CS594082A2 - Method of antiviral effective 2-amino-9-/(2-hydroxy-1-hydroxymethyl-ethoxy)methyl/purines production - Google Patents

Description

R W Á·· VT 2 τ„ · 4* ý ti X i? * · -X, · 'Ό Xí

> O Q 5 C· V) xj< m .^ »< r·'~< m.?

CO

b 'LLJ Č 01 3 AA2 A$

r™

O 4i>. oe cz- to 4^ ο- ν-

Autor vynálezu 8CHABFFFR HOWART) 0OKN, RALFIOH(Norťň Ofirolina? Sp. st. a.)

Majiťel patentu TRP VELLOOMP ΤΟΤΤΝΡΛΤΤΟΝ LIMITED. LONDÝN (Velké Británie) Název vynálezu Způsob výroby antivirálnč účinných 2~amino"9“L (S-íTydroxy-l “byúroxyinetbyle t b o xy) me t T ly 1j ρυτ inů Příhléěeno

Velké Británie

•nxr efi A r* OF ..c v Páévo přednosti od 11. 08. 81 (81 24444)

P 8 A Η A 1,

8RA

L ! T W

Tento vynález se týká způsobu výroby 2-amino--9-C(2-hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methyl3purinů·

Tyto sloučeniny mají antivirální účinky, a proto se zdetaké pojednává o farmaceutických a veterinárních směsích,které obsahují tyto sloučeniny a o jejich použití přiléčení virových infekcí u savců. K.K. Ogilvie a M.P.Gillen v Tetrahedron Letters21. 327 - 330 (1980) popisují syntézu bis(hydroxymethyl)-methoxymethylových derivátů adeninu obecného vzorce

HO

HO kde

B

znamená adenino v? "X f která spočívá v kondenzaci β-chlorpuripp s lýj-^dibenzyl·oxy-2-chlormethoxypropanem v dimethylfořs^J^tu s ob-sahem triethylaminu po dobu 16 hodin za teploty míst- nosti. Získaná sloučenina byla podrobena biologickýmtestům, ale nebyla zjištěna žádná biologická aktivita.

Podle uvedené zprávy byla sloučenina testována adeno-sindearainázou a bylo zjištěno, že je špatným substrátempro enzym a slabým kompetetivním inhibitorem. V britském patentovém spisu δ. 1 523 865jsou popsány substituované puriny obecného vzorce R* ,1 R' CH-X-CH-CH-R5 R6 R3 R4 kde znamená atom kyslíku nebo atom síry, R' ,1 představuje atom halogenu, hydroxyskupinu,atom vodíku, merkaptoskupinu, alkylthioskupinu, 4 -

alkoxyskupinu, aminoskupinu, alkylaminoskupi-nu, dialkylaminoskupinu nebo azidoskupinu, o R znamenáá atom vodíku, atom halogenu, amino- skupinu nebo azidoskupinu, R^ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s přímým, rozvětveným nebo cyklickým řetězcem, hydroxy-alkylovou skupinu, benzyloxyalkylovou skupinunebo skupinu fenylovou, R^ znamená atom vodíku, hydroxyskupinu nebo alkylo- vou skupinu, c R představuje atom vodíku, hydroxyskupinu, amino- skupinu, alkylosou skupinu, hydroxyalkylovouskupinu, benzoyloxyskupinu, benzoyloxymethy-lovou skupinu, benzyloxyskupinu, sulfamoyloxy-skupinu, fosfátovou skupinu, karboxypropionyl-oxyskupinu, acetoxyskupinu nebo substituovanoukarbamoylovou skupinu vzorce -NH-CO-Z, ve kterém Z znamená alkylovou skupinu, arylovouskupinu nebo aralyklovou skulinu popřípadě

- 4a - substituovanou jednou nebo několika sulfo-nylovými skupinami, aminoskupinami, karbamoylo-vými skupinami nebo atomy halogenu, g R znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu, 2 3 s podmínkou, že když X znamená atom kyslíku, R , R , R^ a R^ znamenají vždy atom vodíku a R^ značí hydroxysku-pinu, atom vodíku nebo benzyloxyskupinu, potom R^ nezna-mená aminoskupinu nebo metfeylaminoskupinu a když R jfjÉznamená atom vodíku, potom R nepředstavujeatom chloru, jakož i jejich solí.

Tyto sloučeniny se podle britského patentu δ. 1 523 865 vyrábějí třemi odlišnými způsoby a to bučíodštěpením skupiny OY, kde Y znamená alifatický neboaromatický acyl nebo arylmethylovou skupinu, a je na místěskupiny R^ ve vyráběném produktu, hydrolýzou nebohydrogenolýzou za vzniku sloučeniny svrchu uvedeného obec-ného vzorce, ve kterém R znamená hydroxyskupinu, nebo převedením atomu halogenu, aminoskupiny, hydroxysku-piny, azidoskupiny, aralkoxyskupiny nebo merkaptoskupiny

- 4b - substituujících kruhový heterocyklický systém na atomuuhlíku v místě, kde je v konečném produktu přítomen bužjeden ze substituentů R a S nebo jsou přítomny obatyto substituenty, nebo nechá se reagovat heterocyklická sloučenina odpovídajícíkruhovému systému v konejáčném produktu a sloučeninaodpovídající bočnímu řetězci v konečné sloučenině, při-čemž obě výchozí látky v místě jejieh spojení obsahujískupiny reakcí se odštěpující·

Svrchu uvedené sloučeniny, popsané v britském patentu č. 1 523 865, mají antivirální účinek protirůzným skupinám DNA s SNA virů, jak in vivo, tak invitjwř· Zejména tyto sloučeniny mají účinek proti skupiněherpes virů, která zahrnuje Herpes simplex, Herpes zostera Herpes varicella. Tyto sloučeniny tedy potlačujívirová onemocnění, jako je herpetická keratitida, herpe-tická encefalitida, záněty kůže a infekce genetálií.

Ze sloučenin jmenovitě uvedenýeh v britském patentu č. 1 523 865 byl 9-í2-hydroxyethoxymethyl)guanin, jinakznámý jako acyklovir, zjištěn jako látka, která je účin-ná vůči mnoha infekcím způsobeným Herpes simplex, alemá tu nevýhodu, že je špatně rozpusiný ve vodnýchsystémech· - 4c 9-C(2-Hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methyl3-guanin a odpovídající 6-aminoanalog jsou zahrnuty vobecném vzorci britského patentu δ. 1 523 865, ale v žádné části tohoto patentového spisu nejsou speciálněuvedeny.

Nyní bylo neočekávaně shledáno, že sloučeninyníže uvedeného obecného vzorce I, na rozdíl od slouče-nin popsaných v britském patentovém spisu δ. 1 523 865,dříve zkoušených, mají výhodnou antivirální účinnost,dostatečnou k léčbě koáské rhinopneumonitidy, kterou vy-volává virus equinae rhinopnuemonitidis in vivo. Přizkouškách těchto sloučenin na myších bylo také zjištěno,že mají výhodnou účinnost proti hepatieké encefalitidě.Dále tyto sloučeniny selektivně přečěí známé sloučeninyvětší rozpustností ve vodě, vřetně acyfeloviru, cožzlepšuje možnost dosahování vyšších hladin léčiva «Β «Μ ®-/~/2-hydroxy-l-hydroxymethylethoxy/methylJTguahin a9-/"" /2-hy droxy-l-hy droxyme thylethoxy/methylJ7-2,6-diaminopurin.

Jak je výše uvedeno, sloučeniny obec-ného vzorce I mají důležitou výhodu v tom, že jsourozpustnější ve vodě než aeyklovir. Tak sloučeninyobecného vzorce I, kde X je atom kyslíku a R je hydro·xylová skupina nebo aminová skupina, mají rozpustnos-ti 0,4 až 0,5 % hmotnostních a 2 až 3 % hmotnostníve srovnání s rozpustnostní 0,14 $ hmotnostních proaeyklovir.

Soli sloučenin obecného vzorce I, kterémohou být výhodně použity v terapii, zahrnují fyzio-logicky vhodné soli organických kyselin, jako je ky-selina mléčná,, kyselina octová, kyselina jablečnánebo kyselina p-toluensulfonová, stejně jako fyzio-logicky vhodné soli minerálních kyselin, jako je ky-selina chlorovodíková nebo kyselina sírová.

Estery sloučenin obecného vzorce 1,které mohou být běžně používány v terapii, zahrnujíestery, obsahující formyloxy-skupinu nebo /na- příklad C^<_g/-alkanoyloxy-skupinu, například acetoxy-

o 4 nebo propionyloxyskupinu, případně substituovanou aral-kanoyloxyskupinu, fnapříklad fenyl-Cj-4t-alkanoyloxysku-pinu, jako je fenyl^ceioxyskupina nebo případně sdeti-tuovanou aroyloxyesterovou skupinu, například benzoylo-xy- nebo naftoyloxyesterovou skupinu, v jedné nebo oboukoncových polóhách 9 postranního řetězce sloučeninobecného vzorce I. Výše zmíněné aralkanoyloxy- a aroyloxyesterovéskupiny mohou být substituovány, například jedním nebovíce halogenovými atomy (například chlorem nebo bromem)nebo aminoskupinfiu, nitrilovou skupinou nebo sulfamidovouskupinou, přičemž arylový zbytek této skupiny výhodněobsahuje 6 až 10 atomů uhlíku. obecného

Vynálezvzorce I také poskytuje bioprekursory sloučenina jejich fyziologicky přijatelné soli a estery. To jsou sloučeniny, kteréjí na sloučeniny obecného vzorce T a se in vivo přeměnu-jejich výše zmíněné deriváty.

Sloučeniny obecného vzorce 1 a jejich soli a jv » estery jsou známé látky. V Sestee-a 1σvenokém patentu č. 4“$ íýPV 6312-_£U4 je popsán a, chráněn způsob výroby těchto sloučenin.

oQ ί

Nyní byl nalezen nový způsob výroby těchtosloučenin, který je proti jiS známému způsobu technickyi ekonomicky výhodnější. Tento dosud nepopsaný způsob"výroby sloučenin, obecného vzorce I a jejich solí a este-ru je analogickým postupem, který je obdobný přípravěsloučenin podobné i struktury, jako jsou způsoby popsané v britském paten-tovém spise δ. 1 523 865.

Předmětem tohoto vynálezu je způsob výroby2-amino-9-C(2-hydroxy-l-hydroxymethylethoxy)methyl3pu-rinů obecného vzorce I uvedeného svrchu a jejich fyziologicky přijatelných solí a esterů, jehož podstataspočívá v tom, že se sloučenina obecného vzorce II

A ch2xchgh2ow I \ ch2owx ve kterém

X má výše uvedený význam a W a každá znamená atom vodíku nebo alkanoylovou sku- pinu s 1 až 4 atomy uhlíku, aroylovou skupi-nu/^eyylmo thylo vou-skupimý neb o trialkylsily-lovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v každéalkylové části, Y znamená atom vodíku nebo alkanoylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, aroylovou skupinu,arylmethylovou skupinu nebo trialkylsilylovouskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v každém z alky-lů a Z znamená skupinu vzorce -QY nebo -NHY, kde Y má výše uvedený význam, za předpokladu, že znamená-li X atom kyslíku a Z hydro-xyskupinu, pak každý ze substituentů W a znamenábuá alkanoylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, neboaroylovou skupinu nebo trialkylsilylovou skupinu s 1 až4 atomy uhlíku v každé alkylové části, podrobí zpracování k odštěpení přítomných skupin W,a $ hydrolýzou, hydrogenolýzou nebo solvolýzou, zavzniku sloučeniny obecného vzorce I nebo její soli nebo jejího esteru, a popřípadě se provede alespoň jednaz dále uvedených konverzí v jakémkoli požadovaném pořadí,a to i) tam, kde výsledným produktem je báze, převádíse tato báze na fyziologicky přijatelnou adičnísůl s kyselinou, ii) tam, kde je výsledným produktem adiční sůl s ky-selinou, převádí se tato sůl na základní bázi, iii) tam, kde je výsledným produktem sloučenina obec-ného vzorce I nebo její sůl, převádí se tatosloučenina nebo její sůl na fyziologicky přija-telný ester této sloučeniny nebo soli, a/nebo iv) tam, kde je výsledným produktem ester sloučeni-ny obecného vzorce I, převádí se tento ester na základní sloučeninu obecného vzorce I nebojejí fyziologicky přijatelnou sůl. U způsobu podle tohoto vynálezu se skupiny W, W1 a Y s výhodou volí takto£ Značí-li tyto substituen-ty alkanoylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, výhodnějde o acetylovou skupinu, představují-li aroylové sku- - 9a - piny, pak jde například s výhodou o benzoylovou skupi-nu, v případě ary lmethylových skupinýVs výhodou jde obenzylovou skupinu a v případě trialkylsilylových skupins 1 až 4 atomy uhlíku v každé alkylové části se napří-klad s výhodou jedná o trimethylsilylovou skupinu.

Alkanoylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, aroylové skupiny^ ary|mothylevé skupiny a trialkylsilylovéskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé alkylové části,značící substituenty Ϊ, / a I mohou být v předcháze-jícím nebo následujícím textu také označovány společnýmoznačením “chránící skupiny" nebo "Blokující skupiny", o

Arylmethylové skupiny se mohou odstraň4atnapříklad hydrogenolýzou, jako hydrogenací v přítomnos-ti Raneyova niklu nebo palladiového katalyzátoru nebopůsobením jžlsodíku v kapalném amoniaku. Acylové chránícískupiny, spadající pod svrchu uvedené vymezení, mohoubýt odstraněny například hydrolýzou za použití aminu,jako je methylamin nebo triethylamin, výhodně ve vodnémprostředí. Trialkylsilylové skupiny s 1 až 4 atomyuhlíku se mohou odstraňovat například solvolýzou, účelněpůsobením alkoholického nebo vodného amoniaku, neboalkoholýzou.

Podle tohoto vynálezu se získávají sloučeniny

- 10 - obecného vzorce I a jejich fyziologicky přijatel-né soli a estery pro použití při léčbě nebo profy-laxi virových onemocnění u živočichů, napříkladu savců jako je člověk. Sloučenina jsou zejménavýhodné pro léčení nebo profylaxi onemocnění vy-volaných r&amp;znými DBA viry, jako jsou infekce vy-volané viry herpes, například herpes simplex,varicella nebo zoster, cytomegalovirus, stejně jakonemocí vyvolaných hepatitis B viry nebo Epstein-Barrovými viry.

Sloučeniny obecného vzorce I mohoubýt také použity pro léčení nebo profylaxi papi-lomů nebo bradavičnatých virových onemocnění. Kro-mě použití v humánní medicinální terapii sloučeninyobecného vzorce I mohou být podávány jiným živoči-chům pro léčení nebo profylaxi virových onemocně-ní, například jiným.' savcům. Hapříklad sloučeninyvzorce I jsou zvlášt výhodné pro léčení koňské rhinopneumonitidy

Xc/ Předložený vynález zraké vytrvání způsobu léčení nebo profylaxe virových onemocněníu živočichů, například savců jako je člověk, kterýzahrnuje podávání účinného antivirálního množstvíslončeniny obecného vzorce I nebo fyziologicky vhod· -lí- né soli nebo esteru, této sloučeniny příslušnémuživočichu.

Sloučeniny obecného vzorce I a jejichfyziologicky vhodné soli a estery /dále souhrnněnazývané jako aktivní složky/ mohou být podáványcestou vhodnou pro stav, který má být léčen, přičemžtyto vhodné cesty zahrnují podání orální, rektální,nasální, topické /včetně bukálního a sublinguální-ho/, vaginální a parenterální /včetně subkutánního,intramuskulárního, intravenózního, intradermálního,intrathekálního a epidurálního/. Je třeba poznamenat,že výhodná cesta se může měnit například se stavempříjemce.

Pro každé z výše vyznačených využitía indikací bude množství požadované aktivní složky/jak byla výše definována/ záviset na více fakto-rech včetně vážnosti stavu, který má být léčen atotožnosti příjemce a bude v základě na uváženípřítomného lékaře nebo veterináře. Obecně však prokaždé z těchto využití a indikací bude vhodná účin-ná dávka v rozmezí 0,1 až 250 mh na kg tělesnéhmotnosti příjemce na den, výhodně v rozmezí 1 až 100 - 12 - mg na kg tělesné hmotnosti na den a nejvýhodnějiv rozmezí S až 20 mg na kg tělesné hmotnosti zaden} optimální dávka je asi 10 mg na kg tělesnéhmotnosti za den. /Pokud není jinak uvedeno, všech-ny hmotnosti aktivní složky jsou počítány pro zá-kladní sloučeninu onecného vzorce I: pro soli aestery této sloučeniny se hodnoty proporcionálnězvýší./

Požadovaná dávka se výhodně podává ja-ko dvě, tři, čtyři nebo více dílčích dávek podá-vaných ve vhodných intervalech během dne. Tytodílčí dávky mohou být podávány v jednotkové dáv-kovači formě, například obsahující 10 až 1 000 mg,výhodně 20 až 500 mg a nejvýhodněji 100 až 400 mgaktivní složky na jednotkovou dávkovači formu. I když je možné, aby aktivní složkybyly podávány samotné, je výhodné podávat je ve for-mě léčivých přípravků. Tyto přípravky, jak proveterinární, tak humánní použití, tohoto vynále-zu obsahují alespoň jednu aktivní složku, jak by-la výše definována společn‘ě s alespoň jedním vhod-ným nosičem pro tuto aktivní složku a případně ji-nými terapeutickými složkami. Hosič nebo nosiče - 13 - musí být ”přijatelné” v tom smyslu, aby byly kom-patibilní s ostatními složkami přípravku a nebylyškodlivé pro použivatele /pacienta/. léčivými přípravky jsou přípravky vhod-né pro podávání orální, rektální, nasální, topické/včetně podávání sliznicí ústní dutiny a sublinguál-ního/, vaginální nebo parenterální /včetně subkután-ního, intramuskulárního, intravenúzního, intrader-málního, intrathekálního a epidurálního podávání/.Přípravky mohou být běžně předkládány v podobě jed-notkových dávek a mohou být připravovány jakýmkoliznámým postupem farmaceutické technologie. Takový-mi postupy je spojování účinné složky s nosičem,který tvoří alespoň jednu přísadu. Všeobecně sepřípravky připravují stejnoměrným a dokonalým spo-jováním účinné složky s kapalnými nosiči nebo jemněrozmělněnými tuhými nosiči nebo s oběma a pak, je-lito nutné, se tvaruje výrobek. léčivé přípravky podle vynálezu vhod-né pro orální podávání mohou být předkládány v od-dělených jednotkách jako jsou tobolky, kapsle ne-bo tablety, přičemž každá obsahuje předem stanovené - 14 - množství účinné složky; jako prášky nebo granule;jako roztok nebo suspenze ve vodném, kapalném nebonevodném kapalném médiu; nebo jako emulze typuolej ve vodě nebo emulze voda v oleji. Účinná slož-ka můž být také podávána nako velká kulička /bolus/suspenze nebo pasta.

Tableta může být vyráběna lisováníminebo odléváním, případně s alespoň jednou přísadou.Lisované tablety mohou být vyráběny lisováním vevhodném stroji, přičemž se stlačuje účinná složkav sypké formě jako je prášek nebo granule, případ-ně ve směsi s pojivém, klouzadlem, inertním zřeňovad·lem, konservačním prostředkem, povrchově aktivnílátkou nebo dispergačním prostředkem. Odlévané ta-blety mohou být vyráběny odléváním ve vhodném stro-ji, a to odléváním směsi práškovité sloučeniny smá-čené inertním kapalným zřežovadlem. Tablety mohou .být případně povlékány nebo rýhovány a mohou býtupravovány tak, aby bylo zajištěno pomalé a řízenéuvolňování jejich účinné složky.

Pro infekční ochoření oka nebo ji-ných zevních tkání, například úst a kůže, mohou býtléčivé přípravky výhodně aplikovány jako lokální - 15 masti nebo krémy, obsahující účinnou složku v množvství například 0,075 až 20 % hmotnostních, výhodné0,2 až 15 % hmotnostních a nejvýhodněji 0,5 až 10hmotnostních. Pro přípravu masti lze účinné složkypoužít buS s parafinovým nebo s vodou mísitelnýmmasíovým základem. Alternativně může být účinnásložka upravena jako krém s krémovým základem typuolej ve vodě.

Je-li třeba, pak vodná fáze krémové-ho základu může obsahovat například až 30 % hmot-nostních vícemocného alkoholu, to je alkoholu, kte-rý má dvě nebo vícejKydroxylové skupiny, jako je propylengylkol, butanvl,*3-diol,mannitol, sorbitol,glycerol a pólyethylenglykol a jejich směsi. lokál-ní přípravky mohou případně obsahovat sloučeninu,která zvyšuje vstřebávání nebo průnik účinné slož-ky kůží nebo jinými krajinami těla. Příklady tako-výchto látek zvyšujících průnik kůží jsou dimethyl-sulfoxid a příbuzné analogy.

Olejová fáze emulzí podle vynálezu mů-že být tvořena ze známých složek známým způsobem,Zatímco tato fáze může obsahovat pouze emulgátor - 16 /jinak známý jako emulgent/, vhodně obsahuje směs alespoň jednoho emulgátoru s tukem nebo olejem nebojak s tukem tak s olejem. Výhodně je obsažen hydro-filní emulgátor společně s lipofilním emulgátorem,který působí jako stabilizátor. Je také výhodné, abyobsahovala jak. ol^j tak tuk. Společně emulgátor neboemulgátory se stabilizátorem nebo stabilizátory vytvá-řejí tzv. emulgační vosk a tento vosk spolu s olejema/nebo tukem t vytváří tzv. emulgační mastový základ,který tvoří olejově dispergovanou fázi krémových pří-pravků.

Emulgenty a stabilizátory emulze vhod-né k použití v přípravcích tohoto vynálezu zahrnujíTween 60, Spán 80, cetostearinalkohol, myristyalko-hol, glycerylmonostearát a laurylsulfát sodný.

Volba vhodných olejů nebo tuků pro přípravky se zakládá na dosažení požadovaných kosmetickýchvlastností, protože rozpustnost účinné sloučeninyve většině obvykle používaných olejů ve farmaceu-tických emulsích přípravcích je velmi nízká. Takkrém by měl být výhodně nemastný, nepotřísňující avypratelný produkt vhodné konsistence, aby nedochá-zelo k vytékání z tub nebo jiných nádob. Mohou být - 17 - použity mono nebo dialkylestery s přímým nebo roz-větveným řetězcem, jako je diisoadipát, isocetyl-stearát, propylenglykoldiester, mastných kokosovýchkyselin, isopropylmaristát, decyloleát, isopropyl-palmitát, butylstearát, 2-ethylhexylpalmitát ne-bo směs esterů, s rozvětveným řetězcem známé jakoCrodamol CÁP, přičemž poslední tři látky jsou vý-hodnými estery. Ty mohou být použity bučí. samostatněnebo v kombinaci v závislosti na požadovaných vlast-nostech. V jiném případě mohou být použity lipidyo vysoké teplotě tání, jako je bílý měkký parafina/nebo kapalný parafin nebo jiné minerální, oleje. Přípravky vhodné pro lokální podává-ní do oka jsou oční kapky, v nichž je účinná složkarozpuštěna nebo suspendována ve vhodném nosiči,zejména ve vodném rozpouštědle pro účinnou složku.Účinná složka je výhodně přítomna v těchto příprav-cích v koncentraci 0,5 až 30 ¢, výhodně 0,5 až 10 %zejména kolem 1,5 % hmotnostního. Přípravky vhodné pro topické podá-ní v ústech jsou pastilky obsahující účinnou slož-ku a vonnou bázi, obvykle sacharosu a arabskou gu-mu nebo tragent. - 18

Pastilky obsahují aktivní složku v inertním zákla-du, jako je želatina a glycerín nebo sacharosa a arab-ská guma. Ústí vody obsahují aktivní složku ve vhod-ném kapalném nosiči. Přípravky pro rektální podání mohoubýt předkládány ve formě čípků s vhodnou bází obsa-hující například kakaové máslo nebo salicylát. Přípravky vhodné pro nosní podávání,ve kterých je nosič tuhou látkou, obsahují hrubý prá-šek o velikosti částic např. v rozmezí 20 až 500 mikrometrů, který může být podáván ve formé šnupce, to jerychlým vdechnutím nosním průduchem z nádoby s práš-kem, držené těsné u nosu. Vhodnými přípravky, v nichžje nosičem kapalina pro podání například jako nosníspray nebo nosní kapky, jsou vodné nebo olejové roz-toky účinné složky. Přípravky vhodné pro vaginální podává-ní mohou být upraveny jako pesary, tampony, krémy,želé, pasty, pěny nabo sprayové přípravky, obsahují-cí vedle účinné složky takové nosiče, o kterých jeznámo, že jsou vhodné. - 19 - Přípravky vhodnými pro parenterálnípodávání jsou vodné a nevodné sterilní injekčníroztoky, které mohou obsahovat antioxidanty, pufry,bakteriestatiká a přísady pro isotonizaci příprav-ku s krví předpokládaného uživatele, vodné a nevod-né sterilní suspenze, které mohou obsahovat suspen-zní prostředky a zahuštovací prostředky. Přípravkymohou být předkládány v jednodávkových nebo více-dávkových obalech, například ve formě zatavenýchampulí a mohou být skladovány ve lyofilizovánémstavu vyžadujícím jen přidání sterilního kapalnéhovehikula, například vody pro injekce, bezprostřed-ně před použitím. Injekční roztoky a suspenze mohoubýt připravovány ex tempore ze sterilních prášků,granulí a tablet výše popsaného druhu. Výhodnými jednotkovými dávkovačími pří-pravky jsou přípravky obsahující denní dávku nebojednotlivou denní dílčí dávku, jak bylo výše popsá-no, nebo příslušný zlomek dávky účinné složky.

Je třeba poznamenat, Že kromě složekvýše konkrétně zmíněných, mohou přípravky podle vy-nálezu obsahovat i jiné prostředky, které jsou běž-ně používané a známé s ohledem na typ přípravku, - 20 - o který ae jedná, například prostředky pro orální podávání mohou obsahovat ochucovadla a voni&amp;La.

Podle vynálezu lze získávat veterinárnípřípravky obsahující alespoň jednu účinnou složku,,jak byla výše definována, společně s veterinárnímnosičem pro tuto složku.

Veterinární nosiče jsou materiály, výhod-né pro použití k účelům podávání přípravku a mohouto být tuhé, kapalné nebo plynné materiály, kteréjsou jinak inertní nebo přijatelné pro veterinárnípraxi a jsou kompatibilní s účinnou složkou. Tytoveterinární přípravky mohou být podávány orálně, pa-renterálně nebo jinou požadovanou cestou.

I

Pro orální podání mohou být přípravky veformě tablety, granulované dávkové jednotky, pasty,tobolky, kapsle nebo krmného doplňku. Granule mohoubýt vyráběny známými postupy granulace, za mokra,předlisováním nebo drcením. Mohou být podávána zvířatům v inertním kapalném vehikulu tak, aby se vytvo-řil nápoj nebo v suspenzi s vodnou nebo olejovoubází. Výhodně obsahují další přísady, jako je dis-pergační prostředek. Tyto přípravky výhodně obsahu- - 21 - jí 15 až 85 $ aktivní složky. řasta může být vytvářena suspendovánímúčinné složky v kapalném rozpouštědle. Může být ob-sažen ztužovací nebo zahuětovací prostředek, společně se smáěedlem nebo zkušíovadlem, je-li kapalnýmrozpouštědlem voda. Jestliže je potřebná emulznípasta, pak je vhodné, aby obsahovala alespoň jednupovrchově aktivní látku. 25 až 80 $ hmotnostníchtěchto pastovitých přípravků může tvořit účinnásložka. V krmných doplňcích obvykle je účinnásložka přítomna ve velkých množstvích ve vztahuk přísadám a tyto doplňky mohou být podávány přímonebo po bezprostředním smíchání nebo zředění. Pří-klady přísad pro tyto přípravky jsou tuhé orálněpřijímatelné nosiče jako je kukuřičná mouka, sojo-vá mouka, pšeničný šrot, sojové otruby, jedlé rost-linné materiály a kvasné výpalky. Účinná složka jeobvykle začleněna v alespoň jedné z přísad a důkladně a rovnoměrně dispergována mletím nebo míchánímv běžných zařízeních. Přípravky obsahující 1 až90 % hmotnostních účinné složky jsou vhodné propřidávání do krmiv. - 23

Pro léčení herpetických infekcí koní můžebýt žádoucí orální nebo parenterální dávka 0,1 až350 mg na kg tělesné hmotnosti za den, výhodně 2až 100 mg na kg tělesné hmotnosti za den. Tato dáv-ka může být rozdělena do oddělených jednotek podá-vaných v pravidelných intervalech během dne a opa-kována denně až do 14 dnů nebo dokud se infekce ne-potlačí. Pro virové infekce u jiných živočichů můžedávka kolísat v závislosti na velikosti a metabolis-mu živočicha. Přípravky mohou být podávány ve formědávkové jednotky, jako jsou např. tablety, několi-krát denně v množství 10 až 1000 mg na dávkovou jed-notku.

Vynález bude nyní objasněn na následu-jících příkladech. - 23 - Příklad 1 a/ 9-/”A-Benzoyloxy-l-benzoyloxymethyl/ethoxy-me t hy 1J7guanin

Ke chladnému /0 °C/ roztoku aeetylační smě- .si, připravené kombinováním acetanhydridu A ml/,ledové kyseliny octové /3 ml/ a koncentrované kyse-liny sírové /0,1 ml/, byl přidán za magnetického mí-chání tetrabenzoylmethylen-bis-2-glycerol A»0 g/. A.T.Hess, R.M.Hann a O.S, Hudson, J. Amer. Chem.

Soc. Hov. 1943, 2815.

Roztok byl míchán při teplotách 3 až 10 °0po dobu 30 minut a pak nalit do směsi 260 ml ledua vody. Kyselý roztok byl extrahován třikrát chloro-formem a organické extrakty promyty solankou a vy-sušeny nad síranem sodným.

Odfiltrovaný chloroformový roztok byl odpa-řen fca vakua a zbylý olej vyčištěn sloupcovou chro-matografií na silikagelu. Elucí dichlormethanem sezískal 2,0-acetoxymethyl-l,3-bis/0-benzoyl/glycerol.Proton a uhlík 13 HMR spektra byly shodné s požadovanou strukturou. - 24 -

Směs 2,9-diacetylguaninu /0,49 g/,2-0-/acetoxyiijethy-l/-l ,3-bis/0-benzoyl/gly cerolu/1,22 g/, p-toluensulfonové kyseliny /0,013 g/v suchém toluenu /30 ml/ se vaří pod zpětným chladi-čem za míchání pod dobu 18 hodin. Rozpouštědlo seodstraní prudkým odpařením a zbytek se rozpustí vevařícím methanolu /35 ml/. Přidá se n-butanol /1 ml/a směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu 5 min,čímž se zhydrolýzuje 2-acetamidoskupina. Směs se od-paří za vakua při teplotě lázně 30 °C a rekrystalujejednou z methanolu a jednou z formamidu, čímž se zís-ká 9-/7" /benzoyloxy-l-benzoyloxymethyl/ethoxymethylJ7'guanin.

Elementární analýza ukázala, že získa-ný produkt obsahoval 0,75 molu formamidu a MB spek-trum se shodovalo se strukturou, TLO na silikagelus 20 % methanolu v chlorofoímu dalo oblast Rf = 0,49,Teplota tání « 220 až 222 °C. b/ ©-/"" /2-Hydroxy-l-hydroxymethylethoxy /methyl J'-guanin 9-^f" 2-Benzoyloxy-l-/benzoyloxymethyl/· - 25 ethoxyiaethyl_7gu.an.in. /0,6 g/ se zahřívá ve směsi lilmethanolu a 40 ^ního vodného methylaminu na parní láz-ni po dobu 1,5 hodiny. Rozpouštědla se odstraní za va-kua a zbytek se rekrystalizuje dvakrát z vody, čímžse získá 9-/f“/2-hydroxy^l-hy droxymethylethoxy/methyl_7guanin jako jednočtvrteční hydrát. Teplota tání 230 °0za rozkladu. Příklad 2 S-/~/2-hy droxy-1-hydr oxyme thy1e thoxy /met hy l_7-2,6-diaminopurin a/ 9-,/”/2-benzoyloxy-l-benzoyloxymethylethoxy/methyl_7·2,6-dichlorpurin

Směs 1,16 g /6 mM/ 2,6-dichlorpurinua 2,7 g /7,3 mM/ 2-0-/acetoxymethyl/-l,3-bis-/0-ben-zyl/glycerol byla zahřívána na magnetického míchánípři tlaku vodní vývěvy při teplotě olejové lázně 155 °<po dobu přibližně 25 minut. Výsledná čistá žlutá ka-palina byla ochlazena a husté žluté sklo, které sevytvořilo, bylo rozpuštěno v benzenu a vyčištěno od-lučovací chromatografií na silikagelovém sloupci /prů- - 26 měr 6 cm/ počáteční eluce směsí benzenu s dichlor-methanem v poměru lil a samotným dichlormethanem od-stranila vedlejší produkty a požadovaný 9-/~/2-benzoyl-oxy-l-benzoylO3ymethylethoxy/methyl_7-2,6-dichlorpurinbyl získán elucí směsí dichlormethanu s etherem v po-měru lil /l,77 g/. Další podíl u 9-isomeru znečiště-ného 7-isomerem byl eluován za použití 100%'ního vy-čištěného etheru. íT-WB spektrum a TIS /silikagel v dichlor-methanu./ ukázaly mírné množství nečistoty v hlavní1dáv-ce, což je běložlutá pěna. b/ 9-/~ /2-Benzoyloxy-l-benzoyloxymethylethoxy/methyl_J72,6-diazidopurin

Heterogenní směs 1,77 g /3,53 ml/ 9-/-/2-benzoyloxy-l-benzoyloxymethylethoxy/metbylJ72,6-di-chlorpurinu a 0,45 g /6,88 ml/ azidu sodného v 10 mlsměsi vody s ethanolem v objemovém poměru lil bylavařena pod zpětným chladičem za magnetického míchánípo dobu 3 hodin. Rozpouštědla byla odstraněna rychlýmodpařením a zbytkový olej rozmělněn s vodou pro od-straněni chloridu sodného*

Olej byl vyjmut v horkém alkoholu a 27 ochlazen, čímž se získala po filtraci hílá tuhálátka s narůžovělým nádechem po vysušení. Teplotatání 144 až 145 °G. Další podíl byl získán z mateč-ného louhu odpařením a rozmělněním s ethanolem,čímž se získal materiál dostatečné čistoty pró spo-jení s původní sraženinou pro následující stupeň.HMR a UV spektra byla shodná s předpokládanou strukturou. Kvalitativní UV píky: pH 1,0 lambda max « 240, 305, 275 /shďr/ pH 13,0 lambda max = 300 , 270 /shdr/; c/ 9-/~/S-Hydroxy-l-hydroxymethylethoxy/methyl^T*-2,6-diamino purin

Směs 1,68 g /3,26 mffi/ produktu ze stupně b/ ve 120 ml tetrahydrofuran/methanolu /lilobj./obj./ byla třepána se 118 mg katalyzátoruobsahujícího 5 % paladia na aktivním uhlí za počá-tečního tlaku 0,35 MPa plynného vodíku po dobu 72hod. při teplotě místnosti. Směs byla sfiltrovánapřes polštářek s Cellitem a rozpouštědla byla od-straněna prudkým odpařením. Zbývající olejovitý - 28 - zbytek byl pojat do horkého benzenu a hexanu, cožzpůsobilo ztuhnutí. Po ochlazení byla pevná látkaodfiltrována, čímž byl získán 9-/“/2-benzoyloxy-l-benzoyloxymethylethoxy/methyl£7-2>6-diaminopurin,který poskytl uspokojivé spektrum MR/h/, Tato pev-ná látka byla rozpuštěna v minimálním množství metha-nolu a byla míchána se stejným objemem 40$ vodnéhomethylaminu při teplotě místnosti tak dlouho, až sepomocí TIG /křemičitý gel ve 40$ methanoldichlormetha-nu/ prokázalo úplné skončení hydrolýzy· Roztok byl od-pařen ve vakuu a odparek byl překry stal ován zc ethanol-acetonu byl získán 9-/“/2-hydroxy-l-hydroxy-methyl-ethoxy/mettyl^JZ-Sjó-diaminopurin, který poskytl uspo-kojivé spektrum η'-WR a elementární analýzu. Teplotatání 182 až 184 °C. Příklad 3 2,6 -P iamino-9-/” /2-hy dr oxy -1-hy droxy me t hy 1 e thoxy /-methylJ7-9H-purin

Směs 33,6 /0,2 M/ 2,6-diaminofurinového hydrá-tu ve 400 ml xylenu byla vařena pod zpětným chladičem - 29 za separace vody v Dean Stárkově odlučovací. Byl f přidán acetanhydrid 63,84 g /0,625 M/ a reakční směs 4 byla zahřívána pro oddestilování směsi kyseliny octo- vé a xylenu /teplota v hlavě 115 °C/. Teplota bylazvýšena na 125 °0 na konci čtyřhodinové reakční do-by.

Ke směsi bylo přidáno 0,95 g /0,005 M/hydrátu paratoluensulfonové kyseliny a 2-0-/acetoxy- l ' methyl/-l,3-bis-/0-acetyl/glyceřolu 74,47 g /0,3 M/a reakční směs byla zahřívána k oddestilování směsixylenu a kyseliny octové při 125 °0. Destilační teplota byla zvýšena na 135 0 na konci Shodinové reakční doby. Reakční směs byla ochlazena a surový produkt , byl získán odlučováním odpařením a rozmělněním zbyt- ku s acetonem. Rekrystalizací z ethanolu se získalanalyticky čistý meziprodukt 2,6-diacetamido-S-/~/2-acetoxy-l-acetoxymethylethoxy/metb.ylJ7purin. Tuhálátka byla rozpuštěna v methanolu a zahřívána stejnýmobjemem 40/ního vodného roztoku methylaminu po dobu15 minut na parní lázni.

Prudkým odpařením a překrystalováním odpar-ku z ethanolu byl získán 2,6-diamino-9-/~/2-hydroxy-1 -hy dr oxy me thy 1 -e t hoxy /me thy 1J-9H- pur in. - 29a -

Vyrobená sloučenina má teplotu tání 182 až 184 °C, Příklad 4 9-L/(2-Hydroxy-l-(hydroxymethyl)ethyl)thio/-methyljguanin a) 2- (Benzyloxy) -1- l (benzyloxy )me thylZJ ethyl- (p- -toluensulfonát) K roztoku 14,8 g (54,3 mM) 1,3-dibenzyloxy-2--propanolu (J. C. Martin, 0. A, Dvorak, D. F. Smee, T. R.Matthews a J. P. H. Verheyden, J. Med. Chem., 26, 759 (1983),, )v 75 mlyysuáhého pyridinu, který byl ochlazen na teplotu0 °C, bylo přidáno 10,5 g (54,θ mM) vyčištěného p-toluen- 'sulfinylohloridu. Reakční směs byla ponechána za teploty2 °0 po dobu 66 hodin. Reakční roztok byl dekantován odvýsledné pevné látky do 400 ml směsi ledu a vody a dvakrátextrahován vždy 300 ml etheru. Spojené etherové extraktybyly promyty dvakrát 125 ml a dvakrát 250 ml 1 ®&amp;iáKHfxnormální kyseliny chlorovodíkové. Organická vrstva bylavyseušená bezvodým síranem sodným (100 g) a bezvodým uhli-čitanem draselným (10 g) a odpařená na potační odparceza vakua při teplotě místnosti. Získalo se 19,4 g (84 %) - 2$h - 2«- (benzyloxy) -1-C (Bbnzyloxy )methylj ethyl- (p-toluěnsulfo-nátu) tvořeného olejem. Protonové NMR spektrum bylo v sou-ladu se stanovenou strukturou. b) S-u2-/Benzyloxy-l-^(benayléxy)methyiptnioaoetát

Roztok 20,7 g (181 mM) thioacetátu draselného,

19,3 (4?-,2 mM) 2-(benzyloxy)-l-L(benzyloxy)methyl3ethyl--(pr—toluensul£onétu) a 100 ml suchého dimethylfoinnamidubyl míchán za teploty 80 °0 po dobu 18 hodin. Reakční směsse ochladila na. teplotu místnosti a vyliSa na 1 000 mlsměsi ledu a vody. Výsledná směs byla šestkrát -extrahovánavždy 550 ml etheru. Spojené etherové extrakty byly rozdělenyna dva díly, a každý byl dvakrát-promyt vždy 300 ml vody avysušen bezvodým síranem sodným. Spojené roztoky se odpaři-ly do sucha-za teploty 40 až 50 °C pod proudem plynnéhodusíku. Výsledný tmavý olej byl rozpuštěn ve(směsi hexanua ethylacetátu v pdměru 5 * 1 a zaveden na sloupec (7,5 x 18 cm)silikagelu 50 (40 - 53 E. Merck č. 9385) zvlhčený hexanem.Sloupec jayi eluován éěchnikou mžikové chromatografie/W. 0. Still, M. Kahn a A. Metra, J. Qrg, Chem., £2, 2923(1978)/hexanem (1,5 litru) a potom soustavou hexan - ethyl-acétát v poměru 9 i 1 a byly jímány frakce 50 až 100 ml.Příslušné frakce byly spojeny a odpařeny na rotační odparceza vakua. Jako olej bylo získáno 9,16 g (61 %) S-Q2-/benzy-loxy-1-(benzyloxy)methyl/ethyllthioacetátu. Protonové NMR - 29c - spektrum a IČ spektrum byly v souladu se stanovenoustrukturou. c) 1,3-Bis(benzyloxy)-2-propanthiol

Směs 50 ml 20% vodného hydroxidu draselnéhov 50 ml ethanolu a 9,00 g (27 mffi) S-C2-(benzyloxy)-l--^(benzyloxy)methyl/ethyl3ethioacetátu byla reflurována ' za míchání 45 minut pod dusíkovou atmosférou. Reakčníroztok se ochladil na teplotu místnosti a pH roztokuupravilo na 6 kyselinu octovou. Roztok se rozdělil mezi200 ml vody a 300 ml etheru a vodná fáze dále extrahova-la čtyřikrát vžéiy 300 ml etheru. Spojené etherové extrakty se promyly 600 ml vody a vysušily (bezvodý síranhořečnatý). Suchý etherový roztok se odpařil do sucha zateploty 40 až 50 °C pod proudem plynného dusíku. Získa-lo se 6,68 g (85 %) oleje, který se projevil jako dvěskvrny při chromatografii na tenké vrstvě. ProtonovéNMR spektrum této směsi bylo b v souladu s 1,3-bis-(benzyloxy)-2-propanthiolem, který tvořil asi 45 %směsi. - 29d - d) 1,3-Bis (benzyloxy)-2-Γ (chlormethyl) thio3 propan. 6,60 g (10,3 mM) 45 % směsi 1,3-bie(benzylo-xy)-2-propanthiolu, 0,687 g (7,63 mM) paraformaldehydua 60 ml 1,2-dichlorethanu bylo mícháno na solankové láz-ni s ledem při teplotě 0 °C. Reakění směsí se 1 hodinuprobublával proud plynného chlorovodíku a k absorbci ·zbytku vody přidal chlorid vápenatý. Po 1,5 hodiny sereakční směs ^filtrovala a chlorid vápenatý se propách-nul 1?2-dichlorethanem. Filtrát se odpařil na rotačníodparce ve vakuu a dostalo se 7,46 g oleje, který seprojevil jako dvě velké skvrny při ohlorroatografi.ina tenké vrstvě. Protonové NMR spektrum, této směsi bylov souladu s l,3-bis(benzyloxy)-2-C(chlormethyl)thio3-propane^, který tvořil 60 % směsí. e) 9-ET/2-(Benzyloxy)-1-((benzyloxy)měhhyl)ethyl/ thiolmethyljguariin

Směs 1,67 g (11,1 mM) guaninu>l,22 g(9,21 mM) síranu amonného a 100 ml hexamethyldisi-Íaaasrtí byla refluxována za míchání 66 hodin pod dusí- - 29ě - ko/vou atmosférou. Čirý roztok se odpařil na rotační odpar-ce ve vakuu a olej se dvakrát převrstvil 100 ml toluenu,a opět odpařil. Bezbarvý olej se smíchal se 40 ml toluenu,4)48 g (13)3 mM) l,3-bis(henzyloxy)“2-r/chlormethyl/thio3-propanu v 10 ml toluenu z reakční směsi popsané výše a 3)48 g (34,4 mM) triethylaminu. Reakční směs byla refluro-vána za míchání 18 hodin a potom odpařena na rotační od-parce ve vakuu. K odparku bylo přidáno 150 ml ethanolua směs se refluxovala 30 minut. Studená směs se zfiltro-vala (filtrát 1) a hnědá pevná látka se dvakrát promylavždy 200 ml podílem vroucího rnethanolu. Spojené kapalněpodíly s obsahem rnethanolu se odpařily do sucha. Pevnépodíly byly vyloučeny pěti podíly vždy 200 ml ethylacetá-tu a každý podíl se zfiltroval. Spojené ethylacetátovépodíly se vnesly na sloupec (5 x 18 cm) silikagelu 60.Sloupec byl eluován soustavou methanol - ethylacetát vpoměru 1 : 4 a shromažďovaly se frakce o objemu 50 až100 ml. Příslušné frafce se spojily a odpařily na rotačníodparce ve vakuu. Získalo se 1,53 g titulní sloučeniny,jako směsi s 7-isomerem. Počáteční filtrát ífilti’át 1)se odpařil na rotační odparce ve vakuu. Výsledný odparekbyl zpracován s 30 ml dimethylformamidu a filtraci seodstranily bílé pevné látky. Diraethylformamidový filtrátse vylil do 100 ml vody a extrahoval dvěma 150-ml podíletheru a dvěma 100_ml podíly ethylacetátu. Spojené ethe- - 29f - rové extrakty se odpařily aa polovinu původního objemua bílé pevné látky se oddělily na ssacím filtru. Ethero-vý filtrát byl chromátografován na sloupci (5 x 18 cm)silikagelu 60 zvlhčeném methylenchloridem. Sloupec byleluován systémem methanol - methylenchlorid v poměru2 : 98 (1 litr), 5 : 95 (0,5 litru), 10 : 90 (0,5 litru)a nakonec 20 : 80 (0,5 litru). Příslušné frakce se spo-jily a odpařily. Dostal se pevný zbytek, který byl tvo-řen směsí titulní sloučeniny a 7-isomeru. Pevné látky získané zprcováním filtrátu 1 se spojily s ethylacetovýmextraktem (300 ml) popsaným výše a 15 g silikagelu 60(0,063, až 0,200 mm) a vše se odpařilo na rotační odparceve vakuu. Odpařená pevná látka se saesla na sloupec(5x18 cm) silikagelu 60. Sloupec byl eluován směsí me-thanoiu s methylenchloriděm v poměru 5 5 95 a potom smě-sí stejných sloučenin v poměru 10 J 90. Příslušné frak-ce se odpařily na rotační odparce ve vakuu a poskytly0,207 g 9-LC/2-(benzyloxy)-l-((benzyloxy)methyl)ethýl/-thiojmethyljguaninu, jako směsi se 7-isomerem. Rekrysta-lizací z ethylacetátu se dostal analyticky čistý mate-riál (výtěžek 0,06 g, teplota tání 190 až 192 °C),který obsahoval 15 % 7-isomeru a poskytl jedinou skvrnupři chromá to graf i i na tenké vrstvě. NMR (DMSO-άθ)ukázal na směs 7” a 9-isomeru>y poměru 15 s 85. Údajepro 9-isomer: - 29g - g 10,6 (s, 1H, NTí), 7,79 (s, 1H, C-8), 7,22-7,36 (m, 10H, Ar), 6,51 (široký, s, 2H, NHg), 5,19 (s, 2H, CH2N), 4,42 (m, 4H, OCHgAr), 3,37-3,59(m, 5H, 0CH2, CH); UV (PH 7) Amax 256 nm ίε716θ),^min 22? í € 2240), 279 sh ( ζ 4380); hmotnostní spek-trum m/e 343 (M+ - OCHgC^).

Elementární451,54)ívypočteno:nalezeno : analýza pro 61,18 % 0, 61,03 % 0,

Ohromatografie na tenkémethan (l ; 9) θ21^25^5^3^ (®°i 5,58 % H,5,61 % H, hmotnost 15,51 % N,15,46 % W, vrstvě(TLC): methaáol 7,10 % S, 7,02 % S. : dichlor f) 2-l/(2-Acetamido-l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9- -yl )me thyl/ thio3~l, 3-propandiyl-diacetá.t

Směs 0,400 g (0,886 mM) 9-LL/2-(benzyloxy)-l--((benzyloxy)methyl)ethyl/thiojmethyljguaninuJ 0,200 g(1,23 mM) chloridu čeletd.tého a 30 ml anhydridu kyselinyoctové se zahřívala 20 hodin aa teplotu 80 °0. Reakčnísměs se ochladila na teplotu 40 °C a filtrovala přesvrstvu Celitu a promyla 75 ml methanolu. Spojené filtrá-ty byly odpařeny na rotační odparce odpařeny ve vakuu.Odparek se společně odpařil se 75 ml methanolu. Odparek 1 - 29h - se rozpustil v methanolu a přidalo se 5 g silikagelu 60,Směs se odpařila na rotační odparce ve vakuu a pevné po-díly se vnesly na sloupec silikagelu zvlhčený methylen-chloridem. Sloupec se eluoval systémem methanol-methylen-chlorid v poměru 2 : 98 (500 ml), 3 í 97 (300 ml) a 5 í 95 (500 ml). Příslušné frakce se odpařily na rotač- ní odparce ve vakuu. Získalo se 0,114 g (31 %) 2-C/(2--acetamido-1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)methyl/thiol-—1,3-propandiyl-diacetátu, jako směsi s 25 % 7-isomeru.Protonové NMR spektrum bylo v souladu a navrženou struk-turou. q) 9-l£/2-Hydroxy-1-(hydroxymethyl)ethyl/thio!- methyl!guanin

Roztok 0,100 g (Ο.242 mM) *2-L/(2-acetamido--1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9“yl)methyl/thio3-l,3-pro-pan^diyldiacetátu,15 ml eij^nolu a 1.5 ml! Λ 40 % vodné-ho roztoku méthylaminu bylo zahříváno na parní lázni 10minut. Těkavé složky se odstranily odpařením na rotačníodparce ve vakuu. Zbytek se dvakrát odpařil společněvždy s 25 ml eth.anolu a jednou s 25 ml raethylenchlořidu.Odparek (66 mg) se rekrystaloval z 5 ml methanolu a po-skytl 9-lC/2-hydroxy-1-(hydroxymethyl)e thyl!thio/methyl!-guanin, jako směs s 25 % 7-isomeru, Výtěžek byl 0,015 g 29ch - (23 %), teplota tání 160 °0 (rozklad)* Směs se projevova-la jedinou velikou skvrnou při chromatograřiis na tenkévrstvě* NMR (DMSO - dg) ukázalo na směs 7- a 9-isomeru(25 % k 75 %)i údaje pro 9-isomeri /10,6 (á, 1H, TRI), 7,8 (s, 1H, C-8), 6,5 (Široký, s, -2H, NH2), 5,1 (s, 2H, ΌΗ?Ν). 4,8 (t, 2H, OH), 3,5(m, 4H, CH2O), 2,9 (m, 1H,'ch)j UV (pH 7) λ m9x 252,,^mjn 232, sh. 270 nmj hmotnostní spektrum m./e 271 ÍM1"*),241 (M+ - CHpO).

Elementární analýza pro

G9H13N5°3á’1/2 H2°.l/4 CH OH (molá hmotnost = 288,31): vypočteno: 38,54 % C, 5,24 % H, 24,29 % N,nalezeno : 38,59 % 0, 5,17 % H, 24,14 % U*

Chromatografie na tenké vrstvě (TLC): methanol : dichlor—methan (3:7) Příklad 5 2-(9-Guaninylmethoxy)~1,3-propandiyl-dipropionát

Roztok 2 g 9-u2-hydroxy-l-(hydroxyměthyl)ethb- - 295. -

xymethyljguaninu,φ 10 ml propionanliydridu , 96 mg 4-di-methy lamino pyridinu, 1,0 mlv^sušStoého pyridinu a 160 mlvy-suedného dimethylformamidu se mícháš za teploty místnosti3 dny. Roztok se odpařil ve vakuu a odparek tritúrovals ethylacetátem. Pevný podíl se rekrystaloval za 100 %ethanolu a poskytnul 0,98 (34 %) 2-(9-guaninylmethoxy)--1,3-propandíyl-dipropionátu. Teplota tání: 2t78 až 180°0. NMR spektrum odpovídalo očekávané struktuře. Příklad 6 2“(9-^uaninylmethoxy'-1,3-propandiyl-dipivalátu

Směs 0,98 g 2-r(2-ac&amp;tamido-l,6-dihydro-6-oxo--9H-purin-9-yl)methoxy3-l,3-propandiyldipivalátu, 20 ml ethanolu a 1,2 ml n-butylaminu byla míchána za teploty místnosti 45 minut a potom refuxována 15 minut. Roztokse odpařil ve vakuu a odparek čistil mžikovou chromátogra-fií na silikagelu, přičemž titulní sloučenina byla eluo-vána 5 % methanolem v methylencbloridu, po počátečnímpřejití malého množství nečistot. Jímané frakce byly od-pařeny ve vakuu a rekrystálovány z ethanolu. Získalo se0,65 g (75 %) ^2-(9-guaninylmethoxy)-l,3-propandiyl-dipi-valátu. Teplota tání 226 až 229 °C. - 29 j -

Příklad 7 2-C (2-Acetami do-1,6-dibydro-6~oxo-9H-purin-9--yl)methoxyj-l,3-propandiyl-dipivalát

Směs 4>83 g N^-acetyl-9-C/2-chlor-l-(chlor-methyl)ethoxy/methyllguani.nu, 8,13 g pivalátu draselnéhoa 60 miwjsufehého dimethylsulfoxidu se zahřívala na 70 °C(vnitřní teplota) pa míchání po dobu 18 hodin. Reakčnísměs se vylila na 600 ml směsi ledu a vody a vysráženápevná látka odfiltrovala. Pevný podíl byl rozpuštěn vhorkém methanolu a -preabsorbován na silikagelu. Odpařenýprášek se vnesl na sloptpec připravený pro mžikovou chro-matografii. Pluování 4,4 litru ethylacětátu poskytlo,po odpaření, 1,34 g bílé pevné látky, která rekrystali-zací z benzenu poskytla 0,98 g 2-C(2-acetamido-l,6-dihy-dro«6“Oxo~9H""purin-9-yl)měthoxyJ-l, 3-pnopandiyldipi valátuo teplotě tání 180 až 182 °C, který poskytl očekávané spektrum a elementární analýzu. Kluci na sloupci, prováděnousystémem 5% methanolu v methylenchloridu, se dostalo0,84 g dalšího produktu, obsahujícího malé množství ne-čistot, podle NMR a ohromatografi&amp; na tenké vrstvě (si-likagel v 10 % methanolu^ methylenchloridu). Celkový výtě-žek byl přibližně 27 %. 29k Příklad 8 N~~Aee cyl“9“L/2-cbloi‘-l“ (chlorme thyl)ethoxy/ -methyljguanin

Směs 14?2 g (0s75 M) kyseliny p-toluensulfoňo-vé v 500 ml xylenu a 500 ml 4-methyl~2-pentanonu byla re-fluxována s Dean 'Staňkovým nástavcem, aby se odstranilavoda z hydratace. Směs se slabě chladila a nadávkovalose 225,6 g dea.cetylguaninu a 336 g 3,-acetoxymethoxy-1,3--dichlorpropanu. Směs se za míchání ohřála a rozpouštědlopomalu oddestilovalo. Po 2 hodinách se nashromáždilo 200 ml

rozpouštědla. K reakšní směsi se přidalo dalších 500 mlL xylenu a pokračovalo v zářívání, dokud se neodstranilocelkem 500 ml rozpouštědla, během 3 hodinového intervalu.Směs byla potom refluxována tři hodiny a po ochlazenína teplotu 80 °G se pevné látky odfiltrovaly a tritúrová-ly acetonem. Získalo se 226 g (83 %) N^-acetyl“9-C/2-chlor--1-(chlormethyl)ethoxy/methyllguanirtu· Vysokotlakou kapa-linou chromatografií bylo stanoveno, že tento produktje slabě znečištěn ddpovídajícím 7-isomerem (2 %} aguaninem (£ 9 %). - 291 Příklad 9 2-(9-Guaninylmethoxy)-1,3-propandioldiacetát

-1,3-propandioldiaceátů a 50 ml absolutního j^ethanolubyla míchána a zahřívána na refluxu. Ke směsi se přidalo 3,5 ml n-butylaminu a po 40 minutách za refluxu se odreakční směsi odfiltrovala bílá Sraženina. Bílá pevnálátka se čistila kombinací mžikové chromatografie nasloupci (eluent ί methylenchlorid a methanol v poměru6 : l) a potom varem ve směsi ethylaqetátu s acetonem»Horká směs obsahující bíloi^evnou látku se odfiltrovalaa pevná látka usušila. Získalo se 0,380 g 2-(9-guaninyl-methoxy)-l,3-propandioldiacetátu, teplota tání 233 až

- Příklad 10

diacetát v

Směs 4,0 g 2-acetyoxymethoxy-l,3-diacetóxypro-panu, 0,2 g kyseliny p-toluensulfonové a 2,1 g deacetyl- - 29m guaninu v 25 ml/jsuó&amp;ého toluenu a refluxovala za míchání16 hodin, Reakční směs byla potom odpařena ve vakuu aodparek rozpuštěn v horkém aethanolu a preabsorbován nasilikagelu* Odpařený prášek se v§físl na sloupec 100 g si-likagelu a eluoval 5% ethanolem v ethylaoetátu. V počáteěnich frakcích byl eluován 7-isomer, potom směsi 7- a 9-. o -isomeru a nakonec čistý 9-ísomer, S-CM^-acetyl-R-guani-nylmethoxy)-l,3-propandioldiacetát (1,12 g, 32 %) , jakbylo stanoveno NMR spektrum a chromatográfií na tenkévrstvě (silikagel, 12 % ethanol v ethylaoetátu). Příklad.11 2-Acetoxymethoxy-l,3-diacetoxypropan K Roztoku 473 ml anhydiidu kyseliny octové a 10 mlkoncentrované?* kyseliny sírové se přikapalo za míchání 154 g tetraacetylmethylen-bis-2-glycerolu při teplotě0 °C. Roztok se míchal za teploty místnosti 18 hodin, po-tom ochladil opět na teplotu 0 °G a opatrně bylo přidáno27,1 g uhličitanu draselného. Směs se filtrovala přesvrstvu Oelítu, vrstva promyla diehlormethanem a spojenéfiltráty a promývací kapaliny se odpařily ve vakuu. Vý-sledná hnědá pasta se přidala ke 40 g směsi ledu a vody - 29η - a třikrát extrahovala dichlormethanem, Organické extrakty se promyly vodou, 'vysušily síranem horečnatým a odpařily ve vakuu na 176 g oleje. Destilací se dostalo 38.15 g (36 %) 2-acetoxym.ethoxy-l, 3-diacetoxypropanu o teplotě·» varu 125 až 14Ο °C/4Pa, který měl XH NMR spektrum v sou-ladu s navrženou strukturou. Příklad 12

Tetracetylmethylen-bis-2-glycerol

Směs 220 g 2,2*-methylendioxy-bis-(l,3-dichlor-propanu), 20 g lS-orovzn-6 a 907 g octanu draselného v 1litru dímethylsulfoxidu bylo mícháno za teploty 92 °C podobu 24 hodin, Seakční směs byla vylita na 1 litr ledus vodou a třikrát extrahována vždy 1 litrem etheru, Ethe-rové extrakty se sušily síranem hořečnatým, filtrovaly aodpařily. Dostalo se 154 g (52 %) tetraacetylmethylen-bis-2-glyoerolu,

30 - Příklad 4 Účinnost S-^fVS-hydroxy-l-hydroxymethylethoKy/-methyl_J7-guaninu a acykloviru vůči viru. koňskérhinopneumonitidy

Metoda.

Samci krémových syrských odstavenýchkřečků, 40 - 50 g 21 až 24 dní starých byli uzavře-ni do klecí ve skupinách po pěti a byla jim dánavoda a krmivo ad libitum. Virus equine rhinopneumonitidy /EHV-l/, pro křečky adaptovaný druh vakcíny

/—I "pneumabort” byl použit; vakcína byla zředěna 10 v tekutině tkáňové kultury a tento zásobní roztok 0. byl skladován v 1 ml podílech v zatavených skleně-ných ampulích při -70 °G. Ve dni 0 křečci, kteří měli být infikováni, obdrželi 0,2 ml zásobního vak-

-*T cínovaného viru zředěného dále 2.10 ve fosfátempufrovaném solném roztoku, subkutánně do levého bo-ku. 9-/~/2-Hy droxy-l-hy dr oxymethy lethoxy /-methyl_7guanin /dále označovaný jako 759 0/ a acyklovir byly připraveny jako vodné roztoky ve sterilnídestilované vodě v koncentracích, které jsou speci-fikovány níže. - 31 -

Experiment 1 .Intraperitoneální podávání:

Ode dne 0 do dne 4 včetně křečci dostávali7590 nebo acyklovir ve dvou dávkách denně ve vod-ném roztoku, přičemž koncentrace 8590 se měnila,jak je uvedeno dále, totiž 5 mg/ml, čímž se získaldávkový poměr 100 nebo 50 mg/kg/den, 1,8 mg/ml pro20 mg/kg/den, 0,18 mg/ml pro 4 mg/kg/den a 0,036mg/ml pro 2 mg/kg/den. Oeléčení kontrolní křečcidostávali ekvivalentní objem sterilní destilovanévody. Výsledky: Výsledky jso^u uvedeny -5 t, následující, tabulce , počet ve léčení kumulativní mortalita skupině mg/kg/den den intraperi- 2 3 4 5 6 7 toneálně 10 50/acyklovir 0 1 2 5 6 6 10 100/acyklovir 0 0 !♦ 8+ 24- 34- 10 100Λ59Π 0 0 0 0 0 14- 10 50/7590 0 0 0 0 0 0 10 ’ 20/7590 0 0 0 0 0 0 10 4/7590 0 0 0 0 0 0 32 - pokračování tabulky počet veskupině léčení mg/kg/den intraperi- toneálně kumulativní mortalita den 3 4 S 6 7 10 2/750D 0 0 0 0 0 0 10 neléčeno 0 5 0 10 10 10 * uhynutí nezpůsobená virem Závěr: Dávka acykloviru 100 mgAg/den intraperitoneálněpo dobu 5 dnů následně po 5 hodinové předběžné in-fekci byla všeobecně nutná k zábraně Jakékoli viremvyvolané mortality. V porovnání s tím 7SOD při in-traperitoneální dávce 2 mg/kg/den zajistila úplnépotlačení.

Experiment 2 /a/

Orální podání 7SOD Zásobní roztok 750D byl připraven ve sterilnídestilované ovdŠ v koncentraci 0,314 láfe/ml a pakzředěn ve 3 stupních, čímž se získalo 0,101 a 33 - 0,034 mg/ml, Křečci dostali pít léčebnou, vodu po do-

' , ' I bu 5 dnů po 5 hodinové předběžné infekci. Kontrolní skupina dostávala vodu bez léčiva. Výsledky * počet ve léčení ♦ kumulativní mortalita skupině mg/kg/den dne 759U orálně 2 3 4 5 6 7 10 39 0 0 0 0 0 0 10 13 0 0 0 0 0 0 10 3 0 1 1 1 1 1 10 neléčeno 1 5 10 . . 10 io : LO, . + počítáno ze středního denního příjmu

Experiment 2b/

Orální podání acykloviru

Acyklovir byl rozpuštěn ve sterilnídestilované vodě v koncentraci 2 aag/ml a přídavkem trochy hydroxidu sodného a zahřátím na 42 °C k usnad-nění rozpuštění, Křečci byli léčeni pitím vody obsahu- jící acyklovir v koncentraci 2 mg/ml po dobu 5 dnípo 5 hodinách předběžné infekce. Orální léčení pro-bíhal© v dávce přibližně 100 mgAg/den. Kontrolnískupina byla zásobována vodou bez léčiva. Výsledky: počet ve léčení kumulativní mortalita skupině mg/kg/den dny acyklovir 23 456 ___ -___orálně__________________________________ 12 100 0 2 5 7 8 12 ......neléčen© 0 6. 12 12 12 Závěr:

Acyklovir vykázal špatnou účinnost vůčiBHV-1, když byl podáván orálně v dávce 100 mgAg/denpo dobu 5 dní, zatímco 7590 byl zcela účinný orálněpři dávce 13 mg/kg/den s jedině omezenou mortalitoupři dávce 3 mgAg/den. - 35 Příklad 15

Srovnání účinností 7 SOU a @-aqiinoanalogu /45711/ vůči equne rhinopneumonitis viru.

Materiály a způsoby Křečci 50 samců WO/CB. syrských křečků bylo rozmís- těno náhodně do klesí v 10 skupinách po 5 s vodoua krmivém /směs zrní/ ad libitum. Křečci byli váže-ni ve dnech -3, 0, 4 a/nebo úmrtí/obětování. Spotřebavody byla zaznamenána ve dnech -3 až 0 až 4.

Virus a infekce 32HV-1 Pneumabprt vakcína uskladněná jako10“1 zředění byla dále zředěna 10“1 v 3BS proinfekci. Ve dni 0 křáóei veskupináeh 1 až 9 dosta-li 0,2 ml virového inokula s/e do levého boku, cožje ekvivalentní asi 2.10 H?U /plague-forming unita/.

457U a 759U byly rozpuštěny v pitné vodě v množství 0,075 mg/ml. Za předpokladu průměrnéhodenního příjmu 134 ml/mg tělesné hmotnosti by to - 36 - vedlo k denní dávce kolem 10 mg na kg. Mpdikovanávoda byla poskytována po přibližně Shodinové před-běžné infekci po dobu 96 hodin, jak je uvedeno ní-že. skupina medikace 1-3 7590 4-6 4570 7-9 neléčeny/ infikovány 10 neléčeny/neinfikovány Výsledky:

Kumulativní mortalita je shrnuta v násle-dující tabulce. Příjem léčiva byl vypočten z hmot-nosti zvířat a ze spotřeby vody zaznamenávané podobu experimentu.

Bylo pouze 1 uhynutí od virem navozenéhepatitidy ve skupině 15 křečků, léčených 4570 vesrovnání se 14 úmrtími ve skupině 15 kontrolníchkřečků neléčených, a žádné uhynutí ve skupině 15křečků, kteří dostávali 7590. - 37 -

Tabulka skupina vodní končen- vodní kon- průměr kumulativnítrace centrace příjem mortalita

75SU

457H ffigAg/ A^/.naaen * mg/ml mg/ml den 1 - 3 0,075 6,6 0 0 0 4 - 6 0,075 - 6,8 0 1 1 7 - © - - - 0 9 14 10* Ί 0 0 0 Závěry í

Sloučenina 457H, to je diamino derivát759TJ, když byla podávána orálně v pitné vodě v dávcepřibližně 7 mg/kg/den téměř úplně zabránila úhynu vyvolanému EHV-1 u syrských, křečků, zatímco 759Uúplně zabránila úhynu vyvolanému EHV-1- Příklade Účinnost 759TJ vůči Herpes Simplex typ 1 in vitroMetoda eOmilimetrové misky z plastické hmoty na 38 buněčnou kulturu byly zaočkovány 6 ml VÍRO buněčné

kultivačním mediu obsahujícím 5 $ fetálního telecí-ho séra, 10 % Igleova minimálního esenciálního média,0,11 % hydrogenuhliěitanu sodného, 0,25 $ Orystamici-nu /50 000 jednotek benzylpěnicilinu sodného S.P.v 1 ml a 50 mg síranu streptomyeinu B.P« na 1 ml/.Miskami bylo jemně třepáno, aby se zajistila úplnádisperze buněk a pak byly kultury inkubovány při 37 °0v atmosféře vzduchu s 5 $ COg přes noc, aby se dosáhl©splynutí. Kultivační médium bylo pak přeočkováno 2 mi-lilitry virového inokula /Kerpex Simplex typ 1/ vefosfátem pufrovaném solném roztoku /BBS/. Koncentra-ce viru byla taková, aby se vyvolala tvorba 200 až400 plak/na 1 misku. Byla ponechána doba 1 hodinypro absorpci viru při 37 °C ve vzduchu s 5 $ COg,po kteréžto době byly misky odvodněny a bylo přidán©převrstvovací médium /8 ml/ při 42 °C. Převrstvovanímédium sestávalo z 0,6 % agarosy, 2 fetálního te-lecího séra, 10 $ Iglova minimálního esenciálníhomédia, 0,11 $ hydrogenuhliěitanu sodného a 0,25 %

Crystamicinu. 'f

Byla připravena dvojí zředění /co domikromolarity/ účinné sloučeniny v převrstvení a 'du- - se - plikátní kultury byly převrstveny udržovacím médiem,které obsahovalo mezná rozpětí koncentrací slouče-niny. Byla také připraveny neošétřené virové kon-trolní kultury a neinfikované kultury. Převrstveníse nechalo ztuhnout při teplotě místnosti před na-vrácením kultur do inkubátoru při 37 °0 ve vzduchus 5 % GOg po dobu 4 dnů. Kultury pak byly fixoványlO^ním formalínem v pufrovaném solném roztoku podobu 30 minut až 1 hodiny. Převrstvení bylo odstra-něno a buňky byly obarveny roztokem 0,05 $ /hmotnost/objem/ methylvMeti ve 20#ním methanolu* Výslednéplaky byly spočítány a vyjádřeny jako procentovýpodíl plak vztažený na neošetřené virové kontrolníkultury. Tyto hodnoty pak byly vyneseny''proti log^koncentrace sloučeniny a hodnoty představují- cí množství sloučeniny potřebné k snížení počtuplak o 50 byly odečteny z výsledné křivky udáva-jící dávkovou odezvu. 40 - Výsledky: 750U acyklovir

Experiment 1 0,09 0,17 Experiment 2 0,05 0,075 Experiment 3 0,036 0,11 střed 0,059 0,118 Závěrí 759U má větší účinnost in vitro vůči Herpes sim- plex typu I než acyklovir. Příklad? Účinnost 759U vůči herpetieké encefalitidě in vivoPříprava zásobního viru Švýcarské n^ši vážící 12 až 15 g byly anestetizovány etherem a byly intraeerebrálně naočkoványmnožstvím 0,025 ml tkáňové kultury s Herpes viremtypu I. Myši byly denně vyšetřovány na známky herpe-tické encefalitidy, to je na cerebrální iritaci vedou - 41 - cí k paralyse, komatu a úhynu. Myši byly usmrceny,když jevily rané známky cerebřální iritaee. Vnitřnos-ti myší byly zkoumány na známky infekce bakterieminebo jinými činiteli a když nebyly zjištěny žádnéabnormality, byly mozky aseptieky odebrány a rozměl-něny na hladkou pastu, Homogenizát byl resuspendovánv udržovacím médiu tkáňové kultury /4 ml na každý mo-zek/ a smíchán a glyeerolem v poměru 2:1, Myší mozkyvážily přibližně 400 mg a preparát tedy představovalzředění 1O“1.

Takto připravený zásobní směsi virubyly titrovány na myších pro stanovení IDso titru,očkováním myší intraceřebrálně desetinásobnými zře-děními zásobního virového preparátu a následným vy-šetřováním dvakrát denně na známky infekce. titr byl vypočten Karberovou metodou.

Metoda

Skupiny 5 myší byly infikovány intra-eerebrálně zásobním virem zředěným tak, aby se získa-la dávka kolem 300 x Sloučenina, která byla testována, byla podávána dvakrát denně jako suspen-ze orální cestou v dávce 100 mgAg. Zvířata byla vyv - 42 - šetřována dvakrát denně a byly zaznamenávány dobypřežití k nejbližšímu půldni. Dávkování bylo prová-děno po pět dní a celková doba pozorování byla 14dní. Doby přežití byly převedeny na reciproké hodnotya střední doba přežití byla stanovena pro každou sku-pinu podle B. Bauerf, D.J*, Brit. J. Exp* Patli* 1960,£L, 130/.

Acyklovir 7590 Neošetřeno

Střední reciproká doba přežití 0,26 0,15 , 0,33 Závěri Účinnost, která byla zjištěna pro 7590 při,orálním podávání intraeerebrálně infikovaným myším,byla mnohem větší než účinnost acykloviru za stejnýchpodmínek. Příklad 8

Srovnání účinnosti 7590 a 4570 in vivo proti herpe-tické encefalitidě 7590 a 4570 byly testovány in vivo vůči 43 - herpetické encefalitidě u myší ve srovnání s acyklo-vir em a jeho 6-aminoanalogem, 2-amino-9-/2-hydroxy-methoxymethyl/adeninem /Ϊ340/.

Materiály a metody

Myši

Myši CD.l vážící 16 až 20 g byly získányod firmy Charles Eiver, Manston, Kent/ V.Británie.Zvířata byla umístěna ve skupinách přibližně po 10a bylo jim podáváno krmivo a voda ad libitum.

Antivirální sloučeniny

Sloučeniny, totiž acyklovir, 1340, 759U a4570, byly připraveny jako suspenze nebo roztokyve sterilní vodě o koncentraci 20 mg/ml před každýmexperimentem a byly uloženy při 4 °C během doby dáv-kování.

Virus IGI kmen Herpes Simplex viru typ 1 bylpoužit pro všechny experimenty o koncentraci 300 c IBSO /10° pfu/ na 1 ml. Zředění z virových zásob- - 44 - 7 nich roztoků /10 pfu/ml byla připravena v pufrova-ném solném roztoku A·

Testovací postupy

Testovací postup Je analogický jako postupv popsaný v příkladu 13. Byly provedeny 3 experimenty,u kterých byly zkoušeny 3 způsoby podávání sloučeni-ny * i/ subkutánní ii/ orální iii/ intraperitoneální. r-

Sloučeniny byly podávány v dávce 100 mg/mldvakrát denně po 4,5 dne počínaje S - 3 hodiny poinfekci. Výsledky i

Střední reciproké doby přežití pro orální,subkutánní /s.e./ a intraperitoneální /i.p./ podá-ní antivirálních sloučenin jsou uvedeny v následují-cí tabulce. — 45 — ošetřovaná skupina střední reciproká doba přežití orální s * e · i.p. virová kontrola 300 1D5O 0,334 0,3<4 0,307 acyklovir 100 mg/kg/dávku 0,237 0,174 0,236 1340 100 mg/kg/dávku 0,222 0,226 0,231 7500 100 mg/kg/dávku 0,146 0,084 0,003 457U 100 mg/kg/dávku 0,155 0,102 0,077 Při srovnání těchto . ou skupin terapií,aeykloviru a 134U se 759U a 4570, měla druhá sku-pina největší antivirální uěinek. Hozdíly mezi tě-mito dvěma skupinami byly vysoce signifikantní přiKterémkoli ze tří způsobů podávání.

Claims (3)

1. 46 - P δ ϊ BIS Ϊ T ϊ Ϊ Á i Ϊ Z ϋ MDVOKÁTHÍ F0BONA ,/Οá HA 1, Ž 1 T Á O -

   1. Způsob výroby antivirálně účinných 2-amin©-9- -C(2-hydroxy~l-hydroxymethyleth©3{y )aethyl3purinů obecnéhovzorce I

   < I ), ve kterém δ znamená hydroxyskupinu nebo amineskupinu a X znamená atom kyslíku nebo atom síry, jakož i jejich fyziologicky přijatelných solí a esterů,vyznačující se tím, že se sloučenina obecného vzorce II - 47 Z

   W a W1 každá znamená atom vodíku nebo alkanoylovou skupinu s 1 iai 4 atomy uhlíku, aroylovou skupí-*nu/ arylmothýlovou skupin/ nebo trialkylsily-lovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v každéalkylevé skupině, Y znamená atom vodíku nebo alkanoylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, aroylovou skupinu,arylmethylovou skupinu nebo trialkylsilylovouskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v každé alkylevé - 48 « skupině a Z znamená skupinu vzorce -0Y nebo -NHY, kde Y má výše uvedený význam, za předpokladu, že znamená-li X atom kyslíku a Z hydro-xyskupinu, pak každý ze substituentů W a W1 znamená i bučí alkanoylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, neboaroylovou skupinu neb© trialkylsilylovou skupinu s 1 až4 atomy uhlíku v každé alkyl©vé části, podrobí zpracování k odštěpení přítomných skupin V, W1a Y hydrolýzou, hydrogenolýzou neb© solvolýzou, za vznikusloučeniny obecného vzoree 1 nebo její soli nebo jejíhoesteru, a popřípadě se provádí alespoň jedna z následují-cích konvsbzí v jakémkoli požadovaném pořadí, a to i) tam, kde výsledným produktem je báze, převádí se tato báze na# fyziologicky přijatelnou adičnísůl β kyselinou, ii) tam, kde je výsledným produktem adiční sůl s ky-

   iii) tam, kde je výsledným páoduktem sloučenina obecného vzorce I nebo její sůl, převádí se tatosloučenina nebo její sůl na fyziologicky přija-telný ester této sloučeniny nebo soli, a/nebo iv) tam, kde je výsledným produktem ester sloučeni-ny obecného vzorce I, převádí se tento esterna základní sloučeninu obecného vzorce I nebojejí fyziologicky přijatelnou *ůl.
2. 2. Způsob podle bodu 1., vyznačující se tím, že se používá sloučeniny obecného vzorce II, ve kterémW, W1 a T jsou vybrány ze souboru zahrnujícího alkanoylo-vou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, benzoylovou skupinu,benzylovou skupinu nebo trialkylsilylovou skupinu s 1až 4 atomy uhlíku v každé alkylové části.
3. 3. Způsob podle bodu 1 neb© 2, vyznačující se tím, že odštěpení skupin W, W1 a Ϊ se provádí hydrolýzounebo hjrdrogenolýzou. 53 272/VS rt Zastup

   e J*