DK2995626T3 - Bifunktionelle fusionsproteiner til at inhibitere angiogenesis i tumormiljøer og aktivere adaptive immunrerspons, og generne og anvendelser deraf - Google Patents

Claims (8)

1. Bifunktionelt rekombinant protein der besidder aktiviteterne af tumstatin og CD137L, kendetegnet ved, at proteinet omfatter aminosyresekvenserne af de aktive fragmenter af tumstatin og det CD137L-ekstracellulære område, hvor sekvenserne af tumstatin og CD137L fusioneres sammen gennem en fleksibel pep-tidlinker, hvilken aminosyresekvens af det tumstatin-aktive fragment er valgt blandt SEQ ID nr. 65 til SEQ ID nr. 68, hvilken aminosyresekvens af peptidlinke-ren er valgt blandt SEQ ID nr. 69 til SEQ ID nr. 76, og hvilken aminosyresekvens af det CD137L-ekstracellulære område er valgt blandt SEQ ID nr. 77 til SEQ ID nr. 80.

2. Bifunktionelt rekombinant protein ifølge krav 1, kendetegnet ved, at proteinet indeholder aminosyresekvensen, som er valgt blandt SEQ ID nr. 25 til SEQ ID nr. 48.

3. Gen der koder for det bifunktionelle rekombinante protein ifølge krav 1, hvilket gen omfatter genet der koder for det tumstatin-aktive fragment, peptidlinkeren og det CD137L-ekstracellulære område, hvor genet der koder for det aktive fragment af tumstatin er valgt blandt SEQ ID nr. 49 til SEQ ID nr. 52, hvor genet der koder for peptidlinkeren er valgt blandt SEQ ID nr. 53 til SEQ ID nr. 60, og hvor genet der koder for det CD137L-ekstracellulære område er valgt blandt SEQ ID nr. 61 til SEQ ID nr. 64.

4. Gen der koder for det bifunktionelle rekombinante protein ifølge krav 1, kendetegnet ved, at genet indeholder en nucleotidsekvens, som er valgt blandt SEQ ID nr. 1 til SEQ ID nr. 24.

5. Gen der koder for det bifunktionelle rekombinante protein, der besidder aktiviteterne af tumstatin og CD137L, kendetegnet ved, at det har en 70 % eller mere homologi sammenlignet med nucleotidsekvensen ifølge et hvilket som helst af kravene 3 til 4.

6. Fremgangsmåde til fremstilling af det bifunktionelle rekombinante protein, der besidder aktiviteterne af tumstatin og CD137L ifølge krav 1, hvilken fremgangsmåde indbefatter følgende trin: (1) at designe og opnå en nucleotidsekvens ifølge et hvilket som helst af kravene 3 til 5; (2) at konstruere et ekspressionssystem der indeholder nucleotidsekvensen ifølge et hvilket som helst af kravene 3 til 5, hvilket indbefatter at konstruere ekspressionsvektoren og at transformere ekspressionsvektoren til en værtscelle for at danne en rekombinant celle, der kan udtrykke det bifunktionelle rekombinante protein, der besidder aktiviteterne af tumstatin og CD137L ifølge krav 1; (3) at dyrke den rekombinante celle der er opnået fra trin (2); (4) at isolere og oprense det bifunktionelle rekombinante protein, der besidder aktiviteterne af tumstatin og CD137L ifølge krav 1.

7. Fremgangsmåden ifølge krav 6, kendetegnet ved, at ekspressionssystemet er et prokaryotisk ekspressionssystem eller et eukaryotisk ekspressionssystem, hvor det prokaryote ekspressionssystem er valgt blandt Escherichia coli eller Bacillus subtilis, og hvor det eukaryotiske ekspressionssystem er valgt blandt gær.

8. Bifunktionelt rekombinant protein ifølge krav 1 til anvendelse i en fremgangsmåde til at inhibere angiogenese i et tumormikromiljø, at behandle forskellige tumorrelaterede sygdomme, at regulere kropsimmunitet, at stimulere T-celleproli-feration og at syntetisere og udskille cytokiner.