DK163520B

DK163520B - Substitueret androsta-1,4-dien-3,17-dioner, fremgangsmaade til fremstilling deraf, praeparater indeholdende saadanne forbindelser samt anvendelsen af disse til fremstilling af farmaceutiske praeparater

Info

Publication number: DK163520B
Application number: DK324386A
Authority: DK
Inventors: Franco Buzzetti; Natale Barbugian; Paolo Lombardi; Enrico Di Salle
Original assignee: Erba Carlo Spa
Priority date: 1985-07-09
Filing date: 1986-07-08
Publication date: 1992-03-09
Also published as: DK163520C; KR950003614B1; HK94190A; PT82944B; SG80490G; SU1501923A3; BE905067A; YU103687A; NL300017I2; CS257794B2; SE8603046D0; BR1100240A; DK324386A; IE58949B1; AT395157B; JPH0443919B2; ES557466A0; SE468988B; YU44585B; DE10199030I1

Description

i

DK 163520 B

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte 6-alky-lidenandrosta-l,4-dien-3,17-dioner, fremgangsmåde til fremstilling heraf, farmaceutiske præparater indeholdende disse forbindelser samt anvendelsen af disse til frem-5 stilling af farmaceutiske præparater. Forbindelserne anvendes til behandling af hormonafhængige cancere hos pattedyr. Kliniske data angiver at aromatiserede metaboliter af androgener, som f.eks. østrogener, er hormoner, der er involveret i de pathogene cellulære forandringer i for-10 bindelse med væksten af visse hormonafhængige cancere, som f.eks. bryst-, endometriale og ovarie-carcinomer.

Østrogener er også involveret i pathogenesen af benign-prostatisk hyperplasi.

15

Endogene østrogener dannes til slut ud fra enten andro-stendion eller testosteron som umiddelbare precursorer. Omsætningen af central vigtighed er aromatiseringen af steroidringen A, der udføres af enzymet aromatase. Da 20 aromatisering er en enestående reaktion og den sidste i en række trin ved biosyntesen af østrogener, har man forestillet sig, at en effektiv hæmning af aromatase, som var et resultat af forbindelser, der var i stand til at gribe ind i de aromati serende trin, kunne være af værdi 25 ved kontrollen af mængden af cirkulerende østrogener, ved kontrollen af østrogenafhængige processer ved reproduktionen og af østrogenafhængige tumorer.

Kendte steroidforbindelser, der er blevet rapporteret at 30 være i besiddelse af en aromatasehæmmende virkning, er f.eks. Δ^-testololacton [U.S.A. patentskrift nr.

2 744 120], 4-hydroxy-androst-4-en-3,17-dion og estere heraf [se f.eks. U.S.A. patentskrift nr. 4 235 893], 10-(l,2-propadienyl)-estr-4-en-3,17-dion [U.S.A. patent-35 skrift nr. 4 289 762], 10-(2-propynyl)-estr-4-en-3,17-di-on [J. Am. Chem. Soc., 103, 321 (1981) og U.S.A. patentskrift nr. 4 322 416], 19-thioandrosten-derivater [Europ.

DK 163520 B

2 pat. ansøgning nr. 100566], androsta-4,6-dien-3,17-dion, androsta-1,4,6-trien-3,17-dion [engelsk patentansøgning nr. 2 100 601A] og androsta-1,4-dien-3,17-dion [Cancer Res. (Suppl.) 42, 3327 (1982)].

5

De omhandlede forbindelser udviser udover kraftig in vitro hæmning af aromatasen en glimrende in vivo aktivitet på grund af deres bedre metaboliske stabilitet, når de sammenlignes med kendte forbindelser.

10

De her omhandlede forbindelser er ejendommelige ved at have den almene formel (I): CH 0 pi311 15 I CH3i 1 -—1 (I)

oXAfJ

20 R'j CHR2 hvori hver af R og R2 uafhængigt betegner hydrogen eller C^-Cg alkyl, og betegner hydrogen, halogen eller C^-Cg alkyl.

25

Den ovenfor angivne formel for de omhandlede forbindelser omfatter alle mulige isomere, specielt Z og E isomere, både hver for sig og som blandinger af forbindelser med formel (I), hvori R2 betegner C.^-^ alkyl. I formlerne i 30 den foreliggende beskrivelse med krav angiver en brudt linie (|||||), at substituenterne er i «-konfigurationen, dvs. under ringens plan, medens en kraftig optrukken linie ( ) angiver, at substituenterne er i 0-konfigurationen, dvs. over ringens plan; bølgelinie ( ) angiver, 35 at grupperne kan være enten i a-konfigurationen eller i 0-konfigurationen.

DK 163520 B

3

En C^-Cg alkylgruppe er fortrinsvis en C^-C^ alkylgruppe, specielt methyl, ehtyl, propyl eller t-butyl, fortrinsvis methyl eller ethyl. Fra disse eksempler er det klart, at en alkylgruppe kan være lige eller forgrenet. Et halogen-5 atom er f.eks. chlor, fluor, brom, specielt chlor og fluor, foretrukkent fluor.

Foretrukne omhandlede forbindelser med formlen (I) er sådanne, hvori 10 R betegner hydrogen eller C^-C^ alkyl, betegner hydrogen, fluor, chlor eller C^-C^ alkyl, og 15 R2 betegner hydrogen eller C^-C^ alkyl.

Mere foretrukne omhandlede forbindelser med formlen (I) er sådanne, hvori 20 R betegner hydrogen, methyl eller ethyl? R1 betegner hydrogen, fluor eller chlor, og R2 betegner hydrogen.

25

Eksempler på særlige omhandlede forbindelser er: 6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion, 1-methyl-6-methylenandrosta-1,4-dien-3,17-dion, 30 l-ethyl-6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion, 4-methyl-6-methylenandrosta-1,4-dien-3,17-dion, 4-ethyl-6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion, 4-fluor-6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion, 4-chlor-6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion, 35 6-ethylidenandrosta-l,4-dien-3,17-dion, 6-propylidenandrosta-l,4-dien-3,17-dion, 4-fluor-l-methyl-6-methylenandrosta-l, 4-dien-3,17-dion,

DK 163520B

4 4-chlor-1-methyl-6-methylenandrosta-1,4-dien-3,17-dion# l-methyl-6-ethylidenandrosta-l,4-dien-3,17-dion og 4-fluor-6-ethylidenandrosta-l,4-dien-3,17-dion.

