DK156253B - Fremgangsmaade til fremstilling af pyruvatoxidase - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af pyruvatoxidase Download PDFInfo
- Publication number
- DK156253B DK156253B DK119679AA DK119679A DK156253B DK 156253 B DK156253 B DK 156253B DK 119679A A DK119679A A DK 119679AA DK 119679 A DK119679 A DK 119679A DK 156253 B DK156253 B DK 156253B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- pyruvate
- analysis
- enzyme
- pyruvate oxidase
- phosphate
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 3
- 108010042687 Pyruvate Oxidase Proteins 0.000 claims description 54
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 19
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 claims description 19
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 18
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 18
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 15
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 15
- 241000193792 Aerococcus viridans Species 0.000 claims description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 7
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- LIPOUNRJVLNBCD-UHFFFAOYSA-N acetyl dihydrogen phosphate Chemical compound CC(=O)OP(O)(O)=O LIPOUNRJVLNBCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 241000194022 Streptococcus sp. Species 0.000 claims description 4
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 claims description 3
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 3
- 241000193798 Aerococcus Species 0.000 claims description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 claims 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 43
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 39
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 39
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 39
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 35
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 31
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 29
- 229940076788 pyruvate Drugs 0.000 description 22
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 18
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 12
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 12
- 229960002363 thiamine pyrophosphate Drugs 0.000 description 12
- 235000008170 thiamine pyrophosphate Nutrition 0.000 description 12
- 239000011678 thiamine pyrophosphate Substances 0.000 description 12
- YXVCLPJQTZXJLH-UHFFFAOYSA-N thiamine(1+) diphosphate chloride Chemical compound [Cl-].CC1=C(CCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N YXVCLPJQTZXJLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 10
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 9
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 9
- 229930029653 phosphoenolpyruvate Natural products 0.000 description 9
- DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-N phosphoenolpyruvic acid Chemical compound OC(=O)C(=C)OP(O)(O)=O DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000192001 Pediococcus Species 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 235000019162 flavin adenine dinucleotide Nutrition 0.000 description 6
- 239000011714 flavin adenine dinucleotide Substances 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 6
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 2-oxoglutaric acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)C(O)=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 4
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 4
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 4
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 4
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 3
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 3
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- XTDYIOOONNVFMA-UHFFFAOYSA-N dimethyl pentanedioate Chemical compound COC(=O)CCCC(=O)OC XTDYIOOONNVFMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 229910052816 inorganic phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 3
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 3
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N oxaloacetic acid Chemical compound OC(=O)CC(=O)C(O)=O KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JKVUQLWTIZFTMF-UHFFFAOYSA-M potassium;2-oxopropanoate Chemical compound [K+].CC(=O)C([O-])=O JKVUQLWTIZFTMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003736 ATP Synthetase Complexes Human genes 0.000 description 2
- 108010082072 ATP Synthetase Complexes Proteins 0.000 description 2
- ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N Acetoin Chemical compound CC(O)C(C)=O ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002281 Adenylate kinase Human genes 0.000 description 2
- 108020000543 Adenylate kinase Proteins 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 2
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100035882 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- 102000057621 Glycerol kinases Human genes 0.000 description 2
- 108700016170 Glycerol kinases Proteins 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100039905 Isocitrate dehydrogenase [NADP] cytoplasmic Human genes 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 108010013563 Lipoprotein Lipase Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- JLTDJTHDQAWBAV-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylaniline Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=C1 JLTDJTHDQAWBAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710098398 Probable alanine aminotransferase, mitochondrial Proteins 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 2
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 2
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 2
- ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N acetyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N 0.000 description 2
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 description 2
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N guaiacol Chemical compound COC1=CC=CC=C1O LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010017192 4-hydroxy-4-methyl-2-oxoglutarate aldolase Proteins 0.000 description 1
- 102100029589 Acylpyruvase FAHD1, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N Cichoriin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)c1c(O)cc2c(OC(=O)C=C2)c1 WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N CoASH Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-QWWZWVQMSA-N D-Threitol Natural products OC[C@@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N D-melezitose Natural products O1C(CO)C(O)C(O)C(O)C1OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 1
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- -1 GOT Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- 108010059881 Lactase Proteins 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 102000017055 Lipoprotein Lipase Human genes 0.000 description 1
- 102100022119 Lipoprotein lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WAEMQWOKJMHJLA-UHFFFAOYSA-N Manganese(2+) Chemical compound [Mn+2] WAEMQWOKJMHJLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010069823 Oxaloacetate decarboxylase Proteins 0.000 description 1
- 241000604136 Pediococcus sp. Species 0.000 description 1
- YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N Phosgene Chemical compound ClC(Cl)=O YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 244000088415 Raphanus sativus Species 0.000 description 1
- 235000006140 Raphanus sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- BAECOWNUKCLBPZ-HIUWNOOHSA-N Triolein Natural products O([C@H](OCC(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC)C(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC BAECOWNUKCLBPZ-HIUWNOOHSA-N 0.000 description 1
- PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N Trioleoylglycerol Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940100228 acetyl coenzyme a Drugs 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N aldehydo-L-rhamnose Chemical compound C[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M asparaginate Chemical compound [O-]C(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- 229910001626 barium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- WDIHJSXYQDMJHN-UHFFFAOYSA-L barium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ba+2] WDIHJSXYQDMJHN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Chemical compound [O-2].[Ca+2] BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000292 calcium oxide Substances 0.000 description 1
- ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Inorganic materials [Ca]=O ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229910001429 cobalt ion Inorganic materials 0.000 description 1
- XLJKHNWPARRRJB-UHFFFAOYSA-N cobalt(2+) Chemical compound [Co+2] XLJKHNWPARRRJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N coenzime A Natural products OC1C(OP(O)(O)=O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005516 coenzyme A Substances 0.000 description 1
- 229940093530 coenzyme a Drugs 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N dephosphocoenzyme A Natural products OC1C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 1
- 229940093496 esculin Drugs 0.000 description 1
- AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N esculin Natural products OC1OC(COc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O)C(O)C(O)C1O AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- VWWQXMAJTJZDQX-UYBVJOGSSA-N flavin adenine dinucleotide Chemical compound C1=NC2=C(N)N=CN=C2N1[C@@H]([C@H](O)[C@@H]1O)O[C@@H]1CO[P@](O)(=O)O[P@@](O)(=O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C2=NC(=O)NC(=O)C2=NC2=C1C=C(C)C(C)=C2 VWWQXMAJTJZDQX-UYBVJOGSSA-N 0.000 description 1
- 229940093632 flavin-adenine dinucleotide Drugs 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N galactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 1
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 1
- 229960001867 guaiacol Drugs 0.000 description 1
- QRMZSPFSDQBLIX-UHFFFAOYSA-N homovanillic acid Chemical compound COC1=CC(CC(O)=O)=CC=C1O QRMZSPFSDQBLIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M hydrogensulfate Chemical compound OS([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GFAZHVHNLUBROE-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl propionaldehyde Natural products CCC(=O)CO GFAZHVHNLUBROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GQZXNSPRSGFJLY-UHFFFAOYSA-N hydroxyphosphanone Chemical compound OP=O GQZXNSPRSGFJLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- BJHIKXHVCXFQLS-OTWZMJIISA-N keto-L-sorbose Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO BJHIKXHVCXFQLS-OTWZMJIISA-N 0.000 description 1
- 229940116108 lactase Drugs 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001437 manganese ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N melezitose Chemical compound O([C@@]1(O[C@@H]([C@H]([C@@H]1O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O)CO)CO)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000006395 oxidase reaction Methods 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- QVLTXCYWHPZMCA-UHFFFAOYSA-N po4-po4 Chemical compound OP(O)(O)=O.OP(O)(O)=O QVLTXCYWHPZMCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 1
- 208000019585 progressive encephalomyelitis with rigidity and myoclonus Diseases 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 1
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007103 stamina Effects 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 230000036435 stunted growth Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 1
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 1
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003609 titanium compounds Chemical class 0.000 description 1
- PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N triolein Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N 0.000 description 1
- 229940117972 triolein Drugs 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000007738 vacuum evaporation Methods 0.000 description 1
- ORZHVTYKPFFVMG-UHFFFAOYSA-N xylenol orange Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CC1=C(O)C(C)=CC(C2(C3=CC=CC=C3S(=O)(=O)O2)C=2C=C(CN(CC(O)=O)CC(O)=O)C(O)=C(C)C=2)=C1 ORZHVTYKPFFVMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0008—Oxidoreductases (1.) acting on the aldehyde or oxo group of donors (1.2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y102/00—Oxidoreductases acting on the aldehyde or oxo group of donors (1.2)
- C12Y102/03—Oxidoreductases acting on the aldehyde or oxo group of donors (1.2) with oxygen as acceptor (1.2.3)
- C12Y102/03003—Pyruvate oxidase (1.2.3.3)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/885—Streptococcus
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
DK 156253 B
Opfindelsen angâr en fremgangsmâde til fremstilling af pyruvatoxidase, og denne fremgangsmâde er ejendommelig ved det i krav 1 anf0rte.
Et pyruvatoxidaseenzym kan indgâ som katalysator ved 5 folgende tre reaktioner: (1) Pyruvat + P + 02—^Ac/vP + C02 + H2 02 (2) Pyruvat + DPN+ + CoA —>Ac.f*/SCoA + DPNH + H+ + CC>2 (3) Pyruvat + l/202"^Ac + CC>2 hvor P = phosphat, Ac^vP = acetylphosphat, DPN = disphospho-10 pyridinnucleotid, CoA = coenzym A og Acr\/SCoA = acetyl- coenzym A.
Der findes med andre ord tre typer pyruvatoxidase, som hver katalyserer en af reaktionerne (1)-(3).
Pyruvatoxidasen ifolge opfindelsen er katalysator for 15 reaktionen (1).
Pyruvatoxidase er et kendt enzym. I "Methods in En-zymology", bind 1, side 482 (1955) og i "Enzymes", 2. ud-gave, side 684 (1964) er omtalt pyruvatoxidase, som katalysator for reaktionen (1Jhidrorende fra Lactobacillus del-20 brückii. Ved fremgangsmâden ifolge opfindelsen er de produ- cerende organismer Pediococcus,Streptococcus og Aerococcus, som aile er forskellige derfra.
I "Chemical Abstracts", bind 43, nr. 7l8i nævnes pyruvatoxidase hidrcrende fra Streptococcus faecalis, men denne 25 pyruvatoxidase er katalysator for reaktionen (2) eller (3), da der ikke dannes H2C>2 ved processen.
I "Chemical Abstracts", bind 57, nr. 17176f omtales pyruvatoxidase hidrorende fra Pediococcus casei, men denne pyruvatoxidase er afhængig af DPN, hvorfor den katalyserede 30 reaktion er reaktionen (2).
I det folgende menes ved "pyruvatoxidase" et enzym, som katalyserer reaktionen (1).
DK 156253 B
2
Det har vist sig, at enzymet pyruvatoxidase dannes i en bakteriestamme B-0667 tilh0rende slægten Pediococcus og B-0668 tilh0rende slægten Streptococcus isoleret fra en jordprove taget i en radisemark i Ohito-cho, Tagata-gun, 5 Shizuoka-ken, Japan, og at pyruvatoxidasen fremstillet der- fra kan benyttes til pyrodruesyreanalyse i en prove indehold-ende pyrodruesyre eller forskellige systemer, som frigor pyrodruesyre. Det har ogsà vist sig, at dette enzym kan benyttes til kvantitativ analyse af pyrodruesyre, mâling af en-10 zymaktiviteten af enzymreaktionssystemer, som danner pyruvat, kvantitativ bestemmelse af enzymet og substratet deraf. Pyrodruesyre kan analyseres ved omsætning af en prove indehold-ende pyrodruesyre med et reaktionsSystem omfattende i det mindste pyruvatoxidase, flavinadenindinucleotid (i det folg-15 ende kaldet FAD), thiaminpyrophosphat, oxygen og phosphat -
Opfindelsen skal forklares nærmere i forbindelse med tegningen, hvor fig. 1 viser den optimale pH-værdi for pyruvatoxidase, fig. 2 varmestabiliteten af pyruvatoxidase, 20 fig. 3 pH-stabiliteten af pyruvatoxidase, fig. 4 resultatet af analyse af pyrodruesyre med oxy-genelektrode under anvendelse af pyruvatoxidase, fig. 5 resultatet af analyse af sérum med oxygenelek-trode under anvendelse af pyruvatoxidase, 25 fig. 6 resultatet af analyse af pyrodruesyre ved kolometrisk metode under anvendelse af pyruvatoxidase, fig. 7 resultatet af kvantitativ analyse af se-rumpyrodruesyre under anvendelse af pyruvatoxidase, fig. 8 resultatet af analyse af ÂDP under anven-30 delse af pyruvatoxidase, fig. 9 resultatet af analyse af glyoerol, triglyce-rid og serumtriglycerid under anvendelse af pyruvatoxidase, fig. 10 resultatet af analyse af GPÏ- og GOT-ak-tivitet under anvendelse af pyruvatoxidase, •3
DK 156253 B
fig. 11 et korrelationsdiagram for analyse af GPT-aktivitet under anvendelse af pyruvatoxidase, og fig. 12 et korrelationsdiagram for analyse af GOT-aktivitet under anvendelse af pyruvatoxidase.
5 Enzymet pyruvatoxidase katalyserer en oxidativ reaktion fra pyrodruesyre, uorganisk phosphat og oxygen til dannelse af acetylphosphat, carbondioxid og hydrogen-peroxid. Enzymet fremstilles ved dyrkning af de pyruvat-oxidaseproôucerende mikrobestammer 10 Pediococcus sp. B-0667, Streptococcus sp, B-0668, Aero-coccus viridans IPO 12219 eller IPO 12317.
Ben isolerede staminé B-0667 og B-0668 ovenfor har fzlgende taksonomiske egenskaber.
A. Iagttagelser pâ forskellige medier, dyrket ved 30°0 15 i 2 dage;
Stamme B-0667 Stamme B-0668
Tryptosog'a- svag vækst, homogent svag vægt, homogent •væske uklar, senere uldag- uklar, senere uldag- tig udfældning tig udfældning
Tryptosoja- svag vækst, bleggul- svag vækst, bleggul- agarskrâ- liggrâ, ingen glans, liggrâ, ingenglans, flade ingen produktion af ingen produktion af 20 oplzseligt pigment oploseligt pigment
Tryptosoja- koloni, lille og koloni, lille og .agarplade flad flad gelatineplade vækst langs stukket vækst langs stukket
Unie, ingen fly- linie, ingen fly- 25 dendegzrelse af ge- deliggerelse af gélatine latine BOP mælk ingen ændring ingen ændring (14 dage) B. Mikroskopisk iagttagelse;
Stamme B-0667 Stamme B-0668 30 Porm sfærisk, ovoid, par sfærisk, ovoid, par tetraformet eller kort- tetraformet eller kort-kædet kædet
DK 156253 B
4 stsrrelse: 0,5 - 1,0 x 0,5 - 1,0 μ 0,8 - 1,0 x 1,0 - 1,2 μ motilitet spore : gramfarvning + + 5 syrefast - - faire C. ff.vsiologiske egenskaber:
Stamme B-06 6 7_ Stamme B-0668 væksttemperatur
45°C
10 37°C + + 30°0 + + 26°G + + 10°C + + 5°C + eller (+) + eller (+) 15 halogemtolerance
UaCl 10# + 6,5# + 5,0# + + 1,0# + + 20 0 # + OB-prove fermentativ fermentativ opforsel i fakultativt anae- fakultativt anae- oxygen: robisk robisk nitratreduktion: 25 indoldannelse: hydrogensulfat-dannelse: gelatinehydro- lyse: stivelseshydro-30 lyse: esculinhydrolyse: + + acetoindannelse: ME-prove: katalase: 35 oxidase
DK 156253 B
5 urease (SSR): urease (Christen-sen): udnyttelse af 5 citronsyre (Christensen): label fortsat
Syredannelse fra sukker: adosifcol L(+;-arabinose cellobiose + .+ dulcitol 15 meso-erythritol fructose + + fucose galactose + + glucose + + 2o glycerol inositol - inu:lin lactose + + maltose + + 25 mannitol + mannose + + melezitose melibiose + 30 raffinose + l(+)-rhamnose salicin (+) L-sorbose sorbitol 35 stivelse saccharose + + trehalose + + xylose tolérance ved 60°C i 30 minutter - +
DK 156253 B
6
Yed konsultation af Bergers Manual of Déterminative Bacteriology, 8. udgave 1974* og S.T. Cowan og K.J.
Steel, Manual for the Identification of Medical Bacteria, Cambridge Press, 1974 betegnes stammen B-0667 og B-0668 5 med de ovenfor angivne taksonomiske egenskaber, især grampositive cocci, catalase og oxidase negativ, fermen-tativ syredannelse fra glucose og ingen gasdannelse fra sukker (glucose), som tilhorende slægten Pediococcus og slægten Streptococcus.
10 Sammenligning af disse stammer med ovennsevnte identifikationsreferencer er som felgerî I tabellen: + = positiv mere end 85$ - = negativ mere end 85$ d = varierer blandt stammer eller 15 arter.
staminé stamme slægt slægt B-0667 B-0668 Pediococcus Streptocossus vækst ved 45°C + d tolérance 20 ved 60°C i 30 min. - + - d glycerol (syredan- 25 nelse) - d arabi-nose (syredannelse) - - + d 30 halogen- tolerance (FaCl 10$) + - +
Pelgelig skal stammen B-0667 betegnes som slægten Pediococcus eller Streptococcus. Ved konsultation af oven-55 nævnte*Manual for the Identification of Medical Bacteria og J. Gen. Microbiol., 26, 185-197 (1961). Er de taksonomiske egenskaber af stammen B-0667 næsten identiske med egenskaberne af Pediococcus urina-equi, men egenskaberne
DK 156253 E
7 beskrevet i Bergey’s Manual of Beterminative Bacterio-logy, 8, udgave, 1974 er en smule forskellige âerfra, Ber-for betegnes stammen B-0667 som slægten Pediocoocus og betegnes som Pediocoocus sp. B-0667.
5 Stammen B-0668 ligner slægten Streptococcus snare* re end slægten Pediocoocus. Yderligere konsultation af Manual for the ' Identification of Medical Bacteria re-sulterer i, at stammen B-0668 ligner Streptococcus faecium var. durans, men ingen taksonomiske egenskaber er beskre-10 vet i Bergey's Manual, hvorfor sammenligning i enkelt-heder er umulig, Stammen B-0668 betegnes derfor som Streptococcus sp. B-0668.
Stammerne B-0667 og B-0668 er deponeret i Instituts for Microbial Industry and Technology, Agency of 15 Industrial Science'and Technology, M.I.T.I., Japan, un-der de respektive numre PEEM-P nr. 4438 og FERM-P nr.
4439.
I en udforelsesform for den foreliggende opfindel-se dyrkes ovennævnte Pediocoocus sp, B-0667, Streptococcus 20 sp, B-0668, Aerococcus viridans IFO-12219 eller Aerococcus viridans IPO-12317 i et konventionelt medium til enzympro-duktion. Dyrkning kan foretages ved konventionel væskedyrk-ning, og submers luftningskultur foretrækkes til industriel produktion. Ber kan fortrinsvis benyttes et konventionelt 25 medium til mikroorganismer. Som kulstofkiîder kan benyttes assimilerbare carbonkilder sâsom glucose, saccharose, lactose, maltose, fructose, mêlasse og pyrodruesyre, Assimilerbare nitrogenkilder sâsom pepton, kcdekstrakt, gærekstrakt og caseinhydrolysat kan benyttes, Forskellige uorganiske 30 salte sâsom phosphat, carbonat og sulfat af magnésium, calcium, kalium, jern, mangan eller zink kan benyttes.
DK 156253 B
8
Dyrkningstemperaturen kan vælges i omrâdet for dyrkning af mikrobeceller og produktion af pyruvatoxidase, fortrinsvis 25-37°0. Dyrkningstiden kan ændrea afhængende af betingelserne og afsluttes nâr pyruvatoxidaseproduktio-5 nen er praktisk taget fuldstændig, normalt 18-48 timer.
Pyruvatoxidase ekaisterer i cellerne af mikroorga- nismer.
Œil adskillelse af pyruvatoxidase fra de dyrkede celler filtreres eller centrifugeres den dyrkede masse 10 til samling af cellerne, og den oplukkes ved behandling med mekaniske midler eller en enzymatisk procès sâsom et lysozym. Om fornodent solubiliseres pyruvatoxi-dase ' ved tilsætning af ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA) og et overfladeaktivt middel sâsom Triton X-100 15 (indregistreret varemærke) eller Adecatol S0-120 (indre- gistreret varemærke)til fraskillelse af enzymet, Den sâ-ledes opnâede oplzsning af pyruvatoxidase behandles med eller uden inddampning, og derefter fældes enzymet ved udsaltning ved tilsætning af et oploseligt sait sâsom 20 ammoniumsulfat eller natriumchlorid· lavmolekylære uren- heder fjemes ved dialyse. Endvidere fjernes urenheder i oplosningen af pyruvatoxidase fortrinsvis ved adsorp-tionschromâtografi, ionbytningschromâtografi eller gel-filtrering. Den sâledes opnâede benzyloplzsning behand-25 les ved vakuuminddampning og lyofilisering til fremstil- ling af pulverformetpymvatoxidase. Yderligere rensning kan opnâs ved konventionelle rensningsmetoder for proteiner og enzymer sâsom adsorptionschromatografi, ionbytningschro-matografi eller gelfiltrering.
20 Pyruvatoxidase fremstillet ved fremgangsmâden ifzl- ge opfindelsen har folgende fysisk-kemiske egenskaber, hvor der benyttes fzlgende forkortelse:
Pedioeoccus sp. B-0667 forkortes B-0667
Streptococcus sp. B-0668 forkortes B-0668 35 Aerococcus viridans IFO- -12219 forkortes IFO-12219
DK 156253 B
9
Aerococcus viridans IPO-12317 forkortes IPO-12317 (1) Enzymvirkning:
Enzymet katalyserer oxidativ reaktion fra pyro-5 druesyre, uorganisk phosphat og oxygen til dannelse af acetylphosphat, carbondioxid og hydrogenperoxid: CH^COCOOH + H0P0J“ + 02 CH^COOPO^" + C02 + H202 (2) Optimal pH-værdi:
Virkningen af pH-værdien pâ aktiviteten af pyru-10 vatoxidase mâles. Phosphatstzdpudeoplosninger med pH-vær- di 6-8 benyttes til undersegelsen. Eesultaterne fremgâr af fig, 1, hvor den optimale pH-værdi er som fzlger: B-0667: pH-værdi 6,3-7»5 B-0668: pH-værdi 7,5-8,5 15 IPO-12219: pH-værdi 7,0-8,0 IPO-12317: pH-værdi 6,8-7,5
Smâ variationer iagttages ved phosphatkoncentra- tion og art af metalion.
(3) Varmestabilitet: 20 Varmestabiliteten af enzymet bestemmes ved in- kubering i 10 mM phosphatstodpude (pH-værdi 6,5) inde-holdende 10 μΜ. EAD ved 0, 40, 50, 60 og 70°C i 10 mi-nutter efter metoden til enzymbestemmelse. Som det ses af fig. 2 bliver enzymerne opnâet fra B-0667, IP0-12219 25 og IPO-12317 en smule aktiveret ved 40°C og denatureret over 60°C. Det enzym, som opnâs fra B-0668, aktiveres ikke ved 40°G og denatureres næsten over 60°C.
(4) pH-stabilitet:
Til hver enzymoplesning (0,1 ml) sættes 0,2 M 30 phosphatstzdpude for pH 6-8 (0,9 ml) eller 0,2 M af
Tris- HCl-stzdpude for pH 7-9 (0,9) og hver indeholden-de 10 μΜ PAD efterfulgt af henstand i 10 minutter ved 40°C. Der tages 20 μϋίβΓ enzymoplesning, og enzymakti-viteten bestemmes. Som det fremgâr af tabel 3, er enzy-35 met opnâet fra B-0667, IP0-12219 og IPO-12317 mest sta- bilt ved ca. pïï 7, og enzymet opnâet fra B-0668 er sta-bilt ved en sur pH-værdi.
DK 156253 B
10 (5) Virkning af forskellige stoffer: l) Virkningen af forskellige stoffer pâ enzymak-tiviteten underseges ved tilsætning af 5 mM af de neden-for angivne stoffer i stedet for MgClp i analysesystemet.
5 Relativ aktivitet ($) siîûf _ B-0667 B-0668 IPO-12219 IPO-12317 ingen tilsætning 25,4 72,0 42,0 50,3 EDTA 0 0 0 0
MgCl2 100 100 100 100 0aCl2 69,4 75,0 83,4 78,7
MnClp 129,1 102,7 116,2 111,0 10 c C0C12 81,3 81,1 85,0 84,0
BaCl2 20,6 58,8 23,9 28,8
ZnCl2 16,0 38,2 14,9 22,8
Som det ses ovenfor inhiberas enzymet af EDTA 0g 15 aktiveres af Mg++, Ca++, Mn++ og Co-"*"^.
2) Virkningen af eliminering af folgende stoffer fra analysesystemet pâ enzymaktiviteten er vist neden-for. 0,1 M dimethylglutarat-EaOH-stodpude benyttes i til-fælde af phosphateliminering.
20 Eliminerai stof -Belativ aktlyltet ,W- _ B-0667 B-0668 IEO-12219 IE0-12317
Ingen eliminering 100 100 100 100
Thiaminpyrophosphat 000 0 PAD 33,9 100 32,7 41,7
Thiaminpyrophosphat og PAD 000 0 25 phosphat 000 0
Det fremgâr heraf, at enzymet kræver thiaminpyro-phosphat og PAD som oofaktor og phosphat som substrat.
Oxygenforbruget ved enzyiureaktionen mâles med oxy-genelektrode, og oxygenet forbruges i forhold til en en-30 zymaktivitet (dannelse af hydrogenperoxid). Resultaterne fremgâr af folgende:
DK 156253 B
11
Oxygen- Reaktionsproâukt (umol/min.
Æ%fn. ) ¥>8 Xflph0S- B-0667 0,042 0,042 0,038 5 B-0668 0,022 0,0213 0,020 IP0-12219 0,040 0,038 0,037 IPO-12317 0,035 0,036 0,034
Analyserne udfores soin folger:
Qxygenforbrug: Mâleapparat for oplzst oxygen 10 (Handelsnavn: YSI-dissolved oxygen meter model 53)«
Acetylphosphat: P, Bipmann m,fl«, J« Biol, Chem., 134, 463*464 (1940).
Hydrogenperoxid: Metode under anvendelse af Ν,Ι-dimethylanilin, 4-aminoantipyrin og peberrodoxidase.
15 Som forklaret ovenfor betegnes det enzym, sont fâs fra de fire ovennævnte stammer, som pyruvatoxidase og flavinprotein. Analysemetoden for pyruvatoxidase ifolge opfindelsen er som folger: 0,5 M kaliumpyruvat 0,1 ml 20 0,5 M phosphatstsflpude (pH 7,0) 0,2 ml 0,2$ 4-aminoantipyrin 0,1 ml 0,2$ RjE-dimethylanilin 0,2 ml 0,2 M MgCl2 50 pliter 10 MM thiaminpyrophosphat 20 aliter 25 peroxidase (45 enheder/ml) 0,1 ml 1 mM PAB 10 μϋΐβr destilleret vand 0,22 ml
Ovenstâende reaktionsblanding (1,0 ml) forinku-beres ved 37°C i 3 minutter, Til denne oplosning sættes 30 enzymoplosningen (20 μliter), og man inkuberer ved 37°C
i 10 minutter. 0,1 M citratstodpude (pïï 6,0, 2 ml) in-deholdende 0,1 M EDTA tilsættes til standsning af reak-tionen. Ben dannede violette farve mâles ved kolori-metrisk metode ved 665 nm.
35 En enhed for enzymaktivitet defineres som den ak- tivitet, som frembringer 1 μmol hydrogenperoxid pr. minut.
DK 156253 B
12
Til aktivering af pyruvatoxidasereaktionssystemet tilsættes FAD, thiamin-pyïophosphat og phosphat. Til aktivering af enzymet tilsættes der fortrinsvis yderligere ionfrigzrende sait, som frigzr calciumiofc, cobaltion, . 5. magnesiumion eller manganion i form af chlorid. Der væl-ges fortrinsvis en indikator sâsom en farveindikator eller fluoressensindikator for hydrogenperoxid.
Mængden og mængdeforholdet af komponenter i enzym-reaktionssystemet kan vælges til hovedsagelig enzymreak-10 tion og vil variere efter mængden af pyruyat, temperatur og tid af enzymreaktionen.
F.eks. kan der fortrinsvis benyttes 1-20 enhe-der pyruvatoxidase, 0,1-20 nmol FAD og 0,05-0,5 μπιο] thiaminpyrophosphat, 1-10 μιηοΐ uorganisk phosphat og 15 0,05-10 μιηοΐ ionfrigzrende sait pr. forszg. Pyruvatoxi dase kan være i mikroindkapslet form ellerimmobiliseret form af covalent binding med organisk eller uorganisk bærer eller adsorption med bærer. Det mo3ære forhold af indikator for hydrogenperoxid er i det mindste et ækvi- 20 molært forhold eller et overskud af dannet hydrogenperoxid. I tilfælde af peroxidase benyttes der fortrinsvis 0,5-20 enheder pr. forsog. Disse komponenter af enzyma-tisk reaktionsblanding benyttes fortrinsvis ved oplzs-ning i den passende indstillede pH-værdi af stodpuden.
25 Det sâledes fremstillede enzymatiske reaktions- system kan benyttes til analyse af pyrodruesyre. Enhver przve, som indeholder pyruvat, kan analyseres. F.eks, pyrodruesyre selv, pyrodruesyre i sérum eller urin og pyrodruesyredannende enzymreaktionssystemer sâsom mælke-30 syre og lactasedehydrogenase (IDH), ADP og pyruvatkinase og glycerol, glycerolkinase og pyruvatkinase. Yderligere eksempler i enkeltheder pâ enzymatiske reaktioner, som dann-er pyrodruesyre og er genstande for analyse, er fzl-gendeï
DK 156253 B
13 (1) Analyse af mælkesyre- eller IDH-aktivitet: lactat —jjjgy»· pyruvat + BADHg (2) Analyse af ADP eller pyruvatkinase (PK) aktivitet: ptr ADP + phosphoenolpyruvat -H ATP + pyruvat 5 (3) Analyse af glutamat-pyruvat-transaminase (G-TP) aktivitet eller α-ketoglutarat:
GrPT
alanin + a-ketoglutarat -=—h pyruvat + glutamat (4) Analyse af glutamat-oxaloacetat-transaminase (GOT) aktivitet: 10 asparaginat + a-ketoglutarat —> oxaloacetat + glutamat oxaloacetat °^loacetatae.carbox.ylaee^ pyruvat + co2 (5) Analyse af glycerol eller glycerophosphokinase (GK) aktivitet:
glycerol + ATP -glycerol-3-phosphat + .ADP
15 pxr
ADP + phosphoenolpyruvat —pyruvat + ATP
(6) Analyse af triglyeerid: triglyoerid üpase eller lipoproteinllpase., glyoe.
rol-3-
-phos-phat + ADP
PK
20 ADP + phosphoenolpyruvat -r· pyruvat + ATP
(7) Analyse af creatinin eller creatiniriphosphokinase (CPK):
Creatinin oreatin π-ρττ
creatin + ATP -creatinphosphat + ADP
PK
25 ADP + phosphoenolpyruvat ->· pyruvat + ATP
(8) Analyse af myokinase:
ATP + AMP 2 ADP
PK
ADP + phosphoenolpyruvat -> pyruvat + ATP
(9) Analyse af aktivitet af fede syrer eller thio- 30 kinase: fed syre + CoA + ATP thi'°k—acyl-CoA + AMP + PPi
AMP + ATP 2 ADP
PK
ADP + phosphoenolpyruvat -^ pyruvat + ATP
DK 156253 B
14
Disse enzymreaktioner er blot illustre rende, og disse pyruvatdannende reaktioner kan findes i kombination af enzym og dets substrat, f.eks. en biologisk prove. Som eks-emplificeret ovenfor kan analysen ikke blot foretages til 5 analyse af pyruvat, men ogsâ til analyse af enzym, enzymak- tivitet eller substrat.
En analyse foretages ved inkubering med en prsve og reagensblanding. Reagensblandingen er fortrinsvis et udstyr af de fornsdne reagenser. Til analyse mâles for-10 brugt komponent eller dannet komponent. Mâling af mæng-den af oxygenforbrug ved hjælp af et mâleapparat for op-lost oxygen er en foretrukken analysemetode. I dette til-fælde kræves der ingen indikator for hydrogenperoxid.
Hvad angâr analyse for frembragt eller dannet komponent, 15 foretrækkes mâling af mængden af hydrogenperoxid, f.eks.
ved hjælp af en hydrogenperoxidelektrodemâler sâsom YSI--oxidasemâler eller ved kolorimetrisk eller fluorometrisk analyse med indikator for hydrogenperoxid, Analysen kan fortrinsvis foretages i 10-60 minutter og ved 20-40°0, 20 fortrinsvis 35-37°0.
En indikator for hydrogenperoxid er en kombination af en eller flere chromogen- eller fluoressensindi- katorer, som pâvirkes ved kobling med hydrogenperoxid.
Eksempler pâ sàdanne indikatorer er kombinationer af 25 tetravalent titaniumforbindelse og xylenolorange, som kobles med hydrogenperoxid til dannelse af en stabil red farve, eller kombinationer af phénol eller Ιί,Ιϊ'-dimethyl-anilin eller homovanilinsyre, 4-aminoantipyrin og peroxi-dase til mâling af farve eller fluoressens, 4-aminoanti-30 pyrin kan erstattes med 4-aminophenazon. En kombination af 2,6-diohlorphenolindophenol og peroxidase og af guaia-col og peroxidase kan ogsâ benyttes. Indikatoren kan frera-stilles i forvejen som oplesning. Kolorimetriske eller fluorometriske analyser udfzres ved mâling af absorptionen 35 af passende bolgelængder sâsom 565 nm.
DK 156253 B
15 Mængden af pyrodruesyre kan mâles ved beregning ud fra en tilsvarende standardkurve af forbrugt oxygen eller dannet hydrogenperoxid,
Phosphat soin en forbrugt komponent eller acetyl-5 phosphat som en dannet komponent kan ogsâ analyseres ved konventionelle metoder,
Som forklaret ovenfor kan pyruvatoxidase anvendes i forskellige analysemetoder. Diagnostisk analyse sâsom analyse af pyruvat i pyruvatholdige reagenser eller i se-10 rum eller urin, analyse af enzymaktivitet af LDH, pyruvat- kinase, GPT, GOT, glycerolkinase, lipase, lipoproteinlipase, creatininphosphokinase, myokinase eller thiokinase og analyse af biologiske komponenter sâsom lactat, ADP, glycerol, triglycerid, creatinin eller fede syrer kan med fordel ud-15 fores ved hjaelp af et udstyr baseret pâ pyruvatoxidase, som er fremstillet ved fremgangsmâden ifolge opfindelsen.
Nedenstâende eksempler illustrerer udforelsesformer for opfindelsen samt anvendelser heraf.
Eksempel 1, 2o Pt medium (hver 100 ml pH-værdi 7) omfattende glucose (1$), pepton (1 $), gærekstrakt (0,5 $), NaCl (0,2 KH2P04 (0^), K2HP04 (0,1 $), MgS04 (0,05$) og CaCO^ (0,3$) i en 500 ml erlenmeyerkolbe steriliseres ved 12.0°C i 20 minutter. I hvert medium podes en stamme af Pediococcus 25 sp, B-0667, EERI-P nr. 4438, Streptococcus sp. B-0668, EEBM-P nr, 4439, Aerococcus viridans IE0-12218 eller Aerococcus viridans IFO-12317, og man dyrker under ryst-ning ved 30°C i 24 timer ved 300 omdrejninger pr, minut, Derefter samles de dyrkede celler ved centrifugering og 30 vaskes med 10 mM phosphatstedpude (pH-værdi 6,5) og cen- trifugeres igen til samling af bakteriecellerne. De sàle-des opnâede celler suspenderes i 10 mM phosphatstzdpude (10 ml, pH-værdi 7,0) indeholdende 0,02$ lysozym og 0,1$
Triton X-100 og inkuberes ved 37°C i 60 minutter. Ben op-
DK 156253 B
16 nâede fracentrifugerede overliggende væske, aom indeholder pyruvatoxidase, samles. Enzymaktiviteten af den overliggen- de væske fremgâr af felgende tabel:
Staminé Enzymaktivitet .
enheder/ml 5 B-0667 0,60 B-0668 0,38 IEO-12219 0,52 IP0-12317 0,46
Eksempel 2.
10 Et medium (20 liter) bestâende af de samme kompo- nenter som beskrevet i eksempel 1 i en 30 liter forgæ-ringsbeholder dampsteriliseres. Byrkningsvæske (200 ml) af Pediococeus sp. B-0667 PERM-P nr. 4438 dyrket pâ samme mâde som i eksempel 1 overfores dertil og dyrkes ved 15 30°C i 24 timer. De ved centrifugering samlede bakterie- celler (ca, 100 g) suspenderes i lysozymoplosningen (0,2 mg/ml, 4 liter) og tilsættes yderligere Triton X-100 (4 g), EDTA (3 g) og 1 M phosphatstodpude (pH-vær-di 6,5, 40 ml), og man omrorer ved 37°C i 60 minutter.
20 Til den ved centrifugering opnàede overliggende væske sættes ammoniumsulfat, og udfældningen ved 0,54 - 0,73 mætning samles ved centrifugering. Udfældningen oploses i 10 mM phospbatstodpude (pH-værdi 6,5, 1000 ml) (5160 enheder, udbytte 86$), og der tilsættes derpà kold ace- 25 tone (0,65 rumfang), og den urene udfældning skilies fra.
Der tilsættes yderligere acetone (0,3 rumfang), og udfældningen, som samles ved centrifugering, oploses i 10 mM phosphatstzdpude (pH-værdi 6,5, 70 ml) (4750 enheder, udbytte 79,2$).
30 Til oplosningen sættes ammoniumsulfat, og udfæld ningen ved 0,54 - 0,70 mætning samles ved centrifugering^
Efter oplosning af udfældningen i 10 ml phosphat-stedpude (pH-værdi 6,5) hældes oplosningen pâ en sejle
DK 156253 B
17 af Sephadex G-25 (indregistreret varemærke) (6,0 x 70 cm), og man samler en fraktion, som viser absorbens ved 280 nm.
De aktive fraktioner slâs sammen og frysetorres til opnâ-else af et pulver af pyruvatoxidase (3940 enheder, 758 mg, 5 udbytte 65,7$).
Eksempel 3« üdstyr til pyruvatanalyse (til oxygénélektrode): pyruvatoxidase opnâet i eksempel 2 (samme som i de fslgende eksempler) 300 enheder FAD 0,5 μmol 10 thiaminpyrophosphat 10 pmol nm Clg 25 pmol 0,2 M phosphatstodpude (pH 7,5) 1,0 ml saccharose 0,5 g 0,2 M dimethylglutarat-lîaOH-stodpude 15 (PH 7,5) 5 ml
Ovenstâende blanding lyofiliseres til fremstil- ling af udstyret til analyse af pyrodruesyre (til oxy- genelektrodemâling, 50 forssg),
Eksempel 4.
Udstyr til pyruvatanalyse (til kolorimetrisk 20 analyse ) :
Reagens (I) pyruvatoxidase 200 enheder FAD 0,5 μιηοΐ thiaminpyrophosphat 10 pmol 25 0,2 M phosphatstodpude (pH 7,5) 1,0 ml saccharose 0,5 g 0,2 M dimethylglutarat-NaOH-stad- pude (7,5) 5 ml peroxidase (100 enheder/mg, peberrod) 2,5 mg 30 0,3$ 4-aminoantipyrin 5 ml
Ovenstâende blanding lyofiliseres til dannelse af reagens (I) i udstyret til pyruvatanalyse (til ko-lorimetri, 50 forssg).
18
DK1S6253B
Yderligere reagens (II) bestâende af: 0,2io vandig Ε,ΙΤ-dimethylanilin indeholdende 25 μmol nm 012 (50 ml) samt stopreagens (III) bestâende af: 5 0,1 M citratstodpude (pH 6,0, 100 ml) indehol dende 0,1 M EDTA tilfojes.
Eksempel 5«
Et udstyr illustreret i eksempel 3 oplsses i de-stilleret vand (50 ml),og en portion oplosning (1,0 ml) 1° deraf anbringes i en reaktionsbeholder. Der tilsættes 5,0 mM pyruvatoplosning (hver 0-100 μϋΐβΓ) eller humant sérum 50 μΐ^βη og 5,0 ml pyruvatoplosning (hver yderli-gere 0-100 μϋΐβΓ), og man inkuberer ved 37°C og mâler derpà oxygenforbruget med galvanisk oxygénélektrode.
15 Resultaterne fremgâr af fig, 4.
Yderligere oploses et udstyr ifolge eksempel 3 i destilleret vand (25 ml), og en portion oplosning (0,5 ml) deraf anbringes i reaktionsbeholdere og inkuberes under tilsætning af vandig oplosning (0,5 ml) indeholdende hu-20 mant sérum (0-0,5 ml) ved 37°C. I fig. 5 ses resultatet af en analyse af oxygenforbrug mâlt med galvanisk oxygen-elektrode.
Som det fremgâr af fig. 4 og 5, iagttages der gode lineære relationer.
25 Eksempel 6.
Det i eksempel 4 fremstillede lyofiliserede reagens (I) oplsses ved tilsætning af reagens (II) (50 ml), og hver portion oplosning (1 ml) i de smâ reagensglas inkuberes ved 37°C. Der tilsættes 5 mM kalium pyruvatop-losning (hver 0 -50 μϋΐβτ) eller humant sérum (50 μϋ-30 ter) tilsat 5 mM kaliumpyruvatoplosning (hver 0-50 μϋ-ter), og man inkuberer ved 37°C i 10 minutter. Stopop-losning (2 ml) tilsættes,og man mâler absorptionen ved
DK 156253B
19 565 nm. Som vist i fig. 6 fâs der gode lineære relatio-ner og kvantitative resultater i ovenstâende analyser og ogsâ i dette tilfælde falder dette résultat sammen med kalibreringskurven ved (2,5 mM £^2, 0-50 μΙ^βΓ).
5 En yderligere proveportion af humant sérum (0-0,5 ml) anbringes i smâ reagensglas og indstilles til 0,5 ml ved tilsætning af destilleret vand. ïïver oplosning (1,0 ml) af reagens (I) fremstillet ved tilsætning af reagens (II) i eksempel 4 tilsættes og inkuberes ved 37°C i 10 minutter.
10 Reaktionen standses ved tilsætning af stopreagens (III) (1,5 ml)» og man analyserer kolorimetrisk ved 565 nm.
Som det ses i fig 7 fâs der et godt kvantitativt résultat.
Eksempel 7.
Reakti onsbland ing: 15 0,2 M dimethylglutarat-liaOH-stod- pude (pH7,5) 0,2 ml 10 mM MÎ1CI2 50 μΙ^βΓ 0,2$ ίΤ,ΙΓ-dimethylanilin 0,2 ml 0,3$ 4-aminoantipyrin 0,1 ml 20 peroxidase (45 enheder/ml) 0,1 ml 10 mM thiaminpyrophosphat 20 μϋΐβΓ 0,2 M phosphatstodpude (pH 7,5) 25 μliter 20 mM phosphoenolpyruvat 0,1 ml pyruvatkinase (4000 enheder/ml) 5 μϋΐβΓ 25 5 mM ADP 0-50 μ
Ovenstâende reaktionsblanding indstilles'til 1,0 ml ved tilsætning af destilleret vand og forinkuberes ved 37 C, og derpâ tilsættes der en oplssning af pyru-vatoxidase (200 enheder/ml, 20 μϋΐβΓ), og man inkuberer 30 ved 37°C i 10 minutter. Efter standsning af reaktionen ved tilsætning af 0,1 M EDTA i 0,1 M citratstodpude (pH 6,0, 2,0 ml) mâles absorptionen ved 565 nm. Som det ses i fig, 8,opnâs der gode kvantitative resulta-ter for ADP-analyse, idev man analyserer det hydrogen-35 peroxid, som dannes af reaktionsblandingen af ADP, pyru vatkinase og phosphoenolpyruvat.
DK 156253 B
20
Ligeledes ses det i fig. 8, at der iagttages en god linearitet, nâr der benyttes 2,5 mM hydrogenperoxid i stedet for 5 mM .ADP,
Eksempel 8.
5 Triglyceridanalyseudstyr:
Reagens (I): 0,2 M dimethylglutarat-HaOÏÏ-st0dpude (pH 7#5) 10 ml 0,3$ 4-aminoantipyrin 5 ml 10 peroxidase (100 enheder/mg) 2,5 mg thiaminpyrophosphat 10 μιηοΐ 0,2 M phosphatstodpude (pH 7,5) 1,25 ml phosphoenolpyruvat 100 μΐΰοΐ pyruvatkinase (4000 enheder/ml) 0,1 ml 15 pyruvatoxidase (200 enheder/ml) 2 ml lipoproteinlipase (3000 enheder/ml) 0,5 ml glyoerolphosphokinase (300 enheder/ml) 1,0 ml AT P 100 μπιοί
Ovenstâende reagens lyofiliseres, 20 Reagens (II): 25 pmol MhOlg i 0,2$ dimethylanilin 50 ml
Reagens (III): (stopoplosning) 0,1 M EDTA i 0,1 M .citratstodpude (pH 6,0) 100 ml 25 Eksempel 9.
Reagens (i) i eksempel 8 oploses i reagens (II), og hver portion oplosning (1,0 ml) deraf anbringes i reagensglas,
Hver portion prove (0-50. μΐ^βη) af humant sérum 3ΰ indeholdende 1,02 μmûl/ml triglycerid, 5 mM glycerolop- losning, 4,2 mM triolein i 0,1$ Triton X-lOO-oplosning eller 2,5 mM hydrogenperoxid tilsættes og inkuberes ved 37°C i 10 minutter. Som det ses i fig, 9, opnâs der god linearitet.
DK 156253 B
21
Eksenrpel 10.
Et udstyr til analyse af serumtransaminase (til 100 forsog): (1) en udrustning til GPT-analyse (til 100 5 prpver):
Reagens (I): Lyofiliseret reagens bestâende af: pyruvatoxidase 400 enheder FAE 500 nmol thiaminpyrophosphat 150 μηιοί 10 1-alanin 20 mmol α-ketoglutarat 1 mmol saccharose 1 g t 4-aminoantipyrin 150 μπιοί peroxidase 450 enheder 15 0,2 M phosphatstodpude (pH 7,5) 2,5 ml 0,2 M dimethylglutarat-NaOH-stodpude (pH 7,5) 50 ml
Reagens (II) (100 ml benyttes til reagens (1) T: 42 μmol MnClo i 0,2?fe dimethylanilinoplos-20 ning 21° “i
Reagens (III) (sto:popl0sning) (200 ml til reagens (I), 0,2 ml for hvert forsog): 0,1 Μ EDTA i 0,2 M citratstodpude (pH 5,0) 420 ml (2) et udstyr til GOT-analyse (til 100 forsog):
Reagens (I): lyofiliseret reagens bestâende af: 25 pyruvatoxidase ...... 400 enheder FAE 500 nmol thiaminpyrophosphat 150 μιηοΐ L-asparaginsyre 20 mmol 30 α-ketoglutarat 1 mmol oxaloacetatdecarboxylase 200 enheder saccharose 1 g 4-aminoantipyrin 150 μυχοί peroxidase 450 enheder 35 0,2 M phosphatstodpude (pH 7,5) 2,5 ml 0,2 M d imethylglut arat-EaOH-s 10d pud e (pH 7,5) 30 ml
Reagens (II) og reagens (III):
Samme eom ovennævnte (l).
DK 156253 B
. 22
Eksempel 11.
Reagenser (I) fremstillet i eksempel 1, (l) (for analyse af GPT-aktivitet) og (2) (til analyse af GOT-aktivitet ) oplzses ved tilsætning af reagens (II) (100 ml). Hver 5 portion (1,0 ml) af oplzsningen anbringes separat i smâ reagensglas og forinkuberes ved 37°C i 5 minutter (for-inkuberet oplzsning af reagens (I))# Standardserumoplzs-ningen (20 μϋΐθΓ) (Calbioohem Co,, handelsnavn: Maxitol, indeholdende G-PT 700 K enheder/ml og GOT 1000 K/ml) for-10 tyndet med konstant forhold tilsættes og inkuberes ved 37°G i 10 minutter. Reaktionen standses ved tilssstning af stopreagens (III) (2,0 ml), og man mâler absorptionen ved 565 nm.
Som vist i fig. 10 har begge enzymaktiviteter 15 linearitet op til den optiske tæthed pâ ca, 1,0 (enzym-aktivitet: ca. 750 K enheder/ml).
Eksempel 12.
Til hver forinkuberet oplzsning af reagens (I) fremstillet i eksempel 11 sættes 20 μΐ^βτ humant sérum 20 (45 prover), og man inkuberer ved 37°C i 20 minutter.
Der tilsættes stopreagens (III) (2,0 ml), og man mâler absorptionen ved 565 nm.
Samme prover af humant sérum analyseres ligeledes ved EKB-metoden (ultraviolet absorptionsmetode, GOT-ana-25 lyseudstyr og GPT-analyseudstyr, fremstillet af LKB Oorp.) og korrelationen.afhlndes. grafisk.med aktiviteten af GPT og GOT.
Som det ses i fig, 11, iagttages korrelations-koefficienten r = 0,998 og regressionsligningen ; 30 y = 0,00295 x + 0,0032 for GPT-analysen,
Yed GOT-analysen fremgâr korrelationsmonstret af fig, 12, hvor man fâr korrelationskoefficienten r = 0,966 og regressionsligningen y = 0,00287 x + 0,0180.
Claims (1)
- DK 156253B Fremgangsmâde til fremstilling af pyruvatoxidase, som katalyserer en reaktion fra pyrodruesyre, phosphat og oxygen til dannelse af acetylphosphat, carbondioxid og hydrogenperoxid, kendetegnet ved, at den omfat-5 ter dyrkning af en pyruvatoxidaseproducerende mikroorganis- me udvalgt blandt Pediococcus sp. B-0667 FERM-P nr. 4438, Streptococcus sp. B-0668 FERM-P nr. 4439, Aerococcus viri-dans IFO-12219 og Aerococcus viridans IFO-12317 i et nærings-dyrkningsmedium og isolation af den sâledes dannede pyru-10 vatoxidase fra de dyrkede celler.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK257986A DK158681C (da) | 1978-03-25 | 1986-06-02 | Udstyr til pyrodruesyreanalyse. |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3468778 | 1978-03-25 | ||
| JP3468778A JPS5840465B2 (ja) | 1978-03-25 | 1978-03-25 | ピルビン酸オキシダ−ゼの製造法 |
| JP8635078A JPS5915637B2 (ja) | 1978-07-14 | 1978-07-14 | ピルビン酸オキシダ−ゼを用いる分析用キツトおよび分析法 |
| JP8635078 | 1978-07-14 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK119679A DK119679A (da) | 1979-09-26 |
| DK156253B true DK156253B (da) | 1989-07-17 |
| DK156253C DK156253C (da) | 1989-12-11 |
Family
ID=26373526
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK119679A DK156253C (da) | 1978-03-25 | 1979-03-23 | Fremgangsmaade til fremstilling af pyruvatoxidase |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4246342A (da) |
| CA (1) | CA1143640A (da) |
| DE (2) | DE2954385C2 (da) |
| DK (1) | DK156253C (da) |
| FR (2) | FR2420760B1 (da) |
| GB (2) | GB2043650B (da) |
| IT (1) | IT1165650B (da) |
| SE (1) | SE445928B (da) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4246342A (en) * | 1978-03-25 | 1981-01-20 | Toyo Jozo Kabushiki Kaisha | Process for the manufacture of pyruvate oxidase, and analytical method and kit for the use of the same |
| DE2950381A1 (de) * | 1979-12-14 | 1981-06-19 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und reagens zur bestimmulng von triglyceriden |
| US4316954A (en) | 1980-04-18 | 1982-02-23 | Eastman Kodak Company | Assay for neuraminic acids |
| JPS57144996A (en) * | 1981-02-27 | 1982-09-07 | Fuji Photo Film Co Ltd | Film for quantitative analysis |
| JPS57208998A (en) * | 1981-06-17 | 1982-12-22 | Fuji Photo Film Co Ltd | Multi-layered analytical film for determination of transaminase |
| DE3221730A1 (de) * | 1982-06-09 | 1983-12-15 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und analytische mittel zur aktivitaetsbestimmung von glutamat-oxalacetat-transaminase |
| DE3306719A1 (de) * | 1983-02-25 | 1984-08-30 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Pyruvatoxidase |
| JPS6034181A (ja) * | 1983-08-04 | 1985-02-21 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | ノイラミニダ−ゼの製造法 |
| IT1205338B (it) * | 1983-08-09 | 1989-03-15 | Miles Italiana | Composizione e metodo per la determinazione enzimatica di urea in liquidi organici |
| US4812400A (en) * | 1986-07-14 | 1989-03-14 | Steinman Gary D | Process for measuring sodium levels in biological fluids |
| US4965194A (en) * | 1986-08-21 | 1990-10-23 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Pyruvate oxidase and an analytical method using the same |
| JPS63137699A (ja) * | 1986-11-28 | 1988-06-09 | Fuji Photo Film Co Ltd | 酵素活性測定用分析要素 |
| DE3886225T2 (de) * | 1987-01-06 | 1994-03-31 | Asahi Chemical Ind | Pyruvat-Oxidase, ihre Herstellung und Verwendung. |
| JP3034969B2 (ja) * | 1991-03-01 | 2000-04-17 | 旭化成工業株式会社 | アンモニア、α−アミノ酸類またはα−ケト酸の高感度定量法および高感度定量用組成物 |
| US5462858A (en) * | 1993-12-29 | 1995-10-31 | Eastman Kodak Company | Dry multilayer analytical elements for assaying transaminases |
| CA2365668C (en) | 1999-03-17 | 2014-05-20 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | In vitro macromolecule biosynthesis methods using exogenous amino acids and a novel atp regeneration system |
| US7410755B2 (en) * | 2005-02-22 | 2008-08-12 | Discoverx | ADP detection using an enzyme-coupled reaction |
| CN101177686B (zh) * | 2006-11-10 | 2011-05-18 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 一种丙酮酸氧化酶基因、其重组表达质粒及转化的菌株 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK678474A (da) | 1974-02-15 | 1975-10-13 | Hoffmann La Roche | |
| US4246342A (en) | 1978-03-25 | 1981-01-20 | Toyo Jozo Kabushiki Kaisha | Process for the manufacture of pyruvate oxidase, and analytical method and kit for the use of the same |
-
1979
- 1979-03-21 US US06/022,442 patent/US4246342A/en not_active Expired - Lifetime
- 1979-03-22 DE DE2954385A patent/DE2954385C2/de not_active Expired
- 1979-03-22 DE DE2911481A patent/DE2911481C2/de not_active Expired
- 1979-03-23 DK DK119679A patent/DK156253C/da not_active IP Right Cessation
- 1979-03-23 FR FR7907379A patent/FR2420760B1/fr not_active Expired
- 1979-03-23 SE SE7902648A patent/SE445928B/sv not_active IP Right Cessation
- 1979-03-23 CA CA000324045A patent/CA1143640A/en not_active Expired
- 1979-03-23 GB GB8005344A patent/GB2043650B/en not_active Expired
- 1979-03-23 GB GB7910302A patent/GB2020018B/en not_active Expired
- 1979-03-26 IT IT67627/79A patent/IT1165650B/it active
- 1979-11-23 FR FR7928962A patent/FR2436182A1/fr active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IT7967627A0 (it) | 1979-03-26 |
| SE445928B (sv) | 1986-07-28 |
| FR2420760A1 (fr) | 1979-10-19 |
| DK119679A (da) | 1979-09-26 |
| DE2954385C2 (da) | 1989-10-26 |
| FR2436182A1 (fr) | 1980-04-11 |
| DK156253C (da) | 1989-12-11 |
| DE2911481A1 (de) | 1979-10-04 |
| GB2020018B (en) | 1982-11-10 |
| IT1165650B (it) | 1987-04-22 |
| FR2420760B1 (fr) | 1985-04-19 |
| DE2911481C2 (de) | 1985-01-24 |
| US4246342A (en) | 1981-01-20 |
| GB2020018A (en) | 1979-11-07 |
| GB2043650B (en) | 1982-10-20 |
| GB2043650A (en) | 1980-10-08 |
| SE7902648L (sv) | 1979-09-26 |
| CA1143640A (en) | 1983-03-29 |
| FR2436182B1 (da) | 1983-09-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK156253B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af pyruvatoxidase | |
| US5972671A (en) | Fructosyl amino acid oxidase and process for producing the same | |
| EP0204283B1 (en) | Uricase and a method for the preparation thereof | |
| GB1575249A (en) | Enzyme | |
| GB2105843A (en) | Fatty acid assay | |
| US4740465A (en) | Heat-resistant sarcosine oxidase N and process for producing the same | |
| WO1997031103A1 (fr) | Methode de determination du 1,5-anhydroglucitol | |
| US4237222A (en) | Lactate oxidase process for the manufacture thereof and analytical method and kit for the use of the same | |
| JP3041840B2 (ja) | 新規なグリセロールデヒドロゲナーゼ、その製法及びその用途 | |
| JPH0284178A (ja) | Ｎ−アセチルヘキソサミンデヒドロゲナーゼ、その製造法及び該酵素を用いるｎ−アセチルグルコサミン又はｎ−アセチルガラクトサミンの定量法及びその定量用キット | |
| US4965194A (en) | Pyruvate oxidase and an analytical method using the same | |
| KR950012760B1 (ko) | 신규 nad 합성효소 및 그 제조법 및 이를 이용한 측정방법 | |
| JP3782621B2 (ja) | ヒスタミンデヒドロゲナーゼ及びその製造法 | |
| JPH0284177A (ja) | Ｌ―フコースデヒドロゲナーゼ | |
| JP2984043B2 (ja) | ミオ・イノシトールデヒドロゲナーゼおよびその製造法 | |
| GB2030149A (en) | Process for l- -glycerophosphate oxidase | |
| JPS6368099A (ja) | ピルビン酸オキシダーゼを用いるピルビン酸の測定法およびその試薬 | |
| DK158681B (da) | Udstyr til pyrodruesyreanalyse. | |
| JP2684238B2 (ja) | アシルカルニチンエステラーゼ及びその製造法 | |
| JP3114838B2 (ja) | 新規なクレアチンアミジノハイドロラーゼおよびその用途 | |
| JP3824244B2 (ja) | コレステロール・エステラーゼの製造方法 | |
| SE441931B (sv) | Forfarande och medel for bestemning av pyrodruvsyra eller pyruvat | |
| JPH0661278B2 (ja) | ミオイノシトールの高感度定量法および定量用組成物 | |
| JP2678155B2 (ja) | 新規なｎａｄ合成酵素を用いた測定法 | |
| JPS5915637B2 (ja) | ピルビン酸オキシダ−ゼを用いる分析用キツトおよび分析法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |