EA010572B1

EA010572B1 - 7α,17α-ЗАМЕЩЕННЫЕ 11β-ГАЛОГЕНОСТЕРОИДЫ, СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, ПРИМЕНЕНИЕ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ПРЕПАРАТ НА ИХ ОСНОВЕ

Info

Publication number: EA010572B1
Application number: EA200601030A
Authority: EA
Inventors: Людвиг Цорн; Рольф Больманн; Норберт Галлус; Германн Кюнцер; Ханс-Петер Мун; Райнхард Нуббемейер
Original assignee: Шеринг Акциенгезельшафт
Priority date: 2002-07-24
Filing date: 2003-07-24
Publication date: 2008-10-30
Also published as: EP1523568A2; MX260952B; HK1081999A1; NO20050980L; EA200601030A1; ECSP055630A; RS20050045A; WO2004011663A2; CN100339486C; PH12005500143B1; BR0313210A; NZ549529A; CN1671858A; EA200500224A1; WO2004011663A3; WO2004011663A9; RS51855B; IL166358A0; CO5690563A2; CA2492079C

Abstract

В изобретении описываются новые соединения, представляющие собой 7α,17α-замещенные 11β-галогенстероиды общей формулы (8,10,12)способы их получения, применение и фармацевтический препарат на их основе.

Description

Настоящее изобретение относится к новым соединениям, а именно 7а,17а-замещенным 11 βгалогенстероидам, к способам их получения, а также к их применению и к фармацевтическим препаратам, содержащим эти соединения. Кроме того, изобретение относится к другим 7а-замещенным 11βгалогенстероидам, конкретно к 7а-замещенным эстра-1,3,5(10)-триенам, получаемым из 7а-замещенных 11а-гидроксистероидов.

Для терапии климактерических расстройств у мужчин (С11тас1егшт ут1е) и для развития мужских половых органов, равно как и для контроля репродуктивной способности (фертильности) мужчин применяют андрогены, прежде всего тестостерон. Кроме того, эти гормоны содержат также обладающие частично анаболическим действием активные компоненты, которые среди прочего способствуют росту мышц.

Климактерический период у мужчин характеризуется естественным, обусловленным возрастными изменениями организма снижением выработки андрогенов, для восполнения недостатка которых проводят гормонзаместительную терапию (ГЗТ).

Введение в организм ЛГ (лютеинизирующего гормона) и РГ (рилизинг-гормона) с целью контроля фертильности мужчин наряду с уменьшением сперматогенеза приводит также к избыточной активизации (высыпанию) ЛГ и к снижению уровня тестостерона и угасанию либидо, для повышения которых используют лекарственные средства, содержащие тестостерон (Ό.Ε. Ситттдз и др., Рго81а1е-8раппд ΕίГес15 οί Не Ро1еп1 Апбгодеп 7а-Ме1йу1-19-Ыог1е81О81егопе: А Ро1епИа1 АНегпабуе 1о Те81О81егопе ίοτ Апбгодеп Вер1асетеп1 апб Ма1е СоШгасерИоп, 1оита1 оГ Сйшса1 Епбосппо1оду апб Ме1аЬо118т, том 83, № 12, 1998, сс. 4212-4219).

Для контроля мужской фертильности может применяться комбинированная терапия с использованием андрогенов и обладающего гестагенным действием компонента (см., например, заявку XVО 01/60376 А, а также источники, приведенные в этой публикации в качестве ссылки).

При лечении с использованием тестостерона было установлено появление побочных эффектов, таких прежде всего, как увеличение предстательной железы, обусловленное ростом числа клеток и желез стромы (доброкачественная гиперплазия простаты, ДГП). При метаболизме тестостерона, опосредованном 5а-редуктазой, образуется дигидротестостерон (ДГТ), который среди прочего может привести к ДГП (Ситтшдз и др., см. выше; заявка νθ 99/13883 А1). Поэтому в клинической практике подавление 5а-редуктазы используют для лечения ДГП (применение финастеридов).

Быстрый метаболизм андрогенного стероида, которым является тестостерон, в организме человека приводит далее не только к образованию нежелательного ДГТ, но и обусловливает необходимость перорального введения высоких доз для достижения требуемого эффективного уровня тестостерона. Поэтому возникает необходимость в использовании альтернативных лекарственных форм, таких как внутримышечные инъекции или большие пластыри.

Для замены тестостерона, применяемого при вышеназванных показаниях, был предложен 7αметил-19-нортестостерон (МеНТ), биологическая эффективность которого, во-первых, выше по сравнению с тестостероном, поскольку он обладает более высокой аффинностью к андрогенным рецепторам, и который, во-вторых, образуя благодаря 7а-метильной группе своеобразный стерический барьер, препятствует, как предполагают, процессу метаболизма под действием 5а-редуктазы (Ситттдз и др., см. выше; νθ 99/13883 А1; АО 99/13812 А1; И8 5342834).

При метаболизме тестостерона, кроме того, некоторая часть этого соединения в результате ароматизации кольца А стероидной системы превращается в эстрадиол, прежде всего подобное происходит в головном мозге, в печени и в жировой ткани. Эстрадиол касательно общего действия тестостерона и его метаболитов в решающей степени ответствен за обусловленные спецификой пола свойства и регуляцию, осуществляемую гонадотропинами. Поэтому действие эстрадиола, равно как и действие тестостерона в организме взрослого мужчины следует рассматривать как положительный фактор (Ситтшдв и др., см. выше).

Вместе с тем было установлено, что фармакокинетика тестостерона является неудовлетворительной. Прежде всего при пероральном введении тестостерон быстро снова выводится из организма, вследствие чего эффективность и продолжительность действия лекарственных средств на основе тестостерона также не дает удовлетворительных результатов. Поэтому был синтезирован целый ряд производных тестостерона. Подобные производные описаны, в частности, в патенте И8 5952319. Прежде всего речь идет о 7α,11 β-диметильных производных 19-нортестостерона, таких конкретно, как 7а,11в-диметил-17вгидроксиэстр-4-ен-3-он, 7α,11 в-диметил-17в-гептаноилоксиэстр-4-ен-3-он, 7α,11 в-диметил-17в-[[(2циклопентилэтил)карбонил] окси] эстр-4-ен-3-он, 7α,11 β-диметилП 7 β-[фенилацетилокси] эстр-4-ен-3 -он и 7а,11в-диметил-17в-[[(транс-4-[н-бутил]циклогексил)карбонил]окси]эстр-4-ен-3-он.

Названные 7α,11β-диметильные производные обладают аналогично МеНТ такими же преимуществами, включая улучшенную фармакокинетику, иными словами, их эффективность и продолжительность действия подняты на более высокий уровень по сравнению с тестостероном. Однако существенным недостатком этих производных является их требующий значительных материально-технических затрат синтез.

Одна из возможностей синтеза стероидов микробиологическим путем описана в ЕР 0900283 В1. В этой публикации указывается, что эстр-4-ен-3,17-дион и канренон с использованием определенного микроорганизма, выбранного из группы, включающей АзрегдШиз гадбсапв, И1пхори8 агбпхщ и штаммы Ре81е1оба, мож

- 1 010572 но трансформировать в соответствующий Ιΐα-гидроксианалог. Вместе с тем во вступительной части описания названной публикации дается ссылка на работу §1Ьайага и др. авторов в ВюсЫш. ВюрЬуз. Ас1а 202, 1970, стр. 172-179, где говорится, что осуществляемая микробиологическим путем реакция ΐΐα-гидроксилирования стероидов относится к реакциям, не поддающимся точному расчету.

Исходя из вышеизложенного, в основу настоящего изобретения была положена задача получить производные тестостерона, которые отличались бы невосприимчивостью к восстановлению под действием 5а-редуктазы, обладали бы улучшенной фармакокинетикой и прежде всего характеризовались бы простотой и легкостью их получения. Один из крайне важных аспектов настоящего изобретения состоит в соответствии с этим в разработке с целью упростить получение форпродуктов такого способа, который без проблем позволял бы получать эти форпродукты.

Положенная в основу настоящего изобретения задача решается с помощью микробиологических способов получения 7а-замещенных стероидов согласно пп.1, 3 и 6 формулы изобретения, с помощью 7а,17а-замещенных 11 β-галогенстероидов согласно п.10 формулы изобретения, способов получения 7а,17а-замещенных 11 β-галогенстероидов согласно пп.11, 12 формулы изобретения, благодаря применению этих 7а,17а-замещенных 11 β-галогенстероидов согласно п.13 формулы изобретения, благодаря фармацевтическим препаратам, содержащим эти 7а,17а-замещенные 11 β-галогенстероиды, согласно п.14 формулы изобретения, а также с помощью 7α-замещенных 11в-галогенэстра-1,3,5(10)-триенов. Предпочтительные варианты осуществления изобретения представлены в зависимых пунктах формулы изобретения.

Пояснения

Нижеследующие пояснения относятся ко всем разделам описания и к пунктам формулы изобретения.