5 De omhandlede' forbindelser kan fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, der er ejendommelig ved, at man (a) dehydrogenerer en forbindelse med formel (II)

AsO—1

Ra CHR2 hvori Rq betegner hydrogen eller C-^-Cg alkyl, og R og 2q ^2 be-te9ner det ovenfor definerede, hvorved der fås en forbindelse med formel (I), hvori R^ betegner hydrogen eller C-^-Cg alkyl, og R og R2 er som ovenfor defineret; eller 2g (b) omsætter en forbindelse med formel (III) «'3il R, CH, I (III) 30 cXi/t* — ν,·δ cW2 35

DK 163520 B

5 hvori R og R2 er som ovenfor defineret, med et hydro-halogenerende middel, hvorved der fås en forbindelse med formel (I), hvori R^ betegner halogen, og R og R2 betegner det ovenfor definerede; og at man eventuelt 5 adskiller en blanding af isomere af forbindelser med formel (I) i de enkelte isomere.

Dehydrogenering af en forbindelse med formel (II) kan udføres ved behandling med et passende dehydrohalogenerende 10 middel, f.eks. dichlordicyanobenzoquinon (DDQ), selendi-oxid eller chloranil. Fortrinsvis udføres omsætningen ved behandling med DDQ i et inert opløsningsmiddel, som di-oxan, benzen, toluen eller dichlormethan, ved en temperatur, der ligger fra ca. 40 °C til ca. 120 °C, idet reak-15 tionstiden er fra ca. 12 timer til ca. 72 timer.

Hydrohalogenerende midler, der reagerer med en forbindelse med formel (III) er f.eks. en hydrohalogenidsyre eller trihalogenboran. Omsætningen af en forbindelse med formel 20 (III) med en hydrohalogenidsyre eller en trihalogenboran kan udføres på kendt måde, f.eks. som beskrevet af Came-rino et al., 1956, Il Farmaco 11, 586 og A. Bowers et al., 1958, Tetrahedron 3, 14.

25 Dersom hydrohalogenidsyren er saltsyre eller hydrogenbro-midsyre, udføres omsætningen fortrinsvis i eddikesyre eller ethanol ved en temperatur, der ligger fra 0 °C til ca. 100 °C.

30 Dersom der anvendes en trihalogenboran, som f.eks. bor-trifluorid, udføres omsætningen fortrinsvis i et inert opløsningsmiddel, som diethylether, benzen eller dichlormethan, ved en temperatur, der ligger fra ca. -30 °C til ca. 50 °C.

Adskillelsen af en blanding af isomere af en forbindelse med formel (I) kan udføres på i og for sig kendt måde ved 35

DK 163520 B

6 almindeligt anvendte metoder.

F.eks. kan adskillelsen af en blanding af geometriske isomere udføres ved fraktioneret krystallisation eller 5 ved adskillelse ved søjlekromatografi.

Forbindelser med formel (II), hvori R betegner hydrogen, ø.

R betegner C^-Cg alkyl, og R2 betegner det ovenfor definerede, kan fremstilles som angivet i følgende reaktions-10 skema efter i og for sig kendte metoder: nu ?, 0

1 XiCi-J

' j T I _> \ il (iv) (v)

Η H

2° g/ ch,h £H3 i; i φ (vi) ‘ (ylI)

H

30 / β

Ch'J? p

Iv i i

35 f AfA

J J I 011) CHR„ 4ø

DK 163520 B

7 hvor Rb betegner C^-Cg alkyl, og ϊ?2 er som defineret ovenfor.

F.eks. kan dehydrogeneringen af forbindelsen med formel (IV) til fremstilling af forbindelsen med formel (V) udføres som beskrevet i H.J. Ringold et al., 1962, Chemistry and Industry, 211. Fortrinsvis udføres reaktionen ved behandling med DDQ i kogende dioxan.

En forbindelse med formel (VI) fås ved at alkylere en forbindelse med formel (V), f.eks. efter kendte metoder. Fortrinsvis udføres alkyleringen ved at sætte forbindelsen med formel (V) opløst i et inert opløsningsmiddel til en opløsning af dialkyllithiumkobber i det samme eller et andet opløsningsmiddel. Velegnede inerte opløsningsmidler er f.eks. methylenchlorid, tetrahydrofuran, benzen eller diethylether, idet sidstnævnte opløsningsmiddel foretrækkes. Omsætningen udførs fortrinsvis ved temperaturer, der ligger fra ca. -75 °C til ca. 20 °C, idet et temperaturområde fra ca. -5 °C til ca. 0 °C foretrækkes. Forholdet mellem reagenser er ikke kritisk, men mindst 2 mol dialkyllithiumkobber skal være til stede. Det skal bemærkes, at additionen sker selektivt på 5-fladen; som en følge deraf er der i 1-stillingen et aksialt hydrogenatom, der er velegnet til at kunne fjernes. En forbindelse med formel (VII) kan fås, idet der gås ud fra en forbindelse med formel (VI) på kendt måde, f.eks. som beskrevet af M.

Mori, 1962, Chem. Pharm. Bull. (Tokyo), 10, 386. Da en forbindelse med formel (VI) kan bromeres ved behandling med 1-1,2 ækvivalenter brom i eddikesyre eller andre passende opløsningsmidler ved en temperatur, der ligger fra ca. 0 °C til ca. 50 °C, fortrinsvis ved stuetemperatur, fås der et 4-bromderivat, der herefter dehydrobromeres, uden rensning, i dimethylformamidopløsning i nærværelse af lithiumchlorid ved ca. 140-150 “C. En forbindelse med formel (II') kan fås, idet man går ud fra en forbindelse med formel (VII) efter kendt metode, f.eks. som beskrevet

DK 163520 B

8 af K. Annen, 1982, Synthesis, 34. Fortrinsvis omsættes en forbindelse med formel (VII) med usubstitueret eller passende C-^-Cg alkyl-substitueret formaldehyd-diethylacetal i chloroform, der koger med tilbagesvaling, i nærværelse 5 af phosphorylchlorid og natriumacetat. Alternativt kan den samme omsætning udføres i andre inerte opløsningsmidler, som f.eks. 1,2-dichlorethan, diethylether eller di-oxan, og i nærværelse af andre passende kondenserende midler, som phosphorpentaoxid eller p-toluensulfonsyre.

