DK144479B - Fremgangsmaade til fremstilling af vacciner ved hvilken en mikroorganismesuspension underkastes en behanling med en elektrisk stroem - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af vacciner ved hvilken en mikroorganismesuspension underkastes en behanling med en elektrisk stroem Download PDFInfo
- Publication number
- DK144479B DK144479B DK421477AA DK421477A DK144479B DK 144479 B DK144479 B DK 144479B DK 421477A A DK421477A A DK 421477AA DK 421477 A DK421477 A DK 421477A DK 144479 B DK144479 B DK 144479B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- vaccines
- suspension
- microorganisms
- treatment
- virus
- Prior art date
Links
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 25
- 239000000725 suspension Substances 0.000 title description 25
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 35
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 9
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 8
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 6
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 6
- 241000283725 Bos Species 0.000 description 5
- -1 cane Chemical class 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 244000309466 calf Species 0.000 description 4
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 4
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 4
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 3
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 206010051497 Rhinotracheitis Diseases 0.000 description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000203809 Actinomycetales Species 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000537222 Betabaculovirus Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 241001112695 Clostridiales Species 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000589902 Leptospira Species 0.000 description 1
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 241000606860 Pasteurella Species 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000589970 Spirochaetales Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000008055 alkyl aryl sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 229940045714 alkyl sulfonate alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 150000008052 alkyl sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000005868 electrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000005357 flat glass Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 244000243234 giant cane Species 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000005562 infectious bovine rhinotracheitis Diseases 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000010970 precious metal Substances 0.000 description 1
- 229910000923 precious metal alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 1
- RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N silicic acid Chemical compound O[Si](O)(O)O RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000012090 tissue culture technique Methods 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Description
(19) DANMARK (w) f\Ra/
12) FREMLÆGGELSESSKRIFT ου 1 kW9 B
DIREKTORATET FOR PATENT- OG VAREMÆRKEVÆSENET
(21) Ansøgning nr. 4214/77 (51) Int.CI.3 C 12 N 13/00 (22) Indleveringsdag 23· sep. 1977 A 61 K 39/02 (24) Løbedag 23· sep. 1977 ^ ø-j ^ 39/12 (41) Aim. tilgængelig 26. mar. 1978 (44) Fremlagt 15· mar. 1982 (86) International ansøgning nr. “ (86) International indleveringsdag ~ (85) Videreførelsesdag -(62) Stamansøgning nr. ~
(30) Prioritet 25· sep. 1976, 264^213, DE
(71) Ansøger BAYER AKTIENGESELLS CHAFT, 5Ο9Ο Leverkusen, DE.
(72) Opfinder Otto Christian _Straub, DE.
(74) Fuldmægtig Ingeniørfirmaet Budde, Schou & Co.
(54) Fremgangsmåde til fremstilling af vacciner, ved hvilken en mikroorganismesuspension un= derkastes en behandling med en elektrisk strøm.
Den foreliggende opfindelse angår en særlig teknisk fordelagtig fremgangsmåde til fremstilling af vacciner (både som levende og dræbt vaccine), ved hvilken en mikroorganismesuspen-DQ sion underkastes en behandling med elektrisk strøm.
^ Det er allerede kendt, at mikroorganismer, især bakteri- er og vira, kan svækkes ved et antal passager (vævskulturer eller
levende dyr eller organer osv.), hvorved disse således attenuerede vira J
I- * □ 2 144479 og bakterier ganske vist stadig er formeringsdygtige, men har tabt deres pathogenitet. Sådanne attenuerede vira har bibeholdt deres immunogenitet (levende vacciner). Ulempen ved disse i litteraturen ofte beskrevne attenueringsmetoder (se f.eks. tysk offentliggørelsesskrift nr. 2.033.946) er frem for alt det enorme tids- og arbejdsforbrug, der er nødvendigt, indtil der er opnået den ønskede attenueringsgrad ved passager. Man kan således ved en attenuering over f.eks. 100 vævskulturpassager regne med en attenueringsvarighed på ca. 1 år.
Det er desuden kendt, at mikroorganismer,fortrinsvis bakterier og vira,kan inaktiveres ved hjælp af kemiske midler (såkaldte "inaktiveringsmidler"). Som inaktiveringsmidler kommer en række forskellige kemiske stoffer og stofklasser på tale, f.eks. formaldehyd, ethylenimin og dets derivater, glutaraldehyd, β-propiolacton, phenol, hydrogenperoxid og forskellige andre.
De kendte fremgangsmåder er imidlertid ikke altid anvendelige over for alle mikroorganismer, og den tid, der anvendes til inaktivering med forskellige inaktiveringsmidler (f.eks. formaldehyd), er undertiden lang.
Det er desuden kendt, at en inaktivering af mikroorganismer kan gennemføres ved f.eks. indvirkning af varme eller ultraviolet lys.
Fra beskrivelsen til tysk patent nr. 397.888 er det kendt til fremstilling af specifikke vacciner ud fra renkulturer af mikroorganismer at dræbe disse organismer ved hjælp af en elektrisk jævnstrøm og at foretage en forarbejdning til emulsioner i kogsaltopløsning på i og for sig kendt måde. Denne fremgangsmåde har den ulempe, at den forløber under elektrolysebetingelser, ved hvilke vævskulturer ødelægges på meget kort tid, og mikroorganismepartiklernes immunogenitet ophæves på grund af ødelæggelse af de antigene determinanter.
Hidtil kendte inaktiveringsmetoder har til dels forskellige ulemper; således forstyrres i for vid udstrækning til dels den antigenbestemmende nedbrydning af mikroorganismer, f.eks. vira, idet mikroorganismerne kun bør nedbrydes i en sådan grad, at de strukturelementer, der er nødvendige til udløsning af det specifikke immunrespons, bibeholdes. Hvis organismerne nedbrydes vidt- 3 14/U79 gående, d.v.s. når der sker en nedbrydning af de antigene determinanter, mister vaccinen sin specificitet. Desuden er det ofte vanskeligt at bevirke en fuldstændig ødelæggelse af de infektiøse egenskaber af mikroorganismer og samtidig at bevare de antigene egenskaber. Det er til dels muligt ved rekombination og/eller mutation, at eventuelt bestemte inaktiverede mikroorganismer generhverver deres infektiøse egenskaber. Desuden består der f.eks. ved gennemførelse af inaktiveringen med formaldehyd eller ved indvirkning af ultraviolet lys en fare for aggregatdannelse, hvorved eventuelt delmængder af de infektiøse mikroorganismer ikke inaktiveres.
Det har nu vist sig, at man kan svække henholdsvis inaktivere mikroorganismer, fortrinsvis bakterier og vira, men også mycoplasma og chlamydier, ved behandling i et elektrisk vekselstrømsfelt i suspension og herudfra kan fremstille levende eller dræbte vacciner.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen, der er af den allerede angivne art, er således ejendommelig ved, at mikroorganismesuspensionen, eventuelt under tilsætning af et kulturmedium, underkastes en behandling med elektrisk vekselstrøm med en spænding mellem 110 og 330 Volt, en strømstyrke på 200-300 mA og ved en temperatur på 4-60°C, og at den således fremkomne mikroorganismesuspension eventuelt isoleres som sådan og eventuelt på i og for sig kendt måde tilsættes yderligere formuleringshjælpemidler.
Ved fremstillingen af levende eller dræbte vacciner ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse undgås de ovenfor beskrevne ulemper ved hidtil kendte attenuerings- eller inaktiveringsmetoder. Den her omhandlede fremgangsmåde udgør således et stort overraskende fremskridt inden for human- og veterinærmedicinen.
Fremgangsmåde ifølge opfindelsen gennemføres i en reaktionsbeholder under sterile betingelser. De på tegningens fig. 1 og 2 anskueliggjorte apparater har vist sig hensigtsmæssige. Apparatet i fig. 1 består af en flad flaske af glas med tre åbninger. En åbning ved flaskehalsen 3 er lukket med en prop indeholdende et tilledningsrør med ventil, og de to andre åbninger er ligeldes 144479 4 lukket med propper, gennem hvilke elektroder 1, 2 af ædelmetal (f.eks. guld, platin eller sølv, fortrinsvis sølv, men også ædelmetallegeringer er mulige) føres, til hvilke der er sluttet en elektrisk vekselstrømsspændingskilde. Til kontrol er der i flasken anbragt et termometer 5.
I glasbeholderen befinder sig den mikroorganismesuspension, der skal behandles med elektrisk vekselstrøm. De forsøgsbetingelser, der skal vælges (temperatur, varighed af behandlingen med elektrisk vekselstrøm, vekselstrømsspænding, strømstyrke, pH-værdi osv.) er afhængige af beskaffenheden af den mikroorganisme, der skal behandles, og af den ved hjælp af den her omhandlede fremgangsmåde påtænkte effekt (f.eks. attenuering til levende vaccine eller inaktivering til dra±)t vaccine). Desuden er virkningen af de enkelte faktorer til dels forbundet med hinanden, således at man f.eks. kan udligne en lav strømstyrke f.eks. ved en længere indvirkningstid af vekselstrømmen.
Man kan til opnåelse af højere spændings- og strømstyrkeværdier også forsyne beholderen med en kølekappe.
Et apparat til den såkaldte gennemstrømningsmetode er vist i fig. 2.
Herved strømmer den mikroorganismesuspension, der skal behandles, over en med en ventil forsynet togangshane (A) i en beholder (Bj. Over en pumpe (C) pumpes mikroorganismesuspensionen over eventuelt med en kølekappe (E) forsynede elektroder (D). Fra en beholder (F) sker bortledningen fortrinsvis over en med en ventil forsynet togangshane (G). og betegner indretninger til tilførsel og bortledning af luft. Herved anvendes eventuelt steril luft.
Det i fig. 2 skitserede gennemstrømningssystem egner sig godt til fremstilling af vacciner (både levende og inaktiverede vacciner).
Som mikroorganismer kan man ved den her omhandlede fremgangsmåde anvende alle stoffer, der ellers også ved attenuering over vævskultur- eller dyrepassager eller ved inaktivering ved hjælp af kemiske og fysiske metoder kan overføres i levende eller dræbte vacciner.
144479 5
Som eksempler herpå skal i enkeltheder nævnes: RNS-vira fra følgende grupper: stavformige plantevira, Picornavira, Toga-vira, Rhabdovira, Retroviridae, Arenavira, Orthoamyxovira, Para-myxovira. Corona- og Orbirier, doppeltstrengede RNS-vira, DNS-vira fra følgende grupper: små DNS-phager, Parvo- og Reovira, Adenovira, Papovavira, phager med middelstørrelse, store phager, Herpesvira, Iridoviridaevira, paravaccinale vira, koppevira og Adeno-ledsagevira.
Som bakterier, der kan komme på tale, skal følgende nævnes: Bakterier fra ordenen Eubacteriales (uforgrenede bakterier), især fra slægterne Neisseria, Streptococcus, Leuconostoc, Pseudomonas, Escherichia, Serratia, Proteus, Salmonella, Pasteurella, Brucella, Haemophilus, Corynebacterium og Clostridium.
Bakterier fra ordenen Actinomycetales, især fra slægterne Streptomycesbakterier, eller fra ordenen Spirochaetales, især fra slægten Leptospira.
Hvis man vil fremstille attenuerede, dvs. ikke-pathogene, men stadig helt immunogene, levende mikroorganismer i form af levende vacciner, har i afhængighed af den anvendte mikroorganisme følgende fremgangsmådebetingelser vist sig hensigtsmæssige:
Vekselstrømsspænding:
Man arbejder hensigtsmæssigt med den foreliggende netspænding, som ved de inden for rammerne af de her beskrevne forsøg androg 220 volt, men man kan naturligvis også arbejde med andre spændingsværdier, f.eks. 110 eller 330 volt. I sådanne tilfælde skal de andre reaktionsbetingelser udlignes.
Strømstyrke:
Ved en vekselstrømsspænding på 220 volt har en strømstyrke på 200-300 mA vist sig hensigtsmæssig. Strømstyrkeværdien afhænger af strømspænding og beskaffenheden af opløsningen.
Temperaturer:
Behandlingen med elektrisk vekselstrøm gennemføres ved temperaturer fra 4 til 60°C, fortrinsvis ved 20-40°C og især ved 37-39°C (fysiologisk temperaturområde). Den anvendte temperatur er f.eks. afhængig af termostabiliteten af den anvendte mikroorganisme.
6 144479
Man kan indstille temperaturen af den mikroorganisme eller -suspension, der skal behandles, ved uforandret strømspænding, ved at strømstyrken varieres således, at der foreligger en konstant temperaturværdi i den mikroorganismesuspension, der skal behandles.
Varighed af behandlingen med elektrisk vekselstrøm;
Ved behandlingen til fremstilling af levende vacciner på basis af attenuerede mikroorganismer (fortrinsvis bakterier og vira) har en behandlingstid på 5-300 minutter, især på 30-240 minutter vist sig hensigtsmæssig. Det er imidlertid i afhængighed af naturen af den anvendte mikroorganisme og af de anvendte andre forsøgsbetingelser (f.eks. temperatur, suspensionsmiddel, strømspænding og strømstyrke) muligt at anvende tidværdier under 5 eller over 300 minutter.
Det er desuden af betydning hvilken attenueringsgrad, der kan måles ved hjælp af i og for sig kendte dyreeksperimentelle metoder, der skal opnås.
Hvis man ved hjælp af den her omhandlede fremgangsmåde vil fremstille inaktiverede mikroorganismer til anvendelse i dra±>te vacciner, gælder de samme angivelser hvad angår vekselstrømsspænding, strømstyrke og temperaturer ved fremstillingen af attenuerede mikroorganismer til anvendelse i levende vacciner.
Fremgangsmåden til behandling af mikroorganismer med elektrisk vekselstrøm er altså ved inaktivering af mikroorganismer den samme som ved attenuering af mikroorganismer.
Inaktiveringen ifølge den her omhandlede fremgangsmåde kræver imidlertid almindeligvis et større tids- og energiforbrug.
Således varer inaktiveringsprocessen ved den her omhandlede fremgangsmåde (se fig. 1) almindeligvis 10-72 og især 15-48 timer. I afhængighed af naturen af den anvendte mikroorganisme og de anvendte andre forsøgsbetingelser (f.eks. gennemstrømningsmetoden (fig. 2), temperatur, suspensionsmiddel, strømspænding og strømstyrke) er imidlertid værdier på under 10 og over 72 timer mulige.
Som udgangsmaterialer anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen almindeligvis vandige suspensioner af de ovenfor nævnte 7 \kkU79 mikroorganismer. Fortrinsvis anvendes de medier, i hvilke de mikroorganismer, der skal behandles, er blevet dyrket, f.eks. Earle--mediet, eventuelt under tilsætning af lactalbumin-hydrolysat eller følgende andre medier: Eagle's medium, Hanks medium, medium PM-13 (Serva), VM-3a medium og MEM-medium.
De efter behandlingen med elektrisk vekselstrøm dannede slutprodukter, der indeholder attenuerede eller inaktiverede mikroorganismer, anvendes enten som sådanne i steril form eller formuleres på i og for sig kendt og sædvanlig måde til levende eller dræbte vacciner og indgives som opløsning, sirup, emulsion, suspension, spray, salve, pasta, creme, lotion, aerosol eller tabletter.
Formuleringerne fremstilles på i og for sig kendt måde, f. eks. ved fortynding af de ved frangangsmåden ifølge opfindelsen attenuerede eller inaktiverede mikroorganismer ræd egnede opløsningsmidler oa/eller indifferente ikke-toksiske, faste, halvfaste eller flydende bærestof fer, eventuelt under anvendelse af emulgeringsmidler og/eller dispergeringsmidler, sprøjtemidler og drivmidler og under anvendelse af egnede stabilisatorer.
Som opløsningsmidler, bærestoffer, emulgeringsmidler eller dispergeringsmidler skal her nævnes: vand, ikke-toksiske organiske opløsningsmidler eller fortyndingsmidler, såsom paraffiner (f.eks. jordoliefraktioner), vegetabilske olier (f.eks. jordnødde-/sesam--olie), polyvalente alkoholer, f.eks. glycerol, glycoler (f.eks. polypropylenglycol og polyethylenglycol) og vand, faste bærestoffer såsom naturlige stenmelsarter (f.eks. højdispers kiselsyre og silicater), sukker (f.eks. rør-, mælke- og druesukker), emulgeringsmidler, såsom ikke-ionogene og anioniske emulgatorer (f.eks. polyoxyethylen-fedtsyreestere, polyoxyethylen-fedtalkohol--ethere, alkylsulfonater og arylsulfonater), dispergeringsmidler (f.eks. lignin, methylcellulose, stivelse og polyvinylpyrrolidon) og smøremidler (f.eks. magnesiumstearat, talkum, stearinsyre og natriumlaurylsulfat).
Som stabilisatorer skal der nævnes: aminosyrer, sukker, proteiner, polysaccharider og polyalkylenglycoler. Disse stabilisatorer kan både tilsættes i vandig opløsning og i lyophiliseret tilstand.
8 U4479
De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen attenuerede vira og bakterier eller de ud fra disse fremstillede lægemidler kan anvendes på sædvanlig måde, f.eks. intranasalt, intragenitalt, oralt, intra-muskulært, intravenøst,eller subcutant (lokalt,især på alle slimhinder i menneske- eller dyrekroppen).
Indgivelsesmængden ved behandling af menneske- og dyreorganismer skal bestemmes fra tilfælde til tilfælde. Den svarer imidlertid i regelen til de ifølge klassiske metoder fremstillede mængder (f.eks. IO^KID^q pr. ml eller g) af vaccinen (KID = kultur-infektiøse doser).
De i de følgende eksempler anvendte forkortelser har følgende betydninger: IBR-IPV-vira: Infektiøs bovin-Rhinotracheitis infektiøs pustuløs Vulovagenitis PI-3 Virus: Parainfluenza-3-virus MD-VD-Virus: Mucosal-Disease, Virusdiarrhoe-virus HAH: hæmagglutinationshæmmende
Eksempel 1
Virulent IBR-IPV virus isoleret fra respirationsområdet hos et sygt dyr (okse) dyrkes på en kalvenyrecellekultur i Earle-medium under tilsætning af lactalbumin-hydrolysat ved 37°C i 48 timer. Den således fremkomne iBR-lPV-virussuspension befries ved centrifugering ved 4°C og 2000 g fra resterende celler og udsættes derpå i 1 time ved 22°C for et elektrisk vekselstrømfelt (220 V vekselstrømsspænding, strømstyrke 260 mA,sølvelektroder) i den i fig. 1 skitserede reaktionsbeholder.
Den samme mængde IBR-IPV-virus opbevares i et kulturmedium (Earle-medium) til kontrol ved 22°C.
Derpå inficeres med de to suspensioner hver gang fire okser i en isoleringsstald.
Resultater:
Mens kontroldyrene udviser samtlige tegn på Rhinotracheitis, kunne der ved de med de ovenfor behandlede suspensioner inficerede okser ikke fastslås nogen sygdomssymptomer. I vævskulturen kunne det vises, at 144479 9 1) både den med elektrisk vekselstrøm behandlede og den som kontrol tjenende ubehandlede virussuspension udviste en cytopathogen effekt, og at 2) begge grupper dyr fire uger senere udviste specifikt neutraliserende antistoffer i serum.
I tilfælde af med elektrisk vekselstrøm behandlede virussuspensioner foreligger der altså en levende vaccine, der indeholder apathogen IBR-IPV-virus.
Eksempel 2
En parainfluenza-3-virusstamme isoleres fra åndedrætssystemet hos en syg okse og formeres på sekundære kalvenyreceller i Earle's-medium under tilsætning af 0,5% lactalbumin-hydrolysat og 3% antistoffrit, inaktiveret kalveserum. Efter fracentrifugering af cellerester udsattes den aktive Pl^-virussuspension i 1 time ved 37°C for et elektrisk vekselstrømsfelt (220 V vekselstrømsspænding, strømstyrke 255 mA, sølvelektroder).
Ved hjælp af vævskulturteknik kan det derpå fastslås, at der i suspensionen findes formeringsdygtigt virus (der foreligger altså en såkaldt "levende vaccine").
Dyreeksperimentforsøget med den ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen behandlede PI-3-virus stamme viste de sårrene resultater som beskrevet i eksempel 1, dvs. der kunne påvises en cytopathogen effekt, og desuden kunne der påvises specifikt neutraliserende eller HAH-antistoffer i blodserum fra de behandlede dyr.
Eksempel 3 I analogi med den i eksempel 1 beskrevne metode udsættes en vandig suspension af virulent IBR-IPV-virus ved 37°C i 24 timer for et elektrisk vekselstrømsfelt (220 V vekselstrømsspænding, 250 mA strømstyrke, sølvelektroder). Derpå foreligger der en inaktiveret IBR-IPV-vaccine.
Den således fremkomne virussuspension anbringes på en kalvenyrekultur og dyrkes i indtil 5 dage ved 37°C. Herved kunne der ikke mere iagttages nogen cytopathogen effekt.
ίο 1U479
Eksempel 4 85 ml af den ifølge eksempel 3 fremstillede virussuspension blandes med 15 ml af en 3%'s Al(OH)^-suspension. 10 ml af den således dannede vaccine indgives hver gang til 3 IBR-IPV-antistof-fri okser subcutant.
Efter 20 dages forløb kan der ved alle tre okser påvises IBR-IPV-antistoffer i blodserum.
På den 21. dag inficeres de tre vaccinerede okser og et ikke-vaccinet kontroldyr intranasalt med hver 2 ml af den i eksempel 1 beskrevne, ikke for elektrisk vekselstrøm udsatte, aktive IBR-IPV-virussuspension.
Mens kontroldyrene alle udviste tegn på akut Rhinotra-cheitis, kunne der ved de tre vaccinerede okser ikke fastslås nogen sygdomstegn.
Eksempel 5
Analogt med eksempel 1 udsattes en suspension af virulent MD-VD-virus i Eagle's medium ved 37°C for et elektrisk vekselstrømsfelt (220 V vekselstrømsspænding, strømstyrke 260 mA, sølvelektroder) i 32 timer.
Den således fremkomne MD-VD-virussuspension viser sig at vare fuldstændig inaktiveret, dvs. at der ikke kunne påvises nogen cytopathogen effekt.
De immunogene egenskaber forbliver imidlertid bevaret (specifik antistofdannelse, identitet ved dobbeltdiffusionsforsøg) .
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2643213A DE2643213C2 (de) | 1976-09-25 | 1976-09-25 | Verfahren zum Abschwächen oder Inaktivieren von Mikroorganismen |
| DE2643213 | 1976-09-25 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK421477A DK421477A (da) | 1978-03-26 |
| DK144479B true DK144479B (da) | 1982-03-15 |
| DK144479C DK144479C (da) | 1982-09-27 |
Family
ID=5988825
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK421477A DK144479C (da) | 1976-09-25 | 1977-09-23 | Fremgangsmaade til fremstilling af vacciner,ved hvilken en mikroorganismesuspension underkastes en behandling med en elektrisk stroem |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4188375A (da) |
| JP (1) | JPS5341419A (da) |
| BE (1) | BE858992A (da) |
| CH (1) | CH637422A5 (da) |
| DE (1) | DE2643213C2 (da) |
| DK (1) | DK144479C (da) |
| ES (1) | ES462588A1 (da) |
| FR (1) | FR2365632A1 (da) |
| GB (1) | GB1552726A (da) |
| IT (1) | IT1087527B (da) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5932589U (ja) * | 1982-08-27 | 1984-02-29 | スズキ株式会社 | オ−トバイのフレ−ム |
| JPS60105495A (ja) * | 1983-11-11 | 1985-06-10 | Shinryo Air Conditioning Co Ltd | 微生物の生反応促進方法 |
| IL74289A (en) * | 1985-02-10 | 1989-02-28 | Israel State | Vaccine system comprising a live-non-virulent vaccine and an adjuvant |
| US5048404A (en) * | 1985-05-31 | 1991-09-17 | Foodco Corporation | High pulsed voltage systems for extending the shelf life of pumpable food products |
| JP2599366B2 (ja) * | 1986-01-31 | 1997-04-09 | ヤマハ発動機株式会社 | 自動二輪車のラジエータ取付構造 |
| US4888169A (en) * | 1986-10-14 | 1989-12-19 | Norden Laboratories, Inc. | Bordetella Bronchiseptica vaccine |
| US4717717A (en) * | 1986-11-05 | 1988-01-05 | Ethicon, Inc. | Stabilized compositions containing epidermal growth factor |
| DE3707987A1 (de) * | 1987-03-12 | 1988-09-22 | Behringwerke Ag | Inaktivierung von human immunodeficiency virus (hiv) in proteinhaltigen loesungen durch phenole |
| JPS63121585A (ja) * | 1987-10-09 | 1988-05-25 | ヤマハ発動機株式会社 | 自動二輪車の車体 |
| JPS63291780A (ja) * | 1988-04-23 | 1988-11-29 | ヤマハ発動機株式会社 | 自動二輪車 |
| JPS63291781A (ja) * | 1988-04-23 | 1988-11-29 | ヤマハ発動機株式会社 | 自動二輪車 |
| JPH01132486A (ja) * | 1988-07-22 | 1989-05-24 | Yamaha Motor Co Ltd | 自動二輪車 |
| US5139684A (en) * | 1990-08-06 | 1992-08-18 | Steven Kaali | Electrically conductive methods and systems for treatment of blood and other body fluids and/or synthetic fluids with electric forces |
| US5242686A (en) * | 1990-11-07 | 1993-09-07 | American Home Products Corporation | Feline vaccine compositions and method for preventing chlamydia infections or diseases using the same |
| US6004563A (en) * | 1990-11-07 | 1999-12-21 | American Home Products Corporation | Feline vaccine compositions and method for preventing chlamydia infections or diseases using the same |
| US5262359A (en) * | 1990-11-09 | 1993-11-16 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Hhs | Method of propagating human paramyxoviruses using continuous cell lines |
| US20030026782A1 (en) * | 1995-02-07 | 2003-02-06 | Arthur M. Krieg | Immunomodulatory oligonucleotides |
| US6207646B1 (en) | 1994-07-15 | 2001-03-27 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules |
| JPH0994288A (ja) * | 1995-09-28 | 1997-04-08 | Rimoderingu Touentei One:Kk | 微生物の不活化・破壊方法 |
| US6406705B1 (en) * | 1997-03-10 | 2002-06-18 | University Of Iowa Research Foundation | Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant |
| US6204003B1 (en) * | 1997-09-19 | 2001-03-20 | Synbiotics Corporation | Methods for the diagnosis of feline infectious anemia |
| US6268200B1 (en) | 1999-01-15 | 2001-07-31 | Lambda Technologies, Inc. | Biotherapeutic virus attenuation using variable frequency microwave energy |
| JP3973423B2 (ja) * | 1999-11-12 | 2007-09-12 | 三菱レイヨン株式会社 | 死滅化菌体 |
| US6872927B2 (en) | 2001-12-26 | 2005-03-29 | Lambda Technologies, Inc. | Systems and methods for processing pathogen-contaminated mail pieces |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE397888C (de) * | 1919-08-20 | 1924-06-30 | Elektro Osmose Akt Ges Graf Sc | Verfahren zur Herstellung von spezifischen Impfstoffen aus Reinkulturen von Mikroorganismen |
| FR1040552A (fr) * | 1942-07-14 | 1953-10-16 | Procédés de production de vaccins | |
| US2428329A (en) * | 1942-09-05 | 1947-09-30 | American Cyanamid Co | Removal of bacteria from fluids |
| US2955076A (en) * | 1955-10-05 | 1960-10-04 | Gen Electric Co Ltd | Artificial mutation of micro-organisms by electrical shock |
| US3058894A (en) * | 1959-08-10 | 1962-10-16 | Columbian Carbon | Treatment of microorganisms |
| GB904563A (en) * | 1960-10-17 | 1962-08-29 | Columbian Carbon | Manufacture of immunizing vaccines |
| US3445568A (en) * | 1965-02-02 | 1969-05-20 | Gen Electric | Electrohydraulic process for producing antigens |
| NO126955B (da) * | 1967-12-01 | 1973-04-16 | Gray Ind Inc | |
| US3594115A (en) * | 1968-02-09 | 1971-07-20 | Electro Hydraulics Corp | Bacteria destruction methods |
| US3753886A (en) * | 1971-02-11 | 1973-08-21 | R Myers | Selective destruction of bacteria |
| US3660234A (en) * | 1971-02-16 | 1972-05-02 | Gray Ind Inc | Method of attenuating viruses |
| US3725226A (en) * | 1972-03-01 | 1973-04-03 | Research Corp | Electrochemical inactivation of pathogens |
-
1976
- 1976-09-25 DE DE2643213A patent/DE2643213C2/de not_active Expired
-
1977
- 1977-09-20 CH CH1152177A patent/CH637422A5/de not_active IP Right Cessation
- 1977-09-21 GB GB39329/77A patent/GB1552726A/en not_active Expired
- 1977-09-22 JP JP11346677A patent/JPS5341419A/ja active Pending
- 1977-09-23 ES ES462588A patent/ES462588A1/es not_active Expired
- 1977-09-23 FR FR7728744A patent/FR2365632A1/fr active Granted
- 1977-09-23 BE BE181149A patent/BE858992A/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-09-23 US US05/835,923 patent/US4188375A/en not_active Expired - Lifetime
- 1977-09-23 IT IT27908/77A patent/IT1087527B/it active
- 1977-09-23 DK DK421477A patent/DK144479C/da active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK144479C (da) | 1982-09-27 |
| DE2643213A1 (de) | 1978-04-06 |
| JPS5341419A (en) | 1978-04-14 |
| ES462588A1 (es) | 1978-11-01 |
| DE2643213C2 (de) | 1985-02-21 |
| CH637422A5 (de) | 1983-07-29 |
| US4188375A (en) | 1980-02-12 |
| IT1087527B (it) | 1985-06-04 |
| GB1552726A (en) | 1979-09-19 |
| BE858992A (fr) | 1978-03-23 |
| FR2365632B1 (da) | 1984-02-10 |
| DK421477A (da) | 1978-03-26 |
| FR2365632A1 (fr) | 1978-04-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK144479B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af vacciner ved hvilken en mikroorganismesuspension underkastes en behanling med en elektrisk stroem | |
| Salk | Studies in human subjects on active immunization against poliomyelitis. I. A preliminary report of experiments in progress. | |
| Gardner et al. | Cell‐mediated cytotoxicity against ectromelia virus‐infected target cells. I. Specificity and kinetics | |
| CN103071151B (zh) | 猪支原体肺炎疫苗专用稀释剂及其制备方法 | |
| JPH0819396A (ja) | グラム−陰性球菌のリポオリゴ糖が除去された外膜蛋白質の製造および使用 | |
| Amend et al. | Some factors affecting the potency of Yersinia ruckeri bacterins | |
| Detilleux et al. | Effect of endocytic and metabolic inhibitors on the internalization and intracellular growth of Brucella abortus in Vero cells | |
| Nigg et al. | Studies on the cultivation of the typhus fever rickettsia in the presence of live tissue | |
| Bell | An introduction to general virology | |
| Abd El-Baky et al. | Newcastle disease virus (LaSota strain) as a model for virus Ghosts preparation using H2O2 bio-critical concentration | |
| Milzer et al. | A new method for the production of potent inactivated vaccines with ultraviolet irradiation: III. A completely inactivated poliomyelitis vaccine with the lansing strain in mice | |
| Chaffer et al. | Vaccination of turkey poults against pathogenic Escherichia coli | |
| ES2764173T3 (es) | Bacterias modificadas para vacunas mejoradas contra la brucelosis | |
| Costigan | Effectiveness of hot hypochlorites of low alkalinity in destroying Mycobacterium tuberculosis | |
| HU219311B (en) | New bacterium causing poultry disease and vaccine derived thereof | |
| Bang et al. | Chronic infections produced in cultured cell strains by the virus of Eastern equine encephalomyelitis | |
| Kenyon et al. | Preparation of vaccines for Rocky Mountain spotted fever from rickettsiae propagated in cell culture | |
| DE60032293T2 (de) | Lebende attenuierte bakterien zur verwendung als impfstoff | |
| JPS58109426A (ja) | サルモネラ菌による感染に対して有効な細菌ワクチンの製造法 | |
| JPH02432A (ja) | 非特異免疫誘発剤の製造法 | |
| Zinsser et al. | STUDIES ON TREPONEMA PALLIDUM AND SYPHILIS: IV. The Difference in Behavior in Immune Serum between Cultivated Non-Virulent Treponema Pallidum and Virulent Treponemata from Lesions. | |
| Holden | The nature and properties of the virus of herpes | |
| Daouam et al. | Comparative thermo-stability of two Rift Valley fever virus vaccine candidate CL13T with a recombinant arMP-12ΔNSm21/384 | |
| Mukkur et al. | The potassium thiocyanate extract of Pasteurella multocida: Electron microscopy and susceptibility of its immunogenic activity to some physical, chemical and enzymatic treatments | |
| Fellowes | Comparison of the Inactivation and Antigenicity of Foot-and-Mouth-Disease Virus by Acetylethyleneimine and by Combined Effect of Ultraviolet Light and β-Propiolactone |