DK158481B - Fremgangsmaade til analyse af antistoffer samt reagens dertil - Google Patents
Fremgangsmaade til analyse af antistoffer samt reagens dertil Download PDFInfo
- Publication number
- DK158481B DK158481B DK190682A DK190682A DK158481B DK 158481 B DK158481 B DK 158481B DK 190682 A DK190682 A DK 190682A DK 190682 A DK190682 A DK 190682A DK 158481 B DK158481 B DK 158481B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- antigen
- reaction
- antibody
- reaction medium
- anions
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 38
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 18
- -1 sulfonyl anions Chemical class 0.000 claims description 12
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 claims description 11
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 claims description 7
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 claims description 5
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 abstract description 18
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 7
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 7
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 4
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N Fluorine atom Chemical compound [F] YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- GAMPNQJDUFQVQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid;phthalic acid Chemical compound CC(O)=O.OC(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O GAMPNQJDUFQVQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000010339 medical test Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 229920000172 poly(styrenesulfonic acid) Polymers 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 229940005642 polystyrene sulfonic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- RNMCCPMYXUKHAZ-UHFFFAOYSA-N 2-[3,3-diamino-1,2,2-tris(carboxymethyl)cyclohexyl]acetic acid Chemical compound NC1(N)CCCC(CC(O)=O)(CC(O)=O)C1(CC(O)=O)CC(O)=O RNMCCPMYXUKHAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 238000007818 agglutination assay Methods 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000007982 barbital buffer Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- 238000004848 nephelometry Methods 0.000 description 1
- MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N nitrilotriacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L phthalate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C([O-])=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229920005613 synthetic organic polymer Polymers 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
- Y10S436/813—Cancer
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/826—Additives, e.g. buffers, diluents, preservatives
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Data Exchanges In Wide-Area Networks (AREA)
- Photoreceptors In Electrophotography (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
DK 158481 B
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til analyse af antigen-antistofreaktioner og et reagens dertil.
Immunologiske reaktioner har høj specificitet, idet en reaktion optræder nøjagtigt og selektivt, hvilket er én af deres fremtrædende 5 egenskaber, og de anses for en vigtig medicinsk testmetode.
For tiden vækker mange in vivo-reaktioner megen opmærksomhed i forhold til antigen-antistofreaktioner, især inden for medicinen og sundhedsvidenskaberne, og de analyseres og undersøges med det formål at fremme sundhedstilstande, behandle sygdomme og lignende. Hvad 10 angår in vitro-reaktioner, foretages immunokemisk undersøgelse tillige intenst på grundlag af prøver, der afspejler in vivo-betingelser, og en del deraf har allerede fundet praktisk anvendelse i rutinemæssige medicinske tests. Typiske analysemetoder, der er kendt som særdeles følsomme analysesysterner, omfatter radioimmunoassay (RIA), 15 latexagglutineringsassay med nær-infrarød turbidimetri (LPIA), en- zymimmunoassay (EIA), fluorimmunoassay og nephelometri, der anvender lysets spredning. Der er hidtil blevet udført mange immunologiske reaktioner, hvor antigener eller antistoffer i prøver påvises med et reagens, der udover den vandige fase omfatter bærermatrixer såsom 20 biologiske bærere, fx erythrocytter eller bakterier og latexpartikler af syntetiske organiske polymerbærere, der kan gøres følsomme med et egnet antistof eller antigen.
Det er kendt, at immunologiske analysemetoder, som kræver uopløselighed af et antigen-antistofkompleks som en integreret del af analysen, 25 kan forbedres ved til det testmedium, i hvilket uopløseligheden ønskes øget, at sætte en vandig reagensopløsning indeholdende fra omkring 3 til 6 vægtprocent af en blanding af polyethylenglycol og et non-ionisk overfladeaktivt stof, hvilken reagensopløsning har en kalkuleret HLB-værdi (Hydrofil-Lipofil-Balance) på omkring 0,7 til 30 1,7.
Ved den forøgede uopløselighed nedsættes reaktionstiden, hvilket giver en analyseprocedure med stor testspændvidde og sensitivitet.
DK 158481 B
2
Det problem, der løses ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse, er et andet, nemlig at begrænse ikke-specifikke reaktioner, hvorved analysens specificitet (til forskel fra sensitivitet) øges.
5 Legemsvæsker, der afspejler aktiviteter af in vivo-tilstande, har en lang række bestanddele og fysiske egenskaber. Af denne grund kan mange immunologiske reaktioner ikke helt gøre sig fri af ikke-speci-fikke reaktioner, der kan siges at være bireaktioner, som er uafhængige af antigen-antistofreaktionen. Som modforholdsregel mod 10 sådanne ikke-specifikke reaktioner er der i mange tilfælde blevet anvendt fremgangsmåder såsom tilsætning af kaolin eller et tilsvarende adsorberende stof eller ekstraktion for at fjerne eller neutralisere de relevante ikke-specifikke faktorer. Skønt nogle af disse behandlinger er effektive, er det nødvendigt at foretage en detal-15 jeret undersøgelse af hver antigen-antistofreaktion, og de indebærer mange vanskeligheder i deres praktiske anvendelse.
Der er blevet foretaget forskellige undersøgelser med det formål at eliminere de ovennævnte ulemper ved de kendte antigen-antistofreaktioner, og det har vist sig, at hvis reaktionen i analysen af anti-20 gen- antistofreaktionen udføres med en prøve, der er blevet behandlet med en polyanion, forbedres både udvindingen af stoffet, der skal påvises, og analysens nøjagtighed, hvorved fås mere nøjagtige analyseværdier af antigenet eller antistoffet, hvorved den foreliggende opfindelse udføres. Den foreliggende opfindelse angår således en 25 fremgangsmåde til analyse af en antigen-antistofreaktion, hvor et antigen eller antistof, der skal analyseres, omsættes med det tilsvarende antistof eller antigen i et reaktionsmedium, hvilken metode er ejendommelig ved, at en prøve, som indeholder det antigen eller antistof, der skal analyseres, behandles med en polyanion, der er 30 opløselig i reaktionsmediet, og den således behandlede prøve anvendes til reaktionen. Opfindelsen angår yderligere et reagens til analyse af en antigen-antistofreaktion, som indeholder en polyanion og et reaktionsmedium.
De polyanioner, der kan anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfin-35 delsen, er naturlige eller syntetiske polymerer, hvilke stoffer har
DK 158481 B
3 flere sulfonylanioner eller carboxylanioner, og som er opløselige i reaktionsmediet, der anvendes i antigen-antistofreaktionen.
Specifikke eksempler på disse polyanioner omfatter dextransulfat, heparin, polystyrensulfonsyre, cellulosephthalat-acetat, hyaluronsyre 5 og chondroitinsulfat.
I overensstemmelse med fremgangsmåden ifølge opfindelsen behandles en prøve, der indeholder det antigen eller antistof, der skal analyseres, med polyanionen, hvorefter prøven udsættes for antigen-antistof-reaktionen med det tilsvarende antistof eller antigen i reaktionsme-10 diet.
Behandlingen med polyanionen kan udføres ved, at 1. udføre antigen-antistofreaktionen i det medium, hvori polyanionen er blevet inkorporeret, eller 2. behandle prøven med en fast eller flydende fase, der indeholder 15 polyanionen, før antigen-antistofreaktionen (i det sidste tilfælde kan den således behandlede antigen- eller antistofholdige prøve udsættes for antigen-antistofreaktionen, efter at polyanionen er blevet fjernet derfra, men sædvanligvis udsættes den for reaktionen, medens den indeholder polyanionen).
20 De reaktionsmedier, der egner sig til anvendelse i antigen-antistof-reaktionen, er vandige medier, herunder fx vand, en saltopløsning og pufferopløsninger, der kan indeholde ét eller flere tilsætningsstoffer udvalgt blandt stabiliseringsmidler, konserveringsmidler, chela-teringsmidler og overfladeaktive midler.
25 Pufferopløsningen omfatter glycinpuffere, phosphorsyrepuffere, citronsyrepuffere, barbitalpuffere, boratpuffere, tris[tris(hydroxymethyl) aminome than] saltsyrepuf fere, tris-malatpuffere og ammoniumpuffere.
Stabiliseringsmidlerne omfatter fx aminosyrer, polypeptider og pro-30 teiner, som ikke deltager i den påtænkte immunologiske reaktion, og de er sædvanligvis til stede i en koncentration på 0,001-1 vægtprocent, fortrinsvis 0,05-0,6 vægtprocent.
4
DK 158481B
Foretrukne eksempler på konserveringsmidler omfatter natriumazid og merthiolat.
