EA009668B1

EA009668B1 - Ifn-бета в отдельности или в комбинации с другими лекарственными средствами для лечения болезни альцгеймера и нарушений, связанных с деменцией

Info

Publication number: EA009668B1
Application number: EA200501479A
Authority: EA
Inventors: Луиджи Гримальди
Original assignee: Арес Трейдинг С.А.
Priority date: 2003-03-19
Filing date: 2004-03-17
Publication date: 2008-02-28
Also published as: JP2006520368A; WO2004082706A2; KR20050115279A; MXPA05009986A; US20070110715A1; BRPI0408491A; CN1791423A; AR043660A1; IL170751A0; NO20054744L; CA2516990A1; EA200501479A1; WO2004082706A3; EP1620124A2; AU2004222529A1

Abstract

Настоящее изобретение относится к применению интерферона β (IFN-β) для лечения и/или предотвращения болезни Альцгеймера (AD), болезни Крейцфельда-Якоба (CJD) или болезни Герстманна-Штреусслера-Шейнкера (GSSD). Кроме того, оно относится к применению IFN-β в комбинации со средством для лечения болезни Альцгеймера для лечения и/или предотвращения болезни Альцгеймера. Предпочтительно применение IFN-β в комбинации с ингибитором холинэстеразы для лечения и/или предотвращения рано начинающейся болезни Альцгеймера.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к лечению различных видов деменции. Оно относится к применению интерферона-β (ΙΕΝ-β) для изготовления лекарственного средства для лечения и/или предотвращения болезни Альцгеймера (АО), болезни Крейцфельда-Якоба (СТО) или болезни Герстманна-Штреусслера-Шейнкера (0880). Кроме того, оно относится к применению ΙΕΝ-β в комбинации со средством для лечения болезни Альцгеймера для изготовления лекарственного средства для лечения и/или предотвращения АО. В частности, оно относится к применению ΙΕΝ-β в комбинации с ингибиторами холинэстеразы (СИЕ1), средствами, снижающими токсичность Ав, средствами заместительной гормональной терапии, средствами, снижающими уровень липидов, средствами, модулирующими секретазу, ингибиторами агрегации Ав, нейрофибриллярными ингибиторами или ингибиторами катаболизма β-амилоида для изготовления лекарственного средства для лечения и/или предотвращения АО. В частности, оно относится к применению ΙΕΝ-β в отдельности или в комбинации с ингибиторами холинэстеразы (СЙЕ1), средствами, снижающими токсичность Аβ, средствами заместительной гормональной терапии, средствами, снижающими уровень липидов, средствами, модулирующими секретазу, ингибиторами агрегации Аβ, нейрофибриллярными ингибиторами или ингибиторами катаболизма β-амилоида для изготовления лекарственного средства для лечения и/или предотвращения раннего возникновения АО.

Предшествующий уровень техники

Болезнь Альцгеймера (АО).

Болезнь Альцгеймера (АО) представляет собой прогрессирующее нейродегенеративное расстройство, характеризующееся прогрессирующим нарушением познавательной функции (потерей памяти, познавательной и поведенческой устойчивости) вследствие потери нейронов и приводящей к расстройствам речи, проблемами с суждением, с решением проблем, планированием, абстрактным мышлением, апраксии, дефицитам зрительной функции и деменции. Продемонстрировано связанное с возрастом увеличение распространенности АО, поражающей приблизительно 6-10% населения в возрасте старше 65 лет и до 50% в возрасте старше 85 лет. АО является первичной причиной деменции и четвертой по частоте причиной смерти после сердечно-сосудистых заболеваний, рака и инсульта.

Начало этого заболевания характеризуется нарушенной способностью вспоминать недавние события, но, по мере прогрессирования заболевания, снижаются другие интеллектуальные способности. Позднее возникает беспорядочное поведение, бред и потеря контроля над функциями организма. Диагноз болезни Альцгеймера основан на хорошо установленных критериях (МсКйапп с1 а1., 1984): определенность диагноза резервируется за заболеваниями, подтвержденными данными посмертного исследования; вероятность - за клиническими заболеваниями без связанных с ним болезнями и возможность - за теми индивидуумами, которые отвечают критериям других болезней, которые могут вызвать нарушение функции центральной нервной системы, таких как гипотиреоз или цереброваскулярные заболевания. Клинический диагноз заболевания основан на обследовании состояния комбинации неврологического и психического состояния и является достаточно точным. При смерти самые частые патологические проявления в мозге включают специфические нейропатологические поражения в лимбической и мозговой коре, характеризуемые внутриклеточными парными спиральными волокнами (РНЕ) и внеклеточными амилоидными бляшками. Первичным патоморфологическим признаком заболевания является внеклеточное отложение фибриллярного амилоида и его уплотнение в сенильные бляшки.

Следовательно, внутри- и внеклеточные амилоидные отложения, называемые, соответственно, нейрофибриллярными переплетениями и сенильными бляшками (отложениями фибриллярных агрегатов), связаны с болезнью Альцгеймера. Наряду с обширной потерей нейронов (нейронов, а также синапсов), они представляют собой характерные нейропатоморфологические признаки заболевания и все еще являются единственным средством посмертного подтверждения диагноза. Нейрофибриллярные переплетения состоят, в первую очередь, из гиперфосфорилированного тау (структурный белок микротрубочек), в то время как основным фибриллярным компонентом сенильных бляшек является пептид амилоида-β (Λβ). состоящий из 40-42 аминокислот фрагмент белка-предшественника Альцгеймера (АРР). Анализ генетических мутаций, которые ответственны за очень редкие семейные формы заболевания, привел к разработке гипотезы амилоидного каскада. Она характеризуется образованием и отложением амилоидных волокон, состоящих из обычно растворимого пептида Аβ, что является результатом избыточной продукции аберрантных протеолитических явлений и его взаимодействий с патологическими компаньонами, такими как аполипопротеин Е и антихимотрипсин. Они являются второстепенными компонентами сенильных бляшек и имеют аллельные варианты, которые способны увеличивать склонность Аβ к сборке в амилоидные фибриллы.

Сенильная бляшка представляет собой очаг сложной клеточной реакции, включающей активацию и микроглии, и астроцитов, прилегающих к амилоидной бляшке, приводя к повреждению нейронов. В действительности, элементы микроглии являются наиболее многочисленными и заметными клеточными компонентами, связанными с этими бляшками. Микроглия, связанная с бляшками, проявляет реактивный или активированный фенотип. Посредством приобретения реактивного фенотипа эти элементы микроглии реагируют на различные стимулы, о чем свидетельствует увеличенная экспрессия многочисленных

- 1 009668 молекул клеточной поверхности, включая антигены II класса главного комплекса гистосовместимости (МНС) и рецепторы комплемента.

Мутации трех генов, гена белка-предшественника Альцгеймера (АРР) на хромосоме 21, пресенилина 1 (Р81) на хромосоме 14 и пресенилина 2 (Р82) на хромосоме 1, были обнаружены у семей с аутосомно-доминантной рано начинающейся болезнью Альцгеймера, при которой заболевание начинается в третьей декаде жизни. Аллельный вариант аполипопротеина-Е (АРОЕ) ε 4 также был связан со спорадической и семейной болезнью, начинаясь обычно после достижения 65 лет. Предполагалось, что мутация в а2-макроглобулине связана по меньшей мере с 30% популяции АО. Мутации в генах, вызывающих рано начинающееся заболевание, повышают уровни амилоидного β-пептида (Αβ1-40 и Αβ1-42). Аллельный вариант АРОЕ может участвовать в удалении или распаде амилоида-β. Таким образом, общий путь, ведущий к патогенезу, был идентифицирован системным исследованием семей с болезнью Альцгеймера.

Трансмиссивные губчатые энцефалопатии (Т8Е).

Болезнь Крейцфельда-Якоба (СТО) и болезнь Герстманна-Штреусслера-Шейнкера (0880) представляют собой трансмиссивные губчатые энцефалопатии (Т8Е). Термин «губчатые» относится к внешнему виду инфицированного головного мозга, характеризуемому отверстиями и под микроскопом напоминающему подобие губок. СЮ представляет собой самую распространенную из известных человеческих Т8Е. Другие человеческие Т8Е включают куру, смертельную семейную бессонницу (ΕΕΙ). Куру была идентифицирована у людей из изолированного племени в Папуа Новой Гвинее и в настоящее время почти исчезла. Смертельная семейная бессонница и 0880 представляют собой крайне редкие наследственные заболевания, обнаруживаемые лишь у нескольких семей во всем мире.

Болезнь Крейцфельда-Якоба (СЮ) представляет собой необычное, редкое, дегенеративное, неизменно смертельное мозговое расстройство с распространенностью приблизительно 1 случай на миллион во всем мире, что составляет приблизительно 1/10000 распространенности болезни Альцгеймера. 85% случаев СТО являются спорадическими, причем семейные и ятрогенные (или приобретенные) случаи составляют остальное количество случаев. Начало симптомов обычно возникает в возрасте приблизительно 60 лет, и около 90% пациентов умирают на следующий год. При спорадической СТО заболевание возникает при неизвестных связанных факторах риска. При наследственной СТО имеется семейный анамнез заболевания, иногда со связью с генетической мутацией. Ятрогенная СТО передается при манипуляциях на ткани мозга или других тканях нервной системы, обычно при определенных медицинских процедурах.

Первоначально пациенты с СТО испытывают проблемы, связанные с мышечной координацией; происходят изменения личности, включая нарушение памяти, суждения и мышления; и другими обычными симптомами являются нарушение зрения, бессонница, депрессия или необычные ощущения. При прогрессировании заболевания психические нарушения становятся тяжелыми. Могут возникать непроизвольные мышечные подергивания, называемые миоклонусом, а также слепота. Могут возникнуть неспособность двигаться и говорить, и возможным исходом является кома. У этих пациентов часто возникают пневмония и другие инфекции, которые могут привести к смерти.

Существуют несколько известных вариантов СТО, которые отличаются симптомами и течением заболевания. Новый вариант или вариант (ην-СЮ. ν-СГО) начинается, в первую очередь, с психиатрических симптомов, поражает более молодых пациентов, чем другие типы СТО, и имеет более длительное, чем обычное, течение от начала симптомов до смерти. У пациентов с новым вариантом болезни Крейцфельда-Якоба симптомы развиваются в среднем возрасте 26 лет - почти на 4 десятилетия раньше, чем у пациентов со спорадическим заболеванием - и у многих пациентов проявляются выраженные аффективные симптомы, включая дисфорию, раздражительность, тревогу, апатию, потерю энергии, бессонницу и социальный аутизм. Другой вариант, называемый панэнцефалопатической формой, возникает преимущественно в Японии и имеет относительно длинное течение с симптомами, часто прогрессирующими в течение нескольких лет. Некоторые симптомы СТО могут быть аналогичны симптомам других прогрессирующих неврологических расстройств, таких как расстройства, указанные выше в отношении АО, и другие, связанные с болезнью Хантингтона. Однако СТО вызывает необычные изменения в ткани мозга и имеет тенденцию вызывать более быстрое ухудшение способности индивидуума, чем АО или большинство других типов деменции.

Болезнь Герстманна-Штреусслера-Шейнкера характеризуется мозжечковой атаксией, прогрессирующей деменцией и отсутствующими рефлексами в нижних конечностях и патоморфологически проявляется амилоидными бляшками по всей центральной нервной системе. Обычно оно возникает в пятом десятилетии, и преобладает атаксия ранней фазы. Деменция развивается позже. Течение длится в диапазоне от 2 до 10 лет.

Диагноз СТО обычно не подозревается до тех пор, пока не появятся неврологические симптомы, включая нарушение познавательной функции, боль и парестезии, дизартрию и аномалии походки. Миоклонус представляет собой поздний признак, и редко выявляется выраженный миоклонус. Стандартные диагностические тесты включают спинно-мозговую пункцию для исключения более обычных причин деменции и электроэнцефалограмму (ЭЭГ) для регистрации электрической активности мозга, которая

- 2 009668 может быть особенно ценной, потому что показывает специфический тип аномалии при СГО. Компьютерная томография мозга может помочь исключить возможность того, что симптомы возникают в результате других проблем, таких как инсульт или опухоль мозга. Сканирование мозга посредством магнитно-резонансной визуализации (МК!) также может выявить характерные признаки дегенерации мозга, которая может помочь диагностировать СГО. Но единственным путем подтверждения диагноза СГО является биопсия или патоморфологическое исследование мозга. Иммунодиагностика болезни Крейцфельда-Якоба устанавливается использованием антител, которые распознают и нормальные, и патологические изоформы прионового белка или РгР, при специфичности, приданной предварительной обработкой ткани, которая преимущественно разрушает нормальный белок, в то же самое время сохраняя патологический белок.

Ведущая современная научная теория считает, что СГО и другие Т8Е вызваны не организмом, а типом белка, называемого прионом. Прионы возникают и в нормальной форме, и в форме РгР, который представляет собой безвредный белок, обнаруживаемый в клетках организма; и в инфекционной форме или РтР8е, которая вызывает заболевание. Безвредные и инфекционные формы прионового белка почти идентичные, но инфекционная форма принимает другую, свернутую форму, отличную от нормального белка. Спорадическая СГО может развиться, потому что некоторые из нормальных прионов индивидуума спонтанно изменяются в инфекционную форму белка, а затем изменяют прион в других клетках в цепной реакции. Аномальные прионовые белки при их появлении сцепляются вместе и образуют волокна и/или глыбки, называемые бляшками. Волокна и бляшки могут начать накапливаться за годы до начала появления симптомов СГО.

