DK146962B

DK146962B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af indolizinderivater

Info

Publication number: DK146962B
Application number: DK291180AA
Authority: DK
Inventors: Gilbert Rosseels; Pierre Nokin
Original assignee: Labaz Sanofi Nv
Priority date: 1979-07-06
Filing date: 1980-07-04
Publication date: 1984-02-27
Also published as: DD151940A5; OA06563A; AU529725B2; YU171880A; PL225479A1; FI67217C; PT71424A; DK291180A; HU182151B; DK146962C; GR69280B; NO153496B; IN151594B; AR225314A1; JPS5618979A; IE49994B1; ES8105710A1; ATA354380A; EP0022762B1; EP0022762A1

Description

148962

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte indolizinderivater med den almene formel

Br I1 v »<Z>-°H m o I x2 5 hvori R betyder en ligekædet eller forgrenet alkylgruppe med 1-8 carbonatomer, phenyl, 3-chlor-4-methylphenyl, 3,4-dichlorphenyl eller phenyl substiuteret med et fluor-, chlor- eller bromatom eller med en methyl- eller methoxy-gruppe, og og er ens eller forskellige og hver for 10 sig betyder hydrogen, chlor, brom eller methoxy.

Indolizinderivaterne med formlen I har nyttige farmakologiske egenskaber, nærmere betegnet en hæmmende virkning med hensyn til virkningen af xanthinoxidase og af adenosinde-aminase samt en uricosurisk virkning. Endvidere har de om-15 handlede forbindelser potenserende virkning på catechol-aminernes cardiovaskulære virkninger.

Indolizinderivaterne med formlen I kan derfor anvendes til behandling af fysiologiske forstyrrelser som følge af for høj urinsyreproduktion og som følge af forstyrrelser i immun-20 systemet.

Som eksempler på fysiologiske forstyrrelser som følge af for høj urinsyreproduktion kan nævnes Arthritis urica eller Tophi urica. Ved behandling af sådanne forstyrrelser kan en effektiv dosis af forbindelserne med formlen I f.eks. være 25 30 mg daglig til en person med en legemsvægt på ca. 60 kg.

Hvad angår de fysiologiske forstyrrelser som følge af sygdomme i immunsystemet, der kan behandles med de omhandle- 2 166962

Ue forbindelser, kan nævnes forhindring af afstødningsfænomenet ved organtransplantationer.

Endvidere kan indolizinderivaterne med formlen I anvendes ved cardiovæskulære sygdomme, som kan behandles ved poten-5 sering af catecholaminernes cardiovaskulære virkninger, f.eks. ved forstyrrelser i det cerebrale vaskulære system og ved cardialinsufficiens.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at man omsætter et benzoyl-indolizinderivat med den almene 10 formel

j-R

L N-xS-OH (II)

ii \_=_/ o I

X2 hvori R har den ovenfor angivne betydning, og X j og X^ er ens eller forskellige og hver for sig betyder hydrogen, chlor, brcm eller methoxy, med brcm ved stuetemperatur i et egnet opløsningsmiddel og i nærværelse af et • 15 alkalimetalacetat.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen gennemføres ved stuetemperatur i et passende opløsningsmiddel, såsom dioxan, og i nærværelse af et alkalimetalacetat, f.eks. natriumacetat, til dannelse af den ønskede forbindelse med formlen I.

20 Som eksempel på et andet egnet opløsningsmiddel kan nævnes eddikesyre. Imidlertid vil man kun anvende dette opløsningsmiddel, når udgangsforbindelsen med formlen II er mono-substitueret i benzoylgruppen med chlor, brom eller methoxy.

Fremgangsmåden kan gennemføres ved at bringe et molækviva-25 lent af en forbindelse med formlen II i kontakt med et, to eller tre molækvivalenter brom. Det har vist sig, at 3 146962 - når der anvendes et molækvivalent brom, opnås selektiv halogenering i 1-stillingen i indolizinringen i benzoyl-indolizinderivatet med formlen II, idet forbindelsen med formlen II er usubstitueret, monosubstitueret eller disub- 5 stitueret med chlor, brom eller methoxy i benzoylgruppen.

- Når der anvendes to ækvivalenter brom,halogeneres ikke kun 1-stillingen i indolizinringen i forbindelsen li, men også 3- og 5-stillingerne i benzoylgruppen. Af denne årsag gennemføres ovennævnte fremgangsmåde fortrinsvis un- 10 der anvendelse af en udgangsforbindelse med formlen II, som indeholder et chlor- eller bromatom eller en methoxy-gruppe i benzoyldelen for at undgå blandinger af halogenerede forbindelser.

Det er klart, at når der anvendes et molækvivalent af 15 et 2-substitueret-3-(3-chlor-, 3-brom- eller 3-methoxy- 4-hydroxy-benzoyl)'-indolizin med formlen II med to-molækvivalenter brom, er det nødvendigt at adskille blandingen af de således fremstillede halogenderivater.

Denne adskillelse kan gennemføres på konventionel måde, 20 f.eks. ved søjlekromatografering.

- Når der anvendes tre molækvivalenter brom sammen med et molækvivalent 2-substitueret-3-(4-hydroxy-benzoyl)-indolizin med formlen II, dannes det tilsvarende tri-halogenderivat med formlen I på selektiv måde.

25 De franstillede forbindelsers kemiske struktur er bestemt ved hjælp af NMR-spektret af den pågældende forbindelse. Det har vist sig, at den kemiske struktur svarer til den anførte struktur for indolizinderivaterne med formlen I.

Det er eksempelvis blevet påvist, at når et 2-subsitueret-30 3-(4-hydroxybenzoyl)-indolizin bromeres i overensstemmelse med fremgangsmåden som beskrevet ovenfor til dannelse af monobromderivatet, bindes bromatomet til 1-sti-llingen i ·' 146962 4 indolizinringen: De karakteristiske signaler for en p-di-substitueret aromatisk ring registreres, og der registreres ingen singlet med hensyn til H^-protonen.

Til illustration af dette forhold anføres i det følgende 5 NMR-data for l-brom-2-ethyl-3~(4-hydroxy-benzoyl)-indolizin.

Br n * b i Vr A' B'

Kemisk forskydning (i ppm) ------Koblingskonstanter 10 fil 65 56 57 58 (l cps) AA'=7,56 Jg η = 6,5 9‘,0 dt 6,91 7,23 7,56 BB'=6,90 J? Q = 9 11111 j5,6 = 7_ (Opløsningsmiddel: DMSOdg, reference: TMS, d.v.s. tetra-15 methylsilan) På tilsvarende måde, når et 2-substitueret-3-(3-brom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin omsættes til dannelse af et di-bromderivat, bindes det således indførte andet bromatom i 1-stillingen i indolizinringen: 20'. NMR-spektret angiver tilstedeværelsen af et bromatom i 1-stillingen i indolizinet (fravær af H^-proton) og et bromatom i ortho-stilling til hydroxylgruppen (flerdobbeltheden og den kemiske forskydning er i overensstemmelse med denne struktur).

25 Som eksempel herpå anføres i det følgende NMR-data for l-brom-2-ethyl-3- (3-brom-4-hydroxy-benzoyl) -indolizin: 146962 5

Br /^\y\ -ch9ch^ I | ^ C Br

0 B A

Kemisk forskydning (i ppm) —-----Koblingskonstanter 5 51 55 56 57 58 (l cps)

Hc=7,80d Ja>b=8,4 J6j7=6,75 - 5,18 dt 6,96 m 7,27 m 7,54 HB«7,55q J c=2,0 Jj ,=7,0 _ 1_K-7,09d J7,8=8 f 8_ (OpløsningsmiddelsDMSOdg, reference: TMS) 10 i tilfældet med tribromderivaterne viser tilstedeværelsen af en singlet, som skyldes p-hydroxy-benzoyldelen, at to bromatomer er i ortho-stilling til hydroxylgruppen.

Som eksempel herpå anføres i det følgende NMR-data for l-brom-2-ethyl-3-(3,5-dibrom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin:

Br 15 [ I 2 3 Br

^ X /X

xrQ-ra

o I

Br 6 146962

Kemisk forskydning (i ppm) Koblingskonstanter 61 55 56 67 58 U CPS) J5,6 = 7'° - 9,28 dt 7,01 m 7,33 m 7,77 dt 7,81.s J^7 = 8,75 5___;_____J5,6 = 6,5__ (Opløsningsmiddel: DMS0dg, reference: TMS)

Forbindelserne med formlen II, hvori X£ og X£ hver for sig betyder hydrogen, er kendte forbindelser, som er beskrevet i GB-patentskrift nr· 1.518.443, medens de øvrige forbin- 10 delser med formlen II kan fremstilles i overensstemmelse med den i ovennævnte GB-patentskrift beskrevne fremgangsmåde.

Hos mennesker dannes urinsyre primært ved den xanthin-oxidasekatalyserede oxidation af hypoxanthin og xanthin.

15 Allopurinol er for tiden et af de mest anvendte kommercielle lægemidler til behandling af primær hyperuricemia ved Arthritis urica. I modsætning til de uricosuriske midler, som forøger nyrernes udskillelse af urat, hæmmer allopurinol de afsluttende trin i urinsyrebiosyntesen.

20 I lave koncentrationer er allopurinol, hvis kemiske struktur er nært beslægtet med xanthins og hypoxanthins kemiske struktur, et udmærket substrat for og kompetitiv inhibitor af xanthinoxidase. Oxypurinol, som er : metaboliten dannet ved indvirkning af xanthinoxidase på allopurinol, 146962 7 er en særdeles kraftig non-kompetitiv inhibitor for det samme enzym. Den pågældende hæmmende virkning afhænger derfor af de kinetiske forhold ved to reaktioner, nemlig oxidationen til oxypurinol på den ene side og spaltningen 5 af enzym-oxypurinolkomplekset på den anden side.

Inhiberingen af det næstsidste og sidste trin i urinsyrebiosyntesen reducerer plasmakoncentrationen og udskillelsen af urinsyre i urinen og forøger plasmakoncentrationen og nyrernes udskillelse af de mere opløselige oxypurin-10 precursere.

Allopurinol ligner purinbaser. Det kan derfor også gribe forstyrrende ind i stofskiftesystemet for andre purinbaser end xanthin, og dette kan være eh årsag til fysiologiske forstyrrelser.

15 Af denne årsag foretrækkes det, at lægen har et middel til rådighed, som ikke ligner purinbaser, men som ikke desto mindre, ligesom allopurinol, er i stand til at udøve en inhiberende virkning med hensyn til virkningen af xanthin-oxidase og således formindske urinsyrebiosyntesen.

20 Allopurinol har endvidere en relativ kompliceret kemisk struktur, som gør det vanskeligt at fremstille denne forbindelse. Det har derfor stor betydning at udvikle midler, som er i stand til at inhibere virkningen af xanthinoxidase, og som kan fremstilles lettere end allopurinol.

25 De omhandlede indolizinderivater opfylder disse fordringer.

I denne forbindelse kan nævnes forbindelsen l-brom-2-n-propyl-3- (3,5-dibrom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin.

Det er endvidere kendt, at benzofuranderivater, især 3-(3,5-dibrom- og 3,5-diiod-4-hydroxy-benzoyl)-benzofuraner, har inhiberende virkning med hensyn til yirkningen af 30 xanthinoxidase, jf. Arch. int. Pharmacodyn., 165, 25 (1967).

8 146962

Det har vist sig, at det er muligt at opnå en væsentlig forøgelse af førnævnte benzofuranderivaters hæmmende virkning med hensyn til virkningen af xanthinoxidase ved at erstatte benzofurandelen med indolizinringen. Denne ombyt-5 ning af benzofurandelen med indolizinringen tilvejebringer en type hidtil ukendte inhibitorer med virkning på xanthinoxidase, dvs. de omhandlede indolizinderivater, hvoraf nogle har en 10-20 gange kraftigere virkning end benzofuran-derivaterne.

10 Det er kendt, at indolizinderivater har farmakologiske egenskaber. Således har visse 3-(4-dialkylaminoalkoxy-benzoyl)-indolizinderivater anti-anginale egenskaber, jf. J. Gubin et al., Eur. J. Med. Chem., 1977, 12, 345,og dansk fremlæggelsesskrift nr. 142.622. Disse kendte indolizinderivater 15 indeholder ikke noget bromatom i 1-stillingen i indolizin-kernen. Desuden har de en dialkylaminoalkoxysubstituent i 4-stillingen i benzoylgruppen, hvor indolizinderivaterne med formlen I blot har en hydroxygruppe. Der er endvidere ikke beskrevet nogen hæmmende virkning med hensyn til virk-20 ningen af xanthinoxidase for de kendte indolizinderivater.

Det er derfor overraskende, at de omhandlede forbindelser har inhiberende virkning med hensyn til virkningen af xanthinoxidase.

Som tidligere nævnt har de omhandlede forbindelser også in-25 hiberende virkning med hensyn til virkningen af adenosin-deaminase. Forsøg foretaget med benzofuranderivater, hvoraf nogle er kendt fra ovennævnte artikel i Arch. int. Pharmaco-dyn., har vist, at disse benzofuranderivater ikke har nogen eller kun meget ringe virkning med hensyn til inhibering af 30 adenosindeaminase.

Det er kendt, at en total mangel på immunitet kan skyldes en genetisk mangel på adenosindeaminase, hvilket følgelig giver anledning til, at der søges nye midler, som er i stand til at regulere immunresponset.

146962 9

Det synes faktisk at forholde sig således, at adenosin og desoxyadenosin (eller metaboliter deraf, såsom desoxy-ATP) er direkte cytotoksiske overfor lymphocyter og hæmmer formeringen, differentieringen og udviklingen af de immunkompe-5 tente celler.

Endvidere kendes inhibitorer af adenosindeaminase, f.eks.

3,4,7,8-tetrahydro-3- β-D-ribofuranosyl-imidazo [4,5-d] [1,3] diazepin-8-ol, d.v.s. coformysin, og 9-erythro-(2-hydroxy- 3-nonyl)-adenin, d.v.s. EHNA, som potenserer denne cytotok-10 sicitet.

Inhibitorerne af adenosindeaminase kunne således udøve en immunosuppressiv virkning ved at forøge det intracellulære indhold af adenosin eller et metabolit deraf i lymphocyter-ne.

15 I modsætning til de for tiden anvendte immunosuppressorer kunne inhibitorerne af adenosindeaminase udøve en specifik virkning med hensyn til de immunkompetente celler. Endvidere kunne disse inhibitorer have relativ lav toksicitet med hensyn til de andre celletyper, da biosyntesen af adenosin 20 til inosin katalyseret af adenosindeaminase synes at være en relativ lille vej for metabolismen af puriner i størsteparten af de somatiske celler.

Ligesom allopurinol, som omtalt ovenfor, ligner EHNA purin-base. EHNA kan derfor også interferere med andre enzymer i 25 purinmetabolismen, og denne mangel på specificitet kunne føre til fysiologiske forstyrrelser.

Forsøg udført med de omhandlede forbindelser i sammenligning med EHNA har vist, at indolizinderivaterne med formlen I har en mere specifik virkning,end det er tilfældet 30 med EHNA.

ίο 146962

Tilsammen gør alle disse egenskaber de omhandlede indolizin-derivater yderst værdifulde som inhibitorer med hensyn til adenosindeaminase. De kan således anvendes i vid udstrækning indenfor immunpatologien, f.eks. til at forhindre afstød-5 ningsfænomenet ved organtransplantationer, i tilfælde med autoimmune rheumatiske sygdomme, såsom kronisk progressiv polyarthritis', - og i tilfælde med lupus erythematosus disse-minatus, auto-immun glomerulonephritis, kronisk svære hepatitistilfælde, dissemineret sclerosis etc.

10 immunsuppression er ikke den eneste potentielle terapeutiske anvendelse for stoffer, som udviser en hæmmende virkning med hensyn til adenosindeaminase. De kan også udvise en specifik cytotoksisk virkning ved lymphocytisk neoplasia. Ligeledes kan de have potenserende virkning på antitumormidler og 15 antivirale midler, såsom 3'-deoxyadenosin, d.v.s. cordycepin, eller 'adeninarabinosid.

"In vivo" omdannes adeninarabinosid (Ara-A) hurtigt ved deaminering til hypoxanthinarabinosid, som er en forbindelse med mindre antiviral virkning og antitumorvirkning end 20 udgangsforbindelsen.

Inhiberingen af denne proces ved hjælp af adenosindeaminase-inhibitorer fører til en potensering af den antivirale virkning og antitumorvirkningen ved adeninarabinosid.

Forsøg gennemført "in vivo" har vist, at de omhandlede for-25 bindeiser kan virke som inhibitorer på deamineringen af adeninarabinosid ved hjælp af adenosindeaminase og således føre til en synergisk forøgelse af den anti-herpetiske virkning af Ara-A i mus.

Som inhibitorer med hensyn til virkningen af adenosinde-30 aminase er følgende forbindelser foretrukne: U6962 11 l-Brom-2-phenyl-3-(3-brom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin, l-brom-2-(4—fluor-phenyl)-3-(3-brom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin.

Som tidligere anført potenserer de omhandlede forbindelser 5 de cardiovaskulære virkninger af catecholaminerne, hvilket gør forbindelserne anvendelige ved behandlingen af f.eks. forstyrrelser af det cerebrale vaskulære system.

Med hensyn til hjertet bevirker denne potensering af virkningerne af catecholaminerne en forøgelse af den myocardia-10 le kontraktilitet, hvilket kan være nyttigt ved behandling af cardialinsufficiens og angina pectoris.

De omhandlede forbindelsers farmakologiske virkninger er blevet bedømt ved forsøg.

Hvad angår den hæmmende virkning med hensyn til virkningen 15 af xanthinoxidase og af adenosindeaminase er der blevet gennemført forsøg "in vitro" i absorptionscellen i et U.V.-spektrofotometer. Endvidere har der været gennemført forsøg "in vivo" med hensyn til den uricosuriske virkning og den hæmmende virkning med hensyn til virkningen af adenosin-20 deaminase.

I. Hæmning af virkningen af xanthinoxidase.

Dette forsøg gennemføres med xanthinoxidase fra mælk. Aktiviteten af enzympræparatet måles ved at følge dannelsen af urinsyre ud fra hypoxanthin i nærværelse af oxygen og 25 en phosphatpufferopløsning.

Der anvendes følgende forsøgsmetode: I absorptionscellen indføres følgende opløsninger: 1,5 ml 0,1 molær phosphatpufferopløsning (pH-værdi 7,4) mættet med oxygen.

30 0,3 ml 1 molær opløsning af ethylendiamintetracetat.

146962 12 0,8 ml vand.

0,01 ml kommerciel xanthinoxidaseopløsning med en kendt enzymkoncentration.

_3 0,01 ml 3-10 molær ethanolopløsning af forsøgsforbindel-5 sen.

Indholdet i absorptionscellen inkuberes i 2 minutter, hvorefter den enzymatiske reaktion startes ved tilsætning af -3 0,3 ml 10 molær opløsning af hypoxanthin til adsorptionscellen. Reaktionen følges ved spektrofotometrisk registre-10 ring af oxidationshastigheden for hypoxanthin ved 293 nm og 37°C. Den optiske tæthed registreres automatisk. De samme målinger foretages med en kontrolopløsning indeholdende alle de ovenfor anførte bestanddele bortset fra forsøgsforbindelsen.

15 På denne måde fås en kurve, som repræsenterer variationen i optisk tæthed i forhold til tiden for på den ene side opløsningen indeholdende inhibitoren og på den anden side opløsningen uden indhold af inhibitor. Hældningen af de to kurver måles og udtrykker antallet af mol urinsyre dan-20 net i 1 minut. Det er således muligt at sammenligne de opnåede værdier og beregne den procentvise hæmning af aktiviteten af xanthinoxidase fremkaldt af forsøgsforbindelsen. Der opnås følgende resultater:

Br Αλ. i1 νΝ-^τ<3'0Η

o I

X2 13 UB962 r X^ X2 Hæmning af virk ningen af xanthin-oxidase in vitro

_(i %) ved 10 ^ M

5 4-Methyl-phenyl HH 48 n-Propyl H Cl 84

Ethyl Br H 93 n-Propyl Br H 97 4-Methoxy-phenyl Br H 80 10 n-Propyl Br Br 95

Phenyl Br Br 48

Methyl Cl Ή 44

Ethyl 0CH3 H 21

Methyl Cl Cl 46 15 Ethyl 0CH3 Br 25 II. Hæmning af virkningen af adenosindeaminase.

A. Forsøg "in vitro".

Dette forsøg gennemføres med adenosindeaminase fra kalvetarme.

20 Der anvendes følgende forsøgsmetode: I absorptionscellen indføres følgende opløsninger: 2,7 ml 0,1 molær phosphatpufferopløsning (pH-værdi 7,4).

-4 -4 0,3 ml af en 10 eller 5*10 molær opløsning af adenosin 25 i phosphatpufferopløsningen (slutkoncentration af adenosin: 10“5 eller 5-10~5 mol).

-3 0,01 ml 3·10 molær ethanolopløsning af forsøgsforbindelsen (ca. 10 millienheder).

Indholdet i absorptionscellen inkuberes i 2 minutter, hvor-= 30 efter enzymreaktionen startes ved tilsætning af 0,03 ml af en kommerciel adenosindeaminaseopløsning, som har en kendt enzymkoncentration. Reaktionen gennemføres ved 30°C og følges ved spektrofotometrisk registrering af formindskelsen i absorbansen ved 265 nm som følge af omdannelsen 146962 14 af adenosin til inosin ved hjælp af adenosindeaminase. Enzymreaktionen kan udtrykkes ved følgende ligning:

Adenosin + 1^0 adenosindeaminase ^ inosin + NH^

De samme målinger foretages med en kontrolopløsning indehol-5 dende alle de ovenfor anførte bestanddele bortset fra forsøgsforbindelsen. Der fremstilles derpå grafiske afbildninger, som gengiver formindskelsen i absorbansen i forhold til tiden for opløsningen indéholdei)de.:inh5bitoren og for kontrolopløsningen .

10 Hældningen for de to kurver måles og udtrykker antal mol inosin dannet i 1 minut.Derefter Jberegnes den procentvise hæmning af aktiviteten af adenosindeaminase fremkaldt af forsøgsforbindelsen.

Der opnås følgende resultater:

Br

N-\-C-<? %-OH

is v ii v=/

o I

X2 146962 15 R X^ X2 Hæmning af virkningen af adenosindeaminase in vitrc (%)

Ved ΙΟ-5 M Ved 5·1θ“5 M

5 adenosin adenosin n-Butyl HH 45 n-Pentyl HH 32

Phenyl HH - 52 4-Brom-phenyl HH 26 10 Ethyl Br H 74 n-Propyl Br H 82

Isopropyl Br H 75 54

Phenyl Br H 100 88 2- Brom-phenyl Br H 50 15 3-Brom-phenyl Br H 53 4-Fluor-phenyl Br H 100 94 4-Chlor-phenyl Br H 58 3,4-Dichlor-phenyl Br H 51 3- Chlor-4-methyl-phenyl Br H 52 20 Isopropyl Br Br 57 n-Pentyl Br Br 33

Phenyl Br Br 53 22

Phenyl Cl H - 86

Der foretages sammenligningsforsøg med 2-ethyl-3-(4-hydroxy-25 benzoyl)-benzofuran og 2-phenyl-3-(3,5-dibrom-4-hydroxy-benzoyl)-benzofuran, og det viser sig, at disse forbindelser kun bevirker inhibering af adenosindeaminase ved en -5 koncentration på 10 M af adenosin på henholdsvis 18 og 15%.

30 2-Ethyl-, 2-isopropyl- og 2-n-butyl-3-(3,5-dibrom-4-hydroxy-benzoyl)-benzofuran samt 2-ethyl-3-(3,5-diiod-4-hydroxy-benzoyl)-benzofuran viser sig at være fuldstændig inaktive 146962 16 med hensyn til hæmningen af adenosindeaminase ved en koncentration af adenosin på 1θ”^ M.

Ved en koncentration på 10 ® M bevirker l-brom-2-phenyl-og l-brom-2-(4-fluor-phenyl)-3-(3-brom-4-hydroxy-benzoyl)-5 indolizin en inhiberende virkning på adenosindeaminase "in vitro" på henholdsvis 80 og 86%.

De to sidstnævnte forbindelsers inhiberende virkning på adenosindeaminase er også blevet undersøgt i intakte celler ved at inkubere ascitesceller (Krebs II) i nærvæ- 14 -5

10 relse af C-adenosin ved en koncentration på 5·10 M

14 og ved at måle dannelsen af inosin og hypoxanthin C.

Deamineringen af adenosin som følge af ascitescellerne inhiberer 50% i nærværelse af 2*10 ^ M l-brom-2-phenyl- 3-(3-brom-4-hydroxybenzoyl)-indolizin og af 10 ® Μ 1-15 brom-2-(4-fluor-phenyl)-3-(3-brom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin.

B. Forsøg "in vivo".

Dette forsøg gennemføres med henblik på at bestemme virkningerne af adeninarabinosid (Ara-A) og de omhandlede 20 forbindelser på forekomsten af herpetiske hudlæsioner og dødeligheden hos nu/nu mus inokuleret med HSV-1 (KOS).

Athymiske nøgne (nu/nu) mus, 20-25 dage gamle, inokule-res intrakutant med HSV-1 (KOS) med ca. 10^'^ PFU (plague-dannende enheder) pr. mus. Ara-A og/eller en af de omhand-25 lede forbindelser påføres topisk i en koncentration på 1% i dimethylsulfoxid fire gange daglig på dag 0, 1, 2, 3 og 4. Antallet af mus med epidermale læsioner (necro-sis på mindst 5 x 10 mm) i forhold til det totale antal levende mus optælles.

30 Resultaterne er anført på tegningen, på hvilken fig. 1 repræsenterer resultaterne opnået med kontroldyr, 146962 17 som kun er blevet behandlet med dimethylsulfoxid, fig. 2 viser resultaterne opnået med Ara-A alene, fig. 3 viser resultaterne opnået med l-brom-2-phenyl-3-(3-brom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin, der betegnes 5 LB 31400, fig. 4 viser resultaterne opnået med Ara-A i forbindelse med LB 31400.

Det fremgår klart af disse resultater, at den omhandlede forbindelse potenserer adeninarabinosids antivirale virk-10 ning.

III· Toksicitet.

Der foretages forsøg med mus til bestemmelse af forbindelsernes akutte toksicitet.

Ved intravenøs indgift af 20 mg/kg l-brom-2-phenyl- eller 15 l-brom-2-(4-fluor-phenyl)-3-(3-brom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin observeres ingen døde mus efter 14 dage.

Ved intragastisk indgift af 1500 mg/kg af l-brom-2-iso-propyl- eller 2-ethyl-3-(3,5-dibrom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin opnås samme resultat.

20 Hvad angår andre mulige egenskaber ved de omhandlede forbindelser skal især fremhæves den ovenfor omtalte hæmmende virkning på adenosindeaminase. Da denne virkning også udøves af visse kendte forbindelser, f.eks. coformycin og 2'-desoxycoformycin, som har antiparasitiske egenskaber, 25 kan de omhandlede forbindelser have antiparasitiske egenskaber, hvilket kan gøre dem særdeles nyttige ved terapeutisk behandling af en vært.

Det er klart, at ved terapeutisk anvendelse af de omhandlede forbindelser vil disse sædvanligvis blive indgivet i 30 form af et farmaceutisk præparat eller et veterinærpræparat, som kan være på dosisenhedsform, der er velegnet til den ønskede indgiftsform.

18 T 469 6 2

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen illustreres nærmere i de følgende eksempler.

Eksempel 1.

l-Brom-2-ethyl-3-(4-hydroxy-benzoyl)-indolizin.

5 Til en blanding af 5/3 g (0/02 mol) 2-ethyl-3-(4-hydroxy-benzoyl)-indolizin, 5,6 g (0,041 mol) natriumacetat-tri-hydrat og 50 ml eddikesyre sættes dråbevis i løbet af 3 3/4 time 3,25 g (0,021 mol) brom i 50 ml eddikesyre.

Under denne operation holdes temperaturen mellem 20 og 10 22°C. Omrøringen fortsættes i 3/4 time, hvorefter der tilsættes 150 ml vand. Blandingen omrøres i yderligere 1 time, hvorefter det dannede bundfald sugefiltreres.

Bundfaldet bringes på pastaform i 50 ml og derpå i 100 ml benzen, hvorved fås 6,35 g fast stof. Dette faste stof om-15 krystalliseres derpå fra 90 ml methanol.

På denne måde fremstilles 4,4 g l-brom-2-ethyl-3-(4-hydroxy-benzoyl)-indolizin.

Udbytte 63,9%.

Smp.: 160-161,5°C.

20 Analogt med den ovenfor beskrevne fremgangsmåde og under anvendelse af passende udgangsmaterialer fremstilles de nedenfor anførte forbindelser:

Forbindelse Smp. °C

l-Brom-2-methyl-3-(4-hydroxy-benzoyl)- 238-239 25 indolizin (dichlorethan) l-brom-2-n-butyl-3-(4-hydroxy-benzoyl)- 160-162 indolizin (benzen) l-brom-2-n-pentyl-3.- (4-hydroxy-benzoyl) - 155-157 indolizin (dichlorethan) 30 l-brom-2-n-hexy1-3-(4-hydroxy-benzoyl)- 162-163 indolizin (dichlorethan) 146962 19

Forbindelse Smp. °C

l-brom-2-n-heptyl-3-(4-hydroxy-benzoyl)- 145-149 indolizin (benzen) l-brom-2-n-octyl-3-(4-hydroxy-benzoyl)- 132-133 5 indolizin (dichlorethan) l-brom-2-phenyl-3-(4-hydroxy-benzoyl)- 210 indolizin (dioxan) 1-brom-2-(4-methyl-phenyi)-3-(4-hydroxy- 197-198 benzoyl)-indolizin (dichlorethan) 10 l-brom-2-(4-brom-phenyl)-3-(4-hydroxy- 220-225 benzoyl)-indolizin (benzen) l-brom-2-(3-brom-phenyl)-3-(4-hydroxy- 225 benzoyl)-indolizin (carbontetra- chlorid) l-brom-2-(3-chlor-4-methyl-phenyl)-3- 210 15 (4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (benzen) l-brom-2-(3,4-dichlor-phenyl)-3-(4- 240 hydroxy-benzoyl)-indolizin (dichlorethan)

Eksempel 2.

l-Brom-2-ethyl-3-(3-brom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin.

20 Til en blanding af 1,3 g (0,004 mol) 2-ethyl-3-(3-brom- 4-hydroxy-benzoyl)-indolizin, 0,6 g (0,09 mol) vandfrit natriumacetat og 10 ml eddikesyre sættes dråbevis i løbet af 3 3/4 time under omrøring 0,6 g (0,004 mol) brom i lo ml eddikesyre. Herunder holdes temperaturen 25 mellem 20 og 22°C. Blandingen omrøres i yderligere 45 minutter, hvorefter den hældes i 50 ml vand.

Det dannede bundfald sugefiltreres og vaskes til neutral reaktion. På denne måde fås 1,4 g af et fast stof, som omkrystalliseres fra 20 ml chloroform, hvorved fås 0,7 g 30 l-brom-2-ethyl-3-(3-brom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin.

20 146962

Udbytte: 45%.

Srap.: 213-214°C.

Analogt med den ovenfor beskrevne fremgangsmåde og under anvendelse af passende udgangsmaterialer fremstilles de 5 nedenfor anførte forbindelser:

Forbindelse Smp. °C

l-Brom-2-methyl-3-(3-brom-4- 245-246 hydroxy-benzoyl)-indolizin (dichlorethan) l-brom-2-n-propyl-3-(3-brom-4- 189-191 10 hydroxy-benzoyl)-indolizin (benzen) l-brom-2-isopropyl-3-(3-brom-4- 130-132 hydroxy-benzoyl)-indolizin1 (benzen) l-brom-2-n-butyl-3-(3-brom-4- 183-184 hydroxy-benzoyl)-indolizin (benzen) 15 l-brom-2-n-pentyl-3-(3-brom-4- 174-175 hydroxy-benzoyl)-indolizin (dichlorethan) l-brom-2-n-hexyl-3-(3-brom-4- 175-177 hydroxy-benzoyl)-indolizin (dichlorethan) l-brom-2-n-heptyl-3-(3-brom-4- 165-166 20 hydroxy-benzoyl)-indolizin (dichlorethan) l-brom-2-n-octyl-3-(3-brom-4- 161,5-163 hydroxy-benzoyl)-indolizin (dichlorethan) l-brom-2-phenyl-3-(3-brom-4- 184,5-186 hydroxy-benzoyl)-indolizin (benzen) 25 l-brom-2-(4-methyl-phenyl)-3- 231 (3-brom-4-hydroxy-benzoyl) -indolizin (dichloretjian) l-brom-2-(4-methoxy-pheny1)-3-( 3- 204-205 brom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (dichlorethan) l-brom-2-(4-fluor-phenyl)-3-(3- 196 30 brom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (benzen) l-brom-2-(4-chlor-phenyl)-3-(3- 228-230 brom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (benzen)

Forbindelse Smp. °C

21 U6962 l-brom-2-(4-brom-phenyl)-3-(3- 240-245 brom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (dichlorethan) l-brom-2-(3-brom-phenyl)-3-(3- 185-186 5 brom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (carbontetra- chlorid) l-brom-2-(2-brom-phenyl)-3-(3 213-214 brom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (benzen) l-brom-2-(3-chlor-4-methyl-phenyl)-3- 201-202 10 (3-brom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (dichlorethan) l-brom-2-(3,4-dichlor-phenyl)-3-(3- 207-209 brom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (benzen) l-brom-2-methyl-3-(3-chlor-4-hydroxy- 228 benzoyl)-indolizin (dioxan) 15 l-brom-2-ethyl-3-(3-chlor-4- 191-192 hydroxy-benzoyl)-indolizin (dichlorethan) l-brom-2-n-propyl-3-(3-chlor-4- 180-181 hydroxy-benzoyl)-indolizin (isopropanol) l-brom-2-isopropyl-3-(3-chlor-4- 174 20 hydroxy-benzoyl)-indolizin (benzen) l-brom-2-n-butyl-3-(3-chlor-4- 177-178 hydroxy-benzoyl)-indolizin (dichlorethan) l-brom-2-phenyl-3-(3-chlor-4-hydroxy- 198-199 benzoyl)-indolizin (benzen) .

25 l-brom-2-(4-chlor-phenyl)-3-(3- 212-213 chlor-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (dichlorethan) l-brom-2-(3-brom-phenyl)-3-(3- 126-128 chlor-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (benzen) l-brom-2-(4-brom-phenyl)-3-(3-chlor- 231-232 30 4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (dichlorethan) 22 146962

Forbindelse Snip. °C

l-brom-2-methyl-3-(3-methoxy-4-hydroxy- 155 .

benzoyl)-indolizin (methanol) l-brom-2-ethyl-3-(3-methoxy-4-hydroxy- 160 5 benzoyl)-indolizin (methanol)

Eksempel 3.

l-Brom-2-ethyl-3-(3,5-dibrom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin.

Til en opløsning af 4,2 g (0,01 mol) 2-ethyl-3-(3,5-di-brom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin i 100 ml dioxan sættes 10 1,6 g (0,02 mol) vandfrit natriumacetat. Under kraftig om røring tilsættes dråbevis en opløsning af 1,6 g (0,01 mol) brom i 20 ml dioxan. Temperaturen holdes mellem 20 og 22°C under tilsætningen. Derpå omrøres blandingen i yderligere 1 time, hvorefter reaktionsproduktet hældes i 250 ml vand.

15 Der dannes et gulgrønt bundfald, som frafiltreres og vaskes med vand til neutral reaktion.i filtratet.

Efter tørring under vakuum fås 5,2 g af et råprodukt, som omkrystalliseres fra 50 ml dichlorethan.

På denne måde fås 4,2 g l-brom-2-ethyl-3-(3,5-dibrom-4-20 hydroxy-benzoyl)-indolizin efter behandling med aktivt kul.

Udbytte: 83,6%.

Smp.: 195°C.

Analogt med den ovenfor beskrevne fremgangsmåde og under anvendelse af passende udgangsmaterialer fremstilles de neden-25 for anførte forbindelser:

Forbindelse Smp. °c l-Brom-2-methyl-3-(3,5-dibrom-4- 254-2.55 hydroxy-benzoyl)-indolizin (dichlorethan) l-brom-2-n-propyl-3-(3,5-dibrom-4- 183-184 30 hydroxy-benzoyl)-indolizin (benzen)

Forbindelse Smp. °c 23 146962 l-brom-2-isopropyl-3-(3,5-dibrom-4- 188-189 hydroxy-benzoyl)-indolizin (carbontetra- chlorid) 5 l-brom-2-n-butyl-3-(3,5-dibrom-4- 162-163 hydroxy-benzoyl)-indolizin (heptan) l-brom-2-n-pentyl-3-(3,5-dibrom- 139-140 4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (carbontetra- chlorid) 10 l-brom-2-n-hexyl-3-(3,5-dibrom-4- 152-153 hydroxy-benzoyl)-indolizin (benzen) l-brom-2-n-heptyl-3-(3,5-dibrom- 167-168 4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (benzen) l-brom-2-n-octyl-3-(3,5-dibrom-4- 153-154 15 hydroxy-benzoyl)-indolizin (benzen) l-brom-2-phenyl-3-(3,5-dibrom- 211-212 4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (benzen) l-brom-2-(4-methyl-phenyl)-3-(3/5-dibrom- 148-150 4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (cyclohexan/carbon- 20 tetrachlorid) l-brom-2-(4-methoxy-phenyl)-3-(3,5- 167-168 dibrom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (isopropanol) l-brom-2-(4-fluor-phenyl)-3-(3,5- 191-192 dibrom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (benzen) 25 l-brom-2-(4-chlor-phenyl)-3-(3,5- 203-204 dibrom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (carbontetra- chlorid) l-brom-2-(4-brom-phenyl)-3-(3,5- 203-204 dibrom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (carbontetra- 30 chlorid) l-brom-2-(3-brom-phenyl)-3-(3,5- 269-270 dibrom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (dichlorethan)

Forbindelse Smp. °C

24 146962 l-brom-2-(2-brom-phenyl)-3-(3,5- 17 6-177 dibrom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (carbontetra- chlorid) 5 l-brom-2-(3-chlor-4-methyl-phenyl)- 214-215,5 3-(3,5-dibrom-4-hydroxy-benzoyl)- indolizin (dichlorethan) l-brom-2-(3,4-dichlor-phenyl)-3-(3,5- 244 dibrom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin (benzen) 10 . Eksempel 4.

l-Brom-2-ethyl-3-(3,5-dibrom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin

Til en blanding af 5,3 g (0,02 mol) 2-ethyl-3-(4-hydroxy-benzoyl)-indolizin, 17,7 g (0,13 mol) natriumacetat-tri-hydrat og 50 ml eddikesyre sættes dråbevis i løbet af 3 ti-15 mer 10,55 g (0,066 mol) brom i 50 ml eddikesyre. Under tilsætningen holdes temperaturen mellem 20 og 22°C. Omrøringen fortsættes i 18 timer. Derefter sugefiltreres bundfaldet, hvorpå det vaskes med eddikesyre og vand. Til filtratet sættes 450 ml vand, og blandingen filtreres igen.

20 De to bundfald blandes og omkrystalliseres fra carbontetra-chlorid.

På denne måde fås 7,9 g l-brom-2-ethyl-3-(3,5-dibrom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin.

Udbytte: 79%.

25 Eksempel 5.

l-Brom-2-methyl-3- (3,5-dichlor-4-hydroxy-benzoyl) -indolizin.

Til en opløsning af 3,2 g (0,01 mol) 2-methyl-3-(3,5-di-chlor-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin i 100 ml dioxan sættes 1,6 g (0,02 mol) vandfrit natriumacetat. Under kraftig 146962 25 omrøring tilsættes dråbevis 1,6 g (0,01 mol) brom ved 20°C. Temperaturen holdes mellem 20 og 22°C under tilsætningen.

Efter omrøring af blandingen i yderligere 1 time hældes 5 reaktionsproduktet i 250 ml vand. Der dannes et gulgrønt bundfald, som frafiltreres og vaskes med vånd til neutral reaktion i filtratet. Efter tørring i vakuum fås et råprodukt, som omkrystalliseres fra en blanding af dichlor-ethan og heptan i blandingsforholdet 80:20.

10 På denne måde fås 1,7 g l-brom-2-methyl-3-(3,5-dichlor-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin efter behandling med aktivt kul.

Udbytte 42,6%.

Smp.: 240°C.

15 Analogt med den ovenfor beskrevne fremgangsmåde og under anvendelse af passende udgangsmaterialer fremstilles de nedenfor anførte forbindelser:

Forbindelse Smp. °C

l-Brom-2-ethyl-3-(3,5-dichlor-4- 174 20 hydroxy-benzoyl)-indolizin (dichlorethan/ heptan 90:10) l-brom-2-phenyl-3-(3,5-dichlor-4- 236 hydroxy-benzoyl)-indolizin (dichlorethan/ heptan 90:10)

Claims

146962 PATENTKRAV.

1 N_Å-c-yy \-0H (II) V" Il o I *2 hvori R har den ovenfor angivne betydning, og X| og X£ er ens 15 eller forskellige og hver for sig betyder hydrogen, chlor, brom eller methoxy, med brom ved stuetemperatur i et egnet opløsningsmiddel og i nærværelse af et alkalimetalacetat.

1 N-l-c-<f >-0H (I) v ! W *2 5 hvori R betyder en ligekædet eller forgrenet alkylgruppe med 1-8 carbonatomer, phenyl, 3-chlor-4-methylphenyl, 3,4-dichlorphenyl eller phenyl substitueret med et fluor-, chlor- eller bromatom eller med en methyl- eller methoxy-gruppe, og X^ og X2 er ens eller forskellige og hver for 10 sig betyder hydrogen, chlor, brom eller methoxy, kendetegnet ved, at man omsætter et benzoyl-indolizinderivat med den almene formel . . X,' fYYR

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af indolizin- derivater med den almene formel Br γΛ-j

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man omsætter 2-n-propyl-3-(3,5-dibrom-4-hydroxy- 20 benzoyl)-indolizin med brom.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man omsætter 2-phenyl-3-(3-brom-4-hydroxy-benzoyl)-indolizin med brom.