DK154561B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af antivirale 9-substituerede 2-aminopurinderivater eller fysiologisk acceptable salte eller estere deraf - Google Patents

Description

DK 15456 1 B

Opfindelsen angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af kendte og hidtil ukendte antivirale purinderivater, som indeholder en acyclisk sidekæde i 9-stillingen med den i krav 1 angivne almene formel I, samt fysiologisk acceptable salte eller estere deraf. Forbindelserne og deres salte og estere er navnlig anvendelige som lægemidler til behandling af virusinfektioner hos pattedyr og mennesker.

Ogilvie og Gilien beskriver i Tetrahedron Letters, 21, 1980, side 327-330, syntesen af bis-(hydroxymethyl)- methoxymethylderivater af adenin, men der er ikke omtalt 1 o nogen biologisk virkning. I dette litteratursted afprøvedes forbindelsen med adenosin-deaminase og fandtes at være et dårligt substrat for enzymet og en svag kompeti-tiv inhibitor.

9-[(2-Hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methyl]guanin 1 5 og den tilsvarende 6-amino-analoge omfattes af den almene formel i beskrivelsen til engelsk patent nr. 1.523.865, men er ikke specielt angivet deri. I beskrivelsen til engelsk patent nr. 1.523.865 angives en gruppe acycliske nucleosider, navnlig 9-(2-hydroxyethoxymethyl)-derivater 20 af puriner, som har vist sig at besidde antiviral virkning mod forskellige klasser af DNA- og RNA-vira både in vitro og in vivo. Navnlig besidder disse forbindelser virkning mod herpes-gruppen blandt vira, hvilken gruppe omfatter H. simplex, H. zoster og H. varicella. Disse vi-25 ra forårsager sådanne sygdomme som herpes-keratitis, herpes-encephalitis, forkølelsessår, helvedesild og geni-talie-infektioner. Blandt de forbindelser, som er specielt omtalt i beskrivelsen til engelsk patent nr.

1.523.865, har 9-(2-hydroxyethoxymethyl)guanin, der i 30 øvrigt er kendt under betegnelsen acyclovir, vist sig at være særligt aktiv mod mange H-simplex-infektioner, men forbindelsen har den ulempe, at den er dårligt opløselig i vandige •systemer.

Det har nu overraskende vist sig, at forbindelser 35 med den nedenfor angivne formel I, i modsætning til andre 2

DK 154561 B

forbindelser, som er angivet i beskrivelsen til engelsk patent nr. 1.523.865 og tidligere afprøvet, besidder nyttig antiviral virkning, som er tilstrækkelig til in vivo behandling af virus, der forårsager rhinopneumonitis hos heste. Ved forsøg med mus har forbindelserne også vist sig at besidde fordelagtig virkning mod herpes-encepha-5 litis. Endvidere har forbindelserne den specielle fordel at besidde større opløselighed i vand i sammenligning med acyclovir, hvilket forbedrer muligheden for, at man bliver i stand til at opnå høje koncentrationer af lægemidlet i plasmaet uden risiko for renale komplikationer.

1q Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstilles

forbindelser med den almene formel I

R

15 H_N

2 I 1

CH„®CHCH OH i I 1 CH2OH

hvor R er en hydroxy- eller aminogruppe, og fysio-2q logisk acceptable salte og estere deraf.

Som eksempler på forbindelser med formlen I kan nævnes 9- [ (2-hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methyltøuanin og 9-[(2-hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methyl]-2,6-diamino-25 purin.

Som omtalt ovenfor har forbindelserne med formlen I den betydningsfulde fordel at besidde større opløselighed i vand end acyclovir. Således har de forbindelser med formlen I, hvor R er en hydroxygruppe eller aminogruppe, opløseligheder på henholdsvis 0,4 til 0,5% og 2 til 3% vægt/vægt i sammenligning med en opløselighed på 0,14% vægt/vægt for acyclovir.

Salte af forbindelserne med formlen I, der hensigtsmæssigt kan anvendes i terapien, omfatter fysiologisk acceptable salte af organiske syrer, såsom mælkesy-35 re, eddikesyre, æblesyre eller p-toluensulfonsyre, såvel som fysiologisk acceptable salte af mineralsyrer, som f. eks. saltsyre eller svovlsyre.

3

DK 154561 B

Som estere af forbindelserne med formlen I, der hensigtsmæssigt kan benyttes i terapien, kan nævnes estere, som indeholder en formyloxy-estergruppe eller en 5 Cl-16 <f .eks. C2.-6^ alkanoyloxy-estergruppe (f.eks. en acetoxy- eller propionyloxy-estergruppe), en eventuelt substitueret aralkanoyloxy-estergruppe (f.eks. en phe-nyl-C^_^-alkanoyloxy-estergruppe, såsom en phenyl-acet-oxy-estergruppe) eller en eventuelt substitueret aroyl-10 oxy-estergruppe (f.eks. en benzoyloxy- eller naphthoyl-oxy-estergruppe) ved den ene af eller begge endestillingerne i 9-sidekæden i forbindelserne med formlen I. De ovennævnte aralkanoyloxy- og aroyloxy-estergruppe kan være substituerede, eksempelvis med et eller flere halo-15 . genatomer (f.eks. chlor- eller bromatomer) eller med a-mino-, nitril- eller sulfamidogrupper, hvorhos aryIdelen i gruppen hensigtsmæssigt indeholder 6-10 carbonatomer.

Den ældre, men ikke tidligere offentliggjorte danske patentansøgning nr. 2277/82 omhandler en frem-20 gangsmåde til fremstilling af 9-(1,3-dihydroxy-2-pro-poxymethyl)guanin og farmaceutisk acceptable salte deraf, hvilken fremgangsmåde går ud på, at a) der foretages deacylering af en forbindelse med den almene formel

25 O

H CH2OCHCH2OH

30 CH2OH

hvor R er defineret som en acylgruppe, R"C=0, hvor R" er en ligekædet eller forgrenet carbonhydridkæde med 1-10 carbonatomer, hvorved fås 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxyme-thyl)guanin, eller at b) der foretages dearalkylering af en forbindelse med den almene formel 4

DK 154561 B

O

5 · Z CH2OCHCH2OR' ch2or' hvor R' er en beskyttelsesgruppe såsom benzyl, eventuelt 1 0 substitueret med 1 eller 2 alkoxygrupper, hvor alkyl er som heri defineret, fortrinsvis methoxy, eller lavere alkylgrupper, hvor alkyl er defineret som en ligekædet eller forgrenet carbonhydridkæde med 1-4 carbonatomer, fortrinsvis methyl, hvorved fås 9-(1,3-dihydroxy-2-prop-oxymethyl)guanin, eller ved at c) der foretages dearylalkylering og dearylering af en forbindelse med den almene formel

O

20 I! " H CH2OCHCH2OR' ch2or· 25 hvor R og R1 er som ovenfor defineret, hvorved fås 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)guanin, eller ved at d) 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)guanin omdannes til et farmaceutisk acceptabelt salt, eller ved 30 at e) et salt af 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanin omdannes til 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxy)guanin, eller ved at f) et salt af 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanin omdannes til et farmaceutisk acceptabelt salt her af.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af forbindelser med formlen I og fysiologisk acceptable salte og estere deraf er kendetegnet ved, at 5

DK 154561 B

(a) en forbindelse med den almene formel II

rV\ 5 HN / y i

CH OCHCH OW

1 1

CH OW

'p 10 hvor Y er et hydrogenatom eller en blokeringsgruppe,

Z er en gruppe med formlen -OY eller -NHY, hvor Y

har den før angivne betydning, og W og W hver især betegner et hydrogenatom eller en blokeringsgruppe, •idet mindst en af grupperne Y, W og W er en blokerings- 15 gruppe, idet dog symbolerne W, W hver især repræsenterer en acyl-blokeringsgruppe, når Z er en hydroxygruppe, underkastes deblokering til dannelse af en forbindelse med formlen I eller et salt eller en ester deraf, eller

20 (b) en forbindelse med den almene formel III

M

. 111

25 I

CH O.CHCH OH

ch2oh hvor enten M er en 6-hydroxy- eller -aminogruppe, 30 og G er en azidgruppe, et halogenatom eller en alkyl-thio- eller alkylsulfonylgruppe, som kan ombyttes med eller omdannes til en aminogruppe, eller G er en 2-aminogruppe, og M er en azidgruppe, et halogenatom eller en alkylthio- eller alkylsulfonylgruppe, 35 som kan ombyttes med eller omdannes til en amino-eller hydroxygruppe, eller et salt eller en ester deraf, omdannes til en forbindelse med formlen I eller et salt eller en ester deraf, eller 6

DK 154561 B

(c) en forbindelse med den almene formel IV R

5 N;S

v ' N f IV

CH-OCHCH OH

2 i

10 CHO

hvor R har den før angivne betydning, eller et salt eller en ester deraf, reduceres på i og for sig kendt måde, 15 hvorpå én eller flere af de efterfølgende omdannelser, i vilkårlig rækkefølge, eventuelt gennemføres: i) når det dannede produkt er en base, omdannes denne base til et fysiologisk acceptabelt syreadditionssalt deraf, 20 il) når det dannede produkt er et syreadditionssalt, omdannes dette salt til stambasen, iii) når det dannede produkt er en forbindelse med formlen I eller et salt deraf, omdannes denne forbindelse eller saltet deraf til en fysiologisk acceptabel 25 ester af forbindelsen eller saltet, og/eller iv) når det dannede produkt er en ester af en forbindelse med formlen I, omdannes denne ester til stamfor-bindelsen med formlen I eller et fysiologisk acceptabelt salt deraf.

30 1

I fremgangsmåde a) kan blokeringsgrupperne W, W

og Y eksempelvis vælges blandt acylgrupper, såsom alkanoylgrupper, f.eks. acetyl; aroylgrupper, f.eks.

benzoyl; arylmethylgrupper, f.eks. benzyl; eller tri- C, ,-alkylsilyl, f.eks. trimethylsilyl. Arylmethyl-blo-35 1-4 7

DK 154561 B

keringsgrupper kan eksempelvis fjernes ved hydrogenolyse, f.eks. ved hydrogenering i nærværelse af Raney-nikkel eller en palladium-katalysator, eller ved anvendelse af natrium i flydende ammoniak. Acyl-blokeringsgrupper kan 5 fjernes f.eks. ved hydrolyse under anvendelse af eksempelvis en amin, såsom methylamin eller triethylamin, hensigtsmæssigt i et vandigt medium. Trialkylsilyl-blo-keringsgrupper kan fjernes eksempelvis ved solvolyse, f.eks. med alkoholisk eller vandig ammoniak, eller ved 10 alkoholyse.

I fremgangsmåde a) kan blokeringsgrupperne W og Λ

W omfatte en enkelt = O-blokeringsgruppe, dvs. under dannelse af en forbindelse med formlen VII

15 f

AhX'*/ . 12,1 i r\ m CH o - C=0 20 L»/ der kan deblokeres ved hydrolyse, f.eks. ved behandling med en organisk amin, såsom methylamin eller triethyl-25 amin.

Omdannelse af en forbindelse med formlen III til en forbindelse med formlen I ved fremgangsmåde b) kan ske på forskellig måde. Eksempelvis kan M eller G hver især betegne en azid-gruppe, der kan reduceres til 30 en aminogruppe ved katalytisk hydrogenering under anvendelse af en passende katalysator, som f.eks. palladium. Alternativt kan M eller G hver især repræsentere et halogenatom eller en alkylthio- eller alkylsulfonylgrup-pe, der kan ombyttes med en aminogruppe ved aminolyse 35 under anvendelse af eksempelvis ammoniak. Til fremstilling af forbindelsen med formlen I, hvor R er en hydro-xygruppe, kan en forbindelse med formlen III, hvor M er en aminogruppe, omdannes eksempelvis ved behandling med {

DK 154561 B

s salpetersyrling. Alternativt kan en forbindelse med formlen III, hvor M er en mercapto- eller alkylthiogryppe, omdannes til en forbindelse med formlen I, hvor R er en hydroxygruppe, ved oxidation og hydrolyse på konventio-5 nel måde. Endvidere kan en forbindelse med fomlen III, hvor M er halogen, omdannes til en forbindelse med fomlen I, hvor R er hydroxy, ved behandling med 2-mercapto-ethanol og et alkalimetalalkoxid, f.eks. natriummethoxid.

Disse fremgangsmåder er sammen med andre konven-10 tionelle fremgangsmåder beskrevet i Fused Pyrimidines,

Part II, Purines Ed. by D.J.Brown (1971), Wiley-Inter-science. Ved en yderligere alternativ fremgangsmåde kan en forbindelse med formlen III, hvor M er en aminogruppe, omdannes til en forbindelse med fomlen I, hvor R er en 15 hydroxygruppe, ved behandling med et deaminerende enzym, såsom adenosin-deaminase.

Reduktion af en forbindelse med formlen IV i fremgangsmåde c) kan eksempelvis ske ved omsætning med et passende aldehydreducerende middel, som f.eks. natri-20 umborhydrid, natriumcyanoborhydrid, tetraethylammonium-borhydrid eller pyridin/diboran/tetrahydrofuran/trifluor-eddikesyre.

De som mellemprodukter i syntesen af forbindelserne med formlen I anvendte forbindelser med fomel II 25 til VII kan fremstilles på konventionel måde, f.eks. ved fremgangsmåder, der er beskrevet i beskrivelsen til engelsk patent nr. 1.523.865. Ved disse fremgangsmåder anvendes mellemprodukter, der fremstilles ud fra på simpel måde substituerede puriner, som kan være tilgængelige 30 i handelen, eller som kan fremstilles i overensstemmelse med i og for sig velkendt teknik, og som er omtalt i litteraturen, som f.eks. den før omtalte lærebog.

Således kan forbindelser med formlerne II og III almindeligvis fremstilles ved anvendelse af en frem-35 gangsmåde, der er analog med fremgangsmåde d), dvs. omsætning af en passende purin, hvor 2-, 6- og/eller 9-stillingerne eventuelt er beskyttede , f.eks. med acyl-eller trialkylsilylgrupper af den ovenfor beskrevne art, 9

DK 154561 B

med en forbindelse med formlen VI, hvor de terminale hy-droxygrupper eventuelt er beskyttede med acyl- eller tri-alkylsilylgrupper af den beskrevne art, og derefter om 5 nødvendigt og/eller ønsket fjernelse af en vilkårlig af beskyttelsesgrupperne før anvendelsen i fremgangsmåde a) eller b).. Alternativt kan en forbindelse med formlen II, hvor W og W"*" hver især betegner en benzoyl-bloke-ringsgruppe, fremstilles ved eksempelvis at behandle en 1 0 tilsvarende 9-bis-(chlormethyl)methoxymethyl-purinanalog med et benzoyleringsmiddel, f.eks. natriumbenzoat, idet den som udgangsmateriale anvendte purinanalog eksempelvis kan fremstilles ved behandling af en forbindelse med formlen V, der eventuelt er beskyttet i 2- og/eller 1 5 · 6-stillingerne, med en forbindelse med formlen ach2.ochch2ci ch2ci 20 hvor A har den før angivne betydning.

Forbindelser med formlen IV kan fremstilles på konventionel måde, f.eks. som beskrevet i det efterfølgende eksempel 2 eller på analog måde.

Ved den foreliggende opfindelse tilvejebringes 25 forbindelser med formlen I og fysiologisk acceptable salte og estere deraf til anvendelse ved behandling eller profylakse af en virussygdom hos et dyr, f.eks. et pattedyr, eller et menneske. Forbindelserne er specielt anvendelige til behandling eller profylakse af sygdomme, 30 der forårsages af forskellige DNA-vira, såsom herpes-infektioner, f.eks. af herpes simplex, varicella eller zoster, eller cytomegalovirus,såvel som sygdomme, der forårsages af hepatitis B- eller Epstein-Barr-virus. Forbindelserne med formlen I kan også anvendes til be-35 handling eller profylakse af papillom- eller vorte-virusinfektioner. Foruden anvendelse i den humanmedicinske terapi kan forbindelserne med formlen I administreres til dyr til behandling eller profylakse af virussygdom- 10

DK 154561 B

me, f.eks. hos pattedyr. Eksempelvis er forbindelserne med formlen I særligt nyttige til behandlingen af rhino-pneumonitis hos heste.

Forbindelserne med formlen I og de fysiologisk 5 acceptable salte eller estere deraf (i det følgende under ét betegnet som de aktive bestanddele) kan administreres på en hvilken som helst måde, der er passende for den lidelse, som skal behandles, og egnede administreringsmåder omfatter oral, rectal, nasal, topisk (her-10 under i kindhulen og under tungen), vaginal og parenteral (herunder subcutan, intramuskulær, intravenøs, intradermal, intrathecal og epidural) administrering. Man vil forstå, at den foretrukne administreringsmåde kan variere med eksempelvis lidelsen hos recipienten.

15 For enhver af de ovenfor angivne anvendelser og indikationer vil den nødvendige mængde af en aktiv bestanddel (som ovenfor defineret) afhænge af en række faktorer, herunder hvor alvorlig den tilstand er, som skal behandles, og hvem recipienten er, og det vil i 20 sidste ende være lægens eller dyrlægens sag at fastlægge mængden. Til hver af disse anvendelser og indikationer vil en passende, effektiv dosis imidlertid i almindelighed ligge i området fra 0,1 til 250 mg pr. kg legemsvægt af recipienten pr. dag, fortrinsvis i området fra 1 til 25 100 mg pr. kg legemsvægt pr. dag,og mest foretrukkent i området fra 5 til 20 mg pr. kg legemsvægt pr. dag. En optimal dosis ligger på ca. 10 mg pr. kg legemsvægt pr. dag. (Med mindre andet er angivet, er alle vægtmængder af aktiv bestanddel beregnet som stamforbindelse med 30 formel I: for salte og estere deraf må tallene forholdsmæssigt forøges). Den ønskede dosis indgives fortrinsvis i form af 2, 3, 4 eller flere underdoser med passende mellemrum dagen igennem. Disse underdoser kan indgives i enhedsdosis-former, f.eks. indeholdende 1Q-1000 mg, for-35 trinsvis 20-500 mg og mest foretrukkent 100-400 mg aktiv bestanddel pr. enhedsdosis-form.

Selv om det er muligt at indgive de aktive be-

DK 15456 1 B

11 standdele alene, foretrækkes det at indgive dem i form af farmaceutiske formuleringer. Formuleringerne irddrldsrde fcQ±>in3elssr franstillet ifølge cpElnMs^n,både til veterinær og til human anvendelse, omfatter mindst in aktiv bestanddel 5 som ovenfor defineret sammen med in eller flere acceptable bærere for denne bestanddel og eventuelt andre terapeutiske bestanddele. Bæreren eller bærerne må være "acceptable" i den forstand, at de er kompatible med de øvrige bestanddele i formuleringen og ikke er skadelige .10 for recipienten.

Formuleringerne omfatter sådanne formuleringer, som er egnede til oral, rectal, nasal, topisk (herunder i kindhulen og under tungen), vaginal eller parenteral • (herunder subcutan, intramuskulær, intravenøs, intrader-15 mal, intrathecal og epidural) administrering. Formuleringerne kan hensigtsmæssigt foreligge i enhedsdosisform og kan fremstilles ved en vilkårlig af de i den farmaceutiske teknik velkendte fremgangsmåder. Sådanne fremgangsmåder omfatter den foranstaltning at bringe den 20 aktive bestanddel sammen med bæreren, som udgøres af en eller flere hjælpebestanddele. I almindelighed fremstilles formuleringerne ved på ensartet og grundig måde at bringe den aktive bestanddel sammen med flydende bærere eller findelte faste bærere eller begge dele og derpå om 25 nødvendigt forme produktet.

Formuleringer indeholdende forbindelser fremstillet ifølge opfindelsen som er egnet til oral indgivelse, kan foreligge som særskilte enheder, såsom kapsler, oblater eller tabletter, der hver indeholder en forudbe-30 stemt mængde af den aktive bestanddel, eller de kan foreligge i form af et pulver eller granulat, i form af en opløsning eller en suspension i en vandig væske eller en ikke-vandig væske, eller i form af en flydende olie-i-vand-emulsion eller en flydende vand-i-olie-emulsion.

35 Den aktive bestanddel kan også dispenseres i form af en bolus, et electuarium eller en pasta.

En tablet kan fremstilles ved kompression eller formning, eventuelt sammen med én eller flere hjælpebe-

DK 154561 B

12 standdele. Komprimerede tabletter kan fremstilles ved i en passende maskine at komprimere den aktive bestanddel i en fritstrømmende form, såsom i form af et pulver eller granulat, eventuelt blandet med et bindemiddel, et smø-5 remiddel, indifferent fortyndingsmiddel, konserveringsmiddel, overfladeaktivt middel eller dispergeringsmiddel.

Formede tabletter kan fremstilles ved i en passende maskine at forme en blanding af den pulverformige forbindelse befugtet med et indifferent, flydende fortyndings-middel. Tabletterne kan eventuelt overtrækkes eller forsynes med kærv og kan formuleres, så at de giver langsom eller kontrolleret frigivelse af den indeholdte aktive bestanddel.

Til infektioner i øjet eller andre ydre vævsdele, 15 f.eks. i munden og huden, anvendes formuleringerne fortrinsvis i form af en topisk salve eller creme, indeholdende den aktive bestanddel i en mængde på f.eks. 0,075 til 20% vægt/vægt, fortrinsvis 0,2 til 15% vægt/yægt og mest foretrukkent 0,5 til 10% vægt/vægt. Ved formulering 20 i en salve kan de aktive bestanddele anvendes sammen med enten et paraffinisk eller et med vand blandbart salvegrundlag. Alternativt kan de aktive bestanddele formuleres i en creme med et olie-i-vand-cremegrundlag.

Om ønsket kan den vandige fase i cremegrundlaget 25 indeholde eksempelvis mindst 30% vægt/vægt af en polyvalent alkohol, dvs. en alkohol med to eller flere hydroxy Igrupper, som f.eks. propylenglycol, butan-l,3-diol, mannitol, sorbitol, glycerol og polyethylenglycol og blandinger deraf. De topiske formuleringer kan hensigts-30 mæssigt indeholde en forbindelse, som forøger absorptionen eller penetrationen af den aktive forbindelse gennem huden eller andre angrebne områder. Som eksempler på sådanne midler til forøgelse af dermal penetration kan nævnes dimethylsulfoxid og beslægtede analoge.

35

Oliefasen i emulsioner indeholdende forbindelser fremstillet ifølge opfindelsen kan dannes ud fra kendte bestanddele på kendt måde. Selv om fasen kan indeholde blot et emulgeringsmiddel (også betegnet

DK 154561B

13 som rensemiddel eller emulgent), indeholder den hensigtmæssigt en blanding af mindst ét emulgeringsmiddel med et fedtstof eller en olie eller både et fedtstof og en olie. Fortrinsvis inkorporeres et hydrofilt 5 emulgeringsmiddel sammen med et lipofilt emulgeringsmiddel, der virker som stabilisator. Det foretrækkes også at inkorporere både en olie og et fedtstof. Tilsammen udgør emulgeringsmidlet eller -midlerne med eller uden stabiliseringsmidlet eller -midlerne det såkaldte emulgerings-1q voks, og vokset udgør sammen med olien og/eller fedtstoffet det såkaldte emulgerings-salvegruridlag, som danner den olieagtige disperse fase i cremeformuleringerne.

Emulgeringsmidler og emulsions-stabilisatorer, som er egnede til anvendelse i formuleringen indeholdende forbindelser fremstillet ifølge opfindelsen, 1 5 omfatter Tween 60, Span 80, ketostearylalkohol, myristyl-alkohol, glyceryl-mono-stearat og natrium-laurylsulfat.

Valget af passende olier eller fedtstoffer til formuleringen foretages med henblik på opnåelse af de ønskede kosmetiske egenskaber, eftersom opløseligeheden 20 af den aktive forbindelse i de fleste af de olier, der med sandsynlighed vil blive anvendt i farmaceutiske e-mulsions-formuleringer, er meget lav. Cremen bør således fortrinsvis være et ikke-fedtende, ikke-plettende og bortvaskeligt produkt med en konsistens, der er egnet 2^ til undgåelse af lækage fra tuber eller andre beholdere.

Der kan anvendes mono- eller dibasiske alkylestere med lige eller forgrenet kæde, såsom di-isoadipat, isocetyl-stearat, propylenglycol-diester af kokosnød-fedtsyrer, isopropylmyristat, decyloleat, isopropylpalmitat, butyl-30 stearat, 2-ethylhexylpalmitat eller en blanding af estere med forgrenet kæde, der er kendt som "Cromadol CAP", idet de tre sidstnævnte er de foretrukne estere. Disse kan anvendes alene eller i kombination afhængig af de ønskede egenskaber. Alternativt kan der anvendes højt-35 smeltende lipider, såsom hvid vaseline og/eller paraffinolie eller andre mineralolier.

Formuleringer, som er egnede til topisk admini- 14

DK 15456 1 B

stration til øjet, omfatter også øjendråber, hvori den aktive bestanddel er opløst eller suspenderet i en passende bærer, navnlig et vandigt opløsningsmiddel for den aktive bestanddel. Den aktive bestanddel er i sådanne 5 formuleringer fortrinsvis til stede i en koncentration på 0,5 til 20%, hensigtsmæssigt 0,5 til 10% og navnlig omkring 1,5% vægt/vægt.

Formuleringer, der er egnede til topisk administration i munden omfatter pastiller (eller bolsjer el-10 ler tabletter) indeholdende den aktive bestanddel i et aromatiseret grundlag, sædvanligvis sucrose og akacie eller tragant,eller pastiller indeholdende den aktive bestanddel i et indifferent grundlag, som f.eks. gelatine og glycerin, eller sucrose og akacie? eller mundskyl-15 lemidler indeholdende den aktive bestanddel i en passende flydende bærer.

Formuleringer til rectal administrering kan foreligge i form af et suppositorium med en passende grundlag indeholdende eksempelvis kakaosmør eller et salicy-20 lat.

Formuleringer, der er egnede til nasal administrering, hvor bæreren er et fast stof, indeholder et groft pulver med en partikelstørrelse på eksempelvis i området 20 til 500 mikron, der administreres på samme måde som 25 ved indtagelse af snus, dvs. ved hurtig inhalering gennem næsepassagen fra en pulverbeholder, som holdes tæt op til næsen. Egnede formuleringer, hvor bæreren er en væske, til administrering eksempelvis som næsespray eller som næsedråber, indeholder vandige eller olieagtige 30 opløsninger af den aktive bestanddel.

Formuleringer, der er egnede til vaginal administrering, kan foreligge i form af pessarer^ tamponer, * cremer, geler, pastaer, skum eller spray-formuleringer, som foruden den aktive bestanddel indeholder sådanne bæ-35 rere, som i den omhandlede teknik er kendte som velegnede.

Formuleringer, der er egnede til parenteral administrering, omfatter vandige og ikke-vandige sterile in- 15

DK 154561 B

jektionsopløsninger, der kan indeholde antioxidanter, puffere, bakteriostatiske midler og opløste stoffer, som gør formuleringen isotonisk med blodet hos patienten, som skal modtage injektionen; og endvidere vandige og 5 ikke-vandige sterile suspensioner, som kan indeholde suspensionsmidler og fortykkelsesmidler. Formuleringerne kan dispenseres i enhedsdosis- eller multidosis-beholdere, f.eks. forseglede ampuller og medicinglas, og kan opbevares i frysetørret (lyofiliseret) tilstand, som kun 1q kræver tilsætning af den sterile flydende bærer, f.eks. vand til injektion, umiddelbart før brugen. Ekstemporalt fremstillede injekionsopløsninger og -suspensioner kan fremstilles ud fra sterile pulvere, granulater og tabletter af den før beskrevne art.

^5 Foretrukne enhedsdosis-formuleringer er sådanne, som indeholder en daglig dosis eller en enhed daglig sub-dosis af en aktiv bestanddel, som ovenfor omtalt, eller en passende brøkdel deraf.

Det vil forstås, at foruden de i det foregående 20 specielt omtalte bestanddele kan formuleringer indeholdende forbindelser fremstillet ifølge opfindelsen indholde andre, i den omhandlede teknik sædvandige midler under hensyntagen til arten af den formulering, der er tale om, f.eks. kan formuleringer, som er 25 egnede til oral administrering, indeholde aromatise-rende midler.

Veterinære kompositioner kan indeholde mindst én aktiv bestanddel som ovenfor defineret, sammen med et veterinært bærestof for denne.

2o Veterinære bærere er materialer, som er nyttige med henblik på administrering af kompositionen, og de kan være faste, flydende eller luftformige materialer, som i øvrigt er indifferente eller acceptable i veterinærmedicinen og er kompatible med den aktive bestanddel.

25 Disse veterinære kompositioner kan administreres oralt, parenteralt eller på hvilken som helst anden ønsket måde.

Til oral administrering kan kompositionerne være i fom af en tablet, et granulat, en drik til veterinært

DK 154561 B

16 brug, en pasta,en oblatkapsel, en kapsel eller et kosttilskud. Granulater kan fremstilles ved den velkendte teknik bestående i vådgranulering, forkompression eller "slugging". De kan indgives dyr eller mennesker i et in-5 different flydende hjælpemiddel, så at der dannes en drik, eller i en suspension med vand eller oliebasis. Fortrinsvis inkorporeres der yderligere hjælpebestanddele, som f.eks. et dispergeringsmiddel. Disse formuleringer indeholder fortrinsvis 15-85% af den aktive bestanddel.

1 0

En pasta kan formuleres ved at suspendere den aktive bestanddel i et flydende fortyndingsmiddel. Et stiv-nings- eller fortykkelsesmiddel kan inkorporeres sammen med et befugtningsmiddel eller en humectant, hvis det flydende fortyndingsmiddel er vand. Såfremt der ønskes 1 5 en emulsionspasta, bør der hensigtsmæssigt inkorporeres et eller flere overfladeaktive midler. Fra 25 til 80 vægt% af disse pastaformuleringer kan udgøre den aktive bestanddel.

I kosttilskud er den aktive bestanddel alminde- 20 ligvis til stede i store mængder i forhold til hjælpebe-standdelene, og tilskuddene kan tilsættes direkte eller efter forudgående blanding eller fortynding. Som eksempler på hjælpebestanddele for sådanne formuleringer kan nævnes faste, oralt indtagelige bærestoffer, såsom majs-25 mel, sojamel, hvede-"shorts", sojagryn, spiselige vegetabilske materialer og fermentationsremanenser. Den aktive bestanddel inkorporeres sædvanligvis i én eller flere af hjælpebestanddelene og fordeles grundigt og ensartet ved formaling, tromleblanding eller omrøring med sædvan-30 ligt apparatur. Formuleringer indeholdende fra 1 til 90 vægt% aktiv bestanddel er egnede for tilsætning til kost eller foder.

Til behandling af herpes-infektioner i heste kan det være nødvendigt med en oral eller parenteral dosis

IS

på fra 0,1 til 250 mg pr. kg legemsvægt pr. dag, fortrinsvis fra 2 til 100 mg pr. kg pr. dag. Dosen kan opdeles i særskilte enheder, som indgives med regelmæssige mellemrum dagen igennem, med daglig gentagelse i op til 17

DK 154561 B

14 dage,eller indtil infektionen er slået ned. Til virusinfektioner i andre dyr kan dosis variere afhængig af dyrets størrelse og metabolisme. Kompositionerne kan indgives i enhedsdosis-form, f.eks. i form af en tablet 5 nogle få gange om dagen, i en mængde på fra 10 til 1000 mg pr. enhedsdosis.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen forklares nærmere i de efterfølgende eksempler. 1-7.

1 o Eksempel 1.

a) 9-[(2-Benzoyloxy-l-benzoyloxymethyl)ethoxymethyl]-gua-nin.

Til en 0°C kold opløsning af en acetylerende bian-15 ding (fremstillet ved at blande 7 ml eddikesyreanhydrid, 3 ml iseddikesyre og 0,1 ml koncentreret svovlsyre) sattes under magnetisk omrøring 1,0 g tetrabenzoyl-methylen-bis-2-glycerol. A.T.Ness, R.M.Hann & C.S.Hudson, J. Amer.

Chem. Soc. Nov. 1943, 2215.

20 Opløsningen omrørtes ved en temperatur på fra 3 til 10°C i 30 minutter og hældtes derpå i en blanding af 260 ml is og vand. Den sure opløsning ekstraheredes 3 gange med chloroform, og de organiske ekstrakter vaskedes med saltvand og tørredes over natriumsulfat.

25 Den filtrerede chloroformopløsning inddampedes i vakuum, og den resterende olie rensedes ved søjlechroma-tografi på silicagel. Ved eluering med dichlormethan opnåedes 2-0-(acetoxymethyl)-1,3-bis(0-benzoyl)-glycerol.

Proton- og carbon-13-NMR-spektrene var i overensstemmelse 30 med den ønskede struktur.

En blanding af 0,49 g 2,9-diacetylguanin, 1,22 g 2-0-(acet-oxymethyl)-1,3-bis(O-benzoyl)-glycerol og 0,013 g p-toluensulf onsyre i 30 ml tør toluen opvarmedes under tilbagesvaling og omrøring i 18 timer. Opløsningsmidlet fjernedes ved mcmentanfordairpning, og rema-35 nensen opløstes i 35 ml kogende methanol. Der tilsattes 1 ml n-bu-tanol, og blandingen opvarmedes under tilbagesvaling i 5 minutter til hydrolyse af 2-acetamidogruppen. Blandingen inddampedes i vakuum ved en badtemperatur på 30°C og om-

DK 154561 B

18 krystalliseredes 1 gang i methanol og 1 gang i formamid, hvorved der opnåedes 9-[(2-benzoyloxy-l-benzoyloxymeth-yl)ethoxymethyl]-guanin. Elementaranalyse viste, at produktet indeholdt 0,75 mol formamid, og NMR-spektret 5 var i overensstemmelse med strukturen. TLC på silicagel med 20% methanol i chloroform gav én plet Rf = 0,49. Smp.

= 220-222°C.

b) 9-[(2-Hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methyU-guanin.

0,6 g 9-(2-benzoyloxy-l-(benzoyloxymethyl)ethoxy- 1 0 methyl)-guanin opvarmedes i en 1:1 blanding af methanol og 40%'s vandig methylamin på dampbad i 1 time. Opløsningsmidlerne fjernedes i vakuum, og remanensen omkrystalliseredes 2 gange i vand, hvorved der opnåedes 9- [(2-hydroxy-1-hydroxymethylethoxy)methyl]-guanin i form 15 o af et hydrat med 1/4 mol hydratvand. Smp. 23Q C (sønderdeling) .

Eksempel 2 9-[(2-Hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methyl]-guanin.

En blanding af 111,8 g l,4-dichlorbutan-2,3-diol, 42,2 g paraformaldehyd og 22 ml bortrifluorid-etherat i 450 ml acetonitril opvarmedes med tilbagesvaling under omrøring, indtil de faste stoffer var opløst. Der tilsat-^ tes molekylsigte, og reaktionsblandingen opvarmedes med tilbagesvaling i yderligere 3 timer. Blandingen afkøledes og tørredes ved tilsætning af mere molekylsigte, filtreredes og inddampedes i vakuum.

Den olieagtige remanens sattes til 250 ml af en ^ mættet natriumbicarbonatopløsning og ekstraheredes 3 gange med lige så store rumfang renset ether. Etherekstrak-terne tørredes over natriumsulfat, filtreredes og inddampedes i vakuum.

Den resterende væske destilleredes ved det med vandstrålesuger tilvejebragte tryk (16 mm), og den ved 35 q 99-109 C kogende fraktion opsamledes og gav 4,5-bis-(chlormethyl)-1,3-dioxolan.

En blanding af 76,5 g 4,5-bis(chlormethyl)-1,3- 19

DK 154561 B

dioxolan og 258 g natriumbenzoat i 1500 ml tør dimethyl-formamid omrørtes under opvarmning til en temperatur på 142°C i 18 timer.

Blandingen afkøledes og filtreredes, og de faste 5 stoffer vaskedes med ether. Moderluden og vaskevæskerne inddampedes i vakuum til tørhed og underkastedes 3 gange fordeling mellem dichlormethan og vand. De organiske lag vaskedes med vand og tørredes over natriumsulfat. Efter filtrering og momentanfordampning rensedes remanensen 10 ved hurtig-chromatografi på silicagel i dichlormethan, hvorved 4,5-bis(benzoyloxymethyl)-1,3-dioxolan opnåedes i form af en tyk olie. En analyseprøve opnåedes ved at lade en portion af olien krystallisere i luft. Smp. 66,5-• 68°C.

15 Til en til 0°C afkølet opløsning af 100 ml eddi- kesyreanhydrid og 0,3 ml koncentreret svovlsyre sattes portionsvis 114,2 g 4,5-bis(benzoyloxymethyl)-1,3-dioxolan, idet der opretholdtes en indre temperatur på 0-5°C.

Man lod opløsningen antage stuetemperatur, hvorpå den 20 opvarmedes i 3 timer ved dampbadtemperatur (indre temperatur 92°C). Efter afkøling hældtes opløsningen på 600 ml is og vand og ekstraheredes 3 gange med renset ether.

De etheriske ekstrakter vaskedes 1 gang med vand og 1 gang med 5%'s natriumbicarbonatopløsning og sluttelig 25 med saltopløsning. De etheriske ekstrakter tørredes (Na2S0^), og den klare ravfarvede opløsning filtreredes og inddampedes i vakuum, hvorved der opnåedes 2-acetoxy- 3-acetoxymethoxy-l,4-butandiyl-dibenzoat. En analyseprøve opnåedes ved omkrystallisation i benzen-hexan. Smp.

30 56-58°C.

En blanding af 5,75 g 2,6-dichlorpurin og 14,1 g 2-acetoxy-3-acetoxymethoxy-l,4-butandiyl-dibenzoat opvarmedes til 140°C ved det af vandstrålesuger tilvejebragte tryk, indtil blandingen havde dannet en flydende 35 masse. Efter yderligere 10 minutters opvarmning afkøledes reaktionsblandingen,og der tilsattes under omrøring 150 mg p-toluensulfonsyre. Opvarmning under det af vandstrålesuger fremkaldte tryk genoptoges i 20 minutter, 20

DK 154561 B

hvorpå reaktionsopløsningen afkøledes og 3 gange underkastedes fordeling mellem dichlormethan og vand. De organiske ekstrakter vaskedes 1 gang med mættet natriumbi-carbonatopløsning, 2 gange med vand og sluttelig 1 gang 5 med saltopløsning. Efter tørring over natriumsulfat og filtrering fjernedes opløsningsmidlet ved momentanfordampning, og det resterende gule skum rensedes ved søjle-chromatografi. Efter eluering med dichlormethan til fjernelse af ikke-purine biprodukter gav eluering med 50%'s 1 g ethylacetat-hexan og fordampning en farveløs olie med et for det ønskede 9-(2-acetoxy-3-(2,6-dichlor-9H-purin-9-yl)-methoxy-1,4-butandiyl-dibenzoat.

En blanding af 11,5 g 2-acetoxy-3-(2,6-dichlor-9H-purin-9-yl)methoxy-1,4-butandiyldibenzoat og 2,6 g 15 natriumazid i 50 ml ethanol-vand i rumfangsforholdet 1:1 opvarmedes med tilbagesvaling og under omrøring i 4 timer.

Den heterogene blanding inddampedes i vakuum, og inddampningsresten underkastedes fordeling mellem ether 20 0<3 van<^· Ved yderligere 2 vaskninger af den vandige fase og inddampning af de forenede, tørre etheriske ekstrakter opnåedes 2-acetoxy-3(2,6-diazido-9H-purin-9-yl)methoxy- 1,4-butandiyl-dibenzoat. NMR- og IR-spektrerne var i overensstemmelse med den ønskede struktur.

25 En opløsning af 5,0 g 2-acetoxy-3-(2,6-diazido- 9H-purin-9-yl)methoxy-1,4-butandiyldibenzoat i 200 ml tetrahydrofuran og 20 ml methanol indeholdende 190 mg 5%'s palladium-på-kul-katalysator omrystedes under et hydrogentryk på 3,5 kg/cm^ ved stuetemperatur i 3 dage.

30 Blandingen filtreredes gennem en pude af "Celite", og opløsningen inddampedes i vakuum. Den sirupagtige remanens omkrystalliseredes i methanol, hvorved der opnåedes 2-acetoxy-3-(2,6-diamino-9H-purin-9-yl)methoxy-1,4-butan-diyl-dibenzoat med smp. 192-194°C. 0,2 g 2-acetoxy-3-35 (2,6-diamino-9H-purin-9-yl)methoxy-1,4-butandiyl-diben zoat i 1Q0 ml methanol og 35 ml 40%'s vandig methylamin opvarmedes på dampbad i 1 time, hvorpå opløsningen inddampedes i vakuum. Remanensen blev udrevet med ether til fjernelse af N-methylbenzamid og omkrystalliseredes i

DK 15456 1 B

21 ethanol, hvorved der opnåedes 3-(2,6-diamino-9H-purin-2)— yl)methoxy-l,2,4-butantriol med smp. 167-169°C. ‘

En opløsning af 0,7 g (2,4 mmol) 3-(2,6-diamino-9H-purin-9-yl)methoxy-l,2,4-butantriol og 0,6 g (2,8 mmol) 5 natriumperiodat i 50 ml vand omrørtes ved stuetemperatur i 3,5 timer. Et bundfald dannedes i løbet af 5 minutter ved forening af de to reaktanter.

Blandingen afkøledes, filtreredes og vaskedes med vand, hvorved der opnåedes 2—[(2-amino-l,6-dihydro-6-<10 oxo-9H-purin-9-yl)methoxy]-3-hydroxypropanal. Et masse-spektrum af dette produkt gav m/e M = 253.

Til en suspension af 150 mg (0,592 mmol) af aide-hydderivatet i 20 ml vand sattes portionsvis 18 mg (0,47 mmol) natriumborhydrid. Opløsningen omrørtes natten over Ί5 ved stuetemperatur og afkøledes, og pH-værdien indstilledes på 6 med 4 N vandig saltsyre. Det dannede bundfald frafiltreredes, hvorved der opnåedes 9-[(2-hydroxy-l-hy-droxymethylethoxy)methyl]-guanin med smp. 248-250°C» 2o Eksempel 3 9-[(2-Hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methyl]-guanin.

Til en opløsning af 0,5 g 2„:6-diamino-9-[ (2-hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methyl]-purin i 10 ml dobbeltdestil-leret vand sattes tilnærmelsesvis 600 μΐ af en suspen-25 sion af adenosin-deaminase fra kalvemaveslimhinde i ammoniumsulfat (Sigma). Blandingen inkuberedes ved 37°C og kontrolleredes med u.v., indtil reaktionen var afsluttet (26 dage). Med mellemrum inddampedes reaktionsblandingen i vakuum ved stuetemperatur og genopløstes i vand 30 til fjernelse af den dannede ammoniak, således at opløsningens pH holdtes mellem 7 og 7,5.

Opløsningen inddampedes i vakuum, og remanensen omkrystalliseredes 1 gang i methanol og 2 gange i vandif hvorved der opnåedes 9-[(2-hydroxy-l-hydroxymethyletho-35 xy)methyl]-guanin i form af et hydrat med 1/4 mol hydrat-' vand. Smp. 230°C (sønderdeling).

DK 154561 B

22

Eksempel 4 9-[(2-Hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methyl]-2,6-diamino-purin.

a) 9-[(2-Benzoyloxy-l-benzoyloxymethylethoxy)methyl]-2,6-

C

dichlorpurin.

En blanding af 1,16 g (6 mmol) 2,6-dichlorpurin og 2,7 g (7,3 mmol) 2-0-(acetoxymethyl)-1,3-bis(O-benzyl)-glycerol opvarmedes under magnetisk omrøring og under et med vandstrålesuger tilvejebragt tryk til en oliebadtem- 10 peratur på 155°C i ca. 25 minutter. Den opnåede, klare gule væske afkøledes, og den dannede tykke, gule, glas- agtige masse opløstes i benzen og rensedes ved hurtig- chromatografi på silicagelsøjle (diameter = 6 cm). Ved indledende eluering med benzen-dichlormethan i forholdet 15 1:1 og med dichlormethan alene fjernedes biprodukter, og den ønskede 9-[(2-benzoyloxy-l-benzoyloxymethylethoxy)-methyl]-2,6-dichlorpurin opnåedes i en mængde på 1,77 g ved eluering med dichlormethan og ether i forholdet 1:1.

En yderligere portion af 9-isomeren forurenet med 7-iso- 20 mer elueredes med 100%1 s renset ether.

H1-NMR-Spektret og TLC (silicagel i dichlormethan) viste en ringe mængde urenhed i hovedportionen, som er et hvidgult skum.

25 b) 9-[(Benzoyloxy-lrbenzoyloxymethylethoxy)methyl]-2,6-diazidopurin.

En heterogen blanding af 1,77 g (3,53 mmol) 9-[(2-benzoyloxy-l-benzoyloxymethyl)ethoxy)methyl]-2,6-di-chlorpurin og 0,45 g (6,88 mmol) natriumazid i 1Q ml 2Q vand-alkohol i rumfangsforholdet 1:1 opvarmedes med tilbagesvaling under magnetisk omrøring i 3 timer. Opløsningsmidlerne fjernedes ved momentanfordampning, og den resterende olie blev udrevet med vand til fjernelse af natriumchlorid. Olien optoges i varm alkohol og afkøle-35 des, og efter filtrering opnåedes et hvidt fast stof, som efter tørring havde et rødligt skær. Smp. 144-145°C. En yderligere portion opnåedes fra moderluden ved inddamp-ning og udrivning med ethanol, hvorved materialet fik 23

DK 15456 1 B

tilstrækkelig renhed til at kunne forenes med det oprindelige bundfald med henblik på næste trin. NMR- og tfV-spektrerne var i overensstemmelse med den postulerede struktur.

5 Kval. U.V.toppe: pH 1,0 Xmax = 240, 305, 275 (shdr) pH 13,0 Xmax = 300, 27Q (sdr).

c) 9-[(2-Hydroxy-1-hy droxymethy1ethoxy)methyl]-2,6-dia-minopurin.

En blanding af 1,68 g (3,26 mmol) af produktet 10 fra trin b) i 120 ml tetrahydrofuran-methanol i rumfangsforholdet 1:1 omrystedes med 118 mg 5%'s palladium-på-kul-katalysator ved stuetemperatur og under et begyn-delsestryk på 3,5 kg/cm2 H2 i 72 timer. Blandingen filtreredes gennem en pude af "Celite'", og opløsningsmidlerne 15 fjernedes ved momentanfordampning. Den resterende olie optoges i varm benzen og hexan, hvilket bevirkede indtrædelse af størkning. Efter afkøling frafiltreredes det faste stof, hvorved der opnåedes 9-[ (2-benzoyloxy-l-:ben-zoyloxymethylethoxy)methyl] -2,, 6-diaminopurin, som gav et 20 tilfredsstillende NMR (H)-spektrum. Det faste stof opløstes i en minimal mængde methanol og omrørtes med et lige så stort rumfang 40%*s vandig methylamin ved stuetemperatur, indtil TLC (silicagel i 40%'s methanol-dichlor-methan) viste, at der var sket fuldstændig hydrolyse* 25 Opløsningen inddampedes i vakuum, og remanensen omkrystalliseredes i ethanol-acetone, hvorved der opnåedes 9-t(2-hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methyl]-2,6-diamine-purin, som gav et tilfredsstillende H'-NMR-spektrum og tilfredsstillende elementaranalyse. Smp. 182-184°C.

30

Eksempel 5 2,6-Diamino-9-[(2-hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methyl]— 9H-purin.

En blanding af 33,6 g ((0,2 mol) 2,6-diaminopurim-35 hydrat og 400 ml xylen opvarmedes under tilbagesvaling og med vandudskillelse i en Dean-Stark-udskiller. Der tilsattes 63,84 g (0,625 mol) eddikesyreanhydrid, og reaktionsblandingen opvarmedes til afdestillering af en

DK 154561 B

24 blanding af eddikesyre og xylen (toptemperatur 115°C). Temperaturen hævedes til 125°C ved slutningen af en 4 timers reaktionstid. Til blandingen sattes 0,95 g (0,005 mol) p-toluensulfonsyre-hydrat og 74,47 g (0,3 mol) 2-5 0-(acetoxymethyl)-1,3-bis(O-acetyl)glycerol, og reakti onsblandingen opvarmedes til afdestillering af en blanding af xylen og eddikesyre ved 125°C. Destillationstemperaturen hævedes til 135°C ved slutningen af en 3 timers reaktionstid. Reaktionsblandingen afkøledes, og rå- 10 produktet opnåedes ved momentanfordampning og udrivning af remanensen med acetone. Ved omkrystallisation i ethanol opnåedes det analytisk rene mellemprodukt 2,6-diacet-amido-9-[(2-acetoxy-l-acetoxymethylethoxy)methyl]-purin.

Det faste stof opløstes i ethanol og opvarmedes med et lige så stort rumfang 40%'s vandig methylamin i 5 minutter på dampbad. Ved momentanfordampning og omkrystallisation af remanensen i ethanol opnåedes 2,6-diamino-9-[(2-hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methylj-9H-purin.

20

Eksempel 6 a) 9-[(2-Hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methyl]-2-chlor-adenin.

En opløsning af 2,0 g (4 mmol) 9-[(2-benzoyloxy- (l-benzoyloxymethylethoxy)methyl]-2,6-dichlorpurin i 65 25 ml mættet methanolisk ammoniak opvarmedes i en bombe til 85°C i 20 timer. Opløsningen inddampedes i vakuum, og der omkrystalliseredes 2 gange i ethanol, hvorved der opnåedes analytisk ren 9-[(2-hydroxy-l-hydroxymethyleth- oxy)methyl]-2-chloradenin.

30 b) 9-[(2-Hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methyl]-2-chlor-" ’ 6-hydrokypurin.

Til en opløsning af 500 mg (1,83 mmol) 9-[(2-hy-droxy-1-hydroxymethylethoxy)methyl]-2-chloradenin i 10 35 ml iseddikesyre sattes 0,63 g (9,15 mmol) natriumnitrit portionsvis i løbet af et tidsrum på 45 minutter. Reaktionsblandingen omrørtes ved stuetemperatur i 4 timer og inddampedes derpå til tørhed i vakuum. Inddampningsrestei 25

DK 154561 B

krystalliseredes 1 gang i vand og 1 gang i ethanol, hvorved der opnåedes analytisk ren 9-[(2-hydroxy-l-hydroxy-methylethoxy)methyl]-2-chlor-6-hydroxypurin.

c) 9- [ (2-Hydroxy-l-hydroxymethylethoxy) methyl-guanin-, 5 ' En opløsning af 0,724 g (1 mmol) 9-[(2-hydroxy- 1-hydroxymethylethoxy)methyl]-2-chlor-6-hydroxypurin i 60 ml mættet methanolisk ammoniak opvarmedes til 120°C i en bombe i 25 timer. Den afkølede opløsning inddampedes i vakuum, og der omkrystalliseredes 2 gange i vand, hvor-10 ved der opnåedes analytisk ren 9-[(2-hydroxy-l-hydroxy-methylethoxy)methyl]-guanin. Smp. 220-222°c.

Eksempel 7 a) 5-Benzyloxy-l,3-dioxan-2-on.

15 En opløsning af 182 g (1 mol) 2-O-benzylglycerol (Carbohydrate Research 91 (1981) 85-88 G. Chittenden), 128 ml (1,1 mol) 2,6-lutidin og 550 ml (1,1 mol) 20%'s phosgen i toluen omrørtes ved stuetemperatur i 2 dage. Opløsningsmidlet fjernedes i vakuum, og remanensen ren— 20 sedes ved fraktioneret destillation, hvorved der opnåedes 157 g (75%) 5-benzyloxy-l-,3-dioxan-2-on.

b) 5-Hydroxy-l,3-dioxan-2-on.

En opløsning af 177 g (0,85 mol) 5-benzyloxy-2,3-^ dioxan-2-on i 100 ml tetrahydrofuran-ethanol i forholdet 1:1 emeystedes med 16 g 5%1 s palladium-på-kul ved atmosfæretryk, indtil den teoretiske mængde hydrogen var forbrugt. Katalysatoren frafiltreredes, og filtratet lededes gennem en pude af "Celite'” og inddampedes i vakuum·, hvorved der opnåedes 94,5 g (80%) 5-hydroxy-l,3-dioxan— 2-on.

c) 5,5-Methylendioxy-bis(1,3-dioxan-2-on).

En blanding af 59 g (0,5 mol) 5-hydroxy-l,3-dlo-xan-2-on, 45 g (0,5 mol) paraformaldehyd og 24 ml bor-35 trifluorid-etherat i 80 ml tør tetrahydrofuran omrørtes ved stuetemperatur med 30 g 3A-mo lekylsigte i 18 timer,.

Blandingen filtreredes, og filtratet inddampedes i vakuum. Den resterende olie opløstes i ether og ekstra-

DK 154561 B

26 heredes 2 gange med 5%'s vandig natriumbicarbonatopløs-ning og 2 gange med vand. De etheriske ekstrakter tørredes over natriumsulfat, filtreredes og inddampedes, hvorved der opnåedes 5,5-methylendioxy-bis(l,3-dioxan-2-on).

^ d) (2-Oxo-l,3-dioxan-5-yl)oxymethylacetat.

Til en til 0°C afkølet opløsning af 10Q ml eddi-kesyreanhydrid og 0,3 ml koncentreret svovlsyre sattes portionsvis 100,4 g (0,33 mol) 5,5-methylendioxy-bis-(l,3-dioxan-2-on), idet der opretholdtes en indre tempe-10 ratur på 0-5°C. Opløsningen omrørtes derpå ved stuetemperatur i 18 timer. Reaktionsopløsningen hældtes på 600 ml is og vand og ekstraheredes 3 gange med et lige så stort rumfang renset ether. Ekstrakterne tørredes over natriumsulfat, filtreredes og inddampedes, hvorved der ^ opnåedes (2-oxo-l,3~dioxan-5-yl)oxymethylacetat.

e) 2-Acetamido-l,9-dihydro-9-[(2-oxo-l,3-dioxan-5-yl)oxy-methyl]-purin-6-on.

En blanding af 6,53 g (27,8 mmol) diacetylguanin, 0,217 g p-toluensulfonsyre-monohydrat og 9,16 g (48,2 mmol) (2-oxo-l,3-dioxan-5-yl)-oxymethylacetat i 60 ml tør xylen opvarmedes under tilbagesvaling og omrøring i 18 timer. Opløsningsmidlet fjernedes ved inddampning i vakuum, og remanensen rensedes ved søjlechromatografi på 22 silicagel, idet den tørre 9-isomer elueredes med 10%'s methanol i dichlormethan. Ved omkrystallisation i methanol opnåedes 5,4 g (60%) 2-acetamido-l,9-dihydro-9-[(2-oxo-1,3-dioxan-5-yl) oxymethyl) -6H-purin-6-ron.

f) 9-[(2-Hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methyl]-guanin.

30 En opløsning af 0,63 g (1,96 mmol) 2-acetamido- 1,9-dihydro-9-[(2-oxo-l,3-dioxan-5-yl)oxymethyl-6H-purin- 6-on i 30 ml 40%'s vandig methylamin opvarmedes på dampbad i 1/2 time og inddampedes derpå i vakuum. Remanensen omkrystalliseredes i vand, hvorved der opnåedes 9 — [(2 — 3 5 hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methyl]-guanin.

De efterfølgende eksempler 8-12 er eksempler på farmaceutiske formuleringer, hvor den 27

DK 154561 B

aktive forbindelse er en forbindelse med formlen I eller et fysiologisk acceptabelt salt eller en fysiologisk aacceptabel ester deraf.

Eksempel £ 5 Tablet

Aktiv forbindelse 100 mg

Lactose 200 mg

Stivelse 50 mg

Polyvinylpyrrolidon 5 mg 10 Magnesiumstearat 4 mg 359 mg

Tabletter fremstilledes af de angivne bestanddele ved vådgranulering efterfulgt af komprimering.

^ 5 Eksempel 9

Injicerbar opløsning

Aktiv forbindelse 0,775 g

Steril,pyrogenfri, pH 7-phosphatpuffer til 25 ml 2^ Eksempel 10

Ophthalmisk opløsning

Aktiv forbindelse 1,0 g

Natriumchlorid, analysekvalitet 0,9 g

Thiomersal 0,001 g 25 Renset vand . til 100 ml pH indstillet til 5,5-7,5

Eksempel 11 Oliebaseret pasta

Kaolin (fast fortynder) 20,0% vægt/vægt

Mineralolie (flydende fortynder) 60,0% vægt/vægt

Aktiv forbindelse 20,0% vægt/vægt

Komponenterne blandedes til dannelse af en pasta af ensartet konsistens.

35 φ

Mineralolie er en højtkogende fraktion af en raffineret jordolie indeholdende mindst 96% ikke-sulfonerbart materiale.

DK 154561 B

28

Eksempel Μ Kosttilskud - Pellets

Aktiv forbindelse 1%

Cerealbasis 99%

C

De to bestanddele blandedes, og blandingen lededes derpå til et vilkårligt konventionelt foder-pellet-teringsanlæg.

Eksempel 13 1 Ω

In vivo-virkning af 9-[(2-hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)-methyl]-guanin og acyclovir mod rhinopneumonitis-virus hos heste.

Metode.

Syriske cremefarvede han-hamstere, 21-24 dage 1 5 gamle, lige afvænnede og med en vægt på 40-50 g sattes i bur i grupper på 5 og fik vand og foder ad libitum.

Der anvendtes heste-rhinopneumonitis-virus (EHV-1), hamster-adapteret vaccine-stamme "Pneumabort". Vaccinen fortyndedes 10 ^ i vævskultur-væske, og denne stamvæske 20 opbevaredes i 1 ml portioner i forseglede medicinglas ved -70°C. På dag 0 blev de hamstere, der skulle inficeres, indgivet 0,2 ml stam-vaccinevirus, fortyndet y-derligere 2 x 10 ^ i phosphatpufret saltvand, subcutant i venstre side.

25

Der fremstilledes vandige opløsninger af 9-[(2-hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methyl]-guanin {i det følgende betegnet som 759U) og acyclovir i steril destilleret vand i de nedenfor angivne koncentrationer.

Forsøg 1

Intraperitoneal indgivelse: fra dag 0 til dag 4, inklusive, blev hamstere indgivet 759U eller acyclovir i vandig opløsning i opdelte doser 2 gange daglig, idet koncentrationen af 759U varierede på følgende måde, nem- 35 lig 5mg/ml til indgivelse af en dosis af størrelse på 100 eller 50 mg/kg/dag, 1,2 mg/ml til en dosis på 20 mg/kg/dag, 0,18 mg/ml til en dosis på 4 mg/kg/dag og 0,036 mg/ml til en dosis på 2 mg/kg/dag. Ubehandlede kon-

DK 154561 B

29 trolhamstere blev indgivet et lige så stort rumfang steril destilleret vand.

Resultater.

5 Resultaterne er angivet i den efterfølgende tabel.

Antal i Behandling, Dag, kumulativ mortalitet gruppe mg/kg/dag 2 3 4 ς e 7 intraperi- _tonealt_ 10 50/acyclovir 012566 10 10 100/acyclovir 0 0 1* 2* 2* 3* 10 100/759U 0 0 0 0 0 1* 10 50/759U 000000 10 20/759U 000000 10 4/759U 000000 15 10 2/759U 0 0 0 0 0 0 10 ubehandlet 0 5 9 10 10 10 * ikke-virusspecifikke dødsfald.

Konklusion.

20

En dosis af acyclovir af en størrelse på 100 mg/ kg/dag intraperitonealt i 5 dage begyndende efter 5 timers forudgående infektion var almindeligvis nødvendig til forhindring af virus-induceret mortalitet. Til sammenligning gav 759U i en dosis på 2 mg/kg/dag intraperi— 25 tonealt fuldstændig bekæmpelse«

Forsøg 2 (a,)

Oral indgivelse af 759U.

3q Der fremstilledes en sfcamopløsning af 759U i ste ril destilleret vand med en koncentration på 0,304 mg/li-ter, hvilken opløsning derpå fortyndedes i tre trin til 0,101 og 0,034 mg/ml. Hamstere fik i 5 dage medicinbol-digt drikkevand, idet der begyndtes efter en forudgående 35 infektion på 5 timer. En kontrolgruppe fik ikke-medicin— ' holdigt vand.

DK 154561 B

30

Resultater.

$

Antal i Behandling Kumulativ mortalitet gruppe mg/kg/dag ' Dag 759U oralt 234567 5 -- 10 39 0 0 0 0 0 0 10 13 0 0 0 0 0 0 10 3 011111 10 ubehandlet 1 5 10 10 10 10 i n 3|t 'u Beregnet ud fra den gennemsnitlige daglige indtagelse.

Forsøg 2(b)

Oral indgivelse af acyclovir.

Acyclovir opløstes i steril destilleret vand til ^ en koncentration på 2 mg/ml under tilsætning af lidt natriumhydroxid og opvarmning til 42°C til lettelse af opløsning. Hamstere fik medicinholdig drikkevand, indeholdende acyclovir i en koncentration på 2 mg/ml, i 5 dage, idet der begyndtes efter forudgående infektion i 5 90 timer. Den orale indgivelse resulterede i en dosis af en størrelse på ca. 100 mg/kg/dag. Der opstilledes en kontrolgruppe, som fik ikke-medicinholdig vand.

Resultater.

25 Antal i Behandling Kumulativ mortalitet gruppe mg/kg/dag Dag acyclovir oralt 23456 12 100 0 2 5 7 8 12 ubehandlet 0 6 12 12 12 30

Konklusion.

Acyclovir viste dårlig effektivitet over for EHV-1 ved oral indgivelse i en dosis på 100 mg/kg/dag i 5 dage, medens 759U var fuldstændig effektiv ved oral ind-givelse i en dosis på 13 mg/kg/dag, og med kun begrænset mortalitet ved en dosis af en størrelse på 3 mg/kg/dag.

DK 154561B

31

Eksempel 14

Sammenligning af in vivo-virkninger af 759U og déns 6-amino-analoge (457U) mod heste-rhinopneumonitisvirus. Materialer og metoder.

5 Hamstere.

50 WO/CR syriske han-hamstere anbragtes på tilfældig måde i bure i 10 grupper på hver 5 og fik vand og føde(frø- eller kornblanding) ad libitum. Hamsterne vejedes på dagene -3, 0, 4 og/eller ved død/aflivning.

10 Vandforbruget noteredes i dagene -3 til 0 til 4.

Virus og infektion.

EHV-1 Pneumabort-vaccinestammen, opbevaret i foran -1 -1

af en 10 opløsning, fortyndes yderligere 10 i PBS

til infektion. På dag 0 fik hamsterne i grupperne 1-9 15 indgivet 0,2 ml virus-podevæske subcutant i venstre side, 5 ækvivalent med ca. 2 x 10 PFU (plague-dannende enheder).

Forbindelser og lægemiddelindgivelse.

457U og 759U opløstes i drikkevand til en koncen-2q tration på 0,075 mg/ml. Idet der regnes med en gennemsnitlig daglig indtagelse på 134 ml/mg legemsvægt, vil dette resultere i en daglig dosis på omkring 10 mg/kg. Læ-gemiddelholdigt vand blev tilført fra ca. 5 timer efter forudgående infektion og i 96 timer, som angivet neden- 25 £0r·

Gruppe Lægemiddelindgivelse

1-3 759U

4-6 ' 457U

7-9 ubehandlet/inficeret 2Q 10 ubehandlet/uinficeret

Resultater.

De kumulative mortalitetsmønstre er angivet i efterfølgende tabel. Lægemiddelindtagelsen beregnedes ed fra vægten af dyrene og det i forsøgstiden opnoterede 35 vandforbrug.

Der forekom kun ét dødsfald af virusinduceret hepatitis iblandt de 15 med 457TJ behandlede hamstere, sammenlignet med 14 dødsfald blandt 15 ubehandlede kontrol-

DK 154561 B

32 dyr og ingen dødsfald blandt 15 hamstere, der blev indgivet 759U.

Tabel 5 -—-

Gruppe Vand,kone. Vand,kone. Gennemsnitlig Kumulativ mortalitet af 457U af 759U indtagelse (ud af 15) på dag mg/ml mg/ml mg/kg/dag 2 3 4* 1-3 - 0,075 6,6 000 4-6 0,075 - 6,8 011 10 __ 7-9 - - - 0 9 14 10* - - - 0 0 0

Konklusioner.

15 Forbindelse 457U, diaminoderivatet af 759U, hin drede ved oral indgivelse i drikkevand i en dosis på tilnærmelsesvis 7 mg/kg/dag næsten fuldstændig EHV-l-indu-ceret mortalitet blandt syriske hamstere, medens 759U fuldstændig hindrede EHV-l-induceret mortalitet.

20

Eksempel 15

In vitro-aktivitet af 759U mod Herpes simplex type 1.

Metode.

60 mm cellekultur-plader af plast tilsåedes med 25 en VERO-cellesuspension (6 ml 2 x 10** celler/ml) i VERO-cellevækstsubstrat indeholdende 5% føtalt kalveserum, 10% "Eagle's minimal essential medium", 0,11% natrium-bicarbonat, 0,25% Crys.tam.yc in (50.000 enheder/ml natrium-benzylpenicillin B.P. og 50 mg/ml streptomycinsulfat 30 B.P.). Pladerne rystedes forsigtigt til sikring af fuldstændig dispersion af cellerne, og derpå inkuberedes kulturerne ved 37°C i en atmosfære af 5% CC^/luft natten over til opnåelse af fuldstændig konfluens. Vækstmediet erstattedes derpå med 2 ml virus (Herpes simplex type 1)-35 podevæske i phosphatpufret saltvand (PBS). Viruskoncentrationen var instillet til at fremkalde dannelse af 200-400 plaques/plade. Der afsattes et tidsrum på 1 time til virusabsorption ved 37°C i 5% COj/luft, hvorefter 33

DK 154561 B

pladerne drænedes, og der tilsattes et overliggende medium (8 ml) ved 42°C. Det overliggende medium bestod af 0/6% agarose, 2% føtalt kalveserum, 10% "Eagle's minimal essential medium", 0,11% natriumbicarbonat og 0,25% Cry-5 stamycin.

Af den aktive forbindelse fremstilledes dobbeltfortyndinger i mikromolaritet i det overliggende medium (belægningen), og der tilførtes replikat-kulturer med belægningen af vedligeholdelsesmedium indeholdende en 10 række koncentrationer af forbindelsen. Ligeledes fremstilledes der virus-kontrolkulturer og ikke-inficerede kulturer. Man lod belægningen størkne ved stuetemperatur, inden kulturerne igen sattes i. inkubatoren ved 37°C i 5% CC^/luft i 4 dage. Derpå fikseredes kulturerne med 10% 15 formalin i PBS i fra 30 minutter til 1 time. Belægningen fjernedes, og cellerne farvedes med 0,05%'s vægt/volumen methylviolet i 20%'s methanol. De resulterende plagues taltes og blev angivet som en procentdel af plaque-fæl-lingen for de ubehandlede virus-kontrolkulturer. Disse 20 værdier afsattes derpå i afhængighed af log^Q af forbindelsens koncentration, og IC^q—værdierne, der repræsenterer den mængde af forbindelsen, som er nødvendig til reduktion af plaque-tællingen med 50%, aflæstes af åen resulterende dosis-responslinie.

25 Resultater.

759U Acyclovir

IC50 μΜ - IC50 UM

Forsøg 1 0,09 0,17

Forsøg 2 0,05 0,075 30 Forsøg 3 0,036 0,11

Middel 0,059 0,118

Konklusion.

759U har større aktivitet in vitro mod Herpes simplex Type 1 end acyclovir.

• I

DK 154561 B

34

Eksempel .16

In vivo-aktivitet af 759U mod herpes-encephalitis. Fremstilling af stam-virus.

Svejtsiske mus, som vejede 12-15 g, bedøvedes 5 med ether og fik intracerebralt indpodet 0,025 ml af et vævskultur-præparat af type 1 herpes-virus. Musene undersøgtes dagligt for tegn på herpes-encephalitis, dvs. cerebral irritation førende til paralyse, coma og død.

Mus dræbtes, når de viste tidlige tegn på cerebral irri-10 tation. Musenes indre organer undersøgtes for tegn på infektion med bakterier eller andre agenser, og såfremt der ikke fandtes nogen unormaliteter, fjernedes hjernerne aseptisk og formaledes til en blød pasta. Homogenatet resuspenderedes i 4 ml vævskultur-vedligeholdelsesmedium 15 for hver hjerne og blandedes med glycerol i forholdet 2:1. Musehjerner vejer tilnærmelsesvis 400 mg, og præparatet repræsenterer således en fortynding på 10 ^.

De således fremstillede stam-viruspræparater ti-treredes i mus til bestemmelse af LD^Q-titeren ved at 20 pode mus intracerebralt med ti-dobbelte fortyndinger af stam-viruspræparatet og derefter undersøge to gange dagligt for tegn på infektion. LD^g-Titeren beregnedes ved Kårber's metode.

Metode.

25 Grupper på 5 mus inficeredes intracerebralt med stam-virus fortyndet til at give en dosis på omkring 300 x LD^g. Den afprøvede forbindelse blev indgivet oralt 2 gange dagligt i form af en suspension og i en dosis på 100 mg/kg. Dyrene undersøgtes 2 gange dagligt, og over-30 level ses tiderne noteredes til h.ærmeste halve dag. Doseringen gennemførtes i 5 dage, og den totale observationsperiode var 14 dage. Overlevelsestider omregnedes til reciprokke værdier, og middel-overlevelsestiden bestemtes for hver gruppe.(L. Bauer, D.J., Brit. J. Exp. Path., 35 3-960,· 41, 130) .

35

DK 154561B

Acyclovir 759U ubehandld:

Gennemsnitlig reciprok overlevelsestid ' r '

Konklusion.

Ved oral indgivelse på intracerebralt inficerede 5 mus var aktiviteten af 759U meget større end aktiviteten af acyclovir under de samme betingelser.

Eksempel J7

Sammenligning af in vivo-aktiviteten af 759U og 457U mod herpes-encephalitis.

10 759U og 457U afprøvedes in vivo mod herpes-ence phalitis hos mus i sammenligning med acyclovir og dens 6-amino-analoge, 2-amino-9-(2-hydroxymethoxymethyl)-ade-nin (134U).

Materialer og metoder.

15 Mus.

CD.l mus, der vejede 16-20 g, fremskaffedes fra Charles River, Manston, Kent, England. Dyrene holdtes i bure i grupper på ca. 10 og fik føde og vand ad libitum«.

Antivirale forbindelser.

20 Forbindelserne, nemlig acyclovir, 134U, 759U og 457U, fremstilledes i form af suspensioner eller opløsninger i sterilt vand i en koncentration på 20 mg/kg før hvert forsøg og opbevaredes ved 4°C under doseringsperioden .

25 Virus.

ICI-stammen af Herpes simplex-virus type 1 anvendtes til alle forsøg i en koncentration på 300 LD^.g (10^ pfu)/ml. Fortyndinger ud fra stampræparater af vi- 7 rus (10 pfu)/ml fremstilledes i PBS "A".

30 Testmetoder.

Testmetoden er analog med den i eksempel 13 tæskrevne .

Der gennemførtes 3 forsøg, i hvilke der undersøgtes tre indgivelsesmåder for forbindelsen: i) subcu- 36

DK 154561 B

tan, ii) oral og iii) intreperitoneal. Forbindelserne blev indgivet i en dosis på 100 mg/ml to gange dagligt i 4 1/2 dag, begyndende 2-3 timer efter infektion.

Resultater.

5 De gennemsnitlige reciprokke overlevelsestider efter oral, subcutan (s.c.) og intraperitoneal (i.p.) indgivelse af de antivirale forbindelser er vist i efterfølgende tabel.

Behandlingsgruppe Gennemsnitlig reciprok overlevelsestid 10 oral s.c. i.p.

Virus-kontrolforsøg 300 LD50 0,334 0,344 0,307

Acyclovir 100 mg/kg/dosis 0,237 0,174 0,236

15 134U

100 mg/kg/dosis 0,222 0,226 0,231

759U

100 mg/kg/dosis 0,146 0,084 0,093

457U

20 100 mg/kg/dosis 0,155 0,102 0,077

Sammenligning af de to grupper af behandlinger med lægemidler, nemlig acyclovir og 134U med 759U og 457U, viser, at sidstnævnte gruppe havde den største antivirale virkning. Forskellene mellem de to grupper var i høj 25 grad signifikant ved alle de tre indgivelsesmåder.

Claims (7)

1. CH OCHCH OH I 1 CH2OH hvor R betegner en hydroxy- eller aminogruppe, eller fysiologisk acceptable salte eller estere med alkansyrer, phenyl-C.j_4alkansyrer, benzoesyre og naphthoesyrer deraf, kendetegnet ved, at (a) én forbindelse med den almene formel II z

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af 9-substituerede 2-aminopurinderivater med den almene formel I: όό Η N N \n·' 2 i

2. Fremgangsmåde ifølge krav la) , kendetegnet ved, at blokeringsgrigpperne W, og Y er ^valgt ^ q blandt C^_^-alkanoyl-, aroyl—, arylmethyl- og tri-C^^-alkylsilyl-blokeringsgrupper».

3„ Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at deblokeringen 'udføres ved hydrolyse eller hydrogenolyse. 15

4„ Fremgangsmåde ifølge krav 1b), kende tegnet ved, at M eller G hver især repræsenterer en azidgrappe, som omdannes til en aminogruppe ved katalytisk hydrogenering.

2. JL jr fY\ Jk / T T HN ^ / -1--1 Y il <CH_OCHCH_OW 2 I z

25 CH^W1 hvor Y er et hydrogenatom eller en blokeringsgruppe,, Z er en gruppe med formlen -0Y eller -NHY, hvor Y har den før angivne betydning, og W og W hver især betegner et hydrogenatom eller en blokeringsgruppe, 30 i idet mindst en af grupperne Y, W og W er en blokerrngs- 1 " gruppe, idet dog symbolerne W„ W hver især repræsenterer en acyl-blokeringsgruppe, når Z er en hydroxy-gruppe, underkastes deblokering til dannelse af en forbindelse med formlen I eller et salt eller en 35 ester deraf, eller (b) en forbindelse med den almene formel III 4 \ DK 154561 B Μ Λλ / III

5. Fremgangsmåde ifølge krav 1b), kende— 20. e g n e t ved, at M eller G hver især betegner et halogenatom eller en alkylthio- eller alkylsulfio-nyl-gruppe, som omdannes til en aminogruppe ved aonmno-lyse.

5 G CH O.CHCH OH CH2OH hvor enten M er en 6-hydroxy- eller -aminogruppe, 10 og G er en azidgruppe, et halogenatom eller en alkyl-thio- eller alkylsulfonylgruppe, som kan ombyttes med eller omdannes til en aminogruppe, eller G er en 2-aminogruppe, og M er en azidgruppe, et halogenatom eller en alkylthio- eller alkylsulfonylgruppe, 15 som kan ombyttes med eller omdannes til en amino-eller hydroxygruppe, eller et salt eller en ester deraf, omdannes til en forbindelse med formlen I eller et salt eller en ester deraf, eller (c) en forbindelse med den almene formel IV 20 r :ώΟ h2n I IV

25 C&jOCHCH^OH CHO hvor R har den før angivne betydning, eller et salt eller en ester deraf, reduceres på i og for sig kendt måde, 30 hvorpå én eller flere af de efterfølgende omdannelser, i vilkårlig rækkefølge, eventuelt gennemføres: 1 når det dannede produkt er en base, omdannes denne base til et fysiologisk acceptabelt syreadditionssalt 35 deraf, ii) når det dannede produkt er et syreadditionssalt, omdannes dette salt til stambasen, iii) når det dannede produkt er en forbindelse med formlen I eller et salt deraf, omdannes denne forbindelse DK 154561 B 3 9 eller saltet deraf til en fysiologisk acceptabel tester af forbindelsen eller saltet, og/eller iv) når det dannede produkt er en ester af en forbindelse med formlen I, omdannes denne ester til stamfor- 5 bindeisen med formlen I eller et fysiologisk acceptabelt salt deraf.

6. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kende — 25tegne± ved, at R repræsenterer en hydroxygriaggpe.

7. "Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R repræsenterer en aminogruppe.. 1 35