбензил;

К⁶ представляет собой трет-бутоксикарбонил, возможно замещенный галогеном, третбутиламинокарбонил, адамантан-1-илоксикарбонил, адамантан-1-иламинокарбонил, фенил, возможно замещенный 1-2 заместителями, независимо выбираемыми из галогена и метокси;

К⁷ представляет собой циклопропил;

К⁸ представляет собой метокси или бензилокси.

Во втором аспекте объектом настоящего изобретения является соединение формулы (II) он⁸

(II), или его фармацевтически приемлемая соль, где η равно 1;

К² представляет собой С2алкил, С2алкенил или дифторметил;

К³ представляет собой 4-бифенил-4-ил;

К⁵ представляет собой С3-4алкил, С7алкенил или 4-трет-бутилбензил;

К⁶ представляет собой трет-бутоксикарбонил, возможно замещенный галогеном, третбутиламинокарбонил, адамантан-1-илоксикарбонил, адамантан-1-иламинокарбонил, фенил, возможно замещенный 1-2 заместителями, независимо выбираемыми из галогена и метокси;

К⁷ представляет собой циклопропил;

К⁸ представляет собой метокси или бензилокси.

Соединение может также быть выбрано из

- 2 015827

или их фармацевтически приемлемых солей.

В третьем аспекте настоящее изобретение включает в себя композицию, содержащую соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель. В первом воплощении третьего аспекта композиция дополнительно содержит по крайней мере одно дополнительное соединение, имеющее противо-НСУ активность. Одно из дополнительных соединений пред

- 3 015827 ставляет собой интерферон или рибавирин. Интерферон может быть выбран из интерферона а-2В, пегилированного интерферона α, консенсусного интерферона, интерферона а-2А и лимфобластоидного интерферона τ.

Настоящее изобретение охватывает также композицию, содержащую соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, фармацевтически приемлемый носитель и по крайней мере одно дополнительное соединение, обладающее противо-НСУ активностью, где по крайней мере одно из дополнительных соединений выбрано из интерлейкина 2, интерлейкина 6, интерлейкина 12, соединения, которое улучшает развитие реакции хелперных Т-клеток 1-го типа, интерферирующего РНК, антисмыслового РНК, имиквимода, рибавирина, ингибитора инозин 5'-монофосфат дегидрогеназы, амантадина и римантадина.

Настоящее изобретение охватывает также композицию, содержащую соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, фармацевтически приемлемый носитель и по крайней мере одно дополнительное соединение, обладающее противо-НСУ активностью, где по крайней мере одно из дополнительных соединений, эффективно ингибирующих функцию мишени, выбрано из НСУ металлопротеазы, НСУ сериновой протеазы, НСУ полимеразы, НСУ хеликазы, НСУ Ν84Β белка, НСУ входа, НСУ сборки, НСУ выхода, НСУ Ν85Α белка и 1МРИН для лечения НСУ инфекции.

В четвертом аспекте настоящее изобретение включает в себя способ лечения НСУ инфекции у пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В первом воплощении четвертого аспекта способ дополнительно включает введение одного дополнительного соединения, обладающего противо-НСУ активностью, перед, после или одновременно с соединением формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солью. В одном из воплощений четвертого аспекта изобретения по крайней мере одно из дополнительных соединений представляет собой интерферон или рибавирин. В другом его воплощении интерферон выбран из интерферона а-2В, пегилированного интерферона α, консенсусного интерферона, интерферона а-2А и лимфобластоидного интерферона τ.

В ещё одном воплощении четвертого аспекта настоящее изобретение включает в себя способ лечения НСУ инфекции у пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и по крайней мере одного дополнительного соединения, обладающего противо-НСУ активностью, перед, после или одновременно с соединением формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солью, где по крайней мере одно из дополнительных соединений выбрано из интерлейкина 2, интерлейкина 6, интерлейкина 12, соединения, которое улучшает развитие реакции хелперных Т-клеток 1-го типа, интерферирующего РНК, антисмыслового РНК, имиквимода, рибавирина, ингибитора инозин 5'-монофосфат дегидрогеназы, амантадина и римантадина.

Настоящее изобретение включает также способ лечения НСУ инфекции у пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и по крайней мере одного дополнительного соединения, обладающего противо-НСУ активностью, перед, после или одновременно с соединением формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солью, где по крайней мере одно из дополнительных соединений, эффективно ингибирующих функцию мишени, выбрано из НСУ металлопротеазы, НСУ сериновой протеазы, НСУ полимеразы, НСУ хеликазы, НСУ Ν84Β белка, НСУ входа, НСУ сборки, нСу выхода, НСУ Ν85Α белка и [МРОН для лечения НСУ инфекции.

В пятом аспекте объектом настоящего изобретения является композиция, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, один, два, три, четыре или пять дополнительных соединений, имеющих противо-НСУ активность и фармацевтически приемлемый носитель. В первом воплощении пятого аспекта композиция содержит три или четыре дополнительных соединений, имеющих противо-НСУ активность. Во втором воплощении пятого аспекта композиция содержит один или два дополнительных соединения, имеющих противо-НСУ активность.

В шестом аспекте объектом настоящего изобретения является способ лечения НСУ инфекции у пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и один, два, три, четыре или пять дополнительных соединений, имеющих противо-НСУ активность, перед, после или одновременно с соединением формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солью. Способ может включать введение трех или четырех дополнительных соединений, имеющих противо-НСУ активность, или же введение одного или двух дополнительных соединений, имеющих противо-НСУ активность.

Описание настоящего изобретения должно быть рассмотрено в соответствии с правилами и принципами образования химической связи. В некоторых случаях это может быть необходимо, чтобы удалить атом водорода для размещения заместителя на любом заданном месте при любой заданном положении.

Должно быть понятно, что соединения, охваченные настоящим изобретением, являются теми, которые обеспечивают подходящую стабильность для применения в качестве фармацевтического агента.

Все патенты, патентные заявки и опубликованные ссылки, процитированные в описании, при этом

- 4 015827 включены как ссылки в своей полноте. В случае несовместимости будет преобладать настоящее изобретение, включая определения.

Как используют в настоящем описании, следующие термины имеют соответствующие значения.

Термин алкенил, как используют в настоящем описании, относится к прямой или разветвленной цепи группы от двух до шести атомов углерода, содержащей по крайней мере одну углерод-углеродную двойную связь.

Термин алкокси, как используют в настоящем описании, относится к алкильной группе, присоединенной к остатку исходной молекулы через атом кислорода.

Термин алкоксиалкил, как используют в настоящем описании, относится к алкильной группе, замещенной одним, двумя или тремя алкоксигруппами.

Термин алкоксикарбонил, как используют в настоящем описании, относится к алкоксигруппе, присоединенной к остатку исходной молекулы через карбонильную группу.

Термин алкоксикарбонилалкил, как используют в настоящем описании, относится к алкильной группе, замещенной одним, двумя или тремя алкоксикарбонильными группами.

Термин алкил, как используют в настоящем описании, относится к группе, производной от прямой или разветвленной цепи насыщенного углеводорода, содержащей от одного до десяти атомов углерода.

Термин алкилкарбонил, как используют в настоящем описании, относится к алкильной группе, присоединенной к остатку исходной молекулы через карбонильную группу.

Термин алкилсульфанил, как используют в настоящем описании, относится к алкильной группе, присоединенной к остатку исходной молекулы через атом серы.

Термин алкилсульфонил, как используют в настоящем описании, относится к алкильной группе, присоединенной к остатку исходной молекулы через сульфонильную группу.

Термин арил, как используют в настоящем описании, относится к фенильной группе или бициклической конденсированной кольцевой системе, где одно или оба кольца представляют собой фенильную группу. Бициклические конденсированные кольцевые системы состоят из фенильной группы, конденсированной с содержащим от четырех до шести членов ароматическим или неароматическим карбоциклическим кольцом. Арильные группы по настоящему изобретению могут быть присоединены к остатку исходной молекулы через любой замещаемый атом углерода в группе. Типичные примеры арильных групп включают, но без ограничения, инданил, инденил, нафтил, фенил и тетрагидронафтил. Арильные группы по настоящему изобретению могут быть необязательно замещены одним, двумя, тремя, четырьмя или пятью заместителями, независимо выбранными из алкокси, алкоксикарбонила, алкила, второй арильной группы, циано, галогена, галогеналкокси, галогеналкила, гетероциклила, гетероциклилалкила, гидрокси, гидроксиалкила, нитро, -ΝΚ^ΧΒ^Υ, (КВ^хВ^у)алкокси, (КВ^хВ^у)алкила, (КЮКЦкарбонила и оксо; где вторая арильная группа, гетероциклил и гетероциклильная часть гетероциклилалкила может быть дополнительно необязательно замещена одним, двумя, тремя, четырьмя или пятью заместителями, независимо выбранными из алкокси, алкила, циано, галогена, галогеналкокси, галогеналкила, гидрокси и нитро.

Термин арилалкил, как используют в настоящем описании, относится к алкильной группе, замещенной одним, двумя или тремя арильными группами.

Термин карбонил, как используют в настоящем описании, относится к -С(О)-.

Термин карбокси, как используют в настоящем описании, относится к -СО₂Н.

Термин карбоксиалкил, как используют в настоящем описании, относится к алкильной группе, замещенной одним, двумя или тремя карбоксигруппами.

Термин циано, как используют в настоящем описании, относится к -ΟΝ.

Термин цианоалкил, как используют в настоящем описании, относится к алкильной группе, замещенной одним, двумя или тремя цианогруппами.

Термин циклоалкил, как используют в настоящем описании, относится к насыщенной моноциклической, бициклической или трициклической углеводородной кольцевой системе, имеющей от трех до четырнадцати атомов углерода и ноль гетероатомов. Типичные примеры циклоалкильных групп включают, но без ограничения, циклопропил, циклопентил, бицикло[3.1.1]гептил и адамантил. Циклоалкильные группы по настоящему изобретению могут быть необязательно замещены одним, двумя, тремя или четырьмя заместителями, независимо выбранными из алкенила, алкокси, алкоксиалкила, алкила, арилалкила, арилкарбонила, циано, циклоалкенила, (циклоалкил)алкила, галогена, галогеналкокси, галогеналкила и АКВ^к)карбонила; где К·’ и К^к независимо выбраны из водорода, алкила, арила, арилалкила и гетероциклила; где арил, арильная часть арилалкила и гетероциклил необязательно замещены одним или двумя заместителями, независимо выбранными из алкокси, алкила и галогена.

Термин (циклоалкил)алкил, как используют в настоящем описании, относится к алкильной группе, замещенной одним, двумя или тремя циклоалкильными группами.

Термин циклоалкилкарбонил, как используют в настоящем описании, относится к циклоалкиль

- 5 015827 ной группе, присоединной к остатку исходной молекулы через карбонильную группу.

Термин циклоалкилокси, как используют в настоящем описании, относится к циклоалкильной группе, присоединной к остатку исходной молекулы через атом кислорода.

Термин циклоалкилоксикарбонил, как используют в настоящем описании, относится к циклоалкилоксигруппе, присоединенной к остатку исходной молекулы через карбонильную группу.

Термины гало и галоген, как используют в настоящем описании, относится к Р, С1, Вг и I.

Термин галогеналкокси, как используют в настоящем описании, относится к галогеналкильной группе, присоединенной к остатку исходной молекулы через атом кислорода.

Термин галогеналкоксиалкил, как используют в настоящем описании, относится к алкильной группе, замещенной одним, двумя или тремя галогеналкоксигруппами.

Термин галогеналкоксикарбонил, как используют в настоящем описании, относится к галогеналкоксигруппе, присоединенной к остатку исходной молекулы через карбонильную группу.

Термин галогеналкил, как используют в настоящем описании, относится к алкильной группе, замещенной одним, двумя, тремя или четырьмя атомами галогена.

Термин галогеналкилкарбонил, как используют в настоящем описании, относится к галогеналкильной группе, присоединенной к остатку исходной молекулы через карбонильную группу.

Термин гетероциклил, как используют в настоящем изобретении, относится к содержащему пять, шесть или семь членов кольцу, включающему один, два, три или четыре гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода и серы. Содержащее пять членов кольцо имеет от нуля до двух двойных связей, и содержащие шесть и семь членов кольца имеют от нуля до трех двойных связей. Термин гетероциклил также включает бициклические группы, в которых гетероциклильное кольцо является конденсированным еще с моноциклической гетероциклильной группой или содержащим от четырех до шести членов ароматическим или неароматическим карбоциклическим кольцом или другой моноциклической гетероциклильной группой. Гетероциклильные группы по настоящему изобретению могут быть присоединены к остатку исходной молекулы через атом углерода или атом азота в группе. Примеры гетероциклильных групп включают, но без ограничения, бензотиенил, фурил, имидазолил, индолинил, индолил, изотиазолил, изоксазолил, морфолинил, оксазолил, пиперазинил, пиперидинил, пиразолил, пиридинил, пирролидинил, пирролопиридинил, пирролил, тиазолил, тиенил и тиоморфолинил. Гетероциклильные группы по настоящему изобретению могут быть необязательно замещены одним, двумя, тремя, четырьмя или пятью заместителями, независимо выбранными из алкокси, алкоксикарбонила, алкила, арила, циано, галогена, галогеналкокси, галогеналкила, второй гетероциклильной группы, гетероциклилалкила, гидрокси, гидроксиалкила, нитро, -ΝΚ^ΧΒ^Υ, (ПК^хВ^у)алкокси, (КВ^хВ^у)алкила, (КВ^хВ^у)карбонила и оксо; где арил, вторая гетероциклильная группа и гетероциклильная часть гетероциклилалкила может быть дополнительно необязательно замещены одним, двумя, тремя, четырьмя или пятью заместителями, независимо выбранными из алкокси, алкила, циано, галогена, галогеналкокси, галогеналкила, гидрокси и нитро.

Термин гетероциклилалкил, как используют в настоящем описании, относится к алкильной группе, замещенной одним, двумя или тремя гетероциклильными группами.

Термин гидрокси, как используют в настоящем описании, относится к -ОН.

Термин гидроксиалкил, как используют в настоящем описании, относится к алкильной группе, замещенной одним, двумя или тремя гидроксигруппами.

Термин -ΝΚ³Κ¹’, как используют в настоящем описании, относится к двум группам К^а и К.¹’, которые присоединены к остатку исходной молекулы через атом азота. К^а и К.^ь, каждый, независимо выбран из водорода, алкокси, алкоксиалкила, алкила, арила, арилалкила, циклоалкила, галогеналкоксиалкила, галогеналкила, гетероциклила и гетероциклилалкила.

Термин (ПК^аК^ь)алкил, как используют в настоящем описании, относится к алкильной группе, замещенной одним, двумя или тремя -ΝΚΚ группами.

Термин (ПК^аК^ь)карбонил, как используют в настоящем описании, относится к -ΝΚ/'Κ.¹’ группе, присоединной к остатку исходной молекулы через карбонильную группу.

Термин (Ык^аК^ь)карбонилалкил, как используют в настоящем описании, относится к алкильной группе, замещенной одним, двумя или тремя (МКК^карбонильными группами.

Термин (ПК^аК^ь)сульфонил, как используют в настоящем описании, относится к -ΝΚ/'Κ.¹’ группе, присоединной к остатку исходной молекулы через сульфонильную группу.

Термин -ΝΚ°Κ.^ά, как используют в настоящем описании, относится к двум группам К^с и К⁴, которые присоединены к остатку исходной молекулы через атом азота. К^с и К⁴ независимо выбраны из алкокси, алкила, арила, арилалкила, циклоалкила, (циклоалкил)алкила, гетероциклила и гетероциклилалкила; или К^с и К⁴ вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют содержащее пять или шесть членов моноциклическое гетероциклическое кольцо.

Термин -ΝΚΚ, как используют в настоящем описании, относится к двум группам К^е и К^г. которые присоединены к остатку исходной молекулы через атом азота. К^е и К независимо выбраны из водо

- 6 015827 рода, алкила и арилалкила; или К^е и К^г вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют содержащее пять или шесть членов моноциклическое гетероциклическое кольцо, необязательно содержащее один дополнительный гетероатом, выбранный из О, ΝΚ^Χ и 8; где К^х выбран из водорода и алкила; и где К' выбран из водорода и алкила.

Термин -ΝΕ^Ε.¹¹, как используют в настоящем описании, относится к двум группам и К¹, которые присоединены к остатку исходной молекулы через атом азота. К⁸ и К¹ независимо выбраны из водорода, алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкила, алкилкарбонила, арилалкила и галогеналкила.

Термин -ΝΒΈ^μ. как используют в настоящем описании, относится к двум группам К·’ и К^к, которые присоединены к остатку исходной молекулы через атом азота. К’ и К^к независимо выбраны из водорода, алкила, арила, арилалкила и гетероциклила; где арил, арильная часть арилалкила и гетероциклил необязательно замещены одним или двумя заместителями, независимо выбранными из алкокси, алкила и галогена.

Термин (МК’К^к)карбонил, как используют в настоящем описании, относится к -ΝΕΈ⁷ группе, присоединной к остатку исходной молекулы через карбонильную группу.

Термин (МК’К^к)сульфонил, как используют в настоящем описании, относится к -ΝΕ.^ группе, присоединной к остатку исходной молекулы через сульфонильную группу.

Термин -Ик^хК^у, как используют в настоящем описании, относится к двум группам К^х и К^у, которые присоединены к остатку исходной молекулы через атом азота. К^х и К^у независимо выбраны из водорода и алкила.

Термин (НК^хК^у)алкокси, как используют в настоящем описании, относится к (Ик^хК^у)алкильной группе, присоединной к остатку исходной молекулы через атом кислорода.

Термин (Ик^хК^у)алкил, как используют в настоящем описании, относится к алкильной группе, замещенной одним, двумя или тремя -Ик^хК^у группами.

Термин (Ик^хК^у)карбонил, как используют в настоящем описании, относится к -Ик^хК^у группе, присоединной к остатку исходной молекулы через карбонильную группу.

Термин нитро, как используют в настоящем описании, относится к -ΝΟ₂.

Термин оксо, как используют в настоящем описании, относится к =О.

Термин сульфонил, как используют в настоящем описании, относится к -8Ο₂-.

Соединения по настоящему изобретению могут существовать как пролекарства. Термин пролекарство, как используют в настоящем описании, представляет собой соединения, которые быстро преобразуются ίη νίνο в исходные соединения путем гидролиза в крови. Пролекарства по настоящему изобретению включают сложные эфиры карбоксильных групп исходной молекулы, сложные эфиры гидроксильных групп исходной молекулы и амиды аминов исходной молекулы.

Соединения по настоящему изобретению могут существовать в виде фармацевтически приемлемых солей. Термин фармацевтически приемлемая соль, как используют в настоящем изобретении, представляет собой соли или цвиттерионные формы соединений по настоящему изобретению, которые растворимы в воде или масле или диспергированы, которые в рамках указанного медицинского определения приемлемы для применения в контакте с тканями пациента без излишней токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, соразмерных приемлемому соотношению польза/риск, и эффективны для их указанного определения. Соли могут быть получены при конечном выделении и очистке соединений или отдельно путем взаимодействия приемлемой основной функциональности с приемлемыми кислотами. Типичные кислотно-аддитивные соли включают ацетат, адипат, альгинат, цитрат, аспарат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, камфорат, камфорсульфонат; диглюконат, глицерофосфат, гемисульфат, гептапоат, гексаноат, формиат, фумарат, гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, мезитиленсульфонат, метансульфонат, нафтиленсульфонат, никотинат, 2-нафталинсульфонат, оксалат, пальмоат, пектинат, персульфат, 3фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, сукцинат, тартрат, трихлорацетат, трифторацетат, фосфат, глютамат, бикарбонат, паратолуолсульфонат и ундеканоат. Примеры кислот, которые могут быть применены, чтобы образовать фармацевтически приемлемые аддитивные соли, включают неорганические кислоты, такие как хлористо-водородная, бромисто-водородная, серная и фосфорная, и органические кислоты, такие как щавелевая, малеиновая, янтарная и лимонная.

Основно-аддитивные соли могут быть получены при конечном выделении и очистке соединений путем взаимодействия кислотной группы с приемлемым основанием, таким как гидроксид, карбонат или бикарбонат катиона металла или с аммиаком, или с органическим первичным, вторичным или третичным амином. Катионы фармацевтически приемлемых солей включают литий, натрий, калий, кальций, магний и алюминий, так же как катионы нетоксичного четвертичного амина, такого как аммоний, тетраметиламмоний, тетраэтиламмоний, метиламин, диметиламин, триметиламин, триэтиламин, диэтиламин, этиламин, трибутиламин, пиридин, Ν,Ν-диметиланилин, Ν-метилпиперидин, Ν-метилморфолин, дициклогексиламин, прокаин, дибензиламин, Ν,Ν-дибензилфенэтиламин и Ν,Ν'-дибензилэтилендиамин. Другие типичные органические амины, пригодные для образования основно-аддитивных солей, включают этилендиамин, этаноламин, диэтаноламин, пиперидин и пиперазин.

- 7 015827

Как используют в настоящем описании, термин противо-НСУ активность означает соединение, являющиеся эффективными для лечения НСУ вируса.

Термин соединения по настоящему изобретению и эквивалентные выражения предназначены, чтобы охватить соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые энантиомеры, диастереомеры и соли. Подобным образом ссылки на промежуточные соединения предназначены, чтобы охватить их соли, если позволяет контекст.

Термин пациент включает как человека, так и других млекопитающих.

Термин фармацевтическая композиция означает композицию, содержащую соединение по изобретению в комбинации по крайней мере с одним дополнительным фармацевтическим носителем, то есть адъювант, наполнитель или связующее вещество, такое как разбавители, консерванты, наполнители, агенты регуляторы потока, агенты расщепления, агенты увлажнения, эмульгаторы, агенты суспендирования, подсластители, ароматизаторы, отдушки, противобактериальные агенты, противогрибковые агенты, смазывающие агенты и распределяющие агенты, в зависимости от сущности способа введения и формы дозирования. Могут быть использованы ингредиенты, перечисленные, например, в Кетш§1оп'з Рйагшасеи11са1 8с1епсез, 18¹¹' еб., Маск РиЪНзЫпд Сотрапу, Еаз1оп, РА (1999).

Выражение фармацевтически приемлемый, используемое в данном описании, относится к тем соединениям, веществам, композициям и/или лекарственным формам, которые при взвешенном медицинском решении подходят для применения в контакте с тканями пациентов без избыточной токсичности, раздражения, аллергических реакций или других проблем или осложнений, соответствующих приемлемому отношению польза/риск, и являются эффективными в отношении их предполагаемого использования.

Термин терапевтически эффективное количество означает общее количество каждого активного компонента, которое достаточно, чтобы продемонстрировать значительную пользу для пациента, например снижение вирусного воздействия. Когда используют индивидуальный активный ингредиент, вводимый сам по себе, термин сам по себе относится к одному ингредиенту. Когда используют комбинацию, термин относится к объединенному количеству активных ингредиентов, которые приводят к терапевтическому эффекту, или при введении в комбинации, периодически или одновременно.

Термины лечить и лечение относятся к (1) профилактике заболевания, расстройства или патологического состояния, возникающих у пациента, который может быть предрасположен к заболеванию, расстройству и/или патологическому состоянию, которое еще не диагностировано у этого пациента; (й) подавлению заболевания, расстройства или патологического состояния, т.е. торможение их развития; и (ϊϋ) облегчение заболевания, расстройства или патологического состояния, т.е. вызывание регрессии заболевания, расстройства и/или патологического состояния.

Там, где используют при наименовании соединения по настоящему изобретению, обозначения Р1', Р1, Р2, Р2*, Р3 и Р4, как используемые в настоящем описании, отображают относительные положения аминокислотных остатков ингибитора протеазы, связанных по отношению к связанному природному пептидному расщепленному субстрату. Расщепление происходит в природном субстрате между Р1 и Р1', где второстепенные положения обозначают аминокислоты, начиная с окончания С-конца пептидного природного расщепляемого сайта по направлению к Ν-концу; тогда как основные положения отсчитывают от окончания Ν-конца обозначеннного расщепляемого сайта и распространяются до С-конца. Например, Р1' относится к первому положению от правого окончания С-конца расщепляемого сайта (т.е. исходному положению Ν-конца); тогда как Р1 начинает нумерацию от левой стороны С-конца расщепляемого сайта, Р2 - второе положение от С-конца и т.д. (см. Вегдег А. & 8сйесЫег, Тгапзасйопз о1 Коуа1 8ос1е1у Ьопбоп зепез (1970), В257, 249-264).

Следующая фигура демонстрирует обозначения для соединений по настоящему изобретению.

Η³ Р2* к⁵ рз

Асимметричные центры существуют в соединениях по настоящему изобретению. Например, соединения могут включать Р1 циклопропильный элемент формулы

- 8 015827

Ρ1 где С₁ и С₂, каждый, представляет собой асимметричный атом углерода в положениях 1 и 2 циклопропильного кольца.

Н О (1К,28)

К² зуп-положение к карбонилу

(1К, 2К)

к амиду (3)^Г^Н

N (3) У о (18,28)

В² $уп-положение к амиду

Понятно, что изобретение охватывает все стереохимические формы или их смеси, которые обладают способностями для ингибирования НСУ протеазы.

Определенные соединения по настоящему изобретению могут также существовать в различных стабильных конформационных формах, которые могут быть выделены. Спиральная асимметрия, благодаря ограниченной ротации около асимметричной простой связи, например, вследствие стерического несоответствия или деформации кольца, может допустить разделение различных конформеров. Настоящее изобретение включает каждый конформационный изомер этих соединений и их смесей.

Определенные соединения по настоящему изобретению могут существовать в цвиттерионной форме, и настоящее изобретение включает каждую цвиттерионную форму этих соединений и их смесей.

Когда возможно для использования в терапии, терапевтически эффективные количества соединения формулы (I), так же как его фармацевтически приемлемых солей, могут быть введены в виде сырого химического соединения, можно представить активный ингредиент в виде фармацевтической композиции. Таким образом, изобретение дополнительно обеспечивает фармацевтические композиции, которые включают терапевтически эффективные количества соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли и один или большее количество фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или наполнителей. Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли являются теми, как описано выше. Носитель(и), разбавитель(и) или наполнитель(и) должны быть совместимы в смысле того, чтобы быть совместимыми с другими ингредиентами состава и не быть опасными для реципиента. В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения также обеспечен способ получения фармацевтического состава, включая смешивание соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли с одним или большим количеством фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или наполнителей.

Фармацевтические составы могут быть представлены в дозированных лекарственных формах, содержащих заранее определенное количество активного ингредиента на единицу дозирования. Уровни дозировок соединений настоящего изобретения примерно от 0,01 до 250 мг на 1 кг массы тела в день, предпочтительно примерно от 0,05 до 100 мг/кг массы тела в день являются обычными для монотерапии с целью профилактики и лечения НСУ-опосредованного заболевания. Обычно фармацевтические композиции настоящего изобретения вводят примерно от 1 до 5 раз в сутки или альтернативно в виде продолжающейся инфузии. Такое введение может применяться в качестве длительной или срочной терапии. Количество активного ингредиента, которое может быть комбинировано с веществами-носителями для получения единой лекарственной формы, будет варьироваться в зависимости от патологического состоя ния, по поводу которого проводится лечение, тяжести состояния, времени введения, пути введения, ско

- 9 015827 рости выведения используемого соединения, продолжительности лечения, возраста, пола, веса и состояния пациента. Предпочтительными дозированными лекарственными формами являются те, которые содержат суточную дозу или субдозу активного ингредиента, как было выше указано, или их подходящую часть. Как правило, лечение начинают малыми дозами, существенно меньшими, чем оптимальная доза соединения. После этого дозировку постепенно увеличивают до достижения оптимального эффекта в этих условиях. В общем, соединение наиболее желательно вводить при уровне концентрации, который обычно приводит к эффективным противовирусным результатам и не вызывает вредных или опасных побочных эффектов.

Когда композиции настоящего изобретения включают комбинацию соединения по изобретению и одного или более дополнительного терапевтического или профилактического агента, оба соединения и дополнительный агент обычно находятся на уровне дозирования примерно от 10 до 150% и более предпочтительно от около 10 до 80% доз, обычно вводимых в режиме монотерапии.

Фармацевтические составы могут быть адаптированы для введения посредством любого подходящего пути, например пероральным путем (включая защечный, подъязычный), ректальным, интраназальным, местным (включая защечный, подъязычный или чрескожный), вагинальным или парентеральным (включая подкожные, внутрикожные, внутримышечные, внутрисуставные, внутрисиновиальные, интрастернальные, интратекальные, внутриочаговые, внутривенные или внутрикожные инъекции или инфузии) путем. Такие препараты могут быть приготовлены с использованием любого из способов, известных в области фармацевтики, например путем сочетания активного ингредиента с носителем(ями) или наполнителем(ями).

Фармацевтические составы, адаптированные для перорального введения, могут быть приготовлены как дискретные единицы, такие как капсулы или таблетки; порошки или гранулы; растворы или суспензии в водных или неводных жидкостях; пищевые пенки или взбитые массы; или жидкие эмульсии маслов-воде или эмульсии вода-в-масле.

Например, для перорального введения в форме таблетки или капсулы активный лекарственный компонент может быть комбинирован с пероральным нетоксичным фармацевтически приемлемым инертным носителем, таким как этанол, глицерин, вода и т.п. Порошки готовят путем измельчения соединения до подходящего малого размера и смешивания с аналогично измельченным фармацевтическим носителем, таким как пищевой углевод, как, например, крахмал или маннитол. Ароматизатор, консервант, диспергирующий агент или краситель может также присутствовать.

Капсулы готовят путем приготовления порошковой смеси, как описано выше, и заполнения ею формованного желатинового футляра. Глиданты и смазывающие вещества, такие как коллоидный кремний, тальк, стеарат магния, стеарат кальция, или твердый полиэтиленгликоль могут быть добавлены к порошковой смеси перед процедурой заполнения. Дезинтегрирующий или солюбилизирующий агент, такой как агар-агар, кальция карбонат или карбоната натрия, может быть добавлен для улучшения биодоступности лекарственного средства в случаях приема капсулы внутрь.

Более того, по желанию или по необходимости подходящие связывающие вещества, смазывающие вещества, дезинтегрирующие агенты и красители могут также быть включены в эту смесь. Подходящие смазывающие вещества включают крахмал, желатин, природные сахара, такие как глюкоза или беталактоза, сахаристые вещества кукурузы, природные и синтетические камеди, такие как гуммиарабик, трагакант или натрия альгинат, карбоксиметилцеллюлоза, полиэтиленгликоль и т.п. Смызывающие вещества, используемые в этих лекарственных формах, включают натрия олеат, натрия хлорид и т. п. Дезинтегрирующие вещества включают, помимо прочего, крахмал, метилцеллюлозу, агар-агар, бетонит, ксантановую камедь и т.п. Таблетки изготавливают, например, путем приготовления порошковой смеси, гранулирования или комкования, добавления смазывающего вещества и дезинтегрирующего вещества и прессования в таблетки. Порошковую смесь готовят путем смешивания соединения, подходящим образом измельченного, с разбавителем или основой, как описано выше, и по необходимости со связывающим веществом, таким как карбоксиметилцеллюлоза, альгинат, желатин или поливинилпирролидон, замедлитель растворения, такой как парафин, ускоритель всасывания, такой как четвертичная соль и/или поглощающее вещество, такое как бетонит, каолин или дикальция фосфат. Порошковая смесь может быть приготовлена путем смачивания связующими веществами, такими как сироп, крахмальная паста, смесь гуммиарабика или полученный раствор целлюлозных или полимерных материалов и продавливания через сито. В качестве альтернативы гранулированию порошковая смесь может быть пропущена через таблеточную машину и результатом являются неправильной формы комки, разделенные на гранулы. Гранулы могут быть смазаны для предотвращения прилипания к таблетирующему прессу посредством добавления стеариновой кислоты, стеариновой соли, талька или минерального масла. Смазанную затем смесь прессуют в таблетки. Соединения настоящего изобретения могут быть также комбинированы с сыпучим инертным носителем и прессованы в таблетки напрямую без проведения этапов гранулирования или комкования. Прозрачная или непрозрачная оболочка, состоящая из герметичного слоя шеллака, оболочка из сахара или полимерного материала и гладкая оболочка из воска может быть предусмотрена. Красители могут быть добавлены к этим оболочкам, чтобы различать различные лекарственные формы.

Жидкости для перорального применения, такие как раствор, сиропы и эликсиры, могут быть приго

- 10 015827 товлены в дозированных лекарственных формах, так что заданная доза содержит определенное количество соединения. Сиропы могут быть приготовлены путем растворения соединения в подходящем ароматизированном водном растворе, тогда как эликсиры готовят с помощью нетоксичного носителя. Солюбилизирующие средства и эмульгаторы, такие как этоксилированные изостеариловые спирты и эфиры полиоксиэтиленсорбитола, консерванты, ароматизирующие добавки, такие как перечное масло, или природные подсластители, или сахарин, или другие искусственные подсластители и т.п., могут быть добавлены.

Если это необходимо, дозированные лекарственные средства для перорального введения могут быть микроинкапсулированными. Препарат также может быть приготовлен для продления или замедления высвобождения, например с помощью помещения состоящего из частиц материала в оболочку из полимеров, воска или т.п.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут также быть введены в форме липосомальных систем доставки, таких как малые моноламеллярные везикулы, большие моноламеллярные везикулы и мультиламеллярные везикулы. Липосомы могут быть образованы из множества фосфолипидов, таких как холестерин, стеариламин или фосфатидилхолины.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут быть также доставлены с помощью моноклональных антител в качестве индивидуальных носителей, к которым прикреплены молекулы соединения. Соединения могут также быть связаны с растворимыми полимерами, такими как носители нацеливаемых лекарств. Такие полимеры могут включать поливинилпирролидон, пиран сополимер, полигидроксипропилметакриламидфенол, полигидроксиэтиласпартамидфенол или полиэтиленоксидполилизин, замещенный остатками пальмитоила. Более того, соединения могут быть связаны с классом биоразлагаемых полимеров, применяемых для достижения контролируемого высвобождения лекарственного препарата, например полимолочная кислота, полиэпсилонкапролактон, полигидроксимасляная кислота, полиортоэфиры, полиацетали, полигидропираны, полицианоакрилаты и поперечно-сшитые или амфипатические блок-сополимеры гидрогелей.

Фармацевтические составы, адаптированные для чрескожного введения, могут быть представлены в виде отдельных пластырей, предназначенных для пребывания в тесном контакте с эпидермисом реципиента в течение длительного периода времени. Например, активный ингредиент может поступать из пластыря посредством ионофореза, как в общем описано в Рйагтасеи11са1 Кекеагсй 1986, 3(6), 318.

Фармацевтические составы, адаптированные для местного введения, могут быть приготовлены в виде мазей, кремов, суспензий, лосьонов, порошков, растворов, паст, гелей, спреев, аэрозолей или масел.

Для лечения глаз или других внешних тканей, например рта и кожи, составы предпочтительно применяют в виде местной мази или крема. Когда состав в виде мази, активный компонент может быть применен с или парафиновой, или смешанной с водой основой мази. Альтернативно, активный компонент может быть введен в крем вместе с основой крема масло-в-воде или с основой вода-в-масле.

Фармацевтические составы, адаптированные для местного введения в глаза, включают глазные капли, в которых активный компонент растворен или суспендирован в подходящем носителе, в особенности водном растворителе.

Фармацевтические составы, адаптированные для местного введения в рот, включают лепешки, пастилки и растворы для полоскания полости рта.

Фармацевтические составы, адаптированные для ректального введения, могут быть приготовлены в виде суппозиториев или клизм.

Фармацевтические составы, адаптированные для интраназального введения, в которых носитель является твердым веществом, включают сыпучий порошок, имеющий размер частиц, например, в диапазоне от 20 до 500 мкм, который вводится таким же образом, как и нюхательный порошок, т.е. путем быстрого вдыхания через носовой ход порошка из контейнера, который держат близко к носу. Подходящие составы в случае, когда носитель является жидким для введения в виде интраназального спрея или носовых капель, включают водные или масляные растворы активного ингредиента.

Фармацевтические составы, адаптированные для введения путем ингаляции, включают мелкодисперсные пудры и аэрозоли, которые могут быть получены с помощью различных видов дозирующих аэрозолей, небулайзеров или инсуфляторов.

Фармацевтические составы, адаптированные для вагинального введения, могут быть представлены в виде пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или спреев.

Фармацевтические составы, адаптированные для парентерального введения, включают водные и неводные стерильные растворы для инъекций, которые могут содержать антиоксиданты, буфера, бактериостатические средства, которые делают препарат изотоничным с кровью предполагаемого реципиента; и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие агенты и загустители. Препараты могут быть представлены в однодозных или многодозных контейнерах, например запаянные ампулы и флаконы, и могут храниться в высушенном сублимацией (лиофилизированном) состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, например воды для инъекций, непосредственно перед применением. Растворы для немедленного приготовления препарата для инъекции и суспензии могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток.

- 11 015827

Необходимо понимать, что наряду с ингредиентами, в частности, упомянутыми выше, препараты могут включать другие агенты, традиционные в области, имеющей отношение к типу рассматриваемого препарата, например таковые, подходящие для перорального введения, могут включать ароматизаторы.

В нижеприведенной табл. 1 перечислены некоторые показательные примеры соединений, которые могут быть введены с соединениями настоящего изобретения. Соединения по изобретению могут быть введены с другими обладающими анти-НСУ активностью соединениями в комбинированной терапии, либо совместно, либо раздельно, или путем сочетания этих соединений в композиции.

__Таблица 1

Торговое название	Физиологический класс	Тип ингибитора или мишень	Компанияпроизводитель
ΝΙΜ811		Ингибитор циклофилина	ИоуэгИз
7ас1ах1П		Иммуномодулятор	8с1с1опе
Зиуиз		Метиленовый синий	Βΐοεηνΐδΐοη
АсШоп (СРС10101)		ТЬК9 агонист	Со1еу
ВасаЪиНп (Т67)	Противораковое средство	Ингибитор β- тубулина	Ти1апк 1пс., δοιτίΐι 8ап Ргапс18со, СА
1818 14803	Противовирусное средство	антисмысловой	1818 РйаппасеийсаВ 1пс, СагкЬаб, СА/Е1ап РйагтасеиИсаН 1пс., Νεχν Уогк, ΝΥ
8итте1ге1	Противовирусное средство	Противовирусное средство	Εηάο Ркагтасеийсак Но1с1т£8 1пс., Скабск Рогб, РА
Торговое название	Физиологический класс	Тип ингибитора или мишень	Компанияпроизводитель
08-9132 (АСН- 806)	Противовирусное средство	НСУ ингибитор	АсЫШоп / СПеаб
Соединения пиразолопиримиди на и соли из ЮО2005047288 от 26 мая 2005	Противовирусное средство	НСУ ингибиторы	Аггоху Ткегареийсз Ш.
Ιχνονίπη	Противовирусное средство	ΙΜΡϋΗ ингибитор	КлЬаркагт 1пс., Соз1а Меза, СА

- 12 015827

МептеросНЬ (УХ- 497)	Противовирусное средство	ΙΜΡϋΗ ингибитор	Уег1ех РйагтасеиПса18 1пс., СатЬпс1§е, МА
ХТЬ-6865 (ХТЬ002)	Противовирусное средство	моноклональное антитело	ХТЬ ВюрйагтасеиНса1з Ых1., ΚεΗονοΐ, 1згеа1
Те1аргеуй (УХ-950, ЬУ-570310)	Противовирусное средство	Ингибитор сериновой протеазы N83	УеПех РйагтасеиПсаН 1пс., СатЬпб§е, МА/ ЕН Ы11у апс! Со. 1пс., ЬкНапароНз, ΙΝ
НСУ-796	Противовирусное средство	Ингибитор Ν85Β репликазы	АУуеНз / Упорйагта
ΝΜ-283	Противовирусное средство	Ингибитор Ν85Β репликазы	Ιάεηϊχ / ΝονατΗβ
ОЬ-59728	Противовирусное средство	Ингибитор Ν85Β репликазы	Оепе ЬаЬз / ИоуагНз
СЬ-60667	Противовирусное средство	Ингибитор Ν85Β репликазы	Степе ЬаЬз / МоуагНз
2’С МеА	Противовирусное средство	Ингибитор Ν85Β репликазы	СгПеаб
Ρ8Ι6130	Противовирусное средство	Ингибитор Ν85Β репликазы	Коске
К.1626	Противовирусное средство	Ингибитор Ν85Β репликазы	Коске
2'С метиладенозин	Противовирусное средство	Ингибитор Ν85Β репликазы	Меток
.ГТК-003	Противовирусное средство	КНКр ингибитор	1арап ТоЬассо 1пс., Токуо, 1арап
Т Ζ=»Χ7ΓΛΤ71Τ·1ΤΤ ν ν/ ν лип	ГГтАГЧ'Т'ТЖП Г\Т->ТТТЛХ 7Г»ТТГ\О А хр/ν/ А иопру νχι V V средство		ТГ'Ы ΑΚ-Ά РкагтасеиНса1з, Со81а Меза, СА
Торговое название	Физиологический класс	Тип ингибитора или мишень	Компанияпроизводитель
КлЬаушп	Противовирусное средство	рибавирин	8скепп§-Р1ои§к СогрогаНоп, Кет1\уогН1, N1
УпаппсНпе	Противовирусное средство	Пролекарство рибавирина	ЮЬаркагт 1пс., СозГа Меза, СА
Нер1агуше	Противовирусное средство	рибозим	К1Ьогуте РкагтасеиНса1з 1пс., ВоиМег, СО

- 13 015827

В1ЬЫ-2061	Противовирусное средство	ингибитор сериновой протеазы	Воейгт§ег 1п§е1йепп Рйагта КО, 1п§еШе1т, Оегтапу
8СН 503034	Противовирусное средство	ингибитор сериновой протеазы	8сйегт§ Р1ои§11
гада/та	Иммуномодулятор	Иммуномодулятор	8с1С1опе РйагтасеийсаЬ 1пс., Зап Ма1ео, С А
Сер1епе	Иммуномодулятор	Иммуномодулятор	Махйп РйагтасеиРсак 1пс., Зап ϋϊε§ο, СА
Се11Сер1	Иммуносупрессант	НСУ 1§О Иммуносупрессант	Р. ПоП'тапп-1.а Коске ЬТИ, Вазе1, 8ип17.ег1апс1
С1Уас1г	Иммуносупрессант	НСУ 1§О Иммуносупрессант	ИаЫ В юркагтасеийса! 8 1пс., Воса КЛоп, РЬ
А1ЬиГегоР1- а	Интерферон	Альбумин ΙΡΝ-α2Ρ	Нитап (лепоте 8с1епсе§ 1пс., КоскуШе, МП
1п£ег§еп А	Интерферон	ΙΡΝ альфакон-1	ЬПегМипе РкагтасеиксаИ 1пс., ВпзЬапе, СА
Оте§а ΙΡΝ	Интерферон	ΙΡΝ-ω	1п1агс1а Ткегареийса
ΙΡΝ-β и ΕΜΖ701	Интерферон	ΙΡΝ-β и ΕΜΖ701	Тгапзйюп Ткегареийсз 1пс., Оп1апо, Сапайа
ВеЫГ	Интерферон	ΙΡΝ-β 1а	Зегопо, Сепеуа, 8у/кгег1апй
Торговое название	Физиологический класс	Тип ингибитора или мишень	Компанияпроизводитель
КоГегоп А	Интерферон	1РИ-а2а	Р. Нойтапп-Ьа Коске ЬТО, Вазе1, Зхуйгейапс!
1п1гоп А	Интерферон	ΙΡΝ-α21>	8скепп§-Р1ои§к Согрогайоп, КепПмгойк, N1

- 14 015827

	ΙηΐΓοη А и 2ас1ахт	Интерферон	ΙΡΝ-α26/α1-тимозин	КедепеКх В юрйагппсеийсаН
1пс., ВеГйезйа, Зс1С1опе РйагтасеийсаН Зап МаГео, СА	МЛ/ 1пс,
	КеЬеГгоп	Интерферон	1РЫ-а2Ь/рибавирин	8с11епп§-Р1ои§Ь Согрогайоп, ΚεηϋννοΓύι, N1
	Асйттипе	Интерферон	ΙΝΡ-γ	1ШегМипе ВпзЬапе, С А	1пс.,
	1п1егГегоп-Р	Интерферон	Интерферон-β-1 а	Зегопо
	МиШГегоп	Интерферон	ΕΡΝ длительного действия	У1га§епУа1епЙ8
	у/ сИГ^гоп	Τ/ΤτϊΎΆΙΛ гБ РИЛГЧХГ X 111 Л	тттяглл гК гт с» гтпт/г ттитлт*	О1ахо8 т! νΙιΚΙίηο	ТНГ 1/Χ4Ζ’
			ΙΡΝ-αηΙ	ихЪг1й§е, ик
	Отпйегоп	Интерферон	природный ΙΡΝ-а	Упа§еп Р1ап1айоп, РЬ	1пс.,
	Ре§азу8	Интерферон	пегилированный	Р. Нойтпапп-Ьа Косйе
			ЕЕМ-а2а	ЬТО, Вазе1, 8\У11гег1апй
	Ре§ахуз и Сер1епе	Интерферон	пегилированный	Мах1ш
			ΙΡΝ-α23/	РйагшасеибсаГз	1пс.,
			иммуномодулятор	Зап ϋίε§ο, СА
	Ре^азуз и ЮЬаушп	Интерферон	пегилированный	Р. НоГГтапп-Ьа КосЬе
			1РМ-а2а/рибавирин	1ЛТ), Вазе1, ЗшЩейапб
	РЕО-1п1гоп	Интерферон	пегилированный	8с1зепп§-Р1ои§11
			ΙΡΝ-α2Β	Сотрогабоп, Кеп11\¥оПЬ
				N1
	РЕСМпГгоп/	Интерферон	пегилированный	8 сНепп£-Р1ои£Й
	КдЬаутп		1РИ-а2Ь/рибавирин	Согрогайоп, КепПу/огШ, N1
	Торговое название	Физиологический	Тип ингибитора или	Компания-
		класс	мишень	производитель
	ΙΡ-501	Защита печени	Антифибротическое	Ιηάενυδ
			средство	РЬагтасеийсаИ Ьехт§1оп, МА	1пс.,
	ПЖ-6556	Защита печени	Ингибитор каспазы	Йип РЬагтасеийса18 Зап Охе§о, СА	1пс.,
ΓΓΜΝ-191 (К-7227)	Противовирусное	ингибитор	1п1егМипе
		средство	сериновой протеазы	РИагтасеибсак ВпзЬапе, СА	1пс.,
СЬ-59728	Противовирусное	Ингибитор Ν85Β	Сепе1аЬ8
		средство	репликазы
ΑΝΑ-971	Противовирусное	ТЬК-7 агонист	Апабуз
		средство
ТМС-465350	Противовирусное	ингибитор	Μεάϊνϊτ/ Т1Ьо1ес
		средство	сериновой протеазы

Соединения по изобретению могут также быть использованы в качестве лабораторных реактивов. Соединения могут быть средством обеспечения исследовательских инструментов для проведения опытов по вирусной репликации, разработки опытных систем исследования животных и исследований структурной биологии для дальнейшего углубленного раскрытия механизмов заболевания НСУ. Более того, со

- 15 015827 единения настоящего изобретения пригодны для установления или определения сайта связывания других противовирусных соединений, например, путем конкурентного ингибирования.

Соединения по изобретению могут также быть пригодны для лечения или предотвращения вирусной контаминации материалов и, таким образом, снижения риска вирусной инфекции лабораторного или медицинского персонала или пациентов, которые контактируют с такими веществами, как, например, кровь, ткань, хирургические инструменты и костюмы, лабораторные инструменты и костюмы, а также аппараты и материалы для забора и переливания крови.

Настоящее изобретение предназначено для охватывания соединений, имеющих формулу (I), полученных посредством способов синтеза или посредством метаболических способов, включая таковые, происходящие в организме человека или животного (ίη νίνο), или способов, происходящих ίη νίίτο.

Сокращения, используемые в настоящем описании, включая в особености включенные в иллюстративные схемы и последующие примеры, хорошо известны среднему специалисту. Некоторые из сокращений используют как следующие: ΌΌΙ для 1,1'-карбонилдиимидазола; ТГФ для тетрагидрофурана; ΌΒϋ для 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундек-7-ена; ТРЛ для трифторуксусной кислоты; ΗΆΤϋ для фосфата О(7-азабензотриазол-1-ил)-НН№,№-тетраметилурония; РуВОР для гексафторфосфата бензотриазол-1-илокси-трис-пирролидинофосфония; Ме1 для метилиодида; Вос или ВОС для трет-бутоксикарбонила; О!Ви для трет-бутокси; ТВМЕ для трет-бутилметилового эфира; Εί₃Ν для триэтиламина; ИМ8О для диметилсульфоксида; Оас для ацетата; ЭРРЛ для дифенилфосфорилазида; Ме для метила; ТВАР для фторида тетрабутиламмония; ЭМАР для 4-^№диметиламинопиридина; 1ВиЕ1 для трет-бутиллития; ΕίΗΜϋδ для литий гексаметилдисилазид; Т1е для трет-бутиллейцина, также ссылаются как трет-бутилглицин; 4В1рйМдВг для 4-бифенилмагнийбромида; ЭСМ для дихлорметана; МеО для метокси; ЕЭАС или ЕЭС для гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида и НОВ! для 1-гидроксибензотриазола.

Исходные продукты, пригодные для синтеза соединений по настоящему изобретению, известны среднему специалисту и могут быть легко произведены или являются коммерчески доступными.

Способы, представленные ниже, раскрыты с целью иллюстрации и не предназначены для ограничения объема заявленного изобретения. Понятно, что может быть необходимо получение такого соединения, в котором функциональная группа является защищенной, используя обычную защитную группу, затем удаляют защитную группу, чтобы обеспечить соединение по настоящему изобретению. Подробности, касающиеся применения защитных групп в соответствии с настоящим изобретением, известны сред нему специалисту.

Схема II демонстрирует общий способ, в котором соединения формулы (I) создают путем связывания трипептидкарбоновой кислоты (1) с сульфонамидом Р1'. Указанная реакция связывания требует обработки карбоновой кислоты (1) реагентом связывания, таким как карбонилдиимидазол в растворителе, таком как ТГФ, который может быть нагрет до температуры кипения с обратным холодильником, с последующим добавлением образовавшегося производного соединения (1), с сульфонамидом Р1', в растворителе, таком как ТГФ или дихлорметан, в присутствии основания, такого как ИВИ.

Схема II

Способ Р4-РЗ-Р2-Р1 ——*· Р4-РЗ-Р2-Р1-РГ

Й⁵

Альтернативный способ получения соединений формулы (I) представлен на схеме III. Сульфонамидная частица Р1' связывается с элементом Р1, используя способ, примененный на схеме II. С полученного остатка Р1-Р1' может затем быть снята защита по его аминоконцам. В этом общем примере применяют Вос-защитную группу, но средним специалистом должно быть признано, что в этом способе может быть применен ряд подходящих аминозащитных групп. Вос защитная группа может быть удалена, используя кислоту, такую как трифторуксусная кислота, в растворителе, таком как дихлорэтан, чтобы обеспечить амин со снятой защитой в виде ТРА соли. ТРА соль амина может быть непосредственно применена в последующей реакции связывания или как альтернатива ТРА соль амина может быть вначале превращена в НС1 соль амина и эту НС1 соль амина используют в указанной реакции связывания, как показано на схеме III. Связывание НС1 соли амина (3) с карбоксильным концом промежуточного соединения Р4-Р3-Р2 может быть выполнено, используя реагенты связывания, такие как ΗΑΤϋ, в растворителях, таких как дихлорметан, чтобы обеспечить соединения формулы (I) (4).

- 16 015827

Схема III

1. Кислота

2. Кислота (3)

Основание агент связывания

Соединения формулы (I)

Альтернативный способ получения соединений формулы (I) представлен на схеме ГУ. В настоящем описании гидрохлоридную соль Р1-Р1' концевого амина (1) связывают со свободной карбоксильной группой элемента Р2, используя агенты связывания, такие как РуВОР, в присутствии основания, такого как диизопропиламин, и в растворителе, таком как дихлорметан. Полученное промежуточное соединение Р2-Р1-Р1' может быть превращено в соединения формулы (I) путем двухстадийного синтеза, где на первой стадии снимают защиту с аминного конца Р2, используя кислоту, такую как ТТА, в растворителе, таком как дихлорметан. Полученная соль трифторуксусной кислоты может быть связана с карбоксильным концом элемента Р4-Р3, используя типовые агенты связывания, такие как РуВОР, в присутствии основания, такого как диизопропиламин, и используя растворители, такие как дихлорметан, чтобы обеспечить соединения формулы (I) (4).

Схема ТУ

Способ Р1-РГ ---Р2-Р1-РГ ......^Р4'^РЗ Р4-РЗ-Р2-Р1-Р1'

Основание

Снятие защиты

агент связывания

Основание

Промежуточное соединение Р4-Р3-Р2, используемое в указанных выше схемах, может быть сформировано, как описано в последующем описании данного способа, показанного на общей схеме У. На указанной схеме свободный карбоксильный конец Р4-Р3 промежуточного соединения (1) может быть связан с аминоконцом элемента Р2, чтобы обеспечить дипептид (2) Р4-Р3-Р2. С карбоксильного конца промежуточного соединения Р4-Р3-Р2 может быть снята защита путем омыления эфирной группы, чтобы обеспечить Р4-Р3-Р2 в виде свободной карбоновой кислоты (3). Промежуточные соединения, подобные (3), могут быть превращены в соединения формулы (I), используя способы, описанные в настоящем описании.

- 17 015827

Схема У

Р2

Способ Р4-РЗ ---------->- Р4-РЗ-Р2

Соединения формулы (I) могут также быть превращены в другие соединения формулы (I), как описано в настоящем описании. Пример такого способа представлен на схеме VI, где соединение формулы (I) (1), которое несет Вос-группу по положению Р4, преобразуют в соединение формулы (I) (3), где указанное соединение несет группу мочевины по положению Р4. Превращение соединения (1) в соединение (3) может быть осуществлено путем двухстадийного синтеза, на первой стадии которого превращают соединение (1) в амин (2) путем обработки соединения (1) кислотой, такой как ТРА, в растворителе, таком как дихлорметан. Полученная ТРА соль амина может быть обработана изоцианатом, таким как третбутилизоцианат, в присутствии одного эквивалента основания, чтобы обеспечить соединение формулы (I) (3), где Р3 остаток закрывается мочевиной. Как ранее отмечено, средним специалистом будет признано, что промежуточное соединение (2) может быть использовано в виде исходных продуктов для получения соединений формулы (I), где Р3 группа закрывается амидом или сульфонамидом или тиомочевиной или сульфамидом. Создание указанных соединений формулы (I) может быть выполнено, используя типовые условия образования указанных Р4 функциональностей из аминов.

При получении соединений формулы (I) конец Р1' вводят в молекулу, используя один из общих способов, представленный выше и описанный более подробно ниже. В некоторых примерах элементы Р1' представляют собой циклоалкил- или алкилсульфонамиды, которые являются коммерчески доступными или могут быть получены из соответствующих алкил- или циклоалкилсульфонилхлоридов путем обработки указанного сульфонилхлорида аммиаком. Альтернативно, эти сульфонамиды могут быть синтезированы, используя общий способ, представленный на схеме УН. На указанной схеме коммерчески доступный 3-хлорпропилсульфонилхлорид (1) преобразуют в соответствующий защищенный сульфонамид, как, например, путем обработки трет-бутиламином. Полученный сульфонамид (2) затем преобразуют в соответствующий циклоалкилсульфонамид путем обработки двумя эквивалентами основания, такого как бутиллитий, в растворителе, таком как ТГФ. С полученного циклоалкилсульфонамида может быть снята защита путем обработки кислотой, чтобы обеспечить требуемый незащищенный циклоалкилсульфонамид.

- 18 015827

Основание ,С1-->

Схема VII

ОС

V сГ⁵'

5 ____^С1			I Ον,О
(П		-νη2	1 н
V	Кислота	Ок,о
К А			н2гА
(3)			РГ

(2)

Связывание с Р1 кислотой с последующим элонгированием

-----------—............. Соединение формулы (I)

Замещенные циклоалкилсульфонамиды могут также быть введены в соединения формулы (I), используя модификацию указанный выше методики. Например, промежуточное соединение 2 схемы VIII может быть обработано 2 экв. основания, такого как бутиллитий, и полученная реакционная смесь может быть обработана электрофилом, таким как метилиодид, чтобы обеспечить замещенный циклоалкилсульфонамид (3). С этого промежуточного соединения (3) может быть снята защита на Ν-конце, и полученное соединение (4) используют как промежуточное соединение при получении соединений формулы (I). Схема VIII

I Ч./9 1) Основание ___I Ме . Ой' А

Н ^2) 2) электрофил, такой как Ме! ^ν

1) Основание

Связывание с Р1 кислотой с последующим элонгированием _{Соединеиие формуль}, ₍₁₎

Кислота θ\/θ Ме

РГ (4)

Промежуточные соединения Р1', применяемые для получения соединений формулы (I), являются в некоторых случаях производными от сульфамидных производных. В этих случаях промежуточные сульфамиды являются доступными с помощью ряда направлений синтеза, как, например, с помощью направления, представленного на схеме IX.

Схема IX

Сульфамоилхлорид (2) может быть получен ΐη 811и путем добавления воды (например, 1 экв.) к хлорсульфонилизоцианату 1 (например, 1 экв.) в растворителе, таком как ТГФ, пока поддерживается пониженная температура, такая как -20°С, и полученному раствору дают возможность нагреться до температуры 0°С. К этому раствору добавляют основание, такое как безводный триэтиламин (например, 1 экв.), затем добавляют амин (например, 1 экв.). Реакционную затем смесь нагревают до комнатной температуры, фильтруют и фильтрат концентрируют, чтобы получить требуемые сульфамиды (3).

Сульфамиды могут быть введены в соединения формулы (I), следуя направлению синтеза, представленному на схеме X. На указанной схеме элемент (1) карбоновой кислоты Р1 обрабатывают активирующим агентом, таким как СО!. В отдельной колбе к указанному выше описанному раствору сульфамида добавляют сильное основание и полученную реакционную смесь перемешивают в течение нескольких часов, после чего эту реакционную смесь добавляют в колбу, содержащую активированную карбоновую кислоту, чтобы обеспечить ацилсульфамидные производные (2). Промежуточные соединения, подобные 2, могут быть превращены в соединения формулы (I), как описано в настоящем описании.

Следует отметить, что ацилсульфамидные производные могут также быть получены из трипептид- 19 015827 карбоновых кислот на первой стадии способа, как определено на схеме XI. Схема XI

Элементы Р1, используемые для получения соединений формулы (I), являются в некоторых случаях коммерчески доступными, но в других случаях их синтезируют, используя способы, описанные в настоящем описании, и затем их вводят в соединения формулы (I), используя способы, описанные в настоящем описании. Замещенные Р1 циклопропиламинокислоты могут быть синтезированы, следуя общему способу, представленному на схеме XII.

Обработка коммерчески доступного или легко синтезируемого имина (1) 1,4-дигалогенбутеном (2) в присутствии полученного основания обеспечивает получение имина (3). Гидролиз кислоты (3) затем обеспечивает соединение (4) в виде основного продукта, которое имеет аллильный заместитель в зупположении, к карбоксильной группе. Остаток амина (4) может быть защищен, используя Вос-группу, обеспечивает полностью защищенную аминокислоту (5). Это промежуточное соединение представляет собой рацемат, который может быть разделен с помощью энзиматического способа, в котором эфирный остаток (5) расщепляют с помощью протеазы, чтобы обеспечить соответствующую карбоновую кислоту. Не основываясь ни на какой отдельной теории, следует полагать, что эта реакция является селективной по той причине, что один из энантиомеров вступает в реакцию с более высокой скоростью, чем его зеркальное отображение, обеспечивая кинетическое разделение промежуточного рацемата. В воплощениях примеров, представленных в настоящем описании, стереоизомером для интегрирования в соединения формулы (I) является соединение (5а), которое имеет (1К, 28) стереохимию. В присутствии фермента этот энантиомер не подвергается эфирному расщеплению, и, таким образом, этот энантиомер (5а) выделяют из реакционной смеси. Тем не менее, другой энантиомер (5Ь), который содержит (18, 2К) стереохимию, подвергается эфирному расщеплению, т.е. гидролизу, чтобы обеспечить свободную кислоту (6). При завершении этой реакции сложный эфир (5 а) может быть отделен от кислотного продукта (6) с помощью обычных способов, таких как, например, способы водного экстрагирования или хроматография.

Схема XII

К

(3) (Вос)₂0, основание

2) ТЕМЕ экстракт

3) Водный раствор НС1

Неограничивающие методики получения промежуточных соединений Р2 и соединений формулы (I)

- 20 015827 показаны на схемах ниже. Указанные промежуточные соединения, условия реакции и способы получения в конкретных примерах являются широкоприменимыми к соединениям с другими конфигурациями замещения. Например, синтез элементов Р2, представленный в соединениях формулы (I) схемы XIII, может быть осуществлен, следуя определенному направлению синтеза. На указанной схеме легкосинтизируемый или коммерчески доступный Х-Вос-4-оксо-Б-пролин или Х-СЬх-4-оксо-Ь-пролин обрабатывают металлоорганическим агентом, таким как реагент Гриньяра (или альтернативно алкил или ариллитиевые классы или альтернативно алкил или арилцинковые реагенты), чтобы обеспечить промежуточное соединение (2), в котором по С4 положению пролина находится К³ заместитель и свободная третичная гидроксильная группа. Спиртовая группа промежуточного соединения (2) может затем функционировать так, чтобы обеспечить требуемую К⁸ функциональность. В этом способе промежуточный спирт (2) может быть включен в ряд общепринятых технологических процессов. Например, спирт (2) может быть ацилирован, чтобы обеспечить сложные эфиры, карбаматы или карбонаты; алкилирован, чтобы обеспечить эфиры, и фосфонилирован, чтобы обеспечить фосфаты. Для превращения промежуточного соединения (2) в промежуточное соединение (3), как показано на схемеы XIII, может быть необходимо вначале защитить карбоксильную группу (2).

Химия на основе спиртовой функции описана для данного объекта в стандартных методиках, такой как СошргеГеп81уе Отдашс ТгапзГогшаИопз: А СшСе ίο ЕипсИопа1 Сгоир РгерагаИопз, Второе издание, Ьу К1скагс1 Багоск. Этот текст издан ^11еу апС 8опз. В нем выделены конкретные ссылки и обзоры, которые средним специалистом могут быть легко применены для превращения промежуточного соединения (2) по схеме XIII в промежуточное соединение (3). Например, условия и подходящие ссылки для образования эфиров из спиртов могут быть найдены на стр. 883-929 текста Ларока (Багоск'з). Более конкретно, условия и конкретные ссылки на стр. 890-894 являются более подходящими для практического осуществления настоящего изобретения. Также условия для превращения спиртов в соответствующие производные сложного эфира могут быть найдены на стр. 1952 и 1955 текста Ларока. Кроме того, химия, описанная в 1оитпа1 о£ Огдашс СЬеш181гу 2001, уо1ише 66, раде 8926 и содержащихся там подходящих цитируемых ссылках, является полезной для практического осуществления настоящего изобретения.

Схема XIII

(3)

ТНЕ, контроль температуры

Стадия 3 защита карбоновой Стадия 5 снятие защиты с кислоты ^: карбоновой кислоты

Удаление СЬг группы

Стадия

- 21 015827

Способ 2: связывание с Р3-Р4 затем с Р1-Р1'

Стадия 9 удаление СЬх группы гидрогенолиз

Стадия 11

Снятие защиты

Стадия 10

Связывание

Стадия 12

Связывание

Альтернативный подход к синтезу соединений формулы (I), как описано на схеме XIII, представлен на схеме XIV. Введиние функциональных групп по С4 положению пролиновой группы происходит через синтез по Гриньяру с участием последнего промежуточного соединения (5), обеспечивает промежуточное соединение 6, которое может затем быть превращено в соединения формулы (I). Промежуточное соединение (5) является доступным через 4-стадийную последовательность, начинающуюся с коммерчески доступного промежуточного соединения (1), первая стадия которой касается связывания соединения (1) с промежуточными реагентами связывания Р1-Р1', установленными в технологии. Снятие защиты ΝВос-группой в присутствии кислотного катализатора с промежуточного соединения (2) обеспечивает свободный промежуточный амин (3), который затем связывают с фрагментом Р3-Р4, чтобы обеспечить промежуточное соединение (4). Селективное окисление гидроксильной группы С4 в промежуточном соединении (4), чтобы обеспечить промежуточное соединение (5), может быть выполнено, используя реагенты окисления, такие как реагент Десс-Мартина.

Схема XIV

Стадия 2 4¾ катализированное _н θ кислотайрасщепление”

Вос группы I³)

Стадия 3	но. о 9 гл н о Η ν\τΝΧ··'ΚΝζ Δ Η К5 к2	Стадия 4	н <'ν'τν\Αν к % н % в2 (5)
н он К5	Окисление

(4)

Стадия 5

Соединение формулы (I)

Следует отметить, что присоединение металлоорганических агентов к кетоновому остатку пролинового производного 1 (схема XVI) хорошо известно в технологии. Например, Груби и коллеги (1. Отд. Сйет. 2001, 66, 3593) описали присоединение фенилмагнийбромида в промежуточные соединения общей структуры 1 (схема XVI). Эти находки являются доказательством того, что оптимальные выходы требуемых 1,2 продуктов присоединения (2, схемы XVI) получают, когда трет-бутиловую эфирную группу применяют как защитную группу карбоксильного остатка С2. Кроме того, эта работа обеспечивает очевидное доказательство в виде данных кристаллографии, полученных с помощью рентгеновских

- 22 015827 лучей относительно стереохимического результата этой реакции присоединения. Конкретно, в результате вышеупомянутого присоединения реагента Гриньяра к кетону 1 получают единственный продукт, в котором гидроксильная группа С4 и карбоксильная группа С2 предполагают относительную зупориентацию около пятичленного кольца. Из этого структурного определения лицо селективности при присоединении К₃М к кетону 1 установлено как α-положение в контексте структуры 1 схемы XVI. То есть металлоорганка селективно присоединяется к обратной стороне (нижняя часть) карбонила в соединениии 1, чтобы обеспечить соответствующие третичный спирт (2) с представленной стереохимией.

Схема XVI

Упомянутая выше работа Груби описывает присоединение конкретного реагента Гриньяра к производным соединения 1 (схема XVI). Тем не менее, присоединение различных реагентов Гриньяра в пролин 1 представлено в примерах настоящего изобретении. Основная литература, которая описывает введение металлоорганических агентов, включая реагенты Гриньяра, в кетоны, значительна и получена в итоге в общем обзоре в технологии, таком как СотргеНепзгсе Огдатс Рипсйопа1 Огоир ТгапзЕогтайопз. Уо1ите 2: 8уп1йез18: СагЪоп \еиЬ опе Ье!егоа1от аЦасЬеб Ъу а зтд1е Ъопб. Ебйог ίη СЫе£ А1ап. К. Каййгку, е! а1. 1995. СЬар!ег 2.02, раде 37. Этот класс реакций также описан в Сотргейеп81уе Огдатс 8уп1йе818. Ебйог ίη СЫе£ Ваггу М Тгозр Уо1ите 1: Аббйюпз 1о С-Х ρί-Ъопбз (рай 1). 1991.

Последние исследования в технологии обеспечивают условия для дальнейшей оптимизации реагентов Гриньяра в реакциях присоединения к кетону, и эти работы могут быть полезны в настоящем изобретении. Например, Ишихара и коллеги (Огд. 1,еИ. 2005, Уо1. 7, Νο. 4, 573) недавно описали образование и применимость магнийатных комплексов. Магнийатный комплекс К₃МдЬ1 представляет собой производную от реагентов Гриньяра и алкиллития. Как описано у Ишихара, эти комплексы обеспечивают превосходные выходы продуктов 1,2 в реакциях присоединения к кетонам. В отдельном исследовании Кнохель и коллеги (Апдеш. СНет НЕ Еб. 2006, 45, 497) описали применение растворимых лантаноидных солей, таких как ЬпС1₃, вместе с магнийорганическими реагентами. Присутствие этой лантаноидной соли приводит к улучшению эффективности реакции 1,2 присоединения к карбонильным соединениям. Эти рабо

- 23 015827 ты и ссылки, представленные в настоящем описании, отражают современное состояние уровня техники относительно оптимизации реакции Гриньяра с помощью простого присоединения к карбонильным соединениям и служат важным источником информации в настоящем изобретении.

Должен также быть отмечен диапазон металлорганических реагентов, участвующих в реакциях присоединения к кетонам. Включенными в эту основную работу являются реагенты, такие как ариллитиевые, алкиллитиевые и гетероариллитивые реагенты, которые хорошо известны для введения 1,2 положения к карбонильным остаткам. Например, в недавнем исследовании Дондони и коллег (7. Огд. Сйет. 2005, 70, 9257) бензотиоазол литиируют, используя ВиЬ1, и полученные С2-литиевые группы присоединяют к 1,2 положениям лактона. В качестве аналогии литиирования бензотиазола следует ожидать присоединения по 1,2 положениям к кетону 1 схемы XVI, чтобы обеспечить промежуточное соединение, подобное 2а.

Средним специалистом должно быть признано, что металлоорганические реагенты, производные от гетероциклов, такие как оксазолы, тиазолы и имидазолы, могут также участвовать в 1,2 реакциях присоединения к кетону 1. Имеется значительное количество основной литературы, которая определяет уникальные условия, применяемые для каждый из этих гетероциклических систем, и эта информация является легко доступной среднему специалисту. Например, применение металлоорганических реагентов, производных от бензоксазола или оксазола, в реакциях присоединения к кетонам требует применение литиймагнезатов. Конкретно указанное исследование Байч и партнеров описано в ί. Огд. Сйет., 2005, 70, 5190. Введение бензоксазола в кетон 1 схемы XVI должен обеспечить доступ к промежуточным соединениям, подобным 2й.

Имеется существенный литературный прецедент для присоединения к кетонам, используя широкий класс металлоорганических реагентов, производных от гетероциклов. Например, работа Бехинида и партнеров (Те!. Ьей. 42, 2001, 647) описывает образование литиированного бензимидазола и его введение в простой лактон. По аналогии, применение этого литиированного бензимидазола в реакциях присоединения к кетону 1 схемы XVI должна обеспечить доступ к промежуточным соединениям, подобным 2с. Кроме того, недавнее исследование Кавасаки и партнеров (Вюогдашс и Мебюша1 Сйет. Ьей. 13, 2003, 87) описывает образование ряда литиированных гетероароматических соединений и реакции их присоединения в активированным амидам. По аналогии, применение этих литиированных гетероароматических промежуточных соединений в реакциях присоединения к кетону 1 схемы XVI должно обеспечить доступ к промежуточным соединениям 2б-2к.

Применение металлоорганических производных из биарильных или гетероариларильных систем в реакциях присоединения 1,2 к кетону 1 также имеет отношение к настоящему изобретению. Введение этого класса металлоорганических реагентов в кетон 1 должен обеспечить доступ к промежуточным соединениям, подобным 21 и 2т. Следует отметить, что в иллюстративных примерах по настоящему изобретению может быть необходим синтез металлоорганических биарилов или гетероарилов для последующего применения в реакциях присоединения к кетону 1 по схеме XVI. Средний специалист знаком с существенным количеством основной литературы, которая описывает получение металлоорганики этого класса и их предшественников. Например, недавняя статья Шиншилла и партнеров (Сйет. Ееу. 2004, 104, 2667) описывает получение металлированных гетероциклов и их применение. Базовой химией для получения биарильных или гетероариларильных систем часто является реакция связывания, подобная Сузуки. Основная литература, издаваемая Грегори Фу, описывает современное состояние в таких реакциях связывания и подмножество этих ссылок включают следующиее: 1АС8 2004, 126, 1340; 1АС8, 2002,124, 13662; Апдеч. Сйет. ]ηί. Еб. 2002, 41, Νο. 11, 1945; Апдеч. Сйет. Σηΐ. Еб. 2002, 41, Νο.20, 3910; 1АС8 2002, 122, 4020; 1АС8 2001, 123, 10099; Огд. Ьей. 2001, Уо1. 3, Νο. 26, 4295; Апдеч. Сйет. Ш!. Еб. 1998, 37, Νο.24, 3387. В дополнение к этой основной работе легко доступными являются критические обзоры в данной области, такие как Κοδδί ίη 8уи1йе§щ 2004, Νο. 15, 2419.

Примеры

Настоящее изобретение будет описано в связи с определенными воплощениями, которые не предназначены для ограничения его области. С другой стороны, настоящее изобретение охватывает все альтернативы, модификации и эквиваленты, которые могут быть включены в объем формулы изобретения. Таким образом, последующие примеры, которые включают конкретные воплощения, будут демонстрировать осуществление настоящего изобретения, при этом должно быть понятно, что примеры предназначены для иллюстративных целей определенных воплощений и представлены, чтобы обеспечить, как полагают, более полезное и легко понимаемое из описания воплощения приведенных методик и концептуальных аспектов.

Процентное содержание раствора выражают отношением веса к объему и соотношения растворов выражают отношением объема 2 к объему, за исключением иным образом установленного. Спектр ядерного магнитного резонанса (ЯМР) регистрируют или на Вгикег 300, 400 или 500 МГц спектрометре; химические сдвиги (δ) выражают в частях на миллион. Флеш-хроматографию проводят на силикагеле (δίθ₂) в соответствии с методикой флеш-хроматографии по Штилле (8ΐί11'δ) (I. Огд. Сйет. 1978, 43, 2923).

Промежуточные соединения, описанные в примерах, представленные в настоящем описании, могут быть применены для синтеза соединений формулы I.