Прионовые заболевания (например, СГО и Ο88Ό), подобные АО, характеризуются внеклеточным накоплением амилоидных волокон, состоящих из устойчивых к протеазе изоформ (РтР8е) РгР, подобных АО, присутствие реакции микроглии в пораженных областях мозга было показано при чесотке и СГО. Мультицентрические амилоидные бляшки состоят из фрагментов РгР, устойчивых к протеазе, из 8, 15 и 21-30 кДа. Хотя фрагмент 21 кДа также наблюдался при СГО, фрагмент 8 кДа оказывается специфичным для С88О. Хотя имеется много неврологических аномалий, С88О отличается от СГО присутствием курубляшек и многочисленных, мультицентрических, хлопьевидных бляшек в мозговой и мозжечковой коре, базальных ганглиях и белом веществе.

У пациентов с семейной СГО, а также С88О имеются мутации в гене, кодирующем РгР (РКИР). Человеческий прионовый белок кодируется одним экзоном на длинном плече хромосомы 20. Важно, что по меньшей мере 2 мутации в прионовом гене (у кодонов 145 и 183) могут вызвать заболевание, которое клинически имитирует АО (см. ниже), и может присутствовать вставка у пары оснований 144 при очень вариабельном фенотипе.

Самой распространенной мутацией, связанной с семейным СГО, является кодон 200 прионового гена с немного более ранним средним возрастом начала (55 лет) и мутациями вблизи кодонов 208 и 210, обнаруживаемых у итальянских семей. Вторая по частоте мутация у кодона 178 вызывает заболевание с более ранним началом (в пятом десятилетии) и более длительным течением (1-2 года). Хотя вариантная СГО была связана с передачей возбудителя бычьей губчатой энцефалопатии, все исследованные до настоящего времени случаи были гомозиготными по метионину у кодона 129. У многих пациентов со спорадической болезнью Крейцфельда-Якоба имеются аномальные белки в их спинно-мозговой жидкости, в частности белок 14-3-3.

При С88О мутация кодона 102 является самой частой (обнаруживаемая в нескольких европейских странах и в Японии). Она вызывает атаксическую форму С88О; мозжечковый синдром в третьем или четвертом десятилетии при начале с последующими зрительными, пирамидными и интеллектуальными признаками. Смерть наступает приблизительно между 1 и 11 годами после начала. Амилоидные бляшки можно обнаружить, главным образом, в мозжечке. Мутация кодона 117 (немецкие и аляскинские семьи) вызывает деменцию с пирамидными или псевдобульбарными признаками, такими как параличи глазодвигательных мышц, глухота, псевдобульбарный паралич и корковая слепота, а также подавленные рефлексы и паралич подошвенных разгибателей. Амилоидные бляшки являются моно- или мультицентрическими. Другие редкие мутации включают 198 (одна американская семья), 217 (одна шведская семья), 145 (один японский пациент) и 105 (1 случай в Японии). Мультицентрические бляшки и нейрофибриллярная дегенерация, сходная с таковой при АО, обнаруживаются при мутациях кодона 198 и 217. Клинические симптомы, связанные с АО, развиваются при мутации кодона 145, где амилоидные бляшки образованы из усеченных РгР. В конечном счете, мутация кодона 105 вызывает спастические парапарезы с поздней деменцией. Амилоидные бляшки, главным образом, локализуются в лобной доле.

Нет лечения, которое может излечить или устранить СГО. Современное лечение по поводу СГО нацелено на облегчение симптомов и достижение максимально возможной управляемости пациента. Описанные препараты могут облегчить боль, и препараты клоназепам и вальпроат натрия могут облегчить миоклонус. Нет также способов лечения по поводу С88О. Могут быть полезны соединения, которые могут ингибировать превращение РгР в его патологические изоформы, включая акридин и производные фенотиазина хинакрин и хлорпромазин. Некоторые формы РгР могут противостоять конформационному превращению в патологические изоформы. Избыточная экспрессия этих «доминантно негативных» при

- 3 009668 оновых белков может предотвратить или резко замедлить развитие чесотки у мышей, свидетельствуя о том, что вмешательство в превращение РгР в его патологическое состояние представляет возможный терапевтический подход.

Ингибиторы СЬЕ.

Ацетилхолинэстеразы или ацетилхолинацетилгидролазы (АСЬЕ, ЕС 3.1.1.8) и родственные ферментные бутирилхолинэстеразы или ацилхолинацилгидролазы (ВиСЬЕ, ЕС 3.1.1.7) представляют собой другие белки, которые, как обнаруживается, аномально связаны с сенильными бляшками при болезни Альцгеймера (1). Исследования показали, что оба фермента могут совместно регулировать уровни нейромедиатора ацетилхолина (АСЬ) гидролизом у холинергических синапсов и нервно-мышечных синапсов в нервной системе млекопитающих (2) и могут играть важные роли в мозге пациентов с АО. Реакция гидролиза происходит посредством нуклеофильной атаки на карбонильный углерод, ацилируя фермент и высвобождая холин. За этим следует быстрый гидролиз ацилированного фермента, дающий уксусную кислоту, и восстановление фермента. АСЬЕ предпочтительно гидролизует сложные ацетиловые эфиры, такие как АСЬ, в то время как ВиСЬЕ - преимущественно другие типы сложных эфиров, таких как бутирилхолин. Существуют 3 различные субъединицы АСЬЕ, и они возникают альтернативным сплайсингом мРНК: синаптический АСЬЕ (АСЬЕ-8), гематопоэтический АСЬЕ (АСЬЕ-Н), обнаруживаемый на эритроцитах, и «прочитанный» АСЬЕ (АСЬЕ-К).

Тяжесть нейропатологии типа Альцгеймера, а конкретнее, дегенеративные изменения в базальном переднем мозге снижают содержание АСЬЕ и активность холинацетилтрансферазы (3), которая коррелируется с пораженными областями (4) и возникает рано, относясь к ранним симптомам. ВиСЬЕ обычно экспрессирован в мозге лишь на очень низких уровнях (5). Существует также корреляция между областями, которые имеют высокие уровни АсЬЕ, и дегенеративными областями при болезни Альцгеймера (6).

Данные показывают, что АСЬЕ может играть непосредственную роль при дифференциации нейронов (7). Преходящая экспрессия АСЬЕ в мозге во время эмбриогенеза свидетельствует о том, что АСЬЕ может функционировать при регуляции разрастания нейритов (8) и в развитии аксонных путей (9). Кроме того, была изучена роль АСЬЕ в клеточной адгезии (10). Результаты указывают на то, что АСЬЕ способствует разрастанию нейритов в линии клеток нейробластомы посредством способности к клеточной адгезии (11). Более того, исследования показали, что периферический анионный сайт АСЬЕ участвует в нейротропной активности фермента (12), и сделан вывод о том, что функция сцепления АСЬЕ локализуется в периферическом анионном сайте (13).

Было продемонстрировано взаимодействие между АСЬЕ (но не ВиСЬЕ) и фибриллярным Ав (14), и показано, что АСЬЕ ведет себя как патологический компаньон (способный увеличивать скорость образования фибрилл Ав (15) и нейротоксичность фибрилл (16). АСЬЕ непосредственно способствует сборке пептида Ав в амилоидные фибриллы, формирующие устойчивые комплексы вА-АСЬЕ, которые способны изменять биохимические и фармакологические свойства фермента и вызывать увеличение нейротоксичности фибрилл вА. Было также показано, что нейротоксичность агрегатов пептида Ав зависит от количества АСЬЕ, связанного с комплексами, свидетельствуя также о том, что АСЬЕ играет роль при нейродегенерации в мозге при АО. Сообщается, что ВиСЬЕ связан с амилоидными бляшками. Присутствие фибриллогенной области внутри АСЬЕ может быть релевантным для взаимодействия АСЬЕ с амилоидными фибриллами, образованными Ав (17), и было обнаружено, что ингибиторы человеческой рекомбинантной ацетилхолинэстеразы (НиАСЬЕ) ингибируют агрегацию Ав, вызванную НиАСЬЕ (18). Следовательно, были идентифицированы области, связанные с не холинергическими функциями АСЬЕ, такие как сцепление и отложение Ав. Было показано, что усиление активности АСЬЕ внутри и вокруг амилоидных бляшек вызывается Ав25-35, опосредованными окислительным стрессом, и что витамин Е и ингибиторы N08 предотвращали этот эффект, дополнительно свидетельствуя о важной роли в поддержании уровней ацетилхолиновых синапсов, таким образом, предотвращая или улучшая познавательную функцию и функцию памяти пациентов с АО (19).

Таким образом, холинергические дефициты (в частности, потеря корковой холинергической нейропередачи) коррелируют с нарушением познавательной функции и психических функций, связанных с АО. Разработка первых эффективных способов симптоматического лечения по поводу АО от легкой до умеренной степени тяжести (20) включает ингибиторы холинэстеразы (СЬЕ1), которые действуют ингибированием разрушения АСЬ (21). Клиническая эффективность этих препаратов характеризовалась когнитивными, функциональными и общими улучшениями у пациентов с АО, и существуют доказательства, что они могут задержать прогрессирование деменции (21). Холинергические препараты могут быть эффективными при всех формах АО (легкой, умеренной и тяжелой). Хотя неокортикальные холинэргические дефициты характерны для пациентов с АО с тяжелой деменцией, явные холинергические дефициты, в целом, не появляются до относительно позднего периода в течении заболевания (22). Следовательно, СЬЕ1 проявили эффективность у пациентов с АО «от умеренной до тяжелой степени тяжести» (23). Кроме того, галантамин проявил эффективность у пациентов с «запущенной умеренной» АО, дополнительно повышая возможность применения СЬЕ1 не только при АО от легкой до умеренной степени тяжести (23).

Ингибиторы СЬЕ1 действуют на 2 сайта-мишени на ферменте, активный сайт и периферический

- 4 009668 сайт. Ингибиторы, направленные на активный сайт, предотвращают связывание молекулы субстрата или ее гидролиз, или занимая сайт с высоким аффинитетом (такрин) (24), или необратимым взаимодействием с каталитическим серином (органофосфатами и карбаматами) (25). Периферический сайт состоит из менее четко определенной области, локализованной у входа в каталитическое «ущелье». Ингибиторы, которые связываются с этим сайтом, включают небольшие молекулы, такие как пропидий (26) и пептидные токсины, такие как фасцикулины (27). бис-Четвертичные ингибиторы, такие как декаметоний (28), одновременно связываются с активным и периферическим сайтами, занимая, таким образом, все каталитическое «ущелье».

Отдельные СЬЕ1 отличаются друг от друга в отношении их фармакологических свойств, и эти различия могут быть отражены в их профилях эффективности или безопасности. Такрин, донепезил и галантамин представляют собой обратимые СЬЕ1, метрифонат представляет собой необратимый СЬЕ1, и ривастигмин представляет собой псевдонеобратимые (медленно обратимые) СЬЕ1 с промежуточной длительностью действия. Принимая во внимание, что первичной мишенью этих средств является АСЬЕ, некоторые также проявляют аффинитет к ВиСЬЕ. Некоторые ингибиторы (например, галантамин) имеют также двойной тип действия, модулируя никотиновые ацетилхолиновые рецепторы и ингибируя АСЬЕ (23). Данное фармакологическое свойство было связано со способностью никотина и других родственных агонистов а7-рецепторов обеспечивать нейрозащиту на разнообразных экспериментальных моделях (29). Предполагается, что комбинация ингибирования АСЬЕ и модуляции никотиновых ацетилхолиновых рецепторов обеспечит потенциальные значительные преимущества перед одним ингибированием АСЬЕ в облегчении ацетилхолиновой нейропередачи (30). Было показано, что холин обладает и агонистической активностью в отношении а7-никотиновых рецепторов, и потенциальной нейрозащитной активностью, и многие из этих соединений, включая пирролидинхолин, транспортируются наряду с холином в ЦНС (29). Другие соединения также проявляют двойной ингибиторный тип в отношении ЛС11Е и моноаминооксидазы (МАО). Расагилин, селегилин и транилципромин представляют собой ингибиторы МАО, которые, вероятно, задерживают дальнейшее нарушение познавательных функций до более далеко зашедших форм при АО. Карбаматы имино-1,2,3,4-тетрагидроциклопент[Ь]индола (гибриды ингибитора АСЬЕ физостигмина и ингибиторов МАО селегилина и транилципромина), 4-ацетиланилиновые производные Ν-пиримидина, производные 7-арилоксикумарина, пропаргиламинокарбаматы, такие как Ν-пропаргиламиноинданы и Ν-пропаргилфенэтиламины, представляют собой соединения, проявляющие двойную активность, ингибирующую МАО-АСЬЕ.

Учитывая не холинергические аспекты холинергического фермента АСЬЕ, их связь с признаками болезни Альцгеймера и роль периферического сайта АСЬЕ во всех этих функциях, а также ингибиторы двух сайтов АСЬЕ и ингибиторы двойного типа, такие как АСЬЕ1 с агонистами а7-рецепторов или ингибиторами МАО, могут одновременно происходить облегчение когнитивного дефицита и снижение сборки β-амилоида, эффективно задерживающие нейродегенеративный процесс.

Следовательно, ингибиторы холинэстеразы, такрин, амиридин, донепезил и производные ТАК-147 и СР-118954, минаприн, ривастигмин, галантамин, гуперзин, гуприн, производные бис-тетрагидроаминоакридина (бис-ТНА), такие как бис-(7)-такрин, имидазолы, 1,2,4-тиадиазолидинон, производные бензазепина, 4,4'-бипиридин, инденхинолиниламин, декаметоний, эдрофоний, В\х284С5Е производное физостигмина эптастигмин, метрифонат, пропидий, фасцикулины, органофосфаты, карбаматы, карбаматы имино-1,2,3,4-тетрагидроциклопент[Ь]индола (гибриды ингибитора АСЬЕ физостигмина и ингибиторы МАО селегилин и транилципромин), производные №пиримидин-4-ацетиланилина, производные 7-арилоксикумарина, пропаргиламинокарбаматы, такие как Ν-пропаргиламиноинданы и Ν-пропаргилфенилтиамины, витамин Е, ингибиторы, предшественники ΝΟ8, такие как холин и пирролидинхолин, а также агонисты холинергических рецепторов (например, никотиновых, в частности α7 и мускариновых) можно использовать при лечении АО.

Другие способы лечения болезни Альцгеймера

Снижение токсичности Ав.

Противовоспалительные средства могут оказаться полезными при лечении АО (31). Нестероидные противовоспалительные препараты, такие как ибупрофен, индометацин и сульфид сулиндака, уменьшают количество Ав1-42 (32, 33). Связанные со смертью ингибиторы протеинкиназы (ОАРК), такие как производные 3-аминопиридазина, могут модулировать нейровоспалительные реакции в астроцитах активацией Ав (34). Ингибиторы циклооксигеназ (СОХ-1 и -2), антиоксиданты, такие как витамины С и Е, а также модуляторы ΝΜΟΛ. такие как мемантин, также могут снизить клеточную токсичность Ав. Ингибиторы МАО расагилин, селегилин и транилципромин, как указано выше, вероятно, задержат дальнейшее ухудшение познавательных функций до более поздних форм при АО.

Гормональное замещение.

Применение эстрогена женщинами в постклимактерическом периоде было связано со сниженным риском АО (35). У женщин, применяющих гормональное замещение, риск заболевания снижен приблизительно на 50%. Было обнаружено, что эстроген оказывает антиамилоидные эффекты регуляцией переработки амилоидного белка-предшественника в пути гамма-секретазы (36).

- 5 009668

Средства, снижающие уровень липидов, и модуляторы холестерина.

Средства, снижающие уровень липидов (ингибиторы редуктазы 3-гидрокси-3-метилглутарил кофермента А (НМС-СоА)), или статины связаны с более низким риском АО. Было показано, что статины снижают внутри- и внеклеточное количество пептида Ав (37). Эти средства включают метил-β-цикло декстрин, 7-дегидрохолестеринредуктазу (например, ВМ15.766), ингибиторы ацил кофермента А: холестерин ацилтрансферазы (АСАТ), ингибиторы Р13К, такие как вортманнин, ловастатин, правастатин, аторвастатин, симвастатин, флувастатин, церивастатин, розувастатин, компактин, мевилонин, мевастатин, визастатин, велостатин, синвинолин, ривастатин, итавастатин, питавастатин.

Ингибиторы секретаз.

Ингибиторы β- и γ-секретазы (аспарагиновые протеазы), вероятно, снизят уровни Αβ1-40 и Αβ1-42, и молекулы, стимулирующие α-секретазу, также можно применять при лечении АО. Пептиды Аβ расщепляются из АРР последовательным протеолизом β- и γ-секретазами, генерирующими Αβ1-40, Αβ1-42 и Αβ1-43. α-секретаза расщепляет также АРР, генерирующий фрагменты кАРРа и С83, которые являются не амилоидогенными фрагментами. Затем С83 расщепляется γ-секретазой, генерируя пептид р3. Ингибиторы фермента, расщепляющего β-сайт амилоида (ВАСЕ) и ВАСЕ2 (β-секретазы), которые требуются для продукции Аβ, использованием, например, пептидных ингибиторов, могут быть полезны в качестве терапевтического подхода к АО (38). Альдегид 1 трипептида, 8ΙΒ-1281, ОМ99-2 и 81а1-Уа1 - все эти соединения являются пептидными ингибиторами. Непептидные ингибиторы ВАСЕ включают алкоксизамещенные тетралины. Ингибиторы γ-секретазы включают и пептидные, и мелкие молекулы, такие как соединения на основе дифторкетона, 8ΙΒ-1405, гидроксизамещенная пептидмочевина, производные аланинфенилглицина, капролактамы, бензодиазепины и гексанамиды. Непептидные ингибиторы γ-секретазы включают сульфонамид фенхиламина, бициклический сульфонамид и изокумарин. Вероятные ингибиторы продукции амилоида посредством механизма γ-секретазы, кроме того, включают сульфонамид, диарилацетилен, имидазопиридин и полиоксигенированные ароматические структуры. Молекулы, стимулирующие а-секретазу, включают активаторы протеинкиназы С, глутамат, карбахол, мускариновые агонисты, А1Т-082 (№о1горЫи™), нейротропные агенты, соединения, содержащие медь(11), и средства, истощающие запасы холестерина.

Ингибиторы агрегации Аβ.

Аβ может агрегироваться в нейротоксические олигомеры и фибриллы после отщепления от АРР. Ингибиторы пептидила (например, ингибиторы пентапептидов) представляют собой фрагменты Аβ или аналоги фрагментов из центральной гидрофобной области (А[310-25) пептида, которые связывают Ар, и изменяют образование агрегатов А(к Непептидиловые ингибиторы представляют собой аналоги связывающих амилоид красителей Конго красный и тиофлавин Т, аналоги противоракового средства доксорубицина (например, антрациклин-4'-деокси-4'-йододоксорубицин (ГООХ)), антибиотики, такие как рифампицин или его аналоги, и клиохинол, бензофураны (например, 8КЕ-74652), ингибиторы сывороточного амилоидного белка (8АР), такие как каптоприл (например, СРНРС), и образование комплексов металлов при добавлении Си²⁺, Ζη²⁺ или Ее³⁺.

Нейрофибриллярное ингибирование.

Синтаза-киназа гликогена (Ο8Κ3β) и зависимая от циклина киназа 5 (ебк5), которые представляют собой направляемые пролином киназы, ассоциируются с микротрубочками, фосфорилатом тау у релевантных АО эпитопов и участвуют в апоптотических каскадах (39), которые могут быть опосредованы кальпаином. Ингибиторы Ο8Κ3β, такие как Ь1С1, Ο8Κ3β и ингибиторы ебк5, такие как индирубины и паулоны, и ингибиторы кальпаина могут уменьшить патологию тау при АО, снижая нейрофибриллярную патологию. Препараты, стабилизирующие микротрубочки, такие как паклитаксел и родственные средства, усиливают выживание клеток и снижают апоптоз, вызванный Λβ (40).

Катаболизм β-амилоида.

Ферменты, которые разрушают амилоидные пептиды или эндогенные ингибиторы этих ферментов, могут представлять собой мишени для лечения АО (41). Протеолитические ферменты включают цинковые металлопротеиназы (например, неприлизин), эндотелинпревращающий фермент, ферменты, разрушающие инсулин (например, ГОЕ, инсулисин) и плазмин. Были идентифицированы ингибиторы неприлизина, которые могут представлять мишени для лекарственной интервенции (41).

Интерфероны

Интерфероны представляют собой другой класс молекул, которые могут оказаться полезными при лечении сенильной деменции.

Интерфероны представляют собой цитокины, т.е. растворимые белки, которые передают информацию между клетками и играют существенную роль в иммунной системе, помогая разрушить микроорганизмы, которые вызывают инфекцию, и восстанавливая повреждение. Интерфероны естественно секретируются инфицированными клетками и впервые были идентифицированы в 1957г. Их название происходит от того факта, что они «вмешиваются» в репликацию и продукцию вирусов.

Интерфероны проявляют и антивирусную, и антипролиферативную активность. На основании био

- 6 009668 химических и иммунологических свойств, естественно встречающиеся человеческие интерфероны группируются в 3 основных класса: интерферон-альфа (лейкоцит), интерферон-бета (фибробласт) и интерферон-гамма (иммунный). Альфа-интерферон в настоящее время утвержден для применения в США и других странах для лечения лейкозного ретикулоэндотелиоза, венерических бородавок, саркомы Капоши (рака, обычно поражающего пациентов, страдающих синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД)) и хронического не-А, не-В гепатита.

Кроме того, интерфероны (ΙΕΝ) представляют собой гликопротеиды, продуцируемые организмом в ответ на вирусную инфекцию. Они ингибируют размножение вирусов в защищенных клетках. Поскольку ΙΕΝ состоят из белка более низкой молекулярной массы, они в высшей степени не специфичны в их действии, т.е. ΙΕΝ, индуцированный одним вирусом, эффективен против широкого диапазона других вирусов. Однако они обладают видовой специфичностью, т.е. ΙΕΝ, продуцируемый одним видом, будет стимулировать антивирусную активность клеток того же или близко родственного вида. ΙΕΝ представляли собой первую группу цитокинов для использования ввиду их возможной противоопухолевой и противовирусной активности.

основных ΙΕΝ именуются ΙΕΝ-α , ΙΕΝ-β и ΙΕΝ-γ. Такие основные виды ΙΕΝ первоначально классифицировались в соответствии с их клетками происхождения (лейкоцитами, фибробластами или Т клетками). Однако стало ясно, что несколько типов могут продуцироваться одной клеткой. С тех пор ΙΕΝ называется ΙΕΝ-α, ΙΕΝ фибробластов представляет собой ΙΕΝ-β и ΙΕΝ Т клеток представляет собой ΙΕΝ-γ. Существует также четвертый тип ΙΕΝ, лимфобластоидный, продуцируемый в линии клеток Ναιηα1\να (полученной из лимфомы Беркитта), которая, как оказывается, продуцирует смесь ΙΕΝ как лейкоцитов, так и фибробластов.

Об интерфероновой единице или международной единице для интерферона (ЕД или МЕ для международной единицы) сообщалось как о мере активности ΙΕΝ, определенной как количество, необходимое для защиты 50% клеток против вирусного повреждения. Анализ, который можно использовать для измерения биологической активности, представляет собой анализ ингибирования цитопатического эффекта, как описано в публикации (42). В этих противовирусных анализах на интерферон приблизительно 1 ед./мл интерферона представляет собой количество, необходимое для того, чтобы вызвать цитопатический эффект, составляющий 50%. Единицы определяются в отношении международного эталонного стандарта для Ηιι-ΙΕΝ-бета. предоставляемого Национальными Институтами Здоровья (43).

Каждый класс ΙΕΝ содержит несколько различных типов. Каждый из ΙΕΝ-β и ΙΕΝ-γ представляет собой продукт одного гена.

Белки, классифицированные как ΙΕΝ-α, представляют собой наиболее разнообразную группу, содержащую приблизительно 15 типов. Существует кластер генов ΙΕΝ-α на хромосоме 9, содержащий по меньшей мере 23 члена, из которых 15 являются активными и транскрибированными. Зрелые ΙΕΝ-α являются не гликозилированными.

Все ΙΕΝ-α и ΙΕΝ-β имеют одинаковую длину (165 или 166 аминокислот) с одинаковой биологической активностью. ΙΕΝ-γ имеют длину 146 аминокислот, и они менее близко напоминают классы α и β. Только ΙΕΝ-γ могут активировать макрофаги или индуцировать созревание Т клеток-киллеров. В сущности, эти новые типы терапевтических средств могут быть названы модификаторами биологической реакции (ВКМ), потому что они оказывают воздействие на реакцию организма на опухоль, воздействуя на распознавание посредством иммуномодуляции.

В частности, интерферон фибробластов человека (ΙΕΝ-β) обладает антивирусной активностью и может также стимулировать естественные клетки-киллеры против неопластических клеток. Он представляет собой полипептид приблизительно 20000 Да, индуцированный вирусами и двухнитевыми РНК. Из нуклеотидной последовательности гена интерферона фибробластов, клонированного технологией рекомбинантной ДНК (44), была прослежена полная аминокислотная последовательность белка. Он имеет длину 166 аминокислот.

Была описана мутация у основания 842 (Сук^Туг в положении 141), которая устраняет его противовирусную активность (45) и вариантный клон с делецией нуклеотидов 1119-1121.

Искусственная мутация была внесена замещением основания 469 (Т) (А), вызывающим переключение аминокислоты с Сук^-Бег в положении 17 (46). Сообщалось, что полученный ΙΕΝ-β так же активен, как «нативный» ΙΕΝ-β, и устойчив во время длительного хранения (-70°С).

РеЫГ (рекомбинантный человеческий интерферон-β) представляет собой последнюю разработку в терапии интерфероном по поводу рассеянного склероза (МБ) и представляет значительный прогресс в лечении. ВеЫГ® представляет собой интерферон (ШЩ-бета 1а, продуцируемый линиями клеток млекопитающих. Было установлено, что интерферон (ШЩ-бета 1а, вводимый подкожно 3 раза в неделю, эффективен при лечении рецидивирующего-ремиттирующего рассеянного склероза (КК.-МБ). Интерферон-бета 1а может оказывать положительный эффект на отдаленное течение МБ снижением числа и тяжести рецидивов и снижением симптоматики заболевания и активности заболевания, по данным измерения ЯМР (Тйе Талсе!, 1998).

Было показано, что ΙΕΝ-β представляет собой мощный стимулятор продукции астроцитами фактора роста нервов, и на основании этого наблюдения предполагалось, что ΙΕΝ-β может найти потенциальное

- 7 009668 применение при ΑΌ, но это заявление не было подкреплено экспериментальными данными или какимилибо другими доказательствами (47).

Большинство современных терапевтических стратегий при ΆΌ направлены на снижение уровней Άβ и уменьшение уровней токсических агрегатов Άβ посредством (1) ингибирования переработки амилоидного белка-предшественника (АРР) в пептид Άβ, (2) ингибирования, устранения или клиренса агрегации Άβ, (3) индукции холестерина и (4) иммунизации Άβ. Настоящее изобретение включает использование одного интерферона-β для лечения ΆΌ и губчатых энцефалопатий или в комбинации с указанными выше имеющимися стратегиями лечения ΆΌ для продукции синергического эффекта для лечения ΆΌ.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение основано на данных о том, что введение ΙΕΝ-β отдельно или в комбинации с ингибиторами холинэстеразы (Ο11ΕΙ) оказывает благоприятное воздействие на рано начинающуюся болезнь Άльцгеймера (ΑΌ) и значительно снижает клинические признаки заболевания у пациентов с рано начинающейся болезнью Лльцгеймера. На основании общих признаков болезни Άльцгеймера и губчатых энцефалопатий, ΙΕΝ-β мог бы также быть благоприятен при болезни Крейцфельда-Якоба (СГО) или болезни Герстманна-Штреусслера-Шейнкера (Ο88Ό).

Поэтому первой задачей настоящего изобретения является применение интерферона-β (ΙΕΝ-β) или его изоформы, мутеина, гибридного белка, функционального производного, активной фракции или соли для производства лекарственного средства для лечения и/или предотвращения ΑΌ, СГО или С88Э.

Второй задачей настоящего изобретения является применение ΙΕΝ-β или его изоформы, мутеина, гибридного белка, функционального производного, активной фракции или соли в комбинации со средством для лечения болезни Άльцгеймера для изготовления лекарственного средства для производства и/или предотвращения ΑΌ.

Третьей задачей настоящего изобретения является применение ΙΕΝ-β или его изоформы, мутеина, гибридного белка, функционального производного, активной фракции или соли отдельно или в комбинации с ингибиторами холинэстеразы (СИЕ!), средствами, снижающими токсичность Άβ, средствами гормонального замещения, средствами, снижающими уровень липидов, средствами, модулирующими секретазу, ингибиторами агрегации Άβ, нейрофибриллярными ингибиторами или ингибиторами катаболизма β-амилоида для производства лекарственного средства для лечения и/или предотвращения рано начинающейся ΑΌ.

Четвертой задачей настоящего изобретения является применение ΙΕΝ-β или его изоформы, мутеина, гибридного белка, функционального производного, активной фракции или соли в комбинации с ингибиторами холинэстеразы (Ο11ΕΙ). средствами, снижающими токсичность Άβ, средствами гормонального замещения, средствами, снижающими уровень липидов, средствами, модулирующими секретазу, ингибиторами агрегации Άβ, нейрофибриллярными ингибиторами или ингибиторами катаболизма β-амилоида для производства лекарственного средства для лечения и/или предотвращения ΑΌ.

Пятой задачей настоящего изобретения является применение вещества, состоящего из двух отдельных композиций, изготовленных в упаковочной единице, причем одна композиция содержит ΙΕΝ-β, а другая содержит средство для лечения болезни Άльцгеймера, выбранное из группы, состоящей из ингибиторов холинэстеразы, средств, снижающих токсичность Άβ, средств гормонального замещения, средств, снижающих уровень липидов, средств, модулирующих секретазу, ингибиторов агрегации Άβ, нейрофибриллярных ингибиторов или ингибиторов катаболизма β-амилоида для одновременного, последовательного или отдельного применения, но совместного введения для лечения болезни Άльцгеймера.

Шестой задачей настоящего изобретения является предоставление фармацевтической композиции, содержащей ΙΕΝ-β и средство для лечения болезни Άльцгеймера, выбранное из групп, состоящих из ингибиторов холинэстеразы, средств, снижающих токсичность Άβ, средств гормонального замещения, средств, снижающих уровень липидов, средств, модулирующих секретазу, ингибиторов агрегации Άβ, нейрофибриллярных ингибиторов или ингибиторов катаболизма β-амилоида, в присутствии одного или более фармацевтически приемлемых эксципиентов.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

В соответствии с настоящим изобретением было обнаружено, что интерферон-β при введении отдельно или в комбинации с ингибитором холинэстеразы (Ο11ΕΙ) оказывают выраженное благоприятное воздействие на клиническую тяжесть рано начинающейся болезни Άльцгеймера (ΑΌ). Кроме того, было показано, что ΙΕΝ-β облегчает состояние пациентов с рано начинающейся ΑΌ, синергически усиливая терапевтическую активность ингибиторов холинэстеразы у пациентов с рано начинающейся ΑΌ. Основываясь на том обстоятельстве, что ΙΕΝ-β представляет собой усилитель средств для лечения болезни Άльцгеймера (т.е. ΟΙιΕΙ), ΙΕΝ-β в комбинации с другими средствами для лечения болезни Άльцгеймера мог бы быть благоприятным при ΑΌ. На основании общих признаков ΙΕΝ-β мог бы также использоваться для лечения губчатых энцефалопатий, подобных болезни Крейцфельда-Якоба (СГО) или болезни Герстманна-Штреусслера-Шейнкера (Ο88Ό).

Поэтому один аспект изобретения относится к применению интерферона-β (ΙΕΝ-β) или его изоформы, мутеина, гибридного белка, функционального производного, активной фракции или соли для произ

- 8 009668 водства лекарственного средства для лечения и/или предотвращения АО, СЮ или С88О.

Во втором аспекте изобретение относится к применению интерферона-β (ΙΕΝ-β) или его изоформы, мутеина, гибридного белка, функционального производного, активной фракции или соли в комбинации со средством для лечения болезни Альцгеймера, выбранным из группы, состоящей из ингибиторов холинэстеразы, средствами, снижающими токсичность Аβ, средствами гормонального замещения, средствами, снижающими уровень липидов, средствами, модулирующими секретазу, ингибиторами агрегации Аβ, нейрофибриллярными ингибиторами или ингибиторами катаболизма β-амилоида, для производства лекарственного средства для лечения и/или предотвращения болезни Альцгеймера, для одновременного, последовательного или отдельного применения.

Предпочтительно изобретение относится к определенной подкатегории болезни Альцгеймера, причем эта подкатегория АО относится к подкатегории раннего начала.

Используемый в настоящем описании термин «рано начинающаяся АО» охватывает подкатегорию пациентов, в которой возраст начала АО происходит постоянно до возраста от 60 до 65 лет, а часто до возраста 55 лет.

Также предпочтительно, чтобы ингибитором холинэстеразы (СНЫ) был ингибитор ацетилхолинэстеразы и/или ингибитор бутирилхолинэстеразы или его изоформа, мутеин, гибридный белок, рекомбинантный белок, функциональное производное, гибриды, варианты, активная фракция или соль.

Также наиболее предпочтительно СНЫ представляет собой донепезил, ривастигмин, галантамин, такрин, амиридин, минаприн, гуперзин, гуприн, бис-тетрагидроаминоакридин (бис-ТНА), имидазолы, 1,2,4-тиадиазолидинон, бензазепин, 4,4'-бипиридин, инденхинолиниламин, декаметоний, эдрофоний, физостигмин, метрифонат, пропидий, фасцикулины, органофосфаты, карбаматы, карбаматы имино-1,2,3,4тетрагидроциклопент[Ь] индола, №пиримидин-4-ацетиланилина, 7-арилоксикумарин, пропаргиламинокарбаматы, витамин Е, ингибиторы ΝΟ8, предшественники АСН, такие как холин и пирролидинхолин, или агонисты холинергических рецепторов (например, никотиновых, в частности α7, и мускариновых).

Также предпочтительно, чтобы средствами, снижающими токсичность Аβ, были ибупрофен, индометацин, сульфид сулиндака, связанные со смертью ингибиторы протеинкиназы (ОАРК), такие как производные 3-аминопиридазина, ингибиторы циклооксигеназ (СОХ-1 и -2), антиоксиданты, такие как витамины С и Е, модуляторы ΝΜΟΑ такие как мемантин, или ингибиторы МАО, такие как расагилин, селегилин и транилципромин.

Также предпочтительно, чтобы средство гормонального замещения представляло собой эстроген.

Также предпочтительно, чтобы средства, снижающие уровень липидов, представляли собой ингибиторы редуктазы 3-гидрокси-3-метилглутарил кофермента А (НМО-СоА), статины, ловастатин, правастатин, аторвастатин, симвастатин, флувастатин, церивастатин, розувастатин, компактин, мевилонин, мевастатин, визастатин, велостатин, синвинолин, ривастатин, итавастатин, питавастатин, метил-β-циклодекстрин, редуктазы 7-дегидрохолестерина, ингибиторы ацилкофермента А: холестерин ацилтрансферазы (АСАТ), или ингибиторы Р13К, такие как вортманнин.

Также предпочтительно, чтобы средства, модулирующие секретазу, представляли собой ингибиторы β- и/или γ-секретазы или молекулы, стимулирующие α-секретазу.

Также предпочтительно, чтобы ингибиторы β-секретазы представляли собой ингибиторы ВАСЕ и ВАСЕ2, такие как альдегид 1 трипептида, алкоксизамещенные тетралины, ингибиторы γ-секретазы представляли собой соединения на основе дифторкетона, гидроксизамещенную пептидмочевину, производные аланинфенилглицина, капролактамы, бензодиазепины, гексанамиды, сульфонамид фенхиламина, бициклический сульфонамид, изокумарин, диарилацетилен, имидазопиридин, полиоксигенированные ароматические структуры и молекулы, стимулирующие α-секретазу, которые представляют собой активаторы протеинкиназы С, глутамат, карбахол, мускариновые агонисты, нейротропные агенты или соединения, содержащие медь(П).

Также предпочтительно, чтобы ингибиторы агрегации Аβ представляли собой ингибиторы пептидила (например, ингибиторы пентапептидов), аналоги амилоидсвязывающих красителей Конго красного и тиофлавина Т, аналоги противоракового средства доксорубицина, антибиотики, такие как рифампицин или его аналоги, и клиохинол, бензофураны, ингибиторы сывороточного амилоидного белка (8АР), такие как каптоприл, или соединения, образующие комплексы с металлами, добавлением Си²⁺, Ζη²⁺ или Εο¹'.

Также предпочтительно, чтобы нейрофибриллярные ингибиторы представляли собой ингибиторы 08Κ3β, такие как Ь1С1, 08Κ3β и ингибиторы сбк5, такие как индирубины и паулоны, ингибиторы кальпаина или паклитаксел и родственные средства.

Также предпочтительно, чтобы ингибиторы катаболизма β-амилоида представляли собой металлопротеиназы цинка (например, неприлизин), эндотелинпревращающий фермент, ферменты, разрушающие инсулин (например, ГОЕ, инсулизин), плазмин или ингибиторы неприлизина.

В третьем аспекте настоящее изобретение относится к применению вещества, состоящего из двух отдельных композиций, изготовленных в единице упаковки, причем одна композиция содержит ΙΕΝ-β, а другая содержит средство для лечения болезни Альцгеймера, выбранное из группы, состоящей из ингибиторов холинэстеразы, средств, снижающих токсичность Аβ, средств гормонального замещения,

- 9 009668 средств, снижающих уровень липидов, средств, модулирующих секретазу, ингибиторов агрегации Ав, нейрофибриллярных ингибиторов или ингибиторов катаболизма β-амилоида для одновременного, последовательного или отдельного применения, но совместного введения для лечения болезни Альцгеймера.

В четвертом аспекте настоящее изобретение предоставляет фармацевтическую композицию, включающую ΙΡΝ-β и средство для лечения болезни Альцгеймера, выбранное из групп, состоящих из ингибиторов холинэстеразы, средств, снижающих токсичность Аβ, средств гормонального замещения, средств, снижающих уровень липидов, средств, модулирующих секретазу, ингибиторов агрегации Аβ, нейрофибриллярных ингибиторов или ингибиторов катаболизма β-амилоида, в присутствии одного или более фармацевтически приемлемых эксципиентов.

В соответствии с настоящим изобретением средство для лечения болезни Альцгеймера и интерферон-β можно применять одновременно, последовательно или отдельно.

Термин «ингибиторы холинэстеразы» может означать, например, белок, пептид или соединение с низкой молекулярной массой, обладающие ингибирующим действием в отношении активности холинэстеразы. Такое средство может, например, также участвовать в разрушении холинэстеразы. Оно может также представлять собой средство, замедляющее, уменьшающее, подавляющее, снижающее, сужающее или исключающее активность холинэстеразы. Средство, обладающее активностью уменьшения или ингибирования активности холинэстеразы, может, кроме того, представлять собой любое средство, разрушающее или устраняющее активность холинэстеразы. Примеры таких средств включают антитела, направленные против холинэстеразы.

Термин «предотвращение» в контексте данного изобретения относится не только к полному предотвращению заболевания или одного или нескольких симптомов заболевания, но также к любому частичному или существенному предотвращению, ослаблению, снижению, уменьшению или облегчению эффекта перед или сразу после начала заболевания.

Термин «лечение» в контексте настоящего изобретения относится к любому благоприятному воздействию на прогрессирование заболевания, включая ослабление, снижение, уменьшение или облегчения патологического развития после начала заболевания.

Используемый в настоящем описании термин «интерферон-β (ΙΡΝ-β)» предназначен для включения интерферона фибробластов человека, полученного выделением из биологических жидкостей или полученного методиками рекомбинантной ДНК из прокариотических или эукариотических клеток-хозяев. Применение интерферона-β или ΙΡΝ-β человеческого происхождения также предпочтительно в соответствии с настоящим изобретением. Используемый в настоящем описании термин «интерферон-β (ΙΡΝ-β)» предназначен для включения его солей, изоформ, мутеинов, гибридных белков, функциональных производных, вариантов, аналогов и активных фрагментов.

Используемый в настоящем описании термин «ингибитор холинэстеразы (СНЕ!)» будет означать ингибиторы холинэстеразы (СНЕ!) из растений, насекомых, рыб, животных или людей вместе с их естественно встречающимися аллелями.

В одном варианте осуществления ингибиторы холинэстеразы, средства, снижающие токсичность Άβ, средства гормонального замещения, средства, снижающие уровень липидов, средства, модулирующие секретазу, ингибиторы агрегации Аβ, нейрофибриллярные ингибиторы или ингибиторы катаболизма β-амилоида представляют собой их изоформы, мутеины, гибридные белки, рекомбинантные белки, функциональные производные, гибриды, варианты, активные фракции или соли.