10

Forbindelserne med formel (II), hvor R betegner hydro-gen, R betegner hydrogen, og R£ er som defineret ovenfor, kan fås ved at gå ud fra den kommercielt tilgængelige an-drost-4-en-3,17-dion under anvendelse af den samme metode 15 som beskrevet ovenfor til fremstilling af forbindelsen med formel (II')/ idet man går ud fra androst-4-en-3,17-dion i stedet for en forbindelse med formel (VII).

Forbindelser med formel (II), hvori Ra betegner C^-Cg al-20 kyl, og R og R2 betegner det ovenfor definerede, kan fås efter kendte metoder, f.eks. som angivet i følgende reaktionsskema .

25 1 35

DK 163520 B

9

, rrS

5 Ifs, _ /---)

AkV N·^ I I _-> fil,.

(vin) (IX)

Ra 10 ^

R

? 9·!|ι _ J

15 Λργ- ο^LaJ (,rt K‘a CHR2 20 hvor Ra' betegner C^-Cg alkyl, og R og R2 betegner det ovenfor definerede.

25 Alkylering af en forbindelse med formel (VIII), dvs. an- drost-4-en-3,17-dion og dennes 1-alkyl-derivater under anvendelse af Atwater's metode [N.W. Atwater, JACS 79, 5315 (1957)] ved langsom tilsætning af alkylchlorid til en opløsning, der koger med tilbagesvaling, af ketonen i 30 t-butanol indeholdende et ringe overskud kalium t-but-oxid, giver en forbindelse med formel (IX), dvs. henholdsvis 4-alkylandrost-4-en-3,17-dion og forbindelsens 1-alkyl-derivater. 1

Alternativt kan androst-4-en-3,17-dionen og dennes 1-al-kyl-derivater selektivt thiomethyleres ved stilling 4 med formaldehyd og en thiol under basiske betingelser. Ben-

DK 163520 B

10 zylmercaptan er den foretrukne thiol.

Desulphorisering af mellemprodukts-4-thioetheren fører til henholdsvis 4-methylandrost-4-en-3,17-dionen og dens 5 1-alkyl-analoge.

Indførselen af en alkylidengruppe ved stilling 6 i forbindelserne med formel (IX) kan udføres ved den tidligere beskrevne metode (K. Annen et al., Synthesis 1982, 34).

10

Forbindelserne med formel (III) kan fås på kendt måde, f.eks. som angivet i nedenstående reaktionsskema: 15 0 R f^VS R rr > 20 1 si j ----l'~ \ j ! . , n X? i CHR2 V) CHR2 25 οη,9, - rf^i

30 oAYtV

CHR2 hvor R og R2 betegner det ovenfor definerede.

35

DK 163520B

11

Epoxidering af en forbindelse med formel (II) til fremstilling af en forbindelse med formel (X) kan udføres ved behandling med et passende oxiderende middel, fortrinsvis et koncentreret, f.eks. 36% I^C^, i alkoholisk alkalihy-5 droxidopløsning, fortrinsvis KOH eller NaOH i methanol, ved en temperatur, der ligger fra 0 til 25 °C i fra ca. 2 timer til adskillige dage.

Dehydrogenering af en forbindelse med formel (X) til 10 fremstilling af en forbindelse med formel (III) kan udføres ved behandling med et passende dehydrogenerende middel, som f.eks. dichlordicyanobenzoquinon i et opløsningsmiddel, der koger med tilbagesvaling, f.eks. som beskrevet ovenfor.

15

Forbindelserne med formel (IV) og forbindelserne med formel (VIII), hvori R betegner hydrogen, er kendte forbindelser.

20 Forbindelserne med formel (VIII), hvori R betegner C^-C^ alkyl, er forbindelser med formel (VII), der kan fås som beskrevet ovenfor.

De omhandlede forbindelser er inhibitorer for biotrans-25 formationen af endogene androgener, dvs. de er steroide aromatase-inhibitorer.

De omhandlede forbindelser kan derfor være af værdi som alternativ til endocrin ablation, f.eks. oophorectomi, 30 hypophysectomi eller adrenalectomi, ved behandlingen af avancerede hormon-afhængige bryst-, pancreas-, endome-triale og ovarie-cancere.

Aromatase-inhibitorer med formel (I) anvendes også til 35 reproduktionskontrol: faktisk bevirker en nedgang af østrogenniveauerne in vivo i gonad-hæmmende virkning og i utilstrækkelig uterus-udvikling; aromatase-inhibitorer

DK 163520 B

12 kan på samme tid være implantations-inhibitorer.

En anden anvendelse af de omhandlede forbindelser er ved behandlingen af prostatisk hypertrophi eller hyperplasi i 5 forbindelse méd en for stor østrogenproduktion og skift af østrogen/androgen-forholdet til højere værdier. Aroma-tase-hæmning af de omhandlede forbindelser bestemtes f.eks. både in vitro (human placental aromatase) og in vivo (ovarie-aromatase-aktivitet) i rotter.

10

Som et eksempel sammenlignedes effektiviteten af 6-methy-len-androsta-l,4-dien-3,17-dion (intern kode FCE 24304) med de velkendte aromatase-inhibitorer: 4-hydroxy-andro-sta-4-en-3,17-dion (40H-A), Δ^-testololacton og androsta-15 l,4-dien-3,17-dion [A.M.H. Brodie, Cancer Research (Suppl.) 42, 3327 s, (1982)] og 6-methylenandrost-4-en- 3,17-dion, som er omhandlet i engelsk patentskrift nr.