Foretrukne eksempler på chelateringsmidler omfatter ethylendiaminte-traeddikesyre, nitrilotrieddikesyre og cyclohexandiamintetraeddike-5 syre.
Som overfladeaktivt middel foretrækkes sædvanligvis ikke-ioniske overfladeaktive midler.
Reaktionsmediets pH bør ligge inden for det sædvanlige pH-område, der anvendes til antigen-antistofreaktioner, og der anvendes sædvanligvis 10 en pH på ca. 5-10.
Koncentrationen af polyanionen i reaktionsmediet er sædvanligvis ikke større end 5 vægtprocent, fortrinsvis 0,001-0,5 vægtprocent.
En højere koncentration kan forårsage, at reaktionen bliver ustabil i tilfælde af visse analysesystemer. Men ved en lavere koncentration 15 nedsættes den inhiberende virkning mod de såkaldte ikke-specifikke reaktioner, der vanskeliggør analysen og gør det umuligt at opnå nøjagtige analyseværdier, på grund af en forøget inhiberende virkning forårsaget af faktorer i serumprøven ud over reaktionen med det tilsvarende antigen, hvilket resulterer i en forringet nøjagtighed af 20 analysen.
De antigener, der tjener som et stof, som skal analyseres, og som reaktant, omfatter forskellige antigener såsom fx proteiner, polypep-tider, steroider, polysaccharider, lipider, pollen, støv og haptener. Antistofferne omfatter fx sådanne proteiner, som er antistoffer mod 25 de ovennævnte antigener.
Ved analysen af en antigen-antistofreaktion ifølge opfindelsen kan anvendes et hvilket som helst kendt analysesystem. Således kan der enten anvendes de såkaldte opløsningssystemer, hvor både det stof, der skal analyseres, og reaktanten er opløselige i reaktionsmediet, 30 eller de såkaldte bærersysterner, hvor reaktanten er bundet til en
DK 158481 B
5 partikelformig bærer, der i det væsentlige er uopløselig i reaktionsmediet, dvs. den partikelformige bærer gøres følsom med reaktanten. Specifikke eksempler på de antigen-antistofreaktioner, der kan analyseres i henhold til fremgangsmåden ifølge opfindelsen, omfatter 5 sådanne reaktioner, som forekommer i radioimmunoassay, latexaggluti-nering med nær-infrarød turbidimetri, enzymimmunoassay, fluorimmu-noassay, immunonephelometri, der anvender lysspredning, erythrocytag-glutinering og latexagglutinering. Især anvendes fremgangsmåden ifølge opfindelsen i sådanne analysesystemer som latexagglutinering 10 med nær-infrarød turbidimetri, som fx kan udnytte en omvendt passiv agglutinering.
I henhold til fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan ikke-specifikke reaktioner, som kan opstå i antigen-antistofreaktioner, forhindres, og der kan opnås mere nøjagtige analyseværdier.
15 Opfindelsen belyses nærmere ved nedenstående eksempler.
EKSEMPEL 1
Dette eksempel viser latexagglutinering med nær-infrarød turbidimetri .
Til 50 μΐ serum fra et sundt menneske, hvilket serum ikke indeholder 20 mere end 2 ng/ml a^-fetoprotein (AFP), sattes 50 μΐ af en opløsning, der indeholdt 1 μg/ml AFP, og derefter 100 μλ bovint serumalbumin-saltopløsning, der indeholdt dextransulfat, for at få en testopløsning. Til 50 /il af testopløsningen sattes 50 μΐ af et latexreagens, der blev gjort følsomt med anti-AFP-antistof, og 200 μΐ af en puf-25 feropløsning, og ændringen af turbiditet i en nær-infrarød stråle ved 940 nm blev målt under omrøring. Prøvens analyseværdi blev udlæst på en standardkurve, og udbyttet blev beregnet. Resultaterne er vist i tabel 1 nedenfor sammenlignet med resultaterne for et polyanionfrit reaktionssystem som kontrol. 1
Som det fremgår af tabel 1, fås en væsentlig forbedring af udbyttet (P < 0,01) ved tilsætning af dextransulfat (ved en slutkoncentration 6
DK 158481B
på 0,1 vægtprocent), og variationskoefficienten (CV) blev også væsentligt forbedret. Udbyttet af hvert forsøg er den relative værdi af det vundne udbytte, idet det normale samlede serum fra ti klare, turbiditetsfri prøver antager værdien 100.
