CN101031287A - 纳米细胞药物递送系统 - Google Patents

纳米细胞药物递送系统 Download PDF

Info

Publication number
CN101031287A
CN101031287A CNA2005800130659A CN200580013065A CN101031287A CN 101031287 A CN101031287 A CN 101031287A CN A2005800130659 A CNA2005800130659 A CN A2005800130659A CN 200580013065 A CN200580013065 A CN 200580013065A CN 101031287 A CN101031287 A CN 101031287A
Authority
CN
China
Prior art keywords
reagent
granule
nano
granules
cell
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA2005800130659A
Other languages
English (en)
Inventor
希拉迪蒂亚·森古普塔
赵甘霖
伊尚·卡皮拉
大卫·亚沃罗内
拉姆·萨西采哈伦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Massachusetts Institute of Technology
Original Assignee
Massachusetts Institute of Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Massachusetts Institute of Technology filed Critical Massachusetts Institute of Technology
Publication of CN101031287A publication Critical patent/CN101031287A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/075—Ethers or acetals
    • A61K31/085—Ethers or acetals having an ether linkage to aromatic ring nuclear carbon
    • A61K31/09—Ethers or acetals having an ether linkage to aromatic ring nuclear carbon having two or more such linkages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7012—Compounds having a free or esterified carboxyl group attached, directly or through a carbon chain, to a carbon atom of the saccharide radical, e.g. glucuronic acid, neuraminic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/737—Sulfated polysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/785—Polymers containing nitrogen
    • A61K31/787—Polymers containing nitrogen containing heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/593—Polyesters, e.g. PLGA or polylactide-co-glycolide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6907—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a microemulsion, nanoemulsion or micelle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6925—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a microcapsule, nanocapsule, microbubble or nanobubble
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/167—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction with an outer layer or coating comprising drug; with chemically bound drugs or non-active substances on their surface
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
    • A61K9/5153—Polyesters, e.g. poly(lactide-co-glycolide)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y10/00—Nanotechnology for information processing, storage or transmission, e.g. quantum computing or single electron logic
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/10—Screening for compounds of potential therapeutic value involving cells

Abstract

纳米细胞允许顺序递送两种具有不同作用模式或不同药物动力学的不同治疗剂。纳米细胞通过将具有第一试剂的纳米核心包囊在含有第二试剂的脂囊泡内而形成。首先释放外部脂质隔室内的试剂，并可以在纳米核心中的试剂被释放以前发挥其作用。纳米细胞递送系统可以被配制成药物组合物以递送到患有例如癌症，炎性疾病例如哮喘，自身免疫病例如类风湿性关节炎，传染病和神经系统疾病例如癫痫疾病的患者。在治疗癌症时，常规的抗肿瘤剂被包含在纳米细胞的外部脂囊泡内，抗血管生成剂被装载进入纳米核心。这种布置允许抗肿瘤剂在肿瘤的血液供给被抗血管生成剂切断以前首先被释放和递送到肿瘤。

