DE69837331T2

DE69837331T2 - Trizyklische keto amid derivative als farnesyl protein transferase inhibitoren

Info

Publication number: DE69837331T2
Application number: DE69837331T
Authority: DE
Inventors: Ronald J. Maplewood DOLL; Tarik Philadelphia LALWANI; Carmen Roselle Park ALVAREZ
Original assignee: Schering Corp
Current assignee: Merck Sharp and Dohme Corp
Priority date: 1997-06-17
Filing date: 1998-06-15
Publication date: 2007-11-15
Anticipated expiration: 2018-06-16
Also published as: JP3269636B2; EP0989978A1; US5925639A; JP2000514841A; CN1267288A; CA2293672A1; EP0989978B1; WO1998057947A1; CA2293672C; ES2284206T3; AU8058598A; DE69837331D1; ATE356816T1

Description

Hintergrund
Die internationale Veröffentlichung Nr. WO 95/10516, veröffentlicht am 20. April 1995, offenbart Verbindungen mit der Formel:
wobei R eine substituierte Carbonylgruppe sein kann. Es wird gesagt, dass die Verbindungen zur Inhibierung von Farnesylproteintransferase brauchbar sind.
Zusammenfassung der Erfindung
Erfindungsgemäße Verbindungen werden durch Formel I wiedergegeben:
oder ein N-Oxid davon, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat davon, worin
R und R² unabhängig ausgewählt sind aus Halogen;
R¹ und R³ unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus H und Halogen, mit der Maßgabe, dass mindestens eines von R¹ und R³ H ist;
X N, CH oder C ist, wenn die Doppelbindung an der C-11-Position vorhanden ist;
R⁴ =NOH, =N-NHR⁶, =N-NHSO₂R⁶, =N-NHCOR⁶, =N-NHCONH₂, =N-NHCOCONH₂, (H, OSO₂R⁶) oder -E- (CH₂)_n1-G- ist, wobei n1 1 bis 5 ist und E und G unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus O, S und N, und an den gleichen Kohlenstoff gebunden sind, um eine cyclische Struktur zu bilden;
R⁵ H, C₁- bis C₆-Alkyl oder Aryl ist,
R⁶ C₁- bis C₆-Alkyl oder Aryl ist, und
n 0, 1, 2, 3, 4 oder 5 ist.
In den erfindungsgemäßen Verbindungen ist R vorzugsweise Br, R² ist Halogen und R¹ ist Halogen, oder R ist Br, R² ist Halogen und R³ ist Halogen, oder R ist Br, R² ist Halogen und R¹ und R³ sind jeweils H. R² ist vorzugsweise Br oder Cl. Wenn R¹ oder R³ Halogen ist, ist es vorzugsweise Br oder Cl. X ist vorzugsweise CH. R⁵ ist vorzugsweise C₁- bis C₆-Alkyl.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen: (i) inhibieren Farnesylproteintransferase, jedoch nicht Geranylgeranylproteintransferase I, in potenter Weise in vitro (ii) blockieren die phänotypische Veränderung, die durch eine Form von transformierender Ras induziert wird, die ein Farnesylakzeptor ist, jedoch nicht durch eine Form von transformierender Ras, die gentechnisch verändert worden ist, so dass sie ein Geranylgeranylakzeptor ist; (iii) blockieren die intrazelluläre Verarbeitung von Ras, die ein Farnesylakzeptor ist, jedoch nicht von Ras, die gentechnisch verändert worden ist, so dass sie ein Geranylgeranylakzeptor ist; und (iv) blockieren abnormales Zellwachstum in Kultur, das durch transformierende Ras hervor gerufen worden ist. Die erfindungsgemäßen Verbindungen inhibieren Farnesylproteintransferase und die Farnesylierung des Onkogenproteins Ras. Diese Erfindung liefert ferner ein Verfahren zum Inhibieren von ras-Farnesylproteintransferase bei Säugern, insbesondere Menschen, durch Verabreichen einer wirksamen Menge der oben beschriebenen tricyclischen Verbindungen. Die Verabreichung der erfindungsgemäßen Verbindungen an Patienten, um Farnesylproteintransferase zu inhibieren, ist zur Behandlung der nachfolgend beschriebenen Krebsarten nützlich.
Diese Erfindung liefert ein Verfahren zum Inhibieren oder Behandeln des abnormalen Wachstums von Zellen einschließlich transformierter Zellen durch Verabreichen einer wirksamen Menge einer erfindungsgemäßen Verbindung. Abnormales Wachstum von Zellen bezieht sich auf Zellwachstum, das von normalen Regulierungsmechanismen unabhängig ist (z. B. Verlust der Kontaktinhibierung). Hierzu gehört das abnormale Wachstum von: (1) Tumorzellen (Tumoren), die ein aktiviertes Ras-Onkogen exprimieren; (2) Tumorzellen, bei denen das Ras-Protein infolge von onkogener Mutation in einem anderen Gen aktiviert worden ist, und (c) gutartigen und bösartigen Zellen anderer proliferierender Erkrankungen, in denen irrtümliche Ras-Aktivierung erfolgt.
Diese Erfindung liefert auch ein Verfahren zur Inhibierung oder Behandlung von Tumorwachstum, indem einem Säuger (z. B. einem Menschen), der dieser Behandlung bedarf, eine wirksame Menge der hier beschriebenen tricyclischen Verbindungen verabreicht wird. Diese Erfindung liefert insbesondere ein Verfahren zum Inhibieren oder Behandeln des Wachstums von Tumoren, die ein aktiviertes Ras-Onkogen exprimieren, durch Verabreichen einer wirksamen Menge der oben beschriebenen Verbindungen. Zu Beispielen für Tumoren, die inhibiert oder behandelt werden können, gehören Brustkrebs, Prostatakrebs, Lungenkrebs (z. B. Lungenadenokarzinom), Pankreaskrebse (z. B. Pankreaskarzinom, wie beispielsweise exokrines Pankreaskarzinom), Kolonkrebse (z. B. kolonrektale Karzinome wie beispielsweise Kolonadenokarzinom und Kolonadenom), myeloide Leukämien (bei spielsweise akute myelogene Leukämie (AML)), Schilddrüsenfollikelkrebs, myelodysplastisches Syndrom (MDS), Blasenkarzinom und Epidermalkarzinom, jedoch nicht darauf begrenzt.
Es wird angenommen, dass diese Erfindung auch ein Verfahren zum Inhibieren oder Behandeln sowohl gutartiger als auch bösartiger proliferierender Erkrankungen liefert, in denen Ras-Proteine infolge von onkogener Mutation in anderen Genen irrtümlich aktiviert worden sind, d. h. das Ras-Gen selbst wird nicht durch Mutation zu einer onkogenen Form aktiviert, wobei die Inhibierung oder Behandlung durch die Verabreichung einer wirksamen Menge der hier beschriebenen tricyclischen Verbindungen an einen Säuger (z. B. einen Menschen) erfolgt, der dieser. Behandlung bedarf. Die gutartige proliferierende Störung Neurofibromatose oder Tumoren, in denen Ras infolge von Mutation oder Überexprimierung von Tyrosinkinaseonkogenen (z. B. neu, src, abl, lck, and fyn) aktiviert worden ist, kann beispielsweise durch die hier beschriebenen tricyclischen Verbindungen inhibiert oder behandelt werden.
Die erfindungsgemäß brauchbaren tricyclischen Verbindungen inhibieren oder behandeln das abnormale Wachstum von Zellen. Ohne sich auf eine Theorie festlegen zu wollen, wird angenommen, dass diese Verbindungen durch die Inhibierung der G-Proteinfunktion wie ras p21 wirken können, indem die G-Protein-Isoprenylierung blockiert wird, wodurch sie zur Behandlung von proliferierender Erkrankung wie Tumorwachstum und Krebs brauchbar sind. Ohne sich auf eine Theorie festlegen zu wollen, wird angenommen, dass diese Verbindungen ras-Farnesylproteintransferase inhibieren und somit antiproliferierende Aktivität gegen ras-transformierte Zellen zeigen.
Detaillierte Beschreibung der Erfindung
Die folgenden Begriffe werden hier wie nachfolgend definiert verwendet, wenn nicht anders angegeben:
MH⁺ steht für das Molekülion plus Wasserstoff des Moleküls in dem Massenspektrum:
Bu steht für Butyl; Et steht für Ethyl; Me steht für Methyl; Ph steht für Phenyl;
Alkyl (einschließlich der Alkylanteile von Alkoxy, Alkylamino und Dialkylamino) steht für geradkettige und verzweigte Kohlenstoffketten und enthält ein bis zwanzig Kohlenstoffatome, vorzugsweise ein bis sechs Kohlenstoffatome;
Aryl (einschließlich des Arylanteils von Aryloxy und Aralkyl) steht für eine carbocyclische Gruppe mit mindestens einem aromatischen Ring (Aryl ist z. B. ein Phenylring), welche 6 bis 15 Kohlenstoffatome enthält, wobei alle verfügbaren substituierbaren Kohlenstoffatome der carbocyclischen Gruppe als mögliche Bindungspunkte vorgesehen sind, und
Halogen steht für Fluor, Chlor, Brom und Iod.
Die folgenden Lösungsmittel und Reagenzien können hier durch die angegebenen Abkürzungen bezeichnet werden: Tetrahydrofuran (THF); Ethanol (EtOH); Methanol (MeOH); Essigsäure (HOAc oder AcOH); Ethylacetat (EtOAc); N,N-Dimethylformamid (DMF); Trifluoressigsäure (TFA); Trifluoressigsäureanhydrid (TFAA); 1-Hydroxybenzotriazol (HOBT); m-Chlorperbenzoesäure (MCPBA); Triethylamin (Et₃N); Diethylether (Et₂O); Ethylchlorformiat (ClCO₂Et); 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimidhydrochlorid (DEC).
Repräsentative Strukturen der Formel I in Bezug auf X und die optionale Doppelbindung sind wie folgt:
In das Ringsystem gezeichnete Linien zeigen, dass die angegebene Bindung an irgendeines der substituierbaren Ringkohlenstoffatome gebunden sein kann.
Verbindungen der Formel I können in dem Pyridinylring mit der Bezeichnung Ring I in dem tricyclischen Anteil der Struktur ein N-Oxid bilden, oder an dem R⁴ und/oder R⁵, wenn die Substituenten ein stickstoffhaltiges Heteroaryl enthalten, und können auch Di- oder Trioxide bilden, wobei der Pyridinylring in dem tricyclischen Anteil und in den seitenständigen Ringen N-Oxide sind.
Bestimmte erfindungsgemäße Verbindungen können in unterschiedlichen isomeren Formen vorliegen (z. B. Enantiomere, Diastereoisomere und Atropisomeren). Die Erfindung beinhaltet alle derartigen Isomere sowohl in reiner Form als auch gemischt einschließlich racemischer Mischungen. Enolformen sind auch eingeschlossen.
Bestimmte tricyclische Verbindungen sind auch von saurer Beschaffenheit, z. B. jene Verbindungen, die eine Carboxylgruppe oder phenolische Hydroxylgruppe besitzen. Diese Verbindungen können pharmazeutisch annehmbare Salze bilden. Beispiele für solche Salze können Natrium-, Kalium-, Calcium-, Aluminium-, Gold- und Silbersalze einschließen. Auch Salze mit pharmazeutisch annehmbaren Aminen kommen in Frage, wie Ammoniak, Alkylaminen; Hydroxyalkylaminen, N-Methylglucamin und dergleichen.
Bestimmte basische tricyclische Verbindungen bilden auch pharmazeutisch annehmbare Salze, z. B. Säureadditionssalze. Die Pyridostickstoffatome können beispielsweise Salze mit starker Säure bilden, während Verbindungen mit basischen Substituenten wie Aminogruppen auch Salze mit schwächeren Säuren bilden. Beispiele für geeignete Säuren für die Salzbildung sind Salz-, Schwefel-, Phosphor-, Essig-, Zitronen-, Oxal-, Malon-, Salicyl-, Äpfel-, Fumar-, Bernstein-, Ascorbin-, Malein-, Methansulfonsäure und andere Mineral- und Carbonsäuren, die Fachleuten wohl bekannt sind. Die Salze werden herge stellt, indem die freie Basenform mit einer ausreichenden Menge der gewünschten Säure kontaktiert wird, um in konventioneller Weise ein Salz zu produzieren. Die freien Basenformen können durch Behandlung des Salzes mit einer geeigneten verdünnten wässrigen Basenlösung regeneriert werden, wie mit verdünnter wässriger NaOH, Kaliumcarbonat, Ammoniak oder Natriumbicarbonat. Die freien Basenformen unterscheiden sich in bestimmten physikalischen Eigenschaften etwas von ihren jeweiligen Salzformen, wie Löslichkeit in polaren Lösungsmitteln, die Säure- und Basensalze sind ansonsten für erfindungsgemäße Zwecke jedoch zu ihren jeweiligen freien Basenformen äquivalent.
Alle derartigen Säure- und Basesalze sollen pharmazeutisch annehmbare Salze innerhalb des Umfangs der Erfindung sein, und alle. Säure- oder Basensalze werden für erfindungsgemäße Zwecke als zu den freien Formen der entsprechenden Verbindungen äquivalent angesehen.
Erfindungsgemäße Verbindungen können nach den in den folgenden Beispielen beschriebenen Verfahren und nach den in WO 95/10516 beschriebenen Verfahren hergestellt werden, siehe beispielsweise Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel 400,00.
Erfindungsgemäße Verbindungen können durch Umsetzung einer Verbindung mit der Formel II
wobei alle anderen Substituenten wie für Formel I definiert sind, mit einer Ketosäure, Ketalsäure, Oximsäure oder Hydrazonsäure der Formel III hergestellt werden:
Die Reaktion wird unter Standard-Amidkopplungsbedingungen durchgeführt, die Reaktion kann beispielsweise bei Raumtemperatur in einem inerten Lösungsmittel, wie DM F, in Gegenwart eines Kondensationsmittels, wie 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimidhydrochlorid, einer Base wie N-Methylmorpholin und eines Aktivierungsmittels wie 1-Hydroxybenzotriazol durchgeführt werden.
Alternativ können Acyhalogenide oder Anhydride mit der Formel IV
wobei Z Halogen oder
ist, mit Verbindungen der Formel II in einem Lösungsmittel wie Pyridin umgesetzt werden kann.
Verbindungen der Formel I, die ein Pyridyl-N-Oxid in Ring I des tricyclischen Anteils enthalten, können nach im Stand der Technik wohl bekannten Verfahren hergestellt werden. Die Verbindung der Formel II kann beispielsweise mit mCPBA in einem geeigneten organischen Lösungsmittel, z. B. CH₂Cl₂ (üblicherweise wasserfrei) bei einer geeigneten Temperatur umgesetzt werden, um ein N-Oxid der Formel IIa zu erhalten.
Die Lösung von Formel II in organischem Lösungsmittel wird im Allgemeinen auf etwa 0°C abgekühlt, bevor das mCPBA zugefügt wird. Die Reaktion wird dann während des Reaktionszeitraums auf Raumtemperatur erwärmen gelassen. Das gewünschte Produkt kann durch Standardtrennmittel gewonnen werden, beispielsweise kann die Reaktionsmischung mit einer wässrigen Lösung einer geeigneten Base gewaschen werden, z. B. gesättigtem NaHCO₃ oder NaOH (z. B. 1 N NaOH) und danach über wasserfreiem MgSO₄ getrocknet werden. Die das Produkt enthaltende Lösung kann im Vakuum konzentriert werden, und das Produkt kann mit Standardmitteln gereinigt werden, z. B. durch Chromatographie unter Verwendung von Silikagel (z. B. Flash-Säulenchromatographie).
Wenn eine Verbindung der Formel I, die Pyridylgruppen in Ring I und in den R⁵ und/oder R⁵-Substituenten umfasst, mit mCPBA wie oben beschrieben behandelt wird, werden Di- oder Tri-N-Oxide hergestellt.
Verbindungen der Formel II werden nach im Stand der Technik bekannten Verfahren hergestellt, beispielsweise nach in WO 95/10516, in US 5,151,423 offenbarten Verfahren sowie jenen, die nachfolgend beschrieben sind. Verbindungen der Formel II, worin die C-3-Position des Pyridinrings in der tricyclischen Struktur durch Brom substituiert ist, können auch nach einem Verfahren hergestellt werden, das die folgenden Schritte aufweist:

(a) Umsetzen eines Amids mit der Formel
worin R^11a Br ist, R^5a Wasserstoff ist und R^6a C₁- bis C₆-Alkyl, Aryl oder Heteroaryl ist; R^5a C₁- bis C₆-Alkyl, Aryl oder Heteroaryl ist und R^6a Wasserstoff ist; R^5a und R^6a unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus C₁- bis C₆-Alkyl und Aryl; oder R^5a und R^6a zusammen mit dem Stickstoff, an den sie gebunden sind, einen Ring bilden, der 4 bis 6 Kohlenstof fatome enthält, oder 3 bis 5. Kohlenstoffatome und eine Heteroeinheit ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus -O- und -NR^9a-enthält, wobei R^9a H, C₁- bis C₆-Alkyl oder Phenyl ist; mit einer Verbindung mit der Formel
worin R^1a, R^2a, R^3a und R^9a unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff und Halogen und R^7a Cl oder Br ist, in Gegenwart einer starken Base, um eine Verbindung der Formel
zu erhalten,
(b) Umsetzen einer Verbindung der Stufe (a) mit (i) POCl₃, um eine Cyanoverbindung der Formel
zu erhalten; oder (ii) DIBALH, um einen Aldehyd der Formel
erhalten,
(c) Umsetzen der Cyanoverbindung oder des Aldehyds mit einem Piperidinderivat mit der Formel
worin L eine Abgangsgruppe ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Cl und Br ist, um einen Aldehyd beziehungsweise einen Alkohol mit der folgenden Formel zu erhalten:
(d)(i) Cyclisieren des Aldehyds mit CF₃SO₃H, um eine Verbindung der Formel II zu erhalten, wobei die punktierte Linie für eine Doppelbindung steht; oder
(d)(ii) Cyclisieren des Alkohols mit Polyphosphorsäure, um eine Verbindung der Formel II zu erhalten, worin die punktierte Linie für eine Einfachbindung steht.

Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel II, die in WO 95/10516, US 5,151,423 offenbart und nachfolgend beschrieben sind, verwenden ein tricyclisches Ketonintermediat. Diese Intermediate mit der Formel:
worin R^11b, R^1a, R^2a, R^3a und R^4a unabhängig aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff und Halogen ausgewählt sind, können nach dem folgenden Verfahren hergestellt werden, welches umfasst:

(a) Umsetzen einer Verbindung mit der Formel
(i) mit einem Amin mit der Formel NHR^5aR^6a, worin R^5a und R^6a wie in dem obigen Verfahren definiert sind, in Gegenwart eines Palladiumkatalysators und Kohlenmonoxid, um ein Amid mit der Formel:
zu erhalten; oder
(ii) mit einem Alkohol mit der Formel R^10aOH, worin R^10a niederes C₁- bis C₆-Alkyl oder C₃- bis C₆-Cycloalkyl ist, in Gegenwart eines Palladiumkatalysators und Kohlenmonoxid, um den Ester mit der Formel zu erhalten;
gefolgt von der Umsetzung des Esters mit einem Amin mit der Formel NHR^5aR^6a, um das Amid zu erhalten;
(b) Umsetzen des Amids mit einer iodsubstituierten Benzylverbindung mit der Formel
worin R^1a, R^2a, R^3a, R^4a und R^7a wie oben definiert sind, in Gegenwart einer starken Base, um eine Verbindung mit der Formel
zu erhalten;
(c) Cyclisieren einer Verbindung der Stufe (b) mit einem Reagenz der Formel R^8aMgL, worin R^8a C₁- bis C₈-Alkyl, Aryl oder. Heteroaryl ist und L Br oder Cl ist, mit der Maßgabe, dass vor der Cyclisierung Verbindungen, worin R^5a oder R^6a Wasserstoff ist, mit einer geeigneten N-Schutzgruppe umgesetzt werden.

(+)-Isomere von Verbindungen der Formel II, worin X CH ist, können mit hoher Enantioselektivität unter Verwendung eines Verfahrens hergestellt werden, das enzymkatalysierte Umesterung-beinhaltet. Vorzugsweise wird eine racemische Verbindung der Formel II, worin X C ist; die Doppelbindung vorhanden ist und R³ nicht H ist, mit einem Enzym wie Toyoba LIP-300 und einem Acylierungsmittel wie Trifluorethylisobutyrat umgesetzt; das resultierende (+)-Amid wird dann hydrolysiert, beispielsweise indem es mit einer Säure wie H₂SO₄ unter Rückfluss gehalten wird, um das entsprechende optisch angereicherte (+)-Isomer zu erhalten, wobei X CH ist und R³ nicht H ist. Alternativ wird eine racemische Verbindung der Formel II, worin X C ist, die Doppelbindung vorhanden ist und R³ nicht H ist, zuerst zu der entsprechenden racemischen Verbindung der Formel II reduziert, worin X CH ist, und anschließend mit dem Enzym (Toyobo LIP-300) und Acylierungsmittel wie oben beschrieben behandelt, um das (+)-Amid zu erhalten, das hydrolysiert wird, um das optisch angereicherte (+)-Isomer zu erhalten.
Verbindungen der Formel III sind entweder im Handel erhältlich, in der Technik bekannt, oder können nach im Stand der Technik bekannten Verfahren hergestellt werden. In vielen Füllen sind die entsprechenden Ketoester, Ketalester, Oximester oder Hydrazonester, die zu den entsprechenden Säuren hydrolysiert werden können, entweder im Handel erhältlich, in der Technik bekannt, oder können nach in der Technik bekannten Verfahren hergestellt werden. Die Keto-, Ketal-, Oxim- und Hy drazongruppen in den Verbindungen der Formel III oder in dem Produkt der Formel I können nach im Stand der Technik bekannten Verfahren ineinander umgewandelt werden.
Beispiele für erfindungsgemäß brauchbare Verbindungen werden durch die folgenden präparativen Beispiele veranschaulicht, die nicht als den Umfang der Offenbarung einschränkend angesehen werden sollen. Alternative mechanistische Wege und analoge Strukturen innerhalb des Umfangs der Erfindung ergeben sich Fachleuten von selbst.
PRÄPARATIVES BEISPIEL 1
Stufe A:
25,86 g (55,9 mmol) 4-(8-Chlor-3-Brom-S-dihydro-11H-benzo[5,6]-cyclohepta[1,2-b]pyridin-11-yliden)-1-piperidin-1-carbonsäureethylester und 250 ml konzentrierte H₂SO₄ wurden bei –5°C kombiniert, danach 4,8 g (56,4 mmol) NaNO₃ zugegeben und 2 Stunden gerührt. Die Mischung wurde in 600 g Eis gegossen und mit konzentriertem NH₄OH (wässrig) basisch gemacht. Die Mischung wurde filtriert, mit 300 ml Wasser gewaschen, danach mit 500 ml CH₂Cl₂ extrahiert. Der Extrakt wurde mit 200 ml Wasser gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, danach filtriert und im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde chromatographiert (Silikagel, 10% EtOAc/CH₂Cl₂), um 24,4 g (86 % Ausbeute) des Produkts zu ergeben. Schmelzpunkt = 165–167°C, Massenspektrum: MH⁺ = 506, 508 (CI), Elementaranalyse: berechnet – C, 52,13; H, 4,17; N, 8,29; gefunden – C, 52,18; H, 4,51; N, 8,16.
Stufe B:
20 g (40,5 mmol) des Produkts von Stufe A und 200 ml konzentrierte H₂SO₄ wurden bei 20°C kombiniert, danach die Mischung auf 0°C gekühlt. 7,12 g (24,89 mmol) 1,3-Dibrom-5,5-dimethylhydantoin wurden zu der Mischung gegeben und 3 Stunden bei 20°C gerührt. Es wurde auf 0°C gekühlt, weitere 1,0 g (3,5 mmol) des Dibromhydantoins zugegeben und 2 Stunden bei. 20°C gerührt. Die Mischung wurde in 400 g Eis gegossen, mit konzentrierten NH₄OH (wässrig) bei 0°C alkalisch gemacht und der resultierende Feststoff durch Filtration aufgefangen. Der Feststoff wurde mit 300 ml Wasser gewaschen, in 200 ml Aceton aufgeschlämmt und filtriert, um 19,79 g (85,6 Ausbeute) des Produkts zu ergeben, Schmelzpunkt = 236–237°C, Massenspektrum: MH⁺ = 586 (CI), Elementaranalyse: berechnet – C, 45,11; H, 3,44; N, 7,17; gefunden – C, 44,95; H, 3,57; N, 7,16.
Stufe C:
25 g (447 mmol) Fe-Späne, 10 g (90 mmol) CaCl₂ und eine Suspension von 20 g (34,19 mmol) des Produkts von Stufe B wurden in 700 ml 90:10 EtOH/Wasser bei 50°C kombiniert: Die Mischung wurde über Nacht auf Rückfluss erwärmt, durch Celite^® filtriert und der Filterkuchen mit 2 × 200 ml heißem EtOH gewaschen. Das Filtrat und die Wäschen wurden kombiniert und im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde mit 600 ml CH₂Cl₂ extrahiert, mit 300 ml Wasser gewaschen und über MgSO₄ getrocknet. Es wurde filtriert und im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert, danach chromatographiert (Silikagel, 30% EtOAc/CH₂Cl₂), um 11,4 g (60% Ausbeute) des Produkts zu ergeben, Schmelzpunkt = 211–212°C, Massenspektrum: MH⁺ = 556 (CI), Elementaranalyse: berechnet – C, 47,55; H, 3,99; N, 7,56; gefunden – C, 47,45; H, 4,31; N, 7,49.
Stufe D:
20 g (35,9 mmol) des Produkts von Stufe C wurden langsam (in Portionen) bei –10°C zu einer Lösung von 8 g (116 mmol) NaNO₂ in 120 ml konzentrierter HCl (wässrig) gegeben. Die resultierende Mischung wurde 2 Stunden bei 0°C gerührt, danach wurden langsam (tropfenweise) bei 0°C über einen Zeitraum von einer Stunde 150 ml (1,44 Mol) 50% H₃PO₂ zugegeben. Es wurde bei 0°C 3 Stunden gerührt, danach in 600 g Eis gegossen und mit konzentriertem NH₄OH (wässrig) alkalisch gemacht. Es wurde mit 2 × 300 ml CH₂Cl₂ extrahiert, danach die Extrakte über MgSO₄ getrocknet, im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde chromatographiert (Silikagel, 25% EtOAc/Hexane, um 13,67 g (70% Ausbeute) der Titelverbindung zu ergeben, Schmelzpunkt = 163–165°C, Massenspektrum: MH⁺ = 541 (CI), Elementaranalyse: berechnet – C, 48,97; H, 4,05; N, 5,22; gefunden – C, 48,86; H, 3,91; N, 5,18.
Stufe E:
6,8 g (12,59 mmol) des Produkts von Stufe D und 100 ml konzentrierte HCl (wässrig) wurden kombiniert und bei 85°C über Nacht gerührt. Die Mischung wurde gekühlt, in 300 g Eis gegossen und mit konzentriertem NH₄OH (wässrig) alkalisch gemacht. Es. wurde mit 2 × 300 ml CH₂Cl₂ extrahiert, danach die Extrakte über MgSO₄ getrocknet. Es wurde filtriert, im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert, danach chromatographiert (Silikagel, 10% MeOH/EtOAc + 2% NH₄OH (wässrig)), um 5,4 g (92 Ausbeute) der Titelverbindung zu ergeben, Schmelzpunkt = 172–174°C, Massenspektrum: MH⁺ = 469 (FAB), Elementaranalyse: berechnet – C, 48,69; H, 3,65; N, 5,97; gefunden -. C, 48,83; H, 3,80; N, 5,97.
PRÄPARATIVES BEISPIEL 2
Stufe A:
2,42 g 4-(8-Chlor-3-Brom-5,6-dihydro-11H-benzo[5,6]cyclohepta[1,2-b]pyridin-11-yliden)-1-piperidin-1-carbonsäureethylester wurden durch Lösen in konzentrierter HCl und Erwärmen auf etwa 100°C für 16 Stunden hydrolysiert. Die Mischung wurde abgekühlt, danach mit 1 M NaOH (wässrig) neutralisiert. Es wurde mit CH₂Cl₂ extrahiert, die Extrakte über MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum konzentriert, um 1,39 g (69 Ausbeute) des Produkts zu ergeben.
Stufe B:
1 g (2,48 mmol) des Produkts von Stufe A und 25 ml trockenes Toluol wurden kombiniert, 2,5 ml 1 M DIBAL in Toluol zugefügt und die Mischung auf Rückfluss erwärmt. Nach 0,5 Stunden wurden weitere 2,5 ml 1 M DIBAL zugegeben und eine Stunde auf Rückfluss erwärmt (die Reaktion wurde unter Verwendung von 50 MeOH/CH₂Cl₂ + NH₄OH (wässrig) mit DC überwacht). Die Mischung wurde auf Raumtemperatur gekühlt, 50 ml 1 N HCl (wässrig) zugegeben und 5 Minuten gerührt. 100 ml 1 N NaOH (wässrig) wurden zugegeben und anschließend mit EtOAc (3 × 150 ml) extrahiert. Die Extrakte wurden über MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum konzentriert, um 1,1 g der Titelverbindung zu ergeben. PRÄPARATIVES BEISPIEL 3

[racemisch sowie (+)- und (–)-Isomere]

16,6 g (0,03 Mol) des Produkts des präparativen Beispiels 1, Stufe D, wurden mit einer 3:1 Lösung CH₃CN und Wasser (212,65 ml CH₃CN und 70,8 ml Wasser) kombiniert und die resultierende Aufschlämmung über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. 32.833 g (0,153 Mol). NaIO₄ und anschließend 0,31 g (2,30 mmol) RuO₂ wurden zugegeben und bei Raumtemperatur gerührt, um 1,39 g (69% Ausbeute) des Produkts zu ergeben. (Die Zugabe von RuO war von einer exothermen Reaktion begleitet, und die Temperatur stieg von 20° bis 30°C.). Die Mischung wurde 1,3 Stunden gerührt (die Temperatur kehrte nach etwa 30 Minuten auf 25°C zurück), danach filtriert, um die Feststoffe zu entfernen, und die Feststoffe mit CH₂Cl₂ gewaschen. Das Filtrat wurde im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert und der Rückstand in CH₂Cl₂ gelöst. Es wurde filtriert, um unlösliche Feststoffe zu entfernen, und die Feststoffe mit CH₂Cl₂ gewaschen. Das Filtrat wurde mit Wasser gewaschen, auf eine Volumen von etwa 200 ml konzentriert und mit Bleiche, danach mit Wasser gewaschen. Es wurde mit 6 N HCl (wässrig) extrahiert. Der wässrige Extrakt wurde auf 0°C gekühlt und langsam 50% NaOH (wässrig) zugegeben, um den pH-Wert auf 4 einzustellen, während die Temperatur < 30°C gehalten wurde. Es wurde zwei Mal mit CH₂Cl₂ extrahiert, über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde in 20 ml EtOH aufgeschlämmt und auf 0°C gekühlt. Die resultierenden Feststoffe wurden durch Filtration aufgefangen und die Feststoffe im Vakuum getrocknet, um 7,95 g des Produkts zu ergeben, ¹H NMR (CDCl₃, 200 MHz): 8,7 (s, 1H); 7,85 (m, 6H); 7,5 (d, 2H); 3,45 (m, 2H); 3,15 (m, 2H).
Stufe B:
21,58 g (53,75 mmol) des Produkts von Stufe A und 500 ml einer wasserfreien 1:1-Mischung von EtOH und Toluol wurden kombiniert, 1,43 g (37,8 mmol) NaBH₄ zugegeben und die Mischung 10 Minuten auf Rückfluss erwärmt. Die Mischung wurde auf 0°C gekühlt, 100 ml Wasser zugefügt, danach der pH-Wert mit 1 M HCl (wässrig) auf 4 bis 5 eingestellt, während die Temperatur < 10°C gehalten wurde. 250 ml EtOAc wurden zugegeben und die Phasen getrennt. Die organische Phase wurde mit Salzlösung (3 × 50 ml) gewaschen und anschließend über Na₂SO₄ getrocknet. Es wurde im Vakuum zu einem Rückstand (24,01 g) konzentriert und der Rückstand chromatographiert (Silikagel, 30% Hexan/CH₂Cl₂), um das Produkt zu ergeben. Unreine Fraktionen wurden durch erneute Chromatographie gereinigt. Insgesamt wurden 18,57 g des Produkts erhalten. ¹H-NMR (DMSO-d₆) δ: 400 MHz): 8,5 (s, 1H); 7,9 (s, 1H); 7,5 (d von d, 2H); 6,2 (s, 1H); 6,1 (s, 1H); 3,5 (m, 1H); 3,4 (m, 1H); 3,2 (m, 2H).
Stufe C:
18,57 g (46,02 mmol) des Produkts von Stufe B und 500 ml CHCl₃ wurden kombiniert, danach 6,70 ml (91,2 mmol) SOCl₂ zugegeben und die Mischung bei Raumtemperatur 4 Stunden gerührt. Über einen Zeitraum von 5 Minuten wurde eine Lösung von 35,6 g (0,413 Mol) Piperazin in 800 ml THF zugegeben und die Mischung eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Die Mischung wurde über Nacht auf Rückfluss erwärmt, danach auf Raumtemperatur abgekühlt und die Mischung mit 1 L CH₂Cl₂ verdünnt. Es wurde mit Wasser (5 × 200 ml) gewaschen und die wässrige Waschflüssigkeit mit CHCl₃ (3 × 100 ml) extrahiert. Alle organischen Lösungen wurden kombiniert, mit Salzlösung (3 × 200 ml) gewaschen und über MgSO₄ getrocknet. Es wurde im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert und chromatographiert (Silikagel, Gradient von 5 %, 7,5 %, 10 % MeOH/CH₂Cl₂ + NH₄OH), um 18,49 g der Titelverbindung als racemische Mischung zu ergeben.
Stufe D – Trennung der Enantiomere:
Die racemische Titelverbindung von Stufe C wurde durch präparative chirale Chromatographie (Chiralpack AD, 5 cm × 50 cm Säule, Durchflussgeschwindigkeit 100 ml/Min, 20 % iPrOH/Hexan + 0,2% Diethylamin) getrennt, um 9,14 g des (+)-Isomers und 9,30 g des (–)-Isomers zu ergeben.
Physikalisch-chemische Daten für das (+)-Isomer: Schmelzpunkt = 74,5°C–77,5°C; Massenspektrum = 471,9; [α]_D ²⁵ = +97,4° (8,48 mg/2 ml MeOH).
Physikalisch-chemische Daten für das (–)-Isomer; Schmelzpunkt = 82,9°C–84,5°C; Massenspektrum, MH⁺ = 471,8; [α]_D ²⁵ = –97,4 (8,32 g/2 ml MeOH).
PRÄPARATIVES BEISPIEL 4
Stufe A:
15 g (38,5 mmol) 4-(8-Chlor-3-Brom-5,6-dihydro-11H-benzo[5,6]cyclohepta[1,2-b]pyridin-111H-yliden)-1-piperidin-1-carbonsäureethylester und 150 ml konzentrierte H₂SO₄ wurden bei –5°C kombiniert, danach 3,89 g (38,5 mmol) KNO₃ zugegeben und 4 Stunden gerührt. Die Mischung wurde in 3 L Eis gegossen und mit 50% NaOH (wässrig) alkalisch gemacht. Es wurde mit CH₂Cl₂ extrahiert, über MgSO₄ getrocknet, danach filtriert und im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde aus Aceton umkristallisiert, um 6,69 g des Produkts zu ergeben. ¹H NMR (CDCl₃, 200 MHz): 8,5 (s, 1H); 7,75 (s, 1H); 7,6 (s, 1H); 7,35 (s, 1H); 4,15 (q, 2H); 3,8 (m, 2H); 3,5–3,1 (m, 4H); 3,0– 2,8 (m, 2H); 2,6–2,2 (m, 4H); 1,25 (t, 3H).
Stufe B:
6,69 g (13,1 mmol) des Produkts aus Stufe A und 100 ml 85 EtOH/Wasser wurden kombiniert, danach 0,66 g (5,9 mmol) CaCl₂ und 6,56 g (117,9 mmol) Fe zugefügt und die Mischung über Nacht auf Rückfluss erwärmt. Die heiße Reaktionsmischung wurde durch Celite^® filtriert und der Filterkuchen mit heißem EtOH gespült. Das Filtrat wurde im Vakuum konzentriert, um 7,72 g des Produkts zu ergeben, Massenspektrum: MH⁺ = 478,0.
Stufe C:
7,70 g des Produkts von Stufe B und 35 ml HOAc wurden kombiniert, danach 45 ml Lösung von Br₂ in HOAc zugegeben und die Mischung bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Es wurden 300 ml 1 N NaOH (wässrig), anschließend 75 ml 50 % NaOH (wässrig) zugefügt und mit EtOAc extrahiert. Der Extrakt wurde über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde chromatographiert (Silikagel, 20%–30% EtOAc/Hexan), um 3,47 g des Produkts (zusammen mit weiteren 1,28 g teilgereinigten Produkts) zu ergeben. Massenspektrum: MH⁺ = 555,9, ¹H-NMR (CDCl₃, 300 MHz): 8,5 (s, 1H); 7 5 (s, 1H); 7,15 (s, 1H); 4,5 (s, 2H); 4,15 (m, 3H); 3,8 (br s, 2H); 3,4–3,1 (m, 4H); 9–2,75 (m, 1H); 2,7–2,5 (m, 2H); 2,4–2,2 (m, 2H); 1,25 (m, 3H).
Stufe D:
0,557 g (5,4 mmol) t-Butylnitrit und 3 ml DMF wurden kombiniert und die Mischung auf 60°–70°C erwärmt. Es wurde lang sam (tropfenweise) eine Mischung von 2,00 g (3,6 mmol) des Produkts von Stufe C und 4 ml DMF zugegeben und anschließend die Mischung auf Raumtemperatur abgekühlt. Es wurden bei 40°C weitere 0,64 ml t-Butylnitrit zugegeben und die Mischung erneut eine halbe Stunde auf 60°–70°C erwärmt. Es wurde auf Raumtemperatur gekühlt und die Mischung in 150 ml Wasser gegossen. Es wurde zwei Mal mit CH₂Cl₂ extrahiert, über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde chromatographiert (Silikagel, 10%-20% EtOAc/Hexan), um 0,74 g des Produkts zu ergeben, Massenspektrum: MH⁺ = 541,0. ¹H-NMR (CDCl₃, 200 MHz): 8,52 (s, 1H); 7,5 (d, 2H); 7,2 (s, 1H); 4,15 (q, 2H); 3,9–3,7 (m, 2H); 3,5–3,1 (m, 4H); 3,0–2,5 (m, 2H); 2,4–2,2 (m, 2H); 2,1–1,9 (m, 2H); 1, 26 (t, 3H).
Stufe E:
0,70 g (1,4 mmol) des Produkts von Stufe D und 8 ml konzentrierte HCl (wässrig) wurden kombiniert und die Mischung über Nacht auf Rückfluss erwärmt. 30 ml 1 N NaOH (wässrig), anschließend 5 ml 50 % NaOH (wässrig) wurden zugefügt und mit CH₂Cl₂ extrahiert. Die Extrakte wurden über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert, um 0,59 g der Titelverbindung zu ergeben. Massenspektrum: M⁺ = 468,7. Schmelzpunkt = 123,9°–124,2°C. PRÄPARATIVES BEISPIEL 5

[racemisch sowie (+)- und (–)-Isomere]

Eine Lösung von 8,1 g der Titelverbindung aus dem präparativen Beispiel 4 in Toluol wurde hergestellt und 17,3 ml einer 1 M Lösung von DIBAL in Toluol zugegeben. Die Mischung wurde auf Rückfluss erwärmt und langsam (tropfenweise) über einen Zeitraum von 40 Minuten weitere 21 ml 1 M DIBAL/Toluol-Lösung zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde auf etwa 0°C abgekühlt und 700 ml 1 M HCl (wässrig) zugegeben. Es wurde getrennt und die organische Phase verworfen. Die wässrige Phase wurde mit CH₂Cl₂ gewaschen, der Extrakt verworfen, danach die wässrige Phase durch Zugabe von 50 % NaOH (wässrig) alkalisch gemacht. Es wurde mit CH₂Cl₂ extrahiert, der Extrakt über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert, um 7,30 g der Titelverbindung zu ergeben, die eine racemische Mischung von Enantiomeren war.
Stufe B – Trennung der Enantiomere:
Die racemische Titelverbindung von Stufe A wurde durch präparative chirale Chromatographie (Chiralpack AD, 5 cm × 50 cm Säule, 20% iPrOH/Hexan + 0,2% Diethylamin) getrennt, um das (+)-Isomer und das (–)-Isomer zu ergeben.
Physikalisch-chemische Daten für das (+)-Isomer: Schmelzpunkt = 148,8°C, Massenspektrum: MH⁺ = 469; [α]²⁵ _D = +65,6° (mg/2 ml MeOH).
Physikalisch-chemische Daten für das (–)-Isomer: Schmelzpunkt = 112°C; Massenspektrum MH⁺ = 469; [α]²⁵ _D = –65,6° (mg/2 ml MeOH). PRÄPARATIVES BEISPIEL 6

[racemisch sowie (+)- und (–)-Isomere]

Stufe A:
40,0 g (0,124 Mol) des Ausgangsketons und 200 ml H₂SO₄ wurden kombiniert und auf 0°C abgekühlt. Es wurden langsam 13,78 g (0,136 Mol) KNO₃ über einen Zeitraum von 1,5 Stunden zugegeben, danach auf Raumtemperatur erwärmt und über Nacht gerührt. Die Reaktion wurde unter Verwendung von im Wesentlichen dem gleichen Verfahren wie für das präparative Beispiel 1, Stufe A, beschrieben aufgearbeitet. Chromatographie (Silikagel, 20 %, 30 %, 40 %, 50 % EtOAc/Hexan, dann 100 % EtOAc) ergab 28 g des 9-Nitroprodukts zusammen mit einer kleineren Menge des 7-Nitroprodukts und 19 g einer Mischung der 7-Nitro- und 9-Nitroverbindungen.
Stufe B:
28 g (76,2 mmol) des 9-Nitroprodukts von Stufe A, 400 ml 85 % EtOH/Wasser, 3,8 g (34,3 mmol) CaCl₂ und 38,28 g (0,685 Mol) Fe wurden unter Verwendung von im Wesentlichen dem selben Verfahren wie für das präparative Beispiel 1, Stufe C, beschrieben umgesetzt, um 24 g des Produkts zu ergeben.
Stufe C:
13 g (38,5 mmol) des Produkts von Stufe B und 140 ml HOAc wurden kombiniert und langsam über einen Zeitraum von 20 Minuten eine Lösung von 2,95 ml (57,8 mmol) Br₂ in 10 ml HOAc zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur gerührt, danach im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert. CH₂Cl₂ und Wasser wurden zugefügt, danach der pH-Wert mit 50 % NaOH (wässrig) auf 8–9 eingestellt. Die organische Phase wurde mit Wasser, danach Salzlösung gewaschen und über Na₂SO₄ getrocknet. Es wurde im Vakuum konzentriert, um 11,3 g des Produkts zu ergeben.
Stufe D:
100 ml konzentrierte HCl (wässrig) wurden auf 0°C gekühlt, danach 5,61 g (81,4 mmol) NaNO₂ zugegeben und 10 Minuten gerührt. Langsam wurden (in Portionen) 11,3 g (27,1 mmol) des Produkts von Stufe C zugegeben und die Mischung 2,25 Stunden bei 0°–3°C gerührt. Langsam (tropfenweise) wurden 180 ml 50% H₃PO₂ (wässrig) zugegeben und die Mischung bei 0°C über Nacht stehen gelassen. Langsam (tropfenweise) wurden im Verlauf von 30 Minuten 150 ml 50 % NaOH zugegeben, um den pH-Wert auf 9 einzustellen, danach wurde mit CH₂Cl₂ extrahiert. Der Extrakt wurde mit Wasser, danach Salzlösung gewaschen und über Na₂SO₄ getrocknet. Es wurde im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert und chromatographiert (Silikagel, 2 % EtOAc/CH₂Cl₂), um 8,6 g des Produkts zu ergeben.
Stufe E:
8,6 g (21,4 mmol) des Produkts von Stufe D und 300 ml MeOH wurden kombiniert und auf 0°–2°C gekühlt. 1,21 g (32,1 mmol) NaBH₄ wurden zugegeben, und die Mischung wurde eine Stunde bei etwa 0°C gerührt. Es wurden weitere 0,121 g (3,21 mmol) NaBH₄ zugegeben, zwei Stunden bei 0°C gerührt, danach über Nacht bei 0°C stehen gelassen. Es wurde im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert, danach der Rückstand zwischen CH₂Cl₂ und Wasser partitioniert. Die organische Phase wurde abgetrennt und im Vakuum (50°C) konzentriert, um 8,2 g des Produkts zu ergeben.
Stufe F:
8,2 g (20,3 mmol) des Produkts von Stufe E wurden mit 160 ml CH₂Cl₂ kombiniert, auf 0°C abgekühlt, danach wurden langsam (tropfenweise) über einen Zeitraum von 30 Minuten 14,8 ml (203 mmol) SOCl₂ zugegeben. Die Mischung wurde auf Raumtemperatur erwärmt und 4,5 Stunden gerührt, danach im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert, CH₂Cl₂ zugegeben und mit 1 N NaOH (wässrig), danach Salzlösung gewaschen und über Na₂SO₄ getrocknet. Es wurde im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert, danach trockenes THF und 8,7 g (101 mmol) Piperazin zugegeben und bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Es wurde im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert, CH₂Cl₂ zugegeben und mit 0,25 N NaOH (wässrig), Wasser, danach Salzlösung gewaschen. Es wurde über Na₂SO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert, um 9,46 g des Rohprodukts zu ergeben. Chromatographie (Silikagel, 5% MeOH/CH₂Cl₂ + NH₃) ergab 3,59 g der Titelverbindung als Racemat. ¹H NMR (CDCl₃, 200 MHz): 8,43 (d, 1H); 7,55 (d, 1H); 7,45 (d, 1H); 7,11 (d, 1H); 5,31 (s, 1H); 4,86–4,65 (m, 1H); 3,57–3,40 (m, 1H); 2,98–2,55 (m, 6H); 2,45–2,20 (m, 5H).
Stufe G – Trennung der Enantiomere:
Die racemische Titelverbindung aus Stufe F (5,7 g) wurde wie für präparatives Beispiel 3, Stufe D, beschrieben unter Verwendung von 30 % iPrOH/Hexan + 0,2 % Diethylamin chromatographiert, um 2,88 g des R-(+)-Isomers und 2,77 g des S-(–)-Isomers der Titelverbindung zu ergeben.
Physikalisch-chemische Daten für das R-(+)-Isomer: Massenspektrum: MH+ = 470; [α]²⁵ _D = +12,1° (10,9 mg/2 ml MeOH).
Physikalisch-chemische Daten für das S-(–)-Isomer: Massenspektrum: MH+ = 470; [α]²⁵ _D = –13,2° (11,51 mg/2 ml MeOH). PRÄPARATIVES BEISPIEL 7

[racemisch sowie (+)- und (–)-Isomere]

Stufe A:
13 g (33,3 mmol) der Titelverbindung des präparativen Beispiels 1, Stufe D, und 300 ml Toluol wurden bei 20°C kombiniert, danach wurden 32,5 ml (32,5 mmol) 1 M Lösung von DIBAL in Toluol zugegeben. Die Mischung wurde eine Stunde auf Rückfluss erwärmt, auf 20°C abgekühlt, weitere 32,5 ml 1 M DIBAL-Lösung zugegeben und eine Stunde auf Rückfluss erwärmt. Die Mischung wurde auf 20°C gekühlt und in eine Mischung aus 400 g Eis, 500 ml EtOAc und 300 ml 10 % NaOH (wässrig) gegossen. Die. wässrige Phase wurde mit CH₂Cl₂ (3 × 200 ml) extrahiert, die organischen Phasen wurden über MgSO₄ getrocknet, danach im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert. Es wurde chromatographiert (Silikagel, 12 % MeOH/CH₂Cl₂ + 4 % NH₄OH), um 10,4 g der Titelverbindung als Racemat zu ergeben, Massenspektrum: MH+ = 469(FAB). Partielles ¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): 8,38 (s, 1H); 7,57 (m, 1H); 7,27 (d, 1H); 7,06 (m, 1H); 3,95 (d, 1H).
Stufe B – Trennung der Enantiomere:
Die racemische Titelverbindung von Stufe A wurde durch präparative chirale Chromatographie (Chiralpack AD, 5 cm × 50 cm Säule, 5% iPrOH/Hexan + 2% Diethylamin) getrennt, um das (+)-Isomer und das (–)-Isomer der Titelverbindung zu ergeben.
Physikalisch-chemische Daten für das (+)-Isomer: MH+ = 470,9 (FAB); [α]_D ²⁵ = 43,5° (c = 0,402, EtOH); Partielles ¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): 8,38 (s, 1H); 7,57 (s, 1H); 7,27 (d, 1H); 7,05 (d, 1H); 3,95 (d, 1H).
Physikalisch-chemische Daten für das (–)-Isomer: Massenspektrum, MH+ = 470,9 (FAB); [α]_D ²⁵ = –41,8 ° (c = 0,328, EtOH); Partielles ¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): 8,38 (s, 1H); 7,57 (s, 1H); 7,27 (d, 1H); 7,05 (d, 1H); 3,95 (d, 1H). PRÄPARATIVES BEISPIEL 8

[racemisch sowie (+)- und (–)-Isomere]

4-(8-Chlor-3-Brom-5,6-dihydro-11H-benzo[5,6]cyclohepta[1,2-b]pyridin-11-yliden)-1-piperidin-1-carbonsäureethylester wurde nach im Wesentlichen dem gleichen Verfahren wie in dem präparativen Beispiel 3, Stufen A bis D, beschrieben behandelt, um als Produkt von Stufe C die racemische Titelverbindung und als Produkte von Stufe D das R-(+)-Isomer und S-(–)-Isomer der Titelverbindung zu ergeben.
Physikalisch-chemische Daten für das R-(+)-Isomer: ¹³C-NMR (CDCl₃): 155,8 (C); 146,4 (CH); 140,5 (CH); 140,2 (C); 136,2 (C); 135,3 (C); 133,4 (C); 132,0 (CH); 129,9 (CH); 125,6 (CH); 119,3 (C); 79,1 (CH); 52,3 (CH₂); 52,3 (CH); 45,6 (CH₂); 45,6 (CH₂); 30,0 (CH₂); 29,8 (CH₂), [α]_D ²⁵ = +25,8° (8,46 mg/2 mL MeOH).
Physikalisch-chemische Daten für das S-(–)-Isomer: ¹³C-NMR (CDCl₃): 155,9 (C); 146,4 (CH); 140,5 (CH); 140,2 (C); 136,2 (C); 135,3 (C); 133,3 (C); 132,0 (CH); 129,9 (CH); 125,5 (CH); 119,2 (C); 79,1 (CH); 52,5 (CH₂); 52,5 (CH); 45,7 (CH₂); 45,7 (CH₂); 30,0 (CH₂); 29,8 (CH₂) [α]_D ²⁵ = –27,9° (8,90 mg/2 mL MeOH).
PRÄPARATIVES BEISPIEL 9
Stufe A:
9,90 g (18,9 mmol) des Produkts des präparativen Beispiels 4, Stufe B, wurden in 150 ml CH₂Cl₂ und 200 ml CH₃CN gelöst und auf 60°C erwärmt. 2,77 g (20,8 mmol) N-Chlorsuccinimid wurden zugefügt und 3 Stunden auf Rückfluss erwärmt, wobei die Reaktion durch DC (30 % EtOAc/H₂O) überwacht wurde. Es wurden weitere 2,35 g (10,4 mmol) N-Chlorsuccinimid zugegeben und weitere 45 Minuten unter Rückfluss gehalten. Die Reaktionsmischung wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und mit 1 N NaOH und CH₂Cl₂ extrahiert. Die CH₂Cl₂-Phase wurde über MgSO₄ getrocknet, filtriert und durch Flash-Chromatographie (1200 ml Normalphasen-Silikagel, wobei mit 30 % EtOAc/H₂O eluiert wurde), um 6,24 g des gewünschten Produkts zu erhalten. Schmelzpunkt 193 bis 195,4°C.
Stufe B:
Zu 160 ml konz. HCl wurden bei –10°C 2,07 g (30,1 mmol) NaNO₂ gegeben und 10 Minuten gerührt. Es wurden 5,18 g (10,1 mmol) des Produkts von Stufe A zugegeben und die Reaktionsmischung 2 Stunden auf –10°C bis 0°C erwärmt. Die Reaktion wurde auf –10°C abgekühlt, 100 ml H₃PO₂ zugegeben und über Nacht stehen gelassen. Zum Extrahieren der Reaktionsmischung wurde sie über zerkleinertes Eis gegossen und mit 50 % NaOH/CH₂Cl₂ alkalisch gemacht. Die organische Phase wurde über MgSO₄ getrocknet, filtriert und zur Trockne konzentriert. Es wurde durch Flash-Chromatographie (600 ml Normalphasen-Silikagel, wobei mit 20 % EtOAc/Hexan eluiert wurde) gereinigt, um 3,98 g Produkt zu erhalten. Massenspektrum: MH⁺ = 497,2.
Stufe C:
3,9 g des Produkts von Stufe B wurden in 100 ml konz. HCl gelöst und über Nacht unter Rückfluss gehalten. Die Mischung wurde gekühlt, mit 50 % Gew./Gew. alkalisch gemacht und die resultierende Mischung mit CH₂Cl₂ extrahiert. Die CH₂Cl₂-Phase wurde über MgSO₄ getrocknet, das Lösungsmittel verdampft und unter Vakuum getrocknet, um 3,09 g des gewünschten Produkts zu erhalten. Massenspektrum: MH⁺ = 424,9.
Stufe D:
Unter Verwendung eines ähnlichen Verfahrens wie im präparativen Beispiel 5 beschrieben wurden 1,73 g des gewünschten Produkts erhalten, Schmelzpunkt 169,6 bis 170,1°C; [α]_D ²⁵ = +48,2° (c = 1, MeOH).
Beispiele 1 bis 8
Allgemeines Verfahren:
Das (+) Produkt aus dem präparativen Beispiel 5 (2,0 g, 4,25 mmol) wurden in 100 ml DMF gelöst, bei Raumtemperatur gerührt und 0,86 g (8,5 mmol) 4-Methylmorpholin, 1,1 g (5,53 mmol) DEC, 0,75 g (5,53 mmol) HOBT und 5,52 mmol der passenden Säure aus Formel III zugegeben. Die Mischung wurde 18 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, danach im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert und der Rückstand zwischen Ethylacetat und Wasser partitioniert. Die organische Phase wurde mit wässriger NaHCO₃-Lösung, danach Salzlösung gewaschen. Die organische Phase wurde über MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde an Silikagel chromatographiert, wobei mit EtOAc-Hexan (75 % – 25 %) eluiert wurde, um das gewünschte Produkt zu ergeben.
Nach diesem Verfahren wurden die Verbindungen mit der folgenden Formel
erhalten wobei der
der Verbindung in der folgenden Tabelle definiert ist:
Beispiele 9 bis 13
Allgemeines Verfahren:
Das passende Keton wurde in Pyridin gelöst, danach wurde das in der folgenden Tabelle gezeigte Reagenz zugefügt und 18 Stunden lang unter Stickstoff bei 25°C gerührt. Die Reaktion wurde in 40 ml Wasser gegossen und mit drei 50 ml Portionen CH₂Cl₂ extrahiert. Die kombinierten organischen Phasen wurden über MgSO₄ getrocknet und unter Vakuum konzentriert. Der resul tierende Rückstand wurde an Silikagel mit EtOAc-Hexan (80 % – 20 %) chromatographiert, um das Produkt zu ergeben.
Nach diesem Verfahren wurden die Verbindungen mit der folgenden Formel
erhalten, wobei der
der Verbindung in der folgenden Tabelle definiert ist:
FPT IC₅₀ (Inhibierung von Farnesylproteintransferase, in-vitro-Enzym-Assay), COS-Cell-IC₅₀ (Assay auf Zellbasis), GGPT IC₅₀ (Inhibierung von Geranylgeranylproteintransferase, in-vitro-Enzym-Assay), Zellmatten-Assay und Antitumoraktivität (in vivo Antitumorstudien) wurden nach den Assayverfahren bestimmt, die in WO 95/10516 beschrieben sind.
Die Ergebnisse sind in den Tabellen 1 und 2 gezeigt. In den Tabellen steht "Beisp. Nr." für "Beispielnummer" und "nM" steht für "nanomolar".
Tabelle 11
Tabelle 2
Zur Herstellung pharmazeutischer Zusammensetzungen aus den in dieser Erfindung beschriebenen Verbindungen können inerte, pharmazeutisch annehmbare Träger fest oder flüssig sein. Zubereitungen in fester Form schließen Pulver, Tabletten, dispergierbare Körner, Kapseln, Medizinalkapseln und Zäpfchen ein. Die Pulver und Tabletten können aus etwa 5 bis etwa 70 % aktivem Bestandteil zusammensetzt sein. Geeignete feste Träger sind in der Technik bekannt, z. B. Magnesiumcarbonat, Magnesiumstearat, Talkum, Zucker, Lactose. Tabletten, Pulver, Kapseln und Medizinalkapseln können als feste Dosierformen verwendet werden, die für die orale Verabreichung geeignet sind.
Zur Herstellung von Zäpfchen wird ein niedrig schmelzendes Wachs, wie eine Mischung von Fettsäureglyceriden oder Kakaobutter, zuerst geschmolzen und der aktive Bestandteil darin homogen dispergiert, wie durch Rühren. Die geschmolzene homogene Mischung wird dann in zweckmäßig bemessene Formen gegossen, abkühlen gelassen und dadurch verfestigt.
Zubereitungen in flüssiger Form schließen Lösungen, Suspensionen und Emulsionen ein. Als Beispiel können Wasser oder Wasser-Propylenglykol-Lösungen für die parenterale Injektion genannt werden.
Zubereitungen in flüssiger Form können auch Lösungen für intranasale Verabreichung einschließen.
Aerosolzubereitungen, die zur Inhalation geeignet sind, können Lösungen und Feststoffe in Pulverform einschließen, die in Kombination mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger wie einem inerten komprimierten Gas vorliegen können.
Ebenfalls eingeschlossen sind Zubereitungen in fester Form, die kurz vor Gebrauch in Zubereitungen in flüssiger Form für orale oder parenterale Verabreichung überführt werden sollen. Solche flüssigen Formen schließen Lösungen, Suspensionen und Emulsionen ein.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch transdermal verabreichbar sein. Die transdermalen Zusammensetzungen können die Form von Cremes, Lotionen, Aerosolen und/oder Emulsionen annehmen, und können in ein Transdermalpflaster vom. Matrix- oder Reservoirtyp eingeschlossen werden, wie in der Technik zu diesem Zweck konventionell ist.
Die Verbindung wird vorzugsweise oral verabreicht.
Die pharmazeutische Zubereitung liegt vorzugsweise in Einheitsdosisform vor. In einer solchen Form wird die Zubereitung in Einheitsdosen unterteilt, die geeignete Mengen der aktiven Komponente enthalten, z. B. eine wirksame Menge, um den gewünschten Zweck zu erreichen.
Die Menge an aktiver Verbindung in einer Einzelzubereitungsdosis kann. gemäß der speziellen Anwendung auf etwa 0,1 mg bis 1000 mg, vorzugsweise etwa 1 mg bis 300 mg, variiert oder eingestellt werden.
Die tatsächlich verwendete Dosis kann gemäß den Erfordernissen des Patienten und dem Schweregrad des behandelten Zustands variiert werden. Das Ermitteln der richtigen Dosierung für eine spezielle Situation liegt innerhalb des Wissens des Fachmanns. Die Behandlung wird im Allgemeinen mit geringeren Dosierungen begonnen, die unter der Optimaldosis der Verbindung liegen. Nachfolgend wird die Dosierung in kleinen Schritten erhöht, bis die optimale Wirkung unter den Bedingungen erreicht wird. Aus Gründen der Zweckmäßigkeit kann die Gesamttagesdosis auf Wunsch aufgeteilt und portionsweise über den Tag verabreicht werden.
Die Menge und Frequenz der Verabreichung der erfindungsgemäßen Verbindungen und der pharmazeutisch annehmbaren Salze derselben werden gemäß der Beurteilung des behandelnden Arztes unter Berücksichtigung von Faktoren wie Alter, Zustand und Größe des Patienten sowie des Schweregrads der zu behandelnden Symptome festgelegt. Eine typische empfohlene Dosierweise ist orale Verabreichung von 10 mg bis 2000 mg/Tag, vorzugsweise 10 bis 1000 mg/Tag, in in zwei bis vier Dosen unterteilter Form, um Tumorwachstum anzuhalten. Die Verbindungen sind bei Verabreichung innerhalb dieses Dosierungsbereichs nicht giftig.
Es folgen Beispiele für pharmazeutische Dosierformen, die eine erfindungsgemäße Verbindung enthalten. Der Umfang der Erfindung gemäß ihrem Aspekt der pharmazeutischen Zusammensetzung soll durch die gegebenen Beispiele nicht eingeschränkt werden.
Beispiele für pharmazeutische Dosierungsformen Beispiel A – Tabletten
Herstellungsverfahren
Positionen Nr. 1 und 2 wurden in einem geeigneten Mischer 10 bis 15 Minuten gemischt. Die Mischung wurde mit Position Nr. 3 granuliert. Die feuchten Körner wurden nach Bedarf durch ein grobes Sieb (z. B. 1/4'', 0,63 cm) gemahlen. Die feuchten Körner wurden getrocknet. Die getrockneten Körner wurden nach Bedarf gesiebt und mit Position Nr. 4 gemischt und 10 bis 15 Minuten gemischt. Position Nr. 5 wurde zugegeben und 1 bis 3 Minuten gemischt. Die Mischung wurde mit einer geeigneten Tablettiermaschine auf geeignete Größe und geeignetes Gewicht gepresst.
Beispiel B Kapseln
Herstellungsverfahren
Positionen Nr. 1, 2 und 3 wurden in einem geeigneten Mischer 10 bis 15 Minuten gemischt. Position Nr. 4 wurde zugege ben und 1 bis 3 Minuten gemischt. Die Mischung wurde mittels einer geeigneten Verkapselungsmaschine in geeignete zweiteilige Hartgelatinekapseln gefüllt.
Obwohl die vorliegende Erfindung im Zusammenhang mit den hier beschriebenen spezifischen Ausführungsformen beschrieben worden ist, ergeben sich Durchschnittsfachleuten viele Alternativen, Modifikationen und Varianten davon von selbst. Alle derartigen Alternativen, Modifikationen und Varianten davon sollen in dem Geist und Umfang der vorliegenden Erfindung liegen.

Claims

Verbindung mit der Strukturformel
oder ein N-Oxid davon, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat davon, worin R und R² unabhängig ausgewählt sind aus Halogen; R¹ und R³ unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus H und Halogen, mit der Maßgabe, dass mindestens eines von R¹ und R³ H ist; X N, CH oder C ist, wenn die Doppelbindung an der C-11-Position vorhanden ist; R⁴ =NOH, =N-NHR⁶, =N-NHSO₂R⁶, =N-NHCOR⁶, =N-NHCONH₂, =N-NHCOCONH₂, (H, OSO₂R⁶) oder -E-(CH₂)_n1-G- ist, wobei n1 1 bis 5 ist und E und G unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus O, S und N und an den gleichen Kohlenstoff gebunden sind, um eine cyclische Struktur zu bilden; R⁵ H, C₁- bis C₆-Alkyl oder Aryl ist, R⁶ C₁- bis C₆-Alkyl oder Aryl ist und n 0, 1, 2, 3, 4 oder 5 ist.
Verbindung nach Anspruch 1, bei der X CH ist.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 oder 2, bei der R⁵ C₁- bis C₆-Alkyl ist.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1, 2 oder 3, bei der R Brom ist und R² Chlor oder Brom ist.
Verbindung nach Anspruch 4, bei der R¹ H ist und R³ Chlor oder Brom ist, oder bei der R³ H ist und R¹ Chlor oder Brom ist.
Verbindung ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus:
Pharmazeutische Zusammensetzung zum Inhibieren des abnormalen Wachstums von Zellen, die eine wirksame Menge von Verbindung nach Anspruch 1 in Kombination mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger enthält.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Tumorzellen, die ein aktiviertes ras-Onkogen exprimieren.
Verwendung nach Anspruch 8, wobei die behandelten Zellen Pankreastumorzellen, Brustkrebszellen, Prostatakrebszellen, Lungenkrebszellen, myeloide Leukämietumorzellen, Schilddrüsenfollikeltumorzellen, myelodysplastische Tumorzellen, epidermale Carcinomtumorzellen, Blasencarcinomtumorzellen oder Colontumorzellen sind.
Verwendung nach Anspruch 8, wobei die Inhibierung, die von Tumorzellen ist, bei denen das Ras-Protein infolge von onkogener Mutation in anderen Genen als dem Ras-Gen aktiviert ist.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 zur Herstellung eines Medikaments zur Inhibierung von Farnesylproteintransferase, welche die Verabreichung einer wirksamen Menge der Verbindung von Anspruch 1 beinhaltet.