DK164553B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 4-oxo-4h-pyrimido-oe2,1-aaaisoquinoliner - Google Patents

Description

DK 164553 B

i

Den foreliggende opfindelse vedrører en anal ogi fremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte terapeutisk anvendelige 4-oxo-4H-pyri-mido[2,I-a]isoquinolinderivater. De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen tilvejebragte forbindelser er særligt værdifulde til profylaktisk 5 behandling af allergisk bronkial astma ved oral administrering.

De fremstillede antiallergiske forbindelser har den almene formel o

10 «^i^V

7 L I i ™

so * ArV

is y · c c hvori A betegner tetrazol-5-yl eller -C09R , hvori R betegner hydrogen 2 eller resten af en let spaltelig estergruppe i form af (lavere)alkyl, R 20 betegner hydrogen, (lavere)alkyl eller (lavere)alkenyl, RJ og R^ betegner hver for sig hydrogen, hydroxy eller (lavere)alkoxy, og den punkterede linie betegner en eventuel dobbeltbinding, eller farmaceutisk acceptable kationsalte deraf, når A er 5-tetrazolyl eller -Ci^H, bortset fra 25 1) ethyl-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylat, 2) 4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylsyre, 3) ethyl-6,7-dihydro-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylat, 4) 6,7-dihydro-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylsyre, 30 5) ethyl-6,7-dihydro-9-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin- 3-carboxyl at, 6) ethyl-6,7-dihydro-10-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]iso-quinolin-3-carboxylat, 7) ethyl-6,7-dihydro-9,10-dimethoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]iso-35 quinolin-3-carboxylat, 8) ethyl-(±)-7-allyl-6,7-dihydro-10-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido-[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylat,

DK 164553 B

2 9) 6,-7-dihydro-9-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylsyre, 10) 6,7-dihydro-10-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylsyre, 5 11) 6,7-dihydro-9,10-dimethoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin- 3-carboxyl syre, 12) ethyl-9-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,1-a]isoquinolin-3-carb-oxylat, 13) ethyl-10-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,1-a]isoquinolin-3-carb-10 oxylat, 14) ethyl-7-ethyl-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylat, 15) ethyl-9,10-dimethoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,1-a]isoquinolin-3-carboxylat, 16) ethyl-7-allyl-10-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,1-a]isoquinolin-3-15 carboxyl at, 17) ethyl-10-methoxy-4-oxo-7-propyl-4H-pyrimido[2,1-a]isoquinolin- 3-carboxyl at, 18) 10-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylsyre, 19) 7-allyl-10-methoxy-4-oxo-4H-pyriniido[2,1-a]isoquinolin-3-20 carboxylsyre, 20) 9-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylsyre, 21) 7-hydroxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,1-a]isoquinolin-3-carboxylsyre, 22) 6,7-dihydro-10-hydroxy-4-oxo-4H-pyrimidot2,1-a]isoquinolin-3-carboxylsyre, 25 23) 10-i sobutyryloxy-6,7-di hydro-4-oxo-4H-pyrimi do[2,1-a]iso quinol i n-3-carboxyl syre, 24) ethyl-(±)-7-formylmethyl-6,7-dihydro-10-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylat og 25) ethyl-(±)-6,7-dihydro-7-(2,2,-dimethoxyethyl)-10-methoxy-4-oxo-30 4H-pyrimido[2,1-a]isoquinol in-3-carboxylat.

De forskellige ovennævnte substituentgrupper kan defineres yderligere som følger: (a) (lavere)alkyl omfatter både ligekædede og forgrenede mættede alifatiske carbonhydridgrupper med fra 1 til 6 carbonatomer, inklusive, 35 f.eks. methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl isobutyl, sec-butyl, t-butyl, n-pentyl, isopentyl, n-hexyl, etc.

(b) (lavere)alkenyl omfatter ligekædede eller forgrenede umættede alifatiske carbonhydridgrupper indeholdende en dobbeltbinding og med

DK 164553 B

3 fra 2 til 6 carbonatomer, inklusive, f.eks. vinyl, allyl, isopropenyl, 2- eller 3-methallyl eller 3-butenyl, (c) (lavere)alkoxy omfatter Cjg alkoxygrupper, hvori alkyldelen af disse grupper er som defineret under (b) ovenfor. Eksempler på sådanne 5 grupper er methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, isobutoxy, sec-butoxy, n-pentyloxy, isopentyloxy, n-hexyloxy, etc.

Fra GB patentskrift nr. 1.451.423 kendes nært beslægtede 1-oxo-lH- 6-substituerede pyrimido[l,2-a]quinolin-2-carboxylsyrer med antialler-gisk aktivitet. De ifølge den foreliggende opfindelse fremstillede for-10 bindeiser viser sig imidlertid ved PCA-screening at besidde aktiviteter, som ved oral administrering er overraskende højere end for de kendte forbindelser.

Når substituenten A i forbindelserne med formel I er en tetrazol-5-yl-gruppe, vil det være klart for fagmanden, at der er et tautomert 15 hydrogenatom, og at forbindelserne er i stand til at eksistere i begge de nedenfor viste former Ia og I ,. Begge former kan være til stede i større eller mindre grad, og de er i en tilstand af dynamisk ligevægt med hinanden. Opfindelsen medtagerbeggeformer, men af nemheds grunde er formen I arbitrært valgt til afbildning af de omhandlede forbindelser.

d 20

O N-N

r2 J\J\ R\ ! I h -—i 25 ^ r4-|

Ks?

Ia o K-—1N

30 r>3 I

4 vkAJ

R4_r

Formel I omfatter både pyrimido[2,l-a]isoquinolin (dobbeltbinding mellem carbonatomerne 6 og 7) og den tilsvarende 6,7-dihydropyrimido- 35

DK 164553 B

4 [2,l-a]isoquinolin (enkeltbinding mellem C-6 og C-7) som vist ved den 2 punkterede linie. 6,7-dihydroderivaterne med formel I, hvori R er en fra hydrogen forskellig substituent, indeholder et asymmetrisk carbon-atom (C-7), og i sådanne tilfælde kan forbindelserne eksistere i form af 5 såvel optiske isomere som racematerne. Alle sådanne former falder indenfor opfindelsens rammer.

Udtrykket "farmaceutisk acceptable kationsal te" skal omfatte ikke-toxiske salte, såsom alkalimetalsaltene, f.eks. natrium- og kaliumsaltene, jordal kalimetal salte, såsom calcium-, magnesium- eller barium-10 salte, aluminiumsalte, ammoniumsalte og salte med organiske baser, f.eks. aminer, såsom triethylamin, n-propylamin, tri-n-butylamin, piperidin, ethanolamin, diethanolamin, tri ethanolamin, diethylamino-ethylamin, ethyl endiamin, N,Ν'-dibenzylethylendiamin, benzylamin, tris(hydroxymethyl)aminomethan og pyrrolidin. Saltdannelse sker ved at 15 man omsætter den passende carboxylsyre eller tetrazol med formlen I med en i det væsentlige ækvimolær mængde af den passende base i en vandig opløsning eller i et egnet organisk opløsningsmiddel, såsom methanol eller ethanol. Saltene udvindes ved hjælp af standardmetoder, såsom ved hjælp af filtrering, såfremt de er uopløselige i mediet, eller såfremt 20 de er opløselige i mediet ved inddampning eller udfældning ved tilsætning af et ikke-opløsningsmiddel for saltet.

Med "let fraspaltelig estergruppe" menes en estergruppe i form af lavere al kyl (fortrinsvis ethyl), der kan fjernes ved hjælp af metoder, såsom kemisk eller enzymatisk hydrolyse, der ikke resulterer i nogen 25 nævneværdig nedbrydning af den resterende del af molekylet. De let spaltelige estere med formel I kan finde anvendelse som pro-lægemidl er i situationer, hvor der ønskes en mere langvarig administrering af det anti all ergi ske middel.

3 4

Substituenterne R og R i forbindelse med formel I kan være an-30 bragt i en vilkårlig af positionerne 8, 9, 10 og 11 i pyrimido[2,l-a]-isoquinolin-ringsystemet og er fortrinsvis i stillingerne 9 og 10.

En foretrukket udførelsesform af den foreliggende opfindelse omfatter forbindelser med formlen 35

DK 164553 B

5 K2 ^ 1 5

3 jXaX

r — IL

5 (i,) R4 a « i r hvori substituenterne R , R , R^ og R3 har de ovenfor for formel I anførte betydninger, og de farmaceutisk acceptable kationsalte deraf, 10 når R3 betegner hydrogen. Blandt forbindelserne med den almene formel I' er følgende foretrukne undergrupper: c a) forbindelser med formel Γ, hvori R betegner hydrogen, b) forbindelser med formel Γ, hvori R betegner (lavere)alkyl, 2 c) forbindelser med formel Γ, hvori R har de ovenfor angivne 15 betydninger 3 4 d) forbindelser med formel Γ, hvori substituenterne R og R hen- 2 3 4 holdsvis er bundet til ringstillinger 9 og 10, og R , R og R har de ovenfor angivne betydninger, og 3 4 e) forbindelser med formel Γ, hvori substituenterne R og R er 2 20 bundet til henholdsvis ringpositioner 9 og 10, R betegner hydrogen, ethyl, allyl eller n-propyl, R3 og R4 betegner hver for sig hydrogen c eller methoxy, og R betegner hydrogen eller ethyl.

En anden foretrukket udførelsesform af den foreliggende opfindelse omfatter forbindelserne med formlen 25 d ’wy"',s *3 fi^r 30 (r,) hvori substituenterne R^, R3, og R3 har de ovenfor for formel I anførte betydninger, og de farmaceutisk acceptable kationsalte deraf, når 35 R betegner hydrogen. Blandt forbindelserne med den almene formel I" er følgende foretrukne undergrupper: 5 a) forbindelser med formel I", hvori R betegner hydrogen, b) forbindelser med formel I", hvori R betegner (lavere)alkyl, 2

DK 164553 B

6 c) forbindelser med formel I", hvori R har de ovenfor angivne betydninger, d) forbindelser med formel I", hvori substituenterne R^ og R^ er 2 3 4 bundet til henholdsvis ringstillinger 9 og 10, og R , R og R har de 5 ovenfor angivne betydninger, og

O A

e) forbindelser med formel I", hvori substituenterne RJ og R^ er 2 bundet til henholdsvis ringstillinger 9 og 10, R betegner hydrogen, 3 4 ethyl eller allyl, R og R betegner hver for sig hydrogen, methoxy eller hydroxy, og R5 betegner hydrogen eller ethyl.