Все группировки, остатки и иные структурные единицы могут соответственно независимо друг от друга варьироваться в указанных диапазонах значений.

Все алкильные, алкиленовые, алкенильные, алкениленовые, алкинильные и алкиниленовые группы могут иметь либо прямую, либо разветвленную цепь. Так, например, пропенильную группу можно представить в виде следующих химических структур: -СН=С-СН₃, -СН₂-С=СН₂ и -С(СН₃)=СН₂. Тем самым под понятие С_1-18алкил подпадают, например, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутип, н-пентил, изопентил, трет-пентил, неопентил, н-гексил, 1-метил-н-пентил, 2-метил-н-пентил, 3-метил-н-пентил, 4-метил-н-пентил, 1-этил-н-бутил, 2-этил-н-бутил и т. д.

Алициклический алкил представляет собой либо циклоалкил, либо замещенный одной алкильной группой или несколькими алкильными группами циклоалкил, который присоединен непосредственно через циклоалкильное кольцо или через одну из алкильных групп.

Аналогично этому алициклический алкенил представляет собой либо циклоалкенил, либо замещенный одной или несколькими алкенильными группами, или одной либо несколькими алкенильными и алкильными группами, или одной либо несколькими алкильными группами циклоалкенил или циклоалкил, который присоединен непосредственно через циклоалкенильное кольцо или через одну из алкенильных либо соответственно через одну из алкильных групп, при этом в алициклическом алкениле содержится по меньшей мере одна двойная связь.

Арил может представлять собой фенил, а также 1-нафтил или 2-нафтил. Понятие арил включает в принципе также гетероарил, прежде всего 2-, 3- и 4-пиридинил, 2- и 3-фурил, 2- и 3-тиенил, 2- и 3пирролил, 2-, 4- и 5-имидазолил, пиридазинил, 2-, 4- и 5-пиримидинил, а также 3- и 4-пиридазинил.

Галоген представляет собой фтор, хлор, бром или иод.

Фармацевтически приемлемыми аддитивными солями служат соли соответствующих соединений с неорганическими и органическими кислотами, такими как, например, хлористо-водородная кислота, бромисто-водородная кислота, иодисто-водородная кислота, уксусная кислота, лимонная кислота, щавелевая кислота, винная кислота и метансульфоновая кислота. Эфиры можно образовывать прежде всего с янтарной кислотой.

Числа, напечатанные в виде верхнего индекса при соответствующем символе Я, например Я¹³, обозначают его положение в стероидном каркасе, при этом С-атомы в этом каркасе имеют нумерацию согласно номенклатуре ИЮПАК. Числа, напечатанные в виде верхнего индекса при соответствующем символе С, например С¹⁰, обозначают положение соответствующего атома углерода в стероидном каркасе.

Описание изобретения

Микробиологические способы нового типа предназначены для получения 7а-замещенных 11αгидроксистероидов общей формулы 4,В

- 2 010572

в которой К⁷ представляет собой группировку Р-р, где Р обозначает С1-С₄алкилен, а Р обозначает водород, С_£-С₄алкил или С_£-С₄фторалкил (алкил частично либо полностью фторирован), и эта группировка Р-Р через Р связана со стероидным каркасом,

К¹⁰ представляет собой Н или СН₃ и

К¹³ представляет собой метил или этил.

В одном из первых вариантов способа получения данных соединений соответствующий 7αзамещенный стероид общей формулы 3,А

в которой К⁷, К¹⁰ и К¹³ имеют те же значения, что и указанные для соединений общей формулы 4,В, с использованием соответствующего микроорганизма, выбранного из группы, включающей АкрегдШик кр., Веаисепа кр., С1отеге11а кр., Опотоша кр., Нар1окроге11а кр. и Ρΐιίζοριικ кр., на соответствующей стадии способа гидроксилируют и окисляют. Особенно предпочтительны АкрегдШик а\\'атоп. АкрегдШик йксйеп, АкрегдШик таПдпик, АкрегдШик шдег, Веаисепа Ьакшапа, С1отеге11а стди1а1а, Опотоша стди1а1а, Нар1окроге11а йекрегебюа и Кй^ζорик к!о1ошГег, при этом целесообразно использовать в первую очередь АкрегдШик анашой (СВ8), АкрегдШик Пксйеп (АТСС 1020), АкрегдШик таИдпик (ΙΜΙ 16061), Акрегщ11ик шдег (АТСС 9142), Веаиуепа Ьакыапа (АТСС 7159), С1отеге11а стди1а!а (СВ8 15226, СВ8 23849, СВ8 98069, АТСС 56596, АТСС 64682, ΙΕΟ 6425), Опотоша сшди1а1а (СВ8 15226), Нар1окроге11а йекрегебка (СВ8 20837) и Кй^ζорик к1о1оп1Гег (АТСС 15441).

Этот микробиологический способ можно осуществлять также по двухстадийному механизму, проводя последовательно реакцию гидроксилирования и реакцию окисления. Протекание реакции можно регулировать за счет ее продолжительности. Так, например, прекратив реакцию по истечении определенного промежутка времени, можно выделять гидроксилированные, но еще не окисленные продукты. Обе указанные стадии можно проводить поэтому раздельно или же по смешанной ферментативной реакции.

С этой целью соединение общей формулы 3,А на первой стадии микробиологического способа с использованием одного из микроорганизмов, выбранного из группы, включающей АкрегдШик кр., Веаисепа кр., 01ЬЬеге11а кр., С1отеге11а кр., Опотоша кр., Μеίа^^й^ζ^ит кр., Мдгокрога кр., Βй^ζорик кр. и УегйсШшт кр., гидроксилируют в положении 11 с образованием в результате 7а-замещенного стероида с гидроксигруппой в положении 11. Такое соединение соответствует общей формуле С

в которой К⁷, К¹⁰ и К¹³ имеют те же значения, что и указанные выше для соединений общей формулы 4,В. Прежде всего используют следующие микроорганизмы: АкрегдШик шайдиик, АкрегдШик те11еик, АкрегдШик шдег, АкрегдШик осйгасеик, Веаиуепа Ьакыапа, 01ЬЬеге11а Гицкиго!, 01ЬЬеге11а ζеае, С1отеге11а

- 3 010572 стди1а!а. С1отеге11а Гикагснбек. Спотоша стди1а!а. ΜοΙαπΊιίζίιιιη ашкорйае. Ждгокрога крНаепса. Βΐιίζοριίδ οΐΎζαο. Я^орик 8(о1оп1Гег и УегйсШшт баННае. Наиболее предпочтительно использовать для гидроксилирования АкрегдШик таНдпик (ΙΜΙ 16061). АкрегдШик те11еик (СВ8). АкрегдШик шдег (АТСС 11394). АкрегдШик осЬгасеиз (ΝΗΡΡ 405. СВ8 13252. АТСС 46504). Веаиуепа Ьакыапа (АТСС 7159. ΙΡΟ 5838. АТСС 13144. ΙΡΟ 4848. СВ8 11025. СВ8 12736). С1ЬЬеге11а Гиркиго1 (АТСС 14842). С1ЬЬеге11а ζеае (СВ8 4474). С1отеге11а стди1а!а (АТСС 10534. СВ8 23849. СВ8 23749. АТСС 16646. АТСС 16052. ΙΡΟ 6459. ΙΡΟ 6425. ΙΡΟ 6470. СВ8 98069. ΙΡΟ 7478. ΙΡΟ 5257. АТСС 64682. АТСС 15470). С1отеге11а Гикаго1бек (АТСС 9552). Спотоша стди1а!а (СВ8 15226). Ме1ап4^ц.1т ашкорйае (ΙΡΟ 5940). Ждгокрога крНаепса (АТСС 12772). ЯЬкориз о1у.ае (АТСС 4858. АТСС 34102. АТСС 34102). ЯНаорик кЮ1ошГег (АТСС 6227Ь. АТСС 15441) и УегйсШшт баййае (АТСС 11405).

По завершении гидроксилирования промежуточный продукт формулы С на второй стадии микробиологического способа с использованием другого микроорганизма. выбранного из группы. включающей ВасШик кр.. МусоЬас1епит кр.. Ыосагб1а кр. и Ркеиботопак кр.. окисляют с образованием в результате 7а-замещенных 11-α-гидроксистероидов общей формулы 4.В. В этих целях используют прежде всего следующие микроорганизмы: ВасШик 1асйшогЬик. ВасШик крНаепсик. МусоЬас1епит пеоаигит. МусоЬас1епит ктедтаНк. Ыосагб1а согаШпа. Ыосагб1а д1оЬеги1а. Ыосагб1а т1шта. Ыосагб1а гек1пс1ик. Ыосагб1а гиЬгорептс1а. Ыосагб1а ка1тошсо1ог и Ркеиботопак 1ек1ок1егош. наиболее предпочтительно при этом использовать ВасШик 1асйшогЬик (АТСС 245). ВасШик крНаепсик (АТСС 7055). МусоЬас1епит пеоаигит (АТСС 9626. ИККЬ В-3683. ΝΚΚΡ В-3805). МусоЬас1епит ктедтайк (АТСС 14468). Ыосагб1а согаШпа (АТСС 31338). №са1Ша д1оЬеги1а (АТСС 9356). №са1Ша т1шта (АТСС 19150). №са1Ша гек1г1с(ик (Ж.ЧВ 10027). №са1Ша гиЬгорегйпс1а (АТСС 14352). №са1Ша ка1тошсо1ог (АТСС 19149) и Ркеиботопак 1ек1ок1егош (АТСС 11996).

Согласно еще одному варианту способа соединения общей формулы 4.В можно получать с помощью микробиологической реакции из 7а-замещенных стероидов общей формулы Ό

в которой Я⁷. Я¹⁰ и Я¹³ имеют те же значения. что и указанные для соединений общей формулы 4.В. Данную реакцию проводят с использованием соответствующего микроорганизма. выбранного из группы. включающей АкрегдШик кр.. Веаиуепа кр.. СшуШапа кр.. С1ЬЬеге11а кр.. С1отеге11а кр.. Спотоша кр.. Нар1окроге11а кр.. НеНсок1у1ит кр.. Ждгокрога кр.. ЯЫζορик кр. и 8упсерНа1ак1гит кр.. при этом стероидный каркас гидроксилируют в положении 11α. и в результате образуется 7а-замещенный 11αгидроксистероид общей формулы 4.В. Предпочтительны для этой цели следующие микроорганизмы: АкрегдШик аШасеик. АкрегдШик а\\'атоп. АкрегдШик йксйеп. АкрегдШик таНдпик. АкрегдШик те11еик. АкрегдШик шбиа1апк. АкрегдШик шдег. АкрегдШик осНгасеик. АкрегдШик уапесо1ог. Веаиуепа Ьакыапа. СшуШапа 1ипа1а. С1ЬЬеге11а ζеае. С1отеге11а стди1а1а. С1отеге11а Гикаго1бек. Спотоша сшди1а1а. Нар1окроге11а Некрегебюа. НеНсок1у1ит ртГогтае. №дгокрога крНаепса. ЯЫζορик огу^ае и 8упсерНа1ак1гит гасетокит. прежде всего при этом используют АкрегдШик аШасеик (АТСС 10060). АкрегдШик а\\'ашоп (СВ8). АкрегдШик ПксНеп (АтСС 1020). АкрегдШик таНдпик (ГМ! 16061). АкрегдШик те11еик (СВ8). АкрегдШик шбиа1апк (АТСС 11267). АкрегдШик шдег (АТСС 9142. АТСС 11394). АкрегдШик осНгасеик ^ЯЯЬ 405. АТСС 13252. АТСС 46504). АкрегдШик уапесо1ог (АТСС 10067). Веаиуепа Ьакмапа (ΙΡΟ 5838. АТСС 13144. ΙΡΟ 4848. СВ8 11025. СВ8 12736. АТСС 7159). СшуШапа 1ипа1а (ΙΧ3). С1ЬЬеге11а ζеае (СВ8 4474). С1отеге11а сшди1а!а (АТСС 10534. СВ8 23849. СВ8 23749. АТСС 16646. ΙΡΟ 6459. ΙΡΟ 6425. ΙΡΟ 6470. АТСС 15093. АТСС 10529. ΙΡΟ 5257. АТСС 56596. АТСС 64682). С1отеге11а Гикаго1бек (АТСС 9552). Спотоша стди1а!а (СВ8 15226). Нар1окроге11а Некрегеб1са (СВ8 20837). НеНсок1у1ит р1ггГогтае (АТСС 8992). Ждгокрога крНаепса (АТСС 12772). Я^орик огу^ае (АТСС 4858) и 8упсерНа1ак1гит гасетокит (ΙΡΟ 4827).

Наиболее пригодными являются способы. с помощью которых получают 7а-замещенные 11αгидроксистероиды общей формулы 4.В. где независимо друг от друга Я⁷ представляет собой СН3 и/или Я¹⁰ представляет собой Н и/или Я¹³ представляет собой СН3.

Способ осуществляют по обычной методике. Обычно сначала приготавливают стерилизованный питательный раствор для штамма и затем для культивирования штамма в этот питательный раствор вно

- 4 010572 сят содержащий его культуральный раствор. Далее полученную таким путем предварительную культуру переносят в ферментер, в который загружен также соответствующий питательный раствор. Предпочтительно после начальной стадии выращивания культуры штамма в ферментер добавляют затем исходное вещество, в рассматриваемом случае либо соединение общей формулы 3,А, либо соединение общей формулы Ό, инициируя таким образом предлагаемую в изобретении реакцию. По завершении реакции смесь веществ для выделения требуемого 7а-замещенного 11а-гидроксистероида очищают по обычной технологии.

Из полученных таким путем соединений общей формулы 4,В можно синтезировать другие предлагаемые в изобретении соединения с помощью также предлагаемых в изобретении способов. Прежде всего 7а,17а-замещенные Ιΐβ-галогенстероиды общей формулы 8,10,12

в которой И-У-^-Χ-Υ-Ζ представляет собой одну из циклических структур С¹-С²-С³-С⁴ =С⁵-С¹⁰, С¹С²-С³-С⁴-С⁵=С¹⁰ или С¹-С²-С³-С⁴-С⁵-С¹⁰, при этом в данном случае оксогруппа (=0) связана с (=С³), или представляет собой циклическую структуру С¹=С²-С³=С⁴-С⁵=С⁶, при этом в данном случае остаток ОЯ³ связан с (=С³),

Я³ представляет собой Н, С₁-С₄алкил, С₁-С₄алканоил или простой циклический С₃-С₇эфир с Оатомом остатка 0Я³,

Я⁷ представляет собой группировку Р-Ц, где Р обозначает С_1-4алкилен, а О обозначает водород, С₁-С₄алкил или С₁-С₄фторалкил (алкил частично либо полностью фторирован), и эта группировка Р-Ц через Р связана со стероидным каркасом,

Я¹⁰ может находиться в α- либо β-положении и представляет собой Н, СН₃ или СР₃, однако он присутствует лишь при условии, что Χ-Υ-Ζ не обозначает С⁴-С⁵=С¹⁰,

Я¹¹ представляет собой галоген,

Я¹³ представляет собой метил или этил,

Я¹⁷ представляет собой Н, С₁-С₁₈алкил, алициклический С₁-С₁₈алкил, С₁-С₁₈алкенил, алициклический С₁-С₁₈алкенил, С₁-С₁₈алкинил, С₁-С₁₈алкиларил, С₁-С₈алкиленнитрил или группировку Р-Ц, где эта группировка Р-Ц имеет указанное выше значение,

Я¹⁷ представляет собой Н, С1-С18алкил, алициклический С1-С18алкил, С1-С18алкенил, алициклический С1-С18алкенил, С1-С18алкинил или С1-С18алкиларил, при этом Я¹⁷ может быть также через кетогруппу связан с 17в-оксигруппой и, кроме того, Я¹⁷ дополнительно может быть замещен одной или несколькими группами ЫЯ¹⁸Я¹⁹ либо одной или несколькими группами 8ОХЯ²⁰, где х обозначает 0, 1 или 2, а Я¹⁸, Я и Я , каждый независимо друг от друга, может иметь те же значения, что и Я , равно как и их фармацевтически приемлемые аддитивные соли, сложные эфиры и амиды представляют собой действующие вещества, которые обладают целым рядом важных преимуществ. Эти получаемые в результате проведения других стадий способа из 7а-замещенного 11а-гидроксистероида общей формулы 4,В соединения являются ценными активными веществами с ярко выраженным андрогенным действием, не проявляя при их применении упомянутых выше побочных эффектов. Данные соединения пригодны для получения соответствующих лекарственных средств и прежде всего эффективных контрацептивов и действующих веществ для гормонзаместительной терапии (ГЗТ).

В случае дополнительного замещения Я¹⁷ группой ИЯ¹⁸Я¹⁹ речь может идти о метиламино-, диметиламино-, этиламино-, диэтиламино-, циклогексиламино-, дициклогексиламино-, фениламино-, дифениламино-, бензиламино- или дибензиламиногруппе.

К особенно пригодным для использования в указанных целях 7а,17а-замещенным 11βгалогенстероидам общей формулы 8,10,12 относятся соединения, в которых И-У-Ψ-Χ-Υ-Ζ представляет собой циклическую структуру С¹-С²-С³-С⁴=С⁵-С¹⁰, С¹-С²-С³-С⁴-С⁵=С¹⁰ или С¹=С²-С³=С⁴-С⁵=С¹⁰ .

В первом случае (И-У-^-Χ-Υ-Ζ обозначает С¹-С²-С³-С⁴=С⁵-С¹⁰) речь идет о стероидах общей формулы 10

- 5 010572

Во втором случае (И-ν-Ψ-Χ-Υ-Ζ обозначает С¹-С²-С³-С⁴-С⁵=С¹⁰) речь идет о стероидах общей формулы 12

Соединения общих формул 10 и 12 представляют собой соединения с андрогенным действием.

В третьем случае (ϋ-ν-^-Χ-Υ-Ζ обозначает С¹=С²-С³=С⁴-С⁵=С¹⁰) речь идет о стероидах общей формулы 8

Эти соединения представляют собой эстрогены (соединения с аффинностью к эстрогенным рецепторам).

о -7 1 Л 11 1 О 1-7 1-71

Во всех трех случаях остатки К., К., В, В, В, В и В имеют те же значения, что и соответствующие остатки в общей формуле 8,10,12.

Предпочтительно независимо друг от друга В¹ представляет собой Н, и/или В⁷ представляет собой СН3, и/или В¹¹ представляет собой фтор, и/или В¹³ представляет собой СН3, и/или В¹⁷ представляет собой Н, СН₃, С₁-С₁₈алкинил, прежде всего этинил, СН₂СЫ или СР₃, и/или В¹⁷' представляет собой Н.

К особенно пригодным для использования предлагаемым в изобретении 7а,17а-замещенным 11 βгалогенстероидам общей формулы 8,10,12 относятся следующие соединения:

17а-этинил-11 в-фтор-17в-гидрокси-7а-метилэстр-4-ен-3 -он (формула 10),

17а-этинил-11 в-фтор-17в-гидрокси-7а-метилэстр-5( 10)-ен-3-он (формула 12), 17а-этинил-11в-фтор-7а-метилэстра-1,3,5(10)-триен-3,17в-диол (формула 8).

Эти соединения можно синтезировать следующим путем.

Для получения 7а,17а-замещенных 11 β-галогенстероидов общей формулы 10, где И-ν-Ψ-Χ-Υ-Ζ представляет собой циклическую структуру С¹-С²-С³-С⁴=С⁵-С¹⁰, в качестве исходных веществ используют получаемые с помощью микробиологического способа по изобретению 7а-замещенные 11αгидроксистероиды общей формулы 4,В.

На первой стадии синтеза полученные таким образом 7а-замещенные 11а-гидроксистероиды посредством нуклеофильного замещения галодегидроксилирующим реагентом превращают в соответствующие 7а-замещенные 11 β-галогенстероиды формулы 5

- 6 010572

В качестве галодегидроксилирующих реагентов могут рассматриваться все обычно используемые для подобных целей соединения, например фтористо-, хлористо-, бромисто- или иодисто-водородная кислота, тионилхлорид либо тионилбромид, пентахлорид фосфора, оксихлорид фосфора, Νхлорсукцинимид, трифенилфосфин/тетрахлорметан, НР/пиридин или трифторид диэтиламиносеры или предпочтительно нонафлилфторид/1,5-диазабицикло[5.4.0]ундецен.

Из соединения формулы 5 можно затем путем селективного алкилирования у атома С¹⁷ каркаса получать соединение формулы 10. Для селективного алкилирования могут использоваться обычные алкилирующие реагенты, например соединения Гриньяра и металлоорганические соединения, прежде всего алкиллитиевые соединения. Так, например, для получения соответствующего 17а-этинил-17вгидроксиэстр-4-ен-3-она из эстр-4-ен-3,17-диона в качестве алкилирующего реагента можно использовать этинилмагнийбромид.

Для получения 7а,17а-замещенных 11 β-галогенстероидов, в которых И-У-Ψ-Χ-Υ-Ζ представляет собой циклическую структуру С^!-С²-С³-С⁴-С⁵=С¹⁰ и которые соответствуют общей формуле 12, используют и изомеризуют соединения общей формулы 10, в результате чего двойная связь Δ⁴ изомеризуется в двойную связь Δ⁵⁽¹⁰⁾. Для защиты 3-кетогруппы сначала образуют простой циклический эфир в положении 3. Затем двойную связь Δ⁴ изомеризуют в двойную связь Δ⁵⁽¹⁰⁾ с образованием при этом 7α,17αзамещенного 11 β-галогенстероида общей формулы 12, после чего защитную группу снова отщепляют.

При получении других 7а,17а-замещенных 11 β-галогенстероидов общей формулы 8, где И-У-Ψ-ΧΥ-Ζ представляет собой циклическую структуру С^!=С²-С³=С⁴-С⁵=С¹⁰, работают следующим образом.

Сначала, как уже описывалось выше, из полученного в результате микробиологического гидроксилирования и окисления 7а-замещенного 11а-гидроксистероида общей формулы 4,В путем галодегидроксилирования по реакции нуклеофильного замещения образуют соответствующий 11 β-галогенстероид общей формулы 5.

Затем из этого 11 β-галогенстероида путем окисления, например солью меди(11), образуют 7αзамещенный эстра-1,3,5(10)-триен общей формулы 6

в которой В³, В⁷, В¹¹ и В¹³ имеют указанные выше значения. Если В³ представляет собой Н, то эти соединения можно синтезировать непосредственно. Если же В³ имеет значение, отличное от Н, то после образования путем окисления 1,3,5(10)-триенового кольца необходимо по обычной методике образовывать соответствующие простые и сложные эфиры.

7а-замещенные 11β-галогенэстра-1,3,5(10)-триены общей формулы 6, равно как и их фармацевтически приемлемые аддитивные соли, сложные эфиры и амиды являются новыми и включены поэтому в объем настоящего изобретения в качестве промежуточных продуктов, используемых при синтезе также предлагаемых в изобретении 7а,17а-замещенных 11 β-галогенстероидов общей формулы 8.

Одним из особенно предпочтительных 7а-замещенных 11β-галогенэстра-1,3,5(10)-триенов общей формулы 6 является 11β-фтор-3-гидрокси-7α-метилэстра-1,3,5(10)-триен-17-он.

Из 7а-замещенного 11β-галогенэстра-1,3,5(10)-триена общей формулы 6 аналогично описанному выше синтезу соединения общей формулы 10 путем селективного алкилирования у атома С каркаса можно образовывать предлагаемый в изобретении 7а,17а-замещенный 11 β-галогенстероид общей формулы 8.

Кроме того, из полученных в результате микробиологического гидроксилирования и окисления из 7а-замещенных стероидов общей формулы 3,А или Ό веществ общей формулы 4,В могут быть получены также обладающие андрогенным действием 7а-замещенные Πβ-галогенстероиды общей формулы 9

- 7 010572

в которой К^{7 * * *}, К^{11 *} и К¹³ имеют указанные выше значения. Одним из особенно предпочтительных соединений является 11в-фтор-17в-гидрокси-7а-метилэстр-4-ен-3-он. Соединения общей формулы 9, равно как и их фармацевтически приемлемые аддитивные соли, сложные эфиры и амиды также обладают андрогенным действием.

Для получения соединений общей формулы 9 эстр-4-ен-3,17-дион формулы 5 восстанавливают до 17в-гидроксиэстр-4-ен-3-она формулы 9, например с помощью соответствующего борогидрида.

Соединения общей формулы 9 можно превращать, кроме того, в соответствующие 7а-замещенные 11в-галогенэстра-5(10)-ены формулы

10 11 13 в которой К , К , К и К имеют те же значения, что и указанные в общей формуле 8,10,12. С этой целью соединения общей формулы 9 изомеризуют за счет смещения двойной связи Δ⁴ в двойную связь Δ⁵⁽¹⁰⁾. Для защиты 3-кетогруппы сначала образуют простой циклический эфир в положении 3. Затем двойную связь Δ⁴ изомеризуют в двойную связь Δ⁵⁽¹⁰⁾ с образованием при этом вышеуказанного 7αзамещенного Πβ-галогенстероида, после чего защитную группу снова отщепляют.

Еще она возможность получения соответствующих 7а-замещенных 11в-галогенэстра-5(10)-енов формулы

10 11 13 в которой К, К , К и К имеют те же значения, что и указанные в общей формуле 8,10,12, заключается в том, что их образуют из соединений общей формулы 5 за счет изомеризации двойной связи Δ⁴ в двойную связь Δ⁵⁽¹⁰⁾. С этой целью соединения общей формулы 5 изомеризуют за счет смещения двойной связи Δ⁴ в двойную связь Δ⁵⁽¹⁰⁾. Для защиты 3-кетогруппы сначала образуют простой циклический эфир в положении 3. Затем двойную связь Δ⁴ изомеризуют в двойную связь Δ⁵⁽¹⁰⁾ с образованием при этом вышеуказанного 7а-замещенного 11 β-галогенстероида, после чего защитную группу снова отщепляют.

Все названные соединения можно также этерифицировать далее с образованием сложных или простых эфиров, но только при наличии соответствующих гидроксигрупп в положении 3 или 17β. Так, например, соединение формулы 9 можно превращать в соответствующий простой Πβ-эфир или сложный

17в-эфир. Одним из предпочтительных соединений данной группы является 11 в-фтор-17в-(4сульфамоилбензокси)-7а-метилэстр-4-ен-3-он. В качестве заместителей у атома кислорода оксигруппы при С¹⁷ пригодны в принципе такие же остатки, которые указаны для К¹⁷.

Прежде всего 7а,17а-замещенные 11 β-галогенстероиды общей формулы 8,10,12 пригодны для получения соответствующих лекарственных средств. С учетом этого настоящее изобретение относится

- 8 010572 также к применению названных соединений общей формулы 8,10,12 для получения соответствующих лекарственных средств, равно как и к фармацевтическим препаратам, содержащим по меньшей мере одно из указанных соединений общей формулы 8,10,12 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.

Предлагаемые в изобретении 7а,17а-замещенные 11 β-галогенстероиды общей формулы 10,12 представляют собой соединения с ярко выраженным андрогенным действием, не проявляя при их применении указанных выше побочных эффектов, таких, например, как стимуляция предстательной железы (прежде всего никакой доброкачественной гиперплазии простаты). К преимуществам соединений следует отнести и их простой в осуществлении синтез. Как было установлено, предлагаемые в изобретении соединения общей формулы 10 или 12 могут применяться не только для ГЗТ мужчин, они пригодны также без дополнительного введения в организм каких-либо иных действующих веществ в качестве эффективных мужских контрацептивов при соответственно подобранной дозировке с целью требуемого снижения уровня содержания в крови ЛГ, вырабатываемого в организме тестостерона и ФСГ (фолликулостимулирующего гормона). Это объясняется способностью предлагаемых в изобретении 11βгалогенстероидов ингибировать избыточную активацию (высыпание) ЛГ и ФСГ. ЛГ стимулирует клетки Лейдига таким образом, что они секретируют тестостерон. Если содержание ЛГ в крови поддерживать на низком уровне, то при этом снижается также выделение в организме тестостерона. Тестостерон используется для сперматогенеза, тогда как ФСГ стимулирует зародышевые клетки. Поэтому для эффективного сперматогенеза требуется достаточно высокий уровень содержания ФСГ и ЛГ в крови, при этом достаточно высокий уровень содержания ЛГ в крови обусловливает необходимую для сперматогенеза избыточную активацию тестостерона.

Поскольку использование для стерилизации только одних 7а,17а-замещенных 11βгалогенстероидов без добавления каких-либо дополнительных действующих веществ уже может привести к эффективной мужской контрацепции, это позволит не только существенно упростить введение соответствующего лекарственного средства, предназначенного для этих целей, но и значительно снизить расходы, связанные с его применением.

Для контроля мужской фертильности предлагаемые в изобретении 7а,17а-замещенные 11βгалогенстероиды могут применяться также в комбинации с гестагеном.

Помимо этого предлагаемые в изобретении 7а,17а-замещенные 11 β-галогенстероиды эффективно ингибируют 5а-редуктазу и стероид-11-гидроксилазу [СУР11В (Р450с11)6. Ζ1ι;·ιη§. ^.Ь. МШет, 1оигиа1 о£ С11шса1 Еибостто1оду апб Ме1аЬо1щт, том 81, 1996, сс. 3254-3256], благодаря чему удается, например, избирательным путем избежать стимулирующего воздействия на предстательную железу, и соединения проявляют улучшенную фармакокинетику. Ингибирование 11-гидроксилазы приводит к уменьшению степени дезактивации обладающих андрогенным действием соединений и к снижению их выделения из организма человека. Благодаря этому повышаются эффективность и продолжительность действия данных соединений по сравнению с известными соединениями, прежде всего при пероральном применении.

Вышеназванные свойства позволяют применять предлагаемые в изобретении соединения прежде всего для контроля репродуктивной способности мужчин, равно как и для андрогензаместительной терапии со сниженной склонностью к восстановлению 5а-редуктазы при одновременно сохраняемой ароматизации с образованием эстрогенных стероидов и положительном влиянии на сывороточные липиды и центральную нервную систему.

Андрогенное действие и отсутствие, как было предварительно установлено, вышеназванных побочных эффектов исследовали в опытах на семенных пузырьках с использованием предлагаемых в изобретении соединений общих формул 10 и 12. Эффективность же предлагаемых в изобретении соединений общей формулы 8 тестировали в опыте на эстрогенное действие, которое эти соединения оказывают на рост матки.

Предлагаемые в изобретении 7а,17а-замещенные 11 β-галогенстероиды общей формулы 10 или 12, равно как и предлагаемые в изобретении фармацевтические препараты, содержащие эти соединения, пригодны для исключительно успешного лечения не страдающих бесплодием мужчин, а также в принципе мужских особей животных-млекопитающих. Применение препарата в целях мужской контрацепции приводит лишь к временной утрате мужчинами репродуктивной способности. По завершении приема действующих веществ по изобретению, соответственно фармацевтических препаратов первоначальное состояние восстанавливается, т.е. к мужчине возвращается репродуктивная способность и сперматогенез протекает в том же объеме, что и ранее. Для достижения временной стерильности и поддержания ее на постоянном уровне в течение требуемого промежутка времени действующее веществ, соответственно препарат, необходимо вводить в организм постоянно, без перерывов, причем в зависимости от формы применения их следует назначать ежедневно, а в иных случаях предусмотреть периодическое повторение через определенные короткие или же длительные промежутки времени. После однократного или многократного введения действующего вещества либо препарата восстановление первоначального не стерильного состояния мужчины не обязательно происходит сразу, оно может восстанавливаться постепенно, для чего потребуется определенный период времени, зависящий от различных факторов, таких, например, как дозировка, особенности конституции человека и одновременный прием других лекарственных средств.

- 9 010572

Если целью применения является контрацепция, то дозировку 7а,17а-замещенных 11βгалогенстероидов следует выбирать настолько высокой, чтобы содержание ЛГ и ФСГ в крови составляло соответственно максимум 2,5 МЕ/мл, прежде всего максимум 1,0 МЕ/мл, а содержание тестостерона составляло максимум 10 нмолей/л, прежде всего максимум 3 нмоля/л.

Если предлагаемые в изобретении 7а,17а-замещенные 11 β-галогенстероиды предусматривается применять для ГЗТ без достижения при этом контрацепции, то дозировку следует выбирать более низкой. В этом случае стремятся достичь такого уровня действующих веществ, который обеспечивает содержание ЛГ и ФСГ в крови соответственно выше 2,5 МЕ/мл, а содержание тестостерона выше 10 нмолей/л.

Дозировка предлагаемых в изобретении 7а,17а-замещенных 11 β-галогенстероидов общей формулы 10 или 12, требуемая для регуляции уровня содержания в крови ЛГ, ФСГ и тестостерона, зависит от многих факторов и должна определяться поэтому исходя из специфики применения. В первую очередь дозировка зависит, как очевидно, от вида терапии. Если соединения предполагается применять для мужской контрацепции, то их необходимо назначать в существенно более высоких дозах, чем при использовании для ГЗТ. Дозировка определяется далее типом 7а,17а-замещенного 11 β-галогенстероида и его биодоступностью. Специфика применения крайне важна также для выбора вводимого количества соединения. Кроме того, дозировка зависит от конституции человека и от иных факторов, таких, например, как необходимость учитывать возможный параллельный прием других лекарственных средств.

Соединения могут назначаться для перорального и парентерального введения, например интраперитонеального, внутривенного, внутримышечного или чрескожного. Соединения можно также имплантировать в ткань. Назначаемое для введения в организм количество соединений может варьироваться в широких пределах с учетом эффективности этого количества. Оно может варьироваться в широких пределах также в зависимости от состояния, подлежащего лечению, и от методики введения. Суточная доза для человека составляет от 0,1 до 100 мг. Предпочтительная суточная доза для человека составляет от 0,1 до 10 мг. Продолжительность применения соответствующего соединения определяется конечной целью.

Для практического применения могут предназначаться капсулы, пилюли, таблетки, драже, кремы, мази, примочки, жидкости, например сиропы, гели, инъецируемые жидкости, например для интраперитонеальной, внутривенной, внутримышечной или чрескожной инъекции, и т.п., при этом отдельные лекарственные формы высвобождают соединения по изобретению в зависимости от их типа постепенно или высвобождают все количество через короткий промежуток времени.

Для перорального введения применяют капсулы, пилюли, таблетки, драже и жидкости или какиелибо другие пероральные лекарственные формы в качестве фармацевтических препаратов. В этих случаях подобные лекарственные средства можно изготавливать таким образом, чтобы обеспечить высвобождение ими действующих веществ либо через короткий промежуток времени, либо обеспечить эффект депо, что позволит действующему веществу поступать в организм постепенно, с замедлением (пролонгированное действие). Унифицированные дозы наряду с 7а,17а-замещенным 11 β-галогенстероидом могут содержать один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, например вещества для регуляции реологических свойств лекарственного средства, поверхностно-активные вещества, гидротропные солюбилизаторы, микрокапсулы, микрочастицы, грануляты, разбавители, связующие, такие как крахмал, сахар, сорбит и желатин, а также наполнители, такие как кремниевая кислота и тальк, смазки, красители, ароматизаторы и другие вещества.

Предлагаемые в изобретении 7а,17а-замещенные 11 β-галогенстероиды могут быть представлены также в виде раствора, предназначенного для перорального применения и содержащего наряду с активным 11βгалогенстероидом в качестве других компонентов фармацевтически приемлемое масло, и/или фармацевтически приемлемое липофильное поверхностно-активное вещество, и/или фармацевтически приемлемое гидрофильное, поверхностно-активное вещество, и/или фармацевтически приемлемый смешивающийся с водой растворитель. В этом отношении можно сослаться, кроме того, на заявку \УО 97/21440.

Для достижения лучшей биодоступности стероида соединения можно использовать для получения циклодекстриновых клатратов. С этой целью соединения подвергают взаимодействию с α-, β- или γциклодекстрином либо с их производными.

Если предусматривается использовать кремы, мази, примочки и другие предназначенные для наружного применения жидкости, то данные лекарственные средства следует формировать таким образом, чтобы обеспечить для соединений по изобретению возможность поступления в организм в достаточном количестве. В состав таких лекарственных форм входят определенные вспомогательные вещества, например вещества для регуляции реологических свойств, поверхностно-активные вещества, консерванты, гидротропные солюбилизаторы, разбавители, вещества для повышения способности предлагаемых в изобретении стероидов проникать через кожу, красители, ароматизаторы и средства защиты кожи, такие как кондиционеры и регуляторы влажности. В состав лекарственного средства наряду со стероидами по изобретению могут входить и другие действующие вещества.

Для парентерального введения действующие вещества можно растворять или суспендировать в соответствующем физиологически совместимом разбавителе. В качестве разбавителей во многих случаях используют масла с добавлением или без добавления гидротропного солюбилизатора, поверхностно- 10 010572 активного вещества, суспендирующего или эмульгирующего агента. В качестве примера используемых в указанных целях масел можно назвать оливковое масло, арахисовое масло, хлопковое масло, соевое масло, касторовое масло и кунжутное масло. Для приготовления инъецируемого препарата может использоваться любой жидкий носитель, в котором предлагаемые в изобретении соединения находятся в растворенном либо эмульгированном виде. Подобные жидкости содержат часто также вещества для регулирования вязкости, поверхностно-активные вещества, консерванты, гидротропные солюбилизаторы, разбавители и другие добавки, с помощью которых раствору придают изотоничность. Вместе с 7α,17αзамещенными 11 β-галогенстероидами в организм могут вводиться также другие действующие вещества.

Предлагаемые в изобретении Ιΐβ-галогенстероиды могут применяться в виде депо-инъекции или имплантируемого препарата, например подкожно, которые можно формировать таким образом, чтобы обеспечить постепенное, замедленное высвобождение действующего вещества. В этих целях могут использоваться известные технологии, например растворяющиеся или снабженные мембраной депоформы. Имплантаты могут содержать в качестве инертных материалов, например, биологически разлагаемые полимеры или синтетические силиконы, например силиконовый каучук. При чрескожном введении предлагаемые в изобретении ΐΐβ-галогенстероиды можно заделывать, например, в пластырь.

Ниже изобретение более подробно поясняется на примерах.

А. Микробиологический синтез 11а-гидрокси-7а-метилэстр-4-ен-3,17-дион (соединение 4,В) Пример 1

В 2-литровую колбу Эрленмейера после загрузки в нее 1000 мл стерилизованного в течение 30 мин при 121°С в автоклаве питательного раствора, содержащего 3 мас.% глюкозы, 1 мас.% жидкости, полученной после замачивания зерен кукурузы до набухания, 0,2 мас.% ΝαΝΟ₃. 0,1 мас.% КН₂РО₄, 0,2 мас.% К₂НРО₄, 0,05 мас.% КС1, 0,05 мас.% Мд8О₄-7Н₂О и 0,002 мас.% Ре8О₄-Н₂О (рН 6,0), вносили инокулят культуры штамма Спотоша сшди1а1а, выращенного на скошенном агаре (СВ8 15226), и в течение 72 ч при 28°С встряхивали на ротационном шейкере при 165 об/мин. Затем эту предварительную культуру вносили в 20-литровый ферментер, содержавший 19 л стерильной среды такого же конечного состава, что и описанный выше для предварительной культуры. Кроме того, перед стерилизацией для подавления пенообразования добавляли еще 1,0 мл силиконового масла и 1,0 мл 8упретошс (этоксилат кетоспирта). По завершении начальной фазы роста, продолжавшейся в течение 12 ч при повышенном давлении 0,7 бара, температуре 28°С, аэрации с расходом 20 л/мин и скорости перемешивания 250 об/мин, добавляли раствор 4,0 г 17в-гидрокси-7а-метилэстр-4-ен-3-она в 40 мл ДМФ. Далее продолжали перемешивание и аэрацию. Через 135 ч культуральный бульон собирали и в течение 12 ч экстрагировали 10 л метилизобутилкетона и в течение 5 ч 5 л метилизобутилкетона. Объединенные органические фазы концентрировали досуха. Силиконовое масло удаляли путем промывки гексаном. После хроматографии на силикагеле с использованием градиента растворителей гексан/этилацетат выделили 1,64 г (39%) 11а-гидрокси-7аметилэстр-4-ен-3,17-диона.

Пример 2

В 2-литровую колбу Эрленмейера после загрузки в нее 1000 мл стерилизованного в течение 30 мин при 121°С в автоклаве питательного раствора, содержащего 3 мас.% глюкозы, 1 мас.% жидкости, полученной после замачивания зерен кукурузы до набухания, 0,2 мас.% NаNΟз, 0,1 мас.% КН₂РО₄, 0,2 мас.%

- 11 010572

К₂НРО₄, 0,05 мас.% КС1, 0,05 мас.% Мд8О₄-7Н₂О и 0,002 мас.% Ре8О₄-7Н₂О (рН 6,0), вносили инокулят культуры штамма О1отеге11а стди1а!а (1РО 6425), выращенной на скошенном агаре, и в течение 72 ч при 28°С встряхивали на ротационном шейкере при 165 об/мин. Затем эту предварительную культуру вносили в 20-литровый ферментер, содержавший 19 л стерильной среды такого же конечного состава, что и описанный выше для предварительной культуры. Кроме того, перед стерилизацией для подавления пенообразования добавляли еще 1,0 мл силиконового масла и 1,0 мл 8упрегошс (этоксилат кетоспирта). По завершении начальной фазы роста, продолжавшейся в течение 12 ч при повышенном давлении 0,7 бара, температуре 28°С, аэрации с расходом 20 л/мин и скорости перемешивания 350 об/мин, добавляли раствор 2,0 г 17в-гидрокси-7а-метилэстр-4-ен-3-она в 30 мл ДМФ. Далее продолжали перемешивание и аэрацию. Через 19 ч культуральный бульон собирали и в течение 16 ч экстрагировали 20 л метилизобутилкетона и в течение 23 ч 20 л метилизобутилкетона. Объединенные органические фазы концентрировали досуха. Остаток практически полностью растворяли в метаноле. Силиконовое масло отфильтровывали. Затем концентрировали и после хроматографии на силикагеле с использованием градиента растворителей дихлорметан/ацетон выделили 1,55 г (73%) 11а,17в-дигидрокси-7а-метилэстр-4-ен-3-она. После перекристаллизации из ацетона/диизопропилового эфира выделили 827 мг (39%) белых кристаллов с температурой плавления 163°С и |α|_υ = -16° (СНС1₃, с = 0,501).

В 2-литровую колбу Эрленмейера после загрузки в нее 500 мл стерилизованного в течение 30 мин при 121°С в автоклаве питательного раствора, содержащего 0,5 мас.% глюкозы, 0,5 мас.% бактодрожжевого экстракта, 0,1 мас.% пептона и 0,2 мас.% жидкости, полученной после замачивания зерен кукурузы до набухания (рН 7,5), вносили четыре полученных криогенным путем шарика культуры штамма ВасШиз зрйаепсиз (АТСС 7055) и в течение 24 ч при 28°С встряхивали на ротационном шейкере при 165 об/мин. Затем эту предварительную культуру вносили в четыре 2-литровые колбы Эрленмейера, содержавшие 500 мл стерильной среды такого же состава, что и описанный выше для предварительной культуры, при этом в каждую колбу инокулировали по 10% культурального бульона. По завершении начальной фазы роста, продолжавшейся в течение 4 ч при температуре 28°С с использованием ротационного шейкера при 165 об/мин, в каждую из четырех колб добавляли 50 мг 11а,17в-дигидрокси-7а-метилэстр-4-ен-3она в 2,5 мл ДМФ. Встряхивание продолжали еще в течение 48 ч. Объединенные культуральные бульоны дважды экстрагировали 2 л метилизобутилкетона. Объединенные органические фазы сушили над сульфатом натрия и концентрировали досуха. При этом получили 630 мг маслянисто-кристаллического остатка. После перекристаллизации из ацетона/диизопропилового эфира выделили 103 мг (49,2%) желтоватых кристаллов с температурой плавления 189°С и [а]_с = +40,4° (СНС1₃, с = 0,529) (непосредственная кристаллизация, без предварительной хроматографической очистки).

Пример 3

В 2-литровую колбу Эрленмейера после загрузки в нее 500 мл стерилизованного в течение 30 мин при 121°С в автоклаве питательного раствора, содержащего 3 мас.% глюкозы, 1 мас.% жидкости, полученной после замачивания зерен кукурузы до набухания, 0,2 мас.% №1НО₃. 0,1 мас.% КН₂РО₄, 0,2 мас.% К₂НРО₄, 0,05 мас.% КС1, 0,05 мас.% Мд8О₄-7Н₂О и 0,002 мас.% Ре8О₄-7Н₂О (рН 6,0), вносили половину инокулята культуры штамма АзрегдШиз осйгасеиз (СВ8 13252), выращенного на скошенном агаре, и в течение 72 ч при 28°С встряхивали на ротационном шейкере при 165 об/мин. Затем эту предварительную культуру вносили в 10-литровый ферментер, содержавший 9,5 л стерильной среды такого же конечного состава, что и описанный выше для предварительной культуры. Кроме того, перед стерилизацией для подавления пенообразования добавляли еще 0,5 мл силиконового масла и 0,5 мл 8упрегошс (этоксилат кетоспирта). По завершении начальной фазы роста, продолжавшейся в течение 6 ч при повышенном давлении 0,7 бара, температуре 28°С, аэрации с расходом 5 л/мин и скорости перемешивания 350 об/мин, добавляли раствор 1,0 г 7а-метилэстр-4-ен-3,17-диона в 15 мл ДМФ. Далее продолжали перемешивание и аэрацию. Через 22 ч культуральный бульон собирали и дважды в течение 4 ч экстрагировали 7 л метилизобутилкетона. Объединенные органические фазы концентрировали досуха. Остаток практически полностью растворяли в метаноле. Силиконовое масло отфильтровывали. Затем концентрировали и после хроматографии на силикагеле с использованием градиента растворителей дихлорметан/ацетон выделили 0,78 г (74%) 11а-гидрокси-7а-метилэстр-4-ен-3,17-диона. После перекристаллизации из ацетона/диизопропилового эфира выделили 311 мг (29,6%) белых кристаллов с температурой плавления 200°С и [α]_ο = +52° (СНС1₃, с = 0,5905).

- 12 010572

Б. Химический способ получения

Пример 4. Получение 11в-фтор-17в-гидрокси-7а-метилэстр-4-ен-3-она

а) 11в-фтор-7а-метилэстр-4-ен-3,17-дион

К раствору 13,08 г 11а-гидрокси-7а-метилэстр-4-ен-3,17-диона (полученного предлагаемым в изобретении микробиологическим синтезом [раздел А]) в 250 мл толуола и 18,2 мл 1,8диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ена при 0°С добавляли по каплям 11,5 мл фторангидрида перфторбутан-1сульфоновой кислоты. Через 1 ч нейтрализовали 2-молярной соляной кислотой, сливали на воду, четырежды экстрагировали этилацетатом, промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили и концентрировали в вакууме. После хроматографии сырого продукта на силикагеле с использованием градиента растворителей гексан/этилацетат получили 8,7 г 11в-фтор-7а-метилэстр-4-ен-3,17-диона. Температура плавления 101,4°С, [а]_с = +135,8° (СНС1₃).

б) 11в-фтор-17в-гидрокси-7а-метилэстр-4-ен-3-он

Раствор 8,7 г 11в-фтор-7а-метилэстр-4-ен-3,17-диона в 148 мл тетрагидрофурана по каплям смешивали при 0°С с 29,5 мл 1-молярного алюмотри-трет-бутоксигидрида лития и в течение 5,5 ч перемешивали при 0°С.

Затем при 0°С добавляли разбавленную серную кислоту, после чего реакционный раствор сливали на смесь льда и воды, трижды экстрагировали этилацетатом, промывали до нейтрального состояния, сушили над сульфатом натрия, концентрировали в вакууме и хроматографировали на силикагеле с использованием гексана/этилацетата. В результате получили 5,8 г 11в-фтор-17в-гидрокси-7а-метилэстр-4-ен-3она с температурой плавления 143-144°С, [а]_с = +89,9° (СНС1₃).

Пример 5. Получение 11в-фтор-17в-(4-сульфамоилбензокси)-7а-метилэстр-4-ен-3-она

Раствор 500 мг 11в-фтор-17в-гидрокси-7а-метилэстр-4-ен-3-она в 7,5 мл пиридина смешивали при комнатной температуре с 750 мг 4-сульфамоилбензойной кислоты, 800 мг Ν,Ν-дициклогексилкарбодиимида и 125 мг η-толуолсульфоновой кислоты и перемешивали в течение 8,5 ч. Затем смесь сливали в раствор гидрокарбоната натрия, четырежды экстрагировали дихлорметаном, промывали до нейтрального состояния, сушили над сульфатом натрия, концентрировали в вакууме и хроматографировали на силикагеле с использованием дихлорметана/ацетона. В результате получили 302 мг 11в-фтор-17в-(4сульфамоилбензокси)-7а-метилэстр-4-ен-3-она с температурой плавления 232°С, |α|_υ = +100,5° (СНС1₃).

Пример 6. Получение 17а-этинил-11в-фтор-17в-гидрокси-7а-метилэстр-4-ен-3-она

а) 11в-фтор-3-метокси-7а-метилэстра-3,5-диен-17-он

Раствор 2 г 11в-фтор-7а-метилэстр-4-ен-3,17-диона в 20 мл 2,2-диметоксипропана перемешивали совместно с 200 мг тозилата пиридиния в течение 6,5 ч при 80°С. Затем разбавляли этилацетатом, промывали раствором гидрокарбоната натрия и хлорида натрия, сушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Таким путем получили 2 г сырого 11в-фтор-3-метокси-7а-метилэстра-3,5-диен-17-она.

б) 17а-этинил-11в-фтор-17в-гидрокси-7а-метилэстр-4-ен-3-он

Раствор 9,17 г хлорида церия(111) в 60 мл тетрагидрофурана по каплям смешивали при 0°С с 74,2 мл раствора этинилмагнийбромида (0,5-молярный раствор в тетрагидрофуране) и в течение 1 ч перемешивали при 0°С. Затем по каплям добавляли раствор 2 г сырого 11в-фтор-3-метокси-7а-метилэстра-3,5диен-17-она в 40 мл тетрагидрофурана и перемешивание продолжали еще в течение 3,5 ч при 0°С. Для последующей переработки добавляли насыщенный раствор хлорида аммония, сливали на воду, трижды экстрагировали этилацетатом, промывали полуконцентрированной соляной кислотой, раствором гидрокарбоната натрия и хлорида натрия, сушили над сульфатом натрия, концентрировали в вакууме и хроматографировали на силикагеле с использованием гексана/этилацетата. В результате получили 1,15 г чистого 17а-этинил-11в-фтор-17в-гидрокси-7а-метилэстр-4-ен-3-она с температурой плавления 218-220°С, [α]ρ = +19,2° (СНС1₃).

Пример 7. Получение 17а-этинил-11в-фтор-17в-гидрокси-7а-метилэстр-5(10)-ен-3-она

а) 3,3-этандиилдиокси-17 а-этинил-11 в-фтор-7 а-метилэстр-5 (10)-ен-17 β-ол

Раствор 700 мг 17а-этинил-11в-фтор-17в-гидрокси-7а-метилэстр-4-ен-3-она в 7 мл дихлорметана и 4,7 мл этиленгликоля перемешивали совместно с 2,3 мл триметилортоформиата и 30 мг гидрата η-толуолсульфоновой кислоты в течение 6,5 ч при комнатной температуре. Затем смесь сливали в раствор гидрокарбоната натрия, трижды экстрагировали этилацетатом, промывали до нейтрального состояния, сушили над сульфатом натрия, концентрировали в вакууме и хроматографировали на силикагеле с использованием гексана/этилацетата. Таким путем получили 205 мг 3,3-этандиилдиокси-17а-этинил-11в-фтор7а-метилэстр-5(10)-ен-17в-ола.

б) 17а-этинил-11в-фтор-17в-гидрокси-7а-метилэстр-5(10)-ен-3-он

Раствор 205 мг 3,3-этандиилдиокси-17а-этинил-11в-фтор-7а-метилэстр-5(10)-ен-17в-ола в 27 мл метанола и 3,6 мл воды перемешивали совместно с 361 мг щавелевой кислоты в течение 24 ч при комнатной температуре. Затем смесь сливали в раствор гидрокарбоната натрия, трижды экстрагировали этилацетатом, промывали до нейтрального состояния, сушили над сульфатом натрия, концентрировали в вакууме и хроматографировали на силикагеле с использованием гексана/этилацетата. В результате получили 95 мг 17а- 13 010572 этинил-11 в-фтор-17в-гидрокси-7а-метилэстр-5(10)-ен-3-она с температурой плавления 112-114°С.

Пример 8. Получение 17а-этинил-11в-фтор-7а-метилэстра-1,3,5(10)-триен-3,17в-диола

а) 11в-фтор-3-гидрокси-7а-метилэстра-1,3,5(10)-триен-17-он

Раствор 500 мг 11в-фтор-7а-метилэстр-4-ен-3,17-диона в 16,5 мл ацетонитрила перемешивали совместно с 400 мг бромида меди (II) в течение 6,5 ч при 25°С. Затем разбавляли этилацетатом, промывали раствором гидрокарбоната натрия и хлорида натрия, сушили над сульфатом натрия, концентрировали в вакууме и хроматографировали на силикагеле с использованием гексана/ацетона. Таким путем получили 280 мг чистого 11в-фтор-3-гидрокси-7а-метилэстра-1,3,5(10)-триен-17-она с температурой плавления 185-186°С.

б) 17а-этинил-11в-фтор-7а-метилэстра-1,3,5(10)-триен-3,17в-диол

Суспензию 2,03 г хлорида церия(Ш) в 7,5 мл тетрагидрофурана по каплям смешивали при 0°С с 16,5 мл раствора этинилмагнийбромида (0,5-молярного в тетрагидрофуране) и в течение 0,5 ч перемешивали при 0°С. Затем по каплям добавляли раствор 280 мг 11в-фтор-3-гидрокси-7а-метилэстра-1,3,5(10)триен-17-она в 2,8 мл тетрагидрофурана и перемешивание продолжали еще в течение 3,5 ч при 0°С. Для последующей переработки добавляли насыщенный раствор хлорида аммония, затем сливали на воду, четырежды экстрагировали этилацетатом, промывали до нейтрального состояния, сушили над сульфатом натрия, концентрировали в вакууме и хроматографировали на силикагеле с использованием гексана/этилацетата. В результате получили 220 мг 17а-этинил-11в-фтор-7а-метилэстра-1,3,5(10)-триен3,17в-диола с температурой плавления 115-117°С.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. 7а,17а-замещенные Πβ-галогенстероиды общей формулы 8,10,12 в которой ϋ-ν-^-Χ-Υ-Ζ представляет собой одну из циклических структур С^!-С²-С³-С⁴=С⁵-С¹⁰, С¹С²-С³-С⁴-С⁵=С¹⁰ или С^!-С²-С³-С⁴-С⁵-С¹⁰, при этом в данном случае оксогруппа (=О) связана с (=С³), или представляет собой циклическую структуру С¹=С²-С³=С⁴-С⁵=С⁶, при этом в данном случае остаток ОВ³ связан с (=С³),

В³ представляет собой Н, С1-С₄алкил, С1-С₄алканоил,

В⁷ представляет собой группировку Р-Ц, где Р обозначает С1-С₄алкилен, а О обозначает водород, С1-С₄алкил или С1-С₄фторалкил, и эта группировка Р-Ц через Р связана со стероидным каркасом,

В¹⁰ может находиться в α- либо β-положении и представляет собой Н или СН₃, однако он присутствует лишь при условии, что Χ-Υ-Ζ не обозначает С⁴-С⁵=С¹⁰,

В¹¹ представляет собой галоген,

В¹³ представляет собой метил или этил,

В¹⁷ представляет собой Н, С1-С1₈алкил, С1-С1₈алкинил,

В¹⁷ представляет собой Н, С1-С18алкил, С1-С18алкинил, при этом В¹⁷ может быть также через кетогруппу связан с 17β-оксигруппой и, кроме того, В¹⁷ дополнительно может быть замещен группой БОХВ²⁰, где х обозначает 0, 1 или 2, а В²⁰ обозначает С1-С1₈алкиларил, а также их фармацевтически приемлемые аддитивные соли, сложные эфиры и амиды.
2. 7а,17а-замещенные Πβ-галогенстероиды по п.1, отличающиеся тем, что ϋ-ν-^-Χ-Υ-Ζ представляет собой циклическую структуру С^!-С²-С³-С⁴=С⁵-С¹⁰, С -С'-С -С -С' С или С^!=С²-С³=С⁴-С⁵=С¹⁰.
3. 7а,17а-замещенные Πβ-галогенстероиды по одному из пп.1 и 2, отличающиеся тем, что В⁷ представляет собой СН3.
4. 7а,17а-замещенные Πβ-галогенстероиды по одному из пп.1-3, отличающиеся тем, что В¹¹ представляет собой фтор.
5. 7а,17а-замещенные Πβ-галогенстероиды по одному из пп.1-4, отличающиеся тем, что В¹³ представляет собой СН3.
6. 7а,17а-замещенные Πβ-галогенстероиды по одному из пп.1-5, отличающиеся тем, что В¹⁷ представляет собой Н, СН₃, С1-С1₈алкинил.

- 14 010572
7. 7а,17а-замещенные 11 β-галогенстероиды по одному из пп.1-6, отличающиеся тем, что Я¹⁷ представляет собой этинил.
8. 7а,17а-замещенные 11 β-галогенстероиды по одному из пп.1-7, отличающиеся тем, что Я¹⁷ представляет собой Н.
9. 7а,17а-замещенные 11 β-галогенстероиды по одному из пп.1-8 из группы, включающей 17α-этинил-11β-фтор-17β-гидрокси-7α-метилэстр-4-ен-3-он, 17α-этинил-11β-фтор-17β-гидрокси-7α-метилэстр-5(10)-ен-3-он и 17α-этинил-11β-фтор-7α-метилэстра-1,3,5(10)-триен-3,17β-диол.
10. Способ получения 7а,17а-замещенных 11 β-галогенстероидов общей формулы 10 по одному из пп.1-9, в которых ϋ-ν-^-Χ-Υ-Ζ представляет собой циклическую структуру С¹-С²-С³С⁴=С⁵-С¹⁰, заключающийся в том, что он включает следующие стадии:

нуклеофильное замещение в соответствующем 7а-замещенном 11а-гидроксистероиде общей формулы 4,В в положении 11 галодегидроксилирующим реагентом, взаимодействие образованного таким путем 7а-замещенного Πβ-галогенстероида с алкилирующим агентом избирательно у атома С¹⁷ каркаса с получением в результате 7а,17а-замещенного 11βгалогенстероида общей формулы 10.
11. Способ получения 7а,17а-замещенных 11 β-галогенстероидов общей формулы 12 по одному из пп.1-9, в которых ϋ-ν-^-Χ-Υ-Ζ представляет собой циклическую структуру С¹-С²-С³-С⁴-С⁵=С¹⁰, заключающийся в том, что он включает следующие стадии:

нуклеофильное замещение в соответствующем 7а-замещенном 11а-гидроксистероиде общей формулы 4,В в положении 11 галодегидроксилирующим реагентом, взаимодействие образованного таким путем 7а-замещенного Πβ-галогенстероида с алкилирующим агентом избирательно у атома С¹⁷ каркаса с получением в результате 7а,17а-замещенного 11βгалогенстероида общей формулы 10, изомеризацию 7а,17а-замещенного Πβ-галогенстероида общей формулы 10 с образованием соответствующего изомера общей формулы 12, в котором И-ν-Ψ-Χ-Υ-Ζ представляет собой циклическую структуру С¹-С²-С³-С⁴-С⁵=С¹⁰.
12. Способ получения 7а,17а-замещенных 11 β-галогенстероидов общей формулы 8 по одному из пп.1-9, в которых ϋ-ν-^-Χ-Υ-Ζ представляет собой циклическую структуру С¹=С²-С³=С⁴-С⁵=С⁶, заключающийся в том, что он включает следующие стадии:

нуклеофильное замещение в соответствующем 7а-замещенном 11а-гидроксистероиде общей формулы 4,В в положении 11 галодегидроксилирующим реагентом, окисление образованного таким путем 7а-замещенного Πβ-галогенстероида до 7а-замещенного эстра-1,3,5(10)-триена общей формулы 6 по п.17 или 18, взаимодействие 7а-замещенного эстра-1,3,5(10)-триена общей формулы 6 с алкилирующим агентом избирательно у атома С¹⁷ каркаса с получением в результате 7α,17α-замещенногоΠβгалогенстероида общей формулы 8.
13. Применение 7а,17а-замещенных 11 β-галогенстероидов общей формулы 8,10,12 по одному из пп.1-9 для получения соответствующих лекарственных средств.
14. Фармацевтические препараты, содержащие по меньшей мере один 7а,17а-замещенный 11βгалогенстероид общей формулы 8,10,12 по одному из пп.1-9 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.