- 24 015827

Пример 1. Получение промежуточных соединений Р1'.

1. Получение циклопропилсульфонамида.

Способ 1:

циклопропилсульфонамид

Схема 1

Оч .0 1 а С1	Стадия 1	ААЛ 1 н С1
Н2М^
Стадия 2	1 V	Стадия 3 . . . . ТВ»·»—.	О. .0 V
п-ВикГ х		------------- ТРА	η2ν

Стадия 1.

трет-Бутиламин (3,0 моль, 315 мл) растворяют в ТГФ (2,5 л). Раствор охлаждают до температуры -20°С. Медленно добавляют 3-хлорпропансульфонилхлорид (1,5 моль, 182 мл). Реакционной смеси дают возможность нагреться до комнатной температуры и перемешивают в течение 24 ч. Смесь фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в СН₂С1₂ (2,0 л). Полученный раствор промывают 1,0М раствором НС1 (1,0 л), водой (1,0 л) и рассолом (1,0 л), сушат над Να₂8Ο₄, фильтруют и концентрируют в вакууме, что дает твердое вещество слегка желтого цвета, который перекристаллизовывают из гексана, чтобы обеспечить продукт в виде твердого вещества белого цвета (316,0 г, 99%).

¹Н ЯМР (СБС1₃) δ 1.38 (с, 9н), 2.30-2.27 (м, 2Н), 3.22 (т, I = 7.35 Гц, 2Н), 3.68 (т, I = 6.2 Гц, 2Н), 4.35 (б, 1Н).

Стадия 2.

К раствору продукта со стадии 1 (2,14 г, 10,0 ммоль) в ТГФ (100 мл) добавляют η-ΒιιΙ,ί (2,5М в гексане, 8,0 мл, 20,0 ммоль) при температуре -78°С. Реакционной смеси дают возможность нагреться до комнатной температуры в течение более часа и концентрируют в вакууме. Остаток распределяют между этилацетатом и водой (200 мл каждый). Отделенную органическую фазу промывают рассолом, сушат над Νίΐ₂8Ο.|, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток повторно перекристаллизовывают из гексана, чтобы обеспечить требуемый продукт в виде твердого вещества белого цвета (1,0 г, 56%).

¹Н ЯМР (СЭС1₃) δ 0.98-1.00 (м, 2Н), 1.18-1.19 (м, 2Н), 1.39 (с, 9Н), 2.48-2.51 (м, 1Н), 4.19 (б, 1Н).

Стадия 3.

Раствор продукта со стадии 2 (110 г, 0,62 ммоль) в ΤΓΆ (500 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. Летучие вещества удаляют в вакууме. Остаток повторно перекристаллизовывают из смеси этилацетат/гексан (60 мл/240 мл), чтобы обеспечить требуемый продукт в виде твердого вещества белого цвета (68,5 г, 91%).

¹Н ЯМР (ΌΜ8Ο-ά₆) δ 0.84-0.88 (м, 2Н), 0.95-0.98 (м, 2Н), 2.41-2.58 (м, 1Н), 6.56 (б, 2Н).

Способ 2.

О

О-5-С1

О

МНз(насыщУНР от 0 °С до комнатной температуры (КТ)

О

Ο-3-ΝΗ₂ б

В раствор 100 мл ТГФ, охлажденный до температуры 0°С, пробулькивают газообразный аммиак, пока не произойдет насыщение. К указанному раствору добавляют раствор 5 г (28,45 ммоль) циклопропилсульфонилхлорида (приобретенный от Аггау ВюрБагша) в 50 мл ТГФ. Раствор нагревают до комнатной температуры в течение ночи и перемешивают еще в течение дня. Смесь концентрируют, пока не останется 1-2 мл растворителя, и выливают на 30 г плотный слой из 8ΐΟ₂ (элюируют от 30 до 60% смесью этилацетат/гексан), чтобы обеспечить 3,45 г (100%) циклопропилсульфонамида в виде твердого вещества белого цвета.

^!Н ЯМР (метанол-64) δ 0.94-1.07 (м, 4Н), 2.52-2.60 (м, 1Н);

¹³С ЯМР (метанол-бд) δ 5.92, 33.01.

2. Получение С1-замещенных циклопропилсульфонамидов.

2а. Получение №трет-бутил-(1-метил)циклопропилсульфонамида.

- 25 015827

Стадия 1. Получение №трет-бутил-(3-хлор)пропилсульфонамида.

Получают в соответствии с методикой, описанной выше.

Стадия 2. Получение №трет-бутил-(1-метил)циклопропилсульфонамида.

Раствор продукта со стадии 1 (4,3 г, 20 ммоль) растворяют в сухом ТГФ (100 мл) и охлаждают до температуры -78°С. К указанному раствору медленно добавляют н-бутиллития (17,6 мл, 44 ммоль, 2,5М в гексане). Баню с сухим льдом удаляют и полученную реакционную смесь нагревают до комнатной температуры в течение более 1,5 ч. Указанную смесь охлаждают до температуры -78°С и добавляют раствор н-бутиллития (20 ммоль, 8 мл, 2,5М в гексане). Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры, охлаждают до температуры -78°С в течение более 2 ч и обрабатывают чистым раствором метилиодида (5,68 г, 40 ммоль). Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры в течение ночи, затем гасят насыщенным раствором ΝΗ₄€.Ί (100 мл) при комнатной температуре и экстрагируют этилацетатом (100 мл). Органическую фазу промывают рассолом (100 мл), сушат (М§80₄), фильтруют и концентрируют в вакууме, чтобы обеспечить масло желтого цвета, которое перекристаллизовывают из гексана, чтобы обеспечить требуемый продукт в виде слегка твердого вещества желтого цвета (3,1 г, 81%).

'Н ЯМР (СЭС1з) δ 0.79 (м, 2Н), 1.36 (с, 9Н), 1.52 (м, 2Н), 1.62 (с, 3Н), 4.10 (широкий с, 1Н).

Стадия 3. Получение 1-метилциклопропилсульфонамида.

Раствор продукта со стадии 2 (1,91 г, 10 ммоль) растворяют в ТРЛ (30 мл) и полученную реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. Растворитель удаляют в вакууме, чтобы обеспечить масло желтого цвета, которое перекристаллизовывают из смеси этилацетат/гексан (1:4, 40 мл), чтобы обеспечить требуемый продукт в виде твердого вещества белого цвета (1,25 г, 96%).

'Н ЯМР (СЭС1э) δ 0.84 (м, 2Н), 1.41 (м, 2Н), 1.58 (с, 3Н), 4.65 (широкий с, 2Н).

Вычислено для С₄Нс№0₂8: С, 35.54; Н, 6.71; Ν, 10.36.

Найдено: С, 35.67; Н, 6.80; Ν, 10.40.

2Ь. Получение 1-пропилциклопропилсульфонамида.

Указанное соединение получают, используя методику, описанную для получения 1метилциклопропилсульфонамида, заменяя метилиодид на пропилгалоид на второй стадии данной методики.

2с. Получение 1-аллилциклопропилсульфонамида.

Стадия 1. Получение №трет-бутил-(1-аллил)циклопропилсульфонамида.

Указанное соединение получают с 97% выходом в соответствии с методикой, описанной для синтеза №трет-бутил-(1-метил)циклопропилсульфонамида, используя 1,25 экв. аллилбромида в качестве электрофила. Соединение используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

'Н ЯМР (СОС1₃) δ 0.83 (м, 2Н), 1.34 (с, 9Н), 1.37 (м, 2Н), 2.64 (д, I = 7.3 Гц, 2Н), 4.25 (широкий с, 1Η), 5.07-5.10 (м, 2Н), 6.70-6.85 (м, 1Н).

- 26 015827

Стадия 2. Получение 1-аллилциклопропилсульфонамида.

Указанное соединение получают с 40% выходом из продукта со стадии 1 в соответствии с методикой, описанной для синтеза 1-метилциклопропилсульфонамида. Соединение очищают с помощью хроматографии на колонке с 81О₂, используя 2% метанол в дихлорметане в виде элюента.

¹Н ЯМР (СОС1₃) δ 0.88 (м, 2Н), 1.37 (м, 2Н), 2.66 (д, б = 7.0 Гц, 2Н), 4.80 (с, 2Н), 5.16 (м, 2Н), 5.82 (м, 1Н);

¹³С ЯМР (СОС1₃) δ 11.2, 35.6, 40.7, 119.0, 133.6.

26. Получение 1-бензилциклопропилсульфонамида.

Ч„,мн₂ ^ριΌί'ό

Стадия 1. Получение N-трет-бутил-(1-бензил)циклопропилсульфонамида.

Указанное соединение получают с 60% выходом, используя методику, описанную для синтеза N трет-бутил-(1-метил)циклопропилсульфонамида, за исключением того, что используют 1,05 экв. бензилбромида, а затем растирают в порошок с 10% этилацетатом в гексане.

¹Н ЯМР (СОС1₃) δ 0.92 (м, 2Н), 1.36 (м, 2Н), 1.43 (с, 9Н), 3.25 (с, 2Н), 4.62 (широкий с, 1Н), 7.29-7.36 (м, 5Н).

Стадия 2. Получение 1-бензилциклопропилсульфонамида.

°'„жн₂: ^,,: Х о V

Указанное соединение получают с 66% выходом из N-трет-бутил-(1-бензил)циклопропилсульфонамида, используя методику, описанную для синтеза 1-метилциклопропилсульфонамида, с последующей перекристаллизацией из минимального количества 10% этилацетата в гексане.

¹Н ЯМР (СОС1₃) δ 0.90 (м, 2Н), 1.42 (м, 2Н), 3.25 (с, 2Н), 4.05 (с, 2Н), 7.29 (м, 3Н), 7.34 (м, 2Н);

¹³С ЯМР (СОС1₃) δ 11.1, 36.8, 41.9, 127.4, 128.8, 129.9, 136.5.

2е. Получение 1-(1-циклогексенил)циклопропилсульфонамида.

Указанное соединение получают с 84% выходом, используя методику, описанную для синтеза N трет-бутил-(1-метил)циклопропилсульфонамида, за исключением того, что используют 1,30 экв. циклогексанона с последующей перекристаллизацией из минимального количества 20% этилацетата в гексане.

¹Н ЯМР (СОС1₃) δ 1.05 (м, 4Н), 1.26 (м, 2Н), 1.37 (с, 9Н), 1.57-1.59 (м, 6Н), 1.97 (м, 2Н), 2.87 (широкий с, 1Н), 4.55 (широкий с, 1Н).

Стадия 2. Получение 1-(1-циклогексенил)циклопропилсульфонамида.

Указанное соединение 1-(1-циклогексенил)циклопропилсульфонамид получают с 85% выходом из N-трет-бутил-[1-(1-гидрокси)циклогексил]циклопропилсульфонамида, используя методику, описанную для синтеза 1-метилциклопропилсульфонамида, с последующей перекристаллизацией из минимального количества этилацетата и гексана.

¹Н ЯМР (ΌΜ80-66) δ 0.82 (м, 2Н), 1.28 (м, 2Н), 1.51 (м, 2Н), 1.55 (м, 2Н), 2.01 (с, 2Н), 2.16 (с, 2Н),

- 27 015827

5.89 (с, 1Н), 6.46 (с, 2Н);

¹³С ЯМР (ΌΜ8Ο-ά₆) δ 11.6, 21.5, 22.3, 25.0, 27.2, 46.9, 131.6, 132.2; ΙΉ-Μ18 (Ε8Σ): 200 (Μ⁺-1).

2£. Получение 1-бензоилциклопропилсульфонамида.

Стадия 1. Получение №трет-бутил-(1-бензоил)циклопропилсульфонамида.

Указанное соединение получают с 66% выходом, используя методику, описанную для синтеза Νтрет-бутил-(1-метил)циклопропилсульфонамида, за исключением того, что 1,2 экв. метилбензоата используют в качестве электрофила. Соединение очищают с помощью хроматографии на колонке с 8ίΟ₂, используя от 30 до 100% дихлорметана в гексане.

Н ЯМР (СБС1₃) δ 1.31 (с, 9Н), 1.52 (м, 2Н), 1.81 (м, 2Н), 4.16 (широкий с, 1Н), 7.46 (м, 2Н), 7.57 (м,

1Н), 8.05 (д, I = 8.5 Гц, 2Н).

Стадия 2. Получение 1-бензоилциклопропилсульфонамида.

О

Указанное соединение получают с 87% выходом из №трет-бутил-(1-бензоил)циклопропилсульфонамида, используя способ, описанный для синтеза 1-метилциклопропилсульфонамида, с последующей перекристаллизацией из минимального количества этилацетата в гексане.

¹Н ЯМР (ΌΜ8Ο-ά₆) δ 1.39 (м, 2Н), 1.61 (м, 2Н), 7.22 (с, 2Н), 7.53 (т, I = 7.6 Гц, 2Н), 7.65 (т, I = 7.6 Гц, 1Н), 8.06 (д, I = 8.2 Гц, 2Н);

¹³С ЯМР (ΌΜ8Ο-ά₆) δ 12.3, 48.4, 128.1, 130.0, 133.4, 135.3, 192.0.

2д. Получение №трет-бутил-(1-фениламинокарбокси)циклопропилсульфонамида.

Указанное соединение получают с 42% выходом, используя методику, описанную для синтеза Νтрет-бутил-(1-метил)циклопропилсульфонамида, используя 1 экв. фенилизоцианата с последующей перекристаллизацией из минимального количества этилацетата в гексане.

¹Н ЯМР (СПС1₃) δ 1.38 (с, 9Н), 1.67-1.71 (м, 4Н), 4.30 (широкий с, 1Н), 7.10 (т, I = 7.5 Гц, 1Н), 7.34 (т, I = 7.5 Гц, 2Н), 7.53 (т, I = 7.5 Гц, 2Н).

3. Получение С1-замещенных циклопропансульфонамидов. Применение Ν-Вос защитной группы.

а. Получение циклопропилсульфониламино-трет-бутилкарбамата, ключевого промежуточного соединения при получении С1-замещенных циклопропилсульфонамидов.

Стадия 1. Получение 3-хлорпропилсульфонамида.

Раствор 3-хлорпропансульфонилхлорида (55 г, 310.7 ммоль) растворяют в ТГФ (200 мл) и добавляют по каплям в течение более 30 мин к раствору NН4ΟН (200 мл) при температуре 0°С. Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры, перемешивают в течение 1 ч и водный слой экстрагируют дихлорметаном (4x500 мл). Объединенные экстракты промывают 1Ν раствором НС1 (150 мл), водой (150 мл), сушат над Μ§8Ο₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырое твердое вещество повторно перекристаллизовывают из минимального количества дихлорметана в гексане, чтобы обеспечить требуемый продукт в виде твердого вещества белого цвета (45,3 г, 93%).

Ή ЯМР (СПС1₃) δ 2.34 (м, 2Н), 3.32 (т, I = 7.3 Гц, 2Н), 3.70 (т, I = 6.2 Гц, 2Н), 4.83 (с, 2Н); ¹³С ЯМР (СПС1₃) δ 27.10, 42.63, 52.57.

Стадия 2. Получение 3-хлорпропилсульфониламин трет-бутилкарбамата.

- 28 015827

Раствор продукта со стадии 1 (30,2 г, 191,5 ммоль), триэтиламин (30,2 мл, 217,0 ммоль) и 4-ЭМАР (2,40 г, 19,6 ммоль) в дихлорметане (350 мл) при температуре 0°С обрабатывают по каплям раствором ди-трет-бутилдикарбоната (47,2 г, 216,9 ммоль) в дихлорметане (250 мл) в течение более 30 мин. Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры, перемешивают еще 3 ч и промывают 1Ν раствором НС1 (300 мл), водой (300 мл) и рассолом (300 мл), сушат над Мд§О₄, фильтруют и концентрируют в вакууме, чтобы обеспечить сырой продукт. Указанный продукт растирают в порошок с 70 мл 5% дихлорметана в гексане, чтобы обеспечить требуемый продукт в виде твердого вещества грязно-белого цвета (47,2 г, 96%).

'|| ЯМР (СПС1₃) δ 1.51 (с, 9Н), 2.33 (м, 2Н), 3.60 (т, I = 7.3 Гц, 2Н), 3.68 (т, I = 6.21 Гц, 2Н);

¹³С ЯМР (СБС1з) δ 26.50, 27.95, 42.37, 50.40, 84.76, 149.53.

Стадия 3. Получение циклопропилсульфониламин трет-бутилкарбамата.

Раствор н-бутиллития (74,7 мл, 119,5 ммоль, 1,6М в гексане) растворяют в сухом ТГФ (105 мл) и охлаждают до температуры -78°С в атмосфере аргона. К указанному раствору добавляют по каплям раствор продукта со стадии 2 (14 г, 54,3 ммоль) в сухом ТГФ (105 мл) в течение более 20-30 мин. Баню с сухим льдом удаляют и реакционной смеси дают возможность нагреться до комнатной температуры в течение более 2 ч. Реакционную смесь гасят ледяной уксусной кислотой (3,4 мл), концентрируют в вакууме и распределяют между дихлорметаном (100 мл) и водой (100 мл). Органическую фазу промывают рассолом (100 мл), сушат (Мд§О₄), фильтруют и концентрируют в вакууме, чтобы обеспечить требуемый продукт в виде воскообразного твердого вещества грязно-белого цвета (12,08 г, 100%).

'|| ЯМР (СПС1₃) δ 1.10 (м, 2Н), 1.34 (м, 2Н), 1.50 (с, 9Н), 2.88 (м, 1Н), 7.43 (с, 1Н).

¹³С ЯМР (СБС1з) δ 6.21, 28.00, 31.13, 84.07, 149.82.

3Ь. Получение 1-метоксиметилциклопропилсульфонамида.

Стадия 1. Получение 1-метоксиметилциклопропилсульфониламин трет-бутилкарбамата.

К раствору циклопропилсульфониламин трет-бутилкарбамата (1,0 г, 4,5 ммоль), растворенному в ТГФ (30 мл), охлажденному до температуры -78°С, добавляют н-бутиллития (6,4 мл, 10,2 ммоль, 1,6М в гексане) и полученную реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч. К указанному раствору добавляют чистый раствор хлорметилметилового эфира (0-40 мл, 5,24 ммоль) и полученной смеси медленно дают возможность нагреться до комнатной температуры в течение ночи. Значение рН раствора доводят до 3, используя 1Ν водный раствор НС1, и затем экстрагируют этилацетатом (4x50 мл порции). Объединенные экстракты сушат (Мд§О₄), фильтруют и концентрируют, что дает 1-метоксиметилциклопропилсульфониламин трет-бутилкарбамат в виде воскообразного твердого вещества (1,20 г, 100%), которое переносят непосредственно на следующую стадию без дополнительной очистки.

'|| ЯМР (СПС1₃) δ 1.03 (м, 2Н), 1.52 (с, 9Н), 1.66 (м, 2Н), 3.38 (с, 3Н), 3.68 (с, 2Н), 7.54 (с, 1Н);

¹³С ЯМР (СБС1з) δ 11.37, 28.29, 40.38, 58.94, 73.43, 83.61, 149.57.

Стадия 2. Получение 1-метоксиметилциклопропилсульфонамида.

Раствор 1-метоксиметилциклопропилсульфониламин трет-бутилкарбамата (1,14 г, 4,30 ммоль) растворяют в растворе 50% ТРА/дихлорметан (30 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. Растворитель удаляют в вакууме и остаток хроматографируют над 80 г §1О₂ (элюируя смесью от 0 до 60% этилацетат/гексан), что дает 1-метоксиметилциклопропилсульфонамид в виде твердого вещества белого цвета (0,55 г, 77% общий выход в течение двух стадий).

'|| ЯМР (СБС1з) δ 0.95 (м, 2Н), 1.44 (м, 2Н), 3.36 (с, 3Н), 3.65 (с, 2Н), 4.85 (с, 2Н);

¹³С ЯМР (СПС1₃) δ 11.17, 40.87, 59.23, 74.80;

ЬКМБ м/е 183 (М^Н₄).

3с. Получение 1-циклопропилметилциклопропилсульфонамида.

- 29 015827

Стадия 1. Получение 1-циклопропилметилциклопропилсульфониламин трет-бутилкарбамата.

1-Циклодропилметилциклопропилсульфониламин трет-бутилкарбамат получают с 92% выходом в соответствии с методикой, описанной для синтеза 1-метоксиметилциклопропилсульфониламин третбутилкарбамата, за исключением того, что 1,10 экв. циклопропилметилбромида используют в качестве электрофила. Соединение переносят непосредственно на следующую стадию без очистки.

Н ЯМР (СЭС1₃) δ 0.10 (м, 2Н), 0.51 (м, 2Н), 0.67 (м, 1Н), 1.10 (м, 2Н), 1.49 (с, 9Н), 1.62 (м, 2Н), 1.87 (д, 1 = 7.0 Гц, 2Н).

Стадия 2. Получение 1-циклопропилметилциклопропилсульфонамида.

Указанное соединение получают с 65% выходом из 1-циклопропилметилциклопропилсульфониламин трет-бутилкарбамата в соответствии с методикой, описанной для синтеза 1метоксиметилциклопропилсульфонамида. Соединение очищают с помощью хроматографии на колонке с 8ίΟ₂, используя от 0 до 60% этилацетата в гексане в виде элюента.

'Н ЯМР (СОС1₃) δ 0.15 (м, 2Н), 0.51 (м, 2Н), 1.01 (м, 2Н), 1.34 (м, 3Н), 1.86 (д, 1 = 7.0 Гц, 2Н), 4.83 (с, 2Н);

¹³С ЯМР (СОС1₃) δ 4.65, 7.74, 11.26, 35.62, 41.21;

1,1<М8 м/е 193 (М⁺+1УН₄).

36. Получение 1-пропилкарбамоилциклопропансульфонамида.

Стадия 1. Получение 1-пропилкарбамоилциклопропансульфонамид трет-бутилкарбамата.

Указанное соединение получают из сырого продукта со 100% выходом в соответствии с методикой, описанной для синтеза 1-метоксиметилциклопропилсульфониламин трет-бутилкарбамата, за исключением того, что 1,10 экв. н-пропилизоцианата используют в качестве электрофила. Соединение переносят непосредственно на следующую стадию без очистки.

'Н ЯМР (СОС1₃) δ 0.10 (м, 2Н), 0.51 (м, 2Н), 0.67 (м, 1Н), 1.10 (м, 2Н), 1.49 (с, 9Н), 1.62 (м, 2Н), 1.87(д, 1=7.0 Гц,2Н).

Стадия 2. Получение 1-пропилкарбамоилциклопропансульфонамида.

Указанное соединение получают с 50% выходом из 1-пропилкарбамоилциклопропансульфонамид трет-бутилкарбамата в соответствии с методикой, описанной для синтеза 1-метоксиметилциклопропилсульфонамида, за исключением того, что хроматографию не используют, поскольку продукт повторно перекристаллизовывают из минимального количества смеси дихлорметан/гексан.

'Н ЯМР (СОС1₃) δ 0.15 (м, 2Н), 0.51 (м, 2Н), 1.01 (м, 2Н), 1.34 (м, 3Н), 1.86 (д, 1 = 7.0 Гц, 2Н), 4.83 (с, 2Н);

¹³С ЯМР (СОС1₃) δ 4.65, 7.74, 11.26, 35.62, 41.21;

1,1<М8 м/е 193 (М⁺+1УН₄).

3е. Получение 1-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)карбамоилциклопропансульфонамида.

- 30 015827

Стадия 1. Получение 1-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)карбамоилциклопропансульфонамида третбутилкарбамата.

Указанное соединение получают из сырого продукта со 100% выходом в соответствии с методикой, описанной для синтеза 1-метоксиметилциклопропилсульфониламин трет-бутилкарбамата, за исключением того, что 1,20 экв. 3,5-диметилизоксазол-4-изоцианата используют в качестве электрофила. Соединение переносят непосредственно на следующую стадию без очистки.

Стадия 2. Получение 1-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)карбамоилдиклопропансульфонамида.

Указанное соединение получают с 50% выходом (580 мг) из 1,62 г (4,52 ммоль) 1-(3,5диметилизоксазол-4-ил)карбамоилциклопропансульфонамид трет-бутилкарбамата, используя 30 мл (120 ммоль) 4Ν раствора НС1/диоксан, перемешивая в течение ночи, концентрируя и хроматографируя над Б1о1аде 40М колонкой (элюируя смесью от 0 до 5% метанол/дихлорметан.

¹Н ЯМР (метанол) δ 1.57 (м, 2Н), 1.61 (м 2Н), 2.15 (с, 3Н), 2.30 (с, 3Н), 4.84 (с, 3Н);

¹³С ЯМР (метанол-б₄) δ 9.65, 10.94, 15.01, 46.11, 114.82, 159.45, 165.55, 168.15;

ЬКМ8 м/е 260 (М⁺+Н).

4. Получение циклоалкилсульфонамидов из циклоалкилбромидов.

4а. Получение циклобутилсульфонамида из циклобутилбромида.

К раствору 5,0 г (37,0 ммоль) циклобутилбромида в 30 мл безводного диэтилового эфира (диэтиловый эфир), охлажденного до температуры -78°С, добавляют 44 мл (74,8 ммоль) 1,7М трет-бутиллия в пентане. Раствор медленно нагревают до температуры -35°С в течение более 1,5 ч. Указанную смесь медленно вводят через канюлю в раствор 5,0 г (37,0 ммоль) свежеприготовленного дистиллированного сульфурилхлорида в 100 мл гексана, охлажденного до температуры -40°С, нагревают до температуры 0°С в течение более 1 ч и осторожно концентрируют в вакууме. Указанную смесь повторно растворяют в диэтиловом эфире, промывают один раз некоторым количеством холодной воды со льдом, сушат (М§80₄), фильтруют и осторожно концентрируют. Указанную смесь повторно растворяют в 20 мл ТГФ, добавляют по каплям к 500 мл насыщенного раствора ΝΗ₃ в ТГФ и дают возможность перемешиваться в течение ночи. Смесь концентрируют в вакууме до получения сырого твердого вещества желтого цвета и повторно перекристаллизовывают из минимального количества дихлорметана в гексане с 1-2 каплями метанола, чтобы обеспечить 1,90 г (38%) требуемого продукта в виде твердого вещества белого цвета.

¹Н ЯМР (СЭС13) δ 1.95-2.06 (м, 2Н), 2.30-2.54 (м, 4Н), 3.86 (п, I = 8 Гц, 1Н), 4.75 (широкий с, 2Н); ¹³С ЯМР (СЭС13) δ 16.43, 23.93, 56.29.

НКМ8 м/е (М-Н)’.

Вычислено для С₄Щ№80₂: 134.0276, найдено 134.0282.

4Ь. Получение циклопентилсульфонамида.

Раствор 18,5 мл (37,0 ммоль) 2М циклопентилмагнийхлорида в эфире добавляют по каплям к раствору 3,0 мл (37,0 ммоль) свежеприготовленного дистиллированного сульфурилхлорида (полученный от Л1бг1сй) в 100 мл гексана, охлажденного до температуры -78°С. Смесь нагревают до температуры 0°С в течение более 1 ч и затем осторожно концентрируют в вакууме. Указанную смесь повторно растворяют в диэтиловом эфире (200 мл), промывают один раз некоторым количеством холодной воды со льдом (200 мл), сушат (М§80₄), фильтруют и осторожно концентрируют. Указанную смесь повторно растворяют в 35 мл ТГФ, добавляют по каплям к 500 мл насыщенного раствора ΝΠ₃ в ТГФ и дают возможность пере

- 31 015827 мешиваться в течение ночи. Смесь концентрируют в вакууме до получения сырого твердого вещества желтого цвета, остаток фильтруют через 50 г силикагеля, используя 70% смесь этилацетат-гексан в виде элюента, и раствор затем концентрируют. Остаток повторно перекристаллизовывают из минимального количества дихлорметана в гексане с 1-2 каплями метанола, чтобы обеспечить 2,49 г (41%) требуемого продукта в виде твердого вещества белого цвета.

Ίί ЯМР (СПС1₃) δ 1.58-1.72 (м, 2Н), 1.74-1.88 (м, 2Н), 1.94-2.14 (м, 4Н), 3.48-3.59 (м, 1Н), 4.80 (широкий с, 2Н);

¹³С ЯМР (СПС1₃) δ 25.90, 28.33, 63.54;

М8 м/е 148 (М-Н)^-.

4с. Получение циклогексилсульфонамида.

Раствор 18,5 мл (37,0 ммоль) 2М циклогексилмагнийхлорида (ТС4 Ашепсаз) в диэтиловом эфире добавляют по каплям к раствору 3,0 мл (37,0 ммоль) свежеприготовленного дистиллированного сульфурилхлорида в 100 мл гексана, охлажденного до температуры -78°С. Смесь нагревают до температуры 0°С в течение более 1 ч и затем осторожно концентрируют в вакууме. Указанную смесь повторно растворяют в диэтиловом эфире (200 мл), промывают один раз некоторым количеством холодной воды со льдом (200 мл), сушат (Мд8О₄), фильтруют и осторожно концентрируют. Указанную смесь повторно растворяют в 35 мл ТГФ, добавляют по каплям к 500 мл насыщенного раствора ΝΗ₃ в ТГФ и дают возможность перемешиваться в течение ночи. Смесь концентрируют в вакууме до получения сырого твердого вещества желтого цвета, остаток фильтруют через 50 г силикагеля, используя 70% смесь этилацетат-гексан в виде элюента, и концентрируют. Концентрат повторно перекристаллизовывают из минимального количества дихлорметана в гексане с 1-2 каплями метанола, чтобы обеспечить 1,66 г (30%) требуемого продукта в виде твердого вещества белого цвета.

Ίί ЯМР (СПС1₃) δ 1.11-1.37 (м, 3Н), 1.43-1.56 (м, 2Н), 1.67-1.76 (м, 1Н), 1.86-1.96 (м, 2Н), 2.18-2.28 (м, 2Н), 2.91 (ίί, I = 12, 3.5 Гц, 1Н), 4.70 (широкий с, 2Н);

¹³С ЯМР (СПС1₃) δ 25.04, 25.04, 26.56, 62.74;

М8 м/е 162 (М-1)^-.

4С. Получение неопентилсульфонамида.

Следуя методике получения циклогексилсульфонамида, 49 мл (37 ммоль) 0,75М раствора неопентилмагнийхлорида (А1£а) в диэтиловом эфире преобразуют в 1,52 г (27%) требуемого продукта в виде твердого вещества белого цвета.

'Н ЯМР (СПС1₃) δ 1.17 (с, 9Н), 3.12 (с, 2Н), 4.74 (широкий с, 2Н);

¹³С ЯМР (СПС1₃) δ 29.46, 31.51, 67.38;

М8 м/е 150 (М-1)^-.

4е. Получение циклобутилкарбинилсульфонамида.

Раствор 12,3 г (83 ммоль) циклобутилкарбинилбромида (ЛИпсЬ) и 13,7 г (91 ммоль) иодида натрия в 150 мл ацетона нагревают до температуры кипения с обратным холодильником в течение ночи и затем охлаждают до комнатной температуры. Неорганические твердые вещества удаляют путем фильтрования, а ацетон и циклопропилкарбинилиодид (8,41 г, 46%) удаляют путем отгонки (при температуре окружающей среды и давлении 150 торр при температуре 80°С соответственно).

Раствор 4,0 г (21,98 ммоль) циклобутилкарбинилиодида в 30 мл безводного диэтилового эфира, охлажденного до температуры -78°С, вводят через канюлю в раствор 17 мл (21,98 ммоль) 1,3М вторбутиллития в циклогексане и полученный раствор перемешивают в течение 5 мин. В указанную смесь вводят через канюлю в раствор 3,0 г (21,98 ммоль) свежеприготовленного дистиллированного сульфурилхлорида в 110 мл гексана, охлажденного до температуры -78°С, смесь нагревают до комнатной температуры в течение более 1 ч и затем осторожно концентрируют в вакууме. Указанную смесь повторно растворяют в диэтиловом эфире, промывают один раз некоторым количеством холодной воды со льдом, сушат (Мд8О₄), фильтруют и осторожно концентрируют. Указанную смесь повторно растворяют в 30 мл ТГФ, добавляют по каплям к 500 мл насыщенного раствора ΝΗ₃ в ТГФ и дают возможность перемешиваться в течение ночи. Смесь концентрируют в вакууме до получения сырого твердого вещества желтого цвета и повторно перекристаллизовывают из минимального количества дихлорметана в гексане с 1-2

- 32 015827 каплями метанола, чтобы обеспечить 1,39 г (42%) требуемого продукта в виде твердого вещества белого цвета.

¹Н ЯМР (СЭС1з) δ 1.81-2.03 (м, 4Н), 2.14-2.28 (м, 2Н), 2.81-2.92 (м, 1Н), 3.22 (д, 1 = 1 Гц, 2Н), 4.74 (широкий с, 2Н);

¹³С ЯМР (СЭС1₃) δ 19.10, 28.21, 30.64, 60.93.

М8 м/е 148 (М-Н)^-.

41. Получение циклопролилкарбинилсульфонамида.

Используя методику, применяемую для получения циклобутилкарбинилсульфонамида, циклопропилкарбинилсульфонамид получают из циклопропилкарбинилбромида (А1бг1сй) (см. также 1АС8 1981, п. 442-445).

¹Н ЯМР (СЭС1₃) δ 0.39-0.44 (м, 2Н), 0.67-0.76 (м, 2Н), 1.13-1.27 (м, 1Н), 3.03 (д, 1 = 7.3 Гц, 2Н), 4.74 (широкий с, 2Н);

¹³С ЯМР (СЭС1₃) δ 4.33, 5.61, 59.93;

М8 м/е 134 (М-1).

4д. Получение 2-тиофенсульфонамида.

Требуемый продукт получают из 2-тиофенсульфонилхлорида (приобретенный от А1бг1сй), используя способ, описанный в ,Ιιΐ8ΐιΐ8 ЫеЫдз Апп. СНет. 1933, 501, п. 174-182.

411. Получение 4-бромбензолсульфонамида.

4-Бромфенилсульфонамид получают путем обработки коммерчески доступного 4-бромсульфонилхлорида насыщенным раствором аммиака в ТГФ.

5. Общая методика получения сульфамидов.

Промежуточный сульфамоилхлорид получают путем добавления воды (1 экв.) в ТГФ к холодному (-20°С) перемешиваемому раствору хлорсульфонилизоцианата (1 экв.) в ТГФ и полученному раствору дают возможность нагреться до температуры 0°С. К указанному раствору добавляют безводный триэтиламин (1 экв.), а затем требуемый вторичный амин (1 экв.). Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры, затем фильтруют и фильтрат концентрируют, что дает требуемые сульфамиды.

Пример 2. Получение промежуточных соединений Р1.

5. 1-трет-Бутоксикарбониламиноциклопропанкарбоновая кислота является коммерчески доступной

6. Получение гидрохлорида метилового эфира 1-аминоциклобутанкарбоновой кислоты.

1-Аминоциклобутанкарбоновую кислоту (100 мг, 0,869 ммоль) (Тосйз) растворяют в 10 мл метанола. Газообразный НС1 пробулькивают в течение 2 ч. Реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч и затем концентрируют в вакууме, что дает 144 мг масла желтого цвета. Растирание в порошок с 10 мл диэтилового эфира обеспечивает 100 мг требуемого продукта в виде твердого вещества белого цвета.

¹Н ЯМР (СЭС1₃) δ 2.10-2.25 (м, 1Н), 2.28-2.42 (м, 1Н), 2.64-2.82 (м, 4Н), 3.87 (с, 3Н), 9.21 (широкий с, 3Н).

7а. Получение (1К,2К)/(18,28) 1-амино-2-этилциклонронанкарбоновой кислоты трет-бутилового эфира (рацемическая смесь).

- 33 015827

этил §уи по отношению к карбокси

Стадия 1. Получение 2-этилциклопропан-1,1-дикарбоновой кислоты ди-трет-бутилового эфира показано ниже

1ВиО₂С СО₂1Ви

К суспензии бензилтриэтилхлорида аммония (21,0 г, 92,2 ммоль) в 50% водном растворе Να0Η

92,5 ммоль). Реакционную смесь энергично перемешивают в течение 18 ч при комнатной температуре и обрабатывают смесью воды со льдом. Сырой продукт экстрагируют дихлорметаном (3х) и последовательно промывают водой (3х) и рассолом. Органические экстракты объединяют, сушат (Мд80₄), фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают с помощью флеш-хроматографии на колонке (100 г 810₂, 3% диэтиловый эфир в гексане), чтобы обеспечить требуемый продукт (18,3 г, 67,8 ммоль, 73% выход), который используют непосредственно на следующей стадии.

Стадия 2. Получение рацемического 2-этилциклопропан-1,1-дикарбоновой кислоты третбутилового эфира показано ниже

Продукт со стадии 1 (18,3 г, 67,8 ммоль) добавляют к суспензии трет-бутоксида калия (33,55 г,

299,0 ммоль) в сухом диэтиловом эфире (500 мл) при температуре 0°С, обрабатывают Н₂О (1,35 мл, 75,0 ммоль) и энергично перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь выливают в смесь воды со льдом и промывают диэтиловым эфиром (3х). Значение рН водного слоя доводят до кислого значения рН с помощью 10% водного раствора лимонной кислоты при температуре 0°С и экстрагируют этилацетатом (3х). Объединенные органические слои промывают водой (2х), рассолом, сушат (Мд80₄), фильтруют и концентрируют в вакууме, чтобы обеспечить требуемый продукт в виде масла бледно-желтого цвета (10 г, 46,8 ммоль, 69% выход).

Стадия 3. Получение (1К,2К)/(18,28)-2-этил-1-(2-триметилсиланилэтоксикарбониламино)циклопропанкарбоновой кислоты трет-бутилового эфира показано ниже

К суспензии полученного продукта со стадии 2 (10 г, 46,8 ммоль) и 3 г свежеприготовленных активированных 4А молекулярных сит в сухом бензоле (160 мл) добавляют триэтиламин (7,50 мл, 53,8 ммоль) и ΌΡΡΆ (11 мл, 10,21 ммоль). Реакционную смесь нагревают до температуры кипения с обратным холодильником в течение 3,5 ч, обрабатывают 2-триметилсилилэтанолом (13,5 мл, 94,2 ммоль) и нагревают до температуры кипения с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь фильтруют, разбавляют диэтиловым эфиром, промывают последовательно 10% водным раствором лимонной кислоты, водой, насыщенным водным раствором ΝαΙ 10₃, водой (2х) и рассолом (2х), сушат (Мд80₄), фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток суспендируют вместе с 10 г полиизоцианатной поглотительной смолы от Л1с1пс11 в 120 мл дихлорметана, перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и фильтруют, чтобы обеспечить требуемый продукт (8 г, 24,3 ммоль; 52%) в виде масла бледножелтого цвета.

¹Н ЯМР (СЭС1₃) δ 0.03 (с, 9Н), 0.97 (м, 5Н), 1.20 (широкий м, 1Η), 1.45 (с, 9Н), 1.40-1.70 (м, 4Н), 4.16 (м, 2Н), 5.30 (широкий с, 1Η).

Стадия 4. Получение (1К,2К)/(18,28)-1-амино-2-этилциклопропанкарбоновой кислоты третбутилового эфира (рацемическая смесь) показано ниже

- 34 015827

этил 8уп по отношению к карбокси

К продукту со стадии 3 (3 г, 9 ммоль) добавляют 1,0М раствор ТВАР в ТГФ (9,3 мл, 9,3 ммоль). Смесь нагревают до температуры кипения с обратным холодильником в течение 1,5 ч, охлаждают до комнатной температуры и разбавляют 500 мл этилацетата. Раствор последовательно промывают водой (2x100 мл) и рассолом (2x100 мл), сушат (МдЗО₄), фильтруют и концентрируют в вакууме, чтобы обеспечить требуемый продукт.

7Ъ. Общий способ превращения соединений формулы I, несущих Р1-винил-Р1-заместитель в соответствующий насыщенный аналог Р1, как показано

и заместитель винила заместитель этила

СоединениеА Соединение В

Суспензию соединения А (приблизительно 100 мг) и Р1(8)/С (5%, 10 мг) в приблизительно 15 мл Е1ОАс гидрируют Н₂ (30 РЗТ) в течение 0,5 ч. После фильтрования через плотный слой из целита фильтрат концентрируют и очищают, что дает требуемый продукт, соединение В.

8. Получение рацемического (1К,28)/(18,2К)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты этилового эфира.

Схема 1

Стадия 1

......ί......

№₂5О₄₅

ТВМЕ

N СО_ЙЕГ

Стадия 2

--_ΒοΰΗΝ

Вг ц иоьви, толуол, КТ

2) ЮМНС1

3) ЫаОН

4) ВоСрО

Рацемат:

1:1 смесь (1Н.25) и (15,2В)

Стадия 1.

Гидрохлорид этилового эфира глицина (304 г, 2,16 моль) суспендируют в трет-бутилметиловый эфир (1,6 л). Добавляют бензальдегид (231 г, 2,16 моль) и безводный сульфат натрия (155 г, 1,09 моль) и полученную смесь охлаждают до температуры 0°С, используя баню воды со льдом. Добавляют по каплям триэтиламин (455 мл, 3,26 моль) в течение более 30 мин и полученную смесь перемешивают в течение 48 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь гасят путем добавления холодной воды со льдом (1 л) и органический слой отделяют. Водную фазу экстрагируют трет-бутилметиловым эфиром (0,5 л) и органические фазы объединяют и промывают смесью насыщенного водного раствора \а11СО₃ (1 л) и рассолом (1 л). Органический слой сушат над МдЗО₄, фильтруют и концентрируют в вакууме, чтобы обеспечить 392,4 г Ν-бензилиминового продукта в виде густого масла желтого цвета, которое используют непосредственно на следующей стадии.

¹Н ЯМР (СЭС13, 300 МГц) δ 1.32 (т, I = 1А Гц, 3Н), 4.24 (кв, I = 7.1 Гц, 2Н), 4.41 (д, I =1.1 Гц, 2Н), 7.39-7.47 (м, 3Н), 7.78-7.81 (м, 2Н), 8.31 (с, 1Н).

Стадия 2.

К суспензии трет-бутоксида лития (84,1 г, 1,05 моль) в сухом толуоле (1,2 л) добавляют по каплям смесь этилового эфира Ν-бензилиминглицина (100 г, 0,526 моль) и транс-1,4-дибром-2-бутена (107 г, 0,500 моль) в сухом толуоле (0,6 л) в течение более 60 мин. После завершения добавления насыщенного красного цвета смесь гасят путем добавления воды (1 л) и трет-бутилметилового эфира (ТВМЕ, 1 л). Водную фазу отделяют и экстрагируют второй раз ТВМЕ (1 л). Органические фазы объединяют, добавляют 1,0М раствор НС1 (1 л) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Органическую фазу отделяют и экстрагируют водой (0,8 л). Водные фазы затем объединяют, добавляют насыщенный солью раствор (700 г) и ТВМЕ (1 л) и полученную смесь охлаждают до температуры

- 35 015827

0°С. Затем перемешиваемую смесь подщелачивают до значения рН 14 путем добавления по каплям 10,0М раствора №ОН, органический слой отделяют и водную фазу экстрагируют ТВМЕ (2x500 мл). Органические экстракты объединяют, сушат над Мд8О₄, фильтруют и концентрируют до получения объема 1 л. К указанному раствору свободного амина добавляют ВОС₂О или ди-трет-бутилдикарбонат (131 г, 0,600 моль) и полученную смесь перемешивают в течение 4 дней при комнатной температуре. Затем к реакционной смеси добавляют ди-трет-бутилдикарбонат (50 г, 0,23 моль) и полученную смесь нагревают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 3 ч и затем дают возможность остыть до комнатной температуры в течение ночи. Реакционную смесь сушат над Мд8О₄, фильтруют и концентрируют в вакууме, чтобы обеспечить 80 г сырого продукта. Указанный остаток очищают с помощью флешхроматографии (2,5 кг 81О₂, элюируют смесью от 1 до 2% СН₃ОН/СН₂С1₂), чтобы обеспечить 57 г (53%) рацемического N-Βοс-(1К,28)/(18,2К)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты этилового эфи ра в виде масла желтого цвета, которое застывает при стоянии в холодильнике.

¹Н ЯМР (СЭС13, 300 МГц) δ 1.26 (т, I = 7.1 Гц, 3Н), 1.46 (с, 9Н), 1.43-1.49 (м, 1Н), 1.76-1.82 (широкий м, 1Н), 2.14 (кв, I = 8.6 Гц, 1Н), 4.18 (кв, I = 12 Гц, 2Н), 5.12 (дд, 1= 10.3,1.7 Гц, 1н), 5.25 (широкий с, 1Н), 5.29 (дд, I = 17.6, 1.7 Гц, 1Н), 5.77 (ддд, I = 17.6, 10.3, 8.9 Гц, 1Н);

М8 м/е 254.16 (М-1).

9. Разделение N-Вос-(1К,28)/(18,2К)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты этилового эфира.

Разделение А.

К водному раствору натрий фосфатного буфера (0,1М, 4,25 л, рН 8), помещенному в реактор с рубашкой объемом 12 л, поддерживаемому при температуре 39°С и перемешиваемому при 300 об/мин, добавляют 511 г А1еа1азе 2.4Ь (приблизительно 425 мл) (Жуо/ушез ЖгЛ Ашепеа Σηο.). Когда температура смеси достигнет значения 39°С, значение рН доводят до 8,0 путем добавления 50% №ОН в воде. Затем добавляют раствор рацемического N-Вос-(1К,28)/(18,2К)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты этилового эфира (85 г) в 850 мл ЭМ8О в течение более 40 мин. Затем температуру реакционной смеси поддерживают при 40°С в течение 24,5 ч, в течение которых значение рН смеси доводят до 8,0 через 1,5 и 19,5 ч, используя 50% №ОН в воде. Через 24,5 ч энантио-избыток сложного эфира определяют равным 97,2% и полученную реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры (26°С) и перемешивают в течение ночи (16 ч), после чего энантио-избыток сложного эфира определяют равным 100%. Затем значение рН реакционной смеси доводят до 8,5 с помощью 50% №ОН и полученную смесь экстрагируют МТВЕ (2x2 л). Объединенный МТВЕ экстракт затем промывают 5% раствором №НСО₃ (3x100 мл), водой (3x100 мл) и концентрируют в вакууме, что дает энантиомерно чистый N^0041^28)1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты этиловый эфир в виде твердого вещества светложелтого цвета (42,55 г; чистота: 97% @ 210 нм, не содержащее кислоту; 100% энантиомерный избыток (ее)).

Водный слой, полученный в способе экстрагирования, затем подкисляют до значения рН 2 с помощью 50% Н₂8О₄ и экстрагируют МТВЕ (2x2 л). Экстракт МТВЕ промывают водой (3x100 мл) и концентрируют, что дает кислоту в виде твердого вещества светло-желтого цвета (42.74 г; чистота: 99% @ 210 нм, не содержащее сложный эфир).

- 36 015827

	сложный эфир	кислота
Масс спектр высокого разрешения	(+) Ε8Ι, С13Н22>Ю4, [М+Н]+, Вычислено. 256.1549, Найдено 256.1542	(-) ΕδΙ,ϋπΗ,βΝΟ^ [Μ-Н]', Вычислено. 226.1079, Найдено 226.1089
ЯМР регистрируемый химический сдвиг Растворитель СОС13: (протон δ 7.24 част, на млн., С-13 δ 77.0 част, на млн. Вгикег ОКХ-500С: протон 500.032 МГц, углерод 125.746 МГц

Положение	Протон (образец) част. на млн.	С-13 част. на млн.	Протон (образец) част. на млн.	С-13 част, на млн.
1	—	40.9	—	40.7
2	2.10 (кв., 7=9.0 Гц)	34.1	2.17 (кв., 7= 9.0 Гц)	35.0
За	1.76 (широкий)	23.2	1.79 (широкий)	23.4
Положение	Протон (образец) част. на млн.	С-13 част. на млн.	Протон (образец) част. на млн.	С-13 част, на млн.
ЗЬ	1.46 (широкий)		1.51, (широкий)
4	—	170.8	—	175.8
5	5.74 (ддд, 7 = 9.0,10.0, 17.0 Гц)	133.7	5.75 (т)	133.4
6а	5.25 (д, 7 = 17.0 Гц)	117.6	5.28 (д, 7= Гц) = 17.0	118.1
6Ь	5.08 (дд, 7 = 10.0, 1.5 Гц)	5.12 (д, 7 = Гц) = 10.5
7	—	155.8	—	156.2
8	—	80.0	—	80.6
9	1.43 (с)	28.3	1.43 (с)	28.3
10	4.16 (м)	61.3	—	—
11	1.23 (т, 7=7.5 ГЦ)	14.2

Разделение В.

К 0,5 мл 100 мМ Нерз-Ха буферу (рН 8,5) в ячейку 24 ячеечной платы (емкость: 10 мл/ячейка) добавляют 0,1 мл 8ауша§е 16.0Ь (протеазы от ВасШиз с1аизн) (Νονοζνηιυκ \ог111 Лтепса Ыс.) и раствор рацемического №Вос-(1К,28)/(18,2К.)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты этилового эфира (10 мг) в 0,1 мл ΏΜ8Ο. Плату герметизируют и инкубируют при 250 об/мин при температуре 40°С. Через 18 ч энантио-избыток сложного эфира определяют равным 44,3% следующим образом: 0,1 мл реакционной смеси удаляют и смешивают содержимое ячейки с 1 мл этанола; после центрифугирования 10 мкл супернанта анализируют с помощью хиральной НРЬС. К оставшейся реакционной смеси добавляют 0,1 мл ΏΜ8Ο и плату инкубируют еще в течение 3 дней при 250 об/мин при температуре 40°С, после чего в ячейку добавляют 4 мл этанола. После центрифугирования 10 мкл супернанта анализируют с помощью хиральной НРЬС и энантио-избыток сложного эфира определяют равным 100%.

Разделение С.

К 0,5 мл 100 мМ 11ерк-\а буферу (рН 8,5) в ячейку 24-ячеечной платы (емкость: 10 мл/ячейка) добавляют 0,1 мл Езрегазе 8.0Ь (протеазы от ВасШиз Еа1о4игапз) (Nονοζуте8 \ог111 Лтепса Ыс.) и раствор рацемического №Вос-(1К,28)/(18,2К.)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты этилового эфира

- 37 015827 (10 мг) в 0,1 мл ΌΜ8Ο. Плату герметизируют и инкубируют при 250 об/мин при температуре 40°С. Через 18 ч энантио-избыток сложного эфира определяют равным 39,6% следующим образом: 0,1 мл реакционной смеси удаляют и смешивают содержимое ячейки с 1 мл этанола; после центрифугирования 10 мкл супернанта анализируют с помощью хиральной НРЬС. К оставшейся реакционной смеси добавляют 0,1 мл ΌΜ8Ο и плату инкубируют еще в течение 3 дней при 250 об/мин при температуре 40°С, после чего в ячейку добавляют 4 мл этанола. После центрифугирования 10 мкл супернанта анализируют с помощью хиральной НРЬС и энантио-избыток сложного эфира определяют равным 100%. Анализ образцов осуществляют следующим образом.

1) Получение образца: приблизительно 0,5 мл реакционной смеси смешивают в ячейке с 10 об. этанола. После центрифугирования 10 мкл супернанта вводят на НРЬС колонку.

2) Определение превращения:

колонка: УМС ΟΌ8 А, 4.6x50 мм, 8-5 мкм, растворитель: А, 1 мМ раствор НС1 в воде; В, СН₃СЫ, градиент: 30% В в течение 1 мин; от 30 до 45% В в течение более 0,5 мин; 45% В в течение 1,5 мин; от 45 до 30% В в течение более 0,5 мин, скорость потока: 2 мл/мин,

УФ определение: 210 нм, время задержки: кислоту, 1,2 мин; сложный эфир, 2,8 мин.

3) Определение энантио-избытка для сложного эфира: колонка: СШКАСЕЬ ΟΌ-КН, 4.6x150 мм, 8-5 мкм, мобильная фаза: СН₃СЫ/50 мМ раствор НС1О₄ в воде (67/33), скорость потока: 0,75 мл/мин,

УФ определение: 210 нм, время задержки:

(18,2В)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты 5,2 мин;

рацемат (1В,28)/(18,2В)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты этилового эфира 18,5 и 20,0 мин;

(18,2В)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты этилового эфира 18,5 мин.

Разделение Ό.

л 0,3М раствора натрийфосфатного буфера (рН 8), поддерживаемого при температуре 38°С в реакторе с рубашкой объемом 20 л, перемешивают при температуре 130 об/мин. В реактор добавляют 4 л Л1еа1а5С 2.4Ь (Νονοζνιηοδ ΝογΙΙι Атепса 1пс.) и 1 л ΌΙ воды. Когда температура смеси приблизится к 38 С, значение рН доводят до 7.8 с помощью 10Ν раствора №1ОН. В реактор добавляют раствор рацемического №Вос-(1В,28)/(18,2В)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты этилового эфира (500 г) в 5 л ΌΜ8Ο в течение более 1 ч через делительную воронку. Затем температуру реакционной смеси доводят до 48°С. Через 2 ч энантио-избыток сложного эфира достигнет значения 99,3%. Нагревание прекращают через 24 ч и полученную реакционную смесь медленно охлаждают до комнатной температуры (приблизительно 25°С) и перемешивают в течение ночи. Значение рН реакционной смеси доводят до 8,5 с помощью 10Ν раствора №1ОН и полученную смесь экстрагируют МТВЕ (2x4 л).

Объединенный МТВЕ экстракт промывают 5% NаНСΟ₃ (3x400 мл) и водой (3x400 мл) и концентрируют, что дает энантиомерно чистый №Вос-(1В,28)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты этиловый эфир в виде кристалла светло-желтого цвета (259 г; чистота: 96,9% @ 210 нм, не содержащее кислоту; 100% (ее)).

Разделение Е.

л 0.1М натрий фосфатного буфера (рН 8), поддерживаемые при температуре 40°С в реакторе с рубашкой объемом 20 л, перемешивают при 360 об/мин. В реактор добавляют 1,5 л А1са1а§е 2.4Ь (Νονοζ\τικ5 ΝοΠίι Ашепса 1пс.). Когда температура смеси приблизится к 38°С, значение рН доводят до 8,0 с помощью 10Ν раствора №ОН. В реактор добавляют раствор рацемического Ν-Βο^(1Β,28)/(18,2Β)-1амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты этилового эфира (200 г) в 2 л ΌΜ8Ο в течение более 1 ч через делительную воронку. Затем температуру реакционной смеси доводят до 40°С. Через 3 ч значение рН доводят до 8,0 с помощью 10Ν раствора №1ОН. Через 2 ч реакционную смесь охлаждают до температуры 25°С, значение рН реакционной смеси доводят до 8,5 с помощью 10Ν раствора №1ОН и полученную смесь экстрагируют МТВЕ (2x5 л). Объединенный МТВЕ экстракт промывают 5% NаНСΟ₃ (3x500 мл), водой (3x200 мл) и концентрируют, что дает 110 г масла желтого цвета. Масло затвердевает при комнатной температуре в атмосфере лабораторного вакуума и дает энантиомерно чистый Ν-Βο^ (1В,28)/-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты этиловый эфир в виде бесцветного длинностержневого кристалла (101 г; чистота: 97,9% @ 210 нм, не содержащее кислоту; 100% (ее)).

Кристаллическую структуру энантиомерно чистого N-Βοс-(1Я,28)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты этилового эфира характеризуют с помощью простого кристаллографического анализа (Х-гау ΝΒ#: 52795-093, геРюбе: 634592Ν1). Абсолютную конфигурацию не устанавливают изза отсутствия известности хирального центра или тяжелого атома(ов). Структура цепи вдоль кристалло

- 38 015827 графической α-оси образуется через внутримолекулярное водородное связывание между амидной группой и карбонильным атомом кислорода (Ν..Ό 3.159 А).

Структура №Вос-(1К,28)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты этилового эфира:

Кристаллическая система: призматическая

Исходный кристалл: МТВЕ

Пространственная группа: Р2Д2_Х а = 5.2902(1) А а = 90°

Ъ = 13.8946(2) А /3 = 90° с = 19.9768(3) А /= 90°

У= 1468.40(4) А³

Ζ = 4ά_χ= 1.155 г см’³

Νο. рефлексии для параметров пространственной решетки: 6817

Θ диапазон для параметров пространственной решетки (°): 2.2-65.2 Коэффициент поглощения (мм'¹): 0.700

Описание кристалла: Бесцветный стержень

Размеры кристалла (мм): 0.12 х 0.26 х 0.30 Совокупность данных

Температура (К): 293 θ_Μαχ(^ϋ)·. 65.2(СиКа)

Νο. измеренной рефлексии: 7518

Νο. независимой рефлексии: 2390 (Κ_ί№ = 0.0776)

Νο. регистрируемой рефлексии (/ > 2^: 2284 Коэффициент поглощения {Т^-ТтХ: 0.688-1.000

Разделение Р.

л 0,2М Натрийборатного буфера (рН 9) поддерживают при температуре 45°С в реакторе с рубашкой объемом 20 л и перемешивают при 400 об/мин. В реактор добавляют 3 л ϋϊ воды и 4 л 8аушазе 16Ь, тип ЕХ ^оуогушез Νοτΐή Атепса Ыс.). Когда температура смеси приблизится к 45°С, значение рН доводят до 8,5 с помощью 10Ν раствора ΝαΟΙΙ. В реактор добавляют раствор рацемического Ν-Вос(1К,28)/(18,2К)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты этилового эфира (200 г) в 2 л ΌΜ8Ο в течение более 40 мин через делительную воронку. Затем температуру реакционной смеси доводят до 48°С. Через 2 ч значение рН доводят до рН 9,0 с помощью 10Ν раствора ΝαΟΙ I. Через 18 ч, когда энантио-избыток сложного эфира достигнет 72%, значение рН доводят до 9,0 с помощью 10Ν раствора \αΟΙ I. Через 24 ч температуру понижают до 35°С. Через 42 ч температуру повышают до 48°С и значение рН доводят до 9,0 с помощью 10Ν раствора ΝαΟΙ I. Нагревание прекращают через 48 ч и полученную реакционную смесь медленно охлаждают до комнатной температуры (приблизительно 25°С) и перемешивают в течение ночи. Через 66 ч рН реакционной смеси равно 8,6. Смесь экстрагируют МТВЕ (2x4 л). Объединенный МТВЕ экстракт промывают 5% NаНСΟ₃ (6x300 мл), водой (3x300 мл) и концентрируют, что дает энантиомерно чистый N-Вос-(1К,28)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты этиловый эфир в виде кристалла светло-желтого цвета (101А г; чистота: 95,9% @ 210 нм, не содержащее кислоту; 98,6% (ее)).

10. Получение хирального гидрохлорида этилового эфира (1К,28)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты.

О

(1К,28) N-Вос-1-Амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты этиловый эфир (8,5 г, 33,3 ммоль) перемешивают в атмосфере азота с 200 мл 4Ν раствора НС1/диоксан (А1йпсИ) при комнатной температу

- 39 015827 ре в течение 3 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении, поддерживая температуру ниже 40°С. Это дает 6,57 г (~100%) гидрохлорида этилового эфира (1К,28)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты в виде твердого вещества светло-рыжего цвета.

¹Н ЯМР (300 МГц, С1ТО1)) δ 1.31 (т, 1 = 7.0 Гц, 3Н), 1.69-1.82 (м, 2Н), 2.38 (кв, 1 = 8.8 Гц, 1Н), 4.29 (кв, 1 = 7.0 Гц, 2Н), 5.22 (д, 1 = 10.3 Гц, 1Н), 5.40 (д, 1 = 17.2 Гц, 1Н), 5.69-5.81 (м, 1Н).

М8 м/е 156 (М+1).

11. Получение Ы-Вос-(1К,28)-1-амино-2-циклопропилциклопропанкарбоновой кислоты этилового эфира.

Рй(ОАс)₂ эфир, КТ

Раствор Ы-Вос-(1К,28)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты (255 мг, 1.0 ммоль) в диэтиловом эфире (10 мл) обрабатывают ацетатом палладия (5 мг, 0.022 ммоль). Раствор оранжевого/красного цвета помещают в атмосферу азота. Добавляют по каплям избыток диазометана в диэтиловом эфире в течение более 1 ч. Полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Избыток диазометана удаляют, используя ток азота, и полученный раствор концентрируют путем упаривания на роторе, что дает сырой продукт. Флеш-хроматография (10% смесь этилацетат/гексан) обеспечивает 210 мг (78%) (1К,28)-ЫВос-1-амино-2-циклопропилциклопропанкарбоновой кислоты этилового эфира в виде бесцветного масла.

М8 м/е 270 (М+Н).

Получение промежуточных соединений Р1'-Р1.

12. Получение Р1 Р1'.

Схема 1

ΒοοΗΝ. X 1 ^СтЭД^ия1 ΒοοΗΝ. X

МеОН, ТНЕ

Стадия 2

----------------------->·· со1, ови.тнг

О. .0 м

Н₂М

Ферментное выделение единственного изомера

Стадия 1.

К раствору 1(К)-трет-бутоксикарбониламино-2(8)-винилциклопропанкарбоновой кислоты этилового эфира (3.28 г, 13.2 ммоль) в ТГФ (7 мл) и метаноле (7 мл) добавляют суспензию ПОН (1.27 г, 53.0 ммоль) в воде (14 мл). Смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. К смеси добавляют 1,0М раствор ЫаОН (15 мл), воду (20 мл) и этилацетат (20 мл). Смесь встряхивают, фазы разделяют и органическую фазу снова экстрагируют 20 мл 0,5М раствора ЫаОН. Объединенные водные фазы подкисляют 1,0М раствором НС1, пока значение рН не станет равным 4, и затем экстрагируют этилацетатом (3x40 мл). Объединенные органические экстракты промывают рассолом, сушат (Мд8О₄) и фильтруют, чтобы обеспечить требуемый продукт в виде твердого вещества белого цвета (2,62 г, 87%).

¹Н ЯМР (ПМ8О-а₆) δ 1.22-1.26 (м, 1Н), 1.37 (с, 9Н), 1.50-1.52 (м, 1Н), 2.05 (кв, I = 9 Гц, 1Н), 5.04 (д, I = 10 Гц, 1Н), 5.22 (д, I = 17 Гц, 1Н), 5.64-5.71 (м, 1Н), 7.18, 7.53 (с, ЫН (ротамеры, 12.4 (широкий с, 1Н));

ЬС-М8 М8 м/е 228 (М+Н).

Стадия 2.

Раствор продукта со стадии 1 (2,62 г, 11,5 ммоль) и СО! (2,43 г, 15,0 ммоль) в ТГФ (40 мл) нагревают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 50 мин в атмосфере азота. Раствор охлаждают до комнатной температуры и переносят с помощью канюли в раствор циклопропилсульфонамида (1,82 г, 15,0 ммоль) в ТГФ (10 мл). К полученному раствору добавляют ЭВИ (2,40 мл, 16,1 ммоль) и перемешивание продолжают в течение 20 ч. Смесь гасят 1,0М раствором НС1 до значения рН 1 и ТГФ упаривают в вакууме. Суспензию экстрагируют этилацетатом (2x50 мл) и органические экстракты объединяют и сушат (Ыа₂8О₄). Фильтрование, концентрирование и очистка с помощью перекристаллиза

- 40 015827 ции из смеси гексан-этилацетат (1:1) обеспечивают требуемый продукт (2,4 г) в виде твердого вещества белого цвета. Маточный раствор очищают с помощью Вю1аде системы 408 колонка (элюируют 9% раствором ацетона в дихлорметане), что дает вторую порцию требуемого продукта (1,1 г). Обе порции объединяют (общий выход 92%).

¹Н ЯМР: (1)\18О-с1₆) δ 0.96-1.10 (м, 4Н), 1.22 (дд, I = 5.5, 9.5 Гц, 1Н), 1.39 (с, 9Н), 1.70 (т, I = 5.5 Гц, 1Н), 2.19-2.24 (м, 1Н), 2.90 (м, 1Н), 5.08 (д, I = 10 Гц, 1Н), 5.23 (д, I = 17 Гц, 1Н), 5.45 (м, 1н), 6.85, 7.22 (с, ΝΗ (ротамеры));

1,С-\18, Μ8 м/е 331 (М⁺+Н).

Стадия 3.

Раствор продукта со стадии 2 (3,5 г, 10,6 ммоль) в дихлорметане (35 мл) и ТРА (32 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Летучие вещества удаляют в вакууме и остаток суспендируют в 1,0М раствор НС1 в диэтиловом эфире (20 мл) и концентрируют в вакууме. Процесс повторяют один раз. Полученную смесь растирают в порошок с пентаном и фильтруют, что дает указанное в заголовке соединение в виде гигроскопического, твердого вещества грязно-белого цвета (2,60 г, 92%).

¹Н ЯМР (ΌΜ8Θ-ά₆) δ 1.01-1.15 (м, 4Н), 1.69-1.73 (м, 1Н), 1.99-2.02 (м, 1Н), 2.38 (кв, I = 9 Гц, 1Н), 2.92-2.97 (м, 1Н), 5.20 (д, I = 11 Гц, 1Н), 5.33 (д, I = 17 Гц, 1Н), 5.52-5.59 (м, 1Н), 9.17 (широкий с, 3Н);

БС-М8, М8 м/е 231 (М⁺+Н).

13. Получение сульфамидного производного Р1-Р1'.

К раствору (1К,28)-1-трет-бутоксикарбониламино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты (217 мг, 1,194 ммоль) в ТГФ (5 мл) добавляют СЭХ (290 мг, 1,791 ммоль) и полученную реакционную смесь нагревают до температуры кипения с обратным холодильником в течение 45 мин. В другой круглодонной колбе Τ1ΗΜΌ8 (1,0М раствор в гексане, 2,4 мл, 2,4 ммоль) добавляют к раствору Νэтилметилсульфамида (330 мг, 2,388 ммоль) в ТГФ (5 мл) и полученную реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Две реакционные смеси объединяют и перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляют воду, чтобы погасить реакцию, и полученный реакционный раствор экстрагируют этилацетатом. Органический слой отделяют и сушат над Μ§8Θ₄.

Фильтрование и концентрирация дают сырой продукт, который очищают с помощью препаративной НРЬС, чтобы обеспечить требуемый Ν-Вос-защищенный Ν-ацилсульфамид. Вос-защитную группу затем удаляют в виде соединения, растворенного в 4Ν растворе НС1 в диоксане (2 мл), и перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. Концентрирование обеспечивает масло коричневатого цвета в виде НС1 соли (112 мг, 33% выход).

¹Н ЯМР (400 МГц, СОзОЭ) δ 1.16 (т, I = 7.21 Гц, 3Н), 1.68 (дд, I = 10.03, 7.83 Гц, 1Н), 2.15 (м, 1Н), 2.37 (м, 1Н), 2.89 (с, 3Н), 3.30 (м, 2Н), 5.31 (д, I = 10.27 Гц, 1Н), 5.42 (д, I = 17.12 Гц, 3Н), 5.68 (м, 1н). 1,С-\18 (время задержки: 0.883 мин);

Μ8 м/е 270 (М+Ναφ.

Пример 3. Получение соединения по примеру 3.

- 41 015827

Стадия 1.

К раствору (8)-1-(трет-бутоксикарбонил)-4-оксопирролидин-2-карбоновой кислоты (460 мг, 2,0 ммоль) в ТГФ (10 мл) добавляют по каплям 4-бифенилмагнийбромид (0,5М ТГФ, 16,0 мл, 8,0 ммоль) при температуре -50°С. После перемешивания при указанной температуре в течение 4 ч смесь гасят 5% раствором лимонной кислоты, экстрагируют этилацетатом (50 мл). Органический слой промывают рассолом, сушат над М§80₄, фильтруют и концентрируют. Оставшееся твердое вещество повторно перекристаллизовывают из смеси этилацетат: гексан (15:15 мл), чтобы получить на выходе промежуточное соединение 1 в виде твердого вещества белого цвета (415 мг, 54%).

¹Н ЯМР (СО₃0О) δ 1.49, 1.51 (д, 9Н), 2.48-2.51 (м, 1Н), 2.79-2.82 (м, 1Н), 3.75-3.81 (м, 2Н), 4.48-4.53 (м, 1Н), 7.33-7.36 (м, 1Н), 7.43-7.46 (м, 2Н), 7.58-7.65 (м, 6Н);

М8 м/е 384 (М⁺+Н).

Стадия 2.

К охлажденной льдом смеси промежуточного соединения 1 (383 мг, 1,0 ммоль), гидрохлорида циклопропансульфоновой кислоты (1-(К)-амино-2-(8)-винилциклопропанкарбонил)амида (293 мг, 1,1 ммоль) и НАТи (570 мг, 1,5 ммоль) в дихлорметане (10 мл) добавляют диизопропилэтиламин (560 мг, 5,0 ммоль). Образованному раствору дают возможность нагреться до температуры окружающей среды в течение 4 ч и летучие вещества удаляют в вакууме. Остаток растирают в порошок с этилацетатом (100 мл) и фильтруют. Фильтрат промывают 5% раствором лимонной кислоты (50 мл, х2) и рассолом, сушат над М§80₄, фильтруют и концентрируют. Остаток растирают в порошок с метанолом (4 мл), чтобы получить на выходе 314 мг (53%) требуемого продукта, промежуточного соединения 2.

М8 м/е 596 (М⁺+Н).

Стадия 3.

К охлажденной льдом суспензии промежуточного соединения 2 (150 мг, 0,25 ммоль) в 1,4-диоксане (1 мл) добавляют НС1 (4М раствор диоксана, 5 мл). Образованный раствор перемешивают при температуре окружающей среды в течение 2 ч и летучие вещества удаляют в вакууме и сушат в атмосфере высокого вакуума в течение ночи. Продукт используют непосредственно на следующей стадии.

М8 м/е 496 (М⁺+Н).

Стадия 4.

К охлажденной льдом суспензии промежуточного соединения 3 (134 мг, 0,25 ммоль) в дихлорметане (2,5 мл) добавляют по каплям диизопропилэтиламин (560 мг, 5,0 ммоль). К этому образованному раствору добавляют НАТи (144 мг, 0,38 ммоль) и (8)-2-(трет-бутоксикарбонил)-3,3-диметилбутановую кислоту (64 мг, 0,28 ммоль). Конечной смеси дают возможность нагреться до температуры окружающей среды в течение ночи и летучие вещества удаляют в вакууме. Остаток растирают в порошок с этилацетатом (10 мл) и фильтруют. Фильтрат промывают 5% раствором лимонной кислоты (10 мл, х2) и рассолом, сушат над М§80₄, фильтруют и концентрируют.

Остаток очищают с помощью препаративной НРЬС, чтобы получить на выходе 16 мг (9%) требуемого продукта по примеру 4 в виде твердого вещества белого цвета.

¹Н ЯМР (СО₃0О) δ 1.08-1.13 (м, 11Н), 1.27-1.29 (м, 2Н), 1.47-1.53 (м, 10Н), 1.89-1.93 (м, 1Н), 2.26-

2.32 (м, 2Н), 2.68-2.71 (м, 1Н), 2.97-2.99 (м, 1Н), 4.05-4.12 (м, 1Н), 4.34-4.37 (м, 2Н), 4.45-4.47 (м, 1Н), 5.15 (д, 1= 12 Гц, 1Н), 5.33 (д, I = 18.5 Гц, 1Н), 5.77-5.82 (м, 1Н), 7.36-7.37 (м, 1Н), 7.44-7.47 (м, 2Н), 7.62-7.67 (м, 6Н);

М8 м/е 709 (М⁺+Н).

Пример 4. Получение соединения по примеру 4.

- 42 015827

Соединение по Примеру 4

Стадия 1.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 3, стадия 1, за исключением того, что используют фенилмагнийбромид.

¹Н ЯМР (ΏΜ8Ο-ά₆) δ 1.36-1.41 (м, 9Н), 2.25-2.28 (м, 1Н), 2.60-2.64 (м, 1Н), 3.56-3.66 (м, 2Н), 4.274.29 (м, 1Н), 5.50 (с, 1Н), 7.25-7.36 (м, 3Н), 7.46-7.48 (м, 2Н), 12.40 (широкий, 1н);

Μ8 м/е 308 (М⁺+Н).

Стадия 2.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 3, стадия 2, за исключением того, что используют продукт по примеру 4, стадия 1.

Μ8 м/е 520 (М⁺+Н).

Стадия 3.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 3, стадия 3, за исключением того, что используют продукт по примеру 4, стадия 2;

Μ8 м/е 420 (М⁺+Н).

Стадия 4.

Соединение по примеру 4 получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 3, стадия 4, за исключением того, что используют продукт по примеру 4, стадия 3.

¹Н ЯМР (ϋΏ₃ΟΏ) δ 1.08-1.12 (м, 11Н), 1.27-1.28 (м, 2Н), 1.48-1.52 (м, 10Н), 1.89-1.90 (м, 1Н), 2.26-

2.32 (м, 2Н), 2.68-2.71 (м, 1Н), 2.97-2.99 (м, 1Н), 4.05-4.09 (м, 1Н), 4.34-4.35 (м, 2Н), 4.45-4.47 (м, 1Н), 5.14 (д, 1= 12 Гц, 1Н), 5.34 (д, I = 18.5 Гц, 1Н), 5.77-5.82 (м, 1Н), 7.31-7.33 (м, 1Н), 7.37-7.40 (м, 2Н), 7.57-7.59 (м, 2Н);

Μ8 м/е 633 (М⁺+Н).

Пример 5. Получение соединения по примеру 5.

- 43 015827

Стадия 1.

Соединение по Примеру 5

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 3, стадия 1, за исключением того, что используют 2-нафтилмагнийбромид.

¹Н ЯМР (СЭзОЭ) δ 1.50, 1.52 (д, 9Н), 2.54-2.56 (м, 1Н), 2.89-2.91 (м, 1Н), 3.84-3.87 (м, 2Н), 4.51-4.53 (м, 1Н), 7.45-7.52 (м, 2Н), 7.62-7.64 (м, 1Н), 7.85-7.94 (м, 3Н), 7.99 (с, 1Н);

М8 т/е 358 (М⁺+Н).

Стадия 2.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 3, стадия 2, за исключением того, что используют продукт по примеру 5, стадия 1.

М8 м/е 570 (М⁺+Н).

Стадия 3.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 3, стадия 3, за исключением того, что используют продукт по примеру 5, стадия 2.

М8 м/е 470 (М⁺+Н).

Стадия 4.

Соединение по примеру 5 получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 3, стадия 4, за исключением того, что используют продукт по примеру 5, стадия 3.

¹Н ЯМР (СП₃ОП) δ 1.05-1.12 (м, 11Н), 1.28-1.29 (м, 2Н), 1.48-1.53 (м, 10Н), 1.91-1.92 (м, 1Н), 2.252.40 (м, 2Н), 2.75-2.79 (м, 1Н), 2.97-3.00 (м, 1Н), 4.13-4.16 (м, 1Н), 4.38-4.47 (м, 2Н), 5.14 (д, 1 = 12 Гц, 1Н), 5.33 (д, 1= 18.5 Гц, 1Н), 5.77-5.82 (м, 1Н), 7.49-7.51 (м, 2Н), 7.70-7.73 (м, 1Н), 7.86-7.92 (м, 3Н), 8.04 (с, 1Н);

М8 м/е 683 (М⁺+Н).

- 44 015827

Пример 6. Получение соединения по примеру 6.

Стадия 1.

Соединение по Примеру 6

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 3, стадия 1, за исключением того, что используют 4-фторфенилмагнийбромид.

¹Н ЯМР (СП₃ОП) δ 1.48, 1.50 (д, 9Н), 2.44-2.47 (м, 1Н), 2.74-2.95 (м, 2Н), 3.69-3.76 (м, 2Н), 4.45-4.53 (м, 1Н), 7.08-7.12 (м, 2Н), 7.52-7.54 (м, 2Н);

М8 м/е 326 (М⁺+Н).

Стадия 2.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 3, стадия 2, за исключением того, что используют продукт по примеру 6, стадия 1.

М8 м/е 538 (М⁺+Н).

Стадия 3.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 3, стадия 3, за исключением того, что используют продукт по примеру 6, стадия 2.

М8 м/е 438 (М⁺+Н).

Стадия 4.

Соединение по примеру 6 получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 3, стадия 4, за исключением того, что используют продукт по примеру 6, стадия 3.

¹Н ЯМР (СП₃ОП) δ 1.02-1.12 (м, 11Н), 1.26-1.28 (м, 2Н), 1.47-1.52 (м, 10Н), 1.89-1.90 (м, 1Н), 2.25-

2.28 (м, 2Н), 2.55-2.65 (м, 1Н), 2.92-2.99 (м, 1Н), 4.06-4.08 (м, 1Н), 4.25-4.33 (м, 2Н), 4.41-4.49 (м, 1Н), 5.15 (д, 1= 12 Гц, 1Н), 5.32 (д, 1= 18.5 Гц, 1Н), 5.77-5.82 (м, 1Н), 7.09-7.12 (м, 2Н), 7.60-7.63 (м, 2Н);

М8 м/е 651 (М⁺+Н).

- 45 015827

Пример 7. Получение соединения по примеру 7.

Стадия 4

Стадия 5

Пример 7

4-МеО-РПМдВг реагент Десс Мартина

Стадия 1.

К суспензии (28,4К)-метил-4-гидроксипирролидин-2-карбоксилата НС1 соли (5,45 г, 30,0 ммоль), (8)-2-(трет-бутоксикарбонил)-3,3-диметилбутановой кислоты (6,93 г, 30,0 ммоль) и НАТи (17,1 г, 45,0 ммоль) в дихлорметане (100 мл) при температуре 0°С добавляют по каплям диизопропилэтиламин (16,8 г, 150 ммоль). Образованный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, промывают охлажденным льдом, 5% раствором лимонной кислоты и 1М NаΟН (водный раствор) дважды, а затем рассолом, сушат над Μ§8Ο₄ и фильтруют. Фильтрат концентрируют в вакууме, чтобы обеспечить 10,75 г (100%) в виде пены светло-коричневатого цвета.

¹Н ЯМР ^Ώ3ΟΏ) δ 1.04 (с, 9Н), 1.46 (с, 9Н), 2.01-2.06 (м, 1Н), 2.27-2.29 (м, 1Н), 3.73 (с, 3Н), 3.773.87 (м, 2Н), 4.31 (с, 1Н), 4.49 (широкий, 1Н), 4.56 (т, I = 8.5 Гц, 1Н).

Стадия 2.

К раствору продукта по примеру 7, стадия 1 (10,75 г, 30,0 ммоль) в ТГФ (100 мл) и метанола (100 мл) добавляют раствор моногидрата ЬЮН (6,30 г, 150 ммоль) в воде (100 мл). Конечный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Удаляют летучие вещества в вакууме. Остаток подкисляют 1М раствором НС1 (водный раствор) до значения рН, равного 2. Экстрагируют этилацетатом (100 мл). Органический слой промывают 5% раствором лимонной кислоты и рассолом, сушат над Μ§8Ο₄ и фильтруют. Фильтрат концентрируют в вакууме, чтобы обеспечить 8,95 г (87%) требуемого продукта в

- 46 015827 виде пены грязно-белого цвета.

¹Н ЯМР (ΟΌ₃ΟΌ) δ 1.05 (с, 9Н), 1.45 (с, 9Н), 2.03-2.06 (м, 1Н), 2.32-2.36 (м, 1Н), 3.79-3.86 (м, 2Н),

4.32 (широкий, 1Н), 4.49 (широкий, 1Н), 4.54 (т, 1 = 8.5 Гц, 1Н).

Стадия 3.

К раствору продукта из примера 7, стадия 2 (1,95 г, 5,68 ммоль) в этилацетате (150 мл) при температуре 0°С добавляют НС1 соль (1К.,28)-1-амино-№(циклопропилсульфонил)-2-винилциклопропанкарбоксамида (1,51 г, 5,68 ммоль). Смесь перемешивают при той же температуре в течение 5 мин перед добавлением по каплям диизопропилэтиламина (1,91 г, 17,0 ммоль). Образованный прозрачный раствор перемешивают при температуре 0°С еще в течение 5 мин перед добавлением Е1)С (1,41 г, 7,38 ммоль) и ΗΟΒΐ (0,77 г, 5,68 ммоль). Конечную суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Образованный прозрачный раствор промывают охлажденным льдом, 5% раствором лимонной кислоты дважды, насыщенным раствором цитрата натрия (водный раствор) и рассолом соответственно, сушат над Μ§8Ο₄ и фильтруют. Фильтрат концентрируют в вакууме, очищают с помощью флешхроматографии на колонке, элюируя смесью 1:1 гексан-ацетон, чтобы получить на выходе 2,50 г (79%) требуемого продукта в виде пены белого цвета.

¹Н ЯМР 02Ό₃ΟΌ) δ 1.00-1.10 (м, 11Н), 1.24-1.28 (м, 2Н), 1.41-1,46 (м, 10Н), 1.86-1.91 (м, 1Н), 2.002.04 (м, 1Н), 2.12-2.28 (м, 1Н), 2.92-2.99 (м, 1Н), 3.80-3.95 (м, 2Н), 4.30-4.40 (м, 2Н), 4.51 (широкий, 1Н), 5.14 (д, Д = 12 Гц, 1Н), 5.35 (д, Д = 18.5 Гц, 1Н), 5.77-5.82 (м, 1Н);

Μ8 м/е 557 (М⁺+Н).

Стадия 4.

К раствору реагента Десс Мартина (940 мг, 2,2 ммоль) в дихлорметане (20 мл) добавляют продукт по примеру 7, стадия 3 (556 мг, 1,0 ммоль). Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч и концентрируют в вакууме. Остаток растирают в порошок с горячим этилацетатом (10 мл) и фильтруют через диатомитовый фильтр (Целит®). Фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток очищают с помощью флеш-хроматографии на колонке, элюируя смесью 1:1 гексан-ацетон, чтобы получить на выходе 550 мг (99%) требуемого продукта в виде пены белого цвета.

¹Н ЯМР 02Ό₃ΟΌ) δ 1.09-1.14 (м, 11Н), 1.25-1.28 (м, 2Н), 1.43-1.46 (м, 10Н), 1.88-1.91 (м,1Н) 2.22-

2.28 (м, 1Н), 2.51-2.60 (м, 1Н), 2.92-2.96 (м, 1Н), 4.17-4.34 (м, 2Н), 4.77-4.80 (м, 1Н), 5.16 (д, Д = 12 Гц, 1Н), 5.33 (д, Д = 18.5 Гц, 1Н), 5.72-5.82 (м, 1Н);

Μ8 т/е 555 (М⁺+Н).

Стадия 5.

К раствору продукта по примеру 7, стадия 4 (23 мг, 0,05 ммоль) в ТГФ (0,5 мл) при температуре -50°С добавляют по каплям 4-метоксифенилмагнийбромид (0,5 мл, 0,5М раствор в ТГФ, 0,25 ммоль). Образованный раствор перемешивают при той же температуре в течение 2 ч и гасят хлоридом аммония (водный раствор), затем экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают рассолом, сушат над \-1ц8О|, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью препаративной НРЬС, чтобы получить на выходе 4,5 мг (14%) соединения по примеру 7 в виде твердого вещества белого цвета.

¹Н ЯМР ^Ό3ΟΌ) δ 1.09-1.12 (м, 11Н), 1.26-1.28 (м, 2Н), 1.46-1.52 (м, 10Н), 1.89-1.91 (м, 1Н), 2.25-

2.28 (м, 2Н), 2.58-2.65 (м, 1Н), 2.92-2.99 (м, 1Н), 3.81 (с, 3Н), 4.04-4.08 (м, 1Н), 4.25-4.35 (м, 2Н), 4.41-4.49 (м, 1Н), 5.15 (д, Д = 12 Гц, 1Н), 5.32 (д, Д = 18.5 Гц, 1Н), 5.74-5.82 (м, 1Н), 6.92-6.94 (м, 2Н), 7.48-7.50 (м, 2Н);

Μ8 м/е 663 (М⁺+Н).

Пример 8. Получение соединения по примеру 8.

- 47 015827

ОМе

Соединение по Примеру 8

Соединение по примеру 8 получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 7, стадия 5, за исключением того, что используют 4'-метокси-3бифенилмагнийбромид.

¹Н ЯМР (СП₃0П) δ 1.02-1.10 (м, 11Н), 1.29-1.31 (м, 2Н), 1.40-1.50 (м, 10Н), 1.90-1.92 (м, 1Η), 2.252.27 (м, 2Н), 2.68-2.69 (м, 1Η), 2.92-2.98 (м, 1Η), 3.84 (с, 3Н), 4.10-4.15 (м, 1Η), 4.35-4.52 (м, 2Н), 5.15 (д, I = 12 Гц, 1Η), 5.32 (д, I = 18.5 Гц, 1Η), 5.75-5.82 (м, 1Η), 7.00-7.03 (м, 3Н), 7.40-7.60 (м, 5н);

М8 м/е 739 (М⁺+Н).

Пример 9. Получение соединения по примеру 9.

Соединение по Примеру 9

К раствору трет-бутил-(8)-1-{(8)-2-{[(1К,28)-1-(циклопропилсульфонилкарбамоил)-2-винилциклопропил]карбамоил}-4-оксопирролидин-1-ил}-3,3-диметил-1-оксобутан-2-ил-карбамата (77 мг, 0,14 ммоль), полученному в соответствии с методикой, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 7, в ТГФ (5 мл) при температуре -78°С добавляют аллилмагнийбромид (1,0М в диэтиловом эфире, 0,7 мл, 0,7 ммоль). Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Затем ее гасят насыщенным водным раствором №Н₄С1. Смесь экстрагируют этилацетатом, сушат над Мд80₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырой продукт очищают с помощью флеш-хроматографии на колонке с силикагелем, элюируя смесью 2:1 гексан/ацетон, что дает указанный в заголовке продукт (50 мг, 60%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СП₃0П) δ 0.92-0.96 (м, 2Н), 0.93-1.09 (м, 10Н), 1.19-1.25 (м, 2Н), 1.38-1.48 (м, 10Н), 1.83-1.94 (м, 2Н), 2.18-2.31 (м, 2Н), 2.31-2.46 (м, 2Н), 2.88-2.96 (м, 1Η), 3.70 (д, I = 9.82 Гц, 1Η), 3.81 (д, I = 10.32 Гц, 1Η), 4.22 (д, I = 9.32 Гц, 1Η), 4.32 (дд, I = 9.06, 4.78 Гц, 1Η), 5.09-5.20 (м, 3Н), 5.30 (дд, I = 17.25, 1.38 Гц, 1Η), 5.69-5.80 (м, 1Η), 5.87-5.99 (м, 1н), 6.69 (д, I = 9.06 Гц, 1Н);

М8 м/е 619 (\1-\а)'.

Общая методика получения соединений по примерам 10-25.

К раствору трет-бутил-(8)-1-{(8)-2-{[(1К,28)-1 -(циклопропилсульфонилкарбамоил)-2-винилциклопропил]карбамоил}-4-оксопирролидин-1-ил}-3,3-диметил-1-оксобутан-2-илкарбамата (83 мг, 0,15 ммоль) в ТГФ (1-5 мл) при температуре -78°С добавляют реагент Гриньяра (0,75-0,90 ммоль). Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 1-3 ч. Затем ее гасят насыщенным водным раствором ИН₄С1 (1 мл). Смесь нейтрализуют 1Ν раствором НС1, экстрагируют этилацетатом (2х20 мл), сушат над Мд80₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырой продукт очищают с помощью препаративной НРЬС, что дает требуемый продукт.

Пример 10. Получение соединения по примеру 10.

- 48 015827

Е

Соединение по Примеру 10

Соединение по примеру 10 получают, как описано в общей методике, используя (3фторфенил)магнийбромид (1,0М раствор в ТГФ, 0,75 мл, 0,75 ммоль) и 5 мг (6%) полученного продукта.

¹Н ЯМР (400 МГц, С1)₃О1)) δ 0.98-1.01 (м, 2Н), 1.03-1.11 (м, 10Н), 1.21-1.27 (м, 2Н), 1.37-1.51 (м, 10Н), 1.87 (дд, 1 = 8.18, 5.41 Гц, 1Н), 2.18-2.28 (м, 2Н), 2.56-2.64 (м, 1Н), 2.90-2.99 (м, 1Н), 4.03 (д, 1 = 10.83 Гц, 1Н), 4.24 (д, 1 = 10.58 Гц, 1Н), 4.28 (с, 1Н), 4.43 (дд, 1 = 9.06, 4.03 Гц, 1Н), 5.12 (дд, 1= 10.45, 1.64 Гц, 1Н), 5.30 (дд, 1 = 17.12, 1.51 Гц, 1Н), 5.70-5.82 (м, 1Н), 6.99-7.07 (м, 1Н), 7.30-7.41 (м, 3Н);

М8 м/е 651 (М+Н)⁺.

Пример 11. Получение соединения по примеру 11.

Соединение по Примеру 11

Соединение по примеру 11 получают, как описано в общей методике, используя (3метоксифенил)магнийбромид (1,0М раствор в ТГФ, 0,75 мл, 0,75 ммоль) и 7 мг (7%) полученного продукта.

¹Н ЯМР (400 МГц, СОЮО) δ 0.98-1.01 (м, 2Н), 1.03-1.12 (м, 10Н), 1.20-1.27 (м, 2Н), 1.42-1.47 (м, 10Н), 1.87 (дд, 1 = 8.18, 5.41 Гц, 1Н), 2.17-2.29 (м, 2Н), 2.55-2.64 (м, 1н), 2.90-3.00 (м, 1Н), 3.79 (с, 3Н), 3.98-4.06 (м, 1Н), 4.21-4.33 (м, 2Н), 4.43 (дд, 1 = 9.19, 3.90 Гц, 1Н), 5.12 (дд, 1 = 10.45, 1.64 Гц, 1Н), 5.29 (дд, 1 = 17.12, 1.51 Гц, 1Н), 5.69-5.82 (м, 1Н), 6.85 (дд, 1 = 8.06, 2.01 Гц, 1Н), 7.08 (д, 1 = 7.81 Гц, 1Н), 7.14 (с, 1Н), 7.23-7.30 (м, 1Н);

М8 м/е 663 (М+Н)⁺.

Пример 12. Получение соединения по примеру 12.

Соединение по примеру 12 получают, как описано в общей методике, используя (3хлорфенил)магнийбромид (0,5М раствор в ТГФ, 1,8 мл, 0,90 ммоль) и 5 мг (5%) полученного продукта.

¹Н ЯМР (400 МГц, С1ХОО) δ 0.98-1.01 (м, 2Н), 1.03-1.11 (м, 10Н), 1.22-1.27 (м, 2Н), 1.41-1.50 (м, 10Н), 1.87 (дд, 1 = 8,18, 5.41 Гц, 1Н), 2.19-2.28 (м, 2Н), 2.56-2.64 (м, 1Н), 2.90-2.98 (м, 1Н), 4.04 (д, 1 = 10.58 Гц, 1Н), 4.22 (д, 1 = 10.83 Гц, 1Н), 4.27 (с, 1Н), 4.44 (дд, 1 = 9.19, 3.90 Гц, 1Н), 5.12 (дд, 1 = 10.32, 1.51 Гц, 1Н), 5.30 (дд, 1 = 17.12, 1.51 Гц, 1Н), 5.70-5.81 (м, 1Н), 7.28-7.37 (м, 2Н), 7.47 (т, 1 = 7.68 Гц, 1Н), 7.61 (с, 1Н);

М8 м/е 689 (М+№)⁺.

Пример 13. Получение соединения по примеру 13.

- 49 015827

Соединение по примеру 13 получают, как описано в общей методике, используя мтолилмагнийбромид (1,0М раствор в ТГФ, 0,90 мл, 0,90 ммоль) и 11 мг (11%) полученного продукта.

¹Н ЯМР (400 МГц, СП₃ОП) δ 0.99 (с, 2Н), 1.04-1.09 (м, 10Н), 1.21-1.27 (м, 2Н), 1.42-1.47 (м, 10Н),

I. 87 (дд, 1 = 8.31, 5.54 Гц, 1н), 2.18-2.29 (м, 2Н), 2.35 (с, 3Н), 2.56-2.63 (м, 1Н), 2.90-2.98 (м, 1Н), 4.03 (д, 1 =

II. 08 Гц, 1Н), 4.24 (д, 1 = 10.83 Гц, 1н), 4.28-4.32 (м, 1Н), 4.41 (дд, 1 = 9.06, 4.03 Гц, 1Н), 5.12 (дд, 1 = 10.32, 1.51 Гц, 1Н), 5.29 (дд, 1 = 17.25, 1.38 Гц, 1Н), 5.70-5.81 (м, 1Н), 7.11 (д, I = 7.55 Гц, 1Н), 7.23 (т, I = 7.55 Гц, 1Н), 7.32 (д, I = 7.81 Гц, 1Н), 7.37 (с, 1Н));

М8 м/е 669 (МЛа)'.

Пример 14. Получение соединения по примеру 14.

Соединение по Примеру 14

Соединение по примеру 14 получают, как описано в общей методике, используя (3изопропилфенил)магнийбромид (0,5М раствор в ТГФ, 1,5 мл, 0,75 ммоль) и 12 мг (12%) полученного продукта.

¹Н ЯМР (400 МГц, СП₃ОП) δ 0.98-1.01 (м, 2Н), 1.04-1.11 (м, 10Н), 1.22-1.28 (м, 8Н), 1.41-1.47 (м, 10Н), 1.87 (дд, I =8.18, 5.41 Гц, 1Н), 2.18-2.34 (м, 2Н), 2.55-2.63 (м, 1Н), 2.87-2.98 (м, 2Н), 4.00-4.07 (м, 1Н), 4.26 (д, I = 10.83 Гц, 1Н), 4.29-4.33 (м, 1Н), 4.42 (дд, I = 9.06, 4.03 Гц, 1Н), 5.12 (дд, I = 10.45, 1.64 Гц, 1Н), 5.29 (дд, I = 17.12, 1.51 Гц, 1Н), 5.70-5.81 (м, 1Н), 7.17 (д, I = 7.30 Гц, 1Н), 7.24-7.36 (м, 2Н), 7.44 (с, 1Н).

М8 м/е 675 (М+Н)⁺.

Пример 15. Получение соединения по примеру 15.

Соединение по Примеру 15

Соединение по примеру 15 получают, как описано в общей методике, используя (3изопропоксифенил)магнийбромид (0,5М раствор в ТГФ, 1,5 мл, 0,75 ммоль) и 12 мг (12%) полученного продукта.

¹Н ЯМР (400 МГц, СП₃ОП) δ 0.98-1.01 (м, 2Н), 1.04-1.11 (м, 10Н), 1.21-1.27 (м, 2Н), 1.29 (д, 1= 6.04 Гц, 6Н), 1.42-1.47 (м, 10Н), 1.87 (дд, I = 8.18, 5.41 Гц, 1Н), 2.18-2.29 (м, 2Н), 2.55-2.63 (м, 1Н), 2.90-2.99 (м, 1Н), 3.98-4.06 (м, 1Н), 4.23 (д, I = 10.83 Гц, 1Н), 4.29 (с, 1Н), 4.45 (дд, I = 9.32, 3.78 Гц, 1Н), 4.57-4.66 (м, 1Н), 5.12 (дд, I = 10.32,1.76 Гц, 1Н), 5.30 (дд, I = 17.12,1.51 Гц, 1Н), 5.70-5.81 (м, 1Н), 6.83 (дд, I = 8.06, 1.76 Гц, 1Н), 7.05 (д, I = 7.81 Гц, 1Н), 7.12 (с, 1Н), 7.20-7.28 (м, 1Н);

М8 м/е 691 (М+Н)⁺.

- 50 015827

Пример 16. Получение соединения по примеру 16.

Соединение по Примеру 16

Соединение по примеру 16 получают, как описано в общей методике, используя [3-(Ν,Νдиметил)анилин]магнийбромид (0,5М раствор в ТГФ, 1,5 мл, 0,75 ммоль) и 7 мг (7%) полученного продукта.

¹Н ЯМР (400 МГц, СП₃ОП) δ 1.00 (с, 2Н), 1.02-1.13 (м, 9Н), 1.20-1.27 (м, 2Н), 1.40-1.47 (м, 10Н), 1.88 (дд, I = 8.18, 5.41 Гц, 1Н), 2.19-2.29 (м, 2Н), 2.59-2.70 (м, 1Н), 2.90-3.00 (м, 1Н), 3.08-3.19 (м, 6Н), 4.01-4.14 (м, 2Н), 4.24 (д, I = 10.83 Гц, 1Н), 4.28 (с, 1Н), 4.50 (дд, I = 9.44, 3.15 Гц, 1Н), 5.13 (дд, I = 10.32, 1.76 Гц, 1Н), 5.30 (дд, I = 17.25, 1.39 Гц, 1Н), 5.70-5.82 (м, 1Н), 7.16-7.23 (м, 1Н), 7.28-7.36 (м, 1Н), 7.42 (т, I = 7.43 Гц, 1Н), 7.52 (с, 1Н);

М8 м/е 676 (М+Н)⁺.

Пример 17. Получение соединения по примеру 17.

Соединение по Примеру 17

Соединение по примеру 17 получают, как описано в общей методике, используя [3-(1нирролидинилметил)фенил]магнийбромид (0,25М раствор в ТГФ, 3,0 мл, 0,75 ммоль) и 9 мг (9%) полученного продукта.

¹Н ЯМР (400 МГц, СП₃ОП) δ 0.98-1.02 (м, 3Н), 1.04-1.09 (м, 9Н), 1.24 (д, I = 1.51 Гц, 3Н), 1.39-1.51 (м, 11Н), 1.87 (дд, I = 8.31, 5.54 Гц, 1Н), 2.18-2.29 (м, 2Н), 2.35 (с, 3Н), 2.56-2.63 (м, 1Н), 2.90-2.98 (м, 1Н), 4.03 (д, I = 11.08 Гц, 1Н), 4.24 (д, I = 10.83 Гц, 1Н), 4.30 (с, 1Н), 4.41 (дд, I = 9.06, 4.03 Гц, 1Н), 5.12 (дд, I = 10.32, 1.51 Гц, 1Н), 5.29 (дд, I = 17.25, 1.38 Гц, 1Н), 5.70-5.81 (м, 1Н), 7.11 (д, I = 7.55 Гц, 1Н), 7.23 (т, I = 7.55 Гц, 1Н), 7.32 (д, I = 7.81 Гц, 1Н), 7.37 (с, 1Н);

М8 м/е 716 (М+Н)⁺.

Пример 18. Получение соединения по примеру 18.

Соединение по Примеру 18

Соединение по примеру 18 получают, как описано в общей методике, используя [3-(1нинеридинилметил)фенил]магнийбромид (0,25М раствор в ТГФ, 3,0 мл, 0,75 ммоль) и 15 мг (14%) полученного продукта.

¹Н ЯМР (400 МГц, СП₃ОП) δ 0.99-1.04 (м, 5Н), 1.07 (с, 9Н), 1.15-1.26 (м, 3Н), 1.41-1.47 (м, 13Н), 1.77-1.92 (м, 5Н), 2.11-2.40 (м, 2Н), 2.65-2.76 (м, 1Н), 2.86-2.97 (м, 1Н), 4.08-4.19 (м, 2Н), 4.28 (с, 3Н), 4.52 (дд, I = 9.82, 2.77 Гц, 1Н), 5.05-5.15 (м, 1Н), 5.22-5.34 (м, 1Н), 5.72-5.85 (м, 1Н), 7.44 (д, I = 7.20 Гц, 1Н), 7.49 (т, I = 7.43 Гц, 1Н), 7.66 (д, I = 7.55 Гц, 1Н), 7.81 (с, 1Н);

М8 м/е 732 (М+Н)⁺.

Пример 19. Получение соединения по примеру 19.

- 51 015827

Соединение по Примеру 19

Соединение по примеру 19 получают, как описано в общей методике, используя [3-(4морфолинилметил)фенил]магнийбромид (0,25М раствор в ТГФ, 3,0 мл, 0,75 ммоль) и 16 мг (15%) полу ченного продукта.

¹Н ЯМР (400 МГц, СП₃ОП) δ 0.98-1.02 (м, 2Н), 1.07 (с, 9Н), 1.19-1.27 (м, 3Н), 1.40-1.50 (м, 10Н), 1.88 (дд, 1 = 7.93, 5.67 Гц, 1Н), 2.16-2.38 (м, 2Н), 2.60-3.01 (м, 6Н), 3.71-3.83 (м, 4Н), 4.00-4.16 (м, 3н), 4.22 (д, 1 = 10.83 Гц, 1Н), 4.26-4.32 (м, 1Н), 4.48 (дд, 1 = 9.32, 2.77 Гц, 1Н), 5.12 (д, 1 = 10.58 Гц, 1Н), 5.30 (д, 1 = 16.87 Гц, 1Н), 5.70-5.83 (м, 1Н), 6.79 (д, 1 = 8.81 Гц, 1Н), 7.33-7.45 (м, 2Н), 7.56 (д, 1 =8.06 Гц, 1Н), 7.66 (с, 1Н);

Μ8 732 м/е (М+Н)⁺.

Пример 20. Получение соединения по примеру 20.

Соединение по Примеру 20

Соединение по примеру 20 получают, как описано в общей методике, используя [2-(4морфолинилметил)фенил]магнийбромид (0,25М раствор в ТГФ, 3,6 мл, 0,90 ммоль) и 4 мг (4%) получен ного продукта.

¹Н ЯМР (400 МГц, СП₃ОП) δ 0.94-0.98 (м, 2Н), 1.01-1.11 (м, 10Н), 1.16-1.24 (м, 2Н), 1.41-1.48 (м, 10Н), 1.85 (дд, I = 8.06, 5.29 Гц, 1Н), 2.12-2.22 (м, 1н), 2.45 (дд, I = 12.59, 7.55 Гц, 1Н), 2.55-2.68 (м, 4Н), 2.72-2.85 (м, 1Н), 2.87-2.97 (м, 1Н), 3.59-3.84 (м, 6н), 4.00-4.07 (м, 1Н), 4.13-4.21 (м, 1Н), 4.34-4.38 (м, 1Н), 4.47 (д, I = 10.83 Гц, 1Н), 5.10 (дд, I = 10.20, 1.64 Гц, 1Н), 5.26 (дд, I = 17.12, 1.26 Гц, 1Н), 5.68-5.80 (м, 1Н), 6.77 (д, I = 9.57 Гц, 1Н), 7.28-7.40 (м, 3Н), 7.44-7.49 (м, 1Н);

Μ8 м/е (м+Н)⁺.

Пример 21. Получение соединения по примеру 21.

Соединение по Примеру 21

Соединение по примеру 21 получают, как описано в общей методике, используя (3,5диметилфенил)магнийбромид (0,5М раствор в ТГФ, 1,8 мл, 0,90 ммоль) и 7 мг (7%) полученного продукта.

¹Н ЯМР (400 МГц, СП₃ОП) δ 0.97-1.11 (м, 12Н), 1.19-1.27 (м, 2Н), 1.37-1.51 (м, 10Н), 1.87 (дд, I = 8.18, 5.41 Гц, 1Н), 2.15-2.25 (м, 2Н), 2.30 (с, 6Н), 2.54-2.62 (м, 1Н), 2.90-2.98 (м, 1Н), 4.02 (д, I = 10.58 Гц, 1Н), 4.21 (д, I = 10.83 Гц, 1н), 4.27-4.32 (м, 1Н), 4.41 (дд, I = 9.06, 3.78 Гц, 1Н), 5.12 (дд, I = 10.32, 1.51 Гц, 1Н), 5.29 (дд, I = 17.12, 1.51 Гц, 1Н), 5.70-5.81 (м, 1Н), 6.94 (с, 1Н), 7.15 (с, 2Н);

Μ8 м/е 683 (Μ+Να)⁺.

- 52 015827

Пример 22. Получение соединения по примеру 22.

Соединение по Примеру 22

Соединение по примеру 22 получают, как описано в общей методике, используя (4-фтор-3метилфенил)магнийбромид (1,0М раствор в ТГФ, 0,9 мл, 0,90 ммоль) и 8 мг (8%) полученного продукта.

¹Н ЯМР (400 МГц, СОЮО) δ 0.97-1.02 (м, 2Н), 1.03-1.11 (м, 10Н), 1.20-1.27 (м, 2Н), 1.41-1.47 (м, 10Н), 1.87 (дд, 1 = 8.18, 5.41 Гц, 1Н), 2.20-2.25 (м, 1н), 2.27 (д, 1 = 1.51 Гц, 3Н), 2.55-2.63 (м, 1Н), 2.89-2.98 (м, 1Н), 4.03 (д, 1 = 10.83 Гц, 1Н), 4.21 (д, 1 = 10.83 Гц, 1н), 4.26-4.31 (м, 1Н), 4.41 (дд, 1 = 9.19, 3.90 Гц, 1Н), 5.12 (дд, 1 = 10.32, 1.76 Гц, 1Н), 5.30 (дд, 1 = 17.12, 1.26 Гц, 1Н), 5.70-5.81 (м, 1Н), 6.79 (д, 1 = 9.06 Гц, 1Н), 6.96-7.03 (м, 1Н), 7.33-7.40 (м, 1Н), 7.41-7.46 (м, 1Н);

М8 м/е 687 (МГ\а)'.

Пример 23. Получение соединения по примеру 23.

Соединение по Примеру 23

Соединение по примеру 23 получают, как описано в общей методике, используя (3-фтор-4метилфенил)магнийбромид (0,5М раствор в ТГФ, 1,8 мл, 0,90 ммоль) и 5 мг (5%) полученного продукта.

¹Н ЯМР (400 МГц, СОЮО) δ 0.99 (с, 2Н), 1.03-1.10 (м, 10Н), 1.21-1.27 (м, 2Н), 1.42-1.47 (м, 10Н), 1.87 (дд, 1 = 8.31, 5.54 Гц, 1Н), 2.19-2.22 (т, 1 = 8.06 Гц, 1Н), 2.24 (д, 1 = 1.51 Гц, 3Н), 2.54-2.61 (м, 1Н), 2.90-2.98 (м, 1Н), 4.01 (д, 1 = 10.83 Гц, 1Н), 4.22 (д, 1 = 10.83 Гц, 1Н), 4.26-4.30 (м, 1Н), 4.41 (дд, 1 = 9.06, 4.03 Гц, 1Н), 5.12 (дд, 1 = 10.32, 1.76 Гц, 1Н), 5.29 (дд, 1 = 17.25, 1.13 Гц, 1Н), 5.70-5.81 (м, 1Н), 7.20-7.27 (м, 3Н);

М8 м/е 665 (М+Н)⁺.

Пример 24. Получение соединения по примеру 24.

Соединение по Примеру 24

Соединение по примеру 24 получают, как описано в общей методике, используя (2,5диметилфенил)магнийбромид (0,5М раствор в ТГФ, 1,8 мл, 0,90 ммоль) и 5 мг (5%) полученного продукта.

¹Н ЯМР (400 МГц, С1Г00) δ 0.94-0.97 (м, 2Н), 1.02-1.10 (м, 10Н), 1.20-1.26 (м, 2Н), 1.40-1.49 (м, 10Н), 1.86 (дд, 1 = 8.18, 5.41 Гц, 1Н), 2.16 (д, 1 = 4.78 Гц, 1Н), 2.17-2.25 (м, 1Н), 2.28 (с, 3н), 2.48 (с, 3Н), 2.72 (дд, 1 = 12.46, 8.18 Гц, 1Н), 2.88-2.97 (м, 1Н), 4.09 (д, 1 = 10.83 Гц, 1Н), 4.13-4.21 (м, 1Н), 4.37 (д, 1 = 9.32 Гц, 1Н), 4.44 (д, 1 = 10.83 Гц, 1Н), 5.11 (дд, 1 = 10.32, 1.51 Гц, 1Н), 5.28 (дд, 1= 17.12, 1.51 Гц, 1Н), 5.70-5.80 (м, 1Н), 6.82 (д, 1 = 9.57 Гц, 1Н), 6.99 (т, 1 = 7.68 Гц, 1Н), 7.11 (д, 1 = 7.30 Гц, 1Н), 7.17 (д, 1 = 7.81 Гц, 1Н);

М8 м/е 683 (МГ\а)'.

Пример 25. Получение соединения по примеру 25.

- 53 015827

Соединение по Примеру 25

Соединение по примеру 25 получают, как описано в общей методике, используя (5-фтор-2метоксифенил)магнийбромид (0,5М раствор в ТГФ, 1,8 мл, 0,90 ммоль) и 5 мг (5%) полученного продукта.

¹Н ЯМР (400 МГц, ΟΌ₃ΟΌ) δ 1.00-1.10 (м, 11Н), 1.20-1.26 (м, 2Н), 1.40-1.47 (м, 10Н), 1.83-1.89 (м, 1Н), 2.20-2.29 (м, 1Н), 2.34-2.43 (м, 1Н), 2.90-2.98 (м, 1Н), 3.80 (с, 1Н), 3.85 (с, 3Н), 3.93 (д, Д = 10.83 Гц, 1Н), 4.18-4.28 (м, 1Н), 4.45 (д, Д = 10.83 Гц, 1Н), 4.56 (дд, Д = 9.69, 2.64 Гц, 1Н), 5.12 (дд, Д = 10.58, 1.51 Гц, 1Н), 5.30 (д, Д = 17.37 Гц, 1Н), 5.68-5.83 (м, 1Н), 6.75 (д, Д = 8.81 Гц, 1Н), 6.98-7.04 (м, 2Н), 7.36 (д, Д = 10.32 Гц, 1Н);

М8 м/е 703 (Μ+Να)⁺.

Пример 26. Получение соединения по примеру 26.

Соединение по Примеру 26

К раствору продукта из примера 7, стадия 4 (55 мг, 0,10 ммоль) в ТГФ (4 мл) добавляют по каплям (4-феноксифенил)магнийбромид (0,5 М/ТГФ, 1,0 мл, 0,50 ммоль) при температуре -40°С. После перемешивания при указанной температуре в течение 2 ч и затем при температуре 0°С в течение 1 ч смесь гасят 5% раствором лимонной кислоты и экстрагируют ЕЮАс (10 мл). Органический слой промывают рассолом, сушат над Мд8О₄, фильтруют и упаривают. Остаток растирают в порошок с горячим гексаном и фильтруют. Таким образом полученное твердое вещество очищают с помощью препаративной НРЬС, чтобы получить на выходе соединение 100 в виде твердого вещества белого цвета (2,1 мг, 3%).

¹Н ЯМР (СО₃ОО) δ 1.02-1.09 (м, 11Н), 1.26-1.29 (м, 2Н), 1.45-1.50 (м, 10Н), 1.90-1.92 (м, 1Н), 2.25-

2.27 (м, 2Н), 2.68-2.69 (м, 1Н), 2.95-2.99 (м, 1Н), 4.05-4.07 (м, 1Н), 4.35-4.52 (м, 2Н), 5.15 (д, Д = 12 Гц, 1Н), 5.32 (д, Д = 18.5 Гц, 1Н), 5.75-5.82 (м, 1Н), 6.97-7.01 (м, 4Н), 7.15-7.16 (м, 1Н), 7.36-7.39 (м, 2Н), 7.567.58 (м, 2Н);

ЬС-М8 (время задержки: 2.94 мин, способ В), М8 м/е 707 (М⁺-Н₂О).

Пример 27. Получение соединения по примеру 27.

Стадия 1.

К раствору (28,4В)- 1-бензил-2-метил-4-(бифенил-4-ил)-4-гидроксипирролидин-1,2-дикарбоксилата (1,294 г, 3 ммоль) в ТГФ (10 мл) и МеОН (10,00 мл) добавляют предварительно полученный раствор мо

- 54 015827 ногидрата гидроксида лития (0,252 г, 6,00 ммоль) в воде (10,00 мл). Образованный непрозрачный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 6 ч. Разбавляют водой, подкисляют 1М раствором НС1 до значения рН равного 3, экстрагируют ЕЮАс (200 мл). Органический слой промывают 5% раствором лимонной кислоты и рассолом, сушат над Μ§8Ο₄, фильтруют, упаривают. Оставшийся порошок растирают в порошок со смесью 4:1 гексан-ЕЮАс, что дает требуемый продукт (1,20 г, 96% выход) в виде порошка белого цвета.

¹Н ЯМР ^Ώ₃ΟΏ) δ 2.53-2.57 (м, 1Н), 2.79-2.86 (м, 1Н), 3.83-3.90 (м, 2Н), 4.62-4.66 (м, 1Н), 5.16-5.20 (м, 2Н), 7.24-7.46 (м, 8Н), 7.57-7.66 (м, 6Н);

Ι,('’-Μ8 (время задержки: 2,64 мин, способ В), Μ8 м/е 400 (М⁺-НЮ).

Стадия 2.

Предварительно промытый гексаном гидрид калия (73,3 мг, 0,548 ммоль) перемешивают в ДМФА (2,5 мл). Добавляют одной порцией (28,4К)-1-(бензилоксикарбонил)-4-(бифенил-4-ил)-4-гидроксипирролидин-2-карбоновую кислоту (104 мг, 0,249 ммоль) в виде твердого вещества при температуре 0°С. Образованный гель белого цвета перемешивают при той же температуре в течение 30 мин (становится почти прозрачным раствором через указанное время) перед добавлением аллилиодида (0,027 мл, 0,299 ммоль). Конечный непрозрачный раствор перемешивают при той же температуре в течение 2 ч. Гасят охлажденным льдом, 5% раствором лимонной кислоты, экстрагируют ЕЮАс. Промывают органический слой рассолом, сушат над Μ§8Ο₄, фильтруют, упаривают. Очищают с помощью препаративной НРЬС, что дает 35 мг исходного продукта и требуемого продукта (45 мг, 40% выход) в виде твердого вещества белого цвета.

¹Н ЯМР ^Ώ₃ΟΏ) δ 2.56-2.57 (м, 1Н), 2.81-2.84 (м, 1Н), 3.82-3.87 (м, 2Н), 4.69-4.73 (м, 3Н), 5.14-5.23 (м, 3Н), 5.30-5.41 (м, 1Н), 5.87-6.01 (м, 1Н), 7.34-7.46 (м, 8Н), 7.57-7.66 (м, 6Н);

Ι,('’-Μ8 (время задержки: 2.64 мин, способ В), Μ8 м/е 458 (М⁺+Н).

Стадия 1.

К раствору (28,4К)- 1-бензил-2-метил-4-(бифенил-4-ил)-4-гидроксипирролидин-1,2-дикарбоксилата (540 мг, 1,252 ммоль) в уксусном ангидриде (10 мл, 106 ммоль) добавляют по каплям предварительно полученный раствор трифторметансульфоната скандия (61,6 мг, 0,125 ммоль) в ацетонитриле (0,5 мл) при температуре 0°С. Образованный раствор светло-розового цвета перемешивают при той же температуре в течение 1 ч. Гасят насыщенным раствором хлорида аммония, экстрагируют ЕЮАс. Промывают органический слой рассолом, сушат над Μ§8Ο₄, фильтруют, упаривают. Остаток очищают с помощью препаративной НРЬС, что дает требуемый продукт (290 мг, 49%) в виде смеси диастереомеров.

¹Н ЯМР (СЭС1₃) δ 1.97 (с, 1/3Н), 2.00 (с, 2/3Н), 2.42-2.50 (м, 1/3Н), 2.68-2.79 (м, 2/3Н), 3.03-3.05 (м, 2/3Н), 3.24-3.41 (м, 1/3Н), 3.54, 3.77 (с, 1Н, ротамеры), 3.66, 3.79 (с, 2Н, ротамеры), 3.80-3.90 (м, 1/3Н), 4.10-4.19 (м, 2/3 Н), 4.20-4.29 (м, 2/3 Н), 4.49-4.57 (м, 1/3Н), 4.52-4.60 (м, 1Н), 5.09-5.26 (м, 2Н), 7.30-7.56 (м, 14Н);

Ι,('’-Μ8 (время задержки: 2.78 мин, способ В), Μ8 м/е 496 (М⁺-СН₃СО₂₀Н).

Пример 101. Получение соединения по примеру 101.

- 55 015827

Соединение по Примеру 101

Схема 1

Стадия 1.

2-Горлую колбу заполняют измельченным эфиратом магнийбромида (258 мг, 1,0 ммоль). Указанную колбу нагревают на масляной бане при температуре 70°С в атмосфере высокого вакуума в течение 4 ч. После охлаждения колбы на бане со льдом добавляют продукт из примера 7, стадия 4 (110 мг, 0,20 ммоль) вместе с ТГФ (5 мл) и полученную суспензию слегка желтого цвета энергично перемешивают при комнатной температуре в течение ночи.

Стадия 2.

В другую 2-горлую колбу, содержащую 1-(4-бромфенил)-1Н-пиррол (239 мг, 1,0 ммоль) и ТГФ (4 мл), при температуре -78°С добавляют по каплям п-ВиЬ1 (2,5М, 0,4 мл, 1,0 ммоль). Полученную смесь перемешивают при той же температуре в течение 15 мин. Суспензию вводят через канюлю в колбу со стадии 1, которую предварительно охлаждают до температуры -78°С. Конечную смесь перемешивают при той же температуре в течение 2 ч и при температуре 0°С еще в течение 1 ч. Смесь гасят насыщенным раствором ИНдО, разбавляют ЕЮАс и верхнюю органическую фазу отделяют. Органический слой промывают рассолом, сушат над Μ§8Ο₄, фильтруют и упаривают. Остаток растирают в порошок с горячим гексаном и фильтруют. Полученное твердое вещество очищают с помощью препаративной НРЬС, чтобы получить на выходе соединение по примеру 101 в виде твердого вещества белого цвета (16,5 мг, 12%).

¹Н ЯМР (СПДО) δ 1.02-1.09 (м, 11Н), 1.26-1.29 (м, 2Н), 1.45-1.50 (м, 10Н), 1.90-1.92 (м, 1Н), 2.25-

2.27 (м, 2Н), 2.68-2.69 (м, 1Н), 2.95-2.99 (м, 1Н), 4.05-4.07 (м, 1Н), 4.35-4.52 (м, 2Н), 5.15 (д, I = 12 Гц, 1Н), 5.32 (д, I = 18.5 Гц, 1Н), 5.75-5.82 (м, 1Н), 6.30 (м, 2Н), 7.20-7.21 (м, 2Н), 7.48-7.51 (м, 2Н), 7.66-7.68 (м, 2Н);

Ι,('-Μ8 (время задержки: 2.81 мин, способ В), Μ8 м/е 698 (М⁺+Н), 680 (Μ'-Ι Ι₂Ο).

Пример 102. Получение соединения по примеру 102.

Соединение по Примеру 102

Соединение по примеру 102 получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 101, за исключением того, что используют 4'-бром-2-метоксибифенил вместо 1-(4-бромфенил)-1Н-пиррола на стадии 2.

¹Н ЯМР (СПДО) δ 1.02-1.09 (м, 11Н), 1.26-1.29 (м, 2Н), 1.45-1.50 (м, 10Н), 1.90-1.92 (м, 1Н), 2.25-

2.27 (м, 2Н), 2.68-2.69 (м, 1Н), 2.95-2.99 (м, 1Н), 3.80 (с, 3Н), 4.05-4.07 (м, 1Н), 4.35-4.52 (м, 2Н), 5.15 (д, 1= 12 Гц, 1Н), 5,32 (д, I = 18.5 Гц, 1Н), 5.75-5.82 (м, 1Н), 7.00-7.09 (м, 2Н), 7.27-7.34 (м, 2Н), 7.44-7.51 (м, 4Н);

1,С-\18 (время задержки: 2.90 мин, способ В), Μ8 м/е 729 (М⁺+Н), 721 (Μ'-Ι Ι₂Ο).

Пример 103. Получение соединения по примеру 103.

- 56 015827

Соединение по Примеру 103

Стадия 1.

2-Горлую колбу заполняют измельченным гептагидратом хлорида церия(Ш) (373 мг, 1,0 ммоль). Указанную колбу нагревают на масляной бане при температуре 70°С в атмосфере высокого вакуума в течение 20 ч, затем при температуре 100°С в течение 2 ч, затем при температуре 120°С в течение 2 ч и наконец при температуре 160°С в течение 16 ч. После охлаждения колбы на бане со льдом добавляют продукт из примера 7, стадия 4 (110 мг, 0,20 ммоль) и ТГФ (5 мл). Полученную суспензию слегка желтого цвета энергично перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч.

Стадия 2.

В другую 2-горлую колбу, содержащую 2-(4-бромфенил)пиридин (1ОС, 2003, р6959, 233 мг, 1,0 ммоль) и ТГФ (4 мл) при температуре -78°С добавляют по каплям и-ВиЬ1 (2,5 М, 0,4 мл, 1,0 ммоль) и полученную смесь перемешивают при той же температуре в течение 15 мин. Образованную суспензию вводят через канюлю в колбу со стадии 1, которую предварительно охлаждают до температуры -78°С. Конечную смесь перемешивают при той же температуре в течение 2 ч и затем при температуре 0°С еще в течение 1 ч. Смесь гасят насыщенным раствором XI 1.|С1, разбавляют ЕЮАс и верхний органический слой отделяют. Органический слой промывают рассолом, сушат над Мд8О₄, фильтруют и упаривают. Остаток растирают в порошок с горячим гексаном и фильтруют. Полученное твердое вещество очищают с помощью препаративной НРЬС, чтобы получить на выходе соединение по примеру 103 в виде твердого вещества белого цвета (17 мг, 12%).

¹Н ЯМР (СВ3ОВ) δ 1.02-1.09 (м, 11Н), 1.26-1.29 (м, 2Н), 1.45-1.50 (м, 10Н), 1.90-1.92 (м, 1Н), 2.25-

2.27 (м, 2Н), 2.68-2.69 (м, 1Н), 2.95-2.99 (м, 1Н), 4.05-4.07 (м, 1Н), 4.35-4.52 (м, 2Н), 5.15 (д, 1 = 12 Гц, 1Н), 5.32 (д, 1 = 18.5 Гц, 1Н), 5.75-5.82 (м, 1Н), 7.38-7.40 (м, 1Н), 7.71-7.74 (м, 2Н), 7.87-8.00 (м, 4Н), 7.637.64 (м, 1Н);

ЬС-М8 (время задержки: 2,24 мин, способ В), М8 м/е 710 (М⁺+Н).

Пример 104. Получение соединения по примеру 104.

Соединение по Примеру 104

Соединение по примеру 104 получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 101, за исключением того, что используют 2-бромбензо[б]тиазол вместо 1-(4-бромфенил)-1Н-пиррола на стадии 2.

¹Н ЯМР (СВ3ОВ) δ 1.02-1.09 (м, 11Н), 1.26-1.29 (м, 2Н), 1.45-1.50 (м, 10Н), 1.90-1.92 (м, 1Н), 2.25-

2.27 (м, 2Н), 2.68-2.69 (м, 1Н), 2.95-2.99 (м, 1Н), 3.80 (с, 3Н), 4.05-4.07 (м, 1Н), 4.35-4.52 (м, 2Н), 5.15 (д, 1 = 12 Гц, 1Н), 5.32 (д, 1 = 18.5 Гц, 1Н), 5.75-5.82 (м, 1Н), 7.43-7.52 (м, 2Н), 7.93-8.01 (м, 2Н);

ЬС-М8 (время задержки: 2,79 мин, способ В), М8 м/е 690 (м⁺+Н).

- 57 015827

Пример 105. Получение соединения по примеру 105.

Соединение по Примеру 105

Соединение по примеру 105 получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 101, за исключением того, что используют 2-(4-бромфенил)тиазол вместо 1-(4-бромфенил)-1Н-пиррола на стадии 2.

¹Н ЯМР (СП₃0П) δ 1.02-1.09 (м, 11Н), 1.26-1.29 (м, 2Н), 1.45-1.50 (м, 10Н), 1.90-1.92 (м, 1Н), 2.25-

2.27 (м, 2Н), 2.68-2.69 (м, 1Н), 2.95-2.99 (м, 1Н), 3.80 (с, 3Н), 4.05-4.07 (м, 1Н), 4.35-4.52 (м, 2Н), 5.15 (д, Д = 12 Гц, 1Н), 5.32 (д, I = 18.5 Гц, 1Н), 5.75-5.82 (м, 1Н), 7.64 (м, 1Н), 7.72-7.74 (м, 2Н), 7.90 (м, 1Н), 7.987.99 (м, 2Н);

БС-М8 (время задержки: 2.67 мин, способ В), М8 м/е 716 (М⁺+Н).

Получение соединений по настоящему изобретению

Пример 106. Получение соединения 106.

Схема 2

Стадия 1.

К раствору метилсульфоксида (23,90 мл, 337 ммоль) в 1)С\1 (100 мл) при температуре -78°С добавляют по каплям оксалилхлорид (2М в 1)С\-1, 84 мл, 168 ммоль). Образованный раствор перемешивают при той же температуре в течение 30 мин, добавляют по каплям раствор (28,4К)-1-бензил-2-метил-4гидроксипирролидин-1,2-дикарбоксилата (21,38 г, 77 ммоль) в 1)С\1 (100 мл) при температуре -78°С. Образованную суспензию перемешивают при температуре -78°С в течение 2 ч перед добавлением по каплям Ν,Ν-диизопропилэтиламина (66,7 мл, 383 ммоль). Конечный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь промывают охлажденным льдом 1М раствором НС1, 5% раствором лимонной кислоты, а затем рассолом, сушат над Мд80₄, фильтруют и упаривают. Оставшееся масло светло-коричневого цвета очищают с помощью хроматографии на колонке с силикагелем, элюируют

- 58 015827 смесью 4:1, 3:1, затем 2:1 гексан-Е1ОАс, что дает (8)-1-бензил-2-метил-4-оксопирролидин-1,2дикарбоксилат (14,8 г, 70% выход) в виде вязкого масла светло-коричневого цвета.

¹Н ЯМР (СВС1₃) δ 2.58-2.63 (м, 1Н), 2.90-2.99 (м, 1Н), 3.62, 3.77 (с, 3Н, ротамеры), 3.95-4.02 (м, 2Н), 4.82-4.89 (м, 1Н), 5.11-5.24 (м, 2Н), 7.32-7.39 (м, 5Н).

Стадия 2.

К раствору (8)-1-бензил-2-метил-4-оксопирролидин-1,2-дикарбоксилата (14,0 г, 50,5 ммоль) в толуоле (500 мл) при температуре 0°С добавляют по каплям бифенил-4-илмагнийбромид (152 мл, 0,5М раствор в ТГФ, 75,75 ммоль). Образованный раствор светло-желтого цвета перемешивают при той же температуре в течение 1 ч. Гасят ПН₄С1, отделяют органический слой. Водный слой экстрагируют ЕЮАс. Промывают объединенные органические слои рассолом, сушат над Мд8О₄, фильтруют и упаривают. Остаток очищают путем пропускания через плотный слой из силикагеля, элюируют смесью 4:1, 3:1 затем 2:1 и наконец 3:2 гексан-ЕЮАс, чтобы обеспечить 11,70 г твердого вещества белого цвета, которое повторно перекристаллизовывают из смеси ЕЮАс-гексан (50-150 мл), что дает 7,8 г (28,4К)-1-бензил-2метил-4-(бифенил-4-ил)-4-гидроксипирролидин-1,2-дикарбоксилат в виде небольших игл. Маточный раствор концентрируют и очищают с помощью флеш-хроматографии на колонке, элюируют смесью 4:1, 3:1, затем 2:1 и наконец 3:2 гексан-ЕЮАс, чтобы получить на выходе еще 2,41 г требуемого продукта.

¹Н ЯМР (СВС1₃) δ 2.39-2.45 (м, 1Н), 2.70-2.75 (м, 1Н), 3.66, 3.86 (с, 3Н, ротамеры), 3.80-3.90 (м, 1Н), 4.00-4.07 (м, 1Н), 4.62 (дд, 1_Ь2 = 9.5, 28 Гц, 1Н), 5.09-5.15 (м, 1Н), 5.21-5.25 (м, 1Н), 7.31-7.38 (м, 6Н), 7.427.45 (м, 2Н), 7.54-7.59 (м, 6Н);

ЬС-М8 (время задержки: 2.77 мин, способ В), М8 м/е 414 (М'-Н₂О). 370 (М'-Н₂О-СО₂).

Стадия 3.

К раствору (28,4К)-1-бензил-2-метил-4-(бифенил-4-ил)-4-гидроксипирролидин-1,2-дикарбоксилата (8,08 г, 18,73 ммоль) в ДМФА (150 мл) при температуре 0°С добавляют гидрид натрия (0,520 г, 20,60 ммоль). Образованный раствор светло-коричневого цвета перемешивают при той же температуре в течение 30 мин. Добавляют по каплям диметилсульфат (1,949 мл, 20,60 ммоль) при температуре 0°С. Конечный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Гасят 5% раствором лимонной кислоты, экстрагируют ЕЮАс. Органику промывают рассолом, сушат над Мд8О₄, фильтруют и упаривают. Остаток очищают с помощью флеш-хроматографии на колонке с силикагелем, элюируют смесью 4:1, 3:1, затем 2:1 гексан-ЕЮАс до выхода 1,45 г требуемого продукта, который перекристаллизовывают в МеОН (10 мл), чтобы получить на выходе 1,20 г (14,38% выход) в виде твердого вещества белого цвета. 4,50 г исходного продукта также выделяют в течение очистки с помощью флеш-хроматографии на колонке.

¹Н ЯМР (СПС1₃) δ 2.51-2.56 (м, 1Н), 2.85-2.89 (м, 1Н), 2.95, 2.97 (с, 3Н, ротамеры), 3.67, 3.80 (с, 3Н, ротамеры), 3.69-3.86 (м, 1Н), 4.02-4.08 (м, 1Н), 4.62 (дд, Л>₂ = 9.5, 28 Гц, 1Н), 5.09-5.17 (м, 1Н), 5.20-5.29 (м, 1Н), 7.29-7.46 (м, 10Н), 7.57-7.60 (м, 4Н);

ЬС-М8 (время задержки: 2.92 мин, способ В), М8 м/е 446 (М⁺+Н), 414 (М⁺-МеОН), 370 (М'-МеОНСО2).

Стадия 4.

В охлажденный льдом аппарат шейкера Парра, содержащий раствор (28,4К)-1-бензил-2-метил-4(бифенил-4-ил)-4-метоксипирролидин-1,2-дикарбоксилата (1,29 г, 2,90 ммоль) в МеОН (30 мл), добавляют палладий (0,308 г, 0,290 ммоль) на угле (10%). Сосуд помещают в аппарат шейкера Парра в атмосфере водорода при давлении 25 пси в течение 5 ч. Гасят целитом. Фильтруют, упаривают, что дает 0,811 г (91%) требуемого продукта в виде порошка грязно-белого цвета. Указанный продукт используют в течение следующей стадии без дополнительной очистки.

ЬС-М8 (время задержки: 1.92 мин, способ В), М8 м/е 312 (М⁺+Н), 280 (М'-МеОН).

Стадия 5.

К раствору (28,4К)-метил-4-(бифенил-4-ил)-4-метоксипирролидин-2-карбоксилата (500 мг, 1,606 ммоль), (8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутановой кислоты (409 мг, 1,77 ммоль) и НАТи (867 мг, 2,409 ммоль) в ЭСМ (15 мл) добавляют N,N-диизопропилэтиламин (0,839 мл, 4,82 ммоль) при температуре 0°С. Образованный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. Разбавляют ЭСМ, промывают 5% раствором лимонной кислоты и рассолом, сушат над Мд8О₄, фильтруют, упаривают. Остаток очищают с помощью хроматографии на колонке с силикагелем, элюируют смесью 2:1 гексан-ацетон, что дает требуемый продукт (600 мг, 71% выход) в виде пены белого цвета.

Ή-ЯМР (СП₃ОО) δ 1.11 (с, 9Н), 1.42 (с, 9Н), 2.61-2.66 (м, 1Н), 2.71-2.75 (м, 1Н), 3.00 (с, 3Н), 3.75 (с, 3Н), 4.20-4.25 (м, 2Н), 4.30-4.35 (м, 1Н), 4.75-4.79 (м, 1Н), 7.35-7.72 (м, 9Н);

ЬС-М8 (время задержки: 3,04 мин, способ В), М8 м/е 525 (М⁺+Н), 493 (М⁺-МеОН).

- 59 015827

Стадия 6.

К раствору (28,4К)-метил-4-(бифенил-4-ил)-1 -((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоксилата (600 мг, 1,144 ммоль) в ТГФ (5 мл) и МеОН (5,00 мл) добавляют предварительно полученный раствор моногидрата гидроксида лития (96 мг, 2,287 ммоль) в воде (5,00 мл).

Образованный непрозрачный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 8 ч. Удаляют летучие вещества, разбавляют 5% раствором лимонной кислоты, экстрагируют ЕЮАс. Органический слой промывают рассолом, сушат над Мд8О₄, фильтруют и упаривают. Оставшийся порошок (534 мг, 91% выход) повторно перекристаллизовывают из смеси ЕЮАс-гексан (2-4 мл), чтобы получить на выходе 450 мг требуемого продукта в виде кристалла белого цвета.

ЬС-М8 (время задержки: 2,93 мин, способ В), М8 м/е 511 (М⁺+Н), 479 (М⁺-МеОН).

Стадия 7.

К суспензии (28,4К)-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты (255 мг, 0,499 ммоль), (1К,28)-1-амино-Ы(циклопропилсульфонил)-2-винилциклопропанкарбоксамида, п-толуолсульфокислоты (231 мг, 0,549 ммоль) и НАТи (228 мг, 0,599 ммоль) в СН₂С1₂ (5 мл) при температуре 0°С добавляют Ν,Νдиизопропилэтиламин (0,435 мл, 2,497 ммоль). Образованный раствор светло-желтого цвета перемешивают при температуре 0°С в течение 3 ч. Разбавляют ЕЮАс (10 мл), промывают 5% раствором лимонной кислоты и рассолом, сушат над Мд8О₄, фильтруют и упаривают в вакууме. Остаток очищают с помощью препаративной НРЬС (Рйепотепех-Ьипа 30x100 тт 810, от 30% В до 100% В, 15 мин градиентное время, через 20 мин прекращение), что дает соединение 106 (248 мг, 68,7% выход) в виде твердого вещества белого цвета.

¹Н ЯМР (СЭзОЭ) δ 1.01-1.12 (м, 11Н), 1.26-1.27 (м, 2Н), 1.43-1.50 (м, 10Н), 1.87-1.90 (м, 1Н), 2.202.25 (м, 1Н), 2.49-2.57 (м, 2Н), 2.95-2.99 (м, 1Н), 3.11 (с, 3Н), 4.07-4.09 (м, 1Н), 4.22-4.24 (м, 1Н), 4.42 (д, 1 = 9 Гц, 1Н), 4.58-4.60 (м, 1Н), 5.15 (д, 1 = 12 Гц, 1Н), 5.32 (д, 1 = 18.5 Гц, 1Н), 5.75-5.82 (м, 1Н), 7.38-7.39 (м, 1Н), 7.45-7.48 (м, 2Н), 7.57-7.67 (м, 6Н);

ЬС-М8 (время задержки: 2.96 мин, способ В), М8 м/е 723 (М⁺+Н).

Пример 107. Получение соединения 107.

Соединение 107 Схема 3

Стадия 1.

К раствору (28,4К)-метил-4-(бифенил-4-ил)-4-метоксипирролидин-2-карбоксилата (150 мг, 0,482 ммоль), (8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)нон-8-еновой кислоты (144 мг, 0,530 ммоль) и НАТи (260 мг, 0,723 ммоль) в ОСМ (5 мл) добавляют Ν,Ν-диизопропилэтиламин (0,252 мл, 1,445 ммоль) при температуре 0°С. Образованный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Разбавляют

- 60 015827

1)СМ, промывают 5% раствором лимонной кислоты и рассолом, сушат над Мд8О₄, фильтруют и упаривают. Остаток очищают с помощью препаративной НРЬС, чтобы получить на выходе требуемый продукт (140 мг, 51,5% выход) в виде пены белого цвета.

¹Н ЯМР (СП3ОП) δ 1.31-1.57 (м, 15Н), 1.62-1.65 (м, 1Н), 1.78-1.82 (м, 1Н), 2.11-2.13 (м, 2Н), 2.662.69 (м, 1Н), 2.84-2.89 (м, 1Н), 3.00 (с, 3Н), 3.76 (с, 3Н), 4.16 (с, 2Н), 4.30-4.35 (м, 1Н), 4.79-4.81 (м, 1Н), 4.95 (д, 1 = 12 Гц, 1Н), 5.03 (д, 1 = 18.5 Гц, 1Н), 5.83-5.87 (м, 1Н), 7.32-7.39 (м, 1Н), 7.45-7.56 (м, 4Н), 7.647.71 (м, 4Н);

ЬС-М8 (время задержки: 3.20 мин, способ В), М8 м/е 565 (М⁺+Н).

Стадия 2.

К раствору (28,4К)-метил-4-(бифенил-4-ил)-1 -((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)нон-8-еноил)-4метоксипирролидин-2-карбоксилата (166 мг, 0,294 ммоль) в ТГФ (2 мл) и МеОН (2 мл) добавляют предварительно полученный раствор моногидрата гидроксида лития (37 мг, 0,882 ммоль) в воде (2 мл). Образованный непрозрачный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Удаляют летучие вещества в вакууме. Остаток вводят в воду, подкисляют 1М раствором НС1 до значения рН, равного 2. Экстрагируют ЕЮАс. Промывают органический слой 5% раствором лимонной кислоты и рассолом, сушат над Мд8О₄, фильтруют и упаривают.

Оставшееся твердое вещество белого цвета (148 мг, 91% выход) используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

ЬС-М8 (время задержки: 3,14 мин, способ В), М8 м/е 551 (М⁺+Н).

Стадия 3.

К суспензии (28,4К)-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)нон-8-еноил)-4метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты (78 мг, 0,142 ммоль), (1К,28)-1-амино-№-(циклопропилсульфонил)-2-винилциклопропанкарбоксамида, п-толуолсульфокислоты (65,5 мг, 0,156 ммоль) и НАТи (77 мг, 0,212 ммоль) в 1)С\1 (3 мл) добавляют Ν,Ν-диизопропилэтиламин (0,074 мл, 0,425 ммоль) при температуре 0°С. Конечную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Разбавляют ЭСМ, промывают 5% раствором лимонной кислоты и рассолом, сушат над Мд8О₄, фильтруют и упаривают. Остаток очищают с помощью препаративной НРЬС, что дает соединение 107 (64 мг, 59% выход) в виде твердого вещества белого цвета.

¹Н ЯМР (СП3ОЭ) δ 1.11-1.12 (м, 2Н), 1.26-1.28 (м, 2Н), 1.37-1.51 (м, 15Н), 1.64-1.72 (м, 1Н), 1.871.89 (м, 2Н), 2.08-2.11 (м, 2Н), 2.28-2.31 (м, 1Н), 2.95-2.99 (м, 1Н), 3.09 (с, 3Н), 4.19 (д, 1 = 9 Гц, 1Н), 4.384.41 (м, 2Н), 4.95 (д, 1 = 12 Гц, 1Н), 5.03 (д, 1 = 18.5 Гц, 1н), 5.15 (д, 1 = 12 Гц, 1н), 5.32 (д, 1 = 18.5 Гц, 1Н), 5.75-5.84 (м, 2Н), 7.38-7.39 (м, 1Н), 7.45-7.48 (м, 2н), 7.53-7.58 (м, 2Н), 7.63-7.71 (м, 4Н);

ЬС-М8 (время задержки: 3,15 мин, способ В), М8 м/е 763 (М⁺+Н).

Пример 108. Получение соединения 108.

Соединение 108

- 61 015827

Схема 4

Стадия 1.

Гидрид натрия в виде 60% дисперсии в масле (40,0 мг, 1,000 ммоль) промывают гексаном и перемешивают в ДМФА (5 мл). Добавляют одной порцией (28,4К)-1-бензил-2-метил-4-(бифенил-4-ил)-4гидроксипирролидин-1,2-дикарбоксилат (216 мг, 0,5 ммоль) в виде твердого вещества при температуре 0°С. Образованный раствор светло-желтого цвета перемешивают при той же температуре в течение 30 мин перед добавлением бензилбромида (0,072 мл, 0,600 ммоль). Конечный раствор перемешивают при температуре 0°С в течение 2 ч. Гасят охлажденным льдом, 5% раствором лимонной кислоты, экстрагируют ЕЮАс. Промывают органический слой рассолом, сушат над Мд8О₄, фильтруют и упаривают. Остаток очищают с помощью хроматографии на колонке с силикагелем, элюируют смесью 4:1, 3:1, затем 2:1 гексан-ЕЮАс, что дает 64 мг (24% выход) требуемого продукта в виде смеси диастереомеров и 150 мг исходного продукта.

²Н ЯМР (СЭС13) δ 2.28-2.34 (м, 0.5Н), 2.51-2.60 (м, 0.5Н), 2.90-3.02 (м, 1Н), 3.41, 3.55, 3.56, 3.78 (с, 3Н), 3.82-3.99 (м, 1Н), 4.11-4.23 (м, 3Н), 4.41-4.70 (м, 1Н), 5.09-5.29 (м, 2Н), 7.17-7.63 (м, 19Н);

ЬС-М8 (время задержки: 3,18 мин, способ В), М8 м/е 522 (М⁺+Н).

Стадия 2.

В охлажденной льдом аппарат шейкера Парра, содержащий раствор (4К)-1-бензил-2-метил-4(бензилокси)-4-(бифенил-4-ил)пирролидин-1,2-дикарбоксилата (58 мг, 0,111 ммоль) в этилацетате (1 мл) и МеОН (1 мл), добавляют палладий (12 мг, 0,011 ммоль) на угле (10%, вес). Сосуд помещают в аппарат шейкера Парра в атмосфере водорода при давлении 25 пси в течение 3 ч. Гасят целитом. Фильтруют, упаривают, что дает требуемый продукт (38 мг, 88% выход) в виде порошка грязно-белого цвета. Указанный продукт используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

ЬС-М8 (время задержки: 2,36 мин, способ В), М8 м/е 388 (М⁺+Н).

Стадия 3.

К раствору (4К)-метил-4-(бензилокси)-4-(бифенил-4-ил)пирролидин-2-карбоксилата (60 мг, 0,155 ммоль), (8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутановой кислоты (39,3 мг, 0,17 ммоль) и НАТи (84 мг, 0,232 ммоль) в ЭСМ (2 мл) добавляют Ν,Ν-диизопропилэтиламин (0,081 мл, 0,465 ммоль) при температуре 0°С. Образованный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Разбавляют ЭСМ, промывают 5% раствором лимонной кислоты и рассолом, сушат над Мд8О₄, фильтруют и упаривают. Остаток очищают с помощью хроматографии на колонке с силикагелем, элюируют смесью 3:1 гексан-ацетон, что дает требуемый продукт (77 мг, 83% выход) в виде пены белого цвета.

²Н ЯМР (СЭС1₃) δ 1.04, 1.11 (с, 9Н), 1.42, 1.43 (с, 9Н), 2.38-2. 40 (м, 0.5Н), 2.55-2.60 (м, 0.5Н), 2.903.02 (м, 1Н), 3.52, 3.75 (с, 3Н), 4.10-4.18 (м, 2Н), 4.24-4.26 (м, 1Н), 4.34-4.38 (м, 1Н), 4.63-4.64 (м, 0.5Н), 4.80-4.82 (м, 0.5Н), 5.20-5.29 (м, 1Н), 7.16-7.61 (м, 14Н);

ЬС-М8 (время задержки: 3,28 мин, способ В), М8 м/е 601 (М⁺+Н).

Стадия 4.

К раствору (4К)-метил-4-(бензилокси)-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3диметилбутаноил)пирролидин-2-карбоксилата (74 мг, 0,123 ммоль) в ТГФ (1 мл) и МеОН (1 мл) добавляют предварительно полученный раствор моногидрата гидроксида лития (15,5 мг, 0,370 ммоль) в воде (1 мл). Образованный непрозрачный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Удаляют летучие вещества в вакууме. Остаток вводят в воду, подкисляют 1 М раствором НС1 до значения рН, равного 2. Экстрагируют ЕЮАс. Промывают органический слой 5% раствором лимонной кислоты и

- 62 015827 рассолом, сушат над Мд8О₄, фильтруют и упаривают. Оставшееся твердое вещество белого цвета (58 мг, 80% выход) используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

ЬС-М8 (время задержки: 3,19 мин, способ В), М8 м/е 587 (М⁺+Н).

Стадия 5.

К суспензии (4К)-4-(бензилокси)-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3диметилбутаноил^ирролидин^-карбоновой кислоты (63 мг, 0,107 ммоль), (1К,28)-1-амино-Ы(циклопропилсульфонил)-2-винилциклопропанкарбоксамида, п-толуолсульфокислоты (49,7 мг, 0,118 ммоль) и НАТи (58,0 мг, 0,161 ммоль) в дихлорметане (2 мл) добавляют N,N-диизонронилэтиламин (0,056 мл, 0,322 ммоль) при температуре 0°С. Конечную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Разбавляют ЭСМ, промывают 5% раствором лимонной кислоты и рассолом, сушат над Мд8О₄, фильтруют и упаривают. Остаток очищают с помощью препаративной НРЬС (МеОН-вода в виде элюента), чтобы получить на выходе смесь диастереомерных продуктов (48 мг, 55,9% выход) в виде твердого вещества белого цвета. Указанное твердое вещество повторно подвергают препаративной НРЬС (ацетонитрил-вода в виде элюента), чтобы получить гомохиральный продукт (11 мг).

¹Н ЯМР (СП₃ОП) δ 1.05-1.15 (м, 11Н), 1.25-1.31 (м, 2Н), 1.47-1.50 (м, 10Н), 1.80-1.82 (м, 1Н), 2.152.20 (м, 1Н), 2.57-2.70 (м, 2Н), 2.94-2.98 (м, 1Н), 4.08-4.19 (м, 2Н), 4.30 (с, 2Н), 4.45 (д, 1 = 9 Гц, 1Н), 4.724.76 (м, 1Н), 5.13 (д, 1 = 12 Гц, 1Н), 5.28 (д, 1 = 18.5 Гц, 1Н), 5.75-5.82 (м, 1Н), 7.29-7.34 (м, 6н), 7.38-7.40 (м, 2Н), 7.63-7.69 (м, 6Н);

ЬС-М8 (время задержки: 3,22 мин, способ В), М8 м/е 799,5 (М⁺+Н).

Пример 109. Получение соединения 109.

Приблизительно смесь 1:1 изомеров Р1 Соединение 109

Стадия 1. Получение (Е/2)метил-2-(бензилоксикарбониламино)-4,4-дифторбат-2-еноата.

К суспензии трет-бутоксида калия (3,91 г, 34,9 ммоль) в тетрагидрофуране (50 мл) добавляют метил-2-(бензилоксикарбониламино)-2-(диметоксифосфорил)ацетат (10,5 г, 31,7 ммоль) при температуре -78°С в атмосфере Ν2. Смесь перемешивают в течение 30 мин при указанной температуре и затем медленно добавляют 1-этокси-2,2-дифторэтанол (7,99 г, 63,4 ммоль). Полученную смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 18 ч. Затем ее гасят водой, доводят до значения рН 5 путем добавления нескольких капель 1Ν раствора НС1. Смесь экстрагируют ЕЕОАс. Органический слой сушат над Мд8О₄, фильтруют и концентрируют, чтобы получить на выходе 10 г сырого продукта в виде масла желтого цвета. Очистка с помощью Вю1аде системы, элюируя смесью 30% ЕЮАс/гексан, дает 7,12 г (79%) (Е/2)метил-2-(бензилоксикарбониламино)-4,4-дифторбат-2-еноата в виде масла.

ЬС-М8, приблизительно смесь 1:8 изомеров. ЬС-М8, М8 м/е 286 (М+1).

Основной изомер: ¹Н ЯМР (500 МГц, СПС1₃) δ ч. на млн 3.84 (с, 3Н), 5.18 (с, 2Н), 6.21-6.43 (м, 1Н), 6.70 (дт, Е = 55.2 Гц, 1₂ = 5.19, 1Н), 6.90-7.05 (широкий с, 1Н), 7.31-7.50 (м, 5Н).

Стадия 2.

Получение (Е/2)-метил-2-((бензилоксикарбонил)(трет-бутоксикарбонил)амино)-4,4-дифторбат-2еноата показано ниже

- 63 015827

Раствор (Е/2)-метил-2-(бензилоксикарбониламино)-4,4-дифторбат-2-еноата (19 г, 66,6 ммоль), дитрет-бутилдикарбоната (29,1 г, 133 ммоль) и каталитическое количество ОМАР (0,814 г, 6,66 ммоль) в тетрагидрофуране (200 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем его разбавляют ЕЮАс, промывают водой, сушат над Мд8О₄, фильтруют и концентрируют, чтобы получить на выходе 39,1 г сырого продукта в виде бесцветного масла. Очистка с помощью Вкладе системы, элюируя смесью 25% ЕЮАс/гексан, дает 22 г (86%) (Е/2)-метил-2-((бензилоксикарбонил)(трет-бутоксикарбонил)амино)-4,4-дифторбат-2-еноата в виде бесцветного масла.

БС-М8, М8 м/е 408 (М+1+№).

Основной изомер: ¹Н ЯМР (500 МГц, СПС1₃) δ ч. на млн 1.45 (с, 9Н), 3.73 (с, 3Н), 5.21 (с, 2Н), 6.126.39 (дт, 11=54.3 Гц, 1₂=6.10 Гц, 1Н), 6.72-6.81 (м, 1Н), 7.29-7.41 (м, 5Н).

Стадия 3. Получение метил-1-((бензилоксикарбонил)(трет-бутоксикарбонил)амино)-2-(дифторметил)циклопроланкарбоксилата

К смеси гидрида натрия (0,850 г, 21,26 ммоль) в ОМ8О (50 мл) добавляют иодид триметилсульфоксония (4,90 г, 22,25 ммоль) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем добавляют (Е/2)-метил-2-((бензилоксикарбонил)(трет-бутоксикарбонил)амино)-4,4-дифторбат2-еноат (6,4 г, 16,61 ммоль) и полученную смесь нагревают при температуре 80°С в течение 2 ч. Затем реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и перемешивают в течение 18 ч. Добавляют воду (10 мл), а затем 1Ν раствор НС1 и значение рН доводят до 5. Указанную смесь экстрагируют ЕЮАс (3x250 мл). Органический слой промывают водой (20 мл), сушат над Мд8О₄, фильтруют, концентрируют, чтобы получить на выходе 7 г сырого продукта в виде масла желтого цвета. Очистка с помощью Вю1аде системы, элюируя смесью 15% ЕЮАс/гексан, дает 0,8 г метил-1-((бензилоксикарбонил)(третбутоксикарбонил)амино)-2-(дифторметил)циклопропанкарбоксилата в виде масла.

БС-М8, М8 м/е 422 (М+1+№).

Другие 1,35 г с1ез-СЬ/ продукта метил-1-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(дифторметил)циклопропанкарбоксилата также получают в виде масла при очистке с помощью ВЮаде системы.

БС-М8, М8 м/е 288 (М+1+№).

Объединенный выход составляет 42%.

Стадия 4. Получение 1-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(дифторметил)циклопропанкарбоновой кислоты.

Смесь метил-1-((бензилоксикарбонил)(трет-бутоксикарбонил)амино)-2-(дифторметил)циклопропанкарбоксилата (1,05 г, 2,63 ммоль), метил-1-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(дифторметил)циклопропанкарбоксилата (1,43 г, 5,39 ммоль) в МеОН (20 мл) и гидрохлорида натрия (10 мл, 40,0 ммоль) перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрируют и значение рН доводят до рН 4, используя 1Ν раствор НС1. Твердое вещество белого цвета высаживают из раствора и собирают путем фильтрования. Фильтровальную лепешку промывают водой, чтобы получить на выходе 1,2 г сырого продукта в виде твердого вещества белого цвета. Кристаллизация из смеси гексан/ЕЮАс дает 1,0 г (50%) 1-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(дифторметил)циклопропанкарбоновой кислоты в виде твердого вещества белого цвета. Указанное промежуточное соединение выделяют в виде единственного диастереомера, где заместитель СЕ₂Н находится в зуп-положении к карбоксильной группе.

БС-М8, М8 м/е 274 (М+1+№).

¹Н ЯМР (500 МГц, С₄-МеОН) δ ч. на млн 1.31-1.54 (м, 10Н), 1.66-1.86 (м, 1Н), 1.85-2.10 (м, 1Н), 5.92 (т, I = 55.81 Гц, 1Н).

Стадия 5. Получение трет-бутил-1-(циклопропилсульфонилкарбамоил)-2-(дифторметил)циклопролилкарбамата.

- 64 015827

Смесь 1-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(дифторметил)циклопропан карбоновой кислоты (975 мг, 3,88 ммоль) и СЭ! (755 мг, 4,66 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) нагревают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 1 ч. Затем ее охлаждают до комнатной температуры и затем добавляют циклопропансульфонамид (564 мг, 4,66 ммоль), а затем ΏΒϋ (0,702 мл, 4,66 ммоль). Указанную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Затем ее концентрируют в вакууме, разбавляют водой и значение рН доводят до рН 4, используя 1Ν раствор НС1. Кислотный раствор экстрагируют ЕЮЛс, промывают водой (5х15 мл), сушат (М§80₄) и концентрируют в вакууме, чтобы получить на выходе 1,6 г сырого продукта в виде твердого вещества белого цвета. Перекристаллизация из смеси гексан/ЕЮАс дает 1,15 г (84%) трет-бутил-1-(циклопропилсульфонилкарбамоил)-2-(дифторметил)циклопропилкарбамата в виде твердого вещества белого цвета.

ЬС-М8, М8 м/е 377 (М+1+Να).

Ή ЯМР (500 МГц, б₄-Ме0Н) δ ч. на млн 1.03-1.17 (м, 2Н), 1.18-1.25 (м, 1Н), 1.25-1.35 (м, 1Н), 1.391.46 (м, I = 5.49 Гц, 1Н), 1.49 (с, 9Н), 1.90-2.03 (м, 1Н), 2.04-2.20 (м, 1Н), 2.99 (с, 1Н), 5.50-5.89 (м, 1Н).

Стадия 6. Получение 1-амино-к-(циклопропилсульфонил)-2-(дифторметил)циклопропанкарбоксамида, НС1 соль.

НС1 соль

Смесь трет-бутил-1-(циклопропилсульфонилкарбамоил)-2-(дифторметил)циклопропилкарбамата (1,1 г, 3,10 ммоль) и 4Ν раствора НС1/диоксан (10 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем реакционную смесь концентрируют, чтобы получить на выходе 0,93 г (103%) 1-амино-к(циклопропилсульфонил)-2-(дифторметил)циклопропанкарбоксамида, НС1 соль в виде твердого вещества белого цвета.

ЬС-М8, М8 м/е 277 (М+1+Να).

^!Н ЯМР (500 МГц, б₄-Ме0Н) δ ч. на млн 1.07-1.21 (м, 2Н), 1.20-1.37 (м, 2Н), 1.70-1.85 (м, 1Н), 2.212.36 (м, 2Н), 2.96-3.11 (м, 1Н), 5.86-6.13 (дт, В = 55.24 Гц, 1₂ = 5.19 Гц, 1Н).

Стадия 7. Получение соединения 109.

Смесь (28,4К)-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутаноил)-4метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты (30 мг, 0,059 ммоль), 1-амино-к-(циклопропилсульфонил)-2(дифторметил)циклопропанкарбоксамида, НС1 соль (17,08 мг, 0,059 ммоль), НАТи (26,8 мг, 0,071 ммоль) и 1-метилпиперидина (29,1 мг, 0,294 ммоль) в ЭСМ (3 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Затем ее концентрируют в вакууме. Остаток распределяют между ЕЮАс (50 мл) и 5 мл воды, значение рН доводят до рН 4, используя 1Ν раствор НС1. Затем органическую фазу промывают водой (3х5 мл), сушат (М§80₄), фильтруют и концентрируют, чтобы получить на выходе 50 мг сырого продукта в виде твердого вещества белого цвета. Очистка с помощью препаративной НРЬС дает 38 мг соединения 109 в виде твердого вещества белого цвета (смесь ~1:1 двух диастереомеров Р1).

ЬС-М8, М8 м/е 747 (М+1).

Ή ЯМР (500 МГц, б₄-Ме0Н) δ ч. на млн 0.82-1.68 (м, 23Н), 1.89-1.91 (м, 2Н), 2.41-2.74 (м, 2Н), 2.923.05 (м, 1Н), 3.05-3.21 (м, 3Н), 3.98-4.17 (м, 1Н), 4.13-4.29 (м, 1Н), 4.27-4.49 (м, 1Н), 4.49-4.73 (м, 1Н), 5.67-6.14 (м, 1Н), 7.38 (т, I = 7.32 Гц, 1Н), 7.47 (т, I = 7.32 Гц, 2Н), 7.52-7.81 (м, 6Н).

Пример 110. Получение соединения 110.

- 65 015827

Соединение ПО

Промежуточное соединение 111. Получение соединения 111.

Соединение 111

Соединение 111

В охлажденный льдом аппарат шейкера Парра, содержащий раствор трет-бутил-(8)-1-((28,4К)-4(бифенил-4-ил)-2-((1К,28)-1-(циклопропилсульфонилкарбамоил)-2-винилциклопропилкарбамоил)-4метоксипирролидин-1-ил)-3,3-диметил-1-оксобутан-2-илкарбамата в ЕЮАс (1 мл), добавляют палладий (2,061 мг, 1,937 и.моль) на угле (10%, вес). Сосуд помещают на шейкер Парра в атмосферу водорода при давлении 10 пси в течение 2 ч. Гасят целитом. Фильтруют, упаривают. Остаток очищают с помощью препаративной НРЬС, чтобы получить на выходе требуемый продукт (6 мг, 43% выход) в виде твердого вещества белого цвета.

¹Н ЯМР (СП₃ОП) δ 0.98-1.02 (м, 4Н), 1.10-1.14 (м, 10Н), 1.26-1.35 (м, 4Н), 1.29-1.62 (м, 12Н), 2.482.51 (м, 1Н), 2.55-2.61 (м, 1Н), 2.95-2.99 (м, 1Н), 3.11 (с, 3Н), 4.07-4.09 (м, 1Н), 4.22-4.24 (м, 1Н), 4.42 (с, 1Н), 4.58-4.60 (м, 1Н), 7.38-7.39 (м, 1Н), 7.45-7.48 (м, 2Н), 7.57-7.67 (м, 6Н);

1.С-М8 (время задержки: 3,00 мин, способ В), М8 м/е 725 (М⁺+Н), 693 (М⁺-МеОН).

Пример 200. Получение соединения 200.

Стадия 1. Получение (8)-3,3-диметил-2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтоксикарбониламино)масляной кислоты.

- 66 015827

Стадия 1а. Получение угольной кислоты пиридин-2-илового эфира 2,2,2-трифтор-1,1диметилэтилового эфира.

К суспензии КН (1,03 г, 25,8 ммоль) в ТГФ (70 мл) добавляют 1,1,1-трифтор-2-метилпропан-2-ол (3 г, 23,42 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре 0°С в течение 20 мин. Затем к смеси добавляют раствор дипиридин-2-илкарбоната (5,06 г, 23,42 ммоль) в ТГФ (30 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Из раствора выпадает большое количество твердого вещества. Твердое вещество фильтруют и промывают ЕЮАс (30 мл). Объединенный ТГФ/ЕЮАс раствор промывают водой. Органический слой сушат над №₂8О и фильтруют и концентрируют. Полученное твердое вещество белого цвета (1,24 г, 21%) непосредственно используют на следующей стадии.

Стадия 1Ъ. Получение (8)-3,3-диметил-2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтоксикарбониламино)масляной кислоты метилового эфира.

К охлажденному льдом раствору (8)-метил-2-амино-3,3-диметилбутаноата (0,411 г, 2,262 ммоль) в ЭСМ (20 мл) добавляют Ν,Ν-диизопропилэтиламин (1,182 мл, 6,79 ммоль). Образованный раствор перемешивают в течение 5 мин перед добавлением угольной кислоты пиридин-2-илового эфира 2,2,2трифтор-1,1-диметилэтилового эфира (1,24 г, 4,98 ммоль, со стадии 1а) в ОСМ (10 мл). Конечный раствор светло-желтого цвета перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь промывают 5% водным раствором лимонной кислоты, 0,1М водным раствором №ОН и рассолом, затем сушат над №₂8О, фильтруют и упаривают досуха. Остаток очищают с помощью хроматографии на колонке с силикагелем, элюируют смесью (4:1) гексан-Е!ОАс, что дает бесцветное масло в виде продукта (673 мг, 99%).

'Н ЯМР (СБСЦ-б) δ 0.96 (с, 9Н), 1.65 (с, 6Н), 3.73 (с, 3Н), 5.31 (м, 1Н);

ЬСМ8 КТ = 2,72 мин, [М+Ка]⁺=322,3.

Стадия 1с. Получение (8)-3,3-диметил-2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтоксикарбониламино)масляной кислоты.

К раствору (8)-3,3-диметил-2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтоксикарбониламино)масляной кислоты метилового эфира (673 мг, 2,249 ммоль, со стадии 1Ъ) в ТГФ (4 мл) добавляют предварительно полученный раствор моногидрата гидроксида лития (189 мг, 4,50 ммоль) в воде (4,00 мл). Непрозрачный раствор белого цвета перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч. К смеси добавляют другие 100 мг Ь1ОН в 1 мл воды и полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Летучие вещества удаляют и полученную реакционную смесь разбавляют 5% водным раствором лимонной кислоты и экстрагируют ЕЮАс (3x10 мл). Органический слой промывают рассолом, сушат над Nа28О4, фильтруют и упаривают. Сырой продукт (325 мг, 51%) в виде твердого вещества белого цвета используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

ЬСМ8 КТ = 2,55 мин, ^+^^=308,2.

Стадия 2. Получение (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1-[(8)-3,3-диметил-2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтоксикарбониламино)бутирил]-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты метилового эфира.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, за исключением того, что используют (8)-3,3-диметил-2-(2,2,2-трифтор1,1-диметилэтоксикарбониламино)масляную кислоту вместо (8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3

- 67 015827 диметилбутановой кислоты в виде исходного продукта на стадии 5.

¹Н ЯМР (СП₃ОП) δ 1.11 (с, 9Н), 1.57 (с, 3Н), 1.62 (с, 3Н), 2.59 (м, 1Н), 2.76 (м, 1Н), 2.94 (с, 3Н), 3.71 (с, 3Н), 4.12 (м, 1Н), 4.21 (м, 1н), 4.29 (м, 1Н), 4.72 (м, 1Н), 7.31-7.68 (м, 9Н);

1,С’\18 КТ = 3,33 мин, [Μ+Να]⁺=601,2.

Стадия 3. Получение (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1-[(8)-3,3-диметил-2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтоксикарбониламино)бутирил]-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 6, за исключением того, что используют (28,4К)-4-бифенил-4-ил-

1- [(8)-3,3-диметил-2-(2,2,2-трифтор-1,1 -диметилэтоксикарбониламино)бутирил]-4-метоксипирролидин-

2- карбоновой кислоты метиловый эфир вместо (28,4К)-метил-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(третбутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоксилата.

1,С’\18 КТ = 3,26 мин, [Μ+Να]⁺=587,2.

Стадия 4. Получение {(8)-1-[(28,4К)-4-бутил-4-ил-2-((8)-(1К,28)-1-циклопропансульфониламинокарбонил-2-винилциклопропилкарбамоил)-4-метоксипирролидин-1-карбонил]-2,2-диметилпропил} карбаминовой кислоты 2,2,2-трифтор-1,1 -диметилэтилового эфира.

Соединение 200

Соединение 200 получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 7, за исключением того, что используют (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1[(8)-3,3-диметил-2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтоксикарбониламино)бутирил]-4-метоксипирролидин-2карбоновую кислоту вместо (28,4К)-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3диметилбутаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты.

¹Н ЯМР (СП₃ОП) δ 1.12 (с, 9Н), 1.30-1.26 (м, 4Н), 1.43 (м, 1Н), 1.64 (с, 3Н), 1.69(с, 3Н), 1.88 (м, 1Н), 2.22 (м, 1Н), 2.49 (м, 1Н), 2.62 (м, 1Н), 2.96 (м, 1Н), 3.11 (с, 3Н), 4.07 (м, 1Н), 4.23 (м, 1Н), 4.42 (д, I = 9 Гц, 1Н), 4.56 (м, 1Н), 5.15 (д, I = 12 Гц, 1Н), 5.32 (д, I = 18.5 Гц, 1Н), 5.74 (м, 1Н), 7.36-7.70 (м, 9Н);

1,С’\18 КТ = 3,24 мин, [Μ+Να]⁺=799,3.

Пример 201. Получение соединения 201.

Соединение 201

Стадия 1. Получение (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1-((8)-2-трет-бутоксикарбониламино-3-метилбутирил)-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты метилового эфира.

- 68 015827

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, за исключением того, что используют (8)-2-(третбутоксикарбониламино)-3-метилбутановую кислоту (коммерчески доступную от ЛИпсЬ) вместо (8)-2(трет-бутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутановой кислоты в виде исходного продукта на стадии 5.

ΙΧΜ8 КТ = 3,22 мин, [Μ+Να]⁺=533,4.

Стадия 2. Получение (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1-((8)-2-трет-бутоксикарбониламино-3-метилбути-

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 6, за исключением того, что используют (28,4К)-4-бифенил-4-ил1-((8)-2-трет-бутоксикарбониламино-3-метилбутирил)-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты метиловый эфир вместо (28,4К)-метил-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3диметилбутаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоксилата.

ΙΧΜ8 КТ =3,07 мин, [М+Н]⁺=497,4.

Стадия 3. Получение {(8)-1-[(28,4К)-4-бифенил-4-ил-2-((8)-(1К,28)-1-циклопропансульфониламинокарбонил-2-винилциклопропилкарбамоил)-4-метоксипирролидин-1-карбонил]-2-метилпропил} карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир.

Соединение 201 получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 7, за исключением того, что используют (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1((8)-2-трет-бутоксикарбониламино-3-метилбутирил)-4-метоксипирролидин-2-карбоновую кислоту вместо (28,4К)-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутаноил)-4-метокси пирролидин-2-карбоновой кислоты.

'Н ЯМР ^ΏβΟΏ) δ 0.87 (м, 1Н), 0.93 (м, 1Н), 1.00 (м, 4Н), 1.07 (м, 2Н), 1.18-1.30 (м, 4Н), 1.38 (м, 2Н), 1.43 (м, 6Н), 1.85 (м, 1Н), 2.08 (м, 1Н), 2.22 (м, 1Н), 2.49 (м. 1Н), 2.53 (м, 1Н), 2.96 (м, 1Н), 3.07 (с, 3Н), 4.06 (м, 1Н), 4.12 (м, 1Н), 4.22 (т, 1Н), 4.54 (д, I = 9 Гц, 1Н), 5.10 (д, I = 12 Гц, 1Н), 5.27 (д, I = 18.5 Гц, 1Н), 5.74 (м, 1Н), 7.36-7.70 (м, 9Н);

ΙΧ'Μ8 КТ = 3,11 мин, [Μ+Να]⁺=731,2.

Пример 202. Получение соединения 202.

- 69 015827

Соединение 202

Стадия 1. Получение (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1-((8)-2-трет-бутоксикарбониламино-3-метилпен-

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, за исключением того, что используют (28)-2-(третбутоксикарбониламино )-3-метилпентановвую кислоту (коммерчески доступный продукт от АШпсЬ) вместо (8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутановой кислоты в виде исходного продукта на стадии 5.

ΕΕΜ8 КТ = 3,27 мин, [Μ+Να]⁺=547,4.

Стадия 2. Получение (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1-((8)-2-трет-бутоксикарбониламино-3-метилпентаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 6, за исключением того, что используют (28,4К)-4-бифенил-4-ил1-((8)-2-трет-бутоксикарбониламино-3-метилбутирил)-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты метиловый эфир вместо (28,4К)-метил-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3диметилбутаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоксилата.

ΕΕΜ8 КТ = 3,15 мин, [М+Н]⁺=511,5.

Стадия 3. Получение {(8)-1-[(28,4К)-4-бифенил-4-ил-2-((8)-(1К,28)-1-циклопропансульфониламинокарбонил-2-винилциклопропилкарбамоил)-4-метоксипирролидин-1-карбонил]-2-метилбутил}карбаминовой кислоты трет-бутилового эфира.

Соединение 202

Соединение 202 получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 7, за исключением того, что используют (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1((8)-2-трет-бутоксикарбониламино-3-метилпентаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоновую кислоту вместо (28,4К)-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты.

- 70 015827 ¹Н ЯМР (СОЮО) δ 0.91-0.97 (м, 4Н), 1.03 (м, 2Н), 1.10 (м, 2Н), 1.20-1.34 (м, 5Н), 1.40-1.50 (м, 9Н), 1.68 (м, 1Н), 1.88 (м, 1Н), 2.25 (м. 1Н), 2.56 (м, 2Н), 2.98 (м, 1Н), 3.11 (с, 3Н), 4.10 (м, 1Н), 4.22 (м, 2н), 4.63 (д, 1 = 9 Гц, 1Н), 5.15 (д, 1 = 12 Гц, 1Н), 5.32 (д, 1 = 18.5 Гц, 1Н), 5.74 (м, 1Н), 7.36-7.70 (м, 9Н);

1,С\18 КТ = 3,24 мин, [Μ+Να]⁺=745,3.

Пример 203. Получение соединения 203.

Соединение 203

Стадия 1. Получение (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1-((8)-2-трет-бутоксикарбониламино-4-метилпентаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты метилового эфира.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, за исключением того, что используют (8)-2-(третбутоксикарбониламино)-4-метилпентановвую кислоту (коммерчески доступную от А16псй) вместо (8)-2(трет-бутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутановой кислоты в виде исходного продукта на стадии 5.

1,С\18 КТ = 3,26 мин, [Μ+Να]⁺=547,4.

Стадия 2. Получение (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1-((8)-2-трет-бутоксикарбониламино-4-метилпентаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 6, за исключением того, что используют (28,4К)-4-бифенил-4-ил1-((8)-2-трет-бутоксикарбониламино-3-метилбутирил)-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты метиловый эфир вместо (28,4К)-метил-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3диметилбутаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоксилата.

1,С\18 КТ = 3,16 мин, [Μ+Να]⁺=533,5.

Стадия 3. Получение {(8)-1-[(28,4К)-4-бифенил-4-ил-2-((8)-(1К,28)-1-циклопропансульфониламинокарбонил-2-винилциклопропилкарбамоил)-4-метоксипирролидин-1-карбонил]-3-метилбутил}карбаминовой кислоты трет-бутилового эфира.

- 71 015827

Соединение 203

Соединение 203 получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 7, за исключением того, что используют (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1((8)-2-трет-бутоксикарбониламино-4-метилпентаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоновую кислоту вместо (28,4К)-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты.

¹Н ЯМР (СБ₃0Б) δ 0.91-0.98 (м, 2Н), 1.02 (м, 4Н), 1.24-1.32 (м, 6Н), 1.39-1.48 (м, 9Н), 1.64 (м, 1Н), 1.76 (м, 1Н), 1.88 (м, 1Н), 2.30 (м, 1Н), 2.62 (м, 2Н), 2.98 (м, 1Н), 3.11 (с, 3Н), 4.11 (м, 1Н), 4.18 (д, I = 9 Гц, 1Н), 4.37 (м, 1Н), 4.49 (м, 1Н), 5.15 (д, I = 12 Гц, 1Н), 5.32 (д, I = 18.5 Гц, 1Н), 5.74 (м, 1Н), 7.36-7.70 (м, 9Н);

БСМ8 КТ = 3,24 мин, [М+Ка]⁺=745,3.

Пример 204. Получение соединения 204.

Соединение 204

Стадия 1а. Получение (8)-2-(адамантан-1-илоксикарбониламино)-3,3-диметилмасляной кислоты метилового эфира.

К смеси (8)-метил-2-амино-3,3-диметилбутаноата (200 мг, 1,377 ммоль) и ΌΙΕΆ (0,481 мл, 2,75 ммоль) в растворе БСМ (2 мл) добавляют 1-адамантилфторформиат (334 мг, 1,515 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Соединение очищают с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (20% ЕЮЛс/80% гексан), что дает бесцветное масло (358 мг, 68%) в виде продукта.

¹Н ЯМР (СБС1₃-а) δ 0.94 (с, 9Н), 1.62 (с, 6Н), 2.07 (с, 6Н), 2.13 (с, 3Н), 3.70 (с, 3Н), 4.07 (д, I = 9 Гц, 1Н), 5.09 (широкий с, 1Н, ΝΠ);

БСМ8 КТ = 3,05 мин, [М+Н]⁺=324,4.

Стадия 1Ь. Получение (8)-2-(адамантан-1-илоксикарбониламино)-3,3-диметилмасляной кислоты.

ΓΎ) η ^н? %ν^ογ^Νν_ο

К раствору (8)-2-(адамантан-1-илоксикарбониламино)-3,3-диметилмасляной кислоты метилового эфира (358 мг, 1,107 ммоль) в ТГФ (4 мл) и МеОН (4 мл) добавляют предварительно полученный раствор моногидрата гидроксида лития (93 мг, 2,214 ммоль) в воде (4,00 мл). Непрозрачный белого цвета раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч. Летучие вещества удаляют и полученную реакционную смесь разбавляют разбавленным раствором лимонной кислоты и экстрагируют ЕЮЛс (3х10 мл). Органический слой промывают рассолом, сушат над Να₂80₄, фильтруют и упаривают, чтобы получить твердое вещество белого цвета (291,4 мг, 85%) в виде продукта. Сырой продукт используют без дополнительной очистки.

БСМ8 КТ = 2,91 мин, [М+Н]⁺=310,4.

Стадия 2. Получение (28,4К)-1-[(8)-2-(адамантан-1-илоксикарбониламино)-3,3-диметилбутирил]-4

- 72 015827 бифенил-4-ил-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты метилового эфира.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 5, за исключением того, что используют (8)-2-(адамантан-1илоксикарбониламино)-3,3-диметилмасляную кислоту вместо (8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3диметилбутановой кислоты.

ЬСМ8 ВТ = 3,63 мин, [Μ+Να]⁺=625,4.

Стадия 3. Получение (28,4В)-1-[(8)-2-(адамантан-1-илоксикарбониламино)-3,3-диметилбутирил]-4бифенил-4-ил-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 6, за исключением того, что используют (28,4В)-1-[(8)-2(адамантан-1-илоксикарбониламино)-3,3-диметилбутирил]-4-бифенил-4-ил-4-метоксипирролидин-2карбоновой кислоты метиловый эфир вместо (28,4В)-метил-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(третбутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоксилата.

ЬСМ8 ВТ = 3,16 мин, [М+№]⁺=611,3.

Стадия 4. Получение {(8)-1-[(28,4В)-4-бифенил-4-ил-2-((8)-(1В,28)-1-циклопропансульфониламинокарбонил-2-винилциклопропилкарбамоил)-4-метоксипирролидин-1-карбонил]-2,2-диметилпропил] карбаминовой кислоты адамантан-1-илового эфира.

Соединение 204 получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 7, за исключением того, что используют (28,4В)-1-[(8)-2-(адамантан1-илоксикарбониламино)-3,3-диметилбутирил]-4-бифенил-4-ил-4-метоксипирролидин-2-карбоновую кислоту вместо (28,4В)-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутаноил)4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты.

¹Н ЯМР (СП₃ОП) δ 1.00-1.10 (м, 10Н), 1.22-1.31 (м, 3Н), 1.43 (м, 1Н), 1.64-1.71 (м, 6Н), 1.88 (м, 1Н), 1.97-2.22 (м, 10Н), 2.50 (м, 1Н), 2.63 (м, 1Н), 2.98 (м, 1Н), 3.11 (с, 3Н), 4.04 (д, I = 9 Гц, 1Н), 4.23 (м, 1Н), 4.38 (м, 1Н), 4.57 (м, 1Н), 5.12 (д, I = 12 Гц, 1Н), 5.32 (д, I = 18.5 Гц, 1Н), 5.77 (м, 1Н), 7.33-7.67 (м, 9Н);

ЬСМ8 ВТ = 3,43 мин, [М+Н]⁺=801,4.

Пример 205. Получение соединения 205.

- 73 015827

Стадия 1а. Получение (8)-2-(3-адамантан-1-илуреидо)-3,3-диметилмасляной кислоты метилового эфира.

К смеси (8)-метил-2-амино-3,3-диметилбутаноата (200 мг, 1,377 ммоль) и ОША (0,481 мл, 2,75 ммоль) в растворе 1)СМ (2 мл) добавляют 1-адамантилизоцианат (334 мг, 1,515 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Соединение очищают с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (20% Е!ОАс/80% гексан), что дает твердое вещество белого цвета (265 мг, 59%) в виде продукта.

¹Н ЯМР (СПС1₃-ф δ 0.94 (с, 9Н), 1.64 (с, 6Н). 1.93 (с, 6Н), 2.04 (с, 3Н), 3.70 (с, 3Н),. 4.24 (д, 1 = 9 Гц, 1Н), 4.34 (широкий с, 1Н, ЫН), 4.88 (широкий с, 1Н, ЫН);

ЬСМ8 КТ = 2,87 мин, [М+Н]⁺=323,4.

Стадия 1Ь. Получение (8)-2-(3-адамантан-1-илуреидо)-3,3-диметилмасляной кислоты.

К раствору (8)-2-(3-адамантан-1-илуреидо)-3,3-диметилмасляной кислоты метилового эфира (265 мг, 0,822 ммоль) в ТГФ (4 мл) и МеОН (4 мл) добавляют предварительно полученный раствор моногидрата гидроксида лития (69 мг, 1,644 ммоль) в воде (4,00 мл). Непрозрачный белого цвета раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч. Летучие вещества удаляют и полученную реакционную смесь разбавляют разбавленным раствором лимонной кислоты и экстрагируют ЕЮАс (3x10 мл). Органический слой промывают рассолом, сушат над \а₂8О, фильтруют, упаривают, чтобы получить твердое вещество белого цвета (232 мг, 92%) в виде продукта. Сырой продукт используют без дополнительной очистки.

ЬСМ8 КТ = 3,09 мин, [М+Н]⁺=309,4.

Стадия 2. Получение (28,4К)-1-[(8)-2-(3-адамантан-1-илуреидо)-3,3-диметилбутирил]-4-бифенил-4ил-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты метилового эфира.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 5, за исключением того, что используют (8)-2-(3-адамантан-1илуреидо)-3,3-диметилмасляную кислоту вместо (8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутановой кислоты.

ЬСМ8 КТ = 3,51 мин, |М-\а|'624,4.

Стадия 3. Получение (28,4К)-1-[(8)-2-(3-адамантан-1-илуреидо)-3,3-диметилбутирил]-4-бифенил-4ил-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты.

- 74 015827

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 6, за исключением того, что используют (28,4К)-1-[(8)-2-(3адамантан-1-илуреидо)-3,3-диметилбутирил]-4-бифенил-4-ил-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты метиловый эфир вместо (28,4К)-метил-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)3,3-диметилбутаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоксилата.

ЬСМ8 КТ = 3,42 мин, [М+Н]⁺=588,3.

Стадия 4. Получение (28,4К)-1-[(8)-2-(3-адамантан-1-илуреидо)-3,3-диметилбутирил]-4-бифенил-4ил-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты ((1К,28)-1 -циклопропансульфониламинокарбонил-2винилциклопропил)амида.

Соединение 205 получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 7, за исключением того, что используют (28,4К)-1-[(8)-2-(3адамантан-1-илуреидо)-3,3-диметилбутирил]-4-бифенил-4-ил-4-метоксипирролидин-2-карбоновую кислоту вместо (28,4К)-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутаноил)-4метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты.

¹Н ЯМР (СП₃ОП) δ 1.05-1.11 (м, 9Н), 1.23-1.33 (м, 5Н), 1.41 (м, 1Н), 1.72 (с, 6Н), 1.87 (м, 1Н), 1.972.05 (м, 8Н), 2.21 (м, 1Н), 2.56 (м, 1Н), 2.63 (м, 1Н), 2.95 (м, 1Н), 3.11 (с, 3Н), 4.06 (д, 1 = 9 Гц, 1Н), 4.21 (м, 1Н), 4.46 (м, 1Н), 4.67 (м, 1Н), 5.12 (д, 1 = 12 Гц, 1Н), 5.28 (д, 1 = 18.5 Гц, 1Н), 5.77 (м, 1Н), 7.33-7.67 (м, 9Н);

ЬСМ8 КТ = 3,40 мин, |М-\а|'800,5. Пример 206. Получение соединения 206.

Соединение 206

Стадия 1а. Получение (8)-2-(3-трет-бутилуреидо)-3,3-диметилмасляной кислоты метилового эфира.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 205, стадия 1а, за исключением того, что используют трет-бутилизоцианат вместо 1-адамантилизоцианат.

ЬСМ8 КТ = 2,24 мин, [М+Н]⁺=245,2.

Стадия 1Ъ. Получение (8)-2-(3-трет-бутилуреидо)-3,3-диметилмасляной кислоты.

- 75 015827

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 205, стадия 1Ь, за исключением того, что используют (8)-2-(3-трет бутилуреидо)-3,3-диметилмасляной кислоты метиловый эфир вместо (8)-2-(3-адамантан-1-илуреидо)3,3-диметилмасляной кислоты метилового эфира.

¹Н ЯМР (СВСМ) δ 1.00 (с, 9Н), 1.56 (с, 9Н), 3.49 (с, 1Н);

ЬСМ8 КТ = 0,96 мин, [М+Н]⁺=231,3.

Стадия 2. Получение (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1-[(8)-2-(3-трет-бутилуреидо)-3,3-диметилбутирил]-4метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты метилового эфира.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, за исключением того, что используют (8)-2-(3-трет-бутилуреидо)-3,3диметилмасляную кислоту в виде исходного продукта на стадии 5.

ЬСМ8 КТ = 3,26 мин, [М+№]⁺=546,3.

Стадия 2. Получение (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1-[(8)-2-(3-трет-бутилуреидо)-3,3-диметилбутирил]-4метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 6, за исключением того, что используют (28,4К)-4-бифенил-4-ил1-[(8)-2-(3-трет-бутилуреидо)-3,3-диметилбутирил]-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты метиловый эфир вместо (28,4К)-метил-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3диметилбутаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоксилата.

ЬСМ8 КТ = 3,14 мин, |М-\а|'532,3.

Стадия 3. Получение (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1-[(8)-2-(3-трет-бутилуреидо)-3,3-диметилбутирил]-4метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты ((1К,28)-1 -циклопропансульфониламинокарбонил-2винилциклопропил)амида.

Соединение 206 получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 7, за исключением того, что используют (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1[(8)-2-(3-трет-бутилуреидо)-3,3-диметилбутирил]-4-метоксипирролидин-2-карбоновую кислоту вместо (28,4К)-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты.

- 76 015827 ¹Н ЯМР (СБС1₃-а) δ 1.03-1.08 (м, 12Н), 1.23-1.38 (м, 11Н). 1.75 (м, 1Н), 1.92 (м, 1Н), 2.08 (м, 1Н), 2.47 (м, 1Н), 2.96 (м, 1Н), 3.11 (с, 3Н), 4.10 (м, 1Н), 4.49 (м, 1Н), 4.53 (д, I = 9 Гц, 1Н), 4.80 (м, 1Н), 5.11 (д, I = 12 Гц, 1Н), 5.28 (д, I = 18.5 Гц, 1Н), 5.74 (м, 1Н), 7.57-7.61 (м, 4Н), 7.40-7.46 (м, 5Н);

ЬСМ8 КТ = 3,26 мин, [М+Н]⁺=722,4.

Пример 207. Получение соединения 207 и соединения 208.

Соединение 207

Соединение 208

Стадия 1. Получение 2-(3-метоксифениламино)-3,3-диметилмасляной кислоты.

К смеси 3-метоксианилина (100 мг, 0,812 ммоль) и триметилпировиноградной кислоты (211 мг, 1,624 ммоль) в метаноле (3 мл) при комнатной температуре добавляют уксусную кислоту (0,930 мл, 16,24 ммоль). Смесь перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре, затем нагревают при температуре 70°С в течение 2 ч. Смесь охлаждают до комнатной температуры перед введением цианотригидробората натрия (1,624 мл, 1,624 ммоль). Затем ее перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Добавляют воду (10 мл) и полученную смесь экстрагируют этилацетатом (3x10 мл). Органический слой промывают насыщенным раствором \а11С’О₃, раствором рассола и затем сушат над \а₂8О.|, фильтруют и упаривают досуха. Остаток очищают с помощью препаративной НРЬС, что дает твердое вещество белого цвета (30,5 мг, 16%) в виде продукта.

ЬСМ8 КТ = 3,46 мин, [М+Н]⁺=238,2.

Стадия 2. Получение (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1-[(8)-2-(3-трет-бутилуреидо)-3,3-диметилбутирил]-4метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты метилового эфира.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 5, за исключением того, что используют 2-(3метоксифениламино)-3,3-диметилмасляную кислоту вместо (8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3диметилмасляной кислоты.

ЬСМ8 КТ = 3,31 мин, [М+Н]⁺=531,5.

Стадия 2. Получение (28,4К)-4-бифенил-4-ил-4-метокси-1-[2-(3-метоксифениламино)-3,3диметилбутирил]-пирролидин-2-карбоновой кислоты.

- 77 015827

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 6, за исключением того, что используют (28,4К)-4-бифенил-4-ил1-[(8)-2-(3-трет-бутилуреидо)-3,3-диметилбутирил]-4-метоксинирролидин-2-карбоновой кислоты метиловый эфир вместо (28,4К)-метил-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3диметилбутаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоксилата.

ЬСМ8 КТ = 3,20 мин, [М+Н]⁺=517,3.

Пример 207. Получение соединения 207 и соединения 208.

Соединение 207 и соединение 208 получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 7, за исключением того, что используют (28,4К)4-бифенил-4-ил-4-метокси-1-[2-(3-метоксифениламино)-3,3-диметилбутирил]нирролидин-2-карбоновую кислоту вместо (28,4К)-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутаноил)4-метоксинирролидин-2-карбоновой кислоты. Реакционную смесь разделяют с помощью препаративной НРЬС, чтобы получить на выходе соединение 207 (28,4К)-4-бифенил-4-ил-4-метокси-1-[(8)-2-(3метоксифениламино)-3,3-диметилбутирил]нирролидин-2-карбоновой кислоты ((1К,28)-1-циклонронансульфониламинокарбонил-2-винилциклопронил)амид и соединение 208 (28,4К)-4-бифенил-4-ил4-метокси-1-[(К)-2-(3-метоксифениламино)-3,3-диметилбутирил]нирролидин-2-карбоновой кислоты ((1К,28)-1 -циклопронансульфониламинокарбонил-2-винилциклопронил)амид.

Соединение 207: ¹Н ЯМР (СЭС1₃-б) δ 1.00-1.10 (м, 2Н), 1.14 (с, 9Н), 1.31-1.43 (м, 3Н), 1.92 (м, 1Н), 2.03 (м, 1Н), 2.44 (м, 1Н), 2.91-2.98 (м, 2Н), 3.00 (с, 3Н), 3.69 (с, 3Н), 3.75 (м, 1Н), 3.95 (д, I = 10 Гц, 1Н),

4.36 (д, I = 9 Гц, 1Н), 4.57 (д, I = 9 Гц, 1Н), 5.15 (д, I = 12 Гц, 1Н), 5.28 (д, I = 18.5 Гц, 1Н), 5.72 (м, 1Н), 6.17 (с, 1Н), 6.21 (д, I = 9.0 Гц, 1Н), 6.25 (д, I = 9.0 Гц, 1Н), 7.00 (т, 1Н), 7.34 (м, 3Н), 7.45 (м, 2Н), 7.58 (м, 4Н);

ЬСМ8 КТ = 3,29 мин, [М+Н]⁺=729,4.

Соединение 208: ¹Н ЯМР (СЭС1₃-б) δ 1.09 (с, 9Н), 1.30 (м, 2Н), 1.44 (м, 1Н), 1.56 (м, 2Н), 1.95 (м, 1Н), 2.64 (м, 1Н), 2.72 (м, 1Н), 2.86 (м, 2Н), 2.90 (с, 3Н), 3.77 (м, 1Н), 3.80 (с, 3Н), 4.01 (д, I = 10 Гц, 1Н), 4.60 (д, I = 9 Гц, 1Н), 4.66 (д, I = 9 Гц, 1Н), 5.11 (д, I = 12 Гц, 1Н), 5.28 (д, I = 18.5 Гц, 1Н), 5.86 (м, 1Н),

6.36 (с, 1Н), 6.37 (д, I = 9.0 Гц, 1Н), 6.43 (д, I = 9.0 Гц, 1Н), 7.12 (т, 1Н), 7.39 (т, 1Н), 7.44-7.48 (м, 4Н), 7.59 (д, I = 9 Гц, 2Н), 7.66 (д, I = 9 Гц, 2Н);

ЬСМ8 КТ = 3,37 мин, [М+Н]⁺=729,4.

Пример 208. Получение соединения 209 и соединения 210.

- 78 015827

Стадия 1. Получение 2-(3,4-дифторфениламино)-3,3-диметилмасляной кислоты.

.. О

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 207, стадия 1, за исключением того, что используют 3,4-дифторанилина вместо 3-метоксианилина.

ΕΕΜ8 КТ = 2,64 мин, [М+Н]⁺=244,2.

Стадия 2. Получение (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1-[2-(3,4-дифторфениламино)-3,3-диметилбутирил]-4метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты метилового эфира.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 207, стадия 2, за исключением того, что используют 2-(3,4-дифторфениламино)-3,3-диметилмасляную кислоту вместо 2-(3-метоксифениламино)-3,3-диметилмасляной кислоты.

ΕΕΜ8 КТ = 3,37 мин, [М+Н]⁺=537,5.

Стадия 2. Получение (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1-[2-(3,4-дифторфениламино)-3,3-диметилбутирил]-4метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты.

Указанный продукт получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 6, за исключением того, что используют (28,4К)-4-бифенил-4-ил1-[2-(3,4-дифторфениламино)-3,3-диметилбутирил]-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты метиловый эфир вместо (28,4К)-метил-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутаноил)-4-метоксипирролидин-2-карбоксилата.

ΕΕΜ8 КТ = 3,26 мин, [М+Н]⁺=523,3.

Пример 208. Получение соединения 209 и соединения 210.

- 79 015827

Соединение 209 Соединение 210

Соединение 209 и соединение 210 получают с помощью методики, аналогичной методике, описанной для получения соединения по примеру 106, стадия 7, за исключением того, что используют (28,4К)4-бифенил-4-ил-1-[2-(3,4-дифторфениламино)-3,3-диметилбутирил]-4-метоксипирролидин-2-карбоновую кислоту вместо (28,4К)-4-(бифенил-4-ил)-1-((8)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3,3-диметилбутаноил)4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты. Реакционную смесь разделяют с помощью препаративной НРЬС, чтобы получить на выходе соединение 209 (28,4К)-4-бифенил-4-ил-1-[(8)-2-(3,4-дифторфениламино)-3,3-диметилбутирил]-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты ((1К,28)-1-циклопропансульфониламинокарбонил-2-винилциклопропил)-амид и соединение 210 (28,4К)-4-бифенил-4-ил1-[(К)-2-(3,4-дифторфениламино)-3,3-диметилбутирил]-4-метоксипирролидин-2-карбоновой кислоты ((1К,28)-1-циклопропансульфониламинокарбонил-2-винилциклопропил)амид.

Соединение 209:

¹Н ЯМР (СПС1₃-й) δ 1.00-1.10 (м, 2Н), 1.14 (с, 9Н), 1.31-1.43 (м, 3Н), 1.92 (м, 1Н), 2.03 (м, 1Н), 2.44 (м, 1Н), 2.91-2.98 (м, 2Н), 3.00 (с, 3Н), 3.71 (д, I = 10 Гц, 1Н), 3.80 (д, I = 10 Гц, 1Н), 4.36 (д, I = 9 Гц, 1Н), 4.57 (д, I = 9 Гц, 1Н), 5.15 (д, I = 12 Гц, 1Н), 5.28 (д, I = 18.5 Гц, 1Н), 5.74 (м, 1Н), 6.26 (с, 1Н), 6.41 (м, 1Н), 6.86 (кв, 1Н), 7.26 (м, 1Н), 7.29-7.39 (м, 2Н), 7.45 (т, 2Н), 7.58 (т, 4Н);

ЬСМ8 КТ = 3,05 мин, [М+№]⁺=757.3.

Соединение 210:

¹Н ЯМР (СПС13-й) δ 1.00-1.10 (м, 3Н), 1.07 (с, 9Н), 1.48 (м, 2Н), 1.65 (м, 1Н), 2.03 (м, 1Н), 2.69 (м, 1Н), 2.87 (м, 1Н), 2.90 (с, 3Н), 3.71 (д, I = 10 Гц, 1Н), 3.90 (д, I = 10 Гц, 1Н), 4.34 (д, I = 9 Гц, 1Н), 4.61 (д, I = 9 Гц, 1Н), 4.66 (д, I = 9 Гц, 1Н), 5.15 (д, I = 12 Гц, 1Н), 5.28 (д, I = 18.5 Гц, 1Н), 5.89 (м, 1Н), 6.28 (с, 1Н), 6.60 (м, 1Н), 7.03 (кв, 1Н), 7.39 (т, 1Н), 7.44-7.48 (м, 4Н), 7.59 (д, I = 9 Гц, 2Н), 7.66 (д, I = 9 Гц, 2Н);

ЬСМ8 КТ = 3,13 мин, [М+Н]⁺=757,3.

Пример 209. Получение соединения 211.

Биологические исследования

Исследования НСУ N83/4Α протеазного ферментного комплекса и клеточные исследования НСУ репликона применяют в настоящем описании и подготавливают, проводят и подтверждают следующим образом.

Получение рекомбинантного НСУ Ν83/4Α протеазного комплекса

НСУ N83 протеазные комплексы, полученные из штамма ВМ8, штамма Н77 или штамма .141,68, создают, как описано ниже. Эти очищенные рекомбинантные белки получают для применения в гомогенном исследовании (см. ниже) для выявления того, насколько эффективны будут соединения настоящего раскрытия в ингибировании НСУ N83 протеолитической активности.

Сыворотку НСУ-инфицированного пациента получают у От. Т. \\'пд111, 8ап Ргапшзсо Нозр11а1. Сконструированный шаблон инженерной полноразмерной кДНК (комплементной дезоксирибонуклеиновой кислоты) НСУ генома (штамм ВМ8) конструируют из фрагментов ДНК, полученных с помощью обратной ПЦР-транскрипции (КТ-РСК) сывороточной РНК (рибонкулеиновой кислоты) и применения праймеров, выбранных на основании гомологии между другими штаммами с генотипом 1а. Путем определения всей последовательности генома генотип 1а приписывают изоляту НСУ согласно классифика

- 80 015827 ции 81ттопйк с1 а1. (см. Р 81ттопйк, КА Коке, 8 СгаНат, 8ν СНап. Р ΜсΟт^кй, ВС Οο\ν. ЕА Ео11е1Е РЬ Уар апй Н Μа^кйеп/С1^п. Μ^с^οЬ^ο1. 31(6), 1493-1503 (1993)). Аминокислотная последовательность неструктурной области, Ν82-5Β, как было показано, более чем на 97% идентична генотипу 1а НСУ (Н77) и на 87% идентичная генотипу 1Ь (14Ь68). Инфекционные клоны, Н77 (1а генотип) и 14Ь68 (1Ь генотип) получают у К. Ригсе11 (ΝΙΗ) и последовательности были опубликованы в СепЬапк (ААВ67036, см. Уапад1, Μ., Ригсе11, К.Н., Етегкоп, 8.И. и ВикН, 1. Ргос. №11. Асай. 8с1 И.8.А. 94(16), 8738-8743 (1997); АР054247, см. Уапад1, Μ., 81 С1апе, Μ., 8Нар1го, Μ., Етегкоп, 8.И., Ригсе11, К.Н. и ВикН, 1. У1го1оду 244 (1), 161-172. (1998)).

Штаммы Н77 и 14Ь68 используют для получения рекомбинантных протеазных комплексов №3/4А. ДНК, кодирующую рекомбинантный протеазный НСУ Ν83/4Λ комплекс (аминокислоты с 1027 по 1711) для этих штаммов, обрабатывают, как описано Р. СаШпап е1 а1. (см. СаШпап Р., Рао Ши С., Вгеппап Ό., №гй| С., 81е1пкиЫег С., Эе Ргапсексо К. ВюсНетЩгу 38(17):5620-32, (1999)). Вкратце, трехлизиновый повышающий растворимость хвостовой участок был добавлен к 3'-концу области, кодирующей №4А. Цистеин в позиции Р1 сайта расщепления №4А-Ы84В (аминокислота 1711) заменяется на глицин во избежание протеолитического расщепления лизинового хвоста. Более того, мутация замены цистеина на серин была внесена путем ПЦР в позицию аминокислоты 1454 для предотвращения аутолитического расщепления в хеликазном домене Ν83. Альтернативный фрагмент ДНК клонируют в бактериальном векторе экспрессии рЕТ21Ь (№уадеп) и комплекс №3/4А экспрессируют в ЕксНепсЫа сой, штамм ВЬ21 (ЭЕ3) (1пуйтодеп), в соответствии с протоколом, описанным Ьу Р. СаШпап е1 а1. (см. СаШпап Р., Вгеппап Ό., №ий| С., ВгапеШ Μ., Тоте1 Ь., 81е1пкиЫег С., Эе Ргапсексо К., 7 У1го1. 72(8):6758-69 (1998)) с модификациями. Вкратце, экспрессию протеазного комплекса №3/4А вызывают 0,5 мМ изопропил-3-Э-1тиогалактопиранозида (ЬРТС) в течение 22 ч при 20°С. Типичная ферментация (1 л) приводит к получению приблизительно 10 г сырой клеточной массы. Клетки ресуспендируют с литическим буфером (10 мл/г), состоящим из 25 мМ №(2-гидроксиэтил)пиперазин-Ы'-(2-этансульфоновая кислота) (НЕРЕ8), рН 7,5, 20% глицерин, 500 мМ натрия хлорида (№С1), 0,5% Ттйоп Х-100, 1 мкг/мл лизоцима, 5 мМ магния хлорида (Μ§Ο₂), 1 мкг/мл Ипаке1, 5 мМ Р-меркаптоэтанола (РМЕ), ингибитор протеазы без этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), гомогенизируют и инкубируют в течение 20 мин при 4°С. Гомогенат обрабатывают ультразвуком и очищают с помощью ультрацентрифугирования при 235000 г в течение 1 ч при 4°С. Имидазол добавляют к надосадочной фракции до конечной концентрации 15 мМ и рН доводят до 8,0. Сырой экстракт белка загружают на колонку Никель-нитрилтриуксусной кислоты (ΝίNТА), предварительно уравновешенную буфером В (25 мМ НЕРЕ8, рН 8,0, 20% глицерин, 500 мМ №С1, 0,5% Тгйоп Х-100, 15 мМ имидазола, 5 мМ РМЕ). Образец загружают при скорости потока 1 мл/мин. Колонку отмывают 15 об. колонки буфера С (такой же, как буфер В, за исключением 0,2% Тгйоп Х-100). Белок элюируют с 5 об. колонки буфера Ό (такой же, как С, за исключением 200 мМ имидазола).

Фракции, содержащие №3/4А протеазный комплекс, собирают и загружают на деминерализирующую колонку 8ирегйех-8200, предварительно уравновешенную буфером Ό (25 мМ НЕРЕ8, рН 7,5, 20% глицерин, 300 мМ №С1, 0,2% Ттйоп Х-100, 10 мМ РМЕ). Образец загружают при скорости потока 1 мл/мин. Фракции, содержащие №3/4А протеазный комплекс, собирают и концентрируют до приблизительно 0,5 мг/мл. Частота №3/4А протеазных комплексов, полученных из штаммов ΒΜ8, Н77 и 14Ь68, считается более 90% в анализах 8Э8-РАСЕ и масс-спектрометрии. Фермент хранят при -80°С, размораживают на льду и разводят перед применением в буфере исследования.

ЕКЕТ пептидное исследование для оценки протеолитической активности НСУ Ν83/4Α

Целью этого исследования ш уйто является измерение ингибирования НСУ Ν83 протеазных комплексов, полученных из штамма ΒΜ8, штамма Н77 или штамма 14Ь68, как описано выше, соединениями по настоящему изобретению. Это исследование предусматривает выявление, насколько эффективными будут соединения по настоящему изобретению в ингибировании НСУ Ν83 протеолитической активности.

С целью отслеживания НСУ №3/4А протеазной активности используется №3/4А пептидный субстрат. Субстрат является КЕТ 81 (Кекопапсе Епетду ТгапкГег Оерк1рерОйе 8иЬк1га1е; Апа8рес, 1пс. са1 # 22991) (РКЕТ пептидом), описанным Тайаш е1 а1. ίπ Апа1. Вюсйет. 240(2):60-67 (1996). Последовательность этого пептида, в общем, основана на естественном сайте расщепления N84Λ/N84Β для НСУ Ν83 протеазы, за исключением того, что существует скорее сложноэфирная связь, чем амидная связь в сайте расщепления. Этот пептид также содержит флуоресцентный донор, ЕИА№, рядом с одним концом пептида и акцептор, ИАВСУЕ, рядом с другим концом. Флуоресценция пептида гасится внутримолекулярным резонансным переносом энергии (КЕТ) между донором и акцептором, но когда Ν83 протеаза расщепляет пептид, продукты высвобождаются из КЕТ гашения и флуоресценция донора становится явной.

Пептидный субстрат инкубируют с одним из трех рекомбинантных №3/4А протеазных комплексов при отсутствии или в присутствии соединения по настоящему изобретению. Ингибирующее действие соединения определяют путем отслеживания образования флуоресцентного продукта реакции в реальном времени с помощью устройства Су1оГ1иог 8епек 4000.

Реактивы следующие: НЕРЕ8 и глицерин (ультрачистый) получают в СГВСС-ВКЕ. Диметилсуль

- 81 015827 фоксид (ЭМ8О) получают в 81дта. β-меркаптоэтанол получают в Вю К^аб.

Буфер исследования: 50 мМ НЕРЕ8, рН 7,5; 0,15М ЦаС1; 0,1% ТШии; 15% глицерин; 10 мМ РМЕ. Субстрат: 2 мкМ конечная концентрация (из 2 мМ исходного раствора в ЭМ8О, хранят при -20°С). НСУ Ν83/4Ά протеаза тип 1а (1Ъ), 2-3 нМ конечная концентрация (из 5 мкМ исходного раствора в 25 мМ НЕРЕ8, рН 7,5, 20% глицерин, 300 мМ ЦаС1, 0,2% ^1^^100, 10 мМ РМЕ). Для соединений, обладающих возможностью достижения предела исследования, исследование делают более чувствительным путем добавления 50 мг/мл бычьего сывороточного альбумина (81дта) к буферу исследования и снижения конечной концентрации протеазы до 300 нМ.

Исследование проводят в 96-луночном черном планшете из полистирола производства Ра^и. Каждая лунка содержит 25 мкл И83/4А протеазного комплекса в буфере исследования, 50 мкл соединения по настоящему изобретению в 10% ЭМ8О/буфер исследования и 25 мкл субстрата в буфере исследования. Контроль (без соединения) также готовят в том же планшете исследования. Ферментный комплекс смешивают с раствором соединения или контроля в течение 1 мин, после чего запускают ферментативную реакцию путем добавления субстрата. Планшет исследования считывают незамедлительно, используя устройство (ΧίοΠιιοί’ 8епез 4000 (Регзресйуе Вю8у8Хеш8). Устройство настраивают для считывания эмиссии при 340 нм и возбуждения 490 нм при 25°С. Реакции, как правило, продолжаются в течение приблизительно 15 мин.

Процент ингибирования подсчитывают, используя следующее уравнение:

ΙΟΟ-ΚδΡύΛ/δΡ^χΙΟΟ] где δΡ является изменением флуоресценции выше линейного участка кривой. Нелинейная аппроксимация кривой применяется к данным ингибирование-концентрация, и 50% эффективную концентрацию (1С₅₀) подсчитывают, используя программу Ехсе1 УНГй, применяя уравнение у=А+((В-А)/(1+((С/х)^ЛП))).

Все тестированные соединения созданы для ингибарования активности И83/4А протеазного комплекса с ХС₅₀ от 1,6 мкМ или меньше. Кроме того, соединения по настоящему изобретению, которые были тестированы в отношении более чем одного типа Н83/4А комплекса, обнаруживают сходные ингибирующие свойства, хотя эти соединения стабильно демонстрируют большую эффективность в отношении штаммов 1Ъ по сравнению со штаммами 1а.

Исследования специфичности

Исследования специфичности проводят, чтобы продемонстрировать избирательность ίη νίνο соединений настоящего раскрытия в ингибировании НСУ Н83/4А протеазного комплекса по сравнению с другими сериновыми или цистеиновыми протеазами.

Специфичность соединений по настоящему изобретению определяют в отношении множества сериновых протеаз: нейтрофильная эластаза человека (ΗΝΉ), панкреатическая эластаза свиньи (РРЕ) и панкреатический химотрипсин человека, а также одной цистеиновой протеазы: печеночный катепсин В человека. Во всех случаях применялся протокол в формате 96-луночного планшета с использованием флуорометрического аминометилкумарина (АМС), специфического для каждого фермента, как это описано ранее (патентная заявка РСТ ^О 00/09543) с некоторыми модификациями исследований сериновой протеазы. Все ферменты приобретают в 81дта, ЕМПЪю8с1еисе8, тогда как субстраты - в Васйет, 81дта и ЕМПЪю8с1еисе8.

Концентрации соединения варьируют от 100 до 0,4 мкМ в зависимости от их мощности. Каждое из исследований фермента запускают путем добавления субстрата к смеси фермент-ингибитор, предварительно инкубированной в течение 10 мин при комнатной температуре, а также гидролизом до 15% конверсии по измерениям цитофлуориметра.

Конечные концентрации для каждого исследования следующие:

мМ трис-(гидроксиметил)аминометана гидрохлорид (ТП8-НС1) рН 8, 0,5М натрия сульфата (Иа₂8О₄), 50 мМ №С1, 0,1 мМ ЕЭТА, 3% ЭМ8О, 0,01% Тчееп-20 с 5 мкМ ЬЬУУ-АМС и 1 нМ химотрипсина.

мМ ТП8-НС1, рН 8,0, 50 мМ №С1, 0,1 мМ ЕЭТА, 3% ЭМ8О, 0,02% Тчееп-20, 5 мкМ 8исс-ААРУАМС и 20 нМ ΗΝΞ или 8 нМ РРЕ;

100 мМ ИаОАС (натрия ацетат) рН 5,5, 3% ЭМ8О, 1 мМ ТСЕР (Трис(2-карбоксиэтил)фосфина гидрохлорид), 5 нМ катепсина В (исходный фермент, активированный в буфере, содержащем 20 мМ ТСЕР перед применением) и 2 мкМ Ζ-РК-АМС, разбавленного в Н₂О.

Процент ингибирования подсчитывают, используя формулу (ьсиУйл-иУы^УсиУей-иУыапк))] χ юо

Нелинейную аппроксимацию применяют к данным ингибирование-концентрация, и 50% эффективную концентрацию (ХС50) подсчитывают, используя программу Ехсе1 X^ίίΐ.

Получение НСУ репликона

Цельноклеточную систему НСУ репликона создают, как это описано в Ι.οΐιιηηιιιι У., Κοπκ'Γ Ρ., Κοοίι I., Неиап и., ТНейшапп Ь., Ваг!еп8сЫадег К., 8с1епсе 285(5424): 110-3 (1999). Эта система позволяет оце

- 82 015827 нивать эффекты наших соединений НСУ протеазы на репликацию РНК НСУ. Вкратце, используя последовательность штамма 1Ь НСУ, описанную в статье Ьойшапп (Аззеззюп пишЬег: А1238799), кДНК НСУ была синтезирована компанией Οре^οη Тесйпо1од1ез, 1пс. (А1ате6а, СА), и полноразмерный репликон был затем собран в плазмиде р0ет9/Г(+) (Рготеда, Μаά^δοη, №1), используя стандартные методики молекулярной биологии. Репликон состоит из (ί) НСУ 5' ИТК связанного с первыми 12 аминокислотами белка капсида, (ίί) гена фосфотрансферазы неомицина (пео), (ίίί) 1КЕ8 из вируса энцефаломиокардита (ЕЫСУ) и (ίν) генов НСУ от N83 до Ν85Β, а также НСУ 3' ИТК. ДНК плазмиды в линейной форме, полученной с помощью 8еа1, и транскрипты РНК синтезируют ш νίίΐΌ с помощью транскрипционного набора Т7 Μеда8с^^рΐ (АтЬюп, Аизбп, ТХ) согласно инструкциям производителя. Транскрипты кДНК ш νίΐΐΌ трансфицируют в клеточную линию гепатомы человека, НИН-7. Отбор для клеток, стабильно экспрессирующих НСУ репликон, применяют в присутствии селектируемого маркера, неомицина (0418). Полученные клеточные линии характеризуются продукцией позитивной или негативной нити РНК и продукцией белка с течением времени.

ЕКЕТ исследование ИСУ репликона

РКЕТ исследование НСУ репликона разработано для отслеживания ингибирующих эффектов соединений, описанных в данном раскрытии в отношении репликации вируса НСУ. Клетки НИН-7, стабильно экспрессирующие НСУ репликон, выращивают в среде Еад1е, модифицированной Ии1Ьессо (ΌΜΕΜ) (01Ьсо-ВКЬ), содержащей 10% фетальную телячью сыворотку (РС8) (81дта) и 1 мг/мл 0418 (01Ьсо-ВКИ). Клетки высевают за ночь (1,5х10⁴ клетки/лунка) в 96-луночных стерильных планшетах для тканевых культур. Соединение и контроли без соединений готовят в среде ΌΜΕΜ, содержащей 4% РС8, 1:100 пенициллин/стрептомицин (01Ьсо-ВКИ), 1:100 Ь-глутамин и 5% ΌΜ8Ο в планшете разведения (0,5% ΌΜ8Ο конечная концентрация в исследовании). Смеси соединение/^Μ8Ο добавляют к клеткам и инкубируют в течение 4 дней при 37°С. Через 4 дня клетки вначале оценивали на цитотоксичность, используя аламар синий (Тгек 0|адпо1811с 8уЧет8) для считывания СС50. Токсичность соединения (СС50) определяют путем добавления 1/10^Л объема аламара синего к среде, в которой инкубируются клетки. Через 4 ч сигнал флуоресценции из каждой лунки считывают при длине волны возбуждения 530 нм и длине волны эмиссии 580 нм, используя устройство СуЮПиог 8епе8 4000 (РегересРте Вю8у81:ет8). Планшеты затем тщательно ополаскивают физиологическим раствором с фосфатным буфером (РВ8) (3 раза 150 мкл). Клетки разрушают с помощью 25 мкл литического реактива, содержащего субтрат НСУ протеазы (5х литический реактив клеточной культуры клеток с люциферазой (Рготеда #Е153А), разведенный до 1х дистиллированной водой, ИаС1 добавленный до 150 мМ, пептидный субстрат ЕКЕТ (как описано для ферментного исследования выше), разведенный в конечном счете до 10 мкМ из 2 мМ исходного в 100% ΌΜ8Ο. Планшет затем помещают в устройство СуЮПиог 4000, который настраивают следующим образом: 340 нм возбуждение/490 нм эмиссия, автоматический режим на 21 цикл; планшет считывают в кинетическом режиме. Определения ЕС50 проводятся так, как описано для определений 1С₅₀.

Люциферазное репортерное исследование НСУ репликона

В качестве вторичного исследования определения ЕС₅₀, произведенные во ЕКЕТ исследовании репликона, подтверждают в люциферазном репортерном исследовании репликона. Применение люциферазного репортерного исследования репликона впервые было описано Кпедег е1 а1. (Кпедег Ν., Ьойшапп У., апб ВайепзсЫадег К., ί. У1го1. 75(10): 4614-4624 (2001)). Конструкция репликона, описанная для нашего ЕКЕТ исследования, была модифицирована путем вставки кДНК, кодирующей гуманизированную форму гена люциферазы Кеш11а и последовательность связывающей группы, прикрепленной непосредственно к 3' концу гена люциферазы. Эта вставка была внесена в конструкцию репликона при помощи сайта рестрикции Азс1, расположенного в ядре, непосредственно перед маркерным геном неомицина. Адаптивная мутация в положении 1179 (изолейцин вместо серина) также применялась (ВНд111 Κ.Ι., Ко1укНа1оу, А.А., К1се, ΟΜ., 8с1епсе 290(5498): 1972-1974). Стабильную клеточную линию, которая стабильно экспрессирует эту модель НСУ репликона, получают так, как описано выше. Люциферазное репортерное исследование проводят, как это описано для ЕКЕТ исследования НСУ репликона со следующими изменениями. После 4 дней нахождения в 37°С/5% СО₂ инкубаторе клетки анализируют на активность люциферазы Кеш11а с помощью системы Рготеда Ииа1-01о Ьисйегазе Аззау 8уз1ет. Среду (100 мкл) удаляют из каждой лунки, содержащей клетки. К оставшимся 50 мкл среды добавляют 100 мкл реактива Пиа1-01о Ьисйегазе КеадепГ и планшеты встряхивают в течение 10 мин - 2 ч при комнатной температуре. Реактив Пиа1-01о 81ор & 01о Кеадеп! (50 мкл) затем добавляют в каждую лунку и планшеты вновь встряхивают в течение еще 10 мин - 2 ч при комнатной температуре. Планшеты считывают на устройстве Раскагб ТорСошП ИХТ, используя программу люминесценции.

Процент ингибирования подсчитывают, используя нижеприведенную формулу:

% контроля = средний люциферазный сигнал в экспериментальных лунках (+ соединение) средний люциферазный сигнал в контрольных лунках с ΌΜ8Ο (- соединение)

Значения затем отмечают графически и анализируют, используя ХЕШ, чтобы получить значения ЕС50.

Репрезентативные соединения по данному изобретению оценивают в ферментных исследованиях

- 83 015827

НСУ, клеточных исследованиях НСУ репликона и/или в ряде перечисленных исследований специфичности. Например, соединение 3, как установлено, имеет значение 1С₅₀ 4,4 нМ в отношении штамма Ν83/4Α ВМ8 в ферментном исследовании. Сходные значения эффективности получены со штаммами Н77 (1С₅₀ составил 1,6 нМ) и 14Ь68 (1С₅₀ составил 1,1 нМ). Значение ЕС₅₀ во ЕВЕТ исследовании репликона составило 11 и 1,4 нМ в люциферазном исследовании репликона.

В исследованиях специфичности то же соединение, как установлено, имеет следующую активность: НЕЕ = 82 мкМ; РРЕ >100 мкМ; химотрипсин = 75 мкМ; катепсин В >100 мкМ. Эти результаты указывают, что это семейство соединений высокоспецифично для протеазы N83 и многие из его представителей ингибируют репликацию НСУ репликона.

Соединения по текущему изобретению были исследованы и, как установлено, обладают активностью в следующих диапазонах.

Диапазоны активности 1С₅₀ (штамм Ν83/4Α ВМ8): А составляет от 1 до 50 нМ; В составляет от >50 до 100 нМ до 500 нМ; С составляет >500 нМ.

Диапазоны активности ЕС₅₀ (для тестированных соединений): А составляет от 1 до 50 нМ; В составляет от >50 нМ до 100 нМ до 500 нМ; С составляет >500 нМ.

Следует отметить, что применение номера соединения по патенту показано в табл. 2, структуры соединений могут быть найдены в настоящем описании.

Таблица 2

- 84 015827

Соед. 200	А	А
Соед. 201	А	В
Соед. 202	А	в
Соед. 203	А	в
Соед. 204	А	А
Соед. 205	А	А
Соед. 206	А	А
Соед. 207	А	А
Соед. 208	315.00	1,303
Соед. 209	А	А
Соед. 210	С	С
Соед. 211	1600.00

Среднему специалисту будет очевидно, что настоящее изобретение не ограничено вышеприведенными иллюстративными примерами, и что оно может быть воплощено в других частных формах без выхода за пределы его границ. Поэтому желательно, чтобы примеры рассматривались во всех аспектах как иллюстративные, а не ограничительные, ссылки делаются скорее на прилагаемую формулу, нежели на вышеперечисленные примеры, и все изменения, которые подпадают под значение и рамки эквивалентности пунктов формулы изобретения, таким образом, предназначены для включения в них.

Claims (15)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение формулы (I) (I), или его фармацевтически приемлемая соль, где η равно 1;

   К¹ выбран из гидрокси и -ИН8О₂К⁷;

   К² представляет собой С₂алкил, С₂алкенил или дифторметил;

   К³ представляет собой 4-бифенил-4-ил;

   К⁴ представляет собой -ОК⁸;

   К⁵ представляет собой С3-4алкил, С7алкенил или 4-трет-бутилбензил;

   К⁶ представляет собой трет-бутоксикарбонил, возможно замещенный галогеном, третбутиламинокарбонил, адамантан-1-илоксикарбонил, адамантан-1-иламинокарбонил, фенил, возможно замещенный 1-2 заместителями, независимо выбираемыми из галогена и метокси;

   К⁷ представляет собой циклопропил;

   К⁸ представляет собой метокси или бензилокси.
2. 2. Соединение формулы (II)

   - 85 015827 или его фармацевтически приемлемая соль, где η равно 1;

   К² представляет собой С₂алкил, С₂алкенил или дифторметил;

   К³ представляет собой 4-бифенил-4-ил;

   К⁵ представляет собой С_3-4алкил, С₇алкенил или 4-трет-бутилбензил;

   К⁶ представляет собой трет-бутоксикарбонил, возможно замещенный галогеном, третбутиламинокарбонил, адамантан-1-илоксикарбонил, адамантан-1-иламинокарбонил, фенил, возможно замещенный 1-2 заместителями, независимо выбираемыми из галогена и метокси;

   К⁷ представляет собой циклопропил;

   К⁸ представляет собой метокси или бензилокси.
3. 3. Соединение, выбранное из

   - 86 015827 или его фармацевтически приемлемая соль.
4. 4. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.
5. 5. Фармацевтическая композиция по п.4, дополнительно содержащая по крайней мере одно дополнительное соединение, имеющее противо-НСУ активность.
6. 6. Фармацевтическая композиция по п.5, где по крайней мере одно из дополнительных соединении представляет собой интерферон или рибавирин.
7. 7. Фармацевтическая композиция по п.6, где интерферон выбран из интерферона а-2В, пегилированного интерферона α, консенсусного интерферона, интерферона а-2А и лимфобластоидного интерфе

   - 87 015827 рона τ.
8. 8. Фармацевтическая композиция по п.5, где по крайней мере одно из дополнительных соединений выбрано из интерлейкина 2, интерлейкина 6, интерлейкина 12, соединения, которое улучшает развитие реакции хелперных Т-клеток 1-го типа, интерферирующего РНК, антисмыслового РНК, имиквимода, рибавирина, ингибитора инозин 5'-монофосфат дегидрогеназы, амантадина и римантадина.
9. 9. Фармацевтическая композиция по п.5, где по крайней мере одно из дополнительных соединений, эффективно ингибирующих функцию мишени, выбрано из НСУ металлопротеазы, НСУ сериновой протеазы, НСУ полимеразы, НСУ хеликазы, НСУ Ж4В белка, НСУ входа, НСУ сборки, НСУ выхода, НСУ Ж5А белка и [МРЭН для лечения НСУ инфекции.
10. 10. Способ лечения НСУ инфекции, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли.
11. 11. Способ по п.10, дополнительно включающий введение по крайней мере одного дополнительного соединения, имеющего противо-НСУ активность до, после или одновременно с соединением по п.1 или его фармацевтически приемлемой солью.
12. 12. Способ по п.11, где по крайней мере одно из дополнительных соединений представляет собой интерферон или рибавирин.
13. 13. Способ по п.12, где интерферон выбран из интерферона а-2В, пегилированного интерферона α, консенсусного интерферона, интерферона а-2А и лимфобластоидного интерферона τ.
14. 14. Способ по п.11, где по крайней мере одно из дополнительных соединений выбрано из интерлейкина 2, интерлейкина 6, интерлейкина 12, соединения, которое улучшает развитие реакции хелперных Тклеток 1-го типа, интерферирующего РНК, антисмыслового РНК, имиквимода, рибавирина, ингибитора инозин 5'-монофосфат дегидрогеназы, амантадина и римантадина.
15. 15. Способ по п.11, где по крайней мере одно из дополнительных соединений, эффективно ингибирующих функцию мишени, выбрано из НСУ металлопротеазы, НСУ сериновой протеазы, НСУ полимеразы, НСУ хеликазы, НСУ Ж4В белка, НСУ входа, НСУ сборки, нСу выхода, НСУ Ж5А белка и ^РЭН для лечения НСУ инфекции.