DK164917B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af bicyklisk substituerede dipeptidderivater og deres farmaceutisk acceptable salte - Google Patents

Description

DK 164917 B

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte bicyklisk substituerede dipeptidderivater og deres farmaceutisk acceptable salte, der er nyttige som lægemidler.

5 Som forbindelser med hypotensiv virkning på grund af inhiberende virkning på det angiotensin-omdannende enzym kendes der forskellige aminosyrederivater (fx japanske patentpublikationer nr. 77-116457, 77-136117, 79-12372, 80-38382 og 80-81845, som svarer til henholdsvis US-patentskrift nr. 4.105.776, 10 US-patentskrift nr. 4.053.651, GB-patentansøgning nr. 2.005.508 og europæiske patentansøgninger nr. 9183 og 12401). De her omhandlede forbindelser afviger fra disse kendte forbindelser ved deres skeletstruktur, og har desuden en kraftigere inhiberende virkning på det angiotensin-omdannende enzym og forbedret hy-15 potensiv virkning.

Den foreliggende opfindelse angår således en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte bicyklisk substituerede dipeptidderivater med den almene formel 20 ^ 5 Ψ f 9 6 1

/ nN-C-CH-NH-CH-C-R

25 . R2 3 4 I 3 (CH-) COOR 2 m 2 2 hvor R og R , som er ens eller forskellige, hver er hyr. .

3 drogen, hydroxyl eller alkoxy med 1-4 kulstofatomer, el-30 ler hvor R og R tilsammen danner en alkylendioxygruppe med 1-4 kulstofatomer, R^ er hydrogen eller en alkylgrup- 4 pe med 1-4 kulstofatomer, R er hydrogen, en alkylgrup-pe med 1-4 kulstofatomer eller en aminoalkylgruppe med 1-4 kulstofatomer, som på aminogruppen er usubstitueret 35 eller substitueret med en acylgruppe valgt blandt C2_4 alkanoyl, benzoyl, C2_4 alkoxykarbonyl eller benzyloxy-karbonyl, R^ er hydrogen, C^4 alkyl eller fenyl-C^_4 alkyl, som på fenylgruppen er usubstitueret eller substi-

DK 164917 B

2 tueret med 1-3 substituenter valgt blandt halogen, alkyl med 1-4 kulstofatomer, alkoxy med 1-4 kulstofatomer, g amino, nitro og hydroxyl, R er hydroxyl, C1-4 alkoxy, amino eller mono- eller di-C^_4 alkylamino, og m og n er hver 1 eller 2, eller farmaceutisk acceptable salte der-5 af.

Med henvisning til den ovenfor viste formel I indbefatter 1 2 o den lavere alkoxygruppe repræsenteret ved R eller R sådanne som indeholder ca. 1-4 kulstofatomer, såsom metoxy, ætoxy, propoxy, butoxy og isopropoxy. Når R og R ligger ved siden 10 af hinanden kan de danne en lavere (C1-4) alkyl-endioxygruppe, såsom metylendioxy eller ætylendioxy.

3 '

Den lavere alkylgruppe repræsenteret med R indbefatter dem der indeholder ca. 1-4 kulstofatomer, såsom metyl, ætyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, s-butyl og t-butyl.

4 15 Den lavere alkylgruppe repræsenteret med R indbefatter 3 lavere alkylgrupper svarende til dem der repræsenteres af R .

4

Aminolavalkylgruppen repræsenteret med R indbefatter lige eller forgrenede grupper som indeholder ca. 1-4 kulstofatomer, såsom aminometyl, 1-aminoætyl, 2-aminoætyl, 3-aminopropyl, 4-aminobu-20 tyl og 3-amino-2-metylpropyl. Acylaminolavalkylgruppen repræsen- 4 teret med R indbefatter de grupper, hvori ammogruppen i den ovennævnte aminolavalkylgruppe er acyleret med en acylgruppe afledt af en karboxylsyre eller en karbonatester. Denne acylgruppe er fx ^2-4 alkanoyl (fx acetyl eller propionyl), benzoyl, 25 C2-4 alkoxykarbonyl (fx ætoxykarbonyl) eller benzyloxykarbonyl.

Med henvisning til R^ indbefatter den dermed repræsenterede lavere alkylgruppe de lavere alkylgrupper magen til dem der repræsenteres med R^. Aralkylgruppen repræsenteret med R^ indbefatter fenyllav-(C^_4)-alkyl indeholdende ca. 7-10 kulstof-30 atomer, såsom benzyl, fenætyl, 3-fenylpropyl, a-metylbenzyl, α-ætylbenzyl, a-metylfenætyl, β-metylfenætyl og 6-ætylfenætyl. Fenyldelen i fenyllavalkylgruppen kan eventuelt have 1-3 substituenter, såsom halogen (fx fluor, klor, brom eller jod), C1-4 alkyl (fx metyl, ætyl, propyl, butyl), c1-4 alkoxy (fx 35 metoxy, ætoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy eller metylendioxy), amino, nitro eller hydroxyl. Eksempler på sådanne substituerede fenyllavalkylgrupper er 2-(4-klorfenyl)-ætyl, 2-(4-hydroxyfenyl)-

DK 164917B

3 ætyl, 2-(4-metoxyfenyl)-ætyl, 2-(3,4-dimetoxyfenyl)-ætyl, 2-(3,4,5-triraetoxyfenyl) -ætyl, 2- (3,4-metylendioxyfenyl) -ætyl, 2-(p-tolyl)-ætyl, 3,4-dimetoxybenzyl, 3,4-metylendioxybenzyl, , 3,4,5-trimetoxybenzyl, 4-ætylbenzyl og 4-klorbenzyl.

6 5 Med henvisning til JR indbefatter den dermed repræsente rede lavere alkoxygruppe lavere alkoxygrupper indeholdende ca. 1-4 kulstofatomer, såsom metoxy, ætoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, isobutoxy, s-butoxy og t-butoxy, og den lavere alkyl-aminogruppe indbefatter mono- eller di-lav (C^_4)-alkylamino-10 grupper, såsom metylamino, ætylamino, propylamino, butylamino, dimetylamino og diætylamino.

Saltene af forbindelser med formel I indbefatter farmaceutisk acceptable salte, fx uorganiske salte, såsom hydroklorid, hydrobromid, sulfat, nitrat og fosfat, organiske syresalte såsom 15 acetat, tartrat, citrat, fumarat, maleat, toluensulfonat og metansulfonat, metalsalte såsom natrium-, kalium-, kalcium-og aluminiumsalte, og salte med baser såsom salte med triætyl-amin, guanidin, ammonium, hydrazin, kinin og cinchonin.

Blandt de ovennævnte forbindelser med formel I foretræk-1 2 20 kes sådanne, hvori R og R uafhængigt af hinanden repræsente- 1 2

rer hydrogen, hydroxyl eller alkoxy, eller hvor R og R

tilsammen udgør en C1-4 alkylendioxygruppe, R^ er hydrogen eller alkyl med 1-4 kuls tof atomer, R1 er hydrogen, alkyl med 1-4 kulstofatomer eller aminoalkyl med 1-4 kulstofato-25 mer, som er usubstitueret eller substitueret med acyl valgt blandt gruppen bestående af Calkanoyl, benzoyl, C2-4 alkoxykarbonyl eller benzyloxykarbonyl, R2 er hydrogen, C^_4 alkyl eller fenyl-C^_4~alkyl som kan være usubstitueret eller substitueret med 1-3 substituenter valgt blandt halogen, 30 alkyl, C^_4 alkoxy, amino, nitro og hydroxyl, R^ er hydroxyl, C^_4 alkoxy, amino eller mono- eller di-C^_4 alkylamino, og m og n er hver 1 eller 2, eller farmaceutisk acceptable salte deraf.

Blandt forbindelserne med formel I foretrækkes endvi- 12 3 35 dere forbindelser hvori R og R hver er hydrogen, R er 5 hydrogen, R er alkyl eller amino- C^_4 alkyl, R er fenætyl, R^ er C^_4 alkoxy eller hydroxyl og m og n er hver 2 1, eller forbindelser med formlen

DK 164917 B

4 ^ssvx'\ O R4’ R5'o r i \ π i i « 6' I >-N-C-CH-NH-CH-C-R° \h2cooh 5 4« 5' hvor R er hydrogen eller alkyl, R er hydrogen, alkyl eller fenyl-C^_^ alkyl og R^ er hydroxyl eller alkoxy, og farmaceutisk acceptable salte deraf.

10 Idet der refereres til den ovenfor viste formel I' 41 5' 6' 4 c svarer grupperne R , R og R til henholdsvis R , R3 og R6.

I en særlig foretrukket udførelsesform for opfindelsen fremstiller man forbindelsen N-(l-ætoxykarbonyl-3-fenylpropyl)-15 L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

Analogifremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved at man a) underkaster en forbindelse med formlen 20 25 r2 \ Π N-C-CH-NH2 (Ih,) coor3 ώ m hvor alle symbolerne har de ovenfor angivne betydninger, og 30 en forbindelse med formlen

R5-<jj-C-R6 III

0 O

35 5 fi hvor R- og R har de ovenfor angivne betydninger, kondensation under reducerende betingelser, eller

DK 164917B

5 b) til fremstilling af en forbindelse med den almene for- 3 6 mel I, hvori R er hydrogen og/eller R er hydroxyl og alle de øvrige symboler har de ovenfor angivne betydninger hydrolyserer en esterforbindelse med den almene formel I, hvori R^ 5 er C1-4 alkyl og/eller R6 er alkoxy og alle de øvrige symboler har de ovenfor angivne betydninger, eller c) til fremstilling af en forbindelse med den almene for- 3 6 mel I, hvor R er hydrogen og/eller R er hydroxyl og alle de øvrige symboler har de ovenfor angivne betydninger, undergo kaster en benzylester af en forbindelse med den almene for- 3 6 mel I, hvor R er benzyl og/eller R er benzyloxy og alle de øvrige symboler har de ovenfor angivne betydninger, katalytisk reduktion, eller d) hydrolyserer eller katalytisk reducerer en forbindelse 15 med den almene formel R1

vW i\v\JCnH2n) IV

20 4 5

/ \ o RZ R Q

R^ ' I I I I Jj 6

N-C-CH-N—CH-C-R

(CH,) COOR3 z m 25 hvor Z er en beskyttelsesgruppe som kan fjernes ved hydrolyse eller katalytisk reduktion og de øvrige symboler har de ovenfor angivne betydninger, eller

e) omsætter en forbindelse med den almene formel II med en forbindelse med den almene formel V

30 5 R 0

X-CH-C-R6 V

hvor R5 og R6 har de ovenfor angivne betydninger og X er halo- 35 7 7 gen eller en gruppe med formlen R SC^-O-, hvor R er en C^_.4 alkyl, fenyl eller p-tolyl,

DK 164917B

6 hvorefter man om ønsket omdanner en forbindelse med den almene formel I vundet ved en hvilken som helst af fremgangsmåderne a)-e) til et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

De omhandlede forbindelser med formel I kan fx fremstil-5 les ved at man under reducerende betingelser kondenserer en forbindelse med formlen R1 - PQ*?;· Ά N-C-CH-NH2 (CEL·) COOR3 l m 1 g hvor de anvendte symboler hver har de ovenfor angivne betydninger, og en forbindelse med formlen R5-C-C-R6

I II IXX

O o x 20 5 6 hvor R og R har de ovenfor angivne betydninger.

