JP3665698B2

JP3665698B2 - 慢性関節リウマチ用マーカーとしての使用および慢性関節リウマチ診断用免疫試薬

Info

Publication number: JP3665698B2
Application number: JP27329397A
Authority: JP
Inventors: 文緒宇梶; 尚広羽生; 勲北島; 征郎丸山
Original assignee: Tokuyama Corp
Current assignee: Tokuyama Corp
Priority date: 1997-09-22
Filing date: 1997-09-22
Publication date: 2005-06-29
Anticipated expiration: 2017-09-22
Also published as: JPH1194836A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、特定のタンパク質に対する抗体の慢性関節リウマチ用マーカーとしての使用および慢性関節リウマチの診断用試薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
慢性関節リウマチ（以下ＲＡと略すこともある。）は全人口の約1%が羅患している原因不明の全身性自己免疫疾患である。病態の特徴は、関節滑膜の増殖を伴う羅患関節の破壊であり、適切な治療を実施しないと、疼痛、運動機能障害により日常生活に支障を来す。ＲＡの診断はアメリカリウマチ学会の基準（1987年改訂版）を参考にして、血液マーカー、X線所見、組織学的所見、臨床経過を勘案し総合的に行われる。
【０００３】
血液マーカーの測定は自動化されており、多検体を迅速かつ正確に検査することができ、臨床検査に適した方法といえる。ＲＡの血液マーカーとしてはリウマトイド因子（RF）、赤血球沈降速度（ESR）、C反応性タンパク質（CRP）がよく測定される。RFは変性した免疫グロブリンG（IgG）に対する抗体でありＲＡ患者の70〜80%に認められるが、その他の自己免疫疾患でも出現し、さらに健常人の2〜5%も陽性となる。ESRとCRPは炎症のマーカーであり、ＲＡ以外の炎症を伴う疾患でも高値となる。これまでのところＲＡに特異的な血液マーカーは存在しないため、血液マーカーによりＲＡを診断することは不可能であった。
【０００４】
X線所見、組織学的所見は、関節部のX線写真や関節組織切片を観察し、病状を判断するもので、検査に熟練と時間を要する。また、検査する者の主観が入るため精度にばらつきが出る恐れがある。
【０００５】
【発明の解決しようとする課題】
このように、従来のＲＡの診断法は煩雑で時間がかかり、また、精度にも問題を有していた。従って、本発明の目的は上記問題点を解決する新たなＲＡ診断用マーカーを提供することにある。さらに、臨床検査に被検体として利用される体液中に存在し、かつＲＡ発症患者と健常者の間で何らかの有意差を呈する上記ＲＡ診断用マーカーを検出する試薬を開発することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者等はＲＡでは関節部が破壊されるために骨芽細胞より細胞成分が放出され、これらの成分に対する抗体がＲＡ患者に特異的に存在すると考え、鋭意研究を行ってきたところ、抗アルドラーゼＡ抗体がＲＡ患者に特異的に存在することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
即ち、本発明は、抗アルドラーゼＡ抗体の慢性関節リウマチ用マーカーとしての使用である。
【０００８】
また、別の発明は、アルドラーゼＡ又は変性されたアルドラーゼＡを含んでなり、被検体中に存在する抗アルドラーゼＡ抗体を検出することを特徴とする慢性関節リウマチ診断用免疫試薬である。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明で慢性関節リウマチ（ＲＡ）用マーカーとして使用される抗アルドラーゼＡ抗体とは、アルドラーゼＡ、即ち、解糖系の酵素であるD-フルクトース-1,6-二リン酸 D-グリセルアルデヒド-3-リン酸リアーゼＡ（EC 4.1.2.13）に対する抗体であり、アルドラーゼＡおよび変性されたアルドラーゼＡを認識し、結合するという性質を有している抗体であれば特に限定されない。
【００１０】
このような抗アルドラーゼＡ抗体は、後述する実施例に示されるようにＲＡ患者体液中に特異的に存在することが本発明者等によって確認されたことからＲＡ用マーカーとなりうる。ＲＡ患者の体液中に存在する抗アルドラーゼＡ抗体としては、全てのクラス、即ち、免疫グロブリンG（IgG）、免疫グロブリンM（IgM）、免疫グロブリンA（IgA）、免疫グロブリンD（IgD）、免疫グロブリンE（IgE）が挙げられるが、血中濃度の高いIgGが好適に用いられる。
【００１１】
後述する実施例にも示されるように、ＲＡ患者の体液中に存在する抗アルドラーゼＡ抗体の量は健常者、その他の自己免疫疾患や関節炎を呈する疾患に比べて有意に高かったことから、抗アルドラーゼＡ抗体は臨床検査の領域において、ＲＡのマーカーとなりうる。即ち、体液、特に血清または血漿中の抗アルドラーゼＡ抗体の量を測定することにより、ＲＡの診断が可能となる。体液中の抗アルドラーゼＡ抗体を測定する方法としては、後述するアルドラーゼＡと抗アルドラーゼＡ抗体の抗原抗体反応を利用した公知の方法により実施することができる。
【００１２】
また、抗アルドラーゼＡ抗体をＲＡ用マーカーとして使用することにより、ＲＡ診断試薬或いはＲＡ治療のための医薬品の開発の過程においてこれらの性能や効果を評価したりすることもできる。
【００１３】
次に本発明のＲＡ診断用免疫試薬について説明する。
【００１４】
本発明のＲＡ診断用免疫試薬は、アルドラーゼＡ又は変性されたアルドラーゼＡがＲＡ患者の体液中に存在する抗アルドラーゼＡ抗体と抗原抗体反応を起こすことを利用し、当該抗アルドラーゼＡ抗体を検出できる方法であればその形態は特に限定されないが、アルドラーゼＡ又は変性されたアルドラーゼＡが不溶性担体に担持された形態であるのが好適である。
【００１５】
このとき、使用できる不溶性担体とは、上記抗原抗体反応の反応系で溶媒に不溶な担体であれば、その材質及び形状は特に制限されず、公知の不溶性担体が使用できる。即ち、不溶性担体の形状としては、使用目的に応じて適宜の形状を選択すれば良く、例えば、テストプレート状、ビーズ状、球状、ディスク状、チューブ状、フィルター状等が挙げられる。また、その材質としては、通常の免疫測定法用担体として用いられるもの、例えば、プロピレン、スチレン、アクリルアミド、アクリロニトリル等の合成樹脂、又は、これらに公知の方法によりスルホン基、アミノ基などの反応性官能基を導入したもの、ガラス、多糖類又はその誘導体、シリカゲル、多孔性セラミックス、金属酸化物、赤血球等が例示できる。
【００１６】
また、不溶性担体へのアルドラーゼＡ又は変性されたアルドラーゼＡの固定化法は物理的吸着法、共有結合法、イオン結合法、架橋法等の公知の方法が何ら制限無く使用できる。
【００１７】
この様なアルドラーゼＡ又は変性されたアルドラーゼＡが不溶性担体に担持された形態の本発明の免疫試薬の具体的な態様を例示すれば、定性用の試薬としては、ラテックス凝集試薬、マイクロタイター試薬等を、定量用の試薬としては、ラジオイムノアッセイ試薬、エンザイムイムノアッセイ試薬、蛍光イムノアッセイ試薬、化学発光イムノアッセイ試薬、ラテックスイムノアッセイ試薬等をそれぞれ挙げることができる。これらいずれの態様においても本発明のＲＡ診断用免疫試薬を被検体と接触させ、抗アルドラーゼＡ抗体と担持されたアルドラーゼＡとの抗原抗体反応を検出することによりＲＡの診断を行うことができる。
【００１８】
本発明の免疫試薬中に含まれるアルドラーゼＡとしてはＲＡ患者体液中に存在する抗アルドラーゼＡ抗体が認識し結合できるものであれば、特に制限無く各動物種由来のアルドラーゼＡ、遺伝子組換え技術により製造されるアルドラーゼＡ等およびこれらを変性させたものが使用できる。アルドラーゼＡの製造方法としては、例えば、動物組織や培養細胞からの抽出精製、遺伝子組換え技術による微生物、培養細胞による合成、または化学合成等が挙げられる。また、ＲＡ患者体液中に存在する抗アルドラーゼＡ抗体が認識し結合できるものであれば、アルドラーゼＡタンパク質の他に、遺伝子組換え技術や化学合成により合成されたアルドラーゼＡの部分ペプチド、さらに、アルドラーゼＡを化学的、酵素的に切断して得られるアルドラーゼＡの部分ペプチドも使用できる。入手しやすさと反応性という観点から、ヒト組織または培養細胞から、例えばアチーブス・オブ・バイオケミストリー・アンド・バイオフィジックス（Arch. Biochem. Biophys.）、228巻、342〜352頁（1984年）記載の方法に従って抽出精製されたヒトアルドラーゼＡ、広く市販されているウサギ筋肉由来アルドラーゼＡ、またはこれらを変性させたものが好適に使用できる。
【００１９】
ＲＡ患者の体液中に存在する抗アルドラーゼＡ抗体は変性、未変性を問わずにアルドラーゼＡを認識するが、変性したアルドラーゼＡとより強く反応する性質を持っているので、変性されたアルドラーゼＡを使用すればより感度良く抗アルドラーゼＡ抗体を検出することができる。
【００２０】
アルドラーゼＡを変性させる方法としては、酵素タンパク質の立体構造を破壊する公知の方法、即ち、熱、酸、アルカリ、イオン系界面活性剤、変性剤（尿素、塩酸グアニジン等）等による処理により実施することができる。これら各変性方法について具体的に説明すると、熱変性の方法としては、例えばアルドラーゼＡを約４０〜１００℃で約１〜６０分間加熱することにより行うことができる。また、酸又はアルカリによる変性の場合には、それぞれ例えば約０．０１〜１Ｍの塩酸水溶液又は約０．０１〜１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液中でアルドラーゼＡを約１０分〜５時間放置することにより行うことができる。また、イオン系界面活性剤或いは変性剤を使用する場合には、例えば約０．１〜１０重量％のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）水溶液、約１〜９Ｍの尿素水溶液、或いは約１〜８Ｍの塩酸グアニジン水溶液中でアルドラーゼＡを約１０分〜５時間放置することにより行うことができる。これらの変性方法はそれぞれ単独あるいは複数の方法を組み合わせて行っても良い。
【００２１】
これらの方法で変性されたアルドラーゼＡを不溶性担体に担持させるに際しては、担体への吸着を阻害しないように、担持時の溶液のｐＨを中性付近に制御し、過剰のイオン系界面活性剤、変性剤を透析やゲルろ過等により除去してから行うのが好適である。また、変性されたアルドラーゼＡを不溶性担体に均一に担持させるためには担持時に変性されたアルドラーゼＡが不溶化しないようにすることが重要であり、そのために変性されたアルドラーゼＡの溶液に還元剤及び／又は非イオン系界面活性剤を約０．０００１〜１重量％程度添加するのが好適である。この時使用する還元剤としては２−メルカプトエタノール、ジチオトレイトール等が挙げられ、非イオン系界面活性剤としてはトリトンＸ−１００、ツイーン２０等が挙げられる。
【００２２】
上記のようにして得られた本発明の免疫試薬を被検体と接触させると、該被検体中に抗アルドラーゼＡ抗体が存在する場合には、該抗アルドラーゼＡ抗体を検出することができる。
【００２３】
ここで、使用する被検体とは、抗アルドラーゼＡ抗体を含有する可能性がある溶液であれば特に限定されないが、血清、血漿等の体液が好適に使用される。
【００２４】
本発明の免疫試薬を用いて被検体中の抗アルドラーゼＡ抗体を検出する方法としては、被検体中の抗アルドラーゼＡ抗体と本発明の免疫試薬に含まれるアルドラーゼＡ又は変性されたアルドラーゼＡとの抗原抗体反応に基づく物理量の変化を検知することができる方法が何ら制限無く採用できる。例えば、いわゆる標識免疫測定試薬で行われているように標識物質を利用して発色、発光、蛍光として上記抗原抗体反応を検出する方法、いわゆる免疫学的凝集試薬で行われているように不溶性担体の凝集として目視や濁度により上記抗原抗体反応を検出する方法等、抗原抗体反応を利用した公知の免疫学的診断試薬において一般的に採用されている検出方法が採用できる。
【００２５】
具体的には、本願発明の免疫試薬が標識免疫測定試薬である場合には、標識剤として放射性ヨード、放射性炭素等放射性同位体元素或いはフルオレセインイソチオシアネート、テトラメチルローダミン等の蛍光色素を使用して、放射活性或いは蛍光強度を測定するか、又は標識剤としてアルカリフォスファターゼ、パーオキシダーゼ等の酵素を用い酵素反応に基づく発色、蛍光、化学発光を測定すればよい。酵素反応の基質は、一般的に用いられている公知の化合物が特に制限無く使用できる。例えば、標識酵素としてアルカリフォスファターゼを使用した場合には、酵素反応の基質としてp-ニトロフェニルリン酸、4-メチルウンベリフェリルリン酸、ジオキセタン誘導体等を用いることができ、標識酵素量はそれぞれ酵素反応による発色（比色）、蛍光、化学発光により測定できる。また、標識酵素としてパーオキシダーゼを使用した場合は、酵素反応の基質として例えば、2,2'-アジノ-ビス（3-エチルベンゾ-チアゾリン-6-スルホン酸）、ルミノール誘導体等を基質として使用でき、標識酵素量はそれぞれ比色、化学発光により測定できる。
【００２６】
本願発明の免疫試薬が標識免疫測定試薬である場合、該試薬を用いた測定方法は、通常のラジオイムノアッセイ（RIA）法や、ELISA法、ウェスタンブロッティング法、ドットブロッティング法等の酵素免疫測定（EIA）法等に従うことができ、例えば次のようにして行うことができる。即ち、不溶性担体にアルドラーゼＡを0.01〜1000μg／cm²の割合で坦持した後に、被検体を接触させ抗アルドラーゼＡ抗体を抗原抗体反応により結合させる。次いで、0.001〜1000μgの標識された抗ヒト免疫グロブリン抗体を作用させ、放射活性、比色、蛍光、化学発光等により結合した抗アルドラーゼＡ抗体を測定することができる。また、標識抗ヒト免疫グロブリン抗体の代わりに、ビオチンを結合させた抗ヒト免疫グロブリン抗体と標識されたアビジンを使用することによりさらに高感度に測定することができる。この場合は、0.001〜1000μgのビオチン結合抗ヒト免疫グロブリン抗体を接触させた後、0.001〜1000μgの標識されたアビジンを接触させ、同様に、放射活性、比色、蛍光、化学発光等により結合した抗アルドラーゼＡ抗体を測定することができる。
【００２７】
また、本願発明の免疫試薬が免疫学的凝集反応試薬である場合には、該試薬を用いた測定は、通常の赤血球凝集反応、受身凝集反応、免疫比色法、免疫比濁法等と同様に、例えば次のようにして行うことができる。即ち、粒子状の不溶性担体1g当たり0.001〜1000mgのアルドラーゼＡを坦持した粒子（以下感作粒子と略す）を0.001〜15重量%となるように水性媒体に分散させて免疫試薬の有効成分として使用すればよい。アルドラーゼＡを坦持する抗体の粒径は、抗原抗体反応後の凝集の起こりやすさや凝集の判別のしやすさなどの観点から平均粒径が0.05〜10μmの不溶性担体を使用するのが好適である。かかる方法にて作成した感作粒子を被検体中の抗アルドラーゼＡ抗体と接触させ、該感作粒子の凝集の度合いを測定する。粒子の凝集の度合いは、目視、光学的測定等従来の方法が制限無く使用できる。
【００２８】
【実施例】
以下に実施例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００２９】
実施例１
（１）ＲＡでは関節部で骨破壊が進行し、骨芽細胞より細胞成分が放出される。これらの成分に対する抗体がＲＡ患者に特異的に存在すると考え、骨芽細胞株であるMG63（ATCC CRL1427）を用いて次のようにしてＲＡ患者血清に特異的に存在する抗体を検索した。
【００３０】
MG63（1×10⁷細胞）に1mlの細胞溶解液（50mM トリス塩酸緩衝液 pH7.4，150mM NaCl，1% NP-40）添加し、氷中で30分間放置した。遠心後上清をとり細胞抽出液とした。10%ゲルを用いたSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）により細胞溶解液を分離した後、ニトロセルロース膜にタンパク質を電気転写し、ＲＡ患者血清を用いてMG63の細胞成分を認識する抗体の検索を行った。タンパク質を転写したニトロセルロース膜を5% スキムミルクを含むPBS（10mM リン酸緩衝液 pH7.0，150mM NaCl）に室温で1時間浸しブロッキングを行った。洗浄液1（0.1% ツイーン20を含むPBS）で15分づつ3回洗浄した後、ニトロセルロース膜を分割しそれぞれを洗浄液1で100倍に希釈したＲＡ患者血清（４検体）と健常者血清（５検体）に膜を浸し、室温で1時間振とうした。洗浄液1で15分づつ3回洗浄した後、洗浄液1で10000倍に希釈したパーオキシダーゼ標識抗ヒトIgG抗体（カッペル社）中で1時間、室温で浸透した。洗浄液1で15分づつ3回洗浄した後、ECLウエスタンブロッティング検出試薬（アマシャム社）により抗原タンパク質に結合した抗体を検出した。ウエスタンブロッティング法を行った後の各膜の写真を図１に示す。図中の矢印は40kDaのタンパク質の位置を示す。ＲＡ患者血清に浸した膜では矢印部分にバンドが明確に確認できるのに対し、健常者の血清に浸した膜では該部分にバンドが確認できない。このとから、ＲＡ患者血清では40kDaのタンパク質を認識する抗体が特異的に存在することが明らかとなった。
【００３１】
また、高速液体クロマトグラフィー（HPLC）によりMG63細胞抽出液より40kDaタンパク質を精製し、Ｎ末端アミノ酸配列８残基を調べた結果、該８残基はPYQYPALTであることが分かった。また、データベースによりホモロジーを検索したところ、ヒトアルドラーゼＡと完全に一致した。
【００３２】
（２）次に、ＲＡ患者血清と市販ウサギアルドラーゼＡとの反応について調べた。なお、ウサギアルドラーゼＡはヒトアルドラーゼＡと96%の相同性を有している。ＲＡ患者血清と市販ウサギアルドラーゼＡ（和光純薬）との反応性を調べた。市販ウサギアルドラーゼＡを用いた他は上記（１）と同様にしてウサギアルドラーゼＡをSDS-PAGE後にニトロセルロース膜に転写し、抗原抗体反応を行ったところ、ＲＡ患者血清はウサギアルドラーゼＡを認識した。ウエスタンブロッティング法を行った後の各膜の写真を図２に示す。図中矢印で示されるバンドがウサギアルドラーゼＡを表す。ＲＡ患者血清に浸した膜では矢印部分に強いバンドが確認できるのに対し、健常者の血清に浸した膜では該部分にバンドが確認できない。このとから、ＲＡ患者血清ではウサギアルドラーゼＡを認識する抗体が特異的に存在することが明らかとなった。
【００３３】
（３）さらに、次のようにして市販ウサギアルドラーゼＡによるＲＡ患者血清の吸収試験を行った。即ち、前記（１）に従ってMG63細胞抽出液とＲＡ患者血清を反応させる際に、市販ウサギアルドラーゼＡによる吸収試験を行った。洗浄液1で100倍に希釈したＲＡ患者血清に100μg／mlまたは、10μg／mlとなるように市販ウサギアルドラーゼＡを添加し、室温で1時間放置した。対照として100μg／mlの牛血清アルブミン（BSA）による吸収も行った。吸収後は（１）と同様に抗原抗体反応を行わせ、ECLウエスタンブロッティング検出試薬により検出した。ウエスタンブロッティング法を行った後の各膜の写真を図３に示す。図中の矢印は40kDaのタンパク質、即ちヒトアルドラーゼＡを表す。BSAによる吸収ではアルドラーゼＡのバンドの強さに変化はないが、市販ウサギアルドラーゼＡで吸収した場合は、バンドが消失した。このことから、ＲＡ患者血清中に存在する特異的な抗体は40kDaのタンパク質を認識し、該40kDaタンパク質はヒトアルドラーゼＡであることが確認できた。
【００３４】
これらの結果から、40kDaのタンパク質はアルドラーゼＡであり、ＲＡ患者血清ではアルドラーゼＡを認識する抗体が存在することが明らかとなった。また、ＲＡ患者血清中に存在するアルドラーゼＡを認識する抗体はヒトアルドラーゼＡおよびウサギアルドラーゼＡを認識する抗アルドラーゼＡ抗体であることが明らかとなった。
【００３５】
実施例２
［ELISA法による被検体中の抗アルドラーゼＡ抗体の測定］
市販ウサギアルドラーゼＡを８Ｍの尿素溶液に懸濁し、１時間室温で放置して変性させた。変性後の溶液を０．４重量％２−メルカプトエタノール、０．１重量％ＳＤＳ、０．１重量％ツイーン２０を含むPBSに対して室温で透析を行い過剰の尿素を除去し、変性アルドラーゼＡ溶液（３mg／ml）を調製した。洗浄液2（0.05% ツイーン20を含むPBS）に変性アルドラーゼＡ溶液を添加し（20μg/ml）抗原感作液とした。100μlの抗原感作液を96穴マイクロプレートの各ウェルに分注し、4℃で一晩放置した。洗浄液2で3回洗浄し、250μlのブロッキング溶液（1% スキムミルク、1% ツイーン20、PBS）を分注し、室温で3時間放置した。洗浄液2で3回洗い、100μlの血清希釈液（1% カゼイン、1% スキムミルク、2%エマルジット25、PBS）を各ウェルに分注した。10μlの血清を分注し、ウェル内で11倍に希釈した。プレートシールで蓋をし、37℃で1時間静置し一次抗体反応をおこなった。検体として、ＲＡ患者血清、変形性関節症（OA）患者血清、全身性エリトマトーデス（SLE）患者血清、痛風患者血清、そして関節炎症状のない健常者血清を用いた。洗浄液2で3回洗い、パーオキシダーゼ標識抗ヒトIgG抗体を抗体希釈液（1% BSA、0.05% ツイーン20、PBS）で1000倍に希釈して調製した二次抗体液を100μlづつ各ウェルに分注した。プレートシールで蓋をし、37℃で1時間静置し二次抗体反応を行った。洗浄液で3回洗い、基質液として、100μlの2,2'-アジノ-ビス（3-エチルベンゾ-チアゾリン-6-スルホン酸）（ABTS）とH₂O₂溶液の等量混合液（KPL社）を各ウェルに分注した。遮光して室温で30分放置し、100μlのSDS溶液を加えて反応を停止した。各ウェルの405nmの吸光度を測定した（図4）。
【００３６】
図４に示されるように、ＲＡ以外の検体ではすべて吸光度が0.3以下であり、抗アルドラーゼＡ抗体はＲＡ特異的に検出された。この結果から、抗アルドラーゼＡ抗体はＲＡの優れたマーカーとなることが明らかとなった。
【００３７】
実施例３
［アルドラーゼＡを変性することの抗アルドラーゼＡ抗体の反応性へ及ぼす効果の検討］
ELISA法による抗アルドラーゼＡ抗体の測定の際に、変性アルドラーゼＡ及び未変性アルドラーゼＡによる吸収試験を行い、ＲＡ患者に存在する抗アルドラーゼＡ抗体の反応性を調べた。
【００３８】
即ち、２０μｇ／mlの変性アルドラーゼＡ又は未変性アルドラーゼＡを含む血清希釈液を使用した以外は実施例２と同様にしてＲＡ患者血清を用いてELISA法を行った。その結果を図５に示す。図５に示されるように、変性アルドラーゼＡによる吸収で強く阻害を受けたことから、ＲＡ患者血清中に存在する抗アルドラーゼＡ抗体は、未変性アルドラーゼＡよりも変性アルドラーゼＡと強く反応することが明らかとなった。
【００３９】
【発明の効果】
本発明者等はＲＡ患者の体液中に存在する抗アルドラーゼＡ抗体の量は、健常者その他の自己免疫疾患や関節炎を呈する疾患に比べて有意に高いことを見出した。このことは抗アルドラーゼＡ抗体がＲＡを診断する新規な臨床マーカーとして有効に使用できることを示すものである。特に、抗アルドラーゼＡ抗体をＲＡ用のマーカーとして使用した場合には偽陽性の発生率が極めて低く（具体的には、健常者およびその他の疾患の被検体４５検体について測定したところ陽性を示した検体は０であった。）、アルドラーゼＡを含む本発明の診断試薬を使用することにより精度の高いＲＡの診断が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本図は骨芽細胞株（MG63）抽出液及びＲＡ患者血清又は健常者血清を用いてウエスタンブロッティング法を行った後の各ニトロセルロース膜の写真である。
【図２】本図は市販ウサギアルドラーゼＡとＲＡ患者血清および健常者血清を用いたウエスタンブロッティング法を行った後の各ニトロセルロース膜の写真である。
【図３】本図はＲＡ患者血清又は市販ウサギアルドラーゼＡ或いはＢＳＡで吸収を行ったＲＡ患者血清と骨芽細胞株（MG63）抽出液を用いてウエスタンブロッティング法を行った後の各ニトロセルロース膜の写真である。
【図４】本図はＲＡ患者と健常者、ＲＡ以外の関節炎を伴う疾患の患者の血清中抗アルドラーゼ抗体の関係をELISA法によって調べた結果を示す図である。
【図５】本図はELISA法における変性アルドラーゼＡ及び未変性アルドラーゼＡの阻害効果を示す図である。

Claims

抗アルドラーゼＡ抗体の慢性関節リウマチ用マーカーとしての使用。
アルドラーゼＡを含んでなり、被検体中に存在する抗アルドラーゼＡ抗体を検出することを特徴とする慢性関節リウマチ診断用免疫試薬。
変性させたアルドラーゼＡを含んでなり、被検体中に存在する抗アルドラーゼＡ抗体を検出することを特徴とする慢性関節リウマチ診断用免疫試薬。