В предпочтительном варианте осуществления средство, обладающее ингибирующей холинэстеразу активностью, представляет собой ингибитор холинэстеразы или его изоформу, мутеин, гибридный белок, рекомбинантный белок, функциональное производное (например, моно-, двойное (например, димерное производное гуперзина А-такрина) или частичные ингибиторы СНЕ сайта связывания), вариант, аналог, гибрид (например, гуприн, а также ингибиторы МАО-АСНЕ, такие как карбаматы 1,2,3,4-тетрагидроциклопент[Ь]индола), активный фрагмент или соль.

В соответствии с настоящим изобретением ингибитор холинэстеразы может также представлять собой молекулу, ингибирующую рецепторы холинэстеразы. Аналогичным образом, ингибитор секретазы может также представлять собой молекулу, ингибирующую рецепторы секретазы.

Далее в описании «средства для лечения болезни Альцгеймера», и в частности ингибиторы холинэстеразы, средства, снижающие токсичность Аβ, средства гормонального замещения, средства, снижающие уровень липидов, средства, модулирующие секретазу, ингибиторы агрегации Аβ, нейрофибриллярные ингибиторы или ингибиторы катаболизма β-амилоида, а наиболее конкретно ингибиторы ацетилхолинэстеразы или/и ингибиторы бутирилхолинэстеразы, могут также именоваться «веществом (веществами) по изобретению».

Используемый в настоящем описании термин «мутеины» относится к аналогам вещества в соответствии с изобретением, в которых один или более аминокислотных остатков естественного вещества по изобретению замещены различными аминокислотными остатками или подвергнуты делеции или один или более аминокислотных остатков добавляются к естественной последовательности вещества по изобретению без существенного изменения активности полученных продуктов по сравнению с веществом дикого типа изобретения. Эти мутеины получают известным синтезом, и/или методиками направленного

- 10 009668 на сайт мутагенеза, или любой другой известной методикой, пригодной для этого.

Любой из таких мутеинов предпочтительно имеет последовательность аминокислот, достаточно точно воспроизведенную по сравнению с веществом по изобретению, с тем, чтобы вещество по изобретению имело, по существу, аналогичную или даже лучшую активность. Биологическая функция интерферона-β и ингибиторов холинэстеразы хорошо известна специалисту в данной области, и биологические стандарты установлены и имеются для ΙΡΝ-β, например, в Национальном Институте Биологических Стандартов и Контроля (Ы1р://1тгаипо1оду.огд/1шк8/ЫВ§С).

Были описаны биологические анализы для определения ΙΡΝ-β. Анализ ΙΡΝ можно, например, провести, как описано КиЫп81еш с1 а1., 1981. Таким образом, посредством обычного экспериментирования можно определить то, имеет ли любой данный мутеин, производное, гибрид, по существу, аналогичную или даже лучшую активность, чем ΙΡΝ-β.

Мутеины - вещества по изобретению, которые можно применять в соответствии с настоящим изобретением, или нуклеиновая кислота, кодирующая их, включают конечный набор, по существу, соответствующий последовательности в качестве пептидов замещения или полинуклеотидов, которые может обычным образом получить средний специалист в данной области без необычного экспериментирования, на основании представленных в настоящем описании утверждений и предписаний.

Гибриды, производные, ингибиторы моно-, двойных, множественных сайтов связывания СНЕ, варианты и аналоги вещества по изобретению может обычным образом получить средний специалист в данной области без необычного экспериментирования.

Предпочтительными изменениями для мутеинов в соответствии с настоящим изобретением являются те, которые известны как «консервативные» замещения. Консервативные аминокислотные замещения полипептидов или белков по изобретению могут включать синонимические аминокислоты в пределах группы, которая имеет достаточно похожие физико-химические свойства, так что при замещении между членами группы сохраняется биологическая функция молекулы. Ясно, что инсерции и делеции аминокислот можно также произвести в указанных выше последовательностях без изменения их функции, особенно если инсерции или делеции вовлекают лишь несколько аминокислот, например до 30, предпочтительно до 10, и не удаляют и не смещают аминокислоты, которые имеют решающее значение для функциональной конформации, например цистеиновые остатки. Белки и мутеины, продуцированные такими делециями и/или инсерциями, входят в объем настоящего изобретения.

Предпочтительно синонимические аминокислотные группы представляют собой группы, определенные в табл. I. Предпочтительнее синонимические аминокислотные группы представляют собой группы, определенные в табл. II, а наиболее предпочтительно синонимические аминокислотные группы представляют собой группы, определенные в табл. III.

Таблица I Предпочтительные группы синонимических аминокислот

Аминокислота	Синонимическая группа
Зег	Зег, ТЬг, О1у, Азп
Агд	Агд, СЯп, Ьуз, (31и, Н1з
Ьеи	Не, РЬе, Туг, Мер, 7а1, Ьеи
Рго	О1у, А1а, ТЬг, Рго
ТЬг	Рго, Зег, А1а, С1у, Н1з, С1п, ТЬг
А1а	С1у, ТЬг, Рго, А1а
Уа1	Мер, Туг, РЬе, 11е, Ьеи, Уа1
С1у	А1а, ТЬг, Рго, Зег, С1у
Не	МеБ, Туг, РЬе, Уа1, Ьеи, Не
РЬе	Тгр, Мер, Туг, 11е, 57а1, Ьеи, РЬе
Туг	Тгр, МеЬ, РЬе, 11е, 7а1, Ьеи, Туг
Суз	Зег, ТЬг, Суз
Н13	С1и, Ьуз, С1п, ТЬг, Агд, Н1з
С1п	С1и, Ьуз, Азп, Нхз, ТЬг, Агд, С1п
Азп	<31п, Азр, Зег, Азп
Ьуз	61и, <31п, Нхз, Агд, Ьуз
Азр	С1и, Азп, Азр
С1и	Азр, Ьуз, Азп, С1п, ΗΪ3, Агд, С1и
Меб	РЬе, Не, Уа1, Ьеи, МеС
Тгр	Тгр

Таблица II

Более предпочтительные группы синонимических аминокислот

Аминокислота	Синонимическая	группа
Зег	Зег
Агд	ΗΪ3, Ьуз, Агд
Ьеи	Ьеи, 11е, РЬе,	Мер
Рго	А1а, Рго
ТЬг	ТЬг
А1а	Рго, А1а
νβΐ	Уа1, МеЬ, 11е
С1у	С1у
Не	11е, МеЬ, РЬе,	Уа1, Ьеи
РЬе	МеЕ, Туг, 11е,	Ьеи, РЬе
Туг	РЬе, Туг
Суз	Суз, Зег
ΗΪ3	Ηϊβ, (31п, Агд
С1п	<31и, <31η, Н1з
Азп	Азр, Азп
ЬуЗ	Ьуз, Агд
Азр	Азр, Азп
С1и	С1и, (31п
меЪ	МеЬ, РЬе, 11е,	Уа1, Ьеи
Тгр	Тгр

Таблица III

Наиболее предпочтительные группы синонимических аминокислот

Аминокислота	Синонимическая группа
Зег	Зег
Агд	Агд
Ьеи	Ьеи, 11е, Меь
Рго	Рго
ТЬг	ТЬг
А1а	А1а
Уа1	Уа1
(31у	О1у
11е	11е, МеЬ, Ьеи
РЬе	РЬе
Туг	Туг
Суз	Суз, Зег
Н13	ΗΪ8
<31п	<31п
Азп	АЗП
Ьуз	Ьуз
Азр	Азр
С1и	О1и
Меь	Меь, 11е, Ьеи
Тгр	Мес

- 12 009668

Примеры продукции аминокислотных замещений в белках, которые можно использовать для получения мутеинов вещества по изобретению, для применения в настоящем изобретении включают любую из известных стадий способа, представленных, например, в патентах США 4959314, 4588585 и 4737462 Магк е! а1.; 5116943 Ко1Й8 е! а1., 4965195 Матеи е! а1.; 4879111 Сйоид е! а1.; и 5017691 1о Ьее е! а1.; и белки с замещенным лизином, представленные в патенте США № 4904584 (8йает е! а1.). Были описаны специфические мутеины ΙΡΝ-β, например, Магк е! а1., 1984.

Термин «слитый (гибридный) белок» относится к полипептиду, включающему вещество по изобретению или его мутеин, слитый с другим белком, который, например, имеет удлиненное время нахождения в биологических жидкостях. Таким образом, вещество по изобретению может быть слито с другим белком, полипептидом или им подобными, например иммуноглобулином или его фрагментом.

Используемый в настоящем описании термин «функциональные производные» охватывает производные вещества по изобретению и их мутеины и гибридные белки, которые можно получить из функциональных групп, которые возникают в виде боковых цепей на остатках или Ν- или С-концевых группах, средствами, известными в данной области, и включены в изобретение в той степени, в которой они остаются фармацевтически приемлемыми, т.е. они не нарушают активность белка, которая, по существу, аналогична активности вещества по изобретению, и не придают токсические свойства композициям, содержащим его. Эти производные могут, например, включать боковые цепи полиэтиленгликоля, которые могут маскировать антигенные сайты, и продлевать время нахождения вещества по изобретению в биологических жидкостях. Другие производные включают сложные алифатические эфиры карбоксильных групп, амиды карбоксильных групп взаимодействием с аммиаком или с первичными или вторичными аминами, Ν-ацильными производными свободных аминогрупп аминокислотных остатков, образованных с ацильными частями (например, алканоильной или карбоциклической ароильной группой), или Оацильными производными свободных гидроксильных групп (например, остатками серила или треонила), образованных с ацильными частями.

В качестве «активных фракций» вещества по изобретению или мутеинов и гибридных белков настоящее изобретение охватывает любой фрагмент или предшественники полипептидной цепи белковой молекулы отдельно или вместе с ассоциированными молекулами или связанными с ними остатками, например сахарными или фосфатными остатками, или агрегаты белковой молекулы, или сами сахарные остатки, при условии, что указанная фракция не имеет существенно сниженную активность по сравнению с соответствующим веществом по изобретению.

Используемый в настоящем описании термин «соли» относится и к солям карбоксильных групп, и к кислотно-аддитивным солям аминогрупп белков, описанных выше, или их аналогов. Соли карбоксильной группы могут быть образованы средствами, известными в данной области, и включают неорганические соли, например соли натрия, кальция, аммония, трехвалентного железа или цинка и им подобные, и соли с органическими основаниями, как соли, образованные, например, с аминами, такими как триэтаноламин, аргинин или лизин, пиперидин, прокаин и им подобные. Кислотно-аддитивные соли включают, например, соли с минеральными кислотами, такими как, например, хлористо-водородная кислота или серная кислота, и соли с органическими кислотами, такими как, например, уксусная кислота или щавелевая кислота. Конечно, любая такая соль должна сохранять биологическую активность белков (соответственно, ΙΡΝ-β и средства для лечения болезни Альцгеймера), релевантных для настоящего изобретения, т.е. способность связываться с соответствующим рецептором и инициировать передачу сигналов рецептором.

Одной из наиболее распространенных деменций является болезнь Альцгеймера. Поэтому в предпочтительном варианте осуществления изобретения применение ΙΕΝ-β отдельно или в комбинации с ингибитором холинэстеразы используется для лечения и/или предотвращения болезни Альцгеймера (ΑΌ).

Указывалось, что АС11Е1 эффективнее при рано начинающейся ΑΌ по сравнению с обычной формой ΑΌ. Поэтому в наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения применение ΙΕΝ-β отдельно или в комбинации с ингибитором холинэстеразы используется для лечения и/или предотвращения рано начинающейся болезни Альцгеймера.

В соответствии с настоящим изобретением особенно предпочтительно применение рекомбинантного человеческого ΙΕΝ-β и такрина, амиридина, производных донепезина ТАК-147 и СР-118954, минаприна, гуперзина, гуприна, производных бис-тетрагидроаминоакридина (бис-ТНА), таких как бис(7)-такрин, имидазолы, 1,2,4-тиадиазолидинон, производных бензазепина, 4,4'-бипиридина, инденхинолиниламина, декаметония, эдрофония, В\т2 84С51, производного физостигмина эптастигмина, метрифоната, пропидия, фасцикулинов, органофосфатов, карбаматов, карбаматов имино-1,2,3,4-тетрагидроциклопент[Ь]индола (гибридов ингибитора АС11Е физостигмина и ингибиторов МАО селегилина и транилципромина), 4-ацетиланилиновых производных Ν-пиримидина, производных 7-арилоксикумарина, пропаргиламинокарбаматов, таких как Ν-пропаргиламиноинданы и Ν-пропаргилфенилтиамины, витамина Е, ингибиторов ΝΘ8, предшественников, таких как холин и пирролидинхолин, а также агонистов холинергических рецепторов (например, никотиновых, в частности α7, и мускариновых).

В соответствии с настоящим изобретением наиболее предпочтительно применение рекомбинантно

- 13 009668 го человеческого ΙΕΝ-β и донепезила, ривастигмина и галантамина.

Еще в одном предпочтительном варианте осуществления гибридный белок включает слияние 1д. Слияние может быть прямым или через короткий линкерный пептид, длина которого может составлять лишь 1-3 аминокислотных остатков или более, например длиной 13 аминокислотных остатков. Указанный линкер может представлять собой, например, трипептид последовательности Е-Е-М (С1-РНс-Мс1) или последовательность линкерного пептида из 13 аминокислот, включающую С1и-Р11с-С1у-А1а-С1у-ЕсиУа1-Еси-С1у-С1у-С1п-Р11с-МсЕ введенную между последовательностью веществ по изобретению и последовательностью иммуноглобулина. Полученный гибридный белок имеет улучшенные свойства, такие как удлиненное время нахождения в биологических жидкостях (период полувыведения), увеличенная удельная активность, увеличенный уровень экспрессии или облегчение очистки гибридного белка.

В предпочтительном варианте осуществления ΙΕΝ-β слит с константной областью молекулы 1д. Предпочтительно он слит, например, с областями тяжелой цепи, подобными доменам СН2 и СН3 человеческого 1дС1. Другие изоформы молекул 1д также подходят для генерирования гибридных белков в соответствии с настоящим изобретением, такие как изоформы 1дС₂ и 1дС₄ или другие классы 1д, подобные, например, 1дМ или 1дА. Гибридные белки могут быть мономерными или многомерными, гетероили гомомногомерными.

Настоящее изобретение относится к однократному применению интерферона-β или его комбинации со средствами для лечения болезни Альцгеймера. Терапевтические средства могут также быть связаны друг с другом для того, чтобы иметь возможность вводить одну-единственную молекулу, мономерную или многомерную, вместо двух или трех отдельных молекул. Многомерный гибридный белок может включать ингибитор холинэстеразы, слитый с составляющей в виде 1д, а также в форме ΙΕΝ-β, слитого с составляющей в виде 1д. При совместной экспрессии полученный гибридный белок, который может быть связан дисульфидными мостиками, например, будет включать и средство для лечения болезни Альцгеймера, и ΙΕΝ-β. Соединения настоящего изобретения могут, кроме того, быть связаны каким-либо другим поперечно-сшивающим веществом или частью, такой как, например, молекула полиэтилена.

Еще в одном предпочтительном варианте осуществления функциональное производное включает по меньшей мере одну часть, присоединенную к одной или более функциональным группам, которые возникают в виде одной или более боковых цепей на аминокислотных остатках. Предпочтительно составляющая часть представляет собой составляющую часть в виде полиэтилена (РЕС). Соединение с РЕС можно проводить известными способами, такими как способы, описанные, например, в ХУ099/55377.

Дозировки ΙΕΝ-β для лечения АО, СГО или С8ГО находятся в диапазоне от 80000 до 200000 МЕ/кг/сутки, или 6 ММЕ (миллионов международных единиц) и 12 ММЕ на 1 человека в сутки или, от 22 до 44 мкг на 1 человека. В соответствии с настоящим изобретением ΙΕΝ-β можно предпочтительно вводить в дозировке приблизительно от 1 до 50 мкг, предпочтительнее приблизительно от 10 до 30 мкг или приблизительно от 10 до 20 мкг на 1 человека в сутки. Предпочтительным путем введения является подкожное введение, осуществляемое, например, 3 раза в неделю. Еще одним предпочтительным путем введения является внутримышечное введение, которое можно проводить, например, 1 раз в неделю.

Предпочтительно от 22 до 44 мкг или от 6 до 12 ММЕ ΙΕΝ-β вводят 3 раза в неделю подкожной инъекцией.

ΙΕΝ-β можно вводить подкожно в дозировке от 250 до 300 мкг или от 8 до 9,6 ММЕ через день.

мкг или 6 ММЕ ΙΕΝ-β можно, кроме того, вводить внутримышечно 1 раз в неделю.

ΙΕΝ-β можно также вводить ежедневно, или через день, или реже. Предпочтительно ΙΕΝ-β вводится 1 или 3 раза в неделю.

Введение активных ингредиентов в соответствии с настоящим изобретением может осуществляться внутривенным, внутримышечным или подкожным путем. Предпочтительным путем введения ΙΕΝ-β является подкожный путь.

При лечении АО стандартные дозировки такрина, используемые в настоящее время, составляют от 10 мг 4 раза в сутки, причем 40 мг в сутки является рекомендуемым максимумом. В настоящее время капсулы такрина принимаются перорально. Для донепезила стандартная дозировка составляет 5 мг в сутки, причем рекомендуемым максимумом является 10 мг в сутки. В настоящее время таблетки донепезила принимаются перорально. Для ривастигмина стандартной дозировкой является 1,5 мг 2 раза в сутки, причем рекомендуемым максимумом является 6 мг 2 раза в сутки. В настоящее время капсулы ривастигмина принимаются перорально. Для галантамина используемая в настоящее время стандартная дозировка составляет 4 мг 2 раза в сутки. В настоящее время таблетки галантамина принимаются перорально.

В предпочтительном варианте осуществления такрин вводится в дозировке приблизительно от 0,1 до 200 мг на 1 человека в сутки, предпочтительно приблизительно от 10 до 150 мг на 1 человека в сутки, предпочтительнее приблизительно от 20 до 60 мг на 1 человека в сутки или приблизительно от 60 до 100 мг на 1 человека в сутки.

В другом предпочтительном варианте осуществления донепезил вводится в дозировке приблизительно от 0,1 до 200 мг на 1 человека в сутки, предпочтительно приблизительно от 1 до 100 мг на 1 человека в сутки, предпочтительнее приблизительно от 2 до 30 мг на 1 человека в сутки или приблизительно

- 14 009668 от 30 до 60 мг на 1 человека в сутки.

В другом предпочтительном варианте осуществления ривастигмин вводится в дозировке приблизительно от 0,1 до 200 мг на 1 человека в сутки, предпочтительно приблизительно от 0,3 до 50 мг на 1 человека в сутки, предпочтительнее приблизительно от 0,5 до 20 мг на 1 человека в сутки или приблизительно от 20 до 40 мг на 1 человека в сутки.

В другом предпочтительном варианте осуществления галантамин вводится в дозировке приблизительно от 0,1 до 200 мг на 1 человека в сутки, предпочтительно приблизительно от 0,5 до 100 мг на 1 человека в сутки, предпочтительнее приблизительно от 1 до 30 мг на 1 человека в сутки или приблизительно от 30 до 60 мг на 1 человека в сутки.

Действительные применяемые дозировки могут варьироваться в зависимости от потребностей пациента и тяжести подвергаемого лечению состояния. Определение точной схемы дозировки для конкретной ситуации известно в данной области. Для удобства, по требованию, общую суточную дозировку можно разделить и вводить частями в течение дня.

В предпочтительном варианте осуществления ингибиторы холинэстеразы предпочтительно вводятся перорально.

В зависимости от способа введения соединения по изобретению могут быть составлены в композицию с соответствующими разбавителями и носителями для формирования мазей, кремов, пен и растворов, имеющих от приблизительно 0,01 до приблизительно 15 мас.%, предпочтительно от приблизительно 1 до приблизительно 10 мас.%, соединений.

Термин «фармацевтически приемлемый» предназначен для включения любого носителя, дозы которого не мешают эффективности биологической активности активного ингредиента и который нетоксичен для хозяина, которому он вводится. Например, для парентерального введения активный белок (белки) могут составляться в композицию в стандартной лекарственной форме для инъекции в таких носителях, как солевой раствор, раствор декстрозы, сывороточный альбумин и раствор Рингера.

Активные ингредиенты фармацевтической композиции в соответствии с изобретением можно вводить индивидууму разнообразными путями. Пути введения включают внутрикожный, трансдермальный (например, в композициях медленного высвобождения), внутримышечный, внутрибрюшинный, внутривенный, подкожный, пероральный, эпидуральный, местный и интраназальный пути. Можно использовать любой другой терапевтически эффективный путь введения, например всасывание через эпителиальную или эндотелиальную ткани или генной терапией, при которой молекула ДНК, кодирующая активный агент, вводится пациенту (например, посредством вектора), что вызывает экспрессию и секрецию активного агента ίη νίνο. Кроме того, белок (белки) в соответствии с изобретением можно вводить вместе с другими компонентами биологически активных агентов, такими как фармацевтически приемлемые поверхностно-активные вещества, эксципиенты, носители, разбавители и наполнители.

Подкожный путь предпочтительнее для ΙΡΝ-β в соответствии с настоящим изобретением.

Другой возможностью осуществления настоящего изобретения является эндогенная активация генов для соединений по изобретению, т.е. средства для лечения болезни Альцгеймера и/или ΙΡΝ-β. В этом случае вектор для индукции и/или усиления эндогенной продукции ΙΡΝ-β и уменьшения или ингибирования эндогенной продукции, например холинэстеразы в клетке, обычно «молчащей» в плане экспрессии ингибиторов холинэстеразы и/или ΙΡΝ-β или которая экспрессирует количества ингибиторов холинэстеразы и/или ΙΡΝ-β, которые недостаточны, используется для лечения АО, СЮ или 0880. Вектор может включать регуляторную последовательность, функциональную в клетках, в которых желательна экспрессия ΙΡΝ-β, и подавление холинэстеразы. Такие регуляторные последовательности в случае ΙΡΝ-β могут, например, быть промоторами или усилителями и репрессорами или агентами, вызывающими «молчание», в случае холинэстеразы. Регуляторную последовательность можно затем ввести в правильный локус генома гомологичной рекомбинацией, таким образом, оперативно связывая регуляторную последовательность с геном, экспрессию которого требуется индуцировать или усилить. Технология обычно именуется «эндогенной активацией гена» (Е.О.А.), и она описана, например, в ^091/09955.

Изобретение, кроме того, относится к применению клетки, которая была генетически модифицирована для продукции ΙΡΝ-β и/или средств для лечения болезни Альцгеймера при изготовлении лекарственного средства для лечения и/или предотвращения АО и инфекционных заболеваний.

Для парентерального (например, внутривенного, подкожного, внутримышечного) введения активный белок (белки) можно составить в композиции в виде раствора, суспензии, эмульсии или лиофилизированного порошка в сочетании с фармацевтически приемлемым парентеральным носителем (например, водой, солевым раствором, раствором декстрозы) и добавками, которые поддерживают изотоничность (например, маннитом) или химическую устойчивость (например, консервантов и буферов). Композиция стерилизуется обычно используемыми методиками.

Биологическую доступность активного белка (белков) в соответствии с изобретением можно также облегчить использованием процедур сопряженного связывания, которые увеличивают период полувыведения молекулы в теле человека, например, связывая молекулу с полиэтиленгликолем, как описано в патентной заявке РСТ \У0 92/13095.

- 15 009668

Введенная индивидууму дозировка в виде одной или множественных доз будет варьироваться в зависимости от разнообразных факторов, включая фармакокинетические свойства, путь введения, состояния и характеристики пациента (пол, возраст, масса тела, состояние здоровья, размер), выраженность симптомов, одновременно применяемые способы лечения, частоту лечения и желательный эффект.

Вещества по изобретению можно вводить ежедневно, или через день, или реже. Предпочтительно одно или более веществ по изобретению вводятся 1, 2 или 3 раза в неделю.

Суточные дозы обычно вводятся дробными дозами или в форме пролонгированного высвобождения, эффективной для получения желательных результатов. Второе или последующее введение можно выполнять в дозировке, которая является такой же, меньшей или большей, чем первоначальная или предыдущая доза, введенная индивидууму. Второе или последующее введение можно выполнять во время или перед началом заболевания.

В соответствии с изобретением вещества по изобретению можно вводить профилактически или терапевтически индивидууму перед, одновременно или последовательно с другими схемами лечения или средствами (например, схемы с применением множества препаратов) в терапевтически эффективном количестве. Активные средства, которые вводятся одновременно с другими терапевтическими средствами, можно вводить в одних и тех же или других композициях.

Все приведенные в настоящем описании ссылки, включая журнальные статьи или рефераты, опубликованные или неопубликованные заявки на патенты США или других стран, выданные патенты США или патенты других стран, или любые другие ссылки полностью включены в настоящее описание в качестве ссылки, включая все данные, таблицы, цифры и текст, представленные в приведенных ссылках. Кроме того, полное содержание ссылок, приведенных в настоящем описании, также полностью включено в качестве ссылки.

Ссылка на стадии известных способов, стадии обычных способов, известные способы или обычные способы никоим образом не является допущением того, что любой аспект, описание или вариант осуществления настоящего изобретения раскрыт, описан или предложен в релевантном уровне техники.

Предшествующее описание конкретных вариантов осуществления, таким образом, выявит общую природу изобретения, которую другие, применив знания в пределах навыков в данной области (включая содержание приведенных в настоящем описании ссылок), легко модифицируют и/или адаптируют для различного применения таких конкретных вариантов осуществления без ненужного экспериментирования, без отхода от общей концепции настоящего изобретения. Поэтому предполагается, что такие адаптации и модификации находятся в пределах значения диапазона эквивалентов раскрытых вариантов осуществления, на основании представленных в настоящем описании утверждений и предписаний. Следует понимать, что фразеология или терминология, используемая в настоящем описании, предназначена для цели описания, а не ограничения, так что специалист в данной области должен интерпретировать терминологию или фразеологию настоящего описания в свете представленных в настоящем описании утверждений и предписаний в комбинации со знаниями среднего специалиста в данной области.

Далее, после описания изобретения оно будет лучше понятно при ссылке на следующие примеры, которые представлены в качестве иллюстрации, а не предназначены для ограничения настоящего изобретения.

Примеры

Пример 1. Действие ΙΡΝ-β в комбинации с ЛС11Е1 у пациентов с рано начинающейся АО.

Действие ΙΡΝ-β в комбинации с АС11Е1 на развитие болезни АО выполнено у 40 пациентов с рано начинающейся АО.

Клиническая эффективность ΙΡΝ-β 1а (РсЫГ 22 мкг, 2 раза в неделю) при лечении АО оценивается измерением изменений нейрофизиологической функции по сравнению с исходным уровнем.

Это 6-месячное одноцентровое основное исследование выполнено у 40 пациентов с рано начинающейся АО. Индивидуумов методом случайной выборки включают в 2 группы: первую группу (п=20), получающую ЯеЬгГ® 22 мкг, 2 раза в неделю плюс ингибитор ацетилхолинэстеразы (например, донепезил, ривастигмин, галантамин и т.д.); вторую группу (п=20), получающую плацебо плюс ингибитор ацетилхолинэстеразы.

Критерии включения

Возраст >50 лет.

Диагноз болезни Альцгеймера в соответствии с Руководством по диагностике и статистике психических расстройств, 4-е издание (О8М-ГУ).

Балльная оценка мини-исследования психического состояния (ММ8Е) от 11 до 25 (включительно).

Наблюдение лицом, обеспечивающим уход.

Данное информированное согласие и апробация Местным комитетом по этике.

Критерии исключения

Модифицированная ишемическая балльная оценка Хачинского >4.

Неспособность подвергнуться нейропсихологической оценке.

Значительное нарушение функции печени, щитовидной железы или гематологическая дисфункция.

- 16 009668

Структура исследования пациентов методом случайной выборки включают двойным слепым методом в 2 группы для получения или КеЬй® 22 мкг, 2 раза в неделю плюс ингибитор ацетилхолинэстеразы подкожно или плацебо 2 раза в неделю плюс ингибитор ацетилхолинэстеразы, подкожно в течение 24 недель.

Обоснование размера выборки и статистические анализы

Испытание структурировано как поисковое исследование возможности клинического использования КеЬй® 22 мкг, 2 раза в неделю в комбинации с ингибитором ацетилхолинэстеразы при лечении ΆΌ; размер выборки был выбран на основания пригодности для одностороннего исследования. Непрерывные переменные величины, включая познавательные и поведенческие балльные оценки, анализируются измерением изменений по сравнению с исходным уровнем; анализ дисперсии используется для сравнения различий между группами. Побочные эффекты анализируются с использованием описательной статистики и непараметрических тестов.

Включение в группы исследования

Схема рандомизации создана в исследовательской фармации; исследователь и персонал исследования остаются в неведении относительно включения в группу участников до тех пор, пока не завершается сбор данных.

Показатели исхода

Меры исхода оцениваются в исходном состоянии, через 12 и через 25 недель (завершение исследования).

Первичные показатели исхода включают шкалу оценки болезни Альцгеймера (ΑΌΑ8), подшкалу познавательной функции;

шкалу глобального ухудшения;

клиническое общее впечатление шкалы изменения.

Вторичные показатели исхода включают

ММ8Е;

ЛЭЛ8. непознавательную шкалу;

инструментальные способы определения активности в повседневной жизни (ΙΑΌΕ);

шкалу физического, самостоятельного ухода (Р8М8);

общее впечатление об изменении, оцениваемое лицом, обеспечивающим уход (сС1С).

Оценка неблагоприятных явлений

Появление связанных с лечением неблагоприятных явлений оценивается при каждом посещении. Выход из исследования гарантируется при одном из следующих условий:

1) Просьба пациента.

2) Просьба исследователя.

3) Доказательство наличия тяжелого системного заболевания.

4) Доказательство наличия связанных с лечением (ΙΕΝ-β 1а) неблагоприятных явлений.

Пример 2. Действие ΙΕΝ-β у пациентов с рано начинающейся ΑΌ.

Действие ΙΕΝ-β на развитие болезни ΑΌ выполнено у 40 пациентов с рано начавшейся ΑΌ.

Клиническая эффективность ΙΕΝ-β 1а (КеЬй® 22 мкг, 2 раза в неделю) при лечении ΑΌ определяется измерением изменений нейрофизиологической функции при проведении обоих вариантов лечения (плацебо и лечение) по сравнению с исходным уровнем до 28-недельного наблюдения лечения.

Это 52-недельное одноцентровое основное исследование выполнено у 40 пациентов с рано начавшейся ΑΌ. Индивидуумов методом случайной выборки включают в 2 группы: первую группу (п=20), получающую РеЫГ 22 мкг, 2 раза в неделю; вторую группу (п=20), получающую плацебо. Период лечения заканчивается через 28 недель.

Исследователь и персонал исследования остаются в неведении относительно включения в группу участников до тех пор, пока не завершается сбор данных.

Критерии включения

Возраст от 50 до 70 лет.

Диагноз болезни Альцгеймера в соответствии с Руководством по диагностике и статистике психических расстройств, 4-е издание (ΌδΜ-ΓΫ).

Балльная оценка мини-исследования психического состояния (ММ8Е) от 15 до 25 (включительно).

Наблюдение лицом, обеспечивающим уход.

Лекарственные средства исследования

ЯеЬИ® (интерферон-бета 1а) поставляется в предварительно заполненных шприцах, содержащих 0,5 мл. Каждый шприц содержит 22 мкг (6 ММЕ) интерферона-бета 1а, 2 мг альбумина (человеческого) по Фармакопее США, 27,3 мг маннита по Фармакопее США, воду для инъекции и для доводки рН, уксусную кислоту и/или гидроксид натрия. КеЬ1£ поставляется в виде стерильного раствора, содержащего 22 мкг (6 ММЕ) в 0,5 мл, упакованного в предварительно заполненные шприцы, предназначенные для подкожного введения. К.еЬуес1™ М1ш можно использовать с предварительно заполненными шприцами

- 17 009668 раствора КсЫГ.

Доза, путь и схема введения препарата КеЬЛ®

Дозировка КеЬ1Г после первоначального титрования дозы составляет 22 мкг, инъецированных подкожно 3 раза в неделю. КеЬгГ вводится, если возможно, в одно и то же время (предварительно, в начале второй половины дня или вечером) в одни и те же 3 дня (например, в понедельник, среду и пятницу).

Потенциальные побочные эффекты в начале лечения можно минимизировать прогрессирующим увеличением дозы в течение первых 4 недель с использованием схемы, указанной в таблице ниже.

Схема титрования дозы

Недели	Рекомендуемое титрование	Объем	Доза КеЫГ®
1-2	20%	0,2 0 мл	4_г4 мкг
2-4	50%	0,50 мл	11 мкг
>4	100%	1 мл	22 мкг

Структура исследования пациентов методом случайной выборки включают в двойное слепое контролируемое параллельно-групповое исследование, сравнивающее лечение интерфероном-бета с плацебо у пациентов с болезнью Альцгеймера.

Нулевая гипотеза

На основании первичных целей исследования (рассчитанных с использованием балльных оценок ММ8Е и АОА8-сод для оценки когнитивного снижения) нулевая гипотеза состоит в том, что интерферон-бета не остановит прогрессирующее снижение когнитивной функции, типичное для естественного течения деменции Альцгеймера. Другими словами, после 12 месяцев лечения балльные оценки ММ8Е и АЭАЗ-сод пациентов, рандомизированных для получения терапии интерфероном-бета, будут аналогичны балльным оценкам пациентов, которые получают лечение плацебо.

Размер выборки

Для этого протокола в исследование были включены пациенты с балльной оценкой по ММ8Е, равной 20±5. Анализы выборки допускали клинически релевантный размер эффекта, совпадающий со стандартным отклонением (8Ό) относительно балльных оценок ММ8Е и АЭА8-сод в когортах пациентов, включенных в предыдущие рандомизированные клинические испытания. ММ8Е представляет собой шкалу с диапазоном от 0 до 30, уменьшающуюся при ухудшении познавательной функции, аномальную при величине возраста менее 26/30 и корригированную по образованию. АЭА8-сод представляет собой тест с балльной оценкой от 0 до 70, которая увеличивается при нарушении познавательных функций, аномальных до величины 9,5/70. Было показано, что 8Ό средней величины ММ8Е и АЭА8-сод в исходном состоянии равны, соответственно, приблизительно 5 и 10 (Работе К.М., Наке А., Меккша 1.. Набтап К., УеасЬ 1., Апапб К. Кекропке оГ рабепк теЛЬ А1/)еппег бкеаке (о пуакЬдиипе 1геа1теп1 к ргеб1с1еб Ьу (Ье га1е оГ бкеаке ргодгеккюп. АгсЬ. №иго1. 2001; 58: 417-422).

На основании критериев включения (т.е. пациенты со средними балльными оценками ММ8Е, равными 20, и при гипотезе, что пациенты, получавшие лечение плацебо, испытают балльные оценки ухудшения на 1,2 пункта за каждые 3 месяца (Кодегк 8.Ь., РпебЬоГГ Ь.Т. апб (Ье ОоперехП 81ибу Сгоир. ТЬе еГйсасу апб каГе(у оГ ОоперехП ίη ра11еп1к теЛЬ Л1ζЬе^те^'к бкеаке: гекиЛк оГ тиШсепбе, гапботкеб, боиЬ1еЬ11пб, р1асеЬо-соп(го11еб 1па1. Оетепба 1996; 7: 293-303), ожидаемая средняя балльная оценка ММ8Е у пациентов из группы плацебо составляет 15,2. В случае, если нулевая гипотеза ложная, ожидаемая средняя балльная оценка у пациентов, получавших лечение интерфероном-бета, должна быть равна 20,2 (если 8Ό=5). В отношении цели исследования, включение методом рандомизации по 17 пациентов в каждую группу обеспечит возможность отвергнуть нулевую гипотезу при альфе, равной 0,05, и мощности 80%.

В отношении первичной цели эффекта интерферона-бета на снижение познавательной функции, оцененной с использованием А^Л8-сод, сообщалось в литературе, что балльные оценки ММ8Е соответствуют балльным оценкам АОА8-сод (Оогактеату Р.М., В1ерег Р., Какег Ь., КпкЬпап К.К., Кеишпд8сЬегег к, Си1апкк1 В. ТЬе АкЬетегк бкеаке аккекктеп! кса1е: рабегпк апб ргебюЮгк оГ ЬакеЬпе содпЛгуе регГогтапсе ш тиШсеШег Акбете^ бкеаке 1пак. №иго1оду 1997; 48: 1511-1517). Балльная оценка 15,2 по шкале ММ8Е соответствует величине приблизительно 36,5 по шкале АОА8-сод. В случае, когда нулевая гипотеза является ложной, ожидаемая средняя балльная оценка пациентов, получавших лечение интерфероном-бета, должна быть равна 26,5 (если 8Ό=10). Аналогично цели предыдущего исследования включение методом рандомизации по 17 пациентов в каждую группу обеспечит возможность отвергнуть нулевую гипотезу при альфе, равной 0,05, и мощности 80%.

Учитывая частоту выпадения из исследования приблизительно 15%, конечная оценка размера выборки составляет 20 пациентов на одно направление лечения.

В таблицу сведены все тяжелые побочные явления (8АЕ), отмеченные, пока пациенты находятся в

- 18 009668 исследовании или в пределах 30 суток после прекращения лечения.

Лабораторные тесты в исходном состоянии и их изменение по сравнению с исходным состоянием суммированы по рандомизированным группам лечения. Кроме того, таблицы изменений лабораторных тестов на основании классификации величин как низких, нормальных или высоких в отношении эталонного диапазона, сведены и представлены по рандомизированным группам лечения.

Включение в группы исследования

Показатели исхода

Показатели исхода оцениваются в исходном состоянии через 12, 28 и 52 недели (завершение исследования).

Первичные показатели исхода включают шкалу оценки болезни Альцгеймера (АОА!?), подшкалу познавательной функции;

шкалу глобального ухудшения;

клиническое общее впечатление шкалы изменения;

Вторичные меры исхода включают

ММ8Е;

АОАЗ, непознавательную шкалу;

инструментальные способы определения активности в повседневной жизни ЦАПЬ); физическую шкалу самообслуживания (Р8М8);

общее впечатление об изменении, оцениваемое лицом, обеспечивающим уход (сС1С); гериатрическую шкалу депрессии (СЭ8);

пациентов, которые прекратили исследование ввиду прогрессирования заболевания в двух направлениях лечения.

Оценка неблагоприятных явлений

5) Просьба пациента.

6) Просьба исследователя.

7) Доказательство наличия тяжелого системного заболевания.

8) Доказательство наличия связанных с лечением (ΙΕΝ-β 1а) неблагоприятных явлений.

Ссылки

1. Могап, М.А., Миккоп, ЕЛ., апб Сотех-Вашок, Р. (1993) Аба №игоракЬо1. 85, 362-369.

2. 8буег, А. (1974) ТЬе Вю1оду ок СЬо1шеккегакек, №ПЬ-Но11апб, Атккегбат.

3. Кака, Р., Вакопсхау, Ζ., апб Си1уа, К. (1997) Ргод. №игоЬю1. 52, 511-535.

4. Сеи1а, С., Меки1ат, М.М., 8агокк, О.М., апб ^и, С.К. (1998) Е №игоракЬо1. Ехр. №иго1. 57, 63-75.

5. Маккоийе, Е, РеххетегИк Ь., Воп, 8., Кге_|сЕ Е., апб Уа11екке, Е.М. (1993) Ргод. №игоЬю1. 41, 31-91.

6. Меки1ат, М.М., апб Сеи1а, С. (1990) Абу. №иго1. 51, 235-240.

7. Вптуот, 8., КоешдкЬегдег, С. (1999) Епуйоп. Неа1кЬ Регкреск., 107 8ир1. 1, 59-64.

8. В1дЬее, Е№., 8Ьагта, К.У., СЬап, Е.Ь., Вод1ег, О. (2000) Вгаш Век., 861, 354-362.

9. Апбегкоп, В.В., Кеу, В. (1999) 1пк. Е Эех. №игока., 17, 787-793.

10. койпкоп, С., Мооге, 8.\У. (2000) 1пк. Е Эех. №игока., 18, 781-790.

11. 8Ьагта, К.У., В1дЬее, Е№. (1998) Е №игока. Век., 53, 454-464.

12. Мипох, Е.Е, А1бипаке, В., 1пеккгока, КС. (1999) №игогерой, 70, 3621-3625.

13. коИпкоп, С., Мооге, 8.\У. (1999) Вюсйет. Вюрйук. Век. Соттип., 258, 758-762.

14. 1пекйока, КС, А1уагех, А., Регех, С.А., Могепо, О., У1сепке, М., Ьшкег, С., Сакапиеуа, Ο.Ι., 8око, С., апб Сатбо, Е (1996) №игоп 16, 881-891.

15. А1уагех, А., А1агсоп, В., Орахо, С., Сатрок, Е.О., Мипох, Е.Е, Са1бегоп, Е.Н., □фак, Е., Сепкгу, М.К., Ооског, В.Р., Эе Ме11о, Е.С., апб 1пеккгока, КС. (1998) Е №игока. 18, 3213-3223.

16. Мипох, ЕЕ, апб 1пекйока, КС. (1999) ЕЕВ8 Ьей. 450, 205-209.

17. Ма1111е\\· С. Сойтдйат, Мюйае1 8. НоШпкйеаб, апб Оау1б ЕТ. Уаих (2002) Вюсйетккгу, 41 (46), 13539-13547.

18. Мапие1а ВаПоНп!, Саг1о Вейлса, Уапп Саупш апб Утсепха Апбгкапо (2003) Вюсйет1са1 РЬагтасо1оду, Уо1ите 65, ккие 3, 407-416.

19. Вагкик, В.Т. (2000) Ехр. №иго1., 163, 495-529.

20. Ме1о, ЕВ. ек а1. (2003) №игока. Век, 45 (1): 117-27.

21. ШгбЬегд А., 8уепккоп А.Ь. (1998) СЬо1шеккегаке шЫЬйогк т 1Ве кгеактепк ок Акйетег'к бкеаке: а сотрапкоп ок ко1егаЬШку апб рйагтасо1оду. Эгид 8акеку, 19, 465-480.

22. Оаук К.Ь. ек а1. (1999) .ТАМА; 281, 1401-1406.

23. В1ека В. ек а1. (2003) Оетепйа апб Сепакпс Содшйуе Окогбегк, 15, 79-87.

24. ^1обек, 8.Т.; Апкоккетасх, Е; МсСаттоп, ЕА.; 8кгаккта, Т.Р.; Сбкоп, М.К.; Вг1ддк, ЕМ.; НитЬ1ек,

- 19 009668

С.; 8икктап, ЕЬ. (1996) Вюро1утегк, 38, 109-117.

25. Вайо1исс1, С., Рего1а, Е., Се11а1, Ь., ВгиТаш, М., ЬатЬа, Ό. (1999) ВюсЕет., 38, 5714-5719.

26. 8хед1е1ек, Т., Ма11епбег, \У.Э.. ТЕотак, Р.Е, КокепЬеггу, Т.Ь. (1999) ВюсЕет., 38, 122-133.

27. Наге1, М., К1еу^ед!, 6.1, КауеШ, К.В., 8бтап, I., 8икктап, ЕЬ. (1995) 8!гис!иге, 3, 1355-1366.

28. Наге1, М., 8сЕа1к, I., Екге!-8аЬа!кг, Ь., Воие!, Е., 6ое1бпег, М., Н1г!й, С., Ахе1кеп, Р.М., 8бтап, I., 8икктап, 1.Ь. (1993) Ргос. Ыа11. Асаб. 8с1. И8А, 90, 9031-9035.

29. 1оппа1а К.К. е! а1. (2003) 8упарке, 47(4), 262-269.

30. УообгиТТ-Рак Ό.8. е! а1. (2002) СМ8 Сгид Кеу., 8 (4), 405-26.

31. т !'Уе1б, В.А., КийепЬегд, А., НоТтап, А., Ьаипег, Ь.Е, уап С.М., е! а1. (2001) Ыоп8-1его16а1 ап111пДатта!огу бгидк апб !Ее Г1кк оТ АкЕешег'к б1кеаке. N. Епд1. 1. Меб. 345, 1515-21.

32. В1акко, I., АросЕа1, А., Воеск, 6., Набтапп, Т., 6гиЬеск-ЬоеЬепк!ет, В., Капктауг, 6. (2001) 1Ьирго£еп бесгеакек су!окше-шбисеб ату1о1б Ье!а ргобисйоп ш пеигопа1 се11к. №игоЬю1. Ик. 8, 1094-101.

33. Уеддеп, 8., Епккеп, 1.Ь., Иак, Р., 8ад1, 8.А., Уапд, К., е! а1. (2001) А киЬке! оТ ЖАЮк 1о\гег а ту1о1бодешс АЬе!а 42 тберепбепбу оТ сус1оохудепаке асйуйу. книге 414, 212-16.

34. Уайегкоп, Э.М., На1есЕ, 1., апб Уап Е1б1к, Ь.Е (2002) И1ксоуегу оТ пе\г сЕет1са1 с1аккек оТ куп1йейс йдапбк 1йа! кирргекк пеиго1п11атта!огу гекропкек. 1. Мо1. №игока., 19, 89-93.

35. Уаппд, 8.С., Косса, У.А., Ре!егкеп, К.С., О'Впеп, Р.С., Тапда1ок, Е.6., Коктеп, Е. (1999) Рок!тепораика1 екбодеп гер1асетеп! 1йегару апб пкк оТ АО: а рори1айоп-Ьакеб к!ибу. №иго1оду 52, 965-70.

36. 6геепТк1б, 1.Р., Ьеипд, Ь.У., Са1, Ό., Каак1к, К., 6гокк, К.8., е! а1. (2002) Ек!годеп 1о\гегк АкЕетег Ье!а-ату1о1б депегайоп Ьу кйти1айпд !гапк-6о1д1 пейгогк уекк1е Ьюдепекк. 1. Вю1. СЕет. 277 (12), 128-36.

37. ЕаккЬепбег, К., 81топк, М., Вегдтапп, С., 81го1ск, М., ЬиТ)оЕапп, Ό., е! а1. (2001) 81туак!а!т кйопд1у гебисек 1еуе1к оТ АкЕетег'к б1кеаке Ье!а-ату1о1б рерйбек АЬе!а 42 апб АЬе!а 40 т уйго апб т у1уо. Ргос. N311. Асаб. 8а. И8А 98, 5856-61.

38. МкЕаейк, М.Ь., ИоЬго^кку, К.Т., апб Ь1, 6. (2002) №игоДЬгШагу ра!йо1оду апб т1сго!иЬи1е к1аЬШ1у.

1. Мо1. №игока. 19, 289-293.

39. Ьаи, Ь.Е., 8сйасЕ!ег, ЕВ., 8еутоиг, Р.А., апб 8аппег, М.А. (2002) Рго!еш рЕокрЕогу1айоп ак а 1йегареийс !агде! ш АкЕетег'к б1кеаке. Сигг. Тор Меб. СЕет. 2, 395-415.

40. М1сЕае11к, М.Ь., Капаа! Ν., СЕеп, Υ., ВесЕ!е1, М., Кадап, К., Неррег1е, М., Ьш, Υ., апб 6еогд, 6. (1998) Рго!есйоп адатк! 3-ату1о1б !ох1сйу ш рптагу пеигопк Ьу рас1йахе1 [Тахо1]. 1. №игосЕет. 70, 1623-1627.

41. Сагкоп, ЕА., Тигпег, АЧ. (2002) №игосЕет., 81, 1.

42. ЕатШейц Р.С., ВиЬшйет, 8., апб Рек!ка, 8. (1981) А Сопуепкп! апб Кар|б Су!ора1кс ЕТТес! [пВ1Ь111оп Аккау Тог ШегТегоп, т Ме1йобк ш Еп/уто1оду, Уо1. 78 (8. Рек!ка, еб.), Асабетк Ргекк, №\ν Υо^к, 387-394.

43. Рек!ка, 8. (1986) ЕНегГегоп 81апбагбк апб 6епега1 АЬЬгеу1айопк, ш Ме1йобк ш Епхутокду (8. Рек!ка, еб.), Асабетк Ргекк, №\ν Υо^к 119, 14-23.

44. Иегупк, К. е! а1. (1980) Уинге 285, 542-547.

45. 8Еерагб, Н.М. е! а1. (1981) книге, 294, 563-565.

46. Магк, Ό.Ε. е! а1. (1984) Ргос. №!1. Асаб. 8а. И.8.А., 81 (18), 5662-5666.

47. Вои!гок, Т., Сгохе, Е. апб Υопд, У.У. (1997) 1оита1 оТ №игосЕеш1к!гу, 69, 939-946.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Применение интерферона-β (ΓΕΝ-β) для производства лекарственного средства для лечения и/или предотвращения болезни Альцгеймера, где указанная болезнь Альцгеймера представляет собой рано начинающуюся болезнь Альцгеймера и где ΣΕΝ-β вводится в дозировке приблизительно от 1 до 50 мкг на 1 человека в сутки, причем указанный ΤΕΝ-β вводится 3 раза в неделю подкожно.
2. Применение интерферона-β (ΕΕΝ-β) в комбинации со средством для лечения болезни Альцгеймера, выбранным из группы, состоящей из ингибиторов холинэстеразы, представляющих собой донепезил, ривастигмин, галантамин, такрин, амиридин, минаприн, гуперзин, гуприн, бис-тетрагидроаминоакридин (бис-ТНА), имидазолы, 1,2,4-тиадиазолидинон, бензазепин, 4,4'-бипиридин, инденхинолиниламин, декаметоний, эдрофоний, физостигмин, метрифонат, пропидий, фасцикулины, органофосфаты, карбаматы, карбаматы имино-1,2,3,4-тетрагидроциклопент[Ь]индола, №пиримидин-4-ацетиланилин, 7-арилоксикумарин, пропаргиламинокарбаматы, витамин Е, ингибиторы ΝΟ8, предшественники АСЕ, такие как холин и пирролидинхолин, или агонисты холинергических рецепторов, такие как мускариновые и никотиновые, в частности агонисты а7-холинергических рецепторов; средств, снижающих токсичность Аβ, включающих ибупрофен, индометацин, сульфид сулиндака, связанные со смертью ингибиторы протеинкиназы (ИАРК), такие как производные 3-аминопиридазина, ингибиторы циклооксигеназ (СОХ-1 и -2), антиоксиданты, такие как витамины С и Е, модуляторы ММЭА, такие как мемантин, или ингибиторы МАО, такие как расагилин, селегилин и транилципромин; средств гормонального замещения, представляющего собой эстроген; средств, снижающих уровень липидов, включающих ингибиторы редуктазы 3-гидрокси3-метилглутарилкофермента А (НМ6-СоА), статины, такие как ловастатин, правастатин, аторвастатин, симвастатин, флувастатин, церивастатин, розувастатин, компактин, мевилонин, мевастатин, визастатин, велостатин, синвинолин, ривастатин, итавастатин, питавастатин, метил-β-циклодекстрин, редуктазы 7

- 20 009668 дегидрохолестерина, ингибиторы ацилкофермента А: холестерин ацилтрансферазы (АСАТ), или ингибиторы Р13К, такие как вортманнин; средств, модулирующих секретазу, включающих ингибиторы β- и/или γ-секретазы, или молекулы, стимулирующие α-секретазу; ингибиторов агрегации Аβ, включающих ингибиторы пептидила (например, ингибиторы пентапептидов), аналоги амилоидсвязывающих красителей Конго красного и тиофлавина Т, аналоги противоракового средства доксорубицина, антибиотики, такие как рифампицин или его аналоги, и клиохинол, бензофураны, ингибиторы сывороточного амилоидного белка (8АР), такие как каптоприл, или соединения, образующие комплексы с металлами при добавлении Си²⁺, Ζη²⁺ или Ре³⁺; ингибиторов β-секретазы, представляющих собой ингибиторы ВАСЕ и ВАСЕ2, такие как альдегид 1 трипептида, алкоксизамещенные тетралины, ингибиторы γ-секретазы, представляющие собой соединения на основе дифторкетона, гидроксизамещенную пептидмочевину, производные аланинфенилглицина, капролактамы, бензодиазепины, гексанамиды, сульфонамид фенхиламина, бициклический сульфонамид, изокумарин, диарилацетилен, имидазопиридин, полиоксигенированные ароматические структуры и молекулы, стимулирующие α-секретазу, которые представляют собой активаторы протеинкиназы С, глутамат, карбахол, мускариновые агонисты, нейротрофические агенты или соединения, содержащие медь(П); нейрофибриллярных ингибиторов, представляющих собой ингибиторы 08Κ3β, такие как Ь1С1, 08Κ3β и ингибиторы сбк5, такие как индирубины и паулоны, ингибиторы кальпаина или паклитаксел и родственные средства; или ингибиторов катаболизма β-амилоида, представляющих собой металлопротеиназы цинка (например, неприлизин), эндотелинпревращающий фермент, ферменты, разрушающие инсулин (например, ГОЕ, инсулизин), плазмин или ингибиторы неприлизина, для производства лекарственного средства для лечения и/или предотвращения болезни Альцгеймера, для одновременного, последовательного или отдельного применения.
3. Применение по любому из предыдущих пунктов, где указанное производное включает по меньшей мере одну составляющую часть, присоединенную к одной или нескольким функциональным группам, которые присутствуют в виде одной или более боковых цепей на аминокислотных остатках, и где указанная составляющая часть представляет собой остаток полиэтилена.
4. Применение по любому из предыдущих пунктов, где указанный ΙΡΝ-β вводится в дозировке приблизительно от 10 до 30 мкг на 1 человека в сутки или приблизительно от 10 до 20 мкг на 1 человека в сутки.
5. Применение по любому из предыдущих пунктов, где указанный ΙΡΝ-β вводится ежедневно или через день.
6. Применение по п.4, где субтоксическая концентрация составляет менее чем 100 мкг/м², или менее чем 50 мкг/м², или менее чем 10 мкг/м², или менее чем 1 мкг/м².
7. Применение средства, состоящего из двух отдельных композиций, для производства упаковочной единицы для лечения рано начинающейся болезни Альцгеймера, причем одна композиция содержит ΙΡΝβ, а другая содержит средство для лечения болезни Альцгеймера по любому из предыдущих пунктов, для одновременного, последовательного или отдельного применения, но совместного введения для лечения болезни Альцгеймера.
8. Фармацевтическая композиция, содержащая ΙΡΝ-β в комбинации со средством для лечения болезни Альцгеймера по любому из предыдущих пунктов, в присутствии одного или более фармацевтически приемлемых эксципиентов.