DE69811643T2

DE69811643T2 - Mischung primärer fettsäuren aus zuckerrohrwachs

Info

Publication number: DE69811643T2
Application number: DE69811643T
Authority: DE
Inventors: Daysi Carbajal Quintana; Mirian Cora Medina; Maria De Lourdes Arruzazabala Valmana; Luis Gonzales Bravo; Abilio Laguna Granja; David Marrero Delange; Rosa Maria Mas Ferreiro; Roberto Menendez Soto Del Valle
Original assignee: Laboratorios Dalmer SA
Current assignee: Laboratorios Dalmer SA
Priority date: 1997-04-02
Filing date: 1998-04-01
Publication date: 2003-12-24
Anticipated expiration: 2018-04-02
Also published as: AU732045B2; RU2217130C2; JP2012067119A; EP0969827A1; WO1998043631A1; CN1258218A; MY120318A; PT969827E; BR9808470A; ES2192769T3; CU22723A1; US20020058705A1; CA2285242C; CO4940484A1; HK1029054A1; ATE233087T1; ZA982744B; JP2001518092A; CA2285242A1; DE69811643D1

Description

Diese Erfindung betrifft eine neue Mischung von primären, geradkettigen Fettsäuren mit 26, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 und 36 Kohlenstoffatomen. Diese Mischung weist eine relative Zusammensetzung von Fettsäuren auf, welche von Batch zu Batch hochgradig reproduzierbar ist. Sie wird aus Zuckerrohrwachs (Saccharum officinarum L.) extrahiert und kann zur Behandlung von Typ II Hypercholesterinämie, als Mittel zur Verhinderung von Blutplättchenaggregation, als anti-thrombotisches Mittel, als anti-ischämisches Mittel sowie als vorbeugendes und/oder heilendes Mittel gegen Magengeschwüre verwendet werden.
Es existieren andere Mischungen von Fettsäuren, von denen biologische Eigenschaften berichtet worden sind. So wird in US Patent 5,284,873 eine pharmazeutische Zusammensetzung zur Bekämpfung von Prostataerkrankungen beansprucht, in welcher das aktive Prinzip aus einer Fraktion von Fettsäuren aus den Früchten von Sabal Serrulata besteht, wobei Oelsäure die wichtigste, gefolgt von Laurin- und Palmitinsäure, und Eicosensäure die mit der grösseren Anzahl an Kohlenstoffatomen sind. In US Patent 5,502,045 wird eine Methode zur Reduktion des Serum- Cholesterinspiegels beansprucht unter Verwendung eines Esters aus Sitostanol und einer Fettsäure mit 2 (sie) bis 22 Kohlenstoffatomen. Ebenfalls beansprucht wird eine Methode zur Herstellung von solchen Estern, wobei die affektive tägliche Dosis 0.2 bis 20 g an Ester beträgt. In US Patent 5,444,054 wird über eine Methode zur Behandlung von Colitis ulcerosa berichtet, in der eine der verwendeten Fraktionen ein Oel ist, welches gewisse Fettsäuren mit 18 bis 22 Kohlenstoffatomen enthält, die jedoch ungesättigt sind. Nicht so nah bei der vorliegenden Patentanmeldung sind die US Patente 4,505,933 und 4,687,783, in denen Mischungen aus, von Fettsäuren abgeleiteten, Aldehyden zur Behandlung von Patienten mit Multipler Sklerose sowie neurologischen und dermatologischen Erkrankungen beansprucht werden. Die Erfinder beanspruchen eine tägliche Dosis von 100- 400 mg/kg Körpergewicht der Patienten.
In der letzten Dekade sind zahlreiche Patente erschienen, in denen berichtet wird, dass omega-3-polyungesättigte Fettsäuren eine Wirkung auf das Serum-Cholesterin und die Blutplättchenaggregation haben. So wird in US Patent 4,526,902 eine pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung von thrombembolischen Zuständen beansprucht, in welcher das aktive Prinzip ungesättigte Eicosapentaen- und Docohexaensäure zusammen mit Linol- und Linolensäure sowie deren Derivaten sind. Auch in US Patent 5,502,077 wird eine Zusammensetzung von Fettsäuren zur Behandlung oder Prophylaxe von mehrfachen Risikofaktoren für Kreislauferkrankungen beansprucht, in der 80 Gewichts% omega-3 Fettsäuren, deren Salzen oder Derivaten entsprechen, wobei Eicosapentaen- und Docohexaensäure die wichtigsten sind. Im Europäischen Patent 0 422 490 A2 (sic) wird eine pharmazeutische Zusammensetzung zur Hemmung der Cholesterinabsorption beansprucht, welche, vorzugsweise aus einem Gemisch von gesättigten Fettsäuren mit 20 bis 24 Kohlenstoffatomen gebildete, Triglyceride enthält, wobei die Zusammensetzung jedoch in einer täglichen Dosis von 2 bis 10 g verabreicht werden sollte. Auch in den Japanischen Patenten 55092316 A und 56115736 A (sic) von Tokiwa Shigeru et al wird von der Demonstration sowie der Isolierung und Reinigung eines Mittals zur Verminderung von Cholesterin berichtet, welches aus einer Mischung von hochungesättigten Fettsäuren zusammengesetzt ist, insbesondere aus Eicosatrien- und Docosatetraensäure. In anderen Japanischen Patenten (Publikationsnummern 1290625 A, 02053724 A, 02243622 A, 04169524 A) werden verschiedene pharmazeutische Formulierungen beansprucht, wie solche zur Verbesserung der cerebralen Funktion oder zur Behandlung von degenerativen Erkrankungen, oder zur Senkung des Cholesterins im Blut und zum Erreichen einer verbesserten Serum-Lipid-Aktivität. Diese Formulierungen enthalten als aktives Prinzip Mischungen von Fettsäuren, insbesondere von Eicosapentaen- und Docosahexaensäure, in täglichen Dosen von 0.5-30 g/kg Körpergewicht.
Wie gezeigt wurde, beanspruchen diese Patente Mischungen von Fettsäuren mit spezifischen biologischen Eigenschaften, von denen einige mit den Mischungen, welche in der vorliegenden Patentanmeldung beansprucht werden, nahe verwandt sind. Doch unterscheiden sich die Zusammensetzung dieser Mischungen signifikant von denen, wie sie in der vorliegenden Patentanmeldung beansprucht werden, und auch die vorgeschlagene tägliche Dosis, welche in diesen Behandlungen verwendet werden sollte, ist höher als diejenige, welche in der vorliegenden Patentanmeldung beansprucht wird.
Die vorliegende Erfindung ist zur Hauptsache auf die pharmzgeutische Industrie bezogen, insbesondere auf die Entwicklung von pharmazeutischen Formulierungen mit spezifischen Eigenschaftan, da diese als hypocholesterinämische und hypoproteinämische Mittel, als Mittel zur Verhinderung von Blutplättchenaggregation, als anti-thrombotische Mittel, als anti-ischämische Mittel sowie als vorbeugendes Mittel gegen Magen- und Zwölffingerdarmgeschwüre, verursacht durch verschiedene Agenzien, verwendet werden könnten.
Diese Formulierungen enthalten als aktives Prinzip eine natürliche Mischung von primären, geradkettigen Fettsäuren mit 26, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 und 36 Kohlenstoffatomen, erhalten aus Zuckerrohrwachs (genannt M.F.A.S.C.W.). Ueber Arzneimittel mit spezifischen pharmakologischen Eigenschaften, basierend auf der Verwendung von primären Fettsäuren mit einem höheren Molekulargewicht (mit 26 bis 36 Kohlenstoffatomen) als aktives Prinzip, welche aus pflanzlichen oder tierischen Wachsen erhalten wurden, ist bisher nicht berichtet worden, doch ist es bekannt, dass primäre Fettalkohole mit einem hohen Molekulargewicht, erhalten aus Zuckerrohrwachs, die gleichen pharmakologischen Eigenschaften aufweisen. In EP Patent 0 488 928 A2 (sic) wird eine Mischung von Fettalkoholen mit einem hohen Molekulargewicht zur Behandlung von Hypercholesterinämie und Hyperproteinäme vom Typ II beansprucht und auch in Patent WO 94/07830 (sic) wird die Verwendung der gleichen Mischung als Mittel zur Verhinderung von Blutplättchenaggregation, als anti-ischämisches Mittel, als anti- thrombotisches Mittel sowie als vorbeugendes Mittel gegen Magen- und Zwölffingerdarmgeschwüre, verursacht durch verschiedene Agenzien, beansprucht.
EP 0 654 262 A1 beschreibt eine Mischung von höheren aliphatischen Alkoholen, erhalten aus Bienenwachs, welche als Mittel gegen Geschwüre und/oder zum Schutze der Magen- und Zwölffingerdarmschleimhaut sowie als Mittel gegen Entzündungen verwendet werden können. Shoyakugaku Zasshi, 1979, 33(2): 57-64 beschreibt in seinem Abstract, dass gezeigt wurde, dass sieben höhere Fettsäuren mit 26, 27, 28, 29, 30, 31 und 32 Kohlenstoffatomen (plus Coumarin) in einem Brasilianischen Arzneimittel enthalten sind, und in Tabelle II auf Seite 61 sind 13 höhere Fettsäuren mit 20 bis 32 Kohlenstoffatomen aufgelistet.
Vom Wachs, 1970, 2(12): 77A-789 beschreibt die Isolierung einer Mischung von höheren Fettsäuren aus bestimmten Wachsen und die Zusammensetzung dieser Mischungen, nämlich
Carnaubawachs: fettig-grau: in der Hauptsache geradzahlige Säuren mit 16-34 Kohlenstoffatomen;
Carnaubawachs: prime-gelb: in der Hauptsache geradzahlige Säuren mit 16-32 Kohlenstoffatomen;
Ouricourywachs: hauptsächlich geradzahlige Säuren mit 14-34 Kohlenstoffatomen;
BMW (d. h. Wachs erhalten durch Verglimmen von Braunkohle): geradzahlige Säuren mit einem relativ beachtlichen Anteil an ungeradzahligen Säuren mit 17-34 Kohlenstoffatomen;
Candelillawachs: in der Hauptsache geradzahlige Säuren mit 16- 34 Kohlenstoffatomen;
Bienenwachs: Säuren mit 12, 14 und 16-36 Kohlenstoffatomen.
Das Verfahren zur Herstellung dieser Mischung von primären Fettsäuren mit hohem Molekulargewicht basiert gemäss vorliegender Erfindung auf einer homogenen Verseifung von Zuckerrohrwachs mit konzentrierten Lösungen von Alkali- und Erdalkalihydroxiden, insbesondere solchen mit niederem Molekulargewicht, ganz besonders solchen von Natrium, Kalium und Kalzium. Die Konzentration der alkalischen Lösung muss derart sein, dass das Gewichtsverhältnis des entsprechenden Hydroxids zum behandelnden Wachs höher sein muss als 5%, vorzugsweise von 8 bis 25%, und besonders bevorzugt von 15 bis 25%. Das Verseifungsverfahren dauert mehr als 30 Minuten, vorzugsweise zwischen 1 und 5 Stunden. Der in diesem Schritt erhaltene Festkörper wird mittels eines konventionellen Fest-Flüssig- Extraktionssystems aufgearbeitet, wobei die M.F.A.S.C.W in Salzform vom Rast der Komponenten isoliert wird, indem diese Komponenten mit einem adäquaten organischen Lösungsmittel, ausgewählt aus Ketonen mit 3 bis 8 Kohlenstoffatomen, Alkoholen mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen, Kohlenwasserstoffen mit 5 bis 8 Kohlenstoffatomen, Haloformverbindungen sowie aromatischen Verbindungen, einschliesslich Mischungen derselben extrahiert werden. Einige bevorzugte Lösungsmittel, welche erfindungsgemäss eingesetzt werden, sind die folgenden: Aceton, Methylethylketon, Pentanon, Hexanon, Terbutanol, Ethanol, Methanol, 2-Propanol, Butanol, Hexan, Pentan, Isopentan, Cyclohexan, Heptan, Chloroform, 1,2-Dichlorethan, Dichlormethan, Trichlorethan, Trichlormethan, 1,2,3-Trichlorpropan, Benzol, Toluol, Phenol, p-Methyltoluol und andere.
Die Mischung von primären Fettsäuren mit hohem Molekulargewicht in Salzform wird durch einander folgende Rekristallisationen in geeigneten organischen Lösungsmitteln oder in wässrigen Lösungen gereinigt, wobei die Lösungsmittel ausgewählt sind aus Ketonen mit 3 bis 8 Kohlenstoffatomen, Alkoholen mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen, Kohlenwasserstoffen mit 5 bis 8 Kohlenstoffatomen sowie aromatischen Verbindungen, einschliesslich Mischungen derselben. Einige in diesem Verfahrensschritt bevorzugte Lösungsmittel sind unter anderen Aceton, Methylethylketon, Pentanon, Hexanon, Terbutanol, Ethanol, Methanol, 2-Propanol, Butanol, Hexan, Pentan, Heptan, Octan, Cyclohexan, Benzol, Toluol, Phenol, p-Methyltoluol und Wasser.
Ein Schritt in der Reinigung dieser Mischung von primären Fettsäuren mit hohem Molekulargewicht besteht darin, dass man die Komponenten in einem geeigneten organischen Lösungsmittel, ausgewählt aus Ketonen mit 3 bis 8 Kohlenstoffatomen, Alkoholen mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen, Kohlenwasserstoffen mit 5 bis 8 Kohlenstoffatomen sowie aromatischen Verbindungen einschliesslich Mischungen derselben, zum Rückfluss erhitzt und die Fettsäuresalze sofort heiss filtriert.
Im Schlussschritt dieses Verfahrens werden die freien Fettsäuren unter Verwendung einer Säurelösung regeneriert, wobei diese aus Mineralsäuren und/oder organischen Säuren hergestellt werden kann, welche unter anderen aus Salzsäure, Schwefelsäure Salpetersäure, Perchlorsäure, Essigsäure und Oxalsäure ausgewählt werden. Die Ausbeute an Fettsäure liegt zwischen 10 und 40%, während die Reinheit der M.F.A.S.C.W im allgemeinen 85 bis 100%, insbesondere 90 bis 99%, beträgt, wie mittels Gaschromatographie und/oder volumetrisch chemischen Analysen bestimmt wurde.
Die erfindungsgemäss erhaltene M.F.A.S.C.W. ist eine Mischung von primären Fettsäuren mit hohem Molekulargewicht im Bereich von 26 bis 36 Kohlenstoffatomen, insbesondere derjenigen mit 26, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 und 36 Kohlenstoffatomen. In Tabelle I ist die qualitative und quantitative Zusammensetzung der M.F.A.S.C.W angegeben.

Tabelle 1

Qualitative und quantitative Zusammensetzung der M.F.A.S.C.W.

Komponente Prozent in der Mischung (%)
1-Hexacosansäure 0.3-1.5
1-Octacosansäura 25.0-50.0
1-Nonacosansäure 1.0-3.0
1-Triacantansäure 15.0-30.0
1-Hentriacontansäure 0.8-3.0
1-Dotriacontansäure 10.0-22.0
1-Tritriacontansäure 1.0-3.0
1-Tetratriacontansäure 10.0-22.0
1-Pentatriacontansäure 0.5-1.5
1-Hexatriacontansäure 2.0-9.0
Es wurde festgestellt, dass die tägliche Dosis von M.F.A.S.C.W., welche zur Behandlung der verschiedenen Erkrankungan verwendet wird, zwischen 1 und 100 mg pro Tag beträgt. Am angemessensten erfolgt die Verabreichung oral, und zwar einer festen Dosierungsform, wie einer Tablette, eines Dragees oder einer Kapsel. Das Arzneimittel kann also oral oder parenteral oder topisch verabreicht werden, unter Berücksichtigung der erfindungsgemäss beanspruchten Verwendung.
Die pharmazeutische Formulierung zur oralen Verwendung enthält als aktives Prinzip 0.5 bis 25 Gewichts% M.F.A.S.C.W. Diese Dosis wird durch Mischen von M.F.A.S.C.W. mit verschiedenen Excipientien, wie desintegrierende Stoffe, zusammenballende Stoffe, Schmiermittel, Gleitmittel oder Füllstoffe, erhalten.
Ein Aspekt der vorliegenden Erfindung ist die Isolierung und Reinigung einer natürlichen Mischung von primären Fettsäuren mit hohem Molekulargewicht im Bereich von 26 bis 36 Kohlenstoffatomen aus Zuckerrohrwachs, insbesondere von Mischungen von geradkettigen Fettsäuren mit 26, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 und 36 Kohlenstoffatomen.
Ein anderer Aspekt dieser Erfindung ist die Verwendung dieser natürlichen Mischung von Fettsäuren in relativ niederen Dosen als Komponente einer pharmazeutischen Formulierung, die als hypocholesterinämisches und hypolipidämisches Mittal verwandet wird. Ebenfalls ein Aspekt der vorliegenden Erfindung ist die Entwicklung von pharmazeutischen Formulierungen, welche als aktives Prinzip zur Verwendung als anti-ischämisches und anti- thrombotisches Mittel M.F.A.S.C.W. enthalten und oral, topisch oder parenteral verabreicht werden.
Schliesslich ist zur Abrundung des ganzen Bildes des Profils von M.F.A.S.C.W., welche als aktives Prinzip für pharmazeutische Formulierungen vorgeschlagen wird, zu erwähnen, dass die Mischung unschädlich ist und gut toleriert wird, was einen wichtigen Vorteil darstellt. So zeigen Resultate, welche in toxikologischen Versuchen mit Negern durchgeführt worden sind, keine Toxizität der M.F.A.S.C.W. Es wurden keine Nebenwirkungen bei Versuchspersonen festgestellt, welche mit dem erfindungsgemässen Produkt behandelt worden sind. Der Gegenstand der vorliegenden Erfindung soll auf den folgenden Seiten im Detail beschrieben werden. Es wird auf Ausführungsbeispiele Bezug genommen, welche nicht auf den Umfang dar Erfindung beschränkt sind.

Beispiel 1

Eintausend (1000) g raffinierter Zuckerrohrwachs wurden bei 100-110ºC geschmolzen, und 200 g von in 150 ml Wasser gelöstem Kaliumhydroxid zugegeben. Das Verseifungsverfahren wurde 30 Min. unter periodischem Rühren aufrechterhalten. Die Fettsäure wurde aus dem im Verfahren erhaltenen Festkörper mit Aceton in einem Fest-Flüssig Extraktionssystem extrahiert. Der erhaltene Rückstand wurde auf Raumtemperatur abgekühlt, aus Heptan umkristallisiert und danach in Methanol 2 Std. zum Rückfluss erhitzt und heiss filtriert. M.F.A.S.C.W. wurde durch Behandeln mit konz. Schwefelsäure freigesetzt. 250 g dieser M.F.A.S.C.W. mit einer Reinheit von 94.0% wurden erhalten.

Beispiel 2

Zehn (10) kg raffinierter Zuckerrohrwachs wurden bei 100-110ºC geschmolzen, und 2 kg von in 1.5 l Wasser gelöstem Natriumhydroxid zugegeben. Das Hydrolyseverfahren wurde 2 Stunden unter periodischem Rühren aufrechterhalten. Der im Verfahren erhaltene Festkörper wurde mit Ethanol in einem konventionellen Fest-Flüssig Extraktionssystem extrahiert. Der erhaltene Extrakt wurde auf Raumtemperatur abgekühlt, der erhaltene Festkörper wurde aus Aceton umkristallisiert und danach in Pentan 2 Std, zum Rückfluss erhitzt und heiss filtriert. M.F.A.S.C.W. wurde durch Behandeln des Festkörpers mit konz. Salpetersäure erhalten. 2.45 kg M.F.A.S.C.W. mit einer Reinheit von 95.0% wurden erhalten.

Beispiel 3

Zehn (10) kg roher Zuckerrohrwachs wurden geschmolzen, und 2.5 kg von in Wasser gelöstem Kalziumhydroxid zugegeben. Das Verseifungsverfahren wurde 30 Min. unter periodischem Rühren aufrechterhalten. Dar im Verfahren erhaltene Festkörper wurde mit Aceton in einem konventionellen Fest-Flüssig-Extraktionssystem extrahiert. Der in diesem Verfahrensschritt erhaltene Rückstand wurde auf Raumtemperatur gekühlt, aus Benzol umkristallisiert und danach in Toluol 1 Stunde zum Rückfluss erhitzt und heiss filtriert. M.F.A.S.C.W. wurde durch Behandeln das Festkörpers mit konz. Schwefelsäure erhalten. 2.3 kg M.F.A.S.C.W. mit einer Reinheit von 95.0% wurden erhalten.

Beispiel 4

Fünfzig (50) kg raffinierter Zuckerrohrwachs wurden geschmolzen, und eine genügende Menge von in Wasser gelöstem Kaliumhydroxid zugegeben. Das Verseifungsverfahren wurde 30 Min. unter periodischem Rühren aufrechterhalten. Der im Verfahren erhaltene Festkörper wurde mit Chloroform in einem Fest- Flüssig-Extraktionssystem extrahiert. Der in diesem Verfahrensschritt erhaltene Rückstand wurde auf Raumtemperatur gekühlt und aus Methylethylketon umkristallisiert. Danach wurde er in Methanol 3 Stunden zum Rückfluss erhitzt und heiss filtriert. M.F.A.S.C.W. wurde durch Behandeln des Festkörpers mit konz. Salzäure erhalten. 13.6 kg M.F.A.S.C.W. mit einer Reinheit von 96.0% wurden erhalten.

Beispiel 5

Eintausend (1000) g raffinierter Zuckerrohrwachs wurden bei 100-110ºC geschmolzen, 250 g von in 250 ml Wasser gelöstem Kaliumhydroxid zugegeben, und der Wachs 1 Stunde unter periodischem Rühren verseift. Der im Verfahren erhaltene Festkörper wurde mit n-Hexan in einem Fest-Flüssig-Extraktionssystem 12 Std. extrahiert. Der in diesem Verfahrensschritt erhaltene Rückstand wurde auf Raumtemperatur gekühlt, aus Ethanol umkristallisiert und danach in Aceton 30 Min. zum Rückfluss erhitzt und heiss filtriert. M.F.A.S.C.W. wird durch Behandeln mit einer wässrigen Lösung von Schwefelsäure freigesetzt.
Zweihundert (250) g (sie) M.F.A.S.C.W. mit einer Reinheit von 96.7% wurden erhalten.

Beispiel 6

Zwei verschiedene pharmazeutische Formulierungen, Typ Tablette, wurden mit M.F.A.S.C.W. als aktives Prinzip entwickelt. Die Zusammensetzung dieser pharmazeutischen Formulierungen ist in Tabelle II dargestellt. Diese Formulierungen wurden unter Berücksichtigung der physikalischen, chemischen und chemischphysikalischen Charakteristika des aktiven Prinzips entwickelt. Tabelle II Pharmazeutische Formulierungen, Typ Tablette, unter Verwendung von M.F.A.S.C.W. als aktives Prinzip

Beispiel 7

Ziel dieser Arbeit war es, die Wirkung von M.F.A.S.C.W. auf die in Ratten induzierte Blutplättchenaggregation abzuschätzen. Eine Gruppe männlicher Sprague Dawley mit einem Gewicht von 250 bis 300 g wurden während 15 Tagen an Laboratoriumsbedingungen (25 +/-2ºC, Licht-/Dunkelheit-Zyklus von 12 Std.) mit freiem Zugang zu Futter und Wasser gewöhnt. Eine Suspension von M.F.A.S.C.W. in einem Trägerstoff aus Acacia-Gummi und Wasser (10 mg/ml)wurde hergestellt und mit einer Magensonde oral verabreicht. Die Tiere wurden zufällig auf drei Versuchsgruppen verteilt: 1. Kontrollgruppe: die Tiere erhalten ein äquivalentes Volumen an Trägerstoff; 2. Gruppe: die Tiere erhalten 20 mg/kg M.F.A.S.C.W. und 3. Gruppe: die Tiere erhalten 200 mg/kg M.F.A.S.C.W. Alle Tiere wurden 12 Std. vor der Verabreichung des Wirkstoffes vom Futter ferngehalten. Um den Test durchzuführen, wurden die Ratten mit Natriumpentobarbital anästhetisiert. 30 Min. nach dar Verabreichung des Wirkstoffs wurde der Unterlaib geöffnet, aus der Cava-Vene Blut entnommen und mit Natriumcitrat gemischt(1 Volumenteil Citrat auf 9 Teile Blut). Blutplättchenreiches Plasma (PRP) wurde durch Zentrifugieren von Blut während 10 Min. bei 160 g erhalten. Blutplättchenarmes Plasma (PPP) wurde durch 5-minütiges Zentrifugieren eines Aliquots an Plasma bei 2500 g erhalten. Blutplättchenaggregation wurde nach der Methode von Born mit einem Elvi-840-Aggregometer bei 37ºC und unter Rühren mit 1000 Umdrehungen pro Minute (1000 rpm) bestimmt. Der Grad der Blutplättchenaggregation wurde nach dem Kalibrieren des Gerätes bei 0% Lichttransmission für PRP und bei 100% für PPP gemessen. ADP (Sigma) wurde zum Induzieren der Blutplättchenaggregation verwendet.
Der statistische Vergleich der Resultate zwischen den Behandlungsgruppen und der Kontrollgruppe wurde mit dem nicht-parametrischen Mann-Whitney U Test durchgeführt.
Die in einmaliger Dosis verabreichte M.F.A.S.C.W. (20 and 200 mg/kg) zeigte eine signifikante Hemmung der durch ADP in Ratten induzierten Blutplättchenaggregation wie in Tabelle III gezeigt wird. Diese Resultate bestätigen, dass M.F.A.S.C.W. als Mittel gegen die Blutplättchenaggregation wirkt. Tabelle III Wirkung von M.F.A.S.C.W. auf die Blutplättchenaggregation in Ratten
*p < 0.05;
**p < 0.01 Vergleich mit Kontrolle (Mann-Whitney U Test).

Beispiel 8

In dieser Studie wurde die Wirkung von M.F.A.S.C.W. auf in Ratten experimentell induzierte venöse Thrombosan sowie deren mögliche Wirkung auf die Blutungsdauer untersucht. Männliche Sprague Dawley Ratten mit einem Gewicht von 300 bis 500 g wurden während 7 Tagen an Laboratoriumsbedingungen (25 +/-20ºC, Licht-/Dunkelheit-Zyklus von 12 Std.) mit freiem Zugang zu Futter und Wasser gewöhnt. M.F.A.S.C.W. wurde als Suspension in einem Trägerstoff aus Acacia-Gummi und Wasser (10 mg/ml) mit einer Magensonde oral verabreicht(5 mg/kg Körpergewicht). Die Tiere wurden zufällig auf drei Versuchsgruppen verteilt: 1. Kontrollgruppe: die Tiere erhalten nur Trägerstoff, 2. Gruppe: die Tiere erhalten 5 mg M.F.A.S.C.W./kg Körpergewicht und 3, Gruppe: die Tiere erhalten 100 mg M.F.A.S.C.W./kg Körpergewicht. Eine Stunde nach der Verabreichung der Substanzen wurden die Ratten mit Natriumpentobarbital (30 mg/kg) anästhetisiert, und der Schwanz der Tiere bei 37ºC in eine Salzlösung eingetaucht. Zwei (2) cm des Schwanzendes wurden abgeschnitten und die Blutungsdauer mit einem digitalen Chronometer gemessen.
Venöse Thrombosen: Die Tiere wurden zufällig auf vier Versuchsgruppen verteilt: 1. Kontrollgruppe, 2. Gruppe, 3. Gruppe und 4. Gruppe: die Tiere erhalten M.F.A.S.C.W, in Dosen von 20, 100 bzw. 200 mg/kg.
Induktion der Thrombosen: Alle Behandlungen wurden oral durchgeführt, und nach einer Stunde wurden die Tiere mit Natriumpentobarbital, welches intraperitoneal mit einer hypotonischen Salzlösung (0.22%, 1 ml/110 g Körpergewicht) injiziert wurde, anästhetisiert. Sofort wurde der Unterleib geöffnet, und die Cava-Vene in ihrem oberen Teil unterbunden (2 cm) und Teil dieser Vene auf einem Filterpapier gesammelt und geöffnet. Der Thrombus wurde herausgeholt und auf einem in einer physiologischen Salzlösung befeuchteten Filterpapier auf eine Petrischale transferiert und eine Stunde bei Raumtemperatur stehen gelassen. Das Gewicht des Thrombus wurde nach dieser Zeit bestimmt.
Der statistische Vergleich der Resultate zwischen den Behandlungsgruppen und der Kontrollgruppe wurde mit dem nicht-parametrischen Mann-Whitney U Test durchgeführt, und für die Zufallsanalyse wurde Fisher's Test angewendet.
Oral verabreichtes M.F.A.S.C.W. bei Dosen von 100 mg/kg und 200 mg/kg verhindert in signifikanter Weise venöse Thrombosen, nicht aber bei einer Dosis von 20 mg/kg. Die Resultate werden in den Tabellen IV und V gezeigt. Tabelle IV Wirkung von M.F.A.S.C.W. auf venöse Thrombosen in Ratten (x ± SD)
* p < 0.05 Mann-Whitney U Test Tabelle Y Wirkung von M.F.A.S.C.W. auf die Blutungsdauer von Ratten
ns: nicht signifikant
Wie gesehen werden kann, zeigten diese Resultate, dass M.F.A.S.C.W. im Bereich der untersuchten Dosen die Grösse und das Gewicht des Thrombus in Ratten verringert hat, ohne Zunahme der Blutungsdauer. Diese Resultate zeigten, dass M.F.A.S.C.W. anti-thrombotische Wirkung aufweist, ohne signifikante Aenderungen bei der Blutgerinnung hervorzurufen. Diese Tatsache hat den Vorteil, die Auswirkungen des Blutens in der Thrombosentherapie zu verringern und legt nahe, dass der Wirkungsmechanismus u. a. eher mit einer Wirkung auf die Blutplättchen zusammenhängt als mit einer Hemmung von Koagulationsfaktoren.

Beispiel 9

Um die Wirkung von M.F.A.S.C.W. auf experimentell induzierte Magengeschwüre zu untersuchen, wurden zwei experimentelle Modelle studiert. In einem Modell wird das Magengeschwür durch Ethanol induziert, im anderen durch Stress. Männliche und weibliche Sprague Dawley Ratten mit einem Gewicht von 200 bis 250 g wurden während 7 Tagen an Laboratoriumsbedingungen (25 +/-2ºC, Licht-/Dunkelheit-Zyklus von 12 Std.) mit freiem Zugang zu Futter und Wasser gewöhnt. M.F.A.S.C.W. wurde als Suspension in einem Trägerstoff aus Acacia-Gummi und Wasser hergestellt. Die Tiere wurden zufällig auf verschiedene Versuchsgruppen verteilt, und die Verabreichung der Produkte wurde mit einer Magensonde oral durchgeführt(5 ml/kg Körpergewicht); die Tiere der Kontrollgruppe erhielten nur ein äquivalentes Volumen an Trägerstoff. Gemäss der experimentellen Versuchsreihe wurde das Magengeschwür durch orale Verabreichung von Ethanol(60%) oder durch Stress induziert. Nach einem 24-stündigem Fasten wurden die Magengeschwüre in den Tieren induziert.
Induktion mit Ethanol: Die Ratten wurden zufällig auf vier Versuchsgruppen verteilt: 1. Kontrollgruppe, 2. Gruppe, 3. Gruppe und 4. Gruppe: die Tiere erhielten M.F.A.S.C.W. in Dosen von 25, 50 bzw. 100 mg/kg. Eine Stunde nach der Behandlung wurde jeder Ratte 1 ml Ethanol mittels Magensande verabreicht. Eine Stunde später wurden die Ratten getötet, deren Mägen wurden sofort entfernt, der Länge nach entlang der grösseren Krümmung geöffnet und mit destilliertem Wasser gewaschen. Dann wurde das beschädigte Gebiet mit einem Vergrösserungsglas ausgemessen (· 3).
Induktion durch Stress: Die Tiere wurden zufällig auf drei Versuchsgruppen verteilt: 1. Kontrollgruppe, 2. Gruppe und 3. Gruppe: die Tiere erhielten 50 bzw. 200 mg/kg M.F.A.S.C.W. Sofort nach der Behandlung wurde jede Ratte in einem Eisenzylinder von 5 cm Durchmesser eingeklemmt (immobilisiert) und bis zum Brustbein in ein Wasserbad von 24 ± 1ºC eingetaucht, um auf diese Weise in den Ratten Stress zu erzeugen. 7 Stunden später wurden die Tiere getötet, deren Mägen wurden sofort entfernt, der Länge nach entlang der grösseren Krümmung geöffnet und mit destilliertem Wasser gewaschen. Die beschädigten Gebiete wurden von zwei unabhängigen Spezialisten nach Art eines Doppelblindversuchs ausgemessen. Die Läsionen wurden bewertet als Totalsumme der Grössen der beschädigten Gebiete angezeigt in mm der Magengeschwüre.
Alle Vergleiche der Resultate zwischen den Behandlungsgruppen und der Kontrollgruppe wurde mit dem nicht-parametrischen Mann- Whitney U Test durchgeführt.
Wie aus Tabelle VI ersichtlich, hemmt M.F.A.S.C.W. (100 mg/kg) das Vorkommen von durch Ethanol induzierten Magengeschwüren in signifikanter Weise. Tabelle VI Wirkung von M.F.A.S.C.W. auf Magengeschwüre induziert durch Ethanol(60%)
* p < 0.05 (Mann-Whitney 0 Test)
Tabelle IV (sic) zeigt die Resultate von M.F.A.S.C.W. auf stressinduzierte Magengeschwüre. Tabelle VII Wirkung von M.F.A.S.C.W. auf stressinduzierte Magengeschwüre (Immobilisation und Eintauahen)
* p < < 0.05, ** p < < 0.01 Mann-Whitney U Test
Wie ersichtlich schützt M.F.A.S.C.W. die Magenschleimhaut vor durch Ethanol oder Stress induzierten Läsionen und ist so ein Modell, welches von der verabreichten Dosis unabhängig ist.

Beispiel 10

Tabletten, enthaltend 5 mg M.F.A.S.C.W. wurden einer Gruppe von Patienten, die an einer Typ II Hypercholesterinämie leiden, verabreicht. Bevor die Patienten in diese Studie eingeschlossen wurden, mussten sie während 4 Wochen eine Diät einhalten; nur solche mit einem LDL-C-Wert von grösser 3.8 mmol/L wurden in die Studie eingeschlossen. Behandlung mit M.F.A.S.C.W. wurde während 6 Wochen aufrechterhalten. Während dieser aktiven Behandlungsdauer wurden auch die Diätbedingungen aufrechterhalten Nach dieser Zeit wurde das Lipidprofil eines jeden Patienten bestimmt. Die Resultate sind in den Tabellen VIII und IX angegeben. Tabelle VIII Wirkung von 5 mg M.F.A.S.C.W. auf den Cholesterin- und Triglyceridspiegel Tabelle IX Wirkung von 5 mg M.F.A.S.C.W. auf Lipoproteine mit niedriger Dichte (LDL-C) sowie auf Lipoproteine mit hoher Dichte (HDL-C)
Es kann beobachtet werden, dass nach einer 6-wöchigen Behandlungszeit eine signifikante Reduktion von Cholesterin (p < 0.001), Triglyceriden (p < 0.01) und dem LDL-C Spiegel (p < 0.001), sowie eine signifikante Zunahme (p < 0.05) des HDL-C- Spiegels auftritt. Die durchschnittlichen Reduktionen betrugen 18.2% (Cholesterin), 17.4% (Triglyceride) und 25.7% (LDL-C), und die Zunahme an H4L-C betrug 20.7%.
Diese Resultate zeigen, dass die Behandlung mit M.F.A.S.C.W. sehr wirksam ist, da bei 100% der Patienten die Schlusswerte tiefer waren als zu Beginn der Behandlung, und die Veränderung in Prozenten grösser sind als die Limiten, welche verlangt werden, um ein Arzneimittel als wirksam für die Reduktion von Cholesterin und LDL-C zu betrachten.

Claims

1. Mischung von primären Fettsäuren enthaltend 1- Hexacosan-, 1-Octacosan-, 1-Nonacosan-, 1-Triacontan-, 1- Hentriacontan-, 1-Dotriacontan-, 1-Tritriacontan-, 1- Tetratricontan-, 1-Pentatriacontan-, und 1-Hexatriacontansäuren.

2. Mischung nach Anspruch 1, enthaltend:

1-Hexacosansäure 0,3-1,5 Gew.-%

1-Octacosansäure 25,0-50,0 Gew.-%

1-Nonacosansäure 1,0-3,0 Gew.-%

1-Triacontansäure 15,0-30,0 Gew.-%

1-Hentriacontansäure 0,8-3,0 Gew.-%

1-Dotriacontansäure 10,0-22,0 Gew.-%

1-Tritriacontansäure 1,0-3,0 Gew.-%

1-Tetratriacontansäure 10.0-22,0 Gew.-%

1-Pentatriacontansäure 0,5-1,5 Gew.-%

1-Hexatriacontansäure 2,0-9,0 Gew.-%

3. Pharmazeutische Formulierung, wie Tabletten, Kapseln, oder Dragees, enthaltend die Mischung von primären Fettsäuren nach Anspruch 1 oder 2, im Verhältnis von 0.5 bis 25,0 Gew.-% an Aktivsubstanz, sowie Füllstoffe, Bindemittel, Sprengmittel, Schmiermittel und/oder andere pharmazeutisch annehmbare Zusatzstoffe.

4. Mischung nach Anspruch 1 oder 2 für die Verwendung in der medizinischen Behandlung, insbesondere von Typ II Hypercholesterolemia, als antiischemisches und/oder antithrombotisches Mittel, als Mittel zur Verhinderung von Blutplättchenablagerungen, oder als Mittel gegen Magengeschwüre verursacht durch Verbindungen, Agenzien und Arzneimittel.

5. Verwendung der Mischung nach Anspruch 1 oder 2 für die Herstellung eines Medikaments für die Behandlung von Typ II Hypercholesterolemia, als antiischemisches und/oder antithrombotisches Mittel, als Mittel zur Verhinderung von Blutplättchenablagerungen, oder als Mittel gegen Magengeschwüre verursacht durch Verbindungen, Agenzien oder Arzneimittel.

6. Methode zur Herstellung einer Mischung nach Anspruch 1 oder 2, in Form freier Säuren oder ihrer Salze aus Zuckerrohrwachs, dadurch gekennzeichnet, dass man Zuckerrohrwachs homogen mit einer konzentrierten Lösung eines Alkali- oder Erdalkalihydroxids verseift, die Mischung vom Rest der Komponenten isoliert, indem man diese.

Komponenten mittels eines Fest-Flüssig Extraktionssystems extrahiert, wobei das organische Lösungsmittel ausgewählt ist aus Ketonen mit 3 bis 8 Kohlenstoffatomen, Alkoholen mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen, Kohlenwasserstoffen mit 5 bis 8 Kohlenstoffatomen, aus Haloformverbindungen sowie aromatischen Verbindungen, einschliesslich Mischungen derselben, die Mischung durch einander folgende Rekristallisationen in geeigneten organischen Lösungsmitteln oder in wässerigen Lösungen reinigt, und diese Lösungsmittel ausgewählt sind aus Ketonen mit 3 bis 8 Kohlenstoffatomen, Alkoholen mit 1 to 5 Kohlenstoffatomen, Kohlenwasserstoffen mit 5 bis 8 Kohlenstoffatomen, und aromatischen Verbindungen, einschliesslich Mischungen derselben, wobei eine Stufe in der Reinigung dieser Mischung darin besteht, dass man die Komponenten in einem geeigneten organischen Lösungsmittel am Rückfluss erhitzt, und dieses Lösungsmittel ausgewählt ist aus Ketonen mit 3 bis 8 Kohlenstoffatomen, Alkoholen mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen, Kohlenwasserstoffen mit 5 bis 8 Kohlenstoffatomen, sowie aromatischen Verbindungen, einschliesslich Mischungen derselben, und die Fettsäuresalze sofort heiss filtriert, und endlich die Mischung, unter Verwendung einer mineralischen oder organische Säurelösung, wiederherstellt.

7. Methode nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass die Konzentration der alkalischen Lösung derart ist, dass das Gewichtsverhältnis des entsprechenden Hydroxids zum zu behandelndem Wachs höher ist als 5%, vorzugsweise von 8 bis 25%, und insbesondere von 15 bis 25%, dass die Verseifungsstufe mindestens für eine Zeitdauer von mehr als 30 Minuten dauert, vorzugsweise zwischen 1 Stunde und 5 Stunden, dass die Abtrennung der Fettsäuresalze von 1 Stunde bis zu 20 Stunden dauert, die Rekristallisation der Fettsäuresalze von 1 Stunde bis zu 10 Stunden dauert, der Rückfluss der Fettsäuresalze von 15 Minuten bis zu 3 Stunden dauert und/oder die Wiedergewinnung der Fettsäuresalze in einem Zeitraum von 15 Minuten bis 3 Stunden ausgeführt wird.

8. Methode nach Anspruch 6 oder 7, dadurch gekennzeichnet, dass die in der Verseifungsstufe verwendeten Hydroxide ein niedriges Molekulargewicht aufweisen, vorzugsweise jene von Natrium, Kalium und Kalzium.

9. Methode nach Anspruch 6 oder 7, dadurch gekennzeichnet, dass für die Gewinnung der Fettsäuresalze und deren Rekristallisation Aceton, Methylethylketon, Pentanon, Methylbutylketon und/oder Hexanon als Ketone verwendet werden.

10. Methode nach Anspruch 6 oder 7, dadurch gekennzeichnet, dass für die Gewinnung der Fettsäuresalze und deren Rekristallisation Methanol, Ethanol, n-Propanol, 2- Propanol, n-Butanol, 2-Butanol, n-Pentanol und/oder Terbutanol als Alkohole verwendet werden.

11. Methode nach Anspruch 6 oder 7, dadurch gekennzeichnet, dass für die Gewinnung der Fettsäuresalze und deren Rekristallisation Benzol, Toluol, Ethylbenzol, Phenol und/oder p-Methyltoluol als aromatische Verbindungen verwendet werden.

12. Methode nach Anspruch 6 oder 7, dadurch gekennzeichnet, dass für die Gewinnung der Fettsäuresalze und deren Rekristallisation Chloroform, 1,2-Dichlorethan, Dichlormethan, Trichlorethan, Trichlormethan und/oder 1,2,3-Trichlorpropan als Haloformverbindungen verwendet.

13. Methode nach Anspruch 6 oder 7, dadurch gekennzeichnet, dass für die Gewinnung der Fettsäuresalze und deren Rekristallisation Hexan, Pentan, Isopentan, Cyclohexan und/oder Heptan als Kohlenwasserstoffe verwendet werden.

14. Methode nach Anspruch 6 oder 7, dadurch gekennzeichnet, dass für die Rekristallisation der Fettsäuresalze Wasser als Lösungsmittel verwendet wird.

15. Methode nach Anspruch 6 oder 7, dadurch gekennzeichnet, dass für die Wiederherstellung der Fettsäuren unter anderen Säuren, Salzsäure, Schwefelsäure, Salpetersäure, Perchlorsäure, Essigsäure und/oder Oxalsäure als Säure verwendet werden.