De nævnte reducerende betingelser indbefatter de reaktionsbetingelser som benyttes ved katalytisk reduktion under anvendelse af en katalysator, såsom et metal som platin, 25 palladium, Raney-nikkel eller rhodium eller en blanding deraf med en passende bærer; reduktion med en metalhydridforbindelse såom litiumaluminiumhydrid, litiumborhydrid, litiumcyanbor-hydrid, natriumborhydrid eller natriumcyanborhydrid; reduktion med metallisk natrium eller metallisk magnium og en alko-30 hol? reduktion med et sådant metal som jern eller zink og en sådan syre som saltsyre eller eddikesyre; elektrolytisk reduktion og reduktion med et reducerende enzym. Den ovennævnte reduktion gennemføres sædvanligvis i nærværelse af vand eller et organisk opløsningsmiddel (fx metanol, ætanol, ætylæter, 35 dioxan, metylenklorid, kloroform, benzen, toluen, eddikesyre, dimetylformamid eller dimetylacetamid). Reaktionstemperaturen afhænger af de anvendte reduktionsmidler, men sædvanligvis

DK 164917 B

7 foretrækkes der temperaturer som ligger fra -20°C til +100°C. Reaktionen kan forløbe på en tilfredsstillende måde ved almindelig tryk, men reaktionen kan også gennemføres under tryk eller under nedsat tryk afhængig af omstændighederne.

5 De forbindelser med formel I, hvori R3 er hydrogen og/ eller R® er hydroxyl kan også fremstilles ved hydrolyse af de tilsvarende esterforbindelser eller ved katalytisk reduktion af de tilsvarende benzylestere.

Forbindelsen med formel I kan endvidere fremstilles 10 ved at man hydrolyserer eller katalytisk reducerer en forbindelse med formlen 15 \ O R4 Z R5 0 r2 \ i i I 1 « 6

N-C-CH-N-CH-C-R

(<!:h0) -coor3 2 m 20 hvor Z er en beskyttelsesgruppe der kan fjernes ved hydrolyse eller ved katalytisk reduktion og hvor de øvrige symboler har de ovenfor angivne betydninger. Beskyttelsesgruppen som repræsenteres med Z i formel IV og som kan fjernes ved hydrolyse indbefatter alle typer af acylgrupper og trityl. Navnlig så-25 danne grupper som benzyloxykarbonyl, t-butoxykarbonyl, tri-fluoracetyl og trityl er fordelagtige til en reaktion under forholdsvis milde betingelser. Beskyttelsesgruppen som repræsenteres med Z og som kan fjernes ved katalytisk reduktion indbefatter blandt andre grupper benzyl, difenylmetyl og ben-3^ zyloxykarbonyl. Hydrolysereaktionen ved denne fremgangsmåde gennemføres i vand eller et organisk opløsningsmiddel såsom metanol, ætanol, dioxan, pyridin, eddikesyre, acetone eller metylenklorid eller i en blanding deraf. Til at fremskynde reaktionen kan der til reaktionssystemet sættes en syre 35 (fx saltsyre, brombrintesyre, jodbrintesyre, fluorbrintesyre, svovlsyre, metansulfonsyre, p-toluensulfonsyre eller trifluor-eddikesyre) eller en base (fx natriumhydroxyd, kaliumhydroxyd,

DK 164917 B

8 kaliumkarbonat, natriumhydrogenkarbonat, natriumacetat eller triætylamin). Reaktionstemperaturen ligger sædvanligvis i området fra ca. -10°C til +150°C. Den katalytiske reduktion ved denne fremgangsmåde gennemføres i vand eller i et orga-5 nisk opløsningsmiddel såsom metanol, ætanol, dioxan eller te-trahydrofuran eller i en blanding deraf, i nærværelse af en passende katalysator såsom platin eller palladium-kulstof. Denne reaktion gennemføres ved almindelig tryk eller under et tryk op til ca. 150 kg/cm og ved almindelig temperatur 10 eller ved en temperatur op til 150°C. I almindelig kan reaktionen forløbe tilstrækkeligt glat ved almindelig temperatur og almindeligt tryk.

Forbindelserne med formel I kan også fremstilles ved at omsætte en forbindelse med formel II med en forbindelse 15 med formlen 5

R 0 tT

i I 6 V

X-CH-C-R

5 6

hvor R og R hver har de ovenfor angivne betydninger og X

7 7

20 er halogen eller en gruppe med formlen R S02“0-, hvor R

er lavalkyl, fenyl eller p-tolyl. Reaktionen gennemføres ved at man holder begge reaktanterne i et passende opløsningsmiddel ved en temperatur inden for området fra ca. -10°C til ca. +150°C. Til at fremskynde reaktionen kan man lade en sådan 25 base som kaliumkarbonat, natriumhydroxyd, natriumhydrogenkarbonat, pyridin eller triætylamin være til stede i reaktionssystemet som et syrefjernelsesmiddel.

De omhandlede forbindelser med formel I fremstillet på denne måde kan isoleres fra reaktionsblandingen ved sæd-30 vanlige midler til fraskillelse og renselse, såsom ekstraktion, koncentration, neutralisation, filtrering, omkrystallisation, søjlekromatografi og/eller tyndlagskromatografi.

I afhængighed af tilstedeværelsen eller den manglende tilstedeværelse af de substituenter som repræsenteres 4 5 35 med R og R kan der eksistere 2 til 8 steriske isomerer af en forbindelse med formel I. Fremstillingen af disse individuelle isomerer og blandinger falder naturligt inden for ram-

DK 164917 B

9 merne af den foreliggende opfindelse. Om ønsket kan sådanne isomerer fremstilles individuelt. Fx kan en enkelt optisk isomer af forbindelsen med formel I vindes ved at gennemføre den ovenfor beskrevne omsætning under anvendelse af en enkelt 5 isomer af udgangsforbindelsen II eller IV. Når produktet er en blanding af to eller flere isomerer kan de adskilles til individuelle isomerer ved de sædvanlige seperationsmetoder, såsom saltdannelse under anvendelse af en optisk aktiv syre (fx kamfersulfonsyre, vinsyre eller dibenzoylvinsyre) eller 10 en optisk aktiv base (fx cinchonin, cinchonidin, kinin, kini-din, alfametylbenzylamin eller dehydroabietylamin) forskellige kromatografiske metoder eller fraktioneret krystallisation.

4 ς

For de forbindelser med formel I, hvori R og RJ begge er forskellige fra hydrogen, har de isomerer, der har en S-konfigu-15 ration i almindelighed mere gunstige fysiologiske egenskaber sammenlignet med de tilsvarende forbindelser med en R-konfigu-ration.

De omhandlede forbindelser, dvs. de bicykliske forbindelser repræsenteret med formel I og farmaceutisk accep-20 table salte deraf udviser inhiberende virkning på det angio-tensinomdannende enzym, det bradykininnedbrydende enzym (kininase) og enkefalinase hos dyr, navnlig et pattedyr (fx menneske, hund, kat, kanin, marsvin og rotte) og de er derfor nyttige som lægemidler til diagnose, forebyggelse eller behand-25 ling af hypertension og som analgetiske midler eller analge-tikaraktivitetspotentierende midler. De omhandlede forbindelser har lav toxicitet, de absorberes udmærket selv ved oral indgift og har høj stabilitet. Når de derfor anvendes som de ovenfor nævnte lægemidler kan de på sikker måde ind-30 gives oralt eller parenteralt som de er eller i en blanding med passende farmaceutisk acceptable bærestoffer, excipienser eller fortyndingsmidler i forskellige farmaceutiske præparater såsom pulvere, granulater, tabletter, kapsler, injektionsopløsninger osv. Medens dosisniveauet generelt varierer i afhængig-35 hed af tilstandene af de sygdomme som skal behandles såvel som den benyttede indgiftsvej, kan forbindelserne fx ved behandling af hypertension hos et voksent menneske indgives oralt i en

DK 164917 B

10 enkelt dosis på ca. 0,02-20 mg/kg, fortrinsvis ca. 0,2-2 mg/kg eller intravenøst i ca. 0,002-0,2 mg/kg, fortrinsvis ca. 0,02-20,2 mg/kg, ca. 2 til 5 gange pr. dag i afhængighed af de rådende tilstande.

5 De benyttede udgangsforbindelser med formel II kan let fremstilles fx ved den fremgangsmåde som er vist i 12 3 4 følgende reaktionsskema, hvor R , R , R , R , m og n har de ovenfor angivne betydninger og C^z er benzyloxykarbonyl.

10 χ nh2(ch„) coor3 (vii)'^Ssjix/*Sv^ 2n reduktion * 2n

15· r2 r “H

(CH,) -COOR3 δ m

VI VIII

20 f4 R h C^-NHCHCOCH <X»> ΙΓ R2 N-0-tH-NH-C.

bz 25 (CH0) "COOR3 λ m

DK 164917 B

11

Fremgangsmåden til fremstilling af forbindelse II som vist i reaktionsskemaet ovenfor skal nu illustreres mere detaljeret. I trinnet (VI)—»(VIII), omsætter man først forbindelserne VI og VII i et passende opløsningsmiddel til dannelse 5 af en Schiffsk base, som derpå underkastes reduktion. Et organisk opløsningsmiddel såsom metanol, ætanol, dioxan, metylenklorid, kloroform, benzen eller toluen benyttes som opløsningsmidlet og reaktionen gennemføres almindeligvis ved en temperatur inden for området fra ca. -10°C til + 150°C. Til fordelag-10 tig fremadskriden af reaktionen kan der til reaktionsblandingen sættes en katalysator, såsom svovlsyre eller p-toluensul-fonsyre, eller et dehydreringsmiddel, såsom vandfrit natriumsulfat, vandfrit magniumsulfat eller kalciumklorid. Det er også muligt at få reaktionen til at skride fremad på fordelagtig 15 måde ved at benytte en indretning eller en fælde til at fraskille vand. Den vundne Schiffske base sættes enten i form af en reaktionsblanding eller efterisolering på sædvanlig måde atter til et opløsningsmiddel og underkastes reduktion. Reduktionsmidlerne indbefatter katalytisk reduktion hvor man som kataly-20 sator eksempelvis benytter platin eller palladium-kulstof og en fremgangsmåde hvor man anvender et sådant reduktionsmiddel som natriumborhydrid eller natriumcyanborhydrid.

DK 164917 B

12'

Det er også muligt at få den Schiffske basedannelse og reduktionen til at forløbe samtidigt ved at man lader et sådant reduktionsmiddel være til stede samtidigt i reaktionsblandingen mellem (VI) og (VII) fra begyndelsen. I trinnet 5 (VIII) —* (X) omsættes forbindelsen med formel VIII med en forbindelse med formlen IX eller et karboxylafledt funktionelt derivat deraf. Det karboxylafledte funktionelle derivat af en forbindelse med formel IX indbefatter blandt andet syre-halogenider, såsom syreklorid og syrebromid, syreånhydrider 10 vundet ved at fjerne én mol vand fra to mol af forbindelsen med formel IX,blandede anhydrider dannet ved substitution af hydrogenatomet i karboxylgruppen i forbindelse med formel IX med ætoxykarbonyl, isobutyloxykarbonyl, benzyloxykarbonyl osv., og reaktionsdygtige estere af forbindelsen med formel IX af-15 ledt af 1-hydroxybenzotriazol, N-hydroxyftalimid, N-hydroxy-succinimid osv. I almindelighed gennemføres reaktionen i et passende opløsningsmiddel/ som kan være af en hvilken som helst type så længe det ikke forstyrrer reaktionen. Når forbindelsen med formel IX anvendes som den er uden at den omdannes til et 20 funktionelt derivat gennemføres reaktionen fortrinsvis i nærværelse af et dehydratiseringsmiddel såsom dicyklohexylkarbo-diimid eller karbonyldiimidazol. Når der anvendes et syrehalo-genid som det funktionelle derivat kan reaktionen også gennemføres i nærværelse af en base såsom pyridin, pikolin, triætyl-25 amin, natriumhydroxyd, natriumhydrogenkarbonat eller natriumkarbonat. Sædvanligvis ligger reaktionstemperaturen inden for området fra ca. -20°C til ca. +150°C. I de fleste tilfælde kan reaktionen imidlertid forløbe på tilfredsstillende måde ved almindelig temperatur. Trinnene (X)—>(II) består i fjernelse 30 af N-beskyttelsesgruppen ved katalytisk reduktion. Katalytisk reduktion gennemføres i vand eller i et organisk opløsningsmiddel, såsom metanol, ætanol, dioxan, tetrahydrofuran eller eddikesyre, eller i en blanding deraf, i nærværelse af en passende katalysator, såsom platin, palladium-kulstof eller 35 Raney-nikkel. Denne reaktion gennemføres ved almindeligt tryk eller op til ca. 150 kg/cm og ved almindelig temperatur eller op til 150°C. Sædvanligvis kan reaktionen forløbe på tilfreds-

DK 164917 B

13 stillende måde ved almindelig temperatur.

Den foreliggende opfindelse skal nu beskrives nærmere i følgende referenceeksempler (der viser fremstillingen af udgangsmaterialer) udførelseseksempler, prøveeksempler og 5 dosisformeksempler.

Referenceeksempel 1 20 g glycinætylester-hydroklorid opløses i en opløsning af 10 g 2-indanon i 200 ml metanol og derpå sættes 5,0 g 10 natriumcyanborhydrid portionsvis til opløsningen under isafkøling og omrøring. Efter omrøring ved stuetemperatur i 2 timer udhældes reaktionsblandingen i 500 ml isvand og hele blandingen gøres alkalisk med natriumhydrogenkarbonat og ekstra-heres med 300 ml ætylacetat. Ekstrakten vaskes med vand og 15 tørres. Ætylacetatet afdestilleres under nedsattryk, der sættes 10 ml 20%s ætanolisk saltsyre og 200 ml ætylæter til remanensen og blandingen får lov til at stå ved stutetempera-tur. Det resulterende krystallinske bundfald opsamles ved filtrering og tørres hvorved der vindes 11 g N-(indan-2-yl)-glycin-20 ætylester-hydroklorid sc-m farveløse nåle med smp. 165-167°C.

Referenceeksempel 2

Til en cpløsning af 5 g 2-indancn i 150 ml metanol sættes der 15 g glycinbenzylester-paratoluensulfonat og derpå tilsættes 25 5 g natriumcyanborhydrid portionsvis under isafkøling og omrøring. Derefter behandles blandingen på samne måde som beskrevet i referer.ceekserr.pel 1 hvorved der vindes 6,5 g N-(indan-2-yl)-glycinbenzylester-hydroklorid som farveløse prismer med smp. 186-189°C.

30

Referenceeksempel 3 40 g 2-indanon opløses i 300 ml metanol, der tilsættes 78 g glycin-t-butylester-fosfit og 150 g vand hvorpå der i løbet af 15 minutter under isafkøling og omrøring tilsættes 23 g 35 natriumcyanborhydrid. Den resulterende blanding omrøres yder-

DK 164917 B

14 ligere ved stuetemperatur i 4 timer. Til reaktionsblandingen sættes der 400 ml 20%s fosforsyre.portionsvis i løbet af en time hvorpå der tilsættes 200 ml vand, blandingen omrøres i 30 minutter og ekstraheres derpå med 800 ml ætylæter, og det 5 vandige lag indstilles til pH 10 med 20%s natriumhydroxyd og ekstraheres med fire portioner (ialt 500 ml) kloroform. Ekstrakten tørres over vandfrit natriumsulfat og destilleres derefter under nedsat tryk. Til den vundne olie sættes der 50 ml ætanol og derpå 150 ml vand og blandingen afkøles. Det krystallinske 10 bundfald opsamles ved filtrering og afkrystalliseres to gange fra vandig ætanol hvorved der vindes 47 g (indan-2-yl)-glycin-t-butylester som farveløse prismer med smp. 54-55°C.

Referenceeksempel 4 15 En opløsning af 22,3 g N-karbobenzoxy-L-alanin og 14 ml triætylamin i 200 ml tetrahydrofuran afkøledes til -10°C og 13,1 ml isobutylklorkarbonat tilsættes dråbevis i portioner under omrøring. Efter omrøring i 30 minutter tilsættes en opløsning af 24,1 g N-(indan-2-yl)-glycinætylester-hydroklorid 20 og 14 ml triætylamin i 200 ml kloroform dråbevis ved -10°C til -5°C. Efter henstand natten over ved stuetemperatur vaskes reaktionsblandingen i rækkefølge med vand, vandig natrium-hydrogenkarbonat, 10%s saltsyre og vand og tørres over vandfri natriumsulfat. Opløsningsmidlet afdestilleres under ned-25 sat tryk, remanensen opløses i 100 ml metanol, der tilsættes 75 ml 2N natriumhydroxyd og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer. Derpå gøres blandingen sur med 10%s saltsyre for at udskille den resulterende olie, som ekstraheres med 500 ml ætylacetat. Ekstrakten vaskes med vand og tørres 30 og opløsningsmidlet afdestilleres under nedsat tryk hvorved der vindes 25 g N-karbobenzoxyrL-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin i form af en olie. Denne opløses i 50%s ætanol og underkastes katalytisk reduktion i nærværelse af 4 g 10%s palladium på kulstof. Når hydrogenabsorptionen er ophørt filtreres kata-35 lysatoren fra og filtratet koncentreres under nedsat tryk.

Tilsætning af 50 ml metanol til remanensen giver 11 g L-alanyl- — i 7 — rrl \rr· i rr com f ar- λτ o 1 Acp nålo τηοΛ c τη o 1 ft Π — 1

DK 164917B

15

Referenceeksempel 5 21,8 g N-karbobenzoxy-L-alanin og 12,3 ml triætylamin opløstes i 200 ml tetrahydrofuran og 8,5 g ætylklorkarbonat tilsættes dråbevis ved -15°C under omrøring. Efter den dråbe-5 vise tilsætning fortsættes omrøringen i 15 minutter hvorefter der dråbevis ved -10°,C eller derunder tilsættes en opløsning af 22 g (indan-2-yl)-glycin-t-butylester i 100 ml kloroform. Efter omrøring ved stuetemperatur i en time udhældes reaktionsblandingen i 500 ml vand og kloroformlaget skilles fra og 10 kloroformen afdestilles. Remanensen opløses i 300 ml ætylacetat, opløsningen vaskes med to portioner af 50 ml IN vandig natrium-hydroxyd, en 50 ml's portion vand, to 50 ml's portioner 20%s vandig fosforsyre og en 50 ml's portion vand i den nævnte rækkefølge, og derefter tørres der over vandfrit magniumsul-15 fat og opløsningsmidlet afdestilleres hvorved der vindes 35 g N-karbobenzoxy-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester i form af en olie. Denne opløses i 300 ml metanol og efter tilsætning af 7 g oxalsyre og 3,5 g 10%s palladium-kulstof (indeholdende 50% vand) foretages der katalytisk reduktion 20 ved almindelig temperatur og almindeligt tryk. Efter reaktionen filtreres katalysatoren fra, filtratet destilleres under nedsat tryk og der sættes 500 ml ætanol til remanensen. Ved afkøling dannes et bundfald, som opsamles ved filtrering og tørres hvorved der vindes 21,8 g L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-25 t-butylester-oxalat med smp. 138-141°C.

[<x]^= +20,4° (c=l, metanol).

Referenceeksempel 6 6 g N-(Indan-2-yl)-glycin-benzylester-hydroklorid sættes 30 til en blanding af 300 ml ætylacetat og 200 ml 5%s vandig kaliumkarbonat efterfulgt af kraftig omrøring. Til den resulterende opløsning sættes der dråbevis 6 ml kloracetylklorid i løbet af 30 minutter under isafkøling. Dereftér fortsættes omrøringen i 1 time. Derpå skilles ætylacetatlaget fra, vaskes med 35 vand og tørres over vandfri magniumsulfat og opløsningsmidlet afdestilleres under nedsat tryk. Tilsætning af æter til rema-

DK 164917 B

16 nensen giver 6 g N-kloracetyl-N-(indan-2-yl)-glycin-benzyl-ester i form af farveløse flager med smp. 99,5-100,5°C.

Referenceeksempel 7 5 3 g N-Kloracetyl-N-(indan-2-yl)-glycin-benzylester og 2 g N-benzylglycin-ætylester opløses i 50 ml metylætylketon, der tilsættes 10 g kaliumkarbonat og blandingen koges under tilbagesvaling i 24 timer under omrøring. Efter afkøling filtreres det opløselige stof fra og filtratet destilleres under 10 nedsat tryk hvorved der vindes en olie. Denne renses ved søjlekromatografi på silikagel hvorved der vindes 3 g N-ætoxykarbonyl-metyl-N-benzylglycyl-N-(indan-2-yl)-glycin-benzylester i form af en olie.

rent —1

Infrarødt (IR) absorptionsspektrum v cm : 1730, 1640.

Π13Χ 15

Referenceeksempel 8

Ved at omsætte 7 g N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester med 8,5 g N-(karbobenzoxy)-L-leucin og behandle reaktionsblandingen som i referenceeksempel 5 vindes der 3,5 g L-leucyl-N-20 (indan-2-yl)-glycin-t-butylester i form af et farveløst amorft pulver.

Referenceeksempel 9

Ved at omsætte 8,2 g N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester 25 med 13 g Na-t-butoxykarbonyl-Ne-karbobenzoxy-L-lycin som i referenceeksempel 5 vindes der 14 g Na-t-butoxykarbonyl-Ne-karbobenzoxy-L-lycyl-N- (indan-2-yl) -glycin-t-butylester som en farveløs olie.

NMR(CDC13) 6: 1,40, 1,45(18H), 5,05(2H), 7,0-7,3(9H) 30 IR spektrum vr®ntcm 1: 1700, 1640 ΠΙαΧ [α]£4 = -14,3° (c=0,9, metanol)

Referenceeksempel 10 35 5 g N°-t-Butoxykarbonyl-Ne-karbobenzoxy-L-lycyl-N-(indan-

O *»1 \ λτ 1 »τλ 4 *% 4* Kn 4*tr1 ΛΓ·4*Λν* Tnm/iaf nå -i vaf q c* omno 1 Q

17

DK 164917B

beskrevne måde opløses i 100 ml IN opløsning af hydrogenklorid i ætylacetat og opløsningen får lov til at stå ved stuetemperatur i 6 timer. Ved at sætte 500 ml petroleumsæter til reaktionsblandingen udskiller der sig et olieagtigt stof som isoleres.

5 Opløsningslaget koncentreres under nedsat tryk og underkastes igen tilsvarende behandling med hydrogenklorid. De vundne oliefraktioner forenes, opløses i 100 ml ætylacetat og vaskes med 100 ml IN natriumhydroxyd og med vand. Det organiske lag tørres over vandfrit magniumsulfat og efter -tilsætning af 1 g 10 oxalsyre afdestilleres opløsningsmidlet under nedsat tryk.

Ved at sætte en blanding af æter og petroleumsæter til remanensen vindes 2,4 g Ne-karbobenzoxy-L-lysyl-N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester-oxalat som et farveløst pulver.

Beregnet for C2 9^5^3^5^2^2^4 ^2^5 15 C 60,28 H 7,02 N 6,80

Fundet: C 59,83 H 7,01 N 6,41%.

[ctj33,5= +17,5° (c=l, metanol)

Referenceeksempel 11 20 I en opløsning af 13 g 2-indanon i 100 .ml metanol op løses der 13 g β-alanin-ætylester-hydroklorid og under isafkøling og omrøring tilsættes der portionsvis 6,5 g natrium-cyanborhydrid. Efter henstand ved stuetemperatur natten over udhældes blandingen i 500 ml isvand, gøres alkalisk med na-25 triumhydrogenkarbonat og ekstraheres med 200 ml klorofrom.

Ekstrakten vaskes med vand og tørres hvorefter kloroformen af-destilleres under nedsat tryk. Til remanensen sættes i den nævnte rækkefølge 10 ml 20%s ætanolisk saltsyre og 50 ml ætylæter og blandingen får lov til at stå ved stuetemperatur. Det 30 resulterende bundfald opsamles ved filtrering og tørres hvorved der vindes 10 g N-(indan-2-yl)-B-alanin-ætylester-hydro-klorid som farveløser flager med smp. 150-151°C.

18

DK 164917 B

Referenceeksempel 12

Ved at omsætte 7 g N-(indan-2-yl)-B-alanin-ætylester-hydroklorid med 7 g N-karbobenzoxy-L-alanin og ved at behandle reaktionsblandingen som i referenceeksempel 4 vindes der 5 5 g L-alanyl-N-(indan-2-yl)-B-alanin med smp. 205-206°C.

[a]^3/5 = +16° (c=0,8, IN HC1).

Referenceeksempel 13 I en opløsning af 20 g 1,2,3,4-tetrahydro-2-naftalenon 10 i 200 ml metanol opløses der 23 g glycin-ætylester-hydroklorid og 9,0 g natriumcyanborhydrid tilsættes portionsvis under isafkøling og omrøring. Efter omrøring ved stuetemperatur i 2 timer udhældes' reaktionsblandingen i 500 ml isvand og hele blandingen gøres alkalisk med natriumhydrogenkarbonat og eks-15 traheres med 500 ml ætylacetat. Ekstrakten vaskes med vand og tørres, ætylacetaten afdestilleres under nedsat tryk, der sættes 10 ml 20%s ætanolisk saltsyre og 200 ml ætylæter til remanensen og blandingen får lov til at stå ved stuetemperatur.

Det krystallinske bundfald opsamles ved filtrering og tørres 20 hvorved der vindes 25 g N-(1,2,3-4-tetrahydronaftalen-2-yl)-glycin-ætylester-hydroklorid som farveløse nåle med smp. 198-200°C.

Referenceeksempel 14 25 Ved at omsætte 13,5 g N-(l,2,3,4-tetrahydronaftalen- 2-yl)-glycin-ætylester-hydroklorid med 11,6 g N-karbobenzoxy-L-alanin og behandle reaktionsblandingen som beskrevet i referenceeksempel 4 vindes der 7,5 g L-alanyl-N-(1,2,3,4-tetra-hydronaftalen-2-yl)-glycin som et farveløst amorft pulver.

30 IR spektrum vNu^°^cm 1720, 1640 max

Referenceeksempel 15

Ved at omsætte 13 g (indan-l-yl)-glycin-ætylester-hydroklorid med 11,6 g N-karbobenzoxy-L-alanin og behand-35 le reaktionsblandingen som beskrevet i eksempel 4 vindes

DK 164917 B

19 der 8,0 L-alanyl-N-(indan-l-yl)-glycin som et farveløst amorft pulver.

IR spektrum vNuj°lcm 1730, 1640. r max 5 Referenceeksempel 16

Ved at omsætte 10 g (5-benzyloxyindan-l-yl)-glycin-ætylester med 8 g N-karbobenzoxy-L-alanin og behandle reaktionsblandingen som beskrevet i referenceeksempel 4 vindes der 5,2 g L-alanyl-N-(5-hydroxyindan-l-yI)-glycin som et 10 farveløst amorft pulver.

Referenceeksempel 17 11 g 5,6-Dimetoxy-l-indamin-hydroklorid suspenderes i 200 ml metylætylketon hvorpå der tilsættes 6,9 g kalium-15 karbonat, 2,0 g kaliumjodid og 8,2 g t-butylklorkarbonat og blandingen koges under tilbagesvaling i 8 timer. Reaktionsblandingen udhældes i 500 ml vand og ekstraheres med 200 ml ætylacetat, ekstrakten vaskes med vand og tørres og ætylacetatet afdestilleres under nedsat tryk. Remanensen underkastes 20 søjlekromatografi på silikagel og elueres med hexan/acetone i forholdet 7:3 hvorved der vindes 6,0 g N-(5,6-dimetoxyindan- l-yl)-glycin-t-butylester i form af en olie. Denne opløses i 50 ml ætylæter, der tilsættes 2,0 g oxalsyre og blandingen får lov til at stå ved stuetemperatur. Derved vindes der 7,3 g 25 N- (5,6-dimetoxyindan-l-yl)-glycin-t-butylester-oxalat i form af farveløse nåle med smp. 158-160°C.

Referenceeksempel 18

Ved at omsætte 7 g N-(5,6-dimetoxyindan-l-yl)-glycin-30 t-butylester-oxalat med 4,8 g N-karbobenzoxy-L-alanin og behandle reaktionsblandingen som beskrevet i referenceeksempel 5 vindes der 4 g L-alanyl-N-(5,6-dimetoxyindan-l-yl) -glycin-t-butylester-oxalat som et farveløst amorft pulver.

Referenceeksempel 19 20

DK 164917 B

En blanding af 143 g ætyl-3-fenylpropionat, 234 g ætyloxalat og 154 ml 28%s natriumætoxydopløsning i ætanol opvarmedes på et vandbad ved en badtemperatur på 60-70°C i 5 1 1/2 time medens ætanolen afdestilleres under nedsat tryk.

Til den resulterende røde sirupagtige remanens sættes der 1,3 liter 15 rumfangs% svovlsyre. Blandingen koges under tilbagesvaling og omrøring i 15 timer og olielaget skilles fra, neutraliseres med 10%s natriumhydroxyd og ekstraheres 10 med ætylacetat. Det vandige lag gøres surt med fortyndet svovlsyre. Den resulterende olie ekstraheres med ætylacetat, vaskes med vand og tørres. Fjernelse af ætylacetat ved destillation under nedsat tryk giver 130 g 2-oxo-4-fenylsmørsyre som en olie.

15

Referenceeksempel 20 130 g 2-Oxo-4-fenylsmørsyre sættes til en blanding af 650 ml ætanol og 30 ml koncentreret svovlsyre og hele blandingen koges under tilbagesvaling i 5 timer. Reaktions-20 blandingen koncentreres til ca. halvdelen af det oprindelige rumfang og fortyndes derpå med 500 ml vand. Den resulterende olie opsamles og det vandige lag ekstraheres med ætylacetat. Ekstrakten og olien forenes og tørres og opløsningsmidlet afdestilleres under nedsat tryk. Remanensen destilleres un-25 der nedsat tryk hvorved der vindes 113 g ætyl-2-oxo-4-fenyl-butyrat som en farveløs olie med kogepunkt 135-141°C/3 mmHg

Referenceeksempler 21-27

De i tabel 1 viste forbindelser kan fremstilles ud fra 30 de respektive tilsvarende udgangsforbindelser på samme måde som beskrevet i referenceeksempel 19 og 20.

21

DK 164917B

Tabel 1 r l_^^_ch2ch2cocoor" 5 ---—-—-

Ref. eks nI .

R' R" Kogepunkt -nr_____—--- 21 H CH3 108-112°C/0,5 mmHg 1Q 22 H -(CH2)2CH3 105-118°C/1 mmHg ^CH- 23 H -CH 132-135°C/3 mmHg ___^CH3__ 24 H -(CH2)3CH3 145-150°C/4 mmHg 15---- XH, 25 H -CH--CH 120-132°C/0,5 mmHg ___Ν:η3__ 26 Cl -CH2CH3 125-135°C/1 mmHg 20 27 CH3 -CH2CH3 120-130°C/1 mmHg

Referenceeksempel 28 25 7,5 ml piperidin sættes til en opløsning af 99,6 g veratrumaldehyd og 124,8 g malonsyre i 240 ml pyridin og blandingen opvarmes til 80-85°C i 1 time og yderligere til 110-115°C i 3 timer. Efter afkøling udhældes reaktionsblandingen i en stor mængde vand og det resulterende krystallinske 30 bundfald opsamles ved filtrering. Krystallerne opløses i fortyndet vandig natriumhydroxyd. Opløsningen gøres sur med saltsyre hvorved der vindes 70 g 3,4-dimetoxykanelsyre som farveløse nåle med smp. 182-183°C. 35 g Af disse krystaller opløses i 500 ml ætanol og opløsningen mættes med gasformig 35 hydrogenklorid og får lov til at stå ved stuetemperatur natten over. De ved afdestillation af ætanolen vundne kry-

DK 164917 B

22 staller opløses i ætylacetat. Opløsningen vaskes med fortyndet vandig natriumhydrogenkarbonat og med vand og tørres. De ved afdestillation af ætylacetatet vundne krystaller omkrystalliseres fra ætanol hvorved der vindes 65 g ætyl-3,4-dimetoxy-5 cinnamat som flager med smp. 53-55°C. 34 g Af disse krystaller opløses i 300 ml ætanol og der sættes 10 g 5%s palladiumkulstof til opløsningen og blandingen rystes i en hydrogen-atomosfære ved stuetemperatur. Efter 3 timer frafiltreres katalysatoren og filtratet koncentreres hvorved der vindes 10 34 g ætyl-3,4-dimetoxyfenylpropionat i form af en olie. En opløsning af 34,1 g af denne olie i 43 g diætyloxalat sættes til en natriumætoxydopløsning (fremstillet ud fra 3,8 g metallisk natrium og 150 ml ætanol) ved 60°C under omrøring.

Efter at tilsætningen er tilendebragt fortsættes omrøringen 15 ved 70-75°C i yderligere 3 timer. Ætanolen afdestilleres under nedsat tryk, der sættes 200 ml vand til remanensen og blandingen vaskes med ætylacetat. Det vandige lag gøres surt med saltsyre og ekstraheres derpå med ætylacetat. Ætyl-acetatlaget vaskes med vand, tørres og koncentreres hvorved 20 der vindes 27 g ætyl-2-oxo-3-ætoxykarbonyl-4-(3,4-dimetoxy-fenyl)-butyrat i form af en olie. 26 g Af denne olie opløses i en blanding af 80 ml dimetyl sulf oxyd og 8 ml vand. Til opløsningen sættes der 6,3 g natriumklorid og blandingen omrøres ved 120?C i 2 timer. Efter afkøling tilsættes der en 25 stor mængde vand og blandingen ekstraheres med ætylacetat. Ekstrakten vaskes med vand, tørres og koncentreres hvorved der vindes krystaller. Omkrystallisation fra æter giver 15 g ætyl-2-oxo-4-(3,4-dimetoxyfenyl)-butyrat som piller med smp. 85-87°C.

30

Referenceeksempel 29

Ved at gå frem som beskrevet i referenceeksempel 28 vindes ætyl-4-(p-benzyloxyfenyl)-2-oxobutyrat som en gul olie ud fra det tilsvarende udgangsmateriale.

35 NMR spektrum (CDCl^) δ: l,3(t,3H), 2,7-3,3(m,4H), 4,3(g,2H), 5,0(s,2H), 6,7-7,4(m,9H) T Ja Λ ίΤΛ V» -C Λ V· AM Λί ΐ A ΛίΛ Λ4· ί / ΜΜΏ \ Λ ^ 4· Π 1-» A 4 ΤΤ/4 J—\ ·ν> A ΛΜ 23

DK 164917B

singlet, d en dublet, t en triplet, q en kvartet, m en multiplet og pH en fenylgruppe. (Det samme skal gælde for NMR-data i det følgende).

5 Referenceeksempel 30 9 g 2-oxo-4-fenylsmørsyre opløses i 100 ml benzen og 10 g fosforpentaklorid tilsættes portionsvis under isafkøling* Efter omrøring ved stuetemperatur i 1 time sættes der dråbevis til benzenopløsningen en opløsning af 10 g butyl-10 amin i 20 ml tetrahydrofuran. Reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter og udhældes i 100 ml isvand. Blandingen ekstraheres med ætylacetat, ekstrakten vaskes med vand og tørres og ætylacetatet afdestilleres under nedsat tryk. Remanensen underkastes søjlekromatografi på silikagel 15 under anvendelse af hexan/acetone i forholdet 7:3 som elue-ringsmiddel hvorved der vindes 6,0 g N-butyl-2-oxo-4-fenyl-butylamid som en svagt gul olie.

NMR spektrum (CDCl^) δ: 0,90 ^Η,πι,ΟΗ^), 1,20-1,50 (4H,m), 2,70-3,40 (5H,m), 7,20 (5H,s,Ph).

20

Eksempel 1

Til en opløsning af 1,0 g L-alanyl-N-(indan-2-yl)-gly-cin og 6,0 g ætyl-2-oxo-4-fenylbutyrat i 200 ml ætanol sættes der 8 g molekylsigtemateriale og blandingen omrøres ved stue-25 temperatur i 1 time. Derefter tilsættes der 1,0 g natriumcy-anborhydrid. Efter henstand natten over koncentreres reaktionsblandingen under nedsat tryk, remanensen indstilles til pH 9,0 med 10%s natriumhydroxyd og det uopløselige stof fjernes ved ekstraktion med ætylæter. Den vandige opløsning ind-30 stilles til pH 4 med 10%s saltsyre og ekstraheres med to portioner af hver 200 ml ætylacetat. Ekstrakten vaskes med vand og tørres over natriumsulfat og opløsningsmidlet afdestilleres under nedsat tryk. Remanensen opløses i 2 ml 20%s ætano-lisk saltsyre, hvorefter der tilsættes 100 ml ætylæter og 35 blandingen får lov til at stå ved stuetemperatur for at give 0,4 g N-(l-ætoxykarbonyl-3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(indan-

DK 164917 B

24 2-yl)-glycin-hydroklorid med smp. 168-170°C.

Eksempel 2 21 g L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester-oxa-5 lat opløses i 200 ml ætanol. Til opløsningen sættes i den nævnte rækkefølge 4,1 g natriumacetat, 10 ml eddikesyre, 25 g æty1-2-oxo-4-fenylbutyrat og 25 g molekylsigtemateriale 3A. Derefter tilsættes 30 g Raney-nikkel suspenderet i 100 ml ætanol og der gennemføres katalytisk reduktion ved almindelig 10 temperatur og almindeligt tryk. Når absorptionen af hydrogen er ophørt skilles den ovenstående væske fra ved dekantering og bundfaldet vaskes to eller tre gange med ætanol. Den ovenstående væske og vaskevæskerne forenes og koncentreres under nedsat tryk. Remanensen opløses i 500 ml ætylacetat og op-15 løsningen vaskes med vandigt natriumhydrogenkarbonat og filtreres med 30 g diatoméjord. Ætylacetatlaget skilles fra filtratet, vaskes med vand og tørres over vandfri magniumsulfat og opløsningsmidlet afdestilleres under nedsat tryk hvorved der vindes 24 g N-(l-ætoxykarbonyl-3-fenylpropyl)-L-alanyl-20 N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester som en svagt gul, viskos olie.

IR spektrum vren1: cm 1730 (ester), 1640 (amid), max NMR spektrum (CDC13) δ: 1,27 (3H,t,CH3), 1,40 (9H,s, CH3 x 3), 1,8-2,2 (3H,m,CH3), 2,6-4,5 (10H,m), 3,8-3,9 (2H, 25m,CH2), 4,2 (2H,q,CH2), 4,9 (lH,t,CH), 7,1-7,4 (9H,m,Ph).

Eksempel 3

Den ifølge eksempel 2 vundne N-(l-ætoxykarbonyl-3-feny lpropyl) -L-alanyl-N- (indan-2-yl)-glycin-t-butylester under-30 kastes søjlekromatografi under anvendelse af 700 g silikagel og med eluering med benzen, benzen/acetone (10:1 til 4:1) og metanol/benzen (1:9) hvorved der vindes to fraktioner.

Hver fraktion underkastes yderligere søjlekromatografi under anvendelse af 400 g silikagel og der renses ved den ovenfor 35 beskrevne procedure. Den første fraktion giver 2 g N-[1-(R)~ ætoxykarbonyl-3-fenylpropyl]-L-alanyl-N-(indan-2-y1)-glycin- 25

DK 164917B

t-butylester som en farveløs viskos olie.

[a]22 =-16,4° (c = I, metanol).

På den anden side giver den anden fraktion 16,5 g N-[ 1- (S) -ætoxykarbony 1-3-feny lpropyl ] -L-alanyl-N- (indan-2-yl) -5 glycin-t-butylester som en farveløs viskos olie.

[a]22 = -12,6° (c = 1, metanol).

Eksempel 4 5 g N-[l-(S)-ætoxykarbony1-3-fenylpropyl]-L-alanyΙ-ΙΟ N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester vundet ifølge eksempel 3 opløses i 5 ml eddikesyre, der sættes 20 ml 25%s brombrin-tesyre i eddikesyre til opløsningen og blandingen rystes i 10 minutter. De ved tilsætning af 300 ml ætylæter udfældede krystaller opsamles ved filtrering hvorved der vindes 5 g 15 N-[ l-( S) -ætoxykarbony 1-3-fenylpropyl] -L-alanyl-N- (indan-2-yl)-glycin-hydrobromid som farveløse krystaller med smp. 180-183°C.

[o]2® = +15,6° (c = 1,4, metanol).

20 Eksempel 5

Ved at anvende den i eksempel 3 vundne N-[1-(R)-ætoxykarbonyl-3-fenylpropyl]-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester og behandle den som beskrevet i eksempel 4 kan der vindes N-[ 1-(R)-ætoxykarbony 1-3-fenylpropyl]-L-alanyl-N-25 (indan-2-yl)-glycin-hydrobromid som farveløse krystaller med smp. 150-155°.

[a]2^ = -20,2° (c = 1, metanol).

Eksempel 6 30 Til en blanding af 500 ml ætylacetat, 33 g natrium- hydrogenkarbonat og 500 ml vand sættes der 16,2 g N-[1-(S)-ætoxykarbony1-3-fenylpropyl]-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-hydrobromid fremstillet som beskrevet i eksempel 4. Efter omrøring for af fuldende opløsningen indstilles opløsningen 35 til pH 4 med IN saltsyre. Ætylacetatlaget skilles fra, vaskes med vand, tørres og efter tilsætning af 20 ml 7N ætanolisk

DK 164917 B

26 saltsyre koncentreres der under nedsat tryk. Til remanensen sættes der 250 ml ætylæter og 250 ml petroleumsæter og det resulterende bundfald opsamles ved filtrering hvorved der vindes 11 g N-[ 1-(S)-ætoxykarbonyl-3-fenylpropyl]-L-alanyl-5N-(indan-2-yl)-glycin-hydroklorid som farveløse krystaller.

Omkrystallisation fra en blanding af acetone og IN saltsyre giver farveløse plader med smp. 166-170°C under sønderdeling.

[a]p^ = +18,5° (c = 1, metanol).

10 IR spektrum vNu3o1 cm"1: 1740 (COOC-H.), 1705 (COOH), max z j 1640 (CO-N).

Eksempel 7 4,1 g L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester-oxa-15 lat opløses i 40 ml ætanol; derefter tilsættes der 0,85 g natriumacetat, 2 ml eddikesyre, 5 g propyl-2-oxo-4-fenylbuty-rat og 5 g molekylsigtemateriale 3A, hvorefter der tilsættes en suspension af 6 g Raney-nkkkel i 20 ml ætanol og der gennemføres katalytisk reduktion ved almindelig temperatur og 20 almindeligt tryk. Når hydrogenabsorptionen er ophørt skilles den ovenstående væske fra ved dekantering. Bundfaldet vaskes to eller tre gange med ætanol. Den ovenstående væske og vaskevæskerne forenes og opløsningsmidlerne afdestilleres under nedsat tryk. Remanensen rystes med 100 ml ætylacetat og van-25 dig natriumhydrogenkarbonat. Filtrering med 10 g diatoméjord, fraskillelse af filtratets ætylacetatlag, vask med vand, tørring og fjernelse af opløsningsmidlet ved destillation giver N-(l-propoxykarbonyl-3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester som en svagt gul, viskos olie. Til denne 30 sættes der 3 ml eddikesyre og 12 ml 25%s brombrintesyreopløs-ning i eddikesyre og blandingen rystes lejlighedsvis i 15 minutter for at få reaktionen til at skride fremad. Ved tilsætning af 150 ml ætylæter danner der sig et krystallinsk bundfald som opsamles ved filtrering hvorved der vindes 3,4 g 35 N-(1-propoxykarbony1-3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(indan-2-y1)-glycin-hydrobromid som farveløse krystaller. Disse sættes til en blanding af 70 ml vand og 70 ml ætylacetat og blandin- 27

DK 164917B

gen omrøres, neutraliseres med natriumhydrogenkarbonat og indstilles derpå til pH 3-4 med 10%s saltsyre. Ætylacetatla-get skilles fra, tørres over vandfrit magniumsulfat og gøres surt med ætanolisk hydrogenklorid. Opløsningsmidlet afdestil-5 leres og der sættes 150 ml ætylæter til remanensen. Efter at man har ladet blandingen stå i 10 minutter opsamles det resulterende krystallinske bundfald ved filtrering hvorved der vindes 1,7 g N-(l-propoxykarbonyl-3-fenylpropyl)-L-ala-nyl-N-(indan-2-yl)-glycin-hydroklorid med smp. 147-150°C un-10 der sønderdeling.

IR spektrum vNujo1 cm 1740 (ester), 1710 (COOH), c max 1640 (CO-N).

Eksempel 8 15 Den samme fremgangsmåde som beskrevet i eksempel 7, bortset fra at der anvendes butyl-2-oxo-4-fenylbutyrat i stedet for propyl-2-oxo-4-fenylbutyrat giver N-(l-butoxykarbo-nyl-3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-hydroklorid med smp. 154-156°C under sønderdeling.

20 IR spektrum VNU3°1 cm 1740 (ester), 1700 (COOH), max 1640 (CO-N).

Eksempel 9

Den samme procedure som beskrevet i eksempel 7, bort-25 set fra at der anvendes isopropyl-2-oxo-4-fenylbutyrat i stedet for propyl-2-oxo-4-fenylbutyrat giver N-(l-isopropoxykar-bonyl-3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-hydroklorid med smp. 150-153°C under sønderdeling.

30 Eksempel 10

Den samme fremgangsmåde som beskrevet i eksempel 7, bortset fra at der anvendes isobutyl-2-oxo-4-fenylbutyrat i stedet for propyl-2-oxo-4-fenylbutyrat, giver N-(1-isobutoxy-karbonyl-3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-hydro-35 klorid med smp. 148-149°C under sønderdeling.

Eksempel 11 28

DK 164917B

Den .samme fremgangsmåde som beskrevet i eksempel 7 under anvendelse af metyl-2-oxo-4-fenylbutyrat i stedet for propyl-2-oxo-4-fenylbutyrat i metanol som opløsningsmiddel 5 i stedet for ætanol giver N-(l-metoxykarbonyl-3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-hydroklorid som farveløse nåle med smp. 163-165°C under sønderdeling.

IR spektrum v*Ju:)o1 cm-1: 1750 (COOCH-J, 1705 (COOH),

UlaX j 1640 (CO-N).

10

Eksempel 12

Den samme fremgangsmåde som beskrevet i eksempel 7, bortset fra at der anvendes ætyl-4-(4-klorfenyl)-2-oxobuty-rat i stedet for propyl-2-oxo-4-fenylbutyrat, giver N-[l-15 ætoxykarbonyl-3-(4-klorfenyl)-propyl]-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-hydroklorid. Smp. 163-168°C (sønderdeling).

[o]^3 = +28,1° (c = 1, metanol).

IR spektrum vj^01 cm"1: 1740, 1710, 1640.

20 Eksempel 13

Den samme fremgangsmåde som beskrevet i eksempel 7, bortset fra at der benyttes ætyl-2-oxo-4-(p-tolyl)-butyrat i stedet for propyl-2-oxo-4-fenylbutyrat, giver N-[l-ætoxy-karbonyl-3-(p-tolyl)-propyl]-L-alanyl-N-(indan-2-y1)-glycin-25 hydroklorid med smp. 160-163°C (sønderdeling).

[o]33 = +22,2° (c = 1, metanol).

IR spektrum ^3°1 cm"1: 1740, 1710, 1640.

r max

Eksempel 14 30 Til 100 ml ætanol sættes der 3 g L-alanyl-N-(indan- 2-yl)-glycin-t-butylester-oxalat, 0,75 g natriumacetat, 1,5 g eddikesyre, 5 g molekylsigtemateriale 3A og 5 g ætyl-4-(4-benzyloxyfenyl)-2-oxobutyrat, og der gennemføres katalytisk reduktion under anvendelse af Raney-nikkel som katalysator.

35 Når hydrogenabsorptionen er ophørt fjernes katalysatoren,

DK 164917 B

29 og der gennemføres yderligere katalytisk reduktion under anvendelse af palladium-kulstof som katalysator. Katalysatoren filtreres fra og opløsningsmidlet afdestilleres under nedsat tryk hvorved der vindes N-[1-ætoxykarbony1-3-(p-hydroxyfenyl)-5 propyl]-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester i form af en olie. Denne olie omdannes ved den reaktionsprocedure der er anvendt i eksempel 4 til N-[l-ætoxykarbonyl-3-(4-hy-droxyfenyl)-propyl]-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-hydrobro-mid, som igen omdannes til hydrokloridet ved den fremgangsmå-10de der er beskrevet i eksempel 6. Der vindes således 0,65 g N- [ l-ætoxykarbonyl-3-(4-hydroxyfenyl) -propyl] -L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-hydroklorid som farveløse krystaller som smelter ved 126-130°C under sønderdeling.

[a]£4 = +17,7° (c = 1, metanol).

15 Massespektrum m/e: 450 (M+-HC1-H20), 335, 334, 331, 330, 284, 215, 214, 169, 168, 133, 129, 120, 117, 116, 107.

Eksempel 15 3,5 g L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin suspenderes i 20 en blanding af 30 ml ætanol og 20 ml vand og til denne suspension sættes der 15 g ætyl-2-oxo-4-(3,4-dimetoxyfenyl)-butyrat. Under omrøring ved stuetemperatur tilsættes der dråbevis i løbet af ca. 3 timer en opløsning af 1,4 g natriumcyanborhy-drid i 10 ml ætanol. Efter omrøring i 1 time koncentreres reaktionsblandin-25 gen, dér tilsættes vand-og det uopløselig stof fjernes ved ekstraktion med æter. Ved indstilling af det vandige lag til pH 4 med fortyndet saltsyre udskiller der sig en olie, som ekstra- -heres med ætylacetat. Ætylacetatlaget vaskes med vand, tørres og koncentreres under nedsat tryk. Ved tilsætning af først 30 2 ml 4N saltsyre/ætanol-opløsning og derpå 300 ml æter til remanensen udskiller der sig et olieagtigt stof. Æteren fjernes ved dekantering og olien vaskes yderligere med æter ved den samme procedure hvorved olien går over i et pulver. Pulveret krystalliseres ved behandling med diklormetan/æter og 35 omkrystalliseres fra det samme blandede opløsningsmiddel hvorved der vindes 0,4 g N-[1—(S)-ætoxykarbonyl-3-(3,4-dimetoxy-f enyl) -propyl] - L-alanyl-N-(indan-2-yl) -glycin-hydroklorid 30

DK 164917B

i form af krystaller med smp. 138-140°C under sønderdeling.

[a]*2 = +34° { c = 0,5, ætanol).

Eksempel 16 5 1,0 g L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin og 6,0 g fenyl- pyrodruesyre opløses i 50 ml 70%s vandig metanol og pH indstilles til 7,0 med vandig kaliumhydroxyd. Der sættes 1,0 g natriumcyanborhydrid til denne opløsning. EFter at man har ladet blandingen stå ved stuetemperatur natten over afdestil-10 leres opløsningsmidlet under nedsat tryk, remanensen opløses i 2 ml vand og adsorberes på en kolonne med "Dowex" ® 50 (H+) (ionbytterharpiks) og elueres med 2% pyridin. Opløsningsmidlet afdestilleres under nedsat tryk, remanensen renses ved søjlekromatografi på silikagel under anvendelse af acetoni-15 tril/metanol i forholdet 4:1 som fremkalder, hvorved der vindes 0,3 g N-(l-karboxy-2-fenylætyl)-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin som et farveløst pulver.

Beregnet for C^H^N^g,HC1: C 61,81 H 6,09 N 6,27 Fundet: C 61,43 H 6,08 N 6,61%.

20 NMR spektrum (D20) δ: 1,20-1,60 (3H,CH3), 2,80-4,02 (10H), 4,90-5,30 (IH), 7,10-8,40 (10H,Ph).

Massespektrum m/e: 390 (M-H20).

Eksempel 17 25 Ved at anvende 1,0 g L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin, 6,0 g 2-oxo-smørsyre og 1,0 g natriumcyanborhydrid ved en fremgangsmåde svarende til den der er beskrevet i eksempel 1 kan der vindes 0,4 g N-(1-karboxypropyl)-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin som et farveløst pulver.

30 Beregnet for C 62,05 H 6,94 N 8,04

Fundet: C 61,97 H 7,58 N 7,46%.

NMR spektrum (D20) δ: 1,00 (3H,J=6Hz,CHg), 1,25-1,50 (3H,-CH3), 3,00-3,85 (10H), 5,10-5,20 (IH), 7,28 (4H,Ph). Massespektrum m/e: 330 (M-H20).

Eksempel 18 31

DK 164917 B

3 g N-CN'-ætoxykarbonylmetyl-N'-benzylglycyl)-N-(indan-2-yl)-glycin-benzylester opløses i 100 ml ætanol og der gennemføres katalytisk reduktion ved almindelig temperatur og 5 almindeligt tryk under anvendelse af 5%s palladium-kulstof samt katalysator. Efter absorption af to ækvivalenter hydrogen filtreres reaktionsblandingen for at fjerne katalysatoren. Ætanolen afdestilleres under nedsat tryk hvorved der vindes et olieagtigt stof. Tilsætning af ætanolisk saltsyre 10 med 100 ml æter til det olieagtige stof giver N-(N'-ætoxy-karbonylmetylglycyl)-N-(indan-2-yl)-glycin-hydroklorid som et farveløst pulver.

Beregnet for c17H22N205,HC1,1/2H20: C 53,75 H 6,37 N 7,38 Fundet: C 53,63 H 6,87 N 7,18%.

15 Massespektrum m/e: 316 (M-3/2H2O-HCI).

Eksempel 19 1,2 g N-(1-(S)-ætoxykarbonyl-3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-hydroklorid opløses i 30 ml metanol.

20 Til denne opløsning sættes 5 ml 2N vandig natriumhydroxyd.

Efter omrøring ved stuetemperatur natten over koncentreres reaktionsblandingen under nedsat tryk og der tilsættes 30 ml vand. Ved indstilling af pH til 5-6 med fortyndet saltsyre udskiller der sig en olie, som ekstraheres med ætylacetat.

25 Ætylacetatlaget vaskes med vand og tørres og opløsningsmidlet afdestilleres under nedsat tryk. Der sættes 5 ml metanol til remanensen og opløsningen får lov til at stå. Der vindes 0,6 g N-(1-(S)-karboxyl-3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin som krystaller med smp. 140-142°C.

30 [aj^2 = +26° (c = °'6, 1% HC1)*

Eksempel 20 I 30 ml metanol opløses der 1,1 g N-[1-ætoxykarbonyl- 3-(3,4-dimetoxyfenyl) -propyl] -L-alanyl-N- (indan-2-yl) -glycin-35 hydroklorid. Til opløsningen sættes der 5 ml 2N vandig natriumhydroxyd. Efter omrøring i 4 timer koncentreres reaktions-

DK 164917 B

32 blandingen og der tilsættes 30 ml vand. Ved indstilling af pH til ca. 5 med fortyndet saltsyre udskiller der sig et olieagtigt stof, som ekstraheres med ætylacetat. Ekstrakten vaskes med vand, tørres og koncentreres. Til denne remanens 5 sættes der 4 ml metanol og blandingen får lov til at stå.

Der vindes 60 mg N-[l-karboxy-3-(3,4-dimetoxyfenyl)-propyl]-L-alanyl-N-{indan-2-yl)-glycin som krystaller der smelter ved 160-165°C under sønderdeling.

10 Eksempel 21 I 50 ml ætanol opløses der 3,5 g L-leucyl-N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester og der tilsættes 3,5 g ætyl-2-oxo- 4-fenylbutyrat, 1,5 g natriumacetat, 3,5 eddikesyre, 7,0 g molekylsigtemateriale 3A og 5,0 g Raney-nikkel og der gennem-15 føres katalytisk reduktion ved almindelig temperatur og almindeligt tryk. Efter absorption af den teoretiske mængde hydrogen filtreres katalysatoren fra og filtratet koncentreres under nedsat tryk. Til remanensen sættes der 100 ml vand og 2 g natriumhydrogenkarbonat og blandingen ekstraheres med 20 200 ml ætylacetat. Efter vask af ekstrakten med vand og tørring afdestilleres ætylacetatet under nedsat tryk og der sættes 20 ml eddikesyre og 5 ml 25%s brombrintesyreopløsning i eddikesyre til remanensen. Efter omrøring ved stuetemperatur i 10 minutter tilsættes der 100 ml æter og det resulteren-25 de olielag skilles fra og vaskes med ætylæter hvorved der vindes N- (1-ætocykårbony 1 -3-fenylpropyl) -L-leucyl-N- (indan-2-yl)-glycin-hydrobromid. Denne forbindelse suspenderes i 10 ml vand, suspensionen gøres alkalisk med natriumhydrogenkarbonat og de uopløselige bestanddele ekstraheres med ætylæter.

30 Det vandige lag indstilles til pH 4,0 med 10%s saltsyre og ekstraheres med 200 ml ætylacetat. Ekstrakten vaskes med vand og tørres over magniumsulfat, der tilsættes 1 ml ætanolisk saltsyre og ætylacetatet afdestilleres under nedsat tryk.

Ved at sætte 200 ml ætylæter til remanensen og ved at lade 35 blandingen stå ved stuetemperatur vindes der 0,8 g N-(l-ætoxy-karbonyl-3-fenylpropyl)-L-leucyl-N-(indan-2-yl)-glycin-hydro-klorid som et farveløst amorft pulver.

DK 164917 B

33 NMR spektrum (dg-DMSO) 6: 0,93 (6H,d,J=3Hz,CH(CH3)2), 1,30 (3H,t,J=7Hz,CH3), 2,90-3,20 (4H,m,CH2), 3,90 (2H,s,CH2), 4,00-4,35 (3H,m), 7,20 (4H,s,Ph), 7,30 (5H,s,Ph).

Massespektrum m/e: 476, 431, 361, 315, 171.

5

Eksempel 22 I 20 ml metanol opløses der 3,5 g Ne-karbobenzoxy-L-lysyl-N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester-oxalat og der tilsættes 1 g natriumacetat, 1,2 g eddikesyre, 8 g molekylsigte-10 materiale og 15 g ætyl-2-oxo-4-fenylbutyrat. Til denne blanding sættes der dråbevis under omrøring en opløsning af 3,3 g natriumcyanborhydrid i 30 ml metanol i løbet af 2 timer.

Der tilsættes yderligere 3 g natriumcyanborhydrid og blandingen omrøres i 3 timer. Efter tilsætning af 200 ml 25%s vandig 15 fosforsyre ekstraheres reaktionsblandingen med to portioner af 200 ml ætylacetat. Ekstrakten vaskes med 0,5N vandig na-triumhydroxyd og med vand og tørres over vandfrit magniumsulfat. Ætylacetat afdestilleres under nedsat tryk og den således vundne olie skilles fra og renses ved søjlekromatografi på 20 silikagel (acetone/benzen (1:12 til 1:5)). Den første fraktion giver 1,1 g Na- [ 1- (R) -ætoxykarbonyl-3-fenylprqpyI]/-Ne-karbcbenz-oxy-L-lysyl-N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester i form af en olie.

Beregnet for ¢43^53^07: C 70,36 H 7,63 N 6,00 25 Fundet: C 69,89 H 7,64 N 5,76%.

24 n [ej; = -4,5° (c = 1, metanol).

Den anden fraktion giver 1 g Να-[1—(S)-ætoxykarbonyl- 3-fenylpropyl]-Ne-karbobenzoxy-L-lysyl-N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester i form af en olie.

30 Beregnet for : C 70,36 H 7,63 N 6,00

Fundet: C 70,28 H 7,51 N 5,93%.

[o]^4= -8,2° (c = 1, metanol).

rpnf· —1 IR spektrum \> cm : 3300 (NH), 1720 (C=0), 1630 max (C=0).

Eksempel 23 34

DK 164917 B

I 2 ml eddikesyre opløses der 1 g Na-[l-(R)-ætoxykar-bonyl-3-fenylpropyl]-NE-karbobenzoxy-L-lysyl-N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester. til denne opløsning sættes der 8 ml 25%s 5 brombrintesyreopløsning i eddikesyre og blandingen får lov til at stå ved stuetemperatur i 30 minutter- Ved tilsætning af 200 ml æter og 100 ml petroleumsæter til rekationsblan-dingen danner der sig et krystallinsk bundfald. Dette opsamles ved filtrering og omkrystalliseres fra en blanding af 10 metanol og ætylæter hvorved der vindes 0,8 g Na-[1-(R)-ætoxy-karbonyl-3-fenylpropyl]-L-lysyl-N-(indan-2-yl)-glycin-dihy-drobromid med smp. 128-133°C under sønderdeling.

[a]p4 = -11,6° (c =1, metanol).

15 Eksempel 24 På en måde svarende til den der er beskrevet i eksempel 23 vindes der 0,6 g Na-[l-(s)-ætoxykarbonyl-3-fenylpro-pyl]-L-lysyl-N-(indan-2-yl)-glycin-dihydrobromid ud fra 0,9 ct ε g N -[l-(S)-ætoxykarbonyl-3-fenylpropyl]-N -karbobenzoxy-L- 20 lysyl-N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester. Smp.: 160-165°C (sønderdeling), [a]p4 - +18,0° (c = 1, metanol).

Eksempel 25

Ved at omsætte 2,0 g L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin- 25 t-butylester-oxalat med 4,0 g N-butyl-2-oxo-4-fenylbutyryl-amid på en måde svarende til den der er beskrevet i eksempel 2 vindes der 0,5 g N-(l-butylaminokarbonyl-3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester som en farveløs olie.

30 NMR spektrum (CDC13): 1,90 (3H,m,CH3), 1,40-1,55 (16H, m) , 2,60-3,49 (8H,m,CH2), 3,70-3,95 (2H,m), 7,20 (4H,s,Ph), 7,30 (5H,s,Ph).

Eksempel 26 35 Anvendelse af 0,5 g N-(1-butylaminokarbony1-3-feny1-

DK 164917 B

35 propyl)-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-t-butylester som en reaktant på samme måde som beskrevet i eksempel 4 giver N-(l-butylaminokarbonyl-3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-hydrobromid som et farveløst amorft pulver.

5 NMR spektrum (d6-DMSO) 6: 0,8-1,0 (3H,m,CH3), 1,2-1,55 (7H,m,CH3+CH2x2), 1,90-2,25 (2H,m,CH2), 2,40-2,60 (2H,m,CH2), 2,95-3,30 (6H,m,CH2), 4,80-5,0 (lH,m,CH), 7,10-7,30 (9H,m,

Ph) .

10 Eksempel 27 I en blanding af 20 ml vand og 100 ml ætanol opløses der 2,0 g L-alanyl-N-(indan-2-yl)-β-alanin, der tilsættes 10 g ætyl-2-oxo-4-fenylbutyrat og en opløsning af 0,94 g na-triumcyanborhydrid i 20 ml ætanol tilsættes dråbevis i løbet 15 af 2 timer. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 3 timer og indstilles derpå til pH 4,0 med 10%s saltsyre og ætanolen afdestilleres under nedsat tryk. Remanensen ekstraheres med 200 ml ætylacetat, vaskes med vand og tørres og ætylacetaten afdestilleres under nedsat tryk. Remanensen opløses i 2 ml 20 20%s ætanolisk saltsyre, der tilsættes 100 ml ætylæter og blandingen får lov til at stå ved stuetemperatur. På denne måde vindes 1,2 g N-(l-ætoxykarbonyl-3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-6-alanin-hydroklorid som et farveløst amorft pulver.

25 NMR spektrum (dg-DMSO) 6: 1,30 (3H,t,J=7,5Hz), 1,40 (3H,d,J=4,5Hz), 2,65-3,00 (4H,m,CH2), 3,20-3,40 (4H,m,CH2), 4,25 (2H,q,J=7,5Hz,CH2), 7,20 (4H,s,Ph), 7,30 (5H,s,Ph).

Eksempel 28 30 I 200 ml ætanol opløses der 3,0 g L-alanyl-N-(1,2,3,4- tetrahydroftalen-2-yl)-glycin, der tilsættes 15 g ætyl-2-oxo- 4-fenylbutyrat og 12 g molekylsigtemateriale 3A og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter. Derefter tilsættes der dråbevis i løbet af 6 timer en opløsning af 1,3 g natri-35 umcyanborhydrid i 50 ml ætanol og omrøringen fortsættes i yderligere 2 timer. Det uopløselige stof filtreres fra og

DK 164917B

36 filtratet koncentreres til tørhed under nedsat tryk..Der sættes 50 ml vand til remanensen, blandingen gøres alkalisk med natriumhydrogenkarbonat og det uopløselige stof fjernes ved ekstraktion med ætylæter. Det vandige lag indstilles til pH 54,0 med 10%s saltsyre og ekstraheres derpå med 200 ml ætylacetat. Ekstrakten vaskes med vand og tørres, der tilsættes 1 ml 20%s alkoholisk saltsyre og ætylacetatet afdestilleres under nedsat tryk. Der sættes 100 ml ætylæter til remanensen og blandingen får lov til at stå ved stuetemperatur hvorved 10 der vindes 1,5 g N-(l-ætoxykarbonyl-3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(1,2,3,4-tetrahydronaftalen-2-yl)-glycin-hydroklorid som et farveløst amorft pulver.

NMR spektrum (dg-DMS0) δ: 1,30 (3H,t,J=7Hz,CH3), 1,40 (3H,d,J=6Hz,CH3), 1,70-2,30(5H,m,CH2), 2,80-3,05(7H, 15m,CH2), 4,00 (2H,s,CH2), 4,30 (2H,q,J=7Hz,CH2), 7,10 (4H,s,

Ph), 7,30 (5H,s,Ph).

Massespektrum m/e: 448 (M-HCI-H2O), 344, 319, 168. Eksempel 29 20 Ved at omsætte 3 g L-alanyl-N-(indan-l-yl)-glycin med 15 g ætyl-2-oxo-4-fenylbutylat og behandle reaktionsblandingen som beskrevet i eksempel 28 vindes der 1,2 g N-(l-ætoxy-karbonyl-3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(indan-l-yl)-glycin-hydroklorid som et farveløst amorft pulver.

25 NMR-spektrum (dg-DMS0) δ: 1,20-1,45 (3H,m,CH3), 1,55- l, 65 (3H,m,CH3), 2,70-3,05 (4H,m,CH2), 4,00 (2H,s,CH2), 4,40 (2H,q,J=7Hz,CH2), 4,80-5,00 (lH,m,-CH-), 7,30 (9H,s,Ph).

Massespektrum m/e: 434 (M-HC1-H20), 258, 244, 180.

30 Eksempel 30

Ved at omsætte 3 g L-alanyl-N-(5-hydroxyindan-l-yl)-glycin med 15 g ætyl-2-oxo-4-fenylbutylat og ved at behandle reaktionsblandingen som beskrevet i eksempel 28 vindes der 0,8 g N-(l-ætoxykarbonyl-3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(5-hydroxy-35 indan-l-yl)-glycin-hydroklorid som et farveløst amorft pu NMR spektrum (dg-DMSO) δ: 1,10-1,70 (6H,m,CH3x2), 1,75- 3,30 (8H,m,CH2x4), 3,70-4,30 (5H,m,CH2x2+CH), 4,60-5,20 (2H, m, CHx2), 6,55-7,30 (8H,m,Ph).

Eksempel 31 37

DK 164917 B

I 80 ml ætanol opløses der 4,0 g L-alanyl-N-(5,6-dimetoxyindan-l-yl)-glycin-t-butylester og der tilsættes 0,77 g natriumacetat, 4,0 g eddikesyre, 4,0 g ætyl-2-oxo-4-5 fenylbutyrat, 12 g molekylsigtemateriale 3A og 6,0 g Raney-nikkel. Derefter gennemføres reaktionen og behandlingen på samme måde som beskrevet i eksempel 2 hvorved der vindes 2,0 g N-(l-ætoxykarbonyl-3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(5,6-dimetoxy-indan-l-yl)-glycin-t-butylester som en svagt gul olie.

10 NMR-spektrum (CDC13) 6: 1,20-1,50 (15H,m,CH3x5), 1,90- 2,20 (2H,m,CH2), 2,50 (2H,s,CH2), 2,60-2,95 (4H,m,CH2), 3,80 (3H,s,OCH3), 3,90 (3H,s,OCH3), 4,20 (2H,q,J=7,0Hz,CH2), 5,40-5,60 (lH,m,CH), 6,80-6,90 (2H,m,Ph), 7,25 (5H,s,Ph).

Massespektrum m/e = 568 (M+), 495, 361, 308, 234.

15

Eksempel 32 I 10 ml eddikesyre opløses der 2,0 g N-(1-ætoxykarbonyl- 3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(5,6-dimetoxyindan-l-yl)-glycin-t-butylester og der tilsættes dråbevis under isafkøling 2 20 ml 25%s brombrintesyre i eddikesyre. Efter at man har ladet blandingen stå ved stuetemperatur i 5 minutter tilsættes der 50 ml ætylester til reaktionsblandingen, hvorved der udskiller sig et amorft pulver. Dette opsamles ved filtrering og opløses i 10 ml vand. Opløsningen gøres alkalisk med natriumhydrogen-25 karbonat og de uopløselige bestanddele fjernes ved ekstraktion med ætylæter. Det vandige lag indstilles til pH 4,0 med 10%s saltsyre og ekstraheres med 100 ml kloroform. Ekstrakten vaskes med vand og tørres, der tilsættes 1 ml 20%s ætanolisk saltsyre og kloroformen afdestilleres under nedsat tryk. Rema-30 nensen opløses i 2 ml ætanol. Ved at tilsætte 20 ml ætylæter udfælder der sig et farveløst amorft pulver. Opsamling af dette bundfald ved filtrering giver 0,2 g N-(1-ætoxykarbonyl- 3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(5,6-dimetoxyindan-l-yl)-glycin-hydroklorid som et farveløst puvler.

35 NMR spektrum (dg-DMSO) 6: 1,25 (3H,t,J=8Hz,CH3), 1,40 (3H,d,J=4,5Hz,CH3), 3,75 (3H,s,OCH3), 3,80 (3H,s,OCH3), 6,80

DK 164917B

38 (IH,s,Ph), 6,90 (IH,s,Ph), 7,25 (5H,s,Ph).

Eksempel 33 5 Ved en fremgangsmåde svarende til den der er beskrevet i eksempel 32 vindes N-(l-ætoxykarbonyl-3-fenylpropyl)-gly-cyl-N-(indan-2-yl)-glycin-hydroklorid ud fra N-(l-ætoxykar-bonyl-3-fenylpropyl)-glycyl-N-(indan-2-yl)-glycin-t-butyl-ester i form af et farveløst amorft pulver.

10 NMR spektrum (dg-DMSO) δ: 1,30 (3H,t,J=6Hz,CH3), 2,25 (2H,m,CH2), 2,70 (2H,m,CH2), 2,90-3,20 (4H,m,CH2), 4,00-4,60 (5H,m), 4,80-5,10 (lH,m), 7,30 (4h,s), 7,35 (5H,s,Ph).

Forsøg 1 15

Inhibering af det angiotensin I-omdannende enzym (ACE) med de her omhandlede forbindelser.