5 EKSEMPEL 2
Den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde blev gentaget med undtagelse af, at polyanionen var polystyrensulfonsyre i en slutkoncentration på 0,2 vægtprocent. Resultaterne er ligeledes vist i tabel 1, hvoraf det fremgår, at der blev opnået en forbedring af variationskoefficienten.
* 4 10 EKSEMPEL 3
Den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde blev gentaget med tindtagelse af, at der anvendtes heparin som polyanion i en slutkoncentration på 0,1 vægtprocent. Som vist i tabel 1 fås en udbytteforbedring.
EKSEMPEL 4 15 Den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde blev gentaget med undtagelse af, at der anvendtes cellulosephthalat-acetat som en polyanion i en slutkoncentration på 0,1 vægtprocent. Som vist i tabel 1 blev udbyttet forbedret.
Tabel 1 20 _
Prøve Udbytte (vægtprocent)
Kontrol Eksempel 1
Forsøg Hæmo- Turbi- uden dextran- 25 nr. lyse ditet polyanion sulfat 1 - +++ 93,7 101,4 2 - +++ 86,8 88,8
DK 158481 B
7 3 - +++ 83,8 105,8 4 ++ +++ 88,0 96,5 5 - +4-4- 76,7 86,6 6 - + 84,6 98,1 5 7 - + 90,7 103,3 8 - + 85,9 103,0 9 - + 72,9 96,2 10 - + 100,6 100,6 11 - + 105,1 100,4 10 12 ++ + 92,7 101,0 13 + + 96,5 99,1 14 + + 92,4 97,5 15 - + 100,0 100,2 16 + + 79,6 93,1 15 17 - - 95,6 100,1 18 + - 81,1 93,2 19 +4-+ - 82,6 85,5 20 - - 92,0 105,1 20 Gennemsnit 89,07 97,78
Standardafvigelse ±8,39 ±5,76 CV (%) 9,42 5,89
Udbytte (vægtprocent) 25
Eksempel 2 Eksempel 4 polystyren- Eksempel 3 cellulose- sulfonsyre heparin phthalat-
Forsøg nr. acetat 30 _ 1 93,9 96,2 98,3 2 88,2 88,9 88,9 3 80,2 87,2 82,9 4 90,0 92,2 93,2 35 5 80,3 82,3 85,2 6 85,2 87,8 91,2 7 93,4 93,5 98,5 8 86,8 85,9 91,7
DK 158481B
8 9 85,0 82,4 91,7 10 100,0 99,8 101,7 11 89,9 100,2 111,2 12 94,3 102,0 98,4 5 13 97,8 100,0 101,2 14 95,2 99,0 101,2 15 97,5 102,0 101,5 16 80,4 85,0 88,4 17 95,5 99,4 100,9 10 18 87,5 85,5 93,5 19 83,7 87,0 86,0 20 97,2 102,0 98,0
Gennemsnit 90,1 92,92 95,18 15 Standardafvigelse ±6,33 ±7,21 ±7,07 CV (%) 7,02 7,76 7,43 EKSEMPEL 5 20 Dette eksempel viser virkningen af tilsætningen af dextransulfat på erythrocytagglutinering, hvilket kan ledsages af en pseudoreaktion i visse prøver, hvilket resulterer i forkert aflæsning.
En AFP-holdig prøve blev fortyndet 20 gange med en opløsning af dextransulfat i en phosphatpuffer (pH-værdi 6,4), der blev fremstil-25 let på en sådan måde, at slutkoncentrationen af dextransulfat var 0,001 vægtprocent, og 100 μΐ af den fortyndede prøve sattes til en suspension af fåreerythrocytter, der var gjort følsomme med anti-AFP-antistof. Blandingen hens tod i 2 timer. De prøver, der ikke indeholdt mere end 50 ng/ml AFP, viste ringformet agglutinering, hvorimod de 30 prøver, der ikke indeholdt mindre end 100 ng/ml AFP, enten viste tilsyneladende større ringformet eller måttelignende agglutinering.
Når det samme forsøg blev udført med prøver af kendte koncentrationer, forekom der færre pseudoreaktioner, selv med særdeles uklare prøver, hvilket letter bedømmelsen.
Claims (8)
1. Fremgangsmåde til analyse af en antigen-antistofreaktion, hvor et antigen eller antistof, der skal analyseres, omsættes med det tilsvarende antistof eller antigen i en reaktionsblanding, 5 kendetegnet ved, at en prøve, som indeholder det antigen eller antistof, der skal analyseres, behandles med naturlige eller syntetiske polymerer med flere sulfonylanioner eller carboxylanioner, og som er opløselige i reaktionsmediet, og den behandlede prøve anvendes til udførelse af reaktionen.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at reaktionen udføres i nærværelse af naturlige eller syntetiske polymerer med flere sulfonylanioner eller carboxylanioner, og som er opløselige i reaktionsmediet.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, 15 kendetegnet ved, at den naturlige eller syntetiske polymer med flere sulfonylanioner eller carboxylanioner, og som er opløselig i reaktionsmediet, er dextransulfat.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at antigen-antistof reaktionen er aggluti- 20 nering.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 4, kendetegnet ved, at agglutineringen er omvendt passiv agglutinering.
6. Reagens til anvendelse ved analyse af en antigen-antistofreaktion 25 ved fremgangsmåden ifølge et hvilket som helst af kravene 1-5, kendetegnet ved, at det indeholder et reaktionsmedium til antigen-antistofreaktionen og naturlige eller syntetiske polymerer med flere sulfonylanioner eller carboxylanioner, og hvilke polymerer er opløselig i reaktionsmediet. DK 158481 B
7. Reagens ifølge krav 6, kendetegnet ved, at reaktionsmediet er et vandigt medium.
8. Reagens ifølge krav 6, kendetegnet ved, at reaktionsmediet er en pufferopløsning.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6733381 | 1981-05-02 | ||
| JP56067333A JPS57182169A (en) | 1981-05-02 | 1981-05-02 | Measuring method for antigen-antibody reaction |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK190682A DK190682A (da) | 1982-11-03 |
| DK158481B true DK158481B (da) | 1990-05-21 |
| DK158481C DK158481C (da) | 1990-10-08 |
Family
ID=13341982
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK190682A DK158481C (da) | 1981-05-02 | 1982-04-28 | Fremgangsmaade til analyse af antistoffer samt reagens dertil |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4672045A (da) |
| EP (1) | EP0064274B1 (da) |
| JP (1) | JPS57182169A (da) |
| KR (1) | KR880001533B1 (da) |
| AT (1) | ATE12010T1 (da) |
| AU (1) | AU559966B2 (da) |
| CA (1) | CA1195925A (da) |
| CS (1) | CS257757B2 (da) |
| DD (1) | DD202178A5 (da) |
| DE (1) | DE3262469D1 (da) |
| DK (1) | DK158481C (da) |
| ES (1) | ES511797A0 (da) |
| HU (1) | HU188057B (da) |
| IL (1) | IL65767A (da) |
| NO (1) | NO159820C (da) |
| PT (1) | PT74835B (da) |
| SU (1) | SU1554782A3 (da) |
| ZA (1) | ZA822726B (da) |
Families Citing this family (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61241665A (ja) * | 1985-04-18 | 1986-10-27 | Toyobo Co Ltd | 安定化された固相試薬 |
| US5459080A (en) * | 1988-01-29 | 1995-10-17 | Abbott Laboratories | Ion-capture assays using a specific binding member conjugated to carboxymethylamylose |
| US5866322A (en) * | 1988-01-29 | 1999-02-02 | Abbott Laboratories | Method for performing Rubella assay |
| US5459078A (en) * | 1988-01-29 | 1995-10-17 | Abbott Laboratories | Methods and reagents for performing ion-capture digoxin assays |
| US5141853A (en) * | 1988-07-22 | 1992-08-25 | Abbott Laboratories | Determination of ammonia levels in a sample |
| JPH0750110B2 (ja) * | 1988-12-22 | 1995-05-31 | 積水化学工業株式会社 | 免疫測定法 |
| JPH0750108B2 (ja) * | 1988-12-26 | 1995-05-31 | 積水化学工業株式会社 | 免疫反応測定法 |
| WO1992021769A1 (en) * | 1991-05-30 | 1992-12-10 | Abbott Laboratories | Reagents containing a nonspecific binding blocker in ion-capture binding assays |
| DE4328684A1 (de) * | 1993-08-26 | 1995-03-02 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur Bestimmung eines Analyten nach dem Agglutinationsprinzip |
| US5486479A (en) * | 1994-05-02 | 1996-01-23 | Mitsubishi Chemical Corporation | Buffer for immunoassay, kit including same and immunoassay method using said buffer |
| RU2170434C2 (ru) * | 1996-09-12 | 2001-07-10 | Мешандин Алексей Гаврилович | Способ агглютинационного иммунологического анализа |
| JP2003066047A (ja) * | 2001-06-14 | 2003-03-05 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 免疫反応測定方法及びそれに用いる免疫反応測定用試薬 |
| JP3871677B2 (ja) * | 2001-12-27 | 2007-01-24 | 松下電器産業株式会社 | 免疫反応測定方法及びそれに用いる免疫反応測定用試薬キット |
| JP4512492B2 (ja) * | 2002-12-10 | 2010-07-28 | パナソニック株式会社 | 免疫反応測定方法およびそれに用いる免疫反応測定用試薬 |
| DE602004007902T2 (de) * | 2003-03-31 | 2008-05-21 | Denka Seiken Co., Ltd. | Immunnephelometrie von lipoprotein (a) und reagens dafür |
| JP4580180B2 (ja) * | 2004-02-26 | 2010-11-10 | デンカ生研株式会社 | 免疫測定法用測定値低下抑制剤及びそれを用いた免疫測定法 |
| JP5238190B2 (ja) * | 2007-05-24 | 2013-07-17 | 株式会社ビーエル | ヒアルロン酸存在下における免疫測定法及びそれに用いられる物 |
| JP2010127827A (ja) * | 2008-11-28 | 2010-06-10 | Abbott Japan Co Ltd | 非特異的相互作用抑制剤及びその診断測定系への応用 |
| JP5535601B2 (ja) * | 2009-12-01 | 2014-07-02 | デンカ生研株式会社 | 免疫測定法用測定値低下抑制剤及びそれを用いた免疫測定法 |
| JP6116268B2 (ja) * | 2013-01-31 | 2017-04-19 | デンカ生研株式会社 | 生体粘膜由来検体測定イムノアッセイにおいて偽陰性を抑制する方法 |
| JP6675834B2 (ja) * | 2015-05-21 | 2020-04-08 | デンカ生研株式会社 | イムノクロマト試験片及びそれを用いたイムノクロマト法 |
| JP6651794B2 (ja) * | 2015-11-05 | 2020-02-19 | 富士レビオ株式会社 | 心筋トロポニンｉ測定試薬及び方法 |
| EP3444612B1 (en) * | 2016-04-13 | 2022-03-23 | LSI Medience Corporation | Immunoassay employing sulfated polysaccharide |
| EP4130741B1 (en) * | 2020-03-31 | 2026-01-28 | Fujirebio Inc. | Method for immunoassay of amyloid beta in blood, and kit for same |
| CN116670512A (zh) * | 2020-12-03 | 2023-08-29 | 奥索临床诊断有限公司 | 作为封闭剂的肝素锂 |
| CN113030470B (zh) * | 2021-02-24 | 2022-03-18 | 江西英大生物技术有限公司 | 肌酸激酶同工酶测定试剂盒 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4148869A (en) * | 1975-03-06 | 1979-04-10 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Immunological reagent and method of using same |
| US4162192A (en) * | 1978-09-28 | 1979-07-24 | Juridical Foundation | Method for purification of HBs antigen |
| US4223005A (en) * | 1979-02-15 | 1980-09-16 | University Of Illinois Foundation | Antibody coated bacteria |
-
1981
- 1981-05-02 JP JP56067333A patent/JPS57182169A/ja active Granted
-
1982
- 1982-04-19 AU AU82823/82A patent/AU559966B2/en not_active Expired
- 1982-04-21 ZA ZA822726A patent/ZA822726B/xx unknown
- 1982-04-28 DK DK190682A patent/DK158481C/da active
- 1982-04-28 AT AT82103639T patent/ATE12010T1/de not_active IP Right Cessation
- 1982-04-28 EP EP82103639A patent/EP0064274B1/en not_active Expired
- 1982-04-28 KR KR8201863A patent/KR880001533B1/ko not_active Expired
- 1982-04-28 DE DE8282103639T patent/DE3262469D1/de not_active Expired
- 1982-04-29 ES ES511797A patent/ES511797A0/es active Granted
- 1982-04-29 IL IL65767A patent/IL65767A/xx not_active IP Right Cessation
- 1982-04-30 DD DD82239478A patent/DD202178A5/de not_active IP Right Cessation
- 1982-04-30 CS CS823121A patent/CS257757B2/cs unknown
- 1982-04-30 HU HU821359A patent/HU188057B/hu not_active IP Right Cessation
- 1982-04-30 PT PT74835A patent/PT74835B/pt not_active IP Right Cessation
- 1982-04-30 NO NO821444A patent/NO159820C/no unknown
- 1982-05-03 CA CA000402117A patent/CA1195925A/en not_active Expired
- 1982-05-03 SU SU823430145A patent/SU1554782A3/ru active
-
1984
- 1984-10-09 US US06/658,456 patent/US4672045A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU8282382A (en) | 1982-07-01 |
| AU559966B2 (en) | 1987-03-26 |
| KR880001533B1 (ko) | 1988-08-19 |
| HU188057B (en) | 1986-03-28 |
| DK190682A (da) | 1982-11-03 |
| ZA822726B (en) | 1983-11-30 |
| CS312182A2 (en) | 1987-09-17 |
| NO159820C (no) | 1989-02-08 |
| ES8302313A1 (es) | 1983-02-01 |
| DK158481C (da) | 1990-10-08 |
| DE3262469D1 (en) | 1985-04-04 |
| ES511797A0 (es) | 1983-02-01 |
| NO821444L (no) | 1982-11-03 |
| JPS57182169A (en) | 1982-11-09 |
| CS257757B2 (en) | 1988-06-15 |
| PT74835B (en) | 1983-10-28 |
| IL65767A (en) | 1985-06-30 |
| CA1195925A (en) | 1985-10-29 |
| KR830010384A (ko) | 1983-12-30 |
| EP0064274B1 (en) | 1985-02-27 |
| ATE12010T1 (de) | 1985-03-15 |
| JPS6367864B2 (da) | 1988-12-27 |
| DD202178A5 (de) | 1983-08-31 |
| NO159820B (no) | 1988-10-31 |
| PT74835A (en) | 1982-05-01 |
| EP0064274A1 (en) | 1982-11-10 |
| SU1554782A3 (ru) | 1990-03-30 |
| US4672045A (en) | 1987-06-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK158481B (da) | Fremgangsmaade til analyse af antistoffer samt reagens dertil | |
| CA1139203A (en) | Method and reagent for counteracting lipemic interference | |
| US4294817A (en) | Method of fluoro immunoassay | |
| Bernard et al. | Latex immunoassay of retinol-binding protein. | |
| EP0223843A4 (en) | METHOD AND ELEMENT FOR DETECTING IMMUNE COMPLEXES. | |
| NZ201583A (en) | Method for the detection of pregnancy | |
| DK174032B1 (da) | Sæt samt fremgangsmåde til immunometrisk dosering, der kan anvendes på hele celler | |
| EP0746767B1 (en) | Analyzer cuvette, method and diagnostic test kit for determination of analytes in whole blood samples | |
| US4587222A (en) | Reagent comprising treated red blood cells and methods for detecting rheumatoid factor | |
| JPS6360862B2 (da) | ||
| CA1215923A (en) | Reagent for determination of blood coagulation factor xiii | |
| CH674087A5 (da) | ||
| NO159964B (no) | Immunokjemisk reagens. | |
| EP0554657B1 (de) | Verfahren zur Bestimmung von Antigenen oder Antikörpern in Gegenwart eines Immunkomplexes | |
| WO1989007765A1 (en) | Novel buffer and method for detecting rheumatoid factor | |
| JPS63196855A (ja) | 特異的な免疫学的定量方法 | |
| JP3665698B2 (ja) | 慢性関節リウマチ用マーカーとしての使用および慢性関節リウマチ診断用免疫試薬 | |
| IE55316B1 (en) | Method for measuring igg in a neonatal foal or calf and in colostrum | |
| JPH01253654A (ja) | 安定なラテックス試薬 | |
| JPH08193999A (ja) | 免疫測定法 | |
| JPH0456258B2 (da) | ||
| DE2818739C2 (de) | Immunologisches Analysenverfahren | |
| JPH0534348A (ja) | リユウマチ因子検出用の新規緩衝剤及びその方法 | |
| AU700355B2 (en) | Process for preparing clear sera which are stable over a long period | |
| NO870391L (no) | Fremgangsmaate og artikkel for paavisning av immunkomplekser |