929 985 som et bekvemt mellemprodukt til fremstillingen af terapeutisk værdifulde 6a-methylsteroide hormoner; 20 imidlertid er der ikke i dette engelske patentskrift angivet nogen terapeutisk anvendelse af forbindelsen.

(a) Aromatasehæmninq in vitro 25 Enzymsystemet isoleredes fra den mikrosomale fraktion af humant placentavæv efter standardmetode. Thompsons og Siiteris forsøg [E.A. Thompson and P.K. Siiteri, J. Biol. Chem. 249, 5364 (1974)], der bestemmer 3 graden af aromatisering målt ved frigørelsen af Ho0 3 z 30 fra 4-[10,20- H]androstan-3,17-dion, anvendtes. Alle

inkubationer blev udført under omrystning i et vandbad ved 37 °C i luft i 10 mM kaliumphosphatpuffer, pH

7,5, der indeholdt 100 mM KC1, 1 mM EDA og 1 mM di-thiothreitol.

35

Forsøget udførtes i 1 ml inkubationsrumfang indehol- 3 dende 50 nM 4-[ H]androstendion, forskellige koncen-

DK 163520 B

13 trationer af inhibitorerne, 100 μΜ NADPH og 0,05 mg mikrosomale proteiner. Efter 15 minutters inkubation blev reaktionen afbrudt ved tilsætning af chloroform (5 ml). Efter centrifugering ved 1500 x 9 i 5 minut-5 ter udtoges prøver (0,5 ml) fra vandfasen til bestem- 3 melse af dannet ^0.

Den koncentration af hver forbindelse, der krævedes for at reducere kontrolaromatase med 50% (IC^q), blev 10 bestemt ved at plotte % hæmning mod log af inhibitor koncentrationen. Den relative aktivitet af hver forbindelse i forhold til 4 OH-A beregnedes efter følgende ligning:

15 IC50 af 4 OH-A

Relativ aktivitet = - ICgQ af forsøgsforbindelse (b) Aromatasehæmning in vivo hos rotter 20

Voksne hunrotter blev behandlet to gange subkutant med 100 internationale enheder serum gonadotropin (PMSG) fra drægtige hopper med fire dages interval for at forøge ovariearomataseaktiviteten ifølge Bro-25 die's metode [A.M.H. Brodie et al., Steroid 38, 693 (1981)]. Tre dage efter den anden PMSG-behandling indgaves grupper bestående af seks dyr i hver gruppe peroralt vehiklet (0,5% methocel) eller inhibitoren i en koncentration på 30 mg/kg. Dyrene aflivedes 24 30 timer senere, mikrosomer isoleredes fra ovarier, og deres aromatase-aktivitet blev bestemt under anvendelse af en metode, der var lig med den, der er beskrevet under (a). 1

Inkubationerne blev udført i 30 minutter i 1 ml inku bationsrumfang indeholdende 0,1 mg mikrosomale pro- 3 teiner, 100 nM 4-[ H]androstendion og 100 μΜ NADPH. %

DK 163520 B

14 hæmning af kontrolaromatase-aktivitet blev beregnet.

TABEL

5 Hæmning af human placentaaromatase in vitro og af rotte-ovariearomatase in vivo.

In vitro In vivo 10 - - % Aromatase ICgQ nM (Relativ hæmning ved

Forbindelse aktivitet) 30 mg/kg p.o.

15 4-hydroxy-androst- (1,00) 4-en-3,17-dion 44 pr. definition inaktiv Δ^-testololacton (testolacton) 8240 (0,005) inaktiv 20 6-methylenandrost- 4-en-3,17-dion 74 (0,59) inaktiv androsta-1,4- 25 dien-3,17-dion 112 (0,39) 37 6-methylenandrosta- l,4-dien-3,17-dion 39 (1,13) 81 (FCE 24304) 30 -

Af resultaterne angivet i tabellen fremgår det, at den omhandlede forbindelse 6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion (FCE 24304) er en særdeles potent aromataseinhibitor 35 både "in vitro" og "in vivo".

DK 163520 B

15

In vitro er den omhandlede forbindelse FCE 24304 cirka tre gange kraftigere end den beslægtede androsta-1,4-dien-3,17-dion og 200 gange kraftigere end Δ^-testololac-ton. Skønt forbindelsens in vitro aktivitet kun er lidt 5 højere end aktiviteten af 4-OH-A, er den omhandlede forbindelse meget effektiv, dersom den administreres peroralt in vivo som følge af en usædvanlig resistens mod nedbrydning i leveren, medens 4-OH-A er ineffektiv.

10 Faktisk er hovedulempen ved den terapeutiske anvendelse af 4-OH-A som antitumormidler hos kvinder nødvendigheden af parenteral administrering, idet forbindelsen i udstrakt grad bindes ved peroral administrering [R.C. Coombes et al., Lancet 11, 1237 (1984)].

15 På grund af deres høje terapeutiske indeks kan de omhandlede forbindelser anvendes sikkert inden for medicinen.

F.eks. fandtes den omtrentlige akutte toxicitet (LD^q) af de omhandlede forbindelser i mus sig bestemt efter enkel- 20 administrering af stigende doser og målt på den syvende dag efter behandlingen at være praktisk taget uden betydning overhovedet. De omhandlede forbindelser kan administreres i en hel række dosisformer, f.eks. peroralt i form af tabletter, kapsler, som sukker- eller filmover- 25 trukne tabletter, flydende opløsninger eller suspensioner; rektalt i form af suppositorier; parenteralt, f.eks. intramuskulært, eller ved intravenøs injektion eller infusion.

30 Dosis afhænger af patientens alder, vægt og tilstand og af administreringsvejen; f.eks. er en passende dosis til peroral administrering til mennesker for den nævnte forbindelse FCE 24304 i området fra ca. 10 til ca. 150-200 mg pr. dosis fra 1 til 5 gange dagligt.

Opfindelsen omfatter også farmaceutiske præparater indeholdende en omhandlet forbindelse sammen med et farmaceu- 35

DK 163520B

16 tisk acceptabelt hjælpestof (der kan være bærestof eller fortyndingsmiddel).

De omhandlede farmaceutiske præparater indeholdende de 5 omhandlede forbindelser fremstilles på almindelig måde og administreres i farmaceutisk passende form.

