CN112543767A - Pd1-4-1bbl变体融合蛋白及其使用方法 - Google Patents

Pd1-4-1bbl变体融合蛋白及其使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种PD1‑4‑1BBL变体融合蛋白。本发明亦提供一种包括PD1变体或4‑1BBL变体的经分离的多肽。本发明亦提供一种编码PD1‑4‑1BBL融合蛋白或经分离的多肽的多核苷酸及核酸构建体、表达所述多核苷酸及所述核酸构建体的宿主细胞，及其使用的方法。

Description

PD1-4-1BBL变体融合蛋白及其使用方法
相关申请
本申请基于35 USC§119(e)要求于2018年7月11日提交美国临时专利申请案第62/696,365号及于2018年12月31日提交美国临时专利申请案第62/786,599号的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
序列表声明
建立于2019年7月7日且标题为76050序列表.txt的包括268,000个字节的ASCII文件与本申请同时提交，其通过引用结合在本申请中。
背景技术
在本发行的一些实施例中，本发明涉及一PD1-4-1BBL变体融合蛋白及其使用方法。
双信号蛋白(DSP)，亦称为信号转换蛋白(SCP)，目前在本领域中称为双功能融合蛋白，其将第I型膜蛋白的胞外部分(胞外氨基端)连接至第II型膜蛋白的胞外部分(胞外羧基端)，形成具有两个活性侧的融合蛋白(参见例如美国专利第7,569,663号及第8,039,437号)。
PD1是免疫球蛋白超家族的表面共抑制受体。PD1在T细胞、B细胞、单核细胞、自然杀手细胞、树突细胞及许多肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)上表达。PD1具有两个配体：PDL1(亦称为B7H1、CD274)及PDL2(B7DC、CD273)，其皆具有共抑制作用。PDL1在静止及激活的T细胞、B细胞、树突细胞、巨噬细胞、血管内皮细胞及胰岛细胞上表达。亦已知PDL1在各类型的癌症中表达，尤其是在NSCLC、黑色素瘤、肾细胞癌、胃癌、肝细胞癌及皮肤癌以及各种白血病癌、多发性骨髓瘤等中表达。PDL2仅见于在巨噬细胞及树突细胞上表达，且在各肿瘤类型中远不及PDL1普遍。PDL1的表达是通过多种促炎性分子而被诱导，所述促炎性分子包括第I型及第II型IFN-γ、TNF-α、LPS、GM-CSF及VEGF，以及细胞激素IL-10及IL-4，其中IFN-γ为最有效的诱导剂。肿瘤微环境上调PDL1的表达，从而促进免疫抑制。响应于免疫攻击，癌细胞会过度表达PDL1，所述PDL1与T细胞上的PD1受体结合，抑制T细胞的激活，从而抑制T细胞的攻击，并诱导肿瘤免疫逃逸。PD1/PDL1途径通过数种机制而调节免疫抑制：
·诱导经激活的T细胞的凋亡；
·抑制细胞毒性T淋巴细胞(CTL-CD8)的活性；
·抑制T细胞的增生；
·促进T细胞的不活化态及耗尽；
·增强调节性T细胞的功能；以及
·抑制受损的T细胞的激活及IL-2的产生。
4-1BBL是4-1BB受体(CD137)的活化配体，是TNF受体超家族的成员及有效的经诱导激活的T细胞共刺激分子。4-1BBL自然地形成同源三聚体，但通过4-1BB进行信号传导需要显着的4-1BBL的寡聚合。4-1BBL存在于多种抗原呈现细胞(APC)上，包括树突细胞(DC)、B细胞及巨噬细胞。在静止的T细胞或T细胞株中并未检测到4-1BB受体(<3％)；然而，当T细胞被激活时，4-1BB被稳定地上调。4-1BB的激活会上调生存的基因、增强细胞分裂、诱导细胞激素产生，以及在T细胞中防止经激活诱导的细胞的死亡。
其他背景技术包括：
毛特等人，PNAS，2015年11月24日，112(47)：E6506-14；
国际专利申请公开第WO 2018053885号；
国际专利申请公开第WO 2018032793号；
国际专利申请公开第WO 2018006881号；
国际专利申请公开第WO 2013144704号；
国际专利申请公开第WO 2016022994号；
国际专利申请公开第WO 2010027828号；
国际专利申请公开第WO 2018085358号；
中国专利申请公开第CN 107857819号；
国际专利申请公开第WO 2017194641号；
国际专利申请公开第WO 2014180288号；
国际专利申请公开第WO 2017059168号；
国际专利申请公开第WO 2001/049318号；
国际专利申请公开第WO 2016/139668号；
国际专利申请公开第WO 2014/106839号；
国际专利申请公开第WO 2012/042480号；
美国专利申请公开第20150183881号；
美国专利申请公开第20070110746号；
美国专利申请公开第20070036783号；以及
美国专利第9562087号。
发明内容
根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种PD1-4-1BBL融合蛋白，包括一PD1的氨基酸序列及一4-1BBL氨基酸序列，其中所述PD1的氨基酸序列：
(a)长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89、93及115所组成的群组，且不包括对应于SEQID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；或长度为138至145个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18、117及119所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段F146至V150；及/或
(b)在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；及/或
其中所述4-1BBL氨基酸序列：
(aa)长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组；长度为170至197个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：127及129所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段G198至E205；长度为170至182个氨基酸且与SEQ ID NO：125具有至少80％的同一性，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段A1至E23；或长度为184个氨基酸且与SEQ ID NO：123具有至少80％的同一性；及/或
(bb)包括4-1BBL氨基酸序列的三个重复；
且其中所述融合蛋白具有至少以下的能力之一：
(i)结合PDL1及4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种PD1-4-1BBL融合蛋白，包括一PD1的氨基酸序列及一4-1BBL氨基酸序列，其中所述PD1的氨基酸序列：
(a)长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89及93所组成的群组，且不包括对应于SEQ IDNO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者，及/或
(b)在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；及/或
其中所述4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组；且其中所述融合蛋白具有至少以下的能力之一：
(i)结合PDL1及4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种PD1-4-1BBL融合蛋白，包括一PD1的氨基酸序列及一4-1BBL氨基酸序列，其中所述PD1的氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；及/或其中所述4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组，且其中所述融合蛋白具有至少以下的能力之一：
(i)结合PDL1及4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种PD1-4-1BBL融合蛋白，在PD1与4-1BBL之间包括一(GGGGS)n连接子，n＝1至4，其中所述融合蛋白具有至少以下的能力之一：
(i)结合PDL1及4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与SEQ IDNO：145具有至少80％的同一性。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ IDNO：145。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ IDNO：145所组成。
根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种经分离的多肽，包括一PD1的氨基酸序列，其中所述PD1的氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89、93及115所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；或长度为138至145个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18、117及119所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段F146至V150；及可选地在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；且其中所述多肽能够结合PDL1。
根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种经分离的多肽，包括一PD1的氨基酸序列，其中所述PD1的氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89及93所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；及可选地在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；且其中所述多肽能够结合PDL1。
根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种经分离的多肽，包括一PD1的氨基酸序列，其中所述PD1的氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；且其中所述多肽能够结合PDL1。
根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种经分离的多肽，包括一4-1BBL氨基酸序列，其中所述4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组；长度为170至197个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ IDNO：127及129所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段G198至E205；或长度为170至182个氨基酸且与SEQ ID NO：125具有至少80％的同一性，且不包括对应于SEQID NO：3的氨基酸片段A1至E23；及可选地包括所述4-1BBL氨基酸序列的三个重复；且其中所述多肽具有至少以下的能力之一：
(i)结合4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种经分离的多肽，包括一4-1BBL氨基酸序列，其中所述4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组；且其中所述多肽具有至少以下的能力之一：
(i)结合4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
根据本发明的一些实施例，所述PD1的氨基酸序列的长度不超过140个氨基酸。
根据本发明的一些实施例，所述PD1的氨基酸序列的长度至少为126个氨基酸。
根据本发明的一些实施例，所述PD1的氨基酸序列包括所述SEQ ID NO：18、19、20或21。
根据本发明的一些实施例，所述PD1的氨基酸序列包括所述SEQ ID NO：18、19、20、21、85、89或93。
根据本发明的一些实施例，所述PD1的氨基酸序列包括所述SEQ ID NO：18、19、20、21、85、89、93或115。
根据本发明的一些实施例，所述PD1的氨基酸序列包括所述SEQ ID NO：117或119。
根据本发明的一些实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：75、79、81、83、87、91或95。
根据本发明的一些实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：75、83、87、91或95。
根据本发明的一些实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：73。
根据本发明的一些实施例，所述PD1的氨基酸序列包括所述SEQ ID NO：18。
根据本发明的一些实施例，所述PD1的氨基酸序列是由所述SEQ ID NO：18、19、20或21所组成。
根据本发明的一些实施例，所述PD1的氨基酸序列是由所述SEQ ID NO：18、19、20、21、85、89或93所组成。
根据本发明的一些实施例，所述PD1的氨基酸序列是由所述SEQ ID NO：18、19、20、21、85、89、93或115所组成。
根据本发明的一些实施例，所述PD1的氨基酸序列是由所述SEQ ID NO：117或119所组成。
根据本发明的一些实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：75、79、81、83、87、91或95所组成。
根据本发明的一些实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：75、83、87、91或95所组成。
根据本发明的一些实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：73所组成。
根据本发明的一些实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：18所组成。
根据本发明的一些实施例，所述4-1BBL氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至24所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述4-1BBL氨基酸序列不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸残基A1至V6或A1至G14中的任一者。
根据本发明的一些实施例，所述4-1BBL氨基酸序列包括所述SEQ ID NO：22、23、24或25。
根据本发明的一些实施例，所述4-1BBL氨基酸序列是由所述SEQ ID NO：22、23、24或25所组成。
根据本发明的一些实施例，所述4-1BBL氨基酸序列包括所述SEQ ID NO：125、127或129。
根据本发明的一些实施例，所述4-1BBL氨基酸序列是由所述SEQ ID NO：125、127或129所组成。
根据本发明的一些实施例，所述4-1BBL氨基酸序列包括所述SEQ ID NO：123。
根据本发明的一些实施例，所述4-1BBL氨基酸序列是由所述SEQ ID NO：123所组成。
根据本发明的一些实施例，在所述PD1与所述4-1BBL之间，所述PD1-4-1BBL融合蛋白包括一连接子。
根据本发明的一些实施例，在所述4-1BBL氨基酸序列的各个所述三个重复之间，所述PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽包括一连接子。
根据本发明的一些实施例，所述连接子的长度为一至六个氨基酸。
根据本发明的一些实施例，所述连接子是一单一氨基酸连接子。
根据本发明的一些实施例，所述连接子是甘氨酸。
根据本发明的一些实施例，所述连接子并非为一抗体或其片段的一Fc结构域。
根据本发明的一些实施例，所述连接子是一抗体或其片段的一Fc结构域。
根据本发明的一些实施例，所述连接子是一(GGGGS)n连接子，n＝1至4，(SEQ IDNO：149)连接子。
根据本发明的一些实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白是至少为同源三聚体的形式。
根据本发明的一些实施例，通过SEC-MALS测定，所述至少为同源三聚体的分子量至少为100kD。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白或所述经分离的多肽是可溶的。
根据本发明的一些实施例，在相同的生产条件下，所述融合蛋白的产量相较于SEQID NO：5的产量至少高1.5倍，所述生产条件包括在哺乳动物细胞中表达，以及在32至37℃、5至10％二氧化碳下培养5至13天。
根据本发明的一些实施例，在相同的生产条件下，所述融合蛋白的聚集体的量相较于SEQ ID NO：5的聚集体的量低至少20％，所述聚集体的分子量为至少300千道尔顿，且所述生产条件包括在哺乳动物细胞中表达，以及在32至37℃、5至10％二氧化碳下培养5至13天。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107、111、113、133、135、137、139、141、143及147所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：133、135、137、139、141、143及147所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107及111所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105、107及111所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105及107所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16及44至56所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14及16所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述至少80％的同一性包括至少90％的同一性。
根据本发明的一些实施例，所述至少80％的同一性包括至少95％的同一性。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107、111、113、133、135、137、139、141、143及147所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是由SEQ ID NO：133、135、137、139、141、143及147所组成。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107及111所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105、107及111所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105、及107所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16及44至56所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14及16所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由一氨基酸序列所组成，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107、111、113、133、135、137、139、141、143及147所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由一氨基酸序列所组成，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：133、135、137、139、141、143及147所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由一氨基酸序列所组成，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107及111所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由一氨基酸序列所组成，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105、107及111所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由一氨基酸序列所组成，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105及107所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由一氨基酸序列所组成，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16及44至56所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由一氨基酸序列所组成，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14及16所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，提供一种多核苷酸，所述多核苷酸编码所述PD1-4-1BBL融合蛋白或所述经分离的多肽
根据本发明的一些实施例，提供一种核酸构建体，包括所述多核苷酸以及一调控组件，且所述调控组件在一宿主细胞中是用于指导所述多核苷酸的表达。
根据本发明的一些实施例，所述多核苷酸包括一核酸序列，所述核酸序列是选自由SEQ ID NO：57至72、98、102、104、106、108、112、114、134、136、138、140、142、144及148所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述多核苷酸包括一核酸序列，所述核酸序列是选自由SEQ ID NO：57至72、98、102、104、106、108及112所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述多核苷酸包括一核酸序列，所述核酸序列是选自由SEQ ID NO：98、102、104、106、108及112所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述多核苷酸包括一核酸序列，所述核酸序列是选自由SEQ ID NO：98、102、104、106及108所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述多核苷酸包括一核酸序列，所述核酸序列是选自由SEQ ID NO：57至72所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述多核苷酸包括一核酸序列，所述核酸序列是选自由SEQ ID NO：70至72所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述多核苷酸包括一核酸序列，所述核酸序列是选自由SEQ ID NO：134、136、138、140、142、144及148所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述多核苷酸包括SEQ ID NO：146。
根据本发明的一些实施例，提供一种宿主细胞，包括所述PD1-4-1BBL融合蛋白或所述多肽；或所述多核苷酸或所述核酸构建体。
根据本发明的一些实施例，提供一种生产一PD1-4-1BBL融合蛋白或一多肽的方法，所述方法包括在一宿主细胞中表达所述多核苷酸或所述核酸构建体。
根据本发明的一些实施例，所述的方法包括：分离所述融合蛋白或所述多肽。
根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种通过得益于激活免疫细胞而治疗一疾病的方法，所述方法包括：将所述PD1-4-1BBL融合蛋白或所述经分离的多肽、所述多核苷酸或所述核酸构建体，或所述宿主细胞，投予至有需要的一受试者。
根据本发明的一些实施例，所述方法进一步包括：将一治疗剂投予至所述受试者，以治疗所述疾病。
根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种所述PD1-4-1BBL融合蛋白或所述经分离的多肽、所述多核苷酸或所述核酸构建体，或所述宿主细胞用于通过得益于激活免疫细胞而治疗一疾病之用途。
根据本发明的一些实施例，所述用途的成分进一步包括用于治疗所述疾病的一治疗剂。
根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种制品，包括：一包装材料，所述包装材料是包装用于通过得益于激活免疫细胞而治疗一疾病的一治疗剂；以及所述PD1-4-1BBL融合蛋白或所述经分离的多肽、所述多核苷酸或所述核酸构建体，或所述宿主细胞。
根据本发明的一些实施例，所述疾病的细胞表达PDL1。
根据本发明的一些实施例，所述疾病包括一过度增生性疾病。
根据本发明的一些实施例，所述过度增生性疾病包括硬化症、纤维症、特发性肺纤维化、牛皮癣、系统性硬化症/硬皮症、原发性胆道的胆管炎、原发性硬化性胆管炎、肝纤维化、预防放射性肺纤维化、骨髓纤维化或腹膜后纤维化。
根据本发明的一些实施例，所述过度增生性疾病包括癌症。
根据本发明的一些实施例，所述癌症是选自由淋巴瘤、白血病及恶性肿瘤所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述疾病包括一与免疫抑制或经药物诱导的免疫抑制有关的疾病。
根据本发明的一些实施例，所述疾病包括HIV、麻疹、流感、LCCM、RSV、人类鼻病毒、EBV、CMV或细小病毒。
根据本发明的一些实施例，所述疾病包括感染。
根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种激活免疫细胞的方法，包括：在体外激活免疫细胞，所述免疫细胞存在有所述PD1-4-1BBL融合蛋白或所述经分离的多肽、所述多核苷酸或所述核酸构建体，或所述宿主细胞。
根据本发明的一些实施例，所述激活是在表达PDL1或外源性PDL1的细胞的存在下进行的。
根据本发明的一些实施例，所述表达PDL1的细胞包括病理细胞。
根据本发明的一些实施例，所述病理细胞包括癌细胞。
根据本发明的一些实施例，所述激活是在一抗癌剂的存在下进行的。
根据本发明的一些实施例，用于治疗所述疾病的所述治疗剂或所述抗癌剂包括一抗体。
根据本发明的一些实施例，所述抗体是选自由利妥昔单抗(rituximab)、西妥昔单抗(cetuximab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、埃德可洛单抗(edrecolomab)、阿美妥珠单抗(almetuzumab)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、伊布利妥单抗(ibritumomab)、帕尼单抗(panitumumab)、贝利单抗(Belimumab)、贝伐单抗(Bevacizumab)、比妥单抗美坦新(Bivatuzumab mertansine)、布尔妥珠单抗(Blinatumomab)、布隆妥维单抗(Blontuvetmab)、布伦妥昔单抗维多丁(Brentuximab vedotin)、卡妥索单抗(Catumaxomab)、西妥木单抗(Cixutumumab)、达克珠单抗(Daclizumab)、阿达木单抗(Adalimumab)，贝索洛单抗(Bezlotoxumab)、聚乙二醇赛妥珠单抗(Certolizumab pegol)、西他珠单抗(Citatuzumab bogatox)、达拉他珠单抗(Daratumumab)、地昔单抗(Dinutuximab)、依洛珠单抗(Elotuzumab)、曲妥单抗(Ertumaxomab)、依他西单抗(Etaracizumab)、吉妥单抗奥佐米星(Gemtuzumab ozogamicin)、吉瑞妥昔单抗(Girentuximab)、奈昔妥木单抗(Necitumumab)、奥比努珠单抗(Obinutuzumab)、奥法木单抗(Ofatumumab)、帕妥珠单抗(Pertuzumab)、雷米单抗(Ramucirumab)、塞妥昔单抗(Siltuximab)、托西莫单抗(Tositumomab)、曲妥珠单抗(Trastuzumab)及伊匹单抗(ipilimumab)所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述抗体是选自由利妥昔单抗及西妥昔单抗所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，用于治疗所述疾病的治疗剂或抗癌剂包括一IMiD(例如，沙利度胺、来那度胺、泊马度胺)。
根据本发明的一些实施例，所述方法包括：在激活之后将免疫细胞过继转移至有需要的一受试者。
根据本发明的一些实施例，所述免疫细胞包括T细胞。
除非本文另有定义，否则本文中所使用的所有技术的术语及/或科学的术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。尽管与本文中所描述的彼等类似或等同的方法及材料可用于本发明的实施例的实施或测试中，不过以下面描述示例性的方法及/或材料。在有冲突的情况下，以专利说明书及其定义为准。此外，材料、方法及实施例仅是说明性的，并不意图必然是限制性的。
附图说明
本文仅通过示例的方式，并参考附图描述本发明的一些实施例。具体详细地参考附图，要强调的是，所示出的细节是通过实例显示且是出于对本发明的实施例的说明性讨论的目的。就这此方面，结合附图所进行的描述对于本领域技术人员而言显而易见的是能够如何实施本发明的实施例。
在图式中：
图1是一示意图，显示包括N端信号肽及His标签(SEQ ID NO：26)的PD1-4-1BBL融合蛋白，在本文中称为“DSP105”(SEQ ID NO：5)。显示信号肽(黑色底线，SEQ ID NO：4)、N端His标签(黑色粗体)、PD1域(红色，SEQ ID NO：2)、甘氨酸连接子(黑色)及4-1BBL域(蓝色，SEQ ID NO：3)。
图2A至图2D证明DSP105的经预测的3D结构(SEQ ID NO：5)。图2A是一示意性3D模型。PD1是描绘为灰色带、PDL1(PD1配体)是描绘为绿色带、4-1BBL是描绘为蓝色带及额外的2个拷贝的4-1BBL(形成三聚体)是描绘为浅蓝色。图2B是示意性的完整原子3D模型。图2C至图2D是示意性3D模型。X射线分辨域是由其表面表示，并通过一疏水性标度着色：蓝色(最亲水的)至棕色(疏水的)。
图3是在DSP105(SEQ ID NO：5)中所识别的结构域及区段的示意图。浅蓝色突显Ig样的V型域(在X射线中分辨出底线的序列)，X射线分辨的部分是以灰色突显，而侧面/非结构化区域标有红色框。
图4证明本文中称为“DSP105_var1”(SEQ ID NO：12)的PD1-4-1BBL变体融合蛋白的经预测的3D结构。在上图中，X射线分辨域是通过疏水性标度所着色的表面而显示：蓝色(最亲水的)到棕色(疏水的)。PDL1(PD1配体)是描绘为绿色带。在下图中，4-1BBL是描绘为红色带，且PD1是描绘为蓝色带。
图5证明在本文中称为“DSP105_var2”(SEQ ID NO：14)的PD1-4-1BBL变体融合蛋白的经预测的3D结构。颜色代码与图4相同。
图6证明在本文中称为“DSP105_var3”(SEQ ID NO：16)的PD1-4-1BBL变体融合蛋白的经预测的3D结构。颜色代码与图4相同。
图7显示在Expi293细胞中所表达的N端带有His标签的DSP105(SEQ ID NO：1)的SDS-PAGE分析图像；以及在CHO-3E7中所表达的N端带有His标签的DSP105_var17(SEQ IDNO：99)。如所示，两种融合蛋白是通过在镍柱上的单一步亲和纯化而被纯化，并在还原及非还原的条件下进行分离。图像中所显示的样品如下：泳道M-分子量标记、泳道1、泳道2：N-端带有His标签的DSP105(SEQ ID NO：1)的两种单独的制剂、泳道3：N-端带有His标签的DSP105_var17(SEQ ID NO：99)。
图8A至图8E显示使用在CHO-3E7细胞中所生产的PD1-4-1BBL变体融合蛋白的所示抗体的SDS-PAGE分析(标记为PAGE)及北方印迹(标记为WB)分析的图像。在还原或非还原的条件下，显示PD1-4-1BBL变体融合蛋白，在本文中称为“N-端带有His-标记的DSP105_var17”(SEQ ID NO：99，图8A)、“DSP105_var18”(SEQ ID NO：101，图8B)、“DSP105_var19”(SEQ ID NO：103，图8C)、“DSP105_var20”(SEQ ID NO：105，图8D)及“DSP105_var23”(SEQID NO：113，图8E)。图像中显示的样品如下：泳道M：分子量标记、泳道1至泳道3：分别在转染后第2天、第4天及第5天在还原的条件下所收集的细胞培养物的上清液、泳道NC1：在还原条件下的阴性对照、泳道4至泳道6：在非还原条件下分别在转染后第2天、第4天及第5天所收集的细胞培养物的上清液、泳道NC2：在非还原的条件下的阴性对照，及泳道P：多个标签(GenScript，货号M0101)作为阳性对照。
图9A至图9B显示在Expi293F细胞中所生产的PD1-4-1BBL变体融合蛋白的SDS-PAGE分析图像。在还原(图9A)或非还原(图9B)的条件下，显示PD1-4-1BBL变体融合蛋白，在本文中称为“N-端带有His标记的DSP105_var17”(SEQ ID NO：99)、“DSP105_var17”(SEQ IDNO：97)、“DSP105_var20”(SEQ ID NO：105)、“DSP105_var23”(SEQ ID NO：113)、“His标记的DSP105_var22”(SEQ ID NO：110)、“His标记的DSP105”(SEQ ID NO：1)、“DSP105_var24”(SEQ ID NO：133)、“DSP105_var25”(SEQ ID NO：135)及“DSP105_var31”(SEQ ID NO：147)。
图10A至图10C显示流式细胞术分析，证明DSP105_var17(SEQ ID NO：99)与表达PDL1或41BB的细胞结合。图10A证明所指定的受体在DLD1-PDL1或HT1080-41BB细胞株上的表达。PDL1或41BB的表面表达水平是通过用相应的抗体对各细胞株进行免疫染色，之后进行流式细胞术分析而确定的。图10B至图10C证明N端带有His标签的DSP105_var17(SEQ IDNO：99)与DLD1-PD1或HT1080-41BB细胞株的结合。
图11呈现流式细胞术分析，证明HT1080-4-1BB细胞株上的4-1BB受体的表达。
图12呈现的图表证明N端带有His标签的DSP105_var17蛋白(SEQ ID NO：99)、DSP105 var_17蛋白(SEQ ID NO：97)、DSP105 var_21蛋白(SEQ ID NO：107)及His标签的PD1-4-1BBL var_22(SEQ ID NO：110)促进4-1BBL/4-1BB信号转导，如OD值所示，表明在结合DSP105分子之后，HT1080-4-1BB细胞的IL-8分泌水平。
图13A至图13D证明在本文中称为“DSP105_V31”(SEQ ID NO：147)的PD1-4-1BBL变体融合体的经预测3D结构。图13A是示意性3D色带模型。PD1是描绘为灰色带(右侧)、41BB-L是描绘为黑色带(左侧)、在PD1与41BB-L的结构组件之间，连接子段是描绘为白色带。图13B是示意性3D表面显示模型。PD1是描绘为深灰色表面显示(右侧)、41BB-L是描绘为黑色表面显示(左侧)、在PD1与41BB-L的结构组件之间，连接子段是描绘为白色带。图13C是融合蛋白及其结合对应物的示意性3D色带模型。PD1是描绘为深灰色带(右侧)、41BB-L是描绘为黑色带(左侧)、在PD1与41BB-L的结构组件之间，连接子段是描绘为白色带、PDL1结合至PD1是描绘为灰色带(右侧)、三个41BB受体与41BB-L复合是描绘为灰色带(左侧)。图13D是融合蛋白及其结合对应物的示意性3D表面显示模型。PD1是描绘为深灰色表面显示(右侧)、41BB-L是描绘为黑色表面显示(左侧)、在PD1与41BB-L的结构组件之间，连接子是描绘为白色带。PD-L1结合至PD1是描绘为灰色带(右侧)，且三个41BB受体与41BB-L复合是描绘为灰色带(左侧)。
具体实施方式
在一些实施例中，本发明涉及PD1-4-1BBL变体融合蛋白及其使用方法。
在详细解释本发明的至少一实施例之前，应当理解，本发明的应用并非必然限于以下所描述或由实施例举例说明的细节。本发明能够具有其他实施例，或者能够以各种方式被实施或执行。
双信号蛋白(DSP)，亦称为信号转换蛋白(SCP)，目前在本领域中称为双功能融合蛋白，其将第I型膜蛋白的胞外部分(胞外氨基端)连接至第II型膜蛋白的胞外部分(胞外羧基端)，具有两个活性侧的融合蛋白。
利用结构功能工具，本发明的发明人能够生产PD1-4-1BBL融合蛋白，所述PD1-4-1BBL融合蛋白包括具有经改良的生产特性(例如，更高的产量、更低的聚集体的百分比)的PD1变体及/或4-1BBL变体，且其通常可有利地用于激活免疫细胞(通过共刺激)，以及特别地可治疗可得益于激活免疫细胞(例如癌症)的疾病。
不受理论的束缚，发明人建议以下作为本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白在治疗癌症中的作用模式：
由于PDL1在肿瘤细胞表面及肿瘤微环境中相对较高的表达，PD1-4-1BBL嵌合体的PD1部分将分子靶向肿瘤及转移部位，从而导致融合体与PDL1结合在肿瘤微环境内。
将融合蛋白靶向肿瘤细胞或/及肿瘤微环境可促进在肿瘤微环境中PD1-4-1BBL浓度的增加以及随后在肿瘤部位处的融合蛋白的4-1BBL部分的寡聚合。由于4-1BBL的寡聚合是4-1BB信号转导的必要步骤，因此4-1BBL的结合及寡聚合可提供4-1BB共刺激信号，从而促进T细胞、B细胞、NK细胞(尤其是肿瘤浸润淋巴细胞)的激活(TILs)，以及促进其他免疫细胞在肿瘤部位处杀死癌细胞。
除了4-1BBL-4-1BB共刺激信号之外，在肿瘤部位中，融合蛋白的PD1部分与PDL1的结合会与T细胞上所表达的内源性PD1竞争。因此，移除对T细胞的抑制作用，且进一步促进肿瘤微环境中TIL的激活。
PD1-4-1BBL的上述活性预期在肿瘤微环境中对TILs的激活产生协同作用，相较于各部分的个别的作用，预期产生更独特、更强大的作用，以及当组合使用其两种不同的部分时。
因此，根据本发明的一方面，提供一种PD1-4-1BBL融合蛋白，包括一PD1的氨基酸序列及一4-1BBL氨基酸序列，其中所述PD1的氨基酸序列：
(a)长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89、93及115所组成的群组，且不包括对应于SEQID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；或长度为138至145个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18、117及119所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段F146至V150；及/或
(b)在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；及/或
其中所述4-1BBL氨基酸序列：
(aa)长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组；长度为170至197个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：127及129所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段G198至E205；长度为170至182个氨基酸且与SEQ ID NO：125具有至少80％的同一性，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段A1至E23；或长度为184个氨基酸且与SEQ ID NO：123具有至少80％的同一性；及/或
(bb)包括4-1BBL氨基酸序列的三个重复；
且其中所述融合蛋白具有至少以下的能力之一：
(i)结合PDL1及4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
根据本发明的替代或额外的方面，提供一种PD1-4-1BBL融合蛋白，包括一PD1的氨基酸序列及一4-1BBL氨基酸序列，其中所述PD1的氨基酸序列：
(a)长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89及93所组成的群组，且不包括对应于SEQ IDNO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者，及/或
(b)在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；及/或
其中所述4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组；且其中所述融合蛋白具有至少以下的能力之一：
(i)结合PDL1及4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
根据本发明的替代或额外的方面，提供一种PD1-4-1BBL融合蛋白，包括一PD1的氨基酸序列及一4-1BBL氨基酸序列，其中所述PD1的氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；及/或其中所述4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组，且其中所述融合蛋白具有至少以下的能力之一：
(i)结合PDL1及4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
根据本发明的替代或额外的方面，提供一种PD1-4-1BBL融合蛋白，在PD1与4-1BBL之间包括一(GGGGS)n连接子，n＝1至4，其中所述融合蛋白具有至少以下的能力之一：
(i)结合PDL1及4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
根据本发明的替代或额外的方面，提供一种经分离的多肽，包括一PD1的氨基酸序列，其中所述PD1的氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89、93及115所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；或长度为138至145个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18、117及119所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段F146至V150；及可选地在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；且其中所述多肽能够结合PDL1。
根据本发明的替代或额外的方面，提供一种经分离的多肽，包括一PD1的氨基酸序列，其中所述PD1的氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89及93所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；及可选地在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；且其中所述多肽能够结合PDL1。
根据本发明的替代或额外的方面，提供一种经分离的多肽，包括一PD1的氨基酸序列，其中所述PD1的氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；且其中所述多肽能够结合PDL1。
根据本发明的替代或额外的方面，提供一种经分离的多肽，包括一4-1BBL氨基酸序列，其中所述4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组；长度为170至197个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ IDNO：127及129所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段G198至E205；或长度为170至182个氨基酸且与SEQ ID NO：125具有至少80％的同一性，且不包括对应于SEQID NO：3的氨基酸片段A1至E23；及可选地包括所述4-1BBL氨基酸序列的三个重复；且其中所述多肽具有至少以下的能力之一：
(i)结合4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
根据本发明的替代或额外的方面，提供一种经分离的多肽，包括一4-1BBL氨基酸序列，其中所述4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组；且其中所述多肽具有至少以下的能力之一：
(i)结合4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
如本文中所使用，术语“PD1(程序性死亡1，亦称为CD279)”是指PDCD1基因的多肽(基因ID 5133)或其功能同源物，例如其功能片段。根据具体实施例，术语“PD1”是指PD1多肽的功能同源物。根据具体实施例，PD1是人类PD1。根据一具体实施例，PD1蛋白是指例如提供于以下的GenBank编号NP_005009中的人类蛋白。
至目前为止，已确定PD-1的两个配体PDL1及PDL2(亦称为B7-DC)。根据一具体实施例，PDL1蛋白是指例如提供于以下的GenBank编号NP_001254635及NP_054862中的人类蛋白。根据一具体实施例，PDL2蛋白是指例如如提供于以下的GenBank编号NP_079515中的人类蛋白。
如本文中所使用，当短语“功能同源物”或“功能片段”与PD1相关时是指维持全长PD1的活性的多肽的一部分，例如PD-L1的结合。
用于测试结合的分析是本领域众所周知的，包括，但不限于流式细胞术、BiaCore、生物层干涉测定法、HPLC。
根据具体实施例，通过SPR分析确定PD1与PD-L1结合的Kd值是1nM至100μM、10nM至10μM、100nM至100μM、200nM至10μM，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，通过SPR分析确定PD1与PDL1结合的Kd值约为270nM。
根据具体实施例，通过SPR分析确定PD1与PDL1结合的Kd值约为8至9nM。
根据具体实施例，PD1包括所述PD1的胞外结构域或其功能片段。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：27。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：27所组成。
根据具体实施例，PD1核酸序列包括SEQ ID NO：28。
根据具体实施例，PD1核酸序列是由SEQ ID NO：28所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：2。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：2所组成。
根据具体实施例，PD1核酸序列包括SEQ ID NO：29。
根据具体实施例，PD1核酸序列是由SEQ ID NO：29所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：30或SEQ ID NO：31。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：30或SEQ ID NO：31所组成。
术语“PD1”亦涵盖表现出所需活性(即，结合PD-L1及/或PD-L2)的功能同源物(天然存在的或经合成/重组产生的)。此种同源物可为与多肽SEQ ID NO：2、27、30或31例如具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性或同源性，或与编码相同的多肽的多核苷酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、98％、至少99％或100％的同一性(如下文所进一步描述)。
根据具体实施例，PD1功能同源物与多肽SEQ ID NO：2、27、30或31具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性或同源性，或与编码相同的多肽的多核苷酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性(如下文所进一步描述)。
如本文中所使用，“同一性”或“序列同一性”是指整体的同一性，即，在本文所公开的整个氨基酸或核酸序列上，而非在其部分上的同一性。
可使用任何的蛋白质或核酸序列的比对算法以确定序列同一性或同源性，例如Blast、ClustalW及MUSCLE。
同源性亦可指异种同源物、缺失、插入或取代变体，包括氨基酸取代，如下文所进一步描述。
根据具体实施例，PD1多肽可以包括保留及非保留的氨基酸取代(在本文中亦称为突变)。此种取代在本领域中是已知的，且例如公开在毛特等人.PNAS，2015Nov 24；112(47):E6506-14、朱妍等人.Nature Communications2016volume 7，Article number:13354(DOI:10.1038/ncomms13354)，以及扎克KM等人.Structure.2015 23(12)：2341-2348(DOI：10.1016/j.str.2015.09.010)，其内容通过引用全部并入本文中。
当使用序列同一性的百分比来表示蛋白质时，不相同的残基位置通常因保留的氨基酸取代而有所不同，其中氨基酸残基被具有类似的化学特性(例如电荷或疏水性)的其他氨基酸残基取代，因此不会改变分子的功能特性。倘若序列在保留取代方面有所不同，则可向上调整序列同一性的百分比，以校正取代的保留性质。通过此种保留取代而有所不同的序列被认为是具有“序列相似性”或“相似性”。进行此调整的手段是本领域技术人员众所周知的。通常，其涉及将保留取代评分为部分错配而非全部错配，从而增加序列同一性的百分比。因此，例如，在具同一性的氨基酸的评分为1，及非保留取代的评分为0的情况下，保留取代的评分是介于0与1之间。计算保留取代的得分，例如，根据海尼科夫S及海尼科夫JG的算法[来自蛋白质区块的氨基酸替代矩阵.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1992，89(22)：10915-9]。
根据具体实施例，对应于如SEQ ID NO：31所示的PD1氨基酸序列一或多个氨基酸的突变是位于选自以下的氨基酸残基处：V39、L40、N41、Y43、R44、M45、S48、N49、Q50、T51、D52、K53、A56、Q63、G65、Q66、V72、H82、M83、R90、Y96、L97、A100、S102、L103、A104、P105、K106及A107。根据具体实施例，对应于如SEQ ID NO：31所示PD1氨基酸序列，一或多个氨基酸的突变是位于选自以下的氨基酸残基处：V39、L40、N41、Y43、R44、M45、S48、N49、Q50、T51、D52、K53、A56、Q63、G65、Q66、C68、V72、H82、M83、R90、Y96、L97、A100、S102、L103、A104、P105、K106及A107。
根据具体实施例，对应于如SEQ ID NO：31所示的PD1氨基酸序列，一或多个氨基酸的改变是选自由以下所组成的群组：(1)V39H或V39R；(2)L40V或L40I；(3)N41I或N41V；(4)Y43F或Y43H；(5)R44Y或R44L；(6)M45Q、M45E、M45L或M45D；(7)S48D、S48L、S48N、S48G或S48V；(8)N49C、N49G、N49Y或N49S；(9)Q50K、Q50E或Q50H；(10)T51V、T51L或T51A；(11)D52F、D52R、D52Y或D52V；(12)K53T或K53L；(13)A56S或A56L；(14)Q63T、Q63I、Q63E、Q63L或Q63P；(15)G65N、G65R、G65I、G65L、G65F或G65V；(16)Q66P；(17)V72I；(18)H82Q；(19)M83L或M83F；(20)R90K；(21)Y96F；(22)L97Y、L97V或L97I；(23)A100I或A100V；(24)S102T或S102A；(25)L103I、L103Y或L103F；(26)A104S、A104H或A104D；(27)P105A；(28)K106G、K106E、K106I、K106V、K106R或K106T；及(29)A107P、A107I或A107V。
根据具体实施例，对应于如SEQ ID NO：31中所示的PD1氨基酸序列，一或多个氨基酸的改变是选自由以下所组成的群组：(1)V39H或V39R；(2)L40V或L40I；(3)N41I或N41V；(4)Y43F或Y43H；(5)R44Y或R44L；(6)M45Q、M45E、M45L或M45D；(7)S48D、S48L、S48N、S48G或S48V；(8)N49C、N49G、N49Y或N49S；(9)Q50K、Q50E或Q50H；(10)T51V、T51L或T51A；(11)D52F、D52R、D52Y或D52V；(12)K53T或K53L；(13)A56S或A56L；(14)Q63T、Q63I、Q63E、Q63L或Q63P；(15)G65N、G65R、G65I、G65L、G65F或G65V；(16)Q66P；(17)C68S；(18)V72I；(19)H82Q；(20)M83L或M83F；(21)R90K；(22)Y96F；(23)L97Y、L97V或L97I；(24)A100I或A100V；(25)S102T或S102A；(26)L103I、L103Y或L103F；(27)A104S、A104H或A104D；(28)P105A；(29)K106G、K106E、K106I、K106V、K106R或K106T；及(30)A107P、A107I或A107V。
根据具体实施例，对应于如SEQ ID NO：2所示的PD1氨基酸序列，氨基酸的突变是位于的氨基酸残基C73处(例如，等同对应于如SEQ ID NO：31所示的PD1氨基酸序列的氨基酸残基C68处)。
根据具体实施例，对应于如SEQ ID NO：2所示的PD1氨基酸序列的氨基酸残基73PD1处的PD1多肽可包括一由C修饰至S的氨基酸修饰(例如，等同如SEQ ID NO：31所示的PD1氨基酸序列的氨基酸残基68)。
因此，根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：73。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：73所组成。
根据具体实施例，PD1核酸序列包括SEQ ID NO：74。
根据具体实施例，PD1核酸序列是由SEQ ID NO：74所组成。
如本文中所使用，短语“对应于如SEQ ID NO：31所示的PD1氨基酸序列”、“对应于SEQ ID NO：31”、“对应于如SEQ ID NO：2所示的PD1氨基酸序列”或“对应于SEQ ID NO：2”意旨包括相对于任何其他的PD1氨基酸序列的相应的氨基酸残基。
下文进一步提供对于保留氨基酸及非保留氨基酸取代的额外的描述。
本发明的一些实施例的PD1与多肽SEQ ID NO：18至21具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少9％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性或同源性，或与编码相同的多肽的多核苷酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性(如下文所进一步描述)，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18、19、20、21、85、89、93及115所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18、117及119所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：117及119所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89及93所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：18具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：19具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：20具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：21具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：85具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：89具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：93具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：115具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：117具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：119具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少85％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18、19、20、21、85、89、93及115所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少85％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18、117及119所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少85％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：117及119所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少85％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89及93所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少85％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：18具有至少85％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：19具有至少85％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：20具有至少85％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：21具有至少85％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：85具有至少85％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：89具有至少85％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：93具有至少85％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：115具有至少85％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：117具有至少85％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：119具有至少85％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少90％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18、19、20、21、85、89、93及115所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少90％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18、117及119所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少90％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：117及119所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少90％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89及93所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少90％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：18具有至少90％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：19具有至少90％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：20具有至少90％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：21具有至少90％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：85具有至少90％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：89具有至少90％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：93具有至少90％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：115具有至少90％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：117具有至少90％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：119具有至少90％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18、19、20、21、85、89、93及115所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18、117及119所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：117及119所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89及93所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：18具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：19具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：20具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：21具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：85具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：89具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：93具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：115具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：117具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：119具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89、93及115所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18、117及119所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：117及119所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89及93所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：18具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：19有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：20至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：21至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：85至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：89至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：93至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：115少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：117至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：119至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段F146至V150。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸残基P1至L5中的任一者。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸残基F146至V150中的任一者。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸残基P1至L5及F146至V150中的任一者。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列不包括SEQ ID NO：8或其任何片段。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列不包括SEQ ID NO：8。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列不包括SEQ ID NO：9或其任何片段。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列不包括SEQ ID NO：9。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列不包括SEQ ID NO：8及9或其任何片段。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列不包括SEQ ID NO：8及9。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：18、19、20、21、85、89、93或115。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：18、117或119。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：117或119。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：18、19、20、21、85、89或93。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：75、79、81、83、87、91或95。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：75、83、87、91或95。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：18、19、20或21。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：18或21。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：18。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：19。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：20。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：21。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：85。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：89。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：93。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：75。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：79。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：81。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：83。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：87。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：91。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：95。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：115。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：117。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：119。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：18、19、20、21、85、89、93或115所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：18、117或119所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：117或119所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：18、19、20、21、85、89或93所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：75、79、81、83、87、91或95所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：75、83、87、91或95所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：18、19、20或21所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：18或21所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：18所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：19所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：20所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：21所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：85所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：89所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：93所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：75所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：79所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：81所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：83所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：87所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：91所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：95所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：115所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：117所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是由SEQ ID NO：119所组成。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32、33、34、35、76、80、82、84、86、88、90、92、94、96、116、118及/或120具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32、33、34、35、76、80、82、84、86、88、90、92、94及/或96具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：76、80、82、84、86、88、90、92、94及/或96具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：76、80、82、84、88、92及/或96具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32、33、34及/或35具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：33具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：34具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：35具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：76具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：80具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：82具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：84具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：86具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：88具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：90具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：92具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：94具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：96具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：116具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：118具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：120具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32、33、34、35、76、80、82、84、86、88、90、92、94、96、116、118及/或120具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32、33、34、35、76、80、82、84、86、88、90、92、94及/或96具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32、33、34及/或35具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：33具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：34具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：35具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：76具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：80具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：82具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：84具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：86具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：88具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：90具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：92具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：94具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：96具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：116具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：118具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：120具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32、33、34、35、76、80、82、84、86、88、90、92、94、96、116、118及/或120具有至少85％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32、33、34、35、76、80、82、84、86、88、90、92、94及/或96具有至少85％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32、33、34及/或35具有至少85％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32、33、34、35、76、80、82、84、86、88、90、92、94、96、116、118及/或120具有至少90％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32、33、34、35、76、80、82、84、86、88、90、92、94及/或96具有至少90％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32、33、34及/或35具有至少90％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32、33、34、35、76、80、82、84、86、88、90、92、94、96、116、118及/或120具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32、33、34、35、76、80、82、84、86、88、90、92、94及/或96具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32、33、34及/或35具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32、33、34、35、76、80、82、84、86、88、90、92、94、96、116、118及/或120具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32、33、34、35、76、80、82、84、86、88、90、92、94及/或96具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：32、33、34及/或35具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：32、33、34、35、76、80、82、84、86、88、90、92、94、96、116、118或120。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：32、33、34、35、76、80、82、84、86、88、90、92、94或96。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：32、33、34或35。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：32。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：33。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：34。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：35。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：76。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：80。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：82。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：84。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：86。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：88。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：90。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：92。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：94。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：96。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：116。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：118。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括SEQ ID NO：120。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：32、33、34、35、76、80、82、84、86、88、90、92、94、96、116、118或120所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：32、33、34、35、76、80、82、84、86、88、90、92、94或96所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：32、33、34或35所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：32所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：33所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：34所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：35所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：76所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：80所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：82所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：84所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：86所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：88所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：90所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：92所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：94所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：96所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：116所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：118所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列是由SEQ ID NO：120所组成。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列包括100至200个氨基酸、120至180个氨基酸、120至160个氨基酸、130至170个氨基酸、130至160个氨基酸、130至150个氨基酸、140至160个氨基酸、145至155个氨基酸，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1的氨基酸序列的长度为123至166个氨基酸。
根据具体实施例，PD1的氨基酸序列的长度为156个氨基酸。
根据具体实施例，PD1的氨基酸序列的长度为145至155个氨基酸。
根据具体实施例，PD1的氨基酸序列的长度为150个氨基酸。
根据具体实施例，PD1的氨基酸序列的长度为少于150个氨基酸。
根据具体实施例，PD1的氨基酸序列的长度为少于149个氨基酸。
根据具体实施例，PD1的氨基酸序列的长度为少于148个氨基酸、少于147个氨基酸、少于146个氨基酸、少于145个氨基酸、少于144个氨基酸、少于143个氨基酸、少于142个氨基酸、少于141个氨基酸，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1的氨基酸序列的长度为138至145个氨基酸。
根据具体实施例，PD1的氨基酸序列的长度为145个氨基酸。
根据具体实施例，PD1的氨基酸序列的长度为143个氨基酸。
根据具体实施例，PD1的氨基酸序列的长度为不超过140个氨基酸。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列的长度为至少123个氨基酸、至少124个氨基酸、至少125个氨基酸、至少126个氨基酸、至少127个氨基酸、至少128个氨基酸、至少129个氨基酸、至少130个氨基酸、至少133个氨基酸、至少137个氨基酸、至少138个氨基酸，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，所述PD1的氨基酸序列的长度为至少123个氨基酸、至少124个氨基酸、至少125个氨基酸、至少126个氨基酸、至少127个氨基酸、至少128个氨基酸、至少129个氨基酸、至少130个氨基酸，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度至少126个氨基酸。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为126至148个氨基酸。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至140个氨基酸。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为126至140个氨基酸。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为127至140个氨基酸。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为128至140个氨基酸。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为130至140个氨基酸。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为130至135个氨基酸。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为135至140个氨基酸。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为126至130个氨基酸。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为127个氨基酸。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为128个氨基酸。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为133个氨基酸。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为135个氨基酸。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为136个氨基酸。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为137个氨基酸。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为138个氨基酸。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为140个氨基酸。
如本文中所使用，术语“4-1BBL(亦称为CD137L及TNFSF9)”是指TNFSF9基因的多肽(基因ID 8744)或其功能同源物，例如其功能片段。根据具体实施例，术语“4-1BBL”是指4-1BBL多肽的功能同源物。根据具体实施例，4-1BBL是人类4-1BBL。根据一具体实施例，4-1BBL蛋白是指人类蛋白，例如如提供于以下的GenBank编号NP_003802中的人类蛋白。
如本文中所使用，短语“功能同源物”或“功能片段”当与4-1BBL相关时，是指维持全长4-1BBL的活性的多肽的一部分，例如，(i)结合4-1BB、(ii)激活4-1BB信号通路、(iii)激活表达4-1BB的免疫细胞、(iv)形成同源三聚体。
根据具体实施例，当与4-1BBL相关时，功能同源物可为(i)、(ii)、(iii)、(i)+(ii)、(i)+(iii)、(ii)+(iii)。
根据具体实施例，当与4-1BBL相关时，功能同源物可为(i)+(ii)+(iii)。
根据具体实施例，当与4-1BBL相关时，功能同源物可为(iv)、(i)+(iv)、(ii)+(iv)、(iii)+(iv)、(i)+(ii)+(iv)、(i)+(iii)+(iv)、(ii)+(iii)+(iv)。
根据具体实施例，当与4-1BBL相关时，功能同源物可为(i)+(ii)+(iii)+(iv)。
根据一具体实施例，4-1BB蛋白是指人类蛋白，例如提供于以下的GenBank编号NP_001552中的人类蛋白。
用于测试结合的分析法是本领域众所周知的，且在上文及下文中进一步描述。
根据具体实施例，通过SPR确定4-1BBL是以大约0.1至1000nM、0.1至100nM、1至100nM或55.2nM的Kd结合4-1BB，各可能性代表本发明所要求所保护的个别的实施例。
用于测试三聚作用的分析法是本领域众所周知的，包括，但不限于NATIVE-PAGE、SEC-HPLC 2D凝胶、凝胶过滤、SEC-MALS、分析超速离心(AUC)质谱(MS)、毛细管凝胶电泳(CGE))。
如本文中所使用，术语“激活(activating)”或“激活(activation)”是指刺激免疫细胞(例如T细胞、B细胞、NK细胞、吞噬细胞)的过程，其会造成细胞增生、成熟、细胞激素产生、吞噬作用及/或调节的诱导或作用功能。
根据具体实施例，激活包括共刺激。
如本文中所使用，术语“共刺激(co-stimulating)”或“共刺激(co-stimulation)”是指传导一不依赖于二级抗原的刺激信号(例如4-1BB信号)，所述刺激信号会导致免疫细胞的激活。
根据具体实施例，激活包括一抑制导致免疫细胞激活的抑制信号(例如PDL1信号)。
确定刺激或抑制信号的信号传导的方法在本领域中是众所周知的，且亦在随后的实例部分中公开，包括，但不限于使用例如BiaCore、HPLC或流式细胞仪的结合分析法、诸如激酶的激活的分析法的激活分析法，以及使用例如PCR、北方印迹、免疫沉淀及免疫组化的在信号级联反应中所涉及的分子的表达。额外地或可替代地，可通过评估免疫细胞的激活或功能来确定信号的传导(共刺激或抑制)。评估免疫细胞激活或功能的方法是本领域众所周知的，包括，但不限于增生测定法，例如CFSE染色、MTS、阿拉玛蓝、BRDU及胸苷掺入、细胞毒性分析法，例如CFSE染色、铬释放、钙黄绿素(Calcin AM)、诸如细胞内的细胞激素染色的细胞激素分泌分析、ELISPOT及ELISA，使用流式细胞仪检测诸如CD25、CD69、CD137、CD107a、PD1及CD62L的激活标记的表达。
根据具体实施例，如下文进一步所描述，确定信号传导活性或激活是在体外或离体中进行是有效的，例如，在经混合的淋巴细胞反应(MLR)中。
针对相同的培养条件，相较于相同的物种但未与PF1-4-1BBL融合蛋白相接触的细胞中的信号传导、激活或功能，通常表达信号传导活性或免疫细胞的激活或功能、在相同的物种但未与PF1-4-1BBL融合蛋白接触的细胞中的激活或功能、编码相同的多肽的多核苷酸或编码相同的多肽的宿主细胞；或与一载体控件(亦称为控件)接触。
根据具体实施例，4-1BBL包括所述4-1BBL的胞外结构域或其功能片段。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：36。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：36所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：37。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：37所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：3。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：3所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：38。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：38所组成。
术语“4-1BBL”亦涵盖功能同源物(天然存在或经合成/重组产生的)，其表现出期望的活性(如上文所定义)。此种同源物可为与多肽SEQ ID NO：3、36例如具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性或同源性，或与编码相同的多肽的多核苷酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性(如下文所进一步描述)。
根据具体实施例，所述4-1BBL可为与多肽SEQ ID NO：3、36例如具有至少至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性或同源性，或编码相同的多肽的多核苷酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性(如下文所进一步描述)。
根据具体实施例，如上文及下文所进一步描述，4-1BBL多肽可包括的氨基酸取代。
本发明的一些实施例的4-1BBL与多肽SEQ ID NO：22、23、24及/或25具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性或同源性，或与编码相同的多肽的多核苷酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性(如下文所进一步描述)，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：22、23、24及/或25具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：22、23及/或24具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：22具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：23具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：24具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：25具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段A1至V6。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段A1至G14。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段A1至V6或A1至G14中的任一者。
如本文中所使用，短语“对应于SEQ ID NO：3”旨在包括相对于任何其他的4-1BBL氨基酸序列的对应氨基酸残基。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列不包括SEQ ID NO：6或7或其任何片段。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列不包括SEQ ID NO：6或7。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：22、23、24或25。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：22、23或24。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：22或23。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：22。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包含SEQ ID NO：23。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包含SEQ ID NO：24。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包含SEQ ID NO：25。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：22、23、24或25所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：22、23或24所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：22或23所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：22所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：23所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：24所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：25所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：127及129所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少85％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：127及129所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少90％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：127及129所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：127及129所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：127及129所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与一氨基酸序列具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：127及129所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段G198至E205。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列不包括对应于SEQ ID NO：3的任何的氨基酸残基G198至E205。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列不包括SEQ ID NO：166或其片段。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列不包括SEQ ID NO：166。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：127或129。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：127或129所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：125具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：125具有至少85％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：125具有至少90％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：125具有至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：125具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：125具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段A1至E23。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列不包括对应于SEQ ID NO：3的任何的氨基酸残基A1至E23。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列不包括SEQ ID NO：167或其任何片段。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列不包括SEQ ID NO：167。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：125。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：125所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：123具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：123具有至少85％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：123具有至少90％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：123具有至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：123具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：123具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：123。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：123所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：39、40、41及/或42具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：39、40、41及/或42具有至少95％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：39、40、41及/或42具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：39及/或40具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：39、40、41或42。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：39、40或41。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：39或40。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：39。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：40。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：41。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：42。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：39、40、41或42所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：39、40或41所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：39或40所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：39所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：40所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：41所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：42所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：128及/或130具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：128及/或130具有至少95％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：128及/或130具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：128或130。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：128或130所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：126具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：126具有至少95％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：126具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：126。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：126所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：124具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：124具有至少95％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：124具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：124。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：124所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括100至300个氨基酸、150至250个氨基酸、100至250个氨基酸、150至220个氨基酸、180至220个氨基酸、180至210个氨基酸、185至205个氨基酸、190至210个氨基酸，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列的长度为190至210个氨基酸。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列的长度为204个氨基酸。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列的长度为185至200个氨基酸。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列的长度为185至199个氨基酸。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列的长度为170至197个氨基酸。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列的长度为170至182个氨基酸。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列的长度为184个氨基酸。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列的长度为170至197个氨基酸。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列的长度为185、191、197或199个氨基酸，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列的长度为184个氨基酸。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列的长度为183个氨基酸。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列的长度为182个氨基酸。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列的长度为176个氨基酸。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括PD1-4-1BBL融合蛋白或本文中所公开的4-1BBL多肽包括4-1BBL氨基酸序列的三个重复。
根据具体实施例，所述三个重复中的各重复具有至少以下的能力之一：(i)结合4-1BB、(ii)激活所述4-1BB的信号传导途径、(iii)激活表达4-1BB的免疫细胞、(iv)形成同源三聚体。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列在所述4-1BBL氨基酸序列的所述三个重复中的各重复之间不包括一连接子。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列在所述4-1BBL氨基酸序列的所述三个重复中的各重复之间包括一连接子。本领域已知的任何连接子可与本发明的具体实施例一起使用。下文将详细描述可使用的连接子的非限制性实例。
根据具体实施例，连接子是一(GGGGS)x2+GGGG(SEQ ID NO：121)连接子。
根据具体实施例，重复的序列可为本文中所定义的任何4-1BBL。
根据具体实施例，三个重复具有相同的4-1BBL氨基酸序列。
根据其他的具体实施例，三个重复是不同的，即，具有不同的4-1BBL氨基酸序列。
根据其他的具体实施例，三个重复中的两个重复具有相同的4-1BBL氨基酸序列。
根据具体实施例，三个重复中的至少一重复包括本文中所公开的4-1BBL氨基酸序列。
根据具体实施例，三个重复中的至少一重复是由本文中所公开的4-1BBL氨基酸序列所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括一氨基酸的三个重复，所述氨基酸包括SEQ ID NO：22。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括一氨基酸的三个重复，所述氨基酸是由SEQ ID NO：22所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQID NO：131具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQID NO：131具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQID NO：131具有至少85％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQID NO：131具有至少90％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQID NO：131具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：131。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：131所组成。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：132具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：132具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：132具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：132。
根据具体实施例，4-1BBL氨基酸序列是由SEQ ID NO：132所组成。
术语“DSP”及“融合蛋白”、“嵌合蛋白”或“嵌合体”在本文中可互换使用，且是指具有两个或更多部分的氨基酸序列，所述两个或更多部分在自然界中并未一起存在于一氨基酸序列中。
本发明的一些实施例的融合蛋白包括一PD1氨基酸序列及一4-1BBL氨基酸序列(本文中亦称为PD1-4-1BBL融合蛋白)。
根据具体实施例，PD1是在4-1BBL的N端。
根据具体实施例，PD1是在4-1BBL的C端。
本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白可包括本文中所定义的任何的PD1；及任何的4-1BBL氨基酸序列：
(aa)长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组；长度为170至197个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：127及129所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段G198至E205；长度为170至182个氨基酸且与SEQ ID NO：125具有至少80％的同一性，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段A1至E23；或长度为184个氨基酸且与SEQ ID NO：123具有至少80％的同一性；及/或
(bb)包括4-1BBL氨基酸序列的三个重复；例如公开在本文中的例子，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白可包括任一PD1氨基酸序列：
(a)长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89、93及115所组成的群组，且不包括对应于SEQID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者，或长度为138至145个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18、117及119所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段F146至V150；及/或
(b)在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；例如公开在本文中的例子；及在本文中所定义的任一4-1BBL，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白可包括任一PD1氨基酸序列：
(a)长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89、93及115所组成的群组，且不包括对应于SEQID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者，或长度为138至145个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18、117及119所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段F146至V150；及/或
(b)在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；例如公开在本文中的例子；及任一4-1BBL：
(aa)长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组；长度为170至197个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：127及129所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段G198至E205；长度为170至182个氨基酸且与SEQ ID NO：125具有至少80％的同一性，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段A1至E23；或长度为184个氨基酸且与SEQ ID NO：123具有至少80％的同一性；及/或
(bb)包括4-1BBL氨基酸序列的三个重复；例如公开在本文中的例子，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白可包括如本文中所定义的任一PD1氨基酸序列；及长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组；例如公开在本文中的例子，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白可包括任一PD1氨基酸序列：
(a)长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89及93所组成的群组，且不包括对应于SEQ IDNO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；及/或
(b)在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；例如公开在本文中的例子；及在本文中所定义的任一4-1BBL，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白可包括长度为123至148个氨基酸的任一PD1氨基酸序列，且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；例如公开在本文中的例子；及在本文中所定义的任一4-1BBL，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白可包括任一PD1氨基酸序列：
(a)长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89及93所组成的群组，且不包括对应于SEQ IDNO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；及/或
(b)在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；例如公开在本文中的例子；及任一4-1BBL氨基酸序列，所述4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQID NO：22至25所组成的群组；例如公开在本文中的例子，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白可包括任一PD1氨基酸序列，所述PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；例如公开在本文中的例子；以及任4-1BBL氨基酸序列，所述4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组；例如公开在本文中的例子，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：2、18-21、85、89、93、27、30及/或31具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与SEQ ID NO：22、23、24或25具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：73、75、79、81、83、87、91及/或95具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与SEQ ID NO：22、23、24或25具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列与SEQ ID NO：2、18至21、27、30及/或31具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与SEQ ID NO：22、23、24或25具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：2、18至21、85、89、93、27、30或31；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：22、23、24或25，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：73、75、79、81、83、87、91或95；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：22、23、24或25，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：73；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：22、23、24或25，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：75、79、81、83、87、91或95；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：22、23、24或25，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：75、83、87、91或95；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：22、23、24或25，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：73、75、83、87、91或95；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：22、23、24或25，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括SEQ ID NO：2、18至21、27、30或31；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：22、23、24或25，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：2、18至21、85、89、93、27、30或31所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：22、23、24或25所示，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：73、75、79、81、83、87、91或95所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：22、23、24或25所示，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：73所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：22、23、24或25所示，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：75、79、81、83、87、91或95所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：22、23、24或25所示，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：75、83、87、91或95所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：22、23、24或25所示，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：73、75、83、87、91或95所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：22、23、24或25所示，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：2、18至21、27、30或31所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：22、23、24或25所示，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列：
(a)长度为123至148个氨基酸且与SEQ ID NO：18至21、85、89及/或93具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；及/或
(b)在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；以及4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：3、22至25及/或36具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与SEQ ID NO：18、19、20及/或21具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；以及4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：3、22至25及/或36具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列：
(a)长度为123至148个氨基酸且包括SEQ ID NO：18至21、85、89及/或93；及/或
(b)在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；以及4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：3、22至25或36，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括18至21、85、89或93；以及4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：3、22至25或36，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括73、75、79、81、83、87、91或95；以及4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：3、22至25或36，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括73；以及4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：3、22至25或36，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括75、79、81、83、87、91或95；以及4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：3、22至25或36，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括75、83、87、91或95；以及4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：3、22至25或36，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列包括73、75、83、87、91或95；以及4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：3、22至25或36，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且包括SEQ ID NO：18、19、20或21；以及4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：3、22至25或36，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且包括SEQ ID NO：18、19、20或21；以及4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：3、22至25或36，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与SEQ ID NO：18具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与SEQ ID NO：22、23、24或25具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且包括SEQ ID NO：18；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：22、23、24或25。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：18所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：22、23、24或25所示。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与SEQ ID NO：18具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与SEQ ID NO：22、23或24具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且包括SEQ ID NO：18；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：22、23或24。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：18所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：22、23或24所示。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与SEQ ID NO：18具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与SEQ ID NO：22具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且包括SEQ ID NO：18；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：22。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：18所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：22所示。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与SEQ ID NO：18具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与SEQ ID NO：23具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且包括SEQ ID NO：18；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：23。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：18所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：23所示。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与SEQ ID NO：18具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与SEQ ID NO：24具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且包括SEQ ID NO：18；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：24。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：18所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：24所示。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与SEQ ID NO：19具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与SEQ ID NO：22、23、24或25具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且包括SEQ ID NO：19；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：22、23、24或25。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：19所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：22、23、24或25所示。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与SEQ ID NO：20具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与SEQ ID NO：22、23、24或25具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：20所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：22、23、24或25所示。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与SEQ ID NO：21具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与SEQ ID NO：22、23、24或25具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且包括SEQ ID NO：21；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：22、23、24或25。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：21所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：22、23、24或25所示。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与SEQ ID NO：18具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与SEQ ID NO：23具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列：
(a)长度为123至148个氨基酸且与SEQ ID NO：18至21、85、89或93具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；及/或
(b)在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；以及4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：22具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且包括SEQ ID NO：85、89或93；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：22。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：85、89或93所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：22、23、24或25所示。根据具体实施例，氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且包括SEQ ID NO：75、79、81、83、87、91或95；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：22。
根据具体实施例，氨基酸序列是如SEQ ID NO：75、79、81、83、87、91或95所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：22、23、24或25所示。
根据具体实施例，氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且包括SEQ ID NO：75、83、87、91或95；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：22。
根据具体实施例，氨基酸序列是如SEQ ID NO：75、83、87、91或95所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：22、23、24或25所示。
根据具体实施例，氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且包括SEQ ID NO：75；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：22。
根据具体实施例，氨基酸序列是如SEQ ID NO：75所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：22、23、24或25所示。
根据具体实施例，氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且包括SEQ ID NO：83；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且包括SEQ ID NO：22。
根据具体实施例，氨基酸序列是如SEQ ID NO：83所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：22、23、24或25所示。
根据具体实施例，氨基酸序列包括SEQ ID NO：73；以及4-1BBL氨基酸序列包括SEQID NO：3。
根据具体实施例，氨基酸序列是如SEQ ID NO：73所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：3所示。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与SEQ ID NO：115具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；以及4-1BBL是本文中所定义的任何的4-1BBL，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与SEQ ID NO：115具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；以及4-1BBL氨基酸序列：
(aa)长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组；长度为170至197个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQID NO：127及129所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段G198至E205；长度为170至182个氨基酸且与SEQ ID NO：125具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段A1至E23；或长度为184个氨基酸且与SEQ ID NO：123具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；及/或
(bb)包括4-1BBL氨基酸序列的三个重复，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与SEQ ID NO：115具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为170至182个氨基酸且与SEQ ID NO：125具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段A1至E23。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且包括SEQ ID NO：115；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为170至182个氨基酸且包括SEQ ID NO：125。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：115所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：125所示。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与SEQ ID NO：115具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为184个氨基酸且与SEQ ID NO：123具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且包括SEQ ID NO：115；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为184个氨基酸且包括SEQ ID NO：123。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：115所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：123所示。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为138至145个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ IDNO：117及119所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段F146至V150；以及4-1BBL氨基酸序列是本文中所定义的任何的4-1BBL，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为138至145个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ IDNO：117及119所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段F146至V150；以及4-1BBL氨基酸序列：
(aa)长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组；长度为170至197个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQID NO：127及129所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段G198至E205；长度为170至182个氨基酸且与SEQ ID NO：125具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段A1至E23；或长度为184个氨基酸且与SEQ ID NO：123具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；及/或
(bb)包括4-1BBL氨基酸序列的三个重复，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为138至145个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ IDNO：117及119所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段F146至V150；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为170至197个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：127及129所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段G198至E205。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为138至145个氨基酸且包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：117及119所组成的群组；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为170至197个氨基酸且包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：127及129所组成的群组。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：117或119所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：127或129所示。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为138至145个氨基酸且包括SEQ ID NO：117；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为170至197个氨基酸且包括SEQ ID NO：127。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：117所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：127所示。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为138至145个氨基酸且包括SEQ ID NO：119；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为170至197个氨基酸且包括SEQ ID NO：129。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：119所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：129所示。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与SEQ ID NO：115具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为184个氨基酸且与SEQ ID NO：123具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且包括SEQ ID NO：115；以及4-1BBL氨基酸序列的长度为184个氨基酸且包括SEQ ID NO：123。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：115所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：123所示。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与SEQ ID NO：18具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；以及4-1BBL氨基酸序列与SEQ IDNO：3具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸或138至145个氨基酸且包括SEQ ID NO：18；以及4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：3。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：18所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：3所示。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸或138至145个氨基酸且与SEQ ID NO：18具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性；以及4-1BBL氨基酸序列与SEQ ID NO：131具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸或138至145个氨基酸且包括SEQ ID NO：18；以及4-1BBL氨基酸序列包括SEQ ID NO：131。
根据具体实施例，PD1氨基酸序列是如SEQ ID NO：18所示；以及4-1BBL氨基酸序列是如SEQ ID NO：131所示。
可在本发明的具体实施例中使用的PD1氨基酸序列及4-1BBL氨基酸序列的特定组合的非限制性实例提供于以下的实施例部分的表4中，其作为本说明书的组成部分。
根据具体实施例，包括PD1氨基酸序列的经分离的多肽或包括4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽是可溶的(即，不固定在合成的或天然存在的表面上)。
根据具体实施例，将包括PD1氨基酸序列的经分离的多肽或包括4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽固定在合成的或天然存在的表面上。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白是可溶的(即，不固定在合成或天然存在的表面上)。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白是固定在合成或天然的表面上。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白是至少为同源三聚体的形式。
根据具体实施例，至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％的PD1-4-1BBL融合蛋白是至少为同源三聚体的形式，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，所述至少为同源三聚体包括一同源三聚体。
根据具体实施例，所述至少为同源三聚体包括一同源四聚体。
根据具体实施例，所述至少为同源三聚体包括一同源五聚体。
根据具体实施例，所述至少为同源三聚体包括一同源六聚体。
确定三聚体的方法是本领域众所周知的，包括，但不限于NATIVE-PAGE、SEC-HPLC2D凝胶、凝胶过滤、SEC-MALS、分析超速离心(AUC)质谱(MS)、毛细管凝胶电泳(CGE)。
根据具体实施例，通过SEC-MALLS检测，所述至少为同源三聚体的分子量为至少100kD、至少120kD、至少140kD、至少160kD、至少180kD。
根据具体实施例，通过SEC-MALS检测，所述至少为同源三聚体的分子量为至少100kD。
根据具体实施例，通过SEC-MALS检测，所述至少为同源三聚体的分子量为至少140kD。
根据具体实施例，通过SEC-MALS检测，所述至少为同源三聚体的分子量为至少200kD。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL不包括PD1和4-1BBL之间的连接子。
在一些实施例中，PD1-4-1BBL包含可以为任何长度的连接子。
因此，根据具体实施例，在所述PD1与所述4-1BBL之间，PD1-4-1BBL融合蛋白不包括一连接子。
在一些实施例中，PD1-4-1BBL包括可为任何长度的连接子。
因此，根据具体实施例，在所述PD1与所述4-1BBL之间，PD1-4-1BBL融合蛋白包括一连接子。
本领域已知的任何连接子可与本发明的具体实施例一起使用。
根据具体实施例，连接子可为源自天然存在的多结构域蛋白，或者为例如在文献奇奇里等人，(2013)Protein Sci.22(2)：153-167、陈等人，(2013)，Adv Drug DelivRev.65(10)：1357-1369中所描述的经验性连接子，其全部内容通过引用并入本文中。在一些实施例中，可使用诸如陈等人，(2013)，Adv Drug Deliv Rev.65(10)：1357-1369及克雷斯托等人，(2000)，Protein Eng.13(5):309-312中所描述的连接子设计数据库及计算机程序来设计连接子，其全部内容通过引用并入本文中。
根据具体实施例，所述连接子是一合成的连接子，例如PEG。
根据具体实施例，连接子是一抗体(例如，IgG、IgA、IgD或IgE的抗体)的Fc结构域或铰链区或其片段。
根据具体实施例，连接子是人类IgG4的Fc结构域或铰链区。
根据具体实施例，Fc结构域连接子包括SEQ ID NO：160。
根据具体实施例，所述连接子是人类IgG1的Fc结构域或铰链区。
根据具体实施例，Fc结构域连接子包括SEQ ID NO：163。
根据具体实施例，Fc结构域或铰链区连接子可包括保留及非保留的氨基酸取代(在本文中亦称为突变)。此种取代是本领域已知的。
根据其他的具体实施例，连接子非为抗体的Fc结构域或铰链区或其片段。
根据具体实施例，连接子可为功能性的。例如，但不限于，连接子可具有改善折叠及/或稳定性、改善表达、改善药代动力学及/或改善PD1-4-1BBL融合蛋白的生物活性的作用。在另一实例中，连接子可具有将PD1-4-1BBL融合蛋白靶向特定细胞类型或位置的作用。
根据具体实施例，连接子是一多肽。
多肽连接子的非限制性实例包括具有以下序列的连接子：LE、GGGGS(SEQ ID NO：150)、(GGGGS)n，n＝1至4，(SEQ ID NO：149)、GGGGSGGGG(SEQ ID NO：122)、(GGGGS)x2(SEQID NO：151)、(GGGGS)x2+GGGG(SEQ ID NO：121)、(Gly)8、(Gly)6、(EAAAK)n，n＝1至3，(SEQID NO：152)、A(EAAAK)nA，n＝2至5，(SEQ ID NO：153)、AEAAAKEAAAKA(SEQ ID NO：154)、A(EAAAK)4ALEA(EAAAK)4A(SEQ ID NO：155)、PAPAP(SEQ ID NO：156)、K ESGSVSS EQ LAQFRS LD(SEQ ID NO：157)、EGKSSGSGSESKST(SEQ ID NO：158)、GSAGSAAGSGEF(SEQ ID NO：159)及(XP)n，X表示任何氨基酸，例如Ala、Lys或Glu。
根据具体实施例，所述连接子是选自由GGGGS(SEQ ID NO：150)、(GGGGS)n，n＝1至4，(SEQ ID NO：149)、GGGGSGGGG(SEQ ID NO：122)、(GGGGS)x2(SEQ ID NO：151)、(GGGGS)x2+GGGG(SEQ ID NO：121)所组成的群组。
根据具体实施例，所述连接子是(GGGGS)n，n＝1至4，(SEQ ID NO：149)连接子。
根据具体实施例，所述连接子是GGGGSx2(SEQ ID NO：151)连接子。
因此，根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ IDNO：145所组成的群组。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：145具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：145具有至少85％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：145具有至少90％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：145具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：145具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：145。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO：145所组成。
根据具体实施例，所述连接子是一GGGGSGGGG(SEQ ID NO：122)连接子。
根据具体实施例，所述连接子是一(GGGGS)x2+GGGG(SEQ ID NO：121)连接子。
因此，根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ IDNO：147所组成的群组。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：147具有至少80％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：147具有至少85％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：147具有至少90％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：147具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：147具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：147。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO：147所组成。
在一些实施例中，PD1-4-1BBL融合蛋白包括长度为1-6个氨基酸的连接子。
根据具体实施例，所述连接物基本上是由甘氨酸及/或丝氨酸残基所组成(例如，约30％、或约40％、或约50％、或约60％、或约70％、或约80％、或约90％、或约95％、或约97％或100％的甘氨酸及丝氨酸。
根据具体实施例，所述连接子是单一氨基酸连接子。
在本发明的一些实施例中，连接PD1与4-1BBL的一氨基酸是甘氨酸，在本文中亦称为PD1-G-4-1BBL融合蛋白。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107、111、113、133、135、137、139、141、143及147，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：133、135、137、139、141、143及147所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107及111所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105、107及111所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105及107所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16及44至56所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14及16所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107、111、113、133、135、137、139，141、143及147所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：133、135、137、139、141、143及147所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105、107及111所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105及107所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14及16所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少85％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107、111、113、133、135、137、139，141、143及147所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少85％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：133、135、137、139、141、143及147所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少85％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105、107及111所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少85％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105及107所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少85％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14及16所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少90％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107、111、113、133、135、137、139，141、143及147所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少90％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：133、135、137、139、141、143及147所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少90％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105、107及111所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少90％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105及107所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少90％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14及16所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107、111、113、133、135、137、139，141、143及147所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：133、135、137、139、141、143及147所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105、107及111所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105及107所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14及16所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：97具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：101具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：103具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：105具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：107具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：111具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：12具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：14具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：16具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：113具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：133具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：135具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：137具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：139具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：141具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：143具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：147具有至少95％的同一性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ IDNO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107、111、113、133、135、137、139、141、143及147所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ IDNO：133、135、137、139、141、143及147所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ IDNO：97、101、103、105、107及111所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ IDNO：97、101、103、105及107所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ IDNO：12、14及16所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107、111、113、133、135、137、139、141、143及147所组成的群组。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：133、135、137、139、141、143及147所组成的群组。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107及111所组成的群组。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105、107及111所组成的群组。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105及107所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16及44至56所组成的群组。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14及16所组成的群组。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：97。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：101。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：103。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：105。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：107。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：111。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：12。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：14。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：16。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：113。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：133。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：135。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：137。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：139。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：141。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：143。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：147。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由一氨基酸序列所组成，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107、111、113、133、135、137、139、141、143及147所组成的群组。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由一氨基酸序列所组成，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：133、135、137、139、141、143及147所组成的群组。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由一氨基酸序列所组成，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107及111所组成的群组。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由一氨基酸序列所组成，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105、107及111所组成的群组。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由一氨基酸序列所组成，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：97、101、103、105及107所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由一氨基酸序列所组成，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16及44至56所组成的群组。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由一氨基酸序列所组成，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14及16所组成的群组。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO:97所组成。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO:101所组成。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO:103所组成。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO:105所组成。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO:107所组成。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO:111所组成。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO:12所组成。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO:14所组成。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO:16所组成。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO:113所组成。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO:133所组成。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO:135所组成。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO:137所组成。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO:139所组成。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO:141所组成。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO:143所组成。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由SEQ ID NO:147所组成。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列的长度为300至900个氨基酸、300至800个氨基酸、300至600个氨基酸、300至550个氨基酸、300至500个氨基酸，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列的长度为300至750个氨基酸。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列的长度为308至750个氨基酸。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列的长度为308至400个氨基酸。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列的长度为308至350个氨基酸。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列的长度为308至448、308至362、308至351、313至351、313至339、318至351、318至362、318至340、318至332个氨基酸。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列的长度为308至488个氨基酸。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列的长度为308至351个氨基酸。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列的长度为318至351个氨基酸。
在以下的实例部分的表4中提供可与本发明的具体实施例一起使用的特定PD1-4-1BBL融合蛋白的非限制性实例，其作为本说明书的组成部分。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的产量高于包括如SEQ ID NO：2所示的PD1氨基酸序列及如SEQ ID NO：3所示的4-1BBL氨基酸序列的PD1-4-1BBL融合蛋白的产量至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的产量高于包括如SEQ ID NO：2所示的PD1氨基酸序列及如SEQ ID NO：3所示的4-1BBL氨基酸序列的PD1-4-1BBL融合蛋白的产量至少1.5倍。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的产量高于包括如SEQ ID NO：2所示的PD1氨基酸序列及如SEQ ID NO：3所示的4-1BBL氨基酸序列的PD1-4-1BBL融合蛋白的产量至少2倍。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的产量高于SEQ ID NO：5的产量至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的产量高于SEQ ID NO：5的产量至少1.5倍。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的产量高于SEQ ID NO：5的产量至少2倍。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的产量高于SEQ ID NO：2的产量至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的产量高于SEQ ID NO：3的产量至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的聚集体的数量低于SEQ ID NO：5的聚集体的数量至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％，所述聚集体的分子量为至少300kDa，其可由例如SDS-PAGE或SEC-MALS测得。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的聚集体的数量低于SEQ ID NO：5的聚集体的数量至少20％。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的聚集体的数量低于SEQ ID NO：5的聚集体的数量至少50％。
根据具体实施例，例如在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的活性高于包括如SEQ ID NO：2所示的PD1氨基酸序列及如SEQ ID NO：3所示的4-1BBL氨基酸序列的PD1-4-1BBL融合蛋白的活性至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，例如在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的活性高于SEQ ID NO：5的活性至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，例如在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的活性高于SEQ ID NO：2的活性至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，例如在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的活性高于SEQ ID NO：3的活性至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的稳定性高于包括如SEQ ID NO：2所示的PD1氨基酸序列及如SEQ ID NO：3所示的4-1BBL氨基酸序列的PD1-4-1BBL融合蛋白的稳定性至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的稳定性高于SEQ ID NO：5的活性至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的稳定性高于SEQ ID NO：2的活性至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的包括4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽的稳定性高于SEQ ID NO：3的稳定性至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍，各种可能性代表本发明的个别的实施例具体实施例。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的安全性高于包括如SEQ ID NO：2所示的PD1氨基酸序列及如SEQ ID NO：3所示的4-1BBL氨基酸序列的PD1-4-1BBL融合蛋白的安全性至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍，各种可能性代表本发明的个别的实施例具体实施例。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白的安全性高于SEQ ID NO：5的安全性至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍，各种可能性代表本发明的个别的实施例具体实施例。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的包括PD1氨基酸序列的经分离的多肽的安全性高于SEQ ID NO：2至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，在相同的生产条件下，本发明的一些实施例的包括4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽的安全性高于SEQ ID NO：3至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，所述生产条件包括在哺乳动物细胞中表达且在32至37℃、5％至10％CO2下培养5至13天。
可在本发明的具体实施例中使用的生产条件的非限制性实例在以下的实例部分中公开。
因此，例如，编码融合蛋白的表达载体，包括PD1氨基酸序列的经分离的多肽或包括4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽，所述4-1BBL氨基酸序列在N端包括人工信号肽(例如SEQ ID NO：4)及在C端包括His标签及终止密码子，是在哺乳动物细胞中表达，例如Expi293F或ExpiCHO细胞。之后根据Expi293F或ExpiCHO细胞制造商的说明书(Thermo)，经转导的细胞是在细胞特异性培养基中于32至37℃、5至10％CO2中进行培养，并在培养至少5天后自上清液中收集蛋白质并纯化。
根据具体实施例，以批次、分批，批次补料或灌注模式操作培养物。
根据具体实施例，培养物在批次补料的条件下操作。
根据具体实施例，在37℃下进行培养。
根据具体实施例，其在37℃下进行培养，温度转变为32℃。在达到固定相之前，可进行此种温度变化以减缓细胞的新陈代谢。
根据具体实施例，包括PD1氨基酸序列的经分离的多肽能够结合PDL1。
根据具体实施例，相较于SEQ ID NO：2，包括本发明的一些实施例的PD1氨基酸序列的经分离的多肽具有一经增强的活性。
根据具体实施例，包括4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽具有至少以下的能力之一：
(i)结合4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
根据具体实施例，相较于SEQ ID NO：3，本发明的一些实施例的包括4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽具有如本文中所公开的经增强的活性。
根据具体实施例，包括4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽可为(i)、(ii)、(iii)、(i)+(ii)、(i)+(iii)、(ii)+(iii)、(i)+(ii)+(iii)。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL氨基酸序列具有至少以下的能力之一：
(i)结合PD1及4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的免疫细胞(例如，T细胞)中激活4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)激活表达所述4-1BB的免疫细胞(例如，T细胞)。
根据具体实施例，相较于包或如SEQ ID NO：2所示的PD1氨基酸序列及如SEQ IDNO：3所示的4-1BBL氨基酸序列的融合蛋白，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白具有如本文中所公开的经增强的活性。
根据具体实施例，相较于SEQ ID NO：5，本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL融合蛋白具有如本文中所公开的经增强的活性。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽可为(i)、(ii)、(iii)、(i)+(ii)、(i)+(iii)、(ii)+(iii)。
根据具体实施例，PD1-4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽可为(i)+(ii)+(iii)。
确定结合、激活4-1BB信号传导途径及激活免疫细胞的方法是本领域众所周知的，且在上文及以下的实例部分中进一步描述。
作为本发明的一些实施例的组合物(例如，融合蛋白、包括PD1氨基酸序列的经分离的多肽、包括4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽、编码相同的多肽的多核苷酸或核酸或表达相同的多肽的宿主细胞)具有激活免疫细胞的能力，其可用于在体外、离体及/或体内激活免疫细胞的方法。
因此，根据本发明的一方面，提供激活免疫细胞的方法，所述方法包括在PD1-4-1BBL融合蛋白、经分离的多肽的存在下的体外或离体激活免疫细胞。包括本文所公开的PD1氨基酸序列及/或包括4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽，编码相同的多肽的多核苷酸、编码相同的多肽的核酸构建体或表达相同的多肽的宿主细胞。
根据本发明的另一方面，提供激活T细胞的方法，所述方法包括在本文中所公开的PD1-4-1BBL融合蛋白、包括PD1氨基酸序列的经分离的多肽，及/或包括4-1BBL氨基酸序列及表达PDL1的细胞的存在下的体外或离体激活T细胞。
根据具体实施例，在PD1-4-1BBL融合蛋白、编码所述融合蛋白的多核苷酸、编码所述融合蛋白的核酸构建体或表达融合蛋白的宿主细胞的存在下进行激活。
根据具体实施例，在包括PD1氨基酸序列的经分离的多肽、编码相同的多肽的多核苷酸、编码相同的多肽的核酸构建体或表达相同的多肽的宿主细胞的存在下进行激活。
根据具体实施例，在包括4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽、编码相同的多肽的多核苷酸、编码相同的多肽的核酸构建体或表达相同的多肽的宿主细胞的存在下进行激活。
根据具体实施例，在包括PD1氨基酸序列的经分离的多肽、编码相同的多肽的多核苷酸、编码相同的多肽的核酸构建体或表达相同的多肽的宿主细胞；以及4-1BBL氨基酸序列、编码所述4-1BBL氨基酸序列的多核苷酸，编码所述4-1BBL氨基酸序列的核酸构建体或表达所述4-1BBL氨基酸序列的宿主细胞的存在下进行激活。
根据具体实施例，免疫细胞表达4-1BB。
根据具体实施例，免疫细胞包括外周血单核细胞(PBMC)。
如本文中所使用，术语“外周血单核细胞(PBMC)”是指具有单核的血细胞，且包括淋巴细胞、单核细胞及树突细胞(DC)。
根据具体实施例，PBMC是选自由树突细胞(DC)、T细胞、B细胞、NK细胞及NKT细胞所组成的群组。
根据具体实施例，PBMC包括T细胞、B细胞、NK细胞及NKT细胞。
获得PBMC的方法是本领域众所周知的，例如自受试者抽取全血并收集在装有抗凝剂(例如，肝素或柠檬酸盐)的容器中；以及使血球分离。之后，根据具体实施例，自外周血中纯化至少一种类型的PBMC。有多种本领域技术人员已知的用于自全血中纯化PBMC的方法及试剂，例如白细胞分离术、沉降、密度梯度离心(例如，ficoll)、离心淘析、分级分离、例如红血细胞的化学裂解(例如通过ACK)、使用细胞表面标记物选择特定的细胞类型(使用例如FACS分选仪或磁性细胞分离技术，例如可从Invitrogen、Stemcell Technologies、Cellpro、Advanced Magnetics或Miltenyi Biotec商购而得)以及通过诸如使用特异性抗体根除(例如，杀死)的方法或基于阴性选择的亲和力基纯化(使用例如磁性细胞分离技术、FACS分选仪及/或捕获ELISA标记)来清除特定的细胞类型。此种方法例如在《实验免疫学手册》第1至第4卷(D.N.威尔，编辑者)及流式细胞术与细胞分选(A.拉德布鲁赫，编辑，Springer Verlag，2000)中有所描述。
根据具体实施例，免疫细胞包括肿瘤浸润淋巴细胞。
如本文中所使用，术语“肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)是指单核白血细胞，其具有最少的血流并迁移至肿瘤中。
根据具体实施例，TIL是选自由T细胞、B细胞、NK细胞及单核细胞所组成的群组。
获得TIL的方法在本领域中是众所周知的，例如自一受试者获得肿瘤样品，例如通过活组织切片或尸检剖验，并制备其单细胞悬液。可利用任何合适的方式获得单细胞悬液，例如，以机械方式(使用例如GentleMACS(TM)分离器‘Miltenyi Biotec，奥本，加利福尼亚州)或以分解酶方式(例如，胶原蛋白酶或脱氧核糖核酸酶)。之后，可利用细胞悬液中纯化至少一种类型的TIL。已存在多种本领域技术人员已知用于纯化所需类型的TIL的方法及试剂，例如使用细胞表面标记物选择特定的细胞类型(使用例如FACS分选仪或磁性细胞分离技术，例如可从Invitrogen、Stemcell Technologies、Cellpro、Advanced Magnetics或Miltenyi Biotec商购而得)以及通过诸如使用特异性抗体根除(例如，杀死)的方法或基于阴性选择的亲和力基纯化(使用例如磁性细胞分离技术、FACS分选仪及/或捕获ELISA标记)来清除特定的细胞类型。此种方法例如在《实验免疫学手册》第1至第4卷(D.N.威尔，编辑者)及流式细胞术与细胞分选(A.拉德布鲁赫，编辑，Springer Verlag，2000)中有所描述。
根据具体实施例，免疫细胞包括吞噬细胞。
如本文中所使用，术语“吞噬细胞”是指能够吞噬的细胞，且包括专业的吞噬细胞及非专业的吞噬细胞。分析吞噬作用的方法在本领域中是众所周知的，且包括例如杀灭分析、流式细胞术及/或显微镜评估(活细胞成像、荧光显微镜、共聚焦显微镜、电子显微镜)。根据具体实施例，吞噬细胞是选自由单核细胞、树突细胞(DC)及粒细胞所组成的群组。
根据具体实施例，免疫细胞包括单核细胞。
根据具体实施例，术语“单核细胞”是指循环单核细胞以及组织中存在的巨噬细胞(亦称为单核吞噬细胞)。
根据具体实施例，单核细胞包括巨噬细胞。通常，巨噬细胞的细胞表面的表型包括CD14、CD40、CD11b、CD64、F4/80(小鼠)/EMR1(人类)、溶菌酶M、MAC-1/MAC-3及CD68。
根据具体实施例，单核细胞包括循环单核细胞。通常，循环单核细胞的细胞表面的表型包括CD14及CD16(例如CD14++CD16-、CD14+CD16++、CD14++CD16+)。
根据具体实施例，免疫细胞包括DC。
如本文中所使用，术语“树突细胞(DC)”是指在淋巴组织或非淋巴组织中所发现的形态相似的细胞类型的多样化群体中的任何成员。DC是一类专业的抗原呈现细胞，且具有高能力的敏感化HLA限制性T细胞。DC包括，例如，浆细胞样树突细胞、髓样树突细胞(包括未成熟的树突细胞及成熟的树突细胞)、朗格汉斯细胞、交错突细胞、滤泡树突细胞。树突细胞可通过功能或表型，尤其是通过细胞表面的表型来识别。此等细胞的特征在于其独特的形态，所述形态在细胞表面具有面纱样突起、中等至高水平的HLA-II类别的表面表达以及向T细胞，尤其是向初始T细胞呈现抗原的能力(参见斯坦曼R等人，Ann.Rev.Immunol.1991；9：271-196)。典型地，DC的细胞表面表型包括CD1a+、CD4+、CD86+或HLA-DR。术语DC包括未成熟的DC及成熟的DC。
根据具体实施例，免疫细胞包括粒细胞。
如本文中所使用，术语“粒细胞”是指多形核白细胞，其特征在于在其细胞质中存在颗粒。
根据具体实施例，粒细胞包括嗜中性粒细胞。
根据具体实施例，粒细胞包括肥大细胞。
根据具体实施例，免疫细胞包括T细胞。
如本文中所使用，术语“T细胞”是指具有CD3+、具有CD4+或CD8+表型的T细胞受体(TCR)+的经分化的淋巴细胞。所述T细胞可为效应子或调节性T细胞。
如本文中所使用，术语“效应T细胞”是指激活或引导其他的免疫细胞，例如通过产生细胞激素或具有细胞毒活性的T细胞，例如CD4+、Th1/Th2、CD8+细胞毒T淋巴细胞。
如本文中所使用，术语“调节性T细胞”或“Treg”是指负调节其他的T细胞(包括效应子T细胞)的活性以及先天免疫系统的细胞的活性的T细胞。Treg细胞的特征在于持续抑制效应子T细胞的应答。根据一具体实施例，Treg是一CD4+CD25+Foxp3+T细胞。
根据具体实施例，T细胞是CD4+T细胞。
根据其他的具体实施例，T细胞是CD8+T细胞。
根据具体实施例，T细胞是记忆T细胞。记忆T细胞的非限制性例子包括具有CD3+/CD4+/CD45RA-/CCR7-表型的效应子记忆CD4+T细胞、具有CD3+/CD4+/CD45RA-/CCR7+表型的中央记忆CD4+T细胞、具有CD3+/CD8+CD45RA-/CCR7-表型的效应子记忆CD8+T细胞，及具有CD3+/CD8+CD45RA-/CCR7+表型的中央记忆CD8+T细胞。
根据具体实施例，T细胞包括使用编码一感兴趣的表达产物的核酸序列而转导的工程化T细胞。
根据具体实施例，所述感兴趣的表达产物是一T细胞受体(TCR)或一嵌合抗原受体(CAR)。
如本文中所使用，短语“使用编码TCR的核酸序列转导”或“使用编码TCR的核酸序列转导”是指从T细胞克隆可变的α-链及β-链，其对MHC中所呈现的所需抗原具有特异性。使用TCR进行转导的方法在本领域是已知的，且例如公开于尼科尔森等人.AdvHematol.2012；2012：404081；王及里维埃癌症基因疗法.2015三月.22(2)：85-94；以及拉默斯等人.《癌症基因疗法》(2002)9，613至623。
如本文中所使用，短语“使用编码CAR的核酸序列进行转导”或“使用编码CAR的核酸序列进行转导”是指将编码一嵌合抗原受体(CAR)的核酸序列进行克隆，其中CAR包括抗原识别部分及T细胞活化部分。嵌合抗原受体(CAR)是一人工构建的杂合蛋白或多肽，其包括与T细胞信号传导或T细胞活化结构域相连接的抗体的抗原结合结构域(例如，单链可变的片段(scFv))。使用CAR进行转导的方法在本领域中是已知的，且例如公开于达维拉等人.Oncoimmunology.2012年12月1日；1(9)：1577-1583；王及里维埃癌症基因疗法.2015年3月：22(2)：85-94：梅俄斯等人.Blood.2014年4月24日；123(17)：2625-35；波特DL新英格兰医学杂志.2011，365(8)：725-733；杰克逊HJ(Jackson HJ)，Nat Rev Clin Oncol.2016；13(6)：370-383；以及格洛伯森-列文等人.Mol Ther.2014；22(5)：1029-1038。
根据具体实施例，免疫细胞包括B细胞。
如本文中所使用，术语“B细胞”是指具有B细胞受体(BCR)+、CD19+及/或B220+表型的淋巴细胞。B细胞的特征在于其具有结合特异性抗原并引起体液应答的能力。
根据具体实施例，免疫细胞包括NK细胞。
如本文中所使用，术语“NK细胞”是指具有CD16+CD56+及/或CD57+TCR-表型的经分化的淋巴细胞。NK的特征在于其能够通过激活特定的溶细胞酶来结合并杀死无法表达“自身的”MHC/HLA抗原的细胞、具有杀死肿瘤细胞或表达NK激活受体的配体的其他患病细胞的能力，以及具有释放刺激免疫应答或抑制免疫应答的称为细胞激素的蛋白质分子的能力。
根据具体实施例，免疫细胞包括NKT细胞。
如本文中所使用，术语“NKT细胞”是指表达半不变的αβT细胞受体，但亦表达通常与NK细胞相关的多种分子标志物的特定T细胞群，例如NK1.1。NKT细胞包括NK1.1+及NK1.1-，以及CD4+、CD4-、CD8+及CD8-细胞。NKT细胞上的TCR是独特的，因为其可识别通过MHC I样分子CD1d所呈现的糖脂抗原。由于NKT细胞会产生促进炎症或免疫耐受的细胞激素的能力，因此其可能具有保护作用或有害作用。
根据具体实施例，免疫细胞是获自健康受试者。
根据具体实施例，免疫细胞是获自患有一病理的受试者。
根据具体实施例，所述激活是在表达PDL1或外源性PDL1的细胞的存在下进行。
根据具体实施例，所述激活是在外源性PDL1的存在下进行。
根据具体实施例，外源性PDL1是可溶的。
根据其他的具体实施例，将外源性PDL1固定在一固体支持物上。
根据具体实施例，所述激活是在表达PDL1的细胞存在下进行。
根据具体实施例，所述表达PDL1的细胞包括病理性(患病的)细胞。
根据具体实施例，所述表达PDL1的细胞包括癌细胞。
根据具体实施例，所述激活是在能够至少传输一初级激活信号的刺激剂的存在下进行，[例如，T细胞受体(TCR)与抗原呈现细胞(APC)上的主要组织兼容性复合物(MHC)/肽复合物的连接]，导致细胞增生、成熟、细胞激素产生、吞噬及/或诱导免疫细胞的调节性或效应子功能。根据具体实施例，刺激剂亦可传输一次级共刺激信号。
确定刺激剂的量以及刺激剂与免疫细胞之间的比例的方法完全是在本领域技术人员的能力范围内，因此在此不作具体说明。
刺激剂可为抗原依赖性或非依赖性(即，多克隆)的方式激活免疫细胞。
根据具体实施例，刺激剂包括一抗原非特异性刺激剂。
非特异性刺激剂是本领域技术人员已知的。因此，作为非限制性实例，当免疫细胞包括T细胞时，抗原非特异性刺激剂可为能够结合T细胞表面结构并诱导T细胞的多克隆刺激的试剂，例如，但不限于抗CD3抗体与诸如抗CD28抗体的共刺激蛋白联合使用。其他的非限制性实例包括抗-CD2、抗-CD137、抗-CD134、Notch-配体，例如单独或与抗CD3组合使用的Delta样1/4、Jaggedl/2。可诱导T细胞的多克隆刺激的其他试剂包括，但不限于促细胞分裂剂、PHA、PMA-离子霉素、CEB及细胞激活剂(Cytostim)(美天旎生物技术有限公司)。根据具体实施例，抗原非特异性刺激剂包括抗CD3及抗CD28抗体。根据具体实施例，T细胞刺激剂包括抗CD3包覆珠及抗CD28包覆珠，例如获自美天旎生物技术有限公司的CD3CD28MACSiBeads。
根据具体实施例，刺激剂包括一抗原特异性刺激剂。
抗原特异性T细胞刺激剂的非限制性实例包括载有抗原的抗原呈现细胞[APC，例如，树突细胞]以及载有肽的重组MHC。因此，例如，T细胞刺激剂可为预载有所需抗原(例如，肿瘤抗原)或经编码所需抗原的mRNA所转染的树突细胞。
根据具体实施例，抗原是一癌症抗原。
如本文中所使用，术语“癌症抗原”是指相较于非癌细胞，通过一癌细胞而过度表达或单独表达的抗原。癌症抗原可为已知的癌症抗原或在癌细胞中发展的新的特异性抗原(即新抗原)。
已知癌症抗原的非限制性实例包括MAGE-AI、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-AS、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-AS、MAGE-A9、MAGE-AIO、MAGE-全部、MAGE-A12、GAGE-1、GAGE-2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7、GAGE-8、BAGE-1、RAGE-1、LB33/MUM-1、PRAME、NAG、MAGE-Xp2(MAGE-B2)、MAGE-Xp3(MAGE-B3)、MAGE-Xp4(MAGE-B4)、MAGE-Cl/CT7、MAGE-C2、NY-ES0-1、LAGE-1、SSX-1、SSX-2(HOM-MEL-40)、SSX-3、SSX-4、SSX-5、SCP-1及XAGE、黑素细胞分化抗原、p53、ras、CEA、MUCI、PMSA、PSA、酪氨酸酶、Melan-A、MART-1、gp100、gp75、αactinin-4、Bcr-Abl融合蛋白、Casp-8、β-catenin、cdc27、cdk4、cdkn2a、coa-1、dek-can融合蛋白、EF2、ETV6-AML1融合蛋白、LDLR-岩藻糖基转移酶AS融合蛋白、HLA-A2、HLA-All、hsp70-2、KIAA0205、Mart2、Mum-2及3、neo-PAP、第I型肌球蛋白、OS-9、pml-RAR alpha融合蛋白、PTPRK、K-ras、N-ras、磷酸三糖异构酶、GnTV、Herv-K-mel、NA-88、SP17及TRP2-Int2(MART-1)、E2A-PRL、H4-RET、IGH-IGK、MYL-RAR、爱泼斯坦-巴尔病毒抗原、EBNA、人类乳头瘤病毒(HPV)抗原E6及E7、TSP-180、MAGE-4、MAGE-5、MAGE-6、p185erbB2、plSOerbB-3、c-met、nm-23Hl、PSA、TAG-72-4、CA 19-9、CA 72-4、CAM 17.1、NuMa、K-ras、甲胎蛋白、13HCG、BCA225、BTAA、CA 125、CA 15-3(CA 27.29\BCAA)、CA 195、CA 242、CA-50、CAM43、CD68\KP1、C0-029、FGF-5、0250、Ga733(EpCAM)、HTgp-175、M344、MA-50、MG7-Ag、MOV18、NB\170K、NYCO-I、RCASI、SDCCAG16、TA-90(Mac-2结合蛋白\亲环蛋白C相关的蛋白)、TAAL6、TAG72、TLP、TPS、酪氨酸酶相关的蛋白、TRP-1或TRP-2。
可表达的其他的肿瘤抗原是本领域众所周知的(参见例如，W000/20581；癌症疫苗及免疫疗法(2000)，史登、贝弗利及卡罗尔版本，剑桥大学出版社，剑桥)。此等肿瘤抗原的序列可容易地从公共的数据库获得，但亦可见于WO 1992/020356AI、WO 1994/005304AI、WO1994/023031AI、WO 1995/020974AI、WO 1995/023874AI及WO 1996/026214AI。
替代地，或额外地，可使用自受试者所获得的癌细胞来鉴定肿瘤抗原，例如通过活组织切片。
因此，根据具体实施例，所述刺激剂包括一癌细胞。
根据具体实施例，所述激活是在一抗癌剂的存在下进行。
根据具体实施例，所述免疫细胞在激活之后被纯化。
因此，本发明亦考虑根据本发明的方法可获得的经分离的免疫细胞。
根据具体实施例，根据本发明所使用及/或所获得的免疫细胞可被新鲜地分离、储存，例如，在长时间(例如，数月、数年)的任何阶段的液氮温度下进行例如冷冻保存(即，冷冻)、以备将来使用；以及细胞株。
冷冻保存的方法是本领域技术人员通常已知的，且例如公开于国际专利申请公开第WO2007054160号及第WO 2001039594号，以及美国专利申请公开第US20120149108号中。
根据具体实施例，根据本发明所获得的细胞可被存储在一细胞库或保藏库或存储设施中。
因此，本教导进一步建议使用经分离的免疫细胞以及本发明的方法作为，但不限于，可用于激活免疫细胞的疾病的过继免疫细胞疗法的来源，所述疾病可自激活的免疫细胞而受益，例如，过度增生性疾病；与免疫抑制及感染相关的疾病。
因此，根据具体实施例，本发明的方法包括在所述激活之后将免疫细胞过继转移至有需要所述免疫细胞的受试者中。
根据具体实施例，提供根据本发明的方法可获得的用于过继细胞疗法的免疫细胞。
根据本发明的具体实施例所使用的细胞可为自体的或非自体的；其可为同基因的或非同基因的：对受试者是同种或异种的；各种可能性代表本发明的个别的实施例。
本教导亦考虑本发明的组合物的用途(例如融合蛋白，包括PD1氨基酸序列的经分离的多肽、包括4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽、编码相同的多肽的多核苷酸或核酸构建体或表达相同的多肽的宿主细胞)，通过得益于激活免疫细胞而治疗一疾病的方法。
因此，根据本发明的另一方面，提供一种通过得益于激活免疫细胞而治疗一疾病的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施予所述PD1-4-1BBL融合蛋白、包含PD1氨基酸序列的所述经分离的多肽及/或包括本文中所公开的4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽、编码所述4-1BBL氨基酸的多核苷酸或核酸构建体或编码所述多肽的宿主细胞。
根据本发明的另一方面，提供本文中所公开的PD1-4-1BBL融合蛋白、包括PD1氨基酸序列的经分离的多肽及/或包括4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽、多核苷酸或编码所述多肽的核酸构建体或编码所述多肽的宿主细胞以用于通过得益于激活免疫细胞而治疗一疾病。
根据具体实施例，使用PD1-4-1BBL融合蛋白、编码所述融合蛋白的多核苷酸，编码所述融合蛋白的核酸构建体或表达所述融合蛋白的宿主细胞以进行治疗。
根据具体实施例，使用包括PD1氨基酸序列的经分离的多肽、编码相同的多肽的多核苷酸、编码相同的多肽的核酸构建体或表达相同的多肽的宿主细胞以进行治疗。
根据具体实施例，使用包括4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽、编码相同的多肽的多核苷酸，编码相同的多肽的核酸构建体或表达相同的多肽的宿主细胞以进行治疗。
根据具体实施例，使用包括PD1氨基酸序列的经分离的多肽，编码相同的多肽的多核苷酸、编码相同的多肽的核酸构建体或表达相同的多肽的宿主细胞；以及所述4-1BBL氨基酸序列、编码相同的4-1BBL氨基酸序列的多核苷酸、编码相同的4-1BBL氨基酸序列的核酸构建体或表达相同的多肽的宿主细胞以进行治疗。
术语“治疗”是指抑制、预防或阻止病理(疾病、病症或医学状况)的发展及/或引起病理或病理症状的减轻、缓解或消退。本领域技术人员将理解，各种方法及分析可用于评估病理的发展，且类似地，各种方法及分析可用于评估病理的减轻、缓解或消退。
如本文中所使用，术语“受试者”包括哺乳动物，例如，任何年龄及任何性别的人类。根据具体实施例，术语“受试者”是指患有病理(疾病、病症或医学状况)的受试者。根据具体实施例，所述术语包括处于发展病理的危险中的个体。
根据具体实施例，所述受试者患有与表达PDL1的细胞相关的疾病。
根据具体实施例，所述受试者的患病细胞表达PDL1。
如本文中所使用，短语“可受益于激活免疫细胞的疾病”是指其中受试者的免疫应答活性可能足以至少减轻所述疾病的症状或延迟症状发作的疾病，然而，出于任何原因，受试者的免疫反应活动皆不尽人意。
可受益于激活免疫细胞的疾病的非限制性实例包括过度增生性疾病、与免疫抑制相关的疾病、由药物所引起的免疫抑制(例如，mTOR抑制剂、钙调神经磷酸酶抑制剂、类固醇)以及感染。
根据具体实施例，所述疾病包括过度增生性疾病。
根据具体实施例，所述过度增生性疾病包括硬化症、纤维症、特发性肺纤维化、牛皮癣、系统性硬化症/硬皮症、原发性胆道的胆管炎、原发性硬化性胆管炎、肝纤维化、预防放射性肺纤维化、骨髓纤维化或腹膜后纤维化。
根据其他的具体实施例，所述过度增生性疾病包括癌症。
因此，根据本发明的另一方面，提供一种治疗癌症的方法，所述方法包括将如本文中所公开的所述PD1-4-1BBL融合蛋白、包括PD1氨基酸序列的经分离的多肽及/或包括4-1BBL的经分离的多肽施予需要其的受试者。
如本文中所使用，术语癌症包括恶性癌症及恶变前癌症。
关于癌症的恶变前或良性形式，其组合物及方法可任选地用于阻止恶变前癌症发展为恶性形式。
可通过本发明的一些实施例的方法所治疗的癌症可为任何实体或非实体癌症及/或癌症转移。
根据具体实施例，所述癌症包括恶性癌症。
可通过本发明的一些实施例的方法所治疗的癌症可为任何实体或非实体癌症及/或癌症转移。癌症的例子包括但不限于癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤及白血病。此类癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌及肺鳞状癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(gastric cancer)或胃癌(stomach cancer)(包括胃肠道癌)、胰腺癌、胶质母细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝脏恶性肿瘤、膀胱癌、肝肿瘤、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾脏癌(kidney cancer)或肾脏癌(renal cancer)、肝脏恶性肿瘤、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌及各种类型的头颈癌，以及B细胞淋巴瘤(包括低度/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)NHL；中度/滤泡性NHL；中度弥漫性NHL；高度免疫母细胞性NHL；Burkitt淋巴瘤、弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、高度淋巴母细胞性NHL；高度小非裂解细胞NHL；大块体疾病NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关的淋巴瘤；及Waldenstrom的巨球蛋白血症；T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；急性淋巴细胞白血病(ALL)；急性髓性白血病(AML)、急性早幼粒细胞白血病(APL)、毛细胞白血病；慢性粒细胞性白血病(CML)；以及移植后的淋巴增生性疾病(PTLD)，以及与吞噬、水肿(例如与脑肿瘤有关)，及梅格斯氏综合征(Meigs’s syndrome)相关的异常血管增生。优选地，所述癌症是选自由乳腺癌、结肠直肠癌、直肠癌、非小细胞肺癌、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、肾细胞癌、前列腺癌、肝脏恶性肿瘤、胰腺癌；软组织肉瘤、卡波济氏肉瘤、类癌、头颈癌、黑色素瘤、卵巢癌、间皮瘤及多发性骨髓瘤。适用于本发明的治疗的癌性疾病包括转移性癌症。
根据具体实施例，所述癌症包括恶变前癌症。
恶变前癌症(或癌症前期)具有充分的表征且在本领域中广为人知(例如，参见伯曼JJ.以及亨森DE.，2003.癌症前期的分类：元数据方法。BMC Med Inform Decis Mak。3：8)。适用于通过本发明的方法所治疗的恶变前癌症的类型包括后天性小或微观恶变前癌症，具有核非典型的后天性大病变、由遗传性增生综合征所发展而来的前体病变发展为癌症，以及后天性弥漫性增生及弥漫性化生。小或微观恶变前癌症的例子包括HGSIL(高度的子宫颈的鳞状上皮内病变)、AIN(膀胱上皮内瘤变)、声带发育不良、异常隐窝(结肠)、PIN(前列腺上皮内瘤变)。核非典型的后天性大病变的例子包括肾小管腺瘤、AILD(具有高蛋白血症的血管免疫母细胞淋巴结病)、非典型的脑膜瘤、胃息肉、大斑状寄生虫病、骨髓增生异常、原位乳头状移行细胞癌、难治性贫血伴过量胚泡及施耐德乳头状瘤(Schneiderianpapilloma)。因遗传性增生综合症而发展为癌症的前体病变的例子包括非典型痣综合症、C细胞腺腺瘤病及MEA。后天性弥漫性增生及弥漫性化生的例子包括AIDS、非典型的淋巴样增生、骨骼的佩吉特氏病、移植后的淋巴增生性疾病及溃疡性结肠炎。
根据具体实施例，所述癌症是急性髓性白血病、膀胱癌、基底细胞癌、B细胞非霍奇金淋巴瘤、胆管癌、膀胱癌、乳腺癌、子宫颈癌、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性粒细胞性白血病(CML)、结直肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、子宫内膜癌、食道癌、输卵管癌、滤泡性淋巴瘤、胃癌、胃食管(GE)交界部癌、生殖细胞瘤、生殖性的生殖细胞瘤(精母细胞瘤)、生殖细胞肿瘤、多形胶质母细胞瘤(GBM)、胶质肉瘤、头颈癌、肝细胞癌、霍奇金淋巴瘤、下咽喉癌、喉癌、平滑肌肉肉瘤、套细胞淋巴瘤、黑色素瘤、梅克尔细胞癌、多发性骨髓瘤、神经内分泌肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、口腔(口)癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、周围神经鞘瘤(神经纤维肉瘤)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、腹膜癌、前列腺癌、肾细胞癌、涎腺癌、皮肤癌、小细胞肺癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、滑膜肉瘤、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、输尿管癌、尿道癌、子宫癌、阴道癌或外阴癌。
根据具体实施例，所述癌症是急性髓性白血病、膀胱癌、乳腺癌、慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、结肠直肠癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤、上皮性卵巢癌、上皮性肿瘤、输卵管癌、滤泡性淋巴瘤、胶质母细胞瘤、肝细胞癌、头颈癌、白血病、淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、黑色素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、前列腺癌或肾细胞癌。
根据具体实施例，所述癌症是选自由淋巴瘤、白血病及恶性肿瘤所组成的群组。
根据具体实施例，所述癌症是选自由淋巴瘤、白血病、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌、肺癌及鳞状细胞癌。
根据具体实施例，所述癌症是结肠癌。
根据具体实施例，所述癌症是卵巢癌。
根据具体实施例，所述癌症是肺癌。
根据具体实施例，所述癌症是头颈癌。
根据具体实施例，癌症是白血病。
根据具体实施例，所述白血病选自由急性非淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、慢性粒性细胞性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、成年T细胞白血病、白血球缺乏性白血病、白血性白血病、嗜碱性粒细胞白血病、牛白血病、慢性粒细胞白血病、皮肤性白血病、胚胎性白血病、嗜酸性粒细胞白血病、格罗斯白血病、毛细胞白血病、成血性白血病、成血性细胞性白血病、组织细胞性白血病、干细胞白血病、急性单核细胞性白血病、白血球减少性白血病、淋巴白血病、淋巴母细胞性白血病、淋巴细胞性白血病、淋巴生成的白血病、淋巴球增生白血病、淋巴肉瘤细胞白血病、肥大细胞白血病、巨核细胞白血病、微粒细胞白血病、单核细胞白血病、粒血球白血病、粒细胞性白血病、髓样粒细胞性白血病、粒单核细胞性白血病、Naegeli氏白血病、浆细胞性白血病、早幼粒细胞性白血病、里德细胞白血病、席林氏白血病、干细胞白血病、亚白血球缺乏性白血病及未分化细胞白血病。
根据具体实施例，所述白血病是早幼粒细胞白血病、急性髓样白血病或慢性粒细胞性白血病。
根据具体实施例，所述癌症是淋巴瘤。
根据具体实施例，所述淋巴瘤是B细胞淋巴瘤。
根据具体实施例，淋巴瘤是T细胞淋巴瘤。
根据其他具体实施方式，淋巴瘤是霍奇金淋巴瘤。
根据具体实施例，淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤。
根据具体实施例，非霍奇金淋巴瘤是选自由侵袭性NHL、转移的NHL、惰性NHL、复发性NHL、难治性NHL、低度非霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤，伯基特淋巴瘤、NK细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、急性淋巴母细胞淋巴瘤及皮肤T细胞癌，包括蕈样真菌病/塞扎里综合征(Sezary syndrome)。
根据具体实施例，所述癌症是多发性骨髓瘤。
根据至少一些实施例，所述多发性骨髓瘤是选自由产生kappa型轻链及/或lambda型轻链的多发性骨髓瘤癌症；侵袭性多发性骨髓瘤，包括原发性浆细胞白血病(PCL)；良性浆细胞疾病，例如MGUS(具有不确定性的单克隆性球蛋白症)、Waldenstrom巨球蛋白血症(WM，亦称为淋巴浆细胞性淋巴瘤)，可能会发展为多发性骨髓瘤；多发性骨髓瘤的焖燃型多发性骨髓瘤(SMM)、惰性多发性骨髓瘤、恶变形式，亦可能发展为多发性骨髓瘤；原发性淀粉样变性。
根据具体实施例，通过在肿瘤微环境中存在具有肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的肿瘤及/或在肿瘤微环境中具有相对高表达的PDL1的肿瘤来定义癌症。
根据具体实施例，癌症细胞会表达PDL1。
根据具体实施例，所述疾病包括与由药物所引起的免疫抑制或免疫抑制作用相关的疾病(例如mTOR抑制剂、钙调神经磷酸酶抑制剂、类固醇)。
根据具体实施例，所述疾病包括HIV、麻疹、流行性感冒、LCCM、RSV、人类鼻病毒、EBV、CMV或细小病毒。
根据具体实施例，所述疾病包括感染。
如本文中所使用，术语“感染”或“传染病”是指由病原体诱导的疾病。病原体的具体实例包括病毒病原体、细菌病原体，例如细胞内分枝杆菌病原体(例如，结核分枝杆菌)、细胞内细菌病原体(例如，单核细胞增生李斯特氏菌)或细胞内原生动物病原体(例如，诸如利什曼原虫及锥虫)。
根据本发明的教导可治疗引起感染性疾病的病毒病原体的具体类型包括，但不限于逆转录病毒、圆环病毒、细小病毒、乳头瘤病毒、腺病毒、疱疹病毒、虹膜病毒、痘病毒、肝炎病毒、小核糖核酸病毒、杯状病毒、披膜病毒、黄病毒、呼肠孤病毒、正粘病毒、副粘病毒、杆状病毒、布尼亚病毒、新冠病毒、鼻病毒及丝状病毒。
根据本发明的教导可治疗的病毒感染的具体实例包括，但不限于经人类免疫缺陷病毒(HIV)诱导的后天性免疫缺陷综合症(AIDS)、流行性感冒、鼻病毒感染、病毒性脑膜炎、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)感染、A、B或C型肝炎病毒感染、麻疹、乳头瘤病毒感染/疣、巨细胞病毒(CMV)感染、单纯疱疹病毒感染、黄热病、埃博拉病毒感染、狂犬病等。
根据具体实施例，本文中所公开的组合物(例如，PD1-4-1BBL融合蛋白，包括PD1氨基酸序列的多肽、包括4-1BBL氨基酸序列的多肽、编码相同的多肽的多核苷酸或核酸构建体及/或表达相同的多肽的宿主细胞)可与其他既定的或实验性治疗方案组合施予受试者，以通过得益于激活免疫细胞(例如癌症)而治疗一疾病，包括但不限于止痛药、化学治疗剂、放射治疗剂、细胞毒疗法(调节)、激素疗法、抗体及其他本领域众所周知的治疗方案(例如，手术)。
根据具体实施例，本文中所公开的组合物(例如，PD1-4-1BBL融合蛋白、包括PD1氨基酸序列的多肽、包括4-1BBL氨基酸序列的多肽、编码相同的多肽的多核苷酸或核酸构建体及/或表达相同的多肽的宿主细胞)可与过继细胞移植组合施予受试者，所述过继细胞移植例如，但不限于骨髓细胞、造血干细胞、PBMC、脐带血干细胞及/或经诱导的多能干细胞的移植。
根据具体实施例，与本发明的一些实施例的组合物组合施用的治疗剂包括一抗癌剂。
因此，根据本发明的另一方面，提供一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施予一抗癌剂；以及PD1-4-1BBL融合蛋白、包括PD1氨基酸序列的多肽及/或包括4-1BBL氨基酸序列的多肽、编码相同的多肽的多核苷酸、编码相同的多肽的核酸构建体或表达相同的多肽的宿主细胞。
可与本发明的具体实施例一起使用的抗癌剂包括，但不限于阿西维辛(Acivicin)抗癌药；阿克拉比星(Aclarubicin)；盐酸阿考达唑(Acodazole Hydrochloride)；阿克罗宁(Acronine)；阿霉素(Adriamycin)；阿多来新(Adozelesin)；阿地白介素(Aldesleukin)；奥曲胺(Altretamine)；安博霉素(Ambomycin)；乙酸阿美蒽醌(Ametantrone Acetate)；氨基谷氨酰胺；安沙吖啶(Amsacrine)；阿那曲唑(Anastrozole)；蒽霉素(Anthramycin)；天冬酰胺酶；阿斯佩林(Asperlin)；阿扎胞苷(Azacitidine)；阿扎替派(Azetepa)；阿佐霉素(Azotomycin)；巴马司他(Batimastat)；苯佐替派(Benzodepa)；比卡鲁胺(Bicalutamide)；盐酸比桑烯；比斯那非二甲磺酸酯(Bisnafide Dimesylate)；比塞莱辛(Bizelesin)；硫酸博来霉素(Bleomycin Sulfate)；布雷喹钠(Brequinar Sodium)；溴匹立明(Bropirimine)；白消安(Busulfan)；放线菌素(Cactinomycin)；卡鲁睾酮(Calusterone)；卡醋胺(Caracemide)；卡贝替姆(Carbetimer)；卡铂(Carboplatin)；卡莫斯汀(Carmustine)；盐酸卡柔比星(Carubicin Hydrochloride)；卡折来新(Carzelesin)；西地芬戈(Cedefingol)；苯丁酸氮芥(Chlorambucil)；西罗霉素(Cirolemycin)；顺铂(cisplatin)；克拉屈滨；甲磺酸克里斯奈托(Crisnatol Mesylate)；环磷酰胺；阿糖胞苷(Cytarabine)；达卡巴嗪(Dacarbazine)；放线菌素(Dactinomycin)；盐酸柔红霉素(DaunorubicinHydrochloride)；地西他滨(Decitabine)；右奥马钼(dexormaplatin)；地扎狐宁(Dezaguanine)；甲横酸地扎狐宁(Dezaguanine Mesylate)；地吖醌(Diaziquone)；多西他赛(Docetaxel)；多柔比星(Doxorubicin)；盐酸多柔比星(Doxorubicin Hydrochloride)；屈洛昔芬(Droloxifene)；屈洛昔芬柠檬酸盐(Droloxifene Citrate)；屈他雄酮丙酸(Dromostanolone Propionate)；达佐霉素(Duazomycin)；依达曲沙(Edatrexate)；盐酸依氟鸟氨酸(Eflornithine Hydrochloride)；依沙芦星(Elsamitrucin)；恩洛钼(Enloplatin)；恩普胺酯(Enpromate)；依匹哌啶(Epipropidine)；盐酸表柔比星(Epirubicin Hydrochloride)；厄布洛挫(Erbulozole)；盐酸依索比星(EsorubicinHydrochloride)；雌莫司汀(Estramustine)；磷酸钠雌莫司汀(Estramustine PhosphateSodium)；依他硝挫(Etanidazole)；依托泊苷(Etoposide)；磷酸依托泊苷(EtoposidePhosphate)；埃托宁(Etoprine)；盐酸法倔挫(Fadrozole Hydrochloride)；法扎拉滨(Fazarabine)；芬维A胺(Fenretinide)；氮尿苷(Floxuridine)；磷酸氟达拉滨(Fludarabine Phosphate)；氟尿喃啶(Fluorouracil)；氟西他滨(Flurocitabine)；磷喹酮(Fosquidone)；福司曲星(Fostriecin Sodium)；吉西他宾(Gemcitabine)；盐酸吉西他宾(Gemcitabine Hydrochloride)；羟基脲(Hydroxyurea)；盐酸伊达比星(IdarubicinHydrochloride)；异环磷酰胺(Ifosfamide)；伊莫福新(Ilmofosine)；干扰素α-2a(Interferon Alfa-2a)；干扰素α-2b(Interferon Alfa-2b)；干扰素α-n1(InterferonAlfa-n1)；干扰素α-n3(Interferon Alfa-n3)；干扰素β-Ia(Interferon Beta-Ia)；干扰素γ-Ib(Interferon Gamma-Ib)；异丙铂(Iproplatin)；盐酸伊立替康(IrinotecanHydrochloride)；乙酸兰瑞肽(Lanreotide Acetate)；来曲挫(Letrozole)；乙酸亮丙立德(Leuprolide Acetate)；盐酸利阿挫(Liarozole Hydrochloride)；洛美曲索钠(Lometrexol Sodium)；洛莫司汀(Lomustine)；盐酸洛索蒽醌(LosoxantroneHydrochloride)；马索罗酷(Masoprocol)；美登素(Maytansine)；盐酸氮芥(Mechlorethamine Hydrochloride)；乙酸孕甾醇(Megestrol Acetate)；乙酸美仑孕酮(Melengestrol Acetate)；梅法兰(Melphalan)；美诺立尔(Menogaril)；巯基嘌呤(Mercaptopurine)；甲氨蝶呤(Methotrexate)；甲氨蝶呤钠(Methotrexate Sodium)；氯苯氨啶(Metoprine)；美妥替哌(Meturedepa)；米丁度胺(Mitindomide)；米托卡西(Mitocarcin)；米托罗米(Mitocromin)；米托吉林(Mitogillin)；米托马星(Mitomalcin)；丝裂霉素(Mitomycin)；米托司培(Mitosper)；米托坦(Mitotane)；盐酸米托蒽醌(Mitoxantrone Hydrochloride)；麦考酚酸(Mycophenolic Acid)；诺考达唑(Nocodazole)；诺拉霉素(Nogalamycin)；奥马钼(Ormaplatin)；奥昔舒仑(Oxisuran)；紫杉醇(Paclitaxel)；培门冬酶(Pegaspargase)；培利霉素(Peliomycin)；萘莫司汀(Pentamustine)；硫酸培洛霉素(Peplomycin Sulfate)；培磷酰胺(Perfosfamide)；皮布罗曼(Pipobroman)；哌泊舒凡(Piposulfan)；盐酸吡罗蒽醌(Piroxantrone Hydrochloride)；普卡霉素(Plicamycin)；普洛美坦(Plomestane)；卟吩姆钠(Porfimer Sodium)；泊非霉素(Porfiromycin)；泼尼莫司汀(Prednimustine)；盐酸丙卡巴嗪(ProcarbazineHydrochloride)；嘌呤霉素(Puromycin)；盐酸嘌呤霉素(Puromycin Hydrochloride)；吡唑啉(Pyrazofurin)；利波腺苷(Riboprine)；罗谷亚胺(Rogletimide)；沙芬戈(Safingol)；盐酸沙芬戈(Safingol Hydrochloride)；司莫司汀(Semustine)；辛曲烯(Simtrazene)；磷乙酰天冬氨酸钠(Sparfosate Sodium)；司帕霉素(Sparsomycin)；盐酸错螺胺(Spirogermanium Hydrochloride)；螺莫司汀(Spiromustine)；螺铂(Spiroplatin)；链黑霉素(Streptonigrin)；链佐星(Streptozocin)；磺氯苯脲(Sulofenur)；他利霉素(Talisomycin)；紫杉醇(Taxol)；替可加兰钠(Tecogalan Sodium)；替加氟(Tegafur)；盐酸替洛蒽醌(Teloxantrone Hydrochloride)；替莫泊芬(Temoporfin)；替尼泊苷(Teniposide)；替罗昔隆(Teroxirone)；睾内酯(Testolactone)；硫咪嘌呤(Thiamiprine)；硫鸟嘌呤(thioguanine)；噻替哌(Thiotepa)；噻唑林(Tiazofuirin)；替拉扎明(Tirapazamine)；盐酸托泊替康(Topotecan Hydrochloride)；柠檬酸托瑞米芬(Toremifene Citrate)；醋酸曲托龙(Trestolone Acetate)；磷酸曲西立滨(TriciribinePhosphate)；三甲曲沙(Trimetrexate)；三甲曲沙葡萄糖醛酸(TrimetrexateGlucuronate)；曲普瑞林(Triptorelin)；盐酸妥布氯唑(Tubulozole Hydrochloride)；乌拉莫司汀(Uracil Mustard)；乌瑞替派(Uredepa)；伐普肽(Vapreotide)；维替泊芬(Verteporfin)；硫酸长春碱(Vinblastine Sulfate)；硫酸长春新碱(VincristineSulfate)；长春地辛(Vindesine)；硫酸长春地辛(Vindesine Sulfate)；硫酸长春吡啶(Vinepidine Sulfate)；硫酸长春甘酯(Vinglycinate Sulfate)；硫酸长春罗辛(Vinleurosine Sulfate)；酒石酸长春瑞滨(Vinorelbine Tartrate)；硫酸长春罗啶(Vinrosidine Sulfate)；硫酸长春利定(Vinzolidine Sulfate)；伏氯唑(Vorozole)；折尼泊(Zeniplatin)；净司他(Zinostatin)；盐酸佐柔比星(Zorubicin Hydrochloride)。其他的抗肿瘤剂包括在第52章，抗肿瘤剂(保罗·卡拉布瑞西及布鲁斯A.沙布纳)中所公开的药剂，以及在古德曼斯及吉尔曼“治疗学的药理基础”，第1202至1263页，第八版，1990，麦格劳-希尔公司.(健康专业部门)的介绍。
根据具体实施例，所述抗癌剂包括一抗体。
根据具体实施例，所述抗体是选自由利妥昔单抗(rituximab)、西妥昔单抗(cetuximab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、埃德考洛单抗(edrecolomab)、阿仑单抗(alemtuzumab)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、依法妥单抗(ibritumomab)、帕尼单抗(panitumumab)、贝利单抗(Belimumab)、贝伐单抗(Bevacizumab)、比伐单抗(Bivatuzumab)、美登单抗(mertansine)、布尔妥单抗(Blinatumomab)、布隆图维单抗(Blontuvetmab)、布伦妥昔单抗(Brentuximab vedotin)、卡妥昔单抗单抗(Catumaxomab)、西妥单抗(Cixutumumab)、达克珠单抗(Daclizumab)、阿达木单抗(Adalimumab)、贝索洛单抗(Bezlotoxumab)、赛妥珠单抗(Certolizumab pegol)、西他珠单抗(Citatuzumabbogatox)、达拉他珠单抗(Daratumumab)、地昔单抗(Dinutuximab)、依洛珠单抗(Elotuzumab)、曲妥单抗(Ertumaxomab)、依他西单抗(Etaracizumab)、吉妥单抗(Gemtuzumab ozogamicin)、吉瑞妥昔单抗(Girentuximab)、尼珠单抗(Necitumumab)、奥比努珠单抗(Obinutuzumab)、奥法木单抗(Ofatumumab)、帕妥珠单抗(Pertuzumab)、雷米单抗(Ramucirumab)、塞妥昔单抗(Siltuximab)、托西莫单抗(Tositumomab)、尼武单抗(Nivolumab)、派姆单抗(Pembrolizumab)、杜鲁伐单抗(Durvalumab)、阿妥昔单抗(Atezolizumab)、阿维单抗(Avelumab)、曲妥珠单抗(Trastuzumab)、及伊匹单抗(ipilimumab)所组成的群组。
根据具体实施例，所述抗体是选自由利妥昔单抗及西妥昔单抗所组成的群组。
根据具体实施例，所述治疗剂或所述抗癌剂包括IMiD(例如，沙利度胺、来那度胺、泊马度胺)。
根据具体实施例，所述IMiD是选自由沙利度胺、来那度胺及泊马度胺所组成的群组。
根据具体实施例，与本发明的一些实施例的组合物组合施用的治疗剂包括抗感染剂(例如，抗生素及抗病毒剂)。
根据具体实施例，与本发明的一些实施例的组合物组合施用的治疗剂包括一免疫抑制剂(例如，GCSF及其他的骨髓刺激剂、类固醇)。
根据具体实施例，组合疗法具有一加乘作用。
根据具体实施例，组合疗法具有一协同作用。
根据本发明的另一方面，提供一种制品，包括一包装材料，所述包装材料是包装用于通过得益于激活免疫细胞而治疗一疾病的一治疗剂；以及所述PD1-4-1BBL融合蛋白、包括所述PD1氨基酸序列的多肽及/或包括所述4-1BBL氨基酸序列的多肽、编码相同的多肽的多核苷酸、编码相同的多肽的核酸构建体或表达相同的多肽的宿主细胞。
根据具体实施例，鉴定相同制品以通过得益于激活免疫细胞而治疗一疾病。
根据具体实施例，用于治疗所述疾病的治疗剂；及PD1-4-1BBL融合蛋白、包括PD1氨基酸序列的多肽及/或包括4-1BBL氨基酸序列的多肽、编码相同的多肽的多核苷酸、编码相同的多肽的核酸构建体或表达相同的多肽的宿主细胞是分别包装在单独的容器中。
根据具体实施例，用于治疗所述疾病的治疗剂；及PD1-4-1BBL融合蛋白、包括PD1氨基酸序列的多肽及/或包括4-1BBL氨基酸序列的多肽、编码相同的多肽的多核苷酸、编码相同的多肽的核酸构建体或表达相同的多肽的宿主细胞是包装在共同的制剂中。
根据具体实施例，所述制品包括PD1-4-1BBL融合蛋白、编码相同的融合蛋白的多核苷酸、编码相同的融合蛋白的核酸构建体或表达相同的融合蛋白的宿主细胞。
根据具体实施例，所述制品包括包含PD1氨基酸序列的经分离的多肽、编码相同的多肽的多核苷酸、编码相同的多肽的核酸构建体或表达相同的多肽的宿主细胞。
根据具体实施例，所述制品包括包含4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽、编码相同的多肽的多核苷酸、编码相同的多肽的核酸构建体或表达相同的多肽的宿主细胞。
根据具体实施例，所述制品包括PD1氨基酸序列、编码相同的PD1氨基酸序列的多核苷酸、编码相同的PD1氨基酸序列的核酸构建体或表达相同的PD1氨基酸序列的宿主细胞；以及4-1BBL氨基酸序列、编码相同的4-1BBL氨基酸序列的多核苷酸、编码相同的4-1BBL氨基酸序列的核酸构建体或表达相同的4-1BBL氨基酸序列的宿主细胞。
因此，根据本发明的另一方面，提供一种制品，包括包装所述经分离的多肽的一包装材料，所述经分离的多肽包括本文中所公开的PD1氨基酸序列、编码相同的PD1氨基酸序列的多核苷酸、编码相同的PD1氨基酸序列的核酸构建体或表达相同的PD1氨基酸序列的宿主细胞；以及所述经分离的多肽包括本文中所公开的4-1BBL氨基酸序列、编码相同的4-1BBL氨基酸序列的多核苷酸、编码相同的4-1BBL氨基酸序列的核酸构建体或表达相同的4-1BBL氨基酸序列的宿主细胞。
根据具体实施例，所述经分离的多肽包括本文中所公开的PD1氨基酸序列、编码相同的PD1氨基酸序列的多核苷酸、编码相同的PD1氨基酸序列的核酸构建体或表达相同的PD1氨基酸序列的宿主细胞；；以及所述经分离的多肽包括本文中所公开的4-1BBL氨基酸序列、编码相同的4-1BBL氨基酸序列的多核苷酸、编码相同的4-1BBL氨基酸序列的核酸构建体或表达相同的4-1BBL氨基酸序列的宿主细胞是包装在单独的容器中。
根据具体实施例，所述经分离的多肽包括本文中所公开的PD1氨基酸序列、编码相同的PD1氨基酸序列的多核苷酸、编码相同的PD1氨基酸序列的核酸构建体或表达相同的PD1氨基酸序列的宿主细胞；；以及所述经分离的多肽包括本文中所公开的4-1BBL氨基酸序列、编码相同的4-1BBL氨基酸序列的多核苷酸、编码相同的4-1BBL氨基酸序列的核酸构建体或表达相同的4-1BBL氨基酸序列的宿主细胞是包装在共同的制剂中。
根据具体实施例，包括PD1氨基酸序列的经分离的多肽；及/或包括4-1BBL氨基酸序列的经分离的多肽是连接至一异源的治疗部分或包括一异源的治疗部分。所述治疗部分可为任何的分子，包括小分子化合物及多肽。
可与本发明的具体实施例一起使用的治疗部分的非限制性实例包括细胞毒性部分、毒性部分、细胞激素部分、免疫调节部分、多肽、抗体、药物、化学及/或放射性同位素。
根据本发明的一些实施例，通过将编码本发明的一些实施例的多肽的多核苷酸与编码治疗部分的核酸序列转译地融合以偶合为治疗部分。
额外地或可替代地，可使用本领域技术人员已知的任何偶合方法将治疗部分化学地偶合(偶联)至本发明的一些实施例的多肽。例如，可使用3-(2-吡啶基二硫代)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(亦称为N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯)(“SDPD”)将肽与感兴趣的试剂进行偶合。Sigma，目录编号：P-3415；参见例如，坎伯等人，1985，Methods ofEnzymology 112：207-224)、戊二醛偶合过程[参见例如，G.T.赫曼森，1996，抗体修饰及偶合，生物偶合物技术，Academic Press，圣地亚哥)或碳二亚胺结合程序[参见例如，J.马取，Advanced Organic Chemistry：反应的机理及结构，pp.349-50及372-74(第3版)，1985；B.内斯等人，1978，Angew Chem.，Int。Ed.Engl.17：522；A.哈斯纳等人，1978，TetrahedronLett.4475；E.P.博登等人，1986，J.Org.Chem.50：2394和L.J.马蒂亚斯，1979，Synthesis561]。
使用本领域广泛实施的标准化学合成技术可将治疗部分连结至例如本发明的一些实施例的多肽[参见例如，http://worldwideweb.chemistry.org/portal/Chemistry)]，例如通过一肽键(当功能部分为一多肽时)或通过共价键结至诸如一连接肽的中间连接组件或诸如一有机聚合物的其他化学部分的直接或间接使用任何合适的化学连接。嵌合肽可通过在肽的羧基(C)端或氨基(N)端的键结或通过键结至内部的化学基团，例如直链、支链或环状侧链、内部碳原子或内部氮原子等而进行连接。
如本文中所使用，术语“蛋白质”、“肽”及“多肽”在本文可互换使用，包括天然肽(降解产物、合成地经合成的肽或重组肽)及拟肽(通常合成地经合成的肽)，以及类似肽的类肽及半类肽，其可具有例如修饰，从而使肽在体内时更稳定，或者更能够穿透细胞。此种修饰包括，但不限于N端修饰、C端修饰、肽键修饰、骨架修饰及残基修饰。制备拟肽化合物的方法是本领域众所周知的，且例如在Quantitative Drug Design，C.A.拉姆斯登Gd.，第17.2章，F.卓别林佩加蒙出版社(1992)中有具体说明，其通过引用并入本文中，如同在本文中完整阐述。下文提供此方面的进一步细节。
肽内的肽键(-CO-NH-)可被下述所取代，例如N-甲基化的酰胺键(-N(CH3)-CO-)、酯键(-C(＝O)-O-)、酮亚甲基键(-CO-CH2-)、亚磺酰基亚甲基键(-S(＝O)-CH2-)、α-氮杂键(-NH-N(R)-CO-)，其中R为任何的烷基(例如甲基)、胺键(-CH2-NH-)、硫键(-CH2-S-)、乙烯键(-CH2-CH2-)、羟基乙烯键(-CH(OH)-CH2-)、硫酰胺键(-CS-NH-)、烯烃双键(-CH＝CH-)、氟化烯烃双键(-CF＝CH-)、反酰胺键(-NH-CO-)、肽衍生物(-N(R)-CH2-CO-)，其中R为“正常的”侧链、天然存在于碳原子上。
此等修饰可发生在肽链上的任何键上，甚至可同时出现在数个(2至3)键上。
天然芳香族氨基酸Trp、Tyr及Phe可被非天然芳香族氨基酸取代，例如1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸(Tic)、萘丙氨酸、Phe的环甲基化衍生物、Phe或O-甲基-Tyr的卤代衍生物。
本发明的一些实施例的肽亦可包括一种或多种经修饰的氨基酸或一种或多种非氨基酸单体(例如，脂肪酸、复合碳水化合物等)。
术语“氨基酸”应理解为包括20种天然存在的氨基酸。通常在体内转译后修饰的那些氨基酸，包括，例如羟脯氨酸、磷酸丝氨酸及磷酸苏氨酸；以及其他不常见的氨基酸，包括，但不限于2-氨基己二酸、羟赖氨酸、异十二烷、正缬氨酸、正亮氨酸及鸟氨酸。此外，术语“氨基酸”包括D-氨基酸及L-氨基酸。
下表1及表2列出可与本发明的一些实施例一起使用的天然存在的氨基酸(表1)及非常规的或经修饰的氨基酸(例如，合成的，表2)。
表1
氨基酸 三字母缩写 一个字母符号
丙氨酸 Ala A
精氨酸 Arg R
天冬酰胺 Asn N
天冬氨酸 Asp D
半胱氨酸 Cys C
谷氨酰胺 Gln Q
谷氨酸 Glu E
甘氨酸 Gly G
组氨酸 His H
异亮氨酸 Ile I
亮氨酸 Leu L
赖氨酸 Lys K
蛋氨酸 Met M
苯丙氨酸 Phe F
脯氨酸 Pro P
丝氨酸 Ser S
苏氨酸 Thr T
色氨酸 Trp W
酪氨酸 Tyr Y
缬氨酸 Val V
以上任何的氨基酸 Xaa X
表2
Figure BDA0002939076220001371
Figure BDA0002939076220001381
Figure BDA0002939076220001391
本发明的一些实施例的肽优选以线性形式使用，尽管应当理解，在环化不严重地干扰肽特性的情况下，亦可利用环的形式的肽。
由于本发明的肽优选用于需要所述肽为可溶形式的治疗剂中，因此本发明的一些实施例的肽优选包括一种或多种非天然或天然极性氨基酸，包括但不限于丝氨酸及苏氨酸，其中由于其所含的羟基侧链，使得其能够增加肽的溶解度。
本发明的肽的氨基酸可保留地取代或非保留地取代。
如本文中所使用，术语“保留的取代”是指用天然或非天然存在的氨基或具有类似立体特性的拟肽以代替在肽的天然序列中所存在的氨基酸。倘若欲取代的天然氨基酸的侧链为极性或疏水性，则保留取代应使用天然存在的氨基酸、非天然存在的氨基酸或具有极性或疏水性的拟肽部分(除了具有与被取代的氨基酸的侧链相同的立体特性之外)。
由于天然存在的氨基酸通常根据其性质进行分组，因此考虑以下的事实，可容易地确定天然存在的氨基酸的保留取代：考虑根据本发明，可考虑使用立体相似的不带电荷的氨基酸来代替带电荷的氨基酸，以作为保留的替代物。
为了通过非天然存在的氨基酸产生保留取代，亦可使用本领域众所周知的氨基酸类似物(合成的氨基酸)。天然存在的氨基酸的拟肽在熟练技术人员已知的文献中有充分记载。
当影响保留取代时，取代的氨基酸在侧链上应具有与原始氨基酸相同或相似的官能团。
提供功能上相似的氨基酸的保留取代的表格在本领域是众所周知的。在鲍伊等人，1990，Science，247：1306 1310中，亦可找到有关其氨基酸变化可能在表型上沉默的指南。此种保留修饰的变体是多态变体、种间同系物及等位基因的补充，且不排除此等变体。典型的保留取代包括但不限于：1)丙氨酸(A)、甘氨酸(G)；2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、蛋氨酸(M)、缬氨酸(V)；6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)；7)丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；8)半胱氨酸(C)、蛋氨酸(M)(参见例如，克赖顿，Proteins(1984))。氨基酸可基于与侧链相关的性质而被取代，例如，具有极性侧链的氨基酸可被取代，例如丝氨酸(S)及苏氨酸(T)；基于侧链电荷的氨基酸，例如精氨酸(R)及组氨酸(H)；具有疏水性侧链的氨基酸，例如缬氨酸(V)及亮氨酸(L)。如所指出的，变化通常是次要的本质，例如不会显着影响蛋白质的折叠或活性的保留氨基酸取代。
本文中所使用的短语“非保留取代”是指由另一种天然或非天然存在的氨基酸替换亲本序列中所存在的氨基酸，所述天然或非天然存在的氨基酸具有不同的电化学及/或立体特性。因此，取代氨基酸的侧链可为显着大于(或小于)被取代的天然氨基酸的侧链及/或相较于取代的氨基酸可具有明显不同的电子特性的官能团。此种\类型的非保留取代的实例包括以苯丙氨酸或环己基甲基甘氨酸取代丙氨酸、以异亮氨酸取代甘氨酸，或以-NH-CH[(CH2)5-COOH]-CO-取代天冬氨酸。落入本发明的范围内的彼等的非保留取代是彼等仍构成具有抗菌特性的肽的非保留取代。
本发明的肽的N端及C端可被官能团保护。合适的官能团描述于Green及武特，“有机合成中的保护基团”，John Wiley and Sons，1991，第5章及第7章，其教导引入本文中作为参考。优选的保护基是例如通过降低化合物的亲水性及增加化合物的亲脂性而协助其上所附着的化合物向细胞内运输的保护基。
根据具体实施例，例如，一或多个氨基酸可通过添加官能团来修饰(概念上被视为“化学修饰”)。例如，天然序列中所出现的侧氨基酸残基可任选地被修饰，尽管如下所述，除了侧氨基酸残基之外或代替侧氨基酸残基，蛋白质的其他部分亦可任选地被修饰。倘若遵循化学的合成方法，例如通过添加化学修饰的氨基酸，则修饰可任选地在分子的合成过程中进行。然而，当氨基酸已经存在于分子中时，亦可对氨基酸进行化学修饰(“原位”修饰)。可藉由核酸外切酶缺失、藉由化学修饰或藉由编码诸如异源结构域或结合蛋白的多核苷酸序列的融合，通过基因合成、定点的突变(例如，PCR基)或随机的突变(例如，EMS)，以引入对肽或蛋白质的修饰。
如本文中所使用，当术语“化学修饰”是指肽时，是指其中其氨基酸残基中的至少一者通过自然的方法而被修饰的肽，例如加工或其他转译后修饰或通过本领域众所周知的化学修饰的技术。修饰的非限制性示例性类型包括羧甲基化、乙酰化、酰化、磷酸化、糖基化、酰胺化、ADP-核糖基化、脂肪酰化、添加法呢基团、异法呢基团、碳水化合物基团、脂肪酸基团、用于偶合的连接子、功能化、GPI锚形成、脂质或脂质衍生物的共价连接、甲基化、肉豆蔻化、聚乙二醇化、戊烯基化、磷酸化、泛素化或任何类似的方法及已知的保护/封闭基团。醚键可任选地用于将丝氨酸或苏氨酸羟基连接至糖的羟基。可任选地使用酰胺键将谷氨酸或天冬氨酸的羧基与糖上的氨基进行连接(加尔格及让洛兹，碳水化合物化学及生物化学进展，第43卷，Academic Press(1985)；昆兹、Ang.Chem.Int(编辑英文26：294-308(1987))。缩醛及缩酮键亦可任选地形成于氨基酸与碳水化合物之间。脂肪酸酰基衍生物可任选地例如通过将游离的氨基(例如赖氨酸)进行酰化而制得(托斯等人，肽：化学、结构及生物学，里维耶及马歇尔编辑，ESCOM出版，莱顿，1078-1079(1990))。
根据具体实施例，所述修饰包括向肽中添加环烷部分，如PCT申请案第WO 2006/050262号中所述，其通过引用并入本文中。此等部分被设计与生物分子一起使用，且可任选地用于赋予蛋白质各种特性。
此外，任选地，可修饰肽上的任何点。例如，可任选地进行蛋白质上糖基化部分的聚乙二醇化，如PCT申请案第WO 2006/050247号中所述，其通过引用并入本文中。可将一或多个聚乙二醇(PEG)基团任选地添加至O-连接的及/或N-连接的糖基化。所述PEG基团可任选是支链的或直链的。任选地，任何类型的水溶性聚合物可通过糖基连接子连接至一蛋白质上的糖基化位点。
“经聚乙二醇化的蛋白质”是指具有生物活性的蛋白质或其片段，其具有与所述蛋白质的氨基酸残基共价结合的聚乙二醇(PEG)部分。
“聚乙二醇”或“PEG”是指聚亚烷基二醇化合物或其衍生物，所述聚亚烷基二醇化合物或其衍生物具有或不具有偶联剂或与具有偶联部分或活化部分(例如，与硫醇、三氟甲磺酸、三苯甲酸酯、氮丙啶、环氧乙烷或优选与马来酰亚胺部分)一起衍生。诸如马来酰亚胺基单甲氧基PEG的化合物是本发明的示例性或活化的PEG化合物。在本发明中可使用其他的聚亚烷基二醇化合物，例如聚丙二醇。其他合适的聚亚烷基二醇化合物包括，但不限于以下类型的带电的或中性的聚合物：右旋糖酐、聚唾液酸或其他碳水化合物基的聚合物、氨基酸的聚合物及生物素衍生物。
根据具体实施例，将肽修饰使其具有一经改变的糖基化模式(即，自原始或天然糖基化模式改变)。如本文中所使用，“经改变的”是指具有一或多个碳水化合物部分的缺失，及/或具有添加至原始蛋白质的至少一糖基化位点。
蛋白质的糖基化通常是N-连接或O-连接。N-连接是指碳水化合物部分连接至天冬酰胺残基的侧链。三肽序列、天冬酰胺-X-丝氨酸及天冬酰胺-X-苏氨酸，其中X是除了脯氨酸外的任何的氨基酸，是将碳水化合物部分的酶促连接至天冬酰胺侧链的识别序列。因此，在多肽中的此等三肽序列中的任一者的存在产生一潜在的糖基化位点。O-连接糖基化是指糖N-乙酰基半乳糖胺、半乳糖或木糖中的一者与羟基氨基酸连接，所述羟基氨基酸最常为丝氨酸或苏氨酸)，尽管亦可使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸。
通过改变肽的氨基酸序列以使其含有一个或多个上述的三肽序列(针对N-连接的糖基化位点)，可方便地实现将糖基化位点添加至肽。亦可通过在原始肽的序列中(针对O-连接的糖基化位点)添加一或多个丝氨酸或苏氨酸残基或由其取代来进行改变。肽的氨基酸序列亦可通过在DNA水平引入改变以进行改变。
增加肽上碳水化合物部分的数量的另一种方法是通过糖苷与肽的氨基酸残基的化学或酶促偶联。取决于所使用的偶联方式，糖可连接至(a)精氨酸及组氨酸、(b)游离的羧基、(c)游离的巯基，例如半胱氨酸的游离的巯基、(d)游离的羟基，例如丝氨酸、苏氨酸或羟脯氨酸的游离的羟基、(e)芳香残基，例如苯丙氨酸，酪氨酸或色氨酸的芳香残基，或(f)谷氨酰胺的氨基。此等方法例如描述于WO 87/05330中，以及描述于阿普林及威斯顿.CRCCrit.Rev.Biochem.，22：259-306(1981)中。
可通过化学地、酶促地或通过在DNA水平上引入改变来实现存在于肽上的任何碳水化合物部分的移去。化学去糖基化需要使肽暴露于三氟甲磺酸或等效的化合物中。此处理导致除了连接糖(N-乙酰基葡糖胺或N-乙酰基半乳糖胺)之外的大多数或所有的糖的裂解，留下完整地氨基酸序列。
化学的去糖基化是描述于哈基穆丁等人，Arch.Biochem.Biophys.，259:52(1987)；及埃奇等人，Anal.Biochem.，118:131(1981)中。通过索塔仓等人，Meth.Enzymol.，138:350(1987)所描述的可通过使用多种内切糖苷酶及外切糖苷酶对肽上的碳水化合物部分进行酶促切割。
根据具体实施例，所述肽包括一可检测的标签。如本文中所使用，在一实施例中，术语“可检测的标签”是指可由技术人员使用本领域已知的技术进行检测的任何部分。可检测的标签可为肽序列。任选地，可检测的标签可通过化学试剂或通过诸如蛋白水解的酶促手段予以移除。本发明的一些实施例的可检测的标签可用于纯化肽。例如，术语“可检测的标签”包括几丁质结合蛋白(CBP)标签、麦芽糖结合蛋白(MBP)标签、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签、多(His)标签、FLAG标签、诸如V5标签、c-myc标签及HA标签的表位标签，以及诸如绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(RFP)、黄色荧光蛋白(YFP)、蓝色荧光蛋白(BFP)及青色荧光蛋白(CFP)的荧光标签；以及此等标签的衍生物或本领域已知的任何标签。术语“可检测的标签”亦包括术语“可检测的标记”。
根据具体实施例，所述肽包括附着于其N端的可检测的标签(例如，多(His)标签)。
根据具体实施例，所述肽包括附着于其C端的可检测的标签(例如，多(His)标签)。
根据具体实施例，所述肽的N-端不包括一可检测的标签(例如，多(His)标签)。
根据具体实施例，所述肽的C-端不包括一可检测的标签(例如，多(His)标签)。
根据具体实施例，所述肽与一可切割的部分融合。因此，例如，为了协助恢复，可对经表达的编码序列进行改造工程，以编码本发明的一些实施例的肽及经融合的可裂解的部分。在一实施例中，设计所述肽以使其易于通过亲和色谱法而分离；例如，通过固定在具体针对可裂解的部分的柱上。在一实施例中，在肽与可切割的部分之间设计一切割位点，且可通过使用一合适的酶或在此位点上特异地切割所述融合蛋白的试剂进行处理，以将肽自色谱的柱上释放出来[例如，参见布斯等人，Immunol Lett.19：65-70(1988)；及加德拉等人，J.Biol.Chem.265：15854-15859(1990)]。根据具体实施例，所述肽是一经分离的肽。
可通过肽合成领域的技术人员已知的任何技术，例如，但不限于固相及重组技术，来合成并纯化本发明的一些实施例的肽。
针对固相肽的合成，许多技术的概述可参见J.M.斯图尔特及J.D.杨，固相肽的合成，W.H.弗里曼公司(旧金山)，1963年，以及J.梅恩霍夫，激素蛋白质及肽，第2卷，第46页，Academic Press(纽约)，1973年。针对标准溶液合成，参见G.施罗德及K.卢普克，《肽》，第1卷，Academic Press(纽约)，1965年。
通常，此等方法包括将一或多个氨基酸或适经当保护的氨基酸依序地添加至生长中的肽链。通常，第一个氨基酸的氨基或羧基被合适的保护基所保护。之后可在适合形成酰胺键的条件下，通过在具有被适当保护的互补(氨基或羧基)基团的序列中添加下一个氨基酸，以将经保护的或经衍生的氨基酸连接到惰性固体载体上将其用于溶液中。之后自所述新添加的氨基酸残基中移除保护基，之后添加下一个氨基酸(适当地保护)，依此类推。在所有所需的氨基酸以正确的顺序进行连接之后，依次或同时移除任何剩余的保护基团(及任何的固体载体)，以得到最终的肽化合物。通过此通用步骤的简单修饰，可一次性地在一增长的链中添加一个以上的氨基酸，例如，通过将经保护的三肽与经适当保护的二肽进行偶合(在不使用外消旋手性中心的条件下)，并于去保护之后，形成五肽等。肽合成的进一步描述公开于美国专利第6,472,505号中。
制备本发明的一些实施例的肽化合物的优选方法涉及固相肽的合成。
大规模的肽合成描述于Andersson Biopolymers 2000；55(3)：227-50中。
根据具体实施例，使用体外表达系统合成肽。此种体外合成的方法是本领域众所周知的，且所述系统的组件是可商购的。
根据具体实施例，所述肽是通过重组DNA技术产生的。一“重组”肽或蛋白质是指通过重组DNA技术所产生的肽或蛋白质；即，自通过编码所需肽或蛋白质的外源DNA构建体所转染的细胞产生的。
因此，根据本发明的另一方面，提供一种经分离的多核苷酸，其包含编码上述任何的多肽及融合蛋白的核酸序列。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：57至72、98、102、104、106、108、112、114、134、136、138、140、142、144及148所示的核酸序列具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：134、136、138、140、142、144及148所示的核酸序列具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：57至72、98、102、104、106或112所示的核酸序列具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：98、102、104、106、108或112所示的核酸序列具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：98、102、104、106或108所示的核酸序列具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：57至72所示的核酸序列具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：146所示的核酸序列具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸包括一核酸序列，所述核酸序列是选自由SEQ ID NO：57至72、98、102、104、106、108、112、114、134、136、138、140、142、144及148所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸包括一核酸序列，所述核酸序列是选自由SEQ ID NO：134、136、138、140、142、144及148所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸包括一核酸序列，所述核酸序列是选自由SEQ ID NO：57至72、98、102、104、106、108或112所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸包括一核酸序列，所述核酸序列是选自由SEQ ID NO：98、102、104、106、108或112所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸包括一核酸序列，所述核酸序列是选自由SEQ ID NO：98、102、104、106或108所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸包括一核酸序列，所述核酸序列是选自由SEQ ID NO：57至72所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸包括如SEQ ID NO：146所示的一核酸序列。
根据具体实施例，多核苷酸是由一核酸序列所组成，所述核酸序列是选自由SEQID NO：57至72、98、102、104、106、108、112、114、134、136、138、140、142、144及148所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸是由一核酸序列所组成，所述核酸序列是选自由SEQID NO：134、136、138、140、142、144及148所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸是由一核酸序列所组成，所述核酸序列是选自由SEQID NO：57至72、98、102、104、106、108或112所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸是由一核酸序列所组成，所述核酸序列是选自由SEQID NO：98、102、104、106、108或112所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸是由一核酸序列所组成，所述核酸序列是选自由SEQID NO：98、102、104、106或108所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸是由一核酸序列所组成，所述核酸序列是选自由SEQID NO：57至72所组成的群组，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：70至72所示的核酸序列具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性。
根据具体实施例，多核苷酸包括一核酸序列，所述核酸序列是选自由SEQ ID NO：70至72所组成的群组。
根据具体实施例，多核苷酸是由一核酸序列所组成，所述核酸序列是选自由SEQID NO：70至72所组成的群组。
根据具体实施例，多核苷酸是由SEQ ID NO：146所组成。
根据本发明的另一方面，提供一种经分离的多核苷酸，包括一核酸序列，所述核酸序列编码上述PD1氨基酸序列中的任一者，所述PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸，且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89、93及115所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者，或者长度为138至145个氨基酸，且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18、117及119所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段F146至V150；且任选地在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；或上述4-1BBL氨基酸序列中的任何一者，其长度为185至202个氨基酸，且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQID NO：22至25所组成的群组、长度为170至197个氨基酸，且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：127及129所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段G198至E205，或长度为170至182个氨基酸，且与SEQ ID NO：125具有至少80％的同一性，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段A1至E23，且任选地包括包括4-1BBL氨基酸序列的三个重复。
根据本发明的另一方面，提供一种经分离的多核苷酸，包括一核酸序列，所述核酸序列编码上述PD1氨基酸序列中的任一者，所述PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸，且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；及任选地在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；或上述4-1BBL氨基酸序列中的任何一者，其长度为185至202个氨基酸，且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组。
根据本发明的额外的或替代的方面，提供一种经分离的多核苷酸，包括一核酸序列，所述核酸序列编码上述PD1氨基酸序列中的任一者，所述PD1氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸，且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ IDNO：18至21所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；或上述4-1BBL氨基酸序列中的任何一者，其长度为185至202个氨基酸，且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：32、33、34、35、74、76、80、82、84、86、88、90、92、94、96、116、118或120所示的核酸序列具有至少70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：32、33、34、35、74、76、80、82、84、86、88、90、92、94或96所示的核酸序列具有至少70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：32、33、34、35、74、76、80、82、84、86、88、90、92、94、96、116、118或120所示的核酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％的同源性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：32、33、34、35、74、76、80、82、84、86、88、90、92、94或96所示的核酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％的同源性。
根据具体实施例，多核苷酸包括SEQ ID NO：32、33、34、35、74、76、80、82、84、86、88、90、92、94、96、116、118或120。在具体实施例中，所述多核苷酸包括SEQ ID NO：32、33、34、35、74、76、80、82、84、86、88、90、92、94或96。
根据具体实施例，多核苷酸是由SEQ ID NO：32、33、34、35、74、76、80、82、84、86、88、90、92、94、96、116、118或120所组成。
根据具体实施例，多核苷酸是由SEQ ID NO：32、33、34、35、74、76、80、82、84、86、88、90、92、94或96所组成。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：74、76、80、82、84、86、88、90、92、94或96所示的核酸序列具有至少70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：74、76、80、82、84、86、88、90、92、94或96所示的核酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％的同源性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸包括SEQ ID NO：74、76、80、82、84、86、88、90、92、94或96。
根据具体实施例，多核苷酸是由SEQ ID NO：74、76、80、82、84、86、88、90、92、94或96所组成。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：32、33、34或35所示的核酸序列具有至少70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：32、33、34或35所示的核酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％或99％的同源性。
根据具体实施例，多核苷酸包括SEQ ID NO：32、33、34或35。
根据具体实施例，多核苷酸是由SEQ ID NO：32、33、34或35所组成。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：39、40、41、42、126、128、130或132所示的核酸序列具有至少70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：39、40、41或42所示的核酸序列具有至少70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：39、40、41、42、126、128、130或132所示的核酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％的同源性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸与如SEQ ID NO：39、40、41或42所示的核酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％的同源性，各种可能性代表本发明的个别的实施例。
根据具体实施例，多核苷酸包括SEQ ID NO：39、40、41、42、126、128、130或132。
根据具体实施例，多核苷酸包括SEQ ID NO：39、40、41或42。
根据具体实施例，多核苷酸是由SEQ ID NO：39、40、41、42、126、128、130或132所组成。
根据具体实施例，多核苷酸是由SEQ ID NO：39、40、41或42所组成。
如本文中所使用，术语“多核苷酸”是指经分离的或以RNA序列、互补多核苷酸序列(cDNA)、基因组多核苷酸序列及/或复合多核苷酸序列的形式所提供的单链核酸序列或双链的核酸序列(例如，上述各项的组合)。
根据具体实施例，本文中所公开的任何多核苷酸及核酸序列可包括保留的核酸取代。保留地经修饰的多核苷酸是指编码相同的或本质上相同的氨基酸序列的核酸，或其中不编码氨基酸序列的核酸是指本质上相同的或相关的(例如，天然连续的)序列。由于遗传密码的简并性，许多功能相同的核酸编码大多数的蛋白质。例如，密码子GCA、GCC、GCG及GCU皆编码氨基酸的丙氨酸。因此，通过密码子所指定的丙氨酸的各个位置，可将密码子改变为所描述的相应的密码子中的另一者，而不改变经编码的多肽。此种核酸变异是“沉默的变异”，其是保留经修饰的多核苷酸的一种。根据具体实施例，本文中所描述编码多肽的多核苷酸及核酸序列的任一者亦描述核酸的沉默的变异。技术人员将认同在某些情况下，可修饰核酸中的各个密码子(除了通常是蛋氨酸的唯一密码子的AUG，以及通常是色氨酸的唯一密码子的TGG之外)可产生功能性相同的分子。据此，编码多肽的多核苷酸的沉默的变异是隐含在关于表达产物的所描述的序列中。
为了在哺乳动物细胞中表达外源多肽，优选地将编码所述多肽的多核苷酸序列连接至适合哺乳动物细胞表达的核酸构建体中。此种核酸构建体包括一启动子序列，所述启动子序列用于以稳定型的方式或诱导型的方式操纵多核苷酸序列在细胞中进行转录。
因此，根据具体实施例，提供一核酸构建体，所述核酸构建体包括多核苷酸，以及用于操纵在宿主细胞中的所述多核苷酸的表达的调控组件。
根据具体实施例，所述调控组件是一异源的调控组件。
本发明的一些实施例的核酸构建体(本文中亦称为“表达载体”)包括使此载体适于在原核生物、真核生物或优选地二者中进行复制及整合的额外的序列(例如，穿梭载体)。此外，典型的克隆载体亦可包括一转录起始序列及一转译起始序列、转录终止子及转译终止子，以及多腺苷酸化信号。举例而言，此种构建体通常包括一5’LTR、一tRNA结合位点、一包装信号、一第二股DNA合成的起点，以及一3’LTR或其一部分。
本发明的一些实施例的核酸构建体通常包括一信号序列，所述信号序列用于自其所处的宿主细胞分泌肽。优选地，用于此目的的所述信号序列是哺乳动物信号序列或本发明的一些实施例的多肽变体的信号序列。
真核的启动子通常包括两种类型的识别序列、TATA盒及上游的启动子组件。位于转录起始位点的上游25至30个碱基对的TATA盒，被认为与操纵RNA聚合酶以起始RNA的合成有关。其他的上游的启动子组件决定转录起始的速率。
优选地，本发明的一些实施例的核酸构建体所使用的启动子在转殖特定细胞群中是具有活性的。细胞类型特异性及/或组织特异性启动子的实例包括诸如肝脏特异性的白蛋白的启动子[平克特等人，(1987)Genes Dev.1：268-277]、淋巴样特异性启动子[卡拉美等人，(1988)Adv.Immunol.43：235-275]；尤其是T细胞受体的启动子[维诺托等人，(1989)EMBO J.8：729-733]及免疫球蛋白；[巴内吉等人，(1983)Cell 33729-740]、神经元特异性启动子，例如神经丝启动子[拜恩等人，(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:5473-5477]、胰腺特异性启动子[埃德朗奇等人，Science 230：912-916]或乳腺特异性启动子，例如乳清启动子(美国专利第4,873,316号及欧洲专利申请公开第264,166号)。
增强子组件可自经连接的同源或异源启动子刺激多达1000倍的转录。当增强子置于转录起始位点下游或上游时，增强子是有活性的。许多衍生自病毒的增强子具有广泛的宿主范围，且在多种组织中具有活性。例如，SV40早期基因增强子是适用于许多的细胞类型。适用于本发明的一些实施例的其他增强子/启动子组合包括衍生自多瘤病毒、人类或鼠巨细胞病毒(CMV)，来自诸如鼠白血病病毒、鼠或劳斯肉瘤病毒及HIV的各种逆转录病毒的长期重复的增强子/启动子组合。参见，增强子及真核表达，冷泉港出版社，冷泉港，纽约，1983，其通过引用并入本文中。
在表达载体的构建中，优选将启动子定位于使其距离异源转录起始位点的距离与其在天然环境中距离转录起始位点的距离大致相同。然而，如本领域中已知的，在不损失启动子功能的情况下，可通融所述距离的一些变化。
亦可将多腺苷酸化序列添加至表达载体中，以提高PD1-4-1BBL、PD1或4-1BBLmRNA的转译效率。准确有效地进行多腺苷酸化需要两个不同的序列元素：位于多腺苷酸化位点下游的富含GU或U的序列，以及位于上游11至30个核苷酸的高度保留的6个核苷酸的序列AAUAAA。适用于本发明的一些实施例的终止信号及多腺苷酸化信号包括衍生自SV40的彼等。
除了已经描述的组件之外，本发明的一些实施例的表达载体通常可包括旨在增加经克隆的核酸的表达水平或协助鉴定携带重组DNA的细胞的其他特定的组件。例如，许多动物病毒包括DNA序列，所述DNA序列会在允许的容许病毒感染的细胞类型中促进病毒基因组的额外的染色体复制。只要通过携带于质粒上的基因或宿主细胞的基因组而提供适当的因子，即可复制带有此等病毒复制子的质粒。
载体可包括或可不包括真核复制子。倘若存在真核复制子，则可使用合适的选择标记，以在真核细胞中扩增载体。倘若载体不包括真核复制子，则无法进行游离的扩增。相反的，重组DNA整合至经工程化细胞的基因组中，其中启动子操纵所需核酸的表达。
本发明的一些实施例的表达载体可进一步包括额外的多核苷酸序列以及使用于启动子-嵌合的多肽的基因组整合的序列，例如，所述多核苷酸序列允许自诸如内部核糖体进入位点(IRES)的单一mRNA转译数种蛋白质。
应当理解，表达载体中所包括的各个组件可以多种构型进行排列。例如，可将增强子组件、启动子等，以及甚至编码PD1-4-1BBL的多核苷酸序列、包括PD1氨基酸序列的多肽或包括4-1BBL氨基酸序列的多肽可“头至尾”配置进行排列，其可以反向互补或以互补配置的形式存在。尽管表达载体的非编码组件更可能发生此种配置的变化，但亦可设想在表达载体内的编码序列的替代配置。
哺乳动物表达载体的实例包括，但不限于可自Invitrogene购得的pcDNA3、pcDNA3.1(+/-)、pGL3、pZeoSV2(+/-)、pSecTag2、pDisplay/pEF/myc/cyto、pCMV/myc/cyto、pCR3.1、pSinRep5、DH26S、DHBB、pNMT1、pNMT41、pNMT81、可自Promega购得的pCI、可自Strategene购得的pMbac、pPbac、pBK-RSV及pBK-CMV、可自Clontech购得的pTRES，以及其衍生物。
亦可使用含有来自诸如逆转录病毒的真核病毒的调控组件的表达载体。SV40载体包括pSVT7及pMT2。源自牛乳头瘤病毒的载体包括pBV-1MTHA，以及源自爱泼斯坦-巴尔病毒的载体包括pHEBO及p2O5。其他示例性载体包括pMSG、pAV009/A+、pMTO10/A+、pMAMneo-5、杆状病毒pDSVE，以及任何其他允许在SV-40早期启动子、SV-40后期启动子、金属硫蛋白启动子、鼠乳腺肿瘤病毒启动子、劳斯肉瘤病毒启动子、多角体蛋白启动子或其他在真核细胞中表达有效的启动子的操纵下表达蛋白质的载体。
如上所述，病毒是非常专门的感染因子，在许多情况下，其已经进化为逃避宿主防御机制。通常，病毒感染且在特定的细胞类型中进行传播。病毒载体的靶向特异性利用其天然的特异性特异地靶向预定的细胞类型，从而将重组基因引入经感染的细胞。因此，本发明的一些实施例所使用的载体的类型将取决于经转殖的细胞类型。根据经转殖的细胞类型选择合适的载体的能力完全在本领域普通技术人员的能力之内，因此在本文中不提供选择考虑的一般描述。例如，如梁CY等人，2004(Arch Virol.149：51-60)所述，可使用人类T细胞白血病病毒第I型(HTLV-I)靶向骨髓细胞，且可使用杆状病毒的苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)中所存在的异源启动子靶向肾细胞。
由于重组病毒载体具有诸如横向感染及靶向特异性的优势，因此重组病毒载体可用于体内表达PD1-4-1BBL、PD1或4-1BBL。横向感染是例如逆转录病毒的生命周期中所固有的，且是单一感染细胞产生许多子代病毒体的过程，所述子代病毒体会萌芽并感染邻近的细胞。结果为大面积区域迅速被感染，其中大部分最初并未被原始的病毒颗粒感染。此与垂直型感染相反，在垂直型感染中，感染原仅通过子代进行传播。亦可产生未能横向扩散的病毒载体。倘若所需的目的为将一特定基因仅导入局部数量的靶细胞中，则此特性可能是很有用的。
可使用多种方法以将本发明的一些实施例的表达载体引入细胞中。此种方法在以下的文献中进行一般性的描述：桑布鲁克等人，分子克隆：实验室手册，纽约冷泉港实验室，纽约(1989、1992)、奥苏贝尔等人，分子生物学的当前方法，约翰威利及宋斯，巴尔的摩市，马里兰州(1989)、张等人，体细胞基因疗法，CRC出版社，安阿伯市，密歇根州(1995)、维加等人，基因靶向，CRC出版社，安阿伯市，密歇根州(1995)、载体：分子克隆载体及其用途的调查、巴特沃思、波士顿弥撒(1988)，以及吉尔伯等人[Biotechniques 4(6)：504-512，1986]，且包括例如稳定或暂时转染、脂质转染、电穿孔及重组病毒载体感染。另外，针对正负选择的方法，参见美国专利第5,464,764号及第5,487,992号。
相较于诸如脂质转染及电穿孔的其他方法，通过病毒感染而引入核酸更具优势，因为由于病毒的感染特性，可获得更高的转染效率。
当前优选的体内核酸转移技术包括使用病毒或非病毒构建体，例如腺病毒、慢病毒、单纯疱疹第I型病毒或腺伴随病毒(AAV)以及脂质基的系统的转染。用于脂质介导的基因转移的有用脂质为例如：DOTMA、DOPE及DC-Chol[汤金森等人，Cancer Investigation，14(1)：54-65(1996)]。用于基因治疗的最优选的构建体是病毒，最优选的是腺病毒、AAV、慢病毒或逆转录病毒。诸如逆转录病毒构建体的病毒构建体包括至少一转录启动子/增强子或基因座定义组件，或通过其他方式控制基因表达的其他组件，例如交互的剪接、核RNA输出或信号的转译后修饰等。此种载体构建体亦包括一包装信号、长末端重复序列(LTR)或其部分，以及适用于所使用病毒的正引物及负引物的结合位点，除非其已经存在于病毒构建体中。此外，此种构建体通常包括自其所处的宿主细胞用于分泌肽的信号序列。优选地，用于此目的的信号序列是哺乳动物信号序列或本发明的一些实施例的多肽变体的信号序列。任选地，所述构建体还可包括操纵多腺苷酸化的信号，以及一或多个限制位点及一转译终止序列。举例而言，此种构建体通常包括5’LTR、tRNA结合位点、包装信号、第二股DNA合成的起点，以及3’LTR或其一部分。可使用非病毒的其他载体，例如阳离子脂质、聚赖氨酸及树枝状聚合物。
如所提及的，除了包括用于插入的编码序列的转录及转译所必需的组件之外，本发明的一些实施例的表达构建体亦可包括经工程改造的序列，以增强经表达的肽的稳定性、生产、纯化、产率或毒性。例如，可工程改造包括PD1-4-1BBL蛋白或本发明的一些实施例的多肽以及异源蛋白的融合蛋白或可裂解的融合蛋白的表达。可设计此种融合蛋白，使得可通过亲和色谱法而容易地分离出融合蛋白。例如，通过固定在针对异源蛋白质具有特异性的柱上。当在本发明的一些实施例的PD1-4-1BBL蛋白或多肽与异源蛋白之间设计一切割的位点时，PD1-4-1BBL蛋白或多肽可通过使用破坏所述切割的位点的合适的酶或试剂[例如，参见布斯等人，(1988)Immunol.Lett.19：65-70；以及加德拉等人，(1990)J.Biol.Chem.265：15854-15859]。
本发明亦考虑包括本文中所述的组合物的细胞。
因此，根据具体实施例，提供一宿主细胞，所述宿主细胞包括本文中所公开的PD1-4-1BBL融合蛋白、包括PD1氨基酸序列的多肽及/或包括4-1BBL氨基酸序列的多肽、相同的多肽的多核苷酸编码或编码相同的多肽的核酸构建体。
如上所述，多种原核细胞或真核细胞可使用作为宿主表达系统以表达本发明的一些实施例的多肽。此等包括，但不限于微生物，例如具有包括编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体的经转染的细菌；使用含有编码序列的重组酵母菌表达载体的经转染的酵母菌；被重组病毒表达载体(例如花椰菜花叶病毒，CaMV；烟草花叶病毒，TMV)感染的植物细胞系统，或使用含有编码序列的重组质粒表达载体的转染，例如Ti质粒。哺乳动物表达系统亦可用于表达本发明的一些实施例的多肽。
细菌构建体的例子包括pET系列的大肠杆菌表达载体[史达迪尔等人，(1990)Methods in Enzymol.185：60-89]。
可与本发明的教导一起使用的真核细胞的实例包括但不限于，哺乳动物细胞、真菌细胞、酵母菌细胞、昆虫细胞、藻类细胞或植物细胞。
在酵母菌中，可使用许多包含稳定型启动子或诱导型启动子的载体，如美国专利申请第5,932,447号中所述。或者，可使用促进外源DNA序列整合至酵母菌染色体的载体。
在使用植物表达载体的情况下，编码序列的表达可通过许多的启动子予以驱动。例如，可使用病毒启动子，例如CaMV的35S RNA启动子及19S RNA启动子[布里森等人，J.Biol.Chem.Soc.(1984)Nature 310：511-514]，或TMV的外壳蛋白启动子[高松等人，J.Biol.Chem.(1984)EMBO J.6：307-311]。可替代地，可使用诸如RUBISCO的小亚基[科鲁奇等人，(1984)EMBO J.3：1671-1680及布罗利等人，(1984)Science 224：838-843]的植物启动子或热休克启动子，例如大豆hsp17.5-E或hsp17.3-B[古利等人，(1986)Mol.Cell.Biol.6：559-565]。可使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转染、显微注射、电穿孔及本领域技术人员熟知的其他技术而将此等构建体引入植物细胞内。参见，例如，魏斯巴赫及魏斯巴赫，1988，植物分子生物学的方法，Academic Press，NY，VIII，pp421-463。
本领域熟知的其他表达系统，例如昆虫及哺乳动物宿主细胞系统，亦可用于本发明的一些实施例。
根据具体实施例，所述细胞是一哺乳动物细胞。
根据具体实施例，所述细胞是一人类细胞。
根据一具体实施例，所述细胞是一细胞株。
根据另一具体实施例，所述细胞是一原代细胞。
所述细胞可衍生自合适的组织，包括但不限于血液、肌肉、神经、脑、心脏、肺、肝、胰、脾、胸腺、食道、胃、肠、肾、睾丸、卵巢、头发、皮肤、骨骼、乳房、子宫、膀胱、脊髓或各种体液。所述细胞可衍生自任何发育阶段，包括胚胎、胎儿及成年阶段，以及发育起源，即，外胚层、中胚层及内胚层起源。
哺乳动物细胞的非限制性实例包括通过SV40(COS，例如COS-7，ATCC CRL 1651)转染的猴子肾CV1株；人类胚胎肾细胞株(亚克隆HEK293或HEK293细胞以在悬浮培养中生长、格雷厄姆等人，J.Gen Virol.，36：59 1977)；婴儿仓鼠肾细胞(BHK，ATCC CCL 10)；小鼠史托力细胞(TM4，马瑟，Biol.Reprod.，23：243-251 1980)；猴子肾细胞(CV1 ATCC CCL 70)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCC CRL-1587)；人类子宫颈癌细胞(HeLa，ATCC CCL 2)；NIH3T3，Jurkat，犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL 34)；水牛大鼠肝细胞(BRL 3A，ATCC CRL1442)；人类肺细胞(W138，ATCC CCL 75)；人类肝细胞(Hep G2，HB 8065)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562，ATCC CCL51)；TRI细胞(马瑟等人，Annals N.Y.Acad.Sci.，383：44-681982)；MRC 5个细胞；FS4细胞；以及人类肝癌细胞株(Hep G2)、PER.C6、K562以及中国仓鼠卵巢细胞(CHO)。
根据本发明的一些实施例，哺乳动物细胞是选自由中国仓鼠卵巢(CHO)、HEK293、PER.C6、HT1080、NS0、Sp2/0、BHK、Namalwa、COS、HeLa以及Vero细胞所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO)、PER.C6或293(例如，Expi293F)细胞。
根据本发明的另一方面，提供一种产生PD1-4-1BBL融合蛋白、包括PD1氨基酸序列的多肽或包括4-1BBL氨基酸序列的多肽的方法，所述方法包括在一宿主细胞内表达如本文中所述的多核苷酸或核酸构建体。
根据具体实施例，所述方法包括经分离的融合蛋白或多肽。
根据具体实施例，在适当的培养时间之后，回收重组多肽。短语“回收重组多肽”是指收集含有所述多肽的整个发酵培养基，且无需分离或纯化的额外的步骤。尽管如此，本发明的一些实施例的多肽可使用多种标准的蛋白质纯化技术以进行纯化。例如，但不限于，亲和色谱、离子交换色谱、过滤、电泳、疏水性相互作用色谱、凝胶过滤色谱、反相色谱、伴刀豆球蛋白A色谱、混合模式色谱、金属亲和色谱、凝集素亲和色谱以及不同的溶解度。
根据具体实施例，在合成与纯化之后，可在体内或体外分析所述肽的治疗功效。此种方法是本领域已知的，且包括例如细胞生存力、转基因小鼠的存活，以及激活标记的表达。
本发明的一些实施例的组合物(例如，PD1-4-1BBL融合蛋白、包括PD1氨基酸序列的多肽或包括4-1BBL氨基酸序列的多肽、编码相同的多肽的多核苷酸、编码相同的多肽的核酸构建体及/或细胞)可本身或以与合适的载体或赋形剂一起混合的药物组合物施用至一生物体。
因此，在一些实施例中，本发明的特征在于一药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的本文中所公开的组合物。
本文中的术语“活性成分”是指负责生物效应的组合物(例如，本文中所述的PD1-4-1BBL融合蛋白、包括PD1氨基酸序列的多肽、包括4-1BBL氨基酸序列的多肽、多核苷酸、核酸构建体及/或细胞)。
本文中的术语“赋形剂”是指添加至药物组合物中以进一步协助一活性成分给药的惰性物质。赋形剂的实例包括，但不限于，碳酸钙、磷酸钙、各种糖及各种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油及聚乙二醇。
在下文中，可互换使用的短语“生理上可接受的载体”以及“药学上可接受的载体”是指不会对生物造成明显刺激且不会消除所施用化合物的生物学活性及特性的载体或稀释剂。此等短语中包括佐剂。
如本文中所使用，“药学上可接受的载体”包括生理上兼容的任何以及所有的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌及抗真菌剂、等渗及吸收延迟剂等。优选地，所述载体适合于静脉内、肌肉内、皮下、肠胃外、脊髓或表皮给药(例如，通过注射或输注)。根据给药途径，本文中所述的活性化合物，即，多肽、多核苷酸、核酸构建体及/或细胞可包括一或多种药学上可接受的盐。“药学上可接受的盐”是指一盐类，所述盐类保留母体化合物所需的生物学活性且不赋予任何不期望的毒理作用(参见例如，贝格，S.M.等人，(1977)J.Pharm.Sci.66：1-19)。此种盐的实例包括酸加成盐以及碱加成盐。酸加成盐包括衍生自无毒无机酸的酸加成盐，例如，盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚磷酸等，以及衍生自无毒有机酸的酸加成盐，例如，脂肪族单-及二羧酸、经苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸，芳香酸、脂肪族及芳香族磺酸等。碱加成盐包括衍生自碱土金属的碱加成盐，例如，钠、钾、镁、钙等)，以及衍生自无毒有机胺的碱加成盐，如N,N’-二苄基乙二胺、N-甲基葡糖胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、普鲁卡因等。
根据本发明的至少一些实施方式的药物组合物亦可包括一药学上可接受的抗氧化剂。药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，例如棕榈酸抗坏血酸酯、丁基羟基茴香醚(BHA)、丁基羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；以及(3)金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。根据本发明的至少一些实施例的药物组合物亦可包括添加剂，例如洗涤剂及增溶剂(例如，TWEEN 20(聚山梨酯-20)、TWEEN 80(聚山梨酯-80))以及防腐剂(例如，硫柳汞、苄基酒精)以及填充物质(例如，乳糖、甘露醇)。
可用于根据本发明的至少一些实施例的药物组合物中的合适的水性及非水性载体的实例包括水、具有各种缓冲剂含量的缓冲盐水(例如，Tris-HCl、乙酸盐、磷酸盐)、pH及离子强度、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)，及其合适的混合物、诸如橄榄油的植物油，以及诸如油酸乙酯的可注射的有机酯。
例如，通过使用诸如卵磷脂的包衣材料，在分散液的情况下，通过保持所需的粒径，以及通过使用表面活性剂，可保持适当的流动性。
此等组合物亦可包括佐剂，例如防腐剂、湿润剂、乳化剂及分散剂。可通过灭菌程序，同上，以及通过包括各种抗菌剂及抗真菌剂，例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等，以确保防止微生物的存在。亦可能需要在组合物中包括诸如糖、氯化钠等的等渗剂。此外，可通过包括延迟吸收的诸如单硬脂酸铝及明胶的试剂来延长可注射药物形式的吸收。
药学上可接受的载体包括无菌水溶液或分散液及用于临时制备无菌注射溶液或分散液的无菌粉末。此种介质及试剂用于药物活性物质的用途是本领域已知的。除非任何常规的介质或试剂与活性化合物不相容，否则考虑将其用于根据本发明的至少一些实施例的药物组合物中。亦可将补充的活性化合物掺入所述组合物中。
在制造及储存的条件下，治疗组合物通常必须是无菌且稳定的。可将组合物配制为溶液、微乳剂、脂质体或其他适合高药物浓度的有序结构。载体可为溶剂或分散介质，包括例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇及液体聚乙二醇等)，以及其合适的混合物。可例如通过使用诸如卵磷脂的包衣，在分散液的情况下通过维持所需的粒径以及通过使用表面活性剂，以维持适当的流动性。在许多情况下，优选在组合物中包括诸如糖的等渗剂、诸如甘露醇、山梨糖醇或氯化钠的多元醇。通过在组合物中包括延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸盐及明胶，则可实现可注射组合物的延长吸收。可通过将所需量的活性化合物与所需的一种或上述成分的组合掺入适当的溶剂中，之后进行灭菌微过滤，以制备无菌注射溶液。通常，通过将活性化合物掺入无菌载体中来制备分散体，所述无菌载体包括一基本的分散介质及所需的其他上文所列举的成分。针对用于制备无菌注射溶液的无菌粉末，优选的制备方法是真空干燥及冷冻干燥(冻干)，其自其先前无菌过滤的溶液中产生活性成分及任何其他所需成分的粉末。
可通过将所需量的活性化合物与所需的一种或上述成分的组合掺入适当的溶剂中，之后进行灭菌微过滤，以制备无菌注射溶液。通常，通过将活性化合物掺入无菌载体中来制备分散体，所述无菌载体包括一基本的分散介质及所需的其他上文所列举的成分。针对用于制备无菌注射溶液的无菌粉末，优选的制备方法是真空干燥及冷冻干燥(冻干)，其自其先前无菌过滤的溶液中产生活性成分及任何其他所需成分的粉末。
可与一载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将取决于所治疗的受试者及特定的给药方式而有所变化。可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量通常将是产生治疗效果的组合物的量。通常，在百分之一百中，与一药物可接受的载体的组合的所述量为活性成分的约0.01％至约99％，优选地为约0.1％至约70％，最优选地为约1％至约30％。
调整剂量方案以提供最佳的所需反应(例如，治疗反应)。例如，可施予单次推注、可随时间施予数个分剂量，或者可根据治疗情况的紧急程度依比例减少或增加剂量。针对易于施用及剂量的均匀性，以剂量单位形式配制肠胃外的组合物是特别有益的。如本文中所使用，剂量单位形式是指适合作为待治疗的受试者的单位剂量的物理性离散的单位。各单元包括一预定量的活性化合物，所述活性化合物经计算可与所需的药物载体一起产生所需的治疗效果。根据本发明的至少一些实施例的剂量单位形式的规范是由以下因素决定且直接取决于：(a)活性化合物以及欲实现的特定治疗效果的独特的特征，以及(b)在本技术领域中配制此种活性化合物以治疗个体的敏感性的固有的局限。
药物的配制及给药的技术可在以下的文献中找到：“雷明顿药物科学”，马克出版公司，伊斯顿市，宾夕法尼亚州，其通过引用并入本文中。
本发明的一些实施例的药物组合物可通过本领域众所周知的方法予以制备，例如，通过常规的混合、溶解、制粒、糖衣制造、浸出、乳化、包囊、包埋或冻干的方法。
本发明的组合物可使用本领域已知的多种方法中的一种或多种经由一种或多种的施用途径来施予。如本领域技术人员能理解，施用途径及/或方式将取决于所需的结果而有所变化。根据本发明的至少一些实施例的治疗剂的优选给药途径包括血管内递送(例如，注射或输注)、静脉内、肌肉内、皮内、腹膜内、皮下、脊髓、口服、肠、直肠、肺(例如，吸入)、鼻腔、局部(包括经皮、颊及舌下)、膀胱内、玻璃体内、腹膜内、阴道、脑部递送(例如，脑室内、脑内及递送增强扩散)、中枢神经系统递送(例如，鞘内、脊柱周围及椎内)或肠胃外(包括，皮下、肌肉内、腹膜内、静脉内(IV)及皮内)、透皮(被动或使用离子电渗或电穿孔)、透粘膜(例如，舌下给药、经鼻、阴道、直肠或舌下)给药，或通过一植入物或其他的肠胃外给药途径进行给药，例如通过注射或输注，或本领域已知的其他的递送途径及/或给药形式。如本文中所使用，短语“肠胃外施用”是指除了肠内及局部施用之外的施用方式，通常通过注射，所述注射包括，但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下腔、脊柱内、硬膜外及胸骨内注射及输注或使用可生物降解的插入物，且可配制成适合各种给药途径的剂型。在一具体实施例中，根据本发明的至少一些实施例的蛋白质、治疗剂或药物组合物可以腹膜内或静脉内施用。
根据具体实施例，本文中所公开的组合物是以水溶液形式通过肠胃外注射而予以施用。所述制剂亦可为悬浮液或乳液的形式。通常，提供用于肠胃外注射的药物组合物，包括有效量的如本文中所述的组合物，且任选地包括药学上可接受的稀释剂、防腐剂、增溶剂、乳化剂、佐剂及/或载体。此种组合物任选地包括以下一种或多种：稀释剂、无菌水、各种缓冲剂的内容物(例如，Tris-HCl、乙酸盐、磷酸盐)、pH及离子强度的缓冲盐水；以及添加剂，例如去污剂及增溶剂(例如，TWEEN 20(聚山梨酸酯20)、TWEEN 80(聚山梨酸酯80))、抗氧化剂(例如，诸如抗坏血酸、焦亚硫酸钠、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠的水溶性抗氧化剂；诸如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基茴香醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚的油溶性抗氧化剂；以及诸如柠檬酸、乙二胺四乙酸酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸的金属螯合剂)，以及防腐剂(例如，丁香酚、苯甲醇)及填充物质(例如，乳糖、甘露醇)。非水溶剂或媒介物的实例是乙醇、丙二醇、聚乙二醇、诸如橄榄油及玉米油的植物油、明胶以及诸如油酸乙酯的可注射的有机酯。使用前可将制剂进行冷冻干燥(冻干)或真空干燥，并重新溶解/重悬。可通过例如通过细菌保留过滤器进行过滤、通过将灭菌剂掺入组合物中、通过照射组合物或通过加热组合物以对制剂进行灭菌。
本文中所公开的各种组合物(例如，多肽)可局部施用。尽管局部给药对于肺、鼻、口腔(舌下、口颊)、阴道或直肠粘膜特别有效，然而局部给药对于大多数的肽制剂的效果并不理想。
当本发明的组合物以气雾剂或具有小于约5微米的空气动力学直径的喷雾干燥的颗粒形式递送时，可在吸入的同时递送至肺部，并横穿肺上皮内衬而到达血流。可使用设计用于肺部输送治疗产品的多种机械装置，包括但不限于雾化器、定量吸入器及粉末吸入器，此等皆为本领域技术人员所熟悉的。可商购的装置的一些具体实例是Ultravent雾化器(马林克罗特公司，圣刘易斯，密苏里州)；Acorn II雾化器(马奎斯医疗产品公司，科罗拉多州恩格尔伍德)；Ventolin计量吸入器(葛兰素公司，三角研究园，北卡罗莱纳州)；以及Spinhaler粉末吸入器(菲尼克斯公司，贝德福德，马萨诸塞州)。Nektar、Alkermes及Mannkind皆具有已被批准或已在临床试验中的可吸入的胰岛素粉制剂，其中所述技术可被应用于本文中所述的制剂。
用于粘膜给药的制剂通常是喷雾干燥的药物颗粒，可将其掺入片剂、凝胶、胶囊、悬浮液或乳液中。标准的药物赋形剂可自任何的配方商处取得。口服制剂可为口香糖、凝胶条、片剂或锭剂的形式。
亦可制备透皮制剂。此等通常为软膏、乳液、喷雾剂或贴剂，所有的此等皆可使用标准的技术予以制备。透皮制剂需要包括渗透促进剂。可改变本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平，以获得一活性成分的量、组合物及给药方式，所述活性成分的量能有效达到对于特定的患者所需的治疗反应，且对患者无毒性。经选择的剂量水平将取决于多种药代动力学因子，包括所使用的本发明的特定组合物的活性、给药途径、给药时间、所使用的特定化合物的排出速率、治疗的持续时间、化合物及/或与所使用的特定组合物组合使用的其他的材料、年龄、性别、体重、状况、一般健康状况以及所治疗患者的既往病史，以及在医学领域中众所周知的类似因子。
根据具体实施例，以治疗有效量向受试者施用如本文中所公开的组合物。如本文中所使用，术语“有效量”或“治疗有效量”是指足以治疗、抑制或减轻所治疗的疾病的一种或多种症状，或以其他方式提供所需的药理及/或生理作用的剂量。精确地剂量是取决于多种因子而变化，例如取决于受试者的变数(例如，年龄、免疫系统健康等)、疾病及所进行的治疗。对于本文中所公开的多肽组合物、编码相同的多肽组合物的多核苷酸及核酸构建体以及本文中所述的细胞，随着进行进一步的研究，会出现关于用于治疗各种患者的各种病症的合适剂量水平的信息，且普通技术人员在考虑接受者的治疗背景、年龄及总体健康状况之后，将能够确定适当的剂量。所述经选择的剂量取决于所需的治疗效果、给药途径及所需的治疗时间。针对多肽组合物，通常每天向哺乳动物施予0.0001至100mg/kg体重的剂量水平，更通常为0.001至20mg/kg。例如，剂量可为0.3mg/kg体重、1mg/kg体重、3mg/kg体重、5mg/kg体重或10mg/kg体重或在1至10mg/kg的范围内。示例性的治疗方案需要每周给药5次、每周4次、每周3次、每周2次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每月一次、每3个月一次或每3至6个月一次。通常，针对静脉内注射或输注，剂量可更低。剂量方案可被调整以提供最佳的所需反应(例如，治疗反应)。例如，可施用单次推注、可随时间施用数个分剂量，或者可根据治疗情况的紧急程度按比例减少或增加剂量。以剂量单位形式配制肠胃外组合物是特别有利的，以易于施用及剂量均匀。如本文中所使用，剂量单位形式是指适合作为待治疗的受试者的单位剂量的物理上离散的单位；各单位包括预定量的活性化合物，所述活性化合物经计算可与所需的药物载体一起产生所需的治疗效果。根据本发明的至少一些实施例的剂量单位形式的规范由以下因素决定且直接地取决于：(a)活性化合物的独特特征及欲实现的特定的治疗效果，以及(b)在本技术领域中配制此种活性化合物以治疗个体的敏感性的固有的局限。
任选地，根据任何合适的定时方案，可以0.0001至100mg/kg患者的重量/天，优选地0.001至20.0mg/kg/天的量的多肽制剂进行给药。根据本发明的至少一些实施例的治疗组合物可例如进行每天三次、每天两次、每天一次、每周三次、每周两次或每周一次、每两周或3、4、5、6、7或8周一次的施予。此外，可在短或长的时间段(例如，1周、1个月、1年、5年)内施予组合物。
或者，本文中所公开的组合物可以缓释制剂的形式给药，在此种情况下，需要较少的给药频率。剂量及频率是取决于患者中治疗剂的半衰期。通常，人类抗体显示最长的半衰期，其次是人源化抗体、嵌合抗体及非人类抗体。融合蛋白的半衰期的差异可能广泛。给药的剂量及频率可取决于治疗是预防性或是治疗性而变化。在预防性的应用中，在一长的时间段内以相对不频繁的间隔施予相对较低的剂量。一些患者终生持续接受治疗。在治疗性的应用中，有时需要以相对短的时间间隔使用相对高的剂量，直至疾病的进展减少或终止为止，且优选直至患者显示出疾病症状的部分或完全缓解。此后，可对患者进行预防性给药。
在某些实施例中，多肽、多核苷酸、核酸构建体或细胞组合物是局部施用的，例如，通过直接注射至待治疗的部位。通常，注射会引起组合物的局部浓度的增加，其大于全身给药所能达到的局部浓度。多肽组合物可与如上所述的基质组合，以通过减少多肽从待治疗位点的被动扩散而协助产生经增加的多肽组合物的局部浓度。
本发明的药物组合物可与本领域已知的医疗装置一起施用。例如，在一任选的实施例中，根据本发明的至少一些实施例的药物组合物可与一针头皮下注射装置一起施用，例如，在美国专利第5,399,163号、第5,383,851号、第5,312,335号、第5,064,413号、第4,941,880号、第4,790,824号或第4,596,556号中所公开的装置。可用于本发明的众所周知的植入物及模式的实例包括：美国专利第4,487,603号公开一种用于以受控的速率分配药物的植入式微输液泵；美国专利第4,486,194号公开一种通过皮肤给药的治疗装置；美国专利第4,447,233号公开一种用于以精确的输注速率输送药物的药物输注泵；美国专利第4,447,224号公开一种用于连续药物递送的可变流量植入式输液设备；美国专利第4,439,196公开一种具有多腔室的渗透药物输送系统；以及美国专利第4,475,196公开一种渗透药物输送系统。此等专利通过引用并入本文中。许多其他此类的植入物、递送系统及模式是本领域技术人员已知的。
可使用能够保护化合物免于快速释放的载体来制备活性化合物，例如控释制剂，包括植入物、透皮贴剂及微囊递送系统。可使用可生物降解的生物兼容性聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯及聚乳酸。制备此类制剂的许多方法已获准专利或为本领域技术人员通常已知的。参见，例如，维持缓释药物及控释药物的递送系统，J.R.鲁宾逊编辑，马塞尔德克公司，纽约，1978。
可在植入聚合物装置(棒、圆柱、薄膜、圆盘)或注射剂(微粒)之后，将控释聚合物装置制成系统性的长期释放装置。基质可为微粒的形式，例如微球，其中肽是分散在固体聚合物基质或微胶囊中，其中核的材料与聚合物壳的材料不同，且肽是分散或悬浮在核中，其本质上可为液体或固体。除非本文特别定义，否则微粒、微球及微胶囊可互换使用。或者，可将聚合物浇铸为自纳米至四厘米的范围的薄平板或薄膜、通过研磨或其他标准的技术所生产的粉末，或甚至是诸如水凝胶的凝胶。
尽管优选为可生物降解的基质，然而非生物降解的基质或可生物降解的基质皆可用于递送本文中所公开的活性剂。尽管由于降解及释放特性的更好表征而优选合成的聚合物，然而非生物降解的基质或可生物降解的基质可为天然的或合成的聚合物。聚合物是基于需要释放的时间段而进行筛选。尽管在其他情况下，脉冲释放或“批量释放”可能会提供更有效的结果，然而在某些情况下，线性释放可能是最有用的。所述聚合物可为水凝胶的形式(以水的重量计，通常吸收高达约90％)，且可任选地与多价离子或聚合物进行交联。
基质可通过本领域技术人员已知的溶剂蒸发、喷雾干燥、溶剂萃取及其他方法而形成。可生物降解的微球可使用开发用于制备针对药物递送的微球的任何方法而予以制备，例如，如以下文献所述：马乔维茨及朗格，J.Controlled Release，5：13-22(1987)；马乔维茨等人，Reactive Polymers，6：275-283(1987)；以及马乔维茨等人，J.Appl PolymerScL，35：755-774(1988)。
所述设备可配制为局部释放以治疗植入或注射区域-其通常递送一剂量，所述剂量是远低于治疗全身或系统性递送的治疗剂量。此等可为皮下植入或皮下注射至肌肉、脂肪或吞咽中。
在某些实施例中，为了确保根据本发明的至少一些实施例的治疗性化合物穿过BBB(倘若需要的话)，可将其配制为例如脂质体的形式。对于制备脂质体的方法，参见，例如，美国专利第4,522,811号；第5,374,548号；以及第5,399,331号。脂质体可包括一或多个部分，所述一或多个部分被选择性地输送至特定细胞或器官中，从而增强靶向药物的递送(参见，例如，V.V.Ranade(1989)J.Clin.Pharmacol.29：685)。示例性的靶向部分包括叶酸或生物素(参见，例如，刘等人的美国专利第5,416,016号)；甘露糖苷(梅泽等人，(1988)Biochem.Biophys.Res.Commun.153：1038)；抗体(P.G.布洛曼等人，(1995)FEBS Lett.357：140；M.奥怀斯等人，(1995)Antimicrob.Agents Chemother.39：180)；表面活性剂蛋白A受体(布里斯科等人，(1995)Am.J Physiol.1233：134)；p120(施雷尔等人，(1994)J.Biol.Chem.269：9090)；亦参见K.凯南嫩；M.L.劳卡宁(1994)FEBS Lett.346：123；J.J.基利昂；I.J.菲德勒(1994)Immunomethods 4：273。
倘若需要，本发明的一些实施例的组合物可存在于一包装或分配器装置中，例如FDA批准的试剂盒，其可包括一或多种含有活性成分的单位剂型。例如，所述包装可包括金属或塑料箔，诸如泡罩包装。包装或分配器设备可随附给药说明。包装或分配器亦可通过依照由规范药物的生产、使用或销售的政府机构所规定的与容器相关的公告的形式而予以存放，其通知反映所述机构对于所述组合物的形式或人类或家畜给药的批准。例如，此种通知可为经由美国食品及药物监督管理局所批准的用于处方药或经批准的产品说明书。如上文所进一步详述，亦可制备包含在相容的药物载体中所配制的本发明的制剂的组合物，将其置放在适当的容器中，并贴上标签以治疗指定的病症。
如本文中所使用，术语“约”是指±10％。
术语“包括(comprises)”、“包括(comprises)”、“包括(includes)”、“包括(including)”、“具有”及其共轭词表示“包括但不限于”。
术语“由...所组成”是指“包括并限于”。
术语“基本上由...所组成”是指所述组合物、方法或结构可包括额外的成分、步骤及/或部分，但前提是所述额外的成分、步骤及/或部分不会实质性地改变所要求保护的组成物、方法或结构的基础特征及新颖特征。
除非上下文另有明确指出，否则如本文所使用，单数形式“一(a)”、“一(an)”及“所述”包括复数引用。例如，术语“一化合物”或“至少一化合物”可包括多种化合物，包括其混合物。
在整个本申请中，本发明的各种实施例可以一范围格式呈现。应当理解，范围格式的描述仅是为了方便及简洁，而不应被解释为对本发明范围的不灵活的限制。据此，应将范围的描述视为已具体公开所有可能的子范围以及所述范围内的各个数值。例如，范围自1至6的描述应被视为已明确公开自1至3、自1至4、自1至5、自2至4、自2至6、自3至6的子范围等，以及所述范围内的个别的数字，例如1、2、3、4、5及6。此与范围的广度无关。
每当在本文中指示数值范围时，其意在包括所指示范围内的任何引用数字(分数或整数)。短语“在第一指示数字及第二指示数字之间的范围”与“自第一指示数字至第二指示数字的范围”在本文中是可互换使用的，且意在包括第一指示数字及第二指示数字以及其之间的所有小数及整数。
如本文中所使用，术语“方法”是指用于完成一给定任务的方式、手段、技术及过程，包括，但不限于已知的方式、手段、技术及过程，或容易地由化学、药理、生物学、生化及医学领域的从业人员从已知的方式、手段、技术及过程开发。
当提到参照序列表时，应理解为此参照亦包括基本上对应于其互补序列的序列，包括微小的序列变化，所述微小的序列变化是由于例如测序错误、克隆错误或导致碱基取代、碱基缺失或碱基添加的其他改变而所引起的。前提是此种变异的频率是小于50个核苷酸中的1个、或者小于100个核苷酸中的1个、或者小于200个核苷酸中的1个、或者小于500个核苷酸中的1个、或者小于1000个核苷酸中的1个、或者小于5,000个核苷酸中的1个、或者小于10,000个核苷酸中的1个。
实例
现在参考以下的实例，此等实例与以上的描述一起以非限制性方式示出本发明的一些实施例。
通常，本文中所使用的命名法及本发明中所使用的实验室方法包括分子、生化、微生物及重组DNA技术。此种技术在文献中有详尽的解释。参见，例如，“分子克隆：实验室手册”，桑布鲁克等人，(1989)；“分子生物学的当前方法”，第I至III卷，奥苏贝尔，R.M.，编辑(1994)；奥苏贝尔等人，“分子生物学的当前方法”，约翰威利及宋斯，巴尔的摩市，马里兰州(1989)；珀巴尔，“分子克隆的实用指南”，约翰威利及宋斯，纽约(1988)；沃森等人，“重组的DNA”，Scientific American Books，纽约；比伦等人(编辑)“基因组分析：实验室手册系列”，第1至4卷，冷泉港实验室出版社，纽约(1998)；如美国专利第4,666,828号；第4,683,202号；第4,801,531号；第5,192,659号以及第5,272,057号所示；“细胞生物学：实验室手册”，第I至III卷，赛利斯，J.E.，编辑(1994)；法瑞雪尼，威利-利斯，纽约(1994)，第三版，“动物细胞的培养-基础技术的手册”；“免疫学的当前方案”，第I至III卷，科利根J.E.，编辑(1994)；斯蒂茨等人(编辑)，“基础及临床的免疫学”(第8版)，阿普尔顿及朗格，诺沃克，康涅狄格州(1994)；米雪儿及志吉(编辑)，“细胞免疫学的筛选方法”，W.H.弗里曼公司，纽约(1980)；可利用的免疫测定法在专利及科学文献中有广泛的描述，例如，参见美国专利第3,791,932号；第3,839,153号；第3,850,752号；第3,850,578号；第3,853,987号；第3,867,517号；第3,879,262号；第3,901,654号；第3,935,074号；第3,984,533号；第3,996,345号；第4,034,074号；第4,098,876号；第4,879,219号；第5,011,771号以及第5,281,521号；“寡核苷酸合成”给特，M.J.编辑，(1984)；“核酸杂交”，海姆斯，B.D.，及希金斯S.J.，编辑(1985)；“转录及翻译”，海姆斯，B.D.，及希金斯S.J.，编辑(1984)；“动物细胞培养”，法瑞雪尼R.I.，编辑(1986)；“固定化的细胞及酶”，IRL出版社(1986)；“分子克隆的实用指南”，珀巴尔，B.，(1984)及“酶学的方法”，第1至317卷，Academic Press；“PCR方案：方法及应用的指南”，Academic Press，加利福尼亚，圣地亚哥(1990)；马沙克等人，“蛋白质纯化及表征的策略-实验室课程手册”CSHL Press(1996)；所有此等文献皆并入本文中，如同在本文中完整阐述。其中的过程被认为是本领域众所周知的，且为读者的方便而提供。其中包含的所有信息皆通过引用并入本文中。
实例1
PD1-4-1BBL变体的筛选
为了优化以下的参数，针对PD1-4-1BBL融合蛋白的结构进行分析，所述PD1-4-1BBL融合蛋白在本文中称为“DSP105”，包括N端信号肽以及His标签(SEQ ID NO：26，图1)：
·折叠–适当的折叠以允许与靶标结合，最大程度地减少潜在的二硫键干扰
·完整性-未暴露的蛋白水解位点；
·多聚化-探究两个结构域的潜在多聚化。具体而言，优化C端域形成的三聚化；
·在哺乳动物表达系统中高度表达；以及
·低的免疫原性。
具体地，针对PD1结构域(对应于UniProt ID Q15116的细胞外结构域的氨基酸21至170，SEQ ID NO：2)：
1.基于PDB结构产生一PD1综合模型：3RRQ、5GGR、5GGS、5IUS、5JXE、4ZQK、5B8C、5WT9以及一NMR结构2M2D。在上述的PDB结构中所缺失的PD1的C端部分(自GLU150开始，即，EVPTAHPSPSPRPAGQFQTLV，SEQ ID NO：6)包括一富含Pro的片段，所述片段可折叠在其自身上(根据肽模型算法)。
2.使用PROSPER服务器分析融合蛋白的蛋白水解位点。
针对4-1BBL(对应于UniProt ID P41273 EM域的氨基酸50至254，SEQ ID NO：3)：
1.基于PDB结构：2X29，产生4-1BBL细胞外(EC)域模型。由于4-1BBL的N端部分在此PDB结构中缺失且并未在X射线中解析，因此似乎片段(ACPWAVSGARASPGSAASPRLREGPELSPD，SEQ ID NO：7)使疏水性残基暴露于溶剂，并尝试预测其表明存在非结构化区域的结构。其可能会降低融合DSP105的稳定性，且亦可能会干扰经由4-1BBL进行三聚化的正确方向。
2.使用PROSPER服务器分析融合蛋白的蛋白水解位点。
3.检测到4-1BBL解析域内的一个环，所述环朝向外面且面对溶剂，表明其可能是正在进行的一区域。
以下的图2A-3及表3证实在分析DSP105融合蛋白时所产生的3D模型、所确定的结构域及片段，以及所预测的蛋白水解位点。
总体而言，结构的分析表明如下：
1.建议去除在PD1的N端处的五个残基的片段(PGWFL，SEQ ID NO：8)，由于此等残基本质上主要是疏水性的，其对于识别PDL1并非为必需的，且其跨越结构域之外。
2.由于与上述第1点所述类似的表观行为，因此亦建议去除在PD1的C端处的五个残基的片段(FQTLV，SEQ ID NO：9)(即，此等残基本质上主要是疏水性的，其对于识别PDL1并非为必需的，且其跨越结构域之外)。
3.在PD1的C端及4-1BBL的N端发现4个预测的切割位点(仅集中于非结构化的片段)。
4.预期移除4-1BBL结构域的N端片段(ACPWAVSGARASPG，SEQ ID NO：10/ACPWAV，SEQ ID NO：11)以降低DSP105的柔韧性及疏水性。
5.在所述经移除的N端片段中，由于不正确的二硫键，有一游离的Cys残基可能会阻止正确的折叠/重排。
表3：在DSP105 PD1-4-1BBL融合蛋白(SEQ ID NO：1)中的经预测的蛋白水解位点
Figure BDA0002939076220001771
基于结构的分析，设计数种PD1变体，其具有SEQ ID NO：18、19、20、21、73、75、79、81、83、85、87、89、91、93、95、115、117或119的氨基酸序列，其可与4-1BBL或其变体的任一者进行融合。
此外，基于结构的分析，设计数种4-1BBL变体，其具有SEQ ID NO：22、23、24、25、123、125、127或129的氨基酸序列，其可与PD1或其变体的任一者进行融合。
此外，为了避免需要融合蛋白的三聚化以诱导4-1BBL部分的活性，设计包括3个4-1BBL氨基酸序列的重复的4-1BBL变体，其可与PD1或其变体的任一者进行融合。此种4-1BBL变体的示例性序列包括三个SEQ ID NO：23的重复序列，且在重复序列之间具有(GGGGS)x2+GGGG(SEQ ID NO：121)连接子，其氨基酸序列为SEQ ID NO：131。
作为包括此种3个重复的4-1BBL氨基酸序列的DSP105的例子，使用同源建模，随后进行侧链及环修饰，以产生DSP105_V31(SEQ ID NO：147)的模型。基于同源X射线结构对于各部分进行同源性建模。针对PD1-PDB ID：使用3RRQ、5GGR、5GGS、5JXE及4ZQK作为模板。针对hIgG4-PDB ID：使用4C54、4C55、5W5M及5W5N作为模板。针对41BB-L-PDB ID：使用6CPR、6A3V及6CU0作为模板。连接子片段是使用在CHARMM中的循环建模而进行建模的，主要是为了消除结构的冲突，以及为可能的“间隔子”提供合理的评估。此等模型分析预测可能与配体的结合，且在不同域之间并无干扰(图13A至图13D)。
此外，已设计包括(GGGGS)x2(SEQ ID NO：149)连接子的PD1-4-1BBL融合蛋白，以允许三聚化之后的不同PD1-4-1BBL融合蛋白的PD1部分之间更长的距离。
接着，设计数种PD1-4-1BBL变体。包括针对序列的选择及3D模型的合理性的序列证实于下表4及图4至图6中。
表4：经设计的PD1-4-1BBL变体的描述
Figure BDA0002939076220001781
Figure BDA0002939076220001791
Figure BDA0002939076220001801
Figure BDA0002939076220001811
Figure BDA0002939076220001821
Figure BDA0002939076220001831
Figure BDA0002939076220001841
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Figure BDA0002939076220001891
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Figure BDA0002939076220001921
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Figure BDA0002939076220001951
Figure BDA0002939076220001961
实例2
PD1-4-1BBL变种的制备
为了比较功能分析及生产评估，生产数种PD1-4-1BBL融合蛋白，即：在本文中称为“DSP105”(SEQ ID NO：5)的PD1-4-1BBL融合蛋白及九种在DSP105本文中分别称为“DSP105_V1”、“DSP105_V2”、“DSP105_V3”、“DSP105_V17”、“DSP105_V18”、“DSP105_V19”、“DSP105_V20”、“DSP105_V21”、“DSP105_V22”、“DSP_V23”、“DSP105_V24”、“DSP105_V25”、“DSP105_V26”、“DSP105_V27”、“DSP105_V28”、“DSP105_V29”、“DSP105_V30”及“DSP105_V31”的变体(SEQ ID NO：12、14、16、97、101、103、105、107、111、113、133、135、137、139、141、143、145及147)。
在ExpiCHO、Expi293F或CHO-3E7细胞中进行生产经克隆有针对DSP105及其变体的编码序列的pcDNA3.4或pTT5表达载体的转染。使用EcoRI及HindIII限制酶将所述序列克隆至载体中，并在N端或C端带有或不带有6个His-标签标签处添加Kozak序列、人工信号肽(MEAPAQLLFLLLLWLPDTTG，SEQ ID NO：4)，以及在C端的一停止密码子。自细胞培养的上清液中收集蛋白质。
上清液通过HisTrapTMFF Crude柱进行一步的纯化。
经标记的融合蛋白的产物是使用抗His标签或抗分子的其中一个结构域并通过SDS-PAGE及西方墨点分析法以进行验证，(即，各个PD1或4-1BBL的细胞外结构域)的特异性抗体，参见，例如图8A至图8E。
例如，在还原的条件下，在SDS-PAGE凝胶上所分离的经His标签的-DSP105_V17、DSP105-V18、DSP105_V19、DSP105_V20及DSP105_V23变体的西方墨点分析法，随后使用抗PD1的抗体或抗His标签的抗体进行免疫印迹，表明此等变体在CHO-3E7细胞中表达。
任选地，通过尺寸排阻色谱法进一步纯化经生产的融合蛋白，以收集经纯化的三聚体的部分。为此，使用PBS作为流动相，并以1ml/min的流速将蛋白质负载至Superdex色谱柱上。收集对应于蛋白质的三聚体的主峰部份。
使用BCA或Bradford蛋白浓度检测，或通过Nanodrop在280nm处的光密度测量除以蛋白质消光系数，来评估产率。在储存及加速的条件下评估蛋白质的稳定性。
实例3
PD1-4-1BBL变体的低聚合状态的检测
材料–如以上实例2所述，在Expi293细胞中所生产的N端带有His标签的DSP105(SEQ ID NO：1)[在本文中称为“DSP105(HEK-NH)”]、在ExpiCHO细胞中所生产的N端带有His标签的DSP105(SEQ ID NO：1)[在本文中称为“DSP105(CHO-NH)”]、在ExpiCHO细胞中所生产的N端带有His标签的DSP105变体DSP105_V1(SEQ ID NO：13)、DSP105_V2(SEQ ID NO：15)及DSP105_V3(SEQ ID NO：17)[在本文中称为“DSP105(CHO-NH)-V1”、“DSP105(CHO-NH)-V2”及“DSP105(CHO-NH)-V3)]、在CHO-3E7细胞或ExpiCHO细胞中所生产的N端带有His标签的DSP105变体DSP105_V17(SEQ ID NO：99)及DSP105_V22(SEQ ID NO：109)，以及如以上实例2所述，在CHO-3E7细胞或ExpiCHO细胞中所生产的DSP105变体DSP107_V17(SEQ ID NO：97)、DSP105_V18(SEQ ID NO：NO：101)、DSP105_V19(SEQ ID NO：103)、DSP105_V20(SEQ ID NO：105)、DSP105_V21(SEQ ID NO：107)、DSP_V22(SEQ ID NO：111)、DSP105_V23(SEQ ID NO：113)、DSP105_V24(SEQ ID NO：133)、DSP105_V25(SEQ ID NO：135)、DSP105_V26(SEQ IDNO：137)、DSP105_V27(SEQ ID NO：139)、DSP105_V28(SE Q ID NO：141)、DSP105_V29(SEQID NO：143)、DSP105_V30(SEQ ID NO：145)及DSP105_V31(SEQ ID NO：147)。
Spectra BR蛋白质分子量标记(Thermo Fisher Scientific，目录第26634号)、4至20％聚丙烯酰胺凝胶(BioRad，目录第556-8094号)、e-Stain peds(GenScript，目录第L02011号)、Laemmeli负载缓冲液(BioRad，目录第161-0747号)。Superdex 200增加色谱柱(Superdex 200Increase column)(GE医疗)，SEC-MALS系统：AKTA Explorer(GE)+MiniDawnTREOS+OPTILAB T-reX(WYATT)。
方法-
SDS-PAGE分析-将各样品中的2μg蛋白或35μl上清液与加β-巯基乙醇或不加β-巯基乙醇(分别在还原及非还原的条件下)与负载缓冲液混合，在95℃加热5分钟，并在4至20％梯度的聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE上进行分离。蛋白质在凝胶上的迁移是通过含有e-Stain peds的考马斯亮蓝染色以及根据制造商的说明所使用的e-Stain机器(GenScript)进行洗涤予以显现。
SEC-MALS分析-将蛋白质负载至Superdex 200增加色谱柱上(GE医疗)上，以0.8ml/min的流速进行流动，并以10mM KPO4 pH 8.0+150mM NaCl作为流动相。使用AKTAExplorer(GE)+MiniDawn TREOS+OPTILAB T-reX(WYATT)通过UV、MALS及RI进行检测。
结果–
如图7所示，在非还原的条件下，而非在还原的条件下，在N端带有His标签的DSP105(SEQ ID NO：1)中观察到高比例的高分子量形式(HMW，聚集体)。另一方面，在N端带有His标签的DSP105_V17(SEQ ID NO：99)中仅检测到少量的聚集体，表明在DSP105_V17中防止了由于不正确的二硫键的形成而导致的DSP105的聚集。如图8A至图88E所示，在其他的PD1-4-1BBL变体[即，称为DSP105_V18(SEQ ID NO：101)、DSP105_V19(SEQ ID NO：103)、DSP105_V20(SEQ ID NO：105)及DSP105_V23(SEQ ID NO：113]中检测到低量的聚集体。
如图9A至图9B所示，当在非还原的条件下于SDS-PAGE上进行分离时，N端带有His标记的DSP105(WT；SEQ ID NO：1)His、N端带有His标记的DSP105变体DSP105_V17(SEQ IDNO：99)、DSP105_V17(SEQ ID NO：97)、DSP105_V20(SEQ ID NO：105)、DSP_V22(SEQ ID NO：111)、DSP105_V23(SEQ ID NO：113)、DSP105_V24(SEQ ID NO：133)、DSP105_V25(SEQ IDNO：135)及DSP105_V31(SEQ ID NO：147)、PD1-4-1BBL的变体，与在还原的条件下于相同的分子量处被检测到。在带有His标签的DSP105(WT；SEQ ID NO：1，在图9A至图9B中命名为“DSP105WT”)中检测到更高分子量的其他条带，相较于在还原的条件下，此等条带在非还原的条件下更为明显。其可能暗示可能通过S-S桥介导的多聚体的形成。有趣的是，在非还原的DSP105WT中所出现的此种主要的“高分子量”条带在包括CYS73>Ser取代的DSP105_V22(SEQ ID NO：111)中未被观察到，强调此高分子量条带可能是由CYS73所介导的。
实施例4
包括两个结构域的PD1-4-1BBL变体
材料-如以上实例2所述生产：DSP105(HEK-NH)(SEQ ID NO：1)、DSP105(CHO-NH)(SEQ ID NO：1)、DSP105(CHO-NH)-V1(SEQ ID NO：13)、DSP105(CHO-NH)-V2(SEQ ID NO：15)，DSP105(CHO-NH)-V3(SEQ IDN O：17)、N端带有His标签的DSP105_V17(SEQ ID NO：99)、带有His标签的DSP105_V22(SEQ ID NO：109)、DSP_V17(SEQ ID NO：97)、DSP105_V18(SEQID NO：101)、DSP105_V19(SEQ ID NO：103)、DSP105_V20(SEQ ID NO：105)、DSP105_V21(SEQID NO：107)、DSP_V22(SEQ ID NO：111)、DSP105_V23(SEQ ID NO：113)、DSP105_V24(SEQ IDNO：133)、DSP105_V25(SEQ ID NO：135)、DSP105_V26(SEQ ID NO：137)、DSP105_V27(SEQ IDNO：139)、DSP105_V28(SEQ ID NO：141)、DSP105_V29(SEQ ID NO：143)、DSP105_V30(SEQ IDNO：145)及DSP105_V31(SEQ ID NO：147)。
针对西方墨点分析法：Spectra BR蛋白标记物(Thermo Fisher Scientific，目录第26634号)，Laemmeli负载缓冲液(BioRad，目录第161-0747号)、4至20％聚丙烯酰胺凝胶(BioRad，目录第556-8094号)、抗4-1BBL(BioVision，5369-100)、抗PD1(细胞信号，目录第86163号)、抗His(GenScript，目录第A00186号)、二级山羊抗兔IgG(H+L)-HRP结合蛋白(R&D，目录第170-6515号)、ECL加上西方墨点基质(皮尔斯，目录第32132号)。
针对夹心ELISA：抗4-1BBL抗体(来自经配对的捕获抗体；Abnova#H00008744-AP41)、抗经PD1生物素化抗体、链霉亲和素蛋白，HRP(#21126，Thermo Scientific)、TMB基质(1-StepTMUltra TMB-ELISA基质溶液，Thermo Scientific#34028)。
方法-
蛋白质印迹分析-蛋白质(各泳道50至500ng)在还原或非还原的条件下处理(分别在含有β-巯基乙醇的负载缓冲液中，于95℃煮沸5分钟，或者在无β-巯基乙醇的样品缓冲液中且不加热)，并在4至20％的梯度SDS-PAGE凝胶上进行分离。随后，将蛋白质转移至PVDF膜上，并与抗4-1BBL、抗PD1或抗His的初级抗体一起培养过夜，之后与HRP结合蛋白二级抗体培养1小时。在进行ECL之后检测信号。
夹心ELISA-使用抗4-1BBL捕获抗体(PBS中的2.5ug/ml)涂布盘，并在阻断溶液(PBS、1％BSA、0.005％Tween)中进行阻断。将产生的PD1-4-1BBL融合蛋白在阻断溶液中进行连续稀释，并在经涂布的盘中培养2小时，之后与检测抗PD1生物素化抗体一起培养，然后根据制造商的建议与链霉亲和素-HRP及TMB基质一起检测。使用Plate读取仪(ThermoScientific，Multiscan FC)在450nm对盘进行分析，并以620nm作为参考。
实施例5
PD1-4-1BBL变体结合PDL1及4-1BB
PD1-4-1BBL蛋白的PD1部分与PDL1的结合分析
使用过度表达PDL1的DLD1-PDL1细胞株检测PD1-4-1BBL的PD1结构域与人类PDL1的结合。DLD1-WT细胞作为阴性对照。将细胞与不同浓度的经生产的PD1-4-1BBL融合蛋白一起培养，之后使用抗4-1BBL的二级抗体进行免疫染色。通过流式细胞术分析结合能力。
材料-如以上实例2所述生产：DSP105(HEK-NH)(SEQ ID NO：1)、DSP105(CHO-NH)(SEQ ID NO：1)、DSP105(CHO-NH)-V1(SEQ ID NO：13)、DSP105(CHO-NH)-V2(SEQ ID NO：15)、DSP105(CHO-NH)-V3(SEQ IDN O：17)、N端带有His标签的DSP105_V17(SEQ ID NO：99)、带有His标签的DSP105_V22(SEQ ID NO：109)、DSP105_V17(SEQ ID NO：97)、DSP105_V18(SEQ ID NO：101)、DSP105_V19(SEQ ID NO：103)、DSP105_V20(SEQ ID NO：105)、DSP105_V21 SEQ ID NO：107)、DSP_V22(SEQ ID NO：111)、DSP105_V23(SEQ ID NO：113)、DSP105_V24(SEQ ID NO：133)、DSP105_V25(SEQ ID NO：135)、DSP105_V26(SEQ ID NO：137)、DSP105_V27(SEQ ID NO：139)、DSP105_V28(SEQ ID NO：141)、DSP105_V29(SEQ ID NO：143)、DSP105_V30(SEQ ID NO：145)及DSP105_V31(SEQ ID NO：147)。
DLD1-WT及DLD1-PDL1细胞株(亨德里克斯等人，2016)、真染色FCX(Biolegend，货号422302)、抗4-1BBL(Biolegend，货号311506)、同型IgG1、k(Biolegend，货号400122)、抗PDL1(Bioledgend，目录第329708号)、同型IgG2b，(Biolegend，目录第400322号)。
方法-将细胞在冰上与不同浓度(0.05至50μg/ml)的经生产的PD1-4-1BBL融合蛋白一起培养30分钟，然后使用抗4-1BBL的抗体进行免疫染色，并通过流式细胞仪进行分析。
PD1-4-1BBL蛋白的4-1BBL部分与4-1BB的结合分析
使用过量表达4-1BB的HT1080-4-1BB细胞株检测PD1-4-1BBL的4-1BBL结构域与人类4-1BB的结合。HT1080 WT细胞作为阴性对照。将细胞与所生产的PD1-4-1BBL融合蛋白的不同稀释液一起培养，之后使用抗PD1的二级抗体进行免疫染色。通过流式细胞术分析结合能力。
材料-如以上实例2所生产所述生产：DSP105(HEK-NH)(SEQ ID NO：1)、DSP105(CHO-NH)(SEQ ID NO：1)、DSP105(CHO-NH)-V1(SEQ ID NO：13)、DSP105(CHO-NH)-V2(SEQID NO：15)、DSP105(CHO-NH)-V3(SEQ IDN O：17)、N端带有His标签的DSP105_V17(SEQ IDNO：99)、带有His标签的DSP105_V22(SEQ ID NO：109)、DSP105_V17(SEQ ID NO：97)、DSP105_V18(SEQ ID NO：101)、DSP105_V19(SEQ ID NO：103)、DSP105_V20(SEQ ID NO：105)、DSP105_V21(SEQ ID NO：107)、DSP_V22(SEQ ID NO：111)、DSP105_V23(SEQ ID NO：113)、DSP105_V24(SEQ ID NO：133)、DSP105_V25(SEQ ID NO：135)、DSP105_V26(SEQ IDNO：137)、DSP105_V27(SEQ ID NO：139)、DSP105_V28(SEQ ID NO：141)、DSP105_V29(SEQ IDNO：143)、DSP105_V30(SEQ ID NO：145)及DSP105_V31(SEQ ID NO：147)。
HT1080 WT及HT1080-4-1BB细胞(威芶等人，2009)，可固定的存活率染剂(BDBiosciences，目录第562247号)、真染色FCX(Biolegend，目录第422302号)、抗PD1(Bioledgend目录第329908号)、抗41BB(Bioledgend cat#309801)同型IgG1、K(Bioledgend，cat#400122)。
方法-将细胞在冰上与不同稀释度(1：8至1：1024)的经生产的PD1-4-1BBL融合蛋白的一起培养30分钟，然后使用抗PD1的抗体进行免疫染色，并通过流式细胞仪进行分析。
结果–如图10A所示，DLD1-PD1及HT1080-4-1BB细胞分别表达相关的受体PD1及41BB。结合分析显示，经His标记的DSP105_V17(SEQ ID NO：97)以剂量依赖性的方式与DLD1-PDL1细胞及HT1080-41BB细胞结合(图10B)。不同稀释度的上清液对照组(来自未经转染的细胞)并未与HT1080-41BB细胞结合(图10B)。之后，利用GraphPad Prism软件并使用GMFI值以建立结合曲线图(图10C)。组合起来，经His标记的DSP105_V17(SEQ ID NO：97)的两侧、融合蛋白会与在细胞表面过度表达的相关对应物结合。
PD1-4-1BBL与人类、小鼠及食蟹猴PDL1及4-1BB对应物的结合
通过表面等离子体共振(SPR)分析检测PD1-4-1BBL蛋白与PDL1及4-1BB对应物的结合。
材料-如以上实例2所述生产：DSP105(HEK-NH)(SEQ ID NO：1)、DSP105(CHO-NH)(SEQ ID NO：1)、DSP105(CHO-NH)-V1(SEQ ID NO：13)、DSP105(CHO-NH)-V2(SEQ ID NO：15)、DSP105(CHO-NH)-V3(SEQ IDN O：17)、N端带有His标签的DSP105_V17(SEQ ID NO：99)、带有His标签的DSP105_V22(SEQ ID NO：109)、DSP105_V17(SEQ ID NO：97)、DSP105_V18(SEQ ID NO：101)、DSP105_V19(SEQ ID NO：103)、DSP105_V20(SEQ ID NO：105)、DSP105_V21(SEQ ID NO：107)、DSP_V22(SEQ ID NO：111)、DSP105_V23(SEQ ID NO：113)、DSP105_V24(SEQ ID NO：133)、DSP105_V25(SEQ ID NO：135)、DSP105_V26(SEQ ID NO：137)、DSP105_V27(SEQ ID NO：139)、DSP105_V28(SEQ ID NO：141)、DSP105_V29(SEQ ID NO：143)、DSP105_V30(SEQ ID NO：145)及DSP105_V31(SEQ ID NO：147)。
S系列传感器芯片CM5(GE，目录第BR100530号)、抗体捕获试剂盒、人类hCD47(阴性对照组)、人类PDL1、小鼠PDL1、猕猴PDL1、人类4-1BB、小鼠4-1BB、猕猴4-1BB。
方法–使用Biacore T100生物传感器(GE医疗)进行SPR分析。使用制造商所建议的标准胺偶联方案，将捕获试剂盒中的抗体偶联至芯片的所有四个流道(Fc1至4)。在HBS-EP+流动缓冲液(10mM HEPES pH7.3、150mM NaCl、3mM EDTA、0.05％Tween20)中使PD1-4-1BBL对应蛋白(PDL1及4-1BB)与芯片结合：将人类CD47(阴性对照组)负载至参考流道Fc1上，而Fc2至4则负载人类、小鼠及食蟹猴PDL1蛋白。在芯片自动再生之后，将人类CD47重新负载至芯片的流道Fc1上，以及将人类、小鼠及食蟹猴4-1BB蛋白重新负载至流道Fc2至4上。在对应物结合之后，PD1-4-1BBL分析物通过所有的四个流道。使用各种浓度的PD1-4-1BBL分析物，以50μl/min的流速反复地重复此步骤。在各个循环结束时注入3M MgCl2溶液(以20μl/min的速度进行45秒)，通过去负载经捕获的分子以再生活性表面。使用BiaEvaluation软件3.0.2版(GE医疗)中的Kinetic 1：1结合模型评估结合的参数。
实施例6
双面结合-效力分析
通过夹心ELISA基的效力分析法测试分子的两侧与其对应物的结合，即，PD1与PDL1的结合以及4-1BBL与4-1BB的结合。此分析法亦用于比较不同的生产批次的功能特性。
材料–如以上实例2所述生产：DSP105(HEK-NH)(SEQ ID NO：1)、DSP105(CHO-NH)(SEQ ID NO：1)、DSP105(CHO-NH)-V1(SEQ ID NO：13)、DSP105(CHO-NH)-V2(SEQ ID NO：15)、DSP105(CHO-NH)-V3(SEQ IDN O：17)、N端带有His标签的DSP105_V17(SEQ ID NO：99)、带有His标签的DSP105_V22(SEQ ID NO：109)、DSP105_V17(SEQ ID NO：97)、DSP105_V18(SEQ ID NO：101)、DSP105_V19(SEQ ID NO：103)、DSP105_V20(SEQ ID NO：105)、DSP105_V21(SEQ ID NO：107)、DSP_V22(SEQ ID NO：111)、DSP105_V23(SEQ ID NO：113)、DSP105_V24(SEQ ID NO：133)、DSP105_V25(SEQ ID NO：135)、DSP105_V26(SEQ ID NO：137)、DSP105_V27(SEQ ID NO：139)、DSP105_V28(SEQ ID NO：141)、DSP105_V29(SEQ ID NO：143)、DSP105_V30(SEQ ID NO：145)及DSP105_V31(SEQ ID NO：147)。人类重组PDL1(ACROBiosystem，A001-214)、人类重组蛋白4-1BB-生物素(cat#41B-H82E3，ACRO Biosystem)、链霉亲和素蛋白-HRP(cat#21126，Thermoscientific)、1-StepTMUltra TMB-ELISA基质溶液(目录第34028号，Thermoscientific)。
方法-将PDL1结合在塑料盘的表面上，添加PD1-4-1BBL并使其与经固定的PDL1结合。洗涤之后，加入经生物素化的4-1BB，使其结合至分子的4-1BBL臂上。之后，将盘进行洗涤并加入链霉亲和素HRP。使用盘读取器(Thermo Scientific，Multiscan FC)并根据标准ELISA方案，使用TMB基质在450nm处进行检测，并以540nm作为参考。
实施例7
通过PD1-4-1BBL变体激活4-1BB
使用HT1080细胞或过度表达4-1BB受体的另一细胞株检测所生产的PD1-4-1BBL融合蛋白对于4-1BB受体的激活作用。具体而言，HT1080-4-1BB细胞株会过度表达4-1BB，并已知在结合4-1BBL时会分泌IL8(威芶等人，2009，The Journal of Immunology)。在4-1BBL与此等细胞表面上的4-1BB受体结合之后，信号通路会被激活，并导致分泌IL8。为此，将细胞在含有或不含PDL1表达细胞的不同浓度的经生产的PD1-4-1BBL的存在下进行培养，并通过ELISA检测分泌至培养基的IL8。
材料-如以上实例2所述生产：DSP105(HEK-NH)(SEQ ID NO：1)、DSP105(CHO-NH)(SEQ ID NO：1)、DSP105(CHO-NH)-V1(SEQ ID NO：13)、DSP105(CHO-NH)-V2(SEQ ID NO：15)、DSP105(CHO-NH)-V3(SEQ IDN O：17)、N端带有His标签的DSP105_V17(SEQ ID NO：99)、带有His标签的DSP105_V22(SEQ ID NO：109)、DSP105_V17(SEQ ID NO：99)、DSP105_V18(SEQ ID NO：101)、DSP105_V19(SEQ ID NO：103)、DSP105_V20(SEQ ID NO：105)、DSP105_V21(SEQ ID NO：107)、DSP_V22(SEQ ID NO：111)、DSP105_V23(SEQ ID NO：113)、DSP105_V24(SEQ ID NO：133)、DSP105_V25(SEQ ID NO：135)、DSP105_V26(SEQ ID NO：137)、DSP105_V27(SEQ ID NO：139)、DSP105_V28(SEQ ID NO：141)、DSP105_V29(SEQ ID NO：143)、DSP105_V30(SEQ ID NO：145)及DSP105_V31(SEQ ID NO：147)，其方法如上文实施例2所述。
HT1080-4-1BB细胞、IL-8ELISA试剂盒(R&D，货号D8000C)、DMEM(生物工业，货号01-055-1A)、FBS(Rhenium，货号10270106)、抗4-1BB(Biolegend，cat#359810)、同型IgG1，k(Biolegend，cat#400122)。
方法-将HT1080-4-1BB细胞(各孔含有10000个细胞)在含有不同浓度的PD1-4-1BBL融合蛋白的培养基中培养24小时。培养后，根据制造商的方案，通过IL8 ELISA试剂盒检测上清液中IL8的浓度。使用盘读取器(Thermo Scientific，Multiscan FC)在450nm处对盘进行分析，并以540nm作为参考。
结果-如图11所示，HT1080-4-1BB细胞表达相关的受体4-1BB。所有的经测试的DSP105变异蛋白(N端带有His标记的DSP105_V17(SEQ ID NO：99)、带有His标记的DSP105_V22(SEQ ID NO：109)、DSP105_V17(SEQ ID NO：99)及DSP105_V23(SEQ ID NO：13)皆能够以剂量依赖的方式在含有FBS的培养基中启动4-1BB信号，其是通过由HT-4-1BB细胞分泌IL8所检测(图12)。
实施例8
PD1-4-1BBL变体对于阻断PDL1结合的影响
PD1-4-1BBL的PD1部分旨在阻止T细胞上所表达的内源性PD1与肿瘤细胞上所表达的PDL1的相互作用。为此，评估经生产的PD1-4-1BBL变体作为此种相互作用的阻断剂的有效性。
材料-如以上实例2所述生产：DSP105(HEK-NH)(SEQ ID NO：1)、DSP105(CHO-NH)(SEQ ID NO：1)、DSP105(CHO-NH)-V1(SEQ ID NO：13)、DSP105(CHO-NH)-V2(SEQ ID NO：15)、DSP105(CHO-NH)-V3(SEQ IDN O：17)、N端带有His标签的DSP105_V17(SEQ ID NO：99)、带有His标签的DSP105_V22(SEQ ID NO：109)、DSP105_V17(SEQ ID NO：99)、DSP105_V18(SEQ ID NO：101)、DSP105_V19(SEQ ID NO：103)、DSP105_V20(SEQ ID NO：105)、DSP105_V21(SEQ ID NO：107)、DSP_V22(SEQ ID NO：111)、DSP105_V23(SEQ ID NO：113)、DSP105_V24(SEQ ID NO：133)、DSP105_V25(SEQ ID NO：135)、DSP105_V26(SEQ ID NO：137)、DSP105_V27(SEQ ID NO：139)、DSP105_V28(SEQ ID NO：141)、DSP105_V29(SEQ ID NO：143)、DSP105_V30(SEQ ID NO：145)及DSP105_V31(SEQ ID NO：147)，如以上示例2中所述进行生产。
PD-1：PDL1抑制剂筛选ELISA分析对(Acro Biosystems，目录第EP101号)，包括：重组人类PDL1、抗hPD1中和抗体、生物素化hPD1。
方法-使用重组人类PDL1涂布ELISA盘过夜。将盘进行清洗并与不同浓度的经生产的PD1-4-1BBL融合蛋白或抗PD1抗体的阳性对照组一起培养1小时。加入经生物素化的PD1，之后再培养1小时。培养之后，根据标准ELISA方案，将盘进行洗涤并使用链霉亲和素-HRP及TMB基质进行印迹。
使用盘读取器(Thermo Scientific，Multiscan FC)在450nm处对盘进行分析，并以620nm作为参考。
实施例9
PD1-4-1BBL变体激活PBMC或T细胞
T细胞的激活需要两个信号：T细胞受体(TCR)与抗原呈现细胞(APC)上的主要的组织兼容性复合物(MHC)/肽复合物的连接以及在T细胞上的共刺激受体与APC上的相应配体的交联。4-1BB是一种T细胞共刺激受体，其与4-1BBL连接之后可促进CD8+及CD4+T细胞二主的扩增、存活、分化及细胞激素的表达。
本领域已知许多检测T细胞活化的方法，包括但不限于：
-在T细胞表面上的激活标记的表达(例如：CD25、CD69、CD62L、CD137、CD107a、PD1等)。激活标记的表达通过使用特异性抗体对细胞染色及流式细胞仪分析(FACS)进行测试。
-发炎性细胞激素的分泌(例如：IL2、IL6、IL8、INFγ等)。通过ELISA测试发炎性细胞激素的分泌。
-增殖，通过使用CFSE(羧基荧光素琥珀酰亚胺酯)或其他的细胞增殖染剂对T细胞进行预染色，并通过由FACS所检测CFSE稀释来检测细胞的偏差。亦可使用Incucyte机器超时拍照，并使用特定的软件分析照片，以检测增殖。
-杀死靶细胞，例如通过使用Calcine-AM试剂以预先标记癌细胞，并使用发光盘读取仪检测释放至培养基中的Calcine来测量癌细胞。亦可通过Incucyte机器并使用经标记的靶细胞以及对caspase敏感的荧光基质来确定杀死靶细胞的能力。
为此，评估经生产的PD1-4-1BBL融合蛋白对于增强人类T细胞或外周血单核细胞(PBMC)激活的作用。
材料-如以上实例2所述生产：DSP105(HEK-NH)(SEQ ID NO：1)、DSP105(CHO-NH)(SEQ ID NO：1)、DSP105(CHO-NH)-V1(SEQ ID NO：13)、DSP105(CHO-NH)-V2(SEQ ID NO：15)、DSP105(CHO-NH)-V3(SEQ IDN O：17)、N端带有His标签的DSP105_V17(SEQ ID NO：99)、带有His标签的DSP105_V22(SEQ ID NO：109)、DSP105_V17(SEC ID NO：97)、DSP105_V18(SEQ ID NO：101)、DSP105_V19(SEQ ID NO：103)、DSP105_V20(SEQ ID NO：105)、DSP105_V21(SEQ ID NO：107)、DSP_V22(SEQ ID NO：111)、DSP105_V23(SEQ ID NO：113)、DSP105_V24(SEQ ID NO：133)、DSP105_V25(SEQ ID NO：135)、DSP105_V26(SEQ ID NO：137)、DSP105_V27(SEQ ID NO：139)、DSP105_V28(SEQ ID NO：141)、DSP105_V29(SEQ ID NO：143)、DSP105_V30(SEQ ID NO：145)及DSP105_V31(SEQ ID NO：147)。Ficoll-Paque(GE医疗，目录第17-1440-03号)、经叶子纯化的抗人类CD3(BioLegend，目录第BLG-317315号)、重组人类IL-2(Biolegend，目录第589106号)、抗CD27、抗CD25、CD69、CD107a、CD137、PD1抗体、EasySep直接人类T细胞分离试剂盒(Stemcell，cat#19661)、αCD3/CD28 dynabeads(Thermo，cat#Dy-11131D)、IFNg ELISA试剂盒(Peprotech，cat#900-TM27)、CFSE。
方法-使用Ficoll-Paque方法(格林维奇等人，2016，Biopreserv Biobank.14(5)：410-415)自健康的供体的外周血中分离人类PBMC，并通过负筛选磁珠进一步分离T细胞。分离之后，在次优浓度的抗CD3(30ng/ml)或IL-2(1000U/ml)或抗CD3加上IL-2，或αCD3/CD28dynabeads(各细胞为1:10的珠子)的存在下，添加不同浓度的经生产的PD1-4-1BBL融合蛋白以培养细胞。在具有或不具有PDL1表达细胞的情况下或在经PDL1涂布的盘中将细胞培养1至7天。通过ELISA检测分泌至培养基的诸如IFNγ的促炎细胞激素。根据制造商的方案，通过
Figure BDA0002939076220002101
S3活细胞分析系统(IncuCyte)或使用CFSE以检测增殖。通过流式细胞术进一步测试细胞的活化标记CD25、CD69、CD107a、CD137(4-1BB)、PD1在不同时间点的表面表达。根据制造商的方案，通过钙黄绿素AM释放或通过Incucyte机器以评估杀死的能力。
实施例10
PD1-4-1BBL变种的体内抗肿瘤的作用
使用三种不同的体内小鼠模型以测试PD1-4-1BBL在治疗癌症中的功效：
1.使用人类干细胞或人类PBMC或经固定的人类PBMC及人类肿瘤细胞所接种的NSG小鼠。在此模型中，PD1-4-1BBL会与人类PDL1(在肿瘤及免疫细胞上表达)以及与人类T细胞上的4-1BB相互作用。
2.C57BL/6-人类4-1BB敲入小鼠-其是接种有MC38小鼠结肠癌或其他的癌细胞株或过度表达人类PDL1的癌细胞株。在此模型中，小鼠4-1BB的细胞外结构域被人类4-1BB的细胞外结构域取代，因此PD1-4-1BBL可与在小鼠T细胞上所表达的人类4-1BB相互作用。PD1-4-1BBL会与在肿瘤细胞上所表达的小鼠及人类PDL1相互作用。
3.表达小鼠PDL1的同系小鼠肿瘤模型。在此等模型中，PD1-4-1BBL会与肿瘤细胞上的小鼠PDL1相互作用。
方法–在所有的三种模型中，小鼠皆通过静脉地(IV)、腹膜内地(IP)、皮下地(SC)或原位地接种肿瘤细胞。一旦可触知肿瘤(～80mm3)，即以不同的剂量及不同的方案的经产生的PD1-4-1BBL融合蛋白对小鼠进行IV、IP、SC或原位治疗。所述PD1-4-1BBL融合蛋白例如：DSP105(HEK-NH)(SEQ ID NO：1)、DSP105(CHO-NH)(SEQ ID NO：1)、DSP105(CHO-NH)-V1(SEQ ID NO：13)、DSP105(CHO-NH)-V2(SEQ ID NO：15)、DSP105(CHO-NH)-V3(SEQ ID NO：17)、N端His标记的DSP105_V17(SEQ ID NO：99)、His标记的DSP105_V22(SEQ ID NO：109)、DSP105_V17(SEQ ID NO：99)、DSP105_V18(SEQ ID NO：101)、DSP105_V19(SEQ ID NO：103)、DSP105_V20(SEQ ID NO：105)、DSP105_V21(SEQ ID NO：107)、DSP_V22(SEQ ID NO：111)、DSP105_V23(SEQ ID NO：113)、DSP105_V24(SEQ ID NO：133)、DSP105_V25(SEQ ID NO：135)、DSP105_V26(SEQ ID NO：137)、DSP105_V27(SEQ ID NO：139)、DSP105_V28(SEQ IDNO：141)、DSP105_V29(SEQ ID NO：143)、DSP105_V30(SEQ ID NO：145)及DSP105_V31(SEQID NO：147)。
追踪小鼠的体重及临床征状。每周使用卡尺测量肿瘤数次。根据以下的公式计算肿瘤的体积：V＝长度x宽度2/2。通过整个实验监控肿瘤的生长及存活。
通过切除肿瘤或引流淋巴结，使用特异性抗体染色及流式细胞仪分析消化及免疫的表型，以测试肿瘤中免疫细胞的浸润及亚型。额外地或可替代地，通过切除肿瘤、石蜡包埋及切片以用特异性抗体进行免疫组织化学染色来确定免疫细胞的浸润或肿瘤的坏死等级。
牺牲小鼠时，收集小鼠的器官，并将其包埋在石蜡块中，以进行H&E及IHC染色。
根据通用的方法，在不同的时间点自小鼠采集血液样本，以用于以下的测试：PK分析、血浆中细胞激素的检测、循环中血细胞亚群的FACS分析、血液学测试、血清化学测试、抗药物-抗体(ADA)分析及中和抗体分析(NAB)。
尽管已经结合本发明的特定实施例而描述本发明，然而显然许多替代、修改及变化对于本领域技术人员将是显而易见的。因此，旨在涵盖落入所附权利要求书的精神及广的泛范围内的所有此种的替代、修改及变化。
本说明书中提及的所有发表、专利及专利申请案皆通过引用而整体并入本文终，其如同各个单独的发表、专利或专利申请案被具体地及单独地指示通过引用并入本文中的程度相同。此外，在本申请中对于任何参考文献的引用或标识皆不应解释为承认所述参考文献可用作本发明的现有技术。就使用本节的标题而言，不应将其解释为必然的限制。
此外，本申请的任何优先权文件在此全文以引用的方式并入本文中。
序列表
<110> 卡尔医学有限公司
艾莉丝·佩克
伊泰·布洛奇
<120> PD1-4-1BBL变体融合蛋白及其使用方法
<130> 77792
<150> 62/696,365
<151> 2018-07-11
<150> 62/786,599
<151> 2018-12-31
<160> 169
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 362
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有信号肽及His标签的原始PD1-41BBL
<400> 1
His His His His His His Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg
1 5 10 15
Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu
20 25 30
Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser
35 40 45
Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys
50 55 60
Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg
65 70 75 80
Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val
85 90 95
Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile
100 105 110
Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu
115 120 125
Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro
130 135 140
Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Gly Ala Cys Pro
145 150 155 160
Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser Pro
165 170 175
Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu
180 185 190
Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val
195 200 205
Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala
210 215 220
Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu
225 230 235 240
Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu
245 250 255
Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala
260 265 270
Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala
275 280 285
Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala
290 295 300
Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu
305 310 315 320
Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu
325 330 335
Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile
340 345 350
Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
355 360
<210> 2
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 原始PD1域
<400> 2
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Gln Phe Gln Thr Leu Val
145 150
<210> 3
<211> 205
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 原始41BBL域
<400> 3
Ala Cys Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala
1 5 10 15
Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro
20 25 30
Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala
35 40 45
Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro
50 55 60
Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp
65 70 75 80
Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe
85 90 95
Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val
100 105 110
Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala
115 120 125
Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg
130 135 140
Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly
145 150 155 160
Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala
165 170 175
Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr
180 185 190
Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
195 200 205
<210> 4
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 信号肽
<400> 4
Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly
20
<210> 5
<211> 356
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 不带有His标签的原始PD1-41BBL
<400> 5
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Gln Phe Gln Thr Leu Val Gly Ala Cys Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala
145 150 155 160
Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro
165 170 175
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
180 185 190
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
195 200 205
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
210 215 220
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
225 230 235 240
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
245 250 255
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
260 265 270
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
275 280 285
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
290 295 300
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
305 310 315 320
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
325 330 335
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser
340 345 350
Pro Arg Ser Glu
355
<210> 6
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1的C端片段
<400> 6
Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln
1 5 10 15
Phe Gln Thr Leu Val
20
<210> 7
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-1BBL的N端片段
<400> 7
Ala Cys Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala
1 5 10 15
Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp
20 25 30
<210> 8
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 在PD1的N端片段处的五个残基的片段
<400> 8
Pro Gly Trp Phe Leu
1 5
<210> 9
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 在PD1的C端片段处的五个残基的片段
<400> 9
Phe Gln Thr Leu Val
1 5
<210> 10
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-1BBL域的N端片段
<400> 10
Ala Cys Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly
1 5 10
<210> 11
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-1BBL域的N端片段
<400> 11
Ala Cys Pro Trp Ala Val
1 5
<210> 12
<211> 332
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 不带有His标签的K105_var1
<400> 12
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Gly Ser Ala Ala
130 135 140
Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala
145 150 155 160
Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln
165 170 175
Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly
180 185 190
Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr
195 200 205
Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln
210 215 220
Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser
225 230 235 240
Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala
245 250 255
Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn
260 265 270
Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln
275 280 285
Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp
290 295 300
Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro
305 310 315 320
Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
325 330
<210> 13
<211> 338
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His标签的K105_var1
<400> 13
His His His His His His Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro
1 5 10 15
Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr
20 25 30
Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp
35 40 45
Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro
50 55 60
Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln
65 70 75 80
Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg
85 90 95
Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys
100 105 110
Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg
115 120 125
Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala
130 135 140
Gly Gln Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu
145 150 155 160
Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe
165 170 175
Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser
180 185 190
Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu
195 200 205
Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val
210 215 220
Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu
225 230 235 240
Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser
245 250 255
Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala
260 265 270
Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu
275 280 285
His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala
290 295 300
Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly
305 310 315 320
Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg
325 330 335
Ser Glu
<210> 14
<211> 338
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 不带有His标签的K105_var2
<400> 14
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Gly Ala Arg Ala
130 135 140
Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu
145 150 155 160
Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe
165 170 175
Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser
180 185 190
Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu
195 200 205
Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val
210 215 220
Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu
225 230 235 240
Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser
245 250 255
Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala
260 265 270
Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu
275 280 285
His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala
290 295 300
Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly
305 310 315 320
Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg
325 330 335
Ser Glu
<210> 15
<211> 344
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His标签的K105_var2
<400> 15
His His His His His His Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro
1 5 10 15
Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr
20 25 30
Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp
35 40 45
Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro
50 55 60
Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln
65 70 75 80
Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg
85 90 95
Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys
100 105 110
Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg
115 120 125
Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala
130 135 140
Gly Gln Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu
145 150 155 160
Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp
165 170 175
Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu
180 185 190
Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val
195 200 205
Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val
210 215 220
Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg
225 230 235 240
Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His
245 250 255
Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr
260 265 270
Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly
275 280 285
Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val
290 295 300
His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln
305 310 315 320
Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala
325 330 335
Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
340
<210> 16
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 不带有His标签的K105_var3
<400> 16
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Gly Leu Arg Glu
130 135 140
Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg
145 150 155 160
Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp
165 170 175
Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu
180 185 190
Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala
195 200 205
Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val
210 215 220
Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln
225 230 235 240
Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp
245 250 255
Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln
260 265 270
Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu
275 280 285
His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala
290 295 300
Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
305 310 315 320
Pro Ser Pro Arg Ser Glu
325
<210> 17
<211> 332
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His标签的K105_var3
<400> 17
His His His His His His Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro
1 5 10 15
Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr
20 25 30
Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp
35 40 45
Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro
50 55 60
Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln
65 70 75 80
Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg
85 90 95
Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys
100 105 110
Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg
115 120 125
Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala
130 135 140
Gly Gln Gly Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala
145 150 155 160
Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln
165 170 175
Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly
180 185 190
Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr
195 200 205
Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln
210 215 220
Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser
225 230 235 240
Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala
245 250 255
Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn
260 265 270
Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln
275 280 285
Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp
290 295 300
Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro
305 310 315 320
Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
325 330
<210> 18
<211> 140
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 140 aa PD1片段
<400> 18
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln
130 135 140
<210> 19
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 128 aa PD1片段
<400> 19
Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu
1 5 10 15
Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser
20 25 30
Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys
35 40 45
Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg
50 55 60
Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val
65 70 75 80
Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile
85 90 95
Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu
100 105 110
Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro
115 120 125
<210> 20
<211> 135
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 135 aa PD1片段
<400> 20
Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu
1 5 10 15
Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser
20 25 30
Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys
35 40 45
Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg
50 55 60
Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val
65 70 75 80
Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile
85 90 95
Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu
100 105 110
Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro
115 120 125
Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln
130 135
<210> 21
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 133 aa PD1片段
<400> 21
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro
130
<210> 22
<211> 191
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 191 aa 41BBL片段
<400> 22
Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp
1 5 10 15
Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu
20 25 30
Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser
35 40 45
Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys
50 55 60
Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val
65 70 75 80
Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly
85 90 95
Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly
100 105 110
Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu
115 120 125
Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser
130 135 140
Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg
145 150 155 160
His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg
165 170 175
Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
180 185 190
<210> 23
<211> 197
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 197 aa 41BBL片段
<400> 23
Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly
1 5 10 15
Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln
20 25 30
Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly
35 40 45
Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr
50 55 60
Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys
65 70 75 80
Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val
85 90 95
Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro
100 105 110
Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu
115 120 125
Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly
130 135 140
Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His
145 150 155 160
Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr
165 170 175
Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro
180 185 190
Ser Pro Arg Ser Glu
195
<210> 24
<211> 185
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 185 aa 41BBL片段
<400> 24
Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu
1 5 10 15
Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu
20 25 30
Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly
35 40 45
Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu
50 55 60
Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu
65 70 75 80
Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu
85 90 95
His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu
100 105 110
Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe
115 120 125
Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly
130 135 140
Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr
145 150 155 160
Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro
165 170 175
Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
180 185
<210> 25
<211> 199
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 199 aa 41BBL片段
<400> 25
Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg
1 5 10 15
Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu
20 25 30
Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile
35 40 45
Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser
50 55 60
Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val
65 70 75 80
Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg
85 90 95
Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu
100 105 110
Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val
115 120 125
Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe
130 135 140
Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His
145 150 155 160
Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly
165 170 175
Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly
180 185 190
Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
195
<210> 26
<211> 381
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有信号肽及His标签的原始PD1-41BBL
<400> 26
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser His His His His His His Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser
20 25 30
Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val
35 40 45
Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr
50 55 60
Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln
65 70 75 80
Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln
85 90 95
Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His
100 105 110
Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys
115 120 125
Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg
130 135 140
Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His
145 150 155 160
Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Gly
165 170 175
Ala Cys Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala
180 185 190
Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro
195 200 205
Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala
210 215 220
Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro
225 230 235 240
Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp
245 250 255
Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe
260 265 270
Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val
275 280 285
Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala
290 295 300
Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg
305 310 315 320
Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly
325 330 335
Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala
340 345 350
Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr
355 360 365
Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
370 375 380
<210> 27
<211> 288
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1的全长aa序列
<400> 27
Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln
1 5 10 15
Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
20 25 30
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
35 40 45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
50 55 60
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
65 70 75 80
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
85 90 95
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
100 105 110
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115 120 125
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
130 135 140
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
145 150 155 160
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly
165 170 175
Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys
180 185 190
Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro
195 200 205
Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly
210 215 220
Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro
225 230 235 240
Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly
245 250 255
Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg
260 265 270
Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
275 280 285
<210> 28
<211> 867
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1的全长na序列
<400> 28
atgcagatcc cacaggcgcc ctggccagtc gtctgggcgg tgctacaact gggctggcgg 60
ccaggatggt tcttagactc cccagacagg ccctggaacc cccccacctt ctccccagcc 120
ctgctcgtgg tgaccgaagg ggacaacgcc accttcacct gcagcttctc caacacatcg 180
gagagcttcg tgctaaactg gtaccgcatg agccccagca accagacgga caagctggcc 240
gccttccccg aggaccgcag ccagcccggc caggactgcc gcttccgtgt cacacaactg 300
cccaacgggc gtgacttcca catgagcgtg gtcagggccc ggcgcaatga cagcggcacc 360
tacctctgtg gggccatctc cctggccccc aaggcgcaga tcaaagagag cctgcgggca 420
gagctcaggg tgacagagag aagggcagaa gtgcccacag cccaccccag cccctcaccc 480
aggccagccg gccagttcca aaccctggtg gttggtgtcg tgggcggcct gctgggcagc 540
ctggtgctgc tagtctgggt cctggccgtc atctgctccc gggccgcacg agggacaata 600
ggagccaggc gcaccggcca gcccctgaag gaggacccct cagccgtgcc tgtgttctct 660
gtggactatg gggagctgga tttccagtgg cgagagaaga ccccggagcc ccccgtgccc 720
tgtgtccctg agcagacgga gtatgccacc attgtctttc ctagcggaat gggcacctca 780
tcccccgccc gcaggggctc agctgacggc cctcggagtg cccagccact gaggcctgag 840
gatggacact gctcttggcc cctctga 867
<210> 29
<211> 450
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 2的na序列
<400> 29
ccaggatggt tcttagactc cccagacagg ccctggaacc cccccacctt ctccccagcc 60
ctgctcgtgg tgaccgaagg ggacaacgcc accttcacct gcagcttctc caacacatcg 120
gagagcttcg tgctaaactg gtaccgcatg agccccagca accagacgga caagctggcc 180
gccttccccg aggaccgcag ccagcccggc caggactgcc gcttccgtgt cacacaactg 240
cccaacgggc gtgacttcca catgagcgtg gtcagggccc ggcgcaatga cagcggcacc 300
tacctctgtg gggccatctc cctggccccc aaggcgcaga tcaaagagag cctgcgggca 360
gagctcaggg tgacagagag aagggcagaa gtgcccacag cccaccccag cccctcaccc 420
aggccagccg gccagttcca aaccctggtg 450
<210> 30
<211> 167
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1氨基酸序列
<400> 30
Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln
1 5 10 15
Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
20 25 30
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
35 40 45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
50 55 60
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
65 70 75 80
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
85 90 95
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
100 105 110
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115 120 125
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
130 135 140
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
145 150 155 160
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln
165
<210> 31
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1氨基酸序列
<400> 31
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg
115 120
<210> 32
<211> 420
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 18的na序列
<400> 32
gactcccctg acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctgccggttc agagttaccc agctgcctaa cggccgggac 240
ttccacatgt ctgttgtgcg ggccagacgg aacgactctg gcacatatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacctt ctccaagacc tgccggccag 420
<210> 33
<211> 384
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 19的na序列
<400> 33
ccttggaacc ctccaacctt ctctcccgct ctgctggtgg ttaccgaggg cgacaatgcc 60
accttcacct gttccttcag caacacctcc gagtccttcg tgctgaactg gtacagaatg 120
tcccctagca accagaccga caagctggcc gcctttcctg aggacagatc tcagccaggc 180
caggactgcc ggttcagagt tacccagctg cctaacggcc gggacttcca catgtctgtt 240
gtgcgggcca gacggaacga ctctggcaca tatctgtgcg gcgccatctc tctggctccc 300
aaggctcaga tcaaagagtc tctgcgggcc gagctgagag tgacagaaag acgagctgag 360
gtgcccaccg ctcatccctc acct 384
<210> 34
<211> 405
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 20的na序列
<400> 34
ccttggaacc ctccaacctt ctctcccgct ctgctggtgg ttaccgaggg cgacaatgcc 60
accttcacct gttccttcag caacacctcc gagtccttcg tgctgaactg gtacagaatg 120
tcccctagca accagaccga caagctggcc gcctttcctg aggacagatc tcagccaggc 180
caggactgcc ggttcagagt tacccagctg cctaacggcc gggacttcca catgtctgtt 240
gtgcgggcca gacggaacga ctctggcaca tatctgtgcg gcgccatctc tctggctccc 300
aaggctcaga tcaaagagtc tctgcgggcc gagctgagag tgacagaaag acgagctgag 360
gtgcccaccg ctcatccctc accttctcca agacctgccg gccag 405
<210> 35
<211> 399
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 21的na序列
<400> 35
gactcccctg acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctgccggttc agagttaccc agctgcctaa cggccgggac 240
ttccacatgt ctgttgtgcg ggccagacgg aacgactctg gcacatatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacct 399
<210> 36
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 41BBL的全长aa序列
<400> 36
Met Glu Tyr Ala Ser Asp Ala Ser Leu Asp Pro Glu Ala Pro Trp Pro
1 5 10 15
Pro Ala Pro Arg Ala Arg Ala Cys Arg Val Leu Pro Trp Ala Leu Val
20 25 30
Ala Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Ala Cys Ala Val Phe
35 40 45
Leu Ala Cys Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser
50 55 60
Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp
65 70 75 80
Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val
85 90 95
Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp
100 105 110
Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu
115 120 125
Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe
130 135 140
Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser
145 150 155 160
Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala
165 170 175
Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala
180 185 190
Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala
195 200 205
Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His
210 215 220
Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val
225 230 235 240
Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
245 250
<210> 37
<211> 765
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 41BBL的全长na序列
<400> 37
atggaatacg cctctgacgc ttcactggac cccgaagccc cgtggcctcc cgcgccccgc 60
gctcgcgcct gccgcgtact gccttgggcc ctggtcgcgg ggctgctgct gctgctgctg 120
ctcgctgccg cctgcgccgt cttcctcgcc tgcccctggg ccgtgtccgg ggctcgcgcc 180
tcgcccggct ccgcggccag cccgagactc cgcgagggtc ccgagctttc gcccgacgat 240
cccgccggcc tcttggacct gcggcagggc atgtttgcgc agctggtggc ccaaaatgtt 300
ctgctgatcg atgggcccct gagctggtac agtgacccag gcctggcagg cgtgtccctg 360
acggggggcc tgagctacaa agaggacacg aaggagctgg tggtggccaa ggctggagtc 420
tactatgtct tctttcaact agagctgcgg cgcgtggtgg ccggcgaggg ctcaggctcc 480
gtttcacttg cgctgcacct gcagccactg cgctctgctg ctggggccgc cgccctggct 540
ttgaccgtgg acctgccacc cgcctcctcc gaggctcgga actcggcctt cggtttccag 600
ggccgcttgc tgcacctgag tgccggccag cgcctgggcg tccatcttca cactgaggcc 660
agggcacgcc atgcctggca gcttacccag ggcgccacag tcttgggact cttccgggtg 720
acccccgaaa tcccagccgg actcccttca ccgaggtcgg aataa 765
<210> 38
<211> 615
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 3的na序列
<400> 38
gcctgcccct gggccgtgtc cggggctcgc gcctcgcccg gctccgcggc cagcccgaga 60
ctccgcgagg gtcccgagct ttcgcccgac gatcccgccg gcctcttgga cctgcggcag 120
ggcatgtttg cgcagctggt ggcccaaaat gttctgctga tcgatgggcc cctgagctgg 180
tacagtgacc caggcctggc aggcgtgtcc ctgacggggg gcctgagcta caaagaggac 240
acgaaggagc tggtggtggc caaggctgga gtctactatg tcttctttca actagagctg 300
cggcgcgtgg tggccggcga gggctcaggc tccgtttcac ttgcgctgca cctgcagcca 360
ctgcgctctg ctgctggggc cgccgccctg gctttgaccg tggacctgcc acccgcctcc 420
tccgaggctc ggaactcggc cttcggtttc cagggccgct tgctgcacct gagtgccggc 480
cagcgcctgg gcgtccatct tcacactgag gccagggcac gccatgcctg gcagcttacc 540
cagggcgcca cagtcttggg actcttccgg gtgacccccg aaatcccagc cggactccct 600
tcaccgaggt cggaa 615
<210> 39
<211> 573
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 22的na序列
<400> 39
tctgccgctt ctcccagact gagagaagga cctgagctga gccctgatga tcctgctgga 60
ctgctggatc tgcggcaggg catgtttgct cagttggtgg cccagaacgt gctgctgatc 120
gatggccctc tgtcctggta ctctgatcca ggattggctg gcgtgtccct gactggcggc 180
ctgtcttaca aagaggacac caaagaactg gtggtggcca aggccggcgt gtactacgtg 240
ttctttcagc tggaactgcg gagagtggtg gctggcgaag gatctggatc tgtgtctctg 300
gccctgcatc tgcagcctct gagaagtgct gcaggcgctg ctgcactggc tctgacagtt 360
gatctgcctc ctgcctcctc cgaggccaga aactccgcct ttggcttcca aggcagactg 420
ctgcacctgt ccgctggaca gagactggga gtccatctgc acacagaggc cagagctaga 480
cacgcttggc agttgacaca gggcgctaca gtgctgggcc tgtttagagt gacccctgag 540
attccagccg gcctgccatc tcctagatct gag 573
<210> 40
<211> 591
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 23的na序列
<400> 40
gctagagctt ctcctggctc tgccgcttct cccagactga gagaaggacc tgagctgagc 60
cctgatgatc ctgctggact gctggatctg cggcagggca tgtttgctca gttggtggcc 120
cagaacgtgc tgctgatcga tggccctctg tcctggtact ctgatccagg attggctggc 180
gtgtccctga ctggcggcct gtcttacaaa gaggacacca aagaactggt ggtggccaag 240
gccggcgtgt actacgtgtt ctttcagctg gaactgcgga gagtggtggc tggcgaagga 300
tctggatctg tgtctctggc cctgcatctg cagcctctga gaagtgctgc aggcgctgct 360
gcactggctc tgacagttga tctgcctcct gcctcctccg aggccagaaa ctccgccttt 420
ggcttccaag gcagactgct gcacctgtcc gctggacaga gactgggagt ccatctgcac 480
acagaggcca gagctagaca cgcttggcag ttgacacagg gcgctacagt gctgggcctg 540
tttagagtga cccctgagat tccagccggc ctgccatctc ctagatctga g 591
<210> 41
<211> 555
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 24的na序列
<400> 41
ctgagagaag gacctgagct gagccctgat gatcctgctg gactgctgga tctgcggcag 60
ggcatgtttg ctcagttggt ggcccagaac gtgctgctga tcgatggccc tctgtcctgg 120
tactctgatc caggattggc tggcgtgtcc ctgactggcg gcctgtctta caaagaggac 180
accaaagaac tggtggtggc caaggccggc gtgtactacg tgttctttca gctggaactg 240
cggagagtgg tggctggcga aggatctgga tctgtgtctc tggccctgca tctgcagcct 300
ctgagaagtg ctgcaggcgc tgctgcactg gctctgacag ttgatctgcc tcctgcctcc 360
tccgaggcca gaaactccgc ctttggcttc caaggcagac tgctgcacct gtccgctgga 420
cagagactgg gagtccatct gcacacagag gccagagcta gacacgcttg gcagttgaca 480
cagggcgcta cagtgctggg cctgtttaga gtgacccctg agattccagc cggcctgcca 540
tctcctagat ctgag 555
<210> 42
<211> 597
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 25的na序列
<400> 42
tctggcgcta gagcttctcc tggctctgcc gcttctccca gactgagaga aggacctgag 60
ctgagccctg atgatcctgc tggactgctg gatctgcggc agggcatgtt tgctcagttg 120
gtggcccaga acgtgctgct gatcgatggc cctctgtcct ggtactctga tccaggattg 180
gctggcgtgt ccctgactgg cggcctgtct tacaaagagg acaccaaaga actggtggtg 240
gccaaggccg gcgtgtacta cgtgttcttt cagctggaac tgcggagagt ggtggctggc 300
gaaggatctg gatctgtgtc tctggccctg catctgcagc ctctgagaag tgctgcaggc 360
gctgctgcac tggctctgac agttgatctg cctcctgcct cctccgaggc cagaaactcc 420
gcctttggct tccaaggcag actgctgcac ctgtccgctg gacagagact gggagtccat 480
ctgcacacag aggccagagc tagacacgct tggcagttga cacagggcgc tacagtgctg 540
ggcctgttta gagtgacccc tgagattcca gccggcctgc catctcctag atctgag 597
<210> 43
<400> 43
000
<210> 44
<211> 340
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> var 4
<400> 44
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Gly Ser Gly Ala
130 135 140
Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro
145 150 155 160
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
165 170 175
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
180 185 190
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
195 200 205
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
210 215 220
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
225 230 235 240
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
245 250 255
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
260 265 270
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
275 280 285
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
290 295 300
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
305 310 315 320
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser
325 330 335
Pro Arg Ser Glu
340
<210> 45
<211> 333
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> var 5
<400> 45
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Gly Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala
130 135 140
Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro
145 150 155 160
Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala
165 170 175
Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro
180 185 190
Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp
195 200 205
Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe
210 215 220
Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val
225 230 235 240
Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala
245 250 255
Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg
260 265 270
Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly
275 280 285
Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala
290 295 300
Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr
305 310 315 320
Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
325 330
<210> 46
<211> 325
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> var 6
<400> 46
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly
130 135 140
Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln
145 150 155 160
Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly
165 170 175
Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr
180 185 190
Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys
195 200 205
Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val
210 215 220
Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro
225 230 235 240
Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu
245 250 255
Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly
260 265 270
Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His
275 280 285
Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr
290 295 300
Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro
305 310 315 320
Ser Pro Arg Ser Glu
325
<210> 47
<211> 331
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> var 7
<400> 47
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser
130 135 140
Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly
145 150 155 160
Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn
165 170 175
Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu
180 185 190
Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys
195 200 205
Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu
210 215 220
Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu
225 230 235 240
Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu
245 250 255
Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser
260 265 270
Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg
275 280 285
Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln
290 295 300
Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu
305 310 315 320
Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
325 330
<210> 48
<211> 319
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> var 8
<400> 48
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Gly Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp
130 135 140
Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu
145 150 155 160
Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser
165 170 175
Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys
180 185 190
Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val
195 200 205
Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly
210 215 220
Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly
225 230 235 240
Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu
245 250 255
Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser
260 265 270
Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg
275 280 285
His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg
290 295 300
Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
305 310 315
<210> 49
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> var 9
<400> 49
Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu
1 5 10 15
Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser
20 25 30
Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys
35 40 45
Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg
50 55 60
Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val
65 70 75 80
Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile
85 90 95
Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu
100 105 110
Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro
115 120 125
Gly Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu
130 135 140
Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp
145 150 155 160
Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu
165 170 175
Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val
180 185 190
Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val
195 200 205
Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg
210 215 220
Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His
225 230 235 240
Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr
245 250 255
Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly
260 265 270
Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val
275 280 285
His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln
290 295 300
Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala
305 310 315 320
Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
325
<210> 50
<211> 320
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> var 10
<400> 50
Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu
1 5 10 15
Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser
20 25 30
Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys
35 40 45
Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg
50 55 60
Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val
65 70 75 80
Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile
85 90 95
Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu
100 105 110
Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro
115 120 125
Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro
130 135 140
Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln
145 150 155 160
Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr
165 170 175
Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr
180 185 190
Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr
195 200 205
Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser
210 215 220
Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala
225 230 235 240
Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser
245 250 255
Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu
260 265 270
Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala
275 280 285
Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe
290 295 300
Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
305 310 315 320
<210> 51
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> var 11
<400> 51
Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu
1 5 10 15
Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser
20 25 30
Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys
35 40 45
Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg
50 55 60
Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val
65 70 75 80
Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile
85 90 95
Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu
100 105 110
Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro
115 120 125
Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu
130 135 140
Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg
145 150 155 160
Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp
165 170 175
Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu
180 185 190
Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala
195 200 205
Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val
210 215 220
Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln
225 230 235 240
Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp
245 250 255
Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln
260 265 270
Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu
275 280 285
His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala
290 295 300
Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
305 310 315 320
Pro Ser Pro Arg Ser Glu
325
<210> 52
<211> 314
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> var 12
<400> 52
Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu
1 5 10 15
Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser
20 25 30
Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys
35 40 45
Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg
50 55 60
Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val
65 70 75 80
Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile
85 90 95
Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu
100 105 110
Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro
115 120 125
Gly Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu
130 135 140
Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val
145 150 155 160
Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala
165 170 175
Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu
180 185 190
Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu
195 200 205
Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala
210 215 220
Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala
245 250 255
Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu
260 265 270
Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu
275 280 285
Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile
290 295 300
Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
305 310
<210> 53
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> var 13
<400> 53
Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu
1 5 10 15
Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser
20 25 30
Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys
35 40 45
Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg
50 55 60
Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val
65 70 75 80
Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile
85 90 95
Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu
100 105 110
Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro
115 120 125
Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Gly Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly
130 135 140
Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp
145 150 155 160
Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu
165 170 175
Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser
180 185 190
Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys
195 200 205
Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val
210 215 220
Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly
225 230 235 240
Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly
245 250 255
Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu
260 265 270
Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser
275 280 285
Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg
290 295 300
His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg
305 310 315 320
Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
325 330 335
<210> 54
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> var 14
<400> 54
Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu
1 5 10 15
Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser
20 25 30
Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys
35 40 45
Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg
50 55 60
Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val
65 70 75 80
Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile
85 90 95
Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu
100 105 110
Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro
115 120 125
Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg
130 135 140
Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu
145 150 155 160
Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile
165 170 175
Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser
180 185 190
Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val
195 200 205
Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg
210 215 220
Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu
225 230 235 240
Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val
245 250 255
Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe
260 265 270
Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His
275 280 285
Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly
290 295 300
Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly
305 310 315 320
Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
325
<210> 55
<211> 333
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> var 15
<400> 55
Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu
1 5 10 15
Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser
20 25 30
Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys
35 40 45
Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg
50 55 60
Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val
65 70 75 80
Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile
85 90 95
Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu
100 105 110
Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro
115 120 125
Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala
130 135 140
Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro
145 150 155 160
Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala
165 170 175
Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro
180 185 190
Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp
195 200 205
Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe
210 215 220
Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val
225 230 235 240
Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala
245 250 255
Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg
260 265 270
Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly
275 280 285
Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala
290 295 300
Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr
305 310 315 320
Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
325 330
<210> 56
<211> 321
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> var 16
<400> 56
Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu
1 5 10 15
Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser
20 25 30
Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys
35 40 45
Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg
50 55 60
Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val
65 70 75 80
Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile
85 90 95
Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu
100 105 110
Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro
115 120 125
Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Gly Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser
130 135 140
Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala
145 150 155 160
Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp
165 170 175
Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser
180 185 190
Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr
195 200 205
Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala
225 230 235 240
Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser
245 250 255
Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His
260 265 270
Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg
275 280 285
Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu
290 295 300
Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser
305 310 315 320
Glu
<210> 57
<211> 1020
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO的NA序列: 44, var 4
<400> 57
gatagcccgg atcgcccgtg gaacccgccg acctttagcc cggcgctgct ggtggtgacc 60
gaaggcgata acgcgacctt tacctgcagc tttagcaaca ccagcgaaag ctttgtgctg 120
aactggtatc gcatgagccc gagcaaccag accgataaac tggcggcgtt tccggaagat 180
cgcagccagc cgggccagga ttgccgcttt cgcgtgaccc agctgccgaa cggccgcgat 240
tttcatatga gcgtggtgcg cgcgcgccgc aacgatagcg gcacctatct gtgcggcgcg 300
attagcctgg cgccgaaagc gcagattaaa gaaagcctgc gcgcggaact gcgcgtgacc 360
gaacgccgcg cggaagtgcc gaccgcgcat ccgagcccga gcccgcgccc ggcgggccag 420
ggcagcggcg cgcgcgcgag cccgggcagc gcggcgagcc cgcgcctgcg cgaaggcccg 480
gaactgagcc cggatgatcc ggcgggcctg ctggatctgc gccagggcat gtttgcgcag 540
ctggtggcgc agaacgtgct gctgattgat ggcccgctga gctggtatag cgatccgggc 600
ctggcgggcg tgagcctgac cggcggcctg agctataaag aagataccaa agaactggtg 660
gtggcgaaag cgggcgtgta ttatgtgttt tttcagctgg aactgcgccg cgtggtggcg 720
ggcgaaggca gcggcagcgt gagcctggcg ctgcatctgc agccgctgcg cagcgcggcg 780
ggcgcggcgg cgctggcgct gaccgtggat ctgccgccgg cgagcagcga agcgcgcaac 840
agcgcgtttg gctttcaggg ccgcctgctg catctgagcg cgggccagcg cctgggcgtg 900
catctgcata ccgaagcgcg cgcgcgccat gcgtggcagc tgacccaggg cgcgaccgtg 960
ctgggcctgt ttcgcgtgac cccggaaatt ccggcgggcc tgccgagccc gcgcagcgaa 1020
<210> 58
<211> 999
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 45的NA序列, var 5
<400> 58
gactctccag acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctgccggttc agagttaccc agctgcctaa cggccgggac 240
ttccacatgt ctgttgtgcg ggccagacgg aacgactctg gcacatatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacctg gatctggcgc tagagcatct 420
cctggctctg ctgcctctcc tagactgaga gagggacctg agctgtctcc tgatgatcct 480
gctggcctgc tggatctgag acagggcatg tttgctcagc tggtggccca gaacgtgctg 540
ctgattgatg gccctctgtc ctggtactct gatcctggat tggctggcgt gtccctgact 600
ggcggcctgt cttacaaaga ggacaccaaa gaactggtgg tggccaaggc cggcgtgtac 660
tacgtgttct ttcagctgga actgcggaga gtggtggccg gcgaaggatc tggatctgtg 720
tctctggcac tgcatctgca gcccctgaga tctgctgcag gcgctgctgc tctggctctg 780
acagttgatc tgcctcctgc ctcctccgag gccagaaact ccgcctttgg cttccaaggc 840
agactgctgc atctgtctgc cggccagaga ctgggagtcc atctgcatac agaggctaga 900
gccaggcacg cctggcagtt gacacaaggt gctacagtgc tgggcctgtt cagagtgacc 960
ccagagattc cagccggcct gccttctcca agatccgag 999
<210> 59
<211> 975
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 46的NA序列, var 6
<400> 59
gactctccag acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctgccggttc agagttaccc agctgcctaa cggccgggac 240
ttccacatgt ctgttgtgcg ggccagacgg aacgactctg gcacatatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacctg gatctgctgc ttcccctaga 420
ctgagagagg gccctgagct gtcccctgat gatcctgctg gattgctgga cctgcggcag 480
ggcatgtttg ctcagttggt ggcccagaac gtgctgctga tcgatggccc tctgtcctgg 540
tactctgatc caggattggc tggcgtgtcc ctgactggcg gcctgtctta caaagaggac 600
accaaagaac tggtggtcgc caaggccggc gtgtactacg tgttctttca gctggaactg 660
cggagagtgg tggctggcga aggatctgga tctgtgtctc tggccctgca tctgcagcct 720
ctgagaagtg ctgcaggcgc tgctgcactg gctctgacag ttgatctgcc tcctgcctcc 780
tccgaggcca gaaactccgc ctttggcttc caaggcagac tgctgcatct gtctgccgga 840
cagagactgg gagtgcacct ccatacagag gccagagcta gacacgcttg gcagttgaca 900
cagggcgcta cagtgctggg cctgtttaga gtgacccctg agatcccagc tggcctgcca 960
tctcctagat ctgag 975
<210> 60
<211> 992
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 47的NA序列, var 7
<400> 60
actctccaga cagaccttgg aaccctccaa ccttctctcc cgctctgctg gtggttaccg 60
agggcgacaa tgccaccttc acctgttcct tcagcaacac ctccgagtcc ttcgtgctga 120
actggtacag aatgtcccct agcaaccaga ccgacaagct ggccgccttt cctgaggaca 180
gatctcagcc aggccaggac tgccggttca gagttaccca gctgcctaac ggccgggact 240
tccacatgtc tgttgtgcgg gccagacgga acgactctgg cacatatctg tgcggcgcca 300
tctctctggc tcccaaggct cagatcaaag agtctctgcg ggccgagctg agagtgacag 360
aaagacgagc tgaggtgccc accgctcatc cctcacctgg agccagagct tctcctggat 420
ctgctgcttc ccctagactg agagagggcc ctgagctgtc ccctgatgat cctgctggat 480
tgctggacct gcggcagggc atgtttgctc agttggtggc ccagaacgtg ctgctgatcg 540
atggccctct gtcctggtac tctgatccag gattggctgg cgtgtccctg actggcggcc 600
tgtcttacaa agaggacacc aaagaactgg tggtcgccaa ggccggcgtg tactacgtgt 660
tctttcagct ggaactgcgg agagtggtgg ctggcgaagg atctggatct gtgtctctgg 720
ccctgcatct gcagcctctg agaagtgctg caggcgctgc tgcactggct ctgacagttg 780
atctgcctcc tgcctcctcc gaggccagaa actccgcctt tggcttccaa ggcagactgc 840
tgcatctgtc tgccggacag agactgggag tgcacctcca tacagaggcc agagctagac 900
acgcttggca gttgacacag ggcgctacag tgctgggcct gtttagagtg acccctgaga 960
tcccagctgg cctgccatct cctagatctg ag 992
<210> 61
<211> 956
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 48的NA序列, var 8
<400> 61
actctccaga cagaccttgg aaccctccaa ccttctctcc cgctctgctg gtggttaccg 60
agggcgacaa tgccaccttc acctgttcct tcagcaacac ctccgagtcc ttcgtgctga 120
actggtacag aatgtcccct agcaaccaga ccgacaagct ggccgccttt cctgaggaca 180
gatctcagcc aggccaggac tgccggttca gagttaccca gctgcctaac ggccgggact 240
tccacatgtc tgttgtgcgg gccagacgga acgactctgg cacatatctg tgcggcgcca 300
tctctctggc tcccaaggct cagatcaaag agtctctgcg ggccgagctg agagtgacag 360
aaagacgagc tgaggtgccc accgctcatc cctcacctgg actgagagag ggccctgagc 420
tgtcccctga tgatcctgct ggattgctgg acctgcggca gggcatgttt gctcagttgg 480
tggcccagaa cgtgctgctg atcgatggcc ctctgtcctg gtactctgat ccaggattgg 540
ctggcgtgtc cctgactggc ggcctgtctt acaaagagga caccaaagaa ctggtggtcg 600
ccaaggccgg cgtgtactac gtgttctttc agctggaact gcggagagtg gtggctggcg 660
aaggatctgg atctgtgtct ctggccctgc atctgcagcc tctgagaagt gctgcaggcg 720
ctgctgcact ggctctgaca gttgatctgc ctcctgcctc ctccgaggcc agaaactccg 780
cctttggctt ccaaggcaga ctgctgcatc tgtctgccgg acagagactg ggagtgcacc 840
tccatacaga ggccagagct agacacgctt ggcagttgac acagggcgct acagtgctgg 900
gcctgtttag agtgacccct gagatcccag ctggcctgcc atctcctaga tctgag 956
<210> 62
<211> 984
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 49的NA序列, var 9
<400> 62
ccttggaacc ctccaacctt ctctcccgct ctgctggtgg ttaccgaggg cgacaatgcc 60
accttcacct gttccttcag caacacctcc gagtccttcg tgctgaactg gtacagaatg 120
tcccctagca accagaccga caagctggcc gcctttcctg aggacagatc tcagccaggc 180
caggactgcc ggttcagagt tacccagctg cctaacggcc gggacttcca catgtctgtt 240
gtgcgggcca gacggaacga ctctggcaca tatctgtgcg gcgccatctc tctggctccc 300
aaggctcaga tcaaagagtc tctgcgggcc gagctgagag tgacagaaag acgagctgag 360
gtgcccaccg ctcatccctc acctggatct ggcgctagag catctcctgg ctctgctgcc 420
tctcctagac tgagagaggg acctgagctg tctcctgatg atcctgctgg cctgctggat 480
ctgagacagg gcatgtttgc tcagctggtg gcccagaacg tgctgctgat tgatggccct 540
ctgtcctggt actctgatcc tggattggct ggcgtgtccc tgactggcgg cctgtcttac 600
aaagaggaca ccaaagaact ggtggtggcc aaggccggcg tgtactacgt gttctttcag 660
ctggaactgc ggagagtggt ggccggcgaa ggatctggat ctgtgtctct ggcactgcat 720
ctgcagcccc tgagatctgc tgcaggcgct gctgctctgg ctctgacagt tgatctgcct 780
cctgcctcct ccgaggccag aaactccgcc tttggcttcc aaggcagact gctgcatctg 840
tctgccggcc agagactggg agtccatctg catacagagg ctagagccag gcacgcctgg 900
cagttgacac aaggtgctac agtgctgggc ctgttcagag tgaccccaga gattccagcc 960
ggcctgcctt ctccaagatc cgag 984
<210> 63
<211> 960
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 50的NA序列, var 10
<400> 63
ccttggaacc ctccaacctt ctctcccgct ctgctggtgg ttaccgaggg cgacaatgcc 60
accttcacct gttccttcag caacacctcc gagtccttcg tgctgaactg gtacagaatg 120
tcccctagca accagaccga caagctggcc gcctttcctg aggacagatc tcagccaggc 180
caggactgcc ggttcagagt tacccagctg cctaacggcc gggacttcca catgtctgtt 240
gtgcgggcca gacggaacga ctctggcaca tatctgtgcg gcgccatctc tctggctccc 300
aaggctcaga tcaaagagtc tctgcgggcc gagctgagag tgacagaaag acgagctgag 360
gtgcccaccg ctcatccctc acctggatct gctgcttccc ctagactgag agagggccct 420
gagctgtccc ctgatgatcc tgctggattg ctggacctgc ggcagggcat gtttgctcag 480
ttggtggccc agaacgtgct gctgatcgat ggccctctgt cctggtactc tgatccagga 540
ttggctggcg tgtccctgac tggcggcctg tcttacaaag aggacaccaa agaactggtg 600
gtcgccaagg ccggcgtgta ctacgtgttc tttcagctgg aactgcggag agtggtggct 660
ggcgaaggat ctggatctgt gtctctggcc ctgcatctgc agcctctgag aagtgctgca 720
ggcgctgctg cactggctct gacagttgat ctgcctcctg cctcctccga ggccagaaac 780
tccgcctttg gcttccaagg cagactgctg catctgtctg ccggacagag actgggagtg 840
cacctccata cagaggccag agctagacac gcttggcagt tgacacaggg cgctacagtg 900
ctgggcctgt ttagagtgac ccctgagatc ccagctggcc tgccatctcc tagatctgag 960
<210> 64
<211> 978
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 51的NA序列, var 11
<400> 64
ccttggaacc ctccaacctt ctctcccgct ctgctggtgg ttaccgaggg cgacaatgcc 60
accttcacct gttccttcag caacacctcc gagtccttcg tgctgaactg gtacagaatg 120
tcccctagca accagaccga caagctggcc gcctttcctg aggacagatc tcagccaggc 180
caggactgcc ggttcagagt tacccagctg cctaacggcc gggacttcca catgtctgtt 240
gtgcgggcca gacggaacga ctctggcaca tatctgtgcg gcgccatctc tctggctccc 300
aaggctcaga tcaaagagtc tctgcgggcc gagctgagag tgacagaaag acgagctgag 360
gtgcccaccg ctcatccctc acctggagcc agagcttctc ctggatctgc tgcttcccct 420
agactgagag agggccctga gctgtcccct gatgatcctg ctggattgct ggacctgcgg 480
cagggcatgt ttgctcagtt ggtggcccag aacgtgctgc tgatcgatgg ccctctgtcc 540
tggtactctg atccaggatt ggctggcgtg tccctgactg gcggcctgtc ttacaaagag 600
gacaccaaag aactggtggt cgccaaggcc ggcgtgtact acgtgttctt tcagctggaa 660
ctgcggagag tggtggctgg cgaaggatct ggatctgtgt ctctggccct gcatctgcag 720
cctctgagaa gtgctgcagg cgctgctgca ctggctctga cagttgatct gcctcctgcc 780
tcctccgagg ccagaaactc cgcctttggc ttccaaggca gactgctgca tctgtctgcc 840
ggacagagac tgggagtgca cctccataca gaggccagag ctagacacgc ttggcagttg 900
acacagggcg ctacagtgct gggcctgttt agagtgaccc ctgagatccc agctggcctg 960
ccatctccta gatctgag 978
<210> 65
<211> 942
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 52的NA序列, var 12
<400> 65
ccttggaacc ctccaacctt ctctcccgct ctgctggtgg ttaccgaggg cgacaatgcc 60
accttcacct gttccttcag caacacctcc gagtccttcg tgctgaactg gtacagaatg 120
tcccctagca accagaccga caagctggcc gcctttcctg aggacagatc tcagccaggc 180
caggactgcc ggttcagagt tacccagctg cctaacggcc gggacttcca catgtctgtt 240
gtgcgggcca gacggaacga ctctggcaca tatctgtgcg gcgccatctc tctggctccc 300
aaggctcaga tcaaagagtc tctgcgggcc gagctgagag tgacagaaag acgagctgag 360
gtgcccaccg ctcatccctc acctggactg agagagggcc ctgagctgtc ccctgatgat 420
cctgctggat tgctggacct gcggcagggc atgtttgctc agttggtggc ccagaacgtg 480
ctgctgatcg atggccctct gtcctggtac tctgatccag gattggctgg cgtgtccctg 540
actggcggcc tgtcttacaa agaggacacc aaagaactgg tggtcgccaa ggccggcgtg 600
tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg agagtggtgg ctggcgaagg atctggatct 660
gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg agaagtgctg caggcgctgc tgcactggct 720
ctgacagttg atctgcctcc tgcctcctcc gaggccagaa actccgcctt tggcttccaa 780
ggcagactgc tgcatctgtc tgccggacag agactgggag tgcacctcca tacagaggcc 840
agagctagac acgcttggca gttgacacag ggcgctacag tgctgggcct gtttagagtg 900
acccctgaga tcccagctgg cctgccatct cctagatctg ag 942
<210> 66
<211> 1005
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 53的NA序列, var 13
<400> 66
ccttggaacc ctccaacctt ctctcccgct ctgctggtgg ttaccgaggg cgacaatgcc 60
accttcacct gttccttcag caacacctcc gagtccttcg tgctgaactg gtacagaatg 120
tcccctagca accagaccga caagctggcc gcctttcctg aggacagatc tcagccaggc 180
caggactgcc ggttcagagt tacccagctg cctaacggcc gggacttcca catgtctgtt 240
gtgcgggcca gacggaacga ctctggcaca tatctgtgcg gcgccatctc tctggctccc 300
aaggctcaga tcaaagagtc tctgcgggcc gagctgagag tgacagaaag acgagctgag 360
gtgcccaccg ctcatccctc accttctcca agacctgctg gccagggatc tggcgctaga 420
gcatctcctg gctctgctgc ctctcctaga ctgagagagg gacctgagct gtctcctgat 480
gatcctgctg gcctgctgga tctgagacag ggcatgtttg ctcagctggt ggcccagaac 540
gtgctgctga ttgatggccc tctgtcctgg tactctgatc ctggattggc tggcgtgtcc 600
ctgactggcg gcctgtctta caaagaggac accaaagaac tggtggtggc caaggccggc 660
gtgtactacg tgttctttca gctggaactg cggagagtgg tggccggcga aggatctgga 720
tctgtgtctc tggcactgca tctgcagccc ctgagatctg ctgcaggcgc tgctgctctg 780
gctctgacag ttgatctgcc tcctgcctcc tccgaggcca gaaactccgc ctttggcttc 840
caaggcagac tgctgcatct gtctgccggc cagagactgg gagtccatct gcatacagag 900
gctagagcca ggcacgcctg gcagttgaca caaggtgcta cagtgctggg cctgttcaga 960
gtgaccccag agattccagc cggcctgcct tctccaagat ccgag 1005
<210> 67
<211> 981
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 54的NA序列, var 14
<400> 67
ccttggaacc ctccaacctt ctctcccgct ctgctggtgg ttaccgaggg cgacaatgcc 60
accttcacct gttccttcag caacacctcc gagtccttcg tgctgaactg gtacagaatg 120
tcccctagca accagaccga caagctggcc gcctttcctg aggacagatc tcagccaggc 180
caggactgcc ggttcagagt tacccagctg cctaacggcc gggacttcca catgtctgtt 240
gtgcgggcca gacggaacga ctctggcaca tatctgtgcg gcgccatctc tctggctccc 300
aaggctcaga tcaaagagtc tctgcgggcc gagctgagag tgacagaaag acgagctgag 360
gtgcccaccg ctcatccctc accttctcca agacctgctg gccagggatc tgctgcttcc 420
cctagactga gagagggccc tgagctgtcc cctgatgatc ctgctggatt gctggacctg 480
cggcagggca tgtttgctca gttggtggcc cagaacgtgc tgctgatcga tggccctctg 540
tcctggtact ctgatccagg attggctggc gtgtccctga ctggcggcct gtcttacaaa 600
gaggacacca aagaactggt ggtcgccaag gccggcgtgt actacgtgtt ctttcagctg 660
gaactgcgga gagtggtggc tggcgaagga tctggatctg tgtctctggc cctgcatctg 720
cagcctctga gaagtgctgc aggcgctgct gcactggctc tgacagttga tctgcctcct 780
gcctcctccg aggccagaaa ctccgccttt ggcttccaag gcagactgct gcatctgtct 840
gccggacaga gactgggagt gcacctccat acagaggcca gagctagaca cgcttggcag 900
ttgacacagg gcgctacagt gctgggcctg tttagagtga cccctgagat cccagctggc 960
ctgccatctc ctagatctga g 981
<210> 68
<211> 999
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 55的NA序列, var 15
<400> 68
ccttggaacc ctccaacctt ctctcccgct ctgctggtgg ttaccgaggg cgacaatgcc 60
accttcacct gttccttcag caacacctcc gagtccttcg tgctgaactg gtacagaatg 120
tcccctagca accagaccga caagctggcc gcctttcctg aggacagatc tcagccaggc 180
caggactgcc ggttcagagt tacccagctg cctaacggcc gggacttcca catgtctgtt 240
gtgcgggcca gacggaacga ctctggcaca tatctgtgcg gcgccatctc tctggctccc 300
aaggctcaga tcaaagagtc tctgcgggcc gagctgagag tgacagaaag acgagctgag 360
gtgcccaccg ctcatccctc accttctcca agacctgctg gccagggagc cagagcttct 420
cctggatctg ctgcttcccc tagactgaga gagggccctg agctgtcccc tgatgatcct 480
gctggattgc tggacctgcg gcagggcatg tttgctcagt tggtggccca gaacgtgctg 540
ctgatcgatg gccctctgtc ctggtactct gatccaggat tggctggcgt gtccctgact 600
ggcggcctgt cttacaaaga ggacaccaaa gaactggtgg tcgccaaggc cggcgtgtac 660
tacgtgttct ttcagctgga actgcggaga gtggtggctg gcgaaggatc tggatctgtg 720
tctctggccc tgcatctgca gcctctgaga agtgctgcag gcgctgctgc actggctctg 780
acagttgatc tgcctcctgc ctcctccgag gccagaaact ccgcctttgg cttccaaggc 840
agactgctgc atctgtctgc cggacagaga ctgggagtgc acctccatac agaggccaga 900
gctagacacg cttggcagtt gacacagggc gctacagtgc tgggcctgtt tagagtgacc 960
cctgagatcc cagctggcct gccatctcct agatctgag 999
<210> 69
<211> 963
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 56的NA序列, var 16
<400> 69
ccttggaacc ctccaacctt ctctcccgct ctgctggtgg ttaccgaggg cgacaatgcc 60
accttcacct gttccttcag caacacctcc gagtccttcg tgctgaactg gtacagaatg 120
tcccctagca accagaccga caagctggcc gcctttcctg aggacagatc tcagccaggc 180
caggactgcc ggttcagagt tacccagctg cctaacggcc gggacttcca catgtctgtt 240
gtgcgggcca gacggaacga ctctggcaca tatctgtgcg gcgccatctc tctggctccc 300
aaggctcaga tcaaagagtc tctgcgggcc gagctgagag tgacagaaag acgagctgag 360
gtgcccaccg ctcatccctc accttctcca agacctgctg gccagggact gagagagggc 420
cctgagctgt cccctgatga tcctgctgga ttgctggacc tgcggcaggg catgtttgct 480
cagttggtgg cccagaacgt gctgctgatc gatggccctc tgtcctggta ctctgatcca 540
ggattggctg gcgtgtccct gactggcggc ctgtcttaca aagaggacac caaagaactg 600
gtggtcgcca aggccggcgt gtactacgtg ttctttcagc tggaactgcg gagagtggtg 660
gctggcgaag gatctggatc tgtgtctctg gccctgcatc tgcagcctct gagaagtgct 720
gcaggcgctg ctgcactggc tctgacagtt gatctgcctc ctgcctcctc cgaggccaga 780
aactccgcct ttggcttcca aggcagactg ctgcatctgt ctgccggaca gagactggga 840
gtgcacctcc atacagaggc cagagctaga cacgcttggc agttgacaca gggcgctaca 900
gtgctgggcc tgtttagagt gacccctgag atcccagctg gcctgccatc tcctagatct 960
gag 963
<210> 70
<211> 996
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 12的NA序列
<400> 70
gactctccag acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctgccggttc agagttaccc agctgcctaa cggccgggac 240
ttccacatgt ctgttgtgcg ggccagacgg aacgactctg gcacatatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacctt ctccaagacc tgctggccag 420
ggatctgccg cttctcctag actgagagag ggccctgagc tgtctcctga tgatcctgct 480
ggactgctgg acctgagaca gggcatgttt gcccagctgg tggcccagaa tgtgctgctg 540
attgacggcc ctctgtcctg gtactctgat ccaggattgg ctggcgtgtc cctgactggc 600
ggcctgtctt acaaagagga caccaaagaa ctggtggtcg ccaaggccgg cgtgtactac 660
gtgttctttc agctggaact gcggagagtg gtggctggcg aaggatctgg atctgtgtct 720
ctggccctgc atctgcagcc tctgagaagt gctgcaggcg ctgctgcact ggctctgaca 780
gttgatctgc ctcctgcctc ctccgaggcc agaaactccg cctttggctt ccaaggcaga 840
ctgctgcatc tgtctgccgg acagagactg ggagtgcacc tccatacaga ggccagagct 900
agacacgctt ggcagttgac acagggcgct acagtgctgg gcctgtttag agtgacccct 960
gagattccag ccggcctgcc atctccaaga tctgag 996
<210> 71
<211> 1014
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 14的NA序列
<400> 71
gactctccag acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctgccggttc agagttaccc agctgcctaa cggccgggac 240
ttccacatgt ctgttgtgcg ggccagacgg aacgactctg gcacatatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacctt ctccaagacc tgctggacag 420
ggcgccagag cttctcctgg atctgctgct tcccctagac tgagagaggg ccctgagctg 480
tcccctgatg atcctgctgg attgctggac ctgcggcagg gcatgtttgc tcagttggtg 540
gcccagaacg tgctgctgat cgatggccct ctgtcctggt actctgatcc aggattggct 600
ggcgtgtccc tgactggcgg cctgtcttac aaagaggaca ccaaagaact ggtggtcgcc 660
aaggccggcg tgtactacgt gttctttcag ctggaactgc ggagagtggt ggctggcgaa 720
ggatctggat ctgtgtctct ggccctgcat ctgcagcctc tgagaagtgc tgcaggcgct 780
gctgcactgg ctctgacagt tgatctgcct cctgcctcct ccgaggccag aaactccgcc 840
tttggcttcc aaggcagact gctgcatctg tctgccggac agagactggg agtgcacctc 900
catacagagg ccagagctag acacgcttgg cagttgacac agggcgctac agtgctgggc 960
ctgtttagag tgacccctga gatcccagct ggcctgccat ctcctagatc tgag 1014
<210> 72
<211> 978
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 16的NA序列
<400> 72
gactctccag acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctgccggttc agagttaccc agctgcctaa cggccgggac 240
ttccacatgt ctgttgtgcg ggccagacgg aacgactctg gcacatatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacctt ctccaagacc tgctggccag 420
ggactgagag agggacctga actgtctcct gatgatcctg ccggcctgct ggatctgaga 480
cagggcatgt ttgcccagct ggtggcccag aatgtgctgc tgattgacgg ccctctgtcc 540
tggtactctg atccaggatt ggctggcgtg tccctgactg gcggcctgtc ttacaaagag 600
gacaccaaag aactggtggt cgccaaggcc ggcgtgtact acgtgttctt tcagctggaa 660
ctgcggagag tggtggctgg cgaaggatct ggatctgtgt ctctggccct gcatctgcag 720
cctctgagaa gtgctgcagg cgctgctgca ctggctctga cagttgatct gcctcctgcc 780
tcctccgagg ccagaaactc cgcctttggc ttccaaggca gactgctgca tctgtctgcc 840
ggacagagac tgggagtgca cctccataca gaggccagag ctagacacgc ttggcagttg 900
acacagggcg ctacagtgct gggcctgttt agagtgaccc ctgagatccc tgctggactg 960
ccctctccaa gatctgag 978
<210> 73
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 73 带有CYS73>SER取代的PD1 ECD全长
<400> 73
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Ser Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Gln Phe Gln Thr Leu Val
145 150
<210> 74
<211> 450
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 73的na序列
<400> 74
cccggctggt ttctggactc tccagacaga ccttggaacc ctccaacctt ctctcccgct 60
ctgctggtgg ttaccgaggg cgacaatgcc accttcacct gttccttcag caacacctcc 120
gagtccttcg tgctgaactg gtacagaatg tcccctagca accagaccga caagctggcc 180
gcctttcctg aggacagatc tcagccaggc caggactctc ggttcagagt tacccagctg 240
cctaacggcc gggacttcca catgtctgtt gtgcgggcca gacggaacga ctctggcaca 300
tatctgtgcg gcgccatctc tctggctccc aaggctcaga tcaaagagtc tctgcgggcc 360
gagctgagag tgacagaaag acgagctgag gtgcccaccg ctcatccctc accttctcca 420
agacctgctg gccagtttca gacactcgtg 450
<210> 75
<211> 140
<212> PRT
<213> 人工序列人工序列
<220>
<223> 自var17的PD1 -5-5 (带有CYS73>SER取代的DSP105 var 1)
<400> 75
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Ser Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln
130 135 140
<210> 76
<211> 420
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 75的na序列 420 bp
<400> 76
gactctccag acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctctcggttc agagtgaccc agctgcctaa cggcagagac 240
ttccacatgt ccgtcgtgcg ggccagaaga aacgactctg gcacctatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacctt ctccaagacc tgctggccag 420
<210> 77
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His标签、CYS73>SER取代的PD1 -5-5
<400> 77
His His His His His His Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro
1 5 10 15
Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr
20 25 30
Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp
35 40 45
Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro
50 55 60
Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Ser Arg Phe Arg Val Thr Gln
65 70 75 80
Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg
85 90 95
Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys
100 105 110
Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg
115 120 125
Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala
130 135 140
Gly Gln
145
<210> 78
<211> 438
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 77的na序列 438 bp
<400> 78
caccaccacc atcaccacga ctctccagac agaccttgga accctccaac cttctctccc 60
gctctgctgg tggttaccga gggcgacaat gccaccttca cctgttcctt cagcaacacc 120
tccgagtcct tcgtgctgaa ctggtacaga atgtccccta gcaaccagac cgacaagctg 180
gccgcctttc ctgaggacag atctcagcca ggccaggact ctcggttcag agtgacccag 240
ctgcctaacg gcagagactt ccacatgtcc gtcgtgcggg ccagaagaaa cgactctggc 300
acctatctgt gcggcgccat ctctctggct cccaaggctc agatcaaaga gtctctgcgg 360
gccgagctga gagtgacaga aagacgagct gaggtgccca ccgctcatcc ctcaccttct 420
ccaagacctg ctggccag 438
<210> 79
<211> 135
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1 -10-5 (带有CYS73>SER取代的)
<400> 79
Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu
1 5 10 15
Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser
20 25 30
Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys
35 40 45
Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Ser Arg
50 55 60
Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val
65 70 75 80
Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile
85 90 95
Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu
100 105 110
Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro
115 120 125
Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln
130 135
<210> 80
<211> 405
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 79的na序列 405 bp
<400> 80
ccttggaacc ctccaacctt ctctcccgct ctgctggtgg ttaccgaggg cgacaatgcc 60
accttcacct gttccttcag caacacctcc gagtccttcg tgctgaactg gtacagaatg 120
tcccctagca accagaccga caagctggcc gcctttcctg aggacagatc tcagccaggc 180
caggactctc ggttcagagt tacccagctg cctaacggcc gggacttcca catgtctgtt 240
gtgcgggcca gacggaacga ctctggcaca tatctgtgcg gcgccatctc tctggctccc 300
aaggctcaga tcaaagagtc tctgcgggcc gagctgagag tgacagaaag acgagctgag 360
gtgcccaccg ctcatccctc accttctcca agacctgctg gccag 405
<210> 81
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1 -10-12 (带有CYS73>SER取代的)
<400> 81
Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu
1 5 10 15
Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser
20 25 30
Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys
35 40 45
Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Ser Arg
50 55 60
Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val
65 70 75 80
Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile
85 90 95
Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu
100 105 110
Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro
115 120 125
<210> 82
<211> 384
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 81的na序列 384 bp
<400> 82
ccttggaacc ctccaacctt ctctcccgct ctgctggtgg ttaccgaggg cgacaatgcc 60
accttcacct gttccttcag caacacctcc gagtccttcg tgctgaactg gtacagaatg 120
tcccctagca accagaccga caagctggcc gcctttcctg aggacagatc tcagccaggc 180
caggactctc ggttcagagt tacccagctg cctaacggcc gggacttcca catgtctgtt 240
gtgcgggcca gacggaacga ctctggcaca tatctgtgcg gcgccatctc tctggctccc 300
aaggctcaga tcaaagagtc tctgcgggcc gagctgagag tgacagaaag acgagctgag 360
gtgcccaccg ctcatccctc acct 384
<210> 83
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1 -5-12 (新的,来自V20) (带有CYS73>SER取代的)
<400> 83
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Ser Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro
130
<210> 84
<211> 399
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 83的na序列 399 bp
<400> 84
gactctccag acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctctcggttc agagttaccc agctgcctaa cggccgggac 240
ttccacatgt ctgttgtgcg ggccagacgg aacgactctg gcacatatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacct 399
<210> 85
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1 -11-12
<400> 85
Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly
1 5 10 15
Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe
20 25 30
Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe
50 55 60
Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val
65 70 75 80
Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser
85 90 95
Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg
100 105 110
Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro
115 120 125
<210> 86
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 85的na序列 381 bp
<400> 86
tggaaccctc caaccttctc tcccgctctg ctggtggtta ccgagggcga caatgccacc 60
ttcacctgtt ccttcagcaa cacctccgag tccttcgtgc tgaactggta cagaatgtcc 120
cctagcaacc agaccgacaa gctggccgcc tttcctgagg acagatctca gccaggccag 180
gactgtcggt tcagagtgac ccagctgcct aacggcagag acttccacat gtccgtcgtg 240
cgggccagaa gaaacgactc tggcacctat ctgtgcggcg ccatctctct ggctcccaag 300
gctcagatca aagagtctct gcgggccgag ctgagagtga cagaaagacg agctgaggtg 360
cccaccgctc atccctcacc t 381
<210> 87
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1 -11-12 (新的,来自V18) (带有CYS73>SER取代的)
<400> 87
Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly
1 5 10 15
Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe
20 25 30
Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Ser Arg Phe
50 55 60
Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val
65 70 75 80
Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser
85 90 95
Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg
100 105 110
Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro
115 120 125
<210> 88
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 87的na序列 381 bp
<400> 88
tggaaccctc caaccttctc tcccgctctg ctggtggtta ccgagggcga caatgccacc 60
ttcacctgtt ccttcagcaa cacctccgag tccttcgtgc tgaactggta cagaatgtcc 120
cctagcaacc agaccgacaa gctggccgcc tttcctgagg acagatctca gccaggccag 180
gactctcggt tcagagtgac ccagctgcct aacggcagag acttccacat gtccgtcgtg 240
cgggccagaa gaaacgactc tggcacctat ctgtgcggcg ccatctctct ggctcccaag 300
gctcagatca aagagtctct gcgggccgag ctgagagtga cagaaagacg agctgaggtg 360
cccaccgctc atccctcacc t 381
<210> 89
<211> 134
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1 -11-5
<400> 89
Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly
1 5 10 15
Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe
20 25 30
Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe
50 55 60
Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val
65 70 75 80
Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser
85 90 95
Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg
100 105 110
Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Arg Pro Ala Gly Gln
130
<210> 90
<211> 402
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 89的na序列 402 bp
<400> 90
tggaaccctc caaccttctc tcccgctctg ctggtggtta ccgagggcga caatgccacc 60
ttcacctgtt ccttcagcaa cacctccgag tccttcgtgc tgaactggta cagaatgtcc 120
cctagcaacc agaccgacaa gctggccgcc tttcctgagg acagatctca gccaggccag 180
gactgtcggt tcagagtgac ccagctgcct aacggcagag acttccacat gtccgtcgtg 240
cgggccagaa gaaacgactc tggcacctat ctgtgcggcg ccatctctct ggctcccaag 300
gctcagatca aagagtctct gcgggccgag ctgagagtga cagaaagacg agctgaggtg 360
cccaccgctc atccctcacc ttctccaaga cctgctggcc ag 402
<210> 91
<211> 134
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1 -11-5 (新的,来自V19) (带有CYS73>SER取代的)
<400> 91
Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly
1 5 10 15
Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe
20 25 30
Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Ser Arg Phe
50 55 60
Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val
65 70 75 80
Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser
85 90 95
Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg
100 105 110
Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Arg Pro Ala Gly Gln
130
<210> 92
<211> 402
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 91的na序列 402 bp
<400> 92
tggaaccctc caaccttctc tcccgctctg ctggtggtta ccgagggcga caatgccacc 60
ttcacctgtt ccttcagcaa cacctccgag tccttcgtgc tgaactggta cagaatgtcc 120
cctagcaacc agaccgacaa gctggccgcc tttcctgagg acagatctca gccaggccag 180
gactctcggt tcagagtgac ccagctgcct aacggcagag acttccacat gtccgtcgtg 240
cgggccagaa gaaacgactc tggcacctat ctgtgcggcg ccatctctct ggctcccaag 300
gctcagatca aagagtctct gcgggccgag ctgagagtga cagaaagacg agctgaggtg 360
cccaccgctc atccctcacc ttctccaaga cctgctggcc ag 402
<210> 93
<211> 138
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1 -5-7
<400> 93
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala
130 135
<210> 94
<211> 414
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 93的na序列 414 bp
<400> 94
gactctccag acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctgtcggttc agagtgaccc agctgcctaa cggcagagac 240
ttccacatgt ccgtcgtgcg ggccagaaga aacgactctg gcacctatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacctt ctccaagacc tgct 414
<210> 95
<211> 138
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1 -5-7 (新的,来自V21) (带有CYS73>SER取代的)
<400> 95
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Ser Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala
130 135
<210> 96
<211> 414
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 95的na序列 414 bp
<400> 96
gactctccag acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctctcggttc agagtgaccc agctgcctaa cggcagagac 240
ttccacatgt ccgtcgtgcg ggccagaaga aacgactctg gcacctatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacctt ctccaagacc tgct 414
<210> 97
<211> 332
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 不带有His标签的DSP105 var17 (var1在PD1域中的CYS73取代为SER)
<400> 97
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Ser Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Gly Ser Ala Ala
130 135 140
Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala
145 150 155 160
Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln
165 170 175
Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly
180 185 190
Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr
195 200 205
Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln
210 215 220
Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser
225 230 235 240
Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala
245 250 255
Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn
260 265 270
Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln
275 280 285
Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp
290 295 300
Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro
305 310 315 320
Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
325 330
<210> 98
<211> 996
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 97的na序列 996 bp
<400> 98
gactctccag acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctctcggttc agagtgaccc agctgcctaa cggcagagac 240
ttccacatgt ccgtcgtgcg ggccagaaga aacgactctg gcacctatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacctt ctccaagacc tgctggccag 420
ggatctgccg cttctcctag actgagagag ggccctgagc tgtctcctga tgatcctgct 480
ggactgctgg acctgagaca gggcatgttt gctcagctgg tggcccagaa cgtgctgctg 540
attgatggcc ctctgtcctg gtactctgat cctggattgg ctggcgtgtc cctgactggc 600
ggcctgtctt acaaagagga caccaaagaa ctggtggtcg ccaaggccgg cgtgtactac 660
gtgttctttc agctggaact gcggagagtg gtggctggcg aaggatctgg atctgtgtct 720
ctggccctgc atctgcagcc tctgagaagt gctgcaggcg ctgctgcact ggctctgaca 780
gttgatctgc ctcctgcctc ctccgaggcc agaaactccg cctttggctt ccaaggcaga 840
ctgctgcatc tgtctgccgg acagagactg ggagtgcacc tccatacaga ggccagagct 900
agacacgctt ggcagttgac acagggcgct acagtgctgg gcctgtttag agtgacacct 960
gagatcccag ccggcctgcc atctccaaga tctgaa 996
<210> 99
<211> 338
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His标签的DSP105 var17 (var1在PD1域中的CYS73取代为SER
to SER)
<400> 99
His His His His His His Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro
1 5 10 15
Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr
20 25 30
Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp
35 40 45
Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro
50 55 60
Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Ser Arg Phe Arg Val Thr Gln
65 70 75 80
Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg
85 90 95
Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys
100 105 110
Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg
115 120 125
Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala
130 135 140
Gly Gln Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu
145 150 155 160
Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe
165 170 175
Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser
180 185 190
Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu
195 200 205
Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val
210 215 220
Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu
225 230 235 240
Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser
245 250 255
Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala
260 265 270
Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu
275 280 285
His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala
290 295 300
Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly
305 310 315 320
Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg
325 330 335
Ser Glu
<210> 100
<211> 1014
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 99的na序列 1014 bp
<400> 100
caccaccacc atcaccacga ctctccagac agaccttgga accctccaac cttctctccc 60
gctctgctgg tggttaccga gggcgacaat gccaccttca cctgttcctt cagcaacacc 120
tccgagtcct tcgtgctgaa ctggtacaga atgtccccta gcaaccagac cgacaagctg 180
gccgcctttc ctgaggacag atctcagcca ggccaggact ctcggttcag agtgacccag 240
ctgcctaacg gcagagactt ccacatgtcc gtcgtgcggg ccagaagaaa cgactctggc 300
acctatctgt gcggcgccat ctctctggct cccaaggctc agatcaaaga gtctctgcgg 360
gccgagctga gagtgacaga aagacgagct gaggtgccca ccgctcatcc ctcaccttct 420
ccaagacctg ctggccaggg atctgccgct tctcctagac tgagagaggg ccctgagctg 480
tctcctgatg atcctgctgg actgctggac ctgagacagg gcatgtttgc tcagctggtg 540
gcccagaacg tgctgctgat tgatggccct ctgtcctggt actctgatcc tggattggct 600
ggcgtgtccc tgactggcgg cctgtcttac aaagaggaca ccaaagaact ggtggtcgcc 660
aaggccggcg tgtactacgt gttctttcag ctggaactgc ggagagtggt ggctggcgaa 720
ggatctggat ctgtgtctct ggccctgcat ctgcagcctc tgagaagtgc tgcaggcgct 780
gctgcactgg ctctgacagt tgatctgcct cctgcctcct ccgaggccag aaactccgcc 840
tttggcttcc aaggcagact gctgcatctg tctgccggac agagactggg agtgcacctc 900
catacagagg ccagagctag acacgcttgg cagttgacac agggcgctac agtgctgggc 960
ctgtttagag tgacacctga gatcccagcc ggcctgccat ctccaagatc tgaa 1014
<210> 101
<211> 319
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 var18
<400> 101
Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly
1 5 10 15
Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe
20 25 30
Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Ser Arg Phe
50 55 60
Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val
65 70 75 80
Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser
85 90 95
Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg
100 105 110
Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Gly
115 120 125
Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp
130 135 140
Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu
145 150 155 160
Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser
165 170 175
Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys
180 185 190
Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val
195 200 205
Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly
210 215 220
Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly
225 230 235 240
Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu
245 250 255
Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser
260 265 270
Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg
275 280 285
His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg
290 295 300
Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
305 310 315
<210> 102
<211> 957
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 101的na序列 957 bp
<400> 102
tggaaccctc caaccttctc tcccgctctg ctggtggtta ccgagggcga caatgccacc 60
ttcacctgtt ccttcagcaa cacctccgag tccttcgtgc tgaactggta cagaatgtcc 120
cctagcaacc agaccgacaa gctggccgcc tttcctgagg acagatctca gccaggccag 180
gactctcggt tcagagtgac ccagctgcct aacggcagag acttccacat gtccgtcgtg 240
cgggccagaa gaaacgactc tggcacctat ctgtgcggcg ccatctctct ggctcccaag 300
gctcagatca aagagtctct gcgggccgag ctgagagtga cagaaagacg agctgaggtg 360
cccaccgctc atccctcacc tggatctgcc gcttctccta gactgagaga gggccctgag 420
ctgtctcctg atgatcctgc tggactgctg gacctgagac agggcatgtt tgctcagctg 480
gtggcccaga acgtgctgct gattgatggc cctctgtcct ggtactctga tcctggattg 540
gctggcgtgt ccctgactgg cggcctgtct tacaaagagg acaccaaaga actggtggtc 600
gccaaggccg gcgtgtacta cgtgttcttt cagctggaac tgcggagagt ggtggctggc 660
gaaggatctg gatctgtgtc tctggccctg catctgcagc ctctgagaag tgctgcaggc 720
gctgctgcac tggctctgac agttgatctg cctcctgcct cctccgaggc cagaaactcc 780
gcctttggct tccaaggcag actgctgcat ctgtctgccg gacagagact gggagtgcac 840
ctccatacag aggccagagc tagacacgct tggcagttga cacagggcgc tacagtgctg 900
ggcctgttta gagtgacacc tgagatccca gccggcctgc catctccaag atctgaa 957
<210> 103
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 var19
<400> 103
Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly
1 5 10 15
Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe
20 25 30
Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Ser Arg Phe
50 55 60
Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val
65 70 75 80
Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser
85 90 95
Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg
100 105 110
Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Arg Pro Ala Gly Gln Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu
130 135 140
Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg
145 150 155 160
Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp
165 170 175
Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu
180 185 190
Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala
195 200 205
Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val
210 215 220
Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln
225 230 235 240
Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp
245 250 255
Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln
260 265 270
Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu
275 280 285
His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala
290 295 300
Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
305 310 315 320
Pro Ser Pro Arg Ser Glu
325
<210> 104
<211> 978
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 103的na序列 977 bp
<400> 104
tggaaccctc caaccttctc tcccgctctg ctggtggtta ccgagggcga caatgccacc 60
ttcacctgtt ccttcagcaa cacctccgag tccttcgtgc tgaactggta cagaatgtcc 120
cctagcaacc agaccgacaa gctggccgcc tttcctgagg acagatctca gccaggccag 180
gactctcggt tcagagtgac ccagctgcct aacggcagag acttccacat gtccgtcgtg 240
cgggccagaa gaaacgactc tggcacctat ctgtgcggcg ccatctctct ggctcccaag 300
gctcagatca aagagtctct gcgggccgag ctgagagtga cagaaagacg agctgaggtg 360
cccaccgctc atccctcacc ttctccaaga cctgctggcc agggatctgc cgcttctcct 420
agactgagag agggccctga gctgtctcct gatgatcctg ctggactgct ggacctgaga 480
cagggcatgt ttgctcagct ggtggcccag aacgtgctgc tgattgatgg ccctctgtcc 540
tggtactctg atcctggatt ggctggcgtg tccctgactg gcggcctgtc ttacaaagag 600
gacaccaaag aactggtggt cgccaaggcc ggcgtgtact acgtgttctt tcagctggaa 660
ctgcggagag tggtggctgg cgaaggatct ggatctgtgt ctctggccct gcatctgcag 720
cctctgagaa gtgctgcagg cgctgctgca ctggctctga cagttgatct gcctcctgcc 780
tcctccgagg ccagaaactc cgcctttggc ttccaaggca gactgctgca tctgtctgcc 840
ggacagagac tgggagtgca cctccataca gaggccagag ctagacacgc ttggcagttg 900
acacagggcg ctacagtgct gggcctgttt agagtgacac ctgagatccc agccggcctg 960
ccatctccaa gatctgaa 978
<210> 105
<211> 325
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 var20
<400> 105
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Ser Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly
130 135 140
Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln
145 150 155 160
Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly
165 170 175
Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr
180 185 190
Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys
195 200 205
Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val
210 215 220
Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro
225 230 235 240
Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu
245 250 255
Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly
260 265 270
Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His
275 280 285
Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr
290 295 300
Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro
305 310 315 320
Ser Pro Arg Ser Glu
325
<210> 106
<211> 975
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 105的na序列 1062 bp
<400> 106
gactctccag acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctctcggttc agagtgaccc agctgcctaa cggcagagac 240
ttccacatgt ccgtcgtgcg ggccagaaga aacgactctg gcacctatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacctg gatctgccgc ttctcctaga 420
ctgagagagg gccctgagct gtctcctgat gatcctgctg gactgctgga cctgagacag 480
ggcatgtttg ctcagctggt ggcccagaac gtgctgctga ttgatggccc tctgtcctgg 540
tactctgatc ctggattggc tggcgtgtcc ctgactggcg gcctgtctta caaagaggac 600
accaaagaac tggtggtcgc caaggccggc gtgtactacg tgttctttca gctggaactg 660
cggagagtgg tggctggcga aggatctgga tctgtgtctc tggccctgca tctgcagcct 720
ctgagaagtg ctgcaggcgc tgctgcactg gctctgacag ttgatctgcc tcctgcctcc 780
tccgaggcca gaaactccgc ctttggcttc caaggcagac tgctgcatct gtctgccgga 840
cagagactgg gagtgcacct ccatacagag gccagagcta gacacgcttg gcagttgaca 900
cagggcgcta cagtgctggg cctgtttaga gtgacacctg agatcccagc cggcctgcca 960
tctccaagat ctgaa 975
<210> 107
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 var21
<400> 107
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Ser Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Ser Ala Ala Ser Pro
130 135 140
Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu
145 150 155 160
Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val
165 170 175
Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala
180 185 190
Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu
195 200 205
Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu
210 215 220
Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala
225 230 235 240
Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala
245 250 255
Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala
260 265 270
Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu
275 280 285
Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu
290 295 300
Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile
305 310 315 320
Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
325 330
<210> 108
<211> 990
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 107的na序列 1077 bp
<400> 108
gactctccag acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctctcggttc agagtgaccc agctgcctaa cggcagagac 240
ttccacatgt ccgtcgtgcg ggccagaaga aacgactctg gcacctatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacctt ctccaagacc tgctggatct 420
gccgcttctc ctagactgag agagggccct gagctgtctc ctgatgatcc tgctggactg 480
ctggacctga gacagggcat gtttgctcag ctggtggccc agaacgtgct gctgattgat 540
ggccctctgt cctggtactc tgatcctgga ttggctggcg tgtccctgac tggcggcctg 600
tcttacaaag aggacaccaa agaactggtg gtcgccaagg ccggcgtgta ctacgtgttc 660
tttcagctgg aactgcggag agtggtggct ggcgaaggat ctggatctgt gtctctggcc 720
ctgcatctgc agcctctgag aagtgctgca ggcgctgctg cactggctct gacagttgat 780
ctgcctcctg cctcctccga ggccagaaac tccgcctttg gcttccaagg cagactgctg 840
catctgtctg ccggacagag actgggagtg cacctccata cagaggccag agctagacac 900
gcttggcagt tgacacaggg cgctacagtg ctgggcctgt ttagagtgac acctgagatc 960
ccagccggcc tgccatctcc aagatctgaa 990
<210> 109
<211> 362
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His标签的DSP105 var22 362 aa
<400> 109
His His His His His His Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg
1 5 10 15
Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu
20 25 30
Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser
35 40 45
Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys
50 55 60
Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Ser Arg
65 70 75 80
Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val
85 90 95
Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile
100 105 110
Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu
115 120 125
Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro
130 135 140
Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Gly Ala Cys Pro
145 150 155 160
Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser Pro
165 170 175
Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu
180 185 190
Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val
195 200 205
Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala
210 215 220
Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu
225 230 235 240
Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu
245 250 255
Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala
260 265 270
Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala
275 280 285
Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala
290 295 300
Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu
305 310 315 320
Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu
325 330 335
Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile
340 345 350
Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
355 360
<210> 110
<211> 1086
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 109的na序列 1086 bp
<400> 110
caccatcatc accaccatcc tggctggttt ctggacagcc ccgacagacc ttggaaccct 60
cctacattca gccccgctct gctggtggtt accgagggcg ataatgccac cttcacctgt 120
agcttcagca acaccagcga gagcttcgtg ctgaactggt acagaatgag ccccagcaac 180
cagaccgaca agctggccgc ctttcctgag gatagatctc agcccggcca ggactctcgg 240
ttcagagtta cacagctgcc caacggccgg gacttccaca tgtctgtcgt ccgggccaga 300
agaaacgaca gcggcacata tctgtgcggc gccatttctc tggcccctaa ggctcagatc 360
aaagagagcc tgagagccga gctgagagtg acagaaagac gggccgaagt gcccacagct 420
cacccttcac cttctccaag acctgccggc cagtttcaga cactcgtggg agcttgtcct 480
tgggccgttt ctggcgctag agcctctcct ggatctgccg cttctcccag actgagagag 540
ggacctgagc tgagccctga tgatcctgct ggactgctgg atctgagaca gggcatgttt 600
gcccagctgg tggcccagaa tgtgctgctg attgatggcc ctctgtcctg gtacagcgat 660
cctggacttg ctggcgttag cctgactggc ggcctgagct acaaagagga caccaaagaa 720
ctggtggtgg ccaaggccgg cgtgtactac gtgttctttc agctggaact gcggagagtg 780
gtggccggcg aaggatctgg atctgtgtct ctggctctgc atctgcagcc tctgagatct 840
gctgctggtg ctgctgctct ggccctgaca gttgatctgc ctcctgcctc tagcgaggcc 900
agaaactccg cctttggctt ccaaggcaga ctgctgcacc tgagcgctgg acagagactg 960
ggagtccatc tgcacacaga agccagagct agacacgcct ggcagctgac acaaggcgct 1020
acagtgctgg gcctgttcag agtgacccct gagattccag ccggcctgcc atctcctaga 1080
tctgag 1086
<210> 111
<211> 356
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 var22 362 aa
<400> 111
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Ser Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Gln Phe Gln Thr Leu Val Gly Ala Cys Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala
145 150 155 160
Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro
165 170 175
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
180 185 190
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
195 200 205
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
210 215 220
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
225 230 235 240
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
245 250 255
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
260 265 270
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
275 280 285
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
290 295 300
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
305 310 315 320
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
325 330 335
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser
340 345 350
Pro Arg Ser Glu
355
<210> 112
<211> 1068
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 111的na序列 1086 bp
<400> 112
cctggctggt ttctggacag ccccgacaga ccttggaacc ctcctacatt cagccccgct 60
ctgctggtgg ttaccgaggg cgataatgcc accttcacct gtagcttcag caacaccagc 120
gagagcttcg tgctgaactg gtacagaatg agccccagca accagaccga caagctggcc 180
gcctttcctg aggatagatc tcagcccggc caggactctc ggttcagagt tacacagctg 240
cccaacggcc gggacttcca catgtctgtc gtccgggcca gaagaaacga cagcggcaca 300
tatctgtgcg gcgccatttc tctggcccct aaggctcaga tcaaagagag cctgagagcc 360
gagctgagag tgacagaaag acgggccgaa gtgcccacag ctcacccttc accttctcca 420
agacctgccg gccagtttca gacactcgtg ggagcttgtc cttgggccgt ttctggcgct 480
agagcctctc ctggatctgc cgcttctccc agactgagag agggacctga gctgagccct 540
gatgatcctg ctggactgct ggatctgaga cagggcatgt ttgcccagct ggtggcccag 600
aatgtgctgc tgattgatgg ccctctgtcc tggtacagcg atcctggact tgctggcgtt 660
agcctgactg gcggcctgag ctacaaagag gacaccaaag aactggtggt ggccaaggcc 720
ggcgtgtact acgtgttctt tcagctggaa ctgcggagag tggtggccgg cgaaggatct 780
ggatctgtgt ctctggctct gcatctgcag cctctgagat ctgctgctgg tgctgctgct 840
ctggccctga cagttgatct gcctcctgcc tctagcgagg ccagaaactc cgcctttggc 900
ttccaaggca gactgctgca cctgagcgct ggacagagac tgggagtcca tctgcacaca 960
gaagccagag ctagacacgc ctggcagctg acacaaggcg ctacagtgct gggcctgttc 1020
agagtgaccc ctgagattcc agccggcctg ccatctccta gatctgag 1068
<210> 113
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 var23 氨基酸序列
<400> 113
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Ser Ala Ala Ser Pro
130 135 140
Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu
145 150 155 160
Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val
165 170 175
Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala
180 185 190
Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu
195 200 205
Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu
210 215 220
Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala
225 230 235 240
Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala
245 250 255
Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala
260 265 270
Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu
275 280 285
Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu
290 295 300
Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile
305 310 315 320
Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
325 330
<210> 114
<211> 990
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 var23 核酸序列
<400> 114
gactctccag acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctgtcggttc agagtgaccc agctgcctaa cggcagagac 240
ttccacatgt ccgtcgtgcg ggccagaaga aacgactctg gcacctatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacctt ctccaagacc tgctggatct 420
gccgcttctc ctagactgag agagggccct gagctgtctc ctgatgatcc tgctggactg 480
ctggacctga gacagggcat gtttgctcag ctggtggccc agaacgtgct gctgattgat 540
ggccctctgt cctggtactc tgatcctgga ttggctggcg tgtccctgac tggcggcctg 600
tcttacaaag aggacaccaa agaactggtg gtcgccaagg ccggcgtgta ctacgtgttc 660
tttcagctgg aactgcggag agtggtggct ggcgaaggat ctggatctgt gtctctggcc 720
ctgcatctgc agcctctgag aagtgctgca ggcgctgctg cactggctct gacagttgat 780
ctgcctcctg cctcctccga ggccagaaac tccgcctttg gcttccaagg cagactgctg 840
catctgtctg ccggacagag actgggagtg cacctccata cagaggccag agctagacac 900
gcttggcagt tgacacaggg cgctacagtg ctgggcctgt ttagagtgac acctgagatc 960
ccagccggcc tgccatctcc aagatctgaa 990
<210> 115
<211> 136
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1 变异的氨基酸序列
<400> 115
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg
130 135
<210> 116
<211> 408
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1 变异的核酸序列
<400> 116
gactctccag acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctgtcggttc agagttaccc agctgcctaa cggccgggac 240
ttccacatgt ctgttgtgcg ggccagacgg aacgactctg gcacatatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacctt ctccaaga 408
<210> 117
<211> 145
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1 变异的氨基酸序列
<400> 117
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Gln
145
<210> 118
<211> 435
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1 变异的核酸序列
<400> 118
cccggctggt ttctggactc tccagacaga ccttggaacc ctccaacctt ctctcccgct 60
ctgctggtgg ttaccgaggg cgacaatgcc accttcacct gttccttcag caacacctcc 120
gagtccttcg tgctgaactg gtacagaatg tcccctagca accagaccga caagctggcc 180
gcctttcctg aggacagatc tcagccaggc caggactgtc ggttcagagt tacccagctg 240
cctaacggcc gggacttcca catgtctgtt gtgcgggcca gacggaacga ctctggcaca 300
tatctgtgcg gcgccatctc tctggctccc aaggctcaga tcaaagagtc tctgcgggcc 360
gagctgagag tgacagaaag acgagctgag gtgcccaccg ctcatccctc accttctcca 420
agacctgctg gccag 435
<210> 119
<211> 143
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1 变异的氨基酸序列
<400> 119
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala
130 135 140
<210> 120
<211> 429
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PD1 变异的核酸序列
<400> 120
cccggctggt ttctggactc tccagacaga ccttggaacc ctccaacctt ctctcccgct 60
ctgctggtgg ttaccgaggg cgacaatgcc accttcacct gttccttcag caacacctcc 120人工序列
gagtccttcg tgctgaactg gtacagaatg tcccctagca accagaccga caagctggcc 180
gcctttcctg aggacagatc tcagccaggc caggactgtc ggttcagagt tacccagctg 240
cctaacggcc gggacttcca catgtctgtt gtgcgggcca gacggaacga ctctggcaca 300
tatctgtgcg gcgccatctc tctggctccc aaggctcaga tcaaagagtc tctgcgggcc 360
gagctgagag tgacagaaag acgagctgag gtgcccaccg ctcatccctc accttctcca 420
agacctgct 429
<210> 121
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子的氨基酸序列
<400> 121
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5 10
<210> 122
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子的氨基酸序列
<400> 122
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 123
<211> 184
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-1BBL 变异的氨基酸序列
<400> 123
Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp
1 5 10 15
Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu
20 25 30
Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val
35 40 45
Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val
50 55 60
Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg
65 70 75 80
Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His
85 90 95
Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr
100 105 110
Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly
115 120 125
Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val
130 135 140
His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln
145 150 155 160
Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala
165 170 175
Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
180
<210> 124
<211> 552
<212> DNA
<213> 人工序列人工序列
<220>
<223> 4-1BBL 变异的核酸序列
<400> 124
agagagggcc ctgagctgtc tcctgatgat cctgctggac tgctggacct gagacagggc 60
atgtttgctc agctggtggc ccagaacgtg ctgctgattg atggccctct gtcctggtac 120
tctgatcctg gattggctgg cgtgtccctg actggcggcc tgtcttacaa agaggacacc 180
aaagaactgg tggtcgccaa ggccggcgtg tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg 240
agagtggtgg ctggcgaagg atctggatct gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg 300
agaagtgctg caggcgctgc tgcactggct ctgacagttg atctgcctcc tgcctcctcc 360
gaggccagaa actccgcctt tggcttccaa ggcagactgc tgcatctgtc tgccggacag 420
agactgggag tgcacctcca tacagaggcc agagctagac acgcttggca gttgacacag 480
ggcgctacag tgctgggcct gtttagagtg acacctgaga tcccagccgg cctgccatct 540
ccaagatctg aa 552
<210> 125
<211> 182
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-1BBL 变异的氨基酸序列
<400> 125
Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg
1 5 10 15
Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp
20 25 30
Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu
35 40 45
Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala
50 55 60
Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val
65 70 75 80
Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln
85 90 95
Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp
100 105 110
Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln
115 120 125
Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu
130 135 140
His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala
145 150 155 160
Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
165 170 175
Pro Ser Pro Arg Ser Glu
180
<210> 126
<211> 546
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-1BBL 变异的核酸序列
<400> 126
ggccctgagc tgtctcctga tgatcctgct ggactgctgg acctgagaca gggcatgttt 60
gctcagctgg tggcccagaa cgtgctgctg attgatggcc ctctgtcctg gtactctgat 120
cctggattgg ctggcgtgtc cctgactggc ggcctgtctt acaaagagga caccaaagaa 180
ctggtggtcg ccaaggccgg cgtgtactac gtgttctttc agctggaact gcggagagtg 240
gtggctggcg aaggatctgg atctgtgtct ctggccctgc atctgcagcc tctgagaagt 300
gctgcaggcg ctgctgcact ggctctgaca gttgatctgc ctcctgcctc ctccgaggcc 360
agaaactccg cctttggctt ccaaggcaga ctgctgcatc tgtctgccgg acagagactg 420
ggagtgcacc tccatacaga ggccagagct agacacgctt ggcagttgac acagggcgct 480
acagtgctgg gcctgtttag agtgacacct gagatcccag ccggcctgcc atctccaaga 540
tctgaa 546
<210> 127
<211> 183
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-1BBL 变异的氨基酸序列
<400> 127
Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp
1 5 10 15
Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu
20 25 30
Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser
35 40 45
Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys
50 55 60
Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val
65 70 75 80
Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly
85 90 95
Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly
100 105 110
Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu
115 120 125
Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser
130 135 140
Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg
145 150 155 160
His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg
165 170 175
Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala
180
<210> 128
<211> 551
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-1BBL 变异的核酸序列
<400> 128
gatctgccgc ttctcctaga ctgagagagg gccctgagct gtctcctgat gatcctgctg 60
gactgctgga cctgagacag ggcatgtttg ctcagctggt ggcccagaac gtgctgctga 120
ttgatggccc tctgtcctgg tactctgatc ctggattggc tggcgtgtcc ctgactggcg 180
gcctgtctta caaagaggac accaaagaac tggtggtcgc caaggccggc gtgtactacg 240
tgttctttca gctggaactg cggagagtgg tggctggcga aggatctgga tctgtgtctc 300
tggccctgca tctgcagcct ctgagaagtg ctgcaggcgc tgctgcactg gctctgacag 360
ttgatctgcc tcctgcctcc tccgaggcca gaaactccgc ctttggcttc caaggcagac 420
tgctgcatct gtctgccgga cagagactgg gagtgcacct ccatacagag gccagagcta 480
gacacgcttg gcagttgaca cagggcgcta cagtgctggg cctgtttaga gtgacacctg 540
agatcccagc c 551
<210> 129
<211> 176
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-1BBL 变异的氨基酸序列
<400> 129
Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp
1 5 10 15
Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu
20 25 30
Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val
35 40 45
Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val
50 55 60
Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg
65 70 75 80
Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His
85 90 95
Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr
100 105 110
Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly
115 120 125
Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val
130 135 140
His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln
145 150 155 160
Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala
165 170 175
<210> 130
<211> 528
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-1BBL 变异的核酸序列
<400> 130
agagagggcc ctgagctgtc tcctgatgat cctgctggac tgctggacct gagacagggc 60
atgtttgctc agctggtggc ccagaacgtg ctgctgattg atggccctct gtcctggtac 120
tctgatcctg gattggctgg cgtgtccctg actggcggcc tgtcttacaa agaggacacc 180
aaagaactgg tggtcgccaa ggccggcgtg tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg 240
agagtggtgg ctggcgaagg atctggatct gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg 300
agaagtgctg caggcgctgc tgcactggct ctgacagttg atctgcctcc tgcctcctcc 360
gaggccagaa actccgcctt tggcttccaa ggcagactgc tgcatctgtc tgccggacag 420
agactgggag tgcacctcca tacagaggcc agagctagac acgcttggca gttgacacag 480
ggcgctacag tgctgggcct gtttagagtg acacctgaga tcccagcc 528
<210> 131
<211> 601
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> sc3x4-1BBL -14-0 氨基酸序列
<400> 131
Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp
1 5 10 15
Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu
20 25 30
Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser
35 40 45
Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys
50 55 60
Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val
65 70 75 80
Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly
85 90 95
Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly
100 105 110
Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu
115 120 125
Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser
130 135 140
Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg
145 150 155 160
His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg
165 170 175
Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly
180 185 190
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ala
195 200 205
Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala
210 215 220
Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln
225 230 235 240
Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly
245 250 255
Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr
260 265 270
Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln
275 280 285
Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser
290 295 300
Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala
305 310 315 320
Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn
325 330 335
Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln
340 345 350
Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp
355 360 365
Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro
370 375 380
Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly
385 390 395 400
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg
405 410 415
Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu
420 425 430
Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu
435 440 445
Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly
450 455 460
Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu
465 470 475 480
Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu
485 490 495
Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu
500 505 510
His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu
515 520 525
Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe
530 535 540
Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly
545 550 555 560
Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr
565 570 575
Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro
580 585 590
Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
595 600
<210> 132
<211> 1803
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> sc3x4-1BBL -14-0 核酸序列
<400> 132
tctgccgcca gccctaggct gcgcgaggga cccgagctga gcccagacga tcccgccggc 60
ctgctggacc tgaggcaggg aatgttcgca cagctggtgg cccagaacgt gctgctgatc 120
gacggccctc tgtcctggta ctctgatcca ggcctggccg gcgtgtccct gacaggaggc 180
ctgtcttata aggaggatac caaggagctg gtggtggcaa aggcaggcgt gtactacgtg 240
ttcttccagc tggagctgag gagagtggtg gcaggagagg gcagcggctc cgtgtctctg 300
gccctgcacc tccagcctct gcggagcgcc gccggcgccg ccgccctggc cctgaccgtg 360
gatctgcctc cagccagctc cgaggccagg aatagcgcct tcggctttca gggccgcctg 420
ctgcacctgt ccgccggcca gcggctggga gtgcacctgc acacagaggc cagagcccgg 480
cacgcatggc agctgacaca gggagcaacc gtgctgggcc tgttccgcgt gacccctgag 540
atcccagccg gcctgccaag cccccggtcc gagggcggcg gcggctctgg cggaggaggc 600
agcggaggcg gcggctctgc cgccagcccc aggctgcgcg agggacccga gctgtcccca 660
gacgatcctg ccggcctgct ggacctgcgc cagggaatgt ttgcccagct ggtggctcaa 720
aacgtgctgt taatcgacgg ccctctgagc tggtactctg atcctggcct ggccggcgtg 780
agcctgaccg gcggcctgtc ctacaaagag gatactaaag agctggtggt cgccaaagcc 840
ggcgtgtact acgtgttctt ccaactggag ctgaggaggg tcgtcgccgg cgaaggcagc 900
ggctccgtgt ctctggccct gcacctccag ccgctgagga gcgccgccgg cgccgccgcc 960
ctggccctga cggtggacct gccacctgcc tctagcgagg caagaaattc tgccttcggc 1020
ttccagggca ggctgctgca cctgagcgcc ggccagcgcc tgggcgtcca cctgcatacc 1080
gaagccagag cccggcatgc ctggcagctg acccagggcg ccaccgtgct gggcctgttc 1140
agagtgaccc cagagatccc cgccggcctg cctagcccaa ggtccgaagg cggcggcggc 1200
tccggcggcg gaggctctgg aggagggggc tctgccgcca gcccaaggct gcgcgaggga 1260
cccgagctgt cgcctgacga tccagccggc ctgctggacc tgcgtcaggg catgttcgcc 1320
cagctggtgg ctcagaacgt gctgttaatc gacggcccac tgtcttggta ttctgatccc 1380
ggcctggccg gcgtgtctct gacaggaggc ctgagctaca aagaggatac aaaagagctg 1440
gtggtcgcta aagctggcgt gtactacgtg ttcttccaac tggagctgcg cagggtcgtc 1500
gccggcgagg gcagcggctc cgtgtctctg gccctgcacc tccagccatt acggagcgcc 1560
gccggcgccg ccgccctggc cctgactgtg gacctgccac cagcctcctc tgaggcacgg 1620
aacagcgcct tcggcttcca aggcagactg ctgcacctgt ctgccggcca gaggctgggc 1680
gtccacctgc acaccgaagc cagagcccgg cacgcctggc agctgactca gggcgctacc 1740
gtgctgggcc tgttccgcgt aaccccagag atccctgccg gcctgcccag ccctcggtcc 1800
gag 1803
<210> 133
<211> 321
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 变异的氨基酸序列
<400> 133
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Gly Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser
130 135 140
Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala
145 150 155 160
Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp
165 170 175
Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser
180 185 190
Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr
195 200 205
Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala
225 230 235 240
Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser
245 250 255
Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His
260 265 270
Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg
275 280 285
Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu
290 295 300
Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser
305 310 315 320
Glu
<210> 134
<211> 963
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 变异的核酸序列
<400> 134
gactctccag acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctgtcggttc agagttaccc agctgcctaa cggccgggac 240
ttccacatgt ctgttgtgcg ggccagacgg aacgactctg gcacatatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacctt ctccaagagg aagagagggc 420
cctgagctgt ctcctgatga tcctgctgga ctgctggacc tgagacaggg catgtttgct 480
cagctggtgg cccagaacgt gctgctgatt gatggccctc tgtcctggta ctctgatcct 540
ggattggctg gcgtgtccct gactggcggc ctgtcttaca aagaggacac caaagaactg 600
gtggtcgcca aggccggcgt gtactacgtg ttctttcagc tggaactgcg gagagtggtg 660
gctggcgaag gatctggatc tgtgtctctg gccctgcatc tgcagcctct gagaagtgct 720
gcaggcgctg ctgcactggc tctgacagtt gatctgcctc ctgcctcctc cgaggccaga 780
aactccgcct ttggcttcca aggcagactg ctgcatctgt ctgccggaca gagactggga 840
gtgcacctcc atacagaggc cagagctaga cacgcttggc agttgacaca gggcgctaca 900
gtgctgggcc tgtttagagt gacacctgag atcccagccg gcctgccatc tccaagatct 960
gaa 963
<210> 135
<211> 319
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 变异的氨基酸序列
<400> 135
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Gly Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp
130 135 140
Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu
145 150 155 160
Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser
165 170 175
Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys
180 185 190
Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val
195 200 205
Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly
210 215 220
Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly
225 230 235 240
Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu
245 250 255
Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser
260 265 270
Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg
275 280 285
His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg
290 295 300
Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
305 310 315
<210> 136
<211> 957
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 变异的核酸序列
<400> 136
gactctccag acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctgtcggttc agagttaccc agctgcctaa cggccgggac 240
ttccacatgt ctgttgtgcg ggccagacgg aacgactctg gcacatatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacctt ctccaagagg aggccctgag 420
ctgtctcctg atgatcctgc tggactgctg gacctgagac agggcatgtt tgctcagctg 480
gtggcccaga acgtgctgct gattgatggc cctctgtcct ggtactctga tcctggattg 540
gctggcgtgt ccctgactgg cggcctgtct tacaaagagg acaccaaaga actggtggtc 600
gccaaggccg gcgtgtacta cgtgttcttt cagctggaac tgcggagagt ggtggctggc 660
gaaggatctg gatctgtgtc tctggccctg catctgcagc ctctgagaag tgctgcaggc 720
gctgctgcac tggctctgac agttgatctg cctcctgcct cctccgaggc cagaaactcc 780
gcctttggct tccaaggcag actgctgcat ctgtctgccg gacagagact gggagtgcac 840
ctccatacag aggccagagc tagacacgct tggcagttga cacagggcgc tacagtgctg 900
ggcctgttta gagtgacacc tgagatccca gccggcctgc catctccaag atctgaa 957
<210> 137
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 变异的氨基酸序列
<400> 137
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Gln Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser
145 150 155 160
Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala
165 170 175
Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp
180 185 190
Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser
195 200 205
Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr
210 215 220
Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly
225 230 235 240
Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala
245 250 255
Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser
260 265 270
Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His
275 280 285
Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg
290 295 300
Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu
305 310 315 320
Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala
325
<210> 138
<211> 987
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 变异的核酸序列
<400> 138
cccggctggt ttctggactc tccagacaga ccttggaacc ctccaacctt ctctcccgct 60
ctgctggtgg ttaccgaggg cgacaatgcc accttcacct gttccttcag caacacctcc 120
gagtccttcg tgctgaactg gtacagaatg tcccctagca accagaccga caagctggcc 180
gcctttcctg aggacagatc tcagccaggc caggactgtc ggttcagagt tacccagctg 240
cctaacggcc gggacttcca catgtctgtt gtgcgggcca gacggaacga ctctggcaca 300
tatctgtgcg gcgccatctc tctggctccc aaggctcaga tcaaagagtc tctgcgggcc 360
gagctgagag tgacagaaag acgagctgag gtgcccaccg ctcatccctc accttctcca 420
agacctgctg gccagggatc tgccgcttct cctagactga gagagggccc tgagctgtct 480
cctgatgatc ctgctggact gctggacctg agacagggca tgtttgctca gctggtggcc 540
cagaacgtgc tgctgattga tggccctctg tcctggtact ctgatcctgg attggctggc 600
gtgtccctga ctggcggcct gtcttacaaa gaggacacca aagaactggt ggtcgccaag 660
gccggcgtgt actacgtgtt ctttcagctg gaactgcgga gagtggtggc tggcgaagga 720
tctggatctg tgtctctggc cctgcatctg cagcctctga gaagtgctgc aggcgctgct 780
gcactggctc tgacagttga tctgcctcct gcctcctccg aggccagaaa ctccgccttt 840
ggcttccaag gcagactgct gcatctgtct gccggacaga gactgggagt gcacctccat 900
acagaggcca gagctagaca cgcttggcag ttgacacagg gcgctacagt gctgggcctg 960
tttagagtga cacctgagat cccagcc 987
<210> 139
<211> 320
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 变异的氨基酸序列
<400> 139
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp
145 150 155 160
Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu
165 170 175
Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val
180 185 190
Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val
195 200 205
Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg
210 215 220
Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His
225 230 235 240
Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr
245 250 255
Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly
260 265 270
Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val
275 280 285
His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln
290 295 300
Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala
305 310 315 320
<210> 140
<211> 960
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 变异的核酸序列
<400> 140
cccggctggt ttctggactc tccagacaga ccttggaacc ctccaacctt ctctcccgct 60
ctgctggtgg ttaccgaggg cgacaatgcc accttcacct gttccttcag caacacctcc 120
gagtccttcg tgctgaactg gtacagaatg tcccctagca accagaccga caagctggcc 180
gcctttcctg aggacagatc tcagccaggc caggactgtc ggttcagagt tacccagctg 240
cctaacggcc gggacttcca catgtctgtt gtgcgggcca gacggaacga ctctggcaca 300
tatctgtgcg gcgccatctc tctggctccc aaggctcaga tcaaagagtc tctgcgggcc 360
gagctgagag tgacagaaag acgagctgag gtgcccaccg ctcatccctc accttctcca 420
agacctgctg gaagagaggg ccctgagctg tctcctgatg atcctgctgg actgctggac 480
ctgagacagg gcatgtttgc tcagctggtg gcccagaacg tgctgctgat tgatggccct 540
ctgtcctggt actctgatcc tggattggct ggcgtgtccc tgactggcgg cctgtcttac 600
aaagaggaca ccaaagaact ggtggtcgcc aaggccggcg tgtactacgt gttctttcag 660
ctggaactgc ggagagtggt ggctggcgaa ggatctggat ctgtgtctct ggccctgcat 720
ctgcagcctc tgagaagtgc tgcaggcgct gctgcactgg ctctgacagt tgatctgcct 780
cctgcctcct ccgaggccag aaactccgcc tttggcttcc aaggcagact gctgcatctg 840
tctgccggac agagactggg agtgcacctc catacagagg ccagagctag acacgcttgg 900
cagttgacac agggcgctac agtgctgggc ctgtttagag tgacacctga gatcccagcc 960
<210> 141
<211> 346
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 变异的氨基酸序列
<400> 141
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Gly Ala Cys Pro
130 135 140
Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser Pro
145 150 155 160
Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu
165 170 175
Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val
180 185 190
Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala
195 200 205
Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu
210 215 220
Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu
225 230 235 240
Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala
245 250 255
Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala
260 265 270
Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala
275 280 285
Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu
290 295 300
Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu
305 310 315 320
Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile
325 330 335
Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
340 345
<210> 142
<211> 1038
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 变异的核酸序列
<400> 142
gactctccag acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctgtcggttc agagttaccc agctgcctaa cggccgggac 240
ttccacatgt ctgttgtgcg ggccagacgg aacgactctg gcacatatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacctt ctccaagacc tgctggccag 420
ggagcctgtc cttgggctgt gtctggcgct agagcatctc ctggctctgc tgcctctcct 480
agactgagag agggacctga gctgtctcct gatgatcctg ctggcctgct ggatctgaga 540
cagggcatgt ttgctcagct ggtggcccag aacgtgctgc tgattgatgg ccctctgtcc 600
tggtactctg atcctggatt ggctggcgtg tccctgactg gcggcctgtc ttacaaagag 660
gacaccaaag aactggtggt ggccaaggcc ggcgtgtact acgtgttctt tcagctggaa 720
ctgcggagag tggtggccgg cgaaggatct ggatctgtgt ctctggcact gcatctgcag 780
cccctgagat ctgctgcagg cgctgctgct ctggctctga cagttgatct gcctcctgcc 840
tcctccgagg ccagaaactc cgcctttggc ttccaaggca gactgctgca tctgtctgcc 900
ggccagagac tgggagtcca tctgcataca gaggctagag ccaggcacgc ctggcagttg 960
acacaaggtg ctacagtgct gggcctgttc agagtgaccc cagagattcc agccggcctg 1020
ccttctccaa gatccgag 1038
<210> 143
<211> 350
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 变异的氨基酸序列
<400> 143
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Gln Phe Gln Thr Leu Val Gly Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser
145 150 155 160
Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp
165 170 175
Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val
180 185 190
Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp
195 200 205
Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu
210 215 220
Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe
225 230 235 240
Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser
245 250 255
Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala
260 265 270
Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala
275 280 285
Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala
290 295 300
Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His
305 310 315 320
Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val
325 330 335
Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
340 345 350
<210> 144
<211> 1092
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 变异的核酸序列
<400> 144
cctggctggt ttctggacag ccccgacaga ccttggaacc ctcctacatt cagccccgct 60
ctgctggtgg ttaccgaggg cgataatgcc accttcacct gtagcttcag caacaccagc 120
gagagcttcg tgctgaactg gtacagaatg agccccagca accagaccga caagctggcc 180
gcctttcctg aggatagatc tcagcccggc caggactgtc ggttcagagt tacacagctg 240
cccaacggcc gggacttcca catgtctgtc gtccgggcca gaagaaacga cagcggcaca 300
tatctgtgcg gcgccatttc tctggcccct aaggctcaga tcaaagagag cctgagagcc 360
gagctgagag tgacagaaag acgggccgaa gtgcccacag ctcacccttc accttctcca 420
agacctgccg gccagtttca gacactcgtg ggagcttgtc cttgggccgt ttctggcgct 480
agagcctctc ctggatctgg cgctagagcc tctcctggat ctgccgcttc tcccagactg 540
agagagggac ctgagctgag ccctgatgat cctgctggac tgctggatct gagacagggc 600
atgtttgccc agctggtggc ccagaatgtg ctgctgattg atggccctct gtcctggtac 660
agcgatcctg gacttgctgg cgttagcctg actggcggcc tgagctacaa agaggacacc 720
aaagaactgg tggtggccaa ggccggcgtg tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg 780
agagtggtgg ccggcgaagg atctggatct gtgtctctgg ctctgcatct gcagcctctg 840
agatctgctg ctggtgctgc tgctctggcc ctgacagttg atctgcctcc tgcctctagc 900
gaggccagaa actccgcctt tggcttccaa ggcagactgc tgcacctgag cgctggacag 960
agactgggag tccatctgca cacagaagcc agagctagac acgcctggca gctgacacaa 1020
ggcgctacag tgctgggcct gttcagagtg acccctgaga ttccagccgg cctgccatct 1080
cctagatctg ag 1092
<210> 145
<211> 365
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 变异的氨基酸序列
<400> 145
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Gln Phe Gln Thr Leu Val Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
145 150 155 160
Ala Cys Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala
165 170 175
Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro
180 185 190
Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala
195 200 205
Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro
210 215 220
Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp
225 230 235 240
Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe
245 250 255
Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val
260 265 270
Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala
275 280 285
Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg
290 295 300
Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly
305 310 315 320
Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala
325 330 335
Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr
340 345 350
Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
355 360 365
<210> 146
<211> 1095
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 变异的核酸序列
<400> 146
cctggctggt ttctggacag ccccgacaga ccttggaacc ctcctacatt cagccccgct 60
ctgctggtgg ttaccgaggg cgataatgcc accttcacct gtagcttcag caacaccagc 120
gagagcttcg tgctgaactg gtacagaatg agccccagca accagaccga caagctggcc 180
gcctttcctg aggatagatc tcagcccggc caggactgtc ggttcagagt tacacagctg 240
cccaacggcc gggacttcca catgtctgtc gtccgggcca gaagaaacga cagcggcaca 300
tatctgtgcg gcgccatttc tctggcccct aaggctcaga tcaaagagag cctgagagcc 360
gagctgagag tgacagaaag acgggccgaa gtgcccacag ctcacccttc accttctcca 420
agacctgccg gccagtttca gacactcgtg ggaggaggag gatccggagg aggaggatcc 480
gcctgtcctt gggctgtgtc tggcgctaga gcatctcctg gctctgctgc ctctcctaga 540
ctgagagagg gacctgagct gtctcctgat gatcctgctg gcctgctgga tctgagacag 600
ggcatgtttg ctcagctggt ggcccagaac gtgctgctga ttgatggccc tctgtcctgg 660
tactctgatc ctggattggc tggcgtgtcc ctgactggcg gcctgtctta caaagaggac 720
accaaagaac tggtggtggc caaggccggc gtgtactacg tgttctttca gctggaactg 780
cggagagtgg tggccggcga aggatctgga tctgtgtctc tggcactgca tctgcagccc 840
ctgagatctg ctgcaggcgc tgctgctctg gctctgacag ttgatctgcc tcctgcctcc 900
tccgaggcca gaaactccgc ctttggcttc caaggcagac tgctgcatct gtctgccggc 960
cagagactgg gagtccatct gcatacagag gctagagcca ggcacgcctg gcagttgaca 1020
caaggtgcta cagtgctggg cctgttcaga gtgaccccag agattccagc cggcctgcct 1080
tctccaagat ccgag 1095
<210> 147
<211> 750
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 变异的氨基酸序列
<400> 147
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro
145 150 155 160
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
165 170 175
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
180 185 190
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
195 200 205
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
210 215 220
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
225 230 235 240
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
245 250 255
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
260 265 270
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
275 280 285
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
290 295 300
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
305 310 315 320
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser
325 330 335
Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
340 345 350
Gly Gly Ser Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser
355 360 365
Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala
370 375 380
Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp
385 390 395 400
Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser
405 410 415
Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr
420 425 430
Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly
435 440 445
Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala
450 455 460
Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser
465 470 475 480
Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His
485 490 495
Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg
500 505 510
Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu
515 520 525
Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser
530 535 540
Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
545 550 555 560
Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp
565 570 575
Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val
580 585 590
Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp
595 600 605
Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu
610 615 620
Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe
625 630 635 640
Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser
645 650 655
Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala
660 665 670
Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala
675 680 685
Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala
690 695 700
Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His
705 710 715 720
Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val
725 730 735
Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
740 745 750
<210> 148
<211> 2250
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105 变异的核酸序列
<400> 148
gactctccag acagaccttg gaaccctcca accttctctc ccgctctgct ggtggttacc 60
gagggcgaca atgccacctt cacctgttcc ttcagcaaca cctccgagtc cttcgtgctg 120
aactggtaca gaatgtcccc tagcaaccag accgacaagc tggccgcctt tcctgaggac 180
agatctcagc caggccagga ctgtcggttc agagttaccc agctgcctaa cggccgggac 240
ttccacatgt ctgttgtgcg ggccagacgg aacgactctg gcacatatct gtgcggcgcc 300
atctctctgg ctcccaaggc tcagatcaaa gagtctctgc gggccgagct gagagtgaca 360
gaaagacgag ctgaggtgcc caccgctcat ccctcacctt ctccaagacc tgctggccag 420
ggcggcggcg gctccggagg aggaggatct gccgccagcc ctaggctgcg cgagggaccc 480
gagctgagcc cagacgatcc cgccggcctg ctggacctga ggcagggaat gttcgcacag 540
ctggtggccc agaacgtgct gctgatcgac ggccctctgt cctggtactc tgatccaggc 600
ctggccggcg tgtccctgac aggaggcctg tcttataagg aggataccaa ggagctggtg 660
gtggcaaagg caggcgtgta ctacgtgttc ttccagctgg agctgaggag agtggtggca 720
ggagagggca gcggctccgt gtctctggcc ctgcacctcc agcctctgcg gagcgccgcc 780
ggcgccgccg ccctggccct gaccgtggat ctgcctccag ccagctccga ggccaggaat 840
agcgccttcg gctttcaggg ccgcctgctg cacctgtccg ccggccagcg gctgggagtg 900
cacctgcaca cagaggccag agcccggcac gcatggcagc tgacacaggg agcaaccgtg 960
ctgggcctgt tccgcgtgac ccctgagatc ccagccggcc tgccaagccc ccggtccgag 1020
ggcggcggcg gctctggcgg aggaggcagc ggaggcggcg gctctgccgc cagccccagg 1080
ctgcgcgagg gacccgagct gtccccagac gatcctgccg gcctgctgga cctgcgccag 1140
ggaatgtttg cccagctggt ggctcaaaac gtgctgttaa tcgacggccc tctgagctgg 1200
tactctgatc ctggcctggc cggcgtgagc ctgaccggcg gcctgtccta caaagaggat 1260
actaaagagc tggtggtcgc caaagccggc gtgtactacg tgttcttcca actggagctg 1320
aggagggtcg tcgccggcga aggcagcggc tccgtgtctc tggccctgca cctccagccg 1380
ctgaggagcg ccgccggcgc cgccgccctg gccctgacgg tggacctgcc acctgcctct 1440
agcgaggcaa gaaattctgc cttcggcttc cagggcaggc tgctgcacct gagcgccggc 1500
cagcgcctgg gcgtccacct gcataccgaa gccagagccc ggcatgcctg gcagctgacc 1560
cagggcgcca ccgtgctggg cctgttcaga gtgaccccag agatccccgc cggcctgcct 1620
agcccaaggt ccgaaggcgg cggcggctcc ggcggcggag gctctggagg agggggctct 1680
gccgccagcc caaggctgcg cgagggaccc gagctgtcgc ctgacgatcc agccggcctg 1740
ctggacctgc gtcagggcat gttcgcccag ctggtggctc agaacgtgct gttaatcgac 1800
ggcccactgt cttggtattc tgatcccggc ctggccggcg tgtctctgac aggaggcctg 1860
agctacaaag aggatacaaa agagctggtg gtcgctaaag ctggcgtgta ctacgtgttc 1920
ttccaactgg agctgcgcag ggtcgtcgcc ggcgagggca gcggctccgt gtctctggcc 1980
ctgcacctcc agccattacg gagcgccgcc ggcgccgccg ccctggccct gactgtggac 2040
ctgccaccag cctcctctga ggcacggaac agcgccttcg gcttccaagg cagactgctg 2100
cacctgtctg ccggccagag gctgggcgtc cacctgcaca ccgaagccag agcccggcac 2160
gcctggcagc tgactcaggg cgctaccgtg ctgggcctgt tccgcgtaac cccagagatc 2220
cctgccggcc tgcccagccc tcggtccgag 2250
<210> 149
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子的氨基酸序列
<220>
<221> 重复
<222> (1)..(5)
<223> 可重复 1-4次
<400> 149
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 150
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220> 人工序列
<223> 连接子的氨基酸序列
<400> 150
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 151
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子的氨基酸序列
<400> 151
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 152
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子的氨基酸序列
<220>
<221> 重复
<222> (1)..(5)
<223> 可重复 1-3次
<400> 152
Glu Ala Ala Ala Lys
1 5
<210> 153
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子的氨基酸序列
<220>
<221> 重复
<222> (2)..(6)
<223> EAAAK
<220>
<221> 重复
<222> (2)..(6)
<223> 重复 2-5次
<400> 153
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Ala
1 5
<210> 154
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子的氨基酸序列
<400> 154
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala
1 5 10
<210> 155
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子的氨基酸序列
<400> 155
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Ala Lys Ala Leu Glu Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala
20 25 30
Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala
35 40 45
<210> 156
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子的氨基酸序列
<400> 156
Pro Ala Pro Ala Pro
1 5
<210> 157
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子的氨基酸序列
<400> 157
Lys Glu Ser Gly Ser Val Ser Ser Glu Gln Leu Ala Gln Phe Arg Ser
1 5 10 15
Leu Asp
<210> 158
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子的氨基酸序列
<400> 158
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
1 5 10
<210> 159
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子的氨基酸序列
<400> 159
Gly Ser Ala Gly Ser Ala Ala Gly Ser Gly Glu Phe
1 5 10
<210> 160
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG4 Fc 连接子
<400> 160
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 161
<400> 161
000
<210> 162
<400> 162
000
<210> 163
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG4 Fc 连接子
<400> 163
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 164
<400> 164
000
<210> 165
<400> 165
000
<210> 166
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子的氨基酸序列
<400> 166
Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
1 5
<210> 167
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子的氨基酸序列
<400> 167
Ala Cys Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala
1 5 10 15
Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu
20
<210> 168
<211> 331
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105_V32 (4-1BBL-PD1 FUSION) 氨基酸序列
<400> 168
Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp
1 5 10 15
Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val
20 25 30
Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp
35 40 45
Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu
50 55 60
Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe
65 70 75 80
Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser
85 90 95
Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala
100 105 110
Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala
115 120 125
Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala
130 135 140
Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His
145 150 155 160
Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val
165 170 175
Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Asp
180 185 190
Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu
195 200 205
Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn
210 215 220
Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn
225 230 235 240
Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly
245 250 255
Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe
260 265 270
His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu
275 280 285
Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu
290 295 300
Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala
305 310 315 320
His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln
325 330
<210> 169
<211> 996
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DSP105_V32 (4-1BBL-PD1 FUSION) 核酸序列
<400> 169
tctgccgctt ctcccagact gagagaagga cctgagctga gccctgatga tcctgctgga 60
ctgctggatc tgcggcaggg catgtttgct cagttggtgg cccagaacgt gctgctgatc 120
gatggccctc tgtcctggta ctctgatcca ggattggctg gcgtgtccct gactggcggc 180
ctgtcttaca aagaggacac caaagaactg gtggtggcca aggccggcgt gtactacgtg 240
ttctttcagc tggaactgcg gagagtggtg gctggcgaag gatctggatc tgtgtctctg 300
gccctgcatc tgcagcctct gagaagtgct gcaggcgctg ctgcactggc tctgacagtt 360
gatctgcctc ctgcctcctc cgaggccaga aactccgcct ttggcttcca aggcagactg 420
ctgcacctgt ccgctggaca gagactggga gtccatctgc acacagaggc cagagctaga 480
cacgcttggc agttgacaca gggcgctaca gtgctgggcc tgtttagagt gacccctgag 540
attccagccg gcctgccatc tcctagatct gagggcgact cccctgacag accttggaac 600
cctccaacct tctctcccgc tctgctggtg gttaccgagg gcgacaatgc caccttcacc 660
tgttccttca gcaacacctc cgagtccttc gtgctgaact ggtacagaat gtcccctagc 720
aaccagaccg acaagctggc cgcctttcct gaggacagat ctcagccagg ccaggactgc 780
cggttcagag ttacccagct gcctaacggc cgggacttcc acatgtctgt tgtgcgggcc 840
agacggaacg actctggcac atatctgtgc ggcgccatct ctctggctcc caaggctcag 900
atcaaagagt ctctgcgggc cgagctgaga gtgacagaaa gacgagctga ggtgcccacc 960
gctcatccct caccttctcc aagacctgcc ggccag 996

Claims (50)

1.一种PD1-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：所述PD1-4-1BBL融合蛋白包括：一PD1的氨基酸序列及一4-1BBL氨基酸序列，其中所述PD1的氨基酸序列：
(a)长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89、93及115所组成的群组，且不包括对应于SEQ IDNO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；或长度为138至145个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18、117及119所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段F146至V150；及/或
(b)在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；及/或
其中所述4-1BBL氨基酸序列：
(aa)长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组；长度为170至197个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：127及129所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段G198至E205；长度为170至182个氨基酸且与SEQID NO：125具有至少80％的同一性，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段A1至E23；或长度为184个氨基酸且与SEQ ID NO：123具有至少80％的同一性；及/或
(bb)包括4-1BBL氨基酸序列的三个重复；
且其中所述融合蛋白具有至少以下的能力之一：
(i)结合PDL1及4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
2.一种PD1-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：所述PD1-4-1BBL融合蛋白包括：一PD1的氨基酸序列及一4-1BBL氨基酸序列，其中所述PD1的氨基酸序列：
(a)长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89及93所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者，及/或
(b)在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；及/或
其中所述4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组；且其中所述融合蛋白具有至少以下的能力之一：
(i)结合PDL1及4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
3.一种PD1-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：所述PD1-4-1BBL融合蛋白包括：一PD1的氨基酸序列及一4-1BBL氨基酸序列，其中所述PD1的氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；及/或其中所述4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组，且其中所述融合蛋白具有至少以下的能力之一：
(i)结合PDL1及4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
4.一种PD1-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：在所述PD1与所述4-1BBL之间包括一(GGGGS)n连接子，n＝1至4，其中所述融合蛋白具有至少以下的能力之一：
(i)结合PDL1及4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
5.一种经分离的多肽，其特征在于：所述经分离的多肽包括：一PD1的氨基酸序列，其中所述PD1的氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89、93及115所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；或长度为138至145个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18、117及119所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段F146至V150；及可选地在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；且
其中所述多肽能够结合PDL1。
6.一种经分离的多肽，其特征在于：所述经分离的多肽包括：一PD1的氨基酸序列，其中所述PD1的氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21、85、89及93所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；及可选地在对应于SEQ IDNO：2的氨基酸73的位置处包括一由C修饰至S的氨基酸修饰；且其中所述多肽能够结合PDL1。
7.一种经分离的多肽，其特征在于：所述经分离的多肽包括：一PD1的氨基酸序列，其中所述PD1的氨基酸序列的长度为123至148个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：18至21所组成的群组，且不包括对应于SEQ IDNO：2的氨基酸片段P1至L5及F146至V150中的任一者；且其中所述多肽能够结合PDL1。
8.一种经分离的多肽，其特征在于：所述经分离的多肽包括：一4-1BBL氨基酸序列，其中所述4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组；长度为170至197个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：127及129所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段G198至E205；或长度为170至182个氨基酸且与SEQ ID NO：125具有至少80％的同一性，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段A1至E23；及可选地包括所述4-1BBL氨基酸序列的三个重复；且其中所述多肽具有至少以下的能力之一：
(i)结合4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
9.一种经分离的多肽，其特征在于：所述经分离的多肽包括：一4-1BBL氨基酸序列，其中所述4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22至25所组成的群组；且其中所述多肽具有至少以下的能力之一：
(i)结合4-1BB；；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。
10.如权利要求1至4中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或如权利要求5至7中任一项所述的经分离的多肽，其特征在于：所述PD1的氨基酸序列的长度不超过140个氨基酸。
11.如权利要求1至7及10中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述PD1的氨基酸序列的长度至少为126个氨基酸。
12.如权利要求1、5、10及11中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述PD1的氨基酸序列包括所述SEQ ID NO：18、19、20、21、85、89、93或115。
13.如权利要求1、2、4至6、10及11中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述PD1的氨基酸序列包括所述SEQ ID NO：75、83、87、91或95。
14.如权利要求1、5、10及11中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述PD1的氨基酸序列是由所述SEQ ID NO：18、19、20、21、85、89、93或115所组成。
15.如权利要求1、2、4至6、10及11中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述PD1的氨基酸序列是由所述SEQ ID NO：75、79、81、83、87、91或95所组成。
16.如权利要求1、2、4及8至15中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述4-1BBL氨基酸序列不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸残基A1至V6或A1至G14中的任一者。
17.如权利要求1、2、4及8至16中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述4-1BBL氨基酸序列包括所述SEQ ID NO：22、23、24或25。
18.如权利要求1至4及8至16中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述4-1BBL氨基酸序列是由所述SEQ ID NO：22、23、24或25所组成。
19.如权利要求1至3及10至18中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：在所述PD1与所述4-1BBL之间，所述PD1-4-1BBL融合蛋白包括一连接子。
20.如权利要求1、8及10至18中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：在所述4-1BBL氨基酸序列的各个所述三个重复之间，所述PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽包括一连接子。
21.如权利要求19至20中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述连接子是一单一氨基酸连接子。
22.如权利要求21所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述连接子是甘氨酸。
23.如权利要求19所述的PD1-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：所述连接子是一抗体的一Fc结构域或其片段。
24.如权利要求19至20中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述连接子是一(GGGGS)n连接子，n＝1至4。
25.如权利要求1至4及10至24中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：在相同的生产条件下，所述融合蛋白的产量相较于SEQ ID NO：5的产量至少高1.5倍，所述生产条件包括在哺乳动物细胞中表达，以及在32至37℃、5至10％二氧化碳下培养5至13天。
26.如权利要求1至4及10至24中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：在相同的生产条件下，所述融合蛋白的聚集体的量相较于SEQ ID NO：5的聚集体的量低至少20％，所述聚集体的分子量为至少300千道尔顿，且所述生产条件包括在哺乳动物细胞中表达，以及在32至37℃、5至10％二氧化碳下培养5至13天。
27.如权利要求1、19、25及26中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107、111、113、133、135、137、139、141、143及147所组成的群组。
28.如权利要求1至8及10至27中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述至少80％的同一性包括至少90％的同一性。
29.如权利要求1至8及10至27中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述至少80％的同一性包括至少95％的同一性。
30.如权利要求1、10至19、25至29中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是选自由SEQID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107、111、113、133、135、137、139、141、143及147所组成的群组。
31.如权利要求1、10至19、25至29中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：所述PD1-4-1BBL融合蛋白的氨基酸序列是由一氨基酸序列所组成，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：12、14、16、44至56、97、101、103、105、107、111、113、133、135、137、139、141、143及147所组成的群组。
32.一种多核苷酸，其特征在于：所述多核苷酸编码如权利要求1至31中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽。
33.一种核酸构建体，其特征在于：所述核酸构建体包括如权利要求32所述的多核苷酸；以及一调控组件，所述调控组件在一宿主细胞中是用于指导所述多核苷酸的表达。
34.一种宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞包括：如权利要求1至31中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或多肽；或如权利要求32至33中任一项所述的多核苷酸或核酸构建体。
35.一种生产一PD1-4-1BBL融合蛋白或一多肽的方法，其特征在于：所述方法包括：在一宿主细胞中表达如权利要求32至33中任一项所述的多核苷酸或核酸构建体。
36.如权利要求35所述的方法，其特征在于：所述方法包括：分离所述融合蛋白或所述多肽。
37.一种通过得益于激活免疫细胞而治疗一疾病的方法，其特征在于：所述方法包括：将如权利要求1至31中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽、如权利要求32至33中任一项所述的多核苷酸或核酸构建体，或如权利要求34所述的宿主细胞，投予至有需要的一受试者。
38.如权利要求37所述的方法，其特征在于：所述方法进一步包括：将一治疗剂投予至所述受试者，以治疗所述疾病。
39.一种将如权利要求1至31中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽、如权利要求32至33中任一项所述的多核苷酸或核酸构建体，或如权利要求34所述的宿主细胞用于通过得益于激活免疫细胞而治疗一疾病之用途。
40.如权利要求39所述的用途的成分，其特征在于：所述用途的成分进一步包括用于治疗所述疾病的一治疗剂。
41.一种制品，其特征在于：所述制品包括：
一包装材料，所述包装材料是包装用于治疗一疾病的一治疗剂，其是得益于激活免疫细胞；以及
如权利要求1至31中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，或如权利要求32至33中任一项所述的多核苷酸或核酸构建体，或如权利要求34所述的宿主细胞。
42.如权利要求37至41中任一项所述的方法、用途的成分或制品，其特征在于：所述疾病的细胞表达PDL1。
43.如权利要求37至42中任一项所述的方法、用途的成分或制品，其特征在于：所述疾病包括一过度增生性疾病。
44.如权利要求43所述的方法、用途的成分或制品，其特征在于：所述过度增生性疾病包括癌症。
45.如权利要求44所述的方法、用途的成分或制品，其特征在于：所述癌症是选自由淋巴瘤、白血病及恶性肿瘤所组成的群组。
46.如权利要求37至42中任一项所述的方法、用途的成分或制品，其特征在于：所述疾病包括：一与免疫抑制或经药物诱导的免疫抑制有关的疾病，或一感染。
47.一种激活免疫细胞的方法，其特征在于：所述方法包括：在体外激活免疫细胞，所述免疫细胞存在有：如权利要求1至31中任一项所述的PD1-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽、如权利要求32至33中任一项所述的多核苷酸或核酸构建体，或如权利要求34所述的宿主细胞。
48.如权利要求47所述的方法，其特征在于：所述激活是在表达PDL1的细胞的存在下或在外源性PDL1的存在下进行的。
49.如权利要求47至48中任一项所述的方法，其特征在于：所述激活是在一抗癌剂的存在下进行的。
50.如权利要求38、40至46及49中任一项所述的方法、用途的成分或制品，其特征在于：用于治疗所述疾病的所述治疗剂或所述抗癌剂包括一抗体。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114369581A (zh) * 2021-12-30 2022-04-19 杭州医学院 一种具有抗肿瘤免疫功能重组腺病毒、制备方法及应用
CN114940710A (zh) * 2022-06-07 2022-08-26 恺佧生物科技(上海)有限公司 一种提高重组人psma蛋白表达的方法

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3565579B9 (en) 2017-01-05 2023-10-04 KAHR Medical Ltd. A pd1-41bbl fusion protein and methods of use thereof
AU2018205890B2 (en) 2017-01-05 2021-09-02 Kahr Medical Ltd. A sirpalpha-41BBL fusion protein and methods of use thereof
US11299530B2 (en) 2017-01-05 2022-04-12 Kahr Medical Ltd. SIRP alpha-CD70 fusion protein and methods of use thereof
WO2018127916A1 (en) 2017-01-05 2018-07-12 Kahr Medical Ltd. A pd1-cd70 fusion protein and methods of use thereof
KR102171766B1 (ko) * 2018-02-02 2020-10-29 주식회사 뉴라클제네틱스 Pd-l1 결합력이 증대된 pd-1 변이체
US20220267409A1 (en) * 2019-07-11 2022-08-25 Kahr Medical Ltd. Heterodimers and methods of use thereof
WO2021137231A1 (en) * 2019-12-31 2021-07-08 Kahr Medical Ltd. Methods of culturing t cells with a 4-1bbl fusion polypeptide and uses of same
WO2021137230A1 (en) * 2019-12-31 2021-07-08 Kahr Medical Ltd. Methods of culturing t cells and uses of same
KR20220061644A (ko) * 2020-11-06 2022-05-13 주식회사 제넨바이오 Pd-l1 및 il-10의 융합단백질을 유효성분으로 하는 이식거부반응 치료용 약학적 조성물
WO2024088404A1 (en) * 2022-10-28 2024-05-02 Fbd Biologics Limited Engineered 4-1bbl variants and methods of use thereof

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5674704A (en) * 1993-05-07 1997-10-07 Immunex Corporation Cytokine designated 4-IBB ligand
CN1880446A (zh) * 2005-06-16 2006-12-20 VIRxSYS公司 抗体复合物
US20160039903A1 (en) * 2014-08-08 2016-02-11 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University High affinity pd-1 agents and methods of use
WO2017059168A1 (en) * 2015-10-01 2017-04-06 Heat Biologics, Inc. Compositions and methods for adjoining type i and type ii extracellular domains as heterologous chimeric proteins
WO2017162797A1 (en) * 2016-03-23 2017-09-28 Helmholtz Zentrum München - Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) Fusion proteins of pd-1 and 4-1bb
AR105520A1 (es) * 2015-07-30 2017-10-11 Macrogenics Inc Moléculas de unión a pd-1 y métodos de uso de las mismas

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL300733A (en) * 2010-03-05 2023-04-01 Univ Johns Hopkins Compositions and methods for antibodies and fusion proteins targeting immune modulation
MX2017006250A (es) * 2014-11-14 2017-11-17 Hoffmann La Roche Moleculas de union a antigeno que comprenden un trimero de ligando de la familia de tnf.
EP3565579B9 (en) * 2017-01-05 2023-10-04 KAHR Medical Ltd. A pd1-41bbl fusion protein and methods of use thereof

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5674704A (en) * 1993-05-07 1997-10-07 Immunex Corporation Cytokine designated 4-IBB ligand
CN1880446A (zh) * 2005-06-16 2006-12-20 VIRxSYS公司 抗体复合物
US20160039903A1 (en) * 2014-08-08 2016-02-11 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University High affinity pd-1 agents and methods of use
CA2994927A1 (en) * 2014-08-08 2016-02-11 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University High affinity pd-1 agents and methods of use
CN107108707A (zh) * 2014-08-08 2017-08-29 小利兰斯坦福大学理事会 高亲和力pd‑1药剂以及使用方法
AR105520A1 (es) * 2015-07-30 2017-10-11 Macrogenics Inc Moléculas de unión a pd-1 y métodos de uso de las mismas
WO2017059168A1 (en) * 2015-10-01 2017-04-06 Heat Biologics, Inc. Compositions and methods for adjoining type i and type ii extracellular domains as heterologous chimeric proteins
WO2017162797A1 (en) * 2016-03-23 2017-09-28 Helmholtz Zentrum München - Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) Fusion proteins of pd-1 and 4-1bb

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
耿婷;张桂梅;黄波;肖晗;冯作化;: "采用sPD-1协同4-1 BBL进行肿瘤免疫基因治疗的研究", 医学分子生物学杂志, no. 03, 15 May 2007 (2007-05-15), pages 25 - 30 *
邱惠;张慧;冯作化;耿辉;张桂梅;: "可溶性PD-1和4-1BB配体在体内联合表达对小鼠实验性肝癌的治疗作用", 中华肝脏病杂志, no. 07, 28 July 2006 (2006-07-28), pages 41 - 45 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114369581A (zh) * 2021-12-30 2022-04-19 杭州医学院 一种具有抗肿瘤免疫功能重组腺病毒、制备方法及应用
CN114369581B (zh) * 2021-12-30 2023-10-20 杭州医学院 一种具有抗肿瘤免疫功能重组腺病毒、制备方法及应用
CN114940710A (zh) * 2022-06-07 2022-08-26 恺佧生物科技(上海)有限公司 一种提高重组人psma蛋白表达的方法
CN114940710B (zh) * 2022-06-07 2023-09-26 恺佧生物科技(上海)有限公司 一种提高重组人psma蛋白表达的方法

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