10 En anden foretrukket udførelsesform af den foreliggende opfindelse omfatter forbindelser med formlen ^ÅA 11 15

XaJ * R f (I"*)

.V

20 2 3 4 hvori substituenterne R , R og R har de ovenfor for formel I anførte betydninger, og de farmaceutisk acceptable kationsal te deraf. Blandt forbindelserne med den almene formel I"' er følgende foretrukne undergrupper: 25 a) forbindelser med formel I"', hvori R har de ovenfor angivne betydninger 3 4 b) forbindelser med formel I"', hvori substituenterne R og R er 2 3 4 bundet til henholdsvis ringstillinger 9 og 10, og R , R og R har de ovenfor angivne betydninger, og 3 4 30 c) forbindelser med formel I"7, hvori substituenter R og R er 2 bundet til henholdsvis ringstillinger 9 og 10, R betegner hydrogen, ethyl, allyl eller n-propyl, og R og R hver for sig betegner hydrogen eller methoxy.

En anden foretrukket udførelsesform af den foreliggende opfindelse 35 omfatter forbindelser med formlen

DK 164553 B

7

O N~-N

r2 J

5 r3—fjTy^N i·...

R4 O Λ 1 10 hvori substituenterne R , R·3 og R^ har de ovenfor for formel I anførte betydninger, og de farmaceutisk acceptable kationsalte deraf. Blandt forbindelserne med den almene formel I"" er følgende foretrukne undergrupper: 2 a) forbindelser med formel I"", hvori R har de ovenfor angivne 15 betydninger 3 4

b) forbindelser med formel I"", hvori substi tuenterne R og R

2 3 4 henholdsvis er bundet til ringsti 11 i ngerne 9 og 10, og R , R og R har de ovenfor angivne betydninger, og 3 4

c) forbindelser med formel Γ"', hvori substituenterne R og R

2 20 henholdsvis er bundet til ringpositioner 9 og 10, R betegner hydrogen, 3 4 ethyl eller ally!, og R og R hver for sig betegner hydrogen, methoxy eller hydroxy.

Anal ogi fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommi i g ved, at man a) til fremstilling af en forbindelse med formel (I), hvor A beteg-25 ner -C02R , hvor R har den ovenfor anførte betydning, i et eller to trin opvarmer en forbindelse med formlen R2 30 r3 __ j (II) >v nh2 35 2 3 4 hvori R , R og R har den ovenfor anførte betydning, med en di(lavere)alkyl-ethoxymethylenmalonatester med den almene formel (III)

DK 164553 B

8 C2H5OCH=C(C02-(1avere)al kyl)2 (III) 1 nærvær eller fravær af et inert organisk opløsningsmiddel, idet man fortrinsvis først opvarmer den umættede forbindelse med formel (II) ved 5 en temperatur over 80°C med nævnte di(lavere)al kyl-ethoxymethylen-malonatester med formel (III) i nærvær eller fravær af et inert opløsningsmiddel til fremstilling af en forbindelse med formlen R2 10 3 N <IV) R HN1 /CO.,- (lavere) alky 1

15 XCH=C

'^XC02_ (lavere) alkyl 2 3 4 hvori R , R og R har den ovenfor anførte betydning, hvorefter man ringslutter forbindelsen med formel (IV) ved opvarmning 20 ved en temperatur på ca. 200-260°C i et højtkogende inert organisk opløsningsmiddel, og om ønsket omdanner en resulterende forbindelse, 5 5 hvori R betegner lavere al kyl til en forbindelse, hvori R betegner hydrogen, ved hydrolyse med syre eller base, og om ønsket omdanner en 5 fremstillet fri syre, hvori R betegner hydrogen, til en let fraspal-25 telig ester, som defineret ovenfor, ved esterificering på i og for sig kendt måde, og/eller om ønsket omdanner en resulterende forbindelse, 5 hvori R betegner lavere al kyl, som er umættet ved Cg^, til den tilsvarende mættede forbindelse ved katalytisk hydrogenering, og/eller om c ønsket omdanner en resulterende forbindelse, hvori R betegner lavere 30 alkyl, som er mættet ved Cg til den tilsvarende umættede forbindelse ved dehydrogenering, og om ønsket på i og for sig kendt måde omdanner en forbindelse, hvor A betegner -C00H til et farmaceutisk acceptabelt kationsalt deraf, · b) til fremstilling af en forbindelse med formel (I), hvor A beteg-35 ner tetrazol-5-yl, hvilken forbindelse betegnes med formel (Γ")

DK 164553B

9

O N--N

k2 ' i I H d'")

‘V

r4/ hvori R1, og R2 har den ovenfor anførte betydning, 10 kondenserer et passende 1-aminoisoquinolin-udgangsmateriale med formlen R1

R3-^ |^S

15 (II,) R2' NH2 2 3 4 hvor R , R og R har den ovenfor anførte betydning, 20 med ethylethoxymethylencyanoacetat i nærvær eller fravær af et inert organisk opløsningsmiddel til fremstilling af et acrylat-mellemprodukt med formlen R1 25 3 ί<;ίίΥ5^

RJ__ I

(V)

R2 HN

\h=C(C=N)CO,C-H, 30 z 5 3 4 2 fremstilling af forbindelsen med formel (Γ")

35 c) til fremstilling af en forbindelse med formel (I), hvor A

betegner tetrazol-5-yl, hvilken forbindelse betegnes med formel (Γ") 3 hvor R , R og R har den ovenfor anførte betydning, og omsætter mellemproduktet (V) med aluminiumazid i tetrahydrofuran til

DK 164553 B

10

° N-N

rV„M3J

H (I'")

5 4T

y 2 3 4 hvori R , R og R har den ovenfor anførte betydning, 10 omsætter et nitril med formel (VIΓ) o / c=n

r3_V

20 2 3 4 hvor R , R og R har den ovenfor anførte betydning, med aluminiumazid i tetrahydrofuran, eller 25 d) til fremstilling af en 6,7-dihydropyrimidinoforbindelse med formel (I), hvori A betegner tetrazol-5-yl, hvilken forbindelse betegnes med formel (I"") ......

r3—i-

35 V

r4/

DK 164553 B

11

O O A

hvori R , R og R har den ovenfor anførte betydning, omsætter et nitril med formlen 5 0

r2 (VID

‘-$T

R4 2 3 4 hvori R , R og R har den ovenfor anførte betydning, 15 med aluminiumazid i tetrahydrofuran eller med et azidsalt i form af ammoniumazid, substitueret ammoniumazid, natriumazid eller lithiumazid i et inert organisk opløsningsmiddel, hvorefter en under b)-d) opnået forbindelse om ønsket på i og for sig kendt måde omdannes til et farmaceutisk acceptabelt kationsalt deraf.

20 Når der anvendes et l-amino-3,4-dihydroisoquinolin-udgangsmateriale forløber kondensationsreaktionen direkte til de ønskede 6,7-dihydro-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolinestere med formlen I. Reaktionstemperaturen er ikke kritisk i dette tilfælde, og kondensationen kan udføres ved stuetemperatur eller ved forhøjede temperaturer. Med fordel opvarmes reak-25 tanterne til ca. 100°C for at sikre, at reaktionen bliver fuldstændig.

Et inert organisk opløsningsmiddel (f.eks. toluen, benzen eller aceto-nitril) eller en blanding af sådanne opløsningsmidler kan anvendes eller alternativt kan reaktanterne blandes direkte.

I det tilfælde, hvor der anvendes et 1-aminoisoquinolin-udgangs-30 materiale, udføres reaktionen med opvarmning, fortrinsvis ved temperaturer over ca. 80°C. Der kan anvendes et inert organisk opløsningsmiddel med et kogepunkt over reaktionstemperaturen (f.eks. en alkohol eller et carbonhydrid), eller reaktanterne kan opvarmes direkte. Kondensationen af en 1-aminoisoquinolin giver et mellemprodukt med formlen 35

DK 164553 B

? 12

M

r3__I I

L N · (IV) KN /C0--(lavere)alkyl 5 \ / 2

XCH=C

^CC^- (lavere) alkyl

Mellemproduktet IV ringsluttes dernæst termisk ved forhøjede temperaturer (fortrinsvis temperaturer i intervallet fra ca. 200 til 10 260°C) i et højtkogende inert organisk opløsningsmiddel, såsom diphenyl ether, mineralolie, "Dowtherm A" (varemærke for en blanding af 26,5% diphenyl og 73,5% di phenyl ether), perhydronaphthalen, di ethyl -benzen, eddikesyreanhydrid indeholdende svovlsyre eller andre højtkogende carbonhydrider til dannelse af den ønskede ester med formel I.

15 Kondensations- og ringslutningstrinene kan udføres i en enkelt operation uden isolering af mellemproduktet IV ved anvendelse af en tilstrækkeligt høj reaktionstemperatur, f.eks. 200 - 260°C. Alternativt og fortrinsvis udføres reaktionen imidlertid i 2 trin, hvor mellemproduktet IV isoleres og renses før ringslutning.

20 Ved anvendelsen af de ovenfor beskrevne kondensationsreaktioner kan den ønskede (lavere)al kyl ester med formlen I fremstilles direkte ved udvælgelse af det passende dialkyl-ethoxymethylenmalonat som udgangsmateriale. Fortrinsvis anvendes dog di ethylethoxymethylenmalonat til dannelse af ethylesterforbindelsen, som dernæst omdannes på i og for sig 25 kendt måde til andre ønskede (lavere)alkylestere. Forbindelser med formel I, hvori A betegner -C02H, kan fremstilles ud fra de tilsvarende (lavere)al kyl estere ved enten sur (f.eks. HC1) eller basisk (f.eks.

NaOH, KOH) hydrolyse. Sur hydrolyse, mest foretrukket med en blanding af eddikesyre og koncentreret saltsyre, foretrækkes, når 6,7-dobbelt-30 bindingen er til stede, eftersom der opnås bedre udbytter af de frie syrer. De frie syreforbindelser med formel I kan dernæst om ønsket omdannes til de farmaceutisk acceptable kationsalte ved omsætning med den passende base i et passende opløsningsmiddel på i og for sig kendt måde, eller de kan esterificeres på i og for sig kendt måde til dannelse 35 af de ønskede let spaltelige estere.

DK 164553 B

13 6,7-dihydropyrimido[[2,1-a]isoquinol i nforbindelserne med formlen

O

5 lil

Lx J) (I")

r3J-Y

y 10 c hvori R betegner (lavere)alkyl, kan også fremstilles ved reduktion, såsom ved katalytisk hydrogenering af den tilsvarende umættede (lavere) al kyl ester med formlen

15 Jx/ C02rS

I i II

λ Jk jJ (I·) 20 4/

R

2 4

Til opnåelse af en I"-forbindel se med substituenter R -R , der er identiske med substituenterne i udgangsmaterialet Γ, er det naturligvis nødvendigt fra forbindelse Γ at udelukke sådanne substituentgrupper R - 25 R4, som er let reducerbare, f.eks. (lavere)alkenyl. Katalytisk hydrogenering kan hensigtsmæssigt udføres ved anvendelse af en palladium-på-carbon katalysator og eddikesyre som opløsningsmiddel. Estrene med formel I" kan dernæst omdannes som beskrevet ovenfor til de frie syrer eller til farmaceutisk acceptable kationsalte eller let spaltelige 30 estere af de frie syrer.

De umættede pyrimido[2,l-a]isoquinolin (lavere)alkyl estere med formel I (formel Γ ovenfor) kan også fremstilles ved dehydrogenering af de tilsvarende mættede 6,7-dihydropyrimido[2,l-a]isoquinolinester med formel I". Dehydrogenering kan foretages ved opvarmning af esteren I" 35 med et dehydrogeneringsmiddel, såsom svovl, selenium, seleniumdioxid, chloranil (tetrachlorbenzoquinon), o-chloranil, 2,3-dichlor-5,6-dicyano- 1,4-benzoquinon (DDQ), pyridiniumhydrobromid, ceriumammoniumnitrat (CAN) eller fortrinsvis palladium-på-carbon i nærværelse af p-cymen.

DK 164553 B

14

Umættede pyrimido[2,l-a]isoquinolincarboxylsyrer med formlen o

5 C02H

K n ^ L J (v> R-—+- 10 i'T' R" kan også fremstilles ved at man underkaster mellemproduktet med formlen 15

NH

R2 C02C2H5 χχτ 20 a3-i

AA

r4/ sur hydrolyse. Arten af den til hydrolysen anvendte syre er ikke kri-25 tisk. Gode resultater er blevet opnået med en blanding af eddikesyre og koncentreret saltsyre. Efter hydrolyse kan forbindelsen I3, om ønsket α omdannes til farmaceutisk acceptabelt kationsalt eller en let spaltelig ester.

Forbindelser med formel I, hvori A betegner tetrazol-5-yl, kan 30 fremstilles ved hjælp af de nedenfor beskrevne fremgangsmåder.

Umættede pyrimido[2,l-a]isoquinolintetrazoler med formlen ° h-n 35 (Ih (i*")

DK 164553 B

15 kan let fremstilles ved en fremgangsmåde omfattende de trin, at man a) kondenserer det passende 1-aminoisoquinolin-udgangsmateriale med formi en R2 5 3 il I I UI')

R

R2 10 med ethylethoxymethylencyanoacetat i nærværelse eller fravær af et inert organisk opløsningsmiddel (f.eks. toluen) til fremstilling af et acylat- mellemprodukt med formlen ?

IT

15 R3 (V)

R4 HN

\h=C(C2N)C02C2h5 og 20 b) omsætter mellemprodukt V med aluminiumazid i tetrahydrofuran til fremstilling af tetrazolen Γ".

Kondensationstrinet (a) i ovennævnte fremgangsmåde kan udføres ved at man omsætter omtrentlig ækvimolære mængder af reaktanterne ΙΓ og ethylethoxymethylencyanoacetat. Reaktionstemperaturen kan variere fra 25 under stuetemperatur (f.eks. omkring 0°C) til forhøjede temperaturer (f.eks. 100°C eller mere). Trin (a) giver en blanding af det ønskede acrylatmellemprodukt V og en ringsluttet iminoester med formlen

NH

γ i i (vi) R3_J_ 35 7/^

R

DK 164553 B

16 der kan anvendes som beskrevet ovenfor som et mellemprodukt ved fremstillingen af de umættede pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylsyrer med formlen I_,. Forbindelser med formel VI har også vist sig at besidde α kraftig antiallergisk aktivitet, hvilket belyses af de nedenfor i tabel 5 II anførte PCA-screening data på rotter for ethyl-4-imino-4H-pyrimido-[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylat. Forholdet mellem acrylat V og imino-ester VI kan maksimeres ved at køre kondensationstrinet (a) ved lavere temperaturer, d.v.s. fra stuetemperatur ned til ca. 0°C.

Mellemproduktet V omsættes i henhold til trinet (b) af fremgangs-10 måden med aluminiumazid i tetrahydrofuran til dannelse af det ønskede tetrazol-slutprodukt. Omtrentlig ækvimolære mængder af reaktanterne anvendes, og aluminiumazidet kan hensigtsmæssigt fremstilles in situ ved omsætning af natriumazid og aluminiumchlorid i et molært forhold på ca.

3:1. Selv om reaktionstemperaturen for trin (bj ikke er kritisk, er for-15 delagtige resultater blevet opnået ved tilbagesvalingstemperaturen for opløsningsmidlet. Tetrazol produktet Γ" kan let genvindes fra reaktionsmediet ved tilsætning af en tilstrækkelig mængde vand efterfulgt af syretilsætning for at bevirke udfældning. Det på denne måde og ved de efterfølgende metoder fremstillede tetrazol produkt kan om ønsket omdan-20 nes yderligere til et farmaceutisk acceptabelt kationisk salt.

En foretrukket udførelsesform omfatter reaktionstrin (b) til fremstilling af tetrazol produktet Γ" ud fra acrylat-mell emproduktet V.

Tetrazol forbindelserne med formel Γ" kan også fremstilles ved at man omsætter et nitril-mellemprodukt med formlen 25

*2Ύ^*ΑγcsN

30 I (vil') R3 -1" r4/ 35

DK 164553 B

17 med aluminiumazid i tetrahydrofuran. Omtrentlig ækvimolære mængder af reaktanterne anvendes, og aluminiumazidet dannes fortrinsvis in situ ud fra natriumazid og aluminiumchlorid som beskrevet' ved acrylat V-» tetrazol-processen ovenfor. Reaktionstemperaturerne og tetrazoludvindin- 5 gen sker som beskrevet for acrylatomdannelsesprocessen.

Mættede 6,7-dihydropyrimido[2,l-a]isoquinolintetrazoler med formlen

o N-N

ίο d'"')

I H

AN / 3 15 r4 kan fremstilles ved at man omsætter et nitril-mellemprodukt med formlen 20 rVnÅ^n ΊΓ L I (VII)

. -'A

R4 med aluminiumazid i tetrahydrofuran eller med et azidsalt i form af ammoniumazid, substitueret ammoniumazid, natriumazid eller lithiumazid, 30 i et inert organisk opløsningsmiddel. Nitri 1 et VII og azidsaltet anvendes fortrinsvis i omtrentlig ækvimolære mængder. Den almindelige omdannelse af nitriler til tetrazoler er beskrevet af W.G. Finnegan, et al. i J. Am. Chem. Soc., 80, 3908 (1958). Eksempler på egnede azidsalte til denne fremgangsmåde er givet af Finnegan i ovennævnte reference og 35 omfatter azider, såsom NaN3> LiN^, NH4N3, (n-C4Hg)2NH2N3, CgHgNH3N3 og (CH3)4NN3· Azidsaltet kan tilsættes direkte eller kan dannes in situ, f.eks. ved dobbelte dekomponeringsreaktioner af natriumazid og et passende chloridsalt, såsom Li Cl, AlCl3, NH^Cl, (CH3)4NC1, etc. Selv om

DK 164553 B

18 kondensationsreaktionen forløber over et vidt temperaturinterval, foretrækkes det, for at gøre reaktionstiderne så korte som muligt, at anvende forhøjede temperaturer, f.eks. fra ca. 100°C indtil tilbagesvalingstemperaturen for opløsningsmiddelsystemet. Det inerte organiske opløs-5 ningsmiddel kan i almindelighed være et vilkårligt, som har god opløsningsevne for azidsaltet, og som er kemisk inert. Eksempler på foretrukne opløsningsmidler er dimethyl formamid, dimethylacetamid, dimethyl -sul foxid og hexamethylphosphoramid. Det mest foretrukne opløsningsmiddel er dimethyl formamid. Kondensationsreaktionen katalyseres i almindelighed 10 surt, og udbyttet forbedres ved tilsætning af reagenser, såsom hydrazo-syre, aminhydroazider og Lewis-syrer, såsom BF3, til natriumazidet.

Efter endt reaktion kan tetrazolforbi ndel sen udvindes fra reaktionsblandingen ved at fjerne opløsningsmidlet, fortynde remanensen med vand og påfølgende syretilsætning til blandingen til dannelse af den ønskede 15 forbindelse med formel I"".

Nitril-udgangsmaterial erne med formel VII og VII' kan hensigtsmæssigt fremstilles ud fra 6,7-dihydropyrimido[2,l-a]isoquinolinestere med formel I" på den nedenfor viste måde: 20

DK 164553 B

19

O

0 11 C0o-(lavere)alkyl R 2 r3_r; ^ , flydende NHt .

/ lukket beholder 4 I" R dampbad 0 R2 C0NH2 T 1 dehydratiseringsmiddel Π f.eks. P0C1-,

___X

*3-4- VI11 R4 0

r2y^n^YC5N

jj dehydrogenering

Λχ/ΝΝ/ -X

2 i| T f.eks. Pd(C), o-cymen R ~%J VII Δ R4 o

CfN

3 r R--- VI1' r4^

DK 164553 B

20

Amider med formel VIII kan opnås ved behandling af estrene med formel I" med flydende ammoniak, ammoniumhydroxid eller en opløsning af ammoniak i en (lavere)al kano! (f.eks. methanol eller ethanol) eventuelt indeholdende natriummethoxid som katalysator. Reaktionen udføres hen-5 sigtsmæssigt i en lukket beholder ved dampbadstemperatur.

Amid-mel!emprodukterne kan omdannes til nitriler med formel VII ved anvendelse af et dehydratiseringsmiddel, såsom phosphorpentoxid, thionylchlorid, p-toluensulfonylchlorid:pyridin eller mest foretrukket phosphoroxychlorid. Dehydratisering sker ved forhøjede temperaturer, 10 mest foretrukket under tilbagesvalingsbetingelser.

Ni tri let VII kan omdannes til det tilsvarende umættede nitril VII7 ved dehydrogenering ved forhøjede temperaturer med et dehydrogenerings-middel, såsom beskrevet ovenfor for omdannelsen af forbindelser I" til forbindelser Γ. En foretrukket fremgangsmåde indebærer, at man opvarmer 15 nitrilet VII med palladium-på-carbon i nærværelse af p-cymen. Som beskrevet ovenfor kan nitrilet VII7 anvendes som udgangsmateriale til fremstilling af tetrazolen I777.

Forbindelser med formlen I,fremstillet ved en vilkårlig af de ovennævnte fremgangsmåder, kan om ønsket omsættes yderligere på i og for sig 2 3 20 kendt måde til omdannelse af en eller flere af substituenterne R , R eller R til andre substituentgrupper indenfor rammerne af formel I. Eksempelvis kan en (lavere)alkoxy-substitueret forbindelse underkastes sur hydrolyse (f.eks. HC1 eller HCl-HOAc) til fremstilling af den tilsvarende hydroxy-substituerede forbindelse. Denne forbindelse kan igen 25 realkyleres, f.eks. med et al kyl halogenid i nærværelse af en base, til dannelse af en (lavere)alkoxy-substitueret forbindelse, fortrinsvis en forbindelse med en (lavere)alkoxy-substituent, som er forskellig fra substituenten i udgangsforbindelsen. Ozonolyse af det allyl-substituerede produkt giver den formyl methyl-substituerede forbindelse, som igen 30 kan reduceres til den hydroxyethyl-substituerede forbindelse. Den allyl-substituerede forbindelse kan også hydratiseres til dannelse af den tilsvarende hydroxypropylforbindelse. Forbindelser med en dialkoxyethyl-substituent kan fremstilles ved at man behandler den tilsvarende formyl methyl-substituerede forbindelse med den passende (lavere)al kano!, 35 idet eksempelvis methanol giver dimethoxyethyl, og ethanol giver diethoxyethyl.

De ved ovennævnte fremgangsmåde anvendte 1-aminoisoquinolin- og 1-amino-3,4-dihydroisoquinolin-udgangsmaterialer er kendte forbindelser,

DK 164553 B

21 eller de kan fremstilles ved hjælp af kendte metoder.

En fremgangsmåde til fremstilling af l-amino-3,4-dihydroisoquino-liner er belyst i følgende reaktionsskema: CK-C=N 1. C^h^tCH^Li© ? R2__ hexan , Tr.F v. _ 2 ?P-- [

V 2" XJ

R i ^ 2

LiAlPX . ~ 4 ellcar, for \ X „ (C,K.).0 ,2 = H \ (Co^)2° 2 0 2

R n N. - ^ * V

\. o N. R“ χ - ^ jX ^ I I !f ^X!c,fl.ococi, Δ 3 i " 2 3 ' *K/* 1 (c2h5)3037^ \/ cr ψ CH^OSO^F ✓ — Λ Λ

1. NH-. CXH-CH, Δ X

p3 _r f ] - 2 3·

l ! ^ H—i- I I

‘ 2. ilaOH '

R L. I

^ R nk2 2 c Z = BF O eller SC^F® R = C2H5 eller CH3

DK 164553 B

22

Alkylering af phenylacetoni tri ler 1 kan udføres ved anvendelse af forskellige konventionelle baser, såsom natriumamid eller natriumhydrid, men næsten kvantitative udbytter er blevet opnået ved anvendelse af lithiumsaltet af N-isopropylcyclohexylamin. Reduktion af phenylaceto-5 nitrilerne (1 eller 2) til dannelse af phenethylaminerne 4 og dannelse af isothiocyanaterne 3 ud fra sidstnævnte er velkendte reaktioner. Ringslutning af isothiocyanaterne 3 til isoquinoliniumsaltene 5 sker under anvendelse af meget milde betingelser, som tillader, at en lang række forskellige substituenter kan indføres på isoquinolinkernen.

10 Denne almene fremgangsmåde er beskrevet i J. Chem. Soc., Perkin Trans.

1, 1, 33 (1976). Omsætning af isoquinoliniumsaltene 5 i en stål bombe ved ca. 100°C med ethanol, som er mættet med ammoniak, giver enten fluoro-boratsaltet eller fluorosulfonatsaltet af 6. Behandling af saltene med natriumhydroxid frigør de frie baser 6.

15 1-aminoisoquinolin-udgangsmaterialerne kan fremstilles ud fra de tilsvarende l-amino-3,4-dihydroisoquinoliner ved dehydrogenering, såsom ved behandling med palladium-på-carbon i kogende p-cymen.

Anvendelse af Chichibabin-reaktionen (J. Russ. Phys. Chem. Soc., 50, 543 (1920) og U.S.A. Patentskrift 3.847.919) på de passende iso-20 quinoliner tilvejebringer en anden vej til 1-aminosioquinolinerne.

Pesson og Richer [fransk patent 3589M og Compt. rend., Ser. C., 262 (24), 1719 (1966)] har beskrevet fremstillingen af 1-aminoisoquinoliner ved reduktion af de tilsvarende 1-hydrazinoforbindelser.

De fremstillede forbindelser kan anvendes til hæmning eller 25 forebyggelse af symptomerne på en allergisk reaktion, såsom allergisk bronkial astma eller allergisk rhinitis i et pattedyr, der er modtageligt for en sådan reaktion, ved at man til pattedyret administrerer en profylaktisk effektiv dosis af en forbindelse med formel I eller et farmaceutisk acceptabelt kationisk salt deraf.

30 De fremstillede forbindelser kan endvidere indgå i et farmaceutisk præparat, der kan anvendes som et antiallergisk middel, hvilket præparat som aktiv bestanddel indeholder en forbindelse med formel I eller et farmaceutisk acceptabelt kationisk salt deraf i blanding med en farmaceutisk acceptabel bærer eller fortyndingsmiddel.

35 De omhandlede forbindelser kan administreres enten som individuel le terapeutiske midler eller som blandinger med andre terapeutiske midler. De kan administreres alene, men i almindelighed indgives de i form af farmaceutiske præparater. Eksempler oå sådanne præparater om-

DK 164553 B

23 fatter tabletter, pastiller, kapsler, pulvere, aerosol sprays, vandige eller olieagtige suspensioner, salver, sirupper, eliksirer og vandige opløsninger. Forbindelserne administreres fortrinsvis oralt, men kan også indgives ved inhalering, injektion, instillation eller ved implan-5 tering til kontrolleret frigørelse af lægemidlet fra et depot.

Arten af det farmaceutiske præparat og den farmaceutiske bærer eller fortyndingsmidlet afhænger naturligvis af den ønskede administrationsvej. F.eks. kan orale præparater være i form af tabletter eller kapsler og kan indeholde konventionelle strækkemi dl er, såsom bindemidler 10 (f.eks. sirup, akacie, gelatine, sorbitol, tragakant eller polyvinyl-pyrrolidon), fyldstoffer (f.eks. lactose, sukker, majsstivelse, calcium-phosphat, sorbitol eller glycin), smøremidler (f.eks. magnesiumstearat, talkum, polyethylenglycol eller siliciumoxid), desintegreringsmidler (f.eks. stivelse) eller befugtningsmidler (f.eks. natri umiaurylsul fat).

15 Orale flydende præparater kan være i form af vandige eller olieagtige suspensioner, opløsninger, emulsioner, sirupper, eliksirer, etc. eller kan foreligge som et tørt produkt til rekonstituering med vand eller en anden passende bærer før brug. Egnede flydende præparater kan indeholde konventionelle additiver, såsom suspensionsmidler, duftstoffer, fortyn-20 dingsmidler eller emulgeringsmidler. Topiske præparater kan være i form af salver, såvel hydrofile som hydrofobe, i form af lotioner, som kan være vandige, ikke-vandige eller af emulsionstype eller i form af cremer. Farmaceutiske bærere, der er nødvendige til fremstilling af sådanne præparater, vil f.eks. omfatte stoffer, såsom vand, olier, 25 fedtstoffer, polyestere, polyoler og lignende. Til paranteral administrering kan anvendes inhalations- eller instillationsopløsninger eller -suspensioner af en forbindelse med formel I med konventionelle farmaceutiske bærere, f.eks. som en aerosol spray til inhalering, som en vandig opløsning til intravenøs injektion eller instillation eller som 30 en olieagtig suspension til intramuskulær injektion. Forbindelserne kan også administreres ved hjælp af inhalator eller et andet organ, der tillader de aktive forbindelser i form af tørre pulvere at komme i direkte kontakt med lungerne.

De omhandlede forbindelser eller farmaceutiske præparater deraf kan 35 administreres til mennesker, der lider af allergi i enkelte orale doser på ca. 0,5 - 500 mg aktiv bestanddel og multiple orale doser på ialt indtil ca. 1000 mg/dag aktiv bestanddel. Når administreringen sker ved inhalering eller instillation gives i almindelighed lavere doser, nemlig

DK 164553 B

24 af størrelsesordenen ca. 0,1 af den normale orale dosis for den pågældende forbindelse. Disse værdier er kun vejledende, og lægen vil naturligvis i sidste ende bestemme den dosis, som er mest egnet til en bestemt patient på basis af faktorer, såsom alder, vægt, symptomernes 5 alvor og det bestemte middel, som skal administreres.

I det følgende beskrives in vivo dyremodel studier, som viser, at forbindelserne med formel I er kraftigt virksomme antiallergiske midler.

Biologiske aktivitetsdata 10 Den reagin-medierede PCA-screening test (passiv kutan anaphylaxis) på rotter, som anvendtes til vurdering af de foreliggende forbindelser, betragtes i almindelighed som en af.de bedste dyremodeller til forudsigelse af den antiallergiske aktivitet af testforbindelser i mennesker.

I korte træk består metoden i passiv sensibilisering af hudsteder på 15 testdyrene med reagin-antistoffer efterfulgt efter 24 timers forløb af administrering af testforbindelsen og antigen-angreb. Den allergiske reaktion måles ved anvendelse af Evans' blue dye og vurderes ved hjælp af pletdiameteren på injektionsstedet. Detaljer vedrørende testen er givet nedenfor.

20

Materi al er

Ovalbumin (5 x krystallinsk)

Dinitrobenzensul fonsyre, Na+ salt

Bordetella pertussis vaccine - fase I 9 25 10-20 x 10 dræbte organismer/ml

Aluminiumhydroxidgel - 10 mg/ml Kaliumcarbonat

Sprague-Dawley rotter af hankøn - 200 g Sprague-Dawley rotter af hunkøn - 100 g 30 Tris puffer saltopløsning (TBS) - 0,02 M 2-amino-2-hydroxymethyl- 1,3-propandiol (tris), 0,15 M NaCl, pH-værdi 8,2

Antigenfremstilling - DNP-d EA

35 Et substitueret ovalbumin-antigen anvendes både som immunogent og angribende antigen. Antigenet fremstilles som følger: 500 mg ovalbumin (EA) og 500 mg I^COg opløses i 25 ml destilleres 1^0 og omrøres ved stuetemperatur i 5 minutter. 500 mg dinitrobenzensulfonsyre, Na+ salt

DK 164553 B

25 (forud omkrystalliseret fra varm absolut ethanol) tilsættes dernæst langsomt med kontinuert omrøring. Dernæst anbringes reaktionsblandinge straks i mørke og henstår videre i 2 timer under konstant omrøring.

Efter 2 timers forløb anbringes blandingen i egnede dialyseglas og 5 dialyseres overfor 5 portioner (hver på 4 liter) destilleret ved 5°C. Efter dialysen lyofiliseres produktet og opbevares ved stuetemperatur i en brun eller brungul beholder. Det opnåede antigen vil frem-træde som et lysegult amorft fast stof, der er meget opløseligt i vand eller saltvand. Det betegnes DNP denatureret ovalbumin (DNP-d EA).

10

Immuniserinqsmetode til IgE-produktion

Voksne Sprague-Dawley hanrotter anvendes som kilde for reagin-rig antisera til PCA-modellen. Immunisering sker ved en kombination af DNP-d EA på Al(0H)3-gel og B. pertussis vaccine. Fremstillingen af DNP-d EA -15 gel immunogenet sker på følgende måde: DNP-d EA opløses i TBS til dannelse af en koncentration på 10 mg/ml. Langsomt tilsættes 1 ml af denne opløsning til 10 ml A1(0H)3 gel (10 mg faststof/ml) under konstant omrøring ved stuetemperatur. Blandingen omrøres i yderligere 30 minutter for at sikre ensartet adsorption af antigen på gel.

20 Det resulterende præparat anvendes dernæst i kombination med fase I

B. pertussis vaccine til immunisering af S/D hanrotter som følger:

For hver rotte administreres 0,1 ml DNP-d EA - gel suspension intra-muskulært i venstre bagpote (200 /ig DNP-d EA og 2 mg gel totaldosis).

Disse injektioner efterfølges af intraperitoneal administrering af 1,0 g 25 ml B. pertussis (10-20 x 10 organismer). Anvendelse af let ether-anæstesi under denne procedure anbefales for at sikre korrekte intra-muskulære og intraperitoneale injektioner. 9 dage efter immunisering (men højst 10) tømmes dyrene for blod ved hjertepunktur eller abdominal aorta-kanylering under ether- eller pentobarbital-anæstesi. Det opsam-30 lede fuldblod får lov at størkne, serummet fraskilles ved centrifugering, og de individuelle serumprøver opbevares i frossen tilstand, indtil de undersøges for IgE-indhold.

Udvælgelse af serumprøver med høj titer til opbevaring 35 De individuelle serumprøver bør undersøges for reagin-antistof- koncentration inden de sammenblandes med andre sera, eftersom ikke alle rotter reagerer på immuniseringsprocesser med reaginproduktion. En 1:50 saltvandsfortynding af serum fra hver immuniseret rotte anvendes til

DK 164553 B

26 dette formål- Intradermale injektioner på 0,05 ml af de fortyndede sera foretages på de barberede rygge hos 2 små hun-recipientrotter, 100-120 g. Adskillige serumprøver kan testes samtidig på recipientdyrene. Efter en 24 - 48 timers latenstid ledsages antigen-angrebet af intravenøs 5 administrering til hver rotte af 1 mg DNP-d EA i 0,5 ml 0,5% Evans' blue dye i saltvand. Sera, der viser positive PCA-reaktioner ved 1:50 fortynding, målt 20 - 30 minutter efter angrebet, sammenblandes, fordeles i små portioner og opbevares ved -70°C eller lavere, indtil de skal bruges. Negative sera kan kasseres.

10 IgE-titeren af blandingen af de opbevarede antisera bør dernæst bestemmes. Serie-dobbeltfortyndinger (1:5 til 1:160) af uopvarmede sera og sera opvarmet ved 56°C i 1 time fremstilles i saltvand, og 0,05 ml af hver fortynding injiceres intradermalt på ryggene af hun-recipient-rotterne. I det mindste 4 dyr bør anvendes til både de opvarmede og 15 uopvarmede serum-titreringer. Efter en 24 timer latenstid angribes hver gruppe med 1 mg DNP-d EA i 0,5 ml 0,5% Evans' blue dye. Reaktionerne aflæses ved at ombukke huden 20 - 30 minutter efter angrebet. Intensiteten (blåfarvningen);og pletdiameteren måles og registreres. Blandingens titer defineres som den reciprokke værdi af den største fortynding 20 af uopvarmet serum, der giver en målelig PCA-reaktion (> 6 mm diameter) i mindst halvdelen af recipientdyrene. Antiserumbi åndinger med en titer på 50 eller mere er acceptable til PCA-testen. Disse blandinger bør steril-filtreres og opbevares ved -70°C eller mindre, indtil de bruges.

Lyofili sering i små portioner kan anvendes som alternativ.

25 PCA-screening metode 1. Dyr

Unge Sprague-Dawley hunrotter, 90-110 g bør anvendes. Rotterne bør konditioneres (akklimatiseres) mindst 5 dage inden brugen med mad og 30 vand ad libitum.

2. Passiv sensibilisering

Testdyrene præpareres til passiv sensibilisering ved omhyggelig barbering af områder på hver side af ryggen med en fintandet maskinsaks.

35 Ved anvendelse af en ca. 15,9 mm nål (nr. 27) anbragt på en 1 ml tuberkulin-sprøjte fremstilles intradermale injektioner af saltvandsfortyndinger af antiserumbi andingen. 4 fortyndinger (2 på hver side) antiserum anvendes. De nøjagtige fortyndinger, som anvendes, afhænger af blandin-

DK 164553 B

27 gens titer. Hvis f.eks. antiserumbi åndingen har en titer på 50, anvendes fortyndinger på 1:10, 1:20, 1:30 og 1:40; såfremt blandingen har en titer på 100, vil fortyndingerne blive 1:20, 1:40, 1:60 og 1:80. Rækkefølgen af placeringen af hver fortynding bør enten være med uret eller 5 mod uret for at lette aflæsningen. Latenstiden bør være mindst 24 timer og højst 48 timer.

3. Lægemiddel administrering - standard og ukendte

Der anvendes 4 dyr for hver testforbindelse. Dinatriumcromoglycat 10 (DSCG) opløst i saltvand administreres intravenøst (i.v.) på tidspunktet for antigenangrebet. Testforbindelserne opløses i vandig natrium-bicarbonat, når det er muligt. De forbindelser, som er uopløselige i bicarbonat, suspenderes i Tween/CMC. Testforbindelserne administreres i.v. eller per os enten henholdsvis 1-5 eller 10 minutter før antigen-15 angrebet.

4. Antigenangreb og vurdering af reaktionen

Vurdering af PCA-reaktionen sker ved intravenøs administrering af 1 mg DNP-d EA i 0,5 ml 0,5% Evans' blue dye i saltvand for hver testrotte.

20 PCA-reaktionerne er maksimale 20 - 30 minutter efter angrebet. Reaktionerne bør vurderes visuelt med hensyn til farveintensitet, og gennemsnitsdiameteren af pletterne måles for hvert antiserum-fortyndingssted. Begge operationer foretages ved at bøje huden tilbage. Til sammenligningsformål bør antallet i kontrolgruppen (ubehandlet) være 25 mindst 5% og sædvanligvis 10% af det totale antal dyr, som er testet en bestemt dag.

Den observerede inhibering for en forbindelse rapporteres som procentuel reduktion i effektiv antiserum-ti ter hos behandlede grupper i forhold til kontrolgrupper.

30

Resultater

Testresultater for et repræsentativt udvalg af de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser ved henholdsvis i.v. og p.o. administrering er vist i tabel I og II nedenfor sammen med data for dinatrium 35 cromoglycat (DSCG) og for en forbindelse ifølge GB patentskrift nr.

1.451.423, benævnt A. Resultaterne er anført som IDgg-værdier, d.v.s. den dosis af en forbindelse, som hæmmer 50% af reaktionen.

DK 164553 B

28

Tabel I

6,7-dihydropyrimido[2,l-alisoquinoliner

r2 yvV

5 I ? 10 r4

Eksempel Rotte PCA-test nr. R^ R^ R^ A IDg0, m9/^9 Ρ·ο.

3 Et Η H C0£Et 0,13 15 4A Et Η H C02H 0,048 7 Et Η H CHN4 0,10 8 H OMe OMe CHN4 -0,030 6 H OH OH C02H -0,077 4B -CH2CH=CH2 H OMe COgH -0,077 20 DSCG »30 25 I ovenstående tabel anvendes følgende forkortelser:

Et = C2H5, Me = CH3, CHN4 = lH-tetrazol-5-yl.

I tilfælde af DSCG doseredes forbindelsen på angrebstidspunktet, i.v. ID50-dosis for DSCG fandtes at være 0,6 mg/kg.

30

DK 164553 B

29

Tabel II

Pyrimido[2,l-a]isoquinoli ner 5 R2 A

10

Eksempel Rotte PCA-test nr. R2 R3 R4 A ID50, mg/kg i.v. , p.o.

15 ...................................................................-- 2 Η Η H CHN4 0,04 5A Et Η H C02H -0,048 9 Et Η H CHN4 0,009 0,04 5B H OMe OMe COgH -0,01 20 5C -CH2CH2CH3 H OMe COgH -0,071 DSCG 0,6 »30 A 0CH3 Η H C02H 0,3 25 I ovenstående tabel anvendes følgende forkortelser:

Et = C2H5, Me = CH3, CHN4 = IH-tetrazol-5-yl.

30

DK 164553 B

30

Foruden ovenstående testedes forbindelsen ethyl-4-imino-4H-pyrimido[2,l- a]isoquinolin-3-carboxylat fremstillet i henhold til eksempel 3A nedenfor og viste sig at have en p.o. ID50 på ca. 0,19 mg/kg.

Det ses, at forbindelserne ifølge opfindelsen har en højere 5 aktivitet end den kendte forbindelse.

De følgende eksempler belyser fremstillingen af udgangsmaterialer og slutprodukter i henhold til opfindelsen. Alle temperaturer er i °C. Smeltepunkter og kogepunkter er ukorrigerede. "Skellysol ve B" er et varemærke tilhørende Skelly Oil Co. for en petroleumsetherfrakti on med 10 et kogepunkt på 60 - 68°C og i det væsentlige bestående af n-hexan.

Fremstilling af udgangsmaterialer A. l-amino-3,4-dih.ydroisoquino1iner 15 (a) Phenylacetonitri ler (struktur 2) 1. (±)-2-allyl-2-(4-methoxyphenyl)acetonitril n-butyllithium (0,16 mol af 1,6 M i hexan) sattes under en nitrogenatmosfære til tør tetrahydrofuran (100 ml), som var afkølet i et COg-acetonebad. Dette efterfulgtes af successivedråbevisetilsætninger i 20 løbet af 10 minutter af opløsninger i tetrahydrofuran (10 ml hver) af N-isopropylcyclohexylamin (22,6 g, 0,160 mol) og p-methoxyphenylacetoni-tril (21,2 g, 0,144 mol). Blandingen omrørtes i kulden i 10 minutter, hvorefter allylbromid (24,2 g, 0,20 mol) tilsattes dråbevis i løbet af 10 minutter. Omrøringen fortsattes i kulden i 15 minutter, og derefter 25 ved omgivelsestemperatur i 1,5 time. Opløsningen fortyndedes med di ethyl ether og vaskedes successivt med 4% saltsyre (2 x 100 ml) HgO og saltopløsning. Den etheriske opløsning tørredes (NagSO^), koncentreredes, og remanensen destilleredes til opnåelse af 24,2 g (89% udbytte) af nitrilen, kogepunkt 99-114° (0,1 mm).

30 2. (±)-2-phenylbutyronitril

Ved anvendelse af fremgangsmåde A.(a) 1, gav alkylering af phenyl-acetonitril med ethylbromid et 98% udbytte af titel forbindelsen, kogepunkt 110-116° ved 13 mm (lit.* kogepunkt 124-126° ved 25 mm).

ICompt. rend., 232, 1424 (1951).

35

DK 164553 B

31 (b) Pheneth.yl aminer (struktur 4) 1. (i)-2-allyl-2-(4-methoxyphenyl )ethylamin

En opløsning af (±)-2-allyl-2-(4-methoxyphenyl)acetonitril (159,7 g 0,852 mol) i di ethyl ether (200 ml) sattes dråbevis i løbet af 20 minut-5 ter til en omrørt, langsomt til bagesval ende blanding af lithiumalumi-niumhydrid (LiAlH^, 42,2 g, 1,11 mol) i diethylether (800 ml). Blandingen til bagesval edes i yderligere 1,25 time og afkøledes dernæst i et is-HgO bad. Overskud af LiAlH^ dekomponeredes ved langsom dråbevis tilsætning af HgO, indtil gasudviklingen ophørte og et granulært bundfald 10 dannedes. Blandingen filtreredes,og filterkagen vaskedes grundigt med diethylether. Koncentration af filtratet gav titel produktet (146 g, 90%) som en grumset olie.

En prøve af olien destilleredes til opnåelse af et produkt med kogepunkt 78-84° (0,1 mm), der blev karakteriseret som hydrogenfumarat-15 saltet, smeltepunkt 137-139° efter omkrystallisation fra ethanol-ether. Analyse beregnet for Ο^Η^ΝΟ,Ο^Ο^: C, 62,52; H, 6,88; N, 4,56.

Fundet: C, 62,05; H, 7,22; N, 4,50.

20 2. 2-(4-methoxyphenyllethylamin og (+)-2-phenylbutylamin På en måde, der svarer til fremstillingen af (±)-2-allyl-2-(4-methoxyphenyl)ethylamin som beskrevet ovenfor, gav reduktion af p-methoxyphenylacetonitril og (+)-2-phenylbutyronitril med lithium-aluminiumhydrid henholdsvis 2-(4-methoxyphenyl)ethylamin (Ber., 42, 4778 25 (1909)) og (±)-2-phenylbutylamin (Compt. rend., 184, 30 (1927)).

(c) Arylalkylisothiocyanater (struktur 3)

Ved at gå ud fra de passende arylalkylaminer anvendtes fremgangsmåden, der er beskrevet af Gittos et al, (J. Chem. Soc., Perkin Trans.

30 1, 1, 33 (1976)) til syntetisering af de følgende isothiocyanater: 2-(4-methoxyphenyl)ethylisothiocyanat (100% udbytte), kogepunkt 112-114° ved 0,1 mm (britisk patentskrift nr. 1.141.586 angiver kogepunkt 119-120° ved 0,5 mm); 2-(3-methoxyphenyl)ethvlisothiocyanat (89% udbytte), kogepunkt 135-140° ved 0,1 mm; 2-(3,4-dimethoxyphenyl)ethylisothiocyanat 35 (52% udbytte), kogepunkt 155-165° ved 0,4 mm (J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1, 33 (1976) angiver kogepunkt 138-140° ved 0,2 mm); (±)-2-phenylbutylisothiocyanat (97% udbytte), kogepunkt 85-98° ved 0,1 mm, og (+)-2-allyl-2-(4-methoxyphenyl)ethylisothiocyanat (81% udbytte),

DK 164553 B

32 kogepunkt 136-144° ved 0,1 mm.

(d) 1-ethylthio- og 1-methylthioisoquinoliniumsalte (struktur 5)

Fremgangsmåderne ifølge Gittos (U.S.A. patentskrift nr. 3.895.014) 5 og Gittos et al. (J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1, 33 (1976)) blev anvendt til ringslutning af de førnævnte isothiocyanater til de følgende i soqui nol i ni umsalte: 1-ethylthi o-3,4-di hydro-6,7-dimethoxyi soquinol i -niumfluorborat (79% udbytte), smeltepunkt 175-177° fra ethanolether (J.

Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1, 33 (1976) anfører smeltepunkt 174-176°); 10 3,4-di hydro-7-methoxy-1-methylthi oi soqui nol i ni umf1uorsulfonat (41% udbytte), smeltepunkt 208-209,5° ud fra acetonitril.

Analyse beregnet for CjjHjgN0S,HS0jF: C, 42,99; H, 4,59; N, 4,56; S, 20,86.

Fundet: C, 43,41; H, 4,93; N, 4,53; S, 20,99.

15 3,4-di hydro-6-methoxy-l-methyl thi oi soqui nol i ni umfluorsulfonat (100% råt udbytte), smeltepunkt 106-119° ud fra methylenchlorid-ether; (±)-4-ethyl-3,4-di hydro-1-methyl thi oi soqui nol i ni umfluorsulfonat og (±)-4-allyl-3,4-dihydro-7-methoxyl-methylthioisoquinoliniumfluorsulfonat blev 20 isoleret som gummiagtige olier, der blev anvendt uden rensning.

(e) l-amino-3,4-dihydroisoquinoliner (struktur 6) 3,4-dihydro-7-methoxy-l-methylthioi soquinolini umfluorsulfonat (10,0 g, 0,0362 mol) blev sat til ethanol (100 ml), der var mættet med 25 ammoniakv&nd i et stål bombe. Den omrørte blanding blev opvarmet på et dampbad i 2 timer. Blandingen kombineredes med materiale fra fire tilsvarende produktioner og lyninddampedes til tørhed. Remanensen deltes mellem 5N NaOH (300 ml) og methylenchlorid. Det organiske lag vaskedes med vand (2 x) og tørredes med natriumsulfat. Faststoffet, der var op-30 nået efter fjernelse af methylenchloridet, omkrystalliseredes fra benzen til dannelse af 23 g (72% udbytte) af l-amino-3,4-dihydro-7-methoxy-isoquinolin, smeltepunkt 114-117,5°. Omkrystallisation fra ethylacetat gav den analytiske prøve, smeltepunkt 117,5-119,5°.

Analyse beregnet for CjqHj^O: C, 68,16; H, 6,86; N, 15,90.

35 Fundet: C, 68,01; H, 6,81; N, 15,83.

De følgende l-amino-3,4-dihydroisoquinoliner blev fremstillet på tilsvarende måde: l-amino-3,4-dihydro-6,7-dimethoxyisoquinolin (Yakugaku

DK 164553 B

33

Zasshi, 82, 352 (1962)) (105% råt udbytte, fluorboratsalt havde smeltepunkt 181-185° ud fra ethanol); l-amino-3,4-dihydro-6-methoxyisoquinolin (41% udbytte), smeltepunkt 129-131° ud fra ethyl acetat.

(Analyse beregnet for CjqH^^O: C, 68,16; H, 6,86; N, 15,90.

5 Fundet: C, 68,39; H, 7,01; N, 16,05); (+)-l-amino-4-ethyl-3,4-dihydroisoquinolin (102% råt udbytte af brun olie), karakteriseret som monohydrogenfumaratsalt, smeltepunkt 146-148° ud fra vand.

10 (Analyse beregnet for CjjHjC, 62,05; H, 6,25; N, 9,65.

Fundet: C, 60,95; H, 6,12; N, 9,26); og (±)-4-allyl-l-amino-3,4-dihydro-7-methoxyisoquinolin, en brun olie, efte isolering som og regenerering fra monohydrogenfumaratsaltet, smeltepunkt 15 174-176° ud fra ethanol.

(Analyse beregnet for CjjHjg^OjC^O^: C, 61,43; H, 6,07; N, 8,43.

Fundet: C, 60,82; H, 6,15; N, 7,82).

B. 1-aminoisoquinoliner 20 1. l-amino-4-methoxyisoquinolin

Reduktion af l-hydrazino-4-methoxyisoquinolin (Compt, rend.,

Ser. C, 262 (24), 1719 (1966)) med hydrogen og Raney Ni i ethanol i over ensstemmelse med fremgangsmåden ifølge Pesson og Richer (Compt, rend.,

Ser. C, 262 (24), 1719 (1966)) har et 17% udbytte af titel forbi ndel sen, 25 smeltepunkt 112,5-114° efter kromatografi på aluminiumoxid med chloro-form-ethanol (20:1).

2. l-amino-4-ethylisoquinolin

En omrørt blanding af (+)-l-amino-4-ethyl-3,4-dihydroisoquinolin 30 (6,83 g) og 10% palladium-på-carbon (1,5 g) i p-cymen (80 ml) tilbagesval edes i 4 timer. Blandingen filtreredes, og filtratet reduceredes til tørhed i vakuum, hvilket gav en olie, som efter successiv udkrystallisation fra "Skellysolve B" og cyclohexan gav 1,84 g (27% udbytte) af produktet, smeltepunkt 84-85°.

35 Analyse beregnet for C, 76,71; H, 7,02; N, 16,27.

Fundet: C, 76,87; H, 6,98; N, 16,15.

DK 164553 B

34

Eksempel 1

Ethyl-7-methoxy-4-oxo-4H-pyrimidor2,1-a]isoquinolin-3-carboxylat (via mellemprodukt IV) A. Di ethyl-4-methoxyi soqui nolylami nomethylenmalonat 5 En blanding af l-amino-4-methoxyisoquinol in (297 mg, 1,7 mmol) og di ethylethoxymethylenmalonat (370 mg, 1,7 mmol) neddyppedes i et oliebad ved 110° og holdtes der i 6 minutter. Blandingen smeltede og blev dernæst fast. Det rå produkt, smeltepunkt 150-153°, anvendtes uden rensning.

10 B. Ethyl-7-methoxy-4-oxo-4H-pyrimidor2,1-a]isoquinolin-3-carboxylat En blanding af diethyl-4-methoxyisoquinolylaminomethylenmalonat (460 mg, 1,33 mmol) og di phenyl ether (4,6 ml) anbragtes i et oliebad ved 210°, og temperaturen af dette oliebad hævedes til 260° i løbet af 5 15 minutter. Fortynding af opløsningen med "Skellysolve B" fik produktet til at udskille (315 mg, 79% udbytte), smeltepunkt 190-193°. Omkrystallisation fra ethyl acetat hævede smeltepunktet til 202-204°.

Eksempel 2 20 3-(lH-tetrazo1-5-yl)-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinol-4-on (via mellemprodukt V) A. Ethyl-2-cyano-3-(i soqui nolylami no)acrylat En blanding af 1-aminoisoquinolin (14,4 g, 0,10 mol) og ethyl-ethoxymethylencyanoacetat (16,9 g, 0,10 mol) neddyppedes i et oliebad 25 ved 105-110° og holdtes der i 10 minutter under en nitrogenatmosfære. I løbet af denne tid smeltede blandingen, udviklede ethanol og blev fast. Faststoffet udkrystalliseredes fra toluen til opnåelse af kraftigt gule krystaller (18 g, 67% udbytte) af ethyl-4-imino-4H-pyrimido[2,l-a]iso-quinolin-3-carboxylat, smeltepunkt 197-199°. En yderligere omkrystalli-30 sation fra toluen gav en analytisk prøve, smeltepunkt 199-201°.

Den første toluen-modervæske koncentreredes til ca. 150 ml ved kogning, og fortyndedes dernæst med "Skellysolve B" (100 ml). Blandingen filtreredes, og filtratet lyninddampedes til tørhed, hvilket efterlod et gult faststof, som blev udkrystalli seret fra methanol til opnåelse af 35 5,5 g ethyl-2-cyano-3-(isoquinolylamino)acrylat, smeltepunkt 129-133°. Yderligere 1,7 g af dette materiale (27% totalt udbytte), smeltepunkt 129-131° blev opnået ved koncentrering af methanol-modervæsken. Kromatografi af sidstnævnte udbytte på kisel syre (60 g) gav chloroform efter-

DK 164553 B

35 fulgt af omkrystallisation fra methanol gav den analytiske prøve, smeltepunkt 129-130°.

Analyse beregnet for ^5^3^0,,: C, 67,40; H, 4,90; N, 15,72.

Fundet: C, 67,10; H, 5,01; N, 15,78.

5 B. 3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H-pyrimidor2,l-alisoquinol-4-on Aluminiumchlorid (2,98 g, 0,0224 mol) sattes forsigtigt til omrørt, afkølet (is-H20) tetrahydrofuran (150 ml). Natriumazid (4,36 g, 0,0672 mol) tilsattes dernæst, og den resulterende blanding til bagesval edes i 10 0,5 time til fuldendelse af dannelsen af aluminiumazid.

Ethyl-2-cyano-3-(isoquinolylamino)acrylat (4,93 g, 0,0184 mol) sattes til den afkølede blanding. Den resulterende blanding tilbagesva-ledes i 20 timer, lyninddampedes til tørhed og fortyndedes med vand (200 ml). Den vandige blanding gjordes sur med 37% saltsyre (20 ml). Det 15 faste stof, smeltepunkt 260-290° (dek.), opsamledes og omrørtes med 150 ml varm 2% KHCOg-l^O. Blandingen vaskedes med diethylether, og materialet, der var uopløseligt i vand, fjernedes fra det vandige lag ved filtrering. Forsyring af filtratet med eddikesyre fik tetrazolen til at bundfælde, smeltepunkt 304-308° (dek.). Omkrystallisation fra N,N-20 dimethyl formamid gav brungule nåle: 1,1 g (22,6% udbytte), smeltepunkt 313-314° (dek.).

Analyse beregnet for C^HgNgO: C, 59,09; H, 3,05; N, 31,81.

Fundet: C, 58,70; H, 3,02; N, 31,41.

25 Eksempel 3

Ethyl-(i)-7-ethyl-6,7-dihydro-4-oxo-4H-pyrimidor2,l-a1isoquinolin-3-carboxylat (anvendelse af dialkylethoxymethylenmalonat-fremqanqsmåde)

Di ethylethoxymethylenmalonat (10,72 g, 0,0496 mol) sattes til en omrørt blanding ved 25°C af (+)-l-amino-4-ethyl-3,4-dihydroisoquinolin 30 (0,0496 mol) i toluen (330 ml). Omrøring fortsattes i 10 minutter, hvorefter temperaturen af den resulterende gule opløsning hævedes til tilbagesvalingspunktet i løbet af 10 minutter. Opløsningen tilbage-svaledes i 5 minutter og afkøledes til opnåelse af ethyl-(±)-7-ethyl- 6,7-dihydro-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylat; (27% 35 udbytte), smeltepunkt 98-100° ud fra methanol (Analyse beregnet for ci7HisN2°3: C’ 68,44; 6,08; 9,39>

Fundet: C, 68,04; H, 5,80; N, 9,18); .

DK 164553 B

36

Eksempel 4

De følgende 6,7-dihydro-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylsyrer blev fremstillet ved basisk hydrolyse af de tilsvarende estere under tilbagesvaling i IN NaOH og 95% ethanol.

5 A. (±)-7-ethyl-6,7-dihydro-4-oxo-4H-pyrimidor2,l-alisoquinolin-3-carboxylsyre (72% udbytte), smeltepunkt 167-169° ud fra 95% ethanol.

(Analyse beregnet for C, 66,65; H, 5,22; N, 10,37.

10 Fundet: C, 66,28; H, 5,05; N, 10,03); og B. (±)-7-al1yl-6,7-dihydro-10-methoxy-4-oxo-4H-p.yrimidor2,l-a1- isoquinol in-3-carboxyl syre (78% udbytte), smeltepunkt 128-130° ud fra benzen-"Skellysolve B".

15 (Analyse beregnet for ci7HigN2°4: C’ 65>37; 5»16; 8>97·

Fundet: C, 65,10; H, 5,47; N, 8,70).

Eksempel 5 Følgende 4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylsyrer blev 20 fremstillet ved hydrolyse af de tilsvarende ethyl estere i en blanding af eddikesyre og 37% saltsyre under tilbageval ing.

A. 7-ethyl-4-oxo-4H-pvrimidof2,l-alisoquinolin-3-carboxy1syre (58% udbytte), smeltepunkt 221-223° ud fra eddikesyre-vand.

25 (Analyse beregnet for c> 67,15; H, 4,51; N, 10,44.

Fundet: C, 66,85; H, 4,54; N, 10,35); B. 9,10-dimethoxy-4-oxo-4H-p.yrimidor2,l-alisoquinolin-3-carbox.ylsyre (89% udbytte), smeltepunkt 298-301° ud fra 2-methoxyethanol.

30 (Analyse beregnet for ci5Hi2N2°5: C’ 60,00; 4,03; N, 9’33,

Fundet: C, 59,65; H, 4,23; N, 9,34); og C. 10-methoxy-4-oxo-7-propy1-4H-p.yrimidor2,l-a]isoquinolin-3-carboxylsyre, smeltepunkt 245-245,5° ud fra eddikesyre.

35 (Analyse beregnet for CjyHjgNgO^: C, 65,37; H, 5,16; N, 8,97.

Fundet: C, 65,32; H, 5,40; N, 8,78).

DK 164553 B

37

Eksempel 6 6>7-dihydro-9>10-dihydroxy-4-oxo-4H-pyrimidor2,l-a1isoquino1in-3-carboxylsyre (s.yrehydrolyse af ester)

Ethyl-6,7-dihydro-9,10-dimethoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquino-5 lin-3-carboxylat behandledes med 48% hydrogenbromid som beskrevet i eksempel 19 til opnåelse af 82% udbytte af titel syren, smeltepunkt 308-314°. Omkrystallisation fra N,N-dimethyl formamid gav den analytiske prøve, smeltepunkt 321-323°.

Analyse beregnet for ^ 3^0^5-- C, 56,93; H, 3,68; N, 10,22.

10 Fundet: C, 56,42; H, 3,79; N, 10,24.

Eksempel 7 (±)-7-ethy1-6t7-dih,ydro-3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H-p,yrimidor2,l-al-isoquinol-4-on (via nitril VII) 1 15 A. (i)-7-ethyl-6,7-dihydro-4-oxo-4H-pyrimidor2,l-alisoquinolin-3- carboxamid

En blanding af (±)-7-ethyl-6,7-dihydro-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]-isoquinolin-3-carboxylat (1,0 g) og flydende ammoniak (25 ml) i en stål bombe opvarmedes på et dampbad i 1,5 time. Fjernelse af ammoniakken 20 efterlod fnugagtige krystaller af amid: 900 mg (100% udbytte), smeltepunkt 197-202°. Omkrystallisation fra methanol gav farveløse krystaller, smeltepunkt 205-207°.

Analyse beregnet for CjgHjgN^: C, 66,90; H, 5,61; N, 15,61.

25 Fundet: C, 66,37; H, 5,31; N, 15,42.

B. (i)-7-ethy1-6,7-dihydro-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-alisoquinolin-3-carbonitril

En blanding af (+)-7-ethyl-6,7-dihydro-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]iso-30 quinolin-3-carboxamid (800 mg) og phosphoroxychlorid (8 ml) tilbagesva-ledes i 2 timer. Blandingen lyninddampedes til tørhed, og remanensen deltes mellem methylenchlorid og vandig kaliumcarbonat. Det organiske lag tørredes over natriumsulfat og koncentreredes til tørhed, hvilket gav 600 mg (80% udbytte) nitril, smeltepunkt 145-148°. Omkrystallisation 35 fra methanol gav tætte gule krystaller, smeltepunkt 153-154°.

Analyse beregnet for C15H13N30: C, 71,69; H, 5,21; N, 16,72.

Fundet: C, 71,31; H, 5,11; N, 16,75.

DK 164553 B

38 C. (±)-7-ethyl-6,7-dihydro-3-UH-tetrazol-5-yl)-4H-pyrimidof2,l-a]-isoquinol-4-on

En blanding af (±)-7-ethyl-6,7-dihydro-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]-isoquinolin-3-carbonitril (208 mg, 0,836 mmol), natriumazid (59,8 mg, 5 0,92 mmol) og ammoniumchlorid (49,1 mg, 0,92 mmol) i N,N-dimethylform- amid (2 ml) omrørtes i 19 minutter ved en oliebad-temperatur på 120°. Blandingen fortyndedes med vand og gjordes sur med fortyndet saltsyre til bundfældel se af 215 mg (87% udbytte) af tetrazolen, smeltepunkt 254-258° med dekomponer!ng. Omkrystallisation fra eddikesyre gav svagt gule 10 krystaller af den analytiske prøve, smeltepunkt 282-283,5° med dekompo-nering.

Analyse beregnet for CjgH^NgO: C, 61,21; H, 4,79; N, 28,56.

Fundet: C, 61,44; H, 4,81; N, 28,66.

15 Eksempel 8 6,7-dihydro-9,10-dimethoxy-3-(lH-tetrazo1-5-.yl)-4H-pyrimido[2,l-a]-isoquinol-4-on (via nitril VII) A. 6,7-dihydro-9,10-dimethoxy-4-oxo-4H-pyrimidor2,l-a1isoquinolin- 20 3-carboxamid På en måde, der svarer til den i eksempel 23A beskrevne, omdannedes ethyl-6,7-dihydro-9,10-dimethoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin3-carboxylat til amidet i 92% udbytte, smeltepunkt 313-315° ud fra 2-methoxyethanol.

25 Analyse beregnet for CjgHjgNgO^: C, 59,79; H, 5,02; N, 13,95.

Fundet: C, 59,62; H, 5,09; N, 13,94.

B. 6,7-dihydro-9,10-dimethoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-alisoquinolin- 3-carbonitril 30 På en måde, der svarer til den i eksempel 23B beskrevne, dehydre redes 6,7-dihydro-9,10-dimethoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin- 3-carboxamid til nitrilet i 93% udbytte, smeltepunkt 261-262° ud fra eddikesyre.

Analyse beregnet for C^gH^NgO^: C, 63,59; H, 4,63; N, 14,83.

35 Fundet: C, 63,47; H, 4,82; N, 14,79.

DK 164553 B

39 C. 6,7-dihydro-9,10-dimethoxy-3-(lH-tetrazoI-5-yl)-4H-pyrimido-r2,l-alisoquinol-4-on På en måde, der svarer til den i eksempel 23C beskrevne, omdannedes 6,7-dihydro-9,10-dimethoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carbo-5 nitril til det tilsvarende tetrazol i 57% udbytte, smeltepunkt 286-288° (dek.) ud fra eddikesyre.

Analyse beregnet for ^25Η14Ν6°3: C, 55,21; H, 4,32; N, 25,76.

Fundet; C, 54,89; H, 4,39; N, 25,64.

10 Eksempel 9 7-ethyl-3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H-pyrimidor2,l-a1isoquinol-4-on (via nitril VIΓ) A. 7-ethyl-4-oxo-4H-p.yrimido[2,l-alisoquinolin-3-carbonitril 15 En omrørt blanding af (±)-7-ethyl-6,7-dihydro-4-oxo-4H-pyrimido- [2,l-a]isoquinolin-3-carbonitril (3,5 g) og 10% palladium-på-carbon (1,5 g) i p-cymen (50 ml) til bagesval edes i 18 timer. Blandingen fortyndedes med methylenchlorid og filtreredes til fjernelse af katalysatoren. Opløsningsmidlerne fjernedes nå en rotationsfordamper, og remanensen 20 udkrystalli seredes fra ethanol til opnåelse af 1,6 g (46% udbytte) af titel forbindelsen, smeltepunkt 208-211°. Successive omkrystallisationer fra toluen og ethanol gav den analytiske prøve, smeltepunkt 218-219°.

Analyse beregnet for ^δ^ΐΛ^ C, 72,27; H, 4,45; N, 16,86.

Fundet: C, 72,00; H, 4,65; N, 16,56.

25 B. 7-ethyl-3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H-pyrimidoC2,l-alisoquinol-4-on Alunn'niumchlorid (595 mg, 4,46 mmol) sattes til omrørt, iskold tetrahydrofuran (40 ml). Natriumazid (870 mg, 13,4 mmol) tilsattes dernæst, og blandingen til bagesval edes i 0,5 time til fuldendelse af 30 dannelsen af aluminiumazid.

7-ethyl-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carbonitril (1,0 g, 4,05 mmol) blev tilsat, og blandingen tilbagesvaledes i 18 timer. Blandingen fortyndedes med vand og gjordes sur med 37% saltsyre til bundfæl del se af tetrazolen. Den rå tetrazol opvarmedes med 5% natriumcar-35 bonat-vand. Den vandige blanding vaskedes med ethyl acetat, og det vandige lag opvarmedes med affarvende carbon og filtreredes. Forsyring af filtratet med eddikesyre fik 1,0 g (85% udbytte) af produktet til at bundfælde, smeltepunkt 301-303° (dek.). Svagt gule nåle, smeltepunkt

DK 164553 B

40 310,5-312° med dekomponering, opnåedes ved udkrystallisation fra 2-methoxyethanol.

Analyse beregnet for CjgHjgNøO: C, 61,63; H, 4,14; N, 28,76.

Fundet: C, 60,99; H, 4,07; N, 28,24.

5 «

Claims (6)

1. 5 DK 164553 B Anal ogi fremgangsmåde til fremstilling af en 4-oxo-4H-pyrimido-[2,l-a]isoquinolin med den almene formel (I) O T I i {I)
2. 10 R2- f ^ ' " ' 5 5 15 hvori A betegner tetrazol-5-yl eller -CO^R , hvori R betegner hydrogen eller resten af en let fraspalteTig estergruppe i form af (lavere)-al- kyl, 2 R betegner hydrogen, (lavere)alkyl eller (lavere)alkenyl, 3 4 R og R betegner hver for sig hydrogen, hydroxy eller (lavere)alkoxy, 20 og den punkterede linie betegner en eventuel dobbeltbinding, eller farmaceutisk acceptable kationsalte deraf, når A er 5-tetrazolyl eller -COgH, bortset fra 1. ethyl-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylat, 2) 4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylsyre, 25 3) ethyl-6,7-dihydro-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3- carboxylat, 4) 6,7-dihydro-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylsyre, 5. ethyl-6,7-dihydro-9-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin- 3-carboxylat, 30 6) ethyl-6,7-dihydro-10-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]iso- quinolin-3-carboxyl at, 7. ethyl-6,7-dihydro-9,10-dimethoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]iso- quinolin-3-carboxylat, 8. ethyl-(+)-7-allyl-6,7-dihydro-10-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido-35 [2,l-a]isoquinolin-3-carboxylat, 9) 6,7-dihydro-9-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-ajisoquinolin-3-carboxylsyre, DK 164553 B 10) 6,7-dihydro-10-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoqinnolin-3-carboxylsyre, 11) 6,7-dihydro-9,10-dimethoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin- 3-carboxylsyre, 5 12) ethyl-9-methoxy-4-oxo-4H-pyrinndo[2,l-a]isoquinolin-3-carb- oxylat, 13. ethyl -10-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,1-a]isoquinolin-3-carb-oxylat, 14. ethyl-7-ethyl-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylat, 10 15) ethyl-9,10-dimethoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3- carboxylat, 16. ethyl-7-allyl-10-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylat, 17. ethyl-10-methoxy-4-oxo-7-propyl-4H-pyrinndo[2,l-a]isoquinolin- 15 3-carboxylat, 18) 10-methoxy-4-oxo-4H-pyrin)ido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylsyre, 19) 7-allyl-10-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylsyre, 20) 9-methoxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylsyre, 20 21) 7-hydroxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylsyre, 22) 6,7-dihydro-10-hydroxy-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxy1 syre, 23) 10-isobutyryloxy-6,7-dihydro-4-oxo-4H-pyrimido[2,l-a]iso-quinolin-3-carboxylsyre, 25 24) ethyl-(+)-7-formylmethyl-6,7-dihydro-10-methoxy-4-oxo-4H- pyrimido[2,l-a]isoquinolin-3-carboxylat og 25. ethyl-(±)-6,7>dihydro-7-(2,2,-dimethoxyethyl)-10-methoxy-4-oxo-4H-pyri mi do[2,1-a]i soqu i nol i n-3-carboxyl at, KENDETEGNET ved, AT man 30 a) til fremstilling af en forbindelse med formel (I), hvor A beteg- 5 5 ner -CC^R , hvor R har den ovenfor anførte betydning, i et eller to trin opvarmer en forbindelse med formlen R2 35 /L/r1 »3-TJ i R4 NH2 DK 164553 B hvori R^, R3 og R4 har den ovenfor anførte betydning, med en di(lavere)al kyl-ethoxymethylenmalonatester med den almene formel (III)
3. 5 C2H50CH=C(C02-(lavere)al kyl)2 (III) i nærvær eller fravær af et inert organisk opløsningsmiddel, idet man fortrinsvis først opvarmer den umættede forbindelse med formel (II) ved en temperatur over 80°C med nævnte di(lavere)al kyl-ethoxymethylen-10 malonatester med formel (III) i nærvær eller fravær af et inert opløsningsmiddel til fremstilling af en forbindelse med formlen R2 15 ^ [^/γΝ (iv) HN ^/C02~ (lavere) al.wyi \:h=c 20 \ nCC>2- (lavere) alkyl 2 3 4 hvori R , R og R har den ovenfor anførte betydning, hvorefter man ringslutter forbindelsen med formel (IV) ved opvarmning 25 ved en temperatur på ca. 200-260°C i et højtkogende inert organisk opløsningsmiddel, og om ønsket omdanner en resulterende forbindelse, 5 5 hvori R betegner lavere alkyl til en forbindelse, hvori R betegner hydrogen, ved hydrolyse med syre eller base, og om ønsket omdanner en fremstillet fri syre, hvori R betegner hydrogen, til en let fraspal- 30 telig ester, som defineret ovenfor, ved esterificering på i og for sig kendt måde, og/eller om ønsket omdanner en resulterende forbindelse, 5 hvori R betegner lavere al kyl, som er umættet ved Cgy, til den tilsvarende mættede forbindelse ved katalytisk hydrogenering, og/eller 5 om ønsket omdanner en resulterende forbindelse, hvori R betegner lavere 35 alkyl, som er mættet ved Cgy, til den tilsvarende umættede forbindelse ved dehydrogenering, og om ønsket på i og for sig kendt måde omdanner en forbindelse, hvor A betegner -C00H til et farmaceutisk acceptabelt kationsalt deraf, DK 164553 B b) til fremstilling af en forbindelse med formel (I), hvor A betegner tetrazol-5-yl, hvilken forbindelse betegnes med formel (Γ") O N-N 5 r2 aa j i H d·") X Xx j R3—U- R T io r4/ 2 3 4 hvori R , R og R har den ovenfor anførte betydning, 15 kondenserer et passende 1-aminoisoquinolin-udgangsmateriale med formlen R2 20 r3— I (ir>
4. 4 NIU R4 2 25 2 3 4 hvor R , R og R har den ovenfor anførte betydning, med ethylethoxymethylencyanoaeetat i nærvær eller fravær af et inert organisk opløsningsmiddel til fremstilling af et acrylat-mellemprodukt 30 med formlen TC r3 -4^T^ 35 /^YN
5. 45. HK \li=C(CfK)C02C2H5 DK 164553B 2 3 4 hvor R , R og R har den ovenfor anførte betydning, og omsætter mellemproduktet (V) med aluminiumazid i tetrahydrofuran til fremstilling af forbindelsen med formel (I7") c) til fremstilling af en forbindelse med formel (I), hvor A 5 betegner tetrazol-5-yl, hvilken forbindelse betegnes med formel (Γ") o N N «νΛΛ·/ N Y 2 (I'")
6. 10 XxJ r3—γ R 15 2 3 4 hvori R , R og R har den ovenfor anførte betydning, omsætter et nitril med formel (VIP) 20 2 ? YA'1" (VII') R3- 25 r4/ Λ Λ i hvor R , R·3 og R^ har den ovenfor anførte betydning, med aluminiumazid i tetrahydrofuran, eller 30 d) til fremstilling af en 6,7-dihydropyrimidinoforbindelse med formel (I), hvori A betegner tetrazol-5-yl, hvilken forbindelse betegnes med formel (I"") 35 DK 164553 B O N_N (I"") il H v ; 5 „3 TV rr 10 2 3 4 hvori R , R og R har den ovenfor anførte betydning, omsætter et nitril med formlen o 15 r2J\/c-n j I) (VII) . - R4 2 3 4 hvori R , R og R har den ovenfor anførte betydning, med aluminiumazid i tetrahydrofuran eller med et azidsalt i form af 25 ammoniumazid, substitueret ammoniumazid, natriumazid eller 1 i thi umazid i et inert organisk opløsningsmiddel, hvorefter en under b)-d) opnået forbindelse om ønsket på i og for sig kendt måde omdannes til et farmaceutisk acceptabelt kationsalt deraf. 30 35