Forsøgsmetode

Forsøget gennemførtes i overensstemmelse med en modifikation af den metode der er beskrevet af Cushman et al. [Biochemical Pharmacology, bind 20, 1637 (1971)]. Det vil sige at man under anvendelse af hippuryl-L-histidyl-L-leucin (HHL) som substrat bestemte ACE-inhiberingsaktiviteten som den pro-2^ centuelle inhibering af den af ACE fremstillede mængde af hippursyre når de omhandlede forbindelser blev tilsat. En opløsning af den under afprøvning værende forbindelse opløstes i 0,02-2%s dimetylsulfoxyd/100 mM kaliumfosfatpufferopløsning (8,3, indeholdende 300 mM natriumklorid) sattes til 100 μΐ ^ ACE (proteinkoncentration 20 mg/ml) og 100 μΐ 1,25 mM HH1.

Ved dette forsøg blev der som kontrol anvendt en kaliumfosfat-pufferopløsning indeholdende dimetylsulfoxyd i samme koncentration som i prøveopløsningen. Efter inkubering af opløsningen ved 37°C i 1 time sattes der 150 μΐ IN saltsyre til opløsningen for at afslutte reaktionen. Efter at der var tilsat 35

1 ml ætylacetat centrifugeredes opløsningen ved 3000 omdrejninger pr. minut i 10 minutter. En portion på 0,5 ml skiltes fra ætylacetatlaget og tørredes ved en temperatur under 50°C under nitrogengasstrømme. Remanensen blandedes med 5 ml 1M

DK 164917 B

39 vandig natriumklorid og blandingen underkastedes kolorimetri ved en bølgelængde på 228 nm.

Prøveresultat 5 Prøveresultaterne med hensyn til forbindelserne ifølge eksempel 1, 7, 8, 9 og 19 er vist i tabel 2 nedenfor.

Tabel 2

Forbindelse Koncentration Inhiberende virkning ifølge eks. (μΜ) på ACE (%) 10 nr.

. 1 87 10 97 - 1 91 10 97 « 1 69 15 ° 10 99 o 1 72 3 10 95 19 1 95 * 10_ 98_ 20 Forsøg 2

De omhandlede forbindelsers virkning mod angiotensin I's hypertensive virkning.

25 Forsøgsmetode

Der benyttedes som forsøgsdyr hanrotter af stammen Sprague-Dawley vejende 250-350 g, som blev fodret under fri adgang til drikkevand og foder. Rotterne bedøvedes ved intra-peritoneal indgift af 50 mg/kg pentobarbitalnatrium på dagen 30 før forsøgsdagen og et polyætylenrør blev indsat i hver lårarterie til at måle blodtrykket og i lårvenen til injektion af angiotensin I og II, hvorpå rørene blev fastgjort.

På prøvedagen blev det gennemsnitlige blodtryk i kontrolfasen registreret på et elektrisk hæmodynamometer (MP-35 4t model fremstillet af Nippon Koden, Japan) og derefter injiceredes angiotensin I og derpå angiotensin II gennem lårvenen i en dosis på henholdsvis 300 ng/kg og 100 ng/kg til må-

DK 164917 B

40 ling af den hypertensive aktivitet. Derpå blev 13,8 μΜ/kg af den under afprøvning værende forbindelse indgivet oralt som en vandig opløsning eller en vandig gummiarabikumsuspen-sion og 20, 60 og 120 minutter efter indgiften indsprøjtedes 5 der atter angiotensin I og II for at spore hypertensive reaktioner. Ved beregning af den procentuelle inhibering af angiotensin I's hypertensive virkning korrigeredes den procentuelle inhiberingsværdi på basis af den tidsmæssige variation af angiotensin II's hypertensive reaktion.

10

Forsøgsresultater

De vundne forsøgsresultater for de ifølge eksempel 1, 7, 9 og 15 fremstillede forbindelser er vist i tabel 3 nedenfor.

15

Tabel 3

Forbindelse Procentuel inhibering af antiotensin I's ifølge eks. hypertensive virkning nr

Efter Efter Efter 20 min. 60 min. 120 min.

20 1 93 88 77 7 84 91 96 9 88 71 51 15 84 80 65 25 Præparateksempler

De omhandlede forbindelser med formlen I anvendes eksempelvis til behandling af hypertension i følgende eksempler på præparater.

30 1. Tabletter 1) N-(l-ætoxykarbonyl-3-fenylpropyl)-L- alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-hydroklorid 10 g 2) Laktose 90 g 353) Majsstivelse . 29 g 4) Magniumstearat 1 g 130 g til 1000 tabletter

DK 164917 B

41

De ovennævnte ingredienser (1), (2) og 17 g majsstivelse blandes og granuleres under anvendelse af en pasta fremstillet ud fra 7 g majsstivelse- 5 g majsstivelse og ingrediensen (4) sættes til det resulterende granulat og blandingen 5 komprimeres ved hjælp af en tabletteringsmaskine til fremstilling af 1000 tabletter med en diameter på 7 mm hver indeholdende 10 mg af den aktive ingrediens (1).

2. Kapsler 10 1) N-(l-butoxykarbony1-2-fenylætyl)-L- alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-hydroklorid 10 g 2) Laktose 135 g 3) Fint cellulosepulver 70 g 4) Magniumstearat 5 g 15 220 g til 1000 kapsler

Alle de ovennævnte komponenter blandes og indkapsles i gelatinekapsel nr. 3 (IX japansk farmakopé) til fremstilling 20 af 1000 kapsler hver indeholdende 10 mg af den aktive bestanddel (I) .

3. Injektionsopløsning 1) N-[1—(S)-karboxy-3-fenylpropyl)-L-alanyl- 25 N-(indan-2-yl)-glycin-natriumsalt 10 g 2) Natriumklorid 9 g 3) Klorbutanol 5 g 4) Natriumbikarbonat 1 g 30 Alle de ovennævnte ingredienser opløses i 1000 ml de stilleret vand og fyldes i 1000 brune ampuller hver indeholdende 1 ml af opløsningen. Ampullerne udfyldes med nitrogengas og forsegles. Alle præparationstrinnene gennemføres under sterile betingelser.

Claims (16)

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af et bicy klisk substitueret dipeptidderivat med den almene formel R1 5 I (CnH ) ?5? 6 / XN-C-CH-NH-CH-C-R R2 I 3 (CH0) COOR 2 m 10 1 2 hvor R og R , som er ens eller forskellige, hver er hydrogen, hydroxyl eller alkoxy med 1-4 kulstofatomer, el-1 2 ler hvor R og R tilsammen danner en alkylendioxygruppe med 1-4 kulstofatomer, R2 er hydrogen eller en alkylgrup- 15 4 pe med 1-4 kulstofatomer, R er hydrogen, en alkylgrup- pe med 1-4 kulstofatomer eller en aminoalkylgruppe med 1-4 kulstofatomer, som på aminogruppen er usubstitueret eller substitueret med en acylgruppe valgt blandt C2_£ alkanoyl, benzoyl, C, - alkoxykarbonyl eller benzyloxy- 20 5 ^”4 karbonyl, R er hydrogen, alkyl eller fenyl-C^_4 alkyl, som på fenylgruppen er usubstitueret eller substitueret med 1-3 substituenter valgt blandt halogen, alkyl med 1-4 kulstofatomer, alkoxy med 1-4 kulstofatomer, g amino, nitro.og hydroxyl, R-- er hydroxyl,· C, A alkoxy, 25 ~q amino eller mono- eller di-C^_^ alkylamino, og m og n er hver 1 eller 2, eller farmaceutisk acceptable salte deraf, kendetegnet ved at man a) underkaster en forbindelse med formlen 30 1 R2 \ I ΐ

35 N-C-CH-NH2 (Ih,) COOR3 £ m DK 164917B hvor alle symbolerne har de ovenfor angivne betydninger, og en forbindelse med formlen R5-C-C-R6 III „ Ϊ II 5 0 0 hvor R3 og R6 har de ovenfor angivne betydninger, kondensation under reducerende betingelser, eller b) til fremstilling af en forbindelse med den almene for-3 6 10 mel I, hvori R er hydrogen og/eller R er hydroxyl og alle de øvrige symboler har de ovenfor angivne betydninger hydroly- 3 serer en esterforbindelse med den almene formel I, hvori R er C2_4 alkyl og/eller R^ er C^-4 alkoxy og alle de øvrige symboler har de ovenfor angivne betydninger, eller 15 c) til fremstilling af en forbindelse med den almene for- 3 6 mel I, hvor R er hydrogen og/eller R er hydroxyl og alle de øvrige symboler har de ovenfor angivne betydninger, underkaster en benzylester af en forbindelse med den almene for- 3 6 mel I, hvor R er benzyl og/eller R er benzyloxy og alle 20 de øvrige symboler har de ovenfor angivne betydninger, katalytisk reduktion, eller d) hydrolyserer eller katalytisk reducerer en forbindelse med den almene formel r1 I , (C H- ) TW 4 5 R2 ' ? ΐ f ? Ϊ 6 ,Λ N-C-CH-N—CH-C-R0 30 | (CHo) COOR3 ^ m hvor Z er en beskyttelsesgruppe som kan fjernes ved hydrolyse eller katalytisk reduktion og de øvrige symboler har de 35 ovenfor angivne betydninger, eller e) omsætter en forbindelse med den almene formel II med en forbindelse med den almene formel V DK 164917B R5 O I II 6 X-CH-C-R V c 6 5 hvor R og R har de ovenfor angivne betydninger og X er halo- 7 7 gen eller en gruppe med formlen R SC^-O-, hvor R er en alkyl, fenyl eller p-tolyl, hvorefter man om ønsket omdanner en forbindelse med den almene formel I vundet ved en hvilken som helst af fremgangsmå-10 derne a)-e) til et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved at man fremstiller en forbindelse med den almene formel 12 3 I, hvor R , R og R er hydrogen.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet 15 ved at man fremstiller en forbindelse med den almene formel 4 I, hvor R er alkyl med 1-4 kulstofatomer eller aminoalkyl med 1-4 kulstofatomer.

4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved at man fremstiller en forbindelse med den almene formel 20 1/ hvor R5 er fenetyl.

5 S-konfiguration ved hvert af de asymmetriske kulstofatomer, 4' 5' hvortil substituenterne henholdsvis R og R er forbundne.

5. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved at man fremstiller en forbindelse med den almene formel g I, hvor R er hydroxyl eller alkoxy med 1-4 kulstofatomer.

6. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet 25 ved at man fremstiller en forbindelse med den almene formel I, hvori m og n er 1.

7. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved at man fremstiller en forbindelse med formlen ch2cooh 4' 5' hvor R er hydrogen eller alkyl med 1-4 kulstofatomer, R er hydrogen, alkyl med 1-4 kulstofatomer eller fenyl-C, . 61 alkyl, og R er hydroxyl eller alkoxy med 1-4 kulstofatomer, eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf. DK 164917 B

8. Fremgangsmåde ifølge krav 7, kendetegnet 4 ’ ved at man fremstiller en forbindelse hvor R er alkyl med 5« 6 · 1-4 kulstofatomer, R er fenyl-C^_^ alkyl og R er alkoxy med 1-4 kulstofatomer, fortrinsvis i form af en isomer med

9. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, kendetegnet ved at man fremstiller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf i form af hydrokloridet.

10 10. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved at man fremstiller N-(1-ætoxykarbonyl-3-p-tolylpropyl)-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin.

11. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved at man fremstiller N-[1-ætoxykarbonyl-3-(4-hydroxyfe- 15 nyl)-propyl]-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin.

12. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved at man fremstiller N-(1-ætoxykarbonyl-3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin.

13. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet 20 ved at man fremstiller N-[1-(S)-ætoxykarbonyl-3-fenylpropyl]-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin.

14. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved at man fremstiller N-[1-(S)-ætoxykarbonyl-3-fenylpropyl]-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin-hydroklorid.

15. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved at man fremstiller N-(1-karboxy-3-fenylpropyl)-L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin.

16. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved at man fremstiller N-(3-fenylpropoxykarbonylpropyl)-30 L-alanyl-N-(indan-2-yl)-glycin.