F.eks. kan de faste perorale former sammen med den aktive forbindelse indeholde fortyndingsmidler, som lactose, 10 dextrose, saccharose, cellulose, majsstivelse eller kartoffelstivelse; smøremidler, som siliciumoxid, talkum, stearinsyre, magnesium eller calciumstearat og/eller po-lyethylenglycol; bindemidler, som f.eks. stivelsesarter, gummi arabicum, gelatine, methylcellulose, carboxymethyl-15 cellulose eller polyvinylpyrrolidon; henfaldsmidler, som f.eks. stivelse, algininsyre, alginater eller natriumsti-velsesglycolat; bruseblandinger; farvestoffer; sødemidler; befugtningsmidler, som f.eks. lecithin, polysorba-ter, laurylsulfater; og generelt ikke-toxiske og farmako-20 logisk inaktive substanser, der anvendes inden for farmacien. De farmaceutiske præparater kan fremstilles på kendt måde, f.eks. ved blanding, granulering, tablettering, sukkerovertrækning eller ved filmovertrækningsme-toder.

25

Flydende dispersioner til peroral administrering kan f.eks. være sirupper, emulsioner og suspensioner.

Sirupperne kan som bærestoffer indeholde f.eks. saccharo-30 se eller saccharose med glycerol og/eller mannitol og/eller sorbitol.

Suspensionerne og emulsionerne kan som bærestof f.eks. indeholde en naturlig gummi, agar, natriumalginat, pec-35 tin, methylcellulose, carboxymethylcellulose eller poly-vinylalkohol.

DK 163520 B

17

Suspensioner eller opløsninger til intramuskulaer injektionsformål kan sammen med den aktive forbindelse indeholde et farmaceutisk acceptabelt bærestof, som f.eks. sterilt vand, olivenolie, ethyloleat, glycoler, som pro-5 pylenglycol, og eventuelt en passende mængde lidocainhy-drochlorid. Opløsninger til intravenøse injektioner eller infusioner kan indeholde et bærestof, som sterilt vand, eller fortrinsvis kan de foreligge i form af sterile, vandige isotoniske saltvandsopløsninger.

10

Suppositorierne kan sammen med den aktive forbindelse indeholde et farmaceutisk acceptabelt bærestof, som f.eks. kakaosmør, polyethylenglycol, et polyoxyethylen-sorbitan-fedtsyreester-overfladeaktivt middel eller lecithin.

15 Følgende eksempler illustrerer opfindelsen nærmere.

EKSEMPEL 1 20 0,50 g 6-methylenandrost-4-en-3,17-dion og 0,57 g di- chlordicyanobenzoquinon opvarmedes med tilbagesvaling i 20 ml vandfrit dioxan i ca. 15 timer. For at fjerne DDQ filtreredes suspensionen gennem aluminiumoxid. Efter afdampning af opløsningsmidlet opløstes remanensen i ethyl-25 acetat, det organiske lag vaskedes med vand, tørredes over natriumsulfat, og opløsningsmidlet fjernedes under vakuum. Den urensede forbindelse kromatograferedes på si-licagel under anvendelse af hexan-ethylacetat 40%, hvorved der opnåedes 0,25 g rent 6-methylenandrosta-l,4-dien-30 3,17-dion, smp. 188-191 °C.

\nax 247 mμ (e 13.750).

Fundet: C 81,01, H 8,05 35 C20H24°2 kræver c 81,04, h 8,16.

DK 163520 B

18

Idet der arbejdes som ovenfor beskrevet, fremstilledes følgende forbindelser: 1-methyl-6-methylenandrosta-1,4-dien-3,17-dion.

5 Fundet: C 81,18, H 8,37 ^21H26°2 dræver c 81,25, H 8,44, smp. 178-180 °C.

l-ethyl-6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion.

Fundet: C 81,32, H 8,62 10 C22H28°2 kræver c 81,44, H 8,70.

4-methyl-6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion.

Fundet: C 81,15, H 8,32 C21H26°2 dræver C 81,25, H 8,44.

15 6-propylidenandrosta-l,4-dien-3,17-dion.

Fundet: C 81,30, H 8,80 C22H28°2 kræver c 81,44, H 8,70.

20 4-ethyl-6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion, 6-ethylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion og 1-methyl-6-ethylidenandrosta-1,4-dien-3,17-dion.

EKSEMPEL 2 25

En blanding af 6-methylenandrost-4-en-3,17-dion (0,50 g), selendioxid (0,50 g) og t-butylalkohol (200 ml) opvarmedes ca. 30 timer med tilbagesvaling under nitrogen. Den afkølede opløsning filteredes og inddampedes herefter til 30 tørhed under reduceret tryk. Remanensen optoges i ethyl-acetat (100 ml), behandledes med aktivt kul og vaskedes først med vand, derefter med ammoniumsulfidopløsning, dernæst med koldt 17% ammoniumhydroxidopløsning, med kold fortyndet saltsyre, med vand og tørredes med natriumsul-35 fat og inddampedes til slut til tørhed. Den urensede forbindelse kromatograferedes som beskrevet i eksempel 1, hvorved man opnåede 0,20 g 6-methylenandrost-l,4-dien-

DK 163520 B

19 3,17-dion med smp. 188-191 °C.

Ved at arbejde som beskrevet ovenfor fremstillledes følgende forbindelser: 5 l-methyl-6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion.

Fundet: C 81,18, H 8,37 C21H26°2 kræver c 81,25, H 8,44.

10 l-ethyl-6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion.

Fundet: C 81,32, H 8,62 C22H28°2 kræver c 81,44, H 8,70.

4-methyl-6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion.

15 Fundet: C 81,15, H 8,32 C21H26°2 kræver c 81,25, H 8,44.

4-ethyl-6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion, 6-ethylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion, 20 6-propylidenandrosta-l,4-dien-3,17-dion og l-methyl-6-ethylidenandrosta-l,4-dien-3,17-dion.