Description

纳米细胞药物递送系统
相关申请
本申请要求在2004年3月2日提交的题名为“纳米细胞药物递送系统”的美国临时申请USSN 60/549,280的优先权，其在此引作参考。
发明背景
合理的药物治疗的前提是准确的诊断，疾病病理生理学知识，正常人和病人中基本药物疗法的知识，和对这些关系的合理期望使得可以预料药物的效果(DiPiro等编辑，Pharmacotherapy-A pathophysiologicapproach，第二版)。生物医学科学的进展，就基因组、蛋白质组或糖组而言，已经解开了许多疾病的分子机制，并且暗示着明显改变了的信号级联反应、转录组和糖组的复杂网络。在大多数病理生理情况下，这可以显示为对恢复或丧失功能的调节的有效靶，产生治疗效果。然而，复杂性在于涉及患病组织中不同的途径，或甚至患病组织中空间差异的靶细胞，或在表现于最终表型的患病组织中发生的短暂事件。合理的策略是在多水平靶向疾病，该策略可以通过组合多种活性剂或药物而实现。然而，在大多数情况下，这常常不是最适的策略，其受到患者愿意吸收太多药物的限制，或受到在药物动力学(吸收，分布，生物转化，和排泄)水平药物之间相互作用的限制和药效学(药物的生物化学或生理性作用和它们的作用机制)的限制，或毒理学(Goodman和Gilman，The Pharmacological Basis of Therapeutics，第9版)的限制。这种相互作用可以降低活性试剂的实际治疗效果或增加其毒性，其比例被定义为治疗指数。对于上述限制的创造性解决方案将无疑是对医学和治疗的革命。
为更好地理解现代医学的限制，合适的例子是肿瘤的治疗。美国全部人口中1/3会发展癌症。尽管由于早期诊断和治疗的进展五年存活率已经大大提高至接近50％，在美国癌症仍是仅次于心脏病的死因。20％的美国人死于癌症，其中一半是由于肺癌、乳腺癌和结肠癌。
设计对患癌症的病人有效的治疗是巨大的挑战。目前的手术切除方案，外部光照射治疗，和/或全身化疗已经在某些类型的恶性肿瘤中取得部分成功，但是在其他肿瘤还没有产生满意的结果。在一些恶性肿瘤，例如脑恶性肿瘤，该方案产生少于一年的中值存活率。例如，90％切除的恶性神经胶质瘤在一年内在原发肿瘤位置2厘米之内复发。
尽管在一些类型的癌症中有效，使用全身化疗在治疗结肠-直肠癌，食道癌，肝癌，胰腺癌和肾癌以及皮肤癌中只有较小的成功。用于治疗这些类型的癌症的全身化疗主要的问题是达到对肿瘤生长的控制所需的全身剂量通常导致不可接受的全身毒性。改进化疗剂递送到肿瘤位置的努力导致器官导向的化疗的进展，例如，通过持续全身灌注。然而，持续灌注抗癌药物相对于脉冲或短期灌注通常不显示明确的优点。目前在临床使用的抗肿瘤剂或化疗剂包括(a)烷基化试剂，例如氮芥、环磷酰胺，异环磷酰胺，美法仑，瘤可宁，六甲密胺，硫替派，白血福恩，卡莫司汀，环己亚硝脲，赛氮芥，链脲霉素，甲氮咪胺等；(b)抗代谢物，例如氨甲蝶呤，5-FU，FudR，阿糖胞苷，6MP，硫鸟嘌呤，喷司他丁等；(c)天然产物，例如紫杉醇，长春碱，长春新碱，依托泊甙，替尼泊甙等；(d)抗生素，例如放线菌素，柔红霉素，阿霉素，争光霉素，普卡霉素，丝裂霉素C等；(e)酶，例如L-天冬酰胺酶，肝素酶，软骨素酶等；(f)干扰素和白介素，例如干扰素-α，干扰素-γ，肿瘤坏死因子等；(g)铂配位络合物，例如顺铂，卡铂或它们的衍生物；和(h)其它各种试剂，例如米托蒽醌，双氯乙基亚硝基脲，羟基脲，氯乙基-环己基亚硝基脲，强的松，二乙基己烯雌酚，甲羟基孕酮，他莫昔芬，米托坦，普鲁苄肼，氨基苯乙哌啶酮，孕激素，雄激素，抗雄激素，亮丙瑞林等。
抗肿瘤治疗最新的进展是发现血管生成是肿瘤发展的关键步骤。血管生成，从现有的血管床产生新的血管，是肿瘤快速扩张和发展远程转移的基础(Follcman，Nat Med，1995 Jan；1：27-31)。当肿瘤体积达到1-2mm3的阶段，它需要营养以进一步生长。肿瘤核心的细胞开始死亡导致富含生长因子和前血管生成信号的核心坏死，上述因子和信号引起来自最近的血管的内皮细胞的召集。血管生成以清楚的顺序步骤进行，其是由多种介质的相互影响引起的肿瘤细胞、细胞外基质和内皮细胞之间空间-时间相互作用的积累(Griffoen和Molema，Pharmacol.Review，2000 Jun；52：237-68)。对这一复杂过程下事件的理解和弄清了一些介质的作用机制开启了将血管生成作为新型肿瘤管理策略的治疗靶的令人振奋的可能性，超过60种化合物处于临床开发阶段。
目前有两类血管生成抑制剂-直接的和间接的。直接的血管生成抑制剂，例如Vitaxin，血管他丁，内皮他丁，combretastatin，2-甲氧雌甾二醇，avastin，canstatin等，阻止内皮细胞增殖，迁移或形成管道，或允许细胞避免响应于肿瘤分泌的血管生成因子的细胞死亡。间接的血管生成抑制剂通常阻止活化血管生成的肿瘤蛋白的表达或阻断其活性，或阻断内皮细胞上其受体的表达(Kerbel和Follunan，NatureReviews Cancer，Oct 2002；727-739)。在上述两种情形中抗血管生成疗法的最终结果是关闭对生长肿瘤的血管供应导致肿瘤饥饿。因此，抗血管生成疗法导致肿瘤中组织缺氧(Yu JL等，Science，Feb 2002；Vol295：1526-1528)。为克服这种组织缺氧情况，肿瘤开始产生生长因子，生长因子也发挥与肿瘤小得多的时候的血管生成作用相似的血管生成作用。在临床中，一旦抗血管生成治疗结束，这转化为肿瘤出现生长的爆发(Boehm等，Nature 390：404-407，Nov.1997)。相同的生长因子也可以防止一些肿瘤细胞发生凋亡或细胞死亡。此外，由于实体瘤内部区域内的异常或缓慢的血流导致的肿瘤组织缺氧可以产生微环境介导的辐射和化疗药物抗性(Yu等，Differentiation，Dec 2002：Vol70：599-609)。还有可能较少依赖血管的突变肿瘤细胞可以通过成功的抗血管生成疗法随时间发展而筛选。这将导致对更传统形式的化疗的反应丧失或减弱。这可以通过将生物还原性的组织缺氧细胞细胞毒性药物和抗血管生成剂(antiangiogenics)组合使用而克服(Yu JL，Differentiation 2002 Dec；70：599-609)。使用抗肿瘤剂或化疗剂与抗血管生成剂组合的疗法用于治疗癌症/肿瘤在很多专利申请中公开(参见，例如，U.S.专利6,147,060；6,140,346；和5,856,315；5,731,325；5,710,134和5,574,026；其各自在此引为参考；U.S.专利申请20020041880；20020107191；20020128228；20020111362；其各自在此引为参考)。然而，还存在对于递送组合疗法的药物递送系统的需要，以便各试剂提供所需的最佳效果。这样的系统不仅在治疗癌症而且在治疗其他疾病例如自身免疫疾病(例如，类风湿性关节炎)，炎性疾病(例如，哮喘)，神经学疾病(例如，癫痫)，和眼科疾病(例如，糖尿病视网膜病变)中会有用。
发明概述
本发明来自于这样的认识：许多用于组合疗法中的药物通过不同的机制和/或不同的时标起作用。因此，如果组合疗法中的药物不能到达其靶或不能在合适的时间到达其靶，则会丧失药物的大部分药效，如果不是全部的话。例如，在利用更传统的抗肿瘤剂和抗血管生成剂组合治疗癌症时，理想的是抗肿瘤剂应该在抗血管生成剂阻止携带抗肿瘤剂的血流达到肿瘤细胞之前到达肿瘤以发挥其作用。如果抗肿瘤剂没有在起作用的血管系统被抗血管生成剂关闭之前到达肿瘤，患者将遭受抗肿瘤剂的副作用而得不到其任何好处。因此，在癌症以及许多其他疾病中，需要可以以不同的时间间隔递送多种试剂的药物递送系统。
本发明提供一种药物递送系统，其中一种试剂可以在组合疗法的另一种试剂之前或之后递送。该药物递送系统基于气球中气球(balloonin balloon)的概念。含有药剂的纳米核心(例如，纳米颗粒，纳米管，纳米线，量子点等)被包囊在含有其他药剂的脂囊泡、基质或壳中以形成纳米细胞。纳米细胞外部(例如，脂囊泡、壳或基质)中的药剂首先释放，随后随着纳米核心溶解和/或降解释放第二药剂。本发明的纳米细胞的最大直径范围从10nm到500μm，优选最大直径从80nm到50μm。
例如，在治疗癌症时，抗血管生成剂被负载到脂囊泡内并且在纳米颗粒内部的抗肿瘤/化疗剂之前释放。这导致供给肿瘤营养的血管崩溃，并且还导致负载了抗肿瘤剂的纳米核心捕获在肿瘤内部而没有逃逸的途径。抗肿瘤剂缓慢释放杀死营养饥饿的肿瘤细胞。换句话说，这种双气球药物递送系统允许以抗肿瘤剂负载肿瘤然后切断对肿瘤的血液供应。这种顺序方法导致有毒的化疗/抗肿瘤剂捕获在肿瘤内，导致针对肿瘤细胞的选择毒性增强，而更少的药物会出现在全身循环系统中，因为这些有毒药物不会从功能上无血管的肿瘤位置泄漏，从而使副作用减少。这种技术还克服了组织缺氧警告，因为肿瘤捕获的细胞毒性化疗细胞杀死在由于血管并关闭而产生的富含组织缺氧的生长因子的环境中存活的肿瘤细胞。
内部纳米颗粒(也称作纳米核心)其最大尺寸大约10-20000nm并包含包囊在聚合物基质中的第一治疗剂。这些纳米核心使用例如脂类，蛋白质，糖，简单的结合物和聚合物(例如PLGA，聚酯，聚酰胺，聚碳酸酯，聚(β-氨基酯)，聚尿素，聚氨基甲酸酯，蛋白质等)的任何材料和本领域已知的方法(例如，双乳化，喷雾干燥，相转换等)制备。药物或诊断剂可以装载在纳米核心上，或是共价连接，或是通过静电荷结合，或是电共价结合，或是通过接头结合。结果是试剂从纳米核心缓慢，持续，和/或延迟释放。优选地，如果该试剂共价结合到纳米核心，该接头或键是在生理条件下可生物降解的或可水解的，例如对酶分解敏感。纳米核心可以是基本上球形的纳米颗粒，纳米脂质体，纳米线，量子点，或纳米管。
为形成纳米细胞，纳米核心可以涂布有分配在液相中的第二治疗剂。纳米细胞还可以通过用具有第二治疗剂的独特聚合物组合物涂布纳米核心而形成。优选地，纳米细胞的纳米壳或周围的基质应当包括允许其捕获的试剂快速释放的组合物。因此，在某些实施方案中，该试剂在装载在纳米核心中的活性剂达到治疗水平以前起作用。因此，第二治疗剂在纳米核心的外部但是在纳米细胞的脂质膜的内部，纳米细胞最大直径大约50-20000nm。纳米细胞可以进一步涂布以稳定颗粒或将靶向剂添加到该颗粒的外面。
使用本发明的纳米细胞可以递送任何两种或更多种药剂。优选地，一种试剂或试剂的组合被优选在第二试剂或试剂的组合之前递送。在某些实施方案中，试剂的作用模式或靶可以不同。例如，在某些实施方案中，纳米核心中的试剂可以抑制信号途径，纳米细胞外部隔室中的试剂产生不同的途径或相同的途径中不同的信号。这两种试剂可以协同作用。在其他实施方案中，这些试剂的药物动力学可能不同。例如，在治疗关节炎时，氨甲蝶呤或秋水仙碱被包囊在纳米核心中，而抗血管生成剂位于纳米细胞的外侧脂质部分。在治疗哮喘或慢性阻塞性肺疾病(COPD)时，抗炎剂(例如，皮质类固醇，脂加氧酶抑制剂，肥大细胞稳定剂)提供在纳米核心中，而支气管扩张剂(例如，β-激动剂)被提供在纳米细胞的外部隔室。在递送试剂到脑时，为跨越血脑屏障，在颗粒的外侧部分提供允许药物跨越血脑屏障的离液剂或其他试剂，以及神经活化剂，例如在纳米核心中提供抗癫痫发作剂。在一些实施方案中，纳米细胞可以用于治疗具有囊性纤维病变的患者。例如，纳米细胞可以用于递送抗生素或抗炎剂。在一些实施方案中，纳米细胞用作递送疫苗的载体，例如，抗原可以装载在纳米核心，炎性剂例如佐剂可以包含在纳米细胞的外侧部分。
在另一方面，本发明提供具有本发明纳米细胞的药物组合物。这些组合物还可以包含其他药物可接受的赋形剂。这些组合物可以采取片剂、悬液、溶液、胶囊、乳剂等形式。
本发明还提供通过给药装载有合适药剂的纳米细胞到患某种疾病的患者而治疗各种疾病的方法。这些方法包括治疗癌症，炎症疾病，眼科疾病，神经疾病，感染性疾病和自身免疫疾病的方法。纳米细胞被装载有一定量的试剂以递送治疗有效量的试剂并获得所需的结果。如本领域技术人员所理解的，纳米细胞中使用的试剂和剂量以及赋形剂将取决于被治疗的患者(包括肾和肝功能)，被治疗的疾病，待递送试剂的各种药理学和药物动力学特征，临床环境，给药模式等。纳米细可以使用已知的任何给药途径给药。在某些实施方案中，纳米细胞被肠胃外递送。在一些实施方案中，纳米细胞被吸入递送，例如，使用喷雾器，转动推进器(spinhaler)，或盘式推进器(diskhaler)。
本发明的另一个目的是提供一种分析系统，其允许在类似体内环境的条件下共同或单独地筛选抗血管生成剂和化疗剂。这包括在细胞外基质上生长的细胞，和准确模拟体内条件。在该分析中，接种内皮细胞并允许在肿瘤细胞接种到该组织培养板上之前在细胞外基质上生长。为检测肿瘤细胞，它们被转染以表达荧光基因产物，例如绿色荧光蛋白(GFP)。内皮细胞用荧光染料染色。本发明还提高实施本发明分析方法所需的具有必须试剂的试剂盒。
定义
“佐剂”：术语佐剂指免疫反应的非特异性调节剂的任何化合物。在一些优选实施方案中，佐剂刺激免疫反应。任何佐剂可用于本发明中。大量佐剂化合物是已知的；NIH准备了许多这样的化合物的有用的概要(也可参见Allison Dev.Bio1.Stand.92：3-11，1998；Unkeless等Annu.Rev.Immunol.6：251-281，1998；和Phillips等，Vaccine10：151-158，1992，各自在此引作参考)。
“动物”：此处使用的术语动物指人以及非人的动物，包括，例如，哺乳动物，鸟，爬行动物，两栖动物和鱼。优选地，非人动物是哺乳动物(例如，啮齿动物，小鼠，大鼠，兔，猴，狗，猫，灵长动物或猪)。动物可以是转基因动物。
“抗体”：术语抗体指免疫球蛋白，不管是天然的或全部或部分合成制备的。其所有维持特异性结合能力的衍生物也包含在该术语中。该术语还覆盖任何具有与免疫球蛋白结合结构域同源或大部分同源的结合结构域的蛋白。这些蛋白可以衍生自天然来源，或部分或全部合成制备。抗体可以是单克隆或多克隆的。抗体可以是任何免疫球蛋白类别的成员，包括人的类型：IgG，IgM，IgA，IgD，和IgE的任意成员。然而IgG类的衍生物在本发明中是优选的。
“抗体片段”：术语抗体片段指抗体的任何小于全长的衍生物。优选地，抗体片段至少保留全长抗体的特异性结合能力的重要部分。抗体片段的例子包括，但是不限于，Fab，Fab′，F(ab′)2，scFv，Fv，dsFv抗体，和Fd片段。抗体片段可以通过任何方法产生。例如，抗体片段可以通过使完整的抗体片段化而酶法或化学方法产生，或者其可以从编码部分抗体序列的基因重组制备。替代地，抗体片段可以完全或部分合成制备。抗体片段可以任选是单链抗体片段。替代地，片段可以包括多种连接在一起的链，例如通过二硫键连接。片段还可以任选是多分子复合物。功能抗体片段将通常包括至少大约50个氨基酸和更通常包括至少大约200个氨基酸。
单链Fvs(scFvs)是只由可变轻链(VL)和可变重链(VH)通过肽接头彼此共价连接组成的重组抗体片段。VL或VH可以是NH2-末端结构域。多肽接头长度和组成可变，只要两个可变结构域被桥联而没有严重的空间位阻。通常，接头主要包括一段甘氨酸和丝氨酸残基，而一些谷氨酸或赖氨酸残基分布于其中以提高溶解性。
二聚抗体(Diabodies)是二聚体scFvs。二聚抗体的成分通常具有比大多数scFvs更短的肽接头，并且它们显示偏爱连接成为二聚体。
Fv片段是由一个VH和一个VL结构域通过非共价相互作用连接在一起组成的抗体片段。术语dsFv此处用于表示具有工程化的分子间二硫键以稳定VH-VL配对的Fv。
F(ab′)2片段是基本等同于从免疫球蛋白(通常IgG)通过用胃蛋白酶在pH4.0-4.5消化而获得的抗体片段。该片段还可以通过重组产生。
Fab片段是基本等同于通过还原F(ab′)2片段中连接两条重链部分的二硫桥而获得的抗体片段。Fab′片段可以通过重组产生。
Fab片段是基本等同于通过用木瓜蛋白酶消化免疫球蛋白(通常是IgG)而获得的抗体片段。Fab片段可以通过重组产生。Fab片段的重链区段是Fd部分。
“与...连接”：如本发明所述，当两个实体彼此“连接”时，它们通过直接的或间接的共价或非共价的相互作用连接。优选地，这种连接是共价的。理想的非共价相互作用包括氢键，范德华氏相互作用，疏水相互作用，磁性相互作用和静电相互作用等。
“生物相容”：术语“生物相容”在此用于描述对细胞无毒的化合物。如果化合物被添加到体外细胞产生小于或等于30％，20％，10％，5％，或1％的细胞死亡并且不诱导炎症或其他体内这种不期望的副作用，则化合物是“生物相容”的。
“生物可降解”：此处使用的“生物可降解”化合物是那些可以当导入细胞内时被细胞机构分解成为或是细胞可以重新利用或是可以处置而不对细胞具有显著毒性(即，少于大约30％，20％，10％，5％，或1％的细胞被杀死)的那些化合物。
“有效量”：总的来说，活性试剂或微颗粒的“有效量”指引发所需的生物反应所需的量。正如本领域一般技术人员可以理解的，微颗粒的有效量可以根据诸如所需的生物终点(endpoint)，待递送的试剂，包囊基质的组成，靶组织等因素而变化。例如，含有待递送的抗癫痫试剂的微颗粒的有效量是导致疾病严重程度或癫痫发作频率和/或不期待的电活性下降的量。在其他的例子中，含有待递送到个体心脏的抗心律失常药剂的微颗粒的有效量是产生不期待的电活性的量或频率下降的量，或产生心律失常临床指征(例如，ECG发现)或症状(例如，晕厥事件)下降的量。
“纳米细胞”：根据本发明，术语“纳米细胞”指其中纳米核心被包围或包囊在基质或壳中的颗粒。换句话说，较大的颗粒中较小的颗粒，或气球中的气球。纳米细胞优选在纳米核心具有试剂，在纳米细胞的外侧部分具有不同的试剂。在一些优选实施方案中，纳米细胞是脂质体内的纳米核心。在一些实施方案中，纳米核心被聚合物基质或壳(例如，多糖基质)包围。
“纳米核心”：此处使用的术语“纳米核心”指纳米细胞内的任何颗粒。纳米核心可以是微颗粒，纳米颗粒，量子点，纳米装置，纳米管，纳米壳或包含在纳米细胞内合适大小的任何其他组成。优选地，纳米核心包括待更缓慢释放的试剂或在纳米细胞的外侧部分的试剂释放之后释放的试剂。
“肽”或“蛋白质”：根据本发明，“肽”或“蛋白质”包括一串至少三个通过肽键连接在一起的氨基酸。术语“肽”和“蛋白质”可以互换使用。肽可以指单独的肽或肽的集合。本发明的肽优选只含有天然氨基酸，尽管也可以替代的采用本领域已知的非天然氨基酸(即，在自然界不存在但是可以掺入到肽链中的化合物)和/或氨基酸类似物。此外，本发明肽中的一个或多个氨基酸也可以被修饰，例如，通过添加化学实体例如糖基团，磷酸基团，法尼基基团，异法尼基基团，脂肪酸基团，用于结合、官能化或其他修饰等的接头。在优选的实施方案中，肽的修饰导致肽更稳定(例如，体内的半寿期更长)。这些修饰可以包括肽的环化，D-氨基酸的掺入等。这些修饰基本不应当干扰肽所需的生物活性。
“小分子”：此处使用的术语“小分子”指具有相对低分子量的有机化合物，不管是天然存在的还是人工产生的(例如，通过化学合成)，并且不是蛋白质，肽或核酸。通常，小分子的分子量小于大约1500g/mol。此外，小分子通常具有多个碳碳键。已知的天然存在的小分子包括但是不限于，青霉素，红霉素，紫杉醇，环孢素和雷帕霉素。已知的合成小分子包括但是不限于，氨苄青霉素，甲氧西林，磺胺甲唑，和磺酰胺。
附图简述
图1是纳米细胞颗粒的示意图。纳米细胞在含有第二试剂的脂囊泡内包括装载有第一试剂的纳米核心。
图2显示替代的组合治疗策略。具有第一试剂的靶向纳米颗粒与含有第二试剂的单层脂囊泡联合使用以达到纳米细胞的缓慢和快速的药物动力学。
图3显示combretastatin-阿霉素纳米细胞的合成及其特征。(A)阿霉素和PLGA 5050之间结合反应的示意图。(B)使用乳剂-溶剂蒸发技术合成的纳米颗粒的扫描电子显微图(Jeol JSM5600，3700x)，显示异源大小的球形结构。(C)combretastatin的结构，其被包囊在脂质双层中。(D)三种纳米细胞的横截面投射电子显微镜图像，获得方法是以厚度70nm切片，用2.0％乙酸双氧铀染色随后用0.1％醋酸铅染色，然后用Philips EM410检查。通过这一技术，纳米颗粒(深色球)看起来被磷脂嵌段共聚物的白色冠状物包围的核。(E)使用动态激光散射筛分显示限定大小的纳米颗粒可以通过连续的超离心步骤分离，用于包囊在磷脂共聚物包膜中。(F)combretastatin和阿霉素的物理化学的释放速率动态谱显示combretastatin首先从纳米细胞释放，随后游离的阿霉素释放。地塞米松被用作内标。显示的数据用n＝4表示成平均值±SE。没有可见的误差条的数据点表示误差小并被图表所隐藏。***P＜0.002；#P＜0.001vs同一时间点的combretastatin浓度。
图4显示VEGF和HGF对体外肿瘤血管生成的影响，和PTK787(VEGF-受体拮抗剂)对体外肿瘤血管生成的影响。
图5显示在B16/F10骨髓瘤细胞和人脐静脉内皮细胞的共培养分析中，阿霉素，沙利度胺，和combretastatin对VEGF-诱导的反应的影响。
图6显示在B16/F10骨髓瘤细胞和人脐静脉内皮细胞的共培养分析中，阿霉素，沙利度胺，和combretastatin对HGF-诱导的反应的影响。
图7显示在B16/F10骨髓瘤细胞和人脐静脉内皮细胞的共培养分析中，当铺在胶原上时，阿霉素，沙利度胺，和combretastatin对VEGF-诱导的反应的影响。
图8显示在B16/F10骨髓瘤细胞和人脐静脉内皮细胞共培养分析中，当铺在胶原上时，阿霉素，沙利度胺，和combretastatin对HGF-诱导的反应的影响。
图9显示来自纳米细胞的药剂的短暂释放和活性的生物分析。在3维matrigel基质上建立GFP+黑色素瘤内皮细胞共培养。共培养物与不同的处理组孵育确定的时间段。用多聚甲醛固定细胞，用碘丙锭染色，然后用Zeiss LSM510共聚焦显微镜分析。用488nm和543nm激光束激发荧光染料，用505-530BP和565-615BP滤镜以512×512象素分辨率捕获图像。(A)显微图显示来自不同处理组的合并图像。黑色素瘤细胞呈黄色，而成血管内皮细胞为红色。(B)该图显示被各细胞类型覆盖的区域的立体定量。用纳米细胞(NC)处理导致血管系统的短暂快速切除，随后是迟发的肿瘤细胞丢失。作为对比，用脂质体-combretastatin(250μg/ml)(L[C])或阿霉素-结合的纳米颗粒(ND)(20μg/ml的阿霉素)处理的对照组分别产生血管系统或肿瘤细胞选择性地丢失。30h NC处理的图像被特定地选择以显示少数成圆形的细胞以加强共培养的切除，尽管在大多数图像中明显丢失全部细胞。从各重复试验捕获四个随机图像。数据代表来自3组独立实验的平均值±SEM。(C)浓度-影响曲线显示游离阿霉素和PLGA-结合的阿霉素对B16/F10细胞的影响。[Dox]表示作为游离药物或处于纳米细胞中的药物添加到培养物中的浓度。显示的数据是重复两个独立试验的平均值±SE。***P＜0.001(ANOVA，Bonferroni在post-hoc检验)。
图10显示纳米细胞疗法抑制B16/F10黑色素瘤和Lewis肺癌的生长。黑色素瘤和癌在C57/BL6小鼠中建立随后皮下注射3×105GFP+BL6/F10或2.5×105Lewis肺癌细胞至胁侧。(A，B)切除的肿瘤显示纳米细胞(NC)的影响对只具有阿霉素-结合的纳米颗粒的纳米细胞NC[D]的影响，脂质体-combretastatin(L[C])的影响，共同注射NC[D]+L[C]的影响，包囊combretastatin和阿霉素(L[CD])的简单脂质体制剂的影响，和低剂量(ld)NC的影响。对照组用盐水处理。荷有癌和黑色素瘤(50mm3)的小鼠被随机分成6-8组，每隔一天分别用等同于50mg/kg和500□g/kg combretastatin和阿霉素的不同媒介物处理。(C，D)图显示不同的处理组根据对癌和黑色素瘤的最长和最短直径的测量值计算的平均(SE)肿瘤体积。(E)图显示不同处理对白细胞计数的影响。在纳米细胞-处理的组观察到最小的毒性。用纳米细胞(NClt)长期处理与短期处理相比没有额外的毒性。(F)随着时间在第5，10和24小时测量染料的水平而定量交织有荧光染料的纳米细胞的分布。在第24小时，与其他血管化的组织相比，纳米细胞偏爱积累在癌中是明显的，伴随着血液中其水平的降低。所有的数据是平均值±SEM，取决于时间点每组n＝3-5。其中误差条不可见的数据点表示误差小并且被图表所隐藏。
图11显示纳米细胞治疗对肿瘤血管系统和调亡的影响。从接受纳米细胞(NC)，只具有阿霉素-结合的纳米颗粒的纳米细胞NC[D]，脂质体-combretastatin(L[C])，共注射NC[D]+L[C]，或包囊combretastatin和阿霉素(L[CD])的简单脂质体制剂处理的荷Lewis肺癌的动物切除肿瘤。对照组接受盐水。在10天内每隔一天分别使用等同于50mg/kg和500μg/kg的combretastatin和阿霉素的不同媒介物进行治疗。(A)上半部分显示用冷的甲醇固定和免疫显色yon Willebrand因子(vWF)，血管内皮标记物的肿瘤的横截面。下半部分显示不同的治疗对诱导肿瘤调亡的影响。切片在10％福尔马林中固定，并使用Texas红标记的核苷酸处理用于TUNEL+阳性染色。相同的切片被共标记上针对HIF-1□的抗体，和使用FITC-标记的二级抗体检测。NC治疗组中合并图像中黄色的信号显示HIF-1α的核定位，因为TUNEL染色检测DNA链断裂，其是调亡的标记。该图表明使用标准立体测量学技术对肿瘤横截面计算的(B)肿瘤血管密度，(C)组织缺氧细胞百分数，和(D)调亡细胞百分数。使用Zeiss LSM510共聚焦显微镜捕获所有的图像。用488nm和543nm激光束激发荧光团，使用505-530BP和565-615BP滤镜以512×512象素分辨率捕获图像。数据表示为来自三个独立肿瘤样品的平均值±SEM，各样品具有多个随机图像。*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001对对照(ANOVA，Newman-Keul氏Post Hoc检验)。(E)western印迹显示不同的治疗对HIF 1α和VEGF水平的影响，并且在(F&G)图中分别定量归一化到β-肌动蛋白。*P＜0.05对其他combretastatin-治疗组。
图12显示脂质体和纳米细胞combretastatin和长期纳米细胞治疗对肿瘤生长的影响。(A)图显示脂质体combretastatin和纳米细胞(构成为只包囊combretastatin和PLGA核心)被给药到荷黑色素瘤-小鼠中的影响。当肿瘤体积达到50mm3时开始治疗并且每隔一天持续5轮给药。各制剂每次注射给药的总combretastatin为50mg/kg。在另外的实验中，一旦肿瘤体积达到50mm3，对荷黑色素瘤的小鼠用7个NC治疗循环处理。对照动物用PBS媒介物处理，并且在第17天当肿瘤变得过大时处死小鼠。在长期治疗的组中，50％的动物显示肿瘤在28天后几乎完全衰退，并且如图(B)所示，剩余的动物与未治疗的动物相比肿瘤体积显著更小。
图13显示纳米细胞治疗对原发性GFP+黑色素瘤转移到肺和肝的影响。(A)上部显示来自不同治疗组相同水平肺组织的横截面。(B)这部分显示来自不同治疗组相同水平肝的横截面。从用纳米细胞(NC)，阿霉素-结合的纳米颗粒NC[D]，脂质体-combretastatin(L[C])，或共注射NC[D]+LC，或包囊在脂质体中的阿霉素和combretastatin(L[CD])治疗的小鼠切除上述器官。对照组用盐水治疗。组织在冰上固定于4％多聚甲醛，并用标准H&E染色。使用Zeiss LSM510共聚焦显微镜捕获图像。用488nm和543nm激光束激发荧光染料，使用505-530BP和565-615BP滤镜以512×512象素分辨率捕获图像。此处显示的合并图像表现出不同的转移灶，其呈黄色。该图显示各视场的转移灶的定量。表示的数据为来自n＝3的平均值±SEM。***P＜0.001对对照(ANOVA，Newman-Keul氏Post Hoc检验)。
图14是显示涉及阿霉素结合到PLGA 5050的详细合成步骤的示意图。
图15显示开发用于治疗哮喘的纳米细胞的结构和释放动力学谱。电子显微图显示这些纳米细胞的外部基质的超微结构，其中基质是乳糖壳。皮质类固醇(抗炎剂)可以捕获在纳米核心内，而支气管扩张剂被捕获在包围纳米核心的乳糖基质中。该图显示的事实是支气管扩张剂(沙丁胺醇)在数分钟内首先释放，而皮质类固醇(地塞米松)以缓慢持久的方式释放。这种时序释放可以使哮喘中狭窄的细支气管首先被扩张使得纳米核心可以渗入到更深的肺中。随后的缓慢释放将阻断在急性哮喘期之后的慢性炎症，而沙丁胺醇的快速释放可以减轻直接症状。
本发明一些优选实施方案详述
本发明的药物递送系统来自于这样的认识：给药多种试剂以治疗疾病，也许有利的是在第二种试剂或试剂组合被递送之前递送一种试剂或试剂的组合。使用本发明的颗粒在不同的时间释放的试剂可以具有不同作用模式，不同的靶，和/或不同的药物动力学谱。本发明包括本发明的颗粒(纳米细胞)，具有纳米细胞的药物组合物，制备纳米细胞和其药物组合物的方法，和纳米细胞和药物组合物的用法。纳米细胞概念上是气球中的气球或颗粒(例如，脂质体)中的颗粒(例如，纳米颗粒)。
在一个实施方案中，纳米细胞包含装载有第一试剂或试剂组合的内部(纳米核心)，内部被具有第二试剂或试剂组合的脂囊泡或基质/壳外部包围。外部的试剂在内部纳米核心的试剂释放以前释放。优选地，纳米细胞包含一个纳米核心。然而在某些实施方案中，纳米细胞包含一个或多个纳米核心，优选一个到一百个纳米核心，更优选一个到十个纳米核心，更优选一个到三个纳米核心。在另外的实施方案中，纳米细胞是内部核心涂有外壳或基质的颗粒。
本发明的纳米细胞的核心包含至少一种包囊在基质中的试剂。基质优选是生物可降解和生物相容的聚合物基质。用于制备纳米核心的聚合物包括合成聚合物和天然聚合物。用于本发明的聚合物的例子包括聚酯，聚酰胺，聚醚，聚硫醚，聚脲，聚碳酸酯，聚尿素，蛋白质，多糖，聚芳酯等。用于纳米核心的聚合物具有平均分子量从100g/mol到100,000g/mol，优选500g/mol到80,000g/mol。在优选实施方案中，所述聚合物是从选自下列单体合成的聚酯：D，L-丙交酯，D-丙交酯，L-丙交酯，D，L-乳酸，D-乳酸，L-乳酸，乙交酯，乙醇酸，ε-己内酯，ε-羟基己酸，γ-丁内酯，γ-羟基丁酸，δ-戊内酯，δ-羟基戊酸，羟丁酸，和苹果酸。更优选地，生物可降解聚酯是从选自下列单体合成的聚酯：D，L-丙交酯，D-丙交酯，L-丙交酯，D，L-乳酸，D-乳酸，L-乳酸，乙交酯，乙醇酸，ε-己内酯，和ε-羟基己酸。最优选地，生物可降解聚酯是从选自下列单体合成的聚酯：D，L-丙交酯，D-丙交酯，L-丙交酯，D，L-乳酸，D-乳酸，L-乳酸，乙交酯，和乙醇酸。共聚物也可以用于纳米核心。共聚物包括ABA型三嵌段，BAB型三嵌段共聚物，和AB型二嵌段共聚物。所述嵌段共聚物可以具有疏水性的A嵌段(例如，聚酯)和亲水性的B嵌段(例如，聚乙二醇)。
纳米核心的聚合物的选择基于活性剂的捕获和释放动力学。在某些实施方案中，所述纳米核心上的活性剂共价联合到纳米核心的聚合物。为将待递送的试剂共价连接到聚合物基质，可以使用任何本领域已知的技术通过化学法活化聚合物。活化的聚合物然后与试剂在合适的条件下混合以允许在聚合物和试剂之间形成共价键。在优选实施方案中，试剂上的亲核试剂，例如硫醇，羟基，或氨基进攻聚合物上的亲电子试剂(例如，活化的羰基)以产生共价键。
在其他实施方案中，活性剂与纳米核心的基质通过非共价相互作用例如范德华相互作用，疏水性相互作用，氢键，偶极-偶极相互作用，离子相互作用和π堆积而连接。
可以使用本领域已知的用于制备纳米颗粒的任何方法制备纳米核心。这样的方法包括喷雾干燥，乳剂-溶剂蒸发，双乳剂，和相转化。此外，任何的纳米级颗粒，基质，或核心可以用作纳米细胞内的纳米核心。纳米核心可以是，但是不限于纳米壳(参见美国专利6,685,986，此处引作参考)；纳米线(参见美国专利5,858,862，此处引作参考)；纳米晶体(参见美国专利6,114,038，此处引作参考)；量子点(参见美国专利(6,326,144，此处引作参考)和纳米管(参见美国专利6,528,020，此处引作参考)。
在制备纳米核心后，它们可以通过过滤，筛分，压挤，或超离心法以回收特定大小范围的纳米核心而被级分。一种有效的筛分方法包括挤压纳米核心的水悬浮液通过一系列具有选择的均匀孔径大小的聚碳酸酯膜；膜的孔径大小将大致对应于通过膜压挤产生的纳米核心的最大尺寸。参见，例如美国专利4,737,323，此处引作参考。另外的优选的方法是以规定的速度(例如，8,000，10,000，12,000，15,000，20,000，22,000和25,000rpm)连续超离心以分离规定大小的级分。在某些实施方案中，制备的纳米核心在选择的粒度范围之内大小基本上均匀。纳米核心最大的直径优选在10nm到10,000nm的范围。更优选，纳米核心最大的直径从20到8,000nm，最优选从50到5,000nm。可以通过动态光散射和/或扫描电子显微术分析纳米核心以测定颗粒的大小。纳米核心也可以测试用于装载试剂进入纳米核心。纳米核心包括纳米颗粒以及纳米壳，纳米线，量子点，和纳米管。
一旦纳米核心已经制备并任选被表征，用外层例如脂质，聚合物，糖类等涂布纳米核心以形成纳米细胞。纳米核心可以使用本领域描述的任何方法涂有合成或天然存在的大分子，例如脂质，糖类，多糖，蛋白质，聚合物，糖蛋白，糖脂等。制备脂囊泡的各种方法已经描述在美国专利4,235,871，4,501,728，4,837,028，PCT申请WO 96/14057，New RRC，脂质体：实用方法(Liposomes：A practical approach)，IRLPress，Oxford(1990)，第33-104页；Lasic DD，脂质体从物理到应用(Liposomes from physics to applications)，Elsevier Science PublishersBV，Amsterdam，1993；Szoka等，Ann.Rev.Biophys.Bioeng.9：467(1980)；脂质体(Liposomes)，Marc J.Ostro，编辑，Marcel Decker，Inc.，New York，1983，第一章；Hope等，Chem.Phys.Lip.40：89(1986)；各自在此处引作参考。
任何含有本领域已知表面活性剂和乳化剂的脂质适用于制造本发明的纳米细胞。脂质成分也可以是不同脂质分子的混合物。这些脂质可以从天然的来源提取和纯化或可以在实验室合成制备。在优选实施方案中，所述脂质是市场上可买到的。用于涂布纳米核心的脂质包括天然的以及合成的脂质。所述脂质可以化学法或生物学法改变。用于制备本发明纳米细胞的脂质包括但是不限于磷酸甘油酯；磷脂酰胆碱；二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)；二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)；二油酰氧基丙基三乙基铵(DOTMA)；二油酰磷脂酰胆碱；胆固醇；胆固醇酯；甘油二酯；二乙酰甘油基琥珀酸酯；心磷脂(DPPG)；hexanedecanol；脂肪醇例如聚乙二醇(PEG)；聚氧乙烯-9-月桂基醚；表面活性的脂肪酸，例如棕榈酸或油酸；脂肪酸；脂肪酸酰胺；去水山梨糖醇三油酸酯(Span85)甘胆酸酯；表面活性素；poloxomer；山梨糖醇酐脂肪酸酯例如去水山梨糖醇三油酸酯；卵磷脂；溶血卵磷脂；磷脂酰丝氨酸；磷脂酰肌醇；鞘磷脂；磷酯酰乙醇胺(脑磷酯)；心脂；磷脂酸；脑糖苷；二十六烷基磷酸酯；二棕榈酰磷脂酰甘油；十八胺；十二烷胺；十六烷基胺；乙酰棕榈酸酯；甘油蓖麻醇酸酯；十六烷基硬脂酸酯；十四烷酸异丙酯；泰洛沙泊；聚(乙二醇)5000-磷酯酰乙醇胺；和磷脂。所述脂质可以是带正电荷的，带负电荷的，或中性的。在某些实施方案中，所述脂质是脂质的组合。用于制备纳米细胞的磷脂包括带负电荷的磷脂酰肌醇，磷脂酰丝氨酸，磷脂酰甘油，磷脂酸(phosphatic acid)，双磷脂酰甘油，聚(乙二醇)-磷脂酰乙醇胺，二肉豆蔻酰磷脂酰甘油，二油酰磷脂酰甘油，二月桂酰磷脂酰甘油，二棕榈酰磷脂酰甘油，二硬脂酰磷脂酰甘油，二肉豆蔻酰磷脂酸(phosphatic acid)，二棕榈酰磷脂酸，二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸，二棕榈酰磷脂酰丝氨酸，磷脂酰丝氨酸，和其混合物。有用的两性离子的磷脂包括磷脂酰胆碱，磷脂酰乙醇胺，鞘磷脂，卵磷脂，溶血卵磷脂，溶血磷脂酰乙醇胺，脑糖苷，二肉豆寇酰磷脂酰胆碱，二棕榈酰磷脂酰胆碱，二硬脂酰磷脂酰胆碱，二反油酰磷脂酰胆碱，二油酰磷脂酰胆碱，二月桂酰磷脂酰胆碱，1-肉豆寇酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱，1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰磷脂酰胆碱，1-棕榈酰-磷脂酰胆碱，1-硬脂酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱，二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺，二棕榈酰磷脂酰乙醇胺，脑鞘磷脂，二棕榈酰鞘磷脂，二硬脂酰鞘磷脂，和其混合物。两性离子的磷脂构成任何具有可电离基团的磷脂，其中净电荷是零。在某些实施方案中，所述脂质是磷脂酰胆碱。
胆固醇和其它甾醇也可以引入到本发明纳米细胞的脂质外侧部分以改变脂囊泡的物理性质。用于掺入纳米细胞的甾醇包括胆固醇，胆固醇衍生物，胆固醇酯，维生素D，植物固醇，麦角醇，类固醇激素，和其混合物。有用的胆固醇衍生物包括胆固醇-磷酸胆碱，胆固醇聚乙二醇，和胆固醇-SO4，而植物固醇可以是谷固醇，菜油固醇和豆固醇。甾醇有机酸衍生物的盐形式描述于美国专利4,891,208，其在此处引作参考，可以用于本发明的纳米细胞。
纳米细胞的脂囊泡部分可以是多层或单层的。在某些实施方案中，所述纳米核心涂布有多层脂质膜例如脂双层。在一些实施方案中，纳米核心涂有单层脂质膜。
衍生化的脂质也可以用于纳米细胞。添加衍生化的脂质改变纳米细胞的药物动力学。例如，添加具有靶向剂的衍生化的脂质可以允许纳米细胞靶向到特定的细胞，肿瘤，组织，器官，或器官系统。在某些实施方案中，纳米细胞的衍生化的脂质组分包括不稳定脂质聚合物连接，例如肽，酰胺，醚，酯，或二硫连接，其能够在选择性的生理条件下，例如在有肽酶或酯酶或还原剂参与的情况下被切割。使用这种连接将聚合物偶联到磷脂上，允许在给药数小时后获得高血液水平，此外其可能易于被RES系统迅速摄取。参见，例如，美国专利5,356,633，此处引作参考。纳米细胞的药物动力学和/或靶向还可以通过改变脂质组成和比例而改变表面电荷来修饰。通过引入热敏感的或pH敏感的脂质(例如，基于二棕榈酰-磷脂胆碱∶二硬脂酰磷脂胆碱(DPPC∶DSPC)的混合物)作为脂囊泡的成分，在纳米细胞可以建立热释放或pH释放特征。使用热或pH敏感的脂质允许纳米细胞的脂囊泡膜成分可控的降解。
另外，本发明的纳米细胞可以包含结合到外部的非聚合的分子，例如半抗原，酶，抗体或抗体片段，细胞因子，受体和激素(参见，例如，美国专利5,527,528，此处引作参考)，和其他小蛋白，多肽或非蛋白分子，其给予脂制剂以特定的酶特征或表面识别特征。用于将表面分子偶联到脂质的技术是本领域已知的(参见，例如，美国专利4,762,915，此处引作参考)。
在一个实施方案中，所述脂质溶解在合适的有机溶剂或溶剂系统中，并在真空或惰性气体下干燥以形成薄的脂质膜。任选地，膜可以复溶在合适的溶剂中，例如叔丁醇，然后冻干以形成更均匀的脂质混合物，其处于更容易水化的粉末状形式。所得到的膜或粉末覆盖纳米核心的含水缓冲悬浮液，并允许搅动下水化15-60分钟。通过在更剧烈搅动条件下水化或通过添加增溶去污剂例如脱氧胆酸，所得到的多层(multiamellar)囊泡的大小分布可以转变到较小尺寸。
在另外的实施方案中，纳米核心的涂层的制备方法可以通过将用亲水聚合物衍生化的脂质扩散进入预形成的囊泡，例如将预形成的囊泡暴露于由脂质接枝聚合物组成的纳米核心/微团，其中脂质浓度相当于纳米细胞中所需的衍生化脂质的最终克分子百分数。所述围绕纳米核心的含有亲水聚合物的基质还可以通过匀浆，脂质场水化，或挤压技术形成。
在另一个实施方案中，纳米核心首先通过超声波作用分散在低CMC表面活性剂，例如溶血卵磷脂，包括容易溶解疏水性分子的聚合物-接枝的脂质。所得到的纳米核心的胶束悬浮液然后用于再水化包含合适摩尔百分数的聚合物接枝的脂质或胆固醇的干燥脂质样品。然后使用本领域已知的挤压技术将基质/壳和纳米核心悬浮液形成进入纳米细胞。通过标准柱层析将所得到的纳米细胞与未包囊的纳米核心分离。
在另外的优选实施方案中，形成囊泡的脂质被吸收在合适的有机溶剂或溶剂系统中，并在真空中或在惰性气体下干燥或冻干以形成脂质膜。待掺入到纳米细胞外部室的活性剂优选包含在形成膜的脂质中。药物在脂质溶液中的浓度可以为药物在纳米细胞中的最终最大过量摩尔浓度，以使得药物捕获在纳米细胞中的量最大化。用于水化干燥的脂质或脂质/药物的含水介质是生理相容的介质，优选无热原的生理盐水或5％葡萄糖水，用于胃肠外的补液。在水化步骤前，纳米核心以均匀的方式悬浮在含水介质中，纳米核心中其它的活性剂处于所需浓度。溶液还可以与任何附加的溶质组分以所需的溶质浓度混合，例如水可溶性铁螯合剂，和/或可溶性第二化合物。允许在迅速的条件(使用搅动)或缓慢条件(不搅动)下水化脂质。脂质水化以形成多层囊泡的悬浮液，其粒度范围通常在大约0.5微米到10微米或更大之间。通常，泡囊的大小分布通过振动更快速水化脂质膜可以转变到较小的尺寸。所得到的膜双层的结构是脂质的疏水性(非极性的)“尾巴”朝向双层的中心，而亲水性的(极性的)“头”朝向水相。
在另外的实施方案中，干燥的形成泡囊的脂质，含有试剂的纳米核心，和所述试剂(待装载到纳米细胞的外部室内)以合适的比例混合，被溶解在水可混溶的有机溶剂或溶剂的混合物中，如有必要则进行加温。这种溶剂的例子是不同比例的乙醇，或乙醇和二甲亚砜(DMSO)。然后将混合物添加到足够体积的含水受体相以致使自发形成纳米细胞。如有必要含水受体相可以加温以保持所有的脂质在熔化状态。所述受体相可以快速搅拌或温和地搅拌。混合物可以通过小开口快速注射，或直接倾倒。在温育数分钟到数小时后，通过减压，透析或渗滤除去有机溶剂，留下适于人给药的纳米细胞悬浮液。
在另外的实施方案中，以合适的量混合的干燥的形成泡囊的脂质，待装载到纳米细胞的外部室的试剂，和装载试剂的纳米核心被溶解在具有足够高的蒸气压和冰点以允许通过冷干燥(冻干)除去的合适的有机溶剂中，如有必要则进行加温。这种溶剂的例子是叔丁醇和苯。然后所述药物/脂质/溶剂混合物被冷冻和置于高真空下。用于冷冻的方法的例子包括“壳-冷冻”，其中含有混合物的容器被施动或旋转以使液体与容器壁的接触最大化，容器置于冷却的物质例如液氮或与溶剂例如醇或丙酮混合的干冰中。因此混合物被快速冷冻而没有药物/脂质/溶剂混合物成分的分离现象。通过冻干去除溶剂得到蓬松的干燥粉末。药物/脂质粉末在降低成分的化学降解或吸湿的条件下可以存储延长的时间。这种条件的例子包括在干燥的惰性气体(例如氩气或氮气)大气压下密封所述粉末，并贮材在冷处。当需要给药所述材料时，通过添加生理性相容的含水介质优选无热原的生理盐水或5％葡萄糖水溶液而复溶。如果第二活性剂是亲水性的，其还可以在这个阶段添加。复溶导致自发形成纳米细胞，其可以通过此处详述的方法包括超离心，过滤和筛分改进其大小。
正如本领域技术人员可以理解的，任何的药剂，诊断剂或预防剂可以使用本发明的药物递送系统给药。被装载进入纳米细胞的两个隔室的试剂将取决于不同因素包括被治疗的疾病，患者，临床环境，给药方式，和本领域技术人员例如许可执业的医生或药剂师所理解的其它因素。
在某些实施方案中，纳米细胞的内部部分纳米核心中的试剂，比纳米细胞外部部分中的试剂的释放动力学要更缓慢。以这种方法，外部部分中的试剂被首先释放以允许在纳米核心中的试剂开始发挥作用以前发挥其作用。例如，在治疗癌症时，纳米细胞的外部脂囊泡部分装载有常规的化疗剂例如甲氨蝶呤，而纳米核心装载有抗血管生成剂例如combretastatin。甲氨蝶呤被首先从纳米细胞中释放，给肿瘤的血液供应在combretastatin切断到肿瘤的血液供应之前携带细胞毒性的试剂到肿瘤细胞。以这种方法，细胞毒性的试剂允许到达细胞并在抗血管生成剂切断到肿瘤的血液供给之前发挥其细胞毒性的作用。顺序递送细胞毒性试剂继之以抗血管生成剂优选是协同作用的，由于用于本发明系统的药物剂量更低而降低副作用。
使用本发明的纳米细胞递送的试剂包括治疗剂，诊断剂或预防剂。可以使用纳米细胞递送任何待给药到个体的化合物。所述试剂可以是小分子，有机金属化合物，核酸，蛋白质，肽，金属，同位素标记的化合物，药物，疫苗，免疫试剂等。
在优选实施方案中，所述试剂是具有药物活性的有机化合物。在本发明另外的实施方案中，所述试剂是一种临床使用的药物。在另外的实施方案中，所述试剂已经经美国食品药品管理局批准用于人或其它的动物。在特别优选实施方案中，所述药物是抗生素，抗病毒剂，麻醉剂，类固醇试剂，抗炎剂，抗肿瘤剂，抗原，疫苗，抗体，解充血剂，抗高血压药，镇静剂，节育剂，孕前剂，抗胆碱能药物，镇痛剂，抗抑郁剂，抗精神病剂，β-肾上腺素能阻滞剂，利尿剂，心血管活化剂，血管作用试剂，非类固醇的抗炎剂，营养剂等。例如，本发明的纳米细胞可以被制备以便包括一种或者多种化合物，选自以下的在突出和神经效应剂连接位点作用的药物(例如乙酰胆碱，醋甲胆碱，匹鲁卡品，阿托品，东茛菪碱，毒扁豆碱，琥珀酰胆碱，肾上腺素，去甲肾上腺素，多巴胺，多巴酚丁胺，异丙基肾上腺素，舒喘宁，萘异丙仲胺，血清素)；对中枢神经系统起作用的药物(例如clonazepam，地西泮，氯羟去甲安定，苯佐卡因，丁哌卡因，利度卡因，四卡因，ropivacaine，阿米替林，氟苯氧丙胺，paroxetine，丙戊酸，氨甲酰氮卓，溴麦角环肽，咖啡，芬太奴，naltrexone，钠洛酮)；调节炎性反应的药物(例如，阿斯匹林，茚甲新，布洛芬，naproxen，类固醇，色甘酸钠，茶碱)；影响肾和/或心血管功能的药物(例如，速尿，thiazide，氨氯吡脒，螺旋内酯，captopril，enalapril，lisinopril，地尔硫卓，心痛定，异搏停，地高辛，异山梨醇硝酸酯，多巴酚丁胺，利度卡因，奎尼丁，腺苷酸，洋地黄，美伐他汀，洛弗斯特丁，simvastatin，甲羟戊酸盐酯)；影响胃肠道功能的药物(例如，奥梅普拉佐耳，sucralfate)；抗生素(例如，四环素，林大霉素，两性霉素B，奎宁，甲氧西林，万古霉素，青霉素G，阿莫西林，正泰霉素，红霉素，ciprofloxacin，细力霉素，acyclovir，叠氮胸苷(AZT)，ddC，ddI，ribavirin，氯头孢菌素，先锋霉素，链霉素，正泰霉素，托布拉霉素，氯霉素，异烟肼，fluconazole，金刚胺，干扰素)；抗癌剂(例如，环磷酰胺，甲氨蝶呤，氟尿嘧啶，阿拉伯胞嘧啶糖苷，巯基嘌呤，长春花碱，长春新碱，阿霉素，争光霉素，丝裂霉素C，羟基脲，强的松，三苯氧胺，顺铂，decarbazine)；免疫调节剂(例如，白介素，干扰素，GM-CSF，TNFα，TNFβ，环孢素，FK 506，硫唑嘌呤，类固醇)；作用于血液和/或形成血液的器官的药物(例如，白介素，G-CSF，GM-CSF，促红细胞生成素，维生素，铁，铜，维生素B12，叶酸，肝素，抗血凝性杀鼠剂，香豆精)；激素(例如，生长激素(GH)，促乳素，促黄体生成素，TSH，ACTH，胰岛素，FSH，CG，抑生长素，雌激素，雄激素，孕酮，促性腺激素-释放因子(GnRH)，甲状腺素，三碘甲状腺原氨酸)；激素拮抗剂；影响钙化和骨转化的试剂(例如，钙，磷酸盐，甲状旁腺激素(PTH)，维生素D，双膦酸酯，降钙素，氟)，维生素(例如，核黄素，烟酸，吡哆醇，泛酸，生物素，胆碱，肌醇，肉碱，维生素C，维生素A，维生素E，维生素K)，基因治疗试剂(例如，病毒载体，带有核酸的脂质体，DNA-蛋白质结合物，反义试剂)；或其它的试剂例如靶向剂等。
预防剂包括疫苗。疫苗可以包含分离的蛋白或肽，灭活的生物体和病毒，死的生物体和病毒，遗传学改变的生物体或病毒，和细胞抽提物。预防剂可以与白介素，干扰素，细胞因子，和佐剂组合，所述佐剂例如霍乱菌毒素，明矾，弗氏佐剂等。预防剂包括细菌，病毒，真菌，原生动物和寄生虫的抗原。这些抗原可以是完全杀死的生物，肽，蛋白质，糖蛋白，糖类，或其组合的形式。
试剂可以表示已经组合并装载进入纳米核心或纳米细胞的外部脂质部分的试剂的组合。可以使用任意的试剂组合。例如药剂可以与诊断剂组合，药剂可以与预防剂组合，药剂可以与其它的药剂组合，诊断剂可以与预防剂组合，诊断剂可以与其它的诊断剂组合，以及预防剂可以与其它的预防剂组合。在用于治疗癌症的某些实施方案中，至少两种常规的化疗剂被装载进入纳米细胞的其它脂质部分。
在本发明的一个方面，纳米细胞被制备为具有基本上均匀的在选择的粒度范围内的大小。纳米细胞可以被过滤，筛分，离心，超速离心，通过柱层析而分选，或挤压以收集一定大小的颗粒。一种有效的筛分方法包括挤压纳米细胞的水悬浮液通过一系列具有选择的均匀孔径大小的聚碳酸酯膜；膜的孔径大小将大致对应于经压挤通过膜产生的纳米细胞的最大尺寸。参见，例如美国专利4,737,323，此处引作参考。另外的优选的方法是通过连续超离心法以规定的速度分离规定大小的级分。
尽管纳米细胞组合物优选的使用将是肿瘤治疗，不论是实体瘤还是骨髓瘤，在治疗其它的基于异常血管生成的病变时包含了相同的原理。其它的病变可以包括关节炎，视网膜病变，银屑癣，实体瘤，良性肿瘤，卡博氏肉瘤，和血液学恶性肿瘤。这可以包括早先描述的药物；或例如就关节炎而论，其可以在纳米核心包含疾病修饰药物(DMARDs)，非类固醇抗炎性药物(NSAIDS)，秋水仙碱，甲氨蝶呤等，而在围绕的脂囊泡或聚合物壳内包含抗血管生成剂。此外，利用纳米细胞实现了两种无关的活性剂之间的空间时间的释放动力学以及药效的协同作用，打开其用于其他病理生理状况的可能性，在所述状况中治疗剂的这种时间的或空间的活性是需要的。这种状况的例子可以是哮喘，其中抗痉挛的或松弛的药物被装载在纳米壳的外侧部分，而抗炎剂，例如类固醇或NSAID，被装载在纳米核心用于针对与哮喘有关的迟发炎症反应的迟发活性，并在从纳米细胞的外侧部分快速释放的活化剂已经松弛了肺泡和/或小支气管后发挥其作用。相似的，开启血脑屏障的分子可以装载在纳米细胞的外侧部分而中枢作用的刺激神经的试剂可以装载进入纳米核心，导致CNS中活化剂的积累增加。纳米细胞还可以用于递送疫苗以产生较好的结果。例如，炎性剂例如佐剂可以被装载进入纳米细胞的外侧部分，以及抗原装载进入纳米核心。正如本领域技术人员可以理解的，纳米细胞系统可用于治疗多种疾病。
靶向剂
纳米细胞可以被修饰以包括靶向剂，因为通常合乎需要的是将药物递送装置靶向到特定的细胞，收集细胞、组织或器官。将药物组合物导向到特定的细胞的各种靶向剂是本领域公知的(参见，例如，Cotten等Methods Enzym.217：618，1993；此处引作参考)。靶向剂可以包含在整个纳米细胞中，只包含在内部纳米核心，只包含在外部脂质或聚合物壳部分，或可以只包含在纳米细胞的表面上。所述靶向剂可以是一种蛋白质，肽，糖类，糖蛋白，脂质，小分子，金属等。所述靶向剂可用于靶向特定的细胞或组织或可用于促进对颗粒的胞吞或吞噬作用。靶向剂的例子包括但是不限于，抗体，抗体片段，低密度脂蛋白(LDLs)，输铁蛋白，asialycoproteins，人类免疫缺陷性病毒(HIV)的gp120包膜蛋白，糖类，受体配体，唾液酸等。如果靶向剂被包含在纳米核心中，靶向剂可以包含在用于形成纳米颗粒的混合物中。如果靶向剂只在纳米细胞的表面上，靶向剂可以使用标准化学技术与形成的颗粒连接(即通过共价的、疏水的、氢键结合的、范德华或其他的相互作用)。
药物组合物
一旦本发明的颗粒已经制备，它们可以与其它的药物赋形剂组合以形成药物组合物。正如本领域技术人员可以理解的，赋形剂的选择可以基于如下所述的给药途径，被递送的试剂，递送试剂的时程等。
本发明的药物组合物和其根据本发明的应用可以包括药物可接受赋形剂或载体。此处使用的术语“药物可接受的载体”表示无毒，惰性的固体、半固体或液体填充剂，稀释剂，包囊材料，或任何类型的制剂助剂。可以作为药物可接受的载体的材料的一些例子是糖例如乳糖，葡萄糖，和蔗糖；淀粉例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物例如羧甲基纤维素钠盐，乙基纤维素，和醋酸纤维素；粉末黄芪胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂例如可可脂和栓剂蜡；油例如花生油，棉子油；红花油；芝麻油；橄榄油；玉米油和豆油；二醇例如丙二醇；酯例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；去污剂例如吐温80；缓冲剂例如氢氧化镁和氢氧化铝；藻酸；无热原的水；等渗盐水；Ringer氏溶液；乙醇；人工脑脊髓液(CSF)，和磷酸盐缓冲液，以及其它无毒的相容性滑润剂例如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂，释放剂，涂层剂，增甜剂，调味剂和香料，防腐剂和抗氧化剂也可以根据药剂师的判断而存在于所述组合物中。本发明的药物组合物可以口服，直肠，胃肠外，脑池内，阴道内，鼻内，腹腔内，局部(通过粉末，乳膏，油膏，或滴剂)，透皮，皮下，含服，或作为口腔喷雾或鼻喷雾法而给药到人和/或动物。
可注射的制剂，例如，无菌的可注射的含水或含油的悬浮液可以根据现有技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂而配制。无菌的可注射制剂也可以是无毒的胃肠外的可接受稀释剂或溶剂的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如，1，3-丁二醇的溶液。其中可以使用的可接受的载体和溶剂是水，Ringer氏溶液，U.S.P.和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发油常规用作溶剂或悬浮介质。用于这个目的，任何无味的不挥发油可以使用，包括合成的单脂酰或二脂酰甘油脂。此外，脂肪酸例如油酸用于制备可注射制剂。
可注射的制剂可以灭菌，例如，通过截留细菌的滤器过滤，或通过引入无菌固体组合物形式的杀菌剂，其可以在使用前溶解或分散在无菌水或其它无菌的可注射介质中。
分析药物组合物的方法
干预实质-间质轴仍然是肿瘤治疗有吸引力的目标。评价抗血管生成的标准方法已用于研究其对于内皮细胞增殖，迁移，化学侵入或管生成(tubulogenesis)(这些是血管生成过程的主要步骤)的活性(Sengupta等，Circulation 107(23)：2955-61，June 17，2003)。然而，这些分析受到被研究的活化的内皮与肿瘤细胞分离这一事实的限制。这是关键的，因为肿瘤内皮已经证明显示独特的遗传标志(StCroix等，Science289(5482)：1197-1202，August 18，2000)。此外，标准组织培养技术通常不促进空间排列。实际上，在2-D系统生长的内皮细胞不同于已经发展到模拟细胞和细胞外环境之间天然相互作用的3-D模型系统。Shekhar等(Cancer Res.61(4)：1320-26 February 15，2001)开发3-维的基于matrigeI的共培养模型，其中内皮细胞与前-肿瘤乳腺上皮细胞混合以允许研究导管-胞状物的形态发生，血管生成，以及发展为恶性的表型。Nehls和Drenclchahn(Histochem.Cell Biol.104(6)：459-66，December 1995)使用基于微载体的血纤蛋白原凝胶包埋的共培养，而Dutt等(Tissue Eng.9(5)：893-908，October 2003)使用NASA生物反应器开发3D共培养系统。Longo等(Blood 98(13)：3717-26，December 15，2001)研究在3D胶原基质上黑色素瘤细胞与单层内皮细胞的相互作用。然而，在所有这些共培养试验中，使用通常使用的抗体例如CD 31，CD 34，CD 105，vWF等，或结合到al-岩藻糖基部分的植物血凝素，并使用昂贵和耗时的标准的免疫组化方法来标记内皮细胞。此外，对相互作用的细胞伴侣的同步可视化和分析使复杂性水平进一步增加。
本发明克服了这些限制，因为其掺入稳定转染的转化的肿瘤细胞(例如，黑色素瘤细胞)以表达荧光基因产物(例如，绿色荧光蛋白(GFP))，而不改变具有有限寿命的原代内皮细胞。随后区别一步标记内皮和肿瘤组分，允许容易地目视观察和分析，因为合并的图像以不同于内皮细胞的颜色来表示肿瘤细胞(例如，肿瘤细胞为绿色，而内皮细胞呈红色)。
实际上，从完全缺失绿色的黑色素瘤细胞可以显见与阿霉素温育产生化疗作用。此外，捕获具有更低背景的对比度强的图象也促进用于定量的体视学分析，这是可以容易地通过计算实现自动化的步骤。
用于所述分析系统的细胞系是任何可以稳定地表达荧光蛋白质的转化的细胞或当使用合适的波长激发时已经被修饰以发荧光的细胞。优选所述细胞将来自间质来源的肿瘤(肉瘤)，或来自上皮来源的肿瘤(癌)，或畸胎瘤。来自脑癌，肺癌，胃癌，结肠癌，乳癌，膀胱癌，前列腺癌，卵巢癌，子宫癌，睾丸癌，胰腺癌，白血病，淋巴腺癌，骨癌，肌肉癌，和皮肤癌的细胞可以用于本发明的分析。优选所述细胞将吸附到细胞培养皿。内皮细胞应该来自血管系统，例如，动脉，静脉，或微血管系统例如毛细管。所述内皮细胞可以源自于祖细胞或干细胞。在某些实施方案中，所述内皮细胞源自于人脐带。
在这个研究之前报道的所有共培养试验中，相互作用的细胞组分接种在一起。然而，在病理生理学中，血管生成定义为来自现有的血管床的新血管结构的萌发。为更精确模拟该病理生理，在接种肿瘤细胞前本发明允许发展形成内皮细胞的原生网络。在肿瘤细胞参与的情况下，在这个方法之后观察到脉络网络的形成显著增加。这种新的体外模型系统更精确模拟肿瘤血管生成，并允许同步检测新分子的化疗和抗血管生成活性。该分析系统将提供独特的工具以仔细分析实质-间质轴的分子间相互作用，并促进化学治疗和抗血管生成的战略组合方案的开发。
本发明的这些和其它方面在考虑以下实施例后将得到更深的理解，这些实施例是用来说明本发明的某些特定的实施方案，而不打算限定本发明的范围，本发明的范围如权利要求书中所定义。
实施例
实施例1：纳米细胞的合成和分析
(A)阿霉素结合到PLGA(图3)。从Alkermes(Wilmington，OH)获得丙交酯/乙交酯摩尔比50/50的聚乳酸乙醇酸(PLGA)(Medisorb5050DL4A)。这种聚合物的平均分子量被报道是61kDa，其在末端具有游离羟基和羧基。从Sigma-Aldrich(St.Louis，MO)获得阿霉素盐酸盐，p-硝基苯基氯代甲酸酯，和三乙胺。简单地说，1.5g PLGA 5050DL 4A被溶解在15ml二氯甲烷中，并通过添加14mg p-硝基苯基氯甲酸酯和9.4mg(～9.6μL)吡啶至溶液中，保持在0℃冰浴(PLGA∶p-硝基苯基氯甲酸酯∶吡啶的化学计量的摩尔比＝1∶2.8∶4.7)而活化。反应在室温中氮氛下进行3小时。用二氯甲烷稀释所得到的溶液并用0.1％HCl和盐水溶液洗涤。分离有机相，对无水硫酸镁干燥，过滤，然后旋转蒸发以得到活化的PLGA聚合物。活化的PLGA(0.4g)被溶解在3mL二甲基甲酰胺(DMF)中，并与4mg阿霉素和2.7mg(～4μL)三乙胺在室温氮氛下反应24小时(活化的PLGA∶阿霉素∶三乙胺的化学计量摩尔比＝1∶1∶4)。通过添加冷的醚而沉淀最终结合的产品，用醚洗涤，过滤，并在真空下干燥。
称重已知量的结合物并溶解在二甲基亚砜(DMSO)中。通过测量溶液在480nm(测定阿霉素吸光度的波长)的吸光度而测定结合作用的程度。使用DMSO中的一系列阿霉素浓度的吸光度标准曲线来测定结合物中的阿霉素量。结合反应的产量是～90％。
(B)纳米核心的合成和纳米核心的扫描电子显微术(图3B)。使用乳剂-溶剂蒸发技术配制纳米核心。简单地说，在室温下使50mgPLGA-DOX完全溶解在2.5mL丙酮中达1小时。这时，添加0.5mL甲醇，通过使用组织匀浆器持续匀浆缓慢注射继之以超声波作用(Misonix，Farmingdale，NY)一分钟而使整个溶液乳化成PVA的水溶液(0.5g/25mL)。乳剂被添加到稀释的PVA水溶液(0.2g/100mL)，在室温下迅速混合3小时以蒸发所有残余的丙酮或甲醇。通过超离心法以8,000，15,000，20,000和22,000RPMs回收纳米核心尺寸组分。来自最小尺寸组分的纳米核心使用手持挤压机(Avestin，Ottawa，ONT)挤压通过100nm膜以获得用于包囊在纳米细胞内的纳米核心。通过动态光散射(Brookhaven Instruments Corp，Holtsville，NY)以及通过SEM(图3B和3E)确定纳米核心的大小。为准备SEM，将纳米核心冻干72小时，随后少量被撒在碳筛上并用金涂布。使用Philips EM以放大率65000X分析颗粒。在合成后2小时内使用所有纳米核心以使聚集减到最小。
为制备周围的基质/纳米壳，从Avanti Polar Lipids(Birmingham，AL)获得胆固醇(CHOL)，卵磷脂胆碱(PC)，和二硬脂酰磷脂酰胆碱-聚乙二醇(m.w.2000)(DSPE-PEG)。从Tocris Cookson(Ellisville，MO)获得Combretastatin A4。所有其它的试剂和溶剂是分析等级的。
通过在圆底烧瓶中将27.5mg脂质溶解在2mL氯仿而制备PC∶CHOL∶DSPE-PEG(2∶1∶0.2摩尔)脂质膜。12.5mg combretastatin A4以0.9∶1的药物∶脂质摩尔比共溶解在氯仿混合物中。使用旋转蒸发器蒸发氯仿以产生单层脂质/药物膜。在65℃振荡一个小时后该膜重悬浮在1mL水中以使combretastatin A4优先包囊在脂双层中。所得到的悬浮液在65℃使用手持挤压机(Avestin，Ottawa，ONT)被挤压通过200nm膜以产生单层脂囊泡。通过动态光散射(Brookhaven Instruments Corp，Holtsville，NY)测定平均泡囊大小。通过使药物/脂质混合物通过含有Sephadex G-25(Pharmacia Biotech)的PD-10柱，以UV在290nm监测combretastatin A4洗脱液而测定包囊效率。
如上所述制备PLGA-DOX纳米核心，通过挤压通过100nm膜，选择～100nm的纳米核心用于包囊在纳米细胞中。在合成CHOL:PC:DSPE-PEG:Combretastatin纳米细胞时，含有250μg阿霉素的纳米核心被添加到含水脂质重悬浮缓冲液中。使用TEM分析混合物以测定包囊效率。纳米核心被冻干72小时，随后少量被撒在碳筛上并用金涂布。使用Philips EM以放大率65000X分析纳米核心(图3B)。
(C)纳米细胞的合成和透射电子显微图像(图3C)。样品被固定在具有5％蔗糖的2.5％戊二醛，3％多聚甲醛的0.1M二甲胂酸钠缓冲液(pH7.4)中，包埋在低温琼脂糖内，并在1％OsO4的佛罗拿-乙酸盐缓冲液中进行后固定。以0.5％乙酸双氧铀的佛罗拿-乙酸盐缓冲液(pH 6.0)将样品整个儿染色过夜。然后脱水和包埋在epon-812树脂中。在Leica超薄切割UCT以70nm厚度使用金刚石刀切割切片，用2.0％乙酸双氧铀继之以0.1％柠檬酸铅染色，使用Philips EM 410检查。动态激光散射实验也证实大小范围在180-220nm之间(图3D和3E)。
(D)物理化学释放动力学研究。装载浓缩药物的纳米细胞被悬浮在1ml PBS或缺氧细胞裂解物缓冲液中，并密封在透析袋内(M.W.截留：10,000，Spectrapor)。所述透析袋在37℃下以温和振动温育在20ml PBS缓冲液。以预定的时间间隔从温育介质中取200μl等份并冷冻存储用于分析。释放的药物通过反相HPLC使用C18柱(4.5mm×150mm，Waters)以乙腈(A)和水(B)作为洗脱剂来定量。起始条件是80％A和20％B以A线性梯度15min至10％A和90％B，以线性梯度5min至0％A和100％B，以及线性梯度5min返回到起始条件，流速1ml/min。标准量的地塞米松被添加作为内部对照用于combretastatain A4和阿霉素的绝对定量。通过在295nm监测波长而检测Combretastatin A4和地塞米松，并通过在480nm监测波长而检测阿霉素。大量combretastatin首先从纳米细胞中释放继之以阿霉素从纳米核心延长和缓释地释放。释放的游离阿霉素的量比阿霉素-PLGA片段的量少，这证明是游离阿霉素和活性的阿霉素PLGA片段，而不是非阿霉素-PLGA寡聚物，起到细胞毒作用(图3F)。
实施例2：开发新的体外分析系统
规程：为安装所述系统，从Cambrex购买收集自三个供体的人脐静脉内皮细胞，并且传代3-6次。在补充有20％胎牛血清(FBS)和bulletkit-2(Sengupta等Cancer Res.63(23)：8351-59，December 1，2003)的内皮细胞基础培养基中生长细胞。对于肿瘤成分，我们使用B16/F10黑色素瘤细胞作为模式细胞系，其被稳定转染以表达绿色荧光蛋白。表达增强的绿色荧光蛋白的质粒(pEGFP-C2，Clontech)线性化后被脂感染(Lipofectamine 2000，Invitrogen)进入B16-F10细胞。通过800μg/mlG418选择稳定整合的B16-F10细胞克隆。通过流式细胞术和表荧光显微镜法进一步证实G418抗性克隆的绿色荧光。GFP-B16/F10细胞通常培养在补充有5％的DMEM中。无菌的玻璃盖玻片(Corning)被涂有matrigel(从鼠Englebreth-Holms肉瘤提取的细胞外基质，1∶3稀释在磷酸盐缓冲液盐水中；Becton Dickinson)或胶原(来自大鼠尾部的I型胶原，BectonDickinson)。同步化的人脐静脉内皮细胞被胰蛋白酶消化，并以2×104细胞每孔的密度铺在盖玻片上。细胞被允许在补充有20％胎牛血清的内皮细胞基础培养基中粘附24小时。在这一时间点，用补充有1％血清的EBM置换培养基，表达绿色荧光蛋白的B16/F10细胞以×103细胞每孔的密度添加到系统中。共培养物允许温育过夜，随后对培养基进行不同的处理。在处理24小时后，细胞被固定在多聚甲醛(4％于冰上，20min)，用碘化丙锭染色。盖玻片配以抗褪色(antifade)，用LSM510 Zeiss共聚焦显微镜分析。使用488nm和543nm激光线激发荧光染料，使用505/30nm和565/615带通滤波器捕获发射光。以512×512像素分辨率捕获图像。使用平面控制点计数法和224-交点直角网对被内皮细胞或GFP-BL 6/F10细胞覆盖的面积进行定量。数据表示为各组分与被细胞覆盖的总面积的比例。
VEGF和HGF对体外肿瘤血管生成的影响(图4)
内皮细胞在铺在matrigel(1∶3稀释)上24小时之内形成有限数量的管状网络。然而，添加肿瘤细胞以建立共培养加速了血管生成过程。GFP+肿瘤细胞被可视化以浓缩成被血管网络围绕和整合的簇。同时添加VEGF和HGF/SF导致血管网络的显著增加。为证实系统的灵敏度以说明特定途径的调节，我们使用VEGF受体拮抗体，PTK787。象期望的那样，VEGF-诱导的血管生成被PTK787阻断，PTK787的浓度对HGF/SF诱导的反应没有影响(图4)。
Combretastatin，反应停和阿霉素对VEGF-或HGF/SF诱导的反应的影响(图5和6)
如图5所示，用阿霉素(10-50μM)温育产生肿瘤细胞以浓度依赖的方式选择性地切除。即使在使用的最高浓度(50mM)，也没有对VEGF-诱导的内皮网络明显的作用。比较起来，反应停和combretastatin产生VEGF-诱导的血管网络的崩溃而不影响肿瘤细胞。
类似于VEGF诱导的共培养试验，在有HGF/SF参与的情况下，阿霉素产生选择性诱导肿瘤细胞死亡(图6)。然而，与VEGF相反，在有反应停或combretastatin参与的情况下，HGF/SF阻止内皮细胞网络的切除(图6)。VEGF-诱导的血管生成的敏感性和HGF/SF针对这两种间接的抗血管生成的保护作用表明在被两种生长因子诱导的细胞内信号水平的功能性差异。
胶原基质对VEGF-或HGF-诱发肿瘤反应的影响(图7-8)
铺在胶原基质上的内皮细胞呈现平坦的“鹅卵石”形态，其不同于当铺在matrigel上时形成的管状网络。此外，黑色素瘤细胞也呈现“散开的”形态，形成粘着斑，并且不形成在matrigel上显见的细胞簇。用阿霉素温育在VEGF-和HGF/SF-处理的共培养中诱发肿瘤细胞死亡(图7，8)。如图7所示，combretastatin和反应停抑制VEGF的血管生成作用。有趣的是，当细胞平铺在matrigel上时观察到HGF/SF的保护作用，但当细胞被被平铺在胶原上时，该作用消失，反应停和combretastatin均诱发内皮细胞死亡(图8)。这些发现强调需要在筛选抗血管生成治疗时掺入细胞外的组分。
实施例3：装载药物的纳米细胞的体外效力(图9)
无菌的玻璃盖玻片(Corning)被涂有matrigel(从鼠Englebreth-Holms肉瘤提取的细胞外基质，1∶3稀释在磷酸盐缓冲液盐水中；Becton Dickinson)或胶原(来自大鼠尾部的I型胶原，BectonDickinson)。同步化的人脐静脉内皮细胞被胰蛋白酶消化，并以2×104细胞每孔的密度铺在盖玻片上。细胞被允许在补充有20％胎牛血清的内皮细胞基础培养基中粘附24小时。在这一时间点，用补充有1％血清的EBM置换培养基，表达绿色荧光蛋白的B16/F10细胞以×103细胞每孔的密度添加到系统中。允许共培养物温育过夜，随后对培养基进行不同的处理。在处理24小时后，细胞被固定在多聚甲醛(4％于冰上，20min)，用碘化丙锭染色。盖玻片配以抗褪色，用LSM510 Zeiss共聚焦显微镜分析。使用488nm和543nm激光线激发荧光染料，使用505/30nm和565/615带通滤波器捕获发射光。以512×512像素分辨率捕获图像。使用平面控制点计数法和224-交点直角网对被内皮细胞或GFP-BL6/F10细胞覆盖的区域进行定量。数据表示为各组分与被细胞覆盖的总面积的比例。
如统计图表所示，用装载阿霉素的纳米核心温育导致黄黑素瘤细胞选择性丢失而不影响血管生成结果。比较起来，用捕获在周围脂类基质中的combretastatin温育导致血管网络选择性丢失，显示其针对内皮细胞的选择性。当用combretastatin和装载阿霉素的纳米细胞培育共培养物，其首先导致内皮细胞的迅速死亡，随后整个共培养物完全丢失。这显示在接近模拟病理生理的模仿中，周围基质中的活化剂(在该情况下是Combretastatin)在该活化剂连接到纳米核心(对于该实施例为阿霉素)前被释放，强调来自于使用纳米细胞的空间-时间作用，和因为其导致完全切除肿瘤而产生较好的效力。
实施例4：体内肿瘤模型(图10)
雄性的C57/BL6小鼠(20g)被注射3×105 YFP-BL6/F10细胞或2.5×105Lewis肺癌细胞至侧腹。定期地监测肿瘤的生长。当肿瘤体积达到50或150mm3时，小鼠被随机分成不同的治疗组。每隔一天通过尾部静脉进行给药，施用3-7次。每天测量肿瘤大小，根据以下公式计算出肿瘤体积：
体积＝3.14/6×长度×宽度2。
在特定时间点处死动物(参见图10和12)，拍摄肿瘤的总体形态，并切除肿瘤用于组织病理学分析。同时，通过心脏穿刺抽取1ml血液，分析治疗方案的毒性谱，因为白血细胞计数对化学治疗的作用最敏感。
照片显示与纳米细胞治疗组的比较，不同的药物制剂和组合对小鼠黑色素瘤生长的影响。用阿霉素-纳米核心和纳米脂质-捕获的Combretastatin治疗导致肿瘤增殖的减少，当彼此结合时具有叠加效应。然而，当以纳米细胞制剂给药时，结果显著优于任何对比组。这支持我们的假设：纳米细胞在破坏血管系统前递送dox-纳米核心至肿瘤。
该图显示不同治疗对血球分类计数和氧血红蛋白水平的影响。观察到纳米细胞治疗组具有最小的毒性，尽管其是最有效的，该事实表明化疗剂(阿霉素)被捕获在肿瘤内而更少量能够渗漏进入体循环，因为血管在化疗剂从纳米核心释放前已经崩溃。
实施例5：不同治疗对肿瘤新生血管的影响(图11)
用纳米核心-阿霉素(ND)治疗对血管系统或血管密度没有影响(见图)，而纳米脂质-胶束Combretastatin(LC)降低血管密度以及使血管系统崩溃。尽管ND+LC是协同作用的，但在该组和使用纳米细胞完成的组之间无显著的差异。这是预期的，因为在两个组中，LC被预期比ND更早起作用。
实施例6：不同治疗对肿瘤细胞凋亡的影响(图12)
经历凋亡的细胞被染为红色，因为它们是TUNEL阳性的。尽管LC+ND和纳米细胞治疗组对肿瘤血管系统具有相同的影响，可以显见后者在肿瘤中诱发更大的细胞凋亡。这解释了在纳米细胞治疗组观察到更好的治疗结果，并且支持这样的假设：作为LC介导的肿瘤血管崩溃的结果，阿霉素从被捕获在肿瘤内部的纳米核心释放。比较起来，LC+ND治疗的切片显示较少的细胞凋亡，因为在大量ND进入肿瘤基质前血管已经崩溃。
实施例7：不同治疗对转移的影响(图13)
黑色素瘤是一种攻击性的肿瘤，其自发转移到肝脏和肺，和其它器官。我们通过评价这些器官中转移淋巴结的数量而评价不同治疗条件对转移到肺(上部图组)和肝脏(下部图组)的影响。这通过计算绿色荧光阳性淋巴结的数量来完成，尽管在统计图表中它们因为绿色荧光与从所有用标记核的染料标记的细胞发射的红色融合而表现为黄色。如所示的那样，用纳米细胞治疗阻止转移到所述两个器官。
实施例8：组织分布研究
纳米细胞被合成为装载有荧光素染色。将纳米细胞通过SephadexG25柱而除去游离荧光素。荧光素-纳米细胞被注射至荷肿瘤的小鼠。在给药后5，10和24小时处死动物。在尸检过程中收集血清，肿瘤，肝脏，肺和脾，从这些组织中用甲醇提取荧光素。使用荧光读板机检测各样品中的荧光素的量，并对组织重量归一化。纳米细胞清楚地积累在肿瘤内，而不积累在其它器官系统(图10F)。
实施例9：用于治疗哮喘的纳米细胞
图15显示开发用于治疗哮喘的纳米细胞的结构和释放动力学谱。电子显微照片显示纳米细胞的超显微结构，其中生物可降解-纳米核心被涂布乳糖壳。皮质类固醇(抗炎剂)被捕获在纳米核心内，而支气管扩张被诱捕在围绕纳米核心的乳糖基质中。该图显示的事实是：支气管扩张剂(柳丁氨醇)在数分钟内被首先释放，而皮质类固醇(地塞米松)以缓慢延迟的方式释放。这种时间释放将首先使哮喘期间收缩的细支气管扩张以允许纳米核心渗透进入肺的深部。随后的缓慢释放将阻断在急性哮喘事件之后的慢性炎症。
其它的实施方案
前文已经描述了本发明的某些非限制性的优选实施方案。本领域技术人员将理解对以上描述可以进行各种变化和修饰而不背离在权利要求中定义的本发明的精神或范围。

Claims (110)

1.一种颗粒，包含位于脂囊泡内的纳米颗粒，其中纳米颗粒包含第一试剂；以及脂囊泡包含第二试剂。
2.一种颗粒，包含包囊在基质中的纳米颗粒，其中纳米颗粒包含第一试剂；以及基质包含第二试剂。
3.权利要求1或2所述的颗粒，其中第一试剂是多种试剂的组合。
4.权利要求1或2所述的颗粒，其中第二试剂是多种试剂的组合。
5.权利要求1或2所述的颗粒，其中所述试剂是药剂、诊断剂或预防剂。
6.权利要求1或2所述的颗粒，其中所述试剂是药剂。
7.权利要求1或2所述的颗粒，其中第一试剂和第二试剂的作用模式不同。
8.权利要求1或2所述的颗粒，其中第一试剂和第二试剂的药物动力学不同。
9.权利要求1或2所述的颗粒，其中第一试剂和第二试剂的细胞靶不同。
10.权利要求1或2所述的颗粒，其中第一试剂和第二试剂的分子靶或细胞靶不同。
11.权利要求1或2所述的颗粒，其中第一和第二药剂各自独立地是小分子，多核苷酸，反义试剂，RNAi，多糖，寡糖，糖类，脂质，蛋白质，肽，金属，有机化合物，有机金属化合物，或无机化合物。
12.权利要求1或2所述的颗粒，其中第二药剂比第一药剂更快起作用。
13.权利要求1或2所述的颗粒，其中第一药剂是抗肿瘤剂或细胞毒试剂，而第二药剂是抗血管生成剂。
14.权利要求13所述的颗粒，其中抗肿瘤剂选自烷基化剂，抗代谢物，天然产物，抗生素，酶，类固醇，和有机金属络合物。
15.权利要求13所述的颗粒，其中抗肿瘤剂选自二氯甲二乙胺，环磷酰胺，异环磷酰胺，美法仑，瘤可宁，六甲密胺，硫替派，白血福恩，卡莫司汀，环己亚硝脲，赛氮芥，链脲霉素，甲氮咪胺，顺铂，卡铂，米尔法兰，二氯甲二乙胺，双氯乙基亚硝基脲，氯乙基-环己基亚硝基脲，甲氨蝶呤，5-氟尿嘧啶(5FU)，阿糖胞苷，6-巯基嘌呤，6-硫鸟嘌呤，FudR，喷司他丁，羟基脲，阿霉素，争光霉素，丝裂霉素C，放线菌素，紫杉醇，epothilone，长春新碱，长春碱，依托泊甙，替尼泊甙，放线菌素D，柔红霉素，阿霉素，普卡霉素，L-天冬酰胺酶，肝素酶，软骨素酶，干扰素α，干扰素β，干扰素γ，肿瘤坏死因子，米托蒽醌，双氯乙基亚硝基脲，4-二甲基-表鬼臼脂素亚乙基，强的松，二乙基己烯雌酚，甲羟基孕酮，他莫昔芬，普鲁苄肼，氨基苯乙哌啶酮，孕激素，雄激素，抗雄激素，亮丙瑞林，蛋白酶体抑制剂，PS 341，HSP 90抑制剂，格尔德霉素，组蛋白脱乙酰基酶抑制剂，和蛋白激酶抑制剂。
16.权利要求13所述的颗粒，其中抗血管生成剂直接作用于内皮细胞以抑制血管生成。
17.权利要求13所述的颗粒，其中抗血管生成剂选自血管他丁，avastin，arrestin，canstatin，combretastatin，内皮他丁，NM3，血小板反应蛋白，tumstatin，2-甲氧雌甾二醇，2-甲氧雌甾二醇衍生物，vitaxin，和其衍生物。
18.权利要求13所述的颗粒，其中抗血管生成剂分类为间接作用。
19.权利要求18所述的颗粒，其中间接作用的抗血管生成剂选自EGF受体酪氨酸激酶抑制剂，VEGF受体拮抗体，HER-2/neu受体酪氨酸激酶抑制剂，PDGF受体拮抗体，MAPK途径抑制剂，和PI3K途径抑制剂。
20.权利要求18所述的颗粒，其中间接作用的抗血管生成剂选自Iressa，ZD 6474，Tarceva，Erbitux，PTK 787，SU 6668，Herceptine，干扰素α，和SU 11248。
21.权利要求1或2所述的颗粒，其中第一试剂是抗炎剂，而第二试剂是抗血管生成剂。
22.权利要求21所述的颗粒，其中抗炎剂选自非类固醇抗炎药物，类固醇，脂加氧酶抑制剂，和肥大细胞稳定剂。
23.权利要求1或2所述的颗粒，其中第一试剂是抗炎剂，而第二试剂是支气管扩张剂。
24.权利要求23所述的颗粒，其中抗炎剂选自非类固醇抗炎药物，类固醇，脂加氧酶抑制剂，和肥大细胞稳定剂。
25.权利要求23所述的颗粒，其中支气管扩张剂是β-肾上腺素受体激动剂。
26.权利要求23所述的颗粒，其中第一试剂是皮质类固醇，而第二试剂是β-肾上腺素受体激动剂。
27.权利要求1或2所述的颗粒，其中第一试剂是缓解病情抗风湿药物(DMARD)，而第二试剂是抗血管生成剂。
28.权利要求1或2所述的颗粒，其中第一试剂是生长因子，而第二试剂是另一种不同的生长因子，以及其中生长因子的空间/时间释放导致信号途径的协同调节。
29.权利要求1或2所述的颗粒，其中第一试剂抑制信号途径，而第二试剂影响不同的途径或相同途径中不同的信号。
30.权利要求1或2所述的颗粒，其中第一试剂是神经刺激剂，而第二试剂是离液剂。
31.权利要求1或2所述的颗粒，其中第一试剂是神经刺激剂，而第二试剂使血脑屏障更有渗透性。
32.权利要求30所述的颗粒，其中第二试剂使血脑屏障对第一试剂更容易渗透。
33.权利要求2所述的颗粒，其中基质包含多糖，糖类，蛋白质，聚合物，糖蛋白，糖脂，或其衍生物或组合。
34.权利要求33所述的颗粒，其中糖类选自乳糖，葡萄糖胺聚糖，蔗糖，麦芽糖，半乳糖，葡萄糖，鼠李糖，唾液酸，淀粉，纤维素，及其衍生物和组合。
35.权利要求1或2所述的颗粒，其中纳米颗粒最大维度的大小范围从5-10,000nm。
36.权利要求1或2所述的颗粒，其中纳米颗粒最大维度的大小范围从10-800nm。
37.权利要求1或2所述的颗粒，其中纳米颗粒最大维度的大小范围从10-500nm。
38.权利要求1或2所述的颗粒，其中纳米颗粒最大维度的大小范围从50-250nm。
39.权利要求1或2所述的颗粒，其中纳米颗粒是纳米线，量子点，或纳米管。
40.权利要求1或2所述的颗粒，其中纳米颗粒基本上是固体而不是脂质体。
41.权利要求1或2所述的颗粒，其中颗粒最大维度的大小范围从10nm到500,000nm。
42.权利要求1或2所述的颗粒，其中颗粒最大维度的大小范围从50nm到100μm。
43.权利要求1或2所述的颗粒，其中颗粒最大维度的大小范围从500nm到50μm。
44.权利要求1或2所述的颗粒，其中颗粒最大维度的大小范围从20nm到1000nm。
45.权利要求1或2所述的颗粒，其中颗粒最大维度的大小范围从50nm到1000nm。
46.权利要求1或2所述的颗粒，其中颗粒最大维度的大小范围从50nm到500nm。
47.权利要求1或2所述的颗粒，其中纳米颗粒包含聚合物。
48.权利要求47所述的颗粒，其中聚合物是生物相容性的。
49.权利要求47所述的颗粒，其中聚合物是生物可降解的。
50.权利要求47所述的颗粒，其中聚合物是天然聚合物。
51.权利要求47所述的颗粒，其中聚合物是合成聚合物。
52.权利要求47所述的颗粒，其中聚合物选自聚酯，聚酰胺，聚碳酸酯，聚氨基甲酸酯，聚脲，聚醚，聚硫醚，和聚胺。
53.权利要求47所述的颗粒，其中聚合物是共聚物。
54.权利要求47所述的颗粒，其中聚合物从选自以下的单体合成：D，L-丙交酯，D-丙交酯，L-丙交酯，D，L-乳酸，D-乳酸，L-乳酸，乙交酯，乙醇酸，ε-己内酯，ε-羟基己酸，γ-丁内酯，γ-羟基丁酸，δ-戊内酯，δ-羟基戊酸，羟丁酸和苹果酸。
55.权利要求47所述的颗粒，其中聚合物是聚乙二醇。
56.权利要求47所述的颗粒，其中聚合物选自聚(磷酸酯)，聚(亚磷酸酯)，聚(膦酸酯)，用聚(羧酸)改性的聚(磷酸酯)，聚(苯基新羧酸亚磷酸酯)，环状环亚烷基磷酸酯，环状亚芳基磷酸酯，聚羟基氯丙基磷酸-磷酸酯，二次膦酸酯，聚(苯基膦酸酯)，聚(三苯二甲酸膦酸酯)(poly(terphthalate phosphanates))，聚(胺基羧酸)，磷酸的直链饱和聚酯，聚酯膦酸酯，具有含磷部分的聚亚芳基酯，或聚(磷酸酯-氨基甲酸乙酯)，聚(磷酸酯)，聚(亚磷酸酯)，和聚(膦酸酯)。
57.权利要求47所述的颗粒，其中聚合物是PLGA。
58.权利要求1或2所述的颗粒，其中第一试剂在整个纳米颗粒中发现。
59.权利要求1或2所述的颗粒，其中第一试剂只在纳米颗粒内部发现，而不在纳米颗粒的表面上发现。
60.权利要求47所述的颗粒，其中第一试剂共价连接到聚合物。
61.权利要求1或2所述的颗粒，其中所述试剂与聚乙二醇结合。
62.权利要求47所述的颗粒，其中第一试剂电共价连接到聚合物。
63.权利要求47所述的颗粒，其中第一试剂通过接头偶联到聚合物。
64.权利要求63所述的颗粒，其中接头对酶的切割敏感。
65.权利要求64所述的颗粒，其中在第一试剂作用位点，接头对酶切割敏感。
66.权利要求1所述的颗粒，其中脂囊泡还包含选自以下的脂类：磷酸甘油脂；磷脂酰胆碱；二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)；二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)；二油酰氧基丙基三乙基铵(DOTMA)；二油酰磷脂酰胆碱；胆固醇；胆固醇酯；二酰甘油；二酰基甘油琥珀酸酯；双磷脂酰甘油(DPPG)；己烷癸醇；己烷癸醇，1，2-二酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)]，其中所述酰基是二油酰，二硬脂酰，二棕榈酰，或二肉豆蔻酰，和其中所述聚乙二醇范围从350到5000g/mol；联乙炔磷脂；脂肪醇；聚乙二醇(PEG)；聚氧乙烯-9-月桂基醚；表面活性的脂肪酸；棕榈酸；油酸；脂肪酸；脂肪酸酰胺；去水山梨糖醇三油酸酯(Span 85)甘氨胆酸；表面活性素；poloxomer；去水山梨糖醇脂肪酸酯；去水山梨糖醇三油酸酯；卵磷脂；溶血卵磷脂；磷脂酰丝氨酸；磷脂酰肌醇；鞘磷脂；磷酯酰乙醇胺(脑磷酯)；心脂；磷脂酸；脑糖苷；二十六烷基磷酸酯；二棕榈酰磷脂酰甘油；十八胺；十二烷胺；十六烷基胺；乙酰棕榈酸酯；甘油基蓖麻醇酸酯；十六烷基硬脂酸酯；异丙基豆蔻酸酯；泰洛沙泊；聚(乙二醇)5000-磷酯酰乙醇胺；磷脂；官能化磷脂；1，2-二油酰-sn-甘油基-3-琥珀酸酯；磷脂酰肌醇；磷脂酰丝氨酸；磷脂酰甘油；磷脂酸；双磷脂酰甘油；聚(乙二醇)-磷脂酰乙醇胺；二肉豆蔻酰磷脂酰甘油；二油酰磷脂酰甘油；二月桂酰磷脂酰甘油；二棕榈酰磷脂酰甘油；二硬脂酰磷脂酰甘油；二肉豆蔻酰磷脂酸；二棕榈酰磷脂酸；二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸；二棕榈酰磷脂酰丝氨酸；磷脂酰丝氨酸；两性离子的磷脂；磷脂酰胆碱；磷脂酰乙醇胺；鞘磷脂；卵磷脂；溶血卵磷脂；溶血磷脂酰乙醇胺；脑糖苷；二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱；二棕榈酰磷脂酰胆碱；二硬脂酰磷脂酰胆碱；二反油酰磷脂酰胆碱；二油酰磷脂酰胆碱；二月桂酰磷脂酰胆碱；1-肉豆寇酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱；1-棕榈酰-2-肉豆寇酰磷脂酰胆碱；1-棕榈酰-磷脂酰胆碱；1-硬脂酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱；二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺；二棕榈酰磷脂酰乙醇胺；脑鞘磷脂；二棕榈酰鞘磷脂；二硬脂酰鞘磷脂)；阳离子脂类；甾醇；胆固醇；胆固醇衍生物；胆固醇酯；维生素D；植物固醇；类固醇激素；胆固醇-磷酸胆碱，胆固醇聚乙二醇；胆固醇-SO4；植物固醇；谷固醇；camposterol；豆固醇；和其混合物。
67.权利要求1或2所述的颗粒，其中一个纳米颗粒被包含在颗粒中。
68.权利要求1或2所述的颗粒，其中超过一个纳米颗粒被包含在颗粒中。
69.权利要求1或2所述的颗粒，其中所述颗粒被涂布。
70.权利要求1或2所述的颗粒，其中所述颗粒被涂布有聚乙二醇。
71.权利要求1或2所述的颗粒，其中所述颗粒还包含靶向剂。
72.权利要求71所述的颗粒，其中靶向剂选自抗体，抗体片段，受体，糖蛋白，和多糖。
73.一种药物组合物，包含治疗有效量的权利要求1或2所述的颗粒。
74.权利要求73所述的药物组合物，还包含药物可接受的赋形剂。
75.一种制备颗粒的方法，所述颗粒包含位于脂囊泡内纳米颗粒，所述方法包括以下步骤：
提供包含第一试剂的纳米颗粒；
提供脂类；
提供第二试剂；和
在含有第二试剂的脂囊泡内包囊纳米颗粒。
76.权利要求75所述的方法，其中所述提供纳米颗粒的步骤包括以下步骤：
提供聚合物；
提供第一药剂；和
通过喷雾干燥，双乳剂技术，相转化技术制备纳米颗粒。
77.一种给药颗粒的方法，所述颗粒包含位于脂囊泡内的纳米颗粒，所述方法包括以下步骤：
提供颗粒，其中所述颗粒包含纳米颗粒，所述纳米颗粒具有包囊在脂囊泡内的第一试剂，该脂囊泡装载有第二试剂；和
给药治疗有效量的颗粒到需要的受试者。
78.权利要求77所述的方法，由此两种试剂被同时给药但是获得顺序的时间或空间效应。
79.权利要求77所述的方法，由此试剂被同时给药但是获得顺序的时间或空间效应，且至少一种试剂的毒性被降低。
80.权利要求77所述的方法，由此试剂被同时给药但是获得顺序的时间或空间效应，且至少一种试剂的效力被提高。
81.权利要求77所述的方法，由此至少一种试剂在作用位置的效力被提高，和至少一种试剂的全身性毒性被降低。
82.权利要求80所述的方法，其中效力的增加是由于试剂生物利用度的增加。
83.权利要求77所述的方法，其中两种试剂的作用是协同的。
84.权利要求77所述的方法，由此至少一种试剂活性的增强是由于试剂靶向造成病理体况的不同步骤或事件。
85.权利要求77所述的方法，由此至少一种试剂活性的增强是由于试剂在作用位置的局部生物利用度增加，其中局部生物利用度增加是由于另一种试剂的活性。
86.权利要求77所述的方法，由此至少一种试剂毒性的降低是由于作用位置的局部生物利用度增加，而局部生物利用度的增加是由于另一种试剂的活性引起的。
87.权利要求77所述的方法，由此至少一种试剂毒性的降低是由于全身性生物利用度的降低，其中所述降低是由于另一种试剂的活性。
88.权利要求77所述的方法，其中给药步骤包括以口服，胃肠外，静脉内，吸入，肌内，皮下，直肠，鞘内，鼻，阴道，皮内，粘膜，或透皮的方式给药所述颗粒。
89.权利要求77所述的方法，其中给药步骤包括使用雾化器，转动推进器或盘式推进器给药所述颗粒。
90.一种治疗癌症的方法，所述方法包括以下步骤：
提供权利要求1，2，13，14，15，16，17，18，19或20的颗粒；和
给药治疗有效量的颗粒到患有癌症的受试者。
91.一种治疗关节炎或强直性脊柱炎的方法，所述方法包含以下步骤：
提供权利要求1，2，21，22，或27的颗粒；和
给药治疗有效量的颗粒到患有关节炎或强直性脊柱炎的受试者。
92.一种治疗中枢神经系统(CNS)紊乱的方法，所述方法包括以下步骤：
提供权利要求1，2，30，31或32的颗粒；和
给药治疗有效量的颗粒到患有CNS紊乱的受试者。
93.权利要求92所述的方法，其中CNS紊乱是癫痫；而第一治疗剂是抗癫痫发作试剂。
94.一种治疗哮喘或慢性阻塞性肺病(COPD)的方法，所述方法包含以下步骤：
提供权利要求1，2，23，24，25，或26的颗粒；和
给药治疗有效量的颗粒到患有哮喘的受试者。
95.一种治疗银屑癣的方法，所述方法包括以下步骤：
提供权利要求1，2，21或22的颗粒，其中第一试剂是抗银屑癣试剂；和第二试剂是抗血管生成剂；和
给药治疗有效量的颗粒到患有银屑癣的受试者。
96.一种治疗视网膜病变的方法，所述方法包括以下步骤：
提供权利要求1或2的颗粒，其中第一试剂是抗血管生成剂，而第二试剂是吸收促进剂；和
给药治疗有效量的颗粒到患有视网膜病变的受试者。
97.一种分析药剂的方法，所述方法以下步骤：
提供至少一种稳定地转染以表达荧光蛋白质的肿瘤细胞；
提供至少一种原代内皮细胞；
提供细胞外基质，肿瘤和内皮细胞在其上生长；
提供测试化合物；
将测试化合物与在基质上生长的细胞接触；和
检测荧光蛋白质表达的改变。
98.权利要求97所述的方法，其中在肿瘤细胞被接种在基质上之前，内皮细胞被接种在细胞外基质上。
99.权利要求97所述的方法，其中检测的步骤包括用活体染料使细胞染色。
100.权利要求97所述的方法，其中检测的步骤包括用荧光染料使细胞染色，其中染料的发射与荧光蛋白质的不同。
101.权利要求99所述的方法，其中染料是碘化丙锭。
102.权利要求97所述的方法，其中检测的步骤包括使用落谢荧光显微镜或共聚焦显微镜方法，体视学或微量培养板读板机分析和定量不同颜色细胞的数量。
103.权利要求97所述的方法，其中细胞外基质包括胶原。
104.权利要求97所述的方法，其中细胞外基质是matrigel。
105.权利要求97所述的方法，其中细胞外基质包含纤维连接蛋白。
106.权利要求97所述的方法，其中细胞外基质包含层粘连蛋白。
107.权利要求97所述的方法，其中细胞外基质包含玻连蛋白。
108.权利要求97所述的方法，其中细胞外基质是合成的基质。
109.权利要求97所述的方法，其中细胞外基质包含聚赖氨酸。
110.一种试剂盒，包括稳定地转染有荧光蛋白的肿瘤细胞，内皮细胞，涂有细胞外基质的细胞培养板，和标记染料。
CNA2005800130659A 2004-03-02 2005-03-02 纳米细胞药物递送系统 Pending CN101031287A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US54928004P 2004-03-02 2004-03-02
US60/549,280 2004-03-02

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101031287A true CN101031287A (zh) 2007-09-05

Family

ID=34919462

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2005800130659A Pending CN101031287A (zh) 2004-03-02 2005-03-02 纳米细胞药物递送系统

Country Status (8)

Country Link
US (5) US20050266067A1 (zh)
EP (1) EP1722762A2 (zh)
JP (2) JP2007526322A (zh)
CN (1) CN101031287A (zh)
AU (1) AU2005219413A1 (zh)
CA (1) CA2558263A1 (zh)
IL (1) IL177785A0 (zh)
WO (1) WO2005084710A2 (zh)

Cited By (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102238998A (zh) * 2008-10-07 2011-11-09 阿夸兹有限公司 由囊泡-线结合体形成的生物模拟膜
CN103110959A (zh) * 2013-02-19 2013-05-22 中国人民解放军第三军医大学第二附属医院 一种甘油二酯激酶α基因-壳聚糖纳米粒在制备治疗过敏性哮喘药物中应用
CN103442677A (zh) * 2011-01-24 2013-12-11 耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展有限公司 用于药物的经皮递送和全身性递送的纳米粒子
CN103865056A (zh) * 2012-12-17 2014-06-18 张雅珍 含有多柔比星结构的非线性聚合物以及制备方法和用途
CN103910873A (zh) * 2013-01-04 2014-07-09 张雅珍 含有多柔比星结构的星形聚合物以及制备方法和用途
CN103910870A (zh) * 2012-12-28 2014-07-09 张雅珍 蒽环类抗生素偶联非线性多嵌段共聚物及其制备方法和应用
CN103910867A (zh) * 2012-12-31 2014-07-09 张雅珍 含有多柔比星结构的非线性聚合物以及制备方法和用途
CN103910872A (zh) * 2013-01-04 2014-07-09 张雅珍 含有多柔比星结构的星形聚合物以及制备方法和用途
CN104000833A (zh) * 2014-03-07 2014-08-27 江西赣南海欣药业股份有限公司 一种维生素d2和果糖酸钙注射剂组合物及其制备方法
CN104168903A (zh) * 2011-12-22 2014-11-26 埃斯特韦实验室有限公司 用于治疗由包膜病毒导致的疾病的方法和组合物
CN105164143A (zh) * 2013-03-14 2015-12-16 杰罗米.J.申塔格 用于将分子引入到乳糜微粒中的胆固醇体囊泡
CN105418947A (zh) * 2015-12-04 2016-03-23 南开大学 一种程序控制组装的荧光聚合囊泡及其制备方法
CN105832670A (zh) * 2015-12-28 2016-08-10 四川大学 一种利用诱导脂质体融合来制备双载或多载脂质体的技术
CN106995783A (zh) * 2016-01-22 2017-08-01 上海交通大学 细胞电转染装置及其应用
CN103897177B (zh) * 2012-12-24 2017-08-29 张雅珍 蒽环类抗生素偶联非线性多嵌段共聚物及其制备方法和应用
CN107441043A (zh) * 2017-08-01 2017-12-08 南开大学 一种pH敏感性混合胶束及其制备方法与应用
CN108136023A (zh) * 2015-08-12 2018-06-08 北卡罗莱纳州立大学 血小板膜包覆的药物递送系统
CN108175861A (zh) * 2016-12-08 2018-06-19 暨南大学 一种抗肿瘤小核酸药物的递送系统及其应用
CN109045272A (zh) * 2018-08-01 2018-12-21 厦门市壳聚糖生物科技有限公司 一种硼替佐米磷脂复合物及其制备方法与应用
CN109293927A (zh) * 2009-02-04 2019-02-01 布里格姆及妇女医院股份有限公司 纳米级铂化合物及其使用方法
WO2020114390A1 (en) * 2018-12-03 2020-06-11 Master Dynamic Limited Nanoparticle Delivery System
CN111437269A (zh) * 2020-04-21 2020-07-24 中国医学科学院北京协和医院 一种治疗系统性红斑狼疮的药物
CN111700883A (zh) * 2020-07-23 2020-09-25 深圳大佛药业股份有限公司 一种硫酸沙丁胺醇缓释型吸入制剂及其生产工艺
CN112076158A (zh) * 2020-08-28 2020-12-15 西南民族大学 一种治疗慢性肾炎的脂质体-纳米粒复合体
CN115192542A (zh) * 2019-11-04 2022-10-18 四川大学 一种利用小分子营养物质介导的口服纳米递药系统

Families Citing this family (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6346510B1 (en) 1995-10-23 2002-02-12 The Children's Medical Center Corporation Therapeutic antiangiogenic endostatin compositions
US6962699B2 (en) * 2002-06-03 2005-11-08 Massachusetts Institute Of Technology Rationally designed polysaccharide lyases derived from chondroitinase B
WO2005084710A2 (en) * 2004-03-02 2005-09-15 Massachusetts Institute Of Technology Nanocell drug delivery system
US20070053845A1 (en) * 2004-03-02 2007-03-08 Shiladitya Sengupta Nanocell drug delivery system
JP2007529426A (ja) 2004-03-12 2007-10-25 エントレメッド インコーポレイテッド 抗血管新生薬
CN101010137B (zh) * 2004-05-13 2011-02-02 国立大学法人北海道大学 微细碳分散体
WO2006099334A2 (en) 2005-03-11 2006-09-21 Wake Forest University Health Sciences Production of tissue engineered heart valves
US7531503B2 (en) * 2005-03-11 2009-05-12 Wake Forest University Health Sciences Cell scaffold matrices with incorporated therapeutic agents
WO2006099372A2 (en) * 2005-03-11 2006-09-21 Wake Forest University Health Sciences Tissue engineered blood vessels
WO2006099332A2 (en) 2005-03-11 2006-09-21 Wake Forest University Health Sciences Production of tissue engineered digits and limbs
US20060204445A1 (en) * 2005-03-11 2006-09-14 Anthony Atala Cell scaffold matrices with image contrast agents
US20060204539A1 (en) 2005-03-11 2006-09-14 Anthony Atala Electrospun cell matrices
JP2008533157A (ja) * 2005-03-14 2008-08-21 マサチューセッツ・インスティテュート・オブ・テクノロジー 疾患および障害の診断および処置のためのナノセル
US20080015640A1 (en) * 2006-06-28 2008-01-17 Kaiser Daniel E Method for histogenesis and enhancement of tissue
JP2009504803A (ja) 2005-08-22 2009-02-05 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア Ｔｌｒアゴニスト
US20090162277A1 (en) * 2005-11-03 2009-06-25 Clemson University Lysophospholipids Solubilized Single-Walled Carbon Nanotubes
DK1969031T3 (da) 2005-12-05 2009-09-14 Nitto Denko Corp Polyglutamat-aminosyre-konjugater og fremgangsmåder
JP2009530388A (ja) 2006-03-20 2009-08-27 エントレメッド インコーポレイテッド ２−メトキシエストラジオールの疾患修飾性抗関節炎活性
MXPA06007070A (es) * 2006-03-24 2007-09-24 Univ Kyushu Compuestos organicos.
CA2653941C (en) * 2006-05-31 2013-01-08 The Regents Of The University Of California Substituted amino purine derivatives and uses thereof
JP2009542691A (ja) 2006-07-06 2009-12-03 ザ トラスティーズ オブ コロンビア ユニヴァーシティ イン ザ シティ オブ ニューヨーク 血管造影用の様々なサイズの多染性粒子
ITMI20061545A1 (it) * 2006-08-02 2008-02-03 Mediolanum Pharmaceuticals Ltd Particelle in grado di rilasciare il principio attivo per un periodo prolungato di tempo
WO2008021908A2 (en) * 2006-08-08 2008-02-21 Board Of Regents Of The University Of Texas Multistage delivery of active agents
ITMI20062290A1 (it) * 2006-11-28 2008-05-29 Monteres S R L Compresse stabili allo stoccaggio a base di derivati del benzimidazolo rivestite con film gastro-resistente
JP5425642B2 (ja) 2007-02-07 2014-02-26 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 合成ｔｌｒアゴニストの結合体およびそのための使用
EP1958615A1 (en) * 2007-02-13 2008-08-20 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Solid pharmaceutical formulations of a homogeneous dispersion of active principles having pH-dependent solubility
JP2008214324A (ja) * 2007-02-28 2008-09-18 Hokkaido Univ ミセル封入リポソーム
JP5341879B2 (ja) 2007-05-09 2013-11-13 日東電工株式会社 疎水性化合物及びポリアミノ酸複合体を含む組成物
JP2010526917A (ja) * 2007-05-09 2010-08-05 日東電工株式会社 複数種の薬物を有するポリグルタミン酸塩複合体及びポリグルタミン酸塩−アミノ酸複合体
TW200846031A (en) * 2007-05-25 2008-12-01 Shu-Yi Lin Drug delivery system and the preparing method thereof
US8450481B2 (en) 2007-06-14 2013-05-28 The Regents Of The University Of California Compounds for inhibiting protein aggregation, and methods for making and using them
US20080317768A1 (en) 2007-06-21 2008-12-25 Boeing Company Bioconjugated nanoparticles
WO2009026328A2 (en) * 2007-08-21 2009-02-26 Immune Disease Institute, Inc. Methods of delivery of agents to leukocytes and endothelial cells
WO2009052454A2 (en) 2007-10-19 2009-04-23 University Of California Compositions and methods for ameliorating cns inflammation, psychosis, delirium, ptsd or ptss
CA2705862C (en) 2007-11-16 2018-03-27 San Diego State University Research Foundation Compositions and method for manipulating pim-1 activity in circulatory system cells
US20100248260A1 (en) * 2007-12-05 2010-09-30 Massachusetts Institute Of Technology Glycosaminoglycan-coated particles and uses thereof
AU2009210655B2 (en) * 2008-02-07 2013-08-15 Telormedix Sa Treatment of bladder diseases with a TLR7 activator
WO2009143478A2 (en) * 2008-05-22 2009-11-26 Larry Mark Weisenthal Efficient wellbeing assessment and improved treatment protocol
WO2010005726A2 (en) 2008-06-16 2010-01-14 Bind Biosciences Inc. Therapeutic polymeric nanoparticles with mtor inhibitors and methods of making and using same
SI2285350T1 (en) * 2008-06-16 2018-03-30 Pfizer Inc. Methods for the preparation of diblock copolymers functionalized with targeting agent for use in the manufacture of therapeutic nanoparticles
EP2309991B1 (en) 2008-06-16 2019-03-06 Pfizer Inc Therapeutic polymeric nanoparticles comprising vinca alkaloids and methods of making and using same
PL2774608T3 (pl) 2008-06-16 2020-05-18 Pfizer Inc. Polimerowe nanocząstki napełnione lekiem oraz sposoby ich wytwarzania i zastosowania
WO2010059253A2 (en) * 2008-11-24 2010-05-27 Massachusets Institute Of Technology Methods and compositions for localized agent delivery
US8563041B2 (en) * 2008-12-12 2013-10-22 Bind Therapeutics, Inc. Therapeutic particles suitable for parenteral administration and methods of making and using same
US20100216804A1 (en) 2008-12-15 2010-08-26 Zale Stephen E Long Circulating Nanoparticles for Sustained Release of Therapeutic Agents
WO2010091187A2 (en) * 2009-02-04 2010-08-12 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Polymeric nanoparticles with enhanced drug-loading and methods of use thereof
WO2010088924A1 (en) 2009-02-06 2010-08-12 Telormedix Sa Pharmaceutical compositions comprising imidazoquinolin(amines) and derivatives thereof suitable for local administration
SG173617A1 (en) * 2009-02-11 2011-09-29 Univ California Toll-like receptor modulators and treatment of diseases
BRPI1014854A2 (pt) * 2009-03-30 2016-05-03 Cerulean Pharma Inc "conjugados polímero-agente, partículas, composições, e métodos de uso relacionados"
WO2010114768A1 (en) * 2009-03-30 2010-10-07 Cerulean Pharma Inc. Polymer-epothilone conjugates, particles, compositions, and related methods of use
US20120135064A1 (en) * 2009-05-27 2012-05-31 Northeastern University Conjugated nanodelivery vehicles
US8747890B2 (en) * 2009-11-19 2014-06-10 Signpath Pharma Inc. Intravenous infusion of curcumin and a calcium channel blocker
CN102811743B (zh) 2009-12-11 2015-11-25 佰恩德治疗股份有限公司 冻干治疗颗粒的稳定制剂
WO2011084513A2 (en) 2009-12-15 2011-07-14 Bind Biosciences, Inc. Therapeutic polymeric nanoparticle compositions with high glass transition temperature or high molecular weight copolymers
EP2512487A4 (en) * 2009-12-15 2013-08-07 THERAPEUTIC POLYMERNANOPARTICLES WITH CORTICOSTEROIDS AND METHOD FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF
GB0922066D0 (en) * 2009-12-17 2010-02-03 Univ Belfast Modulator
EP2525782B1 (en) * 2010-01-18 2019-03-13 Concept Medical Research Private Limited Formulations of nano-carriers and methods of preparing the same
US20110229556A1 (en) * 2010-03-19 2011-09-22 Massachusetts Institute Of Technology Lipid-coated polymer particles for immune stimulation
US9149432B2 (en) 2010-03-19 2015-10-06 Massachusetts Institute Of Technology Lipid vesicle compositions and methods of use
CA2793604C (en) * 2010-03-19 2015-10-06 Massachusetts Institute Of Technology Lipid vesicle compositions and methods of use
CA2800497C (en) * 2010-05-10 2019-03-12 The Regents Of The University Of California Methods for preparing ratiometric combinatorial nanoparticules
KR101130754B1 (ko) * 2010-06-25 2012-03-28 제일약품주식회사 난용성 트리사이클릭 유도체 화합물의 용해도가 향상된 약학적 조성물
US10117881B2 (en) 2011-06-03 2018-11-06 Signpath Pharma, Inc. Protective effect of DMPC, DMPG, DMPC/DMPG, LYSOPG and LYSOPC against drugs that cause channelopathies
GB2507884B (en) 2011-06-03 2019-10-23 Signpath Pharma Inc Liposomal mitigation of drug-induced long QT syndrome and potassium delayed-rectifier current
US10238602B2 (en) 2011-06-03 2019-03-26 Signpath Pharma, Inc. Protective effect of DMPC, DMPG, DMPC/DMPG, LysoPG and LysoPC against drugs that cause channelopathies
US10349884B2 (en) 2011-06-03 2019-07-16 Sighpath Pharma Inc. Liposomal mitigation of drug-induced inhibition of the cardiac ikr channel
US10449193B2 (en) 2011-06-03 2019-10-22 Signpath Pharma Inc. Protective effect of DMPC, DMPG, DMPC/DMPG, lysoPG and lysoPC against drugs that cause channelopathies
WO2013025846A2 (en) * 2011-08-17 2013-02-21 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Transferrin-tumstatin fusion protein and methods for producing and using the same
US9526701B2 (en) 2011-12-20 2016-12-27 Keith R. Latham Sustained drug release and improved product stability using non-covalent particle coating methods
JP5959248B2 (ja) * 2012-03-15 2016-08-02 オリンパス株式会社 細胞間相互作用を検出する方法
US9827191B2 (en) 2012-05-03 2017-11-28 The Johns Hopkins University Compositions and methods for ophthalmic and/or other applications
WO2013166385A1 (en) 2012-05-03 2013-11-07 Kala Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical nanoparticles showing improved mucosal transport
JP6360040B2 (ja) 2012-05-03 2018-07-18 カラ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 粘液浸透性被覆粒子、組成物、医薬組成物、医薬製剤、及びそれらの形成方法
US11596599B2 (en) 2012-05-03 2023-03-07 The Johns Hopkins University Compositions and methods for ophthalmic and/or other applications
US20150174209A1 (en) 2012-05-25 2015-06-25 Amylin Pharmaceuticals. Llc Insulin-pramlintide compositions and methods for making and using them
CA2882978A1 (en) 2012-08-31 2014-03-06 University Of North Texas Health Science Center Curcumin-er, a liposomal-plga sustained release nanocurcumin for minimizing qt prolongation for cancer therapy
TR201909389T4 (tr) 2012-09-17 2019-07-22 Pfizer Terapötik nanopartikülleri hazırlamaya yönelik proses.
JP2015536319A (ja) * 2012-10-16 2015-12-21 ウィリアム・マーシュ・ライス・ユニバーシティ 薬剤耐性を克服するための改善されたナノベクターベースの薬物送達システム
EP2756842A1 (en) * 2013-01-18 2014-07-23 Nano and Advanced Materials Institute Limited Synthesis and use of Polyhydroxyalkanoate (PHA) Nanocapsules as a protein carrier
US9931412B2 (en) * 2013-02-08 2018-04-03 The Regents Of The University Of Michigan Targeted theranostics
WO2014127214A1 (en) 2013-02-15 2014-08-21 Kala Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic compounds and uses thereof
US9688688B2 (en) 2013-02-20 2017-06-27 Kala Pharmaceuticals, Inc. Crystalline forms of 4-((4-((4-fluoro-2-methyl-1H-indol-5-yl)oxy)-6-methoxyquinazolin-7-yl)oxy)-1-(2-oxa-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)butan-1-one and uses thereof
CA2900680C (en) 2013-02-20 2021-08-10 Kala Pharmaceuticals, Inc. Quinoline and quinazoline compounds and uses thereof for treating and/or preventing diseases
WO2014165608A1 (en) * 2013-04-02 2014-10-09 Stc. Unm Antibiotic protocells and related pharmaceutical formulations and methods of treatment
EP4043036A1 (en) 2013-09-27 2022-08-17 Massachusetts Institute of Technology Carrier-free biologically-active protein nanostructures
US9925149B2 (en) 2013-10-14 2018-03-27 Nanosphere Health Sciences, Llc Nanoparticle compositions and methods as carriers of nutraceutical factors across cell membranes and biological barriers
US10092679B2 (en) 2013-10-18 2018-10-09 Wake Forest University Health Sciences Laminous vascular constructs combining cell sheet engineering and electrospinning technologies
MX355330B (es) 2013-11-01 2018-04-16 Kala Pharmaceuticals Inc Formas cristalinas de compuestos terapeuticos y sus usos.
US9890173B2 (en) 2013-11-01 2018-02-13 Kala Pharmaceuticals, Inc. Crystalline forms of therapeutic compounds and uses thereof
US10374198B2 (en) * 2013-11-25 2019-08-06 Georgetown University Electronic devices with organic nanoparticles
CA2933204C (en) 2013-12-18 2020-04-28 Signpath Pharma, Inc. Liposomal mitigation of drug-induced inhibition of the cardiac ikr channel
MX2016012009A (es) 2014-03-14 2016-12-05 Pfizer Nanoparticulas terapeuticas que comprenden un agente terapeutico, y metodos para su elaboracion y uso.
CA3050535C (en) * 2014-12-15 2021-11-09 Richard Clark Kaufman Methods of treating inflammatory disorders and global inflammation with compositions comprising phospholipid nanoparticle encapsulations of anti-inflammatory nutraceuticals
EP3233124B1 (en) 2014-12-15 2020-11-18 The Regents of The University of California Nanowire-coated microdevice and method of making and using the same
CA3089686A1 (en) 2015-03-10 2016-09-15 Nanosphere Health Sciences, Llc A nanoparticle drug delivery comprising liquid lipids and cannabinoids encapsulated in a single layer of essential phospholipids
WO2017027843A1 (en) 2015-08-12 2017-02-16 Massachusetts Institute Of Technology Cell surface coupling of nanoparticles
US10154947B2 (en) 2016-01-06 2018-12-18 The Procter & Gamble Company Antiperspirant composition
US9730867B2 (en) 2016-01-06 2017-08-15 The Procter & Gamble Company Methods of forming a slurry with microcapsules formed from phosphate esters
US9732303B2 (en) 2016-01-06 2017-08-15 The Procter & Gamble Company Microcapsules formed from phosphate esters and compositions containing same
US11672866B2 (en) 2016-01-08 2023-06-13 Paul N. DURFEE Osteotropic nanoparticles for prevention or treatment of bone metastases
US11806401B2 (en) 2016-04-27 2023-11-07 Signpath Pharma, Inc. Prevention of drug-induced atrio-ventricular block
US11697851B2 (en) 2016-05-24 2023-07-11 The Regents Of The University Of California Early ovarian cancer detection diagnostic test based on mRNA isoforms
AU2017283480A1 (en) 2016-06-13 2019-01-24 Torque Therapeutics, Inc. Methods and compositions for promoting immune cell function
WO2018048747A1 (en) 2016-09-08 2018-03-15 Kala Pharmaceuticals, Inc. Crystalline forms of therapeutic compounds and uses thereof
US10336767B2 (en) 2016-09-08 2019-07-02 Kala Pharmaceuticals, Inc. Crystalline forms of therapeutic compounds and uses thereof
US10392399B2 (en) 2016-09-08 2019-08-27 Kala Pharmaceuticals, Inc. Crystalline forms of therapeutic compounds and uses thereof
WO2018160865A1 (en) 2017-03-01 2018-09-07 Charles Jeffrey Brinker Active targeting of cells by monosized protocells
US20200109205A1 (en) 2017-03-31 2020-04-09 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for targeting and killing alpha-v beta-3-positive cancer stem cells (cscs) and treating drug resistant cancers
CN111432836A (zh) 2017-09-05 2020-07-17 转矩医疗股份有限公司 治疗性蛋白质组合物及其制备和使用方法
US10463746B2 (en) 2017-11-09 2019-11-05 International Business Machines Corporation Macromolecular chemotherapeutics
US20200353062A1 (en) * 2017-11-09 2020-11-12 Immunovaccine Technologies Inc. Pharmaceutical compositions, methods for preparation comprising sizing of lipid vesicle particles, and uses thereof
CN113166783A (zh) 2018-10-09 2021-07-23 不列颠哥伦比亚大学 包含无有机溶剂和去污剂的转染活性囊泡的组合物和系统以及与之相关的方法
SG11202106144VA (en) 2018-12-11 2021-07-29 Disruption Labs Inc Compositions for the delivery of therapeutic agents and methods of use and making thereof
US20220071865A1 (en) * 2018-12-18 2022-03-10 International Flavors & Fragrances Inc. Microcapsules prepared from proteins

Family Cites Families (62)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4235871A (en) * 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
US4501728A (en) * 1983-01-06 1985-02-26 Technology Unlimited, Inc. Masking of liposomes from RES recognition
US4891208A (en) * 1985-04-10 1990-01-02 The Liposome Company, Inc. Steroidal liposomes
US4762915A (en) * 1985-01-18 1988-08-09 Liposome Technology, Inc. Protein-liposome conjugates
US4746505A (en) * 1985-04-26 1988-05-24 President And Fellows Of Harvard College Technetium radiodiagnostic fatty acids derived from bisamide bisthiol ligands
US4737323A (en) * 1986-02-13 1988-04-12 Liposome Technology, Inc. Liposome extrusion method
US4837028A (en) * 1986-12-24 1989-06-06 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5108759A (en) * 1987-04-01 1992-04-28 Ranney David F Endothelial envelopment drug carriers
GB8824591D0 (en) * 1988-10-20 1988-11-23 Royal Free Hosp School Med Fractionation process
US5527528A (en) * 1989-10-20 1996-06-18 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Solid-tumor treatment method
US5356633A (en) * 1989-10-20 1994-10-18 Liposome Technology, Inc. Method of treatment of inflamed tissues
US5143713A (en) * 1990-05-30 1992-09-01 Board Of Regents, The University Of Texas System 99m Tc labeled liposomes
DE4201461A1 (de) * 1992-01-21 1993-07-22 Mueller Schulte Detlef Dr Mittel fuer die selektive tumortherapie auf der basis ferromagnetischer partikel - verfahren zu ihrer herstellung und verwendung
US5753261A (en) * 1993-02-12 1998-05-19 Access Pharmaceuticals, Inc. Lipid-coated condensed-phase microparticle composition
US5543158A (en) * 1993-07-23 1996-08-06 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable injectable nanoparticles
DE4417865A1 (de) * 1994-05-20 1995-11-23 Behringwerke Ag Kombination von Tumornekrose-induzierenden Substanzen mit Substanzen, die durch Nekrosen aktiviert werden, zur selektiven Tumortherapie
US5843925A (en) * 1994-12-13 1998-12-01 American Cyanamid Company Methods for inhibiting angiogenesis, proliferation of endothelial or tumor cells and tumor growth
US5574026A (en) * 1994-12-13 1996-11-12 American Cyanamid Company Methods for inhibiting angiogenesis proliferation of endothelial or tumor cells and tumor growth
US5731325A (en) * 1995-06-06 1998-03-24 Andrulis Pharmaceuticals Corp. Treatment of melanomas with thalidomide alone or in combination with other anti-melanoma agents
US6171576B1 (en) * 1995-11-03 2001-01-09 Organix Inc. Dopamine transporter imaging agent
US6147060A (en) * 1996-04-26 2000-11-14 Magainin Pharmaceuticals Treatment of carcinomas using squalamine in combination with other anti-cancer agents
JPH10106960A (ja) * 1996-09-25 1998-04-24 Sony Corp 量子細線の製造方法
ES2257771T3 (es) * 1996-10-28 2006-08-01 Amersham Health As Agentes de contraste.
US7112338B2 (en) * 1997-03-12 2006-09-26 The Regents Of The University Of California Cationic liposome delivery of taxanes to angiogenic blood vessels
US6344272B1 (en) * 1997-03-12 2002-02-05 Wm. Marsh Rice University Metal nanoshells
US20050025819A1 (en) * 1997-07-14 2005-02-03 Hayat Onyuksel Materials and methods for making improved micelle compositions
KR19990085365A (ko) * 1998-05-16 1999-12-06 허영섭 지속적으로 약물 조절방출이 가능한 생분해성 고분자 미립구 및그 제조방법
US6346189B1 (en) * 1998-08-14 2002-02-12 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Carbon nanotube structures made using catalyst islands
US6165509A (en) * 1998-09-01 2000-12-26 University Of Washington Pegylated drug complexed with bioadhesive polymer suitable for drug delivery and methods relating thereto
US6326144B1 (en) * 1998-09-18 2001-12-04 Massachusetts Institute Of Technology Biological applications of quantum dots
US6114038A (en) * 1998-11-10 2000-09-05 Biocrystal Ltd. Functionalized nanocrystals and their use in detection systems
US7521068B2 (en) * 1998-11-12 2009-04-21 Elan Pharma International Ltd. Dry powder aerosols of nanoparticulate drugs
CN101073668A (zh) * 1999-04-28 2007-11-21 德克萨斯大学董事会 用于通过选择性抑制vegf来治疗癌症的组合物和方法
US6875448B1 (en) * 1999-09-03 2005-04-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of intracellular sustained-release of drug and preparations
US6420378B1 (en) * 1999-10-15 2002-07-16 Supergen, Inc. Inhibition of abnormal cell proliferation with camptothecin and combinations including the same
NO312708B1 (no) * 2000-02-21 2002-06-24 Anticancer Therapeutic Inv Sa Radioaktive liposomer til terapi
US20030152636A1 (en) * 2000-02-23 2003-08-14 Nanopharm Ag Method of treating cancer
US6849599B2 (en) * 2000-03-08 2005-02-01 Rhode Island Hospital Combination drug therapy
US20020041880A1 (en) * 2000-07-05 2002-04-11 Defeo-Jones Deborah Method of treating cancer
US6649138B2 (en) * 2000-10-13 2003-11-18 Quantum Dot Corporation Surface-modified semiconductive and metallic nanoparticles having enhanced dispersibility in aqueous media
US6887493B2 (en) * 2000-10-25 2005-05-03 Adi Shefer Multi component controlled release system for oral care, food products, nutraceutical, and beverages
US20020128228A1 (en) * 2000-12-01 2002-09-12 Wen-Jen Hwu Compositions and methods for the treatment of cancer
US20020127224A1 (en) * 2001-03-02 2002-09-12 James Chen Use of photoluminescent nanoparticles for photodynamic therapy
US20030026831A1 (en) * 2001-04-20 2003-02-06 Aparna Lakkaraju Anionic liposomes for delivery of bioactive agents
US20030082228A1 (en) * 2001-05-09 2003-05-01 Inex Pharmaceuticals Corporation Anti-angiogenic therapy using liposome-encapsulated chemotherapeutic agents
US20020187099A1 (en) * 2001-05-16 2002-12-12 Rajesh Manchanda Stabilization of radionuclide-containing compositions
US6623729B2 (en) * 2001-07-09 2003-09-23 Korea Advanced Institute Of Science And Technology Process for preparing sustained release micelle employing conjugate of anticancer drug and biodegradable polymer
CA2465779A1 (en) * 2001-11-20 2003-05-30 Advanced Inhalation Research, Inc. Compositions for sustained action product delivery
US20030235619A1 (en) * 2001-12-21 2003-12-25 Christine Allen Polymer-lipid delivery vehicles
EP1572639A4 (en) * 2002-01-24 2006-08-09 Barnes Jewish Hospital IMAGING AGENTS TARGETING INTEGRINS
US7053034B2 (en) * 2002-04-10 2006-05-30 Salvona, Llc Targeted controlled delivery compositions activated by changes in pH or salt concentration
US7285289B2 (en) * 2002-04-12 2007-10-23 Nagy Jon O Nanoparticle vaccines
US20040023372A1 (en) * 2002-05-28 2004-02-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Tubular nanostructures
US7939170B2 (en) * 2002-08-15 2011-05-10 The Rockefeller University Water soluble metal and semiconductor nanoparticle complexes
US7785627B2 (en) * 2002-09-20 2010-08-31 Watson Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical formulation containing a biguanide and a thiazolidinedione derivative
US7670627B2 (en) * 2002-12-09 2010-03-02 Salvona Ip Llc pH triggered targeted controlled release systems for the delivery of pharmaceutical active ingredients
CN102697737B (zh) * 2003-04-03 2014-03-19 杰西.L.-S.奥 负载肿瘤靶向药物的颗粒
US7727969B2 (en) * 2003-06-06 2010-06-01 Massachusetts Institute Of Technology Controlled release nanoparticle having bound oligonucleotide for targeted delivery
US20050181015A1 (en) * 2004-02-12 2005-08-18 Sheng-Ping (Samuel) Zhong Layered silicate nanoparticles for controlled delivery of therapeutic agents from medical articles
BRPI0507680A (pt) * 2004-02-13 2007-07-17 Nod Pharmaceuticals Inc partìculas de fosfato de cálcio terapêuticas e métodos de fabricação e uso das mesmas
WO2005084710A2 (en) * 2004-03-02 2005-09-15 Massachusetts Institute Of Technology Nanocell drug delivery system
JP5385785B2 (ja) * 2006-08-23 2014-01-08 ブルー メディカル デバイシーズ ベーフェー メラトニンとパクリタキセルとの組合せを備えた医療用ステント

Cited By (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102238998A (zh) * 2008-10-07 2011-11-09 阿夸兹有限公司 由囊泡-线结合体形成的生物模拟膜
CN102238998B (zh) * 2008-10-07 2014-10-29 应用仿生学有限公司 由囊泡-线结合体形成的生物模拟膜
CN109293927A (zh) * 2009-02-04 2019-02-01 布里格姆及妇女医院股份有限公司 纳米级铂化合物及其使用方法
CN103442677B (zh) * 2011-01-24 2016-11-09 耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展有限公司 用于药物的经皮递送和全身性递送的纳米粒子
CN105853393A (zh) * 2011-01-24 2016-08-17 耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展有限公司 用于药物的经皮递送和全身性递送的纳米粒子
CN103442677A (zh) * 2011-01-24 2013-12-11 耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展有限公司 用于药物的经皮递送和全身性递送的纳米粒子
CN104168903A (zh) * 2011-12-22 2014-11-26 埃斯特韦实验室有限公司 用于治疗由包膜病毒导致的疾病的方法和组合物
CN103865056A (zh) * 2012-12-17 2014-06-18 张雅珍 含有多柔比星结构的非线性聚合物以及制备方法和用途
CN103897177B (zh) * 2012-12-24 2017-08-29 张雅珍 蒽环类抗生素偶联非线性多嵌段共聚物及其制备方法和应用
CN103910870A (zh) * 2012-12-28 2014-07-09 张雅珍 蒽环类抗生素偶联非线性多嵌段共聚物及其制备方法和应用
CN103910870B (zh) * 2012-12-28 2018-08-17 张雅珍 蒽环类抗生素偶联非线性多嵌段共聚物及其制备方法和应用
CN103910867A (zh) * 2012-12-31 2014-07-09 张雅珍 含有多柔比星结构的非线性聚合物以及制备方法和用途
CN103910872A (zh) * 2013-01-04 2014-07-09 张雅珍 含有多柔比星结构的星形聚合物以及制备方法和用途
CN103910873A (zh) * 2013-01-04 2014-07-09 张雅珍 含有多柔比星结构的星形聚合物以及制备方法和用途
CN103110959A (zh) * 2013-02-19 2013-05-22 中国人民解放军第三军医大学第二附属医院 一种甘油二酯激酶α基因-壳聚糖纳米粒在制备治疗过敏性哮喘药物中应用
CN105164143A (zh) * 2013-03-14 2015-12-16 杰罗米.J.申塔格 用于将分子引入到乳糜微粒中的胆固醇体囊泡
CN104000833A (zh) * 2014-03-07 2014-08-27 江西赣南海欣药业股份有限公司 一种维生素d2和果糖酸钙注射剂组合物及其制备方法
CN108136023A (zh) * 2015-08-12 2018-06-08 北卡罗莱纳州立大学 血小板膜包覆的药物递送系统
CN105418947A (zh) * 2015-12-04 2016-03-23 南开大学 一种程序控制组装的荧光聚合囊泡及其制备方法
CN105418947B (zh) * 2015-12-04 2018-02-13 南开大学 一种程序控制组装的荧光聚合囊泡及其制备方法
CN105832670A (zh) * 2015-12-28 2016-08-10 四川大学 一种利用诱导脂质体融合来制备双载或多载脂质体的技术
CN106995783B (zh) * 2016-01-22 2019-11-19 上海交通大学 细胞电转染装置及其应用
CN106995783A (zh) * 2016-01-22 2017-08-01 上海交通大学 细胞电转染装置及其应用
CN108175861A (zh) * 2016-12-08 2018-06-19 暨南大学 一种抗肿瘤小核酸药物的递送系统及其应用
CN107441043A (zh) * 2017-08-01 2017-12-08 南开大学 一种pH敏感性混合胶束及其制备方法与应用
CN107441043B (zh) * 2017-08-01 2020-09-11 南开大学 一种pH敏感性混合胶束及其制备方法与应用
CN109045272A (zh) * 2018-08-01 2018-12-21 厦门市壳聚糖生物科技有限公司 一种硼替佐米磷脂复合物及其制备方法与应用
WO2020114390A1 (en) * 2018-12-03 2020-06-11 Master Dynamic Limited Nanoparticle Delivery System
CN115192542A (zh) * 2019-11-04 2022-10-18 四川大学 一种利用小分子营养物质介导的口服纳米递药系统
CN115192542B (zh) * 2019-11-04 2023-09-08 四川大学 一种利用小分子营养物质介导的口服纳米递药系统
CN111437269A (zh) * 2020-04-21 2020-07-24 中国医学科学院北京协和医院 一种治疗系统性红斑狼疮的药物
CN111700883A (zh) * 2020-07-23 2020-09-25 深圳大佛药业股份有限公司 一种硫酸沙丁胺醇缓释型吸入制剂及其生产工艺
CN111700883B (zh) * 2020-07-23 2021-04-06 深圳大佛药业股份有限公司 一种硫酸沙丁胺醇缓释型吸入制剂及其生产工艺
CN112076158A (zh) * 2020-08-28 2020-12-15 西南民族大学 一种治疗慢性肾炎的脂质体-纳米粒复合体
CN112076158B (zh) * 2020-08-28 2023-12-08 西南民族大学 一种治疗慢性肾炎的脂质体-纳米粒复合体

Also Published As

Publication number Publication date
WO2005084710A2 (en) 2005-09-15
WO2005084710B1 (en) 2006-09-14
AU2005219413A1 (en) 2005-09-15
US20100303912A1 (en) 2010-12-02
CA2558263A1 (en) 2005-09-15
JP2011256207A (ja) 2011-12-22
US20130177607A1 (en) 2013-07-11
IL177785A0 (en) 2006-12-31
JP2007526322A (ja) 2007-09-13
US20130171205A1 (en) 2013-07-04
EP1722762A2 (en) 2006-11-22
WO2005084710A3 (en) 2006-07-13
US20140363497A1 (en) 2014-12-11
US20050266067A1 (en) 2005-12-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101031287A (zh) 纳米细胞药物递送系统
Cong et al. Size-transformable hyaluronan stacked self-assembling peptide nanoparticles for improved transcellular tumor penetration and photo–chemo combination therapy
Palazzolo et al. The clinical translation of organic nanomaterials for cancer therapy: a focus on polymeric nanoparticles, micelles, liposomes and exosomes
Wang et al. Tumor penetrability and anti-angiogenesis using iRGD-mediated delivery of doxorubicin-polymer conjugates
US20150099001A1 (en) Nanocell Drug Delivery System
Zhang et al. RGD-modified PEG–PAMAM–DOX conjugates: In vitro and in vivo studies for glioma
Narang et al. Role of tumor vascular architecture in drug delivery
Zhang et al. EGFP–EGF1-conjugated nanoparticles for targeting both neovascular and glioma cells in therapy of brain glioma
Meng et al. Integrin-targeted paclitaxel nanoliposomes for tumor therapy
Imran et al. “Nanodecoys”-Future of drug delivery by encapsulating nanoparticles in natural cell membranes
US11033637B2 (en) Targeted structure-specific particulate delivery systems
US11612570B2 (en) Decreased adhesivity receptor-targeted nanoparticles for Fn14-positive tumors
CN105012956A (zh) 一种双功能肿瘤靶向脂质体给药系统及其制备和应用
CA3231036A1 (en) Atherosclerosis-targeted liposome nanocarrier delivery system and preparation method therefor
Mi et al. Combined legumain-and integrin-targeted nanobubbles for molecular ultrasound imaging of breast cancer
CN104784118A (zh) 具有内化作用的酸敏感脂质体给药系统及其制备方法和应用
CN109893662B (zh) 抑制Mfsd2a的载前药脑转移瘤靶向给药系统的制备方法及应用
US20220401574A1 (en) Cardioprotective microbubble-liposomal drug complexes
Panjwani et al. A Perspective on EGFR and Proteasome-based Targeted Therapy for Cancer
Guo et al. Nano Materials Science
Yakavets et al. Drug delivery to solid tumors: The predictive value of the multicellular tumor spheroid model for nanomedicine screening
Ding et al. Chaopei Zhou 1†, Xiuxiu Dong 1†, Chunxiang Song 1, Shuang Cui 1, Tiantian Chen 1, Daji Zhang 1, Xiuli Zhao 2 and Chunrong Yang 1
RU2482837C2 (ru) Усовершенствованные липосомы и их применение
Abumanhal-Masarweh et al. Barriers in the Tumor Microenvironment to Nanoparticle Activity
Quattrocchi Biological camouflage imparts cell-like activity to injectable particles: the leukolike delivery system

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Open date: 20070905