DK150521B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af n2-arylsulfonyl-l-argininamider eller farmaceutisk acceptable salte deraf - Google Patents

Description

150521

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til 2 fremstilling af hidtil ukendte og nyttige N -arylsulfonyl-L-ar-gininamider eller de farmaceutisk acceptable salte deraf, som har en særlig værdi på grund af deres fremragende antithrombotiske egenskaber og lave toxiciteter.

Der er hidtil udført mange forsøg på at fremstille nye og forbed- 2 rede midler til behandling af thrombosis. N -(p-toluensulfonyl)--L-argininestere har vist sig at være af den type midler, som kan anvendes, og disse har vist sig at være effektive til opløsning af blodpropper. (USA patentbeskrivelse nr. 3.622.615, udstedt den 23. november 1971). En klasse af forbindelser, som har vist sig at være særlig nyttig som meget specifikke inhibitorer for thrombin ved bekæmpelsen af thrombosis, er N -dansy1-L-argininesteren eller -amidet. (Vor USA patentansøgning nr. 496.939, indleveret 13. august 1974, nu USA patent nr. 3.978.045). Der er imidlertid et vedvarende behov for en meget specifik og mindre toxisk inhibitor for thrombin til bekæmpelse af thrombosis.

Det har nu vist sig, at de ifølge opfindelsen fremstillede N^-aryl-sulfonyl-L-argininamider har antithrombotisk virkning og endog lavere toxicitets-niveau ved de samme relative styrker end de kend-2 te N -dansy1-L-argininestere og -amider.

Den foreliggende opfindelse angår derfor en analogifremgangsmåde 2

til fremstilling af N -arylsulfonyl-L-argininamider med den almene formel I

HN

\

C - N - CH^CH-CH^CHCOR I

/ I I

Η-,Ν H HNSO~ 12

Ar hvor R udvælges fra klassen bestående af 150521 2 /Rl

(1) - IT

Ss'v CH(CH2) nCOOR3 i2 hvor R^ betegner C2_^Q-alkyl, C2_^Q~alkoxyalkyl, C2_^g~alkylthio-alkyl, C2_-L0-alkylsulfinylalkyl, C-^^-aralkyl, Cg^g-cycloalkyl, C4_io_cycl°alkylalkyl, furfuryl, tetrahydrofurfuryl, tetrahydro--2-pyranylmethyl, 2- eller 3-pyridylmethyl eller phenyl? R^ be- 3 tegner hydrogen eller C^_^Q-alkyl; R betegner hydrogen eller C^_^Q-alkylj og n er et helt tal 0 eller 1, - -<? m 4 6 6 hvor R betegner -C00R , hvor R betegner hydrogen eller C, Ί n-

5 J-”1U

-alkyl, hver R beteqner uafhængigt af hinanden hydrogen eller 4

Ci ^Q-alkyl, og m er et helt tal 1 eller 2; R er substitueret i 2- eller 3-stillingen, og R5 er substitueret i 2-, 3-, 4-, 5-og/eller 6-stillingen, (3) COOiU-.

Nn-(CH2)J

hvor p er et helt tal 1 eller 2;

COOH

<«> -N 0 eller '—'

COOH

og (5) 3 15 O 5 21

Ar betegner phenyl, der er substitueret med mindst én substituent valgt fra klassen bestående af amino, C^_10~alkylamino, alkanoyl- amino, C-^g-hydroxyalkyl, phenyl, C7_10~phenylalkyl og C1_1Q-hydr-oxyalkoxy; phenyl substitueret med mindst én substituent valgt fra klassen bestående af hydroxy, C^_^-alkyl og C^_1Q-alkoxy, og mindst én substituent valgt fra klassen bestående af C7_^2-a^al-kyl, C2_g-alkylcarbonyl og phenyl? en phenoxyphenyl-, dibenzothie-nyl-, 9,9-dioxodibenzothienyl-, phenoxathiinyl-_, lH-indazolyl-, quinolyl-, indolinyl-, phenazinyl-, quinoxalinyl-, phthalazinyl-, 1,2,3,4-tetrahydroquinolyl- eller acridinylgruppe, som hver er usubstitueret eller substitueret med én eller flere grupper valgt fra klassen bestående af hydroxy, C1_^Q-alkoxy og C-j^Q-alkyl; en Cg_^g-cycloalkylphenyl-, fluorenyl-, thioxanthenyl-eller 2H-chromenylgruppe, som hver er usubstitueret eller substitueret med én eller flere grupper valgt fra klassen bestående af hydroxy, C1_1Q-alkyl, C1_1Q-alkoxy, Cj.-^alkoxyoarbonyl og oxo? 3-cyclohexyl-4-ethoxycarbonyloxyphenyl? eller en phenyl-gruppe, der er substitueret med mindst én substituent valgt fra klassen bestående af alkyl, alkoxy, halogenalkoxy, alkoxyalkoxy og alkoxycarbonylalkoxy, idet nævnte substituenter indeholder 3-7 carbonatomer, og idet nævnte substituerede phenylgruppe eventuelt er yderligere substitueret med mindst én substituent valgt fra klassen bestående af methyl, ethyl, methoxy, ethoxy, hydroxy og halogen, eller farmaceutisk acceptable salte deraf.

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser kan anvendes til at inhibere virkningen og undertrykke aktiveringen af thrombin in vivo i pattedyr ved administration til et pattedyr af en farmaceutisk (antithrombotisk) effektiv mængde 2 af en N -arylsulfonyl-L-argininamid eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

Den mest foretrukne gruppe Ar er phenyl, som er substitueret mindst én gang med amino, C-^g-alkylamino, C^_10-alkanoylamino, -hydroxyalkyl eller C-^q-hydroxyalkoxy? phenyl, som er substitueret mindst én gang med C7_^2~ara3.kyl og mindst én gang med hydroxy, C^_g-alkyl eller C^_^Q-alkoxy; 150521 4 en phenoxyphenyl-, dibenzothienyl-, phenoxathiinyl-, quinolyl-eller quinoxalinylgruppe, som hver er usubstitueret eller substitueret én eller flere gange med hydroxy eller C-j^g-alkyl; en Cη_-^2-aralkyl, Cg_16-cycloalkylphenyl-, fluorenyl- eller 2H--chromenylgruppe, som hver er usubstitueret eller substitueret én eller flere gange med C-L_1g-alkyl eller C1_1g-alkoxy; eller en phenylgruppe substitueret mindst én gang med alkyl, alkoxy, halogenalkoxy, alkoxyalkyl, alkoxyalkoxy eller alkoxycarbonyl-alkoxy, hvorhos substituenten indeholder 3-7 carbonatomer, og den substituerede phenylgruppe er eventuelt yderligere substitueret mindst én gang med methyl, ethyl, methoxy, ethoxy, hydroxy eller halogen.

Typiske forbindelser fremstillet ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse er: 1-[N2-(quinolin-8-sulfonyl)-L-arginyl]-4-methyl-2-piperidincarbo-xylsyre (jfr· forbindelse 33 i tabel I), 1-[N2-(3-methylquinolin-8-sulfonyl)-L-arginyl]-4-methyl-2-piperidin-carboxylsyre (jfr. forbindelse 38 i tabel I), 1-[N2-(3-ethylquinolin-8-sulfonyl)-L-arginyl]-4-methyl-2-piperi-dincarboxylsyre (jfr. forbindelse 42 i tabel I), 1-[N2-(3-sek.butoxybenzen-l-sulfonyl)-L-arginyl]-4-methyl-2-pipe- ridincarboxylsyre (jfr. forbindelse 111 i tabel I), 1-[N2-(3,5-dimethyl-4-isopropoxybenzen-l-sulfonyl)-L-arginyl]-4-me- thyl-2-piperidincarboxylsyre (jfr. forbindelse 120 i tabel I), o 1-[N -(2,4-dimethoxy-3-butoxybenzen-l-sulfonyl)-L-arginyl]-4-methyl- -2-piperidincarboxylsyre.(jfr. forbindelse 124 i tabel I), 1-[N -(3-isopropoxybenzen-l-sulfonyl)-L-arginyl]-4-methyl-2-pipe- ridincarboxylsyre-(jfr. forbindelse 112 i tabel I), 2 N -(2-phenoxathiinylsulfonyl)-L-arginyl-N-tetrahydrofurfurylglycin (jfr. forbindelse 21 i tabel I), 2 N -(2-fluorensulfonyl)-L-arginyl-N-(2-methoxyethyl)glycin (jfr. forbindelse 58 i tabel I) og 2 1-[N -(4-methoxy-3-cyclohexylbenzen-l-sulfonyl)-L-arginyl]-4-me-thyl-2-piperidincarboxylsyre (jfr. forbindelse 25 i tabel I).

5 150521

De farmaceutisk acceptable salte af de ovennævnte forbindelser falder også inden for den foreliggende opfindelses rammer.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i krav l's kendetegnende del angivne. Fremstillingen sker således ifølge en af de nedenfor skitserede synteseveje.

p p Λ a) Fjernelse af N -substituenten fra et N -substitueret N-aryl-sulfonyl-L-argininamid.

Denne fremgangsmåde kan belyses som følger:

HN

C - N - CH9CH9CH9CHCOOH II -» / I 2 2 2| h2n h nh2

HN

X - N - CH9CH„CHoCHC00H III

/ I 2 2 2,

N R" HN

I I

R' R"' + RH IV —'i

HN

^ - N - CH9CH9CH9CHC0R V -}

/I I

HN R” HN

i1 R"'

HN

\ - N - CH2CH2CH2CHCOR XIX ArSQ2X VI1 y e/ H" NH„ R* 6 150521

HN

\ - N - CHoCHoCHoCHC0R XX

/ I 2 2i HN R" HN|°2 1« Ar

HN

\

_C - N - CH2CH2CH2CHCOR I

H2N H HNS°2

Ar I de ovennævnte formler har R, Ar, Rl °9 R" den ovenfor angivne betydning, og R”' er en a-aminobeskyttelsesgruppe.

2 N -Arylsulfonyl-L-argininamidet med den almene formel I fremstil- G G 2 les ved at fjerne N -substituenten fra et N -substitueret N -aryl- sulfonyl-L-argininamid med den almene formel XX ved syrehydrolyse eller hydrogenoly.se.

p

Syrehydrolysen udføres sædvanligvis ved at bringe det N -substituerede , 2 N -arylsulfonyl-L-argininamid med den almene formel XX i kontakt med et overskud af en syre, f.eks. hydrogenfluorid, hydrogenchlorid, hydrogenbromid eller trifluoreddikesyre, uden et opløsningsmiddel eller i et opløsningsmiddel, f.eks. en ether (tetrahydrofuran eller dioxan), en alkohol (methanol eller ethanol) eller eddikesyre ved en temperatur i området -10 - +100°C, fortrinsvis i området 10 - 60°C, og særligt foretrukket ved stuetemperatur, i en periode på fra 30 minutter til 24 timer. Produkterne isoleres ved afdampning af opløsningsmidlet og syreoverskuddet eller ved tri-turering med et egnet opløsningsmiddel efterfulgt af filtrering og tørring.

Da der anvendes et overskud af syre, er produkterne sædvanligvis 2 i form af syreadditionssaltene af N -arylsulfonyl-L-argininamiderne med den almene formel I, hvilke let kan omdannes til det fri amid ved neutralisation.

150521 7

Fjernelsen af beskyttelsesgrupperne R' og R" i form af nitrogrupper og oxycarbonylgrupper, f.eks. ben2yloxycarbonyl eller p-ni-trobenzyloxycarbonyl, udføres let ved hydrogenolyse. Samtidigt omdannes benzylesterdelen, som kan være inkluderet i gruppen R, når R betegner benzyl, til en carboxylgruppe ved hydrogenolysen.

Hydrogenolysen udføres i et over for reaktionen inert opløsningsmiddel, f.eks. methanol, ethanol, tetrahydrofuran eller dioxan, i nærværelse af en hydrogenaktiverendé katalysator, f.eks. Raney--nikkel, palladium eller platin, i en hydrogenatmosfære ved en temperatur mellem 0°C og opløsningsmidlets kogepunkt, fortrinsvis ved en temperatur i området 10 - 80°C, i en periode på fra 2 timer til 120 timer. Hydrogentrykket er ikke kritisk, og atmosfærisk tryk er tilstrækkeligt.

2 N -Arylsulfonyl-L-argininamiderne med den almene formel I isoleres ved frafiltrering af katalysatoren fulgt af afdampning af opløs-2 ningsmidlet. N -Arylsulfonyl-L-argininamiderne kan renses ved omkrystallisation af et egnet opløsningsmiddel såsom hexan eller benzen.

G 2

De N -substituerede N -arylsulfonyl-L-argininamidudgangsmaterialer med den almene formel XX kan fremstilles ved at beskytte guanidi-no- og α-aminogrupperne i L-arginin med formlen II via nitrering, acetylering, formylering, phthaloylering, trifluoracetylering, p-methoxybenzyloxycarbonylering, benzoylering, benzyloxycarbonylering, tert.butoxycarbonylering eller tritylering, kondensere den G 2 dannede N -substituerede-N -substituerede L-arginin med den almene G 2 formel III (sædvanligvis er N -substituenten nitro eller acyl, og N -sub- stituenten er en beskyttelsesgruppe for aminogruppen, f.eks. ben- zyloxycarbonyl eller tert.butoxycarbonyl) og et tilsvarende amino- syrederivat med den almene formel IV, ved selektivt kun at fjerne 2 G 2 N -substituenten i N -substitueret N -substitueret L-argininamid med den almene formel V ved hjælp af katalytisk hydrogenolyse eller

G

syrehydrolyse, og derpå kondensere det således vundne N -substituerede L-argininamid med den almene formel XIX med et arylsulfonyl-halogenid med den almene formel VII, fortrinsvis et chlorid, i nærværelse af en base i et opløsningsmiddel f.eks. en organisk base (triethylamin eller pyridin), eller en opløsning af en uorganisk base (natriumhydroxid eller kaliumcarbonat) ved en temperatur mel- δ 150521 lerj 0°C og opløsningsmidlets kogepunkt i mellem 10 minutter og 15 timer- Foretrukne opløsningsmidler for kondensationen er ben-zen/diethylether, diethylether/vand og dioxan/vand.

2 b) Kondensation af et N -arylsulfonyl-L-arginylhalogenamid med et aminosyrederivat.

Denne fremgangsmåde kan belyses som følger:

HN H

\ I

C - N - CH2CH2CH2CHCOOH II

H2N NH2 + ArS02X VII -y

HN H

\ i C - N - CH2CH2CH2CHCOOH XXI -> H~N HNSO-

Ar

HN H

\ I

C - N - CHoCH-CHoCHC0X XXII

/ 2 2 2I

H Nx 1 2 HNSO-

Ar + RH IV }

HN H

\ I

C - N - CH2CH2CH2CHCOR i HNS02

Ar I de ovenfor viste formler har R, Ar og X den ovenfor angivne betydning.

2 9 1S0521 N -arylsulfonyl-L-argininamidet med den almene formel I fremstilles ved at kondensere et N -arylsulfonyl-L-arginylhalogenid med den almene formel XXII, fortrinsvis et chlorid, med mindst en ækvimo— laer mængde af et aminosyrederivat med den almene formel IV.

Kondensationen kan udføres uden et tilsat opløsningsmiddel i nærværelse af en base. Tilfredsstillende resultater opnås imidlertid under anvendelse af et opløsningsmiddel, f.eks. basiske opløsningsmidler (dimethylformamid eller dimethylacetamid) eller halogenerede opløsningsmidler (chloroform eller dichlormethan). Den anvendte mængde opløsningsmiddel er ikke kritisk og kan variere 2 fra ca. 5 til ca. 100 gange vægten af N -arylsulfonyl-L-arginyl-halogenidet med den almene formel XXII. Foretrukne kondensationsreaktionstemperaturer ligger i området -10 - +80°C, fortrinsvis i området 20 - 50°C. Reaktionstiden er ikke kritisk, men varierer med det anvendte aminosyrederivat med den almene formel IV. Sædvanligvis er en periode på fra 5 minutter til 10 timer passende.

2

Det vundne N -arylsulfonyl-L-argininamid kan isoleres og renses på samme måde, som beskrevet ovenfor.

2

De N -arylsulfonyl-L-arginylhalogenidudgangsmaterialer med den almene formel XXII, som er nødvendige til kondensationsreaktionen, 2 kan fremstilles ved at omsætte en N -arylsulfonyl-L-arginin med den almene formel XXI med mindst en ækvimolær mængde af et halogener ingsmiddel, f.eks. thionylchlorid, phosphoroxychlorid, phosphor-trichlorid, phosphorpentachlorid eller phosphortribromid. Halogeneringen kan udføres med eller uden et tilsat opløsningsmiddel. Foretrukne opløsningsmidler er chlorerede carbonhydrider såsom chloroform eller dichlormethan og ethere såsom tetrahydrofuran eller dioxan. Den anvendte mængde opløsningsmiddel er ikke kritisk og 2 kan variere fra ca. 5 til ca. 100 gange vægten af N -arylsulfo-nyl-L-argininen med den almene formel XXI.

Foretrukne reaktionstemperaturer ligger i området mellem -10°C og stuetemperatur. Reaktionstiden er ikke kritisk, men afhænger af halogeneringsmidlet og reaktionstemperaturen. Sædvanligvis er en periode på fra 15 minutter til 5 timer passende.

2 150S21 ίο

De N -arylsulfonyl-L-argininer med den almene formel XXI, som er 2 udgangsmaterialer til fremstillingen af N -arylsulfonyl-L-argi-nylhalogeniderne med den almene formel XXII, kan fremstilles ved at kondensere L-arginin med formlen II med en i det væsentlige ækvimolær mængde arylsulfonylhalogenid med den almene formel VII ved en fremgangsmåde, som er analog til den, der er beskrevet i sammenhæng med kondensationen af et L-argininamid med et arylsulfonylhalogenid .

2

Det er kendt, at et esterderivat af N -arylsulfonyl-L-argininamidet 3 6 med den almene formel I, hvor R og R betegner alkyl, kan frem- 2 stilles ud fra et carboxylsyrederivat af N -arylsulfonyl-L-argi-3 6 ninamidet, hvor R og R betegner hydrogen, på til esterifikation i og for sig kendt måde. Det er også kendt, at carboxylsyrede-rivatet kan fremstilles ud fra esterderivatet ved sædvanlig hydrolyse eller syrehydrolyse. De betingelser, under hvilke esteri-fikationen, hydrolysen eller syrehydrolysen skal udføres, vil være åbenbare for en fagmand.

2

De her omhandlede N -arylsulfonyl-L-argininamider med den almene formel I danner syreadditionssalte med en række uorganiske og or- 2 ganiske syrer. Nogle af N -arylsulfonyl-L-argininamiderne, som 3 6 indeholder en fri carboxylgruppe, hvor R og R betegner hydrogen, danner salte med en lang række uorganiske og organiske baser.

Produktet af de ovenfor beskrevne reaktioner kan isoleres i den fri form eller i form af salte. Herudover kan produktet vindes som farmaceutisk acceptable syreadditionssalte ved at omsætte én af de frie baser med en syre såsom saltsyre, brombrintesyre, iodbrin-tesyre, salpetersyre, svovlsyre, phosphorsyre, eddikesyre, citronsyre, maleinsyre, ravsyre, mælkesyre, vinsyre, gluconsyre, benzoesyre, methansulfonsyre, ethansulfonsyre, benzensulfonsyre eller p-toluensulfonsyre. På lignende måde kan produktet vindes som farmaceutisk acceptable salte ved at omsætte en af de fri carboxylsyrer med en base såsom natriumhydroxid, kaliumhydroxid, ammoniumhydroxid, triethylamin, procain, dibenzylamin, 1-ephenamin, Ν,Ν'-dibenzylethylendiamin eller N-ethylpiperidin.

11 150521

Behandling af saltene med base eller syre resulterer i dannelsen af det frie amid.

2

Som angivet ovenfor kan de her omhandlede N -arylsulfonyl-L-arginin-amider og saltene deraf karakteriseres ved deres meget specifikke inhiberende virkning i pattedyr mod thrombin samt deres faktiske mangel på toxicitet, og disse forbindelser er derfor nyttige til medicinsk bekæmpelse eller forebyggelse af thrombosis.

De her omhandlede forbindelser er også nyttige som inhibitor for blodpladeaggregering.

2

Den antithrombotiske virkning af de her omhandlede N -arylsulfo- nyl-L-argininamider sammenlignes med virkningen af det kendte anti- o thrombotiske middel N -(p-tolylsulfonyl)-L-argininmethylester ved bestemmelse af fibrinogenkoagulationstiden. Målingen af fibrinogen-koagulationstiden udføres som følger:

En 0,8 ml alikvot fibrinogenopløsning, som er fremstillet ved at opløse 150 mg bovint fibrinogen (Cohn fraktion I) leveret af Armour Inc. i 40 ml af en boratsaltpuffer med pH-værdi 7,4, blandes med 0,1 ml af en boratsaltpuffer med pH-værdi 7,4 (reference) eller en prøveopløsning i den samme pufferopløsning, og der tilsættes 0,1 ml thrombinopløsning (5 enheder/ml) leveret af Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. til opløsningerne i et isbad.

Straks efter blandingen overføres reaktionsblandingen fra isbadet til et bad, som holdes ved 25°C. Koagulationstiden regnes som tiden mellem overføringstidspunktet til badet ved 25°C og fremkommel-sestidspunktet for de første fibrintråde. I de tilfælde, hvor der ikke tilsættes medikament, er koagulationstiden 50 - 55 sekunder. Forsøgsresultaterne er anført i tabel I. Udtrykket "nødvendig koncentration til at forlænge koagulationstiden med en faktor 2" er den koncentration af aktivt stof, som kræves til at forlænge den normale koagulationstid på 50 - 55 sekunder til 100 - 110 sekunder.

12 150521

Den nødvendige koncentration til at forlange koagulationstiden med en faktor 2 for det kendte antithrombotiske middel N^-(p-tolyl-sulfonyl)-L-argininmethylester er ΙΙΟΟ^λιΜ. Inhibitorerne er i tabel I identificeret-ved at angive R og Ar i den almene formel I og additionsdelen.

o Når en opløsning indeholdende et af de her omhandlede N -ary1sulfony1--L-argininamider administreres intravenøst til dyrelegemer, bibeholdes den høje antithrombotiske virkning i det cirkulerende blod i 1 til 3 timer. Halveringstiden for henfaldet af de her omhandlede antithrombotiske forbindelser i cirkulerende blod viser sig at være ca. 60 minutter; den fysiologiske tilstand hos værtsdyret (rotter, kaniner, hunde og chimpanser) opretholdes godt. Den eksperimentelle reduktion af fibrinogen i dyr forårsaget ved infusion med thrombin reguleres tilfredsstillende ved simultan infusion af de her omhandlede forbindelser.

\

De ved intravenøs administration af forbindelser med den almene formel I til mus (han, 20 g) bestemte akutte toxicitetsværdier (LDjjq) ligger i området 150 - 600 mg pr. kg legemsvægt.

Repræsentative LD^q-værdier for de her omhandlede forbindelser er vist i nedenstående tabel.

Forbindelse ”\ C - NH - (CH2)3CHCOR LD50 (mg/kg) H2N HNS02Ar

Ar R

rV^3 /—\ LI /ch3 -vhCH3 173 I °ch2ch γ-' och3 ch3 cooh 13 150521

Tabel fortsat JL ^OCH, CX -/~\cH3 170 y-' OCH3 cooh tk rv -N VcH3 250 - 300

Xch3 )-/

COOH

^ ^ CH-,

r^rr^V

Λ~Λ 270 -nJ)- ch3

COOH

/C2H5 300

COOH

2 LDgo-Værdierne for henholdsvis N -dansyl-N-butyl-L-argininamid og N2-dansyl-N-methyl-N-butyl-L-argininaraid er mindre end 10 mg pr. kg.

De her omhandlede terapeutiske midler kan administreres til pattedyr, herunder mennesker, alene eller i kombination med farmaceutisk acceptable bærere, hvis andel bestemmes af opløseligheden og den kemiske natur af forbindelsen, den valgte administrationsvej og farmaceutisk standardpraksis.

Forbindelserne kan f.eks. injiceres parenteralt, dvs. intramuskulært, intravenøst eller subcutant. Ved parenteral administration kan for- 150521 14 bindeiserne anvendes i form af sterile opløsninger, som indeholder andre opløste stoffer, f.eks. en tilstrækkelig mængde salt eller glucose til at gøre opløsningen isotonisk. Forbindelserne kan administreres oralt i form af tabletter, kapsler eller granuler, som indeholder egnede excipienser såsom stivelse, lactose eller hvidt sukker. Forbindelserne kan administreres sublingualt i form af trochisci eller pastiller, hvori det aktive stof er blandet med sukker- eller kornsirupper, aromastoffer og farvestoffer og derpå dehydratiseret tilstrækkeligt til at gøre blandingen egnet til at blive presset i fast form. Forbindelserne kan administreres oralt i form af opløsninger, som kan indeholde farve-og aromastoffer. Den behandlende læge afgør størrelsen af den dosis af de her omhandlede terapeutiske midler, som er mest egnet for mennesker, og dosis varierer med administrationsmetoden og den valgte forbindelse. Endvidere afhænger dosis af den enkelte patient, der skal behandles.

Når præparatet administreres oralt, kræves der en større mængde aktivt stof for at give den samme virkning, som bevirkes af en parenteralt administreret mindre mængde.

Den terapeutiske dosis er parenteralt sædvanligvis 10 - 50 mg/kg aktivt middel, og oralt 10 - 500 mg/kg pr. dag.

Fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse belyses nærmere ved følgende eksempler .

Eksempel 1.

2 A) N -(2-dibenzothienylsulfonyl)-L-arginin:

Til en godt omrørt opløsning af 83,6 g L-arginin i 800 ml 10%'s vandig kaliumcarbonatopløsning sættes 112,7 g 2-dibenzothiophen-sulfonylchlorid i 800 ml benzen. Reaktionsblandingen omrøres ved 60°C i 5 timer, hvorunder produktet udfældes. Efter 1 time ved stuetemperatur frafiltreres bundfaldet og vaskes med benzen og vand i nævnte rækkefølge, hvorved fås 127 g (76% af det teoretiske) 2 N -(2-dibenzothienylsulfonyl)-L-arginin.

15 150521

O

B) N -(2-dibenzothienylsulfonyl)-L-arginylchlorid: 2

En suspension af 4,21 g N -(2-dibenzothienylsulfonyl)-L-arginin i 20 ml thionylchlorid omrøres i 2 timer ved stuetemperatur. Tilsætning af kold tør diethylether resulterer i et bundfald, som samles ved filtrering og vaskes adskillige gange med tørt diethylether, hvorved fås N -(2-dibenzothienylsulfonyl)-L-arginylchlorid.

2 C) N -(2-dibenzothienylsulfonyl)-L-arginyl-N-butylglycin-tert.butyl-ester:

Til en omrørt opløsning af 2,67 g N-butylglycin-tert.butylester i 2 20 ml chloroform sættes forsigtigt det ovenfor vundne N -(2-dibenzothienylsulfonyl) -L-arginylchlor id. Reaktionsblandingen lades henstå ved stuetemperatur i 1 time. Derpå vaskes blandingen to gange med 20 ml mættet natriumchloridopløsning og inddampes til tørhed.

Remanensen tritureres med en lille mængde diethylether, hvorved fås et amorft fast stof. Dette frafiltreres og genudfældes fra etha-nol-ethylether, hvorved fås 3,1 g (49% af det teoretiske) N -(2-dibenzothienylsulfonyl) -L-arginyl-N-butylglycin-tert.butylester.

IR-Spektrum (KBr):v = 3350, 1740 og 1625 cm-1.

IuclX

Analyse:

Beregnet for C28H39°5N5S2*1//2H2S04: C 53,31 H 6,39 N 11,10 Fundet: C 53,21 H 6,46 N 10,89.

2 D) N -(2-dibenzothienylsulfonyl)-L-arginyl-N-butylglycin: 2

Til en opløsning af 2,00 g N -(2-dibenzothienylsulfonyl)-L-arginyl-N-butylglycin-tert. buty lester i 20 ml chloroform sættes 50 ml 15%'s hydrogenchloridopløsning i ethylacetat. Reaktionsblandingen omrøres i 5 timer ved stuetemperatur. Derpå inddampes blandingen til tørhed. Remanensen vaskes adskillige gange med tørt diethylether og chromatograferes på 80 ml "Daiaion" SK 102 ionbytterharpiks (200 - 300 mesh, H+-form, fremstillet af Mitsubishi Chemical Industries Limited) pakket i vand og vaskes med vand, og der elueres med 3%'s ammoniumhydroxidopløsning.

16 150521

Den med 3%'s ammoniumhydroxidopløsning eluerede fraktion inddampes 2 til tørhed, hvorved fås 0,9 g (53% af det teoretiske) N -(2-dibenzothienylsulfonyl) -L-arginyl-N-butylglycin i form af et amorft fast stof.

IR-Spektrum (KBr): v „ = 3350, 1640 og 1270 cm-1.

max

Analyse:

Beregnet for c24H3iN5°5S2: C 54,01 H 5,86 N 13,12 Fundet: C 53,78 H 5,97 N 12,96.

Eksempel 2.

2 A) N -(2-dibenzothienylsulfonyl)-L-arginyl-N-(2-methoxyethyl)gly-cinethylester.

Til en omrørt opløsning af 2,42 g N-(2-methoxyethyl)glycinethyl- ester og 4,0 ml triethylamin i 50 ml chloroform, som er afkølet 2 i et is-salt-bad, sættes 7,0 g af det ovenfor vundne N -(2-diben-zothienylsulfonyl)-L-arginylchlorid i små portioner. Reaktionsblandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Derpå tilsættes 50 ml chloroform, og chloroformopløsningen vaskes to gange med 25 ml mættet vandig natriumchloridopløsning, tørres over vandfrit natriumsulfat og inddampes i vakuum. Den olieagtige remanens vaskes med ethylether, hvorved fås 5,5 g N -(2-dibenzothienylsulfonyl)-L--arginyl-N-(2-methoxyethyl)glycinethylester i form af et pulver.

Analyse:

Beregnet for C25H2306N5S2.1/2H2S04: C 50,49 H 4,07 N 11,78 Fundet: C 50,22 H 4,18 N 11,51.

9 B) N -(2-dibenzothienylsulfonyl)-L-arginyl-N-(2-methoxyethyl)glycin: 2

En opløsning af 5,5 g N -(2-dibenzothienylsulfonyl)-L-arginyl-N--(2-methoxyethyl)glycinethylester i 15 ml methanol og 15 ml 2N natriumhydroxidopløsning opvarmes til 40°C og holdes ved denne temperatur i 10 timer. Derpå inddampes blandingen og chromatograferes på 200 ml "Daiaion"®SK 102 ionbytterharpiks (200 - 300 mesh, H+-form, fremstillet af Mitsubishi Chemical Industries Limited), pakket i vand, der vaskes med ethanol-vand (1:4) og elueres med ethanol-vand-ammoniumhydroxid (10:9:1).

17 150521

Hovedfraktionen inddampes til tørhed og vaskes med diethylether, hvorved fås 3,05 g (62% af det teoretiske) N-(2-dibenzothienylsul-fonyl)-L-arginyl-N-(2-methoxyethyl)glycin i form af et amorft fast stof.

IR-Spektrum (KBr): vm_Y = 3400, 1630 og 1280 cm Analyse:

Beregnet for ^23^29^6^5^2 * C 51,57 H 5,46 N 13,08 Fundet: C 51,35 H 5,63 N 12,86.

Eksempel 3.

G 2 A) N -nitro-N -(tert.butoxycarbonyl)-L-arginyl-N-butylglycinben-zylester.

G 2

Til en omrørt opløsning af 28,4 g N -nitro-N -(tert.butoxycarbonyl)--L-arginin i 450 ml tørt tetrahydrofuran sættes 12,4 ml triethyl-amin og 12,4 ml isobutylchlorformiat i den nævnte rækkefølge, medens temperaturen holdes på -5°C. Efter 15 minutter tilsættes 35,0 g N-butylglycinbenzylester-p-toluensulfonat, 12,4 ml triethylamin og tørt tetrahydrofuran, og derpå omrøres blandingen i 15 minutter ved -5°C. Derefter opvarmes blandingen til stuetemperatur. Opløsningsmidlet afdampes, og remanensen optages i 400 ml ethylacetat, og der vaskes med 200 ml vand, 100 ml 5%'s vandig natriumbicarbonat-opløsning, 100 ml 10%'s citronsyreopløsning og 200 ml vand i den nævnte rækkefølge. Ethylacetatopløsningen tørres over vandfrit natriumsulfat. Efter afdampning af opløsningsmidlet opløses remanensen i 20 ml chloroform, og opløsningen sættes på en kolonne (80 cm x 6 cm) af 500 g silicagel, pakket i chloroform.

Produktet elueres først med. chloroform og derpå med 3%'s methanol i chloroform. Den i 3%'s methanol i chloroform eluerede fraktion inddampes til tørhed, hvorved fås 26,0 g (56% af det teoretiske) G 2 N -nitro-N -(tert.butoxycarbonyl)-L-arginyl-N-butylglycinbenzyl-ester i form af en sirup.

IR-Spektrum (KBr): v„aT = 3300, 1740 og 1690 cm-1.

ΙίΙαΛ 150521 18

P

B) N-nitro-L-arginyl-N-butylglycinbenzylesterhydrochlorid: Q 2

Til en omrørt opløsning af 26,0 g N-nitro-N -(tert.butoxycarbonyl)--L-arginyl-N-butylglycinbenzylester i 50 ml ethylacetat sættes 80 ml 10%'s tørt hydrogenchloridopløsning i ethylacetat ved 0°C.

Efter 3 timer sættes til denne opløsning 200 ml tørt ethylether til udfældning af et viskost olieagtigt produkt.

Dette frafiltreres og vaskes med tørt ethylether, hvorved fås p 20,8 g N -nitro-L-arginyl-N-butylglycinbenzylesterhydrochlorid i form af et amorft fast stof.

G 2 C) N-nitro-N -(3-cyclohexyl-4-methoxyphenylsulfonyl)-L-arginyl-N--butylglycinbenzylester:

Q

Til en opløsning af 2,33 g N -nitro-L-arginyl-N-butylglycinbenzyl-esterhydrochlorid i 10 ml vand og 40 ml dioxan sættes 1,26 g na-triumbicarbonat og 2,2 g 3-cyclohexyl-4-methoxyphenylsulfonyl-chlorid i den nævnte rækkefølge ved 5°C, og omrøringen fortsættes i 3 timer ved stuetemperatur. Derefter afdampes opløsningsmidlet, og remanensen opløses i 100 ml ethylacetat og vaskes med 10 ml IN saltsyreopløsning, 20 ml vand, 20 ml 5%'s vandig natriumbicar-bonatopløsning og 10 ml vand i den nævnte rækkefølge.

Ethylacetatopløsningen tørres over vandfrit natriumsulfat. Efter afdampning af opløsningsmidlet chromatograferes remanensen på 50 g silicagel pakket i chloroform, der vaskes med chloroform og elue-res med 3%'s methanol i chloroform. Den med 3%'s methanol i chloroform eluerede fraktion inddampes, hvorved fås 2,6 g (77% af det G 2 teoretiske) N-nitro-N -(3-cyclohexyl-4-methoxyphenylsulfonyl)-L--arginyl-N-butylglycinbenzylester i form af et amorft fast stof.

IR-Spektrum (KBr): v χ = 3300, 2920, 1740, 1640 og 1250 cm

Analyse:

Beregnet for C32H46°8N6S: c 56,95 H 6,87 N 12,46 Fundet: C 56,49 H 6,63 N 12,38.

2 150S21 19 D) N -(3-cyclohexyl-4-methoxyphenylsulfonyl)-L-arginyl-N-butyl-glycin.

G 2

Til en opløsning af 3/00 g N -nitro-N -(3-cyclohexyl-4-methoxyphe-nylsulfonyl)-L-arginyl-N-butylglycinbenzylester i 50 ml ethanol, 10 ml eddikesyre og 10 ml vand sættes 0,5 g palladiumsort, og derpå rystes blandingen i en hydrogenatmosfære i 50 timer ved stuetemperatur. Derefter filtreres ethanolopløsningen for at fjerne katalysatoren og inddampes til tørhed. Remanensen vaskes adskillige gange med tørt diethylether og chromatograferes på 80 ml "Daiaion" ®SK 102 ionbytterharpiks (200 - 300 mesh, H+-form, fremstillet af Mitsubishi Chemical Industries Limited) pakket i vand, vaskes med vand, og elueres med 3%'s ammoniumhydroxidopløsning.

Den med 3%'s ammoniumhydroxidopløsning eluerede fraktion inddampes til tørhed, hvorved fås 1,5 g (72% af det teoretiske) N^-(3--cyclohexyl-4-methoxyphenylsulfonyl)-L-arginyl-N-butylglycin i form af et amorft fast stof.

IR-Spektrum (KBr): = 3350, 2920, 1630 og 1250 cm-1..

JilaX

Analyse:

Beregnet for c25H4iN6°5Sl! C 55,63 H 7,66 N 12,98 Fundet: C 55,32 H 7,39 N 12,84.

Eksempel 4.

G 2 A) Ethyl-1-[N—nitro—N—(3—cyclohexyl—4—methoxyphenylsulfonyl)—L— -arginyl]-4-methyl-2-piperidincarboxylat.

Til en godt omrørt opløsning af 2,05 g ethyl-l-(NG-nitro-L-arginyl·)--4-methyl-2-piperidincarboxylathydrochlorid og 1,26 g natriumhydro-gencarbonat i 10 ml vand og 40 ml dioxan sættes 2,2 g 3-cyclohexyl-4-me-thoxybenzensulfonylchlorid i små portioner, medens temperaturen holdes på 0°C. Reaktionsblandingen omrøres natten over ved stuetemperatur.

Derpå inddampes reaktionsblandingen til tørhed. Remanensen opløses i 50 ml ethylacetat, og ethylacetatopløsningen vaskes med 10%'s citronsyre, mættet natriumchloridopløsning, mættet natriumhydro-gencarbonatopløsning og mættet natriumchloridopløsning i den nævnte 150521 20 rækkefølge. Ethylacetatopløsningen inddampes, og remanensen chroma tograf eres med silicagel pakket i chloroform, og der elueres med chloroform indeholdende 3% methanol. Hovedfraktionen inddampes til tørhed, hvorved fås 2,6 g (ethyl-1-[NG-nitro-N^-(3-cyclohexyl-4--methoxybenzensulfonyl)-L-arginyl]-4-methyl-2-piperidincarboxylat.

IR-Spektrum (KBr): vmax = 3400, 1735, 1635 og 1250 cm"1.

2 B) Ethyl-1-[N -(3-cyclohexyl-4-methoxyphenylsulfonyl)-L-arginyl]--4-methyl-2-piperidincarboxylatacetat.

G 2

Til en opløsning af 2,6 g ethyl-l-[N-nitro-N-(3-cyclohexyl-4--methoxyphenylsulfonyl)-L-arginyl]-4-methyl-2-piperidincarboxy-lat i 40 ml ethanol, 10 ml vand og 20 ml eddikesyre sættes 0,5 g palladiumsort, og derpå rystes blandingen i en hydrogenatmosfære i 15 timer ved stuetemperatur. Opløsningen filtreres til fjernelse af katalysatoren og inddampes, hvorved fås et olieagtigt produkt.

o

Ved genudfældning med ethanoldiethylether fås 2,4 g ethyl-l-[N --(3-cyclohexyl-4-methoxyphenylsulfonyl)-L-arginyl]-4-methyl-2-pipe-ridincarboxylatacetat.

2 C) 1-[N -(3-cyclohexyl-4-methoxyphenylsulfonyl)-L-arginyl]-4--methyl-2-piperidincarboxylsyre.

2

En opløsning af 2,4 g ethyl-l-[N -(3-cyclohexyl-4-methoxyphenyl- sulfonyl)-L-arginyl]-4-methyl-2-piperidincarboxylat-acetat i 10 ml ethanol og 10 ml IN natriumhydroxidopløsning omrøres natten over ved stuetemperatur. Derpå inddampes reaktionsblandingen og opløses i 10 ml vand. Opløsningen neutraliseres med 2N saltsyreopløsning, hvorved fås et hvidt gummiagtigt bundfald, som opløses i 150 ml chloroform. Chloroformopløsningen vaskes med mættet natriumchlorid- opløsning, tørres over vandfrit natriumsulfat og inddampes i 2 vakuum, hvorved fås 1,52 g 1-[N -(3-cyclohexyl-4-methoxyphenyl-sulfonyl)-L-arginyl]-4-methyl-2-piperidincarboxylsyre i form af et amorft fast stof.

IR-Spektrum (KBr): v = 3350, 2920, 1620 og 1250 cm"1.

IuoA

21 150521

Analyse:

Beregnet for C26H41°6N5S: c 56'60 H 7,49 N 12,70 Fundet: C 56,51 H 7,53 N 12,68.

Forskellige andre N2-arylsulfonyl-L-argininamider eller syreadditionssalte deraf syntetiseres analogt til fremgangsmåderne i de ovennævnte eksempler, og testresultaterne er anført i tabel I.

22 g O O o O O o o ^ 3 co 10 ro n in ·« S 0

Li IOH ID σι CM IOH

4J Η Η Η CM H HH

ft^H*" O O O O O O O O

rnui m r-~ o id in ro oro I cq £ ro cm cm ro id -^·ιη

1¾¾ t) roH ro H roH ro H

H ^ _

co co o\ ^ CO ^ 'f CO

o r**·* r*** co on co fcfc fc fc ^ w ^ ' s COCVJ cvj CvJ C'J 04

HH HH HH HH

Q) 01___ >) m HH Hin ιοσι ιοσι c IN H 00 ID ID CO IDt" (rt K » -·> --

H · IOID 10 ID Γ~ Γ— VOID

Cd -P

p <u ·· -- §§>0) N W CM 0Ί rom t'-'# £ <U T3 com o id io ro mm m Li fi O -* *·* *· * HOIS roro r-> io m in enen pq pq pq m m min tnm ί·'# i ta i •Η d i ta <u cd Ρ >i d) b’Jrf 0) fa m at ta x>_ - -

I I S

i i oi i oi di gHClgeUDOl ^ O-HcSd'd^H · ro ro ro ro p+>HS-l(doid<D<DP fa 01H<WtJ>g'-'ftC _ , I +) a) o . L -ri m <U I I +1 i g +) en id η >d ®^μ·Η830ΐβο« o oo m h > _P -P h tn S -PS m ro oi g <? c neoaj<3 Λ i) S O ο-H Φ Id \ io s t? u o <w λ: -p *o <w w EH --- i

•ri rH

P <1> Η Ό t3 oi il i i 'O c —

(O U

® m P O W _

< O ffi OK

pi cm m o cm o OO BOffiOs = o en u o o o as i cn cm cm cm

Sm”? fa O O O o S x \ / \ / CM 2 3 a _ i i p. P. Of ί // \ O O O \_/ ^N.

B ^ a p 0 9 0 0) > «i · U }j fa 2 H CM ro ^ 23 : g g ? g S S 150521 CO ΓΟ Γ> VO ^

HH Η Η Η H

oo o o o o oo 5? OM OM O 00 ° H O ® \o *3? \Ω Ί* Μ ΙΓ)

ΜΗ ΜΗ ΜΗ ΜΗ MH

r~.r^ M CO CO 04 M*M ^ CO

H oo h oo m oo co o- r-~ in ·. - **· cn oo ^ m r- o- inin ™ 2

HH HH HH HH HH

h o co oo οι σ\ O co SS

{>.[>. σι cn μη o- σι cooo -> - «· *· *· *·* in m in in co co m in in in lo γ~» σι σι o co moo 5Ιϋ2

0310 00 θ' O' CO MO

« κ *.«. ·.·. ' ' “ *· VOID ΟΟ 04 04 'S·'» 0404 mm in in m in min +> Λ οι

P

Μ l2 μ 04 Μ 04 04 Η Η d> Λ ιΟ * σι Η

ι II II

μ σι s a

Ο Η U

04 Ε σι au a υ a ο a υ a 04 Ο ΟΙ Ο 04 ο s = bo a ο a o υ υ υ υ υ u OJ ΟΙ ΟΙ 04 04 04 a a a a · a a u u u u u u

V

I I I

o o ©

M ^ W H

/7^ /T\S ('s ο ω a s s a \ ° \ 3 V—/ Χ—ζ 0 p o- P m in co ο» eo σι 24 10 o in O o Λ m Λ * co ro μ o 15052 1 VO U3 ID r~

rH i—I i—I H H

o o o o o o o o o in in m o oo o Γ" m r·' o ro ro id -3< M ^*cs ro μ •«a* io CO Η ΓΟΗ ΓΟΗ ΓΟΗ ΓΟΗ con οο ιο ^3>ιη μ ιο coin Γ'-ιη ο oo roo Η m Η σι

HH ΓΟ CM N 1M COM CO CM

i—1 i—i HH i—i i—I HH H i—I

r* co co ro in ro ior- o id oh ό ho cdo in ro ^ h *- > ** k ·* *a< »a* m in in m mm mm σι m r-~ m vom Hoo moo «»Μ m ro ιο οο ο r* mo ^ ^ ^ *> ^ ·* "* ^ ^ *· ΟΟ HH 0000 CO '»«S' mm mm mm mm

+J

<TJ

in +> 0

Ή Μ Μ Μ Η M

H

H

Φ Λ ce m

Eh m* % o ro

O

CO

M

esiii i

M

\

H

CO

ro m co B co a a a u a

U M u Μ O

ο ο o a a o a mo mo u a mo ao ao = mo ao

OUUO BO OU

MM MM CJ O MM

aaaa mm bb \u o o · a a up / \ / \ /u \ / b b z/ a

II I I

Q ft* Q Q

I ^ BO \ J—i p Pop Ο Η M co O'

Η Η Η Η H

25 o SS SS SS S SS 150521

m N r- ΓΊ 50 H - 50 H

n i—) i—l c—) HH H HH

O O O O O O O O O in , on on lo oo in 5d in oo ** to tji vo nn η n nn η η η η η η η η η h (yi o ks in o r·» r-» -si· oo n >=r h cri o oo Η o Η n n n ho cn n mes nn

HH HH HH HH HH

oooo η ·5Ρ o oo oo m o oo nn es o ho >f m no «, kl Ik kl *. *. % ^ ^ ^ r- to r* r* vovo o o oo h nm no oo h o oo r~ oo nn nn ·5Ρ ^i· *, k, w H ^ »> *» * ^ ^ ιΛ·5ί nn "5J· «3· 50 50 50 50 m in m >o in in tn in in in

P

(8 tn +» u η η η η n

H

iH

0) Λ ej r* tn irt tn * ·. »· »

o n H H

III I I

C° t Q % η η η n

æ aj W W

o G . υ υ \/ b„ v Q e Rj %* R p $ .# p y φ in ko r- oo ers i—1 i—1 r—1 r—l 26 S S S SS 150521 ID CO ID VD Γ"*

i—I Η H r-1 H

O O O O O O O O O o

0 m LT) LO o Ό O Ό OM

«31 I—I M CM H ni CM ^·νθ ΜΗ ΜΗ ΜΗ ΜΗ ΜΗ (Ο VO Μ 00 ·3* ΙΟ ΜΜ ^ Μ

00 Γ' HO CO Γ~ ΈΡ CM -a’M

^ ^ ^ ν w k κ * “·

CM CM CM CM CM CM CM CM Ο O

1—I 1—1 r—1 1—I i—I 1—1 1—I 1—I HH

cm ο η σι r-~ in cm H h vd HO rf T}| 10 00 h* *3· coin m in 10 10 10 vo mm

3* M COM Min Of'· M· ID

«a* 10 r»H cm 0 ^ cm Min ^ a, v *. * * s ^ »* ·» i*» r~ h cm r-~ co in in 0000 in in m in min mm 'p m1

U

nj in

-U

U

0

Ή Μ Η Μ H CM

H

rH

a) Λ (0

Eh

M

O

W

CM

x

CM

. \

1 1 I I H

m

/ ^ X f=\ I ^ cT

\ P CM K O CM

= = \ / O P CM _/ O

'—r u —/ 0 1—r u

CM CM -Γ U CM CM

X X CM CM XX

Ό u « æ 00

V V° V

I I I

Q P 9 Qf P

4 tf Φ p 0 Ο H CM M 'i*

CM CM CM CM CM

o o o o o m 27 in in 00 1C 91 SS Min cm m cm id (M w IOUO£l C7> CM νβΗ CO H CD Η 5 Η

CM Η HH Η H HH HH

o o 00 00 00 in m m cm m cd in id o in r^co ro 10 to ro m cm nro ro Η η Η η η η η η h

o CO ro CO in t-'H OOfM

00 00 r·' ^ in in 10 »t·. » «. -· ** * rM cm nn cmcm cm cm nn

Η H HH HH HH HH

© ro HID C" o ion m H

ro t* ir n in io ^ n *, ». > - » * * * k [< Γ'Γ' void in in void on n in id in n 00 10 m co 0 cm 1—1 ^ in cm 0 .... «.». * * » * - * * void in vo f~t" nn 0000 mm nn nn nn nn +) (0 in

P

0

m -M1 CM

H

H

<u Λ (0

Η Η η H VO

*. * - *

© CM Ο O

I I I > I

n a u 8--0 .

n « O -- Q 0 \ / a '—( « \ .0 / ' p° P p. p Φ η ίο Γ" 00 σι

CM CM CM CM CM

28 o o o o o o 1 c n c 21

rH co ,-4 cm σ\ cm IOUOa I

VP tp Γ* VP CN VP

i—I i—I i—1 i—! i—1 i—l O O O O O O LO O O o m «tf ovo on t'-o oin CO H 1¾1 1-4 ^ VP CO "i N.

CO Η Γ0 H COi-4 ro H ro H

c~ vo co od HO roo ooin cm ro Η o m-tr ri co ro ·η< h % « ^ ** »* ^

ro CO ro CM CM CM C" f- CM CM

i—4 r—1 r-ii—4 i—4 r—4 i—1 i—i rHi—4 O CM O CO CM «3 or*· ID 00 rom i—I o cm ro HO vp vp h h k I. w ^ ^ ^ « fc vo co mm mm vp vp c~- r~- oo oo r- m m oo vooo cm t-~

1-40 t" o vo oo oo o ro CM

»·. ·» ^ h, ^ ^ ^ ^ σι σ\ η cm coco ro o· r»r^ mm mm mm mm mm

4J

nj tø +»

U

O

M-4 ^ ^ji

H

1—4

<D

Λ

tO

E-* η m w * 0 o 1 II ti co ro ro

® K K

3>0 1/Φ 3v^ CK i U, 1 u o 1 8 0 o Π Kl/ o q f q p p -¾ O i-4 CM CO 'sr ro ro co co ro 29' o o om oo o o ____ _ ^ CM <3< CM Γ- CM 00 CM ^ 150521

CD r- CO f0 COCO CO H

I—I Η I—I H rH H HrH

O O Oirt O O O o o o o «i1 o CO 00 CO O CO 00 00 <3< h ^co ro O' O' coco ΓΟΗ ΓΟΗ ΓΟΗ ΓΟΗ ΓΟΗ oco to οΟ CO LO CO IT) CO Η r- oo o oo co «31 co oo com ^ ^ s ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ CM CM HO coco coco coco

HH i—i i—i HH HH HH

ot cd «3* m ot ro at m act-' *31 ro 00 H ro m ro cm coco «. *. * ^ ^ ·* ·* »* *· r- r-, co r- coco coco coco

O CM m<jt rf Η Ό1 O '»O

co 00 co cd t-~ 00 r~m r-» 00 COCO CO CO "3« »3* •M* *3* mm mm mm mm mm

M

Q) > H 5 5

Hi

4J

ctf in

M

M

o «3- CM CM CM

H

rH

0) 9 10

™ m H CM

o o o a o o o <0 a o i 1 1

CO

co a a o

"r, JO - dίνφ “"/O

oAAa o' 1 1 u 1 'υ·

O s" -O -O -Q

X o o ^s' ) ' / ' ro ' a

co U

a o m co r~ 00 at co ro ro co co 30 O in O O O O O O O O 4CAr04

N 00 Min M 00 MM MM 131)36 I

OM OH OM OH OH

HH HH HH HH HH

oo oo o o o tn oo oo oo lo oo r- o o oo oo oo

MM MM M *3* "31 M MM

ΜΗ ΜΗ ΜΗ ΜΗ MH

OM HM H-tf -ψμ σι in

O O MM MM HM OM

^ »i » ^ ^ ^ ^ 0 O O O O O O O ID Γ—

i—1 i—I HH HH HH HH

CTl Μ HO HM O LO H CO

M-tf O 00 O O ΜΗ HO

* * ** ** ** LO O o o o o o o o o η· σι oom oo in oh oo r-feoo ο in r- o oo ooo fe* fe fe ** ** ** •'tf'a* in in in in mm ho in in in in in in in in in in

-P

w

4J

M

o

Ή M MM Μ M

H

H

0)

A

id E*

M

1 I I

M

__ a \ u o a o a , o M o = = = _/ o a o I u o u

MM MM

a a a a u u υ υ

V

a ι ι gu -fS -Q -Λ~\ O-5' q -q m a

a u M

u MB

B U

u Ο Η Μ M "3> 31 _ ° ° £ ° ο 1 I 150521 S i Si 5 5 6 00 mo ooo ooo ooin o oo t" oo vo ο η ιηοιη «Πίΐ

<} m n n n vo η n vo H

nH nH n η h m η h nrHH

n H n lo σν oo noi 25 ¢0 lh m* ^ n vn ^ *·. » * ‘ * *·*· in in vo vo voo oo co vovo

r-l ι-l r-1 i-) Η H HH H H

h n ^ in moo m oo

rji in nn n η ·μ* <n ni-H

«,*. *.*1 ». » * * ‘ * vovo vo vo r· r» vovo h vo n H oo HH Snj cvt" σ> cm mo no cmh > k » * « * ‘ ‘ *·* n n hcm ^ ** 95 Γϊίϊ in in m m n n inn nn d> > i—I " - 3 ft +1 <0 10

4J

U

VH CM CM CM (Μ M

H

H

<D

Λ

fU

H

I I I

n I-\ U n r, a o as a m ° o cm o u a

_/ O MO = U

—r a u u i I

CM CM CM CM I 1

US S! ffi US

uo u o |·| Γ I 35 ν' V Mv§ Kf\% 1 i i u 1 σι

a S

tj. a /-V o .

-τΓΛ h V

)=-( rø g xaés

Hr b -6 -6 n a u in vo r-~ oo σι «31 <3< «3« *3· ’S’ « . Λ Λ Λ 32 _ _ - 1 111 11 11 150521

Μ Μ 5-1 MH

Λ Λ Λ Λ Λ Λ Λ Λ Ο Ο Ο Ο Ο ιη : °°10 ° Ο 10 ifiHvo m (Ί ιη ο ο m ο ο lo ό Η lo ηνοΗ ro ιο Η mvoH co ιο η οο ιο CO Η Η (O ri Η C0 Η Η CO r-t ,_) **1 η η 00 γ-4 CM CM CM σι (Π Η ΓΟΗ

CN Ο CO Ο OO O O "tf CM

k, «, w h k. *. κ ^ ^ 'Φ^'τη ro οο ro ro t—I t—I r-4 r—4 I—I rH rH r—1 rHl—i 00 O VO 1-4 VD O lO 00 ior^ oo oo id in id ro in co r~ oo *. *. ^ ^ SK *» *

ΙΟΙΟ ID ID ID ID ID 10 VOID

m o σι m σι oo h cm 1010 ,—i o >3« id rr cm 10 »a· cm m ^ % H % S ^ ^ ^ ^ cm cm o o o o rom in in min m in in m mm mm +» (0 (0 +i

U

O

14-4 CM CM CM CM CM

H

iH

Φ £> «5 E-i

I II I I

a a O O ro a cm a a o a a o—ϋ cm ο o cm a a n cm a u -ο-} -ο-® -d> -ο-®· O i—1 CM CO -ϋ« m m in m in S 9 O m 33 9 150521 (1) (D ro CM ro Q)

Sh M vo ιο io Sh Λ Λ Η Η Η Λ οοιη ο ο ο ο ο ο oom in η in ο ιο οοο ο ιο ιο cm m CO ΙΟ rH (Μ Μ « Μ* Η ΟΙ (Ο η Π Η Η ΓΟΗ CO ri (Ο Η CO Ή Η οο σι οι η oo ο ro σι ν> <μ cji ro id m in ro 'S' co «, ^ ^ ^ «. * * * *· *

coco CM CM COCO COCO IO ID

rH rH rH rH rH rH rH rH rH rH

lot" CM σι CM 00 MfO CM 00 ίο co t" lot" ο ο σι oo id io t" t" in m void min

ID rH σι 00 ΙΟ H 00 H C31 rH

CM H CO CM rH© ID t" com mm voio coco mm © © mm mm mm mm 'S' O'

Sh Q> >

rH

3 1¾ +> <a to

-P

o

m CM CM I-H CM CM

H

rH

<D

« tn gH CO U* » h 00 o o

I III I

co a co to »" 8 8 co υ a o a ω a CM o CM O CM o * a o a o = a o άυ u u υ υ u

CM CM CM CM CM CM

a a a a a a a · ο ο u · y o u

§ V \J V

i I I I

x / \ »“ f~\ O o

_A M_/ oH D Q

<y p ^ p p m io t" oo © m mm m m _ ~ 34 t ° n 5 150521 H U vc vø ^

JQ Λ Η Η H

ο o in ο ο η ο ο o in o o id in in vo n in oco co r-~ on n vo h n vo H 'a· H nn vo η h rH η η H η h η H nn csvo n oco vo o cmo t>»in nn r-'vo von 'a* n ·» *. fc. ·* ^ ^ ^ % hh η n nn vovo nn

Hl-Η Η H H i—I HH HH

roH vo r~ «a* oo or·« nn nn co nn nn n ^ ^ ^ v s <k »« ^ ^ *» ** ld in in in in in vovo t'· r* no ho 'ίο n co n o nn n< n i^-vo in ^ k » k < * » k * V ‘ cor~ oo hh "3* *j* r-· p* k^i ^jt m in vovo in in in in +>

nJ

w +) in η η η η h h

rH

<u Λ (0 ^ > ' ' n

K

Of-ω K _ r^1 g . nf1 8 X U §

Un Un u 8 \—/ g aT as aT

8 8' . ηΓ »r /λ_§ Λ^ι a 5 8-8

V V V ^A§ V

<n> o O 3· »

Q Φ P b- P

ο Η η n ^ vo vo vo vo vo _ 35 _ _ o o o o Ό Ό 150521 ro cm ro CM O) Q) Q)

lo H lo H H Μ H

I—1 i—I i—I 1—1 pQ pQ pQ

O O O O O O O O O O O O LO

O 00 O 00 o ro LO O CM LO o cm LO

•»ro ·φ ro coloh ro ls h rt .lo H

ro ri CO i—i (O ri ri CO i—I H (O ri ri cm h cm oo oo o σιο σι oo

OH O σ> O O LO LO LO CM

L L L k L * *» * ^ L

lo lo com -«a* roro roro

HH i—I i—I i—i H HH i—I H

LD H LO 0\ OL O OL 00 CL H

H CM HO O CM CM H CM CM

^ ^ pp k ^ W ·» k L

lo lo lo lo r~~ r- r· r·* r-·

10 H logo o ro oo r~ ooH

to«# co cm h <Ti cn r- or· oo OO CO CM coco coco mm mm mm mm mm

4J

<0 0) •p u

O

Ή CM CM Μ1 M*

H

H

0) Λ (0

Eh go * o

11 II I

ro co tS

ta ta o O U O fo O O O a CM ill CM CM fi s ta o ta ta , = a o u u

CM U CO CM CM JL

ta ta ta ta ta / n æ

ϋ ,U-U - U U ’ I 1 O

\/. \J kAs

I I I

„ co co ro ta ta ta ® u o o LJ CM ro ro

\ ^CM ^CM *"cM

\\ t a t a t a B- -tf 'q tf in r- oo σ» vø VØ VØ KD VØ 36 0 m ό ο m ' oo om ιεαγοι mm tu mm mm m m i a u a i

VOH f-t OH OH VDH

r) ri X! H H HH HH

om oom om oo om r^m m m m oom mm mm mm m m h mm mm mm .

m h m η h m h m h m h j

S

r^o mHr-'VO oo σι oom m o m ri m ri mm mm ^ S S SS s *. ^ ^ mm mmmm mm mm i—! i—i i—i i—i HH i—i i—1 i—1 i—1 r» o oom Γ" m mvo mm

OH ri rf OH m ri m H

r-- r~ r- r-~ mr^ mm m h ri h ri oo mm co o m ri mm mm « h >· >> K ·> h ^ ^ h mm ri ri mm hh hh mm mmmm mm mm

4J

to tn μ

U

O

»w m ri m m m

H

H

<D

XI

tO

Eh m ri «► r m

H VD H

1 II I I

m

CC\ B

B O

o o o b /O m o

I O BO

O O I mm O U s O I B B mm

O UO B B

m x [ 1 S \ / °v / \ / ^ψ<8 Nf \/ “f m mm

B m m m B W

U B B BU U

ri U U U^ I / ^ m mm ^u' m B B B i B U O. U _ H aT XS /4 i * ,=^° /=( af ~\J~° O -O- 8 ~^j~° O H m m ri r-~ r- r-~ t" f-» 37 in o o o o in o o 150521 h vø h vø h -tr οα h 10 H lOHVDH 10 10 i—I i—i i—ii—! i—li—I i—i r—1 o o o o in in o o o o o <ø o lø r* in oh in -m*

<ί N "Sf ΟΙ H OJ HH HH

HH HH HH HH HH

HH OJ ΙΟ Η Η H CO O- H

tn o HH σι H in ^ οι h *. fe. «. fe. fe.

(N Ol HH (N H HH HH

HH HH HH HH HH

vø in oo oo tø η (N o tn oo oa o ’tf -tf oa h co tn o o . . . . . . s . . .

t^r» o* o· o- o· is to o>p- hvø ΗΓ'Ηΐη HH in to oa h oo o oa tn o» tn n . . . . . . . . . .

HH h oj oooo oa oa in in in in in in ^ ^ in in +> (0 in •μ

M

0

^ Η "*3* Η Η H

H

»Η ϋ g 171 oa o

I II II

H

o

' „ IO® O ffi H

0 η h L > O oa o B

' o B O te O U

o u To O O I

O I oa cm oa oa 1 oa oa 1 æ s ta æ /\ a a a o o o o [ ] a V CX§ v \/ LA§

1 I I I I

Η H

a a η o o a H o o — OI o

IN IS CN

a o a

O oa O

H --- H a oa a i au na o o o o au tf b y in vo o* oo tn O' O· O' O' O' 38 0 O O O O O O O «rftrn 4 n in h«* Min m m iDUoZl

ΙΟ H ΙΟ H ID H O ID

Η H rH r—1 i—I Η i—1 rH

ld m o o o o om o o id "3· mo in oo in *3< o in m m m mm m h

m h m h mn m H mH

m oo oo H m o σι m σι co σι γ- σι ο ιο ^ Mm vom *. «. W K h. ^ K ^ ^ mm Mm mm mm mm

*—I —I i—! i—! i—li—i i—1 i—I i—1 '—I

void id >!f min η o σι oo

Min id m oooo void mm r- -ρ· p* γ- r- r·» r- r'· p* i-η h m σι cn m ri m σι m m i—i id m co r- σΐΗ * * w « ^ ^ ** % \ mm in m 10 is -a* ># m *3* n m in in mm mm mm +> fd w

+J

5-1 0

*W Η H Tj< m TT

H

i—I 0) Λ <0 B H m

1 II I I

c? ° o m TU a

MM O

tu a i ' .· V 0.|

I I U

m mm a - a a μ o ου a o m ^ ο m m μ — mm a a m a a = α u m a u u \a

a O m ^ m ^ nO

u ~ a i a i / o o oooo / o H m m *3« oo oo co oo oo 39 O OO O o m OO arApo4

«a· coin co co vø n h lOUO« I

IV. VD i—I kO VØ H VØ i—1

H HH H HH HH

o O O O O O O O O O

o co o ro mm cm r~~ hos «cji Vø tj! ID ro H 'tf CM »tf CN .

CO H CO H CO H CO H CO H

hvo m co 10 oo r-H oos VOVD Ο o CM 'tf o os a.v k v V V k >. k k HH CN CN CN CN COCO ΜΗ Η Η Η Η Η Η Η Η Η Η cn »tf ο 'tf oom r^cN r- co rv m ho oh oo r« vø ^ ^ k ^ k k k k k k i" r- r-» tv vovo r-~ r~ t-~ r» os vo co oo covo mos m co [v oo cm <tf m co co h mtv ^ ^ ^ ^ ^ ^ Η H ** ^ tv r- cm cm mm mm mm -tf mm mm +» (0 tn +i o Ή rt< *3·

H

H

<D

Λ (d a

O

0

U I

co a

U III

co co 53 (Λ S3

V a V

ό-J dll : 1 I u co co co a a co co a υ o a a . ϋ CO CM Ο ϋ CM — CO (Ο C0C0C0 »-k CM CM->pv a a a cm a a cn cm uuo a u o aa

\,/ Η Η V T 3 H

\ / O U O O It <μ -cP~ $-a &-* y in vo r> oo o> 00 00 00 00 00 40 o in o o o o o o o 1CflC91 tn is on on ση n m n o\ iuuoa i CO i—| CD CO O co o co o ri ri i—I i—I i—I ri ri ri ri 00 oo oo oo oo ni to m co in co in to oo «# cm on h ro on on «# on«# ΓΟΗ ΓΟΗ ΓΟΗ ΟΙ Η ΓΟΗ ο μ coon ο θ' ιηο ο« in ο οο co «# ιη ιο cm ro -# m S S S S ^ ^ ^ «

O] H HH CN CM CM CM CM CM

HH HH HH HH HH

r~vo oh id οι «# m H ro

("On m CO OH 04 H OH

** ** ** ** ** r~ o~ o» r~ ο» o· o* m «# o-tn oo># Hon o~ h in id oo vo«# man Hro ** * ** ** fe* mm «# «# hh η h anon mm mm mm mm «#«#

-P

<ΰ to

P

M

0-- 'n «# ro «# «# on

H

rH

<D

’S O'

S

r* . . o

I I I I I

on r^Sj a o a I y o ro οι o

V/ Ο Μ a O

t υ u ό o

CM CM I CM CM

= a a /V = a a u u Γ i a u a . v/ L Is v / s s '3

I I I

ro ro ro a a a υ a u on on cm ^cm on cm cm a a a a = = υ o υ on υ '-r on ~ a —

1 ^ I u I

O cm Ο Ο O

-£>“ "M, -b-§" co

CN

Ο H W CN CO ^ σ\ σ\ q o\ <j\ σι co

U

41 S S S ° ® 150521 (Λ (i) ID vo vo

r-1 HH Η H

o o o in o o o o o o lo o o o lo o m in o o ro 4 o ro O Γ0 'N· "3*0 ΓΟΗ ΓΟΗ ΓΟΗ ΓΟΗ CO Η

HH Η 00 CO Ν ΙΟΙ" COO

η η η η mm or- οο *»«, *, ft «. * * (Ν CN Ν Ν HH ΗΗ Ν Ν HH HH HH HH ΗΗ into in η \ο ο οο <ο m cm in ιο into η ό· m ft « ft ft ^ «. ^ ^ ^ ^ r- r- r-r- r-r- voio to r- ton r-(N h oo r-m to •N’ tom oh com oor- ft» ft, ^ ^ S ^ ^ ^ ** **

CN N CNN «3* *3< (Ο ΓΟ COCO

m m in m m m in m m in +i (3 in

-P

0 IH CO Γ0 to ro to

H

H

<U

A

(0

Eh

I II II

to to a a _ o a o r^i * « o< o to a o a a ~ o ~ o kJ o ___ o o N U NO TO / \ Ο ('Λ 9 a n a u ro n n / \ o o o a uaaaa \ / <n k Π m — o -v o—o u u \ / a a \«/ V V Vu

I II· I I

to a o to

N

a to o a --

o I

o o ' #( ' to vo οο σι c\ σι σ\ c\ 42 mo oo oo tn o o o 150521 ro σι n m m σι m o row oo oo oo oo oo i—I i—1 Η Η Η Η Η Η H r| o o o m o m o o o in r- co in in m in mm om ro m ro ^ ro «tf γο«3* ΓΟΗ ro Η ΓΟΗ ΓΟΗ ΓΟΗ ΓΟΗ ΓΟ ^ ΚΩ ΓΟ CX5 Ο ΗΟ mm m ro ο ο κω r- cm ro

HH H H H CM HH N M

HH HH HH HH HH

oh om h<n οοσι mo cor- cor- ^ m vo cor-» < ^ ^ k. *. «. *. «,«.

kd vo mm r-r- r-r- m m γοο γοη oh’ mm mo ΓΟ ^ ro CM ro OH cm ro % « w % s ^ ^ w % in m in in mm oo in in in in mm mm mm •P t0 to +> u 0 η i . m s μ* ^ ^ji h .

i-1 <D _ Λ «> fl . * EH O m O |fj) 0O m m u t a a a

m MOO U

8 8 8 1 I

mm mm i 1 a a a a = OO OO llo 11 « \./ \»/ Usi I 111 mm m 8 8 8 JP °m mm m a . a o mo mo m m a ~ a ^ a a O I O I O o = = oo oo oo -&-s" -b-i ^5' O iH CN m ^ o o o o o

Η Η Η Η H

43 o oo oo m £ 150521 CM (N m M 00 <*> i« m id o Γ" o r~

H HH HH H

oo m in oo o in SS

O 00 t- tn o ro OM S H

«»O CO *3* 'S* o "tf O inZj

η H ro H ro H ro h mrH

oo m t'- oo (Nro mS

o οι σι to oooo o«·* ^ ~ *·*· - " *· “ * * m ro

HH HH HH O O HH

HH HH HH HH HH

n in ro rj’ oH σιιη 2 S

o σι oh ro <3* n· ve * - ‘ » » » ** is m r^r* vo o r-* r* oo vo oo o oo oro £2*2 M "S’ OM VO ^ Γ' oo

in in HH VD VD MM

»31 »3· m in ^ "tf in in 1

P

nJ

m +) u i2 "31 <p ro si* 'S*

H

H

0) Λ (tf fri ^

S

O

O I

υ ro

I IIS

ro U

M

u OS ro ro

m o S ro M

SO OS O

O O I O JL

MM JL M

s s g f 1 § \ / k JL8

XS/ S O I

I I

ro ro SS ro ro

U O O SS

s MM ro U O

M SOM \M/ s o υ υ \m

O O ro ro U

M M ^ M

s s μ M s o υ s . μ α ro M ro M ro U ro U m

SM S Μ S ~ S'-' M

O O U O O 1 O I o O O OOOO OO o -^i-ί -fci1 -få-8 -få§ få in id r- 00 o o o o o o

H HH Η H

44 o in o ld o t n o in o o 150521 (Min Hin cm in cm m o ro

ID H ID H IDH IDH lOH

HH HH HH HH HH

oo OO OO OO OO

«ψοο ·<3< oo m co m oo ooo m h con roen roen mm

HH HH HH HH HH

σ> oo σι Η oo o σι cm cti ο

lOH ID 00 © O ID r~~ CO ID

·« v 4 ^ ^ ^ ^ ^

η H HH HH Η H

i—1 H i—( H HH HH HH

σι σι σι h «no cnoo oh

(Μ Ο CM H OO CM O CMH

^ K k t. k k k k k k r't'* r~ r-~ r~ r« r~

00 Γ— CO ΟΙ Ο Ο 00 Η CD CM

«η r» σι γ» η ο σι h σι σι Η Η HH HH HH ΗΗ ιηιη ιηιη ιηιη ιηιη ιηιη Ρ <β ιο μ

U

^ CM CM CM CM CM

H

(U lCI

S CM H CD ID

*“2 *. * * ** £5 o o o o

Η Η Η H

K ffl ® a o u u u

H CM v / CD Η H

a a \ / HH — a a u o a a a cm o u a a a ·~· « a α ου o a o o o o I o o -6. φ $ Ο H CM Η M1

Η Η Η Η H

Η ι—1 ιΗ ι—1 r-\ 45 o o o o o in o o m o 150521 cm ro ro in η m cm »a* Hin

vo H ID H VOH VOH IDH

HH HH HH HH HH

o O O o o o o o o o n co o oo in io m co moo ro ro roro co roro roro

ro H ro H ro H «OH roH

V

oo <n cm o n to mco m t-~ cn σι roro io m o σι rom

Ih ^ fe * fe fe ** ^ ^ ** r\j om roro mm cm H roro

HH HH HH HH HH

to ri« oo ro ro co ^ σι con vor* ^ m oo Γ" hio «a* m k « ·.>. *. *. » * > > t- r- r·» r- r» t- oo co r^i**·

ro σι ro o σι H om ro H

io m oooo rom coco. coco h ^ fe fe fe ^ m m void r- r-» ^ mm mm mm mm mm +j m fl (Ί cm cm cm ta

P

o Ή *

CM H

H *· ' O o

H

(1) Λ (0

Em ro ro co ro Sd 03 ffi æ U O U ro ro n cm cm coco ro ro cm a a CM— — a a tun!'-» u u — CM CM u α OU CM \ / cm B lu 'v/ro \ / B \ / tu U ro U \/fficor<-\/ucororo. a u a-" xauaa awaaa u -'O u o uouuuouuu o 0 $-»" V-f co r- oo σι o

i—I i—1 Η H CM

HH Η Η H

46 O O 150521 om oo oo rj£

€Nin CM VO CM O

VO c—I VO H VØH . .

Η H r-f r-i »H rH r-irl oo oo oo °g m vo w co ro oo mm ro ro ro ro ro ro m Li

ro H ro H ro H roM

ro oo oo vo in ίο Sri oico ooco N in «.ri.

O) N CM CM N OM HL; HH HH HH 1-1 1-1 O O Ο P- -* H 5I g cm ro vom cm ro V. «.

Γ' Γ' . p* t" 1 1 Η σι N m H ro g g cm ro oh in ·ο< i. i ro ro roro cm cm mm m in m in m in CM cm cm ™ μ ta tn +» m g u p· ^ fi

H

H

<u Λ ta &

ro ro tfl EG

O u ro ro \ / co ro EG 33

31 EG U U R

U U \ / CM

J? ^ V/ 33 CM CM M ^ co 33 co 33 co cm " " EGO EGO 3333 mm O'- U — U O no O O O O O O ° ° \ \ CM ro ^ g CM CM CM J, Η Η H 1-1 47 O O o o o O in o ir> 15 0 5 2 1

SS ° ° ° £ S SS

SS s s s ss SS

ss ss ss °§ ss

ro ro Ί* H moo 2 2 ioS

00 H tO Η ΓΟ Η ΓΟΗ ΠΗ oo ^ <λ ιο m m .¾ m oo oo vor^ n o

(s ni roro m cm m ^ SS

HH HH HH HH HH

ιο Η σ' vo 'tf *tf SS Sh

oo <J\ N N CMO Μ H \.S

io io t" Γ'Γ' r- t- r* "

η σ\ oo m HH SS roS

oor~ σι H m =* oo ro >tf cm cm M ro M ro m in in m in m mm mm

+> CM Η Η Η H

(d tn -p

M

0 m m m cm m * *·

H o] O O

H

0) .0 rd

&H

m ro ro to a a a a μ α ο υ ο

(Vs Cl§ C^X-I

s U \ ° f

ro M

tu a MM U M ro u m a a μ a a m aM u u ~ ou

„ cT S \ / η «" V/ « S

g ? ,° 8 g ~ S 8 a 8 1/ ooo p o a P φ -b-8" -ό Φ" r- co O' ® £

CM CM CM M CO

Η Η Η Η H ’ 48 om o o o o o o 1505 21 cm m cm o cm m cMm I 3 U 3 i Søri 9 9 9 H ^ ^

Η Η Η Η Η H ri H

o o O O O O *2 ° m°o Γ" H mn oom m ^ m ·μ< <2 ^ m η m h m H 00 ^ co oo mm ·μ· m ij1-!

1.0 i—I CM Η H COrH

%,·. k. *. »* ·* * * HH 'Φ -tf m co η n

HH HH HH HH

COCO -S* CO OH 22£ί

m -M< <Μ· O CM CM tiCN

« k k » » » * * r'kt'» o r" cd co t" co o h cd co m m h oo m m1 oo oor» k k. k k. k k -*

M1 m CM CM m CM

mm mm mm mm h H H h

•P

ti co p

M

o

<W CM

H

H -

<U

Λ ti

Eh Q§ Q i Vs"

SS SS J

V V 4m

m m K K O U

\ / m 'M tt! O ϋ mm

cm m K K

^ — U U

CM CM \ / - m tt! m tt! \ /

KU KU 'K

U w u - u o o o o o -d-f -b-ί -d cm m ·μ* £! m mm m

Η H rH H

49 oo oo oo 15 OS 21 m in m in m *3·

O H ΙΟ H V£> H

HH HH HH

O O O O O LO

ko oo oo m oo ro ro ro m mm

m H m h ro H

oo o m σι mm σι t— - ro m ro ro %. * ^ — — ** mm ro ro ro ro

HH i—i i—I HH

ID 00 OO H 00 O

ko m 'S' ^ m ^ V ^ ^ ^ ^ ko r- r~ r— r- r~ ro vo ro o ro Γιο m oo σι oo t-~ ^ *· *> — — — mm 'i ^ ^ mm mm mm

+* Η Η H

(t)

CO

+·

O

IH

H

H

<u

Q

icS

m ro S3 S3

m O

0J &i

I - I

ro ro S3 W ro U O S3 m m υ ^ m m m m S3 S3 m S3 ro O ro O S3 ni

S3 "— S3 U O

U O O O "i o

O O

S3 ID Γ- U 00 ro ro ro

rH rH rH

50 150521

Eksempel 5.

S02C1 N02nS" N(cU;.)3CUCUN^)-C;11:J 00C,b Νυ>^|^(θ!)2)3^1ΰΟλ<^)_ΟΙ]:} ^ COOEt ^ J,n COOKt

Nli? K"

. HC1 I

SO £ <bci_ o A) Ethyl 1-(N - (3-methyl-l,2/3/4-tetrahγdrO-·8-qUinOlinSUlfOnγl)~

Q

-N -nitro)-L-arginyl)-4-methyl-2-piperidincarboxylat.

Λ

Til en velomrørt opløsning af 4,08 g ethyl 1-(N-nitro-L-arginyl)- 4-methyl-2-piperidincarboxylat-hydrochlorid og 3,03 g triethylamin i 200 ml chloroform sættes portionsvis 3,69 g 3-methyl-l,2,3,4-tetra-hydro-8-quinolinsulfonylchlorid, medens temperaturen holdes på 5°C. Reaktionsblandingen omrøres i 5 timer ved stuetemperatur. Ved afslutningen af dette tidsrum vaskes reaktionsblandingen med mættet natriumchloridopløsning og tørres over vandfrit natriumsulfat.

Chloroformopløsningen inddampes, og remanensen chromatograferes på silicagel pakket i chloroform og elueres med chloroform indeholdende 3% methanol. Hovedfraktionen inddampes til tørhed, hvorved fås 3,61 g (62% af det teoretiske) ethyl 1-(N2-(3-methy1-1,2,3,4-tetra- p hydro-8-quinolinsulfony 1) -N -nitro-L-arginyl) -4-methyl-2-piperidin'-carboxylat i form af et amorft fast stof.

IR-Spektrum (KBr) : v „ - 3400, 1730 og 1635 cm-1.

IuciX

NMR-Spektrum (CD3OD): δ (ppm) =6,5 (IH, t), 7,1 (IH, d), 7,4 (IH, d).

150521 51 N02NH^J(C112)3CIICO}^])-CH3 NII^-Nil(CH2)3ClICON<^-Cll3 := L, cooEt NH L ~oEt

: I --' * I

SOo SOp

I \ II .CJUCOOII

. to 05=,,, CU3 B) Ethyl 1-(N2-(3-methyl-l,2,3,4-tetrahydro-8-quinolinsulfonyl)- -L-arginyl)-4-methyl-2-piperidin-carboxylatacetat. Til en opløsning 2 af 3,00 g ethyl 1-(N -(3-methyl-l,2,3,4-tetrahydro-8-quinolinsul- n fonyl)-N -nitro-L-arginyl)-4-methyl-2-piperidin-carboxylat i 100 ml ethanol og 20 ml eddikesyre sættes 0,9 g palladiumsort, og derefter rystes blandingen i en hydrogenatmosfære i 15 timer ved stuetemperatur. Opløsningen filtreres til fjernelse af katalysatoren og inddampes til et olieagtigt produkt. Ved genudfældelse med ethanol--diethylether fås 2,38 g (78% af det teoretiske) ethy1-1-(N2-(3-methyl-l , 2,3,4-tetrahydro-8-quinolinsulfonyl)-L-arginyl)-4-methyl-2--piperidin-carboxylatacetat.

NU2^-NH (C1I2 ) 3C11C0.\'^>-Cli3 MI2^-N11 (C1I2 ) 3CiICON^)-clI3 NH NU COOEt NH NU ϋ0ϋΠ I . I · S02 -^ S02 oa og CH3 Cl,3 52 150521 C) 1-(N2-(3-Methyl-l,2,3,4-tetrahydro-8-quinolinsulfonyl)-L-arginyl)--4-methy1-2-piperidincarboxy1syre.

En opløsning af 2,00 g ethyl 1-(n2-(3-methyl-l,2,3,4-tetrahydro--8-quinolinsulfonyl)-L-arginyl)-4-methy1-2-piperidincarboxylat--acetat i 20 ml ethanol og 10 ml N natriumhydroxidopløsning omrøres natten over ved stuetemperatur. Derefter neutraliseres reaktionsblandingen med 2N saltsyre og inddampes i vakuum, hvorved fås et gummibundfald, der ekstraheres tre gange med 150 ml chloroform.

Chloroformopløsningen vaskes med mættet natriumchloridopløsning, tørres over vandfrit natriumsulfat og inddampes i vakuum, hvorved fås 1,45 g (85% af det teoretiske) 1-(N2-(3-methyl-l,2,3,4-tetrahy-dro-8-quinolinsulfony1)-L-arginyl)-4-methy1-2-piperidincarboxy1-syre i form af et amorft fast stof.

IR-Spektrum (KBr): = 3400, 1620, 1460 og 1380 cm

Analyse:

Beregnet for C23H36°5N6S: c 54'31 H 7,13 N 16,52 Fundet: C 54,09 H 7,00 N 16,80.

Fremstilling af arylsulfonylchlorider til anvendelse som udgangs-forbindelser ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

A) Natrium-3-butoxy-2,4-dimethoxybenzensulfonat.

Til en velomrørt opløsning af 50,8 g 2-butoxy-l,3-dimethoxybenzen i 160 ml carbontetrachlorid sættes dråbevis 16,1 ml chlorsulfonsyre ved en temperatur mellem 0 og 4°C. Reaktionsblandingen omrøres i 1 time ved stuetemperatur, hældes ud i knust is og fortyndes derpå til 300 ml med vand. Efter afdampning af carbontetrachloridet ekstraheres den resulterende vandige fase med ether og neutraliseres derpå med 2N natriumhydroxidopløsning til udfældning af hvide krystaller, som frafiltreres og tørres, hvorved fås 64,3 g (85,1% af det teoretiske) natrium-3-butoxy-2,4-dimethoxybenzensulfonat.

B) 3-Butoxy-2,4-dimethoxybenzensulfonylchlorid.

Til en omrørt suspension af 60,0 g tørt, pulverformigt natrium-3--butoxy-2,4-dimethoxybenzensulfonat i 150 ml tørt dimethylformamid 53 150521 sættes dråbevis 69 ml thionylchlorid i løbet af 20 minutter ved stuetemperatur.

Reaktionsblandingen omrøres i 15 minutter og hældes gradvist ud i 1000 ml isvand og omrøres kraftigt. Efter 1 time fradekanteres den vandige fase, og den tilbageblivende olie ekstraheres med benzen, vaskes med vand, tørres over vandfrit natriumsulfat, destilleres til fjernelse af opløsningsmidlet og destilleres derpå i vakuum, hvorved fås 47,5 g (80,1% af det teoretiske) 3-butoxy--2,4-dimethoxybenzensulfonylchlorid med kogepunkt 154 - 155°C/1 mm Hg.

Analyse:

Beregnet for C^2H15C105S: c 46,68 H 5,56 Fundet: C 46,71 H 5,60.

De nedenstående arylsulfonylchlorider, som ikke tidligere er beskrevet i den kemiske litteratur, syntetiseres ved den ovennævnte fremgangsmåde .

Tabel

Nr. Ar - SC^Cl Kogepunkt (smeltepunkt)

Ar 1 I |1 165 - 166°C/10 mm Hg ^\><ch2)2ch3 <57'5 - 58'5°c> 2 f*\\ 112 " 115°C/1 mm Hg LA (33 - 35°C) ^ O(CH2)3CH3 3 y j| 127 - 129°C/0,5 mm Hg /CH3

OCH,CH,CH

54

Tabel fortsat 150521 4 |^|) 148 ” 150°C/1 ^ Hg o(ch2)4ch3 5 ^\,0(<:η2)3(:η3 143 ~ 145°C/1 ^ Hg i J (48 - 51°C) 6 sL· (41 - 42°C)

Li CH0CH-CHo

och3 * z J

7 Λ /CH3 139 - 140°C/1 mm Hg

I CH

0CH3 nch2ch3 8 Ml i”3 - CH3 129,5 - 132°C/1 mm Hg 0CH3 CH3 9 jr 145 - 148°C/1 mm Hg ^y^O(CH2)3CH3 ch3 10 I Η 151,5 - 153,5°C/1,5 mm Hg —-o(ch2)4ch3 _<=3_ 55

Tabel· fortsat 150521 11 T |T 155 - 156 C/2 mm Hg 0(CH2)3CH3 12 Υγ“3 (44-45¾ OCH2CH2OCH3 •y^Y^CH3 0 13 I II 187 C/l mm Hg och2ch2ch2och3

OCH- Q

14 γ || 3 198 - 200 C/2 mm Hg OCH2CH2CH2Br °ch3 15 A—0CH3 210 ” 220°^1 ^ Hg (ch2) 3co2ch3 _0®3_ J^^OCE3 16 \ II 160 - 162°C/2 mm Hg k;^|A^O(CH2)2CH3 0CH3 och3 17 Γ II 154 - 155°C/1 mm Hg (CH2) 3CH3 och3 150521 56

Tabel fortsat —.......... '1 -- JL^och3 18 I I) 170 " 172°C/2 mm Hg 0CH3

°CH_ O

lg Y jp 3 183 - 185°C/1 ram Hg S^o(ch2)5ch3 0CH3_ 20 iVCH3 (46" 47°c) γ^ΟΟΗ2ΟΗ2ΟΟΗ3 0CH3_

Cl 21 131°C/1 mm Hg

XX

T^0(ch2)3ch3 cl yT\ / 0 (CH2) 2^3 22 ILT (65 - 66°C) o(ch2)3ch3 23 {30 - 32°C) ^/^0(CH2)3CH3 J. 0(Ch2)3ch3 24 f U 208 - 210°C/1 mm Hg o(ch2)3ch3

Tabel fortsat 57 150521 25 178 - 179°C/2 rim Hg o(ch2)3ch3 A ! 26 11 olieagtig substans och3 f*K^°CH3 27 |l 165 - 168 C/l mm Hg ^y^^OCH2CH2OCH2CH3 0CH3_ Λ

28 L IL ✓CH

olieagtig substans 0C02C2H^CH2CH3

30 [ jl CH

3 111 - 116°C/1 mm Hg X™3 31 y olieagtig substans 32

L 1 /CH

OCH«CH olieagtig substans ch3 58 150521 _ Tabel fortsat____ i 33 148 " 150°C/1 ^ Hg (CH2) y^^CE3 34 152 - 153°C/2 mm Hg W^-oc2h5 Όχη3 I 133 - 134°C/1 mm Hg ^o(ch2)2ch3 _ . CH,

36 O

L Jl ^-CH3 142 - 143UC/1 mm Hg ^CH3

CH

38 \\C^ 3 133 ~ 135°c/1 ^ Hg (ch2) 2ch3 ch3 CH, 39 FX VCH, 'V-OCH 136 - 139°C/1 mm Hg W ^ch3 ch3 _^CH^ 40 _/VoChCH3 \ _ / °CH^h (95 - 96°C) ___ ^CH3 · CH -3 41 fX "CH3 \ )-0-(CH2}2CH3 (101 - 103°C) \— / ^*CH, C^CH,_

Claims (2)

150521 Tabel fortsat 42 I II 142 - 144°C/1 mm Hg \/0CH3 Π ^CH 44 \ 7~ 0CH2CH 158 - 160°C/1 mm Hg W ^ch3 0CH3 \/0CH3 45 \ / OCH2CH2CIC^ 3 159 " 160°C/1 mm Hg _^3_i_ \.OC2H5 46. CH3 151 " 152°C/1 ^ Hg _^ OC2H5_ A/CHs 47 I 158 - 159°C/1 mm Hg ys / CH3 OCH 0CH3 3 2

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af N -arylsulfonyl--L-argininamider med den almene formel I HN C - N - CH _ CH ~ CH 0 CHCOR I /11 H2N H HNS°2 Ar 150521 hvor R udvælges fra klassen bestående af /Rl (1) - bt \ 3 XCH(CH0) COOR° ΙΔ Π 2 hvor R1 betegner C2_1Q-alkyl, C2_^Q-alkoxyalkyl, C2_10-alkylthio- alkyl, C2_1Q“alkylsulfinylalkyl/ C^^cj-aralkyl, C^^^g-cycloalkyl, C^iQ-cycloalkylalkyl, furfuryl, tetrahydrofurfuryl, tetrahydro- -2-pyranylmethy1, 2- eller 3-pyridylmethyl eller phenyl? R^ be-— 3 tegner hydrogen eller C^_^g-alkyl; R betegner hydrogen eller Cj_^Q-alkyl? og n er et helt tal 0 eller 1, R4 Æ\ (2) - N ) V (E)m 4 6 6 hvor R betegner -C00R , hvor R betegner hydrogen eller C, , n--alkyl, hver R betegner uafhængigt af hinanden hydrogen eller C, ,n-alkyl, og m er et helt tal 1 eller

2? R4 er substitueret i 2- eller 3-stillingen, og R3 er substitueret i 2-, 3-, 4-, 5-og/eller 6-stillingen, O) coog^. . . >p hvor p er et helt tal 1 eller 2? COOH (4) -N 0 Ί1 >—t eller og 150521 Ar betegner phenyl, der er substitueret med mindst én substituent valgt fra klassen bestående af amino, Q-alkylamino, C1_1Q-al- kanoylamino, ^-hydroxyalkyl, phenyl, -phenylalkyl og C^_1Q-hydroxyalkoxy; phenyl substitueret med mindst én substituent valgt fra klassen bestående af hydroxy, C-j^-alkyl og Cj^Q-alkoxy, og mindst én substituent valgt fra klassen bestående af C7<_12-aralkyl, C2_g-alkylcarbonyl og phenyl; en phenoxy-phenyl-, dibenzothienyl-, 9,9-dioxodibenzothienyl-, phenoxathiinyl-, lH-indazolyl-, quinolyl-, indolinyl-, phenazinyl-, quinoxalinyl-, phthalazinyl-, 1,2,3,4-tetrahydroquinolyl- eller acridinylgruppe, som hver er usubstitueret eller substitueret med én eller flere grupper valgt fra klassen bestående af hydroxy, C1_1Q-alkoxy og Cj_^g-alkyl; en cg_^g-cycloalkylphenyl-, fluorenyl-, thioxanthenyl-eller 2H-chromenylgruppe som hver er usubstitueret eller substitueret med én eller flere grupper valgt fra klassen bestående af hydroxy, C1_1()-alkyl, C1_1()-alkoxy, C2_1()-alkoxycarbonyl og oxo; 3-cyclohexyl-4-ethoxycarbonyloxyphenyl; eller en phenyl-gruppe, der er substitueret med mindst én substituent valgt fra klassen bestående af alkyl, alkoxy, halogenalkoxy, alkoxyalkoxy og alkoxycarbonylalkoxy, idet nævnte substituenter indeholder 3-7 carbonatomer, og idet nævnte substituerede phenylgruppe eventuelt er yderligere substitueret med mindst én substituent valgt fra klassen bestående af methyl, ethyl, methoxy, ethoxy, hydroxy og halogen, eller farmaceutisk acceptable salte deraf, kendetegnet ved, at Q a) guanidinobeskyttelsesgruppen eller -grupperne i et N -substitueret N^-arylsulfonyl-L-argininamid med den almene formel XX HN \ C - N - CHoCH0CHoCHCOR ^ 2 2 2| XX HN R" HNS0o I. r R' Ar hvor R og Ar har den ovenfor angivne betydning, idet R3 i R også kan være erstattet af benzyl, og R1 og R" betegner hydrogen eller beskyttelsesgrupper for guanidinogruppen, idet mindst den ene af R' og Ru er en beskyttelsesgruppe for guanidinogruppen, fraspaltes ved syrehydrolyse eller hydrogenolyse, og det vundne reaktionsprodukt om nødvendigt hydrolyseres eller esterificeres; eller