EKSEMPEL 3 25 En opløsning af 4,5-epoxy-6-methylenandrost-l-en-3,17-di- on (1,0 g) i iseddikesyre (10 ml) behandledes med gasformigt hydrogenchlorid i 30 minutter ved stuetemperatur. Bundfaldet frafiltreredes, vaskedes med diethylether, tørredes og kromatograferedes på silicagel under anven-30 delse af hexan-ethylacetat, hvorved der opnåedes 0,8 g rent 4-chlor-6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion.

Fundet: C 72,40, H 6,91, Cl 10,53 C20H23C102 kræver c 72,61, H 7,01, Cl 10,72, 35 smp. 148-150 °C.

DK 163520 B

20 NMR δ ppm.: 0,84 (3H, s), 1,24 (3H, s), 5,13 (IH, s), 5,43 (IH, s), 6,37 (IH, d), 7,08 (IH, d).

MS (m/z): 330.

5

Ved at arbejde som angivet ovenfor, og idet man gik ud fra det passende 4,5-epoxyderivat og anvendte den pågældende gasformige hydrohalogenidsyre, fremstilledes følgende forbindelser: 10 4-brom-6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion.

Fundet: C 63,90, H 6,03, Br 21,15 C20H23BrO2 kræver c 64,00, H 6,18, Br 21,29.

15 4-fluor-6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion.

Fundet: C 76,35, H 7,34, F 6,01 ^20H23FO2 kræver c 76,41, H 7,37, F 6,04.

4-chlor-l-methyl-6-methylenandrosta-1,4-dien-3,17-dion, 20 4-brom-l-methyl-6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion, 4-fluor-l-methyl-6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion.

Fundet: C 76,75, H 7,62, F 5,71 ^21B25F®2 kræver C 76,80, H 7,67, F 5,79.

25 4-chlor-6-ethylidenandrosta-l,4-dien-3,17-dion, 4-brom-6-ethylidenandrosta-l,4-dien-3,17-dion og 4-fluor-6-ethylidenandrosta-l,4-dien-3,17-dion.

30 EKSEMPEL 4

En opløsning af 4,5-epoxy-6-methylenandrost-l-en-3,17-dion (1,0 g) i diethylether (100 ml) behandledes med bor-trifluoridetherat (1,4 ml) i 3 timer ved stuetemperatur.

35 Herefter vaskedes opløsningen med 5% natriumcarbonatop- løsning, med vand, tørredes (Na2S0^) og inddampedes i vakuum. Remanensen opløstes i pyridin (20 ml), og 0,4 ml

DK 163520 B

21 thionylchlorid tilsattes ved 0 °C. Efter 5 minutters forløb tilsattes vand, og forbindelsen ekstraheredes med ether. Etherekstrakterne vaskedes med 2N saltsyre, med vand og tørredes (Na2SC>4) og inddampedes. Den fremkomne 5 urensede forbindelse kromatograferedes på silicagel under anvendelse af hexan/ethylacetat som elueringsmiddel, hvorved der opnåedes 0,6 g rent 4-fluor-6-methylenandro-sta-1,4-dien-3,17-dion.

10 Fundet: C 76,30, H 7,35, F 5,91 C20H23FO2 kræver c 76,40, H 7,37, F 6,04.

Følgende forbindelser fremstilledes under anvendelse af ovenfor beskrevne fremgangsmåde: 15 4-fluor-l-methyl-6-methylidenandrosta-l, 4-dien-3,17-dion, 4-fluor-6-ethylidenandrosta-l,4-dien-3,17-dion.

EKSEMPEL 5 20 6-methylenandrost-4-en-3,17-dion (5 g) opløstes i 200 ml methanol og afkøledes til 0 °C. Herefter tilsattes iskold 36% 1^2 (17 ml) og 2% NaOH (9 ml). Blandingen omrørtes 1 time, hvorefter den henstod 20 timer ved 5 °C og udhæld-25 tes dernæst i 1400 ml isvand under kraftig omrøring, produktet filtreredes, vaskedes med vand og tørredes, hvorved der opnåedes 4,2 g (80%) 4,5-epoxy-6-methylenandro-sta-3,17-dion [a/Æ-epoxid-blanding]; 30 NMR 6 ppm: 0,90 (3H, s), 0,97 (3H, s), 3,52 (IH, s), 4,92 (IH, bred), 5,06 (IH, bred).

4,5-epoxy-6-methylenandrosta-3,17-dion (3 g) og dichlor-dicyanobenzoquinon (1,7 g) opløst i 60 ml vandfrit dioxan 35 opvarmedes 15 timer med tilbagesvaling. Den afkølede opløsning filtreredes gennem aluminiumoxid, og opløsningsmidlet afdampedes i vakuum. Remanensen optoges i ethyl-

DK 163520B

22 acetat, det organiske lag vaskedes med vand, der tørredes, og opløsningsmidlet fjernedes i vakuum. Den urensede forbindelse kromatograferedes på silicagel linder anvendelse af hexan/ethylacetat 10-40%, hvorved der opnåedes 5 1,5 g rent 4,5-epoxy-6-methylenandrost-l-en-3,17-dion.

NMR e ppm: 0,93 (3H, s), 1,13 (3H, s), 3,71 (IH, d), 5,03 (2H, m), 5,86 (IH, d), 6,78 (IH, d).

10 Ved at arbejde som beskrevet ovenfor under anvendelse af den passende 6-alkylidenandrost-4-en-3,17-dion fremstilledes følgende forbindelser: l-methyl-4,5-epoxy-6-methylenandrost-l-en-3,17-dion, 15 l-ethyl-4,5-epoxy-6-methylenandrost-l-en-3,17-dion, 4,5-epoxy-6-ethylidenandrost-l-en-3,17-dion, l-methyl-4,5-epoxy-6-ethylidenandrost-l-en-3,17-dion og l-ethyl-4,5-epoxy-6-ethylidenandrost-l-en-3,17-dion.

20 EKSEMPEL 6

En opløsning af lithiumdimethylkobber fremstilledes under nitrogen ved tilsætning af 1,6 M etherholdigt methylli-thium til en opslæmning af cuproiodid i vandfrit ether 25 ved 0 °C. Opløsningen omrørtes ved 0 °C i 20 minutter, og herefter tilsattes 5a-androst-l-en-3,17-dion i vandfrit tetrahydrofuran i løbet af 20 minutter og omrørtes i yderligere 30 minutter. Blandingen udhældtes i en mættet ammoniumchloridopløsning, benzen tilsattes, og den frem-30 komne blanding filtreredes hurtigt gennem diatoméjord.

Det organiske lag vaskedes med vandig ammoniumchlorid, med vand og tørredes over magnesiumsulfat og inddampedes til tørhed. Remanensen kromatograferedes på silicagel under anvendelse af hexan/ethylacetat 10-20%, hvorved der 35 opnåedes 10-methyl-5a-androsta-3,17-dion.

DK 163520B

23 IR (KBr): 1710 cm-1 (3-oxo) 1740 cm 1 (17-oxo)

Til en opløsning af 1/5-methyl-5a-androsta-3,17-dion 5 (3,025 g, 10 mmol) i iseddikesyre (100 ml) dryppedes en opløsning af brom (1,60 g, 10 mmol) i iseddikesyre (30 ml) indeholdende én dråbe 47% HBr ved 20-25 °C under kraftig omrøring. Bromen var opbrugt efter 20 minutters forløb.

10

Opløsningen udhældtes i vand, og det fremkomne bundfald opsamledes, vaskedes grundigt med vand og tørredes i vakuum, hvorved der opnåedes 3,82 g (100%) urenset 4-brom-1 /5 -methyl -5α- androsta-3,17 -dion.

15 IR (KBr): 1740 cm-1 (3-oxo, 17-oxo)

En opløsning af den urensede brom-forbindelse fremstillet som beskrevet ovenfor i dimethylformamid (100 ml) omrør-20 tes med tørret lithiumchlorid (7 g) ved 140-150 °C. Efter afkøling udhældtes opløsningen i vand, og den fremkomne olieagtige forbindelse ekstraheredes med ether. Det organiske lag vaskedes med 10% saltsyre og vand, der tørredes og inddampedes i vakuum. Remanensen kromatograferedes på 25 silicagel under anvendelse af hexan/ethylacetat 10-30% til opnåelse af 2,9 g (80%) 1/5-methyl-androst-4-en-3,17-dion.

IR (KBr): 1620 (Δ4) 30 1660 (3-oxo) 1735 cm"1 (17-oxo).

En blanding af natriumacetat (1 g), absolut chloroform (30 ml), formaldehyd-diethylacetal (30 ml, 0,24 mol), 35 phosphorylchlorid (3,8 ml, 0,04 mol) og 1/5-methyl-an- drost-4-en-3,17-dion (0,811 g, 2,7 mmol) omrørtes ca. 7 timer med tilbagesvaling, dvs. indtil udgangsmaterialet

DK 163520 B

24 var forsvundet. Suspensionen henstod for at afkøle, og under kraftig omrøring tildryppedes en mættet natriumcar-bonatopløsning, indtil det vandige lags pH blev alkalisk (ca. 1 time). Det organiske lag fraskiltes, der neutrali-5 seredes med vand og tørredes med natriumsulfat. Efter koncentrering under reduceret tryk rensedes den olieagti-ge remanens ved kromatografi på silicagel under anvendelse af hexan/ethylacetat som elueringsmiddel. Herved opnåedes den rene 10-methyl-6-methylenandrost-4-en-3,17-10 dion i et udbytte på 60% (0,195 g).

IH (KBr): 3100 (6=CH2) 1735 (17-oxo) 1680 (3-oxo) 15 1630, 1660 cm-1 (Δ4 og 6=CH2)

Ved at arbejde på samme måde fremstilledes følgende forbindelser: 20 10-ethyl-6-methylenandrost-4-en-3,17-dion, 10-methyl-6-ethylidenandrost-4-en-3,17-dion, og 10—ethyl-6-ethy1idenandrost-4-en-3,17-dion.

EKSEMPEL 7 25

En opløsning af androst-4-en-3,17-dion i t-butanol opvarmedes til kogning og sattes til en kogende opløsning af kalium-t-butoxid i t-butanol. 1 2 3 4 5 6

Methylchlorid i t-butanol tilsattes langsomt. Opløsningen 2 afkøledes, der syrnedes med koncentreret saltsyre og for 3 tyndedes med vand. Overskud af t-butanol fjernedes under 4 vakuum, og det vandige lag ekstraheredes med ethylacetat.

5

De forenede ekstrakter vaskedes med vand, der tørredes 6 over magnesiumsulfat og inddampedes i vakuum. Remanensen kromatograferedes på silicagel, der elueredes med hexan/ethylacetat. Elueringsmidlet afdampedes, og remanen-

DK 163520 B

25 sen udkrystalliseredes med ether, hvorved der opnåedes 4-methylandrost-4-en-3,17-dion.

IR (KBr): 1735 (18-oxo) 5 1660 (3-oxo) 1620 cm"1 (Δ4)

Alternativt opvarmedes en blanding af androst-4-en-3,17-dion, thiophenon, 40% formaldehyd, triethylamin og etha-10 nol med tilbagesvaling i ca. 48 timer. Den afkølede opløsning udhældtes i vandig natriumhydroxidopløsning, og forbindelsen isoleredes ved etherekstraktion. Ethereks-trakterne vaskedes med vand og tørredes over magnesiumsulfat. Den fremkomne remanens tritureredes med hexan for 15 at fjerne eventuelle kondensationsbiprodukter stammende fra thiophenolen og formaldehydet. 4-phenylthiomethylan-drost-4-en-3,17-dion fremstillet på denne måde afsvovle-des ved opløsning i acetone og tilsætning af en suspension af Raney-nikkel i acetone, der kogte med tilbagesva-20 ling. Blandingen opvarmedes ca. 5 timer under omrøring med tilbagesvaling. Den varme opløsning filtreredes, og katalysatoren vaskedes med kogende ethanol og vand. De forenede filtrater koncentreredes under vakuum, hvorved forbindelsen udskiltes som en fast masse. Omkrystallisa-25 tion med acetone/hexan gav 4-methylandrost-4-en-3,17-dion.

En blanding af natriumacetat (1 g), absolut chloroform (30 ml), formaldehyddiethylacetal (30 ml, 0,24 mol), 30 phosphorylchlorid (3,8 ml, 0,04 mol) og 4-methylandrost-4-en-3,17-dion (0,81 g, 2,7 mmol) opvarmedes ca. 7 timer med tilbagesvaling, dvs. indtil udgangsmaterialet var forsvundet. Suspensionen henstod for at afkøle, og under kraftig omrøring tildryppedes en mættet natriumcarbonat-35 opløsning, indtil det vandige lags pH blev alkalisk (ca.

1 time). Det organiske lag fraskiltes, neutraliseredes med vand og tørredes over natriumsulfat. Efter koncentre-

DK 163520B

26 ring under reduceret tryk rensedes den olieagtige remanens ved kromatografi på silicagel under anvendelse af hexan/ethylacetat som elueringsmiddel.

5 Herved opnåedes det rene 4-methyl-6-methylenandrost-4-en- 3,17-dion i et udbytte på 60%.

IR (KBr): 3080 (6= CH2) 1735 (17-oxo) 10 1665 (3-oxo) 1635, 1595 cm-1 (δ4 og 6=CH2)

Ved at arbejde på samme måde fremstilledes følgende forbindelser: 15 10,4-dimethyl-6-methylenandrost-4-en-3,17-dion, 10-ethyl-4-methyl-6-methylenandrost-4-en-3,17-dion, 1β, 4-diethyl-6-methylenandrost-4-en-3,17-dion, 4-methyl-6-ethylidenandrost-4-en-3,17-dion, og 20 10,4-dimethyl-6-ethylidenandrost-4-en-3,17-dion.

EKSEMPEL 8

Tabletter, der hver vejede 0,150 g og indeholdt 25 mg ak-25 tiv forbindelse, fremstilledes på følgende måde:

Sammensætning (til 10.000 tabletter) 6-methylenandrost-30 l,4-dien-3,17-dion 250 g

Lactose 800 g

Majsstivelse 415 g

Talkum 30 g

Magnesiumstearat 5 g 6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dionen, lactosen og halvdelen af majsstivelsen blandedes; herefter sigtedes 35 27

DK 163520 B

blandingen gennem en sigte på 0,5 mm mesh. Majsstivelse (10 g) opslæmmedes i varmt vand (90 ml), og den fremkomne pasta anvendtes til at granulere pulveret. Granulatet tørredes, findeltes gennem en sigte på 1,4 mm mesh, den 5 øvrige mængde stivelse, talkum og magnesiumstearat tilsattes og blandedes forsigtigt, og der blev slået til tabletter.

EKSEMPEL 9 10

Kapsler, der hver indeholdt 0,20 g og indeholdt 20 mg aktiv forbindelse fremstilledes.

Sammensætning til 500 kapsler 15 6-methylenandrosta- l,4-dien-3,17-dion 10 g

Lactose 80 g

Majsstivelse 5 g 20 Magnesiumstearat 5 g

Dette præparat blev anbragt i todelte hårde gelatinekapsler og doseret med 0,200 g i hver kapsel.

25 1 35

Claims

1. Substitueret androsta-l,4-dien-3,17-dion med den alme-5 ne formel (I) «3Ϊ io rfj (i) R CHR-1 2 15 hvori hver af R og R2 uafhængigt betegner hydrogen eller C1~Cg alkyl, og R^ betegner hydrogen, halogen eller C^-Cg alkyl.

2. Forbindelse ifølge krav 1 med formel (1), kende-20 tegnet ved, at R betegner hydrogen eller C^-C^ alkyl; R^ betegner hydrogen, fluor, chlor eller C^-C^ alkyl; og R2 betegner hydrogen eller C1~C^ alkyl.

3. Forbindelse ifølge krav 1 med formel (I), kende -25 tegnet ved, at R betegner hydrogen, methyl eller ethyl; R^ betegner hydrogen, fluor eller chlor, og R2 betegner hydrogen.

4. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, 30 at den er 6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion.

5. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er valgt blandt 1 l-methyl-6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion og 4-chlor-6-methylenandrosta-l,4-dien-3,17-dion. 29 DK 163520 B

6. Forbindelse med formel (I) ifølge krav 1 til anvendelse ved behandling af fremskredne hormon-afhængige bryst-, pancreas-, endometriale og ovarie cancere og ved behandlingen af prostatisk hypertrophi og prostatisk hyperpla- 5 si.

7. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse med formel (I) ifølge et vilkårligt af kravene 1-5, kendetegnet ved, at man 10 (a) dehydrogenerer en forbindelse med formel (II) CH n S CH3f^S 15 1*4 j_i 'il! (II) o r! CHR_ R 2 a 20 hvori Ra betegner hydrogen eller C^-Cg alkyl, og R og R2 betegner det i krav 1 definerede til opnåelse af en forbindelse med formel (I), hvori R1 betegner hydrogen eller C^-Cg alkyl, og R og R2 betegner det i 25 krav 1 definerede; eller (b) omsætter en forbindelse med formel (III) %?

30 R oMy Ctø (III) 35 DK 163520B 30 hvori R og R2 betegner det i krav 1 definerede, med et hydrohalogenerende middel til fremstilling af en forbindelse med formel (I), hvori R^ betegner halogen, og R og R2 betegner det i krav 1 definerede; og 5 at man eventuelt adskiller blandingen af isomere af en forbindelse med formel (1) i de enkelte isomere.

8. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det indeholder et passende bærestof og/eller fortyndings- 10 middel og som det aktive princip en forbindelse med formel (I) ifølge krav 1.

9. Anvendelse af en forbindelse med den almene formel (I) ifølge krav 1 til fremstilling af et farmaceutisk præpa- 15 rat til behandling af fremskredne hormonafhængige bryst-, pancreas-, endometriale og ovarie cancere.

10. Anvendelse af en forbindelse med den almene formel (I) ifølge krav 1 til fremstilling af et farmaceutisk 20 præparat til behandling af prostatisk hypertrophi og prostatisk hyperplasi. 25 1 35