EA005624B1 - Радиоактивные терапевтические липосомы - Google Patents
Радиоактивные терапевтические липосомы Download PDFInfo
- Publication number
- EA005624B1 EA005624B1 EA200200793A EA200200793A EA005624B1 EA 005624 B1 EA005624 B1 EA 005624B1 EA 200200793 A EA200200793 A EA 200200793A EA 200200793 A EA200200793 A EA 200200793A EA 005624 B1 EA005624 B1 EA 005624B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- liposomes
- antibodies
- folate
- conjugation system
- constructs
- Prior art date
Links
- 239000002502 liposome Substances 0.000 title claims abstract description 166
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title claims description 5
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 title abstract description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 40
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000002555 ionophore Substances 0.000 claims abstract description 18
- 230000000236 ionophoric effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 claims description 45
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 claims description 38
- 229940014144 folate Drugs 0.000 claims description 34
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 34
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 33
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 claims description 31
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 30
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 25
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 15
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 13
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 10
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 10
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 10
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical compound OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 claims description 9
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 8
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 8
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 101710146873 Receptor-binding protein Proteins 0.000 claims description 5
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 claims description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000003186 pharmaceutical solution Substances 0.000 claims description 4
- 229940051022 radioimmunoconjugate Drugs 0.000 claims description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 4
- 241001120493 Arene Species 0.000 claims description 3
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 102000001307 androgen receptors Human genes 0.000 claims description 2
- 108010080146 androgen receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims description 2
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 claims description 2
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 238000011347 external beam therapy Methods 0.000 claims description 2
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000012217 radiopharmaceutical Substances 0.000 claims description 2
- 229940121896 radiopharmaceutical Drugs 0.000 claims description 2
- 230000002799 radiopharmaceutical effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 claims description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 claims 3
- 102000016979 Other receptors Human genes 0.000 claims 2
- 101001039269 Rattus norvegicus Glycine N-methyltransferase Proteins 0.000 claims 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 9
- LBDSXVIYZYSRII-IGMARMGPSA-N alpha-particle Chemical compound [4He+2] LBDSXVIYZYSRII-IGMARMGPSA-N 0.000 abstract description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 21
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 18
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 11
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 11
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 9
- HIYAVKIYRIFSCZ-UHFFFAOYSA-N calcium ionophore A23187 Natural products N=1C2=C(C(O)=O)C(NC)=CC=C2OC=1CC(C(CC1)C)OC1(C(CC1C)C)OC1C(C)C(=O)C1=CC=CN1 HIYAVKIYRIFSCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 8
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 7
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 5
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 5
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 5
- HIYAVKIYRIFSCZ-CYEMHPAKSA-N 5-(methylamino)-2-[[(2S,3R,5R,6S,8R,9R)-3,5,9-trimethyl-2-[(2S)-1-oxo-1-(1H-pyrrol-2-yl)propan-2-yl]-1,7-dioxaspiro[5.5]undecan-8-yl]methyl]-1,3-benzoxazole-4-carboxylic acid Chemical compound O=C([C@@H](C)[C@H]1O[C@@]2([C@@H](C[C@H]1C)C)O[C@@H]([C@@H](CC2)C)CC=1OC2=CC=C(C(=C2N=1)C(O)=O)NC)C1=CC=CN1 HIYAVKIYRIFSCZ-CYEMHPAKSA-N 0.000 description 4
- HIYAVKIYRIFSCZ-CVXKHCKVSA-N Calcimycin Chemical compound CC([C@H]1OC2([C@@H](C[C@H]1C)C)O[C@H]([C@H](CC2)C)CC=1OC2=CC=C(C(=C2N=1)C(O)=O)NC)C(=O)C1=CC=CN1 HIYAVKIYRIFSCZ-CVXKHCKVSA-N 0.000 description 4
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 4
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 4
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 3
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 229910052767 actinium Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000001730 gamma-ray spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 3
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 0.000 description 2
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100324465 Caenorhabditis elegans arr-1 gene Proteins 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BHYOQNUELFTYRT-UHFFFAOYSA-N Cholesterol sulfate Natural products C1C=C2CC(OS(O)(=O)=O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 BHYOQNUELFTYRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 2
- SEGLCEQVOFDUPX-UHFFFAOYSA-N di-(2-ethylhexyl)phosphoric acid Chemical compound CCCCC(CC)COP(O)(=O)OCC(CC)CCCC SEGLCEQVOFDUPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 2
- 102000006815 folate receptor Human genes 0.000 description 2
- 108020005243 folate receptor Proteins 0.000 description 2
- 150000002224 folic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 2
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 2
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- HCWPIIXVSYCSAN-OIOBTWANSA-N radium-223 Chemical compound [223Ra] HCWPIIXVSYCSAN-OIOBTWANSA-N 0.000 description 2
- 229960005562 radium-223 Drugs 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 2
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- -1 4- (para-Maleimidophenyl) butyryl Chemical group 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000726103 Atta Species 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010069747 Burkholderia mallei infection Diseases 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 201000003641 Glanders Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 101100248028 Mus musculus Rev3l gene Proteins 0.000 description 1
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229910052776 Thorium Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- VWQVUPCCIRVNHF-OUBTZVSYSA-N Yttrium-90 Chemical compound [90Y] VWQVUPCCIRVNHF-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- QQINRWTZWGJFDB-UHFFFAOYSA-N actinium atom Chemical compound [Ac] QQINRWTZWGJFDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000003339 best practice Methods 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229910052797 bismuth Inorganic materials 0.000 description 1
- JCXGWMGPZLAOME-UHFFFAOYSA-N bismuth atom Chemical compound [Bi] JCXGWMGPZLAOME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 125000004063 butyryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- BHYOQNUELFTYRT-DPAQBDIFSA-N cholesterol sulfate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OS(O)(=O)=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 BHYOQNUELFTYRT-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006392 deoxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- WQABCVAJNWAXTE-UHFFFAOYSA-N dimercaprol Chemical compound OCC(S)CS WQABCVAJNWAXTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052732 germanium Inorganic materials 0.000 description 1
- GNPVGFCGXDBREM-UHFFFAOYSA-N germanium atom Chemical compound [Ge] GNPVGFCGXDBREM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930004094 glycosylphosphatidylinositol Natural products 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000002449 isotope indicator Substances 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 229910052745 lead Inorganic materials 0.000 description 1
- WABPQHHGFIMREM-BKFZFHPZSA-N lead-212 Chemical compound [212Pb] WABPQHHGFIMREM-BKFZFHPZSA-N 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 229960003330 pentetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920000233 poly(alkylene oxides) Polymers 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 229910052705 radium Inorganic materials 0.000 description 1
- HCWPIIXVSYCSAN-UHFFFAOYSA-N radium atom Chemical compound [Ra] HCWPIIXVSYCSAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001525 receptor binding assay Methods 0.000 description 1
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 229910052712 strontium Inorganic materials 0.000 description 1
- CIOAGBVUUVVLOB-UHFFFAOYSA-N strontium atom Chemical compound [Sr] CIOAGBVUUVVLOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012385 systemic delivery Methods 0.000 description 1
- 238000011361 targeted radionuclide therapy Methods 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/12—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by a special physical form, e.g. emulsion, microcapsules, liposomes, characterized by a special physical form, e.g. emulsions, dispersions, microcapsules
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
- A61K51/1072—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants the tumor cell being from the reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes or prostate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/12—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by a special physical form, e.g. emulsion, microcapsules, liposomes, characterized by a special physical form, e.g. emulsions, dispersions, microcapsules
- A61K51/1217—Dispersions, suspensions, colloids, emulsions, e.g. perfluorinated emulsion, sols
- A61K51/1234—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к системе конъюгации, содержащей липосомы с ионофорами и с раствором хелатообразующего соединения и радионуклида (радионуклидов), излучающего (излучающих) альфа-частицы, помещенного (помещенных) внутри липосомы. Кроме того, описан способ получения данного типа радиоактивных липосом, а также применение этой системы и набор для приготовления этой системы.
Description
Настоящее изобретение относится к системе конъюгации, содержащей липосомы с ионофорами и с хелатообразующим соединением, помещенными внутрь липосом, где эти липосомы являются стабильно меченными тяжелыми радионуклидами, излучающими α-частицы. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу приготовления данной системы конъюгации и к применению этой системы, а также к набору для приготовления этой системы.
Биомедицинское применение радионуклидов в противораковой терапии до сих пор сосредоточено на применении катионных или анионных изотопов, например [1311]йодида против рака щитовидной железы и 89§г для временного облегчения боли вследствие скелетных метастазов рака, и на применении главным образом бета-излучающих радионуклидов, связанных с моноклональными антителами (ОсУНа с1 а1., 1996).
Применение направленной терапии радионуклидами против рака основано на возможности поиска способов связывания радионуклидов со специфичными для опухоли соединениями-носителями (Сахе. 1996). Сегодня некоторые радионуклиды с полезными радиационными характеристиками невозможно применять при направленном лечении опухоли в связи с проблемой, обеспечивающей химически стабильную связь между радионуклидом и соединением-носителем. Новые системы носителей могут, однако, расширить как применение радиоизотопов, так и арсенал радионуклидов, которые считаются полезными для терапии (Сахе, 1996).
Липосомы с рецепторными аффинными группами, присоединенными к поверхности, или без таких групп, разработаны для доставки лекарств, и их в настоящее время применяют клинически для доставки химиотерапевтических агентов при некоторых формах рака. Недавние разработки при исследовании липосом привели к новым вариантам, обладающим фармакокинетикой, которая может сделать эти соединения полезными в качестве носителей для радионуклида для внутренней радиотерапии против рака (СаШ/оо, 1995). Эти недавние разработки в изготовлении препаратов и производстве липосом привели в результате к созданию малых везикул размером менее чем 100 нм с пролонгированным периодом циркуляции в крови, поскольку размер липосом можно лучшим образом ограничить до небольших диаметров с помощью использования экструзии через мембраны. Кроме того, введение липосом с привитым полиэтиленгликолем (ПЭГ) уменьшило взаимодействие с белками плазмы и, следовательно, уменьшило распознавание и клиренс в результате воздействия макрофагов ретикулоэндотелиальной системы (Магиуата е1 а1., 1997). Тем самым были достигнуты повышенные уровни поглощения опухоли благодаря постоянной концентрации в крови. Даже последующее поглощение опухоли достигнуто с помощью конъюгации молекул, обладающих аффинностью к рецепторам, например моноклональных антител или фолата, с поверхностью липосом. Кроме того, некоторые исследования показали преимущество применения ПЭГ в качестве линкера между липосомой и лигандом мишени, поскольку это также может улучшить доступность рецептора (например, Магиуата е1 а1., 1997; СаЫкои е1 а1., 1999; Бее е1 а1., 1994).
Липосомы были исследованы ранее в качестве носителей для радиоизотопов (Соиъ е1 а1., 1998; Тигпег е1 а1., 1988). Р1ки1 е1 а1. (1987) сообщили об исследовании на основе 212РЬ-декстрана, включенного пассивно (то есть 212РЬ-декстран добавляли во время образования липосомы и фракцию 212РЬ-декстрана включали вместе с водной фазой, представляющей собой внутреннюю часть липосомы). Эти авторы не высказали предположения, что такие липосомы являются подходящими для терапии рака, но использовали их прежде всего для исследования внутриклеточного лизиса клетки радиоизотопом ίη νίίτο. Никаких данных о судьбе 212Βί, образованного в результате распада 212РЬ, представлено не было, а размер липосом составлял порядка 350-500 нм, что является очень большим по сравнению с размером (примерно 100 нм), который считается в настоящее время оптимальным для терапии опухоли ίη νίνο (Еогакеп, 1997). Кроме того, эти липосомы не содержали ПЭГ в мембране.
ОдШаг-Итеба е1 а1. (1996) использовали липосомы в качестве носителя для гамма-излучающих радионуклидов 67Са, 'ίη и 99тТс и предложили применение радиоактивно меченых липосом для визуализации.
В теоретическом исследовании Койаге1о8 е1 а1. (1999) предложили применение липосом, меченных потенциально терапевтическими радионуклидами 1311, 67Си, 188Ке и 211Λΐ, но химические методики для получения этих радиоактивно меченых липосом не были предложены.
В ЕР 386146 В1 описана композиция и способ применения соединений, инкапсулированных в липосомы, для терапии опухоли путем захвата нейтронов. Однако, в эти липосомы вводили стабильные элементы (например бор), которые становятся радиоактивными только после активации, и эти липосомы не содержали ни ионофоры, ни хелатообразующее соединение.
Шкйебе е1 а1. (1994) описали липосомы, в которые введены 90Υ и хелатообразующее соединение ΌΤΡΆ (диэтилентриаминпентауксусная кислота), которое представляет собой иное хелатообразующее соединение по сравнению с хелатообразующими соединениями, описанными в настоящем изобретении. Кроме того, удерживание материнского/дочернего нуклида (нуклидов) не описано и, кроме того, 90Υ не является тяжелым элементом в отличие от элементов, описанных в настоящей заявке.
Для достижения достаточно стабильного радиоактивного мечения носителей тяжелыми альфаизлучающими радионуклидами обычно необходимы специальные химические методики, специально приспособленные к соответствующей химии каждого элемента, и такие способы не известны. Нельзя
- 1 005624 ожидать, что методики, использованные для радиоактивного мечения, например, Са, 1п, Тс, Си или Ке, будут совместимы с тяжелыми (атомная масса выше 150) катионными альфа-излучающими радионуклидами, подобными, например, 212/213Βί, 212рь, 223/224Ка, 227Тй или 225Ас.
Следовательно, задача настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить систему конъюгации радионуклид-липосома с рецепторными аффинными группами или без рецепторных аффинных групп, которая (1) инкапсулирует хелатообразующее соединение и тяжелый радионуклид (радионуклиды), который(ые) испускает(ют) альфа-частицы, (2) может удерживать дочерний нуклид (нуклиды), когда материнский нуклид (нуклиды) включен(ы) в липосому, и (3) может быть получена с помощью методики активного включения, подходящей для панели радионуклидов; а также в том, чтобы предложить применение такой системы и набор для приготовления такой системы. Эти задачи достигнуты настоящим изобретением, охарактеризованным прилагаемой формулой изобретения.
Настоящее изобретение относится к системе конъюгации, содержащей липосомы с ионофорами, то есть агентом для липосом, экстрагирующим металл, и с хелатообразующим соединением и тяжелым радионуклидом (радионуклидами) (атомная масса более 150), помещенными внутрь липосом. Эти липосомы получают, используя активное включение радионуклида, то есть посредством ионофоров, и их приготавливают согласно методикам, дающим в результате липосомы, имеющие типичный размер 100 нм. Полученный в результате продукт проявляет хорошую химическую стабильность в течение нескольких суток и может также удерживать дочерний нуклид (нуклиды) внутри липосомы, например в результате 212 212 превращения РЬ в Βί. Эти липосомы можно получить с модифицирующими группами, подобными полиалкиленоксидам, например ПЭГ, связанными с мембраной, либо без таких групп. В настоящем изобретении авторами также описан способ связывания таких радиоактивно меченых липосом с белками, распознающими опухоль, такими как, например, моноклональные антитела, конъюгированные с фолатом.
Далее настоящее изобретение будет описано более подробно со ссылкой на фигуры и примеры.
Фиг. 1 - связывание ПЭГилированных липосом, содержащих либо антитело РаЬ', либо меченное фолатом антитело РаЬ, конъюгированное с мембраной липосомы, с клетками ОУСАК 3;
фиг. 2 - связывание фолатированных ПЭГ-липосом с клетками ОУСАК 3 по сравнению со связыванием нефолатированных ПЭГ-липосом.
В целях разработки радиоактивно меченых липосом, которые являются подходящими для терапии рака, авторы настоящего изобретения исследовали получение и применение липосом, в которые включены тяжелые радионуклиды (то есть, атомная масса более 150), излучающие альфа-частицы, на основе радионуклидов Βί, Βί, Ка, Ка, Ас, РЬ и Т11. Используя липосомы (везикулы) с ионофорами, радиоактивно меченые липосомы предпочтительно с хелатообразующим соединением (то есть, липосомы, инкапсулирующие радионуклид и хелатообразующее соединение) получали путем использования активного включения радионуклида, и приготавливали их согласно методикам, дающим в результате липосомы типичного размера 100 нм.
Однослойные везикулы получали путем гидратации тонкой липидной пленки и экструзии (Окоп е! а1., 1979, Мас Эопа1б е! а1., 1991) следующим образом: И8РС (дистеароилфосфатидилхолин) и холестерин в молярном отношении 2:1, типично 10 и 5 мкмоль, соответственно, растворяли в хлороформе в круглодонной колбе. Растворитель удаляли роторным выпариванием с использованием пониженного давления. Затем сухую липидную пленку подвергали гидратации в 0,5-1 мл 150 мМ лимонной кислоты, 30 мМ ИОТА (1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10,М,М',М,М'-тетрауксусной кислоты), рН 4. Полученную в результате суспензию подвергали пяти циклам замораживания и оттаивания с последующей повторной экструзией через поликарбонатные фильтры с размером пор 100 нм 5 раз и с размером пор 50 нм 5 раз, используя ручной прибор для экструзии (Ауекйп, О11а\уа. Сапаба). Концентрация липидов в продукте составляла ~ 30 мМ. Перед включением радионуклида в липосомы внешний раствор заменяли путем элюции на колонке ΡΌ-10 на 250 мМ сахарозу, 20 мМ НЕРЕ8 (М-2-гидроксиэтилпиперазин-Ы'-2этансульфоновая кислота), рН 7,4.
Составные части липосомы: а) Внутренняя водная среда: рН 1-14, предпочтительно 2-9, более предпочтительно 4-5. Компоненты: вода, агенты, способные к поддержанию желаемого рН во внутренней водной среде в течение желаемого временного интервала, то есть до тех пор, пока не начинается опосредованное ионофором включение радиоактивного металла (металлов). Предпочтительно, эти компоненты внутренней водной среды также приводят в результате к комплексообразующей функции радиоактивного металла (металлов). На это можно воздействовать путем 1) например, электростатических донорных функциональных групп агентов, используемых для регулирования рН, например, атома (атомов) кислорода в ацетате, цитрате и родственных соединениях; 2) дополнительного содержания комплексообразующего агента во внутренней водной среде, например, ЭДТА, ИТРА, ИОТА, ИОТМР и родственных соединений.
б) Ионофор: например, агент, способный к транспортировке, по существу необратимой, радиоактивного металла через липидный бислой из внелипосомной фазы во внутреннюю часть липосомы. При
- 2 005624 меры: ионофоры, для которых показано, что они функционируют желаемым способом: ионофор кальция А 23187, дициклогексил 18-С6, бибензо-18-С6, 2,3-димеркапто-1-пропанол, РЬ-ионофор.
в) Компоненты липидного бислоя: компоненты липидного бислоя предпочтительно приводят в результате к смеси, способной к образованию везикул, и для которой температура перехода жидкость твердое вещество выше физиологической температуры; например, 1) фосфолипиды. Примеры: алкилфосфатидилхолины с длинной цепью, например 1,2-дилуароил-8п-глицеро-3-фосфохолин (ПЕРС), 1,2димиристоил-8п-глицеро-3-фосфохолин (ЭМРС), 1,2-дипальмитоил-8п-глицеро-3-фосфохолин (ЭРРС), 1,2-дистеароил-§п-глицеро-3-фосфохолин (Э8РС), 1,2-диолеоил-§п-глицеро-3-фосфохолин (ЭОРС), 1пальмитоил-2-олеоил-8п-глицеро-3-фосфохолин (РОРС); 2) стерины или соединения, обладающие подобными свойствами, при которых они придают жесткость липидному бислою (уменьшают текучесть липидного бислоя).
Примеры: Соединения класса стеринов: холестерин и холестерин-3-сульфат, и 3) (стерический) стабилизатор (стабилизаторы) ш νίνο для повышения свойств нацеливания этой конструкции на опухолевую клетку и увеличения времени нахождения в крови, например, полиэфиры, полиэтиленгликоли. Включение ПЭГ и/или производных ПЭГ в препараты липосом даст преимущества в отношении сниженного клиренса инъецированных липосом из системы кровообращения ретикулоэндотелиальной системой. Обычно в препарат включают от 3 до 10 мол.% по отношению к фосфолипиду. Количество стабилизатора, необходимое для получения желаемого стабилизирующего эффекта, однако, зависит от мономера (электростатических и полярных свойств) и числа повторяющихся единиц, то есть от длины цепи. Примеры (ПЭГ и/или производные ПЭГ): 1,2-димиристоил-8п-глицеро-3-фосфоэтаноламин-Ы[поли(этиленгликоль) 2000] (РЕ62000 Ό1/1 РЕ), 1,2-дипальмиоил-8п-глицеро-3-фосфоэтаноламин-Ы[поли(этиленгликоль) 2000] (РЕ62000 ЭРРЕ), 1,2-дистеароил-8п-глицеро-3-фосфоэтаноламин-Ы[поли(этиленгликоль)2000] (РЕ62000 Э8РЕ).
г) Компоненты, способствующие такой модификации конструкций, чтобы обладать свойствами нацеливания на опухолевую клетку: Выбор подходящего активированного липида будет определяться природой гаптена, а также потребностями исследования. Эффективность этого взаимодействия будет определяться уходящей группой, гидрофильной пространственной группой, свойствами материала липосомы и концентрацией реагентов. Для исследований ш νίνο, при которых необходимо, чтобы гаптен оставался связанным с липосомой, отдельных преимуществ можно добиться путем выбора липидных якорей с более длинной ацильной цепью, которые медленнее обмениваются между мембранами. Кроме того, ковалентная связь между гаптеном и липидным якорем должна быть устойчивой как к химическому, так и к ферментативному расщеплению. Активированные липиды могут функционировать с образованием, например, аминной, амидной, тиоэфирной или дисульфидной связей между липидом и модификатором. Если в препарат включают стерические стабилизаторы, например ПЭГ и/или производные ПЭГ, эта группа, функционирующая как связывающая, предпочтительно находится на конце соединения, идентичного или подобного стабилизатору, и имеет эффективную длину цепи, равную или большую, чем длина цепи стабилизатора. Примеры: Компоненты везикулы, способствующие такой модификации конструкций из ПЭГ и/или производных ПЭГ, чтобы обладать свойствами нацеливания на опухолевую клетку: Ν-|\\-(2пирцдилдитиопропиониламино)поли(этиленгликоль)2000]-1,2-дистеароил-8п-глицеро-3-фосфоэтаноламин (РОР-РЕС2000-О8РЕ), N-[{^-[4-(пара-малеимцдофенил)бутаноил]амино}полц(этцленглцколь)2000]-1,2-дистеароил-8η-глццеро-3-фосфоэтаноламин (МрВ-РЕС2000-Э8РЕ).
Отделение радионуклида, связанного с липосомой, от несвязанного радионуклида было достигнуто путем использования эксклюзионной хроматографии (Майк апб 6атЬ1е 1979, ТПсоск с1 а1., 1991). Для разделения после методик наполнения липосом использовали колонки для эксклюзионной хроматографии РЭ-10. Из нанесенных на колонки РЭ-10 объемов 1 мл или менее липосомы элюировали в первых 4,5 мл. Радионуклиды, не связанные с липосомами, элюировали во фракции, соответствующей изотопам низкой молекулярной массы. Колонки РЭ-10 также использовали при исследовании стабильности (в отношении удерживания радионуклидов) наполненных липосом в РВ8 (фосфатно-солевом буферном растворе).
Отделение радионуклидов, связанных с липосомой, от свободных радионуклидов в сыворотке осуществляли путем эксклюзионной хроматографии на колонке с Сефарозой СЬ-4В (Нгапд апб Майк, 1977). Посредством этого можно получить растворы, содержащие радиоактивные липосомы, диспергированные в жидком носителе, по существу свободном от несвязанных радионуклидов.
ЭДТА (этилендиамин-^№-тетрауксусную кислоту) добавляли перед хроматографическими методиками, чтобы стабилизировать свободный радионуклид в таком состоянии, что его можно легко отделить от фракции, связанной с липосомой.
Выход радионуклидного наполнения для радионуклидов, связанных с липосомой, и латентность радионуклидов, связанных с липосомой, устанавливали путем гамма-спектроскопии для Ас, Ка, 212РЬ, 212В1, 205В1 и 207В1,228Ас и 205/207В1 использовали в качестве изотопного индикатора для потенциально терапевтически полезных радионуклидов 225Ас, 212В1 и 213В1, соответственно.
Авторы настоящего изобретения сделали значительное и неожиданное открытие того, что 212В1 не претерпевает значительного перехода после распада 212РЬ, включенного в данный тип липосом. Текущее
- 3 005624 состояние применения 212РЬ в качестве молекулярно сшитого генератора для 212Βί указывает на то, что значительное высвобождение (>30%) обычно происходит из хелатообразующего соединения (МсС1иге апб Еетепбедеп, 1998; ΜίΓ/абеН е! а1., 1993). Однако, посредством захвата 212РЬ при высокой концентрации хелатообразующего соединения, как например внутри липосомы, высвобождения дочернего продукта можно избежать, предложив систему конъюгации, которую можно использовать для захвата дочернего нуклида после ядерного превращения. Сообщают о том, что эта система является первой наработкой системы конъюгации для 212РЬ, которая может удерживать дочерний нуклид 212Βί почти количественно. Таким образом, настоящее изобретение относится к липосомам с ионофорами, которые содержат радионуклид и хелатообразующее соединение, помещенные внутрь липосомы (система конъюгации), и причем эта система конъюгации может или не может удерживать дочерний нуклид.
Хелатообразующее соединение по настоящему изобретению может быть выбрано из группы, содержащей 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-Ы,Х',Х,Х'-тетрауксусную кислоту (ЭОТА),
1.4.7.10- тетраазациклотридекан-1,4,7,10-Н,Х',Х,Х'-тетрауксусную кислоту (ΤΡΙΤΑ),
1.4.7.10- тетраазациклотетрадекан-1,4,7,10-Ы,Х',Х,Х'-тетрауксусную кислоту (ТЕТА),
1.4.7.10- тетраазациклододекан-1,4,7,10-Ы,Х',Х,Х'-тетра(метилен)фосфоновую кислоту (ΌΟΤΜΡ),
1.4.7.10- тетраазациклотридекан-1,4,7,10-Ы,Х',Х,Х'-тетра(метилен)фосфоновую кислоту,
1.4.7.10- тетраазациклотетрадекан-1,4,7,10-Ы,Х',Х,Х'-тетра(метилен)фосфоновую кислоту, диэтилентриамин-Ы,Х',Х-пентауксусную кислоту и их изомерные производные, криптат[2,2,2], криптат[3,2,2], криптат[2,2,1] и их моно- и дибензопроизводные, соединенные мостиковой связью каликс[4]арены, содержащие богатые электронами (донорные) группы (гидроксил, карбоксил, эфир, амид, амин),
1.10- диаза-4,7,13,16-тетраоксациклооктадекан-1,10-Н,Ы'-бис-уксусную кислоту и
1.10- диаза-4,7,13,16-тетраоксациклооктадекан-1,10-Н,Х'-бис-малонат.
Другим важным и удивительным открытием было то, что липосомы по настоящему изобретению могут эффективно включать и удерживать 223Ра. Впервые описана система конъюгации, потенциально полезная для направленного лечения опухоли радием-223. Кроме того, авторами изобретения показано, что висмут и актиний также могут включаться и сильно удерживаться в описанном в настоящее время типе липосом, что указывает на то, что можно также получить системы конъюгации на основе Βι, Βι и 225Ас.
Систему конъюгации по настоящему изобретению можно приготовить либо с модифицирующими поверхностными группами, например ПЭГ, в мембране липосомы (включающие ПЭГ/ПЭГилированные липосомы), либо без таких групп. Преимущество включения ПЭГ в мембрану состоит в том, что он дает некоторые ПЭГ-реакционноспособные группы, которые дают возможность конъюгации белков, таких как, например, антитела, фрагменты антител или конструкции фолата, либо другие аффинные к рецептору (связывающие рецептор) белки/молекулы.
Далее настоящее изобретение относится к новому типу липосом с белками, связывающими рецептор, присоединенными к мембране липосомы. Здесь авторами изобретения описаны радиоактивно меченые липосомы; включающие ПЭГ, конъюгированные с меченными фолатом антителами. Применение фолата и производных фолата для нацеливания на опухоли, экспрессирующие белки, связывающие фолат (ΕΒΡ), гликозил-фосфатидил-инозитол-сшитый белок клеточной мембраны, вовлеченный в клеточный захват окисленных фолатов посредством эндоцитоза, привлекло внимание среди исследователей (Кгапх е! а1., 1996; Веббу е! а1., 1998; 8Ыпоба е! а1., 1998; Тпрре! е! а1., 1999). Поскольку показано, что некоторые типы человеческих раковых клеток обладают сверхэкспрессией ΕΒΡ, этот рецептор может представлять собой возможную мишень для доставки терапевтических радиоизотопов, конъюгированных с фолатом. Таким образом может быть достигнута направленная терапия против рака радионуклидами посредством использования антител, конъюгированных с фолатом. Кроме того, если меченный фолатом сайт связывания антигена антителами направлен против антигена, ассоциированного с опухолью, отличного от ΕΒΡ, достигнута двойная связывающая активность (то есть достигнута аффинность как к антителу-антигену, так и к рецептору ΕΒΡ). По мнению авторов изобретения впервые описана конъюгация меченных фолатом антител.
Меченные фолатом антитела, конъюгированные с липосомами, по настоящему изобретению, можно дополнительно метить радионуклидом или смесью различных радионуклидов, чтобы повысить эффективность радиотерапии.
В настоящем изобретении показано, что эту новую комбинацию меченных фолатом антител, конъюгированных с липосомами, можно применять для нацеливания радионуклида (радионуклидов) на клетки, экспрессирующие рецепторы фолата. Это является особенно полезным при излучателях альфачастиц, которые представляют собой источники излучения радиации с высокой линейной передачей энергии (ЫдЕ-ЬЕТ), которые являются крайне цитотоксичными для клеток млекопитающих (На11, 1994; Ьатаеп е! а1., 1998; Кт!!ег е! а1., 1977). Однако, источник альфа-излучения может доставлять излучение в чрезвычайно малую область по сравнению с другими типами излучения. Таким образом, если источник альфа-излучения можно направлять к ткани-мишени, воздействие на нормальную ткань может быть уменьшено.
- 4 005624
Систему конъюгации по настоящему изобретению можно также применять для нацеливания на клетки, экспрессирующие, например, рецептор эстрогена или рецептор тестостерона, посредством конъюгации антител с эстрогеном или тестостероном.
Меченые антитела, используемые согласно настоящему изобретению, предпочтительно представляют собой антитела класса 1дС или 1дМ, и/или их фрагменты, и/или их конструкции (например, миниантитела). Кроме того, эти антитела и/или фрагменты, и/или конструкции могут быть мышиными, химерными или полностью гуманизированными, поликлональными или моноклональными.
Настоящее изобретение также относится к применению системы конъюгации по настоящему изобретению для изготовления фармацевтического раствора, подходящего для инъекции или инфузии млекопитающим, включая людей, путем внутривенного и/или регионарного, и/или внутриопухолевого пути введения. Этот фармацевтический раствор можно применять в комбинации с радиоиммуноконъюгатом или несколькими радиоиммуноконъюгатами и/или другими формами радиофармацевтической терапии, химиотерапии, наружной дистанционной лучевой терапии или хирургии, для лечения злокачественных опухолей.
Настоящее изобретение также относится к способу применения системы конъюгации по настоящему изобретению для лечения злокачественных опухолей, таких как, например, рак головного мозга, легкого, шейки матки, яичника или молочной железы, либо лейкемия, лимфома или злокачественная меланома.
Настоящее изобретение также относится к набору для приготовления системы конъюгации по настоящему изобретению, включающему в себя флакон, содержащий раствор липосом, и второй флакон, содержащий радионуклид в растворе, которые можно смешивать, чтобы способствовать радиоактивному мечению. Кроме того, их можно смешивать с третьим флаконом, содержащим белки и/или молекулы, обладающие аффинностью к рецептору, для получения аффинной к рецептору системы конъюгации.
Реагенты и оборудование
Гамма-спектроскопию осуществляли с использованием германиевого детектора (СапЪегга, Мепбеп, СТ, ИЗА), соединенного с многоканальным анализатором (ЕС&С ОКТЕС, Оак К1бде, ΤΝ, ИЗА). Весктапп ГЗ 6500 (Весктапп, Еи11ег1оп, СА, ИЗА) использовали для подсчета жидкостной сцинтилляции. РЗРС и холестерин приобретали у ΝοιίΙκτη I аркк (Уапсоиуег, Сапаба). Колонки ΡΌ-10 с сефадексом С-25 (АтегзИат РИагтас1а Вю1есИ АВ, иррза1а, З^ебеп) использовали для очистки радиоактивно меченых липосом. Макроциклическое хелатообразующее соединение РОТА использовали в качестве внутрилипосомального хелатообразующего соединения и приобретали у Масгосусйс (К1сйагб8оп, ТХ, ИЗА). В данном исследовании использовали ультрачистые ΗΝΟ3 (I. Т. Вакег, ΡΙίΙΙ 1'р^Ьигд, N1, ИЗА), 6М НС1 (Е18Йег Зс1еп11'1!с, РГОзЬигуИ, РА, ИЗА) и бис(2-этилгексил)-фосфорную кислоту (ΗΌΕΗΡ) от Е1ика (через Зщта-Ак1псИ АЗ, Рог\уау).
Все буферы, используемые для опосредованного ионофором катионного наполнения липосом, доводили до желаемого значения рН, используя аргинин (свободное основание). Всю используемую воду получали из системы очистки воды МПН-С) (Мйкроге, ВебГогб, МА, ИЗА). Ионообменные смолы были предоставлены ВюКаб (Негси1ез, СА, ИЗА).
Смолы предварительно готовили путем промывки водой, затем 6 М НС1, а затем ацетоном и, наконец, водой. Смолы хранили в воде перед набивкой колонок.
Используемый ДМСО хранили с ситами 4 А.
232Т11(ХО3)|, используемый в данной работе, хранили в течение более чем 20 лет. Образец был предоставлен Шс1еа1· СИеншЧу Сгоир, РераПтеп! оГ СИетлау ишуегы1у оГ Оз1о, Оз1о, Рогхуау.
3Н-фолиевую кислоту приобретали у АтегзИат РИаппаоа ВкДесИ (ВисктуИатбше, ЦК).
Все остальные химические реактивы приобретали у Зщта-Ак1псИ, Рогххау.
В табл. 1 показаны некоторые физические свойства радионуклидов, используемых в экспериментах с липосомами.
Таблица 1
| Нуклид | ίΐ/2 | гамма-излучение (излучения) | % вероятности* |
| 6,13 час | 911,2(26,6) - | 26,6 - | |
| 223Ка | 11,43 сут. | 269,4 (13,7) 271,2 (0,108) (219Вп)2 | 13.7 10.8 |
| 2Г2РЬ | 10,6 час | 238,6 (43,6) | 43,6 |
| ТИу, 1 | 3,05 мес. | 583,1 (32,5) | 35,2 |
| 2ϋ/Βΐ | 31,55 лет | 569,7 (97,7) | 97,7 |
| 15,31 сут. | 703,4 (31,1) | 31,1 |
* Для каждого радионуклида в списке приведено только наиболее преобладающее гаммаизлучение.
- 5 005624
Данные из Ыис1еаг Эа1а 8Нсс15. Асабешк Ргевв ΙΝΟ
Наилучшая методика
Липосомы, полученные согласно описанным методикам, наполняли радием-55 или свинцом-212. После этого антитела подвергали взаимодействию с липосомами с получением молекул антител на поверхности липосом. Следует добиваться размера липосом примерно 100 мкм, что будет подходящим для системной доставки, но типичные размеры 200-1000 мкм можно использовать для внутриполостной доставки, например для лечения внутричерепной опухоли мозга или для лечения внутрибрюшинного рака яичника. (Больший размер липосом будет замедлять скорость клиренса из полости, в которую инъецируют препарат, поддерживая тем самым высокую концентрацию в месте опухоли).
Примеры
Пример 1. Включение РЬ/ Βί в липосомы
Способы: 212РЬ/212В1 получали посредством эманации 220Нп из источника 228Тй, как описано Наевшей апб Но££ (1994). 212РЬ/212В1 без добавления носителя выщелачивали из коллектора, используя 0,1М ΗΝΟ3, и этот раствор наносили на колонку 2x20 мм с катионообменной смолой АС 50\У-Х4. Затем 212РЬ/212В1 элюировали в 2М НС1, и этот раствор упаривали до сухого состояния. Затем 212РЬ/212В1 растворяли в 200 мкл 10 мМ раствора ацетата, рН 5. 212РЬ количественно определяли путем измерения его гаммаизлучения 238,6 кэВ (табл. 1). 212Βί количественно определяли измерением гамма-излучения 583,1 кэВ 208тч его дочернего Т1 при радиоактивном равновесии.
Результаты: Обнаружено, что менее чем 0,2% добавленной активности было связано с липосомами в течение периодов инкубации вплоть до 3 суток.
Липосомы, соответствующие концентрации липидов 30-60 мМ, энергично перемешивали с пленкой ионофора А23187 (10-13 нМ). Затем добавляли примерно 1 МБк РЬ/ Βί, и эту смесь инкубировали при 75°С в течение 30 мин с последующей элюцией на колонке РП-10. Затем фракцию, содержащую более чем 95% наполненных везикул, элюировали на второй колонке РП-10. Латентность связанного с ли212 212 посомой РЬ/ Βί исследовали с помощью инкубации везикул при 37°С в человеческой сыворотке или РВБ. За распределением активности следили в течение периода 24 ч.
Результаты: Эффективность включения 212РЬ: 34,8% (п=3).
Удерживание измеряли с помощью гамма-спектроскопии, и более чем 99% 212РЬ было связано с липосомами в течение периодов инкубации вплоть до 24 ч.
Пример 2. Удерживание Βί, образованного в результате распада связанного с липосомами РЬ
Способы: Липосомы наполняли 212РЬ, как описано выше. Связанную с липосомами радиоактивность выделяли путем элюции реакционной смеси 10 мМ ЭДТА в РВБ на колонке РЭ-10, предварительно уравновешенной 10 мМ ЭДТА в РВБ.
212 212
Через 3 ч, чтобы обеспечить, что переходное равновесие между РЬ и Βί установилось, аликвоты этого раствора наносили на колонки РЭ-10, предварительно уравновешенные 10 мМ ЭДТА в РВБ, для отделения свободных радионуклидов от связанных с липосомами радионуклидов. За распределением активности следили в течение периода 24 ч.
Отдельную аликвоту меченых липосом, которые не подвергались процедуре отделения (идентичной геометрии полученных в результате хроматографических методик), измеряли для использования в качестве стандарта. Это осуществляли для того, чтобы установить отношение активности 212В1/212РЬ при радиоактивном равновесии.
212 212
Результаты: В результате сравнения отношения Βί/ РЬ, полученного для хроматографически выделенных липосом, с отношением равновесной смеси, было установлено, что более чем 95% 212Βί показывает удерживание в липосомах после распада связанного с липосомами 212РЬ.
Кроме того, сравнивали измерения активности 212Βί в двух полученных при хроматографии фракциях. Более чем 99% суммарной активности 212Βί элюировалось во фракции, соответствующие липосомам.
Пример 3. Исследование возможного повторного включения РЬ и Βί в липосомы
Способы: Липосомы, соответствующие концентрации липидов 30-60 мМ, включающие 150 мМ лимонной кислоты, 30 мМ ΌΟΤΑ, и использующие внешний раствор, содержащий 10 мМ ЭДТА в РВБ, добавляли к пленке ионофора А23187 (20-26 нмоль на внутренней поверхности стеклянного сосуда). За212 212 тем добавляли РЬ и Βί в РВБ с последующей инкубацией при 37°С. Аликвоты этого раствора элюировали через колонки РЭ-10, и полученные с помощью хроматографии фракции, соответствующие элюату с липосомами, анализировали с помощью внутреннего Се-детектора.
Результаты: Никакого обнаружимого включения (< 1%) 212РЬ и 212Βί не наблюдали в течение периода времени 24 ч.
Пример 4. Включение 223На в липосомы
На продуцировали генератором на основе Ас, как описано (Ьагвеп апб Неппквеп, 1999). Вкрат227 227 це, Ас и его дочерний нуклид Т11 удерживались на колонке с хроматографической смолой для экстракции, способствующей элюции 223На при использовании минеральной кислоты. Для включения радия в липосомы этот элюированный раствор из генератора упаривали до сухого состояния, а затем 223На растворяли в 5 мМ цитрате, рН 7,4.
- 6 005624
Липосомы, соответствующие концентрации липидов 30-60 мМ, энергично перемешивали с пленкой ионофора А23187 (10-13 нмоль на внутренней поверхности стеклянного сосуда). После этого добавляли примерно 50 кБк 223Ка, и эту смесь инкубировали при 75°С в течение 20 мин. Затем эту реакционную смесь добавляли к 100 мкл 10 мМ ЭДТА и элюировали на колонке ΡΏ-10 для выделения радиоактивности, связанной с липидными везикулами.
Удерживание связанного с липосомами 223Ка исследовали с помощью инкубации везикул при 37°С в человеческой сыворотке (81дша) или 5 мМ ЭДТА в человеческой сыворотке при концентрации липосом 0,3 мг суммарного липида/мл сыворотки. Результаты представлены в табл. 2 и демонстрируют, что 223Ка очень стабильно удерживается в липосомах.
Таблица 2
| Время инкубации (сутки) | % суммарного 223Ра во фракции липосом |
| 1 | 94,6 ± 1 |
| 3 | 94 ± 2,5 |
| 4 Среднеквадратичное отклонение, п=4 | 94,7 ± 0,5 |
Пример 5. Определение, вносит ли повторное включение вклад в эксперимент по удерживанию 223Ка
Способы: Липосомы, соответствующие концентрации липидов 30-60 мМ, образованные гидратацией липидных пленок со 150 мМ лимонной кислоты, 30 мМ ΏΟΤΆ, внешний раствор ΡΒ8 или сыворотки, добавляли к пленке ионофора А23187 (10-13 нмоль, распределенные на внутренней поверхности стеклянного сосуда). Затем добавляли 223Ка в 5 мМ цитрате, рН 7,4, с последующей инкубацией при 37°С. Аликвоты этого раствора наносили на колонки ΡΏ-10, и полученную с помощью хроматографии фракцию, соответствующую липосомам, анализировали с помощью внутреннего Ое-детектора.
207
Пример 6. Включение Βι в липосомы
203-207
Способы: ’ Βι продуцировали с помощью реакций (р. хп) на природных свинцовых мишенях и очищали, используя хроматографическую смолу для избирательной экстракции свинца (Неппкзеп апС Ηο££, 1998).
Смесь изотопов Βι, состоящую главным образом из 205Βι и 207Βι, обозначенную здесь далее как 207Βι, использовали в данном исследовании. 50 мкл раствора 207Βι в 10-4 М НС1 добавляли к липосомам, соответствующим концентрации липидов 30-60 мМ, которые предварительно смешивали с пленкой ионофора А23187 (10-13 нмоль на внутренней поверхности стеклянного сосуда) и инкубировали в течение 30 мин при 75°С. Затем эту реакционную смесь добавляли к 100 мкл 10 мМ ЭДТА и элюировали на колонке ΡΏ-10 для выделения радиоактивности, связанной с липидными везикулами.
Результаты: Обнаружено, что 32% суммарного 207Βι связано с липосомами.
Пример 7. Включение 228 * * *Ас в липосомы
228 232
Способы: Ас выделяли из препарата Т^УО3)4 путем комбинирования экстракции растворителем и ионного обмена. 232ΤΗ(ΝΟ3)4 (исходно 4Н2О) растворяли в 20 мл 0,1 М 11\О3 и добавляли в делительную воронку объемом 500 мл и приводили в контакт с 5x100 мл 2М раствора ΗΏΕΗΡ в гептане. Затем водную фазу промывали три раза гептаном и после этого наносили на колонку 3x40 мм с катионообменной смолой А(15(М’-Х12 для выделения Ас, как описано (СаЬе11, 1959). С этой колонки 1’Ь, Βι, 224 228
Ка и Ка элюировали в 3М НNО3, и этот раствор оставляли в течение >20 ч. Затем этот раствор упаривали до сухого состояния с последующим выщелачиванием радионуклидов из сосуда 1 мл 1М ΗΝΟ3.
212 212 224 228
Этот раствор наносили на колонку 3x40 мм с АО50^-Х12. Снова 1’Ь, Βι, Ка и Ка элюировали в
228 228
3М ΗΝΟ3. Ас элюировали в 6М ΗΝΟ3, и этот элюат упаривали до сухого состояния. Затем Ас выщелачивали из сосуда, используя 200 мкл 5 мМ ΗΝΟ3. Примерно 6 кБк 228Ас добавляли к липосомам, содержащим ионофор А23187, как описано выше, и инкубировали в течение 60 мин при 75°С. Затем эту реакционную смесь добавляли к 100 мкл 10 мМ ЭДТА и элюировали на колонке ΡΏ-10 для выделения радиоактивности, связанной с липидными везикулами. Фракции, соответствующие более чем 95% наполненных везикул, объединяли, а затем элюировали на второй колонке ΡΏ-10. Липосомальное удерживание 228Ас исследовали с помощью инкубации радиоактивно меченых везикул при 37°С в человеческой сыворотке или ΡΒ8. За распределением активности следили в течение периода 24 ч.
Результаты: В эксперименте по включению 90-95% добавленного 228Ас (скорректировано с учетом распада во время мечения и очистки) было связано с липосомами после процедуры включения. В эксперименте по удерживанию обнаружено, что более чем 98% 228Ас связано с липосомами в течение периодов инкубации вплоть до 24 ч.
- 7 005624
Пример 8: Включение 90Υ
Способы: 90Υ в данном примере использовали в качестве изотопного индикатора для исследования поведения радиоактивно меченых липосом. 90Υ и 908г в данном исследовании измеряли с помощью подсчета жидкостной сцинтилляции.
90Υ выделяли из 908г посредством хроматографической смолы для избирательной экстракции стронция, как описано ΩίοΙζ апб ΗοπνίΙζ (1992). Здесь 908г (Лтегайат, ВискшдйаткЫге, Епд1апб) в 0,1 М ΗΝΟ3 упаривали до сухого состояния, и к остатку добавляли 3 М ΗΝΟ3. Этот раствор наносили на колонку 3x20 мм со 8г-смолой (Е1СйгоМ, Эаг1еп. 1Ь, И8Л), и колонку отмывали 5 мл 3 М ΗΝΟ3.
При данной процедуре избирательно элюируется 90Υ, тогда как 8г достаточно удерживается на колонке до достижения более низкого содержания 908г в смеси 908γ/90Υ примерно в 103 раз (^^еΐζ апб Ногνίΐζ, 1992). После этого 908г десорбировали с колонки, используя 0,05 М ΠΝΘ3, и этот раствор оставляли на одну неделю, чтобы дать возможность 90Υ кристаллизоваться. Затем этот раствор упаривали до сухого состояния и к остатку добавляли 3 М ΗΝΟ3 перед разделением радионуклидов на второй колонке со 8гсмолой. Элюат, содержащий 90Υ, упаривали до сухого состояния, и радионуклид выщелачивали из сосуда, используя 200 мкл 5 мМ ΗΝΘ3. Этот раствор добавляли к липосомам, содержащим ионофор А23187 (как описано ранее), и инкубировали в течение 60 мин при 75°С. Затем эту реакционную смесь добавляли к 50 мкл 10 мМ ЭДТА и элюировали на колонке ΡΌ-10 для выделения радиоактивности, связанной с липидными везикулами. Фракцию, соответствующую более чем 95% везикул, элюировали на второй колонке ΡΌ-10. Липосомальное удерживание связанного с липосомами 90Υ исследовали с помощью инкубации везикул при 37°С в человеческой сыворотке или РВ8. За распределением активности следили в течение периода 4 суток.
Результаты: Более чем 95% добавленного 90Υ было связано с липосомами после 1 ч включения и очистки на колонке для гелевой эксклюзионной хроматографии.
В исследовании липосомального удерживания получены следующие результаты: через 5 ч и 1 сутки более чем 99% было связано с липосомами. После 4 суток фракцию, связанную с липосомами, определили как 98 ± 1%.
Как показано в этих экспериментах, липосомы можно радиоактивно метить радионуклидами, излучающими альфа-частицы и/или бета-частицы, и эти радионуклиды хорошо удерживаются при физиологической температуре.
Пример 9: Получение меченных Иттрием-90/Радием-223 ПЭГилированных липосом-фолат-БаЬ'
Для данного эксперимента использовали Р(аЬ')2 Р0 миелома (подкласс 1§С1), 14 мг/мл в РВ8 (МкйаПеп, №г\сещап 1п8Йи1е о£ РиЬИс ^аИй, О§1о, №г\сау).
Конъюгация фолиевой кислоты с антителами
Фолиевую кислоту ·2Η2Θ сначала растворяли в диметилсульфоксиде (Б1ика, содержание Η2Θ менее чем 0,05%). Затем этот раствор наносили с помощью канюли на активированные сита 4 А (Б1цка) и хранили в атмосфере аргона в темноте в течение 6-10 ч. Меченный тритием фолат (3Н-фолат) добавляли в виде водного раствора соли калия 3Н-фолата (1% по отношению к лимонной кислоте). Специфичная активность 3Н-фолата, используемая для конъюгации с белком, составляла 7-7,5 ГБк/моль.
3Н-фолат активировали для связывания с антителом Р(аЬ')2 миеломы путем добавления 10 мольэквивалентов 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)-карбодиимида к раствору фолата и инкубации в течение 30 мин при температуре окружающей среды. После этого 30-40-кратный молярный избыток активированного фолата добавляли к белку, 14 мг/мл в РВ8, и оставляли взаимодействовать в течение 30-60 мин. Эту реакционную смесь гасили добавлением 0,2 мл 0,3 М глицина в РВ8/борате, рН 8,5. Конъюгат фолат-Р(аЬ')2 (фолат-Р(аЬ')2) отделяли от непрореагировавшего материала, используя колонку РЭ-10, предварительно уравновешенную в РВ8. Чтобы образовать фолат-БаЬ', фолат-Р(аЬ')2 инкубировали в 1 мМ дитиотрейтоле (ΌΤΤ) при температуре окружающей среды в течение 2 ч с последующей элюцией на колонке для эксклюзионной хроматографии NΑΡ-5. Фракцию, содержащую фолат-БаЬ', подвергали дезоксигенированию путем пропускания пузырьков аргона через раствор, после чего этот раствор немедленно смешивали с раствором липосом.
Степень конъюгации фолиевой кислоты определяли по содержанию 3Н очищенного белка, которое измеряли с помощью подсчета жидкостной сцинтилляции (Весктапп Б86500) в комбинации со спектрофотометрическими записями при 280 нм.
Для количественного определения связанной с липосомой фракции фолат-БаЬ' перед взаимодействием с ΌΤΤ добавляли следовое количество йодированного Б(аЬ')2 (белок йодировали посредством 1обоСеп согласно стандартным методикам).
Конъюгация меченых антител с липосомами
Э8РЕ-РЕС2000-МРВ (№й11егп Είρίάδ, УА. Сапаба), натриевую соль, включали в концентрации 5 мол.% от общего фосфолипида. Иначе, липосомы составляли и также готовили для стадии опосредованного ионофором катионного наполнения способом, идентичным описанному для не ПЭГилированных липосом.
- 8 005624
После того, как реакционную смесь оставляли достичь комнатной температуры вслед за стадией наполнения, суспензию липосом подвергали дезоксигенированию перед добавлением фолат-ГаЬ' с получением концентрации белка 0,3-0,5 мг/мл. Концентрация липидов составляла 1-3 мМ, как определили с помощью фосфорного количественного анализа Бартлетта (Ваг11ей, 1958). Фолат-ГаЬ' и липосомы оставляли взаимодействовать в течение 2 ч при температуре окружающей среды. Затем эту реакционную смесь наносили, используя колонку ΡΌ-10, уравновешенную РВ8. Конъюгированные с фолат-РаЬ' ПЭГлипосомы хранили при 4°С в течение 12-15 ч перед использованием в анализах на связывание с рецептором фолата.
Связанную с липосомами радиоактивность измеряли детектором №1 гнездового типа с поправкой на выход за пределы в соответствующих каналах из образцов двойного мечения. Образцы одиночных нуклидов и смесей нуклидов использовали в качестве сравнения.
На основании измерений радиоактивности концентрацию белка переводили в число ГаЬ' на липосому, принимая размер липосомы 100 нм и 8-104 фосфолипидов/везикулы (ΚΪΓροΐίπ е! а1., 1997), а молекулярную массу антитела ГаЬ' миеломы, равную 52000.
Радиоактивность, связанную с клеткой, измеряли с помощью №1-детектора (3 более высоких концентрации для Υ-90) и подсчета жидкостной сцинтилляции после добавления 1п81а-Ое1 р1и8 (Раскагй) (табл. 3).
Таблица 3. Связывание 9^-липосом, конъюгированных с антителами, с фолатом или без фолата, с клетками
ОУСАК.
| Добавленные липосомы/клетка | % связанных с клетками фолат-отрицательных липосом | % связанных с клетками фолат-положительных липосом |
| 1·105 | <0,5 | 10 ±3 |
| 1.1 о4 | 1 ±0,5 | 9±3 |
| 1.103 | 4±2 | 11 ±2 |
| 1.102 | 5± 1 | 16 ± 2 |
| 10 | 8±3 | 46 ±8 |
Обнаружение 3Н-фолата на липосомах
ПЭГ-липосомы (концентрация липидов 2,5 мМ) в 20 мМ НЕРЕ8/300 мМ сахарозе подвергали взаимодействию с конъюгированными с 3Н-фолатом ГаЬ' (0,5 мг/мл в РВ8, отношение фолат/ГаЬ' 2 ± 0,2). После 2 ч при комнатной температуре липосомы, связанные с фолат-ГаЬ', выделяли путем элюции на колонке с Сефарозой СБ-4В. Количество 3Н-фолат-ГаЬ' на липосомах определяли количественно с помощью подсчета жидкостной сцинтилляции фракций, полученных хроматографически, и отношение фолат-ГаЬ'/липосомы определили как примерно 110.
Сокращения:
О8РС: дистеароилфосфатидилхолин
ΌΟΤΆ: 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-№,№,№',№-тетрауксусная кислота 08РЕ-РЕ02000-МРВ: ^-(4-(пара-Малеимидофенил)бутирил)-1,2-дистеароил-8п-глицеро-3-фосфоэтаноламин (Л'опйегп Γΐρΐά8, УЛ, Сапайа)
НЕРЕ8: №2-гидроксиэтилпиперазин-№-2-этансульфоновая кислота
РВ8: фосфатно-солевой буферный раствор
ЭДТА: этилендиамин-НК-тетрауксусная кислота
НОЕНР: бис(2-этилгексил)фосфорная кислота
ПЭГ: полиэтиленгликоль ϋΤΤ: дитиотрейтол
Ссылки:
Ваг11ей ОК. Рйо8рйогои8 а88ау ίπ со1итп СйготаГодгарйу. I. ВюГ Сйеш. 234(3), 466-468 (1958).
СаЬе11 М.1. Тйе рипйсайоп, йеГегттайоп апй пеиГгоп сарШге сго88 8есйоп оГ асйпшт-227. Сап. 1. Сйет. 37, 1094-1101 (1959).
ОеУиа 1г УТ., Не11тап 8., Ко8епЬегд 8А. Сапсег. Рппс1р1е8 & ргасйсе оГ опсо1оду. 511' еййюп Ырртсо1-Кауеп, РЫ1айе1рЫа, Νον Υο^к, И8А (1997).
1)1е1х М1. апй 11ог\\П/ ЕР. 1тргоуей сйет181гу Гог 111е ргойисйоп оГ Υ-90 Гог теШса1 аррНсайоп8. Арр1. КаФаГ 18оГ 43, 1093-1101 (1992).
Гог88еп ЕА. Тйе йе81дп апй йеуе1ортеп! оГ ОаипоХоте® Гог 8оКс1 Штог Гагдейпд т у1уо. Айу. 1)гид ОеНуегу 1<еу. 24, 133-150 (1997).
- 9 005624
СаЫхоп К, ΗοΐΌ\νίΙζ АТ, Согеп Ό, ТхстаеН Ό, МапТе1Ьаит-8Ьат1( Р, Оиахеп ММ апТ 2а11рхку 8. ТагдеПпд Ро1а(е гесер(ог \νί(1ι Го1а(е 1ткеТ (о ехЕетШех оГ ро1у(е(Ьу1епе д1усо1)-дгайеТ Нрохотех: 1п νίίΓο х(иТ1ех. В1осоп)ида(е СЬет. 10, 289-298 (1999).
СаЫхоп А. Ырохоте спси1а(юп (1те апТ (итог (агдейпд: 1трНса(юп Гог сапсег сЬето(Ьегару. Αάν. Огид ОеНтегу Вет. 16, 285-294 (1995).
Саζе ΜΝ. ТЬе сиггеп( х(а(их оГ (агде(еТ гаТюЫегару т с11шса1 ргасИсе. РЬух. МеТ. Вю1. 41, 1895-1903 (1996).
Сотх В., РЫШрх \УТ апТ КНррег К. Вереа( т|ес(юп х(иТ1ех оГ 1есЬпеИит-99т 1аЬе1еТ РЕС-крохотех ш (Ье хате аттаЪ 1. Ырохоте Вех. 8(2), 265-281 (1998).
На11 Е. ВаТ1оЫо1оду Гог (Ье гаТю1од1х(. Роиг(Ь ЕТп. 1В Ырртсой Сотрапу, РЫ1абе1рЫа. И8А (1994).
НаххГ)е11 8Р апТ НоГГ Р. А депега(ог Гог ргоТисйоп оГ рЬ-212 апТ В1-212. Арр1. ВаТ1а(. 1хо(. 45, 10211025 (1994).
Неппкхеп С апТ НоГГ Р. 1хо1а(юп оГ сус1о(гоп ргоТисеТ В1-205, В1-206 апТ РЬ-203 ихтд а 1еаТ-хе1ес(1те ех(гас(юп скгота(одгарЫс гехт. Арр1. ВаТ1а(. 1хо(. 49, 357-359 (1998).
Н\гапд К1 апТ Майк МВ. Ра(е оГ Нр1Т тех1с1ех т т1то: А датта-гау рейигЬеТ апди1аг согге1айоп х(иТу. Ргос. N811. АсаТ. 8с1. И8А. 74, 4991-4995 (1977).
К1гро(т Ό, Рагк IV, Нопд К, 2а11рхку 8, ^еп-Ьи Ь, Саг1ег Р, Вег^ СС апТ РараЬаТ_)орои1ох Ό. 8(епса11у х(аЬЮеТ Ап(1-НЕВ2 1ттипоЬрохотех: Ьех1дп апТ (агдейпд 1о Ьитап Ьгеах( сапсег се11х ш Уйго. ВюсЬет1х1гу, 36, 66-75 (1997).
Кох1аге1ох К, Етйекод1ои Ό апТ 81ата1е1ои М. Ырохоте-теТ1а(еТ ТеНтегу оГ гаТюписНТех 1о (итог тоТе1х Гог сапсег гаТю(Ьегару: А рпап(1(а(1те апа1ух1х. 1. Ырохоте Вех. 9 (3), 407-424 (1999).
Кгапг ОМ, Воу Е1 апТ Ра(пск ТА. Соп)ида(ех оГ Го1а1е ап(1-еГГес(ог се11 апИЬоЫех. ИпЬеТ 81а1ех Ра1еп1 питЬег: 5547668 (20 Аид. 1996).
Ьагхеп ВН, АкаЬап С, -№е1хЬ Р апТ 2а1и(хку МВ. ТЬе су(о(ох1сЬу апТ т1сгоТох1те1гу оГ ах(а(те-2111аЬе1еТ сЫтепс топос1опа1 ап(1ЬоТ1ех ш Ьитап д1юта апТ те1апота се11х т т1(го. ВаТ1а(. Вех. 149, 155-162 (1998).
Ьагхеп ВН, Неппкхеп С. №г\\'ед1ап Ра1еп1 аррЬсайоп № Р990001 (1999).
Ьее В1 апТ Ьоте Р8. ОеНтегу оГ Нрохотех т(о си11игеТ КВ се11х \аа Го1а1е гесер1ог-теТ1а1еТ епТосу(о818. 1. Вю1. СЬет. 269, 3198-3204 (1994).
МасЬопа1Т ВС, МасЬопа1Т В1, Мепсо ВРЬМ, ТакехЬЬа К, 8иЬЬагао ΝΙ< апТ Ни Ьап-гопд. 8та11то1ите ехйихюп аррага1их Гог ргерагаНоп оГ 1агде, иш1ате11аг техю1ех. ВюсЬ. ВюрЬух. Ас1а 1061, 297-303 (1991).
Магиуата К, Та1^а\га Т, ТакаЬахЫ Ν, Тада^а Т, №да1ке К апТ Ыа(хиги М. ТагдеИпд еГПаепсу оГ РЕС-1ттипоЬрохоте-соп)ида(еТ ап11ЬоТ1ех а1 РЕС (егтта1х. АТт. Эгид ОеИтегу Вет. 24, 235-242 (1997).
Майк МВ апТ СатЬ1е ВС. РгерагаНоп оГ Нр1Т тех1с1ех соп1аштд ЫдЬ 1ете1 оГ еп1гарреТ гаТюасРте са11опх. Апа1. ВюсЬет. 94, 302-307 (1979).
МсС1иге Л апТ РетепТедеп ЬЕ. А1рЬа-ет111егх Гог теТ1са1 (Ьегару: 8есопТ В1аппиа1 Vο^кхЬοр, Тогоп1о, СапаТа, 1ипе 4-5 (1998). Верог1 Ггот Ьераг(теп( оГ Епегду. Сегтап(о^п, МО, И8А.
М1геаТеЬ 8, Китаг К, Сапготе ОА. ТЬе сЬет1са1 Га1е оГ 212В1-ООТА ГогтеТ Ьу Ь-Тесау оГ 212РЬ(ООТА)2-. ВаТюсЫтюа Ас1а 60, 1-10 (1993).
ОдЫага-ЬтеТа I, 8ахак1 Т, Корта 8, №хЫдоп Н. Ор(юпа1 гаТ1о1аЬе1еТ Нрохотех Гог (итог 1тадтд. 1. №с1. МеТ. 37 (2), 326-332 (1996).
О1хоп Р, Нип( СА, 8ζοка Р, УаП VI апТ РараНаТ.|ороп1ох Ό. Ргерага(юп оГ Нрохотех оГ ТеПпеТ х^ζе Т1х(пЬи(юп Ьу ех(гихюп (ЬгоидЬ ро1усагЬопа(е тетЬгапех. ВтсЬ. ВюрЬух. Ас(а 557, 9-23 (1979).
Р1ки1 II 88, Рагкх N1, 8сЬпе1Тег РЬ. 1п т1(го кШтд оГ те1апота Ьу Нрохоте Те1гтегеТ т(гасе11и1аг пгаТ1а(1оп. АгсЬ. 8игд. 122, 1417-1420 (1987).
ВеТТу 1А апТ Ьоте Р8. Ро1а(е-теТ1а(еТ (агдейпд оГ (ЬегареиНс апТ 1тадтд адеп(х (о сапсегх. Сп(юа1 Вет1е\тх ш ТЬегареиНс Эгид Сатег 8ух(етх 15 (6): 587-627 (1998).
В1((ег МА, С1еатег 1Е апТ ТоЫах СА. ШдЬ-ЬЕТ гаТ1а(юпх тТисе а 1агде ргорогйоп оГ поп-ге.) оштд 1ЫА-Ьгеакх. Каппе 266, 653-655 (1977).
8ЫпоТа Т, Такад1 А., МаеТа А., Када(ап 8., Коппо Υ апТ НахЫТа М. 1п Сто Га(е оГ Го1а(е-В8А т поп(итоиг- апТ (птоиг-Ьеаппд тке. 1. РЬагт. 8а 87 (12): 1521-1526, 1998.
ТНсоск СР, АЬкопд ОЕ апТ Рагг М. Ап 1трготеТ те(ЬоТ Гог (Не ргерага(юп оГ Нрохота1 даТоНтитПТРА-1опорЬоге-МеТ1а(еТ ас(гте еп(гартеп( оГ даТоНшит. 1птех(. ВаТю1. 26, 242-247 (1991).
Тпре(( ТМ апТ Вегйпо 1В. ТЬегареиНс х(га(ед1ех (агдейпд рго(етх (Ьа( геди1а(е Го1а(е апТ геТисеТ Го1а(е (гапхрой. 1. СЬето(Ьегару 11:3-10 (1999).
Тигпег АР, Ргехап( СА, РгоГП(( ВТ, V^1^атх ЬЕ, V^пхο^ Όν апТ Vе^пе^ 1Ь. 1п-111-1аЬе1еТ Нрохотех: Пох1те(гу апТ (итог Терю(юп. ВаТю1оду 166 (3), 761-765 (1988).
ЫкЕеТе Ό, ΥеЬ У, 8тсх М апТ ТИсоск С. Ир(аке оГ Υ((πι.ιιη-90 т(о 11р1Т тех1с1ех. 1оиг. Ь1р. Вех. 4 (2), 1049-1061 (1994).
Claims (34)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Система конъюгации, отличающаяся тем, что она представляет собой липосому с ионофорами и с хелатообразующим соединением, помещенными внутрь липосомы, причем в указанную липосому дополнительно инкапсулируют тяжелый(ые) радионуклид(ы), излучающий(ие) α-частицы, или 212РЬ в качестве генератора для α-излучателя 212Вг
- 2. Система конъюгации по п.1, отличающаяся тем, что концентрация хелатообразующего соединения внутри липосом является подходящей для удерживания дочерних нуклидов.
- 3. Система конъюгации по любому из пп.1 или 2, отличающаяся тем, что хелатообразующее соединение выбрано из группы, содержащей1.4.7.10- тетраазациклододекан-1,4,7,10-М,М',М,И'-тетрауксусную кислоту (ΌΟΤΑ),1.4.7.10- тетраазациклотридекан-1,4,7,10-М,М',М,И'-тетрауксусную кислоту (ΤΡΙΤΑ),1.4.7.10- тетраазациклотетрадекан-1,4,7,10-М,М',М,И'-тетрауксусную кислоту (ТЕТА),1.4.7.10- тетраазациклододекан-1,4,7,10-М,М',М,И'-тетра(метилен)фосфоновую кислоту (ΌΟΤΜΡ),1.4.7.10- тетраазациклотридекан-1,4,7,10-М,М',М,И'-тетра(метилен)фосфоновую кислоту,1.4.7.10- тетраазациклотетрадекан-1,4,7,10-М,М',М,И'-тетра(метилен)фосфоновую кислоту, диэтилентриамин-Ы,М',М-пентауксусную кислоту и их изомерные производные, криптат[2,2,2], криптат[3,2,2], криптат[2,2,1] и их моно- и дибензопроизводные, соединенные мостиковой связью каликс[4]арены, содержащие богатые электронами (донорные) группы (гидроксил, карбоксил, эфир, амид, амин), 1,10-диаза-4,7,13,16-тетраоксациклооктадекан-1,10-Ы,М'-бис-уксусную кислоту и1.10- диаза-4,7,13,16-тетраоксациклооктадекан-1,10-М,И'-бис-малонат.
- 4. Система конъюгации по любому из пп.1-3, отличающаяся тем, что липосомы содержат активированные группы в мембране, дающие возможность конъюгации белков или других рецепторных аффинных молекул с этими активированными группами.
- 5. Система конъюгации по п.4, где указанные активированные группы представляют собой полиэтиленгликоль.
- 6. Система конъюгации по любому из пп.1-5, отличающаяся тем, что липосомы являются конъюгированными с белками, связывающими рецептор.
- 7. Система конъюгации по п.6, где указанные белки, связывающие рецептор, представляют собой моноклональные или поликлональные антитела, либо фрагменты или конструкции антител, либо фолат.
- 8. Система конъюгации по п.6, отличающаяся тем, что липосомы являются конъюгированными с антителами класса 1дМ или 1дО либо фрагментами или конструкциями из антител этих классов.
- 9. Система конъюгации по п.6, отличающаяся тем, что липосомы являются конъюгированными с антителами класса 1дМ или 1дО либо фрагментами или конструкциями из антител этих классов, где эти антитела, фрагменты или конструкции являются меченными фолатом и радионуклидом или смесью различных радионуклидов.
- 10. Система конъюгации по любому из пп.1-9, отличающаяся тем, что антитела либо фрагменты или конструкции антител, конъюгированные с липосомами, являются мышиными, химерными или человеческими, моноклональными или поликлональными.
- 11. Система конъюгации по п.10, отличающаяся тем, что антитела либо фрагменты или конструкции антител являются меченными фолатом, где сайт связывания антигена направлен на белок, связывающий фолат (ЕВР).
- 12. Система конъюгации по п.10, отличающаяся тем, что антитела либо фрагменты или конструкции антител являются меченными фолатом, где сайт связывания антигена направлен на антиген, отличный от ЕВР.
- 13. Система конъюгации по любому из пп.1-12, отличающаяся тем, что радионуклид представляет собой тяжелый α-излучатель и/или 212РЬ в качестве генератора для α-излучателя 212В1, выбранный из 211Αΐ, 212В1, 213В1, 212РЬ, 225Ас, 223Ра, 224Ра и 22 ΤΙ1.
- 14. Система конъюгации по любому из пп.1-13, отличающаяся тем, что дочерний нуклид и материн-212 212 ский нуклид представляют собой В1 и РЬ соответственно.
- 15. Способ получения радиоактивно меченой системы конъюгации по пп.1-14, отличающийся тем, что липосомы с ионофорами и хелатообразующим соединением подходящей концентрации являются стабильно радиоактивно меченными тяжелыми излучателями α-частиц, при котором раствор, содержащий радионуклид или смесь радионуклидов, которые испускают излучение α-частиц, или 212РЬ в качестве генератора для α-излучателя 212В1, смешивают с раствором, содержащим липосомы, и инкубируют при повышенной температуре по сравнению с физиологической температурой для получения транспорта радионуклида(ов) в липосомы.
- 16. Способ по п.15, отличающийся тем, что хелатообразующее соединение выбрано из группы, содержащей1.4.7.10- тетраазациклододекан-1,4,7,10-М,М',М,М'-тетрауксусную кислоту (ΌΟΤΑ),1.4.7.10- тетраазациклотридекан-1,4,7,10-М,М',М,М'-тетрауксусную кислоту (ΤΡΙΤΑ),1.4.7.10- тетраазациклотетрадекан-1,4,7,10-М,М',М,М'-тетрауксусную кислоту (ТЕТА),- 11 0056241.4.7.10- тетраазациклододекан-1,4,7,10-М,М',М,М'-тетра(метилен)фосфоновую кислоту (ΌΘΤΜΡ),1.4.7.10- тетраазациклотридекан-1,4,7,10-М,М',М,М'-тетра(метилен)фосфоновую кислоту,1.4.7.10- тетраазациклотетрадекан-1,4,7,10-М,М',М,М'-тетра(метилен)фосфоновую кислоту, диэтилентриамин-НИ.Н-пентауксусную кислоту и их изомерные производные, криптат[2,2,2], криптат[3,2,2], криптат[2,2,1] и их моно- и дибензопроизводные, соединенные мостиковой связью каликс[4]арены, содержащие богатые электронами (донорные) группы (гидроксил, карбоксил, эфир, амид, амин),1.10- диаза-4,7,13,16-тетраоксациклооктадекан-1,10-Ы,М'-бис -уксусную кислоту и1.10- диаза-4,7,13,16-тетраоксациклооктадекан-1,10-Ы,М'-бис-малонат.
- 17. Способ по любому из пп.15, 16, отличающийся тем, что липосомы содержат активированные группы в мембране, дающие возможность конъюгации белков или других рецепторных аффинных молекул.
- 18. Способ по п.17, отличающийся тем, что активированные группы представляют собой полиэтиленгликоль.
- 19. Способ по любому из пп.15-18, отличающийся тем, что липосомы являются конъюгированными с белками, связывающими рецептор.
- 20. Способ по п.19, где указанные белки, связывающие рецептор, представляют собой моноклональные или поликлональные антитела, либо фрагменты или конструкции антител, либо фолат.
- 21. Способ по п.19, отличающийся тем, что липосомы являются конъюгированными с антителами класса 1дМ или 1дС либо фрагментами или конструкциями из антител этих классов.
- 22. Способ по п.19, отличающийся тем, что липосомы являются конъюгированными с антителами класса 1дМ или 1дС либо фрагментами или конструкциями из антител этих классов, где эти антитела являются меченными фолатом и радионуклидом или смесью различных радионуклидов при использовании стандартных методик мечения антитела фолатом и радионуклидом.
- 23. Способ по любому из пп.15-22, отличающийся тем, что антитела либо фрагменты или конструкции антител, конъюгированные с липосомами, являются мышиными, химерными или человеческими, моноклональными или поликлональными.
- 24. Способ по п.23, отличающийся тем, что антитела либо фрагменты или конструкции антител являются меченными фолатом, где сайт связывания антигена направлен на ЕВР.
- 25. Способ по п.23, отличающийся тем, что антитела либо фрагменты или конструкции антител, где сайт связывания антигена направлен на антиген, отличный от ЕВР.
- 26. Способ по любому из пп.15-25, отличающийся тем, что радионуклид представляет собой тяжелый α-излучатель или 212РЬ в качестве генератора для α-излучателя 212В1, выбранный из 211Λΐ, 212В1, 213В1, 212РЬ, 225Ас, 223Ва, 224Ва и 227Тй.
- 27. Способ по любому из пп.15-26, отличающийся тем, что дочерний нуклид и материнский нуклид представляют собой В1 и РЬ соответственно.
- 28. Применение системы конъюгации по любому из пп.1-14 для изготовления фармацевтического раствора, подходящего для инъекции или инфузии млекопитающим, включая людей.
- 29. Применение по п.28 для изготовления фармацевтического раствора, подходящего для инъекции или инфузии млекопитающим, включая людей, посредством внутривенного, и/или регионарного, и/или внутриопухолевого пути введения.
- 30. Применение по п.28 в комбинации с радиоиммуноконъюгатом или несколькими радиоиммуноконъюгатами и/или другими формами радиофармацевтической терапии, химиотерапии, наружной дистанционной лучевой терапии или хирургии для лечения злокачественных опухолей.
- 31. Способ доставки потенциально терапевтического излучения к злокачественным клеткаммишеням, экспрессирующим рецептор(ы), выбранные из белка, связывающего фолат, рецептора эстрогена, рецептора тестостерона и/или различных антигенов для моноклональных антител, при котором субъектам-людям посредством инъекции вводят систему конъюгации по любому из пп.1-14.
- 32. Способ доставки потенциально терапевтического излучения к злокачественным тканям, экспрессирующим рецептор(ы), где злокачественная ткань представляет собой рак головного мозга, легкого, шейки матки, яичника или молочной железы либо лейкемию, лимфому или злокачественную меланому, при котором субъектам-людям посредством инъекции вводят систему конъюгации по любому из пп.1-14.
- 33. Набор для изготовления системы конъюгации по любому из пп.1-14, отличающийся тем, что он содержит флакон, содержащий раствор липосом, и флакон, содержащий радионуклид в растворе, которые можно смешивать, чтобы способствовать радиоактивному мечению.
- 34. Набор для изготовления системы конъюгации по любому из пп.1-14, отличающийся тем, что он содержит флакон, содержащий раствор липосом, второй флакон, содержащий радионуклид в растворе, и третий флакон, содержащий молекулу, обладающую аффинностью к рецептору, которые можно смешивать, чтобы способствовать радиоактивному мечению и мечению молекулой, обладающей аффинностью к рецептору.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO20000855A NO312708B1 (no) | 2000-02-21 | 2000-02-21 | Radioaktive liposomer til terapi |
| PCT/NO2001/000065 WO2001060417A2 (en) | 2000-02-21 | 2001-02-21 | Radioactive therapeutic liposomes |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200200793A1 EA200200793A1 (ru) | 2003-02-27 |
| EA005624B1 true EA005624B1 (ru) | 2005-04-28 |
Family
ID=19910768
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200200793A EA005624B1 (ru) | 2000-02-21 | 2001-02-21 | Радиоактивные терапевтические липосомы |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6592843B2 (ru) |
| EP (1) | EP1257299B9 (ru) |
| JP (1) | JP4933712B2 (ru) |
| KR (1) | KR100822566B1 (ru) |
| CN (1) | CN100350981C (ru) |
| AT (1) | ATE300316T1 (ru) |
| AU (2) | AU3782701A (ru) |
| BR (1) | BR0108572A (ru) |
| CA (1) | CA2400994C (ru) |
| CZ (1) | CZ299032B6 (ru) |
| DE (1) | DE60112251T2 (ru) |
| DK (1) | DK1257299T3 (ru) |
| EA (1) | EA005624B1 (ru) |
| ES (1) | ES2247069T3 (ru) |
| MX (1) | MXPA02008110A (ru) |
| NO (1) | NO312708B1 (ru) |
| NZ (1) | NZ520848A (ru) |
| PL (1) | PL201398B1 (ru) |
| UA (1) | UA73160C2 (ru) |
| WO (1) | WO2001060417A2 (ru) |
| ZA (1) | ZA200206500B (ru) |
Families Citing this family (41)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NO310544B1 (no) * | 1999-01-04 | 2001-07-23 | Algeta As | Opparbeidelse og anvendelse av radium-223 til fremstilling av preparat samt kit til behandling av kalsifisert vev for palliasjon, benkreft-terapi og/eller overflatebehandling av ben |
| NO314537B1 (no) * | 1999-12-06 | 2003-04-07 | Anticancer Therapeutic Inv Sa | Reseptorbindende konjugater |
| US8029795B2 (en) * | 1999-12-30 | 2011-10-04 | Gwathmey, Inc. | Targeted iron chelator delivery system |
| EP1289570B1 (en) * | 2000-06-16 | 2008-09-10 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Liposomal encapsulation of alpha-emitters and uses thereof |
| US20040166060A1 (en) * | 2000-06-16 | 2004-08-26 | Sloan Kettering Institute For Cancer Research | Liposomal encapsulation of alpha particle emittors and uses thereof |
| NO313180B1 (no) * | 2000-07-04 | 2002-08-26 | Anticancer Therapeutic Inv Sa | Bensökende alfapartikkel emitterende radiofarmasöytika |
| US6869591B2 (en) * | 2002-03-26 | 2005-03-22 | Barnes-Jewish Hospital | Paramagnetic particles that provide improved relaxivity |
| GB0213261D0 (en) * | 2002-06-10 | 2002-07-17 | Anticancer Therapeutic Inv Sa | Method |
| GB0308731D0 (en) * | 2003-04-15 | 2003-05-21 | Anticancer Therapeutic Inv Sa | Method of radiotherapy |
| NZ543044A (en) * | 2003-04-15 | 2010-04-30 | Algeta As | Thorium-227 for use in radiotherapy of soft tissue disease |
| CN1849112B (zh) * | 2003-09-09 | 2012-06-13 | 吉里德科学公司 | 治疗性脂质体 |
| EA020542B1 (ru) * | 2004-02-20 | 2014-12-30 | Алгета Ас | Альфа-излучающие частицы гидроксиапатита |
| US20070053845A1 (en) * | 2004-03-02 | 2007-03-08 | Shiladitya Sengupta | Nanocell drug delivery system |
| CN101031287A (zh) * | 2004-03-02 | 2007-09-05 | 麻省理工学院 | 纳米细胞药物递送系统 |
| GB0423565D0 (en) * | 2004-10-22 | 2004-11-24 | Algeta As | Formulation |
| WO2006099445A2 (en) * | 2005-03-14 | 2006-09-21 | Massachusetts Institute Of Technology | Nanocells for diagnosis and treatment of diseases and disorders |
| US8709380B1 (en) * | 2006-02-07 | 2014-04-29 | Sirius Medicine, Llc | Targeting agents for enhancing radiation therapy |
| US20070224115A1 (en) * | 2006-03-22 | 2007-09-27 | The Regents Of The University Of California | Polymeric chelators for radionuclide delivery systems |
| CN101485629B (zh) * | 2008-01-16 | 2013-01-23 | 沈阳药科大学 | 一种给药系统及其制备方法 |
| US20100178245A1 (en) * | 2009-01-13 | 2010-07-15 | Arnsdorf Morton F | Biocompatible Microbubbles to Deliver Radioactive Compounds to Tumors, Atherosclerotic Plaques, Joints and Other Targeted Sites |
| US20100178244A1 (en) * | 2009-01-13 | 2010-07-15 | Arnsdorf Morton F | Biocompatible Microbubbles to Deliver Radioactive Compounds to Tumors, Atherosclerotic Plaques, Joints and Other Targeted Sites |
| WO2010135714A2 (en) | 2009-05-22 | 2010-11-25 | The Methodist Hospital Research Institute | Methods for modulating adipocyte expression using microrna compositions |
| EP2453927B1 (en) * | 2009-07-17 | 2019-05-15 | Technical University of Denmark | Loading technique for preparing radionuclide and ionophore containing liposomes in which the ionophore is 2-hydroxyquionoline (carbostyril) or structurally related 2-hydroxyquinolines |
| JP2011111438A (ja) * | 2009-11-30 | 2011-06-09 | Akita Univ | 有機金属錯体を有効成分として含有する抗がん剤 |
| GB201002508D0 (en) | 2010-02-12 | 2010-03-31 | Algeta As | Product |
| CA2821024A1 (en) | 2010-12-14 | 2012-06-21 | Technical University Of Denmark | Entrapment of radionuclides in nanoparticle compositions |
| GB201105298D0 (en) * | 2011-03-29 | 2011-05-11 | Algeta Asa | Pharmaceutical preparation |
| DE102011079031A1 (de) * | 2011-07-12 | 2013-01-17 | Algeta Asa | Flüssigkeitsbehälter |
| GB201208309D0 (en) | 2012-05-11 | 2012-06-27 | Algeta As | Complexes |
| EP2968150B1 (en) | 2013-03-11 | 2020-08-19 | Wayne State University | Liposomes comprising europium cryptands and their use |
| US9433690B1 (en) | 2015-02-26 | 2016-09-06 | Sciencons AS | Radiopharmaceutical solutions with advantageous properties |
| MX369632B (es) * | 2015-02-26 | 2019-11-14 | Sciencons AS | Soluciones radiofarmaceuticas con propiedades ventajosas. |
| EP3061464B1 (en) * | 2015-02-26 | 2017-10-25 | Sciencons AS | Radiopharmaceutical solutions with advantageous properties |
| PL3111959T3 (pl) * | 2015-07-03 | 2018-03-30 | Oncoinvent As | Radioterapeutyczne cząstki i zawiesiny |
| EP3432936A1 (en) | 2016-03-24 | 2019-01-30 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Radio-pharmaceutical complexes |
| AU2017277463A1 (en) | 2016-06-10 | 2019-01-03 | Bayer As | Radio-pharmaceutical complexes |
| EP3474904A1 (en) * | 2016-06-24 | 2019-05-01 | Sciencons AS | Preparation of 212pb labeled monoclonal antibodies |
| RU2763750C2 (ru) | 2017-05-11 | 2022-01-10 | Альфа Тау Медикал Лтд. | Полимерные покрытия для брахитерапевтических устройств |
| WO2019193464A1 (en) | 2018-04-02 | 2019-10-10 | Alpha Tau Medical Ltd. | Controlled release of radionuclides |
| AR119479A1 (es) | 2019-07-25 | 2021-12-22 | Bayer As | Radiofármacos dirigidos para diagnóstico y tratamiento de cáncer |
| IL303002A (en) | 2020-12-16 | 2023-07-01 | Alpha Tau Medical Ltd | Radiotherapy by diffuse alpha emitters with increased beta therapy |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4310506A (en) * | 1979-02-22 | 1982-01-12 | California Institute Of Technology | Means of preparation and applications of liposomes containing high concentrations of entrapped ionic species |
| IE58659B1 (en) * | 1984-10-22 | 1993-11-03 | Vestar Inc | Use of a micellular particle composition encapsulating a chemotherapeutic agent for intravenous targeting to tumors |
| CA1314209C (en) * | 1987-11-04 | 1993-03-09 | Gary Fujii | Composition and method for use for liposome encapsulated compounds for neutron capture tumor therapy |
| US5527528A (en) * | 1989-10-20 | 1996-06-18 | Sequus Pharmaceuticals, Inc. | Solid-tumor treatment method |
| ATE210464T1 (de) * | 1992-06-09 | 2001-12-15 | Neorx Corp | BIOTIN-DOTA KONJUGATE UND DEREN VERWENDUNG IN ßPRETARGETINGß VERFAHREN |
| GB9420390D0 (en) * | 1994-10-10 | 1994-11-23 | Nycomed Salutar Inc | Liposomal agents |
| CA2333125C (en) * | 1998-05-26 | 2009-12-15 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Alpha emitting constructs and uses thereof |
-
2000
- 2000-02-21 NO NO20000855A patent/NO312708B1/no not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-02-21 BR BR0108572-7A patent/BR0108572A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-02-21 KR KR1020027010848A patent/KR100822566B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-02-21 CA CA002400994A patent/CA2400994C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-21 US US09/790,260 patent/US6592843B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-21 AT AT01910251T patent/ATE300316T1/de active
- 2001-02-21 JP JP2001559512A patent/JP4933712B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-21 AU AU3782701A patent/AU3782701A/xx active Pending
- 2001-02-21 CN CNB018053726A patent/CN100350981C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-21 PL PL358541A patent/PL201398B1/pl unknown
- 2001-02-21 ES ES01910251T patent/ES2247069T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-21 CZ CZ20023164A patent/CZ299032B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-02-21 UA UA2002086850A patent/UA73160C2/ru unknown
- 2001-02-21 DK DK01910251T patent/DK1257299T3/da active
- 2001-02-21 EP EP01910251A patent/EP1257299B9/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-21 AU AU2001237827A patent/AU2001237827B2/en not_active Ceased
- 2001-02-21 EA EA200200793A patent/EA005624B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-02-21 MX MXPA02008110A patent/MXPA02008110A/es active IP Right Grant
- 2001-02-21 NZ NZ520848A patent/NZ520848A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-02-21 DE DE60112251T patent/DE60112251T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-21 WO PCT/NO2001/000065 patent/WO2001060417A2/en active IP Right Grant
-
2002
- 2002-08-14 ZA ZA200206500A patent/ZA200206500B/en unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA005624B1 (ru) | Радиоактивные терапевтические липосомы | |
| Henriksen et al. | Sterically stabilized liposomes as a carrier for α-emitting radium and actinium radionuclides | |
| US20140235924A1 (en) | Method of radiotherapy | |
| JP2003522808A5 (ru) | ||
| US20060228297A1 (en) | Thorium-227 for use in radiotherapy of soft tissue disease | |
| US20080279772A1 (en) | Methods for detecting pathological sites | |
| KR101274867B1 (ko) | 연조직 질환의 방사선 치료에 사용하기 위한 토륨-227 | |
| KR20060118542A (ko) | 치료용 방사선표지된 약물의 효능 개선 방법 | |
| US20060127308A1 (en) | Method to improve the efficacy of therapeutic radiolabeled drugs |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU |