DK141372B - Fremgangsmåde til fremstilling af et antibiotisk kompleks, kaldet Bu2231, eller bestanddele og syreadditionssalte deraf. - Google Patents
Fremgangsmåde til fremstilling af et antibiotisk kompleks, kaldet Bu2231, eller bestanddele og syreadditionssalte deraf. Download PDFInfo
- Publication number
- DK141372B DK141372B DK384076AA DK384076A DK141372B DK 141372 B DK141372 B DK 141372B DK 384076A A DK384076A A DK 384076AA DK 384076 A DK384076 A DK 384076A DK 141372 B DK141372 B DK 141372B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- complex
- copper
- constituents
- free
- strain
- Prior art date
Links
- 239000000470 constituent Substances 0.000 title claims description 19
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims description 16
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 title claims description 15
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 title claims description 14
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 150000004699 copper complex Chemical group 0.000 claims description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 11
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N (2S,5R,10R,13R)-16-{[(2R,3S,4R,5R)-3-{[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy}-5-(ethylamino)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-5-(4-aminobutyl)-10-carbamoyl-2,13-dimethyl-4,7,12,15-tetraoxo-3,6,11,14-tetraazaheptadecan-1-oic acid Chemical compound NCCCC[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)C(C)O[C@@H]1[C@@H](NCC)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N 0.000 claims description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 claims description 6
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 claims description 6
- 241000203644 Streptoalloteichus hindustanus Species 0.000 claims description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 4
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940126575 aminoglycoside Drugs 0.000 claims description 3
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 claims description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000004019 gradient elution chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 2
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 claims 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 38
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 33
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 21
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 21
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 21
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 20
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 19
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 17
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 15
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 14
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 11
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 10
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 9
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 9
- 150000004675 formic acid derivatives Chemical class 0.000 description 9
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 8
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N meso-2,6-diaminopimelic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CCC[C@@H]([NH3+])C([O-])=O GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N 0.000 description 8
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 8
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 7
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 7
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- QRBLKGHRWFGINE-UGWAGOLRSA-N 2-[2-[2-[[2-[[4-[[2-[[6-amino-2-[3-amino-1-[(2,3-diamino-3-oxopropyl)amino]-3-oxopropyl]-5-methylpyrimidine-4-carbonyl]amino]-3-[(2r,3s,4s,5s,6s)-3-[(2s,3r,4r,5s)-4-carbamoyl-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)- Chemical class N=1C(C=2SC=C(N=2)C(N)=O)CSC=1CCNC(=O)C(C(C)=O)NC(=O)C(C)C(O)C(C)NC(=O)C(C(O[C@H]1[C@@]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)(C)O[C@H]1[C@@H]([C@](O)([C@@H](O)C(CO)O1)C(N)=O)O)C=1NC=NC=1)NC(=O)C1=NC(C(CC(N)=O)NCC(N)C(N)=O)=NC(N)=C1C QRBLKGHRWFGINE-UGWAGOLRSA-N 0.000 description 5
- QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 4-[[(3ar,5ar,5br,7ar,9s,11ar,11br,13as)-5a,5b,8,8,11a-pentamethyl-3a-[(5-methylpyridine-3-carbonyl)amino]-2-oxo-1-propan-2-yl-4,5,6,7,7a,9,10,11,11b,12,13,13a-dodecahydro-3h-cyclopenta[a]chrysen-9-yl]oxy]-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid Chemical compound N([C@@]12CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]5C(C)(C)[C@@H](OC(=O)CC(C)(C)C(O)=O)CC[C@]5(C)[C@H]4CC[C@@H]3C1=C(C(C2)=O)C(C)C)C(=O)C1=CN=CC(C)=C1 QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 0.000 description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 5
- 108010035235 Phleomycins Proteins 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 5
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 108700016226 indium-bleomycin Proteins 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 5
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 5
- TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 3-(trimethylsilyl)propane-1-sulfonic acid Chemical compound C[Si](C)(C)CCCS(O)(=O)=O TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 4
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000006552 Lewis Lung Carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 4
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical group NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 3
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 3
- 241001558929 Sclerotium <basidiomycota> Species 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- 241000203615 Streptoalloteichus Species 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- -1 modified dextran derivative cation Chemical class 0.000 description 3
- 229950011272 nebramycin Drugs 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N tobramycin Chemical compound N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 2
- PJDINCOFOROBQW-LURJTMIESA-N (3S)-3,7-diaminoheptanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](N)CC(O)=O PJDINCOFOROBQW-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- YZUPZGFPHUVJKC-UHFFFAOYSA-N 1-bromo-2-methoxyethane Chemical compound COCCBr YZUPZGFPHUVJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MWNLVWUVGCROKL-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-3-(4-amino-6-carboxy-5-methylpyrimidin-2-yl)propionic Acid Natural products CC1=C(N)N=C(C(N)CC(O)=O)N=C1C(O)=O MWNLVWUVGCROKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N D-ribopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- LTQCLFMNABRKSH-UHFFFAOYSA-N Phleomycin Natural products N=1C(C=2SC=C(N=2)C(N)=O)CSC=1CCNC(=O)C(C(O)C)NC(=O)C(C)C(O)C(C)NC(=O)C(C(OC1C(C(O)C(O)C(CO)O1)OC1C(C(OC(N)=O)C(O)C(CO)O1)O)C=1NC=NC=1)NC(=O)C1=NC(C(CC(N)=O)NCC(N)C(N)=O)=NC(N)=C1C LTQCLFMNABRKSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 2
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 2
- 241000204060 Streptomycetaceae Species 0.000 description 2
- 241000203590 Streptosporangium Species 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 2
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 2
- TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L barium sulfate Chemical compound [Ba+2].[O-]S([O-])(=O)=O TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 229910052681 coesite Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229910052906 cristobalite Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N galactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000006877 oatmeal agar Substances 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 description 2
- 229910052682 stishovite Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 229910052905 tridymite Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KQMBIBBJWXGSEI-ROLXFIACSA-N (2s)-2-amino-3-hydroxy-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C(O)C1=CNC=N1 KQMBIBBJWXGSEI-ROLXFIACSA-N 0.000 description 1
- NKVNXNUKNLEVGM-DOACPYJISA-N (3R,4R,5S,6R)-3-amino-6-(hydroxymethyl)oxane-2,4,5-triol (2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O NKVNXNUKNLEVGM-DOACPYJISA-N 0.000 description 1
- DPEYHNFHDIXMNV-UHFFFAOYSA-N (9-amino-3-bicyclo[3.3.1]nonanyl)-(4-benzyl-5-methyl-1,4-diazepan-1-yl)methanone dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.CC1CCN(CCN1Cc1ccccc1)C(=O)C1CC2CCCC(C1)C2N DPEYHNFHDIXMNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- ZEEYNQNRMIBLMK-DFWYDOINSA-N 2-aminoacetic acid;(2s)-2-aminopentanedioic acid Chemical compound NCC(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O ZEEYNQNRMIBLMK-DFWYDOINSA-N 0.000 description 1
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- PECYZEOJVXMISF-REOHCLBHSA-N 3-amino-L-alanine Chemical compound [NH3+]C[C@H](N)C([O-])=O PECYZEOJVXMISF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QUVATQRRTNYWIT-UHFFFAOYSA-N 4-amino-3-hydroxy-2-methylpentanoic acid Chemical compound CC(N)C(O)C(C)C(O)=O QUVATQRRTNYWIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 241000194106 Bacillus mycoides Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000356408 Candida cloacae Species 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000000274 Carcinosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 102100035882 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 240000001817 Cereus hexagonus Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-CBPJZXOFSA-N D-Gulose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-CBPJZXOFSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- GMKMEZVLHJARHF-RFZPGFLSSA-N DD-2,6-diaminopimelic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@H]([NH3+])CCC[C@@H]([NH3+])C([O-])=O GMKMEZVLHJARHF-RFZPGFLSSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 241000515012 Micrococcus flavus Species 0.000 description 1
- 241000588772 Morganella morganii Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000038458 Nepenthes mirabilis Species 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GPBHRSVPAYAVNY-BTIMZKGXSA-N OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO GPBHRSVPAYAVNY-BTIMZKGXSA-N 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 240000000697 Pinguicula vulgaris Species 0.000 description 1
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 1
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 1
- 241000100248 Primula stuartii Species 0.000 description 1
- 239000006159 Sabouraud's agar Substances 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000576755 Sclerotia Species 0.000 description 1
- 241000607715 Serratia marcescens Species 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 244000127759 Spondias lutea Species 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 238000006463 Yamaguchi esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- VUPBDWQPEOWRQP-RTUCOMKBSA-N [(2R,3S,4S,5R,6R)-2-[(2R,3S,4S,5S,6S)-2-[(1S,2S)-3-[[(2R,3S)-5-[[(2S,3R)-1-[[2-[4-[4-[[4-amino-6-[3-(4-aminobutylamino)propylamino]-6-oxohexyl]carbamoyl]-1,3-thiazol-2-yl]-1,3-thiazol-2-yl]-1-[(2S,3R,4R,5S,6S)-5-amino-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-2-hydroxyethyl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-hydroxy-5-oxopentan-2-yl]amino]-2-[[6-amino-2-[(1S)-3-amino-1-[[(2S)-2,3-diamino-3-oxopropyl]amino]-3-oxopropyl]-5-methylpyrimidine-4-carbonyl]amino]-1-(1H-imidazol-5-yl)-3-oxopropoxy]-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl] carbamate Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](NC(=O)C[C@H](O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)c1nc(nc(N)c1C)[C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](OC(N)=O)[C@@H]1O)c1cnc[nH]1)C(=O)NC(O[C@@H]1O[C@@H](C)[C@@H](N)[C@@H](O)[C@H]1O)C(O)c1nc(cs1)-c1nc(cs1)C(=O)NCCCC(N)CC(=O)NCCCNCCCCN VUPBDWQPEOWRQP-RTUCOMKBSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- MHLMRBVCMNDOCW-UHFFFAOYSA-N acetic acid;butan-1-ol;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O.CCCCO MHLMRBVCMNDOCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000002814 agar dilution Methods 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N aldehydo-L-rhamnose Chemical compound C[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-MBMOQRBOSA-N alpha-D-arabinopyranose Chemical compound O[C@@H]1CO[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-MBMOQRBOSA-N 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O ammonium group Chemical group [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000001479 atomic absorption spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007613 bennett's agar Substances 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid group Chemical group C(C1=CC=CC=C1)(=O)O WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-KLVWXMOXSA-N beta-L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1CO[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-KLVWXMOXSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QYOAUOAXCQAEMW-UTXKDXHTSA-N bleomycin A5 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCCNCCCCN)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C QYOAUOAXCQAEMW-UTXKDXHTSA-N 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012511 carbohydrate analysis Methods 0.000 description 1
- 230000025938 carbohydrate utilization Effects 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 229940023913 cation exchange resins Drugs 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- KFZAUHNPPZCSCR-UHFFFAOYSA-N iron zinc Chemical compound [Fe].[Zn] KFZAUHNPPZCSCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 239000010699 lard oil Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- KSSNXJHPEFVKHY-UHFFFAOYSA-N phenol;hydrate Chemical compound O.OC1=CC=CC=C1 KSSNXJHPEFVKHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N pyridine Substances C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 1
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N triammonium citrate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700039493 victomycin Proteins 0.000 description 1
- RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K9/001—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence having less than 12 amino acids and not being part of a ring structure
- C07K9/003—Peptides being substituted by heterocyclic radicals, e.g. bleomycin, phleomycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/803—Physical recovery methods, e.g. chromatography, grinding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/886—Streptomyces
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/886—Streptomyces
- Y10S435/891—Streptomyces bikiniensia
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Oncology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
U1372
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af et antibiotisk kompleks, kaldet Bu-2231 eller dets bestanddele Bu-2231 A og Bu-2231 B i kobberkomplekse former eller kobberfrie former og/eller syreadditionssalte deraf.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at man dyrker en stamme af Streptoalloteichus hindustanus i et vandigt næringsmedium, som indeholder assimilerbare nitrogen- og carbon-kilder under submerse aerobe betingelser og udvinder det antibiotiske kompleks fra dyrkningsmediet, og om ønsket opdeler det i sine bestanddele og/eller omdanner den kobberkomplekse form til den kobberfrie form og/eller til syreadditionssalte.
Ifølge en foretrukket udførelsesform af fremgangsmåden ifølge opfindelsen er stammen Streptoalloteichus hindustanus ATTC 31158. Denne stamme er en ny stamme af Streptoalloteichus benævnt stamme Ξ465-94 i Bristol-Banyu kultursamlingen. Organismen er en Actino-mycetes-bakterie, som isoleredes fra en indisk jordprøve. En kultur af organismen er blevet deponeret i The American Type Culture Collection, Washington, D.C., og indføjet i dens permanente samling af microorganismer som ATCC 31158.
Det hidtil ukendte glycopeptidkompleks fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse omfatter to hoved-glycopeptidbestanddele, benævnt Bu-2231 A og B, idet begge sådanne bestanddele er bio- 2 141372 aktive. Komplekset og enhver af de ovennævnte bestanddele har en hæmmende virkning på væksten af microbielle organismer, både bakterier og fungi, som er patogene i dyre- og planteliv, og disse antibiotika er derfor nyttige til terapi mod bakteriel infektion i mennesker eller dyr og til hindring eller undertrykkelse af sygdomme hos ris, ærter, hvede eller andre planter, hvilke sygdomme er forårsaget af plantepatogene organismer. Komplekset og de enkelte bestanddele er også nyttige i behandlingen af forskellige tumorsystemer i gnavere, indbefattet Walker 256 carcinosarcoma (ascitisk form) og Lewis Lung carcinoma.
På tegningen viser:
Fig. 1 det infrarøde absorptionsspektrum af Bu-2231 A i form af dets i kaliumbromid pelleterede kobberfrie hydrochlorid-salt,
Fig. 2 det protonmagnetiske resonansspektrum af Bu-2231 A som det i O^O opløste kobberfrie hydrochloridsalt under anvendelse af 2,2-dimethyl-2-silapentan-5-sulfonat (DSS) som indre standard ved bestemmelse med et JEOL 60 MHz NMR spektrometer (TNM-C-60 HL-type),
Fig. 3 det infrarøde absorptionsspektrum af Bu-2231 B i form af dets i kaliumbromid pelleterede kobberfrie formiatsalt,
Fig. 4 det protonmagnetiske resonansspektrum af Bu-2231 B som det i O^O opløste kobberfrie formiatsalt vinder anvendelse af 2,2-dimethyl-2-silapentan-5-sulfonat (DSS) som indre standard ved bestemmelse med et JEOL 60 MHz NMR spektrometer (TNM-C-60 HL-type).
De morfologiske, dyrkningsmæssige og fysiologiske egenskaber af stamme E465-94 ATCC 31158 er sammenfattet herunder:
Stamme E465-94 danner klase og sclerotium i luftmyceliet på de fleste agarmedier. Klasen er en fremherskende sporedannende struktur, og dannelsen af sclerotier er noget ustadig. Klasen består af buede eller L-formede korte sporekæder med mange forgreninger og udvikler sig ofte i en tyk masse. Nogle sporekæder stikker ud fra klasestrukturen og danner ofte åbne spiraler.
3 141372
Sclerotiumsformen er oval og lejlighedsvis uregelmæssig. Opdeling af vegetativt mycelium fremkommer ikke. Der dannes ikke krans.
Stamme E465-94 danner kraftige luftmycelier på de fleste af de afprøvede agarmedier. Det modne luftmycelium er lysegulligt beige eller bleglyserødligt gult. Diffusibel pigment dannes ikke. Tyrosinasereaktion er negativ. Stammen kan modstå varme og vokser kraftigt ved 50 °C.
De dyrkningsmæssige og fysiologiske egenskaber og carbon-hydratudnyttelsen af stamme E465-94 er vist i tabellerne I, II og III.
TABEL I.
Dyrkningsmæssige egenskaber af stamme E465-94.
Gærekstrakt-maltekstraktagar G: Kraftig (ISP nr. 2 medium) R: Bleggulligt brun til
Pridham, et al., 1956-57 lysebrun A: Tykt, fløjlsagtigt, lyse gulligt beige eller bleglyserødligt beige D: Intet
Havremelsagar G: Moderat (ISP nr. 3 medium) R: Farveløs, delvist bleg-
Kuster, 1959 gulligt brun A: Letsmuldrende til fløjls agtig, lejlighedsvis med pletter, bleglyserødligt beige D: Intet
Uorganiske salte-stivelses- G: Moderat agar R: Farveløs til bleggulligt (ISP nr. 4 medium) brun
Kuster, 1959 A: letsmuldrende til fløjls agtig, bleglyserødligt gul D: Intet
Glycerol-asparaginagar G: Begrænset (ISP nr. 5 medium) R: Farveløs til blegt oliven-
Pridham and Lyons, 1961 grønligt gul A: Letsmuldrende med pletter,
Hvidligt til bleggulligt beige D: Intet.
4 141372
Pepton-gærekstrakt-jernagar G: Sparsomt (ISP nr. 6 medium) R: Brun
Tresner og Danga, 1958 A: Sparsomt, hvidt D: Lysebrun
Tyrosinagar G: Moderat (ISP nr. 7 medium) R: Lysegul til bleggrønligt
Shinobu, 1958 gul A: Fløjlsagtigt til dunet, hvidt senere let lyserødligt gul D: Intet
Bennett's agar G: Moderat R: Blegt olivengrønligt gul til lysebrun A: Fløjlsagtigt, lysegulligt beige D: Intet Næringssubstratagar G: Begrænset R: Blegbrunligt gul A: Sparsomt, hvidt D: Bleggul
Jordekstraktagar G: Moderat R: Farveløs A: Tyndt, bleggulligt beige, pletter D: Intet
Tomatmasse-havremelsagar G: Moderat R: Lysegulligt brun A: Fløjlsagtigt, bleglyse rødligt gul D: Intet.
Forkortelser: G = vækst; R = bagsidefarve; A = luftmycelium; D = diffusibelt pigment.
TABEL II.
Fysiologiske egenskaber af stamme E465-94.
Gelatinesmeltning Positiv, hurtig smeltning
Stivelseshydrolyse Positiv Mælk Bemærkelsesværdig koagule ring og svag peptonisering. pH bliver alkalisk. Gullig ringvækst.
5 141372
Melanin fra L-tyrosin Negativ tyrosinaseprøve
Nitrit fra nitrat Positiv Væksttemperatur Kraftig vækst ved 32-50 °C, moderat ved 25-30 °C, begrænset ved 23 °C og 52 °C, sparsom ved 20 °C og 54 °C, ingen vækst ved 12 °C og 56 °C.
Fluorescentlys Ingen klar inhibering af luft myceliumsdannelse under 15W-fluorescentlampe i 14 dage
NaCl-tolerance Begrænset vækst og luftmyceliums dannelse i Leudemann's agarsubstrat ved 5% NaCl. Ingen vækst ved 7%
NaCl
Kartoffelprop- Normal vækst og luftmyceliums- surhedstolerance dannelse på Leudemann's kartoffel- propprøve
Katalase-reaktion Positiv
Oxidase Negativ
Dannede antibiotics Bu-2231-kompleks og nebramycin- faktorer.
TABEL III.
Carbonhydratudnyttelse af stamme E465-94.
D(-)-arabinose - D(+)-melibiose L(+)-arabinose - trehalose ++ D-xylose - raffinose D-ribose + D(+)-melezitose L-rhamnose - opløselig stivelse ++ D-glucose ++ cellulose D(+)-galactose ++ glycerol ++ D-fructose ++ inositol - D-mannose ++ D-mannitol L(-)-sorbose - D-sorbitol - saccharose ++ dulcitol lactose ++ salicin - cellobiose 6 141372
Basalsubstrat: Pridham-Gottlieb saltsubstrat, suppleret med 0,1% Difco gærekstrakt.
Inkuberingstemperatur: 37 °C.
Cellevægpræparatfremstilling udførtes efter den af T. Yama-guchi i J. Bacteriol. 8£: 444-453 (1965) beskrevne metode. Amino-syreanalysefremgangsmåden var som følger: Renset cellevæg (10 mg) hydrolyseredes i 1 ml 6N HC1 i et forseglet rør ved 120 °C i 18 timer. Hydrolysatet fortyndedes med et lige så stort volumen destilleret vand, filtreredes og inddampedes derpå i vakuum til tørhed. Halvdelen af slutproduktet genopløstes i 0,1 ml destilleret vand og undersøgtes ved to-dimensional TLC. Den anden halvdel opløstes i 2 ml citratpuffer (pH 2,2) og analyseredes ved væske-chromatografi. En 5 μΐ portion af hydrolysatet anbragtes på en silicagel-TLC plade (6OF254, E. Merck AG, Tyskland) og oparbejdedes med phenol-vand (4:1) i en retning og dernæst med n-butanol-eddikesyre-vand (3:1:1) vinkelret på den første udfoldelsesretning. Pletterne synliggjordes ved en påsprøjtning af 0,2% ethanolsk ninhydrinreagens, efterfulgt af opvarmning af pladen i 5 minutter ved 110 °C. Til adskillelse af meso og/ eller DD-DAP fra LL-DAP anbragtes 5 μΐ af hydrolysatet på en cellulosepulver-TLC plade. Pladen oparbejdedes med opløsnings-middelsysternet methanol-vand-10N HCl-pyridin (80:17,5:2,5:10) i 24 timer og oversprøjtedes derpå med 0,2% ninhydrinreagens.
I dette TLC-system bevægede LL-DAP sig hurtigere end den som referencestandard anvendte meso-DAP. Aminosyrer i cellevægpræparatet bestemtes også ved aminosyreanalyser. Aminosyre-analysen af cellevægpræparatet af stamme E465-94 viste tilstedeværelsen af meso-a, ε-diaminopimelinsyre (meso-DAP), alanin og glutaminsyre (tabel IV). Carbonhydrater i cellevæggen bestemtes som følger: En 50 mg prøve af den rå cellevæg opløstes i 3 ml 2N 0<2 hydro lyserede s i et forseglet rør ved 120 °C i 2 timer. Hydrolysatet neutraliseredes med mættet BaiOH^ opløsning, det udfældede BaSO^ fjernedes ved centrifugering og det ovenstående fluidum lyofiliseredes. Det således opnåede materiale 7 141372 trimethylsilyleredes, og produktet underkastedes gas-chromato-grafi og sammenlignedes med forskellige referencesukkerarter. Carbonhydratanalysen af cellevæggen af E465-94 viste nærværelsen af rhamnose, mannose, galactose og glucosamin (tabel V).
TABEL· IV.
Cellevæg-aminosyresammensætning.
PAP (isomer) glycin glutaminsyre asparaginsyre alanin ++ (meso) - ++ spor +++ TABEL V.
Cellevæg-carbonhydratsammensætning.
arabinose rhamnose mannose galactose glucose glucosamin + ++ +++ - ++
Stamme E465-94 producerer et hidtil ukendt antibiotisk kompleks Bu-2231, hvilket antages at være sammensat af antibio-tica af bleomycintype. Sammenligning udførtes derfor med adskillige Actinomycetes stammer, hvilke har vist sig at producere bleomycin eller bleomycinbeslægtede antibiotica. Resultaterne er sammenfattede i tabel VI. Stamme E465-94 skelnes klart fra enhver af disse microorganismer.
TABEL VI.
141372 8
Sammenligning af stamme E465-94 med 6 Actino-mycetesstammer, hvilke producerer bleomycin-gruppe antibiotics.
Mikroorganismens Dannet Hovedforskel fra navn_ antibioticum stamme E465-94
Streptomyces Phleomyciner Kransdannelse.
verticillus Positiv udnyttelse af g... 1) inositol, mannitol, nr‘ "* raffinose og rhamnose.
Negativ udnyttelse af galactose.
Streptomyces Bleomyciner Kransdannelse.
verticillus Negativ udnyttelse af
Don <70 2) galactose, lactose og BSU-Z2 saccharose.
Streptomyces Zorbamyciner Luftvækst grå til grålig bikiniensis gul. Sporophor lige.
Udnyttelse ++: D-xylose, var.zorbonensis ’ L-arabinose, rhamnose, cellobiose.
Udnyttelse +: Raffinose, dulcitol, D-mannitol, D-sorbitol og inositol.
Streptomyces YA-56 kompleks Luftmycelium: lysebrunligt humidus gråt og hygroskopisk.
... . Positiv udnyttelse af var. an i umoris arabinose, xylose, rhamnose, MCRL-0387 ' mannitol og inositol.
Streptosporangium Victomycin Dannelse af kugleformet violaceochromogenes sporangium.
Luftmycelium: skal-lyserødt.
MK-49 J Positiv udnyttelse af xylose.
Negativ udnyttelse af lactose.
Streptosporangium Platomyciner Dannelse af kugleformet violaceochromogenes sporangium.
Luftmycelium: hvidt til MK-78 b lyserødligt hvidt.
Positiv udnyttelse af xylose.
Negativ udnyttelse af lactose og glycerol.
9 141372 1) K. Maeda, et al. (Institute Microbial Chemistry):
Japan. Japansk patentskrift nr. 34-2598.
2) H. Umezawa, et al: New antibiotics, bleomycin A
and B. J.Antibiotics 19: 200-209,' 1966.
3) The Upjohn Company: Britisk patentskrift nr. 1.277.150.
4) T. Furumai, et al.: The antibiotic YA-56 complex:
Taxonomy and production of the producing strain.
J. Antibiotics 26: 70-76, 1973.
5) I. Kawamoto, et al.: A new antibiotic victomycin (XK 49-1-B-2) . J. Antibiotics 2_8: 358-371, 1975.
6) T. Nara, et al. (kyowa-Hakko Kogyo Co., Ltd.):
Japan. Kokai, 49-108292, October 15, 1974.
Actinomycetesstammen E465-94 dannede på agarmedier en klase og et sclerotium i luftmyceliet, hvilken morforlogi typisk findes hos nogle arter af Streptomyces eller Chainia.
Imidlertid var aminosyre- og sukker-sammensætningen i cellevægpræparatet af stamme E465-94 helt forskellig fra sammensætningen i enhver art i familien Streptomycetaceae. Cellevægpræparatet indeholdt meso-a,e-diaminopimelinsyre (meso-DAP) i stedet for LL-DAP, som har vist sig at være en specifik cellevægbestanddel i slægterne Streptomyces og Chainia. Ydermere var hovedsukker-bestanddelene i stammen galactose, mannose og rhamnose, hvilke er helt forskellige fra de for Streptomyces eller Chainia beskrevne. Under hensyn til de ovennævnte fakta antages det, at en hidtil ukendt slægt Streptoalloteichus (strepto- en streptomyceslignende organisme, allo-ændret og teichos-væg, dvs. en Streptomyceslignende organisme med usædvanlig cellevægsammensætning) må ud-nævnes under familien Streptomycetaceae til udskillelse af Actinomycetesstammer, som ligner Streptomyces i morfologi, men har cellevægsammensætningen af stamme E465-94-type; meso-DAP, alanin og glutaminsyre som hovedaminosyrer og galactose, mannose og rhamnose som diagnostisk neutrale sukkerarter. Således er 10 141372
Streptoalloteichus en blandt slægterne af familien Strepto-mycetaceae enestående slægt, som indeholder meso-DAP i stedet for LL-DAP i cellevægsairanensætningen. Det foreslås også, at stamme E465-94 kan betegnes Streptoalloteichus hindusta-nus gen. nov. og sp. nov., fordi organismen isoleredes fra Nordindien. Stamme E465-94 ser klart forskelllig ud fra microorganismerne, som har vist sig at danne bleomyciner og bleomycinbeslægtede antibiotika.
Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan anvendes stammer, som kan henføres til arten Streptoalloteichus hindu-stanus, d.v.s. hvis egenskaber ikke afviger væsentligt fra de her anførte egenskaber.
»
Organismen dyrkes i et næringsmedium, som indeholder en assimilerbar carbonkilde, f.eks. et assimilerbart car-bonhydrat. Eksempler på passende carbonkilder er glucose, ribose, galactose, fructose, mannose, saccharose, lactose, opløselig stivelse og glycerol. Næringsmediet bør også indeholde en assimilerbar nitrogenkilde, såsom f.eks. fiskemel, soyabønnemel, majsstøbevand, peptoner, kødekstrakt, jordnøddemel, gærekstrakt eller ammoniumsalte. Uorganiske salte, såsom natriumchlorid, kaliumchlorid, magnesiumsulfat, kalciumcarbonat, phosphater etc. tilsættes om nødvendigt. Sporelementer, såsom kobber, mangan, jern zink etc. tilsættes om ønsket mediet eller kan tilføres som urenheder i andre af mediernes bestanddele. Inkuberingstemperatu-ren kan være enhver temperatur, hvorved en Bu-2231 -dannende stamme er i stand til at vokse, f.eks. 20 - 54°C, men det foretrækkes, at fermenteringen udføres ved 25-35°C, især ved 27 - 32°C. En neutral eller nær neutral begyndelses pH- værdi, f.eks. pH svarende til 6-7, anvendes fortrinsvis i mediet, og fremstillingen af antibioticum 141372 11 udføres sædvanligvis i en tidsperiode på fra omkring 2 til 7 dage. Sædvanligvis opnås optimal fremstilling på 3 til 5 dage. Til fremstilling af forholdsvis små mængder kan rystekolber og overfladedyrkning anvendes, men til fremstillingen af store mængder foretrækkes submers aerobisk dyrkning i sterile tanke. Når tankfermentering skal udføres, er det ønskeligt, at man danner et vegetativt inoculum i et næringssubstrat ved inoculering af substratkulturen med en spore fra organismen og overføring, når et ungt aktivt vegetativt inoculum er blevet opnået, af dette inoculum aseptisk til fermenteringstanksubstratet. Beluftning i tanke og kolber kan tilvejebringes ved presning af steril luft gennem eller på det gærende mediums overflade. Yderligere bevægelse i tankene tilvejebringes ved hjælp af en mekanisk omrører. Et antiskummiddel, såsom olie fra svinefedt, kan om nødvendigt tilsættes.
Dannelsen af Bu-2231 i fermenteringsmediet kan let følges under fermenteringen ved hjælp af papirplade-agardiffusions-metoden under anvendelse af Bacillus subtilis PCI-219 og Mycobacterium 607 stamme M6-3 som testorganismer. Bu-2231 A og B er begge, såvel som de antageligt samtidigtdannede nebramycin-faktorer aktive mod B. subtilis PCI-219, men kun Bu-2231 A og B bestanddelene viste aktivitet mod M. 607 M6-3. I rystekolbe-fermenteringen dannede stamme E465-94 50-100 yg/ml Bu-2231 kompleks efter 3-5 dages forløb.
Efter opnåelse af optimal substratstyrke (f.eks. bestemt ved den ovennævnte prøvefremgangsmåde) skilles myceliet og uop-løste rester fra fermenteringssubstratet efter konventionelle metoder, såsom filtrering eller centrifugering. Den antibiotiske aktivitet indeholdes i filtratet og kan udvindes derfra under anvendelse af konventionelle adsorptionsteknikker. Adsorptions- 12 141372 midlerne, som mest formålstjenligt anvendes ved udvindingen, er cation-bytter-harpikserne, f.eks. de harpikser af IRC-5O-typen, som er kommercielt tilgængelige fra Rohm and Haas Company under varemærket "Amberiite IRC-50". Filtratet, som om nødvendigt neutraliseres til pH-værdi 7, sendes gennem en søjle, der er pakket med en cation-bytter-harpiks, såsom "Amberlite IRC-50" i ammoniumform. Harpiksen udvaskes dernæst med vand. Tillige med Bu-2231 komplekset danner organismen E465-94 samtidigt også et af nebra-mycinfaktorer bestående antibiotisk aminoglycosidkompleks.
Denne aminoglycosidurenhed kan adskilles fra Bu-2231 komplekset ved eluering med en fortyndet base, f. eks.
0,25 N· ammoniumhydroxid. Det ønskede Bu-2231 kompleks, som forbliver adsorberet på harpiksen, kan derpå elueres med en mineralsyreopløsning, f.eks. saltsyre med pH-værdi 2, og eluatets Bu-2231 fraktioner kan opsamles og kombineres.
Partiel rensning af komplekset kan udføres ved chromatografi af de kombinerede Bu-2231 fraktioner over et passende adsorptionsmiddel, såsom aktiveret carbon, og eluering med f.eks. vandig butanol med sur pH-værdi. Butanollaget skilles fra, og det vandige lag lyofiliseres eller koncentreres i vakuum til ydelse af det faste Bu-2231 kompleks. Komplekset kan yderligere underkastes chromatografi og/eller gelfiltrering til dannelse af det rensede kobberholdige faste kompleks.
Glycopeptidbestanddelene Bu-2231 A og B kan særlig fordelagtigt adskilles fra komplekset ved gradient-eluerings-chranatografi, især over en modificeret dextranderivat-cationbytter, f.eks. en modificeret poly-sacchariddextran af den kommercielt under varemærket "CM-Sephadex C-25" solgte type. En vandig opløsning af Bu-2231 komplekset, fortrinsvis renset som ovenfor beskrevet, sættes til en søjle, som indeholder den modificerede dextran-ionbytter. Som i tilfældet med bleomycinerne (J. Antibiotics, 19^ 210-215 (1966)) er det lettere at adskille komponenterne efter denne fremgangsmåde, hvis komplekset er tilstrækkeligt chelateret med kobber. Således omfatter den foretrukne adskillelsesfremgangsmåde opløsning af komplekset i en cuprichloridopløsning til sikring af, at det er 13 141372 en tilstrækkeligt kobber-chelateret form, og dernæst tilføring af denne opløsning til søjlen. Bestanddelene elueres derpå på en trinvis måde med vandig ammoniumformiatopløsning af fra 1 til 7% varierende koncentrationer. Bu-2231 B fremkommer i eluatets tidlige fraktioner, medens senere fraktioner indeholder Bu-2231 A. De fraktioner, som indeholder de samme bestanddele, forenes, afsaltes ved gelfiltrering, koncentreres og lyofiliseres til dannelse af de rensede Bu-2231 A og B bestanddele i deres kobberkompleksformer.
Anvendelse af ammoniumformiat som elueringsmiddel i den ovenfor beskrevne chromatografiske adskillelsesfremgangsmåde resulterer i udvinding af de lyofiliserede bestanddele i form af formiatsalte. For fagmanden kendte standardfremgangsmåder kan anvendes til omdannelse af formiatsaltene til deres respektive frie baser og/eller til omdannelse af formiatsaltene eller de frie baser til andre ønskede syreadditionssalte, f.eks. hydrochloridsaltene.
Glycopeptidbestanddele Bu-2231 A og B har den egenskab, at de chelaterer med kobber ligesom bleomycineme gør det, og således kan bestanddelene og deres syreadditionssalte forefindes enten i den kobberkomplekse form eller i den kobberfrie form.
De kobberfrie former af Bu-2231 A og B kan fremstilles ud fra de kobberkomplekse former ved anvendelse af H2S i methanol som beskrevet i OSA Patentskrift nr. 3.646.197.
De to antibiotiske glycopeptidbestanddele kan skelnes fra hverandre og de beslægtede bleomyciner og phleomyciner'enten i deres kobberkomplekse eller kobberfrie form ved hjælp af TLC-systemerne S-102 og S-123 som nedenfor vist i Tabel VII.
14 141372 TABEL VII.
Rf-værdier.
S-102 S-123
Cu-A 0,22 0,05
Cu-B 0,41 0,11
Fri A 0,16 0,04
Fri B 0/31 0,09
Bleomyciner 0,34* 0,44* 0,69 0,21; 0,50* 0,79
Phlemyciner 0,37* 0,54; 0,72 0,22* 0,41* 0,59 S-102: Si02-plade, CH3OH-10% CH3COONH4 (1:1) S-123: Si02-plade, CH3OH-10% CH3COONH4~10% NH4OH (10:9:1).
De antibiotiske stoffer Bu-2231 A og B er begge amorfe baser, som i den kobberkomplekse form fremtræder som blå faststoffer og i den kobberfrie form som hvide faststoffer. Begge stoffer er opløselige i vand og methanol, tungtopløselige i ethanol og praktisk taget uopløselige i andre organiske opløsningsmidler.
Bu-2231 A og B er i stand til dannelse af salte med syrer, f.eks. farmaceutisk acceptable syreadditionssalte.
Eksempler på velegnede farmaceutisk acceptable syreadditionssalte omfatter de ikke-toksiske salte med organiske og uorganiske syrer, såsom f.eks. saltsyre, svovlsyre, phosphorsyre, eddikesyre, myresyre, stearinsyre, propionsyre, vinsyre, ma-leinsyre, benzoesyre, ravsyre og lignende.
Grundstofanalyserne af kobberkompleks og kobberfri Bu-2231 A og B var, som følger: 15 141372
Bu-2231 A (Cu-kompleks):
Beregnet for: C^I^N^O^S^u: C 42,68; H 6,27; N 15,56; S 3,56 fundet: C 42,66; H 6,16; N 15,31; S 3,14.
Bu-2231 A (Cu-fri):
Beregnet for: C64HH2N20°32S2: C 44,23; H 6,50; N 16,12; S 3,69 fundet: C 45,10; H 6,51; N 16,05; S 3,55.
Bu-2231 B (Cu-kompleks):
Beregnet for: C 41,63; H 6,02; N 15,07; S 3,83 fundet: C 40,96; H 5,61; N 14,78; S 3,39.
Bu-2231 B (Cu-fri):
Beregnet for: C58H100N18°31S2: C 43,27; H 6,26; N 15,66; S 3,98 fundet: C 43,01; H 6,22; N 14,81; S 3,61.
Kobberindholdet i en kombineret prøve af Bu-2231 A og B bestemtes til omkring 3% ved atomabsorptionsspektrometri.
Bestanddelenes ultraviolette absorptionsmaxima og optiske rotation er som følger: 16 141372 UV absorption [a]^
ti Λ *1 CL
Forbindelse λ m|ks> i (c 0,5; H20)
Bu-2231 A (Cu-kompleks) 243(125),291 (98) +50°
Bu-2231 A (Cu-fri) 235(sk)*,290 (67) - 21°
Bu-2231 B (Cu-kompleks) 243(134),291 (109) + 76°
Bu-2231 B (Cu-fri) 235(sk)*,289,5 (77) - 19°
Bleomycin A2 (Cu-kompleks) 242(149),291 (121)
Phleomycin (Cu-kompleks) 244(138),301 (49) + 84,5° (litteratur reference) # = skulder.
Forholdet mellem de specifikke UV ekstinktioner ved de to absorptionsmaxima for Bu-2231 (forholdsmæssig specifik ekstinktion ved 240 my og 290 my: 1,2 - 1,3) antyder det hidtil ukendte kompleks' lighed .ned bleomycingruppen af antibiotica snarere end phleomycingruppen.
De infrarøde og kernemagnetiske resonansspektre for det kobberfrie hydrochloridsalt af Bu-2231 A og det kobberfrie formiatsalt af Bu-2231 B er vist på tegningen i fig. 1 til 4.
Begge antibiotiske bestanddele giver positive reaktioner med ninhydrinreagens.
Bu-2231 A's og B's nære strukturelle lighed med bleomycin antydedes ved de ovenfor beskrevne fysisk-kemiske egenskaber.
De kobberfrie præparater af de to bestanddele sammen med bleomycin A2 hydrolyseredes i et forseglet rør med 6N HC1 i 20 timer ved 105 °C. Ethvert af hydrolysaterne undersøgtes sammenligningsvis ved højspændings-papirelektroforese. Lokaliteten af amino-syrerne påvistes ved hjælp af ninhydrinreagens og tillige ved UV lys.
17 141372
Som vist i Tabel VIII identificeredes enhver af de 6 aminosyrer (I til VI) og 1 amindel (VII) af bleomycin A2, hvilken er beskrevet i litteraturen (J. Antibiotics 21: 79, 1968) ved hjælp af papirelektroforese. Hydrolyseprodukteme af Bu-2231 A og B udviste ninhy dr in-positive zoner svarende til aminosyreme I, II, IV og V fra bleomycin A2, og påvisningen af, at enhver af de 4 fra Bu-2231 A og B isolerede aminosyrer var identiske med aminosyreme I, II, IV og V fra bleomycin A2 udførtes ved kemiske og spektrale metoder. Aminosyre III (zone ved 13,5 cm) fra bleomycin A2 var ikke til stede i Bu-2231 A og B, hvilke i stedet udviste en yderligere ninhydrin-positiv zone ved 14,8 cm (betegnet som aminosyre VIII). Strukturen af aminosyre VIII er blevet bestemt som 4-amino-3-hydroxy-n-valerianesyre, som er en desmethylanalog af aminosyre III.
Aminosyre VI (zone ved 8,5 cm, UV absorptionsmaksimum ved 290 my) fra bleomycin A2 var ikke til stede i Bu-2231 A og B.
Imidlertid isoleredes en sur forbindelse (IX) med et UV absorp- 1% tionsmaksimum ved 283 my (E. =280) som et bundfald fra i cm syrehydrolysatet af Bu-2231 A og B.
Den endestillede amindel (VII i Tabel VIII) i bleomycin A2 fremkom ved zone 31,5 cm. Bu-2231 A og B gav den samme zone som amin VII i bleomycin A2, men adskillige amindele i bleomycin-kompleks viser lignende bevægelighed i denne papirelektroforese-metode. Yderligere analyse viser faktisk, at den endestillede amindel i Bu-2231 A og B er spermidin (X), amindelen i bleomycin A5: Bu-2231 A gav en yderligere ninhydrin-positiv zone ved 23,0 cm. (XI i Tabel VIII), hvilken ikke var til stede i bleomycin A2 og Bu-2231 B. Forbindelse XI identificeredes som β-lysin.
Strukturerne af de ovenfor beskrevne aminosyrer og amindele er vist herunder: 18 141372
Aminosyre- og aminbestanddele i bleomycin A2 og Bu-2231 A og B.
I CH_-CH-CH-COOH
3 I I
OH NH2 L-threonin.
II
H3G\ y-CH-CH2-COOH
HOOcV"1^ NH2 p-amino-β- (4-amino-6-carboxy-5-methyl-pyrimidin-2-yl)-propionsyre
III CH--CH—-CH-CH-COOH
3 I I I
NH2 oh ch3 4-amino-3-hydroxy-2-methyl-n-valerianesyre.
IV N-j- CH-CH-COOH
|| I OH NH2
H
β-hydroxyhistidin.
V NH -CH-CH-COOH
2 2 , hh2 L-p-aminoalanin.
19 141372
VI N-fr-COOH
,-17 NH2_CH2'CH2- 2'-(2-aminoethy1)-2,41-bithiazol-4- carboxylsyre.
vii nh2-(ch2)3-s+(ch3)2,x- 3- amlnopropyldimethylsulfoniumsalt.
VIII CH--CH—CH-CHo-C00H
3 I I 2 NH2 oh 4- amino-3-hydroxy-n-valerianesyre.
IX Struktur ukendt (XCH32H= 283 my).
max s X NH2-(CH2)3-NH-(CH2)4-NH2 (spermidin).
XI NH2-(CH2)3-CH-CH2-COOH (β-lysin).
nh2
Sukkerbestanddelen i Bu-2231 A og B undersøgtes også i sammenligning med bleomycin. En blanding af bestanddelene A og B opvarmedes under tilbagesvaling i methanol med en stærkt sur harpiks (Amberlyst 15) i 20 timer. Basiske fragmenter fra hydrolysen adsorberedes på harpiksen, og i opløsningen frigjorte produkter koncentreredes i vakuum til en klæbrig sirup. Dette materiale trimethylsilyleredes og underkastedes derefter gaskromatografisk analyse. Bleomycin gav toppe, som kan henføres til gulose og mannose, og Bu-2231 bestanddelene viste omtrent det samme elueringsmønster som bleomycin, hvilket antyder den Η1372
N
20 samme struktur af carbonhydratdelen i antibiotikaene.
TABEL VIII.
Papirelektroforese af syrehydrolyseprodukter.
Lokalitet af ninhydrin-positiv zone _(afstand fra ordinataksen)
Aminosyrer og amin * Bleomycin An Bu-2231 A Bu-2231 B VI 8,5 cm I 9,7 9,7 9,7 II 12,0 12,0 12,0 III 13,5 VIII - 14,8 14,8 IV 16,0 16,0 16,0 V 18,5 18,5 18,5 XI - 23,0 VII (X) 31,5 31,5 31,5 * Strukturen af aminosyren- og aminbestanddelene er vist i teksten.
** "Toyo"-filterpapir nr. 51, pufferopløsning: Myresyre-eddikesyre-vand (25:75:900).
De minimale inhiberingskoncentrationer (MIC) af Bu-2231 A og B bestemtes mod mange forskellige bakterier og fungi ved dobbelt-agar fortyndingsmetoden. Mueller-Hinton agarmedium anvendtes til bestemmelsen af bakterielle MIC'er (gram-positive og gram-negative), medium nr. 1001 [glycerol (3%), Na-glutaminat (0,3%), pepton (0,2%), Na2HP04 (0,31%), KH2P04 (0,1%), ammoniumcitrat (0,005%), MgS04.7H20 (0,001%), agar (1,5%)] til syrefaste 21 141372 bakterier og Sabouraud's agar til fungi. Resultaterne*er vist i tabellerne IX og X i sammenligning med bleomycin og phleo-mycin. De antibakterielle og antifunglelle aktiviteter af Bu-2231 A og B er meget højere end de samme af reference-antibiotikaene. Bu-2231 A viste noget højere antibakterlel aktivitet end Bu-2231 B, men var mindre kraftig end den sidstnevnte i anti-fungiel aktivitet.
1Λ13 72 22 ΤΑΒΕΙ. IX.
Antibakterielle spektre af Bu-2231 A og B.
Bu-2231 A Bu-2231 B Bleomycin Phleomycin
Testorganisme Cu-fri Cu-kompl. Cu-fri Cu-kompl. NIHJ nr. 616 gram-negative E. coli NIHJ 0,025 0,025 0,2 0,1 0,8 0,8 " Juhl A15119 0,1 0,1 0,2 0,2 1,6 1,6 » K-12 A9632 0,05 0,05 0,1 0,2 0,8 1,6 " A2Q665 0,05 0,05 0,05 0,25 0,2 0,4 '* A20683 6,3 25 12,5 50 >100 >100 " A20732 0,05 0,05 0,2 0,1 1,6 1,6 Ξ.cloacae A21006 1,6 1,6 6,3 12,5 >100 50 K.pneumoniae Dll <0,0063 0,0125 0,025 <0,0063 0,2 0,4 ' A9678 0,2 0,4 0,4 0,4 6,3 12,5 ’ A20680 6,3 50 25 100 >100 >100 » A20328 0,8 0,8 1,6 1,6 25 >100 P.vulgaris A9436 0,2 0,4 0,2 0,2 6,3 0,8 P.morganii A9553 0,4 0,4 1,6 1,6 >100 6,3 P.mirabilis A9554 0,1 0,1 0,2 0,2 50 1,6 P.pettgeri A15167 0,4 0,4 0,8 0,8 >100 3,1 p.stuartii A20854 0,4 0,4 0,4 0,8 3,1 0,8 " A20734 0,4 0,4 0,8 0,8 >100 1,6 S.marcescens A20019 0,4 0,4 0,8 0,8 >100 0,8 " A2046Q 0,4 0,4 0,8 0,8 >100 0,8 " A20333 0,2 0,2 0,8 0,4 >100 0,8 " A21235 0,2 0,4 1,6 1,6 100 0,8 p.aeruginosa A9923 50 100 >100 >100 >100 >100 " A9930 0,4 0,4 0,8 1,6 >100 3,1 » H9,D113 >100 >100 >100 >100 >100 >100 A20741 0,2 0,2 0,2 0,2 12,5 6,3 gram-positive S.aureus 209P 0,1 0,2 0,4 0,4 6,3 0,2 " Smith A9537 0,1 0,1 0,05 0,05 3,1 0,1 nr. 193 0,1 0,2 0,4 0,4 12,5 0,2 " 209P,R4 0,4 0,4 0,8 0,8 12,5 0,4 " A20239 0,2 0,2 0,8 0,8 12,5 0,4 " BX-1633,A9606 0,2 0,2 0,8 0,2 6,3 0,4 S.lutea PCI-1001 0,2 0,2 0,4 0,8 100 0,4 M.flavus D12 0,2 0,2 0,4 0,8 50 0,2 B.mycoides "O" 0,2 0,1 0,2 0,2 12,5 0,2 B.sphaericus nr. 122 <0,0063 <0,0063 0,2 0,2 6,3 0,4 B.cereus ATCC 10702A 0,2 0,2 0,2 0,1 1,6 0,2 B.subtilis PCI—219 <0,0063 <0,0063 <0,0063 <0,0063 <0,0063 <0,0063 B.anthracis 115 0,05 0,05 0,1 0,2 12,5 0,4 syrefaste
Mycobacterium 607,D87 0,2 0,1 0,1 0,05 0,8 0,4 " 607,D46 0,1 0,1 0,1 0,05 0,2 0,2 " 607,D47 0,1 0,1 0,05 0,025 0,4 0,2 " phlei,D88 0,05 0,05 0,05 0,025 0,2 0,1 " ranae,ATCC110 0,1 0,1 0,1 0,05 0,8 0,4 23 141372 C! •Η >2 η ιο ro co co ri n vi <f o co vf cocomroHm^HinroHro
I10 riHioOO roioooooooocNiørocNorniNioroiD
φ . Η Η H
Η M C C 1¾ Η η min m η m ιο u æ vf oo co γοη h a N ri o μ n ci o η h o o' o oooiomooooooo shhhoh h o 2 2 22223
n 17 -4 Η Η Η Η Ή «—i 1—I H
g Z Λ Λ Λ ΛΑΛΑΛΛ Η 03
rH
α s o CO CO Η M O) CO CO Η Η Η H CN CN CN IflHHpOCNCOfOyjyoyj
a ^ q O ro O O OOOOOOOOOHmrnooOiCrHHH
s
H O
ro
• CN
ffl CN
o' 00 00 ΙΟ ΊΓ 00 CO CN CN CN CN CN ^PCNrllOi—ICOCNIOCOCOGOOØ
V O O H O O OOOOOOOOOrOHmoOrHlOOOP
3
H O
ro
CN
CN
3
CO H
&
. *id O 10 ID OO CO CO 10 10 CN CN CN CN CN «d-CNHOOOl^OCNlomiDlOlO
2 a f{ ΐ H ri 10 O O HHOOOOOOOCOvOlOOOHCNrHHrH
3 a 1-1 ni u η υ H +) ro
rn M CN
(1) CN
En ft i
^ C0S*4 ra 00 H 00 CO 00 (O N Ν' Ν' CN COCOHHroOOCOlOmHHH
Ti V o O ro o O OOOOOOOOOroroioooHCNrocoro
-η a H
tn U
! •ri +j m h e σι m 3 4 o ^ ^ m 00 <D h ro cn m (UH CN Is N1 vo 01 cn m I ιβ mm h r> o o < h co i >c Or-im m o o 8 01 cnooi
co-h m'cfcN ·* ^ c m JrooQ
OO+JOCrtH H O _ i (N (g Φ O
<d> 3 cn co <C S · S U S O s o f' « +J m rr ’ Ej ^ 11 ? J λ λ Bh®
2w · lO Η G HlilHrl fliftOl S -P
3 >, u o Ehhwmm <d u < >1 uo
(D Η Z G S · 05 <D _ S O Η Λ tn m H
g ^ c ® p ra s g S fi 5 a I) 1 ΙΛ S in Η a rH « -ri 3 3 3 3 3 O m g P Ό Q 1 .hc «o a μ>+ιμλ·ηή p p η ώ C S ·Η o p -ri <0 Ό O H · -H 3 G &> O § o (U -H O > P&GHHftH.|J-rl3P3ll) Η,-H W Οι Ή <D 0)Η<Ι)ΡίΗΒ)ιΗ3Ρ·Ρ<1)Ρ·Η
fro 3 Cl O P Cng-g-Po 3 G 4J G -P .0 G
OH p P <11 <u h3Q0HPQ3-H®M33
4JC0 x +j G O G<H§p.pOBHUBGPO
in S O Ih o m . . . . . · . O ft <D 3 ·......
4J U = = CJ = 0=UsW=<<fflW>SftUftE<Ect<S: li
G
HflJ H CN ^ H CN H^PHCNHCNHHHHHHHHHHHHH
K fl 1 1 1 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I
So 3 3 3 X X *P*PGGUUGMH >i>i*,jb,PH+Jjj«PU
24 141372
In vivo-aktiviteten af Bu-2231 kompleks evalueredes i eksperimentelle musinfektioner mod S. aureus Smith og E. coli NIHJ. Bleomycin afprøvedes til sammenligning som et referencean tibioticum. Resultaterne er vist i Tabel XI. Bu-2231 var omkring. 20 gange (S. aureus) til 80 gange (E. coli) mere aktivt end bleomycin udtrykt som middelbeskyttelsesdosisværdi (PD^q).
TABEL· XI.
In vivo-aktivitet af Bu-2231.
versus S.aureus Smith-infektion dosis (sc) Bu-2231 (A + B) Bleomycin 8 mg/kg - 4/5 4 - - 2 - 2/5 1 5/5 0,5 5/5 1/5 0,25 5/5 0,13 1/5 0/5 0,06 1/5 Q, 0 3 0/5 PD50 0,14 mg/kg 2,5 mg/kg versus E. coli NIHJ-infektion 8 mg/kg - 5/5 2 5/5 1/5 0,5 5/5 1/5 0,13 5/5 0/5 0,03 2/5 0,008 1/5 PDj-q 0,031 mg/kg 2,55 mg/kg.
In vivo-aktiviteten af de enkelte bestanddele af Bu-2231 i hver af de kobberfrie og kobberkomplekse former bestemtes også i E. coli-infektion. Som vist i Tabel XII var Bu-2231 A noget 25 141372 mere aktivt end Bu-2231 B. Tilstedeværelsen af kobber i Bu-2231 molekylet påvirkede ikke kendeligt in viνο-aktiviteten.
TABEL XII.
In vivo-aktivitet af Bu-2231 A og B i kobberfrie og kobberkomplekse former (versus E. coli NIHJ" infektion.
Bu-2231 A Bu-2231 B
dosis (sc) Cu-fri Cu-kompleks Cu-fri Cu-kompleks 8 - 5/5 - 3/5 2 5/5 5/5 5/5 5/5 0,5 5/5 5/5 5/5 5/5 0,13 5/5 4/5 4/5 3/5 0,03 3/5 3/5 1/5 2/5 0,008 1/5 0/5 0/5 2/5 PD 0,024 0,031 0,065 0,040 mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg.
Den akutte toksicitet af kobberfrit Bu-2231 A og B bestemtes i mus ved en enkelt subkutan injektion. Grupper på 3 mus anvendtes til hver dosisniveau, og legemsvægten registreredes i 16 dage. Resultaterne er vist i Tabel XIII. Bu-2231 A var noget mere toksisk end Bu-2231 B. Ingen død fremkom med Bu-2231 B op til en dosis på 50 mg/kg, men tab i legemsvægt bemærkedes i alle de testede dyr.
26 141372 tn O’ ^ Μ \ \ &
o O’ S
m g _ Q ° J 00 ΙΛ fM Λ ,-, in (O cm m r- cm
One I » » ' - - - - , '-Ή si in r- o o
,—j i—I i—I i—J i—I i i CM CM
cn +> CM O’ οι S co r- ro r- r- cn r- i > o i - - - - - - ' d 01 ι-H CO in t— ID Ol 00
fQ g i—l i—i i—I i—I i—! i—! 1 I
0 ii_i tji q r- r- r- r- r- c- o
CtJØ rtO1 ^ w eo in in vo (o
j_f4J i—i i—f (H i—i r-ί iH iH r-1 H
H 0 0 ^ (_)+J tQ CM O O O ΜΓ-ΟΓ- X-H ΌΟ - - ' - ---- ϋ ·Η cn o o o σιοοοοο
J -H g rH CN CN CM .Η iH CM rH
W M
ca M
< Q
R +> O1 (όνο O CM <M CO m m ro ro
+) Ό H
3 >y ό *C 0) > CM O CM CM ro ΓΟΓΟΟΟΓΟ
rH
0) Ό c
0) CT\ O CM CM CM CMCMCMCM
>
0 I—I
!H in i—I CM CM CM CMCMCMCM
0 > o
«tf CMCMCMCM CMCMCMCM
rH
kJ
+>
CO CMCMCMCM CMCMCMCM
ni
O
tn O’ O’ — v ,¾ \ \ tn O’ o>
Hg in cm g in cm tn - - - - O oincMio o tn cm ro
Ό m cm rH in CM rH
rifi *H CQ Ή rH m rH m CM H CM tø CM 0 CM 0 CM X! CM Λ I Λ I Λ
3 0 3 O
m x ffl x 27 141372
Foruden den ovenfor viste antimikrobielle aktivitet viste Bu-2231 kompleks og dets hovedbestanddele Bu-2231 A og B sig også at inhibere forskellige eksperimentelle dyriske tumorer. Testforsøg, som udførtes på to transplanterede gnaver-tumorsys terner, Walker 256 carcinosarcoma i ascitisk form og Lewis Lung carcinoma med intraperitonalt implanteret tumorvævssuspension, er beskrevet herunder. Den anvendte metodik fulgte i almindelighed protokollerne fra The National Cancer Institute som rapporteret i Cancer Chemotherapy Reports: 3(2):1-103 (1972). Eksperimenternes væsentlige detaljer er fremført i tabellerne Ia-IIIa herunder.
TABEL la.
Effekt af Bu-2231 på Walker 256 ascitisk tumor Eksperiment nr. 5439.
effekt gennemsnit- overlevende dosis MST MST lig vægtæn- dag dag
Materiale Hg/kg/dag dage %T/C dring/g 5_44
Bleomycin 2560 >44,0 >489 +10 6/6 4/6 640 17,5 194 + 9 6/6 1/6 160 10,0 111 +11 6/6 0/6
Bu-2231 2560 26,0 288 + 7,5 6/6 0/6 640 >44,0 >489 +18 6/6 5/6 160 >44,0 >489 +19 6/6 4/6 40 9,0 100 +19,5 6/6 1/6 10 8,5 94 +18 6/6 1/6 kontrol- 9,0 --- +34 10/10 0/10.
saltvand g
Tumor: 10 ascitiske celler implanteret ip i SD-hunrotter behandling: én gang dagligt ip i 8 dage begyndende på dag 1 evaluering: MST»middeloverlevelsestid i dage effekt: %T/C = (MST behandlede/MST kontrol) x 100 criterier: T/C > 125 betragtedes som signifikant tumor- inhibering (forlængelse af værtsoverlevelsestid) overlevende:dag 5 toksicitetevaluering, vægtændring registreret på dag 44, hvor eksperiment afsluttedes, overlevende betragtedes som "kurerede".
Andre døde af tumor.
28 141372 TABEL Ila.
Effekt af Bu-2231 fraktioner på Walker 256 ascitisk tumor eksperiment nr. 5501.
dosis MST effekt gennemsnit- overlevende
Materiale ug/kg/dag dage MST lig vægtæn- dag 5 -_ _ _ %T/C dring/g _
Bleomycin 640 12,5 179 +4,5 6/6 160 11,0 157 + 7,8 6/6 BU-2231A 640 17,5 250 +7,2 6/6 160 12,5 179 +28,8 6/6 40 11,0 157 +6,0 6/6 10 9,0 129 +5,5 6/6
Bu-2231 B 640 13,0 186 +10,7 6/6 160 13,0 186 +36,5 6/6 40 11,0 157 + 8,3 6/6 10 8,0 114 +36,5 6/6 kontrol- 7,0 --- +38,4 10/10.
saltvand
C
Tumor: 10 ascitiske celler implanteret ip i SD-hunrotter behandling: én gang dagligt ip i 8 dage begyndende på dag 1 evaluering: MST^middeloverlevelsestid i dage effekt: %T/C = (MST behandlede/MST kontrol) x 100 criterier: T/C > 125 betragtedes som signifikant tumor- inhibering (forlængelse af værtsoverlevelsestid) overlevende: dag 5 toksicitetevaluering, vægtændring registreret.
U1372 29 TABEL Illa
Effekt af Bu-2231 fraktioner på Lewis Lung carcinoma. Eksperiment nr. 55.
effekt gennemsnitdosis MST MST lig vægtæn- overlevende
Materiale yg/kg/dag dage %T/C dring/g dag 5
Bleomycin 8 10,5 48 - 1,1 6/6 4 12,5 57 - 2,3 6/6 2 24,0 109 - 1,5 6/6 1 24,0 109 - 1,3 6/6
Bu-2231 A 8 6,0 27 - 3,3 6/6 4 7,0 32 - 3,1 6/6 2 25,0 114 - 1,3 6/6 1 27,0 123 - 2,3 6/6 0,5 26,7 120 - 1,1 6/6
Bu-2231 B 8 6,0 27 - 1,8 5/6 4 10,5 48 - 1,4 6/6 2 30,0 136 - 1,8 6/6 1 29,5 134 - 0,8 6/6 0,5 22,5 102 - 1,1 6/6 kontrol- --- 22,0 --- - 0,8 10/10 saltevand
Tumor: 2 x 10^ celler fra findelt tumorvævssuspension implanteret ip i C57 Bl/6 hanmus behandling: én gang dagligt ip i 9 dage begyndende på dag 1 evaluering: MST=middeloverlevelsestid i dage effekt: %T/C = (MST behandlede/MST kontrol) x 100 criterier: T/C > 125 betragtedes som signifikant tumor- inhibering (forlængelse af værtsoverlevelsestid) overlevende: dag 5 toksicitetevaluering, vægtændring registreret.
De i tabellerne viste resultater fortolkes som følger:
Tabel la: Testforsøg udførtes på Walker 256 ascitisk tumor med Bu-2231 kompleks og med bleomycin kompleks som kontrol. Dosen 30 141372 på 2560 yg/kg er aktiv men toksisk, siden T/C var mindre end for den næste lavere dosis, og ingen langtids-overlevende (44. dag) observeredes. Den minimale effektive dosis (MED) af bleomycin var 640 yg/kg, hvorimod MED af Bu-2231 var 160 yg/kg, hvad der antyder, at Bu-2231 er omkring 4 gange så kraftigt som bleomycin.
Tabel Ila: Bu-2231 A og B i form af deres kobberfrie formiatsalte afprøvedes på Walker 256 ascitisk tumor. Den sandsynlige minimale effektive dosis (MED) er 160 yg/kg i dette eksperiment. Sammenlignelig overlevelsesforøgelse (T/C = 157) sås med begge bestanddele ved 40 yg/kg, hvad der således antyder 4 gange større styrke for Bu-2231 A og B. A-bestand-delen kan være lidt mere kraftig end B-bestanddelen (aktivitet ved 10 yg/kg), men forskellen kan ikke betragtes som signifikant.
Tabel Ilia; Bleomycin viser lejlighedsvis skarpt afgrænsede effekter i testforsøg mod Lewis Lung carcinoma. I dette eksperiment var Bu-2231 A aktivt lige under et niveau på 1 mg/kg (T/C = 123), medens Bu-2231 B var aktivt ved doser på 2 og 1 mg/kg.
De følgende eksempler tjener til yderligere belysning af den foreliggende opfindelse.
tM-Sephadex C-25" er et varemærke for et tørt opløseligt pulver (fremstillet af Pharmacia Fine Chemicals Inc.), hvilket ar sammensat af mikroskopiske kom, som er syntetiske organiske forbindelser, der indeholder carboxymethyl-funktionelle grupper, og som udvindes fra polysaccharid-dextran. "Amberlyst 15" er et varemærke for en ionbytter-harpiks, som fremstilles af Rohm and Haas Company. "Amberlite XAD-2" er et varemærke for en adsorberende harpiks, som består af styrendivinylbenzen-copolymer og fremstilles af Rohm and Haas Company.
Eksempel 1.
Fermentering af kompleks.
En veludviklet agar~skråglaskultur af den Bu-2231 produce- 31 141372 rende organisme E465-94 anvendtes til inokulering af flydende vegetativt medium indeholdende de følgende bestanddele: 1,5% glucose, 0,5% polypepton, 0,2% gærekstrakt, 0,05% i^HPO^ og 0,05% MgS04.7H20. Podekulturen inkuberedes ved 28 °C i 2 dage på en rotationsryster (250 omdr./minut), og 2 ml af væksten overførtes til 100 ml af fermenteringsmediet i en 500 ml Erlen-meyer kolbe, hvilket medium havde en sammensætning af 2% glycerol, 1% pharmamedier, 1% majsstøbevand, 0,3% 0,003% ZnS04.7H20 og 0,4% CaCO^. Antibioticumproduktion nåede et maksimum efter 3 til 5 dages omrystning ved 28 °C.
Eksempel 2.
Ekstraktion og oprensning.
Det i overensstemmelse med Eksempel 1 fremstillede udvindingssubstrat (ca. 10 1, 50 yg/ml) filtreredes, og bioaktiviteten i filtratet adsorberedes ved pH-værdi 7 af "Amberlite •j· IRC-50" (NH^ form, 900 ml). Harpiksen udvaskedes med vand, (5 1) og derefter med 0,25N NH^OH opløsning (4 1) til eluering af nebramycinfaktorer. Bu-2231 kompleks elueredes derefter fra harpiksen med HCl-opløsning (11x3) ved pH-værdi 2. Bu-2231 fraktionerne kombineredes, adsorberedes af carbon (30 g) og elueredes med vandig butanol (11x3) ved pH-værdi 2. Butanol-laget fraskiltes, og det vandige lag koncentreredes i vakuum til tørhed. Det således opnåede rå faststof (1,2 g) oprensedes ved "Amberlite XAD-2"-chromatografi og derefter ved "Sephadex LH-20"-chromatografi til dannelse af et svagt grønligt pulver af Bu-2231 kompleks (150 mg, kobberkompleksform).
Eksempel 3.
Adskillelse af bestanddele.
Til adskillelsen i hver komponent opløstes Bu-2231 kompleks (140 mg) i 3 ml 0,7% cuprichloridopløsning og anbragtes på en "CM-sephadex C-25usøjle (85 ml), som elueredes gradvist med vandig ammoniumformiatopløsning på 1 til 7%. Bu-2231 B elueredes med 3% ammoniumformiatopløsning og Bu-2231A ved 5% koncentration.
32 141372
Hver fraktion af saltedes ved’Bephadex LH-20l,-chromatografi, koncentreredes i vakuum og lyofiliseredes til dannelse af de respektive formiatsalte af Bu-2231 A (84 mg) og B (21 mg) (kobber-komplekse fcrmer). De kobberfrie formiatsaltpræparater opnåedes ved behandling af de kobberkomplekse former med H^S i methanol i overensstemmelse med den almene fremgangsmåde i Eksempel 1 i USA Patentskrift nr. 3.646.197.
Eksempel 4.
Bu-2231 A, hydrochloridsalt.
En opløsning af kobberfrit Bu-2231 A formiat (750 mg) i 100 ml methanol indstilledes til pH-værdi 2,0 ved en tilsætning af 2N methanolsk saltsyreopløsning. Opløsningen sattes derpå dråbevis til 300 ml acetone under omrøring. Det dannede bundfald fraskiltes ved filtrering og tørredes i vakuum til dannelse af det rå Bu-2231 A hydrochloridsalt som et hvidt pulver (673 mg). En portion af dette pulver (140 mg) overførtes til en søjle indeholdende 70 ml 'Bephadex LH-20"(varemærke for en modificeret alkyleret dextran-gel, som markedsføres af Pharmacia Fine Chemicals Inc.), som er pakket i 98% methanol. Ejøjlen udvikledes med 98% methanol, og de bioaktive fraktionen samledes derpå, koncentreredes i vakuum og lyofiliseredes til dannelse af det kobberfrie hydrochlorid af Bu-2231 A (105 mg).
Claims (5)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af et antibiotisk kompleks, kaldet Bu-2231, eller dets bestanddele Bu-2231 A og Bu-2231 B, i kobberkomplekse former eller kobberfrie former og/eller syreadditionssalte deraf, kendetegnet ved, at man dyrker en stamme af Streptoalloteichus hindustanus i et vandigt næringsmedium, som indeholder assimilerbare nitrogen- og carbonkilder, under submerse aerobe betingelser, og udvinder det antibiotiske kompleks fra dyrkningsmediet, og om ønsket opdeler det i sine bestanddele og/eller omdanner den kobberkomplekse form til den kobberfrie form og/eller til syreadditionssalte.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1 kendetegne t ved, at stammen er Streptoalloteichus hindustanus ATCC 31158.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2 kendete gnet ved, at det antibiotiske kompleks udvindes fra dyrkningsmediet ved fraskillelse" af myceliet, adsorbering af komplekset på en cationbytter-harpiks, fraskillelse af det samtidigt dannede aminoglycosidkompleks fra Bu-2231-glycopeptidkomplekset ved eluering af aminoglycosidkomplekset med en fortyndet base og eluering af Bu-2231 komplekset fra adsorptionsmidlet med en mineralsyreopløsning.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1-3 kendetegne t ved, at man opdeler Bu-2231 komplekset i de enkelte bestanddele Bu-2231A og B i de kobberkomplekse former ved gradient-eluerings-chromatografi og eventuelt behandler de kobberkomplekse former med hydrogensulfid i methanol til dannelse af de tilsvarende kobberfrie former.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 4 kendetegnet ved, at en cuprichloridopløsning af Bu-2231 komplekset chromatogra-
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK367179A DK145021C (da) | 1975-08-28 | 1979-08-31 | Antibiotikum af bleomycingruppen til anvendelse ved plantebeskyttelse |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US60849475 | 1975-08-28 | ||
| US05/608,494 US4051237A (en) | 1975-08-28 | 1975-08-28 | Glycopeptide antibiotics bu-2231 a and b and process for producing same |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK384076A DK384076A (da) | 1977-03-01 |
| DK141372B true DK141372B (da) | 1980-03-03 |
| DK141372C DK141372C (da) | 1980-09-01 |
Family
ID=24436734
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK384076AA DK141372B (da) | 1975-08-28 | 1976-08-25 | Fremgangsmåde til fremstilling af et antibiotisk kompleks, kaldet Bu2231, eller bestanddele og syreadditionssalte deraf. |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4051237A (da) |
| JP (1) | JPS5231001A (da) |
| BE (1) | BE845513A (da) |
| CA (1) | CA1073386A (da) |
| DE (1) | DE2638766C2 (da) |
| DK (1) | DK141372B (da) |
| FR (1) | FR2321897A1 (da) |
| GB (1) | GB1539740A (da) |
| HU (1) | HU175049B (da) |
| IL (1) | IL50357A (da) |
| NL (1) | NL167199C (da) |
| SE (1) | SE432781B (da) |
| YU (1) | YU39084B (da) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1540466A (en) * | 1975-10-29 | 1979-02-14 | Meiji Seika Kaisha | Antibiotic polypeptides sf-1771 and sf-1881-b and production thereof |
| JPS55102596A (en) * | 1978-12-27 | 1980-08-05 | Meiji Seika Kaisha Ltd | Novel antibiotic substance, bn-183b substance, and its preparation |
| US4314028A (en) * | 1979-07-13 | 1982-02-02 | Bristol-Myers Company | Fermentation process for producing tallysomycin compounds |
| US4246400A (en) * | 1979-07-13 | 1981-01-20 | Bristol-Myers Company | Tallysomycin compounds |
| AU634250B2 (en) * | 1989-07-10 | 1993-02-18 | Bristol-Myers Squibb Company | Antiviral antibiotic bu-3889v |
| US5952466A (en) * | 1997-11-12 | 1999-09-14 | Eli Lilly And Company | Reductive alkylation of glycopeptide antibiotics |
| ID18900A (id) * | 1996-11-21 | 1998-05-20 | Lilly Co Eli | Alkilasi menurun dari gliko peptida anti biotik |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1038242A (en) * | 1963-03-05 | 1966-08-10 | Zaidan Hojin Biseibutsu | Bleomycin and processes for preparation thereof |
-
1975
- 1975-08-28 US US05/608,494 patent/US4051237A/en not_active Expired - Lifetime
-
1976
- 1976-08-10 CA CA258,766A patent/CA1073386A/en not_active Expired
- 1976-08-25 DK DK384076AA patent/DK141372B/da not_active IP Right Cessation
- 1976-08-25 IL IL50357A patent/IL50357A/xx unknown
- 1976-08-25 SE SE7609425A patent/SE432781B/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-08-25 BE BE170073A patent/BE845513A/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-08-25 YU YU02078/76A patent/YU39084B/xx unknown
- 1976-08-25 NL NL7609449.A patent/NL167199C/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-08-27 FR FR7625923A patent/FR2321897A1/fr active Granted
- 1976-08-27 GB GB35740/76A patent/GB1539740A/en not_active Expired
- 1976-08-27 HU HU76BI549A patent/HU175049B/hu not_active IP Right Cessation
- 1976-08-27 DE DE2638766A patent/DE2638766C2/de not_active Expired
- 1976-08-27 JP JP51101723A patent/JPS5231001A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5653318B2 (da) | 1981-12-17 |
| JPS5231001A (en) | 1977-03-09 |
| IL50357A (en) | 1979-07-25 |
| YU39084B (en) | 1984-04-30 |
| NL167199C (nl) | 1981-11-16 |
| IL50357A0 (en) | 1976-10-31 |
| DE2638766A1 (de) | 1977-07-14 |
| BE845513A (fr) | 1977-02-25 |
| SE7609425L (sv) | 1977-03-01 |
| GB1539740A (en) | 1979-01-31 |
| DE2638766C2 (de) | 1985-07-04 |
| SE432781B (sv) | 1984-04-16 |
| HU175049B (hu) | 1980-05-28 |
| FR2321897B1 (da) | 1978-11-17 |
| YU207876A (en) | 1982-06-30 |
| DK141372C (da) | 1980-09-01 |
| CA1073386A (en) | 1980-03-11 |
| DK384076A (da) | 1977-03-01 |
| FR2321897A1 (fr) | 1977-03-25 |
| NL7609449A (en) | 1977-03-02 |
| US4051237A (en) | 1977-09-27 |
| NL167199B (nl) | 1981-06-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kawaguchi et al. | TALLYSOMYCIN, A NEW ANTITUMOR ANTIBIOTIC COMPLEX RELATED TO BLEOMYCIN I. PRODUCTION, ISOLATION AND PROPERTIES | |
| FI98739C (fi) | Menetelmät benanomisiinien A ja B sekä deksylosyylibenanomisiinin B valmistamiseksi | |
| CA1339348C (en) | Novel glycopeptide antibiotics | |
| DK141372B (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af et antibiotisk kompleks, kaldet Bu2231, eller bestanddele og syreadditionssalte deraf. | |
| FI86892B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av antitumoer ll-e33288-antibioter och mikroorganismer, som producerar dessa. | |
| US3832394A (en) | Methanephosphinylethane substituted amid trimer of alanine | |
| DK146282B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af anthracyclin-glycosid-antibiotika, kaldet rhodirubin a og b eller salte eller deoxyribonukleinsyrekomplekser deraf | |
| US4296106A (en) | Istamycins and production thereof | |
| IE45070B1 (en) | Anthracycline glycoside antibiotics | |
| JPS6040840B2 (ja) | 抗生物質類の微生物学的製法 | |
| JPS6261037B2 (da) | ||
| US4452782A (en) | Pentadecapeptide | |
| DK145021B (da) | Antibiotikum af bleomycingruppen til anvendelse af plantebeskyttelse | |
| NO132240B (da) | ||
| US4169140A (en) | Antibiotics SF-1771 substance and SF-1771-B substance as well as the production of these substances | |
| JPS6030320B2 (ja) | 新規抗生物質およびその製造法 | |
| CA1215337A (en) | Antitumor antibiotic | |
| US5451581A (en) | Antibiotic LL-14E605β and O-methyl-LL-14E605β | |
| FI67876C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av antimikrobiellt och antitumoert verkande derivat av tallysomycin a och tallysomycin b | |
| NL8401572A (nl) | Antibiotica. | |
| NO146673B (no) | Aminoglukosid for anvendelse som utgangsmateriale ved fremstilling av aminoglukosidantibiotika | |
| JPH0341477B2 (da) | ||
| Fukuchi et al. | Rotihibins, novel plant growth regulators from Streptomyces graminofadens | |
| GB2028806A (en) | Streptomycin antibiotics | |
| CN1050846C (zh) | 一种抗肿瘤抗生素云南霉素及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |