DK172113B1

DK172113B1 - 5-Substituerede ornithinderivater samt farmaceutisk præparat heraf

Info

Publication number: DK172113B1
Application number: DK051589A
Authority: DK
Inventors: Fritz E Gerhart; Nikolaus J Seiler
Original assignee: Merrell Dow Pharma
Priority date: 1988-02-05
Filing date: 1989-02-03
Publication date: 1997-11-10
Also published as: GR3005551T3; FI890477A0; PT89637B; ZA89833B; CN1037142A; EP0326766B1; JPH021435A; CA1311767C; US4902719A; HUT49320A; PT89637A; KR0150634B1; IL89145A0; KR890012942A; HU204770B; ATE77367T1; NO890455D0; IL89145A; AU2951589A; JP2816431B2

Description

DK 172113 B1

Den foreliggende opfindelse angår visse hidtil ukendte 5-substituerede ornithinderivater og farmaceutiske præparater.

Ornithin nedbrydes metabolisk ad tre veje. Ornithin 5 er substratet for enzymet ornithin-dicarboxylase (ODC). ODC-virkning på ornithin resulterer i putrescin, der kræves til cellevækst og celledeling. Ud fra et kvantitativt synspunkt er denne vej normalt ganske insignifikant, men den er betydningsfuld med hensyn til celler, der hurtigt deler 10 sig, f.eks. tumorceller.

Fra DK patent nr. 148.322 kendes alfa-mono- eller di-fluormethyl-ornithin. Forbindelserne er inhibitorer for decarboxylaseenzymer.

Ornithin er også et substrat for L-ornithin-2-oxosy-15 reaminotransferase (OAT), et mitokondrialt enzym, der er til stede i mange væv, herunder lever, nyre og hjerne. Det katalyserer transamineringen af L-ornithin (Orn) til 2-oxo-glutarat, idet der produceres glutaminsyre-j-semialdehyd og glutamat. Leverenzymet menes at fungere ved den intracel-20 lulære produktion af prolin og ved overflytningen af car-bonskeletter fra overskydende levnedsmiddel-aminosyrer til tricarboxylsyrecyklussen, og det er blevet foreslået, at OAT konkurrerer med ornithin-transcarbamylase med hensyn til Orn og således begrænser urinstofcyklusaktiviteten. Inhibe-25 ring af dette enzym kan resultere i et overskud af ornithin.

Ornithin er også substratet for ornithin-carbamoyl-transferase (OCT), et enzym i urinstofcyklussen, der er ansvarlig for omdannelsen af ornithin til citrullin.

Omend ornithin normalt ikke betragtes som en essentiel 30 aminosyre, kan visse betingelser forekomme naturligt eller resultere fra terapeutisk intervention, som frembringer en relativ mangeltilstand med hensyn til ornithin, f.eks. hepa-tisk toksicitet eller hepatisk svigt, gastrointestinal blødning, nedarvede urinstofcyklus-lidelser, graviditet og fejl-35 ernæring. I disse tilfælde er ornithin hastighedsbegrænsende for urinstofcyklus-funktionen. Indgivelse af ornithin er 2 DK 172113 B1 stort set ineffektiv på grund af virkningen af OAT, men inhibering af dette enzym vil resultere i, at der bliver yderligere mængder ornithin tilgængelige til urinstofcy-klus-funktionen.

5 Der kendes forskellige inhibitorer for OAT. L-canalin (2-amino-4-aminooxysmørsyre), der er en naturligt forekommende struktur analog til Orn, danner f.eks. en oxim med pyridoxalphosphat og påvirker en række pyridoxalphosphat-af-hængige enzymer. På grund af denne oximdannelse kan de bio-10 kemiske virkninger af L-canalin ikke på overbevisende måde tilskrives inhiberingen af OAT.

På grund af den strukturelle analogi mellem Orn og 4-aminosmørsyre (GABA), og de analoge reaktionsmekanismer for OAT og 4-aminosmørsyre: 2-oxosyre-aminotransferase (GAGA-15 -T), er nogle enzym-aktiverede, irreversible inhibitorer for GABA-T, f.eks. 4-aminohex-5-ynsyre og 5-amino-l,3-cyclo-hexadienylcarboxylsyre (gabaculin), også potente irreversible inhibitorer for OAT, men de er pr. definition ikke specifikke for dette enzym.

20 De 5-substituerede ornithinderivater ifølge den fore liggende opfindelse er de første kendte, specifikt irreversible inhibitorer for L-ornithin:2-oxosyre-aminotransferase (OAT). Når de indgives, inhiberer ornithinderivaterne ifølge opfindelsen transformationen af L-ornithin til glutaminsyre-25 -semialdehyd og bevirker således en forøgelse i ornithinkon-centrationen, som derefter vil være tilgængelig til forøgelse af urinstofcyklus-funktionen i leveren. Som sådanne kan forbindelserne ifølge opfindelsen anvendes ved behandlingen af mange tilstande med hensyn til ornithin.

30 Opfindelsen angår 5-substituerede ornithinderivater med den almene formel 3 DK 172113 B1

R

/\/\/c02H 1 5 h2n ' ^ ^ nh2 i hvilken R betyder en -CH2F, -CHF2, -CHC1F, -C=CH, -CH=CH2 eller en -CH=C=CH2-gruppe, og de farmaceutisk acceptable 10 syreadditionssalte deraf, deres anvendelse ved behandlingen af mangeltilstande med hensyn til ornithin, deres farmaceutiske præparater og deres fremstilling.

Forbindelserne ifølge opfindelsen er ornithinderiva-ter, i hvilken 5-stillingen er substitueret med forskellige 15 organiske grupper, og de omhandlede forbindelser omfatter f.eks. følgende: 2.5- diamino-6-fluorhexansyre(ί-fluormethylornithin), 2.5- diamino-6,6-difluorhexansyre(5-difluormethylor-nithin), 20 2,5-diamino-6-chlor-6-f luorhexansyre (5-chlorf luor- methylornithin), 2.5- diaminohept-6-ynsyre(5-acetenylornithin), 2.5- diaminohept-6-ensyre(5-vinylornithin) og 2.5- diamino-6,7-octadiensyre(S-allenylornithin).

25 De 5-substituerede ornithinderivater ifølge opfindel sen kan anvendes såvel på den frie aminosyreform som på syreadditionssaltformen. Syreadditionssaltene er simpelthen en mere bekvemt anvendelig form, og i praksis svarer anvendelsen af saltene til anvendelse af de ækvivalente mængder 30 af den frie base. Udtrykket "farmaceutisk acceptable syread-ditionssalte" skal omfatte alle ikke-toksiske organiske eller uorganiske syreadditionssalte af de basiske forbindelser med formlen I. Illustrative eksempler på organiske syrer, der danner egnede salte, omfatter saltsyre, hydrogenbromid-35 syre, svovlsyre og phosphorsyre, og sure metalsalte, f.eks. natriummonohydrogenorthophosphat og kaliumhydrogensulfat.

4 DK 172113 B1

Eksempler på organiske syrer, der danner egnede salte, omfatter mono-, di- og tricarboxylsyrerne. Eksempler på sådanne syrer er f.eks. eddikesyre, glycolsyre, mælkesyre, pyrodrue-syre, malonsyre, ravsyre, glutarsyre, a-ketoglutarsyre, 5 α-ketocapronsyre og a-ketoisocapronsyre, a-ketovaleriane-syre, fumarsyre, æblesyre, vinsyre, citronsyre, ascorbinsyre, maleinsyre, hydroxymaleinsyre, benzoesyre, hydroxybenzoesyre, phenyleddikesyre, kanelsyre, salicylsyre og 2-phenoxyben-zoesyre. Andre organiske syrer, der danner egnede salte, er 10 sulfonsyrerne, f.eks. methansulfonsyre og 2-hydroxyethan--sulfonsyre. Med organiske syrer kan kun monosyresaltene dannes, og sådanne salte kan eksistere på enten en hydrati-seret eller en i det væsentlige vandfri form. Syresaltene fremsættes ved standardmetoder, f.eks. ved opløsning af den 15 frie base i vandig eller vandig-alkoholisk opløsning eller i et andet egnet opløsningsmiddel indeholdende den ønskede syre, hvorpå der isoleres ved inddampning af opløsningen, eller ved omsætning af den frie aminosyre i et organiske opløsningsmiddel, i hvilket tilfælde saltet udskilles direkte 20 eller kan fås ved koncentrering af opløsningen. I almindelighed er syreadditionssaltene af de her omhandlede forbindelser krystallinske materialer, der er opløselige i vand og forskellige hydrofile organiske opløsningsmidler, og som i sammenligning med deres frie baseformer viser højere 25 smeltepunkter og en forøget opløselighed.

Forbindelserne ifølge opfindelsen indeholder to chi-rale centre ved 2- og 5-stillingerne i den tilsvarende or-nithin. De chirale centre i forbindelserne ifølge opfindelsen er angivet ved en tilføjet stjerne (*) i strukturformlen på 30 følgende måde: 5 DK 172113 B1

R

Av >N*XC°2H

nh2

De to chirale centre i forbindelserne ifølge opfindelsen tilvejebringer to diastereomere par af forbindelser 10 eller fire enantioinere forbindelser. I princippet kan forbindelserne ifølge opfindelse fysisk adskilles i to diastereomere par af forbindelser, der vil kræve optisk opløsning til yderligere adskillelse af blandingen i de fire individuelle enantioinere. Omend en eller flere af de individuelle 15 enantioinere af en forbindelse ifølge opfindelsen kan være i besiddelse af ringe eller ingen biologisk aktivitet, og den iagttagne aktivitet af de substituerede ornithinderivater med den angivne formel f.eks. kan skyldes kun én af de diastereomere, er indgivelse af en blanding af de diastereomere 20 i praksis effektiv.

De 5-substituerede ornithiner med strukturformlen I, i hvilken R betyder -CHF2, -CH2F eller -CHC1F, kan fremstilles ved omsætning af et acetonitrilderivat med den almene formel 25

R-CN II

i hvilken R betyder -CHF2, -CH2F eller -CHC1F, med et Grig-nard-reagens, der er fremstillet ud fra et hydroxy-beskyttet 30 3-hydroxypropylhalogenid med den almene formel III og påføl gende reduktion med natriumborhydrid:

PO(CH2)3X III

35 hvor P betyder en hydroxy-beskyttende gruppe, og X er et chlor-, brom- eller iodatom. Enhver hydroxy-beskyttende 6 DK 172113 B1 gruppe, der er stabil under Grignard-reaktionsbetingelserne, og som let kan fjernes, kan anvendes, f.eks. en benzylgruppe eller en tetrahydropyranylgruppe (THP-gruppe). Forbindelsen med formlen III, i hvilken P er en benzylgruppe, og X er et 5 chloratom, kan f.eks. fremstilles ved at sætte et lille molært overskud af en ikke-nukleofil base, f.eks. kaliumeller natrium-tert.butoxid, til en molær blanding i forholdet 1:1 af benzylbromid og 3-chlor-propanol. Der anvendes fortrinsvis et opløsningsmiddel såsom tetrahydrofuran (THF) 10 til lettelse af omsætningen. Blandingens temperatur holdes fortrinsvis under ca. 15°C i det tidsrum, hvor reaktanterne tilsættes, men kan bekvemt holdes ved stuetemperatur, 25°C, efter at tilsætningen er fuldendt. Reaktionsblandingen får dernæst lov at reagere i fra 1 til 20 timer, fortrinsvis i' 15 fra ca. 8 til ca. 12 timer, hvorpå der til blandingen sættes ca. 1 ækvivalent af en syre, f.eks. 1 N saltsyre, fortrinsvis dråbevis. Forbindelsen med formlen III kan derpå isoleres på enhver passende måde, f.eks. ved ekstraktion af reaktionsblandingen med ethylether og påfølgende fjernelse af 20 opløsningsmidlet fra opløsningen med den organiske fase.

Aminogruppen i det resulterende produkt fra Grig-nard-reaktion/natriumborhydrid-reduktionen, den fluorerede amin med formlen IV

R

y\y\y0Bz IV

h2n ^ v ^

i hvilken R betyder -CHF2, -CH2F eller -CHC1F, og Bz er en 30 benzylgruppe, beskyttes derpå, f.eks. ved omdannelse til et phthalamidderivat med strukturformlen V

R

v 35 PhtN V ^ 7 DK 172113 B1 i hvilken R betyder -CHF2, -CH2F eller -CHC1F, Bz er en benzylgruppe, og NPht er en phthalamid-beskyttet aminogruppe. Phthalamidderivatet kan f.eks. dannes ved behandling af en forbindelse med formlen IV, dvs. en fluoreret amin, med en 5 benzenopløsning af N-carbethoxyphthalamid. Det fremkomne mellemprodukt får dernæst lov at reagere med triethylamin i f.eks. en dichlormethanopløsning til dannelse af den ønskede phtha1imid-beskyttede amin.

Benzyl-beskyttelsesgruppen fjernes derpå til dannelse 10 af den tilsvarende mellemproduktalkohol med formlen Va

R

k

PhtN V

15

f.eks. ved katalytisk hydrogenering under anvendelse af hydrogengas ved atmosfærisk tryk og en palladium på car-bonkatalysator, og den fremkomne frie hydroxygruppe oxideres til det tilsvarende aldehyd med formlen VI

20

R

Ϊ

PhtN CH0 25 i hvilken R betyder en -CHF2, -CH2F eller en -CHCIF-gruppe. Oxidation af alkoholgruppen kan f.eks. gennemføres ved anvendelse af Swern-oxidationsreaktionen på følgende måde. Et ringe molært overskud af dimethylsulfoxid (DMSO) i dichlormethanopløsning sættes til en afkølet opløsning (f.eks.

30 -60°C) af ca. 0,6 molækvivalenter oxalylchlorid, (COCl)2 i dichlormethan. Derpå tilsættes alkoholen, og blandingen omrøres i ca. 1 time, hvorefter en opløsning af triethylamin i dichlormethan tilsættes, den fremkomne blanding afkøles til ca. -10°C og får lov at reagere, indtil omsætningen er 35 fuldstændig. Der sættes dernæst vand til reaktionsblandingen.

8 DK 172113 B1

Isolering af produktet for blandingen kan udføres på den sædvanlige måde.

Aldehydet med strukturformlen VI omsættes derpå med vinylmagnesiumbromid til dannelse af vinylalkohol-derivatet 5 med formlen VII

R

k

10 PhtN J

OH

i hvilken R er en -CHF2, -CH2F eller en -CHCIF-gruppe. Denne Grignard-reaktion gennemføres på den sædvanlige måde i f.eks.

15 THF-opløsning ved formindsket temperatur, f.eks. fra -40 til ca. 0°C.

Alkoholgruppen i vinylalkohol-derivatet med formlen VII omdannes derpå til en phthalimidgruppe til dannelse af diphthalimidderivatet med formlen VIII

20

R

A/\/\ VIII

PhtN ^ V

25 NPht i hvilken R betyder en -CHF2, -CH2F eller en -CHlF-gruppe. Dette kan f.eks. gennemføres ved tilsætning af en opløsning af et svagt molært overskud af diethylazodicarboxylat (DEAD) 30 i THF til en blanding af ca. 1 molækvivalent triphenylphos-phin, et svagt molært overskud af phthalimid og vinylalkohol-derivatet med formlen VII. Opløsningen holdes afkølet, dvs. til en temperatur på under 20°C, og får lov at reagere i ca. 3 dage, hvorefter ekstraktionsoparbejdning på den 35 sædvanlige måde giver det ønskede diphthalimid-derivat.

DK 172113 B1 9

Diphthalimid-derivatet med formlen VIII anvendes derefter til fremstilling af carboxylsyren med formlen IX

R

A^s/c°2H

PhtN ^ J

NPht 10 i hvilken R betegner en -CHF2, -CH2F eller en -CHCIF-gruppe, ved kaliumpermanganat-oxidation af vinylgruppen på den sædvanlige måde. Phthalimid-beskyttelsesgrupperne i syren med formlen IX fjernes ved simpel syrehydrolyse til dannelse af den ønskede frie diamin med formlen I, hvori R betyder en 15 -CHF2, -CH2F eller en -CHCIF-gruppe, f.eks. ved at lade den diphthalimid-beskyttede syre reagere med saltsyre i eddikesyreopløsning i ca. 2 dage ved blandingens tilbagesvalingstemperatur .

Det mere stabile dihydrochloridsalt kan fremstilles 20 ud fra den frie aminosyre ved først at fremstille di-tert.-butyloxycarbonyl (DiBOC)-derivatet med formlen IXa

R

25 C°2H IXa

BocNH J

NHBoc f.eks. ved at lade den frie aminosyre reagere med tert.bu-30 tyloxycarbonylanhydrid og triethylamin i vandig THF. Efterfølgende behandling af DiBOC-derivatet med saltsyre i ethyl-ether, f.eks. i 3 dage, giver dihydrochloridsaltet af den ønskede forbindelse med formlen I, i hvilken R betyder en -CHF2, -CH2F eller -CHCIF-gruppe.

10 DK 172113 B1

De 5-substituerede ornithiner med formlen I, i hvilken R betegner -CH=CH2, fremstilles som illustreret i det følgende skema A.

11 DK 172113 B1 C°2H Xv y co2h ^ I PhtO ν'

NH2 NPht XI

IV

(C0CI)2 Λ Λ Λ X 0

X\X\y\ LiAIH (0- y. I U

' I OH -tert.Bu)^ q

NPht ^- I

xiTT NPht

XIH XII

Swern-

Oxidation

I o OH

. . II 1) TMSCN I

• 2) H20 CN

NPht * .

XIV NPht XV

MsCI

KNPht/DMF I OMs

NPht CN

XVII NPht XVI

HCI/Δ I NH2 nh2

I: R = -CH = CH2 Skema A

12 DK 172113 B1

Vinyl-GABA (X) omdannes til dets N-phthaloyl-derivat (XI) ved opvarmning med phthalsyreanhydrid i toluen. Omsætning med oxalylchlorid i THF og en katalytisk mængde pyridin giver syrechloridet (XII), der reduceres til alkoholen 5 (XIII) , ved omsætning med to ækvivalenter lithium-tris-tert.-butoxy-aluminiumhydrid i THF. Swern-oxidation under anvendelse af dimethylsulfoxid (DMSO) og oxalylchlorid giver aldehydet (XIV), som dernæst omdannes til cyanhydrinen (XV) ved omsætning med trimethylsilylcyanid og påfølgende hydro-10 lyse. Mesylatet (XVI), der fremstilles på den sædvanlige måde ved omsætning med methylchlorid (MsCl) får dernæst lov at reagere med kaliumphthalamid (KNPht) i dimethylformamid-opløsning (DMF) til dannelse af forbindelsen med formlen (XVII), som ved hydrolyse resulterer i dannelsen af den 15 ønskede i-vinylornithin (I, R = -CH=CH2).

Forbindelserne med formlen I, i hvilken R betyder en -CsCH eller en -CH=C=CH2-gruppe, kan fremstilles analogt med skema A ud fra henholdsvis 5-acetenyl-GABA og «S-allenyl--GABA, eller de kan fremstilles ud fra 5-vinylornithin (I, 20 R = -CH=CH2) som illustreret i skema B.

13 DK 172113 B1 nh2 nh3® co2h _^ ^ C°2CH3 NH2 NH3® xviii

J

(BOC)NH H2N

.XX- _ .XX- I i

H XX XIX

(BOC)NH i ΊΓ 1 (BOC)NH ^ «— rx I Br 0^ΝΝ,'Νκη H x 1 XXI Η xxii (BOC)NH i

XX

O N CH = C = CH? . I

H

Skema B

XXIII

14 DK 172113 B1 6-Vinylornithin omdannes til den N-beskyttede lactam (20) i tre trin ved a) opvarmning til tilbagesvaling med thionylchlorid (SOCI2) i methanol til dannelse af ammoniumsaltet (XVIII), b) frigørelse af den frie base ved behandling 5 med en base såsom natriumcarbonat og opvarmning i toluen til dannelse af den cycliserede amin (XIX) og c) behandling med di-tert.butyldicarbonat (B0C20). Den N-beskyttede lactam omdannes derpå til den acetyleniske lactam (XXII) ved behandlingen med molekylært brom i carbontetrachlorid (CCI4) 10 til dannelse af et dibrom-mellemprodukt (XXI) , som ved behandling med ca. 5 ækvivalenter kalium-tert.butoxid ved formindsket temperatur, dvs. -60°c, i THF resulterer i den ønskede lactam. Påfølgende omsætning med en blanding af 37%'s vandig formaldehyd, cuprobromid og diisopropylamin i 15 dioxan resulterer i den alleniske lactam (XXIII). Påfølgende afbeskyttelse ved behandling med f.eks. hydrogenchloridgas i diethylether og hydrolyse ved behandling med tilbages-valende 2 N saltsyre af enten de acetyleniske eller alleniske lactamer giver henholdsvis i-acetenylornithin eller i-al-20 lenylornithin.

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse er inhibitorer for OAT og kan anvendes ved behandling af enhver sygdom eller tilstand, der er karakteriseret ved en mangeltilstand med hensyn til ornithin. Effektiviteten af de her 25 omhandlede forbindelser til behandling af mangeltilstande med hensyn til ornithin kan påvises ved deres evne til at antagonisere ammoniakforgiftning ved anvendelse af f.eks. den metode, der er rapporteret i L. Zieve, Journal of the American College of Nutrition, bind 5, side 167-176 (1986).

30 Udtrykket "patient" som her benyttes skal betegne pattedyr, f.eks. primater, herunder mennesker, får, heste, okser, køer og tyre, grise, hunde, katte, rotter og mus.

Opfindelsen angår også et farmaceutisk præparat til behandling af mangeltilstande med hensyn til ornithin, som 35 er ejendommeligt ved, at det indeholder et substitueret omi-thin-derivat med den almene formel 15 DK 172113 B1

R

Jvv-V ^C°2h h2n ^ Y 1 5 nh2 i hvilken R betyder -CH2F, -CHF2, -CHC1F, -C=CH, CH=CH2 eller -CH=C=CH2 eller et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf samt en farmaceutisk acceptabel bærer.

10 Den mængde <5-substitueret omithin-derivat ifølge opfindelsen, der indgives, vil variere afhængigt af patienten, indgivelsesmåden, graden af den behandlede lidelse eller tilstand, og kan være enhver virksom mængde. Gentagen daglig indgivelse af det δ-substituerede ornithin-derivat 15 er ønskelig. Den effektive mængde af et δ-substitueret ornithin-derivat ifølge opfindelsen kan ligge fra ca. 0,001 mg/kg til ca. 10 mg/kg patient kropsvægt pr. dag. Fortrinsvis indgives det 6-substituerede ornithin-derivat i enhedsdosisform i fra 1 til 4 doser pr. dag på fra f.eks. 10 mg pr.

20 dosis.

Den foretrukne indgivelsesvej for de 6-substituerede ornithin-derivater ifølge opfindelsen er oral indgift. Til oral indgift kan de δ-substituerede ornithin-derivater omdannes til faste eller flydende præparater, f.eks. kapsler, 25 piller, tabletter, pastiller, bolcher, smelter, pulvere, opløsninger, suspensioner eller emulsioner. De faste enhedsdosisformer kan være kapsler, der kan være af den almindelige gelatinetype med hård eller blød skal, f.eks. indeholdende overfladeaktive midler, smøremidler og indifferente 30 fyldstoffer, f.eks. lactose, sucrose, calciumphosphat og majsstivelse. I en anden udførelsesform kan forbindelserne ifølge opfindelsen tabletteres med konventionelle tabletfremstillingsmidler, f.eks. lactose, sucrose og majsstivelse, i kombination med bindemidler, f.eks. acacia, majsstivelse 35 eller gelatine, desintegreringsmidler, der skal medvirke ved opbrydning og opløsning af tabletten, når denne indgives, 16 DK 172113 B1 f.eks. kartoffelstivelse, alginsyre, majsstivelse og guar-gummi, smøremidler, der skal tjene til at forbedre strømmedygtigheden af tabletgranulater og hindre adhæsion af tabletmaterialet til overfladerne af tabletstempleme og tablet-5 formerne, f.eks. talk, stearinsyre eller magnesium-, calciumeller zinkstearat, farvestoffer, farvemidler og aromatise-ringsmidler, der skal forøge de æstetiske egenskaber ved tabletterne og gøre dem mere acceptable for patienten. Egnede strækkemidler til anvendelse i orale, flydende dosisformer 10 omfatter fortyndingsmidler såsom vand og alkoholer, f.eks. ethanol eller benzylalkohol, og polyethylenalkoholer, enten med eller uden tilsætning af et farmaceutisk acceptabelt overfladeaktivt middel, suspenderingsmiddel eller emulgeringsmiddel .

15 De 5-substituerede ornithin-derivater ifølge opfin delsen kan også indgives parenteralt, dvs. subkutant, intravenøst, intramuskulært eller intraperitonealt, som in-jicerbare doser af forbindelsen i et farmaceutisk acceptabelt fortyndingsmiddel sammen med en farmaceutisk bærer, der kan 20 være en steril væske eller blanding af væsker, f.eks. vand, saltopløsning, vandig dextrose og beslægtede sukkeropløsninger, en alkohol, f.eks. ethanol, isopropanol eller hexade-cylalkohol, glycoler, f.eks. propylenglycol eller polyethy-lenglycol, glycerolketaler, f.eks. 2,2-dimethyl-l, 3-dioxolan-25 -4-methanol, ethere, f.eks. polyethylenglycol 400, en olie, fedtsyre, en fedtsyreester eller et glycerid, eller et ace-tyleret fedtsyreglycerid, med eller uden tilsætning af et farmaceutisk acceptabelt overfladeaktivt middel, f.eks. en sæbe eller detergent, et suspenderingsmiddel, f.eks. pectin, 30 carbomere, methylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose eller carboxymethylcellulose, eller et emulgeringsmiddel, og andre farmaceutiske tilsætningsstoffer. Eksempler på olier, der kan anvendes i de omhandlede parenterale præparater, er jordolie, animalsk olie, vegetabilsk olie, eller 35 olier af syntetisk oprindelse, f.eks. jordnøddeolie, sojabønneolie, sesamolie, bomuldsfrøolie, majsolie, olivenolie, 17 DK 172113 B1 petrolatum og mineralolie. Egnede fedtsyrer omfatter olein-syre, stearinsyre og isostearinsyre. Egnede fedtsyreestere er f.eks. ethyloleat og isopropylmyristat. Egnede sæber omfatter fedtsyrealkalimetal-, ammonium- og triethanolamin-5 -salte, og egnede detergenter omfatter kationiske detergenter, f.eks. dimethyldialkylammoniumhalogenider, alkyl-pyridiniumhalogenider og alkylaminacetater, anioniske detergenter, f.eks. alkyl-, aryl- og olefinsulfonater, alkyl-, olefin-, ether- og monoglyceridsulfater, samt sulfosuccina-10 ter, ikke-ioniske detergenter, fedtsyreaminoxider, fedtsyre-alkanolamider og polyoxyethylen-polypropylen-copolymere, samt amphotere detergenter, f.eks. alkyl-Ø-aminopropionater, og 2-alkylimidazolin-kvaternære ammoniumsalte, samt blandinger deraf. De parenterale præparater ifølge opfindelsen 15 vil typisk indeholde fra ca. 0,5 til ca. 25 vægt% af or-nithin-derivatet med formlen I i opløsning. Konserveringsmidler og pufferstoffer kan også anvendes med fordel. Til nedsættelse af irritationen på injektionsstedet til et minimum eller eliminering deraf kan sådanne præparater in-20 deholde et ikke-ionisk overfladeaktivt middel med en hydro-fil-lipofil balance (HLB) på fra ca. 12 til ca. 17. Mængden af overfladeaktivt middel i sådanne præparater skal ligge fra ca. 5 til ca. 15 vægt%. Det overfladeaktive middel kan være en enkelt bestanddel med den ovennævnte HLB eller kan 25 være en blanding af to eller flere bestanddele med den ønskede HLB. Eksempler på overfladeaktive midler, der anvendes i parenterale præparater, er klassen af polyethylen-sor-bitan-fedtsyreestere, f.eks. sorbitanmonooleat og additionsprodukterne af ethylenoxid med en hydrofob base, med høj 30 molekylvægt, dannet ved kondensation af propylenoxid med propylenglyco1.

18 DK 172113 B1

Eksempel 1

Fremstilling af 6-fluor-2.5-diaminohexansyre- dihvdrochlorid

Den i overskriften angivne forbindelse fremstilles 5 ud fra n-chlorpropanol og fluoracetonitril (II, R = -CH2F) på følgende måde.

A. Fremstilling af 3-benzvloxvpropvlchlorid

Til en omrørt opløsning af 421 g (4,4 mol) natriumlo -tert.butoxid i 4 liter tør tetrahydrofuran under nitrogenatmosfære sættes der en blanding af 718 g (4,2 mol) ben-zylbromid og 396 g (4,2 mol) n-chlorpropanol. Temperaturen holdes på en værdi < 15°c. Blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Syrning med 2 N saltsyre efterfølges af 15 ekstraktioner med 3x1 liter ether. Etherlaget skilles fra, vaskes med vand, tørres ved hjælp af natriumsulfat og inddampes. Remanensen destilleres ved 76-86 * C og 0,03 mm Hg. Den i overskriften angivne forbindelse (III, R = -CH2F) fås som en farveløs olie i en mængde på 619 g og et udbytte 20 på 80%. NMR (XH, CDC13, 90 MHz).

B. Fremstilling af 5-benzvloxv-2-aminofluorpentan

En opløsning af 476 g (2,58 mol) af forbindelsen III (R = -CH2F) i 2,4 liter tør ether sættes langsomt til 125 g 25 (5,2 mol) magnesiumspåner under nitrogenatmosfære med en sådan hastighed, at der opretholdes en svag tilbagesvaling (note 1). Reaktionsblandingen tilbagesvales derpå i 3 timer og henstilles natten over. Blandingen filtreres under nitrogenatmosfære og afkøles til -50C. En opløsning af 127 g 30 (2,15 mol) fluoracetonitril i 100 ml tør ether tilsættes dråbevis i løbet af 30 minutter, og der omrøres i 2 timer ved -45*C. Reaktionsblandingen afkøles til -60*C og sættes langsomt til en i forvejen afkølet opløsning af 102 g (2,76 mol) natriumborhydrid i 6,5 liter methanol og 130 ml vand 35 ved -60®C. Opløsningen får lov at varme op til -20°C, og der tilsættes 1,5 liter 6 N saltsyre, idet reaktionsblandin- 19 DK 172113 B1 gen holdes på en temperatur < -20*C. Tilsætningen er særdeles exoterm. Opløsningen inddampes, og remanensen opløses i 3 liter vand og ekstraheres med 2 liter ether. Den vandige fase skilles fra, gøres basisk med 10 N natriumhydroxidop-5 løsning og ekstraheres med 3 x 1,5 liter ether, hvorefter etherfasen vaskes med saltopløsning, tørres med Na2S04 og inddampes, hvorved man får den i overskriften angivne forbindelse (IV, R -CH2F) i form af en gul olie i en mængde på 276 g (udbytte 50,7%). NMR (^, CDC13, 90 MHz).

10 Note 1: Under tilsætningen opvarmes opløsningen ved 45“C til opretholdelse af tilbagesvalingen.

C. Fremstilling af 5-benzvloxv-2-phthalimido-l-pentan Til en opløsning af IV (R = -CH2F) (276 g, 1,31 mol) 15 i 1,2 liter benzen sættes der en opløsning af 260 g (1,18 mol) n-carbethoxyphthalimid i 1,2 liter benzen. Blandingen henstilles natten over ved stuetemperatur, hvorefter der krystalliserer noget forbindelse, og blandingen inddampes. Remanensen opløses i 3 liter dichlormethan, og der tilsættes 20 155 g (1,53 mol) triethylamin. Efter omrøring natten over vaskes opløsningen med 1 liter 2 N saltsyre og dernæst med 2x2 liter vand og inddampes, hvorved der fås 460 g af en olie, som renses ved flash-chromatografi på 2 kg Si02· Elue-ring med en blanding af ethylacetat og petroleumsether i 25 forholdet 20:80 giver den i overskriften nævnte forbindelse (V, R = -CH2F) i form af en olie i en mængde på 200 g svarende til et udbytte på 45%. NMR (½ CDC13, 60 MHz).

D. Fremstilling af 5-fluor-4-phthalimidopentanol 30 En opløsning af V (R = -CH2F) (197 g, 0,58 mol) i 1,2 liter absolut ethanol hydrogeneres ved atmosfæretryk over 22 g palladium på trækul i 3 dage. Katalysatoren skilles fra ved filtrering, og opløsningen inddampes. Den i overskriften angivne forbindele (Va, R = -CH2F) fås i form af 35 en olie i en mængde på 144 g svarende til et udbytte på 100%. NMR ^H, CDCI3, 90 MHz).

20 DK 172113 B1 E. Fremstilling af 5-fluor-4-phthalimidopentanal

Til en opløsning ved -60°C af 75/3 g (0,59 mol) oxa-lylchlorid i 2 liter tør dichlormethan under nitrogenatmosfære sættes der en opløsning af 89,1 g (1,14 mol) tørt DHSO 5 i 2 liter tør dichlormethan. 135 g (0,54 mol) 5-fluor-4--phthalimidopentanol, IVa (R = -CH2F) i 2 liter CH2C1L2 tilsættes derop i løbet af 15 minutter. Blandingen omrøres i 45 minutter ved -60*C, og en opløsning af 352 g (3,47 mol) triethylamin i 2 liter tør CH2C12 tilsættes langsomt 10 (exotermt). Opløsningen omrøres natten over, afkøles til -10eC, og der tilsættes 2 liter vand. Den organiske fase skilles fra, vaskes med 4 N saltsyre efterfulgt af 3 x 2 liter vand. Den organiske fase fraskilles, tørres ved hjælp af Na2S04 og inddampes. Remanensen opløses i ether, vaskes 15 med 3 x 0,5 liter vand og tørres ved hjælp af Na2S04. Ved inddampning af etherfasen fås der en olie, der opvarmes ved 700C og 0,1 mm Hg til fjernelse af spor af DMSO. Den i overskriften angivne forbindelse (VI, R = -CH2F) fås som en rød olie i en mængde på 136 g svarende til et udbytte på 100%.

20 NMR (1H CDC13, 90 MHz).

F. Fremstilling af 3-hvdroxv-7-fluor-6-phthalimidohepten Til en opløsning af VI (R = -CH2F) (136 g, 0,54 mol) i tør tetrahydrofuran under nitrogenatmosfære sættes der 25 dråbevis en opløsning af 633 ml (0,59 mol) vinylmagnesium-bromid i tør THF ved -78'C. Efter at tilsætningen er fuldstændig, får den grønne opløsning lov at varme op til -50’C, hvorefter opløsningen afkøles til -70*C, og der tilsættes 2 liter af en mættet ammoniumchloridopløsning. Temperaturen 30 stiger til -40*C, og der udfældes et hvidt, fast stof. Blandingen henstilles natten over, de to lag adskilles, og den vandige fase ekstraheres med 2x1 liter ether. Den organiske fase vaskes med saltopløsning, tørres ved hjælp af Na2S04 og inddampes til dannelse af 147 g af en gul olie, der op-35 løses i THF og omrøres i 3 timer med mættet natriumbisul-fitopløsning. Den organiske fase skilles fra og inddampes, 21 DK 172113 B1 og remanensen opløses 1 ether og vaskes med saltopløsning, hvorpå etherlaget fraskilles, tørres ved hjælp af Na2S04 og inddampes, hvorved der fås 133 g af en olie. Ved filtrering gennem silicagel og eluering med en blanding af petroleums-5 ether og ethylacetat i forholdet 1:1 fås den i overskriften angivne forbindelse (VII, R = -CH2F) i form af en olie i en mængde på 133 g svarende til et udbytte på 88%. TLC: PE/EtOAc = 1:1, 2 pletter, Rf (produkt) - 0,4. NMR (^H, CDCI3, 90 MHz) .

10 G. Fremstilling af 7-fluor-3.6-bis-phthalimidohepten Til en opløsning af 103 g (0,39 mol) triphenylphos- phin, 57,8 g (0,43 mol) phthalimid og 109 g (0,39 mol) 3-hy-droxy-7-fluor-6-phthalimidohepten i 2 liter tør THF under 15 nitrogenatmosfære sættes der dråbevis en opløsning af 75,4 g (0,43 mol) diethylazodicarboxylat i 1 liter tør THF. Opløsningen holdes ved en temperatur på under 20°C. Reaktionsblandingen omrøres i 72 timer, og THF-laget skilles fra og inddampes, hvorved der fås en olie, der koges i 5 x 250 ml 20 vand, hvorpå vandet dekanteres fra, og remanensen opløses i dichlormethan. Efter vaskning med vand fraskilles den organiske fase, tørres ved hjælp af Na2S04 og inddampes til dannelse af en viskos olie, der tritureres med ether til eliminering af triphenylphosphinoxid. Ved inddampning af 25 etherfasen og chromatografi af remanensen (200 g) på 1,5 kg silicagel, eluering med en blanding af petroleumsether og ethylacetat i forholdet 2:3 fås den i overskriften angivne forbindelse (VIII, R * -CH2F) i form af et hvidt, fast stof i en mængde på 36,4 g svarende til et udbytte på 22,8%.

30 TLC: PE/EtOAc = 1:1, Rf - 0,78. NMR (XH, CDC13, 90 MHz).

H. Fremstilling af 6-fluor-2.5-bis-phthalimidohexansvre Til en en opløsning af 41,3 g (250 mmol) kaliumper- manganat i 1,1 liter vand og 360 ml eddikesyre ved 0'C sættes 35 der dråbevis en opløsning af VIII (R = -CH2F) (36 g, 88,7 mmol) i 1 liter acetone. Efter at tilsætningen er fuldendt, 22 DK 172113 B1 omrøres opløsningen natten over ved stuetemperatur. Opløsningen afkøles til 0eC, og der tilsættes dråbevis en mættet opløsning af natriumbisulfit, idet temperaturen holdes under 5 *C. Affarvning med trækul, efterfulgt af etherekstraktioner 5 med 2 x 200 ml og dernæst med 200 ml dichlormethan giver en organisk fase, der vaskes med vand, tørres ved hjælp af Na2S04 og inddampes. Remanensen behandles azeotropt med toluen, omrøres i acetone, filtreres og inddampes, hvorved man får den i overskriften angivne forbindelse (IX, R = 10 -CH2F) i form af et hvidt, fast stof i en mængde på 24 g svarende til et udbytte på 64%. NMR (^-H, acetone Dg, 90 MHz).

I. Fremstilling af 6-fluor-2.5-bis-(tert.butvlcarbamo- 15 yll-hexansvre

En opløsning af 23,5 g (55,5 mmol) af forbindelsen IX (R = -CH2F) i en blanding af 175 ml koncentreret saltsyre og 75 ml eddikesyre tilbagesvales i 48 timer. Opløsningen inddampes, remanensen omrøres med 100 ml vand, phthalsyren 20 fjernes ved filtrering, og den vandige opløsning inddampes, hvorved der fås 13 g (99%) af diamin-dihydrochloridet i form af en rød olie. En opløsning af 13 g (55 mol) af diamin-dihydrochloridet, 42,5 g (195 mmol) di-tert.butylcarbonat og 39,3 (390 mmol) triethylamin i 250 ml tetrahydrofuran og 25 125 ml vand omrøres i 48 timer ved stuetemperatur og i 4 timer ved 45'C. Opløsningen ekstraheres med 250 ml ether og dernæst med 2 x 150 ml dichlormethan. De kombinerede organiske faser ekstraheres med natriumbicarbonatopløsning.

Den basiske vandfase syrnes med 1 N saltsyre og ekstraheres 30 derpå med 3 x 150 ml dichlormethan, og den organiske fase tørres ved hjælp af Na2S04 og inddampes, hvorved der fås 3 g af den i overskriften angivne forbindelse (IXa, R = -CH2F) i form af et hvidt, fast stof. Alle vandfaserne mættes med natriumchlorid, ekstraheres med 3 x 150 ml dichlormethan, 35 tørres ved hjælp af natriumsulfat og inddampes til dannelse af en olie (21 g). Olien tritureres med petroleumsether, DK 172113 B1 23 hvorved der fås et svagt brunt fast stof i en mængde på 7,5 g. De to batches er tilsvarende med hensyn til TLC: PE/EtOAc (1:1), Rf = 0,6. Udbytte 10,5 g (52%). NMR (^-H, CDC13, 90 MHz).

5 J. Fremstilling af 6-fluor-2.5-diaminohexansyre-dihvdro-chlorid

En opløsning af IXa (R = -CH2F) (10,5 g, 28,8 mmol) i vandfri ether omrøres i 3 dage med etherisk hydrogenchlorid 10 under nitrogenatmosfære. Suspensionen filtreres, hvorved der fås et lysebrunt fast stof, der behandles med trækul i vand. Opløsningen inddampes, og remanensen tritureres med vandfri ether og opsamles og omrøres med tør acetone, hvorved man får den i overskriften angivne forbindelse (X, R = -CH2F) 15 i form af et hvidt pulver efter filtrering under argonatmosfære. Forbindelsen er meget hygroskopisk. Udbytte: 4,7 g (69%) . Værdierne for C, H og N er korrekte. Smp. 146*C.

NMR: kompatibelt.

20 Eksempel 2

Der fremstilles tabletter, der hver har følgende sammensætning: 2.5- diamino-6,6-difluorhexansyre 250 mg stivelse 40 mg 25 talk 10 mg magnesiumstearat 10 mg

Eksempel 3

Der fremstilles kapsler, der hver har følgende sam-30 mensætning: 2.5- diamino-6-fluorhexansyre 400 mg talk 40 mg natriumcarboxymethylcellulose 40 mg stivelse 120 mg 35 24 DK 172113 B1

Eksempel 4

Der fremstilles injicerbare dosisformer, der hver har følgende sammensætning: 2,5-diamino-6,6-difluorhexansyre 0,500 g 5 polyoxyethylen-sorbitan-monooleat 2,000 g natriumchlorid 0,128 g vand til injektionsformål gs op til 20,000 ml

Claims

2. Ornithin-derivat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R er en -CH2F-gruppe.
3. Ornithin-derivat ifølge krav 1, kendete g-20 net ved, at R er en -CHF2-gruppe.
4. Ornithin-derivat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R er en -CH=CH2-gruppe.
5. Farmaceutisk præparat til behandling af mangel tilstande med hensyn til ornithin, kendetegnet ved, at det indeholder et ί-substitueret ornithin-derivat med den almene formel
30 R /k^s/C02H h2n ^ y nh2 DK 172113 B1 i hvilken R betyder -CH2F, -CHF2, -CHC1F, -CsCH, CH=CH2 eller -CH=C=CH2 eller et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf samt en farmaceutisk acceptabel bærer.