JPH01253654A - 安定なラテックス試薬 - Google Patents
安定なラテックス試薬Info
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- JPH01253654A JPH01253654A JP7809688A JP7809688A JPH01253654A JP H01253654 A JPH01253654 A JP H01253654A JP 7809688 A JP7809688 A JP 7809688A JP 7809688 A JP7809688 A JP 7809688A JP H01253654 A JPH01253654 A JP H01253654A
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は非特異的凝集及び自然凝集を防ぐことができる
安定なラテックス試薬に関する。
安定なラテックス試薬に関する。
従来の技術及び発明が解決しようとする課題ラテックス
(Lat、ex)凝集反応を利用する測定項目には、ラ
テックスに抗原を感作させた受身凝集反応法によるR八
(リウマチ様定性因子)、ASO(溶血性連鎖球菌の生
産する菌体外溶血素、5trepLolysinOに対
する抗体価)等があり、一方抗体を感作させた逆受身凝
集反応法によるCRP(C反応性蛋白)、八FP(α−
7エトプロテイン)など゛が挙1ヂられる。
(Lat、ex)凝集反応を利用する測定項目には、ラ
テックスに抗原を感作させた受身凝集反応法によるR八
(リウマチ様定性因子)、ASO(溶血性連鎖球菌の生
産する菌体外溶血素、5trepLolysinOに対
する抗体価)等があり、一方抗体を感作させた逆受身凝
集反応法によるCRP(C反応性蛋白)、八FP(α−
7エトプロテイン)など゛が挙1ヂられる。
しかも従来のプレー) (plate)上のマニュアル
反応から光学機器を利用したラテックス比濁法が開発さ
れるに到り、高感度な系が確立され、測定対象もより拡
大されつつある。特に逆受身凝集反応によるラテックス
凝集比濁法は抗体を調製すれば生体内の対象(抗原)が
測定可能であるがゆえに巾広い項目が期待されている。
反応から光学機器を利用したラテックス比濁法が開発さ
れるに到り、高感度な系が確立され、測定対象もより拡
大されつつある。特に逆受身凝集反応によるラテックス
凝集比濁法は抗体を調製すれば生体内の対象(抗原)が
測定可能であるがゆえに巾広い項目が期待されている。
しかしラテックスに感作された抗体、特にIgGは固体
への吸着の際に変性が生じ、安定性の低下か起る。その
ような非特異的凝集の増加は光学的測定法の場合、感度
に影響が多(S/N比を低下させていた。試薬を評価す
る際、S/N比(S:5pecific agglut
ination+ N:Non−5pecific a
gglutination)が大きいことが常に必要と
され、又試薬化の技術もいかにS/N比を太きく 1−
1しがも一定にするかが問題とされていた。又試薬の保
存中にも凝集が認められ、いわゆる自然凝集が発生する
。これらの非特異的凝集あるいは自然2疑集には物理的
攪拌で分散する程度の凝集か呟物理的攪拌では元通りに
分散出来ない強固なものまで認められる。特に後者の場
合は使用の際試薬を攪1′1゛する程度では尼にもどら
ないため、反応に影響をJjえ、感度、特異性に著しい
影響をりえる結果となる。
への吸着の際に変性が生じ、安定性の低下か起る。その
ような非特異的凝集の増加は光学的測定法の場合、感度
に影響が多(S/N比を低下させていた。試薬を評価す
る際、S/N比(S:5pecific agglut
ination+ N:Non−5pecific a
gglutination)が大きいことが常に必要と
され、又試薬化の技術もいかにS/N比を太きく 1−
1しがも一定にするかが問題とされていた。又試薬の保
存中にも凝集が認められ、いわゆる自然凝集が発生する
。これらの非特異的凝集あるいは自然2疑集には物理的
攪拌で分散する程度の凝集か呟物理的攪拌では元通りに
分散出来ない強固なものまで認められる。特に後者の場
合は使用の際試薬を攪1′1゛する程度では尼にもどら
ないため、反応に影響をJjえ、感度、特異性に著しい
影響をりえる結果となる。
従来知られている安定化を[1的とした添加物としては
ソンウノ、ポリアネl−レスルホネート(特公昭6O−
47552)、ショ糖、塩化ごjリン(特公昭59−2
4387)、グリシン及びデキストラン(特開昭55−
30654 )などが知られているか、いずれも物理的
撹拌で分散する程度の凝集の安定化には効果が認められ
るものの強固な非特異凝集及び自然凝集には効果かなか
った。
ソンウノ、ポリアネl−レスルホネート(特公昭6O−
47552)、ショ糖、塩化ごjリン(特公昭59−2
4387)、グリシン及びデキストラン(特開昭55−
30654 )などが知られているか、いずれも物理的
撹拌で分散する程度の凝集の安定化には効果が認められ
るものの強固な非特異凝集及び自然凝集には効果かなか
った。
昧頌濠M犬↓A力や9」1又
本発明者らは、強固な自然凝集か被感作■gGのメルカ
プト基(−3lt基)か関すし、ノスルフィIζ’(−
S−3−)交換反応によることを明らかにした。そこで
防禦法としでメルカプ1基フロノAンク剤、還元剤であ
るンスルフィト゛開裂剤(例えばフチオスレイ1−ル、
2−メルカプトエチルアミン、亜硫酸、チオグリコール
酸)を4種または2種以上添加することにより強固なJ
1特異的凝集及び自然凝集を防ぐことを0J能とし、本
発明を完成した。
プト基(−3lt基)か関すし、ノスルフィIζ’(−
S−3−)交換反応によることを明らかにした。そこで
防禦法としでメルカプ1基フロノAンク剤、還元剤であ
るンスルフィト゛開裂剤(例えばフチオスレイ1−ル、
2−メルカプトエチルアミン、亜硫酸、チオグリコール
酸)を4種または2種以上添加することにより強固なJ
1特異的凝集及び自然凝集を防ぐことを0J能とし、本
発明を完成した。
本発明にかかわるラテックスの種類はポリスチレン、ポ
リプロピレン、ポリアセタールなどラテックス凝集反応
に用いられる全てのラテックスに適用可能であり、又本
発明にかかわる測定順[1は、抗体免疫グロブリンを感
作する全ての試薬に適用可能て′ある。又、ラテックス
と抗体の結合は物理的吸着または化学的モ14合のいず
れでもよい。
リプロピレン、ポリアセタールなどラテックス凝集反応
に用いられる全てのラテックスに適用可能であり、又本
発明にかかわる測定順[1は、抗体免疫グロブリンを感
作する全ての試薬に適用可能て′ある。又、ラテックス
と抗体の結合は物理的吸着または化学的モ14合のいず
れでもよい。
本発明にががわる凝集防11−剤の使用濃度は防止剤の
種類によっても異なるか通常0.Ol、+nM〜50
+n Mであり、好ましくは0.05+nM〜1.O+
oHの濃度範囲で添加するのがよい。以下に本発明の実
施例を例示するとともに従来法との比較試験を示し、貝
8体的に説明する。
種類によっても異なるか通常0.Ol、+nM〜50
+n Mであり、好ましくは0.05+nM〜1.O+
oHの濃度範囲で添加するのがよい。以下に本発明の実
施例を例示するとともに従来法との比較試験を示し、貝
8体的に説明する。
実施例1
直径0.2μのポリスチレン粒子の2%懸濁液(1,、
atex) 1容に、ポリスチレン粒子1m1B当り2
00μgになるようにヒトガンマ−グロブリン溶液を加
え、よく混合した後、室温で1〜2時間攪拌後、遠心分
離(1,OOOOrpm+30分)で上清を除く。次い
で残漬物に0.02%BS八を含むグリシン緩衝液(p
H8,2)を加え、均一に分散させ、再度遠心分i!A
t(loooorpm、 30分)を行い上清を除外、
残渣物に2%庶糖、1%BSΔ、0.1%N州、を含む
グリシン緩衝液(pH8,2)を加え。
atex) 1容に、ポリスチレン粒子1m1B当り2
00μgになるようにヒトガンマ−グロブリン溶液を加
え、よく混合した後、室温で1〜2時間攪拌後、遠心分
離(1,OOOOrpm+30分)で上清を除く。次い
で残漬物に0.02%BS八を含むグリシン緩衝液(p
H8,2)を加え、均一に分散させ、再度遠心分i!A
t(loooorpm、 30分)を行い上清を除外、
残渣物に2%庶糖、1%BSΔ、0.1%N州、を含む
グリシン緩衝液(pH8,2)を加え。
均一に分散させR△テスI・用のラテックス試薬(対照
品)とする。
品)とする。
このラテックス試薬に、2−メルカプ]・エチルアミン
を]、OmMとなるように加え、改良ラテックス試薬と
する。(保存安定性評価) (1)濁度変化 ラテックス試薬100Inを1)BS 600μりで希
釈し、光路長2+nmのセルを用いて6]Omnで測光
し、濁度変化を調べた結果、表1に示す通り対照ラテッ
クス試薬は9か月日(2〜]0°C保存)からやや濁度
の上昇か認められ、13か月では著しく」二昇した。し
カル改良ラテックス試薬は、13か月「Iでも吸光度の
変化は認められず、安定であった。
を]、OmMとなるように加え、改良ラテックス試薬と
する。(保存安定性評価) (1)濁度変化 ラテックス試薬100Inを1)BS 600μりで希
釈し、光路長2+nmのセルを用いて6]Omnで測光
し、濁度変化を調べた結果、表1に示す通り対照ラテッ
クス試薬は9か月日(2〜]0°C保存)からやや濁度
の上昇か認められ、13か月では著しく」二昇した。し
カル改良ラテックス試薬は、13か月「Iでも吸光度の
変化は認められず、安定であった。
表1(濁度変化)
−−−−−−−−−−−−−づ巻均し一一−−−−−−
−−−−開始時3ケ月6ケ月9ケ月13ケ月 改良試薬 0.407 0.4090,4060.41
50.427対照試薬 0.41.7 0,4280,
4400.4660.665(2)凝集性変化 健常者のnn清5例とRΔ患者3例を用い、各検体50
111と各ラテックス試薬50μaをガラス′I5す定
板上に採り、混合攪拌後1分後の凝集の有無を目視で判
定した所、表2に示す辿り、調製時(0が月日)は両う
テックス試薬共健常者血清は陰性、RA患者は陽性を示
したか、13が月IJでは対照品にのみ健常者血清が陽
性を示し、非特異的凝集の発生が認められた。
−−−−開始時3ケ月6ケ月9ケ月13ケ月 改良試薬 0.407 0.4090,4060.41
50.427対照試薬 0.41.7 0,4280,
4400.4660.665(2)凝集性変化 健常者のnn清5例とRΔ患者3例を用い、各検体50
111と各ラテックス試薬50μaをガラス′I5す定
板上に採り、混合攪拌後1分後の凝集の有無を目視で判
定した所、表2に示す辿り、調製時(0が月日)は両う
テックス試薬共健常者血清は陰性、RA患者は陽性を示
したか、13が月IJでは対照品にのみ健常者血清が陽
性を示し、非特異的凝集の発生が認められた。
ヌ・J照試薬検体1 −−−− ±
2 −−−−+
3 −−−−+
4 −−−−十
5−±−±十
6 + 十 十 十 十7 ++
十十十 8+ 十 十 十 十 改良試薬検体]、−−−−− 6+十十+十 7 +十十+十 8 +十++十 十二明らかな凝集あり。
十十十 8+ 十 十 十 十 改良試薬検体]、−−−−− 6+十十+十 7 +十十+十 8 +十++十 十二明らかな凝集あり。
m:凝集は全く認められない。
±:明らかな凝集ではないがザラツキが認められる
末検体1〜5は健常者であり、検体6へ・8はRΔ患者
実施例2 実施例1で述べた方法に準して、直径0.4μのポリス
チレン粒子を用いたラテックス試薬を調製し、次いで2
−メルカプ)・エチルアミン(10+nM、、 5 +
nM)、デイチオスレイトール(10+nM、 5m
M、 0.5mM、 0.05mM、 0,005mM
)、亜硫酸(10mM、 5 +nM)、チオグリフー
ル酸(lomM、5 +oM)を各々カッコ内に示した
濃度になるよう加え、2〜IO’Cに保存し、1が月後
の濁度の変化を調べた所、表3に示す通り対照は着しい
濁度の上昇が認められた。又、デイチオスレイトール1
0mMでは、還元力が強すぎるため、γ−グロブリンの
変性に伴い、白濁から沈澱を生じたが、適当量の還元剤
を加えたラテックス試薬(2−メルカプトエチルアミン
5 mM、 10mM、デイチオスレイト−ル0.5m
lづ−0,05fnM、チオグリコール酸10+nM−
5mM)はほとんど濁度が変化せず、安定であることが
示された。
実施例2 実施例1で述べた方法に準して、直径0.4μのポリス
チレン粒子を用いたラテックス試薬を調製し、次いで2
−メルカプ)・エチルアミン(10+nM、、 5 +
nM)、デイチオスレイトール(10+nM、 5m
M、 0.5mM、 0.05mM、 0,005mM
)、亜硫酸(10mM、 5 +nM)、チオグリフー
ル酸(lomM、5 +oM)を各々カッコ内に示した
濃度になるよう加え、2〜IO’Cに保存し、1が月後
の濁度の変化を調べた所、表3に示す通り対照は着しい
濁度の上昇が認められた。又、デイチオスレイトール1
0mMでは、還元力が強すぎるため、γ−グロブリンの
変性に伴い、白濁から沈澱を生じたが、適当量の還元剤
を加えたラテックス試薬(2−メルカプトエチルアミン
5 mM、 10mM、デイチオスレイト−ル0.5m
lづ−0,05fnM、チオグリコール酸10+nM−
5mM)はほとんど濁度が変化せず、安定であることが
示された。
表3
添加条件 吸光度開始時 1が月
後 対照 0.512 0.656メル
カプトエチルアミン10「nM /7 0.52
45mM // 0.537 テ゛イチオスレイト−ル10IoM /l 白
濁5mM /l O,494 0、5mM tt 0.5060、05+n
M h O,5950,005m1づ〃0.
607 亜硫酸 1.on+M /l 0.
6005+nH// 0,650 チオグリコール酸 ]、O+nM h O,
5095+nM ’7 0.543 発明の効果 本発明により測定誤差の少ない優れたラテックス試薬を
提供することかできる。
後 対照 0.512 0.656メル
カプトエチルアミン10「nM /7 0.52
45mM // 0.537 テ゛イチオスレイト−ル10IoM /l 白
濁5mM /l O,494 0、5mM tt 0.5060、05+n
M h O,5950,005m1づ〃0.
607 亜硫酸 1.on+M /l 0.
6005+nH// 0,650 チオグリコール酸 ]、O+nM h O,
5095+nM ’7 0.543 発明の効果 本発明により測定誤差の少ない優れたラテックス試薬を
提供することかできる。
Claims (1)
- ジスルフィド結合開裂剤、メルカプト基ブロッキング剤
から選ばれた少なくとも1つを非特異凝集又は自然凝集
防止剤として含有するラテックス試薬。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63078096A JPH0762683B2 (ja) | 1988-04-01 | 1988-04-01 | 安定なラテックス試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
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1988
- 1988-04-01 JP JP63078096A patent/JPH0762683B2/ja not_active Expired - Lifetime
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